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JPH07123984A - Primer for detecting and measuring specific messenger rna - Google Patents

Primer for detecting and measuring specific messenger rna

Info

Publication number
JPH07123984A
JPH07123984A JP5275852A JP27585293A JPH07123984A JP H07123984 A JPH07123984 A JP H07123984A JP 5275852 A JP5275852 A JP 5275852A JP 27585293 A JP27585293 A JP 27585293A JP H07123984 A JPH07123984 A JP H07123984A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
sequence
seq
sequences
nucleic acid
nos
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP5275852A
Other languages
Japanese (ja)
Inventor
Toshiaki Hosokawa
利昭 細川
Tatsuo Akitaya
龍男 秋田谷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Resonac Corp
Original Assignee
Hitachi Chemical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hitachi Chemical Co Ltd filed Critical Hitachi Chemical Co Ltd
Priority to JP5275852A priority Critical patent/JPH07123984A/en
Publication of JPH07123984A publication Critical patent/JPH07123984A/en
Pending legal-status Critical Current

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  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

PURPOSE:To provide new primers, having a specific base sequence, usable for detecting a specific messenger RNA such as a cytokine, beta-actin and a serotonin receptor and excellent in reliability. CONSTITUTION:These new primers have any of the total 35 kinds of sequences including a primer having a base sequence expressed by formula I and other 28 kinds, a primer having a base sequence expressed by formula II and another kind and a primer having a base sequence expressed by formula III and other 3 kinds or sequences homologous therewith and are useful for detecting and measuring a specific messenger RNA such as a cytokine, e.g. human interleukins or human interferons, beta-actin and a serotonin receptor respectively. The primers are readily obtained by synthesis with a DNA synthesizer and the specific messenger RNA can be detected and measured by using the primers according to a polymerase chain reactional(PCR) method.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【0001】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は特異的メッセンジャーR
NAを検出・測定するためのプライマーに関する。本発
明は医薬品工業などの分野に有効に利用される。
The present invention relates to a specific messenger R
The present invention relates to a primer for detecting / measuring NA. The present invention is effectively used in fields such as the pharmaceutical industry.

【0002】[0002]

【従来の技術】メッセンジャーRNA(以下、mRNA
と略す)を検出・測定する方法としてはリバースPCR
法(Reverse Polymerase Chain Reaction Method)、ノ
ーザンブロット法(Northern Blot Method)及びサンド
イッチハイブリダイゼーション法(Sandwich Hybridiza
tion Method)等が知られている。リバースPCR法
は、逆転写酵素を使用して、生物試料に含まれるmRN
Aから相補的DNA(以下、cDNAという)を合成
し、このcDNAを下記のPCR法(Polymerase Chain
Reaction Method)で検出・測定するものである。ここ
で、PCR法は、cDNAを含む試料に、2種類のプラ
イマー(センスプライマー及びアンチセンスプライマ
ー;プライマーは増幅されるDNAの合成の開始に使用
されるDNA断片のこと。)、DNAポリメラーゼ、ヌ
クレオチド類を添加して、加熱、冷却、保温の各工程か
らなるサイクルを繰り返すことによって、特定の長さの
DNAを増幅させ、増幅されたDNAを電気泳動で分離
し、検出・測定する方法である。リバースPCR法及び
PCR法は、「サムブロック他編集、モレキュラー・ク
ローニング 第2版(コールド・スプリング・ハーバー
・ラボラトリー)(1989年)」(J.Samblook et a
l., Molecular Cloning 2nd ed., Cold Spring Harbor
Laboratory Press (1989)、以下、本文献を文献”モ
レキュラー・クローニング”という)に記載されてい
る。ノーザンブロット法は、mRNAを含む試料を電気
泳動して分子量で分離し、mRNAをナイロンメンブレ
ンフィルターに移して固定し、標識化プローブを添加
し、標識を検出・測定するものである。この方法は文
献”モレキュラー・クローニング”に記載されている。
サンドイッチハイブリダイゼーション法は、プローブを
担体に固定し、mRNAを含む試料を添加し、別のプロ
ーブを標識化して添加し、標識を検出・測定するもので
ある。例えばパルバらは、枯草菌のα−アミラーゼをコ
ードするDNAの近接した2種類の断片をプローブとし
て用い、枯草菌のα−アミラーゼのmRNAをサンドイ
ッチハイブリダイゼーション法で測定したことを報告し
ている(A.パルバ他著、DNA、7巻、2号、135
−142頁(1988)(Airi Palva et al., DNA, Vo
l.7, No.2, pp.135-142(1988)))。
2. Description of the Related Art Messenger RNA (hereinafter referred to as mRNA
Reverse PCR as a method for detecting and measuring
Method (Reverse Polymerase Chain Reaction Method), Northern Blot Method (Northern Blot Method) and Sandwich Hybridization Method (Sandwich Hybridiza
tion Method) is known. The reverse PCR method uses reverse transcriptase to detect mRN contained in a biological sample.
A complementary DNA (hereinafter referred to as "cDNA") was synthesized from A, and this cDNA was analyzed by the following PCR method (Polymerase Chain).
Reaction method). Here, the PCR method includes two types of primers (sense primer and antisense primer; a primer is a DNA fragment used to start the synthesis of amplified DNA), a DNA polymerase, and a nucleotide in a sample containing cDNA. Is added, and a cycle of heating, cooling, and heat retention is repeated to amplify a specific length of DNA, and the amplified DNA is separated by electrophoresis, and then detected and measured. . The reverse PCR method and the PCR method are described in “J. Samblook et a,“ Edited by Sam Block, Molecular Cloning, Second Edition (Cold Spring Harbor Laboratory) (1989) ”.
l., Molecular Cloning 2nd ed., Cold Spring Harbor
Laboratory Press (1989), hereinafter referred to as the document "Molecular Cloning". Northern blotting is a method in which a sample containing mRNA is electrophoresed and separated by molecular weight, mRNA is transferred to a nylon membrane filter and immobilized, a labeled probe is added, and the label is detected and measured. This method is described in the document "Molecular Cloning".
In the sandwich hybridization method, a probe is immobilized on a carrier, a sample containing mRNA is added, another probe is labeled and added, and the label is detected and measured. For example, Parva et al. Reported that two adjacent fragments of DNA encoding the Bacillus subtilis α-amylase were used as probes to measure the mRNA of Bacillus subtilis α-amylase by the sandwich hybridization method ( A. Parva et al., DNA, Vol. 7, No. 2, 135
-P. 142 (1988) (Airi Palva et al., DNA, Vo
l.7, No.2, pp.135-142 (1988))).

【0003】mRNAをリバースPCR法で検出・測定
するためのプライマーとして、下記配列番号の配列のD
NA断片がクローンテック(Clontech)社から販売され
ている。 ヒトインターロイキン−1α 5’プライマー 配列番号51 ヒトインターロイキン−1α 3’プライマー 配列番号52 ヒトインターロイキン−1β 5’プライマー 配列番号53 ヒトインターロイキン−1β 3’プライマー 配列番号54 ヒトインターロイキン−2 5’プライマー 配列番号55 ヒトインターロイキン−2 3’プライマー 配列番号56 ヒトインターロイキン−3 5’プライマー 配列番号57 ヒトインターロイキン−3 3’プライマー 配列番号58 ヒトインターロイキン−4 5’プライマー 配列番号59 ヒトインターロイキン−4 3’プライマー 配列番号60 ヒトインターロイキン−5 5’プライマー 配列番号61 ヒトインターロイキン−5 3’プライマー 配列番号62 ヒトインターロイキン−6 5’プライマー 配列番号63 ヒトインターロイキン−6 3’プライマー 配列番号64 ヒトインターロイキン−7 5’プライマー 配列番号65 ヒトインターロイキン−7 3’プライマー 配列番号66 ヒトインターロイキン−8 5’プライマー 配列番号67 ヒトインターロイキン−8 3’プライマー 配列番号68 ヒトインターフェロン−γ 5’プライマー 配列番号69 ヒトインターフェロン−γ 3’プライマー 配列番号70 ヒトβ−アクチン 5’プライマー 配列番号71 ヒトβ−アクチン 3’プライマー 配列番号72
As a primer for detecting and measuring mRNA by the reverse PCR method, D of the sequence shown by the following sequence number is used.
NA fragments are sold by Clontech. Human interleukin-1α 5'primer SEQ ID NO: 51 Human interleukin-1α 3'primer SEQ ID NO: 52 Human interleukin-1β 5'primer SEQ ID NO: 53 Human interleukin-1β 3'primer SEQ ID NO: 54 human interleukin-2 5 'Primer SEQ ID NO: 55 human interleukin-2 3'primer SEQ ID NO: 56 human interleukin-3 5'primer SEQ ID NO: 57 human interleukin-3 3'primer SEQ ID NO: 58 human interleukin-4 5'primer SEQ ID NO: 59 human Interleukin-4 3'primer SEQ ID NO: 60 human interleukin-5 5'primer SEQ ID NO: 61 human interleukin-5 3'primer SEQ ID NO: 62 human interleukin-6 5'primer SEQ ID NO: 63 Interleukin-6 3'primer SEQ ID NO: 64 human interleukin-7 5'primer SEQ ID NO: 65 human interleukin-7 3'primer SEQ ID NO: 66 human interleukin-8 5'primer SEQ ID NO: 67 human interleukin-8 3 ' Primer SEQ ID NO: 68 Human interferon-γ 5'primer SEQ ID NO: 69 Human interferon-γ 3'primer SEQ ID NO: 70 human β-actin 5'primer SEQ ID NO: 71 human β-actin 3'primer SEQ ID NO: 72

【0004】[0004]

【発明が解決しようとする課題】しかし、上記配列番号
51及び52の配列のDNA断片をプライマーとして用
いリバースPCR法でヒトインターロイキン−1αのm
RNAの検出・測定を試みる場合、十分に検出できない
場合があり、また上記配列番号53及び54の配列のD
NA断片をプライマーとして用いリバースPCR法でヒ
トインターロイキン−1βのmRNAの検出・測定を試
みる場合、リバースPCR法の反応液の塩濃度及び冷却
操作時の温度の許容範囲が狭く、実験条件が制限される
等の問題がある。本発明は、上記問題点を解決し、信頼
性の優れた、特異的mRNAの検出・測定用の新規プラ
イマーを提供するものである。
However, using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 51 and 52 as primers, the m of human interleukin-1α was subjected to reverse PCR.
When trying to detect and measure RNA, it may not be detected sufficiently, and D of the sequences of SEQ ID NOs: 53 and 54 may be used.
When attempting to detect and measure human interleukin-1β mRNA by the reverse PCR method using NA fragment as a primer, the allowable range of the salt concentration of the reaction solution of the reverse PCR method and the temperature during the cooling operation are narrow, and the experimental conditions are limited. There are problems such as being done. The present invention solves the above-mentioned problems and provides a novel primer for detecting and measuring a specific mRNA, which is highly reliable.

【0005】[0005]

【課題を解決するための手段】本発明は下記(a)から
(d)のプライマーに関するものである。 (a)配列番号1〜35のいずれかの配列又はそれに相
同な配列を有する、特異的メッセンジャーRNAを検出
・測定するためのプライマー。 (b)配列番号1〜29のいずれかの配列又はそれに相
同な配列を有する、サイトカイン特異的メッセンジャー
RNAを検出・測定するためのプライマー。 (c)配列番号30もしくは配列番号31の配列又はそ
れに相同な配列を有する、β−アクチン特異的メッセン
ジャーRNAを検出・測定するためのプライマー。 (d)配列番号32〜35のいずれかの配列又はそれに
相同な配列を有する、セロトニンレセプター特異的メッ
センジャーRNAを検出・測定するためのプライマー。
The present invention relates to the primers (a) to (d) below. (A) A primer for detecting / measuring a specific messenger RNA having any one of SEQ ID NOs: 1 to 35 or a sequence homologous thereto. (B) A primer for detecting / measuring a cytokine-specific messenger RNA having any one of SEQ ID NOS: 1 to 29 or a sequence homologous thereto. (C) A primer for detecting and measuring β-actin-specific messenger RNA, which has the sequence of SEQ ID NO: 30 or SEQ ID NO: 31 or a sequence homologous thereto. (D) A primer for detecting / measuring a serotonin receptor-specific messenger RNA having any one of SEQ ID NOs: 32 to 35 or a sequence homologous thereto.

【0006】本明細書において使用した略号の意味は以
下の通りである。 dATP:デオキシアデノシン−5’−三リン酸(deox
yadenosine 5'-triphosphate) dCTP:デオキシシチジン−5’−三リン酸(deoxyc
ytidine 5'-triphosphate) dGTP:デオキシグアノシン−5’−三リン酸(deox
yguanosine 5'-triphosphate) dTTP:デオキシチアミン−5’−三リン酸(deoxyt
hiamin 5'-triphosphate) dT:デオキシチミジル酸(deoxythymidylic acid)
The abbreviations used in the present specification have the following meanings. dATP: deoxyadenosine-5'-triphosphate (deox
yadenosine 5'-triphosphate) dCTP: deoxycytidine-5'-triphosphate (deoxyc
ytidine 5'-triphosphate) dGTP: deoxyguanosine-5'-triphosphate (deox
yguanosine 5'-triphosphate) dTTP: deoxythiamine-5'-triphosphate (deoxyt
hiamin 5'-triphosphate) dT: deoxythymidylic acid

【0007】本発明に係るプライマーは、配列番号1〜
35のいずれかの配列又はそれに相同な配列を有するD
NA断片である。ここで相同な配列とは、配列番号1〜
35の塩基配列に対し、その塩基配列中にあるチミンの
少なくとも1個をウラシルで置換して得られた配列のこ
とである。本発明のプライマーは市販のDNA合成装置
を使用して容易に合成することができる。DNA合成装
置はアプライドバイオシステムズ(Applied Biosystem
s)社等で販売されている。
The primers according to the present invention are SEQ ID NO: 1 to
D having any one of sequences 35 or a sequence homologous thereto
NA fragment. Here, the homologous sequences refer to SEQ ID NOS: 1 to
It is a sequence obtained by substituting uracil for at least one thymine in the base sequence of 35 base sequences. The primer of the present invention can be easily synthesized using a commercially available DNA synthesizer. The DNA synthesizer is based on Applied Biosystems.
s) Sold by the company.

【0008】本発明のプライマーは特異的mRNAの検
出・測定に利用できる。特異的mRNAとしては、サイ
トカイン、β−アクチン又はセロトニンレセプター等の
mRNAがある。サイトカインはリンパ球や単球、マク
ロファージをはじめとする細胞が産生する生理活性物質
である。ヒトの場合、ヒトインターロイキン−1α、ヒ
トインターロイキン−1β、ヒトインターロイキン−
2、ヒトインターロイキン−3、ヒトインターロイキン
−4、ヒトインターロイキン−5、ヒトインターロイキ
ン−6、ヒトインターロイキン−7、ヒトインターロイ
キン−8又はヒトインターフェロン−γ等がある。これ
らの生理活性物質のmRNAを検出・測定することは、
特定の疾患とこれらの生理活性物質をコードする遺伝子
の発現状態との関係を調査したり、開発中の新薬がヒト
を含む哺乳動物の免疫系に与える影響を遺伝子の発現レ
ベルで調査する上で重要な意義がある。β−アクチンは
哺乳動物の細胞中に普遍的に含まれている筋肉収縮性タ
ンパク質である。β−アクチンの遺伝子は常に発現して
いるので、β−アクチンのmRNAは、mRNAを使用
する実験系が正常かどうかを判断する際の陽性の対照
(コントロール)として利用できる。セロトニンは脳内
の神経伝達物質であり、神経活動の指標になる物質であ
る。セロトニンレセプターはこのセロトニンが結合する
タンパク質であり、神経活動と深い関係があることが知
られている。ラットの場合、ラットセロトニン1cレセ
プター又はラットセロトニン2レセプター等がある。セ
ロトニンレセプターのmRNAを検出・測定すること
は、特定の疾患とこれらのタンパク質をコードする遺伝
子の発現状態との関係を調査したり、開発中の新薬がヒ
トを含む哺乳動物の脳神経系に与える影響を遺伝子の発
現レベルで調査する上で重要な意義がある。
The primer of the present invention can be used for detection and measurement of specific mRNA. Specific mRNAs include mRNAs for cytokines, β-actin, serotonin receptors and the like. Cytokines are physiologically active substances produced by cells such as lymphocytes, monocytes and macrophages. In the case of human, human interleukin-1α, human interleukin-1β, human interleukin-
2, human interleukin-3, human interleukin-4, human interleukin-5, human interleukin-6, human interleukin-7, human interleukin-8 or human interferon-γ. To detect and measure mRNA of these physiologically active substances,
To investigate the relationship between specific diseases and the expression status of the genes encoding these physiologically active substances, and to investigate the effect of new drugs under development on the immune system of mammals including humans at the gene expression level. It has important significance. β-actin is a muscle contractile protein that is universally contained in mammalian cells. Since the β-actin gene is always expressed, β-actin mRNA can be used as a positive control when determining whether the experimental system using mRNA is normal. Serotonin is a neurotransmitter in the brain and a substance that serves as an index of neural activity. The serotonin receptor is a protein to which this serotonin binds and is known to be closely related to neural activity. In the case of rat, there are rat serotonin 1c receptor, rat serotonin 2 receptor and the like. Detection and measurement of serotonin receptor mRNA can be used to investigate the relationship between specific diseases and the expression status of genes encoding these proteins, and the effects of new drugs under development on the nervous system of mammals including humans. It has important significance in investigating the gene expression level.

【0009】本発明のプライマーを用いて特異的mRN
Aを検出・測定するには、オリゴ(dT)と逆転写酵素
でmRNAからcDNAを合成し、本発明のプライマー
及びDNAポリメラーゼを添加して冷却・保温・加熱の
工程を繰り返して行う。本発明のプライマーを用いる特
異的mRNAの検出・測定は、通常、下記の手順で行
う。 (ア)mRNAからcDNAを合成する。 (イ)加熱し、DNAポリメラーゼ、dATP、dCT
P、dGTT及びdTTPを含む緩衝液を添加し、保温
する。 (ウ)一本鎖核酸分解酵素を含む緩衝液を添加し、保温
し、加熱する。 (エ)本発明のプライマー、DNAポリメラーゼ、dA
TP、dCTP、dGTP及びdTTPを含む緩衝液を
添加し、加熱する。 (オ)冷却し、保温し、加熱する。 (カ)(オ)の操作を繰返す。 (キ)反応液に含まれる核酸を検出・測定する。 工程(ア)は、mRNAを含む試料に、オリゴ(d
T)、逆転写酵素、dATP、dCTP、dGTP及び
dTTPを含む緩衝液を添加し、保温する。mRNAを
含む試料としては、細胞や組織の溶解液を使用すること
ができる。細胞や組織を溶解するには、例えば、細胞や
組織を、エチレンジアミン4酢酸、ドデシル硫酸ナトリ
ウム、RNA分解酵素阻害剤及びプロテイネースKを含
む緩衝液中で保温する。逆転写酵素やRNA分解酵素阻
害剤は東洋紡(株)から購入でき、プロテイネースKは
和光純薬工業(株)から購入できる。工程(ア)や細胞
や組織の溶解操作の一般的手法は文献”モレキュラー・
クローニング”に記載されている。また、工程(ア)を
行うのに東洋紡(株)等から販売されているcDNA合
成キットを使用してもよい。
Using the primers of the present invention, a specific mRN
In order to detect and measure A, cDNA is synthesized from mRNA by oligo (dT) and reverse transcriptase, the primer of the present invention and DNA polymerase are added, and the steps of cooling, keeping, and heating are repeated. Detection / measurement of specific mRNA using the primer of the present invention is usually performed by the following procedure. (A) cDNA is synthesized from mRNA. (B) Heating, DNA polymerase, dATP, dCT
A buffer solution containing P, dGTT and dTTP is added and kept warm. (C) A buffer solution containing a single-stranded nucleic acid degrading enzyme is added, kept warm, and heated. (D) Primer of the present invention, DNA polymerase, dA
A buffer solution containing TP, dCTP, dGTP and dTTP is added and heated. (E) Cool, keep warm, and heat. Repeat steps (f) and (e). (G) Detect and measure the nucleic acid contained in the reaction solution. In the step (a), the oligo (d
T), a reverse transcriptase, dATP, dCTP, dGTP, and a buffer containing dTTP are added, and it heat-retains. A lysate of cells or tissues can be used as the sample containing mRNA. To lyse cells or tissues, for example, the cells or tissues are kept warm in a buffer solution containing ethylenediaminetetraacetic acid, sodium dodecyl sulfate, an RNAse inhibitor and proteinase K. Reverse transcriptase and RNA degrading enzyme inhibitors can be purchased from Toyobo Co., Ltd., and Proteinase K can be purchased from Wako Pure Chemical Industries, Ltd. The general procedure for lysis of cells and tissues in the process (a) is described in the document "Molecular
In addition, a cDNA synthesis kit sold by Toyobo Co., Ltd. or the like may be used for carrying out the step (a).

【0010】工程(イ)及び(ウ)は一本鎖cDNAを
安定な二本鎖cDNAにする工程である。DNAポリメ
ラーゼとしては例えばクレノーフラグメント(Klenow f
ragment)が、一本鎖核酸分解酵素としては例えばS1
ヌクレエースが、それぞれ利用できる。加熱は例えば9
0〜100℃で1〜5分間静置し、保温は例えば37〜
42℃で10〜1時間静置する。クレノーフラグメント
及びS1ヌクレエースは宝酒造(株)から購入できる。
一本鎖cDNAを二本鎖cDNAにする一般的手法は文
献”モレキュラー・クローニング”に記載されている。
工程(エ)のDNAポリメラーゼとしては例えばタック
(Taq)ポリメラーゼを使用することができる。加熱
は例えば90℃〜100℃で1〜10分間静置する。タ
ックポリメラーゼは東洋紡(株)から購入できる。
Steps (a) and (c) are steps for converting a single-stranded cDNA into a stable double-stranded cDNA. Examples of the DNA polymerase include Klenow fragment (Klenow f
ragment) is, for example, S1 as the single-stranded nucleolytic enzyme.
Nucleace is available. Heating is 9
Let stand for 1 to 5 minutes at 0 to 100 ° C.
Let stand at 42 ° C. for 10 to 1 hour. Klenow Fragment and S1 Nucleace can be purchased from Takara Shuzo Co., Ltd.
A general procedure for converting single-stranded cDNA into double-stranded cDNA is described in the document "Molecular Cloning".
As the DNA polymerase in the step (d), for example, Taq polymerase can be used. The heating is performed, for example, at 90 ° C to 100 ° C for 1 to 10 minutes. Tack polymerase can be purchased from Toyobo Co., Ltd.

【0011】工程(オ)の冷却は例えば45℃〜65℃
で1〜5分間静置し、保温は例えば70℃〜80℃で3
〜10分間静置し、加熱は例えば90℃〜100℃で1
〜5分間静置する。工程(エ)の加熱操作や工程(オ)
の冷却、保温及び加熱の操作は、DNAサーマルサイク
ラー(DNA thermal cycler)(登録商標)(パーキン−エ
ルマー シータス(Perkin-elmer Cetus)製)を使用し
て行うことができる。工程(カ)の繰返し回数は特に限
定されないが、30回程度繰り返す。工程(キ)の反応
液に含まれる核酸を検出・測定するには、例えば、反応
液を臭化エチジウム含有アガロースゲルを用いて電気泳
動して反応液に含まれている核酸を分子量で分離し、紫
外線を照射する。なお、一度工程(エ)〜工程(カ)を
行った後、添加する本発明のプライマーを別の配列のも
のにし、再度工程(エ)〜工程(カ)を行ってから工程
(キ)に入ってもよい。
Cooling in the step (e) is, for example, 45 ° C. to 65 ° C.
Let stand for 1 to 5 minutes and keep the temperature at 70 ℃ to 80 ℃ for 3 minutes.
Let stand for 10 minutes and heat at 90 ° C to 100 ° C for 1 minute.
Let stand for ~ 5 minutes. Step (d) heating operation and step (e)
The operations of cooling, heat retention and heating can be performed using a DNA thermal cycler (registered trademark) (manufactured by Perkin-elmer Cetus). The number of times of repeating the step (f) is not particularly limited, but is repeated about 30 times. To detect and measure the nucleic acid contained in the reaction solution of the step (g), for example, the reaction solution is subjected to electrophoresis using an ethidium bromide-containing agarose gel to separate the nucleic acid contained in the reaction solution by molecular weight. , Irradiate with ultraviolet rays. In addition, after performing the steps (d) to (f) once, the primer of the present invention to be added has a different sequence, and the steps (d) to (f) are performed again, and then the step (k) is performed. You may enter.

【0012】配列番号1〜35のいずれかの配列、それ
に相同な配列又は配列番号1〜35のいずれかの配列に
相補的な配列を有するDNA断片は、下記(a’)から
(d’)の特異的mRNAを検出・測定するためのプロ
ーブとしても利用することができる。 (a’)配列番号1〜35のいずれかの配列、それに相
同な配列又は配列番号1〜35のいずれかの配列に相補
的な配列を有する、特異的mRNAを検出・測定するた
めのプローブ。 (b’)配列番号1〜29のいずれかの配列、それに相
同な配列又は配列番号1〜29のいずれかの配列に相補
的な配列を有する、サイトカイン特異的mRNAを検出
・測定するためのプローブ。 (c’)配列番号30もしくは配列番号31の配列、そ
れに相同な配列又は配列番号30もしくは配列番号31
の配列に相補的な配列を有する、β−アクチン特異的m
RNAを検出・測定するためのプローブ。 (d’)配列番号32〜35のいずれかの配列、それに
相同な配列又は配列番号32〜35のいずれかの配列に
相補的な配列を有する、セロトニンレセプター特異的m
RNAを検出・測定するためのプローブ。
DNA fragments having any one of SEQ ID NOS: 1 to 35, a sequence homologous thereto or a sequence complementary to any one of SEQ ID NOS: 1 to 35 are (a ') to (d') below. It can also be used as a probe for detecting and measuring the specific mRNA of. (A ′) A probe for detecting / measuring a specific mRNA, which has any of the sequences of SEQ ID NOs: 1 to 35, a sequence homologous thereto or a sequence complementary to any of the sequences of SEQ ID NOs: 1 to 35. (B ′) A probe for detecting / measuring cytokine-specific mRNA, which has a sequence of any of SEQ ID NOS: 1-29, a sequence homologous thereto or a sequence complementary to any of the sequences of SEQ ID NOS: 1-29 . (C ′) Sequence number 30 or sequence number 31, sequence homologous thereto or sequence number 30 or sequence number 31
Β-actin specific m having a sequence complementary to that of
A probe for detecting and measuring RNA. (D ′) Serotonin receptor-specific m having a sequence of any of SEQ ID NOs: 32 to 35, a sequence homologous thereto, or a sequence complementary to any sequence of SEQ ID NOs: 32 to 35
A probe for detecting and measuring RNA.

【0013】上記特異的mRNAを検出・測定するため
のプローブは、その構成元素が放射性同位元素で標識さ
れていてもよい。放射性同位元素で標識するには、例え
ばT4ポリヌクレオチドキナーゼ(T4 polynucleotide
kinase)存在下、これに(γ−32P)dATPを添加す
る。放射性同位元素で標識する一般的手法は文献”モレ
キュラー・クローニング”に記載されている。T4ポリ
ヌクレオチドキナーゼは東洋紡(株)から、(γ−
32P)dATPは(株)アマシャムから購入できる。ま
た、上記プローブはそれに標識物が付加していてもよ
い。プローブに付加させる標識物としては、例えば、ビ
オチン(Biotin)、アビジン(Avidin)、ストレプトア
ビジン(Streptoavidin)、ディゴキシゲニン(Digoxig
enin)等の化学物質、アルカリフォスファターゼ(Alka
line phosphatase)、ルシフェラーゼ(Luciferase)、
ペルオキシダーゼ(Peroxidase)、β−ガラクトシダー
ゼ(β-galactosidase)等の酵素、フルオレセイン(Fl
uorescine)等の蛍光物質がある。プローブにビオチン
を付加させるには、例えば、ターミナルトランスフェラ
ーゼ(Terminal transferase)存在下で、プローブにビ
オチン化されたデオキシウリジン−5’−三リン酸(de
oxyuridine 5'-triphosphate)を添加する。ターミナル
トランスフェラーゼやビオチン化されたデオキシウリジ
ン−5’−三リン酸はキットとしてベーリンガーマンハ
イム(Boehringer Mannheim)社から購入できる。ビオチ
ン以外の標識物を付加する場合も市販のキットを使用す
ることができ、このようなキットは宝酒造(株)や東洋
紡(株)から購入できる。また、文献”モレキュラー・
クローニング”に記載されている方法に従って標識物を
付加させてもよい。
The constituent element of the probe for detecting / measuring the specific mRNA may be labeled with a radioisotope. For labeling with a radioisotope, for example, T4 polynucleotide kinase (T4 polynucleotide
(γ- 32 P) dATP is added to this in the presence of a kinase. General techniques for labeling with radioisotopes are described in the document "Molecular Cloning". T4 polynucleotide kinase was purchased from Toyobo Co., Ltd. (γ-
32 P) dATP can be purchased from Amersham. Further, the probe may have a label added thereto. Examples of the label added to the probe include biotin (Biotin), avidin (Avidin), streptavidin (Streptoavidin), and digoxigenin (Digoxig).
Chemical substances such as enin), alkaline phosphatase (Alka
line phosphatase), luciferase,
Enzymes such as peroxidase and β-galactosidase, fluorescein (Fl)
There are fluorescent substances such as uorescine). To add biotin to a probe, for example, biotinylated deoxyuridine-5′-triphosphate (de) in the presence of terminal transferase is used.
oxyuridine 5'-triphosphate) is added. Terminal transferase and biotinylated deoxyuridine-5'-triphosphate can be purchased as a kit from Boehringer Mannheim. A commercially available kit can also be used to add a labeled substance other than biotin, and such a kit can be purchased from Takara Shuzo Co., Ltd. or Toyobo Co., Ltd. In addition, the document “Molecular
Labels may be added according to the method described in "Cloning".

【0014】上記プローブを用いて特異的mRNAを検
出・測定するには、固定化したmRNAに標識化された
プローブを添加するか、あるいは、固定化したプローブ
にmRNAを添加しさらに標識化した別のプローブを添
加する。固定化したmRNAに標識化されたプローブを
添加して特異的mRNAを検出・測定するには、例え
ば、mRNAを含む試料を電気泳動して分子量で分離
し、mRNAをナイロンメンブレンフィルターに移して
固定し、標識化されたプローブを添加し、標識を検出・
測定する。この方法はノーザンブロット法と呼ばれてお
り、その一般的手法は文献”モレキュラー・クローニン
グ”に記載されている。固定化したプローブにmRNA
を添加しさらに標識化した別のプローブを添加して特異
的mRNAを検出・測定するには、例えば、プローブを
担体に固定し、mRNAを含む試料を添加し、別のプロ
ーブか又はオリゴ(dT)を標識化して添加し、標識を
検出・測定する。この方法はサンドイッチハイブリダイ
ゼーション法と呼ばれており、その一般的手法は「J.
A.マテウス他著、アナリティカル・バイオケミストリ
ー、169巻、1−25頁(1988)」(J.A.Matthe
wset al., Analytical Biochemistry, Vol.169, p.1-25
(1988))に記載されている。なお、検出・測定すべき
mRNAの塩基配列は、通常、センス(遺伝情報を担う
側の鎖に存在する塩基配列)であるので、プローブは、
配列番号1乃至配列番号35のいずれかの配列、それに
相同な配列又は配列番号1乃至35のいずれかの配列に
相補的な配列、を有するDNA断片のうち、通常はその
mRNAに相補的な配列であるものを使用する。本発明
により特異的mRNAを検出・測定する場合、使用する
器具・水等は、例えば、0.1%(容積)ジエチルピロ
カーボネート(Diethylpyrocarbonate、以下、DEPC
と略す)を添加し、37℃で一昼夜放置し、その後高圧
蒸気滅菌(121℃、1気圧)する等の処理を施し、R
NA分解酵素活性を極力抑制しておくのが望ましい。
In order to detect and measure a specific mRNA using the above-mentioned probe, it is necessary to add a labeled probe to the immobilized mRNA, or to add an mRNA to the immobilized probe and further label it. Add the probe. To detect and measure a specific mRNA by adding a labeled probe to the immobilized mRNA, for example, a sample containing mRNA is electrophoresed and separated by molecular weight, and the mRNA is transferred to a nylon membrane filter and immobilized. Then, add a labeled probe to detect the label.
taking measurement. This method is called Northern blotting, and its general method is described in the document "Molecular Cloning". MRNA on immobilized probe
In order to detect and measure the specific mRNA by adding another probe to which is added and labeled, for example, the probe is immobilized on a carrier, a sample containing mRNA is added, and another probe or oligo (dT ) Is labeled and added, and the label is detected and measured. This method is called a sandwich hybridization method, and its general method is described in "J.
A. Mateus et al., Analytical Biochemistry, 169, pp. 1-25 (1988) "(JAMatthe
wset al., Analytical Biochemistry, Vol.169, p.1-25
(1988)). Since the base sequence of mRNA to be detected / measured is usually sense (base sequence existing in the chain carrying the genetic information), the probe is
Of DNA fragments having a sequence of any of SEQ ID NOs: 1 to 35, a sequence homologous thereto or a sequence complementary to any of the sequences of SEQ ID NOs: 1 to 35, a sequence usually complementary to the mRNA thereof Use what is. When detecting and measuring a specific mRNA according to the present invention, the equipment, water, etc. used are, for example, 0.1% (volume) diethylpyrocarbonate (hereinafter, referred to as DEPC).
Abbreviated) and left at 37 ° C for a whole day and night, and then subjected to high-pressure steam sterilization (121 ° C, 1 atm).
It is desirable to suppress NA degrading enzyme activity as much as possible.

【0015】以下、本発明に係る特異的mRNAの塩基
配列について説明する。特異的mRNAの塩基配列は、
cDNAの塩基配列又はゲノミックDNAの塩基配列と
して、塩基配列に関するデータベースに収録されてい
る。このようなデータベースとしては、ジェンバンク
(GenBank)(登録商標)がある。ジェンバンクの情報
を入手するには、例えば、ジェンバンクの情報を収録し
たCD−ROM等の媒体と専用の情報検索用プログラム
を使用して塩基配列情報を出力する。このCD−ROM
と専用の情報検索用プログラムとしては「HIBIO」
(登録商標)(日立ソフトウェアエンジニアリング
(株)製)があり、宝酒造(株)から購入できる。ヒト
インターロイキン−1α、ヒトインターロイキン−1
β、ヒトインターロイキン−2、ヒトインターロイキン
−3、ヒトインターロイキン−4、ヒトインターロイキ
ン−5、ヒトインターロイキン−6、ヒトインターロイ
キン−7、ヒトインターロイキン−8、ヒトインターフ
ェロン−γ、ヒトβ−アクチン、ラットβ−アクチン、
マウスβ−アクチン、ラットセロトニン1cレセプター
及びラットセロトニン2レセプターの各mRNAの塩基
配列は、ジェンバンクのCD−ROM(R 74.0)
ではそれぞれ下記のファイルから得ることができる。な
お、これらのファイルで示されている配列は下記ファイ
ル名の右側に示した配列番号の配列である。
The base sequence of the specific mRNA according to the present invention will be described below. The base sequence of specific mRNA is
It is recorded in a database concerning nucleotide sequences as the nucleotide sequence of cDNA or the nucleotide sequence of genomic DNA. As such a database, there is GenBank (registered trademark). To obtain Genbank information, for example, a medium such as a CD-ROM in which Genbank information is recorded and a dedicated information search program are used to output the nucleotide sequence information. This CD-ROM
And "HIBIO" as a dedicated information retrieval program
(Registered trademark) (manufactured by Hitachi Software Engineering Co., Ltd.), which can be purchased from Takara Shuzo Co., Ltd. Human interleukin-1α, human interleukin-1
β, human interleukin-2, human interleukin-3, human interleukin-4, human interleukin-5, human interleukin-6, human interleukin-7, human interleukin-8, human interferon-γ, human β-actin, rat β-actin,
The nucleotide sequences of the mRNAs of mouse β-actin, rat serotonin 1c receptor and rat serotonin 2 receptor are shown in GenBank CD-ROM (R 74.0).
Then you can get each from the following files. The sequences shown in these files are the sequences with the sequence numbers shown on the right side of the file names below.

【0016】 ヒトインターロイキン−1α HUMIL1ALPH 配列番号36 ヒトインターロイキン−1β HUMIL1B 配列番号37 ヒトインターロイキン−2 HUMIL2 配列番号38 ヒトインターロイキン−3 HUMIL3A 配列番号39 ヒトインターロイキン−4 HUMIL4 配列番号40 ヒトインターロイキン−5 HUMIL5 配列番号41 ヒトインターロイキン−6 HUMIFNB2 配列番号42 ヒトインターロイキン−7 HUMIL7A 配列番号43 ヒトインターロイキン−8 HUMBTLP 配列番号44 ヒトインターフェロン−γ HUMIFNG 配列番号45 ヒトβ−アクチン HSAC07 配列番号46 ラットβ−アクチン RNAC01 配列番号47 マウスβ−アクチン MMACTBR 配列番号48 ラットセロトニン1cレセプター RATSR1CA 配列番号49 ラットセロトニン2レセプター RN5HT2 配列番号50Human interleukin-1α HUMIL1ALPH SEQ ID NO: 36 Human interleukin-1β HUMIL1B SEQ ID NO: 37 Human interleukin-2 HUMIL2 SEQ ID NO: 38 Human interleukin-3 HUMIL3A SEQ ID NO: 39 Human interleukin-4 HUMIL4 SEQ ID NO: 40 Human interleukin-4 Leukin-5 HUMIL5 SEQ ID NO: 41 Human interleukin-6 HUMILFNB2 SEQ ID NO: 42 Human interleukin-7 HUMIL7A SEQ ID NO: 43 Human interleukin-8 HUMBTLP SEQ ID NO: 44 Human interferon-γ HUMIFGNG SEQ ID NO: 45 Human β-actin HSAC07 SEQ ID NO: 46 Rat β-actin RNAC01 SEQ ID NO: 47 Mouse β-actin MMACTBR SEQ ID NO: 48 Rat Serotonin 1c Receptor RATSR1CA SEQ ID NO: 49 Rat Serotonin 2 Receptor RN5HT2 SEQ ID NO: 50

【0017】次に、配列番号1から35の配列の特徴
を、特異的mRNAの塩基配列と対応させて説明する。
配列番号1、2及び3の配列は、それぞれ、HUMIL
1ALPHの塩基配列の100番目から122番目の配
列、212番目から234番目の配列、及び452番目
から476番目の配列に相補的な配列、である。HUM
IL1ALPHの塩基配列は、ヒトインターロイキン−
1αの二本鎖cDNAのうち、遺伝情報を有する方の鎖
(センス鎖)の塩基配列である。したがって配列番号1
及び2の配列のDNA断片は、いずれもヒトインターロ
イキン−1αのmRNAをリバースPCR法で検出・測
定する場合のセンスプライマーとして利用でき、配列番
号3の配列のDNA断片はアンチセンスプライマーとし
て利用できる(センスプライマーは増幅されるDNAの
うち遺伝情報を有する方の鎖の合成の開始に、アンチセ
ンスプライマーはその相補鎖の合成の開始に、それぞれ
使用されるプライマーのこと。)。さらに、配列番号
1、2もしくは3の配列又はその相補的な配列のDNA
断片は、ヒトインターロイキン−1αのmRNAをノー
ザンブロット法やサンドイッチハイブリダイゼーション
法で検出・測定する場合のプローブとしても利用でき
る。配列番号1及び3の配列のDNA断片をプライマー
として用い、このmRNAをリバースPCR法で検出・
測定すると、増幅されるDNAの大きさは約370塩基
対(bp)となり、配列番号2及び3の配列のDNA断
片の場合は約260bpとなる。
Next, the features of the sequences of SEQ ID NOS: 1 to 35 will be described in association with the base sequence of specific mRNA.
The sequences of SEQ ID NOs: 1, 2 and 3 are HUMIL, respectively.
It is a sequence complementary to the 100th to 122nd sequence, the 212nd to 234th sequence, and the 452nd to 476th sequence of the 1ALPH base sequence. HUM
The base sequence of IL1ALPH is human interleukin-
Of the double-stranded cDNA of 1α, this is the base sequence of the strand having the genetic information (sense strand). Therefore SEQ ID NO: 1
The DNA fragments of sequences 2 and 2 can both be used as sense primers when detecting and measuring human interleukin-1α mRNA by the reverse PCR method, and the DNA fragment of sequence SEQ ID NO: 3 can be used as an antisense primer. (The sense primer is a primer used to start the synthesis of the strand having the genetic information in the amplified DNA, and the antisense primer is used to start the synthesis of the complementary strand thereof.). Furthermore, the DNA of the sequence of SEQ ID NO: 1, 2 or 3 or its complementary sequence
The fragment can also be used as a probe when detecting and measuring human interleukin-1α mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. Using the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 1 and 3 as primers, this mRNA was detected by the reverse PCR method.
When measured, the size of the amplified DNA is about 370 base pairs (bp), and the size of the DNA fragments of SEQ ID NOs: 2 and 3 is about 260 bp.

【0018】配列番号4、5及び6の配列は、それぞ
れ、HUMIL1Bの塩基配列の3617番目から36
36番目の配列、4370番目から4390番目の配
列、及び5817番目から5838番目の配列に相補的
な配列、である。HUMIL1Bの塩基配列はヒトイン
ターロイキン−1βのゲノミックDNAの塩基配列であ
り、配列番号4、5及び6の配列はいずれもHUMIL
1Bの塩基配列のエキソン部分に関するものである。し
たがって配列番号4及び5の配列のDNA断片は、いず
れもヒトインターロイキン−1βのmRNAをリバース
PCR法で検出・測定する場合のセンスプライマーとし
て利用でき、配列番号6の配列のDNA断片はアンチセ
ンスプライマーとして利用できる。さらに、配列番号
4、5もしくは6の配列又はその相補的な配列のDNA
断片は、ヒトインターロイキン−1βのmRNAをノー
ザンブロット法やサンドイッチハイブリダイゼーション
法で検出・測定する場合のプローブとしても利用でき
る。配列番号4及び6の配列のDNA断片をプライマー
として用い、このmRNAをリバースPCR法で検出・
測定すると、増幅されるDNAの大きさは約440bp
となり、配列番号5及び6の配列のDNA断片の場合は
約230bpとなる。なお、HUMIL1Bの塩基配列
のうち、446番目から908番目、971番目から1
535番目、1588番目から3575番目、3778
番目から4322番目、4488番目から5722番目
及び5854番目から6569番目の配列はイントロン
である。
The sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6 are 3617 to 36 of the base sequence of HUMIL1B, respectively.
The sequences complementary to the 36th sequence, the 4370th to 4390th sequences, and the 5817th to 5838th sequences. The base sequence of HUMIL1B is the base sequence of human interleukin-1β genomic DNA, and the sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6 are all HUMIL.
It relates to the exon portion of the base sequence of 1B. Therefore, the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOS: 4 and 5 can be used as sense primers when detecting and measuring the mRNA of human interleukin-1β by the reverse PCR method, and the DNA fragments having the sequence of SEQ ID NO: 6 are antisense. Can be used as a primer. Furthermore, the DNA of the sequence of SEQ ID NO: 4, 5 or 6 or its complementary sequence
The fragment can also be used as a probe when detecting and measuring human interleukin-1β mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. Using the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 4 and 6 as primers, this mRNA was detected by the reverse PCR method.
When measured, the size of amplified DNA is about 440bp
In the case of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 5 and 6, the length is about 230 bp. It should be noted that among the nucleotide sequences of HUMIL1B, 446th to 908th and 971th to 1st
535th, 1588th to 3575th, 3778th
The 4322nd, 4488th to 5722nd and 5854th to 6569th sequences are introns.

【0019】配列番号7、8、9及び10の配列は、そ
れぞれ、HUMIL2の塩基配列の582番目から60
6番目の配列、744番目から768番目の配列、32
02番目から3211番目と5057番目から5070
番目の配列に相補的な配列、及び5139番目から51
61番目の配列に相補的な配列、である。HUMIL2
の塩基配列はヒトインターロイキン−2のゲノミックD
NAの塩基配列であり、配列番号7、8、9及び10の
配列はいずれもHUMIL2の塩基配列のエキソン部分
に関するものである。したがって配列番号7及び8の配
列のDNA断片は、いずれもヒトインターロイキン−2
のmRNAをリバースPCR法で検出・測定する場合の
センスプライマーとして利用でき、配列番号9及び10
の配列のDNA断片はアンチセンスプライマーとして利
用できる。さらに、配列番号7、8、9もしくは10の
配列又はその相補的な配列のDNA断片は、ヒトインタ
ーロイキン−2のmRNAをノーザンブロット法やサン
ドイッチハイブリダイゼーション法で検出・測定する場
合のプローブとしても利用できる。配列番号7及び10
の配列のDNA断片をプライマーとして用い、このmR
NAをリバースPCR法で検出・測定すると、増幅され
るDNAの大きさは約350bpとなり、配列番号8及
び9の配列のDNA断片の場合は約190bpとなる。
なお、HUMIL2の塩基配列のうち、625番目から
714番目、775番目から3067番目及び3212
番目から5056番目の配列はイントロンである。
The sequences of SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 10 are respectively 582 to 60 of the base sequence of HUMIL2.
6th array, 744th to 768th arrays, 32
02nd to 3211th and 5057th to 5070
The sequence complementary to the th sequence, and 5139 to 51
The sequence is complementary to the 61st sequence. HUMIL2
The nucleotide sequence of is the genomic D of human interleukin-2.
The nucleotide sequences of NA, and the sequences of SEQ ID NOS: 7, 8, 9 and 10 all relate to the exon portion of the nucleotide sequence of HUMIL2. Therefore, the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 7 and 8 are both human interleukin-2.
Can be used as a sense primer in the case of detecting / measuring the mRNA of Escherichia coli by the reverse PCR method.
The DNA fragment having the sequence of can be used as an antisense primer. Furthermore, the DNA fragment of the sequence of SEQ ID NO: 7, 8, 9 or 10 or its complementary sequence may also be used as a probe when detecting and measuring human interleukin-2 mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. Available. SEQ ID NOS: 7 and 10
Using the DNA fragment of the sequence of
When NA is detected and measured by the reverse PCR method, the size of the amplified DNA is about 350 bp, and the size of the DNA fragments of SEQ ID NOs: 8 and 9 is about 190 bp.
In the base sequence of HUMIL2, 625th to 714th, 775th to 3067th and 3212th
The sequence from the 50th position to the 5056th position is an intron.

【0020】配列番号11及び12の配列は、それぞ
れ、HUMIL3Aの塩基配列の142番目から163
番目の配列、及び441番目から462番目の配列に相
補的な配列、である。HUMIL3Aの塩基配列は、ヒ
トインターロイキン−3の二本鎖cDNAのうち、セン
ス鎖の塩基配列である。したがって配列番号11の配列
のDNA断片は、ヒトインターロイキン−3のmRNA
をリバースPCR法で検出・測定する場合のセンスプラ
イマーとして利用でき、配列番号12の配列のDNA断
片はアンチセンスプライマーとして利用できる。さら
に、配列番号11もしくは12の配列又はその相補的な
配列のDNA断片は、ヒトインターロイキン−3のmR
NAをノーザンブロット法やサンドイッチハイブリダイ
ゼーション法で検出・測定する場合のプローブとしても
利用できる。配列番号11及び12の配列のDNA断片
をプライマーとして用い、このmRNAをリバースPC
R法で検出・測定すると、増幅されるDNAの大きさは
約320bpとなる。
The sequences of SEQ ID NOs: 11 and 12 are 163rd to 163rd of the base sequence of HUMIL3A, respectively.
The second sequence and the sequence complementary to the 441st to 462nd sequences. The base sequence of HUMIL3A is the base sequence of the sense strand in the double-stranded cDNA of human interleukin-3. Therefore, the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 11 is the mRNA of human interleukin-3.
Can be used as a sense primer for detection / measurement by the reverse PCR method, and the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 12 can be used as an antisense primer. Furthermore, the DNA fragment of the sequence of SEQ ID NO: 11 or 12 or its complementary sequence is the human interleukin-3 mRNA.
It can also be used as a probe when detecting and measuring NA by Northern blotting or sandwich hybridization. Using the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 11 and 12 as a primer,
When detected and measured by the R method, the size of the amplified DNA is about 320 bp.

【0021】配列番号13、14及び15の配列は、そ
れぞれ、HUMIL4の塩基配列の139番目から16
0番目の配列、210番目から231番目の配列、及び
480番目から501番目の配列に相補的な配列、であ
る。HUMIL4の塩基配列は、ヒトインターロイキン
−4の二本鎖cDNAのうち、センス鎖の塩基配列であ
る。したがって配列番号13及び14の配列のDNA断
片は、いずれもヒトインターロイキン−4のmRNAを
リバースPCR法で検出・測定する場合のセンスプライ
マーとして利用でき、配列番号15の配列のDNA断片
はアンチセンスプライマーとして利用できる。さらに、
配列番号13、14もしくは15の配列又はその相補的
な配列のDNA断片は、ヒトインターロイキン−4のm
RNAをノーザンブロット法やサンドイッチハイブリダ
イゼーション法で検出・測定する場合のプローブとして
も利用できる。配列番号13及び15の配列のDNA断
片をプライマーとして用い、このmRNAをリバースP
CR法で検出・測定すると、増幅されるDNAの大きさ
は約360bpとなり、配列番号14及び15の配列の
DNA断片の場合は約290bpとなる。
The sequences of SEQ ID NOs: 13, 14 and 15 are from 139th to 16th of the base sequence of HUMIL4, respectively.
It is a sequence complementary to the 0th sequence, the 210th to 231st sequences, and the 480th to 501st sequences. The base sequence of HUMIL4 is the base sequence of the sense strand in the double-stranded cDNA of human interleukin-4. Therefore, the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 13 and 14 can both be used as sense primers when detecting and measuring the mRNA of human interleukin-4 by the reverse PCR method, and the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 15 is antisense. Can be used as a primer. further,
The DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 13, 14 or 15 or its complementary sequence is the human interleukin-4 m fragment.
It can also be used as a probe when detecting and measuring RNA by Northern blotting or sandwich hybridization. Using the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 13 and 15 as primers, this mRNA was labeled with reverse P
When detected and measured by the CR method, the amplified DNA has a size of about 360 bp, and the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 14 and 15 have a size of about 290 bp.

【0022】配列番号16及び17の配列は、それぞ
れ、HUMIL5の塩基配列の619番目から640番
目の配列、及び2139番目から2160番目の配列に
相補的な配列、である。HUMIL5の塩基配列はヒト
インターロイキン−5のゲノミックDNAの塩基配列で
あり、配列番号16及び17の配列はいずれもHUMI
L5の塩基配列のエキソン部分に関するものである。し
たがって配列番号16の配列のDNA断片は、ヒトイン
ターロイキン−5のmRNAをリバースPCR法で検出
・測定する場合のセンスプライマーとして利用でき、配
列番号17の配列のDNA断片はアンチセンスプライマ
ーとして利用できる。さらに、配列番号16もしくは1
7の配列又はその相補的な配列のDNA断片は、ヒトイ
ンターロイキン−5のmRNAをノーザンブロット法や
サンドイッチハイブリダイゼーション法で検出・測定す
る場合のプローブとしても利用できる。配列番号16及
び17の配列のDNA断片をプライマーとして用い、こ
のmRNAをリバースPCR法で検出・測定すると、増
幅されるDNAの大きさは約280bpとなる。なお、
HUMIL5の塩基配列のうち、697番目から904
番目、938番目から1882番目及び2012番目か
ら2117番目の配列はイントロンである。
The sequences of SEQ ID NOs: 16 and 17 are sequences complementary to the 619th to 640th sequences and the 2139th to 2160th sequences of the base sequence of HUMIL5, respectively. The base sequence of HUMIL5 is the base sequence of human interleukin-5 genomic DNA, and the sequences of SEQ ID NOs: 16 and 17 are both HUMI.
It relates to the exon part of the base sequence of L5. Therefore, the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 16 can be used as a sense primer when detecting and measuring human interleukin-5 mRNA by the reverse PCR method, and the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 17 can be used as an antisense primer. . Furthermore, SEQ ID NO: 16 or 1
The DNA fragment of sequence 7 or its complementary sequence can also be used as a probe when detecting and measuring human interleukin-5 mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. When the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 16 and 17 are used as primers and this mRNA is detected and measured by the reverse PCR method, the size of the amplified DNA is about 280 bp. In addition,
From the 697th position to the 904th position of the base sequence of HUMIL5
The sequences 938, 1882 to 1882 and 2012 to 2117 are introns.

【0023】配列番号18、19、20及び21の配列
は、それぞれ、HUMIFNB2の塩基配列の225番
目から247番目の配列、282番目から305番目の
配列、453番目から475番目の配列に相補的な配
列、及び630番目から651番目の配列に相補的な配
列、である。HUMIFNB2の塩基配列は、ヒトイン
ターロイキン−6の二本鎖cDNAのうち、センス鎖の
塩基配列である。したがって配列番号18及び19の配
列のDNA断片は、いずれもヒトインターロイキン−6
のmRNAをリバースPCR法で検出・測定する場合の
センスプライマーとして利用でき、配列番号20及び2
1の配列のDNA断片はアンチセンスプライマーとして
利用できる。さらに、配列番号18、19、20もしく
は21の配列又はその相補的な配列のDNA断片は、ヒ
トインターロイキン−6のmRNAをノーザンブロット
法やサンドイッチハイブリダイゼーション法で検出・測
定する場合のプローブとしても利用できる。配列番号1
8及び21の配列のDNA断片をプライマーとして用
い、このmRNAをリバースPCR法で検出・測定する
と、増幅されるDNAの大きさは約430bpとなり、
配列番号19及び20の配列のDNA断片の場合は約1
90bpとなる。
The sequences of SEQ ID NOs: 18, 19, 20 and 21 are complementary to the 225th to 247th sequences, the 282nd to 305th sequences, and the 453rd to 475th sequences of the base sequence of HUMIFNB2, respectively. The sequence and a sequence complementary to the 630th to 651st sequences. The base sequence of HUMIFNB2 is the base sequence of the sense strand in the double-stranded cDNA of human interleukin-6. Therefore, the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 18 and 19 are both human interleukin-6.
Can be used as a sense primer in the case of detecting / measuring the mRNA of Escherichia coli by the reverse PCR method.
The DNA fragment of sequence 1 can be used as an antisense primer. Furthermore, the DNA fragment of the sequence of SEQ ID NO: 18, 19, 20 or 21 or its complementary sequence can also be used as a probe for detecting and measuring human interleukin-6 mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. Available. Sequence number 1
When the DNA fragments of the sequences 8 and 21 were used as primers and this mRNA was detected and measured by the reverse PCR method, the size of the amplified DNA was about 430 bp,
About 1 in the case of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 19 and 20
It becomes 90 bp.

【0024】配列番号22、23及び24の配列は、そ
れぞれ、HUMIL7Aの塩基配列の498番目から5
20番目の配列、616番目から638番目の配列、及
び897番目から918番目の配列に相補的な配列、で
ある。HUMIL7Aの塩基配列は、ヒトインターロイ
キン−7の二本鎖cDNAのうち、センス鎖の塩基配列
である。したがって配列番号22及び23の配列のDN
A断片は、いずれもヒトインターロイキン−7のmRN
AをリバースPCR法で検出・測定する場合のセンスプ
ライマーとして利用でき、配列番号24の配列のDNA
断片はアンチセンスプライマーとして利用できる。さら
に、配列番号22、23もしくは24の配列又はその相
補的な配列のDNA断片は、ヒトインターロイキン−7
のmRNAをノーザンブロット法やサンドイッチハイブ
リダイゼーション法で検出・測定する場合のプローブと
しても利用できる。配列番号22及び24の配列のDN
A断片をプライマーとして用い、このmRNAをリバー
スPCR法で検出・測定すると、増幅されるDNAの大
きさは約420bpとなり、配列番号23及び24の配
列のDNA断片の場合は約300bpとなる。
The sequences of SEQ ID NOs: 22, 23 and 24 are 498th to 5th base sequences of HUMIL7A, respectively.
It is a sequence complementary to the 20th sequence, the 616th to 638th sequences, and the 897th to 918th sequences. The base sequence of HUMIL7A is the base sequence of the sense strand in the double-stranded cDNA of human interleukin-7. Therefore, the DN of the sequences of SEQ ID NOs: 22 and 23
All of the A fragments are human interleukin-7 mRN.
A DNA having the sequence of SEQ ID NO: 24, which can be used as a sense primer when detecting and measuring A by the reverse PCR method.
The fragment can be used as an antisense primer. Furthermore, the DNA fragment of the sequence of SEQ ID NO: 22, 23 or 24 or its complementary sequence is human interleukin-7.
Can also be used as a probe when detecting / measuring the above mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. DN of sequences SEQ ID NOs: 22 and 24
When the A fragment is used as a primer and this mRNA is detected and measured by the reverse PCR method, the size of the amplified DNA is about 420 bp, and that of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 23 and 24 is about 300 bp.

【0025】配列番号25及び26の配列は、それぞ
れ、HUMBTLPの塩基配列の146番目から167
番目の配列、及び355番目から376番目の配列に相
補的な配列、である。HUMBTLPの塩基配列は、ヒ
トインターロイキン−8の二本鎖cDNAのうち、セン
ス鎖の塩基配列である。したがって配列番号25の配列
のDNA断片は、ヒトインターロイキン−8のmRNA
をリバースPCR法で検出・測定する場合のセンスプラ
イマーとして利用でき、配列番号26の配列のDNA断
片はアンチセンスプライマーとして利用できる。さら
に、配列番号25もしくは26の配列又はその相補的な
配列のDNA断片は、ヒトインターロイキン−8のmR
NAをノーザンブロット法やサンドイッチハイブリダイ
ゼーション法で検出・測定する場合のプローブとしても
利用できる。配列番号25及び26の配列のDNA断片
をプライマーとして用い、このmRNAをリバースPC
R法で検出・測定すると、増幅されるDNAの大きさは
約230bpとなる。
The sequences of SEQ ID NOs: 25 and 26 are respectively 146th to 167th of the base sequence of HUMBTLP.
Th sequence and a sequence complementary to the 355th to 376th sequences. The base sequence of HUMBTLP is the base sequence of the sense strand in the double-stranded cDNA of human interleukin-8. Therefore, the DNA fragment of the sequence of SEQ ID NO: 25 is a human interleukin-8 mRNA.
Can be used as a sense primer for detection and measurement by reverse PCR, and the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 26 can be used as an antisense primer. Furthermore, the DNA fragment of the sequence of SEQ ID NO: 25 or 26 or its complementary sequence is the human interleukin-8 mR.
It can also be used as a probe when detecting and measuring NA by Northern blotting or sandwich hybridization. Using the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 25 and 26 as a primer,
When detected and measured by the R method, the size of the amplified DNA is about 230 bp.

【0026】配列番号27、28及び29の配列は、そ
れぞれ、HUMIFNGの塩基配列の502番目から5
23番目の配列、1834番目から1855番目の配
列、及び2138番目から2160番目の配列に相補的
な配列、である。HUMIFNGの塩基配列はヒトイン
ターフェロン−γのゲノミックDNAの塩基配列であ
り、配列番号27、28及び29の配列はいずれもHU
MIFNGの塩基配列のエキソン部分に関するものであ
る。したがって配列番号27及び28の配列のDNA断
片は、ヒトインターフェロン−γのmRNAをリバース
PCR法で検出・測定する場合のセンスプライマーとし
て利用でき、配列番号29の配列のDNA断片はアンチ
センスプライマーとして利用できる。さらに、配列番号
27、28もしくは29の配列又はその相補的な配列の
DNA断片は、ヒトインターフェロン−γのmRNAを
ノーザンブロット法やサンドイッチハイブリダイゼーシ
ョン法で検出・測定する場合のプローブとしても利用で
きる。配列番号27及び29の配列のDNA断片をプラ
イマーとして用い、このmRNAをリバースPCR法で
検出・測定すると、増幅されるDNAの大きさは約32
0bpとなり、配列番号28及び29の配列のDNA断
片の場合は約230bpとなる。なお、HUMIFNG
の塩基配列のうち、589番目から1827番目、18
97番目から1991番目及び2175番目から459
9番目の配列はイントロンである。
The sequences of SEQ ID NOs: 27, 28 and 29 are respectively from 502nd to 5th of the base sequence of HUMIFNG.
The sequence complementary to the 23rd sequence, the 1834th to 1855th sequences, and the 2138th to 2160th sequences. The base sequence of HUMIFNG is the base sequence of genomic DNA of human interferon-γ, and the sequences of SEQ ID NOs: 27, 28 and 29 are all HU.
It relates to the exon portion of the base sequence of MIFNG. Therefore, the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 27 and 28 can be used as sense primers when detecting and measuring human interferon-γ mRNA by the reverse PCR method, and the DNA fragments having the sequence of SEQ ID NO: 29 can be used as an antisense primer. it can. Furthermore, the DNA fragment of the sequence of SEQ ID NO: 27, 28 or 29 or its complementary sequence can also be used as a probe when detecting and measuring human interferon-γ mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. When the DNA fragments of SEQ ID NOS: 27 and 29 were used as primers and this mRNA was detected and measured by the reverse PCR method, the size of the amplified DNA was about 32.
It becomes 0 bp, and in the case of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 28 and 29, it becomes about 230 bp. In addition, HUMIFNG
Of the nucleotide sequences of 589th to 1827th, 18th
97th to 1991th and 2175th to 459th
The 9th sequence is an intron.

【0027】配列番号30及び31の配列は、それぞ
れ、HSAC07の塩基配列の101番目から118番
目の配列、及び422番目から441番目の配列に相補
的な配列、である。HSAC07の塩基配列は、ヒトβ
−アクチンの二本鎖cDNAのうち、センス鎖の塩基配
列である。したがって配列番号30の配列のDNA断片
は、ヒトβ−アクチンのmRNAをリバースPCR法で
検出・測定する場合のセンスプライマーとして利用で
き、配列番号31の配列のDNA断片はアンチセンスプ
ライマーとして利用できる。さらに、配列番号30もし
くは31の配列又はその相補的な配列のDNA断片は、
ヒトβ−アクチンのmRNAをノーザンブロット法やサ
ンドイッチハイブリダイゼーション法で検出・測定する
場合のプローブとしても利用できる。また、配列番号3
0及び31の配列は、それぞれ、RNAC01の塩基配
列の1303番目から1320番目の配列、及び217
5番目から2194番目の配列に相補的な配列、でもあ
る。RNAC01の塩基配列はラットのβ−アクチンの
ゲノミックDNAの塩基配列であり、配列番号30及び
31の配列はいずれもRNAC01の塩基配列のエキソ
ン部分に関するものでもある。さらに、配列番号30及
び31の配列は、それぞれ、MMACTBRの塩基配列
の140番目から157番目の配列、及び461番目か
ら480番目の配列に相補的な配列、でもある。MMA
CTBRの塩基配列は、マウスのβ−アクチンの二本鎖
cDNAのうち、センス鎖の塩基配列である。したがっ
て配列番号30の配列のDNA断片は、ヒト、ラット又
はマウスのβ−アクチンのmRNAをリバースPCR法
で検出・測定する場合のセンスプライマーとして共通に
利用でき、配列番号31の配列のDNA断片はアンチセ
ンスプライマーとして共通に利用できる。さらに、配列
番号30もしくは31の配列又はその相補的な配列のD
NA断片は、ヒト、ラット又はマウスのβ−アクチンの
mRNAをノーザンブロット法やサンドイッチハイブリ
ダイゼーション法で検出・測定する場合の共通のプロー
ブとしても利用できる。配列番号30及び31の配列の
DNA断片をプライマーとして用い、これらのmRNA
をリバースPCR法で検出・測定すると、増幅されるD
NAの大きさはいずれも約340bpとなる。なお、R
NAC01の塩基配列のうち、309番目から1237
番目、1367番目から1453番目、1694番目か
ら2157番目、2597番目から2684番目及び2
867番目から2990番目の配列はイントロンであ
る。
The sequences of SEQ ID NOs: 30 and 31 are sequences complementary to the 101st to 118th sequences and the 422nd to 441st sequences of the base sequence of HSAC07, respectively. The base sequence of HSAC07 is human β
-The base sequence of the sense strand of the double-stranded cDNA of actin. Therefore, the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 30 can be used as a sense primer when detecting and measuring human β-actin mRNA by the reverse PCR method, and the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 31 can be used as an antisense primer. Furthermore, the DNA fragment of the sequence of SEQ ID NO: 30 or 31, or its complementary sequence is
It can also be used as a probe when detecting and measuring human β-actin mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. Also, SEQ ID NO: 3
The sequences 0 and 31 are the 1303rd to 1320th sequences of the base sequence of RNAC01, and 217, respectively.
It is also a sequence complementary to the 5th to 2194th sequences. The base sequence of RNAC01 is the base sequence of rat β-actin genomic DNA, and the sequences of SEQ ID NOs: 30 and 31 both relate to the exon portion of the base sequence of RNAC01. Furthermore, the sequences of SEQ ID NOs: 30 and 31 are also sequences complementary to the 140th to 157th sequences and the 461st to 480th sequences of the base sequence of MMACTBR, respectively. MMA
The base sequence of CTBR is the base sequence of the sense strand of the double-stranded cDNA of mouse β-actin. Therefore, the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 30 can be commonly used as a sense primer when detecting and measuring the mRNA of human, rat or mouse β-actin by the reverse PCR method. It can be commonly used as an antisense primer. Furthermore, D of the sequence of SEQ ID NO: 30 or 31 or its complementary sequence
The NA fragment can also be used as a common probe when detecting and measuring human, rat or mouse β-actin mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. Using the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 30 and 31 as primers,
Is detected and measured by the reverse PCR method, amplified D
The size of NA is about 340 bp in each case. In addition, R
From the nucleotide sequence of NAC01, from the 309th position to the 1237th position
Th, 1367 to 1453, 1694 to 2157, 2597 to 2684, and 2
The 867th to 2990th sequences are introns.

【0028】配列番号32及び33の配列は、それぞ
れ、RATSR1CAの塩基配列の994番目から10
13番目の配列、及び1349番目から1368番目の
配列に相補的な配列、である。RATSR1CAの塩基
配列は、ラットのセロトニン1cレセプターの二本鎖c
DNAのうち、センス鎖の塩基配列である。したがって
配列番号32の配列のDNA断片は、ラットのセロトニ
ン1cレセプターのmRNAをリバースPCR法で検出
・測定する場合のセンスプライマーとして利用でき、配
列番号33の配列のDNA断片はアンチセンスプライマ
ーとして利用できる。さらに、配列番号32もしくは3
3の配列又はその相補的な配列のDNA断片は、ラット
のセロトニン1cレセプターのmRNAをノーザンブロ
ット法やサンドイッチハイブリダイゼーション法で検出
・測定する場合のプローブとしても利用できる。配列番
号32及び33の配列のDNA断片をプライマーとして
用い、このmRNAをリバースPCR法で検出・測定す
ると、増幅されるDNAの大きさは約380bpとな
る。
The sequences of SEQ ID NOs: 32 and 33 are respectively from the 994th position to the 10th position of the base sequence of RASSR1CA.
It is a sequence complementary to the 13th sequence and the 1349th to 1368th sequences. The base sequence of RATSR1CA is the double-stranded c of rat serotonin 1c receptor.
It is the base sequence of the sense strand of DNA. Therefore, the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 32 can be used as a sense primer when detecting and measuring mRNA of rat serotonin 1c receptor by the reverse PCR method, and the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 33 can be used as an antisense primer. . Furthermore, SEQ ID NO: 32 or 3
The DNA fragment of sequence 3 or its complementary sequence can also be used as a probe when detecting and measuring rat serotonin 1c receptor mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. When the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 32 and 33 are used as primers and this mRNA is detected and measured by the reverse PCR method, the size of the amplified DNA is about 380 bp.

【0029】配列番号34及び35の配列は、それぞ
れ、RN5HT2の塩基配列の1115番目から113
1番目の配列、及び1510番目から1526番目の配
列に相補的な配列、である。RN5HT2の塩基配列
は、ラットのセロトニン2レセプターの二本鎖cDNA
のうち、センス鎖の塩基配列である。したがって配列番
号34の配列のDNA断片は、ラットのセロトニン2レ
セプターのmRNAをリバースPCR法で検出・測定す
る場合のセンスプライマーとして利用でき、配列番号3
5の配列のDNA断片はアンチセンスプライマーとして
利用できる。さらに、配列番号34もしくは35の配列
又はその相補的な配列のDNA断片は、ラットのセロト
ニン2レセプターのmRNAをノーザンブロット法やサ
ンドイッチハイブリダイゼーション法で検出・測定する
場合のプローブとしても利用できる。配列番号34及び
35の配列のDNA断片をプライマーとして用い、この
mRNAをリバースPCR法で検出・測定すると、増幅
されるDNAの大きさは約420bpとなる。
The sequences of SEQ ID NOs: 34 and 35 are respectively 1115th to 113rd of the base sequence of RN5HT2.
It is a sequence complementary to the 1st sequence and the 1510th to 1526th sequences. The nucleotide sequence of RN5HT2 is a double-stranded cDNA of rat serotonin 2 receptor.
Of these, the base sequence of the sense strand. Therefore, the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 34 can be used as a sense primer when detecting and measuring mRNA of rat serotonin 2 receptor by the reverse PCR method.
The DNA fragment of sequence 5 can be used as an antisense primer. Furthermore, the DNA fragment having the sequence of SEQ ID NO: 34 or 35 or a sequence complementary thereto can also be used as a probe when detecting and measuring rat serotonin 2 receptor mRNA by Northern blotting or sandwich hybridization. When the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 34 and 35 are used as primers and this mRNA is detected and measured by the reverse PCR method, the size of the amplified DNA is about 420 bp.

【0030】[0030]

【実施例】以下、実施例により本発明を詳細に説明す
る。 実施例1 ヒトインターロイキン−1α及びβ (a)ヒトインターロイキン1α及びβのmRNAの測
定 配列番号1から6の配列のDNA断片を、それぞれDN
A合成機(アプライドバイオシステムズ(Applied Bios
ystems)社、394型)で合成し、遠心エバポレーター
(東京理科器械製、VE−100型)で乾燥させ、濃度
が100μg/mlになるようにDEPCで処理した水
に溶解した。0.5mlのチューブ4本に、配列番号1
及び3の配列のDNA断片をそれぞれ1μlずつ入れ、
さらに、PCR用10倍濃縮緩衝液(プロメガ社)1μ
l、25mM塩化マグネシウム溶液(プロメガ社)0.
4μl、10mM dNTP溶液(プロメガ社)0.8
μl及びタックポリメラーゼ(5000unit/m
l)(プロメガ社)0.1μlを入れた。そして、試料
として、DEPC処理水、ヒトインターロイキン1αの
cDNAクローン水溶液(50アトモル/ml)(クロ
ーンテック社)、ヒト単球のcDNAライブラリー水溶
液(1.2×106pfu/μl)(クローンテック
社)又はヒトゲノミックDNA水溶液(100μg/m
l)(クローンテック社)(特異性検討用)を1μlを
入れ、DEPC処理水で全量を10μlにした。配列番
号2及び3の配列のDNA断片についても同様に反応液
を調製した。一方、別に0.5mlのチューブ4本を用
意し、配列番号4及び6の配列のDNA断片をそれぞれ
1μlずつ入れ、試料として、DEPC処理水、ヒトイ
ンターロイキン1βのcDNAクローン水溶液(50ア
トモル/ml)(クローンテック社)、ヒト単球のcD
NAライブラリー水溶液又はヒトゲノミックDNA水溶
液を用い、同様に反応液を調製した。配列番号5及び6
の配列のDNA断片についても同様に反応液を調製し
た。
The present invention will be described in detail below with reference to examples. Example 1 Human interleukin-1α and β (a) Measurement of mRNA of human interleukin 1α and β DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 1 to 6 were respectively subjected to DN.
A Synthesizer (Applied Biosystems)
ystems), 394 type), dried with a centrifugal evaporator (Tokyo Scientific Instruments, VE-100 type), and dissolved in water treated with DEPC to a concentration of 100 μg / ml. SEQ ID NO: 1 in 4 0.5 ml tubes
Add 1 μl of each of the DNA fragments of sequences 3 and 3,
Furthermore, 1x 10x concentrated buffer for PCR (Promega)
1, 25 mM magnesium chloride solution (Promega)
4 μl, 10 mM dNTP solution (Promega) 0.8
μl and tack polymerase (5000 unit / m
l) (Promega) 0.1 μl was added. As samples, DEPC-treated water, human interleukin 1α cDNA clone aqueous solution (50 attomole / ml) (Clontech), human monocyte cDNA library aqueous solution (1.2 × 10 6 pfu / μl) (clones) Tech Co., Ltd.) or human genomic DNA aqueous solution (100 μg / m
1) (Clontech) (for specificity study) (1 μl) was added, and the total amount was adjusted to 10 μl with DEPC-treated water. Reaction solutions were similarly prepared for the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 2 and 3. Separately, four 0.5 ml tubes were prepared, and 1 μl of each of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 4 and 6 was put therein, and as samples, DEPC-treated water and human interleukin 1β cDNA clone aqueous solution (50 attomole / ml ) (Clontech), human monocyte cd
A reaction solution was similarly prepared using an NA library aqueous solution or a human genomic DNA aqueous solution. SEQ ID NOs: 5 and 6
A reaction solution was prepared in the same manner for the DNA fragment having the sequence of.

【0031】これらの反応液にミネラルオイル(シグマ
社)を1滴重相し、DNAサーマルサイクラー(パーキ
ンエルマーシータス社)でPCRを行った。PCR条件
は94℃で10分間加熱後、55℃で1.5分、72℃
で4分、94℃で1.5分のサイクルを30回繰り返し
た。PCR終了後、反応液10μlを取り、これにロー
ディングバッファー(0.25%ブロモフェノールブル
ー(Bromophenol blue)、0.25%キシレンシアノー
ルFF(Xylenecyanol FF)、15%フィコールタイプ
400(Ficol type400)を含む水溶液)2μlを加
え、5μg/mlの臭化エチジウムを含む1.5%アガ
ロースゲルに注ぎ、3V/cmで電気泳動した。電気泳
動終了後、アガロースゲルに紫外線を照射し、バンドを
観察した。
One drop of mineral oil (Sigma) was added to these reaction solutions, and PCR was carried out with a DNA thermal cycler (Perkin Elmer Cetus). PCR conditions: heating at 94 ° C for 10 minutes, then at 55 ° C for 1.5 minutes, 72 ° C
A cycle of 4 minutes at 94 ° C. and 1.5 minutes at 94 ° C. was repeated 30 times. After the PCR was completed, 10 μl of the reaction solution was taken and loading buffer (0.25% Bromophenol blue, 0.25% Xylenecyanol FF), 15% Ficol type 400 (Ficol type 400) was added. 2 μl of an aqueous solution containing 5 μg / ml was added to 1.5% agarose gel containing ethidium bromide and electrophoresed at 3 V / cm. After the electrophoresis was completed, the agarose gel was irradiated with ultraviolet rays to observe bands.

【0032】図1は、上記の電気泳動で観察されたバン
ドの様子を示した図である。図中、レーン1及び10は
分子量マーカーを泳動したものであり、レーン1上の各
バンドの左側にある数字はそれぞれのバンドの分子量
(単位は塩基対(bp))を示す。レーン2〜5、6〜
9、11〜14並びに15〜18は、それぞれ、配列番
号2及び3、1及び3、5及び6並びに4及び6の配列
のDNA断片を用いた場合の反応液を泳動したものを示
す。レーン2、6、11及び15は、いずれも試料とし
てDEPC処理水を、レーン3及び7は、いずれもヒト
インターロイキン1αのcDNAクローン水溶液を、レ
ーン12及び16は、いずれもヒトインターロイキン1
βのcDNAクローン水溶液を、レーン4、8、13及
び17は、いずれもヒト単球のcDNAライブラリー水
溶液を、レーン5、9、14及び18は、いずれもヒト
ゲノミックDNA水溶液を、それぞれ用いた場合の反応
液を泳動したものを示す。図中、レーン3及び4、レー
ン7及び8、レーン12及び13並びにレーン16及び
17には、それぞれほぼ同じ位置にバンドが観察され、
これらのバンドの分子量は予想される値(それぞれ、約
260bp、約370bp、約230bp並びに約44
0bp)と一致した。一方、レーン2、5、6、9、1
1、14、15及び18には全くバンドが観察されなか
った。
FIG. 1 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above electrophoresis. In the figure, lanes 1 and 10 are electrophoresed with molecular weight markers, and the numbers to the left of each band on lane 1 indicate the molecular weight of each band (unit is base pair (bp)). Lanes 2-5, 6-
9, 11 to 14 and 15 to 18 show electrophoresed reaction solutions when the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 2 and 3, 1 and 3, 5 and 6, and 4 and 6 were used, respectively. Lanes 2, 6, 11 and 15 are all samples of DEPC-treated water, lanes 3 and 7 are all human interleukin 1α cDNA clone aqueous solutions, and lanes 12 and 16 are all human interleukin 1 samples.
An aqueous β cDNA clone solution was used for lanes 4, 8, 13 and 17, and an aqueous human monocyte cDNA library solution, and lanes 5, 9, 14 and 18 for human genomic DNA solution. The electrophoresed reaction solution is shown. In the figure, bands are observed at almost the same positions in lanes 3 and 4, lanes 7 and 8, lanes 12 and 13, and lanes 16 and 17, respectively.
The molecular weights of these bands are expected (about 260 bp, about 370 bp, about 230 bp and about 44 bp, respectively).
0 bp). On the other hand, lanes 2, 5, 6, 9, 1
No bands were observed at 1, 14, 15 and 18.

【0033】(b) 本発明のプライマーと市販のプラ
イマーとの感度の比較 対照のプライマーとして、配列番号51及び52の配列
のDNA断片を使用した。ヒト単球のcDNAライブラ
リー水溶液をDEPC処理水で希釈し、原液、1/10
希釈、1/100希釈、1/1000希釈、1/100
00希釈、1/100000希釈、1/1000000
希釈及び1/1000000希釈、の希釈系列を調製し
た。0.5mlのチューブ10本に、対照のプライマー
をそれぞれ1μlずつ入れ、試料として、DEPC処理
水、ヒトインターロイキン1αのcDNAクローン水溶
液又は上記希釈系列を使用し、上記(a)と同様に反応
液を調製した。一方、別に0.5mlのチューブ10本
を用意し、配列番号1及び3の配列のDNA断片をそれ
ぞれ1μlずつ入れ、上記と同様に反応液を調製した。
同様に、配列番号2及び3の配列のDNA断片について
も反応液を調製した。これらの反応液について上記
(a)と同様にPCRを行い、電気泳動してバンドを観
察した。対照のプライマーでは、希釈しなかったヒト単
球のcDNAライブラリー水溶液はバンドが観察された
が、希釈したものはバンドが観察されなかった。一方、
配列番号1及び3の配列のDNA断片では、ヒト単球の
cDNAライブラリー水溶液を1/10000に希釈し
たものまでバンドが観察され、配列番号2及び3の配列
のDNA断片では1/1000に希釈したものまでバン
ドが観察された。
(B) Comparison of sensitivity between the primer of the present invention and a commercially available primer As control primers, DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 51 and 52 were used. An aqueous solution of human monocyte cDNA library was diluted with DEPC-treated water to prepare a stock solution, 1/10.
Dilution, 1/100 dilution, 1/1000 dilution, 1/100
00 dilution, 1/100000 dilution, 1 / 1,000,000
Dilution series of dilution and 1/1000000 dilution were prepared. 1 μl of each control primer was placed in 10 0.5 ml tubes, and DEPC-treated water, human interleukin 1α cDNA clone aqueous solution or the above dilution series was used as a sample, and the reaction solution was the same as in (a) above. Was prepared. Separately, 10 0.5 ml tubes were prepared separately, and 1 μl of each of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 1 and 3 was added, and a reaction solution was prepared in the same manner as above.
Similarly, reaction solutions were prepared for the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 2 and 3. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in (a) above, and the bands were observed by electrophoresis. With the control primer, a band was observed in the undiluted human monocyte cDNA library aqueous solution, but no band was observed in the diluted one. on the other hand,
With the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 1 and 3, bands were observed up to 1/10000 of the human monocyte cDNA library aqueous solution, and 1/1000 with the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 2 and 3. Bands were observed up to what was done.

【0034】(c)本発明のプライマーと市販のプライ
マーとのPCR条件の比較 対照のプライマーとして、配列番号53及び54の配列
のDNA断片を使用した。0.5mlのチューブ6本
に、対照のプライマーをそれぞれ1μlずつ入れ、試料
としてヒト単球のcDNAライブラリー水溶液を用い、
上記(a)と同様に反応液を調製した。ただし、塩化マ
グネシウム溶液については、0.2μl、0.4μl、
0.6μl、0.8μl、1.0μl又は1.2μ分注
した。一方、別に0.5mlのチューブ6本を用意し、
配列番号4及び6の配列のDNA断片をそれぞれ1μl
ずつ入れ、上記と同様に反応液を調製した。これらの反
応液について上記(a)と同様にPCRを行い、電気泳
動してバンドを観察した。なお、加熱、冷却、保温の工
程は上記(a)と同一の条件のもの以外に、「55℃で
1.5分」の条件を「45℃で1.5分」としたもの、
及び「65℃で1.5分」にしたものも実施した。いず
れの冷却工程の場合であっても、本発明のプライマーの
場合、塩化マグネシウム溶液の分注量に関係なく目的の
バンドが観察された。しかし、対照のプライマーの場
合、冷却工程が「55℃で1.5分」では、塩化マグネ
シウム溶液の分注量が0.2μl(すなわち、反応液中
のマグネシウムイオン濃度が0.5mM)のときバンド
が全く観察されなかった。また、冷却工程が「45℃で
1.5分」では、塩化マグネシウム溶液の分注量が0.
6μl(すなわち、反応液中のマグネシウムイオン濃度
が1.5mM)以上のとき目的のバンド以外のバンドも
観察された。さらに、冷却工程が「65℃で1.5分」
では、25mM塩化マグネシウム溶液の分注量が0.2
μl(すなわち、反応液中のマグネシウムイオン濃度が
0.5mM)のときバンドが全く観察されなかった。
(C) Comparison of PCR conditions between the primer of the present invention and a commercially available primer The DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 53 and 54 were used as a control primer. 1 μl of each control primer was placed in 6 0.5 ml tubes, and an aqueous human monocyte cDNA library solution was used as a sample.
A reaction solution was prepared in the same manner as in the above (a). However, for the magnesium chloride solution, 0.2 μl, 0.4 μl,
0.6 μl, 0.8 μl, 1.0 μl or 1.2 μ was dispensed. On the other hand, prepare 6 tubes of 0.5 ml separately,
1 μl each of the DNA fragments of SEQ ID NOs: 4 and 6
Then, the reaction solution was prepared in the same manner as above. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in (a) above, and the bands were observed by electrophoresis. The heating, cooling, and heat retaining steps are the same as those in (a) above, except that the condition of "55 ° C for 1.5 minutes" is "45 ° C for 1.5 minutes".
And "1.5 minutes at 65 ° C" were also carried out. In any of the cooling steps, in the case of the primer of the present invention, the target band was observed regardless of the dispensed amount of the magnesium chloride solution. However, in the case of the control primer, when the cooling step was “1.5 minutes at 55 ° C.”, the amount of the magnesium chloride solution dispensed was 0.2 μl (that is, the concentration of magnesium ion in the reaction solution was 0.5 mM). No band was observed. When the cooling step is “1.5 minutes at 45 ° C.”, the dispensed amount of the magnesium chloride solution is 0.
Bands other than the target band were also observed when the concentration was 6 μl (that is, the magnesium ion concentration in the reaction solution was 1.5 mM). Furthermore, the cooling process is "1.5 minutes at 65 ° C"
Then, the dispensed amount of 25 mM magnesium chloride solution is 0.2
No band was observed when μl (that is, the concentration of magnesium ion in the reaction solution was 0.5 mM).

【0035】実施例2 ヒトのインターロイキン−2 配列番号7から10の配列のDNA断片を実施例1と同
様にして合成した。0.5mlのチューブ3本に、配列
番号7及び10の配列のDNA断片をそれぞれ1μlず
つ入れ、試料として、DEPC処理水、ヒトインターロ
イキン2のcDNAクローン水溶液(50アトモル/m
l)(クローンテック社)又はヒトゲノミックDNA水
溶液を使用し、実施例1と同様に反応液を調製した。配
列番号8及び9の配列のDNA断片についても同様に反
応液を調製した。これらの反応液について実施例1と同
様にPCRを行い、電気泳動してバンドを観察した。図
2は、上記の電気泳動で観察されたバンドの様子を示し
た図である。図中、レーン1は分子量マーカーを泳動し
たものを示し、このレーン上の各バンドの左側にある数
字はそれぞれのバンドの分子量(単位は塩基対(b
p))を示す。レーン2〜4並びに5〜7は、それぞ
れ、配列番号8及び9並びに7及び10の配列のDNA
断片を用いた場合の反応液を泳動したものを示す。レー
ン2及び5、レーン3及び6、並びにレーン4及び7
は、それぞれ、試料としてDEPC処理水、ヒトのイン
ターロイキン2のcDNAクローン水溶液、ヒトゲノミ
ックDNA水溶液、を用いた場合の反応液を泳動したも
のを示す。図中、レーン3及び6にはそれぞれバンドが
観察され、これらのバンドの分子量は予想される値(そ
れぞれ、約190bp及び約350bp)と一致した。
一方、レーン2、4、5及び7には全くバンドが観察さ
れなかった。
Example 2 Human interleukin-2 DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 7 to 10 were synthesized in the same manner as in Example 1. 1 μl each of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOS: 7 and 10 was placed in three 0.5 ml tubes, and DEPC-treated water and a human interleukin-2 cDNA clone aqueous solution (50 attomole / m 2) were used as samples.
l) (Clontech) or an aqueous human genomic DNA solution was used to prepare a reaction solution in the same manner as in Example 1. Reaction solutions were similarly prepared for the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 8 and 9. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1, and electrophoresis was performed to observe bands. FIG. 2 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above electrophoresis. In the figure, lane 1 shows that the molecular weight marker was electrophoresed, and the numbers on the left side of each band on this lane indicate the molecular weight of each band (unit is base pair (b
p)) is shown. Lanes 2 to 4 and 5 to 7 are DNAs of the sequences of SEQ ID NOs: 8 and 9 and 7 and 10, respectively.
The electrophoresed reaction solution when fragments were used is shown. Lanes 2 and 5, Lanes 3 and 6, and Lanes 4 and 7
Shows electrophoresed reaction solutions when DEPC-treated water, human interleukin-2 cDNA clone aqueous solution, and human genomic DNA aqueous solution were used as samples, respectively. In the figure, bands were observed in lanes 3 and 6, respectively, and the molecular weights of these bands were in agreement with expected values (about 190 bp and about 350 bp, respectively).
On the other hand, no band was observed in Lanes 2, 4, 5 and 7.

【0036】実施例3 ヒトのインターロイキン−3 配列番号11及び12の配列のDNA断片を実施例1と
同様にして合成した。0.5mlのチューブ3本に、上
記DNA断片をそれぞれ1μlずつ入れ、試料として、
DEPC処理水、ヒトのインターロイキン3のcDNA
クローン水溶液(50アトモル/ml)(クローンテッ
ク社)又はヒトゲノミックDNA水溶液を使用し、実施
例1と同様に反応液を調製した。これらの反応液につい
て実施例1と同様にPCRを行い、電気泳動してバンド
を観察した。図3は、上記の電気泳動で観察されたバン
ドの様子を示した図である。図中、レーン1は分子量マ
ーカーを泳動したものを示し、このレーン上の各バンド
の左側にある数字はそれぞれのバンドの分子量(単位は
塩基対(bp))を示す。レーン2、レーン3、及びレ
ーン4は、それぞれ、試料として、DEPC処理水、ヒ
トのインターロイキン3のcDNAクローン水溶液、及
びヒトゲノミックDNA水溶液、を用いた場合の反応液
を泳動したものを示す。図中、レーン3にバンドが観察
され、このバンドの分子量は予想される値(約320b
p)と一致した。一方、レーン2及び4には全くバンド
が観察されなかった。
Example 3 Human interleukin-3 DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 11 and 12 were synthesized in the same manner as in Example 1. 1 μl of each of the above DNA fragments was placed in three 0.5 ml tubes to prepare a sample.
DEPC-treated water, human interleukin-3 cDNA
A reaction solution was prepared in the same manner as in Example 1 using an aqueous clone solution (50 attomole / ml) (Clontech) or an aqueous human genomic DNA solution. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1, and electrophoresis was performed to observe bands. FIG. 3 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above electrophoresis. In the figure, lane 1 shows that the molecular weight marker was electrophoresed, and the number on the left side of each band on this lane shows the molecular weight of each band (unit is base pair (bp)). Lane 2, lane 3, and lane 4 show electrophoresed reaction solutions when using DEPC-treated water, human interleukin-3 cDNA clone aqueous solution, and human genomic DNA aqueous solution as samples, respectively. In the figure, a band is observed in lane 3, and the molecular weight of this band is the expected value (about 320 b).
p). On the other hand, no band was observed in Lanes 2 and 4.

【0037】実施例4 ヒトのインターロイキン−4 配列番号13から15の配列のDNA断片を実施例1と
同様にして合成した。0.5mlのチューブ3本に、配
列番号13及び15の配列のDNA断片をそれぞれ1μ
lずつ入れ、試料として、DEPC処理水、ヒトインタ
ーロイキン4のcDNAクローン水溶液(50アトモル
/ml)(クローンテック社)又はヒトゲノミックDN
A水溶液を使用し、実施例1と同様に反応液を調製し
た。配列番号14及び15の配列のDNA断片について
も同様に反応液を調製した。これらの反応液について実
施例1と同様にPCRを行い、電気泳動してバンドを観
察した。図4は、上記の電気泳動で観察されたバンドの
様子を示した図である。図中、レーン1は分子量マーカ
ーを泳動したものを示し、このレーン上の各バンドの左
側にある数字はそれぞれのバンドの分子量(単位は塩基
対(bp))を示す。レーン2〜4並びに5〜7は、そ
れぞれ、配列番号13及び15並びに14及び15の配
列のDNA断片を用いた場合の反応液を泳動したものを
示す。レーン2及び5、レーン3及び6、並びにレーン
4及び7は、それぞれ、試料としてDEPC処理水、ヒ
トのインターロイキン4のcDNAクローン水溶液、ヒ
トゲノミックDNA水溶液、を用いた場合の反応液を泳
動したものを示す。図中、レーン3及び6にはそれぞれ
バンドが観察され、これらのバンドの分子量は予想され
る値(それぞれ、約360bp及び約290bp)と一
致した。一方、レーン2、4、5及び7には全くバンド
が観察されなかった。
Example 4 Human interleukin-4 DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 13 to 15 were synthesized in the same manner as in Example 1. 1 μl of each of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 13 and 15 was placed in three 0.5 ml tubes.
1 pc each, and as a sample, DEPC-treated water, human interleukin 4 cDNA clone aqueous solution (50 attomole / ml) (Clontech) or human genomic DN
Using the aqueous solution A, a reaction solution was prepared in the same manner as in Example 1. Reaction solutions were similarly prepared for the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 14 and 15. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1, and electrophoresis was performed to observe bands. FIG. 4 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above electrophoresis. In the figure, lane 1 shows that the molecular weight marker was electrophoresed, and the number on the left side of each band on this lane shows the molecular weight of each band (unit is base pair (bp)). Lanes 2 to 4 and 5 to 7 show electrophoresed reaction solutions when the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 13 and 15 and 14 and 15, respectively, were used. Lanes 2 and 5, lanes 3 and 6, and lanes 4 and 7 were electrophoresed with a reaction solution using DEPC-treated water, human interleukin 4 cDNA clone aqueous solution, and human genomic DNA aqueous solution, respectively. Show things. In the figure, bands were observed in lanes 3 and 6, respectively, and the molecular weights of these bands were in agreement with the expected values (about 360 bp and about 290 bp, respectively). On the other hand, no band was observed in Lanes 2, 4, 5 and 7.

【0038】実施例5 ヒトのインターロイキン−5 配列番号16及び17の配列のDNA断片を実施例1と
同様にして合成した。0.5mlのチューブ3本に、上
記DNA断片をそれぞれ1μlずつ入れ、試料として、
DEPC処理水、ヒトのインターロイキン5のcDNA
クローン水溶液(50アトモル/ml)(クローンテッ
ク社)又はヒトゲノミックDNA水溶液を使用し、実施
例1と同様に反応液を調製した。これらの反応液につい
て実施例1と同様にPCRを行い、電気泳動してバンド
を観察した。試料としてヒトのインターロイキン5のc
DNAクローン水溶液を用いた反応液ではバンドが観察
され、このバンドの分子量は予想される値(約280b
p)と一致した。一方、DEPC処理水を用いた反応液
及びヒトゲノミックDNA水溶液を用いた場合では全く
バンドが観察されなかった。
Example 5 Human interleukin-5 DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 16 and 17 were synthesized in the same manner as in Example 1. 1 μl of each of the above DNA fragments was placed in three 0.5 ml tubes to prepare a sample.
DEPC-treated water, human interleukin-5 cDNA
A reaction solution was prepared in the same manner as in Example 1 using an aqueous clone solution (50 attomole / ml) (Clontech) or an aqueous human genomic DNA solution. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1, and electrophoresis was performed to observe bands. C of human interleukin 5 as a sample
A band was observed in the reaction solution using the DNA clone aqueous solution, and the molecular weight of this band was the expected value (about 280 b).
p). On the other hand, no band was observed at all when the reaction solution using DEPC-treated water and the aqueous solution of human genomic DNA were used.

【0039】実施例6 ヒトのインターロイキン−6 配列番号18から21の配列のDNA断片を実施例1と
同様にして合成した。0.5mlのチューブ3本に、配
列番号18及び21の配列のDNA断片をそれぞれ1μ
lずつ入れ、試料として、DEPC処理水、ヒトインタ
ーロイキン6のcDNAクローン水溶液(50アトモル
/ml)(クローンテック社)、ヒト単球のcDNAラ
イブラリー水溶液又はヒトゲノミックDNA水溶液を使
用し、実施例1と同様に反応液を調製した。配列番号1
9及び20の配列のDNA断片についても同様に反応液
を調製した。これらの反応液について実施例1と同様に
PCRを行い、電気泳動してバンドを観察した。図5
は、上記の電気泳動で観察されたバンドの様子を示した
図である。図中、レーン1は分子量マーカーを泳動した
ものを示し、このレーン上の各バンドの左側にある数字
はそれぞれのバンドの分子量(単位は塩基対(bp))
を示す。レーン2〜5並びに6〜9は、それぞれ、配列
番号19及び20並びに18及び21の配列のDNA断
片を用いた場合の反応液を泳動したものを示す。レーン
2及び6、レーン3及び7、レーン4及び8、並びにレ
ーン5及び9は、それぞれ、試料としてDEPC処理
水、ヒトのインターロイキン6のcDNAクローン水溶
液、ヒト単球のcDNAライブラリー水溶液、並びにヒ
トゲノミックDNA水溶液、を用いた場合の反応液を泳
動したものを示す。図中、レーン3及び4並びにレーン
7及び8には、それぞれ、ほぼ同じ位置にバンドが観察
され、これらのバンドの分子量は予想される値(それぞ
れ、約190bp並びに約430bp)と一致した。一
方、レーン2、5、6及び9には全くバンドが観察され
なかった。
Example 6 Human interleukin-6 DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 18 to 21 were synthesized in the same manner as in Example 1. 1 μl of each of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 18 and 21 was placed in three 0.5 ml tubes.
Each 1 μl was added, and DEPC-treated water, human interleukin 6 cDNA clone aqueous solution (50 attomole / ml) (Clontech), human monocyte cDNA library aqueous solution or human genomic DNA aqueous solution was used as a sample. A reaction solution was prepared in the same manner as in 1. Sequence number 1
Reaction solutions were similarly prepared for the DNA fragments having the sequences 9 and 20. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1, and electrophoresis was performed to observe bands. Figure 5
FIG. 4 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above-mentioned electrophoresis. In the figure, lane 1 shows that the molecular weight marker was electrophoresed, and the numbers on the left side of each band on this lane are the molecular weight of each band (unit is base pair (bp)).
Indicates. Lanes 2 to 5 and 6 to 9 show electrophoresed reaction solutions when the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 19 and 20 and 18 and 21, respectively, were used. Lanes 2 and 6, lanes 3 and 7, lanes 4 and 8, and lanes 5 and 9, respectively, were treated with DEPC-treated water, human interleukin 6 cDNA clone aqueous solution, human monocyte cDNA library aqueous solution, and The figure shows an electrophoresed reaction solution in the case of using an aqueous solution of human genomic DNA. In the figure, bands were observed at almost the same positions in lanes 3 and 4 and lanes 7 and 8, respectively, and the molecular weights of these bands were in agreement with expected values (about 190 bp and about 430 bp, respectively). On the other hand, no band was observed in Lanes 2, 5, 6, and 9.

【0040】実施例7 ヒトのインターロイキン−7 配列番号22から24の配列のDNA断片を実施例1と
同様にして合成した。0.5mlのチューブ3本に、配
列番号22及び24の配列のDNA断片をそれぞれ1μ
lずつ入れ、試料として、DEPC処理水、ヒトインタ
ーロイキン7のcDNAクローン水溶液(50アトモル
/ml)(クローンテック社)又はヒトゲノミックDN
A水溶液を使用し、実施例1と同様に反応液を調製し
た。配列番号23及び24の配列のDNA断片について
も同様に反応液を調製した。これらの反応液について実
施例1と同様にPCRを行い、電気泳動してバンドを観
察した。図6は、上記の電気泳動で観察されたバンドの
様子を示した図である。図中、レーン1は分子量マーカ
ーを泳動したものを示し、このレーン上の各バンドの左
側にある数字はそれぞれのバンドの分子量(単位は塩基
対(bp))を示す。レーン2〜4並びに5〜7は、そ
れぞれ、配列番号22及び24並びに23及び24の配
列のDNA断片を用いた場合の反応液を泳動したものを
示す。レーン2及び5、レーン3及び6、並びにレーン
4及び7は、それぞれ、試料としてDEPC処理水、ヒ
トのインターロイキン7のcDNAクローン水溶液、並
びにヒトゲノミックDNA水溶液、を用いた場合の反応
液を泳動したものを示す。図中、レーン3及び6にはそ
れぞれバンドが観察され、これらのバンドの分子量は予
想される値(それぞれ、約420bp及び約300b
p)と一致した。一方、レーン2、4、5及び7には全
くバンドが観察されなかった。
Example 7 Human interleukin-7 DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 22 to 24 were synthesized in the same manner as in Example 1. 1 μl of each of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 22 and 24 was placed in three 0.5 ml tubes.
1 liter each, as a sample, DEPC-treated water, human interleukin 7 cDNA clone aqueous solution (50 attomole / ml) (Clontech) or human genomic DN
Using the aqueous solution A, a reaction solution was prepared in the same manner as in Example 1. Reaction solutions were similarly prepared for the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 23 and 24. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1, and electrophoresis was performed to observe bands. FIG. 6 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above electrophoresis. In the figure, lane 1 shows that the molecular weight marker was electrophoresed, and the number on the left side of each band on this lane shows the molecular weight of each band (unit is base pair (bp)). Lanes 2 to 4 and 5 to 7 show electrophoresed reaction solutions when the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 22 and 24 and 23 and 24 were used, respectively. Lanes 2 and 5, lanes 3 and 6, and lanes 4 and 7 were electrophoresed with the reaction solutions using DEPC-treated water, human interleukin 7 cDNA clone aqueous solution, and human genomic DNA aqueous solution, respectively. It shows what was done. In the figure, bands were observed in lanes 3 and 6, respectively, and the molecular weights of these bands were expected values (about 420 bp and about 300 b, respectively).
p). On the other hand, no band was observed in Lanes 2, 4, 5 and 7.

【0041】実施例8 ヒトのインターロイキン−8 配列番号25及び26の配列のDNA断片を実施例1と
同様にして合成した。0.5mlのチューブ4本に、上
記DNA断片をそれぞれ1μlずつ入れ、試料として、
DEPC処理水、ヒトのインターロイキン8のcDNA
クローン水溶液(50アトモル/ml)(クローンテッ
ク社)、ヒト単球のcDNAライブラリー水溶液又はヒ
トゲノミックDNA水溶液を使用し、実施例1と同様に
反応液を調製した。これらの反応液について実施例1と
同様にPCRを行い、電気泳動してバンドを観察した。
図7は、上記の電気泳動で観察されたバンドの様子を示
した図である。図中、レーン1は分子量マーカーを泳動
したものを示し、このレーン上の各バンドの左側にある
数字はそれぞれのバンドの分子量(単位は塩基対(b
p))を示す。レーン2、レーン3、レーン4、及びレ
ーン5は、それぞれ、試料として、DEPC処理水、ヒ
トのインターロイキン8のcDNAクローン水溶液、ヒ
ト単球のcDNAライブラリー水溶液、及びヒトゲノミ
ックDNA水溶液、を用いた場合の反応液を泳動したも
のを示す。図中、レーン3及び4には、ほぼ同じ位置に
バンドが観察され、このバンドの分子量は予想される値
(約230bp)と一致した。一方、レーン2及び5に
は全くバンドが観察されなかった。
Example 8 Human interleukin-8 DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 25 and 26 were synthesized in the same manner as in Example 1. 1 μl of each of the above DNA fragments was placed in 4 0.5 ml tubes to prepare samples.
DEPC-treated water, human interleukin-8 cDNA
Using a clone aqueous solution (50 attomole / ml) (Clontech), a human monocyte cDNA library aqueous solution, or a human genomic DNA aqueous solution, a reaction solution was prepared in the same manner as in Example 1. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1, and electrophoresis was performed to observe bands.
FIG. 7 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above electrophoresis. In the figure, lane 1 shows that the molecular weight marker was electrophoresed, and the numbers on the left side of each band on this lane indicate the molecular weight of each band (unit is base pair (b
p)) is shown. Lane 2, lane 3, lane 4, and lane 5 respectively use DEPC-treated water, human interleukin 8 cDNA clone aqueous solution, human monocyte cDNA library aqueous solution, and human genomic DNA aqueous solution as samples. When the reaction solution is present, it shows the result of electrophoresis. In the figure, bands were observed at almost the same positions in lanes 3 and 4, and the molecular weight of this band was in agreement with the expected value (about 230 bp). On the other hand, no band was observed in Lanes 2 and 5.

【0042】実施例9 ヒトのインターフェロン−γ 配列番号27から29の配列のDNA断片を実施例1と
同様にして合成した。0.5mlのチューブ2本に、配
列番号27及び29の配列のDNA断片をそれぞれ1μ
lずつ入れ、試料として、DEPC処理水又はヒトイン
ターフェロン−γのcDNAクローン水溶液(50アト
モル/ml)(クローンテック社)を使用し、実施例1
と同様に反応液を調製した。配列番号28及び29の配
列のDNA断片についても同様に反応液を調製した。こ
れらの反応液について実施例1と同様にPCRを行い、
電気泳動してバンドを観察した。図8は、上記の電気泳
動で観察されたバンドの様子を示した図である。図中、
レーン4は分子量マーカーを泳動したものを示し、この
レーン上の各バンドの右側にある数字はそれぞれのバン
ドの分子量(単位は塩基対(bp))を示す。レーン1
及び3、並びにレーン2は、それぞれ、配列番号28及
び29、並びに配列番号27及び29、の配列のDNA
断片を用いた場合の反応液を泳動したものを示す。レー
ン1、並びにレーン2及び3は、それぞれ、試料として
DEPC処理水、並びにヒトインターフェロン−γのc
DNAクローン水溶液、を用いた場合の反応液を泳動し
たものを示す。図中、レーン2及び3にはバンドが観察
され、これらのバンドの分子量は予想される値(それぞ
れ、約320bp及び約230bp)と一致した。一
方、レーン1には全くバンドが観察されなかった。
Example 9 Human interferon-γ DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 27 to 29 were synthesized in the same manner as in Example 1. 1 μl of each of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 27 and 29 was placed in two 0.5 ml tubes.
1 each, and DEPC-treated water or a human interferon-γ cDNA clone aqueous solution (50 attomole / ml) (Clontech) was used as a sample.
A reaction solution was prepared in the same manner as in. Reaction solutions were similarly prepared for the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 28 and 29. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1,
The band was observed by electrophoresis. FIG. 8 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above electrophoresis. In the figure,
Lane 4 shows electrophoresis of molecular weight markers, and the numbers on the right side of each band on this lane indicate the molecular weight of each band (unit is base pair (bp)). Lane 1
And 3 and lane 2 are DNA of the sequences of SEQ ID NOs: 28 and 29, and SEQ ID NOs: 27 and 29, respectively.
The electrophoresed reaction solution when fragments were used is shown. Lane 1, and lanes 2 and 3, respectively, were treated with DEPC-treated water and c of human interferon-γ.
The reaction solution obtained by using the DNA clone aqueous solution is shown. In the figure, bands were observed in lanes 2 and 3, and the molecular weights of these bands were in agreement with expected values (about 320 bp and about 230 bp, respectively). On the other hand, no band was observed in Lane 1.

【0043】実施例10 ヒト、ラット及びマウスのβ
−アクチン 配列番号30及び31の配列のDNA断片を実施例1と
同様にして合成した。0.5mlのチューブ7本に、上
記DNA断片をそれぞれ1μlずつ入れ、試料として、
DEPC処理水、ヒトのβ−アクチンのcDNA断片水
溶液(50アトモル/ml)(クローンテック社)、ラ
ットのβ−アクチンのcDNA断片水溶液(50アトモ
ル/ml)(クローンテック社)、マウスのβ−アクチ
ンのcDNA断片水溶液(50アトモル/ml)(クロ
ーンテック社)、ヒトの脳cDNAライブラリー水溶液
(1.2×106pfu/μl)(クローンテック
社)、マウスの脳cDNAライブラリー水溶液(1.2
×106pfu/μl)(クローンテック社)又はラッ
トの脳cDNAライブラリー水溶液(1.2×106
fu/μl)(クローンテック社)を使用し、実施例1
と同様に反応液を調製した。これらの反応液について実
施例1と同様にPCRを行い、電気泳動してバンドを観
察した。図9は、上記の電気泳動で観察されたバンドの
様子を示した図である。図中、レーン8は分子量マーカ
ーを泳動したものを示し、このレーン上の各バンドの右
側にある数字はそれぞれのバンドの分子量(単位は塩基
対(bp))を示す。レーン1、レーン2、レーン3、
レーン4、レーン5、レーン6及びレーン7は、それぞ
れ、試料として、DEPC処理水、ヒトのβ−アクチン
のcDNA断片水溶液、ラットのβ−アクチンのcDN
A断片水溶液、マウスのβ−アクチンのcDNA断片水
溶液、ヒトの脳cDNAライブラリー水溶液、マウスの
脳cDNAライブラリー水溶液、及びラットの脳cDN
Aライブラリー水溶液、を用いた場合の反応液を泳動し
たものを示す。図中、レーン2〜7には、ほぼ同じ位置
にバンドが観察され、これらのバンドの分子量は予想さ
れる値(約340bp)と一致した。一方、レーン1に
は全くバンドが観察されなかった。
Example 10 Human, rat and mouse β
-Actin DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 30 and 31 were synthesized in the same manner as in Example 1. 1 μl of each of the above DNA fragments was put into 7 0.5 ml tubes to prepare samples.
DEPC-treated water, human β-actin cDNA fragment aqueous solution (50 attomole / ml) (Clontech), rat β-actin cDNA fragment aqueous solution (50 attomole / ml) (Clontech), mouse β- Actin cDNA fragment aqueous solution (50 attomole / ml) (Clontech), human brain cDNA library aqueous solution (1.2 × 10 6 pfu / μl) (Clontech), mouse brain cDNA library aqueous solution (1 .2
× 10 6 pfu / μl) (Clontech) or brain cDNA library aqueous rats (1.2 × 10 6 p
fu / μl) (Clontech) and used in Example 1.
A reaction solution was prepared in the same manner as in. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1, and electrophoresis was performed to observe bands. FIG. 9 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above electrophoresis. In the figure, lane 8 shows that molecular weight markers were electrophoresed, and the numbers on the right side of each band on this lane show the molecular weight of each band (unit is base pair (bp)). Lane 1, Lane 2, Lane 3,
Lane 4, lane 5, lane 6, and lane 7 are samples of DEPC-treated water, human β-actin cDNA fragment aqueous solution, and rat β-actin cDNA, respectively.
A fragment aqueous solution, mouse β-actin cDNA fragment aqueous solution, human brain cDNA library aqueous solution, mouse brain cDNA library aqueous solution, and rat brain cDNA
The reaction solution obtained by using the A library aqueous solution is shown. In the figure, bands were observed at almost the same positions in lanes 2 to 7, and the molecular weights of these bands were in agreement with expected values (about 340 bp). On the other hand, no band was observed in Lane 1.

【0044】実施例11 ラットセロトニン1cレセプ
ター及びラットセロトニン2レセプター 配列番号32から35の配列のDNA断片を実施例1と
同様にして合成した。ジュリアス(Julius)らの方法
(「サイエンス、241巻、558−564頁、198
8年(Science, Vol.241, pp.558-564 (1988))」)に
従い、まず、ラットのセロトニン1cレセプター及びセ
ロトニン2レセプターのクローン細胞を作製した。次
に、カブラーとホフマンの方法(「ジーン、25巻、2
63頁、1983年(Gene, Vol.25, pp.263 (198
3))」)に従い、上記クローン細胞からラットのセロト
ニン1cレセプター及びセロトニン2レセプターのcD
NAを調製した。0.5mlのチューブ2本に、配列番
号32及び33の配列のDNA断片をそれぞれ1μlず
つ入れ、試料として、DEPC処理水又はラットのセロ
トニン1cレセプターのcDNA水溶液(50アトモル
/ml)を使用し、実施例1と同様に反応液を調製し
た。一方、別に0.5mlのチューブ2本を用意し、配
列番号34及び35の配列のDNA断片をそれぞれ1μ
lずつ入れ、試料として、DEPC処理水又はラットの
セロトニン2レセプターのcDNA水溶液(50アトモ
ル/ml)を使用し、実施例1と同様に反応液を調製し
た。これらの反応液について実施例1と同様にPCRを
行い、電気泳動してバンドを観察した。
Example 11 Rat Serotonin 1c Receptor and Rat Serotonin 2 Receptor DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 32 to 35 were synthesized in the same manner as in Example 1. The method of Julius et al. ("Science, 241, 558-564, 198.
8 (Science, Vol. 241, pp.558-564 (1988)) ”, first, cloned cells of rat serotonin 1c receptor and serotonin 2 receptor were prepared. Next, Kabbler and Hoffman's method ("Gene, 25, 2
63 pages, 1983 (Gene, Vol.25, pp.263 (198
3)) ”), the rat serotonin 1c receptor and serotonin 2 receptor cdD from the cloned cells
NA was prepared. 1 μl of each of the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 32 and 33 was placed in two 0.5 ml tubes, and DEPC-treated water or an aqueous solution of rat serotonin 1c receptor cDNA (50 attomole / ml) was used as a sample. A reaction solution was prepared in the same manner as in Example 1. On the other hand, prepare two 0.5 ml tubes separately and add 1 μ each of the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 34 and 35.
A reaction solution was prepared in the same manner as in Example 1, using DEPC-treated water or rat serotonin 2 receptor cDNA aqueous solution (50 attomole / ml) as a sample. PCR was performed on these reaction solutions in the same manner as in Example 1, and electrophoresis was performed to observe bands.

【0045】図10は、上記の電気泳動で観察されたバ
ンドの様子を示した図である。図中、レーン5は分子量
マーカーを泳動したものを示し、このレーン上の各バン
ドの右側にある数字はそれぞれのバンドの分子量(単位
は塩基対(bp))を示す。レーン1及び3、並びにレ
ーン2及び4は、それぞれ、配列番号32及び33、並
びに配列番号34及び35、の配列のDNA断片を用い
た場合の反応液を泳動したものを示す。レーン1及び
2、レーン3、並びにレーン4は、それぞれ、試料とし
てDEPC処理水を、ラットのセロトニン1cレセプタ
ーのcDNA水溶液、並びにラットのセロトニン2レセ
プターのcDNA水溶液、を用いた場合の反応液を泳動
したものを示す。図中、レーン3にはバンドが観察さ
れ、このバンドの分子量は予想される値(約380b
p)と一致した。一方、レーン1には全くバンドが観察
されなかった。また、図中、レーン4にもバンドが観察
され、このバンドの分子量は予想される値(約420b
p)と一致した。一方、レーン2には全くバンドが観察
されなかった。
FIG. 10 is a diagram showing the appearance of bands observed by the above electrophoresis. In the figure, lane 5 shows the result of migration of molecular weight markers, and the numbers on the right side of each band on this lane show the molecular weight of each band (unit is base pair (bp)). Lanes 1 and 3, and lanes 2 and 4 show electrophoresed reaction solutions when the DNA fragments of the sequences of SEQ ID NOs: 32 and 33 and SEQ ID NOS: 34 and 35 were used, respectively. Lanes 1 and 2, lane 3, and lane 4 were electrophoresed with a reaction solution using DEPC-treated water as a sample, a rat serotonin 1c receptor cDNA aqueous solution, and a rat serotonin 2 receptor cDNA aqueous solution, respectively. It shows what was done. In the figure, a band is observed in lane 3, and the molecular weight of this band is the expected value (about 380b).
p). On the other hand, no band was observed in Lane 1. In the figure, a band was also observed in lane 4, and the molecular weight of this band was the expected value (about 420b).
p). On the other hand, no band was observed in Lane 2.

【0046】[0046]

【発明の効果】請求項1のプライマーにより、特異的m
RNAを信頼性よく検出・測定できる。請求項2のプラ
イマーにより、ヒトインターロイキン−1α、ヒトイン
ターロイキン−1β、ヒトインターロイキン−2、ヒト
インターロイキン−3、ヒトインターロイキン−4、ヒ
トインターロイキン−5、ヒトインターロイキン−6、
ヒトインターロイキン−7、ヒトインターロイキン−8
もしくはヒトインターフェロン−γ特異的mRNAを信
頼性よく検出・測定できる。請求項3のプライマーによ
り、ヒト、ラット、もしくはマウスβ−アクチン特異的
mRNAを信頼性よく検出・測定できる。請求項4のプ
ライマーにより、ラットセロトニン1cレセプターもし
くはラットセロトニン2レセプター特異的mRNAを信
頼性よく検出・測定できる。
EFFECT OF THE INVENTION With the primer of claim 1, a specific m
RNA can be reliably detected and measured. With the primer of claim 2, human interleukin-1α, human interleukin-1β, human interleukin-2, human interleukin-3, human interleukin-4, human interleukin-5, human interleukin-6, human interleukin-6,
Human interleukin-7, human interleukin-8
Alternatively, human interferon-γ-specific mRNA can be reliably detected and measured. With the primer of claim 3, human, rat, or mouse β-actin-specific mRNA can be reliably detected and measured. With the primer of claim 4, mRNA specific to rat serotonin 1c receptor or rat serotonin 2 receptor can be reliably detected and measured.

【配列表】[Sequence list]

配列番号:1 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 AGTTCCTCCA TTGATCATCT GTC 23 SEQ ID NO: 1 Sequence Length: 23 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence AGTTCCTCCA TTGATCATCT GTC 23

【0047】配列番号:2 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CCTCTAAAAC ATCCAAGCTT ACC 23SEQ ID NO: 2 Sequence Length: 23 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence CCTCTAAAAC ATCCAAGCTT ACC 23

【0048】配列番号:3 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCTCGAATTA TACTTTGATT GAGGG 25SEQ ID NO: 3 Sequence length: 25 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single-stranded Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GCTCGAATTA TACTTTGATT GAGGG 25

【0049】配列番号:4 配列の長さ:20 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CATCCAGCTA CGAATCTCCG 20SEQ ID NO: 4 Sequence length: 20 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CATCCAGCTA CGAATCTCCG 20

【0050】配列番号:5 配列の長さ:21 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCACCTGTAC GATCACTGAA C 21SEQ ID NO: 5 Sequence length: 21 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single-stranded Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GCACCTGTAC GATCACTGAA C 21

【0051】配列番号:6 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GGGCTTATCA TCTTTCAACA CG
22
SEQ ID NO: 6 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single-stranded Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GGGCTTATCA TCTTTCAACA CG
22

【0052】配列番号:7 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCATTTACTG CTGGATTTAC AGATG 25SEQ ID NO: 7 Sequence length: 25 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GCATTTACTG CTGGATTTAC AGATG 25

【0053】配列番号:8 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCTCACATTT AAGTTTTACA TGCCC 25SEQ ID NO: 8 Sequence length: 25 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single-stranded Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GCTCACATTT AAGTTTTACA TGCCC 25

【0054】配列番号:9 配列の長さ:24 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GTTGTTTCAG ATCCCTTTAG TTCC 24SEQ ID NO: 9 Sequence length: 24 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GTTGTTTCAG ATCCCTTTAG TTCC 24

【0055】配列番号:10 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CAGTGTTGAG ATGATGCTTT GAC 23SEQ ID NO: 10 Sequence length: 23 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CAGTGTTGAG ATGATGCTTT GAC 23

【0056】配列番号:11 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CAAGCTGGGT TAACTGCTCT AA 22SEQ ID NO: 11 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Type of sequence: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CAAGCTGGGT TAACTGCTCT AA 22

【0057】配列番号:12 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GGGTTTTCAG ATAGAACGTC AG 22SEQ ID NO: 12 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Type of sequence: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GGGTTTTCAG ATAGAACGTC AG 22

【0058】配列番号:13 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 AAGTGCGATA TCACCTTACA GG 22SEQ ID NO: 13 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence AAGTGCGATA TCACCTTACA GG 22

【0059】配列番号:14 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CGAGTTGACC GTAACAGACA TC 22SEQ ID NO: 14 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CGAGTTGACC GTAACAGACA TC 22

【0060】配列番号:15 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CTCTCTCATG ATCGTCTTTA GC 22SEQ ID NO: 15 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CTCTCTCATG ATCGTCTTTA GC 22

【0061】配列番号:16 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GAAATTCCCA CAAGTGCATT GG 22SEQ ID NO: 16 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GAAATTCCCA CAAGTGCATT GG 22

【0062】配列番号:17 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CTAGGAATTG GTTTACTCTC CG 22SEQ ID NO: 17 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CTAGGAATTG GTTTACTCTC CG 22

【0063】配列番号:18 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CAAACAAATT CGGTACATCC TCG 23SEQ ID NO: 18 Sequence length: 23 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Type of sequence: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CAAACAAATT CGGTACATCC TCG 23

【0064】配列番号:19 配列の長さ:24 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CAAGAGTAAC ATGTGTGAAA GCAG 24SEQ ID NO: 19 Sequence length: 24 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single-stranded Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CAAGAGTAAC ATGTGTGAAA GCAG 24

【0065】配列番号:20 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CCTCACTACT CTCAAATCTG TTC 23SEQ ID NO: 20 Sequence length: 23 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CCTCACTACT CTCAAATCTG TTC 23

【0066】配列番号:21 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCGCAGAATG AGATGAGTTG TC 22SEQ ID NO: 21 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GCGCAGAATG AGATGAGTTG TC 22

【0067】配列番号:22 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GAGTGTTCTA ATGGTCAGCA TC 22SEQ ID NO: 22 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GAGTGTTCTA ATGGTCAGCA TC 22

【0068】配列番号:23 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GGTATGTTTT TATTCCGTGC TGC 23SEQ ID NO: 23 Sequence length: 23 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GGTATGTTTT TATTCCGTGC TGC 23

【0069】配列番号:24 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 TCAGTGTTCT TTAGTGCCCA TC 2
SEQ ID NO: 24 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence TCAGTGTTCT TTAGTGCCCA TC 2
Two

【0070】配列番号:25 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 TGTGTGAAGG TGCAGTTTTG CC 22SEQ ID NO: 25 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence TGTGTGAAGG TGCAGTTTTG CC 22

【0071】配列番号:26 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CCCTCTTCAA AAACTTCTCC AC 22SEQ ID NO: 26 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single-stranded Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CCCTCTTCAA AAACTTCTCC AC 22

【0072】配列番号:27 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 TTTCAGCTCT GCATCGTTTT GG 22SEQ ID NO: 27 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence TTTCAGCTCT GCATCGTTTT GG 22

【0073】配列番号:28 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GGTCATTCAG ATGTAGCGGA TA 22SEQ ID NO: 28 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GGTCATTCAG ATGTAGCGGA TA 22

【0074】配列番号:29 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCTTTTCGAA GTCATCTCGT TTC 23SEQ ID NO: 29 Sequence length: 23 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single stranded Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GCTTTTCGAA GTCATCTCGT TTC 23

【0075】配列番号:30 配列の長さ:18 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CTTCGCGGGC GACGATGC 18SEQ ID NO: 30 Sequence length: 18 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CTTCGCGGGC GACGATGC 18

【0076】配列番号:31 配列の長さ:20 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CGTACATGGC TGGGGTGTTG 20SEQ ID NO: 31 Sequence length: 20 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single stranded Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CGTACATGGC TGGGGTGTTG 20

【0077】配列番号:32 配列の長さ:20 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GTGGGACTAC TTGTCATGCC 20SEQ ID NO: 32 Sequence length: 20 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GTGGGACTAC TTGTCATGCC 20

【0078】配列番号:33 配列の長さ:20 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CGGGATGAAG AATGCCACGA 20SEQ ID NO: 33 Sequence length: 20 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CGGGATGAAG AATGCCACGA 20

【0079】配列番号:34 配列の長さ:17 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GGACCGCTAT GTCGCCA 17SEQ ID NO: 34 Sequence Length: 17 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence GGACCGCTAT GTCGCCA 17

【0080】配列番号:35 配列の長さ:17 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCCTGCGTAG GAGCCTG 17SEQ ID NO: 35 Sequence length: 17 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GCCTGCGTAG GAGCCTG 17

【0081】配列番号:36 配列の長さ:2430 配列の型:核酸 配列の種類:cDNA to mRNA 配列 CATTTCATTG GCGTTTGAGT CAGCAAAGAA GTCAAGATGG CCAAAGTTCC AGACATGTTT 60 GAAGACCTGA AGAACTGTTA CAGTGAAAAT GAAGAAGACA GTTCCTCCAT TGATCATCTG 120 TCTCTGAATC AGAAATCCTT CTATCATGTA AGCTATGGCC CACTCCATGA AGGCTGCATG 180 GATCAATCTG TGTCTCTGAG TATCTCTGAA ACCTCTAAAA CATCCAAGCT TACCTTCAAG 240 GAGAGCATGG TGGTAGTAGC AACCAACGGG AAGGTTCTGA AGAAGAGACG GTTGAGTTTA 300 AGCCAATCCA TCACTGATGA TGACCTGGAG GCCATCGCCA ATGACTCAGA GGAAGAAATC 360 ATCAAGCCTA GGTCAGCACC TTTTAGCTTC CTGAGCAATG TGAAATACAA CTTTATGAGG 420 ATCATCAAAT ACGAATTCAT CCTGAATGAC GCCCTCAATC AAAGTATAAT TCGAGCCAAT 480 GATCAGTACC TCACGGCTGC TGCATTACAT AATCTGGATG AAGCAGTGAA ATTTGACATG 540 GGTGCTTATA AGTCATCAAA GGATGATGCT AAAATTACCG TGATTCTAAG AATCTCAAAA 600 ACTCAATTGT ATGTGACTGC CCAAGATGAA GACCAACCAG TGCTGCTGAA GGAGATGCCT 660 GAGATACCCA AAACCATCAC AGGTAGTGAG ACCAACCTCC TCTTCTTCTG GGAAACTCAC 720 GGCACTAAGA ACTATTTCAC ATCAGTTGCC CATCCAAACT TGTTTATTGC CACAAAGCAA 780 GACTACTGGG TGTGCTTGGC AGGGGGGCCA CCCTCTATCA CTGACTTTCA GATACTGGAA 840 AACCAGGCGT AGGTCTGGAG TCTCACTTGT CTCACTTGTG CAGTGTTGAC AGTTCATATG 900 TACCATGTAC ATGAAGAAGC TAAATCCTTT ACTGTTAGTC ATTTGCTGAG CATGTACTGA 960 CCCTTGTAAT TCTAAATGAA TGTTTACACT CTTTGTAAGA GTGGAACCAA CACTAACATA 1020 TAATGTTGTT ATTTAAAGAA CACCCTATAT TTTGCATAGT ACCAATCATT TTAATTATTA 1080 TTCTTCATAA CAATTTTAGG AGGACCAGAG CTACTGACTA TGGCTACCAA AAAGACTCTA 1140 CCCATATTAC AGATGGGCAA ATTAAGGCAT AAGAAAACTA AGAAATATGC ACAATAGCAG 1200 TTGAAACAAG AAGCCACAGA CCTAGGATTT CATGATTTCA TTTCAACTGT TTGCCTTCTA 1260 CTTTTAAGTT GCTGATGAAC TCTTAATCAA ATAGCATAAG TTTCTGGGAC CTCAGTTTTA 1320 TCATTTTCAA AATGGAGGGA ATAATACCTA AGCCTTCCTG CCGCAACAGT TTTTTATGCT 1380 AATCAGGGAG GTCATTTTGG TAAAATACTT CTTGAAGCCG AGCCTCAAGA TGAAGGCAAA 1440 GCACGAAATG TTATTTTTTA ATTATTATTT ATATATGTAT TTATAAATAT ATTTAAGATA 1500 ATTATAATAT ACTATATTTA TGGGAACCCC TTCATCCTCT GAGTGTGACC AGGCATCCTC 1560 CACAATAGCA GACAGTGTTT TCTGGGATAA GTAAGTTTGA TTTCATTAAT ACAGGGCATT 1620 TTGGTCCAAG TTGTGCTTAT CCCATAGCCA 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TCCATCATGC ACCTCTGCGC CATATCGCTG 1140 GACCGGTATG TAGCAATACG TAATCCTATT GAGCATAGCC GGTTCAATTC GCGGACTAAG 1200 GCCATCATGA AGATTGCCAT CGTTTGGGCA ATATCAATAG GAGTTTCAGT TCCTATCCCT 1260 GTGATTGGAC TGAGGGACGA AAGCAAAGTG TTCGTGAATA ACACCACGTG CGTGCTCAAT 1320 GACCCCAACT TCGTTCTCAT CGGGTCCTTC GTGGCATTCT TCATCCCGTT GACGATTATG 1380 GTGATCACCT ACTTCTTAAC GATCTACGTC CTGCGCCGTC AAACTCTGAT GTTACTTCGA 1440 GGTCACACCG AGGAGGAACT GGCTAATATG AGCCTGAACT TTCTGAACTG CTGCTGCAAG 1500 AAGAATGGTG GTGAGGAAGA GAACGCTCCG AACCCTAATC CAGATCAGAA ACCACGTCGA 1560 AAGAAGAAAG AAAAGCGTCC CAGAGGCACC ATGCAAGCTA TCAACAAC GA AAAGAAAGCT 1620 TCCAAAGTCC TTGGCATTGT ATTCTTTGTG TTTCTGATCA TGTGGTGCCC GTTTTTCATC 1680 ACCAATATCC TGTCGGTTCT TTGTGGGAAG GCCTGTAACC AAAAGCTAAT GGAGAAGCTT 1740 CTCAATGTGT TTGTGTGGAT TGGCTATGTG TGTTCAGGCA TCAATCCTCT GGTGTACACT 1800 CTCTTTAATA AAATTTACCG AAGGGCTTTC TCTAAATATT TGCGCTGCGA TTATAAGCCA 1860 GACAAAAAGC CTCCTGTTCG ACAGATTCCT AGGGTTGCTG CCACTGCTTT GTCTGGGAGG 1920 GAGCTCAATG TTAACATTTA TCGGCATACC AATGAACGTG TGGCTAGGAA AGCTAATGAC 1980 CCTGAGCCTG GCATAGAGAT GCAGGTGGAG AACTTAGAGC TGCCAGTCAA CCCCTCTAAT 2040 GTGGTCAGCG AGAGGATTAG TAGTGTGTAA GCGAAGAGCA GCGCAGACTT CCTACAGGAA 2100 AGTTCCTGTA GGAAAGTCCT CCCCACCCCCCC CGTGATTTTC CTGTGAATCA TAACTAATGT 2160 AAATATTTACCT ATGACTGACAGACAGCGTTAG

【0095】配列番号:50 配列の長さ:2217 配列の型:核酸 配列の種類:cDNA to mRNA 配列 ACGCGATAAC TGTCAATATG AAAGTCACTT GATTTTTACA GAAATACAAG CTCAAATTCC 60 TGGACCGCGG CTGAGGCACT TCTGCCTGAG ACTAAGAAGG GTTAACCCAA GAATATTCAG 120 TTAGGATGGC ATTAACACTG TGTAGGTTTT TAATTGACTT CCTTAATTGA TATAGAGGGC 180 ACACTGCCTC CCTCCTCGTT TGGATCTCAT GCTGTTTTAA CTTTGTGATG GCTGAACTCT 240 TGGAAGCAGC ATATTCAACC CGAGAATTAG CTGAAAGATT TTCACGGATA CAAAACTTTT 300 CTTCCTTGAA CCAGGAACAC GTTTGTGTCC CCGAATACTC AAAGTGCTTT TTTTGGCCTT 360 TGCTTCCGTG AGAACTTACA GCTCAGCCGT GGGCTCTCCC TAGCACCGTG AAGGGAGGCA 420 TAATCAAGAA GCATCACACT TCTGTAACTC TTACTATGGA AGAGGAGAAG GCAGCCAGAG 480 GAGCCACACA TGTTCTCCGC TTCAGCACGT CCTAGCGCCA GGGCACGAAG ATGAATGGTG 540 AGCCCAGGCT ATGACCCCCT AGTCTCTCCA CACTTCATCT GCTACAACTT CCGGCTTAGA 600 CATGGAAATT CTTTGTGAAG ACAATATCTC TCTGAGCTCA ATTCCAAACT CCTTAATGCA 660 ATTAGGTGAT GGCCCGAGGC TCTACCATAA TGACTTCAAC TCCAGAGATG CTTAACACTT 720 CGGAAGCATC GAACTGGACA ATTGATGCTG AAAACAGAAC CAACCTCTCC TGTGAAGGGT 780 ACCTCCCACC GACATGCCTC TCCATTCTTC ATCTCCAGGA AAAAAACTGG TCTGCTTTAT 840 TGACAACTGT CGTGATTATT CTCACCATTG CTGGAAATAT ACTGGTCATC ATGGCAGTGT 900 CCCTAGAAAA AAAGCTGCAG AATGCCACCA ACTATTTCCT GATGTCACTT GCCATAGCTG 960 ATATGCTGCT GGGTTTCCTT GTCATGCCTG TGTCCATGTT AACCATCCTG TATGGGTACC 1020 GGTGGCCTTT GCCTAGCAAG CTCTGTGCGA TCTGGATTTA CCTGGATGTG CTCTTTTCTA 1080 CGGCATCCAT CATGCACCTC TGCGCCATCT CCCTGGACCG CTATGTCGCC ATCCAGAACC 1140 CCATTCACCA CAGCCGCTTC AACTCCAGAA CCAAAGCCTT CCTGAAAATC ATTGCCGTGT 1200 GGACCATATC TGTAGGTATA TCCATGCCAA TCCCAGTCTT TGGACTACAG GATGATTCGA 1260 AGGTCTTTAA GGAGGGGAGC TGCCTGCTTG CCGATGACAA CTTTGTTCTC ATAGGCTCTT 1320 TTGTGGCATT TTTCATCCCC CTAACCATCA TGGTGATCAC CTACTTCCTG ACTATCAAGT 1380 CACTTCAGAA AGAAGCCACC TTGTGTGTGA GTGACCTCAG CACTCGAGCC AAACTAGCCT 1440 CCTTCAGCTT CCTCCCTCAG AGTTCTCTGT CATCAGAAAA GCTCTTCCAA CGGTCCATCC 1500 ACAGAGAGCC AGGCTCCTAC GCAGGCCGAA GGACGATGCA GTCCATCAGC AATGAGCAAA 1560 AGGCGTGCAA GGTGCTGGGC ATCGTGTTCT TCCTGTTTGT TGTAATGTGG TGCCCATTCT 1620 TCATCACCAA TATCATGGCC GTCATCTGCA AAGAATCCTG CAATGAAAAT GTCATCGGAG 1680 CCCTGCTCAA TGTGTTTGTC TGGATTGGTT ATCTCTCCTC AGCTGTCAAT CCACTGGTAT 1740 ATACGTTGTT CAATAAAACT TATAGGTCCG CCTTCTCAAG GTACATTCAG TGTCAGTACA 1800 AGGAAAACAG AAAGCCACTG CAGTTAATTT TAGTGAACAC TATACCAGCA TTGGCCTACA 1860 AGTCTAGTCA GCTCCAGGTG GGACAGAAAA AGAACTCACA GGAAGATGCT GAGCAGACAG 1920 TTGATGACTG CTCCATGGTT ACACTGGGGA AACAACAGTC GGAAGAGAAT TGTACAGACA 1980 ATATTGAAAC CGTGAATGAA AAGGTTAGCT GTGTGTGATG AACTGGATGC TATGGCAATT 2040 GCCAGGGCAT GTGAACAAGG TTATACCCAT GTGTGTGGGG CGGGGATAAG GAGGCTGCAA 2100 CAAATTAGAC TACTCCAGTC GACCAACGTA TAATGTCCTG ACAGCATTGG GAGCTAGGAG 2160 TGTTACGATG CTTTAATTAT TGCCAATGAG ATCTCTAAAA CCATTGGCCC GTCTCGA 2217SEQ ID NO: 50 Sequence length: 2217 Sequence type: Nucleic acid Sequence type: cDNA to mRNA sequence ACGCGATAAC TGTCAATATG AAAGTCACTT GATTTTTACA GAAATACAAG CTCAAATTCC 60 TGGACCGCGG CTGAGGCTACTTCTGCCTGTACGACGATGACGAGATATTCAG TGACAGAGAT GCTGTTTTAA CTTTGTGATG GCTGAACTCT 240 TGGAAGCAGC ATATTCAACC CGAGAATTAG CTGAAAGATT TTCACGGATA CAAAACTTTT 300 CTTCCTTGAA CCAGGAACAC GTTTGTGTCC CCGAATACTC AAAGTGCTTT TTTTGGCCTT 360 TGCTTCCGTG AGAACTTACA GCTCAGCCGT GGGCTCTCCC TAGCACCGTG AAGGGAGGCA 420 TAATCAAGAA GCATCACACT TCTGTAACTC TTACTATGGA AGAGGAGAAG GCAGCCAGAG 480 GAGCCACACA TGTTCTCCGC TTCAGCACGT CCTAGCGCCA GGGCACGAAG ATGAATGGTG 540 AGCCCAGGCT ATGACCCCCT AGTCTCTCCA CACTTCATCT GCTACAACTT CCGGCTTAGA 600 CATGGAAATT CTTTGTGAAG ACAATATCTC TCTGAGCTCA ATTCCAAACT CCTTAATGCA 660 ATTAGGTGAT GGCCCGAGGC TCTACCATAA TGACTTCAAC TCCAGAGATG CTTAACACTT 720 CGGAAGCATC GAACTGGACA ATTGATGCTG AAAACAGAA C CAACCTCTCC TGTGAAGGGT 780 ACCTCCCACC GACATGCCTC TCCATTCTTC ATCTCCAGGA AAAAAACTGG TCTGCTTTAT 840 TGACAACTGT CGTGATTATT CTCACCATTG CTGGAAATAT ACTGGTCATC ATGGCAGTGT 900 CCCTAGAAAA AAAGCTGCAG AATGCCACCA ACTATTTCCT GATGTCACTT GCCATAGCTG 960 ATATGCTGCT GGGTTTCCTT GTCATGCCTG TGTCCATGTT AACCATCCTG TATGGGTACC 1020 GGTGGCCTTT GCCTAGCAAG CTCTGTGCGA TCTGGATTTA CCTGGATGTG CTCTTTTCTA 1080 CGGCATCCAT CATGCACCTC TGCGCCATCT CCCTGGACCG CTATGTCGCC ATCCAGAACC 1140 CCATTCACCA CAGCCGCTTC AACTCCAGAA CCAAAGCCTT CCTGAAAATC ATTGCCGTGT 1200 GGACCATATC TGTAGGTATA TCCATGCCAA TCCCAGTCTT TGGACTACAG GATGATTCGA 1260 AGGTCTTTAA GGAGGGGAGC TGCCTGCTTG CCGATGACAA CTTTGTTCTC ATAGGCTCTT 1320 TTGTGGCATT TTTCATCCCC CTAACCATCA TGGTGATCAC CTACTTCCTG ACTATCAAGT 1380 CACTTCAGAA AGAAGCCACC TTGTGTGTGA GTGACCTCAG CACTCGAGCC AAACTAGCCT 1440 CCTTCAGCTT CCTCCCTCAG AGTTCTCTGT CATCAGAAAA GCTCTTCCAA CGGTCCATCC 1500 ACAGAGAGCC AGGCTCCTAC GCAGGCCGAA GGACGATGCA GTCCATCAGC AATGAGCAAA 1560 AGGCGTGCAA GGTGCTGGGC ATCGTGTTCT TCCTGTTTGT TGTAATGT GG TGCCCATTCT 1620 TCATCACCAA TATCATGGCC GTCATCTGCA AAGAATCCTG CAATGAAAAT GTCATCGGAG 1680 CCCTGCTCAA TGTGTTTGTC TGGATTGGTT ATCTCTCCTC AGCTGTCAAT CCACTGGTAT 1740 ATACGTTGTT CAATAAAACT TATAGGTCCG CCTTCTCAAG GTACATTCAG TGTCAGTACA 1800 AGGAAAACAG AAAGCCACTG CAGTTAATTT TAGTGAACAC TATACCAGCA TTGGCCTACA 1860 AGTCTAGTCA GCTCCAGGTG GGACAGAAAA AGAACTCACA GGAAGATGCT GAGCAGACAG 1920 TTGATGACTG CTCCATGGTT ACACTGGGGA AACAACAGTC GGAAGAGAAT TGTACAGACA 1980 ATATTGAAAC CGTGAATGAA AAGGTTAGCT GTGTGTGATG AACTGGATGC TATGGCAATT 2040 GCCAGGGCAT GTGAACAAGG TTATACCCAT GTGTGTGGGG CGGGGATAAG GAGGCTGCAA 2100 CAAATTAGAC TACTCCAGTC GACCAACGTA TAATGTCCTG ACAGCATTGG GAGCTAGGAG 2160 TGTTACGATG CTTTAATTAT TGCCAATGAG ATCTCTAAA CCATTGGC217GT

【0096】配列番号:51 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ATGGCCAAAG TTCCAGACAT GTTTG 25SEQ ID NO: 51 Sequence Length: 25 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence ATGGCCAAAG TTCCAGACAT GTTTG 25

【0097】配列番号:52 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GGTTTTCCAG TATCTGAAAG TCAGT 25SEQ ID NO: 52 Sequence Length: 25 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence GGTTTTCCAG TATCTGAAAG TCAGT 25

【0098】配列番号:53 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ATGGCAGAAG TACCTAAGCT CGC 23SEQ ID NO: 53 Sequence length: 23 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence ATGGCAGAAG TACCTAAGCT CGC 23

【0099】配列番号:54 配列の長さ:26 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ACACAAATTG CATGGTGAAG TCAGTT 26SEQ ID NO: 54 Sequence Length: 26 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence ACACAAATTG CATGGTGAAG TCAGTT 26

【0100】配列番号:55 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ATGTACAGGA TGCAACTCCT GTCTT 25SEQ ID NO: 55 Sequence Length: 25 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Type of Sequence: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence ATGTACAGGA TGCAACTCCT GTCTT 25

【0101】配列番号:56 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GTTAGTGTTG AGATGATGCT TTGAC
25
SEQ ID NO: 56 Sequence Length: 25 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence GTTAGTGTTG AGATGATGCT TTGAC
25

【0102】配列番号:57 配列の長さ:21 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ATGAGCCGCC TGCCCGTCCT G 21SEQ ID NO: 57 Sequence length: 21 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence ATGAGCCGCC TGCCCGTCCT G 21

【0103】配列番号:58 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCGAGGCTCA AAGTCGTCTG TTG 23SEQ ID NO: 58 Sequence length: 23 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single stranded Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GCGAGGCTCA AAGTCGTCTG TTG 23

【0104】配列番号:59 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ATGGGTCTCA CCTCCCAACT GCT 23SEQ ID NO: 59 Sequence Length: 23 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence ATGGGTCTCA CCTCCCAACT GCT 23

【0105】配列番号:60 配列の長さ:27 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CGAACACTTT GAATATTTCT CTCTCAT 27SEQ ID NO: 60 Sequence Length: 27 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence CGAACACTTT GAATATTTCT CTCTCAT 27

【0106】配列番号:61 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCTTCTGCAT TTGAGTTTGC TAGCT 25SEQ ID NO: 61 Sequence Length: 25 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence GCTTCTGCAT TTGAGTTTGC TAGCT 25

【0107】配列番号:62 配列の長さ:27 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 TGGCCGTCAA TGTATTTCTT TATTAAG 27SEQ ID NO: 62 Sequence length: 27 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence TGGCCGTCAA TGTATTTCTT TATTAAG 27

【0108】配列番号:63 配列の長さ:23 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ATGAACTCCT TCTCCACAAG CGC 23SEQ ID NO: 63 Sequence Length: 23 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence ATGAACTCCT TCTCCACAAG CGC 23

【0109】配列番号:64 配列の長さ:22 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GAAGAGCCCT CAGGCTGGAC TG 22SEQ ID NO: 64 Sequence length: 22 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GAAGAGCCCT CAGGCTGGAC TG 22

【0110】配列番号:65 配列の長さ:28 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ATGTTCCATG TTTCTTTTAG GTATATCT 28SEQ ID NO: 65 Sequence length: 28 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence ATGTTCCATG TTTCTTTTAG GTATATCT 28

【0111】配列番号:66 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 TGCATTTCTC AAATGCCCTA ATCCG 25SEQ ID NO: 66 Sequence length: 25 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence TGCATTTCTC AAATGCCCTA ATCCG 25

【0112】配列番号:67 配列の長さ:24 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ATGACTTCCA AGCTGGCCGT GGCT 24SEQ ID NO: 67 Sequence Length: 24 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence ATGACTTCCA AGCTGGCCGT GGCT 24

【0113】配列番号:68 配列の長さ:25 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 TCTCAGCCCT CTTCAAAAAC TTCTC 25SEQ ID NO: 68 Sequence Length: 25 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence TCTCAGCCCT CTTCAAAAAC TTCTC 25

【0114】配列番号:69 配列の長さ:32 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GCATCGTTTT GGGTTCTCTT GGCTGTTACT GC 32SEQ ID NO: 69 Sequence length: 32 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence GCATCGTTTT GGGTTCTCTT GGCTGTTACT GC 32

【0115】配列番号:70 配列の長さ:32 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CTCCTTTTTC GCTTCCCTGT TTTAGCTGCT GG 32SEQ ID NO: 70 Sequence Length: 32 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence CTCCTTTTTC GCTTCCCTGT TTTAGCTGCT GG 32

【0116】配列番号:71 配列の長さ:21 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 ATGGATGATG ATATCGCCGC G 21SEQ ID NO: 71 Sequence Length: 21 Sequence Type: Nucleic Acid Number of Strands: Single Strand Sequence Type: Other Nucleic Acid Synthetic DNA Sequence ATGGATGATG ATATCGCCGC G 21

【0117】配列番号:72 配列の長さ:33 配列の型:核酸 鎖の数:一本鎖 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 CTAGAAGCAT TTGCGGTGGA CGATGGAGGG GCG 33SEQ ID NO: 72 Sequence length: 33 Sequence type: Nucleic acid Number of strands: Single strand Sequence type: Other nucleic acid Synthetic DNA Sequence CTAGAAGCAT TTGCGGTGGA CGATGGAGGG GCG 33

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図1】配列番号1〜6の配列のDNA断片をプライマ
ーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図である。
FIG. 1 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 1 to 6 as primers.

【図2】配列番号7〜10の配列のDNA断片をプライ
マーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図であ
る。
FIG. 2 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 7 to 10 as primers.

【図3】配列番号11及び12の配列のDNA断片をプ
ライマーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図で
ある。
FIG. 3 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 11 and 12 as primers.

【図4】配列番号13〜15の配列のDNA断片をプラ
イマーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図であ
る。
FIG. 4 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 13 to 15 as primers.

【図5】配列番号18〜21の配列のDNA断片をプラ
イマーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図であ
る。
FIG. 5 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 18 to 21 as primers.

【図6】配列番号22〜24の配列のDNA断片をプラ
イマーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図であ
る。
FIG. 6 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 22 to 24 as primers.

【図7】配列番号25及び26の配列のDNA断片をプ
ライマーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図で
ある。
FIG. 7 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution carried out using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 25 and 26 as primers.

【図8】配列番号27〜29の配列のDNA断片をプラ
イマーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図であ
る。
FIG. 8 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 27 to 29 as primers.

【図9】配列番号30及び31の配列のDNA断片をプ
ライマーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図で
ある。
FIG. 9 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 30 and 31 as primers.

【図10】配列番号32〜35の配列のDNA断片をプ
ライマーとして用い行ったPCR反応液の電気泳動図で
ある。
FIG. 10 is an electrophoretic diagram of a PCR reaction solution using the DNA fragments having the sequences of SEQ ID NOs: 32 to 35 as primers.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

図1から図10において、1から18までの数字は電気
泳動でのレーンを示し、243、271、310、60
3、872、1078、1353、100及び600は
分子量マーカーの分子量を示す。
1 to 10, the numbers 1 to 18 represent lanes in electrophoresis, 243, 271, 310, 60.
3, 872, 1078, 1353, 100 and 600 represent the molecular weights of the molecular weight markers.

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】配列番号1〜35のいずれかの配列又はそ
れに相同な配列を有する、特異的メッセンジャーRNA
を検出・測定するためのプライマー。
1. A specific messenger RNA having any one of SEQ ID NOs: 1 to 35 or a sequence homologous thereto.
A primer for detecting and measuring.
【請求項2】配列番号1〜29のいずれかの配列又はそ
れに相同な配列を有する、サイトカイン特異的メッセン
ジャーRNAを検出・測定するためのプライマー。
2. A primer for detecting / measuring a cytokine-specific messenger RNA having any one of SEQ ID NOs: 1-29 or a sequence homologous thereto.
【請求項3】配列番号30もしくは配列番号31の配列
又はそれに相同な配列を有する、β−アクチン特異的メ
ッセンジャーRNAを検出・測定するためのプライマ
ー。
3. A primer for detecting / measuring β-actin-specific messenger RNA having the sequence of SEQ ID NO: 30 or SEQ ID NO: 31 or a sequence homologous thereto.
【請求項4】配列番号32〜35のいずれかの配列又は
それに相同な配列を有する、セロトニンレセプター特異
的メッセンジャーRNAを検出・測定するためのプライ
マー。
4. A primer for detecting / measuring a serotonin receptor-specific messenger RNA having any one of SEQ ID NOs: 32 to 35 or a sequence homologous thereto.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003070935A1 (en) * 2002-02-20 2003-08-28 Sysmex Corporation PRIMERS FOR NUCLEIC ACID AMPLIFICATION IN DETECTING HOUSEKEEPING GENE mRNA AND TEST METHOD USING THESE PRIMERS

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