JPH06340556A - イメージング剤としての大環状アミノホスホン酸錯体の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 少ない投与量で用いることができる磁気共鳴
イメージング剤を提供する。 【構成】 大環状アミノホスホン酸、好ましくは１，
４，７，10−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，
10−テトラメチレンホスホン酸、及び常磁性核種、例え
ばＧd ⁺³，Ｍn ⁺²，Ｍn ⁺³もしくはＦe ⁺³の錯体を含む
組成物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、イメージング剤としての大環状
アミノホスホン酸錯体の使用に関する。

【０００２】常磁性金属イオンの錯体は過去５年間、特
に患者の磁気共鳴イメージング(MRI）より得られるイメ
ージを高めるその能力に関しかなり注目されていた。こ
の使用に重要な主要なキレート化剤はアミノカルボキシ
レート同族体、例えばジエチレントリアミン五酢酸（DT
PA）であり、これは米国において現在唯一の市販入手可
能なＭＲＩ薬剤（Scheringによる商品名 MAGNEVIST（商
標))である。ＭＲＩに重要な主要な金属はガドリニウム
（Ｇd ⁺³）、鉄（Ｆe ⁺³）及びマンガン（Ｍn ⁺²又はＭn
⁺³）の常磁性イオンである。これらのイオンはキレー
ト化された金属との強い双極性相互作用により水の緩和
速度を低下させる。

【０００３】ＭＲＩコントラストとして用いられる常磁
性キレートは、種々の組織において水の緩和速度を変
え、動的に不活性であり、そしてすみやかに体から排出
されなければならない（投与数時間内）。最近ヨーロッ
パにおいてＭＲＩ用の有効なＧd キレートとして１，
４，７，10−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，
10−四酢酸（DOTA）が導入された（Guerbet による商品
名 DOTAREM（商標))が、この化合物は米国において入手
できない。Gd−DOTA錯体に関する記載は米国特許第4,87
7,600号及び 4,885,363号にみられる。

【０００４】最近、１，４，７，10−テトラアザシクロ
ドデカン−１，４，７，10−テトラメチレンホスホン酸
(DOTMP）のＧd キレートがＭＲＩコントラストの必要な
特性に関しDOTAと同様に作用することがわかった。DOTM
P のキレートは高度の運動不活性を示し、とても好まし
い生物分布を有し、そして水の緩和を高める。

【０００５】さらに、欧州出願 375,376は、石灰化腫瘍
の治療及び骨の痛みの除去のためのランタニド系列の放
射活性核種との錯体として本発明のリガンドの使用を開
示している。この錯体は石灰性部位、例えば骨、転移性
骨腫瘍、及び石灰化軟質組織に優先的に結合することが
示された。石灰化軟質組織はダメージをうけた心臓組織
が石灰化する心臓発作の結果である。またこれらの錯体
は過剰のリガンドを必要とせず石灰性表面へ放射性核種
を輸送できる。従って、低投与量の錯体で達成可能であ
り、リガンドに対する金属の低い比も可能である。

【０００６】本発明は、動物の磁気共鳴イメージング(M
RI）剤として用いるための大環式アミノホスホン酸錯体
並びに活性成分として大環式アミノホスホン酸と錯化し
た常磁性核種を有する組成物及び配合物に関する。

【０００７】特に、本発明は（１）下式

【化５】 〔上式中、置換基Ａ，Ｂ，Ｃ，及びＤは独立に水素、１
〜８個の炭素原子を有する炭化水素基、又は下式

【化６】 （式中、Ｘ及びＹは独立に水素、ヒドロキシ、カルボキ
シ、ホスホン、又は１〜８個の炭素原子を有する炭化水
素基であり、ｎは１〜３であり、ただしｎが１より大き
い場合各Ｘ及びＹは同じであるか又は他の炭素原子を有
する異なるものであってよく、Ｘ′及びＹ′は独立に水
素、メチルもしくはエチル基であり、ｎ′は２もしくは
３である）の成分及び酸基の生理学的に許容される塩で
あり、ただし前記窒素原子の少なくとも２個はリン含有
基である〕の大環状アミノホスホン酸；及び（２）少な
くとも１種の常磁性核種を有し、（２）に対する（１）
のモル比が１：１である錯体を含む石灰性サイト探索組
成物を動物に投与することを含む、動物の磁気共鳴イメ
ージングにおける診断使用方法に関する。

【０００８】この組成物は公知の石灰性サイト探索ＭＲ
Ｉ剤より少ない投与量及び／又は低い金属に対するリガ
ンドの比で用いることができる。本発明の組成物は金属
イオンに対するリガンドの理論比で石灰性表面に特異的
に常磁性核種を輸送することができる。この標的特異性
はＭＲＩコントラスト剤として DOTMP錯体を特に重要な
ものにする。それはこの錯体が石灰化された組織が存在
する体の部位又は骨の高いコントラストイメージを形成
するからである。例えば、心臓発作後石灰化がおこるこ
とが公知である心臓イメージングである。

【０００９】さらに、本発明は、式（Ｉ）の大環式アミ
ノホスホン酸の少なくとも１種と錯化した常磁性核種の
少なくとも１種、及び薬学上許容されるキャリヤー、賦
形剤又はビヒクルを有する、この方法に用いるための配
合物を含む。

【００１０】そのような配合物の製造方法は公知であ
る。この配合物は減菌されており、懸濁液、注射可能な
溶液又は他の好適な薬学上許容される配合物の形状であ
ってよい。薬学上許容される懸濁媒質を用いてもよい。

【００１１】本発明は、ＭＲＩ剤として作用する１種以
上の他の薬剤と組み合せた上記錯体、組成物又は配合物
の使用を含む。

【００１２】驚くべきことに、大環状アミノホスホン酸
錯体、例えばGd−DOTMP は、低い金属に対するリガンド
のモル比において、及び１：１の金属に対するリガンド
のモル比においてさえ生体内で低い軟質組織局在化と共
にすぐれた石灰性サイト探索能を有する。これは、K.Ad
zamli らのJ.Med.Chem. 32,139〜144(1989) に記載され
ているGd−EDTMP のような他のアミノホスホネートのＧ
d 錯体とは異なる。希土類とのDOTMP 錯体の予想外の不
活性がSm−DOTMP により示され（欧州出願 375,376参
照）、我々は、１：１の金属に対するリガンドのモル比
でpH１〜pH13で安定であることを知った。対照的に、我
々はSm−EDTMP について７：１の金属に対するリガンド
のモル比でSm−EDTMP がpH７付近でのみ安定であり、低
い及び高いpHにおいて容易に解離することを発見した。
従って、他の希土類金属、例えばＧd も同様に挙動する
であろう。

【００１３】理論付けようとするものではないが、本発
明の有利な結果は、Ｇd 金属イオンとの DOTMPの錯体の
高い安定性及び不活性度の結果であるGd−DOTMP 錯体の
生体内におけるすぐれた非標的組織に対する標的組織の
比のため得られる。

【００１４】驚くべきことに、本発明は、常磁性核種及
び式（Ｉ）の化合物を有する錯体を含む石灰性サイト探
索組成物を動物に投与することを含む、動物の磁気イメ
ージングにおける診断使用方法に関する。

【００１５】好ましい大環状アミノホスホン酸は、１，
４，７，10−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，
10−テトラメチレンホスホン酸(DOTMP）である。好適な
薬学上許容されるキャリヤーとの配合物として組成物を
投与してもよい。

【００１６】本発明の「常磁性核種」は、スピン角運動
量及び／又は軌道角運動量を示す金属イオンを意味す
る。この２つのタイプの運動量は組み合さり、不対電子
を有する原子に大きく及びそのような原子の環境に一部
依存する観察される常磁性モーメントを与える。本発明
において有効であることがわかった常磁性核種は、ガド
リニウム（Ｇd ⁺³）、鉄（Ｆe ⁺³）及びマンガン（Ｍn
⁺²又はＭn ⁺³）であり、Ｇd ⁺³ が好ましい。

【００１７】常磁性核種及びリガンドはこの２種が錯体
を形成するどのような条件で結合してもよい。通常、調
節されたpH（pHの選択はリガンド及び常磁性核種の選択
に依存する）での水中混合が必要である。形成される錯
体は化学結合により、そして比較的安定な常磁性核種組
成物となり、例えばリガンドからの常磁性核種の解離に
対し安定である。

【００１８】本発明の組成物は公知の石灰化サイト探索
ＭＲＩ剤よりも低い投与量及び／又は低い金属に対する
リガンド比で用いてよい。この組成物は金属イオンに対
するリガンドの化学量論比で石灰性表面に特異的に常磁
性核種を輸送する。この組成物により与えられるこの化
学量論比に対する１つの利点は、標的石灰性サイトへの
多量の金属の輸送を許容することである。

【００１９】大環状アミノホスホン酸錯体は少なくとも
１：１好ましくは１：１〜３：１、より好ましくは１：
１〜５：１の金属に対するリガンドのモル比で投与した
際、すぐれた骨格剤と一致する生物分布を与える。対照
してみると、ある種の他の非大環状アミノホスホン酸錯
体は、過剰量のリガンドを用いない場合軟質組織（例え
ば肝臓）にいくらか局在する。錯体形成しないリガンド
は動物に有毒であり又は心臓停止もしくは低カルシウム
発作をおこすので大過剰のリガンドは望ましくない。さ
らに、大環状アミノホスホン酸リガンドは多量の金属を
必要とする場合有効である。この場合、大環状アミノホ
スホン酸リガンドは、同量の非環状アミノホスホン酸リ
ガンドを用いる場合よりも多量の金属を骨に付着させる
能力を有する。

【００２０】アミノホスホン酸は多くの公知の合成法に
より製造される。特に重要な方法は、少なくとも１種の
反応性アミン水素を含む化合物とカルボニル化合物（ア
ルデヒドもしくはケトン）及びリン酸もしくはこれらの
誘導体との反応である。大環状アミノホスホン酸の製造
に用いられるアミン前駆体（１，４，７，10−テトラア
ザシクロドデカン）は市販入手可能な材料である。

【００２１】カルボキシアルキル基を含むアミン誘導体
を与えるためのカルボキシアルキル化法は、アミン窒素
上にアルキルホスホン及びヒドロキシアルキル置換基を
与える方法（米国特許第 3,398,198号）と同様公知であ
る（米国特許第 3,726,912号）。

【００２２】本発明のリガンドは、我々の欧州出願 37
5,376号に記載された方法により製造された。

【００２３】本発明の組成物及び配合物は、特に石灰性
サイト用のＭＲＩコントラスト剤としての使用に好適で
ある。

【００２４】さらに、本発明は上記のような少なくとも
１種の大環状アミノホスホン酸、特に式（II）の大環状
アミノホスホン酸と錯体形成した少なくとも１種の常磁
性核種、及び薬学上許容されるキャリヤー、賦形剤もし
くはビヒクルを有する配合物を含む。そのような配合物
の製造方法は公知である。この配合物は減菌されてお
り、懸濁液、注射溶液又は他の好適な薬学上許容される
配合物の形状である。薬学上許容される懸濁媒質（助剤
を含んでいても含んでいなくてもよい）を用いてよい。
減菌組成物が動物への投与に好適である。

【００２５】便宜上、本発明の常磁性核種−大環状アミ
ノホスホン酸錯体を有する組成物を「常磁性核種組成
物」又は「組成物」と呼び、大環状アミノホスホン酸誘
導体を「リガンド」又は「キレート」と呼ぶ。

【００２６】「動物」とは人間を含む温血哺乳類を意味
し、診断用にイメージングを必要とする動物を含包す
る。

【００２７】本発明において、錯体及びその生理学上許
容される塩は同等と考えられる。生理学上許容される塩
は、用いられるリガンドの少なくとも１個の酸基と塩を
形成しそして良好な薬理作用に一致する投与量で動物に
投与した際生理作用に悪影響を与えない塩基の酸付加塩
を意味する。好適な塩基は、例えばアルカリ金属及びア
ルカリ土類金属水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、例えば
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウ
ム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸マグネシ
ウム、アンモニア、一級、二級及び三級アミン等を含
む。生理学上許容される塩は上記の大環状アミノホスホ
ン酸、特に式（II）のものを適当な塩基で処理すること
を含む。

【００２８】本発明の配合物はリガンドと錯体形成した
常磁性核種を含む固体又は液体である。この配合物は使
用前の適当な時に２種の成分を混合するキット形状であ
ってよい。予備混合した又はキットのいずれでも、配合
物は通常薬学上許容されるキャリヤーを必要とする。し
ばしば配合物中緩衝剤を有することが望ましい。好適な
緩衝剤の例はリン酸塩、炭酸水素塩及びＮ−２−ヒドロ
キシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸(H
EPES) である。

【００２９】本発明の注射可能な組成物は懸濁液又は溶
液のいずれであってもよい。好適な配合物の製造におい
て、通常塩の水溶性は遊離酸より大きいと考えられる。
溶液において、錯体（又は別々の成分を望む場合）は薬
学上許容されるキャリヤーに溶解される。そのようなキ
ャリヤーは好適な溶剤、防腐剤、例えばベンジルアルコ
ール、及び緩衝剤を含む。有効な溶剤は、例えば水、水
性アルコール、グリコール、及びホスホネートもしくは
カーボネートエステルを含む。そのような水溶液は有機
溶剤を50体積％以下含む。

【００３０】本発明の組成物としての注射可能な懸濁液
はキャリヤーとして液体懸濁媒質（助剤を含んでいても
よい）を必要とする。この懸濁媒質は、例えば水性ポリ
ビニルピロリドン、不活性油、例えば植物油もしくは強
化鉱物油、又は水性カルボキシメチルセルロースであっ
てよい。好適な生理学上許容される助剤（錯体を懸濁液
中に保つに必要な場合）は増粘剤、例えばカルボキシメ
チルセルロース、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、及
びアルギン酸塩より選ばれる。多くの界面活性剤、例え
ばレシチン、アルキルフェノール、ポリエチレンオキシ
ド付加物、ナフタレンスルホネート、アルキルベンゼン
スルホネート、及びポリオキシエチレンソルビタンエス
テルも懸濁助剤として有効である。液体懸濁媒質の親水
性、密度、及び表面張力に影響を及ぼす多くの物質は個
々のケースにおいて注射可能な懸濁液の製造を助ける。
例えば、シリコーン消泡剤、及び糖は有効な懸濁剤であ
る。

【００３１】上記常磁性核種の組み合せを所望のコント
ラスト又は診断情報を得るため連続的に又は同時にＭＲ
Ｉ剤として投与してよい。本発明のリガンドの１つと錯
体形成した異なる常磁性核種の使用は望ましくは確認す
る診断情報を与える。同時に錯体形成し、２種の別々の
錯体形成した常磁性核種を混合し、又は２種の異なる錯
体形成した常磁性核種を連続して投与することによりこ
の組み合せを錯体形成してよい。組成物又は配合物は一
回で又は長期間にわたり多数回投与してよい。

【００３２】本発明の組成物は他の活性成分及び／又は
この組成物の診断効果を高める及び／又は組成物の投与
を容易にする成分と共に用いてよい。

【００３３】本発明の種々の錯体の生物分布を定性的に
測定する研究は、この組成物をラットに投与し、投与後
２時間までの様々な時間において動物全体のガンマ線イ
メージを得ることにより行なわれた。

【００３４】定量的生物分布は50〜 100μｌの組成物を
麻酔をかけていない雄のSprague Dawleyラットの尾の静
脈に投与することにより得られた。次いで解剖する前に
排出したすべての尿を集めるためこのラットを吸収紙を
ひいたケージに入れた。一定時間後、頸脱臼によりラッ
トを殺し、種々の組織を切開した。サンプルを生理食塩
水で洗い、吸収紙上で乾燥し、計量した。サンプルの放
射活性を NaIシンチレーションカウンターで測定した。

【００３５】本発明を以下の実施例によりさらに明確に
するが、これは本発明の単なる例である。

【００３６】出発材料例Ａ ：DOTMP の調製 温度計、還流冷却器、及び加熱マントルを取り付けた 1
00mlの三口丸底フラスコに3.48ｇ(20.２ミリモル）の
１，４，７，10−テトラアザシクロドデカン及び14mlの
水を加えた。この溶液を 17.２mlの濃HCl 及び7.２ｇの
H₃PO₃(87.８ミリモル）で処理し、 105℃に加熱した。
還流懸濁液を激しく攪拌し、１時間かけて13ｇ（160.２
ミリモル）のホルムアルデヒド（37wt％水中）で処理し
た。最後にさらに２時間加熱還流し、その後加熱を止
め、反応溶液を冷却し、室温に 62.５時間放置した。次
いで反応溶液を真空中40℃で粘稠な褐色半固体まで濃縮
した。水30mlを固体に加え、すると溶解し始めたが次い
で固化し始めた。懸濁液全体を攪しく攪拌しながら 400
mlのアセトンに注いだ。得られるオフホワイトの沈殿を
真空濾過し、一晩乾燥し 10.69ｇ（収率97％）の粗DOTM
P を得た。 700μｌの農水酸化アンモニウム(10.０ミリ
モル）を 100μｌづつ加え２〜３のpHの溶液を与えるこ
とにより粗DOTMP のサンプル2.０ｇ（3.65ミリモル）を
２mlの水に溶解した。この溶液を１度に4.５mlの３N HC
l(13. ５ミリモル）に加え、よく混合し、静置させた。
１時間以内に小さな四角形の結晶が液体面の下のガラス
の両サイドに形成し始めた。さらに 111時間結晶成長を
続けさせ、その後結晶を容器の壁からゆっくりくみ出
し、濾過し、３mlの水で４回洗浄し、一定の重量まで風
乾し、1.19ｇ（収率60％）の白色結晶固体DOTMP を得
た。

【００３７】例Ｂ：DOTMP の調製 250mlの三口、丸底フラスコに6.96ｇ（0.04モル）の
１，４，７，10−テトラアザシクロドデカンを入れた。
このフラスコに 14.５ｇ(0.177モル）のリン酸、30mlの
脱イオン水及び28mlの濃塩酸(0.336モル）を加えた。

【００３８】このフラスコを還流冷却器に接続し、熱コ
ントローラーを備えた温度計を取り付けた。 26.０ｇ
(0.32モル）の37％ホルムアルデヒド水溶液の別の溶液
を 100mlの添加漏斗に加え、フラスコに接続した。激し
く攪拌しながらこのフラスコを還流温度（約 105℃) に
上げた。ホルムアルデヒド溶液を30〜40分かけて加え
た。この溶液をさらに３時間加熱及び攪拌し、次いでゆ
っくり周囲温度に冷却した。

【００３９】反応溶液を 500mlの丸底フラスコに移し、
ロータリーエバポレーターに接続した。この溶液は粘稠
な、琥白色の半固体になった（注−温度は40℃を超えて
はならない）。この半固体を約 300mlのHPLCグレードア
セトンで処理し、明るい褐色の粘稠な油を得た。この油
を22mlの水に溶解し、激しく攪拌しながら１リットルの
アセトンにゆっくり加えた。アセトンをデカントし、明
るい色の油を真空下乾燥し、 16.６ｇ（収率76％）の粗
DOTMP を得た。この粗DOTMP13.１ｇに種結晶と共に 39.
３ｇの脱イオン水を加え、この溶液を一晩放置した。得
られる沈殿を真空濾過し、冷水で洗い、真空下乾燥し、
4.75ｇのDOTMP(収率36％）を得た。

【００４０】濃水酸化アンモニウム2.２ml(31.５ミリモ
ル）の添加により上記DOTMP 3.０ｇ（5.47ミリモル）を
３mlの水に溶解することによってさらに精製を行なっ
た。この溶液を2.４ml(28.８ミリモル）の濃HCl の添加
により酸性にした。この際白色固体が沈殿した。この沈
殿を真空濾過し、乾燥し、³¹Ｐ減結合ＮＭＲスペクトル
において 11.５ppm でのシングレット（85％ H₃PO₄に対
し）を特徴とする精製したDOTMP を2.42ｇ（収率81％）
得た。

【００４１】例Ｃ：DOTMP の調製 50mlの三口、丸底フラスコに2.０ｇ(11.６ミリモル）の
１，４，７，10−テトラアザドデカンを入れた。5.56ｇ
の濃HCl 及び3.85ｇのリン酸の添加によりアミンを可溶
にした。このフラスコに温度計及び還流冷却器を取り付
け、ヒーター／攪拌器上にのせた。一定に攪拌しなが
ら、この溶液を還流温度にした。Sage（商標）シリンジ
ポンプに4.33ｇの37％(vol／vol)ホルムアルデヒド溶液
を入れた。この溶液を0.１ml／分の速度で反応フラスコ
にゆっくり入れた。この温度で６時間加熱した。次いで
反応溶液を冷却し、中程度のガラスフィルター漏斗を通
し濾過し、ロータリーエバポレーターにより乾燥した。
固体を脱イオン水で２回洗浄し、次いで蒸発させ粘稠
な、琥珀色の半固体を得た。この生成物をメタノール中
で粉砕し、濾過し1.６ｇの黄褐色の固体を得た。メタノ
ール層を乾燥し（暗琥珀色の粘稠な液体）、真空オーブ
ン内で一晩乾燥した。生成物の総重量は6.17ｇであっ
た。

【００４２】２つの上記面分を 100mlの丸底フラスコに
入れ、ホスホノメチル化工程を再び一晩行った。溶液を
冷却し、前記のように仕上げた。生成物の総量は4.３ｇ
であった。生成物の³¹P NMR はDOTMP のものと一致し
た。

【００４３】最終生成物例１ ：Gd−DOTMP の調製 フラスコの風袋を計量し、例Ｃの方法により製造した20
0mg(0.36ミリモル）のDOTMP 、及び3.０mlの脱イオン水
を入れた。固体がすべて溶解するまで濃NH₄OHをμｌ単
位でフラスコに加えた。次いで溶液を攪拌しながら80℃
に加熱した。この溶液に攪拌しながらガドリニウム・ト
リアセテートの0.２Ｍ溶液を1.５ml(0.300ミリモル）１
滴ずつ加えた。得られる溶液を80℃に10分間保った。こ
の溶液を冷却し、pHを0.５mlの６N HCl を用いて7.０に
調節した。錯体 100μｌに1.０mlのD₂O 及び3.９mlの脱
イオン水を加え 680μMolar の最終錯体濃度を与えた。
この溶液は20％のD₂O (vol／vol)を含んでいる。

【００４４】例２：Ｔ₁ 緩和時間の測定 例１からの錯体に20分間乾燥窒素ガスを吹込むことによ
り酸素を除去した。次いでこのサンプルを５mmＮＭＲチ
ューブに入れ、水プロトン緩和時間を測定するため 270
MHz スペクトロメーター内に入れた。

【００４５】緩和時間の測定に用いられるＮＭＲ実験
は、スピン−格子（Ｔ₁ ）緩和時間を測定するための標
準反転回復法であった。この方法において、水プロトン
ＮＭＲ共鳴の強さはスピン系が平衡に向って緩和する間
の高周波パルスの間の可変減衰時間の関数として測定さ
れる。減衰時間に対するピーク強さからなる最終データ
をプロットし、指数関数に適合させた。適合させた指数
関数の時間定数より回復するためのスピン磁化に特徴的
な時間（Ｔ₁ ）が得られる。例１の錯体に対するＴ₁ の
値は244mS であった。この錯体を用いて実験を繰り返し
た場合、Gd−DTPAに対し422mS 、Gd−DOTAに対し540mS
の値に対しこの値は好ましい。Gd−DTPA及びGd−DOTAは
公知の市販ＭＲＩ剤である。

【００４６】例３： ¹⁵⁹Gd−DOTMP の生物分布 例Ｂの方法により製造したDOTMP のサンプル1.45mgをバ
イアルに入れ、 760μｌの水及び５μｌの50％（wt／w
t) のNaOHに溶解した。トレーサー量の ¹⁵⁹Gdを含むGd
溶液（0.１N HCl 中0.３mM Gd)1000mlを別のバイアルに
入れ、15μｌのDOTMP 溶液を加えた。この溶液のpHをNa
OHを用いて７〜８に調節した。錯体としてのGdの量はカ
チオン交換クロマトグラフィーにより＞99％と決定され
た。この配合物は1.５の金属に対するリガンドのモル比
を有している。

【００４７】Sprague Dawleyラットに上記配合物を投与
し、生物分布を調べた。ラットを５日間順応させ、次い
で尾静脈より上記Gd溶液を 100μｌ投与した。投与の
際、ラットの体重は 150〜 200ｇであった。２時間後、
頸脱臼によりラットを殺した。組織を取り出し、計量
し、各組織の放射活性の量をマルチチャンネルアナライ
ザーに接続した NaIシンチレーションカウンター内でカ
ウントすることにより測定した。各組織のカウントを 1
00μｌ標準のカウントと比較し、各組織中の投与された
量の割合を測定した。各組織の投与した量の割合を表１
に示す。金属（Gd）に対するリガンド(DOTMP) のモル比
は1.５である。

【表１】

【００４８】例４：Gd−DOTMP 錯体の調製 例Ｂの方法により製造した DOTMPのサンプル 54.３mg(8
6.３μMol)を、濃 NH₄OH 0.049ml加えることにより４ml
の水に溶解した。これはpH＝6.33の 0.021ＭのDOTMP の
溶液を与えた。このリガンド溶液３ml（64μMol)を82℃
に加熱し、0.２Ｍガドリニウムトリアセテート溶液 291
μｌ（58μMol)で処理した。ガドリニウムの添加は少量
（20〜50μｌ）づつ20分かけて行った。この添加の間濃
NH₄OH を５μｌづつ加えることによりpHを6.０以上に保
った。ガドリニウムトリアセテート溶液をすべて添加し
た後、20μｌ以上のNH₄OH の添加によりpHを6.56〜7.53
に調節した。この錯体の溶液を室温に冷却し、その際pH
は8.11であった。この溶液のアニオン交換HPLC分析は、
溶液中12％（ＵＶ積分による）リガンド及び88％（ＵＶ
積分による）Gd−DOTMP 錯体の存在を示した。この結果
は理論上存在すべき10％リガンド及び90％錯体に一致す
る。

【００４９】例５：ラット中のGd−DOTMP 錯体の生物分
布 150ｇのSprague Dawleyラットに例４で製造したGd−DOT
MP を 100μｌづつ４日間投与した。このラットを殺
し、その大腿骨の１本を取り出し、計量し 0.690ｇであ
った。この骨を５mlの濃HCl に溶解し、誘導プラズマ分
光器でGdについて分析した。大腿骨にみられるGdの量は
16.76μｇであり、これはラット骨全体において 419μ
ｇに相当する（大腿骨を骨全体の１／25とする）。これ
は投与量の25.５％が骨に達していることになる。この
結果は、投与量の約25〜30％が骨に集った放射活性トレ
ーサー ¹⁵³Ｓm についての同様の実験と一致する。従っ
て、Sm−DOTMP 及びGd−DOTMP の生体内の挙動はとても
類似している。

【００５０】本発明の他の実施態様は、本明細書より当
業者に明らかであろう。この明細書及び実施例の記載は
単なる例示であって、本発明の真の範囲は請求の範囲に
より示される。

【手続補正書】

【提出日】平成３年７月１０日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【化１】 〔上式内、置換基Ａ，Ｂ，Ｃ及びＤは独立に水素、１〜
８個の炭素原子を有する炭化水素基、又は下式

【化２】 （式中、Ｘ及びＹは独立に水素、ヒドロキシ、カルボキ
シ、ホスホン、又は１〜８個の炭素原子を有する炭化水
素基であり、ｎは１〜３であり、ただしｎが１より大き
い場合各Ｘ及びＹは同じであるか又は他の炭素原子を有
する異なるものであってよく、Ｘ′及びＹ′は独立に水
素、メチルもしくはエチル基であり、ｎ′は２もしくは
３である）の成分及び酸基の生理学的に許容される塩で
あり、ただし前記窒素原子の少なくとも２個はリン含有
基である〕の大環状アミノホスホン酸；及び（２）少な
くとも１種の常磁性核種を有し、（２）に対する（１）
のモル比が１：１である錯体を含む石灰性サイト探索組
成物を動物に投与することを含む、動物の磁気共鳴イメ
ージングにおける診断使用方法。

【化３】 〔上式中、置換基Ａ，Ｂ，Ｃ及びＤは独立に水素、１〜
８個の炭素原子を有する炭化水素基、又は下式

【化４】 （式中、Ｘ及びＹは独立に水素、ヒドロキシ、カルボキ
シ、ホスホン、又は１〜８個の炭素原子を有する炭化水
素基であり、ｎは１〜３であり、ただしｎが１より大き
い場合各Ｘ及びＹは同じであるか又は他の炭素原子を有
する異なるものであってよく、Ｘ′及びＹ′は独立に水
素、メチルもしくはエチル基であり、ｎ′は２もしくは
３である）の成分及び酸基の生理学的に許容される塩で
あり、ただし前記窒素原子の少なくとも２個はリン含有
基である〕の大環状アミノホスホン酸；及び（２）少な
くとも１種の常磁性核種を有し、（２）に対する（１）
のモル比が１：１である錯体を含む組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジョセフ アール．ガーリッチ アメリカ合衆国，テキサス 77566，レイ ク ジャクソン，サウザン オークス ド ライブ 301

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （１）下式 【化１】 〔上式中、置換基Ａ，Ｂ，Ｃ及びＤは独立に水素、１〜
   ８個の炭素原子を有する炭化水素基、又は下式 【化２】 （式中、Ｘ及びＹは独立に水素、ヒドロキシ、カルボキ
   シ、ホスホン、又は１〜８個の炭素原子を有する炭化水
   素基であり、ｎは１〜３であり、ただしｎが１より大き
   い場合各Ｘ及びＹは同じであるか又は他の炭素原子を有
   する異なるものであってよく、Ｘ′及びＹ′は独立に水
   素、メチルもしくはエチル基であり、ｎ′は２もしくは
   ３である）の成分及び酸基の生理学的に許容される塩で
   あり、ただし前記窒素原子の少なくとも２個はリン含有
   基である〕の大環状アミノホスホン酸；及び（２）少な
   くとも１種の常磁性核種を有し、（２）に対する（１）
   のモル比が１：１である錯体を含む石灰性サイト探索組
   成物を動物に投与することを含む、動物の磁気共鳴イメ
   ージングにおける診断使用方法。
2. 【請求項２】 大環状アミノホスホン酸が１，４，７，
   10−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，10−テト
   ラメチレンホスホン酸である、請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 常磁性核種がＧd ⁺³，Ｆe ⁺³，Ｍn ⁺²又
   はＭn ⁺³である、請求項１又は２記載の方法。
4. 【請求項４】 常磁性核種がＧd ⁺³である、請求項３記
   載の方法。
5. 【請求項５】 錯体が薬学上許容されるキャリヤー、賦
   形剤又はビヒクルを有する、請求項１記載の方法。
6. 【請求項６】 高度の運動不活性を示す、請求項１，
   ２，３又は４記載の方法。
7. 【請求項７】 錯体がＧd ⁺³を有する１，４，７，10−
   テトラアザシクロドデカン−１，４，７，10−テトラメ
   チレンホスホン酸を含む、請求項５記載の方法。
8. 【請求項８】 動物の磁気共鳴イメージングにおける石
   灰性サイト探索診断剤として用いるための、（１）下
   式、 【化３】 〔上式中、置換基Ａ，Ｂ，Ｃ及びＤは独立に水素、１〜
   ８個の炭素原子を有する炭化水素基、又は下式 【化４】 （式中、Ｘ及びＹは独立に水素、ヒドロキシ、カルボキ
   シ、ホスホン、又は１〜８個の炭素原子を有する炭化水
   素基であり、ｎは１〜３であり、ただしｎが１より大き
   い場合各Ｘ及びＹは同じであるか又は他の炭素原子を有
   する異なるものであってよく、Ｘ′及びＹ′は独立に水
   素、メチルもしくはエチル基であり、ｎ′は２もしくは
   ３である）の成分及び酸基の生理学的に許容される塩で
   あり、ただし前記窒素原子の少なくとも２個はリン含有
   基である〕の大環状アミノホスホン酸；及び（２）少な
   くとも１種の常磁性核種を有し、（２）に対する（１）
   のモル比が１：１である錯体を含む組成物。
9. 【請求項９】 大環状アミノホスホン酸が１，４，７，
   10−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，10−テト
   ラメチレンホスホン酸である、動物の磁気共鳴イメージ
   ングにおける石灰性サイト探索診断剤として用いるため
   の請求項８記載の組成物。
10. 【請求項10】 常磁性核種がＧd ⁺³，Ｆe ⁺³，Ｍn ⁺²又
    はＭn ⁺³である、請求項８又は９記載の組成物。
11. 【請求項11】 薬学上許容されるキャリヤー、賦形剤又
    はビヒクルが存在する、請求項10記載の組成物。