JPH05505591A - 殺線虫菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 殺線虫画側 侠亜盆肚 本発明は、新規バエシロミセス・−巧シナス・（トム）サムソン（乃猥虱す旦ざ ヨ１ｉ１ａｃｉｎｕｓσ’ｈａｍ）　Ｓａｍｓｏｎ）菌株、バエシロミセス・リ ラシナス菌株の胞子を含有する殺線虫画側、および線虫による寄生被害を抑制す る方法に関するものである。

！念技亜 植物寄生性の線虫による有用な農作物や園芸作物の損傷や破壊は農業における深 刻な問題であり、そしてそれはがなりの経済的損失である。過去においては、線 虫の駆除は一般に殺線虫化学薬剤を農場に散布することにより行っていた。しか しながら、殺線虫化学薬剤は線虫の薬剤耐性が強まるにつれ、また薬剤を分解す る土壌生物の蓄積により常にその効果を失うことになる。又、殺線虫化学薬剤の 散布は環境汚染の問題がらしばしば好ましくないことがあり、近年では多くの薬 剤がその毒性や環境への蓄積という好ましくない理由から市場から姿を消してい る。

そこで、線虫を生物学的に駆除することは殺線虫化学薬剤の使用にがゎる魅力的 な代替方法であり、そして多くの実験室規模の実験によりその目的の達成のため に線虫食性の真菌類を使用することが可能であることがわがっな。しがしながら 、実験を実際の収穫サイクルにおける殺菌してない土壌へと拡大応用すると、い つもその結果は失望的なものであった。その結果、Ｓｔｆｌｉｎｇは疑いもなく 最近になって、「生物学的な駆除方法は少なくとも今世紀末までは線虫駆除計画 においては無意味なものとなろう」と予言した（１９８８、”Ｂｉｏｌｏｇｉｃ ａｌ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆＰｌａｎｔＰａｒａｓｉｔｉｃ　Ｎａｍａｔｏｄｅ ｓ”、’Ｔ）ｉｓｅａｓｅｓ　ｏｒ　Ｎａｍａｔｏｄｅｓ”、第■巻（Ｇ、Ｏ， Ｐｏ１ｎａｒ及びＥh−Ｂ Ｊａｎｓｓｏｎ　編）、９３−１３９ページ、ＣＲＣＰｒｅｓｓ社、Ｂｏｃａ　 Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ）。たいていのそのような実験の失敗となっていた 理由は、土壌生態系はいろいろな微生物間の複雑な相互反応を含んでおり、また そのような系に経済的に実行可能な別の微生物を加えることによってその系を変 更操作することは非常に困難であろうからである（Ｖａｎ　Ｇｕｎｄｙ　、　１ ９８５、”Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕ ｒａ１人［ＰＭ　Ｓｙｓ狽■高刀f （Ｍ、Ａ、　Ｈａｙ　ａｎｄ　Ｄ、Ｃ，Ｈｅｒｘｏｆｉ、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐ ｒｅｓｓ刊）、４６８−４７８ページ）。

１５０種以上もの土壌真菌類が線虫類を攻撃しそして破壊することが知られてお り、そして文献でこれらをよく調べることもできる（Ｊａｔａｌａ、　１９８６ ．　ＡＩ□、Ｒｅｖ。

Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ、、２４４５９−４８９）。線虫食性の真菌類は大きく わけて二つのグループに分けることができる。その一つは、（１）機械的な又は 接着性の捕獲器を作りだす線虫捕獲真菌類であり、もう一つは、（２）体内寄生 性真菌類であり、これらはその分生子（胞子）が線虫の表皮に取りこまれたりあ るいはそれに付着することにより線虫類をおかすものである。

過去において、その成長において土壌線虫類の存在に依存する線虫捕獲真菌類を その生物学的抑制剤として使用する試みがなされたことがある。その一つの例と して、アルスロポトリスｓｐｐ、　（Ｎ辿ｍ地に■ｓｐｐ、）を基剤とする市販 品がある。

しかしながら、この市販品は非常に限られた成功を収めたにすぎながった。

ある種の腐生植物性土壌真菌類は線虫類の卵に寄生することができる（Ｓｔｉｒ ｌｉｎｇ、上記文献）。この種の真菌類は土壌線虫類の集落に著しく効果的であ るので、その生物学的抑制剤としてもっとも重要とされるものである（Ｓｔｅｒ ｌｉｎｇ　＆Ｍａｎａｋａｎ、　１９７Ｂ、　Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ　ＺＱ、　７ ７４−７８３）　、Ｊａｔａｌａ　ら（１９７９，Ｊ、　ＮｅｍａｔｏｌA　Ｗ ２Ｏ３）は、バエシロミセス・リラシナス■ａｅｃｉｌｏｍ　ｃｅｓ　１ｉｌａ ｃｉｎｕｓ）がメロイドジンｓｐｐ、　（７ｓｐｐ、）及びグロボデラｓｐｐ、 　（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ　ｓｐｐ、）の卵に効果的に寄生したと述べた。Ｐ、　 １ｉｌａｃｉｎｕｓのペルーの単離体を応用しようとする方法論が発展し、また この特種な生物を使用する試みについているいろな国々でたくさんの研究がおこ なわれた。そのいくつかの成果は明らかに有望なものであったが、この研究のほ とんどは公開されることもなくまたされたとしてもそれらの多くは要領の得ない ものであった（Ｊａｔａｌａ、　１９８６　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｐｈｙｔｏｐ ａｔｈｏｌ、　Ｋ　４５９−４８９）。

過去５年間以上のこの文献を再調査したところ、植物寄生性線虫類を生物学的に 抑制するための実質的な実験室規模のあるいは温室規模の実験はあったものの、 その全体的な状況は混乱したもので有り、そしてまた農業分野に即座に実用化で きるような首尾一貫した具体例に欠けたものであった。Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕ ｓに関して言うと、もみ殻と米ぬかとの混合物に成育したイニセリア（ｉｎｙｃ ｅｌｉａ）あるいは切り花のスイレンから得られた胞子を土壌に混入すると、オ クラを侵すメロイドジン。

インコグニタ（Ｍｅｌｏｉｄｏ　ｅ　１ｎｃｏ　１ｔａ）を著しく抑制すること が知られている（Ｄａｖｉｄｅ　＆　Ｚｏｒｉｌｌａ、　１９８５．　Ｐｈ１１ ．　Ａｇｒｉｃ、　％　４９３−５００）。又、これは殺線虫性化学薬剤である アルジカルブ（Ａｌｄｉｃａｒｂ）に比べて、温室での実験においてとうもろこ し、トマト及びオクラにおいての７に対してもよい結果がえられた（Ｉｂｒａｈ ｉｎら、１９８７．　Ｎｅｍａｔｏｌ、　Ｍｅｄｉｔ、　Ｌ２．１６５−１６８ ）。しがしながら、Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ■ バステラリア・ペネトランス（Ｐａｓｔｅｕｒｉａ　ｅｎｅｔｒａｎｓ）との混 合物をビシア・ビロサ（Ｖｉｃｉａ　ｖｉｌｌｏｓａ）での実験に使用したとこ ろＪに対しては確定的な結果は得られなかった（Ｄｕｂｅ　＆　Ｓｍａｒｔ、　 １９８７．　Ｊ、　Ｎｅｍａｔｏｌ、　Ｂ　２２２−２２７）。Ｈｅｗｌｅａら （Ｊ。

Ｎｅｍａｔｏｌ、　Ｂ　５７８−５８４．１９８８）は、タバコ畑での２年以上 の実験においてＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓはメロイドジン・ヤバニカ（Ｍｅｌｏ ｉｄｏ　ｅ　’ａｖａｎｉｅａ）を抑制せず、また実際にそれはその外の処置を 施したすべての場合よりもタバコの収穫がすくながったことを見いだしている。

又別の実験グループとして、Ｃｕ１ｂｒｅａｔｈら（Ｎｅｍａｔｏｔｒｏｐ、　 坦１５３−１６６、１９８６）は、Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓとキチンとの混合 物にツいてそれがメロイドジン・アレナリア（Ｍｅｌｏｉｄｏ　ｅ　ａｒｅｎａ ｒｉａを抑制する効果があるがどうかについて試験した。しかしながら、加えた 物質のレベルが市販許容範囲を越えるものであった。Ｎｏｖａｒｅｔｔｉら（Ｎ ｅｍａｔｏｌ、　Ｂｒａｓｉｌ、　Ｂ　１３３−１４４．１９８６）によるブラ ジルでの実験では砂糖きびの収穫が実質的に減少しそして砂糖きびにおけるプラ チレンクスｓｐｐ、Ｔ匹立垣更如岨ＳＰｐ、）を抑制することもなかった。Ｐ、 　１ｉｌａｃｉｎｕｓを使用した実験におけるこのような不確定的な結果より、 これを線虫頻用の生物学的抑制剤として広く応用しようとするにはなおその手掛 かりに問題があることがゎがる。実験結果にそのようにばらつきがあるのは変異 が原因となるものであることが示唆されたことがある（Ｃａｂａｍｉｌｉｓら、 １９８９．　Ｊ、　Ｎａｍａｔｏｌ、　！１６４−１７２）。彼らはさらにペル ーの単離体中の線虫食性剤の効果の損失は線虫類を含有しない培地を定期的にか えて培養を行った培養物のせいであるとしている。

バエシロミセス・リラツクス■ａｅｅｉｌｏｍ　ｃｅｓ　１ｉｌａｃｉｎｕｓ） を使用した野外実験において確かにいくつが成功してはいるが、それについてＳ ｔｉｒｌｉｎｇ　（上記文献）は「使用した真菌類が線虫集落を顕著に縮小する ほどの信頼性があるという説得力のある証拠がない」といっている。

現在の技術知見を要約すると、多くの自然に存在する土壌真菌類は線虫類に寄生 しそしてそれらを殺すことが可能であるということが十分に確立されている。し かしながら過去においてこれらを実際の農業の現場で生物学的抑制剤として使用 することには成功したとは言えず、そして多くの場合土壌投与用の真菌製剤は実 用化できるものではなかった。

泣肌［！工 本発明者らはフィリッピンのロス・パーナス（Ｌｏｓ　Ｂａｆｉｏｓ）において メロイドジン（厘ｍｌ可ル！ｆＦ）の卵からバエシロミセス・リラシヌス（旦共 匝Ｅ＝■侶止…撓亘思胆）菌株２５１を単離した。この菌株は強力な線虫食作用 を有しておりそして通常の属の植物寄生性の線虫の幼虫、さなぎ及び成虫に寄生 しそれらを破壊するかって予測しえなかった能力を持つことがわかった。この菌 株のサンプルを、１９８９年８月２旧こ、オーストラリア政府分析研究所（ＡＧ ＡＬ）　（Ｉ　５ａｕｋｉｎ　５ｔｒｅｅｔ、　Ｐｙｍｂｌｅ、　ＮｅｗＳｏｕ ｔｈ　Ｗａｉｅｓ、　２０７３．　Ａｕ５ｔｒａｌｉａ）に寄託し、寄託受付番 号８９１０３０５５０を受けた。

Ｐ、１ｉ１ａｃｉｎｕｓは広く分布する腐生植物性土壌真菌であって、すてにせ 界中至る所で単離可能である。しかしながら、本発明の菌株の特性を有する菌株 はこれまでに単離されていない。

Ｐ、１ｉ１ａｃｉｎｕｓ菌株２５１は、バナナ、じゃがいも、パイナツプル、綿 花、コーヒー、米、胡檄、オクラ、アボガド、トマトなどを含むいろいろな重要 な農作物をあらす植物病原性の線虫類に対して野外条件化において効果的である ことがわかった。殺線虫効果の泣亘巨試験において、この菌株はＭｅｌｉ鼓肛匪 ’ＪＰＰ、１ｓｐｐ、、　及Ｕ及凶鑞朋狙ｓｐｐ、をふくむおおくの線虫種を殺 すのに効果的であることが１証された。本発明者らは、Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ の卵にたいして効果的であることがよく知られている真菌がらこれほどに広いこ のような線虫食性作用スペクトルが得られることを知り、殺線虫作用に関するＰ 、　１ｉｌａｃｉｎｕｓのこれらの特性を同定することを目的としてＰａｅｃｉ ｌｏｍ　ｃｅｓ　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１のいろいろな特性を更に研究し た。

このような特性の同定により、強力な線虫食性をもち従って線虫類の生物学的抑 制に応用できるであろうＰ、１ｉ１ａｃｉｎｕｓ菌にの選択が可能であると考え られる。本発明者らは、２１個の酵素活性のアロチーム型と、２５１菌株および 同系の菌株を（ＮＲＲＬ　８９５）を含むＰａｅｃｉｌｏｍ　ｃｅｓ　１ｉｌａ ｃｉｎｕｓの１２個の分離体の温度依存成長型を研究した。これらの研究により その１２個の分離体はいろいろな特性に基ずいて２つのグループに分けることが できた。その１つのグループは菌株２５１と他の３つの強力な線虫食性をもつ菌 株（２５２，２５３および２５４と呼ぶ）とを含み、もう１つのグループは同系 の菌株を含んでなるものである。これらの特性はこれらが３３°の温度において 成長できないことそして特に６１の酵素についてはそれらがアロチームパターン を有することを示した。これらの酵素の中でもその２つのグループを分けるにの もっとも有用なのは乳酸脱水素酵素Ａでありそしてつぎに有用なのはその有用さ の順番で乳酸脱水素酵素Ｃ、アスパラギン酸アミノ基転移酵素Ｃ、フルクトース −１，６−ジフオスフアターゼ、フオスフォグリセレートムターゼ及びヘキソキ ナーゼである。

従って第一に本発明は、ジ早出四江萱ｍｌル徨（６）姪菌株の胞子と殺線虫剤担 体とからなる靭虫菌体であって、そのＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が乳酸脱水 素酵素Ａに関して乙１ｉ１ａｃｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロチーム型を有する ものである殺線虫画側を提供するものである。

そしてその本発明の１つの好ましい態様としては、そのＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕ ｓ菌株が乳酸脱水素酵素Ａおよび乳酸脱水素酵素Ｃに関してＰ、　１ｉｌａｃｉ ｎｕｓ菌株２５１と同じアロチーム型を有するものである殺線虫画側である。

またその本発明の他の好ましい態様としては、そのＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌 株が乳酸脱水素酵素Ａ、乳酸脱水素酵素Ｃ１ならびにアスパラギン酸アミノ基転 移酵素Ｃ、フルクトース−１，６−ジフオスフアターゼ、フォスフォグリセレー トムターゼ及びヘキソキナーゼから選択した少なくとも１つの酵素に関してＰ、 　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロチーム型を有するものである殺線虫 画側である。

さらにまたその本発明の他の好ましい態様としては、そのＰ、　１ｉｌａｃｉｎ ｕｓ菌株が３３℃よりも高いがあるいはそれと等しい温度において成育しないも のである殺線虫画側である。

そして第二に本発明は、殺線虫剤担体とＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の胞子と からなる殺線虫画側であって、その菌株が菌株２５１、菌株２５２、菌株２５３ 、菌株２５４及びそれらの組合せからなる群から選択したものである殺線虫画側 を提供するものである。

そしてその本発明の１つの好ましい態様としては、その胞子がＰ、　１ｉｌａｃ ｉｎｕｓ菌株２５１である殺線虫画側である。

またその本発明の他の好ましい態様としては、その胞子が担体１ｇにつき約Ｉ× １０５ないし約Ｉ　Ｘ　１０１０（１／ｇ、より好ましくは約５　Ｘ　１０７な いし約５　Ｘ　１０９個／ｇ（７）濃度で存在する殺線虫画側である。

本発明の殺線虫画側は粉末又はペレットとして製剤化できる。この場合、殺線虫 画側を投与したの地にかなりの時間をかけて胞子がゆっくりと放出されるように 担体を調合することが好ましい。

Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株は当技術分野において周知の方法によって培養し そして胞子を形成することができる。胞子の収集は加熱しない条件下で、例えば 振盪、掻き取り、洗浄および遠心分離等に依って行うのが好ましい。ついで胞子 体を適当な方法で、たとえば風乾、凍結乾燥または適当な乾燥剤を使用してのデ シケータ−中での乾燥等に依って乾燥し、そして不活性充てん剤又は新たな成長 物質を添加して再調合して製品単位量当たり適当量の胞子を含有させたものとす る。

Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１は、広い範いのたくさんの種類の鑑賞植物 や作物収穫用の植物にいろいろな濃度をいろいろな方法で接種し６年間もの間そ の殺線虫性を低下することなく野外試験を成功した。この菌株の遺伝子的安定性 は当技術分野において周知の標準的な経過において維持することができる。例え ば、これを試験に使用し、又シリカゲルをがん有するデシケータ−に保存し、又 凍結乾燥をしたばあいにその損失がわずかである。

本則はいろいろな公知の製剤の形に調合でき、特に種子の被覆剤の形に調合でき る。種々の多糖類やコーンミールのような粗製植物製品を菌類の成長を促進する ための充てん剤として使用できる。又同様に小麦やゴマなどの種子全体を真菌の 発育のために使用することもできる。シリカやバーミキュル石の様な鉱物質もま た使用できる。こうして作成した製剤をついで実質的に嫌気性条件下に袋すめす るのがよい。

又更に本発明は、Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１、Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎ ｕｓ菌株２５２、Ｐ、　Ｌｉｌａｃｉｎｕｓｌ株２５３およびＰ、　１ｉｌａｃ ｉｎｕｓ菌株２５４の実質的に純粋な培養物をも提供するものである。

上記したように、Ｐ、　１ｉ１ａｃｉｎｕｓ菌株２５１のサンプルは１９８９年 ８月２日に、オーストラリア政府分析研究所（ＡＧＡＬ）　（Ｉ　５ａｕｋｉ！ ｌ５ｔｒｅｅｔ、　Ｐｙｍｂｌｅ、　Ｎｅｗ　５ｏｕｔｈ　Ｖａｌｅｓ。

２０７３、　Ａｕ５ｔｒａｌｉａ）に寄託し、寄託受付番号８９１０３０５５０ を受けた。更に、菌株２５２．２５３および２５４のサンプルも１９９０年７月 ３１Ｅｌｆ二同じ寄託機関に寄託し、それぞれ寄託受付番号９０１０２８１８８ Ａ、９０１０２８１８８Ｂおよび９０１０２８１８８Ｃを受けた。

又更に本発明は、有効量のＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の感染珠芽を適用する ことからなる作物の線虫感染を抑制する方法であって、該菌株が乳酸脱水素酵素 Ａに関して乙１ｉ１ａｅｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロチーム型を有するもので ある方法を提供するものである。

そしてその本発明の１つの好ましい態様としては、そのＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕ ｓ菌株が乳酸脱水素酵素Ａおよび乳酸脱水素酵素Ｃに関してＰ、　１ｉｌａｃｉ ｎｕｓ菌ａ２５１と同じアロチーム型を有するものである方法である。

またその本発明の他の好ましい態様としては、そのＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌 株が乳酸脱水素酵素Ａ、乳酸脱水素酵素Ｃ１ならびにアスパラギン酸アミノ基転 移酵素Ｃ、フルクトース−１，６−ジフオスフアターゼ、フオスフオグリセレー トムターゼ及びヘキソキナーゼから選択した少なくとも１つの酵素に関してＰ、 　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロチーム型を有するものである方法で ある。

さらに又その本発明の他の好ましい態様としては、そのＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕ ｓ菌株が３３°Ｃよりも高いかあるいはそれと等しい温度において成育しないも のである方法２５１．２５２．２５３および２５４からなる群から選択したもの であり、もっとも好ましくは菌株２５１である方法である。

本文において、「有効量」とは殺線虫効果を現わすのに充分な量をいう。

Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の感染珠芽は、適当な殺線虫剤担体を含む懸濁液 として、あるいは適当な賦形剤を含む固体製剤として作物に適用すればよい。

現在、Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の感染珠芽の適用量は苗床に適用する場合 は土壌１ｇにつき約Ｉ　Ｘ　１０７個程度の胞子を適用し、また畑に適用する場 合は水性懸濁液１ｍｌ当たりｌＸ１０７ないしＩ　Ｘ　１０喝の胞子を含む水性 懸濁液を植物のまわりの土壌をぬらすようにして適用する。バナナの場合は、こ の適用量は畑マット１枚当たり約１５０ｍ１の水性液となる。

本発明の殺線虫画側は従来周知のいかなる方法を使用して作物に適用してもよい 。多くの場合、線虫類による根部の被害を最小のものとするために根部のまわり にこの殺線虫画側を供給するのがよい。これはその製剤で種子を被覆して根部の 発芽と同時にそのまわりから画側を接種するが、あるいは苗床の状態で苗木の根 の部分や種子皿を浸漬し又はこれらに噴霧し、あるいは水性懸濁液または固体形 で該製剤を植物を植付けである所に適用するなどの方法で行うことができる。

もちろん、これは肥料などの様な適当な農薬での処理と組み合せて行ってもよい 。本発明の殺線虫画側は線虫類でおかされた植物球根部に特定して適用するのが とりわけ好ましい。例えば、也似四酉ル胆ｓｐｐ、に感染したバナナの球墓のま わりに水性懸濁液として本発明の殺線虫画側を適用するのに注入装置を使用する ことができる。

本発明の殺線虫画側を投与する植物としては例えば農業分野で重要な作物だけで なく鑑賞用の植物もあげることができる。本発明の殺線虫画側での植物寄生性線 虫の抑制効果は種々の植物、例えば、バナナ、砂糖黍、パイナツプル、オクラ、 コーヒー、カカオ、黒胡檄、タバコ、カラムシ、綿花、米、小麦、大麦、オーツ 麦、とうもろこし、かんきつ類、ぶどう、トマト、じゃがいも、にんじん、まめ 、大豆、種々の園芸作物、及びパパイヤやアボガドなどの種々の熱帯産の果物に おいてみられた。一般に、真菌は複合土壌生態系においては長い間生き続けるこ とがでにないので、現状ではバナナのような多年生の作物には本発明の殺線虫画 側を少なくとも６か月おきに繰り返し与えることが好ましい。

またＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１は家畜に感染した寄生性線虫の抑制に も有用であると考えられる。本発明の新規菌株をこのようにして使用するために は、それらが動物の消化管を通る間保護されていて糞として排泄されるように珠 芽を被覆することが必要であると考えられる。このように保護するためには、胃 腸環境中で不溶性のマトリックス中に真菌剤を埋め込めばよい。このマトリック ス材としては、種々の天然又は合成物質、例えば、ワックス、樹脂、多糖類、澱 粉、鉱物質や植物質の中から選択すればよい。

実験室内実験および野外実験としてじゃがいもを本発明の殺線虫画側で処理して 観察したなところ、Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１は８ｃｌｅｒｏｔｉｕ ｍ　ｒｏｌｆｓｉｉ及びＲｈ１ｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉのような塊茎及び 根部を腐敗する真菌類も抑制することがゎがった。また線虫による被害が減少す ることにより必然的に細菌による植物のしおれの発生する度合いが減少すること も観察された。

本発明の特性をより明かにするために、その好ましい具体例をつぎに添付の図面 を参照しながら説明しよう。

第１図は、１９８７年７月から開始したバナナ畑の野外実験において３が月ごと に相対的な機能性根部の体積の変化を示す。（４）は６が月ごとに各バナナ畑マ ットにｌＸ１０９ないし１×１０１０個の感染珠芽を含む殺線虫画側を施したも の、（１１）は６が月ごとに各バナナ畑マットにフラダン（Ｆｕｒａｄａｎ）を 施したものである。最初に殺線虫剤を施したのは１９８７年７月である。（１２ ）は未処理の対照区である。

第２図は、バナナ畑の野外実験において２か月以上の間隔をおいて測定した平均 の房の重量の変化を示す。開始は１９７７年６月から７月である。（３）は６か 月ごとに各バナナ畑マットにＩ　Ｘ　１０９ないし１ｘｌＯ１０［１の感染珠芽 を含む殺線虫画側を施したものである。（１０）は６か月ごとに各バナナ畑マッ トにネマクール（Ｎｅｍａｃｕｒ）を施したものである。最初に殺線虫剤を施し たのは１９８７年７月である。（１２）は未処理の対照区である。

第３図は、１９８８年１０月から１９９０年４月までの四半期ごとの機能性根部 の体積の変化を示す。上側の薄い線は殺線虫化学薬剤を使用したものであり、下 側の線は本発明の殺線虫画側を使用したもので乗る。

第４図は、化学薬剤で処理したバナナと本発明の殺線虫画側を使用したバナナと のそれぞれの平均の房の重量の違いを経時的に示すものである。化学薬剤で処理 したバナナの平均重量を本発明の殺線虫画側で処理したそれの平均重量から差し 引いた。

寒副■ Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１による種々の線虫類の撫Σ態囚寄生実験Ｐ 、　１ｉｌａｃｉｎｕｓは一般に線虫の卵の集団に寄生する卵寄生性のものと見 られている。本実施例では２５１菌株はまた通常の植物規制側の線虫属のあらゆ る成長段階においてその体内にも寄生するものであることを例証する。上記した ようにもみ殻を使用しての固相発酵により胞子を作り、種々の寄生植物の根部か ら取った種々の属の植物寄生性線虫類の幼虫及び成虫の集落を含有するベトリ皿 にｌＸ１０５／ｍｌの濃度で加えた。こうして接種した後に、室温でその胞子を ４８時間培養した。この一連の実験の結果を表１にまとめた。

これらの結果から、本真菌は体内寄生性および半体内寄生性の両方の線虫類を攻 撃しそして殺すことができることがわかる。そしてこれらの結果はまた種々の生 活体系の線虫類に対して種々の成長段階において本真菌は効果的であることも示 している。本真菌はその胞子によって線虫宿主の表皮に付着するがあるいは胃、 肛門又は生殖器の開口部を通ってその体内に入り込んで寄生する。表皮に付着し た胞子の幼芽管は胞子が発芽し成長するにつれて実際に体壁中へ侵入する。

接種後３日して１１の異なる被験線虫属において高い死亡率が観察された。又５ 日後にその１１の被験線虫属の６属において全個体の８０％が死亡した。このよ うな実験から菌株２５１が幼虫および成虫の植物規制側の線虫類に寄生しこれら を殺すことがはっきりと例証された。

＝ −：　ロ　：：１ −　ψ ＝　゛ −１ｌ　ＩＩ　ｌ　ｌ 五創整 アロチーム研究 表２に記載のＰ、１ｉｌａｃｉｎｕｓの１２単離体について２１の酵素活性に関 して完全アロチーム電気泳動パターンを作成した。調べた１８個の酵素を表３に 示した。表２に揚げたこれらの真菌単離体をポテト・デキストローズ寒天（Ｏｘ ｏｉｄ）上に２１°Ｃで保持した。胞子をほぼ隔週ごとに新しいプレートに移し た。培養物をシリカゲル上で乾燥して保持した。

アロチーム実験は、ｒ　Ａｌｌｏｑｍｅ　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ：　 Ａ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｆｏｒ　ＡｎｉｍａｌＳｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ　ａｎｄ 　Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　５ｔｕｄｉｅｓ　Ｊ　（Ｅ、Ｊ、　Ｒｉｃｈａｒｄｓ ｏｎ、　Ｐ、Ｒ，Ｂａｖｅ窒唐狽盾モ給yび Ｍ、Ａｄａｍｓ　−Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　５ｙｄｎｅｙ、　１９８ ６−４１０ページ）に記載の方法に従って、種々の生物のアロチーム型決定のた めの標準条件下に行った。ポテト・デキストローズ寒天上に成育したＰ、１ｉ１ ａｃｉｎｕｓの培養物から菌糸体を分離し、−８０℃で凍結しそしてこれを解凍 して柔らかくした。検体標本（アリクオソト）を七ロゲル（Ｃｅｌｌｏｇｅｌ、 　Ｃｈａｍｅｔｒｏｎ、　Ｍ山ｍ）上に裁置した。ＡＰＲＨにより命名されたＰ 、　１ｉｌａｃｉｎｕｓの８つの菌株をＡ、　Ｈｏｃｋｉｎｇ博士の所蔵培養物 （Ｃ８ＩＲＯＤｉｖｉｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ）から 人手した。基準菌株に加えて、この所蔵物は、オーストラリア、パプアニューギ ニアおよび米国の土壌から単離された菌株も有している。また動物体由来の２つ のオーストラリアの単離体も有している。その１つはヒト角膜がら単離した菌株 であり、もう１つはメルボルン動物園で死亡したクロコダイルがら単離した菌株 である。又更にフイリッピンからの４つの承離体も有している。これにはＰ、１ ｉ１ｓｒｃｉｎｗ菌株２５１（ＡＧＡＬ、　８９１０３０５５０）も含まれる。

これらの４つの菌株は種々の実験室内実験や野外実験をもとに効果的な線虫食性 の菌株であるとされた。これらの菌株の詳細については表２にまとめた。

アロチームについての研究結果は表４にまとめた。これかられかるようしこ、１ ２種の菌株をしらべたが、２つのグループすなわち線虫食性のものとそうでない ものとではアロチーム型が明確に異なっている。

＠ｇ　−Ｐａｅｃｉｌｏｍ　ｃｅｓｌｉｌａｃｉｎｕｓ＊離体Ｉ　ＦＲＲ１１８ ５−アセトカルミン溶液、Ｇ、　Ｌｅｄｉｎｇｈａｍ、　１９４０．ＵＳＡ２　 ＦＲＲ３４２７−タコツキの実、ＰＮＧ　５ｔｈｎ　Ｈｉｇｈｌａｎｄｓ、　Ａ 、　Ｈｏｃｋｉｎｇ、　１９８４３２５２　−殺線虫性菌株、１９８９年寄託、 フイリッピン４２５１　−殺線虫性菌株、１９８９年寄託、フイリソビン５　Ｆ ＲＲ２４１０−ヒト角膜、シトニー病院、Ｆ、　Ｊｅｎｎｉｓ、　１９８１６　 ＦＲＲ３４３０−タコツキの実、ＰＮＧ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ、 　Ａ、　Ｈｏｃｋｉｎｇ、　１９８４７２５３　−殺線虫性菌株、１９８９年寄 託、フイリッピン８２５４　−殺線虫性菌株、１９８９年寄託、フイリソピン９ 　ＦＲＲ３５８７−珊瑚礁土壌、Ｇｒｅａｔ　Ｂａｒｒｉｅｒ　Ｒｅｅｆ、　Ｒ ｅｄ　、　Ｊ、　Ｗａｌｋｅｒから、１９８８１０　Ｆ１３８８　−土壌、Ｍ沃 、　ＮＳＷ、　Ｊ、　ＰＩｔｔ、　１９７０１１　ＦＲＲ３３１９−クロコダイ ルのけば、メルボルン動物園、Ｍ、　Ｍａｓｌｅｎ、　１９８８１２　ＦＲＲ８ ９５−基準菌株、Ｅｄｇｅｒｔｏｎ、　１９０Ｂ、　Ｒｅｄ、　ＮＲＲＬから、 １９６９珊 ｉ これら２つのグループは１５の酵素活性については同じであるが、のこりの６つ の酵素活性、すなわち、乳酸脱水素酵素Ａ、乳酸脱水素酵素Ｃ、アスパラギン酸 アミノ基転移酵素、フルクトース−１，６−ジホスフェート、ホス４グリ七レー トムターゼ及びヘキソキナーゼについてはかなりの多様性を示した。しカルなが らこれらの単離体は植物寄生性線虫にたいして線虫食性を持つという特徴があっ た。すなわち、菌株２５１．２５２．２５３および２５４は実験したすべての２ １の酵素活ｒに関して同じであった。

この２つのグループを分離するのにもつとも有用な酵素は乳酸脱水素酵素Ａであ ることがわかった。そしてそのつぎはその有用性の順に乳酸脱水素酵素Ｃ１７ス バラギン酸アミン基転移酵素、フルクトース−１，６−ジホスフェート、ホス４ グリ七レートムターゼ及びヘキソキナーゼである。

去ハ旦塁 盛邑り皇匡侭在ユ 表２に記載のＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓの１２の菌株の成長の温度依存性につい て実験してその単離体の温度依存性が異なるものであるかどうかを調べた。その １２の単離体は最高成長温度に基ずいて２つの明確なグループにわけられた。植 物寄生性線虫にｔ−いして線虫食性を持つことがわかった４つの単離体、すなわ ち菌株２５１．２５２．２５３および２５４は３３°Ｃよりも高い温度では成育 しない。このことは、これらの１株はは乳動物中では体系的な真菌症の原因とな ることはほとんどないことを示温するものである。

残りの８つの菌株はすべて３３℃において成育可能であるがしかしその成育はコ 適温度（２５−３０℃）におけるよりも弱いものであった。実験した１２の菌株 のどれイ３７℃では成育できな力じた。すべでの菌株は成長曲線の低末端部にお いてまたＭ過成長温度に関して同様な成長パターンを示した。又１５°Ｃではす べての１２の菌体は実質的に成長せず、２１°Ｃにおいてはせいちょうはその最 適温度（２５〜３０°Ｃ）にオける場合の約５０％であった。これらの実験の結 果を表５にまとめた。

５一種々の温度でのＰ、　Ｌｉ１ａｅｉｎｕｓの菌株の成長ＦＲＲ１１８５＋　 ＋ ＦＲＲ３４２７＋　＋ ＦＲＲ２４１０＋　＋ ＦＲＲ３５８７＋　＋ ＦＲＲ３３Ｂ　＋　＋ ＦＲＲ３３１９＋　＋ ＦＲＲ８９５＋ 寒師３ 殺線虫化学薬剤との比較における、共通のアロチームパターンを有するものとし てまとめられるＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓの４つの異なる線虫食性菌株の殺線虫 活性広く使用されている殺線虫化学薬剤との比較においてＰ、　１ｉｌａｅｉｎ ｕｓの種々の線虫食性菌株の相対的殺線虫特性を調べるために増殖ポット試験上 行なった。トマトの苗木（変異種、ＶＣＩＩ−１）の根部の菌こぶの量を線虫抑 制の尺度として使用した。

この温室実験の結果を表６に示した。

表６ 根部の菌こぶ線虫】ユ匹匹虹すの抑制に関しての、殺線虫剤ネ？　クー　ルＬＯ Ｇ（Ｎａｍａｃｕｒ　ＩＯＧ、　ＢＡＹＥＲ社製）との比較における、Ｐ、　１ ｉｌａｃｉｎｕｓの種々の線虫食性菌株の効果（被験植物としてトマトの苗木（ ｆ異種、ＶＣＩＩ−１）を使用しての温室実験）菌株２５１　２．０　１２．８ 　９３．０菌株２５２　３．８　、　９０．８　５０．４菌株２５３　２．２　 １３．８　９２．４菌株２５４　２．５　２５．０　８６．３未処Ｉｔ　５．０ 　１８３．０ 菌こぶ指数： １＝菌こぶなし ２＝痕跡量の菌こぶあり ３＝わずかな量の菌こぶあり ４＝中位の量の菌こぶあり ５＝たくさんの量の菌こぶあり この実験の結果から、実験に使用したすべての菌株は強力な殺線虫性を有してい るが、特に菌株２５１がもっとも効果的であることがわかる。またこの実験の結 果は菌株２５１および２５３が特に効果的であることを示唆している。

去茜り臣 更に菌ａ２５１がＧｌｏｂｏｄｅｒａを抑制するのにも好ましい菌株でありうる がどうがを検討するために、胞子線虫の被害をうけている土壌に植えたじゃがい も（変異種、ｌ５ｏｌａ）での野外実験をおこなった。本実験では実験区を個個 に殺線虫画側組成物で処理をした。使用した殺線虫画側組成物は、活性珠芽とし てそれぞれ殺線虫菌株２５１．２５２．２５３．２５４ノ胞子を含むものである 。（ＩＸ１０９個ｊｒｎｌｆ）水性懸濁液中に塊墓を浸しついで通常の農業条件 化に植えつけた。）未処理の対照群の外に、化学薬剤フラダン（Ｆｕｒａｄａｎ 　３Ｇ　、　ＦＭＣ社製）での処理も同様に行なった。

本実験の結果を表７にしめした。

返ヱ 胞子線虫感染土壌でのじゃがいもの収量（単位、ｋｖｌｏ　ｍ２）に関する種々 の処理の効果（Ａｔｏｋ、　Ｂｅｎｇｕｅｔ）、およびＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕ ｓの種々の線虫食性菌株を使用しての比較実験結果 実験区 処理 Ｉ　ＩＩ　ＩＩＩ　ｒＶ　平均　標準誤差菌株２５１　１５．８　２０．７　１ ６．５　１５．０　１７．０　２．５４２菌株２５３　１５．３　１５．０　１ ５．８　１５．３　１５．４　０．３３２菌株２５４　１４２　１４．８　１？ 、７　１５．３　１５．５　１．５３４未処理　１０．７　８．５　１０．２　 １２．３　１０．４　１．５６５平均収量にはそれほど違いはないが、菌株２５ １はその他の処理に比べていくぶんよい結果であることがわかる。また未処理詐 にくらべての処理群の収量の改善は明らかでかつ著しい。

寒配弧 土壌におけるＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１の殺線虫活性種々の畑条件に おいてＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１が殺線虫活性を有することを示すた めの試験を行なった。これらの実験の結果を表８．９および１０に示した。なお 、実験条件は各表に記載した。

表８はＢａｕａｎｇ、　Ｌａ　Ｕｎｉｏｎ、　Ｌｕｚｏｎの綿花についての実験 結果である。ここでは主な有害線虫は＆ぬ垣匹垣臣ｓｐｐ、　（腎形線虫）及び ｈ鮎五蜆点■Ｓｐｐ、　（根部損傷線虫）である。処理１−３は１ｍ２あたり菌 株２５１の胞子をＩ　Ｘ　１０８ないしＩ　Ｘ　１０９個含有する殺線虫画側組 成物の水性液をまきつけたものであり、処理４−６は処理１−３と同数の２５１ 胞子を含有するベレット状の殺線虫画側組成物を施したものである。この実験で は水性液をまきつけたものはどれも同様な結果がえられまたこれはベレット状の 殺線虫画側組成物を施したばあいよりもすぐれた線虫抑制効果があることがわか る。

表９は、Ｓｉｌａｎｇ、　Ｃａｖｉｔｅで栽培したパイナツプルに被害を与えた 線虫集落（＆出セμよ四ＳＰＰ、ｌジ１隊り匹抛姪ｓｐｐ、、旦吐区立垣慕如姪 ｇｐｐ・及び−セ４上匹ｓｐｐ・）をちいさくするのに、Ｐ、　１ｉｌａｃｉｎ ｕｓ菌株２５１を含有する殺線虫画側組成物を施した場合の効果を示すものであ る。これらの結果はすべての処理群からの複合土壌４００ｇについて増殖した線 虫の数の計数値に基ずくものである。処理１−３は水性懸濁液を使用した場合で あり、これはパイナツプル球根１個につきｌＸ１０７ないしＩ　Ｘ　１０ｇ個の 胞子に相当する。

赴 １９８７年１０月から１９８７年１２月までのあいだ、菌株２５１含有殺線虫菌 剤組成物での処理後の全体の植物寄生性線虫の減少の程度（％）（増殖土壌線虫 数を計数し処理前の数に対する割合（％）として表した。Ｂａｕａｎｇ、　Ｌａ 　Ｕｎｉｏｎ、　Ｌｕｚｏｎの綿花を被験体とした。） 鉄属 １　２４．０％ ２　２５．０％ ３　２５．８％ ４　３４．２％ ５　３７．４％ ６　３８．０％ 対照　９４．５％ 処理１−１ 一３ｌあたりＩ　Ｘ　１０Ｂないし１×１０９４１ｉＩの胞子に相当する水性液 をほどこした。

処理４−６ 処理１−３と同数の感染珠芽を含む顆粒をほどこした。

１９８７年８月から１９８８年１月までの間、菌株２５１含有非虫菌剤組成物で の処理後の全体の植物寄生性線虫の減少の程度（増殖土壌線虫を計数し処理前の 数に対する割合（％）として表した。Ｓｉｌａｎｇ、　Ｃａｖｉｔｅ、　Ｌｕｚ ｏｎのパイナツプルを被験体とした。）乞冒里　１９８７年１０月　１９８７年 １２月　１９８８年１月１　２８．６％　４１．８％　５０．１％２　２９．１ ％　４２，９％　５０．８％３　２８．２％　４５．４％　４１．２％対照　１ １５．０％　１１８．０％　９１．６％処理１−３ 植物１本あたりｌＸ１０７ないしＩ　Ｘ　ｌｏ８ｇの珠芽に相当する水性液をほ どこした。

表１０は、ミンダナオ高、Ｄａｖａｏ市、Ｂａｎｋａｌにおいて栽培されたカラ ムシの球根中の植物寄生性線虫集落にＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１を含 有する殺線虫画側組成物を施した場合の結果を示す。この表１０は、４か月以上 にわたる全体の植物寄生性線虫集落の縮小の程度（％）ならびに同じ期間のＭ仙 鍜畠凹狙ｓｐｐ、の減少の程度（％）を示す。処理１−３は水性懸濁液を使用し た場合であり、これはＩ　Ｘ　１０７ないしｌＸ１０８個の胞子をｌ個の植物球 根に与えるものである。

表設 １９７７年９月から１９８８年１月までの間、菌株２５１含有殺線虫菌剤組成物 での処理後の全体の植物寄生性線虫並びにｐ狙ｓｐｐ、の減少の程度（％）（増 殖線虫数を計数し処理前の数に対する割合（％）として表した。フィリッピンの Ｄａｖａｏ市、Ｂａｎｋａｌのカラムシを被験体とした。） １　４１．６％　５６．１％　２９．２％　７０．０％２　５０．８％　５８． ６％　３５．７％　６５．３％３　４９．４％　５２．７％　２７．７％　７４ ．２％対照　１２８．７％　１２３．３％　１１８．３％　１１９．７％処理１ −３ 植物１本あたりＩ　Ｘ　１０７ないしＩ　Ｘ　１０８（Ｉの珠芽に相当する水性 液をほどこした。

去箋鯉巨聾匹正 多年生作物に害を与えることが知られている線虫を駆除する、Ｐ、　１ｉｌａｃ ｉｎｕｓ菌株２５１の胞子を含有する殺線虫画側組成物の効果を実証するために 、バナナ畑での野外実験を行なった。これらの実験の結果、経時的な相対的機能 根体積の改善と平均の房重量の増加があり、したがってこの組成物での処理の効 果が明がとなった。

第１図および第２図に示す結果は、ミンダナオ島の５ａｎｔｏ　Ｔｏｍａｓ、　 Ｄａｖａｏ　ｄｅｌＮｏｒｔｅのＭａｒｓｍａｎバナナ農場での大ががすな実験 の一部をまとめたものである。

実験区域は潅流設備の常設された農場０．８ｈａ（ヘクタール）であり、そこに ＧｉａｎｔＣａｖｅｎｄｉｓｈ　（Ｉｊｏ）バナナを栽培した。実験方法として は、まず５つの試験ブロックに分け、それぞれに１２種類のいろいろな処理をほ どこした。各処理には約ｌｏｏ個のバナナ詳生帯を使用した。処理区分に隣接す るバナナ詐生帯については測定しなかった。処理区分のうちの９区分は異なる種 類と異なる珠芽とからなる殺線虫画側での処理である。第１図および第２図に示 す処理１０および１１は、それぞれＮａｍａｃｕｒ　（ＢＡＹＥＲ）及びＦｕｒ ａｄａｎ　（ＦＭＣ社）という名前で市販されている殺線虫化学薬剤での処理で ある。処理１２は殺線虫剤で処理していない対照区である。殺線虫剤の外に各処 理ブロックは抗真菌剤をふくめですべての通常の添加物を加えた。すべての実験 データは、標準的な農作業にしたがってＭａｒｓｍａｎ研究所のスタッフにより 集められた。また殺線虫化学薬剤の施用は推奨される作業方法に従って農場スタ ッフにより行なわれた。実験は１９８７年７月に開始して、結果は１９８９年４ 月までのものを図面に示した。農作業にしたがって実験の開始時に前記の種々の 殺線虫剤を各処理区に施し、その後は６か月の間隔をおいて施し続けた。

第１図は、本実験中の３つの異なる処理について機能根の体積の変化を示すもの である。測定は、バナナの花の芯ができるころにたくさんのバナナ詳生帯に通常 の方法で溝を堀り、１立方フイートの土壌を取りだし、そしてバナナの根をふる いだすことにより行なった。その根を、死んだもの、病気になっているもの、健 康なもの、に分けた。データは、機能根の相対的体積、すなわち、全体の根に対 する機能根（＝健康な根プラス病気になった根）の割合で表した。機能根のの測 定は、この実験のあいだ約３か月の間隔を置いて各処理区について行なった。図 面は、（１）未処理の対照区では連続して減少しており、（２）Ｆｕｒａｄａｎ での処理区は最初は改善されているが次第に減少しており、そして（３）本発明 の殺線虫画側での処理４は著しく改善されていることを示している。機能根の体 積は線虫活性の目安となるものである。この農場では、バナナの根の被害は主と して線虫Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ　ｓｐｐ、、　Ｈｅ１ｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ 　ｓｐｐ、及びＭｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ　ｓｐｐ、によるものであるB 本発明の殺線虫画側での処理４では非常によい結果となっており、これは−っに はこの殺線虫画側はひどく痛められた作物の回復にも特に効果的であることをも 示すものである。

第２図は、１９８７年６月ないし７月に開始し１９８９年３月ないし４月に終了 した実験のその間中に２か月おきに３つの処理区について房の重量を測定しその 平均重量をキログラム巣位で表した収量データを示すものである。処理１ｏは殺 線虫化学薬剤Ｎａｍａｃｕｒ（ＢＡＹＥＲ）で処理したものであり、１２は未処 理の対照区である。処理３は上記したようにＰ、　１ｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５ １をもみ殻で成育させて作成した本発明の殺線虫画側組成物で処理したものであ る。この組成物は袋すめにして農場に運び、そこで１ｍｌ当たりｌＸ１０７ない し１ｘ１０８ｍの胞子を含む水性懸濁液とした。この懸濁液１５０雇をバナナの 木の姫吸根の回りに注ぎがけな。なお実施例７で述べたのと同じ殺線虫画側処理 をここでも行なった。

去施彰υｂ口乙狡 一年生作物に害を与えることが知られている線虫を駆除する、Ｐ、　１ｉｌａｃ ｉｎｕｓ菌株２５１を含有する殺線虫画側組成物の効果を実証するために、じゃ がいも畑での野外実験を行なった。これらの実験から線虫集落の縮小と作物の収 量増加がみとめられた。

実施例９（その結果を表１１および１２にまとめた）は、フィリッピンのＢａｇ ｕｉａｓ。

Ｌｕｚｏｎにおいて、じゃがいも胞子線虫Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ　ｓｐｐ、であら された土壌にじゃがいも変異種ｈｏｌａを栽培した連作実験である。栽培中、上 記の殺線虫画側組成物を２つの方法で施した。一つは、これを鶏糞と混ぜて粉状 にしたものを施した。これは栽培している丘状畑１か所当たりＩ　Ｘ　１０？な いしＩ　Ｘ　１０Ｂの胞子濃度に相当する。もう一つは、塊墓をＨ当たりＩ　Ｘ 　１０８の胞子を含む水性胞子懸濁液に浸し、ついでこれを通常の農作業条件下 に栽培した。又、未処理対照区のほかに更に殺線虫化学薬剤Ｆｕｒａｄａｎ　（ ＦＭＣ社）をそのメーカーの指示どうりに施用した処理区についての実験しその 結果も得た。栽培開始時と実験開始から４週間及び１２週間後に各処理区から５ ００ｇの複合サンプルを取って増殖した土■虫の数を計数した。この実験におい て本発明の殺線虫画側組成物を使用した場合は５０％より以上の収量増加があり またじゃがいも胞子線虫を効果的に抑制することがわかった。

実施例１０（その結果を表１３および１４にまとめた）は、根部損傷線虫欣鮎幼 但金亜ｓｐｐ、であらされた土壌にじゃがいも変異種ｌ５ｏｌａを栽培した同様 の実験結果開示するものである。処理効果は実施例９の場合と非常にょくにてい るが、ここでは欣鮎幼旦虫■ｓｐｐ、で処理した場合の線虫抑制により収量増加 は７０％より以上のものであった。また同様の実験をｈ鮭幼担坐匪ｓｐｐ、であ らされた土壌にじゃがいも変異種Ｇｒａｎｏｌａを栽培して行なったところ、３ か力抜には線虫集落が処理前の３０％に縮小しておりそして未処理の対象区に比 べて８０％もの収量増加となった。

五Ｕ じゃがいも（変異種、ｌ５ｏｌａ）の収量（単位、ｋｇ／１０　ｍ２）に関する 種々の処理の効果（フィリノピン、Ｍａｄａｙｍｅｎ、　Ｂａｇｕｉ！Ｌｓにお いて、１９８５年２月から６月ＸＧ１ｏｂｏｄｅｒａｓｐｐ、であらされ土壌に 栽培した。）実験区 処理 Ｉ　ｎ　ＩＩＩ　ｒＶ　平均　標準誤差１　３４．９　３６．３　３８．８　３ １．３　３５．３３　３．１３０９２　３２．３　３１．５　３３．３　４１． ２　３４，５８　４．４７７６３　４３．１　３１．５　３７．０　２５．０　 ３４．１５　７．７２３８４　２０．３　２２，８　２２．７　２２．２　２２ ．０　１．１６３３処理： １：菌株２５１含有殺線虫菌剤（ＩＸＩＯ？ないし１×１φ個７ｍｌの胞子）生 鶏糞２：菌株２５１含有殺線虫菌剤に塊墓を浸せき３：ＦＵＲＡＤＡＮ３Ｇ（Ｆ ＭＣ社） ４：未処理対照区 表叱 表１１にまとめた畑作野外実験中の土壌胞子数（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ　５ｐｐ− Ｘ処理前の数のパーセント割合としてあられした）の変化 処理　４週間後　１２２週間 後　３６．８％　４２．０％ ２　４０．４％　３５．１％ ３　４６．２％　必、５％ ４　１１３．７％　１２０．０％ 遇旦 表１３にまとめた畑作野外実験中の線虫数（処理前の集落のパーセント割合とし てあられした）の変化■１立１ｅｎｃｈｕｓ　ｓｐｐ、はすべての実験区におい て植物寄生性土壌線虫の９０％より以上をしめた。） 処理　４週間後　１２２週間 後　３９．０％　２９．４％ ２　３（１９％　３０．０％ ３　４２．８％　４．９％ ４　１３２．６％　１４１．４％ 寡茜盟１μし」乙整 上記実施例７および８における畑作野外実験において本発明の殺線虫画側がバナ ナの線虫被害を効果的に抑制することが示されたことをうけて、１９８８年６月 にＭ＆ｒｓｍａｎ農場において半商業的試作実験乞始め１９９０年７月に終了す る計画をたてた。本実施例１１および１２は１９９０年５月末までに得られたこ の試作実験の結果を開示するものである。

本試作実験においては、Ｇｉａｎｔ　Ｃａｖｅｎｄｉｓｈバナナの４ｈａの非潅 概農場を実施例９および１０に記載の殺線虫画側懸濁液で処理した。その施用は 、１９８８年６月、１９８８年１０月、１９８Ｃ１！Ｅ４月、１９８９年１０月 及び１９９０年３月である。バナナの隣接地は化学殺線虫剤で交互に処理した。

これはその薬品メーカーの指示どおりに行なった。

化学殺線虫剤での処理は殺線虫画側での処理よりも３か月早くはじめた。すなわ ち、次のとおりである。１９８８年３月にＦＵＲＡＤＡＮＣＦＥＭ社）、１９８ ８年８月にＭＩＩＦひＬ　（ＣＩＢＡ−ＧＫＩＧＹ社）、１９８９年１が次にＦ ＵＲＡＤＡＮ、１９８９年６月にＭＩＦひＬ、１９８９年１１月にＭＯＣＡＰ（ ＲＨＯＭＥ−ＰＯ田正正Ｎ０社である。

第３図は、１９８８年１０月から１９９０年４月までの機能根体積の四半期毎の 変化を示す。それぞれのデータ点は１２の実験区の平均である。殺線虫画側での 処理及び測定方性については上２己実施例９および１０と同じである。化学殺線 虫剤で処理をしたものは殺線虫画側での処理よりも最初はよい成績であるが、１ ９９０年４月までには両方とも同じとなっている。

第４図は、１９８８年１０月空１９９０年５月までの房の相対的平均重量の経時 変化を示す。データは実施例７および８に記載のようにして集めた。各月ごとに 、殺線虫画側で処理したバナナの平均房重量から化学殺線虫剤で処理をしたバナ ナの平均房重量を差し引いた。その値が増加傾向であることから、殺線虫画側の ほうが化学殺線虫剤よりも優れていることが示される。

この半商業的試作実験における製作パラメーターから、殺線虫画側はバナナ栽培 において線虫を抑制するのに化学殺線虫剤の代替品として少なくとも効果的であ ることが明かとなった。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ　ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の胞子と殺線虫剤担体 とからなる殺線虫菌剤であって、そのＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が乳酸脱水素 酵素Ａに関してＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロチーム型を有する ものであることを特徴とする殺線虫菌剤。 ２、そのＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が乳酸脱水素酵素Ａおよび乳酸脱水素酵素 Ｃに関してＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロチーム型を有するもの である、請求の範囲第１項に記載の殺線虫菌剤。 ３、そのＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が乳酸脱水素酵素Ａ、乳酸脱水素酵素Ｃ、 ならびにアスパラギン酸アミノ基転移酵素Ｃ、フルクトース−１，６−ジフオス フアターゼ、フオスフオグリセレートムターゼ及びヘキソキナーゼから選択した 少なくとも１つの酵素に関してＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロチ ーム型を有するものである、請求の範囲第１項に記載の殺線虫菌剤。 ４、そのＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が３３℃よりも高いかあるいはそれと等し い温度において成育しないものである、請求の範囲第１ないし３項のいずれかに 記載の殺線虫菌剤。 ５、殺線虫剤担体とＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の胞子とからなる殺線虫菌剤で あって、その菌株が菌株２５１、菌株２５２、菌株２５３、菌株２５４及びそれ らの組合せからなる群から選択したものであることを特徴とする殺線虫菌剤。 ６、その菌株が菌株２５１である、請求の範囲第５項に記載の殺線虫菌剤。 ７、その胞子が担体１ｇにつき約１×１０５ないし約１×１０１０個／ｇの濃度 で存在する、請求の範囲第１ないし６項のいずれかに記載の殺線虫菌剤。 ８、その胞子が担体１ｇにつき約５×１０７ないし約５×１０９個／ｇの濃度で 存在する、請求の範囲第７項に記載の殺線虫菌剤。 ９、粉末又はペレット形に製剤としたものである、請求の範囲第１ないし８項の いずれかに記載の殺線虫菌剤。 １０、その殺線虫剤担体がＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の胞子をその胞子が動物 の消化管を通る間保護しそしてそのＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の感染珠芽が動 物の糞のなかに排泄されるようにするものである、請求の範囲第１ないし９項の いずれかに記載の殺線虫菌剤。 １１、有効量のＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の感染珠芽を適用することからなる 作物の線虫感染を抑制する方法であって、該菌株が乳酸脱水素酵素Ａに関してＰ ．　ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロチーム型を有するものであること を特徴とする前記方法。 １２、そのＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が乳酸脱水素酵素Ａおよび乳酸脱水素酵 素Ｃに閲してＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロチーム型を有するも のである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 １３、そのｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が乳酸脱水素酵素Ａ、乳酸脱水素酵素Ｃ 、ならびにアスパラギン酸アミノ基転移酵素Ｃ、フルクトース−１，６−ジフオ スフアターゼ、フオスフオグリセレートムターゼ及びヘキソキナーゼから選択し た少なくとも１つの酵素に関してｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株２５１と同じアロ チーム型を有するものである、請求の範囲第１項に記載の方法。 １４、そのｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が３３℃よりも高いかあるいはそれと等 しい温度において成育しないものである、請求の範囲第１１ないし１３項のいず れかに記載の方法。 １５、そのｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が菌株２５１、菌株２５２、菌株２５３ 及び菌株２５４からなる群から選択したものである、請求の範囲第１１ないし１ ４項のいずれかに記載の方法。 １６、そのｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株が菌株２５１である、請求の範囲第１１ ないし１５項のいずれかに記載の方法。 １７、そのｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株を殺線虫剤担体と組合せて施すものであ る、請求の範囲第１１ないし１６項のいずれかに記載の方法。 １８、作物が農作物、鑑賞用植物、苗木、１年生植物、又は多年生植物である、 請求の範囲第１１ないし１７項のいずれかに記載の方法。 １９、作物がじゃがいも、バナナ、トマトおよびパイタップルからなる群から選 択するものである、請求の範囲第１１ないし１８項のいずれかに記載の方法。 ２０、ｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株を植物の植付け時に施すものである、請求の 範囲第１１ないし１９項のいずれかに記載の方法。 ２１、ｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株を植物の植付け前に種子に被覆するものであ る、請求の範囲第１１ないし２０項のいずれかに記載の方法。 ２２、その方法が、塊茎をｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の水性懸濁液に浸せきす ることからなるもである、請求の範囲第１７ないし２１項のいずれかに記載の方 法。 ２３、その方法が、ｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株の水性懸濁液をバナナ畑マット に施すものである、請求の範囲第１７ないし２１項のいずれかに記載の方法。 ２４、請求の範囲第１０項に記載の殺線虫菌剤の有効量を動物に投与することか らなる、動物の糞の中の線虫を駆除する方法。 ２５、実質的に純粋な形のＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ　ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株 ２５１（ＡＧＡＬ８９／０３０５５０）。 ２６、実質的に純粋な形のＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ　ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株 ２５２。 ２７、実質的に純粋な形のＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ　ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株 ２５３。 ２８、実質的に純粋な形のＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ　ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株 ２５４。