JPH0525041A

JPH0525041A - 抗発癌プロモーター剤

Info

Publication number: JPH0525041A
Application number: JP3207634A
Authority: JP
Inventors: Takao Kijima; 孝夫木島; Munekazu Iinuma; 宗和飯沼; Mizuo Mizuno; 瑞夫水野; Harukuni Tokuda; 春邦徳田
Original assignee: TSUJIMOTO KAGAKU KOGYO KK
Current assignee: TSUJIMOTO KAGAKU KOGYO KK
Priority date: 1991-07-23
Filing date: 1991-07-23
Publication date: 1993-02-02
Anticipated expiration: 2010-09-13
Also published as: JPH0784383B2; US5414015A

Abstract

(57)【要約】【目的】生薬として知られている黄ごん中に含まれる
フラボノイドから、特に抗発癌プロモーター作用が顕著
なものを特定し、これらを抗発癌プロモーター剤として
提供するものである。【構成】黄ごんから抽出した成分中、一般式【化１】（式中、Ｒは水素原子または水酸基を示す）を主成分と
する抗発癌プロモーター剤、または同一の一般式からな
る抗発癌プロモーター剤である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は生薬抽出エキスを利用し
た抗発癌プロモーター剤に関し、抗発癌機能を主とする
機能的物質として用いるものである。

【０００２】

【従来の技術】従来から各種の抗癌剤が開示されている
が、これらは全て癌化した細胞をいかにして殺すかとい
う結果の排除を目的としていた。従って発癌場所や発癌
状態によって投与する抗癌剤が異なり、汎用的ではない
のが現状である。

【０００３】そこで発明者らは癌化した細胞を殺すより
も、正常細胞が癌細胞にならないようにすることがより
好ましいという点に鑑みて、癌細胞の完成に到るメカニ
ズムに着目した。即ち、正常細胞はイニシエーション、
プロモーションという２つの異なった過程を経て癌細胞
になるということが知られている。この過程のうちイニ
シエーションは個体によって種々異なった要因が関与し
ているが、プロモーションは比較的均質な過程をたど
る。従ってプロモーションを抑制する方が汎用性が高い
ので、効果的な抗発癌プロモーターを提供できれば癌に
なりやすいハイリスクグループに対して、非常に有益で
ある。

【０００４】ところで、生薬成分に含まれるフラボノイ
ド中、イソフラボノイドに属する化合物であるアフロモ
シン、ホルモノネチン、オノニン、あるいはウィスチン
等が抗発癌プロモーター作用を有することを発明者は既
に発表している（第７回天然薬物の開発と応用シンポジ
ウム、１９８９年７月２８日、福岡市、日本薬学会主
催）。またフラボノイド一般について、約８０種のフラ
ボノイドを用いて抗発癌プロモーター検索の一次スクリ
ーニングであるＥＢＶ−ＥＡ(Epstein-Barr virus earl
y antigen)活性化抑制の実験を行った点についても発表
している（生薬学雑誌４３(2),１３５〜１４１(1989
年) ）。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】前者においては動物実
験を含む抗発癌プロモーターとしての効果が証明されて
いる。しかし後者ではフラボノイド一般について言及し
ているものの、一次スクリーニングに関する事項のみで
あり、何が直接的な抗発癌プロモーターとなり得るかの
特定を行っているものではない。

【０００６】そこで本発明では、生薬として知られてい
る黄ごん(Scutellaria) 中に含まれるフラボノイドか
ら、特に抗発癌プロモーター作用が顕著なものを特定
し、これらを抗発癌プロモーター剤として提供すること
を目的とするものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】黄ごんの抽出成分中、一
般式

【化３】（ただし式中、Ｒは水素原子または水酸基）を主成分と
する抗発癌プロモーター剤によって本発明の目的を達成
した。

【０００８】また、一般式

【化４】（ただし式中、Ｒは水素原子または水酸基）を合成によ
って精製し、抗発癌プロモーター剤として提供すること
によって本発明の目的を達成した。

【０００９】上記一般式で示される２つの成分は、黄ご
んに含まれる数十種のフラボノイド属から抽出単離した
天然物、あるいはこれと同一の組成の合成物であり、他
の天然物あるいは合成物からなるフラボノイドのうち代
表的な３４例と共に上述したＥＢＶ−ＥＡによって一次
スクリーニングを行い、顕著な活性化抑制作用を示した
ものを特定したものである。表１〜表４で示されたデー
タが合計３６種類に関する一次スクリーニングの結果で
あり、第３４番が本発明の抗発癌プロモーター剤の１つ
である５，７，２′−トリヒドロキシフラボン(trihydr
oxyflavone) 、第３５番が同様に５，７，２′，３′−
テトラヒドロキシフラボン(tetrahydroxyflavone) であ
る。

【表１】

【表２】

【表３】

【表４】一次スクリーニング法としては、ＥＢＶ潜在感染ヒトリ
ンパ芽球様細胞株Ｒａｊｉ細胞を１ｘ１０⁶細胞／mlの
濃度に調製し、酪酸４mMと発癌プロモーターとして知ら
れているＴＰＡ（12-0-tetradecanoylphorbol-13-aceta
te）２０ng／mlのＤＭＳＯ溶液を加え、３７°Ｃで４８
時間培養後に上咽頭癌患者血清を用いた間接蛍光抗体法
によってＥＢＶ−ＥＡを染色し、陽性細胞の発現率を１
００としてこれを陽性コントロールした。試料の発現率
は同じくＲａｊｉ細胞株に同量の酪酸とＴＰＡ、および
各濃度の試料溶液を加え、同様に培養後算出したもので
ある。なお濃度の単位はモル／ＴＰＡであり、３２pMol
/ml に調製されている。また各濃度に対応したデータ中
で左の数値は陽性コントロールの百分率であり、右のカ
ッコで示された数値はＲａｊｉ細胞の生存率である。

【００１０】表１から表４に示された一次スクリーニン
グの結果、抗発癌プロモーターの機能として第３４番の
５，７，２′−トリヒドロキシフラボン、および第３５
番の５，７，２′，３′−テトラヒドロキシフラボンを
特に選択したのは次の理由による。即ち、それぞれカッ
コで示された細胞の生存率があまり低いということは正
常細胞の殺傷をも意味しているので、この数値が低い物
質は避ける必要がある。そこで生存率６０％以上の物質
のみを抽出するようにした。次に、試料の濃度があまり
薄いと全体的に効果が悪くなるので、濃度１０倍および
１００倍の例は条件から外し、濃度５００倍および１０
００倍の数値に着目した。この結果、天然物として黄ご
んエキスから抽出可能であり、かつ合成可能な第３４番
と第３５番の試料を特定したのである。これら５，７，
２′−トリヒドロキシフラボン、および５，７，２′，
３′−テトラヒドロキシフラボンは以前から抗発癌プロ
モーター作用があるとされてきた黄ごんのエキスを同様
にスクリーニングした結果よりもさらに細胞の生存率が
高く、より良好な結果が得られたものである。従ってこ
れら両成分が黄ごん中の活性本体であると考えられる。
なお、合成物である第２４番についても数値上では良好
な結果を示しているが、高濃度におけるＲａｊｉ細胞の
生存率が極めて低く、かつ低濃度における活性化抑制作
用が低いため、本来の活性化抑制作用を判断することは
できなかった。

【００１１】上述したように式

【化５】で示される５，７，２′−トリヒドロキシフラボン、お
よび式

【化６】で示される５，７，２′，３′−テトラヒドロキシフラ
ボンは、生薬である黄ごん中に複数種含まれるフラボノ
イドから選ばれた２種のフラボンである。非常に多彩な
式で表現できるフラボノイド中、抗発癌プロモーター作
用を有することが判明している黄ごんに着目し、他の多
くのフラボノイドと共に一次スクリーニングにかけ、顕
著な効果を発揮する本発明の２つの活性成分を特定した
のである。

【００１２】これら本発明成分の黄ごんからの抽出、単
離方法は次の通りである。即ち、黄ごん１kgを粉砕後、
アセトンで還流抽出し、濃縮後エキスとする。エキスは
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒はクロ
ロホルム−メタノール系）に付し、薄層クロマトグラフ
ィーで５，７，２′−トリヒドロキシフラボン、および
５，７，２′，３′−テトラヒドロキシフラボンをモニ
ターしながら展開し、５，７，２′−トリヒドロキシフ
ラボンあるいは５，７，２′，３′−テトラヒドロキシ
フラボンを含む流出部を集めた。続いて再結晶法によっ
て淡黄色板状晶の５，７，２′−トリヒドロキシフラボ
ン、および淡黄色針状晶の５，７，２′，３′−テトラ
ヒドロキシフラボンを得た。

【００１３】次に、５，７，２′−トリヒドロキシフラ
ボンの化学合成法は次の通りである。即ち、フロロアセ
トフェノンジイソプロピルエーテル（１．８ｇ，７ミリ
モル）と、２−イソプロポキシベンズアルデヒド（２．
４ｇ，１５ミリモル）を水酸化カリウム（２ｇ）を含む
体積パーセント８０％のエタノール（５０ml）に溶か
し、一夜放置して塩酸酸性とし、酢酸エチルで抽出、
２′−ヒドロキシ−２，４′，６′−トリイソプロポキ
シカルコン（２．３ｇ）を橙色板状晶として得た。この
合成物は融点１１９〜１２０°Ｃ（メタノール）であ
る。続いて、上記カルコン（８００mg，２ミリモル）を
リン酸（４ｇ）を含むエタノール（５０ml）に溶かし、
３０時間還流した後、水を加えてから酢酸エチルで抽
出、淡黄色油状物質（７５０mg）を得た。この油状物質
（３００mg）をジオキサン（１０ml）に溶かし、ジクロ
ロ−ジアミノ−ベンゾキノン（ＤＤＱ）（２５０mg，
１．１ミリモル）を加えて３時間還流した。これを冷却
して還元体をろ取し、ろ液をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（展開溶媒はクロロホルム）で精製し、５，
７，２′−トリイソプロポキシフラボン（２４０mg）を
褐色油状物質として得た。最後にこの褐色油状物質（２
３０mg）をジクロロメタンに溶かし、−７０°Ｃに冷却
後、三塩化ホウ素（０．５ml）を加えて１時間室温で放
置した。この反応液を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出する
と、淡黄色板状晶の５，７，２′−トリヒドロキシフラ
ボンを１２０mg得ることができた。

【００１４】この５，７，２′−トリヒドロキシフラボ
ンの性質は次の通りである。融点２７９°Ｃ（アセトン）プロトン核磁気共鳴スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：
６．２２，６．４８（２Ｈ，each d，Ｊ＝１．８Hz，Ｈ
−６，８）、６．９３−７．４０（３Ｈ，ｍ，Ｈ−
３′，４′，５′）、７．８５（１Ｈ，dd，Ｊ＝７．
５，２．０Hz，Ｈ−６′）、１０．７０（２Ｈ，br s，
ＯＨ）、１２．８０（１Ｈ，br s，ＯＨ）電子衝撃マススペクトルm/z （％）：２７０〔Ｍ⁺〕
（１００）、２４２（１３）、１５３（２３）、１５２
（３３）、１２４（２０）、１２１（１６）、１１８
（１１）紫外スペクトル（メタノール）λmax ：２６７、３３８
（nm）

【００１５】次に５，７，２′，３′−テトラヒドロキ
シフラボンの合成方法は次の通りである。即ち、５，
７，２′−トリヒドロキシフラボンの合成法に準じ、フ
ロロアセトフェノンジイソプロピルエーテル（６５０m
g，２．６ミリモル）と２，３−ジイソプロポキシベン
ズアルデヒド（６００mg，２．７ミリモル）の縮合、つ
いでＤＤＱによる酸化および脱保護基の反応により淡黄
色粉末晶の５，７，２′，３′−テトラヒドロキシフラ
ボンを得ることができた。

【００１６】５，７，２′，３′−テトラヒドロキシフ
ラボンの性質は次の通りである。融点３２７°Ｃ（分解）（アセトン−ベンゼン）プロトン核磁気共鳴スペクトル：６．２２、６．４６
（２Ｈ，each d，Ｊ＝２．３Hz，Ｈ−５′）、７．０３
（１Ｈ，dd，Ｊ＝７．５，２．０Hz，Ｈ−４′）、７．
０４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３）、７．３２（１Ｈ，dd，Ｊ＝
７．５，２．０Hz，Ｈ−６′）１０．０５（３Ｈ，br
s，ＯＨ×３）、１２．８８（１Ｈ，ｓ，Ｃ₅−ＯＨ）電子衝撃マススペクトルm/z （％）：２８６〔Ｍ⁺〕
（１００）、１５３（８８）、１３４（１８）紫外スペクトル：２６６、２９４sh、３３２（nm）

【００１７】本発明の抗発癌プロモーター剤の投与方法
は、黄ごんエキス抽出単離物、および合成物共に公知の
カプセル剤、錠剤、注射剤など種々の剤型で行うことが
でき、経口あるいは非経口の何れでも自由である。投与
量は個体の症状や体重差によって異なるが、一般的に成
人では経口投与であれば一日につき１〜２００mgの範囲
で調整可能である。なお好ましくは５〜８０mgを連続投
与すれば、効果的である。

【００１８】毒性については、古くから生薬に指定され
ている黄ごんから抽出単離された成分であるため、全く
問題はない。また、合成によって得られる成分に関して
も、黄ごんから単離同定された成分と同一成分であるた
め問題はない。

【００１９】

【発明の効果】動物実験の結果、本発明の抗発癌プロモ
ーター剤を連続投与あるいは摂取することによって、正
常細胞の癌化を極めて低く抑制することができ、薬理効
果は顕著であった。また生薬である黄ごんに含まれてい
る成分であるため急性毒性もなく、連続投与によっても
安全性が害されることなく、むしろ発癌の抑制という目
的からも好ましいものである。即ち、抗発癌プロモータ
ーという正常細胞の癌化予防の作用をもつものであるた
め、正常時の連続摂取こそ好ましいからである。このこ
とから、本発明剤は機能的食品ともなり得るものであ
る。

【００２０】

【実施例】

〔実施例１〕動物実験として雌ＩＣＲマウスを用い、５
匹を１つのケージに入れて自由に固形飼料と水とを摂取
できる状態に維持し、実験を進めた。６週令のマウスの
背部をバリカンで剃毛し、一昼夜を経過した翌日より発
癌二段階実験を開始する。アセトンに溶解した０．１ml
で１００μｇ（３９０ｎml）の濃度に調整した発癌イニ
シエーターであるＤＭＢＡ（ジメチル−ベンツ−アント
ラセン）をその背部にピペットにて塗布を行い、１週間
経過後から同様にアセトンに溶解した５，７，２′トリ
ヒドロキシフラボン、あるいは５，７，２′，３′−テ
トラヒドロキシフラボン溶液８５ｎmol を同じ部位に塗
布し、１時間後に同じくアセトンに溶解した発癌プロモ
ーターであるＴＰＡ１μｇ／０．１ml（１．７ｎml）を
塗布する。同様の操作を週に２回行い、それを２０週間
連続し、発癌プロモーションの抑制効果を観察した。

【００２１】判定は週に１回、１mm以上の腫瘍について
実験に使用したマウスの匹数あたりの腫瘍を持つマウス
の匹数を百分率で示した値と、マウスあたりの出現した
腫瘍数にて行った。陽性のコントロール実験として、被
験化合物の代わりにアセトンを塗布したマウスを同様に
処理した。全匹数あたりの腫瘍を持つマウスの匹数を百
分率で示したのが図１であり、個体あたりの腫瘍の出現
数を示したのが図２である。図１の横軸はプロモーショ
ン作用を実施した週令を示し、縦軸は腫瘍をもつマウス
の匹数を使用したマウスの匹数あたりの百分率で示した
ものである。また図２の横軸は同様に週令を示し、縦軸
はマウスあたりの出現した腫瘍の数を示したものであ
る。図中、黒丸でプロットしたグラフは抗発癌処理をし
ていないもの、三角でプロットしたグラフは５，７，
２′−トリヒドロキシフラボン溶液の塗布処理をしたも
の、四角でプロットしたグラフは５，７，２′，３′−
テトラヒドロキシフラボン溶液の塗布処理をしたもので
ある。

【００２２】図１の判定結果からも明らかなように、抗
発癌処理を施していないマウス群では第８週令において
全てに腫瘍の発生が見られたが、抗発癌処理を施した２
つのマウス群では６０％の抑制率を示した。また第１１
週令においても２５％の処理済マウスは全く発癌しなか
った。さらに、図２において明らかなように、未処理の
マウスでは第５週令を過ぎると腫瘍数が激増するのに対
し、抗発癌処理を施したマウス群では腫瘍が発見された
マウスでも腫瘍数は微増に止まり、顕著な抑制効果を見
ることができた。

【００２３】本発明の５，７，２′−トリヒドロキシフ
ラボン、および５，７，２′，３′−テトラヒドロキシ
フラボンは抗発癌プロモーターという予防剤の機能を有
するため、臨床実験には適さないが、上記マウスを用い
た動物実験の結果から判断しても非常に効果的な抗発癌
プロモーター剤となるものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】動物実験の結果を示すグラフ、

【図２】同、動物実験の結果を示すグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】黄ごんから抽出した成分中、一般式【化１】（式中、Ｒは水素原子または水酸基を示す）を主成分と
する抗発癌プロモーター剤。
【請求項２】一般式【化２】（式中、Ｒは水素原子または水酸基を示す）からなる抗
発癌プロモーター剤。