JPH05155896A - 新規マクロライド化合物及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 下記一般式 化１で示される新規マクロライ
ド化合物及びその製造法。キブデロスポランギウム（Ｋ
ｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）属に属する微生物
を培養し，培養物から生成蓄積した上記化合物を採取す
ることを特徴とする。 【化１】 （式中， Ｒ^１はイソバレリルオキシ基または水酸基
を，Ｒ^２はメチル基またはヒドロキシメチル基，Ｒ^３は
メチル基または水素原子を意味する。但し，Ｒ^１がイソ
バレリルオキシ基で，Ｒ^２，Ｒ^３がメチル基である化合
物を除く。） 【効果】 医薬，殊に抗菌剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬，殊に抗菌剤として
有用な化合物であるマクロライド化合物及び発酵法によ
る該化合物の製造法に関する。

【０００２】

【発明が解決しようとする課題】先に本発明者等は，キ
ブデロスポランギウム属に属する微生物であるキブデロ
スポランギウム エス・ピー（Ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒ
ａｎｇｉｕｍ ｓｐ．）ＹＬ−０２１０７Ｑ（微工研菌
寄第１１４６７号）の培養液から，新規な下記化３で示
されるマクロライド化合物を純粋に単離し，特許出願を
行った（特願平２−１４３８０４号）。

【０００３】

【化３】 ＹＬ−０２１０７Ｑ物質

【０００４】本発明者等は，前記の培養液をさらに詳細
に分析したところ，ＹＬ−０２１０７Ｑ物質とは構造を
異にする，新規な１４員環マクロライド化合物を純粋に
単離することに成功し，本発明を完成した。

【０００５】

【課題を解決するための手段】すなわち，本発明は下記
一般式（Ｉ）で示される新規マクロライド化合物に関す
る。

【０００６】

【化４】

【０００７】式中，Ｒ^１はイソバレリルオキシ基

【０００８】

【化５】

【０００９】または水酸基を，Ｒ^２はメチル基またはヒ
ドロキシメチル基，Ｒ^３はメチル基または水素原子を意
味する。但し，Ｒ^１がイソバレリルオキシ基で，Ｒ^２，
Ｒ^３がメチル基である化合物を除く。

【００１０】また，本発明者は，上記マクロライド化合
物（Ｉ）を生産する能力を有す微生物を培地に培養し，
培養物中に該化合物を生産させ，次いで該化合物を採取
することからなる新規マクロライド化合物の製造法であ
る。本発明の化合物を生産する菌株は中華人民共和国の
斉斉哈爾（チチハル）で採取された土壌より分離された
微生物で，次のような菌学的性状を有する。

【００１１】（１）形態 各種有機及び無機培地で基生菌糸は良く発達，分岐し，
菌糸の幅はほぼ０．４μｍであり，培地によりわずかに
菌糸の断裂が観察される。気菌糸は灰白色を呈し，形状
は長い直線状またはゆるやかな曲線状で，不規則に分岐
し，５０個以上の胞子連鎖を形成する。胞子の形状は円
筒形，大きさは０．４〜０．６μｍ×１．５〜２．５μ
ｍで，その表面は平滑である。

【００１２】またオートミール寒天培地などの培地上
で，気菌糸中に胞子嚢様の構造が多数観察される。それ
らは，形は亜球状で表面には皺が見られ，大きさは５〜
１５μｍであり，中には胞子は認められない。菌核，運
動性のエレメント，輪生糸などの器官は観察されない。

【００１３】（２） 各種寒天培地上の性状 各種寒天培地上の性状は，以下に示すとおりである。特
に記載しない限り，２７℃で２１日間培養し，常法に従
って観察したものである。色調の記載については色の標
準（日本色彩研究所）によった。 表１． ＹＬ−０２１０７Ｑ株の各種寒天培地上の性状

【００１４】

【表１】

【００１５】（注） Ｇ： 生育程度 Ａ： 気菌糸の着生及びその色相 Ｒ： 裏面の色相 Ｓ： 可溶性色素

【００１６】（３） 生理的性質 表２． ＹＬ−０２１０７Ｑ株の各種生理性状

【００１７】

【表２】

【００１８】（注） 生育温度は各温度（５，１０，１
５，２０，２４，２７，３０，３３，３７，４０，４
５，５０℃）で７〜２１日までの観察結果，ミルクに対
する作用は３７℃で３〜２１日までの観察結果，それ以
外は，特に指摘のないかぎり２７℃で２週間後の観察結
果を示す。

【００１９】（４） 炭素源の資化性（プリドハム・ゴ
ドリーブ寒天培地，２７℃培養） 表３． ＹＬ−０２１０７Ｑ株の炭素源の資化性

【００２０】

【表３】

【００２１】（５） 菌体成分の化学分析 ＬＥＣＨＶＡＬＩＥＲ らの方法（ＬＥＣＨＶＡＬＩＥ
Ｒ．ＭＰ．ｅｔ ａｌ；ｐｐ２７７−２３８ ｉｎ Ｄ
ＩＥＴＺ，Ａ ｅｔ．ａｌ．ｅｄ．， Ａｃｔｉｎｏｍ
ｙｃｅｔｅ Ｔａｘｏｎｏｍｙ，ＳＩＭ Ｓｐｅｃｉａ
ｌ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．６，１９８０）に
従い本菌株の酸加水分解物及び，細胞壁成分の分析を行
った結果，表４の様に細胞壁タイプ ＩＶ−Ａ であっ
た。 表４． ＹＬ−０２１０７Ｑ株の菌体化学分析データ

【００２２】

【表４】

【００２３】上記諸性状を要約すると，ＹＬ−０２１０
７Ｑ株は，寒天培地中に伸長した基生菌糸上に気菌糸を
豊富に着生し，気菌糸の一部に胞子連鎖を形成する。基
生菌糸は培地によってわずかに断裂が生じることがあ
る。胞子は桿菌状で，表面は平滑であり，運動性は認め
られない。気菌糸中に多数の胞子嚢様の構造が形成され
るがその中には胞子は観察されない。菌体成分の化学分
析の結果，細胞壁タイプはＩＶ型，主たるメナキノン分
子種はＭＫ−９（Ｈ_４）であった。

【００２４】以上の性質を有する菌種を各種の文献等に
より検索すると，本菌株は１９８６年にＳｈｅａｒｅｒ
らによって提唱されたキブデロスポランギウム属（Ｇｅ
ｎｕｓ Ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）と形
態，化学分析値がほとんど一致するため，本属に属する
菌株であると判断した。そこで，本属でただ１種報告さ
れているＫｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ ａｒｉ
ｄｕｍと文献上で各種性状を比較した。その結果，Ｋ．
ａｒｉｄｕｍはメラニン様色素の生成が認められる点，
硝酸塩の還元作用，スターチの加水分解能が陰性である
点，グリコペプチド抗生物質を生産する点などにおいて
本菌株と異なっていた。

【００２５】従って，本菌株はキブデロスポランギウム
属の新種と考えられ，キブデロスポランギウム エス・
ピー（Ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍｓｐ．）Ｙ
Ｌ−０２１０７Ｑと命名した。本菌株は，工業技術院微
生物工業研究所に微工研菌寄第１１４６７号として寄託
されている。

【００２６】

【製造法】本発明の新規マクロライド化合物の製造法を
実施するに当たり，該化合物の生産菌株キブデロスポラ
ンギウム エス・ピー ＹＬ−０２１０７Ｑ株を栄養源
を含有する培地に接種し，好気的に発育させることによ
り，本発明の新規マクロライド化合物を含む培養物が得
られる。栄養物としては，放線菌の栄養源として公知の
ものを使用すればよい。

【００２７】たとえば市販されているペプトン，肉エキ
ス，コーン・スティープリカー，綿実粉，落花生粉，大
豆粉，酵母エキス，ＮＺ−アミン，カゼインの水解物，
魚粉，硝酸ソーダ，硝酸アンモニウム等の無機または有
機の窒素源，市販されている糖蜜，澱粉，デキストリ
ン，庶糖，グルコース，マルトース，フラクトース，キ
シロース，ラムノース，マンニトール，グリセリン等の
炭水化物あるいは脂肪等に炭素源が，使用できる。

【００２８】また，金属塩として，Ｎａ，Ｋ，Ｍｇ，Ｃ
ａ，Ｚｎ，Ｆｅ等の硫酸塩，塩酸塩，硝酸塩，燐酸塩，
炭酸塩等が必要に応じて添加される。さらに，バリン，
ロイシン，イソロイシン，スレオニン，フェニルアラニ
ン，トリプトファン，メチオニン，リジン，アルギニン
等の他，通常知られているアミノ酸類や，オレイン酸メ
チル，ラード油，シリコン油，界面活性剤等の抗生物質
生成促進物質または消泡剤等も必要に応じて適宜使用さ
れる。

【００２９】これらのもの以外でも，該生産菌が利用
し，本発明の新規マクロライド化合物の生産に役立つも
のであれば何れでも使用することができる。培養法とし
ては，一般の抗生物質の生産方法と同様に行えばよく，
その培養方法は固体培養でも液体培養でもよい。液体培
養の場合は静置培養，撹拌培養，振盪培養等のいずれを
実施してもよいが，特に通気撹拌培養が好ましい。

【００３０】また，培養温度は生産菌が発育し，本発明
の化合物を生産する温度，すなわち１５℃〜４０℃の範
囲で適宜変更出来るが，およそ２５℃〜３２℃の範囲が
好ましい。培地のｐＨは４〜９の範囲で適宜変更できる
が，できればｐＨ６〜８が好ましい。培養時間は種々の
条件によって異なり，１０時間〜１６８時間であるが，
通常２４時間〜１２０時間程度で培養物中に蓄積される
目的化合物が最高力価に達する。

【００３１】培養物から目的とする化合物を採取するに
は，微生物の生産する代謝産物に用いる通常の抽出，分
離，精製の手段が適宜利用される。培養物中の目的化合
物は培養物をそのままか，または遠心分離あるいは培養
物に濾過助剤を加え濾過して得られた培養濾液に，酢酸
エチル，クロロホルム，ベンゼン，トルエン等の水と混
和しない有機溶媒を加えて抽出する。

【００３２】また，培養濾液を適宜の担体に接触させ，
濾液中の目的化合物を吸着させ，次いで適当な溶媒で溶
出する事により目的化合物を抽出することができる。更
に詳しく述べるならば，例えばダイヤイオンＨＰ−２
０，アンバーライトＸＡＤ−２，ダイヤイオンＳＰ−９
００またはダイヤイオンＣＨＰ−２０Ｐのごとき多孔性
吸着樹脂に接触させて目的物を吸着させる。ついでメタ
ノール，エタノール，アセトン，アセトニトリル等の有
機溶剤と水の混合液を用いて目的物を溶出させる。この
時の溶媒の混合比は，目的化合物が最も効率よく溶出し
うる値にすることはいうまでもない。

【００３３】すなわち溶媒比率を低濃度より段階的，ま
たは連続的に高濃度まで上げて行くことにより，目的化
合物の含まれる比率の，より高い画分を得ることが出来
る。酢酸エチル，クロロホルム等に有機溶媒で抽出する
場合には培養濾液にこれらの溶媒を加え，よく振盪し，
目的化合物を抽出後，得られた抽出液を稀塩酸水溶液の
ような酸性水溶液，また稀炭酸水素ナトリウム水溶液の
ようなアルカリ性水溶液で順次洗浄し，目的化合物を含
む抽出画分を得ることができる。

【００３４】つぎに上記の各操作法を用いて得られた目
的化合物含有画分は常用の吸着処理，例えば活性炭，ア
ルミナ，シリカゲル，セルロース等を担体に用いたカラ
ムクロマトグラフィーや，シリカゲル系ＯＤＳ逆相担体
のカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等の常法
により，更に純粋に分離精製することができる。

【００３５】

【実施例】以上，本発明化合物及びその製造法について
説明したが，以下に実施例により更に具体的に説明す
る。

【００３６】実施例１−ａ グルコース１．０％，ポテトスターチ２．０％，酵母エ
キス０．５％，ポリペプトン０．５％，炭酸カルシウム
０．４％を含む培地（ｐＨ７．０）を作成し，これを５
００ｍｌの三角フラスコに各６０ｍｌずつ分注し，１２
０℃で２０分間滅菌したものを第一段種培地とし，これ
にベネット寒天上によく成育させたキブデロスポランギ
ウム エス・ピーＹＬ−０２１０７Ｑ株の菌糸をかき取
って接種し，２８℃で４８時間振とう培養を行ない，第
一段種培養液とした。

【００３７】つぎに，上記と同様の培地を作成し，これ
を３０ｌ培養槽に１８ｌ分注し，１２０℃で３０分間減
菌したものを第二段種培地とし，これに上記第一段種培
養液を２％の割合で接種し，毎分３０ｌの通気量，回転
数２００ｒｐｍ，温度２８℃で７２時間培養を行ない第
二段種培養液とした。

【００３８】つぎに本培養は，３００ｌの培養槽にグル
コース１％，ポテトスターチ２％，ソイビンミール０．
５％，フェザーミール０．５％，炭酸カルシウム０．４
％を含む培地（ｐＨ７．０）２００ｌを作成し，予め１
２０℃で３０分間滅菌しておく。これに上記第二段種培
養液の全量を接種し，毎分２００ｌの通気量，回転数８
０ｒｐｍ，温度２８℃，６日間培養した。目的化合物等
のバチルスズブチリスＡＴＣＣ６６３３株に対する抗菌
活性は最大となった。このようにして得られた培養液
に，ラジオライト＃６００（昭和化学工業社製）を加
え，撹拌した後に濾過した。

【００３９】得られた培養濾液（ｐＨ７．８）を塩酸で
ｐＨ７．０に調整した後，２０ｌのダイヤイオンＨＰ−
２０（三菱化成工業社製）を充填した外径１８ｃｍ高さ
１５０ｃｍのカラムを通導させて，目的化合物等を吸着
させた。次いで５０ｌの蒸留水で良く水洗いした後，２
５％アセトン水４０ｌで洗浄し，最後に５０ｌの８０％
アセトン水を用いて目的化合物を溶出した。この溶出液
を減圧下で濃縮し，ｐＨを７．０に調整し，４０ｌの酢
酸エチルを加え，抽出した後，分液して水層を除去し
た。

【００４０】この様にして得られた酢酸エチル抽出液を
減圧濃縮してＹＬ−０２１０７Ｑ物質およびＹＬ−０２
１０７Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質を含む飴状粗抽出物４３０ｇを得
た。この粗抽出物を１０００ｍｌの酢酸エチルに溶解
し，６ｌのシリカゲル（ワコーゲルＣ−３００，和光純
薬工業社製）のカラム（９×１５０）２本に，各々半量
づつチャージし，酢酸エチル：メタノール（１００：
０．５）で溶出した。この溶出液は５００ｍｌづつのフ
ラクションに分画して取った。

【００４１】目的化合物等の確認にはシリカゲルプレー
ト（キーゼルゲル６０Ｆ_２５４２０ｃｍ×２０ｃｍ，メ
ルク社製）を用い，クロロホルム：メタノール（９：
１）の溶媒で展開するクロマトグラフィーを行い，１０
％硫酸溶液を噴霧し，１１０℃２０分間加熱して発色
し，目的化合物等を確認した。フラクションナンバー８
〜１５にＹＬ−０２１０７Ｑ物質が溶出され，フラクシ
ョンナンバー１６〜４０にＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ〜Ｄ
物質が溶出された。これらを集め，減圧下で濃縮乾固し
た後，真空デシケーターの中で一夜乾燥し，ＹＬ−０２
１０７−Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質を混合物として，１０ｇ得た。

【００４２】得られたＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質
の混合物を３０ｍｌのクロロホルムに溶解し，別に外径
５ｃｍ長さ１２０ｃｍのクロマト管にクロロホルムで充
填した１ｌのシリカゲル（ワコーゲルＣ−３００，和光
純薬工業社製）のカラムにチャージし，クロロホルム：
メタノール（１００：３）の展開溶出液で溶出した。こ
の溶出液はフラクションコレクターで２０ｇずつに分画
して取った。目的化合物の確認は，実施例１で記したシ
リカゲル薄層クロマトグラフィーと，高速液体クロマト
グラフィーによった。高速液体クロマトグラフィーの条
件はＹＭＣ−ｐａｃｋ−Ａ−３１２ ＯＤＳ（ＹＭＣ株
式会社製）の４．６ｍｍ×１５０ｍｍカラムに溶離液と
してアセトニトリル：メタノール：テトラヒドロフラ
ン：水（２０：３０：１０：４０）を毎分１ｍｌの流量
割合で流して用い，２２０ｎｍでの紫外線吸収を用いて
検出した。

【００４３】実施例１−ｂ 実施例１−ａで得られたＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ物質を
含むフラクション，ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｃ物質を含む
フラクション，ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｄ物質を含むフラ
クションを集め，減圧下で濃縮乾固した後，真空デシケ
ーター中で一夜乾燥して，各々１．４ｇ，１．２ｇ，
１．０ｇの白色粉末を得た。次いで，これらの白色粉末
各々４００ｍｇを各々４ｍｌのメタノールに溶解し，各
々０．４ｍｌずつに分け高速液体クロマトグラフィーに
かけて目的のＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ物質，ＹＬ−０２
１０７Ｑ−Ｃ物質，ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｄ物質を純粋
に分取した。高速液体クロマトグラフィーの条件はＹＭ
Ｃ−ｐａｃｋＤ−５ ＯＤＳ（ＹＭＣ株式会社製）の２
ｃｍ×２５ｃｍカラムに溶離液としてアセトニトリル：
メタノール：テトラヒドロフラン：水（２０：３０：１
０：４０）を毎分１０ｍｌの流量割合で流して用い，２
２０ｎｍでの紫外線吸収を用いて検出した。

【００４４】この様にして得られた分取画分を各々濃縮
して，酢酸エチルで抽出し，得られた酢酸エチルの抽出
液を芒硝を加えて脱水後，ろ去し，減圧下で濃縮乾固し
た。これを真空デシケーター中で一夜乾燥し，純粋なＹ
Ｌ−０２１０７Ｑ−Ｂ物質１０１ｍｇ，ＹＬ−０２１０
７Ｑ−Ｃ物質９７ｍｇおよびＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｄ物
質９０ｍｇの白色粉末を得た。以下に，ＹＬ−０２１０
７Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質の化学構造式及び理化学的性状につい
て記載する。

【００４５】ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ物質

【００４６】

【化６】

【００４７】理化学的性状 （１） 色および形状： 白色粉末 （２） 酸性，中性，塩基性の区分： 中性 （３） 溶解性： メタノール，エタノール，アセト
ン，酢酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルム等
には溶けるが水やヘキサンにはほとんど溶けない。 （４） 融点： １０５．４〜１１０．５℃ （５） 比旋光度：〔α〕Ｄ^２３＝−５４．６０（Ｃ＝
１，メタノール中） （６） 紫外線吸収スペクトル： 図１に示すごとくで
ある。 （７） 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）： 図２に示
すごとくである。 （８） 分子量： ９４９．１４１ （９） マススペクトル： ９７１ｍ／ｚ〔Ｍ＋Ｎａ〕
（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ） （１０）分子式： Ｃ_４７Ｈ_８０Ｏ１９ （１１）元素分析値： Ｃ_４７Ｈ_８０Ｏ_１９・ｎＨ_２Ｏ（ｎ＝１．５０）として Ｃ（％） Ｈ（％） Ｎ（％） Ｏ（％） 計算値 ５７．８３ ８．５７ ０．００ ３３．６０ 実測値 ５７．９１ ８．３８ ０．００ （１２）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図５に示すごとくで
ある。 （１３）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図８に示すごとく
である。 （１４）薄層クロマトグラフィー： 固定相 展開溶媒 Ｒｆ値 シリカゲル クロロホルム：メタノール（９：１） ０．４５ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．５３の時） シリカゲル 酢酸エチル：アセトン（３：１） ０．３５ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．４５の時） （１５）高速液体クロマトグラフィー： カラム ＹＭＣ−ｐａｃｋ−Ａ−３１２ ＯＤＳ
４．６ｍｍ×１５０ｍｍ（分析用） 移動相 アセトニトリル：メタノール：テトラヒ
ドロフラン：水（２０：３０：１０：４０） 流 速 １ｍｌ／ｍｉｎ 検 出 λ２２０ｎｍ 保持時間（Ｒ．Ｔ）＝１
３．９ｍｉｎ（ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲＴ＝２０．
１ｍｉｎ）

【００４８】ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｃ物質

【００４９】

【化７】

【００５０】理化学的性状 （１） 色および形状： 白色粉末 （２） 酸性，中性，塩基性の区分： 中性 （３） 溶解性： メタノール，エタノール，アセト
ン，酢酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルム等
には溶けるが水やヘキサンにはほとんど溶けない。 （４） 融点： １１６．３〜１２２．４℃ （５） 比旋光度： 〔α〕Ｄ^２３＝−７３．８６（Ｃ
＝１，メタノール中） （６） 紫外線吸収スペクトル： 図１に示すごとくで
ある。 （７） 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）： 図３に示
すごとくである。 （８） 分子量： ９７９．１６７ （９） マススペクトル： １００１．６ｍ／ｚ〔Ｍ＋
Ｎａ〕（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ） （１０）分子式： Ｃ_４８Ｈ_８２Ｏ_２０ （１１）元素分析値： Ｃ_４８Ｈ_８２Ｏ_２０・ｎＨ_２Ｏ（ｎ＝１．５０）として Ｃ（％） Ｈ（％） Ｎ（％） Ｏ（％） 計算値 ５７．３０ ８．５１ ０．００ ３４．１９ 実測値 ５７．４２ ８．４２ ０．００ （１２）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図６に示すごとくで
ある。 （１３）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図９に示すごとく
である。 （１４）薄層クロマトグラフィー： 固定相 展開溶媒 Ｒｆ値 シリカゲル クロロホルム：メタノール（９：１） ０．４０ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．５３の時） シリカゲル 酢酸エチル：アセトン（３：１） ０．３０ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．３５の時） （１５）高速液体クロマトグラフィー： カラム ＹＭＣ−ｐａｃｋ−Ａ−３１２ ＯＤＳ
４．６ｍｍ×１５０ｍｍ（分析用） 移動相 アセトニトリル：メタノール：テトラヒ
ドロフラン：水（２０：３０：１０：４０） 流 速 １ｍｌ／ｍｉｎ 検 出 λ２２０ｎｍ保持時間（Ｒ．Ｔ）＝１
１．１ｍｉｎ（ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲＴ＝２０．
１ｍｉｎ）

【００５１】ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｄ物質

【００５２】

【化８】

【００５３】理化学的性状 （１） 色および形状： 白色粉末 （２） 酸性，中性，塩基性の区分： 中性 （３） 溶解性： メタノール，エタノール，アセト
ン，酢酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルム等
には溶けるが水やヘキサンにはほとんど溶けない。 （４） 融点： １２０．８〜１２７．２℃ （５） 比旋光度： 〔α〕Ｄ^２３＝−７９．７６（Ｃ
＝１％，メタノール中） （６） 紫外線吸収スペクトル： 図１に示すごとくで
ある。 （７） 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）： 図４に示
すごとくである。 （８） 分子量： ８７９．０５０ （９） マススペクトル： ９０１．２ｍ／ｚ〔Ｍ＋Ｎ
ａ〕（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ） （１０）分子式： Ｃ_４３Ｈ_７４Ｏ_１８ （１１）元素分析値： Ｃ_４３Ｈ_７４Ｏ_１８・ｎＨ_２Ｏ（ｎ＝１．５０）として Ｃ（％） Ｈ（％） Ｎ（％） Ｏ（％） 計算値 ５７．００ ８．５７ ０．００ ３４．４３ 実測値 ５６．７５ ８．２８ ０．００ （１２）^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図７に示すごとくで
ある。 （１３）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図１０に示すごと
くである。 （１４）薄層クロマトグラフィー： 固定相 展開溶媒 Ｒｆ値 シリカゲル クロロホルム：メタノール（９：１） ０．４７ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．５３の時） シリカゲル 酢酸エチル：アセトン（３：１） ０．３８ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．３５の時） （１５）高速液体クロマトグラフィー： カラム ＹＭＣ−ｐａｃｋ−Ａ−３１２ ＯＤＳ
４．６ｍｍ×１５０ｍｍ（分析用） 移動相 アセトニトリル：メタノール：テトラヒ
ドロフラン：水（２０：３０：１０：４０） 流 速 １ｍｌ／ｍｉｎ 検 出 λ２２０ｎｍ保持時間（Ｒ．Ｔ）＝６．
６ｍｉｎ（ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲＴ＝２０．１ｍ
ｉｎ）

【００５４】

【発明の効果】本発明は，新規かつ有用な物を提供する
と共に，本発明の新規なマクロライド化合物は各種細菌
に強い活性を有している。これらの作用を以下に示す。
試験管内における抗菌活性（ＭＩＣ） ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質の，種々の微生物に対
する抗菌活性を，この目的に従来使用されるミューラー
ヒントン培地を用いた寒天平板希釈法によって測定し
た。 表５． ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質の抗菌活性

【００５５】

【表５】

【００５６】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質のメタ
ノール溶液中の紫外線吸収スペクトルを示す。

【図２】図２はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ物質の赤外線吸
収スペクトルを示す。

【図３】図３はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｃ物質の赤外線吸
収スペクトルを示す。

【図４】図４はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｄ物質の赤外線吸
収スペクトルを示す。

【図５】図５はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ物質の^１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルを示す。

【図６】図６はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｃ物質の^１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルを示す。

【図７】図７はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｄ物質の^１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルを示す。

【図８】図８はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ物質の^１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトルを示す。

【図９】図９はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｃ物質の^１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトルを示す。

【図１０】図１０はＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｄ物質の^１３
Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成３年６月１９日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１０】 また，本発明は，上記マクロライド化合
物（Ｉ）を生産する能力を有す微生物を培地に培養し，
培養物中に該化合物を生産させ，次いで該化合物を採取
することからなる新規マクロライド化合物の製造法であ
る。本発明の化合物を生産する菌株は中華人民共和国の
斉斉哈爾（チチハル）で採取された土壌より分離された
微生物で，次のような菌学的性状を有する。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１６】 （３） 生理的性質 表２． ＹＬ−０２１０７Ｑ株の各種生理的性質

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１７】

【表２】

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２７】 たとえば市販されているペプトン，肉エ
キス，コーン・スティープリカー，綿実粉，落花生粉，
大豆粉，酵母エキス，ＮＺ−アミン，カゼインの水解
物，魚粉，硝酸ソーダ，硝酸アンモニウム等の無機また
は有機の窒素源，市販されている糖蜜，澱粉，デキスト
リン，蔗糖，グルコース，マルトース，フラクトース，
キシロース，ラムノース，マンニトール，グリセリン等
の炭水化物あるいは脂肪等の炭素源が，使用できる。

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３３

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３３】 すなわち溶媒比率を低濃度より段階的，
または連続的に高濃度まで上げて行くことにより，目的
化合物の含まれる比率の，より高い画分を得ることが出
来る。酢酸エチル，クロロホルム等に有機溶媒で抽出す
る場合には培養濾液にこれらの溶媒を加え，よく振盪
し，目的化合物を抽出後，得られた抽出液を希塩酸水溶
液のような酸性水溶液，また希炭酸水素ナトリウム水溶
液のようなアルカリ性水溶液で順次洗浄し，目的化合物
を含む抽出画分を得ることができる。

【手続補正６】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３６】 実施例１−ａ グルコース１．０％，ポ
テトスターチ２．０％，酵母エキス０．５％，ポリペプ
トン０．５％，炭酸カルシウム０．４％を含む培地（ｐ
Ｈ７．０）を作成し，これを５００ｍｌの三角フラスコ
に各６０ｍｌずつ分注し，１２０℃で２０分間滅菌した
ものを第一段種培地とし，これにベネット寒天上によく
生育させたキブデロスポランギウム エス・ピーＹＬ−
０２１０７Ｑ株の菌糸をかき取って接種し，２８℃で４
８時間振とう培養を行ない，第一段種培養液とした。

【手続補正７】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３８

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３８】 つぎに本培養は，３００ｌの培養槽にグ
ルコース１．０％，ポテトスターチ２．０％，ソイビン
ミール０．５％，フェザーミール０．５％，炭酸カルシ
ウム０．４％を含む培地（ｐＨ７．０）２００ｌを作成
し，予め１２０℃で３０分間滅菌しておく。これに上記
第二段種培養液の全量を接種し，毎分２００ｌの通気
量，回転数８０ｒｐｍ，温度２８℃，６日間培養した。
目的化合物等のバチルス ズブチリスＡＴＣＣ６６３３
株に対する抗菌活性は最大となった。このようにして得
られた培養液に，ラジオライト＃６００（昭和化学工業
社製）を加え，撹拌した後に濾過した。

【手続補正８】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４４】 この様にして得られた分取画分を各々濃
縮して，酢酸エチルで抽出し，得られた酢酸エチルの抽
出液を芒硝を加えて脱水後，濾去し，減圧下で濃縮乾固
した。これを真空デシケーター中で一夜乾燥し，純粋な
ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ物質１０１ｍｇ，ＹＬ−０２１
０７Ｑ−Ｃ物質９７ｍｇおよびＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｄ
物質９０ｍｇの白色粉末を得た。以下に，ＹＬ−０２１
０７Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質の化学構造式及び理化学的性状につ
いて記載する。

【手続補正９】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４７】 理化学的性状 （１） 色および形状： 白色粉末 （２） 酸性，中性，塩基性の区分： 中性 （３） 溶解性： メタノール，エタノール，アセト
ン，酢酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルム等
には溶けるが水やヘキサンにはほとんど溶けない。 （４） 融点： １０５．４〜１１０．５℃ （５） 比旋光度：〔α〕Ｄ^２３＝−５４．６０（Ｃ＝
１，メタノー中） （６） 紫外線吸収スペクトル： 図１に示すごとくで
ある。 （７） 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）： 図２に示
すごとくである。 （８） 分子量： ９４９．１４１ （９） マススペクトル： ９７１ｍ／ｚ〔Ｍ＋Ｎａ〕
（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ） （１０）分子式： Ｃ_４７Ｈ_８０Ｏ_１９ （１１）元素分析値：Ｃ_４７Ｈ_８０Ｏ_１９・ｎＨ_２ Ｏ
（ｎ＝１．５０）として （１２） ^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図５に示すごとく
である。 （１３）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図８に示すごとく
である。 （１４）薄層クロマトグラフィー： 固定相 展開溶媒 Ｒｆ値 シリカゲル クロロホルム：メタノール（９：１） ０．４５ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．５３の時） シリカゲル 酢酸エチル：アセトン（３：１） ０．３５ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．４５の時） （１５）高速液体クロマトグラフィー： カラム ＹＭＣ−ｐａｃｋ−Ａ−３１２ ＯＤＳ
４．６ｍｍ×１５０ｍｍ（分析用） 移動相 アセトニトリル：メタノール：テトラヒ
ドロフラン：水（２０：３０：１０：４０） 流 速 １ｍｌ／ｍｉｎ 検 出 λ２２０ｎｍ保持時間（Ｒ．Ｔ） １３．９ｍｉｎ
（ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲ．Ｔ＝２０．１ｍ
ｉｎ）

【手続補正１０】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５０】 理化学的性状 （１） 色および形状： 白色粉末 （２） 酸性，中性，塩基性の区分： 中性 （３） 溶解性： メタノール，エタノール，アセト
ン，酢酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルム等
には溶けるが水やヘキサンにはほとんど溶けない。 （４） 融点： １１６．３〜１２２．４℃ （５） 比旋光度： 〔α〕Ｄ^２３ ＝−７３．８６
（Ｃ＝１，メタノール中） （６） 紫外線吸収スペクトル： 図１に示すごとくで
ある。 （７） 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）： 図３に示
すごとくである。 （８） 分子量： ９７９．１６７ （９） マススペクトル： １００１．６ｍ／ｚ〔Ｍ＋
Ｎａ〕（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ） （１０）分子式： Ｃ_４８Ｈ_８２Ｏ_２０ （１１）元素分析値：Ｃ_４８Ｈ_８２Ｏ_２０・ｎＨ_２Ｏ
（ｎ＝１．５０）として （１２） ^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図６に示すごとく
である。 （１３）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図９に示すごとく
である。 （１４）薄層クロマトグラフィー： 固定相 展開溶媒 Ｒｆ値 シリカゲル クロロホルム：メタノール（９：１） ０．４０ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．５３の時） シリカゲル 酢酸エチル：アセトン（３：１） ０．３０ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．４５の時） （１５）高速液体クロマトグラフィー： カラム ＹＭＣ−ｐａｃｋ−Ａ−３１２ ＯＤＳ
４．６ｍｍ×１５０ｍｍ（分析用） 移動相 アセトニトリル：メタノール：テトラヒ
ドロフラン：水（２０：３０：１０：４０） 流 速 １ｍｌ／ｍｉｎ検 出 λ２２０ｎｍ 保持時間（Ｒ．Ｔ） １１．１ｍｉｎ
（ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲ．Ｔ＝２０．１ｍｉ
ｎ）

【手続補正１１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５３

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５３】 理化学的性状 （１） 色および形状： 白色粉末 （２） 酸性，中性，塩基性の区分： 中性 （３） 溶解性： メタノール，エタノール，アセト
ン，酢酸エチル，ベンゼン，トルエン，クロロホルム等
には溶けるが水やヘキサンにはほとんど溶けない。 （４） 融点； １２０．８〜１２７．２℃ ５） 比旋光度： 〔α〕Ｄ^２３＝−７９．７６（Ｃ＝
１％，メタノール中） ６） 紫外線吸収スペクトル： 図１に示すごとくであ
る。 ７） 赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）： 図４に示す
ごとくである。 ８） 分子量： ８７９．０５０ ９） マススペクトル： ９０１．２ｍ／ｚ〔Ｍ＋Ｎ
ａ〕（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ） １０）分子式： Ｃ_４３Ｈ_７４Ｏ_１８ １１）元素分析値：Ｃ_４３Ｈ_７４Ｏ_１８・ｎＨ_２ Ｏ
（ｎ＝１．５０）として （１２） ^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図７に示すごとく
である。 １３）^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図１０に示すごとく
である。 １４）薄層クロマトグラフィー： 固定相 展開溶媒 Ｒｆ値 シリカゲル クロロホルム：メタノール（９：１） ０．４７ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．５３の時） シリカゲル 酢酸エチル：アセトン（３：１） ０．３８ （ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲｆ値０．４５の時） １５）高速液体クロマトグラフィー： カラム ＹＭＣ−ｐａｃｋ−Ａ−３１２ ＯＤＳ
４．６ｍｍ×１５０ｍｍ（分析用） 移動相 アセトニトリル：メタノール：テトラヒ
ドロフラン：水（２０：３０：１０：４０） 流 速 １ｍｌ／ｍｉｎ 検 出 λ２２０ｎｍ保持時間（Ｒ．Ｔ） ６．６ｍｉｎ
（ＹＬ−０２１０７Ｑ物質のＲ．Ｔ＝２０．１ｍｉ
ｎ）

【手続補正１２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５４】

【発明の効果】本発明は，新規かつ有用な微生物を提供
すると共に，本発明の新規なマクロライド化合物は各種
細菌に強い活性を有している。これらの作用を以下に示
す。試験管内における抗菌活性（ＭＩＣ） ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質の，種々の微生物に対
する抗菌活性を，この目的に従来使用されるミューラー
ヒントン培地を用いた寒天平板希釈法によって測定し
た。 表５． ＹＬ−０２１０７Ｑ−Ｂ〜Ｄ物質の抗菌活性

【手続補正１３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５５】

【表５】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 永井 浩二 東京都板橋区蓮根３−16−１ 山之内製薬 蓮根寮 (72)発明者 山口 洋司 埼玉県大宮市奈良町136−51 10−205 (72)発明者 佐々木 敏雄 埼玉県浦和市文蔵５−22−12−504 (72)発明者 柴崎 充至 東京都板橋区蓮根３−16−１ 山之内製薬 蓮根寮 (72)発明者 平本 昌志 神奈川県横浜市南区弘明寺町134 (72)発明者 竹林 幸弘 千葉県市川市若宮３−３−２ (72)発明者 鷲崎 清司 埼玉県上尾市富士見１−11−30 (72)発明者 森岡 幹夫 埼玉県新座市あたご３丁目12番１号 (72)発明者 リャン スー ファン 中華人民共和国 シャンハイ市200031ユー ヤンロード 319 シャンハイ インスチ テュート オブ マテリア メディカ ア カデミア シニカ 内 (72)発明者 ワン フー チン 中華人民共和国 シャンハイ市200031ユー ヤンロード 319 シャンハイ インスチ テュート オブ マテリア メディカ ア カデミア シニカ 内 (72)発明者 ツァン ウェイ ウェン 中華人民共和国 シャンハイ市200031ユー ヤンロード 319 シャンハイ インスチ テュート オブ マテリア メディカ ア カデミア シニカ 内 (72)発明者 リュー チャー ウェイ 中華人民共和国 シャンハイ市200031ユー ヤンロード 319 シャンハイ インスチ テュート オブ マテリア メディカ ア カデミア シニカ 内

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中，Ｒ^１はイソバレリルオキシ基 【化２】 または水酸基を，Ｒ^２はメチル基またはヒドロキシメチ
   ル基，Ｒ^３は，メチル基または水素原子を意味する。但
   し，Ｒ^１がイソバレリルオキシ基で，Ｒ^２，Ｒ^３がメチ
   ル基である化合物を除く。）で表わされる新規なマクロ
   ライド化合物。
2. 【請求項２】キブデロスポランギウム（Ｋｉｂｄｅｌｏ
   ｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）属に属し，請求項１記載のマク
   ロライド化合物を生産する能力を有する微生物を培地に
   培養し，培養物中に該マクロライド化合物を生成し，蓄
   積させ，培養物から生成蓄積したマクロライド化合物を
   採取することを特徴とする請求項１に記載のマクロライ
   ド化合物の製造法。
3. 【請求項３】キブデロスポランギウム属に属する微生物
   が，キブデロスポランギウム エス・ピー（Ｋｉｂｄｅ
   ｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ ｓｐ．）ＹＬ−０２１０７
   Ｑ（微工研菌寄第１１４６７号）である請求項２記載の
   製造法。