【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明はリゾチームを有効成分として含有する
癌転移抑制剤に関する。
癌の外科療法における大きな難問は術後の再発
であるが、この原因は癌が転移するために起こる
ことが多い。従来、担癌状態にある人及び動物に
おいては、血液凝固能が亢進すること、更にこの
凝固能に重要な役割をはたしている血小板凝集能
も同時に亢進していることが知られている。ま
た、癌細胞は血小板凝集を惹起する活性を有し、
血小板凝集抑制剤（アスピリン、チクロピジンな
ど）はこの血小板凝集を抑制し、癌転移を抑制す
ることが知られている。これらの事実から癌転移
においては、癌細胞による血小板活性化の段階が
重要であることが推察される。しかしながら、か
かる血小板凝集抑制剤は、癌細胞のみならず一般
の血小板凝集に対しても作用するため、癌転移抑
制剤として使用するに際して弊害が生じる。従つ
て、癌細胞の血小板凝集惹起活性のみを特異的に
抑えるものであれば、より本質的な癌転移抑制剤
となり得ることが期待される。
かかる技術状況に鑑み、本発明者らは、生理的
血小板凝集惹起物質による血小板凝集に対し影響
を与えず、癌細胞の血小板凝集惹起活性を抑える
作用に関し、種々の化合物について検討を加えた
ところ予想外にも、リゾチームは癌細胞の増殖能
に対し直接的に影響を与えないにも拘らず、この
ような特異的ないし選択的な作用を有する物質で
あることを知見し、この知見に基づいて更に研究
を重ねた結果本発明を完成させるに至つた。
すなわち、本発明はリゾチームを有効成分とし
て含有する癌転移抑制剤に関する。
本発明薬剤に含有されるリゾチームとしては、
動物組織分泌物、卵白等の天然物中に存在する動
物性蛋白質であるリゾチームが選択され、通常は
ニワトリ卵白リゾチームが遊離または酸塩の形
（例：塩化リゾチーム）で使用される他、リゾチ
ームを酵素等により処理したものも同様に使用で
きる。従つて、本発明におけるリゾチームとは、
遊離のリゾチームおよびその酸塩および酵素等に
よる処理物のいずれをも含むものである。
上記リゾチームの本発明薬剤中の含有量として
は、製剤的、薬理学的に好転な量が選択され、通
常は５〜90％、好ましくは、10〜80％程度であ
る。また、本発明薬剤のヒト成人に対する投与量
としては、リゾチームの含有量に換算し、通常は
0.2〜3.0g／day、好ましくは、0.2〜2.0g／day程
度であるが、適用対象である癌の種類、病状、患
者の年令、性別等によつて適宜増量または減量し
て投与するのがよい。
本発明薬剤はリゾチーム単独あるいは適当な製
剤の形として経口的または非経口的に使用され
る。その具体的な製剤としては、通常の散財、顆
粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤（シロツプ剤を含
む）などの内服用製剤が挙げられるが、場合によ
つては注射用製剤であつてもよい。これらの製剤
は、リゾチームに必要に応じで通常用いられる添
加物を加え、常法により製造することが出来る。
かかる添加物としては、内服用製剤（経口剤）に
あつては、賦形剤（例：でんぷん、乳糖）、結合
剤（例：セルロース類、ポリビニルピロリドリ
ン）、崩壊剤（例：カルボキシメチルセルロー
ス）、滑沢剤（例：ステアリン酸マグネシウム）、
コーテイング剤（例：ヒドロキシエチルセルロー
ス）、矯味剤、着色剤、保存剤、乳化剤などの公
知の製剤用成分が、また注射用製剤（注射剤）に
あつては、水性注射剤を構成する公知の製剤成
分、例えば溶解剤ないし溶解補助材（例：水、生
理食塩水、プレピレングリコール）、懸濁剤
（例：ポリソルベート80などの界面活性剤）、PH調
整剤（例：有機酸またはその塩）、安定化剤など
が使用される。なお、この注射剤の他の態様とし
ては、粉末、微結晶、凍結乾燥物などとしてアン
プルまたはバイアル中に保存し、用時調整して用
いることができる。
本発明薬剤は、特異的ないし選択的な血小板凝
集惹起活性抑制作用によつて、各種の癌、例えば
子宮癌、食道癌、皮ふ癌、胃癌、肺癌、小腸・大
腸・直腸癌、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、じゆう毛性
腫瘍、脳腫瘍、リンパ肉腫、白血病などの悪性腫
瘍の転移に対して抑制効果を有するので、これら
の癌の転移抑制剤として使用される。すなわち、
後述の試験例から明らかな如く本発明薬剤のリゾ
チームは癌の転移抑制作用を示すものである。そ
の作用機序としては、前述の抗血小板薬等と異な
り、血小板に対する直接的な凝集抑制作用による
ものではなく、また癌細胞の増殖能に対しても影
響することなく癌細胞の血小板凝集惹起活性を特
異的に抑えることが明らかにされた。従つて、本
発明薬剤は全く新しいタイプの薬剤を構成するも
のであり、かかる抗血小板薬と比較して、より本
質的な癌転移抑制活性を有する薬剤であり、種々
の癌転移抑制及び転移予防を目的として有効に使
用し得るものである。殊に、癌の外科療法後に本
発明薬剤を投与することによつて、術後の癌の転
移に伴う再発の発生率を低下させることが出来る
ので本発明薬剤は医療上極めて有用である。
次の、本発明薬剤のリゾチームに関する薬理試
験例を述べることによつて、本発明の効果につい
てさらに詳細に説明する。
なお、塩化リゾチームの経口投与の急性毒性値
は20.000mg／Kg以上であり、抗血小板薬チクロピ
ジンにおける750mg／Kg、アスピリンにおける
1.170mg／Kgと比べてはるかに低毒性である（マ
ウスにおける成績）。
試験例 １
生理的血小板凝集惹起物質アデノシン−２−リ
ン酸により惹起される血小板凝集に及ぼす影響
(a) 試験法
SD系雄性ラツトよりヘパリンを抗凝固剤と
して使用して採血し、多血小板血漿を調整し
た。この多血小板血漿１ml当り塩化リゾチーム
0.1〜100μgを含むように添加し、その後アデノ
シンリン−２−酸による血小板凝集を測定し
た。
(b) 結 果
上記の試験結果を表１に示した。この表から
理解されるように、塩化リゾチームは生理的血
小板凝集惹起物質であるアデノシンリン酸によ
つて惹起された凝集に対してほとんど影響しな
い。
The present invention relates to a cancer metastasis inhibitor containing lysozyme as an active ingredient. A major challenge in the surgical treatment of cancer is postoperative recurrence, which often occurs because the cancer metastasizes. It has been known that in cancer-bearing humans and animals, blood coagulation ability is enhanced, and platelet aggregation ability, which plays an important role in this coagulation ability, is also simultaneously enhanced. In addition, cancer cells have the activity of inducing platelet aggregation,
Platelet aggregation inhibitors (aspirin, ticlopidine, etc.) are known to suppress platelet aggregation and cancer metastasis. These facts suggest that the stage of platelet activation by cancer cells is important in cancer metastasis. However, since such platelet aggregation inhibitors act not only on cancer cells but also on platelet aggregation in general, they cause problems when used as cancer metastasis inhibitors. Therefore, if it specifically suppresses only the platelet aggregation-inducing activity of cancer cells, it is expected that it will become a more essential cancer metastasis suppressor. In view of this technical situation, the present inventors have investigated various compounds with regard to the effect of suppressing the platelet aggregation-inducing activity of cancer cells without affecting platelet aggregation induced by physiological platelet aggregation-inducing substances, and have made predictions. In addition, we discovered that lysozyme is a substance that has such a specific or selective effect even though it does not directly affect the proliferation ability of cancer cells, and based on this knowledge, As a result of further research, we have completed the present invention. That is, the present invention relates to a cancer metastasis inhibitor containing lysozyme as an active ingredient. The lysozyme contained in the drug of the present invention includes:
Lysozyme, which is an animal protein present in natural products such as animal tissue secretions and egg white, was selected. Chicken egg white lysozyme is usually used in free or acid salt form (e.g. lysozyme chloride), and lysozyme Those treated with enzymes etc. can also be used in the same way. Therefore, lysozyme in the present invention is
It includes both free lysozyme and its salts and products treated with enzymes. The content of the above-mentioned lysozyme in the drug of the present invention is selected to be a pharmaceutically and pharmacologically favorable amount, and is usually about 5 to 90%, preferably about 10 to 80%. In addition, the dosage of the drug of the present invention for human adults is usually calculated in terms of lysozyme content.
The dose is 0.2 to 3.0 g/day, preferably about 0.2 to 2.0 g/day, but the dose may be increased or decreased as appropriate depending on the type of cancer to be treated, the medical condition, the patient's age, gender, etc. Good. The drug of the present invention can be used orally or parenterally as lysozyme alone or in the form of a suitable preparation. Specific formulations include oral preparations such as ordinary dispersions, granules, tablets, capsules, and liquid preparations (including syrups), but in some cases, injectable preparations may also be included. . These preparations can be produced by conventional methods by adding commonly used additives to lysozyme as necessary.
Such additives include excipients (e.g. starch, lactose), binders (e.g. celluloses, polyvinylpyrrolidrine), and disintegrants (e.g. carboxymethylcellulose) for internal use preparations (oral preparations). , lubricants (e.g. magnesium stearate),
Known formulation ingredients such as coating agents (e.g. hydroxyethyl cellulose), flavoring agents, coloring agents, preservatives, emulsifiers, etc., and in the case of injectable preparations (injections), known preparations constituting aqueous injections. Ingredients, such as solubilizing agents or solubilizing aids (e.g., water, physiological saline, prepylene glycol), suspending agents (e.g., surfactants such as polysorbate 80), PH regulators (e.g., organic acids or their salts) , stabilizers, etc. are used. In addition, as other embodiments of this injection, it can be stored in an ampoule or a vial as a powder, microcrystal, freeze-dried product, etc., and prepared before use. By its specific or selective inhibitory action on platelet aggregation-inducing activity, the drug of the present invention can be used to treat various cancers, such as uterine cancer, esophageal cancer, skin cancer, stomach cancer, lung cancer, small intestine/colon/rectal cancer, pancreatic cancer, and breast cancer. It has an inhibitory effect on the metastasis of malignant tumors such as , bladder cancer, pilonidal tumor, brain tumor, lymphosarcoma, and leukemia, and is therefore used as a metastasis inhibitor for these cancers. That is,
As is clear from the test examples described below, the drug lysozyme of the present invention exhibits an inhibitory effect on cancer metastasis. Unlike the antiplatelet drugs mentioned above, its mechanism of action is not a direct aggregation-inhibiting effect on platelets, and it does not affect the proliferation ability of cancer cells; It was revealed that it specifically suppresses Therefore, the drug of the present invention constitutes a completely new type of drug, and compared to such antiplatelet drugs, it is a drug that has a more substantial cancer metastasis suppressing activity, and is useful for suppressing and preventing various cancer metastases. It can be effectively used for this purpose. In particular, by administering the drug of the present invention after surgical therapy for cancer, the incidence of recurrence due to post-operative cancer metastasis can be reduced, and therefore the drug of the present invention is extremely useful medically. The effects of the present invention will be explained in further detail by describing the following pharmacological test examples regarding the drug of the present invention, lysozyme. The acute toxicity value of oral administration of lysozyme chloride is 20,000 mg/Kg or higher, 750 mg/Kg for the antiplatelet drug ticlopidine, and 750 mg/Kg for aspirin.
It has much lower toxicity than 1.170mg/Kg (results in mice). Test Example 1 Effect on platelet aggregation induced by the physiological platelet aggregation-inducing substance adenosine-2-phosphate (a) Test method Blood was collected from SD male rats using heparin as an anticoagulant, and platelet-rich plasma was collected. It was adjusted. Lysozyme chloride per ml of platelet-rich plasma
Platelet aggregation caused by adenosine phospho-2-acid was then measured. (b) Results The above test results are shown in Table 1. As understood from this table, lysozyme chloride has almost no effect on the aggregation induced by adenosine phosphate, which is a physiological platelet aggregation-inducing substance.
【表】
試験例 ２
癌細胞の血小板凝集惹起活性に及ぼす影響
(a) 試験法
試験に使用した癌細胞はLewis Lung
Carcinomaである。この癌細胞の懸濁液１ml
当り塩化リゾチームを１〜1000μg含むように
添加した後、この塩化リゾチーム処理癌細胞懸
濁液１容量に試験例１で調整した多血小板血漿
９容量を添加した場合の血小板凝集を測定し
た。
(b) 結果
上記の試険結果を表２に示した。この表から
理解されるように、塩化リゾチームは濃度依存
的に癌細胞の有する血小板凝集惹起活性を阻害
する。[Table] Test Example 2 Effect of cancer cells on platelet aggregation-inducing activity (a) Test method The cancer cells used in the test were Lewis Lung
Carcinoma. 1ml of this cancer cell suspension
After adding 1 to 1000 μg of lysozyme chloride per sample, 9 volumes of the platelet-rich plasma prepared in Test Example 1 were added to 1 volume of the lysozyme chloride-treated cancer cell suspension, and platelet aggregation was measured. (b) Results The above trial results are shown in Table 2. As understood from this table, lysozyme chloride inhibits the platelet aggregation-inducing activity of cancer cells in a concentration-dependent manner.
【表】
試験例 ３
塩化リゾチーム処理した癌細胞の増殖能
(a) 試験方法
塩化リゾチーム処理した癌細胞懸濁液に3H
−thymidineを添加し、42時間インキユベート
し、癌細胞のDNA中放射能を測定した。
(b) 結果
上記の試験結果を表３に示した。この表から
理解されるように、塩化リゾチーム処理した癌
細胞DNA中の放射能は対照のそれとほとんど
差が認められず、塩化リゾチームは癌細胞の増
殖能に影響を与えないことが判明した。[Table] Test Example 3 Proliferation ability of cancer cells treated with lysozyme chloride (a) Test method Addition of 3 H to cancer cell suspension treated with lysozyme chloride
-thymidine was added, incubated for 42 hours, and the radioactivity in the DNA of cancer cells was measured. (b) Results The above test results are shown in Table 3. As can be seen from this table, the radioactivity in cancer cell DNA treated with lysozyme chloride showed almost no difference from that in the control, indicating that lysozyme chloride did not affect the proliferation ability of cancer cells.
【表】
試験例 ４
肺転移に及ぼす塩化リゾチームによる癌細胞処
理の効果
(a) 試験方法
試験例２で使用した塩化リゾチーム処理した
癌細胞懸濁液の一部をBDF1雌性マウスに静脈
内投与し、10日目に肺転移数を測定した。
(b) 結果
上記の試験結果を表４に示した。この表から
理解されるように塩化リゾチームで処理した癌
細胞を投与した動物では、無処理の対照群と比
較し肺転移数の著明な低下がみられた。[Table] Test Example 4 Effect of cancer cell treatment with lysozyme chloride on lung metastasis (a) Test method A portion of the cancer cell suspension treated with lysozyme chloride used in Test Example 2 was administered intravenously to BDF 1 female mice. The number of lung metastases was measured on the 10th day. (b) Results The above test results are shown in Table 4. As can be seen from this table, animals administered cancer cells treated with lysozyme chloride showed a marked decrease in the number of lung metastases compared to the untreated control group.
【表】
有意差検定：対照群と比較して
P＜0.05
試験例 ５
Lewis Lung Carcinomaの肺自然転移に及ぼ
す塩化リゾチーム経口投与の影響
(a) 試験方法
Lewis肺癌細胞懸濁液をBDF1雌性マウスの
foot padに移植し、12日目に移植肢を切断し、
22日目に肺転移数を測定した。塩化リゾチーム
は1.000mg／Kgもしくは300mg／Kgを癌細胞移植
後12日目から21日目まで１日１回経口投与し
た。
(b) 結果
上記の試験結果を表５に示した。この表から
理解されるように、塩化リゾチームは1.000
mg／Kg投与群の肺転移数は対照群と比較して著
明に低下した。[Table] Significant difference test: compared to control group
P＜0.05
Test Example 5 Effect of oral administration of lysozyme chloride on spontaneous lung metastasis of Lewis Lung Carcinoma (a) Test method Lewis lung cancer cell suspension was administered to BDF 1 female mice.
The transplanted limb was transplanted into a foot pad, and the transplanted limb was amputated on the 12th day.
The number of lung metastases was measured on the 22nd day. Lysozyme chloride was orally administered at 1.000 mg/Kg or 300 mg/Kg once a day from day 12 to day 21 after cancer cell transplantation. (b) Results The above test results are shown in Table 5. As understood from this table, lysozyme chloride is 1.000
The number of lung metastases in the mg/Kg administration group was significantly reduced compared to the control group.
【表】
次に、本発明薬剤の実施例を述べる。なお、下
記処方製剤の製造法としては、第10改正日本薬局
方製剤総則記載の方法を採用することができる。
実施例 １
（シロツプ剤100mlの処方）
塩化リゾチーム 1000mg
70％ソルビトール 75ml
メチルパラベン 28mg
エチルパラベン 12mg
アルコール 0.1ml
精製水 全量を100mlとするに十分な量
実施例 ２
（錠剤１錠の処方）
塩化リゾチーム 300mg
結晶セルロース 80mg
乳 糖 47.5mg
トウモロコシデンプン 20mgステアリン酸マグネシウム 2.5mg
450mg
実施例 ３
（顆粒剤１包の処方）
塩化リゾチーム 600mg
乳 糖 300mg
トウモロコシデンプン 80mgヒドロキシプロピルセルロース 20mg
1.000mg
実施例 ４
（注射剤100mlの処方）
塩化リゾチーム 3.0g
ソルビトール 5.0mg
界面活性剤 0.1g
メチルパラベン 0.1
プロピルパラベン 0.02
注射用蒸留水 全量を100mlとするに十分な量[Table] Next, examples of the drug of the present invention will be described. Note that the method described in the 10th revised Japanese Pharmacopoeia General Rules for Preparations can be adopted as a manufacturing method for the following prescription preparations. Example 1 (Prescription for 100ml syrup) Lysozyme chloride 1000mg 70% sorbitol 75ml Methylparaben 28mg Ethylparaben 12mg Alcohol 0.1ml Purified water Enough amount to bring the total volume to 100ml Example 2 (Prescription for 1 tablet) Lysozyme chloride 300mg Crystals Cellulose 80mg Lactose 47.5mg Corn starch 20mg Magnesium stearate 2.5mg 450mg Example 3 (Prescription for 1 granule) Lysozyme chloride 600mg Lactose 300mg Corn starch 80mg Hydroxypropyl cellulose 20mg 1.000mg Example 4 (Prescription for 100ml injection) ) Lysozyme chloride 3.0g Sorbitol 5.0mg Surfactant 0.1g Methylparaben 0.1 Propylparaben 0.02 Distilled water for injection Enough amount to bring the total volume to 100ml