【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は、リゾチームまたはその塩類よりなる
免疫増強剤に関する。更に詳しくは、リゾチーム
またはその塩類を経口的に摂取させることによ
り、生体の免疫能力の低下に基づくと考えられる
各種疾患、例えば癌、各種病原微生物感染症（ウ
イルス、細菌、真菌、原虫など）などの予防・治
療剤に関する。
本発明で用いるリゾチームは、卵白、ヒト・動
物の血清、涙、乳汁、ダ液、鼻汁、喀痰などに広
く存在する細菌細胞壁を溶解する酵素で、細菌細
胞壁のＤ−グルコサミンとムラミン酸のβ（１−
４）結合を加水分解することにより溶菌作用を示
すものである。このリゾチームは抗炎症作用など
が注目され、医薬品として広く用いられている。
本発明者等は、リゾチームの他の医薬としての
有用性について鋭意検討を重ねた結果、経口投与
によるリゾチームの投与は、生体の免疫賦活作用
を示し、特に癌の免疫療法に有効であることを見
い出した。すなわち、経口投与によるリゾチーム
は、免疫増強剤として有用であり、生体の免疫能
力の低下に基づくと考えられる各種疾患、例えば
癌、各種病原微生物感染症（ウイルス、細菌、真
菌、原虫など）、その他の免疫機能の不全に再づ
く疾患（アトピー性疾患、種々の自己免疫疾患）
の予防・治療剤として有用である。
従来、免疫増強剤、癌の免疫療法剤としては、
BCG、コリネバクテリウム、溶連菌製剤、PS−
Ｋ（カワラタケ抽出糖蛋白）などのほか種々のも
のがあるが、種々の副作用もあり、決定的な免疫
療法はない。例えばBCG、コリネバクテリウム、
溶連菌製剤は発熱、潰瘍、悪寒、リンパ腺腫張、
注射局所の疼痛などの副作用がある。しかしなが
ら、本発明で用いられるリゾチームまたはその塩
類は、動植物に起源を有するものであるので、副
作用はほとんどなく長期連用が可能である。
本発明で用いるリゾチームは、いかなる起源の
ものでもよい。すなわち、例えば卵白から結晶分
離したものでもよいし、ある種の微生物から産生
したものでもよいし、ヒトリゾチームでもよい
が、通常は卵白リゾチームが用いられる。リゾチ
ーム塩類とは、塩酸塩、炭酸塩、酢酸塩などがあ
るが、通常は塩酸塩である塩化リゾチームが用い
られる。
現在実用に供せられている卵白から結晶分離し
た塩化リゾチームの物理化学的性状および毒性を
示せば次のとおりである。
１ 物理的性質
外 観：白色の結晶性粉末、無臭、甘味
溶解性：水または生理食塩水に溶け、有機溶
媒にほとんど溶けない。
２ 化学的性質
化学構造：18種129個のアミノ酸から成る塩
基性蛋白質である。
分子量：約14500
３ 安定性
温度虐待（室温40℃および45℃で２ケ月）、湿
度虐待（37℃湿度75％、２ケ月）で色、におい等
の外観に変化なく、また力価の低下も認めない。
４ 溶液のPH：水溶液（３→200）のPHは3.0〜
5.0である。
５ 急性毒性・慢性毒性および催奇形性試験の結
果を表１に示す。
The present invention relates to an immune enhancer comprising lysozyme or its salts. More specifically, by orally ingesting lysozyme or its salts, it can be used to treat various diseases thought to be based on a decline in the immune system of the body, such as cancer and various pathogenic microbial infections (viruses, bacteria, fungi, protozoa, etc.). Concerning preventive and therapeutic agents. Lysozyme used in the present invention is an enzyme that dissolves bacterial cell walls, which is widely present in egg white, human/animal serum, tears, milk, saliva, nasal secretions, sputum, etc. 1-
4) It exhibits bacteriolytic action by hydrolyzing bonds. Lysozyme has attracted attention for its anti-inflammatory effects and is widely used as a medicine. As a result of extensive studies on the usefulness of lysozyme as other medicines, the present inventors have found that oral administration of lysozyme exhibits an immune-stimulating effect on the body and is particularly effective in cancer immunotherapy. I found it. In other words, lysozyme administered orally is useful as an immune enhancer, and can be used to treat various diseases that are thought to be based on a decline in the immune system of the body, such as cancer, various pathogenic microbial infections (viruses, bacteria, fungi, protozoa, etc.), and others. Diseases that occur due to immune dysfunction (atopic diseases, various autoimmune diseases)
It is useful as a preventive/therapeutic agent. Conventionally, as immune enhancers and cancer immunotherapeutic agents,
BCG, Corynebacterium, Streptococcus preparation, PS-
There are various other immunotherapies such as K (Corsicolor extract glycoprotein), but they also have various side effects and there is no definitive immunotherapy. For example, BCG, Corynebacterium,
Streptococcus preparations may cause fever, ulcers, chills, lymph gland swelling,
There are side effects such as pain at the injection site. However, since lysozyme or its salts used in the present invention originate from animals and plants, there are almost no side effects and long-term use is possible. The lysozyme used in the present invention may be of any origin. That is, for example, it may be crystallized from egg white, produced from a certain type of microorganism, or human lysozyme, but usually egg white lysozyme is used. Lysozyme salts include hydrochloride, carbonate, acetate, etc., but lysozyme chloride, which is a hydrochloride, is usually used. The physicochemical properties and toxicity of lysozyme chloride crystallized from egg white, which is currently in practical use, are as follows. 1 Physical Properties Appearance: White crystalline powder, odorless, sweet taste Solubility: Soluble in water or physiological saline, almost insoluble in organic solvents. 2. Chemical properties Chemical structure: A basic protein consisting of 129 amino acids of 18 types. Molecular weight: Approximately 14500 3 Stability There is no change in appearance such as color or odor after temperature abuse (2 months at room temperature of 40℃ and 45℃) or humidity abuse (2 months at 37℃ and 75% humidity), and there is no decrease in titer. I will not admit it. 4 PH of solution: PH of aqueous solution (3→200) is 3.0~
It is 5.0. 5. The results of acute toxicity, chronic toxicity and teratogenicity tests are shown in Table 1.
【表】
上記の表で明らかな如く、本発明で用いるリゾ
チームは急性、亜急性、慢性毒性試験でも毒性が
なく、また臨床的にも副作用がほとんど認められ
ない極めて安全な物質であるので、患者に長期連
用することが可能である。
本発明は、リゾチームの経口投与が、免疫賦活
作用を示し、更に癌の免疫療法に有用であること
を見い出したものである。その作用機序について
は必ずしも明らかではないが、リゾチームの摂取
により消化管内で細菌が分解され、何らかの免疫
増強物質が生産されることによるものであると推
定される。
すなわち、本発明はこれまで報告されているリ
ゾチームの非経口的投与による種々の治療効果
や、インビトロにおけるリゾチームそれ自体によ
る種々の薬理作用と同じ機序がインビボにおいて
発現しているのではなく、経口的に投与されたリ
ゾチームによつて消化管内の細菌が分解され、何
らかの免疫増強物質が生産されて生体を免疫賦活
するものと考えられる。この免疫賦活によつて癌
をはじめ広く細菌、ウイルス感染症、その他の免
疫機能の不全にもとずく疾患（アトピー性疾患、
種々の自己免疫疾患）に有効になるものと推定さ
れる。
次に本発明に至つた過程を簡単に述べる。
本発明者等は、まずモルモツトに胸腺依存性抗
原であるＢ型肝炎ウイルス（Hbs）を抗原として
接種し、リゾチーム溶液を飲水として与え、肝炎
ウイルスに対する抗体産生に及ぼす効果を検討し
たところ、リゾチームの経口投与は抗体産生の増
強作用のあることを確認した（実験例１）。
更に、マウス、ラツトにリゾチームを経口投与
し腫瘍の増殖に及ぼす効果を検討した。
すなわち、Balb／ｃマウスに同系線維肉腫
Meth−Ａを皮下に移植し、移植の14日前より連
続的にリゾチーム0.05％水を飲用させると対照群
に比べ有意に増殖を抑制した（実験例２−ａ）。
また、ドンリユー系ラツトの皮下にAS−Ｄ−
653腹水肉腫を移植し、移植の14日前より連続的
にリゾチーム水溶液を飲用させると対照群に比べ
て有意に腫瘍の増殖を抑制した（実験例２−ｂ）。
癌の治療においては術後の転移および緩解導入
後の再発がよくみられ、癌の完全治癒を困難にし
ているが、上述の実験例の成績はリゾチームの経
口投与が術後の転移および再発の防止に有用であ
ることを示している。
免疫応答増強物質と他の抗悪性腫瘍剤との併用
がしばしば試みられているので、本発明者等は次
にリゾチームと、他の抗悪性腫瘍剤との併用効果
について検討した。
Balb／ｃマウスにMeth−Ａ腫瘍を皮下に移植
し、１週間後に抗悪性腫瘍剤としてサイクロホス
フアマイドを投与し、その２日後よりリゾチーム
0.05％水を与え経時的に腫瘍増殖を測定すると、
抗悪性腫瘍剤単独群に比べリゾチーム併用群に有
意の抑制を認めた（実験例３）。
更にSD系ラツトにシオノギ癌115を皮下に移植
１週後より臨床的に繁用されているN1−（２−テ
トラヒドロフリル）−５−フルオロウラシルおよ
びリゾチームを含有する食餌を摂取させ、制癌剤
単独による治療効果と比較した結果、リゾチーム
併用群でのみ無処置対照群に比べ有意延命効果が
認められた（実験例４）。
これらの結果はリゾチームの経口投与が原発性
腫瘍およびその転移に対して他の抗悪性腫瘍剤と
の併用で優れた効果を示すことを明らかにしてい
る。
本発明における抗悪性腫瘍剤としては、例えば
５−フルオロウラシル（５−Fu），N1−（２−テ
トラヒドロフリル）−５−フルオロウラシルなど
の５−フルオロウラシル誘導体、マイトマイシ
ン、アドリアマイシン、サイクロホスフアマイ
ド、ブレオマイシンなどがあげられるが、上記の
作用機序から考慮して、現在用いられている抗悪
性腫瘍剤のみならず、将来開発される抗悪性腫瘍
剤でも同様の併用効果があるものと考えられる。
上述の如く、本発明に係るリゾチームは単独で
も効果を有するものであるが、その効果は他の抗
悪性腫瘍剤との併用によつて更に高められる。
本発明を実施する際は、リゾチームまたはその
塩類を、通常の製剤化方法を用いて経口用の錠
剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロツプ剤など
とするが、必要により腸溶性製剤とする。すなわ
ち、経口用固形製剤を調整する場合には、主薬に
賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤により常法によ
り錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤とする。また
経口液状製剤を調整する場合は、主薬に緩衝剤、
矯味剤、安定化剤を添加して、常法によりシロツ
プ剤とする。
またリゾチームまたはその塩類と抗悪性腫瘍剤
とを併用する際は、それぞれを錠剤、カプセル
剤、注射剤などに医薬として許容されうる担体を
用いて製剤化したものを別個に投与してもよい
し、また必要によりこれらを医薬として許容され
うる担体を用いて常法により合剤としてもよい。
リゾチームまたはその塩類の投与量は、上述の
如くリゾチームが毒性がなく副作用がほとんどな
い安全な物質であるから、かなりの大量投与が可
能である。投与量は、免疫機能不全疾患あるいは
癌の種類、患者の症状などにより異なるが通常成
人１日当たり約１mg〜5000mgである。また抗悪性
腫瘍剤と併用する場合、リゾチームと抗悪性腫瘍
剤との比率は癌の種類、患者の症状、抗悪性腫瘍
剤の種類などによつて異なるが、一般的には重量
比約１：１〜1000：１である。
次に本発明の優れた効果を更に具体的に説明す
るため実験例をあげる。
実験例１ 免疫応答に対する卵白リゾチーム経口
投与の作用
ヒトＢ型肝炎ウイルス（HBs）を抗原として、
１群10匹のモルモツトに200μｇを足蹠皮下に接
種して免疫し、抗原接種の６日前よりリゾチーム
（塩化リゾチーム）水溶液を自由に飲水として１
日平均100mgになるようにして、抗原接種の翌日
までの７日間与えた。
16日後に採血し、抗体価をHBs感作ヒツジ赤
血球凝集反応により検討した。その結果を表２に
示した。[Table] As is clear from the table above, the lysozyme used in the present invention has no toxicity in acute, subacute, and chronic toxicity tests, and is an extremely safe substance with almost no clinically observed side effects. It is possible to use it continuously for a long period of time. The present invention is based on the discovery that oral administration of lysozyme exhibits immunostimulatory effects and is further useful in cancer immunotherapy. The mechanism of action is not necessarily clear, but it is presumed that lysozyme ingestion causes bacteria to be broken down in the digestive tract and some kind of immune-enhancing substance to be produced. In other words, the present invention shows that the various therapeutic effects of parenteral administration of lysozyme and the various pharmacological effects of lysozyme itself in vitro do not occur in vivo, but that It is thought that lysozyme administered to humans breaks down bacteria in the gastrointestinal tract, produces some kind of immune-enhancing substance, and activates the body's immune system. This immune activation causes a wide range of diseases including cancer, bacterial and viral infections, and other diseases based on immune dysfunction (atopic diseases,
It is estimated that it will be effective in treating various autoimmune diseases. Next, the process that led to the present invention will be briefly described. The present inventors first inoculated guinea pigs with hepatitis B virus (Hbs), which is a thymus-dependent antigen, and gave them a lysozyme solution in drinking water to examine the effect of lysozyme on antibody production against the hepatitis virus. It was confirmed that oral administration has an effect of enhancing antibody production (Experiment Example 1). Furthermore, lysozyme was orally administered to mice and rats to examine its effect on tumor growth. That is, syngeneic fibrosarcoma in Balb/c mice.
When Meth-A was subcutaneously transplanted and lysozyme 0.05% water was continuously given to the animals to drink from 14 days before the transplant, proliferation was significantly suppressed compared to the control group (Experimental Example 2-a). In addition, AS-D-
When 653 ascites sarcoma was transplanted and a lysozyme aqueous solution was continuously given for 14 days before transplantation, tumor growth was significantly suppressed compared to the control group (Experimental Example 2-b). In the treatment of cancer, metastasis after surgery and recurrence after induction of remission are common, making complete cure of cancer difficult. It has been shown to be useful for prevention. Since combinations of immune response enhancers and other anti-malignant tumor agents are often attempted, the present inventors next investigated the effects of combined use of lysozyme and other anti-malignant tumor agents. Meth-A tumors were implanted subcutaneously into Balb/c mice, and 1 week later, cyclophosphamide was administered as an anti-cancer agent, and 2 days later, lysozyme was administered.
When 0.05% water was given and tumor growth was measured over time,
Significant inhibition was observed in the lysozyme combination group compared to the antineoplastic agent alone group (Experimental Example 3). Furthermore, SD rats were fed a diet containing N 1 -(2-tetrahydrofuryl)-5-fluorouracil and lysozyme, which are frequently used clinically, starting one week after subcutaneously implanting Shionogi Cancer 115, and were treated with anticancer drugs alone. As a result of comparing the therapeutic effects, a significant survival effect was observed only in the lysozyme combination group compared to the untreated control group (Experimental Example 4). These results demonstrate that oral administration of lysozyme has excellent effects against primary tumors and their metastases when used in combination with other antineoplastic agents. Examples of the anti-malignant tumor agent in the present invention include 5-fluorouracil (5-Fu), 5-fluorouracil derivatives such as N 1 -(2-tetrahydrofuryl)-5-fluorouracil, mitomycin, adriamycin, cyclophosphamide, bleomycin, etc. However, in consideration of the above mechanism of action, it is thought that not only the currently used antineoplastic agents but also the antineoplastic agents to be developed in the future will have a similar combined effect. As mentioned above, the lysozyme according to the present invention has an effect even when used alone, but its effect is further enhanced when used in combination with other anti-malignant tumor agents. When carrying out the present invention, lysozyme or its salts are prepared into oral tablets, capsules, powders, granules, syrups, etc. using conventional formulation methods, and, if necessary, into enteric-coated preparations. That is, when preparing solid preparations for oral use, the main drug is prepared into tablets, capsules, powders, and granules using excipients, binders, disintegrants, and lubricants in a conventional manner. In addition, when preparing oral liquid preparations, add a buffer to the main drug,
Add a flavoring agent and a stabilizer to make a syrup using a conventional method. When lysozyme or its salts are used in combination with an antineoplastic agent, each may be formulated into a tablet, capsule, injection, etc. using a pharmaceutically acceptable carrier and administered separately. Alternatively, if necessary, these may be prepared as a combination using a pharmaceutically acceptable carrier in a conventional manner. As mentioned above, lysozyme or its salts can be administered in a fairly large amount because lysozyme is a safe substance with no toxicity and almost no side effects. The dosage varies depending on the type of immune dysfunction disease or cancer, the patient's symptoms, etc., but is usually about 1 mg to 5000 mg per day for adults. When used in combination with an antineoplastic agent, the ratio of lysozyme to antineoplastic agent varies depending on the type of cancer, patient symptoms, type of antineoplastic agent, etc., but generally the weight ratio is approximately 1: The ratio is 1 to 1000:1. Next, an experimental example will be given to further specifically explain the excellent effects of the present invention. Experimental Example 1 Effect of oral administration of egg white lysozyme on immune response Using human hepatitis B virus (HBs) as an antigen,
Groups of 10 guinea pigs were immunized with 200 μg subcutaneously in their footpads, and 6 days before antigen inoculation, they were given lysozyme (lysozyme chloride) aqueous solution in their drinking water ad libitum.
An average of 100 mg per day was given for 7 days until the day after antigen inoculation. Blood was collected 16 days later, and the antibody titer was examined by HBs-sensitized sheep hemagglutination reaction. The results are shown in Table 2.
【表】
抗体価は希釈倍数の指数±S.E.で示した。
両群のｔ検定の結果Ｐ＜0.01％で、リゾチーム
経口摂取群に有意は抗体価の上昇を認めた。
上記の実験により、リゾチームの経口投与は生
体の免疫応答を増強することが明らかである。
実験例２ リゾチーム経口投与の腫瘍増殖に対す
る抑制効果
ａ 皮下移植されたBalb／ｃマウスの同系腫瘍
Meth−Ａ腺維肉腫の増殖抑制効果
リゾチーム（塩化リゾチーム）0.05％水溶液を
飲水として、１群19匹のBalb／ｃマウスに与え、
投与開始14日後にBalb／ｃの同系腫瘍Meth−Ａ
を皮下に１×106個移植し経時的に腫瘍の長径、
短径を測定した。移植15日後に腫瘍を摘出して重
量を測定し、リゾチームを与えない対照群と比較
した。リゾチームは腫瘍移植の14日前より連続28
日間腫瘍摘出まで飲用せしめた。
図１および表３にMeth−Ａ腫瘍の増殖および
腫瘍重量を示した。図１はリゾチーム経口投与の
Balb／ｃマウス同系腫瘍Meth−Ａの増殖に及ぼ
す効果を示す。縦軸は腫瘍の平均直径（mm）を示
し、横軸は日数を示す。また図１において黒マル
は対照群を示し、白マルはリゾチーム経口摂取群
を示す。[Table] Antibody titer was expressed as dilution index ±SE. The t-test result for both groups was P<0.01%, and a significant increase in antibody titer was observed in the lysozyme oral intake group. From the above experiments, it is clear that oral administration of lysozyme enhances the immune response of the body. Experimental Example 2 Inhibitory effect of oral administration of lysozyme on tumor growth a Syngeneic tumor in Balb/c mice subcutaneously transplanted
Growth inhibitory effect on Meth-A fibrosarcoma A 0.05% aqueous solution of lysozyme (lysozyme chloride) was given as drinking water to 19 Balb/c mice per group.
14 days after the start of administration, Balb/c syngeneic tumor Meth-A
1 × 10 6 cells were implanted subcutaneously, and the long axis of the tumor changed over time.
The short axis was measured. Fifteen days after transplantation, the tumors were excised, weighed, and compared with a control group that did not receive lysozyme. Lysozyme was administered continuously for 28 days starting 14 days before tumor transplantation.
The patient was allowed to drink it for several days until the tumor was removed. Figure 1 and Table 3 show the growth and tumor weight of Meth-A tumors. Figure 1 shows oral administration of lysozyme.
The effect on the proliferation of Balb/c mouse syngeneic tumor Meth-A is shown. The vertical axis shows the average diameter (mm) of the tumor, and the horizontal axis shows the number of days. Further, in FIG. 1, black circles indicate the control group, and white circles indicate the lysozyme oral intake group.
【表】
図１から明らかな如く、移植11日よりリゾチー
ム投与群は対照群と比較して有意（Ｐ＜0.05）な
増殖効果が認められた。また移植15日後の腫瘍重
量においても有意（Ｐ＜0.05）な増殖抑制を示し
た。
ｂ ラツト癌細胞AS−Ｄ−653増殖抑制効果
ドンリユーラツト１群８〜10匹とし、リゾチー
ム（塩化リゾチーム）0.05％水溶液を飲水として
連日自由に与えた。リゾチーム摂取開始後14日目
にAS−Ｄ−653腹水肉腫１×106個を背部皮下に
移植し、経時的に腫瘍の長径、短径を測定し、腫
瘍の増殖および生存率におよぼす効果を移植後50
日間にわたつて観察した。
移植22日以後において、図２（縦軸は腫瘍平均
直径を示し、横軸は日数を示す）に示したごと
く、対照群に比べて有意な腫瘍増殖の抑制がみら
れ、50日目の生存率も対照群の1/8に対し、リゾ
チーム摂取群6/10（Ｐ＝0.056、Fisher exact
test）と有意な延命傾向を認めた。
実験例３ Meth担癌Balb／ｃマウスにおけるリ
ゾチーム経口投与とサイクロホスフアマイドの
併用効果
Balb／ｃマウス５匹に同系腺維肉腫Meth−Ａ
腫瘍細胞を１×106個皮下に移植し、７日後腫瘤
の大きさが径５〜８mmになつた時点で抗悪性腫瘍
剤としてサイクロホスフアマイドを60mg／Kg腹腔
内に投与した。サイクロホスフアマイド投与２日
後より連日リゾチーム（塩化リゾチーム）0.05％
水溶液を飲水として与え続け、腫瘍の長径と短径
を経時的に測定した。対照群としてはサイクロホ
スフアマイド単独投与の10匹のマウスをもうけ
た。
腫瘍移植の16日後における腫瘤の体積を
長径×（短径）2／２として算出し、サイクロホスフア
マイド単独群とリゾチーム併用群とを比較すると
図３のごとくであつた。
図３において、CYはサイクロフオスフアマイ
ドを示し、LYはリゾチームを示し、LY＋CYは
リゾチームとサイクロフオスフアマイド併用群を
示す。縦軸は腫瘤容積（mm3）を示す。
図３から明らかな如く、抗悪性腫瘍剤（サイク
ロホスフアマイド）単独治療群の腫瘤容積が7500
±94.7mm3（10匹の平均値±S.E.）であるのに対し、
リゾチーム摂取とサイクロホスフアマイドの併用
群は324.0±122.2（５匹の平均値±S.E.）で両者の
間にはＰ＜0.05でリゾチームの併用効果が認めら
れた。
実験例４ シオノギ癌115担癌SD系ラツトにおけ
るリゾチームとN1−（２−テトラヒドロフリ
ル）−５−フルオロウラシルの経口投与におけ
る併用効果
SD系雄ラツトにシオノギ癌115をトラカール皮
下に移植し、１週間後触診により腫瘤が確認しえ
たもののみを選び、40匹を１群10匹として４群に
わけた。
リゾチーム（塩化リゾチーム）0.05％および
N1−（２−テトラヒドロフリル）−５−フルオロ
ウラシル0.025％を含有する飼料、リゾチーム
0.05％を含有する飼料、N1−（２−テトラヒドロ
フリル）−５−フルオロウラシル0.025％を含有す
る飼料、無処置群の４群の飼料を、上記の４群に
わけたSD系雄ラツトに連続投与した。腫瘍移植
50日後の生残率は、リゾチーム・N1−（２−テト
ラヒドロフリル）−５−フルオロウラシル併用群
５／１０に対し、N1−（２−テトラヒドロフリル）−
５−フルオロウラシル群2/10、リゾチーム群3/1
０、無処置群0/10で、リゾチーム、N1−（２−テ
トラヒドロフリル）−５−フルオロウラシルそれ
ぞれ単独では無処置群と有意差を認めないのに対
し、リゾチーム・N1−（２−テトラヒドロフリ
ル）−５−フルオロウラシル併用群のみに有意な
延命を認めた。
次に本発明の製剤例をあげるが、本発明の製剤
がこれのみに限定されるものでないことはいうま
でもない。
製剤例 １
塩化リゾチーム 100mg
スプレードライド乳糖 140mg
結晶セルロース 47mg
コンスターチ 40mg
カルシウムステアレート ３mg
全 量 330mg
塩化リゾチーム、スプレードライド乳糖、結晶
セルロース、コンスターチを均一に混合後60メツ
シユのフルイで篩過した。この混合粉末にカルシ
ウムステアレートを80メツシユのフルイをとおし
てふりかけて均一に混合後直径10mm、重量330mg
に打錠した。
製剤例 ２
塩化リゾチーム 200ｇ
コンスターチ 300ｇ
粒状蔗糖 250ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース（HPC）
50ｇ
腸溶性皮膜 200ｇ
全 量 1000ｇ
粒状蔗糖を核にして、フロイント産業(株)製の自
動フイルムコーテイング装置（FM−２型）を用
い、HPCの６％エタノール溶液を結合液として、
塩化リゾチームとコンスターチの混未を散布し、
粒状蔗糖に付着させ、球状顆粒を製する。この顆
粒は棚式乾燥機で40℃で乾燥後、上記の割合にな
るよう腸溶性コーテイングを行なう。腸溶性コー
テイング液は、粒状オイドラジツトＬ（Eudra−
gitL）5.0、アセトトリグリセライド（トリアセ
チン）0.6、エタノール94.4の組成のものを用い
た。出来あがつた腸溶性顆粒は、日局９の腸溶性
顆粒剤の崩壊試験を行なうと第１液では全く崩壊
せず、第２液では全て10分以内に崩壊した。[Table] As is clear from FIG. 1, a significant (P<0.05) proliferation effect was observed in the lysozyme-administered group compared to the control group from day 11 of transplantation. Furthermore, tumor weight 15 days after transplantation also showed significant growth inhibition (P<0.05). b. Inhibitory effect on growth of rat cancer cells AS-D-653 A group of 8 to 10 Don Liu rats were given a 0.05% aqueous solution of lysozyme (lysozyme chloride) ad libitum as drinking water every day. On the 14th day after starting lysozyme intake, 1 x 10 6 AS-D-653 ascites sarcomas were implanted subcutaneously on the back, and the major and minor axes of the tumors were measured over time to determine the effect on tumor growth and survival rate. 50 after transplant
Observations were made over a period of days. As shown in Figure 2 (the vertical axis shows the average diameter of the tumor and the horizontal axis shows the number of days) from 22 days after transplantation, there was a significant suppression of tumor growth compared to the control group, and survival on the 50th day was significantly reduced. The rate was also 1/8 in the control group and 6/10 in the lysozyme intake group (P = 0.056, Fisher exact
test) and a significant trend toward prolonging survival. Experimental Example 3 Combined effect of oral administration of lysozyme and cyclophosphamide in Meth tumor-bearing Balb/c mice Syngeneic fibrosarcoma Meth-A in 5 Balb/c mice
1×10 6 tumor cells were subcutaneously transplanted, and 7 days later, when the tumor size reached 5 to 8 mm in diameter, 60 mg/Kg of cyclophosphamide was intraperitoneally administered as an anti-malignant tumor agent. Lysozyme (lysozyme chloride) 0.05% daily from 2 days after administration of cyclophosphamide
The aqueous solution was continuously given as drinking water, and the major and minor axes of the tumor were measured over time. As a control group, 10 mice were given cyclophosphamide alone. The volume of the tumor mass 16 days after tumor implantation was calculated as major axis x (minor axis) 2 /2, and the results were compared between the cyclophosphamide alone group and the lysozyme combination group, as shown in Figure 3. In FIG. 3, CY represents cyclophosphamide, LY represents lysozyme, and LY+CY represents a combination group of lysozyme and cyclophosphamide. The vertical axis shows the tumor volume (mm 3 ). As is clear from Figure 3, the tumor volume in the anti-cancer drug (cyclophosphamide) monotherapy group was 7500.
± 94.7mm3 (mean value ±SE of 10 animals), whereas
The combined effect of lysozyme intake and cyclophosphamide was 324.0±122.2 (mean value of 5 animals±SE), with P<0.05 between the two, indicating that the combined effect of lysozyme was observed. Experimental Example 4 Combined effect of oral administration of lysozyme and N 1 -(2-tetrahydrofuryl)-5-fluorouracil in SD rats bearing Shionogi cancer 115 tumor Shionogi cancer 115 was implanted subcutaneously into the trocar into SD male rats for 1 week. Only those in which a tumor was confirmed by post-palpation were selected, and 40 animals were divided into 4 groups with 10 animals in each group. Lysozyme (lysozyme chloride) 0.05% and
Feed containing 0.025% N 1 -(2-tetrahydrofuryl)-5-fluorouracil, lysozyme
Four groups of diets, including a diet containing 0.05% N 1 -(2-tetrahydrofuryl)-5-fluorouracil, and an untreated group, were continuously administered to SD male rats divided into the four groups described above. administered. tumor transplant
The survival rate after 50 days was 5/10 in the lysozyme/N 1 -(2-tetrahydrofuryl)-5-fluorouracil combination group, compared to 5/10 in the lysozyme/N 1 -(2-tetrahydrofuryl)-5-fluorouracil combination group.
5-Fluorouracil group 2/10, lysozyme group 3/1
0, untreated group 0/10, lysozyme and N 1 -(2-tetrahydrofuryl)-5-fluorouracil alone showed no significant difference from the untreated group, whereas lysozyme/N 1 -(2-tetrahydrofuryl)-5-fluorouracil alone A significant survival prolongation was observed only in the group treated with frill)-5-fluorouracil. Next, examples of formulations of the present invention will be given, but it goes without saying that the formulations of the present invention are not limited to these. Formulation Example 1 Lysozyme chloride 100mg Spray-dried lactose 140mg Crystalline cellulose 47mg Cornstarch 40mg Calcium stearate 3mg Total amount 330mg Lysozyme chloride, spray-dried lactose, crystalline cellulose, and cornstarch were mixed uniformly and then sieved through a 60-mesh sieve. Sprinkle calcium stearate on this mixed powder through an 80-mesh sieve and mix evenly.The diameter is 10 mm and the weight is 330 mg.
It was compressed into tablets. Formulation example 2 Lysozyme chloride 200g Cornstarch 300g Granular sucrose 250g Hydroxypropyl cellulose (HPC)
50g enteric coating 200g Total amount 1000g Using granulated sucrose as a core, use an automatic film coating machine (Model FM-2) manufactured by Freund Sangyo Co., Ltd., and use a 6% ethanol solution of HPC as a binding liquid.
Spray a mixture of lysozyme chloride and cornstarch,
It is attached to granulated sucrose to produce spherical granules. After drying the granules at 40°C in a tray dryer, they are coated with an enteric coating to achieve the above ratio. The enteric coating liquid is granular Eudragit L (Eudra-
gitL) 5.0, acetotriglyceride (triacetin) 0.6, and ethanol 94.4. When the resulting enteric-coated granules were subjected to a disintegration test for enteric-coated granules (Japanese Pharmacopoeia 9), they did not disintegrate at all in the first liquid, but all disintegrated within 10 minutes in the second liquid.
【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]
図１は、リゾチーム経口投与のBalb／ｃマウ
ス同系腫瘍Meth−Ａの増殖に及ぼす効果を示す。
縦軸は腫瘍の平均直径（mm）を示し、横軸は日数
を示す。黒マルは対照群を示し、白マルはリゾチ
ーム経口摂取群を示す。
図２は、ラツト癌細胞AS−Ｄ−653の増殖に対
するリゾチーム経口投与による抑制効果を示す。
縦軸は腫瘍平均直径（mm）を示し、横軸は日数を
示す。
図３は、リゾチーム経口投与と抗悪性腫瘍剤サ
イクロフオスフアマイドによるマウス腺維肉腫に
対する併用効果を示す。縦軸は腫瘤容積（mm3）
を示す。またCYはサイクロフオスフアマイドを
示し、LYはリゾチームを示す。
FIG. 1 shows the effect of oral administration of lysozyme on the growth of Meth-A, a syngeneic tumor in Balb/c mice.
The vertical axis shows the average diameter (mm) of the tumor, and the horizontal axis shows the number of days. Black circles indicate the control group, and white circles indicate the lysozyme oral intake group. FIG. 2 shows the inhibitory effect of oral administration of lysozyme on the proliferation of rat cancer cells AS-D-653.
The vertical axis shows the average tumor diameter (mm), and the horizontal axis shows the number of days. FIG. 3 shows the combined effect of oral administration of lysozyme and the anti-malignant tumor drug cyclophosphamide on mouse fibrosarcoma. The vertical axis is the tumor volume ( mm3 )
shows. Furthermore, CY represents cyclophosphamide, and LY represents lysozyme.