JPH0460458A - 成人ｔ細胞白血病ウィルス抗体検出用間接凝集反応試薬 - Google Patents
成人ｔ細胞白血病ウィルス抗体検出用間接凝集反応試薬Info
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- JPH0460458A JPH0460458A JP16974290A JP16974290A JPH0460458A JP H0460458 A JPH0460458 A JP H0460458A JP 16974290 A JP16974290 A JP 16974290A JP 16974290 A JP16974290 A JP 16974290A JP H0460458 A JPH0460458 A JP H0460458A
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は成人Ｔ細胞白血病ウィルス（以下ＨＴＬＶ−Ｉ
と記す）を界面活性剤で処理して得られる成分とＨＴＬ
Ｖ−Ｉを構成するｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白質を感作した
担体粒子を用いるＨＴＬＶ−Ｉ抗体検出用間接凝集反応
試薬に関する。
と記す）を界面活性剤で処理して得られる成分とＨＴＬ
Ｖ−Ｉを構成するｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白質を感作した
担体粒子を用いるＨＴＬＶ−Ｉ抗体検出用間接凝集反応
試薬に関する。
ＨＴＬＶ−ｔは白血病の一種であるＴ細胞リンパ腫をひ
きおこす原因ウィルスである。そこで、このウィルス感
染の有無を検査することは臨床上、疫学上そして輸血の
際において重要である。
きおこす原因ウィルスである。そこで、このウィルス感
染の有無を検査することは臨床上、疫学上そして輸血の
際において重要である。
この検査方法として、螢光抗体法、酵素免疫測定法、放
射免疫測定法などが開発されている。更に）ＩＴＬＶ−
１の感染の有無を簡便かつ安価に測定する方法としてＨ
ＴＬＶ−１を処理し、得られる成分を感作した担体粒子
を用い、この粒子がＨＴＬＶ−１抗体の存在下に おい
て凝集反応を起こすことを利用した検査試薬〔特開昭６
０−４４８７０ ）がすでに市販されている。
射免疫測定法などが開発されている。更に）ＩＴＬＶ−
１の感染の有無を簡便かつ安価に測定する方法としてＨ
ＴＬＶ−１を処理し、得られる成分を感作した担体粒子
を用い、この粒子がＨＴＬＶ−１抗体の存在下に おい
て凝集反応を起こすことを利用した検査試薬〔特開昭６
０−４４８７０ ）がすでに市販されている。
しかしながら、従来の試薬は検体の希釈倍率が低い領域
においてプロゾーン現象の発生が稀に見られた、そのた
め他の検査法、例えばＩＦ法で陽性を示す検体で疑陰性
を呈することがあった。
においてプロゾーン現象の発生が稀に見られた、そのた
め他の検査法、例えばＩＦ法で陽性を示す検体で疑陰性
を呈することがあった。
本発明者等は、従来の欠点を克服すべく検討した結果、
ＨＴＬＶ−１を構成する蛋白質の１つであるｅｎＶ ｇ
Ｐ−２１蛋白質及びＨＴＬＶ−１を界面活性剤で処理し
て得られる成分と共に感作した担体粒子を用いるＩ（Ｔ
ＬＶ−１抗体検出用間接凝集反応試薬を調製し、該抗体
検出に使用したところ極めて正確に測定できることを確
認し本発明を完成した。
ＨＴＬＶ−１を構成する蛋白質の１つであるｅｎＶ ｇ
Ｐ−２１蛋白質及びＨＴＬＶ−１を界面活性剤で処理し
て得られる成分と共に感作した担体粒子を用いるＩ（Ｔ
ＬＶ−１抗体検出用間接凝集反応試薬を調製し、該抗体
検出に使用したところ極めて正確に測定できることを確
認し本発明を完成した。
本発明はＨＴＬＶ−１を界面活性剤で処理して得られる
成分とＨＴＬＶ−１を構成するｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白
質を感作した担体粒子を用いるＨＴＬＶ−■抗体検出用
間接凝集反応試薬である。
成分とＨＴＬＶ−１を構成するｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白
質を感作した担体粒子を用いるＨＴＬＶ−■抗体検出用
間接凝集反応試薬である。
ＨＴＬＶ−７を界面活性剤で処理して得られる成分を製
造するにあたっては、まずＨＴＬＶ−Ｉ抗原を取得する
ことである。ＨＴＬＶ−１の取得方法は公知の方法によ
って行えばよく、例えばＭＴ−２、ＨＵＴ−１０２など
の株化細胞を培養し、培養液から細胞を分離してこの細
胞あるいは培養上清からＨＴＬＶ−１を分離すればよい
。ＨＵＴ１０２は、例えばＮ ＣＩ （Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ 、 Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌ
ｔｈ 。
造するにあたっては、まずＨＴＬＶ−Ｉ抗原を取得する
ことである。ＨＴＬＶ−１の取得方法は公知の方法によ
って行えばよく、例えばＭＴ−２、ＨＵＴ−１０２など
の株化細胞を培養し、培養液から細胞を分離してこの細
胞あるいは培養上清からＨＴＬＶ−１を分離すればよい
。ＨＵＴ１０２は、例えばＮ ＣＩ （Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ 、 Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌ
ｔｈ 。
Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、 Ｕ、Ｓ、＾）
から分譲を受けることができる。培養後、増殖したウィ
ルスを細胞から取得する場合には、培養液を遠心して集
めた沈渣をトリス−塩酸緩衝液−ＮａＣｌ −ＥＤＴＡ
、リン酸緩衝生理食塩溶液などで洗浄し、ノニデッ）Ｐ
２Ｏ、トライトンＸ １００等の界面活性剤で処理して
細胞及びウィルスを破壊する。そして、遠心して沈澱物
を除き、上清をウィルス抗原として使用すればよい。一
方、培養上清からウィルスを取得する場合には、超遠心
密度勾配法によってＨＴＬＶ−１画分を分離すればＨＴ
ＬＶ−Ｉを高純度で取得できるので好都合である。分離
したウィルスは通常はノニデッ１−Ｐ４０．）ライドン
Ｘ１００等の界面活性剤などで破壊してウィルス抗原と
して使用する。しかしながら、ウィルスの増殖機能を失
わせるだけで破壊することなくウィルス抗原として使用
することもできる。
から分譲を受けることができる。培養後、増殖したウィ
ルスを細胞から取得する場合には、培養液を遠心して集
めた沈渣をトリス−塩酸緩衝液−ＮａＣｌ −ＥＤＴＡ
、リン酸緩衝生理食塩溶液などで洗浄し、ノニデッ）Ｐ
２Ｏ、トライトンＸ １００等の界面活性剤で処理して
細胞及びウィルスを破壊する。そして、遠心して沈澱物
を除き、上清をウィルス抗原として使用すればよい。一
方、培養上清からウィルスを取得する場合には、超遠心
密度勾配法によってＨＴＬＶ−１画分を分離すればＨＴ
ＬＶ−Ｉを高純度で取得できるので好都合である。分離
したウィルスは通常はノニデッ１−Ｐ４０．）ライドン
Ｘ１００等の界面活性剤などで破壊してウィルス抗原と
して使用する。しかしながら、ウィルスの増殖機能を失
わせるだけで破壊することなくウィルス抗原として使用
することもできる。
ＨＴＬＶ−１を構成するｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白質の取
得は、前記方法により得られたＨＴＬＶ−１抗原成分を
レクチンクロマトグラフィーで精製することにより得る
ことができる。
得は、前記方法により得られたＨＴＬＶ−１抗原成分を
レクチンクロマトグラフィーで精製することにより得る
ことができる。
ＨＴＬＶ−Ｉ又はその抗原成分とｅｎｖ ｇｐ−２１蛋
白質を担体粒子に感作する方法も一般の抗原を感作する
公知の方法によればよく、例えば、タンニン酸、ゲルタ
ールアルデヒド、ビスジアゾベンジジン、トリレンジイ
ソシアナート、ジフロロジニトロベンゼン、カルボジイ
ミド類、キノン類、及び塩化クロム等のいわゆるカップ
リング剤を使用する方法あるいは物理吸着させる方法な
どによって行なうことができる。
白質を担体粒子に感作する方法も一般の抗原を感作する
公知の方法によればよく、例えば、タンニン酸、ゲルタ
ールアルデヒド、ビスジアゾベンジジン、トリレンジイ
ソシアナート、ジフロロジニトロベンゼン、カルボジイ
ミド類、キノン類、及び塩化クロム等のいわゆるカップ
リング剤を使用する方法あるいは物理吸着させる方法な
どによって行なうことができる。
又ＨＴＬＶ−Ｉ又はその抗原成分とｅｎｖ ｇｐ−２１
蛋白質を担体粒子に感作する際には、上記方法を用いて
ＨＴＬＶ−Ｉ又はその抗原成分とｅｎｖ ｇｐ〜２１蛋
白質を所定量混合し、同時に感作することができる他、
ＨＴＬＶ−Ｉ又は抗原成分を感作した後、ｅｎｖ ｇｐ
−２１蛋白質を感作することもできる。
蛋白質を担体粒子に感作する際には、上記方法を用いて
ＨＴＬＶ−Ｉ又はその抗原成分とｅｎｖ ｇｐ〜２１蛋
白質を所定量混合し、同時に感作することができる他、
ＨＴＬＶ−Ｉ又は抗原成分を感作した後、ｅｎｖ ｇｐ
−２１蛋白質を感作することもできる。
担体粒子は間接凝集反応用のものを用いればよく、ヒト
、羊、ニワトリ等の動物の赤血球、セラチア菌などの微
生物菌体、ゼラチン粒子（特開昭５７−１５３６５８号
）、ポリスチレンラテックス、カオリン、炭末などを使
用することができる。
、羊、ニワトリ等の動物の赤血球、セラチア菌などの微
生物菌体、ゼラチン粒子（特開昭５７−１５３６５８号
）、ポリスチレンラテックス、カオリン、炭末などを使
用することができる。
こうして得られたＨＴＬＶ−１抗原感作粒子は通常は常
法により凍結乾燥し、復元液、血清希釈用液、標準血清
、未感作担体、非特異反応吸収液などと組合せて測定に
供される。
法により凍結乾燥し、復元液、血清希釈用液、標準血清
、未感作担体、非特異反応吸収液などと組合せて測定に
供される。
本発明の試薬を用いてＨＴＬＶ−Ｉ抗体を測定する方法
も間接凝集反応を利用した測定方法の常法によればよく
、例えばマイクロプレートのウェルに被検血清を入れて
その希釈列をつくり、各ウェルにＨＴＬＶ−１抗原感作
粒子を加えて攪拌し、通常１〜２時間程度静置してこの
感作粒子の凝集像を観察すればよい。この方法のほか、
例えば被検血清と感作粒子をスライド板上で混ぜ合わせ
、１〜２分後の凝集状態を観察することもできる。
も間接凝集反応を利用した測定方法の常法によればよく
、例えばマイクロプレートのウェルに被検血清を入れて
その希釈列をつくり、各ウェルにＨＴＬＶ−１抗原感作
粒子を加えて攪拌し、通常１〜２時間程度静置してこの
感作粒子の凝集像を観察すればよい。この方法のほか、
例えば被検血清と感作粒子をスライド板上で混ぜ合わせ
、１〜２分後の凝集状態を観察することもできる。
実施例１
特開昭６０−４４８７０の方法により調製したＨＴＬＶ
−Ｉ抗原３５０ｓｌ（４００μｇ／ｍｌ）を１０ｍ１）
ＩＪスス−酸緩衝液（ｐＨ８，３）Ｔ：透析しね１００
００ ｒｐｍ テｌＯ分間高速遠心分離して得られた上
清をトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，３）で平衡化したレ
ンチルーレクチンアフィニティーカラムに充填し、前記
緩衝液で洗浄した後、メチルαＤマンノシドで溶出し、
吸光度２８０ｎａ＋の吸収を示す部分を分取した。更に
、得られた溶画分を１０蒙門トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
８，３）で透析し、精製されたｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白
質９ｍｇを得た。
−Ｉ抗原３５０ｓｌ（４００μｇ／ｍｌ）を１０ｍ１）
ＩＪスス−酸緩衝液（ｐＨ８，３）Ｔ：透析しね１００
００ ｒｐｍ テｌＯ分間高速遠心分離して得られた上
清をトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，３）で平衡化したレ
ンチルーレクチンアフィニティーカラムに充填し、前記
緩衝液で洗浄した後、メチルαＤマンノシドで溶出し、
吸光度２８０ｎａ＋の吸収を示す部分を分取した。更に
、得られた溶画分を１０蒙門トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
８，３）で透析し、精製されたｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白
質９ｍｇを得た。
実施例２
特開昭５９−３５１４３の方法により、実施例１で得ら
れた前記ｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白質が感作されたゼラチ
ン粒子を調製した。又前記方法により、ＨＴＬＶＩ抗原
のみが感作されたゼラチン粒子を調製した。
れた前記ｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白質が感作されたゼラチ
ン粒子を調製した。又前記方法により、ＨＴＬＶＩ抗原
のみが感作されたゼラチン粒子を調製した。
この後、前記感作粒子の前者及び後者を１：１の比率で
混合し、ＨＴＬＶ−Ｉ抗体検出用試薬として用いた。
混合し、ＨＴＬＶ−Ｉ抗体検出用試薬として用いた。
実施例３
実施例１の方法により得られたｅｎｖ ｇｐ−２１蛋白
質及びＨＴＬＶ−Ｉ抗体を５＝１の比率で混合し、該混
合物を特開昭５９−３５１４３の方法によりゼラチン粒
子に感作し、ＨＴＬＶ−１抗体検出用試薬として用いた
。
質及びＨＴＬＶ−Ｉ抗体を５＝１の比率で混合し、該混
合物を特開昭５９−３５１４３の方法によりゼラチン粒
子に感作し、ＨＴＬＶ−１抗体検出用試薬として用いた
。
比較例１
実施例２で調製された粒子及び従来法により調製した粒
子を用い、ＨＴＬＶ−１抗体の疑陰性検体について間接
凝集反応テストを行った。得られた結果を下表に示す。
子を用い、ＨＴＬＶ−１抗体の疑陰性検体について間接
凝集反応テストを行った。得られた結果を下表に示す。
比較例２
実施例２で調製された粒子及び従来法により調製した粒
子を用い、抗原過剰のＨＴＬＶ−１抗体について間接凝
集反応テストを行った。
子を用い、抗原過剰のＨＴＬＶ−１抗体について間接凝
集反応テストを行った。
得られた結果を下表に示す。
〔発明の効果］
本願発明の粒子は、ＨＴＬＶ−１抗体の間接凝集反応テ
ストにおいて従来法で疑陰性を示す検体について陽性を
示し、更に抗原過剰の検体についても陽性を示した０本
願発明の粒子は、ＨＴＬＶ−■抗体検査の検査精度の向
上に寄与するものである。
ストにおいて従来法で疑陰性を示す検体について陽性を
示し、更に抗原過剰の検体についても陽性を示した０本
願発明の粒子は、ＨＴＬＶ−■抗体検査の検査精度の向
上に寄与するものである。
特許出願人 冨士レビオ株式会社
Claims (2)
- （１）成人Ｔ細胞白血病ウィルスを界面活性剤で処理し
て得られる成分と成人Ｔ細胞白血病ウィルスのｅｎｖｇ
ｐ−２１蛋白質を感作した担体粒子を用いる成人Ｔ細胞
白血病ウィルス抗体検出用間接凝集反応試薬。 - （２）担体粒子がゼラチン粒子である請求項（１）の試
薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2169742A JP3033774B2 (ja) | 1990-06-29 | 1990-06-29 | 成人ｔ細胞白血病ウィルス抗体検出用間接凝集反応試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2169742A JP3033774B2 (ja) | 1990-06-29 | 1990-06-29 | 成人ｔ細胞白血病ウィルス抗体検出用間接凝集反応試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0460458A true JPH0460458A (ja) | 1992-02-26 |
| JP3033774B2 JP3033774B2 (ja) | 2000-04-17 |
Family
ID=15892007
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2169742A Expired - Fee Related JP3033774B2 (ja) | 1990-06-29 | 1990-06-29 | 成人ｔ細胞白血病ウィルス抗体検出用間接凝集反応試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3033774B2 (ja) |
-
1990
- 1990-06-29 JP JP2169742A patent/JP3033774B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3033774B2 (ja) | 2000-04-17 |
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