JPH0445519B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

複合多糖類あるいは微生物によつて生成される
ことが知られている。親水性コロイドとしてまた
その粘性と流動学的性質によりこの複合多糖類の
作用のいくつかが水性の系における濃化剤として
使われてきた。 科学技術の他の分野に関し、濃化、懸濁および
または安定剤として有用な性質を有する新しい複
合多糖類を発見する目的の研究が継続された。こ
れらの目的の性質を有する新しい複合多糖を与え
ることが本発明の目的である。この新規化合物の
製造法を与えることも目的である。さらに濃化ま
たは懸濁または安定剤としてこの新規複合多糖を
含む処方の提供も目的である。またさらに本発明
の目的は本発明の続く記述から明確になるであろ
う。 本発明は選ばれた炭素源上で細菌の作用により
生産される新規複合多糖に関する。また本発明は
制御された条件下で選ばれた炭素源と培養地成分
で細菌を培養することにより複合多糖を製造する
新規な方法に関する。本発明の複合多糖は主に炭
水化物残基と少量の蛋白質を含む高分子量の多糖
である。時々これは「ガム（gum）」と呼ばれる
が複合多糖という術語がより正確で的確であると
考えられる。本発明の以下の記述において、該化
合物は時により複合多糖60またはＳ−60と呼ぶこ
とにする。 この新規化合物は広範囲にわたる分類学的研究
に基き、今までに未記載の微生物で未同定のシユ
ードモナス属の菌（unnamed Pseudomonas
species）により適当な栄養培地で醗酵すること
により製造することができる。該複合多糖を製造
する時に使用するこの微生物の拘束を受けない
（unrestricted）永久寄託が1978年11月21日にア
メリカン・タイプ・カルチヤー・コレクシヨン
（American Type Culture Collection）により
受け入れ番号ATCC31461で行われ、1981年１月
31日にブダペスト条約に基づき寄託された。 シユードモナス（Pseudomonas）属の種々の
分類の手がかり及びシユードモナス
（Pseudomonas）属の培養の記述はPergey's
Mannal〔ブリード（Breed）ら、（1957）〕の７版
及びBergey's Manual〔ドウドロフら
（Doudoroff）ら、（1974）〕の８版、また他の学
派による種々の出版物；ヒユー（Hugh）とギラ
ルゲイ（Gilardi）、1974、シユードモナス
（Pseudomonas）、臨床微生物便覧（Manul of
Clinical Microbiologg）、２版、レネツト
（Lennete）ら編、250−269ページ、アメリカ微
生物学会、ワシントンＤ。Ｃ：ウエーバー
（Weaver）ら、1972、診らしい病原性グラム陰
性細菌の同定（Identification of Unusual
Pathogenic Geam−Negatiue Bacteria）、イ
ー・オー・キング（E.O.King）、疾病制御のため
のセンター（Center for Disease Control）、ア
トランタ；イイズカ（Iizuka）ら、1963、シユー
ドモナス属の分類の試み（Attempt of
Grouping the Genus Pseudomonas）、J.Gem.
Appl.Microbiologg ９：７−82；ヘンドリツク
（Hendrie）ら、1966、微生物学者のための同定
方法（Identification Meth ods for
Microbiologists）、Ａの部（PartA）、ギブス
（Gibbs）ら編、１−７ページ、アカデミツク・
プレス（Academic Press）、ニユーヨークに見
られる。 これらの手がかりと記述からATCC31461のそ
れと同様の形態学的及び培養上の特徴を有するシ
ユードモナス（Pseudomonas）種を捜した。以
下の考察は新しいシユードモナス
（Psudomonas）種の帰属に必要かつ正当化する
ものである。 菌株に関する記述 １ 細胞形態の特徴 単細胞、直線またはしばしば曲がつた棒状、
一般的に0.6−0.8×2.0−3.0μｍ、しばしば先細
になつた端、培養期間を長くするとより大きく
より長く（0.8−1.0×＞3μｍ）なり、奇形細胞
及び多形性が、特に炭水化物の制限量の培地上
で現われる。反対に、炭水化物を含んだ培地上
で生育する時には細胞はむしろ一定の桿菌状を
保つが、培養が長くなると再び大部分の細胞は
大きくなり多形性が現われる。グラム陰性、莱
膜を有せず、ポリ−β−ヒドロキシ酪酸とポリ
ホスフエートの顆粒が特に窒素欠損培地上での
培養で見られる。極多毛性の鞭毛着性状態によ
る運動性が、つまり１〜４本の鞭毛がある一方
の端に着毛及び時には端に近い（Subpolav）
所から着生していることにより、見られる。 ２ コロニー形態の特徴 肉汁寒天（nutvient agar）平板上では、小
（直径0.8−1.1mm）及び大（直径3.2−3.5mm）の
コロニーが現われる。コロニーは黄色カロチノ
イド色素を有し、平滑、円形、凸円状からクツ
シヨン状である。大きなコロニーはしばしば同
心円状のしわを有する。コロニーの表面は硬く
非粘着性の組織で白金耳で押すとコロニー全体
が除かれる。YM寒天平板上では、比較的大き
い（直径〜６−７mm）、黄色、円形、平滑、粘
質性、凸円状のただ一種類のコロニーが現われ
る。粘質性で弾力のある膜がコロニーの表面上
に形成され、コロニー表面の膜全体を除くこと
ができる。二次生育が最初のコロニーの周縁に
できる。これらのコロニーの色は周縁よりも中
心の法がより暗黄色であり、同心円状の色素形
成が見られる。細胞内黄色カロチノイド色素に
加えて、拡散性褐色色素が培養期間を長くする
と自動酸化の結果として現われる。この現象は
肉汁寒天（Nutrient agar）上でより容易に認
められる。蛍光性色素は生産されなかつた。 ３ 生理学的及び生化学的特徴 Ｓ−60菌株の生育範囲は約20℃から41℃まで
である。４℃では生育は起きない。3.0％NaCl
は生育を阻止するのに充分であり、菌株はPH５
と11の間で生育が可能である。 ほとんどすべての炭水化物から酸が生成しガ
スは発生しないが、ポリアルコールからは生成
しない。ウレアーゼは生産される。MR、VP、
及びインドールテストはすべて陰性である。ア
ルギニン、ジヒドロラーゼ、リジンとオルニチ
ンデカルボキシラーゼは生産されない。リトマ
ス・ミルクでは酸の生成及び還元が起こる。脂
肪分解性卵黄反応（lipolytic egg yolk
reaction）は陰性である。ゼラチンを弱く加水
分解するが、カゼイン、澱粉、アルギン酸、ペ
クチン、セルロール、キチン、DNAを加水分
解しない。 ４ 抗生物質に対する感受性 菌株はカナマイシン、ネオマイシン、クロー
ルテトラサイクリン、エリスロマイシンに非常
に感受性があり、ストレプトマイシンとペニシ
リンにはない。 ５ 栄養上の特徴 有機物性の生長因子は必要ではないし、アン
ニウム塩は単一の窒素源として要求を満たす。
少なくとも35の有機化合物、すなわちローリボ
ース、澱粉、２−ケトグルコネート、ムケート
（mucate）以外の大部分の炭水化物が利用され
た。さらにアセテート、カプロエート、カプリ
レート、ペラルゴネート、スクシネート、アゼ
レート、Ｌ−マレエート、DL−β−ヒドロキ
シブチレート、ピルウ゛エート、エタノール、
ｎ−プロパノール、ｐ−ヒドロキシベンゾエー
ト、フエニルアセテート、Ｌ−α−アラニン、
Ｌ−スレオニン、Ｌ−ロイシン、DL−イソロ
イシン、Ｌ−アスパルテート、Ｌ−グルタメー
ト、Ｌ−チロシンが利用された。 ６ DNAのGC含量 DNAの評価はモル％で〜68（Tmより）とい
う結果になつた。

【表】

【表】

【表】 第２表に本願発明における菌種と近縁種との比
較データを示す。

【表】 培養条件： 複合多糖Ｓ−60は未同定のシユードモナス
（Pseudomonas）種の微生物の接種による制御
された条件下で適当な水性栄養培地の好気培養
中に生産される。培地は炭素、窒素、無機塩源
を含む通常の培地である。 一般的に、炭水化物（例えば、グルコース、
フルクトース、マルトース、砂糖、キシロー
ス、マンニトールなど）は栄養培地における同
化性炭素源として単独のあるいは組み合せて使
うことができる。培地中に使われる炭素源また
は炭素源類の正確な量は一部分培地の他の成分
によるが、一般的に炭水化物の量は普通培地重
量あたり約２％と４％の間で変化する。これら
の炭素源は個々に、またはいくつかの炭素源類
を組み合せて培地に使用できる。一般に、蛋白
質性の多くの物質が培養工程中における窒素源
として使うことができる。適当な窒素源は、例
えば、酵母加水分解物、生酵母、大豆粉、綿実
粉、カゼイン加水分解物、コーンスチープリカ
ー、蒸溜酒残渣の可溶性粉、トマトペーストな
どを含む。窒素源は、単独でまたは組み合せ
て、水性培地の重量あたり約0.05％から0.2％
までの範囲の量で使われる。 培養培地に加えることができる栄養無機塩類
はナトリウム、カリウム、アンモニウム、カル
シウム、リン酸、硫酸、塩素、炭酸などのイオ
ンになり得る通常の塩類である。コバルト、マ
ンガン、鉄、マグネシウムのような痕跡金属も
また含まれる。 実施例に述べる培地は使用可能な広範囲の培
地の一例にすぎず、これに限定されるものでは
ないことに留意されたい。 培養は約25℃から35℃までの間の温度範囲で
行うが、最適の結果を得るには、約28℃から32
℃までの温度で培養を行うことが好適である。
シユードモナス（Pseudomonas）菌の生育及
び多糖Ｓ−60の生産のための栄養培地のPHは約
６から８まで変えることができる。 新多糖Ｓ−60は表面及び液中培養で生産され
るが、液中培養を行う方が好適である。小規模
な培養は菌を適当な栄養培地に接種、生産培地
に移した後、約30℃の一定温度、シエーカー上
で数日間培養を行うことにより便利に行なわれ
る。 培養は種菌の生育が培地の入つた減菌フラス
コで始められ、１ないしそれ以上の段階を経
る。種菌生育用の栄養培地は炭素及び窒素源の
適当な組み合せたものである。種菌のフラスコ
は約30℃の一定温度で、１〜２日間または満足
な生育が得られるまでの振盪し、得られた増殖
の一部を第二段の種または生産用培地に接種す
ることに使われる。必要とするなら中間段階の
種用フラスコを要するに同様な方法により増殖
させる。すなわち、直前の段階の種用フラスコ
の内容物の一部が生産培地に接種することに使
われる。接種したフラスコは一定温度で数日間
振盪し、培養期の最後にフラスコの内容物をイ
ソプロピラルコールのような適当なアルコール
で沈澱させることにより回収する。 大きな規模の時には、撹拌器及び培養培地を
通気する手段を備えた適当なタンクで培養を行
うことが好適である。この方法によると、栄養
培地はタンク内で作り約121℃までの温度に加
熱減菌す。冷却後、減菌した培地に生産培地に
前に生育させた種を接種し、培養を栄養培地を
撹拌及びまたは通気しながら及び約30℃の温度
に保ちながら、例えば２日から４日間の培養期
間で行う。このＳ−60を生産する方法は特に大
量の製造に適している。 生産物はイソプロパノールのような適当なア
ルコールで沈澱させることにより培養培地から
回収する。 多糖Ｓ−60の物理学的及び化学的諸性質 未同定のシユードモナス（Pseudomonas）菌
により生産される複合多糖はおよそ主に炭水化
物、Ｏ−グリコシド結合したエステルのアセチル
基が３−4.5％、蛋白質10−15％からなる。 多糖Ｓ−60の炭水化物部分はウロン酸（〜12％
ガム重量に対し）と中性糖のグルコースとカムノ
ースを含む。ラムノースとグルコースのおよその
モル比は1.5対１である。 4.5％のアセチル含量はＳ−60樹脂の0.2％水性
溶液をアルカリ生ヒドロキシルアミン試薬と処理
し、続いて酸性塩化第２鉄試薬で処理することに
より決定した〔エス・ヘストリン（S.Hestrin）
（1949）J.Biol.chem.180，249−261〕。 多糖Ｓ−60の中性糖は以下のように決定した。
生成物10mgを2Nd₂SO₄1mlに溶解し、混合物を
100℃４時間加熱する。得られる溶液を冷却し水
酸化バリウムで中和後固体二酸化炭素でPHを５−
６とする。得られる硫酸バリウムの沈澱を遠心分
離により除き上清を減圧下しシロツプ状になるま
で濃縮する。加水分解物の糖は３重量％OV−
225を保持したガスクロームＱ80/100メツシユを
210℃で使いヒユレツト−パツカード5750型クロ
マトグラフ（Hewlett−Packard Model 5750
chromatrgraph）でそれらのアルドノニトリル酢
酸エステル誘導体をガスクロマトグラフを行うこ
とにより試験的に固定する。糖は真の標準品と比
較することにより同定・定量する〔ジエー・ケ
ー・ベアード（J.K.Baird）、エム・ジエー・ホル
ロイド（M.J.Holroyde）、デイー・シー・エルウ
ツド（D.C.Ellwood）（1973）Carbohydr.Res.27、
464−467〕。 多糖の種々の中性糖はまだピリジン：酢酸エチ
ル：水（２：５：５：）の上層を溶媒とするホワ
ツトマン１番（WhatmanNo.１）クロマトグラフ
用紙による下降法ペーパークロマトグラフを用
いることにやり特徴ずけられた。クロマトグラフ
は硝酸銀に浸漬及びフタル酸−アニリン噴霧試薬
により染色した。構成糖は糖の標準品と同時クロ
マトグラフイーを行うことにより及びフタル酸−
アニリン試薬との特異的呈色反応により固定し
た。 多糖のウロン酸含量は２つの異なつた方法によ
り決定した。ある方法では試料を19％塩酸で脱炭
産した遊離した二酸化炭素を標準水酸化ナトリウ
ムで捕捉し逆滴定によ〔ビー・エル・ブラウニン
グ（B.L.Browning）（1967）Methods of Wood
Chemistry、632−633〕及びカルバゾール比色
法により〔テイー・ピター（T.Bitter）、エツ
チ・エム・ムアー（H.M.Muir）（1962）Mnal.
Biochem.4、330−334〕決定した。 紙電気泳動は上述の中和した酸加水分解物に
あるウロン酸の分離及び試験的同定に用いた。こ
の分解物の一定量及び既知のウロン酸標準品をカ
マグ（Camag）電気泳動用紙60−011番にの
せ、電気泳動をカマグ（Camag）モデルHVE電
気泳動装置を用いてPH2.7緩衝液中2.0時間行なつ
た。クロマトグラムを風乾し硝酸銀浸漬試薬で染
色し分離したウロン酸の位置を求めた。２つの大
きな及び１つの小さなスポツトが見られた。大き
なスポツトの１つはグルクロン酸（R_GlcA＝1.0）
と同様の移動度で動きもう一方の大きなスポツト
（R_GlcA＝0.85）及び小さなスポツト（R_GlcA＝0.73）
はより小さな移動度であつた。これらと同一条件
下で既知ウロン酸の相対移動度は以下の通りであ
る： Rm グルクロン酸 1.0 マンニユロン酸 0.96 ガラクツロン酸 0.65 グルロン酸 0.63 自然のＳ−60の赤外吸収スペクトルはKBr錠
剤法で乾燥物質について行なつた。複合多糖は水
酸基、メチレン基、カルボニル基、カルボン酸基
を示す3400cm^-1、2950cm^-1、1740cm^-1、1620cm^-1
にピークを示した。塩化メチレン染料を受けつけ
ず、実質的にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに不
溶、DMSOまたはホルムアミド可溶である。 Ｓ−60の試料は以下の元素分析値を示す：Ｎ−
2.00％、Ｃ−42.62％、Ｈ−5.80％。 多糖Ｓ−60は水に低濃度で溶解した時に水性溶
液に粘度を与える。この事、剪断に対する感受性
及び全体の流動学的性質のため、これは水性の系
における濃化、懸濁及び安定剤として、例えば織
物工業の捺染溶糊、または低流動水性除草剤組成
物、サラダドレツシング、濃厚プデイング、粘着
剤組成物処方用の添加剤として有用である。加熱
及び冷却後、これは弱い弾力のあるゲルを形成す
る。 脱アセチル、非清澄Ｓ−60 乾燥高分子または培養液を高PH（例えば、炭酸
ナトリウムまたは水酸化ナトリウムを用いてPH10
にする）で90−100℃の高温に10分から45分間加
熱すると脱アセチル化が容易に起こる。得られる
脱アセチル多糖Ｓ−60は堅い弾力のないまたはも
ろいゲルを形成し、工業的及び食品関係における
多くの応用に有用である。脱アセチルＳ−60の組
成は主に炭水化物、蛋白質〜17％、アセチル〜０
％である。炭水化物部分は〜13％のウロン酸、お
よびそのモル比が1.5：１の中性糖ラムノースと
グルコースから成る。 脱アセチル化樹脂のある使用法は堅くもろいゲ
ルなので型をつくる及び堅い構造物として使うこ
とができることから、香料のような適当な溶液と
処理した後、室内防臭剤、または空気清浄剤など
に応用を見いだす。脱アセチル樹脂はまだゲル電
気泳動において、電子顕微鏡使用時のミクロトー
ム用のゲル化剤にも使われる。自然の及び脱アセ
チル樹脂はまた放射線学におけるバリウム、菓子
類の懸濁剤として、及び工具作り、歯科学、犯罪
学における型どり物質としても使われる。 KBr錠剤法での乾燥物質で測定した脱アセチ
ルＳ−60の赤外吸収スペクトルは3400cm^-1、2950
cm^-1、1740cm^-1、1650cm^-1、1610cm^-1にピークを
示した。 脱アセチルＳ−60の試料は以下の元素分析値を
示す：Ｎ−2.67％、Ｃ−4189％、Ｈ−6.07％。 脱アセチル、清澄Ｓ−60 清澄、脱アセチルＳ−60の組成は以下に示すと
おりである：〜２％蛋白質、０％アセチル、及び
炭水化物、後者は〜22％のウロン酸およそのモル
比が1.5：１の中性糖ラムノースとグリコースか
ら成る。 KBr錠剤法で乾燥物質で測定した清澄、脱ア
セチルＳ−60の赤外吸収スペクトルは3400cm^-1、
2950cm^-1に、1600cm^-1ピークを示した。脱アセチ
ル、清澄Ｓ−60の試料は以下の元素分析値を示
す：Ｎ−0.42％、Ｃ−36.85％、Ｈ−5.62％。試料
は次の比旋光度を示す。 〔α〕²⁵ ₅₈₉＝−45゜ 脱アセチル清澄樹脂は広範囲の培養基を使用す
る種々の臨床または非臨床微生物のための、微生
物学での培養基における寒天代用品として特に有
用である。寒天に起き換えるために必要な脱アセ
テル清澄樹脂の濃度は使用する培地によるが、約
0.5から約1.25％（容量あたりの重量比）の範囲
内である。微生物の生育の特徴は標準の寒天を基
にした培地のそれと全く同様である。 以下の詳細な実施例は本発明の代表的な菌を説
明したものである。 実施例 １ 複合多糖Ｓ−60生産用の培養工程 Ａ 継代培養 未同定のシユードモナス（Pseudomonas）
菌、ATCC3146はNAまたはYM寒天上で非常
によく生育するから、日常、これらを継代培養
に使用する。培養温度は30℃である。微生物は
黄橙色のカロチノイド色素と褐色の可溶性色素
を２−５日間の培養で生産する。 Ｂ 種菌の製造 フラスコの種菌は30℃で培養したYM培地で
作られる。新しい平板培養の菌を接種した時、
YM培地の培養は24時間までに良い生育と樹脂
の形成を与える。 種培養容器として１ガロン発酵槽を用いる発
酵用種培地は最終の発酵槽の培地と同じもので
ある。 Ｃ 最終の発酵槽用培地 樹脂のナトリウム−とカリウム−塩型は異な
つた培地で作られる：それらは共に以下に述べ
る。微生物は一定のK⁺を要求しこれをナトリ
ウム型培養培地に加えねばならない。（３％デ
キストロースも使うことができる。 ナトリウム塩 カリウム塩 3.0％グルコース 3.0％グルコース 0.01％MgSO₄・7H₂O 0.01％MgSO₄、7H₂O 0.09％NH₄NO₃ 0.09％NH₄NO₃ 0.05％プロモソイ（Promosoy）
0.05％プロモソイ（Promosy） （大豆蛋白濃縮物） １ml／lHoLe塩類 １ml／lHoLe塩類 1ppmFe⁺⁺ 1ppmF⁺⁺ 0.05％Na₂HPO₄ 0.05％K₂HPO₄ 10ppmK⁺ PH制御＝NaOH PH制御＝KOH HoLe塩類は酒石酸、モリブデン酸マグネシ
ウム、CoCl₃、ZnCl₂、CuCl₂、ホウ酸、塩化マ
ンガン、硫酸第１鉄を含む痕後元素の溶液であ
る。 低カルシウム生成物を目的とする時、上記の
培地のいずれかも脱イオン水で使用する。培養
は50時間で完了し；培養液の粘度は通常5000−
8000cpsである。 Ｄ 回収 生成物のゲル化する性質のために良好な繊維
形成は普通自然の放置を沈澱では起きない。し
かし、90−95℃で10−15分間の低温殺菌により
（この間に濃培養液は加熱−著しく薄くなる）、
優秀な繊維が培養液の容量の２倍量の99％イソ
プロパノールを用いて冷却することなく培養液
からの沈澱により得られることがわかつた。樹
脂1.5％の平均収率が20と70の発酵槽がグ
ルコース３％により得られる。 Ｅ 乾燥 生成物を回収し50−55℃で１時間までに強制
通気式トレイドライヤーで乾燥する。 Ｆ 生成物の品質 K⁺塩の１％粘度は通常3000cpsの範囲内にあ
り、低カルシウムナトリウム塩のものでは約
7000cpsである。 実施例 ２ 複合多糖Ｓ−60の脱アセチル化と清澄化すべて
の使用法において必ずしも必要ではないが樹脂の
清澄化は樹脂を寒天の代用品として使用するとき
には価値がある。清澄化は脱アセチルの前（自然
のままの状態）または後でも行うことができる。
脱アセチル化は熱アルカリを用い清澄化は熱い状
態で行われるから、２つの方法は容易に便利で結
合される。脱アセチル化と清澄化は共に培養液ま
たは乾燥高分子のいずれでも行うことができる。
脱アセチル化では、培養液を使用するならば、PH
をKOHで10に合わせ溶液を90℃で15分間加熱、
希H₂SO₄でPHを７とし、CaCl₂を0.2％濃度になる
ように加え冷却する。堅くもろいゲルが得られ
る。 脱アセチル化と清澄化の両方法における一般方
法は以下に示す： Ａ 培養液または樹脂の２％溶液を90℃に加熱す
る。 Ｂ PHをKOHで10にする。 Ｃ 培養液または溶液の温度を15分間90−95℃に
保つ。 Ｄ PHを希HClまたはH₂SO₄で６−８とする。 Ｅ 10ｇ／のスーパーエイド（Super Aid）を
過する物質に加える。 Ｆ この物質を136cm³の面積をもつフイルター部
分を用いて約６mmのスーパーエイド（Super
Aid）の層と約20−30psiの圧力で圧力フイル
ター部分（予備加熱）を通して過する。 Ｇ 液はゲル化を防ぐためにただにちにイソプ
ロパノールで沈澱させ繊維を１時間またはそれ
より少ない時間で50℃で乾燥する。脱アセチル
化が不必要の時は、上述の方法はPHを上げるこ
と以外はそまま従う：90℃に保ち、溶液をただ
ちに過し、回収する。 清澄化はいつもカリウム塩型で行われる：KCl
は必要なら前に作つた生成物の溶液に加えること
ができる。 実施例 ３ 複合多糖Ｓ−60のゲルの特徴 自然のままの樹脂及び脱アセチル樹脂のK⁺型
とCa⁺⁺型の両方の型で、カラゲニン及び寒天と
比較したデータを編集したものを下に示す：

【表】 すべてのいろいろの型のゲルの固化及び融ける
ための広い範囲の温度があることを上述のように
留意されたい。寒天では、変化は主に海草の型に
よりカツパ・カラゲニンではカリウムイオン濃度
がゲルの特徴を決定する。脱アセチルＳ−60のゲ
ルは主に脱アセチル化の程度により特徴づけられ
る。ほんの少し脱アセチル化するとゲルはより高
い温度で固まり、より弾性がある：実際、弾力の
あるものから堅いものまで広い範囲のゲルが脱ア
セチル化の程度により可能である。ケルは、主に
固化点と融点の間の大きなヒステリシスがあるこ
とから、カツパ・カラゲニンよりも寒天により類
似している。それらは溶かすことがむずかしく、
ゲル−ゾルの変化を観察することがむずかしいこ
とを強調しておく。一方、ゲル化の始まりから固
いゲルに鋭く数度でゲルが固化することからゲル
化点は容易に定義できる。 実施例 ４ 脱アセチル非清澄Ｓ−60 Ｓ−60培養液わ90℃に加熱しPHを25％KOHの
添加で10とする。温度を１分間維持し、さらに濃
HClで中和する。この培養を発酵槽から流出さ
せ、熱いうちに２倍量の99％IPAで回収する。脱
アセチルＳ−60の維持をあつめ、55℃で１時間強
制通気式トレイドライヤーで乾燥し、粉にひく。 実施例 ５ 脱アセチルＳ−60の清澄化 実施例４で製造した脱アセチル複合多糖Ｓ−60
をライトニン（Lightnin）混合器で１時間脱イオ
ン水中１％濃度に再構成し50℃まで加熱しArti−
Barinkoで混合する。溶液は温度を40℃以上に保
ちながらSorvallRC2−Ｂ冷凍遠心機で20分間
10000R.P.M（GSAヘツド（head）で遠心する。
上清をデカントしてとり次に穴が5μ、3μ、1.2μ、
0.8μのゲルマン（Gelman）型
ANHydrophilioAcopor膜（293mm）を通して
過する。液を約３−４倍量の99％イソプロパノ
ールに加え、繊維をあつめ、簡単に強制通気式ト
レイドライヤーで55℃で乾燥し、粉にひく。生成
物は本発明の脱アセチル清澄Ｓ−60樹脂である。 実施例 ６ 脱アセチル清澄Ｓ−60を用いて寒天との置換 いくつかの異なつた培地が以下に示す通りに作
られる：

【表】

【表】 脱イオンをすべての培地に使つた。成分を一緒
にして（バーク（Burk's）を除く）121℃、15psi
で15−20分オートクレブを行い55℃に冷却、減菌
したペトリ皿に注いだ。バーク（Purk's）の成
分はグルコースを除いて一緒にし、別々にオート
クレービを行い、オートクレーブ後培地に加え
る。これらの培養養プレートが固化したら減菌を
検査するために室温で24時間培養した後、それら
に以下の14菌株ですじを引いて接種した： アグロマイセス ラモサス（Agromyces
ramosus）ATCC25173アースロバクター グロ
ビホルミス（Arthrobaterglobifomis）
ATCC8010 オーレオバシデイウム プルランス
（Aureobasidium pullulans）NRRL YB−3861 アゾトバクター インデイカス（Azotobacter
indicus）varミクソゲネス（myxogenes）Ｓ−７
菌株ATCC21423アゾトバクター ビネランデイ
（Azotobacter Vinelandii）ATCC9047 ベイジエリンキア ラクテイコゲネス
（Beijerinckia lacticogenes）ATCC19361 エルウ゛イニア カルボラ（Eiwinia
cartovora）ATCC8061エシエリヒア コリ
（Escherichia coli）EG−47菌株 クレブジーラ ニユーモニエ（Klebsiella
pueumoniea）Ｓ−53菌株 ノカルデイア サルモニカラー（Nocordia
salmonicolor）ATCC21243 Ｓ−60 ストレプトコツカス ヘアエカリス
（Streptococcus faecalis） トリコデルマ ロングブラキアタム
（Trichodermalonghrachiatum）ATCC13631 ズーグロエア ラミゲラ（Zoogloea ramigera）
ATCC25935 プレートを30℃で３−５日間培養した生育を調
べた。Ｓ−60で作つた培地上にすべて菌株につい
て良い生育が得られ寒天の代わりＳ−60で作つた
培地と寒天のものはコロニーの形態ではほとんど
差はなかつた。これらの結果はＳ−60が微生物学
の培地における寒天の優秀な代用になることを示
している。BHI培地とTSAを除く、Ｓ−60を含
むすべての培地のゲル化点は42℃であつた。
BHI寒天とTSAのゲル化点は52℃であつた。寒
天は典型的に42−44℃でゲル化する。 実施例 ７ 脱アセチルＳ−60を用いた成型香料ゲルの製
造 (A) 1.50％ 多糖Ｓ−60 0.75％ 炭酸ナトリウム 0.025％ ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル 3.00％ バラのかおり 4.00％ イソプロパノール 2.00％ エチレングリコール 88.50％ 水 自然のままの多糖Ｓ−60を炭酸ナトリウムと防
腐剤と混合し70℃で水に溶解する。溶液はさらに
90℃に加熱しその温度で10分間保ち多糖を脱アセ
チルする。６℃に冷却跡、溶媒に分散させた香料
を加え混合物を通常の空気清浄剤のプラスチツク
の成型に入れる。混合物が38℃に冷えたらゲル化
が起こり芳香を発散する性質を持つ堅い独立した
ゲルを得る。 (B) 乾燥脱アセチル多糖Ｓ−60を培養液から希水
酸化ナトリウムでPHを10.0とし90℃に15分間加
熱することより作る。溶液を希塩酸でPH7.0に
中和し２倍量のイソプロパノールで沈澱させ、
乾燥、粉ひく。固体の空気清浄剤ゲルは以下の
方法で脱アセチル生成物から作られる：脱アセ
チル多糖Ｓ−60 3.0ｇを塩化カリウム1.5ｇ及
びｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル防腐剤0.15ｇ
と混合し水177mlを加える。溶液を90℃に加熱
して溶解し60℃に冷却後、はつか油の香料6.0
ｇ、イソプロパノール8.0ｇ、エチレングリコ
ール4.0ｇの混合物を加える。溶液をプラスチ
ツクの型に入れ室温まで冷却する。香りの強い
はつかの香りをもつた強力な堅いゲルが形成さ
れる。ゲルは簡単に変形できたわむことなくそ
の形を保持する。 本発明の態様を要約すると以下の様である。 １ 10−15％蛋白質、３−4.5％アセチル及び主
として炭水化物を含み、炭水化物部分が〜12％
のウロン酸、モル比がおよそ1.5：１であるラ
ムソースとグリコースからなる複合多糖Ｓ−60
であつて、該多糖が塩化メチレン染料と不相溶
性であり、実質的にＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミドに不溶でかつDMSOまたはホルムアミド
可溶であり、3400cm^-1、2950cm^-1、1740cm^-1、
1620cm^-1のピークによつて特徴づけられる赤外
吸収スペクトルを有することを特徴とする前記
複合多糖Ｓ−60。 ２ 未同定のシユードモナス（Pseudomonas）
属微生物、ATCC 31461を炭素源、カリウムイ
オン源、窒素源、痕跡無機元素、水を含む醗酵
培地で283℃、PH６−８において40−60時間培
養し、適当な低級アルコールによる沈澱法によ
ガムを回収することから成る第１項記載の複合
多糖Ｓ−60の製法。 ３ 窒素源をコーン・スチーブ・リカー、アルコ
ールをイソプロパノールとする第２項記載の製
法。 ４ 未同定のシユードモナス（Pseudomonas）
菌、ATCC 31461の凍結乾燥培養物。 ５ 17％蛋白質、アセチル含量０％で、炭水化物
部分が13％のウロン酸とおよびそのモル比が
1.5：１である中性糖ラムノースとグルコース
から成る炭水化物を含む脱アセチル化非清澄複
合多糖Ｓ−60。 ６ ２％蛋白質、アセチル含量が０％で、炭水化
物部分がエロン酸22％、およそのモル比が
1.5：１である中性糖ラムノースとグルコース
から成る炭水化物を含む脱アセチル化清澄複合
多糖Ｓ−60。 ７ 複合多糖Ｓ−60の１−５％水性溶液をPH約
10、90−100℃の温度10分から45分間加熱し、
それにより生成する生成物を回収することから
なる第５項記載の化合物の製法。 ８ 約0.5−５％の脱アセチル化複合多糖Ｓ−60
と栄養物から成る微生物学的培養基。 ９ 脱アセチル化Ｓ−60が清澄したものである第
８項記載の培養基。 10 約0.1−５％の脱アセチル化複合多糖Ｓ−60、
水及び低級アルカノールから成る香料ゲル組成
物。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ２％タンパク質、アセチル含量が０％で、炭
   水化物部分がウロン酸22％、およそのモル比が
   1.5：１である中性糖ラムノースとグルコースか
   ら成る炭水化物を含み、3400cｍ^-1、2950cm^-1お
   よび1600cm^-1（KBr）のピークによつて特徴づけ
   られる 赤外吸収スペクトル並びに〔α〕²⁵ ₅₈₉＝−45゜の比
   旋光度を有することを特徴とする脱アセチル化清
   澄複合多糖Ｓ−60。 ２ ２％タンパク質、アセチル含量が０％で、炭
   水化物部分がウロン酸22％、およそのモル比が
   1.5：１である中性糖ラムノースとグルコースか
   ら成る炭水化物を含み、3400cm^-1、2950cm^-1およ
   び1600cm^-1（KBr）のピークによつて特徴づけら
   れる 赤外吸収スペクトル並びに〔α〕²⁵ ₅₈₉＝−45゜の比
   旋光度を有する脱アセチル化清澄複合多糖Ｓ−60
   約0.5−５％と栄養物とを用いることを特徴とす
   る微生物培養方法。