JPH04264026A

JPH04264026A - 抗レトロウイルス剤

Info

Publication number: JPH04264026A
Application number: JP3044094A
Authority: JP
Inventors: Takahiro Ogata; 緒形孝弘; Akihisa Kato; 加藤明久
Original assignee: Tsumura and Co
Current assignee: Tsumura and Co
Priority date: 1991-02-18
Filing date: 1991-02-18
Publication date: 1992-09-18

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、レトロウイルスに起因
する各種ウイルス性疾患の治療に有効な抗レトロウイル
ス剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ウイルスに関する研究がなされるにつれ
、ウイルス性疾患の治療法が徐々に確立されつつある。特に最近問題となっている後天性免疫不全症候群（ＡＩ
ＤＳ）を引き起こす、ＨＩＶ（Ｈｕｍａｎ　　Ｉｍｍｕ
ｎｏ　　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　　Ｖｉｒｕｓ）、ＨＴ
ＬＶ−Ｉ（成人Ｔ細胞白血病ウイルス）等はレトロウイ
ルスとして知られている。

【発明が解決しようとする課題】

【０００３】レトロウイルスはウイルス粒子内に、ＲＮ
Ａ依存ＤＮＡ合成酵素（以下、逆転写酵素と称する）を
含むウイルスであり、以下のようにして増殖している。

【０００４】■宿主細胞に感染後、まずＲＮＡが逆転写
酵素によりＤＮＡに転写される。■このＤＮＡが宿主細
胞染色体に組み込まれ、次いで宿主細胞のＲＮＡ合成酵
素によってｍＲＮＡが合成される。■このｍＲＮＡによ
り各種のウイルス蛋白が生成される。このレトロウイル
スに起因するヒトの疾病に画期的な治療効果を有する薬
剤の開発が望まれていた。

【０００５】本発明者等は種々の生薬について、レトロ
ウイルス増殖阻害効果に関する研究を行った結果、ハナ
マスの花の抽出エキスならびにテリマグランジンＩおよ
びペドゥンクラジンにレトロウイルス増殖阻害効果のあ
ることを見い出した。

【０００６】本発明はこの知見に基づくもので、ハナマ
スの花の抽出エキスを有効成分とする抗レトロウイルス
剤ならびに下記式ＩＩ（ただし、Ｒは水素原子または水酸基を示す。）で表
される化合物、すなわちテリマグランジンＩおよび／ま
たは下記式ＩＩＩＩ（ただし、Ｒは水素原子または水酸基を示す。）で表さ
れる化合物、すなわちペドゥンクラジンを有効成分とす
る抗レトロウイルス剤である。

【０００７】なお、ハナマスの花の抽出エキスは、抗下
痢、止血作用を有することが知られており、その成分の
一つであるテリマグランジンＩはヘルペスウイルス阻害
作用を有することが知られているが、ＨＩＶの抗レトロ
ウイルス効果を有することは従来全く知られていなかっ
たことである。

【０００８】また、本発明で用いるハナマスは、生薬と
して用いられているマイカイカを用いてもよいし、その
原植物であるハマナス（Ｒｏｓａ　　ｒｕｇｏｓａ　　
Ｔｈｕｎｂ．）、その変種であるシロバナハマナス（Ｒ
ｏｓａ　　ｒｕｇｏｓａ　　ｃｖ．　　Ａｌｂａ．）、
ヤエシロバナハマナス（Ｒｏｓａ　　ｒｕｇｏｓａ　　
ｃｖ．　　Ａｌｂｏｐｌｅｎａ）等の花の部分を用いて
もよい。

【０００９】以下、ハナマスの花の抽出エキスを本発明
の薬剤といい、式ＩおよびＩＩで表される化合物を式の
化合物といい、これらをまとめて本発明の抗レトロウイ
ルス剤という。

【００１０】本発明の抗レトロウイルス剤は例えば、次
にようにして得ることができる。

【００１１】すなわち、ハマナスの花を必要に応じて細
粉し、ヘキサン、ジエチルエーテル、石油エーテル、酢
酸エチル、クロロホルム、アセトン、メタノール、エタ
ノール、水より選ばれる少なくとも一つの溶媒で抽出す
ることにより本発明の薬剤を得ることができる。

【００１２】抽出は室温でもよいが、抽出効率、抽出時
間等を考慮にいれて、好ましくは使用する溶媒の沸点近
辺で行うのがよく、抽出時間は１ないし６時間が適当で
ある。

【００１３】また、前述のようにして得られた抽出液か
ら溶媒を除去して得た残渣をメタノールで溶解し、可溶
部をヘキサン、ジエチルエーテル、石油エーテル、酢酸
エチル、クロロホルム、アセトン、アセトニトリル、メ
タノール、エタノール、水、リン酸水素ナトリウムより
選ばれる少なくとも一つの溶媒を溶出溶媒として、ダイ
ヤイオンＨＰ−２０、ＭＣＩゲルＣＨＰ２０Ｐなどのポ
ーラスポリマー、セファデックスＬＨ−２０などのセフ
ァデックス、ＴＳＫｇｅｌ１２０Ｔなどの逆相系シリカ
ゲル、シリカゲル、ポリアミドまたはセルロース等を担
体に用いたカラムクロマトグラフィーまたは高速液体ク
ロマトグラフィーに１回または数回付すことにより、式
の化合物を得ることができる。また、必要に応じて脱塩
操作を行ってもよい。

【００１４】次に本発明の抗レトロウイルス剤の製造の
具体例を示す。

【００１５】具体例１ハマナスの花（Ｒｏｓａ　　ｒｕｇｏｓａ　　Ｔｈｕｎ
ｂ．）１００ｇを細粉し、８００ｍｌの水を用いて６０
℃で２時間温浸抽出を行った後、ろ過した。ろ液を濃縮
乾固することにより、水抽出エキス２７．３ｇを得た。

【００１６】具体例２具体例１で得た抽出エキス２７．３ｇをメタノール２５
０ｍｌで抽出を２回行い、メタノール可溶部６．５ｇを
得た。このうち３ｇを水、１０％メタノール、１５％メ
タノール、３０％メタノールを溶出溶媒として、ＭＣＩ
ゲルＣＨＰ２０Ｐ（２．５φ×１８．５ｃｍ）を用いた
カラムクロマトグラフィーに付した。

【００１７】１５％メタノール溶出画分の溶媒を留去し
て得られた１２４ｍｇを２０〜３０％アセトニトリル（
１０ｍＭリン酸水素ナトリウム）を溶出溶媒として、Ｔ
ＳＫｇｅｌ１２０Ｔを用いた逆相系シリカゲルカラムク
ロマトグラフィーに付し、８ｍｌ／分で１５分間段階溶
出した。

【００１８】さらにセファデックスＬＨ−２０を用いた
カラムクロマトグラフィーに付し、水で脱塩の操作を行
った後、水：エタノール：アセトン（１：１：２）混合
液で溶出し、粗ペドゥンクラジンを得た。

【００１９】粗ペドゥンクラジンを、１５〜３０％アセ
トニトリル（１０ｍＭリン酸水素ナトリウム）を溶出溶
媒として、ＴＳＫｇｅｌ１２０Ｔを用いた逆相系シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーに付し、８ｍｌ／分で１
５分間段階溶出し、再度１０〜２５％アセトニトリル（
水）を溶出溶媒として、ＴＳＫｇｅｌ１２０Ｔを用いた
逆相系シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、８
ｍｌ／分で１５分間段階溶出することにより、文献［Ｌ
ｉｅｂｉｇｓ　　Ａｎｎａｌｅｎ　　ｄｅｒｃｈｅｍｉ
ｃ．，１９６５，ｖｏｌ．６９０，ｐｐ．１５０−１６
２，Ｏ．Ｔ．Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｌ．Ｗｕｒｔｅｌｅ　　
ａｎｄ　　Ｈ．Ｈａｒｒｅｕｓ］記載のペドゥンクラジ
ン１０．５ｍｇを得た。

【００２０】具体例３具体例１のＭＣＩゲルＣＨＰ２０Ｐ（２．５φ×１８．
５ｃｍ）を用いたカラムクロマトグラフィーにおいて、
３０％メタノール溶出画分の溶媒を留去して得られた２
７２ｍｇを１５〜３５％アセトニトリル（１０ｍＭリン
酸水素ナトリウム）を溶出溶媒として、ＴＳＫｇｅｌ１
２０Ｔを用いた逆相系シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーに付し、１０ｍｌ／分で３０分間段階溶出した。

【００２１】さらにセファデックスＬＨ−２０を用いた
カラムクロマトグラフィーに付し、水で脱塩の操作を行
った後、水：エタノール：アセトン（１：１：２）混合
液で溶出し、粗テリマグランジンＩ７２ｍｇを得た。

【００２２】粗テリマグランジンを、２０〜３５％アセ
トニトリル（１０ｍＭリン酸水素ナトリウム）を溶出溶
媒として、ＴＳＫｇｅｌ１２０Ｔを用いた逆相系シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーに付し、８ｍｌ／分で１
５分間段階溶出し、再度１０〜３０％アセトニトリル水
溶液を溶出溶媒として、ＴＳＫｇｅｌ１２０Ｔを用いた
逆相系シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、８
ｍｌ／分で２０分間段階溶出することにより、文献［Ｐ
ｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　　１９７６，ｖｏｌ．
１５，ｐｐ．２１１−２１４，Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ　　
Ｋ．，Ｗｉｌｋｉｎｓａｎｄ　　Ｂｒｕｃｅ　　Ａ．　
　Ｂｏｈｎ］記載のテリマグランジンＩ２５．２ｍｇを
得た。

【００２３】次に本発明の抗レトロウイルス剤が抗レト
ロウイルス効果を有することについて実験例を挙げて説
明する。

【００２４】実験例１マウス白血病ウイルス（ラウシャー株）感染細胞を培養
し、中島等の方法［ＣＯＮＰＡＲＡＴＩＶＥ　　ＬＥＵ
ＫＥＭＩＡ　　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　　１９７３，ＬＥＵ
ＫＥＭＯＧＥＮＥＳＩＳ，ＥＤ．Ｙ．ＩＴＯ．　　ＡＮ
Ｄ　　Ｒ．Ｍ．ＤＵＴＣＨＥＲ，ＵＮＩＶ．ＯＦ　　Ｔ
ＯＫＹＯ　　ＰＲＥＳＳ　　ＴＯＫＹＯ／ＫＡＲＧＥＲ
，ＢＡＳＥＬ，ＰＰ．６０３−６０５（１９７５）］に
準拠して、逆転写酵素を分離精製した。次に、以下の組
成の反応混合液を調製した。

【００２５】・逆転写酵素　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　１単位／ｍｌ・テンプレート・プライマー複合体としてのポリアデニ
ル酸・オリゴチミジル酸複合体［ポリアデニル酸：オリ
ゴチミジル酸ｐｄＴ１２−１８（１：１）］ファルマシ
ア製　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　５μｇ／ｍｌ・トリス塩酸（ｐＨ８．０）　　　
　　　２５ｍＭ・塩化カリウム　　　　　　　　　　　
　　　　　　　７５ｍＭ・塩化マグネシウム　　　　　
　　　　　　　　　８ｍＭ・ジチオスレイトール　　　
　　　　　　　　　２ｍＭ・［３Ｈ］デオキシチミジン
三リン酸（１．５５ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）　　　　０．２μＭ・デ
オキシチミジン三リン酸　　　　　　９．８μＭ・本発
明の薬剤または式の化合物　　　　０．０５−１μｇ／
ｍｌ・精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　適量ただし、１単位とは、逆転写酵素が３７
℃、１０分間でｄＮＴＰ（デオキシ核酸三リン酸）１ｎ
ｍｏｌを消費する比活性単位である。

【００２６】この反応混合液５０μｌを、３７℃、３０
分間反応させ、反応産物ＤＮＡの定量はイオン交換ろ紙
法を用い、［３Ｈ］デオキシチミジン三リン酸のＤＮＡ
への放射活性の取り込みをベックマン・シンチレーショ
ンカウンターで測定して逆転写酵素活性とし、各濃度に
おける阻害率を算出し、本発明の薬剤または式の化合物
の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を求めた。

【００２７】その結果、本発明の薬剤のＩＣ５０は０．
６３μｇ／ｍｌであり、式の化合物のうちテリマグラン
ジンＩのＩＣ５０は０．０４μｇ／ｍｌであり、、ペド
ゥンクラジンのＩＣ５０は０．１０μｇ／ｍｌであった
。

【００２８】この結果から本発明の薬剤および式の化合
物の優れた抗レトロウイルス効果が確認された。

【００２９】以上のように本発明の抗レトロウイルス剤
は、レトロウイルスの増殖において必要な逆転写酵素活
性を阻害することにより、その増殖を抑制する作用を有
するものであるから、レトロウイルスであればいかなる
ウイルスにも適用することができる。

【００３０】レトロウイルスの具体例としては、白血病
ウイルス、肉腫ウイルス、乳癌ウイルス、ビスナウイル
ス、マエデイウイルス、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ−Ｉ等が挙げ
られる。

【００３１】次に本発明の抗レトロウイルス剤について
、経口投与での急性毒性試験をｄｄＹ系雄性マウスおよ
びウイスター（Ｗｉｓｔａｒ）系雄性ラットを用いて行
ったところ、本発明の薬剤は１ｇ／ｋｇの経口投与でも
死亡例はなく、式の化合物においては、１００ｍｇ／ｋ
ｇの経口投与でも死亡例はなかった。

【００３２】このように、本発明の抗レトロウイルス剤
は、極めて毒性が低く安全性の高いものである。

【００３３】次に、本発明の抗レトロウイルス剤の投与
量および製剤化について説明する。本発明の抗レトロウ
イルス剤はそのまま、あるいは慣用の製剤担体と共に動
物および人に投与することができる。投与形態としては
、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択して使用され、
錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、
注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられる。

【００３４】経口剤として所期の効果を発揮するために
は、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通
常成人で本発明の抗レトロウイルス剤の重量として１０
０〜６０００ｍｇを、１日数回に分けての服用が適当と
思われる。

【００３５】本発明において錠剤、カプセル剤、顆粒剤
等の経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニッ
ト、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無
機塩類等を用いて常法に従って製造される。

【００３６】この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に
、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤
、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。それぞれの具体例は以下に示す如くである。

【００３７】［結合剤］デンプン、デキストリン、アラ
ビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、
メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース
、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴ
ール。

【００３８】［崩壊剤］デンプン、ヒドロキシプロピル
スターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カ
ルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチ
ルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース。

【００３９】［界面活性剤］ラウリル硫酸ナトリウム、
大豆レシチン、シヨ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート
８０。

【００４０】［滑沢剤］タルク、ロウ類、水素添加植物
油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム
、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム
、ポリエチレングリコール。

【００４１】［流動性促進剤］軽質無水ケイ酸、乾燥水
酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ
酸マグネシウム。

【００４２】また本発明の抗レトロウイルス剤は、懸濁
液、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤として
も投与することができ、これらの各種剤形には、矯味矯
臭剤、着色剤を含有してもよい。

【００４３】非経口剤として所期の効果を発揮するため
には、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、
通常成人で本発明の抗レトロウイルス剤の重量として１
日１〜１００ｍｇまでの静注、点滴静注、皮下注射、筋
肉注射が適当と思われる。

【００４４】この非経口剤は常法に従って製造され、希
釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖
水溶液、注射用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ
油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチ
レングリコール等を用いることができる。さらに必要に
応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また
、この非経口剤は安定性の点から、バイアル等に充填後
冷凍し、通常の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用
直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。更に、必要に応じて適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、
無痛化剤等を加えても良い。

【００４５】その他の非経口剤としては、外用液剤、軟
膏等の塗布剤、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、
常法に従って製造される。

【００４６】次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はこれによりなんら制限されるもの
ではない。

【００４７】実施例１　　上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、打錠機
にて圧縮成型して一錠２００ｍｇの錠剤を得た。この錠
剤一錠には、具体例１で得た薬剤２０ｍｇが含有されて
おり、成人１日５〜１５錠を数回にわけて服用する。

【００４８】実施例２　　上記の処方に従って■、■および■の一部を均一に
混合し、圧縮成型した後、粉砕し、■および■の残量を
加えて混合し、打錠機にて圧縮成型して一錠２００ｍｇ
の錠剤を得た。この錠剤一錠には、具体例２で得た化合
物２０ｍｇが含有されており、成人１日５〜１５錠を数
回にわけて服用する。

【００４９】実施例３　　上記の処方に従って■、■および■を均一に混合し
、常法によりねつ和し、押し出し造粒機により造粒し、
乾燥・解砕した後、■および■を混合し、打錠機にて圧
縮成型して一錠２００ｍｇの錠剤を得た。この錠剤一錠
には、具体例３で得た化合物２０ｍｇが含有されており
、成人１日５〜１５錠を数回にわけて服用する。

【００５０】実施例４　　上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、圧縮成
型機にて圧縮成型後、破砕機により粉砕し、篩別して顆
粒剤を得た。この顆粒剤１ｇには、具体例１で得た薬剤
１００ｍｇが含有されており、成人１日１〜３ｇを数回
にわけて服用する。

【００５１】実施例５　　上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、ねつ和
した。押し出し造粒機により造粒後、乾燥し、篩別して
顆粒剤を得た。この顆粒剤１ｇには、具体例２で得た化
合物１００ｍｇが含有されており、成人１日１〜３ｇを
数回にわけて服用する。

【００５２】実施例６　　上記の処方に従って■〜■を均一に混合し、２００
ｍｇを２号カプセルに充填した。このカプセル剤１カプ
セルには、具体例３で得た化合物２０ｍｇが含有されて
おり、成人１日５〜１５カプセルを数回にわけて服用す
る。

【００５３】実施例７

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ハマナスの花の抽出エキスを有効成分とす
る抗レトロウイルス剤。
【請求項２】下記式ＩＩ（ただし、Ｒは水素原子または水酸基を示す。）で表
される化合物を有効成分とする抗レトロウイルス剤。
【請求項３】下記式ＩＩＩＩ（ただし、Ｒは水素原子または水酸基を示す。）で
表される化合物を有効成分とする抗レトロウイルス剤。