JPH0398578A - 細胞培養による生物学的物質の調製方法 - Google Patents
細胞培養による生物学的物質の調製方法Info
- Publication number
- JPH0398578A JPH0398578A JP23342590A JP23342590A JPH0398578A JP H0398578 A JPH0398578 A JP H0398578A JP 23342590 A JP23342590 A JP 23342590A JP 23342590 A JP23342590 A JP 23342590A JP H0398578 A JPH0398578 A JP H0398578A
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- JP
- Japan
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- bioreactor
- cell
- induction
- cells
- biological substance
- Prior art date
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- Pending
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
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- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
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- Genetics & Genomics (AREA)
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- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
今日まで培養の誘導によって調製される活性物質、タン
パク質、酵素等の生物学的物質はバッチ式生産工程でし
か調製することができなかった。
パク質、酵素等の生物学的物質はバッチ式生産工程でし
か調製することができなかった。
これは例えば発酵槽のような培養器で細胞を生育させ、
そしてある状態に達すると誘導を行うことを意味する。
そしてある状態に達すると誘導を行うことを意味する。
活性物質に依存する期間後■一般に２、３日■生産物を
収集する。その後、発酵槽を分解し、洗浄し再び次の発
酵に備える。次の誘導が起こる前に、まず生育段階にお
けるバイオマスを再び確立する必要がある。この方法の
不利な点は発酵槽の準備、生育段階、誘導段階及び発酵
槽の洗浄からなる全工程が収集のたびに必要となること
及び低濃度の細胞しか得られないことに起因する低い容
積生産性である。さらに、大量の生産物を扱う発酵槽は
大容量でなければならず、それゆえ汚染によって大量の
液体培地が無駄Ｉこなる。
収集する。その後、発酵槽を分解し、洗浄し再び次の発
酵に備える。次の誘導が起こる前に、まず生育段階にお
けるバイオマスを再び確立する必要がある。この方法の
不利な点は発酵槽の準備、生育段階、誘導段階及び発酵
槽の洗浄からなる全工程が収集のたびに必要となること
及び低濃度の細胞しか得られないことに起因する低い容
積生産性である。さらに、大量の生産物を扱う発酵槽は
大容量でなければならず、それゆえ汚染によって大量の
液体培地が無駄Ｉこなる。
連続的生産方法はこれらの問題の原因とはならない。一
度、発酵槽を準備すれば生育段階が起き、中断すること
なく長時間にわたって発酵工程を続けることが可能であ
り、そしてかなり高濃度の細胞が得られる。これは容積
生産性を増大させ、発酵器の容量を減少できることを意
味する。従って、もし汚染された場合の材料の損失は少
ない。今日まで、必要な誘導なしに細胞が活性物質、ま
たはその前駆体を合威し、そして液体培地中に生物質を
放出する細胞培養から活性物質をうまく調製する方法が
とられていた。例としてはボウズ黒腫細胞（ Ｂ ｏｗ
ｅｓ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ） （生産
物、組織プラスミノーゲンアクテイベーター）、ハイブ
リドーマ細胞（ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｅｌｌｓ）
（生産物、モノクローナル抗体）または核酸組み換え
細胞（生産物、例えば第■因子）の細胞培養がある。連
続培養の他の有利な点はバッチ式生産に比べて例えば細
胞密度、栄養分濃度及び分解産物及びプロテアーゼのよ
うな望ましくない副産物に関する一定の培養条件が確立
できるため、生産物の質が高いことである。さらに、液
体培地中での生産物の残留時間が短いため、液体培地中
での例えばプロテアーゼまたは他の化学的相互作用によ
る生産物の分解もまた軽減される。
度、発酵槽を準備すれば生育段階が起き、中断すること
なく長時間にわたって発酵工程を続けることが可能であ
り、そしてかなり高濃度の細胞が得られる。これは容積
生産性を増大させ、発酵器の容量を減少できることを意
味する。従って、もし汚染された場合の材料の損失は少
ない。今日まで、必要な誘導なしに細胞が活性物質、ま
たはその前駆体を合威し、そして液体培地中に生物質を
放出する細胞培養から活性物質をうまく調製する方法が
とられていた。例としてはボウズ黒腫細胞（ Ｂ ｏｗ
ｅｓ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ） （生産
物、組織プラスミノーゲンアクテイベーター）、ハイブ
リドーマ細胞（ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｅｌｌｓ）
（生産物、モノクローナル抗体）または核酸組み換え
細胞（生産物、例えば第■因子）の細胞培養がある。連
続培養の他の有利な点はバッチ式生産に比べて例えば細
胞密度、栄養分濃度及び分解産物及びプロテアーゼのよ
うな望ましくない副産物に関する一定の培養条件が確立
できるため、生産物の質が高いことである。さらに、液
体培地中での生産物の残留時間が短いため、液体培地中
での例えばプロテアーゼまたは他の化学的相互作用によ
る生産物の分解もまた軽減される。
本発明の方法によって培養の誘導を必要とする生産工程
の場合においても連続的生産が可能となる。
の場合においても連続的生産が可能となる。
本発明によって、誘導形式の範囲が実現化される。
ｌ．他の生物の感染による誘導
ウイルスは他の生物の例である。ウイルス及びウイルス
性抗体を調製し、ウイルスの感染によつて培養が誘導さ
れる。天然のウイルスの替わりに、遺伝子工学的手法に
よって組み換えられたウイルスを用いることも可能であ
り、そのため感染細胞は組み換えタンパク質を発現する
。これに関連して、昆虫細胞の培養及び例えばバキュロ
ウイルス（ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）発現系のようなウ
イルス発現系は特に興味深い。これらの発現系はウイル
スがヒトに感染しないということが特徴であり、これは
これらの系で発現された組み換え夕冫パク質をヒトに用
いる場合完全性が高いことを意味する。さらに、これら
の系では液体培地中に高濃度の生産物が得られることが
証明されており、高濃度である場合は精製が容易である
ため、経済面及び生産物の質の両面に対して実際的な効
果がみとめられる。しかしながら、今日までバッチ式の
生産工程しか取られておらず、上記の不利な点がみられ
る。
性抗体を調製し、ウイルスの感染によつて培養が誘導さ
れる。天然のウイルスの替わりに、遺伝子工学的手法に
よって組み換えられたウイルスを用いることも可能であ
り、そのため感染細胞は組み換えタンパク質を発現する
。これに関連して、昆虫細胞の培養及び例えばバキュロ
ウイルス（ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）発現系のようなウ
イルス発現系は特に興味深い。これらの発現系はウイル
スがヒトに感染しないということが特徴であり、これは
これらの系で発現された組み換え夕冫パク質をヒトに用
いる場合完全性が高いことを意味する。さらに、これら
の系では液体培地中に高濃度の生産物が得られることが
証明されており、高濃度である場合は精製が容易である
ため、経済面及び生産物の質の両面に対して実際的な効
果がみとめられる。しかしながら、今日までバッチ式の
生産工程しか取られておらず、上記の不利な点がみられ
る。
２．化学的要因の一時的または永続的変化による誘導
この場合、誘導は細胞が存在する化学的環境を変化させ
ることによってなされる。一般的に、この変化は物質を
添加することによってなされる。
ることによってなされる。一般的に、この変化は物質を
添加することによってなされる。
一般的に、この変化は物質を添加することによってなさ
れる。そのような方法の例としては動物細胞培養による
ＩＬ−２のようなリンフオ力インの生産がある。この場
合、誘導は液体培地中にホルボールエステル（ｐｈｏｒ
ｂｏｌ ｅｓｔｅｒ）を添加することによってなされ
る。一時的な変化は環境の変化を逆転すること、例えば
添加されていた物質を除去すること、沈澱または不活性
化すること、または例えば膜系によって除去することに
よってなされる。
れる。そのような方法の例としては動物細胞培養による
ＩＬ−２のようなリンフオ力インの生産がある。この場
合、誘導は液体培地中にホルボールエステル（ｐｈｏｒ
ｂｏｌ ｅｓｔｅｒ）を添加することによってなされ
る。一時的な変化は環境の変化を逆転すること、例えば
添加されていた物質を除去すること、沈澱または不活性
化すること、または例えば膜系によって除去することに
よってなされる。
３．物理的要因の一時的または永続的変化による誘導
変化される要因は例えばｐＨ、酸素分圧（＋）Ｏ！）、
酸化還元電位または粘性のような液体培地の物理化学的
条件及びまた例えば、温度、光及び他の放射作用、電流
及び磁場作用、その他多数の物理的要因である。言及さ
れる例としては熱ショックタンパク質の調製があり、そ
のため細胞は一定時間、高温に曝される。
酸化還元電位または粘性のような液体培地の物理化学的
条件及びまた例えば、温度、光及び他の放射作用、電流
及び磁場作用、その他多数の物理的要因である。言及さ
れる例としては熱ショックタンパク質の調製があり、そ
のため細胞は一定時間、高温に曝される。
誘導を必要とする方法において連続培養を可能とする本
発明の目的は以下に示すとおりに達威される。
発明の目的は以下に示すとおりに達威される。
Ａ）誘導が永久に続くか、または続くにちがいない場合
。
。
バイオリアクターＡにおいて細胞は培地注に懸濁して培
養される。バイオリアクターＡにおいてある細胞密度に
達すると、懸濁物は第２のバイオリアクターＢに連続的
に移され、そして新鮮な培地が同時に後者の充足の度合
が一定時間平均的に一定であるようにバイオリアクター
Ａに移される。
養される。バイオリアクターＡにおいてある細胞密度に
達すると、懸濁物は第２のバイオリアクターＢに連続的
に移され、そして新鮮な培地が同時に後者の充足の度合
が一定時間平均的に一定であるようにバイオリアクター
Ａに移される。
バイオリアクターＡにおける細胞密度及び細胞の生育速
度は懸濁物がバイオリアクターＡからバイオリアクター
Ｂに移されることによる容積流によって調整される。バ
イオリアクターＢの細胞が誘導される。生育及び生産物
生成の要因が最適になるように保存培地はバイオリアク
ターＢに連続的に徐々に添加される。食い尽された液体
培地、残留細胞、細胞破壊物、誘導物及び他の物質から
なるバイオリアクターＢの内容物は連続的に収集される
。バイオリアクタ−Ｂにおける平均在留時間は至適生産
物特性及び至適生産物収量に関する実験によって決定さ
れる。細胞の溶解を引き起すような誘導物の場合、これ
は例えば８０％の細胞が溶解した状態を言う。在留時間
はバイオリアクターＢの容量を選ぶことによって調整さ
れる。
度は懸濁物がバイオリアクターＡからバイオリアクター
Ｂに移されることによる容積流によって調整される。バ
イオリアクターＢの細胞が誘導される。生育及び生産物
生成の要因が最適になるように保存培地はバイオリアク
ターＢに連続的に徐々に添加される。食い尽された液体
培地、残留細胞、細胞破壊物、誘導物及び他の物質から
なるバイオリアクターＢの内容物は連続的に収集される
。バイオリアクタ−Ｂにおける平均在留時間は至適生産
物特性及び至適生産物収量に関する実験によって決定さ
れる。細胞の溶解を引き起すような誘導物の場合、これ
は例えば８０％の細胞が溶解した状態を言う。在留時間
はバイオリアクターＢの容量を選ぶことによって調整さ
れる。
Ｂ）誘導が単に一時的である場合。
この場合、誘導はバイオリアクターＢでされてはならず
、バイオリアクターＡからバイオリアクターＢへの転送
ラインにおいてであり、それによって細胞のバイオリア
クターＢへの転入が完了する。
、バイオリアクターＡからバイオリアクターＢへの転送
ラインにおいてであり、それによって細胞のバイオリア
クターＢへの転入が完了する。
この転送誘導の時間は転送ラインでの在留時間によって
監視され、それは適切な実験によって測定され、そして
ラインの長さ及び形、及び容積流によって調整される。
監視され、それは適切な実験によって測定され、そして
ラインの長さ及び形、及び容積流によって調整される。
それ以外の方法は永続誘導の場合に記載しｔ；方法と同
様である。
様である。
バイオリアクターＢより連続的に得られる収集物の精製
は回収容器に回収された後連続的にあるいはバッチ式で
行なわれる。種々孔径サイズの膜による分離、遠心分離
、カラムによる分離方法及びその他の既知の分離方法が
用いられる。精製方法は細胞培養及び用いた液体培地、
誘導、生産物及び生産物の精製度に関する必要条件によ
る。それぞれの生産物に対する精製方法の再考が必要で
ある。
は回収容器に回収された後連続的にあるいはバッチ式で
行なわれる。種々孔径サイズの膜による分離、遠心分離
、カラムによる分離方法及びその他の既知の分離方法が
用いられる。精製方法は細胞培養及び用いた液体培地、
誘導、生産物及び生産物の精製度に関する必要条件によ
る。それぞれの生産物に対する精製方法の再考が必要で
ある。
バイオリアクター及びポンプについてはその計測及び制
御技術は先行する技術に従って設計される。装置全体を
高準位のマスクコンピューターによって制御することが
好ましいが、個々の制御糸を用いることも可能である。
御技術は先行する技術に従って設計される。装置全体を
高準位のマスクコンピューターによって制御することが
好ましいが、個々の制御糸を用いることも可能である。
貯蔵容器、発酵容器及び収集容器間において液体培地及
びｍ胞懸濁物を転送するポンプの速度は好ましくは測光
法で細胞密度を測定することｌこよって、または細胞培
養の溶解の度合によって制御される。
びｍ胞懸濁物を転送するポンプの速度は好ましくは測光
法で細胞密度を測定することｌこよって、または細胞培
養の溶解の度合によって制御される。
バイオリアクターは例えば空気、０２．， Ｎ！、ＣＯ
，などのガス及び／またはガス様の混合物を直接液体に
吹きつけることによって通気されるか、または間接的に
、液体表面上または膜（中空繊維膜またはシリコンチュ
ーブ膜）を通して拡散させることによって通気され、そ
れらの膜はバイオリアクターの液体注に浸されているか
、または外部ループ中に置かれる。
，などのガス及び／またはガス様の混合物を直接液体に
吹きつけることによって通気されるか、または間接的に
、液体表面上または膜（中空繊維膜またはシリコンチュ
ーブ膜）を通して拡散させることによって通気され、そ
れらの膜はバイオリアクターの液体注に浸されているか
、または外部ループ中に置かれる。
下流の系の内容物による上流に組み入れられた系の汚染
を避けるために、系の間のすべての連結部に逆拡散を防
ぐトラップを装備することが好まれている。
を避けるために、系の間のすべての連結部に逆拡散を防
ぐトラップを装備することが好まれている。
第１図は本発明により好まれるバイオリアクターＡを含
む装置を示しており、液体培地は培地貯蔵容器４よりポ
ンプ８が装備されたライン６を経て制御された状態でそ
の中へ導入される。
む装置を示しており、液体培地は培地貯蔵容器４よりポ
ンプ８が装備されたライン６を経て制御された状態でそ
の中へ導入される。
このバイオリアクターＡ２はさらにｐＨｔ酸素分圧（ｐ
Ｏ，）、または相対湿度（γＨ）を制御するためにガス
が通る中空繊維膜５８が装備されている。さらにバイオ
リアクターＡ２には磁力撹拌器６２及び減圧弁（ＰＲＶ
）が付いたライン６６を経て排気容器７０と連結してお
り、そのラインには存在するウイルスを保持する中空繊
維フィルター８２が付いている。光度計１２及び逆拡牧
トバイオリアクターＡ２はバイオリアクター８１４と連
結しており、培地は保存培地１６の容器からボング２０
及び逆拡散トラップが装備されたライン１８を経て、そ
の中に供給される。バイオリアクターＢｌ４にはさらに
ガスが通過しそしてまたｐＨ及び酸素分圧（ＰＯ２）を
制御するために用いる中空繊維膜６０が装備されている
。さらに、バイオリアクタ−８１４には内容物を混合す
る磁力撹拌器６４が付いている。減圧弁が付いているラ
イン６８は、圧力補正のために使われそして存在するウ
イルスが保持される中空繊維８４を経て排気安全容器７
０に至る。バイオリアクタ−Ｂｌ４は光度計２４及び逆
拡散トラップが装備されたライン２２を経て第１の濾過
装備である第１貯留容器２６に連結し、この貯留容器２
６はさらに圧力補正のため、中空繊維フィルター８６が
付いてライン７８を経て排気安全容器７０と連結してい
る。
Ｏ，）、または相対湿度（γＨ）を制御するためにガス
が通る中空繊維膜５８が装備されている。さらにバイオ
リアクターＡ２には磁力撹拌器６２及び減圧弁（ＰＲＶ
）が付いたライン６６を経て排気容器７０と連結してお
り、そのラインには存在するウイルスを保持する中空繊
維フィルター８２が付いている。光度計１２及び逆拡牧
トバイオリアクターＡ２はバイオリアクター８１４と連
結しており、培地は保存培地１６の容器からボング２０
及び逆拡散トラップが装備されたライン１８を経て、そ
の中に供給される。バイオリアクターＢｌ４にはさらに
ガスが通過しそしてまたｐＨ及び酸素分圧（ＰＯ２）を
制御するために用いる中空繊維膜６０が装備されている
。さらに、バイオリアクタ−８１４には内容物を混合す
る磁力撹拌器６４が付いている。減圧弁が付いているラ
イン６８は、圧力補正のために使われそして存在するウ
イルスが保持される中空繊維８４を経て排気安全容器７
０に至る。バイオリアクタ−Ｂｌ４は光度計２４及び逆
拡散トラップが装備されたライン２２を経て第１の濾過
装備である第１貯留容器２６に連結し、この貯留容器２
６はさらに圧力補正のため、中空繊維フィルター８６が
付いてライン７８を経て排気安全容器７０と連結してい
る。
第１貯留容器２６の貯留物は逆拡散トラップが装備され
たライン３６を経て取り出される。第１貯たライン２８
を経て第１フィルター３２に転送され、このフィルター
３２により貯留物はライン３４を経て第１貯留容器２６
に再循環され、濾過物は逆拡散トラップが装備されたラ
イン３８を経て第２貯留容器４０に転送され、この第２
貯留容器４０は、さらに圧力補正したライン８０が装備
されており、中空繊維フィルター８６を経て排気安全容
器７０で終結する。さらに、第２貯留容器４０は逆拡散
トラップを含むライン５０が装備され、これを経てウイ
ルス濃縮物は取り出される。第２貯留容器４０より、懸
濁物はポング４４が装備されたライン４２を経て濾過装
置４６に供給され、該濾過装置４６の貯留物はライン４
８を経て第２貯留容器４０に送還され、そして該濾過装
置４６の濾過物は逆拡散トラップが装備されたライン５
４を経て取り出される。洗浄再液容器７６より、コンピ
ューターで制御して逆拡散トラップ及びポンプ７４が装
備されたライン７２を経て貯留容器２６及び４０に洗浄
液を供給することも可能である。
たライン３６を経て取り出される。第１貯たライン２８
を経て第１フィルター３２に転送され、このフィルター
３２により貯留物はライン３４を経て第１貯留容器２６
に再循環され、濾過物は逆拡散トラップが装備されたラ
イン３８を経て第２貯留容器４０に転送され、この第２
貯留容器４０は、さらに圧力補正したライン８０が装備
されており、中空繊維フィルター８６を経て排気安全容
器７０で終結する。さらに、第２貯留容器４０は逆拡散
トラップを含むライン５０が装備され、これを経てウイ
ルス濃縮物は取り出される。第２貯留容器４０より、懸
濁物はポング４４が装備されたライン４２を経て濾過装
置４６に供給され、該濾過装置４６の貯留物はライン４
８を経て第２貯留容器４０に送還され、そして該濾過装
置４６の濾過物は逆拡散トラップが装備されたライン５
４を経て取り出される。洗浄再液容器７６より、コンピ
ューターで制御して逆拡散トラップ及びポンプ７４が装
備されたライン７２を経て貯留容器２６及び４０に洗浄
液を供給することも可能である。
装置の種々の部分に及びそこからの供給及び排出ライン
の制御はプロセスコンピューター５６によって行なわれ
る。
の制御はプロセスコンピューター５６によって行なわれ
る。
以下の実施例は発明をより詳細に説明するためのもので
ある。
ある。
実施例ｌ
連続懸濁培養におけるＢＨＫ２１クローンｌ３細胞の調
製。
製。
ＢＨＫ２ １クローンＢ細胞（ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８
４１００５０１ ［フローラポラトリーメッケンハイ
ム（Ｆｌｏｗ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｍｅｃ
ｋａｎｈｅｉｍ）より入手）］を単一層ビンあるいは回
転ビンで生育させる。植え継ぎには、培養の初期に急速
な生育を保証するために発酵槽中にｍＱあたり最低８×
１０’個の細胞が存在しなければならない。ＢＨＫ２１
クローンｌ３細胞の倍化時間は２４時間であった。連続
的な細胞の収集は３日後、細胞数がｍＱあたり少なくと
も４Ｘ１０’個になってすぐに開始できた。発酵の初期
においては、培地（アールの撹拌塩（ Ｅ ａｒｉａ’
ｓ Ｓ ｐｉｎｎｅｒ ｓａｌｔｓ）が入った９．
５ ３ ８ｇ／ｒｗｙｔｐ：Ｍ （最少必須培地）、２
．２ｇ／（ｌのＮａＨＣＯ，、ｌＯ．ＯｍＱ／ｆｆのＭ
ＥＭビタミン溶液、ｉｏ．ｏｍｌ２／ｆｆの非必須アミ
ノ酸、１０．０％／ａのウシ胎児血清、バイオアクター
に直接連結されている中空繊維束によって濾過滅菌）は
２ ４ ０ ｍＱｌ日の速度で添加され、それは１：１
２．５の希釈に相当し、そして生育に比例して１５００
ｍＱｌ日（１：２）にまで増加された。制御は内蔵の
光度計によって行った。細胞は微粒子担体なしで生育し
た。バイオアクターＡの反応容積は４ｇであり、液体の
容量は３Ｑであった。反応温度は３７゜Ｃであり、撹拌
速度１ ５ ０ ｒｐｍ１及びｐＨ ７ ．０及びｐｏ
ｚ４５％酸素は空気較正溶液中で確立した。基本的なガ
ス流速は４．５Ｍ分であった。
４１００５０１ ［フローラポラトリーメッケンハイ
ム（Ｆｌｏｗ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｍｅｃ
ｋａｎｈｅｉｍ）より入手）］を単一層ビンあるいは回
転ビンで生育させる。植え継ぎには、培養の初期に急速
な生育を保証するために発酵槽中にｍＱあたり最低８×
１０’個の細胞が存在しなければならない。ＢＨＫ２１
クローンｌ３細胞の倍化時間は２４時間であった。連続
的な細胞の収集は３日後、細胞数がｍＱあたり少なくと
も４Ｘ１０’個になってすぐに開始できた。発酵の初期
においては、培地（アールの撹拌塩（ Ｅ ａｒｉａ’
ｓ Ｓ ｐｉｎｎｅｒ ｓａｌｔｓ）が入った９．
５ ３ ８ｇ／ｒｗｙｔｐ：Ｍ （最少必須培地）、２
．２ｇ／（ｌのＮａＨＣＯ，、ｌＯ．ＯｍＱ／ｆｆのＭ
ＥＭビタミン溶液、ｉｏ．ｏｍｌ２／ｆｆの非必須アミ
ノ酸、１０．０％／ａのウシ胎児血清、バイオアクター
に直接連結されている中空繊維束によって濾過滅菌）は
２ ４ ０ ｍＱｌ日の速度で添加され、それは１：１
２．５の希釈に相当し、そして生育に比例して１５００
ｍＱｌ日（１：２）にまで増加された。制御は内蔵の
光度計によって行った。細胞は微粒子担体なしで生育し
た。バイオアクターＡの反応容積は４ｇであり、液体の
容量は３Ｑであった。反応温度は３７゜Ｃであり、撹拌
速度１ ５ ０ ｒｐｍ１及びｐＨ ７ ．０及びｐｏ
ｚ４５％酸素は空気較正溶液中で確立した。基本的なガ
ス流速は４．５Ｍ分であった。
用いた侵入圧は４０ｍｂａｒ Ｎ！、２０ｍｂａｒ
Ｏ，及び３ ０ ｍｂａｒｏ ！、及び制御しない空
気であった。
Ｏ，及び３ ０ ｍｂａｒｏ ！、及び制御しない空
気であった。
本実施例で用いた装置は以下の通りであった。
製造元：
培地の添加；ポンブＴＶ ＢＣＣルドル７ヴイツ
セル通り１ｌ ポンプＩ［［ ３４００ゲッチンゲン西ドイツ （Ｒｕｄｏｌｆ Ｗｉｓｓｅｌ Ｓｔｒ．ｌｌ３４
００ Ｇ６ｔｔｉｎｇｅｎ Ｗｅｓｔ − Ｇｅｒｍａｎｙ） 温度制御：ＴＥＭモジュール ＢＣＣ 温度センサー：ＰＴＩＯＯ シュラエル私書箱７４７ ４９２０レムゴ１ 西ドイツ （ Ｓ ｃｈｒａｅｒ Ｐｏｓｔｆａｃｈ ７４７ ４９２０ Ｌｅｍｇｏ Ｉ Ｗｅｓｔ Ｇｅｒｍａｎｙ） 外部ヒーター：Ｃｏｌｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ
ハーケーｂａｔｈ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔ ディー
ゼル通り４ＫＴ２ ７５００カールシュル
−４１００１−３９７３型 西ドイツ （Ｈａａｋｅ Ｄｉｅｓｅ１ ｓｔｒ． ４ 内部ヒーター：サーモスタット バスケット 撹拌： ＳＰＥモジュール ７５００ Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ ４１ Ｗｅｓｔ Ｇｅｒｍａｎｙ） ＢＢＣ及びハーケー及び ＩＢＴ ｅ．ｖ． ケルナーヴエツク ６ ３４００ゲッチンゲン 西ドイツ （Ｋｅｌｌｎｅｒｗｅｇ ６ ３４００ Ｇ５ｔｔｉｎｇｅｎ Ｗｅｓｔ Ｇｅｒｍａｎｙ） ＢＢＣ （つづき） 製造元：内部駆
動：容器のふたに強く固定、 撹拌プロペラが付いた 磁力撹拌子 外部駆動：収容した供給物内に組み立てそして水平に固
定された磁力 撹拌器 ｐＨコントロール ｐＨモジュール ＢＣＣ電極
：ｐＨ電極、オートクレープ インゴールド可能、ρＨ
範囲０〜１２ ジーメンス通り９４６５−３６−
９０−Ｋ９型 ６３７４ シュティンバッ
ハ／タウヌス 西ドイツ （ Ｉ ｎｇｏｌｄ Ｓ ｉｅｍｅｎｓ ｓｔｒ．９ ６３７４ Ｓ ｔｅｉｎｂａｃｈ／ Ｔａｕｎｕｓ Ｗｅｓｔ− Ｇ ｅｒｍａｎｙ） 酸素分圧制御：ｐＯｘモジュール ＢＣＣ電極：ｐＯｚ
電極、 インゴールドオートクレープ可
能 ７４５５／３２２７５６７０２型 （ Ｉ ｎｇｏｌｄ） （つづき） ガス供給： Ｅｌ形Ｉ 一流出コントロール弁、 測定管 ＦＤ−１／８−０８− Ｇ −５／ｍ 一磁力弁ホース コネクター５ｍｍｄ −ガス混合容器 別形ｒｉ：−マス７ローコン ユニット −ガス混合容器 製造元 フィッシャーアンドボー ドレンスフエルダ一通り ２ ３４００ゲッチンゲン （Ｆｉｓｃｈｅｒ ＆ Ｐｏｒｔｅｒ Ｄｒｅｎｓｆｅｌｄｅｒ ｓｔｒ． ２３４００ Ｇ
５ｔｔｉｎｇｅｎ） ＢＣＣ ＢＣＣ トロール ＭＫＳ シャツツポーゲン４３ ８００ミュンヘン８２ （ Ｓ ｃｈａｔｚｂｏｇｅｎ ４３ ８０００ Ｍｕｎｃｈｅｎ ８２ ＢＣＧ ドラツガーベルクＡＣリ ューベツクモイスリンガ ーアレ−５３／５５ ２４００リ 減圧器： Ｎｏ− Ｄ １ ４ ２ ／ Ｏ ｓ型ユー
ベツクｌ （Ｄｒｔｉｇｅｒｗｅｒｋ ＡＧ ＬｉｊｂｅｃｋＭ
ｏｉｓｌｉｎｇｅｒ Ａｌｌｅｅ ５３／５５ ２４００ Ｌｔｉｂｅｃｋ ｌ）圧縮空気
二連統気流 通気用空洞 アキュレル（Ｒ）ＰＰ 繊維：Ｓ６／２型、疎水性 （Ａｃｃｕｒｅｌ（ Ｒ ） Ｐ Ｐ ｔｙｐｅ Ｓ６／２） エンカーメンブラナ エンカーアクゾＡＧ オンダ一通り２８ ５６００ウツバータル２ Ｅ ｎｋａ−Ｍｅｍｂｒａｎａ Ｅ ｎｋａ− Ａ ｋｚｏ ＡＧ Ｑｎｄｅｒｓｔｒ． ２８ ５６００ Ｗｕｐｐｅｒｔａｌ ２）孔径サイズ：０
．５４μｍを越えない 製造元 （つづき） 巻き：液体面に対して垂直 必要物：３ｍ／１リットルの液体 水平コントロール ＮＩＶモジュール ＢＣＣ電極
オートクレープ可能、 テフロンカバー付き 細胞懸濁物 連続流出光度計 ＢＣＣ モニテツクＧｍｂＨ モーゼンブロイハーベツ ク２００ ４０００デュツセル ドルフ３０ （ＭｏｎｉＬｅｃ ＧｍｂＨ Ｍ５ｓｅｎｂｒｉｏｃｈｅｒ Ｗｅｇ２００ ４００
０ Ｄｔｉｓｓｅｌｄｏｒｆ３０） 実施例２ ＢＨＫ２ １細胞によるＮＤ（ニューキャツスル病、Ｎ
ｅｖ ｃａｓｔｌｅ Ｄ ｉｓｅａｓｅ）ワクチ
ンの連続生産以下の培地を細胞保存培地として用いた。
セル通り１ｌ ポンプＩ［［ ３４００ゲッチンゲン西ドイツ （Ｒｕｄｏｌｆ Ｗｉｓｓｅｌ Ｓｔｒ．ｌｌ３４
００ Ｇ６ｔｔｉｎｇｅｎ Ｗｅｓｔ − Ｇｅｒｍａｎｙ） 温度制御：ＴＥＭモジュール ＢＣＣ 温度センサー：ＰＴＩＯＯ シュラエル私書箱７４７ ４９２０レムゴ１ 西ドイツ （ Ｓ ｃｈｒａｅｒ Ｐｏｓｔｆａｃｈ ７４７ ４９２０ Ｌｅｍｇｏ Ｉ Ｗｅｓｔ Ｇｅｒｍａｎｙ） 外部ヒーター：Ｃｏｌｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ
ハーケーｂａｔｈ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔ ディー
ゼル通り４ＫＴ２ ７５００カールシュル
−４１００１−３９７３型 西ドイツ （Ｈａａｋｅ Ｄｉｅｓｅ１ ｓｔｒ． ４ 内部ヒーター：サーモスタット バスケット 撹拌： ＳＰＥモジュール ７５００ Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ ４１ Ｗｅｓｔ Ｇｅｒｍａｎｙ） ＢＢＣ及びハーケー及び ＩＢＴ ｅ．ｖ． ケルナーヴエツク ６ ３４００ゲッチンゲン 西ドイツ （Ｋｅｌｌｎｅｒｗｅｇ ６ ３４００ Ｇ５ｔｔｉｎｇｅｎ Ｗｅｓｔ Ｇｅｒｍａｎｙ） ＢＢＣ （つづき） 製造元：内部駆
動：容器のふたに強く固定、 撹拌プロペラが付いた 磁力撹拌子 外部駆動：収容した供給物内に組み立てそして水平に固
定された磁力 撹拌器 ｐＨコントロール ｐＨモジュール ＢＣＣ電極
：ｐＨ電極、オートクレープ インゴールド可能、ρＨ
範囲０〜１２ ジーメンス通り９４６５−３６−
９０−Ｋ９型 ６３７４ シュティンバッ
ハ／タウヌス 西ドイツ （ Ｉ ｎｇｏｌｄ Ｓ ｉｅｍｅｎｓ ｓｔｒ．９ ６３７４ Ｓ ｔｅｉｎｂａｃｈ／ Ｔａｕｎｕｓ Ｗｅｓｔ− Ｇ ｅｒｍａｎｙ） 酸素分圧制御：ｐＯｘモジュール ＢＣＣ電極：ｐＯｚ
電極、 インゴールドオートクレープ可
能 ７４５５／３２２７５６７０２型 （ Ｉ ｎｇｏｌｄ） （つづき） ガス供給： Ｅｌ形Ｉ 一流出コントロール弁、 測定管 ＦＤ−１／８−０８− Ｇ −５／ｍ 一磁力弁ホース コネクター５ｍｍｄ −ガス混合容器 別形ｒｉ：−マス７ローコン ユニット −ガス混合容器 製造元 フィッシャーアンドボー ドレンスフエルダ一通り ２ ３４００ゲッチンゲン （Ｆｉｓｃｈｅｒ ＆ Ｐｏｒｔｅｒ Ｄｒｅｎｓｆｅｌｄｅｒ ｓｔｒ． ２３４００ Ｇ
５ｔｔｉｎｇｅｎ） ＢＣＣ ＢＣＣ トロール ＭＫＳ シャツツポーゲン４３ ８００ミュンヘン８２ （ Ｓ ｃｈａｔｚｂｏｇｅｎ ４３ ８０００ Ｍｕｎｃｈｅｎ ８２ ＢＣＧ ドラツガーベルクＡＣリ ューベツクモイスリンガ ーアレ−５３／５５ ２４００リ 減圧器： Ｎｏ− Ｄ １ ４ ２ ／ Ｏ ｓ型ユー
ベツクｌ （Ｄｒｔｉｇｅｒｗｅｒｋ ＡＧ ＬｉｊｂｅｃｋＭ
ｏｉｓｌｉｎｇｅｒ Ａｌｌｅｅ ５３／５５ ２４００ Ｌｔｉｂｅｃｋ ｌ）圧縮空気
二連統気流 通気用空洞 アキュレル（Ｒ）ＰＰ 繊維：Ｓ６／２型、疎水性 （Ａｃｃｕｒｅｌ（ Ｒ ） Ｐ Ｐ ｔｙｐｅ Ｓ６／２） エンカーメンブラナ エンカーアクゾＡＧ オンダ一通り２８ ５６００ウツバータル２ Ｅ ｎｋａ−Ｍｅｍｂｒａｎａ Ｅ ｎｋａ− Ａ ｋｚｏ ＡＧ Ｑｎｄｅｒｓｔｒ． ２８ ５６００ Ｗｕｐｐｅｒｔａｌ ２）孔径サイズ：０
．５４μｍを越えない 製造元 （つづき） 巻き：液体面に対して垂直 必要物：３ｍ／１リットルの液体 水平コントロール ＮＩＶモジュール ＢＣＣ電極
オートクレープ可能、 テフロンカバー付き 細胞懸濁物 連続流出光度計 ＢＣＣ モニテツクＧｍｂＨ モーゼンブロイハーベツ ク２００ ４０００デュツセル ドルフ３０ （ＭｏｎｉＬｅｃ ＧｍｂＨ Ｍ５ｓｅｎｂｒｉｏｃｈｅｒ Ｗｅｇ２００ ４００
０ Ｄｔｉｓｓｅｌｄｏｒｆ３０） 実施例２ ＢＨＫ２ １細胞によるＮＤ（ニューキャツスル病、Ｎ
ｅｖ ｃａｓｔｌｅ Ｄ ｉｓｅａｓｅ）ワクチ
ンの連続生産以下の培地を細胞保存培地として用いた。
ＭＥＭ （最少必須培地）
及びアールの撹拌塩
（ Ｅａｒｌｅ’ｓ Ｓｐｉｎｎｅｒ ｓａｎｓ）
９．５４３ｇ／ＱＮａＨ Ｃ Ｏ ｓ
２．２ｇ／ＱＭＥＭビ
タミン溶液 １０．０ｍｆｆ／ｆｆウ
シ胎児血清 ２．０％／Ｑ培地は
バイオリアクターに直接連結した中空繊維束に通して濾
過することによって滅菌される。
９．５４３ｇ／ＱＮａＨ Ｃ Ｏ ｓ
２．２ｇ／ＱＭＥＭビ
タミン溶液 １０．０ｍｆｆ／ｆｆウ
シ胎児血清 ２．０％／Ｑ培地は
バイオリアクターに直接連結した中空繊維束に通して濾
過することによって滅菌される。
バイオリアクターＢへのウイルス接種（ウイルス）ウイ
ルス発酵槽にｌｏＯ＋ｎＱあたり７．Ｉ Ｘ Ｉ Ｏ’
ＩＤのウイルスを含むＢＨＫ単一層生育の培養物を接種
した。単一層培養物は最初の新鮮な細胞がバイオリアク
ターに添加される２日前に感染されていた。ウイルス発
酵槽へ接種するこの時点までは単一層培養の細胞面には
細胞溶解のいかなる跡が見られてはならない。ウイルス
の実際的な放出は発酵槽においてすなわち細胞リアクタ
ー（リアクターＡ）からの細胞が添加される時点で起ら
なければならない。
ルス発酵槽にｌｏＯ＋ｎＱあたり７．Ｉ Ｘ Ｉ Ｏ’
ＩＤのウイルスを含むＢＨＫ単一層生育の培養物を接種
した。単一層培養物は最初の新鮮な細胞がバイオリアク
ターに添加される２日前に感染されていた。ウイルス発
酵槽へ接種するこの時点までは単一層培養の細胞面には
細胞溶解のいかなる跡が見られてはならない。ウイルス
の実際的な放出は発酵槽においてすなわち細胞リアクタ
ー（リアクターＡ）からの細胞が添加される時点で起ら
なければならない。
バイオリアクターＡからの接種は、バイオリアクターＡ
からりアクターＢに６Ｘ１０＠個／ｍＱの細胞が１時間
あたりの流速が５０からｌｏｏｍ（２（細胞生育に依存
）、１時間あたり３．ＯＸ１０’から６．ＯＸＩＯ’個
の細胞の速度で添加された。バイオリアクターＢのりア
クター容積は同様に４Ｑであり、３Ｑの液体容量、温度
３７゜Ｃ，撹拌速度ｌ５ ０ ｒｐｍ，及びｐＨ７．０
及び４０．０％酸素の酸素分圧は空気較正溶液中で確立
された。基本的なガス流速は４．ＯＱｌ分であり、そし
て用いた侵入圧は４０ｍｂａｒ Ｎ２、２０ｍｂａｒ
Ｏ！及び３０ｍｂａｒＣＯ２、侵入圧を制御するこ
となく用いた空気であった。培地は２Ｑ／日の速度で添
加し、細胞は平均して１．２Ｘ１０”細胞７日の速度で
添加した。ウイルス収量は１．ＯＸＩＯ’ｌＤ／ｍ（２
＝２．ＯＸＩＯ”ＩＤ／日であり、その収集は８０％の
細胞が溶解した時点で行なった。バイオリアクタ−２の
装備は以下の特別な調整を除いてバイオリアクター■と
同じである。
からりアクターＢに６Ｘ１０＠個／ｍＱの細胞が１時間
あたりの流速が５０からｌｏｏｍ（２（細胞生育に依存
）、１時間あたり３．ＯＸ１０’から６．ＯＸＩＯ’個
の細胞の速度で添加された。バイオリアクターＢのりア
クター容積は同様に４Ｑであり、３Ｑの液体容量、温度
３７゜Ｃ，撹拌速度ｌ５ ０ ｒｐｍ，及びｐＨ７．０
及び４０．０％酸素の酸素分圧は空気較正溶液中で確立
された。基本的なガス流速は４．ＯＱｌ分であり、そし
て用いた侵入圧は４０ｍｂａｒ Ｎ２、２０ｍｂａｒ
Ｏ！及び３０ｍｂａｒＣＯ２、侵入圧を制御するこ
となく用いた空気であった。培地は２Ｑ／日の速度で添
加し、細胞は平均して１．２Ｘ１０”細胞７日の速度で
添加した。ウイルス収量は１．ＯＸＩＯ’ｌＤ／ｍ（２
＝２．ＯＸＩＯ”ＩＤ／日であり、その収集は８０％の
細胞が溶解した時点で行なった。バイオリアクタ−２の
装備は以下の特別な調整を除いてバイオリアクター■と
同じである。
リアクター■から供給される細胞と関連する培地添加の
制御 リアクタ−■に設置された水平コントロールによって時
間のずれがある２つの磁力弁を開いた。
制御 リアクタ−■に設置された水平コントロールによって時
間のずれがある２つの磁力弁を開いた。
磁力弁ｌ：リアクタ−■への細胞流出を可能としＩこ
。
。
磁力弁２：磁力弁Ｉを閉じ、細胞供給ラインを洗うため
にリアクター■へ培地を供給す るラインを開いた。
にリアクター■へ培地を供給す るラインを開いた。
開いた時間：５から１０秒
排気の除去：
製造元
７リット：孔径サイズ０．４μｍ ＢＣＣＮａＯＨ
槽：アルカリ槽、２％ 濃度溶液 フィルター：濁度クラスＳ エンカアクゾ孔径サイ
ズ０．０５μＩｎ％ （Ｅｎｋａ Ａｋｚｏ）疎水性 製造元； ウイルス価を決定する 連続流出光度計 ＢＣＣ細胞変
性効果の測定： 細胞破壊物は濾過設備１の孔径サイズＯ。４５ｎｍの細
胞フィルター（Ａｋｚｏ ＭＤ ０２０ Ｐ２Ｎ
）及び濾過設備２のウイルスフィルター５０．０００Ｎ
ＭＧＧ（Ａｋｚｏ ＶＩＯＯＩ）によって分離した。
槽：アルカリ槽、２％ 濃度溶液 フィルター：濁度クラスＳ エンカアクゾ孔径サイ
ズ０．０５μＩｎ％ （Ｅｎｋａ Ａｋｚｏ）疎水性 製造元； ウイルス価を決定する 連続流出光度計 ＢＣＣ細胞変
性効果の測定： 細胞破壊物は濾過設備１の孔径サイズＯ。４５ｎｍの細
胞フィルター（Ａｋｚｏ ＭＤ ０２０ Ｐ２Ｎ
）及び濾過設備２のウイルスフィルター５０．０００Ｎ
ＭＧＧ（Ａｋｚｏ ＶＩＯＯＩ）によって分離した。
ギアポンプ、水平コントロール及び磁力弁はＢＣＣによ
って製造された。適当なソフトウエア付きの産業用マス
ターコンピューターＦＬ３１はメスルス（Ｍｅｓｓｒｓ
）によった。バイオリアクター及びフィルターの高単位
同調装置はミュンザーアンドディール（ＭＱｎｚｅｒ
ａｎｄ Ｄｉｃｈ＋）製のものを用いた。マスター
コンピューター系で密度測定することによってバイオリ
アクターＡにおける細胞生育を、細胞変性（溶解）効果
によってバイオリアクターＢ＋：おけるウイルスの増殖
を監視し、そしてバイオリアクターＡに供給される培地
の最適条件のコントロール及びバイオリアクターＢから
の細胞排出を行った。濾過系の種々速度で操作するポン
プは得られＩ；すべての材料がすみやかに作られるよう
にコンビュークーによって制御された。
って製造された。適当なソフトウエア付きの産業用マス
ターコンピューターＦＬ３１はメスルス（Ｍｅｓｓｒｓ
）によった。バイオリアクター及びフィルターの高単位
同調装置はミュンザーアンドディール（ＭＱｎｚｅｒ
ａｎｄ Ｄｉｃｈ＋）製のものを用いた。マスター
コンピューター系で密度測定することによってバイオリ
アクターＡにおける細胞生育を、細胞変性（溶解）効果
によってバイオリアクターＢ＋：おけるウイルスの増殖
を監視し、そしてバイオリアクターＡに供給される培地
の最適条件のコントロール及びバイオリアクターＢから
の細胞排出を行った。濾過系の種々速度で操作するポン
プは得られＩ；すべての材料がすみやかに作られるよう
にコンビュークーによって制御された。
本発明の主なる特徴及び態様は以下のとおりである。
ｌ．前培養を第１バイオリアクターによって完工し、次
に細胞を第２バイオリアクターに連続的に移し、第２バ
イオリアクターに移す際あるいはその後生物学的物質の
生産を引き起こす誘導を起こさせることを特徴とする細
胞培養の誘導後調製されるべき生物学的物質調製のため
の連続的方法。
に細胞を第２バイオリアクターに連続的に移し、第２バ
イオリアクターに移す際あるいはその後生物学的物質の
生産を引き起こす誘導を起こさせることを特徴とする細
胞培養の誘導後調製されるべき生物学的物質調製のため
の連続的方法。
２，誘導がウィルス、あるいは化学的または物理的変化
によって行われる第１項記載の方法。
によって行われる第１項記載の方法。
第１図は本発明により好まれるバイオリアクタ−Ａ２を
含む装置を示しており、液体培地は培地貯蔵容器４より
ポンプ８が装備されたライン６を経て制御された状態で
その中へ導入される。
含む装置を示しており、液体培地は培地貯蔵容器４より
ポンプ８が装備されたライン６を経て制御された状態で
その中へ導入される。
Claims (1)
- １、前培養を第１バイオリアクターによって完工し、次
に細胞を第２バイオリアクターに連続的に移し、第２バ
イオリアクターに移す際あるいはその後生物学的物質の
生産を引き起こす誘導を起こさせることを特徴とする細
胞培養の誘導後調製されるべき生物学的物質調製のため
の連続的方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19893930140 DE3930140A1 (de) | 1989-09-09 | 1989-09-09 | Verfahren zur herstellung von biologischen materialien in zellkulturen und vorrichtungen |
| DE3930140.0 | 1989-09-09 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0398578A true JPH0398578A (ja) | 1991-04-24 |
Family
ID=6389075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23342590A Pending JPH0398578A (ja) | 1989-09-09 | 1990-09-05 | 細胞培養による生物学的物質の調製方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0417531A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0398578A (ja) |
| DD (1) | DD297663A5 (ja) |
| DE (1) | DE3930140A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20040008859A (ko) * | 2002-07-19 | 2004-01-31 | 삼성전자주식회사 | 디스플레이장치 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2365631T3 (es) * | 1997-12-24 | 2011-10-07 | Abbott Biologicals B.V. | Reparación de células para la producción de material biológico. |
| DE102004032318B4 (de) * | 2004-07-02 | 2015-08-20 | Technische Hochschule Mittelhessen | Herstellung einer konzentrierten Lösung aus biologischen Substanzen |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS215108B2 (en) * | 1977-07-15 | 1982-07-30 | Wellcome Found | Method of making the interferrone |
| DE2821466A1 (de) * | 1978-05-17 | 1979-11-29 | Thomae Gmbh Dr K | Verbessertes verfahren zur herstellung von humaninterferon |
| DE2946275A1 (de) * | 1979-11-16 | 1981-05-27 | Dr. Karl Thomae Gmbh, 7950 Biberach | Verbessertes verfahren zur herstellung von humaninterferon aus lymphoblastoiden zellen |
| JP2509630B2 (ja) * | 1987-07-29 | 1996-06-26 | 三井石油化学工業株式会社 | 培養方法及び培養装置 |
-
1989
- 1989-09-09 DE DE19893930140 patent/DE3930140A1/de not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-08-25 EP EP90116305A patent/EP0417531A1/de not_active Withdrawn
- 1990-09-05 JP JP23342590A patent/JPH0398578A/ja active Pending
- 1990-09-07 DD DD34389790A patent/DD297663A5/de not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20040008859A (ko) * | 2002-07-19 | 2004-01-31 | 삼성전자주식회사 | 디스플레이장치 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0417531A1 (de) | 1991-03-20 |
| DD297663A5 (de) | 1992-01-16 |
| DE3930140A1 (de) | 1991-03-21 |
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