JPH03191864A - 間接凝集免疫測定方法及び装置 - Google Patents
間接凝集免疫測定方法及び装置Info
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- JPH03191864A JPH03191864A JP1329556A JP32955689A JPH03191864A JP H03191864 A JPH03191864 A JP H03191864A JP 1329556 A JP1329556 A JP 1329556A JP 32955689 A JP32955689 A JP 32955689A JP H03191864 A JPH03191864 A JP H03191864A
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Abstract
め要約のデータは記録されません。
Description
抗体反応を利用した間接凝集免疫測定方法及び装置に関
するものである。
結合反応を抗原又は抗体を結合させた粒子を用いて感度
を高めて測定する間接凝集反応は、受身凝集反応又は逆
受身凝集反応と呼ばれ多量検体の簡易測定法として広く
実用化されている。
定法)やRIA(放射免疫測定法)等に比べ操作が簡便
であり、最終の抗原抗体反応の有無の判定にも特別な機
器を要しない等の特徴がある。
化が困難である等の欠点があり、今もって部分自動化の
域を出ない状態である。
V字型のマイクロプレートに所定の希釈検体溶液に所定
の試薬粒子液を添加、撹拌後静置し、粒子の沈降パター
ンから抗原抗体反応の有無を判断する方法(以下静置法
と省略する)と、■字型のマイクロプレートの底に粒子
を遠心力を用いて強制的に沈降させ、その後マイクロプ
レートを傾斜させた状態に置き、粒子の底からの剥離状
況から抗原抗体反応の有無を判断する方法(以下遠心法
と省略する)とがある。前者の静置法による沈降パター
ンから抗原抗体反応の有無を判断する場合には、静置中
の振動によるパターンの乱れ、例えばスリップ現象の誘
発、パターン面積の減少等が起こりやすく自動化を困難
にしていた。更に静置法のもう一つの欠点は、パターン
形成の完成までに、使用する粒子によっても異なるが、
約0゜5乃至3時間もの長時間を要することである。又
後者の遠心法では、遠心機を用いて沈降を数分で行ない
、その後マイクロプレートを傾斜させ数分でパターン読
取りが行なえ、パターン形成中、振動が加わることによ
るパターンの乱れを心配する必要がない等の利点がある
が、実際上、遠心機を用いて自動的に免疫測定を行なう
ことは技術的に困難である。
る検体としては、例えば血清、尿、その他体液等を挙げ
ることができる。従来の方法では、検体は希釈して使用
するものの、血球と血清の分離操作を省き全血液(以下
全血と省略する)を使用すると底面の一点に集中して沈
降パターンを形成するため血液成分が凝集像に大きな影
響を及ぼし間違った判定結果を与えることが知られてい
る。
のとなっている。
免疫測定法等においても、血球と血清の分離操作は、非
特異反応を回避するため前処理操作として用いられてい
るのが現状である。
らには間接凝集反応の全過程を自動化した磁気沈降促進
型の間接凝集免疫測定方法及び装置を提供することであ
る。
「凝集免疫測定方法Jという)は、試薬として磁性体粒
子又は磁性体を含む粒子を用いて間接凝集反応による免
疫測定系を構成し、反応後該粒子を含む成分を容器底部
に磁力により強制沈降させ、次に該容器を傾斜させ、沈
降粒子の該容器からの剥離状況から免疫反応の有無を判
断する凝集免疫測定方法である。本発明の凝集免疫測定
方法において、磁性体粒子又は磁性体を含む粒子を含む
成分を磁力により強制沈降させるには、電磁石を用いて
も永久磁石を用いてもよい。
疫測定用試薬を受容する該免疫測定用試薬の磁性体又は
磁性体を含む粒子を含む成分の沈降を磁力によって強制
沈降させる手段と、該容器を傾斜させた状態に置く手段
とを有するものである。即ち、本発明においては、磁石
を用いた沈降促進台上で磁性体粒子を強制的に沈降させ
、容器底面に引き寄せ、あたかも遠心法で沈降させたの
と同じ作用を得ることができる。これにより従来の静置
法で要した時間の三分の一以下の短時間で、しかも振動
等に影響を受けない測定方法と装置を完成することがで
きる。
に強制的に沈降させるために磁性体の中でも強磁性体を
好適に使用することができる。また本発明において試薬
として使用できる磁性体粒子又は磁性体を含む粒子の具
体例は以下の通りである。
9−195161号参照)、磁性体を血清アルブミン等
で被覆した粒子、同様に合成ポリマーで被覆した粒子、
合成ポリマー中磁性体を含んだ粒子等である。
遠心法で用いられる血清、尿、体液等の他全血を使用で
きる。全血を使用した場合には、間接凝集反応後、磁性
体粒子又は磁性体を含む粒子成分だけを強制沈降させる
ため、血球成分は、容器全体に広がり底面の一点には磁
性体粒子又は磁性体を含む粒子を含む成分のみ選択的に
集中する。このため全血を使用しても磁性体粒子又は磁
性体を含む粒子を含む成分のパターン形成に及ぼす影響
は、事実上無視することができる。また、血球成分によ
り容器が全体に赤色に着色し判定しにくい場合には、プ
レートの上をフィルターで覆い判定を容易にすることが
できる。フィルターとしては、赤色系に着色したものを
使用することができ、ガラス、フィルム、セロハン等よ
り選ぶことができる。
チック類、例えばポリスチレン樹脂、ABS樹脂又はガ
ラス製のU字型又はV字型の容器等を使用できる。これ
ら容器の大きさは問わないが、大量の検体を処理し、取
り扱いが容易であり、鮮明な像を得るために、ポリスチ
レン製のV字型マイクロプレートを好適に用いることが
できる。
疫測定用検体及び免疫測定用試薬を受容するマイクロプ
レート、該試薬の磁性体粒子又は磁性体を含む粒子を含
む成分を磁力により強制沈降させる手段、及び該マイク
ロプレートを傾斜させた状態にする手段とが必須である
が、これを全自動の凝集測定装置として実際に使用する
際には、第1図に示すように、マイクロプレート供給装
置1、検体分注袋W2、試薬分注装置3、検体及び試薬
撹拌装置4、マイクロプレート低部に磁性体粒子又は磁
性体を含む粒子を磁力で沈降させる強制沈降促進装置5
、引続いてこれを傾斜した状態に置く傾斜処理装置6、
沈降粒子成分のマイクロプレートからの傾斜による剥離
状況を読取るパターン読取り装置7及び使用済みマイク
ロプレートを回収するマイクロプレート回収装置8を組
合せて構成することができる。第1図に示す構成例は、
本発明の測定装置の一実施例であって、本発明を限定す
るものではない。
る。
作フェリコロイド含有ゼラチン粒子の調製 フェリコロイドを含むゼラチン粒子(平均粒径約3ミク
ロン、特開昭59−195151号参照)に抗ヒトAF
P抗体(ウサギ、DACO)を用い、Barnard等
の方法(CIin、 Chem、+ 27 (6)
832(1981))に従い、抗ヒトAFP感作フェリ
コロイド含有ゼラチン粒子を調製した。
に希釈し、これを1字型マイクロプレートにとり、これ
に実施例1で調製した上記の抗ヒトAFP感作フェリコ
ロイド含有ゼラチン粒子の0.09%含有の分散液25
μlを加え、撹拌し、10分間経過後、磁石を用いた沈
降促進台に5分間静置し、その後磁力の影響の無いパタ
ーン読取台でマイクロプレートを約70@傾け、マイク
ロプレートのウェル底部からの沈降粒子の剥離状況から
免疫反応の有無を判定した。ウェル底部より、沈降粒子
の剥離の見られるものを陰性判定、見られないものを陽
性判定とした。
Pmono (α−フェトプロティン測定用試薬、富
士レビオ株式会社製)を用いた従来の静置法(従来法)
について、それぞれの力価の相関図を第2図に示す。
検体血清を血清希釈用液で10倍に希釈しこれを1字型
マイクロプレートの1大目に50μmとり、2穴目から
8穴目まで希釈用液25μlを加え、さらに1大目より
25μlとり2穴目から8穴目まで順次2n希釈した。
リコロイド含有ゼラチン粒子の0.14%含有の分散液
25μ2を加え、3分間撹拌し、磁石を用いた沈降促進
台に3分間静置し、その後磁力の影響の無いパターン読
取台でマイクロプレートを約45°傾け、マイクロプレ
ートのウェル底部からの沈降粒子の剥離状況から免疫反
応の有無を実施例2と同様に判定した。結果を表1に示
す。
体血清を血清希釈用液で5倍に希釈した希釈血清に健常
人の全血を等量加え、これをV字型マイクロプレート1
穴目にとり、実施例3と同様な測定を行い結果を得た。
は、磁性体粒子又は磁性体を含む粒子を担体として用い
、これを磁力を用いて容器底部に強制沈降させ、次に該
容器を傾斜させ、沈降粒子容器からの剥離状況から抗原
抗体反応の有無を判定するものであるから、従来の遠心
法と同じ効果を磁性体粒子と磁力で達成でき、従来の遠
心法では困難である全自動化も容易に達成できる。さら
に従来の静置法よりもはるかに短時間でかつ振動等の影
響を全く受けることなく、又遠心法では全く不可能であ
る全血を用いての測定が可能である。
は、それぞれの測定結果に実質的に対応する相関関係が
あり、従来の静置法に代えて使用できる。
血清、尿、体液等の他全血を用いての測定も可能であり
、より簡便な方法を提供する。
集免疫測定装置の一構成例を示すブロック図、第2図は
、本発明による免疫測定方法と従来の静置法(従来法)
についての、それぞれの力価の相関図である。 1・・・マイクロプレート供給装置、2・・・検体分注
装置、3・・・試薬分注装置、4・・・検体及び試薬撹
拌装置、5・・・強制沈降促進装置、6・・・傾斜処理
装置、7・・・パターン読取り装置、8・・・マイクロ
プレート回収装置。
Claims (3)
- (1)磁性体粒子又は磁性体を含む粒子を用いる間接凝
集免疫測定法において (イ)該粒子を容器底部に磁力により強制沈降させる段
階 (ロ)該容器を傾斜させる段階 (ハ)該粒子の該容器底部からの剥離状態を判断する段
階 からなる該測定法。 - (2)検体として全血液を用いてなる、請求項(1)記
載の方法 - (3)免疫測定用検体及び免疫測定用試薬を受容する容
器と、該免疫測定用試薬の磁性体粒子又は磁性体を含む
粒子を含む成分を沈降を磁力によって強制沈降させる手
段と、該容器を傾斜させる手段とを有することを特徴と
する間接凝集免疫測定装置。
Priority Applications (8)
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---|---|---|---|
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ES90120939T ES2054195T3 (es) | 1989-10-31 | 1990-10-31 | Ensayo inmunologico de aglutinacion indirecta y aparato para el mismo. |
DE69007587T DE69007587T2 (de) | 1989-10-31 | 1990-10-31 | Indirektes Agglutinationsimmunnachweisverfahren und Vorrichtung dafür. |
AU65720/90A AU626044B2 (en) | 1989-10-31 | 1990-10-31 | Indirect agglutination immunoassay and apparatus therefor |
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05297001A (ja) * | 1992-04-15 | 1993-11-12 | Fujirebio Inc | 磁性粒子を用いた自動免疫測定方法及び装置 |
JPH06324041A (ja) * | 1993-05-17 | 1994-11-25 | Fujirebio Inc | 間接凝集免疫測定法及びこれに用いる沈降パターン測定装置 |
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Citations (2)
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JPH02107968A (ja) * | 1988-10-15 | 1990-04-19 | Olympus Optical Co Ltd | 磁性粒子を用いた免疫学的測定方法 |
JPH02124464A (ja) * | 1988-07-20 | 1990-05-11 | Olympus Optical Co Ltd | 磁性マーカー粒子を用いた免疫学的測定方法 |
-
1989
- 1989-12-21 JP JP1329556A patent/JP2683944B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
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