JPH03184999A - 磁性蛋白質接合体およびその製造方法 - Google Patents
磁性蛋白質接合体およびその製造方法Info
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- JPH03184999A JPH03184999A JP2157799A JP15779990A JPH03184999A JP H03184999 A JPH03184999 A JP H03184999A JP 2157799 A JP2157799 A JP 2157799A JP 15779990 A JP15779990 A JP 15779990A JP H03184999 A JPH03184999 A JP H03184999A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、式■
Ｍ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ−５−Ｐ Ｉ（式
中、ｎは１〜６、好ましくは１または２、とくに好まし
くはｌであり、Ｍは分散性の、磁気に反応する、アミノ
基を有する物質または粒子であり、Ｐは蛋白質である）
で示される磁性蛋白質接合体に関する。
中、ｎは１〜６、好ましくは１または２、とくに好まし
くはｌであり、Ｍは分散性の、磁気に反応する、アミノ
基を有する物質または粒子であり、Ｐは蛋白質である）
で示される磁性蛋白質接合体に関する。
Ｐは１個または２個以上のスルフヒドリル基が、天然に
存在するかまたはジスルフィド結合の還元によって発生
させるかもしくは化学反応によって導入される蛋白質で
ある。
存在するかまたはジスルフィド結合の還元によって発生
させるかもしくは化学反応によって導入される蛋白質で
ある。
Ｐはとくに、免疫グロブリンまたは免疫グロ６−
プリン残基、好ましくはモノクローナル抗体またはＦａ
ｂ、 Ｆａｂ’もしくはＦ（ａｂ’）２フラグメント、
抗原または酵素、ホルモン、レクチンもしくは成長因子
の残基である。
ｂ、 Ｆａｂ’もしくはＦ（ａｂ’）２フラグメント、
抗原または酵素、ホルモン、レクチンもしくは成長因子
の残基である。
Ｐは好ましくはＩｇＧまたはＩｇＭクラスのモノクロー
ナル抗体であり、とくに体液中もしくは塩水溶液中に溶
解型で存在する抗原に対するモノクローナル抗体、また
は細胞上に発現される抗原に対するモノクローナル抗体
であり、この場合細胞はとくに骨髄系もしくはリンパ系
の細胞、または末梢血液の細胞とくにＢリンパ球、１０
７１球もしくはそれらの前駆体細胞、または腫瘍細胞と
くに骨髄の腫瘍細胞である。これらの細胞は赤血球、細
菌、マイコプラズマまたは原生動物であってもよい。ま
た、ウィルスも本発明の範囲内での細胞とみなすことが
できる。
ナル抗体であり、とくに体液中もしくは塩水溶液中に溶
解型で存在する抗原に対するモノクローナル抗体、また
は細胞上に発現される抗原に対するモノクローナル抗体
であり、この場合細胞はとくに骨髄系もしくはリンパ系
の細胞、または末梢血液の細胞とくにＢリンパ球、１０
７１球もしくはそれらの前駆体細胞、または腫瘍細胞と
くに骨髄の腫瘍細胞である。これらの細胞は赤血球、細
菌、マイコプラズマまたは原生動物であってもよい。ま
た、ウィルスも本発明の範囲内での細胞とみなすことが
できる。
Ｍは金属酸化物核と、アミノ基を有する外皮コートから
なる分散性粒子であることが好まし− く、一群の常磁性物質を金属酸化物核に組込むことがで
きて、直径約０．１〜約１００μ、好ましくは約０．１
〜約１．５μの粒子である。
なる分散性粒子であることが好まし− く、一群の常磁性物質を金属酸化物核に組込むことがで
きて、直径約０．１〜約１００μ、好ましくは約０．１
〜約１．５μの粒子である。
本発明はまた、式１で示される磁性蛋白質接合体の製造
方法ならびに塩水溶液または体液から、溶解した抗原、
受容体、基質、補因子または炭水化物決定基を特異的に
除去するための式■の磁性蛋白質接合体の使用、および
診断補材の一部としてもしくは診断補材として、とくに
骨髄細胞の枯渇またはＨＬＡ型判定のための使用に関す
る。
方法ならびに塩水溶液または体液から、溶解した抗原、
受容体、基質、補因子または炭水化物決定基を特異的に
除去するための式■の磁性蛋白質接合体の使用、および
診断補材の一部としてもしくは診断補材として、とくに
骨髄細胞の枯渇またはＨＬＡ型判定のための使用に関す
る。
骨髄移植は多くの場合、とくにある種の白血病および汎
骨髄機能性障害（汎骨髄痔）の処置に際しての唯一の治
療手段である。
骨髄機能性障害（汎骨髄痔）の処置に際しての唯一の治
療手段である。
白血病およびある種のリンパ性腫瘍の患者は、きわめて
高用量の全身放射線照射および／または侵襲性の化学療
法が時にある。この種類の治療は、すべての血球の前駆
体である骨髄の正常８ 幹細胞の完全な破壊を招来する。したがって患者は、適
当な供血者から骨髄の再輸注を受ける。
高用量の全身放射線照射および／または侵襲性の化学療
法が時にある。この種類の治療は、すべての血球の前駆
体である骨髄の正常８ 幹細胞の完全な破壊を招来する。したがって患者は、適
当な供血者から骨髄の再輸注を受ける。
それによって受血者の骨髄腔に細胞が転移増殖し、造血
系および免疫系の再生が可能になる。
系および免疫系の再生が可能になる。
この方法は、同種骨髄移植と呼ばれる。
同種骨髄移植に伴う高率の危険はとくに、骨髄再輸注で
患者に移入される供血者の１０７１球が受血者の細胞を
異物として認識して攻撃、破壊することが原因になる。
患者に移入される供血者の１０７１球が受血者の細胞を
異物として認識して攻撃、破壊することが原因になる。
この骨髄不寛容性（ｂｏｎｅ ｍａｒｅｏｗ １ｎｔ
ｏｌｅｒａｎｃｅ）は患者にとって致命的となる場合が
多く、移植片対宿主反応または移植片対宿主病（ＧＶＨ
Ｄ）と呼ばれる。この移植片対宿主病に伴う危険は、一
方では、とくに適合した受血者、通常は血縁者からの正
確に型の一致した骨髄を患者へ再輸注することによって
減少させることができる。また他方では、患者への輸注
前に、たとえば受血者の骨髄中の１０７１球に代表され
るような望ましくない細胞集団の選択的除去によっても
危険を減少させることができる。この受血者のＴ細胞の
除去はたとえば、補体の存在下における除去すべき細胞
の選択的溶解もしくはいわゆる免疫トキシンを用いたＴ
細胞の選択的傷害、または他の方法たとえば骨髄の磁性
細胞枯渇（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｃｅｌｌｄｅｐｌｅｔｉ
ｏｎ）によって行うことができる。
ｏｌｅｒａｎｃｅ）は患者にとって致命的となる場合が
多く、移植片対宿主反応または移植片対宿主病（ＧＶＨ
Ｄ）と呼ばれる。この移植片対宿主病に伴う危険は、一
方では、とくに適合した受血者、通常は血縁者からの正
確に型の一致した骨髄を患者へ再輸注することによって
減少させることができる。また他方では、患者への輸注
前に、たとえば受血者の骨髄中の１０７１球に代表され
るような望ましくない細胞集団の選択的除去によっても
危険を減少させることができる。この受血者のＴ細胞の
除去はたとえば、補体の存在下における除去すべき細胞
の選択的溶解もしくはいわゆる免疫トキシンを用いたＴ
細胞の選択的傷害、または他の方法たとえば骨髄の磁性
細胞枯渇（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｃｅｌｌｄｅｐｌｅｔｉ
ｏｎ）によって行うことができる。
この種類の骨髄細胞枯渇は、比較的簡単な方法たとえば
骨髄のＴ細胞に対して特異的で、その結果そのＴ細胞に
のみ結合するマウスモノクローナル抗体とともに骨髄を
インキュベートすることにより実施できる。マウスモノ
クローナル抗体に負荷されたこのＴ細胞は、第二工程に
おいてそれをたとえば磁性粒子に結合させたウサギ抗−
マウス免疫グロブリンとインキュベートすると１０７１
球は磁性材料に特異的に負荷され、したがって磁石を用
いて骨髄からの除去が可能になる（これに関してはＶａ
ｒｔｄａｌら０ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、 ４３． ３６６
〜３７１． １９８７およびそれに引用された文献参照
）。
骨髄のＴ細胞に対して特異的で、その結果そのＴ細胞に
のみ結合するマウスモノクローナル抗体とともに骨髄を
インキュベートすることにより実施できる。マウスモノ
クローナル抗体に負荷されたこのＴ細胞は、第二工程に
おいてそれをたとえば磁性粒子に結合させたウサギ抗−
マウス免疫グロブリンとインキュベートすると１０７１
球は磁性材料に特異的に負荷され、したがって磁石を用
いて骨髄からの除去が可能になる（これに関してはＶａ
ｒｔｄａｌら０ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、 ４３． ３６６
〜３７１． １９８７およびそれに引用された文献参照
）。
同様の方法で骨髄から他の細胞集団たとえば腫瘍細胞を
除去することも可能で、これはいわゆる自家骨髄移植の
場合に重要である（これに関しては、Ｋｖａｌｈｅｉｍ
ら： Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ４７゜８４
６〜８５１．１９８７およびそれに引用された文献参照
）。これはＫｖａｌｈｅｉｍら（前出）によって記述さ
れているように、腫瘍細胞を認識するモノクローナル抗
体を直接磁性粒子に結合させることもできて、この場合
には上述の第二の抗体（ウサギ抗−マウス抗体）は不要
になる。
除去することも可能で、これはいわゆる自家骨髄移植の
場合に重要である（これに関しては、Ｋｖａｌｈｅｉｍ
ら： Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ４７゜８４
６〜８５１．１９８７およびそれに引用された文献参照
）。これはＫｖａｌｈｅｉｍら（前出）によって記述さ
れているように、腫瘍細胞を認識するモノクローナル抗
体を直接磁性粒子に結合させることもできて、この場合
には上述の第二の抗体（ウサギ抗−マウス抗体）は不要
になる。
磁性粒子に結合されるモノクローナルまたはポリクロー
ナル抗体を用いる上述の骨髄枯渇方法はまだきわめて新
しく、今後の開発と試験を要するものである。この目的
に適当な磁性粒子は現在様々の形態で市販されていて、
その製造方法もいくつかの特許文献に記載されている１
− 〔たとえばＣｈａｇｎｏｎら： ＥＰ ０１２５９９５
Ａ２号（１９８３年５月１２日付米国特許出願第４９
３９９１号による優先権主張） 、Ａｄｖａｎｃｅｄ
Ｍａｇｎｅｔｉｃｓｓ またはＵｇｈｅｌｓｔａｄら：
ｗｏ ８３０３９２０号、１９８３年１１月１０日、
５ＩＮＴＥＦ参照〕。これらの磁性粒子としては、常磁
性物質を組込むことができる金属酸化物核から構成され
、その核がたとえば蛋白質とのカップリングに使用でき
るアミノフェニル、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシ
ルまたはスルフヒドリル基のような反応性の基をもっこ
とができる上皮コートによって取囲まれている粒子が知
られている（ Ｃｈａｇｎｏｎら： ＥＰ ０１２５９
９５ Ａ２号）。
ナル抗体を用いる上述の骨髄枯渇方法はまだきわめて新
しく、今後の開発と試験を要するものである。この目的
に適当な磁性粒子は現在様々の形態で市販されていて、
その製造方法もいくつかの特許文献に記載されている１
− 〔たとえばＣｈａｇｎｏｎら： ＥＰ ０１２５９９５
Ａ２号（１９８３年５月１２日付米国特許出願第４９
３９９１号による優先権主張） 、Ａｄｖａｎｃｅｄ
Ｍａｇｎｅｔｉｃｓｓ またはＵｇｈｅｌｓｔａｄら：
ｗｏ ８３０３９２０号、１９８３年１１月１０日、
５ＩＮＴＥＦ参照〕。これらの磁性粒子としては、常磁
性物質を組込むことができる金属酸化物核から構成され
、その核がたとえば蛋白質とのカップリングに使用でき
るアミノフェニル、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシ
ルまたはスルフヒドリル基のような反応性の基をもっこ
とができる上皮コートによって取囲まれている粒子が知
られている（ Ｃｈａｇｎｏｎら： ＥＰ ０１２５９
９５ Ａ２号）。
たとえばカルボキシル基を有する粒子は縮合剤の存在下
に、蛋白質のアミノ基と反応できることが知られている
（Ｃｈａｇｎｏｎら：ＥＰ ０１２５９９５Ａ２号）。
に、蛋白質のアミノ基と反応できることが知られている
（Ｃｈａｇｎｏｎら：ＥＰ ０１２５９９５Ａ２号）。
さらにまたアミノ基を有する磁性粒子をグルタルアルデ
ヒドを用いて蛋白質にカップリング２− させることも知られている。この場合、カップリングは
それぞれのアミノ基を介して起こる（ Ｃｈａｇｎｏｎ
ら： ＥＰ ０１２５９９５ Ａ２号）。
ヒドを用いて蛋白質にカップリング２− させることも知られている。この場合、カップリングは
それぞれのアミノ基を介して起こる（ Ｃｈａｇｎｏｎ
ら： ＥＰ ０１２５９９５ Ａ２号）。
さらにまた、ヒドロキシル基を有する粒子はｐ−トルエ
ンスルホニルクロリドとの反応によって活性化すること
ができ、この方法で活性化された粒子は蛋白質のアミノ
基と反応できることも知られている（ Ｋｖａｌｈｅｉ
ｍら： Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ４７．８
４６〜８５１．１９８７）。
ンスルホニルクロリドとの反応によって活性化すること
ができ、この方法で活性化された粒子は蛋白質のアミノ
基と反応できることも知られている（ Ｋｖａｌｈｅｉ
ｍら： Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、 ４７．８
４６〜８５１．１９８７）。
これらのカップリング方法はすべて、蛋白質をその遊離
アミノ基を介してそれぞれ粒子に付着させる点で共通し
ている。しかしながら、アミノ基を介するこのようなカ
ップリングは、抗体の特異性および反応性を時に損なう
ことがあるので、モノクローナル抗体の場合、かなりの
欠点となる。これは、抗体内のアミノ基は全分子にわた
っていわばランダムに分布し、すなわちＦａｂフラグメ
ントの抗原結合部位にも存在す１３− るという事実によるもので、これらのアミノ基を介する
カップリングにより特異性の喪失を招くからである。
アミノ基を介してそれぞれ粒子に付着させる点で共通し
ている。しかしながら、アミノ基を介するこのようなカ
ップリングは、抗体の特異性および反応性を時に損なう
ことがあるので、モノクローナル抗体の場合、かなりの
欠点となる。これは、抗体内のアミノ基は全分子にわた
っていわばランダムに分布し、すなわちＦａｂフラグメ
ントの抗原結合部位にも存在す１３− るという事実によるもので、これらのアミノ基を介する
カップリングにより特異性の喪失を招くからである。
また、粒子が酸化鉄を含むスチレン／ジビニルベンゼン
共重合体から構成されている場合、蛋白質はポリスチレ
ンに非特異的に結合することから、抗体は化学的結合に
よらず、純粋に吸着によって磁性粒子上に捕捉されるこ
とが知られている。
共重合体から構成されている場合、蛋白質はポリスチレ
ンに非特異的に結合することから、抗体は化学的結合に
よらず、純粋に吸着によって磁性粒子上に捕捉されるこ
とが知られている。
しかしながら、抗体の特異性および反応性の損傷はこの
方法の場合も考えなければならない。
方法の場合も考えなければならない。
この方法のもう一つの重大な欠点は、吸着によって結合
した抗体が骨髄枯渇時に再び脱着し、枯渇骨髄の再輸注
に際して患者にまた投与されることになり、これが、と
くにモノクローナル抗体で以前に治療が試みられていた
場合に重篤な副作用を招くことが考えられる。しかしな
がら、この問題は、磁性粒子へ抗体を共有結合で１４− 付着させることで解決できることが知られている。
した抗体が骨髄枯渇時に再び脱着し、枯渇骨髄の再輸注
に際して患者にまた投与されることになり、これが、と
くにモノクローナル抗体で以前に治療が試みられていた
場合に重篤な副作用を招くことが考えられる。しかしな
がら、この問題は、磁性粒子へ抗体を共有結合で１４− 付着させることで解決できることが知られている。
また、ポリスチレン基剤の磁性粒子には、細胞に侵襲を
与える傾向があるほか、さらにそれら自体が細胞に非特
異的に付着するという重大な欠点が知られている。
与える傾向があるほか、さらにそれら自体が細胞に非特
異的に付着するという重大な欠点が知られている。
このような技術水準に出発し、）・本発明の目的は、モ
ノクローナル抗体をａ）共有結合により、ｂ）それらの
アミノ基を介することなく、磁性粒子にカップリングさ
せる方法を開発することにある。換言すれば、本発明の
目的は、抗体の抗原結合部位を変化させないカッブリ〕
・グ方法または抗体のカップリングが抗体結合部位から
離れた位置で起こるカップリング方法を見出すことにあ
る。
ノクローナル抗体をａ）共有結合により、ｂ）それらの
アミノ基を介することなく、磁性粒子にカップリングさ
せる方法を開発することにある。換言すれば、本発明の
目的は、抗体の抗原結合部位を変化させないカッブリ〕
・グ方法または抗体のカップリングが抗体結合部位から
離れた位置で起こるカップリング方法を見出すことにあ
る。
本発明の目的は式■
Ｍ−ＮＨ−ＣＯ−（Ｃ）Ｉ２）。−５−Ｐ Ｉ
の磁性蛋白質接合体を製造することによって達５ 威された。
の磁性蛋白質接合体を製造することによって達５ 威された。
アミノ基をもつ磁性粒子を、反応性の基としてマレイミ
ド官能基を有する磁性粒子に変換し、この基をスルフヒ
ドリル基を有する蛋白質と接合させることはすでに提案
されている。この場合の蛋白質中のスルフヒドリル基は
すでに天然に存在するもの、また化学的手段によって導
入されるものもしくは存在するジスルフィド結合の還元
によって発生させるもののいずれでもよい。
ド官能基を有する磁性粒子に変換し、この基をスルフヒ
ドリル基を有する蛋白質と接合させることはすでに提案
されている。この場合の蛋白質中のスルフヒドリル基は
すでに天然に存在するもの、また化学的手段によって導
入されるものもしくは存在するジスルフィド結合の還元
によって発生させるもののいずれでもよい。
反応性の基として遊離のアミノ基をもつ磁性粒子は、反
応性の基としてヨードアセチルまたはブロモアセチル官
能基をもつ磁性粒子に直接変換できることが見出された
。この種類の粒子は新規である。
応性の基としてヨードアセチルまたはブロモアセチル官
能基をもつ磁性粒子に直接変換できることが見出された
。この種類の粒子は新規である。
ヨードアセチルまたはブロモアセチル官能基をもつ磁性
粒子がさらに、スルフヒドリル基を有する蛋白質に容易
に接合できることも明らか１６− にされた。この場合の蛋白質中のスルフヒドリル基は、
すでに天然に存在するもの、また化学的手段によって導
入されるかもしくは存在するジスルフィド結合の還元に
よって発生させるものいずれでもよい。
粒子がさらに、スルフヒドリル基を有する蛋白質に容易
に接合できることも明らか１６− にされた。この場合の蛋白質中のスルフヒドリル基は、
すでに天然に存在するもの、また化学的手段によって導
入されるかもしくは存在するジスルフィド結合の還元に
よって発生させるものいずれでもよい。
とくに、ヨードアセチルまたはブロモアセチル官能基を
もつ磁性粒子は、抗体の鋼量のジスルフィド結合が、磁
性粒子のヨードアセチルまたはブロモアセチル官能基と
の反応を誘発してチオエーテル結合を形成できる遊離Ｓ
Ｈ基へ選択的還元で変換される場合には、容易にモノク
ローナル抗体と接合させることができる。モノクローナ
ル抗体を磁性粒子にカップリングさせるこの様式も同様
に新規である。
もつ磁性粒子は、抗体の鋼量のジスルフィド結合が、磁
性粒子のヨードアセチルまたはブロモアセチル官能基と
の反応を誘発してチオエーテル結合を形成できる遊離Ｓ
Ｈ基へ選択的還元で変換される場合には、容易にモノク
ローナル抗体と接合させることができる。モノクローナ
ル抗体を磁性粒子にカップリングさせるこの様式も同様
に新規である。
チオエーテル結合を介して磁性粒子にカップリングさせ
た抗体の特異性および反応性は、驚くべきことに、完全
に保持されていることが見出された。抗体の蝶番領域を
介したカップリン７ グは抗原結合部位に変化も傷害も与えないことを意味し
ている。この点に、先に述べたような純粋な吸着でもア
ミノ基との反応を介してでも、磁性粒子に抗体が捕捉さ
れると、接合された抗体の特異性および反応性の両者が
損なわれる可能性があった従来のカップリング方法と比
較して、本発明がとくに有利な理由がある。しかも、抗
体が磁性粒子に化学的に結合した結果、本発明による磁
性抗体接合体のたとえば骨髄枯渇のための使用時に粒子
から脱着することがなく、本発明は吸着によるカップリ
ングに比較して有利である。
た抗体の特異性および反応性は、驚くべきことに、完全
に保持されていることが見出された。抗体の蝶番領域を
介したカップリン７ グは抗原結合部位に変化も傷害も与えないことを意味し
ている。この点に、先に述べたような純粋な吸着でもア
ミノ基との反応を介してでも、磁性粒子に抗体が捕捉さ
れると、接合された抗体の特異性および反応性の両者が
損なわれる可能性があった従来のカップリング方法と比
較して、本発明がとくに有利な理由がある。しかも、抗
体が磁性粒子に化学的に結合した結果、本発明による磁
性抗体接合体のたとえば骨髄枯渇のための使用時に粒子
から脱着することがなく、本発明は吸着によるカップリ
ングに比較して有利である。
さらに、時として起こる磁性粒子上への抗体の非特異的
吸着は、適当な界面活性剤の添加によって防止されまた
は脱着させることができることが明らかにされた。
吸着は、適当な界面活性剤の添加によって防止されまた
は脱着させることができることが明らかにされた。
さらに、本発明による磁性抗体接合体は、その高い特異
性のため、たとえば骨髄枯渇に際し８ てとくに有利であることが明らかにされた。
性のため、たとえば骨髄枯渇に際し８ てとくに有利であることが明らかにされた。
さらに、本発明による磁性抗体接合体は、その高い特異
性により、診断方法の一部としてまたは診断補材として
、たとえば、とくにＨＬＡ型の判定に有利なことが明ら
かにされた。
性により、診断方法の一部としてまたは診断補材として
、たとえば、とくにＨＬＡ型の判定に有利なことが明ら
かにされた。
本発明の磁性抗体接合体の製造は、以下に骨髄細胞に対
する各種モノクローナル抗体およびポリクローナルウサ
ギ免疫グロブリンについての実施例によって説明するが
、これらの実施例は本発明を限定するものではない。さ
らに、本発明によって製造された磁性抗体接合体例の骨
髄細胞の枯渇への使用を同様に実施例として説明するが
、本発明の使用もこの実施例に限定されるものではない
。
する各種モノクローナル抗体およびポリクローナルウサ
ギ免疫グロブリンについての実施例によって説明するが
、これらの実施例は本発明を限定するものではない。さ
らに、本発明によって製造された磁性抗体接合体例の骨
髄細胞の枯渇への使用を同様に実施例として説明するが
、本発明の使用もこの実施例に限定されるものではない
。
式Ｉの磁性蛋白質接合体の製造方法ニ
アミノ基をもつ磁性粒子Ｍを適当な溶媒中で、アミノ基
と反応し、式■ １９ （式中、ｎは１または２であり、Ｘは塩素、臭素または
ヨウ素原子である）で示されるハロゲノアシルスペーサ
ー化合物と反応させると、アミド結合を形成して式■ Ｍ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ ＩＩＩの化
合物が得られる。これを最後に、蛋白質を変性させない
適当な塩含有水性溶媒たとえば生理食塩溶液またはリン
酸緩衝食塩溶液中で、スルフヒドリル基を有する蛋白質
Ｐと反応させると式１の化合物が得られ、ついで得られ
た式１の化合物を適当な界面活性剤たとえばＴｗｅｅｎ
を添加して洗浄し、存在する非共有結合で結合した蛋白
質を除去する。
と反応し、式■ １９ （式中、ｎは１または２であり、Ｘは塩素、臭素または
ヨウ素原子である）で示されるハロゲノアシルスペーサ
ー化合物と反応させると、アミド結合を形成して式■ Ｍ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ−Ｘ ＩＩＩの化
合物が得られる。これを最後に、蛋白質を変性させない
適当な塩含有水性溶媒たとえば生理食塩溶液またはリン
酸緩衝食塩溶液中で、スルフヒドリル基を有する蛋白質
Ｐと反応させると式１の化合物が得られ、ついで得られ
た式１の化合物を適当な界面活性剤たとえばＴｗｅｅｎ
を添加して洗浄し、存在する非共有結合で結合した蛋白
質を除去する。
式■の化合物の磁性粒子へのカップリングに適当な溶媒
は、それぞれのカップリングに際し２〇− て使用すされる磁性粒子の物理的および磁気的性質を損
なわないような構成でなければならない。
は、それぞれのカップリングに際し２〇− て使用すされる磁性粒子の物理的および磁気的性質を損
なわないような構成でなければならない。
とくにサイズ、分散性および表面特性が使用される溶媒
によって損なわれてはならない。磁性粒子に適当な溶媒
の例としては、たとえばＥＰ０１２５９９５ Ａ２号ま
たはＷｏ ８３０３９２０号に記載されているように、
水とジメチルホルムアミドの混合物を挙げることができ
る。
によって損なわれてはならない。磁性粒子に適当な溶媒
の例としては、たとえばＥＰ０１２５９９５ Ａ２号ま
たはＷｏ ８３０３９２０号に記載されているように、
水とジメチルホルムアミドの混合物を挙げることができ
る。
カップリング度（抗体μｇ／鉄ｒｎｇ）の測定鉄は原子
吸光によって測定し、窒素はキエルダール法によって測
定した。カップリングした蛋白質の窒素値は次の式によ
って計算された。
吸光によって測定し、窒素はキエルダール法によって測
定した。カップリングした蛋白質の窒素値は次の式によ
って計算された。
式中、Ｐ−Ｎは蛋白質窒素、Ｔｏｔ−Ｎは総窒素、Ｆｅ
は鉄である。
は鉄である。
粒子に結合した蛋白質量（蛋白質μｇ／鉄ｍｙ）は鉄１
ｍｇあたりの蛋白質窒素量に係数６．２５を乗２１ じて計算された。計算されたカップリング率を第１表に
まとめる。
ｍｇあたりの蛋白質窒素量に係数６．２５を乗２１ じて計算された。計算されたカップリング率を第１表に
まとめる。
細胞の枯渇方法
枯渇すべき細胞混合物の塩含有溶液好ましくは生理的水
溶液または体験中懸濁液を式■の化合物と、適当な温度
たとえば０°Ｃ〜４０°Ｃで、好ましくは振盪しながら
、また好ましくは滅菌条件下に、適当な時間インキュベ
ートし、ついで磁性粒子を適当な磁石を用いて溶液から
除去する。
溶液または体験中懸濁液を式■の化合物と、適当な温度
たとえば０°Ｃ〜４０°Ｃで、好ましくは振盪しながら
、また好ましくは滅菌条件下に、適当な時間インキュベ
ートし、ついで磁性粒子を適当な磁石を用いて溶液から
除去する。
適当な温度の例はＱ’Ｏ，室温または３７°Ｃであるが
、室温が好ましい。インキュベーションの時間は各場合
の使用された温度、抗体の結合反応性によって変動する
が、たとえば数分からたとえば２時間までとすることが
できる。インキュベーションはたとえば室温で、たとえ
ば１０〜２０分の時間行うのが好ましい。
、室温が好ましい。インキュベーションの時間は各場合
の使用された温度、抗体の結合反応性によって変動する
が、たとえば数分からたとえば２時間までとすることが
できる。インキュベーションはたとえば室温で、たとえ
ば１０〜２０分の時間行うのが好ましい。
可溶性生体内分子の単離方法
２
この方法は、細胞の枯渇方法とほぼ同様である。
実施例：
以下の実施例は本発明を詳細に例示するものであって、
本発明を限定するものではない。
本発明を限定するものではない。
上述の方法でモノクローナル抗体と反応させた磁性粒子
は以下、「マグネトビーズ」と呼ぶこととし、それぞれ
特定の抗体名を前につけてその特異性を示す。
は以下、「マグネトビーズ」と呼ぶこととし、それぞれ
特定の抗体名を前につけてその特異性を示す。
実施例 ｌ：
ＥＰ ０１２５９９５ Ａ２号に開示された磁性粒子と
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルヨードアセテートの接
合 ４Ｘ３００μＱの市販磁性粒子の懸濁液（ＢｉｏＭａｇ
Ｒ。
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルヨードアセテートの接
合 ４Ｘ３００μＱの市販磁性粒子の懸濁液（ＢｉｏＭａｇ
Ｒ。
Ａｄｖａｎｃｅｄ ＭａｇｎｅＬｉｃｓ）を３回、各回
１０ｒｎ（ｌのリン酸緩衝食塩溶液、ｐＨ７，２（ＰＢ
Ｓ）で洗浄し、それぞれＰＢＳＥｔｎＱ中に再懸濁した
。これらの懸濁液のそれぞれに、２ｍＱの乾燥ジメチル
ホルムアミ２３− ド中Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルヨードアセテート
（ＮＨＩＡ ： Ｒｅｃｔｏｒら、Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、 Ｍａｔｈ。
１０ｒｎ（ｌのリン酸緩衝食塩溶液、ｐＨ７，２（ＰＢ
Ｓ）で洗浄し、それぞれＰＢＳＥｔｎＱ中に再懸濁した
。これらの懸濁液のそれぞれに、２ｍＱの乾燥ジメチル
ホルムアミ２３− ド中Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルヨードアセテート
（ＮＨＩＡ ： Ｒｅｃｔｏｒら、Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、 Ｍａｔｈ。
２４、３２１−３３６．１９７８） １０＋ｎｇの新た
に調製した溶液を加え、この混合物を室温で１時間振盪
した。
に調製した溶液を加え、この混合物を室温で１時間振盪
した。
次に粒子を３０００ Ｘ ｙで遠心分離して除去し、各
回それぞれＰＢＳ １０ｍＱで３回洗浄し、ＰＢＳ ｐ
Ｈ７，２のａ） ５＋ｎＬ ｂ）４．３ｍＯ，、ｃ）３
．６＋＋１１２およびｄ）２．９ｍ１２に懸濁した。
回それぞれＰＢＳ １０ｍＱで３回洗浄し、ＰＢＳ ｐ
Ｈ７，２のａ） ５＋ｎＬ ｂ）４．３ｍＯ，、ｃ）３
．６＋＋１１２およびｄ）２．９ｍ１２に懸濁した。
実施例 ２：
ＥＰ ０１２５９９５ Ａ２号に開示された磁性粒子と
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルブロモアセテートの接
合 接合は実施例１と同様にしてＮ−ヒドロキシスクシンイ
ミジルブロモアセテート（ＮＨＢｒＡ）と実施した。Ｎ
ＨＢｒＡはＮＨＩＡの製造の場合と同様にＲｅｃｔｏｒ
らの方法（前出）によって製造される。
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルブロモアセテートの接
合 接合は実施例１と同様にしてＮ−ヒドロキシスクシンイ
ミジルブロモアセテート（ＮＨＢｒＡ）と実施した。Ｎ
ＨＢｒＡはＮＨＩＡの製造の場合と同様にＲｅｃｔｏｒ
らの方法（前出）によって製造される。
実施例 ３：
実施例１のようにして活性化した粒子へのポリ４−
クローナルウサギ抗−マウス免疫グロブリン（ＲＡＭ）
のカップリング リン酸緩衝食塩溶液（５００μＱ）中ポリクローナルウ
サギ抗−マウス免疫グロブリン３ｍｇをジチオスレイト
ール３ｍｇと混合し、室温で３０分間インキュベートし
た。還元された抗体は、リン酸緩衝食塩溶液、ｐＨ７，
２中Ｓｅｐ、ｈａｄｅｘ ０２５を通してゲルが過によ
って溶出容量４．２ｍＱ中に単離され、これを実施例１
と同様にして製造した粒子懸濁液に以下のように加えた
。
のカップリング リン酸緩衝食塩溶液（５００μＱ）中ポリクローナルウ
サギ抗−マウス免疫グロブリン３ｍｇをジチオスレイト
ール３ｍｇと混合し、室温で３０分間インキュベートし
た。還元された抗体は、リン酸緩衝食塩溶液、ｐＨ７，
２中Ｓｅｐ、ｈａｄｅｘ ０２５を通してゲルが過によ
って溶出容量４．２ｍＱ中に単離され、これを実施例１
と同様にして製造した粒子懸濁液に以下のように加えた
。
ａ：添加せず（対照）
ｂ ： ０．７ｍＱ添加（蛋白質約０．５＋ｕｇ）ｃ
： １．４ｍＱ添加（蛋白質約１．０＋ｕ）ｄ ： ２
．１ｍＱ添加（蛋白質約１．５＋ｕｇ）この混合物（各
５ ｍＱ’）をそれぞれ室温で１時間振盪しながらイン
キュベートした。ついで粒子を３０００ ｘ ｇで遠心
分離して除去し、各回１０ｍＱのＰＢＳで３回洗浄し、
５ＴｎＱのＰＢＳ’、 ｐＨ７，２中に再２５− 懸濁し、４°Ｃで保存した。分析データは第１表にまと
める。
： １．４ｍＱ添加（蛋白質約１．０＋ｕ）ｄ ： ２
．１ｍＱ添加（蛋白質約１．５＋ｕｇ）この混合物（各
５ ｍＱ’）をそれぞれ室温で１時間振盪しながらイン
キュベートした。ついで粒子を３０００ ｘ ｇで遠心
分離して除去し、各回１０ｍＱのＰＢＳで３回洗浄し、
５ＴｎＱのＰＢＳ’、 ｐＨ７，２中に再２５− 懸濁し、４°Ｃで保存した。分析データは第１表にまと
める。
実施例 ４゜
ポリクローナルウサギ抗−マウス免疫グロブリン（ＲＡ
Ｍ）の、実施例２におけるように活性化した粒子へのカ
ップリング カップリングは実施例３と同様に実施した。
Ｍ）の、実施例２におけるように活性化した粒子へのカ
ップリング カップリングは実施例３と同様に実施した。
分析データは第１表にまとめる。
実施例 ５：
モノクローナル抗体ＢＭＡ ０８１（抗−ＣＤ８ 、
ＩｇＧ２ａ）の、実施例１におけるようにして活性化し
た粒子へのカップリング ＰＢＳ （５０ＤＱ）中２ｍｇのＢＭＡ ０８１をジチ
オスレイトール１ｍｇと混合し、室温で３０分間インキ
ュベートした。還元された抗体を、リン酸緩衝食塩溶液
、ｐＨ７，２中５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５を通したゲル
濾過によって溶出容量３．６ｍＱ中に単離し、実施例ｉ
と同様にして調製した粒子懸濁液ａ −ｄに以６− 下のように加えた。
ＩｇＧ２ａ）の、実施例１におけるようにして活性化し
た粒子へのカップリング ＰＢＳ （５０ＤＱ）中２ｍｇのＢＭＡ ０８１をジチ
オスレイトール１ｍｇと混合し、室温で３０分間インキ
ュベートした。還元された抗体を、リン酸緩衝食塩溶液
、ｐＨ７，２中５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５を通したゲル
濾過によって溶出容量３．６ｍＱ中に単離し、実施例ｉ
と同様にして調製した粒子懸濁液ａ −ｄに以６− 下のように加えた。
ａ：添加せず（対照）
ｂ ： ０．４ｍＱ添加（蛋白質約０．２ｍｉ＋）ｃ
： １．２ｍ４添加（蛋白質約０．６ｍｇ）ｄ ： ２
．ＯｍＱ添加（蛋白質約１．０ｍｇ）混合物（各約５
ｍＱ）をそれぞれ振盪しながら室温で１時間インキュベ
ートした。ついで、粒子を３０００ Ｘ ｙで遠心分離
して除去し、各回１０ｍＱのＰＢＳで３回洗浄し、５ｍ
ＱのＰＢＳ、 ｐＨ７，２に再懸濁し、４°Ｃで保存し
た。分析データは第１表にまとめる。
： １．２ｍ４添加（蛋白質約０．６ｍｇ）ｄ ： ２
．ＯｍＱ添加（蛋白質約１．０ｍｇ）混合物（各約５
ｍＱ）をそれぞれ振盪しながら室温で１時間インキュベ
ートした。ついで、粒子を３０００ Ｘ ｙで遠心分離
して除去し、各回１０ｍＱのＰＢＳで３回洗浄し、５ｍ
ＱのＰＢＳ、 ｐＨ７，２に再懸濁し、４°Ｃで保存し
た。分析データは第１表にまとめる。
実施例 ６：
モノクローナル抗体ＥＭＡ ０１１０（抗−ＣＤ２ ；
ＩｇＧ２ｂ）の、実施例１におけるようにして活性化
した粒子へのカップリング カップリングは実施例５と同様に実施した。
ＩｇＧ２ｂ）の、実施例１におけるようにして活性化
した粒子へのカップリング カップリングは実施例５と同様に実施した。
分析データは第１表にまとめる。
実施例 ７：
７
単核球から、実施例５で調製したマグネトビーズを用い
るＣＤ８＋細胞の枯渇 単核球（ＭＮＣ）は、それ自体公知の方法によって（Ｂ
ｏｙｕｍ： ５ｃａｎｄ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、、
５ｕｐｐ１．５゜９〜１５．１９７６） 、Ｆｉｃｏ
ｌｌ勾配上、新たに供与されたヒト血液から単離した。
るＣＤ８＋細胞の枯渇 単核球（ＭＮＣ）は、それ自体公知の方法によって（Ｂ
ｏｙｕｍ： ５ｃａｎｄ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、、
５ｕｐｐ１．５゜９〜１５．１９７６） 、Ｆｉｃｏ
ｌｌ勾配上、新たに供与されたヒト血液から単離した。
枯渇には、プラスチックチューブ（Ｆａｌｃｏｎ。
Ｎｏ、２０５１）に１％ＢＳＡ （Ｗ／ ｙ、 Ｓｅｒ
ｏｍｅｄ）含有ＰＢＳ２ｍＱ中３ Ｘ １０’ ＭＭＣ
を取り、ＰＢＳ中２ｒｎｙ／ｍａのマグネトビーズ懸濁
液ｌ＋＋ＩＱと混合し、絶えず振盪しながら室温で１５
分間インキュベートした。実施例５と同様にして調製し
たマグネトビーズとそれに結合した細胞を永久磁石を用
いて除去した。懸濁液中に残った細胞を４００Ｘ９でペ
レット化し、適当な媒体たとえばＰＢＳまたはＲＰＭＩ
１６４０に再懸濁した。枯渇効率はサイトフルオログ
ラフ（Ｏｒｔｈｏ）中、間接免疫蛍光法によって測定し
ｌこ。
ｏｍｅｄ）含有ＰＢＳ２ｍＱ中３ Ｘ １０’ ＭＭＣ
を取り、ＰＢＳ中２ｒｎｙ／ｍａのマグネトビーズ懸濁
液ｌ＋＋ＩＱと混合し、絶えず振盪しながら室温で１５
分間インキュベートした。実施例５と同様にして調製し
たマグネトビーズとそれに結合した細胞を永久磁石を用
いて除去した。懸濁液中に残った細胞を４００Ｘ９でペ
レット化し、適当な媒体たとえばＰＢＳまたはＲＰＭＩ
１６４０に再懸濁した。枯渇効率はサイトフルオログ
ラフ（Ｏｒｔｈｏ）中、間接免疫蛍光法によって測定し
ｌこ。
２８
この目的では、枯渇前および後に所定の細胞集団のｌＸ
ｌ０’個の細胞を１μｇ ／ ｍ （ｌの第一抗体ＢＭ
Ａ ０３１ （Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）つい
で２０ｕｇ／ｍＱの第二抗体（ウサギ抗−マウス免疫グ
ロブリン、Ｆ（ａｂ）、 ７ ラグメント、ＦＩＴＣ−
標識、Ｂｅｈｒｉｎｇ−ｗｅｒｋｅ）によってそれ自体
公知の方法で標識し、サイトフルオログラフで評価した
。枯渇効率は９５％以上と測定された。
ｌ０’個の細胞を１μｇ ／ ｍ （ｌの第一抗体ＢＭ
Ａ ０３１ （Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）つい
で２０ｕｇ／ｍＱの第二抗体（ウサギ抗−マウス免疫グ
ロブリン、Ｆ（ａｂ）、 ７ ラグメント、ＦＩＴＣ−
標識、Ｂｅｈｒｉｎｇ−ｗｅｒｋｅ）によってそれ自体
公知の方法で標識し、サイトフルオログラフで評価した
。枯渇効率は９５％以上と測定された。
９−
第 １ 表
製造された各種マグネトビーズのカップリング度３ｂ
ＲＡＭ ３ｃ ＲＡＭ ３ｄ ＲＡＭ ４ｂ ＲＡＭ ４ｃ ＲＡＭ ４ｄ ＲＡＭ ｐｏｌｙ ＮＨＩＡ ｐｏｌｙ ＮＨＩＡ ｐｏｌｙ ＮＨＩＡ ｐｏｌｙ ＮＨＢｒＡ ｐｏｌｙ ＮＨＢｒＡ ｐｏｌｙ ＮＨＢｒＡ ５ｂ ＢＭＡ ０８１ １ｇＧ２ａ ＮＨＩ
Ａ５ｃ ＢＭＡ ０８１ １ｇＧ２ａ ＮＨ
ＩＡ５ｄ ＢＭＡ ０８１ １ｇＧ２ａ Ｎ
ＨＩＡ６ｂ ＢＭＡ ０１１０ ６ｃ ＢＭＡ ０１１０ ６ｄ ＢＭＡ ０１１０ ＩｇＧ２ｂ ＮＨＩＡ ７６Ｉｇ
Ｇ２ｂ ＮＨＩＡ １５６ＩｇＧ２
ｂ ＮＨＩＡ Ｉ８３ＲＡＭ ：
ウサギ抗−マウス免疫グロブリンｐｏｌｙ ：ポリクロ
ーナル ＮＨＩＡ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルヨードアセ
テートＮＨＢｒＡ ： Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジ
ルブロモアセテート０
ＲＡＭ ３ｃ ＲＡＭ ３ｄ ＲＡＭ ４ｂ ＲＡＭ ４ｃ ＲＡＭ ４ｄ ＲＡＭ ｐｏｌｙ ＮＨＩＡ ｐｏｌｙ ＮＨＩＡ ｐｏｌｙ ＮＨＩＡ ｐｏｌｙ ＮＨＢｒＡ ｐｏｌｙ ＮＨＢｒＡ ｐｏｌｙ ＮＨＢｒＡ ５ｂ ＢＭＡ ０８１ １ｇＧ２ａ ＮＨＩ
Ａ５ｃ ＢＭＡ ０８１ １ｇＧ２ａ ＮＨ
ＩＡ５ｄ ＢＭＡ ０８１ １ｇＧ２ａ Ｎ
ＨＩＡ６ｂ ＢＭＡ ０１１０ ６ｃ ＢＭＡ ０１１０ ６ｄ ＢＭＡ ０１１０ ＩｇＧ２ｂ ＮＨＩＡ ７６Ｉｇ
Ｇ２ｂ ＮＨＩＡ １５６ＩｇＧ２
ｂ ＮＨＩＡ Ｉ８３ＲＡＭ ：
ウサギ抗−マウス免疫グロブリンｐｏｌｙ ：ポリクロ
ーナル ＮＨＩＡ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルヨードアセ
テートＮＨＢｒＡ ： Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジ
ルブロモアセテート０
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）式 I Ｍ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ＿２）＿ｎ−Ｓ−Ｐ I （式
中、ｎは１〜６、好ましくは１または２、とくに好まし
くは１であり、Ｍは分散性で、磁気に反応し、アミノ基
を有する物質または粒子であり、Ｐは蛋白質である）で
示される磁性蛋白質接合体。 ２）蛋白質の１個または２個以上のスルフヒドリル基は
天然に存在するか、またはジスルフィド結合の還元によ
って発生させるかもしくは化学反応によって蛋白質に導
入する請求項１記載の磁性蛋白質接合体。 ３）Ｐはポリクローナル免疫グロブリンである請求項１
記載の磁性蛋白質接合体。 ４）Ｐはモノクローナル抗体またはＦａｂ、Ｆａｂ′も
しくはＦ（ａｂ′）＿２フラグメントである請求項１記
載の磁性蛋白質接合体。 ５）Ｐは抗原または酵素、ホルモン、レクチンもしくは
成長因子の残基である請求項１記載の磁性蛋白質接合体
。 ６）ＰはＩｇＧまたはＩｇＭクラスのモノクローナル抗
体である請求項４記載の磁性蛋白質接合体。 ７）Ｐは塩水溶液または体液中に溶解型で存在する抗原
に対するモノクローナル抗体である請求項４記載の磁性
蛋白質接合体。 ８）Ｐは細胞上、とくに骨髄系もしくはリンパ系の細胞
、末梢血液の細胞とくにＢリンパ球、Ｔリンパ球もしく
はそれらの前駆体細胞、または腫瘍細胞とくに骨髄の腫
瘍細胞上に発現する抗原に対するモノクローナル抗体で
ある請求項４記載の磁性蛋白質接合体。 ９）Ｐは細菌、マイコプラズマもしくは原生動物等、ま
たはウィルス上に発現する抗原に対するモノクローナル
抗体である請求項４記載の磁性蛋白質接合体。 １０）Ｐは抗原である請求項１記載の磁性蛋白質接合体
。 １１）Ｍは金属酸化物核とアミノ基を有する外皮コート
とからなる分散性粒子であり、一群の常磁性物質を金属
酸化物核に組込むことができる請求項１記載の磁性蛋白
質接合体。 １２）粒子の直径は約０．１〜約１００μ、好ましくは
約０．１〜約１．５μである請求項１１記載の磁性蛋白
質接合体。 １３）式 I Ｍ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ＿２）＿ｎ−Ｓ−Ｐ I で示
される磁性蛋白質接合体を製造するにあたり、アミノ基
を有する粒子Ｍを、式II ▲数式、化学式、表等があります▼II （式中、ｎは先に定義した意味を有し、Ｘは塩素、臭素
またはヨウ素原子である）で表され、アミノ基と反応す
るハロゲノアシル型スペーサーと反応させることにより
アミド結合を形成させて式III Ｍ−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ＿２）＿ｎ−Ｘ IIIの化合物
を得、これをスルフヒドリル基をもつ蛋白質Ｐと反応さ
せて式 I の化合物を得、得られた式 I の化合物を洗浄
して非共有結合蛋白質を除去する方法。 １４）式IIIにおいて、Ｍおよびｎは請求項１に特定し
た意味を有し、Ｘは塩素、臭素またはヨウ素原子である
化合物。 １５）塩水溶液または体液から、溶解した抗原、抗体、
受容体、基質、補因子または炭水化物決定基を除去する
方法において、その溶液を式 I の適当な磁性蛋白質接
合体とインキュベートして除去すべき成分を特異的に吸
着させたのち、磁性蛋白質接合体を磁気的手段によって
分離し、特異的に吸着した成分を適宜、磁性蛋白質接合
体から再び溶出させる方法。 １６）塩水溶液または体液から細胞を、除去する方法に
おいて、その細胞懸濁液を式 I の適当な磁性蛋白質接
合体とインキュベートして除去すべき細胞を特異的に吸
着させたのち、磁性蛋白質接合体を磁気的手段によって
分離し、特異的に吸着した細胞または粒子を適宜磁性蛋
白質接合体から再び脱着させる方法。 １７）塩水溶液または体液から、細胞または溶解した抗
原、受容体、基質、補因子もしくは炭水化物決定基を特
異的に除去するための請求項１記載の磁性蛋白質接合体
の使用、または診断方法の一部としてもしくは診断補材
としての使用。 １８）請求項８または９記載の細胞の除去、とくに好ま
しくは骨髄細胞の枯渇またはＨＬＡ型判定のための、請
求項１記載の磁性蛋白質接合体の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3919873.1 | 1989-06-19 | ||
| DE3919873A DE3919873A1 (de) | 1989-06-19 | 1989-06-19 | Magnetische protein-konjugate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03184999A true JPH03184999A (ja) | 1991-08-12 |
| JP2858883B2 JP2858883B2 (ja) | 1999-02-17 |
Family
ID=6382977
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2157799A Expired - Lifetime JP2858883B2 (ja) | 1989-06-19 | 1990-06-18 | 磁性蛋白質接合体およびその製造方法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5095097A (ja) |
| EP (1) | EP0403961B1 (ja) |
| JP (1) | JP2858883B2 (ja) |
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| AT (1) | ATE102052T1 (ja) |
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| CA (1) | CA2019218C (ja) |
| DE (2) | DE3919873A1 (ja) |
| DK (1) | DK0403961T3 (ja) |
| ES (1) | ES2063200T3 (ja) |
| IE (1) | IE63666B1 (ja) |
| PT (1) | PT94398B (ja) |
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