JPH03163032A - 脳内投与用徐放性製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は生体内分解性の担体を用いた脳内疾患を治療対
象とする物質の脳内投与製剤に関する。

さらに詳細には、本発明は脳内疾患を治療対象とする物
質がコラーゲンまたはゼラチンあるいはコラーゲンとゼ
ラチンの混合物から成る担体に含有された徐放性製剤で
あり、従来の投与方法では脳内に分布し難い脳内疾患を
治療対象とする物質の脳内での作用を持続させる脳内投
与用徐放性製剤に関する。本発明における脳内とは、脳
実質および脳髄腔内を示す。脳実質とは、大脳、脳幹お
よび小脳を示す。

〔従来の技術およびその問題点〕

脳実質内の血管は特殊な構造を有しており、血液内の成
分あるいは血液内に投与あるいは吸収された薬物の脳組
織への無秩序な移行、分布を防いでいる。脳実質内の毛
細血管は物質透過性の乏しい細胞によって内側を被われ
、しかもこの内皮細胞はタイトジャンクションで固く結
合しているため多くの物質はその間を通過することがで
きない。この脳血管における血液と脳との間にあるバリ
ャーは血液脳関門　（ｂｌｏｏｄ　ｂｒａｉｎ　ｂａｒ
ｒｉｅｒ：ＢＢＢ）と呼ばれ、脳内に薬物を移行させる
必要のある場合にはこのＢＢＢが大きな障壁となる。

そこでＢＢＢを通過して薬物を効率よく脳内に移行させ
る方法が従来から数多く試みられてきた。

例えば、ラボボルト（Ｓ．ｌ　Ｒａｐｏｐｏｒｔ）らは
マンニトール等の高張溶液を薬物と同時に投与すること
でＢＢＢの開放が起こり、薬物の血管透過性がたかまる
事を示している〔フエデレーション・プロシーデイ　ン
ダス（Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ
）　４３（２），　２１４（１９８４））。また一部の
脂溶性物質は拡散によって脳血管壁を透過しやすいこと
から、薬物の脂溶性を高めること、あるいはリポソーム
に含有させることによりＢＢＢを通過させる研究が行わ
れている。これらの方法では薬物が全身的に分布し選択
的に脳内に輸迭されるわけではないため、治療効果が期
待される量の薬物を移行させることは難しく、大量に投
与する必要がある。

公表特許公報平１−５００９０１では細胞のレセプター
を介してトランスサイトーシスによってＢＢＢを通過し
得るペプタイドに薬物を結合させ、生理的にＢＢＢを通
過させる方法が開示されている。しかし臨床応用におい
て現実的な投与方法として末梢静脈中に注射された場合
、治療効果が期待される量を脳内に移行させることは難
しい。

最も確実に薬物を脳内に送り込む方広として、カテーテ
ルを脳室内に留置するオンマヤ・リザーバ−（Ｏｍｍａ
ｙａ　ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）が考案された。これ（こよ
って薬液を脳内に投与することは可能であるが、持続的
に送り込む機能はないため、間欠投与に用いられている
。一方、長期の持続的投与には埋め込み式注入ポンプが
実用化されているが、装置が高価であり、また手技およ
び信頼性の面の問題もあるため脳内治療において繁用さ
れるには至っていない。さらにこれらの方法ではカテー
テル挿入部の感染や髄液の漏れが起こりやす＜、患者に
とって危険をはらんでいる。

一方、剤形上の工夫による脳内局所投与の試みは脳腫瘍
領域で行われており、嘉悦らは生体内非分解性のビニル
コポリマーを用いた徐放性制癌剤の効果を報告している
〔人工臓器　１５（１），　２１４−２１７　（１９８
６））。例えば、制癌剤塩酸ニムスチン（ＡＣＮＵ）を
含有するビニルコポリマーを調製し、脳内投与後の組織
壊死範囲を調べている。その文献では制癌剤の種類によ
って壊死作用が異なるものの、効果の範囲つまり薬物の
脳内分布範囲は比較的限定されており、脳全体にわたる
治療効果を得ることは難しいことが示唆されている。

本発明に係る脳内疾患を治療対象とする物質は、脳実質
内局所あるいは脳実質全体または髄腔内での効果が期待
される物質であるが、通常の血液内投与ではＢＢＢを通
過して脳内に作用させ難く、また脳内局所投与を行って
も一般に脳内での拡散が難しく、脳全体には分布し難い
ものである。

この傾向は、物質が高分子ほど顕著である。さらに高分
子物質は生体内での半減期が短いため、前述のいずれか
の方法によって脳内に輸送されたとしても脳内での作用
時間が短く、治療効果を高めるには頻回に繰り返し投与
する必要があった。このため、脳内投与による薬物投与
広は実用的な治療法として繁用されるには至っていない
。

従って治療効果を有する量の脳内疾患を治療対象とする
物質を脳内で持続的に作用させる投与方法が望まれてい
た。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは脳内疾患を治療対象とする物質の脳内投与
方法に関し鋭意検討した結果、生体内分解性の担体に含
有させて脳内に直接投与することによって、脳内疾患を
治療対象とする物質が長時間にわたって持続的に脳内分
布し、作用を発揮させることが可能であることを見出し
、本発明を完成するに至った。

本発明に係る脳内疾患としては、脳の神経変性疾患、脳
血管性痴呆、脳腫瘍等の疾患があげられる。ここで、神
経変性疾患とは、神経細胞が萎縮あるいは脱落する疾患
であり、たとえば、アルツハイマー病、アルツハイマー
型老年痴呆症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン氏病
、ビック氏病等があげられる。

本発明に係る脳内疾患を治療対象とする物質には、脳内
ペプタイドあるいはその誘導体あるいはその抗体、アゴ
ニストまたはアンタゴニストが含まれる。

脳内ペプタイドとして、神経栄養因子、細胞或長因子、
神経伝達関連物質、免疫賦活物質、腫瘍壊死因子と呼ば
れる生理后性物質等があげられる神経栄養因子は、神経
細胞の生存維持、分化、酵素の誘導そして走化性を示す
生理活性物質であり、神経栄養因子として神経成長因子
　（ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ：ＮＧＦ）
、脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎｄｅｒｉｖｅｄ　ｎ
ｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｆａｃｔｏｒ：ＢＤＮＦ）　
、毛様体神経栄養因子（ｃｉｌｉａｒｙ　ｎｅｕｒｏｔ
ｒｏｐｈｉｃ　ｆａｃｔｏｒ：　ＣＮＴＦ）、海馬由来
神経栄養因子、ＮＴ−　３等があげられ、さらに海馬由
来神経栄養因子として海馬因子等があげられる。

神経栄養因子の一つであるＮＧＦは、中枢に分布し、中
枢神経に働くことが認められており、アルツハイマー病
等の神経変性疾患に対する治療が期待される。ＮＧＦは
静注や経口投与では脳内に分布せず、脳実質内および脳
室内に投与しても作用時間は短い。従って、ヒトでの治
療効果を高めるためには頻回に繰り返し投与する必要が
ある。

臨床的には煩雑な操作となり、実用化が難しいので、効
果的で簡便な投与方法が望まれている。

神経栄養因子の一つである海馬由来神経栄養因子は、海
馬組織に存在する神経栄養因子であり、種々の因子があ
げられる。例えば、海馬因子はその一つであり、小鹿ら
によって報告されている〔プロンーデイングス・オブ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ
．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．）ＵＳＡ，８１
．　２５６７−２５７Ｈ１９８４）　）。

細胞或長因子はインビボあるいはインビトロにおいて、
動物細胞の或長を促進させる因子であり、作用として細
胞の伸長・肥大および分裂・増殖を促す。細胞成長因子
として、上皮細胞成長因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒ
ｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ：ＥＧＦ）　、線維芽細胞成長
因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔ
ｏｒ：ＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ｐｌａｔｅｌｅ
ｔ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ：Ｐ
Ｉ）ＯＦ）　、内皮細胞成長因子（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉ
ａｌ　ｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ）、トラン
スフォーミング或長因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　
ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ：ＴＧＦ）、インシュリン
様成長因子・ＩおよびＩＩ（［ＧＦｉ，　ＩＩ）、エリ
スロポエチン（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、スロ
ンボポエチン（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）等があ
げられる。上皮細胞或長因子や、線維芽細胞成長因子で
ある酸性線維芽細胞戊長因子（ａｃｉｄｉｃ　ｆｉｂｒ
ｏｂｌａｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ：ａｃｉｄ
ｉｃ　ＦＧＦ）あるいは塩基性線維芽細胞威長因子（ｂ
ａｓｉｃ　　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　　ｇｒｏｗｔｈ　
　ｆａｃｔｏｒ：ｂａｓｉｃ　ＦＧＦ）は神経栄養活性
が認められており、脳への適用が注目されている。

神経伝達関連物質として種々のべプタイドがあげられる
。その中で、記憶に関与するとされているペプタイドホ
ルモンとしてバソブレシン、βエンドルフィン、エンケ
ファリン、オキシトシン、コレシストキニン等があげら
れる。デウイード（ＤｅＷｉｅｄ）により、バソブレシ
ンが学習・記憶に関与しているという最初の報告Ｃイン
ターナショナル・ジャーナル・オブ・ニューロファーマ
コロジ（Ｉｎｔ．　　Ｊ．　　Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａ
ｃｏ、）１４，　　１５７−１６７　（１９６５）〕が
なされて以来、バソブレシンの記憶障害への臨床応用が
検討されてきた。

免疫賦活物質としてインターロイキン、インターフェロ
ン等があげられる。

インターフェロンは、分子量２１，　０００−２４，　
０００の糖蛋白質でα，β　γの３種類がある。インタ
ーフェロンの作用として、抗ウィルス作用と抗ガン作用
が認められている。

インターロイキンはマクロファージにより産生されるリ
ンフォ力インの一種であるが、Ｔ細胞、Ｂ細胞に対し増
殖活性化を促進する。リンドホルム（Ｌｉｎｄｈｏｌｍ
，　Ｄ．　）らにより、インターロイキンが神経細胞の
ＮＧＦ合或を促進することが報告された。インターロイ
キンはＮＧＦの神経栄養后性を介する神経変性疾患治療
剤として注目されている〔ネイチュアー（Ｎａｔｕｒｅ
）３３０　　６５８−６５９（１９８７））。

高度に精製された腫瘍壊死因子（ｔｕｍａｒｎｅｃｒｏ
ｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ：ＴＮＦ）は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
試験におけるすべての癌細胞に対して直接細胞障害后性
を示した。ＴＮＦは、ｉｎ　ｖｉｖｏ試験におけるすべ
てのマウスおよびヒト腫瘍に対して優れた治療効果を示
した〔プロシーデイングス・才ブ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａ
ｃａｄ．　　Ｓｃｉ．）ｔＪｓＡ，７２．　　３６６６
−３６７０（１９７５）　〕．　　ヒトＴＮＦか精製さ
れ、その分子量は約１７，　０００であり、等電点は５
．３であった〔ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル
・ケミストリ−（　Ｊ．　Ｂ　ｉｏ　ｌ．　Ｃｈｅｍ．
　）２６０（４），　２３４５−２３５４（１９８４）
　）。

本発明においては、上記脳内ペプタイドと同様の生理活
性を示すその誘導体、あるいはアゴニストを用いてもよ
い。また、上記脳内ペプタイドの生理活性を抑制するア
ンタゴニストあるいは抗体を用いてもよい。

本発明は、通常の血液内投与ではＢＢＢを通過し難い物
質に有用である。たとえば、分子量１００以上の高分子
物質に有用であり、その中でも、細胞のレセプターを介
したトランスサイトーシスによってもＢＢＢを通過し難
いペプタイドに特に有用である。

また、本発明はＢＢＨのバリャーが実質的にはなく、通
常の経口投与や注射によって脳内に移行、分布する物質
であっても、より臨床効果を高める、あるいは末梢およ
び全身的な副作用を軽減するためには脳内で選択的に長
時間作用させることが望ましい物質にも有用である。

例えば、抗生物質あるいは制癌剤があげられる。抗生物
質では例えば髄膜炎で髄液内での持続的に分布する薬剤
が求められている。制癌剤では脳内特に脳腫瘍内に高濃
度に選択的に長時間作用する薬剤が求められている。

これらの薬効成分は、物性面で異なる点もあるが、いず
れも脳内疾患を対象とし、脳実質内あるいは髄腔内での
分布および作用の持続によって臨床効果の向上が期待さ
れるものである。

なかでも神経栄養因子は脳実質全体に分布、作用するこ
とが臨床上重要であり、本発明の徐放性製剤を脳実質あ
るいは髄腔内に投与することで従来の投与方法では得ら
れなかった効果が得られる。例えば、ＢＤＮＦ，ＣＮＴ
ＦＳＥＧＦおよびＦＧＦは実験例に示したＮＧＦ　（分
子量ｉ３，２５０）と同様の分子量で、それぞれ、１３
，　２５０、２０，　４００、６，４００　、１３，０
００の蛋白であり、本発明により同様に極めて優れた効
果が期待される。また、海馬因子はＮＧＦ同様、胎児ラ
ット脳培養中隔中心核コリン性作動神経の発育を促進す
ることが報告されており〔小鹿，薬物・精神・行動（Ｊ
ｐｎ．　Ｊ．　Ｐｓｙｃｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）
，　７，　４４７−４５Ｈ１９８７）　３　Ｎ　Ｇ　Ｆ
同様の優れた効果が期待される。

本発明における担体成分には、生体適合性、生体内分解
性ポリマーとして知られているものを使用できる。たと
えば、コラーゲン、ゼラチン、アルブミン、ポリグリコ
ール酸、ポリ乳酸等があげられる。コラーゲンおよびゼ
ラチンが特に好ましい。

本発明の徐放性製剤は製造方法がマイルドであり、有機
溶媒や熱を用いないため、上記の何れの物質についても
適用が可能である。

また本発明に用いる、脳内疾患を治療対象とする物質は
その製法によらず、生体からの抽出物質、人工合成物質
また遺伝子組換え法によって得られたものでもいずれで
もよい。

担体成分として用いるコラーゲンは動物の結合組織の主
たるタンパクであり、抗原性の少ないタンパクとして既
に医療上、手術糸等に繁用されている安全な物質である
。より安全性を高める目的で、コラーゲン分子のテロペ
プタイド部分を除去することで抗原性を低下させたアテ
ロコラーゲンを用いてもよい。さらに、本発明方法にお
いてはこれらを化学修飾したサクシニル化コラーゲンま
たはメチル化コラーゲン等をも使用し得る。ゼラチンは
コラーゲンからの誘導タンパクであり、抗原性も少なく
ゾルーゲル変換の性質をもつ安価な高分子両性電解質と
して既に医療上の安全性評価の固まったものである。ゼ
ラチンについても、コラーゲンと同様の化学的修飾が可
能である。本発明においては、コラーゲンおよびゼラチ
ン、あるいはこれらの上記の誘導体をそれぞれ単独ある
いは適当な割合に配合して使用することができる。

本発明において脳内疾患を治療対象とする物質や担体は
純品であることが望ましいが、通常手に入るものを用い
てもよい。通常手に入るものにはその物質に適当な安定
化剤、緩衝剤等の添加剤が適当な量含まれているのがふ
つうである。例えばコラーゲン水溶液には通常リン酸緩
衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液等の無機塩または有
機塩の緩衝液が含まれている。

脳内疾患を治療対象とする物質と担体との配合比は特に
限定されるものではないが例えば担体の量に対して０．
１〜５０％の薬物を含有させることかできる。

本発明の徐放性製剤は例えば次のような方法により得る
ことができる。脳内疾患を治療対象とする物質またはそ
の水溶液と担体またはその水溶液とを撹拌・混合する。

すなわち有効成分と担体とを溶液状態で混合することに
より、薬物は担体マトリックスに包含される。その後こ
の屈合物を濃縮および／または乾燥する。濃縮方法、乾
燥方法は特に限定されるものではないが、たとえば濃縮
方法としては室温で放置する方法等が挙げられ、乾燥方
法としては自然乾燥、スプレードライ、凍結乾燥等が挙
げられる。またこの時、除去する水分量あるいは製剤の
形状等により最適な乾燥速度を検討することが必要であ
ることは言うまでもない。従って乾燥は最適な温度およ
び湿度の条件で行われる。

上記工程は通常室ｄまたはそれ以下の温度で行われ、冷
却して行ってもよい。具体的な目安を示すとすれば、例
えば、混合は通常約５〜３０″Ｃで、凍結乾燥による乾
燥は通常約−５０−０″Ｃで、自然乾燥、スプレードラ
イによる場合は溶液温度と試料容器温度を室温以下に保
ち乾燥条件をコントロールすることで有効成分の温度を
４ｏ″Ｃ以下に制御でき、実質的にダメージを与えない
ようにすることができる。

上記の方法は、特別な結合剤を必要とせず熱をかける必
要もないため、熱に不安定な脳内疾患を治療対象とする
物質に特に適している。

本発明徐放性製剤は、実質的に脳内疾患を治療対象とす
る物質と生体内分解性の担体のみからなることが好まし
い。脳内疾患を治療対象とする物質と担体以外の成分の
存在により、有効成分の放出が促進されることが多いの
で、そのような池の威分はできるだけ含まないのが好ま
しい。しかし現実的には通常人手できる有効成分や担体
由来の他の戊分が含有されても、徐放化効果に実質的に
影響を与えない範囲なら差し支えない。同様に本発明徐
放性製剤は、必要ならば徐放化効果に実質的に影響を与
えないｖＬ囲において薬学上許容される通常の添加剤、
例えば安定化剤、保存剤、局所麻酔剤等を含んでもよい
。また、薬物の特性と治療目的にあわせて、最適な放出
挙動が得られるように放出速度をコントロールするため
の添加剤を加えてもよい。

このようにして得られたものを目的に応じて適宜加工す
る。例えば乾燥後粉砕した粉末を金型により圧縮成形す
る。また、脳内疾患を治療対象とする物質と担体との混
合液をあらかじめ金型に入れた後、濃縮あるいは自然乾
燥または凍結乾燥させ最後に圧縮成形してもよい。また
、ゲル状の混合液を通常の方注で押出成形あるいは射出
或形した後乾燥することもできる。

この際、製剤の形状としては例えば球状、半球状、針状
、棒状、ボタン状、フィルム状、ディスク状、粉末状等
使用する部位に適合した形に成形し、脳実質内あるいは
脳髄腔内に投与することができる。たとえば、本製剤を
カテーテル等を用いて、脳内へ埋め込み、挿入すること
ができ、あるいは手術時に留置することができる。

大きさの目安としては例えば針状、捧状の場合直径約０
．１〜ｌＯｗｎ、長さｌ〜５０ｌｎｆｆＩ程度、好まし
くは直径０．５〜２ｍｍ、長さ５〜１５ｍｍ程度である
。

本発明における脳内疾患を対象とする物質は、ヒトにお
いては、１日あたりｌｏｇ−１ｇ／人を１ケ月に１回、
もしくはそれ以上の回数で投与される。

次に本発明を実施例および実験例によって明瞭に説明す
るが、これらの例はいずれも本発明を限定するものでは
ない。

実施例ｌ モブレイ（Ｍｏｂｌｅｙ　Ｗ．Ｃ．　）らの方法〔バイ
オケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　１５．
　５５４３（１９７６））によって、マウス顎下腺より
抽出し精製したＮＧＦ２ｍｇを含有する０．　２％人血
清アルブミン（Ｈ　Ｓ　Ａ）水溶液５−と、２％アテロ
コラーゲン水溶液５ｇとを均一に混合し、凍結乾燥した
後、少量の蒸留水を加えて膨潤させた。さらに蒸留水を
加えて全量を４００ｍｇとし、十分に練合し、均質な脛
合液にした。これをＩｍｌのディスポーザブルのシリン
ジに入れ、１０，　ＯＯＯＧで３０分間遠心脱泡した。

これをシリンジから押し出し、温度５゜Ｃ、湿度７５％
の条件で２４時間乾燥させ、さらにシリカゲル入りのデ
シケータ内で２４時間室温で放置して乾燥させた。これ
を切断することにより一本あたり２０μｇのＮＧＦを含
有する棒状の徐放性製剤（直径０．４５叩、長さ４ｍｍ
）を得た。

実施例２ マウス顎下腺より抽出したＮＧＦ　１　０　０μｇを含
有する５０ｍＭ酢酸ナトリウム水溶液１０−と２％アテ
ロコラーゲン水溶液（リン酸一水素カリウム１．４％、
リン酸二水素カリウム０．　３％含有）１０ｇとを混合
、撹拌し、凍結乾燥後、液体窒素下で低温粉砕した。得
られた粉砕品２０ｍｇを金型に入れ、圧縮戒形すること
により、直径６皿のディスク状の徐放性製剤を得た。

実施例３ １０％ゼラチン水溶液２０ｒｎｌにインターフエロンー
α（２Ｘ　ｌ　Ｏ＠Ｕ／ｍｌ）を含むトリスーグリシン
溶液５−を加え、その一部を直径３ｍｍの半球形の金型
に注入した後、凍結乾燥を行った。この金型内の凍結乾
燥品を圧縮成形することにより、半球状の徐放性製剤を
得た。

実施例４ アテロコラーゲンを熱変性して得られたゼラチンの１％
水溶液とアテロコラーゲンのｌ％水溶液を２＝８の割合
で混合し、５−の水溶液を得た。

これにＩＸＩＯ’Ｕ／ｒｎｌのインターフェロンーα水
溶液ｌｒｎＩ．を加えて均一になるように混合した。

この混合水溶液をシャーレに入れ、４８時間室温に放置
することでフィルム状の徐放性製剤を得た。

実施例５ マウスＥＧＦ　（ｍ−ＥＧＦ）３００μｇを含有する０
．２％人血清アルブミン（Ｈ　Ｓ　Ａ）水溶液５一と２
％アテロコラーゲン水溶液５ｇとを均一に混合し、凍結
乾燥した後、少量の蒸留水を加えて膨潤させた。さらに
蒸留水を加えて全量を４００ｍｇとし、十分に練合し、
均質な混合液にした。これを１一のディスポーザブルの
シリンジに入れ、１０，　ＯＯＯＧで３０分間遠心脱泡
した。これをシリンジから押し出し、温度５゜ｃＳｉ度
７５％の条件で２４時間乾燥させ、さらにシリカゲル入
りのデシケータ内で２４時間室温で放置して乾燥させた
。

これを切断することにより一本あたり２０μｇのｍ−Ｅ
ＧＦを含有する棒状の徐放性製剤（直径０．９ｍｍ，長
さ９叩）を得た。

実施例６ ウシ塩基性ＦＧＦ　（ｂ−ＦＧＦ）水溶液２ｍｌ（５μ
ｇ／ｒｎｌ）と２％アテロコラーゲン水溶液５０ｇとを
均一に混合し、凍結乾燥した後、少量の蒸留水を加えて
膨潤させた。さらに蒸留水を加えて全量を３４００ｍｇ
とし、十分に練合し、均質な混合液にした。これを５ｍ
ｌのディスポーザブルのンリンジに入れ、１０，ＯＯＯ
Ｇで６０分間遠心脱泡した。これをシリンジから押し出
し、温度５゜Ｃ，湿度７５％の条件で４８時間乾燥させ
、さらにシリカゲル入りのデシケータ内で７２時間、温
度５゜Ｃで放置して乾燥させた。これを切断することに
より一本あたり１０μｇのｂ−ＦＧＦを含有する棒状の
徐放性製剤（直径１ｍｍ、長さ９ｍｍ）を得た。

実験例１ 実験方法 実験例１で調製した本発明のＮＧＦ徐放性製剤をスナネ
ズミの左背側海馬に定位的に挿入した。

対照群ではアテロコラーゲンのみからなるプラセボ製剤
を挿入した。挿入１日後に塩酸ケタミン麻酔し、両側総
頚動脈を１０分間閉塞後再開通し、４日後に断頭屠殺し
た。脳をエタノール酢酸（９５：５）固定後パラフィン
包埋し、製剤挿入部を含めた厚さ６μｍ冠状切片を作製
して、ヘマトキシリン・エオジン染色を行った。背側海
馬ＣＡＩ錐体細胞層を２００μｍずつ区画し、それぞれ
の区画内の生存細胞数を計測した。また製剤挿入１日お
よび５日後に脳各部位の組織を摘出し、エンサイム・イ
ムノアッセイ（ＥＩＡ）ｍを用いて組織ＮＧＦ量を測定
した。

実験結果 対照群の背側海馬では挿入側（左厠）および対側（右側
）において多数の錐体細胞の崩壊を認めたか、ＮＧＦ徐
放性製剤群では挿入側はもとより対剣においても錐体細
胞の壊死はほとんど認められなかった。すなわち、挿入
側ではＮＧＦ徐放性製剤挿入部外側２００〜４００μｍ
で、対側では全区画でＮＧＦ徐放性製剤群でプラセボ製
剤群と比較して有意の生存細胞数の増加が認められた（
第１図）。

脳内各組織のＮＧＦ含量の測定結果は表１に示した。Ｎ
ＧＦ徐放性製剤群では挿入側は対側よりもＮＧＦ含量は
高く、また、各部位で対照群よりも高かった。最もＮＧ
Ｆ含量が高い部位は線条体で、次に大脳皮質後部が高か
った。ＮＧＦ徐放性製剤群では挿入後５日でも対照群よ
りも高く、持続性があることが認められた。

表１ スナネズミ脳組織中ＮＧＦａ度（ｎｇ／ｇ）実験例２ 実験例ｌで２０μｇのＮＧＦを含有する本発明の徐放性
製剤を脳海馬内に挿入することにより、脳内各部位への
良好な分布と持続性が認められた，そこで、さらに詳し
い検討を行う目的で、実験例ｌで測定できなかった海馬
を含め、脳６部位（海馬、線条体、視床、小脳、大脳皮
質前部および大脳皮質後部）のＮＧＦ含量を挿入後６時
間、Ｉ１３、５日で測定した。また、ＮＧＦ非含有プラ
セボ製剤を海馬に挿入したプラセボ製剤群、ＮＧＦ２０
μｇおよび生理食塩液を直接，毎馬組織に注入したＮＧ
Ｆ４馬肉投与および生食海馬肉投与群、ＮＧＦ２０μｇ
を静脈内投与したＮＧＦ静注群、生理食塩液を静脈内投
与した生食静注群を設けて、本発明のＮＧＦ徐放性製剤
群と比較検討を行った。実験は各群１匹ずつで行い、正
常スナネズミの脳内各部位のＮＧＦ濃度も測定した。

実験方法 実験例ｌで調製した本発明のＮＧＦ徐放性製剤をスナネ
ズミの左背側海馬に定位的に挿入した。

プラセボ群ではＮＧＦ非含有製剤を挿入した。ＮＧＦＲ
ではＮＧＦ２０μｇを直接海馬組織に注入した。ＮＧＦ
静注群では、ＮＧＦ２０μｇを静脈内投与した。生食静
注群では生理食塩液を静脈内投与した。挿入あるいは投
与１日後に塩酸ケタミン麻酔し、両側総頚動脈をｌＯ分
間閉塞後再開通し、挿入あるいは投与１時間（静脈内投
与の場合）、６時間、１，３、５日後に断頭屠殺し、脳
各部位の組織を摘出し、ＥＩＡ法を用いて組織ＮＧＦ量
を測定した。

実験結果 脳内各組織のＮＧＦ含量の測定結果は表２、３４に示し
た。ＮＧＦ徐放性製剤群では正常スナネズミの脳内濃度
よりも、挿入側で約２０〜１０００倍高かった。また、
ＮＧＦはほとんどの脳内各部位に分布していた。なかで
も海馬、視床、大脳皮質後部で高かった。また、５日後
でも、２　ｎｇ／　ｇ以上と高濃度が維持されていた。

一方、対側においても、全般に挿入側に比べ濃度が低い
ものの、挿入側と同様の傾向がみられ、脳全体へのＮＧ
Ｆの分布が観察された。しかし、ＮＧＦ２０μｇを海馬
内に投与した群では６時間後にＮＧＦの高濃度が検出さ
れたが、５日後には正常スナネズミの濃度近くまで威少
し、持続性はＮＧＦ徐放性製剤群のようには認められな
かった。また、対側ではＮＧＦ徐放性製剤群程高い濃度
は検出されなかった。

ＮＧＦ静脈内投与群では１時間後においても、ｌｎｇ／
ｇ以下の濃度で、正常スナネズミの濃度と殆ど変わらな
かった。

表２ ・スナ不ズミ脳組織中ＮＧＦ濃度（ｎｇ／　ｇ　）表３ スナネズミ脳組織中ＮＧＦ 濃度（ｎｇ／　ｇ　） 表４ スナネズミ脳組織中ＮＧＦａ度（ｎｇ／ｇ）実験例３ Ｉｎ　　ｖｉｔｒｏ放出性試験 実施例５で得たサンプルをヒト血清アルブミン（　５　
ｍｇ／　ｍｌ　）を含有するリン酸緩衝食塩液４０ｍｌ
、ｐＨ７．４に入れ、温度３７゜Ｃでインキユベーンヨ
ンした。サンプルから放出されるｍ−ＥＧＦの量をラジ
オイムノアッセイで定量し、累積放出量を経時的に定量
した。結果を第２図に示す。

効　　果 ＮＧＦのような分子量の大きな生理活性ペプタイドは、
脳組織内で拡散しに＜＜、投与局所での効果に限局され
ると予想された。しかしながら、実験例で示されたよう
に本発明の徐放性製剤によって、一側背側海馬に投与さ
れたＮＧＦは長時間にわたって組織内に維持され、意外
にも対厠においても高濃度のＮＧＦが検出された。これ
は、本発明により脳内ペプタイドの脳全体への持続的な
分布が可能となることを意味するものである。さらに、
これが従来の投与方法にはない著しい効果を持つことは
、実験１で示されたとおりである。

本発明の徐放性製剤によって神経性脳内疾患あらびに原
発性および転移性の脳腫瘍などに対する実用的で効果的
な治療法が期待される。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＮＧＦ徐放性製剤の海馬内挿入によるスナネ
ズミ海馬ＣＡＩ錐体細胞壊死に対する作用を示す。挿入
側ではＮＧＦ徐放性製剤挿入部外剥２００〜４００μｍ
で、対側では全区画でＮＧＦ徐放性製剤群でプラセボ製
剤群に比較して有意の生存細胞数の増加が認められた。 第２図は、ｉｎ　　ｖｉｔｒｏ放出試験におけるｍ−Ｅ
ＧＦ徐放性製剤からのｍ−ＥＧＦ累積放出ＮＧＦ徐放性
製剤（本発明） 内側 挿入部位 外側 プラセボ（刻照） 内側 神入部位 外側 ★：　　ｐ＜０．０５，　　★★：　　ｐ＜０．０１第
１図 ＮＧＦ徐放性製剤の海馬内挿入に 対する作用 刻側 内側 挿入対応部位 外側 刻側

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）脳内疾患を治療対象とする物質をコラーゲンまた
   はゼラチンあるいはコラーゲンとゼラチンの混合物から
   成る担体に含有させたことを特徴とする脳内投与用徐放
   性製剤。 （２）脳内疾患を治療対象とする物質が、脳内ペプタイ
   ドあるいはその誘導体あるいはその抗体、アゴニストま
   たはアンタゴニストである請求項１記載の脳内投与用徐
   放性製剤。（３）脳内疾患を治療対象とする物質が、抗
   生物質あるいは制癌剤である請求項１記載の脳内投与用
   徐放性製剤。 （４）脳内ペプタイドが神経栄養因子、細胞成長因子、
   神経伝達関連物質、免疫賦活物質あるいは腫瘍壊死因子
   である請求項２記載の脳内投与用徐放性製剤。 （５）神経栄養因子が神経成長因子（ｎｅｒｖｅｇｒｏ
   ｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ：ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子
   （ｂｒａｉｎ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈ
   ｉｃ　ｆａｃｔｏｒ：ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子
   （ｃｉｌｉａｒｙ　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔ
   ｏｒ：ＣＮＴＦ）、海馬由来神経栄養因子あるいはＮＴ
   −３である請求項４記載の脳内投与用徐放性製剤。 （６）海馬由来神経栄養因子が海馬因子である請求項５
   記載の脳内投与用徐放性製剤 （７）細胞成長因子が上皮細胞成長因子 （ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ：
   ＥＧＦ）または線維芽細胞成長因子（ｆｉｂｒｏｂｌａ
   ｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ：ＦＧＦ）である請
   求項４記載の脳内投与用徐放性製剤 （８）神経伝達関連物質がコレシストキニン（ＣＣＫ）
   またはバソブレシンである請求項４記載の脳内投与用徐
   放性製剤 （９）免疫賦活物質がインターロイキンまたはインター
   フェロンである請求項４記載の脳内投与用徐放性製剤 （１０）担体成分がコラーゲンである請求項１、２、３
   、４、５、６、７、８または９記載の脳内投与用徐放性
   製剤。 （１１）コラーゲンがアテロコラーゲンである請求項１
   ０記載の脳内投与用徐放性製剤。（１２）成形された固
   形製剤である請求項１、２、３、４、５、６、７、８、
   ９または１０記載の脳内投与用徐放性製剤。 （１３）脳内疾患を治療対象とする物質が、血液脳関門
   を実質的に透過しない物質である請求項１記載の脳内投
   与用徐放性製剤。