JPH03155791A - 雑種プロモーター - Google Patents
雑種プロモーターInfo
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- JPH03155791A JPH03155791A JP29581889A JP29581889A JPH03155791A JP H03155791 A JPH03155791 A JP H03155791A JP 29581889 A JP29581889 A JP 29581889A JP 29581889 A JP29581889 A JP 29581889A JP H03155791 A JPH03155791 A JP H03155791A
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- Japan
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- promoter
- yeast
- uas
- gene
- isa
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Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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- Medicinal Chemistry (AREA)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、改良酵母プロモーターに関する。
（従来技術）
酵母プロモーターの制御機構はグルコース抑制などの例
を除くと一般にポジティブなコントロールであることが
知られており、このポジティブなコントロールに関与す
るプロモーター側の制御因子として翻訳開始点の数百ベ
ース上流に位置し、シスに機能するアップストリーム・
アクチベーション・サイト（以下、ＵＡＳ）の存在が示
唆されている〔エル命ガランテ（Ｌ、 Ｇｕａｒｅｎｔ
ｅ）＋ Ｃｅ１ｌ。
を除くと一般にポジティブなコントロールであることが
知られており、このポジティブなコントロールに関与す
るプロモーター側の制御因子として翻訳開始点の数百ベ
ース上流に位置し、シスに機能するアップストリーム・
アクチベーション・サイト（以下、ＵＡＳ）の存在が示
唆されている〔エル命ガランテ（Ｌ、 Ｇｕａｒｅｎｔ
ｅ）＋ Ｃｅ１ｌ。
、ＩＬ、７９９．１９８４）。
また、このＵＡＳを他のＵＡＳと置換することによって
そのプロモーターが本来おかれていた制御系から解除さ
れ新たに置き換えられたＵＡＳに関係する制御下に支配
されることが示されている〔エル・ガランテら（Ｌ、
Ｇｕａｒｅｎｔｅ ｅｔ、 ａｌ、）＋Ｐｒｏｃ、 Ｎ
ａｔｌ、＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ、 １３．７４
１０．１９８２ ；エル・ガランテら（Ｌ、 Ｇｕａｒ
ｅｎｔｅ ｅｔ、 ａｌ、）、 Ｃｅ１ｌ。
そのプロモーターが本来おかれていた制御系から解除さ
れ新たに置き換えられたＵＡＳに関係する制御下に支配
されることが示されている〔エル・ガランテら（Ｌ、
Ｇｕａｒｅｎｔｅ ｅｔ、 ａｌ、）＋Ｐｒｏｃ、 Ｎ
ａｔｌ、＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ、 １３．７４
１０．１９８２ ；エル・ガランテら（Ｌ、 Ｇｕａｒ
ｅｎｔｅ ｅｔ、 ａｌ、）、 Ｃｅ１ｌ。
３ｆＬＬ５０３．１９８４ ｉケー・ストルール（Ｌ
５ｔｒｕｈｌ）。
５ｔｒｕｈｌ）。
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ
、 ＦＪｌ、 ７８６５．１９８５）。
、 ＦＪｌ、 ７８６５．１９８５）。
従って、酵母プロモーターの改良を行う場合、一つの方
法としてＵＡＳの置換による制御系の変更あるいはＤＮ
Ａの欠失による制御系からの解除およびプロモーターの
小型化が考えられる。酵母プロモーターの一つとして、
ＧＡＰ−ＤＨ（グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素
酵素遺伝子）プロモーターがあり、Ｂ型肝炎ウィルス表
面抗原（ＨＢｓＡｇ）の産生プラスミドに利用されてい
る〔ビトラー・ジー・ニーおよびエガン・ケー・エム（
Ｂｉｔｌｅｒ、 Ｇ、 Ａ、 ＆ Ｅｇａｎ、 Ｋ、
Ｍ、）＋ Ｇｅｎｅ、 ３１＋２６３−２７４．１９８
４に記載のＧＡＰ−Ｄ）ｌプロモーターを用いたベクタ
ーからサツカロミセス・セレビシェにおける異種遺伝子
の発現（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｈｅｔｅｒｏｌｏ
ｇｏｕｓ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅｔｒｏｔｓ ｖｅｃｔｏｒ
ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅ
ｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇ
ｅｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ）、特開昭５
９−２１０８８８号に記載の酵母発現ベクターおよびそ
の使用方法など〕。
法としてＵＡＳの置換による制御系の変更あるいはＤＮ
Ａの欠失による制御系からの解除およびプロモーターの
小型化が考えられる。酵母プロモーターの一つとして、
ＧＡＰ−ＤＨ（グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素
酵素遺伝子）プロモーターがあり、Ｂ型肝炎ウィルス表
面抗原（ＨＢｓＡｇ）の産生プラスミドに利用されてい
る〔ビトラー・ジー・ニーおよびエガン・ケー・エム（
Ｂｉｔｌｅｒ、 Ｇ、 Ａ、 ＆ Ｅｇａｎ、 Ｋ、
Ｍ、）＋ Ｇｅｎｅ、 ３１＋２６３−２７４．１９８
４に記載のＧＡＰ−Ｄ）ｌプロモーターを用いたベクタ
ーからサツカロミセス・セレビシェにおける異種遺伝子
の発現（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｈｅｔｅｒｏｌｏ
ｇｏｕｓ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅｔｒｏｔｓ ｖｅｃｔｏｒ
ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅ
ｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇ
ｅｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ）、特開昭５
９−２１０８８８号に記載の酵母発現ベクターおよびそ
の使用方法など〕。
例えば、ＨＢｓＡｇ産生プラスミドｐＧＧ５はＧＡＰ−
ＤＨプロモーター、ＨＢｓＡｇ構造遺伝子、ＧＡＰ−Ｄ
Ｈクーミネーター、大腸菌での複製開始点、マーカー遺
伝子（大腸菌におけるアンピシリン耐性遺伝子（Ａｐｅ
）、酵母におけるロイシン遺伝子）および酵母での複製
開始点によって構築された。
ＤＨプロモーター、ＨＢｓＡｇ構造遺伝子、ＧＡＰ−Ｄ
Ｈクーミネーター、大腸菌での複製開始点、マーカー遺
伝子（大腸菌におけるアンピシリン耐性遺伝子（Ａｐｅ
）、酵母におけるロイシン遺伝子）および酵母での複製
開始点によって構築された。
また、酵母プロモーターの一つとして、５ＵＣ２（酵母
インベルターゼ遺伝子）プロモーターがあり（特開昭６
０−４１４８８号、特開昭６２−２２４２９１号）、イ
ンターフェロン等の産生に利用されている。
インベルターゼ遺伝子）プロモーターがあり（特開昭６
０−４１４８８号、特開昭６２−２２４２９１号）、イ
ンターフェロン等の産生に利用されている。
本発明者等は、ヒト血清アルブミン（以下ｌ５Ａ）を酵
母を宿主として用いた系で産生させるべく、種々その発
現系について検討した。そのプロモーターとして、ＧＡ
Ｐ−ＤＩ−１プロモーター、５ｔＪｃ２プロモ一ター等
種々検討したが、いずれも満足すべき産生量を得ること
はできなかった。
母を宿主として用いた系で産生させるべく、種々その発
現系について検討した。そのプロモーターとして、ＧＡ
Ｐ−ＤＩ−１プロモーター、５ｔＪｃ２プロモ一ター等
種々検討したが、いずれも満足すべき産生量を得ること
はできなかった。
本発明者等は、５ＵＣ２プロモーターのＵＡＳを含む領
域とＧＡＰ−ＤＨプロモーターのＴＡＴＡボックスを含
む領域を連結させたハイブリッドプロモーターを作成し
、発現を試みたところ、強いプロモーター活性が発現さ
れることを見出し本発明に至った。
域とＧＡＰ−ＤＨプロモーターのＴＡＴＡボックスを含
む領域を連結させたハイブリッドプロモーターを作成し
、発現を試みたところ、強いプロモーター活性が発現さ
れることを見出し本発明に至った。
本発明で使用する５ＵＣ２プロモーターは、既に報告さ
れている５ＵＳ２遺伝子の塩基配列（特開昭６０−４１
４８８号）をもとに、酵母染色体ＤＮＡから得ることが
できる。塩基配列の解析から、酵母染色体ＤＮＡを、Ｈ
ｉｎｃＩＩ−ＢａｍＨＩ消化すると、５ＵＣ２遺伝子の
プロモーター領域、シグナル配列、酵素遺伝子の一部が
２．５６ｋｂの断片として得られることが判る。そこで
、酵母染色体ＤＮＡのＨｉｎｃＩＩ−ＢａｍＨＩ消化物
のうち２．３〜３．２ ｋ ｂのサイズを有する断片を
、ｐＵｃｌＢのＨｉｎｃＵ−ＢａｍＨＩサイトに投入し
て、酵母染色体ＤＮＡライブラリーを得た。
れている５ＵＳ２遺伝子の塩基配列（特開昭６０−４１
４８８号）をもとに、酵母染色体ＤＮＡから得ることが
できる。塩基配列の解析から、酵母染色体ＤＮＡを、Ｈ
ｉｎｃＩＩ−ＢａｍＨＩ消化すると、５ＵＣ２遺伝子の
プロモーター領域、シグナル配列、酵素遺伝子の一部が
２．５６ｋｂの断片として得られることが判る。そこで
、酵母染色体ＤＮＡのＨｉｎｃＩＩ−ＢａｍＨＩ消化物
のうち２．３〜３．２ ｋ ｂのサイズを有する断片を
、ｐＵｃｌＢのＨｉｎｃＵ−ＢａｍＨＩサイトに投入し
て、酵母染色体ＤＮＡライブラリーを得た。
このライブラリーから、インベルターゼをコードする領
域の一部の配列をもとにして合成した５０ｍｅｒから成
るオリゴヌクレオチド５°−＾ＣＴ ＡＧＣＧＡＴ Ａ
ＧＡ ＣＣＴ ＴＴＧ ＧＴＣＣＡＣＴＴＣＡＣＡ Ｃ
ＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＴＧＧ ＡＴＧ ＡＡ−３”を
プローブとして用いたコロニーハイブリダイゼーション
法により、５ＵＣ２遺伝子を有すると考えられるクロー
ンを同定し、ｐＹＩｏｌｌと命名したプラスミドを得た
（第１図）、５ＵＣ２プロモーターのｔＪＡｓは翻訳開
始点の上流−４１８から−６５０の範囲にあることは既
知である〔サロキン・エルおよびカールソン・エム（Ｓ
ａｒｏｋｉｎ、 Ｌ、 ＆ Ｃａｒｌｓｏｎ、 Ｍ）＋
Ｍｏｌ、 Ｃｅ１ｌ。
域の一部の配列をもとにして合成した５０ｍｅｒから成
るオリゴヌクレオチド５°−＾ＣＴ ＡＧＣＧＡＴ Ａ
ＧＡ ＣＣＴ ＴＴＧ ＧＴＣＣＡＣＴＴＣＡＣＡ Ｃ
ＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＴＧＧ ＡＴＧ ＡＡ−３”を
プローブとして用いたコロニーハイブリダイゼーション
法により、５ＵＣ２遺伝子を有すると考えられるクロー
ンを同定し、ｐＹＩｏｌｌと命名したプラスミドを得た
（第１図）、５ＵＣ２プロモーターのｔＪＡｓは翻訳開
始点の上流−４１８から−６５０の範囲にあることは既
知である〔サロキン・エルおよびカールソン・エム（Ｓ
ａｒｏｋｉｎ、 Ｌ、 ＆ Ｃａｒｌｓｏｎ、 Ｍ）＋
Ｍｏｌ、 Ｃｅ１ｌ。
Ｂｉｏｌ、、５ ２５２１ （１９８５）） 、 Ｓ
ＵＣ２−ＵＡＳ領域のＤＮＡ塩基配列を第２図に示す。
ＵＣ２−ＵＡＳ領域のＤＮＡ塩基配列を第２図に示す。
そのためこれらを含む領域を適当な制限酵素（例えば、
−６９５のＤｄｅｌサイトと−３８６のＮｃａｌサイト
）で消化し、５ＵＣ２−ＵＳＡｊＩ域のカセット化を行
った。具体的には、ｐＹＩｏ １１＠Ｄｄｅ Ｉ −Ｎ
ｃｏｌ消化後、Ｍｕｎｇ ｂｅａｎ ｎｕｃｌｅａｓｅ
消化〔コワルスキー・デイ−、クローカー・ダブ１Ｊニ
ー・デイ−、ラスコラスキー・エム・シニア（にｏ＠ａ
ｌｓｋｉ＋１３、、 Ｋｒｏｅｋｅｒ、 Ｗ、 Ｄ、
ａｎｄ ｔ、ａｓｋｏｗｓｋｉ、 Ｍ、 Ｓｒ、）Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、 ｌｊ＋ ４４５７ （１９７
６） ）を行った後、約３００ｂｐの平滑末端断片を取
得した。そしてこの断片を同様にＭｕｎｇ ｂｅａｎ
ｎｕｃｌｅａｓｅにより平滑末端化されたｐＵｃｌＢの
Ｘｂａ Ｉサイトに挿入した。その結果、ポリリンカ一
部分の５ａｌｌサイト側にＤｄｅ＋サイト側が連結した
プラスミドｐＹ１０２７を得た（第１図）。
−６９５のＤｄｅｌサイトと−３８６のＮｃａｌサイト
）で消化し、５ＵＣ２−ＵＳＡｊＩ域のカセット化を行
った。具体的には、ｐＹＩｏ １１＠Ｄｄｅ Ｉ −Ｎ
ｃｏｌ消化後、Ｍｕｎｇ ｂｅａｎ ｎｕｃｌｅａｓｅ
消化〔コワルスキー・デイ−、クローカー・ダブ１Ｊニ
ー・デイ−、ラスコラスキー・エム・シニア（にｏ＠ａ
ｌｓｋｉ＋１３、、 Ｋｒｏｅｋｅｒ、 Ｗ、 Ｄ、
ａｎｄ ｔ、ａｓｋｏｗｓｋｉ、 Ｍ、 Ｓｒ、）Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、 ｌｊ＋ ４４５７ （１９７
６） ）を行った後、約３００ｂｐの平滑末端断片を取
得した。そしてこの断片を同様にＭｕｎｇ ｂｅａｎ
ｎｕｃｌｅａｓｅにより平滑末端化されたｐＵｃｌＢの
Ｘｂａ Ｉサイトに挿入した。その結果、ポリリンカ一
部分の５ａｌｌサイト側にＤｄｅ＋サイト側が連結した
プラスミドｐＹ１０２７を得た（第１図）。
ＧＡＰ−ＤＨプロモーターは、ＧＡＰ−ＤＨ遺伝子の−
６７４〜−２４の部位に存在し、このものの小型化プロ
モーター（−１６４〜−２５）も公知である（特開昭６
２−１７５１８０）。また、ＧＡＰ−ＤＨプロモーター
のＴＡＴＡボックスは−１４０に存在する。この小型化
プロモーターを担持するプラスミドはｐＧＧ７と名付け
られた。
６７４〜−２４の部位に存在し、このものの小型化プロ
モーター（−１６４〜−２５）も公知である（特開昭６
２−１７５１８０）。また、ＧＡＰ−ＤＨプロモーター
のＴＡＴＡボックスは−１４０に存在する。この小型化
プロモーターを担持するプラスミドはｐＧＧ７と名付け
られた。
この両プラスミドをリゲーション、例えばＧＡＰ−ＤＨ
プロモーターのＴＡＴＡボックスを含む断片を得るため
にＢｇｌＴＩ−Ｂａｍｌ（１処理をして、１５０ｂｐ断
片を得、これを５ＵＣ２−ＵＡＳを担持するプラスミド
（例えば、ｐＹ＋０２７）のＢａｍＨＩサイトに挿入し
てハイブリッドプロモーターを得る（実施例ｐＹＩ０３
０）、このプラスミドは、以下発現用のカセットとして
用いることができ、所望により構造遺伝子、シグナル配
列、ターミネータ−配列を担持するプラスミドとリゲー
ションし、特定蛋白質分泌発現用のベクターを作成でき
る。実施例では、ＩＳＡを分泌発現させた。
プロモーターのＴＡＴＡボックスを含む断片を得るため
にＢｇｌＴＩ−Ｂａｍｌ（１処理をして、１５０ｂｐ断
片を得、これを５ＵＣ２−ＵＡＳを担持するプラスミド
（例えば、ｐＹ＋０２７）のＢａｍＨＩサイトに挿入し
てハイブリッドプロモーターを得る（実施例ｐＹＩ０３
０）、このプラスミドは、以下発現用のカセットとして
用いることができ、所望により構造遺伝子、シグナル配
列、ターミネータ−配列を担持するプラスミドとリゲー
ションし、特定蛋白質分泌発現用のベクターを作成でき
る。実施例では、ＩＳＡを分泌発現させた。
〔効果］
５ＵＣ２−ＵＡＳ／ｍＧＡＰ−ＤＨプロモーター・ｍＨ
３Ａシグナル配列を用いたＨ３Ａ分泌発現ベクターｐＹ
１０３２を酵母ＡＨ２２株に導入し、そのＩＳＡ産生能
を調べた。その結果、本菌株はＲＰＨＡ法で１２０μｇ
／ ｍｌのＩＳＡを培地中に分泌した。これは、５Ｕ
Ｃ２−ＵＡＳｊｌ域を含まないベクターｐＹＩ０３１を
導入した株の３倍、５ＵＣ２プロモ一ター全体を含むベ
クターｐＮｌ（０１６を導入した株の４倍の産生量であ
ワた。
３Ａシグナル配列を用いたＨ３Ａ分泌発現ベクターｐＹ
１０３２を酵母ＡＨ２２株に導入し、そのＩＳＡ産生能
を調べた。その結果、本菌株はＲＰＨＡ法で１２０μｇ
／ ｍｌのＩＳＡを培地中に分泌した。これは、５Ｕ
Ｃ２−ＵＡＳｊｌ域を含まないベクターｐＹＩ０３１を
導入した株の３倍、５ＵＣ２プロモ一ター全体を含むベ
クターｐＮｌ（０１６を導入した株の４倍の産生量であ
ワた。
従って、５ＵＣ２−ＵＡＳ／ｍＧＡＰ−ＤＨプロモータ
ーの組み合わせは、ＩＳＡを産生ずる上で非常に有効で
あることが確認された。
ーの組み合わせは、ＩＳＡを産生ずる上で非常に有効で
あることが確認された。
（１） ５ＵＣ２−ＵＡＳ／ｍＧＡＰ−ＤＨプロモー
ターを用いたＩＳＡの酵母菌体外分泌発現ベクターの構
築 ■ 材料と方法 （ａ） プラスミド ｐＹ１０２７ ：５ＵＣ２−ＵＡＳを含むＤｄｅｌ−Ｎ
ｃｏｌ断片を−ｕｎｇ ｂｅａｎ ｎｕｃｌｅａｓｅに
より平滑末端化した後、同様に 平滑末端化したｐＵｃｌＢのｘｂ ｍｌサイトに挿入したプラスミド （第１図）。
ターを用いたＩＳＡの酵母菌体外分泌発現ベクターの構
築 ■ 材料と方法 （ａ） プラスミド ｐＹ１０２７ ：５ＵＣ２−ＵＡＳを含むＤｄｅｌ−Ｎ
ｃｏｌ断片を−ｕｎｇ ｂｅａｎ ｎｕｃｌｅａｓｅに
より平滑末端化した後、同様に 平滑末端化したｐＵｃｌＢのｘｂ ｍｌサイトに挿入したプラスミド （第１図）。
ｐＧＧ７ ：小型化ＧＡＰ−ＤＨ（ｍＧＡＰ−ＤＨ）プ
ロモーターを担持するＨＢｓＡｇの 酵母菌体内発現ベクター（特開昭６２ −１７５１８０号）。
ロモーターを担持するＨＢｓＡｇの 酵母菌体内発現ベクター（特開昭６２ −１７５１８０号）。
ｐＵｃｌＢ：メッシング・ジｓ７ （Ｍｅｓｓｉｎｇ、
Ｊ、ＬＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ、 １ｆｌｌ、 ２０（１９８３） ｐＹＮＯ２６：ＧＡＬＩプロモーター・ｓ＋ｏｄｉｆｉ
ｅｄＵＳＡシグナル配列（ｍＨ３Ａシ グナル配列）用いたＩＳＡの酵母 菌体外分泌発現ベクター（ＥＰ公 開番号第３１９６４１号） （ｂ）菌株 宝酒造製ｒＥ、ｃｏｌｉ ＪＭ１０９ ｃｏ＋ｍｐｅｔ
ｅｎｔ ｃｅｌｌｓ」を用いた。
Ｊ、ＬＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ、 １ｆｌｌ、 ２０（１９８３） ｐＹＮＯ２６：ＧＡＬＩプロモーター・ｓ＋ｏｄｉｆｉ
ｅｄＵＳＡシグナル配列（ｍＨ３Ａシ グナル配列）用いたＩＳＡの酵母 菌体外分泌発現ベクター（ＥＰ公 開番号第３１９６４１号） （ｂ）菌株 宝酒造製ｒＥ、ｃｏｌｉ ＪＭ１０９ ｃｏ＋ｍｐｅｔ
ｅｎｔ ｃｅｌｌｓ」を用いた。
（Ｃ）組み換えＤＮＡ技術
Ｅ、ｃｏｌｉ ＪＭ１０９ の形質転換は宝酒造のｐ
ｒｏｔｏｃｏｌに従った。ＤＮＡ断片のｌｉｇａｔｉｏ
ｎは宝酒造製「ＤＮＡ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔ 」
を用いた。その他、プラスミドの調製、制限酵素処理、
アガロースゲル電気泳動などの組み換えＤＮＡ技術は常
法に従った。
ｒｏｔｏｃｏｌに従った。ＤＮＡ断片のｌｉｇａｔｉｏ
ｎは宝酒造製「ＤＮＡ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔ 」
を用いた。その他、プラスミドの調製、制限酵素処理、
アガロースゲル電気泳動などの組み換えＤＮＡ技術は常
法に従った。
■ 結果
（ａ） Ｓ Ｕ Ｃ２−Ｕ Ａ Ｓ ／ ｍ Ｇ Ａ
Ｐ −Ｄ Ｈプロモーターを用いたＨＳＡ分泌発現ヘ
クターｐＹＩ０３２の作製 ５ＬＩＣ２−ＵＡＳ／ｍＧＡＰ−ＤＨプロモーターを用
いたＩＳＡ分泌発現ベクターｐＹＩ０３２の概略を第３
図に示す。
Ｐ −Ｄ Ｈプロモーターを用いたＨＳＡ分泌発現ヘ
クターｐＹＩ０３２の作製 ５ＬＩＣ２−ＵＡＳ／ｍＧＡＰ−ＤＨプロモーターを用
いたＩＳＡ分泌発現ベクターｐＹＩ０３２の概略を第３
図に示す。
まず、ｐＧＧ７をＢｇｌｎ−ＢａｍＨＩで消化すること
により、ｍＧＡＰ−ＤＨプロモーターを含む約１５０ｂ
ｐのＤＮＡ断片を得た。次に、この断片をｐＹ１０２７
のＢａｍＨＴサイトに挿入した。その結果得られた多数
の形質転換体のうち１２株からプラスミドを調製し、Ｓ
ａｌＴ−ＢａｍＨｌで消化した。ｍＧＡＰ−ＤＨプロモ
ーターを含む約１５０ｂｐのＤＮＡ断片が目的とする方
向に挿入された場合（ｍＧＡＰ−ＤＨプロモーターを含
む断片のＢａｍ１ＩＩサイト側がＳＵＣ２−ＵＡＳ側と
連結された場合）、Ｓａ ｌ Ｉ−Ｂａｍ）１１消化に
より、ＳυＣ２−υＡＳとｍＧＡＰ−ＤＨプロモーター
を合わせた約４５０ｂＰのＤＮＡ断片が生じる。１２株
のうち４株において約４５０ｂｐのＤＮＡが認められ、
ｐＹＩ０３０を有することが示唆された。
により、ｍＧＡＰ−ＤＨプロモーターを含む約１５０ｂ
ｐのＤＮＡ断片を得た。次に、この断片をｐＹ１０２７
のＢａｍＨＴサイトに挿入した。その結果得られた多数
の形質転換体のうち１２株からプラスミドを調製し、Ｓ
ａｌＴ−ＢａｍＨｌで消化した。ｍＧＡＰ−ＤＨプロモ
ーターを含む約１５０ｂｐのＤＮＡ断片が目的とする方
向に挿入された場合（ｍＧＡＰ−ＤＨプロモーターを含
む断片のＢａｍ１ＩＩサイト側がＳＵＣ２−ＵＡＳ側と
連結された場合）、Ｓａ ｌ Ｉ−Ｂａｍ）１１消化に
より、ＳυＣ２−υＡＳとｍＧＡＰ−ＤＨプロモーター
を合わせた約４５０ｂＰのＤＮＡ断片が生じる。１２株
のうち４株において約４５０ｂｐのＤＮＡが認められ、
ｐＹＩ０３０を有することが示唆された。
次に、ｐＹＩ０３０を５ｐｈｌ −ＢａｍＨＩ消化する
ことにより、ＳυＣ２−ＵＡＳ／ｎＣ；ＡＰ−ＤＨプロ
モーターを含む約４５０ｂｐのＤＮＡ断片を得た１次に
、この断片をｐＹＮＯ２６のＳｐ ｈ Ｉ−ＢａｍＨＩ
サイト間に挿入した。その結果えられた多数の形質転換
体のうち１２株からプラスミドを調製し、ＥｃｏＲｌ−
Ｂａｎ）ＩＩで消化した。目的とするｐＹ１０３０が得
られていれば、ＥｃｏＲｌ−ＢａｍＨ＋消化により、Ｌ
ＥＵ２遺伝子付近に由来する約８００ｂｐの断片が生じ
、更にプロモーターとシグナル配列の間にあるＢａｍＨ
Ｉサイトで消化されることにより約５ｋｂの断片が二つ
生じることが予想される。１２株から調製したプラスミ
ドをＥｃｏＲ１消化した結果、全てにおいて予想される
ｐＹＩ０３２と同じ消化パターンを示したことからｐＹ
Ｉ０３２を有することが示唆された。ｐＹ［０３２制限
酵素地図を第４図に示す。
ことにより、ＳυＣ２−ＵＡＳ／ｎＣ；ＡＰ−ＤＨプロ
モーターを含む約４５０ｂｐのＤＮＡ断片を得た１次に
、この断片をｐＹＮＯ２６のＳｐ ｈ Ｉ−ＢａｍＨＩ
サイト間に挿入した。その結果えられた多数の形質転換
体のうち１２株からプラスミドを調製し、ＥｃｏＲｌ−
Ｂａｎ）ＩＩで消化した。目的とするｐＹ１０３０が得
られていれば、ＥｃｏＲｌ−ＢａｍＨ＋消化により、Ｌ
ＥＵ２遺伝子付近に由来する約８００ｂｐの断片が生じ
、更にプロモーターとシグナル配列の間にあるＢａｍＨ
Ｉサイトで消化されることにより約５ｋｂの断片が二つ
生じることが予想される。１２株から調製したプラスミ
ドをＥｃｏＲ１消化した結果、全てにおいて予想される
ｐＹＩ０３２と同じ消化パターンを示したことからｐＹ
Ｉ０３２を有することが示唆された。ｐＹ［０３２制限
酵素地図を第４図に示す。
（２）ＵＳＡの酵母菌体外分泌発現ベクターの酵母への
導入とＩＳＡ産生 ■材料と方法 （ａ）菌株 ５ａｃｃｈａｒｏｓ＋ｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
Ａ Ｈ２２； ａｌ ｈｉｓ４１ｅｕ２． ｃａｎ
ｌ （ロ）プラスミド ｐＹＩ０３１ ＋ ａＧＡＰ−ＤＨプロモーター・ｍＨ
３Ａ シグナル配列を用いたＩＳＡ分泌発現ベクター 第３図＋７） ｐ’ｌ １０２７１７）代わリニＰＵＣ
１Ｂ ヲ用イ、同様の構築方法により得ることができる
。
導入とＩＳＡ産生 ■材料と方法 （ａ）菌株 ５ａｃｃｈａｒｏｓ＋ｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
Ａ Ｈ２２； ａｌ ｈｉｓ４１ｅｕ２． ｃａｎ
ｌ （ロ）プラスミド ｐＹＩ０３１ ＋ ａＧＡＰ−ＤＨプロモーター・ｍＨ
３Ａ シグナル配列を用いたＩＳＡ分泌発現ベクター 第３図＋７） ｐ’ｌ １０２７１７）代わリニＰＵＣ
１Ｂ ヲ用イ、同様の構築方法により得ることができる
。
ｐＹＩ０３２ ； ５ＵＣ２−ＵＡＳ／ｍＧＡＰ−ＤＨ
プ０モーター・ｍＨ３Ａシグナル配列を用いた）ＩＳＡ
分泌発現ベクター（第４図）。
プ０モーター・ｍＨ３Ａシグナル配列を用いた）ＩＳＡ
分泌発現ベクター（第４図）。
ｐＹＩｏ１６ ； ５ＩＪＣ２プロモー９−・ｍＨ５Ａ
シグナル配列を用いたＨ８＾分泌発現ベクター（ｐｏｓ
１Ｌｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ） ＠ （Ｃ）培地 Ｙ Ｐ Ｆ ｂｒｏｔｈ （２％バタトペプトン（デイ
フコ）、１％酵母エキス（デイフコ）、２％果糖〕およ
びＹＮＢ ｂｒｏｔｈ （０，６７％イーストナイト口
ジェンベース（デイフコ）、２％ブドウ塘〕をそのまま
あるいは寒天を添加して用いた。形質転換体の再生培地
はＹＮＢ寒天培地に２％のソルビトールを添加したもの
を用いた。
シグナル配列を用いたＨ８＾分泌発現ベクター（ｐｏｓ
１Ｌｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ） ＠ （Ｃ）培地 Ｙ Ｐ Ｆ ｂｒｏｔｈ （２％バタトペプトン（デイ
フコ）、１％酵母エキス（デイフコ）、２％果糖〕およ
びＹＮＢ ｂｒｏｔｈ （０，６７％イーストナイト口
ジェンベース（デイフコ）、２％ブドウ塘〕をそのまま
あるいは寒天を添加して用いた。形質転換体の再生培地
はＹＮＢ寒天培地に２％のソルビトールを添加したもの
を用いた。
（ｄ）酵母の形質転換
プロドブロスト法〔ヒンネン・ニー、ヒックス・ジェー
・ビー、フィンク・ジー・アール（旧ｒｔｎｅｎ。
・ビー、フィンク・ジー・アール（旧ｒｔｎｅｎ。
＾、、旧ｃｋｓ、 Ｊ、 Ｂ、 ＆ Ｆｉｎｋ＋ Ｇ、
Ｒ，）＋ Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
Ｒ，）＋ Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＬＩＳＡ、 １１．１９２９
＜１９７８） ）により行った選択マーカーはＬＥＵ２
を用いた。
＜１９７８） ）により行った選択マーカーはＬＥＵ２
を用いた。
■ 結果
（ａ）プラスミドの酵母への導入
ｐＮＨＯ１６，ｐＹＩ０３１．ｐＹＩ０３２を用いて、
３．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＡ Ｈ２２株をプロトプラス
ト法により形質転換した０選択マーカーはＬＥＵ２を用
いた。その結果、何れのプラスミａ用いた場合において
も、プラスミド１μｇ当たりの１０’個以上の形質転換
体が得られた。
３．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＡ Ｈ２２株をプロトプラス
ト法により形質転換した０選択マーカーはＬＥＵ２を用
いた。その結果、何れのプラスミａ用いた場合において
も、プラスミド１μｇ当たりの１０’個以上の形質転換
体が得られた。
伽）形質転換体によるＵＳＡの分泌
（ａ）で得られた形質転換体についてＵＳＡの分泌生産
量を検討した。まず、各々のプラスミドによる形質転換
体外６株について、再生プレート上に生育したコロニー
から菌体を取り、アルミキャップ付きの中試験管に入れ
た３ｄのＹ Ｐ Ｆ ｂｒｏｔｈに植菌した。３０°Ｃ
で４８時間振とう培養を行った後、培養液の５４０ｎｓ
における吸光度および培養上清中のＩＳＡ濃度を測定し
た。ＵＳＡの定量はＲＰＨＡ法で行った。その結果、極
端に増殖の悪いクローンはなく、クローン間のＩＳＡ産
生量のバラツキもほとんど見られなかった。
量を検討した。まず、各々のプラスミドによる形質転換
体外６株について、再生プレート上に生育したコロニー
から菌体を取り、アルミキャップ付きの中試験管に入れ
た３ｄのＹ Ｐ Ｆ ｂｒｏｔｈに植菌した。３０°Ｃ
で４８時間振とう培養を行った後、培養液の５４０ｎｓ
における吸光度および培養上清中のＩＳＡ濃度を測定し
た。ＵＳＡの定量はＲＰＨＡ法で行った。その結果、極
端に増殖の悪いクローンはなく、クローン間のＩＳＡ産
生量のバラツキもほとんど見られなかった。
次いで、正確なＩＳＡ産生量を求めることを目的として
、フラスコ培養を行った。まず、これらの菌株をアルミ
キャップ付き中試験管に入れた５−のＹ Ｎ Ｂ ｂｒ
ｏｔｈに植菌後、３０°Ｃで３日間振とう培養した０次
に、この前培養液全量を３００−バッフル付き三角フラ
スコに入れた５０ｄのＹＰＦ ｂｒｏｔｈに植菌した後
、３０℃にて振とう培養を行ない、経時的に培養液の５
４０ｒｖ＋における吸光度とＨ３Ａ産生量を測定した。
、フラスコ培養を行った。まず、これらの菌株をアルミ
キャップ付き中試験管に入れた５−のＹ Ｎ Ｂ ｂｒ
ｏｔｈに植菌後、３０°Ｃで３日間振とう培養した０次
に、この前培養液全量を３００−バッフル付き三角フラ
スコに入れた５０ｄのＹＰＦ ｂｒｏｔｈに植菌した後
、３０℃にて振とう培養を行ない、経時的に培養液の５
４０ｒｖ＋における吸光度とＨ３Ａ産生量を測定した。
ＩＳＡはＲＰ）ＩＡ法で定量した（表１）。
ｐＹＩ０３２／ＡＨ２２の培養開始７２時間後のＩＳＡ
の産生量は１２０■／ｉであった。従って、ｍＧＡＰ−
ＤＨプロモーターを用いた場合（ｐＹＩ０３１／ＡＨ２
２）では４０に＃！であったＨ３Ａ産生量が、ｍＧＡＰ
−ＤＨプロモーターの上流にＳ Ｕ Ｃ−Ｕ Ａ Ｓ
６Ｎ域を連結することによって（ｐＹ１０３２／ＡＨ２
２）、１２０■／ｌにまでＨ３Ａ産生量が上昇すること
が明らかになった。この産生量は、５ＵＣ２プロモータ
ー全領域を用いた場合（ｐＮＨｏ １６／ＡＨ２２）よ
りもかなり高いものであった０以上の結果から、５ＵＣ
２−ＵＡＳ／ｍＧＡＰ−ＤＨプロモーターの組み合わせ
は、ＩＳＡを産生ずる際、非常に優れたプロモーターで
あることが確認された。
の産生量は１２０■／ｉであった。従って、ｍＧＡＰ−
ＤＨプロモーターを用いた場合（ｐＹＩ０３１／ＡＨ２
２）では４０に＃！であったＨ３Ａ産生量が、ｍＧＡＰ
−ＤＨプロモーターの上流にＳ Ｕ Ｃ−Ｕ Ａ Ｓ
６Ｎ域を連結することによって（ｐＹ１０３２／ＡＨ２
２）、１２０■／ｌにまでＨ３Ａ産生量が上昇すること
が明らかになった。この産生量は、５ＵＣ２プロモータ
ー全領域を用いた場合（ｐＮＨｏ １６／ＡＨ２２）よ
りもかなり高いものであった０以上の結果から、５ＵＣ
２−ＵＡＳ／ｍＧＡＰ−ＤＨプロモーターの組み合わせ
は、ＩＳＡを産生ずる際、非常に優れたプロモーターで
あることが確認された。
第１図は、酵母５ＵＣ２遺伝子プロモーターＵＡ Ｓ
ｆｉｌ域のカセット化の手順を示す。 第２図は、Ｓ Ｕ Ｃ２−Ｕ Ａ Ｓ ８１域の塩基配
列を示す。 第３図は、５ＵＣ２−ＵＡＳ領域とＧＡＰ−ＤＨＴＡＴ
Ａボックスからなる雑種プロモーターを用いた）（ＳＡ
の酵母菌体外分泌発現ベクターρＹＩ０３２の構築手順
を示す。 第４図は、ＩＳＡの酵母菌体外分泌発現ベクターｐＹＩ
０３２の制限酵素地図を示す。 Ｄｄｅ■ ： 虹工旺＾ＣＡ ＴＴＴＡＣＣＧＴＡ ＴＧＧＧＡＧＴＴ
ＧＴＴＧＴＣＣＴＡ ＧＣＧＴ ＡＧＴＴＣＴＣＧＣＴ
ＣＣＣＣＣＡＧＣＡＡＡＧＣＴＣＡＡＡＡＡＡＧＴＡＣ
ＧＴＣＡＴＴＴＡＧＡＡＴＡＧＴＴＴＧＴＧＡＧＣＡＡ
ＴＡＣＣＡＧＴＣＧＧＴＡＴＧＣＴＡＣＧ↑丁ＡＧＡＡ
ＡＧＧＣＣＣＡＣＡＧＴＡＴＴＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＡ
ＧＧＣＧＴＧＣＣＴＴＴＧＴＴＧＡＡＣＴＣＧＡＴＣＣ
ＡＴＴＡＴＧＡＧＧＧＣＴＴＣＣＡＴＴＡＴＴＣＣＧＧ
ＡＡＡＴＴＡＴＣＣＧＧＧＧＧＣＧＡＡＧＡＡＡＴＡＣ
ＧＣＧＴＡＧＣＧＴＴＡＡＴＣＧＡＣＣＣＣＡＣ：
Ｎｃｏｌ ＧＴＣＣＡＧＧＧＴＴＴＴＴＣＣＡＴＧＧ第４図 手続補正書１発） 平成２年１月１６日 １、事件の表示 平成１年特許願第２９５８１８号 ２、発明の名称 雑種プロモーター ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 氏名（名称）株式会社 ミドリ十字 ４、代理人＠５４１ 住所 大阪市中央区平野町三丁目３番９号（湯水ビル） 置 （０６） ２２７−１１５６ 明細書の「特許請求の範囲」、「発明の詳細な６、補正
の内容 （１） 特許請求の範囲を別紙の通り訂正する。 （２）明細書第４頁下から第３行のｒＳＵＳ２゜をｒｓ
Ｕｃ２」に訂正する。 （３）明細書第６頁第４行、第６行、第１６行および第
８頁第１７行のｒＤｄｅｌ」をｒＤｄｅｌ」に訂正する
。 （４）明細書第６頁第５行のｒＵＳＡ、をｒＵＡＳ」に
訂正する。 （５）明細書第９頁第１２行の「配列）」の後に「を」
を加入する。 （６） 明細書第９頁第１４行のｒ３１９６４１号）
」の後に「、」を加入する。 （７）明細書第１Ｏ頁第１４行および第１１頁第１４行
のｒｐＹＩＪをｒｐＹＩ、に訂正する。 （８）明細書第１１頁第１０行のｒ ｐ ＹＮＯ’２６
ＪをｒｐＹＮＯ２６，に訂正する。 （９）明細書第１１頁第１２行の「えられた」を「得ら
れた」に訂正する。 ＯＩ 明細書第１２頁第１４行（７） ｒＰＵｃ１８
Ｊ ヲｒ１）ＵＣｌ３ Ｊに訂正する。 θ０ 明細書第１３頁第１４〜１５行のｒ行った」の後
に「、」を加入する。 ０２） 明細書第１４頁第２行のｒ当たりの」をｒ当
たり」に訂正する。 ０り 明細書第１７頁第６行のｒＳＵＣ，を「５ＵＣ２
，に訂正する。 ０４） 図面の第１図および第３図を別紙の通り差し
換える。 別紙 特許請求の範囲 （１）ＳＵ旦２プロモーターのＵＡＳを含存する領域と
ＧＡＰ−ＤＩ（プロモーターのＴＡＴＡボックスサイト
を含有する領域とを連結させた雑種プロモーター （２）請求項（１）記載の雑種プロモーターを用いた異
種蛋白質の製造方法。
ｆｉｌ域のカセット化の手順を示す。 第２図は、Ｓ Ｕ Ｃ２−Ｕ Ａ Ｓ ８１域の塩基配
列を示す。 第３図は、５ＵＣ２−ＵＡＳ領域とＧＡＰ−ＤＨＴＡＴ
Ａボックスからなる雑種プロモーターを用いた）（ＳＡ
の酵母菌体外分泌発現ベクターρＹＩ０３２の構築手順
を示す。 第４図は、ＩＳＡの酵母菌体外分泌発現ベクターｐＹＩ
０３２の制限酵素地図を示す。 Ｄｄｅ■ ： 虹工旺＾ＣＡ ＴＴＴＡＣＣＧＴＡ ＴＧＧＧＡＧＴＴ
ＧＴＴＧＴＣＣＴＡ ＧＣＧＴ ＡＧＴＴＣＴＣＧＣＴ
ＣＣＣＣＣＡＧＣＡＡＡＧＣＴＣＡＡＡＡＡＡＧＴＡＣ
ＧＴＣＡＴＴＴＡＧＡＡＴＡＧＴＴＴＧＴＧＡＧＣＡＡ
ＴＡＣＣＡＧＴＣＧＧＴＡＴＧＣＴＡＣＧ↑丁ＡＧＡＡ
ＡＧＧＣＣＣＡＣＡＧＴＡＴＴＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＡ
ＧＧＣＧＴＧＣＣＴＴＴＧＴＴＧＡＡＣＴＣＧＡＴＣＣ
ＡＴＴＡＴＧＡＧＧＧＣＴＴＣＣＡＴＴＡＴＴＣＣＧＧ
ＡＡＡＴＴＡＴＣＣＧＧＧＧＧＣＧＡＡＧＡＡＡＴＡＣ
ＧＣＧＴＡＧＣＧＴＴＡＡＴＣＧＡＣＣＣＣＡＣ：
Ｎｃｏｌ ＧＴＣＣＡＧＧＧＴＴＴＴＴＣＣＡＴＧＧ第４図 手続補正書１発） 平成２年１月１６日 １、事件の表示 平成１年特許願第２９５８１８号 ２、発明の名称 雑種プロモーター ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 氏名（名称）株式会社 ミドリ十字 ４、代理人＠５４１ 住所 大阪市中央区平野町三丁目３番９号（湯水ビル） 置 （０６） ２２７−１１５６ 明細書の「特許請求の範囲」、「発明の詳細な６、補正
の内容 （１） 特許請求の範囲を別紙の通り訂正する。 （２）明細書第４頁下から第３行のｒＳＵＳ２゜をｒｓ
Ｕｃ２」に訂正する。 （３）明細書第６頁第４行、第６行、第１６行および第
８頁第１７行のｒＤｄｅｌ」をｒＤｄｅｌ」に訂正する
。 （４）明細書第６頁第５行のｒＵＳＡ、をｒＵＡＳ」に
訂正する。 （５）明細書第９頁第１２行の「配列）」の後に「を」
を加入する。 （６） 明細書第９頁第１４行のｒ３１９６４１号）
」の後に「、」を加入する。 （７）明細書第１Ｏ頁第１４行および第１１頁第１４行
のｒｐＹＩＪをｒｐＹＩ、に訂正する。 （８）明細書第１１頁第１０行のｒ ｐ ＹＮＯ’２６
ＪをｒｐＹＮＯ２６，に訂正する。 （９）明細書第１１頁第１２行の「えられた」を「得ら
れた」に訂正する。 ＯＩ 明細書第１２頁第１４行（７） ｒＰＵｃ１８
Ｊ ヲｒ１）ＵＣｌ３ Ｊに訂正する。 θ０ 明細書第１３頁第１４〜１５行のｒ行った」の後
に「、」を加入する。 ０２） 明細書第１４頁第２行のｒ当たりの」をｒ当
たり」に訂正する。 ０り 明細書第１７頁第６行のｒＳＵＣ，を「５ＵＣ２
，に訂正する。 ０４） 図面の第１図および第３図を別紙の通り差し
換える。 別紙 特許請求の範囲 （１）ＳＵ旦２プロモーターのＵＡＳを含存する領域と
ＧＡＰ−ＤＩ（プロモーターのＴＡＴＡボックスサイト
を含有する領域とを連結させた雑種プロモーター （２）請求項（１）記載の雑種プロモーターを用いた異
種蛋白質の製造方法。
Claims (2)
- （１）ＳＵＳ２プロモーターのＵＡＳを含有する領域と
ＧＡＰ−ＤＨプロモーターのＴＡＴＡボックスサイトを
含有する領域とを連結させた雑種プロモーター。 - （２）請求項（１）記載の雑種プロモーターを用いた異
種蛋白質の製造方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29581889A JPH03155791A (ja) | 1989-11-14 | 1989-11-14 | 雑種プロモーター |
| EP19900121728 EP0428141A3 (en) | 1989-11-14 | 1990-11-13 | Hybrid promoter |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29581889A JPH03155791A (ja) | 1989-11-14 | 1989-11-14 | 雑種プロモーター |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03155791A true JPH03155791A (ja) | 1991-07-03 |
Family
ID=17825567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29581889A Pending JPH03155791A (ja) | 1989-11-14 | 1989-11-14 | 雑種プロモーター |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0428141A3 (ja) |
| JP (1) | JPH03155791A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1223219A3 (en) * | 1997-10-31 | 2002-10-23 | Asahi Glass Company Ltd. | Inducible promoter and secretion signal for use in schizosaccharomyces pombe, expression vector containing them and their use |
| EP3642343B1 (en) | 2017-06-20 | 2021-12-08 | Albumedix Ltd. | Improved protein expression strains |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3587759T2 (de) * | 1984-05-11 | 1994-07-07 | Chiron Corp., Emeryville, Calif. | Erhöhte Hefetranskription unter Verwendung einer Hybridkonstruktion der Promotorregion. |
| JP2615027B2 (ja) * | 1985-04-08 | 1997-05-28 | アムジェン インコーポレイテッド | 外来遺伝子の転写を制御するための方法及びハイブリッドプロモーター |
| ES2028779T3 (es) * | 1985-10-03 | 1992-07-16 | Green Cross Corporation | Promotor de levadura y procedimiento para preparar proteina heterologa. |
| NO177065C (no) * | 1988-09-26 | 1995-07-12 | Labofina Sa | Framgangsmåte for framstilling av enzymatisk aktivt humant lysozym |
-
1989
- 1989-11-14 JP JP29581889A patent/JPH03155791A/ja active Pending
-
1990
- 1990-11-13 EP EP19900121728 patent/EP0428141A3/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0428141A2 (en) | 1991-05-22 |
| EP0428141A3 (en) | 1991-10-02 |
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