JPH03151870A - 新規な組換え大腸菌菌株およびその菌株を用いるビオチン製造法 - Google Patents
新規な組換え大腸菌菌株およびその菌株を用いるビオチン製造法Info
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/185—Heterocyclic compounds containing sulfur atoms as ring hetero atoms in the condensed system
- C12P17/186—Heterocyclic compounds containing sulfur atoms as ring hetero atoms in the condensed system containing a 2-oxo-thieno[3,4-d]imidazol nucleus, e.g. Biotin
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、ＤＮＡ組換え体技術を使用して発酵作用によ
ってビオチンを製造する方法に関するものである。
ってビオチンを製造する方法に関するものである。
ビオチンは若干の微生物、特にバシラスースフエリカス
などのバシラス種のバクテリア、または大腸菌などのバ
クテリアによって天然に合成される。
などのバシラス種のバクテリア、または大腸菌などのバ
クテリアによって天然に合成される。
ピメリン酸から工業的発酵工程においてビオチンを製造
する方法の組織的研究において、若干の微生物、特にバ
シラスースフェリカス種に属する微生物はビオチンと共
にビチオン中間生成物（下記においてビタマーと呼ぶ）
を過剰生産する事が発見された。さらに詳しくは培地中
にピメリン酸塩を添加すればビオチンとその種々のビタ
マーとの生合成を著しく増大する事は公知である（１）
。
する方法の組織的研究において、若干の微生物、特にバ
シラスースフェリカス種に属する微生物はビオチンと共
にビチオン中間生成物（下記においてビタマーと呼ぶ）
を過剰生産する事が発見された。さらに詳しくは培地中
にピメリン酸塩を添加すればビオチンとその種々のビタ
マーとの生合成を著しく増大する事は公知である（１）
。
このような特性はバシラス・スフェリカスについて詳細
に研究され、この場合に生合成に関わる各種の酵素が明
瞭に同定された（２）。
に研究され、この場合に生合成に関わる各種の酵素が明
瞭に同定された（２）。
第１図はこの型の微生物中においてピメリン酸からビオ
チンを生合成する合成連鎖を示す。この生合成連鎖は各
種酵素の活性による５段階を含み、これらの段階におい
て処理される遺伝子は逐次、ｂｉｏＣ，ｂｉｏＦ、 ｂ
ｉｏＡ、 ｂｌｏＤ、 ｂｌｏＢと呼ばれる。
チンを生合成する合成連鎖を示す。この生合成連鎖は各
種酵素の活性による５段階を含み、これらの段階におい
て処理される遺伝子は逐次、ｂｉｏＣ，ｂｉｏＦ、 ｂ
ｉｏＡ、 ｂｌｏＤ、 ｂｌｏＢと呼ばれる。
培地中へのピメリン酸塩の添加はビタマーとビオチンの
基礎レベルを１０００倍に増大する。
基礎レベルを１０００倍に増大する。
バシラス・スフェリカスにおいて観察されたこのような
検証事実は、他種のビオチン生成微生物、大腸菌におい
ては確認されなかった（３）。
検証事実は、他種のビオチン生成微生物、大腸菌におい
ては確認されなかった（３）。
この種の微生物におけるビオチンの生合成経路の発見の
ために多くの研究が成された。このような生合成経路を
よりよく知ればビオチン合成収率を増大するために遺伝
子工学の技術を利用できるに相違ない。
ために多くの研究が成された。このような生合成経路を
よりよく知ればビオチン合成収率を増大するために遺伝
子工学の技術を利用できるに相違ない。
オペロンに結合した５種の構造遺伝子が同定されている
。ピメロイルー〇Ｏ＾のビオチンへの転換における４遺
伝子（Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ）の役割は証明されている。第５
遺伝子、ｂｉｏＣと前記の５遺伝子に付属しない遺伝子
ｂｉｏＨとについては研究が続けられ、さらに確認され
るべきブレカーサからのピメロイル−ｃｏＡの生合成に
おけるこれらの遺伝子の共通の役割と個々の役割を証明
しなければならない。
。ピメロイルー〇Ｏ＾のビオチンへの転換における４遺
伝子（Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ）の役割は証明されている。第５
遺伝子、ｂｉｏＣと前記の５遺伝子に付属しない遺伝子
ｂｉｏＨとについては研究が続けられ、さらに確認され
るべきブレカーサからのピメロイル−ｃｏＡの生合成に
おけるこれらの遺伝子の共通の役割と個々の役割を証明
しなければならない。
多くの特許文献において、大腸菌によるビオチンの生産
の増大のための遺伝子工学技術の利用について記載され
ている。
の増大のための遺伝子工学技術の利用について記載され
ている。
特に、国際特許公報Ｗ０ ８７１０１３９１は、大腸菌
の中における大腸菌ビオチンオペロンのクローニングと
過発現とを記載している。この文献は生成ビオチンレベ
ルの顕著な増大を記載している。しかしビオチンは、ブ
レカーサとして特にグルコースを使用して得られ、ピメ
リン酸塩を使用しない。
の中における大腸菌ビオチンオペロンのクローニングと
過発現とを記載している。この文献は生成ビオチンレベ
ルの顕著な増大を記載している。しかしビオチンは、ブ
レカーサとして特にグルコースを使用して得られ、ピメ
リン酸塩を使用しない。
ところで、ＤＮＡ組換え体としての大腸菌から工業的に
実際に経済的にビオチンを製造するためには、出発生成
物としてピメリン酸塩を使用できる事が重要である。
実際に経済的にビオチンを製造するためには、出発生成
物としてピメリン酸塩を使用できる事が重要である。
本発明は、ＤＮＡ組換え体大腸菌菌株の発酵によるビオ
チンの新規製造法において、生合成のブレカーサとして
培地中に導入されたピメリン酸塩からビオチンを得る事
のできる方法を提供する。
チンの新規製造法において、生合成のブレカーサとして
培地中に導入されたピメリン酸塩からビオチンを得る事
のできる方法を提供する。
この故に、本発明の第１目的は、バシラスΦスフエリカ
スの遺伝子ｂ１ｏ ＸＷＦとｂｉｏ ＤＡＹＢの少なく
とも一部、好ましくはこれらの遺伝子の全部を含むＤＮ
Ａ組換え体大腸菌菌株を提供するにある。
スの遺伝子ｂ１ｏ ＸＷＦとｂｉｏ ＤＡＹＢの少なく
とも一部、好ましくはこれらの遺伝子の全部を含むＤＮ
Ａ組換え体大腸菌菌株を提供するにある。
これらの遺伝子は単数または複数のブラスミドベクター
によって持ち込まれ、あるいは部分的にバクテリアゲノ
ムの中に一体化する事ができる。
によって持ち込まれ、あるいは部分的にバクテリアゲノ
ムの中に一体化する事ができる。
またこれらの遺伝子の一部は大腸菌の遺伝子とする事が
できる。
できる。
大腸菌中への発現プラスミドまたは大腸菌中への組み込
みプラスミドは公知である。この場合には、２ブロツク
組織を保持しながら、さらに好ましくは２ブロツクが対
向配置を保持しながらバシラス・スフェリカスの遺伝子
全体を保持する単一のプラスミドを使用する事が好まし
い。
みプラスミドは公知である。この場合には、２ブロツク
組織を保持しながら、さらに好ましくは２ブロツクが対
向配置を保持しながらバシラス・スフェリカスの遺伝子
全体を保持する単一のプラスミドを使用する事が好まし
い。
好ましいプロモータは誘導性プロモータである。
例えば、大腸菌のトリプトファンオペロンまたは大腸菌
のラクトースオペロンのプロモータである。
のラクトースオペロンのプロモータである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、菌株バシラス・スフェリカスの遺伝子 ｂｉｏＸＷＦとｂｉｏＤＡＹＢの少なくとも一部を含む
事を特徴とする組換え大腸菌菌株。 ２、前記遺伝子は菌株バシラス・スフェリカスＩＦＯ３
５２５に由来する事を特徴とする請求項１に記載の大腸
菌菌株。 ３、すべての遺伝子が単一のブラスミドベクターによっ
て保持される事を特徴とする請求項１または２に記載の
大腸菌菌株。 ４、ブラスミドベクターの中において、遺伝子ｂｉｏＸ
ＷＦとｂｉｏＤＡＹＢのそれぞれの発現が２つの相異な
る発現ブロックによって配向される事を特徴とする請求
項３に記載の大腸菌菌株。 ５、２つの発現ブロックはそれぞれ誘導プロモータを含
む事を特徴とする請求項３に記載の大腸菌菌株。 ６、２つの発現ブロックが逆方向に配向されている事を
特徴とする請求項４または５に記載の大腸菌菌株。 ７、少なくともピメリン酸またはその誘導体の一つを含
有する培養媒質を前項１乃至６のいずれかに記載の大腸
菌菌株によって発酵させる段階と、生成されたビオチン
を回収する段階とを含む事を特徴とする組換え大腸菌菌
株の発酵によるビオチン製造法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8816639A FR2640642B1 (fr) | 1988-12-16 | 1988-12-16 | Nouvelle souche d'escherichia coli recombinante et procede pour la preparation de biotine utilisant ladite souche |
| FR8816639 | 1988-12-16 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03151870A true JPH03151870A (ja) | 1991-06-28 |
Family
ID=9373047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32705889A Pending JPH03151870A (ja) | 1988-12-16 | 1989-12-16 | 新規な組換え大腸菌菌株およびその菌株を用いるビオチン製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0375525A1 (ja) |
| JP (1) | JPH03151870A (ja) |
| FR (1) | FR2640642B1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6277609B1 (en) | 1993-01-06 | 2001-08-21 | Basf Aktiengesellschaft | Method to produce biotin |
| EP0635572A3 (en) | 1993-06-25 | 1995-03-08 | Hoffmann La Roche | Biotin biosynthesis in Bacillus subtilis. |
| US6358714B1 (en) * | 1995-04-03 | 2002-03-19 | The Nutrasweet Company | Materials and methods for the production of D-phenylalanine |
| ATE281527T1 (de) * | 1996-09-27 | 2004-11-15 | Dsm Ip Assets Bv | Biotin-biosynthese-gene ii |
| US6737256B2 (en) * | 1997-07-14 | 2004-05-18 | Roche Vitamins Inc. | Overcoming DAPA aminotransferase bottlenecks in biotin vitamers biosynthesis |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3786578T2 (de) * | 1986-03-25 | 1994-02-03 | Nippon Zeon Co | Biotin-Synthetase kodierendes Gen und dessen Verwendung. |
| AU616380B2 (en) * | 1986-09-30 | 1991-10-31 | Transgene S.A. | Cloning of the bioA, bioD, bioF, bioC, and bioH genes of Bacillus sphaericus, vectors and transformed cells and method for preparing biotin |
-
1988
- 1988-12-16 FR FR8816639A patent/FR2640642B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-12-15 EP EP89403509A patent/EP0375525A1/fr not_active Ceased
- 1989-12-16 JP JP32705889A patent/JPH03151870A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0375525A1 (fr) | 1990-06-27 |
| FR2640642B1 (fr) | 1993-08-27 |
| FR2640642A1 (fr) | 1990-06-22 |
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