JPH01502345A - オイル組成物の調製方法 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 オイル組成物の調整法 技術分野 本発明は、ハイポプサルミチチス（Ｈｙｐｏｐｈｔｈａｌ輸１ｅｈｔｈｉｓ）及 びアブラミス（＾ｂｒａｍｉｓ＞種からの高いオメガ−３不飽和脂肪酸を有する オイル組成物の調製に関する。

技術背景　 動脈硬化及びその影響、たとえば冠状動脈閉塞により引き起こされる心筋梗塞は 、先進国における最とも頻繁な死の原因の１つである。その上昇する頻度は一般 的に、既知の手段によりその負担及び危険性を高める、生命及び栄養の態様の特 徴的な変化に帰する。

素養法においては、脂肪物質の量及び組成の実質的な変化及びゆがみが、大都市 に生存する人々の食事習慣と自然環境下に生存している人々の食事とを比較する 場合に観察され得る。この組成の変化の良く知られた結果は、高脂質血症、すな わち血液中の高められたコレステロールレベルを伴う、動脈硬化を防ぐために、 スクリーニング調節が多くの国々で導入されて来た。

過去１０年間、血液中における不飽和脂肪酸の平均のとれた分布がひじように重 要な役割を有することが見出された。

これらの脂肪酸は、生物中で代謝される化合物（該化合物は重要な調節機能を有 する）の前駆体である０食物が不飽和脂肪酸のあるグループを欠失する場合、こ のようにして得られた調節化合物の機能的な平衡が、不均等になり、健康におけ る重大な影響を導びく。

上記現象は、動脈硬化、高血圧及び血栓症がニスキモ−人及びある日本の漁村の 人々に実質的に検出されない事実により支持された。遺伝的理由は排除され、そ してその相違に対する解答は、魚に富んだひじょうに特徴的な素養法により説明 された。ニスキモ−人の１年間の魚の消費量は、１人当り７００に、を摂取する が、しかしアメリカ人の消費量は年間当り７に、及びハンガリームの消費量は年 間当り３Ｋｇである。これらの魚の種類はまたひじょうに重要である：すなわち 、それらは脂肪に富んでいる植物補食性冷海魚であり、そしてその脂肪組成物は 、そのオメガ−３不飽和脂肪酸含量量により微妙である〔＾−，Ｊ、　Ｃｌ１ｎ 、　Ｎｕｔｒ、、２８．９５８（１９７５）、　Ｌａｎｃｅｔｌ。

１１７（１９７８）、　Ｌａｎｃｅｔ２．４３３（１９７９））　。

脂肪酸は、リン脂質、トリグリセリド及び遊離脂肪酸の形で生物に存在する。そ れらの起源及び機能によれば、それらは４種の主なグループに分配され得るニー 飽和脂肪酸類： それらは、酢酸を通していづれかの生物によりいづれかの炭素源から代謝される 。それらは、動物脂肪としてほとんどヒト血液中に存在する。

一オメガー９不飽和脂肪酸類： このグループの特徴的出発物質はオレイン酸である。それ符表千１−５０２３４ ５　（２） らは動植物により合成される。

一オメガー６不飽和脂肪酸類： このグループの特徴的出発物質はリノール酸である。それらは、植物組織中に、 すなわち種子に存在する。

−オメガ−３不飽和脂肪酸類： このグループの特徴的出発物質は、リルン酸である。それらは水中に生存してい る微生物により合成され、そして前記生物を補食する魚の組織に堆積する。ヒト の食物としては、それらは、魚を食べることによってのみ摂取され得るが、しか しひじように少量のみが生物中に取り込まれる。その重要性は、この少量がほと んど脳組織中に存在する事実により証明される。それらは非不可欠な化合物であ るが、しかしその不在下では、調節障害及び疾病が生じ、そして間接的及び他の 要因と一緒でのその欠失は死さえも引き起こすかも知れない。

脂肪酸はＸ：ＹオメガＺとして分類される（炭素原子の数：二重結合の数及びＺ は、末端のメチル基を含む最後の二重結合の後の飽和炭素鎖の長さを意味する） 。

上記脂肪酸は、次のように分類される：１８：１オメガー９＝オレイン酸； １８：２オメガ−６＝リノール酸； １８：３オメガ−３＝リルン酸。

Ｃ２゜の脂肪酸のグループは、エイコサン酸、たとえば２０：４オメガ−６アラ キドン酸（ＡＡ）及び２０：５オメガ−３エイコサ−ペンタン酸（ＥＰＡ）のグ ループである。

Ｃ０の脂肪酸のグループは、トコサン酸、たとえば数ある中で２２：１オメガ− ９エルカ酸及び２２：６オメガ−３ドコサ−ヘキサン酸（ＤＨＡ）のグループで ある。

上記調節物質の形成において、Ｃ２゜のエイコサン酸は重要な役朽を示し、そし てこのようにして得られたＣ２゜化合物のグループはエイコサノイドとして命名 される。それがら得られた官能誘導体は、閉環（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａ ｄ、　Ｓｃｉ、、１９７５゜Ｈｉｍｂｅｒｇ）により形成されたトロンボキサン 及びプロスタグランジンである。後者のグループはすでにこれまで既知であるが 、しかしそれらはエイコサンに由来することは最近発見された（Ｎａｔｕｒｅ、 　１９７６、　Ｈｏｎｃａｃｌａ）、ロイコトリエンはまた追加の代謝路を通し ても得られ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、、１９７９゜Ｍｕｒ ｐｈｙ）　、そしてさらに今日、代謝物及び機能が知られるようになった。

エイコサノイドの生合成路は、第１図に例示される。その天然の出発物質は、リ ン脂質中に見出され得るアラキドン酸（ＡＡ）である、閉環の間、２個の二重結 合が開裂し、そしてデルタ−５、デルタ−１４−ジエンが形成される。従って、 このグループはまた、“ジエン代謝物”として命名される。

第１図に例示される代謝物の機能は、次のとおりである二匹旺：血管収縮剤、Ａ ＤＰ−開放、血小板活性化、活性血小板の付着が高まり、そして血管壁細胞の増 殖を刺激するホルモンが産生されるであろう、それらはまた、セロトニンの開放 及びトロンボキサンの産生を促進せしめる。

ＰＸＡ、　：血小板を義気せしめる、血栓形成を促進せしめる。

ＬＴＢｉ：炎症を誘発する、免疫反応を刺激する。

１２ＨＥＴＥ　：白血球に対する走化性効果。

Ｆｉ、：血管拡張剤。

ｌ及びｉユｌｘユ匹旺：生物から分泌される副産物。

従って、エイコサノイドのシステムは、損傷影響、たとえば外来性物質の侵入及 び堆積、血管壁の損傷、等に、炎症、アレルギー反応、血管壁の厚化及び血管収 縮並びに損傷の部分での血液の流れの妨害を供って反応する。

その効果に対して反応するそれぞれの調節の基本原理は、一定の範囲で抑制され るべきことであり、他方活性化された調節システムは、反応の、又は所望しない 方向にその条件を向ける。

この場合、生物は、エイコサペンタン酸（ＥＰＡ）及びその誘導体が同じ酵素シ ステムの類似する基質であるように応答する。これらの分子は、ＡＡ代謝物のそ の対応するメンバーと競争し、そして前者を酵素の表面に押いやるが、しかしそ れら自体の代謝物は実質的に無効果である。

２種の出発物質及びその代謝物は、デルタ−１７二重結合においてお互い異なる 。ＥＰＡ起原の代謝物は“トリエン”代謝物として呼ばれる。従って、生物のバ ランスは、ジエン対トリエン代謝物の平衡に依存する（Ｎａｔｕｒｅ　３０７， １６５．１９８４）。

ＥＰＡに由来する生合成路が第２図に示される。

第２図に示される代謝物の機能は次の通りである：ｌ：わずかに血管拡張性であ る。

匹ｈ：　ＰＣｌ３と実質的に同じ血管拡張性。

トリエン代謝物は、ホスホリパーゼＡ２及び従ってＡＡの形成を阻害するサイク リックＡＭＰレベルを高める。

２２：６オメガ−３ドコサヘキサン酸（ＤＭＡ）は、ＥＰＡの効果と同一の効果 を有する。低い炭素原子数を有するオメガ−３酸は、いわゆる“延長過程”によ り生物体中においてＥＰＡに転換される。その代謝経路及び代謝物の機能は、た とえば次の文献に記載される：　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｅｉ、 、７６゜９４４（１９７９）　；　Ｂ、Ｂ、＾、、８７５．３６９（１９８６） 　；　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｃｌ　Ｊ、　ｏｆＷｅｄ、、３１４．９３７（１９ ８６）　；　Ｔｈｒｏｍｂ　ｏｓｉｓ　Ｒｅｓ、、４２．９９（１９８６）　； Ｎｕｔｒ、　Ｒｅｖｉｅｗｓ、　４４．２０５（１９８６）。

生化学的試験、動物及び臨床実験は、不飽和脂肪酸の分布における永久的に高い 、オメガ−３に対するオメガ−６の割合が、血管収縮、血栓症、アレルギー及び 炎症への感受性を高めることを証明した。前記割合を正すことによって、それぞ れ疾病が防止され得、そして病気の徴候が抑制され得る。

その割合を正すためには、オメガ−３不飽和脂肪酸の投与が、一般的な食事習慣 下で必要であろう、オメガ−３不飽和脂肪酸に富む魚肉又は組成物は、血漿中の 脂質含有量に都合良く影響を及ぼし、いわゆるＶＩＤＬ及びＬＤＬ画分がＨＬＤ 画分に対して減少し、そしてその徴候は、コレステロールの蓄積を減じ、そして 分泌を促進することに見られる（Ｐｒｏｇ、　Ｌｉｐｉｄ。

Ｒｅｓ、、２５．４６１（１９８６））　、他の実験によれば、修正されたオメ ガ−３に対するオメガ−６の割合は、ある皮膚疾患の処理において重要な因子と して見なされる〔＾ｒｃｈ、　Ｄｅｒｍａｔｏｌ、　１２２゜１２７７（１９８ ６））　、さらに、悪性増殖及び転移の分野の研究はまた、変性された脂肪酸割 合の役杓を証明した（Ｐｒｏｇ、　Ｌｉｐｉｄ。

Ｒｅｓ、、２５．５８：１１（１９８６））　。

前記発見は、冷海水魚、たとえば、イワシ、サバ、サク、タラ、ニシンの消費を 高めるための研究及び援助を強く促進した。またいくつかの淡水魚も、オメガ− ３不飽和脂肪酸のための源であり得ることがまた示されている０問題の種は、７ ％の脂肪含有率のシプリナスカリビオ（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ　ｃａｒｐｉｏ）であ り、ここでＥＰＡ含有率は合計脂肪量の４．０％であり、そしてＡＡ値は１．３ ％である（Ｌａｎｃｅｔ、　７１７．１９８３　ａｎｄ　Ｐｒｏｇ。

Ｌｉｐｉｄ、　Ｒｅｓ、、２５．２０７（１９８６））　。

＾ｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ　Ｈｕｎｇａｒｉｃｉ　１．３５（１９７８）の論文は 、ハンガリーに広く繁殖するハイポプサルミチチス種の脂肪酸含有率についての 試験を報告するその論文は、食料供給の影響を報告する。その結果に従えば、前 記種におけるＥＰＡ−含有率は、合計脂肪含有量の８．３％又は９．９％に達す る。その対応するＡＡ−値は、それぞれ７．５及び８．５％として見出された。

食費法専門家は、過度の魚の消費は、前記化学物質が初めに魚類に蓄積されるよ うに、殺虫毒性を引き起こすことを指摘する。この理由のために、及び再生でき る投与法を確保するために、オメガ−３不飽和脂肪酸を含む組成物の製造及び販 売が、まずアメリカ合衆国において導入された。これらは、最っとも頻繁には、 オメガ−３不飽和脂肪酸（ＥＰＡ及びＤＭＡ）を２０〜５０％の含有率で有する カプセル化されたオイルである。

しかしながら、これらの可能性は、食事を修正することに対して基本的な影響を もたなかった。良く知られているように、一定の脂肪酸の長期の消費は、生物に 有害である。従って、Ｃ２゜及びＣ２□のモノエン脂肪酸は心筋膜に特徴的に蓄 積し、従って進行的な劣化及び刺激伝達障害、すなわち病理学的なＥＫＧを引き 起こす。

Ｃ２２のエルカ酸は、ナタネ油中に多量に存在する。今日、エルカ酸のないナタ ネを改良するために多大な努力が行なわれている（Ｌｉｐｉｄｓ、　７４６及び ５４８（１９７２）　）　。

１９８６年に入手できるオイル組成物は、この点を分析されていない０本発明者 の試験は、好ましくない結果を提供した。

すなわちいくつかのそれらの例が下記に例示されている：ＥＰＡ　Ｄｆ１＾　２ ０：１　び２２：１タラの肝１１　１０％　１１％　２４％５ＵＰＥＲ−ＥＰＡ 　３０％　２０％　１１％ＬＯＶＩＴＲＯＮ　９％　１１％　２０％また追加の 組成物、たとえばＰＲＯＭＥＧ＾、　ＰＲＯＴＯＣＢＯＬ又はＯＮＥに＾−３− ＥＰ＾は、活性物質の他に５５〜８６％の混合されたバラスト材を含む。

本発明は、上記有害な効果を排除するための溶液を提供することである。

及乳＠匠豆 日常の健康及び医学的処置の両者にためのひじょうに重要である上記目的が、生 物に対して有害な追加の効果を保持しないでかなえられることが見出された。高 い含有量のオメガ−３不飽和脂肪酸を有し、そして２０：１及び２２：１の脂肪 酸を含まない調製物が、野生又は飼育されたハイポプサルミチチス種ニジルバー カーブ類（Ｈ，ｍｏｌｉｔｒｙ（Ｖａｌｕｃｉａｎｎｅ））及びビッグヘッドカ ーブ類（Ｈ，ｎｏｌｉｂｉｓ（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ））並びにあるタイ類（ア ブラミス）、好ましくはアブラミス　ブラフ（＾ｂｒａ曽ｉｓｂｒａｗ＆）の腹 腔内脂肪を出発物質としてそれぞれ用いることによって調製され得る。脂質が有 機溶媒、溶媒混合物、熱湯又は蒸気によりそこから抽出され、そしてこのように して得られた脂質混合物は、脂質−尿素複合体を形成し、そしてそれを分離する ことによってより高い不飽和の脂肪酸に富化される。

それぞれハイボプサルミチチス及びアブラミス種は、２ｏ：１及び２２：１の脂 肪酸を本質的に含まず、そして比較的高いＥＰＡ−及びＤＨＡ−含有量を特徴と する。筋肉の脂肪含有率は低く（３％）、すなわち、上記に列挙された海水魚の 含有率の約１／１０であるが、しかし脂肪蓄積の実質的な量は、前に残骸として 処理された内臓上に見出され得る。腸及び網から分離された脂肪組織は、はとん ど１００％の脂肪含有率の他に、驚くべき且つ好ましくは、ひじように低いＡＡ −含有率を示す、脂肪酸の主要部は飽和脂肪酸及びオレイン酸から成り、その量 は尿素−複合体形成により実質的に減じられ、そして従って活性成分含有率（Ｅ ＰＡ、ＤＨＡ及びＣＩ８ポリエンＥＰ＾に転換されたオメガ−３脂肪酸）は、６ ０％まで高められ得る。

尿素複合体を形成することによる精製法は、脂質文献から良く知られているＣＢ 、　Ｐ、　Ｋａｕｆｍａｎ　：＾ｎａ１ｇｓｅ　ｄｅｒ　Ｆｅｔｔｅ　ｕｎｄＦ ｅｔｔｐｒｏｄｕｋｔｅ、　Ｂａｎｄ　１．７６ページ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖ ｅｒｌａＢ（１９５８））。

その方法は、高い不飽和の脂肪酸は複合体中に尿素を含まないが、モノエン又は 飽和脂肪酸は尿素との複合体を形成する認識に基づかれる。前記複合体はそのシ ステムから沈殿する。

この方法は、ＵＳ−ＰＳ第４，３７７．５２６号により海水魚のオイルを処理す るために使用される。この方法により、積比学的純度（７５〜９３％）のＥＰＡ が得られ、ここで尿素濃縮が第１又は第２段階として行なわれる。単一の成分の 分離法として、分留、低温での分別結晶分子蒸留又は銀−飽和樹脂上でのイオン 交換クロマトグラフィーを挙げることができる。

本発明の方法は、次の利点を有する： −ハイボプサルミチチス種は、十分に繁殖可能な単純な魚の種類であり。

−その脂肪組織を用いることによって、抽出されるべき量が１／１０に減り、 −その脂肪組織を用いることによって、処分できる廃棄物質がほとんど利用され 得す、すなわち環境に対する有害な物質が使用され、 一出発物質の特徴的な脂質組成物が、単純な一段階精製法を用いることによって 、高い活性成分含有物を含みそして有害な物質を含まない組成物を得ることを確 保し、−タイ類（アブラミス）はまた産業的に捕獲され得、そして特別な飼育を 必要としない。

本発明に従って得られた組成物は、食物の完成化及び健康符表千１−５０２３４ ５　（４） の管理のために作用する。それは、高い活性成分の含有物（ＥＰＡ十〇Ｂ＾）及 び好ましくは低いそのＡＡ−含有物により°卓越し、そして微量さえの２０：１ 及び２２：１の酸がそれらの中に見出され得ない。

さらに本発明の方法の利点は、脂質抽出が、価値のない廃棄物質（その量は、新 鮮な又は完全な魚の量よりも実質的に少ない）に対して行なわれることである。

その得られた粗生成物は、単純な一段階法により効果的に精製され得る。

本発明に従って調製された組成物は、血管収縮、動脈硬化、血管閉塞、アレルギ ー性皮膚炎及び腫瘍性転移を妨げるために食物中に混合することによって使用さ れ得又はカプセル化され得る。その組成物はまた、前記疾病の場合に正しい素養 法を調節するためにも使用され得る。毎日の投与量は、その徴候及び処理の期間 に依存して、０．２〜２．０ｇに変化することができる。

区里ｍＢｄ魁１ 第１図は、エイコサノイドの生合成路を示す。

第２図は、ＥＰＡから出発する生合成路を示す。

第３図は、例９における出発オイルの脂肪酸組成物を示す。

第４図は、例９において得られた脂肪酸混合物の分析を示す。

ｔ・めの　の 例１ ３才のシルバーカーブ（池で繁殖され１．２Ｋｇの重さ）を処理する場合、内部 を取り出し、そして内臓上に付着する厚い脂肪組織を手で分離した。１匹の魚か ら得られた組織の重量は平均１３５ｇであった。脂肪組織及び肉からそれぞれ１ ｇのサンプルを取り、そしてそれぞれ５ｍｆｆ１の石油エーテルにより３度抽出 し、その結果、組織を第１回の溶媒充填物と共に乾燥硫酸ナトリウム２ｇの存在 下で均質化し、その固形部分を枦去し、そしてフィルター上でそれぞれ５社の石 油エーテルにより２度懸濁した。３種の溶媒画分を組合し、そして油状残留物が 得られるまで真空蒸発せしめた。油状物を、ガスクロマトグラフィーにかけた。

得られた結果を、カーブの肉の抽出物から得られた結果と比べた。

脂肪酸　シルバーカーブ　カーブ 腹腔内からの １４：０　３，０　１．フ　１，６ １６　：　０　１６，１　１８，３　１７，０１８：　０　０，４　４，６　５ ，０ １６：９オメガ−９７，９５，２フ、０１８　：　１　４５，４　１２，６　５ ４，７１８：２オメガ−６１，５２，６６，３２２：　５　０，５　３，３　０ ，２ １８＝３オメガ−３１，４４，３０，７１８：　４　ｎｙｏｍ　Ｏ，２ ２０：４ ２０　：　５　４，６　１２，４　０，７２２：　５　０，７　２，４　０．１ 腹腔内からの脂肪は、２０：１及び２２：１の脂肪酸を含まず、そしてひじよう に低いＡＡ−含有量を有した。ＥＰＡ−及びＤＨＡ含有量は、肉のそれらの含有 量と比べて比較的少ないけれども、抽出されるべき組織の合計重量に関しては、 その肉の効果的なＥＰＡ−及びＤＨＡ含有量は、脂肪組織のそれの約１／１０で あった。

例２ ３才のビッグヘッドカーブ（２１００ｇの重さ）を処理した。切開し、そしてえ らを抜いた後、内臓上の脂肪組織を手で分離し、そして従って２００ｇの組織を 得た。それぞれ１ｇのサンプルをその脂肪組織及び魚の肉から取り、そして例１ に、記載のようにして抽出し、そしてガスクロマトグラフィーにより分析した。

その得られた結果を、完全な一匹のサンマからの圧縮されたオイルの結果と比較 した。

脂肪酸　ビッグヘッドカーブ　サンマ 腹腔内からの １６　：　０　２０，１　１７，４　１５，１１８　：　０　２，４　６，１　 ２，３１６：１オメガ−９１３，５３，４３，９１８：　１　３１，５　１０， ０　１３，８２０：　１　１，１　０，９　８，４ ２２　：　１　１０，５ １８：２オメガ−６１，７２，８１，１２０：２　０，２　０，２ ２０：３　０，９　０．３ ２０：４　１，０　８，９　０，８ ２２：４　ｏ、ｓ ２２：５　０，１　２．３ １８：３オメガ−３１，９３，８１，４１８：４　０，２　３，３ ２０：４　０，７　０，３ ２０　：　５　６，６　１４，３　７，０２２：　５　１，４　２，４　０，６ ２２　：　６　２，４　１６，７　１０．５ビツグヘツドカーブの腹腔内からの 脂肪組織の脂肪酸組成物は、シルバーカーブのそれに類似し、肉の脂肪組成物は 、より高いＡＡ−含有量及びＥＰＡ−及びＤＨＡ−含有量の百分率で変化した。

しかしながら、オイル抽出のために肉を使用する場合、抽出されるべき物質の重 さは再び多数存在した。

サンマの場合、それはＥＰＡ及びＤＨＡの良好な源を構成するが、その生成物の 高い２０：１及び２２：１の含有率が検出された。

Ａ３ 例１に従って得られた脂肪組織１００ｇを、高速度実験用ホモジナイザー、たと えばＭＳＥホモジナイザーを用いて、ｎ＝８０００ｒｐｍで２層３分間、クロロ ホルム及びメタノールの混合物（２：　１　、ｖ／ｖ）２０００ｇと共に均質化 した。このようにして得られたエマルジョンを３時間静置し、次に沈殿物を形成 するタンパク質を−ｈａｔ＋＋＋ａｎ　ＩＰＳ紙上で一過することにより除去し 、そして０．２Ｍの塩化カリウム水溶液４００社を前記ｒ液に添加した。そのシ ステムを２層に分離し、そしてその分離の完結の後、脂質を含む低い相を分離し 、そして上方の相を捨てた。そのクロロホルム溶液を、乾燥硫酸ナトリウム上で 乾燥せしめ、濾過し、そして溶媒をＰ液から蒸留せしめた。無色又はわずかに黄 色の油状物８３．２．を得、そして脂肪酸組成物は、例１に従って得られた組成 物と同一であった。

例４ 例２で得られた脂肪組織１００ｇを、乾燥硫酸ナトリウム２００゜の存在下で均 質化することによって石油エーテル８００ｍ１により抽出した０組織残留物及び 塩を枦去し、沈殿物を石油エーテル２　Ｘ　１００ｍ１により洗浄し、そして洗 浄物を抽出物と組合した。このようにして得られた脂質溶液から溶媒を真空蒸留 し、９１ｇのわずかに黄色の油状物を得た。その脂肪酸組成物は、例２で得られ た生成物のものと同一であった。

例５ １才のシルバーカーブの処理においては、脂肪組織を腹腔内から集めた。その物 質を氷で満たされたプラスチック容器中に貯蔵し、そして溶融する氷の温度で抽 出の場所に移した。

脂肪組織５０００ｇを、Ｔｕｒｒａｘ撹拌機を備えた２０１のステンレス鋼容器 中に入れ、７０〜８０℃の水５１を添加し、そしてその混合物を３０分間、均質 化した０次に水２Ｘ５００ｍｌを添加し、そしてそれぞれの添加の後、その混合 物を数秒間、撹拌した。その装置を、冷却キャップを通して流れる水により冷却 した。温度が３０℃に下がった後、油状層が水性懸濁液の表面上に現われるまで 、前記物質を静置した。その油状物をデカント用パイプにより吸い取ることによ り取り出し、そして油状物を含まない水性相を捨、てな、その油状物を一過又は 分離することにより乾燥せしめ、このようにしてわずかに黄色の物質４６５０ｇ を得な。

例６ ３匹のタイ　（アブラミス　ブラフ）（それぞれ２５０ｇの重さである）を、腹 腔内から内臓を除き、そして脂肪組織を集めた。

３０ｇの脂肪組織を得、そしてこれを１００ｍ１の石油エーテルの存在下でブレ ード　ホモジナイザーにより押しつぶした。

その均質物を一過し、そしてそのｒ液を乾燥ＷＬｆｍナトリウム上で乾燥せしめ た０石油エーテルを真空蒸留し、そしてこのようにして得られた２５ｇの無色の 脂肪サンプルのアリコートをメチル化し、そしてその脂肪酸組成物をガスクロマ トグラフィーにより決定した。その分析データを、北海のサケ（Ｓａｌｓｉｏｎ 　５ａｌａｒ）から単離されたトリグリセリド含有量と比較した。

腹腔内からの　筋肉の 脂肪　トリグリセリド １４　：　０　６，６　６．６ １６　：　０　１１，９　９．０ １８：Ｏｏ、ｓ　Ｏ，２ １６：１オメガ−９１２，５６，３ １８：１オメガ−９２０，６２１，３ ２０：１オメガ−９１，２２１，３ ２２：１オメガ−９１３，５ １８：２オメガ−６７，９４，１ ２０：２オメガ−６０，２０，２ ２２：４オメガ−６０，６ １８：３オメガ−３７，３１，０ １８：４オメガ−３２，８Ｚ、７ ２０：４オメガ−３０，６０，６ ２０：５オメガ−３８，３４，８ ２２：５オメガ−３１，５１，４ 例７ 例３，４又は５のいづれかから得られたオイルにおいて、そのオイルをその１０ 倍の体積の石油エーテル中に溶解することによって脂肪酸を開放し、そして存在 するその脂肪酸と同量のエタノール性水酸化カリウムをそこに添加した。そのシ ステムを周囲温度で１０〜１６時間靜置した装置の期間に、トリグリセリドの鹸 化が生じな、約１２時間後、同量の水を、その反応混合物に添加し、混合し、そ して静置又は分離により、層を分離しな、上部の石油エーテル性層を捨て、そし て低部の層は、塩酸の添加によりｐＨ＝　４．０に酸性化することによって分解 される脂肪酸のカリウム塩を含んだ、遊離酸をその水溶液から石油エーテル中に 抽出し、そして次に溶媒を蒸留し、オイル（油状物）を得な。

例８ 例３，４及び５のいづれががら得られたオイル中の脂肪酸から、メチルエステル を、半分の体積のメタノール中に溶解されたナトリウムメトキシドを前記オイル に添加することによって形成しな、添加されたナトリウムメトキシドは、脂肪酸 含有量と等モルで存在した０反応混合物を室温で１０〜１６時閏静置し、そして 次に脂肪酸に基づ＜１０倍体積の石油エーテル及び層の分離のために必要な量の 水を添加した。低い層を捨て、石油エーテル溶液を、水により洗浄し、そして溶 媒を蒸留せしめた。このようにして得られたオイルは、脂肪酸メチルエステルを 含んだ。

例９ より高い不飽和度の脂肪酸に富化するために例７で得られた遊離脂肪酸又は例８ で得られた脂肪酸メチルエステルの処理を、次の通りに行なったニ オイル物質から２０％メタノール溶液を調製し、これに、存在する脂肪酸の分子 量に基づいてメタノールに溶解された２０倍量の尿素を添加した。最終溶液の脂 肪酸濃度を１０％にするためにメタノールの量を選択した０反応混合物を、３〜 ５℃で２４時間靜１した。この間に、それぞれ主な量の飽和モノ−及びジエン脂 肪酸及び脂肪酸メチルエステルが、そのシステムから結晶化される尿素と付加物 を形成した。その結晶を、冷却しながら同じ温度下で枦去した。そのＰ液を水に より２倍体積に希釈し、ポリエン脂肪酸を石油エーテル中に抽出し、そして溶媒 を蒸留することによって回収しな、第３及び４図は、熱湯抽出、鹸化及び生成に よりシルバーカーブの脂肪組織から得られた脂肪酸の尿素精製を示す、第３図は 、出発オイルの脂肪酸組成物を示す、第４図は、本発明による付加物形成により 得られたポリエン−富化脂肪酸混合物の分析を示す。

脂肪組織を保存するために、所望により強い冷凍又は酸化防止剤、たとえば０． １％のトコフェロール又は０．０５％のブチル化ヒドロキシトルエンの添加が行 なわれ得る。溶媒抽出は、たとえば逆流抽出器で行なわれ、そして水性抽出は脂 肪組織に蒸気を与えることによってオートクレブ中で行なわれ得る。

遊離脂肪酸はまた、酵素分解により、たとえばリパーゼによりＭｆｒ化された水 性媒体中に生成され得る。

尿素複合体形成は、５０〜７０℃で３０〜６０分間、加熱することによって行な われる。その付加物を沈殿せしめるためには、システムを３０℃以下に冷却する 。

脂肪酸はまた、他の脂肪溶媒、たとえばｎ−ヘキサン、ベンゼン、エチルアセテ ート、等によりその水溶液から抽出され得る。溶媒を蒸留する前、水、たとえば 酢酸エチルを含むものは、硫酸ナトリウム、樹脂処理、等により乾燥されるべき である。

ＰＬ　ＡＡ（ソ＞！ｉＦＸ　） Ｆｉ；ｉ ＰＬＥＰＡ ９′ｖ−〇 ■？Ｌ０ ＦＸＧ、岑 手続補正書 平成１年３月１７日 特許庁長官　吉　１）文　毅　殿 １、事件の表示 ＰＣＴ／ＨＵ８８１０００２７ ２　発明の名称 オイル組成物の調製方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 名称　エムテーアー　セゲディ　ビオローギアイケズポントヤ ４、代理人 住所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号＆　補正の対象 明細書 ６、補正の内容 （１）（Ω　明細書第８頁第２３行、「両者のための」をｊ両者のために１と補 正する。

（ｏ）　同第１０頁第１８行、「利用され得す、」をｒ得られず、Ｊと補正する 。

し〜　同第１６頁第２２〜２３行、「（それぞれ２５０ｇの重さである）を、」 を「（それぞれ２５０ｇの重さである）のｊと補正する。

国際調査報告 ＋Ｐ＋＊ｍａ・ｔｑａ：ム！！’、１ｌｊｌ−ζＩ三Ｓ：ンーー°ミミ：：：： −

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．魚類から脂質を抽出することによってオメガ−３不飽和脂肪酸を含む栄養補 足組成物を調製するための方法であって、魚としてハイポプサルミチチス又はク イ類（アブラミス）を使用し、そして所望によりその抽出物を尿素複合体形成に より精製することを特徴とする方法。
2. ２．ハイポプサルミチチス種を用いることを特徴とする請求の範囲第１項記載の 方法。
3. ３．繁殖されたハイポプサルミチチス種を用いることを特徴とする請求の範囲第 ２項記載の方法。
4. ４．シルバーカーブ又はビッグヘッドカーブを用いることを特徴とする請求の範 囲第２及び３項のいづれか１項記載の方法。
5. ５．タイ類（アブラミスブラマ）を用いることを特徴とする請求の範囲第１項記 載の方法。
6. ６．抽出のための出発原料として魚の腹腔内脂肪を用いることを特徴とする請求 の範囲１〜５項のいづれか１項記載の方法。