JPH01500901A - キメラペプチド及びそれを含む組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 脳血液関門を通過させて神経ペプチドを導入するためのキメラペプチド 見匪勿實見 本発明は、広い意味においては、脳血液関門通過のトランスサイト−シスを利用 して、神経薬物を、脳内に導入するための技術に関する。より具体的には、本発 明は、神経薬物を、脳血液関門通過のレセプター仲介トランスサイト−シスによ り、脳の中に輸送しうるキメラペプチドに関する。

本発明は、米国国立保険研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔ宵ｓ　ｏｆ） １ｅａｌｔｈ）の許可番号ＮＳ−１７７０１号の下に付与された米国政府の援助 により達成されたものである。

を推動物の脳には１体のいかなる部分の臓器とも異なる、独特の毛細血管網があ る。その独特の毛細血管網は、脳血液関門（ＢＢＢ＞　を形成する形態学的特徴 を有している。脳血液関門は、脳の間質部を血液から隔離するための１毛細血管 網金体に亘る細胞膜としての役割を果たす。

脳血液関門（ＢＢＢ）を形成している脳の毛細血管に特有な形態学的特徴は、 （ａ）脳の毛細血管のすべての内皮を１文字通り、互いに結合させ、かつ、高度 の抵抗を有するとともに１強固な上皮様連結部と。

（ｂ）抹消臓器の内皮に多く見られる、弱い飲作用、すなわち内皮の通過通路と を有することである。

前記特徴は、脳血液関門に特有なものであるため、体の他の細胞には簡単に通過 する親水性の薬物およびペプチドも。

脳への通過は阻止される。また、たとえ通過したとしても、その速度は非常に遅 い。

前記のように、通常の方法によっては脳血液関門を通過させることのできない薬 物を、脳内部に輸送するための種々の方法が開発されてきている。

最も広く使用されている方法は、薬物を直接層の中に送り込む侵入法である。最 も一般的な侵入法は、脳血液関門をバイパスさせて、薬物を脳に直接注入できる ように、カテーテルを、脳室系に移植するものである。この方法は、例えば。

脳の白血病的併発のような、脳を髄膜に起こりやすい病気の治療に用いられてい る。

脳室に薬物を直接送り込むための侵入法によって、ある程度の成果は得られるが 、この方法では、薬物は、脳細胞の表面部に輸送されるだけで、脳組織の深層部 には輸送されないので、完全に目的を達成しうるとは言えない、また、侵入法は 、患者にとって、危険をはらんでいる。

脳血液関門を迂回するためのその他の方法は、薬物の潜伏性、すなわち親水性薬 物を、脂溶性薬物に転換することを利用した。薬理学に基づくものである。

潜伏性を利用する方法の大部分は、薬物の脂溶性を高めて、その脳血液関門の透 過率を高めうるように、水酸基、カルボキシル基、並びに第一アミン基を、薬物 上に封鎖することを条件としている。薬理学的方法により、若干の効果は得られ るが、シクロスポリンの脳血液関門通過の輸送に関する本発明者の経験から言え ば、ペプチドを脳血液関門を通過して輸送させる場合には、前記方法では十分な 結果は得られない。

シクロスポリンは、脳血液関門を比較的遅い速度で通過する高度の潜伏性（脂溶 性）を有するペプチドである。

脳血液関門を避けて通すためのもう一つの方法では、脳血液関門を一時的に解放 して、親水性薬物を通過させるようにする高張物質を、動脈内に注入する。しか し、高張物質は、潜毒性を有するので、脳血液関門を損傷する可能性がある。

従って、現在、親水性薬物およびペプチドを、脳血液関門を通過させて、脳内部 に輸送しうるように改良した物質および方法が必要とされている。そのような改 良した物質および方法は、親水性のペプチドあるいは薬物を、脳全体に均一に輸 送し、かつ患者に対する危険性を最小限にしうるちのであることが望ましい。

見匪立災豊 本発明による新規の方法および物質は、神経ペプチドおよびその他の薬物を、脳 全体に均一に輸送するとともに、従来の侵入法および薬理学的な薬物注入法に見 られた欠点を解消しうるものである。

本発明は、薬物と、細胞のレセプター仲介型トランスサイト−シスによって脳血 液関門を通過しろる輸送可能なペプチドとを、結合させると、薬物の親水性ペプ チドは、生理的に脳血液関門を通過して輸送されるという驚くべき発見に基づい ているにれは、脳血液関門は、親水性の薬物あるいはペプチドを浸透させない受 動関門であるとみなす伝統的な見解に照らして考えれば、全く以外な事実である 。

本発明は、また、神経薬物を、トランスサイト−シスによって、脳血液関門を通 過させ、脳内に輸送させるようにした新規のキメラペプチドに関する。

キメラペプチドには、レセプター仲介のトランスサイト−シスによって、比較的 速い速度で、脳血液関門を通過することのできる輸送可能なペプチドが含有され ている。このペプチドは、神経薬物と結合して、キメラペプチドを形成する。

一般に、神経薬物は、それ自体は、さしたる脳血液関門の通過性を有しない親水 性ペプチドからなる。意外にも、輸送可能なペプチドと、神経薬物とを結合させ ることにより、脳血液関門を通過して輸送させうるキメラペプチドが作成される ことが分った。

本発明の特徴の一つは、脳血液関門におけるレセプターを介して行なねれるトラ ンスサイト−シスの生理的過程によって、キメラペプチドは、脳血液関門を通過 して輸送されることである。

この特徴により、キメラペプチドは、確実に、脳のすべての部分に均一に輸送さ れる。また、キメラペプチドを、生理的な通路によって脳に輸送するので、伝統 的な侵入法および薬理学的方法に見られた有害な副作用、危険性を減少させるこ とができる。

また、本発明は、キメラペプチドの皮下投与法あるいは鼻腔内投与法、並びにそ のような治療法に用いられるキメラペプチド含有組成物にも関する。

本発明に関する前述の特徴、その他の多くの特徴、並びに付随する長所は、添付 の図面を参照して行う以下の詳細な説明により、明らかになると思う。

璽ｍ免返１− 図は、実施例２で説明したテストの結果を示すグラフである。

又朋ｆｉ目ｌ吸 本発明によるキメラペプチドは、種々の神経薬物を、脳に輸送するために有益で ある。特に１本発明によるキメラペプチドは、親水性のペプチドからなる神経薬 物の輸送に最適である。

一般に、これらの親水性ペプチドは、脳血液関門を通して、殆んど輸送されない 。

親水性ペプチドの神経薬物の例としては、を髄損傷およびラウ・ゲーリグ（Ｌｏ ｕ　Ｇｅｈｒｉｇ）病の治療に用いられるチロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ） 、健忘症の治療に用いられるバソプレッシン、種々の硬化症の治療に用いられる アルファ・インターフェロン、アルツハイマー病の治療に用いられるソマトスタ チン、疼痛を治療するために用いられるエンドルフィン、てんかんの治療に用い られるし一メチオニル（スルホン）−Ｌ−グルタミン−Ｌ−ヒスチジル−し−フ ェニルアラニル−Ｄ−リシル−Ｌ−フェニルアラニン（副腎度質刺激ホルモン（ ＡＣＴＨ）−４〜９の同族体）、不眠症の治療に用いられるミュラミルジペプチ ドなどがある。

前記の神経薬物ペプチドは、すべて市販されているが、公知の技術を用いて、天 然資源から分離することもできる。

次に、神経薬物が親水性ペプチド（神経ペプチド）からなることを特徴とするキ メラペプチドに限定して説明するが。

本発明は、それ自体は、脳血液関門を通過して輸送される率が低いか、あるいは 全く通過しないような神経薬物に適用可能である。

また、本発明は、脳血液関門を通過して神経薬物を輸送する率を高める必要のあ る場合に適用することができる。

キメラペプチドには、トランスサイト−シスによって、親水性の神経ペプチドよ りはるかに高い率で脳血液関門を通過しうる輸送可能なペプチドと結合させた親 水性ペプチドからなる薬物が含まれている。

輸送可能なペプチドとして好適なものは、インシュリン、トランスフェリン、イ ンシュリン様成長因子１　（ＩＧＦ−１）、シンシュリン様成長囚子ＩＩ　（Ｉ ＧＦ−ＩＩ　）、塩基性アルブミン、並びにプロラクチンなどである。

トランスフェリンは、血液循環の主要な鉄輸送タンパク質としての役割を果たす 、８０にの糖タンパク質である。また。

トランスフェリンは、髄液（Ｃ５Ｆ）中に豊富に含まれているタンパク質でもあ る。トランスフェリンは、様々な方法で入手できるが、市販のものを使用するか 、または公知の技術を用いて、血液あるいは髄液から抽出することができる。

インシュリン、ＩＧＦ−Ｉ、並びにＩＧＦ−Ｉｔもまた、普通に入手可能なもの である。インシュリンは、大量に販売されているが、公知の技術を用いて、天然 資源から抽出することもできる。

ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩは、米国アムゲン（Ａｍｇｅｎ）社あるいは米国 ベニンシュラ・ラボラトリーズ（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｓ）社などから発 売されているが、ローゼンフェルド（Ｒｏｓｅｎｆａｌｄ　）他による方法を用 いて、天然資源から分離することもできる（「ジャーナル・イブ・クリニカル・ エンドクリノロジカル・メタボリズム（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏ ｌ、　Ｎａｔａｂ、）Ｊ　５５号、４３４頁（１９８２年））。

塩基性アルブミン、あるいはカチオン化アルブミンは、自然アルブミンの等電点 （ｐＩ）がｐＨ３，９であるのに対して、ｐ）１８．５の等電点を有する。カチ オン化アルブミンは、自然アルブミンと異なり、脳血液関門を通過して急速に脳 に浸透する。

カチオン化アルブミン（ｐＩ＝８．５）は、ベルクマン（Ｂｅｒｇｍａｎｎ）他 のよる「上皮小体ホルモンに対する、ラット胎児培養長管の反応度を高めうるカ チオン化血清アルブミン（ＣａｔｉｏｎｉｚｅｄＳｅｒｕｍ　Ａｌｂｕｍｉｎ　 Ｅｎｈａｎｃｅｓ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ　ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｄ　Ｆａｔａｌ　 ＲａｔＬｏｎｇ　Ｂｏｎｅｓ　Ｔｏ　Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ　Ｈｏｒｍｏｎｅ ）Ｊ　（内分泌学（Ｅｎｄｏｃｉｎｏｌｏｇｙ）、１１６号、１７２９〜１７３ ３頁（１９８５年）において開示された方法を用いて、ヘキサメチレンジアミン （ＨＭＤ）と。

ウシ血清アルブミン（ｐＩ　＝　３．５）とを共有結合させて得るのが好ましい 。

次に、カチオン化アルブミンの製造法の一例につき説明する。

１０ｍＡの１０％アルブミン含有水溶液を、２．ＯＭのへキサメチレンジアミン ６０−Ｑにゆっくりと添加し、　ＩＮのＨＣＩで、ｐＨを６〜７に調節する。３ ０分後２．アルブミンのカルボキシル基を活性化するために、Ｎ−エチル−Ｎ’ −３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＡＣ）　１　ｇ を添加する。１時間後、さらにＥＤＡＣを１ｇ添加、　０．２ＮのＨＣＩで、ｐ ）ｌを常に６〜７に修正する。

前記溶液を、常時撹拌しつつ、−夜装置する。次の日、前記溶液を、過剰の蒸留 水に対して透析する０次に、ファーマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　）社製造のポ リバッファ交換体９４樹脂およびポリバッファ９６溶離緩衝液を用いたクロマト フォーカス法で精製する。

プロラクチンは、下垂体前菜中で分泌されるホルモンである。プロラクチンは、 広く市販されているものを利用してもよく、あるいは公知の方法を用いて、原性 脳下垂体から分離することもできる。

キメラペプチドは、輸送可能なペプチドを、神経薬学的ペプチドと結合させて作 られる。

ペプチドの結合は、２つのペプチドのいずれとも反応しうる二価性試薬を用いて 、両ペプチド間に橋を形成させるようにして行なわれる。

好適な結合法は、キメラペプチドの形成のために、２つのペプチドの間にジスル フィドの橋を形成するべく、両ペプチドを、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピ リジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）のような試薬で処理することを特徴 としたペプチドのチオレート化を応用した方法である。

その他の公知の結合剤についても、２つのペプチド（すなわち、親水性のペプチ ド薬物および輸送可能なペプチド）を、変性させることなく、結合させうるもの であれば、どのような結合剤でも使用してよい、ただし、キメラペプチドの架橋 結合は、キメラペプチドが一旦脳に入ったならば、容易に壊れることが好ましい 。

適当な結合試薬としては、例えば、グルタルアルデヒド、シスタミン、並びにＥ ＤＡＣなどがある。

グルタルアルデヒドを用いたペプチドの結合については。

ボズナンスキー（Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ）他による「シンシュリン：＃素及び薬物 治療のためのキャリヤー電位（Ｉｎｓｕｌｉｎ　：　Ｃａｒｒｉｅｒｐｏｔｅｎ ｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　ｄｒｕｇ　ｔｈｅｒａｐｙ）Ｊサイ エンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、　２２３号、１３０４〜１３０６頁（１９８４年） ）に開示されている。

また、シスタミンおよびＥＤＡＣを用いて行なうペプチドの結合については、イ トウ（Ｉｔｏ）他による「内在細胞表面レセプターを迂回するためのポリペプチ ドホルモンの膜透過性輸送：インシュリンおよびａ２−マクログロブリン（ａ２ Ｍ）と、生理学的活性とを、細胞内通路との関連において認識してなるインシュ リンおよびａ２Ｍの結合（Ｔｒａｎｓｍｅ＋５ｂｒａｎｅ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　 ｏｆｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｂｙｐａｓｓｉｎｇ　ｔｈｅ 　１ｎｔｒｉｎｓｉｃ　ｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　：　ａ 　ｃｏｎｊｕｇａｔｅ　ｏｆ　１ｎｓｕｌｉｎ　ｗｉｔｈａ２−ｍａｃｒｏｇｌ ｏｂｕｌｉｎ（ａ２Ｍ）　ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ　ｂｏｔｈ　１ｎｓｕｌｉｎ 　ａｎｄ　ａ２Ｍｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ 　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｔ。

ｅｎｄｏｃｙｔｉｃ　ｐａｔｈｗａｙｓ）Ｊ分子細胞内分泌学（Ｍｏ１．　Ｃｅ １ｌ。

Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、）、　３６号、１６５頁（１９８４年）に開示されてい る。

好適なキメラペプチドは、例えば次のような構造式を有するものである。

式中、Ａは、ソマトスタチン、チロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）、バソプレ ッシン、アルファ・インターフェロン、エンドルフィン、ムラミルジペプチド、 またはＡＣＴＨ４〜９同族体であり、Ｂは、インシュリン、ＩＧＦ−Ｉ　、ＩＧ Ｆ−Ｉｆ　’、トランスフェリン、カチオン化（塩基性）アルブミン、またはプ ロラクチンである。

更に好適なキメラペプチドとして、上に挙げたものにおけるＡとＢとのジスルフ ィド架橋を１次に示すような構造の架橋に置きかえられたものが含まれる。

Ａ−ＮＨ（ＣＨ，）、Ｓ−８−Ｂ　（分割可能連鎖）この構造のものは、シスタ ミンおよびＥＤＡＣが、架橋剤として用いられる際に、生成される。

Ａ−ＮＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）、ＣＨ＝ＮＨ−Ｂ　（分割不能連鎖）この構造のもの は、グルタルアルデヒドが、架橋剤として用いられる際に、生成される。

キメラペプチドは、非経口的注射、若しくは鼻腔吸入を含む通常の方法で、体内 に導入される。

キメラペプチドを、製薬的キャリヤーと混ぜ、非経口的に投与するか、また必要 に応じて、適切なキャリヤーと混ぜて、それを、インシュリンの鼻腔内投与に通 常使用されている一般的方法により、投与するのが好ましい。

好適なキャリヤー溶液は、注射とか、鼻腔的吸入用のホルモン製剤に通常使用さ れているもの、例えば１通常の制菌剤を含むｐＨ５付近の無菌生理的食塩水であ る。

キャリヤー中のキメラペプチドの濃度は、特異的輸送ペプチド、および特異的神 経薬物ペプチドにより、変わってくる。

キャリヤー中のキメラペプチドは、約ｏ、ｏｏｔ〜０．０１重量％の範囲が好ま しい。

一般的に、投与量、および注射液若しくは鼻腔内液におけるキメラペプチドの含 有率は、特定の神経薬物ペプチド、並びに輸送可能なペプチドに対して認められ 、かつ確定されている量に対応させる必要がある。

次に、実施例を示す。

ｇ：ソマトスタチン−インシュリンキメラの合成アルツハイマー病にかかってい る脳に欠けているペプチドであるソマトスタチンは、脳血液関門を通過して輸送 されないペプチドである１反対に、インシュリンは、脳血液関門を通して輸送さ れるペプチドである。

シンシュリンが脳血液関門を通る輸送の可能性については、本発明者による「脳 血液関門に係るペプチドのレセプター仲介輸送（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｍｅｄｉａ ｔｅｄ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　Ｔｈｒｏｕｇｈ　ＴｈｅＢｌｏ ｏｄ−Ｂｒａｉｎ　Ｂａｒｒｉｅｒ）Ｊ（エンドタリン・レビュー　（Ｅｎｄｏ ｃｒｉｎｅＲｅｖｉｅｗｓ）第７巻、第３号、１９８６年８月）なる名称の論文 に報告されており、その内容は１本明細書において参照されるべきものである。

カールソン（Ｃａｒｌｓｓｏｎ）等による「蛋白質の硫黄結合化、および可逆的 な蛋白質−蛋白質結合（Ｐｒｏｔｅｉｎ　丁ｈｉｏｌａｔｉｏｎａｎｄ　Ｒｅｖ ｅｒｓｉｂｌｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ） Ｊ　（バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、（１９７８年）　１ ７３．７２３−７３７ページ）に記載の可逆的なペプチド−ペプチド結合方法を 用い、ソマトスタチンおよびインシュリンのペプチド硫黄結合化を行なった。

リシン、若しくはインシュリンの遊離Ｎ末端残基を、遊離リシン、若しくはソマ トスタチンのアミノ末端残基に結合させるため、ヘテロ二価性試薬であるＮ−ス クシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）を用い た。

約０．３ｍｇのインシュリンおよび２６μＣｉの１２５１−インシュリンを、２ ｍＲのリン酸緩衝溶液に入れたものを調製した。それの半分に、４μＱの２０ｍ Ｍ新鮮５ＰＤＰを加え、それを、室温にて、４５分間培養した。

別に、１８０μＣｉのトリチウム化ソマトスタチンを、　０．０１ＮＨＣ１１８ ０μＱに溶解し、それを、１８０μρの０．２Ｍリン酸緩衝溶液に加えた。その 半分に対して、４μρの２０ｍＭ　５ＰＤＰを加え、それを４５分間培養させて から、０．７５Ｍ酢酸ナトリウム２０μＱ（ｐＨ＝４．５）を用いて酸性化し、 引き続いて、　０．２５Ｍジチオトレイトール２０μＱで還元した。それを、室 温にて、３０分間培養した後、未反応の小分子を除去するため、短時間の透析を 行なった・ 次に、結合されたインシュリンおよびソマトスタチンを、室温にて、−晩培養し 、透析を行なってからトリチウム１２２１の放射能を計数した。その結果、全体 で、リン酸緩衝溶液２ｍΩ中、５３μＣｉの３Ｈ−ソマトスタチンと５．３μＣ ｉの１２月−インシュリンとが結合していた。

ソマトスタチン−シンシュリンキメラの構造式を次に示す。

ソマトスタチンは、次のようなアミノ酸配列順序を有している。

Ａ　１ａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ −Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−５ｅｒ−ｃｙｓインシュリンは、構造がよく知られ ている二重鎖蛋白質ホルモンである。

失凰班又−分離つシ腸線脈管および３Ｈ−ソマトスタチン−１２Ｊ−インシュリ ンキメラを用いたラジオレセプターアッセイ 米国のベニンスラ・ラボラトリーズ（ＰｅｎｉｎｓｕｌａＬａｂｏｒａｔｏｒｉ ｅｓ）から入手したソマトスタチンを、３Ｈ−水素化ホウ素ナトリウムを用い、 還元的メチル化により、トリチウム化した。米国のシグマ・ケミカル・カンパニ ー（ＳｉｇｍａＣｈｅ腸１ｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）から入手したインシュリン を、クロラミンＴおよび１！ｓ１を用い、酸化的ヨウ素化により、ヨウ素化を行 なった。

２つの化合物を、実施例１に記載の要領で、５ＰＤＰを用いて結合させた。

バードリッジ（Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ）等による「分離部組脈管によるソマトスタ チン同族体の急速隔離化および減成化（ＰａｐｉｄＳｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ 　Ａｎｄ　Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｏｍａ、ｔｏｓｔａｔｉｎ　Ａｎ ａｌｏｇｕｅｓＢｙ　ｌ５ｏｌａｔｅｄ　Ｂｒａｉｎ　Ｍｉｅｒｏｖｅｓｓａｌ ｓ）Ｊ　（ジャーナル０オブ６二ユーロケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　 Ｎｕｅｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）第４４巻、第４号、１９８５年、１１７８〜１ １８４ページ）に記載の要領で、ウシ腸線脈管を分離した。

室温での約６０分間培養のため、−組の細脈管に３Ｈ−ソマトスタチンを加えた 。培養の別の組みには、′Ｈ−ソマトスタチンー１２５１−インシュリンを加え た０図に示すように、キメラの吸収は、遊離型ソマトスタチンの２倍以上であっ た。また、キメラの吸収は、時間と共に増加し、遊離型ソマトスタチンに関して は、時間による増加がなかった。

遊離型ソマトスタチンの吸収は、前述の文献（ジャーナル・イブ・二ニーロケミ スドジー、第４４巻、第４号、１９８５年）に記載されているように、非特異的 結合を表わしているようである。

本実施例は、インシュリンレセプターを介してのソマトスタチン−インシュリン キメラのレセプター仲介のトランスサイト−シス、またはエンドサイト−シスを 証明している。

従来の研究が示しているように、分離部組脈管におけるペプチドのレセプター仲 介のエンドサイト−シスは、インビボペプチドのインビボ脳血液関門レセプター 輸送活性の信頼しうる指標である（前掲のエンドサイト・レビュー、第７巻、第 ３号（１９８６年８月）における本発明者による論文を参照）。

失凰五主 トランスフェリンの代わりに、インシュリンを用いた以外。

実施例１と同じ要領で、キメラペプチドを調製した。生成されたキメラペプチド を、無菌生理的食塩水と混ぜ、患者に対して非経口的若しくは鼻腔内的に投与し うる０、０１重量％のキメラペプチドを含有する。溶液を作成した。

失胤涯土 バンプレッシンの代わりに、ソマトスタチンを用いた以外、実施例１と同じ要領 で、キメラペプチドを調製した。生成されたキメラペプチドを、無菌生理的食塩 水と混ぜ、患者に非経口的に投与しうる０、０１重量％のキメラペプチドを含有 する溶液を作成した。

失五且旦 トランスフェリンを、アルファ・インターフェロンに結合させた以外、実施例１ と同じ要領で、キメラペプチドを調製した。生成されたキメラペプチドを、無菌 生理的食塩水と混ぜ、患者または被検者に、非経口的若しくは鼻腔内的に投与し うる０、０１重量％のキメラペプチドを作成した。

失嵐五且 ＩＧＦ−ＩＩを、ベータ・エンドルフィンに結合させた以外、実施例１と同じ要 領で、キメラペプチドを調製した。生成されたキメラペプチドを、無菌生理的食 塩水と混ぜ、患者または被検者に、非経口的若しくは鼻腔内的に投与しうる０、 ０１重量％のキメラペプチドを作成した。

失庭涯Ｉ インシュリンを、ＡＣＴＨ４〜９同族体に結合させた以外、実施例１と同じ要領 で、キメラペプチドを調製した。生成されたキメラペプチドを、無菌生理的食塩 水と混ぜ、患者即ち対症者に、非経口的若しくは鼻腔内的に投与しうる０、０１ 重量％のキメラペプチドを含有する溶液を作成した。

末五且旦 カチオン化アルブミンを、ヘキソサミニダーゼＡに結合させた以外、実施例１と 同じ要領で、キメラペプチドを調製した。生成されたキメラペプチドを、無菌生 理的食塩水と混ぜ。

患者即ち対症者に、非経口的若しくは鼻腔内的に投与しうる０、０１重量％のキ メラペプチドを含有する溶液を作成した。

以上１本発明の好適実施例について説明を行なってきたが、その開示内容は、あ くまで本発明を理解するためのものであって、当業者であれば１本発明の範囲を 逸脱することなしに。

他のさまざまな変更や改良を、容易に思い至ることができると思う。

従って、本発明は、請求の範囲において限定した以外は。

前出の特定の実施例に制約されるものではない。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．脳血液関門通過のトランスサイト−シスにより、神経薬物を脳に輸送しうる ようにしたキメラペプチドであって、前記キメラペプチドは、トランスサイト− シスによる脳血液関門の通過が可能であり、かつ前記神経薬物と結合している輸 送可能なペプチドからなることを特徴とするキメラペプチド。 ２．輸送可能なペプチドが、インシュリン、トランスフェリン、ＩＧＦ−Ｉ、Ｉ ＧＦ−ＩＩ、塩基性アルブミン、およびプロラクチンよりなる群から選択される 請求の範囲１に記載のキメラペプチド。 ３．神経薬物が、親水性ペプチドである請求の範囲１に記載のキメラペプチド。 ４．神経薬物が、ソマトスタチン、チロトロピン放出ホルモン、バソプレッシン 、アルファ・インターフェロン、エンドルフィン、ムラミルジペプチド、および Ｌ−メチオニル（スルホン）−Ｌ−グリタミン−Ｌ−ヒスチジル−Ｌフェニルア ラニル−Ｄ−リシル−Ｌ−フェニルアラニンよりなる群から選択されるものであ る請求の範囲３に記載のキメラペプチド。 ５．輸送可能なペプチドおよび神経薬物が、結合剤により結合される請求の範囲 ３に記載のキメラペプチド。 ６．結合剤が、ペプチド硫黄結合化、またはグルタルアルデヒドを介してのリシ ン結合により、輸送可能なペプチドを神経薬物に結合させることが可能である請 求の範囲５に記載のキメラペプチド。 ７．輸送可能なペプチドが、インシュリンである請求の範囲６に記載のキメラペ プチド。 ８．神経薬物が，ソマトスタチンである請求の範囲７に記載のキメラペプチド。 ９．式 （式中、Ａは、神経薬物であり、Ｂは、輸送可能なペプチドである。） を有する請求の範囲１に記載のキメラペプチド。 １０．Ａが、ソマトスタチン、チロトロピン放出ホルモン、バソプレッシン、ア ルファ・インターフェロン、エンドルフィン、ムラミルジペプチド、およびレ− メチオニル（スルホン）−Ｌ−グルタミル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラ ニル−Ｄ−リシル−Ｌ−フェニルアラニンよりなる群から選択されるものである 請求の範囲９に記載のキメラペプチド。 １１．Ｂが、インシュリン、トランスフェリン、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、塩 基性アルブミン、およびプロラクチンよりなる群から選択されるものである請求 の範囲９に記載のキメラペプチド。 １２．Ａが、ソマトスタチンであり、Ｂが、インシュリンである請求の範囲９に 記載のキメラペプチド。 １３．請求の範囲１に記載のキメラペプチド、および前記キメラペプチドに対し 製薬的に使用しうるキャリヤーを含むことを特徴とする組成物。１４．製薬的に 使用しうるキャリヤーが、無菌生理的食塩水である請求の範囲１３に記載の組成 物。 １５．脳血液関門通過のトランスサイト−シスにより、神経薬物を動物の脳に導 入するための方法において、脳血液関門を通して請求の範囲１に記載のキメラペ プチドを輸送させるため、前記キメラペプチドを、十分な量をもって前記動物の 血流に導入する段階を含む神経薬物導入方法。 １６．キメラペプチドを、対症者の血流に鼻腔内的に導入する請求の範囲１５に 記載の神経薬物導入方法。 １７．脳血液関門を通過させ、親水性神経ペプチドを脳に導入するための方法に おいて、 前記神経ペプチドを、トランスサイト−シスによって前記脳血液関門を通過しう る輸送可能なペプチドを結合させ、前記神経ペプチドが脳血液関門を横切る速度 を増大させる段階を含む親水性神経ペプチド導入方法。