JPH01203326A - ヒト免疫不全ウイルス抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈発明の背景〉 本発明は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＸＶ　）の抑制方
法、特に、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ　）の治療
に極めて有用な１，５−ジデオキシ−１゜５−イミノ−
Ｄ−グルシトール（デオキシノジリマイシン）のＮ−ブ
チル誘導体に関する。

後天性免疫不全症候群は、わずか数年前に初めて医学的
に注目された症候群であるが今日では重篤な疾患の１つ
となっている。そのためＡＩＤＳ　ｔ−撲滅するための
薬剤及びワクチン全開発する努力が勢力的になされてい
る。ＡＩＤＢウィルスは１９８３年に初めて同定され、
その後いくつかの名前で報告されている。ＡＩＤＳウィ
ルスは３番目に見出されたＴ−リンパ球ウィルス（ＨＴ
ＬＶ　−ｍ　）であって、免疫系の細胞内で複製してＴ
４÷Ｔ−細胞（又はＣＤ４＋細胞）を破壊に導びく能力
含有している〔例えば、Ｇａ１ｌ　ｅｔ　ａｌ、、　５
ｃｉｅｎｃｅ　２’ｌ　４　。

５００−５０３　（１９８４）　：　Ｐｏｐｏｖｉｃ　
ｅｔ　ａｌ、。

よりｔａ、、４９７−５００　（１９８４）Ｅ。このレ
トロウィルスはリンパ節疾患関連ウィルス（ＬＡＹ　）
又はＡＩＤＢ関連ウィルス（ＡＲＶ　）として知られて
いたものであって、ごく最近ではヒト免疫不全ウィルス
（ＨＩＶ　）として知られているものである。

２つの異なるＡＩＤＳウィルス、即ちＨｘｖ　−１とＨ
ＩＶ　−２が報告されている。ＨＩＶ　−１は、パリの
パスツール研究所のＭｏｎｔａｇｎｉｅｒとその共同研
究者によって１９８３年に初めて同定されたウイルスで
あり（Ａｎｎ、　ｖｉｒｏｌ、　Ｉｎ５ｔ、　Ｐａ５ｔ
ｅｕｒ　１３５１Ｌ１１９−１５４　（１９８４）　）
、Ｉ（ＩＶ　−２ハＭＯｎｔａｇｎｉｅｒとその共同研
究者によって１９８６年に単離されたものである（　Ｎ
ａｔｕｒｅ　３２６　。

６６２（１９８７）〕。Ｈ工ｖはこれらノウイルスを一
般的に意味する言葉である。

ＡＩＤＳについての分子生物学は、今日では解明され始
めたところではあるが、この疾患について探究し研究す
る必要性は極めて高い。強力な抗ＡＩＤＳ剤及びワクチ
ン全開発するため多くの試みがなされている。しかしな
がら、ＨＩＶに対する防御免疫機構の解明が不十分であ
り、またこのウィルスは遺伝子的に変異し有効なＨＩＶ
感染モデル動物も不足しているために、ＡＩＤＳワクチ
ンの開発には多くの障害がある〔例えば、ＫｏｆｆとＨ
ｏｔｈ。

８ｃｉｅｎｃｅ　　２４１　、４２６−４３２　（１９
８８））。

ＡＩＤＳ治療用薬剤としてアメリカ合衆国の食品医薬凸
周（ＦＤＡ　）で最初に承認された薬剤はシトプシンで
あり一〇のシトプシンは以前の名称であるアジドチミジ
ン（ＡＺＴ　）としてよく知られたものである。この薬
剤は化学的には３′−アジド−３２−デオキシチミジン
と命名されるものである。この薬剤はｉｎ　ｖｉｔｒｏ
でウィルスの複製全抑制するために、ＡＩＤＳに対する
強力な薬剤として最初に選択されたものである。このよ
うなｉｎ　ｖｉｔｒｏテストは有用であって、強力な抗
ＡＩＤＳ剤を最初にスクリーニングしテストする唯一の
実際的方法である。ＡＺ’ｌ’は毒性が強いという重大
な欠点含有している。従ってより優れた抗ＡＩＤＳ剤の
研背が行なわれている。

最近において、ある種のグリコシダーゼインヒビターに
ついて、そのＡＩＤＢウィルスに対する活性がテストさ
れている。そして強力な抗ＡＩＤＳ剤として３つの化合
物、即ちカスタノスペルミン、１−デオキシノジリマイ
シン（ＤＮＪ　）及び２゜５−ジヒドロキシメチル−３
，４−ジヒドロキシピロリジンが提案されている〔例え
ば、５ｕｎｋａｒａａｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、
阻ｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１４８（
１）、２０６−２１０（１９８７）；Ｔｙｍｓｅｔａｌ
、、　Ｌａｎｃｅｔ、　　Ｏｃｔ、　３１＊　　１９８
７＊　１）ｐ−１０２５−１［１２６：　　Ｗａｌｋｅ
ｒ　　ａｔ　ａｌ、、　　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。

Ａｅａｄ、　　８ｃｉ、　　Ｕ８Ａ　　８４　ｅ　　８
１　２０−８１　２４（１９８７）　　；　Ｇｒｕｔｅ
ｒｓ　ｅｔ　ａｌａｓ　Ｎａｔｕｒｅ　３３０　ｅ７４
−７７（１９８７））。

カスタノスペルミン　　　デオキシノジリマイシン（Ｄ
ＮＪ　） ジヒドロキシメチルジヒドロキシ ピロリジン（ＤＭＤＰ　） カスタノスペルミンは、オーストラリアのクリの木の種
子から単離されたアルカロイドであって、ＨＩＶ粒子の
正常なグリコシレージョンを阻害してエンベロープ糖蛋
白質を変質させてＨＩＶが標的細胞に侵入することｔ阻
止する作用を有することが見出されている。しかしなが
ら、！’！ＩＶ粒子の感染性がわずかに低下することが
見出されたにすぎないＯ ｐｃ’ｒ出願ＷＯ３７１０３９０′５号明細書（１９８
７年７月２日公開）には、デオキシノジリマイシン（Ｄ
ＮＪ　）のＮ−メチル誘導体がグルコシダーゼｌ抑制活
性を有していることがらＨＩＭに対して活性を有し得る
ことが記載されている。しかしながら、その後、全ての
グルコシダーゼｌインヒビターがＨＩＶの抑制に有効で
あるわけではないことが示されているＣ　Ｆｌｅｅｔ　
ｅｔ　ａｌ、、　ＦＥＢ８　Ｌｅｔｔ、　ｉｎ　ｐｒｅ
ｓｓ。

（１９８８））。従って、Ｈ工ｖ抑制活性には他のいく
つかのメカニズムがかかわっているものと考えられる。

〈発明の要旨〉 本発明によれば、デオキシノジリマイシンのＮ−ブチル
誘導体が、そのＮ−メチル及びＮ−メチル誘導体よりも
より強力な抑制活性をヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＭ　
）に対して非毒性濃度で発揮し得ることが見出された。

Ｎ−ブチル−デオキシノジリマイシンは、その非毒性濃
度で、ウィルス力価？　５　ｌｏｇオーダーで減少せし
めることができる。

一方、Ｎ−メチル及びＮ−エチルデオキシノジリマイシ
ン誘導体は、感染性ＨＩＭ　’ｅ　２−４　ｌｏｇオー
ダーで減少せしめることができるにすぎない。このよう
に、Ｎ−ブチル誘導体は、後天性免疫不全症候群（ＡＩ
ＤＳ　）の治療に極めて有用である。デオキシノジリマ
イシンのＮ−メチル誘導体とＮ−ブチル誘導体とは、実
質的に同様のグルコシダーぜＩ抑制活性を有することが
報告されている（　８ｃｈｗｅｄｅｎ　ｅｔ　ａｌ、、
　Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ。

２４８（１）、　　３３５−３４０（１９８６））こと
から、仮すにグリコシダーゼｌ抑制活性が唯一の作用メ
カニズムであったとしてもデオキシノジリマイシンのＮ
−ブチル誘導体がこのように顕著なＨＩＭ抑制活性全発
揮することは全く予想されず驚くべきことである。

デオキシノジリマイシンのＮ−ブチル誘導体は以下の構
造式を有する。

立体異性を示すため、直線は紙面の上側に結合している
こと全示し、点線は紙面の下側に結合している全示して
いる。

発明の詳細な説明 よって本発明を形成すると考えられる対象が明確に指摘
されているが、以下に示す記載及び図面によってより一
層よく本発明が理解されるものと信ずる。

本明細書に添付した図面について以下に説明丁る。

第１図は、テスト化合物のＨＩＭ抑制活性と同時にテス
ト化合物のＨＩＭ感染Ｔ一細胞又はＨＩＭ非感染で一細
胞に対する細胞毒性効果上評価するために用いたテスト
方法のアウトラインを図示したものである。ＴＣＩＤは
組織培養感染量をポア。１０係袷児ウシ血清並びに１０
０ユニツト／　ｍｌｌペニシリン及び１００μｇ７’ｔ
ｌストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ　−　１　６　４
　０培地中で細胞全培養した。

第２図は、抑制作用を有するテスト化合物を０、１ｒｎ
９／ｍｌ含有する培養中での’Ｅ｛ＩＶ感染細胞の割合
いを求めるために用いたテスト方法のアウトライン金図
示したものである。感染細胞懸濁液の一定分量を各種の
時間で抑制剤金倉まない培地に移し、細胞が細胞変性効
果（　ｃｐｇ　）　’１示丁のに装丁る時間を記鍮した
。

第３図は、ＨＩＶ関連ＣＰＨの抑制（一慢ｃｐＥ減少度
）とテスト化合物関連細胞毒性（−−−−１細胞の死亡
割合い）とを、いくつかのテスト化合物（薬剤）の培地
中での濃度〜／ｎに対してプロットしたグラフである。

用いたテスト化合物は、デオキシノジリマイシン（　Ｄ
ＮＪ　）のＮ−メチル、Ｎ−エチル及びＮ−ブチル誘導
体、カスタノスペルミｙ（Ｃａｓｔ）、Ｎ−（５−カル
ボキシメチル−１−ペンチル）−１．５−イミノーＬー
フシトール（　ＬＦＴ　）並びに１，４−ジデオキシ−
１，４一イミノーＬ−アラビニトール（　Ｌ，ＡＢ　）
である。

第４図は、第３図のパネル（ａ）及び（ｂ）で示した各
種テスト化合物（薬剤）の培地中での濃度■／ｄに対し
てウィルス力価（　’Ｉ’ＣＩＤとして測定した）ｔ−
プロットしたグラフである。

第５図は、０．１１Ｎｉ／ＩｔＮ−ブチル−デオキシノ
ジリマイシン（薬剤）存在下で培養せしめたＨＩＭ感染
細胞を薬剤フリーの培地に移し、その後ＣＰＫを示すま
での時間（　ＣＰＥ発現までの日数）と、薬剤存在下で
の培養日数との関係をポアグラフである。薬剤存在下で
５５日間（０）培養後では、その細胞を薬剤フリーの培
地（薬剤除去後）で更に１００日間培養してもウィルス
は観察されなかった。

デオキシノジリマイシンのＮ−ブチル誘導体は公知化合
物である。この化合物は、１，５−ジデオキシ−１，５
−イミノ−Ｄ−グルシトール（デオキシノジリマイシン
）ｋＮ−ブチル化することによって調製することが出来
る。該調製法は、例えばＵ、８．Ｐ、　４，１８２，７
６７及び４，６３９．４　！１６号明細書に記載されて
いる。

本発明の方法におけるＮ−ブチル−デオキシノジリマイ
シンの効果は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでのＩ（ＩＶの複製に
対するポジティブ抑制効果によって証明された。このア
ッセイ系では、Ｈ工■感染を受けや丁いヒ）Ｔ−細胞を
用いて、Ｈ工ｖ感染細胞の複製を抑制する各種テスト化
合物の相対活性を測定した。

以後に記載するように、各種の類似化合物は実質的に異
なる効果を有することから、ある特定の化合物について
そのＨＩＭ抑制剤としての効果を予想することは困難で
ある。いくつかの研究所での研究により、エンベロープ
糖蛋白質ｇｐ　１２０とＣＤ４抗原のある部分との相互
作用が、ＨＩＶとそれが感染した細胞との識別及び感染
細胞へのＨｆｆの結合に関係していることが明らかにさ
れている。

また、グルコシダーゼインヒビターであるデオキシノジ
リマイシン（ＤＮＪ　）のＨＩＴ感染性に対するポジテ
ィブな効果と、ＤＮＪの２−工ぎマーであってマンノシ
ダーゼｌインヒビターであるデオキシマンノジリマイシ
ン（ＤＭＪ　）がこのような効果含有しないこととを比
較している文献（Ｇｒｕｔｅｒａｅｔａｌ、、Ｎａｔｕ
ｒｅ３３０．７４−７７　（１９８７））において、Ｎ
−結合オリビ糖のトリミング回路がブロックされること
によってｇｐ　１２０又はその前駆体の糖構造に乱れが
生じ、それがＤＮＪのＨＩＭ感染性に対するポジティブ
効果に関与していることが示されている。

ＨＩＭに対するテスト化合物の効果の予想困難性は、構
造的に類似した糖誘導体についてのいくつかの比較研究
によって証明することができる。例えば、α−グルコシ
ダーゼｌインヒビターであるカスタノスペルミンにより
細胞変性効果（ＣＰＥ　）が抑制されることは確認され
ているが、その工ぎマーであるＬ−１ｔｓ−ジエぎカス
タノスペルミンあるいはカスタノスペルミンの立体異性
体であるＬ−６−二−カスタノスペルミンのいずれもそ
のような抑制作用を示さないことが見出されている（　
Ｆｌｅｅｔ　ｅｔ　ａｌ、、　ＦＢＢＢ　Ｌｅｔｔ、、
　ｉｎ　ｐｒｅｓｓ　。

（１９８８））。

また、１，４−ジデオキシ−１，４−イミノ−アラビニ
トールの２つのエナンチオマーはグルコシダーゼインヒ
ーターであることが知られており［Ｆｌｅｅｔ　ｅｔ　
ａｌ、、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　２６
　。

３１２７−３１３０　（１９８５）　：　Ｆｌｅｅｔ　
ｅｔａｌ、、　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔ、　１０
５１−１０５４（１９８６）ＬそのＬ−エナンチオマー
は強力な）ＩＩＶ抑制活性を有しており（１９８７年１
２月２１日に出願したＵ、８．Ｐ、　５ｅｒｉａｌ　Ｎ
ｏ、１１３６＋２１９号明細書〕、他方そのＤ−エナン
チオマーはＩ’ｉＩＶ複製に対して極めてわずかの効果
しか有していない。この両者のエナンチオマーについて
は、Ｎ−メチル化によって抗ＨＩＶ活性が上昇するより
もむしろ減少する。グルコースのアゾフラノース類似体
あるいは七〇Ｎ−ベンジル誘導体はいずれも、ＣＰＢ　
Ｋ対して効果含有しないことが見出されている。同様に
、２−デオキシグルコース類似体であるファイミンはα
−グルコシダーぜ抑制活性を有することが知られている
が（Ｆｌｅｅｔ　ｅｔ　ａｌ、。

ＦＢＢＢ　Ｌｅｔｔ、、　ｉｎ　ｐｒｌｅａｌＬ　１９
８８　］、そのＨＩＴ抑制活性抑制論ては何んら観察さ
れていない。

本発明のＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンのＨＩＴ
に対する抑制活性ｔ＃ＩＨｖｔｔｒｏアッセイによって
証明し類似のテスト化合物のそれと比較した。このアッ
セイ系では、Ｔ−細胞を適当な栄賽培養培地中で生育せ
しめ、テスト化合物の存在下及び非存在下でＨＸＶ接種
して、培養培地のみで生育せしめたコントロール細胞と
比較した。適当な期間インキュベーションした後、培養
細胞について言わゆる融合細胞（巨細胞）の存在全測定
した。

ＨＩＶに対する抑制効果を評価する典型的なテスト方法
の例は、Ｆｕｒｇ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏ　／　Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ　５゜９４０−９４６　（１９８７）
；Ｔｙｍｓｅｔａｌ、。

Ｌａｎｃｅｔ、　０ｃｔｏｂｅｒ３１．　１９８７＊　
ｐｐ−１０２５−１Ｑ　２６；　Ｇｒｕｔｅｒｓ　ｅｔ
　ａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ　３３［１。

７４−７７（１９８７）：及びＷａｌｋｅｒ　ｅｔ　ａ
Ｌ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８４
．　８１　２０−８１２４（１９８７）に記載されてい
る。

本発明におけるテストでは、Ｋａｒｐａｓ　、　　Ｌｅ
ｕｋ。

Ｒｅｓ、１．３５−４９（１９７７）に記載されたヒト
白血病で一セルラインを用い九。このセルライン（Ｔ−
４５）は、急性リンパ芽球白血病に子供の細胞から樹立
したものである。Ｎ−ブチル−デオキシノジリマイシン
の抑制活性全証明するために用いたもう１つのＴ−セル
ラインはＭＯＬＴ　−４セルラインである。このセルラ
インは、急性リンパ芽球白血病患者の末梢血液から誘導
されたものである。このセルラインについての特徴及び
起源については、Ｍｉｎｏｖａｄａ、　Ｊ、　Ｎａｔｌ
、　ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ、４９．８９１−８９５（１
９７２）が参考となる。ＭＯＬＴ　−４セルラインは、
アメリカン・タイプ・カルチャーｅコレクション（ロッ
ク♂ル・メリーランド）に永久保存の形態で分譲制限な
しに寄託されており、受託番号ＡＴＣＣＣＲＬ　１５８
２が付与されている。このセルラインのサンプルは、上
記寄託機関に請求することによって入手することが出来
る。

細胞フリーの）ＩＩＶ懸濁液全感染培養細胞から調製し
た。感染粒子の濃度は、一連の１０倍希釈液を用いるエ
ンドｅポイント滴定アッセイによって評価した。それぞ
れの調＃！懸濁液中の感染粒子の凡の数を、感染性［Ｖ
　’ｉ含む最大希釈液を用いて、Ｔ−細胞１０４個とと
もに１０日間培養後の融合細胞形成、細胞変性（Ｌｅｏ
ｎａｒｄ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ８５？　　
３５７０−３５７４（１９８８）　；　Ｂａｒｒｅ　−
８１ｎｏｕｓｓｉ　ｅｔ　ａｌ、。

８ｃｉｅｎｃｅ２２０，８６８−８７０　（１９８３）
］及びＨ工ｖ抗原（Ｋａｒｐａｓ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｌ
５ＬｎＣｅｌｔｌ　。

６９５−６９７　（１９８５））合成に基いて測定した
。この値は、本明細書では組織培養感染量（ＴＣＩＤ　
）として定義される感染粒子の濃度を示している。

このアッセイは９６ウエルプラスチツク裂マイクロタイ
タープレート金用いて実施し、それぞれのウェルにＴ−
細胞１０４個を含有する培養培地０．２　ＷＬｔ’ｅ加
えた。培養培地としては、１０チ胎児ウシ血清を添加し
たＲＰＭＩ　−１６４０ｋ用いた。

それぞれのアッセイにおいては、６個のウェルを用いた
。３個のウェル（１−３）にはａｘｖ　−１又はＨＩＭ
　−２”１０’　ＴＣＩＤ　／　ウｚ／Ｉ／ｇｉ染？　
Ｌ、メ、他の３個のウェル（４−６）Ｋは培養培地のみ
を加えた。同じ間隔でそれぞれのテスト化合物について
培地全交換した。アッセイ法の詳細は第１図及び第２図
に示した。

以下に本発明ｔ−実施例により更に詳細に説明するが、
本発明はこれら特定の実施例に限定されるものではない
。

実施例１ Ｎ−ｎ−ブチル−デオキシノジリマイシン（ＢｕＤＮＪ
　）のＨＩＭ抑制抑制活性上のＮ−メチル類似体（Ｍｅ
ＤＮＪ　）　、Ｎ−エチル類似体（ＥｔＤＮＪ　）、カ
スタノスベリン（Ｃａｓｔ）、　１　ｅ　４−ジデオキ
シ−１，４−イミノ−Ｌ−７シトール（ＬＡＢ　）、Ｎ
−（５−カルボキシメチル−１−ペンチル）−１，５−
イミノ−Ｌ−７シトール（ＬＦＴ　）　、及び上記した
他のアミン糖誘導体と比較して評価した。

本実施例に用いたテスト化合物の効果は以下のようにし
て評価した。Ｔ−４５細胞１０４個七含有する培養培地
０．２ｆｆｌｊｔ−Ｓ９６−ウェル平底組織培養プラス
チックプレートの各ウェルに移し、細胞を３７℃で静置
せしめた（第１図参照）。４時間後に培地を吸引し、テ
スト化合物を含む培地と交換した。１鴫インキユベーシ
ヨｙ後に、培地全吸引し、ライ肩ス（ＨＩＭ　−１又は
Ｈｘｖ　−２）１０’　ＴＣＩＤ　ｔ−各ウェルに加え
た。５優Ｃｏ、中で３７℃で１時間インキュベーション
を行なった。

その後、各種の化合物を含む生育培地を加え、３７℃で
インキュベーション金継続した。コントロール培養は第
２図に示したようにして維持した。

４日目に各ウェルの細胞懸濁液上分割し、新たな２個の
ウェルに接種し、各テスト化合物とともに新鮮な培地０
．２　ｄ　ｉ−加えた。７日目にまたこの操作ｔくり返
した。１日目から１００日目期間、細胞について、融合
細胞の存在、生育速度及び細胞変性効果（ｃｐｇ　）の
発現（巨細胞、核濃縮、屈折性の欠除など）ｔ−顕微鏡
により調べた。ＣＰＥ（１００１）は、丸く屈折性のあ
る均一な細胞が残存していない状態として定義した。即
ち、巨大でふくれた融合細胞のみが存在する場合’１　
ｃｐｇ（１００１）と定義した。ＨＩＶ感染培養細胞の
生存性は、培地中の丸い屈折性のある均一な（正常）細
胞に比べてＣＰｇ　ｔ−受けた細胞の凡の数を計測する
ことによって測定した。細胞が著しく増殖してＩＩＩＩ
Ｖの複製を抑制し又は減少せしめたと思われる化合物と
インキュベートした細胞は、より大きなウェル（２４−
ウェルプレート）に移すかあるいは分割して、継続的な
細胞分裂が促進されて細胞濃度が一定に維持されるよう
にした。

ＢｕＤＮＪ　＠含有する培地中でＨＩＴ感染細胞の数が
徐々に減少しているか否かを調べるために、ＨＩＶ−１
１０’　ＴＣＩＤで感染せしめて０．１　ｍ９　／　ｌ
１１１ＢｕＤＮＪ存在下で各種の長さの期間生育せしめ
た細胞の一定分量を、それぞれ別々のウェルに移し、薬
剤フリーの培地中で第３図に示すようにして生育せしめ
た。次いで培養細胞について、ＨＩＶの複製を示す指標
であるＣＰｇの発現をモニターした。進行したＣＰＥが
現われるまでの時間を記録した。ＨＩｖ−１又はａｘｖ
　−２がｃｐｇ　ｔ−引き起こすことを確認するために
、細胞をスライドグラスに固定して、Ｋａｒｐａａ　ａ
ｔ　ａｌ、、　Ｌａｎｃｅｔ　１　、　６９５−６９７
（１９８５）に記載された方法により対応するウィルス
抗原の発現を確認した。Ｔ−４５細胞においてＥ！ＩＶ
　−１及びＨＩＴ　−２ノ複ａｔ抑制すルコとが見出さ
れた化合物については、更にＭＯＬＴ　−４ヒト白血病
で一セルラインについても調べた０上記したテストの結
果は以下の通りである。

ＭｅＤＮＪ　、　ＥｔＤＮＪ　、　、Ｃａａｔ　、　Ｂ
ｕＤＮＪ　、　ＬＦＴ及びＬＡＢの各種濃度でのＣＰＥ
形成に対する効果を第３図に示した。　ＭｅＤＮＪ　、
　ｇｔＤＮＪ及びＣａ５ｔ　Ｋついてのデータはベル型
の用量依存曲線を示している。

ＭｅＤＮＪ　％ＲｔＤＮＪ又はＣａｎ　を存在下で生育
せしめた非感染細胞についての第３図に示した細胞生存
性のデータ及び表１に示した生育速度のデータから、オ
リ♂糖生合成のインヒーターについて予想されるのと同
様に、これらＭｅＤＮＪ　、　ＥｔＤＮＪ及びＣａ５ｔ
は選択的な抗ウィルス活性を有しておらず、細胞毒性を
有することが判る。従って、これら薬剤が高濃度の場合
での抗ウィルス活性の見掛は上の低下（ベル型用量依存
曲線）は、これら薬剤の細胞毒性効果に起因しており、
この細胞毒性効果がＨＩＶによって誘導される細胞変性
効果としてデータに示されている。これに対して、Ｂｕ
ＤＮＪ　、　ＬＦＴ及びＩＪＡＢは、いずれも使用した
濃度範囲では細胞毒性を示さなかった。ＢｕＤＮＪは、
テストした全ての濃度において、ＨＩＶ感染細胞のＣＰ
Ｂ　ｔ−抑制した。

ＢｕＤＮＪと他のＤＮＪのアルキル類似体（ＭｅＤＮＪ
及びｗｔ、ＤＮ；ｒ　）とのこのような相違から、これ
らの化合物の作用メカニズムが相違している、ことが考
えられる。また同様に、オリ♂糖の生合成を阻害しない
α−フコシダーゼインヒーターＬＦＴも細胞毒性を有し
ないことが見出された。ＬＡＢもＬＦＴと同様の性質を
示した。ＬＡＢのα−グルコシダーゼインヒビターとし
ての活性は、Ｆｌｅｅｔ　ｅｔ　ａｌ、、　ＦＦ１Ｂ８
Ｌｅｔｔ、、　ｉｎ　ｐｒｅｓ＋ｓ、　１９８８に報告
されているが、プロセッシノグα−グルコシダーゼ（１
及び］）に対する活性については未だテストされていな
い。

ＬＦＴとＬＡＢ　ノＨＩＶ抑制活性は、１９８７年１２
月２１日に出願したＵ、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ、　Ｓｅｒ
、　Ｎｏ。

１３６．２１９号明細書に記載されている。

非感染細胞に対する各種化合物の効果についての定量的
データ（細胞毒性）は、各種化合物にさらさないコント
ロール細胞とその生育速度を比較して求めた（表１）。

第４図及び表２に、培養１０日後のＢＩＴ感染’Ｉ’　
−４５１Ｒ胞の培養上清のＴｆＪＤ力価と薬剤濃度との
関係が示されている。

これらのデータによれば、ＬＡＢとＬＦ’Ｉ’は、高濃
度においてもＴＣＩＤ　’ｉｉ部分的に減少せしめるこ
とができるにすぎないことが判る。同様に、ＤＮＪ。

ＭｅＤＮＪ及びＥｔＤＮＪも、ＬＡＢ及びＬＦＴよりも
その程度は高いが、’Ｉ’ＣＩＩ）’ｉ部分的に減少せ
しめることができるにすぎない。これらの薬剤がいずれ
もＴＣＩＤ　ｔ″全体的に減少せしめることができない
のは、ウィルス産生又は拡散の異質性によるものと考え
られる。第４図と表２によれば、ＢｕＤＮＪのみが、非
細胞毒性濃度においてウィルスＴＣＩＤ力価を無視でき
る程度に減少せしめることができることが判る。第６図
に示したデータとこれらのデータとから、ＢｕＤＮ、Ｔ
がウィルス特異的活性を有していることが示される。表
２には、ＤＮＪとその誘導体のＨＩＭ　−１及びＨＩＭ
　−２に対する抗ウィルス活性（ＴＣＩＤ減少度）全比
較した結果が示されている。更にはＭＯＬＴ　−４セル
ライン金用いた結果も示されている。これらのデータに
よれば、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ　−２に対してもＢｕＤ
ＮＪは同様の抗ウィルス活性を示し、この活性はＴ−４
５セルラインに感染したウィルスに限定されるものでは
ないことが判る。

ＢｕＤＮＪの存在下においてＨＩＭ感染細胞が実際に減
少するか否かを測定するために、ＢｕＤＮＪ存在下で各
種の時間生育せしめた感染細胞懸濁液の一定分ｔｔ−第
２図に示したようにして薬剤フリーの培地に移した。次
いで、培養細胞について、ＣＰＥと巨細胞の形成（ＨＩ
Ｍ複製の指標）をモニターした。

薬剤フリーの培地に移した後に細胞がｃｐｇ　２発現す
るまでの時伺が培養時間とともに上昇することから（第
５図）　、ＢｕＤＮＪに長く細胞をさらすことによって
培養細胞中での感染細胞の割合いが減少することが判る
。この現象を、非感染Ｔ−４５細胞と比べて感染細胞の
倍加時間が減少したと考えたとしても、あるいは細胞溶
解を伴ってウィルスが複製したと考えたとしてもいずれ
でも次の結論に変わりはない。即ち、１ｎｖｉｖｏでの
細胞群の自然の代謝回転に起因して最終的には感染細胞
の数が著しく減少し、再感染サイクルが破られたと結論
することができる。

表１　細胞毒性とＴ−細胞の生育 化合物　　　投与量　　　ウィルス非感染細胞（ｍ９へ
）　　　の生育（７８目） ＤＮＪ　　　　　　Ｏ，５０１，４Ｘ　１０’０．２５
　　　　　１．４　Ｘ　１０’ＭｅＤＮＪ　　　　　Ｏ
，５０５，ＯＸ　１０’０．２５　　　　　１．ＯＸ　
１０’ ０．１０　　　　　１．ＯＸ　１０’ ０．０５　　　　　１．２　Ｘ　１０’０．０１　　　
　　１．２　Ｘ　１０’ＥｔＤＮ、Ｔ　　　　　Ｏ，１
０１，３Ｘ　１０’０．０５　　　　　１．２　ｘ　１
０’０．０１　　　　　１．２　Ｘ　１０’ＢｕＤＮＪ
　　　　　Ｏ，１０１，４Ｘ　１０’０．０５　　　　
　１．２　Ｘ　１０’０．０１　　　　　１．２　Ｘ　
１０’Ｉ、ＡＢ　　　　　　Ｏ，５０１，Ｏｘ　１０’
０．２５　　　　　１．５　Ｘ　１０’０．１０　　　
　　１．５　Ｘ　１０’Ｃａ５ｔ　　　　　　　　Ｏ，
７０毒　　性０．３５　　　　　８．ＯＸ　１０’ ０．１８　　　　　８．Ｏｘ　１０５ ０．０９　　　　　１　、ＯＸ　１０’０．０２　　　
　　１．２　ｘ　１０’表２　　ＤＮＪ誘導体の比較” ウィルス　　　　　投与量　　ＨＩＭ−１Ｔ（ＩＶ−２
コントロール　　　　　　　　　　　　　　１０６　　
　　　１０６ＤＮ、Ｔ　　　　　　　　　　Ｏ，１０１
０’　　　　　　１０’ＭｅＤＮＪ　　　　　　　　　
０−１０　　　　　　１０２　　　　１０２ｇｔＤＮ、
ｒ　　　　　　　　　Ｏ，１０１０３１０３ＢｕＤＮＪ
　　　　　Ｏ，１０＜　１０　　　＜　１０＊：’Ｉ’
−４５細胞及びＭＯＩ、Ｔ　−４細胞１０４個をＤＮＪ
又はその誘導体で処理して、Ｈｒｖ−１及びＨＩＶ　−
２（１０’　ＴＣＩＤ　）　ｋ−’ｆニレツレ別ｈ　Ｋ
Ｗ染すせた場合にも同じ結果が得られた。Ｔ−４５セル
ラインに感染嘔せるために用１．−１ｆｃＨＩＶ　−１
ｋ最初にＴ−４５細胞に通した。同様に、ＭＯＬＴ　−
４セルラインに感染させるために用いたＨＩＭ　−１ｔ
−最初にＭＯＬＴ　−４細胞に通した。ａｘｖ　−２に
ついても同様の操作を行なった。１０日後にＴＣＩＤ値
を測定した。

実施例２ 本発明のＮ−ブチル−デオキシノジリマイシンのＦＩＩ
Ｖ抑制活性を、そのＮ−メチル誘導体、Ｎ−エチル誘導
体、非アルキル化デオキシノジリマイシン並びに未処理
コントロールの抑制活性と比較して説明するため、ＨＩ
Ｖ−１とＨＩＶ　−２とをそれぞれ別々に用いてＴ−４
５細胞とＭＯＬ’ｌ’　−４細胞についても実施例１と
同様のテストを行ないその結果を以下の表に示した。即
ち、１１！ＩＴ−１″！”最初にＴ−４５細胞中に通し
同様にしてＨＩＶ　−１？最初にＭＯＬＴ　−４細胞中
に通した。ＨＩＴ　−２についても同様の操作を実施し
た。テスト化合物は０．１Ｑ　／　ｍＡ　（１）濃度で
用いた。ＨＩＶ　−１及びＨＩＶ　−２１０’　ＴＣＩ
Ｄ　ｐ別々に用いて細胞１０４個に感染せしめた。テス
ト終了後のウィルス力価は以下の通りである。

表３　　ウィルス力価 コントロール　ＤＮＪ　　ＭｅＤＮＪ　　ＥｔＤＮＪ　
　ＢｕＤＮＪＨｒｖ−１１０’　　　１０’　　１０２
１０３１０ａｘｖ−２１０’　　　１０５１０２１０３
１０これらの結果に示されているように、Ｎ−ブチル−
デオキシノジリマイシンは驚くべきことに、Ｎ−メチル
−デオキシノジリマイシンよりも２１ｏｇオーダー高い
ＨＩＶ抑制活性を有し、更には、２つのウィルス株と２
つの異なるセルライン金剛いた重複テスト（表２及び３
）ではＮ−エチル−デオキシノジリマイシンよりも６１
０ｇオーダー高い１（ＩＶ抑制活性を有している。

実施例３ 本発明のＮ−ブチル−ＤＮＪと、ＤＮＪ及びＮ−メチル
−ＤＮ、ＴとｔそれぞれＢ１６−Ｆｌ　０ムリンメラノ
ーマ細胞とインキュベーションした後、放射ラベル化カ
ラクトース、マンノース、グルコース及びチミジンの取
り込みを比較した所１本発明のＮ−ブチル−ＤＮ、Ｔと
、ＤＮＪ及びＮ−メチル−ＤＮ、Ｔとは異なる抑制効果
を示した。即ち以下の結果が得られた。

１、　　ＤＮＪとＮ−ブチル−ＤＮＪとはそれぞれマン
ノースの利用を抑制し、他方、Ｎ−メチル−ＤＮＪはマ
ンノースの取り込みを促進するかあるいは何んら効果を
及ぼさなかった。

２、　　ＤＮＪとＮ−ブチル−ＤＮＪとはそれぞれ、１
．０ｍＭ以下の濃度で、ガラクトースの取り込みｔ実質
的に抑制し、他方、Ｎ−メチル−ＤＮＪはわずかに抑制
しただけであった。

３、　グルコース利用／抑制テストでは、Ｎ−メチル−
ＤＮＪは逆用竜依存曲線を示し、他方、Ｎ−ブチル−Ｄ
ＮＪはほんのわずかに効果を示すか又は全く示さず、Ｄ
ＮＪは正常な用量依存曲線を示した。

４．３Ｈ−チミジンの取り込みは、Ｎ−ブチル−ＤＮ、
Ｔによっては２．０　ｍＭ濃度まで影響を受けず、他方
、Ｎ−メチル−ＤＮＪは１．０ｍＭ濃度で、ＤＮＪは２
．０　ｍＭ濃度で取り込みを抑制した。

本明細書に記載した抗ウィルス剤は、慣用的方法により
好ましくは薬学的に許容し得る希釈剤又は担体とからな
る裂創の形態で、ヒト免疫不全ウィルスに感染した患者
に投与することが出来る。

本発明の抗ウィルス剤はフリーのアミンの形態で又はそ
の塩の形態で用いることができる。薬学的に許容し得る
塩誘導体としては、例えばそのＨＣＪＬ塩を挙げること
が出来る。投与すべき抗ウィルス剤の量は有効量であり
、即ち、医薬的に有利であって毒性を発揮しない量であ
る。成人に対する投与量は、活性成分約１ダよυ上の範
囲である。好ましい投与ルートは、カプセル剤、錠剤、
シロップ剤、エリキシル剤等の形態での経口投与であり
、他方非経口的に投与することもできる。活性成分と薬
学的に許容し得る希釈剤又は担体とからなる治゛療用形
態にある好ましい裂創は、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’
ｓ　　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ
ｓ　、　　Ｅｄ。

Ａｒｔｈｕｒ　０ｓｏｌ、　　１６ｔｈ　ｅｄ、、　　
１９３　［１，Ｍａｃｋｐｕｂｘｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ、
、　Ｆ１ａ５ｔｏｎ、　　ＰＡ　　などの−船釣なテキ
ストを参照することによって調製することができる。

当業者にとっては、本明細書の記載から本発明の精神及
び範囲内にある他の例は自明であると考えられる。本明
細書の特許請求の範囲はそのような他の例をも包含する
ものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、細胞毒性効果を評価するテスト方法を示す。 第２図は、Ｈ工ｖ感染細胞の割合い上京めるテスト方法
を示す。 第３図は、テスト化合物の培地中の濃度と、１（ＩＶ関
連ｃｐｇ抑制及びテスト化合物関連細胞毒性との関係を
示すグラフである。 第４図は、第３図におけるテスト化合物の濃度とウィル
ス力価との関係上水すグラフである。 第５図は、薬剤存在下での培養時間と、ＣＰＥ発現まで
の時間との関係會示すグラフである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒト免疫不全ウィルスに感染した患者に、デオキ
   シノジリマイシンのＮ−ｎ−ブチル誘導体又はその薬学
   的に許容し得る塩誘導体のウィルス抑制有効量を投与す
   ることからなるヒト免疫不全ウィルスの抑制方法。
2. （２）デオキシノジリマイシンのＮ−ｎ−ブチル誘導体
   又はその薬学的に許容し得る塩誘導体を有効成分とする
   ヒト免疫不全ウィルス抑制剤。