JP7474596B2 - 新規ビフィドバクテリウム属細菌、および当該細菌を含む組成物、並びに当該細菌の増殖促進用の組成物 - Google Patents
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Description
(a)ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)
(b)ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03058)
(c)ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)
前記(a)~(c)から選択される細菌は、2’-フコシルラクトース、および
3’-シアリルラクトース、または、ラクト-N-テトラオース
の資化能を有する。
本技術に係る組成物は、プロバイオティクス組成物とすることができる。
本技術に係る組成物は、少なくとも、乳幼児用、大人用、高齢者用のいずれかに用いることができる。
本技術に係る組成物は、整腸用組成物、飲食品組成物、および栄養組成物からなる群より選択される1種または2種以上の組成物とすることができる。
本技術に係る組成物には、2’-フコシルラクトースと、
3’-シアリルラクトース、または、ラクト-N-テトラオースと、
を更に含有させることができる。
前記組成物が、
2’-フコシルラクトースと、
3’-シアリルラクトース、または、ラクト-N-テトラオースと、を含有する、プレバイオティクス組成物を提供する。
(a)ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)
(b)ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03058)
(c)ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)
(a)ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)
(b)ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03058)
(c)ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)
なお、ここに記載された効果は必ずしも限定されるものではなく、本技術中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
本技術に係る新規ビフィドバクテリウム属細菌は、前記(a)~(c)から選択される細菌であって、少なくとも2種以上のHMOsに対し、資化能を発揮することができる。具体的には、2’-フコシルラクトース(以下、「2’-FL」ともいう)、および、3’-シアリルラクトース(以下、「3’-SL」ともいう)、またはラクト-N-テトラオース(以下、「LNT」ともいう)の資化能を有する。このため、本技術に係る新規ビフィドバクテリウム属細菌は、2’-FL、および、3’-SLまたはLNTを使用することで、腸内でも容易に増殖することができる。
ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)は、後述する実施例で示す通り、2’-FL、3’-フコシルラクトース(以下、「3’-FL」ともいう)、LNT、およびラクト-N-ネオテトラオース(以下、「LNnT」ともいう)の資化能が、後述の<糖源の資化性の判定方法>において、それぞれOD0.3以上であり優れている。
ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03058)は、後述する実施例で示す通り、2’-FL、3’-FL、3’-SL、6’-シアリルラクトース(以下、「6’-SL」ともいう)、LNT、およびLNnTの資化能が、後述の<糖源の資化性の判定方法>において、それぞれOD0.3以上であり優れている。
ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)は、後述する実施例で示す通り、2’-FL、3’-FL、3’-SL、6’-SL、LNT、およびLNnTの資化能が、後述の<糖源の資化性の判定方法>において、それぞれOD0.3以上であり優れている。
(1)Randomly Amplified Polymorphic DNA法、Pulsed-field gel electrophoresis法により同一の菌株と判定される菌株(Probiotics in food/Health and nutritional properties and guidelines for evaluation 85 Page43に記載)
(2)当該寄託菌株由来の遺伝子のみ保有し、外来由来の遺伝子を持たず、DNAの同一性が95%以上(好適には98%以上)である菌株
(3)当該菌株から育種された株(遺伝子工学的改変、突然変異、自然突然変異を含む)、同一の形質を有する株
糖源を含むMRS(de Man-Rogosa-Sharpe)液体培地1mLに、菌株1v/v%ずつ接種し、嫌気条件下で37℃にて培養する。培養16時間後に濁度(OD600)を測定し、菌株を接種しなかった培地を同様に培養したコントロールの濁度を差し引いた値を以下の基準に照らし、資化性の有無および資化能の程度を判定する。コントロールとの差でOD600が、0.3以上を「良好な資化性あり」、0.4以上を「より良好な資化性あり」、0.5以上を「よりさらに良好な資化性あり」、0.6以上を「非常に良好な資化性あり」とする。
培養する方法は、本技術のビフィドバクテリウム属細菌が増殖できる限り特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる方法を必要により適宜修正して用いることができる。例えば、培養温度は30~50℃でよく、35~45℃であることが好ましい。また培養は嫌気条件下で行うことが好ましく、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら培養することができる。また、液体静置培養等の微好気条件下で培養してもよい。
前述した2’-FL、および、3’-SLまたはLNTは、前記(a)~(c)に示すビフィドバクテリウム属細菌に対して増殖促進作用を有し、プレバイオティクスとして使用できる。また、各菌株の資化能に応じて3’-FL、6’-SL、およびLNnT等の各種HMOsを、1種または2種以上組み合わせることも可能である。その他、各種用途に適合した任意成分を適宜用い、各用途に適合した公知の製造方法によって、製造することができる。
本技術の組成物は、プロバイオティクス組成物、飲食品組成物、医薬組成物等を含む意味である。また、本技術の組成物は、プロバイオティクス組成物が好適である。
本技術の医薬組成物は、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含有する限り特に制限されない。当該医薬組成物は、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含有する、整腸用組成物等としても使用できる。
「非治療目的」とは、医療行為、すなわち、治療による人体への処置行為を含まない概念である。例えば、健康増進、美容行為等が挙げられる。
「改善」とは、疾患、症状または状態の好転;疾患、症状または状態の悪化防止、遅延;疾患または症状の進行の逆転、防止または遅延をいう。
「予防」とは、適用対象における疾患若しくは症状の発症の防止や遅延、または適用対象の疾患若しくは症状の危険性の低下をいう。
加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、適宜、製剤担体を配合して製剤化してもよい。
本技術の飲食品組成物は、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を公知の飲食品に添加することによって製造してもよいし、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を飲食品の原料中に混合して新たな飲食品組成物として製造することもできる。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本発明の「表示」行為に該当する。
調製乳には、調製粉乳、調製液状乳が含まれる。
調製粉乳は、乳および乳製品の成分規格等に関する省令(乳等省令)において、「生乳、牛乳、特別牛乳、またはこれらを原料として製造した食品を加工し、または主要原料とし、乳幼児に必要な栄養分を加え粉末状にしたもの」として定義される。
調製液状乳は、前記省令において、「生乳、牛乳、特別牛乳、またはこれらを原料として製造した食品を加工し、または主要原料とし、乳幼児に必要な栄養分を加え液状にしたもの」として定義される。
また、調製乳は、各種の蛋白質、油脂、炭水化物、ミネラル類、ビタミン類等の栄養成分が配合されたものであって、粉末状又は液状に加工されたものも含まれる。
また、調製乳にはさらに、健康増進法で規定される特別用途食品における「乳児用調製粉乳」、「乳児用調製液状乳」「妊産婦、授乳婦用粉乳」が含まれ、0~12か月の乳児を対象とする乳幼児用調製粉乳、6~9か月以降の乳児および年少幼児(3歳まで)を対象とするフォローアップミルク、出生時の体重が2500g未満の新生児(低出生体重児)を対象とする低出生体重児用調製粉乳、牛乳アレルギーや乳糖不耐症等の病的状態を有する乳幼児の治療に用いられる各種治療用ミルク、幼児向け調製粉乳、成人用栄養粉末、高齢者用栄養粉末等の態様も含まれる。
本技術の組成物の製造方法について、以下に説明する。本技術の組成物の製造方法において、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌の添加工程は、組成物の製造工程におけるいずれの段階で行ってもよい。
工程A:培地で前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を培養し、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む培養物または生産物を得る工程
工程B:前記培養物または生産物を乾燥に供し、菌末または乾燥物を得る工程
このうち、生菌率を高くする観点から、前記培養物を凍結乾燥に供するのが好適であり、また、生産効率を高くする観点から、前記培養物を噴霧乾燥に供するのが好適である。
工程C:前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌、およびプレバイオティクスを混合する工程
工程D:前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌、および乳成分を混合する工程
このとき前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌として、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む組成物を使用してもよい。さらに、当該組成物に、これ以外のビフィドバクテリウム属細菌や乳酸菌等のプロバイオティクスをさらに含んでもよい。
また、乳成分は粉体が好適であり、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌の菌末と混合することがより好適である。
前述の製造法で得られた前記菌末を、発酵乳原料に添加し、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を用いてこのビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵乳を得る工程を行う。または、前記菌末と、発酵乳とを混合して前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵乳を得る工程を行う。当該組成物中の本技術の細菌の菌体量は、所定の菌体量になるように発酵条件や配合量を調整する。これにより、前記(a)~(c)に示す各ビフィドバクテリウム属細菌を含む発酵飲食品(好適には発酵乳または発酵製品)を提供することができる。
また、比較対象として、ビフィドバクテリウム・ブレーベ(JCM 1192)およびビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(ATCC 15697)を用いた。培養16時間後の濁度(OD660)の測定値の平均を表1に示す。
下記に本技術の組成物、医薬組成物、発酵乳、調製粉乳、および飲食品組成物の製造例を示すが、本技術の組成物は、これに限定されない。
ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)を、MRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末(菌末)を得る。菌末と、ホエイタンパク質濃縮物(Whey protein concentrate;WPC)と、プレバイオティクス(2’-FL、およびLNT)を均一に混合して組成物を得る。当該組成物20gを200gの水に溶かし、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)を含む組成物を得る。
ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03058)を、MRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末(菌末)を得る。菌末と、乳タンパク質濃縮物の乾燥粉末(MPC480、フォンテラ社製、タンパク質含量80質量%、カゼインタンパク質:ホエイタンパク質=約8:2)と、プレバイオティクス(2’-FL、3’-SL、およびLNT)を均一に混合して、組成物を得る。当該組成物20gを200gの水に溶かし、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03058)を含む組成物を得る。
ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)を、MRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)を含む細菌の凍結乾燥粉末(菌末)を得る。次に、プレバイオティクス(2’-FL、3’-SL、およびLNT)、結晶セルロースを撹拌造粒機に投入し混合する。その後、精製水を加え造粒、造粒物を乾燥し、細菌の発酵成分およびプレバイオティクスを含有し、賦形剤を含有してなる造粒物(医薬組成物)を得る。このようにして、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)を含む造粒物を得ることができる。
フィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)を添加した発酵乳の製造法を下記に示す。
まず、乳原料、および必要に応じた水、その他の成分等を混合し、好ましくは均質化処理を行い、加熱殺菌処理する。均質化処理および加熱殺菌処理は常法により行うことができる。加熱殺菌された殺菌調乳液に乳酸菌スターターを添加(接種)し、所定の発酵温度に保持して発酵させ、発酵物を得る。発酵によりカードが形成される。
乳酸菌スターターとしては、例えば、ラクトバチルス・ブルガリクス(Lactobacillus bulgaricus)、ラクトコッカス・ラクチス(Lactococcus lactis)、ストレプトコッカス・サーモフィラス(Streptococcus thermophilus)等のヨーグルト製造に通常用いられている乳酸菌を用いることができる。pHが目標の値に達したら、形成されたカードを撹拌により破砕し、10℃以下に冷却して発酵物を得る。10℃以下に冷却することにより、乳酸菌の活性を低下させて酸の生成を抑制することができる。
次いで、加熱処理工程で得られた加熱後発酵物に、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)、およびプレバイオティクス(2’-FL、3’-SL、およびLNT)を添加する。ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)の添加量は、加熱後発酵物に対して1×107~1×1011CFU/mLが好ましく、1×108~1×1010CFU/mLがより好ましい。ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)が死菌の場合、CFU/mLは、個細胞/mLと置き換えることができる。
遠心分離法では、被濃縮物(ビフィズス菌およびプレバイオティクスが添加された加熱後発酵物)中のホエイが除去されて、固形分濃度が高められたビフィズス菌およびプレバイオティクス入り濃縮発酵乳が得られる。
上述のようにして得られたビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03067)を含む発酵乳を製造することができる。
ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)を添加した調製粉乳の製造法を下記に示す。
脱塩牛乳乳清蛋白質粉末(ミライ社製)10kg、牛乳カゼイン粉末(フォンテラ社製)6kg、乳糖(ミライ社製)48kg、ミネラル混合物(富田製薬社製)920g、およびビタミン混合物(田辺製薬社製)32g、ラクチュロース(森永乳業社製)500g、ラフィノース(日本甜菜製糖社製)500g、ガラクトオリゴ糖液糖(ヤクルト薬品工業社製)900gを温水300kgに溶解し、さらに90℃で10分間加熱溶解し、調製脂肪(太陽油脂社製)28kgを添加して均質化した。その後、殺菌、濃縮の工程を行って噴霧乾燥し、調製粉乳約95kgを調製した。これに、澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)の菌体粉末(1.8×1011cfu/g、森永乳業株式会社製)100gを加えてビフィズス菌・オリゴ糖配合調製粉乳約95kgを調製する。得られた調製粉乳を水に溶解して、標準調乳濃度である総固形分濃度14%(w/V)の調乳液としたとき、調乳液中のビフィズス菌数は2.7×109cfu/100mLを得ることができる。
ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03058)を添加した腸内環境改善食の製造法を下記に示す。
ビフィドバクテリウム・ビフィダム(NITE BP-03058)を、MRS液体培地3mLに添加し、37℃で16時間嫌気培養後、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、細菌の凍結乾燥粉末(菌末)を得、本技術の組成物を得る。セルロースが多く含有する食品(野菜、サラダ等)に本技術の菌末を加えて調理することもでき、これにより本技術の組成物を得ることもできる。
もしくは、菌末を、食事をする際に、食前、食中または食後に摂取する。規則正しい食事(主食、副菜、主菜のある食事)を行えば必然的に食物繊維を摂取するため、本技術の乾燥菌末製品を、食事の際に一緒に摂取することで、大人の腸内環境の改善効果が期待できる。
本技術の腸内環境改善食を、便秘や下痢等の腸に問題を感じる方が継続摂取することで、より腸内環境の改善効果が期待できる。
Claims (10)
- ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)である細菌。
- 2’-フコシルラクトース、
3’-フコシルラクトース、
ラクト-N-テトラオース、および
ラクト-N-ネオテトラオース
の資化能を有する、請求項1に記載の細菌。 - 請求項1または2に記載の細菌を含有する、組成物。
- 前記組成物が、プロバイオティクス組成物である、請求項3に記載の組成物。
- 前記組成物が、少なくとも、乳幼児用、大人用、高齢者用のいずれかに用いられる、請求項3または4に記載の組成物。
- 前記組成物が、整腸用組成物、飲食品組成物、および栄養組成物からなる群より選択される1種または2種以上の組成物である、請求項3~5のいずれか一項に記載の組成物。
- 2’-フコシルラクトースと、
3’-フコシルラクトースと、
ラクト-N-テトラオースと、
ラクト-N-ネオテトラオースと、
を更に含有する、請求項3~6のいずれか一項に記載の組成物。 - ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)である細菌の増殖の促進に使用されるプレバイオティクス組成物であり、
前記組成物が、
2’-フコシルラクトースと、
3’-フコシルラクトースと、
ラクト-N-テトラオースと、
ラクト-N-ネオテトラオースと、を含有する、プレバイオティクス組成物。 - 下記の工程Aおよび工程Bを含む、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)である細菌を含有する組成物の製造方法。
工程A:培地でビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)を培養し、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)を含む培養物または生産物を得る工程
工程B:前記培養物または生産物を乾燥に供し、菌末または乾燥物を得る工程 - 下記の工程Cまたは工程Dを含む、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)である細菌を含有する組成物の製造方法。
工程C:ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)、およびプレバイオティクスを混合する工程
工程D:ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス(NITE BP-03068)、および乳成分を混合する工程
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