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JP7422671B2 - 抗ｋｌｋ５抗体及び使用方法 - Google Patents

抗ｋｌｋ５抗体及び使用方法 Download PDF

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JP7422671B2 JP2020548732A JP2020548732A JP7422671B2 JP 7422671 B2 JP7422671 B2 JP 7422671B2 JP 2020548732 A JP2020548732 A JP 2020548732A JP 2020548732 A JP2020548732 A JP 2020548732A JP 7422671 B2 JP7422671 B2 JP 7422671B2
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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年３月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／６４３，０３４号に対する米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく利益を主張するものであり、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願には、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出され、その全体が参照により本明細書に援用される配列表が含まれる。２０１９年３月１１日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ３４７０７－ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、４２４，５２５バイトのサイズである。
本発明は、抗ＫＬＫ５抗体及びその使用方法に関する。
ヒトカリクレイン関連ペプチダーゼ（ＫＬＫ）は、前立腺、卵巣、乳房、精巣、脳、及び皮膚などの様々な組織で発現する（キモ）－トリプシン様セリンプロテアーゼである。ＫＬＫは、ｃｌａｎ ＰＡ（Ｓ）のキモトリプシン様セリンプロテアーゼファミリＳ１Ａのサブグループに属する。１５のヒトＫＬＫ遺伝子は、染色体１９ｑ１３．４上に位置し、ヒトゲノム中で最大の連続セリンプロテアーゼクラスタを構成する。これらの遺伝子は一般に５つのコード化エクソンからなり、場合によっては、１つ又は２つの５’非コード化エクソンからなり、カリクレイン関連ペプチダーゼＫＬＫ１～ＫＬＫ１５をコードする。全てのＫＬＫ遺伝子は、ＫＬＫ４～ＫＬＫ１５の間でおよそ４０％のアミノ酸配列同一性を有する２２４～２３７残基のキモトリプシン様又はトリプシン様触媒ドメインを含有する、一本鎖プレプロタンパク質をコードする。ＫＬＫ１並びにその近縁の相同体であるＫＬＫ２及びＫＬＫ３はそれら自身のクレードを形成し、ＫＬＫ４、５、及び７は別のサブグループに属するが、一方でＫＬＫ６はＫＬＫ１３及びＫＬＫ１４とより類似している。Ｄｅｂｅｌａら、「Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ」、第３８９巻第６２３～６３２頁（２００８年）を参照されたい。
ＫＬＫ５は、ヒトの皮膚、特に皮膚の上部の棘層及び顆粒層で最も豊富に発現しているようであり、ここで、ケラチノサイトは最終分化を経て、角質層、最外表皮層、及び外部環境に対するバリアを形成する、扁平なレンガ様構造に変化する。Ｄｅｂｅｌａら、「Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ」、第３７３巻第１０１７～１０３１頁（２００７年）、及びＴａｎら、「Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．」、２０１５年１月２２日、第５８巻第２号第５９８～６１２頁（２０１４年）を参照されたい。ＫＬＫ５がネザートン症候群などの皮膚障害において病理学的役割を果たすことが記載されている。Ｆｕｒｉｏら、「ＰＬＯＳ Ｇｅｎｅｔ」、第１１巻第９号、ｅ１００５３８９（２０１５年）を参照されたい。ネザートン症候群は、Ｋａｚａｌ型セリンプロテアーゼ阻害剤５（ＳＰＩＮＫ５）をコードするＳＰＩＮＫ５遺伝子の機能欠失型変異によって引き起こされる。Ｄｅｓｃａｒｇｕｅｓら、「Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．」、２００５年１月、第３７巻第１号第５６～６５頁（２００４年）を参照されたい。ＳＰＩＮＫ５がＫＬＫセリンプロテアーゼファミリ（例えば、ＫＬＫ５及びＫＬＫ７）のいくつかのメンバを阻害することが示されている。Ｗａｎｇら、「Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」、７月、第２３巻第７号第５２４～６頁（２０１４年）を参照されたい。ネザートン症候群におけるＳＰＩＮＫ５の欠如は、拮抗されないＫＬＫ活性を生じる。ＫＬＫ５活動亢進は、ＫＬＫ５が表皮におけるタンパク質分解の調節因子であるため、ネザートン症候群の病態生理における重要な要素であると考えられている。ＫＬＫ５及びＫＬＫ７の切除は、ネザートン症候群様表現型の致死性を救済する。Ｂｒｉｏｔら、「Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．」、５月１１日、第２０６巻第５号第１１３５～４７頁（２００９年）、Ｆｕｒｉｏら、「Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．」、３月１０日、第２１１巻第３号第４９９～５１３頁（２０１４年）、及びＫａｓｐａｒｅｋら、「ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔ．」、２０１７年１月１７日、第１３巻第１号、ｅ１００６５６６（２０１７年）を参照されたい。ネザートン症候群は、複数の作用を有する複雑な全身性疾患であり、現在のところ満足な治療法はない。
喘息は、遺伝的及び環境的危険因子の両方に関連する臨床的に不均一な障害である。喘息双生児研究からの遺伝率の推定値は３５％～８０％にわたり、遺伝的リスクの重要な役割を示唆している。例えば、Ｕｌｌｅｍａｒら、「Ａｌｌｅｒｇｙ」、第７１巻第２３０～２３８頁（２０１６年）を参照されたい。喘息及び喘息関連表現型に対していくつかの大規模ＧＷＡＳが実施されており、ＯＲＭＤＬ３、ＩＬ１３、ＩＬ１ＲＬ１、及びＴＳＬＰ遺伝子近傍の遺伝子といった同定された遺伝子座の多くが、複数の研究集団で確認されている。例えば、Ｂｏｎｎｅｌｙｋｋｅら、「Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ」、第４６巻第５１～５５頁（２０１４年）を参照されたい。最近の研究では、低ペリオスチン喘息又は２型低炎症喘息に関するリスクを保護するＫＬＫ４／５遺伝子座のＳＮＰが同定された。同じ研究で、ＫＬＫ５量は重度喘息患者の気管支肺胞洗浄で増加することが発見され、ＫＬＫ５が気管支閉塞及び喘息病因において役割を担うという仮説を支持した。
ネザートン症候群及び喘息のような疾患の分野における進歩にもかかわらず、標的を同定し、かつ既存の治療法の有効性を補完又は増強できる手段を開発する必要がある。
本明細書では、抗ＫＬＫ５抗体及びその使用方法を提供する。
本明細書では、ＫＬＫ５に結合する単離された抗体がさらに提供され、ここで、該抗体は、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３８、配列番号４５、及び配列番号５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６５、配列番号６９、及び配列番号７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３と、を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、（ａ）配列番号１７、配列番号２２、及び配列番号２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、及び配列番号５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６５、配列番号６９、及び配列番号７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８２、配列番号８７、及び配列番号９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号９９、配列番号１０１、及び配列番号１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１５、配列番号１１９、及び配列番号１２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、該抗体は、（ｉ）（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、（ｉｉ）（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、又は（ｉｉｉ）（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、該抗体は、（ａ）配列番号２０２のＶＨ配列及び配列番号１４０のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２５のＶＨ配列及び配列番号１５１のＶＬ配列、又は（ｃ）配列番号２５７のＶＨ配列及び配列番号１６２のＶＬ配列を含む。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、該抗体は、（ａ）配列番号２０１のＶＨ配列及び配列番号１３９のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２１のＶＨ配列及び配列番号１４９のＶＬ配列、又は（ｃ）配列番号２４８若しくは配列番号２５４のＶＨ配列及び配列番号１６０のＶＬ配列を含む。
本明細書では、ＫＬＫ５に結合する単離された抗体がさらに提供され、ここで、該抗体は、（ａ）配列番号２０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１３９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｃ）配列番号２４８若しくは配列番号２５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む。
本明細書では、ＫＬＫ５に結合する単離された抗体がさらに提供され、ここで、該抗体は、（ｉ）（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、（ｉｉ）（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、（ｉｉｉ）（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、（ｉｖ）（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、（ｖ）（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、（ｖｉ）（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、（ｖｉｉ）（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、（ｉｘ）（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、又は（ｘ）（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、配列番号２２６、配列番号２２７、及び配列番号２２８からなる群から選択されるＶＨ配列と、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１５２、配列番号１５３、及び配列番号１５４からなる群から選択されるＶＬ配列と、を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、（ａ）配列番号１７０のＶＨ配列及び配列番号１３１のＶＬ配列、（ｂ）配列番号１７１のＶＨ配列及び配列番号１３２のＶＬ配列、（ｃ）配列番号１７２のＶＨ配列及び配列番号１３３のＶＬ配列、（ｄ）配列番号２０３のＶＨ配列及び配列番号１４１のＶＬ配列、（ｅ）配列番号２０４のＶＨ配列及び配列番号１４２のＶＬ配列、（ｆ）配列番号２０５のＶＨ配列及び配列番号１４３のＶＬ配列、（ｇ）配列番号２０６のＶＨ配列及び配列番号１４４のＶＬ配列、（ｈ）配列番号２２６のＶＨ配列及び配列番号１５２のＶＬ配列、（ｉ）配列番号２２７のＶＨ配列及び配列番号１５３のＶＬ配列、又は（ｊ）配列番号２２８のＶＨ配列及び配列番号１５４のＶＬ配列を含む。
本明細書では、ＫＬＫ５に結合する単離された抗体がさらに提供され、ここで、該抗体は、（ａ）配列番号１７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｂ）配列番号１７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１３２のアミノ酸配列少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｃ）配列番号１７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｄ）配列番号２０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列と、（ｅ）配列番号２０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｆ）配列番号２０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｇ）配列番号２０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｈ）配列番号２２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｉ）配列番号２２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｊ）配列番号２２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４である。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、本明細書中の以下の実施例に記載される１つ以上の方法によって測定されるように、ＫＬＫ５の生物活性を少なくとも５０％阻害する。いくつかの実施形態では、１つ以上の方法は、組換えＫＬＫ５直接活性アッセイ、結合ｐｒｏ－ＫＬＫ１蛍光ペプチドアッセイ、結合ｐｒｏ－ＫＬＫ７蛍光ペプチドアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ１ ＬＣ／ＭＳアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ７ ＬＣ／ＭＳアッセイ、及びＫｉ（ａｐｐ）アッセイからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該生物活性は、ＫＬＫ５のセリンプロテアーゼ活性である。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＫＬＫ５と結合する抗体断片である。
本明細書では、ＫＬＫ５に結合した際に熱力学的エピトープを形成する抗体であって、水素交換質量分析法によって測定したように、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、及び配列番号３１９からなる群から選択される該配列の１つ以上を含む抗体が、さらに提供される。
本明細書では、本明細書に記載される抗体のいずれかと、結合について競合する抗体が、さらに提供される。
本明細書では、本明細書に記載される抗体のいずれかとして同じエピトープに結合する抗体が、さらに提供される。
本明細書では、本明細書に記載される抗体のいずれかをコードする単離された核酸が、さらに提供される。
本明細書では、本明細書に記載される核酸を含む宿主細胞が、さらに提供される。
本明細書では、該抗体が産生されるように、本明細書に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法がさらに提供される。
本明細書では、本明細書に記載される抗体を含む免疫複合体が、さらに提供される。
本明細書では、本明細書に記載される抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤が、さらに提供される。
本明細書では、医薬として使用するための本明細書に記載される抗体が、さらに提供される。
本明細書では、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さからなる群から選択される疾患の治療に使用するための、本明細書に記載の抗体がさらに提供される。いくつかの実施形態では、疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、及び好酸球性食道炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、喘息は、ＴＨ２低値喘息である。
本明細書では、ＫＬＫ５の生物活性の阻害に使用するための、本明細書に記載の抗体がさらに提供される。
本明細書では、医薬の製造における本明細書に記載の抗体の使用が、さらに提供される。いくつかの実施形態では、該医薬は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さからなる群から選択される疾患の治療のためのものである。いくつかの実施形態では、疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、及び好酸球性食道炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、喘息は、ＴＨ２低値喘息である。
本明細書では、ＫＬＫ５の該生物活性を阻害するための医薬の該製造における、本明細書に記載の抗体の使用がさらに提供される。
本明細書では、疾患を有する個体を治療する方法がさらに提供され、ここで、該疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さからなる群から選択され、有効量である本明細書に記載の抗体を該個体へ投与することを含む。いくつかの実施形態では、疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、及び好酸球性食道炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔｈ２低値喘息である。
本明細書では、個体におけるＫＬＫ５の該生物活性を阻害する方法であって、ＫＬＫ５の該生物活性を阻害するために、有効量である本明細書に記載の抗体を該個体へ投与することを含む方法が、さらに提供される。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５へ特異的に結合する抗体がさらに提供され、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、Ｐｒｏ２２５、及びＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ａｒｇ２２４、及びＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、及びＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、及びＰｒｏ２２５からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５に結合した場合にヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらす抗体であって、該立体構造変化が、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位及び／又は活性部位の破壊をアロステリックにもたらす、抗体をさらに提供する。
図１Ａ～図１Ｎは、直接アッセイにおける蛍光ペプチド基質を用いたＫＬＫ５阻害剤のそれぞれの評価を示す。５ｎＭの組換えヒトＫＬＫ５阻害剤及び０．１９～１００ｎＭのＫＬＫ５阻害剤を、５０μＭのＢｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣの添加前に３０分間プレインキュベートした。プレートは、３４０ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光モジュールを使用するＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）Ｐｌｕｓリーダーを用いて、３０～６０分の間１０２秒毎に検査した。ＫＬＫ５阻害剤の結果を以下に示す。図１Ａ：Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（Ｓｐｉｎｋ９）、図１Ｂ：ｍＡｂ１１０８、図１Ｃ：３－３Ｆ５、図１Ｄ：１０Ｃ８、図１Ｅ：９Ｂ６、図１Ｆ：９Ｆ２、図１Ｇ：９Ｈ３、図１Ｈ：９Ｈ５、図１Ｉ：８Ｂ７、図１Ｊ：２Ｂ１１、図１Ｋ：８Ｆ５、図１Ｌ：１０Ｃ５、図１Ｍ：１０Ｈ３、及び図１Ｎ：２－３Ｆ４。
図２Ａ～図２Ｎは、ｐｒｏ－ＫＬＫ７結合アッセイにおけるＫＬＫ５阻害剤の評価を示す。５ｎＭの組換えヒトＫＬＫ５阻害剤及び０．１９～１００ｎＭの抗ＫＬＫ５阻害剤を、１２５ｎＭのｐｒｏ－ＫＬＫ７及び１００μＭのｓｕｃ－ＬＬＶＹ－ＡＭＣの添加前に３０分間プレインキュベートした。２４時間後、蛍光読取りを３０～６０分の間１０２秒毎に行い、最後の５回の読取値を平均することによってＲＦＵエンドポイント値を算出した。ＫＬＫ５阻害剤の結果を以下に示す。図２Ａ：Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、図２Ｂ：ｍＡｂ１１０８、図２Ｃ：３－３Ｆ５、図２Ｄ：１０Ｃ８、図２Ｅ：９Ｂ６、図２Ｆ：９Ｆ２、図２Ｇ：９Ｈ３、図２Ｈ：９Ｈ５、図２Ｉ：８Ｂ７、図２Ｊ：２Ｂ１１、図２Ｋ：８Ｆ５、図２Ｌ：１０Ｃ５、図２Ｍ：１０Ｈ３、及び図２Ｎ：２－３Ｆ４。
図３Ａ～図３Ｎは、ｐｒｏ－ＫＬＫ１結合アッセイにおけるＫＬＫ５阻害剤の評価を示す。０．５ｎＭの組換えヒトＫＬＫ５阻害剤及び０．０１９～１０ｎＭのＫＬＫ５阻害剤を、３１．２５ｎＭのｐｒｏ－ＫＬＫ１及び５０μＭのＰＦＲ－ＡＭＣの添加前に３０分間プレインキュベートした。プレートは、３４０ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光モジュールを使用するＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）Ｐｌｕｓリーダーを用いて、１２０分の間１０２秒毎に検査した。ＫＬＫ５阻害剤の結果を以下に示す。図３Ａ：Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、図３Ｂ：ｍＡｂ１１０８、図３Ｃ：３－３Ｆ５、図３Ｄ：１０Ｃ８、図３Ｅ：９Ｂ６、図３Ｆ：９Ｆ２、図３Ｇ：９Ｈ３、図３Ｈ：９Ｈ５、図３Ｉ：８Ｂ７、図３Ｊ：２Ｂ１１、図３Ｋ：８Ｆ５、図３Ｌ：１０Ｃ５、図３Ｍ：１０Ｈ３、及び図３Ｎ：２－３Ｆ４。
図４Ａ～図４Ｎは、ＫＬＫ５由来切断生成物ペプチドをモニターすることによって、組換えＫＬＫ５によるｐｒｏ－ＫＬＫ７のタンパク質分解の阻害を測定するＬＣ／ＭＳアッセイの結果を示す。ＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、及び１２の選択した抗体とＫＬＫ５とのプレインキュベーションは、５ｎＭのＫＬＫ５と１５ｎＭのｐｒｏ－ＫＬＫ７との２時間のインキュベーションに先行した。ＫＬＫ５阻害剤の結果を以下に示す。図４Ａ：ＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、図４Ｂ：ｍＡｂ１１０８、図４Ｃ：１０Ｃ８、図４Ｄ：９Ｂ６、図４Ｅ：２Ｂ１１、図４Ｆ：９Ｆ２、図４Ｇ：２－３Ｆ４、図４Ｈ：１０Ｈ３、図４Ｉ：９Ｈ３、図４Ｊ：８Ｂ７、図４Ｋ：８Ｆ５、図４Ｌ：３－３Ｆ５、図４Ｍ：１０Ｃ５、及び図４Ｎ：９Ｈ５。
図５Ａ～図４Ｎは、ＫＬＫ５由来切断生成物ペプチドをモニターすることによって、組換えＫＬＫ５によるｐｒｏ－ＫＬＫ１のタンパク質分解の阻害を測定するＬＣ／ＭＳアッセイの結果を示す。ＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、及び１２の選択した抗体とＫＬＫ５とのプレインキュベーションは、０．５ｎＭのＫＬＫ５と３００ｎＭのｐｒｏ－ＫＬＫ１（図５Ａ～図５Ｎ）との２０分間のインキュベーションに先行した。ＫＬＫ５阻害剤の結果を以下に示す。図５Ａ：ＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、図５Ｂ：ｍＡｂ１１０８、図５Ｃ：１０Ｃ８、図５Ｄ：９Ｂ６、図５Ｅ：２Ｂ１１、図５Ｆ：９Ｆ２、図５Ｇ：２－３Ｆ４、図５Ｈ：１０Ｈ３、図５Ｉ：９Ｈ３、図５Ｊ：８Ｂ７、図５Ｋ：８Ｆ５、図５Ｌ：３－３Ｆ５、図５Ｍ：１０Ｃ５、及び図５Ｎ：９Ｈ５。
図６Ａ～図６Ｎは、ＫＬＫ７活性に対するＫＬＫ５阻害剤の特異性を示す。５ｎＭの組換えヒトＫＬＫ７阻害剤及び０．１９～１００ｎＭの抗ＫＬＫ５阻害剤を、１００μＭのｓｕｃ－ＬＬＶＹ－ＡＭＣの添加前に３０分間プレインキュベートした。プレートは、３４０ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光モジュールを使用するＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）Ｐｌｕｓリーダーを用いて、７５分の間１０２秒毎に検査した。ＩＣ５０値を表６にまとめている。ＫＬＫ５阻害剤の結果を以下に示す。図６Ａ：Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、図６Ｂ：ｍＡｂ１１０８、図６Ｃ：３－３Ｆ５、図６Ｄ：１０Ｃ８、図６Ｅ：９Ｂ６、図６Ｆ：９Ｆ２、図６Ｇ：９Ｈ３、図６Ｈ：９Ｈ５、図６Ｉ：２Ｂ１１、図６Ｊ：８Ｂ７、図６Ｋ：８Ｆ５、図６Ｌ：１０Ｃ５、図６Ｍ：１０Ｈ３、及び図６Ｎ：２－３Ｆ４。
図７Ａ～図７Ｎは、ＫＬＫ１活性に対するＫＬＫ５阻害剤の特異性を示す。３ｎＭの組換えヒトＫＬＫ１阻害剤及び０．１９～１００ｎＭの抗ＫＬＫ５阻害剤を、１００μＭのＰＦＲ－ＡＭＣの添加前に３０分間プレインキュベートした。プレートは、３４０ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光モジュールを使用するＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）Ｐｌｕｓリーダーを用いて、６０分の間１０２秒毎に検査した。ＩＣ５０値を表７にまとめている。ＫＬＫ５阻害剤の結果を以下に示す。図７Ａ：Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、図７Ｂ：ｍＡｂ１１０８、図７Ｃ：３－３Ｆ５、図７Ｄ：１０Ｃ８、図７Ｅ：９Ｂ６、図７Ｆ：９Ｆ２、図７Ｇ：９Ｈ３、図７Ｈ：９Ｈ５、図７Ｉ：８Ｂ７、図７Ｊ：２Ｂ１１、図７Ｋ：８Ｆ５、図７Ｌ：１０Ｃ５、図７Ｍ：１０Ｈ３、及び図７Ｎ：２－３Ｆ４。
図８Ａ～図８Ｎは、ＫＬＫ４活性に対するＫＬＫ５阻害剤の特異性を示す。２ｎＭの組換えヒトＫＬＫ４阻害剤及び０．１９～１００ｎＭの抗ＫＬＫ５阻害剤を、５０μＭのＢｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣの添加前に３０分間プレインキュベートした。プレートは、３４０ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光モジュールを使用するＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）Ｐｌｕｓリーダーを用いて、６０分の間１０２秒毎に検査した。ＩＣ５０値を表８にまとめている。ＫＬＫ５阻害剤の結果を以下に示す。図８Ａ：Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、図８Ｂ：ｍＡｂ１１０８、図８Ｃ：３－３Ｆ５、図８Ｄ：１０Ｃ８、図８Ｅ：９Ｂ６、図８Ｆ：９Ｆ２、図８Ｇ：９Ｈ３、図８Ｈ：９Ｈ５、図８Ｉ：８Ｂ７、図８Ｊ：２Ｂ１１、図８Ｋ：８Ｆ５、図８Ｌ：１０Ｃ５、図８Ｍ：１０Ｈ３、及び図８Ｎ：２－３Ｆ４。
図９Ａ～図９Ｎは、トリプシン活性に対するＫＬＫ５阻害剤の特異性を示す。ウシ膵臓から単離された０．２５ｎＭのトリプシン、及び０．１９～１００ｎＭの抗ＫＬＫ５阻害剤を、５０μＭのＢｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣの添加前に３０分間プレインキュベートした。プレートは、３４０ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光モジュールを使用するＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）Ｐｌｕｓリーダーを用いて、６０分の間１０２秒毎に検査した。選択した抗体のＩＣ５０値（図９Ｃ～図９Ｎ）を、表９にまとめている。ＫＬＫ５阻害剤の結果を以下に示す。図９Ａ：Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、図９Ｂ：ｍＡｂ１１０８、図９Ｃ：３－３Ｆ５、図９Ｄ：１０Ｃ８、図９Ｅ：９Ｂ６、図９Ｆ：９Ｆ２、図９Ｇ：９Ｈ３、図９Ｈ：９Ｈ５、図９Ｉ：８Ｂ７、図９Ｊ：２Ｂ１１、図９Ｋ：８Ｆ５、図９Ｌ：１０Ｃ５、図９Ｍ：１０Ｈ３、及び図９Ｎ：２－３Ｆ４。
図１０Ａ～図１０ＡＢは、Ｋｉａｐｐの測定によるＫＬＫ５阻害剤の効力の分析を示す。種々の濃度（０．５、０．２５、０．１２５、及び０．０６２５ｎＭ）のＫＬＫ５阻害剤及び０．００１９～１０ｎＭの抗ＫＬＫ５阻害剤を、３００μＭのＺ－ＶＰＲ－ｐＮＡの添加前に３０分間プレインキュベートした。プレートを、３時間にわたって１０２秒毎に取得される４０５ｎｍでの測定により、Ｖｅｒｓａｍａｘチューナブルマイクロプレートリーダーで読み取った。導き出されたＫｉａｐｐを表１０にまとめている。ＫＬＫ５阻害剤の結果は以下の通りである（各左側の図は、種々のＫＬＫ５濃度（０．５、０．２５、０．１２５、及び０．０６２５ｎＭ）におけるＫＬＫ５阻害剤のＩＣ５０値を示し、各右側の図は、ＫＬＫ５濃度の関数として決定され、プロットされたＩＣ５０値を示す）：図１０Ａ及び図１０Ｂ：Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、図１０Ｃ及び図１０Ｄ：ｍＡｂ１１０８、図１０Ｅ及び図１０Ｆ：３－３Ｆ５、図１０Ｇ及び図１０Ｈ：１０Ｃ８、図１０Ｉ及び図１０Ｊ：９Ｂ６、図１０Ｋ及び図１０Ｌ：９Ｆ２、図１０Ｍ及び図１０Ｎ：９Ｈ３、図１０Ｏ及び図１０Ｐ：９Ｈ５、図１０Ｑ及び図１０Ｒ：８Ｂ７、図１０Ｓ及び図１０Ｔ：２Ｂ１１、図１０Ｕ及び図１０Ｖ：８Ｆ５、図１０Ｗ及び図１０Ｘ：１０Ｃ５、図１０Ｙ及び図１０Ｚ：１０Ｈ３、図１０ＡＡ及び図１０ＡＢ：２－３Ｆ４。
図１１は、図１～図１０で評価され、それらに示されるＩＣ５０値を要約する表を示す。
図１２Ａは、各抗体と複合体である場合に影響を受けることが水素交換測定によって同定された配列領域を示し、これらの配列領域（下線）は、領域１（５６～６８、ｐＨｅｘｐ８．０）、領域２（１０７～１２４、ｐＨｅｘｐ６．０）、領域３（１８４～１９５、ｐＨｅｘｐ８．０）、領域４（２３２～２４６、ｐＨｅｘｐ６．０）であり、有効時間補正はｐＨｒｅｆ＝７．５を使用する。図１２Ｂは、図１２Ａで下線を引いた各配列領域に対する代表的なペプチドについての実際の水素交換データを示す。
図１３Ａは、抗ＫＬＫ５抗体クローン１４Ｃ８、１４Ｅ１２、８Ｅ１１、８Ｇ１０、９Ｂ６、２－３Ｆ４、１０Ｃ５、２Ｂ１１、１０Ｈ３、９Ｈ３、８Ｂ７、９Ｈ５、９Ｆ２、１０Ｃ８、８Ｆ５，３－３Ｆ５、９Ｅ３、１０Ｄ１０、１２Ｂ３、１Ｄ１０の軽鎖可変配列のアラインメントを示す。図１３Ｂは、抗ＫＬＫ５抗体クローン１４Ｃ８、１４Ｅ１２、８Ｅ１１、８Ｇ１０、９Ｂ６、２－３Ｆ４、１０Ｃ５、２Ｂ１１、１０Ｈ３、９Ｈ３、８Ｂ７、９Ｈ５、９Ｆ２、１０Ｃ８、８Ｆ５，３－３Ｆ５、９Ｅ３、１０Ｄ１０、１２Ｂ３、１Ｄ１０の重鎖可変配列のアラインメントを示す。ＫａｂａｔナンバリングによるＣＤＲ領域も示す。
図１４Ａは、抗ＫＬＫ５抗体クローン１０Ｃ５及び６つのヒト化１０Ｃ５クローンの軽鎖可変配列のアラインメントを示す。図１４Ｂは、抗ＫＬＫ５抗体クローン１０Ｃ５及び２８のヒト化１０Ｃ５クローンの重鎖可変配列のアラインメントを示す。黒で強調したアミノ酸残基は、変化した残基である。ＫａｂａｔナンバリングによるＣＤＲ領域も示す。
図１５Ａは、抗ＫＬＫ５抗体クローン９Ｈ５及び４つのヒト化９Ｈ５クローンの軽鎖可変配列のアラインメントを示す。図１５Ｂは、抗ＫＬＫ５抗体クローン９Ｈ５及び１７のヒト化９Ｈ５クローンの重鎖可変配列のアラインメントを示す。黒で強調したアミノ酸残基は、変化した残基である。ＫａｂａｔナンバリングによるＣＤＲ領域も示す。
図１６Ａは、抗ＫＬＫ５抗体クローン３－３Ｆ５及び５つのヒト化３－３Ｆ５クローンの軽鎖可変配列のアラインメントを示す。図１６Ｂは、抗ＫＬＫ５抗体クローン３－３Ｆ５及び２７のヒト化３－３Ｆ５クローンの重鎖可変配列のアラインメントを示す。黒で強調したアミノ酸残基は、変化した残基である。ＫａｂａｔナンバリングによるＣＤＲ領域も示す。
図１７は、Ａ５４９細胞ベースのＩＬ－８分泌アッセイにおける、ＫＬＫ５阻害剤の評価を示す。ＫＬＫ５誘導ＩＬ－８分泌レベル（灰色の星印）を残存性１００％に設定し、緩衝液（飢餓培地（ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ））のみ（灰色の丸印）を残存性０％に設定した。用量反応曲線は、Ｓｐｉｎｋ５．Ｆｃ（黒い丸印及び黒い点線）、ヒト化３．３Ｆ５（黒い菱形及び黒い実線）抗ＫＬＫ５抗体、ヒト化９Ｈ５抗ＫＬＫ５抗体（実線の灰色の正方形及び灰色の実線）、及びヒト化１０Ｃ５抗ＫＬＫ５抗体（白抜きの黒い丸印及び黒色の点線）で示される。示されたデータは、少なくとも３つの独立した実験の平均±標準偏差である。
図１８Ａは、ＫＬＫ５－１０Ｃ５ Ｆａｂ複合体を有するヒトＫＬＫ５の重なりを示す。図１８Ｂは、ヒトＫＬＫ５と１０Ｃ５ Ｆａｂとの間のインターフェースを示す。ヒトＫＬＫ５のアミノ酸残基のナンバリングは、プロテアーゼの標準的なナンバリングに基づいている。Ｄｅｂｅｌａら、「Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ」、第３７３巻第１０１７～１０３１頁（２００７年）を参照されたい。Ｆａｂ断片のアミノ酸残基のナンバリングはＫａｂａｔに基づく。
図１９Ａは、ＫＬＫ５－９Ｈ５ Ｆａｂ複合体を有するヒトＫＬＫ５の重なりを示す。図１９Ｂは、ヒトＫＬＫ５と９Ｈ５ Ｆａｂとの間のインターフェースを示す。ヒトＫＬＫ５のアミノ酸残基のナンバリングは、プロテアーゼの標準的なナンバリングに基づいている。Ｆａｂ断片のアミノ酸残基のナンバリングはＫａｂａｔに基づく。
図２０Ａは、ＫＬＫ５－３－３Ｆ５ Ｆａｂ複合体を有するヒトＫＬＫ５の重なりを示す。図２０Ｂは、ヒトＫＬＫ５と３－３Ｆ５ Ｆａｂとの間のインターフェースを示す。ヒトＫＬＫ５のアミノ酸残基のナンバリングは、プロテアーゼの標準的なナンバリングに基づいている。Ｆａｂ断片のアミノ酸残基のナンバリングはＫａｂａｔに基づく。
Ｉ． 定義
用語「抗ＫＬＫ５抗体」及び「ＫＬＫ５に結合する抗体」とは、抗体がＫＬＫ５の標的化において診断及び／又は治療剤として有用であるような充分な親和性を有して、ＫＬＫ５に結合可能である抗体を指す。いくつかの実施形態では、無関係なポリペプチド（ＫＬＫ５以外のポリペプチド）への抗ＫＬＫ５抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定されるとき、ＫＬＫ５への抗体への結合の約１０％未満である。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）のＩＣ５０値（酵素反応の速度を５０％減少させるのに必要である、抗体又はその断片などの阻害剤の濃度）を有する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、異なる種のＫＬＫポリペプチド間で保存されているＫＬＫ５の結合領域（例えば、エピトープ）に結合する。
用語「抗体」とは、最も広い意味で使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含めた、これらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
抗体、結合ポリペプチド、ポリヌクレオチド、又は小分子に関して使用される用語「単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」とは、その自然環境の成分から分離されているものである。いくつかの実施形態では、抗体、結合ポリペプチド、ポリヌクレオチド、又は小分子は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、キャピラリ電気泳動法）、又はクロマトグラフ（例えば、イオン交換若しくは逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％又は９９％を超える純度に精製される。抗体純度の評価のための方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎら、「Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ」、第８４８巻第７９～８７頁（２００７年）を参照されたい。
本明細書で使用する場合、用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体の母集団から得られる抗体を指す。すなわち、母集団を含む個々の抗体が、可能性のあるバリアント抗体（例えば、天然に発生する変異を含有し、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じ、このような変異が通常少量存在する）を除いて同一である、及び／又は同一の結合領域（例えば、エピトープ）に結合する。異なる決定基（エピトープ）に対して異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体の調製と比べて、モノクローナル抗体の調製における各モノクローナル抗体は抗原の単一の決定基に対するものである。したがって修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の母集団から得られる抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本明細書に記載のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法、例えば、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよい。
「遮断抗体」又は「アンタゴニスト抗体」は、それが結合する抗原の生物活性を阻害又は低減するものである。好ましい遮断抗体又はアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的に又は完全に阻害する。
用語「キメラ」抗体とは、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の源又は種に由来する一方で、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分が異なる源又は種に由来する抗体を指す。
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」とは、本明細書で交換可能に用いられて、天然抗体の構造に実質的に等しい構造を有する、又はＦｃ領域を含有する重鎖を有する、抗体（例えば、抗ＫＬＫ５抗体）を意味する。
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により作製した抗体、又はヒト抗体レパートリ若しくは他のヒト抗体コード化配列を利用した、非ヒト源由来の抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は特に、非ヒト抗原結合残基を含むヒト抗体を除外する。
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そこではＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、場合により、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」とは、ヒト化を受けた抗体を指す。
「天然抗体」とは、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖からなる約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の１つに割り当てられてもよい。
抗体の「クラス」とは、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。５つの主要なクラスの抗体、つまり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けられ得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
「抗体断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体の一部分を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性抗体、直鎖抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び、抗体断片から形成した多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」又は「同じ結合領域に結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて、参照抗体のその結合パートナ（例えば、抗原）への結合を５０％以上遮断する抗体、及び逆に、競合アッセイにおいて、抗体のその結合パートナへの結合を５０％以上遮断する参照抗体を指す。
用語「熱力学的エピトープ」とは、例えば、水素交換質量分析法を用いたエピトープマッピングの文脈において、その主鎖構造動力学又はアンフォールディングの局所自由エネルギーが、抗体に結合するようになるなどの特異的結合事象に応答して変化する、タンパク質のそれらの部分を指す。構造エピトープは、熱力学的エピトープ内に部分的若しくは完全に含まれていてもよく、又は含まれていなくてもよい。
用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」とは、本明細書で使用される場合、配列において超可変性であり（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」）、及び／又は構造的に所定のループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／又は抗原に接触する残基（「抗原接触」）を含有する、抗体可変ドメインのそれぞれの領域を指す。一般的に、抗体は、６個のＨＶＲを含み、ＶＨに３個（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに３個（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）含む。本明細書における例示的なＨＶＲとしては、以下が挙げられる：
（ａ） アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）、及び９６－１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第１９６巻第９０１～９１７頁（１９８７年））；
（ｂ） アミノ酸残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、８９～９７（Ｌ３）、３１～３５ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、及び９５～１０２（Ｈ３）で生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ（１９９１年））；
（ｃ） アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）、及び９３～１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第２６２巻第７３２～７４５頁（１９９６年））；並びに
（ｄ） （ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組合せ、ＨＶＲアミノ酸残基４６～５６（Ｌ２）、４７～５６（Ｌ２）、４８～５６（Ｌ２）、４９～５６（Ｌ２）、２６～３５（Ｈ１）、２６～３５ｂ（Ｈ１）、４９～６５（Ｈ２）、９３～１０２（Ｈ３）、及び９４～１０２（Ｈ３）を含む。
特に明記されない限り、可変ドメイン中のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書では、前掲のＫａｂａｔらに従って、例えば図１３～図１６並びに以下の本明細書の配列表に記載されているように番号付けされる。特に明記されない限り、ＣＤＲは、前掲のＫａｂａｔらに従って決定される。
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体の抗原への結合に関与する、抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は、一般的に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの超可変領域（ＨＶＲ）と、を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔら、「Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、第６版、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、第９１頁（２００７年）を参照されたい。）抗原結合特異性を与えるには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで充分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、その抗原に結合する抗体からのＶＨ又はＶＬドメインを使用して相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリをそれぞれスクリーニングして、単離されてもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１５０巻第８８０～８８７頁（１９９３年）、Ｃｌａｒｋｓｏｎら、「Ｎａｔｕｒｅ」、第３５２巻第６２４～６２８頁（１９９１年）を参照のこと。
用語「Ｆｃ領域」とは、本明細書では定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、ネイティブ配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リシン（Ｌｙｓ４４７）は、存在していてもよく、又は存在していなくてもよい。本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ（１９９１年）に記載されるような、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」とは、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４の４つのＦＲドメインからなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）中において以下の配列で現れる。ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。
本明細書の目的での「アクセプターヒトフレームワーク」とは、以下に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、又はアミノ酸配列の変更を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸変更の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に対して、配列が同一である。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択にて、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選別は、可変ドメイン配列のサブグループから行う。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ第９１－３２４２、メリーランド州ベセスダ（１９９１年）、第１～３巻におけるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬについては、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記参照）におけるサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨについては、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記参照）におけるサブグループＩＩＩである。
「親和性」又は「結合親和性」は、分子の単一の結合部位（例えば、抗体、結合ポリペプチド、ポリヌクレオチド、小分子）と、その結合パートナ（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の合計強度を指す。別途の指示がない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバ（例えば、抗体、結合ポリペプチド、ポリヌクレオチド、小分子、及び抗原のいずれか）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナＹに対する親和性は一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表され得る。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例証的かつ例示的な実施形態が、以下に記載される。
「親和性成熟」抗体とは、改変などを有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）に１つ以上の改変を有し、そのような改変により抗体の抗原に対する親和性が改善される抗体を指す。
「結合領域」は、ＫＬＫ５抗体が選択的に結合する結合パートナ（例えば、抗原）の一部分である。結合ポリペプチド結合パートナの場合、直鎖状結合領域は、約４～１５（例えば、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５）アミノ酸残基のペプチド部分であり得る。非直鎖状立体構造結合領域は、結合ポリペプチド結合パートナの三次元（３Ｄ）構造において、近接したポリペプチド配列の残基を含み得る。
「エフェクタ機能」とは、抗体アイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクタ機能の例としては、以下が挙げられる：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；並びにＢ細胞活性化。
本明細書で使用される場合、用語「ＫＬＫ５」及び「カリクレイン５」とは、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）並びにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物供給源に由来する任意の天然ＫＬＫ５を指す。この用語は、「全長」の未処理のＫＬＫ５と、細胞の処理から生じるＫＬＫ５の任意の形態を包含する。この用語は、ＫＬＫ５の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ９Ｙ３３７である。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、及び配列番号８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ９Ｙ３３７（Ｇ５５、Ｄ１５３バリアント）のアミノ酸残基２３～２９３（マイナスシグナルペプチド）であり、配列番号２に示される。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、配列番号４に示されるＧ５５、Ｎ１５３バリアントのアミノ酸残基２３～２９３（マイナスシグナルペプチド）である。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、配列番号６に示されるＲ５５、Ｎ１５３バリアントのアミノ酸残基２３～２９３（マイナスシグナルペプチド）である。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、配列番号８に示されるＲ５５、Ｄ１５３バリアントのアミノ酸残基２３～２９３（マイナスシグナルペプチド）である。
以下の段落におけるナンバリングは、全長の未処理ＫＬＫ５に関するものである。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、１５３位のアミノ酸Ｎを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、１５３位のアミノ酸Ｄを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、５５位のアミノ酸Ｇを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、５５位のアミノ酸Ｒを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、５５位のアミノ酸Ｇ及び１５３位のアミノ酸Ｎを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、５５位のアミノ酸Ｇ及び１５３位のアミノ酸Ｄを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、５５位のアミノ酸Ｒ及び１５３位のアミノ酸Ｎを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５のアミノ酸配列は、５５位のアミノ酸Ｒ及び１５３位のアミノ酸Ｄを含む。
以下の段落におけるナンバリングは、全長の未処理ＫＬＫ５に関するものである。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５の核酸配列は、１５３位のＮをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５の核酸配列は、１５３位のＤをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５の核酸配列は、５５位のＧをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５の核酸配列は、５５位のＲをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５の核酸配列は、５５位のＧ及び１５３位のＮをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５の核酸配列は、５５位のＧ及び１５３位のＤをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５の核酸配列は、５５位のＲ及び１５３位のＮをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＫＬＫ５の核酸配列は、５５位のＲ及び１５３位のＤをコードする配列を含む。
本明細書で使用される場合、用語「ＳＰＩＮＫ５」及び「Ｋａｚａｌ型セリンプロテアーゼ阻害剤５」とは、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）並びにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物供給源に由来する任意の天然ＳＰＩＮＫ５を指す。この用語は、「全長」の未処理のＳＰＩＮＫ５と、細胞の処理から生じるＳＰＩＮＫ５の任意の形態を包含する。この用語は、ＳＰＩＮＫ５の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＳＰＩＮＫ５のアミノ酸配列はＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ９ＮＱ３８であり、配列番号９に示される。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＳＰＩＮＫ５のアミノ酸配列は、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ９ＮＱ３８のアミノ酸残基２３～１０６４（マイナスシグナルペプチド）であり、配列番号１０に示される。
本明細書中で使用される場合、用語「ＳＰＩＮＫ融合ポリペプチド」とは、ＳＰＩＮＫポリペプチド又はその断片（例えば、ＳＰＩＮＫポリペプチドの特定のドメイン（例えば、ＳＰＩＮＫ５及び／又はＳＰＩＮＫ９））が、別のポリペプチド（例えば非ＳＰＩＮＫポリペプチド）に直接的又は間接的に連結されている、融合ポリペプチドを指す。
本明細書中で使用される場合、用語「ＳＰＩＮＫ－Ｆｃ融合ポリペプチド」とは、ＳＰＩＮＫポリペプチド又はその断片（例えば、ＳＰＩＮＫポリペプチドの特定のドメイン（例えば、ＳＰＩＮＫ５及び／又はＳＰＩＮＫ９））が、Ｆｃ領域に直接的又は間接的に連結されている、融合ポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ２ａ Ｆｃ領域、及びＩｇＧ４ Ｆｃ領域からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２ａ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２ａ Ｆｃ領域は、マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、ＳＰＩＮＫポリペプチド又はその断片は、ヒトＳＰＩＮＫポリペプチド又はその断片である。いくつかの実施形態では、ＳＰＩＮＫポリペプチド又はその断片は、マウスＳＰＩＮＫポリペプチド又はその断片である。ＳＰＩＮＫポリペプチド、ＳＰＩＮＫドメイン、又はＳＰＩＮＫ－Ｆｃ融合ポリペプチドの機能及び／又は活性に影響しないＳＰＩＮＫポリペプチド、ＳＰＩＮＫドメイン、又はＦｃの挿入、欠失、置換、特に保存的アミノ酸置換などのマイナーな配列変異が本明細書に提供されることが理解されよう。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＳＰＩＮＫ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＫＬＫ５の阻害をもたらし得るＫＬＫ５に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＳＰＩＮＫポリペプチド又はその断片は、ＳＰＩＮＫ９である。いくつかの実施形態では、ＳＰＩＮＫ－Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（配列番号３２０）である。
本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド」とは、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト）並びにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の関心対象の任意の天然ポリペプチド（例えば、ＫＬＫ５又はＳＰＩＮＫ５）を指す。この用語は、「完全長」未処理のポリペプチド、並びに細胞内の処理から生じるポリペプチドの任意の形態を包含する。この用語は、ポリペプチドの天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列の同一性率（％）」は、配列をアラインメントし、最大の配列同一性率を達成するために、必要ならばギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合であると定義される。アミノ酸配列同一性率を決定するためのアラインメントは、当技術分野の範囲内の様々な方式で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたる最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含めた、配列を整列させるのに適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性（％）の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．の著作であり、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ，ワシントンＤ．Ｃ．、２０５５９）に提出されて、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、カリフォルニア州サウス・サンフランシスコのＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から公的に利用可能であり、又はソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含めたＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用する場合はコンパイルするべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変動しない。
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に用いられる状況下で、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、又は含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される：
分率Ｘ／Ｙ×１００
式中、Ｘは、Ａ及びＢのこのプログラムのアラインメントにおいて、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって同一性マッチとしてスコアリングされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の合計数である。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％に等しくないことが理解されるだろう。他の意味であると具体的に述べられていない限り、本明細書で使用されるアミノ酸配列同一性％の値は全て、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを用いる直前の段落に記載されるように得られる。
本明細書で同義に使用される場合、「ポリヌクレオチド」又は「核酸」とは、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド若しくは塩基、及び／若しくはそれらの類似体であっても、又はＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼによって若しくは合成反応によってポリマーに組み込まれ得る任意の基質であってもよい。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾されたヌクレオチドを含んでもよい。存在する場合には、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーのアセンブリの前に付与されても、又は後に付与されてもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって遮られ得る。ポリヌクレオチドは、標識との複合などによって、合成後にさらに修飾されてもよい。他の種類の修飾としては、例えば、「キャップ」、天然に存在するヌクレオチドのうちの１つ以上の類似体との置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電結合を有するもの（例えば、ホスホン酸メチル、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバミン酸塩等）及び荷電結合を有するもの（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等）、ペンダント部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ－Ｌ－リジン等）等を含有するもの、インターカレータを有するもの（例えば、アクリジン、ソラレン等）、キレート剤を含有するもの（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属等）、アルキル化剤を含有するもの、修飾結合を有するもの（例えば、アルファアノマー核酸等）、並びにポリヌクレオチド（複数可）の非修飾形態が挙げられる。さらに、糖内に通常存在するヒドロキシル基のうちのいずれかは、例えば、ホスホン酸基、リン酸基により代置されるか、標準的な保護基により保護されるか、若しくは活性化されて追加のヌクレオチドへの追加の結合を準備してもよく、又は固体若しくは半固体支持体に複合されてもよい。５′及び３′末端ＯＨをリン酸化するか、又はアミン若しくは１～２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分と置換することができる。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化されてもよい。ポリヌクレオチドは、例えば、２’－Ｏ－メチル－、２’－Ｏ－アリル、２’－フルオロ－、又は２’－アジド－リボース、炭素環糖の類似体、α－アノマ－糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロース、又はリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、アクリル酸類似体、及び脱塩基ヌクレオシド類似体、例えば、メチルリボシドを含む、当該技術分野で一般的に知られているリボース糖又はデオキシリボース糖の類似形態も含み得る。１つ以上のホスホジエステル結合は、代替的な連結基によって代置されてもよい。これらの代替連結基には、限定されないが、リン酸塩が、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、’’（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ、又はＣＨ２（「ホルムアセタール」）に置き換えられる実施形態が含まれ、各Ｒ又はＲ’は、独立してＨであるか、又は置換若しくは非置換アルキル（１－２０Ｃ）（任意にエーテル（－Ｏ－）結合を含む）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、又はアラルジルである。ポリヌクレオチドにおける結合全てが同一である必要があるわけではない。前述の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む本明細書で言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。
「単離された」ポリヌクレオチド又は核酸は、その天然環境の構成成分から分離された分子を指す。単離された核酸は、元々その核酸分子を含む細胞に含まれているが、その核酸分子が、染色体外に存在するか、又はその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する核酸分子を含む。
「抗ＫＬＫ５抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体の重鎖及び軽鎖（又はそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子（複数可）を含み、そのような核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
本明細書中で使用される場合、用語「ＫＬＫ５ゲノム配列」とは、ＫＬＫ５遺伝子のｃＤＮＡ及び／又はゲノム形態のいずれかを指し、これはイントロン並びに上流及び下流調節配列を含み得る。
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」とは、交換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、これらは、継代数にかかわらず、初代の形質転換された細胞、及び初代の形質転換された細胞から誘導された子孫を含む。子孫は、親細胞の核酸含有量と完全に同一でなくてもよいが、変異を含んでいてもよい。元々の形質転換された細胞についてスクリーニングされるか、又は選択されるのと同じ機能又は生物活性を有する変異体子孫が本発明に含まれる。
用語「ベクター」とは、本明細書で使用される場合、それが連結している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製する核酸構造としてのベクター、及び導入される宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが機能的に連結されている核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と称される。
本明細書で使用される場合、「参照試料」、「参照細胞」、「参照組織」、「対照試料」、「対照細胞」、又は「対照組織」とは、比較目的のために使用される試料、細胞、組織、標準物、又はレベルを指す。一実施形態では、参照試料、参照細胞、参照組織、対照試料、対照細胞、又は対照組織は、同じ対象の身体の健常及び／又は非罹患部分（例えば、組織又は細胞）から得られる。例えば、罹患細胞又は組織に隣接する健常及び／又は非罹患の細胞又は組織（例えば、腫瘍に隣接する細胞又は組織）。別の実施形態では、参照試料は、同じ対象の身体の処置されていない組織及び／又は細胞から得られる。さらに別の実施形態では、参照試料、参照細胞、参照組織、対照試料、対照細胞、又は対照組織は、別の対象の身体の健常及び／又は非罹患部分（例えば、組織又は細胞）から得られる。より別の実施形態では、参照試料、参照細胞、参照組織、対照試料、対照細胞、又は対照組織は、別の対象の身体の未治療組織及び／又は細胞から得られる。
本明細書で使用される場合、用語「試料」とは、例えば、物理的、生化学的、化学的、及び／又は生理的特徴に基づいて特性化及び／又は特定されることになる、細胞的要素及び／又は他の分子的要素を含有する、目的の対象から得られるか、又はそれに由来する、製剤を指す。例えば、「疾患試料」という語句及びその変化形は、特性評価される細胞及び／又は分子実体を含有することが予期されるか、又は含有することが既知である、目的の対象から得られた任意の試料を指す。試料としては、初代又は培養細胞または細胞株、細胞上清、細胞溶解物、血小板、血清、血漿、硝子体液、リンパ液、滑液、卵胞液、精液、羊水、乳、全血、血液由来の細胞、尿、脳脊髄液、唾液、痰、涙、汗、粘液、腫瘍溶解物、及び組織培養培地、組織抽出物（均質化組織など）、腫瘍組織、細胞抽出物、並びにそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
「組織試料」又は「細胞試料」は、対象の組織から得られた同様の細胞の集合を意味する。組織又は細胞試料の供給源は、新鮮な、凍結した、及び／又は保存された器官、組織試料、生検、及び／又は吸引液からなどの固形組織；血漿などの血液又は任意の血液構成物；脳脊髄液、羊水、腹水、又は間質液などの体液；対象の妊娠又は発育における任意の時期の細胞であってもよい。組織試料はまた、初代又は培養細胞又は細胞株であってもよい。任意で、組織又は細胞試料は、疾患組織／器官から得られる。組織試料は、保存剤、抗凝固剤、緩衝液、固定剤、栄養剤、又は抗生物質などの天然の組織と天然では混合しない化合物を含有し得る。
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、必要な投与量で必要な期間にわたって所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。
「対象」は哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、並びにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
本明細書で使用される場合、用語「患者」とは、哺乳動物などの動物を指す。一実施形態では、患者とは、ヒトを指す。
用語「薬学的製剤」とは、調製物中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を全く含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝液、賦形剤、安定剤、又は保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、用語「Ｔｈ２高値喘息」とは、高レベルな１つ以上のＴｈ２細胞関連サイトカイン、例えば、ＩＬ１３、ＩＬ４、ＩＬ９、ＩＬ５を示す喘息、又はＴｈ２サイトカイン関連炎症を示す喘息を指す。いくつかの実施形態では、Ｔｈ２高値喘息という用語は、高好酸球性喘息と交換可能に使用され得る。いくつかの実施形態では、Ｔｈ２高値喘息は、Ｔｈ２駆動喘息である。いくつかの実施形態では、喘息患者は、好酸球性炎症陽性（Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ：ＥＩＰ）であると判定されている。例えば、国際特許出願公開第２０１５／０６１４４１号を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、対象は、対照又は参照レベルと比較して、好酸性シグネチャー遺伝子（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｇｅｎｅ）の少なくとも１つのレベルが上昇していると判定されている。国際公開第２０１５／０６１４４１号を参照のこと。いくつかの実施形態では、Ｔｈ２高値喘息は、高ペリオスチン喘息である。いくつかの実施形態では、対象は、高血清ペリオスチンを有する。いくつかの実施形態では、対象は、１８歳以上である。いくつかの実施形態では、対象は、対照又は参照レベルと比較して、血清ペリオスチンのレベルが上昇していると判定されている。いくつかの実施形態では、対照又は参照レベルは、集団におけるペリオスチンの中央値レベルである。いくつかの実施形態では、対象は、２０ｎｇ／ｍＬ以上の血清ペリオスチンを有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、２５ｎｇ／ｍＬ以上の血清ペリオスチンを有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、５０ｎｇ／ｍＬ以上の血清ペリオスチンを有すると判定されている。いくつかの実施形態では、血清ペリオスチンの対照又は参照レベルは、２０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、又は５０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、喘息は、高好酸球性喘息である。いくつかの実施形態では、対象は、対照又は参照レベルと比較して、好酸球数が上昇していると判定されている。いくつかの実施形態では、対照又は参照レベルは、集団の中央値レベルである。いくつかの実施形態では、対象は、１５０／μＬ血液以上の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、２００／μＬ血液以上の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、２５０／μＬ血液以上の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、３００／μＬ血液以上の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、３５０／μＬ血液以上の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、４００／μＬ血液以上の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、４５０／μＬ血液以上の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、５００／μＬ血液以上の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの好ましい実施形態では、対象は、３００／μＬ血液以上の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの実施形態では、好酸球は、末梢血好酸球である。いくつかの実施形態では、好酸球は、痰好酸球である。いくつかの実施形態では、対象は、高レベルのＦｅＮＯ（呼気一酸化窒素）及び／又は高レベルのＩｇＥを示す。例えば、いくつかの例では、対象は、約５ｐｐｂ（十億分率）、１０ｐｐｂ、１５ｐｐｂ、２０ｐｐｂ、２５ｐｐｂ、３０ｐｐｂ、３５ｐｐｂ、４０ｐｐｂ、４５ｐｐｂ、５０ｐｐｂ、６０ｐｐｂ、７０ｐｐｂ、８０ｐｐｂ、９０ｐｐｂ、及び１００ｐｐｂのいずれかよりも高いＦｅＮＯレベルを示す。場合によっては、対象は、５０ＩＵ／ｍＬより高いＩｇＥレベルを有する。
用語「Ｔｈ２低値喘息」、「非Ｔｈ２高値喘息」、「２型低値喘息（ｔｙｐｅ ２－ｌｏｗ ａｓｔｈｍａ）」、「Ｔ２低値喘息（Ｔ２－ｌｏｗ ａｓｔｈｍａ）」、「非好酸球性喘息」、「微量顆粒球性喘息（ｐａｕｃｉ－ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｉｃ ａｓｔｈｍａ）」、又は「微炎症性喘息（ｐａｕｃｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｓｔｈｍａ）」は、本明細書で使用される場合、低レベルな１つ以上のＴｈ２細胞関連サイトカイン、例えばＩＬ１３、ＩＬ４、ＩＬ９、ＩＬ５を示す喘息、又は非Ｔｈ２サイトカイン関連炎症を示す喘息を指す。いくつかの実施形態では、Ｔｈ２低値喘息という用語は、低好酸球性喘息と交換可能に使用され得る。いくつかの実施形態では、喘息患者は、好酸球性炎症陰性（Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｎｅｇａｔｉｖｅ：ＥＩＮ）であると判定されている。例えば、国際公開第２０１５／０６１４４１号を参照のこと。いくつかの実施形態では、Ｔｈ２低値喘息は、Ｔｈ１７駆動喘息である。いくつかの実施形態では、Ｔｈ２低値喘息は、低ペリオスチン喘息である。いくつかの実施形態では、対象は、１８歳以上である。いくつかの実施形態では、対象は、対照又は参照レベルと比較して、血清ペリオスチンのレベルが減少していると判定されている。いくつかの実施形態では、対照又は参照レベルは、集団におけるペリオスチンの中央値レベルである。いくつかの実施形態では、対象は、２０ｎｇ／ｍＬ未満の血清ペリオスチンを有すると判定されている。いくつかの実施形態では、喘息は、低好酸球性喘息である。いくつかの実施形態では、対象は、対照又は参照レベルと比較して、好酸球数が減少していると判定されている。いくつかの実施形態では、対照又は参照レベルは、集団の中間レベルである。いくつかの実施形態では、対象は、１５０／μＬ血液未満の好酸球数を有すると判定されている。いくつかの実施形態では、対象は、１００／μＬ血液未満の好酸球数を有すると判定されている。ある特定の好ましい実施形態では、対象は、３００／μＬ血液未満の好酸球数を有すると判定されている。
「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などの変化形）とは、治療される対象又は細胞の自然経過を改変する試みにおける臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患の発生又は再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的病理学的帰結の縮小、疾患の安定した（すなわち、悪化していない）状態、疾患進行速度の減少、病状の回復又は緩和、治療を受けない場合の期待生存率と比較した生存期間の延長、及び予後の改善のうち１つ以上が含まれる。
用語「添付文書」とは、そのような治療製品の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症、及び／又はその使用に関する警告についての情報を含有する、治療製品の商業用パッケージに通例含まれる指示書を指すために使用される。
本明細書に記載する実施形態の文脈において、用語「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」、並びに同様の用語の使用は、本明細書で別途示されない限り、又は文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数形と複数形との両方を包含すると解釈されるべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」とは、別途示されない限り、オープンエンドな用語（ｏｐｅｎ－ｅｎｄｅｄ ｔｅｒｍ）（すなわち、「含むがこれに限定されない」という意味）として解釈されるべきである。本明細書に提供される態様及び実施形態は、態様及び実施形態「からなる」及び／又は「から本質的になる」ことを含むと理解される。
当業者には理解される通り、本明細書における「約」の値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（そしてそれを説明する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。
語句「実質的に異なる」とは、本明細書に使用されるとき、２つの数値（一般に、一方がある分子と関連付けられており、他方が参照／比較分子と関連付けられている）の間の充分に高い相違を表し、結果として、当業者であれば、これら２つの値の間の相違が、かかる値（例えば、Ｋｄ値）によって測定される生物学的特徴に関して、統計学的に有意なものであると見なすであろう。該２つの値の間の差異は、参照／比較分子に対する値の関数として、例えば、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超、及び／又は約５０％超であり得る。
ＩＩ． 組成物及び方法
一態様では、本発明は、ＫＬＫ５の生物活性を阻害するＫＬＫ５抗体の発見に、部分的に基づく。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５に結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５に結合する単離された抗体、すなわち抗ＫＬＫ５抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５の生物活性を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５の生物活性を、実質的又は完全に阻害する。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性は、セリンプロテアーゼ活性である。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性は、トリプシン様セリンプロテアーゼ活性である。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性は、ＫＬＫ５が促進するヒト平滑筋細胞の増殖及び収縮である。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性は、炎症性サイトカイン、ケモカイン、及び接着分子のＫＬＫ５誘導性上皮発現である。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性は、好中球遊走性サイトカインのＫＬＫ５誘導性上皮産生及び肺組織への好中球流入である。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性は、少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、及び／又はそれ以上のいずれかで阻害される。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性は、約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、及び／又はそれ以上のいずれかで阻害される。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性は、４０～５０％、５０～６０％、６０～７０％、７０～８０％、８０～９０％、及び／又は９０～１００％のいずれかで阻害される。
抗ＫＬＫ５抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ＳＰＩＮＫ５のＫＬＫ５への結合を実質的に又は完全に阻害する。いくつかの実施形態では、ＳＰＩＮＫ５のＫＬＫ５への結合は、少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、及び／又はそれ以上のいずれかで阻害される。いくつかの実施形態では、ＳＰＩＮＫ５のＫＬＫ５への結合は、約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、及び／又はそれ以上のいずれかで阻害される。いくつかの実施形態では、ＳＰＩＮＫ５のＫＬＫ５への結合は、約４０～５０％、５０～６０％、６０～７０％、７０～８０％、８０～９０％、及び／又は９０～１００％のいずれかで阻害される。
抗ＫＬＫ５抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、約１０００ｎＭ、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、１ｎＭ、５００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、及び／又は１ｐＭのいずれかよりも小さいＩＣ５０値を有する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、１０００ｎＭ、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、１ｎＭ、５００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、及び／又は１ｐＭのいずれかよりも小さいＩＣ５０値を有する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、約５０μＭ～１μＭ、１μＭ～５００ｎＭ、５００ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１ｎＭ、１０００ｐＭ～５００ｐＭ、５００ｐＭ～２００ｐＭ、２００ｐＭ～１５０ｐＭ、１５０ｐＭ～１００ｐＭ、１００ｐＭ～１０ｐＭ、及び／又は１０ｐＭ～１ｐＭのいずれかのＩＣ５０値を有する。
本明細書で提供される抗体は、例えば、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さからなる群から選択される疾患の診断又は治療に有用である。いくつかの実施形態では、疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、及び好酸球性食道炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、喘息は、生命を脅かし得る症状を悪化させる（増悪又は再燃）急性事象を伴う、持続性の慢性重度喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アトピー性（アレルギー性としても知られる）喘息、非アレルギー性喘息（例えば、しばしば、呼吸器ウイルス（例えば、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルス、及び呼吸系発疹ウイルス）又は吸入した刺激物質（大気汚染物質、スモッグ、ディーゼル粒子、揮発性化学物質及びガス、屋内若しくは屋外又はさらには冷たい乾燥した空気による）での感染によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、喘息は、「煙」（典型的には、紙巻タバコ、葉巻、パイプ）、吸入、若しくは喫煙（タバコ、マリファナ、又は他のそのような物質）への急性又は慢性の一次又は二次曝露による間欠的又は運動誘発性の喘息、又はアスピリン若しくは関連ＮＳＡＩＤの新しい摂取によって引き起こされる喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、軽度の喘息若しくはコルチコステロイド未治療喘息、新たに診断された未処置喘息であるか、又は以前には、症状（咳、喘鳴、呼吸困難／息切れ、又は胸痛）を制御するための吸入局所若しくは全身ステロイドの慢性使用を必要としていない。いくつかの実施形態では、喘息は、慢性のコルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、又は他の慢性喘息制御薬で制御不能な喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、中等度～重度の喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔｈ２高値喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、重度の喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息（例えば、感染及び／又は呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）による）、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息、又は２型（Ｔ２）駆動喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、好酸球性喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アレルギー性喘息である。いくつかの実施形態では、対象は、好酸球性炎症陽性（ＥＩＰ）であると判定されている。国際公開第２０１５／０６１４４１号を参照のこと。いくつかの実施形態では、喘息は、高ペリオスチン喘息（例えば、少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、又は５０ｎｇ／ｍＬの血清のいずれかのペリオスチン濃度を有する）である。いくつかの実施形態では、喘息は、高好酸球性喘息（例えば、少なくとも約１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００／ｍＬ血液の好酸球数）である。いくつかの実施形態では、喘息は、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息である。いくつかの実施形態では、対象は、好酸球性炎症陰性（ＥＩＮ）であると判定されている。国際公開第２０１５／０６１４４１号を参照のこと。いくつかの実施形態では、喘息は、低ペリオスチン喘息（例えば、約２０ｎｇ／ｍＬ血清未満のペリオスチン濃度を有する）である。いくつかの実施形態では、喘息は、低好酸球性喘息（例えば、約１５０未満／μＬ血液の好酸球数又は約１００未満／μＬ血液の好酸球数）である。
Ａ． 例示的抗ＫＬＫ５抗体
ＫＬＫ５に結合する単離抗体が、本明細書において提供される。一実施形態では、抗体は、ＫＬＫ５の生物活性を少なくとも５０％阻害する。ＫＬＫ５は、ヒト皮膚、特に皮膚の上部棘層及び顆粒層で発現する（キモ）－トリプシン様セリンプロテアーゼである。ＫＬＫ５がネザートン症候群などの皮膚障害において病理学的役割を果たすことが知られている。
シグナルペプチド（アミノ酸１～２２）を有する、例示的な天然に存在するヒトＫＬＫ５前駆体タンパク質配列は、配列番号１に提供される。配列番号１のアミノ酸２３～２９３に対応する対応する、対応成熟ＫＬＫ５タンパク質配列は、配列番号２に提供される。アミノ酸交換Ｒ５５及びＮ１５３の一方又は両方を含有するシグナルペプチドを有するヒトＫＬＫ５前駆体タンパク質の例示的なバリアントは、それぞれ、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、及び配列番号８に提供される。
ある特定の実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、任意の組み合わせにおいて、次の特徴のうち１つ以上を有する：
ａ） 少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は１００％のＫＬＫ５の生物活性の阻害；
ｂ） ＫＬＫ５のセリンプロテアーゼ活性の阻害；
ｃ） ヒトＫＬＫ５への特異的な結合；
ｄ） ＩＣ５０値が、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満である；及び／又は
ｅ） ＩＣ５０値が、５００ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、１０ｐＭ未満、５ｐＭ未満、１ｐＭ未満である。
抗体８Ｇ１０、９Ｂ６、２－３Ｆ４、１０Ｃ５、２Ｂ１１、１０Ｈ３、９Ｈ３、８Ｂ７、９Ｈ５、９Ｆ２、１０Ｃ８、８Ｆ５、３－３Ｆ５、及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号１４～２４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２～５３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６２～７２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７９～９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９～１０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１２～１２２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択された少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、（ａ）配列番号１４～２４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２～５３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６２～７２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６２～７２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６２～７２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、及び配列番号１１２～１２２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６２～７２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１２～１２２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号３２～５３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１４～２４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２～５３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６２～７２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号７９～９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９～１０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１２～１２２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７９～９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９～１０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１２～１２２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号１４～２４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３２～５３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６２～７２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号７９～９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９９～１０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１２～１２２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号１４～２４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２～５３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６２～７２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７９～９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９～１０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１２～１２２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
上述の実施形態のうちのいずれかでは、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、配列番号１７０～２５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、配列番号１７０～２５７いずれか１つから選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計で１～１０個のアミノ酸が、配列番号１７０～２５７のいずれか１つにおいて、置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。場合によって、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７０～２５７いずれか１つから選択されるＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１４～２４のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２～５３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６２～７２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１３１～１６１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、配列番号１３１～１６２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計で１～１０個のアミノ酸が、配列番号１３１～１６２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列において、置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。場合によって、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１３１～１６２いずれか１つから選択されるアミノ酸配列のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号７９～９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９～１０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１２～１２２のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１７０及び配列番号１３１のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１７１及び配列番号１３２のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１７２及び配列番号１３３のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０１及び配列番号１３９のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０３及び配列番号１４１のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０４及び配列番号１４２のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０５及び配列番号１４３のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０６及び配列番号１４４のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２１及び配列番号１４９のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２６及び配列番号１５２のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２７及び配列番号１５３のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２８及び配列番号１５４のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２４８及び配列番号１６０のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号１７０～２５７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列のＶＨ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗体が提供される。ある特定の実施形態では、ＫＬＫ５に結合した場合、水素交換質量分析法によって測定したように、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、及び配列番号３１９からなる群から選択される配列の１つ以上を含む熱力学的エピトープをもたらす抗体が、提供される。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号２８８～３０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列のＨＣ配列を含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号２６５～２８０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列のＬＣ配列を含む。
一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２８８及び配列番号２６５のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２８９及び配列番号２６６のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２９０及び配列番号２６７のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２９２及び配列番号２６９のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２９３及び配列番号２６９のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２９４及び配列番号２７０のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２９５及び配列番号２７１のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２９６及び配列番号２７２のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２９７及び配列番号２７３のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２９９及び配列番号２７５のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号３００及び配列番号２７５のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号３０１及び配列番号２７６のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号３０２及び配列番号２７７のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号３０３及び配列番号２７８のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号３０５及び配列番号２８０のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号３０６及び配列番号２８０のＨＣ配列及びＬＣ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
本明細書では、図１４Ａ、図１５Ａ、及び／又は図１６Ａに示されるＫａｂａｔナンバリングに従うＨＶＲ１－ＬＣ、ＨＶＲ２－ＬＣ、及びＨＶＲ３－ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインと、図１４Ｂ、図１５Ｂ、及び／又は図１６Ｂに示されるＫａｂａｔナンバリングに従うＨＶＲ１－ＨＣ、ＨＶＲ２－ＨＣ、及びＨＶＲ３－ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインと、を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本抗体は、図１４Ａ、図１５Ａ、及び／又は図１６Ａに示されるＨＶＲ１－ＬＣ、ＨＶＲ２－ＬＣ、及び／又はＨＶＲ３－ＬＣ配列、並びにＦＲ１－ＬＣ、ＦＲ２－ＬＣ、ＦＲ３－ＬＣ、及び／又はＦＲ４－ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、図１４Ｂ、図１５Ｂ、及び／又は図１６Ｂに示されるＨＶＲ１－ＨＣ、ＨＶＲ２－ＨＣ、及び／又はＨＶＲ３－ＨＣ配列、並びにＦＲ１－ＨＣ、ＦＲ２－ＨＣ、ＦＲ３－ＨＣ、及び／又はＦＲ４－ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
更なる態様では、ＫＬＫ５に結合した場合、水素交換質量分析法によって測定したように、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、及び配列番号３１９からなる群から選択される配列の１つ以上を含む熱力学的エピトープをもたらす抗ＫＬＫ５抗体が、提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体１０Ｃ５、９Ｈ５、３－３Ｆ５、及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３８、配列番号４５、又は配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６５、配列番号６９、又は配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、（ａ）配列番号１７、配列番号２２、又は配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、又は配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６５、配列番号６９、又は配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２、配列番号８７、又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９、配列番号１０１、又は配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１５、配列番号１１９、又は配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、（ａ）配列番号１７、配列番号２２、又は配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、又は配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６５、配列番号６９、又は配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６５、配列番号６９、又は配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６５、配列番号６９、又は配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、及び配列番号１１５、配列番号１１９、又は配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６５、配列番号６９、又は配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１５、配列番号１１９、又は配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、又は配列番号５３のアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１７、配列番号２２、又は配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、又は配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６５、配列番号６９、又は配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８２、配列番号８７、又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９、配列番号１０１、又は配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１５、配列番号１１９、又は配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２０２を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。別の態様では、配列番号１４０を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号１７３～２０１のいずれか１つから選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。別の態様では、配列番号１３４～１３９及び配列番号３２１のいずれか１つから選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２０１のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２０１において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２０１のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１３９において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１３９のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０１及び配列番号１３９のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２０１のＶＨ配列及び配列番号１３９のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態では、ＫＬＫ５に結合した場合、水素交換質量分析法によって測定したように、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、及び配列番号３１９からなる群から選択される配列の１つ以上を含む熱力学的エピトープをもたらす抗体が、提供される。
別の態様では、配列番号２２５を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。別の態様では、配列番号１５１を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２０７～２２４のいずれか１つから選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。別の態様では、配列番号１４５～１５０のいずれか１つから選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２２１のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２２１において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２２１のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１４９のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１４９において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１４９のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２１及び配列番号１４９のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２２１のＶＨ配列及び配列番号１４９のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態では、ＫＬＫ５に結合した場合、水素交換質量分析法によって測定したように、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、及び配列番号３１９からなる群から選択される配列の１つ以上を含む熱力学的エピトープをもたらす抗体が、提供される。
別の態様では、配列番号２５７を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。別の態様では、配列番号１６２を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２２９～２５６のいずれか１つから選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。別の態様では、配列番号１５５～１６１のいずれか１つから選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２４８のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２４８において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２４８のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１６０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１６０において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６０のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２４８及び配列番号１６０のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２４８のＶＨ配列及び配列番号１６０のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
本明細書では、図１４Ａ、図１５Ａ、及び／又は図１６Ａに示されるＫａｂａｔナンバリングに従うＨＶＲ１－ＬＣ、ＨＶＲ２－ＬＣ、及びＨＶＲ３－ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインと、図１４Ｂ、図１５Ｂ、及び／又は図１６Ｂに示されるＫａｂａｔナンバリングに従うＨＶＲ１－ＨＣ、ＨＶＲ２－ＨＣ、及びＨＶＲ３－ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインと、を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本抗体は、図１４Ａ、図１５Ａ、及び／又は図１６Ａに示されるＨＶＲ１－ＬＣ、ＨＶＲ２－ＬＣ、及び／又はＨＶＲ３－ＬＣ配列、並びにＦＲ１－ＬＣ、ＦＲ２－ＬＣ、ＦＲ３－ＬＣ、及び／又はＦＲ４－ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、図１４Ｂ、図１５Ｂ、及び／又は図１６Ｂに示されるＨＶＲ１－ＨＣ、ＨＶＲ２－ＨＣ、及び／又はＨＶＲ３－ＨＣ配列、並びにＦＲ１－ＨＣ、ＦＲ２－ＨＣ、ＦＲ３－ＨＣ、及び／又はＦＲ４－ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５へ特異的に結合する抗体がさらに提供され、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、Ｐｒｏ２２５、及びＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ａｒｇ２２４、及びＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、及びＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、及びＰｒｏ２２５からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５に結合した場合にヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらす抗体であって、該立体構造変化が、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位及び／又は活性部位の破壊をアロステリックにもたらす、抗体をさらに提供する。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体８Ｇ１０及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号１７０のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１７０において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７０のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１３１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１３１において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１３１のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１７０及び配列番号１３１のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号１７０のＶＨ配列及び配列番号１３１のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体９Ｂ６及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号１７１のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１７１において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７１のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１３２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１３２において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１３２のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１７１及び配列番号１３２のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号１７１のＶＨ配列及び配列番号１３２のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体２－３Ｆ４及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号１７２のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１７２において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１７２のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１３３において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１３３のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１７２及び配列番号１３３のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号１７２のＶＨ配列及び配列番号１３３のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体１０Ｃ５及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２０１のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２０１において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２０１のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１３９において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１３９のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０１及び配列番号１３９のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２０１のＶＨ配列及び配列番号１３９のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態では、ＫＬＫ５に結合した場合、水素交換質量分析法によって測定したように、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、及び配列番号３１９からなる群から選択される配列の１つ以上を含む熱力学的エピトープをもたらす抗体が、提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号３３３の重鎖フレームワーク領域１（ＨＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号３３４の重鎖フレームワーク領域２（ＨＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号３３５の重鎖フレームワーク領域３（ＨＣ－ＦＲ３）、及び（ｄ）配列番号３３６の重鎖フレームワーク領域４（ＨＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の重鎖フレームワーク配列を含む、ＶＨドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３３のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３４のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３５のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３６のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号３２９の軽鎖フレームワーク領域１（ＬＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号３３０の軽鎖フレームワーク領域２（ＬＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号３３１の軽鎖フレームワーク領域３（ＬＣ－ＦＲ３）、及び（ｄ）配列番号３３２の軽鎖フレームワーク領域４（ＬＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の軽鎖フレームワーク配列を含む、ＶＬドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３２９のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３０のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３１のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３２のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５へ特異的に結合する抗体がさらに提供され、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、Ａｓｐ１７８、Ａｒｇ２２４、及びＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。一実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２０１及び配列番号１３９におけるＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５に結合した場合にヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらす抗体であって、該立体構造変化が、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位及び／又は活性部位の破壊をアロステリックにもたらす、抗体をさらに提供する。一実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２０１及び配列番号１３９におけるＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体２Ｂ１１及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２０３のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２０３において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２０３のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１４１において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１４１のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０３及び配列番号１４１のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２０３のＶＨ配列及び配列番号１４１のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体１０Ｈ３及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２０４のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２０４において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２０４のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１４２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１４２において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１４２のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０４及び配列番号１４２のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２０４のＶＨ配列及び配列番号１４２のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態では、ＫＬＫ５に結合した場合、水素交換質量分析法によって測定したように、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、及び配列番号３１９からなる群から選択される配列の１つ以上を含む熱力学的エピトープをもたらす抗体が、提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体９Ｈ３及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２０５のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２０５において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２０５のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１４３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１４３において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１４３のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０５及び配列番号１４３のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２０５のＶＨ配列及び配列番号１４３のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体８Ｂ７及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２０６のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２０６において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２０６のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１４４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１４４において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１４４のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２０６及び配列番号１４４のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２０６のＶＨ配列及び配列番号１４４のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体９Ｈ５及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２２１のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２２１において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２２１のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１４９のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１４９において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１４９のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２１及び配列番号１４９のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２２１のＶＨ配列及び配列番号１４９のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態では、ＫＬＫ５に結合した場合、水素交換質量分析法によって測定したように、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、及び配列番号３１９からなる群から選択される配列の１つ以上を含む熱力学的エピトープをもたらす抗体が、提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号３４１の重鎖フレームワーク領域１（ＨＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号３４２の重鎖フレームワーク領域２（ＨＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号３４３の重鎖フレームワーク領域３（ＨＣ－ＦＲ３）、及び（ｄ）配列番号３４４の重鎖フレームワーク領域４（ＨＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の重鎖フレームワーク配列を含む、ＶＨドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４１のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４２のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４３のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４４のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号３３７の軽鎖フレームワーク領域１（ＬＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号３３８の軽鎖フレームワーク領域２（ＬＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号３３９の軽鎖フレームワーク領域３（ＬＣ－ＦＲ３）、及び（ｄ）配列番号３４０の軽鎖フレームワーク領域４（ＬＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の軽鎖フレームワーク配列を含む、ＶＬドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３７のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３８のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３３９のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４０のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５へ特異的に結合する抗体がさらに提供され、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｐｒｏ１３０、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｖａｌ１６２、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｔｙｒ１７２、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｎ１７４Ａ、Ｉｌｅ１７６、Ａｓｐ１７７、及びＬｙｓ２３３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。一実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２２１及び配列番号１４９におけるＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５に結合した場合にヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらす抗体であって、該立体構造変化が、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位及び／又は活性部位の破壊をアロステリックにもたらす、抗体をさらに提供する。一実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２２１及び配列番号１４９におけるＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体９Ｆ２及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２２６のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２２６において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２２６のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１５２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１５２において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１５２のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２６及び配列番号１５２のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２２６のＶＨ配列及び配列番号１５２のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体１０Ｃ８及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２２７のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２２７において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２２７のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１５３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１５３において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１５３のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２７及び配列番号１５３のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２２７のＶＨ配列及び配列番号１５３のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体８Ｆ５及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２２８のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２２８において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２２８のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１５４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１５４において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１５４のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２８及び配列番号１５４のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２２８のＶＨ配列及び配列番号１５４のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
抗体３－３Ｆ５及び他の実施形態
一態様では、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。更なる実施形態では、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２を含む。更なる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体が提供される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全３つのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。
別の態様では、配列番号２４８のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれかの配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれかの同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号２４８において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号２４８のＶＨ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、配列番号１６０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、配列番号１６０において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号１６０のＶＬ配列を含み、これにはその配列の翻訳後修飾が含まれる。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＫＬＫ５抗体が提供され、ここで、抗体は、上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上記に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２４８及び配列番号１６０のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
更なる態様では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体と同じエピトープに結合する、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号２４８のＶＨ配列及び配列番号１６０のＶＬ配列を含む抗ＫＬＫ５抗体と、同じエピトープに結合する抗体が提供される。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号３４９の重鎖フレームワーク領域１（ＨＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号３５０の重鎖フレームワーク領域２（ＨＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号３５１の重鎖フレームワーク領域３（ＨＣ－ＦＲ３）、及び（ｄ）配列番号３５２の重鎖フレームワーク領域４（ＨＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の重鎖フレームワーク配列を含む、ＶＨドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４９のＨＣ－ＦＲ１を含むＶＨドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３５０のＨＣ－ＦＲ２を含むＶＨドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３５１のＨＣ－ＦＲ３を含むＶＨドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３５２のＨＣ－ＦＲ４を含むＶＨドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、（ａ）配列番号３４５の軽鎖フレームワーク領域１（ＬＣ－ＦＲ１）、（ｂ）配列番号３４６の軽鎖フレームワーク領域２（ＬＣ－ＦＲ２）、（ｃ）配列番号３４７の軽鎖フレームワーク領域３（ＬＣ－ＦＲ３）、及び（ｄ）配列番号３４８の軽鎖フレームワーク領域４（ＬＣ－ＦＲ４）から選択される１つ以上の軽鎖フレームワーク配列を含む、ＶＬドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４５のＬＣ－ＦＲ１を含むＶＬドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４６のＬＣ－ＦＲ２を含むＶＬドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４７のＬＣ－ＦＲ３を含むＶＬドメインを含む。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、配列番号３４８のＬＣ－ＦＲ４を含むＶＬドメインを含む。
一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、本抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体若しくはインタクトなＩｇＧ４抗体、又は本明細書に定義される他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５へ特異的に結合するがさらに提供され、ここで、該抗体は、標準的なプロテアーゼナンバリングによる、Ｓｅｒ１３１、Ａｌａ１３２、Ｇｌｙ１３３、Ｌｅｕ１６３、Ｓｅｒ１６４、Ｇｌｎ１６５、Ｌｙｓ１６６、Ａｒｇ１６７、Ｇｌｕ１６９、Ａｓｐ１７０、Ａｌａ１７１、Ｐｒｏ１７３、Ａｒｇ１７４、Ｇｌｙ１８４、Ａｓｐ１８５、Ｌｙｓ１８６、Ａｌａ１８６Ａ、Ａｒｇ１８８、Ａｓｎ２２３、Ａｒｇ２２４、及びＰｒｏ２２５からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むヒトＫＬＫ５上のエピトープと結合する。一実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２４８及び配列番号１６０におけるＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。
本明細書では、ヒトＫＬＫ５に結合した場合にヒトＫＬＫ５の立体構造変化をもたらす抗体であって、該立体構造変化が、ヒトＫＬＫ５の基質結合部位及び／又は活性部位の破壊をアロステリックにもたらす、抗体をさらに提供する。一実施形態では、本抗体は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２４８及び配列番号１６０におけるＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかに従う抗ＫＬＫ５抗体は、以下に記載される特徴のうちのいずれかを、単独で、又は組み合わせて組み込むことができる。
２． 抗体親和性
抗ＫＬＫ５抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５に対して、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の結合親和性（解離定数Ｋｄ）を有する。
一実施形態では、Ｋｄは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、目的の抗体及びその抗原のＦａｂバージョンを用いて行われる。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原によりＦａｂを平衡化し、次いで、結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体でコーティングしたプレートで捕捉することにより測定する（例えば、Ｃｈｅｎら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第２９３巻第８６５～８８１頁（１９９９年）を参照のこと）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍＬの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２～５時間にわたって室温（およそ２３℃）で遮断する。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］－抗原を、目的とされるＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」、第５７巻４５９３～４５９９頁（１９９７年）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一貫する）。次に、目的とするＦａｂを一晩インキュベートするが、このインキュベーションは、平衡が達成されることを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続し得る。その後、混合物を、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のため、捕捉プレートに移す。次に、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイに使用するために選択する。
別の実施形態よれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用するアッセイは、約１０の応答単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で実施される。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従って、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化する。抗原をｐＨ４．８の１０ｍＭの酢酸ナトリウムによって５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈した後、５μｌ／分の流量で注射し、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応の基を遮断する。動態測定のため、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）を、およそ２５μＬ／分の流量にて２５℃で０．０５％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中に注射する。会合速度（ｋオン）及び解離速度（ｋオフ）を、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって、単純１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋオフ／ｋオン比として算出される。例えば、Ｃｈｅｎら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第２９３巻第８６５～８８１頁（１９９９年）を参照されたい。オン速度が上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって１０６Ｍ－１ｓ－１を超える場合、このオン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃でのＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗－抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加又は減少を測定する、蛍光クエンチ技法を使用することによって、判定することができる。
３． 抗体断片
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、並びに以下に記載する他の断片が挙げられるがこれらに限定されない。特定の抗体断片の総説としては、Ｈｕｄｓｏｎら、「Ｎａｔ Ｍｅｄ．」、第９巻第１２９～１３４頁（２００３年）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説としては、例えば、「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、第１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．、（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、ニューヨーク）、第２６９～３１５頁（１９９４年）中のＰｌｕｃｋｔｈｕｅｎを参照のこと。また、国際公開第９３／１６１８５号、並びに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボでの半減期が長くなったＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
二重特異性抗体は、二価又は二重特異性であってもよい、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎら、「Ｎａｔ Ｍｅｄ．」、第９巻第１２９～１３４頁（２００３年）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、「Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第９０巻第６４４４～６４４８頁（１９９３年）を参照されたい。三重特異性抗体及び四重特異性抗体については、Ｈｕｄｓｏｎら、「Ｎａｔ．Ｍｅｄ．」、第９巻第１２９～１３４頁（２００３年）にもまた記載されている。
単一ドメイン抗体とは、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州ウォルサム；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照）。
抗体断片は、本明細書に記載されるように、組換え宿主細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉ又はファージ）による、インタクトな抗体のタンパク分解、及び産生を含むが、これらに限定されない、各種技術により製造可能である。
４． キメラ抗体及びヒト化抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第８１巻第６８５１～６８５５頁（１９８４年））に記載される。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれらから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
ある特定の実施形態では、キメラ抗体はヒト化抗体である。一般的に、非ヒト抗体をヒト化すると、ヒトに対する免疫原性は低下するが、親非ヒト抗体の特異性及び親和性は維持される。通常、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来する１つ以上の可変ドメインを含み、ＦＲ（又はその一部）はヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部もまた含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を復元又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びこれを製造する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、「Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．」、第１３巻第１６１９～１６３３頁（２００８年）に記載され、更に、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、「Ｎａｔｕｒｅ」、第３３２巻第３２３～３２９頁（１９８８年）；Ｑｕｅｅｎら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第８６巻１００２９～１００３３頁（１９８９年）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ」、第３６巻第２５～３４頁（２００５年）（特異性決定領域（ＳＤＲ）のグラフト接合を記載する）；Ｐａｄｌａｎ、「Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第２８巻第４８９～４９８頁（１９９１年）（「リサーフェシング」を記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ」、第３６巻第４３～６０頁（２００５年）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）；並びに、Ｏｓｂｏｕｒｎら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ」、第３６巻第６１～６８頁（２００５年）及びＫｌｉｍｋａら、「Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ」、第８３巻第２５２～２６０頁（２０００年）（ＦＲシャッフリングに対する「ガイド付き選択」手法を記載する）に記載される。
ヒト化に使用可能なヒトフレームワーク領域としては、限定されないが、「ベストフィット」方法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１５１巻第２２９６頁（１９９３年）を参照）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列から誘導されるフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第８９巻第４２８５頁（１９９２年）；及びＰｒｅｓｔａら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１５１巻第２６２３頁（１９９３年）を参照）；ヒト成熟（体細胞性変異を受けた）フレームワーク領域又はヒト生殖系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、「Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．」、第１３巻第１６１９～１６３３頁（２００８年）を参照）；並びに、ＦＲライブラリのスクリーニングから誘導されるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」、第２７２巻第１０６７８～１０６８４頁（１９９７年）及びＲｏｓｏｋら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」、第２７１巻第２２６１１～２２６１８頁（１９９６年）を参照）が挙げられる。
５． ヒト抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知である様々な技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ及びｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ、「Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．」、第５巻第３６８～７４頁（２００１年）及びＬｏｎｂｅｒｇ、「Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第２０巻第４５０～４５９頁（２００８年）に記載される。
ヒト抗体は、抗原負荷に応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製され得る。このような動物は、典型的には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含み、内因性免疫グロブリン遺伝子座が置き換わっているか、又は動物の染色体に外部の染色体が存在するか、若しくは無作為に組み込まれている。このようなトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の総説として、Ｌｏｎｂｅｒｇ、「Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．」、第２３巻第１１１７～１１２５頁（２００５年）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術）を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。そのような動物により産生されたインタクトな抗体のヒト可変領域を、例えば、異なるヒト定常領域を組み合わせることにより、さらに修飾してよい。
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製され得る。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１３３巻第３００１頁（１９８４年）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、第５１～６３頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９８７年）；及びＢｏｅｒｎｅｒら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１４７巻第８６頁（１９９１年）を参照されたい。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体はまた、Ｌｉら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第１０３巻第３５５７～３５６２頁（２００６年）にも記載されている。更なる方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、及びＮｉ、「Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ」、第２６巻第４号第２６５～２６８頁（２００６年）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載する）を含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、「Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ」、第２０巻第３号第９２７～９３７頁（２００５年）、及びＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ」、第２７巻第３号第１８５～９１頁（２００５年）にも記載されている。
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。次いで、そのような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わされてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択する技術について以下で説明する。
６． ライブラリ由来抗体
抗ＫＬＫ５抗体は、所望される活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体に関してそのようなライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で公知である。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、第１７８巻第１～３７頁（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ、２００１年）で総説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、「Ｎａｔｕｒｅ」、第３４８巻第５５２～５５４頁；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ら、「Ｎａｔｕｒｅ」、第３５２巻第６２４～６２８頁（１９９１年）；Ｍａｒｋｓら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第２２２巻第５８１～５９７頁（１９９２年）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、第２４８巻第１６１～１７５頁（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ、２００３年）；Ｓｉｄｈｕら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第３３８巻第２号第２９９～３１０頁（２００４年）；Ｌｅｅら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第３４０巻第５号第１０７３～１０９３頁（２００４年）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第１０１巻第３４号第１２４６７～１２４７２頁（２００４年）；並びに、Ｌｅｅら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ」、第２８４巻第１～２号第１１９～１３２頁（２００４年）で更に説明されている。
ある種のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングされ、ファージライブラリ内で無作為に再結合され、次いでＷｉｎｔｅｒら、「Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１２巻第４３３～４５５頁（１９９４年）に記載されているような、抗原結合ファージに対してスクリーニングすることが可能である。ファージは通常、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、又はＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片をディスプレイする。免疫化源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体を与える。あるいは、天然レパートリを（例えば、ヒトから）クローニングして、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、「ＥＭＢＯ Ｊ」、第１２巻第７２５～７３４頁（１９９３年）に記載するような任意の免疫付与を行わずに、単一源の抗体を、広範囲の非自己抗原及び自己抗原にすることができる。最後に、天然ライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第２２７巻第３８１～３８８頁（１９９２年）に記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を遂行することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリについて記載する特許公報としては、例えば：米国特許第５，７５０，３７３号、並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
ヒト抗体ライブラリから単離した抗体又は抗体断片は、本明細書におけるヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。
６． 多重特異性抗体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＫＬＫ５抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性の一方はＫＬＫ５に対するものであり、他方は任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＫＬＫ５の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体を使用して、ＫＬＫ５を発現する細胞に細胞毒性薬剤を局在化することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製され得る。
多重特異性抗体を作製するための技法としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ及びＣｕｅｌｌｏ、「Ｎａｔｕｒｅ」、第３０５巻第５３７頁（１９８３年））、国際公開第９３／０８８２９号、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、「ＥＭＢＯ Ｊ．」、第１０巻第３６５５頁（１９９１年）を参照されたい）、並びに「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、静電ステアリング効果を操作して抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作製すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）；２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎら、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、第２２９巻第８１頁（１９８５年）を参照）；ロイシンジッパを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１４８巻第５号第１５４７～１５５３頁（１９９２年）を参照）；「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、「「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第９０巻第６４４４～６４４８頁（１９９３年）を参照）；並びに、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１５２巻第５３６８頁（１９９４年）を参照）；並びに、例えば、Ｔｕｔｔら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１４７巻第６０頁（１９９１年）に記載されるような三重特異性抗体を調製することによって作製してもよい。
「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照されたい）。
本明細書の抗体又は断片には、ＫＬＫ５及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」もまた含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号を参照されたい）。
７． 抗体バリアント
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適正な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって調製されてもよい。そのような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、及び／又は挿入、及び／又は置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組合せは、最終構築物が、所望の特徴（例えば、抗原結合）を有する限り、最終構築物に到達するように行うことができる。
ａ） 置換、挿入、及び欠失バリアント
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗ＫＬＫ５抗体バリアントが提供される。置換による変異誘発に関して目的とする部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しで示される。より実質的な変化は、表１において、「例示的置換」の見出しで提示され、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載されるとおりである。目的とする抗体中にアミノ酸置換を導入し、その産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングすることができる。
Figure 0007422671000001
アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ分けされてもよい。
（１） 疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２） 中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３） 酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４） 塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５） 鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６） 芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバを別のクラスと交換することを伴うことになる。
ある種類の置換型バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される、得られたバリアント（複数可）は、親抗体と比較して、ある特定の生物学的特性における修飾（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）を有し、及び／又は実質的に保持された親抗体のある特定の生物学的特性を有することになる。例示的な置換バリアントは、例えば、本明細書に記載されるものなどのファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して好都合に生成することができる、親和性成熟抗体である。要するに、１つ以上のＨＶＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージにディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
改変（例えば、置換）は、ＨＶＲ中で、例えば、抗体親和性を改善するために行われてもよい。そのような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第２０７巻第１７９～１９６頁（２００８年）を参照）、及び／又は抗原と接触する残基内で行われてもよく、結果として得られるバリアントＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、それから再選択することによる親和性成熟が、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、第１７８巻第１～３７頁（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ、（２００１年））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリが創出される。次いで、このライブラリは、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを特定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）をランダム化する、ＨＶＲ指向性アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデリングを使用して、具体的に特定されてもよい。特に、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が、しばしば標的化される。
ある特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１つまたは複数のＨＶＲ中で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的改変（例えば、本明細書に提供されるような保存的置換）が、ＨＶＲ中で行われてもよい。かかる改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であり得る。上に提供されるバリアントＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されていないか、又は１つ、２つ、若しくは３つ以下のアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
変異を標的とし得る抗体の残基又は領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９年）、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、第２４４巻第１０８１～１０８５頁によって記載されるように、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、一残基又は一群の標的残基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕなどの荷電残基）が特定され、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）によって置き換えられて、抗体の抗原との相互作用が影響を受けたかどうかが決定される。更なる置換が、初期置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。あるいは、又は加えて、抗体と抗原との間の接点を特定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、又は除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列挿入として、１個の残基～１００個以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さ範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端の融合、並びに１個又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）又はポリペプチドへの抗体のＮ末端又はＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増大させる。
ｂ） グリコシル化バリアント
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように変化させる。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、又は除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら、「ＴＩＢＴＥＣＨ」、第１５巻第２６～３２頁（１９９７年）を参照。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、特定の改善された特性によって抗体バリアントを作製するために、本発明の抗体中にオリゴ糖の修飾が行われ得る。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗ＫＬＫ５抗体バリアントが提供される。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、又は２０％～４０％であってよい。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されるＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）に位置するアスパラギン残基を指す。しかし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体におけるマイナーな配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸の上流又は下流、すなわち、２９４～３００位の間に位置してもよい。そのようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；同第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体バリアントに関する刊行物の例としては：米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；同第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；同第２００２／０１６４３２８号；同第２００４／００９３６２１号；同第２００４／０１３２１４０号；同第２００４／０１１０７０４号；同第２００４／０１１０２８２号；同第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；同第２００３／０８４５７０号；同第２００５／０３５５８６号；同第２００５／０３５７７８号；同第２００５／０５３７４２号；同第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第３３６巻第１２３９～１２４９頁（２００４年）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、「Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．」、第８７巻第６１４頁（２００４年）が挙げられる。脱フコシル化抗体を生成可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化で欠失したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、「Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．」、第２４９巻第５３３～５４５頁（１９８６年）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２Ａ１号、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１において）、並びにα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、「Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．」、第８７巻第６１４頁（２００４年）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、「Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．」、第９４巻第４号第６８０～６８８頁（２００６年）；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）が挙げられる。
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分オリゴ糖を有する抗ＫＬＫ５抗体バリアントがさらに提供される。そのような抗体バリアントは、低減されたフコシル化機能を有しても、及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有してもよい。そのような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）；、及び同第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載される。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中の少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントもまた提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体バリアントは、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）、国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載される。
ｃ） Ｆｃ領域バリアント
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域バリアントが生成され得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでよい。
いくつかの実施形態では、本発明は、全てではないがいくつかのエフェクタ機能を有し、かつインビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクタ機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不要又は有害である用途に望ましい候補にする、抗体バリアントを企図する。インビトロ及び／又はインビボ細胞毒性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／欠乏を確認してもよい。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故に、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にし得る。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃ（ＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞内でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、「Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第９巻第４５７～４９２頁（１９９１年）の４６４頁、表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第８３巻第７０５９～７０６３頁（１９８６年）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第８２巻第１４９９～１５０２頁（１９８５年）を参照のこと）、米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら、「Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．」、第１６６巻第１３５１～１３６１頁（１９８７年）を参照のこと）に記載される。あるいは、非放射性アッセイ方法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリー（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）のためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞毒性アッセイ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））。そのようなアッセイに有用なエフェクタ細胞としては、末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、又は加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第９５巻第６５２～６５６頁（１９９８年）に開示されるような動物モデルにおいて、インビボで評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができないためにＣＤＣ活性を欠くことを確認してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号に記載されている、Ｃ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏら、「Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ」、第２０２巻第１６３頁（１９９６年）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら、「Ｂｌｏｏｄ」、第１０１巻第１０４５～１０５２頁（２００３年）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．及びＭ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ、「Ｂｌｏｏｄ」、第１０３巻第２７３８～２７４３頁（２００４年）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボでのクリアランス／半減期の決定は、当該技術分野で既知の方法を用いても行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら、「Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１８巻第１２号第１７５９～１７６９頁（２００６年）を参照）。
エフェクタ機能が低下した抗体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９の１つ以上の置換を有するものが挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ変異体としては、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうち２つ以上での置換を有するＦｃ変異体が挙げられ、残基２６５及び２９７がアラニンに置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
ＦｃＲに対する結合が向上又は減少した特定の抗体バリアントが記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号，及びＳｈｉｅｌｄｓら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」、第９巻第２号第６５９１～６６０４頁（２００１年）を参照のこと。）
ある特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／又は３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１６４巻第４１７８～４１８４頁（２０００年）に記載されるように、変化した（すなわち、改善されたか又は減少したかのいずれか）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）をもたらす改変が、Ｆｃ領域において行われる。
半減期が増大し、胎生Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が向上した、母体ＩｇＧを胎児に移行する役割を果たす抗体（Ｇｕｙｅｒら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１１７巻第５８７頁（１９７６年）及びＫｉｍら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第２４巻第２４９頁（１９９４年））は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を向上する１つ以上の置換基を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃバリアントとしては、以下の１つ以上のＦｃ領域残基に置換を有するバリアントが挙げられる：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、又は４３４、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）。
Ｆｃ領域バリアントのその他の例に関係する、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ、「Ｎａｔｕｒｅ」、第３２２巻第７３８～４０頁（１９８８年）；米国特許第５，６４８，２６０号；同第５，６２４，８２１号；及び、国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
ｄ） システイン改変抗体バリアント
いくつかの実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗ＫＬＫ５抗体、例えば、「ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基が抗体の接触可能部位に配置され、抗体を他の部位、例えば薬物部位、又はリンカー／薬物部位と結合させ、本明細書で更に記載する免疫複合体を作製するのに用いられる場合がある。ある特定の実施形態では、以下の残基のうちの任意の１つ以上を、システインで置換してもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）、重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）、重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように作製してよい。
ｅ） 抗体誘導体
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分としては、限定するものではないが、水溶性ポリマーが挙げられる。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｈｏｍｏｐｏｌｙｍｅｒ）、ポリプロリピレンオキシド（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びこれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性に起因して、製造時に利点があるだろう。このポリマーは、任意の分子量を有していてもよく、分岐していてもよく、又は分岐していなくてもよい。抗体に結合したポリマーの数は異なってもよく、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは同じ分子であっても、異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義された条件下である療法に使用されるかなどを含むが、これらに限定されない、考慮すべき事項に基づいて決定され得る。
いくつかの実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗ＫＬＫ５抗体及び非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブ（Ｋａｍら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第１０２巻第１１６００～１１６０５頁（２００５年））である。放射線は、いずれの波長のものであってもよく、これには、限定するものではないが、通常の細胞を傷つけないが、抗体－非タンパク質性部分に近接する細胞が殺滅される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長が挙げられる。
Ｂ． 組換え方法及び組成物
抗ＫＬＫ５抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組換え法及び組成物を使用して生成されてもよい。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＫＬＫ５抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードすることができる。更なる実施形態では、そのような核酸を含む１つ又は複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、（１）本抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び本抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）本抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び本抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体を作製する方法であって、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養物）から回収することとを含む、方法が提供される。
抗ＫＬＫ５抗体の組換え産生のために、例えば、上述のもの等の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内での更なるクローニング及び／又は発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離し、配列決定することができる。
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適した宿主細胞は、本明細書に記載する原核生物細胞又は真核生物細胞を含む。例えば、抗体は、特に、グリコシル化及びエフェクタ機能が必要とされていない場合には、細菌中で産生されてもよい。細菌での抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照のこと。（また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について記載している、Ｃｈａｒｌｔｏｎ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、第２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ、２００３年）第２４５～２５４頁も参照のこと。）発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。
原核生物に加え、真核生物の微生物、例えば、糸状菌又は酵母は、抗体をコードするベクターに適切なクローニング又は発現の宿主であり、グリコシル化経路が「ヒト化」された真菌株及び酵母株を含み、部分的又は完全にヒトグリコシル化パターンを有する抗体を産生する。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ、「Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．」、第２２巻第１４０９～１４１４頁（２００４年）、及びＬｉら、「Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．」、第２４巻第２１０～２１５頁（２００６年）を参照されたい。
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例として、植物及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて（特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションに）使用することができる、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、第６，０４０，４９８号、第６，４２０，５４８号、第７，１２５，９７８号、及び第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術）を参照されたい。
脊椎動物細胞も、宿主として使用されてもよい。例えば、懸濁物中で成長するように適合した哺乳動物細胞株が有用な場合がある。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ら、「Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．」、第３６巻第５９頁（１９７７年）に記載されるような２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ、「Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ．」、第２３巻第２４３～２５１頁（１９８０年）に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト頸部癌腫細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍細胞（ＭＭＴ ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒら、「Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．」、第３８３巻第４４～６８頁（１９８２年）に記載）、ＭＲＣ ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第７７巻第４２１６頁（１９８０年））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、並びにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ及びＷｕ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、第２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ）第２５５～２６８頁（２００３年）を参照のこと。
Ｃ． アッセイ
本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体は、それらの物理的／化学的特性及び／又は生物活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定され得るか、スクリーニングされ得るか、又は特徴付けられ得る。
１． 結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、本発明の抗体は、その抗原結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ、又はウェスタンブロット等の既知の方法によって試験される。
別の態様では、競合アッセイは、ＫＬＫ５への結合について本明細書に記載される抗体のいずれかと競合する抗体を特定するために使用され得る。ある特定の実施形態では、かかる競合する抗体は、本明細書に開示される抗体のいずれかによって結合される同じエピトープ（例えば、直線状又は立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示の方法が、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、第６６巻（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ）のＭｏｒｒｉｓ（１９９６年）「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」に提供されている。
例示的な競合アッセイでは、固定化されたＫＬＫ５は、ＫＬＫ５に結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか）、及びＫＬＫ５への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識の抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化されたＫＬＫ５、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体のＫＬＫ５への結合を許容する条件下でのインキュベーションの後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化されたＫＬＫ５に関連する標識の量を測定する。固定化されたＫＬＫ５に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＫＬＫ５への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８年）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第１４章（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク州コールド・スプリング・ハーバー）を参照のこと。
２． 活性アッセイ
一態様では、生物活性を有するその抗ＫＬＫ５抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物活性には、例えば、ＫＬＫ５の阻害が含まれ得る。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５のセリンプロテアーゼ活性を阻害する。かかる生物活性をインビボ及び／又はインビトロで有する抗体も提供される。
いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体は、そのような生物活性を試験する。いくつかの実施形態では、生物活性は、直接活性アッセイ、蛍光ペプチドアッセイ、ＬＣ／ＭＳアッセイ、及びＫｉ（ａｐｐ）アッセイからなる群から選択される１つ以上の方法によって試験される。いくつかの実施形態では、生物活性は、組換えＫＬＫ５直接活性アッセイ、結合ｐｒｏ－ＫＬＫ１蛍光ペプチドアッセイ、結合ｐｒｏ－ＫＬＫ７蛍光ペプチドアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ１ ＬＣ／ＭＳアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ７ ＬＣ／ＭＳアッセイ、及びＫｉ（ａｐｐ）アッセイからなる群から選択される１つ以上の方法によって測定される。いくつかの実施形態では、ＩＣ５０値は、上で記載されたアッセイ及び以下の実施例において詳述されたアッセイによって測定される。
Ｄ． 免疫複合体
本発明はまた、化学療法剤若しくは化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌真菌、植物、若しくは動物起源の酵素活性毒素、若しくはそれらの断片）、又は放射性同位元素などの１つ以上の細胞毒性薬剤と複合された本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体を含む、免疫複合体を提供する。
一実施形態では、免疫複合体は抗体薬剤複合体（ＡＤＣ）であり、抗体が、これらに限定されるわけではないが、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号を参照のこと）；モノメチルオーリスタチン薬剤部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）などのオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号、及び同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照のこと）；ドラスタチン；カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号；Ｈｉｎｍａｎら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」、第５３巻第３３３６～３３４２頁（１９９３年）；並びにＬｏｄｅら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」、第５８巻第２９２５～２９２８頁（１９９８年）を参照のこと）；ダウノマイシン又はドキソルビシン等のアントラサイクリン（例えば、Ｋｒａｔｚら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．」、第１３巻４７７～５２３頁（２００６年）；Ｊｅｆｆｒｅｙら、「Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ」、第１６巻第３５８～３６２頁（２００６年）；Ｔｏｒｇｏｖら、「Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．」、第１６巻第７１７～７２１頁（２００５年）；Ｎａｇｙら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」第９７巻第８２９～８３４頁（２０００年）；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、「Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ」、第１２巻第１５２９～１５３２頁（２００２年）；Ｋｉｎｇら、「Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．」、第４５巻第４３３６～４３４３頁（２００２年）；並びに米国特許第６，６３０，５７９号を参照のこと）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセル等のタキサン；トリコテセン；並びにＣＣ１０６５を含む１つ以上の薬剤に結合している。
別の実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むがこれらに限定されない酵素活性毒素又はその断片に抱合された、本明細書に記載される抗体を含む。
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子に抱合されて放射性複合体を形成する、本明細書に記載される抗体を含む。放射性複合体の産生のために、種々の放射性同位元素が利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位元素が挙げられる。放射性コンジュゲートが検出のために使用される場合、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍ若しくはＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（別名、磁気共鳴画像法、ｍｒｉ）のためのスピン標識、例えば、この場合もやはりヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄を含み得る。
抗体及び細胞毒性剤の抱合体は、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６－ジイソシアネート）、及びビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）などの多様な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、第２３８巻第１０９８頁（１９８７年）に記載されているように調製することができる。炭素－１４で標識された１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体への複合体化のための例示的なキレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号を参照のこと。リンカは、細胞内において細胞毒性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカ」であってもよい。例えば、酸に不安定なリンカ、ペプチダーゼ感受性リンカ、感光性リンカ、ジメチルリンカ、又はジスルフィド含有リンカ（Ｃｈａｒｉら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」、第５２巻第１２７～１３１頁（１９９２年）；米国特許第５，２０８，０２０号）を使用してよい。
本明細書の免疫抱合体又はＡＤＣは、市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．、Ｕ．Ｓ．Ａから）、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、及びスルホ－ＳＭＰＢ、並びにＳＶＳＢ（サクシニミジル－（４－ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋剤試薬で調製されるかかる抱合体を明示的に企図するが、これらに限定されない。
Ｅ． 診断及び検出のための方法及び組成物
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体のいずれも、生体試料中のＫＬＫ５の存在の検出に有用である。用語「検出すること」とは、本明細書で使用されるとき、定量的検出又は定性的検出を包含する。いくつかの実施形態では、生体試料は、皮膚表皮、肺実質、気管支上皮下組織などの細胞又は組織を含む。いくつかの実施形態では、生体試料は、気管支肺胞洗浄液を含む。
一実施形態では、診断又は検出方法において使用するための抗ＫＬＫ５抗体が提供される。更なる態様では、生体試料中のＫＬＫ５の存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態では、本方法は、ＫＬＫ５への抗ＫＬＫ５抗体の結合を許容する条件下で、生体試料を本明細書に記載される抗ＫＬＫ５抗体と接触させることと、抗ＫＬＫ５抗体とＫＬＫ５との間で複合体が形成されるかどうかを検出することと、を含む。このような方法は、インビトロ法であっても、又はインビボ法であってもよい。一実施形態では、例えば、ＫＬＫ５が患者の選択のためのバイオマーカである場合、抗ＫＬＫ５抗体を使用して、抗ＫＬＫ５抗体での療法に適格な対象を選択する。
本発明の抗ＫＬＫ５抗体を用いて診断され得る例示的な障害は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さを含む。いくつかの実施形態では、疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、及び好酸球性食道炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、喘息は、ＴＨ２低値喘息である。
ある特定の実施形態では、標識抗ＫＬＫ５抗体が提供される。標識には、直接的に検出される標識または部分（例えば、蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性等）、並びに例えば、酵素反応又は分子相互作用を介して間接的に検出される部分、例えば、酵素又はリガンドが含まれるが、これらに限定されない。例示的な標識としては、限定されないが、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリ性ホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ及びグルコース－６－ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ヘテロ環オキシダーゼ、例えば、ウリカーゼ及び過酸化水素を使用する酵素と連結し、染料前駆体を酸化するキサンチンオキシダーゼ、例えば、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はミクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、及び安定な遊離ラジカルなどが挙げられる。
Ｆ． 薬学的製剤
本明細書に記載される抗ＫＬＫ５抗体の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するかかる抗体と、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０年））とを混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は一般的に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質、防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、若しくはベンジルアルコール、メチル若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール等）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質、ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジン等のアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）、並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの介在性薬物分散剤をさらに含む。特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、ｒＨｕＰＨ２０を含め、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰを、１つ以上の更なるグリコサミノグリカナーゼ（例えば、コンドロイチナーゼ）と合わせる。
例示的な凍結乾燥した抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載される。水性抗体製剤としては、米国特許第６，１７１，５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されるものが挙げられ、後者の製剤は、酢酸ヒスチジン緩衝液を含む。
本明細書における製剤はまた、治療される特定の適応症に必要な２つ以上の活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有してもよい。
活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース若しくはゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセルにより、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロ乳濁液、ナノ粒子、及びナノカプセル）内、又はマクロ乳濁液中にも取り込まれ得る。そのような技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０年）に開示されている。
徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、これらのマトリクスは、成形物品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態である。
インビボ投与に使用される製剤は一般に、滅菌される。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜による濾過によって、容易に達成され得る。
Ｇ． 治療方法及び組成物
本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体のいずれも、治療方法において使用することができる。
一態様では、医薬として使用するための抗ＫＬＫ５抗体が提供される。更なる態様では、抗ＫＬＫ５抗体は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さからなる群から選択される疾患の治療に使用するために提供される。いくつかの実施形態では、疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、及び好酸球性食道炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、喘息は、ＴＨ２低値喘息である。
ある特定の実施形態では、治療方法に使用するための抗ＫＬＫ５抗体が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、疾患を有する個体を治療する方法に使用するための抗ＫＬＫ５抗体を提供し、ここで、該疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さからなる群から選択され、有効量である抗ＫＬＫ５抗体を該個体へ投与することを含む。そのような一実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載のような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性の阻害に使用するための、抗ＫＬＫ５抗体が提供される。いくつかの実施形態では、ＫＬＫ５の生物活性を阻害するため有効量の抗ＫＬＫ５抗体を個体へ投与することを含む、個体におけるＫＬＫ５の生物活性を阻害する方法で使用するための抗ＫＬＫ５抗体が提供される。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。いくつかの実施形態では、疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、及び好酸球性食道炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、喘息は、ＴＨ２低値喘息である。
更なる態様では、本発明は、医薬の製造又は調製における抗ＫＬＫ５抗体の使用を提供する。一実施形態では、医薬は疾患を治療するためのものであり、ここで、この疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さからなる群から選択される。更なる実施形態では、医薬は、疾患を治療する方法で使用するためのものであり、ここで、ここで、この疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さからなる群から選択され、該疾患を有する個体へ有効量である医薬を投与することを含む。そのような一実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載のような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。更なる実施形態では、医薬は、ＫＬＫ５の生物活性を阻害するためのものである。更なる実施形態では、医薬は、ＫＬＫ５の生物活性を阻害するため有効な量の医薬を個体へ投与することを含む、個体におけるＫＬＫ５の生物活性を阻害する方法で使用するための医薬である。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。いくつかの実施形態では、疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、及び好酸球性食道炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、喘息は、ＴＨ２低値喘息である。
更なる態様では、本発明は、疾患を治療する方法を提供し、ここで、この疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、及び酒さからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、疾患は、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、及び好酸球性食道炎からなる群から選択される。一実施形態では、本方法は、そのようなネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、又は酒さを有する個体に、有効量の抗ＫＬＫ５抗体を投与することを含む。そのような一実施形態では、本方法は、以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体へ投与することをさらに含む。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。いくつかの実施形態では、該喘息は、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、喘息は、ＴＨ２低値喘息である。
更なる態様では、本発明は、個体におけるＫＬＫ５の生物活性を阻害するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、有効量の抗ＫＬＫ５抗体を個体に投与して、ＫＬＫ５の生物活性を阻害することを含む。一実施形態では、「個体」は、ヒトである。
更なる態様では、本発明は、例えば、上記の治療法のいずれかにおける使用のための、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体のいずれかを含む薬学的製剤を提供する。一実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体のうちのいずれかと薬学的に許容される担体とを含む。別の実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＫＬＫ５抗体のうちのいずれかと、例えば、以下の記載される少なくとも１つの追加の治療剤とを含む。
本発明の抗体は、治療において単独で、又は他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与され得る。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－５軸結合アンタゴニスト、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニスト、Ｍ１主要アンタゴニスト（Ｍ１ ｐｒｉｍｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）、ＩｇＥアンタゴニスト、ＴＲＰＡ１アンタゴニスト、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、気管支拡張剤（ｂｒｏｎｃｏｄｉｌａｔｏｒ）若しくは喘息症状制御薬、免疫調節剤、コルチコステロイド、Ｔｈ２経路阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、又はホスホジエステラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－１３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－１３抗体は、レブリキズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－５軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－５結合アンタゴニスト又はＩＬ－５受容体結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３軸結合アンタゴニストは、ＩＬ－３３結合アンタゴニスト又はＳＴ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３３結合アンタゴニストは、抗ＩＬ－３３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｍ１主要アンタゴニストは、キリズマブである。
上述のかかる併用療法は、併用投与（同じ又は別個の製剤中に２つ以上の治療剤が含まれる）及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤（複数可）の投与前、投与と同時に、及び／又は投与後に行われ得る。一実施形態では、抗ＫＬＫ５抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約一カ月以内、又は約１、２、若しくは３週間以内、又は約１、２、３、４、５、若しくは６日以内に行われる。本発明の抗体は、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、並びに局所治療で所望の場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口輸注としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が挙げられる。投薬は、投与が短時間であるか、又は慢性的であるかに部分的に応じて、例えば任意の好適な経路によるもの、例えば、静脈注射又は皮下注射などの注射によるものであり得る。単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書では企図される。
本発明の抗体は、良好な医療行為と一貫する様式で、製剤化され、投薬され、かつ投与されるだろう。これに関連して考慮すべき要因としては、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の要因が挙げられる。抗体は、必ずしもそうである必要はないが、任意に、問題の障害を予防又は治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤とともに製剤化される。有効量のそのような他の作用物質は、製剤中に存在する抗体の量、障害又は処置の種類、及び上述の他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量及び投与経路によって、又は本明細書に記載の投薬量の約１～９９％、又は適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
疾患の予防又は治療について、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、又は１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的又は治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体への応答、並びに主治医の裁量に依存するだろう。抗体は、一度に、又は一連の治療にわたって患者に好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、例えば、１回以上の別個の投与によるか、又は連続注入によるかにかかわらず、患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。１つの典型的な日用量は、上で言及した因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であってもよい。数日間又はそれ以上にわたる反復投与において、状態に応じ、処置は通常、疾患症状の所望の抑制が生じるまで続けられる。抗体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はこれらの任意の組合せ）のうちの１つ以上の用量が、患者に投与され得る。かかる用量は、間欠的に、例えば、毎週又は３週間に１回（例えば、患者が約２～約２０回、又は例えば、約６回用量の抗体を受けるように）投与され得る。最初の多めの投与量、それに続く一回以上の量の少ない用量を投与してよい。
上の製剤又は治療方法のうちのいずれも、抗ＫＬＫ５抗体の代わりに、又はそれに加えて、本発明の免疫複合体を使用して行われ得ることが理解される。
Ｈ． 製造物品
本発明の別の態様では、上述の障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な材料を含有する製造物品が提供される。製造物品は、容器と、容器に挿入されるか、又は容器に付随するラベル若しくはパッケージ添付文書とを備えている。適切な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、静注溶液袋などが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの種々の材料から作られてもよい。容器は、それ自体で、又は別の組成物との組み合わせで、病態の治療、予防、及び／又は診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグ又は皮下注射針によって穿孔可能な栓を有するバイアルであり得る）。本組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択される病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製造物品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物を内部に収容した第１の容器と、（ｂ）更なる細胞傷害性薬剤、又はさもなければ治療剤を含む組成物を内部に収容した第２の容器とを含み得る。本発明のこの実施形態における製造品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、又は加えて、製造物品は、医薬的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル溶液及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器をさらに備えていてもよい。他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、ニードル、及びシリンジを含め、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含んでいてもよい。
上記の製品はいずれも、抗ＫＬＫ５抗体の代わりに、又はそれに加えて、本発明の免疫複合体を含み得ることが理解されよう。
ＩＩＩ． 実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。上述の概要を考慮すると、様々な他の実施形態が実施され得ることが理解される。
実施例１－材料及び方法
抗ＫＬＫ５抗体の産生
ニュージーランドホワイトウサギをヒトＫＬＫ５で免疫化し、単一のＢ細胞を、公開されている文献に関連した改変プロトコルを用いて単離した。例えば、Ｏｆｆｎｅｒら、「ＰＬｏＳ ＯＮＥ」、第９巻第２号（２０１４年）を参照されたいこの修正されたワークフローは、ＩｇＧ＋ｈｕＫＬＫ５＋Ｂ細胞の単一ウェルへの直接ＦＡＣＳソーティングを含んだ。Ｂ細胞培養上清を、ヒトＫＬＫ５及び無関係な対照タンパク質への結合について、ＥＬＩＳＡによりアッセイした。ＫＬＫ５特異的Ｂ細胞を溶解し、直ちに－８０℃で凍結し、分子クローニングまで保存した。ウサギＢ細胞由来の各モノクローナル抗体の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を、先に記載したように、抽出したｍＲＮＡ由来の発現ベクターにクローニングした。例えば、Ｏｆｆｎｅｒら、「ＰＬｏＳ ＯＮＥ」、第９巻第２号（２０１４年）を参照されたい。個々の組換えウサギ抗体を、Ｅｘｐｉ２９３細胞で発現し、続いてタンパク質Ａで精製した。精製した抗ＫＬＫ５抗体を、次いで機能活性アッセイ及び動力学的スクリーニングに供した。
ラットを同様の方法で免疫化し、ハイブリドーマを、改変した融合パートナを用いて作製した（例えば、Ｐｒｉｃｅら、「Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３１」、第３４３巻第１号第２８～４１頁（２００９年）を参照されたい）。種々の条件を最適化して、個々のＩｇＧ＋ｈｕＫＬＫ５＋ハイブリドーマを単一のウェルへのソーティングを可能にし、次いで、ソーティング後にさらなる培養行った。得られたハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡによりアッセイし、陽性試料をタンパク質Ａを用いて精製し、その後、機能的及び動力学的特徴付けを行った。
ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）実験
この部分における抗体の結合親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００マシンによって決定した。簡潔に述べると、供給者の指示書に従って、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシサクシンイミド（ＮＨＳ）試薬を用いて、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）リサーチグレードＣＭ５チップを活性化した。ヤギ抗ヒトＦｃ ＩｇＧをチップにカップリングして、各フローセルにおいておよそ１０，０００応答単位（ＲＵ）を達成した。未反応のカップリング基を、１Ｍのエタノールアミンで遮断した。動態測定のために、抗体を捕捉して、およそ３００ＲＵを達成した。ヒトＫＬＫ５の１０倍段階希釈液を、３０μＬ／分の流量で３７℃のＨＢＳ－Ｐ緩衝液中に注入した。会合速度（ｋａ）及び解離速度（ｋｄ）を、１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン２．０）を使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、比率ｋｄ／ｋａとして計算した。
ＫＬＫ５阻害を決定するためのアッセイ
抗ＫＬＫ５抗体によるヒトＫＬＫ５の阻害を、組換えＫＬＫ５直接活性アッセイを用いて測定した。組換えヒトＫＬＫ５（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、直接アッセイ緩衝液（７５ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、及び０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）中で５ｎＭに希釈し、３８４ウェルアッセイプレート（３８４ウェルローボリューム、黒、丸底、Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号４５１４）中で抗ＫＬＫ５抗体と組み合わせた。抗体は、リン酸試料緩衝液（７０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６）、２００ｍＭのＮａＣｌ、及び０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）又はクエン酸／トリス試料緩衝液（１０ｍＭのクエン酸、３０ｍＭのトリス（ｐＨ６）、及び０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）のいずれかで供給した。抗体希釈物は、適切な試料緩衝液又は直接アッセイ緩衝液中で作製した。プレートを周囲温度で３０分間インキュベートした。蛍光ペプチド基質Ｂｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣ（Ｂａｃｈｅｍ、品番Ｉ－１１２０）を、アッセイプレートに直接加えた。最終的なウェル内濃度は、５０μＭのＢｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣ、５ｎＭの組換えヒトＫＬＫ５、及び０．１９～１００ｎＭの抗ＫＬＫ５抗体であった。プレートは、３４０ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光モジュールを使用するＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）Ｐｌｕｓリーダーを用いて、３０～６０分の間１０２秒毎に検査した。反応速度（ＲＦＵとして表される）は、典型的には２０４秒で開始しアッセイの終わりまで継続する、線形範囲内の読み取り値の線形回帰によって計算した。緩衝液単独及び１００ｎＭの最終的なＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、それぞれ、１００％及び０％の活性対照として使用した。抗ＫＬＫ５抗体のＩＣ５０値は、それぞれの曲線に対する４パラメータ適合から決定した。
抗ＫＬＫ５抗体によるヒトＫＬＫ５の阻害を、結合ｐｒｏ－ＫＬＫ７蛍光ペプチドアッセイを用いて測定した。抗体試料がクエン酸／トリス試料緩衝液又はｐｒｏ－ＫＬＫ７リン酸結合緩衝液（５０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）中にある場合は、組換えヒトＫＬＫ５（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、ｐｒｏ－ＫＬＫ７クエン酸／トリス結合緩衝液（５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、及び０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）中で５ｎＭまで希釈し、抗体試料がリン酸試料緩衝液中にある場合は、１５０ｍＭのＮａＣｌ及び０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）中で５ｎＭまで希釈した。希釈したＫＬＫ５を、次いで、３８４ウェルアッセイプレート（３８４ウェルローボリューム、黒、丸底、Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号４５１４）中で抗ＫＬＫ５抗体と組み合わせた。抗体希釈物は、直接ＫＬＫ５アッセイについて記載されたように作製した。プレートを周囲温度で３０分間インキュベートした。蛍光ペプチド基質ｓｕｃ－ＬＬＶＹ－ＡＭＣ（Ｂａｃｈｅｍ、品番Ｉ－１３９５）、及びｐｒｏ－ＫＬＫ７（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）をアッセイプレートに直接加え、周囲温度でインキュベートした。最終的なウェル内濃度は、１００μＭのｓｕｃ－ＬＬＶＹ－ＡＭＣ、１２５ｎＭのｐｒｏ－ＫＬＫ７、５ｎＭの組換えヒトＫＬＫ５、及び０．１９～１００ｎＭの抗ＫＬＫ５抗体であった。２４時間後、蛍光読取りを３０～６０分の間１０２秒毎に行い、最後の５回の読取値を平均することによってＲＦＵエンドポイント値を算出した。緩衝液単独及び１００ｎＭの最終的なＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、それぞれ、１００％及び０％の活性対照として使用した。抗ＫＬＫ５抗体のＩＣ５０値は、それぞれの曲線に対する４パラメータ適合から決定した。
抗ＫＬＫ５抗体のＩＣ５０値は、ＬＣ／ＭＳ（ｐｒｏ－ＫＬＫ７ ＬＣ／ＭＳアッセイ）を用いるＫＬＫ５由来切断ペプチド検出によるｐｒｏ－ＫＬＫ７アッセイを用いて決定した。酵素ＫＬＫ５と基質ｐｒｏＫＬＫ７との反応からの生成ペプチドＥＥＡＱＧＤＫを、液体クロマトグラフィと連結した質量分析によって検出した。全ての化合物を、５ｎＭのＫＬＫ５（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）でのアッセイにおいて最終濃度で５０ｍＭの重炭酸アンモニウム緩衝液（粉末／認定、Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａ６４３－５００）で希釈し、０．０２～６５ｎＭの範囲の抗体を、９６ウェルプレート（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｈａｒｄ－Ｓｈｅｌｌ９６ウェルＰＣＲプレート、低側面、薄壁、スカート付き、ブルー／クリア、＃ＨＳＰ９６３１）中で希釈した。プレートを室温度で３０分間インキュベートした。その後、１５ｎＭの基質ｐｒｏＫＬＫ７（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、酵素プラス阻害剤（ｅｎｚｙｍｅ ｐｌｕｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）に加えた。２時間後、０．５μＬのギ酸（９９．５＋％、Ｏｐｔｉｍａ（商標）ＬＣ／ＭＳグレード、Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａ１１７－１０Ｘ１ＡＭＰ）を用いて、反応をクエンチした。ペプチドを、以下の質量の組合せを用いて検出した：Ｑ１、３８８．７ｍ／ｚ及びＱ３、３１９．０ｍ／ｚ、ＱＴＲＡＰ（登録商標）６５００ ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ質量分析器（Ｓｃｉｅｘ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ）。生成したペプチドの定量を、合成ＫＬＫ７ペプチド較正曲線を用いて測定した。ＩＣ５０値を、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州ラホヤ）を用いて測定した。
抗ＫＬＫ５抗体によるヒトＫＬＫ５の阻害を、結合ｐｒｏ－ＫＬＫ１蛍光ペプチドアッセイを用いて測定した。組換えヒトＫＬＫ５（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、ｐｒｏ－ＫＬＫ１結合アッセイ緩衝液（１００ｍＭのトリス（ｐＨ８．５）、及び０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）中で０．５ｎＭに希釈し、３８４ウェルアッセイプレート（３８４ウェルローボリューム、黒、丸底、Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号４５１４）中で抗ＫＬＫ５抗体と組み合わせた。抗体希釈物は、直接ＫＬＫ５アッセイについて記載されたように作製した。プレートを周囲温度で３０分間インキュベートした。蛍光ペプチド基質ＰＦＲ－ＡＭＣ（Ｂａｃｈｅｍ、品番Ｉ－１２９５）及びｐｒｏ－ＫＬＫ１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）をアッセイプレートに直接加え、周囲温度でインキュベートした。最終的なウェル内濃度は、５０μＭのＰＦＲ－ＡＭＣ、３１．２５ｎＭのｐｒｏ－ＫＬＫ１、０．５ｎＭの組換えヒトＫＬＫ５、及び０．１９～１００ｎＭの抗ＫＬＫ５抗体であった。プレートは、３４０ｎｍ励起／４６０ｎｍ発光モジュールを使用するＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）Ｐｌｕｓリーダーを用いて、１２０分の間１０２秒毎に検査した。エンドポイントＲＦＵ値は、阻害剤なし対照についてのＲＦＵ対時間のプロットの変曲点によって指示された時間の周りの読み取り値を平均することによって、計算した。緩衝液単独及び１００ｎＭの最終的なＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、それぞれ、１００％及び０％の活性対照として使用した。抗ＫＬＫ５抗体のＩＣ５０値は、それぞれの曲線に対する４パラメータの適合から決定した。
抗ＫＬＫ５抗体のＩＣ５０値は、ＬＣ／ＭＳ（ｐｒｏ－ＫＬＫ１ ＬＣ／ＭＳアッセイ）を用いるＫＬＫ５由来切断ペプチド検出によるｐｒｏ－ＫＬＫ１アッセイを用いて決定した。酵素ＫＬＫ５と基質ｐｒｏＫＬＫ１との反応からの生成ペプチドＡＰＰＩＱＳＲを、液体クロマトグラフィと連結した質量分析によって検出した。全ての化合物を、０．５ｎＭのＫＬＫ５（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）でのアッセイにおいて最終濃度で５０ｍＭの重炭酸アンモニウム緩衝液（粉末／認定、Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａ６４３－５００）で希釈し、０．０１～２９ｎＭの範囲の抗体を、９６ウェルプレート（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｈａｒｄ－Ｓｈｅｌｌ９６ウェルＰＣＲプレート、低側面、薄壁、スカート付き、ブルー／クリア、＃ＨＳＰ９６３１）中で希釈した。プレートを室温度で６０分間インキュベートした。その後、３００ｎＭの基質ｐｒｏＫＬＫ１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、酵素プラス阻害剤に加えた。２０分後、０．５μＬのギ酸（９９．５＋％、Ｏｐｔｉｍａ（商標）ＬＣ／ＭＳグレード、Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａ１１７－１０Ｘ１ＡＭＰ）を用いて、反応をクエンチした。ペプチドを、以下の質量の組合せを用いて検出した：Ｑ１、３８４．７ｍ／ｚ及びＱ３、６００．３ｍ／ｚ、ＱＴＲＡＰ（登録商標）６５００ ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ質量分析器（Ｓｃｉｅｘ、マサチューセッツ州フレーミングハム）。ＩＣ５０値を、ピーク領域及びＰｒｉｓｍ６ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、カリフォルニア州ラホヤ）を用いて測定した。
基質としてＺ－ＶＰＲ－ｐＮＡを用いるＫｉ（ａｐｐ）アッセイを、９６ウェルハーフエリアプレート（白、平底、透明ボトム、Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３８８４）中で室温にて実施した。阻害剤試料を、アッセイ緩衝液（１００ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１００ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）中において、３倍の最終濃度に希釈した。緩衝液単独及び１００ｎＭの最終的なＳＰＩＮＫ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、それぞれ、１００％及び０％の活性対照として使用した。阻害剤又は対照試料（２０μＬ）をプレートに加え、続いて、０．５、０．２５、０．１２５、及び０．０６２５ｎＭの最終濃度で、アッセイ緩衝液中２０μＬのＫＬＫ５（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を加えた。３０分後、アッセイ緩衝液中２０μＬのＺ－ＶＰＲ－ｐＮＡ基質（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｐｅｐｔｉｄｅ、＃８７６－０８、ＤＭＳＯ中３０ｍＭストック溶液として調製）を、３００μＭの最終濃度で加えた。いくつかの初期アッセイでは、アッセイ緩衝液中で９００μＭ（すなわち、最終的に３倍）に希釈する前に、基質をＤＭＳＯ中で３ｍＭに初期希釈することによって、最終ＤＭＳＯ濃度を１０％まで増加させた。基質を加えた後、プレートを、３時間にわたって１０２秒毎に取得される４０５ｎｍでの測定により、Ｖｅｒｓａｍａｘチューナブルマイクロプレートリーダーで読み取った。反応速度（μＡＵ／秒で表される）を、４１８２～１０７１０秒の範囲で線形回帰により計算した。反応速度を０％及び１００％の活性対照の値に標準化し、ＩＣ５０値を計算するために４パラメータ方程式に適合させた。二価阻害剤の場合、生のＩＣ５０値を２倍した。次いで、ＩＣ５０値をＫＬＫ５酵素濃度に対してプロットし、ｙ切片値からＫｉ（ａｐｐ）を得た。その上、阻害剤が充分に強力であれば、プロットの傾きを理論値０．５と比較することにより、酵素と阻害剤との両方の組合せ純度を判定することができた。
抗体選択性を測定するアッセイ
ＫＬＫ１選択性アッセイを、３８４ウェルプレート（黒、ローボリューム、丸底、Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃４５１４）中で室温において、最終反応体積１５μＬで行った。阻害剤試料を、アッセイ緩衝液（７５ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）中において、３倍の最終濃度に希釈した。阻害剤を欠く反応及び酵素を欠く反応を、それぞれ、１００％及び０％の活性対照として用いた。阻害剤又は対照試料（５μＬ）をプレートに加え、続いて、３ｎＭの最終濃度で、アッセイ緩衝液中５μＬのＫＬＫ１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、２３３７－ＳＥ、ロット番号ＮＬＹ０３１５１１１、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓプロトコルに従って活性化）を加えた。３０分後、アッセイ緩衝液中５μＬのＨ－Ｐｒｏ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－ＡＭＣ酢酸塩（Ｂａｃｈｅｍ、Ｉ－１２９５、水中１０ｍＭストック溶液）を、１００μＭの最終濃度で加えた。基質を加えた後、ゲインを８５％に設定した光モジュールＦＩ ３４０ ４６０を用いて、プレートをＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダーで読み取った。測定は１０２秒毎に１時間行った。反応速度（ＲＦＵ／秒で表される）を、２０４～９１８秒の範囲で線形回帰により計算した。反応速度を０％及び１００％の活性対照の値に標準化し、ＩＣ５０値を計算するために４パラメータ方程式に適合させた。二価阻害剤の場合、生のＩＣ５０値を２倍した。
ＫＬＫ４選択性アッセイを、３８４ウェルプレート（黒、ローボリューム、丸底、Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃４５１４）中で室温において、最終反応体積１５μＬで行った。阻害剤試料を、アッセイ緩衝液（７５ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）中において、３倍の最終濃度に希釈した。阻害剤を欠く反応及び酵素を欠く反応を、それぞれ、１００％及び０％の活性対照として用いた。阻害剤又は対照試料（５μＬ）をプレートに加え、続いて、２ｎＭの最終濃度で、アッセイ緩衝液中５μＬのＫＬＫ４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１７１９－ＳＥ、ロット番号ＭＳＹ０１１６０１１、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓプロトコルに従って活性化）を加えた。３０分後、アッセイ緩衝液中５μＬのＢｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣ（Ｂａｃｈｅｍ、Ｉ－１１２０、水中３１．３ｍＭストック溶液）を、５０μＭの最終濃度で加えた。基質を加えた後、ゲインを８５％に設定した光モジュールＦＩ ３４０ ４６０を用いて、プレートをＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダーで読み取った。測定は１０２秒毎に１時間行った。反応速度（ＲＦＵ／秒で表される）を、５１０～３５７０秒の範囲で線形回帰により計算した。反応速度を０％及び１００％の活性対照の値に標準化し、ＩＣ５０値を計算するために４パラメータ方程式に適合させた。二価阻害剤の場合、生のＩＣ５０値を２倍した。
トリプシン選択性アッセイを、３８４ウェルプレート（黒、ローボリューム、丸底、Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃４５１４）中で室温において、最終反応体積１５μＬで行った。阻害剤試料を、アッセイ緩衝液（７５ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）中において、３倍の最終濃度に希釈した。阻害剤を欠く反応及び酵素を欠く反応を、それぞれ、１００％及び０％の活性対照として用いた。阻害剤又は対照試料（５μＬ）をプレートに加え、続いて、アッセイ緩衝液中５μＬのトリプシン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｔ８００３、ロット番号ＳＬＢＭ２３２１Ｖ、１ｍＭ ＨＣｌ中４２．０μＭストック溶液）を最終濃度０．２５ｎＭで加えた。３０分後、アッセイ緩衝液中５μＬのＢｏｃ－Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ＡＭＣ（Ｂａｃｈｅｍ、Ｉ－１１２０、水中３１．３ｍＭストック溶液）を、５０μＭの最終濃度で加えた。基質を加えた後、ゲインを８５％に設定した光モジュールＦＩ ３４０ ４６０を用いて、プレートをＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダーで読み取った。測定は１０２秒毎に１時間行った。反応速度（ＲＦＵ／秒で表される）を、２０４～３５７０秒の範囲で線形回帰により計算した。反応速度を０％及び１００％の活性対照の値に標準化し、ＩＣ５０値を計算するために４パラメータ方程式に適合させた。二価阻害剤の場合、生のＩＣ５０値を２倍した。
ＫＬＫ７選択性アッセイを、３８４ウェルプレート（黒、ローボリューム、丸底、Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃４５１４）中で室温において、最終反応体積１５μＬで行った。阻害剤試料を、アッセイ緩衝液（７５ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）中において、３倍の最終濃度に希釈した。阻害剤を欠く反応及び酵素を欠く反応を、それぞれ、１００％及び０％の活性対照として用いた。阻害剤又は対照試料（５μＬ）をプレートに加え、続いて、５ｎＭの最終濃度で、アッセイ緩衝液中５μＬのＫＬＫ７（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を加えた。３０分後、アッセイ緩衝液中５μＬのＳｕｃ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－ＡＭＣ（Ｂａｃｈｅｍ、Ｉ－１３９５、水中２５ｍＭストック溶液）を、１００μＭの最終濃度で加えた。基質を加えた後、ゲインを８５％に設定した光モジュールＦＩ ３４０ ４６０（ＡＭＣ Ｍｏｄｕｌｅ）を用いて、プレートをＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダーで読み取った。測定は１０２秒毎に１時間１５分行った。反応速度（ＲＦＵ／秒で表される）を、２０４０～４４８８秒の範囲で線形回帰により計算した。反応速度を０％及び１００％の活性対照の値に標準化し、ＩＣ５０値を計算するために４パラメータ方程式に適合させた。
ＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）実験
事前ＭＣＡ ＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）モジュール：３０分後、アッセイ緩衝液中５μＬのＳｕｃ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ｔｙｒ－ＡＭＣ（Ｂａｃｈｅｍ、Ｉ－１３９５、水中２５ｍＭストック溶液）を、１００μＭの最終濃度で加えた。基質を加えた後、ゲインを８５％に設定した光モジュールＦＩ ３４０ ４６０（ＡＭＣ Ｍｏｄｕｌｅ）を用いて、プレートをＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダーで読み取った。測定は１０２秒毎に１時間１５分行った。反応速度（ＲＦＵ／秒で表される）を、２０４０～４４８８秒の範囲で線形回帰により計算した。反応速度を０％及び１００％の活性対照の値に標準化し、ＩＣ５０値を計算するために４パラメータ方程式に適合させた。
事後ＭＣＡ ＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）モジュール：３０分後、アッセイ緩衝液中の５μＬのＭｃａ－ＲＰＫＰＶＥ－Ｎｖａｌ－ＷＲＫ（Ｄｎｐ）－ＮＨ２蛍光発生ＭＭＰ基質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＥＳ００２、ＤＭＳＯ中４．３ｍＭストック溶液）を、１０μＭの最終濃度で加えた。基質を加えた後、ゲインを８５％に設定した光モジュールＦＩ ３２０ ４０５（ＭＣＡ Ｍｏｄｕｌｅ）を用いて、プレートをＰＨＥＲＡｓｔａｒ（登録商標）マイクロプレートリーダーで読み取った。測定は１０２秒毎に１時間１５分行った。反応速度（ＲＦＵ／秒で表される）を、２０４～１０２０秒の範囲で線形回帰により計算した。反応速度を０％及び１００％の活性対照の値に標準化し、ＩＣ５０値を計算するために４パラメータ方程式に適合させた。
Ｗａｓａｔｃｈ実験
アレイベースのＳＰＲイメージングシステム（Ｃａｒｔｅｒｒａ（商標）、米国）を使用して、２８８のモノクローナル抗体のパネルをエピトープビンした。精製された抗体を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ４．５中で１０μｇ／ｍＬにて希釈した。アミンカップリングを使用して、Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（Ｃａｒｔｅｒｒａ（商標）、米国）を用いてＳＰＲセンサプリズムＣＭＤ２００Ｍチップ（ＸａｎＴｅｃ Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、ドイツ）上に抗体を直接固定化して、２８８の抗体のアレイを作製した。分析のため、ＩＢＩＳ ＭＸ９６ ＳＰＲｉ（Ｃａｒｔｅｒｒａ（商標）、米国）を用いて、固定化リガンドへの分析物結合を評価した。動態解析のため、ヒト、カニクイザル、及びマウスＫＬＫ５を、３倍希釈で０～３００ｎＭまで３分間注入し、続いて１０分の解離時間を与えた。抗体の特異性を確認するために、ヒトＫＬＫ１、ＫＬＫ４、及びＫＬＫ７を５００ｎＭの単一濃度で注射した。ＳＰＩＮＫ９－Ｆｃ－ＳＲＥに対するエピトープビニングのために、ヒトＫＬＫ５を最初に１００ｎＭで４分間注入し、続いて第２に、１０μｇ／ｍｌでＳＰＩＮＫ９－Ｆｃ－ＳＲＥを４分間注入した。サイクル間に１０ｍＭグリシンｐＨ１．５で表面を再生した。実験は、ＨＢＳ－Ｔ緩衝液（０．０１ＭでｐＨ７．４のＨＥＰＥＳ、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）のランニング緩衝液中で２５℃にて行った。動力学的データはＳｃｒｕｂｂｅｒ ２．０（ＢｉｏＬｏｇｉｃ（商標）ソフトウェア）を用いて処理し、エピトープビニングデータはＷａｓａｔｃｈビニングソフトウェアツール（Ｃａｒｔｅｒｒａ（商標）、米国）を用いて処理した。
水素交換質量分析法
実験の出発物質組成を表２に列挙する。２つの標識溶液を、ｐＨ６．０又はｐＨ８．０のいずれかを有し、適切な比率で合わせた無水リン酸二水素ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウム二水和物（ｄｉｂａｓｉｃ ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）との混合物からなる２Ｈ２Ｏ（重水）で調製し、１４０ｍＭのＮａＣｌを伴う合計濃度１０ｍＭにて示された重水素活性を達成した。出発物質（表２）を、Ｌｅａｐ Ｒｏｂｏｔｉｃｓプラットフォームを用いて標識溶液でおよそ１：１０に希釈し、種々の時間インキュベートした後、クエンチ緩衝液（４ＭのＧｄｍＣｌ、０．５ＭのＴＣＥＰ、２００ｍＭのクエン酸）で１：１に希釈して、最終ｐＨ２．５にし、次いで、質量測定のために迅速に調製した。クエンチした材料をオンラインフローシステムに注入し、そこでペプシンを用いて消化し、トラップカラムに結合させたまま緩衝液を交換し、逆相クロマトグラフィによって分離し、エレクトロスプレイによって気相に導入し、そこで個々のペプチドを重水素運搬量について評価した。
Figure 0007422671000002
ｐＨ６．０又はｐＨ８．０のいずれかで、試料を０．５、５．０、５６．０、及び６００．０分間標識した。独立した実験的反復が含まれた。示したプロットでは、エラーバーは測定範囲を表し、その平均を図１２Ｂのマーカーで示した。特徴抽出及びデータ分析には、カスタムの社内ソフトウェアが必要であった。
参照ｐＨでの効果的な標識時間は、実験ｐＨと実際の標識時間との両方により規定した：ｔ効果＝ｔ実験＊１０＾（ｐＨ参照－ｐＨ実験）。図１２Ｂの参照ｐＨは６．０である。２Ｈ２Ｏの結果として生じる公知のプロトン活性オフセットを補正するために、以下の関係式は、ｐＨ測定値を本明細書で言及するｐＨ値と連結する：
ｐＨ＝ｐＨ測定値＋（［２Ｈ２Ｏ／２Ｈ２Ｏ＋１Ｈ２Ｏ］＊０．４）。
ＫＬＫ５由来の実験ペプチドの配列及び保持時間を、上記と同じ手順ワークフローに従ったが、１Ｈ２Ｏ溶媒中の標識緩衝液を用いて、最初の実験において決定した。標識実験中に各ペプチドに含まれる重水素の量を決定するための出発物質がこれにより得られる。加えて、これらの実験は、ＭＳによるデノボ配列決定用のタンデムＭＳを利用する。
ＩＬ－８分泌アッセイ
ＩＬ－８は炎症性刺激に応答していくつかの細胞型によって分泌される。ＫＬＫ５はＡ４５９細胞を刺激し、ＩＬ－８の分泌をもたらす。腺がんヒト肺胞基底上皮細胞（ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍｉｃ ｈｕｍａｎ ａｌｖｅｏｌａｒ ｂａｓａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）はＡ５４９細胞株を構成する。Ａ５４９細胞を、ＲＰＭＩ、１０％ ＦＢＳ、Ｌ－グルタミンを含有する培地で培養し、ペニシリン及びストレプトマイシンを補充した。細胞を、ＴＣ処理した９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号＃３９９７）中に５０，０００細胞／ウェルで播種し、ＫＬＫ５負荷前に１８時間にわたって血清を飢餓状態にした。ヒトＫＬＫ５を、最初にＫＬＫ５阻害剤又は飢餓培地とともに室温で１時間インキュベートし、その後、プレート（ウェル内濃度２００ｎＭ）に５％のＣＯ２存在下における多湿環境で３７℃にて２４時間加えた。エンドトキシン阻害剤（１μＭ）もまた各ウェルに添加した。インキュベーション後、細胞上清を収集し、直ちに分析するか、又は－２０℃で保存した。細胞上清を、捕捉用のマウス抗ヒトＩＬ－８モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ２０８）及び検出用のビオチニル化マウス抗ヒトＩＬ－８モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＢＡＦ２０８）による標準プロトコルを用いて、ＩＬ－８サンドイッチＥＬＩＳＡで分析するために、試料希釈液（ＰＢＳ／０．５％、ＢＳＡ／０．０５％、ポリソルベート－２０／５ｍＭ、ＥＤＴＡ／０．２５％、ＣＨＡＰＳ／０．２％、ＢＧＧ／１０ｐｐＭプロクリン）中で連続的に希釈した。ＫＬＫ５の細胞刺激活性は、ＩＬ－８濃度を、ＫＬＫ５処理単独では１００％に、飢餓培地単独では０％に正常化することにより分析した。ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアによる４パラメータ適合を用いて決定した。
ＫＬＫ５及びＦａｂの発現、精製、及び結晶化
組換えヒトＫＬＫ５残基Ｉ６７－Ｓ２９３（配列番号３２８）を、ユビキチンとＫＬＫ５との間で操作したエンテロキナーゼ切断部位とのユビキチンのＣ末端融合として、バキュロウイルス発現系で発現させた。Ｓｆ９細胞を、１ｍｇ／ｍＬのキフネンシンと共にＥｎｄｏＨと共発現させた。タンパク質を、ＨｉＴｒａｐ（商標）ヘパリンカラムで精製した。カラムを５ＣＶ（カラム体積）について２５ｍＭトリスｐＨ７．５で洗浄し、次いで２０ＣＶの勾配で０～７５０ｍＭのＮａＣｌによって溶出した。次いで、得られたタンパク質プールを、２５ｍＭトリスｐＨ７．５、３００ｍＭのＮａＣｌ中のＳＥＣによってＳ２００でさらに精製した。次いで、ユビキチンをエンテロキナーゼを用いて切断し、試料をＳＥＣによって再度さらに精製した。質量分析及びＳＤＳ ＰＡＧＥは、活性であることを確認した純粋なＫＬＫ５試料を明らかにした。重鎖及び軽鎖を含むＦａｂ断片を、記載のように発現させ、精製した。Ｃａｒｔｅｒら、「Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、第１０巻第２号第１６３～１６７頁（１９９２年）を参照されたい。次いで、ＫＬＫ５を、それぞれのＦａｂ、１０Ｃ５、９Ｈ５、及び３－３Ｆ５と別々に混合し、複合体を２５ｍＭでｐＨ７．２のＨＥＰＥＳ、１００ｍＭのＮａＣｌ中でＳＥＣによって精製した。３つのＦａｂ－ＫＬＫ５複合体の結晶化条件は、以下の通りであった：３－３Ｆ５複合体１５％ＰＥＧ ４Ｋ、０．１Ｍ ＭｇＣｌ２、０．１Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ５．０；１０Ｃ５複合体：２０％ＰＥＧ４Ｋ、０．２Ｍ硫酸アンモニウム、２５％グリセロール；９Ｈ５複合体：１５％ＰＥＧ４Ｋ、１０％イソプロパノール、０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５。１０Ｃ５及び９Ｈ５複合体の結晶は、タンパク質複合体のリシン残基がメチル化された場合にのみ得られた。Ｗａｌｔｅｒら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ」、第１４巻第１１号第１６１７～１６２２頁（２００６年）。
データ収集及び構造解
Ｘ線回折データを、標準的な方法に従って、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ（カリフォルニア州バークレー）又はＡｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅ（イリノイ州アルゴンヌ）における種々のシンクロトロンＸ線放射を用いて、１００ケルビンで低温冷却条件下において収集した。回折画像はデータ処理ソフトウェアＸＤＳを用いて処理し、縮小した。Ｋａｂｓｃｈ Ｗ、「Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ」、第６６巻第２部第１２５～１３２頁（２０１０年）を参照のこと。モデルはプログラムＰＨＡＳＥＲによる分子置換法を用いて作成した。ヒトＴＩＧＩＴ構造（Ｄｅｂａｌａら、「Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ」、第３７３巻第１０１７～１０３１頁（２００７年）を参照）及びＦａｂ抗体モデル（Ｎａｋａｍｕｒａら、「Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ」、第１４巻第１号第９３～１０３頁（２０１３年）を参照）を、探索モデルとして使用した。構造は、ＣＯＯＴプログラムを用いたモデル調整、及びＰｈｅｎｉｘ．ｒｅｆｉｎｅ又はＢＵＳＴＥＲプログラムを用いた精密化の反復ラウンドを受けた。モデルを、許容可能なＲ及びＲ自由値並びにＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎ統計（モル確率で算出）に改良した。Ｆａｂ、１０Ｃ５、９Ｈ５、及び３－３Ｆ５の各々と複合したＫＬＫ５の結晶構造、並びに相互作用及びエピトープの詳細を、図１８～図２０及び表５～表１３で見ることができる。
実施例２：抗ＫＬＫ５抗体のヒト化
上述のように、動物をヒトＫＬＫ５で免疫することによって、５４０のモノクローナル抗ＫＬＫ５抗体のセットを得た。このセットは、高度に可変的な特徴を有する抗ＫＬＫ５抗体を含有するため、抗体を、特定のＩＣ５０値及びヒトＫＬＫ５に対する選択性などの所望の特徴についてスクリーニングした。このスクリーニングは、ヒトＫＬＫ５に対する低親和性、ヒトＫＬＫ５に対する選択性が無い、及び／又は不充分な機能的活性を有する、多数の抗体を明らかにした。例えば、得られた抗ＫＬＫ５抗体のいくつかは、部分的阻害剤、すなわち、５０％以下による阻害（例えば、クローン１２Ｂ３、１Ｄ１０）又は９０％以下による阻害（例えば、クローン１４Ｃ８、１４Ｅ１２、８Ｅ１１）であった。得られた抗ＫＬＫ５抗体のいくつかは、本明細書に記載されるアッセイの１つにおいてのみヒトＫＬＫ５を阻害した（例えば、クローン９Ｅ３、１０Ｄ１０）。１３種類の抗ＫＬＫ５抗体のみを、それらの特徴に基づき選別した（クローン８Ｇ１０、９Ｂ６、２－３Ｆ４、１０Ｃ５、２Ｂ１１、１０Ｈ３、９Ｈ３、８Ｂ７、９Ｈ５、９Ｆ２、１０Ｃ８、８Ｆ５、３－３Ｆ５）。次いで、最も高い阻害活性を有する３つの抗ＫＬＫ５抗体（クローン９Ｈ５、１０Ｃ５、３－３Ｆ５）を、ヒト化のために選択した。
ウサギモノクローナル抗体９Ｈ５、１０Ｃ５、及び３－３Ｆ５を、以下に記載されるようにヒト化した。残基番号は、Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ（１９９１年）に従った。
９Ｈ５、１０Ｃ５、及び３－３Ｆ５のヒト化中に構築されたバリアントを、ヒトＩｇＧ１の形態で評価した。ウサギ抗体の各々からの超可変領域（すなわち、ＶＬドメインにおける２４～３４位（Ｌ１）、５０～５６位（Ｌ２）、及び８９～９７位（Ｌ３）、並びにＶＨドメインにおける２６～３５位（Ｈ１）、５０～６５位（Ｈ２）、及び９５～１０２位（Ｈ３））を、種々の受容体フレームワークに移植した。具体的には、９Ｈ５については、ＶＬ ＣＤＲをＫＶ１Ｄ－３９＊０１に移植し、ＶＨ ＣＤＲをＨＶ３－５３＊０１に移植した。１０Ｃ５については、ＶＬ ＣＤＲをＫＶ１－８＊０１に移植し、ＶＨ ＣＤＲをＨＶ３－６４＊０１に移植した。３－３Ｆ５については、ＶＬ ＣＤＲをＫＶ１－８＊０１に移植し、ＶＨ ＣＤＲをＨＶ３－２３＊０１に移植した。ウサギ抗体からの全てのＶＬ及びＶＨ Ｖｅｒｎｉｅｒ位置もまた、それぞれのヒト生殖細胞系フレームワークに移植した。全てのウサギアミノ酸がＶｅｒｎｉｅｒ位にある移植片は、Ｌ１Ｈ１（ｈｕ９Ｈ５．Ｌ１Ｈ１、ｈｕ１０Ｃ５．Ｌ１Ｈ１、及びｈｕ３－３Ｆ５．Ｌ１Ｈ１）と呼ばれる（図１４～図１６）。
この部分における抗体の結合親和性を、上で本明細書中に記載するとおり、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００を用いて決定した。ヒト化９Ｈ５、１０Ｃ５、及び３－３Ｆ５バージョンＬ１Ｈ１（ｈｕ９Ｈ５．Ｌ１Ｈ１、ｈｕ１０Ｃ５．Ｌ１Ｈ１、及びｈｕ３－３Ｆ５．Ｌ１Ｈ１）抗体の結合親和性を、それらのキメラ親クローンと比較した。バージョンＬ１Ｈ１抗体のウサギＶｅｒｎｉｅｒ位置をヒト残基に戻して、ｈＫＬＫ５への結合親和性に対する各ウサギＶｅｒｎｉｅｒ位置の寄与を評価した。
９Ｈ５について、３つの追加の軽鎖（Ｌ２：Ｌ１＋Ａｌａ４３、Ｌ３：Ｌ１＋Ｔｙｒ４９、及びＬ４：Ｌ１＋Ａｌａ４３＋Ｔｙｒ４９（ＣＤＲ移植片））及び１６の追加の重鎖（Ｈ２：Ｈ１＋Ａｌａ２４、Ｈ３：Ｈ１＋Ｔｒｐ４７、Ｈ４：Ｈ１＋Ｖａｌ４８、Ｈ５：Ｈ１＋Ｓｅｒ４９、Ｈ６：Ｈ１＋Ｐｈｅ６７、Ｈ７：Ｈ１＋Ａｓｎ７３、Ｈ８：Ｈ１＋Ｌｅｕ７８、Ｈ９：Ｈ１＋Ｔｙｒ９１、Ｈ１０：Ｈ１＋Ｇｌｎ１０５、Ｈ１１：Ｖｅｒｎｉｅｒ位置（ＣＤＲ移植片）にウサギ残基無し、Ｈ１２：Ｈ１＋Ａｓｐ６１＋Ｓｅｒ６２＋Ｖａｌ６３＋Ｇｌｙ６５、Ｈ１３：ＣＤＲ移植片＋Ａｓｐ６１＋Ｓｅｒ６２＋Ｖａｌ６３＋Ｇｌｙ６５、Ｈ１４：ＣＤＲ移植片＋Ｔｙｒ４７＋Ｇｌｙ４９、Ｈ１５：Ｈ１４＋Ｇｌｎ２、Ｈ１６：Ｈ１４＋Ａｓｎ７２＋Ｔｈｒ７３＋Ａｓｎ７４＋Ｌｅｕ７５、及びＨ１７：Ｈ１４＋Ｐｈｅ６２）を作製した（図１５）。重鎖（Ｈ１４）上のＴｙｒ４７及びＧｌｙ４９は、上記バリアント抗体（データ示さず）の結合親和性評価に基づいて、鍵となるウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定した。キメラ９Ｈ５は１．９Ｅ－１０ＭのＫＤと結合したが、ｈｕ９Ｈ５．Ｌ４Ｈ１４は、６．９Ｅ－１０ＭのＫＤと結合した。
１０Ｃ５について、４つの追加の軽鎖バリアントＬ２－Ｌ５（Ｌ２：Ｌ１＋Ｉｌｅ２、Ｌ３：Ｌ１＋Ａｌａ４３、Ｌ４：Ｌ１＋Ｉｌｅ２＋Ａｌａ４３（ＣＤＲ移植片）、Ｌ５：ＣＤＲ移植片＋Ｓｅｒ７７＋Ｐｒｏ８０、Ｌ６：ＣＤＲ移植片＋Ｓｅｒ７７＋Ｐｒｏ８０＋Ｇｌｕ１０３＋Ｖａｌ１０５＋Ｖａｌ１０６）及び２７の追加の重鎖バリアントＨ２～Ｈ２８（Ｈ２：Ｈ１＋Ａｌａ２４、Ｈ３：Ｈ１＋Ｔｙｒ４７、Ｈ４：Ｈ１＋Ｖａｌ４８、Ｈ５：Ｈ１＋Ｓｅｒ４９、Ｈ６：Ｈ１＋Ｐｈｅ６７、Ｈ７：Ｈ１＋Ａｓｎ７３、Ｈ８：Ｈ１＋Ｌｅｕ７８、Ｈ９：Ｈ１＋Ｔｙｒ９１、Ｈ１０：Ｈ１＋Ｇｌｎ１０５、Ｈ１１：Ｈ１＋Ａｓｎ６１＋Ｓｅｒ６２＋Ｖａｌ６３＋Ｇｌｙ６５、Ｈ１２：Ｖｅｒｎｉｅｒ位置（ＣＤＲ移植片）にウサギ残基無し、Ｈ１３：ＣＤＲ移植片＋Ａｓｎ６１＋Ｓｅｒ６２＋Ｖａｌ６３＋Ｇｌｙ６５、Ｈ１４：ＣＤＲ移植片＋Ｔｒｐ４７＋Ｇｌｙ４９、Ｈ１５：Ｈ１４＋Ｇｌｎ２、Ｈ１６：Ｈ１４＋Ａｓｎ７２＋Ｌｅｕ７３＋Ａｓｎ７４＋Ｔｈｒ７５、Ｈ１７：Ｈ１４＋Ｐｈｅ６２、Ｈ１８：Ｈ１４＋Ａｓｎ７２＋Ｔｈｒ７３＋Ａｓｎ７４＋Ｌｅｕ７５、Ｈ１９：Ｈ１４＋Ａｓｎ７２、Ｈ２０：Ｈ１４＋Ａｓｎ７４、Ｈ２１：Ｈ１４＋Ａｓｎ７２＋Ａｓｎ７４、Ｈ２２：Ｈ１４＋Ｉｌｅ４８、Ｈ２３：Ｈ１４＋Ｓｅｒ６７、Ｈ２４：Ｈ２２＋Ｓｅｒ６７、Ｈ２５：Ｈ１４＋Ｔｈｒ７３、Ｈ２６：Ｈ１４＋Ｔｈｒ７８、Ｈ２７：Ｈ２５＋Ｔｈｒ７８、Ｈ２８：Ｈ２２＋Ｓｅｒ６７＋Ｔｈｒ７３＋Ｔｈｒ７８）を作製した（図１４）。重鎖（Ｈ２８）上のＴｒｐ４７、Ｉｌｅ４８、Ｇｌｙ４９、Ｓｅｒ６７、Ｔｈｒ７３、及びＶａｌ７８は、上記バリアント抗体（データ示さず）の結合親和性評価に基づいて、鍵となるウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定した。キメラ１０Ｃ５は１．６５Ｅ－１１ＭのＫＤで結合したが、ｈｕ１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８は、５．７０Ｅ－１１ＭのＫＤで結合した。
３－３Ｆ５については、４つの追加の軽鎖バリアントＬ２－Ｌ５（Ｌ２：Ｌ１＋Ｉｌｅ２、Ｌ３：Ｌ１＋Ａｌａ４３、Ｌ４：Ｌ１＋Ｉｌｅ２＋Ａｌａ４３（ＣＤＲ移植片）、Ｌ５：ＣＤＲ移植片＋Ｓｅｒ７７＋Ｐｒｏ８０）及び２６の追加の重鎖バリアントＨ２～Ｈ２７（Ｈ２：Ｈ１＋Ａｌａ２４、Ｈ３：Ｈ１＋Ｖａｌ４８、Ｈ４：Ｈ１＋Ｓｅｒ４９、Ｈ５：Ｈ１＋Ｐｈｅ６７、Ｈ６：Ｈ１＋Ａｓｎ７３、Ｈ７：Ｈ１＋Ｌｅｕ７８、Ｈ８：Ｈ１＋Ｔｙｒ９１、Ｈ９：Ｈ１＋Ａｒｇ１０５、Ｈ１０：Ｈ１＋Ｐｈｅ５８、Ｈ１１：Ｈ１＋Ａｓｐ６１＋Ｓｅｒ６２＋Ｖａｌ６３、Ｈ１２：ＣＤＲ移植片＋Ｐｈｅ５８、Ｈ１３：ＣＤＲ移植片＋Ｐｈｅ５８＋Ａｓｐ６１＋Ｓｅｒ６２＋Ｖａｌ６３、Ｈ１４：ＣＤＲ移植片＋Ｇｌｙ４９、Ｈ１５：Ｈ１４＋Ｐｈｅ５８、Ｈ１６：Ｈ１４＋Ｇｌｎ２、Ｈ１７：Ｈ１４＋Ａｓｎ７２＋Ｔｈｒ７３＋Ａｓｎ７４＋Ｌｅｕ７５、Ｈ１８：Ｈ１４＋Ｐｈｅ６２、Ｈ１９：Ｈ１８＋Ｖａｌ２４、Ｈ２０：Ｈ１８＋Ｉｌｅ４８、Ｈ２１：Ｈ１８＋Ｓｅｒ６７、Ｈ２２：Ｈ１８＋Ｉｌｅ４８＋Ｓｅｒ６７、Ｈ２３：Ｈ１８＋Ｔｈｒ７３、Ｈ２４：Ｈ１８＋Ｖａｌ７８、Ｈ２５：Ｈ１８＋Ｔｈｒ７３＋Ｖａｌ７８、Ｈ２６：Ｈ１８＋Ｉｌ４８＋Ｓｅｒ６７＋Ｔｈｒ７３＋Ｖａｌ７８、Ｈ２７：ＣＤＲ移植片＋Ａｌａ２４＋Ｉｌｅ４８＋Ｇｌｙ４９＋Ｐｈｅ５８＋Ｐｈｅ６２＋Ｓｅｒ６７、Ｈ２８：Ｈ１９＋Ｐｈｅ５８＋Ｔｈｒ７３＋Ｔｈｒ７８）を作製した（図１６）。重鎖（Ｈ２８）上のＶａｌ２４、Ｇｌｙ４９、Ｔｈｒ７３、及びＶａｌ７８は、上記バリアント抗体（データ示さず）の結合親和性評価に基づいて、鍵となるウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定した。キメラ３－３Ｆ５は＜１Ｅ－１２Ｍ（ＫＤは装置の検出限界１０Ｅ－６ｓ－１以下）のＫＤと結合したが、ｈｕ３－３Ｆ５・Ｌ５Ｈ１９は４．１Ｅ－１２ＭのＫＤと結合し、ｈｕ３－３Ｆ５．Ｌ５Ｈ２５は９．１Ｅ－１２ＭのＫＤと結合した。
ｈｕ９Ｈ５．Ｌ４Ｈ１４、ｈｕ１０Ｃ５．Ｌ５Ｈ２８、ｈｕ３－３Ｆ５．Ｌ５Ｈ１９、ｈｕ３－３Ｆ５．Ｌ５Ｈ２５、及びそれらのキメラ対応物を、本明細書中に上述したように、ヒトＫＬＫ５に結合する能力について試験した。ヒト化抗体の結合特性を、下の表３に示す。
Figure 0007422671000003
実施例３－抗ＫＬＫ５抗体のＩＣ５０値及び特異性の評価
蛍光ペプチド基質を用いたＫＬＫ５阻害剤のＩＣ５０値の評価
ヒトＫＬＫ５による基質Ｂｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣのタンパク質分解を阻害する、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗体の能力を、酵素アッセイを用いて評価した。このアッセイでは、三量体蛍光発生ペプチド基質は、ｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）への共鳴エネルギー移動によりクエンチされる、高度に蛍光性の７－アミノ４－メチルクマリン（ＡＭＣ）基を含有する。ヒトＫＬＫ５によるペプチド基質の切断は蛍光シグナルの増加をもたらし、ＫＬＫ５の阻害又は不存在は蛍光シグナルのクエンチをもたらした。結果は、最大ＫＬＫ５活性の割合（対照％）として表した。単回の実験を二重に行った結果を図１に示す。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃについて計算されたＩＣ５０値（図１Ａ）は１．２３ｎＭであり、１２の選択した抗体についてのＩＣ５０値（図１Ｃ～図１Ｎ）の範囲は０．８９～１．３２ｎＭであった。Ｓｐｉｎｋ０．ＳＲＥ．Ｆｃ及び全１２の選択した抗体は、ＫＬＫ５活性を完全に阻害したが、ｍＡｂ１１０８（図１Ｂ）はＫＬＫ５活性の約２０％の阻害のみを示した。曲線近似から得られたＩＣ５０値を図１１に示す（カラム１）。
結合高分子基質活性を用いたＫＬＫ５阻害剤ＩＣ５０値の評価
図１に示すように、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ及び同定された１２の抗ＫＬＫ５抗体は、ペプチドベースの基質を用いてモニターされるＫＬＫ５活性の強力な阻害剤である。これらの阻害剤の阻害プロファイルをさらに評価するために、ＫＬＫ特異的蛍光ペプチド基質と組み合わせて、高分子基質、ｐｒｏ－ＫＬＫ７（図２）、及びｐｒｏ－ＫＬＫ１（図３）を利用する２つのアッセイを開発した。
図２では、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗ＫＬＫ５抗体の、ｐｒｏ－ＫＬＫ７のＫＬＫ５媒介活性化を阻害する能力を、結合酵素アッセイを用いて評価した。このアッセイでは、ヒトＫＬＫ５をヒトｐｒｏ－ＫＬＫ７とインキュベートして、切断、ＫＬＫ７プロドメインの放出、及びＫＬＫ７の活性化を得る。活性化されたヒトＫＬＫ７は、ＫＬＫ７特異的基質Ｓｕｃ－ＬＬＶＹ－ＡＭＣをタンパク質分解し、蛍光シグナルの増加をもたらすことができる。ヒトＫＬＫ５によるｐｒｏ－ＫＬＫ７の切断は、活性ＫＬＫ７及び蛍光シグナルの増加をもたらす一方で、ＫＬＫ５の阻害又は不存在は、蛍光シグナルのクエンチをもたらした。結果は、最大ヒトＫＬＫ５活性の割合（対照％）として表した。単回の実験を二重に行った結果を図２に示す。
ペプチドベースの基質を用いたデータと同様に（図１）、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（図２Ａ）はｐｒｏ－ＫＬＫ７のＫＬＫ５活性化の強力な阻害剤であり、ＩＣ５０値は２．０７ｎＭであった。加えて、ｍＡｂ１１０８（図２Ｂ）は１．２１ｎＭのＩＣ５０値を有したが、１２の選択した抗ＫＬＫ５抗体に対するＩＣ５０値の範囲（図２Ｃ～図２Ｎ）は０．５８～１．５３ｎＭであった。ＫＬＫ５ ｐｒｏ－ＫＬＫ７結合アッセイにおいて、全ての阻害剤、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、及び抗体はＫＬＫ５活性を完全に阻害した。曲線近似から得られたＩＣ５０値を図１１に示す（カラム２）。
図３では、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗ＫＬＫ５抗体の、ｐｒｏ－ＫＬＫ１のＫＬＫ５媒介活性化を阻害する能力を、結合酵素アッセイを用いて評価した。このアッセイでは、ヒトＫＬＫ５をヒトｐｒｏ－ＫＬＫ１とインキュベートして、切断、ＫＬＫ７プロドメインの放出、及びＫＬＫ１の活性化を得る。活性化されたヒトＫＬＫ１は、ＫＬＫ１特異的基質ＰＦＲ－ＡＭＣをタンパク質分解し、蛍光シグナルの増加をもたらすことができる。ヒトＫＬＫ５によるｐｒｏ－ＫＬＫ１の切断は、活性ＫＬＫ１及び蛍光シグナルの増加をもたらす一方で、ＫＬＫ５の阻害又は不存在は、蛍光シグナルのクエンチをもたらした。結果は、最大ヒトＫＬＫ５活性の割合（対照％）として表した。単回の実験を二重に行った結果を図３に示す。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃについて計算されたＩＣ５０値（図３Ａ）は０．３２５ｎＭであり、選択された１２の抗ＫＬＫ５抗体についてのＩＣ５０値の範囲（図２Ｃ～図２Ｎ）は０．０７４～０．１５１ｎＭであった。Ｓｐｉｎｋ０．ＳＲＥ．Ｆｃ及び全１２の選択された抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５活性を完全に阻害したが、ｍＡｂ１１０８（図１Ｂ）はＫＬＫ５活性の約４０％の阻害のみを示した。曲線近似から得られたＩＣ５０値を図１１に示す（カラム３）。
ＩＣ５０値測定対するＬＣ／ＭＳによるＫＬＫ５由来切断ペプチド検出
組換えＫＬＫ５によるｐｒｏ－ＫＬＫ７又はｐｒｏ－ＫＬＫ１のタンパク質分解を阻害する、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗ＫＬＫ５抗体の能力を、ＫＬＫ５由来の切断産物ペプチドをモニターするＬＣ／ＭＳアッセイを用いて評価した。両方のアッセイについて、ヒトＫＬＫ５によるプロペプチドＫＬＫ７又はＫＬＫ１の切断は特異的ＭＳシグナルをもたらし、ＫＬＫ５活性の阻害はペプチドシグナルの測定可能な減少をもたらす。ｐｒｏ－ＫＬＫ７についての単一実験の結果を図４に示し、それらをプロペプチドＫＬＫ７の面積として表す。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃについて計算されたＩＣ５０値（図４Ａ）は１．１３ｎＭであり、ＭＡｂ１１０８（図４Ｂ）については１．８６ｎＭであり、１２の選択された抗ＫＬＫ５抗体についてのＩＣ５０値の範囲（図４Ｃ～図４Ｎ）は０．３１～１．７２ｎＭであった。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ及び全１２の選択された抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５活性を完全に阻害したが、ｍＡｂ１１０８（図４Ｂ）はＫＬＫ５活性の約８０％の阻害を示した。曲線近似から得られたＩＣ５０値を図１１に示す（カラム４）。図５は、ｐｒｏ－ＫＬＫ１についての３つの実験の結果を示し、それらはプロペプチドＫＬＫ１の領域として発現される。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．ＦｃについてのＩＣ５０値（図５Ａ）は０．５８ｎＭであり、ＭＡｂ１１０８（図５Ｂ）については０．３４ｎＭであり、１２の選択された抗ＫＬＫ５抗体についてのＩＣ５０値の範囲（図５Ｃ～図５Ｎ）は０．０８～０．４８ｎＭであった。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ及び全１２の選択された抗ＫＬＫ５抗体は、ＫＬＫ５活性を完全に阻害したが、ｍＡｂ１１０８（図５Ｂ）はＫＬＫ５活性の約４０％の阻害のみを示した。曲線近似から得られたＩＣ５０値を図１１に示す（カラム５）。
ＫＬＫ５抗体の特異性
図１～５で特徴づけられた抗ＫＬＫ５抗体の特異性を評価するために、１２の抗ＫＬＫ５抗体を、活性化ヒトＫＬＫ７（図６）、ヒトＫＬＫ１（図７）、ヒトＫＬＫ４（図８）、及びトリプシン（図９）に対してアッセイし、特異的蛍光ペプチド基質の切断によってモニターした。これら１２の抗ＫＬＫ５抗体はＫＬＫ５と選択的に相互作用するように生成したため、これらの分子は他のＫＬＫ（図６～図９）又はトリプシン（図９）を阻害すべきではないと予想された。
図６では、ヒトＫＬＫ７による基質Ｓｕｃ－ＬＬＶＹ－ＡＭＣのタンパク質分解を阻害する、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗ＫＬＫ５抗体の能力を、酵素アッセイを用いて評価した。ヒトＫＬＫ７によるペプチド基質の切断は蛍光シグナルの増加をもたらし、ＫＬＫ７の阻害又は不存在は蛍光シグナルのクエンチをもたらした。結果は、最大ＫＬＫ７活性の割合（対照％）として表した。単回の実験を二重に行った結果を図６に示す。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（図６Ａ）及びｍＡｂ１１０８（図６Ｂ）は、最大１００ｎＭまでＫＬＫ７を阻害しなかった。図６に見られるように、１２の選択された抗ＫＬＫ５抗体（図６Ｃ～図６Ｎ）もまた、最大１００ｎＭまでＫＬＫ７活性を阻害しない。曲線近似から得られたＩＣ５０値を図１１に示す（カラム６）。
図７では、ヒトＫＬＫ１による基質ＰＦＲ－ＡＭＣのタンパク質分解を阻害する、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗ＫＬＫ５抗体の能力を、酵素アッセイを用いて評価した。ヒトＫＬＫ１によるペプチド基質の切断は蛍光シグナルの増加をもたらし、ＫＬＫ１の阻害又は不存在は蛍光シグナルのクエンチをもたらした。結果は、最大ＫＬＫ１活性の割合（対照％）として表した。単回の実験を二重に行った結果を図７に示す。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（図７Ａ）及びｍＡｂ１１０８（図７Ｂ）は、最大１００ｎＭまでＫＬＫ１を阻害しなかった。図７に見られるように、１２の選択された抗ＫＬＫ５抗体（図７Ｃ～図７Ｎ）もまた、最大１００ｎＭまでＫＬＫ１活性を阻害しない。曲線近似から得られたＩＣ５０値を図１１に示す（カラム７）。
図８では、ヒトＫＬＫ４による基質Ｂｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣのタンパク質分解を阻害する、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗ＫＬＫ５抗体の能力を、酵素アッセイを用いて評価した。ヒトＫＬＫ４によるペプチド基質の切断は蛍光シグナルの増加をもたらし、ＫＬＫ４の阻害又は不存在は蛍光シグナルのクエンチをもたらした。結果は、最大ＫＬＫ４活性の割合（対照％）として表した。単回の実験を二重に行った結果を図８に示す。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（図８Ａ）及びｍＡｂ１１０８（図８Ｂ）は、最大１００ｎＭまでＫＬＫ４を阻害しなかった。図８に見られるように、１２の選択された抗ＫＬＫ５抗体（図８Ｃ～図８Ｎ）もまた、最大１００ｎＭまでＫＬＫ４活性を阻害しない。曲線近似から得られたＩＣ５０値を図１１に示す（カラム８）。
図９では、ウシトリプシンによる基質Ｂｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣのタンパク質分解を阻害する、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗体の能力を、酵素アッセイを用いて評価した。トリプシンによるペプチド基質の切断は蛍光シグナルの増加をもたらし、トリプシンの阻害又は不存在は蛍光シグナルのクエンチをもたらした。結果は、最大トリプシン活性の割合（対照％）として表した。単回の実験を二重に行った結果を図９に示す。Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ（図９Ａ）及びｍＡｂ１１０８（図９Ｂ）は、最大１００ｎＭまでトリプシンを阻害しなかった。図９に見られるように、１２の選択した抗体（図９Ｃ～図９Ｎ）もまた、最大１００ｎＭまでトリプシン活性を阻害しない。曲線近似から得られたＩＣ５０値を図１１に示す（カラム９）。
まとめると、ＫＬＫ７（図６及び表６）、ＫＬＫ１（図７及び表７）、ＫＬＫ４（図８及び表８）、及びトリプシン（図９及び表９）を用いたこれらの試験は、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ，ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗体が特異的に相互作用し、ＫＬＫ５活性のみを阻害することを示している。
Ｋｉａｐｐによる抗体の順位
直接アッセイ（図１）又は結合アッセイ（図２～図５）のいずれかにおける１２の選択した抗体の特徴付けでは、選択された抗体が、ＫＬＫ５についてＳｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃと同様の、又はより大きな阻害効力を有することが観察された。しかしながら、いくつかの抗体は、各アッセイにおいて類似のＩＣ５０値を有するため（表１～表５）、抗体の効力を順位付けることが困難になっている。
図１０では、種々の濃度においてヒトＫＬＫ５による基質ｚ－ＶＰＲ－ｐＮＡのタンパク質分解を阻害する、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、ｍＡｂ１１０８、又は１２の選択した抗体の能力を、酵素アッセイを用いて評価した。このアッセイでは、三量体発色性ペプチド基質は、末端アミノ酸によりクエンチされるｐ－ニトロアニリド（ｐＮＡ）基を含有する。ＫＬＫ５による発色性ペプチド基質の切断は４０５ｎｍでの光吸収の増加をもたらし、ＫＬＫ５の阻害又は不存在は４０５ｎｍでの低光吸収をもたらした。結果は、最大ＫＬＫ５活性の割合（対照％）として表した。
種々のＫＬＫ５濃度におけるＳｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．ＦｃのＩＣ５０値（図１０Ａ）を決定し、Ｋｉａｐｐ値をｙ切片として決定したＫＬＫ５濃度の関数（図１０Ｂ）としてプロットする。この分析から、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．ＦｃのＫｉａｐｐ値は１．２８ｎＭである。この分析はまた、１．５３ｎＭのＫｉａｐｐ値を有するｍＡｂ１１０８（図１０Ｃ～図１０Ｄ）、及び０．０１ｎＭ未満～６．３５ｎＭのＫｉａｐｐ値の範囲を有する１２の選択した抗体（図１０Ｅ～図１０ＡＢ）についても、実施された。この分析から得られたＫｉａｐｐ値を図１１に示す（カラム１０）。
実施例４－Ｗａｓａｔｃｈによる動態解析及びエピトープビニング
最も強力な抗体のサブセットについてのヒトＫＬＫ５に対するエピトープビニング及びオフ速度の結果を、表４に示す。様々なレベルの結合が、マウス及びカニクイザルＫＬＫ５について観察された。重要なことに、ヒトＫＬＫ１、ヒトＫＬＫ４、又はヒトＫＬＫ７に対する結合は観察されず、これらの抗体が特異的であることが確認された。８Ｅ１１及び８Ｇ１０を除くほとんどのクローンは、ヒトＫＬＫ５への結合についてＳＰＩＮＫ９と競合し、ＳＰＩＮＫ９で同じエピトープ（すなわち、活性部位）に結合するか、又はＳＰＩＮＫ９がもはや結合できないようにヒトＫＬＫ５をアロステリックに改変するかのいずれかであることを示唆する。
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実施例５－水素交換質量分析法によるエピトープマッピング
本明細書中で完了した水素交換測定は、主鎖アミド残基に結合したプロトンと溶媒分子に結合したプロトンとの交換を測定する。プロトン化された（１Ｈ）試料を重溶媒に希釈すると、プロトンと重陽子との質量の差を質量分析で測定することができる。重溶媒（２Ｈ２Ｏ）中で一連のインキュベーション時間を増加させる際、交換速度を測定することができる。このようにして、３つの別個の実験を介して３つの抗ＫＬＫ５抗体（１０Ｃ５、１０Ｈ３、及び９Ｈ５）のうちの１つに複合されたＫＬＫ５（配列番号３５３）を測定し、次いで、ＫＬＫ５単独で実験を行って得られた結果と比較した。その後、質量差の示差的分析を行い、重複するペプチドを利用して、全３つの抗ＫＬＫ５抗体（１０Ｃ５、１０Ｈ３、及び９Ｈ５）間で共有される共通の熱力学的エピトープ上を絞り込んだ（図１２Ａ）。用語「熱力学的エピトープ」とは、その主鎖構造動力学又はアンフォールディングの局所自由エネルギーが、抗体に結合するようになるなどの特異的結合事象に応答して変化する、タンパク質のそれらの部分を指す。構造エピトープは、熱力学的エピトープ内に含まれていてもよい。
データの解釈にはＮ－２の法則を用いたため、各ペプチドは後方交換により最初の２つの部位に重水素を運ぶことができなかった。さらに、多くのユニークな重複ペプチドが存在する場合、この情報を用いて、各ペプチド内の影響を受ける残基を絞り込むことができる。間に共通の熱力学的エピトープを含むことが同定されたＫＬＫ５の４つの配列領域は、ＬＲＰＮＱＬ（図１２Ｂ、領域１）、ＱＧＶＫＳＩ（図１２Ｂ、領域２）、ＫＲＣＥＤＡＹＰＲＱＩＤＤＴ（図１２Ｂ、領域３）、及びＤＹＰＣＡＲＰＮＲＰＧＶＹ（図１２Ｂ、領域４）であり、試験された全３つの抗体の間の共通する構造エピトープがこれらの領域内に含まれる。
前述の発明は、明確な理解のために例証及び例によっていくらか詳細に記載されているが、説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示は、その全体が参考として明示的に組み込まれる。
実施例６－細胞に基づくＩＬ－８分泌アッセイにおけるＫＬＫ５阻害剤ＩＣ５０値の評価
ＫＬＫ５はＡ５４９細胞を刺激してＩＬ－８を分泌させる。ＫＬＫ５誘導ＩＬ－８分泌を阻害する、Ｓｐｉｎｋ５．Ｆｃ、Ｓｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃ、又はヒト化抗ＫＬＫ５抗体３－３Ｆ５、９Ｈ５、若しくは１０Ｃ５の能力を、Ａ５４９細胞に基づくＩＬ－８分泌アッセイで評価した。このアッセイでは、血清欠乏Ａ５４９細胞を、２００ｎＭのＫＬＫ５で２４時間刺激した（ＫＬＫ５単独又はＫＬＫ５を阻害剤と１時間プレインキュベート）。ＩＬ－８濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡで測定し、阻害剤のＩＣ５０を測定した。結果は最大ＫＬＫ５活性の割合として表され、少なくとも３つの独立した実験の平均値＋標準偏差が図１７に示される。全ての阻害剤は、ＫＬＫ５誘導ＩＬ－８分泌を緩衝液単独（飢餓培地）のレベルの５％以内で完全に阻害した。これはアッセイの誤差内であった。全ての阻害剤はＫＬＫ５誘導ＩＬ－８分泌の強力な阻害を示し、少なくとも３つの独立した実験に対する平均ＩＣ５０は以下の通りであった：Ｓｐｉｎｋ５．Ｆｃ（２１ｎＭ）、１０Ｃ５（２８ｎＭ）、９Ｈ５（１５ｎＭ）、３－３Ｆ５（１．２ｎＭ）。ＫＬＫ５を３６０ｎＭのＳｐｉｎｋ９．ＳＲＥ．Ｆｃとインキュベートした場合に観察される残存性は、２％である（データ示さず）。
実施例７－ヒトＫＬＫ５に結合した、１０Ｃ５、９Ｈ５、及び３－３Ｆ５の構造
本明細書に記載する結晶構造実験では、ヒトＫＬＫ５残基Ｉ６７－Ｓ２９３（配列番号３２８）を使用した。この実施例７で使用したヒトＫＬＫ５のアミノ酸残基のナンバリング、並びに対応する図１８～図２０及び表５～表１３に示すようなナンバリングは、プロテアーゼの標準的なナンバリングに基づいている。Ｄｅｂｅｌａら、「Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ」、第３７３巻第１０１７～１０３１頁（２００７年）を参照されたい。この実施例７で使用したＦａｂ断片のアミノ酸残基のナンバリング、並びに対応する図１８～図２０及び表５～表１３に示すようなナンバリングは、Ｋａｂａｔに基づいている。
ヒトＫＬＫ５に結合した１０Ｃ５の構造
１０Ｃ５ Ｆａｂ／ＫＬＫ５複合体構造は、１０Ｃ５のＫＬＫ５への結合が立体構造変化をもたらし、その結果、基質結合部位及び触媒三残基を含むＫＬＫ５の活性部位の破壊をアロステリックにもたらし、プロテアーゼが基質に結合できなくなり、活性を失うことを示す。１０Ｃ５ Ｆａｂによって認識されるＫＬＫ５の最も特徴的な要素は、残基１６３～１７４Ａを包含するヘリックスである。残基１７３～１７４Ａで構成されるヘリックスのすぐ後のループ／ターンは、抗体結合によってフリップアップされ、その結果、ペプチドを切断する活性部位における触媒三残基の位置決定と同様に、基質結合にとって重要である２２０ｓループ及び９０ｓループ中の残基（標準的プロテアーゼ表示法）との立体衝突を生じる（図１８Ａ）。
ＫＬＫ５と１０Ｃ５ Ｆａｂとの間の埋没表面積（埋没表面積）は、約８６０Å２である。１０Ｃ５ Ｆａｂ軽鎖において、ＣＤＲ－Ｌ１では、残基Ｑ２４～Ｓ３４は、ＫＬＫ５中の残基Ｓ１３１、Ａ１３２、Ｓ１６４、及びＲ１６７と接触し、ＣＤＲ－Ｌ２由来のＹ５０はＫＬＫ５中のＲ１６７と接触し、ＣＤＲ－Ｌ３は、ＫＬＫ５中のＡ１３２、Ｌ１６３、Ｓ１６４、Ｑ１６５、Ｋ１６６、Ｅ１６９、Ｉ１７６、Ｄ１７７、及びＤ１７８と接触する。１０Ｃ５重鎖において、ＣＤＲＨ１では、残基Ｓ３１～Ｔ３５はＫＬＫ５中のＤ１７０とのみ接触し、ＣＤＲＨ２では、残基Ｙ５０～Ａ６３は、ＫＬＫ５中の残基Ｋ１６６、Ｅ１６９、Ｄ１７０、Ａ１７１、Ｙ１７２、Ｐ１７３、Ｒ１７４、Ｑ１７４Ａ、及びＩ１７６と接触し、ＣＤＲＨ３では、Ｅ９５－Ｙ１００ｃは、ＫＬＫ５中の残基Ｓ１６４、Ｋ１６６、Ｒ１６７、及びＤ１７０と接触する（表５～表７、図１８Ｂ）。
ヒトＫＬＫ５を用いた結晶化に使用される１０Ｃ５ Ｆａｂ ＨＣ及びＬＣの配列は、それぞれ、配列番号３２２及び配列番号３２３で示される。
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ヒトＫＬＫ５に結合した９Ｈ５の構造
９Ｈ５ Ｆａｂ／ＫＬＫ５複合体構造は、１０Ｃ５ Ｆａｂと同様に、９Ｈ５のＫＬＫ５への結合が立体構造変化をもたらし、その結果、基質結合部位及び触媒三残基を含むＫＬＫ５の活性部位のアロステリックな破壊をもたらし、プロテアーゼが基質に結合できなくなり、活性を失うことを示す。９Ｈ５ Ｆａｂによって認識されるＫＬＫ５の最も特徴的な要素は、残基１６３～１７４Ａを包含するヘリックスである。残渣１７３～１７４Ａで構成されるヘリックスのすぐ後のループ／ターンは、抗体結合によってフリップアップされ、その結果、ペプチドを切断する活性部位における触媒三残基の位置決定と同様に、基質結合にとって重要である２２０ｓループ及び９０ｓループ（標準プロテアーゼ表示法）における残基との立体衝突を生じる。１０Ｃ５結合ＫＬＫ５と比較すると、全体としてＫＬＫ５タンパク質の多くは９Ｈ５：ＫＬＫ５複合体結晶構造で無秩序化しており、Ｆａｂ結合及び誘導された立体構造変化の直接の結果であると思われる（図１９Ａ）。
ＫＬＫ５と９Ｈ５ Ｆａｂとの間の埋没表面積（埋没表面積）は、８０５Å２である。９Ｈ５軽鎖において、ＣＤＲＬ１では、残基Ｑ２４～Ｓ３４は、ＫＬＫ５中の残基Ｓ１３１、Ａ１３２、Ｇ１３３、Ｌ１６３、Ｓ１６４、Ｒ１６７と接触し、ＣＤＲＬ２では、残基Ｓ５０～Ｓ５６はＫＬＫ５中のいかなる残基とも接触せず、ＣＤＲＬ３では、残基Ｈ８９～Ｔ９７は、ＫＬＫ５中の残基Ａ１３２、Ｓ１６４、Ｑ１６５、Ｋ１６６、Ｅ１６９、Ｑ１７４Ａ、Ｉ１７６、及びＤ１７７と接触する。９Ｈ５重鎖において、ＣＤＲＨ１では、残基Ｓ３１～Ｓ３５はＫＬＫ５とは接触せず、ＣＤＲＨ２では、残基Ｆ５０～Ａ６３は、ＫＬＫ５中の残基Ｋ１６６、Ｅ１６９、Ｄ１７０、Ｙ１７２、Ｐ１７３、Ｒ１７４、Ｑ１７４Ａ、及びＩ１７６と接触し、ＣＤＲＨ３では、残基Ｄ９５～Ｉ１０２は、ＫＬＫ５中の残基Ｋ１６６、Ｒ１６７、及びＤ１７０と接触する（表８～表１０、図１９Ｂ）。
ヒトＫＬＫ５を用いた結晶化に使用される９Ｈ５ Ｆａｂ ＨＣ及びＬＣの配列は、それぞれ、配列番号３２４及び配列番号３２５で示される。
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ヒトＫＬＫ５に結合した３Ｆ５．５ Ｆａｂの構造
３－３Ｆ５ Ｆａｂ／ＫＬＫ５複合体構造は、３－３Ｆ５のＫＬＫ５への結合が、ＫＬＫ５との１０Ｃ５又は９Ｈ５複合体で観察されるほど劇的ではないが、わずかな立体構造変化をもたらすことを示す。基質認識ポケットが変化し、ここではＫＬＫ５中のＡｓｐ１８９（これは塩橋を形成することによって、タンパク質分解の前に正に荷電したＰ１残基（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）を認識する）が無秩序になる。ＫＬＫ５の触媒三残基はインタクトなように見えるが、Ｆａｂ結合は触媒ポケットをより開放させて、ＫＬＫ５の触媒活性を失わせる。１４０ｓループ及び７０ｓループは結晶構造中において無秩序である（図２０Ａ）。
ＫＬＫ５と３Ｆ５．５ Ｆａｂとの間の埋没表面積は、９５６Å２である。３－３Ｆ５軽鎖において、ＣＤＲＬ１では、残基Ｑ２４～Ａ３４は、ＫＬＫ５中のＳ１３１、Ａ１３２、及びＧ１３３と接触し、ＣＤＲＬ２では、残基Ｄ５０～Ｓ５６はＫＬＫ５中のいかなる残基とも接触せず、ＣＤＲＬ３では、残基Ｑ８９～Ｉ９７は、ＫＬＫ５中の残基Ｓ１６４、Ｑ１６５、Ｋ１６６、及びＥ１６９と接触する。３Ｆ５．５重鎖において、ＣＤＲＨ１では、残基Ｄ３１～Ｅ４６はＫＬＫ５と全く相互作用せず、ＣＤＲＨ２でも相互作用せず、ＣＤＲＨ３では、残基Ｄ９５～Ｇ１００ｉは、ＫＬＫ５中の残基Ｌ１６３、Ｓ１６４、Ｋ１６６、Ｒ１６７、Ｄ１７０、Ｇ１８４、Ｄ１８５、Ｋ１８６、Ａ１８７、Ｎ２２４、Ｒ２２５、及びＰ２２５と接触する（表１１～表１３、図２０Ｂ）。
ヒトＫＬＫ５を用いた結晶化に使用される３－３Ｆ５ Ｆａｂ ＨＣ及びＬＣの配列は、それぞれ、配列番号３２６及び配列番号３２７で示される。
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Claims (34)

  1. ＫＬＫ５に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、
    （ｉ） （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３５～３７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｉｉ） （ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号４２～４４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、又は
    （ｉｉｉ） （ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号４８～５３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
    を含む、抗体。
  2. 前記抗体が、
    （ｉ） （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｉｉ） （ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、又は
    （ｉｉｉ） （ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
    を含む、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記抗体が、（ａ）配列番号２０２のＶＨ配列及び配列番号１４０のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２５のＶＨ配列及び配列番号１５１のＶＬ配列、又は（ｃ）配列番号２５７のＶＨ配列及び配列番号１６２のＶＬ配列を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
  4. 前記抗体が、（ａ）配列番号２０１のＶＨ配列及び配列番号１３９のＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２１のＶＨ配列及び配列番号１４９のＶＬ配列、又は（ｃ）配列番号２４８若しくは配列番号２５４のＶＨ配列及び配列番号１６０のＶＬ配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
  5. 前記抗体が、（ａ）配列番号２０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１３９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｂ）配列番号２２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｃ）配列番号２４８若しくは配列番号２５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。
  6. ＫＬＫ５に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、
    （ｉ） （ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｉｉ） （ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｉｉｉ） （ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｉｖ） （ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｖ） （ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｖｉ） （ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｖｉｉ） （ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｖｉｉｉ） （ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、
    （ｉｘ） （ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、又は、
    （ｘ） （ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｃ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（ｄ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｅ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｆ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗体。
  7. 前記抗体が、配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、配列番号２２６、配列番号２２７、及び配列番号２２８からなる群から選択されるＶＨ配列と、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１５２、配列番号１５３、及び配列番号１５４からなる群から選択されるＶＬ配列と、を含む、請求項６に記載の抗体。
  8. 前記抗体が、（ａ）配列番号１７０のＶＨ配列及び配列番号１３１のＶＬ配列、（ｂ）配列番号１７１のＶＨ配列及び配列番号１３２のＶＬ配列、（ｃ）配列番号１７２のＶＨ配列及び配列番号１３３のＶＬ配列、（ｄ）配列番号２０３のＶＨ配列及び配列番号１４１のＶＬ配列、（ｅ）配列番号２０４のＶＨ配列及び配列番号１４２のＶＬ配列、（ｆ）配列番号２０５のＶＨ配列及び配列番号１４３のＶＬ配列、（ｇ）配列番号２０６のＶＨ配列及び配列番号１４４のＶＬ配列、（ｈ）配列番号２２６のＶＨ配列及び配列番号１５２のＶＬ配列、（ｉ）配列番号２２７のＶＨ配列及び配列番号１５３のＶＬ配列、又は（ｊ）配列番号２２８のＶＨ配列及び配列番号１５４のＶＬ配列を含む、請求項６又は７に記載の抗体。
  9. 前記抗体が、（ａ）配列番号１７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｂ）配列番号１７１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１３２のアミノ酸配列少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｃ）配列番号１７２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｄ）配列番号２０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｅ）配列番号２０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｆ）配列番号２０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｇ）配列番号２０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１４４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｈ）配列番号２２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１５２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、（ｉ）配列番号２２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｊ）配列番号２２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列及び配列番号１５４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む、請求項６～８のいずれか一項に記載の抗体。
  10. 前記抗体が、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４である、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  11. 前記抗体が、組換えＫＬＫ５直接活性アッセイ、結合ｐｒｏ－ＫＬＫ１蛍光ペプチドアッセイ、結合ｐｒｏ－ＫＬＫ７蛍光ペプチドアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ１ ＬＣ／ＭＳアッセイ、ｐｒｏ－ＫＬＫ７ ＬＣ／ＭＳアッセイ、及びＫｉ（ａｐｐ）アッセイからなる群から選択される１つ以上の方法によって測定されるように、前記ＫＬＫ５の生物活性を少なくとも５０％阻害する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
  12. 前記生物活性が、ＫＬＫ５のセリンプロテアーゼ活性である、請求項１１に記載の抗体。
  13. 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体。
  14. 前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体。
  15. 前記抗体が、ＫＬＫ５に結合する抗体断片である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体。
  16. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
  17. 請求項１６に記載の核酸を含む、宿主細胞。
  18. 抗体が産生されるように、請求項１７に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
  19. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体を含む、免疫複合体。
  20. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的製剤。
  21. 医薬として使用するための、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体。
  22. ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎、及び酒さからなる群から選択される疾患の治療に使用するための、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体。
  23. 前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息（ａｓｐｉｒｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ／ｅｘａｃｅｒｂａｔｅｄ ａｓｔｈｍａ）、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される、請求項２２に記載の抗体。
  24. 前記喘息が、ＴＨ２低値喘息である、請求項２３に記載の抗体。
  25. ＫＬＫ５の生物活性の阻害に使用するための、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体。
  26. 医薬の製造における、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体の使用。
  27. 前記医薬が、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎、及び酒さからなる群から選択される疾患の治療のためのものである、請求項２６に記載の使用。
  28. 前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される、請求項２７に記載の使用。
  29. 前記喘息が、Ｔｈ２低値喘息である、請求項２８に記載の使用。
  30. ＫＬＫ５の生物活性を阻害するための医薬の製造における、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体の使用。
  31. 有効量の、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体を含む、疾患を有する個体を治療するための医薬であって、前記疾患が、ネザートン症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、好酸球性食道炎、及び酒さからなる群から選択される、医薬。
  32. 前記喘息が、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、運動誘発喘息、アスピリン感受性／増悪喘息、軽度の喘息、中等度～重度の喘息、コルチコステロイド未治療喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、Ｔヘルパーリンパ球２型（Ｔｈ２）喘息若しくは２型（Ｔｈ２）高値喘息又は２型（Ｔ２）駆動喘息、好酸球性喘息、高ペリオスチン喘息、高好酸球性喘息、Ｔｈ２低値喘息又は非Ｔｈ２駆動喘息、低ペリオスチン喘息、及び低好酸球性喘息からなる群から選択される、請求項３１に記載の医薬。
  33. 前記喘息が、Ｔｈ２低値喘息である、請求項３２に記載の医薬。
  34. 有効量の、請求項１～１１及び１３～１５のいずれか一項に記載の抗体を含む、個体におけるＫＬＫ５の生物活性を阻害するための医薬であって、
    前記生物活性は、ＫＬＫ５のセリンプロテアーゼ活性である、医薬。
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