JP7273204B2

JP7273204B2 - 眼科疾患の処置

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Publication number: JP7273204B2
Application number: JP2022000341A
Authority: JP
Inventors: ウェイカート，ロバート・ジェームズ; オズボーン，アーロン; サーニ，ジャヤシュリー
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2018-02-06
Filing date: 2022-01-05
Publication date: 2023-05-12
Anticipated expiration: 2039-02-05
Also published as: IL276383B2; JP2022046738A; CN111699004A; JP7005772B2; TW202000700A; AU2019219004A1; JP7646727B2; TW202419464A; WO2019154776A1; CN119733046A; US20210139576A1; KR20240093772A; KR20200119274A; JP2023099094A; IL276383B1; MX2020007527A; IL276383A; SG11202006712XA; CA3088355A1; JP2021506947A

Description

本発明は、眼科疾患の処置のための、ＶＥＧＦとＡＮＧ２とに結合する抗体の使用に関する。

発明の背景
血管形成は、固形腫瘍、眼内新生血管症候群、例えば増殖網膜症又は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、関節リウマチ、及び乾癬をはじめとする、様々な障害の発病に関与している（Folkman, J., et al., J. Biol. Chem. 267 (1992) 10931-10934; Klagsbrun, M., et al., Annu. Rev. Physiol. 53 (1991) 217-239；及びGarner, A., Vascular diseases、 Pathobiology of ocular disease, A dynamic approach, Garner, A., and Klintworth, G. K. (eds.), 2nd edition, Marcel Dekker, New York (1994), pp. 1625-1710）。

ラニビズマブ（商標名ルセンティス（登録商標））は、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））と同じ親マウス抗体に由来するモノクローナル抗体断片である。しかしながら、それは、ＶＥＧＦ－Ａに対するより強力な結合を与えるために親和性成熟されている（国際公開公報第９８／４５３３１号）。ＶＥＧＦ－Ａの全身における遮断は、特定の有害事象のリスクの増加を伴うことが知られているので、それ故、ラニビズマブは、全身への曝露及び全身毒性のリスクを低減させるために、Ｆｃ部分を欠失している。それは、加齢に関連した視力低下の一般的な病型である、「滲出」型の加齢黄斑変性（新生血管型加齢黄斑変性）を処置するために認可されている抗血管形成剤である。

角膜血管形成アッセイは、ＡＮＧ－１及びＡＮＧ－２のどちらも類似した効果を有し、ＶＥＧＦと相乗的に作用することにより、新規血管の増殖を促進することを示した（Asahara, T., et al., Circ. Res. 83 (1998) 233-40）。用量依存的な内皮応答が存在していた可能性は、ＡＮＧ－２が、インビトロにおいて高濃度で、血管形成促進性でもあり得るという観察によって持ち上がった（Kim, I., et al., Oncogene 19 (2000) 4549-52）。ＡＮＧ－２は、高濃度において、血清の枯渇によるアポトーシス中に、ＰＩ－３キナーゼ及びＡｋｔ経路を介するＴｉｅ２の活性化を通して、内皮細胞に対するアポトーシス生存因子として作用する（Kim, I., et al., Oncogene 19 (2000) 4549-52）。

「滲出」型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）及び増殖性糖尿病網膜症（ＰＤＲ）などの眼血管疾患は、それぞれ、異常な脈絡膜又は網膜の血管新生に起因する。これらの血管からの出血及び漏出は、網膜の機能障害及び視力低下を引き起し得る。他の網膜血管疾患、例えば糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、及び網膜静脈閉塞（ＲＶＯ）に続発する黄斑浮腫は、異常な網膜の漏出に起因し、これにより、網膜の腫脹及び視覚機能の障害に至る。これらの容態は、工業国における視力低下の主因である。網膜は、境界がきちんと定められた神経細胞成分、グリア細胞成分、及び血管成分の層からなり、血管増殖又は浮腫に見られるような比較的小さな障害により、かなりの視覚機能の低下が起こり得る。遺伝性網膜変性、例えば網膜色素変性症（ＲＰ）もまた、細動脈狭窄及び血管萎縮などの、血管の異常を伴う。それらに、３５００人中１人という多くの個体が罹患し、それらは、進行的な夜盲症、視野の欠失、視神経萎縮、細動脈の減弱、及び、全盲へと進行することの多い中心視野欠損によって特徴付けられる。

虚血型網膜症は、網膜血管構造の減少又は機能障害によって特徴付けられ、これは血流の低下及び低酸素症をもたらす。網膜は、新規血管を増殖させるようシグナルを発生することによって低酸素症に応答するが、これらの新規血管は通常、脆弱であり、無秩序である。視力にとって脅威の大半を作り出すのは、これらの異常な新規血管の増殖である。なぜなら、それらは、漏出する可能性があるか、出血する可能性があるか、又は瘢痕をもたらす可能性があり、これらは最終的には網膜剥離に至る可能性がある。虚血型網膜症のための現在の処置は、病的血管の増殖を止めることを探索しているが、病的血管の増殖を駆り立てる根本的な虚血には取り組んでいない。さらに、数百万人が罹患している虚血性網膜症である糖尿病網膜症の標準的な処置は、新規血管の増殖を停止しかつ中心視野を保存するために虚血組織を破壊する試みにおける、レーザーを用いた網膜の一部の破壊を含む。異常な血管増殖及び漏出の主要な促進因子である、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の機能を遮断するための戦略が使用されている。短期的には、抗ＶＥＧＦ抗体療法は視力を改善させることができるが、根本的な虚血には取り組んでおらず、事実、有益な側副血管をはじめとする、全ての血管の増殖を阻害するので、この容態を悪化させる可能性がある。また、虚血している脳、心臓、又は手足において新規血管増殖が必要とされ得る、高齢者及び／又は糖尿病患者において、これらの薬物への全身曝露には深刻な懸念がある。

発明の要約
本発明の１つの態様によると、方法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤が、眼血管疾患を患う患者の処置のために提供され、該方法は、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の有効量を患者に投与する工程を含み、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１６週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの態様は、眼血管疾患を患う患者の処置の／処置のための、このような方法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤（使用するための）であり、該方法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤（使用するための）は、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の有効量を患者に（硝子体内）投与する工程を含み、ここで、患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力に１２レター以上（１つの実施態様では、１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加がある。１つの実施態様では、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内投与される。本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患を患う患者の処置法であり、該方法は、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の有効量を患者に（硝子体内）投与する工程を含み、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力の１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加によって測定されるような、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投与後の視力の改善を示す。１つの実施態様では、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内投与される。

本発明の１つの実施態様では、ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、処置開始後それぞれ、４週間目、及び／又は８週間目、及び／又は１２週間目、及び／又は１６週間目、及び／又は２０週間目、及び／又は２４週間目に測定される。

本発明の１つの実施態様では、ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、それぞれ処置開始後、２４週間目、及び／又は２５週間目、及び／又は２６週間目、及び／又は２７週間目、及び／又は２８週間目、及び／又は２９週間目、及び／又は３０週間目、及び／又は３１週間目、及び／又は３２週間目、及び／又は３３週間目、及び／又は３４週間目、及び／又は３５週間目、及び／又は３６週間目、及び／又は３７週間目、及び／又は３８週間目、及び／又は３９週間目、及び／又は４０週間目、及び／又は４１週間目、及び／又は４２週間目、及び／又は４３週間目、及び／又は４４週間目、及び／又は４５週間目、及び／又は４６週間目、及び／又は４７週間目、及び／又は４８週間目、及び／又は４９週間目、及び／又は５０週間目、及び／又は５１週間目、及び／又は５２週間目、及び／又は５３週間目、及び／又は５４週間目、及び／又は５５週間目、及び／又は５６週間目、及び／又は５７週間目、及び／又は５８週間目、及び／又は５９週間目、及び／又は６０週間目に測定される。本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）、新生血管型加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）、非増殖性糖尿病網膜症（ＮＰＤＲ）、増殖性糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜中心静脈閉塞症に続発するか、半側網膜静脈閉塞症に続発するか又は網膜分枝静脈閉塞症に続発する黄斑浮腫、網膜炎、結膜炎、ぶどう膜炎、脈絡膜炎、眼内炎症に続発する（眼ヒストプラズマ症又は推定ヒストプラズマ症又は脈絡膜炎に続発をはじめとする）脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）；近視性脈絡膜血管新生（ｍＣＮＶ）、並びに、外傷、未熟児網膜症、及び虹彩ルベオーシス／血管新生緑内障に続発する脈絡膜血管新生の群から選択される。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）である。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）であり、ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、処置開始後、約９～１５カ月目（１つの実施態様では９～１４カ月目、１つの実施態様では９～１２カ月目）に測定される。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）であり、ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、処置開始後それぞれ、３６週間目、及び／又は３７週間目、及び／又は３８週間目、及び／又は３９週間目、及び／又は４０週間目、及び／又は４１週間目、及び／又は４２週間目、及び／又は４３週間目、及び／又は４４週間目、及び／又は４５週間目、及び／又は４６週間目、及び／又は４７週間目、及び／又は４８週間目、及び／又は４９週間目、及び／又は５０週間目、及び／又は５１週間目、及び／又は５２週間目、及び／又は５３週間目、及び／又は５４週間目、及び／又は５５週間目、及び／又は５６週間目、及び／又は５７週間目、及び／又は５８週間目、及び／又は５９週間目、及び／又は６０週間目に測定される。

これらの時点は極めて早期であり、典型的には、血管新生型加齢黄斑変性では約６～９カ月目、糖尿病黄斑浮腫では９～１２カ月目までは、最大の増加には到達しない。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）又は新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）である。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）又は新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）であり、ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、処置開始後、約９～１５カ月目に測定される（１つの実施態様では６～９カ月目、１つの実施態様では６～１２カ月目）。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）又は新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）であり、ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、処置開始後それぞれ、２４週間目、及び／又は２５週間目、及び／又は２６週間目、及び／又は２７週間目、及び／又は２８週間目、及び／又は２９週間目、及び／又は３０週間目、及び／又は３１週間目、及び／又は３２週間目、及び／又は３３週間目、及び／又は３４週間目、及び／又は３５週間目、及び／又は３６週間目、及び／又は３７週間目、及び／又は３８週間目、及び／又は３９週間目、及び／又は４０週間目、及び／又は４１週間目、及び／又は４２週間目、及び／又は４３週間目、及び／又は４４週間目、及び／又は４５週間目、及び／又は４６週間目、及び／又は４７週間目、及び／又は４８週間目、及び／又は４９週間目、及び／又は５０週間目、及び／又は５１週間目、及び／又は５２週間目、及び／又は５３週間目に測定される。

本発明の１つの実施態様では、ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２とに結合する二重特異的抗体は、ヒトＶＥＧＦに特異的に結合する第一の抗原結合部位と、ヒトＡＮＧ－２に特異的に結合する第二の抗原結合部位とを含む、二重特異的で二価の抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体であり、ここで
ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号１のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号３のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号４のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号５のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号６のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号９のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１０のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１２のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号１３のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉｉ）二重特異的抗体は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａと、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）とを含むヒトＩｇＧ１サブクラスの重鎖定常領域を含む。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患を患う患者は、抗ＶＥＧＦ抗体による処置（例えば、単独療法）を以前に受けたことがない（未処置である）。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患を患う患者は、抗ＶＥＧＦ抗体による処置（例えば、単独療法）を以前に受けたことがある。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に一定した８週間毎の（Ｑ８Ｗ）投薬計画を含む。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に一定した１２週間毎の（Ｑ１２Ｗ）投薬計画を含む。本発明の１つの実施態様では、処置開始後、一定したＱ１２Ｗの投薬計画の前に、初回の１用量のＱ８Ｗのサイクルがある。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に、安定して疾患が存在しない場合には投与間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する、投薬計画を含む。本発明の１つの実施態様では、このような投薬計画は、患者の疾患状態に応じて、患者がＱ４Ｗ又はＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬を受けることを含む。本発明の１つの実施態様では、安定して疾患が存在しないことは、
－５０μm未満増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター未満減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定され、疾患活動性は、
－５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター以上減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定される。

本発明の１つの実施態様では、眼血管疾患は加齢黄斑変性であり、加齢黄斑変性を患う患者の処置は、処置開始後に、安定して疾患が存在しない場合には投与間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する、投薬計画を含む。本発明の１つの実施態様では、このような投薬計画は、患者の疾患状態に応じて、患者がＱ４Ｗ又はＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬を受けることを含む。本発明の１つの実施態様では、安定して疾患が存在しないことは、
－５０μm未満増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター未満減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定され、疾患活動性は、
－５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター以上減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定される。

ベースラインから経時的に２４週目まで処置された糖尿病黄斑浮腫患者（未処置の患者）の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）の変化。ＶＡ２は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体ＲＯ６８６７４６１（６．０mg又は１．５mgの用量が硝子体内に投与される）を指し、ＲＢＺはラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））（０．３mgの用量が硝子体内に投与される）を指す。スペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤＯＣＴ）によって測定される中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）。ベースラインから経時的に２４週目まで処置された糖尿病黄斑浮腫患者（未処置の患者）の中心窩領域網膜厚の変化。配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体ＲＯ６８６７４６１（６．０mg又は１．５mgの用量が硝子体内に投与される）を、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））（０．３mgの用量が硝子体内に投与される）と比較した。５レター以上減少した最高矯正視力と５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚の両方によって評価される疾患活動性に基づいて、必要とされる再処置までの時間（投薬が停止された後（２０週間後又は６カ月間毎の用量＝最後の硝子体内（ＩＶＴ）投与後の時間））。配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体ＲＯ６８６７４６１（６．０mg又は１．５mgの用量が硝子体内に投与される）を、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））（０．３mgの用量が硝子体内に投与される）と比較した。公表されている結果に基づいた、糖尿病黄斑浮腫の他の処置選択肢との図による比較（比較する薬剤ルセンティス（登録商標）（ラニビズマブ）、アイリーア（登録商標）（アフリベルセプト）、ブロルシズマブ、及びＶＡ２（ＲＯ６８６７４６１／ＲＧ７７１６））。新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）患者における１２週間間隔及び１６週間間隔で投与される、二重特異的抗体ＲＯ６８６７４６１の評価のための治験設計の概観。二重特異的抗体ＲＯ６８６７４６１（配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む）（６．０mgが１２週間間隔及び１６週間間隔で硝子体内に投与される）と、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））（０．３mgの用量が４週間間隔で硝子体内に投与される）を比較した、新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）患者のベースラインからの最高矯正視力の増加。二重特異的抗体ＲＯ６８６７４６１（配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む）（６．０mgが硝子体内に１２週間間隔及び１６週間間隔で投与される）と、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））（０．３mgの用量が４週間間隔で硝子体内に投与される）を比較した、新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）患者のベースラインの中心窩領域網膜厚（ＯＣＴを介して測定される）の変化。

発明の詳細な説明
本発明の１つの態様によると、眼血管疾患を患う患者の処置法が提供され、該方法は、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の有効量を患者に投与する工程を含み、
該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患を患う患者の処置法であり、該方法は、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の有効量を患者に投与する工程を含み、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力に１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加がある。１つの実施態様では、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患を患う患者の処置法であり、該方法は、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の有効量を患者に投与する工程を含み、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力の１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加によって測定されるような、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投与後の視力の改善を示す。１つの実施態様では、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様では、ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、処置開始後それぞれ、２４週間目、及び／又は２５週間目、及び／又は２６週間目、及び／又は２７週間目、及び／又は２８週間目、及び／又は２９週間目、及び／又は３０週間目、及び／又は３１週間目、及び／又は３２週間目、及び／又は３３週間目、及び／又は３４週間目、及び／又は３５週間目、及び／又は３６週間目、及び／又は３７週間目、及び／又は３８週間目、及び／又は３９週間目、及び／又は４０週間目、及び／又は４１週間目、及び／又は４２週間目、及び／又は４３週間目、及び／又は４４週間目、及び／又は４５週間目、及び／又は４６週間目、及び／又は４７週間目、及び／又は４８週間目、及び／又は４９週間目、及び／又は５０週間目、及び／又は５１週間目、及び／又は５２週間目、及び／又は５３週間目、及び／又は５４週間目、及び／又は５５週間目、及び／又は５６週間目、及び／又は５７週間目、及び／又は５８週間目、及び／又は５９週間目、及び／又は６０週間目に測定される。本発明の１つの実施態様では、ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、処置開始後それぞれ、４５週間目、及び／又は４６週間目、及び／又は４７週間目、及び／又は４８週間目、及び／又は４９週間目、及び／又は５０週間目、及び／又は５１週間目、及び／又は５２週間目、及び／又は５３週間目、及び／又は５４週間目、及び／又は５５週間目、及び／又は５６週間目、及び／又は５７週間目、及び／又は５８週間目、及び／又は５９週間目、及び／又は６０週間目に測定される。

本発明の１つの実施態様では、前記方法は、再処置までの時間を延長するために及び／又は視力低下までの時間を延長するために使用され、前記二重特異的抗体を用いての再処置は、
（１つの実施態様ではスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）を使用して）５０μm以上の中心窩領域網膜厚の増加；及び／又は
５レター以上の最高矯正視力（ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳ）の減少
として決定された疾患活動性の場合に投与される。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患の処置に使用するための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体であり、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患を患う患者の処置に使用するための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体であり、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力に１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加がある。１つの実施態様では、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患を患う患者の処置に使用するための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体であり、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力の１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加によって測定されるような、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の（硝子体内）投与後の視力の改善を示す。１つの実施態様では、二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様では、ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、処置開始後それぞれ、４５週間目、及び／又は４６週間目、及び／又は４７週間目、及び／又は４８週間目、及び／又は４９週間目、及び／又は５０週間目、及び／又は５１週間目、及び／又は５２週間目、及び／又は５３週間目、及び／又は５４週間目、及び／又は５５週間目、及び／又は５６週間目、及び／又は５７週間目、及び／又は５８週間目、及び／又は５９週間目、及び／又は６０週間目に測定される。

本発明の１つの実施態様では、このような二重特異的抗体（使用するための）は、再処置までの時間を延長するために及び／又は視力低下までの時間を延長するために使用され、ここで、該二重特異的抗体を用いての再処置は、
（１つの実施態様ではスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）を使用して）５０μm以上の中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）の増加；及び／又は
５レター以上の最高矯正視力（ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳ）の減少
として決定された疾患活動性の場合に投与される。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患の処置に使用するための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体を含む医薬品又は医薬製剤であり、ここで、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患を患う患者の処置に使用するための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体を含む医薬品又は医薬製剤であり、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力に１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加がある。１つの実施態様では、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患を患う患者の処置に使用するための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体を含む医薬品又は医薬製剤であり、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力の１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加によって測定されるような、二重特異的抗ＶＥＧＦ/ＡＮＧ２抗体の（硝子体内）投与後の視力の改善を示す。１つの実施態様では、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様では、このような医薬品又は医薬製剤は、再処置までの時間を延長するために及び／又は視力低下までの時間を延長するために使用され、ここで、二重特異的抗体を用いての再処置は、
（１つの実施態様ではスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）を使用して）５０μm以上の中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）の増加；及び／又は
５レター以上の最高矯正視力（ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳ）の減少
として決定された疾患活動性の場合に投与される。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患の処置に使用するための医薬品の製造のための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の使用であり、ここで、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患の処置に使用するための医薬品の製造のための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の使用であり、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力に１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加がある。１つの実施態様では、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様は、眼血管疾患の処置に使用するための医薬品の製造のための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の使用であり、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力の１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加によって測定されるような、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の（硝子体内）投与後の視力の改善を示す。１つの実施態様では、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

本発明の１つの実施態様では、医薬品は、再処置までの時間を延長するために及び／又は視力低下までの時間を延長するために使用され、ここで、該二重特異的抗体を用いての再処置は、
（１つの実施態様ではスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）を使用して）５０μm以上の中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）の増加；及び／又は
５レター以上の最高矯正視力（ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳ）の減少
として決定された疾患活動性の場合に投与される。

１つの実施態様では、このような方法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤における最高矯正視力の決定は、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）プロトコールに適応させた視力表に基づき、４メートルの距離から開始して評価される。

このような方法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤は、初回量（「処置開始」）を投与し、続いて、２回目の１用量以上の治療有効量の二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤を順次投与することを含み得る（例えば、３～７カ月間毎の投与；１つの実施態様では処置開始は３～４カ月間毎の投与を含み、１つの実施態様では処置開始は４～５カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では処置開始は４～６カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では処置開始は少なくとも４カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では処置開始は５～７カ月間毎の投与を含み、１つの実施態様では処置開始は６カ月間毎の投与を含む）。

本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、（処置開始後）１０～１２週間毎に投与される。

本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、（処置開始後）１１～１３週間毎に投与される。

本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、（処置開始後）１２～１４週間毎に投与される。

本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、（処置開始後）１３～１５週間毎に投与される。

本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、（処置開始後）１４～１６週間毎に投与される。

本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、（それぞれ、処置開始後）１０～１１週間毎、又は１１～１２週間毎、又は１２～１３週間毎、又は１３～１４週間毎、又は１４～１５週間毎、又は１５～１６週間毎に投与される。

本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、（それぞれ、処置開始後）１０週間毎、又は１１週間毎、又は１２週間毎、又は１３週間毎、又は１４週間毎、又は１６週間毎に投与される。

本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、（各処置において）約５～７mgの用量で投与される。１つの実施態様では、二重特異的抗体は、（各処置において）６mg＋/－１０％の用量で投与される。１つの実施態様では、二重特異的抗体は、（各処置において）約６mgの用量で投与される（１つの実施態様では、（各処置において）６mgの用量で）。

本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、約３０mg/mlの二重特異的抗体の濃度で投与される。本発明の１つの実施態様では、二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、約１２０mg/mlの二重特異的抗体の濃度で投与される。

「眼血管疾患」及び「血管性眼疾患」という用語は、本明細書において同義語として使用され、糖尿病網膜症、糖尿病黄斑浮腫、未熟児網膜症、血管新生緑内障、網膜静脈（分枝）閉塞症、中心網膜静脈閉塞症、黄斑変性、加齢黄斑変性、網膜色素変性症、網膜血管腫状増殖、黄斑部毛細血管拡張症、虚血性網膜症、虹彩血管新生、眼内血管新生、角膜血管新生、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、及び網膜変性などの、眼内血管新生症候群を含むがこれらに限定されない（Garner, A., Vascular diseases, In: Pathobiology of ocular disease, A dynamic approach, Garner, A., and Klintworth, G.K., (eds.), 2nd edition, Marcel Dekker, New York (1994), pp. 1625-1710）。本明細書において使用する眼血管障害は、新規血管の変化した又は制御不能な増殖、及び網膜又は角膜などの眼組織構造への侵入によって特徴付けられる、あらゆる病状を指す。１つの実施態様では、眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）、新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）、非増殖性糖尿病網膜症（ＮＰＤＲ）、増殖性糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜中心静脈閉塞症に続発するか、半側網膜静脈閉塞症に続発するか又は網膜分枝静脈閉塞症に続発する黄斑浮腫、網膜炎、結膜炎、ぶどう膜炎、脈絡膜炎、眼内炎症に続発する（眼ヒストプラズマ症又は推定ヒストプラズマ症又は脈絡膜炎の続発をはじめとする）脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）；近視性脈絡膜血管新生（ｍＣＮＶ）、並びに、外傷、未熟児網膜症、及び虹彩ルベオーシス／血管新生緑内障に続発する脈絡膜血管新生、並びに、他の眼科疾患（眼疾患又は眼障害が、眼血管新生、血管漏出、及び／又は網膜浮腫を伴っている）からなる群より選択される。よって、本明細書に記載の使用及び方法のための抗ＶＥＧＦ/ＡＮＧ２二重特異的抗体は、滲出型加齢黄斑変性、新生血管型加齢黄斑変性、嚢胞様黄斑浮腫、糖尿病黄斑浮腫、非増殖性糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、およびぶどう膜炎、また好ましくは滲出型加齢黄斑変性、新生血管型加齢黄斑変性、また好ましくは糖尿病黄斑浮腫、嚢胞様黄斑浮腫、非増殖性糖尿病網膜症、及び増殖性糖尿病網膜症、及びまた特に滲出型加齢黄斑変性の予防及び治療に有用である。いくつかの実施態様では、眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）、新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）、（糖尿病）黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、未熟児網膜症、及び糖尿病網膜症からなる群より選択される。

角膜の血管新生に関連した（又は、角膜の血管新生の原因となり得る）他の疾患／容態としては、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズによる代謝障害、アトピー性角膜炎、上方輪部角膜炎、翼状片、乾性角膜炎、シェーグレン症候群、酒さ性ざ瘡、フクテリン症、梅毒、マイコバクテリア感染症、脂肪変性、化学熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペスウイルス感染、帯状疱疹感染、原虫感染、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン周辺角膜変性、周縁角質溶解、関節リウマチ、全身性ループス、多発動脈炎、外傷、ウェゲナー肉芽腫症、強膜炎、スティーブンジョンソン病、類天疱瘡、放射状角膜切開術、及び角膜移植後拒絶反応が挙げられるがこれらに限定されない。

網膜／脈絡膜の血管新生に関連した（又は、網膜／脈絡膜の血管新生の原因であり得る）疾患／容態としては、糖尿病性網膜症、黄斑変性、鎌状赤血球貧血、類肉腫、梅毒、弾性線維性仮性黄色腫、ページェット病、静脈閉塞症、動脈閉塞症、頸動脈閉塞症、慢性ぶどう膜炎／硝子体炎、マイコバクテリア感染症、ライム病、全身性エリテマトーデス、未熟児網膜症、網膜色素変性症、網膜浮腫（黄斑浮腫を含む）、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎／脈絡膜炎を引き起こす感染症、推定眼ヒストプラズマ症、ベスト病、近視、視神経（乳頭）小窩、シュツットガルト病、毛様体扁平部炎、慢性網膜剥離、過粘稠度症候群、トキソプラスマ症、外傷、及びレーザー後合併症が挙げられるがこれらに限定されない。他の疾患としては、ルベオーシス（隅角の血管新生）に関連した疾患、及び全ての病型の増殖性硝子体網膜症を含む血管結合組織又は線維組織の異常な増殖によって引き起こされる疾患が挙げられるがこれらに限定されない。

未熟児網膜症（ＲＯＰ）は、未熟児に発症する眼の疾患である。それは網膜血管の無秩序な増殖によって引き起こされると考えられており、これにより、瘢痕及び網膜剥離が起こり得る。未熟児網膜症は軽度である場合もあり、自然に回復する場合もあるが、深刻な症例では（全）盲に至る場合もある。したがって、全ての早産の赤ちゃんは、未熟児網膜症の危険があり、出生時の非常に少ない体重は、追加のリスク因子である。酸素中毒及び相対的な低酸素症のどちらも、未熟児網膜症の発症の原因となる可能性がある。

黄斑変性は、高齢者に主に見られる病状であり、網膜の黄斑領域として知られる眼の内境界膜の中心では、剥離、萎縮、及び場合によって出血が起こる。これにより中心視野の欠損が起こる可能性があり、それは、細かい事を見ることができないか、読書することができないか、又は顔を認識することができないことを伴う。米国眼科学会によると、それは、米国において、今日、５０歳以上の人々にとって中心視野欠損（盲目）の主因である。より若年者の個体に発症するいくつかの黄斑ジストロフィーは時に、黄斑変性と称され、該用語は一般的に、加齢黄斑変性（ＡＭＤ又はＡＲＭＤ）と称される。

本明細書において使用する「加齢黄斑変性（ＡＭＤ）」は、黄斑として知られる網膜の小さな中心部分が悪化した場合の深刻な眼の容態を指す。ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤ及び新生血管型ＡＭＤを含む。滲出型ＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ、すなわちｗＡＭＤ、又は、新生血管型ＡＭＤ、すなわちｎＡＭＤとも呼ばれる）は、黄斑下の脈絡膜からの異常な血管の増殖によって特徴付けられる。これは、脈絡膜血管新生と呼ばれる。これらの血管は、血液及び液体を（下に及び）網膜に漏出し、（網膜の上昇及び）直線が波状に見える視覚の歪み、並びに、盲点及び中心視野欠損を引き起こす。これらの異常な血管は最終的に瘢痕を形成し、それにより、中心視野の恒久的な欠損が起こる。加齢黄斑変性の症状としては、視野の中心における暗くかすんだ領域；及び、消失したか又は変化した色覚が挙げられる。加齢黄斑変性は、通常の眼検査で検出することができる。黄斑変性の最も一般的な初期の兆候の１つは、網膜下の小さな黄色の沈着物であるドルーゼン、及び色素塊の存在である。

顕著な視力低下に関与する進行性加齢黄斑変性は、ドライ型及び滲出型という２つの病型を有する。ドライ型進行性加齢黄斑変性である中心部地図上萎縮は、網膜下の網膜色素上皮層の萎縮から生じ、これにより、眼の中心部における光受容体（桿体及び錐体）の減少を通した、視力の低下が引き起こされる。この容態のための処置は全く得ることができないので、高用量の抗酸化剤、ルテイン、及びゼアキサンチンと共にビタミンサプリメントが、国立眼病研究所及びその他によって、ドライ型黄斑変性の進行を緩徐化し、幾人かの患者においては視力を改善することが実証されている。

網膜色素変性症（ＲＰ）は、遺伝性眼容態の一群である。網膜色素変性症の症状の進行では、夜盲が一般的に、視野狭窄より数年間又はさらには数十年間前に起こる。網膜色素変性症を有する多くの人々は、４０代又は５０代までは法的盲にはならず、全生涯を通じていくらかの視力を保持する。その他の人々は、網膜色素変性症から完全に盲目となり、場合によっては早くも小児においてなる。網膜色素変性症の進行は、各症例において異なる。網膜色素変性症は、網膜の光受容体（桿体及び錐体）又は網膜色素上皮（ＲＰＥ）の異常により、進行的な視力の低下に至る、遺伝性障害の一群である、一種の遺伝性網膜ジストロフィーである。罹患した個体にまず、暗順応の異常又は鳥目（夜盲症）が起こり、続いて、周辺の視野の減少（視野狭窄症としても知られる）及び時には疾患の経緯の後期に中心視野の欠損が起こる。

黄斑浮腫は、良好な視力に関与する網膜の中心領域である、眼の黄斑の上又は下に、液体及びタンパク質の沈着物が集まり、網膜の肥厚及び膨潤が引き起こされる場合に起こる。膨潤は、ヒトの中心視野を歪める可能性がある。なぜなら、黄斑は、眼球の後の網膜の中心近くにあるからである。この領域は、シャープで明瞭な中心視野をもたらすことにより、視線上に直接ある形状、色、及び詳細をヒトが見ることを可能とする、緻密に詰まった錐体を保有する。嚢胞様黄斑浮腫は、嚢胞の形成を含む、一種の黄斑浮腫である。

本明細書において使用する「糖尿病黄斑浮腫」（ＤＭＥ）は、糖尿病（１型又は２型）を有する人々に発症する深刻な眼の容態を指す。黄斑浮腫は、網膜内の血管が黄斑に漏出し、眼の黄斑の上又は下に、液体及びタンパク質の沈着物が集まり、網膜の肥厚及び膨潤（浮腫）を引き起こす場合に起こる。膨潤は、ヒトの中心視野を歪める可能性がある。なぜなら、黄斑は、眼球の後の網膜の中心近くにあるからである。糖尿病黄斑浮腫の主な症状としては、かすみ目、飛蚊症、コントラスト視力の低下、複視、及び最終的な視力の低下が挙げられるがこれらに限定されない。糖尿病黄斑浮腫の病態は、通常は網膜内への液体の移動を防ぐ内側血液網膜関門が破壊され、これにより網膜組織内に液体が蓄積することが可能となること、及び網膜肥厚の存在によって特徴付けられる。糖尿病黄斑浮腫は現在、ヒトが標準視力表上の読むことができる最小の文字を測定する視力検査、疾患の兆候について調べる散瞳検査、光干渉断層計（ＯＣＴ）又はフルオレセイン血管造影法（ＦＡ）などの造影検査、及び眼内圧を測定する機器である眼圧測定からなる、眼検査中に診断される。以下の試験もまた、処置を決定するために実施される：光干渉断層計（ＯＣＴ）、フルオレセイン血管造影法、及びカラーステレオ眼底写真。糖尿病黄斑浮腫は概括的に、局所性及びびまん性という、２つの大きなカテゴリーに特徴付けられ得る。局所性の糖尿病黄斑浮腫は、黄斑内に十分な血流を有する、黄斑内における離れたかつ明確に異なる特定の漏出領域によって特徴付けられる。びまん性糖尿病黄斑浮腫は、眼の内側血液網膜関門の破壊から生じた、黄斑を囲む全毛細血管床の漏出から生じる。局所性及びびまん性の他に、糖尿病黄斑浮腫はまた、臨床検査所見に基づいて、臨床的に重要な黄斑浮腫（ＣＳＭＥ）、臨床的に重要ではない糖尿病黄斑浮腫、及び中心窩を含む中心窩に併発する糖尿病黄斑浮腫（ＣＳＭＥ－ＣＩ）に分類される。本発明は、上記のカテゴリーの糖尿病黄斑浮腫を処置する方法を含む。

最高矯正視力（ＢＣＶＡ）は、（糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して）４メートルの距離での糖尿病性網膜症早期治療研究［ＥＴＤＲＳ］プロトコールから適応させた方法を使用して、それぞれのレタースコアを出して、決定される。

疾患活動性は、例えば、ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲレタースコアの減少を介して、及び／又は、中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）（中心窩下中心厚としても知られる）としての黄斑の中心を含むスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）による黄斑肥厚を介して決定される。１つの好ましい実施態様では、中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）は、スペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）を使用して決定される。１つの好ましい実施態様では、中心窩領域網膜厚は、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定され；１つの好ましい実施態様では、中心窩領域網膜厚は、Cirrus(シーラス)（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定され；１つの実施態様では、中心窩領域網膜厚は、Topcon(トプコン)（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定され；１つの実施態様では、中心窩領域網膜厚は、Optvue(オプトビュー) （商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定される。本明細書において使用する「を患う患者」という用語は、本明細書に記載のような眼血管疾患の１つ以上の症状若しくは徴候を示す、及び／又は本明細書に記載のような眼血管疾患であると診断されたヒトを指す。「を患う患者」という用語はまた、処置前に、眼血管疾患の１つ以上の徴候、例えば、網膜血管形成、血管新生、血管漏出、中心窩の網膜肥厚、隣接する網膜の肥厚を伴う硬く黄色な中心窩の滲出液、及び少なくとも１乳頭面積の網膜肥厚（そのどの部分も、中心窩の１乳頭径以内である）、かすみ目、飛蚊症、コントラスト視力の低下、複視、及び最終的な視力の低下を示す（又は示したことがある）、例えば被験者も含み得る。

本明細書において使用する「を患う患者」という用語はまた、糖尿病黄斑浮腫若しくは加齢黄斑変性により罹りやすいか、又は、糖尿病黄斑浮腫に関連しているか若しくは加齢黄斑変性に関連しているバイオマーカーの上昇したレベルを示し得る、個体群のサブセットを含み得る。例えば、「それを必要とする被験者」は、１０年間以上糖尿病を患っているか、頻繁に高い血糖値又は高い空腹時血糖値を示す、被験者を含み得る。特定の実施態様では、「を患う患者」という用語は、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投与前又は投与時に、糖尿病を有しているか又は糖尿病と診断されている、被験者を含む。特定の実施態様では、「を患う患者」という用語は、抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投与前又は投与時に、５０歳を超える年齢である被験者を含む。いくつかの実施態様では、「を患う患者」という用語は、喫煙者である被験者、又は高血圧若しくは高コレステロールを有する被験者を含む。

本発明は、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体（又は、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体を含む医薬品又は医薬製剤）の治療有効量をそれを必要とする被験者に投与する工程を含む、眼血管疾患を治療するためであるか、予防するためであるか、又はその重症度を低減するための、方法又は二重特異的抗体（使用するための）、医薬品又は医薬製剤を含み、ここで、このような二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体を含む二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、例えば、特定の治療投薬処方計画の一部として、複数の用量で、被験者に（硝子体内）投与される。

本発明の１つの実施態様は、本明細書に記載のような処置法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤であり、ここでの眼血管疾患を患う患者は、以前に抗ＶＥＧＦ抗体による処置（例えば単独療法）を受けたことがなかった（未処置である）。

本発明の１つの実施態様は、本明細書に記載のような処置法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤であり、ここでの眼血管疾患を患う患者は、以前に抗ＶＥＧＦ抗体による処置（例えば単独療法）を受けたことがあった。

本発明の１つの実施態様は、本明細書に記載のような処置法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤であり、ここでの眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後の一定した８週間毎（Ｑ８Ｗ）の投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は、５～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は６カ月間毎の投与を含む）。

本発明の１つの実施態様は、本明細書に記載のような処置法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤であり、ここでの眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後の一定した１２週間毎（Ｑ１２Ｗ）の投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は、５～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は６カ月間毎の投与を含む）。１つの実施態様では、処置開始後、一定したＱ１２Ｗの投薬計画の前に、初回の１用量のＱ８Ｗのサイクルがある。

本発明の１つの実施態様は、本明細書に記載のような処置法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤であり、ここでの眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に、安定して疾患が存在しない場合には投与間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する、投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は３～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は３～５カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は、少なくとも４カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は４～６カ月間毎の投与を含む）。１つの実施態様では、このような投薬計画は、患者が、患者の疾患状態に応じて、Ｑ４Ｗ又はＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬を受けることを含む。１つの実施態様では、安定して疾患が存在しないことは、
－５０μm未満増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）、
－５レター未満減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定され、疾患活動性は、
－５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）、
－５レター以上減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定される。

１つの実施態様では、安定して疾患が存在しないことは、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μm未満である（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μm未満；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μm未満）
として決定され、疾患活動性は、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μmを超える（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μmを超える；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μmを超える）
として決定される。

本発明の１つの実施態様は、本明細書に記載のような処置法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤であり、ここでの眼血管疾患は加齢黄斑変性（１つの実施態様では滲出型加齢黄斑変性）であり、加齢黄斑変性（１つの実施態様では滲出型加齢黄斑変性）を患う患者の処置は、処置開始後に、安定して疾患が存在しない場合には投与間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する、投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は３～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は３～５カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は、少なくとも４カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は４～６カ月間毎の投与を含む）。１つの実施態様では、このような投薬計画は、患者が、患者の疾患状態に応じて、Ｑ４Ｗ又はＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬を受けることを含む。１つの実施態様では、安定して疾患が存在しないことは、
－５０μm未満増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター未満減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定され、疾患活動性は、
－５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター以上減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定される。

１つの実施態様では、このような方法、使用、二重特異的抗体（使用するための）、医薬品、又は医薬製剤における眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（新生血管型加齢黄斑変性）である。

本明細書において使用する「抗体」は、抗原結合部位を含む結合性タンパク質を指す。本明細書において使用する「結合部位」又は「抗原結合部位」という用語は、リガンドが実際に結合する抗体分子の領域（群）を示す。「抗原結合部位」という用語は、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（ＶＨ／ＶＬ対）を含む。

抗体特異性は、抗原の特定のエピトープに対する抗体の選択的認識を指す。天然抗体は、例えば、単一特異的である。

本発明による「二重特異的抗体」は、２つの異なる抗原結合特異性を有する抗体である。本発明の抗体は、第一抗原としてのＶＥＧＦと、第二抗原としてのＡＮＧ－２という、２つの異なる抗原に対して特異的である。

本明細書において使用する「単一特異的」抗体という用語は、その各々が、同じ抗原の同じエピトープに結合する、１つ以上の結合部位を有する、抗体を示す。

本出願内で使用されるような「価」という用語は、抗体分子内の特定の数の結合部位の存在を示す。したがって、「二価」、「四価」及び「六価」という用語は、抗体分子内における、それぞれ、２つの結合部位、４つの結合部位、及び６つの結合部位の存在を示す。本発明による二重特異的抗体は好ましくは「二価」である。

本明細書において使用する「ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）に結合する二重特異的抗体」、「二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体」及び「二重特異的＜ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２＞抗体」という用語は同義語であり、ＶＥＧＦに結合する第一の抗原結合部位と、ＡＮＧ２に結合する第二の抗原結合部位という、少なくとも２つの異なる抗原結合部位を有する抗体を指す。

二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は、例えば、国際公開公報第２０１００４０５０８号、国際公開公報第２０１１／１１７３２９号、国際公開公報第２０１２／１３１０７８号、国際公開公報第２０１５／０８３９７８号、国際公開公報第２０１７／１９７１９９号、及び国際公開公報第２０１４／００９４６５号に記載されている。国際公開公報第２０１４／００９４６５号は、眼血管疾患の処置のために特別に設計された二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体を記載している。国際公開公報第２０１４／００９４６５号（これはその全体が本明細書に組み入れられる）の二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は、本明細書に記載のような眼血管疾患の処置及び処置計画に特に有用である。

１つの実施態様では、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）に結合する二重特異的抗体は、ヒトＶＥＧＦに特異的に結合する第一の抗原結合部位と、ヒトＡＮＧ－２に特異的に結合する第二の抗原結合部位とを含む、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体であり、ここで
ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号１のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号３のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号４のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号５のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号６のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号９のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１０のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１２のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号１３のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉｉ）二重特異的抗体は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａと、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）とを含むヒトＩｇＧ１サブクラスの重鎖定常領域を含む。

１つの実施態様では、このような二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は二価である。

１つの実施態様では、このような二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は、
ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインＶＨとして配列番号７のアミノ酸配列、及び軽鎖可変ドメインＶＬとして配列番号８のアミノ酸配列を含み、
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインＶＨとして配列番号１５のアミノ酸配列、及び軽鎖可変ドメインＶＬとして配列番号１６のアミノ酸配列を含むことを特徴とする。

本発明の１つの態様では、本発明によるこのような二重特異的で二価の抗体は、
ａ）ＶＥＧＦに特異的に結合する第一の完全長の抗体の重鎖及び軽鎖；
ｂ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する第二の完全長の抗体の改変された重鎖及び改変された軽鎖（ここでの定常ドメインＣＬ及びＣＨ１は、互いに交換されている）
を含むことを特徴とする。

ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）に特異的に結合する二重特異的抗体のためのこの二重特異的で二価の抗体フォーマットは、国際公開公報第２００９／０８０２５３号に記載されている（ノブ・イントゥ・ホール型の改変されたＣＨ３ドメインを含む）。この二重特異的で二価の抗体フォーマットに基づいた抗体は、交差モノクローナル抗体（ＣｒｏｓｓＭＡｂ）と命名されている。

１つの実施態様では、このような二重特異的で二価の抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は、
ａ）第一の完全長抗体の重鎖としての配列番号１７のアミノ酸配列、及び第一の完全長抗体の軽鎖として配列番号１８のアミノ酸配列、並びに
ｂ）第二の完全長抗体の改変された重鎖としての配列番号１９のアミノ酸配列、及び第二の完全長抗体の改変された軽鎖としての配列番号２０のアミノ酸配列
を含むことを特徴とする。

１つの実施態様では、このような二重特異的で二価の抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むことを特徴とする。１つの好ましい実施態様では、二重特異的で二価の抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体はファリシマブである。

したがって、本発明の１つの実施態様は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、ヒトＶＥＧＦに特異的に結合する第一の抗原結合部位と、ヒトＡＮＧ－２に特異的に結合する第二の抗原結合部位とを含む、二重特異的で二価の抗体である。１つの好ましい実施態様では、二重特異的で二価の抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体はファリシマブである。

１つの実施態様では、本発明による二重特異的で二価の抗体のＣＨ３ドメインは、例えば、国際公開公報第９６／０２７０１１号、Ridgway J.B., et al., Protein Eng 9 (1996) 617-621；及びMerchant, A.M., et al., Nat Biotechnol 16 (1998) 677-681において数例を用いて詳述されている、「ノブ・イントゥ・ホール」技術によって改変されている。この方法では、２つのＣＨ３ドメインの相互作用表面は、これらの２つのＣＨ３ドメインを含有している両方の重鎖のヘテロ二量体化を増加させるように改変されている。（２本の重鎖の）２つのＣＨ３ドメインは各々「ノブ」となることができ、一方、他方は「ホール」である。ジスルフィド橋の導入は、ヘテロ二量体を安定化させ（Merchant, A.M, et al., Nature Biotech 16 (1998) 677-681; Atwell, S., et al. J. Mol. Biol. 270 (1997) 26-35）、収量を増加させる。

本発明の好ましい態様では、本発明による二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は、
一方の重鎖のＣＨ３ドメイン及び他方の重鎖のＣＨ３ドメインが各々、抗体のＣＨ３ドメイン間の元来の界面を含む界面において接触し；
ここで、該界面は、二重特異的抗体の形成を促進するように改変されており、ここでの改変は、
ａ）一方の重鎖のＣＨ３ドメインは改変され、
これにより、二重特異的抗体内の一方の重鎖のＣＨ３ドメインの元来の界面に接触する、他方の重鎖のＣＨ３ドメインの元来の界面内で、
アミノ酸残基が、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換され、これにより、一方の重鎖のＣＨ３ドメインの界面内に突起を生じ、これは、他方の重鎖のＣＨ３ドメインの界面内の空洞内に位置することができ、そして
ｂ）他方の重鎖のＣＨ３ドメインは改変され、
これにより、二重特異的抗体内の第一のＣＨ３ドメインの元来の界面と接触する、第二のＣＨ３ドメインの元来の界面内で、
アミノ酸残基が、より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換され、これにより、第二のＣＨ３ドメインの界面内に空洞を生じ、この中に、第一のＣＨ３ドメインの界面内の突起が位置することができる
ことを特徴とする。

したがって、本明細書に記載の使用のための二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は好ましくは、
ａ）の完全長抗体の重鎖のＣＨ３ドメイン及びｂ）の完全長抗体の重鎖のＣＨ３ドメインは各々、抗体のＣＨ３ドメイン間の元来の界面内に改変を含む、界面において接触し；
ここで、
ｉ）一方の重鎖のＣＨ３ドメインにおいて、
アミノ酸残基は、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換され、これにより、一方の重鎖のＣＨ３ドメインの界面内に突起を生じ、これは、他方の重鎖のＣＨ３ドメインの界面内の空洞内に位置することができ、そして
ｉｉ）他方の重鎖のＣＨ３ドメインにおいて、
アミノ酸残基は、より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換され、これにより、第二のＣＨ３ドメインの界面内に空洞が生じ、この中に、第一のＣＨ３ドメインの界面内の突起が位置することができる
ことを特徴とする。

好ましくは、より大きな側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）からなる群より選択される。

好ましくは、より小さな側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）からなる群より選択される。

本発明の１つの態様では、両方のＣＨ３ドメインは、各々のＣＨ３ドメインの対応する位置にアミノ酸としてのシステイン（Ｃ）の導入によってさらに改変され、これにより、両方のＣＨ３ドメイン間でジスルフィド橋を形成することができる。

１つの実施態様では、二重特異的抗体は、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｗの突然変異、及び「ホール鎖」のＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖの突然変異を含む。例えば、一方のＣＨ３ドメインにＳ３５４Ｃ突然変異を、他方のＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃ突然変異を導入することにより、ＣＨ３ドメイン間に追加の鎖間ジスルフィド橋を使用してもよい（Merchant, A.M, et al., Nature Biotech 16 (1998) 677-681）。

別の好ましい実施態様では、二重特異的抗体は、２つのＣＨ３ドメインの一方にＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗの突然変異、並びに２つのＣＨ３ドメインの他方にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖの突然変異を含む。別の好ましい実施態様では、二重特異的抗体は、２つのＣＨ３ドメインの一方にＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗの突然変異、及び２つのＣＨ３ドメインの他方にＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖの突然変異を含む（一方のＣＨ３ドメイン内の追加のＹ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃの突然変異と、他方のＣＨ３ドメイン内の追加のＳ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃの突然変異は、鎖間ジスルフィド橋を形成している）（番号付けは常にＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）（Kabat, E.A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)））。

ヘテロ二量体化を強化するＣＨ３改変のための他の技術は、本発明の代替法として考えられ、例えば、国際公開公報第９６／２７０１１号、国際公開公報第９８／０５０４３１号、欧州特許第１８７０４５９号、国際公開公報第２００７／１１０２０５号、国際公開公報第２００７／１４７９０１号、国際公開公報第２００９／０８９００４号、国際公開公報第２０１０／１２９３０４号、国際公開公報第２０１１／９０７５４号、国際公開公報第２０１１／１４３５４５号、国際公開公報第２０１２／０５８７６８号、国際公開公報第２０１３／１５７９５４号、及び国際公開公報第２０１３／０９６２９１号に記載されている。

１つの実施態様では、欧州特許第１８７０４５９Ａ１号に記載されたヘテロ二量体化アプローチが代わりに使用される。このアプローチは、両方の重鎖間のＣＨ３／ＣＨ３ドメイン内の界面の特定のアミノ酸の位置において、逆の荷電を有する、荷電アミノ酸の置換／突然変異の導入に基づく。前記の多重特異的抗体についての１つの好ましい実施態様は、多重特異的抗体の一方の重鎖のＣＨ３ドメイン内のアミノ酸Ｒ４０９Ｄ及びＫ３７０Ｅの突然変異、並びに他方の重鎖のＣＨ３ドメイン内のアミノ酸Ｄ３９９Ｋ及びＥ３５７Ｋの突然変異である（番号付けはＫａｂａｔＥＵインデックスによる）。

別の実施態様では、前記多重特異的抗体は、「ノブ鎖」のＣＨ３ドメイン内にアミノ酸Ｔ３６６Ｗの突然変異、並びに「ホール鎖」のＣＨ３ドメイン内にアミノ酸Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖの突然変異を含み、さらに「ノブ鎖」のＣＨ３ドメイン内にアミノ酸Ｒ４０９Ｄ及びＫ３７０Ｅの突然変異、並びに「ホール鎖」のＣＨ３ドメイン内にアミノ酸Ｄ３９９Ｋ及びＥ３５７Ｋの突然変異を含む。

１つの実施態様では、国際公開公報第２０１３／１５７９５３号に記載のヘテロ二量体化アプローチが代わりに使用される。１つの実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ｋの突然変異を含み、他方の重鎖のＣＨ３ドメインはアミノ酸Ｌ３５１Ｄの突然変異を含む。さらなる実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインはさらに、アミノ酸Ｌ３５１Ｋの突然変異を含む。

さらなる実施態様では、他方の重鎖のＣＨ３ドメインはさらに、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｄ、及びＬ３６８Ｅ（１つの実施態様ではＬ３６８Ｅ）から選択されたアミノ酸の突然変異を含む。

１つの実施態様では、国際公開公報第２０１２／０５８７６８号に記載のヘテロ二量体化アプローチが代わりに使用される。１つの実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインはアミノ酸Ｌ３５１Ｙ及びＹ４０７Ａの突然変異を含み、他方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ａ及びＫ４０９Ｆの突然変異を含む。さらなる実施態様では、他方の重鎖のＣＨ３ドメインはさらに、Ｔ４１１位、Ｄ３９９位、Ｓ４００位、Ｆ４０５位、Ｎ３９０位、又はＫ３９２位においてアミノ酸の突然変異を含む。１つの実施態様では、前記のアミノ酸の突然変異は、
ａ）Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ及び４１１Ｗ、
ｂ）Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｗ、Ｄ３９９Ｙ及びＤ３９９Ｋ、
ｃ）Ｓ４００Ｅ、Ｓ４００Ｄ、Ｓ４００Ｒ及びＳ４００Ｋ、
ｄ）Ｆ４０５Ｉ、Ｆ４０５Ｍ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｓ、Ｆ４０５Ｖ及びＦ４０５Ｗ、
ｅ）Ｎ３９０Ｒ、Ｎ３９０Ｋ及びＮ３９０Ｄ、
ｆ）Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｒ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｆ及びＫ３９２Ｅ
からなる群より選択される。

さらなる実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｌ３５１Ｙ及びＹ４０７Ａの突然変異を含み、他方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ｖ及びＫ４０９Ｆの突然変異を含む。さらなる実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｙ４０７Ａの突然変異を含み、他方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ａ及びＫ４０９Ｆの突然変異を含む。さらなる実施態様では、他方の重鎖のＣＨ３ドメインはさらに、アミノ酸Ｋ３９２Ｅ、Ｔ４１１Ｅ、Ｄ３９９Ｒ、及びＳ４００Ｒの突然変異を含む。

１つの実施態様では、国際公開公報第２０１１／１４３５４５号に記載のヘテロ二量体化アプローチが代わりに使用される。１つの実施態様では、国際公開公報第２０１１／１４３５４５号によるアミノ酸の改変は、重鎖のＣＨ３ドメイン内の３６８及び４０９からなる群より選択された位置に導入される。

１つの実施態様では、上記のノブ・イントゥ・ホールも使用する、国際公開公報第２０１１／０９０７６２号に記載のヘテロ二量体化アプローチが代わりに使用される。１つの実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ｗの突然変異を含み、他方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｙ４０７Ａの突然変異を含む。１つの実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｔ３６６Ｙの突然変異を含み、他方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｙ４０７Ｔの突然変異を含む。

１つの実施態様では、多重特異的抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプの抗体であり、国際公開公報第２０１０／１２９３０４号に記載のヘテロ二量体化アプローチが代わりに使用される。

１つの実施態様では、国際公開公報第２００９／０８９００４号に記載のヘテロ二量体化アプローチが代わりに使用される。１つの実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインは、負に荷電したアミノ酸（１つの実施態様では、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）；さらなる実施態様では、Ｋ３９２Ｄ又はＮ３９２Ｄの突然変異）を用いてのＫ３９２又はＮ３９２のアミノ酸の置換を含み、他方の重鎖のＣＨ３ドメインは、正に荷電したアミノ酸（１つの実施態様では、リジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）、さらなる実施態様では、Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｋ、又はＥ３５７Ｋの置換；もっとさらなる実施態様では、Ｄ３９９Ｋ又はＥ３５６Ｋの突然変異）を用いてのＤ３９９、Ｅ３５６、Ｄ３５６、又はＥ３５７のアミノ酸の置換を含む。さらなる実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインはさらに、負に荷電したアミノ酸（１つの実施態様では、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｅ）；さらなる実施態様では、Ｋ４０９Ｄ又はＲ４０９Ｄの突然変異）を用いてのＫ４０９又はＲ４０９のアミノ酸の置換を含む。さらなる実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインはさらに又は代替的には、負に荷電したアミノ酸（１つの実施態様では、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ））を用いてのＫ４３９及び／又はＫ３７０のアミノ酸の置換を含む。

１つの実施態様では、国際公開公報第２００７／１４７９０１号に記載のヘテロ二量体化アプローチが代わりに使用される。１つの実施態様では、一方の重鎖のＣＨ３ドメインはアミノ酸Ｋ２５３Ｅ、Ｄ２８２Ｋ、及びＫ３２２Ｄの突然変異を含み、他方の重鎖のＣＨ３ドメインは、アミノ酸Ｄ２３９Ｋ、Ｅ２４０Ｋ、及びＫ２９２Ｄの突然変異を含む。

１つの実施態様では、国際公開公報第２００７／１１０２０５号に記載のヘテロ二量体化アプローチが代わりに使用される。

１つの実施態様では、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体は、ヒトＶＥＧＦに特異的に結合する第一の抗原結合部位と、ヒトＡＮＧ－２に特異的に結合する第二の抗原結合部位とを含む、二重特異的な抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体であり、ここで、
ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号１のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号３のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号４のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号５のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号６のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号９のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１０のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１２のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号１３のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉｉ）二重特異的抗体は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａと、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）とを含むヒトＩｇＧ１サブクラスの重鎖定常領域を含み；
ｉｖ）重鎖定常領域には、Ｔ３６６Ｗ突然変異が一方のＣＨ３ドメインに含まれ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖの突然変異が他方のＣＨ３ドメインに含まれる（番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）。

１つの実施態様では、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体は、ヒトＶＥＧＦに特異的に結合する第一の抗原結合部位と、ヒトＡＮＧ－２に特異的に結合する第二の抗原結合部位とを含む、二重特異的な抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体であり、ここで
ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号１のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号３のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号４のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号５のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号６のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号９のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１０のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１２のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号１３のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉｉ）二重特異的抗体は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａと、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）とを含むヒトＩｇＧ１サブクラスの重鎖定常領域を含み；
ｉｖ）重鎖定常領域には、Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ突然変異が一方のＣＨ３ドメインに含まれ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの突然変異が他方のＣＨ３ドメインに含まれる（番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）。

１つの実施態様では、このような二重特異的な抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は二価である。

１つの実施態様では、このような二重特異的な抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体は、
ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインＶＨとして配列番号７のアミノ酸配列、及び軽鎖可変ドメインＶＬとして配列番号８のアミノ酸配列を含み、
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインＶＨとして配列番号１５のアミノ酸配列、及び軽鎖可変ドメインＶＬとして配列番号１６のアミノ酸配列を含む
ことを特徴とする。

本発明の１つの態様では、本発明によるこのような二重特異的で二価の抗体は、
ａ）ＶＥＧＦに特異的に結合する第一の完全長抗体の重鎖及び軽鎖；
ｂ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する第二の完全長の抗体の改変された重鎖及び改変された軽鎖（ここでの定常ドメインＣＬ及びＣＨ１は、互いに交換されている）
を含むことを特徴とする。

本明細書において使用する「ＶＥＧＦ」という用語は、１６５アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子（ヒトＶＥＧＦ１６５の前駆配列のアミノ酸２７～１９１：配列番号２４；アミノ酸１～２６は、シグナルペプチドを示す）であるヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ－Ａ）、及びLeung, D.W., et al., Science 246 (1989) 1306-9; Houck et al., Mol. Endocrin. 5 ( 1991) 1806 -1814; Keck, P.J., et al., Science 246 (1989) 1309-12及びConnolly, D.T., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 20017-24に記載のような、関連した１２１、１８９、及び２０６の血管内皮細胞増殖因子アイソフォームと共に、そうした増殖因子の天然の対立遺伝子形及びプロセシング形を指す。ＶＥＧＦは、腫瘍及び眼内障害に関連した正常及び異常な血管形成及び血管新生の調節に関与している（Ferrara, N., et al., Endocr. Rev. 18 (1997) 4-25; Berkman, R.A.,et al., J. Clin. Invest. 91 (1993) 153-159; Brown, L.F., et al., Human Pathol. 26 (1995) 86-91; Brown, L.F., et al., Cancer Res. 53 (1993) 4727-4735; Mattern, J., et al., Brit. J. Cancer. 73 (1996) 931-934；及びDvorak, H.F., et al., Am. J. Pathol. 146 (1995) 1029-1039）。ＶＥＧＦは、いくつかの入手源から単離されたホモ二量体糖タンパク質であり、いくつかのアイソフォームを含む。ＶＥＧＦは、内皮細胞に対して高度に特異的な有糸分裂活性を示す。ＶＥＧＦアンタゴニスト／阻害剤は、ＶＥＧＦのその受容体であるＶＥＧＦＲへの結合を阻害する。公知のＶＥＧＦアンタゴニスト／阻害剤は、国際公開公報第２０１４／００９４６５号に記載のような二重特異的な抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体を含む。

本明細書において使用する「ＡＮＧ－２」という用語は、例えば、Maisonpierre, P.C., et al, Science 277 (1997) 55-60及びCheung, A.H., et al., Genomics 48 (1998) 389-91に記載されている、ヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）（あるいはＡＮＧＰＴ２又はＡＮＧ２とも略称される）（配列番号２５）を指す。アンジオポエチン－１（配列番号２６）及びアンジオポエチン－２は、血管内皮内に選択的に発現されている、チロシンキナーゼファミリーであるＴｉｅのリガンドとして発見された（Yancopoulos, G.D., et al., Nature 407 (2000) 242-48）。アンジオポエチンファミリーに現在、４つの確定されているメンバーが存在する。アンジオポエチン－３及び－４（Ａｎｇ－３及びＡｎｇ－４）は、マウス及びヒトにおいて同じ遺伝子座の広範に分岐した対応物を示し得る（Kim, I., et al., FEBS Let, 443 (1999) 353-56; Kim, I., et al., J Biol Chem 274 (1999) 26523-28）。ＡＮＧ－１及びＡＮＧ－２は当初、組織培養実験において、それぞれアゴニスト及びアンタゴニストとして同定された（ＡＮＧ－１については、Davis, S., et al., Cell 87 (1996) 1161-69；ＡＮＧ－２については、Maisonpierre, P.C., et al., Science 277 (1997) 55-60を参照されたい）。公知の全てのアンジオポエチンは主に、その受容体であるＴＩＥ２（配列番号２７）に結合し、Ａｎｇ－１及びＡｎｇ－２のどちらも、３nMの親和性（Ｋｄ）でＴＩＥ２に結合する（Maisonpierre, P.C., et al., Science 277 (1997) 55-60）。ＡＮＧ２アンタゴニスト／阻害剤は、ＡＮＧ２のその受容体であるＴＩＥ２への結合を阻害する。公知のＡＮＧ２アンタゴニスト／阻害剤は、国際公開公報第２０１４／００９４６５号に記載のような二重特異的な抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体を含む。

本発明の二重特異的抗体の抗原結合部位は、抗原に対する結合部位の親和性の度合いを変化させることに寄与する、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有している。３つの重鎖可変ドメインＣＤＲ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）と、３つの軽鎖可変ドメインＣＤＲ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）が存在する。ＣＤＲ及びフレームワーク領域（ＦＲ）の範囲は、編集されたアミノ酸配列データベースとの比較によって決定され、そうした領域は、配列間の可変度により規定されている。

本発明の抗体は、ヒトを起源とする１つ以上の免疫グロブリンクラスに由来する免疫グロブリン定常領域を含み、このような免疫グロブリンクラスは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥクラス、並びに、ＩｇＧ及びＩｇＡの場合には、それらのサブクラスであるＩｇＧ１及びＩｇＧ４を含む。

本明細書において使用する「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一アミノ酸組成の抗体分子の調製物を指す。

「キメラ抗体」という用語は、通常は組換えＤＮＡ技術によって調製された、ある入手源又は種に由来する可変領域、すなわち結合領域と、異なる入手源又は種に由来する定常領域の少なくとも一部とを含む、抗体を指す。マウス可変領域とヒト定常領域とを含むキメラ抗体が好ましい。本発明によって包含される他の好ましい形態の「キメラ抗体」は、定常領域が、元来の抗体の定常領域から改変又は変化して、本発明による特性、特にＣ１ｑへの結合及び／又はＦｃ受容体（ＦｃＲ）への結合に関する特性を生じたものである。このようなキメラ抗体は、「クラススイッチ抗体」とも称される。キメラ抗体は、免疫グロブリン可変領域をコードしているＤＮＡセグメントと、免疫グロブリン定常領域をコードしているＤＮＡセグメントとを含む、免疫グロブリン遺伝子発現産物である。キメラ抗体の作製法は、当技術分野において周知である、慣用的な組換えＤＮＡ技術及び遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Morrison, S.L.,et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855; US 5,202,238 and US 5,204,244を参照されたい。

「ヒト化抗体」という用語は、フレームワーク又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンと比較して異なる特異性を有する免疫グロブリンのＣＤＲを含むように改変されている、抗体を指す。好ましい実施態様では、マウスＣＤＲが、ヒト抗体のフレーム領域に移植され、「ヒト化抗体」が調製される。例えば、Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327；及びNeuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270を参照されたい。特に好ましいＣＤＲは、キメラ抗体について上述されている抗原を認識する配列を示すＣＤＲに相当する。本発明によって包含される他の形態の「ヒト化抗体」は、定常領域が、元来の抗体の定常領域から改変又は変化し、それにより、本発明による特性、特にＣ１ｑへの結合及び／又はＦｃ受容体（ＦｃＲ）への結合に関する特性を生じているものである。

本明細書において使用する「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図する。ヒト抗体は、最先端の当技術分野において周知である（van Dijk, M.A., and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374）。免疫化時に、内因的な免疫グロブリンの産生を伴うことなく、完全なレパートリーのヒト抗体又は選択されたヒト抗体を生成することができる、トランスジェニック動物（例えばマウス）においても、ヒト抗体を産生することができる。このような生殖系列突然変異体マウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの導入により、抗原によるチャレンジ時にヒト抗体が産生されるだろう（例えば、Jakobovits, A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555; Jakobovits, A., et al., Nature 362 (1993) 255-258; Brueggemann, M., et al., Year Immunol. 7 (1993) 33-40を参照されたい）。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーにおいて作製されてもよい（Hoogenboom, H.R., and Winter, G., J. Mol. Biol. 227 (1992) 381-388; Marks, J.D., et al., J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597）。Cole, A., et al.及びBoerner, P., et al.の技術も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である（Cole, A., et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Liss, A.L., p. 77 (1985)；及びBoerner, P., et al., J. Immunol. 147 (1991) 86-95）。本発明に記載のキメラ抗体及びヒト化抗体についてすでに記載されているように、本明細書において使用する「ヒト抗体」という用語はまた、例えば、「クラススイッチ」、すなわちＦｃ部分の変化又は突然変異（例えばＩｇＧ１からＩｇＧ４へ及び／又はＩｇＧ１／ＩｇＧ４の突然変異）によって、本発明に記載の特性、特にＣ１ｑへの結合及び／又はＦｃＲへの結合に関する特性を生じるように定常領域が改変されている、このような抗体も含む。

本明細書において使用する「組換え抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作出、又は単離されている全てのヒト抗体、例えば、ＮＳ０細胞若しくはＣＨＯ細胞などの宿主細胞から単離されたか又はヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えばマウス）から単離された抗体、又は宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体を含むことを意図する。このような組換え抗体は、再編成された形態の可変領域及び定常領域を含む。本発明による組換え抗体は、インビボでの体細胞超突然変異にかけられている。したがって、組換え抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ配列及びＶＬ配列に由来しかつ関連しているが、インビボにおいてヒト抗体生殖系列レパートリーに天然には存在しない可能性がある、配列である。

本明細書において使用する「可変ドメイン」（軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）、重鎖の可変ドメイン（ＶＨ））は、抗原への抗体の結合に直接関与している、軽鎖と重鎖の各対を示す。ヒト軽鎖及び重鎖の可変ドメインは、同じ一般的な構造を有し、各ドメインは、３つの「超可変領域」（すなわち相補性決定領域（ＣＤＲ））によって接続されている、その配列が広範囲に保存されている、４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域はβシート構造をとり、ＣＤＲは、βシート構造を接続しているループを形成している場合がある。各鎖内のＣＤＲはフレームワーク領域によってその３次元構造を保ち、他の鎖のＣＤＲと一緒に抗原結合部位を形成する。抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ３領域は、本発明に記載の抗体の結合特異性／親和性に特に重要な役割を果たし、それ故、本発明のさらなる目的を提供する。

本明細書において使用する場合の「超可変領域」又は「抗体の抗原結合部分」という用語は、抗原との結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」領域は、本明細書において定義されているような超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。それ故、抗体の軽鎖及び重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４のドメインを含む。各鎖上のＣＤＲは、このようなフレームワークアミノ酸によって隔てられている。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原との結合に最も寄与する領域である。ＣＤＲ領域及びＦＲ領域は、Kabat, E.A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD（1991）の標準的な定義に従って決定される。

「完全長抗体」という用語は、２本の「完全長抗体重鎖」と２本の「完全長抗体軽鎖」からなる抗体を示す。「完全長抗体重鎖」は、抗体のＮ末端からＣ末端の方向に、ＶＨ－ＣＨ１－ＨＲ－ＣＨ２－ＣＨ３と略称される、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体重鎖定常ドメイン１（Ｃ１）、抗体ヒンジ領域（ＨＲ）、抗体重鎖定常ドメイン２（ＣＨ２）、及び抗体重鎖定常ドメイン３（ＣＨ３）；及び場合により、サブクラスＩｇＥ抗体の場合には抗体重鎖定常ドメイン４（ＣＨ４）からなる、ポリペプチドである。好ましくは、「完全長抗体重鎖」は、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＶＨ、ＣＨ１、ＨＲ、ＣＨ２、及びＣＨ３からなるポリペプチドである。「完全長抗体軽鎖」は、抗体のＮ末端からＣ末端の方向に、ＶＬ－ＣＬと略称される、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）からなるポリペプチドである。抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）はκ（カッパ）又はλ（ラムダ）であり得る。２本の完全長抗体鎖は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間、及び完全長抗体重鎖のヒンジ領域の間の、ポリペプチド間ジスルフィド結合を介して、互いに連結されている。典型的な完全長抗体の例は、ＩｇＧ（例えばＩｇＧ１及びＩｇＧ２）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥのような天然抗体である。本発明に記載の完全長抗体は、単一の種であっても、例えばヒトに由来していても、又は、それらはキメラ化抗体又はヒト化抗体であってもよい。本発明に記載の完全長抗体は、ＶＨとＶＬの対によって各々が形成されている２つの抗原結合部位を含み、それらはどちらも同じ抗原に特異的に結合する。前記の完全長抗体の重鎖又は軽鎖のＣ末端は、前記の重鎖又は軽鎖のＣ末端における最後のアミノ酸を示す。前記の完全長抗体の重鎖又は軽鎖のＮ末端は、前記の重鎖又は軽鎖のＮ末端における最後のアミノ酸を示す。

本出願内で使用される「定常領域」という用語は、可変領域以外の抗体のドメインの合計を示す。定常領域は、抗原との結合に直接関与していないが、様々なエフェクター機能を示す。それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体はＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭというクラスに分類され、これらの中のいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２などのサブクラスにさらに分類され得る。抗体の異なるクラスに相当する重鎖定常領域は、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。５つ全ての抗体クラスに認めることのできる軽鎖定常領域は、κ（カッパ）及びλ（ラムダ）と呼ばれる。

本出願において使用される「ヒト起源に由来する定常領域」又は「ヒト定常領域」という用語は、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４のヒト抗体の重鎖定常領域、及び／又は軽鎖定常領域κ又はλを示す。このような定常領域は、最先端の当技術分野において周知であり、例えば、Kabat, E.A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)によって記載されている（例えば、Johnson, G., and Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218; Kabat, E.A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72 (1975) 2785-2788も参照されたい）。出願内の位置及び突然変異の番号付けについて、Kabat, E.A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD（1991）に記載のＥＵ番号付け体系（ＥＵインデックス）が使用され、「ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付け」と称される。

１つの実施態様では、本発明に記載の二重特異的抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラス（ヒトＩｇＧ１サブクラスに由来）の定常領域を有する。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）及びＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在していても存在していなくてもよい。

１つの実施態様では、本明細書に記載のような二重特異的抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ／サブクラスであり、配列番号２３の重鎖定常ドメイン、又は配列番号１７の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１８の重鎖アミノ酸配列の定常部分を含む。１つの実施態様ではさらに、Ｃ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）が存在する。１つの実施態様ではさらに、Ｃ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）及びＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）が存在する。

本明細書において特記されない限り、定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication 91-3242に記載されているような、ＫａｂａｔのＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵ番号付け体系による。

１つの実施態様では、本発明に記載の二重特異的抗体は、突然変異Ｌ２３４Ａ（Ｌｅｕ２３５Ａｌａ）、Ｌ２３５Ａ（Ｌｅｕ２３４Ａｌａ）及びＰ３２９Ｇ（Ｐｒｏ３２９Ｇｌｙ）を有するヒトＩｇＧ１サブクラスである。このような抗体は、低減したＦｃＲへの結合を示す（特にそれらは、ＦｃＲγＩ、ＦｃＲγＩＩ、及びＦｃＲγＩＩＩに対してもはや全く結合を示さない）。これは、例えば血栓症などの起こり得る副作用を低減させるのに特に有用である（Meyer, T., et al., J. Thromb. Haemost. 7 (2009) 171-81）。

すでに記載されていたＰｒｏ３２９Ａｌａ突然変異は、ＦｃγＲＩＩＩａサンドイッチ相互作用の僅か３分の２しか除去しないが、本発明に記載の抗体におけるＰｒｏ３２９Ｇｌｙは、ＦｃγＲＩＩＩに対するＦｃ部分の結合を完全に付与する。これは特に有用である。なぜなら、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合は、細胞死をもたらし、癌疾患の処置において有益であり得る、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞障害）に関与するが、他の血管疾患又は免疫学的疾患の抗体を基剤とした処置において深刻な副作用を引き起こす可能性もあるからである。よって、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇを有するＩｇＧ１サブクラス、並びに突然変異Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇを有するＩｇＧ４サブクラスの本発明に記載の抗体は特に有用である。なぜなら、それらはどちらも、ＦｃＲγＩ、ＦｃＲγＩＩ、及びＦｃＲγＩＩＩに対してもはや全く結合を示さないからである。

薬剤、例えば医薬製剤又は二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要とされる用量及び期間において、有効な量を指す。

本発明の１つの実施態様では、本明細書に記載のような二重特異的抗体、医薬品、又は医薬製剤は、硝子体内適用を介して、例えば硝子体内注射を介して投与される（「硝子体内」投与される）。これは、当技術分野において公知である標準的な手順に従って実施され得る。例えば、Ritter et al., J. Clin. Invest. 116 (2006) 3266-76; Russelakis-Carneiro et al., Neuropathol. Appl. Neurobiol. 25 (1999) 196-206；及びWray et al., Arch. Neurol. 33 (1976) 183-5を参照されたい。

いくつかの実施態様では、本発明の治療用キットは、医薬品又は医薬製剤に存在する記載された１用量以上の二重特異的抗体、医薬品又は医薬製剤の硝子体内注射に適した器具、及び注射を実施するための適切な対象及びプロトコールを詳述した説明書を含有していてもよい。これらの実施態様では、医薬品又は医薬製剤は典型的には、硝子体内注射を介して処置の必要な被験者に投与される。これは、当技術分野において公知である標準的な手順に従って実施され得る。例えば、Ritter et al., J. Clin. Invest. 116 (2006) 3266-76; Russelakis-Carneiro et al., Neuropathol. Appl. Neurobiol. 25 (1999) 196-206；及びWray et al., Arch. Neurol. 33 (1976) 183-5を参照されたい。

選択される投与経路に関わらず、本明細書に記載のような二重特異的抗体は、当業者には公知である慣用的な方法によって、薬学的に許容可能な剤形へと製剤化される。

以下において、本発明の実施態様が列挙されている：
１．眼血管疾患の処置に使用するための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）に結合する二重特異的抗体であって、該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

２Ａ．眼血管疾患を患う患者の処置に使用するための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）に結合する二重特異的抗体であって、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力に１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１５レター以上）の増加がある。

２Ｂ．眼血管疾患を患う患者の処置に使用するための、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）に結合する二重特異的抗体であって、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力の１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１５レター以上）の増加によって測定されるような、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投与後の視力の改善を示す。

３．該二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）、実施態様２Ａ～２Ｂのいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

４．ＢＣＶＡＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレターの増加は、処置開始後それぞれ、４週間目、及び／又は８週間目、及び／又は１２週間目、及び／又は１６週間目、及び／又は２０週間目、及び／又は２４週間目に測定される、実施態様１～３のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

５．ＢＣＶＡＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレターの増加は、処置開始後それぞれ、４５週間目、及び／又は４６週間目、及び／又は４７週間目、及び／又は４８週間目、及び／又は４９週間目、及び／又は５０週間目、及び／又は５１週間目、及び／又は５２週間目、及び／又は５３週間目、及び／又は５４週間目、及び／又は５５週間目、及び／又は５６週間目、及び／又は５７週間目、及び／又は５８週間目、及び／又は５９週間目、及び／又は６０週間目に測定される、実施態様１～３のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

６．前記二重特異的抗体が、再処置までの時間を延長するために及び／又は視力（例えば最高矯正視力（ＢＣＶＡ）ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳ）低下までの時間を延長するために使用され、再処置は、（１つの実施態様ではスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）を使用して）５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は５レター以上減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳ）として決定された疾患活動性の場合に必要であると思われる、実施態様１～５のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

７．前記二重特異的抗体は、処置開始後に３～７カ月間毎の投与で投与される（１つの実施態様では、処置開始は３～５カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は、４カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は５～７カ月間毎の投与を含み、１つの実施態様では、処置開始は６カ月間毎の投与を含む）、実施態様１～６のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

８．眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）、新生血管型加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）、非増殖性糖尿病網膜症（ＮＰＤＲ）、増殖性糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜中心静脈閉塞症に続発するか、半側網膜静脈閉塞症に続発するか又は網膜分枝静脈閉塞症に続発する黄斑浮腫、網膜炎、結膜炎、ぶどう膜炎、脈絡膜炎、眼内炎症に続発する（眼ヒストプラズマ症又は推定ヒストプラズマ症又は脈絡膜炎に続発をはじめとする）脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）；近視性脈絡膜血管新生（ｍＣＮＶ）、並びに、外傷、未熟児網膜症、及び虹彩ルベオーシス／血管新生緑内障に続発する脈絡膜血管新生の群から選択される、実施態様１～７のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

９．眼血管疾患は、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）である、実施態様１～７のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１０．眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）又は新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）である、実施態様１～７のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１１．ＶＥＧＦとヒトＡＮＧ－２とに結合する二重特異的抗体はＶＥＧＦアンタゴニスト／阻害剤及びＡＮＧ２アンタゴニスト／阻害剤であるか、又はＶＥＧＦのその受容体であるＶＥＧＦＲへの結合を阻害し、かつＡＮＧ２のその受容体であるＴＩＥ２への結合を阻害する、実施態様１～１０のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１２．前記二重特異的抗体は、１０～１２週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１３．前記重特異的抗体は、１１～１３週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１４．前記重特異的抗体は、１２～１４週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１５．前記重特異的抗体は、１３～１５週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１６．前記重特異的抗体は、１４～１６週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１７．ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２とに結合する二重特異的抗体は、ヒトＶＥＧＦに特異的に結合する第一の抗原結合部位と、ヒトＡＮＧ－２に特異的に結合する第二の抗原結合部位とを含む、二重特異的で二価の抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体であり、ここで
ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号１のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号３のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号４のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号５のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号６のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号９のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１０のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１２のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号１３のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉｉ）二重特異的抗体は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａと、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）とを含むヒトＩｇＧ１サブクラスの重鎖定常領域を含む、実施態様１～１６のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１８．ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインＶＨとして配列番号７のアミノ酸配列、及び軽鎖可変ドメインＶＬとして配列番号８のアミノ酸配列を含み、
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインＶＨとして配列番号１５のアミノ酸配列、及び軽鎖可変ドメインＶＬとして配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施態様１７記載の（使用するための）二重特異的抗体。

１９．ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２に結合する二重特異的抗体は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、実施態様１８記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２０．前記二重特異的抗体は、（各処置において）約５～７mgの用量で投与される、実施態様１７～１９のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２１．前記二重特異的抗体は、（各処置において）約６mgの用量で投与される（１つの実施態様では、（各処置において）６mg＋/－１０％の用量で）；（１つの実施態様では、（各処置において）約６mgの用量で）、実施態様１７～１９のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２２．前記二重特異的抗体は、約３０mg/mlの濃度で投与される、実施態様２０～２１のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２３．前記二重特異的抗体は、約１２０mg/mlの濃度で投与される、実施態様２０～２１のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２４．眼血管疾患を患う患者は、抗ＶＥＧＦ抗体による処置（例えば単独療法）を以前に受けたことがなかった（未処置である）、実施態様１～２３のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２５．眼血管疾患を患う患者は、抗ＶＥＧＦ抗体による処置（例えば単独療法）を以前に受けたことがあった、実施態様１～２４のいずれか１つに記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２６．眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に一定した８週間毎の（Ｑ８Ｗ）投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は５～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は６カ月間毎の投与を含む）、実施態様１～２５記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２７．眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に一定した１２週間毎の（Ｑ１２Ｗ）投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は５～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は６カ月間毎の投与を含む）、実施態様１～２６記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２８．処置開始後、一定したＱ１２Ｗの投薬計画の前に、初回の１用量のＱ８Ｗのサイクルがある、実施態様２７記載の（使用するための）二重特異的抗体。

２９．眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に、安定して疾患が存在しない場合には投与間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する、投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は３～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は４～６カ月間毎の投与を含む）、実施態様１～２８記載の（使用するための）二重特異的抗体。

３０．このような投薬計画は、患者の疾患状態に応じて、患者がＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬を受けることを含む（１つの実施態様では、患者の疾患状態に応じて、Ｑ４Ｗ又はＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬）、実施態様２９記載の（使用するための）二重特異的抗体。

３１．安定して疾患が存在しないことは、
－５０μm未満増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター未満減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定され、疾患活動性は、
－５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター以上減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定される、実施態様２９又は３０記載の（使用するための）二重特異的抗体。

３２．安定して疾患が存在しないことは、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μm未満である（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μm未満；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μm未満）
として決定され、疾患活動性は、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μmを超える（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μmを超える；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μmを超える）
として決定される、実施態様２９又は３０記載の方法。

３３．眼血管疾患は加齢黄斑変性（１つの実施態様では滲出型加齢黄斑変性）であり、加齢黄斑変性（１つの実施態様では滲出型加齢黄斑変性）を患う患者の処置は、処置開始後に（１つの実施態様では、処置開始は３～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は４～６カ月間毎の投与を含む）、安定して疾患が存在しない場合には投与間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する、投薬計画を含む、実施態様１～３２記載の（使用するための）二重特異的抗体。

３４．このような投薬計画は、患者の疾患状態に応じて、患者がＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬を受けることを含む（１つの実施態様では、患者の疾患状態に応じて、Ｑ４Ｗ又はＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬）、実施態様３３記載の（使用するための）二重特異的抗体。

３５．安定して疾患が存在しないことは、
－５０μm未満増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター未満減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定され、疾患活動性は、
－５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター以上減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定される、実施態様３３又は３４記載の（使用するための）二重特異的抗体。

３６．安定して疾患が存在しないことは、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μm未満である（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μm未満；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μm未満）
として決定され、疾患活動性は、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μmを超える（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μmを超える；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μmを超える）
として決定される、実施態様３３又は３４記載の（使用するための）二重特異的抗体。

以下において、本発明の実施態様が列挙されている：
１．眼血管疾患を患う患者の処置法であり、該方法は、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の有効量を患者に投与する工程を含み、ここで前記二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）。

２Ａ．眼血管疾患を患う患者の処置法であり、該方法は、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の有効量を患者に投与する工程を含み、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力に１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加がある。

２Ｂ．眼血管疾患を患う患者の処置法であり、該方法は、ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体の有効量を患者に投与する工程を含み、ここで、該患者は、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投薬前の患者の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアと比較して、糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートを使用して測定された最高矯正視力の１２レター以上（１つの実施態様では１３レター以上、１つの実施態様では１４レター以上、１つの実施態様では１５レター以上）の増加によって測定されるような、二重特異的ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の投与後の視力の改善を示す。

３．前記二重特異的抗体は、８週間毎又はより少ない頻度で硝子体内に投与される（投与される予定である）（１つの実施態様では、９週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１０週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１１週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１２週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１３週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１４週間毎又はより少ない頻度で；１つの実施態様では、１５週間毎又はより少ない頻度で）、実施態様２Ａ～２Ｂのいずれか１つに記載の方法。

４．ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳのレタースコアのレターの増加は、処置開始後それぞれ、４週間目、及び／又は８週間目、及び／又は１２週間目、及び／又は１６週間目、及び／又は２０週間目、及び／又は２４週間目に測定される、実施態様１～３のいずれか１つに記載の方法。

５．ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳレタースコアのレターの増加は、処置開始後それぞれ、４５週間目、及び／又は４６週間目、及び／又は４７週間目、及び／又は４８週間目、及び／又は４９週間目、及び／又は５０週間目、及び／又は５１週間目、及び／又は５２週間目、及び／又は５３週間目、及び／又は５４週間目、及び／又は５５週間目、及び／又は５６週間目、及び／又は５７週間目、及び／又は５８週間目、及び／又は５９週間目、及び／又は６０週間目に測定される、実施態様１～３のいずれか１つに記載の方法。

６．前記二重特異的抗体は、再処置までの時間を延長するために及び／又は視力低下までの時間を延長するために使用され、該二重特異的抗体を用いての再処置は、（１つの実施態様ではスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）を使用して）５０μm以上の中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）の増加；及び／又は５レター以上の最高矯正視力（ＢＣＶＡ/ＥＴＤＲＳ）の減少として決定された疾患活動性の場合に投与される、実施態様１～５のいずれか１つに記載の方法。

７．前記二重特異的抗体は、処置開始後に３～７カ月間毎の投与で投与される（１つの実施態様では、処置開始は３～５カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は、４カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は５～７カ月間毎の投与を含み、１つの実施態様では、処置開始は６カ月間毎の投与を含む）、実施態様１～６のいずれか１つに記載の方法。

８．眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）、新生血管型加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）、非増殖性糖尿病網膜症（ＮＰＤＲ）、増殖性糖尿病網膜症（ＰＤＲ）、網膜中心静脈閉塞症に続発するか、半側網膜静脈閉塞症に続発するか又は網膜分枝静脈閉塞症に続発する黄斑浮腫、網膜炎、結膜炎、ぶどう膜炎、脈絡膜炎、眼内炎症に続発する（眼ヒストプラズマ症又は推定ヒストプラズマ症又は脈絡膜炎に続発をはじめとする）脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）；近視性脈絡膜血管新生（ｍＣＮＶ）、並びに、外傷、未熟児網膜症、及び虹彩ルベオーシス／血管新生緑内障に続発する脈絡膜血管新生の群から選択される、実施態様１～７のいずれか１つに記載の方法。

９．眼血管疾患は、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）である、実施態様１～７のいずれか１つに記載の方法。

１０．眼血管疾患は、滲出型加齢黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）又は新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）である、実施態様１～７のいずれか１つに記載の方法。

１１．ＶＥＧＦとヒトＡＮＧ－２とに結合する二重特異的抗体はＶＥＧＦアンタゴニスト／阻害剤及びＡＮＧ２アンタゴニスト／阻害剤であるか、又はＶＥＧＦのその受容体であるＶＥＧＦＲへの結合を阻害し、ＡＮＧ２のその受容体であるＴＩＥ２への結合を阻害する、実施態様１～１０のいずれか１つに記載の方法。

１２．前記二重特異的抗体は、１０～１２週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。

１３．前記二重特異的抗体は、１１～１３週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。

１４．前記二重特異的抗体は、１２～１４週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。

１５．前記二重特異的抗体は、１３～１５週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。

１６．前記二重特異的抗体は、１４～１６週間毎に投与される、実施態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。

１７．ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２とに結合する二重特異的抗体は、ヒトＶＥＧＦに特異的に結合する第一の抗原結合部位と、ヒトＡＮＧ－２に特異的に結合する第二の抗原結合部位とを含む、二重特異的で二価の抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体であり、ここで
ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号１のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号２のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号３のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号４のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号５のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号６のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインに、配列番号９のＣＤＲ３Ｈ領域、配列番号１０のＣＤＲ２Ｈ領域、及び配列番号１１のＣＤＲ１Ｈ領域、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１２のＣＤＲ３Ｌ領域、配列番号１３のＣＤＲ２Ｌ領域、及び配列番号１４のＣＤＲ１Ｌ領域を含み；
ｉｉｉ）二重特異的抗体は、突然変異Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａと、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）とを含むヒトＩｇＧ１サブクラスの重鎖定常領域を含む、実施態様１～１６のいずれか１つに記載の方法。

１８．ｉ）ＶＥＧＦに特異的に結合する前記の第一の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインＶＨとして配列番号７のアミノ酸配列、及び軽鎖可変ドメインＶＬとして配列番号８のアミノ酸配列を含み、
ｉｉ）ＡＮＧ－２に特異的に結合する前記の第二の抗原結合部位は、重鎖可変ドメインＶＨとして配列番号１５のアミノ酸配列、及び軽鎖可変ドメインＶＬとして配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施態様１７記載の方法。

１９．ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２に結合する二重特異的抗体は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、実施態様１８記載の方法。

２０．前記二重特異的抗体は、（各処置において）約５～７mgの用量で投与される、実施態様１７～１９のいずれか１つに記載の方法。

２１．前記二重特異的抗体は、（各処置において）約６mgの用量で投与される（１つの実施態様では、（各処置において）６mg＋/－１０％の用量で）；（１つの実施態様では、（各処置において）約６mgの用量で）、実施態様１７～１９のいずれか１つに記載の方法

２２．前記二重特異的抗体は、約３０mg/mlの濃度で投与される、実施態様２０～２１のいずれか１つに記載の方法。

２３．前記二重特異的抗体は、約１２０mg/mlの濃度で投与される、実施態様２０～２１のいずれか１つに記載の方法。

２４．眼血管疾患を患う患者は、抗ＶＥＧＦ抗体による処置（例えば単独療法）を以前に受けたことがなかった（未処置である）、実施態様１～２３のいずれか１つに記載の方法

２５．眼血管疾患を患う患者は、抗ＶＥＧＦ抗体による処置（例えば単独療法）を以前に受けたことがあった、実施態様１～２４のいずれか１つに記載の方法。

２６．眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に一定した８週間毎の（Ｑ８Ｗ）投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は５～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は６カ月間毎の投与を含む）、実施態様１～２５に記載の方法。

２７．眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に一定した１２週間毎の（Ｑ１２Ｗ）投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は５～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は６カ月間毎の投与を含む）、実施態様１～２６に記載の方法。

２８．処置開始後、一定したＱ１２Ｗの投薬計画の前に、初回の１用量のＱ８Ｗのサイクルがある、実施態様２７記載の方法。

２９．眼血管疾患は糖尿病黄斑浮腫であり、糖尿病黄斑浮腫を患う患者の処置は、処置開始後に、安定して疾患が存在しない場合には投与間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する、投薬計画を含む（１つの実施態様では、処置開始は３～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は４～６カ月間毎の投与を含む）、実施態様１～２８記載の方法。

３０．このような投薬計画は、患者の疾患状態に応じて、患者がＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬を受けることを含む（１つの実施態様では、患者の疾患状態に応じて、Ｑ４Ｗ又はＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬）、実施態様２９記載の方法。

３１．安定して疾患が存在しないことは、
－５０μm未満増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター未満減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定され、疾患活動性は、
－５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター以上減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定される、実施態様２８又は２９記載の方法。

３２．安定して疾患が存在しないことは、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μm未満である（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μm未満；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μm未満）
として決定され、疾患活動性は、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μmを超える（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μmを超える；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μmを超える）
として決定される、実施態様２８又は２９記載の方法。

３３．加齢黄斑変性（１つの実施態様では滲出型加齢黄斑変性）を患う患者の処置は、処置開始後に（１つの実施態様では、処置開始は３～７カ月間毎の投与を含み；１つの実施態様では、処置開始は４～６カ月間毎の投与を含む）、安定して疾患が存在しない場合には投与間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する、投薬計画を含む、実施態様１～３２記載の方法。

３４．このような投薬計画は、患者の疾患状態に応じて、患者がＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬を受けることを含む（１つの実施態様では、患者の疾患状態に応じて、Ｑ４Ｗ又はＱ８Ｗ又はＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗの投薬）、実施態様３３記載の方法。

３５．安定して疾患が存在しないことは、
－５０μm未満増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター未満減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定され、疾患活動性は、
－５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）；及び／又は
－５レター以上減少した最高矯正視力（ＢＣＶＡ／ＥＴＤＲＳ）
として決定される、実施態様３３又は３４記載の方法。

３６．安定して疾患が存在しないことは、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μm未満である（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μm未満；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μm未満；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μm未満）
として決定され、疾患活動性は、
－中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）が約３００μmを超える（１つの実施態様では、スペクトラリス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３２５μmを超える；１つの実施態様では、シーラス（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、トプコン（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ３１５μmを超える；１つの実施態様では、オプトビュー（商標）機器を用いたスペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）によって測定したところ２９５μmを超える）
として決定される、実施態様３３又は３４記載の方法。

実施例
ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２に結合する二重特異的抗体を用いた、眼血管疾患を患う患者の処置
実施例１Ａ：糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）を患う患者の処置の有効性及び持続期間
目的
第一の目的
本治験の第一の目的は以下であった：
中心窩を含む糖尿病黄斑浮腫（ＣＩ－ＤＭＥ）を有する未処置の患者において、実薬と比較した、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２とに結合する二重特異的抗体（この抗体ＶＥＧＦａｎｇ２－００１６及びその生成は、参照により組み入れられる国際公開公報第２０１４／００９４６５号にも詳述されている）の有効性を評価するため。本明細書におけるこの二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の名称は、ＲＯ６８６７４６１又はＲＧ７７１６又はＶＥＧＦａｎｇ２－００１６、又はファリシマブである。４週間毎に１．５mg又は６mgのいずれかの用量の硝子体内投与用のＲＯ６８６７４６１の無菌で無色から茶色がかった保存剤を含まない溶液のバイアルを使用した。二重特異的抗体の濃度は約１２０mg/mlであった。

第二の目的
本治験の第二の目的は以下の通りであった：
ＲＯ６８６７４６１の作用機序に関する情報を与える、薬物動態及び解剖学的転帰を調べるため。血漿中の抗ＲＯ６８６７４６１抗体の形成を調べるため。ＲＯ６８６７４６１の効果の持続時間を探索するため。

探索的目的
本治験の探索的目的は以下の通りであった：
ＲＯ６８６７４６１の有効性に対する、以前の硝子体内への抗ＶＥＧＦ抗体による処置の予測される効果を探索するため。以前に硝子体内に抗ＶＥＧＦ抗体による処置を受けた中心窩を含む糖尿病黄斑浮腫患者における、実薬と比較した、ＲＯ６８６７４６１の有効性及び安全性を評価するため。血管形成及び炎症の血漿中マーカーレベルに対するＲＯ６８６７４６１の効果を評価するため。眼房水試料（任意）及び硝子体液（任意）中の、ＲＯ６８６７４６１の濃度、並びに試料容積が許容すれば、血管形成及び炎症のバイオマーカーを調べるため。糖尿病網膜症（ＤＲ）重症度スコアの改善を評価するため。

治験デザイン
これは、中心窩を有する糖尿病黄斑浮腫患者における、複数用量を用いる、多施設、無作為化、実薬対照、二重盲検、三群での並行群間、３６週間の治験であった。この治験の３つの群は以下の通りであった：
Ａ群：０．３mgのラニビズマブ（硝子体内）
Ｂ群：１．５mgのＲＯ６８６７４６１（硝子体内）
Ｃ群：６mgのＲＯ６８６７４６１（硝子体内）

片方の眼のみが治験眼として選択された。両眼が全ての適格基準を満たしている場合、より悪い最高矯正視力を有する眼が、治験眼として定められた。両眼が全ての適格基準を満たし、１日目に同じ最高矯正視力レタースコアを有している場合、治験眼の選択は、治験責任医師により判断された。

患者数
最大２１０人までの患者が無作為化された。

約１５０人の未処置の患者、及び抗ＶＥＧＦ抗体で硝子体内に以前に処置されたことがある約６０人の患者が治験に参加した。

約５０人の未処置の患者が各群（１：１：１の無作為化スキーム）に無作為化され、抗ＶＥＧＦ抗体で硝子体内に以前に処置された約３０人の患者が、Ａ群及びＣ群に無作為化された。

標的個体群
中心窩を有する糖尿病黄斑浮腫を有する、１８歳以上の男性及び女性の患者。

選択基準／除外基準
選択基準
患者は、治験への参加のために以下の基準を満たしていなければならない：

治験眼ついての眼の基準：
黄斑の中心部を含む、スペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）による黄斑肥厚化として定義される、糖尿病網膜症を合併した黄斑浮腫：スクリーニング時にスペクトラリス（商標）（ハイデルベルグ社）を用いて３２５μm以上の中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）（スペクトラリス（商標）が利用不可能である場合には、以下の機器及び中心窩領域網膜厚の閾値が許容可能であった：シーラス（商標）については３１５μm以上の中心窩領域網膜厚、トプコンについては３１５m以上の中心窩領域網膜厚、オプトビュー（商標）については２９５μm以上の中心窩領域網膜厚）。

１日目に糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートにおいて、７３～２４レター（境界値を含む）の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）レタースコアを有する（スネレン指標にて２０/４０－２０/３２０と同等）、糖尿病黄斑浮腫に主に起因して低下した視力。

確定診断のための良質な網膜画像の取得を可能とする、透明な透光体及び適切な瞳孔散大。

一般的基準：
世界保健機関及び／又は米国糖尿病学会によって定義されているような、糖尿病（ＤＭ：１型又は２型）の診断。

書面によるインフォームドコンセントを準備し、医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）及び地方条例による治験プロトコールを順守する能力も意思もあること。あるいは、法的に権限のある代表者は、医薬品規制調和国際会議及び地方条例に従って患者を承諾しなければならない。

１８歳以上。

閉経後（すなわち、ホルモン補充療法を受けていないならば、卵胞刺激ホルモンによって確認された、治療により誘発されたものではない無月経が１２カ月間以上）ではないか、又は禁欲を維持するために不妊手術（卵巣及び／又は子宮がない）に同意した、又は処置期間中及び最後の投薬から少なくとも４週間を通して年間１％未満の失敗率である混合型避妊法を使用する女性。

禁欲は、それが患者の好ましくかつ通常の生活様式に沿っている場合にのみ許容可能である。定期禁欲（例えば、カレンダー法、排卵法、排卵徴候体温法、又は排卵後法）及び膣外射精法は、許容可能な避妊法ではなかった。

年間１％未満であると予想される失敗率を示す避妊法の例としては、精管切除、ホルモン剤のインプラント、混合型経口用又は注射用ホルモン避妊薬の適正使用、及び特定の子宮内器具が挙げられる。あるいは、２つの方法（例えば、コンドーム及び子宮頸部キャップなどの２つのバリア法）を組み合わせて年間１％未満の失敗率を達成してもよく、バリア法は常に、殺精子剤の使用を補足しなければならない。

男性については、治験薬の最後の投薬後少なくとも４週間の処置期間中には、バリア避妊法を使用することに同意すること。

患者は、現在の治験の完了時まで、治験薬（ＩＭＰ）又は器具を含むあらゆる他の臨床試験に参加しようとしないようにしなければならない。

除外基準
以下のいずれかの基準を満たす患者は、治験への参加から除外された：

治験眼についての眼の基準：
以下として定義されるハイリスクな増殖性糖尿病網膜症のあらゆる兆候：
あらゆる硝子体内出血又は網膜前出血。
臨床検査で散瞳薬を用いた標準的な７フィールドのＥＴＤＲＳと同等な領域内の乳頭面積の２分の１以上の血管新生。
臨床検査で乳頭面積の３分の１以上の血管新生。
１日目より前の３か月以内の硝子体内への抗ＶＥＧＦ抗体によるあらゆる処置。
１日目より前のあらゆる広範囲網膜光凝固（ＰＲＰ）処置。
１日目より前の３か月以内のあらゆる黄斑レーザー光凝固。
網膜硝子体手術歴。
１日目より前の３か月以内のあらゆる硝子体内又は眼球周囲の副腎皮質ステロイドによる処置。１日目より前のどのようなIluvien（登録商標）又はオザーデックス（登録商標）インプラントの使用歴も許容されないだろう。
１日目より前の３か月以内のあらゆる白内障手術又はステロイドを用いての白内障手術の合併症の処置。
切開緑内障手術歴。
制御されていない緑内障（例えば、進行的な視野の減少、又は緑内障医薬品での処置にも関わらず２５mmHg以上の眼内圧［ＩＯＰ］）。

治験眼における併発している眼の容態：
ルベオーシス歴
黄斑の評価を混乱させ得るか中心視力に影響を及ぼし得る、糖尿病黄斑浮腫以外のあらゆる現在の眼疾患又は眼疾患病歴（例えば、加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞症、ぶどう膜炎、網膜色素線条症、ヒストプラズマ症、活動性又は非活動性のサイトメガロウイルス、病的近視、網膜剥離、黄斑牽引、黄斑円孔、重度の白内障）。
治験責任医師の意見では、黄斑浮腫の回復により視力低下は改善しないだろう、あらゆる現在の眼容態（例えば、中心窩萎縮症、色素異常、濃い中心窩の硬性白斑、網膜以外の容態）。
１日目におけるあらゆる活動性の眼感染。
１日目におけるあらゆる活動性の眼内炎症（グレードはほんのわずか又はそれより多い）。

他眼についての特徴：
１日目より前の７日間以内のあらゆる抗ＶＥＧＦ抗体による処置。
治験責任医師の意見では、１日目から７日間以内に抗ＶＥＧＦ抗体による処置を必要とし得る、あらゆる網膜の容態。

一般的な基準：
１日目より前の６カ月間以内のあらゆる全身性の抗ＶＥＧＦ抗体。
１日目より前の１か月間以内のあらゆる大きな病気又は大きな手術。
１日目より前の１週間以内のあらゆる熱性病。
１日目より前の１２カ月間以内のあらゆる脳卒中又は心筋梗塞。
制御されていない血圧（血圧；安静時の患者において１８０mmHgを超える収縮期血圧及び／又は１００mmHgを超える拡張期血圧として定義される）。患者の初回の解読値がこれらの数値を超える場合、２回目の解読は、同じ日の３０分以上後に行なわれても、又はスクリーニング期間中の別の日に行なわれてもよい。患者の血圧が、高血圧薬によって制御される必要がある場合、患者は、１日目より前の少なくとも１か月間、同じ医薬品を連続的に摂取しているべきである。
スクリーニング時に１２％を超える糖化ヘモグロビンＨｂＡ１ｃを有する患者。

未処置の糖尿病、又は１日目より前の４カ月以内に経口抗糖尿病薬若しくはインシュリンの開始、又は治験期間中の抗糖尿病薬の予期される変更。
１日目より前の６カ月間以内に腎移植、血液透析、若しくは腹膜透析を必要とするか、又は治験中の任意の時点において血液透析若しくは腹膜透析を必要とすることが予想される、腎不全。
他の疾患の病歴、代謝機能障害、治験薬の使用が禁忌である容態が妥当に疑われるか、又は、治験結果の解釈に影響を及ぼす可能性があるか、又は治験責任医師の意見で合併症の処置において患者をハイリスクとさせる、身体検査所見若しくは臨床検査所見。
出産可能な女性、妊娠血液検査陽性。
授乳中の女性。
１日目より前の１か月間以内の副腎皮質ステロイドの全身使用。
実薬、フルオレセイン、使用される製剤のあらゆる成分、散瞳点眼液、又は使用される任意の麻酔薬及び抗菌点眼薬に対するあらゆる既知の過敏症。
実薬の使用によるあらゆる他の制約。
１日目より前の３か月以内の治験薬を用いてのあらゆる処置。

治験の期間
治験の全期間は、以下のように参加した各患者について、最大４０週間であった（スクリーニングから治験完了まで）：
スクリーニング：最大４週間まで。
ベースライン：１日目。
治験処置投与期間：１日目から２０週目まで。
観察期間：２０週目から最大３６週目まで。
安全性に関する経過観察の要求：観察期間中及びラニビズマブの投与から７日間。

治験の終了
治験の終了は、最後の患者の最後の観察（ＬＰＬＯ）が行なわれる日として定義された。ＬＰＬＯは、最後の患者が参加してから３６週間後に行なわれることが予想された。

有効性及び薬物動態の評価項目
一次分析の個体群は、未処置の患者であった。追加の分析は、全個体群において及び硝子体内への抗ＶＥＧＦ抗体を用いて以前に処置された患者において行なわれ得る。

この治験についての有効性の主要評価項目は、未処置の患者におけるベースラインから２４週目におけるＢＣＶＡ（ＥＴＤＲＳレター）変化の平均値であった。

ＳＤ－ＯＣＴによる解剖学的評価項目：
２４週目における中心窩厚のベースラインからの変化平均値。
２４週目における中心窩領域網膜厚の平均値（直径１mm）のベースラインからの変化平均値。
２４週目において網膜下液及び網膜内液の消散を示した患者の比率。
眼底フルオレセイン血管造影（ＦＦＡ）による解剖学的評価項目。
２４週目における黄斑における漏出の消散を示した患者の比率。
２４週目における中心窩無血管域のサイズのベースラインからの変化。

探索的評価項目
この治験における探索的評価項目は、以下を含んでいたがこれらに限定されなかった：
ＢＣＶＡ：
未処置の患者と、以前に硝子体内に抗ＶＥＧＦ抗体を投与された患者との間のベースラインからの最高矯正視力（ＢＣＶＡ）の変化の平均値の差（ＲＯ６８６７４６１の効果の差）。

持続性に関連した探索的評価項目：
２０週目における数値と比較して、糖尿病黄斑浮腫に起因する５０μm以上の中心窩領域網膜厚の増加及び／又は５レター以上の最高矯正視力の減少までの時間。
２０週目以後の０．３mgのラニビズマブを用いての再処置までの時間。

結果
有効性の一次分析は、全ての無作為化された患者を含み、患者は無作為化時に割り当てられた処置に従って分類された。

有効性の主要変数は、ベースラインから２４週目までの最高矯正視力の変化であった。有効性の主要分析は、反復測定（ＭＭＲＭ）モデルのための混合モデルを使用して実施された。

最高矯正視力
開始時４メートルの試験距離の最高矯正視力は、散瞳前に、治験薬群の割り当てを盲検化された、訓練された公認の視力検査員によって測定された。

最高矯正視力は、３つのプレシジョン・ビジョン（商標）又はライトハウス社の遠見視力表（改訂されたＥＴＤＲＳのチャート１、２及びＲ）のセットを使用することによって測定された。視力マニュアルが治験責任医師に提供された。視力検査員及び視力検査室の認定証は、あらゆる視力検査が実施される前に得られた。

最高矯正視力の検査員は、治験眼及び処置の割り当てに関して盲検化され、屈折及び最高矯正視力の評価（例えば、視力の仕様マニュアル）のみを実施するだろう。最高矯正視力の検査員はまた、患者の以前の来診の最高矯正視力のレタースコアに対して盲検化され、以前の来診から患者の屈折データのみを知っている。最高矯正視力の検査員は、直接的な患者の介護をはじめとするあらゆる他の仕事を実施することを許可されていなかった。

有効性の主要評価項目を図１に示す。図１は、有効性の主要評価項目：すなわち、これまで未処置である患者についての、ベースラインから経時的に２４週間目までの最高矯正視力の変化を示す。ＶＡ２は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体ＲＯ６８６７４６１（６．０mg又は１．５mgの用量が硝子体内に投与される）を指し、ＲＢＺはラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））（０．３mgの用量が硝子体内に投与される）を指す。

ベースラインからの中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）の変化（治験眼）
重要な第二評価項目は、中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）のベースラインからの変化であった。結果を図２に示す。配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体ＲＯ６８６７４６１（６．０mg又は１．５mgの用量が硝子体内に投与される）を、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））（０．３mgの用量が硝子体内に投与される）と比較した。この第二の解剖学的評価項目は、最高矯正視力の一次評価項目を直接支持する。

持続期間／再処置までの時間
観察期間中のラニビズマブを用いての処置の基準
治験処置の最後の投薬後（２０週目の来診）の各来診時に、最高矯正視力を評価し、ＳＤ－ＯＣＴ造影を実施した（２６週目の来診時以外）。

２４週目に得られた最高矯正視力及び中心窩領域網膜厚の数値を、２０週目の来院時に得られた数値と比較した。２８、３２、及び３６週目に得られた最高矯正視力及び中心窩領域網膜厚の数値を、２４週目の数値と比較した。

患者が以下の両方の基準を満たしていれば、患者は１回量の０．３mgのラニビズマブを受け、治験を終了した：
・中心窩領域網膜厚が５０μm以上増加。
・糖尿病黄斑浮腫に因り最高矯正視力が５レター以上減少。

結果を図３に示す：図３は、５レター以上減少した最高矯正視力、及び５０μm以上増加した中心窩領域網膜厚の両方によって評価される疾患活動性に基づいて、投薬が中止された後（２０週間後又は６カ月間毎の投薬後＝最後の硝子体内（ＩＶＴ）への投与後の時点）の再処置までの時間を示す。配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体ＲＯ６８６７４６１（６．０mg又は１．５mgの用量が硝子体内に投与される）を、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））（０．３mgの用量が硝子体内に投与される）と比較した。

概観のために図４は、公表されている結果に基づいた、糖尿病黄斑浮腫の他の処置選択肢に対する図による比較を示す（以下の薬剤、ルセンティス（登録商標）（ラニビズマブ）、アイリーア（登録商標）（アフリベルセプト）、ブロルシズマブ、及びＶＡ２（ＲＯ６８６７４６１/ＲＧ７７１６）を比較する）。

実施例１Ｂ：糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）を患う患者の処置の有効性及び持続期間
実施例１Ａの下で上記されている治験と類似したさらなる治験において、糖尿病黄斑浮腫（例えば、中心窩を含む糖尿病黄斑浮腫（ＣＩ－ＤＭＥ））を患う患者を、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２に結合する二重特異的抗体で処置する。処置において実薬として、例えばアフリベルセプト及び／又はラニビズマブ及び／又はブロルシズマブが使用されるだろう。患者は、抗ＶＥＧＦ抗体による処置を受けていない（抗ＶＥＧＦ抗体単独療法を用いて、例えばアフリベルセプト及び／又はラニビズマブ及び／又はブロルシズマブを用いて以前に処置されたことがない）患者、及びまた抗ＶＥＧＦ抗体による単独療法を以前に処置されたことがある患者群も含む。ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２に結合するそれぞれの二重特異的抗体の名称は、ＲＯ６８６７４６１又はＲＧ７７１６である。１．５mg又は６mgのいずれかの用量の硝子体内投与用のＲＯ６８６７４６１の無菌で無色から茶色がかった保存剤を含まない溶液のバイアルを使用する。

以下の１つ以上の投薬計画を使用する：
ａ）糖尿病黄斑浮腫を患う患者は、処置（例えば、最初は６カ月間毎の注射）開始後に一定した８週間毎の投薬計画で処置されるだろう、
ｂ）糖尿病黄斑浮腫を患う患者は、処置（例えば、最初は６カ月間毎の注射）開始後に一定した１２週間毎の投薬（１つの計画では、まず１サイクルの８週間毎の投薬を含む）で処置されるだろう、
ｃ）糖尿病黄斑浮腫を患う患者は、処置（例えば、最初は３～７カ月間毎の注射）開始後に、安定して疾患が存在しない場合には注射間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する投薬処方計画で処置されるだろう。このような処方計画は、例えば、患者が、患者の疾患状態に応じて、Ｑ４Ｗ/Ｑ８Ｗ/Ｑ１２Ｗ/Ｑ１６Ｗの投薬を受けることを含む。

疾患安定性の評価は、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）及び中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）、並びに、光干渉断層計（ＯＣＴ）に基づいた網膜厚に基づくだろう。評価項目及び結果は、例えば、実施例１Ａに記載のように評価されるだろう。主要評価項目は４５週目から６０週目までであろう。

１つの実施態様では、糖尿病黄斑浮腫を患う患者は、未処置である（抗ＶＥＧＦ抗体による単独療法、例えばアフリベルセプト及び／又はラニビズマブ及び／又はブロルシズマブを用いて以前に処置されたことがない）。

１つの実施態様では、糖尿病黄斑浮腫を患う患者は、抗ＶＥＧＦ抗体による単独療法、例えばアフリベルセプト及び／又はラニビズマブ及び／又はブロルシズマブを用いて以前に処置されたことがある。

１つの実施態様では、糖尿病黄斑浮腫を患う患者は、処置（例えば最初は６カ月間毎の注射）開始後、一定の８週間毎の投薬計画で処置されるだろう。

１つの実施態様では、糖尿病黄斑浮腫を患う患者は、処置（例えば最初は６カ月間毎の注射）開始後、一定の１２週間毎の投薬計画（１つの実施態様ではまず１サイクルの８週間毎の投薬を含む）で処置されるだろう。

１つの実施態様では、糖尿病黄斑浮腫を患う患者は、処置（例えば、最初は３～７カ月間毎の注射）開始後に、安定して疾患が存在しない場合には注射間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する投薬処方計画で処置されるだろう。１つの実施態様では、このような処方計画は、患者が、患者の疾患状態に応じて、Ｑ４Ｗ/Ｑ８Ｗ/Ｑ１２Ｗ/Ｑ１６Ｗの投薬を受けることを含む。

１つの実施態様では、加齢黄斑変性を患う患者は、処置（例えば、最初は３～４カ月間毎の注射）開始後に、安定して疾患が存在しない場合には注射間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する投薬処方計画で処置されるだろう。１つの実施態様では、このような処方計画は、患者が、患者の疾患状態に応じて、Ｑ４Ｗ/Ｑ８Ｗ/Ｑ１２Ｗ/Ｑ１６Ｗの投薬を受けることを含む。

実施例２Ａ：加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を患う患者の処置の有効性及び持続期間
目的及び評価項目
本治験は、新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）患者に１２週間間隔及び１６週間間隔で投与されたＲＯ６８６７４６１の有効性、安全性、及び薬物動態を評価した。ＲＯ６８６７４６１は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２に結合する二重特異的抗体である（この抗体ＶＥＧＦａｎｇ２－００１６及びその生成は、参照により組み入れられる国際公開公報第２０１４／００９４６５号にも詳述されている）。本明細書におけるこの二重特異的抗ＶＥＧＦ/ＡＮＧ２抗体の名称は、ＲＯ６８６７４６１又はＲＧ７７１６又はＶＥＧＦａｎｇ２－００１６又はファリシマブである。

治験のための具体的な目的及び対応する評価項目の概略を以下に示す。

目的及び対応する評価項目
主要な有効性の目的
・１２週間間隔及び１６週間間隔で投与された場合の視力に対する、ＲＯ６８６７４６１の有効性を評価すること。

対応する評価項目
・ＥＴＤＲＳ様チャートを使用した４０週目における最高矯正視力のベースラインからの変化の平均値。

第二の有効性の目的：
１）追加の視力評価項目に対するＲＯ６８６７４６１の有効性を評価すること。
対応する評価項目
・ＥＴＤＲＳ様チャートを使用した経時的な最高矯正視力のベースラインからの変化の平均値。
・経時的な最高矯正視力のベースラインから１５レター以上、１０レター以上、５レター以上、又は０レター以上増加している患者の比率。
・経時的な最高矯正視力のベースラインからの１５レター以上、１０レター以上、５レター以上、又は０レター以上の減少を回避している患者の比率。
・経時的な２０/４０又はそれより良好な最高矯正視力を有する患者の比率。
・経時的な２０/２００又はそれより悪い最高矯正視力を有する患者の比率。

２）ＳＤ－ＯＣＴを使用した解剖学的な評価項目に対する、ＲＯ６８６７４６１の有効性を評価すること。
対応する評価項目
・経時的な中心窩領域網膜厚のベースラインからの変化の平均値。
・経時的な中心窩領域網膜厚の平均値（直径１mm）のベースラインからの変化の平均値。
・経時的な網膜内液、網膜下液、嚢胞、又は網膜色素上皮剥離を有する患者の比率。

３）眼底フルオレセイン血管造影（ＦＦＡ）を使用した解剖学的評価項目に対する、ＲＯ６８６７４６１の有効性を評価すること。
対応する評価項目
・４０週目及び５２週目における脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の全領域におけるベースラインからの変化の平均値。
・４０週目及び５２週目における脈絡膜血管新生成分の全領域におけるベースラインからの変化の平均値。
・４０週目及び５２週目における漏出の全領域におけるベースラインからの変化の平均値。

有効性を探索する目的
・２４週目における疾患活動性の発症率を調査すること。
対応する評価項目
・２４週目における疾患活動性を有する患者の比率。

安全性の目的
・１２週間間隔及び１６週間間隔でのＲＯ６８６７４６１の硝子体内への複数回の投与量の安全性を評価すること。
対応する評価項目
・眼有害事象の発症率及び重症度。
・眼以外の有害事象の発症率及び重症度。
・治験を離脱した理由、臨床データ、併用薬物、生命徴候、及び身体検査結果を含むがこれらに限定されない、他の安全性データも列挙され、記述により要約されるだろう。

薬物動態／薬力学を探索する目的
１）ＲＯ６８６７４６１の全身における薬物動態プロファイルを評価すること。
対応する評価項目
・特定の時点におけるＲＯ６８６７４６１の血漿中濃度。
２）眼房水中のＲＯ６８６７４６１、ラニビズマブ、遊離ＶＥＧＦ－Ａ、及びＡｎｇ－２プロファイルを評価すること。
・眼房水中のＲＯ６８６７４６１の濃度又は薬物動態パラメーターと遊離ＶＥＧＦ－Ａの濃度とＡｎｇ－２の濃度との間の関係。
対応する評価項目
・眼房水のラニビズマブ濃度又は薬物動態パラメーターと遊離ＶＥＧＦ－Ａの濃度とＡｎｇ－２の濃度との間の関係。
・眼房水中の遊離ＶＥＧＦ－Ａの濃度とＡｎｇ－２の濃度の時間経過。

免疫原性の目的
・血漿中の抗ＲＯ６８６７４６１抗体の形成を調べること。
対応する評価項目
・治験中の抗薬物抗体の発生率。

バイオマーカーを探索する目的
・ＲＯ６８６７４６１に対する応答を評価するために、ベースライン及び追加の時点における、眼房水中における血管形成及び炎症のバイオマーカー候補のレベルを探索すること。
対応する評価項目
・主要評価項目及び二次評価項目と、バイオマーカー候補の眼房水中濃度との間の関係。
上記で使用されている略称：
ＡＤＡ＝抗薬物抗体；Ａｎｇ－２＝アンジオポエチン－２；ＢＣＶＡ＝最高矯正視力；ＣＦＴ＝中心窩厚；ＣＮＶ＝脈絡膜血管新生；ＣＳＴ＝中心窩領域網膜厚；ＥＴＤＲＳ＝糖尿病性網膜症早期治療研究；ＦＦＡ＝眼底フルオレセイン血管造影；ＩＶＴ＝硝子体内；ＰＫ＝薬物動態；ＳＤ－ＯＣＴ＝スペクトラルドメイン光干渉断層計；ＶＥＧＦ－Ａ＝血管内皮増殖因子Ａ。

治験設計（図５は、治験設計の概観を提示する）
治験の説明
これは、新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）を有する未処置患者に１２週間間隔及び１６週間間隔で投与されたＲＯ６８６７４６１の有効性、安全性、及び薬物動態を調べるための、第ＩＩ相、多施設、無作為化、実薬対照、被験者及び評価項目の評価者に盲検化された、並行群間、５２週間の治験であった。

約７５人の患者が参加し、３つの処置群の１つに２：２：１の比で無作為化された：
・Ａ群（Ｑ１２Ｗ）：１２週目まで４週間毎（４回の注射）に硝子体内（ＩＶＴ）に６mgのＲＯ６８６７４６１を、その後、４８週目まで１２週間毎に（２４週目、３６週目、及び４８週目に注射；３回の注射）６mgのＲＯ６８６７４６１を硝子体内に。
・Ｂ群（Ｑ１６Ｗ）：１２週目まで４週間毎（４回の注射）に硝子体内に６mgのＲＯ６８６７４６１を、その後、４８週目まで１６週間毎に（２８週目及び４４週目に注射；２回の注射）６mgのＲＯ６８６７４６１を硝子体内に。２４週目における疾患活動性のプロトコールにより規定された評価は、活動性疾患（以下の基準を参照）を有するＢ群患者が、治験の残りの期間において、１２週間毎の６mgのＲＯ６８６７４６１の投薬処方計画に切り替えることを必要とし、注射は２４週目に開始され、３６週目及び４８週目に繰り返される。
・Ｃ群（比較群）：４週間毎に４８週間（１３回の注射）０．５mgのラニビズマブ（硝子体内に）。片方の眼だけが、治験眼として選択されるだろう。各患者における治験の全期間は最大５６週間であり、以下のように分類されるだろう：
・スクリーニング：無作為化より最大４週間前又は無作為化と同じ日に。
・無作為化：１日目。
・治験処置投与：１日目から４８週目まで。
・最後の来診：５２週目。

患者は、治験処置の投与までの４週間以内にスクリーニング検査を受けた。スクリーニング検査時の来院及び１週目／１日目（無作為化）の来院は、全ての評価（インフォームドコンセント以外）が４８時間以内に完了したならば、来院日を合わせてもよい。眼底撮影法（ＦＰ）の中央判定、スペクトラルドメイン光干渉断層計（ＳＤ－ＯＣＴ）、及び眼底フルオレセイン血管造影（ＦＦＡ）をはじめとする、スクリーニング（又はスクリーニング検査時の来院／１日目の来院を合わせた来診日）の間に、加齢黄斑変性に続発する脈絡膜血管新生が、治験における予め規定された眼基準を満たすことを確実にするために、患者の適格性を評価した。以下のいずれかの理由からスクリーニング結果に基づいて不適格であると考えられる患者は、再スクリーニングすることが可能であった：
・制御されていない血圧
・管理上の理由（例えば、スクリーニング検査の来院から２８日以内に１日目を計画することができない）
・治験眼の適格基準を満たしていない（そういう場合には、患者は、最初のスクリーニング期間の後、第二の眼での参加が適格である場合もある）。

再度スクリーニングする際に、全てのスクリーニング検査時の来院の評価を実施した（眼底フルオレセイン血管造影の画像収集を除く）。ただし、中央読影センターの適格な眼底フルオレセイン血管造影（ＦＦＡ）画像は、新たな１日目の来院（無作為化）前の４週間以内に撮影された。

１日目に、適格な患者は、上記の無作為化計画に従って、及び確立された標準的な投与手順に従って、ＲＯ６８６７４６１又はラニビズマブのいずれかの初回の硝子体内投与を受けた。患者は、プロトコールにおける活動計画に概略が示されているような治験処置投与及び評価のために、初回の硝子体内投与から７日後、その後、４週間毎に眼クリニックに戻った。治験期間全体を通して盲検化を維持するために、偽薬の硝子体内投与が、Ａ群及びＢ群に無作為化された患者に送達された。

全ての患者が、２４週目に疾患活動性について評価された。２４週目に活動性疾患（以下の基準を参照）を有していたＢ群に無作為化された患者は、治験の残りの期間において６mgのＲＯ６８６７４６１のＱ１２Ｗの投薬処方計画に切り替えられ、注射は２４週目に開始され、３６週目及び４８週目に繰り返された。

以下のいずれかの基準が満たされている場合には、活動性疾患であるとの決定が行なわれた：
・最近の２回の来院（１６週目及び２０週目）にかけての中心窩領域網膜厚の平均値と比較して、中心窩領域網膜厚の増加（スペクトラリス（登録商標）ＯＣＴで５０μmを超える中心窩領域網膜厚）、又は
・１６週目又は２０週目のいずれかに記録された最も低い中心窩領域網膜厚と比較して、７５μm以上の中心窩領域網膜厚の増加、又は
・新生血管型加齢黄斑変性の疾患活動性に因り最近の２回の来院（１６週目及び２０週目）にかけての最高矯正視力の平均値と比較して、少なくとも５レターの最高矯正視力（ＢＣＶＡ）の減少、又は
・新生血管型加齢黄斑変性の疾患活動性に因り１６週目又は２０週目のいずれかに記録された最も高い最高矯正視力と比較して、１０レター以上の最高矯正視力の減少、又は
・新生血管型加齢黄斑変性の活動性に因る、新たな黄斑出血の存在。

患者は、５２週目に最後の来院のために戻るだろう。最後の来院後、プロトコールに概略が示されているように有害事象が経過観察されるべきである。計画されていない来院の場合に実施された評価は、治験責任医師により判断される。

患者数：新生血管型加齢黄斑変性を有する約７５人の未処置の患者が、米国におけるこの治験に参加し、無作為化されると予想された。

標的個体群
適格基準
患者は、治験への参加のために以下の基準を満たしていた：治験眼についての眼の基準。
・加齢黄斑変性（新生血管型加齢黄斑変性）に続発する未処置の脈絡膜血管新生。
・眼底フルオレセイン血管造影又はスペクトラルドメイン光干渉断層計による脈絡膜血管新生活性に関連した中心窩成分（網膜下液、網膜下高反射性物質、漏出のエビデンス、又は出血によって証明されるような）を有する中心窩下脈絡膜血管新生又は傍中心窩脈絡膜血管新生。
・以下を伴う、全種類の脈絡膜血管新生の病変（圧倒的にクラシック型、最小限のクラシック型、又はオカルト型）：全病変サイズ（血液、萎縮、線維症、及び血管新生を含む）は眼底フルオレセイン血管造影により６乳頭面積以下、及び脈絡膜血管新生成分の面積は眼底フルオレセイン血管造影により全病変サイズの５０％以上、及び眼底フルオレセイン血管造影により確認された活動性の脈絡膜血管新生（漏出のエビデンス）、及びスペクトラルドメイン光干渉断層計によって確認された脈絡膜血管新生の滲出物（液体の存在）。
・良質の網膜画像を取得して確定診断することを可能とする、透明な透光体及び適切な瞳孔拡張。
一般的基準
・インフォームドコンセント書式への署名。
・１日目において年齢が５０歳以上であること。
・治験責任医師の判断において、治験プロトコールの順守が可能であること。
・出産可能な女性について：禁欲を維持する（異性との性交を控える）か又は処置期間中及び治験処置の最後の投薬から少なくとも２８日間を通して年間１％未満の失敗率である避妊法を使用することに同意すること。
・患者は、現在の治験の完了までに、治験薬（ＩＭＰ）又は器具を含む、任意の他の臨床試験に進んで参加しないようにしなければならない。

除外基準
以下のいずれかの基準を満たした患者は、治験の参加から除外された：
治験眼についての眼の基準
・眼ヒストプラズマ症、外傷、病的近視、網膜色素線条症、脈絡膜破裂、又はぶどう膜炎などの、加齢黄斑変性以外の原因に起因する脈絡膜血管新生。
・スクリーニング時における中心性漿液性脈絡網膜症。
・黄斑を含む、網膜色素上皮裂孔。
・眼底フルオレセイン血管造影において、全病変面積の５０％を超え、及び／又は全病変面積の５０％を超える中心窩線維症又は萎縮症を含む、及び／又は中心窩を含む、網膜下出血。
・硝子体内処置（ステロイド、抗血管内皮増殖因子［ＶＥＧＦ］抗体、組織プラスミノーゲンアクチベーター、オクリプラスミン、八フッ化プロパンガス、空気）、眼球周囲の薬理学的介入、アルゴンレーザーによる光凝固、ベルテポルフィン光線力学的療法、ダイオードレーザー、経瞳孔的温熱療法、又は手術による介入を含む（がこれらに限定されない）、脈絡膜血管新生のためのあらゆる前処置又は併用処置。
・ベースライン評価（１日目）から３か月以内の白内障手術。
・あらゆる他の眼内手術（経毛様体扁平部硝子体切除術、緑内障手術、角膜移植、放射線療法）。
・ステロイドによる硝子体内への処置を用いての白内障合併症の管理を除く、以前の硝子体内処置（抗ＶＥＧＦ抗体薬物を含む）。
・他の網膜疾患のための以前の眼球周囲における薬理学的介入。
現在の眼容態
・治験責任医師の意見では、視力改善の可能性を低減させるか、又は治験経過中に内科的介入若しくは手術による介入を必要とする可能性があるかのいずれかである、治験眼におけるあらゆる併発している眼内容態（例えば、弱視、無水晶体、網膜剥離、白内障、糖尿病性網膜症、又は黄斑症、又は牽引を伴う網膜前膜）。
・１日目（無作為化前）の治験眼における活動的な眼内炎症（ほんのわずかなグレード又はそれ以上）。
・１日目に糖尿病性網膜症早期治療研究（ＥＴＤＲＳ）様チャートにおいて７３～２４レター（境界値を含む）の最高矯正視力レタースコア（スネレン指標にて２０/４０から２０/３２０と同等）。
・治験眼における現在の硝子体内出血。
・治験眼における制御されていない緑内障（例えば、進行的な視野の減少、又は、緑内障薬を用いての処置にも関わらず２５mmHg以上の眼内圧［ＩＯＰ］として定義される）。
・治験眼における８ディオプトリーを超える近視を示す、屈折障害の等価球面度数。
・いずれかの眼における特発性又は自己免疫に関連したぶどう膜炎の病歴。
・１日目（無作為化前）にいずれかの眼における活動性で感染性の結膜炎、角膜炎、強膜炎、又は眼内炎。
一般的基準
・スクリーニング前の１か月間以内に何らかの大きな病気又は大きな外科手術。
・制御されていない血圧（患者の安静時において、１８０mmHgを超える収縮期血圧及び／又は１００mmHgを超える拡張期血圧として定義される［血圧］）。患者の最初の解読値がこれらの数値を超えている場合、同じ日に後で又はスクリーニング期間中の別の日に、２回目の解読を行なってもよい。患者の血圧が高血圧薬によって制御されている場合、患者は、１日目より前の少なくとも３０日間連続的に同じ医薬品を摂取しているべきである。
・１日目より前の３カ月間以内の脳卒中又は心筋梗塞。
・他の疾患の病歴、代謝機能障害、治験薬の使用が禁忌であるか、又は、治験結果の解釈に影響を及ぼす可能性があるか、又は治験責任医師の意見で処置の合併症に対して患者をハイリスクとさせる、容態が妥当に疑われる、身体検査所見若しくは臨床検査所見。
・妊娠中、又は授乳中、又は治験中に妊娠する予定である。出産可能な女性は、治験処置の開始前の２８日間以内に妊娠尿検査結果陰性でなければならない。妊娠尿検査が陽性である場合、妊娠血清検査によって確認されなければならない。
・ラニビズマブ、フルオレセイン、使用される製剤のあらゆる成分、散瞳点眼薬、又は使用されるあらゆる麻酔用及び抗菌用点眼薬に対する既知の過敏症。
・治験処置の開始前の３か月間以内に治験療法を用いての処置。

治験の終了
治験の終了は、最後の患者の最後の来院（ＬＰＬＶ）が行なわれた日として定義された。ＬＰＬＶは、最後の患者が参加した５２週間後に行なわれると予想された。

治験の期間
最初の患者のスクリーニングから治験の終了までの治験の全期間は、約１８～１９カ月間であると予想された。

治験薬の試験製品
ＲＯ６８６７４６１薬品（１２０mg/mL）は、無菌の無色から茶色がかった液体として提供され、保存剤を全く含有していない。６mgの用量毎の硝子体内投与用の無菌で無色から茶色がかった保存剤を含まないＲＯ６８６７４６１溶液のバイアルが使用された。二重特異的抗体の濃度は約１２０mg/mlであった。

用量及び投与、
ＲＯ６８６７４６１、ラニビズマブ、及び偽薬。

患者は、以下に記載されているように、無作為化計画に従って、治験眼へのＲＯ６８６７４６１若しくはラニビズマブの５０μLの硝子体内注射又は偽薬投与を与えられた。
・Ａ群（Ｑ１２Ｗ）：１２週目まで４週間毎に６mgのＲＯ６８６７４６１の硝子体内注射（４回の注射）、その後、４８週目まで１２週間毎に６mgのＲＯ６８６７４６１の硝子体内注射（２４週目、３６週目、及び４８週目に注射；３回の注射）。
・Ｂ群（Ｑ１６Ｗ）：１２週目まで４週間毎に６mgのＲＯ６８６７４６１の硝子体内注射（４回の注射）、その後、４８週目まで１６週間毎に６mgのＲＯ６８６７４６１の硝子体内注射（２８週目及び４４週目に注射；２回の注射）。
・Ｃ群（比較群）：４週間毎に４８週間（１３回の注射）０．５mgのラニビズマブの硝子体内注射。

片方の眼だけが治験眼として選択された。

治験の評価
いくつかの評価が同時に行なわれる時点では、以下の順番が、治験責任医師の判断で示唆された。順序は、はっきりと義務的であると（すなわちイタリック体の本文で）述べられている場合を除いて、現場人員及び患者の時間管理を最適化するように調整されてもよい。
・生命徴候
・血液試料採取：眼底フルオレセイン血管造影が実施される来院では、血液試料採取及び血管造影を、同じ静脈カニューレから実施することができる。血液試料は、血管造影前に収集されなければならない。
・眼の評価及びイメージング。
最高矯正視力：最高矯正視力は、瞳孔散大前に実施されなければならない。スクリーニング検査時の来院時及び１日目の来院時に、最高矯正視力は、最高矯正視力のレタースコアの結果としてスクリーニング失敗である可能性のある患者において、不必要な調査を避けるために、生命徴候及び血液試料採取前に実施されてもよい。
細隙灯顕微鏡検査。
瞳孔散大。
ＳＤ－ＯＣＴ。
眼底撮影法（＋赤外線反射率）。
眼底フルオレセイン血管造影。
瞳孔散大による双眼倒像鏡高拡大率眼底検査。
眼内圧：全てのイメージング評価後に実施される義務があり、同方法は、治験期間全体を通して使用されるべきである。

・眼房水の試料採取（任意）
疾患に特異的な評価
活動性の計画（追記１）に特記されていない限り、全ての眼の評価は両眼について実施された。

最高矯正視力
４メートルから始まる試験距離での最高矯正視力は、治験眼処置の割り当てに関して盲検化された、訓練され認定された視力（ＶＡ）検査者によって、散瞳する前に測定された。

最高矯正視力は、プレシジョンビジョン社（商標）又はライトハウス社の距離視力表（改訂されたＥＴＤＲＳチャート１、２及びＲ）のセットを使用して測定された。視力手順マニュアルが、治験責任医師に提供された。視力検査者及び視力検査室の認可は、あらゆる視力検査が実施される前に得られた。

最高矯正視力の検査者は、治験眼及び処置の割り当てに対して盲検化され、屈折及び最高矯正視力の評価（例えば視力の仕様マニュアル）を実施するだろう。最高矯正視力の検査者はまた、患者の以前の来院の最高矯正視力のレタースコアに対して盲検化され、以前の来院から既知である患者の屈折データしか知らない場合がある。

追加の眼の評価
治験中に実施される追加の眼の評価としては、以下が挙げられる：
・細隙灯顕微鏡検査（細胞１つあたりの発赤及び硝子体内出血密度を等級付けするための尺度が追記２に詳述されている）
・瞳孔散大による双眼倒像鏡高拡大率眼底検査。
・眼内圧

患者に使用される眼内圧の測定法は、治験全体を通して一貫していた。両眼の眼内圧の測定は、全てのイメージング後に実施された。

治験処置の来院時に、眼内圧は、治験処置投与前及び治験眼への処置投与から３０（±１５）分後に実施され、眼内圧が３０mmHg以上である場合、眼内圧は、３０（±１５）分後に再評価されるべきである。眼内圧が上昇し続けた場合、治験責任医師の判断で処置が行なわれた。
・指折り数える視力の評価
治験眼における、処置後の視神経乳頭灌流液を、各患者について、治験処置投与後直ちに（処置投与後の最大１５分間以内に）、適宜、指折り数える視力、手の動き、又は光覚を試験することによって評価した。

眼のイメージング
中央読影センターは、治験に要求される眼イメージングのための中央読影センターマニュアル及び教材を現場に提供した。治験画像が得られる前に、現場人員及びイメージングシステム（適用可能な場合）は、中央読影センターマニュアルに明記されているように、読影センターによって認可された。全ての治験被験者の眼画像は、治験現場において認可／登録された機器で、訓練されかつ中央読影センターにより認定された人員によってのみ得られた。全ての治験被験者の眼画像のコピーは、保存のため及び独立した分析のために（規定された画像に関連した基準の適格性の確認のためを含む）、中央読影センターに転送された。

２４週目における疾患活動性の評価
全ての患者を、２４週目における疾患活動性について評価した。２４週目に活動性疾患（以下の基準を参照）を有していたＢ群に無作為化された患者は、治験の残りの期間中、６mgのＲＯ６８６７４６１のＱ１２Ｗ投薬処方計画に切り替えられ、注射は２４週目に開始され、３６週目及び４８週目に繰り返された。

活動性疾患の決定は、以下のいずれかの基準が満たされている場合に行なわれた：
・最近２回の来院（１６週目及び２０週目）におよぶ中心窩領域網膜厚の平均値と比較して、スペクトラリスＯＣＴで５０μmを超える中心窩領域網膜厚の増加、又は
・１６週目又は２０週目のいずれかにおいて記録された最も低い中心窩領域網膜厚と比較して、７５μm以上の中心窩領域網膜厚の増加、又は
・新生血管型加齢黄斑変性の疾患活動性に因る、最近２回の来院（１６週目及び２０週目）におよぶ最高矯正視力の平均値と比較して、少なくとも５レターの最高矯正視力の減少、又は
・新生血管型加齢黄斑変性の疾患活動性に因る、１６週目又は２０週目のいずれかにおいて記録された最も高い最高矯正視力と比較して、１０レター以上の最高矯正視力の減少、又は
・新生血管型加齢黄斑変性の活動性に因る、新規黄斑出血の存在。

結果
最高矯正視力（ＢＣＶＡ）及びＢＣＶＡの増加の持続期間（ＢＣＶＡの増加を維持するための再処置までの時間）
有効性の主要評価項目を図６に示す。図６は、有効性の主要評価項目：ベースラインから経時的に４０週目までのＢＣＶＡの変化を示す。ＲＯ６８６７４６１は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体ＲＯ６８６７４６１（６．０mgの用量がＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗのいずれかで硝子体内に投与される）を指し、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））は、０．３mgの用量でＱ４Ｗで硝子体内に投与された。最初の最高矯正視力の増加は、ＲＯ６８６７４６１のＱ１２Ｗ群又はＱ１６Ｗ群で完全に維持され、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））のＱ４Ｗ群で同じような範囲で維持された。

ベースラインからの中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）の変化（治験眼）
重要な二次評価項目は、中心窩領域網膜厚（ＣＳＴ）のベースラインからの変化であった。結果を図７に示す。配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体ＲＯ６８６７４６１（６．０mgの用量がＱ１２Ｗ又はＱ１６Ｗのいずれかで硝子体内に投与される）を、ラニビズマブ（ルセンティス（登録商標））（０．３mgの用量でＱ４Ｗで硝子体内に投与された）と比較した。この解剖学的二次評価項目は最高矯正視力の主要評価項目を直接支持する。処置開始中にラニビズマブよりも二重特異的抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体のＲＯ６８６７４６１の方が中心窩領域網膜厚はより減少していた。

実施例２Ｂ：加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を患う患者の処置の有効性及び持続期間
実施例２Ａの下で上記された治験と類似したさらなる治験において、加齢黄斑変性（例えば、滲出型加齢黄斑変性（ｗＡＭＤ）、特に新生血管型加齢型黄斑変性）を患う患者を、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２とに結合する二重特異的抗体で処置する。処置における実薬として、例えばアフリベルセプト及び／又はラニビズマブ及び／又はブロルシズマブが使用されるだろう。患者は、抗ＶＥＧＦ抗体による処置を受けていない患者（抗ＶＥＧＦ抗体による単独療法、例えばアフリベルセプト及び／又はラニビズマブ及び／又はブロルシズマブを用いて以前に処置されたことがなかった）及びまた抗ＶＥＧＦ抗体による単独療法、例えばアフリベルセプト及び／又はラニビズマブ及び／又はブロルシズマブを用いて以前に処置されたことがある患者群も含む。ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ２に結合するそれぞれの二重特異的抗体の名称は、ＲＯ６８６７４６１又はＲＧ７７１６である。１．５mg又は６mgのいずれかの用量の硝子体内投与用のＲＯ６８６７４６１の無菌で無色から茶色がかった保存剤を含まない溶液のバイアルを使用する。

例えば、以下の投薬計画を使用する：
加齢黄斑変性を患う患者は、処置開始後（例えば、最初は３～７か月毎の注射を用いて）、安定して疾患が存在しない場合には注射間隔を延長するか、又は疾患活動性が存在する場合には間隔を短縮する、投薬処方計画を用いて処置されるだろう。このような処方計画は、例えば、患者の疾患状態に応じて、患者がＱ４Ｗ／Ｑ８Ｗ／Ｑ１２Ｗ／Ｑ１６Ｗの投薬を受けることを含む。

疾患安定性の評価は、最高矯正視力（ＢＣＶＡ）及び中心窩領域網膜厚、並びに、光干渉断層計（ＯＣＴ）に基づいた網膜厚に基づくだろう。評価項目及び結果は、例えば実施例１Ａに記載のように評価されるだろう。主要評価項目は、４５週目から６０週目までであろう。

実施例３
ＶＥＧＦ、Ａｎｇ２、ＦｃγＲ、及びＦｃＲｎに対する抗ＶＥＧＦ／ＡＮＧ２抗体の結合
種交差反応性の評価を含む、ＶＥＧＦアイソフォームの動態親和性
約１２０００共鳴単位（ＲＵ）の捕獲システム（１０μg/mlのヤギ抗ヒトＦ（ａｂ）’_２；注文番号：２８９５８３２５；ＧＥヘルスケア・バイオサイエンシーズ社、スウェーデン）を、ＧＥヘルスケア社によって供給されたアミンカップリングキットを使用することによって、ｐＨ５．０でＣＭ５チップ（ＧＥヘルスケア社ＢＲ－１００５－３０）上にカップリングさせた。試料及びシステム緩衝液は、ＰＢＳ－Ｔ（０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を含む１０mMのリン酸緩衝食塩水）ｐＨ７．４であった。フローセルは２５℃に設定され（試料ブロックは１２℃に設定された）、ランニング緩衝液を用いて２回プライミングされた。二重特異的抗体は、５０nMの溶液を５μl/分の流速で３０秒間注入することによって捕獲された。会合は、１：３の希釈率で３００nMから開始して、様々な溶液中濃度のヒトｈＶＥＧＦ１２１、マウスｍＶＥＧＦ１２０、又はラットｒＶＥＧＦ１６４を３０μl/分の流速で３００秒間注入することによって測定された。解離相は、最大１２００秒間までモニタリングし、試料溶液からランニング緩衝液へと切り替えることによってトリガーした。表面は、グリシンｐＨ２．１溶液を用いて３０μl/分の流速で６０秒間洗浄することによって再生された。バルク屈折率の差は、ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ）’_２表面から得られた応答を差し引くことによって修正された。ブランク注射も差し引いた（＝二重参照）。見かけのＫ_Ｄ及び他の動態パラメーターの計算のために、ラングミュア１：１モデルが使用された。結果を表５に示す。

種交差反応性の評価を含む、Ａｎｇ２溶液の親和性
溶液親和性は、平衡混合物中の遊離相互作用対の濃度を決定することによって相互作用の親和性を測定する。溶液親和性アッセイは、一定濃度に保たれた＜ＶＥＧＦ－ＡＮＧ－２＞二重特異的抗体を、様々な濃度のリガンド（＝Ａｎｇ２）と混合することを含む。可能な最大の共鳴単位（例えば１７０００共鳴単位（ＲＵ））の抗体を、ＧＥヘルスケア社によって供給されたアミンカップリングキットを使用して、ｐＨ５．０でＣＭ５チップ（ＧＥヘルスケア社ＢＲ－１００５－３０）表面上に固定した。試料及びシステム緩衝液はＨＢＳ－Ｐ（ｐＨ７．４）であった。フローセルを２５℃に設定し、試料ブロックを１２℃に設定し、ランニング緩衝液を用いて２回プライミングした。検量曲線を作成するために、漸増濃度のＡｎｇ２を、固定された＜ＶＥＧＦ－ＡＮＧ２＞二重特異的抗体を含有しているビアコア（商標）フローセルに注入した。結合したＡｎｇ２の量を、共鳴単位（ＲＵ）として決定し、濃度に対してプロットした。各リガンド（＜ＶＥＧＦ－ＡＮＧ－２＞二重特異的抗体について０～２００nMの１１個の濃度）の溶液を１０nMのＡｎｇ２と共にインキュベートし、室温で平衡に到達させた。遊離Ａｎｇ２濃度は、既知量のＡｎｇ２を含む溶液の応答を測定する前後に作成された検量曲線から決定された。４パラメーターフィットを、ｙ軸として遊離Ａｎｇ２濃度及びｘ軸として阻害のために使用された抗体の濃度を使用して、モデル２０１を使用してＸＬｆｉｔ４（ＩＤＢＳソフトウェア）を用いて設定した。親和性は、この曲線の変曲点を決定することによって計算された。表面は、０．８５％のＨ_３ＰＯ_４溶液を３０μl/分の流速で用いて３０秒間、１回洗浄することによって再生された。バルク屈折率の差は、ブランクの結合した表面から得られた応答を差し引くことによって修正された。結果を表６に示す。

ＦｃＲｎの定常状態における親和性
ＦｃＲｎの測定のために、定常状態の親和性を使用して、互いに対する二重特異的抗体を比較した。ヒトＦｃＲｎを、カップリング緩衝液（１０μg/ml、酢酸ナトリウムｐＨ５．０）に希釈し、２００ＲＵの最終応答となるまで、ビアコア（商標）ウィザードを使用して標的化された固定化手順によって、Ｃ１チップ（ＧＥヘルスケア社ＢＲ－１００５－３５）上に固定した。フローセルは２５℃に設定され、試料ブロックは１２℃に設定され、ランニング緩衝液を用いて２回プライミングした。試料及びシステム緩衝液はＰＢＳ－Ｔ（０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を含む１０mMのリン酸緩衝食塩水）ｐＨ６．０であった。各抗体についての様々なＩｇＧ濃度を評価するために、６２．５nM、１２５nM、及び２５０nM、５００nMの濃度を調製した。流速は３０μl/分に設定され、様々な試料を、１８０秒間の会合時間を選択しながらチップ表面上に連続的に注入した。表面は、３０μl/分の流速で６０秒間注入されたＰＢＳ－Ｔ（ｐＨ８）によって再生された。バルク屈折率の差は、ブランク表面から得られた応答を差し引くことによって修正された。緩衝液の注入も差し引いた（＝二重対照）。定常状態の親和性の計算のために、Ｂｉａ－Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアの方法を使用した。簡潔に言えば、共鳴単位の数値（ＲＵ最大値）を、分析された濃度に対してプロットし、用量反応曲線を得た。２パラメーターフィットに基づいて上漸近線を計算し、最大半値ＲＵ値、及びこれにより親和性を決定することが可能となる。結果を図５及び表７に示す。同様に、カニクイザル、マウス、及びウサギのＦｃＲｎに対する親和性も決定することができる。

ＦｃγＲＩＩＩａの測定
ＦｃγＲＩＩＩａの測定のために、直接的な結合アッセイを使用した。約３０００共鳴単位（ＲＵ）の捕獲システム（１μg/mlのペンタ－Ｈｉｓ；キアゲン社）を、ＧＥヘルスケア社によって供給されたアミンカップリングキットを使用することによって、ｐＨ５．０でＣＭ５チップ（ＧＥヘルスケア社ＢＲ－１００５－３０）上にカップリングした。試料及び試料緩衝液はＨＢＳ－Ｐ＋ｐＨ７．４であった。フローセルを２５℃に設定し（試料ブロックは１２℃に設定された）、ランニング緩衝液を用いて２回プライミングした。ＦｃγＲＩＩＩａ－Ｈｉｓ受容体を、５μl/分の流速で６０秒間１００nMの溶液を注入することによって捕獲した。結合は、１００nMの二重特異的抗体又は単一特異的対照抗体（ＩｇＧ１サブクラス及びＩｇＧ４サブクラスの抗体では抗Ｄｉｇ抗体）を３０μl/分の流速で１８０秒間注入することによって測定された。表面は、グリシン（ｐＨ２．５）溶液を３０μl/分の流速で１２０秒間洗浄することによって再生された。ＦｃγＲＩＩＩａの結合はラングミュア１：１モデルから異なるので、結合のみ／結合無しを、このアッセイを用いて決定した。同じように、ＦｃγＲＩａ及びＦｃγＲＩＩａの結合を決定することができる。結果を図６に示し、ここでは、突然変異Ｐ３２９ＧＬＡＬＡの導入によって、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合をこれ以上検出することができないことが分かる。

＜ＶＥＧＦ－ＡＮＧ－２＞二重特異的抗体に対する独立したＶＥＧＦ及びＡｎｇ－２の結合の評価
約３５００共鳴単位（ＲＵ）の捕獲システム（１０μg/mlのヤギ抗ヒトＩｇＧ；ＧＥヘルスケア・バイオサイエンシーズ社、スウェーデン）を、ＧＥヘルスケア社によって供給されたアミンカップリングキットを使用することによって、ｐＨ５．０でＣＭ４チップ（ＧＥヘルスケア社ＢＲ－１００５－３４）上にカップリングさせた。試料及びシステム緩衝液は、ＰＢＳ－Ｔ（０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を含む１０mMのリン酸緩衝食塩水）ｐＨ７．４であった。フローセルの温度は２５℃に設定され、試料ブロックの温度は１２℃に設定された。捕獲前に、フローセルを、ランニング緩衝液を用いて２回プライミングした。

二重特異的抗体は、１０nMの溶液を５μl/分の流速で６０秒間注入することによって捕獲された。二重特異的抗体に対する各リガンドの独立した結合は、順次又は同時のいずれかで添加（３０μl/分の流速）された各リガンドに対する有効な結合能を決定することによって分析された。

１．２００nMの濃度でヒトＶＥＧＦを１８０秒間注入（抗原の単独結合を同定）
２．１００nMの濃度でヒトＡｎｇ２を１８０秒間注入（抗原の単独結合を同定）
３．２００nMの濃度でヒトＶＥＧＦを１８０秒間注入、その後、１００nMの濃度でヒトＡｎｇ２を１８０秒間さらに注入（ＶＥＧＦの存在下におけるＡｎｇ２の結合を同定）
４．１００nMの濃度でヒトＡｎｇ２を１８０秒間注入、その後、２００nMの濃度でヒトＶＥＧＦをさらに注入（Ａｎｇ２の存在下におけるＶＥＧＦの結合を同定）
５．２００nMの濃度のヒトＶＥＧＦ及び１００nMの濃度のヒトＡｎｇ２を１８０秒間同時注入（同時にＶＥＧＦとＡｎｇ２の結合を同定）

表面は、３mM ＭｇＣｌ_２溶液を３０μl/分の流速で用いて６０秒間洗浄することによって再生された。バルク屈折率の差は、ヤギ抗ヒトＩｇＧ表面から得られた応答を差し引くことによって修正された。

アプローチ３、４及び５の結果として得られた最終シグナルが、アプローチ１及び２の個々の最終シグナルの合計と等しいか又は類似している場合、二重特異的抗体は、互いに独立して両方の抗原に結合することができる。結果は以下の表に示され、ここではＶＥＧＦａｎｇ２－００１６（＝ＲＯ６８６７４６１）は、ＶＥＧＦ及びＡＮＧ２に互いに独立して結合することができることが示される。

＜ＶＥＧＦ－ＡＮＧ－２＞二重特異的抗体に対するＶＥＧＦ及びＡｎｇ２への同時結合の評価
まず、約１６００共鳴単位（ＲＵ）のＶＥＧＦ（２０μg/ml）を、ＧＥヘルスケア社によって供給されたアミンカップリングキットを使用することによって、ｐＨ５．０でＣＭ４チップ（ＧＥヘルスケア社ＢＲ－１００５－３４）上にカップリングさせた。試料及びシステム緩衝液は、ＰＢＳ－Ｔ（０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を含む１０mMのリン酸緩衝食塩水）ｐＨ７．４であった。フローセルは２５℃に設定され、試料ブロックは１２℃に設定され、ランニング緩衝液を用いて２回プライミングされた。第二に、５０nMの二重特異的抗体の溶液を、３０μl/分の流速で１８０秒間注入した。第三に、ｈＡＮＧ－２を、３０μl/分の流速で１８０秒間注入した。ｈＡｎｇ－２の結合応答は、ＶＥＧＦに結合した二重特異的抗体の量に依存し、同時結合を示す。表面は、０．８５％のＨ_３ＰＯ_４溶液を３０μl/分の流速で用いて６０秒間洗浄することによって再生された。同時結合は、事前にＶＥＧＦに結合した＜ＶＥＧＦ－ＡＮＧ－２＞二重特異的抗体に対するｈＡｎｇ２の追加の特異的な結合シグナルによって示される。

Claims

ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とヒトアンジオポエチン－２（ＡＮＧ－２）とに結合する二重特異的抗体を含む、眼血管疾患又は眼血管疾患を患っている患者の処置に使用するための医薬組成物であって、
前記眼血管疾患が、新生血管型加齢黄斑変性（ｎＡＭＤ）であり、
前記ヒトＶＥＧＦとヒトＡＮＧ－２とに結合する二重特異的抗体が、ファリシマブであり、及び
６mgの用量のファリシマブが、１２週まで４週間毎に硝子体内に投与（４回注射）され、続いて６mgの用量のファリシマブが、４８週まで１６週間毎に硝子体内に投与される、前記医薬組成物。