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JP6862428B6 - アミノグリコシド誘導体および遺伝性疾患の治療におけるその使用 - Google Patents

アミノグリコシド誘導体および遺伝性疾患の治療におけるその使用 Download PDF

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Description

本発明は、その一部の実施態様において、アミノグリコシド、より詳細には、これらに限定されないが新規のアミノグリコシド誘導体、ならびに終止コドン変異を有する遺伝子の発現を増加させること、および／または遺伝性疾患の治療におけるその使用に関する。
多くのヒト遺伝性疾患は、３つの終止コドン（ＵＡＡ、ＵＡＧまたはＵＧＡ）の１つがアミノ酸をコードするコドンを置き換えることで、翻訳の早期終結を生じ、最終的にはトランケートされた不活性タンパク質をもたらすナンセンス変異に起因する。現在のところ何百ものこのようなナンセンス変異が公知であり、そのうち数種が、例えば嚢胞性線維症（ＣＦ：ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ：Ｄｕｃｈｅｎｎｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、毛細血管拡張性運動失調、ハーラー症候群、血友病Ａ、血友病Ｂ、テイ−サックス病、レット症候群、アッシャー症候群、重度の表皮水疱症などの致死的疾患の特定の症例において、主原因であることが示されている。このような疾患の多くに関して、現在のところ有効な治療はない。
一部のアミノグリコシド化合物は、リボソームによる終止コドン変異のリードスルーを誘導し、ｍＲＮＡ分子の一部から全長タンパク質を生成する能力を有することから、数種の遺伝病の治療において治療的価値を有することが示されている。
アミノグリコシドは、高い有用性を有する広域抗生物質であり、生命を脅かす感染の治療に一般的に使用されている。アミノグリコシド抗生物質、例えばパロモマイシンの作用機序（図１を参照）は、原核生物のリボソームとの相互作用、より具体的には１６ＳリボソームＲＮＡのデコード領域のＡ部位に結合することを含み、それによりタンパク質翻訳の阻害および翻訳忠実度への干渉が生じるということが認められている。
細菌リボソーム構造の決定における数々の成功と、それに加えて細菌のＡ部位のオリゴヌクレオチドモデルの結晶構造およびＮＭＲ構造が、原核生物細胞におけるデコーデイング・メカニズムの理解、およびアミノグリコシドがどのようにしてその有害な遺伝子コードの読み違えを引き起こすのかの理解のための有用な情報をもたらした。これらの研究などから、対応しないｍＲＮＡ−ｔＲＮＡ複合体に対するＡ部位の親和性は、アミノグリコシドの結合によって増加し、リボソームが対応しない複合体と対応する複合体とを効率的に識別しないようにするという仮説が立てられている。
真核生物におけるアミノグリコシドによる終結抑制の増強は、原核生物においてアミノグリコシドがタンパク質合成中に翻訳忠実度に干渉するメカニズムと同様に生じると考えられる。すなわち、特定のアミノグリコシドのリボソームＡ部位への結合は、放出因子を挿入する代わりに、ほぼ対応する（ｎｅａｒ−ｃｏｇｎａｔｅ）ｍＲＮＡ−ｔＲＮＡ複合体を安定化させるコンフォメーションの変化を誘導すると考えられる。アミノグリコシドは、様々な終止コドンを顕著に異なる効率で抑制することが示されており（ＵＧＡ＞ＵＡＧ＞ＵＡＡ）、抑制の有効性は、終止コドンのすぐ下流の第４のヌクレオチドの種類（Ｃ＞Ｕ＞Ａ≧Ｇ）のみならず、終止コドン周辺の局所的な配列関係にさらに依存することが見出された。
有効なリードスルー薬の望ましい特徴は、経口投与用であることと、細菌への作用がほとんどないことと考えられる。リードスルー薬の抗微生物活性は、抗生物質のいかなる不必要な使用もそうであるように、特に胃腸（ＧＩ：ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ）の生物相にとって望ましいものではない。これは、ＧＩ生物相の平衡を壊し、耐性が出現ことにより生じる副作用故である。この点において、上述の制約に加えて、臨床用のアミノグリコシドの大半は、細菌リボソームに対して極めて選択的であり、ヒト細胞の細胞質リボソームに対して有意な作用を発揮することはない。
上述の制約を回避する目的で、生物医薬産業は、ナンセンスリードスルー活性に関して大きな化学物質ライブラリーをスクリーニングすることで、新しい終止コドン変異抑制薬を探索している。
嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御タンパク質（ＣＦＴＲ：ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）終止コドン変異のアミノグリコシド媒介抑制の最初の実験は、気管支上皮細胞株における機能的な全長ＣＦＴＲの出現の測定によって、ＣＦＴＲ遺伝子に見出される未成熟終止コドン変異は、ゲンタマイシンファミリーのメンバーおよびｇｅｎｉｔｉｃｉｎ（登録商標）（Ｇ−４１８）により抑制できることを明かにした（図１を参照）。
ヒトＣＦＴＲ−Ｇ５４２Ｘ導入遺伝子を有するＣＦＴＲ−／−トランスジェニックマウス変異体由来の腸組織の抑制実験によって、ゲンタマイシンによる処置、それより程度は低いがトブラマイシンによる処置は、処置マウスの腺におけるヒトＣＦＴＲタンパク質の出現を引き起こすことが示された。最も重要なことに、二重盲検プラセボ対照交差試験を使用した臨床研究から、ゲンタマイシンは、罹患した患者において終止コドン変異を抑制できること、さらに、ゲンタマイシンによる治療は、ＣＦＴＲ終止コドン変異を有する患者１９人のグループにおいて、鼻粘膜を通過する膜貫通コンダクタンスを改善することが示された。インビトロの系、培養細胞株、または動物モデルでアミノグリコシドの治療的可能性が試験された他の遺伝性疾患としては、ＤＭＤ、ハーラー症候群、腎性尿崩症、腎症性シスチン症、網膜色素変性症、および毛細血管拡張性運動失調が挙げられる。
しかしながら、医薬品としてのアミノグリコシドの使用における主要な制約の１つは、哺乳動物に対するその高い毒性であり、典型的には腎臓（腎毒性）疾患および耳に関連する（聴器毒性）疾患で出現する。この毒性の起源は、例えばリン脂質との相互作用、ホスホリパーゼの阻害、およびフリーラジカルの形成などの様々な要因およびメカニズムの組合せに起因すると推定される。細菌リボソームに選択的であるとみなされているにもかかわらず、大部分のアミノグリコシドは、細菌のＡ部位に対するよりも低い親和性ではあるが、真核生物のＡ部位にも結合する。また哺乳類細胞における翻訳の阻害も、これらの薬剤の高い毒性の原因となり得る要因の１つである。その細胞傷害性に寄与しうる別の要因は、細菌のＡ部位に極めて近い配列を有する、ミトコンドリアリボソームの１２Ｓ ｒＲＮＡのＡ部位に対するアミノグリコシドの結合である。
アミノグリコシドに関連する毒性を軽減する方法を理解し提供するために多くの研究が試みられており、そのような研究には、フリーラジカルレベルを低減するための抗酸化剤の使用、加えてアミノグリコシドがリン脂質と相互作用する能力を低減するためのポリ−Ｌ−アスパルテートおよびダプトマイシンの使用などが含まれる。近年、アミノグリコシドの取り込みにおけるメガリン（特に近位尿細管および内耳に豊富に存在するマルチリガンドのエンドサイトーシス受容体）の役割が明らかになっている。また、アミノグリコシドのメガリンへの結合と競合するアゴニストの投与も、アミノグリコシドの取り込みおよび毒性の低減をもたらした。加えて、毒性を低減するための手段として、アミノグリコシドの投与のスケジュールおよび／または投与方式の変更についての調査も行われている。
アミノグリコシドの毒性を低減しようとする多大な努力にもかかわらず、投与スケジュールの変更以外には、終止コドン変異を抑制するためのアミノグリコシド投与の標準的な臨床診療および手順にまで発展した結果はほとんどなかった。例えば、臨床試験におけるゲンタマイシンの毒性水準未満の用量の使用は、インビトロの系と比較して、インビボの実験で得られるリードスルー効率の低減を引き起こす可能性が高かった。アミノグリコシドであるｇｅｎｅｔｉｃｉｎ（登録商標）（Ｇ−４１８硫酸塩または単にＧ−４１８としても公知である。図１を参照）は、インビトロの翻訳−転写系において最良の終結抑制活性を示したが、極めて低濃度であっても致死性を有することから、その治療剤としての使用は不可能である。例えば、ヒト線維芽細胞に対するＧ−４１８のＬＤ５０は、０．０４ｍｇ／ｍｌであるが、それと比較してゲンタマイシン、ネオマイシンおよびカナマイシンの場合は２．５〜５．０ｍｇ／ｍｌである。
一部のアミノグリコシド薬物、例えばＧ−４１８およびゲンタマイシン、に対する真核生物のリボソームの感受性の増加は興味深いが、それらが真核生物のリボソームと相互作用しているときの十分な構造データがないためにこれまで合理的に説明することはできなかった。Ｇ−４１８は非常に低濃度であっても極めて毒性が高いため、現状においては、ゲンタマイシンが様々な動物モデルおよび臨床試験で試験された唯一のアミノグリコシドである。アミカシンおよびパロモマイシンは、培養細胞に対してゲンタマイシンよりも比較的低毒性であり、終止コドン変異抑制療法のためのゲンタマイシンの代替物の代表になり得ることが一部の研究から示されているが、これらアミノグリコシドを用いた臨床試験はまだ報告されていない。
これまでほぼ全ての抑制実験が臨床用の市販のアミノグリコシドを用いて実行されてきたが、ゲンタマイシン、アミカシン、およびトブラマイシンといった限られた数のアミノグリコシドしか、ヒトの内服用の抗生物質として臨床で使用されていない。これらのなかでも、トブラマイシンは終止コドン変異抑制活性を有さず、ゲンタマイシンが、動物モデルおよび臨床試験で終止コドン変異抑制活性に関して試験された唯一のアミノグリコシドである。近年、一連のネアミン誘導体が、脊髄性筋萎縮症（ＳＰＡ；ｓｐｉｎａｌ ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ）患者由来の線維芽細胞におけるＳＭＮタンパク質のリードスルーを促進することが示されたが、これらの化合物は元々、抗生物質として設計されたものであり、これらの誘導体のリードスルー活性のさらなる改善に関して何の結論も得られなかった。
ＷＯ２００７／１１３８４１およびＷＯ２０１２／０６６５４６は、哺乳類細胞における低い細胞傷害性および低い抗微生物活性を発揮しながらも、高い未成熟終止コドン変異に対するリードスルー活性を示すように設計された、パロモマイシン由来のアミノグリコシドのクラスを開示しており、したがってこれらは、遺伝病の治療に使用することができる。このパロモマイシン由来のアミノグリコシドのクラスは、パロマミンのコアに、リードスルー活性の増強ならびに毒性および抗微生物活性の低下をもたらす特定の操作を施すことによって設計された。この操作は、パロマミンのコアの数々の位置になされた。
Figure 0006862428
これらの公報で教示されている例示的なパロマミンのコアの操作としては、アミノグリコシドのコアの６’位のヒドロキシル基；アミノグリコシドのコアの３’位、５位および／または６位への１つまたは複数の単糖部分またはオリゴ糖部分の導入；パロマミンのコアの１位への（Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）部分の導入；アルキル、例えばメチル置換基などによる６’位の水素の置換；および５”位へのアルキル基の導入が挙げられる。
追加の背景技術としては、Nudelman, I., et al., Bioorg Med Chem Lett, 2006. 16(24): p. 6310-5、Hobbie, S.N., et al., Nucleic Acids Res, 2007. 35(18): p. 6086-93、Kondo, J., et al., Chembiochem, 2007. 8(14): p. 1700-9、Rebibo-Sabbah, A., et al., Hum Genet, 2007. 122(3-4): p. 373-81、Azimov, R., et al., Am J Physiol Renal Physiol, 2008. 295(3): p. F633-41、Hainrichson, M., et al., Org Biomol Chem, 2008. 6(2): p. 227-39、Hobbie, S.N., et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2008. 105(52): p. 20888-93、Hobbie, S.N., et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2008. 105(9): p. 3244-9、Nudelman, I., et al., Adv. Synth. Catal., 2008. 350: p. 1682-1688、Nudelman, I., et al., J Med Chem, 2009. 52(9): p. 2836-45、Venkataraman, N., et al., PLoS Biol, 2009. 7(4): p. e95、Brendel, C., et al., J Mol Med (Berl), 2010. 89(4): p. 389-98、Goldmann, T., et al., Invest Ophthalmol Vis Sci, 2010. 51(12): p. 6671-80、Malik, V., et al., Ther Adv Neurol Disord, 2010. 3(6): p. 379-89、Nudelman, I., et al., Bioorg Med Chem, 2010. 18(11): p. 3735-46、Warchol, M.E., Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg, 2010. 18(5): p. 454-8、Lopez-Novoa, J.M., et al., Kidney Int, 2011. 79(1): p. 33-45、Rowe, S.M., et al., J Mol Med (Berl), 2011. 89(11): p. 1149-61、Vecsler, M., et al., PLoS One, 2011. 6(6): p. e20733、米国特許第３，８９７，４１２号、４，０２４，３３２号、４，０２９，８８２号、および３，９９６，２０５号、Greenberg et al., J. Am. Chem. Soc., 1999, 121, 6527-6541、Kotra et al., antimicrobial agents and chemotherapy, 2000, p. 3249-3256、Haddad et al., J. Am. Chem. Soc., 2002, 124, 3229-3237、Kandasamy, J. et al., J. Med. Chem. 2012, 55, pp. 10630-10643、Duscha, S. et al., MBio, 2014, 5(5), p. e01827-14、Huth, M.E. et al., J Clin Invest., 2015, 125(2), pp. 583-92、Shulman, E. et al., J Biol Chem., 2014, 289(4), pp. 2318-30、ならびにフランス国特許第２，４２７，３４１号、日本国特許４０４６１８９号が挙げられる。これらの文献の全ての教示は、本明細書に全体が記載されたものとして参照により組み込まれる。
本発明は、アミノグリコシドに関し、当該アミノグリコシドは、未成熟終止コドン変異に対する高いリードスルー活性、哺乳類細胞における低毒性、および低抗微生物活性に加えて、改善されたバイオアベイラビリティーおよび／または細胞透過性を示し、遺伝病の治療において有利に使用することができる。ここで開示されるアミノグリコシドは、パロモマイシンの環Ｉ、環ＩＩおよび任意選択で環ＩＩＩをベースとしたコア構造を特徴とする。
本発明の一部実施形態の態様によれば、式Ｉにより表される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
Figure 0006862428
（式中：
点線は、６’位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
Ｘ１は、ＯまたはＳであり；
環Ｉ中のＣ４’とＣ５’との間の破線の結合は、単結合または二重結合を表し；
環Ｉ中のＣ４’とＣ３’との間の破線の結合は、単結合または二重結合を表し；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ独立に、水素、アルキルもしくはシクロアルキルであるか、または存在せず、Ｃ４’とＣ５’との間の破線の結合が二重結合である場合、少なくともＲｚは存在せず、Ｃ４’とＣ３’との間の破線の結合が二重結合である場合、少なくともＲｙ１は存在せず；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルから選択され、これらはそれぞれ置換または非置換であるか、あるいは、それぞれＲ７〜Ｒ９に関して本明細書で定義された通りであってもよく；
Ｒ１は、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアミド、アシル、カルボキシレート、ならびに飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換のヒドロキシアルキル（例えば、−ＣＨ２−ＯＨ）からなる群から選択され；
Ｒ２は、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルからなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロ脂環式、アリール、ヘテロアリール、アミンおよびＯＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６は、独立に、水素、単糖部分、オリゴ糖部分、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルから選択されるか、または存在せず、Ｃ４’とＣ５’との間の破線の結合が二重結合である場合、Ｒ３は任意選択で存在せず、Ｃ４’とＣ３’との間の破線の結合が二重結合である場合、Ｒ４は任意選択で存在せず；
Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロ脂環式、アリール、ヘテロアリール、アミンおよびＯＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６は、独立に、水素、単糖部分、オリゴ糖部分、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルから選択され；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、本明細書で定義されたような水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、カルボキシレート、スルホニル（アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルなど）および細胞透過性基からなる群から選択される）。
本明細書にわたり、環Ｉ、環ＩＩおよび環ＩＩＩが存在する場合、それらのの立体配置は、いかなる可能な、適合性を有する配置であってもよい。したがって、本明細書で示す一般式中のこれら環の例示に限定されないことに留意されたい。例示的な立体配置は、以下に示す。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうちの少なくとも１つはＯＲ１６である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１６はアリールである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうちの少なくとも１つは、フェニルオキシ、１−アントリルオキシ、１−ナフチルオキシ、２−ナフチルオキシ、２−フェナントリルオキシおよび９−フェナントリルオキシからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１６は置換または非置換のヘテロアリールであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうちの少なくとも１つは、独立に、置換または非置換のヘテロアリールオキシである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうちの少なくとも１つは、独立に、２−アントリルオキシ、２−フリルオキシ、２−インドリルオキシ、２−ナフチルオキシ、２−ピリジルオキシ、２−ピリミジルオキシ、２−ピリルオキシ、２−キノリルオキシ、２−チエニルオキシ、３−フリルオキシ、３−インドリルオキシ、３−チエニルオキシ、４−イミダゾリルオキシ、４−ピリジルオキシ、４−ピリミジルオキシ、４−キノリルオキシ、５−メチル−２−チエニルオキシおよび６−クロロ−３−ピリジルオキシからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１６は置換アリールである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうちの少なくとも１つはＯＲ１６であり、Ｒ１６は、独立に、２−（Ｎ−エチルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−ヘキシルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、２，４−ジメトキシフェニル、２−アセトアミドフェニル、２−アミノフェニル、２−カルボキシフェニル、２−クロロフェニル、２−エトキシフェニル、２−フルオロフェニル、２−ヒドロキシメチルフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−メトキシカルボニルフェニル、２−メトキシフェニル、２−メチルフェニル、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジブチルアミノ）フェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、３，４−ジクロロフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、３，５−ジメトキシフェニル、３−アミノフェニル、３−ビフェニリル、３−カルボキシフェニル、３−クロロ−４−メトキシフェニル、３−クロロフェニル、３−エトキシカルボニルフェニル、３−エトキシフェニル、３−フルオロフェニル、３−ヒドロキシメチルフェニル、３−ヒドロキシフェニル、３−イソアミルオキシフェニル、３−イソブトキシフェニル、３−イソプロポキシフェニル、３−メトキシフェニル、３−メチルフェニル、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、３−トリル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−（ベンジルオキシ）フェニル、４−（イソプロポキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジヘキシルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ペンチルアミノ）フェニル、４−（ｎ−ヘキシルオキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−アミノフェニル、４−ベンジルオキシフェニル、４−ビフェニリル、４−ブトキシフェニル、４−ブチルアミドフェニル、４−カルボキシフェニル、４−クロロフェニル、４−エトキシカルボニルフェニル、４−ヘキサンアミドフェニル、４−ヒドロキシメチルフェニル、４−ヒドロキシフェニル、４−ヨードフェニル、４−イソブチルフェニル、４−イソブチルアミドフェニル、４−イソプロポキシフェニル、４−イソプロピルフェニル、４−メトキシフェニル、４−メチルフェニル、４−ｎ−ヘキサンアミドフェニル、４−ｎ−ヘキシルオキシフェニル、４−ｎ−ヘキシルフェニル、４−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、４−プロピオンアミドフェニル、４−トリル、４−トリフルオロメチルフェニルおよび４−バレロイルオキシカルボニルフェニルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ３はＯＲ１６であり、Ｒ１６は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ３はＯＲ１６であり、Ｒ１６は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、プロペニル、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、２，３−ジヒドロキシプロピルおよびメトキシメチルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうちの少なくとも１つまたはそれぞれは、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、独立に、アシルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれはＯＲ１６であり、Ｒ１６は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうちの少なくとも１つはＯＲ１６であり、Ｒ１６は単糖部分である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、単糖部分は、式ＩＩにより表される。
Figure 0006862428
（式中：
波線は、結合位置を意味し；
点線は、５”位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
Ｘ２は、ＯＲ１３またはＮＲ１４Ｒ１５であり；
Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３は、それぞれ独立に、、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、およびアシルからなる群から選択され；
Ｒ１２は、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアミド、アシル、カルボキシレート、ならびに飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換のヒドロキシアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１４およびＲ１５は、それぞれ独立に、、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、アシル、および細胞透過性基からなる群から選択されるか、あるいは、Ｒ１４およびＲ１５は存在する場合、共同で複素環を形成する）。
式ＩＩにおいて、例えば６’、１”、２”、３”、４”および５”などの位置に示されていない置換基は、典型的には水素であるが、例えば、これらに限定されないが、Ｒｙ２〜Ｒｙ９に関して定義した他の置換基であることも想定される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本化合物は式Ｉｂにより表される。
Figure 0006862428
式Ｉｂにおいて、例えば、６’、１”、２”、３”、４”および５”などの位置に示されていない置換基は、典型的には水素であるが、例えば、これらに限定されないが、Ｒｙ２〜Ｒｙ９に関して定義した他の置換基であることも想定される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｘ２はＯＲ１３である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｘ２はＮＲ１４Ｒ１５である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１２は水素以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３のうちの少なくとも１つは、存在する場合にはアシルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｘ１はＯである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、環Ｉ中のＣ４’とＣ５’との間の結合は単結合である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、環Ｉ中のＣ４’とＣ５’との間の結合は二重結合であり、ＲｘまたはＲ３およびＲｚは存在しない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、環Ｉ中のＣ４’とＣ３’との間の結合は単結合である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、環Ｉ中のＣ４’とＣ３’との間の結合は二重結合であり、ＲｘまたはＲ４およびＲｙ１は存在しない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は水素以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１はヒドロキシアルキルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１はヒドロキシメチルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のアルケニル、または置換もしくは非置換のアルキニルであるかまたはそれを含む。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、ブチルおよびペンチルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、アリールであるかまたはそれを含む。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、フェニル、１−アントリル、１−ナフチル、２−ナフチル、２−フェナントリルおよび９−フェナントリルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、置換または非置換のヘテロアリールであるかまたはそれを含む。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、２−アントリル、２−フリル、２−インドリル、２−ナフチル、２−ピリジル、２−ピリミジル、２−ピリル、２−キノリル、２−チエニル、３−フリル、３−インドリル、３−チエニル、４−イミダゾリル、４−ピリジル、４−ピリミジル、４−キノリル、５−メチル−２−チエニルおよび６−クロロ−３−ピリジルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、置換アリールであるかまたはそれを含む。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、２−（Ｎ−エチルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−ヘキシルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、２，４−ジメトキシフェニル、２−アセトアミドフェニル、２−アミノフェニル、２−カルボキシフェニル、２−クロロフェニル、２−エトキシフェニル、２−フルオロフェニル、２−ヒドロキシメチルフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−メトキシカルボニルフェニル、２−メトキシフェニル、２−メチルフェニル、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジブチルアミノ）フェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、３，４−ジクロロフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、３，５−ジメトキシフェニル、３−アミノフェニル、３−ビフェニリル、３−カルボキシフェニル、３−クロロ−４−メトキシフェニル、３−クロロフェニル、３−エトキシカルボニルフェニル、３−エトキシフェニル、３−フルオロフェニル、３−ヒドロキシメチルフェニル、３−ヒドロキシフェニル、３−イソアミルオキシフェニル、３−イソブトキシフェニル、３−イソプロポキシフェニル、３−メトキシフェニル、３−メチルフェニル、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、３−トリル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−（ベンジルオキシ）フェニル、４−（イソプロポキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジヘキシルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ペンチルアミノ）フェニル、４−（ｎ−ヘキシルオキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−アミノフェニル、４−ベンジルオキシフェニル、４−ビフェニリル、４−ブトキシフェニル、４−ブチルアミドフェニル、４−カルボキシフェニル、４−クロロフェニル、４−エトキシカルボニルフェニル、４−ヘキサンアミドフェニル、４−ヒドロキシメチルフェニル、４−ヒドロキシフェニル、４−ヨードフェニル、４−イソブチルフェニル、４−イソブチルアミドフェニル、４−イソプロポキシフェニル、４−イソプロピルフェニル、４−メトキシフェニル、４−メチルフェニル、４−ｎ−ヘキサンアミドフェニル、４−ｎ−ヘキシルオキシフェニル、４−ｎ−ヘキシルフェニル、４−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、４−プロピオンアミドフェニル、４−トリル、４−トリフルオロメチルフェニルおよび４−バレロイルオキシカルボニルフェニルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、アミンであるかまたはそれを含む。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ１は、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨおよび−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＣＨ３）２からなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ２は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ２はアルキルであり、好ましくはメチル、エチルおよびプロピルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ２はアシルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ７は、水素、（Ｒ／Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）、（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオネート（ＡＨＰ）、（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオニル、５−アミノペンタノイル、５−ヒドロキシペンタノイル、ホルミル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−メチル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−エチル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ベンジル、−β−アミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−アミノ−α−ヒドロキシバレリル、−β−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシバレリル、メチルスルホニル、フェニルスルホニル、ベンゾイル、プロピル、イソプロピル、−（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）５ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ−エチル、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ（−ＮＨ２）ＣＨ２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＯＨ）ＣＨ２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＯＨ）−（ＣＨ２）２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＮＨ２）−（ＣＨ２）２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＣＨ２ＮＨ２）−（ＣＨ２ＯＨ）、−（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）２、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２−フェニル、−ＣＨ（ｉ−プロピル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ベンジル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＯＨおよび−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２からなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、水素、（Ｒ／Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）、（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオネート（ＡＨＰ）、（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオニル、５−アミノペンタノイル、５−ヒドロキシペンタノイル、ホルミル、−ＣＯＯ−メチル、−ＣＯＯ−エチル、−ＣＯＯ−ベンジル、−β−アミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−アミノ−α−ヒドロキシバレリル、−β−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシバレリル、メチルスルホニル、フェニルスルホニル、ベンゾイル、プロピル、イソプロピル、−（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）５ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ−エチル、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ（−ＮＨ２）ＣＨ２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＯＨ）ＣＨ２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＯＨ）−（ＣＨ２）２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＮＨ２）−（ＣＨ２）２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＣＨ２ＮＨ２）−（ＣＨ２ＯＨ）、−（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）２、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２−フェニル、−ＣＨ（ｉ−プロピル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ベンジル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＯＨおよび−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２からなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシルは、（Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、細胞透過性基はグアニジルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本明細書に記載の非置換のアリールは、フェニル、１−アントリル、１−ナフチル、２−ナフチル、２−フェナントリルおよび９−フェナントリルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本明細書に記載の置換または非置換のヘテロアリールは、２−アントリル、２−フリル、２−インドリル、２−ナフチル、２−ピリジル、２−ピリミジル、２−ピリル、２−キノリル、２−チエニル、３−フリル、３−インドリル、３−チエニル、４−イミダゾリル、４−ピリジル、４−ピリミジル、４−キノリル、５−メチル−２−チエニルおよび６−クロロ−３−ピリジルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本明細書に記載の置換アリールは、２−（Ｎ−エチルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−ヘキシルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、２，４−ジメトキシフェニル、２−アセトアミドフェニル、２−アミノフェニル、２−カルボキシフェニル、２−クロロフェニル、２−エトキシフェニル、２−フルオロフェニル、２−ヒドロキシメチルフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−メトキシカルボニルフェニル、２−メトキシフェニル、２−メチルフェニル、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジブチルアミノ）フェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、３，４−ジクロロフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、３，５−ジメトキシフェニル、３−アミノフェニル、３−ビフェニリル、３−カルボキシフェニル、３−クロロ−４−メトキシフェニル、３−クロロフェニル、３−エトキシカルボニルフェニル、３−エトキシフェニル、３−フルオロフェニル、３−ヒドロキシメチルフェニル、３−ヒドロキシフェニル、３−イソアミルオキシフェニル、３−イソブトキシフェニル、３−イソプロポキシフェニル、３−メトキシフェニル、３−メチルフェニル、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、３−トリル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−（ベンジルオキシ）フェニル、４−（イソプロポキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジヘキシルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ペンチルアミノ）フェニル、４−（ｎ−ヘキシルオキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−アミノフェニル、４−ベンジルオキシフェニル、４−ビフェニリル、４−ブトキシフェニル、４−ブチルアミドフェニル、４−カルボキシフェニル、４−クロロフェニル、４−エトキシカルボニルフェニル、４−ヘキサンアミドフェニル、４−ヒドロキシメチルフェニル、４−ヒドロキシフェニル、４−ヨードフェニル、４−イソブチルフェニル、４−イソブチルアミドフェニル、４−イソプロポキシフェニル、４−イソプロピルフェニル、４−メトキシフェニル、４−メチルフェニル、４−ｎ−ヘキサンアミドフェニル、４−ｎ−ヘキシルオキシフェニル、４−ｎ−ヘキシルフェニル、４−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、４−プロピオンアミドフェニル、４−トリル、４−トリフルオロメチルフェニルおよび４−バレロイルオキシカルボニルフェニルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本明細書に記載のアシルは、任意選択でハロ、ニトロ、ヒドロキシ、アミン、シアノ、チオシアノ、およびアルコキシの１つまたは複数で置換されていてもよい、２から１８個の炭素原子を有する炭化水素アシルラジカルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、アシルは、飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換の脂肪族カルボン酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、吉草酸、イソ吉草酸、カプロン酸、カプリル酸、デカン酸、ドデカン酸、ラウリン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アクリル酸、クロトン酸、ウンデシレン酸、オレイン酸、ヘキシン酸、ヘプチン酸、オクチン酸、飽和または不飽和の脂環式カルボン酸、シクロブタンカルボン酸、シクロペンタンカルボン酸、シクロペンテンカルボン酸、メチルシクロペンテンカルボン酸、シクロヘキサンカルボン酸、ジメチルシクロヘキサンカルボン酸、ジプロピルシクロヘキサンカルボン酸、飽和または不飽和の脂環式の脂肪族カルボン酸、シクロペンタン酢酸、シクロペンタンプロピオン酸、シクロヘキサン酢酸、シクロヘキサン酪酸、メチルシクロヘキサン酢酸、置換または非置換の芳香族カルボン酸、安息香酸、トルイル酸、ナフトエ酸、エチル安息香酸、イソブチル安息香酸、メチルブチル安息香酸、芳香族脂肪族カルボン酸、フェニル酢酸、フェニルプロピオン酸、フェニル吉草酸、ケイ皮酸、フェニルプロピオル酸、ナフチル酢酸、ハロアルコキシ炭化水素カルボン酸、ニトロアルコキシ炭化水素カルボン酸、ヒドロキシアルコキシ炭化水素カルボン酸、アミノアルコキシ炭化水素カルボン酸、シアノアルコキシ炭化水素カルボン酸、チオシアノアルコキシ炭化水素カルボン酸、モノ酢酸、ジ酢酸、トリクロロ酢酸、１，２，３，４，５，６−ヘキサクロロシクロヘキサンカルボン酸、１，２−ジブロモ−４−メチルシクロヘキサンカルボン酸、１，６−ジブロモ−３−メチルシクロヘキサンカルボン酸、１−ブロモ−３，５−ジメチルシクロヘキサンカルボン酸、２−クロロシクロヘキサンカルボン酸、４−クロロシクロヘキサンカルボン酸、２，３−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、２，４，６−トリニトロ安息香酸、２，５−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、２−ブロモ−４−メチルシクロヘキサンカルボン酸、２−ニトロ−１−メチル−シクロブタンカルボン酸、３，４−ジニトロ安息香酸、３，５−ジニトロ安息香酸、３−ブロモ−２，２，３−トリメチルシクロペンタンカルボン酸、３−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、３−ブロモ−３−メチルシクロヘキサンカルボン酸、４−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、５−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、４，４’−ジクロロベンジル酸、４，５−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、５−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、６−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、５，６−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、６−ブロモ−３−メチルシクロヘキサンカルボン酸、アニス酸、シアノ酢酸、シアノプロピオン酸、エトキシギ酸（炭酸水素エチル）、没食子酸、ホモゲンチジン酸、ｏ−、ｍ−、およびｐ−クロロ安息香酸、乳酸、メバロン酸、ｏ−、ｍ−、ｐ−ニトロ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、サリチル酸、シキミ酸、チオシアノ酢酸、トリメトキシ安息香酸、トリメトキシケイ皮酸、ベラトルム酸、α−およびβ−クロロプロピオン酸、α−およびγ−ブロモ酪酸ならびにα−およびδ−ヨード吉草酸、β−レソルシル酸からなる群から選択される酸から誘導されるものである。
本発明の一部実施形態の態様によれば、本明細書の実施形態のいずれか１つに記載の化合物およびそれらのあらゆる組合せと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、医薬組成物は、未成熟終止コドンのトランケーション変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型を伴う遺伝性疾患の治療で使用するために、パッケージング材料中に梱包され、パッケージング材料の表面またはその内部に、その識別が印刷されたものである。
本発明の一部実施形態の態様によれば、未成熟終止コドンのトランケーション変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型を伴う遺伝性疾患を治療するための方法であって、上記遺伝性疾患の治療を必要とする対象に、治療有効量の本明細書の実施形態のいずれか１つに記載される化合物およびそれらのあらゆる組合せを投与することを含む方法を提供する。
本発明の一部実施形態の態様によれば、未成熟終止コドンのトランケーション変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型を伴う遺伝性疾患の治療で使用するための、本明細書の実施形態のいずれか１つに記載の化合物およびそれらのあらゆる組合せを提供する。
本発明の一部実施形態の態様によれば、未成熟終止コドンのトランケーション変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型を伴う遺伝性疾患を治療するための医薬品の製造における、本明細書の実施形態のいずれか１つに記載される化合物およびそれらのあらゆる組合せの使用を提供する。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、遺伝性疾患は、嚢胞性線維症（ＣＦ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、毛細血管拡張性運動失調、ハーラー症候群、血友病Ａ、血友病Ｂ、アッシャー症候群、テイ−サックス病、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ：Ｂｅｃｋｅｒ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、先天性筋ジストロフィー（ＣＭＤ：Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、第ＶＩＩ因子欠乏症、家族性心房細動、ヘイリー−ヘイリー病、マッカードル病、ムコ多糖症、腎症性シスチン症、多発性嚢胞腎、レット症候群、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ：Ｓｐｉｎａｌ ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ）、シスチン症、重度の表皮水疱症、ドラベ症候群、Ｘ連鎖性腎性尿崩症（ＸＮＤＩ：Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ ｎｅｐｈｒｏｇｅｎｉｃ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎｓｉｐｉｄｕｓ）、Ｘ連鎖性網膜色素変性症およびがんからなる群から選択される。
本発明の一部実施形態の態様によれば、未成熟終止コドン変異を有する遺伝子の発現レベルを増加させる方法であって、本明細書の対応する実施形態のいずれかに記載の化合物およびそれらのあらゆる組合せの存在下で、遺伝子をタンパク質に翻訳することを含む方法を提供する。
本発明の一部実施形態の態様によれば、未成熟終止コドン変異を有する遺伝子の発現レベルを増加させるために使用するための、本明細書の対応する実施形態のいずれかに記載の化合物およびそれらのあらゆる組合せを提供する。
本発明の一部実施形態の態様によれば、未成熟終止コドン変異を有する遺伝子の発現レベルを増加させるための医薬品の製造における、本明細書の対応する実施形態のいずれかに記載の化合物およびそれらのあらゆる組合せの使用を提供する。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、未成熟終止コドン変異は、ＵＧＡ、ＵＡＧおよびＵＡＡからなる群から選択されるＲＮＡコードを有する。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、タンパク質は、細胞質内の翻訳系で翻訳される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本化合物を、変異抑制量で使用する。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、真核生物の細胞質内の翻訳系における本化合物の翻訳阻害ＩＣ５０は、リボソームの翻訳系における本化合物の翻訳阻害ＩＣ５０より大きい。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、真核生物の細胞質内の翻訳系における本化合物の翻訳阻害ＩＣ５０は、原核生物の翻訳系における本化合物の翻訳阻害ＩＣ５０より大きい。
別段の指定がない限り、本明細書で使用される全ての技術的および／または科学的な用語は、本発明が関連する当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で説明したものに類似した、または同等な方法および材料も本発明の実施形態の実施または試験で使用することができるが、例示的な方法および／または材料が後述される。矛盾がある場合、定義を含めて本特許明細書が優先される。加えて、材料、方法、および実施例は単なる例示にすぎず、必ずしも限定を意図するものではない。
単なる例示として、添付の図面を参照しながら、本発明のいくつかの実施形態について記載する。ここで、具体的な図面に詳細に参照するが、ここに示す詳細は例示に過ぎず、本発明の実施形態を例証するための考察を目的とすることを強調する。この観点から、図面とともに本記載を検討することで、当業者には、いかに本発明の実施形態を実施するかが明らかとなる。
図１（背景技術）は、アミノグリコシドの公知ファミリーの一部の化学構造を示す図である。 図２Ａ〜２Ｃは、未成熟終止コドン変異Ｒ１６８Ｘ（図２Ａ）、Ｒ２７０Ｘ（図２Ｂ）およびＲ２９４Ｘ（図２Ｃ）を生じるレット症候群のリードスルーレベルを示す比較棒グラフであり、当該レベルは、０．３ｍＭおよび１ｍＭの濃度の本発明の一部の実施形態に係る例示化合物か、対照試料（化合物の添加なし）と、発現ＨＥＫ２９３細胞とを接触させて測定および計算した、ホタル／ウミシイタケ発現比率と野生型（ＷＴ）で観察された発現比率との比較に基づくものである。 図３Ａ〜３Ｃは、未成熟終止コドン変異Ｒ１６８Ｘ（図３Ａ）、Ｒ２７０Ｘ（図３Ｂ）およびＲ２９４Ｘ（図３Ｃ）を生じるレット症候群のリードスルーレベルを示す比較棒グラフであり、当該レベルは、０．３ｍＭおよび１ｍＭの濃度の本発明の一部の実施形態に係る例示化合物か、対照試料（化合物の添加なし）と、発現ＨＥＫ２９３細胞とを接触させて測定および計算した値であり、対照について観察されたホタル／ウミシイタケ発現比率（１００％）に対する割合として表され、ＷＴで観察された発現比率と比較したものである。 図４Ａ〜４Ｆは、０〜５０μＭの濃度範囲の本発明の一部の実施形態に係る例示化合物であるＮＢ１４４、ＮＢ１４５およびＮＢ１４６を用いて実施した、嚢胞性線維症のＧ５４２Ｘナンセンス変異抑制用量応答性細胞非含有アッセイの結果を示す図である。図４Ａは、ＷＴ配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図４Ｂは、Ｇ５４２Ｘ変異配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図４Ｃは、ＷＴ配列の上流に見出されるウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルを示し、図４Ｄは、Ｇ５４２Ｘ変異配列の上流に見出されるウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルを示し、図４Ｅは、ＷＴ配列で測定されたホタル／ウミシイタケ発現比率を示し、図４Ｆは、Ｇ５４２Ｘ変異配列で測定されたホタル／ウミシイタケ発現比率を示す。 図５Ａ〜５Ｂは、０〜５０μＭの濃度範囲の本発明の一部の実施形態に係る例示化合物であるＮＢ１４４、ＮＢ１４５およびＮＢ１４６を用いて実施した、嚢胞性線維症のＧ５４２Ｘナンセンス変異抑制用量応答性細胞非含有アッセイの結果を示す図である。図５Ａは、対照実験（化合物の添加なし）で得られた発現レベルに対する、変異配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルの割合を示し、図５Ｂは、対照実験で得られた発現レベルに対する、それぞれ変異配列の下流および上流のホタル／ウミシイタケ発現の比率を示す。 図６Ａ〜６Ｆは、０〜５０μＭの濃度範囲の本発明の一部の実施形態に係る例示化合物であるＮＢ１５０、ＮＢ１５１およびＮＢ１５２を用いて実施した、嚢胞性線維症のＧ５４２Ｘナンセンス変異抑制用量応答性細胞非含有アッセイの結果を示す図である。図６Ａは、ＷＴ配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図６Ｂは、Ｇ５４２Ｘ変異配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図６Ｃは、ＷＴ配列の上流で見出されるウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルを示し、図６Ｄは、Ｇ５４２Ｘ変異配列の上流で見出されるウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルを示し、図６Ｅは、ＷＴ配列で測定されたホタル／ウミシイタケ発現比率を示し、図６Ｆは、Ｇ５４２Ｘ変異配列で測定されたホタル／ウミシイタケ発現比率を示す。 図７Ａ〜７Ｂは、０〜５０μＭの濃度範囲の本発明の一部の実施形態に係る例示化合物であるＮＢ１５０、ＮＢ１５１およびＮＢ１５２を用いて実施した、嚢胞性線維症のＧ５４２Ｘナンセンス変異抑制用量応答性細胞非含有アッセイの結果を示す図である。図７Ａは、対照実験（化合物の添加なし）で得られた発現レベルに対する、変異配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルの割合を示し、図７Ｂは、対照実験で得られた発現レベルに対する、それぞれ変異配列の下流および上流のホタル／ウミシイタケ発現の比率を示す。 図８Ａ〜８Ｃは、５μＭの濃度の本発明の一部の実施形態に係る例示化合物であるＮＢ１４４、ＮＢ１４５、ＮＢ１４６、ＮＢ１５０、ＮＢ１５１およびＮＢ１５２を用いて実施した、レット症候群ナンセンス変異Ｒ１６８Ｘ（図８Ａ）、Ｒ２７０Ｘ（図８Ｂ）およびＲ２９４Ｘ（図８Ｃ）の抑制の細胞非含有アッセイの結果を示す図であり、対照試料で測定したホタル／ウミシイタケ発現比率（化合物の添加なし；１００％）に対するの割合としての、ホタル／ウミシイタケ発現の比率を示す。 図９Ａ〜９Ｂは、化合物３５（上のスペクトル）および化合物３６（下のスペクトル）の１Ｈ ＮＭＲの磁気異方性スペクトルを示す図であり、ＮＭＲスペクトル中で帰属されたプロトンの化学シフト値の差（図９Ａ）、および対応するＭαＮＰセクター則（Ｓｅｃｔｏｒ Ｒｕｌｅ）（図９Ｂ）を示す。 図１０は、ＵＳＨ１遺伝病を表すＲ３Ｘナンセンス変異コンストラクトにおける、化合物１（−■−）、ＮＢ１５３（−▲−）、およびＮＢ１５５（−△−）により誘導されたインビトロの終止コドン抑制レベルを示す比較プロットである。 図１１Ａ〜Ｄは、Ｒ３Ｘ（ＵＳＨ１）（図１１Ａ）、Ｒ２４５Ｘ（ＵＳＨ１）（図１１Ｂ）、Ｑ７０Ｘ（ＨＳ）（図１１Ｃ）、およびＧ５４２Ｘ（ＣＦ）（図１１Ｄ）を表すナンセンスコンストラクトにおける、ＮＢ７４（−△−）、ＮＢ１５６（−▲−）、およびゲンタマイシン（−−■−−）（左）、ならびにＮＢ１２４（−Δ−）、ＮＢ１５７（−▲−）、およびゲンタマイシン（−−■−−）（右）により誘導されたインビトロの終止コドン抑制レベルを示す比較プロットである。 図１２Ａは、終止コドン変異リードスルーの比較プロットであり、リードスルーのパーセントをＮＢ１５６を与えたＷＴにおける濃度に対する関数として表し（５０％ウミシイタケまでのリードスルー）、数々の異なる変異のリードスルーとの比較を示す。 図１２Ｂは、終止コドン変異リードスルーの比較プロットであり、未処理対照をＮＢ１５６に曝露した後のリードスルーの増加倍率をＮＢ１５６濃度の関数として表し、数々の異なる変異のリードスルーとの比較を示す。 図１３Ａは、終止コドン変異リードスルーの比較プロットであり、リードスルーのパーセントをＮＢ１５７を与えたＷＴにおける濃度に対する関数として表し（５０％ウミシイタケまでのリードスルー）、数々の異なる変異のリードスルーとの比較を示す。 図１３Ｂは、終止コドン変異リードスルーの比較プロットであり、未処理対照をＮＢ１５７に曝露した後のリードスルーの増加倍率をＮＢ１５７濃度の関数として表し、数々の異なる変異のリードスルーとの比較を示す。
本発明は、その一部の実施形態において、アミノグリコシド、より詳細には、これらに限定されないが新規のアミノグリコシド誘導体、ならびに終止コドン変異を有する遺伝子の発現を増加させること、および／または遺伝性疾患の治療におけるその使用に関する。
具体的には、本発明は、その一部の実施形態において、未成熟終止コドン変異に対する高いリードスルー活性を示しつつも、哺乳類細胞に対する毒性作用が低く、さらには、バイオアベイラビリティーおよび／または細胞透過性の向上を特徴とする、パロモマイシン由来の新規アミノグリコシド化合物に関する。本発明の実施形態はさらに、これらの化合物を含有する医薬組成物、および遺伝性疾患の治療におけるその使用である。本発明の実施形態はさらに、これらの化合物を調製するプロセスである。
本発明の原理および運用は、図面と添付の説明を参照することにより、よりよく理解することができる。
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、以下の説明または実施例によって例示される詳細によって、その用途が必ずしも制限されるものではないことを理解されたい。本発明は、その他の実施形態、または種々の方法による実行または実施が可能である。また、本明細書で使用する表現および用語は、説明を目的とするものであり、限定とみなすべきではないことも理解されたい。
上記で論じられたように、治療剤としてのアミノグリコシドの使用は、主としてその高い毒性のために制限される。遺伝性疾患の治療においてこのような使用は、さらに毒性にも転換し得る、アミノグリコシドの抗菌活性によっても制限される。
アミノグリコシドに関連するさらなる制限としては、バイオアベイラビリティーが低いために典型的には静脈内または皮下投与を必要とすること、および真核細胞への透過性が不十分なために典型的には有害な副作用を伴う高用量の投与を必要とすることが挙げられる。アミノグリコシドの高い水溶性および極性が、腸の組織を介したその吸収度と細胞膜を介したその透過性を制限すると推定される。
さらに上記で論じられたように、パロマミン構造に数々の構造的な操作を施すことによって、未成熟終止コドン変異に対する改善されたリードスルー活性を発揮しつつも、哺乳類細胞において毒性作用が低いことが示された合成アミノグリコシドが生み出されてきた。本明細書に全体が記載されたものとして参照により組み込まれるＷＯ２００７／１１３８４１およびＷＯ２０１２／０６６５４６は、このようなアミノグリコシドを記載している。
遺伝性疾患に対する治療効果をさらに改善する試みにおいて、このようなアミノグリコシドの構造と活性との相関をさらに解明しつつ、本発明者は、本明細書において式ＩおよびＩａにより集合的に示される、パロマミン構造の様々な位置におけるさらなる修飾を設計した。
本発明を実施するに当たり、例示的な新規アミノグリコシドの構造を調製した。後述する実施例で示すように、これらの化合物は、疾患を引き起こすナンセンス変異に対する高いリードスルー活性に加えて、毒性の低下を示すことがわかった。
化合物：
本発明の一部実施形態の態様によれば、集合的に式Ｉａにより表される新規のアミノグリコシド（ＡＭＧ）化合物（本明細書では「アミノグリコシド誘導体」とも称される）を提供する。
Figure 0006862428
式中：
点線は、６’位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
Ｘ１は、ＯまたはＳであり；
環Ｉ中のＣ４’とＣ５’との間の破線の結合は、単結合または二重結合を表し；
環Ｉ中のＣ４’とＣ３’との間の破線の結合は、単結合または二重結合を表し；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルから選択されるか、または存在せず、Ｃ４’とＣ５’との間の破線の結合が二重結合である場合、少なくともＲｚは存在せず、Ｃ４’とＣ３’との間の破線の結合が二重結合である場合、少なくともＲｙ１は存在せず；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルから選択され、これらはそれぞれ置換または非置換であるか、あるいは、それぞれＲ７〜Ｒ９に関して本明細書で定義された通りであってもよく；
Ｒ１は、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアミド、アシル、カルボキシレート、ならびに飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換のヒドロキシアルキル（例えば、−ＣＨ２−ＯＨ）からなる群から選択され；
Ｒ２は、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルからなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロ脂環式、アリール、ヘテロアリール、アミンおよびＯＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６は、独立に、（Ｒ３〜Ｒ６の２つ以上が前記ＯＲ１６である場合）、水素、単糖部分、オリゴ糖部分、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルから選択されるか、または存在せず、Ｃ４’とＣ５’との間の破線の結合が二重結合である場合、Ｒ３は任意選択で存在せず、Ｃ４’とＣ３’との間の破線の結合が二重結合である場合、Ｒ４は任意選択で存在せず；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、カルボキシレート、スルホニル（アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルなど）および細胞透過性基からなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、本化合物は、式Ｉａに示した環Ｉおよび環ＩＩを有する疑似二糖である。
これらの実施形態において、Ｒ３〜Ｒ６はいずれもＯＲ１６ではなく、Ｒ１６は、単糖またはオリゴ糖部分である。
これらの実施形態の一部において、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全ては、ＯＲ１６である。
これらの実施形態の一部において、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全ては、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、独立に、置換でも非置換でもよいアリールである。これらの実施形態において、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全ては、本明細書で定義されたようなアリールオキシである。
これらの実施形態の一部において、アリールは非置換であり、したがってＲ３〜Ｒ６の１つまたは複数または全てが、独立に、フェニルオキシ、１−アントリルオキシ、１−ナフチルオキシ、２−ナフチルオキシ、２−フェナントリルオキシおよび９−フェナントリルオキシであり得るが、これらは限定的な例示ではない。
これらの実施形態の一部において、ＯＲ１６の１つまたは複数におけるアリールの１つまたは複数は、置換アリールであり、したがってＲ３〜Ｒ６の１つまたは複数または全ては、独立に、アリールオキシであって、アリールが、２−（Ｎ−エチルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−ヘキシルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、２，４−ジメトキシフェニル、２−アセトアミドフェニル、２−アミノフェニル、２−カルボキシフェニル、２−クロロフェニル、２−エトキシフェニル、２−フルオロフェニル、２−ヒドロキシメチルフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−メトキシカルボニルフェニル、２−メトキシフェニル、２−メチルフェニル、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジブチルアミノ）フェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、３，４−ジクロロフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、３，５−ジメトキシフェニル、３−アミノフェニル、３−ビフェニリル、３−カルボキシフェニル、３−クロロ−４−メトキシフェニル、３−クロロフェニル、３−エトキシカルボニルフェニル、３−エトキシフェニル、３−フルオロフェニル、３−ヒドロキシメチルフェニル、３−ヒドロキシフェニル、３−イソアミルオキシフェニル、３−イソブトキシフェニル、３−イソプロポキシフェニル、３−メトキシフェニル、３−メチルフェニル、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、３−トリル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−（ベンジルオキシ）フェニル、４−（イソプロポキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジヘキシルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ペンチルアミノ）フェニル、４−（ｎ−ヘキシルオキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−アミノフェニル、４−ベンジルオキシフェニル、４−ビフェニリル、４−ブトキシフェニル、４−ブチルアミドフェニル、４−カルボキシフェニル、４−クロロフェニル、４−エトキシカルボニルフェニル、４−ヘキサンアミドフェニル、４−ヒドロキシメチルフェニル、４−ヒドロキシフェニル、４−ヨードフェニル、４−イソブチルフェニル、４−イソブチルアミドフェニル、４−イソプロポキシフェニル、４−イソプロピルフェニル、４−メトキシフェニル、４−メチルフェニル、４−ｎ−ヘキサンアミドフェニル、４−ｎ−ヘキシルオキシフェニル、４−ｎ−ヘキシルフェニル、４−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、４−プロピオンアミドフェニル、４−トリル、４−トリフルオロメチルフェニルおよび／または４−バレロイルオキシカルボニルフェニルであるアリールオキシであり得るが、これらは限定的な例示ではない。
これらの実施形態の一部において、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全ては、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、独立に、置換でも非置換でもよいヘテロアリールである。これらの実施形態において、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全ては、本明細書で定義されたようなヘテロアリールオキシである。
一部の実施形態において、Ｒ３〜Ｒ６の１つまたは複数または全ては、独立に、２−アントリルオキシ、２−フリルオキシ、２−インドリルオキシ、２−ナフチルオキシ、２−ピリジルオキシ、２−ピリミジルオキシ、２−ピリルオキシ、２−キノリルオキシ、２−チエニルオキシ、３−フリルオキシ、３−インドリルオキシ、３−チエニルオキシ、４−イミダゾリルオキシ、４−ピリジルオキシ、４−ピリミジルオキシ、４−キノリルオキシ、５−メチル−２−チエニルオキシおよび６−クロロ−３−ピリジルオキシであってもよいが、これらは限定的な例示ではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３は、本明細書に記載されるように、アリールオキシまたはヘテロアリールオキシである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３はＯＲ１６であり、Ｒ１６は置換または非置換のアルキルまたはアルケニル、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、プロペニル、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、２，３−ジヒドロキシプロピルおよびメトキシメチルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３はＯＲ１６であり、Ｒ１６は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ４はＯＲ１６であり、Ｒ１６は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３およびＲ４のそれぞれは、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全ては、ＯＲ１６である。
これらの実施形態の一部において、Ｒ３〜Ｒ６のそれぞれにおいて、Ｒ１６は水素である。
これらの実施形態の一部において、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全てにおいて、Ｒ１６は水素以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全てがＯＲ１６である場合、およびＲ１６部分の１つもしくは複数または全てが水素以外である場合、Ｒ１６は、Ｒ３〜Ｒ６のそれぞれにつき同一でもよいし、または異なっていてもよい。
これらの実施形態の一部において、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全てにおいて、Ｒ１６が水素以外である場合、Ｒ１６は、例えば、独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであってもよく、それぞれが、本明細書に記載されるように任意選択で置換されていてもよい。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全てにおいて、Ｒ１６は、独立に、それぞれの位置でエステル（カルボン酸エステル）を形成するアシルである。
本明細書にわたり、用語「アシル」は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ’基を表しており、式中のＲ’は本明細書に記載される通りである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１６がアシルの場合、Ｒ’は、本明細書に記載されるように、任意選択で置換されていてもよい炭化水素鎖である。一部の実施形態において、炭化水素鎖の長さは、炭素原子数が２から１８個である。一部の実施形態において、アシルは、任意選択でハロ、ニトロ、ヒドロキシ、アミン、シアノ、チオシアノ、およびアルコキシの１つまたは複数で置換されていてもよい炭素原子数が２から１８個の炭化水素アシルラジカルである。
本明細書において、用語「炭化水素」または「炭化水素ラジカル」は、その基礎骨格として、本明細書では骨格鎖とも称される炭素原子の鎖が、主として水素原子で置換されたものを包含する有機部分を表す。炭化水素は、飽和していてもよいし、または飽和していなくてもよく、脂肪族、脂環式および／または芳香族で一部が構成されていてもよく、任意選択で１つまたは複数の基（水素以外の）で置換されていてもよい。置換炭化水素は、１つまたは複数の置換基を有していてもよく、ここで各置換基は、独立に、例えば、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、アミン、ハロゲン化物、スルホネート、スルホキシド、ホスホネート、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、シアノ、ニトロ、アゾ、アジ化物、スルホンアミド、カルボキシ、チオカルバメート、尿素、チオ尿素、カルバメート、アミド、およびヒドラジン、ならびに他の任意の置換基であり得る。
炭化水素部分は、任意選択で、これらに限定されないが、１つまたは複数の酸素原子、窒素原子（−ＮＲ’−に関して本明細書で定義されたような置換または非置換である）および／または硫黄原子などの１つまたは複数のヘテロ原子で中断されていてもよい。
炭化水素に関する本明細書に記載の実施形態のいずれかの実施形態において、炭化水素は、いかなるヘテロ原子によっても中断されず、またその骨格鎖中にヘテロ原子も含まず、さらに、アルキレン鎖であってもよいし、またはあらゆる順番で互いに共有結合した、アルキル、シクロアルキル、アリール、アルケンおよび／またはアルキンで構成されていてもよい。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１６がアシルの場合、アシルは、カルボン酸から誘導されてもよい。したがってそれぞれの位置で形成されたエステルは、例えば、飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換の脂肪族カルボン酸、これらに限定されないが、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、吉草酸、イソ吉草酸、カプロン酸、カプリル酸、デカン酸、ドデカン酸、ラウリン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アクリル酸、クロトン酸、ウンデシレン酸、オレイン酸、ヘキシン酸、ヘプチン酸、オクチン酸など；飽和または不飽和の脂環式カルボン酸（これらに限定されないが、シクロブタンカルボン酸、シクロペンタンカルボン酸、シクロペンテンカルボン酸、メチルシクロペンテンカルボン酸、シクロヘキサンカルボン酸、ジメチルシクロヘキサンカルボン酸、ジプロピルシクロヘキサンカルボン酸など）；飽和または不飽和の脂環式の脂肪族カルボン酸（これらに限定されないが、シクロペンタン酢酸、シクロペンタンプロピオン酸、シクロヘキサン酢酸、シクロヘキサン酪酸、メチルシクロヘキサン酢酸、置換または非置換の芳香族カルボン酸、安息香酸、トルイル酸、ナフトエ酸、エチル安息香酸、イソブチル安息香酸、メチルブチル安息香酸など）；芳香族カルボン酸（これらに限定されないが、フェニル酢酸、安息香酸、フェニルプロピオン酸、フェニル吉草酸、ケイ皮酸、フェニルプロピオル酸、ナフチル酢酸など）；ハロアルコキシ炭化水素カルボン酸；ニトロアルコキシ炭化水素カルボン酸；ヒドロキシアルコキシ炭化水素カルボン酸；アミノアルコキシ炭化水素カルボン酸；シアノアルコキシ炭化水素カルボン酸；チオシアノアルコキシ炭化水素カルボン酸；加えてモノ酢酸；ジ酢酸、トリクロロ酢酸；１，２，３，４，５，６−ヘキサクロロシクロヘキサンカルボン酸、１，２−ジブロモ−４−メチルシクロヘキサンカルボン酸、１，６−ジブロモ−３−メチルシクロヘキサンカルボン酸、１−ブロモ−３，５−ジメチルシクロヘキサンカルボン酸、２−クロロシクロヘキサンカルボン酸、４−クロロシクロヘキサンカルボン酸、２，３−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、２，４，６−トリニトロ安息香酸、２，５−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、２−ブロモ−４−メチルシクロヘキサンカルボン酸、２−ニトロ−１−メチル−シクロブタンカルボン酸、３，４−ジニトロ安息香酸、３，５−ジニトロ安息香酸、３−ブロモ−２，２，３−トリメチルシクロペンタンカルボン酸、３−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、３−ブロモ−３−メチルシクロヘキサンカルボン酸、４−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、５−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、４，４’−ジクロロベンジル酸、４，５−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、５−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、６−ブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、５，６−ジブロモ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、６−ブロモ−３−メチルシクロヘキサンカルボン酸、アニス酸、シアノ酢酸、シアノプロピオン酸、エトキシギ酸（炭酸水素エチル）、没食子酸、ホモゲンチジン酸、ｏ−、ｍ−、およびｐ−クロロ安息香酸、乳酸、メバロン酸、ｏ−、ｍ−、ｐ−ニトロ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、サリチル酸、シキミ酸、チオシアノ酢酸、トリメトキシ安息香酸、トリメトキシケイ皮酸、ベラトルム酸、α−およびβ−クロロプロピオン酸、α−およびγ−ブロモ酪酸ならびにα−およびδ−ヨード吉草酸、β−レソルシル酸から誘導されたものであり得る。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７〜Ｒ９の１つまたは複数は、アシルである。当該アシルは、Ｒ’が、それぞれ任意選択で１つまたは複数のアミン置換基で置換されていてもよいアルキルまたはアルカリルまたはアリールになるようなアシルである。
一部の実施形態において、Ｒは、置換アルキルであり、一部の実施形態において、Ｒは、アシルがα−ヒドロキシアシルになるように、カルボニル基に対してα位においてヒドロキシで置換されている。
一部の実施形態において、α−ヒドロキシアシルは、さらに１つまたは複数のアミン基で置換されており、アミノ置換α−ヒドロキシアシルである。
本明細書に記載されるようなアシル基の実施形態の一部において、アミン置換基は、例えば、アシルに対してＲ部分のβ位、γ位、δ位、および／またはω位の１つまたは複数にあってもよい。
例示的なアミノ置換α−ヒドロキシアシルとしては、本明細書ではＡＨＢとも称される（Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル部分が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明の一部の実施形態によれば、ＡＨＢ部分の代わりに、α−ヒドロキシ−β−アミノプロピオニル（ＡＨＰ）部分であってもよい。追加の例示的なアミノ置換α−ヒドロキシアシルとしては、Ｌ−（−）−γ−アミノ−α−ヒドロキシブチリル、Ｌ（−）−δ−アミノ−α−ヒドロキシバレリル、Ｌ−（−）−β−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、Ｌ−（−）−δ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシバレリルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
本明細書において特筆すべきことに、本発明の一部の実施形態によれば、カルボニル、ヒドロキシルおよびアミノ基の組合せを低級アルキルと共に含む、いずれかの立体化学を示す他の部分を、ＡＨＢおよび／またはＡＨＰの代わりに任意選択の置換基とすることが想定される。このような部分としては、例えば、２−アミノ−３−ヒドロキシブタノイル、３−アミノ−２−ヒドロキシペンタノイル、５−アミノ−３−ヒドロキシヘキサノイルなどが挙げられる。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３〜Ｒ６の１つまたは複数は、ＯＲ１６以外である。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３〜Ｒ６の１つまたは複数は、水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ４は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３〜Ｒ６の１つまたは複数は、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、化合物が疑似三糖、疑似四糖、疑似五糖、疑似六糖などになるように、独立に、本明細書で定義されたような単糖部分またはオリゴ糖部分である。
Ｒ３〜Ｒ６の１つまたは複数がＯＲ１６であり、Ｒ１６が単糖部分またはオリゴ糖部分であり、且つＲ３〜Ｒ６の１つまたは複数がＯＲ１６（但し、Ｒ１６は単糖部分またはオリゴ糖部分である）ではない場合、当該ＯＲ１６（但し、Ｒ１６は単糖部分またはオリゴ糖部分である）ではないＲ３〜Ｒ６の１つまたは複数は、Ｒ３〜Ｒ６の対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載される通りであり得る。
用語「単糖」は、本明細書で使用する場合、当業界において周知であり、加水分解によってそれ以上分解できない単一の糖分子からなる糖の単純な形態を指す。単糖の最も一般的な例としては、グルコース（デキストロース）、フルクトース、ガラクトース、およびリボースが挙げられる。単糖は、炭水化物の炭素原子の数に従って分類することができる。すなわち、トリオースは、３個の炭素原子を有し、例えばグリセルアルデヒドおよびジヒドロキシアセトンなどであり；テトロースは、４個の炭素原子を有し、例えばエリトロース、トレオースおよびエリトルロースなどであり；ペントースは、５個の炭素原子を有し、例えばアラビノース、リキソース、リボース、キシロース、リブロースおよびキシルロースなどであり；ヘキソースは、６個の炭素原子を有し、例えばアロース、アルトロース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、タロース、フルクトース、プシコース、ソルボースおよびタガトースなどであり；ヘプトースは、７個の炭素原子を有し、例えばマンノヘプツロース、セドヘプツロースなどであり；オクトースは、８個の炭素原子を有し、例えば２−ケト−３−デオキシ−マンノ−オクトネート（ｏｃｔｏｎａｔｅ）などであり；ノノースは、９個の炭素原子を有し、例えばシアロースなどであり；デコース、は、１０個の炭素原子を有する。単糖は、スクロースのようなオリゴ糖（一般的な糖）および他の多糖（例えばセルロースおよびデンプンなど）の構造単位である。
用語「オリゴ糖」は、本明細書で使用する場合、グリコシル結合（−Ｏ−）を介して互いに連結された２つ以上の単糖単位を含む化合物を指し、このような単糖は本明細書において定義された通りである。オリゴ糖は、好ましくは２〜６個の単糖を含み、オリゴ糖は、より好ましくは２〜４個の単糖を含み、オリゴ糖は、最も好ましくは２つの単糖単位を有する二糖部分である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、単糖は、ペントース部分であり、例えば式ＩＩにより表されるペントース部分である。代替として、単糖部分は、ヘキソースである。さらなる代替として、単糖部分は、ペントースまたはヘキソース以外、例えば米国特許第３，８９７，４１２号に記載のヘキソース部分以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、単糖部分は、式ＩＩにより表されるリボースである。
Figure 0006862428
式中：
波線は、結合位置を意味し；
点線は、５”位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
Ｘ２は、ＯＲ１３またはＮＲ１４Ｒ１５であり；
Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３は、それぞれ独立に、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、およびアシルからなる群から選択され；
Ｒ１２は、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアミド、アシル、カルボキシレート、ならびに飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換のヒドロキシアルキルからなる群から選択され；
Ｒ１４およびＲ１５は、それぞれ独立に、、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、アシル、および細胞透過性基からなる群から選択されるか、あるいは、Ｒ１４およびＲ１５が存在する場合、共同で複素環を形成する。
一部の実施形態において、Ｘ２はＯＲ１３である。
一部の実施形態において、Ｘ２はＮＲ１４Ｒ１５である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１２は水素以外である。これらの実施形態の一部において、Ｒ１２は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、一部の実施形態において、Ｒ１２は、アルキルであり、好ましくは低級アルキル、例えばメチルである。
一部の実施形態において、Ｒ１２は、Ｒ１に関して本明細書で定義された通りである。
Ｒ３〜Ｒ６の１つまたは複数がＯＲ１６であり、Ｒ１６が単糖部分またはオリゴ糖部分である実施形態のいずれかの一部において、単糖またはオリゴ糖部分／部分（複数）中のヒドロキシ基の１つまたは複数は、本明細書の対応する実施形態のいずれかに記載されるエステル（カルボン酸エステル）を形成するアシルで置換されている。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３〜Ｒ６の１つはＯＲ１６であり、Ｒ１６は、化合物が疑似三糖になるような単糖部分である。
疑似三糖に関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１０およびＲ１１、ならびにＲ１３の１つもしくは複数または全ては、それらが存在する場合、本明細書に記載されるように、アシルであってもよい。
疑似三糖に関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または全てはＯＲ１６であり、このとき、Ｒ３〜Ｒ６の１つにおいてＲ１６が単糖部分であり、その他のものにおいては、Ｒ１６が本明細書で定義された通り（例えば、水素、アシル）である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ５はＯＲ１６であり、Ｒ１６は単糖部分である。
これらの実施形態の一部において、本化合物は式Ｉｂにより表される。
Figure 0006862428
式中、可変の基は、式ＩａおよびＩＩに関して本明細書に記載される通りであり、それらのあらゆる組合せを包含する。
式ＩａおよびＩｂに関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１はＯである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、環Ｉ中のＣ４’とＣ５’との間の結合は単結合である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、環Ｉ中のＣ４’とＣ５’との間の結合は二重結合である。これらの実施形態の一部において、ＲｘおよびＲｚは存在しない。代替として、Ｒ３およびＲｚは存在しない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、環Ｉ中のＣ４’とＣ３’との間の結合は単結合である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、環Ｉ中のＣ４’とＣ３’との間の結合は二重結合である。これらの実施形態の一部において、ＲｘおよびＲｙ１は存在しない。代替として、Ｒ４およびＲｙ１は存在しない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒｘ、Ｒｚ、Ｒｙ１が存在する場合、およびＲｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３の１つもしくは複数または全ては、水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は水素以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はヒドロキシアルキルであり、当該アルキルは、さらに置換されていてもよいし、置換されていなくてもよい。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はヒドロキシメチルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、それぞれ置換または非置換のアルキル、アルケニルまたはアルキニルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はアルキルであり、好ましくは低級アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチルまたはペンチルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、置換でも非置換でもよいアリールであるかまたはそれを含む。一部の実施形態において、Ｒ１は、非置換のアリールであり、フェニル、１−アントリル、１−ナフチル、２−ナフチル、２−フェナントリルまたは９−フェナントリルであってもよいが、これらに限定されるものではない。
一部の実施形態において、Ｒ１は置換アリールであり、２−（Ｎ−エチルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−ヘキシルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、２，４−ジメトキシフェニル、２−アセトアミドフェニル、２−アミノフェニル、２−カルボキシフェニル、２−クロロフェニル、２−エトキシフェニル、２−フルオロフェニル、２−ヒドロキシメチルフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−メトキシカルボニルフェニル、２−メトキシフェニル、２−メチルフェニル、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジブチルアミノ）フェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、３，４−ジクロロフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、３，５−ジメトキシフェニル、３−アミノフェニル、３−ビフェニリル、３−カルボキシフェニル、３−クロロ−４−メトキシフェニル、３−クロロフェニル、３−エトキシカルボニルフェニル、３−エトキシフェニル、３−フルオロフェニル、３−ヒドロキシメチルフェニル、３−ヒドロキシフェニル、３−イソアミルオキシフェニル、３−イソブトキシフェニル、３−イソプロポキシフェニル、３−メトキシフェニル、３−メチルフェニル、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、３−トリル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−（ベンジルオキシ）フェニル、４−（イソプロポキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジヘキシルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ペンチルアミノ）フェニル、４−（ｎ−ヘキシルオキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−アミノフェニル、４−ベンジルオキシフェニル、４−ビフェニリル、４−ブトキシフェニル、４−ブチルアミドフェニル、４−カルボキシフェニル、４−クロロフェニル、４−エトキシカルボニルフェニル、４−ヘキサンアミドフェニル、４−ヒドロキシメチルフェニル、４−ヒドロキシフェニル、４−ヨードフェニル、４−イソブチルフェニル、４−イソブチルアミドフェニル、４−イソプロポキシフェニル、４−イソプロピルフェニル、４−メトキシフェニル、４−メチルフェニル、４−ｎ−ヘキサンアミドフェニル、４−ｎ−ヘキシルオキシフェニル、４−ｎ−ヘキシルフェニル、４−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、４−プロピオンアミドフェニル、４−トリル、４−トリフルオロメチルフェニルまたは４−バレロイルオキシカルボニルフェニルであってもよいが、これらに限定されるものではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、置換または非置換のヘテロアリールであるかまたはそれを含み、２−アントリル、２−フリル、２−インドリル、２−ナフチル、２−ピリジル、２−ピリミジル、２−ピリル、２−キノリル、２−チエニル、３−フリル、３−インドリル、３−チエニル、４−イミダゾリル、４−ピリジル、４−ピリミジル、４−キノリル、５−メチル−２−チエニルおよび６−クロロ−３−ピリジルであってもよいが、これらに限定されるものではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、本明細書で定義したように、アミンであるかまたはそれを含み、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨおよび−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＣＨ３）２であってもよいが、これらに限定されるものではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はアルキルであり、一部の実施形態において、Ｒ１は、１から４個の炭素原子を有する低級アルキルであり、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、およびイソブチルなどであるが、これらに限定されるものではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は非置換のアルキルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はメチルである。
代替として、本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はシクロアルキルであり、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルなどであるが、これらに限定されるものではない。
さらに代替として、本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はアリールであり、例えば置換または非置換のフェニルなどである。非限定的な例としては、非置換のフェニルおよびトルエンが挙げられる。
さらに代替として、本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はアルカリルであり、例えば、置換または非置換のベンジルなどである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、アルキル、シクロアルキルおよびアリール以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、それぞれ非置換の、アルキル、シクロアルキルおよびアリール以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はメチル以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ２は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ２は水素以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ２は、本明細書に記載されるように、この位置でエステルを形成するアシルである。
一部の実施形態において、Ｒ２はアルキルであり、好ましくはメチル、エチルおよびプロピルからなる群から選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ２はアルキルであり、これらの実施形態の一部において、Ｒ２は置換アルキルであり、例えば、１つまたは複数のアミン基で置換されたアルキル（アミノアルキル）である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ２は、本明細書で定義されたような置換もしくは非置換のアルキル、または本明細書で定義されたような置換もしくは非置換のシクロアルキルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ２は、本明細書で定義されたような置換または非置換のアリールである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はヒドロキシアルキルであり、Ｒ２は水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１はヒドロキシアルキルであり、Ｒ２はアシルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７〜Ｒ９の１つまたは複数およびＲ１４およびＲ１５の１つまたは複数は、存在する場合、独立に、本明細書に記載されるようにアルキル、または細胞透過性基であるか、あるいは本明細書に記載されるように、アシル、例えば、アルファ−ヒドロキシアシルもしくはアミノ置換アルファ−ヒドロキシアシルなどである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７〜Ｒ９の１つまたは複数およびＲ１４およびＲ１５の１つまたは複数は、存在する場合、スルホニル、例えば、アルキルスルホニルまたはアリールスルホニルである。
Ｒ７〜Ｒ９の１つまたは複数およびＲ１４およびＲ１５の１つまたは複数により表される例示的な部分としては、これらが存在する場合、水素、（Ｒ／Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）、（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオニル（ＡＨＰ）、５−アミノペンタノイル、５−ヒドロキシペンタノイル、ホルミル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−メチル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−エチル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ベンジル、−β−アミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−アミノ−α−ヒドロキシバレリル、−β−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシバレリル、メチルスルホニル、フェニルスルホニル、ベンゾイル、プロピル、イソプロピル、−（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）５ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ−エチル、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ（−ＮＨ２）ＣＨ２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＯＨ）ＣＨ２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＯＨ）−（ＣＨ２）２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＮＨ２）−（ＣＨ２）２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＣＨ２ＮＨ２）−（ＣＨ２ＯＨ）、−（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）２、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２−フェニル、−ＣＨ（ｉ−プロピル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ベンジル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＯＨおよび−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７は、水素、（Ｒ／Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）、（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオニル、５−アミノペンタノイル、５−ヒドロキシペンタノイル、ホルミル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−メチル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−エチル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ベンジル、−β−アミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−アミノ−α−ヒドロキシバレリル、−β−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシバレリル、メチルスルホニル、フェニルスルホニル、ベンゾイル、プロピル、イソプロピル、−（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）５ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ−エチル、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ（−ＮＨ２）ＣＨ２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＯＨ）ＣＨ２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＯＨ）−（ＣＨ２）２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＮＨ２）−（ＣＨ２）２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＣＨ２ＮＨ２）−（ＣＨ２ＯＨ）、−（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）２、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２−フェニル、−ＣＨ（ｉ−プロピル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ベンジル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＯＨまたは−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７は、水素、（Ｒ／Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）、および（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオニル（ＡＨＰ）以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７は水素以外であり、これらの実施形態の一部において、Ｒ７は、本明細書で定義されたようなアミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７は、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキル、アリールおよび細胞透過性基以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ８およびＲ９の一方または両方は、独立に、水素、（Ｒ／Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）、（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオネート（ＡＨＰ）、（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオニル、５−アミノペンタノイル、５−ヒドロキシペンタノイル、ホルミル、−ＣＯＯ−メチル、−ＣＯＯ−エチル、−ＣＯＯ−ベンジル、−β−アミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−アミノ−α−ヒドロキシバレリル、−β−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシプロピオニル、−δ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−α−ヒドロキシバレリル、メチルスルホニル、フェニルスルホニル、ベンゾイル、プロピル、イソプロピル、−（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）５ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ−エチル、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−ＣＨ（−ＮＨ２）ＣＨ２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＯＨ）ＣＨ２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＯＨ）−（ＣＨ２）２（ＮＨ２）、−ＣＨ（−ＮＨ２）−（ＣＨ２）２（ＯＨ）、−ＣＨ（−ＣＨ２ＮＨ２）−（ＣＨ２ＯＨ）、−（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）２、−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２−フェニル、−ＣＨ（ｉ−プロピル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ（ベンジル）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＯＨまたは−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシルは、（Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７〜Ｒ９のそれぞれは、水素、（Ｒ／Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）、および（Ｒ／Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピオニル（ＡＨＰ）以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７〜Ｒ９のそれぞれは、水素以外であり、これらの実施形態の一部において、Ｒ７〜Ｒ９のそれぞれは、本明細書で定義されたようなアミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル以外である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７〜Ｒ９のそれぞれは、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキル、アリールおよび細胞透過性基以外である。
本明細書にわたり、水素以外の置換基を有するアミンは、本明細書では「修飾されたアミン置換基」または単に「修飾されたアミン」と称される。
本発明の一部の実施形態によれば、式ＩａおよびＩｂにより表されるアミノグリコシド構造の、１位（Ｒ７）、２’位（Ｒ８）、３位（Ｒ９）または５”位（Ｒ１４またはＲ１５）のアミン置換基の一方または両方は、存在する場合、例えばアルキル、シクロアルキル、アルカリルおよび／もしくはアリールなどの疎水性部分、または生理学的なｐＨで正電荷を有し、化合物の細胞の透過性を増加させることができる基（また本明細書では同義的に「細胞透過性基」または「細胞透過基」とも称される）、例えば本明細書で定義されたようにグアニンもしくはグアニジン基など、または代替として、ヒドラジン、ヒドラジド、チオヒドラジド、尿素およびチオ尿素を含むように修飾されている。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、１つまたは複数のＲ７〜Ｒ９およびＲ１４およびＲ１５は、存在する場合、本明細書で定義されたような細胞透過性基であり、一部の実施形態において、本明細書で定義されたようなグアニジルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、１つまたは複数のＲ７〜Ｒ９およびＲ１４およびＲ１５は、存在する場合、例えばアルキル、シクロアルキル、アルカリルおよび／またはアリールなどの疎水性部分である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７〜Ｒ９およびＲ１４およびＲ１５はいずれも、存在する場合、疎水性部分、例えばアルキル、シクロアルキル、アルカリルおよび／またはアリールなどではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７〜Ｒ９およびＲ１４およびＲ１５はいずれも、存在する場合、本明細書で定義されたような細胞透過性基ではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７〜Ｒ９およびＲ１４およびＲ１５はいずれも、存在する場合、本明細書に記載されるように修飾されたアミンではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、１つまたは複数のＲ７〜Ｒ９およびＲ１４およびＲ１５は、存在する場合、本明細書で定義されたようなアシルであり、これらの実施形態の一部においてアシルは、独立に、本明細書で定義されたようなアミノ置換アルファ−ヒドロキシアシルであってもよい。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、可変の基が非置換のアリールと定義される場合、非置換のアリールは常に、フェニル、１−アントリル、１−ナフチル、２−ナフチル、２−フェナントリルおよび／または９−フェナントリル等であってもよい。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、可変の基が置換または非置換のヘテロアリールと定義される場合、ヘテロアリールはいつでも、例えば、２−アントリル、２−フリル、２−インドリル、２−ナフチル、２−ピリジル、２−ピリミジル、２−ピリル、２−キノリル、２−チエニル、３−フリル、３−インドリル、３−チエニル、４−イミダゾリル、４−ピリジル、４−ピリミジル、４−キノリル、５−メチル−２−チエニルおよび／または６−クロロ−３−ピリジルであってもよい。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、可変の基が置換アリールと定義される場合、アリールはいつでも、例えば、２−（Ｎ−エチルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−ヘキシルアミノ）フェニル、２−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、２，４−ジメトキシフェニル、２−アセトアミドフェニル、２−アミノフェニル、２−カルボキシフェニル、２−クロロフェニル、２−エトキシフェニル、２−フルオロフェニル、２−ヒドロキシメチルフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−ヒドロキシフェニル、２−メトキシカルボニルフェニル、２−メトキシフェニル、２−メチルフェニル、２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジブチルアミノ）フェニル、３−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、３，４−ジクロロフェニル、３，４−ジメトキシフェニル、３，５−ジメトキシフェニル、３−アミノフェニル、３−ビフェニリル、３−カルボキシフェニル、３−クロロ−４−メトキシフェニル、３−クロロフェニル、３−エトキシカルボニルフェニル、３−エトキシフェニル、３−フルオロフェニル、３−ヒドロキシメチルフェニル、３−ヒドロキシフェニル、３−イソアミルオキシフェニル、３−イソブトキシフェニル、３−イソプロポキシフェニル、３−メトキシフェニル、３−メチルフェニル、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル、３−トリル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−（ベンジルオキシ）フェニル、４−（イソプロポキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジヘキシルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ペンチルアミノ）フェニル、４−（ｎ−ヘキシルオキシカルボニル）フェニル、４−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−アミノフェニル、４−ベンジルオキシフェニル、４−ビフェニリル、４−ブトキシフェニル、４−ブチルアミドフェニル、４−カルボキシフェニル、４−クロロフェニル、４−エトキシカルボニルフェニル、４−ヘキサンアミドフェニル、４−ヒドロキシメチルフェニル、４−ヒドロキシフェニル、４−ヨードフェニル、４−イソブチルフェニル、４−イソブチルアミドフェニル、４−イソプロポキシフェニル、４−イソプロピルフェニル、４−メトキシフェニル、４−メチルフェニル、４−ｎ−ヘキサンアミドフェニル、４−ｎ−ヘキシルオキシフェニル、４−ｎ−ヘキシルフェニル、４−ニトロフェニル、４−ニトロフェニル、４−プロピオンアミドフェニル、４−トリル、４−トリフルオロメチルフェニルおよび／または４−バレロイルオキシカルボニルフェニルであってもよい。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、式ＩａまたはＩｂの１位（Ｒ７、環ＩＩ）におけるアミン置換基は、Ｒ７が水素以外になるような、本明細書に記載されるように修飾されたアミンである。
これらの実施形態の一部において、Ｒ７は、本明細書で定義されたようなアルキル、シクロアルキル、アルカリル、アリール、アシル、またはアミノ置換α−ヒドロキシアシル、例えば、（Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）、もしくは（Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシプロピオニル（ＡＨＰ）などであってもよい。
Ｒ７がアルキルである実施形態の一部において、アルキルは、例えば、１〜４個の炭素原子を有する低級アルキルであってもよく、例えば、これらに限定されないが、本明細書に記載されるように、それぞれが任意選択で置換されていてもよいメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、およびイソブチルなどである。
これらの実施形態の一部において、アルキルは、独立に、非置換のアルキルであり、例えば、これらに限定されないが、エチル、プロピルおよびイソプロピルなどである。
これらの実施形態の一部において、アルキルは、独立に、置換メチルであり、例えば、これらに限定されないが、ベンジルなどのアルカリルなどである。
代替として、Ｒ７はシクロアルキルであり、当該シクロアルキルは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルであってもよい。
さらに代替として、Ｒ７はアリールであり、当該アリールは、例えば、置換または非置換のフェニルであってもよい。非限定的な例としては、非置換のフェニルおよびトルエンが挙げられる。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７は、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキルまたはアリールである。
これらの実施形態の一部において、Ｒ１は、本明細書で定義されたようなアルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルである。
これらの実施形態の一部において、Ｒ１は、本明細書で定義されたようなアルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルであり、Ｒ３は、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、水素である（Ｒ３がヒドロキシになるように）。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７はアルキルであり、一部の実施形態において、Ｒ７は１〜４個の炭素原子を有する低級アルキルである。
一部の実施形態において、Ｒ７はアルキルであり、例えば、それぞれ任意選択で置換されていてもよい、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどである。
一部の実施形態において、Ｒ７はメチルまたはエチルであり、好ましくは置換されたメチルまたはエチルである。これらの実施形態の一部において、メチルまたはエチルは、例えばシクロアルキルまたはアリールで置換されている。このような置換基はまた、当業界ではそれぞれアルキルシクロアルキルおよびアルカリルとも称される。例示的なアルカリルは、ベンジル（−ＣＨ２−フェニル）である。
一部の実施形態において、Ｒ７はプロピルまたはイソプロピルである。
一部の実施形態において、Ｒ７はベンジルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７は、本明細書で定義されたような細胞透過性基であり、一部の実施形態において、Ｒ７はグアニジルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、本明細書で定義されたようなアルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルであり、Ｒ７は、本明細書で定義されたようなアルキルであり、好ましくは、エチル、プロピル、イソプロピルまたはベンジルである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、本明細書で定義されたようなアルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルであり；Ｒ７は、本明細書で定義されたようなアルキルであり、好ましくは、エチル、プロピル、イソプロピルまたはベンジルであり；Ｒ３は、水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、本明細書で定義されたようなアルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルであり；Ｒ７は、本明細書で定義されたような細胞透過基であり、好ましくは、グアニジンまたはグアニンであり；Ｒ３は、水素である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、本明細書で定義されたようなアルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルであり；Ｒ７は、本明細書で定義されたような細胞透過基であり、好ましくは、グアニジンまたはグアニンであり、より好ましくはグアニジン（グアニジニル）である。
例示的な疑似二糖化合物は、化合物ＮＢ１４４、ＮＢ１４５、ＮＢ１４６およびＮＢ１５０である（表１を参照）。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ７は、水素であるか、または例えば（Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシブチリル（ＡＨＢ）、または（Ｓ）−４−アミノ−２−ヒドロキシプロピオニル（ＡＨＰ）などの部分である。
これらの実施形態の一部において、修飾されたアミンは、第３の糖部分（環ＩＩＩ；例えば、式ＩａではＲ５として）内で化合物に導入されている。
式Ｉａ、およびそれらのあらゆる組合せに関する本明細書に記載される実施形態のいずれかは、式Ｉｂに関する実施形態に包含される。
式Ｉｂの実施形態のいずれかの一部において、Ｒ１は、本明細書で定義されたようなアルキルである。
式Ｉｂの実施形態のいずれかの一部において、Ｒ２およびＲ７は、式Ｉａに関する対応する実施形態のいずれかに記載される通りである。
式Ｉｂの実施形態のいずれかの一部において、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６はそれぞれ、水素である。
これらの実施形態の一部において、Ｒ７は、本明細書に記載されるように、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルである。
一部の実施形態において、Ｒ１は、本明細書で定義されたようなアルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルであり；Ｒ７は、本明細書で定義されたようなアルキルであり、好ましくは、エチル、プロピル、イソプロピルまたはベンジルであり；Ｒ５は、式ＩＩの単糖部分であり、Ｒ１４およびＲ１５は、両方とも水素である。
例示化合物は、ＮＢ１４７（表１を参照）である。
式Ｉｂの実施形態のいずれかの一部において、Ｒ７は、本明細書で定義されたような水素、アシルまたはアミノ置換α−ヒドロキシアシルである。
これらの実施形態の一部において、Ｘは、ＮＲ１４Ｒ１５であり；Ｒ１４およびＲ１５の１つは、水素以外である。これらの実施形態の一部において、Ｒ１４およびＲ１５の１つは、例えばグアニジン基などの細胞透過性基である。代替として、Ｒ１４およびＲ１５の１つは、例えばＲ７の実施形態のいずれかに関して定義された、アルキル、シクロアルキルまたはアリールである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｒ１は、本明細書で定義されたようなアルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくはアルキルであり；Ｒ７は、本明細書で定義されたような水素またはアミノ置換α−ヒドロキシアシルであり；Ｒ５は、式ＩＩの単糖部分であり；ＸはＮＲ１４Ｒ１５であり；Ｒ１５はグアニジン基（グアニジニル；グアニジル）である。
これらの実施形態の一部において、Ｒ１４は水素である。
例示化合物は、ＮＢ１５１およびＮＢ１５２（表１を参照）である。
式Ｉｂに関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、ＸはＮＲ１４Ｒ１５であり、Ｒ１４は、特に別段の指定がない限り、水素またはメチルである。
式Ｉｂに関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、ＸはＮＲ１４Ｒ１５であり、Ｒ１４は水素である。
式Ｉｂに関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、ＸはＮＲ１４Ｒ１５であり、Ｒ１５は、本明細書で定義されたようなアシルである。
式Ｉｂに関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、ＸはＮＲ１４Ｒ１５であり；Ｒ１４およびＲ１５の一方または両方は、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のアルカリル、または置換もしくは非置換のヘテロアリール、またはアシルである。これらの用語は本明細書で定義された通りである。
式Ｉｂに関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、ＸはＮＲ１４Ｒ１５であり；Ｒ１４およびＲ１５は共同で窒素を含有する複素環、例えば、モルホリン、ピペリジン、およびピペラジンなどを形成するものであるが、これらに限定されない。
式Ｉｂに関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、ＸはＯＲ１３であり；Ｒ１３は、Ｒ１６に関して、対応する実施形態のいずれかについて本明細書で定義された通りである。これらの実施形態の一部において、Ｒ１３は、本明細書の対応する実施形態のいずれかに記載される５”位でエステルを形成するアシルである。
式ＩａおよびＩｂに関する本明細書に記載される実施形態ならびにそれらのあらゆる組合せのいずれかの一部において、６’位における立体配置は、Ｒ配置である。
式Ｉｂ、およびそれらのあらゆる組合せに関する本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、５”位における立体配置は、Ｓ配置である。
以下の表１に、本発明の一部の実施形態に係る例示化合物を示す。
Figure 0006862428
Figure 0006862428
追加の例示化合物としては、本明細書でＮＢ１５３、ＮＢ１５５、ＮＢ１５６、ＮＢ１５７、ＮＢ１５４、ＮＢ１５８、およびＮＢ１５９と称する化合物が挙げられ、これらの構造は、後述する実施例で示す。
追加の例示化合物としては、本明細書で多重エステル化された化合物と称する化合物が挙げられ、このような化合物において、Ｒ３〜Ｒ６の１つもしくは複数または２つ以上がＯＲ１６であり、Ｒ１６、Ｒ２およびＲ１３の１つまたは複数が存在する場合、化合物が少なくとも２つのエステルを含むように、それぞれ独立に、対応する位置でエステルを形成するアシルである。このような化合物の例示的な構造は、後述する実施例のスキーム１４に示す。
本発明の実施形態のいずれかの一部によれば、式ＩａまたはＩｂに包含される公知の化合物（本願の背景技術で引用した文献に記載のものを含む）は、本発明の範囲から排除する。
本発明の範囲から排除される例示化合物としては、ゲンタマイシン、ジェネティシン（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）、ホルチマイシン、アプラマイシン、アルベカシン、ジベカシン、ジェネティシン（Ｇ−４１８、Ｇ４１８）、ハベカシン、カナマイシン、リビドマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシンおよびトブラマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の実施形態の範囲から排除されるさらなる例示化合物としては、式Ｉａにより表される化合物であって、Ｒ２が水素であり、Ｒ７が水素、ＡＨＢもしくはＡＨＰであるか、またはＷＯ２００７／１１３８４１およびＷＯ２０１２／０６６５４６で定義されたＡＨＢおよびＡＨＰの均等物である化合物、および式Ｉｂにより表される化合物であって、Ｒ２が水素であり、Ｒ７が水素、ＡＨＢもしくはＡＨＰであるか、またはＷＯ２００７／１１３８４１およびＷＯ２０１２／０６６５４６で定義されたＡＨＢおよびＡＨＰの均等物である化合物が挙げられる。
本発明の一部の実施形態によれば、Ｒ２が水素の場合、Ｒ７は、水素、ＡＨＢもしくはＡＨＰ、またはＷＯ２００７／１１３８４１およびＷＯ２０１２／０６６５４６で定義されたＡＨＢおよびＡＨＰの均等物ではない、および／またはＲ１４およびＲ１５の一方または両方が存在する場合は、水素ではない。
本発明の一部の実施形態によれば、アミノグリコシド構造の１位または５”位のアミン置換基の一方または両方が、本明細書で定義されたような修飾されたアミンであり、よって、Ｒ７および／またはＲ１４とＲ１５の一方または両方が水素でない。
以下の表２に、本発明の範囲から排除される例示化合物の化学構造を示す。
Figure 0006862428
Figure 0006862428
Figure 0006862428
Figure 0006862428
Figure 0006862428
本発明の一部の実施形態によれば、以下の式Ｉ’ａにより表される化合物も、本発明の実施形態の範囲から排除される。
Figure 0006862428
式中：
点線は、６’位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
Ｒ’１は、アルキル、シクロアルキル、アルカリルまたはアリールであり；
Ｒ’２はＯＲ’であり、Ｒ’は、本明細書で定義されたような水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、およびアシルから選択され；
Ｒ’４は、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、および細胞透過性基、例えばグアニルまたはグアニジルなどから選択され；
Ｒ’３は、水素であるか、または式ＩＩ’により表される単糖部分である。
Figure 0006862428
式中、
波線は、結合位置を意味し；
Ｒ’５およびＲ’６は、それぞれ独立に、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のヘテロアリール、アシル、および細胞透過性基、例えばグアニルおよびグアニジニルなどから選択され、あるいは、Ｒ’５およびＲ’６は共同で複素環を形成し、
Ｒ’２が水素である場合、Ｒ’４は、水素、ＡＨＢまたはＡＨＰではなく、ならびに／またはＲ’５および／もしくはＲ’６のうちの少なくとも１つは、存在する場合、水素ではない。
本発明の一部の実施形態によれば、以下のような式Ｉ’ｂにより表される化合物またはその薬学的に許容される塩も、本発明の実施形態の範囲から排除される。
Figure 0006862428
式中：
点線は、６’位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
Ｒ’１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールから選択され；
Ｒ２はＯＲ’であり、Ｒ’は、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、およびアシルから選択され；
Ｒ’４は、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、および細胞透過性基から選択され；
Ｒ’６およびＲ’７は、それぞれ独立に、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のヘテロアリール、アシル、および細胞透過性基から選択されるか、あるいは、Ｒ’５およびＲ’６は共同で複素環を形成し；
Ｒ’８は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、
Ｒ’２が水素である場合、Ｒ’４は、水素、ＡＨＢまたはＡＨＰではなく、ならびに／またはＲ’６および／またはＲ’７のうちの少なくとも１つは、存在する場合、水素ではない。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、表１に示した化合物は、本発明の範囲から排除される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉｃにより表される。
Figure 0006862428
式中：
点線は、６’位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
Ｘ１はＯまたはＳであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ独立に、水素、アルキルまたはシクロアルキルであり；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルから選択され、これらはそれぞれ置換または非置換であるか、あるいは、それぞれＲ７〜Ｒ９に関して本明細書で定義された通りであってもよく；
Ｒ１は、置換または非置換のヒドロキシアルキル（例えば、−ＣＨ２−ＯＨ）であり；
Ｒ２は、式Ｉａに関して本明細書に記載されるように、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルからなる群から選択され；
Ｒ３〜Ｒ６は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロ脂環式、アリール、ヘテロアリール、アミンおよびＯＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６は、独立に、式Ｉａの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、単糖部分、オリゴ糖部分、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルから選択され；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式Ｉａの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、カルボキシレート、スルホニル（アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルなど）および細胞透過性基からなる群から選択される。
これらの実施形態の一部において、１つまたは複数のＲ３〜Ｒ６は、式ＩａおよびＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、単糖またはオリゴ糖である。
式Ｉｃの実施形態のいずれかの一部において：
Ｘ１はＯであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ水素であり；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ水素であり；
Ｒ２は、式ＩａまたはＩｂに関して本明細書に記載されるように、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルからなる群から選択され；
Ｒ３〜Ｒ６は、それぞれ独立に、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、独立に、式Ｉａの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、単糖部分、オリゴ糖部分、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルから選択され；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、カルボキシレート、スルホニル（アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルなど）および細胞透過性基からなる群から選択される。
式Ｉｃの実施形態のいずれかの一部において：
Ｘ１はＯであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ水素であり；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ水素であり；
Ｒ２は水素であり；
Ｒ３〜Ｒ６は、それぞれ独立に、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、水素であり；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、および細胞透過性基からなる群から選択される。
式Ｉｃの実施形態のいずれかの一部において：
Ｘ１はＯであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ水素であり；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ水素であり；
Ｒ２は水素であり；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ６は、それぞれ独立に、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は水素であり；
Ｒ５は、本明細書に記載されるように、式ＩＩにより表される単糖であり、Ｘ２は、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、好ましくはＮＲ１４Ｒ１５であり；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、および細胞透過性基からなる群から選択される。
式Ｉｃにより表される化合物は、本明細書では「ジオールを含有する」化合物とも称される。
式Ｉｃに包含される例示化合物としては、ＮＢ１５３、ＮＢ１５５、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７が挙げられ、これらの構造は、後述する実施例で示す。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉｄにより表される。
Figure 0006862428
式中：
点線は、６’位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
Ｘ１は、ＯまたはＳであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルから選択され、これらはそれぞれ置換または非置換であるか、あるいは、それぞれＲ７〜Ｒ９に関して本明細書で定義された通りであってもよく；
Ｒ１は、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかで本明細書に記載されるように、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアミド、アシル、カルボキシレート、ならびに飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換のヒドロキシアルキル（例えば、−ＣＨ２−ＯＨ）からなる群から選択され；
Ｒ２は、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかで本明細書に記載されるように、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルからなる群から選択され；
Ｒ４〜Ｒ６は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロ脂環式、アリール、ヘテロアリール、アミンおよびＯＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６は、独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかで本明細書に記載されるように、水素、単糖部分、オリゴ糖部分、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルから選択され；
Ｒ７〜Ｒ９は、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかで本明細書に記載されるように、それぞれ独立に、本明細書で定義されたような水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、カルボキシレート、スルホニル（アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルなど）および細胞透過性基からなる群から選択される。
これらの実施形態の一部において、１つまたは複数のＲ４〜Ｒ６は、式ＩａおよびＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、単糖またはオリゴ糖である。
式Ｉｄの実施形態のいずれかの一部において：
Ｘ１はＯであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ水素であり；
Ｒ１は、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかで本明細書に記載されるように、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアミド、アシル、カルボキシレート、ならびに飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換のヒドロキシアルキル（例えば、−ＣＨ２−ＯＨ）からなる群から選択され；
Ｒ２は、式ＩａまたはＩｂに関して本明細書に記載されるように、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルからなる群から選択され；
Ｒ４〜Ｒ６は、それぞれ独立に、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、独立に、式Ｉａの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、単糖部分、オリゴ糖部分、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルから選択され；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、カルボキシレート、スルホニル（アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルなど）および細胞透過性基からなる群から選択される。
式Ｉｄの実施形態のいずれかの一部において：
Ｘ１はＯであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ水素であり；
Ｒ１は、本明細書に記載されるように、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくは、本明細書に記載されるように、水素または低級アルキルであり；
Ｒ２は水素であり；
Ｒ４〜Ｒ６は、それぞれ独立に、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、水素であり；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、および細胞透過性基からなる群から選択される。
式Ｉｄの実施形態のいずれかの一部において：
Ｘ１はＯであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ水素であり；
Ｒ１は、本明細書に記載されるように、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくは、本明細書に記載されるように、水素または低級アルキルであり；
Ｒ２は水素であり；
Ｒ４およびＲ６は、それぞれ独立に、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、水素であり；
Ｒ５は、本明細書に記載されるように、式ＩＩにより表される単糖であり、Ｘ２は、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、好ましくはＮＲ１４Ｒ１５であり；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、および細胞透過性基からなる群から選択される。
式Ｉｄにより表される化合物は、本明細書では「不飽和のグルコサミン（環Ｉ）を含有する」化合物とも称される。式Ｉｄに包含される例示化合物としては、ＮＢ１５４、ＮＢ１５８およびＮＢ１５９が挙げられ、これらの構造は、後述する実施例で示す。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉｅにより表される。
Figure 0006862428
式中：
点線は、６’位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
Ｘ１は、ＯまたはＳであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ独立に、水素、アルキルまたはシクロアルキルであり；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよびシクロアルキルから選択され、これらはそれぞれ置換または非置換であるか、あるいは、それぞれＲ７〜Ｒ９に関して本明細書で定義された通りであってもよく；
Ｒ１は、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかで本明細書に記載されるように、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアミド、アシル、カルボキシレート、ならびに飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換のヒドロキシアルキル（例えば、−ＣＨ２−ＯＨ）からなる群から選択され；
Ｒ２は、式Ｉａに関して本明細書に記載されるように、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルからなる群から選択され；
Ｒ３〜Ｒ６は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロ脂環式、アリール、ヘテロアリール、アミンおよびＯＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６は、独立に、式Ｉａの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、単糖部分、オリゴ糖部分、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルから選択され、Ｒ３〜Ｒ６のうちの少なくとも１つは、ＯＲ１６であり；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、カルボキシレート、スルホニル（アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルなど）および細胞透過性基からなる群から選択され、
ＯＲ１６であるＲ３〜Ｒ６の１つまたは複数におけるＲ２およびＯＲ１６のうちの少なくとも２つは、アシルである。
これらの実施形態の一部において、１つまたは複数のＲ３〜Ｒ６は、式ＩａおよびＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、単糖またはオリゴ糖である。
式Ｉｅの実施形態のいずれかの一部において：
Ｘ１はＯであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ水素であり；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ水素であり；
Ｒ１は、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかで本明細書に記載されるように、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアミド、アシル、カルボキシレート、ならびに飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換のヒドロキシアルキル（例えば、−ＣＨ２−ＯＨ）からなる群から選択され；
Ｒ２はアシルであり；
Ｒ３〜Ｒ６は、それぞれ独立に、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、独立に、式Ｉａの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、単糖部分、オリゴ糖部分、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリルおよびアシルから選択され、Ｒ３〜Ｒ６のうちの少なくとも１つはＯＲ１６であり、Ｒ１６はアシルであり；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、カルボキシレート、スルホニル（アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルなど）および細胞透過性基からなる群から選択される。
式Ｉｅの実施形態のいずれかの一部において：
Ｘ１はＯであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ水素であり；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ水素であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくは、本明細書に記載されるように、水素または低級アルキルであり；
Ｒ２はアシルであり；
Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、アシルであり；
Ｒ４はＯＲ１６であり、Ｒ１６は水素またはアシルであり；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、および細胞透過性基からなる群から選択される。
式Ｉｅの実施形態のいずれかの一部において：
Ｘ１はＯであり；
Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、それぞれ水素であり；
Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、それぞれ水素であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、好ましくは本明細書に記載されるように、水素または低級アルキルであり；
Ｒ２はアシルであり；
Ｒ３およびＲ６は、それぞれ独立に、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、アシルであり；
Ｒ４は、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、水素またはアシルであり；
Ｒ５は、本明細書に記載されるように、式ＩＩにより表される単糖であり、Ｘ２は、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、好ましくはＮＲ１４Ｒ１５であり；
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立に、式ＩａまたはＩｂの対応する実施形態のいずれかに関して本明細書に記載されるように、水素、アシル、アミノ置換アルファ−ヒドロキシアシル、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアルカリル、および細胞透過性基からなる群から選択される。
式Ｉｅにより表される化合物は、本明細書では「多重エステル化した」化合物とも称される。
式Ｉｅに包含される例示化合物としては、後述する実施例のスキーム１４に示した化合物が挙げられる。
本明細書に記載される実施形態のいずれかおよびそれらのあらゆる組合せに関して、本化合物は、塩、例えば薬学的に許容される塩の形態であってもよい。
成句「薬学的に許容される塩」は、本明細書で使用する場合、親化合物の電荷を有する化学種およびその対イオンを指し、これは、典型的には、投与される化合物の生物活性および特性を妨げずに、親化合物の溶解特性を修飾したり、および／または親化合物による生物へのあらゆる有意な刺激を低減したりするのに使用される。本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩は、本化合物の合成中に、例えば、反応混合物から本化合物を単離したり、または本化合物を再結晶化したりする過程で代替的に形成することができる。
本発明の実施形態の一部の状況において、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩は、任意選択で酸付加塩であってもよく、当該酸付加塩は、正電荷を有する形態（例えば、塩基性基がプロトン化されている形態）の本化合物の少なくとも１つの塩基性基（例えば、アミンおよび／またはグアニジン）と、薬学的に許容される塩を形成する、選択した塩基から誘導された少なくとも１つの対イオンとの組合せを含む。
それゆえに本明細書に記載の化合物の酸付加塩は、本化合物の１つまたは複数の塩基性基と、それと当量の１つまたは複数の酸とで形成された複合体であり得る。
本化合物中の電荷を有する基と、塩における対イオンとの化学量論的な割合に応じて、酸付加塩は、モノ付加塩（ｍｏｎｏ−ａｄｄｉｔｉｏｎ ｓａｌｔ）またはポリ付加塩（ｐｏｌｙ−ａｄｄｉｔｉｏｎ ｓａｌｔ）のいずれかであり得る。
成句「モノ付加塩」は、本明細書で使用する場合、対イオンと、電荷を有する形態の本化合物との化学量論的な比率が１：１である塩であって、１モル当量の本化合物当たり１モル当量の対イオンを包含する塩を指す。
成句「ポリ付加塩」は、本明細書で使用する場合、対イオンと、電荷を有する形態の本化合物との化学量論的な比率が１：１より大きく、例えば２：１、３：１、４：１などである塩であって、１モル当量の本化合物当たり２モル当量以上の対イオンを包含する塩を指す。
薬学的に許容される塩の例としては、アンモニウムカチオンまたはグアニジニウムカチオンおよびそれらの酸付加塩が考えられるが、これらに限定されるものではない。
酸付加塩としては、様々な有機酸および無機酸、例えば、塩化水素酸の酸付加塩をもたらす塩酸、臭化水素酸の酸付加塩をもたらす臭化水素酸、酢酸の酸付加塩をもたらす酢酸、アスコルビン酸の酸付加塩をもたらすアスコルビン酸、ベシル酸の付加塩をもたらすベンゼンスルホン酸、カンファースルホン酸の付加塩をもたらすカンファースルホン酸、クエン酸の酸付加塩をもたらすクエン酸、マレイン酸の酸付加塩をもたらすマレイン酸、リンゴ酸の酸付加塩をもたらすリンゴ酸、メタンスルホン酸（メシル酸）の付加塩をもたらすメタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸の付加塩をもたらすナフタレンスルホン酸、シュウ酸の酸付加塩をもたらすシュウ酸、リン酸の酸付加塩をもたらすリン酸、ｐ−トルエンスルホン酸の付加塩をもたらすトルエンスルホン酸、コハク酸の酸付加塩をもたらすコハク酸、硫酸の酸付加塩をもたらす硫酸、酒石酸の酸付加塩をもたらす酒石酸、およびトリフルオロ酢酸の付加塩をもたらすトリフルオロ酢酸などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。これらの酸付加塩のそれぞれは、モノ付加塩またはポリ付加塩のいずれであってもよく、これらの用語は本明細書で定義された通りである。
本発明の実施形態はさらに、本明細書に記載の化合物の、あらゆるエナンチオマー、ジアステレオマー、プロドラッグ、溶媒和物、水和物および／または薬学的に許容される塩を包含する。
用語「エナンチオマー」は、本明細書で使用する場合、化合物の立体異性体であって、互いの完全な反転／鏡映（鏡像）によってのみその対応構造と重ね合わせることができるものを指す。エナンチオマーは、互いに右手と左手のようであると述べられることから、「対掌性」を有すると言われている。エナンチオマーは、それ自体が対掌性を有する環境（例えばあらゆる生物系）に存在する場合を除いて、同じ化学的および物理的特性を有する。本発明の実施形態において、化合物は１つまたは複数のキラル中心を有してもよく、それぞれがＲ配置またはＳ配置であり、あらゆる組合せをでもよい。本発明の一部の実施形態に係る化合物は、Ｒ配置またはＳ配置を示す、あらゆるキラル中心を有し得る。
用語「ジアステレオマー」は、本明細書で使用する場合、互いにエナンチオマーではない立体異性体を指す。ある化合物の２つ以上の立体異性体が、等価な（関連する）立体中心の全てではないが１つまたは複数で異なる配置を有し、互いに鏡像ではない場合に、ジアステレオマー特性（ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｉｓｍ）を発揮する。２つのジアステレオ異性体が１つの立体中心のみで互いに異なる場合、それらは、エピマーである。各立体中心（キラル中心）は、２つの異なる配置、したがって２つの異なる立体異性体をもたらす。本発明の文脈において、本発明の実施形態は、立体配置のあらゆる組合せ、すなわち、あらゆるジアステレオマーで生じる、複数のキラル中心を有する化合物を包含する。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、６’位および５”位（が存在する場合）のそれぞれの立体配置は、独立に、Ｒ配置またはＳ配置である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、６’位の立体配置はＲ配置である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、５”位が存在する場合、その立体配置はＳ配置である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、６’位の立体配置はＲ配置であり、５”位が存在する場合、その立体配置はＲ配置またはＳ配置である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、６’位の立体配置はＲ配置であり、５”位が存在する場合、その立体配置はＳ配置である。
用語「プロドラッグ」は、インビボで活性な化合物（活性な親薬物）に変換される薬剤を指す。プロドラッグは、典型的には、親薬物の投与を容易にするのに有用である。これらは、例えば、経口投与により生物的に利用可能であり得るが、親薬物はそうではない。またプロドラッグは、医薬組成物中の親薬物と比較して、改善された溶解性も有し得る。またプロドラッグは、インビボで活性な化合物の持続放出を達成するのに使用されることも多い。プロドラッグの例は、１つまたは複数のカルボン酸部分を有する本発明の化合物であって、エステル（「プロドラッグ」）として投与されるものであるが、これに限定されない。このようなプロドラッグは、インビボで加水分解されることにより、遊離の化合物（親薬物）を生じる。選択されたエステルは、プロドラッグの溶解特性と加水分解速度の両方に影響を与える可能性がある。
用語「溶媒和物」は、溶質（本発明の化合物）と溶媒によって形成される、可変の化学量論（例えば、ジ、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサなど）を有する複合体であって、溶媒が溶質の生物活性を妨害しないものを指す。好適な溶媒としては、例えば、エタノール、酢酸などが挙げられる。
用語「水和物」は、溶媒が水である、上記溶媒和物を指す。
用語「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」は、本明細書で使用する場合、−ＯＨ基を指す。
用語「アミン」は、本明細書で使用する場合、−ＮＲ’Ｒ”基を表しており、式中のＲ’およびＲ”は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロ脂環式、アリール、ヘテロアリール、アルカリル、アルクヘテロアリール、またはアシルであり、これらの用語は本明細書で定義された通りである。代替として、Ｒ’およびＲ”の一方または両方は、例えば、ヒドロキシ、アルコキシ、ヒドロキシアルキル、トリハロアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、アミン、ハロゲン化物、スルホネート、スルホキシド、ホスホネート、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、カルボニル、Ｃ−カルボキシレート、Ｏ−カルボキシレート、Ｎ−チオカルバメート、Ｏ−チオカルバメート、尿素、チオ尿素、Ｎ−カルバメート、Ｏ−カルバメート、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、グアニル、グアニジンおよびヒドラジンであってもよい。
用語「アルキル」は、本明細書で使用する場合、直鎖および分岐鎖の基を包含する脂肪族炭化水素を表す。アルキルは、１から２０個の炭素原子、または１〜１０個の炭素原子を有していてもよく、分岐状または非分岐状であってもよい。本発明の一部の実施形態によれば、アルキルは、１〜４個の炭素原子を有する低分子量（または低級）アルキル（すなわち、メチル、エチル、プロピルおよびブチル）である。
本明細書において数値範囲、例えば「１〜１０」、が述べられる場合、それは常にその基が、ここではアルキル基が、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等の、１０個までの炭素原子を含有し得ることを意味する。一部の実施形態において、アルキルは、１〜６または１〜４個の炭素原子を有する低級アルキルである。
アルキルは、置換でも非置換でもよい。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル（分岐状のアルキルを形成する）、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つまたは複数であってもよく、これらの用語は以下で定義する通りである。アリールで置換されたアルキルは、本明細書では「アルカリル」とも称され、その例は、ベンジルである。
「アルキル」が記載される場合、それは常に、アルケニルまたはアルキニルで置換可能である。本明細書で使用される用語「アルキル」はまた、飽和または不飽和の炭化水素も包含し、したがってこの用語はさらに、アルケニルおよびアルキニルも包含する。
用語「アルケニル」は、本明細書で定義されたような不飽和のアルキルを表し、これは少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有し、例えば、アリル、ビニル、３−ブテニル、２−ブテニル、２−ヘキセニルおよびｉ−プロペニルである。アルケニルは、上述した１つまたは複数の基で置換されていても、非置換でもよい。
用語「アルキニル」は、本明細書で定義されたような少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する不飽和のアルキルである。アルキニルは、上述した１つまたは複数の基で置換されていても、非置換でもよい。
用語「シクロアルキル」は、全て炭素の単環または縮合環（すなわち、隣接する一対の炭素原子を共有する環）であり、３個以上の炭素原子を含有する分岐状または非分岐状の基であって、環の１つまたは複数は、完全に共役したπ電子系を有さず、さらに置換でも非置換でもよい。例示的なシクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、またはシクロドデシルが挙げられる。シクロアルキルは、置換でも非置換でもよい。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つまたは複数であってもよく、これらの用語は以下で定義される通りである。
用語「アリール」は、完全に共役したπ電子系を有する、全て炭素の単環または多環式の縮合環の（すなわち、隣接する一対の炭素原子を共有する環）を表している。アリール基は、非置換でもよいし、または１つまたは複数の基で置換されていてもよい。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つまたは複数であってもよく、これらの用語は以下で定義される通りである。
用語「ヘテロアリール」は、単環または縮合環（すなわち、隣接する一対の原子を共有する環）であり、環中に、例えば窒素、酸素および硫黄などの１つまたは複数の原子を有し、加えて完全に共役したπ電子系を有する基を表す。ヘテロアリール基の例としては、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリンおよびプリンが挙げられる。代表的な例は、チアジアゾール、ピリジン、ピロール、オキサゾール、インドール、プリンなどであるが、これらに限定されない。ヘテロアリール基は、非置換でもよいし、または１つまたは複数の基で置換されていてもよい。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つまたは複数であってもよく、これらの用語は以下で定義される通りである。
用語「ヘテロ脂環式」は、本明細書で使用する場合、環中に例えば窒素、酸素および硫黄などの１つまたは複数の原子を有する単環または縮合環を表している。このような環はまた、１つまたは複数の二重結合を有する場合もある。しかしながら、このような環は、完全に共役したπ電子系を有さない。代表的な例は、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピランなどである。ヘテロ脂環式は、置換されていてもよいし、または置換されていなくてもよい。置換されている場合、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ハロ、トリハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルの１つまたは複数であってもよく、これらの用語は以下で定義される通りである。
用語「ハロゲン化物」は、本明細書で使用する場合、ハロ原子のアニオン、すなわちＦ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−およびＩ−を指す。
用語「ハロ」は、置換基としてのＦ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩ原子を指す。
用語「アルコキシド」は、Ｒ’−Ｏ−アニオンを指し、式中のＲ’は本明細書の上記で定義した通りである。
用語「アルコキシ」は、−ＯＲ’基を指し、式中のＲ’は、本明細書で定義されたようなアルキルまたはシクロアルキルである。
用語「アリールオキシ」は、−ＯＲ’基を指し、式中のＲ’は、本明細書で定義されたようなアリールである。
用語「ヘテロアリールオキシ」は、−ＯＲ’基を指し、式中のＲ’は、本明細書で定義されたようなヘテロアリールである。
用語「チオアルコキシ」は、−ＳＲ’基を指し、式中のＲ’は、本明細書で定義されたようなアルキルまたはシクロアルキルである。
用語「チオアリールオキシ」は、−ＳＲ’基を指し、式中のＲ’は、本明細書で定義されたようなアリールである。
用語「チオヘテロアリールオキシ」は、−ＳＲ’基を指し、式中のＲ’は、本明細書で定義されたようなヘテロアリールである。
用語「ヒドロキシアルキル」は、本明細書で使用する場合、本明細書で定義されたような１つまたは複数のヒドロキシ基で置換されたアルキル基を指し、例えば、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチルおよび４−ヒドロキシペンチルである。
用語「アミノアルキル」は、本明細書で使用する場合、本明細書で定義されたような１つまたは複数のアミノ基で置換されたアルキル基を指す。
用語「アルコキシアルキル」は、本明細書で使用する場合、１つまたは複数のアルコキシ基で置換されたアルキル基を指し、例えば、メトキシメチル、２−メトキシエチル、４−エトキシブチル、ｎ−プロポキシエチルおよびｔ−ブチルエチルである。
用語「トリハロアルキル」は、−ＣＸ３を指し、式中Ｘは、本明細書で定義されたように、ハロである。例示的なハロアルキルは、ＣＦ３である。
「グアニジノ」または「グアニジン」または「グアニジニル」または「グアニジル」基は、−ＲａＮＣ（＝ＮＲｄ）−ＮＲｂＲｃ基を指し、式中のＲａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、Ｒ’およびＲ”に関してそれぞれ本明細書で定義された通りである。
「グアニル」または「グアニン」基は、ＲａＲｂＮＣ（＝ＮＲｄ）−基を指し、式中のＲａ、ＲｂおよびＲｄはそれぞれ、Ｒ’およびＲ”に関して本明細書で定義された通りである。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、グアニジン基は、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、グアニル基は、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−基である。
本明細書に記載されるアミン（修飾されたアミンを包含する）、グアニジンおよびグアニン基はいずれも、それらの遊離塩基の形態で示されているが、生理学的なｐＨにおけるそれらのイオン化された形態および／またはその塩の形態、例えば、本明細書に記載の薬学的に許容される塩の形態も包含することを意味する。
アルキル、シクロアルキル、アリール、アルカリル、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、アシルおよび本明細書に記載される他の任意の部分が置換されている場合、それらは常に、１つまたは複数の置換基を包含する。当該置換基は、それぞれ独立に、ヒドロキシ、アルコキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、チオアリールオキシ、アルカリル、アルケニル、アルキニル、スルホネート、スルホキシド、チオスルフェート、スルフェート、サルファイト、チオサルファイト、ホスホネート、シアノ、ニトロ、アゾ、スルホンアミド、カルボニル、チオカルボニル、Ｃ−カルボキシレート、Ｏ−カルボキシレート、Ｎ−チオカルバメート、Ｏ−チオカルバメート、オキソ、チオオキソ、オキシム、アシル、ハロゲン化アシル、アゾ、アジ化物、尿素、チオ尿素、Ｎ−カルバメート、Ｏ−カルバメート、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、グアニル、グアニジル、ヒドラジンおよびヒドラジドであってもよいが、これらに限定されない。これらの用語は本明細書で定義された通りである。
用語「シアノ」は、−Ｃ≡Ｎ基を表している。
用語「ニトロ」は、−ＮＯ２基を表している。
用語「スルフェート」は、−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）２−ＯＲ’末端基、または−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｏ−結合基を表しており、この用語およびこれらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書の上記で定義した通りである。
用語「チオスルフェート」は、−Ｏ−Ｓ（＝Ｓ）（＝Ｏ）−ＯＲ’末端基または−Ｏ−Ｓ（＝Ｓ）（＝Ｏ）−Ｏ−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書の上記で定義した通りである。
用語「サルファイト」は、−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ’末端基または−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）−Ｏ−基である結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書の上記で定義した通りである。
用語「チオサルファイト」は、−Ｏ−Ｓ（＝Ｓ）−Ｏ−Ｒ’末端基または−Ｏ−Ｓ（＝Ｓ）−Ｏ−基である結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書の上記で定義した通りである。
用語「スルフィン酸塩」は、−Ｓ（＝Ｏ）−ＯＲ’末端基または−Ｓ（＝Ｏ）−Ｏ−基である結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書の上記で定義した通りである。
用語「スルホキシド」または「スルフィニル」は、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’末端基または−Ｓ（＝Ｏ）−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書の上記で定義した通りである。
用語「スルホネート」または「スルホニル」は、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ’末端基または−Ｓ（＝Ｏ）２−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書で定義した通りである。
用語「Ｓ−スルホンアミド」は、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ’Ｒ”末端基または−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ’−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義された通りである。
用語「Ｎ−スルホンアミド」は、Ｒ’Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ”−末端基または−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ’−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義した通りである。
用語「カルボニル」または「炭酸塩」は、本明細書で使用する場合、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ’末端基または−Ｃ（＝Ｏ）−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書で定義された通りである。
用語「チオカルボニル」は、本明細書で使用する場合、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ’末端基または−Ｃ（＝Ｓ）−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書で定義された通りである。
用語「オキソ」は、本明細書で使用する場合、（＝Ｏ）基を表しており、酸素原子は、示された位置において二重結合で原子（例えば、炭素原子）に連結されている。
用語「チオオキソ」は、本明細書で使用する場合、（＝Ｓ）基を表しており、硫黄原子は、示された位置において二重結合で原子（例えば、炭素原子）に連結されている。
用語「オキシム」は、＝Ｎ−ＯＨ末端基または＝Ｎ−Ｏ−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りである。
用語「ハロゲン化アシル」は、−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ””基を表しており、式中のＲ””は、本明細書の上記で定義されるハロゲン化物である。
用語「アゾ」または「ジアゾ」は、−Ｎ＝ＮＲ’末端基または−Ｎ＝Ｎ−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書の上記で定義した通りである。
用語「アジ化物」は、−Ｎ３末端基を表している。
用語「カルボキシレート」は、本明細書で使用する場合、Ｃ−カルボキシレートおよびＯ−カルボキシレートを包含する。
用語「Ｃ−カルボキシレート」は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ’末端基または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書で定義した通りである。
用語「Ｏ−カルボキシレート」は、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’末端基または−ＯＣ（＝Ｏ）−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書で定義した通りである。
カルボキシレートは、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。環状の場合、Ｒ’と炭素原子とが一緒に連結されて、Ｃ−カルボキシレートの形態で環を形成し、この基はまた、ラクトンとも称される。代替として、Ｒ’とＯとが一緒に連結されて、Ｏ−カルボキシレートの形態で環を形成する。環状カルボキシレートは、例えば形成された環中の原子が別の基に連結される場合、結合基として機能することができる。
用語「チオカルボキシレート」は、本明細書で使用する場合、Ｃ−チオカルボキシレートおよびＯ−チオカルボキシレートを包含する。
用語「Ｃ−チオカルボキシレート」は、−Ｃ（＝Ｓ）−ＯＲ’末端基または−Ｃ（＝Ｓ）−Ｏ−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書で定義した通りである。
用語「Ｏ−チオカルボキシレート」は、−ＯＣ（＝Ｓ）Ｒ’末端基または−ＯＣ（＝Ｓ）−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’は本明細書で定義した通りである。
チオカルボキシレートは、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。環状の場合、Ｒ’と炭素原子とが一緒に連結されて、Ｃ−チオカルボキシレートの形態で環を形成し、この基はまた、チオラクトンとも称される。代替として、Ｒ’とＯとが一緒に連結されて、Ｏ−チオカルボキシレートの形態で環を形成する。環状チオカルボキシレートは、例えば形成された環中の原子が別の基に連結される場合、結合基として機能することができる。
用語「カルバメート」は、本明細書で使用する場合、Ｎ−カルバメートおよびＯ−カルバメートを包含する。
用語「Ｎ−カルバメート」は、Ｒ”ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ’−末端基または−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ’−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義された通りである。
用語「Ｏ−カルバメート」は、−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ’Ｒ”末端基または−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ’−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義された通りである。
カルバメートは、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。環状の場合、Ｒ’と炭素原子とが一緒に連結されて、Ｏ−カルバメートの形態で環を形成する。代替として、Ｒ’とＯとが一緒に連結されて、Ｎ−カルバメートの形態で環を形成する。環状カルバメートは、例えば形成された環中の原子が別の基に連結される場合、結合基として機能することができる。
用語「カルバメート」は、本明細書で使用する場合、Ｎ−カルバメートおよびＯ−カルバメートを包含する。
用語「チオカルバメート」は、本明細書で使用する場合、Ｎ−チオカルバメートおよびＯ−チオカルバメートを包含する。
用語「Ｏ−チオカルバメート」は、−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲ’Ｒ”末端基または−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲ’−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義された通りである。
用語「Ｎ−チオカルバメート」は、Ｒ”ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−末端基または−ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義された通りである。
チオカルバメートは、カルバメートに関して本明細書に記載されるように、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。
用語「ジチオカルバメート」は、本明細書で使用する場合、Ｓ−ジチオカルバメートおよびＮ−ジチオカルバメートを包含する。
用語「Ｓ−ジチオカルバメート」は、−ＳＣ（＝Ｓ）−ＮＲ’Ｒ”末端基または−ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義された通りである。
用語「Ｎ−ジチオカルバメート」は、Ｒ”ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−末端基または−ＳＣ（＝Ｓ）ＮＲ’−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義された通りである。
用語「尿素」は、本明細書では「ウレイド」とも称され、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ”Ｒ”’末端基または−ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ”−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は、本明細書で定義された通りであり、Ｒ”’は、Ｒ’およびＲ”に関して本明細書で定義された通りである。
用語「チオ尿素」は、本明細書では「チオウレイド」とも称され、−ＮＲ’−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ”Ｒ”’末端基または−ＮＲ’−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ”−結合基を表しており、式中のＲ’、Ｒ”およびＲ”’は本明細書で定義された通りである。
用語「アミド」は、本明細書で使用する場合、Ｃ−アミドおよびＮ−アミドを包含する。
用語「Ｃ−アミド」は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ’Ｒ”末端基または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ’−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義した通りである。
用語「Ｎ−アミド」は、Ｒ’Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ”−末端基またはＲ’Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’およびＲ”は本明細書で定義した通りである。
用語「ヒドラジン」は、−ＮＲ’−ＮＲ”Ｒ”’末端基または−ＮＲ’−ＮＲ”−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’、Ｒ”、およびＲ”’は本明細書で定義された通りである。
本明細書で使用する場合、用語「ヒドラジド」は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ’−ＮＲ”Ｒ”’末端基または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ’−ＮＲ”−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’、Ｒ”およびＲ”’は本明細書で定義した通りである。
本明細書で使用する場合、用語「チオヒドラジド」は、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ’−ＮＲ”Ｒ”’末端基または−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ’−ＮＲ”−結合基を表しており、これらの成句は本明細書の上記で定義した通りであり、式中のＲ’、Ｒ”およびＲ”’は本明細書で定義した通りである。
プロセス：
さらに本発明の実施形態によれば、本明細書に記載の化合物を調製するプロセスを提供する。
これらのプロセスは、一般的に、パロマミン誘導体を提供すること、およびそれに所望の修飾を導入することにより、本明細書に記載される疑似二糖化合物を得ることによって実行する。
本明細書に記載される疑似三糖化合物を調製するプロセスは、一般的に、アミノグリコシドの分野において公知のように、適切なアクセプターであるアミノグリコシド分子および対応するドナー分子を創出することによって実行する。
一般的に、本発明の一部の実施形態に係る疑似三糖化合物の合成は、好適なアクセプターおよびドナー分子と、所望の式Ｉａの疑似三糖が得られるように、当該ドナーおよび当該アクセプターのそれぞれの保護された誘導体を反応させ、保護基を除去することを可能にする反応条件とを使用して達成される。
用語「アクセプター」は、本明細書において、Ｃ３’位、Ｃ４’位、Ｃ６位またはＣ５位、好ましくはＣ５位に、利用可能な（保護されていない）ヒドロキシル基を有する、パロマミン由来の骨格構造であって、当該ヒドロキシル基はグリコシル化反応中に反応性を示し、グリコシルを受容できるものを表すために使用される。
用語「ドナー」は、本明細書において、アクセプターと反応して最終的な疑似三糖化合物を形成するグリコシルを表すために使用される。
用語「グリコシル」は、本明細書で使用する場合、単糖のヘミアセタール官能基からヒドロキシル基を除去することにより得られる化学基を指す。
ドナーおよびアクセプターは、本発明の一部の実施形態に係る所望の化合物を形成するように設計される。以下にこの本発明の態様の一部の実施形態を記載し、本明細書に記載の化合物の例示的なサブセットの例示的な調製プロセスを示す。本発明の一部の実施形態に係る例示化合物のより詳細な調製プロセスは、後述する実施例で示す。
本発明の一部の実施形態に係る疑似三糖化合物の合成は、一般的に、以下の工程を包含する。（ｉ）パロマミン足場に存在する選択された位置の１つまたは複数のヒドロキシルおよびアミンを選択的に保護し、選択された位置（例えば、Ｃ５）を未保護のままにして、本明細書で定義されるドナー（グリコシル）化合物を自由に受容できるようにすることにより、アクセプター化合物を調製し、（ｉｉ）グリコシルに存在する選択された位置の１つまたは複数のヒドロキシルおよびアミンを選択的に保護し、１つの位置を未保護のままにして、本明細書で定義されるアクセプター化合物と自由にカップリングできるようにすることにより、ドナー化合物を調製し、（ｉｉｉ）ドナーとアクセプターとをカップリング反応に供し、そして（ｉｉｉ）保護基を除去して、所望の化合物を得る。
成句「保護された基（protected group）」は、本明細書で使用する場合、基の官能性部分をブロックし、反応条件（例えば、本明細書に記載されるカップリング反応）下で他の基と反応しないようにその基を保護するように置換または修飾された基を指す。保護された基は、置換基を除去または再度修飾することにより、再生することができる。
「保護されたアミノ基」または「保護されたヒドロキシル基」を使用した場合、これらは、保護された基が生成されるように、保護基がそれぞれの基と結合している、またはそれぞれの基の修飾に使用されていることを意味する。
成句「保護基（protecting group）」は、本明細書で使用する場合、化合物の特定の官能基をブロックまたは保護しながらも、他の官能基は反応させるために一般的に採用される置換基または修飾を指す。保護基は、置換基の放出または再修飾によって、所望の保護されていない基を生成するように選択される。
例えば、「アミノ保護基」または「アミン保護基」は、アミノ基に結合した置換基、またはアミノ基の修飾であって、化合物のアミノ官能性をブロックまたは保護し、それが化学反応に参加しないようにするものである。アミノ保護基は、置換基の除去、またはアミン基を再生する修飾によって除去される。
好適な保護されたアミノ基としては、アジ化物（アジド）、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−アセチル、Ｎ−トリフルオロアセチル、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）およびＮ−９−フルオレニルメチルエノキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。
「ヒドロキシル保護基」または「ヒドロキシル保護基」は、ヒドロキシル基に結合している置換基、またはヒドロキシル基の修飾であって、化合物のヒドロキシル官能性をブロックまたは保護し、それが化学反応に参加しないようにするものである。ヒドロキシル保護基は、置換基の除去、またはヒドロキシル基を再生する修飾によって除去される。
好適な保護されたヒドロキシ基としては、（２つの隣接するヒドロキシル基と共に１，３−ジオキサンを形成する）イソプロピリデンケタールおよびシクロヘキサノンジメチルケタール、（２つの隣接するヒドロキシル基と共に１，３−ジオキサンを形成する）４−メトキシ−１−メチルベンゼン、Ｏ−アセチル、Ｏ−クロロアセチル、Ｏ−ベンゾイルおよびＯ−シリルが挙げられる。
保護基およびその使用の一般的な説明に関しては、T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991を参照されたい。
一部の実施形態によれば、保護されたアミノ基としては、アジド（Ｎ３−）および／またはＮ−フタルイミド基が挙げられ、保護されたヒドロキシル基としては、Ｏ−アセチル（ＡｃＯ−）、Ｏ−ベンゾイル（ＢｚＯ−）および／またはＯ−クロロアセチルが挙げられる。
本明細書において特筆すべきことに、適用可能な場合に「保護された基」は、化合物上の１つの反応性官能基が保護されている部分、または（例えば２つの官能性が隣接する場合に）１つより多くの官能基が同時に保護されている部分を指す。例えば、イソプロピリデンケタールにより同時に保護することができる２つのヒドロキシル基を指す。
一部の実施形態において、ドナー化合物は、一般式ＩＩＩによって表すことができる保護された単糖である。
一部の実施形態において、ドナー化合物は、本明細書で定義されたように、それらの１”位にＬで表される脱離基を有し、任意選択で５”位に置換基Ｒ１２を有する一般式ＩＩＩによって表すことができる保護された単糖である。
Figure 0006862428
式中：
Ｌは脱離基であり；
ＯＴは、ドナーである保護されたヒドロキシル基であり；
Ｒ１２は、式Ｉｂに関して本明細書で定義された通りであり（式ＩＩＩに示されるような５”位における配置は、非限定的な例である）；
Ｄは、式Ｉｂに関して定義されたＮＲ１４Ｒ１５の保護されたまたは保護されていない形態であり、式Ｉｂ中のＲ１４およびＲ１５が両方とも水素である場合、Ｄは、ドナーである保護されたアミン基である。
成句「脱離基」は、本明細書で使用する場合、化学反応中に有機分子から分離し易い不安定性の原子、基または化学的部分を表しており、ここで分離は、典型的には、分離の際の脱離する原子、基または部分の相対的な安定性により促進される。典型的には、強酸の共役塩基であるあらゆる基が、脱離基として作用することができる。本発明の実施形態の一部に係る好適な脱離基の代表的な例としては、トリクロロアセトイミデート、アセテート、トシレート、トリフレート、スルホネート、アジ化物、ハロゲン化物、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、シアネート、チオシアネート、ニトロおよびシアノが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の一部の実施形態によれば、ドナーであるヒドロキシル保護基のそれぞれは、Ｏ−ベンゾイルであり、Ｒ１５またはＲ１７のいずれかのドナーであるアミノ保護基は、アジドであるが、他の保護基も想定される。
Ｒ１４およびＲ１５の１つが水素以外である場合、それらは保護されていてもよいし、または保護されていなくてもよいことに留意されたい。典型的には、Ｒ６およびＲ７の１つがグアニンまたはグアニジンである場合、反応条件（例えば、アクセプターとのカップリング反応の条件）に好適な保護基を使用することができる。任意選択で、グアニンまたはグアニジンは保護されていない。Ｒ１４およびＲ１５の１つがアルキル、アリールまたはシクロアルキルである場合、典型的には、式ＩＩＩ中のＤは、ＮＲ１４Ｒ１５の保護されていない形態である。
ドナー化合物の構造が、本発明の一部の実施形態により得られる化合物中の環ＩＩＩの絶対構造、すなわち、５”位の立体配置ならびに式Ｉｂ中のＲ１４、Ｒ１５およびＲ１２の種類を設定する。
本明細書に記載の化合物の調製で使用するのに好適な例示的な受容体分子は、式ＩＶにより表される化合物である。
Figure 0006862428
式中：
点線は、６’位におけるＳ配置またはＲ配置を表し；
ＯＰは、アクセプターである保護されたヒドロキシル基であり；
ＡＰは、アクセプターである保護されたアミン基であり；
Ｒ１は、式ＩａまたはＩｂに関して本明細書で定義された通りであり；
Ａは、アクセプターである保護されたヒドロキシル基（ＯＰ）であるか；またはＯＲ２を定義するそれ以外の基の１つであってもよく、これらの基は、その化学的性質および反応条件に基づき、保護されていても、未保護でもよく；
Ｂは、アクセプターである保護されたアミン基であり、Ｒ７が式Ｉａである場合は水素であり、それ以外の場合は、Ｒ７を定義する基の保護または未保護の形態である。
本発明の一部の実施形態によれば、アクセプターである保護されたヒドロキシル基は、Ｏ−アセチルである。
本発明の一部の実施形態によれば、ドナーであるアミノ保護基はアジドであるが、他の保護基も想定される。
アクセプターの様々な位置に存在する、アクセプターである保護されたヒドロキシル基およびアクセプターである保護されたアミノ基は、各位置において同一でもよいし、または異なっていてもよい。
一部の実施形態において、例えば、Ｒ７がＨ以外の場合、ドナーとの反応の前に、部分Ｂを生成することによりアクセプターを調製する。
アクセプター化合物の構造が、本発明の一部の実施形態に係る化合物中の環Ｉおよび環ＩＩの絶対構造を設定する。
一部の実施形態において、本発明の一部の実施形態による式Ｉａの疑似二糖化合物の合成は、式Ｖのアミノ保護された化合物を使用して達成される。
Figure 0006862428
式中：
点線は、６’位におけるＳ配置またはＲ配置を表し；
ＡＰは、アクセプターである保護されたアミン基であり；
Ｒ１は、式Ｉａに関して本明細書で定義された通りであり；
Ａは、本明細書に記載のアクセプターである保護されたヒドロキシル基（ＯＰ）であるか；またはＯＲ２を定義するそれ以外の基の１つであってもよく、これらの基は、その化学的性質および反応条件に基づき、保護されていても、未保護でもよい。
本発明の実施形態はさらに、本発明の実施形態の化合物を調製するプロセスに関連して、本明細書に記載される中間化合物のいずれかを包含する。
治療用途：
当業界で公知のように、遺伝病を引き起こす対立遺伝子の約３分の１が、トランケートされたタンパク質の産生を引き起こす早期終結（停止）コドン（ＰＴＣ）を有する。１つの可能性がある治療アプローチとして、全長タンパク質の合成を可能にするためのこのようなＰＴＣのリードスルーの誘導および／または促進が挙げられる。ＰＴＣは、ナンセンス変異、フレームシフト欠失および挿入などの変異、またはトランケートされたリーディングフレームを有するｍＲＮＡアイソフォームを生成する異常なスプライシングのいずれかによって生じる。これらの変異は、そのドミナントネガティブ型または機能獲得型の作用故に、トランケートされた、非機能的または有害なタンパク質の産生を引き起こしうる。
一般的に、ＰＴＣのリードスルーは、サプレッサートランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）によって達成でき、これは、翻訳終結効率を減少させる因子であり、例えば、翻訳終結因子を対象とする短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、およびナンセンス変異領域を標的とするＲＮＡアンチセンスなどである。本発明の目的の１つは、少なくとも１つの未成熟終止コドン変異に関連する遺伝性疾患の少なくとも１つに罹患した対象において、十分なレベルの機能性タンパク質を達成することを目的とした、薬理学的な治療アプローチを提供することである。本発明の実施形態によれば、提供する治療アプローチは、疾患を引き起こすＰＴＣの翻訳リードスルーを誘導および／または促進して、全長機能性タンパク質の合成および発現を可能にすることを目的としている。
上記で示された通り、臨床試験まで到達した、大規模に研究されたアプローチの１つは、リボソームのデコード部位に影響を及ぼす、アミノグリコシド抗生物質などの薬物によるリードスルーに基づくものであるが、アミノグリコシドは、その高濃度の使用および／または長期使用は、重度の副作用を伴う。本明細書で示す化合物は、未成熟終止コドン変異を有する生物において、最少の副作用しかし起こさずに、当該コドン変異のリードスルーを誘導および／または促進する能力を発揮するように設計された。このような活性故に、これらの化合物は、未成熟終止コドン変異に関連する遺伝性疾患の治療のための、治療活性を示す薬剤としての使用に適している。
後述する実施例で示すように、本発明の実施形態に包含される例示化合物は、実際に未成熟終止コドン変異抑制活性を発揮することが明らかとなった。したがって、疾患を引き起こす未成熟終止コドン変異を特徴とする遺伝子のリードスルーの誘導において有用であり、未成熟終止コドン変異に関連するそれぞれの遺伝病または遺伝子疾患の治療において、有用性を発揮する。
本発明の一部実施形態の態様によれば、本明細書で提供する、式ＩａまたはＩｂで表される化合物には、対応する実施形態のいずれかおよびそれらのあらゆる組合せが含まれ（そして式ＩＣ、ＩｄおよびＩｅにより表される化合物も含まれ）、当該化合物は、未成熟終止コドン変異のリードスルーの誘導および／または促進、ならびに／あるいは未成熟終止コドン変異を有する遺伝子の発現増加、ならびに／あるいは未成熟終止コドン変異のリードスルーの誘導および／または促進、および／または未成熟終止コドン変異を有する遺伝子の発現増加のための医薬品の製造において使用するためのものである。
本発明の一部実施形態の態様によれば、本明細書で提供する、式ＩａまたはＩｂで表される化合物には、対応する実施形態のいずれかおよびそれらのあらゆる組合せが含まれ（そして式ＩＣ、ＩｄおよびＩｅにより表される化合物も含まれ）、当該化合物は、未成熟終止コドン変異に関連する遺伝性疾患の治療用であるか、または未成熟終止コドン変異に関連する遺伝性疾患を治療するための医薬品の製造用である。
あらゆる未成熟終止コドン変異が想定される。一部の実施形態において、変異は、ＵＧＡ、ＵＡＧまたはＵＡＡと行ったＲＮＡコードを有する変異である。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、タンパク質は、細胞質内の翻訳系で翻訳される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、本化合物は、変異を抑制する量で使用される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、真核生物の細胞質内の翻訳系における本化合物の翻訳阻害ＩＣ５０は、リボソームの翻訳系における本化合物の翻訳阻害ＩＣ５０より大きい。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによれば、真核生物の細胞質内の翻訳系における本化合物の翻訳阻害ＩＣ５０は、原核生物の翻訳系における本化合物の翻訳阻害ＩＣ５０より大きい。
本発明の一部実施形態の態様によれば、本明細書で提供する、式ＩａまたはＩｂで表される化合物には、対応する実施形態のいずれかおよびそれらのあらゆる組合せが含まれ（そして式ＩＣ、ＩｄおよびＩｅにより表される化合物も含まれ）、当該化合物は、未成熟終止コドン変異に関連する遺伝性疾患の治療用であるか、または未成熟終止コドン変異に関連する遺伝性疾患の治療のための医薬品の製造用である。
本発明の一部実施形態の態様によれば、未成熟終止コドン変異に関連する遺伝性疾患を治療する方法を提供する。本発明のこの態様によれば、本方法は、治療を必要とする対象に、本明細書で提供する化合物を、治療有効量で投与することで実行される。当該化合物は、本明細書で提供する、式ＩａまたはＩｂで表される化合物であり、対応する実施形態のいずれかおよびそれらのあらゆる組合せを含む（そして式ＩＣ、ＩｄおよびＩｅにより表される化合物も含む）。
本明細書で使用する場合、用語「治療する」は、病態の進行を無効化する、実質的に阻害する、減速させる、または逆転させることであって、病態に伴う臨床症状または審美的症状の実質的な改善、または病態に伴う臨床症状または審美的症状の出現の実質的な防止を含む。
成句「治療有効量」は、本明細書で使用する場合、治療される病態の症状の１つまたは複数をある程度和らげると予想される、投与されるポリマーの量を表す。
成句「遺伝性疾患」は、本明細書で使用する場合、しばしば親から受け継がれる１つまたは複数の欠陥のある遺伝子によって引き起こされ、欠陥性の劣性遺伝子を有する２体の健康なキャリアが繁殖した場合、または欠陥性遺伝子が優性である場合に、予期せず発生しうる慢性障害を指す。遺伝性疾患は、様々な遺伝形式で起こる可能性があり、そのような形式としては、子孫に影響を及ぼすのに必要な変異遺伝子のコピー数が１のみである常染色体優性形式、および子孫に影響を及ぼすために変異遺伝子のコピー数が２でなければならない常染色体劣性形式が挙げられる。
成句「遺伝性疾患」は、本明細書で使用する場合、遺伝性疾患、遺伝病、遺伝的病態または遺伝的症候群を包含する。
本発明の実施形態のいずれかの一部によれば、遺伝性疾患、遺伝病、遺伝的病態または遺伝的症候群は、未成熟終止コドン変異を有する遺伝子と関連しており、このような変異は、本明細書ではトランケーション変異および／またはナンセンス変異とも称され、遺伝子の誤った翻訳を引き起こす。誤った翻訳は、機能不全の必須タンパク質を産生するか、または必須タンパク質合成の低減もしくは消失を引き起こす。本発明の一部の実施形態において、本発明の実施形態の範囲に含まれる想定される遺伝性疾患は、未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型に関連する遺伝性疾患と称される。
本発明の実施形態のいずれかの一部によれば、未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型に関連する遺伝性疾患は、全長ではあるがそれ以外の点で欠陥がある転写産物（ｍＲＮＡ）において、変異のリードスルーを誘導および／または促進する、言い換えれば、ナンセンス変異（未成熟終止コドン変異および／またはトランケーション変異）の抑制を誘導および／または促進することによって治療可能である。本発明の実施形態において、遺伝性疾患は、リードスルーを誘導および／または促進する化合物によって治療可能な遺伝性疾患である。
未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型に関連する遺伝性疾患を同定するための方法は、当業界において周知であり、そのようなものとしては、完全なまたは部分的なゲノム解明、遺伝学的なバイオマーカーの検出、表現型の分類および遺伝情報の分析が挙げられる。
このような方法は、しばしば、変異体／野生型（ＷＴ）配列の対を発生し、これらの対は、公知の手法で、遺伝性疾患が未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型に関連するかどうかを同定するのに使用することができる。
このような遺伝性疾患を治療するために、化合物のリードスルーを誘導／促進する活性は、当業界において周知の方法により確立することができる。
例えば、変異した遺伝子（遺伝性疾患を引き起こす遺伝子）の配列により中断された２つのレポーター遺伝子を含むプラスミドを、完全な細胞または無細胞系のいずれかのタンパク質発現プラットフォームにトランスフェクトし、試験化合物の存在下における２つの遺伝子の発現レベルの比率を、典型的には、試験化合物の濃度系列および重複系列を用いて測定し、野生型の遺伝子発現レベルの比率および／または試験された化合物を含有しない対照試料で測定された発現レベルの比率と比較する。
留意すべきことに、リードスルー活性の実験モデル、すなわち未成熟終止コドン変異を含有する遺伝子のヌクレオチド配列は、未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型に関連する遺伝性疾患を同定する過程の副産物である。さらに留意すべきことに、ゲノムデータ収集における大きな進歩によって、上記過程は、現在では、十分に当業者の能力の範囲内であり、未成熟終止コドン変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型に関連することが示された遺伝性疾患の場合のように、薬物候補の作用機序が一旦確立されれば、本明細書に記載したリードスルー誘導性化合物のいずれか１つの効能、選択性および安全性の同定、特徴付け、および評価は、十分に当業者の能力の範囲内である。さらに、本明細書に記載したリードスルー誘導性化合物をさらに医薬開発の慣例的なプロセスで処理することも十分に当業者の能力の範囲内である。
本明細書ではリードスルー活性と称する、未成熟終止コドン変異および／またはトランケーション変異のリードスルーを試験するための手法は、当業界において公知であり、後述する実施例に例示的な実験方法のいくつかを提供する。このような手法により、本発明の一部の実施形態に係るリードスルー誘導性化合物を特徴付けることができる。他の方法もリードスルー誘導性化合物の特徴付けに使用可能であり、このような方法も本発明の範囲内であると想定されることを理解されたい。例えば、本明細書で提供する方法はまた、比較的短期間で何千もの化合物をアッセイすることのできるハイスループットスクリーニング技術にも適合させることができる。
当業者であれば、本明細書で提供されるリードスルー誘導性化合物を、薬物としての使用における安全性に関して特徴付けたり、薬物候補を、その細胞傷害性とその効能とのバランスの観点から評価したりするために、多くのインビトロの手法が使用可能であることを理解するであろう。また当業者であれば、本明細書で提供するリードスルー誘導性化合物を、真核生物に対する選択性と原核生物に対する選択性との観点から特徴付けるために多くのインビトロの手法が使用可能であることを理解するであろう。さらにこのような手法は、比較的短期間で何千もの化合物をアッセイすることのできるハイスループットスクリーニング技術にも適合させることができる。
少なくとも１つの未成熟終止コドンまたは他のナンセンス変異の存在に関連がある遺伝性の疾患、病気、病態および症候群の非限定的な例としては、がん、レット症候群、嚢胞性線維症（ＣＦ）、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、先天性筋ジストロフィー（ＣＭＤ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、第ＶＩＩ因子欠乏症、家族性心房細動、ヘイリー−ヘイリー病、血友病Ａ、血友病Ｂ、ハーラー症候群、ルイ−バール症候群（毛細血管拡張性運動失調、ＡＴ：ａｔａｘｉａ−ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、マッカードル病、ムコ多糖症、腎症性シスチン症、多発性嚢胞腎、Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ型脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、テイ−サックス病、アッシャー症候群、シスチン症、重度の表皮水疱症、ドラベ症候群、Ｘ連鎖性腎性尿崩症（ＸＮＤＩ）およびＸ連鎖性網膜色素変性症が挙げられる。
少なくとも１つの未成熟終止コドンまたは他のナンセンス変異の存在に関連がある追加の遺伝性の疾患、病気、病態および症候群は、Kim M. Keeling, K.M Bedwell, D.M.による“Suppression of nonsense mutations as a therapeutic approach to treat genetic diseases”, Wiley Interdisciplinary Reviews: RNA, 2011, 2(6), p. 837-852、Bordeira-Carrico, R. et al.による“Cancer syndromes and therapy by stop-codon readthrough”, by, Trends in Molecular Medicine, 2012, 18(11), p. 667-678、およびそこで引用されたあらゆる文献に列挙されており、これらの全てが、参照によりその全体が本願に組み込まれる。
本明細書に記載した方法および使用のいずれかにおいて、本明細書に記載の化合物は、それ自体で利用されるか、または本明細書で定義されたように、薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物の一部を形成するかのいずれでもよい。
本発明の一部実施形態の態様によれば、活性成分としての本明細書に記載される新規の化合物のいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
「医薬組成物」は、本明細書で使用する場合、本明細書で提供する化合物の製剤であって、薬学的に許容される好適な担体および賦形剤などの、他の化学的要素を共に含むものである。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を容易にすることである。
以下、用語「薬学的に許容される担体」は、生物に著しい刺激を与えず、投与される化合物の生物活性および特性を無効にしない担体または希釈剤を指す。担体の例は、これらに限定されないが、プロピレングリコール、塩類溶液、有機溶媒と水とのエマルジョンおよび混合物、加えて固体（例えば、粉末化）およびガス状の担体である。
本明細書において、用語「賦形剤」は、化合物の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例としては、これらに限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖および種々のデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが挙げられる。
製剤化および薬物投与のための技術は、参照により本明細書に組み込まれる“Remington's Pharmaceutical Sciences” Mack Publishing Co., Easton, PA, latest editionに見出すことができる。
本発明の医薬組成物は、当業界において周知の工程、例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠の形成、湿式粉砕、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥といった工程を用いて製造することができる。
したがって、本発明に従って使用するための医薬組成物は、本明細書で示した化合物の薬学的に使用可能な製剤への加工を容易にする賦形剤および助剤を含む、１つまたは複数の薬学的に許容される担体を使用し、従来の方式で製剤化することができる。適当な処方は、選ばれる投与経路によって決まる。
一部の実施形態によれば、投与は、経口的に実行される。経口投与の場合、本明細書で示した化合物は、本化合物を当業界において周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることにより容易に製剤化することができる。このような担体は、本明細書で示した化合物を、患者による経口摂取のために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤等として製剤化することを可能にする。経口で使用するための薬理学的な製剤は、固体賦形剤を使用し、任意選択で得られた混合物を磨り潰し、必要に応じて好適な助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して、錠剤または糖衣錠のコアを得ることにより作製することができる。好適な賦形剤は、特に、増量剤、例えばラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールなどの糖；セルロース製剤、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボメチルセルロースナトリウムなど；および／または生理学的に許容されるポリマー、例えばポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などである。必要に応じて、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはそれらの塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどを添加してもよい。
経口的に使用することができる医薬組成物としては、ゼラチンで製造されたプッシュフィット式のカプセル、加えてゼラチンおよび可塑剤（例えばグリセロールまたはソルビトールなど）で製造されたソフト封入カプセルが挙げられる。プッシュフィット式のカプセルは、ラクトースなどの増量剤、デンプンなどの結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および任意選択で安定剤と混和した活性成分を含有してもよい。ソフトカプセル中で、本明細書で示した化合物は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの好適な液体に溶解または懸濁されていてもよい。加えて、安定剤が添加されてもよい。全ての経口投与用の処方は、選択した投与経路に好適な投与量とするすべきである。
注射の場合、本明細書で示した化合物は、水溶液、好ましくは生理学的に適合する緩衝液を用いて処方されてもよく、このような緩衝液としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどの有機溶媒を含有するか、または含有しない、例えばハンクス溶液、リンゲル液、または生理的緩衝塩類溶液などが挙げられる。
経粘膜投与の場合、処方に浸透剤を使用する。このような浸透剤は、一般的に当業界において公知である。
糖衣錠のコアは、好適なコーティングと共に提供される。この目的のために、濃縮した糖溶液を使用することができ、このような糖溶液は、任意選択で、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有してもよい。活性アミノグリコシド化合物の用量の様々な組合せを識別したりまたは特徴付けたりするために、錠剤または糖衣錠コーティングに染料または顔料が添加されてもよい。
口腔粘膜投与の場合、組成物は、従来の方式で製剤化された錠剤またはロゼンジの形態をとっていてもよい。
吸入による投与の場合、本明細書で示した化合物は、好適な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロ−テトラフルオロエタンまたは二酸化炭素を使用した、加圧されたパックまたはネブライザーからのエアロゾルのスプレー供給（典型的には粉末状、液状および／またはガス状の担体を包含する）の形態で都合よく送達される。加圧されたエアロゾルのケースにおいて、投薬量単位は、定量を送達するためのバルブを提供することにより決定することができる。本明細書で示した化合物と、例えば、これらに限定されないがラクトースまたはデンプンなどの好適な粉末ベースとの粉末混合物を含有する、吸入器または注入器で使用するための、例えばゼラチンのカプセルおよびカートリッジの形態に製剤化されてもよい。
本明細書で示した化合物は、例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与のために製剤化されてもよい。注射のための処方は、例えばアンプルまたは複数回投与用容器の中に、任意選択で追加の保存剤を含む、単位剤形で提供されてもよい。組成物は、油性または水性の媒体中の懸濁液、溶液またはエマルジョンであってもよいし、例えば懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤などの成形剤を含有してもよい。
非経口投与用の医薬組成物には、水溶性の形態の化合物製剤である、化合物の水溶液が含まれる。加えて、本明細書で示した化合物の懸濁液は、適切な油性懸濁注射液およびエマルジョン（例えば、油中水型、水中油型または油中油中水型エマルジョン）として調製してもよい。好適な親油性溶媒または媒体としては、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチル、トリグリセリドもしくはリポソームなどの合成脂肪酸エステルが挙げられる。水性懸濁注射液は、懸濁液の粘度を増加させる物質、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランなどを含有してもよい。任意選択で、懸濁液はまた、好適な安定剤、または本明細書で示した化合物の溶解性を増加させて高度に濃縮した溶液の調製を可能にする薬剤を含有してもよい。
代替として、本明細書で示した化合物は、使用前に、好適な媒体、例えば滅菌されたパイロジェンフリーの水で溶解させることのできる、粉末形態であってもよい。
本明細書で示した化合物はまた、カカオバターや他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を使用して、坐剤または保留浣腸などの直腸用の組成物に製剤化することもできる。
本明細書に記載される医薬組成物はまた、好適なゲル相の担体または賦形剤の固体を含んでいてもよい。このような担体または賦形剤の例としては、これらに限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、および例えばポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。
本発明における使用に好適な医薬組成物としては、活性成分が、意図する目的を達成するのに有効な量で含有されている組成物が挙げられる。より具体的には、治療有効量は、障害の症状の予防、軽減、もしくは緩和、または治療される対象の生存を延長するのに有効な、本明細書で示した化合物の量を意味する。
治療有効量の決定は、特に本明細書で提供する詳細な開示を鑑みれば、十分に当業者の能力の範囲内である。
本発明の実施形態の方法で使用する本明細書で示したあらゆる化合物について、その治療有効量または用量は、初期のうちは動物における活性アッセイから推測することができる。例えば、活性アッセイによって決定される変異抑制レベル（例えば、トランケーション変異の実質的なリードスルーを達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲を達成するように、動物モデルで用量を処方することができる。このような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するのに使用することができる。
本明細書で示した化合物の毒性および治療効能は、実験動物を用いた標準的な医薬的手順によって決定することができ、例えば、対象化合物のＥＣ５０（最大作用の５０％が観察される化合物の濃度）およびＬＤ５０（試験された動物の５０％の死亡を引き起こす致死量）を決定することによって決定することができる。これらの活性アッセイおよび動物実験から得られたデータは、ヒトで使用するための投薬量範囲を処方するために使用することができる。
投薬量は、採用される剤形および利用される投与経路に応じて様々であり得る。正確な処方、投与経路および投薬量は、患者の状態を考慮して個々の医師により選ぶことができる。（例えば、Fingl et al., 1975, in “The Pharmacological Basis of Therapeutics”, Ch. 1 p.1を参照。）
本明細書で示した化合物の血漿濃度が、最小有効濃度（ＭＥＣ：ｍｉｎｉｍａｌ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）と呼ばれる、所望の効果を維持するのに十分な値となるように、投薬量および投薬間隔を個々に調整することができる。ＭＥＣは、製剤ごとに異なるが、インビトロのデータ、例えば、トランケーション変異を有する遺伝子全体の５０〜９０％の発現、すなわち変異コドンのリードスルーを達成するのに必要な化合物の濃度、から推測することができる。ＭＥＣを達成するのに必要な投薬量は、個体の特徴および投与経路に依存すると考えられる。血漿濃度を決定するのに、ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを使用することができる。
ＭＥＣ値を使用して、投薬間隔も決定することができる。ＭＥＣより高い血漿濃度を、時間の１０〜９０％、好ましくは３０〜９０％、最も好ましくは５０〜９０％にわたり維持するレジメンを使用して製剤が投与することができる。
治療しようとする慢性状態の重症度および応答性に応じて、投与は、上述した遅延放出組成物の単回定期的投与であってもよく、ここで定期的な治療の持続は、数日から数週間であるか、または定期的な治療の間に十分な緩和が成し遂げられるまでであるか、または定期的な治療のために障害状態の実質的な減退が達成されるまででもよい。
投与する組成物の量は、当然ながら、治療される対象、苦痛の重症度、投与方式、担当医師の判断などに依存するものである。本発明の組成物は、必要に応じて、ＦＤＡ（米国食品医薬品局）により承認されたキット等のパックまたはディスペンサーデバイスに入れて提供してもよく、このようなパックまたはデバイスは、活性成分を含有する１つまたは複数の単位剤形を含有してもよい。パックは、例えば、金属またはプラスチックホイルを含み、例えば、ただしこれらに限定されないが、ブリスターパックまたは加圧容器（吸入用）などでありうる。パックまたはディスペンサーデバイスは、投与のための説明書が添付されていてもよい。パックまたはディスペンサーはまた、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府機関により規定された形態で容器に付随する通知が添付されていてもよく、この通知は、組成物の形態がヒトまたは動物への投与用として当該機関により承認されていることを反映するものである。このような通知は、例えば、処方薬に関して米国食品医薬品局により承認されたラベルの形態であってもよいし、または承認された製品の差し込み物の形態であってもよい。また、本発明の実施形態に係る化合物を含み、適合可能な医薬用担体中に製剤化された組成物を調製し、適切な容器中に入れて、上記で詳述したように、表示した病態の治療または診断用であることを標識してもよい。
したがって、一部の実施形態において、医薬組成物は、本明細書で定義されたような遺伝性疾患の治療、および／または本明細書に記載されるいずれかの用途用であって、パッケージング材料中に梱包され、パッケージング材料の表面またはその内部に、その識別が印刷されたものである。
一部の実施形態において、医薬組成物は、本明細書で定義されたような遺伝性疾患の治療、および／または本明細書に記載されるいずれかの用途用である。
本明細書に記載される組成物、方法および使用のいずれかにおいて、本化合物は、遺伝性疾患の治療、および／または未成熟終止コドン変異のリードスルー活性の誘導または促進、および／または本明細書に記載される未成熟終止コドン変異を有する遺伝子の発現の増加において有用な他の薬剤と組み合わせて利用することができる。
本明細書で示した化合物またはそれを含有する医薬組成物は、定義によれば慢性である遺伝性疾患の治療を主たる目的とするため、治療される対象の寿命中ずっと投与されることが予期される。それゆえに、本化合物を含有する医薬組成物の投与様式は、投与が簡単で快適になるような投与様式、好ましくは自己投与による投与様式、さらに、患者の良好な生活状態および人生に対する犠牲が最も少なくなるような投与様式とするべきである。
本明細書で示した化合物またはそれを含有する医薬組成物の繰り返しのおよび定期的な投与は、例えば、毎日（すなわち１日１回）実行することができ、より好ましくは、投与を毎週（すなわち週１回）実行し、より好ましくは、投与を毎月（すなわち月１回）実行し、最も好ましくは、投与を数カ月毎に（例えば、１．５カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、またはさらには６カ月毎に）１回実行する。
上記で論じられたように、トランケーション変異のリードスルー薬として目下公知のアミノグリコシドを使用することに関する制約の一部は、それらは主として抗細菌性である（抗生物質製剤として使用される）という事実に関連する。いずれの抗細菌剤の長期使用も、腸の微生物フローラを変更し、それにより例えば炎症性腸疾患の突発などの他の病状を引き起こしたりまたは悪化させたりする可能性がある。さらに、一部の病的な微生物株において耐性の出現を引き起こす可能性があることから、是認されがたく、生命を脅かすことすらある。
一部の実施形態において、本明細書で示した化合物は、実質的に抗菌活性を有さない。「抗菌活性を有さない」とは、特定の株に対するそれらの最小阻害濃度（ＭＩＣ：ｍｉｎｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）が、この株に関して抗生物質とみなされる化合物の濃度よりかなり高いことを意味する。さらに、これらの化合物のＭＩＣは、トランケーション変異抑制活性を発揮するのに必要な濃度より顕著に高い。
本明細書で示した化合物は、実質的に非殺菌性であるため、上述の副作用を生じることはない。したがって、当該化合物の標的とはならない、保護すら必要な場合もある、良性のおよび／または有益な微生物を含有し得る吸収経路を介して投与することが可能である。本明細書で示した化合物はこのような重要な特徴故に、慢性的な病態に対する特に有効な薬物となる。なぜならばこれらの化合物は、抗細菌性に関連した、累積的な副作用を引き起こすことなく、繰り返し生涯にわたり投与することが可能であり、さらには、経口投与または直腸投与、すなわち胃腸管を介して投与可能という、慢性障害の治療を目的とした薬物にとって非常に有用で重要な特徴を有する。
一部の実施形態によれば、本明細書で示した化合物は、原核細胞の翻訳系に比べて真核細胞の翻訳系に選択的となるように選択および／または設計される、すなわち本化合物は、それらの原核細胞における活性、例えば細菌における活性などと比較して、真核細胞、例えば哺乳類（ヒト）などにおいてより高い活性を示す。いかなる特定の理論にも縛られることはないが、本明細書で示した化合物は、リボソームが遺伝子の翻訳に関与している間に１６ＳリボソームＲＮＡのＡ部位に結合することによって作用することが公知であり、真核生物のリボソームＡ部位に対してより高い親和性を有するか、またはそうではない場合は、原核生物のリボソームＡ部位や、原核生物の相対部位と類似したミトコンドリアのリボソームＡ部位と比べて、真核生物のＡ部位に対して選択的である。
用語「約」は、本明細書で使用する場合、±１０％を指す。
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」およびその同根語は、「限定されるものではないが、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」を意味する。
用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、「含み、限定される（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｎｄ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」を意味する。
用語「実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、組成物、方法または構造が、追加の成分、ステップ、および／または部分を含んでいてもよいが、当該追加の成分、ステップ、および／または部分が、特許請求の範囲に記載された組成物、方法、または構造の基本的および新規な特徴を物質的に変化させない場合に限られることを意味する。
本明細書で用いられる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に記述しない限り、複数の参照を含む。例えば、用語「化合物（ａ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または「少なくとも１つの化合物」は、複数の化合物、例えばそれらの混合物などを包含してもよい。本出願にわたり、本発明の様々な実施形態が、範囲の様式で示される場合がある。範囲の様式での記載は、単に便宜上および簡潔さのためであり、本発明の範囲に対する不変の限定として解釈されるべきではないことが理解されるものとする。したがって、範囲の記載は、具体的に開示された全ての可能性がある部分範囲に加えてその範囲内の個々の数値を含むとみなされるものとする。例えば１から６などの範囲の記載は、具体的に開示された部分範囲、例えば１から３、１から４、１から５、２から４、２から６、３から６など、加えてその範囲内の個々の数値、例えば１、２、３、４、５、および６を含むとみなされるものとする。これは、範囲の幅に関係なく適用される。
数値範囲は、本明細書に示される場合はいつでも、示された範囲内の引用された全ての数字（分数または整数）を包含することを意味する。第１の指定された数値と第２の指定された数値との間の「範囲である／範囲」および第１の指定された数値「から」第２の指定された数値の「範囲である／範囲」という成句は、本明細書において同義的に使用され、第１および第２の指定された数値と、それらの間の全ての分数のおよび整数の数値とを包含することを意味する。
用語「方法」は、本明細書で使用する場合、所与のタスクを達成するための方式、手段、技術および手順であり、例えば、これらに限定されないが、公知であるか、または化学、薬理学、生物学、生化学および医療分野の技術者に公知の方式、手段、技術および手順から容易に開発されるかのいずれかの方式、手段、技術および手順などを指す。
本出願から成立した特許の存続期間中、本明細書で定義されるような多くの関連する遺伝病および障害が見出されることが予測されるが、この用語の範囲は、このような全ての新しい障害および疾患を先験的に包含することを意図している。
本発明の特徴であって、明確にするために個別の実施形態のとして記載したものは、組み合わせて１つの実施形態としても提供可能であることを理解されたい。逆に、簡潔にするために１つの実施形態として記載した本発明の様々な特徴を、個別に、または任意の適切な部分組合せで、または本発明で記載した他の実施形態との適切な組み合わせとして提供することもできる。様々な実施形態に関連して記載された特徴は、その特徴なしでは実施形態が動作不能でない限り、それらの実施形態の必須要件とは見なさない。
以下の実施例で、上記で詳述された、さらに以下の特許請求の範囲の章で特許請求された本発明の様々な実施形態および態様の実験的な裏付けを記載する。
以下に実施例を記載するが、これらは上記の説明と共に本発明の一部の実施形態を非限定的な様式で例示するものである。
実施例１
本発明の実施形態の一部に係る細胞透過基を含有する例示化合物の化学合成
一般的に、アミノグリコシド（ＡＧ）抗生物質は、生理学的なｐＨで電荷を有し、したがってこれらは、胃腸管を介した吸収が限定的である可能性があることから、典型的には注射で投与される。加えてＡＧは、真核細胞への限定的な透過性を示すため、細胞内取り込みの制約を克服するためにはより多くの投薬量でそれらを投与することが必要であり、その結果、副作用を引き起こし、翻訳療法における使用を限定的なものとする。本実施例に記載の化合物は、これらの問題を解決するために設計された。
胃腸管吸収の問題を和らげるために、疑似二糖足場上でパロマミン由来のアミノグリコシドのＮ１位に、アルキル／アリール基を結合させた。例示化合物ＮＢ１４４、ＮＢ１４５、ＮＢ１４６およびＮＢ１４７（本明細書に記載の表１を参照）を、それぞれＮ−１位のイソプロピル、ベンジル、プロピルおよびプロピル置換を示すように調製した。
細胞内取り込みの制約を和らげるために、細胞透過性基を有する一連の化合物を、それらの細胞内取り込みが増加するように調製した。これらの化合物は、足場上の様々な位置に細胞透過性基、例えばグアニジン基など、を導入することにより調製した。
以下は、上記の表１に示される本発明の一部の実施形態に係る例示化合物を調製するためのプロセスである。
化合物ＮＢ１４４、ＮＢ１４５およびＮＢ１４６の合成を、以下の一般的なスキーム２に示したように、化合物１から開始して２工程で達成した（これまでにBaasov et al., Bioorg. Med. Chem.,2010, 18, pp. 3735-3746で報告された通りに調製した）（試薬および条件：（ｉ）ＲＣＨＯ、Ｈ２Ｏ、１ＭのＨＣｌ、ＮａＢＣＮＨ３またはＲＣＨＯ、ＭｅＯＨ、ＮａＢＨ４ ０℃；（ｉｉ）ＰＭｅ３、ＮａＯＨ、ＴＨＦ、室温）。
Figure 0006862428
第一アミンの脂肪族アルデヒドによるモノアルキル化を、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを含む水中で実行し、一方でベンズアルデヒドの場合は、メタノール／ＮａＢＨ４を使用した。この工程の総収量は、３５〜５８％のモノアルキル化／ベンジル化生成物２ａ〜ｃであった（スキーム２）。次いでシュタウディンガー反応を実行して、最終的な化合物ＮＢ１４４、ＮＢ１４５およびＮＢ１４６を６８〜８５％の優れた収量で得た。
ＮＢ１４４の合成：
Figure 0006862428
ＮＢ１４４を上記のスキーム２に従って、前駆化合物１から開始して調製した。化合物１（０．５グラム、１．２ｍｍｏｌ）を溶解し、水（１５ｍＬ）中で０℃で１５分間撹拌し、塩酸の１Ｍ溶液を一滴ずつ添加して、反応混合物のｐＨを約２〜３に調整した。約２当量のイソブチルアルデヒド（０．２ｍＬ）を反応混合物に添加し、室温で１５分間撹拌した。得られた溶液を０℃に冷却し、ＮａＢＣＮＨ３（３０ｍｇ、１．５当量）を添加し、進行をＴＬＣでモニターした。反応の１時間後、出発原料が消費されて望ましい生成物になるまで類似のプロセスを繰り返した。完了後、反応混合物を蒸発させ、カラムクロマトグラフィーに供し、モノアルキル化生成物である化合物２ａ（０．２グラム、３５％）を得た。化合物２ａをＴＨＦ（５ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５．０ｍＬ）の混合物中に溶解した。混合物を室温で１０分間撹拌し、その後、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、２．０ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を添加した。ＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）１０：１５：６：１５］により反応の進行をモニターしたところ、１時間後に完了が判明した。生成物をシリカゲルの短いカラムでのカラムクロマトグラフィーで精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（２００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（２００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物をＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）およびＭｅＯＨ（８：２）の混合物で溶出した。生成物を含有する分画を合わせて、乾燥するまで蒸発させた。残留物を、少量の水に再溶解し、再度蒸発させて（２〜３回繰り返す）、ＮＢ１４４の遊離アミンの形態を得た。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４ ＋型）の短いカラムに通過させることにより、分析的に純粋な生成物を得た。カラムを最初にＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（３：２）の混合物で洗浄し、次いで生成物をＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＮＨ４ＯＨ（８：１：１）の混合物で溶出して、表題の化合物ＮＢ１４４を得た（０．１５０グラム、８５％）。貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１４４をその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基を水中に溶解し、Ｈ２ＳＯ４（０．１Ｎ）でｐＨを約７．０に調整し、凍結乾燥した。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝１．２１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ３）、２．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝３．４，Ｊ２＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．２１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．４８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３’）、３．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝３．４，Ｊ２＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−５’）、４．０９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）、５．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，Ｈ−１’）；「環ＩＩ」：δＨ＝１．１１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ａｘ）、２．１４（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．５，Ｊ２＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、２．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、２．７１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．１９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４およびＨ−６）、３．４４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−５）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝０．９６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝３．１Ｈｚ）、０．９７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ）、１．７９（ｍ，１Ｈ）、２．３２（ｍ，１Ｈ）、２．５６（ｍ，１Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ＝１６．６、２０．８、２０．９、２９．０、３４．６、５１．５、５５．８、５７．４、５８．９、６７．８、７３．６、７５．８、７６．５（２Ｃ）、７７．８、９０．９、１０３．２（Ｃ−１’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１７Ｈ３６Ｎ３Ｏ７（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ：３９４．２；実測値ｍ／ｅ：３９４．１。
ＮＢ１４５の合成：
Figure 0006862428
ＮＢ１４５を上記スキーム２に従って前駆化合物１から開始して調製した。化合物１（０．５グラム、１．２ｍｍｏｌ）およびベンズアルデヒド（０．３グラム、４ｍｍｏｌ）を溶解し、メタノール（１５ｍＬ）中で室温で１５分間撹拌した。得られた溶液を０℃に冷却し、ＮａＢＨ４（１００ｍｇ）を添加し、進行をＴＬＣでモニターした。完了後、反応混合物を蒸発させ、カラムクロマトグラフィーに供して、モノベンジル化された化合物２ｂを０．３グラム、５０％収量で得た。化合物２ｂをＴＨＦ（５ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５．０ｍＬ）の混合物中に溶解した。混合物を室温で１０分間撹拌し、その後、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、２．０ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を添加した。ＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）１０：１５：６：１５］により反応の進行をモニターしたところ、１時間後に完了が判明した。生成物をシリカゲルの短いカラムでのカラムクロマトグラフィーで精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（２００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（２００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物をＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）およびＭｅＯＨ（８：２）の混合物で溶出した。生成物を含有する分画を合わせて、乾燥するまで蒸発させた。残留物を、少量の水に再溶解し、再度蒸発させて（２〜３回繰り返す）、ＮＢ１４５の遊離アミンの形態を得た。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４ ＋型）の短いカラムに通過させることにより、分析的に純粋な生成物を得た。カラムを最初にＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（３：２）の混合物で洗浄し、次いで生成物をＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＮＨ４ＯＨ（８：１：１）の混合物で溶出して、ＮＢ１４５を得た（０．２００グラム、７５％収量）。貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１４５をその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基を水中に溶解させ、Ｈ２ＳＯ４（０．１Ｎ）でｐＨを約７．０に調整し、凍結乾燥した。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝１．２１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ３）、２．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．６，Ｊ２＝１０．３Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．２３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．４９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３’）、３．８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝３．４，Ｊ２＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−５’）、４．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）、５．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，Ｈ−１’）；「環ＩＩ」：δＨ＝１．１５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ａｘ）、２．２３（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．５，Ｊ２＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、２．５６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、２．７０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．２２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−６）、３．２８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．４３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−５）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝３．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ）、３．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ）、７．２８〜７．３７（ｍ，５Ｈ，Ａｒ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ＝１６．４、３４．２、５１．１、５１．６、５７．２、５７．８、６７．６、７３．２、７５．７、７６．３、７６．４、７７．７、９０．２、１０２．９（Ｃ−１’）、１２８．３（Ａｒ）、１２９．４（Ａｒ）、１２９．６（Ａｒ）、１４０．３（Ａｒ）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ Ｃ２０Ｈ３４Ｎ３Ｏ７（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ：４２８．２；実測値ｍ／ｅ：４２８．１。
ＮＢ１４６の合成：
Figure 0006862428
ＮＢ１４６を上記スキーム２に従って化合物１から開始して調製した。化合物１（０．５グラム、１．２ｍｍｏｌ）を溶解し、水（１５ｍＬ）中で０℃で１５分間撹拌し、塩酸の１Ｍ溶液を一滴ずつ添加して、反応混合物のｐＨを約２〜３に調整した。約２当量のプロピルアルデヒド（０．２ｍＬ）を反応混合物に添加し、室温で１５分間撹拌した。得られた溶液を０℃に冷却し、ＮａＢＣＮＨ３（３０ｍｇ、１．５当量）を添加し、進行をＴＬＣでモニターした。反応の１時間後、出発原料が消費されて望ましい生成物になるまで類似のプロセスを繰り返した。完了後、反応混合物を蒸発させ、カラムクロマトグラフィーに供して、０．３２５ｇ（５８％）の化合物２ｃを得た。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝１．２７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ３）、３．０９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．２，Ｊ２＝１０．５Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝８．７，Ｊ２＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．９４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３’およびＨ−５’）、４．０４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）、５．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ−１’）；「環ＩＩ」：δＨ＝１．２６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ａｘ）、２．３１（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．５，Ｊ２＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、２．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．１５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．４６〜３．５４（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５およびＨ−６）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝０．９８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、１．５６（ｍ，２Ｈ）、２．５３（ｍ，１Ｈ）、２．７２（ｍ，１Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ＝１１．９、１８．１、２３．６、３２．６（Ｃ−２）、４９．７、５７．９、６１．７、６４．７、６９．４、７２．３、７４．３、７５．２、７６．７、７８．６、８０．７、９８．６（Ｃ−１’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ Ｃ１６Ｈ３０Ｎ７Ｏ７（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ：４３２．２；実測値ｍ／ｅ：４３２．２。
化合物２ｃ（０．３２５グラム、０．７５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５．０ｍＬ）の混合物中に溶解した。混合物を室温で１０分間撹拌し、その後、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、２．０ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を添加した。ＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）１０：１５：６：１５］により反応の進行をモニターしたところ、１時間後に完了が判明した。生成物をシリカゲルの短いカラムでのカラムクロマトグラフィーで精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（２００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（２００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を８０％ＭｅＯＨ中の２０％ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）の混合物で溶出した。生成物を含有する分画を合わせて、乾燥するまで蒸発させた。残留物を、少量の水に再溶解し、再度蒸発させて（２〜３回繰り返す）、ＮＢ１４６の遊離アミンの形態を得た。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４ ＋型）の短いカラムに通過させることにより、分析的に純粋な生成物を得た。カラムを最初にＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（３：２）の混合物で洗浄し、次いで生成物をＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＮＨ４ＯＨ（８：１：１）の混合物で溶出して、ＮＢ１４６を得た（０．１７５グラム、６８％収量）。貯蔵および生物学的試験のために、化合物をその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基を水中に溶解し、Ｈ２ＳＯ４（０．１Ｎ）でｐＨを約７．０に調整し、凍結乾燥した。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝１．２１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ３）、２．７１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．２，Ｊ２＝１０．３Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．２１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．４８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３’）、３．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝３．４，Ｊ２＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−５’）、４．０９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）、５．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，Ｈ−１’）；「環ＩＩ」：δＨ＝１．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ａｘ）、２．１４（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．５，Ｊ２＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、２．４９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、２．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４およびＨ−６）、３．４４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−５）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝０．９７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、１．５７（ｍ，２Ｈ）、２．４９（ｍ，１Ｈ）、２．７１（ｍ，１Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ＝１１．９、１６．６、２３．７、３４．６（Ｃ−２）、４９．７、５１．４、５７．４、５８．９、６７．８、７３．５、７５．８、７６．５、７６．６、７７．８、９０．８、１０３．２（Ｃ−１’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ Ｃ１６Ｈ３４Ｎ３Ｏ７（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ：３８０．２；実測値ｍ／ｅ：３８０．１。
ＮＢ１４７の合成：
Figure 0006862428
ＮＢ１４７を、下記のスキーム３（試薬および条件：ａ）５．５当量のＡｃ２Ｏ、Ｐｙ、−２０℃、２４時間；ｂ）ＢＦ３・ＯＥｔ２、ＭＳ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、３時間；ｃ）ＴＨＦ、０．５ＭのＮａＯＨ、６０℃、２４時間；ｄ）ＰＭｅ３、ＮａＯＨ、ＴＨＦ、室温）に従って、化合物２ｃ（ＮＢ１４６の前駆体、上記のスキーム２を参照）から開始して調製した。
Figure 0006862428
簡単に言えば、化合物２ｃを選択的にアセチル化して、必要なアクセプターＡを得て、次いでこれを、公知技術のようにしてトリクロロアセトイミデートドナーＢでグリコシル化して（Nudelman, I. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, 16, pp. 6310-6315）、対応する三糖Ｃを９１％の単離した収量で得た。それに続く、全てのエステルおよびアミド保護を除去するための強塩基での処理（ＮａＯＨ、６０℃）、およびアジ化物をアミンに変換するためのシュタウディンガー反応を包含する２つの脱保護工程により、標的ＮＢ１４７を２工程で８１％の収量で得た。最終産物は、全ての中間体も併せて、生成物の構造を割り当てるための１Ｄ−ＴＯＸＹと連携させた１Ｈ、１３Ｃおよび２Ｄ−ＮＭＲを包含するあらゆる標準的な分析技術によって特徴付けられる。
ＮＢ１４７の合成：
化合物２ｃ（７５０ｍｇ、１．０当量）を無水ピリジン（８ｍＬ）中に溶解し、−２０℃に冷却した。この温度で、無水酢酸（２．０ｍＬ、５．６当量）を一滴ずつ添加し、そのまま−２０℃で反応を進行させた。ＴＬＣにより反応の進行をモニターしたところ、１７時間後に完了が判明した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３の水溶液、ＨＣｌ（２％）、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液、およびブラインで抽出した。合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４上で脱水し、濃縮した。未精製の生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物Ａを得た（６００ｍｇ、５４％収量）。無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）を、粉末化し、火炎乾燥した４Å分子篩（２．０グラム）に添加し、続いてアクセプターＡ（５００ｍｇ、１．０当量）および公知のドナーＢ（２．５グラム、４．０当量）を添加した。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで−３０℃に冷却した。この温度で、触媒となる量のＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（０．１５ｍｌ）を添加し、混合物を−３０℃で撹拌し、ＴＬＣにより反応の進行をモニターしたところ、６０分後に完了が判明した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供して、表題の化合物Ｃ（７１５ｍｇ）を９１％収量で得た。上記工程で得た化合物Ｃ（７１５ｍｇ）を最少量のＴＨＦ中に溶解し、ＮａＯＨの０．５Ｍ溶液で処理し、６０℃で一晩還流した。その後、反応混合物を室温に冷却し、乾燥するまで蒸発させた。未精製の生成物を、ＤＯＷＥＸ−Ｈ＋イオン交換カラムによって精製して、表題の化合物Ｄ（４００ｍｇ）を９５％収量で得た。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝１．２５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ３）、３．１２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝３．４，Ｊ２＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．３４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．９６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’およびＨ−５’）、４．０４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）、６．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，Ｈ−１’）；「環ＩＩ」：δＨ＝１．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ａｘ）、２．２７（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．５，Ｊ２＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、２．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．２４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−４）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝３．４８〜３．５９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５”およびＨ−５”）、４．０１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４”）、４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３”） ４．１５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２”）、５．３６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１”）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝０．９８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、１．５５（ｍ，２Ｈ）、２．５０（ｍ，１Ｈ）、２．７０（ｍ，１Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ＝１１．９、１７．９、２３．８、３２．７、４９．７、５４．４、５８．０、６２．３、６４．９、６９．３、７２．５、７２．６、７４．４、７５．１、７６．３（２Ｃ）、７６．９、８２．４、８６．２、９７．３（Ｃ−１’）、１１０．７（Ｃ−１”）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ２１Ｈ３７Ｎ１０Ｏ１０（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ：５８９．２；実測値ｍ／ｅ：５８９．１。
ＴＨＦ（３ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５ｍＬ）の混合物中に上記工程で得た化合物Ｄ（３８０ｍｇ、１．０当量）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、５ｍＬ、７．８当量）を添加した。反応の進行をＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）、１０：１５：６：１５］によりモニターしたところ、３時間後に完了が判明した。反応混合物を、シリカゲルの短いカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（１００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を８０％ＭｅＯＨ中の５％ＭｅＮＨ２溶液（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）の混合物で溶出した。生成物を含有する分画を合わせて、真空中で蒸発させた。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４ ＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。最初に、カラムを水で洗浄し、次いで生成物を水中の１０％ＮＨ４ＯＨの混合物で溶出して、化合物ＮＢ１４７を得た（２３０ｍｇ、６７％収量）。貯蔵および生物学的試験のために、化合物ＮＢ１４７を、以下のようにしてその硫酸塩の形態に変換した。遊離塩基の形態を水中に溶解させ、ｐＨをＨ２ＳＯ４（０．１Ｎ）で６．７に調整し、凍結乾燥して、ＮＢ１４７の硫酸塩を得た。
１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝１．２２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＣＨ３）、２．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝３．４，Ｊ２＝９．０Ｈｚ，Ｈ−２’）、３．２３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４’）、３．５４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３’）、３．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝３．４，Ｊ２＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−５’）、４．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）、５．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ−１’）；「環ＩＩ」：δＨ＝１．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ａｘ）、２．１０（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．５，Ｊ２＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、２．４９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、２．７５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．３２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．３８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５）；「環ＩＩＩ」δＨ：２．８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．０，Ｊ２＝１３．５Ｈｚ，Ｈ−５”）、２．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．３，Ｊ２＝１３．５Ｈｚ，Ｈ−５”）、３．８６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４”）、３．９６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−３”）、４．０７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２”）、５．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，Ｈ−１”）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝０．９７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、１．５３（ｍ，２Ｈ）、２．４９（ｍ，１Ｈ）、２．７１（ｍ，１Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δｃ＝１１．９、１６．７、２３．７、３４．７（Ｃ−２）、４５．２、４９．７、５２．５、５７．９、５８．６、６７．９、７２．５、７３．６、７５．３、７６．３、７６．４、７６．７、８４．９、８５．６、８７．１、１０２．０（Ｃ−１’）、１１０．３（Ｃ−１”）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ２１Ｈ４３Ｎ４Ｏ１０（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ：５１１．２；実測値ｍ／ｅ：５１１．１。
ＮＢ１５０（そのＴＦＡ酸付加塩として示したもの）の合成：
Figure 0006862428
ＮＢ１５０を下記のスキーム４に従って化合物１から開始して調製した。簡単に言えば、保護したグアニジニル化試薬および塩基としてのＥｔ３Ｎによる遊離のＮ−１アミンのグアニジニル化により、所望の化合物３を得た。Ｂｏｃ脱保護をＴＦＡにより行って、グアニジニウム部分に遊離アミンを有する化合物４を生産した。最終的に、シュタウディンガー反応を使用して、アジ化物の保護を除去し、結果として最終産物ＮＢ１５０を得た（スキーム４、試薬および条件：（ａ）Ｅｔ３Ｎ、Ｈ２Ｏ／ジオキサン、８１％（ｂ）ＴＦＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃→２５℃（ｃ）（ｉ）ＰＭｅ３、ＴＨＦ、０．１ＭのＮａＯＨ、（ｉｉ）生成物をイオン交換カラムからＭｅＯＨ中の２％ＴＦＡの混合物を用いて溶出し、２工程で８３％の収量であった）。
Figure 0006862428
Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）中の化合物１（２．６９グラム、１当量）の溶液に、１，４−ジオキサン（５ｍＬ）とＮ，Ｎ’−ジＢｏｃ−Ｎ”−トリフリルグアニジン（４．０５グラム、１．５当量）とを、溶液が比較的透明なままになるように一部ずつ交互に添加した。５分後、ＮＥｔ３（３ｍＬ、３当量）を室温で添加した。２４時間後、１，４−ジオキサンを蒸発させ、残った残留物およびＨ２Ｏを、ＣＨＣｌ３（３×１０ｍＬ）で抽出し、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で脱水した。グアニジニル化した生成物から、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ）により化合物３（３．５１グラム、８１％）を単離した。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δＨ＝５．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−３）、４．０４〜４．００（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、３．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．７，５．７Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，Ｈ−４）、３．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５，４．２Ｈｚ，Ｈ−２）、１．３１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，ＣＨ３〜６）；「環ＩＩ」：δＨ＝４．１９〜４．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．６７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５４〜３．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．４１〜３．３２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−６）、２．４０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５，４．１Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１９．７，８．８Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝１１．４６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，ＮＨ）、１．４９（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．４８（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ＝１６２．７、１５７．２、１５３．２、９８．７（Ｃ１’）、８４．０（Ｂｏｃ）、８２．２、８０．３（Ｂｏｃ）、７７．２（Ｃ５）、７６．３、７４．１（Ｃ４’）、７３．６（Ｃ５’）、７２．３（Ｃ３’）、７０．３（Ｃ６’）、６３．６、５９．４（Ｃ３）、５０．１（Ｃ１）、３３．０（Ｃ２）、２８．４（Ｂｏｃ）、２８．２（Ｂｏｃ）、１９．３（ＣＨ３−６’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ２４Ｈ４１Ｎ９Ｏ１１（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ６３２．６；実測値ｍ／ｅ ６３２．６。
１０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中の化合物３（４９８ｍｇ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（６ｍＬ）を一滴ずつ添加し、添加後、反応混合物をそのまま室温にした。ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ８：２）により反応の進行をモニターしたところ、３時間で反応の完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、未精製の生成物４（６８６ｍｇ）を得た。未精製の生成物を、シュタウディンガー反応に供した。
ＴＨＦ（３．０ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５．０ｍＬ）の混合物中に化合物４（６８６ｍｇ、１当量）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、０．５５ｍＬ、８当量）を一滴ずつ添加し、混合物をさらに一晩撹拌した。反応の完了は、ＴＬＣ（ＴＦＡ／ＭｅＯＨ １：４９）により示された。上記の混合物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。カラムを、以下の溶媒：ヘキサン、ＴＨＦ、ＥｔＯＡｃ、ＭｅＯＨおよびＣＨ３ＣＮで洗浄した。次いで生成物をＴＦＡ／ＭｅＯＨ（１：４９）の混合物で溶出させて、ＮＢ１５０を得た。貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５０を水中に溶解させ、凍結乾燥して、ＮＢ１５０のＴＦＡ塩を得た（２工程で７０１ｍｇ、８３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，Ｈ−１）、４．２５（ｑｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２，１．８Ｈｚ，Ｈ−６）、３．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２，２．２Ｈｚ，Ｈ，５）、３．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．６，８．９Ｈｚ，Ｈ−４）、３．３９〜３．２７（ｍ，２Ｈ）、１．２２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＣＨ３−６）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．７２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−５）、３．６２〜３．５２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−６）、３．４８〜３．３５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４）、２．３０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．４，４．１Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．７１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２４．９，１２．３Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１５９．２、１００．１（Ｃ１’）、８５．６（Ｃ５）、７７．０（Ｃ５’）、７６．５、７６．３（Ｃ４）、７２．２、７１．８（Ｃ４’）、６６．０（Ｃ６’）、５６．４、５２．９、５１．０（Ｃ３）、３２．１（Ｃ２）、１５．７（ＣＨ３−６’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１４Ｈ２９Ｎ５Ｏ７（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ３８０．４；実測値ｍ／ｅ ３８０．８。
ＮＢ１５１およびＮＢ１５２を、２つの異なるアクセプター６および７と、後述のスキーム５に示したようにグアニジニウム基を含有するドナー５とのグリコシル化反応と、それに続く脱保護工程により調製した。
Figure 0006862428
スキーム５におけるアクセプター６および７の合成を、これまでに公開された手順に従って実行した（Nudelman, I. et al., Bioorg. Med. Chem., 2010, 18, pp. 3735-3746）。後述のスキーム６で例示されるように、公知のリボース誘導体Ａ（これまでに、Nudelman, I. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, 16, pp. 6310-6315で報告されている）からドナー５の合成を行った。
ワンポット反応で２つの化学的工程を使用することによって、すなわち、Ｈ２、Ｐｄ／Ｃによりアジ化物をアミンに還元し、得られたアミンをグアニジニウム試薬および塩基としてのＥｔ３Ｎと反応させて、所望の化合物Ｂを得ることによって、化合物Ａを化合物Ｂに変換した。次の２工程は、化合物Ｃを得るためのＳＴｏｌのＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）での脱保護、および最終的な活性ドナー５を得るためのトリクロロアセトイミデート基の置換であった（スキーム６、試薬および条件：（ａ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、ＤＩＰＥＡ、９５％（ｂ）ＮＢＳ、アセトン／Ｈ２Ｏ、−２５℃、８３％（ｃ）ＣＣｌ３ＣＮ、Ｋ２ＣＯ３、０℃→２５℃、５０％のドナー５）。
Figure 0006862428
ドナー５を、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）中の化合物Ａ（６．８７グラム、１当量）の溶液を撹拌することにより調製し、Ｎ，Ｎ’−ジＢｏｃ−Ｎ”−トリフリルグアニジン（５．４８グラム、１当量；Santana, A.G. et al., J. Org. Chem., 2010, 75(15), pp. 5371-5374に従う）、２０モル％のＰｄ／Ｃ（５％ｗ／ｗ）、およびジエチルイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）（２．７１グラム、１．５当量）を添加した。３回の真空／水素サイクルを実行し、混合物をＨ２雰囲気（バルーン）下で一晩さらに撹拌した。反応の完了は、ＴＬＣにより判明した（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：４）。次いで反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過し、これを酢酸エチルで２回洗浄し、合わせた濾液を蒸発させた。残留物のカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １５：８５）により、必要なグアニジニル化化合物Ｂを得た（９．４４グラム、９５％収量）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＨ＝１１．４８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．７３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＮＨ）、７．９１（ｄｄ，４Ｈ Ｊ＝１０．０，８．８Ｈｚ，ＳＴｏｌ）、７．５１（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｂｚ）、７．３５（ｄｄ，４Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｂｚ）、７．１７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｂｚ）、５．６５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２）、５．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．３８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−３）、４．４８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．３，５．３Ｈｚ，Ｈ−４）、３．９０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．６，５．５，４．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５５〜３．４４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’）、１．４９（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．４５（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ＝２１．３（ＳＴｏｌ）、４３．１（Ｃ−５）、７２．９（Ｃ−３）、７５．１（Ｃ−２）、７９．４，８０．２（Ｃ−４）、８３．３，８８．９（Ｃ−１）、１２７．７、１２８．５（２Ｃ）、１２９．２（２Ｃ）、１２９．９、１３０．１、１３３．５（２Ｃ）、１３４．７、１３９．１、１５３．１（Ｂｏｃ）、１５６．５（Ｂｏｃ）、１６３．５（Ｂｏｃ）、１６５．１（Ｂｚ）、１６５．３（Ｂｚ）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ３７Ｈ４３Ｎ３Ｏ９Ｓ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ７０６．８；実測値ｍ／ｅ ７０６．６。
アセトン／Ｈ２Ｏ（５０：５ｍＬ）の混合物中に化合物Ｂ（３グラム、１当量）を撹拌した溶液を、−２５℃に冷却した。１０分間撹拌した後、ＮＢＳ（３グラム、４当量）を一部ずつ添加した。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：４）によりモニターしたところ、反応が１．５時間で完了したことが判明した。この段階で反応物をＥｔＯＡｃで希釈した（５０ｍＬ）。希釈した溶液を、ＮａＨＣＯ３（２×３０ｍＬ）で抽出した。次いで有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で脱水した。乾燥するまで溶媒を蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：４）に供して、化合物Ｃを得た（１３．３グラム、８３％）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ３０Ｈ３７Ｎ３Ｏ１０（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ６００．６；実測値ｍ／ｅ ６００．９。
アルゴン雰囲気下で蒸留したＣＨ２Ｃｌ２（８５ｍＬ）中に化合物Ｃ（６．６６グラム、１当量）を撹拌した溶液を、０℃に冷却した。１０分間撹拌した後、ＣＣｌ３ＣＮ（１２．８２グラム、８当量）を一滴ずつ添加した。次いでＫ２ＣＯ３（４．６グラム、３当量）および乾燥させたＭｇＳＯ４（８．５グラム）を添加した。０℃で３０分間撹拌した後、混合物をそのまま室温に温め、一晩撹拌した。反応の完了は、ＴＬＣにより判明した（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：４）。次いで反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドで濾過し、これをＥｔＯＡｃで２回洗浄し、合わせた濾液を蒸発させた。残留物のカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １５：８５＋１ｍｌのＥｔ３Ｎ）により、必要なドナー５を得た（４グラム、４８％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＨ＝１１．４１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，ＮＨ）、７．９６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２，１．１Ｈｚ，Ｂｚ）、７．９０（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２，１．０Ｈｚ，Ｂｚ）、７．５６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｂｚ）、７．５１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｂｚ）、７．４０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｂｚ）、７．３３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｂｚ）、６．５４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、５．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈ−２）、５．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，４．９Ｈｚ，Ｈ−３）、４．７１（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２，４．７Ｈｚ，Ｈ−４）、４．０３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．０，６．３，４．９Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．９，７．３，４．９Ｈｚ，Ｈ−５’）、１．４３（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．４１（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ＝２８．１（Ｂｏｃ）、２８．３（Ｂｏｃ）、４３．５（Ｃ５）、７２．６（Ｃ３）、７４．９（Ｃ２）、８０．９（Ｃ４）、１０２．７（Ｃ１）、１２８．５、１２８．６、１２９．９、１３０．０、１３３．５、１３３．７、１５３．０、１５６．６、１６０．６、１６３．５、１６５．０、１６５．４。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ３２Ｈ３７Ｃｌ３Ｎ４Ｏ１０（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ７４５．０；実測値ｍ／ｅ ７４５．５。
ＮＢ１５１（そのＴＦＡ酸付加塩ととして示したもの）の合成：
Figure 0006862428
ＮＢ１５１を、後述のスキーム７に示すようにアクセプター６およびドナー５から開始して調製した（試薬および条件：（ａ）ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、５４％（ｂ）ＭｅＮＨ２、５２％（ｃ）ＴＦＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃→２５℃（ｄ）（ｉ）ＰＭｅ３、ＴＨＦ、０．１ＭのＮａＯＨ、（ｉｉ）生成物をイオン交換カラムからＭｅＯＨ中の２％ＴＦＡの混合物を用いて溶出し、２工程で８５％であった）。
Figure 0006862428
無水ＣＨ２Ｃｌ２（１９ｍＬ）を、粉末化し火炎乾燥した４Å分子篩（１．６グラム）に添加し、続いてアクセプター６（１４２ｍｇ、１当量）およびドナー５（５４６ｍｇ、３当量）を添加した。混合物を−５０℃まで冷却し、ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏを一滴ずつ添加した。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）によりモニターしたところ、反応が３０分間で完了したことが判明した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通過させて濾過した。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）をＥｔＯＡｃで徹底的に洗浄した後、洗浄液を合わせ、乾燥するまで蒸発させた。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）によって精製して、化合物Ａを得た（４９６ｍｇ、４０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δＨ＝５．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７，９．３Ｈｚ，Ｈ−３）、４．９８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７，２．０Ｈｚ，Ｈ−６）、４．９５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５，９．３Ｈｚ，Ｈ−４）、４．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．６，２．０Ｈｚ，Ｈ−５）、３．８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．９，３．９Ｈｚ，Ｈ−２）、１．２４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ３−６）；「環ＩＩ」：δＨ＝５．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，Ｈ−６）、３．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５８〜３．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３）、２．３８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３．２，４．７Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２６．５，１２．９Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３）、５．３０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３，５．２Ｈｚ，Ｈ−２）、４．５８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．４，２．７Ｈｚ，Ｈ−４）、４．０６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．５，６．０，３．９Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．８，８．４，３．８Ｈｚ，Ｈ−５）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝１１．５３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２，４．２Ｈｚ，ＮＨ）、７．９２〜７．８７（ｍ，４Ｈ，Ｂｚ）、７．５７〜７．４９（ｍ，２Ｈ，Ｂｚ）、７．３９〜７．３２（ｍ，４Ｈ，Ｂｚ）、２．０７（ｓ，３Ｈ，Ａｃ）、２．０５（ｓ，３Ｈ，Ａｃ）、２．０４（ｓ，３Ｈ，Ａｃ）、１．６９（ｓ，３Ｈ，Ａｃ）、１．５４（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．４６（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ＝１７０．２（Ａｃ）、１７０．２（Ａｃ）、１７０．１（Ａｃ）、１６９．９（Ａｃ）、１６５．６（Ｂｚ）、１６５．２（Ｂｚ）、１６３．５、１５６．４、１５３．４、１３３．８（Ｂｚ）、１３３．６（Ｂｚ）、１２９．９（Ｂｚ）、１２９．８（Ｂｚ）、１２８．６（Ｂｚ）、１２８．５（Ｂｚ）、１０８．１（Ｃ３”）、９６．５（Ｃ１’）、８０．１（Ｃ５）、７９．５（Ｃ４”）、７７．５（Ｃ４）、７４．７（Ｃ１”）、７３．７（Ｃ６）、７２．２（Ｃ２”）、７１．１（Ｃ３’）、７０．２（Ｃ５’）、６９．２（Ｃ４’）、６８．７（Ｃ６’）、６１．６（Ｃ２’）、５８．９、５８．６、４３．８（Ｃ５”）、３２．４（Ｃ２）、２８．３（Ｂｏｃ）、２８．３（Ｂｏｃ）、２１．３（Ａｃ）、２１．０（Ａｃ）、２０．９（Ａｃ）、２０．７（Ａｃ）、１３．７（ＣＨ３−６’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ５１Ｈ６４Ｎ１２Ｏ２０（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ １１６６．１；実測値ｍ／ｅ １１６６．１。
化合物Ａ（４９５ｍｇ）をＭｅＮＨ２の溶液（ＥｔＯＨ中の３３％溶液、２０ｍＬ）に室温で一晩溶解させた。反応の完了は、ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ １：４）により示された。その後、反応混合物を乾燥するまで蒸発させた。未精製の生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ １：４）に供して、化合物Ｂを得た（１７５ｍｇ、５２％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０３〜３．９９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．９８〜３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、３．３８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−４）、３．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．６，５．２Ｈｚ，Ｈ−２）、１．２４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，ＣＨ３−６）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．６９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４，１０．９，４．４Ｈｚ，Ｈ−１）、３．４８〜３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．３７（ｔ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，Ｈ−６）、２．２１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１．７，４．０Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２６．２，１３．１Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．３５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０６〜３．９９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．２，１．１Ｈｚ，Ｈ−４）、３．４３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．９，１．３Ｈｚ，Ｈ−５）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝１．５５（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．４９（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１６４．４、１５７．７、１５４．０、１１１．４（Ｃ１”）、９７．６（Ｃ１’）、８５．２（Ｃ５）、８１．６、７７．６、７７．０（Ｃ４）、７６．４（Ｃ２”）、７５．０、７４．４、７３．０、７２．４、６９．７、６４．６、６２．１、６１．５、４５．０（Ｃ５”）、３３．３（Ｃ２）、２８．６（Ｂｏｃ）、２８．４（Ｂｏｃ）、１８．３（ＣＨ３−６’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ２９Ｈ４８Ｎ１２Ｏ１４（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ８１１．７；実測値ｍ／ｅ ８１１．８。
−１０℃のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の化合物Ｂ（１７５ｍｇ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（３．２ｍＬ）を一滴ずつ添加し、添加後、反応混合物をそのまま室温にした。ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ８：２）により反応の進行をモニターしたところ、３時間で反応の完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、未精製の生成物Ｃ（１８５ｍｇ）を得た。未精製の生成物を、シュタウディンガー反応に供した。
ＴＨＦ（３ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５．０ｍＬ）の混合物中に化合物Ｃ（１８５ｍｇ、１当量）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、３ｍＬ、７．８当量）を一滴ずつ添加し、混合物をさらに一晩撹拌した。反応の完了は、ＴＬＣ（ＴＦＡ／ＭｅＯＨ １：４９）により示された。上記の混合物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。カラムを、以下の溶媒：ヘキサン、ＴＨＦ、ＥｔＯＡｃ、ＭｅＯＨおよびＣＨ３ＣＮで洗浄した。次いで生成物をＴＦＡ／ＭｅＯＨ（１：４９）の混合物で溶出し、ＮＢ１５１を得た。貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５１を水中に溶解し、凍結乾燥して、ＮＢ１５１のＴＦＡ塩を得た（２工程で５７４ｍｇ、８５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、４．３０〜４．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、３．９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６，１．９Ｈｚ，Ｈ−５）、３．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３）、３．４０〜３．２９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−４）、１．２０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ＣＨ３−６）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．９７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−４）、３．８２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−５）、３．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−６）、３．５１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１８．４，１４．２，８．３Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３１〜３．２１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、２．４８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．６，３．９Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２５．１，１２．３Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０６〜３．９７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４）、３．５６〜３．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１５９．１、１１０．９（Ｃ１”）、９８．５（Ｃ１’）、８５．１、８２．５、８２．０（Ｃ４）、７７．５（Ｃ５’）、７５．６（Ｃ２”）、７３．６（Ｃ６）、７１．８、７１．７、７１．３、６６．２（Ｃ６’）、５５．８、５０．９（Ｃ１）、５０．９（Ｃ３）、４４．５（Ｃ５”）、２９．６（Ｃ２）、１５．８５（ＣＨ３−Ｃ６’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１９Ｈ３８Ｎ６Ｏ１０（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ５１１．５；実測値ｍ／ｅ ５１１．９。
ＮＢ１５２（そのＴＦＡ酸付加塩として示したもの）の合成：
Figure 0006862428
ＮＢ１５２を、スキーム７に示すようにアクセプター７およびドナー５から開始して調製した（試薬および条件：（ａ）ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、４０％（ｂ）ＭｅＮＨ２、７８％（ｃ）ＴＦＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃→２５℃（ｄ）（ｉ）ＰＭｅ３、ＴＨＦ、０．１ＭのＮａＯＨ、（ｉｉ）イオン交換カラムからＭｅＯＨ中の２％ＴＦＡの混合物を用いて生成物を溶出させ、２工程で８８％であった）。
Figure 0006862428
粉末化し、火炎乾燥した４Å分子篩（５．８５グラム）に、無水ＣＨ２Ｃｌ２（７８ｍＬ）を添加し、続いてアクセプター７（７５５ｍｇ、１当量）およびドナー５（２．３グラム、３当量）を添加した。混合物を−５０℃まで冷却し、ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏを一滴ずつ添加した。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）によりモニターしたところ、反応が１０分間で完了したことが判明した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通過させて濾過した。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）をＥｔＯＡｃで徹底的に洗浄した後、洗浄液を合わせ、乾燥するまで蒸発させた。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）によって精製して、化合物Ａを得た（４９６ｍｇ、４０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δＨ＝５．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５．３９（ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．９８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．２，８．０Ｈｚ，Ｈ−４）、４．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７，３．９Ｈｚ，Ｈ−２）、１．２４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ３−６）；「環ＩＩ」：δＨ＝４．９１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，Ｈ−６）、４．０３〜３．９６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．９３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６４〜３．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、２．５４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．６，４．１Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２４．８，１２．３Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．６１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３）、５．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，５．４Ｈｚ，Ｈ−２）、４．５７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３，４．８Ｈｚ，Ｈ−４）、４．１１〜４．０１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．６１〜３．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝１１．５４（ｓ，１Ｈ）、８．７２（ｔ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．９９〜７．７８（ｍ，６Ｈ，Ｂｚ）、７．４２〜７．３０（ｍ，４Ｈ，Ｂｚ）、５．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７，５．０Ｈｚ）、３．５４〜３．４５（ｍ，２Ｈ）、２．１４〜２．０２（ｍ，１Ｈ）、１．５７〜１．５２（ｍ，１Ｈ）、２．２９（ｓ，３Ｈ，Ａｃ）、２．２１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ）、２．０７（ｓ，３Ｈ，Ａｃ）、２．０６（ｓ，３Ｈ，Ａｃ）、２．０５（ｓ，３Ｈ，Ａｃ）、１．５４（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．４５（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ＝１７７．１、１７０．２（Ａｃ）、１７０．１（Ａｃ）、１７０．０（Ａｃ）、１６９．９（Ａｃ）、１６５．５（Ｂｚ）、１６５．１（Ｂｚ）、１６４．１、１５７．３、１５３．６、１３３．７（Ｂｚ）、１２９．７（Ｂｚ）、１２８．８（Ｂｚ）、１０８．１（Ｃ３”）、９６．６（Ｃ１’）、８０．５（Ｃ５）、７８．９（Ｃ４”）、７７．７（Ｃ４）、７４．８（Ｃ１”）、７３．３（Ｃ６）、７２．２、７１．５、７０．９、７０．４（Ｃ５’）、６８．６（Ｃ４’）、６１．６（Ｃ２’）、５８．７（Ｃ３）、４９．０（Ｃ１）、４３．８（Ｃ５”）、３２．９（Ｃ２）、２８．３（Ｂｏｃ）、２８．１（Ｂｏｃ）、２１．０（Ａｃ）、２０．９（Ａｃ）、２０．５（Ａｃ）、１３．９（ＣＨ３−６’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ５７Ｈ７３Ｎ１３Ｏ２３（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ １３０９．３；実測値ｍ／ｅ １３０９．７。
化合物Ａ（５０ｍｇ）をＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液、２ｍＬ）の溶液に室温で一晩溶解した。反応の完了は、ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ １：４）により示された。反応の完了後、反応混合物を乾燥するまで蒸発させた。未精製の生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ １：４９）に供して、化合物Ｂを得た（２７ｍｇ、７８％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０８〜３．９１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−６）、３．９６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−３）、３．３６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４）、３．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８，５．２Ｈｚ，Ｈ−２）、１．２６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，ＣＨ３〜６）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．６３〜３．７２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．５４〜３．５８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．３４〜３．３８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．１５（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．９，４．０Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２５．０，１２．７Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．３７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，Ｈ−４）、３．３８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，Ｈ−５）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝４．１５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９，８．８Ｈｚ）、３．５３〜３．４４（ｍ，２Ｈ）、２．１３〜１．９９（ｍ，１Ｈ）、１．９２〜１．８２（ｍ，１Ｈ）、１．５４（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．４７（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１７７．４、１６４．５、１５７．７（Ｂｏｃ）、１５４．０（Ｂｏｃ）、１１１．４（Ｃ１”）、９７．６（Ｃ１’）、８６．１、８１．６、８０．５、７７．１、７６．５（Ｃ２”）、７５．７（Ｃ５”）、７５．１、７４．５、７３．２、７２．３、７０．２、６９．４、６４．６（Ｃ２’）、６１．９（Ｃ１）、５０．５、４７．５、４５．３、３４．７、３２．１（Ｃ２）、２８．４（Ｂｏｃ）、２６．３（Ｂｏｃ）、１８．１（ＣＨ３〜６’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ３３Ｈ５５Ｎ１３Ｏ１６（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ９１２．８；実測値ｍ／ｅ ９１２．７。
−１０℃のＣＨ２Ｃｌ２（３．３ｍＬ）中の化合物Ｂ（１０９ｍｇ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（１．３ｍＬ）を一滴ずつ添加し、添加後、反応混合物をそのまま室温にした。ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ８：２）により反応の進行をモニターしたところ、２時間で反応の完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、未精製の生成物Ｃ（１６９ｍｇ）を得た。未精製の生成物を、シュタウディンガー反応に供した。
ＴＨＦ（３ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５．０ｍＬ）の混合物中に化合物Ｃ（１６９ｍｇ、１当量）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、２．７４ｍＬ、７．８当量）を一滴ずつ添加し、混合物をさらに一晩撹拌した。反応の完了は、ＴＬＣ（ＴＦＡ／ＭｅＯＨ １：４９）により示された。上記の混合物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。カラムを、以下の溶媒：ヘキサン、ＴＨＦ、ＥｔＯＡｃ、ＭｅＯＨおよびＣＨ３ＣＮで洗浄した。次いで生成物をＴＦＡ／ＭｅＯＨ（１：４９）の混合物で溶出して、ＮＢ１５２を得た。貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５２を水中に溶解し、凍結乾燥して、ＮＢ１５２のＴＦＡ塩を得た（２工程で３５０ｍｇ、８８％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，Ｈ−１）、４．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，Ｈ−６）、３．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−５）、３．８１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４）、３．３６〜３．２８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−３）、１．１９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３２Ｈｚ，ＣＨ３−６）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．９３〜３．８３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−４）、３．７５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−５）、３．６０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−６）、３．４５〜３．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、２．２０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３．１，３．８Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２５．２，１２．４Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０４〜３．９６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４）、３．４９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，Ｈ−５）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝４．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５，８．９Ｈｚ）、３．１４〜３．０１（ｍ，２Ｈ）、２．１５〜２．０３（ｍ，１Ｈ）、２．０３〜１．９７（ｍ，１Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１７６．２、１５９．２、１１１．２（Ｃ１”）、９８．５（Ｃ１’）、８６．０（Ｃ５）、８２．４４、８２．１、７７．４、７５．８（Ｃ２”）、７４．７（Ｃ６）、７１．８、７１．８、７１．４（Ｃ４’）、７１．０（Ｃ６’）、６６．２、５５．９、５１．４（Ｃ３）、４９．８、４４．５（Ｃ５”）、３７．８、３２．７、３１．７（Ｃ２）、１５．９（ＣＨ３−６’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ２３Ｈ４５Ｎ７Ｏ１１（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ６１２．６；実測値ｍ／ｅ ６１２．９。
実施例２
実施例１の化合物の細胞に基づくアッセイにおけるリードスルー活性
実験方法：
本発明の実施形態に係る試験化合物によるナンセンス変異の抑制（リードスルー活性）を、例えば米国特許第８，８９５，５１９号およびVecsler, M. et al.［PLoS ONE, 2011, 6(6) p. e20733］に記載のように、インビトロにおいて、選ばれた遺伝子中に変異を内包するレポータープラスミドを使用して試験した。
簡単に言えば、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞をプラスミドでトランスフェクトし、トランスフェクションの２４時間後に細胞を溶解し、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルについて試験した。野生型（ＷＴ）プラスミドはホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼの両方を発現したが、変異プラスミドは、挿入した配列に見出される終止コドンのためにウミシイタケルシフェラーゼのみを発現した。試験化合物のリードスルー活性アッセイにおいて、トランスフェクションの６時間後に本化合物を細胞懸濁液に添加した。本化合物が未成熟ナンセンス／終止コドン変異の抑制を発揮した場合には、ホタルルシフェラーゼが発現され、数倍異なる発現が観察された。
結果：
試験化合物が、ヒト細胞において疾患を引き起こすナンセンス変異の機能的な抑制を誘導できるかどうかを決定するために、レット症候群を引き起こす天然に存在する未成熟終止コドン変異を含有するｃＤＮＡからの、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼの合成をアッセイした。全てのケースにおいて、変異は、フレーム内にアルギニン残基の代わりにオーカー（ＵＧＡ）終止コドンを導入しており、Ｒ１６８Ｘ、Ｒ２７０ＸおよびＲ２９４Ｘ変異はそれぞれ、ＵＧＡＧ、ＵＧＡＡおよびＵＧＡＵテトラヌクレオチド終結シグナルをもたらす。
レット症候群変異のリードスルー活性を表１に示した化合物を使用して試験し、変異抑制を、ホタル／ウミシイタケ比の値に基づいて計算し、試験化合物（対照）なしで得られた同比で値を正規化した。結果をＷＴで観察された発現レベルと比較する。一般的に、ウミシイタケレポーター遺伝子は試験した遺伝子の上流に存在し、ホタルレポーター遺伝子は下流に存在するため、リードスルー活性は、下流発現の上流発現に対する比（ホタル／ウミシイタケ発現の比）を計算して、この比の、ＷＴ配列を使用した同測定値に対する割合（パーセント）、すなわちＷＴで観察された発現レベル比の正規化した比として記録することにより定量化することができる。代替として、ホタル／ウミシイタケ発現比は、対照実験（リードスルー誘導性化合物なし）で観察されたホタル／ウミシイタケ発現比に対して正規化してもよい。ＷＴにおけるホタル／ウミシイタケ発現比は、実質的にリードスルー誘導性化合物の存在に非感受性であり、さらに対照実験も、何も存在しないために実質的にリードスルー誘導性化合物の存在に非感受性であることから、２つの正規化方法は、下記で示された結果からわかるように、類似の傾向を示すと考えられる。
同じ化合物および対照を使用するが、ただしＷＴ配列を使用して測定した、同じホタル／ウミシイタケ発現比は、リードスルー活性に関係のない、試験化合物の一般的な発現レベルに対する作用を意味し、それによって試験化合物が、典型的なアミノグリコシド抗生物質のようにタンパク質合成阻害活性を発揮するかどうかを示すと考えられる。ＷＴ測定はまた、実験誤差の指標でもある。
したがって、本発明の一部の実施形態に係る所与のリードスルー誘導性化合物が、ある程度のリードスルー活性を発揮する場合、測定は、対照（リードスルー誘導性化合物なし）で観察されたホタル／ウミシイタケ発現比と比較して大きいホタル／ウミシイタケ発現比、および高い比例値（数百パーセントもの規模で）を示すと考えられる。リードスルー活性がない場合、不活性な化合物と対照の両方に対するホタル／ウミシイタケ発現比は、絶対的に小さく、比例的に類似し、約１００％の値となることが予測される。
図２Ａ〜２Ｃは、未成熟終止コドン変異Ｒ１６８Ｘ（図２Ａ）、Ｒ２７０Ｘ（図２Ｂ）およびＲ２９４Ｘ（図２Ｃ）を引き起こすレット症候群のリードスルーレベルを示す比較棒グラフであり、これらは、表１に示した化合物を０．３ｍＭおよび１ｍＭの濃度で発現細胞と接触させた場合、および対照試料（化合物の添加なし）の場合に測定および計算した、ホタル／ウミシイタケ発現比とＷＴで観察された発現比との比較に基づくものである。
図３Ａ〜３Ｃは、未成熟終止コドン変異Ｒ１６８Ｘ（図３Ａ）、Ｒ２７０Ｘ（図３Ｂ）およびＲ２９４Ｘ（図３Ｃ）を引き起こすレット症候群のリードスルーレベルを示す比較棒グラフであり、これらは、表１に示した化合物を０．３ｍＭおよび１ｍＭの濃度で発現細胞と接触させた場合、および対照試料（化合物の添加なし）の場合に測定および計算した値を、対照試料について観察された値（１００％）に対するホタル／ウミシイタケ発現比として提供し、ＷＴで観察された発現比との比較に基づくものである。
図２Ａ〜２Ｃからわかるように、本発明の一部の実施形態に係る例示化合物は、３種全てのレット症候群変異モデルにおいて傑出した用量依存性のリードスルー活性を示した。化合物ＮＢ１５０およびＮＢ１５１は、０．３および１ｍＭの用量でアミノグリコシド抗生物質製剤Ｇ４１８（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）で示されたレベルに類似したリードスルー活性を示した。この結果は、Ｇ４１８の有意な細胞傷害性に関連する可能性があり、したがってこれは、全体的な限定されたリードスルーレベルに関連していた。
図３Ａ〜３Ｃからわかるように、対照（未処理細胞）と比較したリードスルー活性は、野生型細胞では影響を受けない（およそ１００％）。しかしながら、３種全てのレット症候群変異モデルにおいて、リードスルー活性に対して異なる処理の有意な用量依存性の影響がある（＞１００％）。化合物ＮＢ１５０、ＮＢ１５１およびＮＢ１５２は、０．３および１ｍＭの用量でアミノグリコシド抗生物質製剤Ｇ４１８（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）で示されたレベルに類似したリードスルー活性を示した。この結果は、Ｇ４１８の有意な細胞傷害性に関連する可能性があり、したがってこれは、全体的な限定されたリードスルーレベルに関連していた。
実施例３
実施例１の化合物の細胞非含有アッセイにおけるリードスルー活性
実験方法：
プラスミドをインビトロで転写させ、ウサギ網状赤血球（ＴＮＴミックス）を使用して翻訳し、次いでホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルについて試験した。ＷＴプラスミドは、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼの両方を発現したが、変異プラスミドは、挿入された配列に見出される終止コドンのためにウミシイタケルシフェラーゼのみを発現した。化合物をインビトロの転写／翻訳反応混合物に添加することによって、リードスルーアッセイを試験化合物および対照で実施した。化合物が未成熟ナンセンス／終止コドン変異の抑制を発揮した場合は、ホタルルシフェラーゼが発現され、その発現において数倍異なる発現が観察された。
結果：
嚢胞性線維症（ＣＦ）変異Ｇ５４２Ｘのリードスルー活性を表１に示した化合物を使用して試験し、変異抑制を、ホタル／ウミシイタケ発現比の値に基づいて計算し、ＷＴおよび対照試料（試験化合物なし）の発現レベルに対して正規化した。
図４Ａ〜４Ｆは、本発明の実施形態に係る３つの例示化合物であるＮＢ１４４、ＮＢ１４５およびＮＢ１４６について、０〜５０μＭの濃度範囲内で実施した、嚢胞性線維症のＧ５４２Ｘナンセンス変異抑制の、用量応答性細胞非含有アッセイの結果を示す図である。図４Ａは、ＷＴ配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図４Ｂは、Ｇ５４２Ｘ変異配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図４Ｃは、ＷＴ配列の上流に見出されるウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルを示し、図４Ｄは、Ｇ５４２Ｘ変異配列の上流に見出されるウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルを示し、図４Ｅは、ＷＴ配列で測定したホタル／ウミシイタケ発現比を示し、図４Ｆは、Ｇ５４２Ｘ変異配列で測定したホタル／ウミシイタケ発現比を示す。
図４Ａ〜４Ｆからわかるように、ＷＴ配列の上流または下流の発現レベルは、試験化合物の濃度に対して極めて非感受性であり、試験化合物が高濃度のとき、発現レベルの減少は相対的に小さく、これはおそらく残留したそれらのタンパク質合成阻害作用のためである（図４Ａ、４Ｃおよび４Ｅを参照）。それとは際立って対照的に、変異配列の下流の発現レベルは強い用量依存性の応答を示す。これは、変異配列の上流では見られず（図４Ｂおよび４Ｄを参照）、それゆえに上流の発現レベルに対する下流の発現レベルの比率（ホタル／ウミシイタケ発現比）も強い用量依存性の応答を示し、これは、試験化合物の変異抑制活性の指標である（図４Ｆ）。
図５Ａ〜５Ｂは、本発明の実施形態に係る３つの例示化合物であるＮＢ１４４、ＮＢ１４５およびＮＢ１４６について、０〜５０μＭの濃度範囲内で実施した、嚢胞性線維症のＧ５４２Ｘナンセンス変異抑制の、用量応答性細胞非含有アッセイの結果を示す図である。図５Ａは、対照実験（化合物の添加なし）で得られた発現レベルに対する割合としての、変異配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図５Ｂは、対照実験における発現レベルに対する割合としての、変異配列の下流および上流におけるホタル／ウミシイタケ発現比を示す。
図５Ａ〜５Ｂからわかるように、本発明の実施形態に係る３つの例示化合物の変異抑制活性は、明らかに３種全ての化合物について用量依存性であり、特にＮＢ１４６は、より高いタンパク質合成阻害作用（図４Ａ、４Ｃおよび４Ｅを参照）を示し、この作用はホタルルシフェラーゼ遺伝子について顕著だった。
図６Ａ〜６Ｆは、本発明の実施形態に係る３つの例示化合物であるＮＢ１５０、ＮＢ１５１およびＮＢ１５２について、０〜５０μＭの濃度範囲内で実施した、嚢胞性線維症のＧ５４２Ｘナンセンス変異抑制の、用量応答性細胞非含有アッセイの結果を示す図であり、図６Ａは、ＷＴ配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図６Ｂは、Ｇ５４２Ｘ変異配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図６Ｃは、ＷＴ配列の上流に見出されるウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルを示し、図６Ｄは、Ｇ５４２Ｘ変異配列の上流に見出されるウミシイタケルシフェラーゼの発現レベルを示し、図６Ｅは、ＷＴ配列で測定したホタル／ウミシイタケ発現比を示し、図６Ｆは、Ｇ５４２Ｘ変異配列で測定したホタル／ウミシイタケ発現比を示す。
図７Ａ〜７Ｂは、本発明の実施形態に係る３つの例示化合物であるＮＢ１５０、ＮＢ１５１およびＮＢ１５２について、０〜５０μＭの濃度範囲で実施した、嚢胞性線維症のＧ５４２Ｘナンセンス変異抑制用量応答性細胞非含有アッセイの結果を示す図であり、図７Ａは、対照実験（化合物の添加なし）で示された発現レベルに対する割合としての、変異配列の下流に見出されるホタルルシフェラーゼの発現レベルを示し、図７Ｂは、対照実験における発現レベルに対する割合としての、変異配列の下流および上流におけるホタル／ウミシイタケ発現比を示す。
図６Ａ〜６Ｆおよび図７Ａ〜７Ｂからわかるように、化合物ＮＢ１５０、ＮＢ１５１およびＮＢ１５２もまた、図４Ａ〜４Ｆおよび図５Ａ〜５Ｂにおいて例示化合物ＮＢ１４４、ＮＢ１４５およびＮＢ１４６に関して観察されたのと実質的に同じ変異抑制活性、すなわち傑出した用量依存性のリードスルー活性を示した。これは、ＮＢ１５２について、特にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子に関して見られたように、タンパク質合成阻害とある程度相関している。
図８Ａ〜８Ｃは、本発明の実施形態に係る６つの例示化合物であるＮＢ１４４、ＮＢ１４５、ＮＢ１４６、ＮＢ１５０、ＮＢ１５１およびＮＢ１５２について、５μＭの濃度で実施した、レット症候群のＲ１６８Ｘ（図８Ａ）、Ｒ２７０Ｘ（図８Ｂ）およびＲ２９４Ｘ（図８Ｃ）ナンセンス変異抑制の細胞非含有アッセイの結果を示す。ここで示した通り、対照（未処理の細胞抽出物）と比較した場合、野生型細胞抽出物は影響を受けないが（およそ１００％）、３種全てのレット症候群変異モデルにおいて、リードスルー活性に対して種々の処理が有意な影響（＞＞＞１００％）を与えた。
図８Ａ〜８Ｃからわかるように、試験化合物のリードスルー活性は、タンパク質合成阻害作用よりも顕著且つ実質的であることから、試験された例示化合物の、相対的に低い阻害性副作用と、ナンセンス変異を抑制することにおける有効性が実証された。Ｎ１置換誘導体のなかでも、ＮＢ１４６が、ＮＢ１４４およびＮＢ１４５と比較してより優れた活性を示し、グアニジン誘導体のなかでも、疑似三糖ＮＢ１５２が、ＮＢ１５０およびＮＢ１５１と比較してより高い活性を示した。これらのデータから、Ｎ１位に疎水性部分を包含することは、アミノグリコシドの生物学的作用に顕著な作用を有することが示唆される。
実施例４
本発明の一部の実施形態に係る例示的なジオール含有アミノグリコシドの化学合成
一般的な技術：
ＮＭＲスペクトル（１Ｈ、１３Ｃ、ＤＥＰＴ、２Ｄ−ＣＯＳＹ、１Ｄ ＴＯＣＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣなど）を、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ（商標）５００分光計で慣例的に記録した。報告された化学シフト（ｐｐｍで）は、溶媒としてＣＤＣｌ３を含む内部Ｍｅ４Ｓｉ（δ＝０．０）、および溶媒としてＭｅＯＤ（δ＝３．３５）に対するものである。１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ（商標）５００分光計において１２５．８ＭＨｚで記録し、化学シフトを、ＣＤＣｌ３の溶媒シグナル（δ＝７７．００）、またはＭｅＯＤの溶媒シグナル（δ＝４９．０）に対して報告した（ｐｐｍで）。
エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）下でのＢｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｘ Ａｐｅｘ ３質量分析計、またはＴＳＱ−７０Ｂ質量分析計（Ｆｉｎｎｉｇａｎ Ｍａｔ）のいずれかで質量スペクトル分析を達成した。
シリカゲル６０Ｆ２５４（０．２５ｍｍ、Ｍｅｒｃｋ）でのＴＬＣにより反応をモニターし、１０％Ｈ２ＳＯ４（８００ｍＬ）中に（ＮＨ４）Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏ（１２０グラム）および（ＮＨ４）２Ｃｅ（ＮＯ３）６（５グラム）を含有する黄色の溶液を注入することによりスポットを可視化した。
フラッシュカラムクロマトグラフィーをシリカゲル６０（７０〜２３０メッシュ）で実行した。
全ての反応を、別段の指定がない限り、アルゴン雰囲気下で無水溶媒を用いて行った。
Ｇ４１８（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）およびゲンタマイシンをＳｉｇｍａから購入した。全ての他の化学物質および生化学的物質を、別段の指定がない限り、商業的な供給源から得た。
以下の表３に示した化合物ＮＢ１５３、ＮＢ１５５、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７は、上述した通り、さらに後述の詳細の通りに実質的に調製した。
全ての構造を、質量分析と共に、１Ｄ ＴＯＣＳＹ、２Ｄ ＣＯＳＹ、２Ｄ １Ｈ−１３Ｃ ＨＭＱＣおよびＨＭＢＣなどの様々な１Ｄおよび２ＤのＮＭＲ技術の組合せにより確認した。
Figure 0006862428
Figure 0006862428
疑似二糖ＮＢ１５３およびＮＢ１５５の合成：
ＮＢ１５３およびＮＢ１５５疑似二糖は、６’，７’−ジオールのＣ６’位における２つのジアステレオマーであり、それぞれ６’−（Ｒ）配置および６’−（Ｓ）配置を示す。
化合物ＮＢ１５３およびＮＢ１５５の合成は、以下のスキーム８に示した。
Figure 0006862428
試薬および条件：（ｉ）（ａ）ＴＩＰＳＣｌ、ＤＭＦ、４−ＤＭＡＰ、０〜２５℃、８３％；（ｂ）ＰＭＢＣｌ、ＮａＨ、ＤＭＦ、０〜２５℃、８４％；（ｉｉ）（ａ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ、０〜２５℃、８８％；（ｂ）ＩＢＸ、ＥｔＯＡｃ、８０℃、８５％；（ｃ）ＣＨ３Ｐ（Ｐｈ）３Ｉ、ｎ−ＢｕＬｉ、ＴＨＦ、０〜２５℃、５６％；（ｉｉｉ）Ｋ２ＯｓＯ４・２Ｈ２Ｏ、ＮＭＯ、アセトン／Ｈ２Ｏ／ｔ−ＢｕＯＨ、９３％（３：１の比率）；（ｉｖ）（ａ）ＤＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２／Ｈ２Ｏ；（ｂ）Ａｃ２Ｏ、Ｐｙ、０〜２５℃、２工程で９１％；（ｃ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、６０％；（ｖ）ＰＭｅ３、ＴＨＦ、ＮａＯＨ（０．１Ｍ）、７３％［ＮＢ１５３］；７８％［ＮＢ１５５］。
簡単に言えば、ペルアジド誘導体１８をＴＩＰＳＣｌで選択的に保護し、残存するヒドロキシルをｐメトキシベンジル（ＰＭＢ）基で保護して、１９を得た。ＴＢＡＦによるシリル基の選択的な脱保護に続いて、２−ヨードキシ安息香酸（ＩＢＸ）による酸化およびウィッティヒ反応を行い、末端のアルケン２０を得た。アルケン２０をジヒドロキシ化して、６−ジアステレオマーの分離不可能な混合物としてジオール２１を提供した。２１のＤＤＱによる処理に続いて、アセチル化（Ａｃ２Ｏ）および脱アセチル化（ＮａＯＭｅ）工程を行い、６’−ジアステレオマーの混合物（約３：１の比率）を得て、これをカラムクロマトグラフィーによりうまく分離して、主要なジアステレオマー２２および副ジアステレオマー２３を得た。６’位における絶対配置を、以下で詳述するように１Ｈ−ＮＭＲの磁気異方性を使用することによって割り当て、それによりそれぞれ主および副ジアステレオマーの６−（Ｒ）−および６−（Ｓ）−配置を確立した。２つのジアステレオマー２２および２３を別々にシュタウディンガー反応に供して、それぞれ疑似二糖ＮＢ１５３およびＮＢ１５５を生産した。
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アジド−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ジヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）−２−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジオール（化合物１８）の合成：化合物１８をこれまでに公開された手順［Nyffeler et al. J. Am. Chem. Soc. 2002, 124, 10773-10778］に従って調製した。簡単に言えば、パロマミン（１．０グラム、３．０ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（３．１グラム、３６．９ｍｍｏｌ）および硫酸銅（ＩＩ）（６ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を水（５．０ｍＬ）中に溶解した。Ｔｆ２Ｏ（４．６ｍＬ、２７．６ｍｍｏｌ）およびＮａＮ３（３．６グラム、５５．７ｍｍｏｌ）から調製されたトリフリン酸アジドストック溶液を添加し、続いてメタノール（４０ｍＬ）を添加して、均一な溶液を得た。反応混合物（青色）を室温で激しく撹拌し、反応の完了を青色から緑色への変化によりモニターした。４８時間撹拌した後、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ９５：５）分析により反応の完了が判明した。乾燥するまで溶媒を蒸発させ、残留物を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ１００％）に供することによって、化合物１８を得た（６５０ｍｇ、５２％収量）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，Ｈ−１）、３．９９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９，４．１，２．６Ｈｚ，Ｈ−５）、３．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２，９．１Ｈｚ，Ｈ−３）、３．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．９，２．３Ｈｚ，Ｈ−６）、３．７８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．８，４．４Ｈｚ，Ｈ−６）、３．４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．７，９．３Ｈｚ，Ｈ−４）、３．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５，３．７Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ ３．８０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７７〜３．６７（ｍ，３Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３，Ｈ−４）、３．５６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−６）、２．５９〜２．４８（ｍ，１Ｈ）、１．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２６．３，１２．７Ｈｚ，Ｈ−２）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝Ｃ ９９．３（Ｃ１’）、８０．７、７７．８（Ｃ５）、７７．７（Ｃ６）、７３．９（Ｃ５’）、７２．４（Ｃ３’）、７１．６、６４．８（Ｃ２’）、６２．１（Ｃ６’）、６１．６、６０．９、３３．１（Ｃ２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１２Ｈ１９Ｎ９Ｏ７（［Ｍ＋Ｋ］＋）の計算値ｍ／ｅ ４４０．３；実測値ｍ／ｅ ４４０．２。
（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アジド−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ビス（（４−メトキシベンジル）オキシ）シクロヘキシル）オキシ）−３，４−ビス（（４−メトキシベンジル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メトキシ）トリイソプロピルシラン（化合物１９）の合成：化合物１８（１１．６グラム、２８．９ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（８０ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却した。トリイソプロピルシリルクロリド（ＴＩＰＳＣｌ、８ｍＬ、３７．３ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加し、続いて４−ＤＭＡＰ（１０．６グラム、８６．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を撹拌しながらそのまま室温にし、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ７：３）により反応の進行をモニターしたところ、５時間後に完了が判明した。反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、２つに相分離した。水相を酢酸エチルで徹底的に洗浄した（４×３０ｍＬ）。合わせた有機相を、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で脱水した。乾燥するまで溶媒を蒸発させ、残留物を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２５：７５）に供して、対応するシリルエーテル（１８ａ）を得た（１３．３グラム、８３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０９〜４．０２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、３．９８（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝８．０，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．８２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．５，Ｊ２＝８．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．６６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．４８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−５）、３．４７〜３．３７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−６）、３．３４〜３．２２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４）、２．２９（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．０Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ １．１６〜１．０９（ｍ，３Ｈ，ＴＩＰＳ）、１．０７（ｓ，１２Ｈ，ＴＩＰＳ）、１．０６（ｓ，６Ｈ，ＴＩＰＳ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ ９９．３（Ｃ１’）、８３．４（Ｃ４）、７６．１（Ｃ５）、７５．５（Ｃ６）、７５．１（Ｃ４’）、７２．６（Ｃ３’）、６９．６（Ｃ５’）、６６．０（Ｃ６’）、６３．５（Ｃ２’）、５９．８（Ｃ１）、５８．９（Ｃ３）、３２．１（Ｃ２）、１７．９（２Ｃ，ＴＩＰＳ）、１１．８（ＴＩＰＳ）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ２１Ｈ３９Ｎ９Ｏ７Ｓｉ（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ５８０．６；実測値ｍ／ｅ ５８０．３。
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中に上記のシリルエーテル（９．８２グラム、１７．６ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（３．３８グラム、１４０ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、０℃でｐ−メトキシベンジルクロリド（１４．３ｍＬ、１０５．３ｍｍｏｌ）を添加した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）により反応の進行をモニターした。８時間後、反応が完了し、氷を少量ずつ添加して、反応をクエンチした。混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層をジエチルエーテル（２×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４上で脱水し、乾燥するまで蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ８：９２）、それによって化合物１９を得た（１５．２８グラム、８４％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ−１）、３．９４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−５）、３．８８〜３．７８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６）、３．５９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝３．５Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５６〜３．４２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．４１〜３．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．３２〜３．２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．１７（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．３４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）； スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．２１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、７．１７（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、６．８５〜６．７２（ｍ，８Ｈ，ＰＭＢ）、４．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、４．８０〜４．６５（ｍ，６Ｈ，ＰＭＢ）、４．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、３．７４〜３．６８（ｍ，１２Ｈ，ＰＭＢ）、１．０４〜０．９４（ｍ，２１Ｈ，ＴＩＰＳ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １５９．５（ＰＭＢ）、１５９．４（ＰＭＢ）、１５９．３（ＰＭＢ）、１５９．２（ＰＭＢ）、１３０．７（ＰＭＢ）、１３０．３（ＰＭＢ）、１３０．２（ＰＭＢ）、１２９．９（ＰＭＢ）、１２９．８（ＰＭＢ）、１２９．７（ＰＭＢ）、１２９．３（ＰＭＢ）、１２８．７（ＰＭＢ）、１１３．９（２Ｃ，ＰＭＢ）、９７．５（Ｃ１’）、８４．５、８４．４、７９．８、７７．９（Ｃ４’）、７６．９、７５．６（ＰＭＢ）、７５．２（ＰＭＢ）、７４．９（ＰＭＢ）、７４．５（ＰＭＢ）、７２．９、６３．５（Ｃ２’）、６２．３（Ｃ６’）、６０．３（Ｃ１）、５９．５、５５．３（４Ｃ，ＰＭＢ）、３２．４（Ｃ２）、１８．１（２Ｃ，ＴＩＰＳ）、１２．１（ＴＩＰＳ）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ５３Ｈ７１Ｎ９Ｏ１１Ｓｉ（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ １０６１．２；実測値ｍ／ｅ １０６１．６。
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アジド−２−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ビス（（４−メトキシベンジル）オキシ）シクロヘキシル）オキシ）−４，５−ビス（（４−メトキシベンジル）オキシ）−６−ビニルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（化合物２０）の合成：０℃でＴＨＦ（２３０ｍＬ）中に化合物１９（１９．８２グラム、１９ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＴＢＡＦ（１１．０５ｍＬ、３８．１ｍｍｏｌ）を添加し、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）により反応の進行をモニターした。１９時間後、乾燥するまで溶媒を蒸発させ、得られた残留物を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）に供することによって、対応する６’−アルコールを得た（１４．７４グラム、８８％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、３．９８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝８．０，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，Ｈ−５）、３．９２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−３）、３．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝８．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５３〜３．４４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．３８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝１０．０，Ｊ３＝４．５Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３４〜３．２４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．２０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．３６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．２３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、７．２０〜７．１４（ｍ，６Ｈ，ＰＭＢ）、６．８３〜６．７５（ｍ，８Ｈ，ＰＭＢ）、４．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、４．８０〜４．６８（ｍ，６Ｈ，ＰＭＢ）、４．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、３．７３〜３．７（ｍ，１２Ｈ，ＰＭＢ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １５９．５（ＰＭＢ）、１５９．４（２Ｃ，ＰＭＢ）、１５９．２（ＰＭＢ）、１３０．２（ＰＭＢ）、１３０．１（２Ｃ，ＰＭＢ）、１２９．９（ＰＭＢ）、１２９．８（ＰＭＢ）、１２９．６（２Ｃ，ＰＭＢ）、１２８．８（ＰＭＢ）、１１４．０（２Ｃ，ＰＭＢ）、１１３．９（２Ｃ，ＰＭＢ）、９７．６（Ｃ１’）、８４．４，８４．３，７９．８（Ｃ３’）、７７．４，７５．６（ＰＭＢ）、７５．２（ＰＭＢ）、７５．１（ＰＭＢ）、７４．６（ＰＭＢ）、７２．０（Ｃ５’）、６３．３（Ｃ２’）、６１．４（Ｃ６’）、６０．３（Ｃ１）、５９．５，５５．３（３Ｃ，ＰＭＢ）、３２．４（Ｃ２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ４４Ｈ５１Ｎ９Ｏ１１（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ９０３．３；実測値ｍ／ｅ ９０３．９。
上記反応から得た６’−アルコール（１００ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を含む酢酸エチル（５ｍＬ）の溶液に、ＩＢＸ（９５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を一部ずつ添加した。得られた懸濁液を８０℃で加熱し、激しく撹拌した。反応の完了（３．５時間）がＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）により判明した後、反応物を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通過させて濾過した。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で徹底的に洗浄し、合わせた有機相を減圧下で蒸発させた。未精製の生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３５：６５）に供し、それによって６’−アルデヒドを得た（８５ｍｇ、８５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ９．５３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、４．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．９８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−３）、３．５２〜３．４５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５３〜３．４３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．３７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝１０．０，Ｊ３＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３３〜３．２４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．２０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．３５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．２３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、７．１９〜７．１０（ｍ，６Ｈ，ＰＭＢ）、６．８３〜６．７２（ｍ，８Ｈ，ＰＭＢ）、４．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、４．８０〜４．６４（ｍ，６Ｈ，ＰＭＢ）、４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、３．７３（ｓ，３Ｈ，ＰＭＢ）、３．７１（ｓ，６Ｈ，ＰＭＢ）、３．７０（ｓ，３Ｈ，ＰＭＢ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １９７．３（ＣＨＯ）、１５９．７（ＰＭＢ）、１５９．６（２Ｃ，ＰＭＢ）、１５９．２（ＰＭＢ）、１３０．２（ＰＭＢ）、１３０．０（ＰＭＢ）、１２９．９（２Ｃ，ＰＭＢ）、１２９．７（ＰＭＢ）、１２９．６（ＰＭＢ）、１２９．３（ＰＭＢ）、１２８．６（ＰＭＢ）、１１４．１（ＰＭＢ）、１１４．０（３Ｃ，ＰＭＢ）、９７．５（Ｃ１’）、８４．３，８４．２，７９．８（Ｃ３’）、７８．０，７７．６，７５．６（ＰＭＢ）、７５．５（ＰＭＢ）、７５．２（Ｃ４’）、７５．１（ＰＭＢ）、７４．８（ＰＭＢ）、６２．８（Ｃ２’）、６０．２（Ｃ１）、５９．１，５５．４（ＰＭＢ）、５５．３（ＰＭＢ）、３２．２１（Ｃ２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ４４Ｈ４９Ｎ９Ｏ１１（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ９０２．３；実測値ｍ／ｅ ９０２．３。
メチルトリフェニルホスホニウムヨージド（７０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を含む０℃の無水ＴＨＦである冷却した懸濁液に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ、１３６μＬ）を一滴ずつ添加し、得られた黄色の溶液を０℃でさらに３０分間撹拌した。その後、前の工程で得た６’−アルデヒド（６１ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）を含む無水ＴＨＦ（０．３ｍＬ）を０℃でさらに添加し、反応液を室温で追加の１．５時間にわたりそのまま撹拌した。反応の完了がＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）により示された後、反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチした。相分離し、水相を、エーテル（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で脱水し、乾燥するまで蒸発させた。未精製の生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２．５：７．５）によって精製して、化合物２０を得た（２７ｍｇ、５６％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．８３〜５．７４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、５．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，Ｈ−７ｔｒａｎｓ）、５．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−７ｃｉｓ）、４．４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．５，Ｊ２＝７．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．９０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−３）、３．２５〜３．１４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−４）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５４〜３．４４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．３８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝９．５，Ｊ３＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３４〜３．２５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．２１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．３８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．２５〜７．０９（ｍ，８Ｈ，ＰＭＢ）、６．８４〜６．７３（ｍ，８Ｈ，ＰＭＢ）、４．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，ＰＭＢ）、４．７７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．０，２．５Ｈｚ，ＰＭＢ）、４．７４〜４．６６（ｍ，３Ｈ，ＰＭＢ）、４．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，ＰＭＢ）、４．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，ＰＭＢ）、３．７３（ｓ，３Ｈ，ＰＭＢ）、３．７２（ｓ，６Ｈ，ＰＭＢ）、３．７１（ｓ，３Ｈ，ＰＭＢ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １５９．５（ＰＭＢ）、１５９．４（２Ｃ，ＰＭＢ）、１５９．２（ＰＭＢ）、１３４．９（Ｃ６’）、１３０．３（ＰＭＢ）、１３０．２（２Ｃ，ＰＭＢ）、１２９．９（２Ｃ，ＰＭＢ）、１２９．６（２Ｃ，ＰＭＢ）、１２８．７（ＰＭＢ）、１１８．８（Ｃ７’）、１１４．０（ＰＭＢ）、１１３．９（２Ｃ，ＰＭＢ）、９７．６（Ｃ１’）、８４．４、８４．３、８２．４（Ｃ４’）、７９．４（Ｃ３’）、７７．６、７５．６（ＰＭＢ）、７５．３（ＰＭＢ）、７５．０（ＰＭＢ）、７４．６（ＰＭＢ）、７２．７（Ｃ５’）、６３．４（Ｃ２’）、６０．３（Ｃ１）、５９．３、５５．４（ＰＭＢ）、５５．３（ＰＭＢ）、３２．３（Ｃ２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ４５Ｈ５１Ｎ９Ｏ１０（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ９００．９；実測値ｍ／ｅ ９００．５。
１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アジド−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ビス（（４−メトキシベンジル）オキシ）シクロヘキシル）オキシ）−３，４−ビス（（４−メトキシベンジル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エタン−１，２−ジオール（化合物２１）の合成：アセトン（５ｍＬ）中に化合物２０（３８３ｍｇ、０．４３６ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、水（１．５ｍＬ）およびｔ−ＢｕＯＨ（５ｍＬ）、Ｋ２ＯｓＯ４・２Ｈ２Ｏ（１６ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）およびＮＭＯ（１８１μＬ）を逐次的に添加した。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）によりモニターしたところ、２４時間後に完了が判明した。次いで乾燥するまで溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ中に溶解し、それにＮａ２Ｓ２Ｏ３の水溶液を添加した。相分離し、有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させた。未精製の生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）に供することによって、化合物２１を６’−ジアステレオマーの混合物として得た（３７０ｍｇ、９３％）。
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アジド−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ジヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジオール（化合物２２）および（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アジド−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ジヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）−２−（（Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジオール（化合物２３）の合成：上記で得た化合物２１（２２０ｍｇ、１．０当量）を、塩化メチレンおよび水（２０：１ｖ／ｖ、１５ｍＬ）中の２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）（３８３ｍｇ、６当量）と共に室温で撹拌した。ＤＤＱの添加後、暗緑色の電荷移動複合体が即座に形成され、反応が進行するにつれてゆっくりオレンジ色に変化した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ９８：２）によって、反応が１５時間後に完了したことが判明した。次いで溶媒を蒸発させ、残留物を事前の分析を行わずにシリカゲルカラム上にロードした。表題の化合物の高い極性のために、このカラムクロマトグラフィーにより、ＤＤＱ反応副産物の部分だけを除去することができた。それゆえに、分析的に純粋な生成物を得るために、生成物を含有する分画を合わせ、蒸発させ、次いで以下のように残留物を過アセチル化および脱アセチル化工程に供した。上記で得た粗生成物を無水ピリジン（５ｍＬ）中に溶解させ、０℃に冷却した。無水酢酸（０．７３ｍＬ、９当量）を一滴ずつ添加し、続いて４−ＤＭＡＰ（０．６２１グラム、６当量）を添加した。反応の完了（２時間）がＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）により示された後、反応物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、５％ＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ３、およびブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で脱水した。乾燥するまで溶媒を蒸発させ、残留物を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）に供することによって、対応する過酢酸塩を６’−ジアステレオマーの分離不可能な混合物として得た（１５０ｍｇ、２工程で９１％）。
上記で得た過酢酸塩（２１５ｍｇ、０．３１４ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に溶解し、撹拌溶液にＮａＯＭｅ（１５２ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）を室温で一部ずつ添加した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ９５：５）により反応の進行をモニターしたところ、４時間後に完了が判明した。反応混合物を短いシリカゲルカラムに通過し、生成物をＭｅＯＨで溶出した。本化合物を含む画分を合わせ、蒸発させ、未精製の生成物を追加のカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ９９：１）に供することにより、２つのジアステレオマー、すなわち主（Ｒｆ＝０．３６）および副（Ｒｆ＝０．２）ジアステレオマーに完全に分離した。後に主ジアステレオマーを、以下で詳述するように、６’−（Ｒ）−ジアステレオマー（化合物２２）に割り当て、副ジアステレオマーを６’−（Ｓ）−ジアステレオマー（化合物２３）に割り当てた。
主ジアステレオマー（２２）：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．５，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．９７〜３．９２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、３．９３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−３）、３．７９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．５，３．５Ｈｚ，Ｈ−７）、３．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．５，Ｊ２＝７．０Ｈｚ，Ｈ−７）、３．５８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５７〜３．４７（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．４４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１６．５，Ｊ２＝８．５，Ｊ３＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、３．２９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−６）、２．２６（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝Ｃ ９９．１（Ｃ１’）、８０．５、７７．９（Ｃ６）、７７．９、７４．８（Ｃ６’）、７３．７（Ｃ４’）、７２．９（Ｃ５’）、７２．３（Ｃ３’）、６４．５（Ｃ２’）、６４．３（Ｃ７’）、６１．７（Ｃ１）、６１．０、３３．３（Ｃ２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１３Ｈ２７Ｎ３Ｏ８（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ４３２．３；実測値ｍ／ｅ ４３２．８。
副ジアステレオマー（２３）：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：環Ｉ’：δ＝Ｈ ５．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ−１）、４．００（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝６．８，Ｊ２＝６．０，Ｊ３＝１．１Ｈｚ，Ｈ−６）、３．９７〜３．９１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−３）、３．７４〜３．６７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−７）、３．６４〜３．５９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝３．７Ｈｚ，Ｈ−１）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５７〜３．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−６）、３．４５〜３．３７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４）、３．２６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−５）、２．２４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．８，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝Ｃ ９９．１（Ｃ−１’）、８０．１（Ｃ−４）、７８．０（Ｃ−６）、７７．８（Ｃ−５）、７３．１（Ｃ−５’）、７２．３（Ｃ−３’）、７１．３（Ｃ−４’）、７０．８（Ｃ−６’）、６５．３（Ｃ−７’）、６４．４（Ｃ−２’）、６１．７（Ｃ−３）、６１．１（Ｃ−１）、３３．３（Ｃ−２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１３Ｈ２７Ｎ３Ｏ８（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ４３２．３；実測値ｍ／ｅ ４３２．８。
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アミノ−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアミノ−２，３−ジヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジオール［ＮＢ１５３（（Ｒ）−ジアステレオマー）］の合成：ＴＨＦ（３ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５ｍＬ）の混合物中に化合物２２（８２ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、０．１５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応の進行をＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）、１０：１５：６：１５］によりモニターしたところ、１時間後に完了が判明した。その後反応混合物をシリカゲルの短いカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（１００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を５％ＭｅＮＨ２溶液（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）を含む８０％ＭｅＯＨである混合物で溶出した。生成物を含有する画分を合わせて、真空中で蒸発させた。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。最初に、カラムを水で洗浄し、次いで生成物を１０％ＮＨ４ＯＨ水溶液である混合物で溶出することによって、ＮＢ１５３（４９．０ｍｇ、７３％）を得た。貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５３を、以下のようにしてその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基の形態を水中に溶解させ、ｐＨをＨ２ＳＯ４（０．１Ｎ）で６．７に調整し、凍結乾燥して、ＮＢ１５３の硫酸塩を白色の泡沫状の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ，−ＮＨ２型）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、３．９８〜３．９３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、３．９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．５，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−７）、３．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．５，Ｊ２＝６．０Ｈｚ，Ｈ−７）、３．５１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−３）、３．４４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、２．７４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．４３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５）、３．２０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．１０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−６）、２．７７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝９．０，Ｊ３＝５．０Ｈｚ，Ｈ−３）、２．６６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝９．５，Ｊ３＝５．０Ｈｚ，Ｈ−１）、２．０２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．２２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ １０２．９（Ｃ−１’）、９０．０（Ｃ−４）、７８．２（Ｃ−６）、７７．５、７５．６（Ｃ−３’）、７４．３（Ｃ−４’）、７３．６（Ｃ−６’）、７３．３、６３．３（Ｃ−７’）、５７．１（Ｃ−２’）、５２．４（Ｃ−３）、５１．３（Ｃ−１）、３６．７（Ｃ２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１３Ｈ２７Ｎ３Ｏ８（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ３５４．３；実測値ｍ／ｅ ３５４．８。
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アミノ−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアミノ−２，３−ジヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）−２−（（Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジオール［ＮＢ１５５（（Ｓ）−ジアステレオマー）］の合成：ＴＨＦ（３ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５ｍＬ）の混合物中に化合物２３（５２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、０．１５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応の進行をＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）、１０：１５：６：１５］によりモニターしたところ、１時間後に完了が判明した。反応混合物を、シリカゲルの短いカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（１００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を５％ＭｅＮＨ２溶液（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）を含む８０％ＭｅＯＨである混合物で溶出した。生成物を含有する画分を合わせて、真空中で蒸発させた。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。最初に、カラムを水で洗浄し、次いで生成物を１０％ＮＨ４ＯＨ水溶液である混合物で溶出することによって、ＮＢ１５５を得た（３６．０ｍｇ、７８％）。貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５５を、以下のようにしてその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基の形態を水中に溶解させ、ｐＨをＨ２ＳＯ４（０．１Ｎ）で６．７に調整し、凍結乾燥して、ＮＢ１５５の硫酸塩を白色の泡沫状の固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ，−ＮＨ２型）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、３．９７（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．１，Ｊ２＝１．０Ｈｚ，Ｈ−６’）、３．８９〜３．８２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−７’，Ｈ−７’）、３．５９〜３．５１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−３’）、２．７２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．４１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−５）、３．２０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−４）、３．０８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，Ｈ−６）、２．７４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、２．６４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．２，Ｊ２＝９．７，Ｊ３＝４．１Ｈｚ，Ｈ−１）、２．００（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．９，Ｊ２＝４．１Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．２１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．３Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝Ｃ １０２．９（Ｃ−１’）、８９．６（Ｃ−４）、７９．０（Ｃ−６）、７７．９（Ｃ−５）、７５．８（Ｃ−３’）、７２．３（Ｃ−４’）、７１．１（Ｃ−５’）、７０．２（Ｃ−６’）、６３．２（Ｃ−７’）、５７．１（Ｃ−２’）、５２．４（Ｃ−１）、５１．４（Ｃ−３）、３７．７（Ｃ−２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１３Ｈ２７Ｎ３Ｏ８（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ３５４．３；実測値ｍ／ｅ ３５４．８。
疑似三糖ＮＢ１５６およびＮＢ１５７の合成：
化合物ＮＢ１５６およびＮＢ１５７の合成を以下のスキーム９に示したが、これらの合成は、ＮＢ１５３およびＮＢ１５５の場合と実質的に同じ化学的変換を使用することにより、中間化合物２２から達成した。
Figure 0006862428
試薬および条件：（ｉ）Ａｃ２Ｏ、Ｐｙ．、−２０℃、５３％；（ｉｉ）ＢＦ３−ＯＥｔ２、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、２７の８５％、２８の９３％；（ｉｉｉ）（ａ）ＭｅＮＨ２、ｒ．ｔ．、８０％（Ｒ＝Ｈ）、９８％（Ｒ＝ＣＨ３）；（ｂ）ＰＭｅ３、ＴＨＦ、ＮａＯＨ（０．１Ｍ）、ＮＢ１５６の６０％、ＮＢ１５７の６４％。
簡単に言えば、低温でＡｃ２Ｏを用いた化合物２２の位置選択的なアセチル化により、対応するＣ５アクセプター化合物２４を得た。２４をグリコシル化するために、もっぱらβ−アノマーとして、対応する疑似三糖２７および２８のそれぞれの単離収量が８５％および９３％となるように供給するトリクロロアセミデートドナー２５および２６を供給した。メチルアミンによる処理に続いて、シュタウディンガー反応を行い、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７を得た。
ＮＢ１５６の合成：
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−３−アセトキシ−４，６−ジアジド−２−ヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）−５−アジド−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジイルジアセテート（２４）の合成：化合物２２（３７０ｍｇ、０．８５７ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（８ｍＬ）中に溶解し、−２０℃に冷却した。無水酢酸（０．４５ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加し、反応をそのまま−２０℃で進行させた。ＴＬＣにより反応の進行をモニターしたところ、１７時間後に完了が判明した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＨＣｌの水溶液（２％）、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液、およびブラインで抽出した。合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４上で脱水し、濃縮した。未精製の生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）によって精製して、化合物２４を得た（２９２ｍｇ、５３％収量）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝９．３Ｈｚ，Ｈ−３’）、５．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．１９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．６，Ｊ２＝４．０，Ｊ３＝２．０Ｈｚ，Ｈ−６’）、５．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．４，Ｊ２＝９．２Ｈｚ，Ｈ−４’）、４．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝１．８Ｈｚ，Ｈ−５’）、４．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝４．１Ｈｚ，Ｈ−７’）、４．１９〜４．０８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７’）、３．６３〜３．５６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ４．９１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．８，Ｊ２＝７．１Ｈｚ，Ｈ−６） ３．６６（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．６，Ｊ２＝３．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．４，Ｊ２＝１０．１，Ｊ３＝４．５Ｈｚ，Ｈ−１）、３．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１９．１，Ｊ２＝９．２Ｈｚ，Ｈ−４）、３．３８〜３．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、２．３８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．５８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．６Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ２．１７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＯ）、２．０８（ｄ，９Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，ＣＨ３ＣＯ）、２．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＯ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １７０．７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．６（Ｃ＝Ｏ）、１７０．２（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０（Ｃ＝Ｏ）、１６９．９（Ｃ＝Ｏ）、９８．５（Ｃ−１’）、８２．９（Ｃ−４）、７５．１（Ｃ−６）、７４．６（Ｃ−５）、７１．４（Ｃ−３’）、７０．０（Ｃ−６’）、６９．９（Ｃ−５’）、６８．９（Ｃ−４’）、６１．８（Ｃ−７’）、６１．５（Ｃ−２’）、５８．２（Ｃ−３）、５８．０（Ｃ−１）、３２．０（Ｃ−２）、２０．９６（ＣＨ３）、２０．９２（ＣＨ３）、２０．８９（ＣＨ３）、２０．８６（ＣＨ３）、２０．８（ＣＨ３）、２０．７（ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ２３Ｈ３１Ｎ９Ｏ１３（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ６６４．２０；実測値ｍ／ｅ ６６４．２０。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−２−アセトキシ−３，５−ジアジド−６−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−４，５−ジアセトキシ−３−アジド−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）シクロヘキシル）オキシ）−５−（アジドメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジベンゾエート（２７）の合成：無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）を、粉末化し、火炎乾燥した４Å分子篩（２．０グラム）に添加し、続いてアクセプター化合物２４（２９２ｍｇ、０．４５５ｍｍｏｌ）およびドナー化合物２５（１．０グラム、１．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで−３０℃に冷却した。触媒となる量のＢＦ３−Ｅｔ２Ｏ（５０μＬ）を添加し、混合物を−３０℃で撹拌し、ＴＬＣにより反応の進行をモニターしたところ、６０分後に完了が判明した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供して、化合物２７を得た（３９３ｍｇ、８５％収量）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４２〜５．３４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、５．２４〜５．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．１０〜５．０３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、４．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝２．２Ｈｚ，Ｈ−５）、４．３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝４．１Ｈｚ，Ｈ−７）、４．２０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．９，Ｊ２＝７．８Ｈｚ，Ｈ−７）、３．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．９，Ｊ２＝３．８Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ５．０１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５７〜３．４８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３）、２．３８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．９，Ｊ２＝４．３Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．５２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．７Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δ＝Ｈ ５．６１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、５．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，Ｈ−２）、５．４２〜５．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、４．５９〜４．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．６３〜３．５５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−５）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．９３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，Ａｒ）、７．８７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，Ａｒ）、７．５４（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ１＝１９．０，Ｊ２＝７．４Ｈｚ，Ａｒ）、７．３９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ａｒ）、７．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ａｒ）、２．２９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０８〜２．０４（ｍ，１２Ｈ，４ｘＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １７０．７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．１（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０８（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０６（Ｃ＝Ｏ）、１６９．９（Ｃ＝Ｏ）、１６５．５（Ａｒ）、１６５．２（Ａｒ）、１３３．８（Ａｒ）、１３３．７（Ａｒ）、１２９．８（Ａｒ）、１２９．７（Ａｒ）、１２８．８（Ａｒ）、１２８．６８（Ａｒ）、１２８．６３（Ａｒ）、１２８．５（Ａｒ）、１０７．７（Ｃ−１”）、９６．１（Ｃ−１’）、８０．９（Ｃ−４”）、７９．８（Ｃ−５）、７７．２（Ｃ−４）、７４．５（Ｃ−２”）、７３．９（Ｃ−６）、７２．０（Ｃ−３’）、７０．７（Ｃ−３”）、６９．９（Ｃ−６’）、６９．２（Ｃ−５’）、６８．８（Ｃ−４’）、６１．５（Ｃ−７’）、６１．４（Ｃ−２’）、５８．９（Ｃ−３）、５８．３（Ｃ−１）、５３．１（Ｃ−５”）、３２．１（Ｃ−２）、２１．０４（ＣＨ３）、２１．０３（ＣＨ３）、２０．８（ＣＨ３）、２０．７（ＣＨ３）、２０．６（ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ４２Ｈ４６Ｎ１２Ｏ１８（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ １０２９．３１；実測値ｍ／ｅ １０２９．２９。
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アミノ−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアミノ−２−（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（アミノメチル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジオール（ＮＢ１５６）の合成：グリコシル化生成物２７（３９３ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を、ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液、１５ｍＬ）の溶液で処理し、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ８５：１５）により反応の進行をモニターしたところ、１２時間後に完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ ２：８）に供することによって、対応する完全に脱エステル化したペルアジド誘導体を８０％収量で得た（１８３ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，Ｈ−１）、３．９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．７，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，Ｈ−５）、３．８４（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝７．１Ｈｚ，Ｈ−６，Ｈ−３）、３．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−７）、３．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．６，Ｊ２＝６．４Ｈｚ，Ｈ−７）、３．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝８．７Ｈｚ，Ｈ−４）、３．０６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．６，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．６２〜３．５４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．５０〜３．４３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．４０〜３．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．３３〜３．２６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、２．１２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．３，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−２ ｅｑ）、１．２９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．４Ｈｚ，Ｈ−２ ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δ＝Ｈ ５．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，Ｈ−１）、４．１１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．４，Ｊ２＝０．８Ｈｚ，Ｈ−２）、３．９８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．４，Ｊ２＝４．２Ｈｚ，Ｈ−３）、３．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．０，Ｊ２＝３．４Ｈｚ，Ｈ−４）、３．４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．３，Ｊ２＝２．８Ｈｚ，Ｈ−５）、３．４１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．１，Ｊ２＝６．３Ｈｚ，Ｈ−５）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝Ｃ １１１．２（Ｃ−１”）、９７．４（Ｃ−１’）、８５．２（Ｃ−４）、８２．３（Ｃ−５’）、７７．６（Ｃ−６）、７６．８（Ｃ−５）、７６．３（Ｃ−２”）、７４．６（Ｃ−６’）、７３．３（Ｃ−３”）、７３．２（Ｃ−４’）、７２．７（Ｃ−４”）、７２．５（Ｃ−３’）、６４．７（Ｃ−２’）、６４．１（Ｃ−７’）、６１．９（Ｃ−３）、６１．４（Ｃ−１）、５４．５（Ｃ−５”）、３３．１（Ｃ−２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１８Ｈ２８Ｎ１２Ｏ１１（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ６１１．２０；実測値ｍ／ｅ ６１１．１９。
ＴＨＦ（３ｍＬ）とＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５ｍＬ）との混合物中に上記反応で得たペルアジド誘導体（１８３ｍｇ、０．３１１ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、０．２２ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応の進行をＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）、１０：１５：６：１５］によりモニターしたところ、１時間後に完了が判明した。反応混合物を、シリカゲルの短いカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（１００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を５％ＭｅＮＨ２溶液（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）を含む８０％ＭｅＯＨである混合物で溶出した。生成物を含有する画分を合わせて、真空中で蒸発させた。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。最初に、カラムを水で洗浄し、次いで生成物を１０％ＮＨ４ＯＨ水溶液である混合物で溶出することによって、化合物ＮＢ１５６を遊離塩基の形態として得た（９０．０ｍｇ、６０％）。
貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５６を、以下のようにしてその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基の形態を水中に溶解させ、ｐＨをＨ２ＳＯ４（０．１Ｎ）で６．７に調整し、凍結乾燥して、ＮＢ１５６の硫酸塩を白色の泡沫状の固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ−１）、３．９１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝６．３，Ｊ２＝３．９Ｈｚ，Ｈ−６）、３．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．２，Ｊ２＝２．８Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．５，Ｊ２＝３．７Ｈｚ，Ｈ−７）、３．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．５，Ｊ２＝６．４Ｈｚ，Ｈ７）、３．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３）、３．４０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、２．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２，３．３Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．４４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−５）、３．３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．０，Ｊ２＝７．６Ｈｚ，Ｈ−４）、３．１３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−６）、２．７９〜２．７０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、２．６０（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．４，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−１）、１．９３（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．０，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．１６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．４Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δ＝Ｈ ５．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝５．１，Ｊ２＝２．８Ｈｚ，Ｈ−２）、３．９５〜３．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．８３（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝５．３，Ｊ２＝３．４Ｈｚ，Ｈ−４）、２．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−５）、２．７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝７．３Ｈｚ，Ｈ−５）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝Ｃ １１０．６（Ｃ−１”）、１０１．７（Ｃ−１’）、８６．８（Ｃ−４）、８５．５（Ｃ−５）、８４．７（Ｃ−４”）、７８．８（Ｃ−６）、７６．２（Ｃ−２”）、７５．３（Ｃ−３’）、７４．７（Ｃ−５’）、７３．８（Ｃ−６’）、７３．０（Ｃ−４’）、７２．５（Ｃ−３”）、６３．４（Ｃ−７’）、５７．５（Ｃ−２’）、５２．５（Ｃ−３）、５２．３（Ｃ−１）、４５．２（Ｃ−５”）、３７．５（Ｃ−２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１８Ｈ３６Ｎ４Ｏ１１（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ４８５．２４；実測値ｍ／ｅ ４８５．１９。
ＮＢ１５７の合成：
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−２−アセトキシ−３，５−ジアジド−６−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−４，５−ジアセトキシ−３−アジド−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）シクロヘキシル）オキシ）−５−（（Ｓ）−１−アジドエチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジベンゾエート（化合物２８）の合成：無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）を、粉末化し火炎乾燥した４Å分子篩（２．０グラム）に添加し、続いてアクセプター化合物２４（２６５ｍｇ、０．４１３ｍｍｏｌ）およびドナー化合物２６（０．８９５グラム、１．６５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで−３０℃に冷却した。この温度で、触媒となる量のＢＦ３−Ｅｔ２Ｏ（５０μＬ）を添加し、混合物を−３０℃で撹拌した。ＴＬＣにより反応の進行をモニターしたところ、６０分後に完了が判明した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供して、化合物２８を９３％収量で得た（３９３ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、３．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．７，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２）、５．３６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．６，Ｊ２＝９．３Ｈｚ，Ｈ−３）、５．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝９．３Ｈｚ，Ｈ−４）、４．５３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．６，Ｊ２＝２．２Ｈｚ，Ｈ−５）、５．１８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．５，Ｊ２＝４．１，Ｊ３＝２．２Ｈｚ，Ｈ−６）、４．３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝３．９Ｈｚ，Ｈ−７）、４．１９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．１，Ｊ２＝７．６Ｈｚ，Ｈ−７）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ５．０１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，Ｈ−６）、３．８４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５２（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝１０．０，Ｊ３＝４．６Ｈｚ，Ｈ−１，Ｈ−３）、２．３９（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝５．２，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．５２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．７Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δ＝Ｈ ５．６０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，Ｈ−１，Ｈ−２）、５．４１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．６，Ｊ２＝４．９Ｈｚ，Ｈ−３）、４．３３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−４）、３．７７〜３．６４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、１．２４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６−ＣＨ３）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．９２〜７．８９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．８９〜７．８５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．６０〜７．５０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．３９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ａｒ）、７．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ａｒ）、２．４１〜２．３５（ｍ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １７０．７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．３（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０７（Ｃ＝Ｏ）、１７０．０３（Ｃ＝Ｏ）、１６９．９（Ｃ＝Ｏ）、１６５．５（Ａｒ）、１６５．０（Ａｒ）、１３３．８（Ａｒ）、１３３．７（Ａｒ）、１２９．８（Ａｒ）、１２９．７（Ａｒ）、１２８．８（Ａｒ）、１２８．６（Ａｒ）、１２８．５８（Ａｒ）、１２８．５６（Ａｒ）、１０７．８（Ｃ−１”）、９６．１（Ｃ−１’）、８４．６（Ｃ−４”）、７９．７（Ｃ−５）、７７．６（Ｃ−４）、７４．７（Ｃ−２”）、７３．７（Ｃ−６）、７２．０（Ｃ−３”）、７１．０（Ｃ−３）、７０．０（Ｃ−６’）、６９．２（Ｃ−４’）、６８．９（Ｃ−５’）、６１．７（Ｃ−２’）、６１．５（Ｃ−７’）、５９．６（Ｃ−５”）、５８．９（Ｃ−１）、５８．５（Ｃ−３）、３２．２（Ｃ−２）、２１．１（ＣＨ３）、２１．０（ＣＨ３）、２０．８（ＣＨ３）、２０．７９（ＣＨ３）、２０．７８（ＣＨ３）、１５．８（Ｃ−６”，ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ４３Ｈ４８Ｎ１２Ｏ１８（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ １０４３．３２；実測値ｍ／ｅ １０４３．３０。
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アミノ−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアミノ−２−（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（Ｓ）−１−アミノエチル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）オキシ）−３−ヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジオール（ＮＢ１５７）の合成：グリコシル化生成物である化合物２８（０．３９３グラム、０．３８４ｍｍｏｌ）を、ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液、１５ｍＬ）の溶液で処理し、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ８５：１５）により反応の進行をモニターしたところ、１２時間後に完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ ２：８）に供し、対応する完全に脱エステル化したペルアジド誘導体を９８％収量で得た（２３０ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，Ｈ−１）、３．１１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝３．８Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．７，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．９６〜３．８８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、３．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝８．８Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．２，Ｊ２＝２．５Ｈｚ，Ｈ−７）、３．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．６，Ｊ２＝６．５Ｈｚ，Ｈ−７）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．６９〜３．６４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．６０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．３，Ｊ２＝９．７，Ｊ３＝４．４Ｈｚ，Ｈ−３）、３．４２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．９，Ｊ２＝９．７，Ｊ３＝４．４Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３８〜３．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、２．１８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．６，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．５２〜１．１７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δ＝Ｈ ５．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝０．５Ｈｚ，Ｈ−１）、４．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．８，Ｊ２＝０．６Ｈｚ，Ｈ−２）、４．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．２，Ｊ２＝４．７Ｈｚ，Ｈ−３）、３．７８〜３．７０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．６９〜３．５７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、１．３３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６−ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝Ｃ １１０．７９（Ｃ−１”）、９７．４１（Ｃ−１’）、８６．０３（Ｃ−４”）、８５．２４（Ｃ−５）、７７．４７（Ｃ−６）、７６．７６（Ｃ−４）、７６．４７（Ｃ−２”）、７４．６０（Ｃ−６’）、７３．４２（Ｃ−３）、７３．３１（Ｃ−４’）、７２．７７（Ｃ−３”）、７２．６０（Ｃ−３’）、６４．６６（Ｃ−２’）、６４．１３（Ｃ−７’）、６１．９６（Ｃ−１）、６１．５１（Ｃ−５’）、６０．８６（Ｃ−５”）、３３．１７（Ｃ−２）、１６．０６（Ｃ−６”，ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１９Ｈ３０Ｎ１２Ｏ１１（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ６２５．２２；実測値ｍ／ｅ ６２５．２０。
ＴＨＦ（３ｍＬ）とＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５ｍＬ）との混合物に上記反応から得たペルアジド誘導体（２３０ｍｇ、０．３８１ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、０．２２ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応の進行をＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）、１０：１５：６：１５］によりモニターしたところ、１時間後に完了が判明した。反応混合物を、シリカゲルの短いカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（１００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を５％ＭｅＮＨ２溶液（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）を含む８０％ＭｅＯＨである混合物で溶出した。生成物を含有する画分を合わせて、真空中で蒸発させた。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。最初に、カラムを水で洗浄し、次いで生成物を１０％ＮＨ４ＯＨ水溶液である混合物で溶出することによって、ＮＢ１５７をその遊離塩基の形態で得た（１２３ｍｇ、６４％）。
貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５７を、以下のようにしてその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基の形態を水中に溶解させ、ｐＨをＨ２ＳＯ４（０．１Ｎ）で６．７に調整し、凍結乾燥して、ＮＢ１５７の硫酸塩を白色の泡沫状の固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ−１）、４．００〜３．９４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、３．９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．９，Ｊ２＝３．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５６〜３．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．４７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１８．３，Ｊ２＝８．８Ｈｚ，Ｈ−４）、２．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．３，Ｊ２＝３．５Ｈｚ，Ｈ−２）、３．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．５，Ｊ２＝３．７Ｈｚ，Ｈ−７）、３．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．５，Ｊ２＝６．４Ｈｚ，Ｈ−７）、；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．４８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１５．９，Ｊ２＝６．７Ｈｚ，Ｈ−５）、３．３７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１６．５，Ｊ２＝７．２Ｈｚ，Ｈ−４）、３．１８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．１，Ｊ２＝５．６Ｈｚ，Ｈ−６）、２．７８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．９，Ｊ２＝８．２Ｈｚ，Ｈ−３）、２．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝２２．９，Ｊ２＝１０．３Ｈｚ，Ｈ−１）、１．９６（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝７．８，Ｊ２＝３．７Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．２３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δ＝Ｈ ５．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，Ｈ−３）、３．５６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−４）、３．０１〜２．８６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、１．１６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６−ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝Ｃ １０９．７８（Ｃ−１”）、１０１．６７（Ｃ−１’）、８８．６１（Ｃ−４”）、８６．８０（Ｃ−４）、８４．８６（Ｃ−５）、７８．７０（Ｃ−６）、７６．２８（Ｃ−２”）、７５．４６（Ｃ−３’）、７４．７２（Ｃ−５’）、７３．７９（Ｃ−６’）、７３．０７（Ｃ−４’）、７２．３０（Ｃ−３”）、６３．４３（Ｃ−７’）、５７．５５（Ｃ−２’）、５２．５３（Ｃ−３）、５２．３５（Ｃ−１）、５０．６８（Ｃ−５”）、４９．８５（Ｃ−４）、３７．６４（Ｃ−２）、１９．３７（Ｃ−６”，ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１９Ｈ３８Ｎ４Ｏ１１（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ４９８．２５；実測値ｍ／ｅ ４９９．２６。
ＮＢ１５３およびＮＢ１５５の６’位における絶対配置の決定：
ＮＢ１５３およびＮＢ１５５中の側鎖Ｃ６’−アルコールにおける絶対立体化学を決定するために、主Ｃ６’−ジアステレオマーであるアルコール３１をスキーム１０に示すように合成した。
Figure 0006862428
二級アルコール上の保護基の変化は、スキーム８の経路で経る様々な合成工程における中間生成物の収量および単離を改善すると仮定した。スキーム８におけるＰＭＢ保護を、スキーム１０に示したベンジル保護で置き換えた。したがって、ＴＩＰＳ保護された化合物１８ａのベンジル化に続いて、ＴＢＡＦでのシリルの脱保護を行い、６’−アルコール２９を全体的に優れた収量で得た。デス−マーチンペルヨージナン（ＤＭＰ）酸化により、対応するアルデヒドを得て、これを、ウィッティヒ試薬で処理して、末端のアルケン３０を得た。ジヒドロキシル化工程に続いて、一級アルコールの選択的なベンジル化を行い、所望の６’−アルコール３１を２つの６’−ジアステレオマーの混合物として得た。数々の異なる溶媒系でのカラムクロマトグラフィーを使用することによってこの混合物を分離する試みは、うまくいかないことが証明されており、イミダゾールの存在下におけるｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣｌ）での混合物３１のシリル化の進行は非常に遅く、主要な６’−ジアステレオマーの選択性が高いことが見出された。この利点を使用して、主要なジアステレオマー３２のシリル化された生成物をその純粋な形態で単離することができた。３２のＴＢＡＦでの処理により、望ましい生成物３１が生産され、これを配置の割り当てに使用した。
化合物３１の６’位における絶対立体化学を割り当てるために、主要なジアステレオマー３１を、ＤＣＣ、４−ＤＭＡＰおよびＣＳＡ６の存在下で、公知の絶対立体化学を有する（Ｒ）−２−メトキシ−２（１−ナフチル）プロパン酸［（Ｒ）−ＭαＮＰ］３３および［（Ｓ）−ＭαＮＰ］３４で別々にカップリングして、スキーム１１に示すように、それぞれのエステル（Ｒ，Ｘ）−ＭαＮＰ３５および（Ｓ，Ｘ）−ＭαＮＰ３６を得た。
Figure 0006862428
（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アジド−３，４−ビス（ベンジルオキシ）−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ビス（ベンジルオキシ）シクロヘキシル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）メタノール（２９）の合成：ＤＭＦ（５ｍＬ）中にシリルエーテル化合物１８ａ（０．２グラム、０．３５８ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（０．１１４グラム、４．７５ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、０℃で臭化ベンジル（０．２５５ｍＬ、２．１４ｍｍｏｌ）を添加した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）により反応の進行をモニターした。８時間後、反応が完了し、氷を少量ずつ添加して、反応をクエンチした。混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層をジエチルエーテル（２×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４上で脱水し、乾燥するまで蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ８：９２）で精製して、過ベンジル化されたシリルエーテルを得た（０．２４３グラム、７４％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，Ｈ−１）、３．９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１７．７，Ｊ２＝８．２Ｈｚ，Ｈ−３，Ｈ−５）、３．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６，Ｈ−６）、３．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．０，Ｈ−６）、３．７２〜３．５３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．１９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．６，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．４０（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．９，Ｊ２＝５．３Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３０（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ１＝１７．６，Ｊ２＝１５．１，Ｊ３＝９．２Ｈｚ，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝８．２，Ｊ２＝４．２Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．３４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．９Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．２８（ｍ，２０Ｈ，Ｂｎ）、４．９４（ｍ，２Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．８０（ｍ，６Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、１．１４〜０．９５（ｍ，２１Ｈ，ＴＩＰＳ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ １３８．５４（Ｂｎ）、１３８．１７（Ｂｎ）、１３８．０３（Ｂｎ）、１３７．４９（Ｂｎ）、１２８．６１（Ｂｎ）、１２８．５８（Ｂｎ）、１２８．５５（Ｂｎ）、１２８．３１（Ｂｎ）、１２８．２８（Ｂｎ）、１２８．１４（Ｂｎ）、１２７．９９（Ｂｎ）、１２７．７８（Ｂｎ）、１２７．７２（Ｂｎ）、１２７．１０（Ｂｎ）、９７．７（Ｃ１’）、８４．８、８４．６２、８０．２、７７．３ ７６．０、７５．７、７５．２、７４．９、７２．９、６３．５（Ｃ２’）、６２．３（Ｃ６）、６０．４（Ｃ１）、５９．５、３２．５（Ｃ２）、１８．２（ＴＩＰＳ）、１８．１（ＴＩＰＳ）、１２．１（ＴＩＰＳ）。
０℃でＴＨＦ（１００ｍＬ）中に上記工程から得た過ベンジル化されたシリルエーテル化合物（９．２４グラム、１０．０ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＴＢＡＦ（９．０ｍＬ、３１．０ｍｍｏｌ）を添加し、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）により反応の進行をモニターした。１５時間後、乾燥するまで溶媒を蒸発させ、得られた残留物を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）に供して、対応する過ベンジル化された６’−アルコール２９を得た（７．０グラム、９１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，Ｈ−１）、４．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−５）、４．０５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−３）、３．８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．０，Ｊ２＝２．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．１，Ｊ２＝２．９Ｈｚ，Ｈ−６）、３．６９〜３．５７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．６，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．６０〜３．５７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．５５〜３．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．４６〜３．３７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．３１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１０．６Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．５２〜７．２８（ｍ，２０Ｈ，Ｂｎ）、５．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．９３（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ１＝１０．７，Ｊ２＝６．０Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．９０〜４．８６（ｍ，３Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １３８．０（Ｂｎ）、１３８．０（Ｂｎ）、１３７．８（Ｂｎ）、１３７．３（Ｂｎ）、１２８．６（Ｂｎ）、１２８．６（Ｂｎ）、１２８．５（Ｂｎ）、１２８．２（Ｂｎ）、１２８．１（Ｂｎ）、１２８．１（Ｂｎ）、１２８．０（Ｂｎ）、１２８．０（Ｂｎ）、１２７．７（Ｂｎ）、１２７．１（Ｂｎ）、９７．７（Ｃ１’）、８４．７、８４．５、８０．１（Ｃ３’）、７７．６、７７．５、７６．０、７５．６、７５．３、７５．０、７２．０（Ｃ５’）、６３．４（Ｃ２’）、６１．４（Ｃ６’）、６０．３、５９．４、３２．４（Ｃ２）。
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アジド−４，５−ビス（ベンジルオキシ）−２−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ビス（ベンジルオキシ）シクロヘキシル）オキシ）−６−ビニルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（３０）の合成：６’−アルコール２９（１．０グラム、１．３１ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（４０ｍＬ）溶液に、ＩＢＸ（１．１グラム、３．９２ｍｍｏｌ）を一部ずつ添加した。得られた懸濁液を８０℃で加熱し、激しく撹拌した。反応の完了（３．５時間）がＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）により示された後、反応物を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通過させて濾過した。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で徹底的に洗浄し、合わせた有機相を減圧下で蒸発させた。未精製の生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３５：６５）に供して、６’−アルデヒドを得た（０．９２５グラム、９２％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ９．６２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６（ＣＨＯ））、５．６２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，Ｈ−４）、４．０１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，Ｈ−３）、３．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１８．０，Ｊ２＝９．１Ｈｚ，Ｈ−５）、３．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．０，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ１＝１８．０，Ｊ２＝９．１Ｈｚ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．２Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１４．０Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．２７（ｍ，２０Ｈ，Ｂｎ）、５．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．９２〜４．７５（ｍ，６Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １９７．２（ＣＨＯ）、１３８．０（Ｂｎ）、１３７．５（Ｂｎ）、１３７．３（Ｂｎ）、１３７．１（Ｂｎ）、１２８．７（Ｂｎ）、１２８．６（Ｂｎ）、１２８．６（Ｂｎ）、１２８．６（Ｂｎ）、１２８．３（Ｂｎ）、１２８．３（Ｂｎ）、１２８．２（Ｂｎ）、１２８．１（Ｂｎ）、９７．６（Ｃ１’）、８４．６、８４．３、８０．１（Ｃ３’）、７８．４、７７．７、７６．１、７５．８、７５．３、７５．２、６２．８（Ｃ２’）、６０．３、５９．１（Ｃ１）、３２．２（Ｃ２）。
０℃の無水ＴＨＦ中のメチルトリフェニルホスホニウムヨージド（０．９６６グラム、２．７ｍｍｏｌ）の冷却した懸濁液に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ、０．３２ｍＬ）を一滴ずつ添加し、得られた黄色の溶液を０℃でさらに３０分間撹拌した。無水ＴＨＦ（０．３ｍＬ）に、上記の工程で得た６’−アルデヒド（０．８２２グラム、１．０８ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応液を室温でさらに１．５時間そのまま撹拌した。反応の完了がＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）により示された後、反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチした。相分離し、水相をエーテル（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で脱水し、乾燥するまで蒸発させた。未精製の生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２．５：７．５）によって精製して、化合物３０を得た（０．４グラム、５０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．８９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１７．２，Ｊ２＝１０．４，Ｊ３＝６．８Ｈｚ，Ｈ−６）、５．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，Ｈ−７ｔｒａｎｓ）、５．３３〜５．２７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７ｃｉｓ）、４．６４〜４．５６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、４．０９（ｍ，Ｈ−３）、３．３２〜３．２７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−４）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．６９〜３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．５４〜３．４５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．４５〜３．３５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．３１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．６Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．３２〜７．２９（ｍ，２０Ｈ，Ｂｎ）、５．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．９，Ｊ２＝５．４Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．８３（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．７，８．５Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．６４〜４．５６（ｍ，１Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １３８．２（Ｂｎ）、１３８．０（Ｂｎ）、１３８．０（Ｂｎ）、１３７．４（Ｂｎ）、１３４．９（Ｂｎ）、１２８．６（Ｂｎ）、１２８．５（Ｂｎ）、１２８．５（Ｂｎ）、１２８．５（Ｂｎ）、１２８．３（Ｂｎ）、１２８．２（Ｂｎ）、１２８．１（Ｂｎ）、１２７．９（Ｂｎ）、１２７．９（Ｂｎ）、１２７．７（Ｂｎ）、１２７．０（Ｂｎ）、１１８．９（Ｃ７’）、９７．７（Ｃ１’）、８４．７、８４．５、８２．７（Ｃ４’）、７９．７（Ｃ３’）、７７．７、７６．０５、７５．６、７５．３、７５．０、７２．７（Ｃ５’）、６３．４（Ｃ２’）、６０．３（Ｃ１）、５９．３、３２．４（Ｃ２）。
１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アジド−３，４−ビス（ベンジルオキシ）−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ビス（ベンジルオキシ）シクロヘキシル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２−（ベンジルオキシ）エタノール（３１）の合成：アセトン（１０ｍＬ）、水（３ｍＬ）およびｔ−ＢｕＯＨ（１０ｍＬ）中に化合物３０（４０２ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、Ｋ２ＯｓＯ４・２Ｈ２Ｏ（１６ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）およびＮＭＯ（０．２２ｍＬ）を逐次的に添加した。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）によりモニターしたところ、２４時間後に完了が判明した。その後、乾燥するまで溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ中に溶解し、それにＮａ２Ｓ２Ｏ３の水溶液を添加した。相分離し、有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させた。未精製の生成物を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）に供して、ジヒドロキシ化した生成物を６’−ジアステレオマーの混合物として得た（３００ｍｇ、７２％）。
トルエン／ＭｅＯＨ（１０：１、７ｍＬ）中の上記工程で得たジヒドロキシ化した化合物（０．３グラム、０．３７８ｍｍｏｌ）およびＢｕ２ＳｎＯ（０．１０３グラム、０．４１３ｍｍｏｌ）の混合物を３時間還流し、減圧下で濃縮した。トルエン（３ｍＬ）中のこの残留物の溶液に、臭化テトラブチルアンモニウム（０．１２２グラム、０．３７８ｍｍｏｌ）およびＢｎＢｒ（０．０９ｍＬ、０．７５６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を８５℃で一晩撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（２ｍＬ）の添加によりクエンチした。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを介して濾過した後、有機相をＨ２Ｏ（３ｍＬ）、ブライン（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で脱水し、減圧下で濃縮した。未精製の生成物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）で精製して、化合物３１を６’−ジアステレオマーの混合物として得た（０．２８０グラム、８４％）。
（１−（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アジド−３，４−ビス（ベンジルオキシ）−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ビス（ベンジルオキシ）シクロヘキシル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２−ベンジルオキシ）エトキシ）（ｔｅｒｔ−ブチル）ジメチルシラン（３２）の合成：化合物３１（２０５ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解させ、０℃に冷却した。ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＳＣｌ、４５ｍｇ、０．２９８ｍｍｏｌ）を添加し、続いてイミダゾール（３９ｍｇ、０．５７２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を撹拌しながらそのまま室温にし、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）により反応の進行をモニターした。ＴＬＣによれば、延長した反応時間（２４時間）の後でさえも反応は完了せず、この段階で、酢酸エチル（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１０ｍＬ）の混合物を添加することによって反応を止め、２つに相分離した。水相を酢酸エチル（４×３０ｍＬ）で徹底的に洗浄した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で脱水した。乾燥するまで溶媒を蒸発させ、残留物を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２５：７５）に供して、対応するシリルエーテル（３２）を純粋な主ジアステレオマーとして得た（８５ｍｇ、２３％）。
１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−５−アジド−３，４−ビス（ベンジルオキシ）−６−（（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−４，６−ジアジド−２，３−ビス（ベンジルオキシ）シクロヘキシル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２−（ベンジルオキシ）エタノール（純粋な主ジアステレオマーとしての３１）の合成：室温でＴＨＦ（３ｍＬ）中に化合物３２（６０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＴＢＡＦ（０．０５２ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を５０℃で一晩還流した。反応の完了がＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）により示された後、乾燥するまで溶媒を蒸発させ、得られた残留物を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）に供して、単一のジアステレオマー３１を得た（５２ｍｇ、９５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，Ｈ−１）、４．１７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝２．４Ｈｚ，Ｈ−５）、４．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、３．９６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．３，Ｊ２＝８．９Ｈｚ，Ｈ−３）、３．６９〜３．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．５０〜３．４５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−７）、３．２２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．３，Ｊ２＝３．９Ｈｚ，Ｈ−２）、３．５９（ＢｒＳ，１Ｈ，６’−ＯＨ）；「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５８〜３．４９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．４４〜３．１１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３，Ｈ−６）、２．２３（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．３８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．６Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ７．２９〜７．２３（ｍ，２５Ｈ，Ｂｎ）、４．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．９２〜４．７４（ｍ，６Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．４２（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １３８．０（Ｂｎ）、１３８．０（Ｂｎ）、１３７．９（Ｂｎ）、１３７．７（Ｂｎ）、１３７．３（Ｂｎ）、１２８．６（Ｂｎ）、１２８．６（Ｂｎ）、１２８．５（Ｂｎ）、１２８．５（Ｂｎ）、１２８．５（Ｂｎ）、１２８．３（Ｂｎ）、１２８．１（Ｂｎ）、１２８．１（Ｂｎ）、１２８．０（Ｂｎ）、１２７．９（Ｂｎ）、１２７．８（Ｂｎ）、１２７．７（Ｂｎ）、１２７．６（Ｂｎ）、１２７．０（Ｂｎ）、９７．４（Ｃ１’）、８４．６、８４．４、８０．８、７８．４（Ｃ４’）、７７．５、７６．０（Ｂｎ）、７５．６（Ｂｎ）、７５．３（Ｂｎ）、７４．６（Ｂｎ）、７３．４（Ｂｎ）、７１．８、７１．６、７１．２（Ｃ７’）、６３．３（Ｃ２’）、６０．２（Ｃ１）、５９．５（Ｃ３）、３２．４（Ｃ２）。
（Ｒ，Ｘ）−エステルの合成：（Ｒ）−２−メトキシ−２（１−ナフチル）プロパン酸［（Ｒ）−ＭαＮＰ］（０．０１グラム、０．０４ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．００６グラム、０．０４９ｍｍｏｌ）、１０−カンファースルホン酸（ＣＳＡ、０．００２グラム、０．００８ｍｍｏｌ）、および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、０．０４７グラム、０．２２ｍｍｏｌ）の混合物を、０℃でＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中で撹拌した。上記で得た主要なアルコール３１（０．０３８グラム、０．０４３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）中に溶解し、上記の撹拌した混合物にゆっくり添加し、室温で７２時間そのまま反応させた。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１％ＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供して、所望のエステル（Ｒ，Ｘ）−３５（０．００８グラム、１７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．５５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９，３．７Ｈｚ，Ｈ−６）、４．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，Ｈ−１）、３．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５０〜３．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）、３．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，Ｈ−３）、３．３６〜３．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）、１．５５〜１．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、１．２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．４，Ｊ２＝３．９Ｈｚ，Ｈ−２）、「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．７Ｈｚ，Ｈ−６）、３．４３（ｄｔ，３Ｈ，Ｊ１＝１２．１，Ｊ２＝７．８Ｈｚ，Ｈ−４，Ｈ−５，Ｈ−３）、３．２５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．６，Ｊ２＝１０．０，Ｊ３＝４．６Ｈｚ，Ｈ−１）、２．２３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．９，Ｊ２＝６．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４６〜１．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝８．３９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ａｒ）、７．８０〜７．７５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ａｒ）、７．５４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ａｒ）、７．４７〜７．４０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．３８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，Ａｒ）、７．３７〜７．３３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．３２〜７．２７（ｍ，９Ｈ，Ａｒ）、７．２３（ｄｄｄ，４Ｈ，Ｊ１＝６．５，Ｊ２＝４．７，Ｊ３＝２．２Ｈｚ，Ａｒ）、７．２０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ａｒ）、７．０９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝８．５，Ｊ２＝６．８，Ｊ３＝１．５Ｈｚ，Ａｒ）、７．０６〜７．０２（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）、６．９６〜６．９２（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、５．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．８８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、３．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、３．７１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、３．０７（ｓ，１Ｈ，ＯＣＨ３）、２．０２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １７３．３（Ａｒ）、１３８．５（Ａｒ）、１３８．４（Ａｒ）、１３７．９（Ａｒ）、１３７．７（Ａｒ）、１３７．３（Ａｒ） １３５．３（Ａｒ）、１３４．２（Ａｒ）、１３１．８（Ａｒ）、１３０．１（Ａｒ）、１２８．９（Ａｒ）、１２８．６５（Ａｒ）、１２８．６２（Ａｒ）、１２８．５（Ａｒ）、１２８．４６（Ａｒ）、１２８．４４（Ａｒ）、１２８．２２（Ａｒ）、１２８．２２（Ａｒ）、１２７．７６（Ａｒ）、１２７．７１（Ａｒ）、１２７．５（Ａｒ）、１２７．４（Ａｒ）、１２７．２（Ａｒ）、１２６．７（Ａｒ）、１２６．４（Ａｒ）、１２６．３（Ａｒ）、１２６．２（Ａｒ）、１２４．８（Ａｒ）、９９．７（Ｃ１’）、８４．５、８４．４３（ｓ）、８１．１、７９．８、７７．０、７６．７、７６．１、７５．１、７４．２、７４．２、７３．７、７２．７、７０．２、６９．８、６１．８、６０．２、５９．１、５０．７、３２．３、３１．１、２９．８、２１．５（ＣＨ３）。
（Ｓ，Ｘ）−エステル（３６）の合成：（Ｓ）−２−メトキシ−２（１−ナフチル）プロパン酸［（Ｓ）−ＭαＮＰ］（０．００７グラム、０．０３ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．００５グラム、０．０４ｍｍｏｌ）、１０−カンファースルホン酸（ＣＳＡ、０．００１グラム、０．００４ｍｍｏｌ）、および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、０．０３４グラム、０．１６ｍｍｏｌ）の混合物を、０℃でＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中で撹拌した。上記で得た主要なアルコール３１（０．０２８グラム、０．０３１ｍｍｏｌ）、をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）中に溶解し、上記の撹拌した混合物にゆっくり添加し、室温で７２時間そのまま反応させた。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１％ＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供して、所望のエステル（Ｓ，Ｘ）−３６（０．００７グラム、２０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝Ｈ ５．４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５，４．４Ｈｚ，Ｈ−６）、５．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−３）、３．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−７）、３．２２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．７，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，Ｈ−７）、２．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１７．０，Ｊ２＝６．３Ｈｚ，Ｈ−５）、２．１２〜２．０２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２） 「環ＩＩ」：δ＝Ｈ ３．５１（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ１＝１７．８，Ｊ２＝９．３Ｈｚ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．４６〜３．３７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−６）、３．３３〜３．２７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、２．２５（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．６Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝Ｈ ８．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，Ａｒ）、７．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，）、７．７６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ１＝１５．９，Ｊ２＝８．１Ｈｚ，Ａｒ）、７．４６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，）、７．４４〜７．４１（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）、７．３９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ａｒ）、７．３６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ａｒ）、７．３４〜７．２７（ｍ，８Ｈ，Ａｒ）、７．２５〜７．２３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．２３〜７．１９（ｍ，６Ｈ，Ａｒ）、７．１６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，Ａｒ）、７．１４〜７．０９（ｍ，３Ｈ，Ａｒ）、６．９１〜６．８７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、５．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．９０〜４．７９（ｍ，３Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．６３（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．２２〜４．１５（ｍ，２Ｈ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、４．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、３．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，Ｏ（ＣＨ２）Ｂｎ）、３．２９（Ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、１．９７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝Ｃ １７２．７（Ａｒ）、１３８．３（Ａｒ）、１３８．０（Ａｒ）、１３７．９（Ａｒ）、１３７．７（Ａｒ）、１３７．３（Ａｒ） １３４．１（Ａｒ）、１３０．５（Ａｒ）、１２９．３（Ａｒ）、１２９．１（Ａｒ）、１２８．６（Ａｒ）、１２８．６（Ａｒ）、１２８．４（Ａｒ）、１２８．４（Ａｒ）、１２８．３（Ａｒ）、１２８．３（Ａｒ）、１２８．２（Ａｒ）、１２７．９（Ａｒ）、１２７．７（Ａｒ）、１２７．７（Ａｒ）、１２７．６（Ａｒ）、１２７．６（Ａｒ）、１２７．５（Ａｒ）、１２６．９（Ａｒ）、１２６．１（Ａｒ）、１２５．６（Ａｒ）、１２５．１（Ａｒ）、１２５．１（Ａｒ）、１２４．６（Ａｒ）、９７．１（Ｃ１’）、８４．５（Ｃ５）、８４．５（Ｃ４）、８１．２、８０．１（Ｃ３’）、７７．９（Ｃ５’）、７７．３、７７．０（Ｃ４）、７６．１、７５．２、７４．８、７４．４、７４．３（Ｃ６’）、７２．８、７０．４（Ｃ４’）、６９．４（Ｃ７’）、６２．５（Ｃ２’）、６０．２（Ｃ３）、５９．１（Ｃ１）、５１．４（ＯＣＨ３）、３２．３（Ｃ２）、２９．８５、２１．９（ＣＨ３）。
次いで６’位（Ｘで示される）における絶対立体化学を、セクター則７に基づき、ＮＭＲスペクトル中の割り当てられたプロトンの化学シフト値の差に依存する１Ｈ ＮＭＲ磁気異方性によって決定した（図９Ａ〜Ｂを参照）。図９Ａで示されるように、Ｈ−５’（−０．８２）の化学シフトにおける差［Δδ＝δ（Ｒ，Ｘ）−δ（Ｓ，Ｘ）］はマイナスであったが、Ｈ−７’、７’（＋０．２３、＋０．１０）の場合はプラスであった。図９Ｂに示されるセクター則によれば、構造（Ｒ，Ｘ）−ＭαＮＰ３５および（Ｓ，Ｘ）−ＭαＮＰ３６は、ＯＭαＮＰが前に配置され、Ｈ−６’が後ろに配置され、同時にΔδプラスとΔδマイナス部分がそれぞれ右側と左側に位置されるように配列される。これらのデータから、化合物３１の６’炭素原子におけるＲ配置（Ｘ＝Ｒ）を確認した。
この研究から、主要なおよび副ジアステレオマーである化合物ＮＢ１５３およびＮＢ１５５が、６’位における（Ｒ）−および（Ｓ）−配置を示す、すなわち６’−（Ｒ）−ＮＢ１５３および６’−（Ｓ）−ＮＢ１５５であることが確立された。
実施例５
実施例４の例示化合物の活性アッセイ
実験アッセイ手順および結果分析は実質的に上述した通り行ったが、さらなる詳細を以下に示す。
材料および方法：
全ての生物学的試験において、全ての試験されたアミノグリコシドは、それらの硫酸塩の形態であった［硫酸塩のＭｗ（グラム／ｍｏｌ）は以下の通りであった：化合物１−４３７．１、ＮＢ７４−５６４．３、ＮＢ１２４−６０５．９、ＮＢ１５３−５２６．８、ＮＢ１５５−５１２．２、ＮＢ１５６−７０５．９、ＮＢ１５７−７４６．６、Ｇ４１８−６９２．７、ゲンタマイシン−６５３．２］。
二重のルシフェラーゼリードスルーアッセイ：
ＰＣＤＨ１５、ＣＦＴＲ、およびＩＤＵＡのｃＤＮＡ由来の、試験したナンセンス変異または対応する野生型（ｗｔ）コドンと、その上流および下流に隣接する４〜６個のコドンとを含むＤＮＡフラグメントを、以下の相補的オリゴヌクレオチド対をアニーリングすることにより作製した。
アッシャー症候群：
ｐ．Ｒ３Ｘｍｕｔ／ｗｔ：
５’−ＧＡＴＣＣＣＡＧＡＡＧＡＴＧＴＴＴＴ／ＣＧＡＣＡＧＴＴＴＴＡＴＣＴＣＴＧＧＡＣＡＧＡＧＣＴ−３’、および
５’−ＣＴＧＴＣＡＧＡＧＡＴＡＡＡＡＣＴＧＴＣＡ／ＧＡＡＡＣＡＴＣＴＴＣＴＧ−３’。
ｐ．Ｒ２４５Ｘｍｕｔ／ｗｔ：
５’ＧＡＴＣＣＡＡＡＡＴＣＴＧＡＡＴＧＡＧＡＧＧＴ／ＣＧＡＡＣＣＡＣＣＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＣＧＡＧＣＴ−３’および
５’−ＣＧＡＧＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＴＴＣＧ／ＡＣＣＴＣＴＣＡＴＴＣＡＧＡＴＴＴＴＧ−３’。
嚢胞性線維症：
ｐ．Ｇ５４２Ｘｍｕｔ／ｗｔ：
５’−ＴＣＧＡＣＣＡＡＴＡＴＡＧＴＴＣＴＴＴ／ＧＧＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＴＣＧＡＧＣＴ−３’および
５’−ＣＧＡＴＴＣＣＡＣＣＴＴＣＴＣＡ／ＧＡＡＧＡＡＣＴＡＴＡＴＴＧＧ−３’。
ハーラー症候群：
ｐ．Ｑ７０Ｘｍｕｔ／ｗｔ：
５’−ＴＣＧＡＣＣＣＴＣＡＧＣＴＧＧＧＡＣＴ／ＣＡＧＣＡＧＣＴＣＡＡＣＣＴＣＧＡＧＣＴ−３’および
５’−ＣＧＡＧＧＴＴＧＡＧＣＴＧＣＴＡ／ＧＧＴＣＣＣＡＧＣＴＧＡＧＧ−３’。
ｐ２ＬｕｃプラスミドのポリリンカーのＢａｍＨＩおよびＳａｃＩ制限部位の間（ｐ．Ｒ３Ｘおよびｐ．Ｒ２４５Ｘ）またはＳａｌＩおよびＳａｃＩ制限部位の間（残りの全て）に、フレーム内となるようにフラグメントを挿入した。インビトロでのリードスルーアッセイのために、得られたプラスミドを、試験したアミノグリコシドを添加して、ＴＮＴ網状赤血球ライセートクイック転写／翻訳組合せアッセイ（ＴＮＴ Ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅ Ｑｕｉｃｋ Ｃｏｕｐｌｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ／Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して転写および翻訳した。３０℃での９０分のインキュベーション後、デュアルルシフェラーゼレポーターアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ（商標））を使用してルシフェラーゼ活性を決定した。終止コドンのリードスルーを公知技術のようにして計算した［Grentzmann et al. RNA 1998, 4, 479-486］。
タンパク質翻訳阻害試験：
異なるアミノグリコシドによるインビトロにおける原核生物の翻訳阻害を、ｐＢＥＳＴｌｕｃプラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ）を含む大腸菌Ｓ３０の環状ＤＮＡ抽出物を使用し、製造元のプロトコールに従って、転写／翻訳組合せアッセイで定量化した。様々な濃度の試験されたアミノグリコシドを含有した翻訳反応（２５μＬ）を３７℃で６０分間インキュベートし、氷上で５分間冷却し、希釈試薬（トリス−リン酸緩衝液（２５ｍＭ、ｐＨ７．８）、ＤＴＴ（２ｍＭ）、１，２−ジアミノシクロヘキサンテトラアセテート（２ｍＭ）、グリセロール（１０％）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（１％）およびＢＳＡ（１ｍｇ／ｍＬ））で９６−ウェルプレートに希釈した。インビトロにおける真核生物の翻訳阻害を、製造元のプロトコールに従ってルシフェラーゼＴ７対照ＤＮＡプラスミドを含むＴＮＴ（登録商標）Ｔ７クイック転写／翻訳系の組合せ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用することによって定量化した。様々な濃度の試験したアミノグリコシドを含有する翻訳反応液（２５μＬ）を３０℃で６０分間インキュベートし、氷上で５分間冷却し、希釈試薬で希釈し、９６−ウェルプレートに移した。原核生物系と真核生物系の両方において、ルシフェラーゼアッセイ試薬（５０μＬ；Ｐｒｏｍｅｇａ）の添加直後に発光を測定し、ＦＬｘ８００蛍光マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）で光の放出を記録した。Ｇｒａｆｉｔ ５ソフトウェアを使用し、濃度−応答曲線を少なくとも２つの独立した実験のデータに当てはめることによって、半最大阻害濃度（ＩＣ５０）値を得た。
抗菌活性試験：
臨床研究所規格委員会（ＮＣＣＬＳ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）（ＮＣＣＬＳ．“National Committee for Clinical Laboratory Standards, Performance standards for antimicrobial susceptibility testing.（臨床研究所規格委員会、抗微生物の感受性試験に関する性能基準）、第５情報別冊：“Approved Standard M100-S5（承認基準Ｍ１００−Ｓ５）”ペンシルベニア州ビラノバ：ＮＣＣＬＳ、１９９４）に従い、二重微量希釈法を使用してＭＩＣ値を測定することにより、２種の代表的なグラム陰性株菌（大腸菌Ｒ４７７−１００）およびグラム陽性株（枯草菌ＡＴＣＣ−６６３３）菌について、比較抗菌活性を決定した。全ての実験を３回繰り返したところ、３つの異なる実験で類似した結果を得た。
結果：
図１０は、ＵＳＨ１遺伝病を代表するＲ３Ｘナンセンス変異コンストラクトにおける化合物１（−■−）、ＮＢ１５３（−▲−）、およびＮＢ１５５（−△−）により誘導された、インビトロにおける終止コドンの抑制レベルを示す比較プロットを示す。
これらの比較ＰＴＣ抑制活性試験は、Ｃ７’−ヒドロキシル基（ＮＢ１５３）を化合物１に取り付けることにより、そのインビトロにおけるリードスルー活性が劇的に増加し、その作用はＮＢ１５５の作用より顕著であることを示す。これらのデータは、追加のヒドロキシル基に起因する活性の改善を示し、ＲＮＡ標的認識における６’位の立体化学の役割をさらに強調する。化合物１の活性と比べてＮＢ１５５の活性が多少高いことが観察されたが、これは、ＮＢ１５５における追加の７’−ヒドロキシルによって、６’位における配置上の不利益を克服できることを示唆している。
化合物ＮＢ１５６およびＮＢ１５７における追加の７’−ヒドロキシルの影響を、以下に示すように、７’−ヒドロキシルが存在しない点が化合物ＮＢ１５６およびＮＢ１５７と異なる、公知の化合物ＮＢ７４およびＮＢ１２４と比べることで評価した。
Figure 0006862428
一揃いのデュアルルシフェラーゼレポータープラスミドを使用して活性を試験し、当該プラスミドは、ＵＳＨ１、ＣＦ、およびＭＰＳ Ｉ−Ｈのそれぞれの特徴となるＰＣＤＨ１５、ＣＦＴＲ、およびＩＤＵＡ遺伝子に由来する未成熟終止コドンの周りに異なる配列構造（ｃｏｎｔｅｓｔｓ）を含有するものである。例示したナンセンスレポーターは、ＵＳＨ１についてはＲ３ＸおよびＲ２４５Ｘ、ＣＦについてはＧ５４２Ｘ、およびＭＰＳ Ｉ−ＨについてはＱ７０Ｘであった。
得られたデータを図１１Ａ〜１１Ｄに示した。これらは、Ｒ３Ｘ（ＵＳＨ１）（図１１Ａ）、Ｒ２４５Ｘ（ＵＳＨ１）（図１１Ｂ）、Ｑ７０Ｘ（ＨＳ）（図１１Ｃ）、およびＧ５４２Ｘ（ＣＦ）（図１１Ｄ）を代表するナンセンスコンストラクトにおける、ＮＢ７４（−△−）、ＮＢ１５６（−▲−）、およびゲンタマイシン（−−■−−）（左）ならびにＮＢ１２４（−Δ−）、ＮＢ１５７（−▲−）、およびゲンタマイシン（−−■−−）（右）により誘導されたインビトロにおける終止コドン抑制レベルの比較プロットを示す。結果は、少なくとも３回の独立した実験の平均である。
図１１Ａ〜１１Ｄによって明らかに示されるように、ＮＢ１５３で示されたＣ７’−ヒドロキシル基の正の影響は、疑似三糖でも保持されている。試験した全ての変異において、ＮＢ１５６のリードスルー活性は、構造的に関連するＮＢ７４の活性より実質的に優れており、ＮＢ１５７の活性は、その構造的に関連するＮＢ１２４より優れている。加えて、試験した全ての変異において、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７の両方の活性は、臨床薬であるゲンタマイシンの活性より有意に優れていた。
真核生物の細胞質内リボソームへの特異性を評価するために、真核生物系における化合物ＮＢ７４、ＮＢ１２４、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７の比較タンパク質翻訳阻害を、転写／翻訳組合せアッセイを使用して決定した。
全ての生物学的試験において、全てのＡＧがそれらの硫酸塩の形態であったことから、濃度は、各ＡＧの遊離アミン形態を指す。真核生物および原核生物に対する半最大阻害値（ＩＣ５０ ＥｕｋおよびＩＣ５０ Ｐｒｏ）は、公知のように、転写／翻訳組合せアッセイで活性ルシフェラーゼを検出することで定量化した。最小阻害濃度（ＭＩＣ）値を、二重微量希釈方法を使用することによって決定した。
以下の表４に、得られたデータを示す。
Figure 0006862428
得られたデータから、ＮＢ１５７（半最大阻害濃度値ＩＣ５０ Ｅｕｋ＝１．２μＭ）が真核生物の翻訳を阻害する効能は、ＮＢ１５６の効能（ＩＣ５０ Ｅｕｋ＝１３．９μＭ）およびゲンタマイシンの効能（ＩＣ５０ Ｅｕｋ＝６２μＭ）よりも大きいことが示され、これは、図１１Ａ〜Ｄに示されるＰＴＣ抑制活性と類似している。加えて、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７は、それぞれが構造的に関連する化合物ＮＢ７４およびＮＢ１２４よりも１．８５倍および１．２５倍高く真核生物のリボソームに対して特異的である。これらのデータから、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７の上昇したＰＴＣ抑制活性は、それらの真核生物のリボソームに対する特異性の増加に関連することを示す。
表４の測定されたＩＣ５０ ＰｒｏおよびＭＩＣ値から、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７が、原核生物のリボソームを阻害する効能とそれに続く抗菌活性が、それらの構造的に関連する化合物ＮＢ７４およびＮＢ１２４のそれぞれと非常に類似していることが示された。観察されたこれら化合物による細菌リボソームに対する類似の影響から、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７は、ゲンタマイシンおよびＧ４１８よりも聴器毒性が低いことが示唆される。
したがって、本明細書では、新しい薬理作用ポイントである７’−ヒドロキシル基は、原核生物対真核生物における選択性およびそれに続くＰＴＣ抑制活性に有意に影響を与える、グルコサミン環（環Ｉ）の有用な構造的エレメントとして示す。
さらなるアッセイを、実質的に上述と同様に実行した。図１２Ａ〜１３Ｂに得られたデータの一部を示す。
これらのアッセイにおいて、広範にわたる終止コドン変異の宝庫に対して、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７の存在下におけるリードスルーを試験した。簡単に言えば、漸増用量のＮＢ１５６およびＮＢ１５７の、ナンセンス変異に対するそれらのリードスルー特性を試験した。試験には、対照としてのそれぞれの特異的な相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の野生型（ＷＴ）配列と、終止コドン変異を保有するプラスミドとを使用して、デュアルルシフェラーゼアッセイを実施した。異なるｃＤＮＡ由来のＤＮＡ断片は、変異型または野生型のコドンが、その上流側および下流側に隣接する４個〜６個のコドンによって囲まれているＷＴまたはナンセンス変異のいずれかを使用して調製した。各配列につき、ｃＤＮＡ配列をｐ２ｌｕｃプラスミドのポリリンカーに挿入した。
以下の表５に、試験した変異およびそれと関連する遺伝病を示す。
Figure 0006862428
図１２Ａは、終止コドン変異リードスルーの比較プロットであって、リードスルーのパーセントをＮＢ１５６を用いたＷＴの濃度（５０％ウミシイタケまでのリードスルー）に対する関数として示し、変異Ｇ５４２Ｘ、Ｗ３９２Ｘ、Ｒ１２８２Ｘ、Ｑ２５２２Ｘ、Ｒ３Ｘ、Ｑ７０Ｘ、Ｒ５７８Ｘ、Ｒ１６８Ｘ、Ｒ２４５Ｘ、Ｒ３１Ｘ、ｍｄＸ、Ｒ２７０Ｘ、Ｒ３３８１Ｘ、Ｒ５５３Ｘ、Ｑ２５１ＸおよびＲ２９４Ｘのリードスルーを比較したものである。
図１２Ｂは、終止コドン変異リードスルーの比較プロットであって、ＮＢ１５６に曝露した後の未処理対照におけるリードスルーの増加倍率をＮＢ１５６の濃度に対する関数として示し、変異Ｇ５４２Ｘ、Ｗ３９２Ｘ、Ｒ１２８２Ｘ、Ｑ２５２２Ｘ、Ｒ３Ｘ、Ｑ７０Ｘ、Ｒ５７８Ｘ、Ｒ１６８Ｘ、Ｒ２４５Ｘ、Ｒ３１Ｘ、ｍｄｘ、Ｒ２７０Ｘ、Ｒ３３８１Ｘ、Ｒ５５３Ｘ、Ｑ２５１ＸおよびＲ２９４Ｘのリードスルーを比較したものである。
図１３Ａは、終止コドン変異リードスルーの比較プロットであって、リードスルーのパーセントをＮＢ１５７を用いたＷＴの濃度（５０％ウミシイタケまでのリードスルー）に対する関数として示し、変異Ｇ５４２Ｘ、Ｗ３９２Ｘ、Ｒ１２８２Ｘ、Ｑ２５２２Ｘ、Ｒ３Ｘ、Ｑ７０Ｘ、Ｒ５７８Ｘ、Ｒ１６８Ｘ、Ｒ２４５Ｘ、Ｒ３１Ｘ、ｍｄＸ、Ｒ２７０Ｘ、Ｒ３３８１Ｘ、Ｒ５５３Ｘ、Ｑ２５１ＸおよびＲ２９４Ｘ（上記の表５を参照）のリードスルーを比較したものである。
図１３Ｂは、終止コドン変異リードスルーの比較プロットであって、ＮＢ１５７に曝露した後の未処理対照におけるリードスルーの増加倍率をＮＢ１５７の濃度に対する関数として示し、変異Ｇ５４２Ｘ、Ｗ３９２Ｘ、Ｒ１２８２Ｘ、Ｑ２５２２Ｘ、Ｒ３Ｘ、Ｑ７０Ｘ、Ｒ５７８Ｘ、Ｒ１６８Ｘ、Ｒ２４５Ｘ、Ｒ３１Ｘ、ｍｄＸ、Ｒ２７０Ｘ、Ｒ３３８１Ｘ、Ｒ５５３Ｘ、Ｑ２５１ＸおよびＲ２９４Ｘ（上記の表５を参照）のリードスルーを比較したものである。
追加の比較アッセイにおいて、ＮＢ１５６の終止コドン変異に対するリードスルー活性をＮＢ７４の活性と比較した。全ての試験された変異において、ＮＢ１５６は、ＮＢ７４より活性であることが明らかとなった。
これらのデータによって、ＮＢ１５６およびＮＢ１５７による様々な終止コドン変異に対してリードスルー活性がさらに明らかとなった。
実施例６
本発明の一部の実施形態に係る不飽和グルコサミン（環Ｉ）を含有する例示化合物
アミノグリコシド構造の例示的な新しい修飾を、環Ｉ（グルコサミン環）に不飽和を挿入することにより実施した。Ｃ４’−ＯＨまたはＣ３’，Ｃ４’−ヒドロキシルを除き得、同時に環Ｉに不飽和基を導入することは、Ｇ１４０８とのよりよい偽対相互作用およびＡ１４９１との改善されたπ−πスタッキングのために、結合ポケット内で環を比較的「自由に」移動できるようにすると考えられた。
化学合成
以下の例示的なアミノ糖化合物であるＮＢ１５４、ＮＢ１５８およびＮＢ１５９を合成した。
Figure 0006862428
全ての構造を、質量分析と共に、１Ｄ ＴＯＣＳＹ、２Ｄ ＣＯＳＹ、２Ｄ １Ｈ−１３Ｃ ＨＭＱＣおよびＨＭＢＣなどの様々な１Ｄおよび２Ｄ ＮＭＲ技術の組合せによって確認し、特徴付けた。
ＮＢ１５４の合成：
以下のスキーム１２に、ＮＢ１５４の合成を示す。
Figure 0006862428
簡単に言えば、合成はパロマミンから開始した。パロマミンは、過去に報告されているように、市販の硫酸パロモマイシン（ｐａｒｏｍｏｍｉｃｉｎ）の酸性（ＨＣｌ／ＭｅＯＨ）加水分解によって得られる。最初に、ＣｕＳＯ４の存在下でトリフリック無水物およびＮａＮ３からインサイチュでトリフリン酸アジドを生成する作用により、パロマミンをトリアジドに変換して、パロマミンペルアジド（１８）を得た。パロマミンペルアジドを得たら、酸性条件下でベンズアルデヒドジメチルアセタールを使用して、４’，６’−ＯＨ基を対応するベブジリデン（ｂｅｂｚｙｌｉｄｅｎｅ）アセタール（４２）に変換した。他のヒドロキシ基を、無水酢酸の存在下、塩基性条件下で酢酸エステルに変換した（４３）。穏やかな酸性環境下での化合物４３におけるアリーリデン基の脱保護によりジオール４４が形成され、これをさらなるその後の官能基変換に供して所望の化合物を得た。選択的な酸化が実行されるように４’−ＯＨ基と６’−ＯＨ基を区別するために、化合物４３中の６’−ＯＨ基を、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド（ＴＢＤＰＳＣｌ）での選択的な保護によりそのシリルエーテル４５として保護し、一方で他のヒドロキシル基を、塩基条件（Ｅｔ３Ｎ）下で塩化メシル（ＭｓＣｌ）を使用してメシル酸エステルとしてマスクすることによって、化合物４６を優れた収量で得た。
ＴＢＡＦを使用したシリル脱保護中の４’−ＯＭエステル官能基の加水分解を回避するために、ＴＢＡＦ反応混合物をＡｃＯＨで緩衝化し、６’−ＯＨ官能性分子４７得て、その分子で４’−ＯＭエステルを無傷のままにした。ワンポット反応でのＣ−６’ヒドロキシル基のＤＭＰ酸化とそれに続く塩基性条件下における４’−ＯＭエステルの付随的な消去により、対応するα、β−不飽和アルデヒド４８の形成が優れた収量で起こる。化合物４８は、ルーシェ還元条件でアリル型のアルコール４９をもたらし、これをＮａＯＭｅ、続いてシュタウディンガー反応で処理することで、疑似二糖ＮＢ１５４を得た。
１，３，２’−ペルアジド−パロマミン（１８）の合成：硫酸パロモマイシンを酸性条件（ＨＣｌ／ＭｅＯＨ）下でパロマミンに加水分解した。ＣｕＳＯ４の存在下でトリフリック無水物およびＮａＮ３からインサイチュでトリフリン酸アジドを生成することにより、パロマミンをトリアジドに変換した。
トリフリン酸アジドの生成：０℃の水（９．０ｍＬ）およびトルエン（９．０ｍＬ）中にＮａＮ３（３．６グラム、１８当量）を徹底的に撹拌した溶液に、トリフリック無水物（４．６ｍＬ、９．０当量）を一滴ずつ添加し、反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。その後温度を１０℃に上げ、二相系を２時間撹拌した。次いでＮａＨＣＯ３の飽和水溶液を、ガスの評価が終わるまで一滴ずつ添加した。相分離し、水相をトルエン（２×９ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相は、ジアゾ転移反応に使用した。
ジアゾ転移反応：パロマミン（１．０グラム、１．０当量）、ＮａＨＣＯ３（３．１グラム、１２．０当量）および硫酸銅（ＩＩ）を水（５．０ｍＬ）中に溶解した。トリフリン酸アジドストック溶液を添加し、続いてメタノール（４０ｍＬ）を添加することにより、均一な溶液を得た。青色の反応混合物を室温で激しく撹拌した。アミンの完全な変換が、青色から緑色への変化により判明した。４８時間撹拌した後、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ９５：５）分析により反応の完了が判明した。その後、乾燥するまで溶媒を蒸発させ、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ １００％）に供した。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，Ｈ−１）、３．９９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９，４．１，２．６Ｈｚ，Ｈ−５）、３．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２，９．１Ｈｚ，Ｈ−３）、３．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．９，２．３Ｈｚ，Ｈ−６）、３．７８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．８，４．４Ｈｚ，Ｈ−６）、３．４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．７，９．３Ｈｚ，Ｈ−４）、３．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５，３．７Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．８０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７７〜３．６７（ｍ，３Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３，Ｈ−４）、３．５６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−６）、２．５９〜２．４８（ｍ，１Ｈ）、１．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２６．３，１２．７Ｈｚ，Ｈ−２）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝９９．３（Ｃ１’）、８０．７、７７．８（Ｃ５）、７７．７（Ｃ６）、７３．９（Ｃ５’）、７２．４（Ｃ３’）、７１．６、６４．８（Ｃ２’）、６２．１（Ｃ６’）、６１．６、６０．９、３３．１（Ｃ２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１２Ｈ１９Ｎ９Ｏ７（［Ｍ＋Ｋ］＋）の計算値ｍ／ｅ ４４０．３；実測値ｍ／ｅ ４４０．２）。
４’，６’−Ｏ−ベンジリデン−１，２’，３−トリアジド−パロマミン（４２）の調製：化合物１８（１グラム、２．４９ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）中に溶解させ、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（０．８７ｍＬ、５．７９ｍｍｏｌ）および触媒となる量のＣＳＡを添加した。反応混合物を６０℃で撹拌し、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ６０％、ヘキサン４０％）により反応の進行をモニターしたところ、２時間後に反応の完了が判明した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液およびブラインで抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。未精製の生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）によって精製して、化合物４２を得た（１．０グラム、８３％収量）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ−１）、４．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．０，Ｊ２＝５．０Ｈｚ，Ｈ−６）、４．２０（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．１，Ｊ２＝５．０Ｈｚ，Ｈ−６）、４．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−３）、３．８１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５６Ｈｚ，Ｈ−４）、３．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．４，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．５７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５４〜３．４８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４）、３．４５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．７，１１．３，５．５Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−６）、２．２８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝８．５，Ｊ２＝３．９Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．３Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：７．５８〜７．５０（ｍ，２Ｈ）、７．４３〜７．３５（ｍ，３Ｈ，Ａｒ）、７．４３〜７．３５（ｍ，３Ｈ，Ａｒ）、５．６３（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δｃ＝１３９．１０（Ａｒ）、１２９．９８（Ａｒ）、１２９．０７（Ａｒ）、１２７．５６（Ａｒ）、１０３．１４（ＰｈＣＨ）、１００．３６（Ｃ−１’）、８３．０６、８１．３３、７７．８２、７７．８１、６９．８５（Ｃ−５’）、６９．５９（Ｃ−６’）、６５．２３（ｓ）、６４．５８（ｓ）、６１．７６（ｓ）、６０．９５（ｓ）、３３．２１（Ｃ−２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１９Ｈ２４Ｎ９Ｏ７（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ４９０．４；実測値ｍ／ｅ ４９０．０。
４’，６’−Ｏ−ベンジリデン−１，２’，３−トリアジド−ペルアセチルパロマミン（４３）の調製：化合物４２（１．４グラム、２．９４ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（８ｍＬ）中に溶解し、無水酢酸（１．４ｍＬ、１４．８ｍｍｏｌ）、および４−ＤＭＡＰ（３．２グラム、２６．１ｍｍｏｌ）を添加した。ＴＬＣにより反応の進行をモニターしたところ、４時間後に完了が判明した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＨＣｌの水溶液（２％）、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液、およびブラインで抽出した。合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４上で脱水し、濃縮した。未精製の生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ４：６）によって精製して、４３を得た（１．３２グラム、７３％収量）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．５７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．３，Ｊ２＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３）、５．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，Ｈ−１）、４．３１（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ１＝１３．０，Ｊ２＝５．０Ｈｚ，Ｈ−５，Ｈ−６）、３．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１４．４，Ｊ２＝５．６Ｈｚ，Ｈ−６）、３．６２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，Ｈ−４）、３．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．５，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝５．１７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−５）、４．９２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．７４〜３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−１）、３．４６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．２，Ｊ２＝１０．１，Ｊ３＝４．９Ｈｚ，Ｈ−３）、２．４３（ｄｔ，１Ｈ Ｊ１＝１３．０，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２）、１．５９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝２５．８，Ｊ２＝１２．８Ｈｚ，Ｈ−２）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝７．４４（ｄｔ，Ｊ１＝５．０，Ｊ２＝３．０Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ）、７．３９〜７．３０（ｍ，３Ｈ，Ａｒ）、５．４９（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δｃ＝１７０．０６（Ｃ＝Ｏ）、１６９．７６（Ｃ＝Ｏ）、１６９．３７（Ｃ＝Ｏ）、１３６．９３（Ａｒ）、１２９．２６（Ａｒ）、１２８．３６（Ａｒ）、１２６．３０（Ａｒ）、１０１．７４（ＰｈＣＨ）、１００．２２（Ｃ−１’）、７９．１７（Ｃ−４’）、７８．７２（Ｃ−４）、７４．２７（Ｃ−６）、７３．７２（Ｃ−５）、６８．６９（Ｃ−６’）、６８．６３（Ｃ−３’）、６３．５１（Ｃ−５’）、６１．４６（Ｃ−２’）、５８．２９（Ｃ−３）、５７．６８（Ｃ−１）、３１．７７（Ｃ−２）、２０．８７（ＣＨ３ＣＯ）、２０．６７（ＣＨ３ＣＯ）、２０．６４（ＣＨ３ＣＯ）。
（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ）−３−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−４−アセトキシ−３−アジド−５−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４，６−ジアジドシクロヘキサン−１，２−ジイルジアセテート（４４）の調製：化合物４３（１．３２グラム、２．１４ｍｍｏｌ）をＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ（５：１、１０ｍＬ）の混合物中に溶解し、溶液を６０℃で一晩撹拌した。反応の完了がＴＬＣによって判明した後、水性の酢酸を蒸発により除去した。未精製の残留物をＥｔＯＡｃ中に溶解し、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液、およびブラインで抽出した。合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４上で脱水し、濃縮した。未精製の生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ６：４）によって精製して、４４を得た（７７１ｍｇ、６８％収量）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δＨ＝５．２８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，Ｈ−３）、５．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ−１）、４．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．９５〜３．７９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−６）、３．６７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−５）、３．２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１０．３，Ｊ２＝３．５Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝５．１２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−５）、４．９１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．７３〜３．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５２（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．１，４．６Ｈｚ，Ｈ−１）、２．４２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−２）、１．５９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．６Ｈｚ，Ｈ−２）；）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝２．１５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３Ｃ＝Ｏ）、２．１１〜２．０２（ｍ，６Ｈ，ＣＨ３Ｃ＝Ｏ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δｃ＝１７１．７８（Ｃ＝Ｏ）、１７０．１０（Ｃ＝Ｏ）、１６９．７３（Ｃ＝Ｏ）、９９．３３（Ｃ−１’）、７８．７９（Ｃ−４）、７４．２１（Ｃ−６）、７３．６８（Ｃ−５）、７３．０３（Ｃ−３’）、７２．６２（Ｃ−４’）、６９．４５（Ｃ−５’）、６１．６４（Ｃ−６’）、６１．０２（Ｃ−２’）、５８．７１（Ｃ−１）、５７．６５（Ｃ−３）、３１．９８（Ｃ−２）、２１．０６（ＣＨ３ＣＯ）、２０．７２（ＣＨ３ＣＯ）、２０．６６（ＣＨ３ＣＯ）。
（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ）−３−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−アセトキシ−３−アジド−６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４，６−ジアジドシクロヘキサン−１，２−ジイルジアセテート（４８）の調製：０℃でＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中に化合物４７（８８ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＤＭＰ（１２３ｍｇ、０．２８９ｍｍｏｌ）を一部ずつ添加し、得られた混合物を０℃で４０分間撹拌した。次いで反応混合物をそのまま室温にし、さらに３時間撹拌した。反応の完了がＴＬＣにより判明した後、Ｅｔ３Ｎ（０．２ｍＬ）をワンポットで室温で添加し、混合物を３０分間撹拌した。その後、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水、続いてブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４上で脱水し、濃縮した。未精製の生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：７）によって精製して、４８を得た（５０ｍｇ、６８％収量）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δＨ＝５．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，Ｈ−４）、５．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．４，Ｊ２＝２．４Ｈｚ，Ｈ−３）、５．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，Ｈ−１）、３．７１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．４，Ｊ２＝２．７Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝５．１３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，Ｈ−５）、４．９０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．８２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．６，Ｊ２＝１０．２，Ｊ３＝４．６Ｈｚ，Ｈ−１）、３．４２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．６，Ｊ２＝１０．０，Ｊ３＝４．６Ｈｚ，Ｈ−３）、２．３１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．５，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，Ｈ−２）、１．４９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．７Ｈｚ，Ｈ−２）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝９．２４（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ）、２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＯ）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＯ）、２．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３ＣＯ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δｃ＝１８５．１２（ＣＨＯ）、１７０．０１（Ｃ＝Ｏ）、１６９．８７（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４８（Ｃ＝Ｏ）、１４８．７９（Ｃ−５’）、１１６．７１（Ｃ−４’）、９８．９８（Ｃ−１’）、７９．２０（Ｃ−４）、７３．９９（Ｃ−６）、７３．２５（Ｃ−５）、６６．４３（Ｃ−３’）、５９．１４（Ｃ−３）、５８．５０（Ｃ−２’）、５７．８４（Ｃ−１）、３２．１４（Ｃ−２）、２０．９１（ＣＨ３ＣＯ）、２０．６９（ＣＨ３ＣＯ）、２０．６４（ＣＨ３ＣＯ）。
（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ）−３−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−アセトキシ−３−アジド−６−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４，６−ジアジドシクロヘキサン−１，２−ジイルジアセテート（４９）の調製：０℃に冷却した乾燥ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中にアルデヒド４８（１．０グラム、１．９７ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ（７３４ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）およびＮａＢＨ４（７４ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ２：３）によりモニターしたところ、１時間後に完了が判明した。ＭｅＯＨを完全に蒸発させ、Ｈ２Ｏを添加した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相を、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で脱水し、乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、対応するアリルアルコール４９を得た（９６０ｍｇ、９６％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δＨ＝５．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９，Ｈ−３）、５．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，Ｈ−１）、５．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，Ｈ−４）、４．０９〜３．９６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−６）、３．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．０，Ｊ２＝２．５Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝５．１２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，Ｈ−５）、４．８９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｈ−６）、３．７９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６９〜３．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．４８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．６，Ｊ２＝１０．０，Ｊ３＝４．６Ｈｚ，Ｈ−３）、２．３０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．４，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．８Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝２．５７（ｂｒｓ，１Ｈ，６’−ＯＨ）、２．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０４（ｓ，６Ｈ，ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ＝１７０．０（ＣＨ３−ＣＯ）、１６９．９（ＣＨ３−ＣＯ）、１６９．４（ＣＨ３−ＣＯ）、１５２．６（Ｃ５’）、９８．３（Ｃ１’）、９６．３（Ｃ４’）、７８．８（Ｃ４）、７３．９（Ｃ６）、７３．３（Ｃ５）、６６．６（Ｃ３’）、６１．７（Ｃ６’）、５９．３（Ｃ３）、５８．９（Ｃ２’）、５７．８（Ｃ１）、３２．３（Ｃ２）、２１．０（ＣＨ３）、２０．６（ＣＨ３）、２０．５（ＣＨ３）。
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ）−４，６−ジアジド−３−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−３−アジド−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）シクロヘキサン−１，２−ジオール（５０）の調製：アルゴン雰囲気下で乾燥ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中にアルコール４９（９６０ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＮａＯＭｅ（４５９ｍｇ、８．４９ｍｍｏｌ）を添加した。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ３：２）によりモニターしたところ、６時間後に完了が判明した。次いで反応混合物をシリカゲルカラムのパッドを通過させ、カラムをＭｅＯＨで洗浄した。合わせた有機相を乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、化合物５０を得た（７００ｍｇ、９７％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，Ｈ−１）、５．０３（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝２．５，Ｊ２＝１．０Ｈｚ，Ｈ−４）、４．４７〜４．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、４．０６〜３．９６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６）、３．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝８．０，Ｊ２＝２．５Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．６１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．４６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝９．５，Ｊ３＝４．５Ｈｚ，Ｈ−３）、３．４３〜３．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）、３．２６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−６）、２．１６（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．２９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１５２．６、１００．５（Ｃ４’）、９９．６（Ｃ１’）、８１．７（Ｃ４）、７７．９（Ｃ６）、７７．６（Ｃ５）、６４．９（Ｃ３’）、６３．８（Ｃ２’）、６２．０（Ｃ１）、６１．９（Ｃ６’）、６１．６（Ｃ３）、３３．７（Ｃ２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１２Ｈ１７Ｎ９Ｏ６（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ４０６．３；実測値ｍ／ｅ ４０６．３。
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ）−４，６−ジアミノ−３−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）シクロヘキサン−１，２−ジオール（ＮＢ１５４）の調製：ＴＨＦ（３．０ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５．０ｍＬ）の混合物中に化合物５０（２５６ｍｇ、１．０当量）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、０．５５ｍＬ、７．８当量）を添加した。反応の進行をＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）、１０：１５：６：１５］によりモニターしたところ、３．５時間後に完了が判明した。反応混合物を、シリカゲルの短いカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（１００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を８０％ＭｅＯＨ中の５％ＭｅＮＨ２溶液（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）の混合物で溶出した。生成物を含有する画分を合わせて、真空中で蒸発させた。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４ ＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。最初に、カラムを水で洗浄し、次いで生成物を水中の１０％ＮＨ４ＯＨの混合物で溶出して、ＮＢ１５４を得た（１８４ｍｇ、９０％）。
貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５４を、以下のようにしてその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基の形態を水中に溶解し、ｐＨをＨ２ＳＯ４（０．１Ｎ）で７に調整し、凍結乾燥して、ＮＢ１５４の硫酸塩を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，Ｈ−１）、４．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，Ｈ−４）、４．０６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．０，Ｊ２＝３．０Ｈｚ，Ｈ−３）、４．０１〜３．９１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６）、２．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．０，Ｊ２＝２．５Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．４１〜３．３５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．０９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−６）、２．７６〜２．７０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、２．６６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝１０．０，Ｊ３＝４．５Ｈｚ，Ｈ−１）、２．０３（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．２４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１５２．６、１０１．８（Ｃ１’）、１０１．５（Ｃ４’）、８６．７、７８．８（Ｃ６）、７７．７、６８．０（Ｃ３’）、６２．５（Ｃ６’）、５５．６（Ｃ２’）、５２．４（Ｃ３）、５１．２（Ｃ１）、３６．６（Ｃ２）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ１２Ｈ２３Ｎ３Ｏ６（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ ３０６．３；実測値ｍ／ｅ ３０６．８。
ＮＢ１５８およびＮＢ１５９の合成：
ＮＢ１５８およびＮＢ１５９を、スキーム１３に示したようにして調製した。
Figure 0006862428
簡単に言えば、疑似三糖であるＮＢ１５８およびＮＢ１５９の合成を、ピリジン中の無水酢酸を使用した低温（−２０℃）での５０の位置選択的なアセチル化によって得られる、対応するアクセプター５１から達成した。アクセプター５１を、触媒となる量のＢＦ３・ＯＥｔ２を用いてトリクロロアセトイミデートドナー５２および５３とグリコシル化反応させることで、保護された疑似三糖５４および５５を、主として対応するβ−アノマーとして優れた収量で得た。メチルアミンおよびシュタウディンガー反応での疑似三糖５４および５５の全体的なエステル脱保護により、アジ化物を対応するアミンに変換することで、化合物ＮＢ１５８およびＮＢ１５９を得た。
（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−アセトキシ−２−（（（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，６Ｓ）−３−アセトキシ−４，６−ジアジド−２−ヒドロキシシクロヘキシル）オキシ）−３−アジド−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−６−イル）酢酸メチル（５１）の調製：化合物５０（７００ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（８ｍＬ）中に溶解し、−２０℃に冷却した。この温度で、無水酢酸（０．６ｍＬ、６．１９ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加し、反応をそのまま−２０℃で進行させた。ＴＬＣにより反応の進行をモニターしたところ、１７時間後に完了が判明した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３の水溶液、ＨＣｌ（２％）、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液、およびブラインで抽出した。合わせた有機相を無水ＭｇＳＯ４上で脱水し、濃縮した。未精製の生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、５１を得た（５２０ｍｇ、５６％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δＨ＝５．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７，Ｈ−３）、５．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，Ｈ−１）、５．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，Ｈ−４）、４．５２（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，Ｈ−６，Ｈ−６）、３．７７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝８．７，Ｊ２＝２．８Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝４．８６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，Ｈ−６）、３．６９（ｔｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．５，Ｊ２＝４．３Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．６，Ｊ２＝１０．０，Ｊ３＝４．６Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．６，Ｊ２＝９．８，Ｊ３＝４．６Ｈｚ，Ｈ−３）、２．２８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．５，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．６Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝２．１７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ＝１７０．９（ＣＨ３−ＣＯ）、１７０．４（ＣＨ３−ＣＯ）、１７０．４（ＣＨ３−ＣＯ）、１４８．２（Ｃ５’）、９９．１（Ｃ４’）、９８．８（Ｃ１’）、８３．１（Ｃ４）、７５．７（Ｃ６）、７４．７（Ｃ５）、６７．４（Ｃ３’）、６２．４（Ｃ６’）、５９．７（Ｃ２’）、５９．１（Ｃ３）、５８．０（Ｃ１）、３２．６（Ｃ２）、２１．１（ＣＨ３）、２０．９（ＣＨ３）、２０．９（ＣＨ３）。
グリコシル化生成物（５４）の調製：無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）を粉末化し、火炎乾燥した４Å分子篩（２．０グラム）に添加し、続いてアクセプター５１（２７０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）およびドナー５２（１．１１５グラム、２．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで−３０℃に冷却した。この温度で、触媒となる量のＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（０．１ｍｌ）を添加し、混合物を−３０℃で撹拌し、ＴＬＣにより反応の進行をモニターしたところ、６０分後に完了が判明した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供して、化合物５４を８０％収量で得た（３７０ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δＨ＝５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３，Ｈ−１）、５．４３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝６．４，Ｊ２＝４．０Ｈｚ，Ｈ−３）、５．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，Ｈ−４）、４．５５（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，Ｈ−６，Ｈ−６）、３．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝６．８，Ｊ２＝２．３Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝５．０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，Ｈ−６）、３．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４）、３．４９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．２，Ｊ２＝１０．０，Ｊ３＝４．３Ｈｚ，Ｈ−１）、３．４３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．１，Ｊ２＝９．８，Ｊ３＝４．５Ｈｚ，Ｈ−３）、２．３４〜２．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．７Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５５〜５．５３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、５．４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝６．８，Ｊ２＝５．３Ｈｚ，Ｈ−３）、４．５７〜４．４９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．５，Ｊ２＝３．６Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．３，Ｊ２＝６．０Ｈｚ，Ｈ−５）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝７．９３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，Ａｒ）、７．８８（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ１＝８．３，Ｊ２＝１．２Ｈｚ，Ａｒ）、７．５９〜７．５０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．３９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ａｒ）、７．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ａｒ）、２．２９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ＝１７０．３（ＣＨ３−ＣＯ）、１７０．１（ＣＨ３−ＣＯ）、１７０．０（ＣＨ３−ＣＯ）、１６５．５（Ｃ６Ｈ５−ＣＯ）、１６５．２（Ｃ６Ｈ５−ＣＯ）、１４９．３（Ｃ５’）、１３３．８（Ａｒ）、１３３．７（Ａｒ）、１２９．７（Ａｒ）、１２９．７（Ａｒ）、１２８．８（Ａｒ）、１２８．７（Ａｒ）、１２８．６（Ａｒ）、１２８．５（Ａｒ）、１０７．５（Ｃ１”）、９７．９（Ｃ１’）、９７．８（Ｃ４’）、８０．８（Ｃ４”，Ｃ４）、７８．９（Ｃ５）、７４．７（Ｃ２”）、７３．９（Ｃ６）、７１．７（Ｃ３’）、６６．８（Ｃ３”）、６２．３（Ｃ６’）、５９．８（Ｃ３）、５９．３（Ｃ２’）、５８．４（Ｃ１）、５２．７（Ｃ５”）、３２．５（Ｃ２）、２１．１（ＣＨ３）、２０．９（ＣＨ３）、２０．８（ＣＨ３）。
化合物５６の調製：グリコシル化生成物５４（３７０ｍｇ、０．４２２ｍｍｏｌ）を、ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液、１５ｍＬ）の溶液で処理し、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ８５：１５）により反応の進行をモニターしたところ、１２時間後に完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ ２：８）に供して、対応する完全に保護されていないペルアジド誘導体５６を９７％収量で得た（２３７ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５，Ｈ−１）、５．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１．８，Ｊ２＝１．１Ｈｚ，Ｈ−４）、４．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．４，Ｊ２＝２．４Ｈｚ，Ｈ−３）、４．０５〜３．９４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−６）、３．５３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．６，Ｊ２＝４．２Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．７０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−５）、３．４９〜３．４１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．３９（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝９．８，Ｊ２＝４．９Ｈｚ，Ｈ−１）、３．３７〜３．３４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、２．１２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．０，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．２３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，Ｈ−１）、４．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝４．７，Ｊ２＝１．３Ｈｚ，Ｈ−２）、４．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．７，Ｊ２＝４．２Ｈｚ，Ｈ−３）、４．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．０，Ｊ２＝２．７Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．３，Ｊ２＝３．２Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝６．４Ｈｚ，Ｈ−５）；
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１５２．８（Ｃ５’）、１１１．１（Ｃ１”）、１００．１（Ｃ４’）、９８．８（Ｃ１’）、８３．９（Ｃ５）、８２．４（Ｃ４”）、７９．７（Ｃ４）、７７．５（Ｃ６）、７６．２（Ｃ２”）、７２．４（Ｃ３”）、６５．３（Ｃ３’）、６４．０（Ｃ２’）、６２．１（Ｃ６’）、６１．９（Ｃ１）、６１．７（Ｃ３）、５４．２（Ｃ５”）、３３．５（Ｃ２）。
ＮＢ１５８の調製：ＴＨＦ（３ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５ｍＬ）の混合物中に化合物５６（２３７ｍｇ、０．４３８ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、３．５ｍＬ、４０．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応の進行をＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）、１０：１５：６：１５］によりモニターしたところ、３時間後に完了が判明した。反応混合物を、シリカゲルの短いカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（１００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を８０％ＭｅＯＨ中の５％ＭｅＮＨ２溶液（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）の混合物で溶出した。生成物を含有する画分を合わせて、真空中で蒸発させた。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４ ＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。最初に、カラムを水で洗浄し、次いで生成物を水中の１０％ＮＨ４ＯＨの混合物で溶出して、ＮＢ１５８を得た（１３８ｍｇ、７５％）。
貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５８を、以下のようにしてその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基の形態を水中に溶解し、ｐＨをＨ２ＳＯ４（０．１Ｎ）で６．７に調整し、凍結乾燥して、ＮＢ１５８の硫酸塩を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０，Ｈ−１）、５．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，Ｈ−４）、４．０４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，Ｈ−３）、４．０（ｓ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−６）、３．０９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝５．１，Ｊ２＝１．９Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．５７〜３．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．１９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，Ｈ−６）、２．７９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝９．３，Ｊ３＝４．３Ｈｚ，Ｈ−３）、２．６７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．８，Ｊ２＝９．９，Ｊ３＝４．１Ｈｚ，Ｈ−１）、２．０４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝８．３，Ｊ２＝６．２Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．２４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．３Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−２）、４．０６〜４．０２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．９２〜３．８７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、２．９８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．０，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−５）、２．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．９，Ｊ２＝８．４Ｈｚ，Ｈ−５）；
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１５３．４（Ｃ５’）、１１０．６（Ｃ１”）、１００．５（Ｃ４’，Ｃ１’）、８４．９（Ｃ５）、８４．４５（Ｃ４）、８４．４１（Ｃ４”）、７８．９（Ｃ６）、７６．３（Ｃ２”）、７２．８（Ｃ３”）、６７．８（Ｃ３’）、６２．３（Ｃ６’）、５５．０（Ｃ２’）、５２．５（Ｃ１）、５１．４（Ｃ３）、４５．４（Ｃ５”）、３７．２（Ｃ２）。
グリコシル化生成物（５５）の調製：無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）を、粉末化し火炎乾燥した４Å分子篩（２．０グラム）に添加し、続いてアクセプター５１（２６５ｍｇ、０．５２０ｍｍｏｌ）およびドナー５３（１．１２グラム、２．０６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで−３０℃に冷却した。この温度で、触媒となる量のＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（０．１ｍｌ）を添加し、混合物を−３０℃で撹拌し、ＴＬＣにより反応の進行をモニターしたところ、６０分後に完了が判明した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に供して、化合物５５を６４％収量で得た（２９５ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δＨ＝５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４，Ｈ−１）、５．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝６．７，Ｊ２＝３．８Ｈｚ，Ｈ−３）、５．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，Ｈ−４）、４．５４（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，Ｈ−６，Ｈ−６）、３．９６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝６．８，Ｊ２＝２．５Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝４．９９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，Ｈ−６）、３．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．６，Ｊ２＝１０．１，Ｊ３＝４．６Ｈｚ，Ｈ−１）、３．４１（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．５，Ｊ２＝９．７，Ｊ３＝４．６Ｈｚ，Ｈ−３）、２．２８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．４４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．７Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．５８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、５．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，Ｈ−２）、５．４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．５，Ｊ２＝５．１Ｈｚ，Ｈ−３）、４．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．１，Ｊ２＝６．０Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６７（ｐ，１Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−５）、１．３１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６−ＣＨ３）；スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δＨ＝７．８９（ｄｄｔ，４Ｈ，Ｊ１＝１４．３，Ｊ２＝８．４，Ｊ３＝１．４Ｈｚ，Ａｒ）、７．５７〜７．５０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．４０〜７．３２（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）、２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δＣ＝１７０．３（ＣＨ３−ＣＯ）、１７０．２（ＣＨ３−ＣＯ）、１７０．１（ＣＨ３−ＣＯ）、１６５．５（Ｃ６Ｈ５−ＣＯ）、１６５．０（Ｃ６Ｈ５−ＣＯ）、１４９．３（Ｃ５’）、１３３．７６（Ａｒ）、１３３．７１（Ａｒ）、１２９．７５（Ａｒ）、１２９．６９（Ａｒ）、１２８．８（Ａｒ）、１２８．６６（Ａｒ）、１２８．６１（Ａｒ）、１２８．５（Ａｒ）、１０７．２（Ｃ１”）、９７．８８（Ｃ１’）、９７．８７（Ｃ４’）、８０．７（Ｃ４”）、８１．０（Ｃ４）、７８．２（Ｃ５）、７４．６（Ｃ２”）、７３．７（Ｃ６）、７１．９（Ｃ３’）、６６．９（Ｃ３”）、６２．３（Ｃ６’）、５９．７（Ｃ３）、５９．５（Ｃ２’）、５８．８（Ｃ５”）、５８．４（Ｃ１）、３２．５（Ｃ２）、２１．０８（ＣＨ３）、２１．０１（ＣＨ３）、２０．８（ＣＨ３）、１５．６（６”−ＣＨ３）。
化合物５７の調製：グリコシル化生成物５５（２９５ｍｇ、０．３３１ｍｍｏｌ）を、ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液、１５ｍＬ）の溶液で処理し、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ ８５：１５）により反応の進行をモニターしたところ、１２時間後に完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ ２：８）に供して、対応する完全に保護されていないペルアジド誘導体５７を９９％収量で得た（１８０ｍｇ）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６，Ｈ−１）、５．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，Ｈ−４）、４．４２（ｄｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝８．０，Ｊ２＝２．７，Ｊ３＝１．４，Ｈｚ，Ｈ−３）、４．０７〜３．９９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−６）、３．５５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝７．９，Ｊ２＝３．６Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．７４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４）、３．６６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−５）、３．４７（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ１＝１２．１，Ｊ２＝８．２，Ｊ３＝３．３Ｈｚ，Ｈ−１，Ｈ−３）、３．４２〜３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、２．１７（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．２，Ｊ２＝４．４Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．２８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．３Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，Ｈ−１）、４．２２〜４．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−３）、３．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．２，Ｊ２＝３．２Ｈｚ，Ｈ−４）、３．７２〜３．６６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、１．４０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６−ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１５２．５（Ｃ５’）、１１０．５（Ｃ１”）、１００．３（Ｃ４’）、９８．６（Ｃ１’）、８６．３（Ｃ４”）、８３．４（Ｃ４）、７９．４（Ｃ４）、７７．４（Ｃ６）、７６．２（Ｃ２”）、７２．６（Ｃ３”）、６５．３（Ｃ３’）、６４．０（Ｃ２’）、６２．１（Ｃ６’）、６１．９（Ｃ１）、６１．７（Ｃ３）、６０．６（Ｃ５”）、３３．５（Ｃ２）、１６．０（６”−ＣＨ３）。
ＮＢ１５９の調製：ＴＨＦ（３ｍＬ）およびＮａＯＨ水溶液（１ｍＭ、５ｍＬ）の混合物中に化合物５７（１８０ｍｇ、０．３２４ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、ＰＭｅ３（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、３．５ｍＬ、４０．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応の進行をＴＬＣ［ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＮＨ２（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）、１０：１５：６：１５］によりモニターしたところ、３時間後に完了が判明した。反応混合物を、シリカゲルの短いカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを、以下の溶媒：ＴＨＦ（１００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。次いで生成物を８０％ＭｅＯＨ中の５％ＭｅＮＨ２溶液（ＥｔＯＨ中の３３％溶液）の混合物で溶出した。生成物を含有する画分を合わせて、真空中で蒸発させた。上記の生成物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＣＧ５０（ＮＨ４ ＋型）の短いカラムに通過させることにより、純粋な生成物を得た。最初に、カラムを水で洗浄し、次いで生成物を水中の１０％ＮＨ４ＯＨの混合物で溶出し、ＮＢ１５９を得た（１１０ｍｇ、７６％）。
貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１５９を、以下のようにしてその硫酸塩の形態に変換した：遊離塩基の形態を水中に溶解させ、ｐＨをＨ２ＳＯ４（０．１Ｎ）で６．７に調整し、凍結乾燥して、ＮＢ１５９の硫酸塩を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δＨ＝５．３９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、５．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，Ｈ−４）、４．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−３）、４．０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．７ Ｈ−６，Ｈ−６）、３．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，Ｈ−２）；「環ＩＩ」：δＨ＝３．５４（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ１＝２０．３，Ｊ２＝１０．７Ｈｚ，Ｈ−４，Ｈ−５）、３．１８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，Ｈ−６）、２．７９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１２．８，Ｊ２＝６．９，Ｊ３＝４．０Ｈｚ，Ｈ−３）、２．６７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝９．６，Ｊ２＝５．１，Ｊ３＝３．９Ｈｚ，Ｈ−１）、２．０４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．１，Ｊ２＝４．３Ｈｚ，Ｈ−２ｅｑ）、１．２４（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝Ｊ２＝Ｊ３＝１２．３Ｈｚ，Ｈ−２ａｘ）；「環ＩＩＩ」：δＨ＝５．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、４．１１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１４．７，Ｊ２＝６．２Ｈｚ，Ｈ−２，Ｈ−３）、３．５９〜３．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、２．９８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，Ｈ−５）、１．１９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，６−ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δＣ＝１５３．４（Ｃ５’）、１０９．８（Ｃ１”）、１００．４（Ｃ１’）、１００．３（Ｃ４’）、８８．５（Ｃ４”）、８４．５（Ｃ４）、８４．０（Ｃ５）、７８．８（Ｃ６）、７６．４（Ｃ２”）、７２．９（Ｃ３”）、６７．８（Ｃ３’）、６２．４（Ｃ６’）、５５．０（Ｃ２’）、５２．６（Ｃ１）、５１．４（Ｃ３）、５１．３（Ｃ５”）、３７．２（Ｃ２）、１８．９（６”−ＣＨ３）。
リードスルー活性
予備的な比較のためのインビトロのＰＴＣ抑制活性アッセイを、実質的に本明細書に記載した通りに実行したところ、ＮＢ１５４は、パロマミンよりほぼ３．５倍高いリードスルー活性を有し、程度の差はあるが、ＮＢ８２の活性と類似の活性を有することが明らかとなった。
比較のためのインビトロのＰＴＣ抑制活性アッセイを、実質的に本明細書に記載した通りに実行したところ、ＮＢ１５８およびＮＢ１５９のどちらも、それらに対応する、構造的に関連する化合物ＮＢ３０およびＮＢ１１８と比較して、類似のまたはそれよりわずかに低い活性を示すことがさらに明らかとなった。
しかしながら、ＮＢ１５４、ＮＢ１５８およびＮＢ１５９について測定された原核生物タンパク質の合成阻害およびそれに続く抗菌活性は、以下の表６に示したように、対応するパロマミン、ＮＢ３０、およびＮＢ１１８よりも有意に低く、これは、これらの化合物は極めて低い毒性を示す可能性が高いことを示唆している。
Figure 0006862428
実施例７
本発明の一部の実施形態に係る多重エステル化した例示化合物
細胞透過性を改善する目的で、公知のアミノグリコシドへの追加の化学的修飾を導入した。この修飾は、プロドラッグタイプの化合物を生成するための、アミノグリコシドの２つ以上のヒドロキシ基の多重エステル化を含んでいた。この戦略の合理性は、（ｉ）何らかの疎水性Ｒ−基を化合物に結合させることは、その脂肪親和性を改善すると予想され、したがって細胞の確率および取り込みを増加させること；（ｉｉ）細胞内エステラーゼが、プロドラッグを加水分解して、活性な薬物を再生すると考えられること；および（ｉｉｉ）所望のプロドラッグの薬物動態学的特性が改善される可能性があることであった。
最初に、Ｇ４１８の以下の３つの多重エステル化した誘導体を合成した：ポリ安息香酸誘導体であるＢｚ−Ｇ４１８、ポリイソ酪酸誘導体であるｉＢｕｔ−Ｇ４１８、およびポリ酢酸誘導体であるＡｃ−Ｇ４１８。次いで同じ合成プロトコールを使用して、Ｂｚ−ＮＢ１２４も合成した。以下のスキーム１４は、これらの化合物の化学構造を示す。
Figure 0006862428
多重エステル化したＧ４１８化合物の合成：
最終的な化合物６３、６５および６７（それぞれＢｚ−Ｇ４１８、ｉＢｕｔ−Ｇ４１８およびＡｃ−Ｇ４１８）の合成を市販のＧ４１８から実行した。これをスキーム１５に示す。
Figure 0006862428
試薬および条件：（ａ）Ｂｏｃ２Ｏ、Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ、Ｅｔ３Ｎ、５０℃、５７％（ｂ）ＲＣＯＣｌ、Ｐｙ、４−ＤＭＡＰ、７２％（ｃ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、７２％。
まずＧ４１８を、その遊離のアミン基でのＢｏｃ保護に供し、それによって、後のエステル化誘導体およびＴＦＡを介したＢｏｃ脱保護工程のための中間体として役立つ化合物６１を得た。Ｂｏｃ保護戦略の選択は、エステル官能基を修飾することなくさらなる選択的な脱保護を実行する必要性から生じたものである。得られた最終的な化合物６３、６５および６７は、ＴＦＡ付加塩に変換され、それによりアミンがエステル官能基と反応することを防ぐ。
Ｇ４１８と二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルとの反応により、過Ｂｏｃ化および三Ｂｏｃ化した生成物の混合物を得て、ここから過Ｂｏｃ化生成物６１をカラムクロマトグラフィーにより単離した。化合物６１の単離後、合成を３つの異なる合成経路に分けた（スキーム１５を参照）。塩化ベンゾイル、塩化アセチルおよび塩化イソブチリルでの化合物６１のエステル化反応を別々に実行して、それぞれ化合物６２、６４、および６６を得た。反応混合物を５０℃に加熱して化合物６２を得た。エステル化反応に続いて、ＴＦＡによりＢｏｃ保護基の除去を行い、それによって化合物６３、６５および６７を得た。全ての得られた化合物において、４”ヒドロキシルは遊離のままであったが、これはおそらく３級のヒドロキシルの反応性がより低いためである。
化合物６１の調製：２０ｍＬのＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（１：１）中にＧ４１８（５グラム、１０．０６ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１２０ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加し、続いて二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１３．０９５グラム、６０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃に加熱し、そのまま一晩撹拌した。反応の進行をＴＬＣ［ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、１：９］によりモニターしたところ、２４時間後に完了が判明した。その後、ＭｅＯＨを蒸発させ、残存する水溶液をＥｔＯＡｃで抽出し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で脱水した。残留物のカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１００％ＥｔＯＡｃ）により、化合物１を白色の固体として得た（３．９６グラム、５７％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝５．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，Ｈ−１”）、４．２５〜４．０１（ｍ，４Ｈ）、３．７９（ｄｄ，Ｊ＝９．９，２．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．６３（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．４７（ｍ，６Ｈ）、３．２４〜３．１７（ｍ，１Ｈ） ２．９４（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ３−Ｃ３”）、２．１４〜１．９２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、１．４４（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２，ＣＨ３−Ｃ４”）、１．２４（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ１．４４（ｍ，３６Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝１５９．３０（カルバメート）、１５９．０３（カルバメート）、１５８．６２（カルバメート）、１５８．０５（カルバメート）、１００．０８（Ｃ−１”）、９９．０９（Ｃ−１’）、８２．３３，８１．２７（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、８０．８４（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、８０．２０（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７７．１９（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７５．０２、７４．７１、７３．７０、７３．５２、７３．２６、７１．０８、７０．９３、６８．７０、６６．１４、６１．５３、６０．２０、５９．００、５６．８０、２８．８５（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．８４（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．８４（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．８３（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．８３（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．８２（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．７９（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．７４（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２２．５８、２２．１４。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ４０Ｈ７２Ｎ４Ｏ１８（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ９１９．４８；実測値ｍ／ｅ ９１９．７９。
化合物６２の調製：化合物６１（０．６グラム、０．６６８ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１５ｍＬ）中に溶解した。溶液を氷槽中で撹拌しながら冷却し、塩化ベンゾイル（３ｍＬ、８．０２ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加した。氷槽を除去し、４−ＤＭＡＰ（触媒）を添加し、反応混合物を６０℃に加熱し、一晩そのままにした。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ５：５）によりモニターした。反応の完了がＴＬＣにより判明した後、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、５％ＨＣｌ溶液、ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させ、続いて残留物のカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、４：６）に供することにより、化合物６２を白色の固体として得た（０．６８７グラム、７２％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝５．４９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，Ｈ−１）、４．８９〜４．７７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４）、４．６９〜４．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、４．０１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８，３．３Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．４，３．１Ｈｚ，Ｈ−２）、１．５７〜０．６３（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７）。「環ＩＩ」：δ＝５．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６，３．５Ｈｚ，Ｈ−４）、５．１９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．８，４．８Ｈｚ，Ｈ−５）、４．０８〜３．９６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、３．２４〜２．９８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３）、１．９２〜１．６６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ ｅｑ）、．５７〜０．６３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ ａｘ）「環ＩＩＩ」：δ＝５．４７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９，１．５Ｈｚ，Ｈ−２）、５．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１）、４．４３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６，１．７Ｈｚ，Ｈ−３）、δ３．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，Ｈ−５）、２．８９（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ３−Ｃ３”）、２．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，Ｈ−５）、１．５７〜０．６３（ｍ，３Ｈ，ＣＨ３−Ｃ４”）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝８．１３〜７．２０（ｍ，２５Ｈ，Ｐｈ）、１．５７〜０．６３（ｍ，３６Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１６５．８３（Ｃ＝Ｏ）、１６５．７５（Ｃ＝Ｏ）、１６５．３４（Ｃ＝Ｏ）、１６５．１２（Ｃ＝Ｏ）、１６５．０７（Ｃ＝Ｏ）、１５５．００（カルバメート）、１５４．８４（カルバメート）、１５４．７３（カルバメート）、１５４．６７（カルバメート）、１３３．７６（Ｐｈ）、１３３．６６（Ｐｈ）、１３３．５８（Ｐｈ）、１３３．４１（Ｐｈ）、１３３．３８（Ｐｈ）、１３３．２２（Ｐｈ）、１３３．１２（Ｐｈ）、１３２．９５（Ｐｈ）、１３２．９０（Ｐｈ）、１３０．１５（Ｐｈ）、１３０．０３（Ｐｈ）、１２９．９９（Ｐｈ）、１２９．９６（Ｐｈ）、１２９．９０（Ｐｈ）、１２９．７７（Ｐｈ）、１２９．４１（Ｐｈ）、１２９．３０（Ｐｈ）、１２８．７９（Ｐｈ）、１２８．７５（Ｐｈ）、１２８．６７（Ｐｈ）、１２８．６１（Ｐｈ）、１２８．５４（Ｐｈ）、１２８．３２（Ｐｈ）、１２８．２３（Ｐｈ）、１２８．０３（Ｐｈ）、９８．１２（Ｃ−１”）、９６．８４（Ｃ−１’）、８０．１８（Ｃ−５）、７９．８８（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．７６（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．５２（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．４４ ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．４３（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．３６（Ｃ−６’）、７８．５４（Ｃ−５’） ７５．８４（Ｃ−６）、７３．０３（Ｃ−４）、７２．３９（Ｃ−２”）、７０．７５（Ｃ−４’）、７０．０４（Ｃ−３’）、６９．０５（Ｃ−４） ６９．２０（Ｃ−５”）、５５．６７（ｓ）、５４．８０（Ｃ−３”）、５３．３７（ｓ）、５２．８９（Ｃ−３）、５２．５０（Ｃ−１）、４９．１５（Ｃ−２’）、４９．１３（ｓ）、４９．０２（ｓ）、４１．２６（ＮＣＨ３−Ｃ３”）、３１．５４（ｓ）、３０．３２（ｓ）、２９．６２（ｓ）、２８．４４（Ｂｏｃ）、２８．２１（Ｂｏｃ）、２８．２０（Ｂｏｃ）、２８．１８（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．１５（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．０９（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．０２（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２７．８９（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２７．８８（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２７．８６（Ｃ−６’−ＣＨ３）、２２．２９、２０．８４（Ｃ−４”−ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ７５Ｈ９２Ｎ４Ｏ２３（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ １４４０．５５；実測値ｍ／ｅ １４４０．４１。
Ｇ４１８−Ｂｚ（６３）の調製：化合物６２（０．６８７グラム、０．５２３ｍｍｏｌ）を新たに蒸留したＤＣＭ（７ｍＬ）中に溶解し、氷槽で冷却し、ＴＦＡ（２ｍｌ）を一滴ずつ添加した。反応混合物をそのまま室温にした。反応の進行をＴＬＣ（Ｅｔ３Ｎ／ＭｅＯＨ １：９）によりモニターしたところ、４時間後に反応の完了が判明した。反応混合物をその後乾燥するまで蒸発させて、Ｇ４１８−Ｂｚを得た。貯蔵および生物学的試験のために、Ｇ４１８−Ｂｚを水およびメタノール中に溶解し、凍結乾燥して、Ｇ４１８−ＢｚのＴＦＡ塩を得た（０．５１１グラム、７２％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝５．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６，４．８Ｈｚ，Ｈ−３）、５．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７，６．０Ｈｚ，Ｈ−４）、５．４７（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、５．４０〜５．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、４．４７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９，４．６Ｈｚ，Ｈ−５）、３．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７，１．６Ｈｚ，Ｈ−２）、１．３５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ−７）。「環ＩＩ」：δ＝５．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−５）、４．５５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−４）、４．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、δ３．８６〜３．６７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−１） ２．５５（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５，４．２Ｈｚ，Ｈ−２ ｅｑ）、２．１２（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，Ｈ−２ ａｘ）。「環ＩＩＩ」：δ＝５．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２，３．３Ｈｚ，Ｈ−２）、５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，Ｈ−１）、３．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，Ｈ−３）、δ３．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，Ｈ−５）、３．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，Ｈ−５）、δ２．８９（ｓ，１Ｈ）、２．８９（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ３−Ｃ３”）、１．２６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−Ｃ４”）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝８．１６（ｄ，２Ｈ Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｐｈ）、８．０３（ｄｄ，５Ｈ，Ｊ＝１６．４，７．５Ｈｚ，Ｐｈ）、７．９３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｐｈ）、７．７０（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝１３．９，７．５Ｈｚ，Ｐｈ）、７．５７（ｄｔ，６Ｈ，Ｊ＝１２．２，５．８Ｈｚ，Ｐｈ）、７．４７〜７．２５（ｍ，１０Ｈ，Ｐｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝１６７．１７（Ｃ＝Ｏ）、１６６．８９（Ｃ＝Ｏ）、１６６．８４（Ｃ＝Ｏ）、１６６．４２（Ｃ＝Ｏ）、１６６．４１（Ｃ＝Ｏ）、１６３．６１（ＴＦＡ）、１６３．３３（ＴＦＡ）、１６３．０６（ＴＦＡ）、１６２．７８（ＴＦＡ）、１３５．２１（Ｐｈ）、１３４．９３（Ｐｈ）、１３４．８９（Ｐｈ）、１３４．７８（Ｐｈ）、１３４．５６（Ｐｈ）、１３４．２２（Ｐｈ）、１３４．０３（Ｐｈ）、１３１．００（Ｐｈ）、１３０．９８（Ｐｈ）、１３０．９５（Ｐｈ）、１３０．８５（Ｐｈ）、１３０．７６（Ｐｈ）、１３０．７１（Ｐｈ）、１３０．５９（Ｐｈ）、１３０．４７（Ｐｈ）、１３０．３３（Ｐｈ）、１３０．２２（Ｐｈ）、１２９．９５（Ｐｈ）、１２９．７６（Ｐｈ）、１２９．６７（Ｐｈ）、１２９．６３（Ｐｈ）、１２９．５８（Ｐｈ）、１２９．５１（Ｐｈ）、１２９．４６（Ｐｈ）、１０４．３９（Ｃ−１”）、９９．８４（Ｃ−１’）、８３．４０（Ｃ−５）、７６．０５（Ｃ−５’）、７１．７３（Ｃ−２”）、７１．６４（Ｃ−３’） ７０．７７（Ｃ−５）、７０．４４（Ｃ−６）、６９．０５（Ｃ−４） ６８．５０（Ｃ−４’）、６３．５１（Ｃ−５”）、５２．４６（Ｃ−３） ５０．１８（Ｃ−３”）、５０．１０（Ｃ−２’）、４９．６２（Ｃ−１） ３６．０５（ＮＣＨ３−Ｃ３”）、２９．１５（Ｃ−２）、２２．２７（Ｃ−６’−ＣＨ３）、１６．９４（Ｃ−４”−ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ５５Ｈ６０Ｎ４Ｏ１５（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値ｍ／ｅ １０１７．０８；実測値ｍ／ｅ １０１８．１８。
化合物６４の調製：化合物６１（０．５グラム、０．５５７ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１５ｍＬ）中に溶解した。溶液を氷槽中で撹拌しながら冷却し、塩化イソブチリル（０．７ｍｌ、６．６８４ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加した。氷槽を除去し、４−ＤＭＡＰ（触媒）を添加し、反応混合物を６０℃に加熱し、一晩そのままにした。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ４：６）によりモニターした。反応の完了がＴＬＣにより判明した後、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、５％ＨＣｌ溶液、ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させた。残留物のカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３：７）により、化合物６４を白色の固体として得た（０．４９０、７５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝５．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．８，３．５Ｈｚ，Ｈ−３）、５．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，Ｈ−１）、５．００〜４．９６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−４）、４．５９〜４．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，Ｈ−２）、１．４５〜１．０１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７）。「環ＩＩ」：δ＝４．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．７，８．３Ｈｚ，Ｈ−５）、４．８１〜４．７３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、４．２４〜４．１８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、４．００〜３．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３）、１．４５〜１．０１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２ ｅｑ，Ｈ−２ ａｘ）。「環ＩＩＩ」：δ＝４．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，Ｈ−１）、４．８９〜４．８５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、３．５５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．４，１．４Ｈｚ，Ｈ−３）、３．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０，２．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．３２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．６，１．６Ｈｚ，Ｈ−５）、２．９６（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ３−Ｃ３”）、１．４５〜１．０１（ｍ，３Ｈ，ＣＨ３−Ｃ４”）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝６．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，ＲＮＨＣＯＯＲ）、５．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，ＲＮＨＣＯＯＲ）、５．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，ＲＮＨＣＯＯＲ）、５．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，ＲＮＨＣＯＯＲ）、１．４５〜１．０１（ｍ，７１Ｈ，Ｂｏｃ，ｉ−Ｂｕｔ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１７５．９０（Ｃ＝Ｏ）、１７５．５０（Ｃ＝Ｏ）、１７５．４５（Ｃ＝Ｏ）、１７５．３９（Ｃ＝Ｏ）、１７４．７３（Ｃ＝Ｏ）、１５７．４９（カルバメート）、１５６．５４（カルバメート）、１５６．１６（カルバメート）、１５５．７９（カルバメート）、９９．４１（Ｃ−１”）、９９．０１（Ｃ−１’）、８３．０９（ｓ）、８２．２９（ｓ）、８１．７３（Ｃ−６）、７９．９３（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．７９（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．７６（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．６４（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．４５（Ｃ−４）、７７．４０（ｓ）、７５．６９（ｓ）、７４．７４（Ｃ−５）、７４．４２（ｓ）、７３．５０（ｓ）、７１．２０（Ｃ−６’）、７１．１０（ｓ）、７０．５９（Ｃ−３”）、７０．５１（ｓ）、７０．１０（Ｃ−５”）、６９．７３（ｓ）、６９．０５（Ｃ−４）、６８．９８（ｓ）、６８．９１（Ｃ−２”）、６８．３７（Ｃ−４’）、６７．４７（ｓ）、６７．２５（Ｃ−３’）、６５．３８（Ｃ−２’）、５５．７２（ｓ）、５４．５２（Ｃ−５’）、５２．６０（ｓ）、５２．５３（ｄ，Ｊ＝１７．３Ｈｚ）、５０．８３（Ｃ−３）、４９．２３（Ｃ−１）、４１．２０（Ｎ−ＣＨ３）、３４．１７（ｉ−Ｂｕｔ）、３４．１０（ｉ−Ｂｕｔ）、３４．０４（ｉ−Ｂｕｔ）、３３．９８（ｉ−Ｂｕｔ）、３３．７４（ｉ−Ｂｕｔ）、２９．９１（ｓ）、２９．６１（Ｃ−２）、２８．４０（ｉ−Ｂｕｔ）、２８．３６（ｉ−Ｂｕｔ）、２８．３４（ｉ−Ｂｕｔ）、２８．３０（ｉ−Ｂｕｔ）、２８．２６（ｉ−Ｂｕｔ）、２８．１８（ｉ−Ｂｕｔ）、２２．９０（ｓ）、１８．８３（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、１８．７３（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、１８．７２（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、１８．６１（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、１８．５８（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、１８．４９（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、１８．３４（Ｃ−６’−ＣＨ３）、１７．９１（Ｃ−４”−ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ６０Ｈ１０２Ｎ４Ｏ２３（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ １２７０．４６；実測値ｍ／ｅ １２７０．４２。
Ｇ４１８−ｉ−Ｂｕｔ（６５）の調製：化合物６４（０．４９０グラム、０．４２ｍｍｏｌ）を新たに蒸留したＤＣＭ（１０ｍＬ）中に溶解し、氷槽で冷却し、ＴＦＡ（２ｍＬ）を一滴ずつ添加し、反応混合物をそのまま室温にした。反応の進行をＴＬＣ（Ｅｔ３Ｎ／ＭｅＯＨ １：９）によりモニターしたところ、４時間後に反応の完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させて、Ｇ４１８−ｉ−Ｂｕｔを得た。貯蔵および生物学的試験のために、Ｇ４１８−ｉ−Ｂｕｔを水およびメタノール中に溶解し、凍結乾燥して、Ｇ４１８−ｉ−ＢｕｔのＴＦＡ塩を得た（０．４０８グラム、７８％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，６．２Ｈｚ，Ｈ−３）、５．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５．２３〜５．１６（ｍ，Ｈ，Ｈ−６）、５．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６，６．１Ｈｚ，Ｈ−４）、４．０９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０，５．３Ｈｚ，Ｈ−５）、３．６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．６，２．０Ｈｚ，Ｈ−２）、１．３１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−７）。「環ＩＩ」：δ＝５．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．３，７．３Ｈｚ，Ｈ−５）、４．２１〜４．１４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−６）、３．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１．Ｈ−３）、２．６１〜２．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２，ｅｑ）、２．１７（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．６９，１Ｈ，Ｈ−２，ａｘ）。「環ＩＩＩ」：δ＝５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，２．７Ｈｚ，Ｈ−２）、３．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，Ｈ−３）、３．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，Ｈ−５）、３．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，Ｈ−５）、２．８８（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ３−Ｃ３”）、１．３８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−Ｃ４”）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝１．２１（ｍ，３５Ｈ，ｉ−Ｂｕｔ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝１７７．３５（Ｃ＝Ｏ）、１７７．３（Ｃ＝Ｏ １７７．１９（Ｃ＝Ｏ）、１７６．８３（Ｃ＝Ｏ）、１７６．６７（Ｃ＝Ｏ）、１６３．２２（ＴＦＡ）、１６２．９４（ＴＦＡ）、１６２．６６（ＴＦＡ）、１６２．３８（ＴＦＡ）、１２１．４４（ＴＦＡ）、１１９．１２（ＴＦＡ）、１１６．８０（ＴＦＡ）、１１４．４７（ＴＦＡ）、９７．７７（Ｃ−１”）、９２．８１（Ｃ−１’）、８１．８１（Ｃ−６）、７７．４８（Ｃ−４）、７６．６１（Ｃ−５’）、７４．５９（Ｃ−５）、７０．０３（Ｃ−３’）、６９．７１（Ｃ−６’）、６９．２４（Ｃ−５”）、６９．０５（Ｃ−４）、６８．２７（Ｃ−２”）、６７．２６（Ｃ−４’）、６３．６２（Ｃ−３”）、５１．６６（Ｃ−２’）、５０．２９（Ｃ−３）、４９．８６（Ｃ−１）、３５．５６（ＮＣＨ３−Ｃ３”）、３５．２２（ｉ−Ｂｕｔ）、３５．１８（ｉ−Ｂｕｔ）、３４．９３（ｉ−Ｂｕｔ）、３４．８７（ｉ−Ｂｕｔ）、３４．８０（ｉ−Ｂｕｔ）、２８．６１（Ｃ−２）、２７．７１（ｓ）、２３．１９（ｓ）、１９．２７（ｉ−Ｂｕｔ）、１９．２４（ｉ−Ｂｕｔ）、１９．１８（ｉ−Ｂｕｔ）、１９．１６（ｉ−Ｂｕｔ）、１９．１０（ｉ−Ｂｕｔ）、１８．９８（ｉ−Ｂｕｔ）、１８．７２（ｉ−Ｂｕｔ）、１８．６７（Ｃ−６’−ＣＨ３）、１６．２０（Ｃ−４”−ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ３６Ｈ６３Ｎ４Ｏ１３（［Ｍ＋Ｈ２Ｏ］＋）の計算値ｍ／ｅ ７７７．９；実測値ｍ／ｅ ７７７．５４。
化合物６６の調製：化合物６１（０．３グラム、０．３３４ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（８ｍＬ）中に溶解した。溶液を氷槽中で撹拌しながら冷却し、塩化アセチル（０．３ｍｌ、４．００８ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加した。氷槽を除去し、４−ＤＭＡＰ（触媒）を添加し、反応液を６０℃に加熱し、一晩そのままにした。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ６．５：４．５）によりモニターした。反応の完了がＴＬＣにより判明した後、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、５％ＨＣｌ溶液、ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させた。残留物のカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、５：５）により、化合物６６を白色の固体として得た（０．２５グラム、６８％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝５．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，Ｈ−１）、５．２０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４，１．３Ｈｚ，Ｈ−３）、４．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．４，３．５Ｈｚ，Ｈ−４）、４．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．８，１．３Ｈｚ，Ｈ−４）、４．１４〜４．０９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．４，１．０Ｈｚ，Ｈ−２）、１．４６〜１．２０（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７）。「環ＩＩ」：δ＝３．９５〜３．６８（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，Ｈ−６）、３．６５〜３．２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３）、２．７３〜２．４９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、２．４６〜２．２６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）。「環ＩＩＩ」：δ＝５．２０〜５．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−２）、４．１８〜４．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３）、３．８０〜３．７３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、３．５７〜３．５１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、２．９４（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ３−Ｃ３”）、１．４６〜１．２０（ｍ，３Ｈ，ＣＨ３−Ｃ４”）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝６．７４（ｓ，１Ｈ，ＲＮＨＣＯＯＲ）、５．９０（ｓ，１Ｈ，ＲＮＨＣＯＯＲ）、５．８８（ｓ，１Ｈ，ＲＮＨＣＯＯＲ）、５．５２（ｓ，２Ｈ，ＲＮＨＣＯＯＲ）、２．１３〜１．９２（ｍ，１２Ｈ，Ａｃ）、１．４７〜１．２１（ｍ，３６Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１７０．７６（Ｃ＝Ｏ）、１７０．５９（Ｃ＝Ｏ）、１６９．７０（Ｃ＝Ｏ）、１６９．３１（Ｃ＝Ｏ）、１５７．６５（カルバメート）、１５６．９８（カルバメート）、１５６．４２（カルバメート）、１５５．６３（カルバメート）、９９．４８（Ｃ−１”）、９８．３９（Ｃ−１’）、８５．８８（Ｃ−６）、８２．５０（Ｃ−４）、８０．０４（ｓ）、７９．９５（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．８０（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．６４（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．３８（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．２９（ｓ）、７５．６６（Ｃ−５）、７４．３２（ｓ）、７１．８９（Ｃ−３’）、７０．５８（Ｃ−２’）、７０．３５（Ｃ−５’）、７０．３２（Ｃ−２”）、７０．２９（Ｃ−３”）、６９．０５（Ｃ−４）、６８．７０（Ｃ−６’）、６０．３５（Ｃ−５”）、５４．３７（Ｃ−４’）、５０．２８（Ｃ−３）、５０．０８（Ｃ−１）、４１．１９（Ｎ−ＣＨ３）、３０．５０（Ｃ−２）、２８．３８（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．３４（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．２９（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．２７（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．２１（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．１４（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２２．９３（ｓ）、２１．７０（Ｃ−４”−ＣＨ３）、２０．８２（Ａｃ）、２０．７２（Ａｃ）、２０．７０（Ａｃ）、２０．６３（Ａｃ）、１４．１３（Ｃ−６’−ＣＨ３）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ４８Ｈ８０Ｎ４Ｏ２２（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ １０８８．１６；実測値ｍ／ｅ １０８８．２７。
Ｇ４１８−Ａｃ（６７）の調製：化合物６６（０．２５グラム、０．２３ｍｍｏｌ）を新たに蒸留したＤＣＭ（５ｍＬ）中に溶解し、氷槽で冷却し、ＴＦＡ（１ｍＬ）を一滴ずつ添加した。反応混合物をそのまま室温にした。反応の進行をＴＬＣ（Ｅｔ３Ｎ／ＭｅＯＨ １：９）によりモニターしたところ、４時間後に反応の完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させて、Ｇ４１８−Ａｃを得た。貯蔵および生物学的試験のために、Ｇ４１８−Ａｃを水およびメタノール中に溶解し、凍結乾燥して、Ｇ４１８−ＡｃのＴＦＡ塩を得た（０．１９グラム、７３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝５．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，Ｈ−１）、５．０８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５，９．３Ｈｚ，Ｈ−３）、４．６７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０，８．８Ｈｚ，Ｈ−４）、４．６２〜４．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、４．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０，１．５Ｈｚ，Ｈ−５）、３．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．９，３．７Ｈｚ，Ｈ−２）、０．８９（ｄ，３Ｈ Ｊ＝６．１Ｈｚ，Ｈ−７’）。）。「環ＩＩ」：δ＝３．８２〜３．７７（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，Ｈ−６）、３．５６〜３．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３）、２．５２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０，４．０Ｈｚ，Ｈ−２）、２．００〜１．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）。「環ＩＩＩ」：δ＝５．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，Ｈ−１）、５．１４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２，３．１Ｈｚ，Ｈ−２）、３．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，Ｈ−３）、３．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−５）、３．５６〜３．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５２．７６）、（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ３−Ｃ３”）、１．２６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−Ｃ４”）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝２．０８（ｓ，３Ｈ，アセテート）、２．００（ｓ，３Ｈ，アセテート）、１．９７（ｓ，３Ｈ，アセテート）、１．９７（ｓ，３Ｈ，アセテート）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝１７１．６５（カルボニル）、１７１．４３（カルボニル）、１７１．０９（カルボニル）、１６２．９３（ＴＦＡ）、１６２．６４（ＴＦＡ）、１６２．３６（ＴＦＡ）、１６２．０５（ＴＦＡ）、１２１．３３（ＴＦＡ）、１１９．００（ＴＦＡ）、１１６．６８（ＴＦＡ）、１１４．３６（ＴＦＡ）、９９．３５（Ｃ−１’）、９７．９９（Ｃ−１”）、８４．０２（Ｃ−６）、８３．４３（Ｃ−４）、７５．１５（Ｃ−５）、７３．１７（Ｃ−５’）、７０．８５（Ｃ−６’）、７０．６２（Ｃ−２”）、７０．１６（Ｃ−３’）、６９．５７（Ｃ−４’）、６９．０９（Ｃ−５”）、６９．０５（Ｃ−４）、６２．７４（Ｃ−３”）、５３．４４（Ｃ−２’）、４９．８７（Ｃ−３）、４９．７３（Ｃ−１）、３５．８１（Ｎ−ＣＨ３）、２９．１９（Ｃ−２）、２２．０５（Ｃ−４”−ＣＨ３）、２１．０４（アセテート）、２０．９６（アセテート）、２０．６９（アセテート）、２０．５０（アセテート）、１３．８１（Ｃ−７’）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ２８Ｈ４８Ｎ４Ｏ１４（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ６６４．３２；実測値ｍ／ｅ ６６４．３２。
Ｂｚ−ＮＢ１２４の合成：
ベンジルエステルを特徴とし、本明細書ではＮＢ１２４−ＢｚエステルまたはＢｚ−ＮＢ１２４とも称される、ＮＢ１２４の例示的な多重エステル化した形態を、以下のスキーム１６に示したように調製した。
Figure 0006862428
出発原料ＮＢ１２４を公知の記載に基づき合成した［Kandasamy et al., J. Med. Chem. 2012］。その遊離アミン形態としてのＮＢ１２４を、Ｂｏｃ保護で全てのアミンを保護することによりさらに修飾して、化合物７１を得た。次に、２級のヒドロキシルを、塩化ベンゾイルでの処理によって対応する安息香酸エステルに変換して、化合物７２を得た。最終的に、ＴＦＡでの処理によってＢｏｃ脱保護を実行し、それにより所望の化合物ＮＢ１２４−ＢｚをＴＦＡ塩として得た。
化合物７１の調製：
１０ｍＬのＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（１：１）中にＮＢ１２４（０．５グラム、１．０３６ｍｍｏｌ）を撹拌した溶液に、Ｅｔ３Ｎ（８．２８９ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加し、続いて二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４グラム、１８．６４８ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を５０℃に加熱した。反応の進行をＴＬＣ［ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、１：９］によりモニターしたところ、２４時間後に完了が判明した。その後、ＭｅＯＨを蒸発させ、残存する水溶液をＥｔＯＡｃで抽出し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で脱水した。残留物のカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１００％ＥｔＯＡｃ）により、化合物７１を白色の固体として得た（０．５８０グラム、６０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝５．５２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．１６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１”）、４．１２（ｍ，３Ｈ）、３．８９（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．７８（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）、３．６８〜３．４８（ｍ，６Ｈ）、３．４３（ｄｄ，Ｊ＝１５．６，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．３３〜３．２４（ｍ，１Ｈ）、１．９６（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ）、１．５１〜１．４７（ｍ，４０Ｈ，Ｂｏｃ） １．２７（ｄｄ，６Ｈ，Ｊ＝１０．２，４．０Ｈｚ，Ｃ６’−ＣＨ３，Ｃ５”−ＣＨ３）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝１５７．２７（カルバメート）、１５７．０３（カルバメート）、１５６．８５（カルバメート）、１５６．７８（カルバメート）、１０９．９９（Ｃ−１”）、９６．６１（Ｃ−１’）、８６．２３、８４．３５、８２．３２、７９．３８、７８．７８、７７．１７、７４．０９、７３．６６、７２．８３、７２．３０、７０．４９、７０．１１、６９．２８、６６．９１、６２．８６、６０．０９、５５．２０、５５．１２、５１．０３、４９．６４、３４．４７、２９．４６、２９．３１、２７．４６（カルバメート）、２７．４４（カルバメート）、２７．３３（カルバメート）、２６．０９、２６．０７、１５．６５、１３．０４。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ３９Ｈ７０Ｎ４Ｏ１８（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ ９０５．９９；実測値ｍ／ｅ ９０５．６１。
化合物７２の調製：
化合物７１（０．１９５グラム、０．１２９ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（８ｍＬ）中に溶解した。溶液を氷槽中で撹拌しながら冷却し、塩化ベンゾイル（０．２ｍｌ、１．５５２ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加した。氷槽を除去し、４−ＤＭＡＰ（触媒）を添加し、反応液を５０℃に加熱し、一晩そのままにした。反応の進行をＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）によりモニターした。反応の完了がＴＬＣにより判明した後、得られた反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、５％ＨＣｌ溶液、ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で脱水し、蒸発させた。残留物のカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：１）により、化合物７０を白色の固体として得た（０．２６９グラム、８０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：「環Ｉ」：δ＝５．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，Ｈ−１）、５．５５（ｄｄ，１Ｈ Ｊ＝１０．５，９．０Ｈｚ，Ｈ−３）、５．４９（ｄｄ，１Ｈ Ｊ＝５．６，４．３Ｈｚ，Ｈ−４）、５．２６〜５．２１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、４．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．４，２．１Ｈｚ，Ｈ−５）、４．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３，１．１Ｈｚ，Ｈ−２）、１．５５（ｄ，３Ｈ Ｊ＝６．５Ｈｚ，Ｈ−７）。「環ＩＩ」：δ＝５．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６，２．０Ｈｚ，Ｈ−４）、５．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５，１．４Ｈｚ，Ｈ−５）、４．１３〜４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、３．９３〜３．８４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３）、１．５５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９，１．１Ｈｚ，Ｈ−２ ｅｑ）、１．２４〜１．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２ ａｘ）。「環ＩＩＩ」：δ＝５．３９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，Ｈ−１）、５．２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．８，６．１Ｈｚ，Ｈ−３）、５．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５，４．６Ｈｚ，Ｈ−２）、３．７６〜３．６４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、１．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，Ｈ−５）、１．２２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−６）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝８．１４〜７．１３（ｍ，３０Ｈ，Ｐｈ）、１．５１（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．３９（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．２５（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）、１．１２（ｓ，９Ｈ，Ｂｏｃ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１６６．３９（Ｃ＝Ｏ）、１６５．９４（Ｃ＝Ｏ）、１６５．４９（Ｃ＝Ｏ）、１６５．３６（Ｃ＝Ｏ）、１６４．９４（Ｃ＝Ｏ）、１６４．４１（Ｃ＝Ｏ）、１５５．５９（カルバメート）、１５５．２８（カルバメート）、１５５．０５（カルバメート）、１５４．７８（カルバメート）、１３３．４４（Ｐｈ）、１３３．３６（Ｐｈ）、１３３．２３（Ｐｈ）、１３３．０５（Ｐｈ）、１３２．９５（Ｐｈ）、１３０．３８（Ｐｈ）、１３０．２４（Ｐｈ）、１２９．９６（Ｐｈ）、１２９．８８（Ｐｈ）、１２９．８２（Ｐｈ）、１２９．５５（Ｐｈ）、１２９．３１（Ｐｈ）、１２９．１１（Ｐｈ）、１２８．９６（Ｐｈ）、１２８．８７（Ｐｈ）、１２８．７８（Ｐｈ）、１２８．２９（Ｐｈ）、１２８．２２（Ｐｈ）、１２８．１３（Ｐｈ）、１０７．４４（Ｃ−１”）、９７．３０（Ｃ−１’）、８２．９３（Ｃ−６）、８１．６７、８０．０３（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．５６（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．４０（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７９．１９（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、７８．３２（Ｃ−３）、７５．７７（Ｃ−４）、７５．６８（Ｃ−３”） ７５．１５（Ｃ−５）、７２．４８（Ｃ−４’）、７０．０２（Ｃ−２”）、７０．６９（Ｃ−６’）、７０．０７（Ｃ−５’）、６９．９４（Ｃ−３’）、６０．３３（Ｃ−４”）、５３．２６（Ｃ−２’）、５０．２（Ｃ−５”） ４９．６８（Ｃ−３）、４７．６４（Ｃ−１）、３４．８２（Ｃ−２）、２８．４７（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２８．４２（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２７．９５（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２７．８０（ＲＯＣ（ＣＨ３）３）、２０．９７（Ｃ−７’）、１７．７３（Ｃ−６”）、１４．１８（Ｃ−６”）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ８１Ｈ９４Ｎ４Ｏ２４（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ １５３０．８１；実測値ｍ／ｅ １５３０．８１。
ＮＢ１２４−Ｂｚの調製：化合物７２（０．１８９グラム、０．１２５ｍｍｏｌ）を新たに蒸留したＤＣＭ（５ｍＬ）中に溶解し、氷槽で冷却し、ＴＦＡ（１ｍＬ）を一滴ずつ添加した。反応混合物をそのまま室温にした。反応の進行をＴＬＣ（Ｅｔ３Ｎ／ＭｅＯＨ １：９９）によりモニターしたところ、４時間後に反応の完了が判明した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、ＮＢ１２４−Ｂｚを得た。貯蔵および生物学的試験のために、ＮＢ１２４−Ｂｚを水およびメタノール中に溶解し、凍結乾燥して、ＮＢ１２４−ＢｚのＴＦＡ塩を得た（０．１９１グラム、９７％）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：「環Ｉ」：δ＝６．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，Ｈ−１）、６．１０（ｄｄ，１Ｈ Ｊ＝１０．６，９．９Ｈｚ，Ｈ−３）、５．７６（ｄｄ，１Ｈ Ｊ＝１０．１，９．２Ｈｚ，Ｈ−４）、５．５３〜５．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６）、４．５３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８，３．９Ｈｚ，Ｈ−５）、４．０９（ｄ，１Ｈ Ｊ＝１３．５Ｈｚ，Ｈ−２）、１．４６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，Ｈ−７）。「環ＩＩ」：δ＝５．５１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０，８．６Ｈｚ，Ｈ−４）、４．８５〜４．８１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、４．４７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．１，８．２Ｈｚ，Ｈ−６）、３．８８〜３．７７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−３）、２．６８〜２．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）、２．１９〜２．０９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）。「環ＩＩＩ」：δ＝５．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１）、５．５０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８，４．３Ｈｚ，Ｈ−３）、５．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５，０．４Ｈｚ，Ｈ−２）、４．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０，８．６Ｈｚ，Ｈ−４）、３．５２〜３．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）、０．９６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−６）。スペクトル中の追加のピークを以下のように同定した：δ＝８．０３〜７．８１（ｍ，Ｐｈ）、７．６５〜７．２４（ｍ，Ｐｈ）、７．０１（ｍ，Ｐｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ＝１６７．３１（Ｃ＝Ｏ）、１６７．１３（Ｃ＝Ｏ）、１６６．９２（Ｃ＝Ｏ）、１６６．７６（Ｃ＝Ｏ）、１６５．６７（Ｃ＝Ｏ）、１６５．１４（Ｃ＝Ｏ）、１６３．２７（ＴＦＡ）、１６２．９９（ＴＦＡ）、１６２．７０（ＴＦＡ）、１６２．４３（ＴＦＡ）、１３５．０４（Ｐｈ）、１３４．９１（Ｐｈ）、１３４．９０（Ｐｈ）、１３４．８７（Ｐｈ）、１３４．８４（Ｐｈ）、１３４．５７（Ｐｈ）、１３４．０３（Ｐｈ）、１３０．９７（Ｐｈ）、１３０．８２（Ｐｈ）、１３０．７０（Ｐｈ）、１３０．５１（Ｐｈ）、１２９．９５（Ｐｈ）、１２９．８６（Ｐｈ）、１２９．６９（Ｐｈ）、１２９．６７（Ｐｈ）、１２９．６０（Ｐｈ）、１２９．５８（Ｐｈ）、１２９．５０（Ｐｈ）、１２９．４５（Ｐｈ）、１２９．３４（Ｐｈ）、１２９．２４（Ｐｈ）、１２９．０２（Ｐｈ）、１２１．２９（ＴＦＡ）、１１８．９８（ＴＦＡ）、１１６．６６（ＴＦＡ）、１１４．３５（ＴＦＡ）、１０７．２３（Ｃ−１”）、９２．７０（Ｃ−１’）、８１．０８（Ｃ−５）、８０．７８（Ｃ−２’）、７６．９３（Ｃ−６）、７６．７６（Ｃ−２”）、７５．２８（Ｃ−４）、７２．９５（Ｃ−３”）、７２．４８（Ｃ−５’）、７１．８２（Ｃ−３’）、７１．４８（Ｃ−６’）、７０．９２（Ｃ−４’）、５３．８５（Ｃ−４”）、５２．３４（Ｃ−５”）、５０．２６（Ｃ−３）、５０．０４（Ｃ−１）、２９．２８（Ｃ−２）、１６．６１（Ｃ−７’）、１４．１９（Ｃ−６”）。
ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ：Ｃ６１Ｈ６２Ｎ４Ｏ１６（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の計算値ｍ／ｅ １１２９．４２；実測値ｍ／ｅ １１２９．４２。
本発明をその特定の実施形態とともに記載したが、多数の代替法、改変および変法も当業者に明らかとなる。したがって、添付の特許請求の範囲の趣旨および広い範囲内に入るすべてのこのような代替法、改変および変法も包含するものとする。
本明細書で述べた全ての刊行物、特許、および特許出願は、当該刊行物、特許、または特許出願について具体的かつ個別に記載した場合と同様に、参照によりそれらが完全に本明細書に組み込まれるものとする。さらに、本願におけるいかなる参考文献の引用または記載も、そのような参考文献が本願に対する従来技術として存在することの自認と解釈すべきではない。セクションの見出しの使用についても、それらを必ずしも限定として解釈すべきではない。
配列番号１： １本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、１８位のｎはｃまたはｔ
配列番号２： １本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、２１位のｎはａまたはｇ
配列番号３： １本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、２３位のｎはｃまたはｔ
配列番号４： １本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、２２位のｎはａまたはｇ
配列番号５： １本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、１９位のｎはｔまたはｇ
配列番号６： １本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、１６位のｎはａまたはｇ
配列番号７： １本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、１９位のｎはｃまたはｔ
配列番号８： １本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、１６位のｎはａまたはｇ

Claims (29)

  1. 下記式Ｉにより表される化合物またはその薬学的に許容される塩。
    Figure 0006862428
     （式中：
    点線は、任意選択で、６’位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
    Ｘ１は、Ｏであり；
    環Ｉ中のＣ４’とＣ５’との間の破線の結合は、単結合または二重結合を表し；
    環Ｉ中のＣ４’とＣ３’との間の破線の結合は、単結合または二重結合を表し；
    Ｒｘ、Ｒｙ１およびＲｚは、水素であるか、または存在せず、Ｃ４’とＣ５’との間の破線の結合が二重結合である場合、少なくともＲｚは存在せず、Ｃ４’とＣ３’との間の破線の結合が二重結合である場合、少なくともＲｙ１は存在せず；
    Ｒｙ２〜Ｒｙ９およびＲｗ１〜Ｒｗ３は、水素であり；
    Ｒ１は、水素、あるいはヒドロキシアルキルであり；
    Ｒ２は、水素であり；
    Ｒ３は、水素またはＯＲ１６であり、但しＲ１６は水素であるか、Ｃ４’とＣ５’との間の破線の結合が二重結合である場合、Ｒ３は任意選択で存在せず、
    Ｒ４は、ＯＲ１６であり、但しＲ１６は水素であるか、Ｃ４’とＣ３’との間の破線の結合が二重結合である場合、Ｒ４は任意選択で存在せず；
    Ｒ５およびＲ６は、ＯＲ１６であり、Ｒ１６は、独立に、単糖部分または水素であり；
    Ｒ７〜Ｒ９は、水素であり、但し、Ｒ１が水素であるとき、Ｃ４’とＣ５’との間の破線の結合は二重結合である。）
  2. Ｒ３〜Ｒ６がそれぞれＯＲ１６であり、Ｒ１６が水素である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  3. Ｒ３〜Ｒ６がそれぞれＯＲ１６であり、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６においてＲ１６が水素であり、Ｒ５においてＲ１６が単糖部分である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  4. Ｒ３がＯＲ１６であり、Ｒ１６が水素である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  5. Ｒ３が水素である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  6. Ｒ４がＯＲ１６であり、Ｒ１６が水素である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  7. Ｒ５がＯＲ１６であり、Ｒ１６が単糖部分である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  8. 前記単糖部分が、式ＩＩにより表される、請求項１または７に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
    Figure 0006862428
     （式中：
    波線は、結合位置を意味し；
    点線は、５”位の立体配置がＲ配置またはＳ配置であることを示し；
    Ｘ２は、ＯＲ１３またはＮＲ１４Ｒ１５であり；
    Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３が、それぞれ独立に、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、およびアシルからなる群から選択され；
    Ｒ１２は、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアミド、アシル、カルボキシレート、ならびに飽和もしくは不飽和のおよび／または置換もしくは非置換のヒドロキシアルキルからなる群から選択され；
    Ｒ１４およびＲ１５が、それぞれ独立に、水素、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアルカリル、アシル、およびグアニジンまたはグアニンからなる群から選択されるか、あるいは、Ｒ１４およびＲ１５が存在する場合、共同で複素環を形成する。）
  9. 式Ｉｂにより表される化合物である、請求項７または８に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
    Figure 0006862428
  10. Ｘ２がＯＲ１３である、請求項８または９に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  11. Ｘ２がＮＲ１４Ｒ１５である、請求項８または９に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  12. Ｒ１２が水素以外である、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  13. Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３のうちの少なくとも１つはアシルである、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  14. Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３のうちの少なくとも１つはアシルである、請求項１２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  15. 環Ｉ中のＣ４’とＣ５’との間の結合が単結合である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  16. 環Ｉ中のＣ４’とＣ５’との間の結合が二重結合であり、ＲｘまたはＲ３が存在しない、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  17. Ｒ１が水素であり、Ｃ４’とＣ５’との間の破線の結合が二重結合である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  18. Ｒ１がヒドロキシアルキルである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  19. 前記ヒドロキシアルキルがヒドロキシメチルである、請求項１８に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  20. 請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
  21. 未成熟終止コドンによるトランケーション変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型を伴う遺伝性疾患の治療に使用するための、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  22. 前記遺伝性疾患が、嚢胞性線維症（ＣＦ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、毛細血管拡張性運動失調、ハーラー症候群、血友病Ａ、血友病Ｂ、アッシャー症候群、テイ−サックス病、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、先天性筋ジストロフィー（ＣＭＤ）、第ＶＩＩ因子欠乏症、家族性心房細動、ヘイリー−ヘイリー病、マッカードル病、ムコ多糖症、腎症性シスチン症、多発性嚢胞腎、レット症候群、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、シスチン症、重度の表皮水疱症、ドラベ症候群、Ｘ連鎖性腎性尿崩症（ＸＮＤＩ）、Ｘ連鎖性網膜色素変性症および癌からなる群から選択される、請求項２１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  23. 未成熟終止コドンによるトランケーション変異および／またはタンパク質のトランケーション表現型を伴う遺伝性疾患の治療に使用するための、請求項２０に記載の医薬組成物。
  24. 前記遺伝性疾患が、嚢胞性線維症（ＣＦ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、毛細血管拡張性運動失調、ハーラー症候群、血友病Ａ、血友病Ｂ、アッシャー症候群、テイ−サックス病、ベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、先天性筋ジストロフィー（ＣＭＤ）、第ＶＩＩ因子欠乏症、家族性心房細動、ヘイリー−ヘイリー病、マッカードル病、ムコ多糖症、腎症性シスチン症、多発性嚢胞腎、レット症候群、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、シスチン症、重度の表皮水疱症、ドラベ症候群、Ｘ連鎖性腎性尿崩症（ＸＮＤＩ）、Ｘ連鎖性網膜色素変性症および癌からなる群から選択される、請求項２３に記載の医薬組成物。
  25. Ｒ５がＯＲ１６であり、Ｒ１６が水素である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  26. Ｒ６がＯＲ１６であり、Ｒ１６が水素である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
  27. 下記式からなる群より選ばれる式により表される化合物である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
    Figure 0006862428
  28. 下記式からなる群より選ばれる式により表される化合物である、請求項１または９に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
    Figure 0006862428
  29. 下記式からなる群より選ばれる式により表される化合物である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
    Figure 0006862428
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