JP6636925B2

JP6636925B2 - 細胞障害性ペプチドおよびその抱合体

Info

Publication number: JP6636925B2
Application number: JP2016540522A
Authority: JP
Inventors: ゲイアースタンガー，バーナード; グルンウォルド，ジャン; オウ，ベイジア; 哲郎宇野; ワン，ヨングイン; ワン，シン; ジン，ユンホ
Original assignee: ノバルティスアーゲー
Priority date: 2013-12-17
Filing date: 2014-12-17
Publication date: 2020-01-29
Anticipated expiration: 2034-12-17
Also published as: US20180244717A1; IL245558A0; SG11201604877UA; EA201691251A1; WO2015095301A3; US20160311853A1; IL245558B; JP2020023514A; US9988420B2; ES2758506T3; EP3082877B1; US20190382441A1; KR20160098257A; US10787480B2; WO2015095301A2; CN105899526A; CA2930614A1; BR112016012538A2; EP3753578A1; AU2014364812B2

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その全体が参照として本明細書に組み込まれる２０１３年１２月２７日出願の米国特許仮出願第６１／９１７２９３号の利益を主張する。

本発明は、抗有糸分裂細胞障害性ペプチドであり、細胞増殖性障害の治療に有用である化合物を提供する。本発明は、抗原結合部分に連結しているそのような細胞障害性ペプチドを含む抱合体、およびこれらの抱合体を含有する医薬組成物も含む。これらの化合物および抱合体を使用して、がんを含む細胞増殖性障害を治療する方法も含まれる。

特定の細胞への細胞増殖阻害剤および／または細胞障害剤の標的送達のための抗体薬物抱合体（ＡＤＣ）の使用が、重要な研究の焦点になっている。Antibody-Drug Conjugate, Methods in Molecular Biology, Vol. 1045, Editor L. Ducry, Humana Press (2013)。ＡＤＣは、治療介入の標的になる細胞に結合する能力のために選択された、細胞増殖抑制または細胞障害活性のために選択された薬物に連結している抗体を含む。抗体が標的細胞に結合することによって、薬物を、その治療効果が必要な部位に送達する。

がん細胞のような標的細胞を認識し、それに選択的に結合する多くの抗体が、ＡＤＣに使用するために開示されており、抗体に細胞毒素などのペイロード（payload）（薬物）化合物を結合させる多くの方法が、記載されてきた。ＡＤＣにおける広範囲に及ぶ研究にもかかわらず、僅か数種類の細胞増殖阻害剤だけが、ＡＤＣのペイロードとして広範囲に使用されている。米国においてヒトにおける使用が最初に認可されたＡＤＣは２０００年に発売されたが（後に市場から回収された）、１０年後には、僅か数種類の化学物質クラスの薬物化合物（マイタンシノイド、オーリスタチン（auristatin）、カリケアマイシン（calicheamycin）およびデュオカルマイシン）だけが、ＡＤＣのペイロードとして臨床試験に到達している。Antibody-Drug Conjugates: the Next Generation of Moving Parts, A. Lash, Start-Up, Dec. 2011, 1-6。したがって、特にがんを治療する治療薬として広く認められているＡＤＣの価値を考えると、ＡＣＤのペイロードとして使用するために改善された特性を有する細胞障害性ペプチドが依然として求められている。

本明細書において提供される発明は、細胞障害性ペプチド、および抗体薬物抱合体（ＡＤＣ）の薬物構成成分としてそのような細胞障害性ペプチドを使用する方法を含む。本発明は、新規の細胞障害性ペプチド、およびＡＤＣのペイロードとしてのそのような新規の細胞障害性ペプチドの使用を含む。本発明は、そのような新規の細胞障害性ペプチドをＡＤＣに組み込むのに有用な方法および中間体、ならびに細胞増殖性障害を治療するために新規の化合物および抱合体を使用する方法を更に含む。そのような細胞障害性ペプチドは、チューブリンの重合を遮断し、それにより核移動、ならびに核および細胞分裂を遮断することによって細胞分裂を阻害する、抗有糸分裂剤である。

本発明の一態様では、式（Ｉ）の構造

［式中、
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり（ここで、それぞれは非置換であるか、またはそれぞれ、Ｒ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されているか、またはそれぞれ、Ｒ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^４は、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６、−ＬＲ^９、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、−ＮＨＳ（Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮ_３、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２ＬＲ^９、

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２もしくは１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^７は、ＬＲ^９であり；
Ｒ^８は、ＨまたはＬＲ^９であり；
各Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−、−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から独立して選択され（ここで、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、本明細書に定義されているとおりである）；
Ｒ^９は、

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、ＳＨ、−ＳＳＲ^１５、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｒ^１０、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＯＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、

、−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０は、

であり；
各Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、および１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、テトラゾリル、フェニルにより置換されているイミダゾリル、フェニルにより置換されているオキサジアゾリル、ピラゾリル、ピリミジニル、

、−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２、−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨＬＲ^９、−ＬＲ^９、または−Ｘ_４ＬＲ^９であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５は、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり、これは非置換であるか、または−ＬＲ^９により置換されており；
各Ｒ^１９は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｘ_３は、

であり、Ｘ_４は、

であり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
を有する細胞障害性ペプチド、またはその立体異性体、およびそれらの薬学的に許容される塩である。

この前述の態様の実施形態において、
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり（ここで、それぞれは非置換であるか、またはそれぞれ、Ｒ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されているか、またはそれぞれ、Ｒ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^７は、ＬＲ^９であり；
Ｒ^８は、ＨまたはＬＲ^９であり；
各Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−、−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から独立して選択され（ここで、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、本明細書に定義されているとおりである）；
Ｒ^９は、

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０は、

であり；
各Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、および１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、テトラゾリル、

、−ＬＲ^９または−Ｘ_４ＬＲ^９であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５は、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり、これは非置換であるか、または−ＬＲ^９により置換されており；
Ｘ_３は、

であり、Ｘ_４は、

であり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される。

式（Ｉ）の構造を有する細胞障害性ペプチドのこの態様のある特定の実施形態において、
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり（ここで、それぞれは非置換であるか、またはそれぞれ、Ｒ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^４は、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^８は、Ｈであり；
各Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、および１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、テトラゾリル、

であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５は、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含む非置換Ｎ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される。

式（Ｉ）の構造を有する細胞障害性ペプチドのこの態様のある特定の実施形態では、式（Ｉａ）

の構造を有する細胞障害性ペプチドである。

式（Ｉ）または式（Ｉａ）の構造を有する細胞障害性ペプチドの態様の他の実施形態では、式（Ｉｂ）

の構造を有する細胞障害性ペプチドである。

式（Ｉ）の構造を有する細胞障害性ペプチドの態様のある特定の実施形態では、式（Ｉｃ）

の構造を有する細胞障害性ペプチドである。

式（Ｉ）または式（Ｉｃ）の構造を有する細胞障害性ペプチドの態様の他の実施形態では、式（Ｉｄ）

の構造を有する細胞障害性ペプチドである。

式（Ｉ）の構造を有する細胞障害性ペプチドの態様のある特定の実施形態では、式（Ｉｅ）

の構造を有する細胞障害性ペプチドである。

式（Ｉ）または式（Ｉｅ）の構造を有する細胞障害性ペプチドの態様の他の実施形態では、式（Ｉｆ）

の構造を有する細胞障害性ペプチドである。

本発明は、抗体または抗体フラグメントなどの抗原結合部分に連結している細胞障害性ペプチドを含有する、本明細書においてＡＤＣとも呼ばれている免疫抱合体を提供する。細胞障害性ペプチドを含むこれらの抱合体は、特に、がん細胞を認識し、したがって攻撃の標的となった細胞への細胞障害性ペプチドの送達を促進する抗体に、細胞障害性ペプチドが連結している場合、細胞増殖性障害を治療することに有用である。免疫抱合体は、本明細書において更に詳述されるある特定のがんの治療にとりわけ有用である。本明細書において提供されるデータは、これらの免疫抱合体が、細胞増殖の有効な阻害剤であること実証しており、理論に束縛されることなく、これらの活性は、細胞中のチューブリンの重合を阻害することに起因すると考えられる。

本発明の免疫抱合体の１つの一態様では、式（ＩＩ）

［式中、
Ａｂは、抗原結合部分を表し；
Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−、−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から選択され（ここで、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、本明細書に定義されているとおりである）；
ｙは、１〜１６の整数であり；
Ｒ^１０１は、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルであるか（ここで、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、

基にＣ連結し、かつＬ_１にＮ連結しているか、またはＬ_１にＣ連結しており、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；あるいは
Ｒ^１０１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含む５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル二価ラジカルであり（ここで、５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、

基にＣ連結し、かつＬ_１にＮ連結しているか、またはＬ_１にＣ連結しており、５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^４は、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、もしくは−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、または

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２もしくは１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、テトラゾリル、フェニルにより置換されているイミダゾリル、フェニルにより置換されているオキサジアゾリル、ピラゾリル、ピリミジニル、

または−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ^１９は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の免疫抱合体を含む。

本発明の免疫抱合体の一態様では、式（ＩＩ）

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、テトラゾリル、

であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の免疫抱合体を含む。

本発明の免疫抱合体の別の態様では、式（ＩＩＩ）

［式中、
Ａｂは、抗原結合部分を表し；
Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−、−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から選択され（ここで、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、本明細書に定義されているとおりである）；
ｙは、１〜１６の整数であり；
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキルであるか（ここで。６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；あるいは
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含む５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり（ここで、５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ^１７は、結合、−ＮＨ−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２−、

であり；
Ｒ^１８は、結合、

または−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨであり；
Ｒ^１９は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の構造を有する免疫抱合体である。

本発明の免疫抱合体の別の態様では、式（ＩＩＩ）

［式中、
Ａｂは、抗原結合部分を表し；
Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−、−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から選択され（ここで、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、本明細書に定義されているとおりである）；
ｙは、１〜１６の整数であり；
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキルであるか（ここで、６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；あるいは
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含む５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり（ここで、５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^１８は、結合、

であり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の構造を有する免疫抱合体である。

本発明は、送達されるペイロード（薬物）として式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドを使用して、このようなＡＤＣを作製する方法を提供する。そのような細胞障害性ペプチドにおいて、細胞障害性ペプチドのＮ末端またはＣ末端は、反応性官能基および任意に１つまたは複数のリンカー構成成分を有するように修飾されており、細胞障害性ペプチドを、抗体または抗原結合フラグメントに直接的または間接的に接続することを推進し、例えば上に記載された式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドの第２および第３の態様である。加えて、本発明は、これらのＡＤＣを使用して、細胞増殖性障害を治療する方法を提供する。

別の態様において、本発明は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤と混合した、任意に２つ以上の薬学的に許容される担体または賦形剤と混合した、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはこれらの下位式（subformula）の免疫抱合体を含む医薬組成物、およびこれらの組成物を使用して、細胞増殖性障害を治療する方法を提供する。

別の態様において、本発明は、過剰な、または望ましくない細胞増殖を特徴とする状態を治療する方法であって、有効量の式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の免疫抱合体を、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。治療の対象は、哺乳動物であり得、好ましくはヒトである。本明細書に記載されている免疫抱合体および方法により治療可能な状態には、胃、骨髄、結腸、鼻咽頭、食道および前立腺の腫瘍、神経膠腫、神経芽細胞腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、白血病（例えば、骨髄性白血病、リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ系統急性リンパ芽球性白血病またはＴ−ＡＬＬ慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、有毛細胞白血病）、リンパ腫（ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、多発性骨髄腫、膀胱、腎臓、胃（例えば、胃腸管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ））、肝臓、黒色腫、および膵臓のがん、ならびに肉腫などの様々な形態のがんが含まれる。これらの方法および組成物により治療できる他の細胞増殖性障害には、糖尿病性網膜症、肝および肺線維症、シェーグレン症候群、ならびに全身性エリテマトーデスが含まれる。

本発明は、本明細書に記載されている式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）およびその下位式の組成物、全ての立体異性体（ジアステレオ異性体および鏡像異性体を含む）、互変異性体およびその同位体濃縮型（重水素置換を含む）、ならびにこれらの化合物の薬学的に許容される塩を含む。本発明は、式（Ｉ）（または、その下位式）の多形体およびその塩、特に薬学的に許容される塩も含む。

ＭＤＡ−ＭＢ−２３１クローン４０を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ａ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｂ）突然変異ＡＤＣ、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１クローン１６を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ｃ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｄ）突然変異ＡＤＣ、ＨＣＣ１９５４を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ｅ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｆ）突然変異ＡＤＣ、ならびにＪｉｍＴ−１細胞を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ｇ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｈ）突然変異ＡＤＣのインビトロ細胞増殖アッセイである。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１クローン４０を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ａ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｂ）突然変異ＡＤＣ、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１クローン１６を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ｃ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｄ）突然変異ＡＤＣ、ＨＣＣ１９５４を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ｅ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｆ）突然変異ＡＤＣ、ならびにＪｉｍＴ−１細胞を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ｇ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｈ）突然変異ＡＤＣのインビトロ細胞増殖アッセイである。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１クローン４０を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ａ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｂ）突然変異ＡＤＣ、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１クローン１６を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ｃ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｄ）突然変異ＡＤＣ、ＨＣＣ１９５４を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ｅ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｆ）突然変異ＡＤＣ、ならびにＪｉｍＴ−１細胞を用いた抗Ｈｅｒ２Ｃｙｓ（Ｇ）およびＡ１／ｙｂｂＲタグ（Ｈ）突然変異ＡＤＣのインビトロ細胞増殖アッセイである。抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０（Ａ）、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｓ３７５Ｃ−４７（Ｂ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｃ）、および抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｄ）のＡＤＣのインビトロ細胞増殖アッセイである。抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０（Ａ）、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｓ３７５Ｃ−４７（Ｂ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｃ）、および抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｄ）のＡＤＣのインビトロ細胞増殖アッセイである。未処置マウスにおける抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０（Ａ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７（Ｂ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７（Ｃ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０（Ｄ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９（Ｅ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８（Ｆ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４（Ｇ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（Ｈ）、および抗Ｈｅｒ２−１０（Ｉ）の薬物動態研究である。未処置マウスにおける抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０（Ａ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７（Ｂ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７（Ｃ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０（Ｄ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９（Ｅ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８（Ｆ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４（Ｇ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（Ｈ）、および抗Ｈｅｒ２−１０（Ｉ）の薬物動態研究である。未処置マウスにおける抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０（Ａ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７（Ｂ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７（Ｃ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０（Ｄ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９（Ｅ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８（Ｆ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４（Ｇ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（Ｈ）、および抗Ｈｅｒ２−１０（Ｉ）の薬物動態研究である。１ｍｇ／ｋｇの用量での未処置マウスにおける抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０（Ａ）、抗体２０５０７−ＬＣ−Ｋ１０７Ｃ−４７（Ｂ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｃ）、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（Ｄ）、抗体２０５０７−１０（Ｅ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−２０（Ｇ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｈ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｉ）、および抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１１）−７５（Ｊ）のＡＤＣの薬物動態研究である。抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｆ）の薬物動態研究は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍担持マウスにおいて実施した。１ｍｇ／ｋｇの用量での未処置マウスにおける抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０（Ａ）、抗体２０５０７−ＬＣ−Ｋ１０７Ｃ−４７（Ｂ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｃ）、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（Ｄ）、抗体２０５０７−１０（Ｅ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−２０（Ｇ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｈ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｉ）、および抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１１）−７５（Ｊ）のＡＤＣの薬物動態研究である。抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｆ）の薬物動態研究は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍担持マウスにおいて実施した。１ｍｇ／ｋｇの用量での未処置マウスにおける抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０（Ａ）、抗体２０５０７−ＬＣ−Ｋ１０７Ｃ−４７（Ｂ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｃ）、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（Ｄ）、抗体２０５０７−１０（Ｅ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−２０（Ｇ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｈ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｉ）、および抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１１）−７５（Ｊ）のＡＤＣの薬物動態研究である。抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｆ）の薬物動態研究は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍担持マウスにおいて実施した。１ｍｇ／ｋｇの用量での未処置マウスにおける抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０（Ａ）、抗体２０５０７−ＬＣ−Ｋ１０７Ｃ−４７（Ｂ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｃ）、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（Ｄ）、抗体２０５０７−１０（Ｅ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−２０（Ｇ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｈ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（Ｉ）、および抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１１）−７５（Ｊ）のＡＤＣの薬物動態研究である。抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（Ｆ）の薬物動態研究は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍担持マウスにおいて実施した。ＡＤＣのインビトロ安定性研究である。３７℃で異なるｐＨの緩衝液中にインキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０のペイロード保持の時間経過（Ａ）、３７℃で異なるｐＨの緩衝液中にインキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０のスクシンイミド環の加水分解の時間経過（Ｂ）、３７℃で異なるｐＨの緩衝液中にインキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７のペイロード保持の時間経過（Ｃ）、３７℃で異なるｐＨの緩衝液中にインキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７のスクシンイミド環の加水分解の時間経過（Ｄ）、３７℃でｐＨ８．５の緩衝液中に２４時間インキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８および抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４のペイロード保持率（Ｅ）、３７℃でｐＨ８．５の緩衝液中に２４時間インキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８および抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４のスクシンイミド環の加水分解の程度（Ｆ）。ＡＤＣのインビトロ安定性研究である。３７℃で異なるｐＨの緩衝液中にインキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０のペイロード保持の時間経過（Ａ）、３７℃で異なるｐＨの緩衝液中にインキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０のスクシンイミド環の加水分解の時間経過（Ｂ）、３７℃で異なるｐＨの緩衝液中にインキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７のペイロード保持の時間経過（Ｃ）、３７℃で異なるｐＨの緩衝液中にインキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７のスクシンイミド環の加水分解の時間経過（Ｄ）、３７℃でｐＨ８．５の緩衝液中に２４時間インキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８および抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４のペイロード保持率（Ｅ）、３７℃でｐＨ８．５の緩衝液中に２４時間インキュベートされた抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８および抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４のスクシンイミド環の加水分解の程度（Ｆ）。Ｈ５２６腫瘍モデルにおける抗体２０５０７のＡＤＣのインビボ効力研究である。（Ａ）抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０および抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−ＭＭＡＦのＡＤＣ。（Ｂ）抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０および抗体２０５０７−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−ＭＭＡＦのＡＤＣ。（Ｃ）抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０および抗体２０５０７−１０。（Ｄ）抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２および抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２のＡＤＣ。Ｈ５２６腫瘍モデルにおける抗体２０５０７のＡＤＣのインビボ効力研究である。（Ａ）抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０および抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−ＭＭＡＦのＡＤＣ。（Ｂ）抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０および抗体２０５０７−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−ＭＭＡＦのＡＤＣ。（Ｃ）抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０および抗体２０５０７−１０。（Ｄ）抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２および抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２のＡＤＣ。

特に明示されない限り、以下の定義が適用される。

用語「アミノ酸」は、標準、合成および非天然のアミノ酸、ならびに標準アミノ酸と類似した方法で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を指す。標準アミノ酸は、遺伝子コードによりコードされたタンパク質生成アミノ酸であり、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、ならびにセレノシステイン、ピロルリシンおよびピロリン−カルボキシ−リシンが含まれる。アミノ酸類似体は、標準アミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち水素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基に結合しているα炭素を有する化合物を指し、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムである。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド主鎖を有するが、標準アミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。

用語「抗原結合部分」は、本明細書で使用されるとき、抗原に特異的に結合することができる部分を指し、抗体および抗体フラグメントが含まれるが、これらに限定されない。

用語「抗体」は、本明細書で使用されるとき、対応する抗原と非共有的、可逆的、および特異的に結合することができる免疫グロブリンファミリーのポリペプチドを指す。例えば、天然に生じるＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合により相互接続している少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む四量体である。各重鎖は、重鎖可変部領域（本明細書においてＶ_Ｈと略される）および重鎖定常部領域から構成される。重鎖定常部領域は、３つのドメインのＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変部領域（本明細書においてＶ_Ｌと略される）および軽鎖定常部領域から構成される。軽鎖定常部領域は、１つのドメインＣ_Ｌから構成される。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域に散在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる高度に可変性の領域に更に細分化され得る。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４の順番で配置されている、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。重鎖および軽鎖の可変部領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常部領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および伝統的な補体系の第１の構成成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。

用語「抗体」には、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ抗体、キメラ抗体、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）が含まれるが、これらに限定されない。抗体は、任意のアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）のものであり得る。

軽鎖および重鎖は、両方とも構造的および機能的に相同性の領域に分けられる。用語「定常部」および「可変部」は、機能的に使用される。この点において、軽（Ｖ_Ｌ）および重（Ｖ_Ｈ）鎖部分の両方の可変部ドメインは、抗原認識および特異性を決定することが理解される。逆に、軽鎖（Ｃ_Ｌ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の定常部ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性を付与する。慣用的に、定常部領域ドメインの番号付けは、抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠位になるほど増える。Ｎ末端は可変部領域であり、Ｃ末端では定常部領域であり、ＣＨ３およびＣ_Ｌドメインは、実際に、重鎖および軽鎖それぞれのカルボキシ末端ドメインを含む。

用語「抗原結合フラグメント」は、本明細書で使用されるとき、抗原のエピトープと特異的に（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布により）相互作用する能力を保持する抗体の１つまたは複数の部分を指す。結合フラグメントの例には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_ＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦ（ａｂ’）フラグメント；ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結している２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ）２フラグメント；Ｖ_ＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；抗体の単一アームのＶ_ＬおよびＶ_ＨドメインからなるＦｖフラグメント；Ｖ_ＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ward et al., Nature 341:544-546, 1989）；ならびに単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）、または抗体の他のエピトープ結合フラグメントが含まれるが、これらに限定されない。

更に、Ｆｖフラグメントの２つのドメインＶ_ＬおよびＶ_Ｈは別々の遺伝子によりコードされるが、これらを、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ領域対が一価分子を形成する単一タンパク質鎖にすることができる合成リンカーによって、組み換え方法を使用して結合させることができる（単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）として公知であり、例えば、Bird et al., Science 242:423-426, 1988およびHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883, 1988を参照されたい）。そのような単鎖抗体も、用語「抗原結合フラグメント」の範囲内に包含されることが意図される。これらの抗原結合フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を使用して得られ、フラグメントは、無傷の抗体と同じ方法によって有用性について選別される。

抗原結合フラグメントを、単一ドメイン抗体、マキシ抗体（maxibody）、ミニ抗体（minibody）、ナノ抗体（nanobody）、細胞内抗体（intrabody）、二特異性抗体（diabody）、三特異性抗体（triabody）、四特異性抗体（tetrabody）、ｖ−ＮＡＲおよびビスｓｃＦｖに組み込むこともできる（例えば、Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136, 2005を参照されたい）。抗原結合フラグメントを、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づいて足場にグラフトすることができる（フィブロネクチンポリペプチドモノ抗体（monobody）を記載する、米国特許第６，７０３，１９９号を参照されたい）。

相補的軽鎖ポリペプチドと一緒になって一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｖセグメント（Ｖ_Ｈ−ＣＨ１−Ｖ_Ｈ−ＣＨ１）を含む単鎖分子に、抗原結合フラグメントを組み込むことができる（Zapata et al., Protein Eng. 8:1057-1062, 1995および米国特許第５，６４１，８７０号）。

用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、本明細書で使用されるとき、実質的に同一のアミノ酸配列を有する、または同じ遺伝源から誘導される抗体および抗原結合フラグメントを含む、ポリペプチドを指す。この用語は、単一分子組成物の抗体分子の調合剤も含む。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す。

用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用されるとき、フレームワークとＣＤＲの両方の領域がヒト由来の配列から誘導される可変部領域を有する抗体を含む。更に、抗体が定常部領域を含有する場合、定常部領域も、そのようなヒト配列、例えばヒト生殖細胞株配列から、またはヒト生殖細胞株配列の突然変異型から、または例えばKnappik et al., J. Mol. Biol. 296:57-86, 2000に記載されているヒトフレームワーク配列分析から誘導されるコンセンサスフレームワーク配列を含有する抗体から誘導される。

本発明のヒト抗体は、ヒト配列によりコードされていないアミノ酸残基（例えば、インビトロにおけるランダムもしくは部位特異的突然変異誘発により、またはインビボにおける体細胞突然変異により導入された突然変異、あるいは安定性または製造を促進する置換）を含むことができる。

用語「ヒト化抗体」は、本明細書で使用されるとき、非ヒト抗体の反応性を保持し、一方でヒトにおいて免疫原性が少ない抗体を指す。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を保持し、抗体の残りの部分をヒト対応物で置き換えることによって、達成することができる。例えば、Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984); Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994)を参照されたい。

用語「特異的に結合する」または「選択的に結合する」は、抗原（例えば、タンパク質またはグリカン）と、抗体、抗体フラグメントまたは抗体由来結合剤との相互作用を記載する文脈において使用される場合、例えば生物学的試料、例えば血液、血清、血漿または組織試料中のタンパク質および他の生物製剤の異種個体群における抗原の存在の決定因である結合反応を指す。したがって、ある特定の指定された免疫アッセイ条件下では、特定の結合特異性を有する抗体または結合剤は、特定の抗原に、バックグラウンドの少なくとも２倍結合し、試料に存在する他の抗原に有意な量で実質的に結合しない。一実施形態において、指定された免疫アッセイ条件下では、特定の結合特異性を有する抗体または結合剤は、特定の抗原に、バックグラウンドの少なくとも１０倍結合し、試料に存在する他の抗原に有意な量で実質的に結合しない。そのような条件下での抗体または結合剤の特異的結合は、抗体または作用物質が特定のタンパク質に対する特異性に関してすでに選択されていることが必要となり得る。望ましくは、または適切であれば、この選択は、他の種（例えば、マウスまたはラット）または他のサブタイプから分子と交差反応する抗体を差し引くことによって、達成することができる。あるいは、幾つかの実施形態では、ある特定の望ましい分子と交差反応する抗体または抗体フラグメントが選択される。

様々な免疫アッセイ様式を使用して、特定のタンパク質と特異的に免疫反応する抗体を選択することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイは、タンパク質と特異的に免疫反応する抗体を選択するために日常的に使用されている（例えば、特異的免疫反応性を決定するために使用できる免疫アッセイ様式および条件の記載については、Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual (1998)を参照されたい）。典型的には、特異的または選択的結合反応は、バックグラウンドシグナルの少なくとも２倍、より典型的にはバックグラウンドの少なくとも１０〜１００倍のシグナルを生成する。

用語「親和性」は、本明細書で使用されるとき、単一抗原部位における抗体と抗原の相互作用の強さを指す。各抗原部位の範囲内において、抗体「アーム」の可変部領域は、多数の部位の抗原と弱い非共有結合力を介して相互作用し、相互作用の数が多いほど、親和性が強くなる。

用語「単離抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体から実質的に遊離している抗体を指す。しかし、１つの抗原に特異的に結合する単離抗体は、他の抗原との交差反応性を有し得る。更に、単離抗体は、他の細胞材料および／または化学物質から実質的に遊離し得る。

用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書において交換可能に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。用語は、標準アミノ酸ポリマーにも、非標準アミノ酸ポリマーにも当てはまる。特に指定のない限り、特定のポリペプチド配列は、その修飾変異体も包含する。

用語「免疫抱合体」または「抗体薬物抱合体」は、本明細書で使用されるとき、抗体またはその抗原結合フラグメントなどの抗原結合部分と、式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドとの連結を指す。連結は、共有結合または非共有相互作用であり得、キレート化が含まれ得る。免疫抱合体を形成するために、当技術分野で公知の様々なリンカーを用いることができる。

用語「細胞障害性」または「細胞障害剤」は、本明細書で使用されるとき、細胞の成長および増殖に有害であり、細胞または悪性腫瘍を低減、阻害または破壊するように作用し得る任意の作用物質を指す。

用語「抗がん剤」は、本明細書で使用されるとき、細胞障害剤、化学療法剤、放射線療法および放射線療法剤、標的化抗がん剤、ならびに免疫療法剤が含まれるが、これらに限定されない、がんなどの細胞増殖性障害の治療に使用され得る任意の作用物質を指す。

用語「薬物部分」または「ペイロード」は、本明細書で使用されるとき、抗体または抗原結合フラグメントと抱合して、免疫抱合体を形成する、またはすることができる化学部分を指し、抗体または抗原結合フラグメントへの結合に有用な任意の部分が含まれ得る。例えば、「薬物部分」または「ペイロード」には、本明細書に記載されている細胞障害性ペプチドが含まれるが、これに限定されない。本発明の免疫抱合体は、ペイロードとして本明細書に記載されている１つまたは複数の細胞障害性ペプチドを含むが、１つまたは複数の他のペイロードを含むこともできる。他のペイロードには、例えば薬物部分が含まれる、またはペイロードは、抗がん剤、抗炎症剤、抗真菌剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、抗ウイルス剤、または麻酔剤であり得る。ある特定の実施形態において、薬物部分は、Ｅｇ５阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＩＡＰ阻害剤、ｍＴｏｒ阻害剤、微小管安定剤、微小管不安定化剤、オーリスタチン（auristatin）、ドラスタチン、マイタンシノイド、ＭｅｔＡＰ（メチオニンアミノペプチダーゼ）、タンパク質ＣＲＭ１の核外輸送の阻害剤、ＤＰＰＩＶ阻害剤、ミトコンドリアにおけるホスホリル転移反応の阻害剤、タンパク質合成阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＣＤＫ２阻害剤、ＣＤＫ９阻害剤、プロテアソーム阻害剤、キネシン阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ副溝結合剤、およびＤＨＦＲ阻害剤から選択される。適切な例には、ガンマ−カリケアマイシンなどのカリケアマイシン、ならびにＤＭ１、ＤＭ３およびＤＭ４などのマイタンシノイドが含まれる。これらのうちのそれぞれを、抗体と適合性があるリンカーに結合する方法および本発明の方法は、当技術分野で公知である。例えば、Singh et al., (2009) Therapeutic Antibodies: Methods and Protocols, vol. 525, 445-457を参照されたい。

「腫瘍」は、悪性または良性にかかわらず新生物細胞の成長および増殖、ならびに全ての前がん性およびがん性の細胞および組織を指す。

用語「抗腫瘍活性」は、腫瘍細胞増殖、生存度または転移活性の率の低減を意味する。抗腫瘍活性を示す可能な方法は、療法に際に生じる異常細胞の成長率の低下、または腫瘍サイズの安定もしくは低減を示すことである。そのような活性は、異種移植片モデル、同種移植片モデル、ＭＭＴＶモデルおよび抗腫瘍活性を調査する当技術分野で公知である他の公知のモデルが含まれるが、これらに限定されない、許容されているインビトロまたはインビボ腫瘍モデルを使用して評価することができる。

用語「悪性腫瘍」は、非良性腫瘍またはがんを指す。本明細書で使用されるとき、用語「がん」には、調節解除された、または制御不能な細胞成長を特徴とする悪性腫瘍が含まれる。例示的ながんには、癌腫、肉腫、白血病、およびリンパ腫が含まれる。

用語「がん」には、原発性悪性腫瘍（例えば、細胞が最初の腫瘍部位以外の対象の身体部位に遊走しなかったもの）および二次性悪性腫瘍（例えば、最初の腫瘍部位と異なる二次部位に腫瘍細胞が遊走する転移から生じるもの）が含まれる。

本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容される担体」には、任意および全ての溶媒、分散媒、被覆剤、界面活性剤、酸化防止剤、防腐剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、防腐剤、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、風味剤、色素など、ならびにこれらの組合せが含まれ、当業者には公知である（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329を参照されたい）。任意の従来の担体が活性成分と適合性がない場合を除いて、治療用または医薬組成物におけるその使用が考慮される。

本発明の化合物の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的または医学的応答、例えば、酵素もしくはタンパク質活性の低減もしくは阻害を誘発する、または症状を寛解させる、状態を緩和する、疾患の進行を緩徐もしくは遅延する、または疾患を予防するなどの本発明の化合物の量を指す。非限定的な一実施形態において、用語「治療有効量」は、対象に投与されたとき、状態、または障害、または疾患を少なくとも部分的に緩和する、阻害する、予防するおよび／または寛解させるために有効である、本発明の化合物の量を指す。

本明細書で使用されるとき、用語「対象」は動物を指す。典型的には、動物は哺乳動物である。対象は、例えば、霊長類（例えば、男性または女性のヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、サカナ、トリなども指す。ある特定の実施形態において、対象は霊長類である。具体的な実施形態において、対象はヒトである。

本明細書で使用されるとき、用語「阻害する」、「阻害」または「阻害すること」は、所定の状態、症状、または障害、または疾患の低減または抑制、あるいは生物学的活性または過程のベースライン活性における有意な減少を指す。

本明細書で使用されるとき、任意の疾患または障害における用語「治療する」、「治療すること」または「治療」は、一実施形態において、疾患または障害を寛解させること（すなわち、疾患またはその少なくとも１つの臨床症状の発生を緩徐、または阻止、または低減すること）を指す。別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」または「治療」は、患者により認識できないものを含む少なくとも１つの身体的パラメーターを緩和または寛解させることを指す。更に別の実施態様において、「治療する」、「治療すること」または「治療」は、疾患または障害の身体的（例えば、認識される症状の安定化）、生理学的（例えば、身体的パラメーターの安定化）のいずれか、または両方を調節することを指す。更に別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」または「治療」は、疾患または障害の進行を予防または遅延することを指す。

本明細書で使用されるとき、対象は、そのような対象がそのような治療から生物学的、医学的または生活の質に利益を得る場合、治療を「必要とする」。

本明細書で使用されるとき、本発明の文脈（とりわけ、特許請求の範囲の文脈）において使用される用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」および類似の用語は、本明細書において特に指示のない限り、または文脈により明確に否定されない限り、単数および複数の両方を網羅すると解釈されるべきである。

ある特定の実施形態において、本発明の修飾免疫抱合体は、例えば、１、２、３、４、５、６、７または８、または１２または１６の「細胞障害性ペプチドと抗体との」比に従って記載され、この比は、式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の「ｙ」に対応する。この比は、特定の抱合体分子ごとに整数値を有するが、免疫抱合体の試料内にある程度の不均等性があるので、典型的には、多くの分子を含有する試料を記載するために平均値が使用されることが理解される。免疫抱合体の試料への平均ローディングは、本明細書において「薬物抗体比」またはＤＡＲと呼ばれる。幾つかの実施形態において、ＤＡＲは、約１〜約１６、典型的には約１、２、３、４、５、６、７、または８である。幾つかの実施形態において、試料重量の少なくとも５０％が、平均ＤＡＲ±２を有する化合物であり、好ましくは試料の少なくとも５０％が、平均ＤＡＲ±１．５を含有する生成物である。好ましい実施形態は、ＤＡＲが約２〜約８の間、例えば、約２、約３、約４、約５、約６、約７、または約８である免疫抱合体を含む。これらの実施形態において、「約ｑ」のＤＡＲは、ＤＡＲの測定値がｑの±２０％以内であること、または好ましくはｑの±１０％以内であることを意味する。

本明細書で使用されるとき、用語「光学異性体」または「立体異性体」は、本発明の所定の化合物に存在し得る様々な立体異性体配置のいずれかを指し、幾何異性体が含まれる。置換基が炭素原子のキラル中心に結合し得ることが理解される。用語「キラル」は、鏡像パートナーを重ね合わせることができない特性を有する分子を指し、一方、用語「アキラル」は、鏡像パートナーを重ね合わせることができる分子を指す。したがって、本発明は、化合物の鏡像異性体、ジアステレオマーまたはラセミ化合物を含む。「鏡像異性体」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である一対の立体異性体である。一対の鏡像異性体の１：１混合物は、「ラセミ」混合物である。用語は、適切な場合にラセミ混合物を示すために使用される。「ジアステレオ異性体」は、少なくとも２個の不斉原子を有するが、互いに鏡像ではない立体異性体である。絶対立体化学は、カーン−インゴルド−プレローグＲ−Ｓ系に従って特定される。化合物が純粋な鏡像異性体である場合、各キラル炭素の立体化学をＲまたはＳのいずれかにより特定することができる。絶対配置が不明である分割された化合物を、ナトリウムＤ線の波長で平面偏光を回転する方向（右旋回または左旋回）に応じて（＋）または（−）と示すことができる。本明細書に記載されているある特定の化合物は、１つまたは複数の不斉中心または軸を含有し、したがって、鏡像異性体、ジアステレオマー、および絶対立体化学に関して（Ｒ）−または（Ｓ）−として定義され得る他の立体異性体形態を生じることができる。

出発材料および手順の選択に応じて、化合物は、可能な異性体の１つの形態またはその混合物として、例えば純粋な光学異性体として、または不斉炭素原子の数に応じてラセミ化合物およびジアステレオ異性体混合物などの異性体混合物として存在することができる。本発明は、例えば特定の異性体が確認されないといった特に記述のない限り、ラセミ混合物、ジアステレオマー混合物および光学的に純粋な形態を含むそのような全ての可能な異性体を含むことが意図される。光学的に活性な（Ｒ）−および（Ｓ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製され得る、または従来技術を使用して分割され得る。化合物が二重結合を含有する場合、置換基は、ＥまたはＺ配置であり得る。化合物が二置換シクロアルキルを含有する場合、シクロアルキル置換基はシス−またはトランス配置を有することができる。全ての互変異性形態が含まれることも意図される。

本明細書で使用されるとき、用語「塩」（複数可）は、本発明の化合物の酸付加塩または塩基付加塩を指す。「塩」には、特に「薬学的に許容される塩」が含まれる。用語「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持し、典型的には生物学的か、そうでない理由で望ましくないものではない塩を指す。多くの場合、本発明の化合物は、アミノおよび／もしくはカルボキシル基または同様の基の存在によって、酸および／または塩基の塩を形成することができる。

薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸により形成することができ、例えば、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物／臭化水素酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ショウノウスルホン酸塩、塩化物／塩酸塩、クロロテオフィリネート（chlorotheophyllinate）、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、硫酸メチル、ナフトエ酸塩、ナプシレート、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、およびトリフルオロ酢酸塩である。

塩が誘導され得る無機酸には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが含まれる。

塩が誘導され得る有機酸には、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸などが含まれる。薬学的に許容される塩基付加塩は、無機および有機塩基により形成することができる。

塩が誘導され得る無機塩基には、例えば、アンモニウム塩および周期表のＩからＸＩＩの列の金属が含まれる。ある特定の実施形態において、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛および銅から誘導され、特に適した塩には、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウムの塩が含まれる。

塩が誘導され得る有機塩基には、例えば、第一級、第二級および第三級アミン、天然に生じる置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂などが含まれる。ある特定の有機アミンには、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート（cholinate）、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リシン、メグルミン、ピペラジンおよびトロメタミンが含まれる。

本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的な方法により塩基性または酸性部分から合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を、化学量論量の適切な塩基（例えば、Ｎａ、Ｃａ、ＭｇまたはＫの水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩など）と反応させることにより、またはこれらの化合物の遊離塩基形態を、化学量論量の適切な酸と反応させることにより、調製することができる。そのような反応は、典型的には、水中もしくは有機溶媒中、またはこれらの２つの混合物中で実施される。一般に、実行可能である場合は、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水性媒体の使用が望ましい。追加の適切な塩のリストは、例えば、“Remington's Pharmaceutical Sciences”, 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)および“Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use” by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)において見出すことができる。

本明細書に提示される任意の式は、化合物の非標識形態と共に同位体標識形態を表すことも意図される。同位体標識化合物は、１個または複数の原子が、選択される原子質量または質量数を有する原子で置き換えられていることを除いて、本明細書に提示されている式により表される構造を有する。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例には、それぞれ^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｆ ^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^１２５Ｉなどの水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体が含まれる。本発明は、本明細書において定義される様々な同位体標識化合物、例えば^３Ｈおよび^１４Ｃなどの放射性同位体、または^２Ｈおよび^１３Ｃなどの非放射性同位体が存在するものを含む。そのような同位体標識化合物は、代謝研究（^１４Ｃ）、反応動力学研究（例えば、^２Ｈもしくは^３Ｈ）、薬物もしくは基質組織分布アッセイを含む陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）もしくは単一光子放出型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）などの検出もしくは画像化技術、または患者の放射線治療において有用である。特に、^１８Ｆまたは標識化合物は、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ研究にとって特に望ましいことがある。式（Ｉ）の同位体標識化合物は、一般に、当業者に公知の従来技術により、または以前に用いられた非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用して、添付の実施例および調製例に記載されているものと類似のプロセスにより調製することができる。

更に、より重い同位体、特に重水素（すなわち、^２ＨまたはＤ）による置換は、より大きな代謝安定性、例えばインビボ半減期の増加、または投与必要量の低減、または治療指数の改善による、ある特定の治療上の利点をもたらし得る。そのようなより重い同位体、特に重水素の濃度は、同位体濃縮係数により定義することができる。用語「同位体濃縮係数」は、本明細書で使用されるとき、同位体存在度と特定の同位体の天然存在度との比を意味する。本発明の化合物における置換基が、示される重水素である場合、そのような化合物は、それぞれ指定された重水素原子の同位体濃縮係数の少なくとも３５００（それぞれ指定された重水素原子における５２．５％の重水素取り込み）、少なくとも４０００（６０％の重水素取り込み）、少なくとも４５００（６７．５％の重水素取り込み）、少なくとも５０００（７５％の重水素取り込み）、少なくとも５５００（８２．５％の重水素取り込み）、少なくとも６０００（９０％の重水素取り込み）、少なくとも６３３３．３（９５％の重水素取り込み）、少なくとも６４６６．７（９７％の重水素取り込み）、少なくとも６６００（９９％の重水素取り込み）、または少なくとも６６３３．３（９９．５％の重水素取り込み）を有する。

本発明の薬学的に許容される溶媒和物には、結晶化の溶媒が同位体により置換され得るもの、例えばＤ_２Ｏ、ｄ^６−アセトン、ｄ^６−ＤＭＳＯ、ならびに非濃縮溶媒による溶媒和物が含まれる。

本発明の化合物、すなわち、水素結合のドナーおよび／またはアクセプターとして作用することができる基を含有する式（Ｉ）の化合物は、適切な共結晶形成剤と共結晶を形成する能力があり得る。これらの共結晶は、公知の共結晶形成手順により式（Ｉ）の化合物から調製することができる。そのような手順には、粉砕、加熱、同時昇華、同時溶融、または式（Ｉ）の化合物を結晶化条件下において共結晶形成剤と溶液中で接触させ、それにより形成された共結晶を単離することを含む。適切な共結晶形成剤には、ＷＯ２００４／０７８１６３に記載されたものが含まれる。したがって、本発明は、式（Ｉ）の化合物を含む共結晶を更に提供する。

本発明の化合物の任意の不斉原子（例えば、炭素など）は、ラセミ体に、または鏡像異性的に濃縮されて、例えば、（Ｒ）−、（Ｓ）−または（Ｒ，Ｓ）−配置で存在することができる。ある特定の実施形態において、各不斉原子は、少なくとも５０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも６０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも７０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも８０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも９０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも９５％の鏡像異性体過剰率、または少なくとも９９％の鏡像異性体過剰率を、（Ｒ）−または（Ｓ）−配置に有し、すなわち、光学的に活性な化合物では、一方の鏡像異性体を使用し、他方の鏡像異性体を実質的に除外することが多くの場合に好ましい。不飽和二重結合を有する原子における置換基は、可能であれば、ｃｉｓ−（Ｚ）−またはｔｒａｎｓ−（Ｅ）−形態で存在することができる。

したがって、本明細書で使用されるとき、本発明の化合物は、例えば実質的に純粋な幾何（シスまたはトランス）異性体、ジアステレオマー、光学異性体（対掌体）、ラセミ化合物またはこれらの混合物として、可能な異性体、回転異性体、アトロプ異性体、互変異性体またはこれらの混合物のうちの１つの形態であり得る。「実質的に純粋」または「他の異性体を実質的に含まない」は、本明細書で使用されるとき、生成物が、好ましい異性体の量に対して、他の異性体を、重量に基づいて５％未満、好ましくは２％未満含有することを意味する。

異性体の得られる任意の混合物を、例えばクロマトグラフィーおよび／または分別結晶法により、構成成分の物理化学的な差に基づいて、純粋または実質的に純粋な幾何または光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ化合物に分離することができる。

最終生成物または中間体の得られる任意のラセミ化合物を、公知の方法により、例えば、光学的に活性な酸または塩基により得たそれらのジアステレオマー塩を分離し、光学的に活性な酸性または塩基性化合物を遊離させることにより、光学的対掌体に分割することができる。特に、このように塩基性部分を用いて、光学的に活性な酸、例えば酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸またはカンファー−１０−スルホン酸により形成された塩の例えば分別結晶法により、本発明の化合物をこれらの光学的対掌体に分割することができる。ラセミ生成物を、キラルクロマトグラフィー、例えば、キラル吸着剤を使用する高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分割することもできる。

更に、その塩が含まれる本発明の化合物は、水和物の形態で得ること、またはそれらの結晶化に使用される他の溶媒和物を含むこともできる。本発明の化合物は、本質的に、または設計により、薬学的に許容される溶媒（水を含む）と溶媒和物を形成することができ、したがって、本発明は溶媒和と非溶媒和の両方の形態を包含することが意図される。用語「溶媒和物」は、本発明の化合物（その薬学的に許容される塩を含む）と、１つまたは複数の溶媒分子との分子複合体を指す。そのような溶媒分子は、薬学分野において一般的に使用されるものであり、これらは受容者に無害であることが知られており、例えば水、エタノールなどである。用語「水和物」は、溶媒分子が水である複合体を指す。

その塩、水和物および溶媒和物が含まれる本発明の式（Ｉ）の化合物は、本質的に、または設計により多形体を形成することができる。

用語「チオール−マレイミド」は、本明細書で使用されるとき、チオールとマレイミドとの反応により形成され、この一般式

［式中、ＹおよびＺは、チオール−マレイミド連結を介して接続される基である］を有する基を指し、リンカー構成成分、抗体またはペイロードを含むことができる。

「切断可能」は、本明細書で使用されるとき、共有接続により２つの部分を接続するが、生理学的に関連する条件下で分解して、部分の間の共有接続を切断するリンカーまたはリンカー構成成分を指し、典型的には、切断可能なリンカーは、インビボにおいて、細胞の外側よりも細胞内環境で素早く切断され、ペイロードの放出を標的細胞の内側で優先的に生じさせる。切断は、酵素的または非酵素的であり得るが、一般に、ペイロードを、抗体を分解することなく抗体から放出させる。切断は、ペイロードに結合しているリンカーもしくはリンカー構成成分の一部を残すことがある、またはリンカーの残留部分または構成成分なしで、ペイロードを放出することができる。

「Ｐｃｌ」は、本明細書で使用されるとき、ピロリンカルボキシリシンを指し、例えば、

であり、ここでＲ^２０はＨであり、ペプチドに組み込まれたときには以下の式を有する。

Ｒ^２０がメチルである対応する化合物は、ピロリシンである。

「非切断性」は、本明細書で使用されるとき、生理学的条件下での分解にとりわけ感受性があるわけではない、リンカーまたはリンカー構成成分を指し、例えば、少なくとも免疫抱合体の抗体または抗原結合フラグメント部分と同じほど安定している。そのようなリンカーは、時々、「安定している」と呼ばれ、それは、ペイロードを抗原結合部分Ａｂに、Ａｂがそれ自体少なくとも部分的に分解されるまで、すなわち、Ａｂの分解がインビボにおけるリンカーの切断に先行するまで接続させ続けるのに十分なほど分解に対して抵抗性があることを意味する。安定している、または非切断性リンカーを有するＡＤＣの抗体部分の分解は、インビボで送達されるペイロードまたは薬物部分に結合しているリンカーの一部または全て、および抗体の１つまたは複数のアミノ酸基を残すことがある。

用語「Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル」、「Ｃ_２〜Ｃ_３アルキル」、「Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル」、「Ｃ_１〜Ｃ_５アルキル」、「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル」および「Ｃ_２〜Ｃ_６アルキル」は、本明細書で使用されるとき、１〜３個の炭素原子、２〜３個の炭素原子、１〜４個の炭素原子、１〜５個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、または２〜６個の炭素原子をそれぞれ含有する、完全に飽和されている分岐鎖または直鎖炭化水素を指す。「Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル」基の非限定的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピルが含まれる。「Ｃ_２〜Ｃ_３アルキル」基の非限定的な例には、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピルが含まれる。「Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル」基の非限定的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。「Ｃ_１〜Ｃ_５アルキル」基の非限定的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびイソペンチルが含まれる。「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル」基の非限定的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチルおよびヘキシルが含まれる。「Ｃ_２〜Ｃ_６アルキル」基の非限定的な例には、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチルおよびヘキシルが含まれる。

本明細書で使用されるとき、用語「アルキレン」は、１〜１０個の炭素原子および他の特徴に結合するために２つの空原子価（open valence）を有する、二価アルキル基を指す。特に提示されない限り、アルキレンは、１〜１０個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子を有する部分を指す。アルキレンの代表例には、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソ−プロピレン、ｎ−ブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、イソ−ブチレン、ｔｅｒｔ−ブチレン、ｎ−ペンチレン、イソペンチレン、ネオペンチレン、ｎ−ヘキシレン、３−メチルヘキシレン、２，２−ジメチルペンチレン、２，３−ジメチルペンチレン、ｎ−ヘプチレン、ｎ−オクチレン、ｎ−ノニレン、ｎ−デシレンなどが含まれるが、これらに限定されない。

用語「Ｃ_１〜Ｃ_３アルコキシ」、「Ｃ_２〜Ｃ_３アルコキシ」、「Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシ」、「Ｃ_１〜Ｃ_５アルコキシ」、「Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ」および「Ｃ_２〜Ｃ_６アルコキシ」は、本明細書で使用されるとき、それぞれ、基−Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル、−Ｏ−Ｃ_２〜Ｃ_３アルキル、−Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル、−Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_５アルキル、−Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、および−Ｏ−Ｃ_２〜Ｃ_６アルキルを指し、ここで基「Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル」、「Ｃ_２〜Ｃ_３アルキル」、「Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル」、「Ｃ_１〜Ｃ_５アルキル」、「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル」および「Ｃ_２〜Ｃ_６アルキル」は、本明細書に定義されているとおりである。「Ｃ_１〜Ｃ_３アルコキシ」基の非限定的な例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシおよびイソプロポキシが含まれる。「Ｃ_２〜Ｃ_３アルコキシ」基の非限定的な例には、エトキシ、ｎ−プロポキシおよびイソプロポキシが含まれる。「Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシ」基の非限定的な例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが含まれる。「Ｃ_１〜Ｃ_５アルコキシ」基の非限定的な例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシおよびイソペンチルオキシが含まれる。「Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ」基の非限定的な例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシおよびヘキシルオキシが含まれる。「Ｃ_２〜Ｃ_６アルコキシ」基の非限定的な例には、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシおよびヘキシルオキシが含まれる。

本明細書で使用されるとき、用語「ハロゲン」（または、ハロ）は、フッ素、臭素、塩素またはヨウ素、特にフッ素または塩素を指す。ハロゲンにより置換されているアルキル（ハロアルキル）などのハロゲン置換基および部分は、モノ−、ポリ−またはペルハロゲン化され得る。

本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロ原子」は、特に提示のない限り、窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）原子、特に窒素または酸素を指す。

用語「４員〜８員ヘテロシクロアルキル」は、本明細書で使用されるとき、飽和４員〜８員単環式炭化水素環構造を指し、ここで炭化水素環構造の１〜２個の環炭素は、１〜２つのＮＲ基で置き換えられており、Ｒは、水素、結合、本明細書に定義されているＲ^５基、または本明細書に定義されているＲ^７基である。４員〜８員ヘテロシクロアルキル基の非限定的な例には、本明細書で使用されるとき、アゼタジニル、アゼタジン−１−イル、アゼタジン−２−イル、アゼタジン−３−イル、ピロリジニル、ピロリジン−１−イル、ピロリジン−２−イル、ピロリジン−３−イル、ピロリジン−４−イル、ピロリジン−５−イル、ピペリジニル、ピペリジン−１−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−５−イル、ピペリジン−６−イル、ピペラジニル、ピペラジン−１−イル、ピペラジン−２−イル、ピペラジン−３−イル、ピペラジン−４−イル、ピペラジン−５−イル、ピペラジン−６−イル、アゼパニル、アゼパン−１−イル、アゼパン−２−イル、アゼパン−３−イル、アゼパン−４−イル、アゼパン−５−イル、アゼパン−６−イル、およびアゼパン−７−イルが含まれる。

用語「６員ヘテロシクロアルキル」は、本明細書で使用されるとき、飽和６員単環式炭化水素環構造を指し、ここで炭化水素環構造の１〜２個の環炭素は、１〜２つのＮＲ基で置き換えられており、Ｒは、水素、結合、本明細書に定義されているＲ^５基、または本明細書に定義されているＲ^７基である。６員ヘテロシクロアルキル基の非限定的な例には、本明細書で使用されるとき、ピペリジニル、ピペリジン−１−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−５−イル、ピペリジン−６−イル、ピペラジニル、ピペラジン−１−イル、ピペラジン−２−イル、ピペラジン−３−イル、ピペラジン−４−イル、ピペラジン−５−イル、およびピペラジン−６−イルが含まれる。

用語「５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル」は、本明細書で使用されるとき、飽和５員〜８員縮合二環式炭化水素環構造を指し、ここで炭化水素環構造の１〜２個の環炭素は、１〜２つのＮＲ基で置き換えられており、Ｒは、水素、結合、本明細書に定義されているＲ^５基、または本明細書に定義されているＲ^７基である。５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル基の非限定的な例には、本明細書で使用されるとき、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニルおよび３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニルが含まれる。

本明細書に使用されている、免疫抱合体の命名規則は、抗体化合物番号であり、化合物番号は、特定の抗体に対する、抱合に使用される式（Ｉ）の化合物を指す。

リンカー
ＡＤＣペイロードとして使用するため本明細書に提供される細胞障害性ペプチドを、リンカーＬに、または直接的に抗原結合部分に結合することができる。そのようなＡＤＣでの使用に適したリンカーは、当技術分野において周知であり、本発明の抱合体に使用することができる。リンカーＬを、抗原結合部分の任意の適した利用可能な位置で抗原結合部分に結合することができ、典型的には、Ｌは、利用可能なアミノ窒素原子（すなわち、アミドではなく第一級または二級アミン）またはヒドロキシル酸素原子、あるいはシステインなどの利用可能なスルフヒドリルに結合される。本明細書に提供される細胞障害性ペプチドへのリンカーＬの結合は、細胞障害性ペプチドのＮ末端、または細胞障害性ペプチドのＣ末端においてであり得る。ＡＤＣに使用される多種多様なリンカーが公知であり（例えば、Lash, Antibody-Drug Conjugates: the Next Generation of Moving Parts, Start-Up, Dec. 2011, 1-6を参照されたい）、本発明の範囲内の抱合体に使用することができる。

式（Ｉ）、式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）のリンカーＬは、１つまたは複数のリンカー構成成分Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、Ｌ_６などを含む連結部分である。ある特定の実施形態において、リンカー構成成分は、隣接する基を一緒に接続する結合を表すことができる。ある特定の実施形態において、Ｌは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。ある特定の実施形態において、リンカー構成成分は、隣接する基を一緒に接続する結合を表すことができる。ある特定の実施形態において、Ｌは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。ある特定の実施形態において、リンカー構成成分は、隣接する基を一緒に接続する結合を表すことができる。ある特定の実施形態において、Ｌは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。ある特定の実施形態において、リンカー構成成分は、隣接する基を一緒に接続する結合を表すことができる。ある特定の実施形態において、Ｌは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。好ましい実施形態において、Ｌは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。ある特定の実施形態において、Ｌは、−Ｌ_１−である。幾つかの好ましいリンカーおよびリンカー構成成分が、本明細書に表される。

式（Ｉ）、式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）のリンカーＬは、二価であってもよく、それは、１つのリンカー毎に１つのペイロードだけを抗原結合部分への連結に使用できることを意味し、または三価であってもよく、１つのリンカー毎に２つのペイロードを抗原結合部分に連結することができ、または多価であってもよい。三価、四価および多価リンカーを使用して、抗原結合部分（例えば、抗体）へのペイロード（薬物）のローディングを増加させることでき、それによって、薬物抗体比（ＤＡＲ）を、複数のリンカーの結合のために抗体に追加の部位を必要とすることなく増加することができる。そのようなリンカーの例は、Bioconjugate Chem., 1999 Mar-Apr;10(2):279-88、ＵＳ６６３８４９９、Clin Cancer Res October 15, 2004 10; 7063およびＷＯ２０１２／１１３８４７Ａ１に提示されている。

式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体に使用されるリンカーＬは、切断可能または非切断性であり得る。ヒドラゾン、ジスルフィド、ジペプチドＶａｌ−Ｃｉｔを含有しているもの、およびグルクロニダーゼ切断可能ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル部分を含有しているものなどの切断可能なリンカーは、当技術分野において周知であり、使用することができる。例えば、Ducry, et al., Bioconjugate Chem., vol. 21, 5-13 (2010)を参照されたい。切断可能なリンカーを含む免疫抱合体では、リンカーは、免疫抱合体が細胞に結合または侵入し、その時点で、細胞内酵素または細胞内の化学的条件（ｐＨ、還元能）のいずれかがリンカーを切断して、細胞障害性ペプチドを遊離させるまで、インビボにおいて実質的に安定している。

あるいは、非切断性リンカーを、式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体に使用することができる。非切断性リンカーは、細胞内で分解するように設計された構造的構成成分を欠いており、したがってその構造は実質的に異なり得る。例えば、Ducry, et al., Bioconjugate Chem., vol. 21, 5-13 (2010)を参照されたい。これらの免疫抱合体は、標的細胞に侵入し、リンカーの分解ではなく抗体のタンパク質分解を受けるので、リンカーの少なくとも一部または全て、更には抗体または抗体フラグメントの一部もペイロードに結合したままであり得ると考えられる。

式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカーＬは、典型的には、一般に、２つ以上のリンカー構成成分を含有し、これらは抱合体の組み立てに好都合なように選択され得る、または抱合体の特性に影響を与えるように選択され得る。リンカーＬを形成するのに適したリンカー構成成分は、当技術分野において公知であり、リンカーＬを構築する方法も同様である。リンカー構成成分には、基をアミノ酸に結合するのに一般的に使用される基、アルキレン基およびエチレンオキシドオリゴマーなどのスペーサー、アミノ酸、および約４アミノ酸長さまでの短ペプチド；結合；ならびにカルボニル、カルバミン酸、炭酸、尿素、エステルおよびアミド連結などが含まれ得る。リンカー構成成分は、チオール−マレイミド基、チオエーテル、アミドおよびエステル；ジスルフィド、ヒドラゾン、Ｖａｌ−Ｃｉｔのようなジペプチド、置換ベンジルオキシカルボニル基などの、標的細胞において、またはそれに対する、またはその周囲に見出される条件下でインビボにおいて容易に切断される基；フェニル、ヘテロアリール、シクロアルキルまたはヘテロシクリル環およびアルキレン鎖などの、ペイロードを抗原結合部分に対して適切な位置に配向させるスペーサー；ならびに／あるいは１つまたは複数の極性基（カルボキシ、スルホネート、ヒドロキシル、アミン、アミノ酸、糖）により置換されているアルキレン、およびｐが１〜１０であるグリコールエーテル（−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−）_ｐなどのメチレン基の代わりに１つまたは複数の−ＮＨ−または−Ｏ−を含むアルキレン鎖などの、例えば可溶性を増強、または分子間凝集を低減し得る薬物動態特性増強基を含むことができる。

加えて、リンカー構成成分は、２つの反応性基間の反応によって容易に形成される化学部分を含むことができる。そのような化学部分の非限定的な例は、表１に提示されている。

ここで、表１のＲ^３２は、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキル、フェニル、ピリミジンまたはピリジンであり、表１のＲ^３５は、Ｈ、Ｃ_１〜６アルキル、フェニル、または１〜３個の−ＯＨ基により置換されているＣ_１〜４アルキルであり、表１の各Ｒ^３６は、Ｈ、Ｃ_１〜６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨにより置換されているベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨにより置換されているベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨにより置換されているＣ_１〜４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨにより置換されているＣ_１〜４アルキルから独立して選択され、表１のＲ^３７は、Ｈ、フェニルおよびピリジンから独立して選択され、表１の各Ｒ^５は、ＨまたはＣ_１〜６アルキルから独立して選択され、表１のＲ^１２は、Ｈ、−ＣＨ_３またはフェニルであり、表１のＲ^５０は、Ｈまたはニトロである。

幾つかの実施形態において、式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカーＬのリンカー構成成分は、反応性官能基と、抱合に一般的に使用されるアミノ酸側鎖のうちの１つとの反応により形成される基であり、例えば、システインのチオール、またはリシンの遊離−ＮＨ_２、または抗体に組み込まれたＰｃｌもしくはＰｙｌ基である。例えば、Ou, et al., PNAS 108(26), 10437-42 (2011)を参照されたい。抗原結合部分のシステイン残基との反応により形成されるリンカー構成成分には、

が含まれるが、これらに限定されない。各ｐが１〜１０であり、各Ｒが独立してＨまたはＣ_１〜４アルキル（好ましくは、メチル）である、抗原結合部分のリシン残基の−ＮＨ_２との反応により形成されるリンカー構成成分には、

が含まれるが、これらに限定されない。ＰｃｌまたはＰｙｌ基との反応により形成されるリンカー構成成分には、

が含まれるが、これらに限定されず、ここで、Ｒ^２０は、ＨまたはＭｅであり、Ｒ^３０は、Ｈ、Ｍｅまたはフェニルであり、連結すると、アシル基が示されているところが、改変抗体におけるＰｃｌまたはＰｙｌのリシン部分と結合する。Ａｂジスルフィド架橋、

と、ヒドロキシルアミンを含有する式（Ｉ）の化合物との反応により形成されるリンカー構成成分は、

である。Ａｂジスルフィド架橋、

である。

幾つかの実施形態において、式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカーＬのリンカー構成成分には、例えば、アルキレン基−（ＣＨ_２）_ｎ−（ここでｎは、典型的には１〜１０または１〜６である）、エチレングリコール単位（−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−）_ｎ（ここでｎは、１〜２０、典型的には１〜１０または１〜６である）、−Ｏ−、−Ｓ−、カルボニル（−Ｃ（＝Ｏ）−）、アミド−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、エステル−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、フェニル（１，２−、１，３−および１，４−二置換フェニルを含む）、Ｃ_５〜６ヘテロアリール、１，１−二置換シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルおよび１，４−二置換シクロヘキシルを含むＣ_３〜８シクロアルキル、およびＣ_４〜８ヘテロシクリル環から選択される二価環などの、２つの利用可能な結合点を有する環系、ならびに下記に表される具体例、アミノ酸−ＮＨ−ＣＨＲ^＊−Ｃ＝Ｏ−もしくは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＲ^＊−ＮＨ−、または式：［Ｎ］−ＣＨＲ^＊−Ｃ（＝Ｏ）−を有する隣接構造のＮ（例えば、マレイミド窒素）に結合するアミノ酸から誘導される基が含まれ、ここでＲ^＊は、公知のアミノ酸の側鎖（頻繁には、例えばｔｒｐ、ａｌａ、ａｓｐ、ｌｙｓ、ｇｌｙなどの標準アミノ酸のうちの１つであるが、例えばノルバリン、ノルロイシン、ホモセリン、ホモシステイン、フェニルグリシン、シトルリンおよび他の一般的な名称のアルファ−アミノ酸も含む）、公知のアミノ酸のポリペプチド（例えば、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドなど）、チオール−マレイミド連結（マレイミドへの−ＳＨの付加による）、−Ｓ−ＣＲ_２−、および−Ｓ−ＣＲ_２−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＲ_２−Ｓ−（式中Ｒは出現毎に独立してＨまたはＣ_１〜４アルキルである）、−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−などの他のチオールエーテル、およびジスルフィド（−Ｓ−Ｓ−）であり、ならびにこれらのうちのいずれかと、下記に記載されている他のリンカー構成成分との組合せ、例えば、結合、非酵素的に切断可能なリンカー、非切断性リンカー、酵素的に切断可能なリンカー、光安定性リンカー、光により切断可能なリンカー、または自壊的（self-immolative）スペーサーを含むリンカーが含まれる。

ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカーＬは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカーＬは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカーＬは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカーＬは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカーＬは、−^＊Ｌ_１Ｌ_２−であり、ここで^＊は、本発明の細胞障害性ペプチドへの結合部位を示す。ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物のリンカーＬは、−Ｌ_１−である。

式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカー構成成分Ｌ_１は−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、

、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｘ_４−、−Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ
_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ^ａａＮＲ^１２−、−ＣＨＲ^ａａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｓ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ_１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＲ_１２−、

から選択され、
ここで、
Ｒ^２０は、ＨまたはＭｅであり、Ｒ^３０は、Ｈ、−ＣＨ_３またはフェニルであり；
Ｒ^２１は、

であり；
各Ｒ^２５は、ＨまたはＣ_１〜４アルキルから独立して選択され；
Ｒ^ａａは、グリシン、アラニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、ヒスチジン、アルギニン、リシン、システイン、メチオニン、セリン、トレオニン、フェニルグリシン、およびｔ−ブチルグリシンから選択されるアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ^３２は、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキル、フェニル、ピリミジンおよびピリジンから独立して選択され；
Ｒ^３３は、

から独立して選択され；
Ｒ^３４は、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキルおよびＣ_１〜６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｘ_１は、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２は、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３は、

であり、Ｘ_４は、

式（Ｉ）の化合物、ならびに式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体のリンカー構成成分Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、結合、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｘ_４−、−Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ
_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ^ａａＮＲ^１２−、−ＣＨＲ^ａａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｓ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ_１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＲ_１２−、

；
からそれぞれ独立して選択され、
ここで、
Ｒ^２０は、ＨまたはＭｅであり、Ｒ^３０は、Ｈ、−ＣＨ_３またはフェニルであり；
Ｒ^２１は、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２は、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３は、

であり、Ｘ_４は、

細胞障害性ペプチド
本発明の細胞障害性ペプチド、またはその立体異性体、およびその薬学的に許容される塩は、式（Ｉ）

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０は、

、−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２、−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨＬＲ^９、−ＬＲ^９、または−Ｘ_４ＬＲ^９であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５は、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり、これは非置換であるか、または−ＬＲ^９により置換されており；
各Ｒ^１９は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり；
Ｘ_３は、

であり、Ｘ_４は、

であり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の構造を有する化合物である。

本発明の一態様では、式（Ｉ）

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^７は、ＬＲ^９であり；
Ｒ^８は、ＨまたはＬＲ^９であり；
各Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−、−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から独立して選択されるリンカーであり（ここで、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、本明細書に定義されているとおりである）；
Ｒ^９は、

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０は、

、−ＬＲ^９、または−Ｘ_４ＬＲ^９であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５は、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり、これは非置換であるか、または−ＬＲ^９により置換されており；
Ｘ_３は、

であり、Ｘ_４は、

であり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の構造を有する細胞障害性ペプチド、またはその立体異性体、およびその薬学的に許容される塩である。

合成方法
本発明の化合物を合成するために利用される全ての出発材料、構成単位、試薬、酸、塩基、脱水剤、溶媒および触媒は、市販されているか、または当業者に公知の有機合成法により生成することができる（例えば、Houben-Weyl 4th Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volume 21を参照されたい）。更に、本発明の化合物は、以下の例を考慮して、当業者に公知の有機合成方法により生成することができる。

式（Ｉ）およびその下位式の化合物への合成手法の説明例は、以下の一般的なスキームで提供される。以下のスキームにおいて、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、およびＬは、本明細書に定義されているとおりである。一般的なスキームは、様々な合成ステップに使用される特定の試薬を示しているが、他の公知の試薬を使用して、そのような合成ステップを達成できることが理解される。

Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれが非置換であるか、またはそれぞれ、Ｒ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている、式（Ｉ）およびその下位式の化合物への合成手法が、下記のスキーム１〜３に示されている。

スキーム１において、Ｒ^３は、アミド結合形成を介して短ペプチドにカップリングされ、その後に、アミド結合形成を介したＲ^１のカップリングによる脱保護ステップが続く。スキーム１では、例として、

は、

であることができ、これらはカップリングの後に続いて脱保護される。スキーム１では、例として、

は、

でもあり得る。

スキーム２は、式（Ｉ）およびその下位式の化合物への１つの例示的な合成手法を説明し、ここで、Ｒ^３は、

であり、Ｒ^４は、−ＯＨまたは−ＯＣＨ_３である。スキーム２において、Ｒ^３は、アミド結合形成を介して短ペプチドにカップリングされ、その後に、アミド結合形成を介したＲ^１のカップリングによる脱保護ステップが続く。スキーム２では、例として、

は、

でもあり得る。

スキーム３は、式（Ｉ）およびその下位式の化合物への１つの例示的な合成手法を説明し、ここで、Ｒ^３は、

である。スキーム３において、Ｒ^３は、アミド結合形成を介して短ペプチドにカップリングされ、その後に、アミド結合形成を介したＲ^１のカップリングによる脱保護ステップが続く。スキーム３では、例として、

は、

でもあり得る。

Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれがＲ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている、式（Ｉ）およびその下位式のＮ末端連結化合物への合成手法が、下記のスキーム４〜６に示されている。

スキーム４において、Ｒ^３は、アミド結合形成を介して短ペプチドにカップリングされ、その後に、アミド結合形成を介したＲ^１のカップリングによる脱保護ステップが続く。スキーム３では、例として、

は、

であり得る。

スキーム５において、Ｒ^１は、最初に、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれが非置換であるか、またはそれぞれ、Ｒ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されており（スキーム１〜３を参照されたい）、次にＲ^７が後に結合されて、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルを得るか、またはＲ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、それぞれ、Ｒ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている。説明例を下記のスキームに示す。

あるいは、Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれが非置換であるか、またはそれぞれ、Ｒ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されており（スキーム１〜３を参照されたい）、次にＲ^７が後に結合されて、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルを得るか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、それぞれ、Ｒ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている、式（Ｉ）およびその下位式の化合物は、スキーム６に見られる２ステッププロセスによって得られる。

ここで、ＲＧ_１およびＲＧ_２は、表１に提示されているものなどの反応性基であり、Ｌ’は、１つまたは複数のリンカー構成成分である。

説明例を下記のスキームに示す。

Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれがＲ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている、式（Ｉ）およびその下位式のＣ末端連結化合物への１つの合成手法が、下記のスキーム７に示されている。

スキーム８
Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれがＲ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている、式（Ｉ）およびその下位式のＣ末端連結化合物への代替的な合成手法が、下記のスキーム８に示されている。

Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれがＲ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている、式（Ｉ）およびその下位式のＣ末端連結化合物への代替的な合成手法が、下記のスキーム９に示されている。

Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれがＲ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている、式（Ｉ）およびその下位式のＣ末端連結化合物への代替的な合成手法が、下記のスキーム１０に示されている。

Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれがＲ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている、式（Ｉ）およびその下位式のＣ末端連結化合物への代替的な合成手法が、下記のスキーム１１に示されている。

Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここでそれぞれがＲ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている、式（Ｉ）およびその下位式のＣ末端連結化合物への代替的な合成手法が、下記のスキーム１２に示されている。

スキーム７〜１２では、例として、

は、

でもあり得る。あるいは、スキーム７〜１２において、Ｒ^５を、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む非置換Ｃ連結６員ヘテロシクロアルキルの脱保護の後に、または非置換Ｒ^１が、１〜２個のヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルである場合に、続く

のいずれかとの反応によって、結合させることができる。

本発明は、任意の段階で得られる中間生成物を出発材料として使用し、残りのステップを実施する、または出発材料を反応条件下においてその場で形成する、または反応構成成分を、塩もしくは光学的に純粋な材料の形態で使用する、本プロセスの任意の変形を更に含む。

以下の実施例は、本発明を説明することが意図され、制限的であると解釈されるべきではない。温度は摂氏で提示される。特に記述のない場合、全ての蒸発は、減圧下、典型的には約１５ｍｍＨｇ〜１００ｍｍＨｇ（＝２０〜１３３ｍｂａｒ）の間で実施される。使用される略語は、当技術分野において慣用的なものである。全ての反応は、市販等級の溶媒を更に蒸留することなく使用して、窒素下で実施した。試薬は、市販等級のものを更に精製することなく使用した。薄層クロマトグラフィーは、ＴＬＣシリカゲルプレートを使用して実施した。カラムクロマトグラフィーは、フラッシュグレードプレパックド（flash grade prepacked）Ｒｅｄｉｓｅｐ（登録商標）カラムを使用するＩＳＣＯＣｏｍｂｉｆｌａｓｈＣｏｍｐａｎｉｏｎシステムを使用して、実施した。

分取ＨＰＬＣは、以下の条件を使用して、ＷａｔｅｒｓＡｕｔｏｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎシステムにより実施した。ＣｏｌｕｍｎＳｕｎｆｉｒｅＣ１８３０×１００ｍｍ、５μｍ、３０ｍｌ／分での水＋０．０５％ＴＦＡ中ＣＨ_３ＣＮ〜ＣＨ_３ＣＮによる勾配溶出。

分析方法
特に指示のない限り、以下のＨＰＬＣおよびＨＰＬＣ／ＭＳ方法を、中間体および実施例の調製に使用した。
ＬＣ／ＭＳ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００ｓｌ／６１４０システムにより実施した。
カラム：ＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＨＳＳＴ３Ｃ１８、５０×２．０、１．８μｍ
移動相：Ａ）Ｈ_２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル＋０．０３５％ＴＦＡ

ポンプ法：

ＭＳパラメーター：

中間体の合成手順
（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）エタンアミン（ｉ−１）の合成

ステップ１：（Ｓ）−２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−フェニルプロパン酸（２００ｍｇ、０．７５４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５．５ｍｌ）に０℃で加え、続いてカルボニルジイミダゾール（１２８ｍｇ、０．７９２ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で３０分間撹拌した後、ベンゾヒドラジド（１０３ｍｇ、０．７５４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で更に４５分後、四臭化炭素（４９７ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（１９８ｍｇ、０．７５４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で２時間、次に室温で１６時間撹拌した。水を混合物に加え、ＤＣＭ（５ｍｌ×３）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲルカラム（ヘキサン中２０〜４０％の酢酸エチル）により精製して、ｔ−ブチル［（１Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）エチル］カルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ３６６（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．３５１分間。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 8.03 - 7.85 (m, 2H), 7.62 - 7.38 (m, 3H), 7.33 - 7.16 (m, 3H), 7.18 - 7.04 (m, 2H), 5.35 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.28 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.54 (s, 9H).

ステップ２：ＤＣＭ（５ｍｌ）中のステップ１で得た化合物（５４８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）に、ＴＦＡ（１．５ｍｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１８時間撹拌し、次に濃縮して、（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）エタンアミン（ｉ−１）のＴＦＡ塩を得た。これを更に精製することなく使用した。ＭＳｍ／ｚ２６６（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．８５８分間。

２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エタンアミン（ｉ−２）の合成
ベンジルマグネシウムクロリド（１．２ｍｌ、２．４ｍｍｏｌ）（ＴＨＦ中２Ｍ）を、トルエン（１０ｍｌ）中の２−シアノピリミジン（２１０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）に０℃で滴下添加した。反応物をこの温度で１時間撹拌した。次に２−ブタノール（１０ｍｌ）、続いて水素化ホウ素ナトリウム（１０６ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌し、次にＭｅＯＨ（３ｍｌ）および水でクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（０．０５％ＴＦＡを有する水中１０〜３０％のアセトニトリル）により精製して、２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エタンアミン（ｉ−２）を得た。ＭＳｍ／ｚ２００．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．６３７分間。¹H NMR (400 MHz, アセトニトリル-d3) δ 8.75 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 7.27 (m, 3H), 7.14 - 7.05 (m, 2H), 4.84 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 14.1, 6.3 Hz, 1H), 3.33 (dd, J = 14.1, 7.1 Hz, 1H).

（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミン（ｉ−３）の合成

ステップ１：ヒドラジン一水和物（０．０３４ｍｌ、０．６９ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（５ｍｌ）中の（Ｓ，Ｅ）−ｔ−ブチル（５−（ジエチルアミノ）−３−オキソ−１−フェニルペンタ−４−エン−２−イル）カルバメート（６０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）に加えた。反応物を７０℃で２時間、次に５０℃で３日間加熱した。反応混合物を濃縮し、水に溶解し、ＤＣＭ（５ｍｌ×２）で抽出した。ＤＣＭ層を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、シリカゲル分取ＴＬＣ（ＤＣＭ中４％のＭｅＯＨ）により精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（２−フェニル−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）カルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ２８８．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．３１０分間。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 7.53 - 7.35 (m, 1H), 7.28 - 6.90 (m, 5H), 6.01 (s, 1H), 5.47 - 5.25 (m, 0.3 H), 5.15 - 4.84 (m, 0.7H), 3.40 (s, 1H), 3.09 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 1.34 (d, J = 31.2 Hz, 9H).

ステップ２：ＤＣＭ（２ｍｌ）中のステップ１で得た化合物（３８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＦＡ（０．５ｍｌ）により室温で２時間処理し、次に濃縮して、（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミンのＴＦＡ塩（ｉ−３）を得た。生成物を更に精製することなく次のステップに使用した。ＭＳｍ／ｚ１８８．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．６１６分間。

（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバメート（ｉ−４）の合成

ステップ１：ＴＨＦ（１Ｍ、１０ｍｌ）中のＢＨ_３を、ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の（Ｓ）−２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−ニトロフェニル）プロパン酸（５６２ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）に、０℃で撹拌しながら加えた。次に反応物を５０℃で１時間撹拌した。反応混合物を０℃で冷却し、水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、１０％Ｋ_２ＣＯ_３水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗物質を、シリカゲルカラム（３０〜７０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−ヒドロキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバメートを白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ３１９．１（Ｍ＋Ｎａ）。保持時間１．１８３分間。1H NMR (600 MHz, クロロホルム-d) δ 8.13 - 8.04 (m, 2H), 7.57 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.9, 7.6 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 3.87 (dq, J = 8.0, 4.6, 4.1 Hz, 1H), 3.69 (dd, J = 10.9, 3.9 Hz, 1H), 3.58 (dd, J = 10.8, 4.7 Hz, 1H), 2.97 (td, J = 13.1, 12.5, 7.3 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H).

ステップ２：アセトニトリル（５ｍｌ）中の（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−ヒドロキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバメート（０．３１ｇ、１．０ｍｍｏｌ）に、１０％塩酸（５ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で４８時間撹拌し、次に濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−１−オールをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ１９７．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．７７５分間。

ステップ３：（Ｓ）−２−アミノ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−１−オールのＨＣｌ塩（０．２４３ｇ、１．０４６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍｌ）に溶解し、１０％パラジウム担持炭（５０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を加えた。２Ｌの水素バルーンを取り付けた。反応物をＨ_２で３回フラッシュし、次に室温で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。反応物をセライトパッドを通して濾過し、濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−３−（３−アミノフェニル）プロパン−１−オールをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ１６７．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．３７３分間。

ステップ４：（Ｓ）−２−アミノ−３−（３−アミノフェニル）プロパン−１−オールのＨＣｌ塩（０．２１２ｇ、１．０４６ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ_２Ｏ（２２８ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）およびジオキサン−水−ＡｃＯＨ（１０：９：１、２０ｍｌ）を合わせ、室温で３日間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が７５％完了したことを示した。追加のＢｏｃ_２Ｏ（１５０ｍｇ）を加え、反応物を更に６時間撹拌した。次に反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（０．０５％ＴＦＡを有する水中１０〜４０％のアセトニトリル）により精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバメート（ｉ−４）を油状物として得た。ＭＳｍ／ｚ２６７．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．０１１分間。

（Ｓ）−ｔ−ブチル（４−（２−アミノ−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバメート（ｉ−５）の合成

ステップ１：ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の（Ｓ）−２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（４−ニトロフェニル）プロパン酸（０．８０ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）に、ボランジメチルスルフィド錯体（１．００ｍｌ、１０．５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応物を０℃で１０分間、次に室温で５時間撹拌した。次に反応物を水により０℃でクエンチした。クエンチした混合物を、ＤＣＭと１ＭＮａ_２ＣＯ_３水溶液に分配した。ＤＣＭ層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−ヒドロキシ−３−（４−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバメートを白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ３１９．１（Ｍ＋Ｎａ）。保持時間１．０３１分間。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 8.10 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 4.73 (s, 1H), 3.83 (s, 1H), 3.70 - 3.56 (m, 1H), 3.50 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 2.91 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.32 (s, 9H).

ステップ２：アセトニトリル（５ｍｌ）および１０％塩酸（５ｍｌ）中の（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−ヒドロキシ−３−（４−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバメート（３００ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を、室温で４時間撹拌し、次に濃縮した。残留物を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液で処理し、ＣＤＭ−ｉＰｒＯＨ（１０：１、１０ｍｌ×３）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥し、濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）プロパン−１−オールを得た。ＭＳｍ／ｚ１９７．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．５１２分間。¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 8.32 - 7.92 (m, 2H), 7.41 - 7.21 (m, 2H), 4.18 - 4.00 (m, 1H), 3.66 - 3.49 (m, 2H), 3.49-3.36 (m, 1H), 3.25-3.00 (m, 1H), 3.01 - 2.74 (m, 2H), 2.70-2.65 (m, 1H).

ステップ３：（Ｓ）−２−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）プロパン−１−オール（２００ｍｇ、１．０１９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍｌ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）を加えた。２Ｌの水素バルーンを取り付けた。反応物をＨ_２で３回フラッシュし、次に室温で３時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、次に濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−３−（４−アミノフェニル）プロパン−１−オールを得た。ＭＳｍ／ｚ１６７．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．２４０分間。

ステップ４：（Ｓ）−２−アミノ−３−（４−アミノフェニル）プロパン−１−オール（１６８ｍｇ、１．０１２ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（１０ｍｌ）−水（９ｍｌ）−ＡｃＯＨ（１ｍｌ）に溶解し、ｔ−ブチルジカーボネート（０．２８ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）と合わせ、室温で１６時間撹拌した。次に反応混合物を濃縮し、０．０５％ＴＦＡを有する水中１０〜４０％のアセトニトリルで溶出する、Ｃ１８カラムを使用するＩＳＣＯにより精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（４−（２−アミノ−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバメートＴＦＡ（ｉ−５）を得た。ＭＳｍ／ｚ２６７．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．７６４分間。¹H NMR (400 MHz, アセトニトリル-d3) δ7.59 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.14 (s, 3H), 3.69 (dd, J = 11.7, 3.2 Hz, 1H), 3.57 - 3.36 (m, 2H), 2.86 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H).

（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−メトキシプロピル）フェニル）カルバメート（ｉ−６）の合成

ステップ１：ボランジメチルスルフィド錯体（３．００ｍｌ、３１．６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の（Ｓ）−２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−ニトロフェニル）プロパン酸（１．５ｇ、４．８３ｍｍｏｌ）に０℃で加えた。反応物を０℃で１０分間、次に室温で６時間撹拌した。次に反応物を水により０℃でクエンチした。クエンチした反応混合物を、ＤＣＭと１ＭＮａ_２ＣＯ_３水溶液に分配した。ＤＣＭ層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−ヒドロキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバメートを白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ３１９．１（Ｍ＋Ｎａ）。保持時間１．０３１分間。¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ8.14 - 7.97 (m, 2H), 7.57 (dt, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.8, 7.6 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.69 (dd, J = 10.9, 3.8 Hz, 1H), 3.58 (dd, J = 10.9, 4.7 Hz, 1H), 2.95 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H).

ステップ２：ＴＨＦ／ＤＭＦ４：１（１０ｍｌ）中の（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−ヒドロキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバメート（０．２００ｇ、０．６７５ｍｍｏｌ）に、０℃で、ＮａＨ（鉱油中６０％、０．０４８ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、続いてヨウ化メチル（０．１９ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。反応物を、泡立ち（Ｈ_２）が観察されなくなるまで、水のゆっくりとした添加によって注意深くクエンチした。粗生成物をＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、０．０５％ＴＦＡを有する水中３０〜６７％のＡＣＮで溶出する、Ｃ１８カラムを使用するＩＳＣＯにより精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−メトキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバメートを白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ３３３．１（Ｍ＋Ｎａ）。保持時間１．２０５分間。¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) d 8.10 (dd, J = 4.5, 2.5 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 8.8, 7.6 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.07 - 3.88 (m, 1H), 3.43 - 3.28 (m, 5H), 2.98 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H).

ステップ３：アセトニトリル（３ｍｌ）および１０％塩酸（３ｍｌ）中の（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−メトキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバメート（１２４ｍｇ、０．４００ｍｍｏｌ）を、室温で４時間撹拌し、次に濃縮した。飽和Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を残留物に加え、得られた混合物をＣＤＭ−ｉＰｒＯＨ（１０：１、１０ｍｌ×３）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥し、濃縮して、（Ｓ）−１−メトキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−アミンを得た。ＭＳｍ／ｚ２１１．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．６２２分間。

ステップ４：（Ｓ）−１−メトキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−アミンをＭｅＯＨ（１０ｍｌ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）を加えた。２Ｌの水素バルーンを取り付けた。反応物をＨ_２で３回フラッシュし、次に室温で３時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、次に濃縮して、（Ｓ）−３−（２−アミノ−３−メトキシプロピル）アニリンを得た。ＭＳｍ／ｚ１８１．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．２８２分間。

ステップ５：ジオキサン（３ｍｌ）−水（３ｍｌ）−ＡｃＯＨ（０．６ｍｌ）中の（Ｓ）−３−（２−アミノ−３−メトキシプロピル）アニリン（６２．６ｍｇ、０．３４７ｍｍｏｌ）と、ｔ−ブチルジカーボネート（０．０９３ｍｌ、０．４ｍｍｏｌ）とを合わせ、室温で１６時間撹拌した。次に反応混合物を濃縮し、０．０５％ＴＦＡを有する水中１０〜４０％のアセトニトリルで溶出する、Ｃ１８カラムを使用するＩＳＣＯにより精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−メトキシプロピル）フェニル）カルバメートのＴＦＡ塩（ｉ−６）を得た。ＭＳｍ／ｚ２８１．２（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．８５６分間。¹H NMR (400 MHz, アセトニトリル-d3) d 7.61 (s, 1H), 7.40 - 7.12 (m, 3H), 6.89 (dt, J = 7.4, 1.5 Hz, 1H), 6.78 (s, 3H), 3.59 (m, 1H), 3.50 (dd, J = 10.6, 3.4 Hz, 1H), 3.38 (dd, J = 10.6, 6.9 Hz, 1H), 3.33 (s, 3H), 2.90 (d, J=7.5 Hz, 3H), 1.48 (s, 9H).

（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸（ｉ−７）の合成

ステップ１：Ｄｉｌ−ＯｔＢｕＨＣｌ塩（３８８ｍｇ、０．９８２ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（２８７ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（４１１ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．４２ｍｌ、２．３８ｍｍｏｌ）と、ＤＭＦ（５ｍｌ）とを合わせ、室温で３０分間撹拌した。反応混合物を水（１０ｍｌ）で希釈し、ＲＰ−Ｃ１８ＩＳＣＯにより精製して、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−ｔ−ブチル４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノエートを得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝５８２．５、ＨＰＬＣピーク保持時間＝１．５４２分間。

ステップ２：１，４−ジオキサン（１０ｍｌ）中の、４ＭＨＣｌ中のステップ１で得た生成物（５４０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を、室温で一晩撹拌した。反応混合物を濃縮して、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝４２６．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝０．７３６分間。

ステップ３：ステップ２で得た生成物（４３０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、３７％ホルムアルデヒド溶液（０．３８ｍｌ、４．７ｍｍｏｌ）、酢酸（０．２７ｍｌ、４．６５ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ_３ＣＮ（５８５ｍｇ、９．３１ｍｍｏｌ）、およびＭｅＯＨ（１０ｍｌ）を合わせ、室温で３０分間撹拌し、次に濃縮した。残留物をＲＰ−Ｃ１８ＩＳＣＯにより精製して、４５０ｍｇの（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸をＴＦＡ塩として得た。ＴＦＡ塩を、１０ｍｌの１２ＮＨＣｌ溶液で処理し、２回濃縮して、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸のＨＣｌ塩（ｉ−７）を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝４４０．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝０．７５４分間。

Ｂｏｃ−Ｄａｐ−ＯＭｅ：（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１，３−ジメトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−カルボキシレート）（ｉ−８）の合成

Ｂｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨ（ＳｍａｌｌＭｏｌｅｃｕｌｅｓＩｎｃ．、３．１１ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（２．９９ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（２．９５ｇ）、およびアセトン（５５ｍＬ）を合わせた。反応を２０℃で２時間撹拌した。追加のヨウ化メチル（２．２８ｇ）を反応物に加え、反応物を４０℃で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。残留物を２００ｍＬのＥｔＯＡｃと１００ｍＬのＨ_２Ｏに分配した。有機層を分離し、５０ｍＬの飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、Ｂｏｃ−Ｄａｐ−ＯＭｅ（ｉ−８）を黄色の油状物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ計算値３２４．２、実測値３２４．２（Ｍ＋２３）。保持時間１．２４５分間。

Ｄａｐ−ＯＭｅ：（（２Ｒ，３Ｒ）−メチル３−メトキシ−２−メチル−３−（（Ｓ）−ピロリジン−２−イル）プロパノエート）（ｉ−９）の合成

Ｂｏｃ−Ｄａｐ−ＯＭｅ（３．１０７ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）を、ジエチルエーテル中のＨＣｌ（２Ｍ、１０ｍＬ）と合わせ、濃縮した。この操作を繰り返した。反応は、７回目の処理の後に完了した。Ｄａｐ−ＯＭｅ（ｉ−９）のＨＣｌ塩を、濃縮した後に白色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ計算値２０２．１、実測値２０２．２（Ｍ＋１）。保持時間０．４８６分間。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 4.065-4.041 (m, 1H), 3.732 (br.s, 1H), 3.706 (s, 3H), 3.615 (s, 3H), 3.368 (br.s, 1H), 3.314 (br.s, 1H), 2.795 (q, 1H, J=6.8Hz), 2.085-1.900 (m, 4H), 1.287 (d, 3H, J=7.2Hz).

（Ｒ）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−オキソ−３−（（２−オキソプロピル）アミノ）プロピル）ブタンアミド（ｉ−１０）の合成

ステップ１：パントテン酸（５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、ジフェニルホスホリルアジド（９８μＬ、０．４６ｍｍｏｌ）および２−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）エタンアミン（４０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、トリエチルアミン（７９μＬ、０．５７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１０分間撹拌し、次に室温で２４時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加え、０．１ＮＨＣｌ溶液（２０ｍＬ）、０．１ＮＮａＯＨ溶液（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過した。濾液を真空中で濃縮し、残留物をＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥して、（Ｒ）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−（（（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）メチル）アミノ）−３−オキソプロピル）ブタンアミドを得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝３１９．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝０．４６６分間。

ステップ２：（Ｒ）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−（（（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）メチル）アミノ）−３−オキソプロピル）ブタンアミド（４６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）および３ＮＨＣｌ溶液（３ｍＬ）に溶解し、室温で４時間撹拌した。０℃に冷却した後、反応混合物を１ＮＮａＯＨ溶液で中和し、真空中で半分の体積に濃縮した。反応混合物をＩＳＣＯＲＰ−Ｃ１８により精製し、凍結乾燥して、（Ｒ）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−オキソ−３−（（２−オキソプロピル）アミノ）プロピル）ブタンアミド（ｉ−１０）を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝２７５．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝０．３３７分間、1H-NMR (MeOD, 400 MHz) δ 3.99 (s, 2H), 3.84 (s, 1H), 3.42〜4.47 (m, 2H), 3.42 (d, 1H, J = 11.2 Hz), 3.34 (d, 1H, J = 11.2 Hz), 2.45 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.10 (s, 3H), 0.87 (s, 6H).

（Ｒ）−Ｎ−（３−（（２−アジドエチル）アミノ）−３−オキソプロピル）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチルブタンアミド（ｉ−１１）の合成

パントテン酸（５０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、ジフェニルホスホリルアジド（９８μＬ、０．４６ｍｍｏｌ）および２−アジドエタンアミン（３０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、トリエチルアミン（７９μＬ、０．５７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１０分間撹拌し、次に室温で２４時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加え、０．１ＮＨＣｌ溶液（２０ｍＬ）、０．１ＮＮａＯＨ溶液（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過した。濾液を真空中で濃縮し、残留物をＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥して、（Ｒ）−Ｎ−（３−（（２−アジドエチル）アミノ）−３−オキソプロピル）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチルブタンアミド（ｉ−１１）を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝２８８．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝０．５０４分間、1H-NMR (MeOD, 400 MHz) δ 3.84 (s, 1H), 3.41〜4.47 (m, 3H), 3.31〜3.35 (m, 5H), 2.40 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 0.87 (s, 6H).

（Ｒ）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−オキソ−３−（（３−オキソブチル）アミノ）プロピル）ブタンアミド（ｉ−１２）の合成

ステップ１：パントテン酸ヘミカルシウム塩（hemicalcium salt）（１００ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_３ＣＮ（１０ｍＬ）に溶解し、硫酸樹脂を使用して、パントテン酸に交換した。パントテン酸（１０ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、ジフェニルホスホリルアジド（２０μＬ、０．０９１ｍｍｏｌ）および２−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）エタンアミン（７ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、トリエチルアミン（１６μＬ、０．１１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１０分間撹拌し、次に室温で２４時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加え、０．１ＮＨＣｌ溶液（２０ｍＬ）、０．１ＮＮａＯＨ溶液（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過した。濾液を真空中で濃縮し、残留物をＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥して、（Ｒ）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−（（２−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）エチル）アミノ）−３−オキソプロピル）ブタンアミドを得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝３３３．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝０．５１２分間。

ステップ２：（Ｒ）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−（（２−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）エチル）アミノ）−３−オキソプロピル）ブタンアミド（６ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）および３ＮＨＣｌ溶液（１ｍＬ）に溶解し、室温で４時間撹拌した。０℃に冷却した後、反応混合物を１ＮＮａＯＨ溶液で中和し、真空中で半分の体積に濃縮した。反応混合物をＩＳＣＯＲＰ−Ｃ１８により精製し、凍結乾燥して、（Ｒ）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−オキソ−３−（（３−オキソブチル）アミノ）プロピル）ブタンアミド（ｉ−１２）を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝２８９．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝０．３６２分間、1H-NMR (MeOD, 400 MHz) δ 3.83 (s, 1H), 3.37〜4.45 (m, 3H), 3.34 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 3.32 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 2.65 (t, 2H, J = 6.4Hz), 2.34 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.10 (s, 3H), 0.87 (s, 6H).

２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−オキソブチル）ブタンアミド（ｉ−１３）の合成

ステップ１：水素化アルミニウムリチウム（５８３ｍｇ、１５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の（±）−パントラクトン（１ｇ、８ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で加え、室温で４時間撹拌した。反応混合物に、無水硫酸ナトリウムをゆっくりと加え、続いてＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加えた。反応混合物を短セライトパッドによって濾過し、濾液を濃縮した。残留物をＩＳＣＯ（ＣＨ_２Ｃｌ_２中５％〜２０％のＭｅＯＨ）により精製して、３，３−ジメチルブタン−１，２，４−トリオールを得た。1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 3.71〜3.74 (m, 1H), 3.65 (dd, 1H, J = 4.8および7.6 Hz), 3.57 (dd, 1H, J = 2.4および4.8 Hz), 3.54 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 3.48 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).

ステップ２：３，３−ジメチルブタン−１，２，４−トリオール（５７０ｍｇ、４ｍｍｏｌ）および１−（ジメトキシメチル）−４−メトキシベンゼン（１．１６ｇ、６ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）に溶解し、（７，７−ジメチル−２−オキソビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−イル）メタンスルホン酸（９９ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、トリエチルアミン（０．２９ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を加えた。遠心分離した後、残留物をＩＳＣＯ（ｎ−ヘキサン中０％〜３０％のＥｔＯＡｃ）により精製して、２−（４−メトキシフェニル）−５，５−ジメチル−１，３−ジオキサン−４−イル）メタノールを得た。1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 7.44 (d, 2H, J = 6.0 Hz), 6.91 (d, 2H, J = 6.0 Hz), 5.47 (s, 1H), 3.90 (s, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.59〜3.70 (m, 5H), 1.14 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).

ステップ３：ＤＭＳＯ（０．２７ｍＬ、４ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）に溶解し、塩化オキサリル（０．２５ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を−７８℃で加えた。反応混合物を−７８℃で１５分間撹拌し、無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）中の２−（４−メトキシフェニル）−５，５−ジメチル−１，３−ジオキサン−４−イル）メタノール（４８５ｍｇ、２ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加えた。反応混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、トリエチルアミン（１．３４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に加温し、１時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）とＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）に分配し、有機層を、飽和ＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をＩＳＣＯ（ｎ−ヘキサン中２０％〜５０％のＥｔＯＡｃ）により精製して、２−（４−メトキシフェニル）−５，５−ジメチル−１，３−ジオキサン−４−カルバルデヒドを得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝２５１．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝１．１０５分間。

ステップ４：２−（４−メトキシフェニル）−５，５−ジメチル−１，３−ジオキサン−４−カルバルデヒド（２８９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を、アセトン／ＣＨ_２Ｃｌ_２（３：１、２０ｍＬ）に溶解し、新たに調製した水（５ｍＬ）中のＮａＨ_２ＰＯ_４．Ｈ_２Ｏ（１５９３ｍｇ、１２ｍｍｏｌ）およびＮａＣｌ_２Ｏ（５２８ｍｇ、６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、濃縮した。残留物をＩＳＣＯ（Ｃ１８）により精製して、２−（４−メトキシフェニル）−５，５−ジメチル−１，３−ジオキサン−４−カルボン酸を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝２６７．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝０．９５７分間。

ステップ５：２−（４−メトキシフェニル）−５，５−ジメチル−１，３−ジオキサン−４−カルボン酸（４０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解し、ＨＡＴＵ（３９ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．０５ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、２−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）エタンアミン（４０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、分取ＨＰＬＣにより精製して、２−（４−メトキシフェニル）−５，５−ジメチル−Ｎ−（２−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）エチル）−１，３−ジオキサン−４−カルボキサミドを得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝３８０．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝１．１０２分間。1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 7.44 (d, 2H, J = 5.6 Hz), 7.33 (bs, 1H), 6.90 (d, 2H, J = 5.2 Hz), 5.46 (s, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.82〜3.88 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.75 (m, 1H), 3.68 (dd, 2H, J = 7.6および16.0 Hz),3.38 (m, 2H), 1.86 (m, 4H), 1.31 (s, 3H), 1.11(s, 3H), 1.09 (s, 3H).

ステップ５：２−（４−メトキシフェニル）−５，５−ジメチル−Ｎ−（２−（２−メチル−１，３−ジオキソラン−２−イル）エチル）−１，３−ジオキサン−４−カルボキサミド（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中の３ＭＨＣｌに溶解し、水（０．１ｍＬ）を加えた。反応混合物を真空中で濃縮し、ＩＳＣＯ（Ｃ１８）により精製して、２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチル−Ｎ−（３−オキソブチル）ブタンアミド（ｉ−１３）を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝２１８．２、ＨＰＬＣピーク保持時間＝０．４００分間。1H-NMR (MeOD-d₄, 400 MHz) δ 3.84 (s, 1H), 3.31〜3.44 (m, 4H), 2.70 (t, 2H, J = 4.0 Hz),2.12 (s, 3H), 0.88 (s, 3H).

非連結ペプチドの合成手順

（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエート（１）

ステップ１：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、２０．０ｍＬ）中のＢｏｃＶａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（１．００ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、０．６７７ｇ、５．２５ｍｍｏｌ）および１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（０．７３１ｇ、１．９３ｍｍｏｌ）を加えた。次に得られた溶液を５分間撹拌し、ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中のＬ−フェニルアラニンメチルエステルのＨＣＬ塩（０．３７７ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．２２６ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で加えた。反応混合物を室温に加温し、更に３０分間撹拌し、次に濃縮した。残留物を、２０〜９０％のアセトニトリル−水で溶出するＣ１８カラムのＩＳＣＯシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製して、ＢｏｃＶａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＰｈｅＯＭｅを得た。ＭＳｍ／ｚ７３３．４（Ｍ＋１）、保持時間１．４７分間。

ステップ２：メタノール（２０ｍＬ）中のステップ１で得たＢｏｃＶａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＰｈｅＯＭｅ（０．６８３ｇ、０．９３２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ（１，４−ジオキサン中４Ｎ、１６ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で７時間撹拌し、濃縮した。残留物をジオキサンに溶解し、凍結乾燥して、Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＰｈｅＯＭｅのＨＣｌ塩を得た。ＭＳｍ／ｚ６３３．４（Ｍ＋１）、保持時間０．９６分間。

ステップ３：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（１２．６ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を、１５ｍｌの丸底フラスコ中のＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（１２．３ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１９ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１０分間撹拌し、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中のＶａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＰｈｅＯＭｅのＨＣｌ塩（３０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、２０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する、逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−（（（Ｓ）−１−メトキシ−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ８５６．６（Ｍ＋１）、保持時間１．６７分間。

ステップ４：ステップ３で得た生成物をジクロロメタン（ＤＣＭ）（２．０ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）で処理した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物をロータリーエバポレーターにより濃縮して、化合物１をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７５６．６（Ｍ＋１）、保持時間１．２２分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（２）

２５ｍＬの丸底フラスコに、（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエートのＴＦＡ塩（１）（３８．４ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ一水和物（５０．０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）、およびＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏの溶媒混合物（２：１、４．０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で６０時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を濃縮し、アセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ（１０〜７０％）で溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を合わせ、濃縮して、化合物２をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７４２．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１５分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（３）

ステップ１：１５ｍＬの丸底フラスコの中のＤＭＦ（１．０ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（２０．０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（９．０ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）、続いてＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）（１３．３ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を加えた。ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノ−１−フェニルプロパン−１−オール（６．４ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を反応混合物に加える前に、反応混合物を１０分間撹拌した。反応物を１時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ７０５．４（Ｍ＋１）。保持時間１．３９分間。

ステップ２：ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（２４．７ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド（ＭＳｍ／ｚ６０５．４（Ｍ＋１））、保持時間０．９６分間と、そのＴＦＡエステル（ＭＳｍ／ｚ７０１．４（Ｍ＋１））、保持時間１．１７分間との混合物を得た。混合物を更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ３：ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（８．４ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（０．０２４ｍｌ、０．１４ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（１３．３ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１０分間撹拌し、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のステップ２で得た生成物の混合物（２５．２ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）（ＴＦＡエステルを含有する）の溶液に加えた。反応混合物を室温で１８時間保持し、次に粗物質を３０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（ＭＳｍ／ｚ８２８．５（Ｍ＋１））、保持時間１．４２分間と、そのＴＦＡエステル（ＭＳｍ／ｚ９２４．４（Ｍ＋１））、保持時間１．６１分間との混合物を得た。

ステップ４：ＤＣＭ（１．５ｍＬ）中のステップ３で得た混合物の溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（ＭＳｍ／ｚ７２８．４（Ｍ＋１））、保持時間０．９９分間と、（１Ｓ，２Ｒ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−１−フェニルプロピル２，２，２−トリフルオロアセテート（ＭＳｍ／ｚ８２４．５（Ｍ＋１））、保持時間１．３１分間との混合物を得た。この混合物を更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ５：ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（１：１、３．０ｍＬ）中のステップ４で得た混合物の溶液に、ＬｉＯＨ（１０．０ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次に濃縮して、総体積をおよそ１ｍＬにした。粗混合物を、２０〜３５％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、化合物３を得た。ＭＳｍ／ｚ７２８．４（Ｍ＋１）。保持時間０．９９分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（メチルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４）

ステップ１：（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−フェニルプロパン酸（１３２．５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（０．５２３ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４７５ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、メタンスルホンアミド（１４３ｍｇ）を加え、反応混合物を２時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。生成物を、２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの分取ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、白色の固体を得た。ＭＳｍ／ｚ２４３．１（Ｍ＋１）。保持時間１．０２３分間。生成物をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解した。ＴＦＡ（２ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。脱保護生成物も、１０〜４０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出する分取ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、白色の固体を得た。ＭＳｍ／ｚ２４３．１（Ｍ＋１）。保持時間０．４０３分間。NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 7.41-7.30 (m, 5H), 4.10-4.06 (m, 1H), 3.32-3.25 (m, 1H), 3.19 (s, 3H), 3.12-3.07 (m, 1H).

ステップ２：Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ（６５．５ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（５９．２ｍｇ、８０ｕＬ）およびＨＡＴＵ（２７．７ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（メチルスルホニル）−３−フェニルプロパンアミド（１８．５ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。生成物を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの分取ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、白色の固体を得た。ＭＳｍ／ｚ７９６．４（Ｍ＋１）。保持時間１．３８８分間。生成物を、ＭｅＯＨ中のＨＣｌ（３Ｍ、３ｍＬ）に溶解した。溶媒をゆっくりと除去した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。ＭＳｍ／ｚ６９６．３（Ｍ＋１）。保持時間１．０４６分間。

ステップ３：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（１４．２３ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（２２．９ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２０．１９ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、前のステップの生成物（２１．６ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。生成物を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの分取ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、白色の固体を得た。ＭＳｍ／ｚ９１９．５（Ｍ＋１）。保持時間１．３７０分間。生成物を、ＭｅＯＨ中のＨＣｌ（３Ｍ、３ｍＬ）に溶解した。溶媒をゆっくりと除去した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。ＭＳｍ／ｚ８１９．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０９６分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（メチルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５）

化合物４（５ｍｇ、０．００５８４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）に溶解した。パラホルムアルデヒド（５．９７ｍｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）および酢酸（６．０ｕＬ）を加えた。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１２．５ｍｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃に加熱し、１時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。生成物を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの分取ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、白色の固体を得た。ＭＳｍ／ｚ８３３．５（Ｍ＋１）。保持時間０．９８３分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６）

ステップ１：Ｎ−Ｂｏｃアミノニトリル（０．５ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（０．２６４ｇ、４．０６ｍｍｏｌ）、および臭化亜鉛（０．２２９ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を、２−プロパノール−水溶媒混合物の混合物（１：１、６０ｍｌ）に溶解し、反応混合物を還流状態で１６時間撹拌した。反応が完了した後、５ｍｌの１０％クエン酸および３０ｍｌの酢酸エチルを加え、撹拌を、固体が残らなくなるまで続けた。水層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を、水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水した。溶媒を除去し、残留物を、ＤＣＭ中１０％のメタノールで溶出するシリカゲルカラムにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮し、酢酸エチルに再溶解し、ブラインで洗浄し、乾燥し、濃縮して、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（２−フェニル−１−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）カルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ２９０．２（Ｍ＋１）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.40 - 7.24 (m, 3H), 7.22 - 7.12 (m, 2H), 5.22 - 5.02 (m, 2H), 3.49 - 3.24 (m, 2H), 1.40 (s, 9H).

ステップ２：１５ｍｌの丸底フラスコに、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（２−フェニル−１−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）カルバメート（３０ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（２ｍｌ）、およびＤＣＭ（４ｍｌ）を加えて、明澄な溶液を得て、これを室温で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、Ｂｏｃ基が切断されたことを示した。溶液を濃縮して、粗（Ｓ）−２−フェニル−１−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）エタンアミンをＴＦＡ塩（Ｍ＋１１９０．２）として得て、これを更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ３：１５ｍｌの丸底フラスコに、ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（５９．３ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．０７２ｍｌ、０．４１５ｍｍｏｌ）を加えて、明澄な溶液を得た。ＨＡＴＵ（４３．４ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）を加え、次に反応混合物を５分間撹拌し、次にステップ２で得た（Ｓ）−２−フェニル−１−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）エタンアミンのＴＦＡ塩（０．１０４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で７２時間撹拌した。粗物質を、１０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ７４３．５（Ｍ＋１）。保持時間１．３２５分間。

ステップ４：１５ｍｌの丸底フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（４６ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（２ｍｌ）、およびＤＣＭ（４ｍｌ）を加えて、明澄な溶液を得て、これを室温で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、Ｂｏｃ基が切断されたことを示した。溶液を濃縮して、粗（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミドのＴＦＡ塩を得た。ＭＳｍ／ｚ６４３．５（Ｍ＋１）。保持時間０．９４７分間。これを更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ５：ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（７．６ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（０．０１４ｍｌ、０．０７９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１２ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）を加え、次にこれを、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミドのＴＦＡ塩（２０ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に粗物質を３０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートをＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ８６６．６（Ｍ＋１）。保持時間１．４０７分間。

ステップ６：ＤＣＭ（２ｍｌ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートのＴＦＡ塩（１０．２ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７６６．６（Ｍ＋１）。保持時間０．９８５分間。

（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホン酸（７）

ステップ１：（（Ｒ）−１−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（１００ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）（J. Chem. Soc. Perkin Trans. I 1984, 2845に記載されている手順に従って合成）を、ピリジン（５ｍｌ）に溶解し、ｎ−ＢｕＯＨ（３５ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、続いて塩化ピバロイル（７０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を加えた。ＬＣＭＳが、反応が不完全であったことを示したので、全てのホスフィン酸が消費されるまで、追加のｎ−ＢｕＯＨおよび塩化ピバロイルを３回に分けて加えた。次に、２ｍｌのピリジン−Ｈ_２Ｏ（水１０％）中のヨウ素（１６０ｍｇ、０．６３０ｍｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を２０分間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。ピリジンを真空により除去した。チオ硫酸塩水溶液を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。次にＥｔＯＡｃ層を乾燥し、濃縮し、０．５％ＴＦＡを有する水中１０％〜６０％のアセトニトリルで溶出するＩＳＣＯ（５．５ｇ、Ｃ１８カラム）により精製して、ベンジル（（１Ｒ）−１−（ブトキシ（ヒドロキシ）ホスホリル）−２−フェニルエチル）カルバメートを白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ３９２．１（Ｍ＋１）。保持時間１．１７９分間。1H NMR (400 MHz, CD₃CN) d 7.42 - 7.18 (m, 8H), 7.18 - 7.00 (m, 2H), 6.10 (s, 1H), 5.07 - 4.59 (m, 2H), 4.20-4.35 (m, 1H), 4.13 - 3.93 (m, 2H), 3.15-3.30 (m, 1H), 2.85-2.75 (s, 1H), 1.71 - 1.47 (m, 2H), 1.47 - 1.23 (m, 2H), 0.89 (t, J = 7.3 Hz, 3H).

ステップ２：ＭｅＯＨ（５ｍｌ）中のベンジル（（１Ｒ）−１−（ブトキシ（ヒドロキシ）ホスホリル）−２−フェニルエチル）カルバメート（８４．７ｍｇ、０．２１６ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（２６ｍｇ）を加えた。水素バルーンを取り付け、反応混合物を室温で２時間撹拌した。触媒を、セライトを介する濾過により除去し、濾液を蒸発乾固して、ブチル水素（（Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルエチル）ホスホネートを得た。ＭＳｍ／ｚ２５８．１（Ｍ＋１）。保持時間０．７８９分間。これを精製することなく次のステップに使用した。

ステップ３：１５ｍＬの丸底フラスコに、ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（８０ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（６２．９ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）を加えて、明澄な溶液を得た。ＨＡＴＵ（５３ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５分間撹拌し、次にブチル水素（（Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルエチル）ホスホネート（４１．９ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で１８時間撹拌した。粗物質を、４０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｒ）−１−（ブトキシ（ヒドロキシ）ホスホリル）−２−フェニルエチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートとした。ＭＳｍ／ｚ８１１．４（Ｍ＋１）。保持時間１．３７６分間。

ステップ４：ＤＣＭ（３ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル（（２Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｒ）−１−（ブトキシ（ヒドロキシ）ホスホリル）−２−フェニルエチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１０６ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１ｍｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に濃縮した。約２／３が、ホスホン酸（１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホン酸に変換した。ＭＳｍ／ｚ６５５．３（Ｍ＋１）。保持時間０．９５７分間。他の１／３は、ブチル水素（１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホネートであった。ＭＳｍ／ｚ７１１．４（Ｍ＋１）。保持時間１．０３８分間。混合物を分離することなく次のステップに使用した。

ステップ５：ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（３．８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（６．１ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）、次にＨＡＴＵ（５．９ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次に主にホスホン酸を含有するステップ４のアミンの混合物（１２ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。粗物質を、０．０５％ＴＦＡを有する水中の１０〜７０％のアセトニトリルで溶出する４．５ｇのＣ１８カラムを使用するＩＳＣＯにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホン酸、ＭＳｍ／ｚ８７８．５（Ｍ＋１）、保持時間１．３０７分間、および（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（２Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｒ）−１−（ブトキシ（ヒドロキシ）ホスホリル）−２−フェニルエチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート、ＭＳｍ／ｚ９３４．５（Ｍ＋１）、保持時間１．４４７分間、を得た。

ステップ６：ＤＣＭ（２ｍｌ）中の（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホン酸（１１．０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に濃縮して、（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホン酸（７）を得た。ＭＳｍ／ｚ７７８．４（Ｍ＋１）。保持時間０．９７３分間。

（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（８）

ステップ１：１５ｍＬの丸底フラスコに、ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（５０ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３３．９ｍｇ、０．２６２ｍｍｏｌ）を加えて、明澄な溶液を得た。ＨＡＴＵ（３３．３ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）を加え、次に反応混合物を５分間撹拌し、（（Ｒ）−１−アミノ−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（４１ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）（J. Chem. Soc. Perkin Trans. I 1984, 2845に記載された手順に従って合成）に加えた。溶液を室温で１８時間撹拌した。ＬＣＭＳは、所望の生成物が形成されたことを示した。粗物質を、３０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ７３９．４（Ｍ＋１）。保持時間１．２４８分間。

ステップ２：ＤＣＭ（２ｍｌ）中の（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（６９．１ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１ｍｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に濃縮して、（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（ＭＳｍ／ｚ６３９．３（Ｍ＋１）、保持時間０．８５１分間）を得て、これを更に精製することなく次にステップに使用した。

ステップ３：ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（１１．３ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（０．０３３ｍｌ、０．１８８ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（１７．９ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１０分間撹拌し、次にＤＭＦ（１ｍｌ）中の（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（３５．４ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。ＬＣＭＳは、反応が１０分間で完了したことを示した。粗物質を、３０〜５５％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ８６２．５（Ｍ＋１）。保持時間１．３７２分間。

ステップ４：ＤＣＭ（２ｍｌ）中の（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（６０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に濃縮して、（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（８）を得た。ＭＳｍ／ｚ７６２．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２２０分間。

（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（９）

ＭｅＯＨ（２ｍｌ）中の（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（８）（２０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）の溶液に、パラホルムアルデヒド（１０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）および酢酸（０．０１９ｍｌ、０．３３３ｍｍｏｌ）、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間、次に室温で２日間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。反応混合物をセライトを通して濾過して、不溶性残留物を除去し、粗物質を、１０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（９）を得た。ＭＳｍ／ｚ７７６．４（Ｍ＋１）。保持時間０．９４４分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５０）

ステップ１：ＤＩＥＡ（０．０１３ｍｌ、０．０７５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１８．５ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（９．８ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を５分間撹拌し、次にＤＭＦ中のＶａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（１７．７ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）に加えた。反応物を室温で１６時間撹拌した。次に粗物質を、分取ＨＰＬＣ（３０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ６９５．４（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．３７６分間。

ステップ２：ＤＭＦ（１ｍｌ）中のステップ１で得た生成物（５．９ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（１．１ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（３．８ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を５分間撹拌した後、ＤＭＦ中の（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパン−１−オール（１．９ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。粗物質を分取ＨＰＬＣ（２０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ８２８．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．３８８分間。

ステップ３：ＤＣＭ（３ｍｌ）中のステップ２で得た生成物（４ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１ｍｌ）により室温で１時間処理し、次に濃縮して、化合物（５０）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７２８．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．００８分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５１）

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５０）（６．１ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（２ｍｌ）、酢酸（０．００５ｍｌ、０．０９ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を室温で合わせ、次に５０℃で１時間撹拌した。次に反応混合物を室温に冷却し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（２０〜４０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（５１）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７４２．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．００８分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−アミノフェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５２）

ステップ１：ＤＩＥＡ（０．１０５ｍｌ、０．６０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４５．５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍｌ）中の（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸（ｉ−７）（５７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌し、次にＤＭＦ（１ｍｌ）中のＤａｐＯＭｅ（ｉ−９）（２８．５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に分取ＨＰＬＣ（１０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（２Ｒ，３Ｒ）−メチル３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノエートを得た。ＭＳｍ／ｚ６２３．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．２２５分間。

ステップ２：ＬｉＯＨ（３０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（１：１、４ｍｌ）中のステップ１で得た生成物（４３．２ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、濃縮し、ＨＣｌ（１Ｎ、１ｍｌ）で酸性化した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（１０〜３８％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ６０９．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．９６２分間。

ステップ３：ＤＭＦ（１ｍｌ）中のステップ２で得た生成物（４５．７ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（０．０５５ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２４．０ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次にＤＭＦ（１ｍｌ）中の（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバメートのＴＦＡ塩（ｉ−４）（２４．１ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に濃縮した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、ｔ−ブチル（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバメートをＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ８５７．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１４５分間。

ステップ４：アセトニトリル−水（１：１、４ｍｌ）中のステップ３で得た生成物（６１．４ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）の溶液を、５％ＨＣｌと共の室温で２４時間撹拌した。次に反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（１０〜３０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（５２）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７５７．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．７４４分間。

（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエート（５３）

ＭｅＯＨ（５ｍｌ）中の（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエートのＴＦＡ塩（１）（５５．４ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）に、酢酸（０．００９ｍｌ、０．２ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（２４ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）、次にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２５ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で１６時間撹拌し、濾過し、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（１０〜４５％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有水）により精製して、化合物（５３）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７７０．３（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１００分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（９ｄ）

化合物（５３）のＴＦＡ塩（５０．８ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（１：１、５ｍｌ）に溶解し、ＬｉＯＨ（２０ｍｇ、０．８３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を４０℃で１時間撹拌した。ＭｅＯＨを蒸発により除去した。水を残留物に加え、ＡｃＯＨ（０．０４０ｍｌ）で酸性化した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（２７〜３３％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（５４）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７５６．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．９８５分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５５）

ＤＩＥＡ（１０．２ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（７．７ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸のＴＦＡ塩（実施例１２、ステップ２）（１２．３ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）に加えた。反応物を１５分間撹拌し、次にＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパン−１−スルホンアミド（４．３ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で更に１時間撹拌した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（５５）を得た。ＭＳｍ／ｚ８０５．５（Ｍ＋１）。保持時間０．９６５分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５６）

ステップ１：ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＢｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨ（２１．６ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（４８．５ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２６．２ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１５分間撹拌し、次に（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパン−１−スルホンアミド（１３．４ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ４８４．２（Ｍ＋１）。保持時間１．１３０分間。

ステップ２：（Ｓ）−ｔ−ブチル２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−カルボキシレート（２８．５ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）を、メタノールＨＣｌ（３Ｍ、３ｍｌ）に溶解した。溶媒をＮ_２流下でゆっくりと除去し、続いて減圧下に一晩置いて、（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）−３−（（Ｓ）−ピロリジン−２−イル）プロパンアミドをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ３８４．２（Ｍ＋１）。保持時間０．６３０分間。

ステップ３：ＤＭＦ（１ｍｌ）中のＣｂｚ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨ（２８．７ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（０．０４８ｍｌ）およびＨＡＴＵ（２２．９ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１５分間撹拌し、次にＤＭＦ（１ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−メトキシ−２−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）−３−（（Ｓ）−ピロリジン−２−イル）プロパンアミド（２３ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、ベンジル（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ８０２．４（Ｍ＋１）。保持時間１．２９８分間。

ステップ４：ステップ３で得た生成物（２４．６ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）、１０％Ｐｄ−Ｃ（３２．７ｍｇ）、およびＥｔＯＡｃ（３ｍｌ）を合わせ、水素下において室温で８時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミドを得た。ＭＳｍ／ｚ６６８．４（Ｍ＋１）。保持時間０．８８８分間。

ステップ５：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（７．０ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１ｍｌ）、ＤＩＥＡ（０．０２１ｍｌ）、およびＨＡＴＵ（１０．１ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を合わせ、室温で１５分間撹拌し、次にＤＭＦ（１ｍｌ）中のステップ４で得た生成物（１６．２ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、分取ＨＰＬＣ（３０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ８９１．５（Ｍ＋１）。保持時間１．３１９分間。

ステップ６：ステップ５で得た生成物（１３．２ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、メタノールＨＣｌ（３Ｍ、３ｍｌ）に溶解した。溶媒をＮ_２流下でゆっくりと除去し、続いて減圧下に一晩置いて、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５６）をＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７９１．５（Ｍ＋１）。保持時間０．９２３分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５７）

ＤＩＥＡ（３３ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１９ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（４０ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）に加えた。反応物を室温で１５分間撹拌し、次に（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミン（２２．４ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ９４０．５（Ｍ＋１）。保持時間１．３３３分間。この生成物（１３．９ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、メタノールＨＣｌ（３Ｍ、３ｍｌ）に溶解した。溶媒をＮ_２流下でゆっくりと除去し、続いて減圧下に一晩置いて、化合物（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５７）をＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ８４０．５（Ｍ＋１）。保持時間０．９３６分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−（（（Ｓ）−１−メトキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５８）

化合物（５８）は、（Ｓ）−１−メトキシ−３−フェニルプロパン−２−アミンのＨＣｌ塩を（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミンの代わりに使用して、化合物（５７）について記載された手順により調製した。ＭＳｍ／ｚ７４２．５（Ｍ＋１）。保持時間０．９９７分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５９）

化合物（５９）は、（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミンのＨＣｌ塩を（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミンの代わりに使用して、化合物（５７）について記載された手順により調製した。ＭＳｍ／ｚ７６４．５（Ｍ＋１）。保持時間０．９５９分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６０）および（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｒ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６１）

化合物（６０）および（６１）は、２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エタンアミンを（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミンの代わりに使用して、化合物（５７）について記載された手順により調製した。Ｂｏｃ保護（６０）および（６１）を、分取ＨＰＬＣ（３０〜６５％アセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により分離した。Ｂｏｃ保護（６０）および（６１）からＢｏｃ基を除去することによって、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６０）および（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｒ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６１）を、それぞれＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７７６．５（Ｍ＋１）。保持時間１．００１分間（６０）および１．０１６分間（６１）。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６２）

化合物（６２）は、ステップ１において（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）エタンアミンを（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミンの代わりに使用して、化合物（５７）について記載された手順により調製した。Ｂｏｃ基を除去した後、化合物（６２）をＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ８４２．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１１２分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（シアノメチル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６３）

ステップ１：ＤＩＥＡ（１０４ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１２２ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（３ｍｌ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（７８ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌し、次にＤＭＦ（２ｍｌ）中のＶａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＭｅ（１３０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）に加えた。次に反応混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮した。飽和重炭酸ナトリウム溶液（５ｍｌ）を残留物に加え、生成物をＤＣＭ（１０ｍｌ×３）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥し、濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１，３−ジメトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。生成物を更に精製することなく次のステップに使用した。ＭＳｍ／ｚ７１０．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．４４０分間。

ステップ２：ＤＣＭ（１０ｍｌ）中のステップ１で得た生成物（１９０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（２ｍｌ）により室温で３時間処理し、次に濃縮して、（２Ｒ，３Ｒ）−メチル３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノエートをＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ６１０．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．００３分間。生成物を更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ３：ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中のステップ２で得た生成物（１９３ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）に、酢酸（０．０１５ｍｌ、０．２７ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（４０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８４ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を５０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳは、およそ９０％がシアノメチル化化合物に変換し、約１０％がメチル化化合物に変換したことを示した。反応混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（２０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製した。シアノ付加物を含有する画分を集め、濃縮して、（２Ｒ，３Ｒ）−メチル３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（シアノメチル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノエートをＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ６４８．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．２６１分間。

ステップ４：ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（１：１、５ｍＬ）中のステップ３で得た生成物（０．１２ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）に、ＬｉＯＨ（５０ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次に０．２ｍｌの１０％ＨＣｌで酸性化した。シアノ基を部分的に加水分解して、カルバモイルメチル化生成物を、シアノメチル生成物のほかに形成した。反応物を濃縮し、２つの生成物を分取ＨＰＬＣ（２０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により単離して、（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（シアノメチル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸、ＭＳｍ／ｚ６３４．４（Ｍ＋Ｈ）、保持時間１．１３８分間、および（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２−アミノ−２−オキソエチル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸を、ＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ６５２．４（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．８８８分間。

ステップ５：ＤＭＦ中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（シアノメチル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸のＴＦＡ塩（６ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（３．１ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（３．７ｍｇ、０．００９６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で５分間撹拌し、次に（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパン−１−オール（２．４ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（１０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（６３）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７６７．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１８９分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２−アミノ−２−オキソエチル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６４）

ＤＭＦ中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（２−アミノ−２−オキソエチル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸のＴＦＡ塩（実施例２２、ステップ４）（６．１ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（３．１ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（３．７ｍｇ、０．００９６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で５分間撹拌し、次に（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパン−１−オール（２．４ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（１０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（６４）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７８５．５５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．９５１分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アセチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６５）

ステップ１：ＤＣＭ（２ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−メチル３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノエート（実施例６３、ステップ２）（１３ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）のＴＦＡ塩に、ＤＩＥＡ（０．０１４ｍｌ、０．０８２ｍｍｏｌ）および無水酢酸（０．００３９ｍｌ、０．０４１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。Ｎａ_２ＣＯ_３（２Ｍ）水溶液を加え、反応混合物をＤＣＭ（５ｍｌ×３）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、次に濃縮して、（２Ｒ，３Ｒ）−メチル３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アセチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノエートを得た。生成物を更に精製することなく次のステップに使用した。ＭＳｍ／ｚ６５１．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１８８分間。

ステップ２：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ（１：１、２ｍｌ）中のステップ１で得た生成物に、ＬｉＯＨ（１０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、０．０４０ｍｌのＨＯＡｃを加えた。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（１０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アセチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ６３７．４（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１５８分間。

ステップ３：ＤＭＦ（１ｍｌ）中のステップ２で得た生成物（５ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（２．７ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（３．９ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で５分間撹拌し、次に（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパン−１−オール（１．６ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌し、次に粗物質を、分取ＨＰＬＣ（１０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（６５）を得た。ＭＳｍ／ｚ７７０．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１２１分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６６）

ＤＩＥＡ（０．００９７ｍｌ）およびＨＡＴＵ（３．２ｍｇ、０．００８３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸のＴＦＡ塩（実施例１２、ステップ２）（４．０ｍｇ、０．００５５ｍｍｏｌ）に加えた。反応物を室温で１５分間撹拌し、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の（Ｓ）−２−フェニル−１−（４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミン（２．９ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（６６）を得た。ＭＳｍ／ｚ８５４．５（Ｍ＋１）。保持時間０．９８０分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−（（（Ｓ）−１−メトキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６７）

化合物（６７）は、（Ｓ）−１−メトキシ−３−フェニルプロパン−２−アミンのＨＣｌ塩を（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミンの代わりに使用して、化合物（６６）について記載された方法により得た。ＭＳｍ／ｚ７５６．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０４６分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６８）

化合物（６８）は、（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミンのＨＣｌ塩を（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミンの代わりに使用して、化合物（６６）について記載された方法により得た。ＭＳｍ／ｚ７７８．５（Ｍ＋１）。保持時間０．９９８分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６９）および（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｒ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（７０）

化合物（６９）および（７０）は、２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エタンアミンを（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミンの代わりに使用して、化合物（６６）について記載された方法により、２つのジアステレオマーの分取ＨＰＬＣ分離（３０〜５５％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）の後に得た。ＭＳｍ／ｚ７９０．５（Ｍ＋１）。（６９）および（７０）それぞれの保持時間１．０１６分間および１．０３４分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（７１）

化合物（７１）は、（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）エタンアミンを（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エタンアミンの代わりに使用して、化合物（６６）について記載された方法により得た。ＭＳｍ／ｚ８５６．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１２０分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−アミノフェニル）−３−メトキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（７２）

ＤＩＥＡ（０．０１２ｍｌ、０．０６９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（７．８９ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（実施例１２、ステップ２）（１０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）に加えた。反応物を室温で５分間撹拌し、次に（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−メトキシプロピル）フェニル）カルバメートのＴＦＡ塩（１０．９ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌し、次に粗物質を、分取ＨＰＬＣ（２０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、ｔ−ブチル（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−メトキシプロピル）フェニル）カルバメートをＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ８７１．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１５７分間。アセトニトリル（２ｍｌ）中のこの生成物（１３．６ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）に、１０％塩酸（２ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−アミノフェニル）−３−メトキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（７２）をＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７７１．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．８８３分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（４−アミノフェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（７３）

化合物（７３）は、（Ｓ）−ｔ−ブチル（４−（２−アミノ−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバメートのＴＦＡ塩を（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−メトキシプロピル）フェニル）カルバメートのＴＦＡ塩の代わりに使用して、化合物（７２）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ７５７．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．７８７分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（７４）

ＤＩＥＡ（０．００６ｍｌ、０．０３５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４．０ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（５ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）に加えた。反応物を室温で５分間撹拌し、次に（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェドリン（３ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に分取ＨＰＬＣ（２０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製した。所望の生成物を含有する画分を合わせ、１０％塩酸を加えた。濃縮することにより、化合物（７４）をＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ７４２．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．００５分間。

式（Ｉ）のＮ末端連結化合物の例の合成手順

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１０）

１５ｍＬの丸底フラスコの中のＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸（ＥＭＣＡ）（１．２ｍｇ、０．００５８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（３．０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（２．７ｍｇ、０．００７０ｍｍｏｌ）を加えた。ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸のＴＦＡ塩（２）（５．０ｍｇ、０．００５８ｍｍｏｌ）の溶液を反応混合物に加える前に、反応混合物を１０分間撹拌した。反応混合物を１時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、２０〜８０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含有する画分を濃縮して、化合物１０を得た。ＭＳｍ／ｚ９３５．６（Ｍ＋１）。保持時間１．１７分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキシル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１１）

ステップ１：１００ｍＬの丸底フラスコに、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１２．０ｍＬ）中の６−アミノ−１−ヘキサノール（１．００ｇ、６．４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で冷却し、Ｎ−メトキシカルボニルマレイミド（０．７５０ｇ、６．４４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１．５時間撹拌した。次に反応混合物を２ＭＨＣｌにより０℃でｐＨ１に酸性化した。酸性化した反応混合物を酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）で抽出した。有機層を濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、シリカゲルカラムにローディングし、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０〜４％）で溶出して、１−（６−ヒドロキシヘキシル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンを白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ１９８．２（Ｍ＋１）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 6.68 (s, 2H), 3.63 (t, d = 6.4 Hz, 2H), 3.52 (t, d = 7.2 Hz, 2H), 1.63-1.52 (m, 4H), 1.43-1.28 (m, 4H).

ステップ２：ＤＣＭ（１０．０ｍＬ）中の１−（６−ヒドロキシヘキシル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（２３７ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）に、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ試薬（６１８ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間後、反応混合物をＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、濾過した。濾液を濃縮し、ＩＳＣＯ（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０〜２０％）により精製して、６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサナールを無色の油状物として得た。ＭＳｍ／ｚ１９６．２（Ｍ＋１）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 9.76 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 6.69 (s, 2H), 3.52 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.43 (td, J = 7.2 Hz, 1.6 Hz, 2H), 1.70-1.56 (m, 4H), 1.36-1.28 (m, 2H).

ステップ３：化合物２（５．０ｍｇ、０．００６７ｍｍｏｌ）および６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサナール（６．６ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）に溶解した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（４．２ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキシル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸１１を得た。ＭＳｍ／ｚ９２１．６（Ｍ＋１）。保持時間１．０７分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１２）

１５ｍＬの丸底フラスコに、室温で、ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ（５．２ｍｇ、０．００７０ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸のＴＦＡ塩（２）（５．０ｍｇ、０．００５８ｍｍｏｌ）、および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡＴ）（０．６ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）、続いてピリジン−ＤＭＦ（１：４、１．２５ｍＬ）を加えた。得られた溶液に、ＤＩＥＡ（２．３ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を７２時間撹拌し、その時点で化合物２が消費された。反応混合物を濃縮し、残留物を、２０〜８０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、化合物１２を得た。ＭＳｍ／ｚ１３４０．７（Ｍ＋１）。保持時間１．１５分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１３）

ステップ１：ＤＭＦ（２ｍＬ）中の３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）プロパン酸（６．６ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（０．０１１ｍＬ、０．０６５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１０．３ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、化合物１（８．２ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエートを得た（ＭＳｍ／ｚ９４１．３（Ｍ＋１））。保持時間１．３０分間。

ステップ２：ステップ１のエステル生成物を、アセトニトリル（０．３ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（０．２ｍＬ）に溶解した。ＮａＯＨ水溶液（１．０Ｎ、０．１５ｍＬ）を加えた。反応混合物を３０分間撹拌した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、化合物１３（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ９２７．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２１分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１４）

ＤＭＦ（１．２ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（０．３ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１３）（５．４ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）、１−（プロパ−２−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１．６ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）およびＣｕＳＯ_４（０．７ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム塩（２．６ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）で処理し、室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸１４を得た。ＭＳｍ／ｚ１０６２．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１５分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−（ビニルスルホニル）エトキシ）エトキシ）エチル）スルホニル）エチル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１５）

ステップ１：ｔ−ＢｕＯＫ（１１９ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のジビニルスルホン（１．６０ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）およびエチレングリコール（３３０ｍｇ、５．３２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、粗物質を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ−ヘキサンの２：１〜３：１）により精製して、（（２−（２−（２−ビニルスルホニルエトキシ）エトキシ）エチル）スルホニル）エテンを無色のシロップ状物として得た。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) d 6.75 (dd, J = 9.9 Hz, 16.6 Hz, 2H), 6.39 (d, J = 16.6 Hz, 2H), 6.09 (d, J = 9.9 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 5.7 Hz, 4H), 3.61 (s, 4H), 3.24 (t, J = 5.7 Hz, 4H).

ステップ２：ＤＣＭ−ｉ−ＰｒＯＨ（２：１）中の（（２−（２−（２−ビニルスルホニルエトキシ）エトキシ）エチル）スルホニル）エテン（１３．３ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸のＴＦＡ塩（２）（１０．０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．００２０ｍＬ、０．０１２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８０℃に１８時間加熱し、その時点でＬＣＭＳ分析は、反応が７０〜８０％完了したことを示した。反応混合物を濃縮し、残留物を、１０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、化合物１５をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ１０４０．４（Ｍ＋１）。保持時間１．０３分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（メチル（２−（ビニルスルホニル）エチル）アミノ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１６）

ステップ１：ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパン酸（５．４ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（０．００７０ｍＬ、０．０４０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（９．１ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５分間撹拌し、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸のＴＦＡ塩（２）（１１．４ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応は、ＬＣＭＳ分析により判断して、１時間以内に完了した。粗物質を、１０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ９２７．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２８分間。

ステップ２：ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中のステップ１で得た生成物（６．４ｍｇ、０．００６９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（メチルアミノ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸のＴＦＡ塩を得た。ＭＳｍ／ｚ８２７．４（Ｍ＋１）。保持時間０．９９分間。この生成物を更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ３：ｉ−ＰｒＯＨ（２．０ｍＬ）中のステップ２で得た生成物のＴＦＡ塩（６．５ｍｇ、０．００６９ｍｍｏｌ）の溶液に、ジビニルスルホン（２０．０ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．０１０ｍＬ、０．０５７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８０℃で１時間撹拌し、その時点で反応は、ＬＣＭＳ分析により判断して完了しており、反応混合物を濃縮した。残留物を、１０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、化合物１６を得た。ＭＳｍ／ｚ９４５．４（Ｍ＋１）。保持時間０．９９分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（１７）

この化合物は、ＥＭＣＡ（５．５ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１０．０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（９．８ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）、および（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドのＴＦＡ塩（３）（２１．８ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）から、化合物（４）（実施例４）について記載されたものと同じ方法を使用して合成した。化合物１７を、逆相ＨＰＬＣにより精製した後に得た。ＭＳｍ／ｚ９２１．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２５分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−メルカプトヘキシル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１８）

ステップ１：ＭｅＯＨ（２．０ｍｌ）中のＳ−（６−オキソヘキシル）エタンチオエート（４．２８ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸のＴＦＡ塩（２）（７．０ｍｇ、０．００８２ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸（０．００５０ｍＬ、０．０８３ｍｍｏｌ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２．５７ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間加熱し、粗物質を２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を合わせ、濃縮して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（アセチルチオ）ヘキシル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ９００．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１７分間。

ステップ２：ステップ１で得た生成物を、ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（２：１、３．０ｍＬ）に溶解した。溶液に、水酸化リチウム（５．０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で０．５時間撹拌し、次におよそ１．５ｍＬに濃縮した。粗物質を、２０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、化合物１８を得た。ＭＳｍ／ｚ８５８．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１６分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（３−アミノ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキシル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１９）

ステップ１：ＤＭＦ（２．０ｍＬ）の２−ニトロ−４−（（６−オキソヘキシル）オキシ）ベンズアルデヒド（２０．１ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエート（１）（１６．５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸（０．００７６ｍＬ、０．１３ｍｍｏｌ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（１１．９ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間加熱し、粗物質を２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のアルデヒドを含有する画分（ＭＳｍ／ｚ１００５．５（Ｍ＋１）、保持時間１．２７分間）および所望のアルコールを含有する画分（ＭＳｍ／ｚ１００７．５（Ｍ＋１）、保持時間１．２１分間）の中間体を合わせ、濃縮して、次のステップに使用した。

ステップ２：アルデヒドおよびアルコールを含有するステップ１で得た混合物を、ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（４．０ｍｇ、０．００９５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次に反応混合物をＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液で洗浄し、ＤＣＭで抽出した。ＤＣＭ層を無水ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗物質を、２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（４−ホルミル−３−ニトロフェノキシ）ヘキシル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエートのＴＦＡ塩を得た。ＭＳｍ／ｚ１００５．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２７分間。生成物は、いくらかの加水分解された酸も含有した。ＭＳｍ／ｚ９９１．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２２分間。

ステップ３：水中７０％ＥｔＯＨ中のステップ２で得た生成物（１６．９ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）の溶液に、鉄粉末（０．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）およびＨＣｌ（０．１Ｎ、０．１５ｍＬ、０．０１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間激しく撹拌した。褐色の沈殿物が形成された。混合物をセライトプラグを通して濾過し、濾液を濃縮した。粗物質を、３０〜１００％のアセトニトリル−Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムのＩＳＣＯにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（３−アミノ−４−ホルミルフェノキシ）ヘキシル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエートを得た。ＭＳｍ／ｚ９７５．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２３分間。

ステップ４：ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（１．５：１、２．５ｍＬ）中のステップ３で得た生成物（４．６ｍｇ、０．００４７ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム（１０．０ｍｇ、０．４３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を約５０％の体積に濃縮し、１ＮＨＣｌによりｐＨ５に酸性化した。粗物質を、３０〜７５％のアセトニトリル−Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムのＩＳＣＯにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、０．３ｍｇのＬｉＯＨで中和し、凍結乾燥して、化合物１９を得た。ＭＳｍ／ｚ９６１．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１５分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸の補酵素Ａ付加物（２０）

５ｍＭのＥＤＴＡを含有するｐＨ７．５の１００ｍＭのリン酸緩衝液中の補酵素Ａ（ＣｏＡ）トリリチウム塩（７．６ｍｇ、０．００９６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＳＯ（０．０４８ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１７）（９．０ｍｇ、０．００９６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を室温で１時間放置し、その時点で反応は、ＬＣＭＳ分析により判断して完了していた。試料を、２０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、ＣｏＡ付加物２０を得た。ＭＳｍ／ｚ８５２（Ｍ／２＋１）。保持時間０．９８分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２−ブロモアセトアミド）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（２１）

ステップ１：ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（１２ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（１８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１８ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を加えた。（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（２）（４０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を加える前に、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。反応は、３０分以内に完了した。粗物質を、２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ９５５．５（Ｍ＋１）。保持時間１．３２分間。

ステップ２：ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中のステップ１で得た化合物（１５．６ｍｇ、０．００１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、濃縮して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−アミノヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸のＴＦＡ塩を得た。ＭＳｍ／ｚ８５５．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０１分間。

ステップ３：（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−アミノヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸のＴＦＡ塩（２０ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）をＤＣＭに溶解し、ＤＩＥＡ（１２ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を０℃に冷却した。次に反応混合物に、ＤＣＭ（０．２ｍＬ）中の２−ブロモアセチルブロミド（９．０ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）の溶液を、撹拌しながら加えた。反応混合物を０℃で１０分間撹拌し、ＬＣＭＳ分析は、アミン出発材料が消費されたことを示した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液を加えて、反応物をクエンチした。反応混合物をＤＣＭ（５ｍＬ×３）で抽出した。有機層を合わせ、濃縮した。粗物質を、３０〜４５％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。画分を集め、濃縮して、化合物２１を得た。ＭＳｍ／ｚ９７５．３（Ｍ＋１）。保持時間１．１９分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（アミノオキシ）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（２２）

ステップ１：ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中のリチウム６−（（（１−エトキシエチリデン）アミノ）オキシ）ヘキサノエート（６．３ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（８．９ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物全体を、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエートのＴＦＡ塩（１）（２０ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（６．０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）の溶液に加える前に、反応混合物を室温で２０分間撹拌した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を、４０〜８０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮した。ＬＣＭＳ分析は、アルコキシルアミン部分の保護基が除去されて、（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（アミノオキシ）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエートのＴＦＡ塩を得たことを明らかにした。ＭＳｍ／ｚ８８５．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１０分間。

ステップ２：ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ（１：１、２．０ｍＬ）中のステップ１で得た化合物（２４．３ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム（２０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を加えた。反応をＬＣＭＳによりモニターした。完了すると、粗物質を、２０〜４０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、化合物２２のＴＦＡ塩を得た。ＭＳｍ／ｚ８７１．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０３分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（（Ｓ）−アジリジン−２−カルボキサミド））ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（２３）

ステップ１：７ｍＬのバイアル中において、６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（１６ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（０．０３６ｍＬ、０．２１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２４ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）を加えた。（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエート（１、ＨＣｌ塩、３０ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を加える前に、反応混合物を１０分間撹拌した。反応混合物を室温で更に２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のＡＣＮ−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエートを得た。ＭＳｍ／ｚ９６９．６（Ｍ＋１）。保持時間１．４２分間。このようにして得た生成物（２１ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ中のＨＣｌ（３Ｍ、２ｍＬ）に溶解した。溶媒を減圧下でゆっくりと除去した。残留物のＬＣＭＳ分析は、Ｂｏｃ基が完全に除去されたことを示した。残留物をアセトニトリルおよび水に溶解し、凍結乾燥して、（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−アミノヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエートをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ８６９．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０１分間。

ステップ２：前のステップの生成物（１０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（０．８ｍＬ）、ＭｅＯＨ（０．１ｍＬ）、およびＨ_２Ｏ（０．１ｍＬ）に溶解した。水酸化リチウム一水和物（４．８３ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で除去した。残留物を、０．１Ｎ塩酸を使用して中和し、アセトニトリルおよびＨ_２Ｏに溶解し、凍結乾燥して、いくらかのＬｉＣｌを含有する、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−アミノヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ８５５．６（Ｍ＋１）。保持時間０．９８分間。

ステップ３：７ｍＬのバイアル中において、（Ｓ）−１−トリチルアジリジン−２−カルボン酸（７．６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（０．０１０ｍＬ、０．０２１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（７．９ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）を加えた。（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−アミノヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（１０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）の前に、反応混合物を１０分間撹拌した。反応混合物を室温で更に２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、１０〜１００％のアセトニトリル−Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８ａｑカラム（５．５ｇ）を使用する逆相ＩＳＣＯにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（（Ｓ）−１−トリチルアジリジン−２−カルボキサミド）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ１１６６．５（Ｍ＋１）。保持時間１．４９分間。

ステップ４：ステップ３の生成物（４．０ｍｇ、０．００３４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３（１：１、１ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。ＴＦＡ（０．００４０ｍＬ、０．０５１ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を室温に加温し、１時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応がおよそ６０％完了したことを示した。ＴＦＡ（０．００４０ｍＬ、０．０５１ｍｍｏｌ）を再び加えた。室温で更に１時間後、ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物をＭｅＯＨに溶解し、１０〜１００％のアセトニトリル−Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８ａｑカラム（５．５ｇ）を使用する逆相ＩＳＣＯにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（（Ｓ）−アジリジン−２−カルボキサミド）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（２３）を得た。ＭＳｍ／ｚ９２４．６（Ｍ＋１）。保持時間１．０１２分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（４−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ブタノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（２４）

ステップ１：ＤＭＦ１００ｍＬ）中のエチル４−ブロモブタノエート（３．４ｇ、０．０１７４ｍｏｌ）の溶液に、アジ化ナトリウム（１．７ｇ、０．０２６２ｍｏｌ）を加えた。混合物を８０℃に加熱し、一晩撹拌した。反応混合物を水で希釈し、エーテルで３回抽出した。有機相を水で３回洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これを更に精製することなく次にステップに直接使用した。

ステップ２：エチル４−アジドブタノエート（１５７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（４ｍＬ）、ＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）、および水（０．５ｍＬ）に溶解した。次にＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（１６８ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。反応を停止させ、ｐＨを、１ＮＨＣｌの使用により２〜３に調整し、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濃縮して、粗生成物を得て、これを更に精製することなく次のステップに直接使用した。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 3.36 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.39 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.89-1.82 (m, 2H).

ステップ３：ＤＭＦ（３．０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（０．７５ｍＬ）中の４−アジドブタン酸（１９ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）、１−（プロパ−２−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（３９．８ｍｇ、０．２９４ｍｍｏｌ）、およびＣｕＳＯ_４（１７．６２ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム塩（７２．９ｍｇ、０．３６８ｍｍｏｌ）で処理し、室温で２時間撹拌した。反応混合物を、２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの分取ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、白色の固体を得た。ＭＳｍ／ｚ２６５．１（Ｍ＋１）。保持時間０．６４２分間。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 7.94 (s, 1H), 6.86 (s, 2H), 4.77 (s, 2H), 4.43 (t, J=7.0 Hz, 2H), 2.31 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.17-2.13 (m, 2H).

ステップ４：４−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ブタン酸（４．５ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（９．９ｕＬ、０．０５７ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（５．６１ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、２（９．７２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）の添加の前に１０分間撹拌した。次に反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。生成物を、２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの分取ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物２４を含有する画分を集め、凍結乾燥して、白色の固体を得た。ＭＳｍ／ｚ９８８．５．１（Ｍ＋１）。保持時間１．０７４分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（メチルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（２５）

ＥＭＣＡ（４．１ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（８．３１ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（５．８７ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を加え、１０分後、化合物４（１１ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。生成物を、３０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの分取ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、所望の生成物２５を白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ１０１２．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２２２分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（２６）

ＤＭＦ（１ｍｌ）中のＥＭＣＡ（２．５ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（６．２ｕｌ、０．０３５ｍｍｏｌ）、次にＨＡＴＵ（４．５ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５分間撹拌し、次に（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドのＴＦＡ塩（６．７ｍｇ、０．００７６ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を室温で１時間保持し、粗物質を、２０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、化合物２６を得た。ＭＳｍ／ｚ９５９．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２２０分間。

（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホン酸（２７）

ＤＭＦ（１ｍｌ）中のＥＭＣＡ（３．３ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（２．７ｕｌ、０．０１６ｍｍｏｌ）、次にＨＡＴＵ（５．９３ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次にＤＭＦ中の（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホン酸７（１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。粗物質を、３０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホン酸２７とした。ＭＳｍ／ｚ９７１．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１８１分間。

（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸（２８）

ＤＭＦ（１ｍｌ）中のＥＭＣＡ（２．４ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（６．６ｕｌ、０．０３８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４．０ｍｇ、１０．４２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５分間撹拌し、次にＤＭＦ（１ｍｌ）中の（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸８（８．３ｍｇ、０．００９５ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物は１０分間で完了し、粗物質を、３０〜５５％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸２８を得た。ＭＳｍ／ｚ９５５．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１５１分間。

ブチル水素（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホネート（２９）

ピリジン（１ｍｌ）中の（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸８（４．２ｍｇ、０．００４４ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ＢｕＯＨ（３．３ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）、次に塩化ピバロイル（３．５ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を加えた。反応を、全ての亜リン酸がエステルに変換されるまでＬＣＭＳによりモニターした。次に、湿潤ピリジン−水（１０：１、１ｍｌ）中のヨウ素（１１ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）の新たに調製した溶液を加えた。反応を、完了するまでＬＣＭＳによりモニターした。ピリジンを真空により除去し、粗物質を、３０〜５５％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、ブチル水素（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホネート２９を得た。ＭＳｍ／ｚ１０２７．５（Ｍ＋１）。保持時間１．３００分間。エステルは、酸性条件下で加水分解する傾向がある。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（（（（１Ｒ，８Ｓ，９Ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イルメトキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（７５）

ＤＭＦ−ＴＨＦ（１：１、２ｍｌ）中の（Ｓ）−２−（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−アミノヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（実施例４４、ステップ２）（５ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）に、（１Ｒ，８Ｓ，９Ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イルメチル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）カーボネート（１．５ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．００２５ｍｌ、０．０１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次に分取ＨＰＬＣ（４０〜６５％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（７５）を得た。ＭＳｍ／ｚ１０３１．６（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．３３７分間。

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（７６）

ＤＭＦ（１ｍｌ）中のＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰ（１．９ｍｇ、０．００２６ｍｍｏｌ）、化合物（５０）のＴＦＡ塩（１．８ｍｇ、０．００２ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（０．２５ｍｌ）、ＨＯＡＴ（０．２９ｍｇ、０．００２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．００５４ｍｌ、０．０３１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を４０℃で２時間、次に３０℃で１８時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（２０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（７６）を得た。ＭＳｍ／ｚ６６４．０（Ｍ／２＋Ｈ）。保持時間１．１６５分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（７７）

ＤＭＦ（１ｍｌ）中の３−（２−（マレイミド）エトキシ）プロパン酸（２．２ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（３．７ｍｇ、０．００９８ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３．６ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を５分間撹拌し、次にＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（８ｍｇ、０．００９３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に濃縮した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（１０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（７７）を得た。ＭＳｍ／ｚ９３７．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１３８分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（７８）

化合物（７８）は、３−（２−（２−（マレイミド）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（２．６ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を３−（２−（マレイミド）エトキシ）プロパン酸の代わりに使用して、化合物（７７）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ９８１．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１４０分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（３−（２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（７９）

化合物（７９）は、３−（２−（２−（２−（マレイミド）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（３．１ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を３−（２−（マレイミド）エトキシ）プロパン酸の代わりに使用して、化合物（７７）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ１０２５．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１４３分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（８０）

化合物（８０）は、１−（マレイミド）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−酸（３．６ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を３−（２−（マレイミド）エトキシ）プロパン酸の代わりに使用して、化合物（７７）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ１０６９．５（Ｍ＋Ｈ）。保持時間１．１４４分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（４−（１−（２−（２−（２−（２−（４−（５−（メチルスルホニル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ブタノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（８１）

ステップ１：（Ｓ）−メチル２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパノエート（１）（６３ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ（０．７５ｍｌ）および水（０．５ｍｌ）に溶解した。ＮａＯＨ（１Ｍ、０．３５ｍｌ）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌した。１ＮＨＣｌによりおよそｐＨ５に中和した後、反応混合物を水で希釈し、凍結乾燥して、粗（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ７４２．４（Ｍ＋１）。保持時間１．０１０分間。生成物を更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ２：ＤＭＦ（２ｍｌ）中のヘキサ−５−イン酸（５．４ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（２６．１ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１６．９ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１５分間撹拌した。次にステップ１で得た生成物（３０ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ヘキサ−５−イノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ８３６．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２２４分間。

ステップ３：（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ヘキサ−５−イノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（７ｍｇ、０．００８４ｍｍｏｌ）および２−（４−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）フェニル）−５−（メチルスルホニル）−１，３，４−オキサジアゾール（３．７ｍｇ、０．００８４ｍｍｏｌ）を、ｔ−ＢｕＯＨ（１ｍｌ）および水（１ｍｌ）に懸濁した。０．３ｍｌのＨ_２Ｏ中のＬ−アスコルビン酸ナトリウム（１．７ｍｇ、０．００８４ｍｍｏｌ）および０．３ｍｌのＨ_２Ｏ中のＣｕＳＯ_４（０．３ｍｇ、０．００１７ｍｍｏｌ）を、シリンジの使用により逐次的に加え、反応物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を、分取（１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（８１）を白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ６３９．４（Ｍ／２＋１）。保持時間１．１９６分間。

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシート（８２）

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（（５６）、８．７ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）、ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−ＰＮＰ（９．７ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）、ＨＯＡＴ（１．７ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．０１３ｍｌ、０．０７７ｍｍｏｌ）を、ピリジン（０．５ｍｌ）およびＤＭＦ（２ｍｌ）中で合わせた。反応物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、分取ＨＰＬＣ（１０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（８２）を白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ６９５．５（Ｍ／２＋１）。保持時間１．１３９分間。

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（８３）

化合物（８３）は、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５７）を化合物（５６）の代わりに使用して、化合物（８２）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ７２０．０（Ｍ／２＋１）。保持時間１．１６９分間。

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−（（（Ｓ）−１−メトキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（８４）

化合物（８４）は、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−３−（（（Ｓ）−１−メトキシ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５８）を化合物（５６）の代わりに使用して、化合物（８２）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ６７１．０（Ｍ／２＋１）。保持時間１．２３６分間。

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（８５）

化合物（８５）は、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（５９）を化合物（５６）の代わりに使用して、化合物（８２）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ６８２．１（Ｍ／２＋１）。保持時間１．１７２分間。

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（８６）

化合物（８６）は、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６２）を化合物（５６）の代わりに使用して、化合物（８３）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ７２１．１（Ｍ／２＋１）。保持時間１．２８０分間。

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（８７）

化合物（８７）は、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６０）を化合物（５６）の代わりに使用して、化合物（８２）について記載された方法により調製した。保持時間１．２０４分間。

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｒ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（８８）

化合物（８８）は、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｒ）−２−フェニル−１−（ピリミジン−２−イル）エチル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（６１）を化合物（５６）の代わりに使用して、化合物（８２）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ６８８．０（Ｍ／２＋１）。保持時間１．２２１分間。

（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（５−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（８９）

ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−アミノヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（（実施例４４、ステップ２）、２０ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．０１８ｍｌ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ（１ｍｌ）中のビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）グルタレート（１０．１ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．０１８ｍｌ）に加えた。反応物を室温で２時間撹拌した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（５−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（８９）を得た。ＭＳｍ／ｚ１０６６．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１０３分間。

式（Ｉ）のＣ末端連結化合物の例の合成手順

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（３０）

ステップ１：１５ｍＬの丸底フラスコに、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（１２ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．０３２ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（１９ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を５分間撹拌した。次にＮ−（４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ベンジル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドのＴＦＡ塩（４８．５ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。粗物質を、１０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ１１３９．６（Ｍ＋１）。保持時間１．３９分間。

ステップ２：１５ｍＬの丸底フラスコに、ステップ１で得た生成物（４２．６ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（２．０ｍＬ）、およびＤＣＭ（４．０ｍＬ）を加えて、明澄な溶液をもたらした。反応混合物を室温で１時間撹拌し、その時点でＬＣＭＳ分析は、Ｂｏｃが完全に除去されたことを示した。反応混合物を濃縮して、化合物３０をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ１０３９．６（Ｍ＋１）。保持時間１．０６分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（３１）

１５ｍＬの丸底フラスコに、ＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドのＴＦＡ塩（３０）（２０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（５．９ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、および酢酸（０．００２９ｍＬ、０．０５０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液に、ＮａＣＮＢＨ_３（６．６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。追加のホルムアルデヒドおよびＮａＣＮＢＨ_３を加え、反応混合物を５０℃に１時間加熱して、反応を完了させた。粗物質を、１０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、化合物３１をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ１０５３．７（Ｍ＋１）。保持時間１．０７分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アセチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（３２）

１５ｍＬの丸底フラスコに、酢酸（０．７９ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１．７ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（１．０ｍＬ）、続いてＨＢＴＵ（２．２ｍｇ、０．００５８ｍｍｏｌ）を加えた。（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−３−メチルピロリジン−２−カルボキサミドのＴＦＡ塩（３０）（５．５ｍｇ、０．００４８ｍｍｏｌ）を加える前に、反応混合物を５分間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。粗物質を、２０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、化合物３２を得た。ＭＳｍ／ｚ１０８１．３（Ｍ＋１）。保持時間１．２２分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−（６−ヒドロキシヘキシル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（３３）

ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）中の化合物３０（３．０ｍｇ、０．００２９ｍｍｏｌ）に、６−ヒドロキシヘキサナール（６．７ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）、続いてＮａＢＨ_３ＣＮ（９．１ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、追加のＮａＢＨ_３ＣＮ（９．１ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。更に３０分後、ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−（６−ヒドロキシヘキシル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド３３を得た。ＭＳｍ／ｚ１１３９．６（Ｍ＋１）。保持時間１．１０分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−（６−ヒドロキシヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（３４）

ＤＭＦ（１ｍＬ）中６−ヒドロキシヘキサン酸（３．８ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（７．５ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（９．１ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、化合物３０（１０ｍｇ、０．００９６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１時間撹拌し、その時点でＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、化合物３４を得た。ＭＳｍ／ｚ１１５３．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２０分間。

（２Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボキサミド（３５）

この化合物は、３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸（１２．５ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２８．５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２１ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）、およびＮ−（４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ベンジル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドのＴＦＡ塩（１１ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を使用し、化合物３０について記載されたものと同じ方法を使用して合成した。精製した後、Ｂｏｃ保護中間体を得た。ＭＳｍ／ｚ１１２５．５（Ｍ＋１）。保持時間１．３４分間。このようにして得た生成物（１０ｍｇ、０．００８９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中のＴＦＡ（２．０ｍＬ）で処理した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、ＬＣＭＳ分析は、Ｂｏｃが完全に除去されたことを示した。溶液を濃縮して、化合物３５をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ１０２５．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０６分間。

（２Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−３−メチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボキサミド（３６）

ＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）中の（２Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボキサミドのＴＦＡ塩（３５）（７．９ｍｇ、０．００６２ｍｍｏｌ）およびパラホルムアルデヒド（２．７ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）にＮａＣＮＢＨ_３（１１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。粗物質を、２０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、濃縮して、化合物３６をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ１０３９．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０７分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサオクタトリアコンタン−３８−オイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（３７）

ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサオクタトリアコンタン−３８−酸（１７．０ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（７．５ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（９．２ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、化合物３０（１０．０ｍｇ、０．００９６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、化合物３７を得た。ＭＳｍ／ｚ８０５．６（（Ｍ＋２）／２）。保持時間１．２５分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−（２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３−オクタオキサヘキサコサン−２６−オイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（３８）

化合物３８は、化合物３０（１０ｍｇ、０．００９６ｍｍｏｌ）および２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３−オクタオキサヘキサコサン−２６−酸（１１．９１ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を使用し、化合物３７について記載されたものと同じ方法により合成した。ＭＳｍ／ｚ７１７．５（（Ｍ＋２）／２）。保持時間１．２５分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−（１−ヒドロキシ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（３９）

化合物３９は、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の３０（１０ｍｇ、０．００９６ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−酸（７．７ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（７．４６ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（９．１２ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を使用し、化合物３７について記載されたものと同じ方法により合成した。ＭＳｍ／ｚ１２８７．６（Ｍ＋１）。保持時間１．１８分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４０）

ステップ１：（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−フェニルプロパン酸（９６４ｍｇ、３．６３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（１．２７ｇ、９．８４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１．１３ｇ、３．０３ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、ベンジル４−アミノベンジルカルバメート（３８８ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、その時点でＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）を反応物に加えた。次に反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＨ_２Ｏ（５×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をＤＣＭ（５．０ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（５．０ｍＬ）で処理した。室温で１時間後、ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。溶媒を減圧下で除去した。残留物を、ＤＣＭ中２Ｍアンモニアを有する０〜８％のＭｅＯＨを使用するＩＳＣＯにより精製して、（Ｓ）−ベンジル４−（２−アミノ−３−フェニルプロパンアミド）ベンジルカルバメートを白色の固体として得た。ＭＳｍ／ｚ４０４．２（Ｍ＋１）。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 7.44-7.23 (m, 14H), 5.10 (s, 2H), 4.26 (s, 2H), 4.12 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.28-3.22 (m, 1H), 3.15-3.10 (m, 1H).

ステップ２：（Ｓ）−ベンジル４−（２−アミノ−３−フェニルプロパンアミド）ベンジルカルバメート（２０１．７ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）および（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（４２９ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解した。次にＤＩＥＡ（３２３ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（３４２ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して、ベンジル４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ベンジルカルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ９５７．５（Ｍ＋１）。保持時間１．５４分間。Ｂｏｃ保護生成物（３９３ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を、メタノールＨＣｌ（３Ｍ、１５ｍＬ）に溶解した。溶媒を減圧下でゆっくりと蒸発させた。ＬＣＭＳ分析は、脱保護反応が完了したことを示した。アセトニトリルおよび水を加え、得られた溶液を凍結乾燥して、ベンジル４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ベンジルカルバメートをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ８５７．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１６分間。

ステップ３：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（１９０ｍｇ、０．７８８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５．０ｍＬ）に溶解した。ＤＩＥＡ（２５４ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２７０ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１５分間撹拌し、ベンジル４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ベンジルカルバメート（３３６ｍｇ、０．３９４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、その時点でＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ１０８０．５（Ｍ＋１）。保持時間１．５６分間。
Ｂｏｃ保護生成物（８８ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）を、メタノールＨＣｌ（３Ｍ、６．０ｍＬ）に溶解した。溶媒を減圧下でゆっくりと蒸発させた。ＬＣＭＳ分析は、脱保護反応が完了したことを示した。アセトニトリルおよび水を加え、得られた溶液を凍結乾燥して、ベンジル４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ベンジルカルバメートをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ９８０．５（Ｍ＋１）。

ステップ４：ベンジル４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ベンジルカルバメート（６５．８ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解した。パラホルムアルデヒド（２２．８ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）および酢酸（０．０２３ｍＬ、０．４０ｍｍｏｌ）、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（４７．７ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を撹拌しながら５０℃に１時間加熱した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、ベンジル４−（（Ｒ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ベンジルカルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ９９４．５（Ｍ＋１）。保持時間１．２１分間。

ステップ５：ベンジル４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ベンジルカルバメート（４８ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（５．０ｍＬ）に溶解し、Ｎ_２下でフラッシュした。Ｐｄ／Ｃ（２０．５ｍｇ、１０％Ｐｄ）を加えた。反応容器を排気し、Ｈ_２を戻し充填した。この操作を５回繰り返して、反応雰囲気をＨ_２に置き換えた。反応混合物をＨ_２下において室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を濾過し、濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（アミノメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドを得た。ＭＳｍ／ｚ８６０．５（Ｍ＋１）。保持時間０．８６分間。このようにして得た生成物を、更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ６：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（アミノメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（１２ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）シクロヘキサンカルボキシレート（５．６ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、ＤＩＥＡ（１０．８ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、化合物４０を得た。ＭＳｍ／ｚ１０７９．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１２分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（３−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパンアミド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４１）

ＤＭＦ（１．５ｍｌ）中の３−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（７．２ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（１０．８ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（８．０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（アミノメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（１２ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、化合物４１を得た。ＭＳｍ／ｚ１０９９．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０７分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４２）

飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３．０ｍＬ）に、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（アミノメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（２０．０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を０℃に冷却し、メチル２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキシレート（１４．４ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１．５時間撹拌した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、化合物４２を得た。ＭＳｍ／ｚ９４０．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１３分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（３−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキシル）ウレイド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４３）

ステップ１：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（２１１ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（４１．６ｍｇ、１０％Ｐｄ）を加えた。反応容器を排気し、Ｈ_２を戻し充填した。この操作を５回繰り返して、反応雰囲気をＨ_２に置き換えた。反応混合物をＨ_２下において室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を濾過し、濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（アミノメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ９４６．６（Ｍ＋１）。これを更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ２：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（アミノメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（３０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（３ｍｌ）およびＴＨＦ（３ｍｌ）に溶解した。次にＤＩＥＡ（２０．５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェニルカルボノクロリデート（１２．８ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ１１１１．５（Ｍ＋１）。保持時間１．５４分間。

ステップ３：ＤＭＦ（１．０ｍＬ）およびＴＨＦ（１．０ｍＬ）に溶解した（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）アミノ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート（１３．７ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）に、１−（６−アミノヘキシル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１４．５ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３１．９ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（３−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキシル）ウレイド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレートを得た。ＭＳｍ／ｚ１１６８．６（Ｍ＋１）。このようにして得たＢｏｃ保護生成物を、メタノールＨＣｌ（３Ｍ、２．０ｍＬ）に溶解した。溶媒を減圧下でゆっくりと除去した。ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。残留物をアセトニトリルおよび水に溶解し、凍結乾燥して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（３−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキシル）ウレイド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ１０６８．６（Ｍ＋１）。保持時間１．０９分間。

ステップ４：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（３−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキシル）ウレイド）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（８．４ｍｇ、０．００７９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に溶解した。パラホルムアルデヒド（２．７ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）および酢酸（０．００２７ｍＬ、０．０４６ｍｍｏｌ）、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（５．６ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を撹拌しながら５０℃に１時間加熱した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、化合物４３を得た。ＭＳｍ／ｚ１０８２．６（Ｍ＋１）。保持時間１．１１分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（（４−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）メチル）フェニル）（メチル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４４）

ステップ１：６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸（３４９ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した。次に、ＤＩＥＡ（８２０ｍｇ、６．３５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（５７９ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次にｔｅｒｔ−ブチル（４−（アミノメチル）フェニル）（メチル）カルバメート（３００ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）を反応物に加えた。次に反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＨ_２Ｏ（５×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濃縮し、ＩＳＣＯ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの０〜８０％）により精製した。ＭＳｍ／ｚ３７４．２（Ｍ＋１−ｔＢｕ）、保持時間１．１５６分間の所望の生成物を、黄色の油状物として得た。生成物をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（１ｍＬ）で処理した。室温で１時間後、溶媒を減圧下で除去した。残留物をアセトニトリルおよび水に溶解し、凍結乾燥して、６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（４−（メチルアミノ）ベンジル）ヘキサンアミドを黄色の固体として得た（ＭＳｍ／ｚ３３０．２（Ｍ＋１）、保持時間０．６１分間）。

ステップ２：ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−フェニルプロパン酸（２１９ｍｇ、０．８２７ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（３５６ｍｇ、２．７６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２８８ｍｇ、０．７５８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１０分間撹拌した後、６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（４−（メチルアミノ）ベンジル）ヘキサンアミド（２２７ｍｇ、０．６８９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を反応物に加えた。次に反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＨ_２Ｏ（５×１０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で脱水し、濃縮し、ＩＳＣＯ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの０〜７５％）により精製して、所望の生成物を得た。ＭＳｍ／ｚ５７７．３（Ｍ＋１）。保持時間１．１９分間。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.00 (s, 1H), 8.24 (t, J = 6.0 Hz, 1h), 7.52 (d, j = 8.4 Hz, 2H), 7.32-7.09 (m, 7H), 7.01 (s, 2H), 4.31 (m, 1H), 4.19 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.17 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 3.00 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.10 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.54-1.44 (m, 4H), 1.31 (s, 9H), 1.22-1.15 (m, 4H).生成物を、ＭｅＯＨ中の３ＭＨＣｌ（５ｍＬ）に溶解した。溶媒を減圧下でゆっくりと除去した。残留物をアセトニトリルおよび水に溶解し、凍結乾燥して、（Ｓ）−Ｎ−（４−（２−アミノ−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパンアミド）ベンジル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ４７７．２（Ｍ＋１）。保持時間０．８３分間。

ステップ３：ＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解したＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（３７４ｍｇ、０．６０７ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（２６１ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２８２ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１５分間撹拌した後、（Ｓ）−Ｎ−（４−（２−アミノ−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパンアミド）ベンジル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１９３ｍｇ、０．４０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を逆相ＨＰＬＣにより精製して、所望の生成物のＮ−（４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパンアミド）ベンジル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドを得た。ＭＳｍ／ｚ１０３０．５（Ｍ＋１）。保持時間１．４３０分間。生成物を３ＭメタノールＨＣｌ（３ｍＬ）に溶解した。溶媒を減圧下で除去した。残留物をアセトニトリルおよびＨ_２Ｏに溶解し、凍結乾燥して、所望の生成物のＮ−（４−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−Ｎ−メチル−３−フェニルプロパンアミド）ベンジル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミドをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ９３０．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０７分間。

ステップ４〜５：化合物３０および化合物３１の調製について記載されたものと同じ手順に従って、化合物４４を得た。ＭＳｍ／ｚ１０６７．６（Ｍ＋１）。保持時間１．１０分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（３−アジドプロピルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４５）

ステップ１：水（２５ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（３．５０ｇ、５３．８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、アセトン（２５ｍＬ）中の１，３−プロパンスルホン（６．１０ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、濃縮乾固した。得られた固体をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に懸濁し、還流状態で１時間撹拌した。懸濁液を室温に冷却し、固体を濾過により収集し、アセトンおよびジエチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥して、３−アジド−１−プロパンスルホン酸を得た。ＭＳｍ／ｚ１８８．１（Ｍ＋１）。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 3.47 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.07-2.00 (m, 2H).

ステップ２：３−アジド−１−プロパンスルホン酸（２．０７ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）をトルエンに懸濁した。ＰＣｌ_５（２．６１ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、濾過して、不溶性物質を除去した。フィルターケーキをＤＣＭで洗浄した。合わせた濾液を濃縮して、３−アジドプロパン−１−スルホニルクロリドを暗黄色の油状物として得て、これを更に精製することなく次のステップに使用した。

ステップ３：０℃に冷却したＮＨ_４ＯＨ（５ｍＬ）に、３−アジドプロパン−１−スルホニルクロリド（１．７５ｇ、９．５３ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、反応混合物を室温に加温し、同じ温度で３時間撹拌した。油状混合物は明澄になった。反応混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で脱水し、濃縮した。残留溶媒を高真空下で１８時間更に除去して、３−アジドプロパン−１−スルホンアミドを得た。ＭＳｍ／ｚ１８７．１（Ｍ＋１）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 4.83 (s, 2H), 3.51 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.23 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.17-2.10 (m, 2H).

ステップ４：（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−フェニルプロパン酸（１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解し、続いてＤＩＥＡ（０．３９５ｍＬ、２．２６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（３５８ｍｇ、０．９４０ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、３−アジドプロパン−１−スルホンアミド（１８６ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２時間撹拌し、その時点でＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−（３−アジドプロピルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）カルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ３１２．１（Ｍ＋１−Ｂｏｃ）。保持時間１．１５分間。このようにして得た生成物（７２．４ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）を３ＭメタノールＨＣｌ（５ｍＬ）に溶解した。溶媒を減圧下で除去した。残留物をアセトニトリルおよびＨ_２Ｏに溶解し、凍結乾燥して、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３−アジドプロピル）スルホニル）−３−フェニルプロパンアミドをピンク色がかった黄色を帯びた固体を得た。ＭＳｍ／ｚ３１２．１（Ｍ＋１）。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 7.42-7.31 (m, 5H), 4.16-4.13 (m, 1H), 3.51-3.47 (m, 4H), 3.32-3.26 (m, 1H), 3.13-3.08 (m, 1H), 2.00-1.94 (m, 2H).

ステップ５：ＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解したＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＯＨ（１９５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（１３２ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１０８ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（３−アジドプロピル）スルホニル）−３−フェニルプロパンアミド（５９．２ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加える前に、反応混合物を室温で１５分間撹拌した。反応混合物を室温で更に２時間撹拌した。粗物質を逆相ＨＰＬＣにより精製して、所望の生成物（９５ｍｇ、収率６５％、ＭＳｍ／ｚ８６５．４（Ｍ＋１）、保持時間１．４３分間）を得た。生成物を、ＭｅＯＨ中の３ＭＨＣｌ（３ｍＬ）に溶解した。溶媒を真空下で除去した。アセトニトリルおよびＨ_２Ｏを残留物に加え、溶液を凍結乾燥して、所望の生成物の（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（３−アジドプロピルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−２−アミノ−３−メチル−１−オキソブタンを得た。ＭＳｍ／ｚ７６５．４（Ｍ＋１）。保持時間１．０４分間。

ステップ６：ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（１６．５ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（１７．６ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２１．６ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を加えた。（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（３−アジドプロピルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−２−アミノ−３−メチル−１−オキソブタン（２０ｍｇ、ＴＦＡ塩、０．０２３ｍｍｏｌ）を加える前に、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、その時点でＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のＡＣＮ−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（３−アジドプロピルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドを得た。ＭＳｍ／ｚ９８８．５（Ｍ＋１）。保持時間１．５１分間。このようにして得た生成物（９．４ｍｇ、０．００９５ｍｍｏｌ）をメタノールＨＣｌ（３Ｍ、２．０ｍＬ）に溶解した。溶媒を減圧下でゆっくりと除去した。残留物をアセトニトリルおよびＨ_２Ｏに溶解し、凍結乾燥して、化合物４５をＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ８８８．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１０分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（３−アジドプロピルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４６）

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（３−アジドプロピルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４５）（８．８ｍｇ、０．００９９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）に溶解した。パラホルムアルデヒド（１０．１ｍｇ、０．３３７ｍｍｏｌ）および酢酸（０．０１０２ｍＬ）、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２１．２ｍｇ、０．３３７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を撹拌しながら５０℃で１時間加熱した。更なるパラホルムアルデヒド（１０．１ｍｇ、０．３３７ｍｍｏｌ）、酢酸（０．０１０２ｍＬ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２１．２ｍｇ、０．３３７ｍｍｏｌ）を加えた。５０℃で１時間後、ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のＡＣＮ−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、化合物４６を得た。ＭＳｍ／ｚ９０２．５（Ｍ＋１）。保持時間１．１２分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（３−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロピルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４７）

ＤＭＦ（２．０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（０．５ｍＬ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−Ｎ−１−（３−アジドプロピルスルホンアミド）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４６）（５．２ｍｇ、０．００５８ｍｍｏｌ）、１−（プロパ−２−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１．５６ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）およびＣｕＳＯ_４（０．７ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム塩（２．５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）で処理し、室温で２時間撹拌した。更なるＣｕＳＯ_４（０．７ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）およびＬ−アスコルビン酸ナトリウム塩（２．５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で更に２時間後、ＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。粗物質を、１０〜９０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を集め、凍結乾燥して、化合物４７を得た。ＭＳｍ／ｚ１０３７．４（Ｍ＋１）。保持時間１．００分間。

６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキシル水素（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスホネート（４８）

ピリジン（２ｍｌ）中の（（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）ホスフィン酸９（１０．２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）に、１−（６−ヒドロキシヘキシル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１３．５ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）、次に塩化ピバロイル（４０ｍｇ、０．３３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で０．５時間撹拌し、反応を、ホスフィン酸の９０％が消滅するまでＬＣＭＳによりモニターした。次に、新たに調製したピリジン中５％Ｈ_２Ｏ中のＩ_２溶液を加えた。酸性化ステップが完了すると、ピリジンを高真空により除去した。粗物質をアセトニトリルに溶解し、粗物質を、１０〜６０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏで溶出するＣ１８カラムの逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、化合物４８を得た。ＭＳｍ／ｚ９７１．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０３８分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）フェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（９０）

ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のＥＭＣＡ（１．３ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）を、ＤＩＥＡ（０．００６ｍｌ、０．０３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２．３ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）により室温で１０分間処理し、次にＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の化合物（５２）のＴＦＡ塩（６ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１６時間撹拌した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（１０〜４５％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（９０）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ９５０．６（Ｍ＋Ｈ）。保持時間０．９３４分間。

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバメート（９１）

ピリジン（０．２５ｍｌ）を、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（５２）のＴＦＡ塩（６ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）、ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＰＮＰ（１３ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）に加え、ＨＯＡＴ（０．８ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１３ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）をさらに加えた。反応物を４０℃で４８時間撹拌した。粗物質を、分取ＨＰＬＣ（２５〜４０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（９１）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ６７８．６（Ｍ／２＋Ｈ）。保持時間０．９５９分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−（Ｎ−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−スルファモイルプロパン）−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（９２）

ＥＭＣＡ（１２．１ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解した。ＤＩＥＡ（０．００２４ｍｌ）およびＨＡＴＵ（１９．７ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えた。次にＤＭＦ（２ｍｌ）中の（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−スルファモイルプロパン−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（（５５）、２６．４ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌した。次に、更なるＥＭＣＡ（１２．１ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．００２４ｍｌ）およびＨＡＴＵ（１９．７ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後、ＥＭＣＡ（１２．１ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．００２４ｍｌ）およびＨＡＴＵ（１９．７ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を再び加えた。次に反応物を５０℃で２時間加熱した。反応物を冷却し、更なるＥＭＣＡ（１２．１ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．００２４ｍｌ）およびＨＡＴＵ（１９．７ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳは、（５５）のおよそ２０％が生成物の変換されたことを示した。反応混合物を、分取ＨＰＬＣ（３０〜５０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−メトキシ−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（（（Ｓ）−１−フェニル−３−（Ｎ−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル）−スルファモイルプロパン）−２−イル）アミノ）プロピル）ピロリジン−１−イル）−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（９２）を得た。ＭＳｍ／ｚ９９８．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０４１分間。

（１Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジル−２０−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−４−メチル−５，８−ジオキソ−２，１２，１５，１８−テトラオキサ−６，９−ジアザイコサン−３−イル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（９３）

ステップ１：ＤＭＦ（４ｍｌ）中の（Ｓ）−２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−フェニルプロパン酸（１７５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を、ＤＩＥＡ（０．４８ｍｌ、２．７５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２３０ｍｇ、０．６０５ｍｍｏｌ）で１５分間処理し、続いて２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミン（１２０ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を一晩撹拌した。粗物質を分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−アジド−１３−オキソ−１５−フェニル−３，６，９−トリオキサ−１２−アザペンタデカン−１４−イル）カルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ４６６．３（Ｍ＋１）。保持時間１．１７０分間。

ステップ２：（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−アジド−１３−オキソ−１５−フェニル−３，６，９−トリオキサ−１２−アザペンタデカン−１４−イル）カルバメート（１１７ｍｇ、０．２５１ｍｍｏｌ）をメタノールＨＣｌ（３Ｍ、５ｍｌ）に溶解した。溶媒をゆっくりと蒸発により除去すると、Ｂｏｃ基の完全な除去をもたらした。残留溶媒を減圧下で一晩かけて更に除去して、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３−フェニルプロパンアミドをＨＣｌ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ３６６．１（Ｍ＋１）。保持時間０．８５８分間。

ステップ３：ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（実施例１２、ステップ２、８ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を、ＤＩＥＡ（０．０１１ｍｌ、０．０６６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４．６３ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）で１５分間処理し、続いてＤＭＦ（１ｍｌ）中の（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３−フェニルプロパンアミド（５．３ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌した。粗物質を分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（１Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−２０−アジド−７−ベンジル−４−メチル−５，８−ジオキソ−２，１２，１５，１８−テトラオキサ−６，９−ジアザイコサン−３−イル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドを得た。ＭＳｍ／ｚ９５６．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０５１分間。

ステップ４：ｔ−ＢｕＯＨ（１ｍＬ）および水（１ｍｌ）中のステップ３で得た生成物（６．２ｍｇ、０．００５８ｍｍｏｌ）および１−（プロパ−２−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１．６ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）に、０．２ｍｌのＨ_２Ｏ中のＬ−アスコルビン酸ナトリウム（１．１ｍｇ、０．００５８ｍｍｏｌ）、および０．１ｍｌの水中のＣｕＳＯ_４（０．２ｍｇ、０．００１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、次に分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（９３）を得た。ＭＳｍ／ｚ１０９１．６（Ｍ＋１）。保持時間０．９８０分間。

（１Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジル−１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−４−メチル−５，８−ジオキソ−２，１２，１５−トリオキサ−６，９−ジアザヘプタデカン−３−イル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（９４）

ステップ１：ｔ−ブチル（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（２５０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）およびメチル２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキシレート（１５６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１０ｍｌ）中で合わせ、０℃で１．５時間撹拌した。反応混合物を塩酸（２Ｍ）でｐＨ２に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濃縮した。粗物質を、０〜４％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するＩＳＣＯにより精製して、ｔ−ブチル（２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメートを、無色の油状物として得た。ＭＳｍ／ｚ２２９．２（Ｍ＋１−Ｂｏｃ）。保持時間０．９６３分間。¹H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 6.71 (s, 2H), 5.04 (bs, 1H), 3.74 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.64 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.61-3.59 (m, 2H), 3.56-3.54 (m, 2H), 3.50 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.31-3.26(m, 2H), 1.44 (s, 9H).

ステップ２：ＤＣＭ（２ｍｌ）中のｔ−ブチル（２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（１８４ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（０．４ｍｌ）により０℃で３０分間、次に室温で２時間処理した。反応混合物を濃縮して、１−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ２２９．２（Ｍ＋１）。保持時間０．３５３分間。

ステップ３：ＤＭＦ（１ｍｌ）中のＢｏｃ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＨ（３０ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）を、ＤＩＥＡ（８８ｍｇ）およびＨＡＴＵ（４３ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）により１５分間活性化させ、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の１−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンのＴＦＡ塩（４６．４ｍｇ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−（（２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）カルバメートを得た。ＭＳｍ／ｚ４７６．２（Ｍ＋１）。保持時間１．０９１分間。ＤＣＭ（２ｍｌ）中のこの生成物（３１ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（０．２ｍｌ）により０℃で３０分間、次に室温で２時間処理した。反応混合物を濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）−３−フェニルプロパンアミドをＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ３７６．２（Ｍ＋１）。保持時間０．６４９分間。

ステップ４：ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸のＴＦＡ塩（実施例１２、ステップ２）（７．２ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（７．７ｍｇ）およびＨＡＴＵ（４．１８ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１５分間撹拌し、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）−３−フェニルプロパンアミドのＴＦＡ塩（６．３ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、分取ＨＰＬＣ（２０〜７０％のアセトニトリル−０．０５％ＴＦＡ含有Ｈ_２Ｏ）により精製して、化合物（９３）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳｍ／ｚ９６６．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０１６分間。

（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジル−１４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−４−メチル−５，８−ジオキソ−２，１２−ジオキサ−６，９−ジアザテトラデカン−３−イル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（９５）

化合物（９５）は、ｔ−ブチル（２−（２−アミノエトキシ）エチル）カルバメートをｔ−ブチル（２−（２−（２−アミエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメートの代わりに使用して、化合物（９４）について記載された方法により調製した。ＭＳｍ／ｚ９２２．５（Ｍ＋１）。保持時間１．０４４分間。

補酵素Ａ類似体の合成手順

補酵素Ａの３−ブテン−２−オン付加物（４９）

補酵素Ａトリリチウム塩（２５９ｍｇ、Ｓｉｇｍａ、アッセイ＞９３％）を、ＥＤＴＡを有する２．０ｍＬのリン酸緩衝液（１００ｍＭのリン酸塩、５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．５）に溶解した。反応混合物に、３−ブテン−２−オン（２９．０μＬ、Ａｌｄｒｉｃｈ、９９％）を加え、反応混合物を２０℃で７５分間放置した。反応混合物全体を、１００％のＨ_２Ｏで予備平衡したＩＳＣＯＣ１８ＡｑＧｏｌｄ１５．５ｇカラムにローディングした。所望の生成物を１００％のＨ_２Ｏで溶出した。純粋な所望の生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、化合物４９を結晶質の固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ８３８．２（Ｍ＋１）。H-NMR (400MHz, D₂O) δ 8.525 (s, 1H), 8.235 (s, 1H), 6.140 (d, 1H, J=7.2Hz), 4.746 (m, 1H), 4.546 (bs, 1H), 4.195 (bs, 1H), 3.979 (s, 1H), 3.786 (dd, 1H, J= 4.8, 9.6Hz), 3.510 (dd, 1H, J=4.8, 9.6Hz), 3.429 (t, 2H, J= 6.6Hz), 3.294S (t, 2H, J=6.6Hz), 2.812 (t, 2H, J=6.8Hz), 2.676 (t, 2H, J=6.8Hz), 2.604 (t, 2H, J=6.8Hz), 2.420 (t, 2H, J=6.6Hz), 2.168 (s, 3H), 0.842 (s, 3H), 0.711 (s, 3H)（注：Ｄ_２Ｏと重複する幾つかのピークは、報告されていない）。

ケトン−補酵素Ａ類似体（ＣｏＡ−（ｉ−１０））

化合物（ｉ−１０）は、５ｍＭの化合物（ｉ−１０）を、２０のＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）中に１０μＭの黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）ＣｏＡＡ、２５μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＤ、および２０μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＥの存在下において２５ｍＭのＡＴＰと３７℃で約１４時間反応させることによって、ケトン官能化ＣｏＡ類似体ＣｏＡ−（ｉ−１０）に変換された。可溶性酵素を、１０ｋＤａカットオフを有するＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ遠心分離フィルターを介した限外濾過により分離した。化合物（ｉ−１０）からＣｏＡ類似体ＣｏＡ−（ｉ−１０）への酵素変換は、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１０）−２２ＡＤＣの形成によって確認した（表９および表１０を参照されたい）。

アジド−補酵素Ａ類似体（ＣｏＡ−（ｉ−１１））

化合物（ｉ−１１）は、５ｍＭの化合物（ｉー１１）を、２０のＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）中に１０μＭの黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）ＣｏＡＡ、２５μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＤ、および２０μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＥの存在下において２５ｍＭのＡＴＰと３７℃で約１４時間反応させることによって、アジド官能化ＣｏＡ類似体ＣｏＡ−（ｉ−１１）に変換された。可溶性酵素を、１０ｋＤａカットオフを有するＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ遠心分離フィルターを介した限外濾過により分離した。化合物（ｉ−１１）からＣｏＡ類似体ＣｏＡ−（ｉ−１１）への酵素変換は、限外濾過の小画分と５倍モル過剰の化合物（７５）との反応後のＬＣ−ＭＳ分析により確認した。銅無含有のクリック化学反応を、５０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ／Ｈ_２Ｏにおいて２３℃で３時間実施し、反応混合物を、０．０５％ＴＦＡ含有水中の１０〜１００％のアセトニトリルの１．３５分勾配溶出を、０．９ｍＬ／分の流速で使用する逆相ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＨＳＳＴ３カラム（１００Å、２．１ｍｍ×５０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ）により分離した。質量スペクトル分析は、所望の付加物の存在を明らかにし、それによって３つ全てのＣｏＡ生合成酵素による化合物（ｉ−１１）からＣｏＡ類似体ＣｏＡ−（ｉ−１１）への変換が確認された。ＭＳｍ／ｚ９０４．６（（Ｍ＋２）／２）。保持時間０．９４分間。

ケトン−補酵素Ａ類似体（ＣｏＡ−（ｉ−１２））

化合物（ｉ−１２）は、５ｍＭの化合物（ｉ−１２）を、２０のＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）中に１０μＭの黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）ＣｏＡＡ、２５μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＤ、および２０μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＥの存在下において２５ｍＭのＡＴＰと３７℃で約１６時間反応させることによって、ケトン官能化ＣｏＡ類似体ＣｏＡ−（ｉ−１２）に変換された。反応混合物を２０８１７×ｇで２分間遠心分離した後、可溶性酵素を、１０ｋＤａカットオフを有するＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ遠心分離フィルターを介した限外濾過（１５分間、１４０００×ｇ）により分離した。化合物（ｉ−１２）からＣｏＡ類似体ＣｏＡ−（ｉ−１２）への酵素変換は、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１２）−２２ＡＤＣの形成によって確認した（表１０を参照されたい）。

ケトン−補酵素Ａ類似体（ＣｏＡ−（ｉ−１３））

化合物（ｉ−１３）は、１０ｍＭの化合物（ｉ−１３）を、２０のＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）中に１０μＭの黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）ＣｏＡＡ、２５μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＤ、および２０μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＥの存在下において２５ｍＭのＡＴＰと３７℃で約４８時間反応させることによって、ケトン官能化ＣｏＡ類似体ＣｏＡ−（ｉ−１３）に変換された。反応混合物を２０８１７×ｇで２分間遠心分離した後、可溶性酵素を、１０ｋＤａカットオフを有するＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ遠心分離フィルターを介した限外濾過（１５分間、１４０００×ｇ）により分離した。

比較例のペプチドの合成手順
（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−メチルヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（ＭＣ−ＭＭＡＦ）の合成

ＭＭＡＦ−ＯＭｅ（１３５ｍｇ、ＣｏｎｃｏｒｔｉｓＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）をＣＨ_３ＣＮ（１０ｍＬ）に溶解した。得られた明澄な溶液に、５ｍＬの水、続いて０．３７５ｍＬの１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（認証済、ＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加えた。反応混合物を２１℃で１８時間磁気的撹拌し、その時点でＬＣＭＳ分析は、反応が完了したことを示した。反応混合物を冷凍および凍結乾燥し、ＭＭＡＦナトリウム塩を得た。ＬＣＭＳ保持時間０．９１１分間。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ７３２．５（Ｍ＋１）。前の反応においてこのようにして得たＭＭＡＦナトリウム塩全体を、１０ｍＬのＤＭＳＯに溶解した。別個の反応容器において、６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサン酸（９５ｍｇ）を、３．０ｍＬのＤＭＳＯ中のＨＡＴＵ（１６５ｍｇ）およびＤＩＥＡ（０．１２６ｍＬ）により２１℃で２５分間処理した。活性化エステルの反応混合物全体を、ＭＭＡＦナトリウム塩の溶液に加え、反応混合物を同じ温度で３時間撹拌した。反応混合物を、４０ｍＬのＥｔＯＡｃと２０ｍＬの５％クエン酸水溶液に分配した。有機層を分離し、水層を２０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を１０ｍＬの飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物を、ＩＳＣＯＣ１８ゴールド１５．５ｇカラムを使用するＩＳＣＯＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ機器により精製した。所望の材料をＨ_２Ｏ中５０％のＣＨ_３ＣＮで溶出した。所望の生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥して、化合物を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ保持時間１．３９２分間。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ９２５．６（Ｍ＋１）。

ペイロードのインビトロ細胞死滅アッセイ

式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドのインビトロにおける細胞死滅効力を評価するため、細胞増殖アッセイを、８つの細胞株：ＭＤＡ−ＭＢ２３１クローン１６、クローン４０、ＪｉｍＴ１、ＨＣＣ１９５４、Ｈ５２６、ＫＵ８１２、ＣＭＫ１１−５の細胞、およびジャーカット細胞を用いて並行して実施した。加えて、インビトロにおいて、細胞増殖アッセイを、３つの他の細胞株：Ａ３７５、ＳＫＢＲ３、およびＮＣＩ−Ｎ８７を使用して実施した。全ての細胞株を、実施例１０６において更に詳細に記載し、本発明の免疫抱合体のインビトロ効力を評価するためにも使用した。細胞増殖アッセイは、細胞を様々な濃度のＡＤＣと共にインキュベートした５日後に、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）により実施した（Riss et al., (2004) Assay Drug Dev Technol. 2:51-62）。幾つかの研究において、細胞に基づいたアッセイは、ハイスループットであり、自動化システムにより実施される（Melnick et al., (2006) Proc Natl Acad Sci U S A. 103:3153-3158）。式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドのある特定の例によって得られたインビトロ細胞死滅効力を、表２ａおよび表２ｂに提示する。

抗原結合部分
式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の抗原結合部分は、標的細胞型において見出される細胞表面マーカーに選択的に結合する任意の部分であり得る。幾つかの態様において、Ａｂは、がん細胞の表面に主に、または優先的に見出される抗原、例えば、腫瘍関連抗原に特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗体の抗原結合フラグメント）である。幾つかの態様において、Ａｂは、細胞表面受容体タンパク質もしくは他の細胞表面分子、細胞生存調節因子、細胞増殖調節因子、組織発達もしくは分化に関連する（例えば、機能性に寄与することが知られている、もしくは推定される）分子、リンホカイン、サイトカイン、細胞周期調節に関与する分子、脈管形成に関与する分子、または血管新生に関連する（例えば、機能性に寄与することが知られている、もしくは推定される）分子に特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）である。腫瘍関連抗原は、クラスター分化因子（すなわち、ＣＤタンパク質）であり得る。本発明の幾つかの態様において、本発明の抗原結合部分は、１つの抗原に特異的に結合する。本発明の幾つかの態様において、本発明の抗原結合部分は、本明細書に記載されている２つ以上の抗原に特異的に結合し、例えば、本発明の抗原結合部分は、二特異的または多特異的抗体またはその抗原結合フラグメントである。

抗体または抗原結合フラグメントの例には、抗エストロゲン受容体抗体、抗プロゲステロン受容体抗体、抗ｐ５３抗体、抗ＨＥＲ−２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗カテプシンＤ抗体、抗Ｂｃｌ−２抗体、抗Ｅ−カドヘリン抗体、抗ＣＡ１２５抗体、抗ＣＡ１５−３抗体、抗ＣＡ１９−９抗体、抗ｃ−ｅｒｂＢ−２抗体、抗Ｐ−糖タンパク質抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗網膜芽細胞腫タンパク質抗体、抗ｒａｓ腫瘍性タンパク質抗体、抗ＬｅｗｉｓＸ抗体、抗Ｋｉ−６７抗体、抗ＰＣＮＡ抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ５抗体、抗ＣＤ７抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ９／ｐ２４抗体、抗ＣＤ１−抗体、抗ＣＤ１１ｃ抗体、抗ＣＤ１３抗体、抗ＣＤ１４抗体、抗ＣＤ１５抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２３抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３１抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ３４抗体、抗ＣＤ３５抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ４１抗体、抗ＬＣＡ／ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ４５ＲＯ抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体、抗ＣＤ７１抗体、抗ＣＤ９５／Ｆａｓ抗体、抗ＣＤ９９抗体、抗ＣＤ１００抗体、抗Ｓ−１００抗体、抗ＣＤ１０６抗体、抗ユビキチン抗体、抗ｃ−ｍｙｃ抗体、抗サイトケラチン抗体、抗ラムダ軽鎖抗体、抗メラノソーム抗体、抗前立腺特異的抗原抗体、抗タウ抗原抗体、抗フィブリン抗体、抗ケラチン抗体、および抗Ｔｎ−抗原抗体が含まれるが、これらに限定されない。

一実施形態において、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の抗体薬物抱合体（ＡＤＣ）の抗原結合部分は、ＥｒｂＢ遺伝子にコードされる受容体に特異的に結合する。抗原結合部分は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４から選択されるＥｒｂＢ受容体に特異的に結合することができる。抗原結合部分は、ＨＥＲ２受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に特異的に結合して、ＨＥＲ２受容体を過剰発現する腫瘍細胞の成長を阻害する抗体であり得る。抗体は、モノクローナル抗体、例えば、ネズミモノクローナル抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体であり得る。ヒト化抗体は、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７、またはｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（トラツズマブ）であり得る。抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂフラグメントであり得る。

式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の抗原結合部分には、細胞表面受容体および腫瘍関連抗原に対する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）が含まれるが、これらに限定されない。そのような腫瘍関連抗原は、当技術分野において公知であり、当技術分野に周知の方法および情報を使用して、抗体の生成に使用するために調製され得る。がん診断および療法に有効な細胞標的を発見する試みにおいて、研究者たちは、１つまたは複数の正常な非がん性細胞と比較して、１つまたは複数の特定の種類のがん細胞の表面に特異的に発現される膜貫通、そうでなければ腫瘍関連ポリペプチドを確認することを探求してきた。多くの場合、そのような腫瘍関連ポリペプチドは、非がん性細胞の表面と比較してがん細胞の表面により豊富に発現する。そのような腫瘍関連細胞表面抗原ポリペプチドの確認は、抗体に基づいた療法を介した破壊のために、がん細胞を特異的に標的にする能力を生じさせる。
本発明の免疫抱合体に有用な抗体および抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）には、システイン残基（Junutula JR, Raab H, Clark S, Bhakta S, Leipold DD, Weir S, Chen Y, Simpson M, Tsai SP, Dennis MS, Lu Y et al.: Nat Biotechnol 2008, 26:925-932）、またはＰｃｌ、ピロリシン、ペプチドタグ（Ｓ６、Ａ１およびｙｂｂＲタグなど）を含む他の反応性アミノ酸、ならびに非天然アミノ酸を、未変性配列の少なくとも１個のアミノ酸の代わりに導入して、式（Ｉ）またはその下位式の細胞障害性ペプチドへの抱合のために、抗体または抗原結合フラグメントに反応性部位を提供するように修飾される抗体などの、修飾または改変抗体が含まれる。例えば、抗体または抗体フラグメントは、、Ｐｃｌもしくはピロリシン（W. Ou et al. (2011) PNAS 108 (26), 10437-10442）または非天然アミノ酸（J.Y. Axup, K.M. Bajjuri, M. Ritland, B.M. Hutchins, C.H. Kim, S.A. Kazane, R. Halder, J.S. Forsyth, A.F. Santidrian, K. Stafin, Y. Lu et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 109 (2012), pp. 16101-16106; for review, see C.C. Liu and P.G. Schultz (2010) Annu Rev Biochem 79, 413-444; C.H. Kim, J.Y. Axup, P.G. Schultz (2013) Curr Opin Chem Biol. 17, 412-419）を薬物への抱合のための部位として組み込むように修飾され得る。同様に、酵素的抱合方法のペプチドタグを、抗体に導入することができる（Strop P. et al. Chem Biol. 2013, 20(2):161-7; Rabuka D., Curr Opin Chem Biol. 2010 Dec;14(6):790-6; Rabuka D,et al., Nat Protoc. 2012, 7(6):1052-67）。他の一例は、補酵素Ａ類似体の抱合のための４’−ホスホパンテテイニル（phosphopantetheinyl）トランスフェラーゼ（ＰＰＴａｓｅ）の使用である（ＷＯ２０１３１８４５１４）。そのような修飾または改変抗体とペイロードとの抱合方法、またはリンカーペイロード組合せは、当技術分野において公知である。

本発明に有用な抗原結合部分（例えば、抗体および抗原結合フラグメント）は、他の修飾を有することもできる、またはポリエチレングリコールタグ、アルブミン、および他の融合ポリペプチドなどであるが、これらに限定されない他の部分と抱合され得る。

本明細書の例に使用される抗体は、表３に列挙されている重鎖および軽鎖配列を有する。これらの抗体は、本発明の細胞障害性ペプチドとの部位特異的抱合のためのシステイン残基またはＰＰＴａｓｅ酵素タグを含有するように改変された。本明細書の例は、これらの改変抗体が式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の免疫抱合体における使用に適した抗体であることを説明している。加えて非改変抗体を、伝統的な方法によって式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の免疫抱合体の調製に使用することもできる（Carter PJ, Senter PD, Antibody-drug conjugates for cancer therapy, Cancer J. 2008, 14(3):154-69; J.E. Stefano, M. Busch, L. Hou, A. Park, and D.A. Gianolio, p. 145-171, and M.-P. Brun and L. Gauzy-Lazo, p. 173-187 in Antibody-Drug Conjugate, Methods in Molecular Biology, Vol. 1045, Editor L. Ducry, Humana Press (2013).）。

配列番号１および配列番号２は、野生型抗Ｈｅｒ２抗体重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）それぞれの完全長アミノ酸配列である。ＣＤＲ領域には、下線が引かれている。配列番号３は、抗Ｈｅｒ２ＬＣ−Ｓ１５９Ｃおよび抗体２０５０７−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ突然変異抗体のＬＣ定常部領域のアミノ酸配列である。配列番号４、配列番号５、および配列番号６は、重鎖ＨＣ−Ｅ１５２ＣおよびＨＣ−Ｓ３７５Ｃ、ならびにＨＣ−Ｅ１５２Ｃ〜Ｓ３７５Ｃ突然変異抗体、それぞれの定常部領域のアノ酸配列である。配列番号７は、抗体２０５０７の軽鎖ＬＣ−Ｋ１０７Ｃ突然変異体である。配列番号８は、ｙｂｂＲタグがＨＣ残基Ｇｌｕ３８８の後ろに挿入されている抗Ｈｅｒ２ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲの突然変異重鎖の定常部領域のアミノ酸配列である。配列番号９は、Ａ１タグがＨＣ残基Ｇｌｕ３８８の後ろに挿入されている抗Ｈｅｒ２と抗体２０５０７ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１抗体の両方の突然変異重鎖の定常部領域のアミノ酸配列である。突然変異Ｃｙｓ残基、ならびに挿入配列タグのｙｂｂＲおよびＡ１は、太字で示されており、対応する突然変異鎖の配列に下線が引かれている。配列番号１０および配列番号１１は、野生型抗体２０５０７重鎖および軽鎖それぞれの定常部領域のアミノ酸配列である。

抗体の産生
本発明の抗体および抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、組み換え発現、化学合成、および抗体四量体の酵素消化が含まれるが、これらに限定されない当技術分野において公知の任意の手段によって産生され、一方、完全長モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマまたは組み換え産生によって得られ得る。組み換え発現は、例えば、哺乳類宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞などの当該技術に既知の任意の適切な宿主細胞に由来するものでもよい。

本発明は、本明細書に記載されている抗体をコードするポルヌクレオチド、例えば、本明細書に記載されている相補性決定領域を含む重鎖または軽鎖の可変部領域またはセグメントをコードするポリヌクレオチドを更に提供する。

ポリヌクレオチド配列は、抗体またはその結合フラグメントをコードする現存の配列（例えば、下記の例に記載されている配列）のデノボ固相ＤＮＡ合成により、またはＰＣＲ突然変異誘発により産生され得る。核酸の直接化学合成は、Narang et al., Meth. Enzymol. 68:90, 1979のホスホトリエステル法、Brown et al., Meth. Enzymol. 68:109, 1979のホスホジエステル法、Beaucage et al., Tetra. Lett., 22:1859, 1981のジエチルホスホルアミダイト法、および米国特許第４，４５８，０６６号の固体支持体法などの、当技術分野において公知の方法により達成することができる。ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への突然変異の導入は、例えば、PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992; PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990; Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991およびEckert et al., PCR Methods and Applications 1:17, 1991に記載されているように実施することができる。

発現ベクター、および上に記載された抗体または抗体フラグメントを産生する宿主細胞も、本発明において提供される。様々な発現ベクターを用いて、本発明の抗体鎖または結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを発現することができる。ウイルスに基づいた、および非ウイルス発現ベクターの両方とも、哺乳類宿主細胞に抗体を産生することに使用できる。非ウイルスベクターおよび系には、プラスミド、典型的にタンパク質またはＲＮＡを発現する発現カセットを有するエピソームベクター、およびヒト人工染色体が含まれる（例えば、Harrington et al., Nat Genet 15:345, 1997を参照されたい）。例えば、哺乳類（例えば、ヒト）細胞におけるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現に有用な非ウイルスベクターには、ｐＴｈｉｏＨｉｓＡ、Ｂ＆Ｃ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓＡ、Ｂ＆Ｃ（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、および他のタンパク質を発現する当技術分野において公知の多数の他のベクターが含まれる。有用なウイルスベクターには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、ＳＶ４０に基づいたベクター、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタイン・バーウイルス、ワクシニアウイルスベクター、およびセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）に基づいたベクターが含まれる。Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995; and Rosenfeld et al., Cell 68:143, 1992を参照されたい。

発現ベクターの選択は、ベクターが発現される、意図される宿主細胞によって決まる。典型的には、発現ベクターは、本発明の抗体鎖またはフラグメントをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結するプロモーターおよび他の調節配列（例えば、エンハンサー）を含有する。幾つかの実施形態において、誘発性プロモーターは、誘発条件下以外では、挿入配列の発現を防止するために用いられる。誘発性プロモーターには、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーター、または熱ショックプロモーターが含まれる。形質転換生物体の培養は、発現産物が宿主細胞においてより良好に耐容される配列をコードする集団に偏ることなく、非誘発条件下で拡大させることができる。プロモーターに加えて、他の調節要素が、本発明の抗体鎖またはフラグメントの効率的な発現に必要である、または望ましいこともある。これらの要素には、典型的には、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接リボソーム結合部位または他の配列が含まれる。加えて、発現効率は、使用される細胞株に適したエンハンサーを含めることによって増強され得る（例えば、Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994; and Bittner et al., Meth. Enzymol., 153:516, 1987を参照されたい）。例えば、ＳＶ４０エンハンサーまたはＣＭＶエンハンサーを使用して、哺乳類宿主細胞における発現を増加させることができる。

発現ベクターは、挿入抗体配列によりコードされるポリペプチドと融合タンパク質を形成するために、分泌シグナル配列位置を提供することもできる。より多くの場合に、挿入抗体配列は、ベクターに含める前に、シグナル配列と連結される。抗体の軽および重鎖可変部ドメインをコードする配列を受け取るために使用されるベクターは、時々、定常部領域またはその一部もコードする。そのようなベクターは、定常部領域との融合タンパク質として可変部領域の発現を許容し、それによって、無傷の抗体またはそのフラグメントの産生をもたらす。典型的には、そのような定常部領域は、ヒトのものである。

本発明の抗体鎖を持ち、発現する宿主細胞は、原核または真核のいずれかであり得る。大腸菌（Escherichia coli）は、本発明のポリヌクレオチドをクローンし、発現するために有用な１つの原核宿主である。使用に適した他の微生物宿主には、枯草菌（Bacillus subtilis）などの桿菌属、ならびにサルモネラ（Salmonella）、セラチア（Serratia）および様々なシュードモナス（Pseudomonas ）種などの他の腸内細菌科が含まれる。これらの原核宿主において、典型的には、宿主細胞（例えば、複製元）に匹敵する発現制御配列を含有する発現ベクターを作製することもできる。加えて、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ベータ−ラクタマーゼプロモーター系、またはファージラムダのプロモーター系などの、いくつもの様々な周知のプロモーターが存在することができる。プロモーターは、典型的には、任意にオペレーター配列により発現を制御し、転写および翻訳を開始および完了するためにリボソーム結合部位配列などを有する。酵母菌などの他の微生物を用いて、本発明の抗体または抗体フラグメントを発現することもできる。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞を使用することもできる。

一態様において、哺乳類宿主細胞は、本発明の抗体および抗体フラグメントを発現および産生するために使用される。例えば、内在性免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドーマ細胞株、または外来性発現ベクターを持つ哺乳類細胞株のいずれかであり得る。これらには、任意の正常な致死の、または正常もしくは異常な不死の動物またはヒト細胞が含まれる。例えば、ＣＨＯ細胞株、様々なＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換Ｂ細胞、およびハイブリドーマを含む、無傷の免疫グロブリンを分泌することができる多数の適切な宿主細胞株が開発されている。ポリペプチドを発現するための哺乳類組織細胞培養の使用は、例えば、Winnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987において一般的に考察されている。哺乳類宿主細胞の発現ベクターは、複製元、プロモーターおよびエンハンサーなどの発現制御配列（例えば、Queen et al., Immunol. Rev. 89:49-68, 1986を参照されたい）、ならびにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位および転写ターミネーター配列などの必要なプロセシング情報部位を含むことができる。これらの発現ベクターは、通常、哺乳類遺伝子または哺乳類ウイルスから誘導されるプロモーターを含有する。適切なプロモーターは、構成的、細胞型特異的、段階特異的、および／または調整可能もしくは調節可能であり得る。有用なプロモーターには、メタロチオネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘発性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰＰＩＩＩＩプロモーター、構成的ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘発性ＣＭＶプロモーター（ヒト最初期ＣＭＶプロモーターなど）、構成的ＣＭＶプロモーター、および当技術分野において公知のプロモーター−エンハンサー組合せが含まれるが、これらに限定されない。

目的のポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主の種類に応じて変わる。例えば、塩化カルシウム形質移入は、一般的に、原核細胞に利用され、一方、リン酸カルシウム処理または電気穿孔は、他の細胞宿主のために使用することができる（一般的に、上記のSambrook et al.を参照されたい）。他の方法には、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介形質転換、注入および微量注入、弾道法、ビロソーム、免疫リポソーム、ポリカチオン：核酸複合体、裸ＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２への融合（Elliot and O'Hare, Cell 88:223, 1997）、ＤＮＡの作用物質増強取り込み、およびエキソビボ形質導入が含まれる。組み換えタンパク質の長期的な高収率の産生のため、安定した発現が、多くの場合に望ましい。例えば、抗体鎖または結合フラグメントを安定して発現する細胞株を、ウイルス由来の複製または内在性発現エレメントおよび選択可能マーカー遺伝子を含有する本発明の発現ベクターを使用して、調製することができる。ベクターの導入に続いて、選択培地に交換する前に、細胞を濃縮培地で１〜２日間成長させることができる。選択可能マーカーの目的は、選択に抵抗性を付与することであり、その存在は、選択培地において導入された配列を成功裏に発現する細胞の成長を可能にする。抵抗性があり、安定して形質移入された細胞を、細胞型に適した組織培養技術を使用して増殖させることができる。

抱合研究のための抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７Ｃｙｓ、ならびにＡ１／ｙｂｂＲタグ突然変異抗体のクローニング

抗Ｈｅｒ２抗体の重および軽鎖の可変部領域をコードするＤＮＡオリゴヌクレオチド（Carter P, Presta L, Gorman CM, Ridgway JB, Henner D, Wong WL, Rowland AM, Kotts C, Carver ME, Shepard HM. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 4285-4289. Humanization of an anti-p185her2 antibody for human Cancer therapy）を化学合成し、ヒトＩｇＧ１およびヒトカッパ軽鎖の定常部領域を含有する２つの哺乳類発現ベクターのｐＯＧ−ＨＣおよびｐＯＧ−ＬＣにクローンして、２つの野生型構築物のｐＯＧ−抗Ｈｅｒ２抗体ＨＣおよびｐＯＧ−抗Ｈｅｒ２抗体ＬＣをそれぞれもたらした。これらのベクターにおいて、哺乳類細胞における抗体重および軽鎖の発現は、ＣＭＶプロモーターにより導かれる。ベクターは、合成２４アミノ酸シグナル配列のＭＫＴＦＩＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＩＦＬＬＰＧＡＴＡ（配列番号１２）を重鎖および軽鎖のＮ末端でコードして、哺乳類細胞からそれらの分泌を導き出す。シグナル配列は、２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）細胞における数百の哺乳類タンパク質にタンパク質分泌を指示するのに効率的であることが実証されている（Gonzalez R, Jennings LL, Knuth M, Orth AP, Klock HE, Ou W, Feuerhelm J, Hull MV, Koesema E, Wang Y, Zhang J, Wu C, Cho CY, Su AI, Batalov S, Chen H, Johnson K, Laffitte B, Nguyen DG, Snyder EY, Schultz PG, Harris JL, Lesley SA. (2010) Proc Natl Acad Sci U S A. 107:3552-7）。オリゴヌクレオチド指示突然変異誘発を用いて、抗Ｈｅｒ２抗体のＬＣ−Ｓ１５９Ｃ突然変異体を調製した。ヒトカッパ軽鎖の定常部領域におけるＬＣ−Ｓ１５９Ｃ突然変異部位に対応するセンスおよびアンチセンスプライマー（表４）を、化学的に合成した。ＰＣＲ反応を、ｐＯＧ−抗Ｈｅｒ２抗体ＨＣおよびｐＯＧ−抗Ｈｅｒ２抗体ＬＣをテンプレートとして用いるＰｆｕＵｌｔｒａＩＩＦｕｓｉｏｎＨＳＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して実施した。ＰＣＲ産物を、アガロースゲルにより確認し、ＤＰＮＩにより処理し、続いてＤＨ５ａ細胞で形質転換した（Klock et al., (2009) Methods Mol Biol. 498:91-103）。

ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ突然変異構築物の配列は、ＤＮＡ配列決定により確認した。野生型抗Ｈｅｒ２抗体重鎖の完全長アミノ酸配列は、配列番号１として示され、軽鎖のものは、配列番号２として示されている。ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ突然変異抗体のアミノ酸配列は、表３に示されており、Ｃ１５９は太字で、下線が引かれている。ヒトＩｇＧ１重鎖およびヒトカッパ軽鎖のアミノ酸残基をＥｕ番号付けシステムに従って番号付けした（Edelman et al, (1969) Proc Natl Acad Sci USA, 63:78-85)）。抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ抗体を、対応する抗生物質を含有する培地における安定して形質移入された細胞クローンの選択のために抗生物質選択マーカーを含有するベクターに更にクローンした。

同様に、抗Ｈｅｒ２抗体の二重Ｃｙｓ突然変異体であるＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ、および第２の抗体の抗体２０５０７の４つのＣｙｓ突然変異体（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ、ＨＣ−Ｓ３７５Ｃ、ＬＣ−Ｋ１０７Ｃ、ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ、ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ）を、表４に列挙されているＤＮＡプライマーおよび上記の手順を使用してクローンした。抗体２０５０７は、ヒトＩｇＧ１重鎖およびヒトカッパ軽鎖を含有する。抗体２０５０７の重および軽鎖の定常部パートは、抗Ｈｅｒ２抗体のものとアミノ酸配列が同一である。抗Ｈｅｒ２抗体および抗体２０５０７のＣｙｓ突然変異体の定常部領域のアミノ酸配列を表３に示し、突然変異したＣｙｓは太字で、下線が引かれている。

抗Ｈｅｒ２抗体重鎖の定常部領域へのｙｂｂＲおよびＡ１ペプチド配列の挿入は、標準的な分子生物学の方法により達成した。ベクターのｐＯＧ−抗Ｈｅｒ２抗体ＨＣは、ＰＣＲテンプレートとして機能して、対応するＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲおよびＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１挿入突然変異体を得た。表４は、これらの構築物のクローニングに使用したセンスおよびアンチセンスプライマーを列挙する。抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１挿入突然変異体をコードするベクターは、抗体２０５０７重鎖の可変部領域を増幅することによって調製した。次に増幅されたＤＮＡフラグメントを抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１挿入突然変異体をコードする現存のベクターに移した。もたらされた、ペプチドタグ重鎖をコードする発現ベクターは、全て、ＤＮＡ配列決定により確認した。ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲおよびＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１挿入を含有する抗Ｈｅｒ２抗体を、抗生物質選択マーカーを有するベクターに更にクローンして、それによって、続く、それぞれのペプチドタグ構築物を安定して発現するクローンの単離を可能にした。抗Ｈｅｒ２抗体および抗体２０５０７のＡ１／ｙｂｂＲ挿入突然変異体の定常部領域のアミノ酸配列を表３に示す。挿入されたペプチドタグは、太字で示されており、下線が引かれている。

抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７Ｃｙｓ、ならびにＡ１タグ突然変異抗体は、実施例１００に記載されているように調製し、式（Ｉ）の例示的な細胞障害性ペプチドとの抱合体は、実施例１０１、１０２、１０３，１０４、および１０５に記載されているようにした。

抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７Ｃｙｓ、ならびにＡ１／ｙｂｂＲタグ突然変異抗体の調製
抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７Ｃｙｓ、Ａ１タグおよびｙｂｂＲタグ突然変異体を、以前に記載された一過性形質移入方法（Meissner, et al., Biotechnol Bioeng. 75:197-203 (2001)）を使用して、重鎖および軽鎖プラスミドを同時形質移入することにより、２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）細胞に発現した。同時形質移入に使用したＤＮＡプラスミドは、製造会社のプロトコールに従ってＱｉａｇｅｎプラスミド調製キットを使用して調製した。２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）細胞を、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に５％ＣＯ_２下において３７℃で懸濁して培養した。形質移入の１日前に、細胞を０．７×１０^６細胞／ｍｌで新たな培地に分けた。形質移入の当日に、細胞密度は、典型的には１．５×１０^６細胞／ｍｌに達した。細胞を、ＰＥＩ法（上記のMeissner et al., 2001）を使用して、比が１：１の重鎖および軽鎖プラスミドの混合物により形質移入した。形質移入された細胞を更に５日間培養した。培養物の２０００×ｇで２０分間の遠心分離および０．２マイクロメートルフィルターを通す濾過によって、培養物から培地を採取した。発現した抗体を、ＰｒｏｔｅｉｎＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して濾過培地から精製した。抗体ＩｇＧを、ｐＨ３．０の溶出緩衝液を使用してＰｒｏｔｅｉｎＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）カラムから溶出した。溶出したＩｇＧ溶液を、１ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）により直ぐに中和し、続いて緩衝液をＰＢＳに交換した。

抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ＹｂｂＲおよび抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１抗体の発現構築物も、ＣＨＯ細胞に形質移入した。次に標準的なプロトコールに従って、これらに抗体に安定して発現している細胞を抗生物質の使用により選択した。選択されたＣＨＯ細胞クローンに発現している全ての抗Ｈｅｒ２抗体構築物を、上に記載されようにＰｒｏｔｅｉｎＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィーにより精製した。

別個の研究において、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ抗体をＣＨＯ細胞に安定して発現させ、続いて抗生物質選択により選択した。確立されたＣＨＯ細胞クローンに発現している抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ抗体を、上に記載されようにＰｒｏｔｅｉｎＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム手順により精製した。

免疫抱合体
そのような細胞障害性ペプチドをペイロード（薬物）として含む本発明の免疫抱合体は、式（ＩＩ）：

［式中、
Ａｂは、抗原結合部分を表し；
Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−、−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から選択されるリンカーであり、ここで−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、本明細書に定義されているとおりであり；
ｙは、１〜１６の整数であり；
Ｒ^１０１は、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルであり、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、

基にＣ連結し、かつＬ_１にＮ連結しているか、またはＬ_１にＣ連結しており、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されており；あるいは
Ｒ^１０１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含む５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル二価ラジカルであり、ここで５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、

基にＣ連結し、かつＬ_１にＮ連結しているか、またはＬ_１にＣ連結しており、５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されており；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６および−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、テトラゾリル、

であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の抱合体を含む。

そのような細胞障害性ペプチドをペイロード（薬物）として含む本発明の他の免疫抱合体は、式（ＩＩＩ）：

［式中、
Ａｂは、抗原結合部分を表し；
Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−、−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から選択され、ここで−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、本明細書に定義されているとおりであり；
ｙは、１〜１６の整数であり；
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキルであり、ここで６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されており；あるいは
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含む５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり、ここで５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されており；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６および−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ^１７は、結合、−ＮＨ−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２−、

であり；
Ｒ^１８は、結合、

であり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の抱合体を含む。

本発明の式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の他の免疫抱合体が、下記に列挙された実施形態において提供されている。

本発明は、抗体または抗体フラグメントなどの抗原結合部分に連結している１つまたは複数の抗有糸分裂細胞障害性ペプチドを含む免疫抱合体を提供する。本発明の好ましい免疫抱合体は、本明細書に記載されている式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のものである。そのような免疫抱合体を作製する方法は、当技術分野において周知である。好ましい免疫抱合体には、表５に開示されているもの、および抗Ｈｅｒ２抗体の代わりに別の抗原結合部分を有するその変種、特に抗Ｈｅｒ２抗体が、以下のリスト：抗エストロゲン受容体抗体、抗プロゲステロン受容体抗体、抗ｐ５３抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗カテプシンＤ抗体、抗Ｂｃｌ−２抗体、抗Ｅ−カドヘリン抗体、抗ＣＡ１２５抗体、抗ＣＡ１５−３抗体、抗ＣＡ１９−９抗体、抗ｃ−ｅｒｂＢ−２抗体、抗Ｐ−糖タンパク質抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗網膜芽細胞腫タンパク質抗体、抗ｒａｓ腫瘍性タンパク質抗体、抗ＬｅｗｉｓＸ抗体、抗Ｋｉ−６７抗体、抗ＰＣＮＡ抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ５抗体、抗ＣＤ７抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ９／ｐ２４抗体、抗ＣＤ１−抗体、抗ＣＤ１１ｃ抗体、抗ＣＤ１３抗体、抗ＣＤ１４抗体、抗ＣＤ１５抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ２３抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３１抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ３４抗体、抗ＣＤ３５抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ４１抗体、抗ＬＣＡ／ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ４５ＲＯ抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体、抗ＣＤ７１抗体、抗ＣＤ９５／Ｆａｓ抗体、抗ＣＤ９９抗体、抗ＣＤ１００抗体、抗Ｓ−１００抗体、抗ＣＤ１０６抗体、抗ユビキチン抗体、抗ｃ−ｍｙｃ抗体、抗サイトケラチン抗体、抗ラムダ軽鎖抗体、抗メラノソーム抗体、抗前立腺特異的抗原抗体、抗タウ抗原抗体、抗フィブリン抗体、抗ケラチン抗体、および抗Ｔｎ−抗原抗体から選択される抗体に置き換えられいる抱合体が含まれるが、これらに限定されない。

幾つかの実施形態において、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）、またはこれらの下位式の免疫抱合体は、リンカーＬがＡｂのシステイン硫黄原子でＡｂに結合する、抗原結合活性を有する抗体または抗体フラグメントＡｂを含む。システイン硫黄基との反応に使用される典型的な反応性基、その結果として形成される基が表１に提示される。抗原結合部分のシステイン残基との反応により形成されるリンカー構成成分の非限定的な例には、

が含まれるが、これらに限定されない。

他の実施形態において、式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の免疫抱合体は、リンカーがＡｂの架橋ジスルフィドを介してＡｂに結合する、抗原結合活性を有する抗体または抗体フラグメントであるＡｂを含む。そのような実施形態において、

部分ｈは、

と、ヒドロキシルアミンを含む式（Ｉ）の化合物との反応により形成される。

幾つかの実施形態において、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）、またはこれらの下位式の免疫抱合体は、リンカーＬがリシンの遊離−ＮＨ_２でＡｂに結合する、抗原結合活性を有する抗体または抗体フラグメントＡｂを含む。各ｐが１〜１０であり、各Ｒが独立してＨまたはＣ_１〜４アルキル（好ましくは、メチル）である、抗原結合部分のリシン残基の−ＮＨ_２との反応により形成されるリンカー構成成分には、

が含まれるが、これらに限定されない。

幾つかの実施形態において、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）、またはこれらの下位式の免疫抱合体は、リンカーＬが、操作されて抗体に組み込まれたＰｃｌまたはＰｙｌ基でＡｂに結合する、抗原結合活性を有する抗体または抗体フラグメントＡｂを含む。例えば、Ou, et al., PNAS 108(26), 10437-42 (2011)を参照されたい。ＰｃｌまたはＰｙｌ基との反応により形成されるリンカー構成成分には、

が含まれるが、これらに限定されず、ここで、Ｒ^２０は、ＨまたはＭｅであり、Ｒ^３０は、Ｈ、Ｍｅまたはフェニルであり、連結すると、アシル基が示されているところが、改変抗体におけるＰｃｌまたはＰｙｌのリシン部分と結合する。

幾つかの実施形態において、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）、またはこれらの下位式の免疫抱合体は、リンカーＬが、操作されて抗体に組み込まれたＳ６、ｙｂｂＲまたはＡ１ペプチドのセリン残基でＡｂに結合する、抗原結合活性を有する抗体または抗体フラグメントＡｂを含む。そのようなセリン残基との反応により形成されるリンカー構成成分には、

が含まれるが、これらに限定されない。

例として、式（ＩＩ）の免疫抱合体を形成する１つの一般的な反応スキームを、下記のスキーム１３に示す。

ここでＲＧ_１は、表１の反応性基１であり、ＲＧ_２は、表１の反応性基１であり、それぞれの基の反応生成物（表１に示されるとおり）は、リンカーＬのリンカー構成成分である。Ｒ^１０１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｌ、およびＡｂは、本明細書において定義されたとおりである。

式（ＩＩ）の免疫抱合体を形成する別の一般的な反応スキームを、下記のスキーム１４に示す。

例として、式（ＩＩＩ）の免疫抱合体を形成する１つの一般的な反応スキームを、下記のスキーム１５に示す。

ここでＲＧ_１は、表１の反応性基１であり、ＲＧ_２は、表１の反応性基１であり、それぞれの基の反応生成物（表１に示されるとおり）は、リンカーＬのリンカー構成成分である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｌ、およびＡｂは、本明細書において定義されたとおりである。

式（ＩＩ）の免疫抱合体を形成する別の一般的な反応スキームを、下記のスキーム１６に示す。

別の態様において、本発明は、本発明の式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。医薬組成物は、静脈内投与、非経口投与などの特定の投与経路のために処方され得る。

本発明の免疫抱合体は、典型的には、水性緩衝液および／または等張水溶液により液剤または懸濁剤として処方される。これらは、典型的には、注射または注入により非経口投与される。これらの処方および投与の方法は、抗体療法剤などの他の生物学に基づいた医薬品の処方および投与の方法と類似しており、当業者に公知である。

ある特定の注射用組成物は、水性等張液剤また懸濁剤であり、坐剤は、有利には脂肪乳剤または懸濁剤から調製される。前記組成物は、滅菌され得る、ならびに／あるいは防腐剤、安定剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶液促進剤、浸透圧を調節する塩および／または緩衝液などの補助剤を含有することができる。加えて、これらは他の治療上貴重な物質を含有することもできる。前記組成物は、従来の混合、造粒または被覆方法によりそれぞれ調製され、活性成分を約０．１〜７５％含有する、または約１〜５０％含有する。

式（Ｉ）のある特定の細胞障害性ペプチドで得た、表２に提示されているインビトロ細胞死滅効力は、式（Ｉ）のそのような化合物が、貴重な薬理学的活性を示すことを示しており、このように、これらの化合物を、ＡＤＣのペイロードとして使用することができる。式（Ｉ）の化合物を含む免疫抱合体は、本明細書に実証されているように、インビトロにおいて標的細胞に対して、および異なるヒトがんを提示する異種移植片腫瘍の強力な成長阻害によって実証されているように、インビボにおいて腫瘍に対して実質的な活性を示している。したがって抗体などの抗原結合部分に連結している、式（Ｉ）およびその下位式のペイロードを含む、本発明の式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の免疫抱合体は、胃、骨髄、結腸、鼻咽頭、食道および前立腺の腫瘍、神経膠腫、神経芽細胞腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、白血病（例えば、骨髄性白血病、リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ系統急性リンパ芽球性白血病またはＴ−ＡＬＬ慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、有毛細胞白血病）、リンパ腫（ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、多発性骨髄腫、膀胱、腎臓、胃（例えば、胃腸管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ））、肝臓、黒色腫、および膵臓のがん、ならびに肉腫などのがんの治療にも有用である。

本発明の実施形態は、式（Ｉ）およびその下位式の化合物と、抗原結合部分との抱合、それによる、本明細書に記載されている式（ＩＩ）または式（ＩＩＩ）の免疫抱合体の形成を提供する。

式（Ｉ）またはその下位式の化合物を含む本発明の免疫抱合体は、抗有糸分裂毒素により阻害される当技術分野において公知のがん、ならびに本発明の化合物および抱合体による阻害に感受性がある本明細書に示されている腫瘍型の治療に特に有用である。治療に適した適応症には、胃、骨髄、結腸、鼻咽頭、食道および前立腺の腫瘍、神経膠腫、神経芽細胞腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、白血病（例えば、骨髄性白血病、リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ系統急性リンパ芽球性白血病またはＴ−ＡＬＬ慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、有毛細胞白血病）、リンパ腫（ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、多発性骨髄腫、膀胱、腎臓、胃（例えば、胃腸管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ））、肝臓、黒色腫、および膵臓のがん、ならびに肉腫が含まれるが、これらに限定されない。式（Ｉ）またはその下位式の化合物を含む本発明の免疫抱合体は、療法において特に有用である。更なる実施形態において、療法は、抗有糸分裂毒素により治療され得る疾患のためのものである。別の実施形態において、本発明の化合物は、胃、骨髄、結腸、鼻咽頭、食道および前立腺の腫瘍、神経膠腫、神経芽細胞腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、白血病（例えば、骨髄性白血病、リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ系統急性リンパ芽球性白血病またはＴ−ＡＬＬ慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、有毛細胞白血病）、リンパ腫（ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、多発性骨髄腫、膀胱、腎臓、胃（例えば、胃腸管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ））、肝臓、黒色腫、および膵臓のがん、ならびに肉腫が含まれるが、これらに限定されないがんの治療に有用である。

方法は、典型的には、有効量の本明細書に記載されている本発明の免疫抱合体、またはそのような免疫抱合体を含む医薬組成物を、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む。免疫抱合体を、本明細書に記載されているものなどの任意の適切な方法により投与することができ、投与を、治療医師により選択された間隔で繰り返すことができる。

したがって、更なる実施形態において、本発明は、医薬の製造のための、式（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）、または本明細書に記載されているそのような化合物の任意の実施形態の免疫抱合体の使用を提供する。更なる実施形態において、医薬は、抗有糸分裂毒素により治療され得る疾患の治療のためのものである。別の実施形態において、疾患は、胃、骨髄、結腸、鼻咽頭、食道および前立腺の腫瘍、神経膠腫、神経芽細胞腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、白血病（例えば、骨髄性白血病、リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ系統急性リンパ芽球性白血病またはＴ−ＡＬＬ慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、有毛細胞白血病）、リンパ腫（ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、多発性骨髄腫、膀胱、腎臓、胃（例えば、胃腸管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ））、肝臓、黒色腫、および膵臓のがん、ならびに肉腫から選択される。

本発明の医薬組成物または組合せは、約５０〜１００ｋｇの対象に対して約１〜１０００ｍｇの活性成分、または約１〜５００ｍｇ、または約１〜２５０ｍｇ、または約１〜１５０ｍｇ、または約０．５〜１００ｍｇ、または約１〜５０ｍｇの活性成分の単位投与量であり得る。化合物、医薬組成物またはその組合せの治療有効投与量は、対象の種、体重、年齢および個々の状態、治療される障害もしくは疾患、またはそれらの重症度によって左右される。通常の技能を有する医師、臨床医または獣医は、障害または疾患を予防、治療、またはその進行の阻害に必要なそれぞれの活性成分の有効量を容易に決定することができる。

上記に引用された投与量特性は、哺乳動物、例えばマウス、ラット、イヌ、サル、またはそれらの単離された臓器、組織および調製物を有利に使用して、インビトロおよびインビボ試験によって実証可能である。本発明の化合物を、インビトロにおいて液剤、例えば水性液剤の形態により、インビボにおいて経腸的、非経口的、有利には静脈内に、例えば懸濁剤として、または水性液剤により適用することができる。インビトロにおける投与量は、約１０^−３モル〜１０^−１２モル濃度の間の範囲であり得る。インビボにおける治療有効量は、投与経路に応じて、約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇの間、または約１〜１００ｍｇ／ｋｇの間の範囲であり得る。

本発明の式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を、１つまたは複数の治療併用剤と同時に、またはその前もしくは後に投与することができる。本発明の式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を、同じ、もしくは異なる投与経路により別々に、または併用剤として同じ医薬組成物で一緒に投与することができる

一実施形態において、本発明は、療法における同時、別々、または逐次の使用のための組合せ調合剤として、式（Ｉ）またはその下位式の化合物と、少なくとも１つの他の治療併用剤とを含む製品を提供する。一実施形態において、療法は、抗有糸分裂毒素によるがんなどの疾患または状態の治療である。組合せ調合剤として提供される製品は、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を含む組成物と、同じ医薬組成物で他の治療併用剤を一緒に、あるいは式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体と、他の治療併用剤とを別々の形態で、例えばキットの形態で含む。

一実施形態において、本発明は、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体と、別の治療併用剤とを含む、医薬組成物を提供する。任意に、医薬組成物は、上に記載された薬学的に許容される担体を含むことができる。

本発明の化合物および抱合体との使用に適した併用剤には、他の抗がん剤、抗アレルギー剤、制吐剤（または、抗嘔吐剤）、鎮痛剤、抗炎症剤、細胞保護剤、およびこれらの組合せが含まれる。

本明細書に開示されている化合物および抱合体との組合せにおける使用が考慮される具体的な併用剤には、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、ブレオマイシン硫酸塩（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注入用（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注入用（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（ＡｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、ダウノルビシン塩酸塩（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、ダウノルビシンクエン酸塩ポソーム注入用（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、フルダラビンリン酸エステル（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン（tezacitibine）、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキセート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ナツメヤシ（Ｙｔｔｒｉｕｍ９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを有するポリフェプロサン（polifeprosan）２０（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、タモキシフェンクエン酸塩（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、トポテカン塩酸塩注入用（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が含まれる。

一実施形態において、本発明は、少なくとも１つが式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式を含有する、２つの以上の別個の医薬組成物を含むキットを提供する。一実施形態において、キットは、容器、分割ボトル、または分割ホイルパケットなどの前記組成物を別々に保持する手段を含む。

本発明の併用療法において、本発明の式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体、ならびに他の治療併用剤を、同じ、または異なる製造会社により製造および／または処方することができる。更に、本発明の式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体と他の治療を、（ｉ）組合せ製品を医師に渡す前に（例えば、キットが本発明の化合物と他の治療剤とを含む場合）、（ｉｉ）投与の少し前に医師自身により（または医師に指導により）、（ｉｉｉ）例えば、本発明の化合物と他の治療剤の逐次投与の際に、患者自身により、一緒に併用療法にすることができる。

本発明は、また、細胞障害性ペプチドにより疾患または状態を治療する方法における使用のために、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を提供する。本発明は、また、細胞障害性ペプチドにより疾患または状態を治療する方法における使用のために、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を提供し、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体は、別の治療剤を伴う投与のために調製される。本発明は、また、細胞障害性ペプチドにより疾患または状態を治療する方法における使用のために、別の治療併用剤を提供し、他の治療併用剤は、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を伴う投与のために調製される。本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療する方法における使用のために、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を提供し、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体は、別の治療併用剤と共に投与される。本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療する方法における使用のために、別の治療併用剤を提供し、他の治療併用剤は、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体と共に投与される。

本発明は、また、細胞障害性ペプチドにより疾患または状態を治療するために、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を提供し、患者は、以前に（例えば、２４時間以内に）別の治療剤により治療されている。本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療するために別の治療剤の使用を提供し、患者は、以前に（例えば、２４時間以内に）式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体により治療されている。

本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療する方法における使用のために、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を提供する。本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療する方法における使用のために、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を提供し、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体は、別の治療剤を伴う投与のために調製される。本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療する方法における使用のために、別の治療併用剤を提供し、他の治療併用剤は、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を伴う投与のために調製される。本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療する方法における使用のために、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体を提供し、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体は、別の治療併用剤と共に投与される。本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療する方法における使用のために、別の治療併用剤を提供し、他の治療併用剤は、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体と共に投与される。

本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療するために、式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体の使用を提供し、患者は、以前に（例えば、２４時間以内に）別の治療剤により治療されている。本発明は、また、抗有糸分裂毒素により疾患または状態を治療するために別の治療剤の使用を提供し、患者は、以前に（例えば、２４時間以内に）式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＩ）またはその下位式の免疫抱合体により治療されている。

リンカー−ペイロード（Ｌ−Ｐ）と抗原結合部分との抱合

抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７Ｃｙｓ突然変異抗体と、式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドとの抱合により形成された抗体薬物抱合体（ＡＤＣ）

リンカー−ペイロードと抗原結合部分に抱合する多数の方法が、当技術分野において公知である（例えば、Antibody-Drug Conjugate, Methods in Molecular Biology, Vol. 1045, Editor L. Ducry, Humana Press (2013)に概説されている）。この実施例では、リンカーを含む本発明の式（Ｉ）の化合物を、Junutula JR, Raab H, Clark S, Bhakta S, Leipold DD, Weir S, Chen Y, Simpson M, Tsai SP, Dennis MS, Lu Y, Meng YG, Ng C, Yang J, Lee CC, Duenas E, Gorrell J, Katta V, Kim A, McDorman K, Flagella K, Venook R, Ross S, Spencer SD, Lee Wong W, Lowman HB, Vandlen R, Sliwkowski MX, Scheller RH, Polakis P, Mallet W. (2008) Nature Biotechnology 26:925-932に記載されている方法を使用して、操作されて抗体に組み込まれたシステイン残基と抱合した。本発明の式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドの抱合は、本明細書において、小さいセットのＣｙｓ抗体突然変異体を使用して説明されているが、細胞障害性ペプチドを、全てでなければ大部分の可能なＣｙｓ抗体突然変異体と抱合できることが予想される。更に、細胞障害性ペプチドを、全てでなければ多数の抗体のＣｙｓ突然変異体と抱合できることが予測される。

哺乳類細胞に発現された抗体における改変Ｃｙｓは、生合成の際にグルタチオン（ＧＳＨ）および／またはシステインなどの付加物（ジスルフィド）により修飾されているので（Chen et al. 2009）、最初に発現した産物における修飾Ｃｙｓは、マレイミドまたはブロモもしくはヨードアセトアミド基などのチオール反応性試薬と非反応性である。発現後に改変システインを抱合するため、グルタチオンまたはシステイン付加物は、これらのジスルフィドを還元して除去する必要があり、このことは、一般に発現タンパク質における全てのジスルフィドの還元を引き起こす。このことは、最初に抗体をジチオスレイトール（ＤＴＴ）などの還元剤に曝露し、続いて機能的抗体構造を回復および／または安定化するために抗体の全ての未変性ジスルフィド結合の再酸化を可能にする手順により、達成することができる。したがって、全ての未変性ジスルフィド結合、および改変システイン残基のシステインまたはＧＳＨ付加物の間で結合したジスルフィドを還元するため、新たに調製したＤＴＴを加えて、抗Ｈｅｒ２または抗体２０５０７Ｃｙｓ突然変異構築物を精製して、最終濃度の２０ｍＭにした。ＤＴＴと共に３７℃で１時間インキュベートした後、混合物をＰＢＳに対して４℃で３日間透析し、緩衝液を毎日交換して、ＤＴＴを除去し、未変性ジスルフィド結合を再酸化した。代替的な方法は、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５などの脱塩カラムを介して還元試薬を除去することである。タンパク質が完全に還元されると、１ｍＭの酸化アスコルビン酸塩（デヒドロ−アスコルビン酸）を脱塩試料に加え、再酸化インキュベーションを２０時間実施する。両方の方法は、同様の結果を生じる。しかし、ＣｕＳＯ_４を使用する文献に以前に記載された再酸化プロトコールに従った試みは、タンパク質の沈殿をもたらした（Junutula JR, Raab H, Clark S, Bhakta S, Leipold DD, Weir S, Chen Y, Simpson M, Tsai SP, Dennis MS, Lu Y, Meng YG, Ng C, Yang J, Lee CC, Duenas E, Gorrell J, Katta V, Kim A, McDorman K, Flagella K, Venook R, Ross S, Spencer SD, Lee Wong W, Lowman HB, Vandlen R, Sliwkowski MX, Scheller RH, Polakis P, Mallet W. (2008) Nature Biotechnology 26:925）。本明細書における全ての試料は、上に記載された透析プロトコールを使用する。再酸化は、鎖内ジスルフィドを回復し、一方、透析は、抗体の改変システインに最初に接続していたシステインおよびグルタチオンを除去する。

再酸化した後、抗体を式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドと抱合させ、ここで式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドは、リンカーおよび反応性部分を有する。例として、連結マレイミド部分（抗体に対して１０モル当量）を有する式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドを、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）中の再酸化した抗Ｈｅｒ２または抗体２０５０７Ｃｙｓ突然変異抗体に添加した。インキュベーションを１時間実施した。抱合過程を、抱合抗体を非抱合抗体から分離することができる逆相ＨＰＬＣによりモニターした。抱合反応混合物は、８０℃に加熱したＰＲＬＰ−Ｓカラム（４０００Å、５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）により分析し、カラムの溶出は、０．１％ＴＦＡ含有水中の３０〜６０％のアセトニトリルの直線勾配を流速１．５ｍｌ／分で実施した。カラムからのタンパク質の溶出を、２８０ｎｍ、２５４ｎｍ、および２１５ｎｍでモニターした。

連結マレイミドを有する様々な細胞障害性ペプチドと、抗Ｈｅｒ２または抗体２０５０７Ｃｙｓ突然変異抗体との抱合効率は、使用される細胞障害性ペプチドの可溶性に応じて変わるが、大部分の反応は、９０％を超える抱合体をもたらした（表５および６）。凝集状態を評価するため、得られた抱合体を、ＰＢＳにおいて流速０．１ｍｌ／分でサイズ排除クロマトグラフィーカラム（ＧＥ、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００、３．２／３０）により分析した。全ての抱合体は、主に単量体であった。大部分の抱合体は、３％未満の二量体およびオリゴマー材料を含有し（表５および６）、連結マレイミドを有するそのような細胞障害性ペプチドと抗Ｈｅｒ２または抗体２０５０７Ｃｙｓ突然変異抗体との抱合が、凝集を引き起こさなかったことを示している。同様に、Ａ１またはｙｂｂＲタグを介した酵素的抱合（実施例１０４および１０５）も、９０％を超える抱合効率で進行し（表７および９）、３％未満の検出可能な凝集体を有する単量体である抱合体をもたらしている（表７および９）。

抱合体は、一般に薬物抗体比（ＤＡＲ）と呼ばれる、抗体結合部分への細胞障害性ペプチドの平均ローディングも特徴とする。ＤＡＲ値は、還元され、脱グリコシル化された試料のＬＣ−ＭＳデータから推定される。ＬＣ／ＭＳは、ＡＤＣにおける抗体に結合したペイロード（薬物）の平均分子数の定量化を可能にする。ＨＰＬＣは、抗体を軽鎖および重鎖に分離し、鎖１つあたりのリンカー−ペイロード基の数に従って重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）を分離する。質量スペクトルデータは、混合物における構成成分種、例えば、ＬＣ、ＬＣ＋１、ＬＣ＋２、ＨＣ、ＨＣ＋１、ＨＣ＋２などの確認を可能にする。ＬＣおよびＨＣ鎖への平均ローディングから、平均ＤＡＲをＡＤＣのために計算することができる。所定の抱合体試料のＤＡＲは、２つの軽鎖および２つの重鎖を含有する四量体抗体に結合する薬物（ペイロード）分子の平均数を表す。表５および６は、抗Ｈｅｒ２または抗体２０５０７抗体および連結マレイミドを有するある特定の細胞障害性ペプチドによって得た抱合体に対して得たＤＡＲ値を提示する。

比較として、抗体２０５０７−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ突然変異抗体を、マレイミドカプロイルモノ−メチルオーリスタチンＦ（MC-MMAF; Doronina SO, Mendelsohn BA, Bovee TD, Cerveny CG, Alley SC, Meyer DL, Oflazoglu E, Toki BE, Sanderson RJ, Zabinski RF, Wahl AF, Senter PD. Bioconjug. Chem. 2006 Jan-Feb;17(1):114-24.）と、同じプロトコールに従って、抱合した。比較抗体２０５０７−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−ＭＭＡＦＡＤＣの特性を表６に列挙する。

非改変抗体の未変性ジスルフィド結合の部分還元を介した抗体薬物抱合体の調製

本発明の細胞障害性薬物を、抗体の部分還元を伴う手順を使用して、非改変抗体の未変性システイン残基に抱合させることもできる（Doronina, S. O., Toki, B. E., Torgov, M. Y., Mendelsohn, B. A., Cerveny, C. G., Chace, D. F., DeBlanc, R. L., Gearing,R. P., Bovee, T. D., Siegall, C. B., Francisco, J. A., Wahl, A. F., Meyer, D. L., and Senter, P. D. (2003) Development of potent monoclonal antibody auristatin conjugates for cancer therapy. Nat. Biotechnol. 21, 778-784）。この実施例では、濃度５〜１０ｍｇ／ｍｌの抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７抗体の鎖間および鎖内ジスルフィド結合を、固体メルカプトエチルアミンを最終濃度の５０ｍＭで加え、混合物を３７℃で１時間インキュベートすることによって、２ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳにおいて最初に部分的に還元した。脱塩し、１％ｗ／ｖＰＳ−２０洗剤を加えた後、部分的に還元された抗体（１〜２ｍｇ／ｍｌ）を、抗体１０ｍｇあたり０．５〜１ｍｇのペイロード化合物１０と４℃で一晩反応させた。得られたＡＤＣの抗Ｈｅｒ２−１０および抗体２０５０７−１０を、ＰｒｏｔｅｉｎＡクロマトグラフィーにより精製した。ＰＢＳによるベースライン洗浄の後、抱合体を５０ｍＭのクエン酸塩、ｐＨ２．７で溶出し、１４０ｍＭのＮａＣｌで中和し、滅菌濾過した。得られた２つのＡＤＣの抗Ｈｅｒ２−１０および抗体２０５０７−１０の平均ＤＡＲを、疎水性相互作用クロマトグラフィーおよびＭＳにより、それぞれ４．１および４．６と決定した。２つのＡＤＣの選択された生化学特性を表５および６に示した。抗Ｈｅｒ２抗体および抗体２０５０７に加えて、本発明の細胞障害性ペプチドを、上記の方法（実施例１０２）を使用して全てでなければ多数の抗体の未変性システイン残基と抱合できることが予測される。

非改変抗体の未変性ジスルフィド結合に再接続する１，３−ジクロロプロパン−２−オンを使用する抗体薬物抱合体の調製

実施例１０２の手順を使用する非改変抗体の未変性システイン残基への抱合は、抗体を天然に安定化する幾つかの未変性ジスルフィド結合が破壊されて、薬物抱合の後でもそのままである欠点を有する。この欠点を克服する代替的な方法において、抗体の鎖間および鎖内ジスルフィド結合を、最初に還元し、次に１，３−ジクロロプロパン−２−オンとの反応を介して化学的に再接続させる。このプロセスにおいて、抗体における４つの未変性鎖間ジスルフィド結合は、３つの炭素「ケトン架橋」により置き換えられる（スキーム１７）。次にケトン基を、第２のステップにおいて細胞障害性薬物と特異的に抱合させることができる。得られるＡＤＣは、抗体の４つの未変性鎖間ジスルフィド結合の位置に特異的に結合している４つまでの薬物を有する。部分的に還元された未変性ジスルフィドへの伝統的な抱合（実施例１０２）と対照的に、この実施例で調製されたＡＤＣは、より安定している。一例では、非改変組み換え抗Ｈｅｒ２が標準的な方法により調製されており、上に記載されている。精製した後、修飾抗Ｈｅｒ２を、スキーム１７に従って２ステップで細胞障害性薬物を抱合した。

ステップ１：未変性ジスルフィド架橋の還元および１，３−ジクロロプロパン−２−オンを使用する再架橋。ＴＣＥＰ・ＨＣｌ（４７．２μｇ、０．１６５μｍｏｌ）を、トリス緩衝液（ｐＨ７．４、０．２５Ｍ、１７７μＬ）中の抗Ｈｅｒ２ＩｇＧ（２０３６μｇ、０．０１４μｍｏｌ）および１，３−ジクロロプロパン−２−オン（２２０μｇ、１．６４８μｍｏｌ）の溶液に４℃で加えた。得られた混合物を４℃で４時間保持した。次に反応混合物を、溶出緩衝液としてＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いるＺｅｂａスピンカラム７ＫＭＷＣＯを使用して脱塩した。得られた溶液を１０ＫＡｍｉｃｏｎフィルターにより濃縮して、修飾抗Ｈｅｒ２を得た。ＥＳＩ（溶出剤Ａ：水＋０．１％ギ酸、溶出剤Ｂ：アセトニトリル＋０．０４％ギ酸。勾配：３〜８０％のＢを２分間−流速１．０ｍｌ／分。カラム：ＰｒｏｓｗｉｆｔＭｏｎｏｌｉｔｈ４．６^＊５０ｍｍ４０℃）；１４５３９９Ｄａ（ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシル化の後（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄｂｉｏｌａｂ））。

ステップ２：細胞障害性薬物の抱合。（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（６−（アミノオキシ）ヘキサノイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸（２２）（７７μｇ、０．０７８μｍｏｌ、ＤＭＳＯ中０．７７μＬ）および３，５−ジアミノ安息香酸（３５５μｇ、２．３３４μｍｏｌ、ＤＭＳＯ中１．４２μＬ）の溶液を、修飾抗Ｈｅｒ２（５７７．５μｇ、０．００３９μｍｏｌ、ＰＢＳ中の３５μＬ、ｐＨ７．４）の溶液に２３℃で加えた。得られた混合物を２３℃で２１時間保持した。次に反応混合物を、溶出緩衝液としてＰＢＳ（ｐＨ７．４）を２回用いるＺｅｂａスピンカラム７ＫＭＷＣＯを使用して脱塩して、化合物（２２）と抱合した修飾抗Ｈｅｒ２を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（溶出剤Ａ：水＋０．１％ギ酸、溶出剤Ｂ：アセトニトリル＋０．０４％ギ酸。勾配：３〜８０％のＢを２分間−流速１．０ｍｌ／分。カラム：ＰｒｏｓｗｉｆｔＭｏｎｏｌｉｔｈ４．６^＊５０ｍｍ４０℃）；１４７９５５Ｄａ（ＤＡＲ３）、１４８８０７Ｄａ（ＤＡＲ４）（ＰＮＧａｓｅＦでの処理による脱グリコシル化の後（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄｂｉｏｌａｂ））。全体的なＤＡＲを、ＤＡＲ３．７として計算した。

抗Ｈｅｒ２抗体のみが本明細書において示されているが、この実施例の抱合手法は、全てでなければ多数の他の抗体に適用可能であることが予測される。

抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７Ａ１／ｙｂｂＲタグ突然変異抗体と式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドとの抱合

翻訳後４’−ホスホパンテテイニル化（phosphopantetheinylation）は、構造的に多様な小分子による組み換えタンパク質の部位特異的標識化の汎用的な方法である（Yin J, Straight PD, McLoughlin SM, Zhou Z, Lin AJ, Golan DE, Kelleher NL, Kolter R, Walsh CT (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102:15815-15820) (Zhou Z, Cironi P, Lin AJ, Xu Y, Hrvatin S, Golan DE, Silver PA, Walsh CT, Yin J (2007) ACS Chem. Biol. 2:337-346）。乱交雑４’−ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ（ＰＰＴａｓｅ）の触媒作用に基づいているこの酵素的な手法を、高度に均質なＡＤＣの調製に採用した（ＷＯ２０１３１８４５１４）。酵素標識化は、１１または１２−ｍｅｒＳ６、ｙｂｂＲ、およびＡ１ペプチド配列を、ＩｇＧ１抗体の定常部領域の様々な部位に組み込むことによって達成される。以下の実施例は、１つの部位のみにおけるＰＰＴａｓｅ媒介性ＡＤＣ形成を記載しているが、この手法は、抗体足場内の多数の挿入部位に適用可能であることが予測され、多数の抗体に適用可能であることが予測される。

Burkarおよび同僚による以前の研究は、基質として様々なＣｏＡレポーター類似体を受け入れる、汎用酵素としてのＰＰＴａｓｅを明らかにした（La Clair JJ, Foley TL, Schegg TR, Regan CM, Burkart MD (2004) Chem. Biol. 11:195-201）。したがって、薬物ペイロードを、ＰＰＴａｓｅ触媒作用に適した基質に変換するため、式（Ｉ）のマレイミド含有細胞障害性ペプチドを、マイケル付加によりＣｏＡの末端チオール基と抱合させた（実施例４３を参照されたい）。細胞障害性ペプチドを酵素認識要素に共有的に連結させると、得られた細胞障害性ＣｏＡ−ペプチド類似体（化合物２０）は、それぞれの抗体の包埋ペプチド配列と酵素的に抱合した。例として、２．５μＭの抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ抗体または抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１を、枯草菌（Bacillus subtilis）由来の１μＭのＳｆｐＰＰＴａｓｅの存在下で３０μＭの細胞障害性ＣｏＡ−ペプチド類似体（化合物２０）（抗体に対して１２モル当量）と抱合させた。酵素的抱合反応を、２０ｍＭのＮａＣｌおよび１２．５ｍＭのＭｇＣｌ_２を補充した７５ｍＭのトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）において室温でおよそ１６時間実施した。細胞障害性ペイロードによる抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１のほぼ完全な標識化を確実にするため、インキュベーション時間を、更に３日間延長し、（化合物２０）のＣｏＡ−ペプチド類似体およびＳｆｐＰＰＴａｓｅの濃度が、３５μＭ（抗体に対して１４モル当量）および２μＭにそれぞれ増加した。抱合した後、ＳｆｐＰＰＴａｓｅおよび過剰な試薬をＰｒｏｔｅｉｎＡアフィニティークロマトグラフィー（ＰｒｏｔｅｉｎＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）により除去した。カラムの溶出は、０．１Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）により実施し、直後に、１ＭのトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）により中和した。ペプチドタグＡＤＣは、最終的に、ＰＤ−１０脱塩カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＰＢＳに緩衝液交換した。

ペイロード抱合の程度は、０．１％トリフルオロ酢酸含有水中の２５〜５０％のアセトニトリルの６分間直線勾配を用いて、ＲＬＲＰ−Ｓカラム（４０００Å、５μＭ、５０×４．６ｍｍ、ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の分析ＨＰＬＣにより決定した。抱合および非抱合抗体の逆相分離を、２８０ｎｍの波長でモニターした。このため、ＨＰＬＣピーク積分は、ＣｏＡ−ペプチド類似体（化合物２０）による抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲおよび２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１抗体のほぼ完全な標識化を示した。酵素標識ＡＤＣの同一性は、対応する還元および脱グリコシル化試料のデコンボリューションされたＥＳＩ−ＭＳスペクトルを得ることにより更に確認した。表８に示されているように、観察された質量は、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲおよび２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１抗体の薬物標識重鎖の計算分子量と一致している。最後に、酵素標識ＡＤＣを、ＳｈｏｄｅｘＰＲＯＴＥＩＮＫＷ−８０３カラムの分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＡｎＳＥＣ）により分析した。両方の抗体抱合体は、単量体ＡＤＣの見掛分子量に相当する保持時間で溶出した（表７を参照されたい）。親水性ＣｏＡ−ペプチド類似体の抱合が抗体凝集を促進しなかったことを示す種は、他に検出されなかった。

Ａ１／ｙｂｂＲタグ抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７突然変異抗体と、式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドとの２ステップ抱合

２ステップ方法は、翻訳後４’−ホスホパンテテイニル化（Ｗ０２０１３１８４５１４）による部位特異的ＡＤＣを調製する代替的な戦略である。この手法の第１のステップは、アジド、アルケン、アルキン、ケトン、またはアルデヒド部分などの生体直交（bioorthogonal）基を含有するＣｏＡ類似体による、ペプチドタグ抗体のＰＰＴａｓｅ触媒標識化に基づいている。生体直交標識抗体のアフィニティー精製の後、２ステップ方法の第２のステップは、生体直交基と反応性がある部分を含む細胞障害性ペイロードの抱合を伴う。例として、以下のセクションは、重鎖の定常部領域内の特定の部位にＡ１またはｙｂｂＲタグ挿入を含有する抗体２０５０７および抗Ｈｅｒ２突然変異抗体についての２ステップ方法を記載する。加えて、以下のセクションは、重鎖の定常部領域内の特定の部位にＡ１またはｙｂｂＲタグ挿入を含有する抗体２０５０７および抗Ｈｅｒ２突然変異抗体についての２ステップ方法を記載する。しかし、この戦略は、多種多様な抗体の定常部領域内の多数の挿入部位に広く適用可能であると予想される。加えて、２ステップ方法は、オキシムライゲーションおよび銅無含有クリック化学を例示するが、この戦略を、シュタウディンガーライゲーション、イソニトリルに基づいたクリック化学、およびテトラジンライゲーションなどの他の生体直交型化学に広げることができると考えられる。

オキシムライゲーションおよび銅無含有クリック化学は、幾つかの研究集団により、部位特異的タンパク質抱合体を調製する効率的な生体直交型の方法として使用されている（Axup JY, Bajjuri KM, Ritland M, Hutchins BM, Kim CH, Kazane SA, Halder R, Forsyth JS, Santidrian AF, Stafin K, Lu Y, Tran H, Seller AJ, Biroc SL, Szydlik A, Pinkstaff JK, Tian F, Sinha SC, Felding-Habermann B, Smider VV, Schultz PG (2012) Proc Natl Acad Sci U S A. 109:16101-16106) (Rabuka D, Rush JS, deHart GW, Wu P, Bertozzi CR (2012) Nat Protoc. 7:1052-1067) (Plass T, Milles S, Koehler C, Schultz C, Lemke EA (2011) Angew Chem Int Ed Engl. 50:3878-3881) (Kaya E, Vrabel M, Deiml C, Prill S, Fluxa VS, Carell T (2012) Angew Chem Int Ed Engl. 51:4466-4469）。翻訳後４’−ホスホパンテテイニル化をオキシムライゲーションと組み合わせるため、ケトン基をＣｏＡと、後者をメチルビニルケトンと反応させることによって共有結合させた（実施例９３を参照されたい）。次に、ＰＰＴａｓｅ触媒を使用して、生体直交ケトン基を、抗Ｈｅｒ２抗体の包埋Ａ１タグと部位特異的に酵素抱合させた。具体的には、２．５μＭの抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１抗体を、枯草菌（Bacillus subtilis）の１μＭのＳｆｐＰＰＴａｓｅの存在下で３０μＭの得られたケトン−ＣｏＡ類似体（化合物４９）（抗体に対して１２モル当量）と抱合させた。２ステップ方法のこの第１のステップは、１２．５ｍＭのＭｇＣｌ_２および２０ｍＭのＮａＣｌを補充した７５ｍＭのトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）において室温で約１６時間実施した。ケトン−ＣｏＡ類似体（化合物４９、実施例９３を参照されたい）による抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１抗体のほぼ完全な標識化は、還元および脱グリコシル化試料のデコンボリューションされたＥＳＩ−ＭＳスペクトルを得ることによって確認した。同様の反応条件も、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１のほぼ定量的なケトン官能化をもたらした。表１０に示されているように、観察された質量は、対応するケトン官能化重鎖の計算分子量と一致していた。ＰｒｏｔｅｉｎＡアフィニティークロマトグラフィー（ＰｒｏｔｅｉｎＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）によりＳｆｐＰＰＴａｓｅおよび過剰なケトン−ＣｏＡ類似体を除去した後、ケトン活性化抗体、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９、および抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９を、０．１Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３）により溶出し、続いて直後に１ＭのトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８）により中和した。中和した抗体溶液を、水に緩衝液交換し、孔径が０．２２μｍのフィルターに通過させた。

２ステップ標識化手法の別の態様において、修飾ＣｏＡ類似体を、ＣｏＡ生合成酵素のＣｏＡＡ、ＣｏＡＤ、およびＣｏＡＥを使用して化学酵素的に調製した（Worthington AS, Burkart MD (2006) Org Biomol Chem. 4:44-46) (Kosa NM, Haushalter RW, Smith AR, Burkart MD (2012) Nat Methods 9:981-984）。この手法を採用して、ケトン官能化ＣｏＡ類似体を、対応するパントテン酸塩前駆体分子（ｉ−１０）、（ｉ−１２）、および（ｉ−１３）（実施例９４、９６、および９７を参照されたい）から調製した。同様に、アジド官能化ＣｏＡ類似体を、それぞれのパントテン酸塩誘導体（ｉ−１１）（実施例９５を参照されたい）から化学酵素的に合成した。この手法において、実施例９４〜９７の限外濾液を更に精製することなく使用し、ＣｏＡ類似体のＣｏＡ−（ｉ−１０）、ＣｏＡ−（ｉ−１１）、ＣｏＡ−（ｉ−１２）、およびＣｏＡ−（ｉ−１３）を、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ（２．５μＭ）との抱合に、およそ３０μＭの最終濃度で使用した。抗体標識化は、１２．５ｍＭのＭｇＣｌ_２および２０ｍＭのＮａＣｌを補充した７５ｍＭのトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）中において、１．５μＭの枯草菌（B. subtilis）ＳｆｐＰＰＴａｓｅの存在下、２３℃で１６〜７２時間実施した。同様に、ＣｏＡ−（ｉ−１３）を、２μＭのＳｆｐ酵素の存在下、およそ２５μＭの最終濃度で抱合した。

生体直交標識抗体のアフィニティークロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を、ケト−ＣｏＡ類似体４９について上に記載されたものと全く同じ方法により実施した。精製した後、中和された抗体溶液を、ＰＢＳに緩衝液交換した。ｙｂｂＲタグ抗体へのケトンおよびアジド部分の共有結合は、質量分析法により確認し、続いてＰＮＧａｓｅＦおよびＴＣＥＰにより試料を処理した（表１０）。

ケトン基の部位特異的結合は、続く、２ステップ方法の第２のステップとしてのケトン活性化抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１０）、および抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１２）への細胞障害性ペイロードのオキシム連結を可能にした。２５〜６７μＭのケトン官能化抗体を、２．５〜５％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含有する５０または１００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４〜５）中で、７．５〜４０倍モル過剰（０．５〜１ｍＭ）のアミノオキシ−ペプチド類似体（化合物２２）と反応させた。２３または３７℃での１６〜３６時間のインキュベーションの後、過剰なアミノオキシ試薬を、ＨｉＬｏａｄ２６／６００Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ｐｒｅｐｇｒａｄｅカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）の分取サイズ排除クロマトグラフィーにより除去した。薬物抗体比（ＤＡＲ）は、０．１％トリフルオロ酢酸含有水中の３０〜６０％のアセトニトリルの５分間直線勾配を用いて、ＲＬＲＰ−Ｓカラム（４０００Å、５μＭ、５０×４．６ｍｍ、ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の分析ＨＰＬＣにより決定した。ＨＰＬＣ追跡は、２８０ｎｍの波長でモニターし、続いて抱合および非抱合抗体のピーク積分をモニターした。表９に示されているように、２ステップ方法は、アミノオキシ−ペプチド類似体（化合物２２）によるケトン活性化抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９および抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９のほぼ定量的な標識化をもたらした。対照的に、ケトン活性化抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１０）抗体への化合物２２の部位特異的抱合は、効率が低く、ＤＡＲが１．３のＡＤＣをもたらした。オキシムライゲーションを介したＡＤＣ形成は、免疫抱合体の還元および脱グリコシル化の後、ＥＳＩ−ＭＳにより更に確認した（表１０）。最後に、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００１０／３００ＧＬ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）およびＰｒｏｔｅｉｎＫＷ−８０３５μｍ３００×８ｍｍ（Ｓｈｏｄｅｘ）カラムの分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＡｎＳＥＣ）は、僅か少量の凝集ＡＤＣを明らかにし、２ステップ抱合プロセスの際に凝集がほとんど誘発されないことを示唆している。

改変抗体へのアジド部分の部位特異的結合は、続く銅無含有クリック化学を介したペイロード抱合を可能にする。この実施例において、生体直交反応は、薬物リンカーに共有結合しているビシクロ［６．１．０］ノニン（ＢＣＮ）基の環歪みにより促進される。歪み促進アルキン−アジド付加環化は、ＢＣＮ官能化ペイロード化合物７５の存在下でアジド活性化抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１１）抗体により実施した。２ステップ方法のこの第２のステップは、１ＭのＮａＣｌおよび６％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを補充した１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）中において１２７μＭの抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１１）抗体および１２７０μＭのＢＣＮ連結ペプチド類似体（化合物７５）により実施した。２３℃でおよそ１６時間のインキュベーションの後、過剰なＢＣＮ試薬を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（商標）（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用する標準的なＰｒｏｔａｉｎＡアフィニティークロマトグラフィーにより除去した。溶出は、ＩｇＧ溶出緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により実施し、続いて１ＭトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８）により中和し、ＰＢＳに緩衝液交換した。表１０に示されているように、銅無含有クリック化学によるペイロード抱合は、ＡＤＣ試料の還元および脱グリコシル化の後、ＥＳＩ−ＭＳにより確認した。同じ方法を使用して、免疫抱合体の平均ＤＡＲを計算した。このプロセスにおいて、１０μｇのＡＤＣに、ＩｇＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ６ＦａｓｔＦｌｏｗ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）の５０％スラリーを１０μＬ補充した。樹脂結合は、２３℃で１時間穏やかに撹拌して実施した。樹脂をＰＢＳで洗浄した後、アフィニティー結合ＡＤＣを、５μｇのＰＮＧａｓｅＦの添加により脱グリコシル化し、続いて３７℃で３時間インキュベートした。ＰＮＧａｓｅＦ酵素を、ＰＢＳによるアフィニティー樹脂の洗浄により除去した。次に、脱グリコシル化試料を、１％ギ酸を使用して溶出し、続いて直後に１０Ｍの酢酸アンモニウム（ｐＨ５）により中和した。抗体構築物を重鎖および軽鎖に効果的に還元するため、２０μＬの溶出剤に、１０Ｍの酢酸アンモニウム（ｐＨ５）中に６Ｍのグアニジン塩酸塩および５μＬの０．６６ＭＴＣＥＰを含有する１０μＬの１００ｍＭギ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）を補充した。２３℃で少なくとも３０分間インキュベートした後、還元および脱グリコシル化試料を、６５５０ｉＦｕｎｎｅｌＱ−ＴＯＦＬＣ／ＭＳシステム（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に注入した。ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒＱｕａｌｉｔａｔｉｖｅＡｎａｌｙｓｉｓＳｏｆｔｗａｒｅ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、スペクトル記録およびスペクトルのデコンボリューション処理のために使用した。平均ＤＡＲを、分布にわたる相対ピーク高さのＤＡＲ状態加重平均として計算した。表９に示されているように、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１１）−７５ＡＤＣは、２．０の平均ＤＡＲを有し、両方の抱合ステップがほぼ定量的であることを示唆している。最後に、ＡＤＣを、ＢｉｏＳＥＣ−３カラム（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＡｎＳＥＣ）により検査し、９５％の単量体であることが見出され、抱合プロセスにおいて凝集がほとんど誘発されないことを示唆している。

表５および６に開示されている式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の免疫抱合体は、抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７Ｃｙｓ抗体と、連結マレイミド部分を有する式（Ｉ）のある特定の細胞障害性ペプチドとを抱合することによって得たが、本発明の他のリンカー−ペイロード組合せも使用されている。表７〜１０に開示されている免疫抱合体がそのような例である。非改変抗体への抱合は、別の例である。これは、実施例１０２および１０３に記載されているように、部分的に還元されたジスルフィド結合への抱合によって達成することができる。非改変抗体は、例えば化合物８９、または様々な他の当技術分野において公知の方法を使用した抱合リシンでもあり得る。

抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７Ｃｙｓ、ならびにＡ１／ｙｂｂＲタグＡＤＣのインビトロ細胞死滅効力を測定する細胞増殖アッセイ

標的抗原を天然に発現する細胞、または標的抗原を発現するように改変された細胞株が、ＡＤＣの活性および効力をアッセイするために頻繁に使用される。抗Ｈｅｒ２抗体ＡＤＣの細胞死滅効力をインビトロで評価するため、２つの改変細胞株のＭＤＡ−ＭＢ２３１クローン１６およびクローン４０、ならびに４つの内在性細胞株のＪｉｍＴ１、ＨＣＣ１９５４、ＮＣＩ−Ｎ８７、およびＳＫＢＲ３細胞を用いた（Clinchy B, Gazdar A, Rabinovsky R, Yefenof E, Gordon B, Vitetta ES. Breast Cancer Res Treat. (2000) 61:217-228）。ＭＤＡ−ＭＢ２３１クローン１６細胞は、組み換えヒトＨｅｒ２の多いコピー数（約５×１０^５コピー／細胞）を安定して発現し、一方、クローン４０は、ヒトＨｅｒ２の少ないコピー数（約５×１０^３コピー／細胞）を発現する。高レベルのＨｅｒ２は、ＨＣＣ１９５４（約５×１０^５コピー／細胞）、ＳＫＢＲ−３（５．４×１０^５コピー／細胞）、およびＮＣＩ−Ｎ８７（２．７×１０^５コピー／細胞）細胞株に内在的に発現し、一方、ＪｉｍＴ−１細胞は、中程度のレベル（約８×１０^４コピー／細胞）でヒトＨｅｒ２を発現する。陰性対照として、Ｈｅｒ２陰性Ａ３７５細胞株を使用した。抗原依存性細胞障害効果は、細胞表面に十分な抗原を発現する細胞のみを死滅させるべきであり、抗原を欠いている細胞を死滅させるべきではない。細胞増殖アッセイは、細胞を様々な濃度のＡＤＣと共にインキュベートした５日後に、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）により実施した（Riss et al., (2004) Assay Drug Dev Technol. 2:51-62）。幾つかの研究において、細胞に基づいたアッセイは、ハイスループットであり、自動化システムにより実施される（Melnick et al., (2006) Proc Natl Acad Sci U S A. 103:3153-3158）。

１つ（抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４４）を除いて全ての抗Ｈｅｒ２ＡＤＣは、高レベルのＨｅｒ２発現を有する細胞株、すなわち、ＭＤＡ−ＭＢ２３１クローン１６、ＨＣＣ１９５４、ＮＣＩ−Ｎ８７、ＳＫＢＲ３を特異的に死滅させたが、低レベルのＨｅｒ２を発現するＭＤＡ−ＭＢ２３１クローン４０細胞に対して細胞障害効力を示さず、Ｈｅｒ２陰性Ａ３７５細胞に対しても細胞障害効力を示さなかった（図１、表１１、表１３）。高レベルのＨｅｒ４２を発現する４つの細胞株における抗Ｈｅｒ２ＡＤＣのＩＣ_５０は、２０ｐＭ〜７００ｐＭの範囲である（表１１、表１３）。中程度のレベルのＨｅｒ２を発現するＪｉｍＴ−１細胞では、抗Ｈｅｒ２−ＡＤＣによる細胞死滅活性は、広範囲に変動する。幾つかのＡＤＣは、高レベルのＨｅｒ２を発現する細胞において活性であったが、ＪｉｍＴ−１細胞では活性ではなかった。多くのＡＤＣは、高レベルのＨｅｒ２を発現する細胞株と同じくらい効果的にＪｉｍＴ−１細胞を死滅させた（表１１、表１３）。結果は、抗Ｈｅｒ２ＡＤＣが、Ｈｅｒ２＋細胞をＨｅｒ２依存的に死滅させ、ＡＤＣが多数の細胞型に対して活性であることを示唆している。同様に、野生型抗体の部分還元法により（実施例１０２）、Ａ１またｙｂｂＲタグを介して酵素的方法により（実施例１０４および１０５）、およびケトン架橋方法により（実施例１０３）調製された抗Ｈｅｒ２ＡＤＣは、Ｈｅｒ２＋細胞をＨｅｒ２依存的に死滅させ（表１１）、本発明に開示されている細胞障害性ペプチドが、異なる抱合方法および化学を介して抗体に抱合されたときに効力を保持することを実証している。

式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドが他の抗体と抱合されたときも活性であるかを確認するために、式（Ｉ）の幾つかの細胞障害性ペプチドを、標的抗原がＨ５２６、ＫＵ８１２、およびＣＭＫ１１−５細胞に発現するが、ジャーカット細胞には発現しない抗体２０５０７と抱合させた。図２および表１２に示されているように、Ｈｅｒ２＋細胞に細胞死滅活性を示すペイロードリンカー組合せは、抗体２０５０７と抱合されたときも活性であり、標的抗原を発現する細胞を死滅させる。結果は、本明細書に記載されている式（Ｉ）の細胞障害性ペプチドが広範囲の細胞型に対して細胞障害性を示すことを示している。

抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７ＡＤＣの薬物動態研究
長期血清半減期がＡＤＣの高いインビボ効力にとって重要であることが実証されている（Hamblett, et al., “Effects of drug loading on the antitumor activity of a monoclonal antibody drug conjugate,” Clin Cancer Res., 10:7063-7070 (2004); Alley et al., Bioconjug Chem. 19:759-765 (2008)）。疎水性薬物ペイロードを抗体に結合することは、抗体の特性に影響を与えることがあり、これは、インビボにおけるＡＤＣの素早いクリアランス（Hamblett et al., 2004）および不十分なインビボ効力をもたらし得る。インビボにおけるＡＤＣのクリアランスに対する本発明の様々な細胞障害性ペプチドの抱合効果を評価するため、腫瘍非担持マウスにおいて薬物動態研究を実施した。ネズミ血漿における本発明の免疫抱合体の細胞障害性ペプチド（すなわち、薬物パート）を検出するため、本発明の様々な細胞障害性ペプチドも認識する抗ＭＭＡＦ抗体を生成した。免疫抱合体を検出するＥＬＩＳＡを、血漿からヒトＩｇＧ分子を捕捉するための抗ｈＩｇＧ抗体を使用するＧｙｒｏｓ（商標）プラットフォーム、ならびに２つの別々のアッセイにおいてシグナルを検出するための第２の抗ヒトＩｇＧ抗体および抗ＭＭＡＦ抗体によって開発した。抗ＭＭＡＦ抗体は、本発明の細胞障害性ペプチドを認識し、したがって結合した細胞障害性ペプチドによるＡＤＣの検出に使用することができる（「無傷の」ＡＤＣ）。したがって、２つのＥＬＩＳＡは、ヒト抗体および「無傷の」ＡＤＣそれぞれの血清濃度を測定する。

ＰＫ研究の例は、図３および図４に示されている。１群あたり３匹のマウスに単回用量の以下のＡＤＣを１ｍｇ／ｋｇで投与した。抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０（図３Ａ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７（図３Ｂ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７（図３Ｃ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０（図３Ｄ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９（図３Ｅ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８（図３Ｆ）、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４（図３Ｇ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（図３Ｈ）、抗Ｈｅｒ２−１０（図３Ｉ）、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０（図４Ａ）、抗体２０５０７−ＬＣ−Ｋ１０７Ｃ−４７（図４Ｂ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（図４Ｃ）抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（図４Ｄ）、抗体２０５０７−１０（図４Ｅ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−２０（図４Ｇ）、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（図４Ｈ）、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２（図４Ｉ）、および抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１１）−７５（図４Ｊ）のＡＤＣ。抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０（図４Ｆ）を、単回用量の１０ｍｇ／ｋｇで投与した。血漿試料を３週間にわたって集め、抗体２０５０７および呼応Ｈｅｒ２ＡＤＣ、ならびにそれぞれの裸抗体を含むＩｇＧ分子を捕捉する抗ｈＩｇＧ抗体を使用してＥＬＩＳＡによりアッセイした。次に抗ＭＭＡＦおよび抗ｈＩｇＧ抗体を、２つの別々のアッセイにおける検出に使用した。抗ＭＭＡＦ抗体アッセイは、抗体抱合体の濃度のみを測定し、抗ｈＩｇＧは、抗体抱合体と、ペイロードを欠いている抗体の両方を定量化する。標準曲線を、マウスに注入したものと同じ材料を使用して各ＡＤＣにおいて別々に生成した。したがって抗ＭＭＡＦおよび抗ｈＩｇＧによるアッセイは、マウスへの注入後に抗体２０５０７または抗Ｈｅｒ２ＡＤＣの薬物ローディングに変化が生じなければ、同一の濃度読み取り値を生じるはずである。いくらかのペイロードを失っているＡＤＣでは、抗ＭＭＡＦ抗体によるアッセイは、抗ｈＩｇＧアッセイよりも低い濃度を測定する。したがって、２つの濃度読み取り値の比較は、マウスにおけるインビボインキュベーションの際に抗体２０５０７および抗Ｈｅｒ２ＡＤＣからの薬物放出の測定を可能にする。

図３および図４に示されているように、両方の抗ｈＩｇＧおよび抗ＭＭＡＦアッセイにより得られた血漿濃度は、抗Ｈｅｒ２および抗体２０５０７抗体の両方に操作されて組み込まれたＣｙｓに抱合するマレイミドペイロードを有する大部分のＡＤＣと十分に適合し（図３Ａ−Ｉ、図４Ｄ）、これらのＡＤＣの試験期間中のＡＤＣからの薬物損失が最小限であることを示唆している。野生型抗体の抗Ｈｅｒ２−１０（図３Ｉ）および抗体２０５０７−１０（図４Ｅ）の部分還元により調製された２つのＡＤＣは、抗ｈＩｇＧおよび抗ＭＭＡＦアッセイにより決定された濃度の間に強い隔たりを示し、前者が後者よりも高く、２つのＡＤＣの試験期間中の薬物損失が有意であることを示唆している。酵素媒介方法により調製されたＡＤＣである抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−２０、抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２、および抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２のＡＤＣは、抗ＩｇＧおよび抗ＭＭＡＦアッセイにより決定された濃度の間に良好な適合性を示した（図４Ｆ、Ｇ、Ｈ、およびＩ）。対照的に、抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−ｙｂｂＲ−（ｉ−１１）−７５のＡＤＣ（図４Ｊ）は、抗ｈＩｇＧおよび抗ＭＭＡＦアッセイの間に大きな隔たりを示し、ＡＤＣが、ＰＫ研究の際に有意な薬物脱抱合を受けることを示唆している。

図４に示されているように、抗ｈＩｇＧアッセイおよび抗ＭＭＡＦアッセイの両方により得られた血漿濃度は、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５３Ｃ−１０のＡＤＣ、抗体２０５０７−ＬＣ−Ｋ１０７Ｃ−４７のＡＤＣ、および抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０のＡＤＣと十分に適合し、試験期間中のこれらのＡＤＣの薬物損失が最小限であることを示唆している。

マウス循環において３週間後に、ＡＤＣの薬物ペイロードの保持をより詳細に決定するため、ＡＤＣを、最終採血により集めたマウス血清からアフィニティー精製し、ＡＤＣに結合した薬物ペイロードをＭＳ分析により分析した。典型的なプロセスにおいて、２００μｌの血漿を１０ｍＭのＥＤＴＡを含有する等量のＰＢＳで希釈した。希釈物に、１０μｌのアフィニティー樹脂（ＩｇＧＳｅｌｅｃｔＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｆａｓｔｆｌｏｗ；ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ１７−０９６９−０１；５０％スラリー）を加えた。樹脂と希釈血漿試料とのインキュベーションを、樹脂沈降を避けるために穏やかな撹拌を適用することによって、室温で１時間実施した。次に樹脂を濾別し、２００μｌのＰＢＳで２回洗浄した。抗体を脱グリコシル化するため、１０μｌのＰＢＤで希釈した１０μｌのＰＮＧａｓｅＦ（１ｍｇ／ｍＬ、１／２×ＴＢＳｐＨ７．４、２．５ｍＭＥＤＴＡ、５０％グリセロール）を樹脂に加え、混合物を３７℃で２〜３時間インキュベートした。ＰＮＧａｓｅＦを、アフィニティー樹脂を２００μｌのＰＢＳで２回洗浄することにより除去した後、試料を、２０μｌの１％ギ酸の添加によりアフィニティー樹脂から２回溶出し、樹脂を濾別した。合わせた溶出液を、２０μｌの６Ｍグアニジン塩酸塩および５μｌの還元緩衝液（０．６６ＭＴＣＥＰ、３．３Ｍ酢酸アンモニウム、ｐＨ５）で希釈した。抗体を効果的に還元するため、試料を、分析する前に、室温で少なくとも３０分間インキュベートした。ＬＣＭＳを、ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ６５５０−ｉＦｕｎｎｅｌＱＴＯＦＭＳ／Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０ＨＰＬＣシステムにより実施した。ＰＬＲＳカラム（８μｍ、２．１×５０ｍｍ、１０００Å、Ａｇｉｌｅｎｔ）を流速０．５ｍｌ／分で８０℃で用いて脱塩する、標準的な逆相クロマトグラフィーを、試料に使用した。溶出は、０．１％ギ酸を含有する２０％〜６０％のアセトニトリルの直線勾配を６分で使用して実施した。ＡｇｉｌｅｎｔＱｕａｌｉｔａｔｉｖｅＡｎａｌｙｓｉｓを、スペクトル記録およびスペクトルデコンボリューションの処理のために使用した。分析では、スペクトル記録を、関連する全ての種の溶出を網羅する時間間隔にわたって合計した。合計したスペクトルを荷電状態でデコンボリューションし、デコンボリューションしたスペクトルの画像を記録した。ピーク強度の値を指定可能種から抽出した。ＤＡＲ状態および細分種の指定は、分析した抗体の配列の計算質量の値および薬物分子を有する抱合体の予測質量シフトに基づいて行った。平均ＤＡＲは、分布にわたる全てのＤＡＲ状態の相対ピーク高さを使用して計算した。平均抗体ＤＡＲは、２つの平均軽鎖および２つの平均重鎖のＤＡＲの合計として計算した。

マウス循環において３週間後、精製ＡＤＣの平均ＤＡＲを、ＭＳにより測定して、元のＡＤＣ調製物におけるＤＡＲと比較した。「ペイロード保持」は、２つのＤＡＲの比（マウス血漿から単離されたＡＤＣのＤＡＲを、元のＡＤＣ調製物のＤＡＲで割ったもの）から計算し、マウス循環において３週間後のＡＤＣに保持されたペイロードの率を表す。ＭＳにより測定された様々なＡＤＣのペイロード保持は、抗ＭＭＡＦ抗体を使用した前述のＥＬＩＳＡアッセイにより得られた結果（図３および４）とほぼ一致している。

表１４に示されているように、ペイロード保持は、化合物、抱合部位、および抱合方法に応じて５％〜９６％の広い範囲であった。ＰＰＴａｓｅ酵素法により調製されたＡＤＣでは、化合物２０および２２のペイロード保持（ＭＳによる）は５０％を超え、一方、化合物７５では、ペイロード保持は僅か５％である（表１４）。後者の場合では、最終採血の血清から精製されたＡＤＣの質量分析評価は、薬物リンカーのカルバメート部分のほぼ定量的な切断を明らかにし、一方、抗体と細胞障害性ペイロードとのクリック化学連結は、循環において安定したままであった。

マレイミド基が特徴であるＣｙｓ反応性の細胞障害性ペプチドにより調製されたＡＤＣでは、ペイロード保持は、化合物構造および抱合部位に応じて１８％〜９６％の範囲であった（表１４）。血漿試料から単離されたＡＤＣのＭＳの結果は、ＡＤＣからのペイロードの脱抱合が、マレイミドペイロードと抱合Ｃｙｓ残基のチオール基との間で生じたことを確認している。リンカー構造に破壊は観察されなかった。したがって、マレイミド連結ペイロードのペイロード保持は、回収された非抱合抗体の観察質量が、非修飾抗体のものであるので、逆マイケル付加を介して脱抱合に反比例し得る。

マレイミドと遊離チオール基の間にチオエーテルを形成する反応は、可逆的であることが公知である（Bioconjugate Chem. 2011, 22, 1946-1953）。逆反応が、ＡＤＣからのマレイミド薬物ペイロードのインビボおよびインビトロにおける脱抱合の原因であると考えられている。続いて、脱抱合ペイロードのマレイミドは、アミノ酸、ペプチド、またはタンパク質の形態の遊離チオールと反応することができる。（Bioconjugate Chem. 2008, 19, 759-765; Nat. Biotechnol. 2012, 30, 184-189）。

本発明のある特定の細胞障害性ペプチドでは、マウス血液循環中のＡＤＣからのペイロード脱抱合は、無視できるほどであることが見出された（表１４）。マウス循環において３週間後、９０％のペイロードが、抗体の改変Ｃｙｓに抱合した化合物４７、１４、７７、８０、７９、および７８を用いて調製されたＡＤＣに保持されたことが見出された。血漿試料から単離されたこれらのＡＤＣのＭＳ分析は、ＡＤＣの質量が、それぞれの抱合薬物ペイロードで１８ダルトン増加したことを明らかにし、加水分解反応が生じたことを示唆した。マレイミド基とシステインとの反応によりもたらされたスクシンイミド環は、自発的な加水分解を受けることが知られている（Gregory, J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 3922; Knight, P. Biochem. J. 1979, 179, 191-197; Khan M.N. J Pharm Sci. 1984, 73:1767-1771）。事実、抱合体を塩基性ｐＨに曝露することによって、基を意図的に加水分解することができる（例えば、Biochem. J. 1979 179, 191-197; Biochemistry 1976, 15, 2863-8; Chem Commun. 2011; 47: 5452-5454）。スクシンイミド基の加水分解開環は、前述のマレイミド逆反応に付されない安定したチオエーテル連結を生じる（Bioconjugate Chem. 2011, 22, 1946-1953; Nat. Biotechnol. 2012, 30, 184-189; Nat. Biotechnol. 2014, 32, 1059）。化合物４７、１４、７７、８０、７９、および７８により例示される本発明のある特定の化合物は、抗体のＣｙｓ残基と抱合すると、より大きなスクシンイミド環加水分解を有し、それによってより安定した抗体薬物抱合体を生じる。

ＡＤＣのインビトロ安定性
本発明の細胞障害性ペプチドにより調製されたＡＤＣの安定性に対するスクシンイミド環加水分解の効果を、インビトロにおいて更に研究した。ペイロード脱抱合、および抗体に抱合したマレイミドペイロードのスクシンイミド環の加水分解によってもたらされる質量変化を、ＬＣ−ＭＳによりモニターした。スクシンイミド環の加水分解は、高ｐＨ、高温、または高塩などのある特定の条件により刺激されることが報告されている（J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 3922; Biochemistry, 1976, 1 5, 2836; Biochem. J. 1979, 179, 191-197; J Pharm Sci. 1984, 73:1767-1771, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17 (2007) 6286-6289）。ｐＨの関数としてＡＤＣのインビトロ安定性を精査するため、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０および抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７を、ｐＨ７．０〜ｐＨ９．０の範囲の緩衝液中に３７℃でインキュベートし、ＡＤＣをＭＳにより様々な時点で分析して、ペイロード脱抱合およびスクシンイミド加水分解の程度を決定した。脱抱合ＡＤＣ、加水分解されたスクシンイミド環を有するペイロードが結合したＡＤＣ、および無傷のスクシンイミド環を有するペイロードが結合したＡＤＣの相対的個体数を、対応するＡＤＣ種の相対的ＭＳ強度から計算した。図５Ａに示されているように、インキュベーション緩衝液のｐＨの増加は、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０の脱抱合を増強する。ｐＨ７．０の緩衝液において、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０は安定しており、１０時間後におよそ１０％のペイロード損失を有した。しかし、ｐＨ８．０およびｐＨ９．０緩衝液における１０時間のインキュベーションは、ペイロード脱抱合の程度を、それぞれおよそ３０％および６０％増加した（図５Ａ）。対照的に、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７のｐＨ７．０〜ｐＨ９．０の緩衝液における３７℃での２５時間のインキュベーションは、１５％を超える脱抱合をもたらさなかった（図５Ｃ）。

並行して、２つのＡＤＣのスクシンイミド環加水分解の程度も様々な時点で決定した（図５Ｂおよび図５Ｄ）。両方のＡＤＣでは、インキュベーション緩衝液のｐＨの増加は、スクシンイミド環の加水分解を刺激した。抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７のスクシンイミド環加水分解は、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０よりも相当迅速に生じた。抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０のｐＨ７．５の緩衝液中の２５時間のインキュベーションは、３０％のペイロードの脱抱合をもたらし、抗体に依然として結合しているペイロードの２０％が加水分解された（図５Ａおよび図５Ｂ）。同じインキュベーション条件下では、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−４７は、およそ１０％のペイロードのみを失い、一方、結合ペイロードのおよそ９０％が加水分解された（図５Ｃおよび図５Ｄ）。図５ＥおよびＦに示されているように、インビトロペイロード抱合およびスクシンイミド環加水分解を、ｐＨ８．５緩衝液において３７℃で２４時間インキュベートした抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８、および抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４のＡＤＣに対して分析した。ペイロードの脱抱合は、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７７、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−８０、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７９、抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−７８、および抗Ｈｅｒ２−ＬＣ−Ｓ１５９Ｃ−１４のＡＤＣにおいて検出されなかったが（図５Ｅ）、高い程度のスクシンイミド環加水分解が、全てのＡＤＣにおいて観察された（図５Ｆ）。したがって、化合物４７、１４、７７、８０、７９、および７８により例示されている本発明のある特定の化合物は、逆マレイミド反応を介した脱抱合に低い感受性があり、スクシンイミド環加水分解を介して更に安定化しているので、改善されたＡＤＣ安定性を示す。

抗体２０５０７のＡＤＣによるインビボ効力研究
インビボ異種移植片腫瘍モデルは、ヒトに観察される生物学的活性を刺激し、関連し、十分に特徴決定されたヒト原発性腫瘍または腫瘍細胞株を免疫欠損ヌードマウスにグラフトすることから構成される。抗がん試薬による腫瘍異種移植片マウスの治療研究は、試験試薬のインビボ効力に関する貴重な情報を提供している（Sausville and Burger, (2006) Cancer Res. 66:3351-3354）。Ｈ５２６細胞は、抗体２０５０７の抗原を表面に発現し、抗体２０５０７のＡＤＣにより選択的に死滅させられるので（図２、表１２）、細胞株を異種移植片モデルの生成に使用して、抗体２０５０７のＡＤＣのインビボ活性を評価した。全ての動物研究は、ＧｕｉｄｅｆｏｒｔｈｅＣａｒｅａｎｄＵｓｅｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌｓ（NIH publication; National Academy Press, 8^th edition, 2001）に従って実施した。Ｈ５２６細胞をｎｕ／ｎｕマウスの皮下に移植した（Morton and Houghton, Nat Protoc. 2007;2:247-250）。腫瘍サイズが約２００ｍｍ^３に達した後、３つの抗体２０５０７のＡＤＣを単回用量の３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射によってマウスに投与した。腫瘍成長を、ＡＤＣ注射後に定期的に測定した。各治療群は、７匹のマウスを含んだ。そのようなインビボ効力研究の例を図６Ａに示す。３ｍｇ／ｋｇの抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０のＡＤＣによるマウスの治療は、腫瘍成長の阻害を引き起こし、一方、１０ｍｇ／ｋｇの抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０のＡＤＣによる治療は、腫瘍退縮をもたらした（図６Ａ）。抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０のＡＤＣの効力は、陽性対照ＡＤＣの、基準化合物ＭＣ−ＭＭＡＦと抱合した抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−ＭＭＡＦのものと同等であった。ＡＤＣ治療に関連する体重減少は観察されず、低い全身性毒性が示唆される。結果は、１０ｍｇ／ｋｇの単回用量治療では、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０のＡＤＣは、有意な体重減少を有することなくＨ５２６腫瘍の退縮を効果的に引き起こしたことを確認した。第２の研究において、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０および抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０のＡＤＣを、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの用量でＨ５２６腫瘍担持マウスに投与した（図６Ｂ）。両方のＡＤＣは、３ｍｇ／ｋｇで腫瘍阻害活性および１０ｍｇ／ｋｇで腫瘍退縮活性を同様に示した。抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０のＡＤＣは、２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−２０のＡＤＣよりも僅かに効力があった。

別の例では、Ｈ５２６異種移植片モデルにおける２つの抗体２０５０７のＡＤＣの、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０および抗体２０５０７−１０のインビボ効力を比較した（図６Ｃ）。２つのＡＤＣは、２つの異なる方法を使用して、異なるＣｙｓ部位に抱合させた同じペイロード化合物１０により調製した。抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０は、改変Ｃｙｓ残基のＨＣ−Ｅ１５２ＣおよびＨＣ−Ｓ３７５Ｃと抱合させた化合物１０を用いて、実施例１０１に記載されたようにＣｙｓ突然変異抗体により調製した。抗体２０５０７−１０は、未変性Ｃｙｓ残基に抱合させた化合物１０を用いる実施例１０２に記載されたように、野生型抗体２０５０７の部分還元法を使用して調製した。抗体２０５０７−１０は、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０（ＤＡＲ３．９）よりも僅かに高いＤＡＲ（ＤＡＲ４．６）を有する（表６）。薬物動態研究は、２つのＡＤＣが、マウスにおける３週間の循環の際に非常に異なる程度で同じペイロードを保持したことを示した（図４Ｄ、図４Ｅ、表１４）。抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０は、抗体２０５０７−１０（２０％）よりもかなり良好なペイロード保持（５６％）を示している。

Ｈ５２６異種移植片モデルにおいて、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０の同じ投与量は、抗体２０５０７−１０よりも腫瘍阻害において効力がある（図６Ｃ）。抗原がＨ５２６細胞に発現していない抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ−１０は、腫瘍阻害活性を何も示さなかった。

第３の研究において、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０および抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２のＡＤＣを、単回用量の７ｍｇ／ｋｇでＨ５２６腫瘍担持マウスに静脈内注射した（図６Ｄ）。抗体２０５０７−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２のＡＤＣは、腫瘍阻害を示したが、抗体２０５０７−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−１０のＡＤＣは、同じ用量レベルで腫瘍退縮を示し、後者のＡＤＣのより高い効力を示している。アイソタイプ対照ＡＤＣの抗Ｈｅｒ２−ＨＣ−ｉｎｓ３８８−Ａ１−４９−２２においては有意な腫瘍阻害活性が観察されず、抗体２０５０７のＡＤＣによる抗原特異的な腫瘍の死滅が示唆されている。まとめると、３つの研究は、全て、抗体に様々な方法で結合された本発明の細胞障害性ペプチドがマウス異種移植片モデルにおいて抗原発現がんの退縮を引き起こし得ることを確認している。

Ｓｆｐ４’−ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ（ＰＰＴａｓｅ）の産生
枯草菌（Bacillus subtilis）ＳｆｐＰＰＴａｓｅを、ＰＩＰＥ法（Klock et al., Proteins 71:982-994 (2008)を参照されたい）を使用して、ｐＥＴ２２ｂ発現ベクターにクローンした。Ｃ末端Ｈｉｓ_６タグの切断を可能にするため、ＴＥＶ（タバコエッチウイルス）プロテアーゼ認識部位を、Ｓｆｐコード配列の下流に挿入した。クローニングに使用した全てのプライマーおよびＳｆｐタンパク質配列を表１５に列挙する。

タンパク質発現および精製は、Ｙｉｎｅｔａｌ．に従い（Nat. Protoc. 1:280-285 (2006)を参照されたい）、いくらかの変更を伴って実施した。簡潔には、１ＬのＴＢ培地に、ｐＥＴ２２ｂ／Ｓｆｐ発現プラスミドを有する大腸菌（Escherichia coli）ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の飽和一晩培養物を接種した。培養物を２５０ｒｐｍで３７℃において振とうし、最適密度（６００ｎｍ）の０．７に達した後、１ｍＭのＩＰＴＧの添加により誘発した。温度を３０℃に低下させ、培養物を、細菌細胞を遠心分離（３４００ｒｐｍで２０分間）により採取する前に、２５０ｒｐｍでおよそ１６時間振とうした。使用前に、細胞ペレットを−２０℃で貯蔵した。タンパク質精製を開始するため、凍結ペレットを氷上でおよそ１５分間解凍し、２０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ８）、０．５ＭのＮａＣｌ、５ｍＭのイミダゾール、および２Ｕ／ｍＬのＤＮａｓｅＩを含有する緩衝液に再懸濁した（細胞の湿潤重量１ｇあたり３ｍＬの緩衝液）。細胞溶解は、１秒間遅延の間欠を伴う１秒音波処理パルスを使用して、合計２分間音波処理することによって誘発した。不溶性細胞細片を除去するため、得られた溶解産物を４００００×ｇで４℃において２５分間遠心分離した。次にＨｉｓ_６タグＳｆｐ酵素を、４ｍＬの５０％Ｎｉ−ＮＴＡアガローススラリー（Ｑｉａｇｅｎ）の添加により捕捉して、溶解産物を明澄にした。４℃で１時間振とうした後、樹脂溶解産物混合物を使い捨てカラムに注ぎ入れた。沈降した樹脂を、５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ８）、３００ｍＭのＮａＣｌ、および２０ｍＭのイミダゾールの５０カラム体積で洗浄した。溶出は、５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ８）、３００ｍＭのＮａＣｌ、および２５０ｍＭのイミダゾールの６カラム体積で実施した。Ｓｆｐ酵素を、５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ８）および５０ｍＭのＮａＣｌを含有するＴＥＶ切断緩衝液に交換した。Ｈｉｓ_６タグ除去は、７％（ｗ／ｗ）ＴＥＶプロテアーゼにより２３℃で１時間、次に４℃でおよそ１６時間消費することによって実施した。次にＴＥＶ消費Ｓｆｐ酵素を、ＰＢＳで予め平衡化した新たなＮｉ−ＮＴＡカラムに再ローディングした。切断酵素をカラムフロースルー（flowthrough）から、ならびに５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ８）、３００ｍＭのＮａＣｌ、および２０ｍＭのイミダゾールの５カラム体積を伴う洗浄ステップから集めた。次に精製Ｓｆｐ酵素を、３．５ｋＤａカットオフを有するＳｌｉｄｅ−Ａ−ＬｙｚｅｒＤｉａｌｙｓｉｓＣａｓｓｅｔｔｅｓ（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して、１０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１ｍＭのＥＤＴＡ、および１０％グリセロールに対して透析した。透析物を０．２２μｍフィルターに通した後、Ｓｆｐ酵素の収量を、モル吸光係数の２８６２０Ｍ^−１ｃｍ^−１を使用する２８０ｎｍでの紫外分光法（ＮＤ−１０００ＵＶ−ＶｉｓＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ，ＮａｎｏＤｒｏｐＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）により定量化した。１９ｍｇのＴＥＶ切断Ｓｆｐ酵素を、培養物１リットル毎に得た。次に、ＳｆｐＰＰＴａｓｅを、１０ｋＤａカットオフを有するＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａＣｅｎｔｒｉｆｕｇａｌＦｉｌｔｅｒＵｎｉｔｓ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して１５１μＭに濃縮した。酵素の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより評価し、Ｈｉｓ_６タグの除去は、ＬＣ−ＭＳにより確認した。分析サイズ排除クロマトグラフィーによると、ＴＥＶ切断ＳｆｐＰＰＴａｓｅは、９０％単量体である。濃縮された酵素をアリコートし、液体窒素に急速冷凍し−８０℃で貯蔵した。

本発明の他の態様および例が、以下の列挙された実施形態の一覧において提供される。それぞれの実施形態において特定された特徴を他の特定された特徴と組み合わせて、本発明の更なる実施形態を提供できることが理解される。

実施形態１．式（Ｉ）

［式中、
Ｒ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１は、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり（ここで、それぞれは非置換であるか、またはそれぞれ、Ｒ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５は、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含む非置換Ｎ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の構造を有する化合物またはその立体異性体。

実施形態２．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルである（ここで、Ｃ連結６員ヘテロシクロアルキルが、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）、実施形態１の化合物。

実施形態３．式（Ｉ）

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０は、

、−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２、−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨＬＲ^９、−ＬＲ^９、または−Ｘ_４ＬＲ^９であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５は、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり、これは非置換であるか、または−ＬＲ^９により置換されており；
Ｘ_３は、

であり；
Ｘ_４は、

であり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］
の構造を有する化合物もしくはその立体異性体、またはその薬学的に許容される塩。

実施形態４．式（Ｉ）

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^７は、ＬＲ^９であり；
Ｒ^８は、ＨまたはＬＲ^９であり；
各Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−、−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から独立して選択され（ここで、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６は、本明細書に定義されているとおりである）；
Ｒ^９は、

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０は、

であり；
Ｘ_４は、

実施形態５．式（Ｉａ）

の構造を有する化合物である、実施形態１〜４のいずれか１つにおける化合物。
実施形態６．式（Ｉｂ）

の構造を有する化合物である、実施形態１〜５のいずれか１つにおける化合物。

実施形態７．式（Ｉｃ）

の構造を有する化合物である、実施形態１〜４のいずれか１つにおける化合物。

実施形態８．式（Ｉｄ）

の構造を有する化合物である、実施形態１〜４および７のいずれか１つにおける化合物。

実施形態９．式（Ｉｅ）

実施形態１０．式（Ｉｆ）

の構造を有する化合物である、実施形態１〜４および９のいずれか１つにおける化合物。

実施形態１１．式（Ｉｇ）

実施形態１２．式（Ｉｈ）

の構造を有する化合物である、実施形態１〜４または１１のいずれか１つにおける化合物。

実施形態１３．式（Ｉｉ）または式（Ｉｊ）

実施形態１４．式（Ｉｋ）または式（Ｉｍ）

の構造を有する化合物である、実施形態１〜４または１３のいずれか１つにおける化合物。

実施形態１５．式（Ｉｎ）または式（Ｉｏ）

実施形態１６．式（Ｉｐ）または式（Ｉｑ）

の構造を有する化合物である、実施形態１〜４または１５のいずれか１つにおける化合物。

実施形態１７．Ｒ^１９がＨである、実施形態１１〜１６のいずれか１つにおける化合物。

実施形態１８．各Ｌが、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−および−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−から独立して選択され、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が本明細書において定義されたとおりである、実施形態３〜１７のいずれか１つにおける化合物。

実施形態１９．各Ｌが、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、および−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−から独立して選択され、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が本明細書において定義されたとおりである、実施形態３〜１８のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２０．各Ｌが、−Ｌ_１Ｌ_２−および−Ｌ_２Ｌ_１−から独立して選択され、−Ｌ_１およびＬ_２は本明細書において定義されたとおりである、実施形態３〜１９のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２１．Ｌが−Ｌ_１−であり、−Ｌ_１が本明細書において定義されたとおりである、実施形態３〜１９のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２２．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルである（ここで、それぞれはＲ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている）、実施形態３〜２１のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２３．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルである（ここで、Ｃ連結６員ヘテロシクロアルキルは、Ｒ^７、ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている）、実施形態３〜２１のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２４．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり（ここで、それぞれはＲ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている）、
Ｒ^４が、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮ_３、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、

である、実施形態３〜６および１８〜２１のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２５．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであり（ここで、Ｃ連結６員ヘテロシクロアルキルは、Ｒ^７ならびにＲ^５およびＲ^６から独立して選択される０〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^４が、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮ_３、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、

である、実施形態３〜６、１８〜２１、および２４のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２６．Ｒ^２が、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^５が、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６が、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^７が、Ｌ_１Ｒ^９であり；
Ｒ^８が、Ｈであり；
Ｒ^９が、

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、ＳＨ、−ＳＳＲ^１５、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＯＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、

−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０が、

であり；
各Ｒ^１１が、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１２が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３が、テトラゾリル、

であり；
各Ｒ^１４が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５が、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６が、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含む非置換Ｎ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルである、実施形態３〜２５のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２７．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルである（ここで、それぞれは非置換であるか、またはそれぞれ、Ｒ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）、実施形態１〜２１のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２８．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルである（ここで、Ｃ連結６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）、実施形態１〜２１および２７のいずれか１つにおける化合物。

実施形態２９．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであるか、またはＲ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含むＣ連結５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキルであり（ここで、それぞれは非置換であるか、またはそれぞれ、Ｒ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^３が、

であり；
Ｒ^４が、−Ｌ_１Ｒ^９、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２Ｌ_１Ｒ^９、

である、実施形態３〜２７のいずれか１つにおける化合物。

実施形態３０．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含むＣ連結６員ヘテロシクロアルキルであり（ここで、Ｃ連結６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
Ｒ^３が、

である、実施形態３〜２０および２９のいずれか１つにおける化合物。

実施形態３１．Ｒ^２が、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^５が、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６が、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、および−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^８が、Ｌ_１Ｒ^９であり；
Ｒ^９が、

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、ＳＨ、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｒ^１０、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＯＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、

、−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０が、

であり；
各Ｒ^１１が、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、および１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１２が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３が、

、−ＬＲ^９、または−Ｘ_４ＬＲ^９であり；
各Ｒ^１４が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６が、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり、これは−ＬＲ^９により置換されており；
Ｘ_３が、

であり；
Ｘ_４が、

であり；
各ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される、実施形態３〜２１および２７〜３０のいずれか１つにおける化合物。

実施形態３２．Ｒ^４が、−ＯＨ、−ＯＣＨ_３、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、または

である、実施形態１〜６および１８〜２８のいずれか１つにおける化合物。

実施形態３３．Ｒ^４が、−ＯＨ、−ＯＣＨ_３、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、−ＮＨＳ（Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮ_３、または

である、実施形態３〜６および１８〜２８のいずれか１つにおける化合物。

実施形態３４．Ｒ^４が、−Ｌ_１Ｒ^９、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｌ_１Ｒ^９、

である、実施形態３〜６、１８〜２３、および２７〜３１のいずれか１つにおける化合物。

実施形態３５．Ｒ^１３が、

である、実施形態１〜４、９、１０、および１８〜３０のいずれか１つにおける化合物。

実施形態３６．Ｒ^１３が、

、−ＬＲ^９、または−Ｘ_４ＬＲ^９である、実施形態１〜４、９、１０、１８〜３０、および３５のいずれか１つにおける化合物。
実施形態３７．Ｒ^１が、

である、実施形態１〜２１、および２６〜３６のいずれか１つにおける化合物。

実施形態３８．Ｒ^１が、

である、実施形態１〜２１、および２６〜３７のいずれか１つにおける化合物。

実施形態３９．Ｒ^１が、

である、実施形態１、３〜２１、２６、２７、２９、および３１〜３６のいずれか１つにおける化合物。

実施形態４０．Ｒ^１が、

である、実施形態１、３〜２１、２６、２７、２９、３１〜３６、および３９のいずれか１つにおける化合物。

実施形態４１．Ｒ^１が、

である、実施形態３〜２６、および３２〜３６のいずれか１つにおける化合物。

実施形態４２．Ｒ^１が、

である、実施形態３〜２６、３２〜３６、および４１のいずれか１つにおける化合物。

実施形態４３．Ｒ^１が、

である、実施形態３〜２２、２４、および３１〜３６のいずれか１つにおける化合物。

実施形態４４．Ｒ^１が、

である、実施形態３〜２２、２４、３１〜３６、および４３のいずれか１つにおける化合物。

実施形態４４．Ｒ^９が、

、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＯＮＨ_２、Ｎ_３、

実施形態４５．Ｒ^９が、

である、実施形態３〜４４のいずれか１つにおける化合物。

実施形態４６．式（ＩＩ）：

または−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ^１９は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］の免疫抱合体。
実施形態４７．式（ＩＩ）：

であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］の免疫抱合体。

実施形態４８．Ｌが、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−または−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−であり、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が本明細書において定義されたとおりである、実施形態４６および４７の免疫抱合体。

実施形態４９．Ｌが、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、および−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−から選択され、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が本明細書において定義されたとおりである、実施形態４６および４７の免疫抱合体。

実施形態５０．式（ＩＩ）の免疫抱合体が、式（ＩＩａ）

の免疫抱合体である、実施形態４７および４９のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態５１．Ｌが、−Ｌ_１Ｌ_２−または−Ｌ_２Ｌ_１−であり、−Ｌ_１およびＬ_２が本明細書において定義されたとおりである、実施形態４６および４７の免疫抱合体。

実施形態５２．式（ＩＩ）の免疫抱合体が、式（ＩＩｂ）

の免疫抱合体である、実施形態４６、４７、および５１のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態５３．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）または式（ＩＩｂ）の免疫抱合体が、式（ＩＩｃ）

の構造を有する免疫抱合体である、実施形態４６、４７、５１、および５２のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態５４．Ｒ^１０１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルであるか（ここで、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、

基にＣ連結し、かつＬ_１にＮ連結しており、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）；
あるいは
Ｒ^１０１が、１〜２個のＮヘテロ原子を含む５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル二価ラジカルである（ここで、５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、

基にＣ連結し、かつＬ_１にＮ連結しており、５員〜８員縮合二環式ヘテロシクロアルキル二価ラジカルが、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）、実施形態４６〜５３のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態５５．Ｒ^１０１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルであるか（ここで、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、

基にＣ連結し、かつＬ_１にＮ連結しており、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）、実施形態４６〜５４のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態５６．Ｒ^１０１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルである（ここで、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、

基にＣ連結し、かつＬ_１にＮ連結しており、６員ヘテロシクロアルキル二価ラジカルは、非置換である）、実施形態４６〜５５のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態５７．Ｒ^１０１が、

である、実施形態４６〜５６のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態５８．Ｒ^１０１が、

である、実施形態４６〜５７のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態５９．Ｒ^３が、

であり、Ｒ^１９がＨである、実施形態４６〜５８のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態６０．Ｒ^４が、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、または−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６であり；
Ｒ^１３が、テトラゾリル、

である、実施形態４６〜５９のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態６１．Ｒ^４が、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、または−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６である、実施形態４６〜６０のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態６２．Ｒ^１３が、テトラゾリル、

である、実施形態４６〜６１のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態６３．Ｒ^４が、−ＯＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシである、実施形態４６〜６２のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態６４．式（ＩＩＩ）：

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２であり；
Ｒ^６は、ハロ、オキソ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、または−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１であり；
Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ^１７は、結合、−ＮＨ−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２−、

であり；
Ｒ^１８は、結合、

または−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨであり；
Ｒ^１９は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］の免疫抱合体。
実施形態６５．式（ＩＩＩ）：

であり；
Ｒ^１８は、結合、

であり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される］の免疫抱合体。

実施形態６６．Ｌが、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５Ｌ_６−または−Ｌ_６Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−であり、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が本明細書において定義されたとおりである、実施形態６４および６５のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態６７．Ｌが、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４Ｌ_５−、−Ｌ_５Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３Ｌ_４−、−Ｌ_４Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−、−Ｌ_１Ｌ_２Ｌ_３−、および−Ｌ_３Ｌ_２Ｌ_１−から選択され、−Ｌ_１、Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が本明細書において定義されたとおりである、実施形態６４および６５のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態６８．式（ＩＩＩ）の免疫抱合体が、式（ＩＩＩａ）

の免疫抱合体である、実施形態６４、６５および６６のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態６９．Ｌが、−Ｌ_１Ｌ_２−または−Ｌ_２Ｌ_１−であり、−Ｌ_１およびＬ_２が本明細書において定義されたとおりである、実施形態６４および６５のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態７０．式（ＩＩＩ）の免疫抱合体が、式（ＩＩＩｂ）

の免疫抱合体である、実施形態６４、６５および６９のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態７１．式（ＩＩＩ）、式（ＩＩＩａ）または式（ＩＩＩｂ）の免疫抱合体が、式（ＩＩＩｃ）

の免疫抱合体である、実施形態６４、６５、６９、および７０のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態７２．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキルである（ここで、６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５およびＲ^６から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）、実施形態６４〜７１のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態７３．Ｒ^１が、１〜２個のＮヘテロ原子およびＣ_１〜Ｃ_２アルキレン架橋を含む６員ヘテロシクロアルキルである（ここで、６員ヘテロシクロアルキルは、非置換であるか、またはＲ^５から独立して選択される１〜３個の置換基により置換されている）、実施形態６４〜７２のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態７４．Ｒ^１が、

である、実施形態６４〜７３のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態７５．Ｒ^１が、

である、実施形態６４〜７４のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態７６．Ｒ^１が、

である、実施形態６４〜７１のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態７７．Ｒ^１が、

実施形態７８．Ｒ^５が、−ＣＨ_３または−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_３である、実施形態１〜４５のいずれか１つにおける化合物、または実施形態４６〜７７のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態７９．Ｒ^１２が、Ｈ、−ＣＨ_３、または−ＣＨ_２ＣＨ_３である、実施形態１〜４５および７８のいずれか１つにおける化合物、または実施形態４６〜７８のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態８０．Ｒ^２が、メチル、エチル、イソプロピル、またはｓｅｃ−ブチルである、実施形態１〜４５、７８、および７９のいずれか１つにおける化合物、または実施形態４６〜７９のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態８１．Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−

（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｘ_４−、−Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ^ａａＮＲ^１２−、−ＣＨＲ^ａａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｓ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ_１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＲ_１２−、

から選択され；
Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合、−（ＣＨ_２）_ｍ−、Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

からそれぞれ独立して選択され；
ここで
Ｒ^２０が、ＨまたはＭｅであり、Ｒ^３０が、Ｈ、−ＣＨ_３またはフェニルであり；
Ｒ^２１が、

であり；
各Ｒ^２５が、ＨまたはＣ_１〜４アルキルから独立して選択され；
Ｒ^ａａが、グリシン、アラニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、ヒスチジン、アルギニン、リシン、システイン、メチオニン、セリン、トレオニン、フェニルグリシン、およびｔ−ブチルグリシンから選択されるアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ^３２が、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキル、フェニル、ピリミジンおよびピリジンから独立して選択され；
Ｒ^３３が、

から独立して選択され；
Ｒ^３４が、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキル、およびＣ_１〜６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｘ_１が、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２が、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３が、

であり、Ｘ_４が、

である、実施形態３〜４５および７８〜８０のいずれか１つにおける化合物、ならびに実施形態４６〜８０のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態８２．Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

から選択され；
Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２が、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３が、

であり、Ｘ_４が、

実施形態８３．Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、

、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨ−、−ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ−、−ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｘ_４−、−Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ^ａａＮＨ−、−ＣＨＲ^ａａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＮＨＣ（＝Ｓ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（Ｃ

Ｈ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＨ−、

から選択され；
Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨ−、−ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ−、−ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｘ_４−、−Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ^ａａＮＨ−、−ＣＨＲ^ａａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＮＨＣ（＝Ｓ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３

（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＨ−、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２が、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３が、

であり、Ｘ_４が、

実施形態８４．Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合であり；
Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｘ_４−、−Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ
_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ^ａａＮＲ^１２−、−ＣＨＲ^ａａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、および−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＲ^１２−から選択され；
Ｘ_１が、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２が、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３が、

であり、Ｘ_４が、

実施形態８５．Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合であり；
Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨ−、−ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ−、−ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＨ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｘ_４−、−Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ^ａａＮＨ−、−ＣＨＲ^ａａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−および−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２

）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ− −ＮＨＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、および−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＨ−から選択され；
Ｘ_１が、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２が、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３が、

であり、Ｘ_４が、

実施形態８６．Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合であり；
Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣＨ_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、

、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ１Ｘ２（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎ（ＣＨ２）ｍＸ３（ＣＨ２）ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−および−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＨ−から選択され；
Ｘ_１が、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２が、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３が、

であり、Ｘ_４が、

である、実施形態３〜４５および７８〜８０のいずれか１つにおける化合物、ならびに実施形態４５〜８０のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態８７．Ｌ_２、Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合であり；
Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＣＨ_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−および−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−および−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＨ−から選択され；
Ｘ_１が、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２が、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３が、

であり、Ｘ_４が、

実施形態８８．Ｌ_１が−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−_、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、または−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ ^＊−であり（ここで、免疫抱合体の実施形態では、^＊はＲ^１０１への結合点を示し、化合物の実施形態では、^＊はＲ^１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、結合、

、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ−、または−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−であり（ここで、^＊は、Ｌ_１への結合点を示す）；
Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合である、実施形態３〜４５および７８〜８０のいずれか１つにおける化合物、ならびに実施形態４６〜６３および７８〜８０のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態８９．Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−_、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ ^＊−または−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ ^＊−であり（ここで、免疫抱合体の実施形態では、^＊はＲ^１０１への結合点を示し、化合物の実施形態では、^＊はＲ^１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、結合、

実施形態９０．Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、および−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−から選択され（ここで、免疫抱合体の実施形態では、^＊はＲ^１０１への結合点を示し、化合物の実施形態では、^＊はＲ^１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、

、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ−、または−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−であり（ここで、^＊は、Ｌ_１への結合点を示す）；
Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合である、実施形態３〜４５および７８〜８０のいずれか１つにおける化合物、ならびに実施形態４６〜６３および７８〜８０いずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態９１．Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−および−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−から選択され（ここで、免疫抱合体の実施形態では、^＊はＲ^１０１への結合点を示し、化合物の実施形態では、^＊はＲ^１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、

、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−ＮＨ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、または−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−であり（ここで、^＊は、Ｌ_１への結合点を示す）；
Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合である、実施形態３〜４５および７８〜８０のいずれか１つにおける化合物、ならびに実施形態４６〜６３および７８〜８０のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態９２．Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−および−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−から選択され（ここで、免疫抱合体の実施形態では、^＊はＲ^１０１への結合点を示し、化合物の実施形態では、^＊はＲ^１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、

であり（ここで、^＊は、Ｌ_１への結合点を示す）；
Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合である、実施形態３〜４５および７８〜８０のいずれか１つにおける化合物、ならびに実施形態４６〜６３および７８〜８０のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態９３．Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−および−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−から選択され（ここで、免疫抱合体の実施形態では、^＊はＲ^１０１への結合点を示し、化合物の実施形態では、^＊はＲ^１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、

実施形態９４．Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−および−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−から選択され（ここで、免疫抱合体の実施形態では、^＊はＲ^１０１への結合点を示し、化合物の実施形態では、^＊はＲ^１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、

実施形態９５．Ｌ_１が、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ）−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ）−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊ＮＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−および−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−から選択され（ここで、^＊はＲ^３への結合点を示す）；
Ｌ_２が、結合、

、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、

、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、または−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−であり（ここで、^＊はＬ_１への結合点を示す）；
Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合である、実施形態３〜２１、２７〜３１、３４、３６〜４０、４５、および７８〜８０のいずれか１つにおける化合物、ならびに実施形態６４〜８０いずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態９６．Ｌ_１が、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ）−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ）−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊ＮＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−および−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−から選択され（ここで、^＊はＲ^３への結合点を示す）；
Ｌ_２が、結合、

実施形態９７．Ｌ_１が、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−^＊ＮＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ）−、および−^＊Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ）−から選択され（ここで、^＊はＲ^３への結合点を示す）；
Ｌ_２が、

実施形態９８．Ｌ_１が、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、または−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−であり（ここで、^＊はＬ_１への結合点を示す）；
Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合である、実施形態３〜２１、２７〜３１、３４、３６〜４０、４５、および７８〜８０のいずれか１つにおける化合物、ならびに実施形態６４〜８０のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態９９．Ｌ_１が、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

であり（ここで、^＊はＬ_１への結合点を示す）；
Ｌ_３、Ｌ_４、Ｌ_５、およびＬ_６が、結合である、実施形態３〜２１、２７〜３１、３４、３６〜４０、４５、および７８〜８０のいずれか１つにおける化合物、ならびに実施形態６４〜８０のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態１００．Ｌ_１が、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

実施形態１０１．Ｌ_１が、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

実施形態１０２．Ｌ_１が、−^＊Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−^＊Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

実施形態１０３．

から選択される、実施形態１〜４５および７８〜１０２のいずれか１つにおける化合物。

実施形態１０４．実施形態４６〜１０２のいずれか１つにおける免疫抱合体と、１つ以上の薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

実施形態１０５．治療有効量の実施形態４６〜１０２のいずれか１つにおける免疫抱合体と、１つ以上の治療活性併用剤（therapeutically active co-agent）とを含む、組合せ。

実施形態１０６．細胞増殖性障害を治療する方法であって、治療有効量の実施形態４６〜１０２のいずれか１つにおける免疫抱合体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。

実施形態１０７．医薬として使用するための、実施形態４６〜１０２のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態１０８．医薬ががんの治療のために使用される、実施形態１０７の免疫抱合体。

実施形態１０９．がんの治療に使用するための、実施形態４６〜１０２のいずれか１つにおける免疫抱合体。

実施形態１１０．

から選択される式を有する、実施形態４６〜１０２の免疫抱合体。

実施形態１１１．実施形態１１０において、Ｘは、

であり、ここで、Ｒ^１０１、Ｒ^２およびＲ^３は、実施形態４６、４７、５４〜５９、および８０において定義されたとおりである。

実施形態１１２．実施形態１１１において、Ｘは、

であり、ここで、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、実施形態６５、６６、７３〜７８、および８１において定義されたとおりである。

実施形態１１３．実施形態１１２において、Ｘは、実施形態１または２におけるいずれか１つの種である。

実施形態１１４．実施形態４６〜１１３のいずれか１つにおいて、特に記載のない限り、Ａｂは、任意の抗原結合部分であることができ、好ましくは、がん細胞などの標的細胞に特徴的な本明細書に記載されているものなどの細胞表面マーカーを認識する、抗原または抗原フラグメントである。

実施形態１１５．実施形態４６〜１１３のいずれか１つにおいて、特に記載のない限り、Ａｂは、任意の抗原結合部分であり、典型的には、がん細胞などの、薬学的介入の標的になる細胞に特徴的な抗原を認識するものであり得る。多くの適切な抗原が、当技術分野において周知であり、特に興味深い特定のものが本明細書に記載されている。典型的には、Ａｂは、単離、もしくは構築され得、天然、もしくは修飾（改変）され得る抗体、または抗体に類似した抗原結合活性を保持する抗体フラグメントである。

実施形態１１６．上記の実施形態のいずれか１つにおいて、各ｍは、１、２、３、４、５、および６から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｍは、１、２、３、４、および５から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｍは、１、２、３、および４から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｍは、１、２、および３から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｍは、１および２から独立して選択される。

実施形態１１７．上記の実施形態のいずれか１つにおいて、各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、および１２から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、および１１から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、および９から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、および８から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１、２、３、４、５、６、および７から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１、２、３、４、５、および６から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１、２、３、４、および５から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１、２、３、および４から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１、２、および３から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは、１および２から独立して選択される。

実施形態１１８．実施形態４６〜１１４のいずれか１つにおいて、各ｙは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、および１２から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、および１１から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１、２、３、４、５、６、７、８、および９から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１、２、３、４、５、６、７、および８から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１、２、３、４、５、６、および７から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１、２、３、４、５、および６から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１、２、３、４、および５から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１、２、３、および４から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１、２、および３から独立して選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、各ｙは、１および２から独立して選択される。

実施形態１１９．Ｒ^３が、

であり、Ｒ^１９がＨである、実施形態３の化合物。

実施形態１２０．Ｒ^１が、

であり、Ｒ^２が、メチル、エチル、イソプロピル、またはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ^３が、

であり；
Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^９が、

であり；
Ｌが、Ｌ_１であり（ここで、Ｌ_１は、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、および−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−から選択される）；
各ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される、実施形態３〜６、１８〜２６、３２、３３、４５、および８１〜８７のいずれか１つにおける化合物。

実施形態１２１．Ｒ^１が、

であり、Ｒ^２が、メチル、エチル、イソプロピル、またはｓｅｃ−ブチルであり；
Ｌが、Ｌ_１であり（ここで、Ｌ_１は、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、および−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−から選択される）；
Ｒ^３が、

であり、Ｒ^４が、−ＯＨであり、Ｒ^９が、

であり、Ｘ_３が、

であり；
各ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から独立して選択される、実施形態３〜６、１８〜２６、３２、３３、４５、および８１〜８７のいずれか１つにおける化合物。

Claims

式（Ｉ）の構造を有する化合物もしくはその立体異性体、またはそれらの薬学的に許容
される塩：

［式中、
Ｒ^１は、

であり；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^４は、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−ＬＲ^９、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、−ＮＨ
Ｓ（Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮ_３、−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２ＬＲ^９、

であり；
Ｒ^５は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ
）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）
_ｎＲ^１２、または−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２もしくは１〜５個のヒドロキシルにより任
意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^８は、ＨまたはＬＲ^９であり；
各Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から独立して選択され、
（ここで、
Ｌ_１は、
−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、

−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＳ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、−（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＯ（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｘ_４−、
−Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ^ａａＮＲ^１２−、
−ＣＨＲ^ａａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、
−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、
−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｓ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ_１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＲ_１２−、

から選択される）；
Ｒ^２０は、ＨまたはＭｅであり、Ｒ^３０は、Ｈ、−ＣＨ_３またはフェニルであり；
Ｒ^２１は、

であり；
各Ｒ^２５は、ＨまたはＣ_１〜４アルキルから独立して選択され；
Ｒ^ａａは、グリシン、アラニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、ロイ
シン、イソロイシン、バリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン
酸、ヒスチジン、アルギニン、リシン、システイン、メチオニン、セリン、トレオニン、
フェニルグリシン、およびｔ−ブチルグリシンから選択されるアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ^３２は、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキル、フェニル、ピリミジンおよびピリジンから独立して
選択され；
Ｒ^３３は、

から独立して選択され；
Ｒ^３４は、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキル、およびＣ_１〜６ハロアルキルから独立して選択され
；
Ｘ_１は、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２は、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３は、

であり；
Ｘ_４は、

であり；
Ｌ_２は、結合およびＬ_１からそれぞれ独立して選択され；
Ｒ_９は、

−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

−ＳＨ、−ＳＳＲ^１５、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｒ^１０、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＯＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、

−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０は、

であり；
各Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、および１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換さ
れているＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、テトラゾリル、フェニルにより置換されているイミダゾリル、フェニルによ
り置換されているオキサジアゾリル、ピラゾリル、ピリミジニル、

、−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２、または−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨＬＲ^９であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５は、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員
〜８員ヘテロシクロアルキルであり、これは非置換であるか、または−ＬＲ^９により置換
されており；
各Ｒ^１９は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、および１８から独立して選択される］。
式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）：

の構造を有する化合物である、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^１が、

であり
Ｒ^４が、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（
ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、
または

である、請求項１または２に記載の化合物。
Ｒ^２が、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^８が、Ｈであり；
Ｒ^９が、

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、−ＳＨ、−ＳＳＲ^１５、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＯＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、

−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり；
Ｒ^１０が、

であり；
各Ｒ^１１が、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換さ
れているＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１２が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３が、テトラゾリル、

であり；
各Ｒ^１４が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１５が、２−ピリジルまたは４−ピリジルであり；
Ｒ^１６が、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含む非置換Ｎ連
結４員〜８員ヘテロシクロアルキルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合
物。
Ｒ^１が、

である、請求項１または２に記載の化合物。
Ｒ^２が、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^５が、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換されているＣ
_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）
_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、または−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１
^２であり；
Ｒ^８が、Ｌ_１Ｒ^９であり；
Ｒ^９が、

、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｎ_３、

、−ＳＨ、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｒ^１０、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｉ、−ＯＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、

、−ＣＯ_２Ｈ、−ＮＨ_２、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、

であり：
Ｒ^１０が、

であり；
各Ｒ^１１が、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、および１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換さ
れているＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１２が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３が、

であり；
各Ｒ^１４が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６が、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員
〜８員ヘテロシクロアルキルであり、これは−ＬＲ^９により置換されており；
各ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、および１８から独立して選択される、請求項１から２および５のいずれか
一項に記載の化合物。
Ｒ^４が、−Ｌ_１Ｒ^９、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｌ_１Ｒ^９、または

である、請求項１から２および５から６のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^１３が、

である、請求項１から２および６のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^９が、

、−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ＝ＣＨ_２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ
Ｈ_２Ｉ、−ＯＮＨ_２、Ｎ_３、

である、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
Ｌが−Ｌ_１−であり、−Ｌ_１−が、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、および
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−
から選択される、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^１が、

であり；
Ｒ^２が、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３が、

であり；
Ｒ^４が、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（
ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６、−ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^１１、

であり；
Ｒ^５が、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１１、−（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ
）（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＲ^１２、−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）
_ｎＲ^１２、または−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２もしくは１〜５個のヒドロキシルにより任
意に置換されているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^８が、Ｈであり；
各Ｒ^１１が、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、および１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換さ
れているＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ^１２が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３が、テトラゾリル、フェニルにより置換されているイミダゾリル、フェニルによ
り置換されているオキサジアゾリル、ピラゾリル、ピリミジニル、

または−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２であり；
各Ｒ^１４が、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６が、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含む非置換Ｎ連
結４員〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ^１９が、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、および１８から独立して選択される、請求項１または２に記載の化合物。
Ｒ^２が、メチル、エチル、イソプロピル、またはｓｅｃ−ブチルである、請求項１から
１１のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^１が、

であり；
Ｒ^２が、メチル、エチル、イソプロピル、またはｓｅｃ−ブチルであり；
Ｒ^３が、

であり；
Ｒ^４が、−ＯＨであり；
Ｒ^９が、

であり；
Ｌ_１は、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ
（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、および−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２
）_ｍ−から選択され；
各ｍが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、および１８から独立して選択される、請求項１または２に記載の化合物。
から選択される、請求項１に記載の化合物。
式（ＩＩ）の免疫抱合体：

［式中、
Ａｂは、抗原結合部分を表し；
Ｌは、−Ｌ_１Ｌ_２−、−Ｌ_２Ｌ_１−、および−Ｌ_１から選択され、
ここで、
Ｌ_１は、
−（ＣＨ_２）_ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、

−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、

−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＳ（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２Ｃ（Ｒ^１２）_２（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＣ（Ｒ^１２）_２ＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、
−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ^１２（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＮＲ^１２−、
−（Ｃ（Ｒ_１２）_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−、
−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｍＯ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−Ｘ_４Ｘ_１Ｘ_２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｘ_４−、
−Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_１−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ^ａａＮＲ^１２−、−ＣＨＲ^ａａＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、
−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^１２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、
−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、
−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＮＲ^１２Ｃ（＝Ｓ）−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−ＮＲ_１２Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ＮＲ_１２−、

から選択され；
Ｒ^２０は、ＨまたはＭｅであり、Ｒ^３０は、Ｈ、−ＣＨ_３またはフェニルであり；
Ｒ^２１は、

であり；
各Ｒ^２５は、ＨまたはＣ_１〜４アルキルから独立して選択され；
Ｒ^ａａは、グリシン、アラニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、ロイ
シン、イソロイシン、バリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン
酸、ヒスチジン、アルギニン、リシン、システイン、メチオニン、セリン、トレオニン、
フェニルグリシン、およびｔ−ブチルグリシンから選択されるアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ^３２は、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキル、フェニル、ピリミジンおよびピリジンから独立して
選択され；
Ｒ^３３は、

から独立して選択され；
Ｒ^３４は、Ｈ、Ｃ_１〜４アルキル、およびＣ_１〜６ハロアルキルから独立して選択され
；
Ｘ_１は、

から選択される自壊的スペーサーであり；
Ｘ_２は、

から選択されるジペプチドであり；
Ｘ_３は、

であり；
Ｘ_４は、

であり；
Ｌ_２は、結合およびＬ_１から選択され；
ｙは、１〜１６の整数であり；
Ｒ^１０１は、

であり（ここで、

は、

基にＣ連結し、かつＬ_１にＮ連結している、）；
Ｒ^２は、−Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^３は、

であり；
Ｒ^４は、−ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、−Ｎ（Ｒ^１４）_２、−Ｒ^１６、−ＮＲ^１２（
ＣＨ_２）_ｍＮ（Ｒ^１４）_２、もしくは−ＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＲ^１６、−ＮＨＳ（Ｏ）_２
Ｒ^１１、または

であり；
Ｒ^１１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または１〜５個のヒドロキシルにより任意に置換され
ているＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各Ｒ^１２は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１３は、テトラゾリル、フェニルにより置換されているイミダゾリル、フェニルによ
り置換されているオキサジアゾリル、ピラゾリル、ピリミジニル、

または−ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２であり；
各Ｒ^１４は、ＨおよびＣ_１〜Ｃ_６アルキルから独立して選択され；
Ｒ^１６は、ＮおよびＯから独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含むＮ連結４員
〜８員ヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ^１９は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から独立して選択され；
各ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、および１８から独立して選択される］。
式（ＩＩ）の免疫抱合体が、式（ＩＩｂ）または式（ＩＩｃ）：

の免疫抱合体である、請求項１５に記載の免疫抱合体。
Ｒ^３が、

であり、Ｒ^１９がＨである、請求項１５または１６に記載の免疫抱合体。
Ｒ^４が、−ＯＨ、またはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシである、請求項１５から１７のいずれか
一項に記載の免疫抱合体。
Ｒ^１３が、テトラゾリル、

である、請求項１５から１８のいずれか一項に記載の免疫抱合体。
Ｒ^２が、メチル、エチル、イソプロピル、またはｓｅｃ−ブチルである、請求項１５か
ら１９のいずれか一項に記載の免疫抱合体。
Ｌ_１が、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＳ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−_、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＸ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（（ＣＨ_２）_ｍＯ）_ｎ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ ^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ ^＊−、
−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、または
−（ＣＨ_２）_ｍＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｍＳ（＝Ｏ）_２ ^＊−
であり（ここで、^＊は、Ｒ^１０１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、結合、

、−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ
_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）
_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ−、または
−ＮＨＳ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−である（ここで、^＊は、Ｌ_１への結合点を示す）；
請求項１５から２０のいずれか一項に記載の免疫抱合体。
Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）
^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ
）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝
Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（
ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ
Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、および−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）
^＊−からなる群より選択され（ここで、^＊は、Ｒ^１０１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、

−Ｓ−、−ＳＣＨ_２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２
Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２
−、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−、−ＳＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ−、および−
ＮＨＳ（＝Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ−からなる群より選択される（ここで、^＊は、Ｌ_１への
結合点を示す）；
請求項１５から２１のいずれか一項に記載の免疫抱合体。
Ｌ_１が、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（Ｃ
Ｈ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ
_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍ−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｘ_２Ｘ_１Ｃ（＝
Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍＸ_３（
ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎＣ（＝Ｏ）^＊−、−（ＣＨ_２）_ｍ（Ｏ（ＣＨ_２）_ｍ）_ｎ
Ｓ（＝Ｏ）_２（ＣＨ_２）_ｍ ^＊−、および−（ＣＨ_２）_ｍＮＲ^１２（ＣＨ_２）_ｍＣ（＝Ｏ）
^＊−からなる群より選択され（ここで、^＊は、Ｒ^１０１への結合点を示す）；
Ｌ_２が、

である（ここで、^＊は、Ｌ_１への結合点を示す）；
請求項１５から２２のいずれか一項に記載の免疫抱合体。
請求項１５から２３のいずれか一項に記載の免疫抱合体と、１つ以上の薬学的に許容さ
れる担体とを含む、医薬組成物。
治療有効量の請求項１５から２３のいずれか一項に記載の免疫抱合体と、１つ以上の治
療活性併用剤とを含む、組合せ物。