JP6200414B2 - ｐＡＶＥＣ - Google Patents
ｐＡＶＥＣ Download PDFInfo
- Publication number
- JP6200414B2 JP6200414B2 JP2014503706A JP2014503706A JP6200414B2 JP 6200414 B2 JP6200414 B2 JP 6200414B2 JP 2014503706 A JP2014503706 A JP 2014503706A JP 2014503706 A JP2014503706 A JP 2014503706A JP 6200414 B2 JP6200414 B2 JP 6200414B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plasmid
- cells
- antigen
- host cell
- polynucleotide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 88
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 69
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 49
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 49
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 49
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 34
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 27
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 27
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 19
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 17
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 10
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 229960005027 natalizumab Drugs 0.000 claims description 6
- 229960000470 omalizumab Drugs 0.000 claims description 6
- 229960000402 palivizumab Drugs 0.000 claims description 6
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 claims description 6
- 229960003876 ranibizumab Drugs 0.000 claims description 6
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 claims description 6
- 229960005267 tositumomab Drugs 0.000 claims description 5
- 229960000446 abciximab Drugs 0.000 claims description 4
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 claims description 4
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 claims description 4
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 claims description 4
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 3
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims description 3
- 102000007665 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Human genes 0.000 claims description 3
- 108010007457 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Proteins 0.000 claims description 3
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 claims description 3
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001098868 Homo sapiens Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000654356 Homo sapiens Sodium channel protein type 10 subunit alpha Proteins 0.000 claims description 3
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 claims description 3
- 101000610605 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A Proteins 0.000 claims description 3
- 101000610604 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Proteins 0.000 claims description 3
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 108010076561 Interleukin-23 Subunit p19 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100036672 Interleukin-23 receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 102100036705 Interleukin-23 subunit alpha Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 3
- 102000004232 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinases Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000744 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinases Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 3
- 102100038955 Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 claims description 3
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 claims description 3
- 102100031374 Sodium channel protein type 10 subunit alpha Human genes 0.000 claims description 3
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims description 3
- 102100040113 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A Human genes 0.000 claims description 3
- 102100040112 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Human genes 0.000 claims description 3
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 3
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 229960004669 basiliximab Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 claims description 3
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 claims description 3
- 229960001251 denosumab Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002224 eculizumab Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000284 efalizumab Drugs 0.000 claims description 3
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 108040006858 interleukin-6 receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 3
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 claims description 2
- 101000853012 Homo sapiens Interleukin-23 receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 101000654386 Homo sapiens Sodium channel protein type 9 subunit alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 101000845170 Homo sapiens Thymic stromal lymphopoietin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 2
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100031367 Sodium channel protein type 9 subunit alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 102100031294 Thymic stromal lymphopoietin Human genes 0.000 claims description 2
- 229960002806 daclizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229950001808 robatumumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960000578 gemtuzumab Drugs 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 39
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 15
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 101000823116 Homo sapiens Alpha-1-antitrypsin Proteins 0.000 description 4
- -1 N v1.7 Proteins 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 102000051631 human SERPINA1 Human genes 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 3
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 3
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 3
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 2
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 2
- 102100032859 Protein AMBP Human genes 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 108091008394 cellulose binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 229960002482 dalotuzumab Drugs 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 108010079892 phosphoglycerol kinase Proteins 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- MRXDGVXSWIXTQL-HYHFHBMOSA-N (2s)-2-[[(1s)-1-(2-amino-1,4,5,6-tetrahydropyrimidin-6-yl)-2-[[(2s)-4-methyl-1-oxo-1-[[(2s)-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]pentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]carbamoylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](NC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C=O)C1NC(N)=NCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MRXDGVXSWIXTQL-HYHFHBMOSA-N 0.000 description 1
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRDABNWSWOHGMS-UHFFFAOYSA-N AEBSF hydrochloride Chemical compound Cl.NCCC1=CC=C(S(F)(=O)=O)C=C1 WRDABNWSWOHGMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000714235 Avian retrovirus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001227615 Bovine foamy virus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- OLVPQBGMUGIKIW-UHFFFAOYSA-N Chymostatin Natural products C=1C=CC=CC=1CC(C=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(C1NC(N)=NCC1)NC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OLVPQBGMUGIKIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007755 F10 Nutrient Mixture Substances 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150038242 GAL10 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 description 1
- 102100024637 Galectin-10 Human genes 0.000 description 1
- 102100039556 Galectin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- 101500025164 Homo sapiens Alpha-1-microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 description 1
- 101000608765 Homo sapiens Galectin-4 Proteins 0.000 description 1
- 101500025163 Homo sapiens Inter-alpha-trypsin inhibitor light chain Proteins 0.000 description 1
- 101000797623 Homo sapiens Protein AMBP Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000713862 Moloney murine sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101710149086 Nuclease S1 Proteins 0.000 description 1
- 241001465803 Orgyia pseudotsugata Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000010310 bacterial transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 229960003115 certolizumab pegol Drugs 0.000 description 1
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 1
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011098 chromatofocusing Methods 0.000 description 1
- 108010086192 chymostatin Proteins 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 108040001844 interleukin-23 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 208000024191 minimally invasive lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 238000009428 plumbing Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
Landscapes
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本出願は、２０１１年４月８日付け出願の米国仮特許出願第６１／４７３，４３１号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）の利益を主張するものである。
発明の分野
本発明の分野は、例えば、関心のあるポリペプチドを発現させるために使用されうるプラスミドに関する。
本発明の分野は、例えば、関心のあるポリペプチドを発現させるために使用されうるプラスミドに関する。
治療用タンパク質の商業的製造のための細胞培養は、高い経費を要する方法である。必要な設備は高くつき、研究開発および製造のコストは高い。細胞培養１リットル当たりに製造される治療用タンパク質の量を最大にする細胞培養方法の開発は、与えられた量の該タンパク質を製造するのに必要な資源を最小にするであろう。したがって、大量のタンパク質を製造する商業的に実施可能な試薬を使用することが望ましい。
天然に存在する多数の細胞は標準的な培養条件下で所望のタンパク質を大量には産生しない。したがって、培養内の細胞に大量の治療用タンパク質を産生させる細胞培養方法の広範な研究開発が行われる必要がある。典型的には、タンパク質を高レベルで発現させるのに有用なプラスミドベクターの特定は相当な創作力を要する。
本発明は、一部には、例えば配列番号２のヌクレオチド配列を含む、以下の制限部位を含むマルチクローニングサイトを含む線状または環状の単離されたｐＡＶＥＣプラスミドを提供する。
本発明は更に、ｐＡＶＥＣプラスミドを切断し、該切断プラスミドの末端を導入ポリヌクレオチド［例えば、免疫グロブリン、例えば、アブシキシマブ（Ａｂｃｉｘｉｍａｂ）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、バシリキシマブ（Ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、セルトリズマブ・ペゴール（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ）、ダロツズマブ（Ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）（ＭＫ０６４６）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、デノスマブ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、エクリズマブ（Ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）、エファリズマブ（Ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ ｔｉｕｘｅｔａｎ）、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、ムロモナブ（Ｍｕｒｏｍｏｎａｂ）−ＣＤ３、ナタリズマブ（Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）、オマリズマブ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）、パリビズマブ（Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ラニビズマブ（Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ロバツムマブ（Ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）ＡＬＤ５１８およびトラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、あるいは抗体またはその抗原結合性フラグメント（ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＴＮＦアルファ、ＴＧＦベータ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、ＥＲＫ、ＭＥＫ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ−２３ｐ１９、ＩＬ−２３Ｒ、ＰＣＳＫ９、ＣＤ２０、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫ、ＣＤ３３、ＣＤ１１ａ、ＥｒｂＢ２、ＩｇＥ、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、ＨＩＶ抗原、ＨＣＶ抗原および呼吸器性シンシチウムウイルス（ＲＳＶ）抗原からなる群から選択される抗原に特異的に結合するもの）の重鎖もしくは軽鎖である免疫グロブリン鎖をコードするもの］の適合性末端に連結して、閉環状プラスミドを得ることを含む、組換えプラスミドの製造方法を含み、この場合、例えば、該導入ポリヌクレオチドは、該プラスミド内のプロモーター、例えばｈＣＭＶプロモーターに機能的に連結されている。そのような方法により製造されるいずれの組換えプラスミドも本発明の一部を構成する。
本発明は更に、本発明のｐＡＶＥＣプラスミドのいずれかを含む単離された宿主細胞を含む単離された宿主細胞（例えば、細菌細胞、または哺乳類細胞、例えばＣＨＯ細胞）を含む。
本発明はまた、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む本発明のいずれかの組換えｐＡＶＥＣプラスミドベクターを、該ポリペプチドの発現を可能にする条件下、宿主細胞内に導入し、所望により該ポリペプチドを精製することを含む、単離された宿主細胞における組換えポリペプチドの製造方法を提供し、この場合、例えば、該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、該プラスミド内のプロモーター、例えばｈＣＭＶプロモーターに機能的に連結されている。
更に、本発明は、本発明のｐＡＶＥＣプラスミドベクターと１以上の追加的成分とを含むキットを含む。
本発明は、いずれかの細胞、例えば哺乳類細胞、細菌細胞、酵母細胞または昆虫細胞における組換えタンパク質発現に有用な発現ベクターを提供する。該ベクターは、広範な組換えタンパク質を一過性または安定に発現させるために使用されうる。該ベクターのマルチクローニングサイトは、種々の発現カセットを収容するための多数の一般的または稀有な制限部位を提供する。
ｐＡＶＥＣプラスミドは、図１に記載されているプラスミド地図により特徴づけられる、および／または配列番号１のヌクレオチド配列を含む若しくはそれからなるプラスミドである。該用語はまた、ｐＡＶＥＣプラスミドを切断し、該切断プラスミドの末端を導入ポリヌクレオチドの適合性末端に連結して、該導入ポリヌクレオチドを含む閉環状プラスミドを得ることを含む製造方法により製造される組換えプラスミドを含む。
分子生物学
本発明においては、当技術分野の技量の範囲内の通常の分子生物学、微生物学および組換えＤＮＡ技術が用いられうる。そのような技術は文献中に十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ＆ Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（本明細書中では「Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９」）；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ ＩおよびＩｌ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編，１９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＭＪ．Ｇａｉｔら，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ ＳＪ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８５））；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ ＳＪ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編，（１９８４））；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編，（１９８６））；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６））；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら，（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４）を参照されたい。
本発明においては、当技術分野の技量の範囲内の通常の分子生物学、微生物学および組換えＤＮＡ技術が用いられうる。そのような技術は文献中に十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ＆ Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（本明細書中では「Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９」）；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ ＩおよびＩｌ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編，１９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（ＭＪ．Ｇａｉｔら，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ ＳＪ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８５））；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ ＳＪ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編，（１９８４））；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編，（１９８６））；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６））；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら，（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４）を参照されたい。
「ポリヌクレオチド」、「核酸」または「核酸分子」はＤＮＡおよびＲＮＡを含む。例えば、本発明の１つの実施形態においては、ポリヌクレオチドは環状プラスミドｐＡＶＥＣである。
「ポリヌクレオチド配列」、「核酸配列」または「ヌクレオチド配列」は核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）における一連のヌクレオチドであり、２以上のヌクレオチドの鎖のいずれかを意味する。
発現産物、例えばＲＮＡまたはペプチド（例えば、免疫グロブリン鎖）を「コード」する配列または「コード配列」は、発現されると該産物の産生をもたらすヌクレオチド配列である。
本明細書中で用いる「オリゴヌクレオチド」なる語は、遺伝子、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは関心のある他の核酸をコードするゲノムＤＮＡ分子、ｃＤＮＡ分子またはｍＲＮＡ分子にハイブリダイズ可能でありうる、一般には３００ヌクレオチド以下（例えば、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１５０、１７５、２００、２５０または３００ヌクレオチド）の核酸を意味する。オリゴヌクレオチドは、通常、一本鎖であるが、二本鎖であることも可能である。オリゴヌクレオチドは、例えば、３２Ｐ−ヌクレオチド、３Ｈ−ヌクレオチド、１４Ｃ−ヌクレオチド、３５Ｓ−ヌクレオチドの取り込みにより、または例えばビオチンのような標識が共有結合したヌクレオチドの取り込みにより、標識されうる。１つの実施形態においては、標識されたオリゴヌクレオチドは、核酸の存在を検出するためのプローブとして使用されうる。もう１つの実施形態においては、オリゴヌクレオチド（そのうちの一方または両方が標識されうる）は、遺伝子の完全長または断片をクローニングするための又は核酸の存在を検出するためのＰＣＲプライマーとして使用されうる。一般に、オリゴヌクレオチドは、例えば核酸合成装置により、合成的に製造される。
「タンパク質配列」、「ペプチド配列」もしくは「ポリペプチド配列」または「アミノ酸配列」はタンパク質、ペプチドまたはポリペプチドにおける一連の２以上のアミノ酸を意味する。
「タンパク質」、「ペプチド」または「ポリペプチド」は２以上のアミノ酸の連続鎖を含む。
「単離されたポリヌクレオチド」または「単離されたポリペプチド」なる語は、細胞において若しくは組換えＤＮＡ発現系において通常見出される他の成分またはいずれかの他の混入物から部分的または完全に分離された、それぞれ、ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡもしくはＤＮＡ分子または混合重合体）またはポリペプチドを含む。これらの成分には、細胞膜、細胞壁、リボソーム、ポリメラーゼ、血清成分および外来性ゲノム配列が含まれるが、これらに限定されるものではない。
単離されたポリヌクレオチド（例えば、ｐＡＶＥＣ）またはポリペプチドは、好ましくは、実質的に均一な分子組成物であるが、ある程度の不均一性を伴いうる。
「宿主細胞」なる語は、該細胞による物質の産生、例えば、該細胞による遺伝子、ポリヌクレオチド、例えば環状プラスミド（例えば、ｐＡＶＥＣ）またはＲＮＡまたはタンパク質の発現または複製のために任意の様態で選択され、修飾され、トランスフェクトされ、形質転換され、成長され又は使用され若しくは操作される任意の生物の任意の細胞を含む。例えば、宿主細胞は、ｐＡＶＥＣプラスミドを維持しうる、そして本発明の１つの実施形態においては、該プラスミドにおけるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、例えば免疫グロブリン鎖の発現を促進しうる、哺乳類細胞または細菌細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））、あるいはいずれかの単離された細胞でありうる。哺乳類宿主細胞の例には、限定的なものではないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＨＯ−Ｋ１細胞、ＣＨＯ−ＤＸＢ−１１細胞、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞、ウシ乳房上皮細胞、マウスＳｅｒｔｏｌｉ細胞、イヌ腎細胞、バッファローラット肝細胞、ヒト肺細胞、マウス乳癌細胞、ラット繊維芽細胞、ウシ腎（ＭＤＢＫ）細胞、ＮＳＯ細胞、ＳＰ２細胞、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞、ＮＩＨ−３Ｔ３細胞、ＨｅＬａ細胞、乳児ハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、アフリカミドリザル腎（ＣＯＳ）細胞、ヒト肝細胞癌（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）細胞、Ａ５４９細胞などが含まれる。１つの実施形態においては、哺乳類宿主細胞はヒト宿主細胞である。哺乳類宿主細胞は、当技術分野で公知の方法により培養されうる（例えば、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ５６：２２１（１９８３），Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ２ｎｄ Ｅｄ．，Ｒｉｃｋｗｏｏｄ，Ｄ．およびＨａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．編，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９２）を参照されたい）。適当な大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の例には、ＤＨ１、ＤＨ５、ＤＨ５アルファ、ＸＬ１−Ｂｌｕｅ、ＳＵＲＥ、ＳＣＳ１１０、ＯｎｅＳｈｏｔ Ｔｏｐ １０およびＨＢ１０１が含まれる。本発明のもう１つの実施形態においては、本発明のｐＡＶＥＣプラスミドは宿主細胞内で異所的に維持され、および／または宿主細胞の染色体ＤＮＡ内に組込まれる。そのような宿主細胞およびその使用方法（例えば、本明細書に記載されているもの）は本発明の一部を構成する。
本発明のベクター、例えばｐＶＥＣは、当技術分野で公知の多数の技術のいずれかにより、例えばデキストラン媒介トランスフェクション、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム共沈、リポフェクション、核内への該ベクターの直接マイクロインジェクション、または与えられた宿主細胞型に適したいずれかの他の手段により、宿主細胞内に導入されうる。
「カセット」または「発現カセット」は、例えば一定の制限部位において、ベクター内に挿入されうる、発現産物（例えば、ペプチドまたはＲＮＡ）をコードするＤＮＡコード配列またはＤＮＡセグメントを意味する。発現カセットは、ＤＮＡコード配列に機能的に連結されたプロモーターおよび／またはターミネーターおよび／またはポリＡシグナルを含みうる。
一般に、「プロモーター」または「プロモーター配列」は、細胞内で（例えば、直接的に又は他のプロモーター結合タンパク質もしくは物質を介して）ＲＮＡポリメラーゼに結合しコード配列の転写を開始させうるＤＮＡ調節領域である。プロモーター配列は、一般に、その３’末端において、転写開始部位に結合しており、いずれかのレベルで転写を開始させるのに必要な最少数の塩基または要素を含むよう上流（５’方向）に伸長している。該プロモーター配列内には、転写開始部位（簡便には、例えば、ヌクレアーゼＳ１でのマッピングにより定められる）、およびＲＮＡポリメラーゼの結合をもたらすタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が存在しうる。プロモーターは、エンハンサーおよびリプレッサー配列を含む他の発現制御配列に、または発現されるべき核酸に機能的に結合または機能的に連結されていることが可能である。発現制御配列がプロモーターに機能的に結合または機能的に連結されていると言えるのは、それが該プロモーターからの発現を調節する場合である。
遺伝子発現を制御するために使用されうるプロモーターには以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：ＳＲαプロモーター（Ｔａｋｅｂｅら，Ｍｏｌｅｃ．ａｎｄ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．８：４６６−４７２（１９８８））、ヒトＣＭＶ最初期プロモーター（Ｂｏｓｈａｒｔら，Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５）；Ｆｏｅｃｋｉｎｇら，Ｇｅｎｅ ４５：１０１−１０５（１９８６））、マウスＣＭＶ最初期プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｎｏｉｓｔら，Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３０４−３１０（１９８１））、オルギア・シュードツガタ（Ｏｒｇｙｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｔａ）最初期プロモーター、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１４４１−１４４５（１９８１））、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９−４２（１９８２））；原核生物発現ベクター、例えばβ−ラクタマーゼプロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋｏｍａｒｏｆｆら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７−３７３１（１９７８））またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２１−２５（１９８３））；ならびに酵母または他の真菌由来のプロモーター、例えばＧＡＬ１、ＧＡＬ４またはＧＡＬ１０プロモーター、ＡＤＨ（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーターまたはアルカリホスファターゼプロモーター。
ウイルス長末端反復プロモーター、例えばマウス乳癌ウイルス長末端反復（ＭＭＴＶ−ＬＴＲ）（Ｆａｓｅｌら，ＥＭＢＯ Ｊ．１（１）：３−７（１９８２））、モロニーマウス肉腫ウイルス長末端反復（Ｒｅｄｄｙら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７（９）：５２３４−５２３８（１９８０））、モロニーマウス白血病ウイルス長末端反復（Ｖａｎ Ｂｅｖｅｒｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７（６）：３３０７−３３１１（１９８０））、ＨＩＶ ＬＴＲ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢ１００２４５）、ウシフォーミーウイルスＬＴＲ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＣ ００１８３１）、ＲＳＶ ５’−ＬＴＲ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｋ０００８７）、ＨＩＶ−２ ＬＴＲ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＣ ００１７２２）、トリレトロウイルスＬＴＲ（Ｊｕら，Ｃｅｌｌ ２２：３７９−３８６（１９８０））およびヒトヘルペスウイルスＬＴＲ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＣ ００１８０６）が本発明のベクターに含まれうる。
他の許容されるプロモーターには、ヒトＣＭＶ５プロモーター、マウスＣＭＶプロモーター、ＥＦ１αプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、肝特異的発現のためのハイブリッドＣＭＶプロモーター（例えば、ＣＭＶ最初期プロモーターをヒトα１−アンチトリプシン（ＨＡＴ）もしくはアルブミン（ＨＡＬ）プロモーターの転写プロモーター要素に結合させることにより製造される）、または肝癌特異的発現のためのプロモーター（例えば、この場合、ヒトアルブミン（ＨＡＬ；約１０００ｂｐ）またはヒトα１アンチトリプシン（ＨＡＴ、約２０００ｂｐ）の転写プロモーター要素がヒトα１−ミクログロブリンおよびビクニン前駆体遺伝子（ＡＭＢＰ）の１４５ｂｐ長のエンハンサー要素と組合される；ＨＡＬ−ＡＭＢＰおよびＨＡＴ−ＡＭＢＰ）が含まれる。
また、細菌プロモーター、例えばＴ７ ＲＮＡポリメラーゼプロモーターまたはｔａｃプロモーターが、発現の制御のために使用されうる。
１つの実施形態においては、プロモーターはヒトＣＭＶ（ｈＣＭＶ）プロモーターである。ｈＣＭＶプロモーターは種々の哺乳類細胞型において高レベルの発現をもたらす。
コード配列が細胞内の転写または翻訳制御配列「の制御下にある」、「に機能的に結合されている」または「に機能的に連結されている」と言えるのは、該配列が該配列の発現を導き又は調節する場合である。例えば、遺伝子に機能的に連結されているプロモーターは、ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡへの該コード配列のＲＮＡポリメラーゼ媒介性転写を導き、ついで該ＲＮＡは（それがイントロンを含有する場合には）スプライシングされることが可能であり、所望により、該コード配列によりコードされるタンパク質へと翻訳されうる。遺伝子に機能的に連結されたターミネーター／ポリＡシグナルはＲＮＡへの遺伝子の転写を終結させ、ＲＮＡ上へのポリＡシグナルの付加を導く。
「発現する」および「発現」なる語は、遺伝子、ＲＮＡまたはＤＮＡ配列内の情報が現れることを可能にする又はもたらすことを意味し、例えば、対応遺伝子の転写および翻訳に関与する細胞機能を活性化することによりタンパク質を産生させることを意味する。「発現する」および「発現」は、ＤＮＡからＲＮＡへの、およびＲＮＡからタンパク質への転写を含む。ＤＮＡ配列は細胞内で又は細胞により発現されて、「発現産物」、例えばＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）またはタンパク質を生成しうる。また、該発現産物自体が該細胞により「発現される」と言われることが可能である。
「形質転換」なる語は細胞内への核酸の導入を意味する。導入された遺伝子または配列は「クローン」と称されうる。該導入ＤＮＡまたはＲＮＡの受容宿主細胞は「形質転換」されており、「形質転換体」または「クローン」である。宿主細胞に導入されるＤＮＡまたはＲＮＡは、宿主細胞と同じ属もしくは種の細胞または異なる属もしくは種の細胞を含む任意の起源に由来することが可能である。当技術分野で非常によく知られている形質転換方法の例には、リポソーム運搬、エレクトロポレーション、ＣａＰＯ４形質転換、ＤＥＡＥ−デキストラン形質転換、マイクロインジェクションおよびウイルス感染が含まれる。
本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターを含む。「ベクター」なる語は、宿主を形質転換し、所望により導入配列の発現および／または複製を促進するための、宿主細胞内へのＤＮＡまたはＲＮＡ配列の導入をもたらしうるビヒクル（例えば、プラスミド）を意味する。
本発明のポリヌクレオチドは発現系において発現されうる。「発現系」なる語は、ベクターにより運ばれ宿主細胞に導入されたタンパク質または核酸を適当な条件下で発現しうる宿主細胞および和合性ベクターを意味する。一般的な発現系には、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）宿主細胞およびプラスミドベクター、昆虫宿主細胞およびバキュロウイルスベクター、ならびに哺乳類宿主細胞およびベクター、例えばプラスミド、コスミド、ＢＡＣ、ＹＡＣ、およびウイルス、例えばアデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）が含まれる。
ベクター
本発明は、以下のマルチクローニングサイト：ＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩ、ＰａｅＲ７Ｉ、Ｂｓｐ１２０Ｉ、ＡｐａＩ、ＢｓｔＺ１７Ｉ、Ｂｓｔ１１０７Ｉ、ＰｓｔＩ、ＢａｍＨＩを含むプラスミドを提供し、これは、例えば、図１に示されているとおり、これらの制限部位間の相対的配置を含み、例えば、該マルチクローニングサイトの重複制限部位は以下のとおりに特徴づけられる。
本発明は、以下のマルチクローニングサイト：ＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩ、ＰａｅＲ７Ｉ、Ｂｓｐ１２０Ｉ、ＡｐａＩ、ＢｓｔＺ１７Ｉ、Ｂｓｔ１１０７Ｉ、ＰｓｔＩ、ＢａｍＨＩを含むプラスミドを提供し、これは、例えば、図１に示されているとおり、これらの制限部位間の相対的配置を含み、例えば、該マルチクローニングサイトの重複制限部位は以下のとおりに特徴づけられる。
本発明の１つの実施形態においては、該プラスミドは、以下のヌクレオチド配列を含むｐＡＶＥＣである。
幾つかの遺伝子のいずれか（例えば、免疫グロブリン）が本発明のプラスミド内に挿入されうる。以下の標的免疫グロブリンアミノ酸配列のいずれかをコードする本発明のプラスミドは本発明の一部を構成する。本発明は、ポリヌクレオチドまたは遺伝子（例えば、免疫グロブリンをコードするもの）をｐＡＶＥＣ内に挿入するための、該過程において或るｐＡＶＥＣポリヌクレオチド配列の喪失（例えば、ベクター内への導入遺伝子の連結に適合性である制限酵素切断部位を生成するマルチクローニングサイトの一部の切り出しによるもの）を招くいずれかの方法の産物を含む。そのような方法の産物は、本明細書においては、特定の遺伝子またはポリヌクレオチドを含むｐＡＶＥＣベクターと称されうる。
本発明の範囲は、ｐＡＶＥＣプラスミド内にポリヌクレオチドを導入するための方法を含み、該方法は、該プラスミドを、例えばプラスミドマルチクローニングサイトにおいて、例えば１以上の制限エンドヌクレアーゼで切断し、該切断プラスミドの末端を、例えばＤＮＡリガーゼで、該導入ポリヌクレオチドの適合性末端に連結して、閉じた組換えプラスミドを得ることを含む。そのような方法の産物であるいずれの組換えプラスミドも本発明の一部である。ポリヌクレオチドの適合性末端は、ＤＮＡリガーゼにより連結されうる末端である。本発明の１つの実施形態においては、該末端は平滑または粘着末端（例えば、ＥｃｏＲ１またはＢａｍＨ１のような制限エンドヌクレアーゼによる切断により生じるもの）である。
本発明の１つの実施形態においては、免疫グロブリンは、以下のポリペプチドのいずれか（例えば、可変領域のみ、または可変ドメインおよび定常ドメイン）の成熟または未プロセシング形態である。
本発明の実施形態は、該プラスミドが２以上の免疫グロブリンを含む実施形態、例えば、該プラスミドが、本明細書に記載されている免疫グロブリンのいずれかの組合せ（例えば、重鎖Ｉｇ＃１．０および軽鎖Ｉｇ＃１．０；またはＬＣＣおよびＨＣＡ；またはＬＣＦおよびＨＣＡ；またはＬＣＣおよびＨＣＢ）を含む実施形態を含む。
本発明の実施形態においては、ｐＡＶＥＣプラスミドは、アミノ酸配列：
本発明の１つの実施形態においては、ｐＡＶＥＣベクターは、例えばアブシキシマブ（Ａｂｃｉｘｉｍａｂ）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、バシリキシマブ（Ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、セルトリズマブ・ペゴール（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ）、ダロツズマブ（Ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、デノスマブ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、エクリズマブ（Ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）、エファリズマブ（Ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ ｔｉｕｘｅｔａｎ）、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、ムロモナブ（Ｍｕｒｏｍｏｎａｂ）−ＣＤ３、ナタリズマブ（Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）、オマリズマブ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）、パリビズマブ（Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ラニビズマブ（Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ロバツムマブ（Ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、ＡＬＤ５１８またはトラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）のような抗体の軽および／または重免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。そのような抗体の配列は当技術分野で公知である。本発明の実施形態においては、ｐＡＶＥＣベクターは、抗原（例えば、いずれかの哺乳動物、例えばヒトまたはイヌまたはサルまたはラットまたはウサギまたはマウスに由来するもの）、例えば、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＰＤ−１、ＴＮＦアルファ、ＴＧＦベータ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＳＬＰ、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、ＥＲＫ、ＭＥＫ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ−２３ｐ１９、ＩＬ２３Ｒ、ＰＣＳＫ９、ＣＤ２０、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫ、ＣＤ３３、ＣＤ１１ａ、ＥｒｂＢ２、ＩｇＥ、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、ＨＩＶ抗原、ＨＣＶ抗原および呼吸器性シンシチウムウイルス（ＲＳＶ）抗原のような抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントの重鎖および／または軽鎖免疫グロブリン；あるいはその抗原結合性フラグメント、またはそのような抗体もしくは抗原結合性フラグメントのいずれかの可変ドメイン、またはそのような抗体もしくは抗原結合性フラグメントのいずれかの軽鎖および／もしくは重鎖のＣＤＲの１以上（例えば３個）を含む軽鎖および／もしくは重鎖免疫グロブリンを含む。本発明の１つの実施形態においては、該抗原が由来する種は軽鎖および／もしくは重鎖定常ドメインならびに／または免疫グロブリンフレームワークのものと同じ又は異なる。
本発明の実施形態においては、ｐＡＶＥＣベクターは、以下のものからなる群から選択されるメンバーを含む軽鎖および／または重鎖免疫グロブリンを含む：
本発明のもう１つの態様は、ｐＡＶＥＣを使用する組換えタンパク質の製造方法および／または特定のポリヌクレオチドの増幅方法に関する。例えば、本発明の実施形態においては、タンパク質の発現方法は、（例えば、ｐＡＶＥＣのｈＣＭＶプロモーターのようなプロモーターに機能的に連結された）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを有するｐＡＶＥＣプラスミドを含む宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）を、該プラスミドを含む宿主細胞の増殖および該組換えタンパク質の発現を可能にする適当な条件下で培養することを含む。例えば、該方法は以下の工程を含む。
ａ）関心のあるポリペプチド（例えば、免疫グロブリン鎖）をコードするポリヌクレオチドをｐＡＶＥＣプラスミド（例えば、配列番号１）（例えば、ｐＡＶＥＣのｈＣＭＶプロモーターのようなプロモーターに機能的に連結されているもの）内に導入する工程。
前記のとおり、ｐＡＶＥＣプラスミド内への該ポリヌクレオチドの導入は、例えば、該プラスミド内への導入ポリヌクレオチドの末端の連結に適合性である制限酵素切断部位を生成するためのマルチクローニングサイトの一部の切り出しによる、或るｐＡＶＥＣポリヌクレオチド配列の喪失を招きうる。
ｂ）関心のあるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むｐＡＶＥＣプラスミドで宿主細胞をトランスフェクトする工程。
該プラスミドは、異所的に自律複製要素として（例えば、該プラスミドが高コピー数、例えば、約２、３、４、５、１０、２０または５０のコピー数を有する場合）または宿主細胞染色体内に組込まれて、宿主細胞において増幅されうる。
ｃ）該プラスミドを含む宿主細胞の増殖および組換えタンパク質の発現を可能にする適当な条件下、細胞を培養する工程。
ｄ）所望により実施されうる、産生されたポリペプチドを回収する工程。
与えられたタンパク質を、例えば、細胞、細胞培養、または細胞が培養された培地から回収（単離および／または精製）するための方法は、当技術分野でよく知られている。非限定的な例としては、塩またはアルコール沈殿（例えば、硫酸アンモニウム沈殿またはエタノール沈殿）、アフィニティクロマトグラフィー（例えば、精製タグと共に用いられる）；免疫アフィニティまたはイオン交換カラム上での分画；高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）；逆相ＨＰＬＣ；シリカ上またはカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥ上のクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；等電点フォーカシング；向流分配；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；ゲル濾過（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−７５を使用するもの）；およびＩｇＧのような混入物を除去するためのプロテインＡセファロースカラムにより、生物学的物質からタンパク質が単離および／または精製されうる。そのような精製方法は当技術分野でよく知られており、例えば、“Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１８２，Ｍ．Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ編，，１９９０，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹに開示されている。
液体水性培養内の哺乳類細胞の増殖（成長）は当技術分野でよく知られている。当技術分野で公知の哺乳類細胞培養増殖培地の例には、ＥＸ−ＣＥＬＬ ＡＣＦ、ＣＨＯ培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）；後記で更に詳細に説明される）、ＤＭＥＭ、ＤＭＥＭ／Ｆ−１２、Ｆ−１０栄養混合物、ＲＰＭＩ培地１６４０、Ｆ−１２栄養混合物、培地１９９、イーグルＭＥＭ、ＲＰＭＩ、２９３培地およびイスコベ（Ｉｓｃｏｖｅ）培地が含まれる。
細胞増殖は幾つかの系のいずれかにおいて行われうる。例えば、細胞増殖は、単純なフラスコ、例えばガラス振とうフラスコにおいて行われうる。他の系には、タンクバイオリアクター、バッグバイオリアクターおよび使い捨てバイオリアクターが含まれる。タンクバイオリアクターには、典型的には、細胞を液体培地内で増殖させる金属容器（例えば、ステンレス鋼ジャケット付き容器）を含む。タンクバイオリアクターは広範な培養体積（例えば、１００Ｌ、１５０Ｌ、１００００Ｌ、１５０００Ｌ）で使用されうる。タンクバイオリアクターは、しばしば、温度制御、培地攪拌、スパージガス濃度の制御、ｐＨの制御、Ｏ２濃度の制御、培地からのサンプルの除去、リアクター重量表示および制御、ハードウェアの清掃、ハードウェアの滅菌、全供給を送るための配管またはチューブ配置、培地の添加、ｐＨの制御、溶液の制御および気体の制御、増殖溶液内への無菌流体の送出、ならびに管理上の制御およびデータ収集のための手段を含む、細胞増殖条件を制御するための追加的な特徴を有する。タンクバイオリアクターの分類は、熱および材料（例えば、酸素および基質）を分配するためにリアクターを混合するために機械的攪拌装置（例えば、羽根車）が使用される攪拌タンクリアクターを含む。バブルカラムリアクターは、内容物を混合するために空気のみを使用する背の高いリアクターである。エアリフトリアクターはバブルカラムリアクターに似ているが、それがドラフトチューブを含有する点で異なる。ドラフトチューブは、典型的には、循環および酸素移動を改善し該リアクター内のせん断力を均等化する内部チューブである。流動床リアクターにおいては、細胞は、流体と共に移動する小粒子上に「固定化」される。該小粒子は、細胞が付着するための並びに該細胞への酸素および栄養物の高率の移動を可能にする大きな表面積をもたらす。充填床リアクターにおいては、細胞は大粒子上に固定化される。これらの粒子は液体と共には移動しない。充填床リアクターは、構築および運転が簡単であるが、閉塞および酸素移動不良を被りうる。使い捨てバイオリアクターは、使い捨て可能な１回使用のためのバイオリアクターである。しばしば、使い捨てバイオリアクターは、非使い捨てバイオリアクターに類似した特徴（例えば、攪拌系、スパージ、プローブ、出入口など）を有する。
ポリペプチドが細胞または組織から単離される場合には特に、１以上のタンパク質分解酵素インヒビター、例えばフェニルメタンスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、ペファブロック（Ｐｅｆａｂｌｏｃ）ＳＣ、ペプスタチン、ロイペプチン、キモスタチンおよびＥＤＴＡをアッセイ系に加えることが好ましい。
幾つかの実施形態においては、関心のあるタンパク質は、「タグ」または「マーカー」と称されうる第２のポリペプチドまたはポリヌクレオチド部分を伴う。タグは、例えば、発現後のポリペプチドの精製または検出を促進するために使用されうる。例えば、発現されるべきポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’または３’末端におけるタグをコードするポリヌクレオチドのインフレーム挿入により、融合ポリペプチドが構築されうる。ついで本発明の発現系において融合ポリヌクレオチドが発現されうる。そのようなタグには、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ヘキサヒスチジン（Ｈｉｓ６）タグ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ、赤血球凝集素（ＨＡ）タグ、セルロース結合タンパク質（ＣＢＰ）タグおよびｍｙｃタグが含まれる。本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドを標識するために、検出可能なタグ、例えば３２Ｐ、３５Ｓ、３Ｈ、９９ｍＴｃ、１２３Ｉ、１１１Ｉｎ、６８Ｇａ、１８Ｆ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１３ｍＩｎ、７６Ｂｒ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、１２３Ｉ、１１１Ｉｎおよび６８Ｇａが使用されうる。そのような融合体を構築し使用するための方法は非常に一般的であり、当技術分野でよく知られている。
関心のあるポリペプチドに適した精製方法は、組換え細胞培養内の発現の際の該ポリペプチドの特性の変化に対処するための修飾を要しうる、と当業者は理解している。
本発明はまた、宿主細胞をｐＡＶＥＣプラスミドで形質転換することを含む、ポリヌクレオチドをｐＡＶＥＣプラスミド内に導入するための方法に関する。例えば、該方法は以下の工程を含む。
ａ）該ポリヌクレオチドの挿入が望まれる部位において、（例えば、制限酵素、例えば、挿入されるポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーションに適合性である、および該ポリヌクレオチドの後続の連結の末端に適合性である末端を生成する制限酵素を使用して）ｐＡＶＥＣプラスミドを切断する工程。挿入されるポリヌクレオチドの末端は、切断プラスミドの末端に適合性の末端を生成する制限酵素での切断を含む方法によっても生成されうる。
前記のとおり、ｐＡＶＥＣプラスミド内への該ポリヌクレオチドの導入は、例えば、該プラスミド内への導入ポリヌクレオチドの末端の連結に適合性である制限酵素切断部位を生成するためのマルチクローニングサイトの一部の切り出しによる、或るｐＡＶＥＣポリヌクレオチド配列の喪失を招きうる。
ｂ）該切断ｐＡＶＥＣの末端を、（例えば、ＤＮＡリガーゼを使用して）該ポリヌクレオチドの末端に連結して、最終的な環状組換えプラスミドを得る工程。
ｂ）ついで該組換えプラスミドは、該プラスミドおよび添加ポリヌクレオチドが増幅される宿主細胞内に形質転換されうる。該プラスミドは、異所的に自律複製要素として（例えば、該プラスミドが高コピー数、例えば、約２、３、４、５、１０、２０または５０のコピー数を有する場合）または宿主細胞染色体内に組込まれて、宿主細胞において増幅されうる。
キット
本発明のｐＡＶＥＣプラスミドベクターはキットにおいて提供されうる。本発明のキットは、該プラスミドベクターに加えて、該プラスミドベクターの利用において使用されうるいずれかの試薬を含みうる。１つの実施形態においては、該キットは、細菌および／または哺乳類宿主細胞内への該ベクターの形質転換に必要な試薬を含む。例えば、該キットは、リン酸カルシウム形質転換法のための試薬、すなわち、塩化カルシウム、バッファー（例えば、２×ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水）および無菌蒸留水を含みうる。もう１つの実施形態においては、該キットは、ＤＥＡＥ−エキストラン形質転換のための試薬、すなわち、ＰＢＳ中のクロロキン、ＰＢＳ中のＤＥＡＥ−デキストランおよびリン酸緩衝食塩水を含む。更にもう１つの実施形態においては、該キットには、リポソーム形質転換のための試薬、すなわち、ＤＯＴＡＰ／コレステロール押出し（ｅｘｔｒｕｄｅｄ）リポソームから押出されたリポソームが含まれる。例えば、該キットはカチオン性脂質系トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（リポフェクタミン）（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含みうる。
本発明のｐＡＶＥＣプラスミドベクターはキットにおいて提供されうる。本発明のキットは、該プラスミドベクターに加えて、該プラスミドベクターの利用において使用されうるいずれかの試薬を含みうる。１つの実施形態においては、該キットは、細菌および／または哺乳類宿主細胞内への該ベクターの形質転換に必要な試薬を含む。例えば、該キットは、リン酸カルシウム形質転換法のための試薬、すなわち、塩化カルシウム、バッファー（例えば、２×ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水）および無菌蒸留水を含みうる。もう１つの実施形態においては、該キットは、ＤＥＡＥ−エキストラン形質転換のための試薬、すなわち、ＰＢＳ中のクロロキン、ＰＢＳ中のＤＥＡＥ−デキストランおよびリン酸緩衝食塩水を含む。更にもう１つの実施形態においては、該キットには、リポソーム形質転換のための試薬、すなわち、ＤＯＴＡＰ／コレステロール押出し（ｅｘｔｒｕｄｅｄ）リポソームから押出されたリポソームが含まれる。例えば、該キットはカチオン性脂質系トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（リポフェクタミン）（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含みうる。
該キットは、本発明のベクターの細菌形質転換に必要な試薬を含みうる。例えば、該キットは形質転換コンピテント細菌（例えば、ＤＨ１、ＤＨ５、ＤＨ５α、ＸＬ１−Ｂｌｕｅ、ＳＵＲＥ、ＳＣＳ１１０、ＯｎｅＳｈｏｔ Ｔｏｐ１０またはＨＢ１０１）を含みうる。
該キットは、増殖培地、または増殖培地の調製に必要な試薬を含みうる。例えば、１つの実施形態においては、該キットは哺乳類細胞の増殖のためのウシ胎児血清またはＤＭＥＭ（ダルベッコ／フォークト変法イーグル（ハリー・イーグル）最少必須培地）を含みうる。もう１つの実施形態においては、該キットは、細菌を増殖させるための適当な抗生物質（例えば、アンピシリンまたはカナマイシン）を含有する粉末ルリアブロス培地またはルリアブロスプレートを含有しうる。
該キットにおいて供給される成分は適当なバイアルまたは容器（例えば、プラスチックまたはガラスバイアル）内で提供されうる。該キットは貯蔵のための適当なラベル表示、および使用のための適当な説明を含みうる。
以下の実施例は、本発明を更に詳しく説明するために記載されており、それを限定するものと解釈されるべきではない。本発明の範囲は、以下の実施例に記載されている方法の全てを含む。
実施例１：ｐＡＶＥＣプラスミドの構築
マルチクローニングサイト（ＭＣＳ）の配列：
マルチクローニングサイト（ＭＣＳ）の配列：
ｐＡＩＬ１７Ｌの配列：
本出願の全体にわたり特許、特許出願、刊行物、製品説明およびプロトコールが引用されているが、それらの開示の全体をあらゆる目的のために参照により本明細書に組み入れることとする。
Claims (10)
- 配列番号２に記載されているポリヌクレオチド配列を含む、線状または環状である単離されたプラスミド。
- 請求項１記載のプラスミドを切断し、該切断プラスミドの末端を、導入されるポリヌクレオチドの適合性末端に連結して、閉環状プラスミドを得ることを含む、組換えプラスミドベクターの製造方法。
- 該導入ポリヌクレオチドが免疫グロブリン鎖をコードしている、請求項２記載の製造方法。
- 該免疫グロブリン鎖が、アブシキシマブ（Ａｂｃｉｘｉｍａｂ）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、バシリキシマブ（Ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、セルトリズマブ・ペゴール（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ）、ダロツズマブ（Ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、デノスマブ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、エクリズマブ（Ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）、エファリズマブ（Ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ ｔｉｕｘｅｔａｎ）、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、ムロモナブ（Ｍｕｒｏｍｏｎａｂ）−ＣＤ３、ナタリズマブ（Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）、オマリズマブ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）、パリビズマブ（Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ラニビズマブ（Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ロバツムマブ（Ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、ＡＬＤ５１８およびトラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）からなる群から選択されるメンバーの重鎖または軽鎖であり、あるいは該免疫グロブリン鎖が、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＰＤ−１、ＴＮＦアルファ、ＴＧＦベータ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＳＬＰ、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、ＥＲＫ、ＭＥＫ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ−２３ｐ１９、ＩＬ２３Ｒ、ＰＣＳＫ９、ＣＤ２０、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫ、ＣＤ３３、ＣＤ１１ａ、ＥｒｂＢ２、ＩｇＥ、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、ＨＩＶ抗原、ＨＣＶ抗原および呼吸器性シンシチウムウイルス（ＲＳＶ）抗原からなる群から選択される抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントの重鎖または軽鎖である、請求項３記載の製造方法。
- 請求項２記載の製造方法の産物である組換えプラスミドベクター。
- 請求項１記載のプラスミドを含む単離された宿主細胞。
- 細菌細胞または哺乳類細胞である、請求項６記載の宿主細胞。
- 単離された宿主細胞における組換えポリペプチドの製造方法であって、該ポリペプチドの発現を可能にする条件下、請求項５記載の組換えベクターを該宿主細胞内に導入することを含む製造方法。
- 該ポリペプチドを精製することを更に含む、請求項８記載の方法。
- 請求項１記載のプラスミドと１以上の追加的成分とを含むキット。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201161473431P | 2011-04-08 | 2011-04-08 | |
| US61/473,431 | 2011-04-08 | ||
| PCT/US2012/031785 WO2012138591A1 (en) | 2011-04-08 | 2012-04-02 | pAVEC |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017105855A Division JP2017184752A (ja) | 2011-04-08 | 2017-05-29 | ｐＡＶＥＣ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2014511696A JP2014511696A (ja) | 2014-05-19 |
| JP6200414B2 true JP6200414B2 (ja) | 2017-09-20 |
Family
ID=46969512
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2014503706A Active JP6200414B2 (ja) | 2011-04-08 | 2012-04-02 | ｐＡＶＥＣ |
| JP2017105855A Withdrawn JP2017184752A (ja) | 2011-04-08 | 2017-05-29 | ｐＡＶＥＣ |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017105855A Withdrawn JP2017184752A (ja) | 2011-04-08 | 2017-05-29 | ｐＡＶＥＣ |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9080177B2 (ja) |
| EP (1) | EP2694655A4 (ja) |
| JP (2) | JP6200414B2 (ja) |
| CN (1) | CN103717743A (ja) |
| WO (1) | WO2012138591A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI684683B (zh) | 2016-12-19 | 2020-02-11 | 財團法人紡織產業綜合研究所 | 改質聚醯胺的製作方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10277519B2 (en) * | 2006-01-31 | 2019-04-30 | Silicon Laboratories Inc. | Response time for a gateway connecting a lower bandwidth network with a higher speed network |
| US9255154B2 (en) | 2012-05-08 | 2016-02-09 | Alderbio Holdings, Llc | Anti-PCSK9 antibodies and use thereof |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19822287C2 (de) | 1998-05-18 | 2003-04-24 | Switch Biotech Ag | Klonierungsvektor, seine Herstellung und Verwendung zur Analyse von mRNA Expressionsmuster |
| ATE481493T1 (de) * | 2003-06-02 | 2010-10-15 | B R A I N Biotechnology Res An | Archäen-expressionssystem |
| JP2007510434A (ja) * | 2003-11-12 | 2007-04-26 | シェーリング コーポレイション | 多重遺伝子発現のためのプラスミドシステム |
| MX2011004998A (es) * | 2008-11-12 | 2011-05-25 | Schering Corp | Intron de beta-globina-inmunoglobina gamma para la expresion mejorada del anti-factor de crecimiento similar a la insulina 1r. |
-
2012
- 2012-04-02 EP EP12768642.6A patent/EP2694655A4/en not_active Withdrawn
- 2012-04-02 WO PCT/US2012/031785 patent/WO2012138591A1/en active Application Filing
- 2012-04-02 US US14/110,217 patent/US9080177B2/en active Active
- 2012-04-02 JP JP2014503706A patent/JP6200414B2/ja active Active
- 2012-04-02 CN CN201280017429.0A patent/CN103717743A/zh active Pending
-
2017
- 2017-05-29 JP JP2017105855A patent/JP2017184752A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI684683B (zh) | 2016-12-19 | 2020-02-11 | 財團法人紡織產業綜合研究所 | 改質聚醯胺的製作方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2014511696A (ja) | 2014-05-19 |
| US20140030760A1 (en) | 2014-01-30 |
| EP2694655A4 (en) | 2015-01-14 |
| EP2694655A1 (en) | 2014-02-12 |
| JP2017184752A (ja) | 2017-10-12 |
| CN103717743A (zh) | 2014-04-09 |
| US9080177B2 (en) | 2015-07-14 |
| WO2012138591A1 (en) | 2012-10-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1694850B1 (en) | Plasmid system for multigene expression | |
| Boscolo et al. | Simple scale-up of recombinant antibody production using an UCOE containing vector | |
| JP2008528033A (ja) | ポリペプチドの分泌を検出するためのリーダー配列およびその産生のための方法 | |
| KR20170090508A (ko) | 포유류 세포의 배양 방법 | |
| JP2017184752A (ja) | ｐＡＶＥＣ | |
| US20220403398A1 (en) | Methods of cell selection | |
| CN102498212B (zh) | Cho/cert细胞系 | |
| JP2012508563A (ja) | 抗ＩＧＦ１Ｒ発現の増強のためのβＧｌ−ＩＧＧイントロン | |
| US9528125B2 (en) | Mammalian expression vector pUHAB | |
| WO2023202967A1 (en) | Improved production cells | |
| JP2009195197A (ja) | 哺乳動物細胞の形質転換方法 | |
| Fu et al. | Improvement strategies for transient gene expression in mammalian cells | |
| EP0232845A2 (en) | Inducible heat shock and amplification system | |
| JP2022529063A (ja) | 安定的な標的組み込み | |
| JP5124737B2 (ja) | 哺乳動物細胞内で目的遺伝子を高度に増幅させるための方法およびベクター | |
| EP4339272A1 (en) | Systems and methods for developing and optimizing cell culture processes | |
| EP3250696B1 (en) | Stock solution of retrovirus like particles with method | |
| CN119137265A (zh) | 经由天冬酰胺生物合成途径的代谢选择 | |
| Dröge | Mammalian Expression Systems | |
| CA3088906A1 (en) | Systems and methods for identifying viral contaminants | |
| CN114008081A (zh) | 通过以限定的组织形式靶向整合多个表达盒来产生二价双特异性抗体表达细胞的方法 | |
| MXPA06005307A (en) | Plasmid system for multigene expression | |
| EA043386B1 (ru) | Прямой отбор клеток, экспрессирующих высокие уровни гетеромерных белков, с использованием глутаминсинтетазных векторов внутригенной комплементации | |
| WO2003000908A1 (en) | A method for introducing a nucleic acid into a eukaryotic cell |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150401 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160322 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160616 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160916 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20170131 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170529 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20170605 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170801 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170825 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6200414 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |