JP5555186B2 - ｐ３８ＭＡＰキナーゼ阻害剤 - Google Patents

Description

本発明は、一連のアミノ酸エステル、それらを含有する組成物、それらの製造方法、ならびにリウマチ性関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、多発性硬化症、糖尿病、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主疾患、全身性エリテマトーデスなどを含む自己免疫および炎症性疾患の治療のための、p38 MAPキナーゼ阻害剤としての医薬品におけるそれらの使用に関する。

TNF-α、IL1-βおよびIL-8のようなサイトカインの産生レベルの上昇を導く、単球、マクロファージおよび好中球を含む白血球の不適切な活性化は、リウマチ性関節炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、喘息および乾癬を含むいくつかの炎症性疾患の病因の特徴である。炎症性細胞によるサイトカインの産生は、種々の外部刺激に対する応答の結果であり、いくつかの細胞内シグナル伝達機構の活性化を導く。これらのうち顕著なものは、細胞成長、分化およびストレス応答を調節する高度に保存されたシグナル伝達キナーゼからなるマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ (MAPK)スーパーファミリーである。哺乳動物細胞は、MAPKの少なくとも3つのファミリーを含む：p42/44細胞外シグナル調節キナーゼ(ERK) MAPK、c-Jun NH2-末端キナーゼ (JNKs)、およびp38 MAPK (p38α/Mpk2/RK/SAPK2α/CSBP1/2ともよばれる)。p38 MAPKは、リポ多糖(LPS)による単球の刺激の後にチロシンリン酸化されるキナーゼとして同定された後に、最初にクローニングされた[Hanら, Science 1994,265,808]。哺乳動物p38のさらなるホモログは、記載されており、p38β[Jiangら, J.Biol.Chem, 1996, 271, 17920]、p38γ[Liら, Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996, 228, 334]、およびp38δ[Jiangら, J.Biol.Chem. 1997, 272, 30122]を含む。p38αおよびp38βは遍在して発現されるが、p38γは骨格筋に主に限定され、p38δは肺および腎臓において主に発現される。

宿主の防御細胞によるサイトカインの放出、ならびにサイトカインおよび他の炎症誘発性ストレスに対する白血球の応答は、種々の程度でp38 MAPKにより調節される程度を変動させる[Cuendaら, FEBS Lett, 1995, 364, 229〜233]。他の細胞タイプにおいて、p38 MAPKは、TNF-αにより刺激された気管支上皮細胞によるIL-8の産生、およびLPS-刺激内皮細胞における細胞接着分子ICAM-1のアップレギュレーションのようなストレス応答を制御する。二重特異性キナーゼMKK3およびMKK6によるTGYモチーフの二重リン酸化による活性化により、p38 MAPKは、転写因子およびその他のキナーゼのリン酸化によりその効果を発揮する。MAPキナーゼ-活性化タンパク質キナーゼ-2 (MAPKAPK-2)は、p38リン酸化についての標的であると同定されている。MAPKAPK-2欠損マウス[Kotlyarovら, Nat. Cell Biol. 1999, 1, 94〜97]では、LPS/ガラクトサミン媒介内毒素性ショックに応答してTNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10およびIFN-γの放出レベルが低下した。これらのサイトカイン、およびCOX-2のレベルの調節は、mRNAレベルで行われる。TNF-αレベルは、TNF-α mRNAの3'-UTRのAUリッチエレメントを介して、翻訳制御により調節され、MAPKAPK-2シグナル伝達がTNF-α mRNA翻訳を増加させる。MAPKAPK-2シグナル伝達は、COX-2、IL-6およびマクロファージ炎症性タンパク質についてのmRNAの安定性の増加を導く。MAPKAPK-2は、p38 MAPKの細胞内位置を決定するとともに、p38 MAPKシグナル伝達を変換し、そのカルボキシ末端に核局在化シグナルと、その自己抑制ドメインの一部分として核外輸送シグナルとを保持する[Engelら, EMBO J. 1998, 17, 3363〜3371]。ストレスが負荷された細胞では、MAPKAPK-2およびp38 MAPKが核から細胞質に移動し、この移動は、p38 MAPKが触媒活性である場合にのみ起こる。この事象は、p38 MAPKによるリン酸化の結果としてのMAPKAPK-2核外輸送シグナルの曝露により駆動されると考えられている[Mengら, J. Biol. Chem. 2002, 277, 37401〜37405]。さらに、p38 MAPKは、ATF1/2 (活性化転写因子(activating transcription factors) 1/2)、CHOP-10/GADD-153 (成長停止およびDNA損傷誘導性遺伝子(growth arrest and DNA damage inducible gene) 153)、SAP-1 (血清応答因子アクセサリータンパク質(serum response factor accessory protein)-1)、およびMEF2C (筋細胞エンハンサー因子(myocyte enhancer factor)-2)を含む炎症を媒介すると考えられるいくつかの転写因子のリン酸化を直接または間接的に導く[Fosterら, Drug News Perspect. 2000, 13, 488〜497]。

小分子によるp38 MAPK活性の阻害が、リウマチ性関節炎、COPD、喘息および脳虚血を含む、不適切なサイトカイン産生により媒介されるいくつかの疾患の状態の治療に有用であることが、いくつかの場合において示されている。この様相は、いくつかの総説の主題である[Salituroら, Current Medicinal Chemistry, 1999, 6, 807〜823およびKumarら, Nature Reviews Drug Discovery 2003, 2, 717〜726]。

p38 MAPKの阻害剤は、ラットにおけるコラーゲン誘導関節炎[Reveszら, Biorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10, 1261〜1364]、およびラットにおけるアジュバント誘導関節炎[Wadsworthら, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1999, 291, 1685〜1691]のようなリウマチ性関節炎の動物モデルにおいて、効果があることが示されている。膵炎誘導肺損傷のマウスモデルにおいて、p38 MAPK阻害剤による前処理が、気道および肺浮腫におけるTNF-α放出を減少させた[Denhamら, Crit. Care Med., 2000, 29, 628およびYangら, Surgery, 1999, 126, 216]。オボアルブミン(OVA)感作マウスにおけるOVA攻撃の前のp38 MAPKの阻害は、炎症のアレルギー性気道モデルにおける気道でのサイトカインおよび炎症性細胞の蓄積を低下させた[Underwoodら, J. Pharmacol. Exp. Ther., 2000,293, 281]。p38 MAPキナーゼの活性の増加は、炎症性腸疾患に罹患している患者において観察されている[Waetzigら, J. Immunol, 2002,168, 5432〜5351]。p38 MAPK阻害剤は、心臓肥大のラットモデル[Behrら, Circulation, 2001, 104, 1292〜1298]、および局所脳虚血[Baroneら, J. Pharmacol. Exp. Ther., 2001, 296, 312〜321]において効果があることが示されている。

我々は、p38 MAPK (p38α、β、γおよびδ)、ならびにそのアイソフォームおよびスプライスバリアント、特にp38α、p38βおよびp38β2の強力で選択的な阻害剤である化合物の群を、今回、見出した。したがって、これらの化合物は、医薬品、例えば本明細書に記載される免疫および炎症性障害の治療および予防において有用である。上記の化合物は、α,α-2置換グリシンモチーフまたは細胞内カルボキシルエステラーゼにより加水分解され得るα,α-2置換グリシンモチーフが分子内に存在することを特徴とする。親油性α,α-2置換グリシンエステルモチーフを有する本発明の化合物は、細胞膜を通過し、細胞内カルボキシルエステラーゼにより酸に加水分解される。極性加水分解産物は、細胞膜を容易に通過しないので、細胞内に蓄積する。よって、この化合物のp38 MAPキナーゼ活性は、細胞内で持続し、増強される。本発明の化合物は、国際特許出願WO03076405の開示に含まれるp38 MAPキナーゼ阻害剤に関連するが、本発明の化合物は、上記のアミノ酸エステルモチーフを有する点で、これらとは異なる。

本発明の化合物は、我々の同時係属国際特許出願番号WO 2007/129040に開示されるものにも関連する。後者の化合物は、該化合物が細胞膜を通過し、そしてそこで細胞内カルボキシルエステラーゼによって対応する酸に加水分解される、細胞に入ることを可能にもするα-1置換グリシンエステルモチーフを有する。しかしながら、該公報は、α,α-2置換グリシンエステル共役物(conjugates)が、細胞内カルボキシルエステラーゼによって加水分解され得ることを示唆していない。実際、細胞内カルボキシルエステラーゼ、主にhCE-1、hCE-2およびhCE-3のα,α-2置換グリシンエステルを加水分解する能力は以前に研究されていなかったと思われる。

カルボン酸加水分解生成物の細胞内蓄積の恩恵を得るために、α-1置換グリシンエステルモチーフを細胞内酵素またはレセプターの調節剤にコンジュゲートさせる(conjugated)一般的概念は、我々の国際特許出願WO 2006/117567に開示されている。しかしながら、この公報は、α,α-2置換グリシンエステル共役物が、細胞内カルボキシルエステラーゼによって加水分解され得ることを示唆していない。上記のように、細胞内カルボキシルエステラーゼ、主にhCE-1、hCE-2およびhCE-3のα,α-2置換グリシンエステルを加水分解する能力は以前に研究されていなかったと思われる。

本発明によると、式(I)：
(式中：
Gは、-N=または-CH=であり；
Dは、任意に置換されていてもよい2価の単環もしくは2環式で5〜13員環のアリールまたはヘテロアリール基であり；
R₆は、水素、または任意に置換されていてもよいC₁〜C₃アルキルであり；
Pは水素を表し、かつUは式(IA)の基を表すか；またはUは水素を表し、かつPは式(IA)の基を表す；

-A-(CH₂)_z-X¹-L¹-Y-NH-CR₁R₂R₃ (IA)
(式中、
Aは、任意に置換されていてもよい2価の単環もしくは2環式で5〜13員環の炭素環式または複素環式の基であり；
zは0または1であり；
Yは、結合手、-C(=O)-、-S(=O)₂-、-C(=O)NR₇-、-C(=S)-NR₇、-C(=NH)NR₇、または-S(=O)₂NR₇- (式中、R₇は水素または任意に置換されていてもよいC₁〜C₆アルキルである)であり；
L¹は、式-(Alk¹)_m(Q)_n(Alk²)_p-の2価の基
(式中、m、nおよびpは、独立して0または1であり、
Qは、(i) 任意に置換されていてもよい2価の単環もしくは2環式で5〜13員環の炭素環式または複素環式の基であるか、あるいは(ii) mおよびpがともに0である場合は、式-X²-Q¹-または-Q¹-X²- (式中、X²は-O-、S-またはNR^A- (式中、R^Aは水素または任意に置換されていてもよいC₁〜C₃アルキルである)であり、Q¹は任意に置換されていてもよい2価の単環もしくは2環式で5〜13員環の炭素環式または複素環式の基である)の2価の基であり；
Alk¹およびAlk²は、独立して、任意に置換されていてもよい2価のC₃〜C₇シクロアルキル基、または任意に置換されていてもよい直鎖状または分岐鎖状のC₁〜C₆アルキレン、C₂〜C₆アルケニレンもしくはC₂〜C₆アルキニレン基を表し、これらの基は、エーテル(-O-)、チオエーテル(-S-)またはアミノ(-NR^A-)(式中、R^Aは、水素または任意に置換されていてもよいC₁〜C₃アルキルである)結合を任意に含むかまたは該結合が末端をなしていてもよい)
であり；

X¹は、結合手；-C(=O)；または-S(=O)₂-；-NR₄C(=O)-、-C(=O)NR₄-、-NR₄C(=O)NR₅-、-NR₄S(=O)₂-、または-S(=O)₂NR₄- (式中、R₄およびR₅は、独立して、水素または任意に置換されていてもよいC₁〜C₆アルキルである)であり；
R₁は、カルボン酸基 (-COOH)、または1以上の細胞内エステラーゼ酵素によりカルボン酸基に加水分解され得るエステル基であり；
R₂およびR₃は、R₂もR₃も水素でないという条件で、天然または非天然のアルファアミノ酸の側鎖から選択される)）
の化合物が提供される。

上記の式(I)は、それらの塩、特に医薬的に許容される塩、N-オキシド、水和物および溶媒和物の形態で製造され得る。本明細書における化合物についてのいずれの請求項、または本明細書で用いる場合「本発明の化合物」、「本発明に係る化合物」、「式(I)の化合物」などの記載は、このような化合物の塩、N-オキシド、水和物および溶媒和物を含む。

上記の定義は、高分子量の分子を潜在的に含むが、医薬品化学のプラクティスの通常の原理に従って、本発明に係る化合物は、600以下の分子量を有することが好ましい。

別の広い態様において、本発明は、上記で定義される式(I)の化合物、またはそのN-オキシド、塩、水和物もしくは溶媒和物の、p38 MAPキナーゼ酵素の活性を阻害するための組成物の製造における使用を提供する。
本発明に係る化合物は、インビトロまたはインビボでのp38 MAPキナーゼ酵素活性の阻害のために用いられ得る。

本発明のある態様において、本発明の化合物は、自己免疫疾患または炎症性疾患、特にp38 MAPキナーゼ活性が役割を演じる上記の疾患の治療用組成物の製造において用いられ得る。

別の態様において、本発明は、上記のタイプの疾患に罹患している患者に、上記で定義される式(I)の化合物の有効量を投与することを含む、上記のタイプの疾患の治療方法を提供する。

用語
用語「エステル」または「エステル化されたカルボキシ基」は、基R^XO(C=O)- (式中、R^Xは、アルコールR^XOHから概念的に誘導されるエステルに特徴的な基である)を意味する。
本明細書で用いる場合、用語「(C_a〜C_b)アルキル」(ここで、aおよびbは整数である)は、a〜b個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のアルキル基のことである。よって、例えばaが1でありbが6である場合、この用語は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、t-ブチル、n-ペンチルおよびn-ヘキシルを含む。

本明細書で用いる場合、用語「2価の(C_a〜C_b)アルキレン基」(ここで、aおよびbは整数である)は、a〜b個の炭素原子と2つの不飽和原子価(unsatisfied valences)を有する飽和炭化水素鎖のことをいう。
本明細書で用いる場合、用語「(C_a〜C_b)アルケニル」(ここで、aおよびbは整数である)は、a〜b個の炭素原子を有し、適用可能である場合にEまたはZの立体化学の少なくとも1つの二重結合をする直鎖または分岐鎖のアルケニル部分のことである。この用語は、例えばビニル、アリル、1-および2-ブテニルおよび2-メチル-2-プロペニルを含む。
本明細書で用いる場合、用語「2価の(C_a〜C_b)アルケニレン基」は、a〜b個の炭素原子、少なくとも1つの二重結合、および2つの不飽和原子価を有する炭化水素鎖を意味する。

本明細書で用いる場合、用語「(C_a〜C_b)アルキニル」(ここで、aおよびbは整数である)は、a〜b個の炭素原子を有し、さらに1つの三重結合を有する直鎖または分岐鎖の炭化水素基のことである。この用語は、例えばエチニル、1-プロピニル、1-および2-ブチニル、2-メチル-2-プロピニル、2-ペンチニル、3-ペンチニル、4-ペンチニル、2-ヘキシニル、3-ヘキシニル、4-ヘキシニルおよび5-ヘキシニルを含む。
本明細書で用いる場合、用語「2価の(C_a〜C_b)アルキニレン基」(ここで、aおよびbは整数である)は、a〜b個の炭素原子および少なくとも1つの三重結合を有する2価の炭化水素鎖である。

本明細書で用いる場合、用語「炭素環式」は、全て炭素の16個までの環原子を有する単環式、2環式もしくは三環式の基または架橋された単環式基（例えばビシクロ[2.2.1]ヘプチ-2-イル）のことであり、アリールおよびシクロアルキルを含む。
本明細書で用いる場合、用語「シクロアルキル」は、3〜8個の炭素原子を有する単環式の飽和炭素環式基のことであり、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを含む。

本明細書で用いる場合、限定されていない用語「アリール」は、単環式、2環式または3環式の炭素環式芳香族基のことであり、共有結合により直接連結された2つの単環式の炭素環式芳香族環を有する基を含む。このような基の例は、フェニル、ビフェニルおよびナフチルである。

本明細書で用いる場合、限定されていない用語「ヘテロアリール」は、S、NおよびOから選択される1以上のヘテロ原子を含む単環式、2環式または3環式の芳香族基のことであり、そのような単環式環を2つ有する基、またはそのような単環式環1つと1つの単環式アリール環とが共有結合により直接連結された基を含む。そのような基の例は、チエニル、ベンズチエニル、フリル、ベンズフリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンズチアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ベンズオキサゾリル、イソキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、ベンズトリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、インドリルおよびインダゾリルである。

本明細書で用いる場合、限定されていない用語「ヘテロシクリル」または「複素環式」は、上記で定義される「ヘテロアリール」を含み、その非芳香族の意味は、S、NおよびOから選択される1以上のヘテロ原子を含む単環式、2環式もしくは3環式の非芳香族基または架橋された単環式の非芳香族基、およびこのような1以上のへテロ原子を含む単環式の非芳香族基からなり、該非芳香族基が別のそのような基または単環式の炭素環式基に共有結合した基に関する。そのような基の例は、ピロリル、フラニル、チエニル、ピペリジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピリミジニル、ピペラジニル、インドリル、モルホリニル、ベンズフラニル、ピラニル、イソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニル、マレイミドおよびスクシンイミド基である。

「2価のフェニレン、ピリジニレン、ピリミジニレンまたはピラジニレン基」は、2つの不飽和原子価を有するベンゼン、ピリジン、ピリミジンまたはピラジン環であり、1,3-フェニレン、1,4-フェニレンおよび以下のものを含む：

その用語を用いるときの関係において特に言及しない限りは、いずれの部分に適用される用語「置換」は、4つまでの両立可能な置換基で置換されることを意味する。該置換基はそれぞれ独立して、例えば(C₁〜C₆)アルキル、(C₁〜C₆)アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシ(C₁〜C₆)アルキル、メルカプト、メルカプト(C₁〜C₆)アルキル、(C₁〜C₆)アルキルチオ、フェニル、ハロ (フルオロ、ブロモおよびクロロを含む)、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、ニトリル(-CN)、オキソ、-COOH、-COOR^A、-COR^A、-SO₂R^A、-CONH₂、-SO₂NH₂、-CONHR^A、-SO₂NHR^A、-CONR^AR^B、-SO₂NR^AR^B、-NH₂、-NHR^A、-NR^AR^B、-OCONH₂、-OCONHR^A、-OCONR^AR^B、-NHCOR^A、-NHCOOR^A、-NR^BCOOR^A、-NHSO₂OR^A、-NR^BSO₂OH、-NR^BSO₂OR^A、-NHCONH₂、-NR^ACONH₂、-NHCONHR^B、-NR^ACONHR^B、-NHCONR^AR^B、または-NR^ACONR^AR^B （ここで、R^AおよびR^Bは独立して(C₁〜C₆)アルキル、(C₃〜C₆)シクロアルキル、フェニルまたは5もしくは6個の環原子を有する単環式ヘテロアリールであるか、またはR^AおよびR^Bが同じ窒素原子に結合するとき環状アミノ基（例えばモルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルまたはテトラヒドロピロリル）を形成する）であり得る。「任意の置換基」は、上記の置換基の1つであり得る。

用語「天然または非天然のアルファアミノ酸の側鎖」は、式NH₂-CH(R^Y)-COOHの天然または非天然アミノ酸中のR^Y基のことをいう。
天然のアルファアミノ酸の側鎖の例は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン酸、ヒスチジン、5-ヒドロキシリジン、4-ヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、α-アミノアジピン酸、α-アミノ-n-酪酸、3,4-ジヒドロキシフェニルアラニン、ホモセリン、α-メチルセリン、オルニチン、ピペコリン酸(pipecolic acid)およびチロキシンのものを含む。

その特徴的な側鎖に官能性置換基、例えばアミノ、カルボキシル、ヒドロキシ、メルカプト、グアニジル、イミダゾリルまたはインドリル基を含む天然のアルファ-アミノ酸は、アルギニン、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、チロシンおよびシステインを含む。本発明の化合物においてR₂またはR₃がこれらの側鎖の1つである場合、官能性置換基は、任意に保護され得る。

天然のアルファ-アミノ酸の側鎖における官能性置換基の関係において用いる場合、用語「保護された(る)」は、実質的に非官能性であるこのような置換基の誘導体を意味する。例えば、カルボキシ基はエステル化でき(例えばC₁〜C₆アルキルエステルとして)、アミノ基はアミド(例えば、NHCOC₁〜C₆アルキルアミドとして)またはカルバメート(例えばNHC(=O)OC₁〜C₆アルキルまたはNHC(=O)OCH₂Phカルバメートとして)に変換でき、ヒドロキシ基は、エーテル(例えばOC₁〜C₆アルキルまたはO(C₁〜C₆アルキル)フェニルエーテル)またはエステル(例えばOC(=O)C₁〜C₆アルキルエステル)に変換でき、チオール基は、チオエーテル(例えばtert-ブチルまたはベンジルチオエーテル)またはチオエステル(例えばSC(=O)C₁〜C₆アルキルチオエステル)に変換できる。

非天然アルファアミノ酸の側鎖の例は、本発明の化合物で用いるのに適したR₂およびR₃基の説明において以下に述べるものを含む。

本明細書で用いる場合、用語「塩」は、塩基付加塩、酸付加塩および第4級塩を含む。酸性である本発明の化合物は、医薬的に許容される塩を含む塩を、例えばアルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウムおよびカリウム；アルカリ土類金属水酸化物、例えば水酸化カルシウム、バリウムおよびマグネシウムのような塩基と；例えばN-メチル-D-グルカミン、コリントリス(ヒドロキシメチル)アミノ-メタン、L-アルギニン、L-リジン、N-エチルピペリジン、ジベンジルアミンなどのような有機塩基とともに形成できる。塩基性であるこれらの化合物(I)は、医薬的に許容される塩を含む塩を、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸または臭化水素酸、硫酸、硝酸またはリン酸などの無機酸と、および酢酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、グルタミン酸、乳酸およびマンデル酸などの有機酸とともに形成できる。適切な塩の総説のために、StahlおよびWermuthによるHandbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)を参照されたい。

用語「溶媒和物」は、本明細書で用いられる場合、本発明の化合物と、1以上の医薬的に許容される溶媒分子、例えばエタノールの化学量論量とを含む分子複合体のことである。用語「水和物」は、該溶媒が水のときに用いられる。

不斉炭素原子の存在のために1以上の実際のまたは潜在的なキラル中心を含む本発明の化合物は、鏡像異性体または各キラル中心にてRもしくはSの立体化学を有するいくつかのジアステレオ異性体として存在し得る。本発明は、全てのこのような鏡像異性体およびジアステレオマー、ならびにその混合物を含む。

上記のように、本発明のエステルは、細胞内エステラーゼにより、カルボン酸に変換される。エステルおよびカルボン酸はともに、それ自体でp38 MAPキナーゼ阻害活性を有し得る。よって、本発明の化合物は、エステルだけでなく、対応するカルボン酸加水分解生成物も含む。

本発明に係る化合物、あらゆる互換性の組合せにおいて、以下の構造的特徴が存在し得る：
基D
Dは、任意に置換されていてもよい2価の単環もしくは2環式の5〜13員環のアリールまたはヘテロアリール基である。現在のところ、Dは任意に置換されていてもよいフェニル、または任意に置換されていてもよいピリジニルであることが好ましい。任意の置換基は上記のものであるが、Dにおける好ましい任意の置換基はフルオロおよびクロロを含み、例えばDが2,4-ジフルオロフェニルのときである。

P/U位置異性体
現在のところ、Pが水素であり、Uが上記で定義される式(IA)の基であるのが好ましい。

基A
式(IA)の基において、現在のところ、Aは任意に置換されていてもよい1,4-フェニレンであるのが好ましい。この場合、任意の置換基は上記のものであるが、好ましい任意の置換基は、フルオロおよびクロロを含む。Aは、例えば、同様に任意に置換されていてもよい以下のいずれかでもあり得る：

(式中、Z₁はNH、SまたはOである)。

本発明の化合物の特に好ましい部分群は、式(II)のものからなる：
（式中、R₁₅およびR₁₆は独立して、水素またはフルオロであり、z、X¹、L¹、Y、R¹、R²およびR³は式(I)に関して前記のとおりであり、以下にさらに説明するとおりである）

基-Y-L¹-X¹-[CH₂]_z-
この基(または結合手)は、アミノ酸エステルモチーフR₁R₂R₃CNH-を、環系Aに連結する際に選択される具体的な化学的方策から生じる。この結合のための化学的方策は、明らかに、広く変動可能であり、可変部Y、L¹、X¹およびzの多くの組み合わせが可能である。アミノ酸エステルモチーフと環系Aとの間の連結化学を構成する可変部の厳密な組み合わせは、全体としての化合物の最初の結合形態とはしばしば無関係である。一方、連結化学は、酵素とのさらなる結合相互作用を採用する場合がある。

アミノ酸エステルモチーフの恩恵(細胞内への容易な侵入、細胞内でのエステラーゼ加水分解、および活性なカルボン酸加水分解産物の細胞内での蓄積)は、アミノ酸エステルモチーフと環系Aとの間の連結が、細胞内のペプチダーゼ活性(分子からのアミノ酸の切断をもたらし得る)の基質でない場合に、最もよく成就されることにも注目すべきである。もちろん、細胞内ペプチダーゼへの安定性は、化合物を、破砕細胞内容物とインキュベートし、いずれかのこのような切断を分析することにより容易に試験される。

上記の一般的な考察を念頭において、基-Y-L¹-X¹-[CH₂]_z-を構成する可変部を順番に採用する：
zは0または1であり得、よって、環系Aに連結するメチレン基は任意である；
マクロファージ選択性が要求されない場合のYの好ましい具体例は、-(C=O)-、-(C=O)NH-、および-(C=O)O-である。マクロファージ選択性が要求される場合は、Yが結合手である場合を含む、Yについてのいずれのその他の選択肢が適切である。

基L¹において、存在する場合、Alk¹およびAlk²基の例は：
-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂CH₂-、-CH=CH-、-CH=CHCH₂-、-CH₂CH=CH-、CH₂CH=CHCH₂-C≡C-、-C≡CCH₂-、-CH₂C≡C-、およびCH₂C≡CCH₂を含む。Alk¹およびAlk²のさらなる例は、-CH₂W-、-CH₂CH₂W-、-CH₂CH₂WCH₂-、-CH₂CH₂WCH(CH₃)-、-CH₂WCH₂CH₂-、-CH₂WCH₂CH₂WCH₂-、および-WCH₂CH₂- (式中、Wは、-O-、-S-、-NH-、-N(CH₃)-、または-CH₂CH₂N(CH₂CH₂OH)CH₂-である)を含む。Alk¹およびAlk²のさらなる例は、2価のシクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシル基を含む。

L¹において、nが0である場合、この基は炭化水素鎖である(任意に置換されていてもよく、おそらくエーテル、チオエーテルまたはアミノ結合を有する)。現在のところ、L¹には任意の置換基は存在しないのが好ましい。mおよびpがともに0である場合、L¹は、2価の単環もしくは2環式の5〜13環原子を有する炭素環式または複素環式の基である(任意に置換されていてもよい)。nが1でありかつmおよびpの少なくとも一方が1である場合、L¹は、炭化水素鎖もしくは鎖、および単環もしくは2環式の5〜13環原子を有する炭素環式または複素環式の基(任意に置換されていてもよい)を含む2価の基である。存在する場合、Qは、例えば、2価のフェニル、ナフチル、シクロプロピル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシル基、または単環もしくは2環式の5〜13員環の複素環式基、例えばピペリジニル、ピペラジニル、インドリル、ピリジル、チエニルもしくはピロリル基であり得るが、現在のところ、1,4-フェニレンが好ましい。

具体的に、本発明、L¹のいくつかの実施形態において、mおよびpは0、かつnは1であり得る。別の実施形態において、nおよびpは0、かつmは1であり得る。さらなる実施形態において、m、nおよびpは全て0であり得る。さらなる実施形態において、mは0であり得、nは1、かつQは単環式の複素環式の基であり得、かつpは0または1であり得る。Alk¹およびAlk²は、存在する場合、-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-、-CH₂O-、-CH₂CH₂O-、-CH₂OCH₂-、-CH₂CH₂OCH₂-から選択され、Qは1,4-フェニレンであり得る。

基-Y-L¹-X¹-[CH₂]_z-の具体的な例は、-C(=O)-および-C(=O)NH-、ならびに-(CH₂)_v-、-(CH₂)_vO-、-C(=O)-(CH₂)_v-、-C(=O)-(CH₂)_vO-、-C(=O)-NH-(CH₂)_w-、-C(=O)-NH-(CH₂)_wO-、

(式中、vは1、2、3または4であり、wは1、2または3である)を含み、例えば-Y-L¹-X¹-[CH₂]_z-が、-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂CH₂-、-CH₂O-、-CH₂CH₂O-、-CH₂CH₂CH₂O-、-CH₂CH₂CH₂CH₂O-、-C(=O)-CH₂-、-C(=O)-CH₂O-、-C(=O)-NH-CH₂-、または-C(=O)-NH-CH₂O-である。

基R₁
本発明の化合物のあるクラスにおいて、R₁は、カルボン酸基である。このクラスの化合物は、カルボン酸またはその塩として投与され得るが、これらが、細胞内で、R₁がエステル基である対応する化合物に対する細胞内エステラーゼの作用により生じることが好ましい。

エステル基R₁は、本発明の化合物において、1以上の細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素によりカルボン酸基に加水分解され得るものでなければならない。本発明の化合物のエステル基を対応する酸に加水分解可能な細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素は、3つの既知のヒト酵素アイソタイプhCE-1、hCE-2およびhCE-3を含む。これらが主要な酵素であると考えられるが、ビフェニルヒドロラーゼ(BPH)のような他の酵素も、エステルの加水分解において役割を有し得る。通常、カルボキシルエステラーゼが遊離のアミノ酸エステルを親の酸に加水分解するならば、阻害剤に共有的にコンジュゲートされているエステルモチーフも加水分解するであろう。よって、本明細書に記載される破砕細胞アッセイおよび／または単離されたカルボキシルエステラーゼアッセイは、要求される加水分解プロフィールを有するエステルの直接的で、迅速かつ単純な最初のスクリーニングを提供する。この方法で選択されたエステルモチーフは、次いで、選択されたコンジュゲーション化学により阻害剤にコンジュゲートされた場合に、同じカルボキシルエステラーゼアッセイにおいて再アッセイされ、それがそのバックグラウンドにおいてもまだカルボキシルエステラーゼの基質であることが確認される。

それらが細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素により加水分解可能であるという要件に従って、具体的なエステル基R₁の例は、式-(C=O)OR₁₄ (式中、R₁₄は、R₈R₉R₁₀C- (式中、
(i) R₈は、水素、または任意に置換されていてもよい(C₁〜C₃)アルキル-(Z¹)_a-[(C₁〜C₃)アルキル]_b-、もしくは(C₂〜C₃)アルケニル-(Z¹)_a-[(C₁〜C₃)アルキル]_b- (式中、aおよびbは独立して0または1であり、Z¹は、-O-、-S-または-NR₁₁- (式中、R₁₁は水素または(C₁〜C₃)アルキルである)であり；R₉およびR₁₀は、独立して、水素または(C₁〜C₃)アルキル-であるか；
(ii) R₈は、水素、または任意に置換されていてもよいR₁₂R₁₃N-(C₁〜C₃)アルキル- (式中、R₁₂は水素または(C₁〜C₃)アルキルであり、R₁₃は水素または(C₁〜C₃)アルキルであるか；あるいはR₁₂およびR₁₃は、それらが結合している窒素と一緒になって、任意に置換されていてもよい単環式の5もしくは6環原子の複素環、または2環式の8〜10環原子の複素環を形成する)であり、R₉およびR₁₀は、独立して水素または(C₁〜C₃)アルキル-であるか；あるいは
(iii) R₈およびR₉は、それらが結合する炭素と一緒になって、任意に置換されていてもよい単環式の3〜7環原子の炭素環、または2環式の8〜10環原子の炭素環、または架橋された単環式の7〜10環原子の炭素環を形成し、R₁₀は水素である)
である)のものを含む。
上記の(i)、(ii)および(iii)の場合、「アルキル」はフルオロアルキルを含む。

これらのクラス(i)、(ii)および(iii)内で、R₁₀は、しばしば水素である。R₁₄の具体的な例は、メチル、トリフルオロメチル、エチル、n-もしくはイソ-プロピル、n-、sec-もしくはtert-ブチル、シクロヘキシル、アリル、ビシクロ[2.2.1]へプチ-2-イル、2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル、フェニル、ベンジル、2-、3-もしくは4-ピリジルメチル、N-メチルピペリジン-4-イル、テトラヒドロフラン-3-イルまたはメトキシエチルを含む。現在好ましいものは、R₁₄がシクロペンチルであるものである。

マクロファージは、サイトカイン、特にTNFαおよびIL-1の放出により炎症性障害において重要な役割を演じていることが知られている(van Roonら, Arthritis and Rheumatism, 2003, 1229〜1238)。リウマチ性関節炎において、これらは、関節の炎症および関節の破壊の維持に主に寄与する。マクロファージは、腫瘍の成長および発達にも関与する(NaldiniおよびCarraro, Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2005, 3〜8)。よって、マクロファージ細胞増殖を選択的に標的にする薬剤は、癌および自己免疫疾患の治療において価値があるだろう。特定の細胞のタイプを標的することは、副作用の低減を導くことが期待される。本発明者らは、p38キナーゼ阻害剤にマクロファージを標的にさせる方法を見出し、これは、エステラーゼモチーフがp38キナーゼ阻害剤に連結する様式が、それが加水分解されるかを決定し、よって、それが異なる細胞のタイプにおいて蓄積するか否かを決定するという観察に基づく。具体的に、マクロファージが、ヒトカルボキシルエステラーゼhCE-1を含有するが、他のタイプの細胞は含有しないことが見出されている。一般式(I)において、エステラーゼモチーフR₁C(R₂)(R₃)NH-の窒素がカルボニル(-C(=O)-)に直接連結していない場合、すなわちYが-C(=O)、-C(=O)O-または-C(=O)NR₃-基でない場合、エステルは、hCE-1のみによって加水分解され、よって、阻害剤は、マクロファージにおいてのみ蓄積する。本明細書で用いる場合、「単球」と特定しない限り、マクロファージの用語は、マクロファージ(腫瘍関連マクロファージを含む)および／または単球のことをいうために用いられる。

置換基R₂およびR₃
置換基R₂およびR₃は、α,α-2置換グリシンまたはα,α-2置換グリシンエステルのα-置換基として見なされ得る。それゆえ、これらの置換基は、グリシン以外の天然または非天然アルファ-アミノ酸の側鎖であり得、そのような側鎖においてあらゆる官能基は保護され得る。

例えば、R₂およびR₃の例は、フェニルおよび式-CR_aR_bR_cの基
(式中：
R_a、R_bおよびR_cはそれぞれ独立して、水素、(C₁〜C₆)アルキル、(C₂〜C₆)アルケニル、(C₂〜C₆)アルキニル、フェニル(C₁〜C₆)アルキル、(C₃〜C₈)シクロアルキルであるか；
R_cは水素であり、R_aおよびR_bは独立して、フェニルまたはピリジルのようなヘテロアリールであるか；
R_cは、水素、(C₁〜C₆)アルキル、(C₂〜C₆)アルケニル、(C₂〜C₆)アルキニル、フェニル(C₁〜C₆)アルキルまたは(C₃〜C₈)シクロアルキルであり、R_aおよびR_bは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、3〜8員のシクロアルキルまたは5〜6員の複素環を形成するか；
R_a、R_bおよびR_cは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、3環式の環(例えばアダマンチル)を形成するか；

R_aおよびR_bはそれぞれ独立して、(C₁〜C₆)アルキル、(C₂〜C₆)アルケニル、(C₂〜C₆)アルキニル、フェニル(C₁〜C₆)アルキル、またはR_cについて以下で定義される水素以外の基であるか、またはR_aおよびR_bはそれらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたは複素環を形成し、R_cは水素、-OH、-SH、ハロゲン、-CN、-CO₂H、(C₁〜C₄)ペルフルオロアルキル、-CH₂OH、-O(C₁〜C₆)アルキル、-O(C₂〜C₆)アルケニル、-S(C₁〜C₆)アルキル、-SO(C₁〜C₆)アルキル、-SO₂(C₁〜C₆)アルキル、-S(C₂〜C₆)アルケニル、-SO(C₂〜C₆)アルケニル、-SO₂(C₂〜C₆)アルケニルまたは基-Q-W (式中、Qは結合手または-O-、-S-、-SO-またはSO₂-を表し、Wはフェニル、フェニルアルキル、(C₃〜C₈)シクロアルキル、(C₃〜C₈)シクロアルキルアルキル、(C₄〜C₈)シクロアルケニル、(C₄〜C₈)シクロアルケニルアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキル基を表し、基Wは、ヒドロキシ、ハロゲン、-CN、-CONH₂、-CONH(C₁〜C₆)アルキル、-CONH(C₁〜C₆アルキル)₂、-CHO、-CH₂OH、(C₁〜C₄)ペルフルオロアルキル、-O(C₁〜C₆)アルキル、-S(C₁〜C₆)アルキル、-SO(C₁〜C₆)アルキル、-SO₂(C₁〜C₆)アルキル、-NO₂、-NH₂、-NH(C₁〜C₆)アルキル、-N((C₁〜C₆)アルキル)₂、-NHCO(C₁〜C₆)アルキル、(C₁〜C₆)アルキル、(C₂〜C₆)アルケニル、(C₂〜C₆)アルキニル、(C₃〜C₈)シクロアルキル、(C₄〜C₈)シクロアルケニル、フェニルもしくはベンジルから独立して選択される1以上の置換基で任意に置換されていてもよい)を含む。

あるいは、置換基R₂およびR₃は、それらが結合している炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシル環のような3〜6員の
飽和スピロシクロ環、又はピペリジン-4-イル環のようなスピロヘテロシクリル環を形成し得る。
ある場合に、置換基R₂およびR₃の少なくとも一つはC₁〜C₆アルキル置換基、例えばメチル、エチル又はn-もしくはイソ-プロピルである。
いくつかの実施形態において、置換基R₂およびR₃の一方はC₁〜C₆アルキル置換基、例えばメチル、エチル又はn-もしくはイソ-プロピルであり、他方はメチル、エチル、n-およびイソ-プロピル、n-、sec-およびtert-ブチル、フェニル、ベンジル、チエニル、シクロヘキシルならびにシクロヘキシルメチルからなる群から選択される。

現在のところ、R₂およびR₃の一方がメチルであり、他方がメチル、エチルまたはn-もしくはイソ-プロピルであるか；またはR₂およびR₃がそれらが結合している炭素と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシル環を形成する場合が好ましい。具体的事例において、置換基R₂およびR₃はそれぞれメチルである。

全身投与される本発明の化合物について、カルボキシルエステラーゼ切断の速度が遅いエステルが好ましい。なぜなら、それらは、前全身性(pre-systemic)代謝に、より影響を受けにくいからである。よって、それらの標的組織に無傷で到達するそれらの能力は増加し、エステルは標的組織の細胞の内部で酸生成物に変換され得る。しかし、エステルが標的組織に直接用いられるかまたは指向される局所投与に対しては、全身への曝露、よって望ましくない副作用を最小限にするために、エステルのエステラーゼ切断速度が迅速であることがしばしば望ましい。本発明の化合物において、アルファアミノ酸エステルのアルファ炭素に隣接する炭素が1置換されている場合、すなわちR₂がCH₂R^z (R^zは1置換基である)である場合、このエステルは、R₂が例えばフェニルまたはシクロヘキシルである場合のように炭素が2または3置換されている場合よりも、より迅速に切断される傾向にある。

上記のように、本発明に係る化合物は、p38 MAKキナーゼ活性の阻害剤であり、よって、p38 MAPキナーゼ活性が役割を有する乾癬、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、多発性硬化症、糖尿病、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主疾患または全身性エリテマトーデスおよびリウマチ性関節炎のような疾患の治療において有用である。

いずれの特定の患者についての具体的な用量レベルが、用いられる具体的な化合物の活性、年齢、体重、全身の健康、性別、食事、投与の時間、投与経路、排泄経路、薬物の組み合わせおよび治療を受ける特定の疾患の重篤度を含む種々の因子に依存することが理解される。最適な用量レベルおよび投与の頻度は、臨床試験により決定される。

本発明に係る化合物は、それらの薬物動態学的特性に矛盾しないいずれの経路による投与のために製造できる。経口投与可能な組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、ロゼンジ、液剤またはゲル製剤の形であり得、例えば経口、局所もしくは滅菌非経口の溶液または懸濁液の形であり得る。
経口投与のための錠剤およびカプセル剤は、単位用量提示形態(unit dose presentation form)であり得、通常の賦形剤、例えば結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントまたはポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、ショ糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；打錠滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、またはシリカ；崩壊剤、例えばバレイショデンプン、あるいは許容される湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムを含有し得る。錠剤は、通常の製薬のプラクティスにおいて公知の方法に従って被覆できる。

経口の液体製剤は、例えば水性もしくは油性の懸濁剤、液剤、乳剤、シロップまたはエリキシル剤の形であり得るか、あるいは使用前に水またはその他の適切なビヒクルを用いる再構成のための乾燥物質であり得る。このような液体製剤は、通常の添加剤、例えば懸濁剤、例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン硬化食用油；乳化剤、例えばレシチン、ソルビタンモノオレエート、またはアカシア；非水性ビヒクル（食用油を含み得る）、例えばアーモンド油、ヤシ油、油状エステル、例えばグリセリン、プロピレングリコールまたはエチルアルコール；防腐剤、例えばメチルもしくはプロピルp-ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸、ならびに所望により通常の矯味矯臭剤または着色剤を含み得る。

皮膚への局所的な塗布のために、薬剤は、クリーム、ローションまたは軟膏剤として製造できる。薬剤に使用し得るクリームまたは軟膏の製剤は、例えば英国薬局方のような製薬の標準的な参考書に記載されるような当該技術における公知の通常の製剤である。

吸入による局所的な使用のために、薬剤は、例えば圧力駆動噴射噴霧器または超音波噴霧器によるか、あるいは好ましくは噴射剤駆動計量供給噴霧器または微粉末の噴射剤フリーの投与、例えば吸入カプセルもしくはその他の「乾燥粉末」送達系によるエアロソル送達用に処方できる。賦形剤、例えば噴射剤(例えば計量供給エアロソルの場合、Frigen)、界面活性剤、乳化剤、安定化剤、防腐剤、矯味矯臭剤および充填剤(例えば粉末吸入器の場合、ラクトース)が、このような吸入製剤に存在し得る。吸入の目的のために、患者に適する吸入法を用いて、最適粒子サイズのエアロソルを発生させ投与できる多数の装置が利用可能である。アダプタ(スペーサー、エキスパンダー)および洋ナシ形の容器(例えばNebulator（登録商標）、Volumatic（登録商標）)、および特に粉末吸入器の場合の計量供給エアロソル用の吹きかけるスプレーを発射する自動装置(Autohaler(登録商標))に加えて、多くの技術的解決法が利用可能である(例えば、Diskhaler（登録商標）、Rotadisk（登録商標）、Turbohaler（登録商標）、または欧州特許出願EP 0 505 321に記載されるような吸入器)。

眼への局所的な使用のために、薬剤は、安定で滅菌の水性または非水性のビヒクル中の液剤または懸濁剤として製造できる。添加剤、例えば緩衝剤、例えばメタ重硫酸ナトリウムまたはエデト酸二ナトリウム；殺菌剤および殺真菌剤を含む防腐剤、例えば酢酸-もしくは硝酸-フェニル第2水銀、塩化ベンザルコニウムまたはクロルヘキシジン、および増粘剤、例えばヒプロメロースも含まれることができる。

活性成分は、滅菌媒体中で非経口的に投与することもできる。用いるビヒクルおよび濃度に応じて、薬剤は、ビヒクル中に懸濁または溶解できる。有利には、アジュバント、例えば局所麻酔剤、防腐剤および緩衝剤をビヒクル中に溶解できる。

合成
本発明に係る化合物(I)の合成のために多数の合成方策があるが、それらは全て、合成有機化学者に知られる既知の化学に基づく。よって、式(I)の化合物は、標準的な文献に記載され、かつ当業者に公知の手順に従って合成できる。典型的な文献の出典は、"Advanced organic chemistry", 第4版(Wiley), J March、"Comprehensive Organic Transformation", 第2版(Wiley), R.C. Larock、"Handbook of Heterocyclic Chemistry", 第2版(Pergamon), A.R. Katritzky)、"Synthesis"、"Acc. Chem. Res."、"Chem. Rev"に見出される総説文献、またはオンラインの標準的な文献検索もしくは"Chemical Abstracts"もしくは"Beilstein"のような二次的な出典により同定される一次的な文献の出典である。

本発明の化合物は、以下に一般的に、そして以下の実施例により具体的に記載されるいくつかの方法により調製され得る。以下に記載される反応において、反応性官能基、例えばヒドロキシ、アミノおよびカルボキシ基を、最終生成物においてそれらが所望される場合に保護して、それらの望ましくない反応への参加を避ける必要があろう[例えばGreene, T.W., "Protecting Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, 1999を参照されたい]。通常の保護基は、標準的なプラクティスに従って用いられ得る。一般式(I)の化合物の合成における最終工程が脱保護である場合があり、以下の本明細書に記載される本発明による方法は、保護基のそのような除去に拡張されると理解される。

本発明の化合物は次の実施例に従って製造され得る。温度は全て℃である。次の略語が用いられる。
EtOAc = 酢酸エチル
Boc = tert-ブトキシカルボニル
CDI = 1,1'-カルボニル ジイミダゾール
DCM = ジクロロメタン
DMAP = ジメチルアミノピリジン
DMF = ジメチルホルムアミド
DMSO = ジメチルスルホキシド
NMP = 1-メチル-2-ピロリドン
THF = テトラヒドロフラン
HCl = 塩酸
NaHCO₃ = 炭酸水素ナトリウム
Pd/C = パラジウム炭素
MgSO₄ = 硫酸マグネシウム
EDCI = N-(3-ジメチルアミノプロピル)-N'-エチルカルボジイミド塩酸塩
Et₂O = ジエチルエーテル
HOBt = 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
TFA = トリフルオロ酢酸
TLC = 薄層クロマトグラフィー
ml = ミリリットル
g = グラム
mg = ミリグラム
mol = モル
mmol = ミリモル
LCMS = 高速液体クロマトグラフィー／質量分析
NMR = 核磁気共鳴
RT = 室温

マイクロ波照射は、CEM Discover集束(focused)マイクロ波反応器を用いて行った。溶媒は、加熱せずにGeneVac Series Iを用いるか、または30℃にてVacRampを備えるGenevac Series IIを用いるか、またはBuchiロータリーエバポレータを用いて除去した。フラッシュクロマトグラフィーカラムによる化合物の精製は、Silicycleから得た粒子サイズ40〜63μm (230〜400メッシュ)のシリカゲルを用いて行った。分取HPLCによる化合物の精製は、逆相ThermoHypersil-Keystone Hyperprep HS C18カラム(12μm、100×21.2 mm)、9.5分かけてのグラジエント20〜100% B (A= 水/ 0.1% TFA、B= アセトニトリル/ 0.1% TFA)、流速= 30 ml/分、注入溶媒2：1 DMSO：アセトニトリル (1.6 ml)、215 nmでのUV検出を用いるGilsonシステムで行った。

¹H NMRスペクトルは、重水素化溶媒中でのBruker 400 MHz AVまたはBruker 300 MHz AV分光計で記録した。ケミカルシフト(δ)は、百万分率である。薄層クロマトグラフィー(TLC)分析は、Kieselgel 60 F₂₅₄ (Merck)プレートで行い、UV光を用いて視覚化した。

分析HPLCMSは、Agilent HP1100, Waters 600またはWaters 1525 LCシステムで、逆相Hypersil BDS C18カラム(5μm, 2.1×50 mm)、2.10分かけてのグラジエント0〜95% B (A= 水/0.1% TFA, B= アセトニトリル/0.1% TFA)、流速= 1.0 ml/分を用いて行った。UVスペクトルは、215 nmにて、Gilson G1315Aダイオードアレイ検出器、G1214A単一波長UV検出器、Waters 2487二波長UV検出器、Waters 2488二波長UV検出器、またはWaters 2996ダイオードアレイUV検出器を用いて記録した。質量スペクトルは、1秒当たり2スキャンまたは1.2秒当たり1スキャンのサンプリング速度にてm/z 150〜850の範囲で、Z-スプレーインターフェースを有するMicromass LCT、またはZ-スプレーもしくはMUXインターフェースを有するMicromass LCTを用いて得た。データは、OpenLynxおよびOpenLynx Browserソフトウエアを用いて積分して報告した。

中間体1: 4-クロロフェニル 3-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロパンイミドチオエート
中間体1は、WO 2003076405に記載された実験手順を用いて製造できる。

中間体2: ｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)イル]-フェニル｝アセトアルデヒド

｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)イル]-フェニル｝アセトアルデヒドは、次のスキーム1に示される経路を用いて合成された。

段階1 - 2-(4-｛[3-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロパンイミドイル]アミノ｝フェニル)エチル アセテート
4-クロロフェニル 3-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロパンイミドチオエート (中間体 1) (69.7 g, 192 mmol)を氷酢酸 (700 ml)に懸濁し、2-(4-アミノフェニル)エタノール (27.71 g, 202 mmol, 1.05 等量)を加えた。混合物を80℃で2.5時間加熱した後、室温まで冷却し、減圧下に濃縮した。残渣をEt₂O (500 ml)で摩砕し、Et₂O (2×250 ml)で洗浄し、白色の固体を得、それを飽和NaHCO₃ (700 ml)中に懸濁し、30分間激しく撹拌した。濾過および水で洗浄し、ベージュ色の固体を得、それを減圧下に乾燥して、標記の化合物 (64.12 g, 収率92 %)を得た。
LC/MS: m/z 361 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 7.79-7.71 (1H, m), 7.45-7.07 (6H, m), 5.26 (1H, s), 4.21 (2H, t, J=6.8 Hz), 2.89 (2H, t, J=6.5 Hz), 2.00 (3H, s).

段階2 - 2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル アセテート
窒素雰囲気下、CDI (43.26 g, 267 mmol, 1.5 等量)を無水THF (1 l)中に溶解し、0℃に冷却した。プロピオール酸 (16.43 ml, 267 mmol, 1.5 等量)を滴下し、混合物を室温まで温め、1時間撹拌した。無水THF (500 ml)中の2-(4-｛[3-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロパンイミドイル]-アミノ｝フェニル)エチル アセテート (64.12 g, 178 mmol)の懸濁液を加え、混合物を80℃で6時間加熱した後、室温で一晩撹拌しておいた。生じた沈殿を濾過により回収し、Et₂Oで洗浄し、減圧下に乾燥し、淡黄色の固体として標記の化合物(39.56 g)を得た。濾液を減圧下に濃縮し、褐色の油状物を得、それをEtOAc (500 ml)で摩砕し、濾過により第2のバッチ (7.21 g)を得た。2つのバッチを合わせ、黄色の固体として標記の化合物 (46.77 g, 収率64 %)を得た。
LC/MS: m/z 413 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 7.55- 7.37 (4H, m), 7.3-7.20 (4H, m), 5.72 (1H, d, J=9.6 Hz), 4.30 (2H, t, J=6.9 Hz), 3.01 (2H, t, J=6.9 Hz), 2.04 (3H, s).

段階3 - 6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-1-[4-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]ピリジン-2(1H)-オン
2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル アセテート (46.77 g, 113 mmol)を6N HCl水溶液 (500 ml)中に懸濁し、還流で2時間加熱した。室温まで冷却して形成された沈殿を濾過により回収し、飽和NaHCO₃ 水溶液(1000 ml)中に懸濁し、30分間激しく撹拌した。濾過、水(2×500 ml)での洗浄および減圧下に乾燥して、オフホワイト色の固体として標記の化合物 (40.11 g, 収率96 %)を得た。
LC/MS: m/z 371 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 7.55-7.37 (4H, m), 7.31-7.20 (4H, m), 5.71 (1H, d, J=9.9 Hz), 4.69 (1H, t, J=5.3 Hz), 3.71 (2H, m), 2.84 (2H, d, J=6.9 Hz).

段階4 - ｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝-アセトアルデヒド
0℃で、無水DCM (750 ml)中の6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-1-[4-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]-ピリジン-2(1H)-オン (15.00 g, 40.5 mmol)の懸濁液に、デス-マーチン ペルヨージナン(Dess-Martin Periodinane) (20.62 g, 48.6 mmol, 1.2 等量)を少しずつ加えた。混合物を室温まで温め、3時間撹拌した後、飽和NaHCO₃ 水溶液(400 ml)および飽和Na₂S₂O₃ 水溶液(400 ml)中に注ぎ、30分間激しく撹拌した。水層を分離し、DCM (2×500 ml)で抽出し、有機抽出物を合わせ、MgSO₄で乾燥した。濾過および減圧下に濃縮して、淡黄色の粗固体として標記の化合物(15.13 g)を得、さらに精製することなく用いた。
LC/MS: m/z 369 [M+H]⁺.

中間体3: 2-(4-アミノ-3,5-ジフルオロ-フェニル)-エタノール
2-(4-アミノ-3,5-ジフルオロ-フェニル)-エタノールは、次のスキーム2に示される経路を用いて合成された。

段階1 - tert-ブチル (3, 5-ジフルオロ-4-ニトロフェニル)アセテート
NMP (100 ml)中のカリウム tert-ブトキサイド (12.3 g, 111.0 mmol)の混合物を、N₂下、-20℃に冷却した。NMP (100 ml)中の2,6-ジフルオロニトロベンゼン (5.0 g, 31.43 mmol)およびtert-ブチルクロロアセテート (7.6 ml, 53.11 mmol)の混合物を、1.5時間かけて-10℃〜-20℃でゆっくりと加えた。1.5時間後、2M HCl (120 ml)および氷中に注ぐことによって反応混合物をクエンチし(quenched)、次いでヘプタン (300 ml)を加えた。混合物を10分間撹拌し、分離し、水性部をヘプタン(2×400 ml)で抽出した。有機層を食塩水(×2)で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、濾過し、ヘプタンで洗浄した。溶液を真空下に濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー (3〜4% EtOAc/ヘプタン)により精製し、オレンジ色の油状物として標記の化合物(4.34 g, 収率53 %)を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7.06 (2H, d, J=8.7Hz), 3.59 (2H, s), 1.48 (9H, s).

段階2 - (3, 5-ジフルオロ-4-ニトロフェニル)酢酸
DCM (10 ml)中のtert-ブチル (3,5-ジフルオロ-4-ニトロフェニル)アセテート (4.34 g, 15.88 mmol)の溶液に、0℃でTFA (10 ml)を加えた。反応混合物を室温に温め、1.5時間撹拌した。反応混合物を真空下に濃縮し、ヘプタン(10 ml)中でスラリーにし、濾過し、乾燥して、オレンジ色の固体として標記の化合物(2.95 g, 収率86 %)を得た。
¹H NMR (300 MHz, d₆ DMSO) δ: 7.45 (2H, d, J=9.6Hz), 3.79 (2H, s).

段階3 - 2-(3,5-ジフルオロ-4-ニトロフェニル)エタノール
N₂下、THF (30 ml)中の(3,5-ジフルオロ-4-ニトロフェニル)酢酸 (2.95 g, 13.59 mmol)の溶液を0℃に冷却し、THF中のBH₃Me₂Sの溶液 (10.2 ml, 20.38 mmol)を5分かけて滴下した。混合物を室温に温め、4.5時間撹拌した。反応混合物を0℃に冷却し、MeOH (10 ml)でクエンチした。混合物を真空下に濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー (30〜60% EtOAc/ヘプタン)により精製し、油状物として標記の化合物(2.45 g, 収率89 %)を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7.03 (2H, d, J=9.3 Hz), 3.97-3.91 (2H, q, J=5.4, 5.7 Hz), 2.93 (2H, t, J=6.2 Hz), 1.52 (1H, t, J=5.0 Hz).

段階4 - 2-(4-アミノ-3,5-ジフルオロフェニル)エタノール
EtOAc (50 ml)中の2-(3,5-ジフルオロ-4-ニトロフェニル)エタノール (2.45 g, 12.06 mmol)の溶液に、Pd/C (0.8 g)を加えた。混合物をH₂ 雰囲気下、19時間撹拌し、濾過し、真空下に濃縮し、淡褐色の固体として標記の化合物 (2.15 g, 収率100 %)を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 6.70-6.67 (2H, m), 3.82 (2H, t, J=6.5 Hz), 2.76 (2H,t, J=6.5 Hz).

中間体 4: ｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソ-2H-ピリジン-1-イル]-3,5-ジフルオロ-フェニル｝-アセトアルデヒド
｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロ-ベンゾイル)-2-オキソ-2H-ピリジン-1-イル]-3,5-ジフルオロ-フェニル｝-アセトアルデヒドは、次のスキーム3に示さる経路を用いて合成された。

段階1 - 2-(4-｛[1-アミノ-3-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロペ-1-エン-1-イル]アミノ｝-3,5-ジフルオロフェニル)エチル アセテート
酢酸 (20 ml)中の3-アミノ-3-[(4-クロロフェニル)チオ]-1-(2,4-ジフルオロフェニル)プロペ-2-エン-1-オン 塩酸塩 (3.99 g, 11.1 mmol) (中間体 1)の混合物に、2-(4-アミノ-3,5-ジフルオロフェニル)エタノール (中間体 3) (2.00 g, 11.6 mmol)を加え、混合物を80℃で20時間加熱した。混合物を冷却し、真空下に濃縮し、残渣をジエチルエーテルで摩砕して、固体を得た。その固体をEtOAcと飽和NaHCO₃との間で分配し、食塩水で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、減圧下に濃縮して、固体として標記の化合物(2.91 g, 収率67 %)を得た。
LC/MS: m/z 397 [M+H]⁺.

段階2 - 2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェニル｝エチル アセテート
N₂下、0℃で、THF (36 ml)中のCDI (1.78 g, 10.98 mmol)の溶液に、プロピオール酸 (675 μl, 10.98 mmol)を滴下した。混合物を室温に温め、1.5時間撹拌した。THF (18 ml)中の2-(4-｛[1-アミノ-3-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロペ-1-エン-1-イル]アミノ｝-3,5-ジフルオロフェニル)エチル アセテート (2.9 g, 7.32 mmol)の溶液を滴下し、混合物を80℃で5時間加熱した。混合物を冷却し、真空下に濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー(0.7〜1% MeOH/DCM)により2回精製し、固体として標記の化合物(1.20 g, 収率37 %)を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7.49-7.39 (2H, m), 7.09-6.90 (4H, m), 5.93 (1H, d, J=9.9 Hz), 4.37 (2H, t, J=6.4 Hz), 3.06 (2H, t, J=6.6 Hz), 2.10 (3H, s).

段階3 - 6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-1-[2,6-ジフルオロ-4-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]ピリジン-2(1H)-オン
6N HCl水溶液 (50 ml)中の2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェニル｝エチル アセテート (1.1 g, 2.45 mmol)の混合物を還流で24時間加熱した。混合物を冷却し、濾過し、水で洗浄した。沈殿物をEtOAcと飽和NaHCO₃水溶液との間で分配し、有機層をさらに食塩水で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、真空下に濃縮して、固体として標記の化合物(993 mg, 収率100 %)を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7.49-7.39 (2H, m), 7.15-6.90 (4H, m), 5.92 (1H, d, J=9.6 Hz), 4.00-3.85 (2H, m), 2.95 (2H, t, J=6.0 Hz).

段階4 - ｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェニル｝アセトアルデヒド
DCM (20 ml)中の6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-1-[2,6-ジフルオロ-4-(2 ヒドロキシエチル)フェニル] ピリジン-2(1H)-オン (500 mg, 1.23 mmol)の混合物に、デス-マーチン ペルヨージナン (783 mg, 1.85 mmol)を加えた。混合物を3.5時間撹拌し、飽和Na₂S₂O₃水溶液(20 ml)および飽和NaHCO₃ (20 ml)を加え、混合物を30分間激しく撹拌した。有機層を分離し、水性部(the aqueous)をDCMで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、濃縮して、固体として標記の化合物(497 mg, 収率100 %)を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 9.88 (1H, s), 7.49-7.40 (2H, m), 7.12-6.91 (4H, m), 5.93 (1H, d, J=9.9 Hz), 3.89 (2H, s).

中間体5: ｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝酢酸
中間体5は、次のスキーム4に示される経路を用いて合成された。

段階1 - ｛4-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]フェニル｝酢酸
0.2N 水酸化ナトリウム水溶液 (40 ml)中の3-(4-アミノフェニル)酢酸 (5.00 g, 33 mmol)の溶液に、ジ-tert-ブチル ジカルボネート (7.22 g, 33mmol)を加え、反応混合物をRTで一晩撹拌した。反応混合物を1M HClでpH 2に酸性化し、EtOAc (3×50 ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水 (50 ml)で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、濾過し、減圧下に濃縮して、ベージュ色の固体を得た。エタノール/ヘプタンから再結晶し、標記化合物(5.70 g, 収率68%)を得た。
LC/MS: m/z 274 [M+Na]⁺.

段階2 - ベンジル ｛4-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]フェニル｝アセテート
DCM (60 ml)中の｛4-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]フェニル｝酢酸 (5.70 g, 22.7 mmol)の溶液に、EDCI (4.78 g, 25 mmol)、DMAP (277 mg, 2.3 mmol)およびベンジル アルコール (4.7ml, 45.4 mmol)を加えた。反応混合物をRTで一晩撹拌し、次いで1M HCl (50 ml)、飽和Na₂CO₃ (50 ml)で洗浄した。有機層を水性部から分離し、乾燥(MgSO₄)し、濾過し、減圧下に濃縮して、淡褐色の油状物を得た。カラムクロマトグラフィー (へプタン中の30% EtOAc)により精製し、固体として標記の化合物(7.75 g, 収率100%)を得た。
LC/MS: m/z 364 [M+Na]⁺.

段階3 - ベンジル (4-アミノフェニル)アセテート
DCM (50 ml)中のベンジル ｛4-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]フェニル｝アセテート (8.15 g, 23.8 mmol)の溶液に、TFA (25 ml)を加えた。反応混合物をRTで一晩撹拌し、次いで減圧下に濃縮して、黄色の油状物を得た。Et₂Oで摩砕し、淡黄色の固体を得た。これをEtOAc (100 ml)と飽和Na₂CO₃ (100 ml)との間で分配した。有機層を分離し、食塩水(30 ml)で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、濾過し、減圧下に濃縮して、黄色の油状物得た(3.78 g, 収率69%)。
LC/MS: m/z 242 [M+H]⁺.

段階4 - ベンジル (4-｛[(1E)-1-アミノ-3-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロペ-1-エン-1-イル]アミノ｝フェニル)アセテート
ベンジル (4-アミノフェニル)アセテート (3.78 g, 12.1 mmol)および4-クロロフェニル 3-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロパンイミドチオエート (中間体 1) (4.4 g, 12.1mmol)を酢酸 (45 ml)中に溶解し、その混合物を80℃で1時間撹拌し、次いで減圧下に濃縮した。得られた黄色の油状物をEt₂Oで摩砕し、淡黄色の固体を得た。この固体を飽和NaHCO₃ (200 ml)中に懸濁し、RTで30分間激しく撹拌した。黄色の固体を濾過により回収し、水で十分に洗浄し、減圧下で乾燥して、黄色の固体を得た(5.13 g, 100%)。
LC/MS: m/z 423 [M+H]⁺.

段階5 - ベンジル ｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝アセテート
N₂下、0℃でTHF (100 ml)中のCDI (2.95 g, 18.2 mmol)の溶液に、プロピオール酸 (1.12ml, 18.2 mmol)を滴下した。混合物を室温に温め、1時間撹拌した。THF (50 ml)中のベンジル (4-｛[(1E)-1-アミノ-3-(2,4-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロペ-1-エン-1-イル]アミノ｝フェニル)アセテート (5.13 g, 12.1 mmol)の溶液を滴下し、混合物を80℃で一晩加熱した。混合物をRTに冷却した。濾過によりベージュ色の固体を回収し、捨てた(望ましくない副生物)。濾液を減圧下に濃縮し、褐色の油状物を得た。EtOAcで摩砕し、褐色の粘着性の固体を得、これも少量の望ましくない生成物のみを含むので捨てた。摩砕からの濾液を真空下に濃縮し、褐色の固体を得た。少量のMeOHおよびEt₂Oで摩砕して、ベージュ色の固体として標記の化合物(1.05 g, 収率18%)を得た。
LC/MS: m/z 475 [M+H]⁺.

段階6 - ｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝酢酸
ベンジル ｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル]アセテート (1.05 g, 2.21 mmol)をEtOAc (50 ml)中に溶解した。溶液を脱気し、窒素でフラッシュした(flushed)後、Pd/C (200 mg)を加えた。得られる懸濁液を窒素(×3)でフラッシュし、次いで水素と一緒にRTで2時間撹拌した。反応混合物をセライトのパッドにより濾過し、次いでEtOAcで十分に洗浄した。合わせた濾液を減圧下に濃縮し、薄いオレンジ色の固体を得た(0.65 g, 77%)。
LC/MS: m/z 385 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 7.56-7.48 (3H, m), 7.41 (1H, td, J=2.5, 9..8Hz), 7.32-7.20 (4H, m), 5.72 (1H, d, J=9.8 Hz), 3.70 (2H, s).

中間体6: 3-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェノキシ｝プロパナール
中間体6は、次のスキーム5に示される経路を用いて合成された。

段階1 - (2E)-3-アミノ-3-[(2,6-ジフルオロ-4-ヒドロキシフェニル)アミノ]-1-(2,4 ジフルオロフェニル)プロペ-2-エン-1-オン
段階1 生成物は、中間体4 (スキーム3)の段階1 生成物と同様の方法で製造された。
LC/MS: m/z 327 [M+H]⁺.

段階2- 6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-1-(2,6-ジフルオロ-4-ヒドロキシフェニル)ピリジン-2(1H)-オン
段階2 生成物は、中間体4 (スキーム3)の段階2 生成物と同様の方法で製造された。
LC/MS: m/z 379 [M+H]⁺.

段階3 - 6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-1-[2,6-ジフルオロ-4-(3-ヒドロキシプロポキシ)フェニル]ピリジン-2(1H)-オン
アセトン (25ml)中の6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-1-(2,6-ジフルオロ-4-ヒドロキシフェニル)ピリジン-2(1H)-オン (1 g, 2.6 mmol)の溶液に、 3-ブロモプロパン-1-オール (0.26ml, 2.9 mmol)、続いてヨウ化ナトリウム (0.8 g, 5.3 mmol)および炭酸カリウム (1.46 g, 10.6 mmol)を加えた。窒素雰囲気下、反応混合物を70℃で8時間撹拌し、次いで減圧下に濃縮した。残渣を水およびEt₂Oで摩砕した。得られる固体を真空下で濾過し、オフホワイト色の固体を得た(0.7 g, 61%)。
LC/MS: m/z 437 [M+H]⁺.

段階4 - 3-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェノキシ｝プロパナール
DCM (10 ml)中の6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-1-[2,6-ジフルオロ-4-(3-ヒドロキシプロポキシ)フェニル]ピリジン-2(1H)-オン (0.25 g, 0.57 mmol)の溶液に、デス-マーチン ペルヨージナン (0.29 g, 0.69 mmol)を加え、混合物をRTで一晩撹拌した。反応混合物を飽和NaHCO₃ (5 ml)とチオ硫酸ナトリウム (5 ml)との1:1混合物でクエンチした。二相混合物を濾過し、淡黄色の固体を得た。これを水およびEt₂Oで洗浄し、白色の固体を得た(0.2 g, 82%)。
LC/MS: m/z 435 [M+H]⁺.

中間体7: シクロペンチル 2-メチルアラニネート 塩酸塩
中間体7は、次のスキーム6に示される経路を用いて合成された。

段階1 − シクロペンチル N-(tert-ブトキシカルボニル)-2-メチルアラニネート
0℃で、DCM (10 ml)中のN-(tert-ブトキシカルボニル)-2-メチルアラニン (1.00 g, 4.92 mmol)の溶液に、シクロペンタノール (0.83 ml, 9.84 mmol)、EDCI (1.06 g, 5.42 mmol)および最後にDMAP (60 mg, 0.49 mmol)を加えた。反応混合物をRTに温め、18時間撹拌した。DCMを真空下に除去し、透明な油状物得た。粗残渣をEtOAc (100 ml)に溶解し、水、1M NaHCO₃ および食塩水で洗浄した。有機相を乾燥 (MgSO₄)し、真空下に濃縮した。粗抽出物をカラムクロマトグラフィー (ヘプタン中の10% EtOAc)により精製し、透明な油状物として所期の生成物 (0.254 g, 収率20 %)を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.25-5.17 (1H, m), 5.04 (1H, br s), 1.93-1.54 (8H, m), 1.49 (6H, s), 1.45 (9H, s).

段階2 − シクロペンチル 2-メチルアラニネート 塩酸塩
シクロペンチル N-(tert-ブトキシカルボニル)-2-メチルアラニネート (0.254 g, 0.93 mmol)をTHF (5 ml)に溶解し、4M HCl/ジオキサン (2 ml)で処理し、反応混合物をRTで24時間撹拌した。粗混合物を減圧下に濃縮し、Et₂Oで摩砕し、白色の沈殿物を得た。これをさらにEt₂Oで洗浄し、白色の粉末として所期の生成物 (0.16 g, 収率82 %)を得た。
¹H NMR (300MHz, DMSO-d₆) δ 8.58 (3H, br s), 5.21-5.14 (1H, m), 1.93-1.78 (2H, m), 1.74-1.53 (6H, m), 1.45 (6H, s).

中間体8: tert-ブチル 2-メチルアラニネート

中間体8は、次のスキーム7に示される経路を用いて合成された。
段階1 − tert-ブチル N-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-2-メチルアラニネート
窒素下、0℃で、DCM (10 ml 無水)、シクロヘキサン (10 ml)中のN-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-2-メチルアラニン (1 g, 4.21 mmol)の溶液に、ボロン トリフルオライド ジエチル エーテレート (7.7 μl, 触媒)を加えた。次いで、シクロヘキサン (10 ml)中のtert-ブチル 2,2,2-トリクロロアセトイミデート (1.51 ml, 8.43 mmol)を30分かけてゆっくりと加えた後、RTまで温めた。反応混合物をRTで16時間撹拌したままにした。該粗反応混合物にNaHCO₃の190 mgを加え、反応混合物を濾過した。母液を真空下に濃縮した。粗抽出物をカラムクロマトグラフィー (ヘプタン中の10% EtOAc)により精製し、所期の生成物 (0.863 g, 収率70 %)を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.39-7.31 (5H, m), 5.46 (1H, br s), 5.10 (2H, s), 1.54 (6H, s), 1.45 (9H, s).

段階2 − tert-ブチル 2-メチルアラニネート
EtOAc (20 ml)中のtert-ブチル N-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-2-メチルアラニネート (0.863 mg, 2.90 mmol)の溶液に、Pd/C 触媒の100 mgを加えた。該混合物を排気し、水素雰囲気下、18時間撹拌し、濾過(セライト)し、EtOAcで洗浄し、真空下に濃縮した。粗生成物(0.45 mg, 収率96%)を、微量のEtOAcを含む黄色の油状物として単離した。該生成物は、揮発性であると思われるので、真空下での蒸発の間に注意が必要である。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 1.48 (9H, s), 1.32 (6H ,s).

中間体9: シクロペンチル 1-アミノシクロペンタンカルボキシレート

中間体9は、次のスキーム8に示される経路を用いて合成された。

段階1 − シクロペンチル 1-アミノシクロペンタンカルボキシレート
シクロペンタノール (20 ml)中の1-アミノシクロペンタンカルボン酸 (2.58 g, 19.97 mmol)の溶液に濃硫酸 (2.15 g, 21.97 mmol)を加え、混合物を70℃で一晩撹拌した。反応混合物をRTまで冷却し、シクロペンタノールを減圧下に除去した。残渣をEtOAc (30 ml)に溶解し、飽和NaHCO₃ (30 ml)および水 (3×20 ml)で洗浄し、次いで乾燥(MgSO₄)し、濾過し、真空下に濃縮して、暗黄色の油状物を得た。カラムクロマトグラフィー (EtOAc中の15% 1.2M NH₃/MeOH)により精製し、所期の生成物 (1.97 g, 収率50%)を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.21-5.17 (1H, m), 2.15-1.90 (2H, m), 1.85-1.57 (14H, m).

中間体10: tert-ブチル 1-アミノシクロペンタンカルボキシレート

中間体10は、次のスキーム9に示される経路を用いて合成された。

段階1 − 1-｛[(ベンジルオキシ)カルボニル]アミノ｝シクロペンタンカルボン酸
1:1 ジオキサン / 水 (60 ml)中の1-アミノシクロペンタンカルボン酸 (3.0 g, 23.2 mmol)の溶液に、Na₂CO₃ (12.3 g, 116 mmol)、続いてベンジル クロロホルメート (3.6 ml, 25.5 mmol)を加え、混合物をRTで一晩撹拌した。反応混合物を注意深く1M HClでpH 2に酸性化し、次いでEtOAc (3×30 ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水 (30 ml)で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、濾過し、真空下に濃縮して、淡黄色の油状物を得た。LCMSおよびNMRは、粗生成物は所期の生成物および対応するベンジルエステルの混合物であることを示した。粗生成物を1:1 THF / 水 (60 ml)中に溶解し、水酸化リチウム (2.67 g, 116 mmol)で処理した。混合物をRTで一晩撹拌し、次いでEt₂O (3×30 ml)で洗浄し、pH 2に酸性化し、EtOAc (3×30 ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水(30 ml)で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、濾過し、減圧下に濃縮して、標記の化合物(4.76 g, 78%)を得た。LCMS: m/z 264 [M+H]⁺.

段階2 - tert-ブチル 1-｛[(ベンジルオキシ)カルボニル]アミノ｝シクロペンタンカルボキシレート
tert-ブチル 1-｛[(ベンジルオキシ)カルボニル]アミノ｝シクロペンタンカルボキシレートは、中間体8の段階1 (スキーム7)と同様の様式で製造された。
LC/MS: m/z 320 [M+H]⁺.

段階3- tert-ブチル 1-アミノシクロペンタンカルボキシレート
tert-ブチル 1-アミノシクロペンタンカルボキシレートは、中間体8の段階2 (スキーム7)と同様の様式で製造された。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.08-2.02 (2H, m), 1.87-1.72 (4H, m), 1.64-1.58 (2H, m), 1.47 (9H, s).

中間体11: シクロペンチル L-イソバリネート

中間体11は、次に示される1段階法にしたがって合成された。
シクロペンタノール(20 ml)中のL-イソバリン 塩酸塩 (2 g, 13 mmol)の溶液に、濃硫酸 (0.76 ml, 14 mmol)を加えた。反応混合物を70℃に加熱し、一晩撹拌した。反応混合物を冷却し、減圧下に蒸発し、黄色の油状物を得、それを2M HCl (25 ml)中に溶解し、Et₂O (2×20 ml)で洗浄した。次いで、水層を2M NaOHでpH 12に調整し、EtOAc (3×20 ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥(MgSO₄)し、濾過し、減圧下に濃縮した。カラムクロマトグラフィー (DCM中の5% MeOH)により精製し、無色の油状物として標記の化合物(0.4 g, 16%)を得た。
LC/MS: m/z 186 [M+H]⁺.

中間体12: tert-ブチル L-イソバリネート

中間体12は、次のスキーム10に示される経路を用いて合成された。

段階1 - N-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-L-イソバリン
ジオキサンと水との1:1 混液(40 ml)中のL-イソバリン 塩酸塩 (2 g, 13 mmol)の溶液に、Na₂CO₃ (6.9 g, 26 mmol)、続いてベンゾイルクロロホルメート (3.7 ml, 65 mmol)をゆっくりと加えた。混合物をRTで一晩撹拌した。反応混合物を濃HClでpH 2に注意深く酸性化し、EtOAc (3×30 ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水(30 ml)で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、濾過し、減圧下に濃縮して、淡黄色の油状物を得た(2 g, 61%)。
LC/MS: m/z 252 [M+H]⁺.

段階2 - tert-ブチル N-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-L-イソバリネート
0℃で、DCM (20 ml)およびシクロヘキサン (20 ml)中のN-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-L-イソバリン (2 g, 8 mmol)の溶液に、ボロントリフルオライド ジエチルエーテレート (0.02 ml, 0.16 mmol)を加えた。シクロヘキサン (10 ml)中のt-ブチル-2,2,2-トリクロロアセトイミデート (2.85 ml, 16 mmol)の溶液を15分かけて滴下し、混合物を0℃で15分間撹拌した。反応混合物をRTまで温め、2.5時間撹拌した。固体のNaHCO₃ を加え、反応混合物を濾過した。濾液を減圧下に濃縮し、粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィー(ヘプタン中の10% EtOAc)により精製し、無色の油状物として標記の化合物 (1.39 g, 57%)を得た。
LC/MS: m/z 330 [M+Na]⁺.

段階3 - tert-ブチル L-イソバリネート
EtOAc (25 ml)中に溶解されたtert-ブチル N-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-L-イソバリネート (1.39 g, 4.52 mmol)の溶液に、窒素雰囲気下、Pd/C (0.15 g)を加えた。懸濁液を窒素(×3)、次いで水素でフラッシュし、1 atmの水素下、RTで2時間撹拌した。反応混合物をセライトのバッドにより濾過し、濾液を減圧下に濃縮して、無色の油状物を得た(0.8 g, 100%)。
LC/MS: m/z 174 [M+H]⁺.

中間体13: 2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル 2-メチルアラニネート

中間体13は、次のスキーム11に示される経路を用いて合成された。

段階1 - 2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル N-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-2-メチルアラニネート
0℃で、DCM (10 ml)中のN-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-2-メチルアラニン (2.00 g, 8.4 mmol)の溶液に、インダノール (2.26 g, 16.9 mmol)、EDCI (1.78 g, 9.3 mmol)および最後にDMAP (103 mg, 0.8 mmol)を加えた。反応混合物をRTに温め、18時間撹拌した。反応混合物を1M HCl (10 ml)、飽和Na₂CO₃ (20 ml)で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、濾過し、真空下に濃縮して、褐色の油状物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー (ヘプタン中の20% EtOAc)により精製して、白色の固体として所期の生成物 (2.26 g, 76%)を得た。
LC/MS: m/z 354 [M+H]⁺.

段階2 - 2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル 2-メチルアラニネート
EtOAc (30 ml)中に溶解された2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル N-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-2-メチルアラニネート (2.26 g, 6.39 mmol)の溶液に、窒素雰囲気下、Pd/C (0.2 g)を加えた。懸濁液を窒素(×3)、次いで水素でフラッシュし、1atmの水素下、RTで一晩撹拌した。反応混合物をセライトのパッドにより濾過し、濾液を減圧下に濃縮して、淡黄色の油状物を得た(1.35 g, 96 %)。
LC/MS: m/z 220 [M+H]⁺.

中間体14: ビシクロ[2.2.1]ヘプチ-2-イル 2-メチルアラニネート

中間体14は、スキーム11の段階1でノルボルネオールを用い、中間体13の製造に用いられたのと同様の方法にしたがって合成された。
LC/MS: m/z 198 [M+H]⁺.

実施例
実施例1: シクロペンチル N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-2-メチルアラニネート

実施例1は、次に記載されるように、中間体2および中間体7を用いて合成された。
無水THF (4 ml)中の中間体2 (189 mg, 0514 mmol)の溶液に、シクロペンチル 2-メチルアラニネート 塩酸塩 (中間体 7) (160 mg, 0.77 mmol, 1.5 等量)およびNaBH(OAc)₃ (326 mg, 1.54 mmol, 3 等量)を加えた。混合物を室温で16時間撹拌し、次いで水(20 ml)でクエンチした。水層をEtOAc (3×20 ml)で抽出し、合わせた有機抽出物を食塩水(40 ml)で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮した。残渣を分取HPLCにより精製して、標記の化合物 (130 mg, 収率48 %)を得た。
LC/MS: m/z 524 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 10.43 (1H, br s), 7.51-7.34 (4H, m), 7.28-7.26 (2H, m), 7.04-6.90 (2H, m), 5.93 (1H, d, J=9.6Hz), 5.20-5.10 (1H,m), 2.93-2.75 (4H, m), 1.95-1.55 (8H, m), 1.31 (6H, s).

実施例2: シクロペンチル N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェニル｝エチル)-2-メチルアラニネート

実施例2は、実施例1と同様の方法で、中間体4および中間体7を用いて合成された。
LC/MS: m/z 560 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz,CDCl₃) δ: 7.48-7.39 (2H, m), 7.09-6.92 (4H, m), 5.92 (1H, d,J=9.6 Hz), 5.13 (1H, br s), 2.87-2.81 (4H, m), 2.05-1.89(2H, m), 1.76-1.62 (6H, m), 1.30 (6H, s).

実施例3: シクロペンチル N-(｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝アセチル)-2-メチルアラニネート

DCM/DMF (1:1, 6 ml)中の｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝酢酸 (中間体 5) (0.1 g, 0.26 mmol)の溶液に、EDCI (0.055 g, 0.29 mmol)、DMAP (0.003 g, 0.03 mmol)およびトリエチルアミン (40 μl, 0.29 mmol)を加え、続いてシクロペンチル 2-メチルアラニネート 塩酸塩 (中間体 7) (0.059 g, 0.29 mmol)を加えた。混合物をRTで一晩撹拌した。反応混合物をEtOAc (20 ml)で希釈し、水 (2×20 ml)、食塩水 (20 ml)で洗浄し、次いで乾燥(MgSO₄)し、濾過し、減圧下に濃縮して、黄色の油状物を得た。カラムクロマトグラフィー(100% EtOAc)により精製し、淡黄色の固体として標記の化合物(68 mg, 48%)を得た。
LC/MS: m/z 538 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 8.48 (1H, s), 7.55-7.37 (4H, m), 7.29-7.20 (4H, m), 5.72 (1H, d, J=9.6 Hz), 5.03-4.99 (1H, m), 3.54 (2, s), 1.78-1.69 (2H, m), 1.63-1.47 (6H, m), 1.36 (6H, s).

実施例4〜10は、実施例1と同様の方法で合成された。
実施例4: シクロペンチル 1-[(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)アミノ]シクロペンタンカルボキシレート

中間体2および中間体9から。
LC/MS: m/z 550 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 7.55-7.34 (6H, m), 7.29-7.21 (2H, m), 5.72 (1H, d, J=9.8 Hz), 5.27-5.21 (1H, m), 3.31-3.20 (2H, m), 3.10-3.00 (2H, m), 2.22-2.12 (2H, m), 2.08-1.98 (2H, m), 1.90-1.58 (12H, m)

実施例5: シクロペンチル N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-L-イソバリネート

中間体2および中間体11から。
LC/MS: m/z 538 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 10.09 (1H, br s), 7.55-7.38 (4H, m), 7.27-7.21 (4H, m), 6.88 (1H, br s), 5.71 (1H, d, J=9.8 Hz), 5.09 (1H, br s), 2.77-2.63 (4H, m), 1.97 (1H, br s), 1.83-1.76 (2H, m), 1.68-1.55 (8H, m), 1.16 (3H, s), 0.79 (3H, t, J=7.3 Hz).

実施例6: tert-ブチル N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-L-イソバリネート

中間体2および中間体12から。
LC/MS m/z 526 [M+H]^{+: 1}H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ: 7.54-7.42 (4H, m), 7.30-7.26 (2H, m), 7.15-7.08 (2H, m), 5.82 (1H, d, J=9.8 Hz), 2.95-2.84 (3H, m), 2.79-2.68 (1H, m), 1.71-1.59 (2H, m), 1.48 (9H, s), 1.26 (3H, s), 0.90-0.83 (3H, m).

実施例7: 2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-2-メチルアラニネート

中間体2および中間体13から。
LC/MS: m/z 572 [M+H]^{+ 1}H NMR (300 MHz, CDCl₃) 7.48-7.35 (4H, m), 7.27-7.20 (6H, m), 7.02 (1H, td, J=2.3, 7.9 Hz), 6.94 (1H, td, J=2.3, 9.1 Hz), 5.94 (1H, d, J=9.6 Hz), 5.56-5.50 (1H, m), 3.38 (2H, dd, J=6.4, 17.0 Hz), 3.01 (2H, dd, J=2.8, 17.0 Hz), 2.82-2.78 (2H, m), 1.30 (6H, s).

実施例8: ビシクロ[2.2.1]ヘプチ-2-イル N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-2-メチルアラニネート

中間体2および中間体14から。
LC/MS:m/z 499 [M+H]^{+ 1}H NMR (300 MHz, CDCl₃) 11.12 (1H, s), 7.52 (1H, s), 7.37-7.43 (1H, m), 7.28-7.32 (1H, m), 7.18-7.24 (1H, m), 7.07 (1H, s), 5.44 (2H, s), 4.64-4.70 (1H, m), 3.77-3.86 (1H,m), 3.60-3.67 (1H, m), 3.27 (1H, t, J=7.2 Hz), 2.31 (2H, d, J=3.8 Hz), 1.69-1.90 (2H, m), 1.37-1.58 (4H, m), 1.08-1.23 (2H, m), 0.84-0.97 (6H, m).

実施例9: シクロペンチル N-(3-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェノキシ｝プロピル)-2-メチルアラニネート

中間体6および中間体7から。
LC/MS m/z 590 [M+H]⁺.:¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) 7.48-7.38 (2H, m), 7.02 (1H, td, J=2.1, 8.1 Hz), 6.94 (1H, td, J=2.5, 9.4 Hz), 6.74 (2H, d, J=9.4 Hz), 5.92 (2H, d, J=9.8 Hz), 5.23-5.19 (1H, m), 4.12 (2H, t, J=6.0 Hz), 2.69 (2H, t, J=6.8 Hz), 2.03-1.95 (2H, m), 1.92-1.84 (2H, m), 1.75-1.60 (6H, m), 1.31 (6H, s).

実施例10: tert-ブチル N-(3-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェノキシ｝プロピル)-2-メチルアラニネート

中間体6および中間体8から。
LC/MS: m/z 578 [M+H]^{+ 1}H NMR (300 MHz, CDCl₃) 7.36-7.26 (2H, m), 6.93 (1H, td, J=2.1, 7.7 Hz), 6.86 (1H, td, J=2.3, 9.4 Hz), 6.64 (2H, d, J=9.2 Hz), 5.83 (1H, d, J=9.8 Hz), 4.03 (2H, t, J=6.0 Hz), 2.61 (2H, t, J=6.9 Hz), 1.95-1.86 (2H, m), 1.40 (9H, s), 1.20 (6H, s).

実施例11: N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-2-メチルアラニン

実施例11は、次のスキーム12に記載されるように、中間体2および中間体8を用いて合成された。

段階1 − tert-ブチル N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-2-メチルアラニネート
THF (3 ml)中の中間体2 (180 mg, 0.489 mmol)の溶液に、tert-ブチル 2-メチルアラニネート (中間体 8) (117 mg, 0.73 mmol)を加え、30分間撹拌し、次いでNaBH(OAc)₃ (310 mg, 1.467 mmol)を加えた。反応混合物を24時間撹拌し、EtOAcで希釈し、有機物を飽和NaHCO₃、食塩水で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、真空下に濃縮した。残渣を分取HPLCで精製し、標記の化合物 (中間体 15) (120 mg, 収率48 %)を得た。
LC/MS: m/z 512 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 10.41 (1H, br s), 7.51-7.34 (4H, m), 7.28-7.26 (2H, m), 7.05-6.90 (2H, m), 5.93 (1H, d, J=9.9Hz), 5.15 (1H, br s), 2.93-2.78 (4H, m), 1.46 (9H, s), 1.29 (6H, s).

段階2 − N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-2-メチルアラニン
DCM (3 ml)中の中間体15 (100 mg, 0.19 mmol)の溶液に、トリフルオロ酢酸 (3 ml)を加えた。混合物を室温で16時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残渣をEt₂Oで摩砕し、濾過により回収し、減圧下に乾燥して、オフ-ホワイト色の固体として標記の化合物 (50 mg, 収率56 %)を得た。
LC/MS: m/z 456 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 10.05 (1H, br s), 7.60-7.15 (9H, m), 6.95 (1H, br s), 5.72 (1H, d, J=9.6Hz), 3.15-2.95 (4H, m), 1.33 (6H, br s).

実施例12: N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェニル｝エチル)-2-メチルアラニン

実施例12は、実施例11 (スキーム12)と同じ合成経路にしたがって、中間体4および中間体8を用いて合成された。
LC/MS: m/z 492 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 7.62-7.54 (1H, m), 7.47-7.35 (4H,m), 7.27-7.21 (1H, m), 5.75 (1H, d, J=9.8 Hz), 3.44-3.07(4H, m), 1.52 (6H, s).

実施例13: N-(｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝アセチル)-2-メチルアラニン

実施例13は、次のスキーム13に記載されるように、中間体5および中間体8を用いて合成された。

段階1 - tert-ブチル N-(｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝アセチル)-2-メチルアラニネート (中間体16)
DCM/DMF (1:1, 6 ml)中の｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝酢酸 (中間体5) (0.13 g, 0.34 mmol)の溶液に、EDCI (0.07 g, 0.36 mmol)、DMAP (0.004 g, 0.03 mmol)を加え、続いてtert-ブチル 2-メチルアラニネート (中間体8) (0.057 g, 0.36 mmol)を加えた。混合物をRTで一晩撹拌した。反応混合物をEtOAc (20 ml)で希釈し、水 (2 ×20 ml)、食塩水 (20 ml)で洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、濾過し、減圧下に濃縮して、黄色の油状物を得た。カラムクロマトグラフィー (100% EtOAc)により精製して、オフ-ホワイト色の固体として標記の化合物(78 mg, 収率44%)を得た。
LCMS: m/z 526 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7.57 (2H, d, J=8.4 Hz), 7.47-7.32 (4H, m), 7.02(1H, t, J=8.3 Hz), 6.94 (1H, td, J=2.4, 9.3 Hz), 6.37 (1H, br.s), 5.93 (1H, d, J=9.9 Hz), 3.64 (2H, s), 1.58 (6H, s), 1.47 (9H, s).

段階2 - N-(｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝アセチル)-2-メチルアラニン
DCM (2 ml)中の中間体16 (0.05 g, 0.095 mmol)の溶液にTFA (1 ml)を加えた。反応混合物をRTで5時間撹拌し、次いで減圧下に濃縮して、黄色の油状物を得た。Et₂Oで摩砕し、オフ-ホワイト色の固体として標記の化合物 (42 mg, 94%)を得た。
LCMS: m/z 470 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.19 (1H, s), 8.38 (1H, s), 7.55-7.37 (4H, m), 7.29-7.21 (4H, m), 5.71 (1H, d, J=9.6 Hz), 3.55 (2H, s),1.38 (6H, s).

実施例14: N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-L-イソバリン
実施例14は、スキーム12に記載された同様の合成経路にしたがって、実施例6から合成された。

実施例15: 1-[(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)アミノ]シクロペンタンカルボン酸
実施例15は、スキーム12に記載された同様の合成経路にしたがって、中間体2および中間体10を用いて合成された。
LCMS: m/z 482 [M+H]⁺. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ: 7.52-7.37 (4H, m), 7.31-7.20 (4H, m), 5.71 (1H, d, J=10.0 Hz), 3.08-2.93 (4H, m), 2.10-1.99 (2H, m), 1.78-1.68 (6H, m).

実施例16: N-(3-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェノキシ｝プロピル)-2-メチルアラニン
実施例16は、スキーム12に記載された同様の合成経路にしたがって、実施例10から合成された。
LC/MS: m/z 522 [M+H]⁺ .¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) 7.56-7.49 (2H, m), 7.17-7.11 (2H, m), 6.95 (2H, d, J=10.1 Hz), 5.82 (1H, d, J=9.8 Hz), 4.25 (2H, t, J=5.7 Hz), 3.26-3.21 (2H, m), 2.30-2.21 (2H, m), 1.58 (6H, s).

生物学的活性の測定
p38 MAPキナーゼ活性
化合物がp38 MAP aキナーゼ活性を阻害する能力を、Upstate (Dundee UK)により行われるアッセイにおいて測定した。最終反応容量25μL中に、p38 MAPキナーゼ a (5〜10 mU)を、25mM Tris pH 7.5、0.002 mMEGTA、0.33 mg/mLミエリン塩基性タンパク質、10mM酢酸Mgおよび[g-33p-ATP] (特異的活性約500cpm/pmol、所望の濃度)とインキュベートする。反応を、MgATPミックスの添加により開始する。室温にて40分間のインキュベートの後に、反応を、5μLの3%リン酸溶液の添加により停止する。10μLの反応混合物を、次いで、P30フィルタマットにスポットし、75 mMリン酸中で5分間、3回、およびメタノール中で1回洗浄した後に、乾燥してシンチレーションカウントを行う。

二重のデータ点を、DMSO中のストック溶液の1/3 log希釈系列から作製する。最高濃度10μMから9つの希釈段階を作製し、「化合物なし」ブランクを含める。標準的な放射分析フィルタ結合アッセイを、Kmまたはそれに近いATP濃度で行う。シンチレーションカウントからのデータを回収し、Prismソフトウエアによるフリー-フィット分析に供する。作製された曲線から、50%阻害を与える濃度を決定し、報告する。

p38 MAPキナーゼ細胞アッセイ： MAPKAP-2のリン酸化阻害
U937またはHUT78細胞をRPMI 1640に植え、37℃、5% CO₂で18時間インキュベートした。化合物の10mMストック物を媒体/0.1% DMSOで希釈し、logまたはセミ-log希釈系列を得た。「無処理」および「アニソマイシン」に対するウェルは0.1% DMSOのみで処理した。細胞を37℃、5% CO₂でさらに4時間インキュベートした。「無処理」以外の全てのウェルに10 μMの最終濃度でアニソマイシンを加えた。採取前に、細胞を37℃、5% CO₂で30分間インキュベートした。採取の間、プレートを氷の上に置き、続く全ての工程を4℃で行なった。細胞を4℃で、10分間の1000rpmでペレットにし、媒体を吸引し、ペレットを冷PBSで洗浄した。ペレットを、SDS溶解(lysis)バッファー（製造者の推奨により加えられたプロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤と一緒の62.5mM Tris, pH 6.8, 2% SDS, 10% グリセロール, 50mM DTT）中で溶解した。氷上で30分間後、試料を5秒間超音波処理した後、細胞の破片を除くために、13,000rpm、4℃で10分間遠心分離した。NOVEX 4-12% Bis-Tris MOPSゲル上に、レーン当たり得られたゲル試料の10μlを装填した。ゲルのウエスタン転写からの膜を、製造者の指示にしたがって、抗-ホスホMAPKAP2、抗-ホスホHSP27および抗GAPDHでブロットした。シグナルは、HRP-結合の抗-ウサギ抗体または抗-マウス抗体、ECLリガンドおよびECLフィルムを用いて視覚化された。種々の化合物に対するIC50値は、バンド-シフトおよびシグナル強度の両方を用いて、得られた画像から視覚化された。

THP-1細胞のLPS刺激
THP-1細胞を、100μlに4×10⁴細胞/ウェルの密度で、V底96ウェル組織培養処理プレートに植え、37℃にて5% CO₂中で16時間インキュベートした。阻害剤を100μlで組織培養培地に添加した2時間後に、細胞を1μg/mlの最終濃度のLPS (E coli 005:B5株、Sigma)で刺激し、37℃にて5% CO₂中で6時間インキュベートした。TNF-αのレベルを、サンドイッチELISA (R&D Systems #QTA00B)により、無細胞上清から測定した。

ヒト全血のLPS刺激
全血を、ヘパリン添加ヴァキュテイナー(Becton Dickinson)を用いて静脈穿刺により採取し、等容量のRPMI1640組織培養培地(Sigma)で希釈した。100μlを、V底96ウェル組織培養処理プレートに植えた。100μlのRPMI1640培地中の阻害剤の添加の2時間後に、血液を、100ng/mlの最終濃度のLPS (E coli 005:B5株、Sigma)で刺激し、37℃にて5% CO₂中で6時間インキュベートした。TNF-αのレベルを、サンドイッチELISA (R&D Systems #QTA00B)により、無細胞上清から測定した。

IC50の値を、以下のような3つの範囲の1つに割り当てた：
範囲A: IC50＜100nM
範囲B: 100nM＜IC50＜1000nM
範囲C: IC50＞1000nM

「NT」は、化合物が問題のアッセイで試験されたかったことを示す。
「NR」は「無関連」を示す。実施例11〜16は、細胞内部で切断されるアミノ酸エステルの合成カルボン酸類似物である。これらのカルボン酸が細胞に接触させられる場合、それらは細胞内に入り込まず、それゆえにこのアッセイにおいてTNF-αを阻害しない。

破砕細胞カルボキシルエステラーゼアッセイ
R₁がエステル基である本発明のいずれの所定の化合物は、細胞内エステラーゼにより加水分解されるという要件を満たすかについて、以下のアッセイにおいて試験することにより試験して決定できる。

細胞抽出物の調製
U937またはHut78腫瘍細胞(約10⁹)を、4容量のダルベッコのPBS (約1リットル)中で洗浄し、4℃、525 gにて10分間、ペレットにした。これを2回繰り返し、最終の細胞ペレットを、35 mlの冷ホモジナイズバッファー(Trizma 10 mM, NaCl 130 mM, CaCl₂ 0.5 mM 25℃にてpH 7.0)に再懸濁した。ホモジネートを、窒素キャビテーション(700 psi、4℃にて50分間)により調製した。ホモジネートを氷上に維持し、最終濃度：
ロイペプチン 1μM
アプロチニン 0.1μM
E64 8μM
ペプスタチン 1.5μM
ベスタチン 162μM
キモスタチン 33μM
の阻害剤のカクテルを補った。
細胞ホモジネートを、525 gで10分間の遠心分離により清澄にした後に、得られた上清を、エステラーゼ活性の供給源として用い、必要になるまで-80℃にて貯蔵した。

エステル切断の測定
対応するカルボン酸へのエステルの加水分解は、上記のようにして調製した細胞抽出物を用いて測定できる。このために、細胞抽出物(約30μg / 0.5 mlの全アッセイ容量)を、37℃にて、Tris- HCl 25 mM、125 mM NaClバッファー、25℃にてpH 7.5中でインキュベートした。ゼロ時間に、エステル(基質)を、2.5μMの最終濃度で加え、試料を37℃にて適切な時間(通常、0または80分)インキュベートした。反応を、3×容量のアセトニトリルの添加により停止した。ゼロ時間の試料のために、アセトニトリルをエステル化合物の前に加えた。12000 gで5分間の遠心分離の後に、試料をエステルおよびその対応するカルボン酸について、室温にてLCMS (Sciex API 3000, HP1100バイナリポンプ, CTC PAL)により分析した。クロマトグラフィーは、MeCN (75×2.1mm)カラム、および水/0.1%ギ酸中の5〜95%アセトニトリルの移動相に基づいた。

加水分解の速度は、pg/mL/分で表す。
表1は、いくつかの異なるリンカー化学により種々の細胞内酵素阻害剤にコンジュゲートされたいくつかのアミノ酸エステルモチーフが、細胞内カルボキシエステラーゼにより、対応する酸に全て加水分解されることを示すデータを表す。

表2は、エステラーゼモチーフが付けられた実施例1は、単離された酵素に対する活性は同じであるけれども、エステラーゼモチーフを欠いた親化合物より細胞中で30倍強力であることを示す。実施例1中のエステルの切断によって形成された酸は、U937細胞に蓄積する。

表3は、親化合物I が単球および非単球細胞中で等しい効力であるが、実施例1は、単球細胞株中で100倍強力であることを示す。細胞選択性が、単球細胞株中でのみ切断されるエステラーゼモチーフの結合によって達成されることを示す実施例1だけが単球細胞中に蓄積する。細胞中での増加した効力は、酸の細胞中への蓄積と相関することも示している。

Claims (19)

1. 式(I)：
   (式中：
   Gは、-CH=であり；
   Dは、フルオロおよびクロロから選択される置換基で任意に置換されていてもよい、フェニルまたはピリジル基であり；
   R₆は、水素、またはC ₁〜C₃アルキルであり；
   Pは水素を表し、Uは式(IA)の基を表す；
   -A-(CH₂)_z-X¹-L¹-Y-NH-CR₁R₂R₃ (IA)
   (式中、
   Aは、フルオロおよびクロロから選択される置換基で任意に置換されていてもよい1,4-フェニレン基であり；
   zは0または1であり；
   Yは、結合手であり；
   L¹は、式-(Alk¹)_m -(Alk²)_p-の2価の基
   (式中、mおよびpは、独立して0または1であり；
   Alk¹およびAlk²は、独立して、直鎖状または分岐鎖状のC₁〜C₆アルキレン、C₂〜C₆アルケニレンもしくはC₂〜C₆アルキニレン基を表し、これらの基は、エーテル(-O-)、チオエーテル(-S-)またはアミノ(-NR^A-)(式中、R^Aは水素またはC ₁〜C₃アルキルである)結合を任意に含むかまたは該結合が末端をなしていてもよい)であり；
   X¹は、結合手または-C(=O)であり；
   但し、R ₁ C(R ₂ )(R ₃ )NH-基の窒素はカルボニルに直接結合せず；
   R₁は、カルボン酸基 (-COOH)、または式-(C=O)OR ₁₄ (式中、R ₁₄ は、R ₈ R ₉ R ₁₀ C- (式中、
   (i) R ₈ は、水素、または(C ₁ 〜C ₃ )アルキル-(Z ¹ ) _a -[(C ₁ 〜C ₃ )アルキル] _b -、もしくは(C ₂ 〜C ₃ )アルケニル-(Z ¹ ) _a -[(C ₁ 〜C ₃ )アルキル] _b - (式中、aおよびbは独立して0または1であり、Z ¹ は、-O-、-S-または-NR ₁₁ - (式中、R ₁₁ は水素または(C ₁ 〜C ₃ )アルキルである)であり；R ₉ およびR ₁₀ は、独立して、水素または(C ₁ 〜C ₃ )アルキル-であるか；
   (ii) R ₈ は、水素、またはR ₁₂ R ₁₃ N-(C ₁ 〜C ₃ )アルキル- (式中、R ₁₂ は水素または(C ₁ 〜C ₃ )アルキルであり、R ₁₃ は水素または(C ₁ 〜C ₃ )アルキルであるか；あるいはR ₁₂ およびR ₁₃ は、それらが結合している窒素と一緒になって、単環式の5もしくは6環原子の複素環、または2環式の8〜10環原子の複素環を形成する)であり、R ₉ およびR ₁₀ は、独立して水素または(C ₁ 〜C ₃ )アルキル-であるか；
   あるいは
   (iii) R ₈ およびR ₉ は、それらが結合する炭素と一緒になって、単環式の3〜7環原子の炭素環、または2環式の8〜10環原子の炭素環、または架橋された単環式の7〜10環原子の炭素環を形成し、R ₁₀ は水素であり；
   ここで、上記の(i)、(ii)および(iii)の場合、「アルキル」はフルオロアルキルを含む)
   である）のエステル基であり；
   R₂およびR₃ の一方はメチルであり、他方はメチル、エチル、またはn-もしくはイソ-プロピルであるか、またはR₂ およびR₃ は、それらが結合する炭素と一緒になるときは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシル環を形成する)）
   の化合物。
2. Dが、フルオロおよびクロロから選択される置換基で任意に置換されていてもよいフェニルである、請求項1に記載の化合物。
3. R₆が水素またはメチルである、請求項1または2に記載の化合物。
4. X ¹ が結合手を表す、請求項1〜3のいずれか1項に記載の化合物。
5. 式(II)：
   （式中、R₁₅およびR₁₆は独立して、水素またはフルオロであり、z、X¹、L¹、Y、R₁、R₂およびR₃は請求項1で定義されたとおりである）
   を有する、請求項1に記載の化合物。
6. 基-Y-L¹-X¹-[CH₂]_z-が、-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂CH₂-、-CH₂O-、-CH₂CH₂O-、-CH₂CH₂CH₂O-、-CH₂CH₂CH₂CH₂O-、-C(=O)-CH₂-、-C(=O)-CH₂O-、-C(=O)-NH-CH₂-、または-C(=O)-NH-CH₂O-である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の化合物。
7. 基-Y-L ¹ -X ¹ -[CH ₂ ] _z -が、-CH ₂ -、-CH ₂ CH ₂ -、-CH ₂ CH ₂ CH ₂ -、-CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ -、-CH ₂ O-、-CH ₂ CH ₂ O-、-CH ₂ CH ₂ CH ₂ O-または-CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ O-である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の化合物。
8. R₁が、式-(C=O)OR₁₄ (式中、R₁₄は、R₈R₉R₁₀C- (式中：
   (i) R₈は、水素、または(C₁〜C₃)アルキル-[(C₁〜C₃)アルキル]_b-、もしくは(C₂〜C₃)アルケニル-[(C₁〜C₃)アルキル]_b- (式中、bは0または1であり；R₉およびR₁₀は、独立して水素または(C₁〜C₃)アルキル-であるか；
   あるいは
   (ii) R₈およびR₉は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、単環式の3〜7環原子の炭素環、または8〜10環原子の2環式の炭素環、または架橋された単環式の7〜10環原子の炭素環を形成し、R₁₀は水素であり；
   ここで、上記の(i)および(ii)の場合、用語「アルキル」はフルオロアルキルを含む)
   である)のエステル基である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の化合物。
9. R₁₄が、
   (i) メチル、エチル、n-もしくはイソ-プロピル、n-、sec-もしくはtert-ブチル、シクロヘキシル、アリル、ビシクロ[2.2.1]ヘプチ-2-イル、2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル、N-メチルピペリジン-4-イル、テトラヒドロフラン-3-イルまたはメトキシエチル、あるいは
   (ii) シクロペンチル
   である、請求項1〜8のいずれか1項に記載の化合物。
10. R ₂およびR₃ の一方がメチルであり、他方がメチル、エチル、またはn-もしくはイソ-プロピルである、請求項1〜9のいずれか1項に記載の化合物。
11. 基-Y-L ¹ -X ¹ -[CH ₂ ] _z -が、-CH ₂ -、-CH ₂ CH ₂ -、-CH ₂ CH ₂ CH ₂ -、-CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ -、-CH ₂ O-、-CH ₂ CH ₂ O-、-CH ₂ CH ₂ CH ₂ O-または-CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ O-であり；
    R ₁ が、式-(C=O)OR ₁₄ (式中、R ₁₄ は、メチル、エチル、n-もしくはイソ-プロピル、n-、sec-もしくはtert-ブチル、シクロヘキシル、アリル、ビシクロ[2.2.1]ヘプチ-2-イル、2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル、N-メチルピペリジン-4-イル、テトラヒドロフラン-3-イルまたはメトキシエチルである)のエステル基であり；
    R ₂ およびR ₃ の一方がメチルであり、他方がメチル、エチル、またはn-もしくはイソ-プロピルである、請求項3に記載の化合物。
12. シクロペンチル N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]フェニル｝エチル)-2-メチルアラニネート、
    シクロペンチル N-(2-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェニル｝エチル)-2-メチルアラニネート、
    シクロペンチル N-(3-｛4-[6-アミノ-5-(2,4-ジフルオロベンゾイル)-2-オキソピリジン-1(2H)-イル]-3,5-ジフルオロフェノキシ｝プロピル)-2-メニチアラニネート
    からなる群から選択される、請求項1に記載の化合物。
13. 医薬的に許容される塩の形態にある、請求項1〜12のいずれか1項に記載の化合物。
14. 請求項1〜13のいずれか1項に記載の化合物を、医薬的に許容される担体とともに含む医薬組成物。
15. 自己免疫または炎症性疾患の治療用組成物の製造における、請求項1〜13のいずれか1項に記載の化合物の使用。
16. 前記疾患がリウマチ性関節炎である、請求項15に記載の使用。
17. 癌の治療用組成物の製造における、請求項1〜13のいずれか1項に記載の化合物の使用。
18. 活性成分として、請求項1〜13のいずれか1項に記載の化合物を含む、自己免疫または炎症性疾患の治療のための薬剤。
19. 活性成分として、請求項1〜13のいずれか1項に記載の化合物を含む、癌の治療のための薬剤。