[go: up one dir, main page]

JP5509084B2 - 新規硫酸化オリゴ糖誘導体 - Google Patents

新規硫酸化オリゴ糖誘導体 Download PDF

Info

Publication number
JP5509084B2
JP5509084B2 JP2010529195A JP2010529195A JP5509084B2 JP 5509084 B2 JP5509084 B2 JP 5509084B2 JP 2010529195 A JP2010529195 A JP 2010529195A JP 2010529195 A JP2010529195 A JP 2010529195A JP 5509084 B2 JP5509084 B2 JP 5509084B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
tri
glucopyranosyl
compound
tetra
mannopyranosyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2010529195A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2011500606A (ja
Inventor
ヴィート フェロ，
トミスラブ カロリ，
リゴン リュー，
ポール ニュートン ハンドリー，
ケネス デイビッド ジョンストン，
ノルベルト ヴィンマー，
エドワード ティモシー ハモンド，
Original Assignee
プロジェン ファーマシューティカルズ リミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2007905680A external-priority patent/AU2007905680A0/en
Application filed by プロジェン ファーマシューティカルズ リミテッド filed Critical プロジェン ファーマシューティカルズ リミテッド
Publication of JP2011500606A publication Critical patent/JP2011500606A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP5509084B2 publication Critical patent/JP5509084B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/04—Disaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H11/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by inorganic acids; Metal salts thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/207—Cyclohexane rings not substituted by nitrogen atoms, e.g. kasugamycins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/02—Heterocyclic radicals containing only nitrogen as ring hetero atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/02—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/04—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to nitrogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/04—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to nitrogen
    • C07H5/06—Aminosugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J17/005—Glycosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0088—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing unsubstituted amino radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0094—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing nitrile radicals, including thiocyanide radicals

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

本発明は、酵素ヘパラナーゼなどのヘパラン硫酸結合タンパク質の阻害剤としての活性を有する化合物に関する。 特に、本願発明は、硫酸化オリゴ糖誘導体に関するものであるが、必ずしもこれらに限定されない。 具体的には、本願発明は、特異的な、親油性に富んだ化学基で修飾されたポリ硫酸化オリゴ糖に関する。 また、本願発明は、当該化合物、当該化合物を含む組成物の製造方法、そして、哺乳動物での抗血管形成的治療、抗転移的治療、抗炎症的治療、抗微生物的治療、抗凝固および／または抗血栓的治療のための当該化合物およびそれらを含む組成物の使用に関する。 さらに、これら化合物は、哺乳動物に対して投与することで、前述した障害の予防において有用である。
ＰＩ-８８１、２として公知の硫酸化オリゴ糖製剤は、腫瘍の成長および転移に対する有望な抑制剤であることが解明されており３、４、１、そして、癌患者での臨床試験が行われている５、６。 ＰＩ-８８は、二糖類から六糖類に至る範囲の大きさの高度に硫酸化され、かつ、一リン酸化反応を受けたマンノースオリゴ糖の混合物である７、８。 ＰＩ-８８は、血管形成生育因子(主として、ＦＧＦ-１、ＦＧＦ-２、および、ＶＥＧＦ)およびその受容体と、ヘパラン硫酸との相互作用を抑制することによって、抗血管形成作用を示す９、１。 加えて、ＰＩ-８８は、腫瘍細胞を包囲する細胞外マトリックス(ＥＣＭ)および基底膜の主要構成成分であるプロテオグリカンのヘパラン硫酸側鎖を分解するグリコシダーゼである酵素ヘパラナーゼに対する強力な阻害剤である１、２。 ヘパラナーゼは、血管形成に関与していることが強力に示唆されており、ＥＣＭから活性ヘパラン硫酸結合血管形成成長因子を遊離させることができ、そして、ＥＣＭの分解、および、その後の新血管萌芽に関連する組織改造にも関与している１０。 また、ヘパラナーゼによるＥＣＭの分解は、腫瘍細胞を血流中に放流せしめ、そして、二次腫瘍を形成できる遠隔部位に定着させることで、腫瘍細胞の拡散(転移)において重要な部分を担っている１１、１０。
その抗血管形成作用に加えて、ＰＩ-８８は、(i)内因性の経路においてプロテアーゼを阻害すること、(ii)組織因子経路阻害剤(ＴＦＰＩ)の放出を刺激すること、および、(iii)トロンビンのヘパリンコファクターII媒介阻害を活性化することによって、血液凝固カスケードを阻害する。 しかしながら、ＰＩ-８８は、AT IIIと相互作用しないため、抗XaまたはAT III媒介抗IIa活性を示さない１２、１３。 サルを用いたin vivo試験によれば、低用量のＰＩ-８８が、血管細胞壁からのヘパラン硫酸結合TFPIのすべての放出を刺激することがわかっている１２。 凝固に関する作用の他に、TFPIは、細菌抗血管形成剤１４、および、転移抑制剤１５でもある。 また、ＰＩ-８８は、血管平滑筋細胞増殖および内膜肥厚化をブロックし１６、細胞の単純疱疹ウィルス(HSV)感染およびHSV-１およびHSV-２の細胞から細胞への拡散を抑制し１７、デング熱および脳炎フラビウイルスのマウスモデルでの感染力を阻害し、かつ、生存性を改善し１８、受動ヘイマン腎炎における蛋白尿を抑制し１９、そして、熱帯熱マラリア原虫に対して抗マラリア活性をin vitroで示す２０、ことが明らかにされている。
その他の様々なポリ硫酸化されたオリゴおよび多糖類ならびにその誘導体が、ＰＩ-８８の生物学的活性と同様の型を示すことがよく知られている２１〜２６。 これらの生物学的活性は、様々なヘパラン硫酸(ＨＳ)結合タンパク質の阻害に寄与している。 最近になって、改善された薬物動態および／またはADME(吸収、分布、代謝、排出)プロファイルを有する幾つかの硫酸化オリゴ糖誘導体が開示されている。 これら化合物は、単一の炭素骨格を含み、そして、ＰＩ-８８のような混合物と比較して、簡便に合成や特性評価を行うこともできる。
本願発明の目的は、十分に大きな薬効を示し、改善された薬物動態特性を有し、さらに、副作用の少ないＨＳ模倣薬を調製することにある。
本願発明の第一の実施態様によれば、以下の一般式、すなわち、
[Ｘ]ｎ−Ｙ−ＺＲ１Ｒ２ Ｉ、
式中、
ＸおよびＹの各々は、グリコシド結合に関与をしていない水酸基の各々が、独立して、ＳＯ３Ｍの化学基または水素で置換された単糖類単位であり、かつ、当該化学基でのＭが、薬学的に許容可能なカチオンであり、
ＸおよびＹは、Ｄ-またはＬ-ヘキソースまたはペントースであり、
Ｙは、環状体または開環体であり、
Ｚは、Ｏ、Ｎ、ＳまたはＣまたはそれらの高酸化状態、または、結合であり、および、Ｙが還元単糖類である場合には、アノマー炭素に結合しており、
Ｒ１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、アシル、アロイル、アルキルアミド、アルキルチオアミド、トリアゾリルを含むグループから選択されるリンカー、または、結合であり、
Ｒ２は、コレステリル、コレスタニル、コール酸塩、デオキシコール酸塩、直鎖アルキル、分岐アルキル、置換アルキル、直鎖アシル、分岐アシル、置換アシルを含むグループから選択される親油性部分であり、
ｎは、０〜６の整数であり、
各化合物での硫酸化のレベルが、全水酸基の７０％〜１００％であり、
Ｒ１が結合である場合には、Ｒ２は、グリシルレチン酸またはその誘導体ではなく、
Ｒ１が結合であり、ｎが０またまは１であり、そして、ＺがＳである場合には、Ｒ２は、Ｃ８またはＣ１８直鎖アルキル基ではなく、
ｎが３〜６であり、Ｒ１が結合であり、そして、ＸおよびＹがα(１→４)-結合グルコースである場合には、Ｒ２は、Ｃ１２〜Ｃ１８直鎖アルキル基ではなく、
ｎが３〜５であり、Ｒ１が結合であり、そして、ＸおよびＹがβ(１→３)-結合グルコースである場合には、Ｒ２は、Ｃ４〜Ｃ１２直鎖アルキル基またはコレステリル基ではなく、および、
ＸおよびＹがリボースであり、そして、Ｒ１が結合である場合には、Ｒ２は、Ｃ１８基ではない、一般式で表される化合物が提供される。
本願発明の第二の実施態様によれば、血管形成、転移、炎症、凝固／血栓、高血中トリグリセリド濃度、微生物感染および／または心臓血管疾患に起因する哺乳動物の障害を予防または治療するための医薬組成物または獣医薬組成物であって、第一の実施態様に記載の化合物の少なくとも一つを、当該化合物のための薬学的または獣医学的に許容可能な少なくとも一つの担体または希釈剤と共に含む組成物が提供される。
本願発明の第三の実施態様は、血管形成、転移、炎症、凝固／血栓、高血中トリグリセリド濃度、微生物感染および／または心臓血管疾患に起因する哺乳動物の障害の予防剤または治療剤を製造するための化合物の使用を含み、当該化合物が、以下の一般式、すなわち、
[Ｘ]ｎ−Ｙ−ＺＲ１Ｒ２ II、
式中、
ＸおよびＹの各々は、グリコシド結合に関与をしていない水酸基の各々が、独立して、ＳＯ３Ｍの化学基または水素で置換された単糖類単位であり、かつ、当該化学基でのＭが、薬学的に許容可能なカチオンであり、
ＸおよびＹは、Ｄ-またはＬ-ヘキソースまたはペントースであり、
Ｙは、環状体または開環体であり、
Ｚは、Ｏ、Ｎ、ＳまたはＣまたはそれらの高酸化状態、または、結合であり、および、Ｙが還元単糖類である場合には、アノマー炭素に結合しており、
Ｒ１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、アシル、アロイル、アルキルアミド、アルキルチオアミド、トリアゾリルを含むグループから選択されるリンカー、または、結合であり、
Ｒ２は、コレステリル、コレスタニル、コール酸塩、デオキシコール酸塩、直鎖アルキル、分岐アルキル、置換アルキル、直鎖アシル、分岐アシル、置換アシルを含むグループから選択される親油性部分であり、
ｎは、０〜６の整数であり、および
各化合物での硫酸化のレベルが、全水酸基の７０％〜１００％である、一般式IIで表される化合物の使用を含む。
本願発明の第四の実施態様によれば、血管形成、転移、炎症、凝固／血栓、高血中トリグリセリド濃度、微生物感染および／または心臓血管疾患に起因する哺乳動物の障害を予防または治療する方法であって、一般式IIで表される有効量の化合物または少なくとも一つの当該化合物を含む組成物を当該動物に投与する工程を含む方法が提供される。
本願発明の理解を促し、かつその実施を容易ならしめるために、本願発明の一つまたはそれ以上の実施態様を、添付した図面を参照しつつ、以下に詳細に記載するが、それらは例示目的のものに他ならない。
国際公開第WO 2005/085264号公報に記載された硫酸化オリゴ糖誘導体は、血管形成、それに、ＨＳ結合タンパク質が介在するその他のプロセスに対する優れた阻害剤である。 このような化合物は、血管形成、転移、炎症、凝固、血栓、高血中トリグリセリド濃度、微生物感染、および／または、心臓血管疾患に起因する哺乳動物の障害の予防または治療において有用である。 この有用性は、ＦＧＦ-２やＶＥＧＦなどの成長因子、それに、酵素ヘパラナーゼのようなＨＳ結合タンパク質の活性を阻害する化合物の性質に起因するものである。 本発明者らは、硫酸化したオリゴ糖を、例えば、コレスタノールやステアリン酸などの糖鎖に対して直接に、あるいは、リンカーを介して結合する親油性に富んだ化学基で修飾をして得られる新規の化合物が、抗血管形成剤としての強力な薬効を示し、また、改善された薬物動態特性を有することを知見するに至ったのである。 このことは、成長因子誘発内皮細胞の増殖および移動に関する評価法、マトリゲル商品名を用いた内皮管形成評価法、および、ラット大動脈評価法などの様々なin vitroおよびex vivo血管形成評価法において認められた活性に基づいて実証されている。 このような活性の増大は、腫瘍成長に関する動物モデルにおいても明らかになっている。 特筆すべき事項として、その同族糖類と比較して、不活性であるか、あるいは、わずかの抗血管形成活性(または、その他のＨＳ模倣活性)しか示さない硫酸化された小さな単糖類(例えば、モノ-〜トリ糖類)が、一旦、修飾を受けると、修飾を受けていない大きな単糖類と同等またはそれ以上の顕著に増大した活性を示すことが挙げられる。
幾つかの化合物は、抗ウィルス剤としての高い薬効を示す。 例えば、親油性化することで、細胞の感染や、単純疱疹ウイルス(ＨＳＶ)、呼吸器合胞体ウイルス(ＲＳＶ)、または、ＨＩＶの細胞間感染を阻害する性質が改善されることとなる。 加えて、そのような修飾を行うことで、ウィルス粒子を完全に不活化する化合物、すなわち、ビリオンを不活化せずに、ウィルス結合／侵入工程を阻害することができ、しかも、修飾を受けていない硫酸化オリゴ糖(ＰＩ-８８など)よりも優れた抗ウィルス活性を呈する化合物が提供されることとなる。
修飾を施していない硫酸化オリゴ糖が示す副作用の一つに、抗凝固活性がある。 本明細書に記載の親油性化を行うことで、ＰＩ-８８と比較して、抗凝固活性が非常に小さく、しかも、非常に広範な治療用途に供することができる新規の化合物が得られる。 ＰＩ-８８を利用した治療を受けた動物によく認められる注射痕も解消され、それにより、患者の負担軽減をも図れることとなる。
本明細書に記載の硫酸化オリゴ糖誘導体は、以下に概説し、かつ、実施例において例示した幾つもの多様な方法を用いて合成することができる。
式Ｉおよび式IIで表される化合物に関して、単糖類単位のＸおよびＹとして、例えば、ヘキソースまたはペントース、それに、ＤまたはＬ異性体のいずれかがある。 ヘキソースとして、グルコース、マンノース、アルトロース、アロース、タロース、ガラクトース、イドース、および、グロースなどがある。 ペントースとして、リボース、アラビノース、キシロース、および、リキソースなどがある。 単糖類単位のグリコシド結合は、立体構造および結合に応じて、一種類の結合だけ、あるいは、幾つもの種類の結合を利用することもできる。
薬学的に許容可能なカチオンＭとしては、特に制限はないが、ナトリウムが好ましい。
整数ｎに関して、ｎは、０〜６の整数、好ましくは、トリ-、テトラ-、または、ペンタ-の形態の糖類の化合物をもたらす、２、３または４が好ましい。
Ｒ２基としては、好適な親油性部分であれば特に制限はないが、コレスタニル、または、プロピルステアラミドが好ましい。
式Ｉの化合物のＺＲ１のアノマー配置を利用する場合、 αまたはβ、あるいは、アノマーα／β混合物を利用することができる。
式Ｉおよび式IIで表される化合物の定義における置換基に関して、「アルキル」の用語は、それ単独で用いる場合、あるいは、「アリールアルキル」のような複合語で用いる場合のいずれでも、直鎖、分岐、または、環状の炭化水素基を指す。
「アリール」の用語は、それ単独で用いる場合、あるいは、「アリールアルキル」のような複合語で用いる場合のいずれでも、芳香族炭化水素の単一の、多核の、接合または融合した残基を指す。 アリール基は、一つまたはそれ以上の任意の置換基で任意に置換することができる。
「アシル」の用語は、-Ｃ(Ｏ)-Ｒの化学基、式中、Ｒは、アルキル基、または、アリール基である化学基を指す。 前述した通り、Ｒ基は、任意に置換することができるので、「アシル」は、任意に置換されたアシルをも含む。
アルキル、アリール、または、アシルに対する任意の置換基として、ハロ基(ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード)、水酸基、Ｃ１−６アルキル基(例えば、メチル、エチル、プロピル(ｎ-およびｉ-異性体))、Ｃ１−６アルコキシ基(例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ(ｎ-およびｉ-異性体)、ブトキシ(ｎ-、sec-およびｔ-異性体)、ニトロ基、アミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノ基(例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピル(ｎ-およびｉ-異性体)アミノ)、Ｃ１−６ジアルキルアミノ基(例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジイソプロピルアミノ)、ハロメチル基(例えば、トリフルオロメチル、トリブロモメチル、トリクロロメチル)、ハロメトキシ基(例えば、トリフルオロメトキシ、トリブロモメトキシ、トリクロロメトキシ)、および、アセチル基などがある。
本願発明の化合物での硫酸化の度合いは、通常は、少なくとも70％である。 すなわち、グリコシド結合に関与をしていないオリゴ糖誘導体の水酸基の少なくとも70％が、ＳＯ３Ｍで置換される。 硫酸化の度合いは、通常は、70％〜100％であるが、少なくとも90％が好ましい。
式Ｉおよび式IIで表される化合物は、段階的合成経路を経て糖鎖要素から調製することができ、あるいは、好適な長さのオリゴ糖から出発して、所望の修飾を加えながら調製することもできる。 式Ｉで表されるモノ糖類は、出発物質である単糖類から直接に調製することができる。 当業者に周知の様々な方法を用いて、単糖類に対して親油性部分を導入することもできる。 例えば、Ｏ-、Ｎ-、Ｓ-、または、Ｃ-グリコシド結合を介して、還元生成した糖類のアノマー位に親油基を導入することができ、また、それら化学基は、アノマー位に直接に結合することができ、あるいは、リンカーを介して結合させることもできる。 無数のタイプの好適なリンカーがあることは、当業者であれば、容易に理解するであろう。
前述したすべての誘導体は、脱保護(通常は、NaOMeを用いた脱アセチル化)され、そして、ピリジン三酸化硫黄コンプレックスや三酸化硫黄トリエチルアミンコンプレックスのようなスルホン化試薬で硫酸化したポリオールが得られることとなる。
前述した本願発明の化合物は、血管形成、転移、炎症、凝固、血栓、高血中トリグリセリド濃度、微生物感染、または、心臓血管疾患に起因する哺乳動物の障害を予防または治療する上で有用である。 これら化合物は、ヒトでの前述した障害を治療する上で特に有用である。 これら化合物は、通常は、後述する医薬組成物の成分として投与される。
経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、粉末、または、液状の形態とすることができる。 錠剤には、ゼラチンのような固形担体や、補助剤、または、不活性希釈剤などを用いることができる。 液状の医薬組成物は、一般的に、水、石油、動物油脂や植物油、鉱油、または、合成油などの液状担体などを用いることができる。 生理食塩水の他に、エチレングリコール、ポリプレングリコール、ポリエチレングリコールなどのグリコール類も、利用することができる。 このような組成物や調製物は、一般的には、少なくとも０.１重量％の化合物を含んでいる。
非経口投与には、静脈内、経皮または皮下、経鼻、筋肉内、眼球内、経上皮、腹腔内、および、局所の経路からの投与を含む。 局所投与として、皮膚、眼球、直腸、鼻などからの投与があり、また、吸入による投与や、エアロゾールによる投与などもある。 静脈内、経皮または皮下への注射、または、処置が必要とされる箇所への注射の場合、活性成分は、発熱物質を含まずに、好適なpH、等張性、および、安定性を兼ね備えた、非経口的に許容可能な水性溶液の形態に調製される。 当業者であれば、例えば、目的とする化合物またはその誘導体の溶液を用いて、好適な溶液を調製することができるであろう。
少なくとも一つの化合物、および、担体または希釈剤に加えて、本願発明の組成物は、薬学的または獣医学的に許容可能な賦形剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、防腐剤、または、抗酸化剤、または、当業者に周知のその他の物質をさらに含むことができる。 当業者であれば、非毒性で、そして、化合物の効果に影響を与えない物質を好むであろう。 添加物の詳細な性質を、組成物の投与経路、すなわち、組成物を、経口投与または非経口投与するかによって、変化させることができる。 緩衝剤に関しては、一般的に、水性組成物は、そのものを、生理学的pHに近接させるための物質、または、少なくとも、約5.0〜8.0の範囲に維持するための物質を含む。
本願発明の組成物は、少なくとも一つの化合物の他に、活性成分も含むことができる。
これら成分は、主に、抗血管形成剤、抗転移剤、抗炎症剤、抗凝固剤、抗微生物剤、および、抗血栓剤、それに、高血中トリグリセリド濃度および心臓血管疾患に対して効果的な薬剤としての効果に基づいて選択されるが、関連する病態に対する効果に基づいて選択することもできる。
本願発明の医薬組成物または獣医薬組成物は、診断対象としている病態に応じて必要な予防的有効量または治療的有効量のいずれかをもってして、個体に対して投与される。 組成物でもってして投与される少なくとも一つの化合物の使用量や、投与の速度および経時的な対応は、治療を行っている病態の性質や重篤度、あるいは、必要とされている予防レベルに応じて変化する。 服用量などの治療にまつわる指示事項を含む処方箋は、治療にあたっている医師や獣医師の業務範囲に属する。 しかしながら、通常は、ヒトへの投与用の組成物は、約0.01〜100mg化合物／患者の体重(kg)、好ましくは、約0.1〜10mg／体重(kg)の化合物を含んでいる。
本願発明の化合物は、薬学的または獣医学的に許容可能なそれらの誘導体を含むことができる。 本明細書で用いる化合物の「誘導体」として、塩類、それに、Mn２＋やZn２＋などの金属イオンを有する配位錯体、in vivoで加水分解可能なエステルなどのエステル類、遊離酸または遊離塩基、水和物、または、プロドラッグなどがある。 リン酸塩や硫酸塩のような酸性基を有する化合物は、Na、Ｋ、MgおよびCaなどのアルカリ金属またはアルカリ土類金属を有する塩類や、トリエチルアミンやトリス(２-ヒドロキシエチル)アミンのような有機アミンを有する塩類を形成することができる。 アミンなどの塩基性化学基、塩酸、リン酸、または、硫酸などの無機塩、あるいは、酢酸、クエン酸、安息香酸、フマル酸、または、酒石酸などの有機酸を用いて、化合物と化合物との間に塩類を形成することもできる。 酸性基および塩基性基の双方を有する化合物は、内部塩を形成することができる。
当業者に周知の技術を用いて、化合物内に存在する水酸基またはカルボン酸基と適切なカルボン酸またはアルコール反応パートナーとの間にエステルを形成することができる。
本願発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、in vivoまたはin vitroで、親化合物の転換をすることができる。 一般的には、親化合物の少なくとも一つの生物学的活性は、化合物のプロドラッグ体において抑制されてしまい、そして、プロドラッグを親化合物またはその代謝産物に変換することで活性化することができる。 本願発明の化合物のプロドラッグは、活性化合物を放出するためにin vivoで除去されたり、あるいは、薬剤の消失を阻害する機能を果たす保護基の使用を含む。 好適な保護基は、当業者に周知の事項である。
また、前述したように、本願発明の化合物は、血管形成、転移、炎症、凝固／血栓、微生物感染、高血中トリグリセリド濃度、および／または、心臓血管疾患に起因する哺乳動物の障害の予防剤または治療剤を製造する上で有用である。 そのような薬剤の製造プロセスは、当業者に周知の事項であり、また、上記した医薬組成物を製造するために用いたプロセスを含む。
本願発明の化合物に至る一般的な合成経路を、以下に示す。
基本手順
脱アセチル化のための基本手順
過酢酸を含む無水メタノールの溶液(0.1M)(または、メタノール-THF)を、ナトリウムメトキシド(1.35M、0.2〜0.6等量)のメタノール溶液で処理した。 この混合物を、１〜３時間、室温で攪拌した(ＴＬＣでモニタリングした)。 酸性樹脂ＡＧ(登録商標)-50Ｗ-Ｘ８(Ｈ＋型)を添加して、pHを６〜７に調整し、得られた混合物を濾過し、そして、樹脂をメタノールで洗浄した。 合わせた濾液と洗液を、真空下で濃縮し、十分に乾燥を行って、ポリオール産物を得た。
スルホン化のための基本手順
ポリオールおよびSO３トリメチルアミンまたはSO３ピリジン複合体(アルコール当たり２等量)の混合物を含むＤＭＦを加熱した(60℃、一晩）。 冷却(室温)した反応混合物を、メタノールで処理し、次いで、Na２CO３(10％w／w)を添加して塩基性(pH＞10まで)とした。 この混合物を濾過し、濾液を蒸発し、共蒸発(H２O)させた。 粗製のポリ硫酸化物質を水に溶解し、(後述する)サイズ排除クロマトグラフィーに適用して、硫酸化物を得た。 必要に応じて、凍結乾燥をした後に、生成物を、イオン交換樹脂カラム(ＡＧ(登録商標)-50Ｗ-Ｘ８、Na＋型、１×４cm、脱イオン水、15ml）に適用することで、生成物を均質にナトリウム塩にした。 回収した溶液を蒸発させ、そして、凍結乾燥をして、最終生成物を得た。
サイズ排除クロマトグラフィー
サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)は、５×100cmカラムに充填されたBio-Gel P-2において、0.1M NH４ ＋・HCO３ −の流量2.8ml／分で行い、2.8分(7.8ml)の画分を回収した。 これら画分を、シリカゲルプレートの表面にスポットし、燃焼させて可視化することにより糖類含量を分析し、および／または、ジメチルメチレンブルー(DMB)試験２９によって多価物質の分析をした。 最後に、これら画分の純度をＣＥ８で確認し、塩類を含んでいないと推定されるものをプールし、そして、凍結乾燥をした。
実施例１：ドデシル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-2,4,6-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(２)
トリクロロアセトイミダート１２８(0.469ｇ、0.285mmol)を含むDCM(15ml)の溶液に対して、１-ドデカノール(0.849mmol、３当量)および３Å MS(50mg)を加えた。 この混合物を、−20℃で、20分間かけて攪拌した。 TMSOTf(103μl、0.57mmol、２当量)を加え、そして、Et３Nで急冷するまで、−20℃で、50分間かけて、混合物を攪拌した(38μl、0.285mmol、１当量)。 室温に至るまで加温した後、この混合物の濾過を行い、そして、固形物をDCMで洗浄した。 合わせた濾液と洗液を、シリカゲルを用いて蒸発乾固させ、そして、カラムクロマトグラフィー(２×20cmのシリカ、CHCl３、CHCl３-メタノール 99:１〜98:２の勾配溶離)によって精製したところ、配糖体２が、無色の粘性物質として得られた。 二つの画分が得られ、その各々には、副産物のBnNHAcが含まれていた(76mg,２:BnNHAc=5:3; 179mg,２:BnNHAc=５:11)。 1H NMR (CDCl3、400 MHz): 5.30-5.16 (m、8H)、4.99-4.87 (m、8H)、4.31-3.77 (m、19H)、3.68-3.61 (m、1H、OCH2)、3.44-3.36 (m、1H,OCH2)、2.18、2.17、2.15、2.11、2.10、2.09、2.07、2.06、2.05、2.02、2.01、1.97、1.95 (各々がs、トータル 48H、16×Ac)、1.58 (クインテット、2H、J = 6.7、CH2)、1.33-1.22 (m、18H、9×CH2)、0.86 (t、3H、J = 6.7、CH3).
ドデシル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-α-Ｄ-マンノピラノシド (３)
脱アセチル化のための基本手順に従って、配糖体２(72mg、0.043mmolを含むメタノール(３ml)を、NaOMe(11Mを含むメタノール、５μl、0.055μmol)で処理をした。 この混合物を、室温で、20時間かけて攪拌し、AG50WX8樹脂(Ｈ＋型)を添加して中和を行い、濾過をしてから、水で洗浄をした。 BnNHAcを除去するために、この溶液を、EtOAc(×２)で抽出をした。 水相を蒸発乾固させて乾燥せしめ、そして、その残渣を凍結乾燥したところ、ポリオール３が無定形の固体として生成し、このものを、次の工程において直接に利用した。 1H NMR (D2O、400 MHz、4.60ppmにて内部DOH) d 4.97-4.83 (m、5H)、4.06-3.21 (m、32H)、1.41 (br s、2H)、1.11 (br s、18H)、0.71 (t、3H、J = 6.7、CH3).
ドデシル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(４)
スルホン化のための標準手順にしたがって、ポリオール３(0.43mmol)を硫酸化し、そして、SECで精製をしたところ、産物４が白色粉末として生成した(77mg)。 1H NMR (D2O、400 MHz、4.60ppmにて内部DOH) d 5.19 (s、1H)、5.15 (d、1H、J = 1.9)、5.10 (d、1H、J = 1.9)、5.07 (d、1H、J = 1.9)、4.89 (m、1H)、3.77-3.64 (m、30H、糖類)、3.48-3.41 (m、1H,OCH2)、3.33-3.27 (m、1H,OCH2)、1.30 (m、2H、CH2)、1.10-0.90 (m、18H、9×CH2)、0.54 (t、3H、J = 6.7、CH3).
実施例２：１２-アジド-１-ドデカノール
12-ブロモ-１-ドデカノール(246mg、0.927mmol)とt-ブタノール(1.8ml、0.5M)との混合物を、アジ化ナトリウム(121mg、1.855mmol、２当量)、テトラブチルアンモニウムヨージド(17mg、0.0464mmol、0.05当量)、および、飽和水性重炭酸ナトリウム(0.9ml)を用いて、この順序で処理をした。 この混合物を、室温で、４日間かけて攪拌をした。 この混合物を、セリット栓に通して濾過し、そして、残渣固形物を、酢酸エチル(20ml)で洗浄した。 合わせた濾液と洗液を、シリカゲルを用いて蒸発乾固させ、そして、フラッシュカラム(2.5×18cm、ヘキサン-酢酸エチル ６:１、４:１〜２:１の勾配溶離)によって精製したところ、12-アジド-１-ドデカノールが、無色の油状物質として得られた(193mg、92％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz): 3.62 (t、2H、J = 7.0,OCH2)、3.24 (t、2H、J = 7.0、NCH2)、1.61-1.51 (m、4H)、1.35-1.25 (m、16H).
12-アジドドデシル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド (５)
トリクロロアセトイミダート１(0.325ｇ、0.197mmol)を含むDCM(15ml)の溶液に対して、12-アジドドデカノール(1.5当量)および ３ÅMS (50mg)を加えた。 この混合物を、−20℃で、20分間かけて攪拌した。 TMSOTf(54μl、0.296mmol、1.5当量)を加え、そして、Et３N(１当量)で急冷するまで、−20℃で、30分間かけて、混合物を攪拌した。 室温に至るまで加温した後、この混合物の濾過を行い、そして、固形物をDCMで洗浄した。 合わせた濾液と洗液を、シリカゲルを用いて蒸発乾固させ、そして、カラムクロマトグラフィー(２×20cmのシリカ、CHCl３、CHCl３-メタノール 99:１〜98:２の勾配溶離)によって精製したところ、副産物のBnNHAcを含む配糖体５が、無色の粘性物質として得られた(71.1mg、５:BnNHAc = １:１)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 5.29-5.14 (m、8H)、5.01-4.86 (m、8H)、4.28-3.75 (m、19H)、3.64 (dt、1H、J = 9.5、7.0,OCH2)、3.39 (dt、1H、J = 9.5、7.0,OCH2)、3.22 (t、2H、J = 7.0、NCH2)、2.16、2.15、2.11、2.10、2.09、2.09、2.09、2.09、2.07、2.06、2.04、2.04、2.01、1.95 (各々がs、トータル 48H、16×Ac)、1.57 (m、4H、2×CH2)、1.36-1.22 (m、16H、8×CH2).
１２-(４-フェニル-[１,２,３]トリアゾール-１-イル)ドデシル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(６)
１mlのHPCL試料バイアルに対して、アジド５(71mg、41.5μmol)、t-ブタノール(100μl、0.4M)、フェニルアセチレン(83μmol、２当量)、硫酸銅溶液(0.3Mを含む水、14μl、4.2μmol、10Mol％)、および、アスコルビン酸ナトリウム溶液(1Mを含む水、12.4μl、12.4μmol、30Mol％)を、この順に加えた。 この混合物を、室温で、２日間かけて攪拌した。 次いで、この混合物を、シリカゲルを用いて蒸発乾固させ、そして、フラッシュカラム(１×18cm、ヘキサン-酢酸エチル 6:1、4:1、2:1、1:1、1:2〜1:3の勾配溶離)によって精製したところ、フェニルトリアゾール６が、無色の油状物質として得られた(46.3mg、62％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 7.82 (d、2H、J = 7.2、Ph)、7.75 (s、1H、トリアゾール)、7.41 (t、2H、J = 7.2、Ph)、7.31 (t、1H、J = 7.2、Ph)、5.30-5.15 (m、8H)、5.03-4.87 (m、8H)、4.38 (t、2H、J = 7.2、NCH2)、4.29-3.77 (m、19H)、3.64 (dt、1H、J = 9.6、6.8,OCH2)、3.40 (dt、1H、J = 9.6、6.8,OCH2)、2.17、2.16、2.16、2.13、2.11、2.11、2.11、2.10、2.09、2.07、2.05、2.05、2.02、2.00、1.96 (各々がs、トータル 48H、16×Ac)、1.93 (m、2H、CH2)、1.57 (m、2H、CH2)、1.34-1.24 (m、16H、8×CH2).
１２-(４-フェニル-[１,２,３]トリアゾール-１-イル)ドデシル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(８)
(ａ) 脱アセチル化のための基本手順に従って、過酢酸６(46mg、0.0254mmol)を含むメタノール(4.5ml)を、NaOMe(11Mを含むメタノール、50μl、0.55μmol)で処理をした。 この混合物を、室温で、18時間かけて攪拌し、AG50WX8樹脂(Ｈ＋型)を添加して中和を行い、濾過をしてから、メタノールで洗浄をした。 濾液を蒸発乾固させて乾燥せしめ、そして、Ｐ２Ｏ５の存在下で減圧デシケーターにて残渣を乾燥して得たものを、精製または同定を行わずに、利用した。 (ｂ) スルホン化のための標準手順にしたがって、前出のポリオール７を硫酸化し、そして、SECで精製をしたところ、産物８が白色粉末として生成した(45mg)。 1H NMR (D2O、400MHz、4.60 ppmにて内部DOH) d 7.88 (s、1H、トリアゾール-CH)、7.47-7.44 (m、2H)、7.21-7.10 (m、3H)、5.23 (br s、1H)、5.19 (d、1H、J = 1.5)、5.12 (d、1H、J = 1.8)、5.10 (d、1H、J = 1.5)、4.91 (m、1H)、4.76-3.72 (m、32H、糖類およびNCH2)、3.37-3.30 (m、1H,OCH2)、3.23-3.17 (m、1H,OCH2)、1.51 (m、2H、CH2)、1.12 (m、2H、CH2)、0.90-0.63 (m、16H、8×CH2).
実施例３：１２-(４-ナフタレン-１-イル-[１,２,３]トリアゾール-１-イル)ドデシル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(９)
１mlのHPCL試料バイアルに対して、アジド５(86mg、50.3μmol)、t-ブタノール (100μl、0.4M)、１-エチニルナフタレン(83μmol、２当量)、硫酸銅溶液(0.3Mを含む水、14μl、4.2μmol、10Mol％)、および、アスコルビン酸ナトリウム溶液(1Mを含む水、12.4μl、12.4μmol、30Mol％)を、この順に加えた。 この混合物を、室温で、11日間かけて攪拌した。 次いで、この混合物を、シリカゲルを用いて蒸発乾固させ、そして、フラッシュカラム(１×18cm、ヘキサン-酢酸エチル 6:1、4:1、2:1、1:1、1:2〜1:3の勾配溶離)によって精製したところ、ナフチルトリアゾール９が、無色の粘性物質として得られた(24.2mg、26％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 8.38-8.33 (m、1H)、7.92-7.86 (m、2H)、7.80 (s、1H、トリアゾール-CH)、7.72 (dd、1H、J = 7.3、1.5)、7.54-7.48 (m、3H)、5.31-5.15 (m、8H)、5.03-4.87 (m、8H)、4.47 (t、2H、J = 7.3、N-CH2)、4.30-3.77 (m、19H)、3.64 (dt、1H、J = 9.7、6.8,OCH2)、3.40 (dt、1H、J = 9.7、6.8,OCH2)、2.17、2.16、2.16、2.13、2.12、2.11、2.11、2.10、2.09、2.07、2.06、2.05、2.02、2.00、1.97、1.57 (15s、各々が3H、2.100 (6H)を除く、16×Ac)、2.07-1.95 (m、Ac 一重項と重複している、2H、CH2)、1.57 (m、1H、CH2)、1.42-1.23 (m、16H、8×CH2).
１２-(４-ナフタレン-１-イル-[１,２,３]トリアゾール-１-イル)ドデシル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド (１１)
(ａ) 脱アセチル化のための基本手順に従って、配糖体９(39.6mg、0.0213mmol)を含むメタノール(３ml)を、NaOMe(11Mを含むメタノール、40μl、0.44μmol)で処理をした。 この混合物を、室温で、24時間かけて攪拌し、AG50WX8樹脂(Ｈ＋型)を添加して中和を行い、濾過をしてから、メタノールで洗浄をした。 濾液を蒸発乾固させて乾燥せしめ、そして、Ｐ２Ｏ５の存在下で減圧デシケーターにて残渣を乾燥した。 (ｂ) スルホン化のための標準手順にしたがって、前出のポリオール１０を硫酸化し、そして、SECで精製をしたところ、産物１１が白色粉末として生成した(40mg、68％)。 1H NMR (D2O、400MHz、4.60 ppmにて内部DOH) d 8.05 (s、1H、トリアゾール-CH)、7.97 (d、1H、J = 8.3)、7.90 (d、2H、J = 7.8)、7.55-7.40 (m、4H)、5.44-5.22 (m、4H)、5.09-3.82 (m、33H、糖類およびNCH2)、3.41-3.33 (m、1H,OCH2)、3.25-3.16 (m、1H,OCH2)、1.78 (クインテット、2H、CH2)、1.14-0.79 (m、18H、9×CH2).
実施例４：２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-Ｄ-マンノピラノース (１３)
四糖類１２３０を、過アセチル化(Ac2O、ピリジン、DMAP、室温、４日間)し、そして、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン-酢酸エチル勾配)によって精製したところ、 過酢酸１３が油状物質として得られた。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ 6.20 (d、1H、J1,2 = 1.8、H-1)、5.35-5.15 (m、7H)、5.05-4.92 (m、5H)、4.30-3.85 (m、15H)、2.18 (s、6H、OAc)、2.14 (s、6H、OAc)、2.12 (s、6H、OAc)、2.10 (s、3H、OAc)、 2.08 (s、6H、OAc)、2.06 (s、3H、OAc)、2.03 (s、3H、OAc)、2.02 (s、6H、OAc)、1.97 (s、3H、OAc).
２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル トリクロロアセトイミダート(１４)
過酢酸13(500mg、398μmol)を含むジエチルエーテル(3.0ml)およびTHF(750μl)を、０℃で、ベンジルアミン(0.137ｇ、1.3mmol、139μl)で処理をした。 この混合物を、徐々に室温にまで加温し、一晩かけて反応を行った。 溶媒を蒸発させ、残渣をDCMに合わせ、そして、冷たい0.5M HCl(×３)で洗浄をした後に、ブラインと有機溶液を乾燥させ(Na２SO４)、濾過し、そして、蒸発乾固した。 残渣を、ドライDCMに合わせ、そして、分子篩(３Å、30mg)、無水炭酸セシウム(12.9mg、39.8μmol)、および、炭酸カリウム (110mg、796μmol)を加えた。 トリクロロアセトニトリル (115mg、80μl、796μmol)を加えるまで、０℃で、この混合物を攪拌した。 この混合物を、ＴＬＣによる完全な変化が認められるまで、室温で、５時間かけて攪拌をした。 この混合物を、濾過し、そして、溶媒を蒸発させて得た粗製産物をカラムクロマトグラフィー(SiO2、6:1 Hex:EtOAc〜1:3 Hex:EtOAc、1:2 Hex:EtOAcで溶出した産物)に適用したところ、トリクロロアセトイミダート14(307.5mg、57％)が、澄明な油状物質として得られ、このものは、冷蔵庫に放置しておくと固化した。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ 6.40 (d、0.7H、J1,2 = 1.5、H-1Ia)、6.22 (d、0.3H、J1,2 = 1.5、H-1Ib)、5.40-5.14 (m、7H)、5.05-4.89 (m、5H)、4.31-3.84 (m、15H)、2.19-1.98 (m、39H、OAc).
３β-コレステリル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(１５)
14(90mg、0.0663mmol)およびコレステロール (39.8mg、0.0995mmol、1.5当量)を含んだ(３ÅMSで乾燥したもの、0.7ml、0.094M)の溶液を、−20℃で、３ÅMS (〜50mg)を用いて攪拌する一方で、注射器を用いて、TMSOTf (18ml、0.0995mmol、1.5当量)を加えた。 40分かけて、温度(外部)を、−５℃にまで加温した。 黄色が、徐々に、オレンジ色(赤色調)に変化した。 Et３N(50ml)を加えた。 即座に色が消失した。 この混合物を、DCM (20ml)で希釈し、そして、飽和Na２CO３ブラインで洗浄し、乾燥(Na２SO４)および濾過をした。 この濾液を、シリカゲルを用いて蒸発乾固させ、そして、カラムクロマトグラフィー(１×18cmのシリカ、ヘキサン-酢酸エチル 4:1、2:1、1:1、1:2〜1:3の勾配溶離)によって精製したところ、配糖体15が、無色の粘性物質として得られた(58mg、55％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz): 5.34-5.14 (m、8H、糖類および コレステロール-H6)、5.05-4.90 (m、6H、糖類)、4.30-3.84 (m、15H、糖類)、2.34-0.80 (m、30H、コレステロール)、2.17、2.16、2.13、2.06、2.05、2.02、2.01、2.01、1.96 (各々がs、各々が3H、9×Ac)、2.11、2.10 (各々がs、各々が6H、4×Ac)、0.98 (s、3H,Me)、0.90 (d、3H、J = 6.4,Me)、0.85 (d、3H、J = 6.4,Me)、0.84 (d、3H、J = 6.4,Me)、0.66 (s、3H,Me); ESMS:M/z 1604 ([M+Na]+).
３β-コレステリル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-α-Ｄ-マンノピラノシド(１６)
15(56mg、0.0354mmol)を含んだメタノール(３ÅMSで乾燥したもの、3ml)の溶液を、11M NaOMeを含んだメタノール(50ml)と共に、40分かけて攪拌した。 白色の沈殿物が形成された。 THF(１ml)を加えたが、可溶性に変化は認められなかった。 DMF(４ml)を添加した。 沈殿物の一部が溶解した。 この混合物を、合計で６時間にわたって攪拌をした。 水(0.8ml)を加えて、澄明な溶液を得た。 AG50WX8樹脂(Ｈ＋型)を添加して、pHを６〜７に調整した。 この混合物を濾過し、そして、樹脂をメタノール(１ml)で洗浄をした。
顕著な発泡が起こったため、ロータリエバポレーターを用いた蒸発乾固を止めた。 この混合物を風乾させ、そして、８時間かけて凍結乾燥したところ、ポリオール16が、白色固形物として得られ、このものは、Ｐ２Ｏ５の存在下で減圧デシケーターにて乾燥され、そのまま、次の工程に供された。
３β-コレステリル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(１７)
スルホン化のための標準手順にしたがって、ポリオール16(0.0354mmol)のスルホン化を行った。 5M NaOH(561ml、2.81mmol、SO３ピリジン錯体に基づく2.05当量)を用いて、冷却した粗製混合物を塩基性化した。 蒸発乾固した後に、残渣を、水(３ml)に溶解し、そして、SECで精製した。 純画分を合わせ、そして、1M Na２CO３を加えた精製水を利用したスライド-α-ライザー(登録商標)カセット２Ｋ(0.5-３ml)を用いて、一晩かけて、透析をした。 別の1M Na２CO３を新たに加え、そして、精製水を新しいものと交換をした。
一晩をかけて、透析を続けた。 黄色の溶液を除去し、そして、凍結乾燥を行ったところ、産物17が、 灰色がかった白色の粉末として得られた(34.8mg、42％)。 1H NMR (D2O、400MHz) d 6.41-6.26 (m、4H、糖類およびコレステリル-H6)、5.09 (s、1H)、5.03 (d、1H、J = 2.2)、4.86 (s、1H)、4.73-3.94 (m、22H)、3.51 (m、1H、コレステリル-H3)、2.35 (dm、1H、J = 11.7、コレステリル-H4)、2.24 (dm、1H、J = 11.7、コレステリル-H4)、1.90-0.51 (m、0.869 [s、3H]、0.766 [d、3H、J = 6.6]、0.689 [d、3H、J = 6.6]、0.686 [d、3H、J = 6.6]、および 0.533 [s、3H]、43H、コレステリルを含む).
実施例５：コレスタノール
コレステロール(500mg)を、酢酸エチルに合わせた。 10％パラジウム炭素(触媒)を加え、そして、水素バルーンの存在下で、一晩かけて、攪拌をした。 この混合物を濾過紙、そして、溶媒を蒸発させたところ、定量可能な量の白色固形物の産物が得られた。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 3.58 (m、1H、CHOH)、2.44 (ブロード、1H、OH)、1.97-0.83 (m、31H)、0.88 (d、3H、J = 6.6、CH3)、0.85 (dd、6H、J = 1.5、J = 6.6、CH3)、0.79 (s、3H、CH3)、0.64 (s、3H、CH3).
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(１８)
アルゴン下に置かれた14(600mg、4.42×10-4Moles)を含んだDCM(32ml)の溶液に対して、コレスタノール (300mg)を加えた。 この混合物を、−20℃で、20分かけて攪拌をした。 TMSOTf(40μl)を加えた。 この混合物を、−20℃で、40分かけて攪拌をし、そして、20分かけて、−10℃にまで加温をした。 この混合物に対して、トリエチルアミン(70μl)を加え、そして、室温にまで加温をした。 溶媒を蒸発させた。 カラムクロマトグラフィー(SiO２: 3:1 Hex:EtOAc〜1:2 Hex:EtOAc)を用いて、粗製産物を精製したところ、配糖体18が、無色の油状物質として得られた(220mg、31％)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 5.35-5.15 (m、7H)、5.03-4.91 (m、6H)、4.31-3.85 (m、15H)、3.51 (m、1H、C-3)、2.18 (s、3H、OAc)、2.17 (s、3H、OAc)、2.14 (s、3H、OAc)、2.12 (s、6H、OAc)、2.11 (s、3H、OAc)、2.10 (s、3H、OAc)、2.07 (s、3H、OAc)、2.06 (s、3H、OAc)、2.05 (s、3H、OAc)、2.03 (s、3H、OAc)、2.00 (s、3H、OAc)、1.97-0.78 (m、31H、コレスタノール)、1.97 (s、3H、OAc)、0.88 (d、3H、J = 6.6、CH3)、0.85 (dd、6H、J = 1.5、J = 6.6、CH3)、0.79 (s、3H、CH3)、0.63 (s、3H、CH3).
３β-コレスタニル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-α-Ｄ-マンノピラノシド(１９)
基本手順にしたがって、配糖体18(43.1mg)を脱アセチル化したところ、ポリオール19が、白色固形物として得られ(21mg、74％)、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(２０)
ポリオール19(19mg、18.3μmol)を、DMF(1.3ml、0.015M)に溶解した。 SO３.ピリジン(６当量/OH、1.43mmol、227mg)を加え、そして、この混合物を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 5M NaOH(613μl)を加えて溶液全体を中和する前に、この混合物を氷水で冷却した。 溶媒を蒸発させた。 C18 SPEカートリッジを用いて残渣を脱色し、そして、2000MWCO透析カートリッジを用いて、48時間かけて、三度の水の交換を行って、透析をして脱塩をした後に、凍結乾燥をしたところ、産物20が、白色固形物として得られた(19.2mg、44％)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ 5.52-5.46 (m、3H)、5.26-5.20 (m、2H)、5.04 (m、1H)、4.88 (m、1H)、4.84-4.15 (m、21H)、3.76 (m、1H、C-3)、2.00-0.81 (m、31H、コレスタノール)、0.91 (d、3H、CH3)、0.86 (d、6H、J = 6.2、CH3)、0.81 (s、3H、CH3)、0.66 (s、3H、CH3).
実施例６：３-アジドプロプ-１-イル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(２１)
過酢酸13(276mg、220μmol)および３-アジドプロパン-１-オール(67mg、660μmol)を含む無水DCE(８ml)の溶液に対して、BF３・Et２O(78mg、550μmol)を加えた。 BF３・Et２O(115mg、810μmol)をさらに加えて、その溶液を、さらに３時間かけて加熱する以前に、この溶液を、密閉した容器内で、２時間かけて攪拌をした。 この溶液を、室温にまで冷却し、そして、砕いた氷、NaHCO３(飽和溶液)、および、ブラインの混合物に対して注いだ。 EtOAcを用いて、この混合物を抽出し、そして、１:１のブライン：NaHCO３(飽和溶液)で有機相をさらに洗浄し、そして、乾燥(Na２SO４)、蒸発乾固を行い、さらに、無水トルエンを用いて共蒸溜した。 無水DCM(５ml)、無水酢酸(66mg、648μmol)、Et3N(89mg、875μmol)、および、DMAP(結晶)を加え、そして、溶液を、−20℃で、一晩かけて保存をした。 この溶液を、調製済フラッシュクロマトグラフィーカラム(17×２cmのシリカゲル、60:40〜75:25 EtOAc:Hxの勾配溶離)に直接に適用したところ、配糖体２1が油状物質として得られた(176mg、61％)。 ESMS:M/z 1319.69 ([M+Na]+). 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ 5.31-5.12 (m、7H)、5.00-4.87 (m、6H)、4.26-3.94 (m、11H)、3.90-3.81 (m、2H)、3.77 (dt、1H、J = 9.9、6.0)、3.47 (dt、1H、J = 9.9、6.0)、3.42-3.32 (m、2H)、2.14(1)、2.13(5)、2.10、2.08×2、2.06×2、2.05、2.03(2)、2.02(5)、1.99、1.98、1.93 (13×s、13×3H、OAc×13)、1.84 (クインテット、1H、J = 6.2). 13C NMR (100MHz、CDCl3) δ:170.6、170.5、170.4、170.3、170.1(4)、170.0(9)、169.9(2)、169.8(8)、169.7、169.6、169.5(4)、169.4(5)、169.3、99.4、98.9、98.8、98.1、76.8、75.1(5)、75.1(1)、70.9、70.8、70.1、69.6、69.5、69.4、69.2、68.5、68.3、67.3、66.6、66.1、65.5、64.7、62.5、61.9、61.7、48.0、28.5、20.8(4)、20.7(6)、20.7、20.6、20.5(4)、20.5(2)、20.4(9)、20.4(7).
３-ステアラミドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(２２)
(ａ) 配糖体２1(500mg、386μmol)を、THF(10ml)に溶解した。 重合体に結合したトリフェニルホスフィン(725mg)を加え、そして、この混合物を、室温で、１時間かけて攪拌をした。 水(210μl)を加え、そして、この混合物を、50℃で、４時間かけて攪拌をした。 この混合物を、冷却、濾過し、そして、溶媒を蒸発させたところ、白色固形物が得られ、このものを、さらに精製または同定することなく、そのままに次の工程に供した。
(ｂ) 上記したアミン(250mg、197μmol)を、DCM(６ml)に溶解した。 ステアロイルクロリド(２当量、394μmol、119mg、133μl)を加えた後に、トリエチルアミンとこの混合物を、室温で、５時間かけて攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、そして、NaHCO３(飽和)で洗浄し、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させる以前に、残渣をDCMに合わせた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２：DCM(登録商標)４％メタノール/DCM)を用いて精製したところ、アミド22が、澄明な油状物質として得られた(102mg、33％)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ 5.86 (ブロードM、1H、NH)、5.32-5.12 (m、7H)、5.02-4.88 (m、6H)、4.28-3.96 (m、15H)、3.73 (m、1H、CH2O)、3.45 (m、1H、CH2O)、3.32 (m、2H、CH2N)、2.15 (s、3H、OAc)、2.15 (s、3H、OAc)、2.12 (m、2H、CH2CO)、2.11 (s、3H、OAc)、2.10 (s、6H、OAc)、2.08 (s、6H、OAc)、2.06 (s、3H、OAc)、2.04 (s、6H、OAc)、2.00 (s、3H、OAc)、1.99 (s、3H、OAc)、1.95 (s、3H、OAc)、1.79 (m、2H、CH2)、1.58 (m、2H、CH2)、1.28-1.20 (m、28H、CH2)、0.84 (t、3H、CH3).
３-ステアラミドプロピル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-α-Ｄ-マンノピラノシド(２３)
基本手順にしたがって、アミド22(101.6mg)を脱アセチル化したところ、ポリオール23が、白色固形物として得られ(61mg、93％)、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３-ステアラミドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(２４)
ポリオール23(60.9mg、62μmol)を、DMF(0.02M、3.1ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量/OH、2.42mmol、385mg)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この混合物を氷水で冷却し、そして、5M NaOH(2.1当量/SO３.ピリジン、5.08mmol、1.02ml)を加えて溶液全体を中和する前に蒸発乾固させた。 この化合物を、１％メタノールの水と合わせ、そして、C18 SPEカートリッジを用いて精製をした。 そして、2000MWCO透析カートリッジを用いて、この化合物を、二晩かけて透析をした後に、凍結乾燥をしたところ、産物24が、白色固形物として得られた(113mg、79％)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ 5.56 (m、1H)、5.48 (m、2H)、5.28 (m、1H)、5.11 (m、1H)、5.06 (m、1H)、4.91-4.13 (m、22H)、3.87 (m、1H、CH2O)、3.70 (m、1H、CH2O)、3.32 (m、2H、CH2N)、2.29 (t、2H、CH2CO)、1.88 (m、2H、CH2)、1.62 (m、2H、CH2)、1.33-1.28 (m、28H、CH2)、0.90 (t、3H、CH3).
実施例７：３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(２５)
トリクロロアセトイミダート１(165mg、0.1mmol)、コレスタノール(78mg、２当量、0.2mmol)、および、３Å分子篩(100mg)を、ドライDCMにおいて、２時間かけて、攪拌をした。 TMS-トリフラートを含むドライDCM(0.4M、0.075ml、0.03mmol、0.３当量)の溶液を、０℃で、滴下し、そして、同じ温度で、40分かけて攪拌を続けた。 Et３N(５ml)を加えて反応を停止させ、EtOAc(100ml)で希釈をし、超音波処理し(３分間)、そして、デカンテーションを行った。 有機溶液を、飽和NaHCO３溶液(３×20ml)で洗浄し、有機相を、EtOAc(３×20ml)で再抽出し、ブライン(１×20ml)で洗浄をし、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、真空内で濃縮を行ったところ、無色泡沫の配糖体が得られた。 産物を、シリカゲルのカラム(20×２cm、トルエン:EtOAc、1:2)で精製した。 この精製によって、二つの画分、すなわち、純産物を含む画分Ａ(90mg、48％の収率)と、純産物と脱アセチル化物の混合物(1:1、74mg)である画分Ｂが得られた。 所望の配糖体の収率を改善するために、ドライ画分ＢおよびDMAP(触媒)を、ドライピリジン(２ml)に溶解し、そして、０℃で、Ac２O(0.1ml)を滴下して加えることで、脱アセチル化をし、そして、室温で、２時間かけて攪拌を続けた。 ０℃で、ドライメタノール(５ml)を加えることで、この混合物を急冷し、そして、さらに、30分間かけて攪拌を続けた。 この溶液を、真空内で濃縮し、そして、トルエン(３×20ml)で共蒸発させたところ、純産物としての配糖体25(71mg、38％の収率)が、総収率86％で得られた。 1H NMR (400MHz、CDCl3): d 5.14-5.32 (m、9 H、5 H-4、2 H-3、H-2IV)、4.90-5.05 (m、8 H、5 H-1、3 H-3)、3.90-4.31 (m、19 H、H-2、H-3I、H-3II、H-3III、5 H-5、5 H-6a、5 H-6b)、3.80 (ddd、1 H、H-5)、3.52 (m、1 H、H-3 コール)、2.18、2.17、2.14、2.12、2.11、2.10、2.08、2.07、2.06、2.03、2.01、1.98、(s、48H、16 × Ac)、0.55-1.82 (m、33 H、12 CH2、9 CH)、0.89 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.857 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.853 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.79 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.64 (s、3H、コレスタニル-CH3).
３β-コレスタニル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-α-Ｄ-マンノピラノシド(２６)
基本手順にしたがって、配糖体25(181mg、0.097mmol)を脱アセチル化したところ、ポリオール26が、白色結晶体として得られ(116mg、100％)、このものは、さらに精製または同定を行わずに、次の工程に供した。
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(２７)
ドライポリオール26(40mg、0.033mmol)を、ドライDMF(0.83ml)に溶解し、そして、新たに洗浄を行い、また、ドライSO３.ピリジン(250mg、３当量／水酸基、1.85mmol)を加えて、60℃で、16時間かけて攪拌をした。 水性水酸化ナトリウム溶液(５M、2.１当量 SO3、0.66mmol)を、０℃(pH 12)で、滴下して加えて反応を停止し、そして、40℃で、真空下で濃縮を行ったところ、黄色の粉末が得られた。 その粉末を、水(HPLC品質、12ml)に溶解し、そして、精製水に対して、36時間かけて、2Kカートリッジにて透析を行った。 16時間後に、NH４HCO３(0.1M、0.5ml)の水性溶液を、このカートリッジに加えて、７を超えるpHを維持するようにした。 10％MeCN-水 → 35％MeCN-水の勾配と、５ml/分の流速とが設定され、また、検出用ELSも具備している逆相HPLCを用いて、産物の精製を行った。 純産物を含む画分を合わせ、そして、凍結乾燥を行ったところ、27が、毛様の白色粉末として得られた(23.8mg、25％収率)。 1H NMR (400MHz、D2O): 1H NMR (400MHz、CDCl3) d 5.48-5.57 (m、4 H、4 H-2)、5.29、5.23 (bs、4 H、H-1’、H-1’’、H-1’’’、H-1’’’’)、4.35-4.90 (m、23 H、H-1、5 H-3、5 H-4、2 H-5、5 H-6a、5 H-6b、4.28 (t、1 H、H-2)、4.15-4.24 (m、3 H、3 H-5)、3.81 (m、1 H、H-3 コール)、0.66-2.05 (m、33 H、12 CH2、9 CH)、0.96、0.94、0.90、0.88、0.85、0.70 (s、15 H、CH3). 0.85 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.88 (d、6H、J = 6.8、2×コレスタニル-CH3)、0.85 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.70 (s、3H、コレスタニル-CH3).
実施例８：ベンジル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(２８)
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシルトリクロロアセトイミダート３２(0.609ｇ、0.822mmol、1.１当量)、および、ベンジル ３,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド３３(0.435ｇ、0.747mmol)を、無水DCM(６ml)に溶解した。 粉末MS３Å(新たに活性化した80mg)を加えた。 この混合物を、０℃で、40分かけて攪拌をした。 TMSOTf(0.027ml、0.149mmol、0.2当量)を含んだDCM(1.5ml)の溶液を滴下して加えた。 この混合物を、０℃で、攪拌をし、その一方で、ＴＬＣ(ヘキサン-EtOAc = 65:35)で反応をモニターリングした。 40分後に、反応が完了し、そして、Et３N(0.3ml、2.15mmol)を加えた。 粗製の混合物を、他の反応から得た粗製産物(TCA: 1.42ｇ、2.098mmol; 2-アルコール: 1.22ｇ、2.098mmol、TMSOTf: 0.114ml、0.629mmol、0.３当量、０℃、40分)と合わした。 この混合物を、セリット栓に通して濾過を行い、そして、DCM(３×１ml)で洗浄をした。 濾液と洗液との混合液に対して、ピリジン(0.121ml、1.494mmol、２当量)と塩化ベンゾイル(0.130ml、1.212mmol、1.5当量)を加えた。 この混合物、室温で、一晩かけて攪拌を行い、シリカゲルを用いて蒸発乾固し、そして、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル ３×20cm、ヘキサン-EtOAc 200:20、400:80、200:50、240:80、200:90、200:100の勾配溶離)を用いて精製をしたところ、二糖類28が、無色の粘性物質として得られた(594mg、68％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 8.15-7.88 (m、14H、Ph)、7.59-7.25 (m、26H、Ph)、6.16-5.94 (m、5H)、5.30-5.27 (m、2H)、4.82 (d、1H、J = 11.7)、4.68-4.39 (m、8H).
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-マンノピラノース(２９)
二糖類28(670mg、0.577mmol)を、メタノール(３ml)とEtOAc(30ml)に溶解した。 パラジウムチャコール(５％、80mg)を加えた。 この混合物を、50psiの水素の存在下で、室温で、一晩かけて攪拌をした。 ＴＣＬは、〜60％の変換を示していた。 パラジウムチャコール(５％、80mg)を、さらに加えた。 50psiで、３日間かけて攪拌を続けた。 ＴＣＬは、完全な変換を示していた。 この混合物を、セリット栓に通して濾過を行い、そして、EtOAc(５×１ml)で洗浄をした。 濾液と洗液との混合液を蒸発させて乾燥させたところ、無色泡沫の標記化合物29が得られた(609mg、99％)。 この産物は、精製を行わずに、次の工程にそのまま供した。
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-マンノピラノシル トリクロロアセトイミダート(３０)
29(609mg、0.569mmol)を含む無水DCM(2.8ml、0.2M)の予冷した溶液(０℃)に対して、トリクロロアセトニトリル(114μl、1.138mmol、２当量)を加えた。 DBU(4.3μl、0.05当量、0.0285mmol)を含む無水DCM(0.3ml)の溶液を加えた。 この混合物を、０℃で、４時間かけて攪拌をしたところ、ＴＬＣ(ヘキサン-EtOAc = 65:35)は、完全な変換を示していた。 粗製混合物を、シリカゲルを用いて蒸発させ、そして、シリカカラムクロマトグラフィー (2.5×14cm、ヘキサン-EtOAc-Et３N 210:20:0.5、200:50:0.5、180:60:0.5、150:70:0.5の勾配溶離)によって精製をした。 産物画分を合わせて、蒸発させ、そして、P２O５を利用した減圧デシケーターで、一晩かけて乾燥させたところ、白色泡沫のトリクロロアセトイミダート30が得られ(530mg、77％)、このものは、精製を行わずに、次の工程に供した。
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(３１)
トリクロロアセトイミダート30(260mg、0.214mmol)と３β-コレスタノール(166mg、0.428mmol、２当量)を含む無水DCM(3.8ml)の溶液に対して、新たに活性化させた粉状の分子篩３Å(50mg)を加えた。 この混合物を、０℃で、0.5時間かけて攪拌を行い、そして、TMSOTf(7.7μl、0.0428mmol、0.２当量)を含む無水DCM(0.3ml)の溶液を、０℃で、滴下して加えた。 この混合物を、０℃で、1.5時間かけて攪拌を行ったところ、ＴＬＣは、反応の完全な変換を示した。 Et３N(150μl)を加え、次いで、この混合物を、シリカゲルを用いて蒸発させ、そして、シリカカラムクロマトグラフィー(２×15cm、ヘキサン-EtOAc 210:20、200:50、180:60、180:90の勾配溶離)で精製をしたところ、白色泡沫の配糖体31(301mg、98％)が得られた。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 8.11-7.28 (m、35H、Bz)、6.09 (dd or t、1H、JH3(II)-H4(II) = 10.3、JH4(II)-H5(II)= 9.6、H4II)、5.97-5.87 (m、3H、H2II、H3I and H4I)、5.28 (d、1H、JHI-H2 = 2.2、H1)、5.28 (d、1H、JHI-H2 = 1.5、H1)、4.69-4.44 (m、6H、H5I、H5II、H6I and H6II)、4.33 (br s、1H、H2I)、3.59 (m、1H,OCH-コール)、3.02 (dd、1H、JH2(II)-H3(II)= 2.9、H3II)、1.99-0.47 (m、31H、コレスタニル)、0.91 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.872 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.867 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.75 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.65 (s、3H、コレスタニル-CH3).
３β-コレスタニル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-α-Ｄ-マンノピラノシド(３２)
31(293mg、0.203mmol)を含む無水THF(４ml)とメタノール(６ml)の溶液を、11M NaOMeを含むメタノール(0.1ml、1.1mmol、5.4当量)の溶液で処理をした。 この混合物を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 懸濁液を、AcOH (50μl)で処理したところ、即座に透明な溶液となった。 AG50WX8樹脂(Ｈ＋型)を加えて、pHを６にまで調整した。 この混合物を濾過し、そして、樹脂を、メタノール(２×２ml)で洗浄をした。 濾液と洗液とを合わして得た混合液を、乾燥するまで蒸発せしめ、そして、真空デシケーターで、一晩かけて乾燥をしたところ、ポリオール32が、淡黄色の粉末として得られ(171mg、118％)、このものは、精製せずに、次の工程に供した。
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(３３)
ポリオール32(96mg、0.135mmol)を、無水DMF(3.4ml、0.04M)に溶解した。 三酸化硫黄-ピリジン錯体(451mg、2.835mmol、3当量／水酸基、水、トルエン、EtOH、DCMで新たに洗浄し、そして、P２O５の存在下で真空デシケーターで、１時間かけて乾燥したもの)を加えた。 この混合物を、60℃で、一晩かけて攪拌を行い、そして、０℃にまで冷却した。
5M NaOH(794μl、3.969mmol、SO３に基づいた1.4当量)と飽和Na２CO３(2.5M、690ml、1.701mmol、SO３に基づいた0.6当量)を加えた。 色調が、若干暗くなった(橙黄色)。 この混合物を、乾燥するまで、蒸発を行った。 残渣を、4mlの水(pH>９)に溶解し、そして、バイオ-ゲル P-2 カラムクロマトグラフィー(0.1M NH４HCO３を用いて、196ml/hの速度で溶離し、一回あたりに、６分かけて回収を行った)を用いて精製をした。 産物の画分を、MBTおよびCEによって同定をした。 凍結乾燥を行ったところ、淡黄色粉末の産物33が得られた(33mg、二段階で20％)。 1H NMR (D2O、300MHz) d 5.27 (s、1H)、4.98 (s、1H)、4.81 (s、1H)、4.64-4.48 (m、4H)、4.38-4.18 (m、4H)、4.08-3.85 (m、4H)、3.50 (m、1H,OCH)、1.75-0.49 (m、46H、コレスタニル).
実施例９：２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル トリクロロアセトイミダート(３６)
三糖類34３０を、過アセチル化し(Ac２O、ピリジン、DMAP、室温、4日間)、そして、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン-EtOAc勾配)を用いて精製をしたところ、油状物質の過酢酸35が得られた。 エチレンジアミン(1.2mmol、0.08ml)を含むドライTHF(15ml)の溶液に、０℃で、氷酢酸(0.65mmol、0.038ml)を滴下して加えたところ、即座に沈殿物が形成され、このものは、水性になるまで留まり続ける。 過酢酸35(500mg、0.52mmol)を、０℃で、添加し、そして、この混合物を、室温で、2.5時間かけて攪拌を行い、そして、−20℃で、一晩かけて保存をした。 ＴＬＣ(トルエン/EtOAc、1:2)は、出発物質が存在していないこと、そして、緩慢な動きを見せる産物、すなわち、ほとんどアノマー混合物と考えられる産物が存在していることを示していた。 pHが６になるまで酢酸(0.12ml)を加えて、溶液の中和を行った。 気流下に置いて溶媒を蒸発させ、次いで、残渣を、EtOAc(100ml)に溶解し、そして、飽和NaHCO３溶液(３×50ml)、水(３×10ml)、ブライン(30ml)で洗浄をし、乾燥を行い(Na２SO４)、次いで、真空下で濃縮を行ったところ、黄色泡沫のヘミアセタール(500mg)が得られ、このものは、精製を行わずに用いた。
このヘミアセタール(500mg、〜0.54mmol)を、ドライDCM(４ml)、K２CO３(0.95ｇ、6.81mmol)に溶解し、次いで、トリクロロアセトニトリル(0.67ml、6.63mmol)を、０℃で添加し、そして、室温で、120分かけて攪拌を続けた。 この混合物を、シリカゲルのカラム(30×2.5cm、トルエン- EtOAc、1:1→1:2→ EtOAc)で直接に精製をしたところ、毛様の白色粉末が得られた(300mg、65 ％)。 この化合物を、P２O５を用いて、一晩かけて乾燥を行い、そして、−20℃で、保存をした。
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(３７)
イミダート36(295mg、0.28mmol)、コレスタノール(210mg、２当量、0.56mmol)、および、３Å分子篩(100mg)を、ドライDCMにおいて、0.5時間かけて攪拌をした。 TMS-トリフラートを含むドライDCM(0.4M、0.21ml、0.084mmol、0.３当量)の溶液を、０℃で、滴下して加え、そして、室温で、30分かけて、攪拌を継続した。 Et３N(0.02ml)を、０℃で、加えて反応を停止させ、DCM(25ml)で希釈をし、超音波処理し(３分間)、そして、デカンテーションを行った。 有機溶液を、飽和NaHCO３溶液(３×20ml)で洗浄し、水相を、EtOAc(50ml)で再抽出し、ブライン(20ml)で洗浄をし、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、真空内で濃縮を行ったところ、粗製配糖体が、白色固形物として得られた(564mg)。 産物を、シリカゲルのカラム(20×２cm、トルエン:EtOAc、3:2→1:1→1:2)で精製した。 この精製によって、二つの画分、すなわち、画分Ａ(56mg、〜80％の配糖体)と、白色固形物(170mg、58％収率)として得た純品の配糖体37を含んだ画分Ｂが得られた。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 5.26-5.34 (m、3H、2×H4、H3)、5.17-5.24 (m、3H、H2I、H3II,H4)、5.28 (dd、1H、JHI-H2= 2.0、H2II)、5.05 (d、1H、JHI-H2 = 2.0、H1)、5.02 (d、1H、H1II)、4.93 (d、1H、JHI-H2 = 2.0、H1I)、4.30 (dd、1H、JH6a-H6b = -12.7、JH6-H5 = 3.9、H6a)、3.97-4.22 (m、9H、2×H6a、3×H6b、H3I、3 ×H5、3.95 (dd、1H、H2)、3.53 (m、1H、コレスタニル-H3)、2.19、2.15、2.14、2.11、2.10、2.08、2.07、2.03、2.03、2.02、1.99 (s、30H、10×Ac)、0.55-1.85 (m、33H、12 CH2、9 CH)、0.89 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.860 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.854 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.80 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.64 (s、3H、コレスタニル-CH3).
３β-コレスタニル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-α-Ｄ-マンノピラノシド(３８)
基本手順にしたがって、過酢酸37(165mg、0.127mmol)を脱アセチル化したところ、ポリオール38が、白色結晶として得られ(107mg、96％収率)、このものは、さらに精製または同定を行わずに、次の工程に供した。
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(３９)
ドライポリオール38(50mg、0.058mmol)を、ドライDMF(2.9ml、0.02M)に溶解し、次いで、改めて洗浄を行い、そして、ドライSO３ピリジン(1:1、277mg、３当量／水酸基,1.74mmol)を加えた。 この混合物を、60℃で、16時間かけて攪拌を行い、次いで、15分かけて０℃にまで冷却し、そして、０℃で、氷冷水性NaOH溶液(５M、2.１当量/SO３、0.731ml、3.65mmol)の一部を(〜pH12になるまで)加えて中和をした。 懸濁液を、０℃で、15分かけて攪拌し、500ml容の丸底フラスコに移した水(10ml)で希釈し、そして、40℃で、真空下で濃縮をした。 淡黄色の粉末が得られ、このものを、水(10ml)に溶解したところ、pH 10の溶液が得られた。 この溶液に対して、NaOH(５M、５滴)の水性溶液を加えることでpHを12に調整し、スライド-α-ライザー(登録商標)カセット(2000MWCO、4-12ml)を用いて、水(４リットル)に対して、室温で、16時間かけて透析を行った。 NH４HCO３(3M、0.6ml)の水性溶液を、24時間ごとに、水(４リットル)に加えて、その水のpHを〜6.5に調整することによって、この透析を、０℃で、その水に対して、３日間かけて継続した。 そして、脱塩した溶液を凍結乾燥したところ、過硫酸塩39が、毛様の白色粉末として得られた(91mg、83％)。 1H NMR (400MHz、D2O) d 5.50 (m、2 H、H1 or H2)、5.23、5(m、2 H、H1 or H2)、4.12-4.92 (m、17 H、H1、1×H2、3×H-3、3×H-4、3×H-5、3 H-6a、3 H-6b) 3.80 (m、1 H、H-3 コール)、0.66-2.04 (m、33 H、12 CH2、9 CH)、0.95 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.887 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.882 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.85 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.70 (s、3H、コレスタニル-CH3).
実施例10：３-アジドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(４１)
五糖類過酢酸40２８(500mg、324μmol)および３-アジドプロパン-１-オール(98mg、972μmol)を含む無水DCE(８ml)の溶液に対して、BF3・Et2O (115mg、810μmol)を加えた。 BF３・Et２O(115mg、810μmol)をさらに加えて、その溶液を、さらに３時間かけて加熱する以前に、この溶液を、密閉した容器内で、60℃で、２時間かけて攪拌をした。 この溶液を、室温にまで冷却し、そして、砕いた氷、NaHCO３(飽和溶液)、および、ブラインの混合物に対して注いだ。 EtOAcを用いて、この混合物を抽出し、そして、１:１のブライン：NaHCO３(飽和溶液)で有機相をさらに洗浄し、そして、乾燥(Na２SO４)、蒸発乾固を行い、さらに、無水トルエンを用いて共蒸溜した。 無水DCM(５ml)、無水酢酸(66mg、648μmol)、Et３N(89mg、875μmol)、および、DMAP(結晶)を加え、そして、溶液を、−20℃で、一晩かけて保存をした。 この溶液を、調製済フラッシュクロマトグラフィーカラム(17×２cmのシリカゲル、60:40〜75:25 EtOAc:Hxの勾配溶離)に直接に適用したところ、配糖体41が油状物質として得られた(387mg、75％)。 ESMS: 1601.81、[M+NH4]+. 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 5.30-5.13 (m、8H)、5.02-4.88 (m、8H)、4.28-3.75 (m、20H)、3.49 (dt、1H、J = 9.8、6.1,OCH2CH2B)、3.42-3.35 (m、2H、CH2N3)、2.16、2.14(9)、2.14(7)、2.11、2.10、2.09(2)、2.08(8)、2.08(7)、2.08、2.07、2.06、2.05、2.04、2.00、1.99、1.95 (16s、16×3H、AcO×16)、1.89-1.84 (m、2H、CCH2C). 13C NMR (100MHz、CDCl3) δ:170.4、170.3、170.2、170.1、169.9、169.8(2)、169.7(7)、169.6、169.5、169.4、169.3、169.2、99.1(2)、99.1(0)、98.8(4)、98.7(7)、98.1、76.7、75.0、74.9、74.7、71.0、70.8、70.7、70.0、69.5、69.3、69.2、68.5、68.2、67.2、66.7、66.6、66.0、65.4、64.6、62.4、62.3、61.9、61.5、47.9、28.5、20.7(4)、20.7(2)、20.6(9)、20.6、20.4(9)、20.4(6)、20.4.
３-ステアラミドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(４２)
アジド41(460.5mg、291μmol)を、THF(10ml)に溶解した。 重合体に結合したトリフェニルホスフィン(725mg)を加え、そして、この混合物を、室温で、１時間かけて攪拌をした。 水(210μl)を加え、そして、この混合物を、50℃で、４時間かけて攪拌をした。 この混合物を、冷却、濾過し、そして、溶媒を蒸発させたところ、白色固形物が得られた(APCIMS: 1558.25 [M+H]＋)。 この産物を、DCM(10ml)に溶解した。 ステアロイルクロリド(２当量、580μmol、176mg、196μl)を加えた後に、トリエチルアミン(２当量、580μmol、80μl)とこの混合物を、室温で、６時間かけて攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、そして、NaHCO３(飽和)で洗浄し、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させる以前に、残渣をDCMに合わせた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２：DCM(登録商標)２％メタノール/DCM)を用いて精製したところ、アミド42が、澄明な油状物質として得られた(232mg、44％、二段階)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ 6.10 (ブロードM、1H、NH)、5.24-5.09 (m、8H)、4.96-4.83 (m、8H)、4.22-3.71 (m、19H)、3.68 (m、1H、CH2O)、3.40 (m、1H、CH2O)、3.26 (m、2H、CH2NH)、2.12-2.09 (m、2H、CH2CO)、2.11 (s、3H、OAc)、2.10 (s、6H、OAc)、2.06 (s、3H、OAc)、2.04 (s、3H、OAc)、2.03 (s、12H、OAc)、2.02 (s、3H、OAc)、2.01 (s、3H、OAc)、1.99 (s、6H、OAc)、1.95 (s、3H、OAc)、1.94 (s、3H、OAc)、1.90 (s、3H、OAc)、1.74 (m、2H、CH2CH2N)、1.53 (m、2H、CH2CH2CO)、1.23-1.16 (m、28H、CH2)、0.79 (t、3H、CH3).
３-ステアラミドプロピル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-α-Ｄ-マンノピラノシド(４３)
基本手順にしたがって、アミド42(231.5mg)を脱アセチル化したところ、ポリオール43が、白色固形物として得られ(140mg、96％)、このものは、さらに精製または同定を行わずとも反応性を示した。
３-ステアラミドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(４４)
ポリオール43(140mg、122μmol)を、DMF(0.02M、6.1ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量/OH、5.83mmol、928mg)を加え、そして、その溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この混合物を、氷水で冷却し、そして、すべての溶媒を一旦蒸発させる以前に、５M NaOH(2.1当量/SO３.ピリジン、2.45ml)を加えた。 この化合物を、１％メタノールの水と合わせ、そして、C18 SPEカートリッジで精製をした。 そして、この化合物を、2000MWCO透析カートリッジを用いて、二晩かけて透析をしてから、凍結乾燥を行ったところ、産物44を、白色固形物として得た(220mg、65％)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ 5.55 (d、1H、H-1)、5.53 (d、1H、H-1)、5.50 (d、1H、J1,2 = 1.8、H-1)、5.49 (d、1H、H-1)、5.28 (m、1H)、5.12 (m、1H)、5.08 (m、1H)、4.90-4.12 (m、28H)、3.85 (ddd、1H、J = 6.2、J = 7.0、J = 10.5、CH2O)、3.68 (ddd、1H、J = 6.2、J = 6.2、J = 9.7、CH2O)、3.31 (m、2H、CH2N)、2.29 (t、2H、J = 7.0、CH2CO)、1.88 (t、2H、J = 6.2、CH2CH2N)、1.62 (m、2H、CH2CH2CO)、1.31 (m、28H、CH2)、0.90 (t、3H、J = 7.0、CH3).
実施例11：３β-(プロプ-２-イニルオキシ)コレスタノール
３β-コレスタノール(1.23ｇ、3.16mmol)を、室温で、無水トルエン(7ml、0.45M)に完全に溶解した。 粉末カリウムt-ブトキシド(1.06ｇ、9.49mmol、３当量)の一部を加えた。 この混合物を、室温で、３時間かけて攪拌をした。 臭化プロパルギルの溶液(80重量％を含むトルエン、0.94ｇ、6.32mmol、２当量)を加えた。 この混合物を、室温で、３時間かけて攪拌をした。 この混合物を、ヘキサン(30ml)とEtOAc(10ml)で希釈し、そして、水(２×60ml)とブライン(60ml)で洗浄をした。 水相を、EtOAc(20ml)で、一度、抽出をした。 合わせた有機相を、乾燥し(Na２SO４)、濾過し、次いで、濾液を、シリカゲルを用いて蒸発させ、そして、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル 2.5×24cm,ヘキサン 250ml、ヘキサン-EtOAc 125:5を用いた勾配溶離)を用いて精製したところ、黄色の固形物の産物が得られた。 EtOAc(３ml)から再結晶を行ったところ、灰色がかった白色の結晶が得られた(736mg、55％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 4.18 (d、2H、J = 2.2)、3.45 (m、1H)、2.38 (t、1H、J = 2.2)、1.99-0.57 (m、31H)、0.89 (d、3H、J = 6.6)、0.86 (d、3H、J = 6.6)、0.86 (d、3H、J = 6.6)、0.79 (s、3H)、0.64 (s、3H).
３-アジドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(４５)
過酢酸35(1000mg、1.03mmol)と３-アジドプロパノール(1.２当量.、124mg、1.24mmol)を、ドライDCM(５ml)に溶解し、そして、０℃で、BF３-エーテル(５当量.、0.546ml、5.17mmol)を滴下し、さらに、この混合物を、60℃で、３時間かけて攪拌をした。 ０℃で、Et３N(2.2ml、15.5mmol)を加えることで、反応を停止した。 次いで、０℃で、粗製の反応混合物に対して、ピリジン(１ml)、DMAP(触媒)、および、Ac２O(0.585ml)を加えてアセチル化し、そして、室温で、一晩かけて、攪拌を継続した。 ０℃で、ドライメタノール(５ml)を加えることで、暗赤色の溶液を急冷し、そして、室温で、２時間かけて、攪拌をした。 トルエン(50ml)を用いて共蒸発をさせた後に、残渣をEtOAc(100ml)に溶解し、次いで、飽和NaHCO３溶液(３×20ml)、水(50ml)で洗浄し、水相を、EtOAc(３×20ml)で再抽出し、その他の有機抽出物と合わせて、ブライン(20ml)で洗浄をし、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、真空内で濃縮を行ったところ、粗製配糖体が、粘性物質として得られた(〜１ｇ)。 粗製産物を、シリカゲルのカラム(20×２cm、トルエン:EtOAc、2:1→1:1→1:2)で精製したところ、所望の配糖体45が、灰色がかった白色泡沫として得られた(374mg、36％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 5.19-5.38 (m、6H、3×H4、H2II、H3I,H3III)、5.08 (dd 1H、JH2-H3 = 3.3、H2III)、5.04 (d、1H、JHI-H2 = 1.7、H1III)、4.94 (m、2H、H1I,H-1II)、4.31 (dd、1H、JH6a-H6b= 12.5、JH6-H5 = 4.2、H6a)、3.93-4.26 (m、9H、2×H6a、3×H6b、H2I、H3II、H5I,H5II or H5III)、3.93 (ddd、1H、H5IIor H5III)、3.82 (dt、1H、Jgem = 10.0、J = 6.6,OCH2)、3.53 (dt、1H、J = 6.6,OCH2)、3.43 (t、2H、J = 6.6、CH2N3)、2.20、2.161、2.157、2.12、2.11、2.10、2.19、2.05、2.04、2.00 (s、30H、10×Ac)、1.90 (クインテット、2H、J = 6.6、CH2).
３-{４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)-[１,２,３]トリアゾール-１-イル}プロピル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-マンノピラノシド(４６)
３β-(プロプ-２-イニルオキシ)コレスタノール(156mg、２当量、0.367Mmol)、および、アジド45(185mg、0.183mmol)を、DCM/ t-BuOH (3:2、w/w、0.4M、0.562ml)の混合物に溶解した。 この混合物に対して、CuSO４の水性溶液(0.3M、0.１当量.、0.061ml)とアスコルビン酸ナトリウムの水性溶液(1M、0.３当量.、0.055ml)とを加え、そして、この混合物を、暗黒下で、48時間かけて、激しく攪拌をした。 ＴＬＣ分析(トルエン:EtOAc、1:1)は、反応の末期において、出発物質のアジドよりも極性に富んだ産物が出現していたことを示した。 この混合物を、DCM(50ml)で希釈し、そして、飽和NaHCO３溶液(３×30ml)で洗浄をした。 水相を、EtOAc(３×20ml)で再抽出し、有機抽出物と合わせて、ブライン(20ml)で洗浄をし、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、真空内で濃縮を行ったところ、粗製産物が、黄色泡沫として得られた(475mg)。 粗製産物を、シリカゲルのカラム(25×2.5cm、トルエン:EtOAc、1:2→1:3→1:4)で精製したところ、トリアゾール46が、白色泡沫として得られた(214mg、81％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 7.76 (s、1H,=CH)、5.18-5.36 (m、6H、3×H4、H2II、H3I,H3III)、5.06 (dd 1H、JH2-H3 = 3.2、H2III)、5.02 (d、1H、JHI-H2 = 1.7、H1III)、4.94 (d、2H、JHI-H2 = 1.6、H-1II)、4.92 (d、1H、JHI-H2 = 1.6、H1I)、4.71 (s、2H,OCH2)、4.49 (t、2H、J = 6.6、CH2N),4.30 (dd、1H、JH6a-H6b = -11.9、JH6-H5 = 4.0、H6a)、3.96-4.26 (m、9H、2×H6a、3×H6b、H2I、H3II、H5I,H5II or H5 III )、3.92 (ddd、1H、H5 II or H5III)、3.43 (m、2H,OCH2、H-3 コール)、2.31 (m、2H、CH2)、2.19、2.145、2.142、2.11、2.09、2.08、2.06、2.04、1.99 (s、30H、10×Ac)、1.90 (クインテット、2H、J = 6.6、CH2)、0.56-2.04 (m、33 H、12 CH2、9 CH)、0.89 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.858 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.855 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.79 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.64 (s、3H、コレスタニル-CH3).
３-{４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)-[１,２,３]トリアゾール-１-イル}プロピル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-α-Ｄ-マンノピラノシド(４７)
基本手順にしたがって、ドライ過酢酸46(202mg、0.141mmol)を脱アセチル化したところ、ポリオール47が、結晶質の白色固形物として得られ(138mg、97％収率)、このものは、さらに精製または同定を行わずに、次の工程に供した。
３-{４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)-[１,２,３]トリアゾール-１-イル}プロピル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(４８)
ドライポリオール47(50mg、0.049mmol)を、ドライDMF(2.45ml、0.02M)に溶解し、次いで、改めて洗浄を行い、そして、ドライSO３.ピリジン錯体(234mg、３当量／水酸基,1.47mmol)を加えて、この混合物を、60℃で、16時間かけて攪拌をした。 反応混合物を、15分かけて、０℃にまで冷却し、そして、０℃で、氷冷した水性NaOH溶液(５M、2.１当量/SO3、0.617ml、3.09mmol)の一部(〜pH 12)を加えて中和をした。 この懸濁液を、０℃で、15分かけて攪拌をし、水(10ml)で希釈し、そして、40℃で、真空下で、水(３×20ml)を用いて共蒸発させた。 黄色固形物を、水(9ml,→ pH10.5)に溶解し、次いで、NaOHの水性溶液(５M、５滴)を加えて、pH 12にまで調整し、そして、スライド-α-ライザー(登録商標)カセット(2000MWCO、4-12ml)を用いて、室温で、16時間かけて、水(４リットル)に対して透析を行った。 NH４HCO３(３M、0.6ml)の水性溶液を、24時間ごとに、水(４リットル)に加えて、その水のpHを6〜6.5に調整することによって、この透析を、０℃で、その水に対して、２日間かけて継続した。 そして、脱塩した溶液を凍結乾燥したところ、産物48が、毛様の白色粉末として得られた(94mg、94％)。 1H NMR (400MHz、D2O) d 8.08 (s、1H、=CH)、5.50 (m、2 H、H2II、H2III)、5.22、5(m、1 H、H1II or H1III)、5.07 (m、1H、H1I)、4.33-4.93 (m、19 H、H1II or H1III、3×H3、3×H4、3×H4、CH2N、4 H6、H2,OCH2)、4.15 (m、4 H、2×H6、2×H-5)、4.02 (m、1H、H-5)、3.83 (m、1H,OCH2)、3.71 (m、1H,OCH2)、3.51 (m、1H、H-3 コール)、2.28 (m、2H、CH2)、0.62-2.06 (m、33 H、12 CH2、9 CH)、0.94 (d、3H、J = 5.8、コレスタニル-CH3)、0.86 (d、9H、J = 6.7、コレスタニル-CH3)、0.70 (s、3H、コレスタニル-CH3).
実施例12：ベンジル ３-O-アリル-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(４９)
３-O-アリル-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシルトリクロロアセトイミダート３４(0.504ｇ、0.744mmol、1.05当量)、および、ベンジル ２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(0.413ｇ、0.709mmol)を、無水DCM(6.4ml、0.11M)に溶解した。 粉末のMS３Å(70mg、新たに活性化したもの)を加えた。 この混合物を、０℃で、30分かけて攪拌をした。 TMSOTfの溶液(26μl、0.142mmol、0.2当量)を含むDCM(0.6ml)を滴下した(最終濃度：１Ｍ)。 この混合物を、０℃で攪拌をし、そして、その反応を、ＴＬＣ(ヘキサン-EtOAc = 65:35)でモニタリングした。 60分後に、変換が完了し、そして、Et３N(0.15ml)を加えた。 粗製混合物を、ピリジン(0.115ml、1.418mmol、２当量)と塩化ベンゾイル(0.124ml、1.064mmol、1.5当量)で処理をした。 この混合物を、室温で、一晩かけて攪拌を行い、そして、濾過を行った。 固形物を、DCM(６×１ml)で洗浄をした。 濾液と洗液とを合わしたものを、シリカゲルを用いて蒸発乾固せしめ、そして、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル 2.5×24 cm、ヘキサン-EtOAc 200:20、210:40、200:50、180:60、170:85の勾配溶離)を用いて精製を行ったところ、純産物49が、淡黄色の粘性物質として得られた(0.738ｇ、95％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 8.20-8.06 (m、8H、Ph)、7.90-7.80 (m、4H、Ph)、7.67-7.23 (m、23H、Ph)、5.98 (dd または t、1H、JH3(I)-H4(I) = 9.8、JH4(I)-H5(I) = 9.8、H4I)、5.75 (dd または t、1H、JH3(II)-H4(II) = 9.8、JH4(II)-H5(II)= 9.8、H4II)、5.41 (m、1H、アリル-2')、5.23 (d、1H、J = 2.0)、5.18-5.15 (m、2H)、4.87-4.71 (m、3H)、4.64-4.56 (m、4H)、4.48 (dd または t、1H、J = 12.7、J = 4.9)、4.34-4.27 (M、2H)、4.22 (dd、1H、J = 12.7、J = 3.9)、3.87 (dd、1H、J = 9.8、J = 2.9)、3.74 (dd、1H、J = 12.7、J = 5.9)、3.59 (dd、1H、J = 12.7、J = 5.9).
ベンジル ２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(５０)
アリルエーテル49(688mg、0.627mmol)を含むメタノール(６ml)と１,２-ジクロロエタン(６ml)(0.05M)の溶液を、固体塩化パラジウム(25mg)を用いて処理をした。 この混合物を、70℃(外部油浴)で、２時間かけて攪拌をした。 ＴＬＣは、完全な変換に至っていることを示していた。 この混合物を、シリカを用いて蒸発乾固し、そして、カラムクロマトグラフィー(シリカ 2.7×17cm、ヘキサン-EtOAc 200:20、200:40、200:50、210:70、200:100の勾配溶離)を用いて精製を行ったところ、アルコール50が、無色の粘性物質として得られた(0.539mg、81％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 8.18-8.03 (m、8H、Ph)、7.85-7.81 (m、4H、Ph)、7.68-7.25 (m、23H、Ph)、5.97 (dd または t、1H、JH3(I)-H4(I) = 9.8、JH4(I)-H5(I) = 9.8、H4I)、5.68 (dd、1H、JH1(I)-H2(I)= 2.0、JH2(I)-H3(I) = 2.9、H2I)、5.60 (dd または t、1H、JH3(II)-H4(II)= 9.8、JH4(II)-H5(II) = 9.8、H4II)、5.28 (br s、1H、H1II)、5.15 (d、1H、JH1(II)-H2(II)= 2.0、H1I)、5.05 (dd、1H、JH1(II)-H2(II) = 2.0、JH2(II)-H3(II) = 2.9、H2II)、4.77 (d、1H、Jgem= 11.7、CH2)、4.65-4.56 (m、4H、CH2、H6Ieq、H3I and H6II)、4.44 (dd、1H、Jgem= 12.7、JH5(I)-H6(I)ax = 4.9、H6Iax)、4.34 (m、1H、H5II)、4.32 (dd、1H、Jgem = 10.7、JH5(II)-H6(II) = 2.9、H6II)、4.28 (ddd、1H、JH5(I)-H6(I)ax= 4.9、JH5(I)-H6(I)eq = 2.9、H5I)、4.17 (dd、1H、H3II).
ベンジル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(５１)
アルコール50(424mg、0.401mmol)、および、２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシルトリクロロアセトイミダート(357mg、0.481mmol、1.２当量)を含む無水DCM(7.5ml)の溶液を、粉末分子篩３Å(50mg)と共に、０℃で、１時間かけて攪拌をした。
TMSOTf(15μl、0.0802mmol、0.２当量)を含むDCM(0.5ml)の溶液を、注射器から滴下した。 この混合物を、０℃で、２時間かけて攪拌を行ったところ、ＴＬＣは、完全な変換を示すに至った。 Et３N(100μl)を加えた。 ピリジン(65μl、0.802mmol)と塩化ベンゾイル(47μl、0.401mmol)を加えた。 この混合物を、室温で、一晩かけて攪拌し、そして、シリカゲルを用いて蒸発乾固した。 カラムクロマトグラフィー(シリカ 2.5×17cm、ヘキサン-EtOAc 210:30、200:50、180:60、160:80、および、150:100の勾配溶離)を用いて精製を行ったところ、三糖類51が、無色の粘性物質として得られた(392mg、60％)。
1H NMR (CDCl3、400MHz) d 8.19-7.89 (m、16H、Ph)、7.68-7.63 (m、4H、Ph)、7.61-7.15 (m、35H、Ph)、6.00 (dd または t、1H、JH3-H4 = 10.7、JH4-H5 = 9.8、H4)、5.98 (dd または t、1H、JH3-H4 = 9.8、J = 9.8、H4)、5.92 (dd または t、1H、J = 10.7、J = 9.8、H4)、5.72 (dd、1H、JH1-H2 = 2.0、JH2-H3 = 3.9、H2)、5.56 (dd、1H、JH2-H3 = 2.9、H3)、5.33 (d、1H、J = 2.0、H1)、5.26 (dd、1H、J = 2.0、H2)、5.19 (d、1H、J = 2.0、J = 3.9、H2)、5.16 (d、1H、J = 2.0、H1)、4.90 (d、1H、H1)、4.78 and 4.62 (AB カルテット、2H、Jgem = 11.7、CH2)、4.65-4.56 (m、3H)、4.45 (dd、1H、Jgem = 12.7、JH5-H6 = 3.9、H6)、4.35 (dd、1H、H3)、4.34-4.28 (m、2H)、4.24 (dd、1H、J = 12.7、JH5-H6 = 2.9、H6)、4.10 (dt または dm、1H、H5)、4.01 (dd、1H、J = 12.7、H6)、3.95 (dd、1H、JH5-H6 = 2.0、H6).
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-マンノピラノース(５２)
ベンジル配糖体51(385mg、0.235mmol)を、メタノール(５ml)とクロロホルム(５ml)に溶解した。 パラジウムチャコール(５％、538mg)を加えた。 この混合物を、水素の存在下で、100psiで、３日かけて攪拌をした。 ＴＬＣは、完全な変換を示していた。 この混合物を、セリット栓に通して濾過し、そして、EtOAc(５×１ml)を用いて洗浄した。 濾液と洗液とを合わしたものを、乾燥するまで蒸発せしめ、DCM(３ml)を用いて共蒸発させたところ、ヘミアセタール52が、淡黄色の泡沫として得られ(338mg、93％)、このものは、さらなる精製または同定を行わずに、次の工程に供した。
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-マンノピラノシル トリクロロアセトイミダート(５３)
ヘミアセタール52(330mg、0.214mmol)を、無水DCM(1.1ml、0.2M)に溶解した。 この溶液に対して、トリクロロアセトニトリル(43μl、0.427mmol、２当量)を加えた。 この混合物を、０℃で攪拌を行っている間に、DBU(1.6μl、0.05当量、0.0107mmol)を含む無水DCM(0.15ml)の溶液を加えた。 この混合物を、０℃で、４時間かけて攪拌をしたところ、ＴＬＣ(ヘキサン-EtOAc = 65:35)は、完全な変換を示すに至った。 粗産物を、シリカゲルで蒸発乾固し、そして、シリカカラムクロマトグラフィー(２×14 cm、ヘキサン-EtOAc 200:20、150:30、120:30、150:50の勾配溶離、および、ヘキサン-EtOAc-Et3N 140:70:0.3)を用いて精製をしたところ、トリクロロアセトイミダート53が、白色泡沫として得られ(261mg、72％)、このものは、さらなる同定を行わずに、次の工程に直接に供した。
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(５４)
トリクロロアセトイミダート53(128mg、0.0757mmol)、および、３β-コレスタノール(59mg、0.151mmol、２当量)を含む無水DCM(２ml)の溶液に対して、新たに活性化した粉末分子篩３Å(50mg)を加えた。 この混合物を、０℃で、0.5時間をかけて攪拌し、そして、TMSOTf(2.7μl、0.0151mmol、0.２当量)を含む無水DCM(0.15ml)の溶液を、０℃で、滴下した。 この混合物を、０℃で、２時間かけて攪拌をしたところ、ＴＬＣは、反応の完了を示した。 Et３N(150μl)を加えた。 この混合物を、シリカゲルで蒸発乾固し、そして、シリカカラムクロマトグラフィー(２×14cm、ヘキサン-EtOAc 180:20、150:30、120:30、120:40、および、120:60の勾配溶離)を用いて精製をしたところ、配糖体54が、無色の粘性物質として得られた(74mg、51％)。 1H NMR (CDCl3、300MHz) d 8.21-7.15 (m、50H、Bz)、6.00 (dd または t、1H、JH3(II)-H4(II) = 10.0、JH4(II)-H5(II) = 10.0、H4II)、5.93 (dd または t、1H、JH3-H4 = 10.0、JH4-H5 = 10.0、H4I および H4III)、5.61 (dd、1H、JH2(I)-H3(I)= 3.0、JH1(II)-H2(II) = 1.5、H2I)、5.57 (dd、1H、JH3(III)-H4(III) = 10.0、JH2(III)-H3(III) = 3.0、H3III)、5.36 (d、1H、JH1(II)-H2(II)= 1.5、H1II)、5.26 (dd、1H、JH2(II)-H3(II) = 3.0、H2II)、5.21 (m、2H、H1I および H2III)、4.91 (s、1H、H1III)、4.68-3.90 (m、11H)、3.62 (m、1H,OCH-コール)、1.99-0.50 (m、31H、コレスタニル)、0.90 (d、3H、J = 6.9、コレスタニル-CH3)、0.87 (d、3H、J = 6.9、コレスタニル-CH3)、0.86 (d、3H、J = 6.9、コレスタニル-CH3)、0.80 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.65 (s、3H、コレスタニル-CH3).
３β-コレスタニル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシド(５５)
基本手順にしたがって、配糖体54(70mg、0.0365mmol)を脱アセチル化したところ、ポリオール55が、淡黄色粉末として得られ、このものは、直接に次の工程に供した。
３’-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(５６)
上記粉末(55)を、無水DMF(1.8ml、0.02M)に溶解した。 SO３.ピリジン錯体(174mg、1.096mmol、３当量／水酸基、水、トルエン、EtOH、DCMで新たに洗浄し、そして、P２O５の存在下で、真空デシケーターで、１時間かけて乾燥したもの)を加えた。 この混合物を、60℃で、一晩(18時間)かけて攪拌をし、そして、０℃になるまで冷却した。 pH >10になるまで、5M NaOHを加えた。 EtOH(６ml)を加え、そして、この混合物を、０℃で、20分かけて攪拌をした。 遠心分離して沈殿物を単離し、そして、ロータリエバポレータを用いて、乾燥するまで蒸発乾固を行った。 残渣を、水(1.5ml)で再溶解した。 この溶液を、スライド-α-ライザー(登録商標)カセット(2000MWCO、0.5-3.0ml容量)に入れた。
このフラスコを、水(２×0.5ml)で濯ぎ、その洗液もカセットに入れた。 10リットルの精製水に対して、室温で、４時間かけて、透析を行った。 水(10リットル)を交換し、そして、透析を、０℃で、一晩かけて継続した。 水(４リットル)を交換し、そして、透析を、さらに一日かけて継続した。 淡黄色の溶液を除去し、そして、凍結乾燥を行ったところ、過硫酸塩56が、淡橙色の粉末として得られた(46.8mg)。 1H NMR (D2O、300MHz) d 5.28 (s、1H)、5.21 (s、1H)、5.16 (s、1H)、5.05 (br s、1H)、4.76 (br s、1H)、4.67-3.88 (m、16H)、3.53 (m、1H,OCH)、1.82-0.44 (m、31H、コレスタニル)、0.74 (d、3H、コレスタニル-CH3)、0.67 (d、6H、コレスタニル-CH3)、0.65 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.49 (s、3H、コレスタニル-CH3).
実施例13：３-アジドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(５７)
トリクロロアセトイミダート53(128mg、0.0757mmol)、および、３-アジドプロパノール(15mg、0.151mmol、２当量)を含む無水DCM(２ml)の溶液に対して、新たに活性化した粉末分子篩３Å(50mg)を加えた。 この混合物を、０℃で、0.5時間をかけて攪拌し、そして、TMSOTf(2.7μl、0.0151mmol、0.２当量)を含む無水DCM(0.15ml)の溶液を、０℃で、滴下した。 この混合物を、０℃で、２時間かけて攪拌をしたところ、ＴＬＣは、反応の完了を示した。 Et３N(150μl)を加えた。 この混合物を、シリカゲルで蒸発乾固し、そして、シリカカラムクロマトグラフィー(２×14cm、ヘキサン-EtOAc 150:20、150:30、120:30、120:40、120:60、および、120:80の勾配溶離)を用いて精製をしたところ、配糖体57が、無色の粘性物質として得られた(86mg、70％)。 1H NMR (CDCl3、300MHz) d 8.22-7.16 (m、50H、Bz)、6.02 (dd または t、1H、JH3(II)-H4(II) = 10.0、JH4(II)-H5(II) = 9.5、H4II)、6.00 (dd または t、1H、JH3(I)-H4(I) = 10.0、JH4(I)-H5(I)= 9.5、H4I)、5.96 (dd または t、1H、JH3(III)-H4(III)= 10.0、JH4(III)-H5(III) = 9.5、H4III)、5.69 (dd、1H、JH2(I)-H3(I) = 3.2、JH1(II)-H2(II) = 1.6、H2I)、5.59 (dd、1H、JH3(III)-H4(III)= 10.3、JH2(III)-H3(III) = 3.2、H3III)、5.37 (d、1H、JH1(II)-H2(II) = 2.4、H1II)、5.29 (dd、1H、JH1(II)-H2(II) = 1.6、JH2(II)-H3(II) = 2.4、H2II)、5.23 (dd、1H、JH1(III)-H2(III)= 1.6、H2III)、5.09 (d、1H、JH1(I)-H2(I) = 1.6、H1I)、4.94 (d、1H、JH1(III)-H2(III) = 1.6、H1III)、4.71 (dd、1H、Jgem = 11.9、J = 2.4、H6)、4.60 (dd、1H、J = 11.9、J = 2.4、H6)、4.58 (dd、1H、H3I)、4.50 (dd、1H、J = 4.8、H6)、4.38 (dd、1H、JH2(II)-H3(II)= 3.2、H3II)、4.34-4.22 (m、3H)、4.14-3.94 (m、3H)、3.91 (dt、1H、Jgem = 9.5、J = 6.4、J = 6.4,OCH2)、3.59 (dt、1H、J = 6.4、J = 6.4,OCH2)、3.44 (t、2H、J = 6.4、NCH2)、1.91 (クインテット、2H、J = 6.4、CH2).
３-{４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)-[１,２,３]トリアゾール-１-イル}プロピル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(５８)
57(81mg、0.0497Mol)、３β-(プロプ-２-イニルオキシ)コレスタノール(43mg、0.0994mmol、２当量)を含むDCM(64μl)、および、t-ブタノール(60μl)(0.4M)の混合物に対して、CuSO４の溶液(0.3Mを含む水、33μl、0.00994mmol、0.２当量)とアスコルビン酸ナトリウムの溶液(1Mを含む水、20μl、0.0199mmol、0.4当量)とを加えた。 この混合物を、室温で、３日間かけて、激しく攪拌をした。 この混合物を、シリカゲルで蒸発乾固し、そして、シリカカラムクロマトグラフィー(２×14cm、ヘキサン-EtOAc 170:20、150:30、120:30、120:40、120:60、120:80、および、100:100の勾配溶離)を用いて精製をしたところ、トリアゾール58が、無色の粘性物質として得られた(74mg、72％)。 1H NMR (CDCl3、300MHz) d 8.19-7.88 (m、16H、Bz)、7.69-7.15 (m、35H、Bz および トリアゾール-CH)、5.99 (dd または t、1H、JH3-H4= 9.9、JH4-H5 = 9.9、H4)、5.98 (dd または t、1H、J = 9.9、J = 9.9、H4)、5.94 (dd または t、1H、H4)、5.66 (dd、1H、JH2(I)-H3(I) = 3.1、JH1(I)-H2(I)= 1.6、H2I)、5.57 (dd、1H、JH3(III)-H4(III) = 10.0、JH2(III)-H3(III) = 3.1、H3III)、5.36 (d、1H、JH1(II)-H2(II)= 1.6、H1II)、5.28 (dd、1H、JH2(II)-H3(II) = 3.1、H2II)、5.21 (dd、1H、JH1(III)-H2(III) = 1.6、H2III)、5.04 (d、1H、H1I)、4.94 (d、1H、H1III)、4.70 (s、2H,OCH2)、4.70-3.92 (m、11H)、3.84 (dt または ddd、1H、Jgem = 9.9、J = 6.3、J = 6.3,OCH2)、3.50 (dt または ddd、1H、J = 5.5、J = 5.5,OCH2)、3.37 (m、1H,OCH-コール)、2.26 (m、2H、CH2)、1.99-0.53 (m、31H、コレスタニル)、0.90 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.87 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.86 (d、3H、J = 6.8、コレスタニル-CH3)、0.76 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.64 (s、3H、コレスタニル-CH3).
３-{４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)-[１,２,３]トリアゾール-１-イル}プロピル α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-α-Ｄ-マンノピラノシド(５９)
ペルベンゾアート58(70mg、0.0341mmol)を、無水THF(２ml)およびメタノール(２ml)に溶解した。 この混合物を、11M NaOMeを含むメタノール(0.2ml、2.2mmol)の溶液で処理をした。 室温で、２日間かけて攪拌をした後に、白色の懸濁液に対してAG50WX8樹脂(Ｈ＋型)を添加して中和した。 樹脂を濾過したところ、透明な溶液が分離された。 この樹脂を、メタノール(３×２ml)で洗浄した。 濾液と洗液とを合わせたものを、乾燥するまで蒸発乾固を行い、そして、P２O５の存在下で、真空デシケーターを用いて、一晩かけて乾燥を行ったところ、ポリオール59が得られ、このものは、そのまま、次の工程に供した。
３-{４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)-[１,２,３]トリアゾール-１-イル}プロピル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-３,４,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(６０)
ポリオール59を、無水DMF(1.7ml、0.02M)に溶解した。 SO３.ピリジン錯体(163mg、1.023mmol、３当量／水酸基、水、トルエン、EtOH、DCMで新たに洗浄し、そして、P２O５の存在下で、真空デシケーターで、１時間かけて乾燥したもの)を加えた。 この混合物を、60℃で、一晩(19時間)かけて攪拌をし、そして、０℃になるまで冷却した。 pH >10になるまで、５M NaOHを加えた。 EtOH(６ml)を加え、そして、この混合物を、０℃で、20分かけて攪拌をした。 遠心分離して沈殿物を単離し、次いで、EtOH(１ml)で洗浄し、そして、水(1.5ml)で再溶解した。 橙色溶液を、Waters(登録商標) C18 SPE (200mg、メタノール、メタノール-H2O 50:50、10:90、5:95、および、1:99の各３mlを用いて重力溶離によって前処理したもの)に導入し、そして、メタノール-H2O(1:99)で溶出した。 産物画分を、スライド-α-ライザー(登録商標)透析カセット(2000MWCO、0.5-3.0ml容量)に入れた。 10リットルの精製水に対して、室温で、１日かけて、透析を行った。 水(10リットル)を交換し、そして、透析を、０℃で、さらに一日かけて継続した。 淡黄色の溶液を除去し、そして、凍結乾燥を行ったところ、過硫酸塩60が、淡黄色の粉末として得られた(43mg、62％)。 1H NMR (D2O、300MHz) d 7.92 (s、1H、トリアゾール)、5.27 (d、1H、J = 1.8)、5.20 (d、1H、J = 1.4)、5.04 (m、1H)、4.89 (br s、1H)、4.72 (m、1H)、4.65-3.28 (m、23H)、2.07 (m、2H、CH２)、1.83-0.45 (m、31H、コレスタニル)、0.73 (d、3H、J = 6.4、CH3)、0.66 (d、6H、J = 6.4、2×CH3)、0.63 (s、3H、CH3)、0.49 (s、3H、CH3).
実施例14：２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１,２,３,６-テトラ-O-アセチル-Ｄ-グルコピラノース(６１)
ドライマルトテトラオース(502mg、0.753mmol)、および、DMAP(触媒)を、０℃で、ドライピリジン(10ml)に溶解し、次いで、Ac２O(2.8 g)を含むピリジン(５ml)の溶液を、０℃で滴下し、０℃で、４時間かけて攪拌を行い、そして、−20℃で、48時間にわたって放置をした。 反応が完了していなかったので、０℃で、Ac２O(1ｇ、mmol)を加え、次いで、室温で、16時間後に、０℃で、ドライメタノール(10ml)を加えて反応を停止し、そして、室温で、２時間かけて攪拌を継続した。 その溶液を、トルエン(３×30ml)を用いて共蒸発させたところ、過酢酸61が、白色固形物として得られた(920mg、97％)。
２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシルトリクロロアセトイミダート(６２)
エチレンジアミン(1.66mmol、0.11ml)を含むドライTHF(15ml)の溶液に対して０℃で、氷酢酸(0.90mmol、0.053ml)を滴下ところ、即座に沈殿物が形成され、、このものは、水性になるまで留まり続ける。 ０℃で、過酢酸61(900mg、0.717mmol)を加え、そして、この混合物を、室温で、２時間かけて攪拌をしたところ、ＴＬＣ(トルエン/EtOAc、1:2)は、出発物質が消失していること、そして、緩慢に移動する産物の存在を示し、その産物の大半はアノマー混合物であると考えられる。 pHが６になるまで酢酸(0.15ml)を滴下して加えて、この溶液を中和した。 気流下に置いて溶媒を蒸発させ、次いで、残渣を、EtOAc(100ml)に溶解し、そして、飽和NaHCO３溶液(３×50ml)、水(３×10ml)、ブライン(30ml)で洗浄をし、乾燥を行い(Na２SO４)、次いで、真空下で濃縮を行ったところ、黄色泡沫のヘミアセタール(830mg)が得られた。 このドライヘミアセタール(830mg、0.684mmol)を、ドライDCM(５ml)、K２CO３(1.20ｇ、8.60mmol)に溶解し、次いで、トリクロロアセトニトリル(0.849ml、8.40mmol)を、０℃で添加し、そして、室温で、２時間かけて攪拌を続けた。 この混合物を、シリカゲルのカラム(20×1.5cm、トルエン- EtOAc、1:2→ EtOAc、0.2％(v/v) Et３Nを含むもの)で精製をしたところ、所望のトリクロロアセトイミダート62３５が、毛様の白色粉末として得られた(795mg、86％)。 この化合物を、P２O５を用いて、一晩かけて乾燥を行い、そして、−20℃で、保存をした。
コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-β-Ｄ-グルコピラノシド (６３)
トリクロロアセトイミダート62(300mg、0.221mmol)、コレスタノール(２当量、172mg、0.442mmol)、および、３Å分子篩(100mg)を、ドライDCM(1.5ml)にて、0.5時間かけて攪拌をした。 TMS-トリフラートを含むドライDCM(0.5当量.、0.4M、0.275ml、0.11mmol)の溶液を、０℃で、滴下して加えた。 30分後に、室温で、TMS-トリフラートを含むドライDCM(0.36当量、0.4M、0.2ml、0.08mmol)をさらに加え、そして、室温で、30分かけて攪拌を継続した。 Et３N(0.025ml)を、０℃で、10分かけて、加えて反応を停止し、セリット栓(0.5cm)に通して濾過を行い、DCM(５×25ml)とEtOAc(３×25ml)を用いて洗浄をした。 両方の有機相を、飽和NaHCO３溶液(３×25ml)とブライン(25ml)で個別に線上をした。 水性抽出物を合わせ、次いで、EtOAc(３×30ml)を用いて再抽出し、ブライン (30ml)で洗浄をし、その他の有機抽出物と合わせ、乾燥をし(Na２SO４)、そして、真空下で濃縮を行ったところ、粗製の黄色泡沫(480mg)が得られた。 この産物を、シリカゲルのカラム(30×5 cm、トルエン:EtOAc 3:2→1:1→1:2→ EtOAc、0.2％ Et３N(v/v)を含むもの)を用いて精製した。 この精製によって、画分Ａには、白色泡沫の所望のβ結合配糖体63(81mg、23％)が含まれており、また、画分Ｂには、部分的に脱アセチル化したα結合配糖体が77％、それに、部分的に脱アセチル化したβ結合配糖体が23％を占める配糖体(118mg)が含まれていた。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 5.24-5.45 (m、7H、3×H1,4×H3)、5.08 (t、3H、JH3-H4 = JH4-H5 9.80、H4IIII,) 4.86 (dd、1H、JHI-H2 = 4.1、JH2-H3 = 10.4、H2IIII)、4.70-4.80 (m、3H、3×H2)、4.63 (d、1H、JHI-H2 = 7.7、H1I)、4.33-4.54 (m、4H、4×H6)、3.86-4.31 (m、10 H、3×H4、3×H5、4×H6)、3.70 (ddd、1H、H5I)、3.56 (m、1H、コレステリル-H3)、2.20、2.19、2.16、2.11、2.07、2.04、2.03、2.02、2.015、2.010、2.00、1.99 (s、39H、13×Ac)、0.55-2.00 (m、33H、12 CH2、9 CH)、0.90 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.871 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.867 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.78 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.65 (s、3H、コレスタニル-CH3).
３β-コレスタニル α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(６４)
基本手順にしたがって、過酢酸63(75mg、0.047mmol)を脱アセチル化したところ、ポリオール64が、白色固形物として得られ(48mg、98％)、このものは、さらに精製または同定を行わずに、次の工程に供した。
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(６５)
ポリオール 64(48mg、0.046mmol)をドライDMF(2.3ml、0.02M)に溶解し、そして、改めて洗浄を行い、次いで、ドライSO３.ピリジン錯体(285mg、３当量／水酸基,1.79mmol)を加え、そして、この混合物を、60℃で、16時間かけて攪拌をした。 この混合物を、10分かけて０℃にまで冷却し、そして、０℃で、氷冷水性NaOH溶液(５M、2.１当量/SO３、0.752ml、3.76mmol)の一部を(〜pH12になるまで)加えて中和をした。 懸濁液を、０℃で、15分かけて攪拌し、水(10ml)で希釈し、そして、40℃で、真空下で濃縮をした。 淡黄色の粉末が得られ、このものを、水(10ml)に溶解したところ、pH 11.5の溶液が得られた。
この溶液に対して、NaOH(５M、5滴)の水性溶液を加えることでpHを12.5に調整し、スライド-α-ライザー(登録商標)カセット(2000MWCO、4-12ml)を用いて、水(４リットル)に対して、室温で、16時間かけて透析を行った。 24時間ごとに、水(４リットル)の交換を行うと共に、NH４HCO３(３M、0.6ml)の水性溶液を、その水に加えて、水のpHを6.0〜6.5に調整することで、この透析を、０℃で、その水に対して、３日間かけて継続した。 そして、脱塩した溶液を凍結乾燥したところ、過硫酸塩65が、毛様の白色粉末として得られた(97mg、89％)。 1H NMR (400MHz、D2O) d 5.72 (d、1 H、JHI-H2 = 3.3、1H1)、5.69 (d、1 H、JHI-H2 = 3.6、H1)、5.59 (d、1H、JHI-H2= 3.6、H1)、5.10 (d、1H、JHI-H2 = 4.8、H1I)、4.19-5.02 (m、23H、4×H2、4×H3、4×H-4、3×H5、8×H6)、4.14 (m、1H、H5I)、3.85 (m、1H、H-3 コール)、0.63-2.06 (m、33 H、12 CH2、9 CH)、0.95 (d、3H、J = 6.5、コレスタニル-CH3)、0.885 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.882 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.85 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.70 (s、3H、コレスタニル-CH3).
実施例15：２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１,２,３,６-テトラ-O-ベンゾイル-Ｄ-グルコピラノース(６６)
Ｇ４糖蜜(1.8ｇ、凍結乾燥したもの、〜72％マルトテトラオース(w/w)を含むもの、〜1.94mmol)、および、DMAP(75mg)をドライピリジン(36ml)に溶解し、次いで、０℃で、塩化ベンゾイル(94.7mmol、11ml)を含むピリジン(８ml)の溶液を滴下して加え、そして、室温で、16時間かけて攪拌を継続した。 ０℃で、メタノール(50ml)を加え、次いで、攪拌を２時間かけて継続することで、この混合物を急冷した。 この混合物を、トルエン(３×50ml)を用いて共蒸発させたところ、黄色糖蜜が得られた。 この糖蜜を、EtOAc(150ml)に懸濁させ、飽和重炭酸ナトリウム(５×50ml)、水性HCl(５％、5×50ml)、および、水(５×50ml)で洗浄をした。 この水相を、EtOAc(２×50ml)で再抽出をし、主要な有機抽出物と合わせ、ブライン(50ml)で洗浄をし、乾燥をし(Na２SO４)、濾過をし、そして、真空下で濃縮をした。 芳香族不純物の大半を除去するために、この糖蜜を、沸騰ｎ-ヘキサン(５×50ml)で洗浄し、超音波処理し、そして、高真空下で、一晩かけて乾燥を行ったところ、過ベンゾイル化マルトオリゴ糖が、ベージュ色がかった泡沫(6.0 g)として得られた。 残渣を、50℃で、最少量のトルエン/酢酸エチル(15:1、25ml)の混合物に溶解し、そして、シリカゲルのカラム(21×5.5cm、トルエンで前処理したもの)に適用し、15:1(〜１カラム容量)〜10:1(1.5カラム容量)〜5:1(1.5カラム容量)のトルエン/酢酸エチルの勾配で溶出をした。 画分を、ＴＬＣに付し、そして、紫外線と化学染色を用いて確認を行い、次いで、マルトテトラオースペルベンゾアートの純産物画分を合わせ、真空下で濃縮を行い、そして、高真空下で乾燥をしたところ、純産物66が、白色泡沫として得られた(3.04ｇ、76％、ドライ糖蜜での72％マルトテトラオースに基づく数値)。 1H-NMRは、アノマー混合物(α：β =１：１)の存在と、すべての水酸基が完全にベンゾイル化していたことを示している(純度>95％)。 1H NMR (400MHz、CDCl3): β-アノマー: 8.26-7.09 (m、65H、13×Bz)、6.33 (d、1H、J1(I)-2(I) = 7.5、H1I)、6.19 (dd または t、1H、J2(IV)-3(IV) = 10.2、J3(IV)-4(IV)= 10.2、H3IV)、6.07 (dd、1H、J2(II)-3(II)= 10.2、J3(II)-4(II) = 8.9、H3II)、5.96 (dd、1H、J2(III)-3(III) = 10.2、J3(III)-4(III) = 8.2、H3III)、5.83 (d、1H、J1(IV)-2(IV)= 4.1、H1IV)、5.82 (dd または t、1H、J2(I)-3(I) = 6.8、J3(I)-4(I)= 8.2、H3I)、5.76 (dd または t、1H、J4(IV)-5(IV)= 9.6、H4IV)、5.71 (d、1H、J1(II)-2(II) = 4.1、H1II)、5.69 (d、1H、J1(III)-2(III) = 4.1、H1III)、5.65 (dd、1H、H2I)、5.34 (dd、1H、H2IV)、5.20 (dd、1H、H2II)、5.14 (dd、1H、H2III)、5.03-4.22 (m、15H、4.70、4.52 and 4.40 ppmの各々での3×H4、および 4×H5 および 8×H6). 注記：環状の糖IIおよびIIIについての数値は不明確であった。 α-アノマー: 6.84 (d、1H、J1(I)-2(I) = 3.6、H1I)、5.46 (dd、1H、J1(I)-2(I)= 10.2、J2(I)-3(I) = 3.6、H2I).
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシルアジド(６７)
ペルベンゾアート66(500mg、0.235mmol)を、ドライDCM(２ml)に溶解し、次いで、０℃で、30％HBrを含む酢酸(0.5ml)の溶液を加え、そして、アルゴンの存在下で、２時間かけて攪拌をした。 この溶液を、氷水DCM(100ml)に対して注いで反応を停止し、有機相を、氷水(３×50ml)、飽和NaHCO３溶液(３×30ml)、ブライン(25ml)で洗浄をし、乾燥をし(Na２SO４)、そして、真空下で、室温で濃縮を行ったところ、粗製の臭化物が得られた。 この粗製の臭化物を、クロロホルム(２ml)に溶解し、次いで、NaN３(130mg、2mmol)、臭化テトラブチルアンモニウム(129mg、0.4mmol)、そして、最後に、飽和NaHCO３溶液(3.5ml)を加え、その後、室温で、24時間かけて、激しく攪拌をした。 気流下に置いて溶媒を蒸発させた。 次いで、残渣を、EtOAc(10ml)に溶解し、そして、水(３×50ml)、飽和NaHCO３溶液(４×25ml)で洗浄をした。 水相を、EtOAc(２×50ml)で再抽出し、有機抽出物を合わし、ブライン(２×25ml)で洗浄をし、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、真空下で濃縮を行った。 黄色泡沫のグリコシルアジド67(466mg、97％)が得られ、このものは、精製を行わずに、次の工程に供した。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 7.03-8.24 (m、65 H、13×Bz)、6.10 (dd、1H、JH2-H3 = 10.4、JH3-H4 9.9、H3IIII,) 5.99 (dd、1H、JH2-H3 = 10.1、JH3-H4 8.7、H3III)、5.84 (dd、1H、JH2-H3= 9.9、JH2-H3 = 8.2、H3II)、5.75 (d、1H、JHI-H2= 3.9、H1IIII)、5.67 (m、2H、H3、H4IIII)、5.63 (d、1H、JHI-H2 = 4.1、H1III)、5.58 (d、1H、JHI-H2 = 3.9、H1II)、5.26 (dd、1H、JHI-H2 = 4.1、JH2-H3 = 10.4、H2IIII)、5.20 (dd、1H、JHI-H2= 8.4、JH2-H3 = 9.2、H2)、5.10 (dd、1H,、JH2-H3= 10.1、H2IIII)、5.04 (dd、1H、H2II)、4.98 (dd、1H、JH6b-H5= 2.1、JH6bH6a = -12.0、H6b)、4.88 (d、1H、JHI-H2 = 8.4、H1)、4.82 (dd、1H、JH6b-H5= 1.7、JH6bH6a = -12.0、H6b)、4.67-4.76 (m、2H、H-6a、H-6b)、4.53-4.63 (m、2H、H-6a、H-6b)、4.30-4.47 (m、7H、3×H4、2×H6、2×H5)、4.10-4.21 (m、2H、2×H5).
４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド(６８)
３β-(プロプ-２-イニルオキシ)コレスタノール(84mg、２当量、0.196mmol)とアジド67(200mg、0.098mmol)を、DCM/t-BuOH(3:2、w/w、0.21M、0.200ml)に溶解した。 硫酸銅の水性溶液(0.3M、0.１当量.、0.033ml)とアスコルビン酸ナトリウムの水性溶液(1M、0.３当量.、0.029ml)を加え、そして、この混合物を、暗黒下で、48時間かけて、激しく攪拌をした。 ＴＬＣ分析(トルエン:EtOAc、１:１)は、反応の末期において、出発物質のアジドよりも極性に富んだ産物が出現していたことを示した。 この混合物を、DCM(100ml)で希釈し、そして、飽和NaHCO３溶液(３×50ml)で洗浄をした。 水相を、EtOAc(３×20ml)で再抽出し、有機抽出物と合わせて、ブライン(50ml)で洗浄をし、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、真空内で濃縮を行ったところ、粗製産物が、黄色泡沫として得られた(279mg)。 粗製産物を、シリカゲルのカラム(30×5cm、トルエン:EtOAc、7:1→5:1→3:1)で精製したところ、トリアゾール68が、黄色がかった泡沫として得られた(153mg、63％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 7.05-8.24 (m、65 H、13×Bz)、6.14 (d、1H、JH1-H2 = 8.9、H1I)、6.11 (dd、1H、JH2-H3= 10.6、JH3-H4 9.8、H3IIII)、6.00 (dd、1H、JH2-H3= 10.1、JH3-H4 = 8.6、H3III)、5.86 (m、2H、H3I、H1III)、5.76 (d、1H、JHI-H2 = 3.8、H1IIII)、5.64-5.71 (m、3H、H1III,H2I、H4IIII)、5.63 (d、1H、JHI-H2 = 3.8、H1II)、5.26 (dd、1H、H2IIII)、5.12 (dd、1H、JHI-H2= 3.8、H2III)、5.08 (dd、1H,、JH2-H3 = 9.8、H2II)、4.98 (dd、1H、JH6b-H5 = 1.7、JH6bH6a = -12.5、H6b)、4.87 (dd、1H、H6b)、4.69-4.77 (m、2H、H6a、H6b)、4.53-4.66 (m、4H、2×H6,OCH2、H4I)、4.29-4.50 (m、7H、2×H4、2H6,3×H-5)、4.18 (m、1H、H5)、4.10-4.21 (m、2H、2×H5)、3.26 (m、1H、H-3 コール)、0.52-2.00 (m、33 H、12 CH2、9 CH)、0.90 (d、3H、J = 6.5、コレスタニル-CH3)、0.869 (d、3H、J = 6.7、コレスタニル-CH3)、0.864 (d、3H、J = 6.6、コレスタニル-CH3)、0.77 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.65 (s、3H、コレスタニル-CH3).
４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-β-Ｄ-グルコピラノシド(６９)
ペルベンゾアート68(95mg、0.038mmol)を、メタノール/THF(4:1 (w/w)、7.5ml)の混合物に溶解し、次いで、０℃で、NaOMeを含むメタノール(11M、0.040ml)の溶液を加え、そして、室温で、攪拌を継続した。 16時間が経過してもなお、部分的にベンゾイル化した化合物が残っていた(TLC: メタノール:EtOAc、3:1)ので、NaOMeを含むメタノール(11M、0.040ml)をさらに加えて、さらに３時間かけて攪拌を続けた。 強酸の陽イオン交換樹脂(BioRad AG-X8、H+)を加えて、pHを７に調整して溶液を中和し、その後、溶液を濾過し、メタノール(５×20ml)で洗浄し、そして、真空下で濃縮をした。 この残渣を、シリカゲルのカラム(15×1 cm、EtOAc,→メタノール-EtOAc、3:1→メタノール、0.2％ Et３Nを含むもの)を用いて精製したところ、ポリオール69が、白色固形物として得られた(47mg、100％)。
４-(コレスタン-3-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(７０)
ポリオール69(45mg、0.040mmol)を、ドライDMF(2ml、0.02M)に溶解し、次いで、改めて洗浄を行い、そして、ドライSO３.ピリジン錯体(248mg、３当量／水酸基,1.56mmol)を加えて、この混合物を、60℃で、16時間かけて攪拌をした。 この反応混合物を、10分かけて、０℃にまで冷却し、そして、０℃で、氷冷した水性NaOH溶液(５M、2.１当量/SO3、0.656ml、3.28mmol)の一部(〜pH 12)を加えて中和をした。 この懸濁液を、０℃で、15分かけて攪拌をし、水(20ml)で希釈し、そして、40℃で、真空下で濃縮をした。 この固形物を、水(11ml)に溶解して、pH 10.5の溶液を得た。 この溶液に、NaOHの水性溶液(５M、5滴)を加えて、pH 12にまで調整し、そして、スライド-α-ライザー(登録商標)カセット(2000MWCO、4-12ml)を用いて、室温で、16時間かけて、水(４リットル)に対して透析を行った。 24時間ごとに、水(４リットル)の交換を行うと共に、NH４HCO３(3M、0.6ml)の水性溶液を、その水に加えて、水のpHを6.0〜6.5に調整することで、この透析を、０℃で、その水に対して、３日間かけて継続した。 そして、脱塩した溶液を凍結乾燥したところ、過硫酸塩70が、毛様の白色粉末として得られた(80mg、82％)。 1H NMR (400MHz、D2O) d 8.31 (s、1H、=CH)、6.25 (d、1 H、JHI-H2 = 6.9、1H、H1I)、5.70 (m、2 H、2×H1)、5.65 (d、1H、JHI-H2 = 3.6、H1)、4.72-5.03 (m、11H、4×H2、4×H3、H4IIII,OCH2)、4.13-4.69 (m、15 H、3×H4、4×H5、8×H6)、3.58 (m、1 H、H-3 コール)、0.63-2.05 (m、33 H、12 CH2、9 CH)、0.95 (d、3H、J = 6.3、コレスタニル-CH3)、0.87 (d、6H、2×コレスタニル-CH3)、0.84 (s、3H、コレスタニル-CH3)、0.70 (s、3H、コレスタニル-CH3).
実施例16：２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシルブロミド(７２)
マルトトリオース過酢酸(71)３６(200mg、207μmol)を、０℃で、DCM(１ml)および33％HBr/HOAc(0.7ml)に合わせた。 この混合物を、０℃で、４時間かけて攪拌をした。 この溶液を、DCMで希釈をし、次いで、氷水(×２)、NaHCO３(飽和)(×２)、および、ブライン(×１)で洗浄をしてから、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させたところ、臭化物72が白色固形物として得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-β-Ｄ-グルコピラノシル アジド(７３)
臭化物72(〜200mg)を、EtOAc(５ml)とNaHCO３(飽和)(５ml)の混合物に合わせた。 NaN３(500mg)を加えた後に、Bu４NBr(触媒)を加えた。 この混合物を、室温で、一晩かけて、激しく攪拌をした。 この溶液を、EtOAcで希釈し、次いで、NaHCO３(飽和)(×２)およびブライン(×１)で洗浄をしてから、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させたところ、アジド73が白色固形物(198.9mg、100％、二段階)として得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
４-(コレスタン-３β-イルオキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-１-デオキシ-β-Ｄ-グルコピラノシド(７４)
アジド73(200mg、211μmol)、３-(プロプ-２-イニルオキシ)コレスタノール(３当量、267mg)、CHCl３(２ml)、t-BuOH (２ml)、CuSO４(0.3M水性溶液の50μl)、および、アスコルビン酸ナトリウム(1M水性溶液の62.5μl)を、室温で、一晩かけて、激しく攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜2:3 ヘキサン:EtOAc)ところ、トリアゾール74(197mg、68％)が得られた。 1H NMR (300MHz、CDCl3) δ 7.66 (s、1H、トリアゾール-H)、5.85 (d、1H、J1,2 = 9.3、H-1I)、5.46-5.27 (m、6H、H-1II、H-1III、H-2I、H-4III、H-3II、H-3III)、5.03 (dd、1H、J3,2 = 9.8、J3,4 = 9.8、H-3I)、4.82 (dd、1H、J2,1 = 4.1、J2,3 = 10.3、H-2)、4.72 (dd、1H、H-2)、4.63 (s、2H、CH2O)、4.47-4.41 (m、2H)、4.32-3.88 (m、9H)、3.31 (m、1H、CHO)、2.12 (s、6H、OAc)、2.06 (s、3H、OAc)、2.03 (s、3H、OAc)、2.00 (s、3H、OAc)、1.99 (s、3H、OAc)、1.98 (s、3H、OAc)、1.96 (s、3H、OAc)、1.96-0.83 (m、31H)、1.82 (s、3H、OAc)、0.85 (d、3H、J = 6.7、CH3)、0.82 (m、6H、CH3)、0.76 (s、3H、CH3)、0.60 (s、3H、CH3).
４-(コレスタン-3-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-β-Ｄ-グルコピラノシド(７５)
基本手順にしたがって、過酢酸74(197.2mg)を脱アセチル化したところ、ポリオール75が、白色固形物として得られ(131mg、96％)、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(７６)
ポリオール75(131.2mg、137μmol)を、DMF(0.02M、6.9ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／水酸基、4.12mmol、655mg)を加え、そして、溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、氷水で冷却してから、5M NaOH(2.1当量/SO３.ピリジン、1.73ml)で中和をした。 溶媒を蒸発させ、そして、粗製産物をC18 SPEカートリッジ(２×１ｇカートリッジ)で精製した後に、透析を行った(48時間、2000MWCOカートリッジ)。 灰色がかった白色の溶液を凍結乾燥したところ、過硫酸塩76が、灰色がかった白色固形物として得られた(156mg、58％)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ 8.32 (s、1H、トリアゾール-H)、6.22 (d、1H、J1,2= 7.5、H-1I)、5.69 (d、1H、J1,2 = 3.4、H-1)、5.63 (d、1H、H-1)、5.04-4.17 (m、18H)、3.58 (m、1H、CHO)、2.03-0.85 (m、31H)、0.95 (d、3H、J = 6.2、CH3)、0.88 (d、6H、CH3)、0.85 (s、3H、CH3)、0.71 (s、3H、CH3).
実施例17：３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド(７７)
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシルトリクロロアセトイミダート(0.372ｇ、0.502mmol)、および、３β-コレスタノール(0.390ｇ、1.004mmol、２当量)を無水DCM(５ml、0.1M)に溶解した。 粉末MS３Å(新たに活性化した120mg)を加えた。 この混合物を、０℃で、30分かけて攪拌をした。 TMSOTf(0.018ml、0.100mmol、0.2当量)を含むDCM(0.3ml)の溶液を、注射器から滴下して加えた。 この混合物を、０℃で、攪拌をしている間に、ＴＬＣ(ヘキサン-EtOAc=83:17)で反応をモニタリングした。 1.5時間後に、変換が完了し、そして、Et３N(0.2ml)を添加した。 粗製の混合物を濾過し、そして、固形物を、DCM(５×1.5ml)で濯いだ。 合わせた濾液と洗液を、シリカゲルを用いて蒸発乾固させ、そして、カラムクロマトグラフィー(2.5×22cmのシリカゲル、ヘキサン-EtOAc 200:20、210:30、400:80の勾配溶離)によって精製したところ、配糖体77が、無色の泡沫として得られた(368mg、76％)。
３β-コレスタニル α-Ｄ-マンノピラノシド(７８)
前出の無色の泡沫(358mg、0.370mg)を、無水THF(５ml)とメタノール(３ml)に溶解し、そして、11M NaOMeを含むメタノール(0.4ml)の溶液を加えた。 白色の沈殿物が即座に形成された。 この混合物を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 THF(３ml)をさらに加え、そして、希釈した懸濁液を、さらに１日間、室温で、攪拌をした。 この混合物に対してAG50WX8樹脂(Ｈ＋型)を加えて中和をしたところ、懸濁液が、透明な溶液に変化した。
この樹脂を濾過して除去し、そして、メタノール(４×1.5ml)で洗浄をした。 濾液と洗液を合わしたものは、５分もたたない内に、ゲル(半透明)に変化した。 この混合物を蒸発乾固して体積を小さくし、そして、EtOH(10ml)から晶出させた。 混合物全体が、室温で、ゲル状を呈しており、このものを、濾過および押圧して水分を除去した。 残渣を、EtOH(1.5ml)で洗浄し、風乾し、そして、P２O５の存在下、真空下で、一晩かけて乾燥をしたところ、テトラオール78が、白色粉末(131mg)として得られた。 濾過を行ったところ、沈殿物が得られ、そして、還流するためにこのものを加熱した。 得られた透明な溶液を、シリカゲルを用いて蒸発乾固し、そして、シリカカラムクロマトグラフィー(３×8cm、CHCl3200ml および メタノール-CHCl３ 20:200、20:160、30:150の勾配溶離)によって精製をした。 産物画分をプールし、蒸発乾固し、そして、P２O５の存在下、真空下で、３日間かけて乾燥をしたところ、二回目の産物が、白色粉末(79mg)として得られた。
1H NMR (DMSO-d6、300MHz) d 4.73 (d、1H、J = 1.5、H1)、4.64 (d、D２Oで交換可能、1H、J = 4.6、OH)、4.61 (br d、D２Oで交換可能、1H、J = 4.1、OH)、4.48 (d、D２Oで交換可能、1H、J = 5.7、OH)、4.37 (t、D２Oで交換可能、1H、J = 6.0、OH)、3.62 (dd、1H、J = 10.3、5.7)、3.56-3.29 (m、6H、糖類 5×H および コレスタニルについてのH3)、1.95-0.56 (m、46H、コレスタニル).
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナト-α-Ｄ-マンノピラノシドテトラナトリウム塩(７９)
テトラオール78(102.8mg、0.187mmol)を、無水DMF(4.67ml、0.04M)に溶解した。 SO３.ピリジン錯体(357mg、2.244mmol、３当量／水酸基、水、トルエン、EtOH、DCMで改めて洗浄を行い、そして、P２O５の存在下、真空デシケーターで、１時間かけて乾燥をしたもの)を加えた。 この混合物(pH > 10)の色は、橙黄色に変化した。 この混合物を、乾燥するまで蒸発させた。 残渣(淡黄色粉末)を、４mlの水(pH > 10)に溶解し、そして、SPE-C18 カートリッジ(800mg、MeCN,MeCN-水1:1、1:9、1:99の各４mlを用いて溶出して前処理したもの)で精製をした。 導入を終えた後に、水(12ml)、１％MeCNの水(4.04ml)、５％(4.2ml)、10％(4.4ml)、20％(4.8ml)、30％(5.2ml)、40％(5.6ml)、50％(６ml)、60％(4.8ml)、および、70％(5.1ml)の水を用いて、SPEの溶出を行った。 画分を、MBT、特性試験、CEで確認をし、そして、プールおよび凍結乾燥をした。 １％〜５％のMeCN-水から少量の産物79(25mgの褐色粉末)が得られた。 産物の大半が、10％、20％および30％のMeCNの水で溶出された産物であった(淡黄色粉末、120mg、67％)。 40％のMeCNの水で溶出された産物も、少量の別の産物として得られた(淡黄色粉末、４mg)。 1H NMR (D2O、400MHz) d 5.16 (br s、1H、H1)、4.70 (br s、1H、H2)、4.6 (HODと重複していた、1H、H3)、4.35 (brM、1H、H4)、4.22 (brM、1H、H6)、4.14 (brM、1H、H6)、3.96 (brM、1H、H5)、3.54 (brM、1H、コレスタニル-H3)、1.90-0.50 (m、46H、コレスタニル).
実施例18： ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O- ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシルアミン(８０)
アジド67(201mg、0.098mmol)を、EtOAc(10ml)に溶解し、そして、水素雰囲気下で、Pd-C(10％、(w/w)、100mg)を用いて、３時間かけて攪拌をした(TLC:トルエン:EtOAc、7:1)。
水素をアルゴンと交換し、そして、この混合物を、セリット(メタノールおよびEtOAcの５mlで予洗したもの)に通して濾過をし、EtOAc(５×20ml、＋超音波処理)で洗浄し、そして、最後に、室温で、真空下で濃縮を行ったところ、アミン80が、白色固形物(200mg、100％)として得られ、このものは、さらに精製または同定することなく、そのままに次の工程に供した。
Ｎ-(２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O- ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシル)-４-((３Ｒ、１０Ｓ、１２Ｓ、１３Ｒ)-３,１２-ジ-O-アセチル-１０、１３-ジメチルヘキサデカヒドロ-１Ｈ-シクロペンタ[ａ]フェナントレン-１７-イル)ペンタンアミド(８１)
ジアセチルデオキシコール酸(53mg、0.111mmol)およびDMAP(触媒)をドライDCM(３ml)に溶解し、次いで、０℃で、DCCを含むDCM(1M、１当量、0.111ml)とHOBt(17mg、0.111mmol)の溶液を加え、そして、この混合物を、室温で、30分かけて攪拌をした。 この溶液に、Et３N(2滴)を加えてpHを８に調整して塩基性にし、その後、０℃で、アミン80(150mg、0.074mmol)を含むDCM/DMF(5:1,(w/w)、2.5ml)の混合物を加え、そして、室温で、16時間かけて攪拌を継続した(pH 8)。 ＴＬＣ(トルエン:EtOAc、3:1)では何も進展が確認されなかったので、ジアセチルデオキシコール酸(53mg、0.111mmol)、DCCを含むDCM(1M、１当量、0.111ml)、HOBt(17mg、0.111mmol)、および、Et３N(3滴)をさらに加え、そして、56時間かけて攪拌を継続した。 ＴＬＣは、反応の完了を示していたので、溶液を、セリット(２mlで予洗したもの)に通して濾過をし、そして、DCM(３×40ml)で洗浄をした。 透明な溶液を、飽和NaHCO３溶液(４×30ml)で洗浄をした。 DCM(２×20ml)を用いて水相の再抽出を行い、有機抽出物を合わせ、水性HCl(3％、５×30ml)、飽和NaHCO３溶液(20ml)で洗浄をし、乾燥をし(Na２SO４)、そして、真空下で濃縮をした。 残渣を、シリカゲルのカラム(30×5cm、トルエン-EtOAc 7:1→5:1→1:1)を用いて精製をしたところ、アミド81が、淡黄色の固形物として得られた(58mg、32％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 7.01-8.28 (m、65 H、13×Bz)、6.31 (d、1H、JH1-NH = 9.3、NH)、6.10 (dd、1H、JH2-H3= JH3-H4 10.1、H3IIII)、6.00 (dd、1H、JH2-H3 = 10.2、JH3-H4 = 8.9、H3I)、5.82 (m、2H、H3II、H3III)、5.74 (d、1H、JHI-H2 = 3.9、H1IIII)、5.67 (t、1H、H4IIII)、5.61 (d、1H、JHI-H2= 4.0、H1III)、5.57 (d、1H、JHI-H2 = 4.0、H1II)、5.48 (t、1H、JH1-H2 = 9.4H1I)、5.25 (dd、1H、JH2-H3= 10.6、H2IIII)、4.99-5.15 (m、4H、3×H2、H3-デオキシコール.)、4.92 (dd、1H、JH6b-H5= 1.7、JH6bH6a = -12.4、H6b)、4.63-4.81 (m、4H、3×H6、H12-デオキシコール)、4.56 (dd、1H、JH6b-H5 = 1.7、JH6bH6a= -12.6、H6b)、4.08-4.52 (m、10H、3×H4、4×H5、3 H6)、2.07 (s、3H、Ac)、2.03 (s、3H、Ac)、0.8-2.15 (m、26H、10×CH2、6×CH)、0.89 (s、3H、CH3)、0.70 (d、3H、J = 6.4、CH-CH 3)、0.63 (s、3H、CH3).
Ｎ-(α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシル)-４-((３Ｒ、１０Ｓ、１２Ｓ、１３Ｒ)-１２-O-アセチル-１０、１３-ジメチルヘキサデカヒドロ-１Ｈ-シクロペンタ[ａ]フェナントレン-１７-イル)ペンタンアミド(８２)
化合物81(53mg、0.021mmol)を、メタノール/THF(7:1(w/w)、4ml)に溶解し、次いで、０℃で、NaOMeを含むメタノール(11M、0.040ml)の溶液を加え、そして、室温で、攪拌を継続した。 16時間後もなお、10％の部分的にベンゾイル化した非極性化合物が残存していたので(TLC:メタノール:EtOAc、2:1)、NaOMeを含むメタノール(11M、0.050ml)をさらに加え、そして、さらに１時間かけて攪拌を継続した(pH 12)。 強酸の陽イオン交換樹脂(BioRad AG-X8、H+)を加えて、pHを７に調整して溶液を中和し、その後、溶液を濾過し、メタノール(３×30ml、＋超音波処理)で洗浄し、そして、真空下で濃縮をした。 強い芳香臭を放っている残渣を、シリカゲルのカラム(10×１cm、EtOAc,→メタノール-EtOAc,2:1→メタノール、0.2％ Et３Nを含むもの)を用いて精製をしたところ、ポリオール82が、白色固形物として得られた(23mg、100％)。
Ｎ-(２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシル)-4-((３Ｒ、１０Ｓ、１２Ｓ、１３Ｒ)-３-O-スルホナトナトリウム-１２-O-アセチル-１０、１３-ジメチルヘキサデカヒドロ-１Ｈ-シクロペンタ[ａ]フェナントレン-１７-イル)ペンタンアミド(８３)
ポリオール82(22mg、0.020mmol)を、ドライDMF(0.02M、1.05ml)に溶解し、次いで、改めて洗浄を行い、そして、ドライSO３.ピリジン錯体(３当量／水酸基、150mg、0.945mmol)を加え、次いで、この混合物を、60℃で、16時間かけて攪拌をした。 ０℃で、水性NaOH溶液(５M、2.１当量/SO3、0.39ml、1.985mmol)の一部(pH 12)を加えて反応を停止し、そして、０℃で、15分かけて攪拌をした。 懸濁液を、40℃で、真空下で濃縮をしたところ、黄色粉末が得られた。 この粉末を水(11ml)(pH 11.5)に溶解し、そして、スライド-α-ライザー(登録商標)カセット(2000MWCO、4-12ml)を用いて、水(４リットル)に対して、室温で、２時間かけて透析を行った。 この透析は、水(４リットル、0.6mlの3M 水性NH４HCO３、pH 6を含むもの)に対して、室温で、16時間かけて透析を行った。 24時間ごとに、水(４リットル)の交換を行うと共に、NH４HCO３(３M、0.6ml)の水性溶液を、その水に加えて、水のpHを〜6.0-6.5に調整することで、この透析を、０℃で、その水に対して、46時間かけて継続した。 そして、脱塩した溶液を凍結乾燥したところ、毛様の白色粉末として得られた。 ＣＥ分析を行ったところ、5.228分(80％)での主要な一つのピーク、それと、5.121分(５％)および5.278分(10％)での小さな二つのピークに対応する三つの化合物を示した。 この混合物(〜54mg)を、C18 HPLCカラム、すなわち、溶媒Ａ:100％水、溶媒Ｂ：100％アセトニトリル、流速：10ml/分、画分サイズ：5ml、検出器：ELS、勾配：５％ＢとしたC18 HPLCカラムで精製をした。 C18マトリックスに対して弱度の結合性を示しながらも、83の純産物画分である産物を回収し、そして、ＣＥで分析を行った。 凍結乾燥を行ったところ、過硫酸塩83が、毛様の白色粉末(12.1mg、ＣＥで決定した24％、98％の純度)として得られた。 1H NMR (400MHz、D2O) d 5.96 (d、1H、NH)、5.79 (d、2H、2×H1IIII、H1III)、5.68 (d、1H、H1II)、5.19 (s、1H、H3-デオキシコール)、5.00-5.10 (m、3H1、3×H3)、4.67-4.98 (m、6H、H1I、4×H2、H3)、4.18-4.60 (m、16 H、3×H4、4×H5、8×H6、H12-デオキシコール.)、2.46 (m、2H,OCH2)、2.28 (s、3H、12-O Ac-デオキシコール)、1.08-2.13 (m、24H、9×CH2、6×CH)、1.05 (s、3H、CH3)、0.93 (d、3H、J = 6.2、CH-CH 3)、0.88 (s、3H、CH3).
(２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル)-(１→４)-(２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル)-(１→４)-(２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル)臭化物(８４)
マルトトリオースペルベンゾアート(200mg、207μmol)を、０℃で、DCM(１ml)およびHBr/HOAc(0.7ml)に合わせた。 この混合物を、０℃で、６時間かけて攪拌をした。 この溶液を、DCMで希釈し、そして、氷水(×２)、NaHCO３(飽和)(×２)、および、ブライン(×１)で洗浄をしてから、乾燥をし(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させたことろ、白色固形物(定量的)が得られ、このものは、さらに精製を行わなくとも、反応性を示した。 1H NMR (CDCl3、400MHz) d 8.19 (m、2H、Ar)、8.05 (m、2H、Ar)、7.95 (m、2H、Ar)、7.88-7.85 (m、4H、Ar)、7.74-7.70 (m、4H、Ar)、7.63-7.09 (m、36H、Ar)、6.73 (d、1H、J1,2 = 3.4、H-1I)、6.13-6.08 (m、2H、H-3III、H-3I)、5.95 (m、1H、H-3II)、5.76 (d、1H、J1,2= 4.1、H-1III)、5.67 (m、1H、H-4III)、5.65 (d、1H、J1,2= 3.4、H-1II)、5.27 (dd、1H、H-2III)、5.11 (dd、1H、H-2II)、5.03 (dd、1H、H-2I)、4.99 (dd、1H、H-6I)、4.76-4.72 (m、2H、H-6II,H-6I)、4.66-4.58 (m、2H、H-6II、H-5I)、4.55-4.35 (m、5H、H-4I、H-4II、H-5II、H-5III、H-6III)、4.23 (dd、1H、H-6III).
実施例19：３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド(８５)
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル臭化物84(200mg、124μmol)３８、分子篩(〜50mg)、および、コレスタノール(３当量、370μmol、145mg)を、アルゴンの存在下で、ドライDCMと合わせ、そして、０℃にまで冷却した。 AgOTf(1.5当量、187μmol、48mg)を加え、そして、溶液を、０℃で、２時間かけて攪拌をした。 トリエチルアミン(600μl)を加え、そして、溶液を、室温にまで加温した。 この混合物を、(0.5% (v/v)トリエチルアミンを含む1:1 EtOAc:Hexを溶出溶媒として用いて)短いシリカ栓に通した。 この溶媒を、蒸発させた(水浴の温度は、室温に保っていた)。 得られた混合物を、分子篩を用いて、アルゴンの存在下で、ドライDCMと合わせ、そして、０℃にまで冷却してから、TMSOTf(0.1Mの溶液を含む1.24mlのDCM)を、20分かけて、少しずつ加えた。 この溶液を、０℃で、１時間かけて攪拌をし、そして、室温で、0.5当量のTMSOTfを、15分かけて、さらに加えた。 さらに30分後に、トリエチルアミン(１ml)を加え、次いで、溶液を濾過し、そして、溶媒を蒸発させた。
粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜35％ EtOAc/Hex)で精製したところ、純配糖体85が、白色固形物として得られた(91mg、38％)。 1H NMR (300MHz、CDCl3) δ 8.17 (m、2H、Ar)、8.06 (m、2H、Ar)、7.96 (m、2H、Ar)、7.88 (m、2H、Ar)、7.82 (m、2H、Ar)、7.72 (m、4H、Ar)、7.57 (m、4H、Ar)、7.52-7.09 (m、32H、Ar)、6.10 (t、1H、J = 9.7、H-3III)、5.92 (t、1H、H-3II)、5.75 (d、1H、J1,2= 3.8、H-1III)、5.71-5.64 (m、2H、H-4III、H-3I)、5.58 (d、1H、J1,2 = 3.8、H-1II)、5.30-5.19 (m、2H、H-2III、H-2I)、5.10 (dd、1H、H-2II)、4.95 (m、1H、H-6II)、4.84 (d、1H、J1,2= 7.7、H-1I)、4.77-4.61 (m、3H、H-6I、H-6I、H-6II)、4.49-4.34 (m、5H、H-6III、H-5I、H-5III、H-4I、H-4II)、4.25 (m、1H、H-6III)、4.06 (m、1H、H-5II)、3.53 (m、1H、CHO)、1.99-0.47 (m、31H)、0.91 (d、3H、CH3)、0.87 (m、6H、CH3)、0.64 (s、3H、CH3)、0.62 (s、3H、CH3).
３β-コレスタニル α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(８６)
配糖体85(91mg、47.5μmol)を、1:1 メタノール:THFと合わせ、そして、基本手順にしたがって脱アセチル化したところ、ポリオール86(48mg)が、(微量の安息香酸メチルを含む)白色固形物として得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３β-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(８７)
ポリオール86(47.8mg、54.6μmol)を、DMF(0.02M、2.73ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／水酸基、1.64mmol、261mg)を加え、そして、溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、氷水で冷却し、そして、5M NaOH (700μl)で中和をしてから、溶媒を蒸発させた。 残渣を水と合わせ、そして、メタノール/水を移動相として用いたC18 SPE カートリッジにて精製を行った。 この産物を含む画分をプールし、そして、2000MWCO透析カートリッジを用いて、48時間かけて透析を行ってから、40ミクロン注射器型フィルターを用いて濾過をしてから、凍結乾燥を行ったところ、過硫酸塩87が、灰色がかった白色固形物として得られた(43mg、二段階で48％)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ 5.68 (d、1H、H-1)、5.58 (d、1H、H-1)、5.05-4.03 (m、19H)、3.82 (m、1H、コレスタニル H-3)、2.05-0.65 (m、31H)、0.96 (d、3H、J = 5.6、CH3)、0.90 (d、6H、J = 6.4、CH3)、0.86 (s、3H、CH3)、0.71 (s、3H、CH3).
実施例20：２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-((１→４)-１,２,３,６-テトラ-O-アセチル-Ｄ-グルコピラノース(８８)
ラクトース(5.0221g、13.88mmol)を、ドライピリジン(40ml)に懸濁させ、そして、DMAP(50mg)を加えた。 無水酢酸(26.24ml、277.6mmol)を、０℃で、15分かけて、この懸濁液に対して滴下し、そして、この混合物を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 無水メタノールを、０℃で、滴下して加えることで、この反応を停止させ、そして、溶液の攪拌を行った。 溶液を蒸発させ、次いで、無水トルエン(３×50ml)を用いて共溶出し、そして、残余の溶媒を、一晩かけて、真空下で還元したところ、白色固形物が得られ(９ｇ、13.26mmol、95％)、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル臭化物(８９)
過酢酸88(510.3mg、0.75mmol)を、無水DCM(1.5ml)に溶解し、そして、HBr/酢酸(30％、1ml)を、０℃で、滴下して加えた。 この混合物を、室温で、３時間かけて攪拌をし、次いで、DCM(30ml)で希釈し、氷水(２×40ml)、氷冷した飽和NaHCO３溶液(３×30ml)、および、ブライン(２×30ml)で洗浄をした。 この溶液を、Na２SO４を用いて乾燥させ、そして、真空下で濃縮したところ、粗製臭化物が得られた。 この濃縮を終えて直ちに、次の反応が進行した。
２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-((１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-β-Ｄ-グルコピラノシルアジド(９０)
粗製グリコシル臭化物89(0.75mmol)を、CHCl３(４ml)に加え、そして、Bu４NHBr(193.42mg、0.6mmol)、NaN３(195.03mg、3.0mmol)、および、飽和NaHCO３溶液(７ml)を加えた。
反応物を、室温で、一晩かけて、激しく攪拌をした。 反応物を、還元し、EtOAcで希釈し、そして、飽和NaHCO３溶液(３×30ml)およびブライン(３×30ml)で洗浄をした。 有機層を、Na２SO４を用いて乾燥させ、次いで、真空下で濃縮し、そして、0.2％ Et３Nを含むEtOAc/ヘキサン(１:１)を用いたフラッシュクロマトグラフィーを利用して精製をしたところ、アジドが生成した(348mg、２段階で70％)。 1H NMR (300MHz、CDCl3) δ5.33 (dd、1H、JH4’,H3’ = 3.4 Hz、JH4’,H5’ = 1.1 Hz、H-4')、5.19 (dd、1H、JH3,H4= 9.4 Hz、JH2,H3 = 9.0 Hz、H-3)、5.09 (dd、1H、JH2’,H3’ = 10.4 Hz、J H2’,H1’ = 7.8 Hz、H-2')、4.94 (dd、1H、JH2’,H3’ = 10.4 Hz、JH3’,H4’ = 3.4 Hz、H-3')、4.84 (dd、1H、JH2,H3 = 9.5 Hz、JH2,H1 = 8.8 Hz、H-2)、4.61 (d、1H、JH2,H1= 8.8 Hz、H-1)、4.49 (dd、1H、JH6a,H6b = 11.9 Hz、JH6a,H5 = 2.2 Hz、H-6a)、4.46 (d、1H、JH1’,H2’ = 7.8 Hz、H-1')、4.14-4.03 (m、3H、H-6b、H-6a'、H-6b')、3.87 (dd、1H、JH5’,H4’ = 1.1 Hz、H-5')、3.80 (t、1H、JH4,H5 and H4,H3 = 9.4 Hz、H-4)、3.68 (ddd、1H、JH6a,H5 = 2.0 Hz、JH6b,H5 = 5.0 Hz、JH4,H5 = 9.9 Hz、H-5)、2.13 (s、3H、OAc)、2.12 (s、3H、OAc)、2.05 (s、3H、OAc)、2.05 (s、3H、OAc)、2.03 (s、3H、OAc)、2.03 (s、3H、OAc)、2.02 (s、3H、OAc)、1.95 (s、3H、OAc).
４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-β-Ｄ-グルコピラノシド(９１)
ドライアジド90(100mg、0.15mmol)、および、３β-(プロプ-２-イニルオキシ)コレスタノール(129mg、0.302mmol、2当量)を、DCM/t-BuOH(3:2、0.21M)に溶解した。 硫酸銅の水性溶液(0.3M、0.1当量、0.015mmol、50μl)を、この混合物に加え、そして、アスコルビン酸ナトリウムの溶液(1M、0.3当量、0.045mmol、45.3μl)を加えた。 反応物を暗黒下に移し、そして、一晩かけて激しく攪拌をした。 この混合物を、DCM(100ml)に希釈し、そして、飽和NaHCO３溶液(３×30ml)で洗浄した。 水相を、DCM(20ml)を用いて再抽出し、次いで、合わせた有機層をブライン(２×30ml)で洗浄し、そして、Na２SO４を用いて乾燥をした。 溶媒を真空下で蒸発させたところ、粗製産物が得られた。 この粗製産物を、0.2％ Et３Nを含むヘキサン/EtOAc(3:2)を用いたフラッシュクロマトグラフィーを利用して精製をしたところ、白色固形物が生成した(135.3mg、82％)。 1H NMR (300MHz、CDCl3) δ 7.67 (s、1H、CH-N)、5.79 (d、1H、J H1,H2 = 9.2、H-1)、5.43-5.37 (m、2H、H-2、H-3)、5.35 (dd、1H、JH3’,H4’ = 3.4、JH4’,H5’ = 0.8、H-4')、5.11 (dd、1H、JH2’,H3’ = 10.4、JH2’,H1’ = 7.8、H-2')、4.95 (dd、1H、JH2’,H3’ = 10.4、JH3’,H4’ = 3.4、H-3')、4.64 (s、2H、CH2-N)、4.50 (d、1H、JH1’,H2’ = 7.9、H-1')、4.46 (dd、1H、JH6a’,H6b’ = 12.4、J H6a’,H5’ = 1.6、H-6a')、4.16-4.04 (m、3H、H-6b'、H-6a、H-6b)、3.96-3.85 (m、3H、H-4、H-5、H-5')、3.39-3.28 (m、1H、H-コール)、2.14 (s、3H、OAc)、2.09 (s、3H、OAc)、2.06 (s、3H、OAc)、2.05 (s、3H、OAc)、2.04 (s、3H、OAc)、1.95 (s、3H、OAc)、1.88-1.80 (m、31H)、1.85 (s、3H、OAc)、0.88-0.80 (m、3H、CH3-CH)、0.85 (d、3H、J = 1.3、CH3-CH)、0.83 (d、3H、J = 1.2、CH3-CH)、0.77 (s、3H、CH3)、0.62 (s、3H、CH3).
４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(９２)
ドライＮ配糖体91(100mg、0.092mmol)を、無水CH３OHに溶解し、そして、この混合物に対して、０℃で、アルゴンの存在下で、NaOMe/CH３OH(11M、30μl)の溶液を滴下して加えた。 この溶液を、室温で、一晩かけて、攪拌をした。 ＴＬＣでモニタリングを行った後に、無水CH３OH(２ml)とNaOMe/CH３OH(11M、50μl)をさらに加えたところ、反応混合物のpHは、11を示していた。 反応完了次第に、Dowex Ｈ＋イオン交換樹脂を加えて、pHを６にまでして中和をし、そして、得られた懸濁液を、40℃で、CHCl３/CH３OH(１:１)に溶解した。 この溶液を、濾過し、濃縮し、そして、P２O５を用いて乾燥をしたところ、粗製産物が得られた。
４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(９３)
SO３-ピリジン(124.89mg、0.785mmol、3eq/OH、予洗および乾燥したもの)の一部を、60℃で、ドライポリオール92(29.7mg、0.037mmol)を含む無水DMF(0.02M、1.85ml)に加えた。 反応物を、一晩かけて攪拌をした。 反応物を、０℃にまで冷却し、そして、攪拌をしながら、5M NaOH(329.7μl、1.65mmol、2.1当量のSO３-Pyr)の冷溶液の一部を加えた。
即座にpHを確認したところ、わずかに塩基性を示していた。 反応物に対して冷却した5M NaOH(50μl)をさらに加えたところ、pHは、約13になっていた。 この懸濁液を、０℃で、15分かけて攪拌をし、次いで、HPLCグレード水(100ml)で希釈をし、そして、溶媒を徐々に蒸発させた。 100％HPLCグレード水〜ACN/H２O(１:１)の勾配溶離を利用したC18固相抽出カートリッジ(ウォーターズ セプ パク、１g)で、この産物の脱塩を行った。 0.1M NH４HCO３を加えることで、この画分の塩基性を保ちつつ、すべての画分についての特性試験を行った。 特性試験で陽性の画分は、CEを用いて分析を行い、そして、JR245_33を含む画分は、５-50％のACNを含む水の勾配溶離を利用したC18液体クロマトグラフィーで、35分かけて、結合および分離させた。 40μlの１,９-ジメチル-メチレンブルー水性溶液を含む10μlの試料を用いて、すべての画分に対して、糖類についての分析を行い、そして、糖類陽性画分については、CEで分析を行った。 純産物の画分を回収して、凍結乾燥を行ったところ、灰色がかった白色の粉末が産物として得られ(21.1mg、37％の収率)、CEによって決定されたその純度は、98％であった。 1H NMR (300MHz、D2O) δ: 8.29 (s、1H、CH=C-)、6.27 (d、1H、JH1,H2 = 8.1 Hz、H-1)、5.14 (d、1H、JH3’,H4’= 3.0 Hz、H-4')、4.98 (t、1H、JH1,H2 = 7.8 Hz、H-2)、4.91-4.82 (m、1H、H-3)、4.89 (d、1H、J H1’,H2’ = 7.5 Hz、H-1')、4.74 (s、2H、CH2)、4.57 (dd、2H、JH2’,H3’ = 10.2 Hz、JH3’,H4’ = 3.0 Hz、H-3'、H-5')、4.46 (dd、1H、JH2’,H3’ = 9.9、JH1’,H2’ = 7.5、H-2')、4.36 (m、5H、H-4,H-5,H-6a,H-6a'、H-6b')、4.18-4.14 (m、1H、H-6b)、3.63-3.49 (m、1H、コール-H)、2.04-0.98 (m、31H、コール)、0.97-0.83 (m、12H、CH3)、0.70 (s、3H、CH3).
実施例21：２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-β-Ｄ-グルコピラノシルアジド(９４)
マルトース過酢酸(200mg、295μmol)を、０℃で、DCM(１ml)およびHBr/HOAc(0.7ml)に合わせた。 この混合物を、０℃で、４時間かけて攪拌をした。 この溶液を、DCMで希釈をし、次いで、氷水(×２)、NaHCO３(飽和)(×２)、および、ブライン(×１)で洗浄をしてから、乾燥をし(Na2SO4)、そして、溶媒を蒸発させたところ、白色固形物の臭化物が得られ、このものを、EtOAc(５ml)およびNaHCO３(飽和)(５ml)の混合物に合わせた。 NaN３(2.0 g)を加え、次いで、Bu４NBr(触媒)も加えた。 この混合物を、室温で、激しく攪拌をした。 この溶液を、EtOAcで希釈をし、次いで、NaHCO3(飽和)(×２)、および、ブライン(×１)で洗浄をしてから、乾燥をし(Na2SO4)、そして、溶媒を蒸発させたところ、粗製産物が得られ、このものを、カラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜50％ EtOAc/ヘキサン；トルエンを用いて導入をした)を用いて精製をしたところ、170.6mgの白色固形物が得られ(二段階で87％)、このものは、さらに同定を行わなくとも、反応性を示した。
４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-β-Ｄ-グルコピラノシド(９５)
アジド94(170mg、257μmol)、３β-(プロプ-２-イニルオキシ)コレスタノール(２当量、219mg)、CHCl３(２ml)、t-BuOH(２ml)、CuSO４(0.3M 水性溶液の50μl)、および、アスコルビン酸ナトリウム(1M 水性溶液の62.5μl)を、室温で、一晩かけて、激しく攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、次いで、残渣をシリカカラム(SiO２:ヘキサン〜50％ EtOAc/ヘキサン)に導入したところ、190mgの純物質95(68％)が得られた。 1H NMR (300MHz、CDCl3) δ: 7.67 (s、1H、トリアゾール-H)、5.85 (d、1H、J1,2 = 9.3、H-1I)、5.46-5.29 (m、4H、H-1II、H-2I、H-4II、H-3II)、5.04 (t、1H、J2,3= 10.3、J3,4 = 10.3、H-3I)、4.85 (dd、1H、J1,2= 4.1、J2,3 = 10.8、H-2II)、4.63 (s、2H、CH2)、4.45 (ddd、1H、H-6I)、4.25-4.19 (m、2H、H-5I、H-6II)、4.14-3.92 (m、4H、H-5II、H-6I、H-6II、H-4I)、3.32 (m、1H、CHO)、2.31-0.53 (m、31H)、2.10 (s、3H、OAc)、2.08 (s、3H、OAc)、2.03 (s、3H、OAc)、2.00 (s、6H、OAc)、1.98 (s、3H、OAc)、1.82 (s、3H、OAc)、0.83 (d、3H、J = 1.0、CH3)、0.81 (d、3H、J = 1.5、CH3)、0.76 (s、3H、CH3)、0.61 (s、3H、CH3).
４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(９６)
過酢酸95(190mg)を、THF/メタノール(１:１)に溶解した。 NaOMeを含むメタノール(11M、20μl)を加え、次いで、この溶液を、室温で、３時間かけて攪拌をした。 この溶液を、Ｈ＋樹脂を用いて中和をし、濾過を行い、そして、溶媒を蒸発させたところ、125mg(90％)の灰色がかった白色固形物の産物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(９７)
ポリオール96(124.5mg、157μmol)を、DMF(0.02M、7.84ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／OH、3.3mmol、525mg)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、5M NaOH(2.1当量/SO３.ピリジン、1.4ml)を用いて中和をした。 この混合物を、水の入った大きな丸底フラスコに移し、蒸発を行い、そして、精製水(５リットル、12時間ごとに水を交換した)に対して、24時間をかけて、透析を行った(2000MWCO カートリッジ、ピアス社)。 この溶液を凍結乾燥し、そして、水と合わせてから、分取用C18 RP-HPLCシステム(５％〜95％アセトニトリルを含む水を用いて20分間)を用いて精製をした。 HPLC精製の後に回収した各画分の純度を決定するために、CEを利用した。 90％を超える純度を示す画分を合わせ、そして、凍結乾燥を行ったところ、白色固形物の産物が得られた(55mg、23％)。 1H NMR (300MHz、D2O) δ: 8.25 (s、1H、トリアゾール)、6.20 (d、1H、J1,2 = 6.0、H-1I)、5.65 (d、1H、H-1II)、5.04-4.94 (m、3H、H-3I、H-3II、H-2I)、4.80 (s、2H、CH2)、4.73 (m、1H、H-2II)、4.58 (dd、1H、H-4II)、4.49-4.23 (m、7H、H-4I、H-5I、H-5II、4 x H-6)、3.57 (m、1H、CHO)、2.09-0.56 (m、46H).
実施例22：２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１,２,３,６-テトラ-O-ベンゾイル-Ｄ-グルコピラノース(９８)
マルトース(2.0ｇ、5.84mmol)を、０℃で、ドライピリジン(40ml)に溶解した。 DMAP(触媒)を加えた。 塩化ベンゾイル(2.5当量、14.6mmol、16.4ｇ、13.6ml)を滴下して加え、そして、この溶液を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、氷水とDCMの混合物に対して注いだ。 有機層を、NaHCO３(飽和)(×７)、ブライン、H２SO４(５％)(×２)、それに、ブラインで洗浄をした。 この溶液を乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させた。 この産物を、短いシリカ栓に通して、残存する塩化ベンゾイルを除去し、そして、溶媒を蒸発させたところ、3.5ｇ(51％)の白色固形物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-グルコピラノシルトリクロロアセトイミダート(９９)
ペルベンゾアート98(0.5ｇ)を、ピリジン(５ml)に溶解した。 ジメチルアミン(3.5ml; 5.6Mを含むEtOH)を加えた。 この反応混合物を、室温で、１時間かけて攪拌をした。 トルエン(10ml)を加え、そして、この溶液を、ブライン、H２SO４(５％)(×２)、ブライン、NaHCO３(飽和)、および、ブラインで洗浄をした。 この溶液を乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製ヘミアセタールを、分子篩、炭酸カリウム(200mg)、および、炭酸セシウム(70mg)を含むドライDCMに合わせた。 この溶液を、０℃にまで冷却してから、トリクロロアセトニトリル(120μl)を加えた。 この混合物を、室温で、３時間かけて攪拌をした。 この混合物を濾過し、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜50％ EtOAc/ヘキサン)を用いて精製をしたところ、白色固形物の産物が得られ(336mg、二段階で66％)、このものは、さらに同定を行わなくとも、反応性を示した。
３’-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-アセチル-β-Ｄ-グルコピラノシド(１００)
トリクロロアセトイミダート99(336.2mg、280μmol)、コレスタノール(３当量、326mg)、および、分子篩を、アルゴンの存在下で、ドライDCMに合わせた。 この溶液を、15分かけて攪拌をしてから、TMSOTf(0.1M DCM溶液、0.33当量、924μl)を徐々に加えた。 30分後に、１当量のTMSOTf (2.77ml の0.1M DCM溶液)をさらに徐々に加え、そして、この溶液を、さらに40分かけて攪拌をした。 トリエチルアミン(200μl)を加え、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜15％ EtOAc/ヘキサン)で精製をしたが、出発物質であるコレスタノールの過剰量は、ほぼ溶出した。
よって、この混合物は、良好な分離を行うべく、脱ベンゾイル化、アセチル化、および、再精製がされた。 この化合物は、メタノール/THF(１:１)に合わせた。 11M NaOMeを含むメタノール(50μl)を加え、そして、この溶液は、室温で、５時間かけて攪拌をした。 この溶液を、Ｈ＋樹脂で中和し、濾過し、そして、溶媒を蒸発させた。 この粗製ポリオール産物を、ピリジン(５ml)および無水酢酸(５ml)に合わせた。 DMAP(触媒)を加え、そして、この溶液を、一晩かけて、室温で攪拌をした。 氷水に対してこの混合物を加え、そして、DCMを用いて抽出を行ってから、５％ H２SO４、それに、ブラインで洗浄をした。 この溶液を乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させてから、カラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜50％ EtOAc/ヘキサン)を用いて粗製試料を精製したところ、118mgの過アセチル化産物が、白色固形物として得られた(42％)。 1H NMR (300MHz、CDCl3) δ: 5.40 (d、1H、J1,2 = 4.1、H-1II)、5.35 (dd、1H、J3,2 = 10.6、J3,4 = 9.5、H-3II)、5.23 (dd、1H、J3,2= 9.0、J3,4 = 9.0、H-3I)、5.03 (dd、1H、J4,3= 10.0、J4,5 = 10.0、H-4II)、4.83 (dd、1H、J2,1= 3.9、J2,3 = 10.3、H-2II)、4.76 (dd、1H、J2,1= 8.0、J2,3 = 9.3、H-2I)、4.60 (d、1H、J1,2= 8.0、H-1I)、4.42 (dd、1H、H-6I)、4.26-4.20 (m、2H、H-6I、H-6II)、4.04-3.92 (m、3H、H-4I、H-5II、H-6II)、3.64 (ddd、1H、H-5I)、3.53 (m、1H、CHO)、2.12 (s、3H、OAc)、2.09 (s、3H、OAc)、2.03 (s、3H、OAc)、2.01 (s、3H、OAc)、2.00 (s、3H、OAc)、1.99 (s、3H、OAc)、1.98 (s、3H、OAc)、1.96-0.52 (m、31H)、0.87 (d、3H、J = 6.4、CH3)、0.86 (d、3H、J = 1.5、CH3)、0.83 (d、3H、J = 1.3、CH3)、0.76 (s、3H、CH3)、0.63 (s、3H、CH3).
３'-コレスタニルα-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(１０１)
配糖体100(118mg)を、THF/メタノール(１:１)に溶解した。 NaOMeを含むメタノール(11M、30ul)を加え、そして、この溶液を、室温で、３時間かけて攪拌をした。 この溶液を、Ｈ＋樹脂を用いて中和し、濾過し、そして、溶媒を蒸発させたところ、定量値の灰色がかった白色固形物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３'-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(１０２)
ポリオール101(99.5mg、140μmol)を、DMF(0.02M、7ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／OH、2.9mmol、467mg)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、5M NaOH(2.1当量/SO３.ピリジン、1.23ml)を用いて中和をした。 この混合物を、水の入った大きな丸底フラスコに移し、蒸発を行い、そして、精製水(５リットル、12時間ごとに水を交換した)に対して、24時間をかけて、透析を行った(2000MWCO カートリッジ、ピアス社)。 この溶液を凍結乾燥し、そして、水と合わせてから、分取用C18 RP-HPLCシステム(５％〜95％アセトニトリルを含む水を用いて20分間)を用いて精製をした。 HPLC精製の後に回収した各画分の純度を決定するために、CEを利用した。 90％を超える純度を示す画分を合わせ、そして、凍結乾燥を行ったところ、白色固形物の産物が得られた(27mg、14％)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ: 5.59 (d、1H、J1,2 = 3.4、H-1II)、5.09 (d、1H、J1,2 = 5.0、H-1I)、4.89 (m、1H、H-3II)、4.73 (m、1H、H-3I)、4.61 (dd、1H、H-2II)、4.53-4.42 (m、3H、H-2I、H-4II、H-6II)、4.37-4.14 (m、6H、H-4I、H-5II、H-5I、3 x H-6)、3.85 (m、1H、CHO)、2.08-0.64 (m、46H).
実施例23：２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１,２,３,６-テトラ-O-ベンゾイル-Ｄ-グルコピラノース(１０３)
セロビオース(1.0ｇ、2.92mmol)を、０℃で、ドライピリジン(20ml)に溶解した。 DMAP(触媒)を加えた。 塩化ベンゾイル(2.5当量、58mmol、6.8ml)を滴下して加え、そして、この溶液を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、氷水とDCMの混合物に対して注いだ。 有機層を、NaHCO３(飽和)(×７)、ブライン、H２SO４(５％)(×２)、それに、ブラインで洗浄をした。 この溶液を乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させた。 この産物を、短いシリカ栓に通して、残存する塩化ベンゾイルを除去し、そして、溶媒を蒸発させたところ、740mg(22％)の白色固形物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-グルコピラノシル トリクロロアセトイミダート(１０４)
ペルベンゾアート103(740mg、0.63mmol)を、ピリジン(５ml)に溶解した。 この溶液を０℃にまで冷却してから、ジメチルアミン(3.1ml; 5.6Mを含むEtOH)を加えた。 この反応混合物を、室温で、２時間かけて攪拌をした。 トルエン(20ml)を加え、そして、この溶液を、ブライン、H２SO４(５％)(×２)、ブライン、NaHCO３(飽和)、および、ブラインで洗浄をした。 この溶液を乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製ヘミアセタールを、分子篩、および、炭酸カリウム(1.17 g)を含むドライDCM(５ml)に合わせた。 この溶液を、０℃にまで冷却してから、トリクロロアセトニトリル(782μl)を加えた。 この混合物を、室温で、２時間かけて攪拌をした。 この混合物を濾過し、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:トルエン:EtOAc(5:1)〜100％EtOAc)を用いて精製をしたところ、白色泡沫の産物が得られ(566mg、二段階で75％)、このものは、さらに同定を行わなくとも、反応性を示した。
３'-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド(１０５)
トリクロロアセトイミダート104(250mg、210μmol)、コレスタノール(２当量、163mg)、および、分子篩を、アルゴンの存在下で、ドライDCMに合わせた。 この溶液を、30分かけて、０℃で、攪拌をしてから、TMSOTf(0.4M DCM溶液、0.5当量、260μl)を徐々に加えた。 30分後に、１当量のTMSOTf(130μlの0.4M DCM溶液)をさらに徐々に加え、そして、この溶液を、さらに20分かけて攪拌をした。 トリエチルアミン(15μl)を加え、そして、この溶液を濾過してから、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:トルエン:EtOAc、10:1〜5:1)で精製をしたところ、208mgの白色固形物の産物が得られた(69％)。 1H nmr (300MHz、CDCl3) δ: 7.99-7.16 (m、35H、Ar)、5.73 (m、2H、H-3I、H-3II)、5.51 (dd、1H、J2,1= 7.9、J2,3 = 9.8、H-2II)、5.37 (m、2H、H-4II、H-2I)、4.93 (d、1H、J1,2 = 7.9、H-1II)、4.76 (d、1H、J1,2 = 7.9、H-1I)、4.59 (dd、1H、H-6)、4.45 (dd、1H、H-6)、4.19 (dd、1H、J4,3 = 9.5、J4,5 = 9.5、H-4I)、4.07 (dd、1H、H-6)、3.84-3.79 (m、2H、2 x H-5)、3.72 (dd、1H、H-6)、3.46 (m、1H、CHO)、1.95-0.45 (m、31H)、0.88 (d、3H、J = 7.3、CH3)、0.86 (d、3H、J = 1.4、CH3)、0.84 (d、3H、J = 1.4、CH3)、0.62 (s、3H、CH3)、0.60 (s、3H、CH3).
３'-コレスタニルβ-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(１０６)
配糖体105(152mg)を、THF/メタノール(１:１)に溶解した。 NaOMeを含むメタノール(11M、30ul)を加え、そして、この溶液を、室温で、24時間かけて攪拌をした。 この溶液を、Ｈ＋樹脂で中和し、濾過し、そして、溶媒を蒸発させたところ、23mg(30％)の灰色がかった白色固形物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３'-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(１０７)
ポリオール106(23mg、32μmol)を、DMF(0.02M、1.6ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／OH、672μmol、107mg)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、5M NaOH(2.1当量/SO３.ピリジン、0.282ml)を用いて中和をした。 この混合物を、水の入った大きな丸底フラスコに移し、蒸発を行い、そして、精製水(５リットル、12時間ごとに水を交換した)に対して、48時間をかけて、透析を行った(2000MWCO カートリッジ、ピアス社)。 この溶液を凍結乾燥し、そして、水と合わせてから、分取用C18 RP-HPLCシステム(５％〜95％アセトニトリルを含む水を用いて20分間)を用いて精製をした。 HPLC精製の後に回収した各画分の純度を決定するために、CEを利用した。 90％を超える純度を示す画分を合わせ、そして、凍結乾燥を行ったところ、白色固形物の産物が得られた(11.6mg、25％)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ: 5.06 (d、1H、J1,2 = 6.3、H-1II)、4.86 (d、1H、J1,2 = 6.3、H-1I)、4.72-4.66 (m、2H、H-3I、H-3II)、4.57-4.48 (m、2H、H-4II、H-6)、4.40-4.35 (m、3H、H-2I、H-2II、H-6)、4.30 (dd、1H、H-6)、4.24-4.20 (m、2H、H-4I、H-6)、4.08 (m、2H、H-5I、H-5II)、3.62 (m、1H、CHO)、2.00-0.67 (m、31H)、0.93 (d、3H、CH3)、0.87 (d、3H、CH3)、0.86 (d、3H、CH3)、0.83 (s、3H、CH3)、0.68 (s、3H、CH3).
実施例24：２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-１,２,３,６-テトラ-O-ベンゾイル-Ｄ-グルコピラノース(１０８)
ラクトース(1.0ｇ、2.92mmol)を、０℃で、ドライピリジン(20ml)に溶解した。 DMAP(触媒)を加えた。 塩化ベンゾイル(2.5当量、58mmol、6.8ml)を滴下して加え、そして、この溶液を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、氷水とDCMの混合物に対して注いだ。 有機層を、NaHCO３(飽和)(×７)、ブライン、H２SO４(５％)(×２)、それに、ブラインで洗浄をした。 この溶液を乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させた。
この産物を、短いシリカ栓に通して、残存する塩化ベンゾイルを除去し、そして、溶媒を蒸発させたところ、3.67ｇ(定量的)の白色固形物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-グルコピラノシルトリクロロアセトイミダート(１０９)
ペルベンゾアート108(500mg、0.43mmol)を、ピリジン(3.5ml)に溶解した。 この溶液を０℃にまで冷却してから、ジメチルアミン(2.1ml; 5.6Mを含むEtOH)を加えた。 この反応混合物を、室温で、２時間かけて攪拌をした。 トルエン(20ml)を加え、そして、この溶液を、ブライン、H２SO４(５％)(×２)、ブライン、NaHCO３(飽和)、および、ブラインで洗浄をした。 この溶液を乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製ヘミアセタールを、分子篩、および、炭酸カリウム(871mg)を含むドライDCM(５ml)に合わせた。 この溶液を、０℃にまで冷却してから、トリクロロアセトニトリル(582μl)を加えた。 この混合物を、室温で、２時間かけて攪拌をした。 この混合物を濾過し、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:トルエン:EtOAc(5:1)〜100％EtOAc)を用いて精製をしたところ、白色泡沫の産物が得られ(152mg、二段階で29％)、このものは、さらに同定を行わなくとも、反応性を示した。
３'-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド(１１０)
トリクロロアセトイミダート109(250mg、210μmol)、コレスタノール(２当量、163mg)、および、分子篩を、アルゴンの存在下で、ドライDCMに合わせた。 この溶液を、30分かけて、０℃で、攪拌をしてから、TMSOTf(0.4M DCM溶液、0.5当量、260μl)を徐々に加えた。 30分後に、１当量のTMSOTf(130μl の0.4M DCM溶液)をさらに徐々に加え、そして、この溶液を、さらに20分かけて攪拌をした。 トリエチルアミン(12μl)を加え、そして、この溶液を濾過してから、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:トルエン:EtOAc、15:1〜7:1)で精製をしたところ、237mgの白色固形物の産物が得られた(78％)。 1H nmr (400MHz、CDCl3) δ: 8.02-7.11 (m、35H、Ar)、5.77 (dd、1H、J3,2= 9.6、J3,4 = 9.6、H-3I)、5.74-5.69 (m、2H、H-2II、H-4II)、5.43-5.35 (m、2H、H-2I、H-3II)、4.86 (d、1H、J1,2= 7.9、H-1II)、4.78 (d、1H、J1,2 = 7.9、H-1I)、4.57 (dd、1H、H-6I)、4.47 (dd、1H、H-6I)、4.20 (dd、1H、J4,3= 9.6、J4,5 = 9.6、H-4I)、3.89 (ddd、1H、H-5II)、3.83 (ddd、1H、H-5I)、3.75 (dd、1H、H-6II)、3.65 (dd、1H、H-6II)、3.49 (m、1H、CHO)、1.94-0.47 (m、31H)、0.88 (d、3H、J = 6.5、CH3)、0.86 (d、3H、J = 1.7、CH3)、0.84 (d、3H、J = 1.9、CH3)、0.63 (s、3H、CH3)、0.60 (s、3H、CH3).
３'-コレスタニル β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(１１１)
配糖体110(231mg)を、THF/メタノール(１:１)に溶解した。 NaOMeを含むメタノール(11M、150ul)を加え、そして、この溶液を、室温で、24時間かけて攪拌をした。 この溶液を、Ｈ＋樹脂で中和し、濾過し、そして、溶媒を蒸発させたところ、61mg(54％)の白色固形物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３'-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(１１２)
ポリオール111(30mg、42μmol)を、DMF(0.02M、2.1ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／OH、882μmol、140mg)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、5M NaOH(2.5当量/SO３.ピリジン、0.442ml)を用いて中和をした。 この混合物を、水の入った大きな丸底フラスコに移し、蒸発を行い、そして、精製水(５リットル、12時間ごとに水を交換した)に対して、48時間をかけて、透析を行った(2000MWCO カートリッジ、ピアス社)。 この溶液を凍結乾燥し、そして、水と合わせてから、分取用C18 RP-HPLCシステム(５％〜95％アセトニトリルを含む水を用いて20分間)を用いて精製をした。 HPLC精製の後に回収した各画分の純度を決定するために、CEを利用した。 90％を超える純度を示す画分を合わせ、そして、凍結乾燥を行ったところ、白色固形物の産物が得られた(13mg、22％)。 1H NMR (300MHz、D2O) δ: 5.15 (d、1H、H-1)、4.70 (d、1H、H-1)、4.55-3.88 (m、12H)、3.50 (m、1H、CHO)、1.88-0.44 (m、46H).
実施例25：１,２,３,４-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノース(１１３)
６-O-トリチル-１,２,３,４-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノース(5ｇ、6.0mmol)を、メタノールに溶解した。 H２SO４(濃)(150μl)を、注意しながら加え、そして、この溶液を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、氷水(300ml)に注ぎ、そして、EtOAc(80ml)を用いて抽出をした。 有機層を分離し、そして、ブライン(80ml)、それに、NaHCO３(飽和)で洗浄をした。 この溶液を乾燥し(Na２SO４)、濾過し、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２;Hex:EtOAc、500:50〜200:200)を用いて精製したところ、1.79ｇの白色固形物の産物が得られた(50％)。 1H NMR (300MHz、CDCl3) δ: 8.20-8.12 (m、4H、Ar)、8.02-7.98 (m、2H、Ar)、7.87-7.84 (m、2H、Ar)、7.70-7.26 (m、27H、Ar)、6.63 (d、1H、J1,2= 2.1、H-1)、6.12 (dd、1H、J3,2 = 3.3、J3,4 = 10.2、H-3)、6.02 (dd、1H、J4,3= 10.0、J4,5 = 10.0、H-4)、5.89 (dd、1H、J2,1= 1.8、J2,3 = 3.1、H-2)、4.25 (ddd、1H、H-5)、3.90-3.76 (m、2H、H-6).
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-グルコピラノシルトリクロロアセトイミダート(１１４)
マルトトリオースペルベンゾアート(400mg)を、０℃で、THF(３ml)に溶解した。 NH３を含むメタノールの飽和溶液(６ml)を加え、そして、この溶液を、０℃で、４時間かけて攪拌をした。 この溶液を、DCMで希釈し、冷やした0.5M HClで洗浄をし、そして、ブラインで洗浄をしてから、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:10-50％ EtOAc/ヘキサン)を用いて精製したところ、211mgの純産物のヘミアセタールが得られ、このものを、分子篩、炭酸カリウム(129mg)、および、炭酸セシウム(45mg)を含むドライDCMと合わせた。 この混合物を、０℃で、攪拌をしてから、トリクロロアセトニトリル(93μl)を加えた。 この混合物を、室温にまで加温し、そして、５時間かけて攪拌をした。 この溶液を濾過し、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜50％ EtOAC/ヘキサン)を用いて精製したところ、149.2mgの白色固形物の産物が得られ(36％、二段階)、このものは、さらに同定を行わなくとも、反応性を示した。
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→６)-１,２,３,４-テトラ-O-ベンゾイル-Ｄ-マンノピラノース(１１５)
トリクロロアセトイミダート114(279μmol、435mg)、１,２,３,４-テトラ-O-ベンゾイルマンノピラノース113(1.2当量、200mg、335μmol)、および、分子篩を、DCMに合わせ、そして、０℃で、30分かけて攪拌をしてから、TMSOTf(1.1当量、68.2mg、56μlを含む600μlのDCM)を、徐々に滴下して加えた。 この混合物を、０℃で、90分かけて攪拌をしてから、トリエチルアミン(200μl)を用いて中和を行い、濾過を行い、そして、溶媒を蒸発させたところ、粗製産物が得られ、このものを、カラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜50％ EtOAc/ヘキサン)を用いて精製をしたところ、312.8mgの白色固形物の産物が得られ(53％)、このものは、さらに同定を行わなくとも、反応性を示した。
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→６)-2,3,4-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-マンノピラノシルトリクロロアセトイミダート(１１６)
ペルベンゾアート115(312.8mg)を、ピリジン(4.5ml)に溶解した。 ジメチルアミン(3ml；5.6Mを含むEtOH)を加えた。 この反応混合物を、室温で、２時間かけて攪拌をした。
DCM(10ml)を加え、そして、この溶液を、ブライン、H２SO４(５％)(×２)、ブライン、そして、NaHCO３(飽和)で洗浄をした。 この溶液を乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製ヘミアセタールを、分子篩、炭酸カリウム(600mg)、および、炭酸セシウム(100mg)を含むドライDCMと合わせた。 この溶液を０℃にまで冷却してから、トリクロロアセトニトリル(200μl)を加えた。 この混合物を、室温で、４時間かけて攪拌をした。 この混合物を濾過し、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜60％ EtOAc/ヘキサン)を用いて精製をしたところ、白色固形物の産物が得られ(153.9mg、二段階で48％)、このものは、さらに同定を行わなくとも、反応性を示した。
３'-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→６)-２,３,４-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-マンノピラノシド (１１７)
トリクロロアセトイミダート116(153.9mg、71.1μmol)、コレスタノール(３当量、83mg)、および、分子篩を、アルゴン存在下で、ドライDCMと合わせた。 この溶液を、０℃で、15分かけて攪拌をしてから、TMSOTf(1.1当量、17.4μlを含む200ulのDCM)を徐々に加えた。 この溶液を、０℃で、90分かけて攪拌をした。 トリエチルアミン(20μl)を加え、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２：ヘキサン〜40％ EtOAc/ヘキサン；トルエンを用いて導入したもの)によって精製をしたところ、71.4mgの白色固形物の産物が得られた(42％)。 1H NMR (300MHz、CDCl3) δ: 8.00-6.94 (m、65H、Ar)、5.94 (dd、1H、J3,2= 9.7、J3,4 = 9.7、H-3IV)、5.76 (dd、1H、J3,2= 10.0、J3,4 = 7.9、H-3III)、5.68 (dd、1H、J3,2= 3.3、J3,4 = 10.0、H-3I)、5.59 (d、1H、J1,2= 3.8、H-1IV)、5.57-5.49 (m、3H、H-3II、H-4IV、H-4I)、5.42 (d、1H、J1,2= 3.8、H-1III)、5.35 (dd、1H、J2,1 = 1.8、J2,3 = 3.3、H-2I)、5.16 (dd、1H、J2,1= 7.4、J2,3 = 9.5、H-2II)、5.12 (dd、1H、J2,1= 3.8、J2,3 = 10.5、H-2IV)、4.93 (dd、1H、J2,1= 3.8、J2,3 = 10.0、H-2III)、4.76 (dd、1H、H-6III)、4.73 (d、1H、J1,2= 1.8、H-1I)、4.71 (d、1H、J1,2 = 7.7、H-1II)、4.53 (dd、1H、H-6II)、4.48-4.41 (m、2H、H-6II、H-6III)、4.32-4.16 (m、6H、H-5IV、H-5II、H-5I、H-4II、H-4III、H-6IV)、4.11-4.03 (m、2H、H-6I、H-6IV)、3.88 (ddd、1H、H-5III)、3.60 (dd、1H、H-6I)、3.23 (m、1H、CHO)、1.87-0.38 (m、31H)、0.77 (d、3H、J = 6.4、CH3)、0.74 (d、3H、J = 1.3、CH3)、0.72 (d、3H、J = 1.5、CH3)、0.61 (s、3H、CH3)、0.51 (s、3H、CH3).
３'-コレスタニル α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→６)-α-Ｄ-マンノピラノシド(１１８)
配糖体117(80mg)を、メタノール/THF(１:１)に溶解した。 NaOM(11Mの200ul)を加え、そして、この溶液を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 この混合物を、酸性樹脂で中和し、そして、この溶液を濾過してから、溶媒を蒸発させたところ、白色固形物が得られ、このものは、EtOAcを用いて粉砕され、そして、溶媒を移した(×３)。 固形物を、真空下で乾燥させたところ、定量値の白色固形物の産物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３'-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→６)-2,3,4-トリ-O-スルホ-α-Ｄ-マンノピラノシド、トリデカナトリウム塩(１１９)
ポリオール118(72.8mg、70.2μmol)を、DMF(0.02M、3.5ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／OH、2.7mmol、436mg)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、5M NaOH(2.1当量/SO３.ピリジン、1.15ml)を用いて中和をした。 この混合物を、水の入った大きな丸底フラスコに移し、蒸発を行い、そして、精製水(５リットル、12時間ごとに水を交換した)に対して、24時間をかけて、透析を行った(2000MWCO カートリッジ、ピアス社)。 この溶液を凍結乾燥し、そして、水と合わせてから、分取用C18 RP-HPLCシステム(５％〜95％アセトニトリルを含む水を用いて20分間)を用いて精製をした。 HPLC精製の後に回収した各画分の純度を決定するために、CEを利用した。 90％を超える純度を示す画分を合わせ、そして、凍結乾燥を行ったところ、白色固形物の産物が得られた(25mg、15％)。 1H NMR (300MHz、D2O) δ: 5.70 (d、1H、J1,2 = 3.5、H-1)、5.55 (d、1H、H-1)、5.36 (m、2H、H2 × H-1)、5.03-4.05 (m、24H)、3.88 (m、1H、CHO)、2.00-0.70 (m、31H)、0.94 (d、3H、J = 6.4、CH3)、0.89 (d、3H、J = 1.3、CH3)、0.86 (s、3H、CH3)、0.86 (d、3H、J = 1.3、CH3)、0.70 (s、3H、CH3).
実施例26：３-アジドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド(１２０)
トリクロロアセトイミダート114(２ｇ、1.3mmol)、３-アジドプロパノール(２当量、260mg)、および、分子篩を、DCM(10ml)と合わせ、そして、０℃にまで冷却した。 TMSOTf(1.1当量、318mg、260μl)を、滴下して(2.6mlのDCMを、30分ごとに、その１/３を滴下して)加えた。 この溶液を、90分かけて、０℃で攪拌をしてから、トリエチルアミン(300μl)を用いて中和し、濾過し、次いで、水で洗浄し、乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させたところ、粗製産物が得られた。 このものを、カラムクロマトグラフィー(SiO２:トルエン〜５％ EtOAc/トルエン、トルエンを用いて導入をしたもの)によって精製をしたところ、2.06ｇの透明な油状産物120が得られた(97％)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 8.18 (m、2H、Ar)、8.04 (m、2H、Ar)、7.95 (m、2H、Ar)、7.87 (m、2H、Ar)、7.84 (m、2H、Ar)、7.74-7.70 (m、4H、Ar)、7.61-7.10 (m、36H、Ar)、6.09 (t、1H、J3,2= 10.2、J3,4 = 10.2、H-3III)、5.92 (dd、1H、J3,2= 9.9、J3,4 = 8.2、H-3II)、5.75 (d、1H、J1,2= 3.8、H-1III)、5.70-5.64 (m、2H、H-3I,H-4III)、5.60 (d、1H、J1,2= 4.1、H-1II)、5.30-5.23 (m、2H、H-2III、H-2I)、5.08 (dd、1H、J2,1 = 3.8、J2,3 = 9.9、H-2II)、4.99 (dd、1H、H-6I)、4.75-4.59 (m、3H、H2 x H-6II,H-6I)、4.74 (d、1H、J1,2 = 7.5、H-1I)、4.48-4.36 (m、5H、H-5III、H-5II、H-4I、H-4II、H-6III)、4.23 (dd、1H、H-6III)、4.05 (ddd、1H、H-5I)、3.92 (m、1H、CH2O)、3.57 (m、1H、CH2O)、3.19 (m、2H、CH2N3)、1.74 (m、2H、CH2).
３-ステアラミドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル)-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド(１２１)
配糖体120(２ｇ、1.23mmol)を、THF(10ml)に溶解した。 トリフェニルホスフィン(３当量、966mg)を加え、そして、この混合物を、室温で、１時間かけて、アルゴンの存在下で攪拌をした。 水(30当量、665μl)を加え、そして、この溶液を、50℃で、4.5時間かけて攪拌をした。 溶媒を蒸発させてから、粗製アミンを、DCMと合わせた。 ステアロイルクロリド(３当量、1.18ｇ、1.25ml)を加え、次いで、トリエチルアミン(3.1当量、386mg、532μl)とこの溶液を、一晩かけて、室温で攪拌をした。 溶媒を蒸発させてから、粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:トルエン〜８:１トルエン: EtOAc、トルエンを用いて導入をしたもの)によって精製をしたところ、1.65ｇの透明な油状産物121が得られた(72％、二段階)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 8.16 (m、2H、Ar)、8.05 (m、2H、Ar)、7.95 (m、2H、Ar)、7.86 (m、2H、Ar)、7.82 (m、2H、Ar)、7.74-7.70 (m、4H、Ar)、7.63-7.10 (m、36H、Ar)、6.10 (t、1H、J3,2 = 10.2、J3,4 = 10.2、H-3III)、5.98-5.91 (m、2H、H-3II、NH)、5.76 (d、1H、J1,2 = 4.1、H-1III)、5.73-5.65 (m、2H、H-3I,H-4III)、5.61 (d、1H、J1,2= 4.1、H-1II)、5.29-5.20 (m、2H、H-2III、H-2I)、5.11-5.05 (m、2H、H-2II、H-6I)、4.79 (dd、1H、H-6II)、4.71 (d、1H、J1,2= 7.5、H-1I)、4.68-4.61 (m、2H、H-6II,H-6I)、4.49-4.38 (m、5H、H-5III、H-5II、H-4I、H-4II、H-6III)、4.23 (dd、1H、H-6III)、4.04 (ddd、1H、H-5I)、3.92 (m、1H、CH2O)、3.57 (m、1H、CH2O)、3.27 (m、1H、CH2N)、3.13 (m、1H、CH2N)、2.11 (t、2H、CH2CO)、1.72 (m、2H、CH2)、1.56 (m、2H、CH2)、1.30-1.24 (m、28H、14 × CH2)、0.88 (t、3H、CH3).
３-ステアラミドプロピル α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(１２２)
配糖体121(1.61ｇ、861μmol)を、メタノール/THF １:１(40ml)に溶解した。 NaOMe(１mlの6M溶液)を加え、そして、この溶液を、室温で、48時間かけて攪拌をした。 この混合物を、酸性樹脂で中和し、そして、この溶液を濾過してから、溶媒を蒸発させたところ、白色固形物が得られ、このものは、EtOAcを用いて粉砕され、そして、溶媒を移した(×３)。 固形物を、真空下で乾燥させたところ、651mgの白色固形物の産物(91％)が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３-ステアラミドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、デカナトリウム塩(１２３)
ポリオール122(200mg、242μmol)を、DMF(0.02M、12.1ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／OH、7.26mmol、1.16ｇ)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、5M NaOH(３当量/SO３.ピリジン、4.4ml)を用いて中和をした。 この混合物を、１時間、−20℃で冷却した。 上清を移して廃棄した。 沈殿物を、水の入った大きな丸底フラスコに移し、蒸発を行い、そして、精製水(１mlの1.7M NH４HCO３を含んだ５リットル)に対して、72時間をかけて、透析を行った(2000MWCO カートリッジ、ピアス社)。 この溶液を凍結乾燥したところ、黄色固形物の産物が得られた(177mg、40％)。 1H NMR (D2O、400MHz) d 5.69 (d、1H、J1,2 = 3.4、H-1)、5.59 (d、1H、J1,2 = 2.7、H-1)、4.99-4.92 (m、2H)、4.85-4.08 (m、17H)、4.01 (ddd、1H、CH2O)、3.75 (ddd、1H、CH2O)、3.32 (t、2H、J = 6.7、CH2N)、2.27 (t、2H、CH2CO)、1.87 (m、2H、CH2)、1.61 (m、2H、CH2)、1.37-1.29 (m、28H、CH2)、0.91 (t、3H、CH3).
実施例27：２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-Ｄ-グルコピラノシルトリクロロアセトイミダート(１２４)
マルトテトラオースペルベンゾアート66(12.4ｇ)を、０℃で、ピリジン(47ml)に溶解した。 ジメチルアミン(5.6Mを含むEtOH)(28.3ml)を加え、そして、この溶液を、室温で、２時間かけて攪拌をした。 この溶液を、氷冷した0.5M HClに対して注ぎ、次いで、得られた沈殿物を濾過し、そして、水で洗浄をしてから、乾燥を行った。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:５-70% EtOAc/ヘキサン)を用いて精製したところ、6.7ｇの純産物のヘミアセタールが得られ、このものを、分子篩と炭酸カリウム(6.6ｇ)を含むドライDCMと合わせた。 この混合物を、０℃で攪拌をしてから、トリクロロアセトニトリル (4.4ml)を加えた。 この混合物を、室温になるまで加温をし、そして、２時間かけて攪拌をした。 この溶液を濾過し、そして、溶媒を蒸発させた。 この粗製産物 (7.2ｇ、57％)は、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３-アジドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド(１２５)
トリクロロアセトイミダート124(1.476ｇ、0.682mmol)、３-アジドプロパノール(２当量、137mg)、および、分子篩を、DCM(10ml)と合わせ、そして、０℃にまで冷却した。 TMSOTf(0.5当量、62μlを含む850μlのDCM)を、滴下して加えた。 この溶液を、90分かけて、０℃で攪拌をしてから、トリエチルアミン(300μl)を用いて中和し、濾過し、次いで、水で洗浄し、乾燥し(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させたところ、粗製産物が得られた。 このものを、カラムクロマトグラフィー(SiO２:トルエン〜24:３ トルエン: EtOAc、トルエンを用いて導入をしたもの)によって精製をしたところ、660mgの白色固形物の産物が得られた(46％)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 8.25-7.05 (m、35H、Ar)、6.12 (dd、1H、J3,2= 9.9、J3,4 = 9.9、H-3IV)、6.00 (dd、1H、H-3)、5.87 (dd、1H、H-3)、5.76 (d、1H、J1,2= 3.7、H-1IV)、5.71-5.64 (m、3H、H-1、H-3I、H-4IV)、5.60 (d、1H、J1,2= 3.7、H-1)、5.29-5.23 (m、2H、H-2I、H-2IV)、5.14-5.05 (m、2H、2 × H-2)、5.01 (dd、1H、H-6)、4.85 (dd、1H、H-6)、4.76-4.69 (m、2H、2 × H-6)、4.75 (d、1H、J1,2 = 7.5、H-1I)、4.59 (m、2H、2 × H-6)、4.47-4.33 (m、7H、3 × H-4、3 × H-5、H-6)、4.19 (dd、1H、H-6)、4.05 (ddd、1H、H-5I)、3.91 (m、1H、CH2O)、3.57 (m、1H、CH2O)、3.19 (m、2H、CH2N)、1.74 (m、2H、CH2).
３-ステアラミドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド(１２６)
配糖体125(660mg、0.314mmol)を、ACN(21ml)に溶解した。 トリフェニルホスフィン(３当量、247mg)を加え、そして、この混合物を、室温で、１時間、アルゴン存在下で攪拌をした。 水(30当量、169μl)を加え、そして、この溶液を、50℃で、７時間かけて攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、そして、粗製アミンを、DCMと合わせた。 ステアロイルクロリド(３当量、317μl)を加えてから、トリエチルアミン(３当量、131μl)を加え、そして、この溶液を、３日間、室温で攪拌をした。 溶媒を蒸発させてから、粗製産物をカラムクロマトグラフィー (SiO２:トルエン〜15:３トルエン: EtOAc、トルエンを用いて導入をしたもの)を用いて精製したところ、403mgの透明な油状産物が得られた(55％、二段階)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 8.21-7.05 (m、35H、Ar)、6.09 (dd、1H、J3,2= 9.8、J3,4 = 9.8、H-3IV)、6.02 (t、1H、NH)、5.97 (dd、1H、H-3)、5.90 (dd、1H、H-6)、5.86 (dd、1H、H-3)、5.75 (d、1H、J1,2= 3.9、H-1IV)、5.71-5.63 (m、3H、H-1、H-3I、H-4IV)、5.59 (d、1H、J1,2= 3.9、H-1)、5.27-5.18 (m、2H、H-2I、H-2IV)、5.12-5.04 (m、3H、H-6I、2 × H-2)、4.72-4.66 (m、2H、2 × H-6)、4.70 (d、1H、J1,2 = 7.8、H-1I)、4.58 (m、2H、H2 × H-6)、4.45-4.31 (m、6H、3 × H-4、3 × H-5、H-6)、4.17 (dd、1H、H-6)、4.02 (ddd、1H、H-5I)、3.91 (m、1H、CH2O)、3.56 (m、1H、CH2O)、3.28 (m、1H、CH2N)、3.13 (m、1H、CH2N)、2.13 (m、2H、CH2CO)、1.76-1.58 (m、4H、CH2)、1.26-1.24 (m、28H、CH2)、0.88 (t、3H、CH3).
３-ステアラミドプロピル α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(１２７)
配糖体126(377mg、161μmol)を、メタノール/THF １:１(10ml)に溶解した。 NaOMe(60μlの11M溶液)を加え、そして、この溶液を、室温で、24時間かけて攪拌をした。 この混合物を、酸性樹脂で中和し、そして、この溶液を濾過してから、溶媒を蒸発させたところ、白色固形物が得られ、このものは、EtOAcを用いて粉砕され、そして、溶媒を移した(×３)。 固形物を、真空下で乾燥させたところ、159mg(定量的)の白色固形物の産物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
３-ステアラミドプロピル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、トリデカナトリウム塩(１２８)
ポリオール127(159mg、161μmol)を、DMF(0.02M、8.1ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／OH、6.3mmol、1.0ｇ)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、5M NaOH(３当量/SO３.ピリジン、3.8ml)を用いて中和をした。 この混合物を、１時間、−20℃で冷却した。 上清を移して廃棄した。 沈殿物を、水の入った大きな丸底フラスコに移し、蒸発を行い、そして、精製水(１mlの1.7M NH４HCO３を含んだ５リットル)に対して、72時間をかけて、透析を行った(2000MWCO カートリッジ、ピアス社)。 この溶液を凍結乾燥したところ、黄色固形物の産物が得られた(227mg、61％)。 1H NMR (D2O、400MHz) d 5.89 (d、1H、J1,2 = 3.4、H-1)、5.72 (d、1H、J1,2 = 2.7、H-1)、5.67 (d、1H、H-1)、5.06-4.09 (m、18H)、4.01 (ddd、1H、CH2O)、3.75 (ddd、1H、CH2O)、3.33 (t、2H、J = 6.1、CH2N)、2.28 (t、2H、J = 7.4、CH2CO)、1.87 (m、2H、CH2)、1.62 (m、2H、CH2)、1.37-1.29 (m、28H、CH2)、0.91 (t、3H、CH3).
実施例28：tert-ブチル ２-(コレスタン-３-イルオキシ)酢酸塩(１２９)
コレスタノール(0.662ｇ、1.703mmol)を、トルエン(13ml)に溶解した。 カリウムtert-ブトキシド(573mg、5.11mmol)の一部を加えた。 この混合物を、室温で、３時間かけて攪拌をした。 tert-ブチルブロモ酢酸(503μl、3.406mmol)を、滴下して加え、そして、この混合物を、一晩かけて、室温で攪拌をした。 トルエン(20ml)を加え、そして、この溶液を、ブライン(50ml)で洗浄をした。 この水相を、トルエン(30ml)で抽出をしてから、すべての有機層を合わし、乾燥をし(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させた。 この粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２;ヘキサン:EtOAc、200:１〜200:20)を用いて精製をしたところ、白色固形物の産物が得られた(0.65ｇ、76％の収率)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 3.98 (s、2H、CH2O)、3.30 (m、1H、CHO)、1.97-0.56 (m、31H)、1.46 (s、9H、CH3)、0.89 (d、3H、J = 6.1、CH3)、0.85 (d、3H、J = 2.0、CH3)、0.84 (d、3H、J = 1.4、CH3)、0.79 (s、3H、CH3)、0.64 (s、3H、CH3).
２-(コレスタン-３-イルオキシ)酢酸(１３０)
tert-ブチル ２-(コレスタン-３-イルオキシ)酢酸塩129(634mg、1.26mmol)を、DCM(４ml)と合わせてから、TFA(１ml)を加えた。 この溶液を、室温で、90分かけて攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、そして、残渣を短いシリカ栓(SiO２:DCM〜100:５ DCM:メタノール)を用いて精製してから、ヘキサンから再結晶を図ったところ、439mgの白色固形物の産物が得られた(78％)。 1H nmr (400MHz、CDCl3) δ: 4.25 (s、2H、CH2O)、3.37 (m、1H、CHO)、1.99-0.58 (m、31H)、0.89 (d、3H、J = 6.6、CH3)、0.85 (d、3H、J = 2.0、CH3)、0.84 (d、3H、J = 1.4、CH3)、0.80 (s、3H、CH3)、0.64 (s、3H、CH3).
２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシルイルチオシアネート(１３１)
臭化物84(1.8ｇ、1.12mmol)、KSCN(３当量、326mg)、分子篩、および、Bu４NI(触媒)を、ドライアセトニトリルと合わせ、そして、75℃で、一晩かけて攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、次いで、残渣をDCMと合わせ、NaHCO３(飽和)で洗浄をしてから、乾燥を行い(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させた。 粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２:ヘキサン〜35％ EtOAc/ヘキサン、トルエンを用いて導入をしたもの)を用いて精製をしたところ、1.15ｇの白色固形物の産物が得られた(65％)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 8.23-7.12 (m、50H、Ar)、6.16 (dd、1H、J3,2= 9.6、J3,4 = 9.6、H-3III)、5.96 (dd、1H、J3,2= 9.6、J3,4 = 8.2、H-3II)、5.81 (d、1H、J1,2= 4.1、H-1III)、5.75-5.68 (m、2H、H-3I、H-4III)、5.65 (d、1H、J1,2 = 4.1、H-1II)、5.40 (dd、1H、J2,1 = 8.2、J2,3 = 8.2、H-2I)、5.32 (dd、1H、J2,1= 4.1、J2,3 = 10.2、H-2III)、5.28 (d、1H、J1,2= 8.2、H-1I)、5.13 (dd、1H、J2,1 = 4.1、J2,3 = 10.2、H-2II)、5.00 (dd、1H、H-6I)、4.77 (dd、1H、H-6II)、4.72-4.65 (m、2H、H-6I、H-6II)、4.53-4.41 (m、5H、H-5II、H-5III、H-4I、H-4II、H-6III)、4.30 (dd、1H、H-6III)、4.13 (ddd、1H、H-5I).
２-(コレスタン-３-イルオキシ)アセタミド ２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド(１３２)
イルチオシアネート131(0.5ｇ、315μmol)、および、２-(コレスタン-３-イルオキシ)酢酸130(141mg、315μmol)を、トルエン(6.3ml)に溶解した。 トリエチルアミン(20μl)を加え、そして、この溶液を、室温で、４日間かけて攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、そして、残渣をカラムクロマトグラフィー(SiO２:トルエン〜10％ EtOAc/トルエン)を用いて精製をしたところ、358mgの白色固形物の産物が得られた(58％)。 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 8.23-7.09 (m、50H、Ar)、7.50 (d、1H、NH)、6.09 (dd、1H、J3,2= 10.2、J3,4 = 9.9、H-3III)、5.91 (dd、1H、J3,2= 9.9、J3,4 = 7.8、H-3II)、5.82 (dd、1H、J3,2= 9.5、J3,4 = 9.2、H-3I)、5.74 (d、1H、J1,2= 4.1、H-1III)、5.67 (dd、1H、J4,3 = 9.9、J4,5 = 9.9、H-4III)、5.60 (d、1H、J1,2= 4.1、H-1II)、5.51 (dd、1H、J1,2 = 9.5、J1,NH = 8.5、H-1I)、5.27 (dd、1H、J2,1= 4.1、J2,3 = 10.6、H-2III)、5.24 (dd、1H、J2,1= 9.5、J2,3 = 9.5、H-2I)、5.08 (dd、1H、J2,1= 4.1、J2,3 = 10.2、H-2II)、4.92 (dd、1H、H-6)、4.70-4.64 (m、2H、H2 × H-6)、4.56 (dd、1H、H-6)、4.46-4.31 (m、5H、H-5III、H-4I、H-4II、2 ×H-6)、4.22 (ddd、1H、H-5II)、4.15 (ddd、1H、H-5I)、3.95 (dd、1H、CH2O)、3.73 (dd、1H、CH2O)、3.11 (m、1H、CHO)、1.47-0.50 (31H)、0.90 (d、3H、J = 6.8、CH3)、0.86 (d、3H、J = 6.8、CH3)、0.86 (d、3H、J = 6.8、CH3)、0.77 (s、3H、CH3)、0.64 (s、3H、CH3).
２-(コレスタン-３-イルオキシ)アセタミド α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド(１３３)
アミド132(345mg、175μmol)を、メタノール/THF １:１(16ml)に溶解した。 NaOMe(500μlの6M溶液)を加え、そして、この溶液を、室温で、24時間かけて攪拌をした。 この混合物を、酸性樹脂で中和し、そして、この溶液を濾過してから、溶媒を蒸発させたところ、白色固形物が得られ、このものは、EtOAcを用いて粉砕され、そして、溶媒を移した(×３)。 固形物を、真空下で乾燥させたところ、124mgの白色固形物の産物(76％)が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
２-(コレスタン-３-イルオキシ)アセタミド ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、デカナトリウム塩(１３４)
ポリオール133(118mg、127μmol)を、DMF(0.04M、4.4ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／OH、5.3mmol、838mg)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、5M NaOH(３当量/SO３.ピリジン)を用いて中和をした。 この混合物を、１時間、−20℃で冷却した。 上清を移して廃棄した。 沈殿物を、水の入った大きな丸底フラスコに移し、蒸発を行い、そして、精製水(１mlの1.7M NH４HCO３を含んだ５リットル)に対して、72時間をかけて、透析を行った(2000MWCO カートリッジ、ピアス社)。 この溶液を凍結乾燥したところ、黄色固形物の産物が得られた(195mg、79％)。 1H NMR (D2O、400MHz) d: 5.67 (d、1H、J1,2 = 2.9、H-1)、5.57 (d、1H、J1,2 = 1.2、H-1)、5.35 (d、1H、J1,2= 7.3、H-1I)、5.06-4.06 (m、20H)、3.48 (m、1H、CHO)、2.07-0.68 (m、46H).
実施例29：３-(コレスタン-３-イルオキシ)プロパンニトリル(１３５)
コレスタノール(1.554ｇ、3.998mmol)を、DCM(６ml)に溶解した。 この溶液に対して、KOH (40% w/w in water、1.2ml)、そして、アクリロニトリル(0.8ml)、それに、18-クラウン-６(104mg)を加えた。 この混合物を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 有機層を、ブラインで洗浄をし、そして、乾燥(Na２SO４)をしてから、溶媒を蒸発させた。 残渣を、熱メタノールから再結晶化させたところ、無色の結晶質固体が純産物として得られた(1.42ｇ、80％の収率). 1H NMR (400MHz、CDCl3) δ: 3.68 (t、2H、CH2O)、3.29 (m、1H、CHO)、2.57 (t、2H、CH2CN)、1.98-0.58 (m、31H)、0.89 (d、3H、J = 6.6、CH3)、0.87 (d、3H、J = 1.8、CH3)、0.85 (d、3H、J = 2.0、CH3)、0.79 (s、3H、CH3)、0.64 (s、3H、CH3).
１-アミノ-３-(コレスタン-３-イルオキシ)-プロパン(１３６)
３-(コレスタン-３-イルオキシ)プロパンニトリル135(442mg、1mmol)を、トルエン(１ml)、クロロホルム(1.5ml)、EtOH(１ml)、および、濃HCl(200μl)の混合物に対して合わせた。 酸化白金水和物(46mg)を加えた。 この混合物を、水素の存在下(80 psi)、室温で、48時間かけて攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、そして、残渣を、DCM(40ml)およびNaHCO３(飽和)(40ml)と合わせた。 有機層を分離し、NaHCO３(飽和)(30ml)に続いてブライン(20ml)で洗浄をしてから、乾燥をし(Na２SO４)、そして、溶媒を蒸発させたところ、白色泡沫が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
１-[(コレスタン-３-イルオキシ)プロピル]-３-[２,３,４,６-テトラ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-ベンゾイル-β-Ｄ-グルコピラノシド]チオ尿素(１３７)
３-(コレスタン-３-イルオキシ)プロパン-１-アミン136(0.5mmol)を、トルエン(３ml)と合わせた。 イルチオシアネート131(403mg、0.254mmol)を加えた。 この溶液を、室温で、３日間かけて攪拌をした。 溶媒を蒸発させ、そして、粗製産物を、カラムクロマトグラフィー(SiO２;トルエン〜180:30 トルエン:EtOAc)を用いて精製をしたところ、白色固形物として純産物が得られた(355mg、35％)。 1H nmr (400MHz、CDCl3) δ: 8.23-7.09 (m、50H、Ar)、6.90 (dd、1H、J = 4.9、J = 4.9、NH)、6.09 (dd、1H、J3,2 = 10.2、J3,4 = 9.8、H-3III)、5.89 (m、2H、H-3II、H-3I)、5.74 (d、1H、J1,2= 3.9、H-1III)、5.67 (dd、1H、J4,3 = 9.8、J4,5 = 9.8、H-4III)、5.58 (d、1H、J1,2= 3.9、H-1II)、5.28 (dd、1H、J2,1 = 3.9、J2,3 = 10.7、H-2III)、5.19 (dd、1H、J2,1= 9.3、J2,3 = 9.3、H-2I)、5.09 (dd、1H、J2,1= 3.9、J2,3 = 10.2、H-2II)、4.92 (dd、1H、H-6)、4.70 (dd、1H、H-6)、4.67 (dd、1H、H-6)、4.58 (dd、1H、H-6)、4.46-4.34 (m、5H)、4.27-4.18 (m、2H)、3.50 (dd、2H、CH2)、3.18 (m、1H、CHO)、1.98-0.56 (35H)、0.90 (d、3H、J = 6.8、CH3)、0.87 (d、3H、J = 6.8、CH3)、0.86 (d、3H、J = 6.8、CH3)、0.80 (s、3H、CH3)、0.64 (s、3H、CH3).
１-[(コレスタン-３-イルオキシ)プロピル]-３-[α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-β-Ｄ-グルコピラノシド]チオ尿素(１３８)
チオ尿素137(345mg、171μmol)を、メタノール/THF １:１(16ml)に溶解した。 NaOMe(500μlの6M溶液)を加え、そして、この溶液を、室温で、24時間かけて攪拌をした。 この混合物を、酸性樹脂で中和し、そして、この溶液を濾過してから、溶媒を蒸発させたところ、白色固形物が得られ、このものは、EtOAcを用いて粉砕され、そして、溶媒を移した(×３)。 固形物を、真空下で乾燥させたところ、169mg(定量的)の白色固形物の産物が得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
１-[(コレスタン-３-イルオキシ)プロピル]-３-[２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド]チオ尿素、デカナトリウム塩(１３９)
ポリオール138(169mg、171μmol)を、DMF(0.04M、4.4ml)に溶解した。 SO３.ピリジン(３当量／OH、5.13mmol、816mg)を加え、そして、この溶液を、60℃で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、5M NaOH(３当量/SO３.ピリジン、1.15ml)を用いて中和をした。 この混合物を、１時間、−20℃で冷却した。 上清を移して廃棄した。 沈殿物を、水の入った大きな丸底フラスコに移し、蒸発を行い、そして、精製水(１mlの1.7M NH４HCO３を含んだ５リットル)に対して、72時間をかけて、透析を行った(2000MWCO カートリッジ、ピアス社)。 この溶液を凍結乾燥し、そして、水と合わせてから、分取用C18 RP-HPLCシステム(５％〜95％アセトニトリルを含む水を用いて20分間)を用いて精製をした。 HPLC精製の後に回収した各画分の純度を決定するために、CEを利用した。 90％を超える純度を示す画分を合わせ、そして、凍結乾燥を行ったところ、白色固形物の産物が得られた(７mg、２％)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ: 6.00-5.56 (m、3H、3 × H-1)、4.98-3.14 (m、21H)、2.04-0.72 (m、50H).
実施例30：３'-コレスタニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-O-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-((１-ピリジニウム-１-イル)-２,３,５,６-テトラ-O-スルホ-Ｄ-グルコシド、トリデカナトリウム塩(１４０)
ポリオール64(3.552)を、ドライDMF(46ml)に溶解し、次いで、改めて洗浄を行い、そして、ドライSO３ピリジン(21.24ｇ)を加え、そして、この混合物を、60℃で、16時間かけて攪拌をした。 この反応混合物を、10分かけて０℃にまで冷却し、そして、０℃で、氷冷水性NaOH溶液(５M、54ml)の一部を(〜pH12になるまで)加えて中和をした。 懸濁液を、０℃で、15分かけて攪拌し、水(10ml)で希釈し、そして、40℃で、真空下で濃縮をした。 淡黄色の粉末が得られ、このものを、水(10ml)に溶解したところ、pH 11.5の溶液が得られた。 この溶液に対して、NaOH(５M、５滴)の水性溶液を加えることでpHを12.5に調整し、４×スライド-α-ライザー(登録商標)カセット(2000MWCO、4-12ml)を用いて、水(４リットル)に対して、室温で、16時間かけて透析を行った。 24時間ごとに、水(４リットル)の交換を行うと共に、NH４HCO３(３M、0.6ml)の水性溶液を、その水に加えて、水のpHを〜6.0-6.5に調整することで、この透析を、０℃で、その水に対して、３日間かけて継続した。 そして、脱塩した溶液を凍結乾燥したところ、主に65と140の混合物が得られ、このものを、分取用C18 RP-HPLCシステム(５％〜30％アセトニトリルを含む水を用いて20分間)を用いて精製をした。 HPLC精製の後に回収した各画分の純度を決定するために、CEを利用した。 90％を超える純度を示す画分を合わせ、そして、凍結乾燥を行ったところ、白色固形物の産物が得られた(30mg、約１ｇの粗製物質からの精製物)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ: 9.09 (m、2H、Ar)、8.39 (m、1H、Ar)、7.93 (m、2H、Ar)、6.40 (d、1H、H-1I)、5.56 (d、1H、J1,2 = 3.4、H-1II)、5.54 (d、1H、J1,2 = 2.3、H-1III)、5.45 (d、1H、J1,2 = 3.3、H-1IV)、5.00 (ddd、1H、H-5I)、4.86 (dd、1H、H-3II)、4.79 (dd、1H、H-3III)、4.77 (dd、1H、H-2I)、4.77 (dd、1H、H-4I)、4.64 (dd、1H、H-2III)、4.58 (dd、1H、H-3IV)、4.49 (dd、1H、H-3I)、4.40 (m、1H、H-6I)、4.32 (m、1H、H-6I)、4.31 (dd、1H、H-4IV)、4.29 (dd、1H、H-2II)、4.29 (dd、1H、H-2IV)、4.20-4.10 (m、6H、H6 x H-6)、4.13 (ddd、1H、H-5II)、4.12 (dd、1H、H-4II)、4.10 (dd、1H、H-4III)、4.07 (ddd、1H、H-5III)、3.81 (ddd、1H、H-5IV)、2.00-0.67 (m、31H)、0.93 (d、3H、CH3)、0.87 (d、3H、CH3)、0.86 (d、3H、CH3)、0.83 (s、3H、CH3)、0.68 (s、3H、CH3).
実施例31：８-ペンタデカニル ２,３,４,６-テトラ-O-アセチル-Ｄ-グルコピラノシド (１４１)
Ｄ-グルコース過酢酸(250mg、640μmol)を含むDCE(１ml)の溶液に対して、８-ペンタデカノール(220mg、960μmol)を加えた。 BF３.O(Et)２(134ml、1.1mmol)を加え、そして、この混合物を、室温で、一晩かけて攪拌をしてから、短いシリカ栓に対して注ぎ、そして、EtOAcを用いて溶出をした。 溶媒を蒸発させてから、粗製物質をカラムクロマトグラフィー(SiO２、DCMを用いて導入したもの、DCM(100ml)に続いて20％ EtOAc/ヘキサン〜35％ EtOAc/ヘキサンを用いて溶出した)によって精製をしたところ、配糖体141が、白色固形物として得られた(179mg、50％)。 1H NMR (CDCl3、400MHz) δ: 5.19 (dd、1H、J2,3= 9.5、J3,4 = 0.0、H-3)、5.06 (dd、1H、J4,5= 9.7、H-4)、4.96 (dd、1H、J1,2 = 8.0、J2,3 = 9.6、H-2)、4.52 (d、1H、H-1)、4.21 (dd、1H、J5,6b= 5.2、J6a,6b = 12.1、H-6b)、4.12 (dd、1H、J5,6a= 2.6、H-6a)、3.66 (ddd、1H、J4,5 = 10.0、H-5)、3.53 (m、1H、CH2CHOCH2)、2.07 (s、3H,OCOCH3)、2.02 (s、6H,OCOCH3)、2.00 (s、3H,OCOCH3)、1.60-1.20 (m、〜24H、CH2)、0.88 (t、3H、J = 7.0、CH3)、0.87 (t、3H、J = 7.0、CH3).
８-ペンタデカニル Ｄ-グルコピラノシド(１４２)
配糖体141(70mg)を、基本手順にしたがって脱アセチル化したところ、ポリオール142(50mg、定量値)が、白色固形物として得られ、このものは、さらに精製または同定を行わなくとも、反応性を示した。
８-ペンタデカニル ２,３,４,６-テトラ-O-スルホ-Ｄ-グルコピラノシド、テトラナトリウム塩(１４３)
ポリオール142(50mg)を、DMF(５ml)に溶解した。 SO３ピリジン(250mg)を加え、そして、この溶液を、室温で、一晩かけて攪拌をした。 この溶液を、０℃にまで冷却し、そして、2M NaOHで、pHを10にまでして中和をした。 この溶液が乾燥するまで蒸発を続けた。 残渣を、４mlの水に溶解し、そして、Bio-Gel P-2カラムクロマトグラフィー(0.1M NH４HCO３を用いて、196ml/時間の速度、６分／回収で溶出をした)によって精製をした。 この産物画分を、MBTおよびCEによって同定をした。 凍結乾燥を行ったところ、産物143が、淡黄色粉末として得られた(33mg、32％)。 1H NMR (400MHz、D2O) δ: 4.79 (d、1H、J1,2= 5.3、H-1)、4.67 (br、1H)、4.45 (br、1H、H-2)、4.28 (m、2H)、4.28 (m、2H)、3.68 (s、1H)、1.52-1.38 (m、4H)、1.32-1.10 (m、〜24H)、0.76-0.71 (m、6H).
化合物の生物学的検証
成長因子結合アッセイ
成長因子ＦＧＦ-１、ＦＧＦ-２、および、VEGFに対する化合物の結合親和性を、表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)に基づく溶液親和性分析法を用いて測定した９。 この分析法で用いたヘパリンコーティングセンサーチップは、ストレプトアビジンでコーティングしたセンサーチップにビオチニル化ＢＳＡヘパリンを固定する方法、あるいは、アジピン酸ジヒドラジドまたは１,４-ジアミノブタンのいずれかを用いたアルデヒドカップリングを介した固定化を利用して調製された９。 各々のＫｄを測定するために、一定の濃度のタンパク質および多様な濃度のリガンドを緩衝液に含む溶液を調製した。 ＦＧＦ-１及びVEGFに結合するリガンドは、HBS-EP緩衝液(10mM HEPES、pH7.4、150mM NaCl、3.0mM EDTA、および、0.005％(v/v)ポリソルベート20)において測定し、その一方で、ＦＧＦ-２への結合は、0.3M NaClを含有するHBS-EP緩衝液において測定した。 注入を行う前に、試料を４℃に保って、タンパク質の安定性を最大とした。 分析に供する各混合物に対して、50〜200μlの溶液を、５〜40μl／分の速度で注入し、相対結合応答を測定した。 すべての表面結合実験は、25℃で実施した。 40μl／分で40μlの４M NaClを注入し、その後、40μl／分で40μlの緩衝液を注入することで、表面は再生した。
センサーグラムデータは、ビアエバリュエーションソフトウエア(ビアコア社)を用いて分析し、そして、前述したようにして、Ｋｄ値を決定した９。 Ｋｄ値を二度にわたって決定した場合には、二度の測定値の平均値を表示してある。 それら結果を、表１に示してある。
ヘパラナーゼ阻害アッセイ
ヘパラナーゼの酵素活性は、基質であるフォンダパリヌクスの開裂を測定することによって検出することができる３９,４０。 新たに形成された還元二糖類は、584nmにおいてマイクロプレートリーダーで計測可能な青色を呈するモノテトラゾリウム塩WST-1(オースペップ社、メルボルン、オーストラリア)と反応させることで検出することができる。 阻害剤の存在下では、ヘパラナーゼの触媒活性は低下し、そして、二糖類の生成量およびこの溶液の光学密度の双方も低下する。 阻害剤が呈する阻害率およびＩＣ５０は、阻害剤の濃度範囲における光学密度(ＯＤ)の計測を行うことで決定される。
分析は、40mM 酢酸ナトリウム緩衝剤、pH 5.0を用いて、以下のようにして行った。 フォンダパリヌクス(100 μM)、様々な濃度の阻害剤、そして、緩衝剤を、最終体積が100μlとなるように合わせ、それらを、BSAを予めコーティングした96ウェルプレート(コスターEIZ/RIA、コーニング社)において混合をした。 次いで、生成組換えヒトヘパラナーゼ(2.55nM)を加えて、分析を始めた。 このプレートを、37℃で、24時間かけてインキュベーションをし、そして、WST-１溶液(100μl)を加えて分析を終えた。 このプレートを、60℃で、60分かけてインキュベーションをしたところ、青色が発色した。 584nmにおいてマイクロプレートリーダー(フルオスター)で光学密度を決定し、そして、Ｄ-ガラクトースを、標準の還元糖として構築した標準曲線を用いて定量をした。 各化合物についてのＩＣ５０値を評価し、そして、以下の式を用いて、Ｋｉ(阻害定数)に変換した。
Figure 0005509084
 フォンダパリヌクスについてのＫｍ値(最大速度を半減させる基質濃度)は、33±６μMであった。 それら結果を、表１に示した。
成長因子誘発内皮細胞増殖アッセイ
内皮細胞の培養
HUVEC細胞を、維持し、そして、実質的には、Lonzaが教示した標準的な細胞培養のためのプロコトールに従って継代培養を行った。 すなわち、推奨された添加物や成長因子(VEGF、FGF２、EFG、IGF、ヒドロコルチゾン、ウシ胎仔血清(ＦＢＳ)、アスコルビン酸、ヘパリン、および、ゲンタマイシン)を含んだLonzaの内皮増殖用培地(ＥＧＭ)で細胞を維持した。 細胞が、70〜80％の集密度に達すると、トリプシン処理をし、そして、別個の培養用容器に入った新鮮培地に、2500〜5000細胞/容器表面積(cm２)の割合で再接種をして継代培養を行った。 細胞の数を、血球計数器を用いて決定し、そして、トリパンブルーを用いて、生存している細胞を視覚化した。
２％FBSとゲンタマイシンだけを含むEGMを用いて、増殖試験用の培地を調製した。 その後の研究において、VEGF刺激を与えたグループの増殖指数を改善する研究を行うべく、完全EGMをVEGFグループに対して用いた。 管形成分析にあっては、ヘパリンだけを省いた完全培地を用いた。 研究に用いる化合物だけを粉体から図り分けをし、次いで、10mMストック溶液になるようにPBSで希釈をし、そして、−80℃で保存をした。 実験に向けて、必要に応じた様々な濃度のものを提供すべく、化合物を、EBM-２培地(２％FBSとゲンタマイシンが補充されたもの)で連続希釈した。
増殖アッセイ
様々な濃度の成長因子、VEGF、FGF-１またはFGF-２を用いて、72時間かけて、HUVECの増殖を促した。 最初の一連の実験において、成長因子による増殖を最大限にする上で必要な細胞密度や成長因子濃度を検証することで、分析法の最適化をさらに図った。 すなわち、100μlの細胞を、１〜３×10３／ウェルの濃度で各ウェルに加えた。 次いで、成長因子と試験化合物を、50μlの体積で、特定の濃度でもってして加えることで、最終体積を200μlにした。 70時間のインキュベーションを行った後に、490nmで吸光度を計測して光学密度値を決定する２時間前に、20μlのセルタイター96(登録商標)アクエアウスワン溶液細胞増殖アッセイ(プロメガ社)を加えた。 これらのデータを、表２に示した。
マトリゲル商品名微小管形成アッセイ
管形成分析は、Malinda et al.,に記載の方法４１に修正を加えた手順に従って行った。 四代または五代にわたって継代培養して70〜80％の集密度に至ったHUVECを回収し、そして、製造者の指示に従って(ヘパリン以外の)すべての添加物を加えたLonzaの内皮増殖用培地(ＥＧＭ２)に、４×10５細胞/mlの細胞密度で再懸濁した。 三つ一組の各ウェルにおいて、200μlの細胞(４×10５/ml)を、等量の化合物で処理を行って、10、50または100μMの最終濃度とした(これにより、各条件について、１×300μlの利用が保証されることとなる)。 そして、100μlの一定量の細胞を、成長因子で予めコーティングをした96ウェルプレートに置き、マトリゲル商品名で還元し(50μlに対して30分間、次いで、30μlに対してさらに１時間)、そして、18〜22時間かけてインキュベーションをした。 位相差顕微鏡法によって管形成を検証し、そして、オリンパスC5050ディジタルカメラを用いて画像の回収を行った。 三つまたはそれ以上の管と結合している結節の総数を記録することによって、手作業で、画像から管形成度を定量した。 その結果を、コントロールと比較した阻害率で表現して、表２に示した。 未処理のHUVECを、マトリゲルにおける正常細胞の成長および管形成についてのコントロールとして用いた。
内皮細胞移動アッセイ
ＢＤバイオコート商品名血管形成システムを、in vitroでの内皮細胞移動度定量分析プラットフォームとして用いた。 このものは、ヒトフィブロネクチンが均等にコーティングをされた蛍光ブロッキング微多孔性(3.0μm細孔径)ＰＥＴメンブラン(ＢＤフルオロブロック商品名)を具備したＢＤファルコン商品名24マルチウェル挿入プレート(および、ＴＣ処理されていない24ウェル回収プレートと蓋)から構成されている。 メンブランの孔が塞がれないように、フィブロネクチンの濃度とコーティング作業について、最大限の配慮をする。 こうすることで、内皮細胞がメンブランに付着し、そして、プレートの下部チャンバーにある血管新生刺激要素に向かって自由に動くことが可能となる。 蛍光プレートリーダーを用いて、特別の操作を行わずに、移動する細胞が定量される。 この場合、移動した後に、細胞は、蛍光染料で標識付けされる。
すなわち、200μlのHUVECが、2.5×10５/mlの濃度で、キットに含まれている24ウェルプレートの上部チャンバーに置かれる。 次いで、様々な濃度(通常は、10および/または50μg/ml)の化合物が加えられ、また、未処置のコントロールグループとして培地だけ(ＥＢＭ-２)が用いられる。 我々の研究ではFGF-２またはVEGFで刺激をしたHUVECの移動度が小さく、また、10％ウシ胎仔血清(ＦＣＳ)を用いると、ＦＣＳを含まない培地を用いた場合と比較して、HUVECの移動度が６倍以上も改善されたので、このものを使用することとした。 したがって、10％ＦＣＳを含む750μlの培地を、下部チャンバーに加えて移動を促し、そして、プレートを、37℃／５％ＣＯ２で、18時間、一晩かけて、インキュベーションをした。 インキュベーションを終えた後に、上部プレートを、新しい24ウェルボトムプレートに移し、そして、多孔質メンブランの底面に移動した細胞を、90分かけて、37℃で染色をするために、500μlのカルセインＡＭを加えた。 485nmおよび520nmのそれぞれの励起フィルターおよび発光フィルターを有するフルオスターオプチマ(BMGラボラトリーズ社)を用いて、蛍光の測定を行った。 データは、FCSで誘発したHUVECと比較して得た移動の阻害率として表している(表３)。
Ex Vivo血管新生出芽アッセイ
前出のプロコトールの修正法にしたがって、ラットの大動脈から移植片を得た４２-４５。 このモデルでは、ラットの大動脈の内皮細胞は、ECM誘導タンパク質(マトリゲル商品名)の三次元マトリックスに曝され、微小血管の表現型は変換され、そして、微小血管の分岐網が生成することとなる。 切開行為に起因する損傷を契機にして血管形成が始まり、そして、外因性の成長因子による刺激を必要としない。
すなわち、２〜４ヶ月齢のスプラーグドーリーラットから胸部大動脈を摘出し、そして、余分な脂肪や結合組織を切り取った。 大動脈の損傷を避けるべく、各処理工程において、最大限の注意を払った。 ２％FCSと、ヘパリン以外のすべてのシングルコート商品名(カンブレックス)試薬を含んだ完全EBM-２培地(カンブレックス)に、組織を移した。 ところで、マトリゲル商品名(ＢＤバイオサイエンス)を、氷で冷却し、そして、一旦は液体に戻してから、その180μlを、48ウェル組織培養プレート(ヌンク)にピペットで移した。 マトリゲル商品名を固化させるべく、そのプレートを、37℃で、30分かけてインキュベーションした。
大動脈を、１mm環状片に切断し、次いで、二等分した。 次いで、大動脈片を、各ウェルの中心にあるマトリゲル商品名の真上に注意深く置き、次いで、必要に応じて置き場所を一旦調整をしてから、真上から60μlのマトリゲル商品名をさらに置き、そして、インキュベーターに戻して、さらに20分かけてインキュベーションをした。 次いで、通常は、特定の化合物／実験に応じて、１〜50μMの範囲内の二つの濃度の試験化合物の存在下または不在下(コントロール)で、各ウェルに対して1.0mlの培地が加えられる。 約48時間ごとに培養物を継ぎ足し、そして、８〜10日目までの様々な時点において、微小血管の評価を行った。 微小血管の出芽度を、０〜５の評価システムを用いて決定した。 すなわち、前出の通り、０の評価は、微小血管の形成が認められないことを示し、そして、５の評価は、瀰漫性の血管形成を示すものである４５。 出芽している血管を、オリンパスC-7070カメラと接眼レンズ用のアダプターを装備した４倍対物レンズを用いて撮影をした。
ある事例では、この分析での化合物の毒性を決定するために、６日目または７日目に、培養物から化合物／培地を除去し、そして、さらに最大で７日間の時間をかけて、VEGF(通常は、10ng/ml)を含む完全培地を加えることで、組織の利用可能性を評価した。 毒性が認められない場合には、生存している組織は、外因性成長因子に応答して、微小血管を出芽させることとなる。
血管形成に関する本願発明の化合物の阻害効果を、前述した血管新生出芽／微小血管形成(ラットの大動脈)アッセイを用いて評価をした。 阻害剤の不在下(コントロール)で、マトリゲル商品名にラットの大動脈組織を埋設すると、図１に示したように、過剰な血管新生出芽(瀰漫性の血管形成を示す５の評価)が認められた。
ＰＩ-８８およびＰＧ５２４(非親油性類似体)を、10μMおよび50μMの濃度で加えることで、強力な阻害反応が認められた。 しかしながら、本願発明の化合物は、10μMの濃度で、100％に近い強度で血管形成を阻害することが実証されている。 これら結果を、以下の表４に示してある。
前記化合物を用いた処理の後における大動脈組織の生存性を確認するために、(各実験に応じて)６日目または７日目に、これら化合物を除去した後に、さらに最大で７日間の時間をかけて、VEGFで処理をした。 微小血管の発芽が認められたことは、本願発明の化合物が、組織に対して毒性効果を及ぼすのではなく、抗血管新生メカニズムを介して阻害効果を奏することを実証するものである(以下の図２)。
抗凝固活性
試験化合物の抗凝固活性は、プールした正常なヒト血漿に関する活性化部分トロンボプラスチン時間(ＡＰＴＴ)の上昇についての様々な濃度の化合物(０〜100mg/mlを含むPBS)の効果を評価することによって決定された。 APTTの評価は、STAGO STA-コンパクト凝固分析装置を用いて、製造業者の指示に従って、標準的なプロトコールを用いて評価を実施をした。 非分画ヘパリン(ＵＦＨ)を、コントロールとして用いた。 プールした正常なヒト血漿についてのAPTTの正常な範囲は、26〜36秒である。 それら結果を、表５に示してあり、そこでは、新規化合物が、軽度の抗凝固活性しか有しておらず、また、その活性が、ＰＩ-８８よりも遙かに小さいことが示されている。
In Vivoマウス黒色腫モデル
Ｂ16黒色腫は、同系Ｃ57/BL６マウスにおいて腫瘍を誘発させるために一般的に用いられている細胞系である。 このものは、非転移性で、腫瘍の成長が速く、また、ほとんどの抗癌剤に対して反応性を示さない。
Ｂ16Ｆ１細胞を、10％FCS、ペニシリン/ストレプトマイシン、Ｌ-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、２-メルカプトエタノールを含む完全DMEM培地で培養をした。 トリプシン／EDTAを用いた攪乱によってＢ16Ｆ１細胞、すなわち、腫瘍を接種するために細胞を回収し、HBSSで洗浄をし、そして、５分間、1500rpmで、遠心分離をした。 次いで、５×10５個の細胞を、50μlの体積で注射するために、細胞をPBSに再懸濁した。 首の真後ろに、腫瘍を埋め込んだ。 腫瘍を接種してから３日後に、各処置グループに対して、日に応じて異なる部位に、かつ、50μlまたは100μlの注射量において異なる濃度で皮下注射をした。 治療期間が12日間である場合には、注射を15日目まで続けた。 注射を開始してから、毎日、マウスをモニターし、また、目で確認できる腫瘍は、毎日、計測を行った。 腫瘍の大きさは、二つの寸法を計測し、ｌ×ｗの式、式中、ｌは、最大の寸法値で、ｗは、最小の寸法値である式によって決定をした。 腫瘍の体積を見積もるために、０.５×ｌ×(ｗ２)という式を用いた。 平均的な腫瘍の成長、および、腫瘍成長阻害率(％ＴＧＩ)の双方に関するデータを示している。 実験相互の差異を修正するために、％ＴＧＩの計算を行った。
本明細書において、本願発明の化合物が、血管新生出芽形成を阻害することが示されており、また、腫瘍の進行が、血管形成に依存しているため、原発腫瘍の増殖および全生存に関するこれら化合物の効果を、前述したようにして分析を行った。 図３には、Ｂ16黒色腫モデルにおいて、本願発明の様々な試験化合物について認められた一般的な腫瘍の平均体積を例示している。
直接比較のためのデータである図４に示した結果は、腫瘍を患ったマウスの腫瘍の大きさが、対応するコントロールと比較して、相対的に小さくなっていることを示しており、また、そのことを、腫瘍の成長阻害率(％ＴＧＩ)として知られているパラメーターで表している。 ＴＧＩ値は、ＴＧＩ＝[１−(ΔＴ/ΔＣ)]×１００という数式を用いて算出されるものであって、式中、ΔＴおよびΔＣは、それぞれ、化合物で処理をした試料のグループ(Ｔ)、および、賦形剤で処理をしたコントロールのグループ(Ｃ)での治療最終日の腫瘍の平均質量と治療開始日と腫瘍の平均質量との差異を表している。
In Vivoマウス肺転移モデル
Ｂ16固形腫瘍マウス黒色腫モデルに関して前述したようにして培養を行ったＢ16Ｆ１細胞を、尾静脈を介してマウスに注射をしたところ、肺での転移性結節の形成が認められた。 腫瘍細胞は黒く映し出されるので、転移性結節は容易に特定することができる。 図５には、コントロールのマウスの肺と化合物で処置を行ったマウスの肺が示されており、肺コロニー(黒点箇所)の形成において明確な差異が認められる。
転移モデルにおいて、０日目に、50mlのＢ16細胞(２×10５)を、Ｃ57/BL６マウスの尾静脈に注射をした。 ０日目に試験化合物を用いた処置を開始し、そして、12日間にわたって、毎日、処置を継続した。 実験の12日目に、肺転移の数を計数した。 図６に示した結果は、選択した化合物が、ＰＩ-８８が奏する肺転移に対する強力な阻害性を維持していることを示している。 このデータは、生理食塩水で処理したコントロールと比較して得た転移性肺結節の比率(％)を表している。
In vivoＨＴ２９結腸直腸癌異種移植モデル
ＨＴ-２９ヒト結腸直腸腺癌細胞(通常在庫ＶＰ-ストック325由来の４代継代)を、10％ＦＢＳおよびペニシリン-ストレプトマイシン(50IU/mlの最終濃度)を含んだRPMI1640細胞培養培地で培養を行った。 これら細胞を、トリプシン処理して回収をし、HBSSで二度の洗浄を行い、そして、計数を行った。 そして、これら細胞を、HBSSに再懸濁させ、次いで、２×10７細胞/mlを含む最終体積にまで調整をした。 注射部位への接種に先駆けて、背側右脇腹を大まかにアルコールで消毒をし、そして、注射針が皮膚を貫通するように針を導入して、動物の右肩の直下にある皮下腔で、100μlの細胞(２×10６細胞)を放出した。 約155mm３の平均体積の腫瘍を有するマウスを用いて処置を開始した。 腫瘍に関する二つの寸法(腫瘍の長さおよび直径)を測定し、そして、腫瘍の体積を、Ｖ(mm３)＝長さ×直径２×π／６の数式を用いて算出した。
賦形剤コントロールである滅菌ＰＢＳを、10ml/kgの用量で、毎日１回、21日かけて、皮下に投与をした。 毎日の投与の直前に、各動物の体重を計量した。 各マウスに対して実際に投与をした体積を算出し、そして、体重に基づいて補正をした。 図７に示した結果は、結腸直腸癌のマウス腫瘍モデルにおいて、選択した化合物が、抗癌活性を有していることを実証している。 すべての化合物が、このモデルにおいて顕著な効果が認められなかったＰＩ-８８と比較して、改善された活性を示していた。
抗ウィルス活性
抗ウィルスアッセイの結果を、表６〜10に示してある。
細胞およびウィルス
アフリカングリーンモンキーの腎(ＧＭＫ ＡＨ１)細胞４６を、２％子牛血清、０.０５％プリマトンＲＬ物質(クラフト社、ノーウィッチ、米国)、および、抗生物質を含んだイーグル最小必須培地(ＥＭＥＭ)で培養をした。 ヒトの表皮癌(HEp-２)細胞を、10％ウシ胎仔血清と抗生物質とを含んだダルベッコ変法イーグル培地(ＤＭＥＭ)で培養をした。 ここで用いたＨＳＶ株は、ＨＳＶ-１ ＫＯＳ３２１、野生型株ＫＯＳ４７のプラーク精製単離物、ＨＳＶ-１ ＫＯＳ ｇＣ-無意味変異体ｇＣ-３９４８、および、ＨＳＶ-２株３３３４９であった。 ＲＳＶ株Ａ-２５０を用いた。 Hallak et al.５１の記載に従って、ＲＳＶストックを調製し、そして、40％ショ糖５２の存在下で、−70℃で保存をした。
ウィルス精製および細胞に対するウィルス結合のアッセイ
細胞外のメチル-[３Ｈ]チミジンで標識付けをしたＨＳＶビリオンを、前述した三段階の不連続ショ糖勾配を用いて遠心分離をして精製した５３,５４。 ４℃における、ＧＭＫ ＡＨ１細胞に対する精製したメチル-[３Ｈ]チミジンで標識付けをしたウィルスの結合性に関する試験化合物の効果を、前述したようにして分析を行った１７。 すなわち、細胞を、PBS-Ａ(１mM CaCl２および0.5mM MgCl２を含んだPBS)で洗浄し、次いで、１％BSAを含むPBS-Ａを用いて、１時間かけて、室温でブロックをした。 試験化合物を含むPBS-Ａの５倍連続希釈液を、精製したビリオンと共に混合し、そして、15分かけて、４℃で、インキュベーションをした。 細胞を、PBS-Ａで一旦洗浄を行い、次いで、ウィルスと化合物との混合物を加え、そして、緩慢な攪拌を行いながら、細胞を、２時間かけて、４℃で、インキュベーションをした。 続いて、細胞を、PBS-Ａで三度の洗浄を行い、５％SDSを含んだ0.2mlのPBS-Ａで溶解をし、そして、最後に、放射能を定量するために、シンチレーションバイアルに移した。
ウィルス不活性化アッセイ
約10５のプラーク形成単位のＨＳＶ-１ ＫＯＳ３２１、または、ＨＳＶ-２ ３３３株と、特定の濃度の試験化合物を含む200μlの血清不含EMEMとを混合し、そして、37℃で、15分かけて、インキュベーションをした。 この混合物を、阻害作用を示さない濃度の試験化合物となるまで希釈を行い、次いで、感染力価を決定すべく、ウィルスプラーク数減少アッセイに関連して述べた手法に供した。 ＲＳＶの場合、この分析法は、EMEMに代えて、２％熱不活性化ウシ胎仔血清を含んだDMEMを用いた同様の方法に従って行った。 低pH値、または、頸管分泌物の存在による効果を評価するために、ウィルス(ＨＳＶ-２ ３３３)および化合物は、低pH緩衝剤(４.５)で希釈され、または、この化合物の希釈液に対して頸管分泌物が加えられてから、ウィルス(ＨＳＶ-２ ３３３)と混合される。 この頸管分泌物は、三つの異なる個体の頸部から採取した試料を用いて調製した。 これら試料は、蒸留水で濯いでから、5,000×ｇで、10分かけて遠心分離をした。 上清を、−20℃で保存をした。 ＲＳＶの場合、この分析法は、EMEMに代えて、２％熱不活性化ウシ胎仔血清を含んだDMEMを用いた同様の方法に従って行った。
ウィルスプラークアッセイ
ウイルス感染価(プラーク数減少)アッセイ、および、プラークサイズ減少アッセイを、前述したようにして実施をした１７。 すなわち、プラーク数減少アッセイについては、ウィルスと化合物との混合物を、15分かけて、室温でインキュベーションを行ってから、細胞を加え、そして、１時間かけて、37℃で、細胞をウィルス感染せしめた。 続いて、それら細胞を、２mlのEMEMで洗浄をし、そして、１％メチルセルロース溶液を含むEMEMに対して重層をした。 37℃で、２日間(ＨＳＶ-２)または３日間(ＨＳＶ-１)かけて、細胞をインキュベートした後に、それらプラークを、クリスタルバイオレット溶液で染色して視覚化を図った。 ウィルスプラークの50％を阻害する試験化合物の濃度(ＩＣ５０)を、用量反応曲線から補間した。 これら化合物を、抗HSV活性または抗RSV活性に関してスクリーニングをする場合には、200PFUのウィルスと試験化合物(100 μg/ml)の血清不含EMEMとの混合物を、10分間、室温で、インキュベーションをしてから、細胞を加え、そして、細胞をウィルス感染せしめるための全期間とウィルスプラークの形成期間にわたってインキュベーションを行った。 プラークサイズ減少アッセイについては、阻害剤の不在下で、２時間にわたって、細胞をウィルス感染せしめてから、それら化合物を、細胞(を含むメチルセルロース重層培地)に対して加えた。 37℃で、２〜３日間かけてインキュベーションを行った後に、細胞を、１％クリスタルバイオレット溶液で染色して、ウィルスプラークの視覚化を図った。 試験をした各化合物について、ライツ-ベツラー ディアベルト顕微鏡に装備されているライカDC300ディジタルカメラを用いて、周辺の２０のプラークの画像をキャプチャーした。 IM500イメージソフトウエア(ライカ)を用いて、各プラークの面積を決定した。 HEp-２細胞を用いてアッセイを行ったこと、そして、EMEMに代えて、２％熱不活性化ウシ胎仔血清を含んだDMEMを用いたことを除けば、ＲＳＶについても同様のプロトコールを用いた。
細胞毒性アッセイ
このアッセイは、96ウェルクラスタープレートに接種され、そして、２日間の培養の後に約80〜90％の集密度にまで至ったＧＭＫ ＡＨ１細胞において実施した。 これら細胞を、EMEMで洗浄をし、そして、試験化合物を含む血清不含EMEMの２倍連続希釈液の100μlを用いて、24時間かけて、37℃で、インキュベーションをした。 テトラゾリウムを利用したセルタイター96アッセイを用いて、製造業者(プロメガ社、マジソン、ウィスコンシン州、米国)のプロコトールに従って、細胞生存性に関する試験化合物の効果を評価した。
薬物動態
この実験では、オスの成体のスプラーグドーリー(ＳＤ)ラット(約300ｇ)を用いた。 大腿動脈カニューレを挿入し、そして、イソフルランで麻酔を行ってから、動脈を露出させた。 頸静脈カニューレを挿入し、そして、静脈を露出させた。 投与前は、動物のカニューレ挿入部を回復させ、そして、実験中は、代謝ケージに収容し、また、自由給餌給水とした。 薬剤の総濃度を、１.２５〜５.００mg/mlの範囲とするために、３Ｈ(アグリコン標識したもの)、または、３５Ｓ(硫酸塩標識したもの)で標識付けした化合物を、リン酸緩衝化生理食塩水に溶解した。 全用量を、約２ml/kgの用量で、２.５〜１０mg/kgのボーラスとして投与した。 各ラットに投与された放射能の総量は０.５〜１０μCiであった。 投与前、および、投与して５分、20分、２時間、５時間、８時間、12時間、24時間、および、48時間後に、血液試料(〜325μl)を、大腿動脈カテーテルから抗凝固剤のクエン酸ナトリウムを含んだ試料管へと回収し、そして、遠心分離に供するまで、低温下(約４℃)で保存をした。 血液試料を遠心分離し、血漿を分離し、そして、計数を行うために、50μlの一定量の血漿をシンチレーションバイアルに移した。 実験終了時に、動物を、致死過剰量のペントバルビタールを用いて屠殺した。 血漿の放射能レベルは、パッカードウルティマゴールド液体シンチレーション計数カクテルと試料とを混合した後に測定した。 計数は、ベッカム液体シンチレーションカウンター(ＬＳ６５００)、または、パッカードトリカーブ液体シンチレーションカウンターにて、一試料当たり10分間かけて行った。 計算を行う前に、結果(ＤＰＭ、カウンターに固有のクエンチ曲線から算出した数値)を、バックグラウンドについて補正を行った。 薬物動態パラメーターを、ＰＫソリューションズ２.０ソフトウエア(サミット リサーチ サービシーズ社、オハイオ州、米国)を用いて計算し、そして、以下の表11にまとめた。
前出の実施態様は、本願発明の原理を例示する目的のものでしかなく、当業者であれば、それらに様々な修正や変更を加えるであろうことは容易に想到できる。 本願発明は、様々な方法で、また、前出の実施態様で示した以外の方法でもってしても、実施および再現することが可能である。 また、本明細書で使用した術語は、本願発明の説明のためのものでしかなく、本願発明を限定する意図で用いたものではない。
本願明細書で用いられている「含む」の用語、それに、その異形用語である「包含する」または「含んでいる」などの用語は、これら用語に関する限定的解釈を必要とする事情または用法についての特別な断りがない限りは、そこで言及された一つまたはそれ以上の要素を含むものの、それ以外の一つまたはそれ以上の要素は除外しない、ことを意味するものである。
本願明細書で引用した文献に関する言及は、そこに開示された事項が、オーストラリアでの一般共通認識を形成していることを容認するものではない。
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
Figure 0005509084
参照文献
１. Parish、C.R.; Freeman、C.; Brown、K.J.; Francis、D.J.; Cowden、W.B. Cancer Res. 1999、59、3433.
２. Parish、C.R.; Cowden、W.B. 米国特許第6,143,730号、2000.
３. Iversen、P.O.; Sorenson、D.R.; Benestad、H.B. Leukemia 2002、16、376.
４. Joyce、J.A.; Freeman、C.;Meyer-Morse、N.; Parish、C.R.; Hanahan、D. Oncogene 2005、24、4037.
５. Basche,M.; Gustafson、D.L.; Holden、S.N.; O'Bryant、C.L.; Gore、L.; Witta、S.; Schultz,M.K.;Morrow,M.; Levin、A.; Creese、B.R.; Kangas,M.; Roberts、K.; Nguyen、T.; Davis、K.; Addison、R.S.;Moore、J.C.; Eckhardt、S.G. Clin. Cancer Res. 2006、12、5471.
６. Ferro、V.; Dredge、K.; Liu、L.; Hammond、E.; Bytheway、I.; Li、C.; Johnstone、K.; Karoli、T.; Davis、K.; Copeman、E.; Gautam、A. Semin. Thromb. Hemost. 2007、33、557.
７. Ferro、V.; Li、C.; Fewings、K.; Palermo,M.C.; Linhardt、R.J.; Toida、T. Carbohydr. Res. 2002、337、139.
８. Yu、G.; Gunay、N.S.; Linhardt、R.J.; Toida、T.; Fareed、J.; Hoppensteadt、D.A.; Shadid、H.; Ferro、V.; Li、C.; Fewings、K.; Palermo,M.C.; Podger、D. Eur. J.Med. Chem. 2002、37、783.
９. Cochran、S.; Li、C.; Fairweather、J.K.; Kett、W.C.; Coombe、D.R.; Ferro、V. J.Med. Chem. 2003、46、4601.
10. Vlodavsky、I.; Friedmann、Y. J. Clin. Invest. 2001、108、341.
11. Parish、C.R.; Freeman、C.; Hulett,M.D. Biochim. Biophys. Acta 2001、1471,M99.
12. Demir,M.; Iqbal、O.; Hoppensteadt、D.A.; Piccolo、P.; Ahmad、S.; Schultz、C.L.; Linhardt、R.J.; Fareed、J. Clin. Appl. Thromb. Hemost. 2001、7、131.
13. Wall、D.; Douglas、S.; Ferro、V.; Cowden、W.; Parish、C. Thromb. Res. 2001、103、325.
14. Hembrough、T.A.; Ruiz、J.F.; Papathanassiu、A.E.; Green、S.J.; Strickland、D.K. J. Biol. Chem. 2001、276、12241.
15. Amirkhosravi、A.;Meyer、T.; Chang、J.Y.; Amaya,M.; Siddiqui、F.; Desai、H.; Francis、J.L. Thromb. Haemost. 2002、87、930.
16. Francis、D.J.; Parish、C.R.;McGarry,M.; Santiago、F.S.; Lowe、H.C.; Brown、K.J.; Bingley、J.A.; Hayward、I.P.; Cowden、W.B.; Campbell、J.H.; Campbell、G.R.; Chesterman、C.N.; Khachigian、L.M. Circ. Res. 2003、92、e70.
17. Nyberg、K.; Ekblad,M.; Bergstrom、T.; Freeman、C.; Parish、C.R.; Ferro、V.; Trybala、E. Antiviral Res. 2004、63、15.
18. Lee、E.; Pavy,M.; Young、N.; Freeman、C.; Lobigs,M. Antiviral Res. 2006、69、31.
19. Levidiotis、V.; Freeman、C.; Punler,M.;Martinello、P.; Creese、B.; Ferro、V.; van der Vlag、J.; Berden、J.H.M.; Parish、C.R.; Power、D.A. J. Am. Soc. Nephrol. 2004、15、2882.
20. Adams、Y.; Freeman、C.; Schwartz-Albiez、R.; Ferro、V.; Parish、C.R.; Andrews、K.T. Antimicrob. Agents Chemother. 2006、50、2850.
21. Ferro、V.; Hammond、E.; Fairweather、J.K.Mini-Rev.Med. Chem. 2004、4、159.
22. Foxall、C.; Wei、Z.; Schaefer,M.E.; Casabonne,M.; Fugedi、P.; Peto、C.; Castellot、J.J.,Jr; Brandley、B.K. J. Cell. Physiol. 1996、168、657.
23. Fugedi、P.; Tyrrell、D.J.; Tressler、R.J.; Stack、R.J.; Ishihara,M. 米国特許第5,739,115号、1998.
24. Gunay、N.S.; Linhardt、R.J. PlantaMed. 1999、65、301.
25. Katsuraya、K.; Nakashima、H.; Yamamoto、N.; Uryu、T. Carbohydr. Res. 1999、315、234.
26. Wessel、H.P. Topics Curr. Chem. 1997、187、215.
27. Ferro、V.; Fairweather、J.K.; Karoli、T.; Liu、L. PCT国際特許出願公開公報第WO 2005/085264 A1号、2005.
28. Karoli、T.; Liu、L.; Fairweather、J.K.; Hammond、E.; Li、C.P.; Cochran、S.; Bergefall、K.; Trybala、E.; Addison、R.S.; Ferro、V. J.Med. Chem. 2005、48、8229.
29. Farndale、R.W.; Buttle、D.J.; Barrett、A.J. Biochim. Biophys. Acta 1986、883、173.
30. Ferro、V.; Fewings、K.; Palermo,M.C.; Li、C. Carbohydr. Res. 2001、332、183.
31. Aucagne、V.; Hanni、K.D.; Leigh、D.A.; Lusby、P.J.; Walker、D.B. J. Am. Chem. Soc. 2006、128、2186.
32. Dubber,M.; Lindhorst、T.K.J. Org. Chem. 2000、65、5275.
33. Fairweather、J.K.; Karoli、T.; Ferro、V. Bioorg.Med. Chem. 2004、12、6063.
34. Chen、L.; Kong、F.J. Carbohydr. Chem. 2002、21、341.
35. Narumi、A.;Miura、Y.; Otsuka、I.; Yamane、S.; Kitajyo、Y.; Satoh、T.; Hirao、A.; Kaneko、N.; Kaga、H.; Kakuchi、T.J. Polym. Sci.、Part A: Polym. Chem. 2006、44、4864.
36. Pazur、J.H.Methods Carbohydr. Chem. 1962、1、337.
37. Ahmed、S.; Alauddin,M.; Caddy、B.;Martin-Smith,M.; Sidwell、W.T.L.; Watson、T.R. Aust. J. Chem. 1971、24、521.
38. Ferro、V.;Meldal,M.; Bock、K. J. Chem. Soc.、Perkin Trans. 1 1994、2169.
39. Driguez、P. A.; Petitou,M. PCT国際特許出願公開公報第WO 2006/021653 A2号、2006.
40. Bisio、A.;Mantegazza、A.; Urso、E.; Naggi、A.; Torri、G.; Viskov、C.; Casu、B. Semin. Thromb. Hemost. 2007、33、488.
41.Malinda、K.M.; Nomizu,M.; Chung,M.; Delgado,M.; Kuratomi、Y.; Yamada、Y.; Kleinman、H.K.; Ponce,M.L. Faseb J. 1999、13、53.
42. Nicosia、R.F.; Ottinetti、A. Lab. Invest. 1990、63、115.
43. Dredge、K.;Marriott、J.B.;Macdonald、C.D.;Man、H.W.; Chen、R.;Muller、G.W.; Stirling、D.; Dalgleish、A.G. Br. J. Cancer 2002、87、1166.
44. Ng、S.S.W.;MacPherson、G.R.; Gutschow,M.; Eger、K.; Figg、W.D. Clin. Cancer Res. 2004、10、4192.
45.Min、J.-K.; Han、K.-Y.; Kim、E.-C.; Kim、Y.-M.; Lee、S.-W.; Kim、O.-H.; Kim、K.-W.; Gho、Y.S.; Kwon、Y.-G. Cancer Res. 2004、64、644.
46. Gunalp、A. Proc. Soc. Exp. Biol.Med. 1965、118、185.
47. Holland、T.C.; Homa、F.L.;Marlin、S.D.; Levine,M.; Glorioso、J. J. Virol. 1984、52、566.
48. Holland、T.C.;Marlin、S.D.; Levine,M.; Glorioso、J.J. Virol. 1983、45、672.
49. Duff、R.; Rapp、F. Nat. New Biol. 1971、233、48.
50. Lewis、F.A.; Rae,M.L.; Lehmann、N.I.; Ferris、A.A.Med. J. Aust. 1961、2、932.
51. Hallak、L.K.; Collins、P.L.; Knudson、W.; Peeples,M.E. Virology 2000、271、264.
52. Gupta、C.K.; Leszczynski、J.; Gupta、R.K.; Siber、G.R. Vaccine 1996、14、1417.
53. Karger、A.;Mettenleiter、T.C. Virology 1993、194、654.
54. Trybala、E.; Liljeqvist、J.A.; Svennerholm、B.; Bergstrom、T.J. Virol. 2000、74、9106.
本願発明の化合物の抗血管形成活性を実証するために用いたラットの大動脈血管形成分析での血管の成長度を示す図である。 ０日目から４８日ごとに、７日間かけて、培地(未処理コントロール群)または試験化合物で処理した大動脈培養物に関するデータを示す図である。 ７日目に、２〜３日ごとに、さらに７日間かけて、培養物に対してＶＥＧＦ(10mg/ml)を加え、そして、血管形成の程度を記録し、そうすることにより、試験化合物が、組織に対する毒性の誘発とは対照的な効果、すなわち、抗血管形成活性メカニズムを介した阻害効果を奏していることを実証する。 三つのすべての化合物が、血管形成を強く阻害した(表４を参照されたい)。 Ｂ１６マウス黒色腫モデルにおいて、未処理のコントロールマウスでの腫瘍と、選択した試験化合物で処理したマウスでの腫瘍の平均体積を示す図である。 本願発明の化合物の投与量レベルを減少したり、あるいは、処理期間を短くしたにもかかわらず、ＰＩ-８８または非親油性類似体と比較して、抗腫瘍活性は、依然として増大していた。
Bidは、bis in die (１日２回)であり、sidは、semel in die (１日１回)であり、そして、qdは、quaque die (毎日)である。
Ｂ１６マウス黒色腫モデルにおいて、腫瘍を患ったマウスに対して選択した試験化合物で処理して得られた腫瘍の成長阻害率(％)のデータである。 本願発明の化合物の投与量レベルを減少したにもかかわらず、ＰＩ-８８または非親油性類似体と比較して、腫瘍の成長阻害率(％)は、依然として改善されていた。 bidは、bis in die (１日２回)であり、また、sidは、semel in die (１日１回)である。 マウスから得たＢ１６Ｆ１黒色腫細胞の肺コロニーの形成をブッロクする試験化合物の例を示す図である。 化合物と投与量は、各イメージの下方に記載してある。 Ｂ１６肺転移癌モデルにおいて、生理食塩水のコントロール群と選択した試験化合物とを比較して得た割合(％)に基づく転移性肺結節の数を示す図である。 生理食塩水のコントロール群と比較して、ＰＩ-８８および選択した試験化合物で処理を行ったマウスでは、転移性肺結節はほとんど認められなかった。 本願発明の化合物に関するほとんどの実施例において投与量レベルを減少したにもかかわらず、転移の阻害効果は、高用量のＰＩ-８８を投与して得られる効果と同様であった。 bidは、bis in die (１日２回)であり、また、sidは、semel in die (１日１回)である。 結腸直腸癌ＨＴ２９異種移植モデルにおいて、腫瘍を患ったマウスに対して選択した試験化合物で処理して得られた腫瘍の成長阻害率(％)のデータである。 本願発明の化合物の投与量レベルを減少したにもかかわらず、ＰＩ-８８または非親油性類似体と比較して、腫瘍の成長阻害率(％)は、依然として改善されていた。 bidは、bis in die (１日２回)であり、また、sidは、semel in die (１日１回)である。 ＨＳＶの細胞間感染に関する試験化合物の効果を示す図である。 細胞を、〜２００ＰＦＵのＨＳＶ-１またはＨＳＶ-２のいずれかで感染させ、そして、１％メチルセルロースと10μg/mlの試験化合物を含むEMEMで重層した。 結果は、疑似処理したコントロールの細胞でのウィルスプラークの平均面積に対する薬剤処理した細胞において認められたウィルスプラークの平均面積の比率(％)で表している。 ２０個のウィルスプラークの画像が取得され、そして、ＩＭ５００ソフトウェアを用いて、面積の決定を行った。 ＨＳＶビリオンと細胞との間の結合についての試験化合物の効果を示す図である。 ＧＭＫ ＡＨ１細胞へのウィルスを吸着させるために、特定の濃度の試験化合物を、４℃で、メチル-[３Ｈ]チミジンで標識付けをしたＨＳＶ-１またはＨＳＶ-２と共に、２時間かけてインキュベーションした。 結果は、疑似処理したコントロールでの付着ウィルス(cpm)に対する化合物処理したビリオンにおいて認められた付着ウィルス(cpm)の比率(％)で表している。 化合物４を用いた実験では、４℃で細胞に付着した疑似処理をしたウィルスの個数の平均値は、ＨＳＶ-１については4263個であり、また、ＨＳＶ-２については1742個であった。 ここで示した数値は、二つの個別の実験から得た四つの決定値の平均値である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。 本願発明の反応スキームと化学構造を示す図である。

Claims (12)

  1. 以下の一般式、すなわち、
    [Ｘ]ｎ−Ｙ−ＺＲ１Ｒ２、
    式中、
    ＸおよびＹの各々は、グリコシド結合に関与をしていない水酸基の各々が、独立して、ＳＯ3Ｍの化学基または水素で置換された単糖類単位であり、かつ、当該化学基でのＭが、薬学的に許容可能なカチオンであり、
    ＸおよびＹは、Ｄ-またはＬ-ヘキソースまたはペントースであり、
    Ｙは、環状体または開環体であり、
    Ｚは、Ｏ、Ｎ、ＳまたはＣまたはそれらの高酸化状態、または、結合であり、および、Ｙが還元単糖類である場合には、アノマー炭素に結合しており、
    Ｒ１は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリーレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアリーレン、アシレン、アロイレン、アルキレンアミド、アルキレンチオアミド、トリアゾリル、および、置換トリアゾリルからなるグループから選択されるリンカー、または、結合であり、
    Ｒ２は、コレステリル、コレスタニル、コール酸塩、デオキシコール酸塩、グリチルレチニル、Ｃ８を超える直鎖アルキル、および、プロピルステアラミドからなるグループから選択される親油性部分であり、
    ｎは、０〜６の整数であり、
    各化合物での硫酸化のレベルが、全水酸基の７０％〜１００％であり、
    Ｒ１が結合である場合には、Ｒ２は、グリシルレチン酸またはその誘導体ではなく、
    Ｒ１が結合であり、ｎが０またまは１であり、そして、ＺがＳである場合には、Ｒ２は、Ｃ１８直鎖アルキル基ではなく、
    ｎが３〜６であり、Ｒ１が結合であり、そして、ＸおよびＹがα(１→４)-結合グルコースである場合には、Ｒ２は、Ｃ１２〜Ｃ１８直鎖アルキル基ではなく、
    ｎが３〜５であり、Ｒ１が結合であり、そして、ＸおよびＹがβ(１→３)-結合グルコースである場合には、Ｒ２は、Ｃ９〜Ｃ１２直鎖アルキル基またはコレステリル基ではなく、
    ｎが０であり、ＺがＯであり、Ｙがグルコピラノースであり、そして、Ｒ１が結合である場合には、Ｒ２は、コレステリルではなく、および
    ＸおよびＹがリボースであり、そして、Ｒ１が結合である場合には、Ｒ２は、Ｃ１８基ではない、一般式で表される化合物。
  2. Ｒ２が、コレスタニルである請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ２が、プロピルステアラミドである請求項１に記載の化合物。
  4. Ｒ１が、オキシメチル[１,２,３]-トリアゾール-１-イルリンカーである請求項１乃至３のいずれかに記載の化合物。
  5. ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物６５)；
    ４-(コレスタン-３-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物７０)；
    ４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物７６)；
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物８７)；
    ３-ステアラミドプロピル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-Ο-Ｄ-グルコピラノシド、デカナトリウム塩(化合物１２３)；および、
    ３-ステアラミドプロピル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、トリデカナトリウム塩(化合物１２８)からなるグループから選択される化合物。
  6. ドデシル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物４)；
    １２-(４-フェニル-[１,２,３]トリアゾール-１-イル)ドデシル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物８)；
    １２-(４-ナフタレン-１-イル-[１,２,３]トリアゾール-１-イル)ドデシル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物１１)；
    ３β-コレステリル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物１７)；
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物２０)；
    ３-ステアラミドプロピル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物２４)；
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物２７)；
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物３３)；
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物３９)；
    ３-ステアラミドプロピル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物４４)；
    ３-[４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)-[１,２,３]トリアゾール-１-イル]プロピル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→２)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物４８)；
    ３'-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物５６)；
    ３-[４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)-[１,２,３]トリアゾール-１-イル]プロピル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-２,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシル-(１→３)-３,４,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-マンノピラノシド(化合物６０)；
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナト-α-Ｄ-マンノピラノシドテトラナトリウム塩(化合物７９)；
    Ｎ-(2,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシル)-４-((３Ｒ,１０Ｓ,１２Ｓ,１３Ｒ)-３-Ｏ-スルホナトナトリウム-１２-Ｏ-アセチル-１０,１３-ジメチルヘキサデカヒドロ-１Ｈ-シクロペンタ[a]フェナントレン-１７-イル)ペンタンアミド(化合物８３)；
    ４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(化合物９３)；
    ４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(化合物９７)；
    ３'-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(化合物１０２)；
    ３'-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(化合物１０７)；
    ３'-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-ガラクトピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、ヘプタナトリウム塩(化合物１１２)；
    ３'-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→６)-２,３,４-トリ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-マンノピラノシド、トリデカナトリウム塩(化合物１１９)；
    ２-(コレスタン-３-イルオキシ)アセタミド２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、デカナトリウム塩(化合物１３４)；
    １-[(コレスタン-３-イルオキシ)プロピル]-３-[２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド] チオ尿素、デカナトリウム塩(化合物１３９)；
    ３'-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ｏ-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-((１-ピリジニウム-１-イル)-２,３,５,６-テトラ-Ｏ-スルホ-Ｄ-グルコシド、トリデカナトリウム塩(化合物１４０)；および、
    ８-ペンタデカニル２,３,４,６-テトラ-Ｏ-スルホ-Ｄ-グルコピラノシド、テトラナトリウム塩(化合物１４３)からなるグループから選択される化合物。
  7. 血管形成、転移、炎症、凝固／血栓、高血中トリグリセリド濃度、微生物感染および／または心臓血管疾患に起因する哺乳動物の障害を予防または治療するための医薬組成物であって、請求項１乃至６のいずれかに記載の化合物の少なくとも一つを、当該化合物のための薬学的に許容可能な少なくとも一つの担体または希釈剤と共に含む組成物。
  8. 血管形成、転移、炎症、凝固／血栓、高血中トリグリセリド濃度、微生物感染および／または心臓血管疾患に起因する哺乳動物の障害の予防剤または治療剤を製造するための請求項１乃至６のいずれかに記載の化合物の使用。
  9. 前記化合物が、
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物６５)；
    ４-(コレスタン-３-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物７０)；
    ４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物７６)；
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物８７)；
    ３-ステアラミドプロピル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-Ο-Ｄ-グルコピラノシド、デカナトリウム塩(化合物１２３)；および、
    ３-ステアラミドプロピル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、トリデカナトリウム塩(化合物１２８)からなるグループから選択される請求項８に記載の使用。
  10. 血管形成、転移、炎症、凝固／血栓、高血中トリグリセリド濃度、微生物感染および／または心臓血管疾患に起因する哺乳動物の障害を予防または治療するための獣医薬組成物であって、請求項１乃至６のいずれかに記載の化合物の少なくとも一つを、当該化合物のための獣医学的に許容可能な少なくとも一つの担体または希釈剤と共に含む組成物。
  11. 血管形成、転移、炎症、凝固／血栓、高血中トリグリセリド濃度、微生物感染および／または心臓血管疾患に起因するヒト以外の哺乳動物の障害を予防または治療する方法であって、有効量の請求項１乃至６のいずれかに記載の化合物または少なくとも一つの当該化合物を含む組成物を当該動物に投与する工程を含む方法。
  12. 前記化合物が、
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物６５)；
    ４-(コレスタン-３-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物７０)；
    ４-(コレスタン-３β-イル-オキシメチル)[１,２,３]トリアゾール-１-イル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-１-デオキシ-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物７６)；
    ３β-コレスタニル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホナトナトリウム-β-Ｄ-グルコピラノシド(化合物８７)；
    ３-ステアラミドプロピル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-Ο-Ｄ-グルコピラノシド、デカナトリウム塩(化合物１２３)；および、
    ３-ステアラミドプロピル２,３,４,６-テトラ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-α-Ｄ-グルコピラノシル-(１→４)-２,３,６-トリ-Ο-スルホ-β-Ｄ-グルコピラノシド、トリデカナトリウム塩(化合物１２８）からなるグループから選択される請求項１１に記載の方法。
JP2010529195A 2007-10-16 2008-10-16 新規硫酸化オリゴ糖誘導体 Active JP5509084B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2007905680A AU2007905680A0 (en) 2007-10-16 Novel Sulfated Oligosaccharide Derivatives
AU2007905680 2007-10-16
PCT/AU2008/001535 WO2009049370A1 (en) 2007-10-16 2008-10-16 Novel sulfated oligosaccharide derivatives

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2014002123A Division JP2014111609A (ja) 2007-10-16 2014-01-09 新規硫酸化オリゴ糖誘導体

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2011500606A JP2011500606A (ja) 2011-01-06
JP5509084B2 true JP5509084B2 (ja) 2014-06-04

Family

ID=40566927

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2010529195A Active JP5509084B2 (ja) 2007-10-16 2008-10-16 新規硫酸化オリゴ糖誘導体
JP2014002123A Pending JP2014111609A (ja) 2007-10-16 2014-01-09 新規硫酸化オリゴ糖誘導体
JP2015098003A Active JP6028284B2 (ja) 2007-10-16 2015-05-13 新規硫酸化オリゴ糖誘導体

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2014002123A Pending JP2014111609A (ja) 2007-10-16 2014-01-09 新規硫酸化オリゴ糖誘導体
JP2015098003A Active JP6028284B2 (ja) 2007-10-16 2015-05-13 新規硫酸化オリゴ糖誘導体

Country Status (14)

Country Link
US (3) USRE46955E1 (ja)
EP (1) EP2205616B3 (ja)
JP (3) JP5509084B2 (ja)
KR (1) KR101646960B1 (ja)
CN (2) CN104666318A (ja)
AU (1) AU2008314505C1 (ja)
BR (1) BRPI0816613A2 (ja)
CA (1) CA2704201C (ja)
ES (1) ES2584927T7 (ja)
HK (2) HK1149564A1 (ja)
IL (1) IL205143A (ja)
MX (1) MX338213B (ja)
RU (1) RU2483074C2 (ja)
WO (1) WO2009049370A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014111609A (ja) * 2007-10-16 2014-06-19 Progen Pharmaceuticals Ltd 新規硫酸化オリゴ糖誘導体

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030104410A1 (en) * 2001-03-16 2003-06-05 Affymetrix, Inc. Human microarray
ES2728135T3 (es) 2011-07-20 2019-10-22 Univ Brigham Young Materiales de hidrogel que incorporan un compuesto de elución de ceragenina
FR2993182B1 (fr) * 2012-07-13 2014-10-17 Urgo Lab Pansement a liberation prolongee d'actifs
US10568893B2 (en) 2013-03-15 2020-02-25 Brigham Young University Methods for treating inflammation, autoimmune disorders and pain
AU2014234992B2 (en) 2013-03-15 2018-01-18 Brigham Young University Methods for treating inflammation, autoimmune disorders and pain
US11524015B2 (en) 2013-03-15 2022-12-13 Brigham Young University Methods for treating inflammation, autoimmune disorders and pain
CN103145774A (zh) * 2013-03-21 2013-06-12 苏州鸿洋医药科技有限公司 一种抗凝戊糖及其制备方法
US9758607B2 (en) 2013-10-10 2017-09-12 Research Foundation Of The City University Of New York Polymer with antibacterial activity
US11690855B2 (en) 2013-10-17 2023-07-04 Brigham Young University Methods for treating lung infections and inflammation
US20150203527A1 (en) 2014-01-23 2015-07-23 Brigham Young University Cationic steroidal antimicrobials
US10441595B2 (en) 2014-06-26 2019-10-15 Brigham Young University Methods for treating fungal infections
EP3271405A1 (en) 2015-03-20 2018-01-24 Aarhus Universitet Inhibitors of pcsk9 for treatment of lipoprotein metabolism disorders
CN104725447A (zh) * 2015-04-02 2015-06-24 天津理工大学 一种3-S-四羟基-β-D-葡萄糖苷-1,2,4-三唑类化合物
US10370403B2 (en) 2015-04-22 2019-08-06 Brigham Young University Methods for the synthesis of ceragenins
CN108348532A (zh) * 2015-04-22 2018-07-31 布莱阿姆青年大学 塞拉集宁的合成方法
CN105111261A (zh) * 2015-09-08 2015-12-02 天津理工大学 一种3-S-四羟基-β-D-葡萄糖苷-1,2,4-三唑类化合物及其制备方法和应用
US10226550B2 (en) 2016-03-11 2019-03-12 Brigham Young University Cationic steroidal antimicrobial compositions for the treatment of dermal tissue
CA3035875A1 (en) * 2016-09-20 2018-03-29 Aarhus Universitet Compounds for treatment of lipoprotein metabolism disorders
RU2635765C1 (ru) * 2016-10-31 2017-11-15 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) Средство, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гриппа
EP3555071A4 (en) * 2016-12-13 2020-06-10 Beta Therapeutics Pty. Ltd. HEPARANASE INHIBITORS AND THEIR USE
CN110291073A (zh) 2016-12-13 2019-09-27 贝塔医疗私人有限公司 乙酰肝素酶抑制剂及其用途
US11787783B2 (en) 2016-12-13 2023-10-17 Beta Therapeutics Pty Ltd Heparanase inhibitors and use thereof
KR20190134591A (ko) 2016-12-15 2019-12-04 프로젠 피지500 시리즈 피티와이 리미티드 조성물 및 그의 용도
US10959433B2 (en) 2017-03-21 2021-03-30 Brigham Young University Use of cationic steroidal antimicrobials for sporicidal activity
EP3492481A1 (en) 2017-11-30 2019-06-05 Vaxxilon AG Vaccine against klebsiella pneumoniae
WO2020118103A1 (en) * 2018-12-05 2020-06-11 Wayne State University Heparanase inhibitors and their use as anti-cancer compounds
US12186328B2 (en) 2019-05-23 2025-01-07 Brigham Young University Use of CSA compounds to stimulate stem cells and hair growth
AU2022231107A1 (en) * 2021-03-04 2023-10-19 Progen Pg500 Series Pty Ltd Methods of producing sulfated oligosaccharide derivatives and intermediates thereof

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05279381A (ja) * 1991-09-13 1993-10-26 Dainippon Ink & Chem Inc 硫酸化オリゴ糖芳香族配糖体
GB9200245D0 (en) * 1992-01-07 1992-02-26 British Bio Technology Compounds
US5591835A (en) * 1992-06-29 1997-01-07 Glycomed Incorporated Substituted lactose derivatives
CA2105345A1 (en) 1992-09-02 1994-03-03 Petrus B. Kruger Chemical compound
CA2159649A1 (en) * 1993-03-29 1994-10-13 Queen's University At Kingston Anticoagulant compounds
JPH0782292A (ja) * 1993-09-16 1995-03-28 Nippon Kayaku Co Ltd 新規なグリチルレチン酸関連化合物又はそれらの塩
WO1995009637A1 (en) * 1993-10-07 1995-04-13 Glycomed Incorporated Highly sulfated maltooligosaccharides with heparin-like properties
US5739115A (en) 1993-10-07 1998-04-14 Glycomed Incorporated Sulfated maltooligosaccharides with heparin-like properties
CA2180149A1 (en) * 1993-12-28 1995-07-06 Michael Paul Deninno Steroidal glycosides
US5663151A (en) * 1994-03-04 1997-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Sulfated α-glycolipid derivatives as cell adhesion inhibitors
SE9401826D0 (sv) * 1994-05-27 1994-05-27 Pharmacia Ab Anti-Helicobacter pyroli substance
US5783568A (en) 1994-06-10 1998-07-21 Sugen, Inc. Methods for treating cancer and other cell proliferative diseases
AUPN261895A0 (en) * 1995-04-28 1995-05-18 Australian National University, The Preparation and use of sulfated oligosaccharides
JPH09183789A (ja) * 1995-10-31 1997-07-15 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd 新規な硫酸化及び燐酸化糖誘導体、その製法及び用途
FR2751334B1 (fr) * 1996-07-19 1998-10-16 Sanofi Sa Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant
US6291434B1 (en) * 1998-11-24 2001-09-18 American Home Products Corp. Benzylmaltotriosides as inhibitors of smooth muscle cell proliferation
CN1347919A (zh) * 2000-10-12 2002-05-08 中国科学院生态环境研究中心 带有支链的硫酸酯化寡糖的制备
CN1450075A (zh) 2002-04-11 2003-10-22 中国科学院生态环境研究中心 一类寡糖及其硫酸化产物和它们的制备方法及含该寡糖的药物组合物
EP1359649A1 (de) 2002-05-03 2003-11-05 Trumpf Werkzeugmaschinen GmbH + Co. KG Montagesystem insbesondere für einen Schaltschrank
CN1989146A (zh) * 2004-03-04 2007-06-27 普罗吉恩工业有限公司 硫酸化寡聚糖衍生物
FR2873377B1 (fr) 2004-07-23 2006-10-13 Sanofi Synthelabo Derives d'azasucre, inhibiteurs d'heparanases, leur procede de preparation, les compositions en contenant et leur utilisation
US7741311B2 (en) 2005-01-03 2010-06-22 Shaker Mousa Composition and method for treating occlusive vascular diseases, nerve regeneration, and wound healing
AU2006245440B2 (en) * 2005-05-06 2012-04-19 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Immunogens for meningitidis-A vaccines
EP1908768A1 (en) * 2006-10-05 2008-04-09 Endotis Pharma Anticoagulant compounds
FR2912409B1 (fr) * 2007-02-14 2012-08-24 Sanofi Aventis Heparines de bas poids moleculaire comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine leur procede de preparation,leur utilisation
CN104666318A (zh) 2007-10-16 2015-06-03 普罗吉恩制药有限公司 新的硫酸化寡糖衍生物

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014111609A (ja) * 2007-10-16 2014-06-19 Progen Pharmaceuticals Ltd 新規硫酸化オリゴ糖誘導体

Also Published As

Publication number Publication date
KR20100097111A (ko) 2010-09-02
CA2704201C (en) 2015-06-30
US8828952B2 (en) 2014-09-09
AU2008314505A1 (en) 2009-04-23
CN104666318A (zh) 2015-06-03
IL205143A0 (en) 2010-11-30
USRE46955E1 (en) 2018-07-17
JP6028284B2 (ja) 2016-11-16
ES2584927T3 (es) 2016-09-30
JP2014111609A (ja) 2014-06-19
CA2704201A1 (en) 2009-04-23
KR101646960B1 (ko) 2016-08-09
CN101874035A (zh) 2010-10-27
BRPI0816613A2 (pt) 2018-10-23
MX2010004240A (es) 2010-08-02
JP2015164947A (ja) 2015-09-17
EP2205616A1 (en) 2010-07-14
EP2205616B1 (en) 2016-04-27
WO2009049370A1 (en) 2009-04-23
JP2011500606A (ja) 2011-01-06
EP2205616B3 (en) 2020-01-22
HK1149564A1 (en) 2011-10-07
AU2008314505B2 (en) 2012-02-02
ES2584927T7 (es) 2020-11-05
MX338213B (es) 2016-04-07
CN101874035B (zh) 2014-12-03
IL205143A (en) 2013-07-31
US20110245196A1 (en) 2011-10-06
HK1209648A1 (en) 2016-04-08
RU2010119466A (ru) 2011-11-27
EP2205616A4 (en) 2013-05-01
RU2483074C2 (ru) 2013-05-27
US20150065440A1 (en) 2015-03-05
AU2008314505C1 (en) 2020-11-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5509084B2 (ja) 新規硫酸化オリゴ糖誘導体
JP5139797B2 (ja) 硫酸化オリゴ糖誘導体
JP6295202B2 (ja) 感染性疾患の予防および治療のために有用なマンノシル化された化合物
CN101535327A (zh) 抗凝血化合物
EP0837867A1 (en) MODIFIED $g(a)-D-Glcp-(1-2)-$g(a)-D-Glcp-(1-3)-$g(a)-D-Glcp-ANALOGUES
ES2202212T3 (es) Benzofenona-a-d.glicopiranosidos, preparacion y uso terapeutico.
JP5283033B2 (ja) シアリルα（２→６）ラクトース含有化合物及びその使用
TW200413400A (en) Lipid a derivatives which have glucose back-bone as the reducing sugar part

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20110810

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20130514

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20130807

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20130814

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20130909

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20131008

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20140109

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20140128

A911 Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20140219

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20140311

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20140324

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 5509084

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

RD02 Notification of acceptance of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D02

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D04

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113

S531 Written request for registration of change of domicile

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531

S533 Written request for registration of change of name

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250