JP4216838B2

JP4216838B2 - 非連続式免疫分析装置及びこれを利用した免疫分析方法

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Publication number: JP4216838B2
Application number: JP2005278337A
Authority: JP
Inventors: チョヤンシク; イヒョクン; チョビョンキ
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Filing date: 2005-09-26
Publication date: 2009-01-28
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Description

本発明は、非連続式免疫分析装置に関し、より詳しくは、免疫クロマトグラフィーなどの免疫分析に使用されるパッド（ｐａｄ）が二つ以上の部分に分離されており、分離されたパッドを通じて液状検体などの移動相が移動する速度を調節することができる非連続式免疫分析装置及びこれを利用した免疫分析方法に関する。

迅速試験（ｒａｐｉｄｔｅｓｔ）法と知られた免疫クロマトグラフィー分析法は、微量の分析物質を短時間に定性及び定量的に検査できるように開発されて来た。このような分析法は、抗原抗体反応を利用して各種疾病の検査を含めて医学、農業、畜産業、食品、軍事、環境など多様な分野で使用されている。このような免疫クロマトグラフィー分析には、一般的に分析ストリップ（ａｓｓａｙｓｔｒｉｐ）または分析ストリップをプラスチックケース内部に装着したデバイス形態の分析装置が使用される。

図１は、通常的な免疫クロマトグラフィー分析に使用される分析ストリップの断面図である。

図１に示したように、通常的な分析ストリップ１０は、液状検体を収容する検体パッド１２と、接合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を含有する接合体パッド１４と、検体内の分析物質及び／または接合体と特異的に結合する結合剤（抗体または抗原）１６ａを固定させた多孔性メンブレンパッド１６と、液状検体を最終的に収容する吸湿パッド１８と、で構成される。

接合体は、肉眼またはセンサーを利用して感知することができるシグナルを発生させるラベルを抗原、抗体などのリガンド（ｌｉｇａｎｄ）に接合させたものである。このようなパッドは、連結部位がお互いに重畳された形態にプラスチック支持体２０の上部に連続的に配列される。

分析ストリップ１０がプラスチックケース内部に装着されて使用される場合には、ケースの上部に検体を検体パッド１２に滴下するための検体投入口と検査結果を確認するための結果確認窓とが形成されている。

このような分析ストリップ１０を利用した免疫クロマトグラフィー分析法において、液状検体は検体パッド１２に滴下される。滴下された液状検体は毛細管現象により接合体パッド１４及び多孔性メンブレンパッド１６を通じて移動し、最終的に吸湿パッド１８に収容される。この時、接合体パッド１４に含有されていた接合体も液状検体とともに移動する。もし、検体内に分析物質（ａｎａｌｙｔｅ）が存在すれば、分析物質を媒介として多孔性メンブレンパッド１６に固定された結合剤１６ａと結合するか（通常、“サンドイッチ（ｓａｎｄｗｉｃｈ）”反応と言う）、分析物質と競争的に結合剤１６ａと結合するようになる（通常、“競争型（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）”反応と言う）。したがって、検体内に分析物質が存在するか否かを肉眼またはセンサーを利用して感知することができる。

しかしながら、このような通常の分析ストリップ１０において、液状検体などの移動相が移動する速度を調節するためには、多孔性メンブレンパッド１６の細孔（ｐｏｒｅ）のサイズを調節しなければならない。したがって、通常の分析ストリップ１０では液状検体の移動速度（ｆｌｏｗｒａｔｅ）及び抗原抗体反応速度を効果的に制御することができない。即ち、液状検体と検体を希薄させる測定希薄額の反応、検体と接合体の反応、多孔性メンブレンパッド１６に固定された結合剤１６ａと検体及び／または接合体の抗原抗体反応が十分な時間を置いて実行されないので、免疫クロマトグラフィー分析の感度と特異性が低下される短所がある。

また、図１に示された分析ストリップ１０の場合、製造過程中に一部のパッド、例えば、多孔性メンブレンパッド１６に不良が発生すれば、パッドが連続的に連結されているので分析ストリップ１０全体を廃棄しなければならない。また、通常の分析ストリップ１０は、分析ストリップ１０の形態やこれを含む免疫分析デバイスの形態が棒形態に限定される短所がある。

また、このような通常の分析ストリップ１０において、検体として全血（ｗｈｏｌｅｂｌｏｏｄ）を使用する場合には、溶血された赤血球などの全血成分の移動速度が分析物質と比較して非常に遅い。即ち、溶血された赤血球などの全血成分は細孔（ｐｏｒｅ）のサイズが小さな検体パッド１２及び接合体パッド１４を非常に遅い速度で通過して検体パッド１２、多孔性メンブレンパッド１６などに長期間残存する。したがって、固定された検査線で目的とする抗原抗体反応が発生した場合にも、多孔性メンブレンパッド１６、即ち、バックグラウンド（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）に存在する赤色の全血成分により検査線の発色が遮られて検査結果の判読が困難になって、全血成分が検査線を全部通過した後に検査線の発色を判読しなければならない。

これは検査結果判読に長期間が必要されて実用的ではない。このような短所は、マラリア抗原（Ａｇ）、エイズ、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、梅毒、胃潰瘍の原因菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）、腫瘍マーカー（ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＣＥＡ）、結核、サス、デング熱、ハンセン病など主に全血を検体として使用する疾病の検査において特に問題になる。

本発明は、上述したような従来技術の問題点を解決するためになされたもので、その目的は、液状バッファー、接合体、検体などの速度調節及び免疫クロマトグラフィー分析の感度と特異性が優秀な免疫分析装置を提供することにある。

本発明の他の目的は、免疫分析に使用されるパッドを通じて液状検体などの移動相が移動する速度を調節することができる免疫分析装置を提供することにある。

本発明のまた他の目的は、抗原抗体反応の種類によって抗原抗体反応時間を任意に調節することができる免疫分析装置を提供することにある。

本発明のまた他の目的は、免疫分析に使用されるパッドの製造工程が単純であり、一部パッドに不良が発生する場合にもパッド全体を交替する必要がない非連続式免疫分析装置及びこれを利用した免疫分析方法を提供することにある。

本発明のまた他の目的は、検体投入または判読を容易にするために免疫分析装置の構造を容易に変形することができる非連続式免疫分析装置及びこれを利用した免疫分析方法を提供することにある。

本発明のまた他の目的は、全血を検体として使用してもバックグラウンドが鮮明で結果判読が容易な全血検査用免疫分析装置及びこれを利用した免疫分析方法を提供することにある。

前記目的を達成するための本発明の第１の側面によれば、液状検体を収容する検体パッドを含む第１のパッドと、前記第１のパッドと所定距離が離隔されており、前記液状検体が移送される第２のパッドと、前記第１及び第２のパッドの上部を覆う上部ケースと、前記第１及び第２のパッドの下部を覆う下部ケースと、前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、記第１のパッドと第２のパッドとの間に位置する液体不透過性突出部である連結部であって、前記下部ケース及び上部ケースの間に前記液状検体が移動する毛細管通路を形成する前記連結部と、を含むことを特徴とする、免疫分析装置が提供される。

本発明の第２の側面によれば、ストリップ型プラスチック支持体と、各々所定距離が離隔されて前記プラスチック支持体の上部に位置する二つ以上の免疫分析用パッドと、前記二つ以上の免疫分析用パッドの上部を覆う上部ケースと、前記プラスチック支持体の下部を覆う下部ケースと、前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記所定距離が離隔された各々のパッドの間に位置する液体不透過性突出部である連結部であって、前記下部ケース及び上部ケースの間に前記液状検体が移動する毛細管通路を形成する前記連結部と、を含むことを特徴とする、免疫分析装置が提供される。

本発明の第３の側面によれば、検体パッドに液状検体を注入する段階と、前記検体パッドを覆う上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成された液体不透過性突出部により前記上部ケース及び下部ケースの間に形成される毛細管通路を通じて前記液状検体を移動させる段階と、前記毛細管通路を通過した液状検体を抗原抗体反応により検出する段階と、を含むことを特徴とする免疫分析方法が提供される。

本発明の第４の側面によれば、（ａ）液状バッファーを収容するバッファー収容部及び、（ｂ）前記バッファーに溶解されて移動する接合体を含有する接合体収容部が形成されている第１のパッドと、前記第１のパッドと所定距離が離隔されており、（ｃ）全血検体を収容する全血検体収容部及び、（ｄ）検体内の分析物質及び／または前記接合体と抗原抗体反応により結合する結合剤が固定された検査線が形成されている多孔性メンブレンパッドとを含む第２のパッドと、前記第１及び第２のパッドの上部を覆う上部ケースと、前記第１及び第２のパッドの下部を覆う下部ケースと、前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれの一つ以上に形成されており、前記第１のパッドと第２のパッドの間に位置する液体不透過性突出部である連結部であって、前記下部ケース及び上部ケースの間に前記液状バッファー及び接合体が移動する毛細管通路を形成する前記連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置が提供される。

本発明の第５の側面によれば、バッファー収容部に液状バッファーを注入して接合体を溶解させる段階と、多孔性メンブレンパッドの全血検体収容部に全血検体を注入する段階と、前記多孔性メンブレンパッド及び前記バッファー収容部を覆う上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成された液体不透過性突出部により前記上部ケース及び下部ケースの間に形成される毛細管通路を通じて前記液状バッファー及び接合体を前記多孔性メンブレンパッドに移動させる段階と、前記毛細管通路を通過した液状バッファー及び接合体が前記全血検体と混合されて前記多孔性メンブレンパッドに固定されている結合剤と抗原抗体反応する段階と、を含むことを特徴とする免疫分析方法が提供される。

本発明の第６の側面によれば、移動相を収容する第１のパッドと、前記第１のパッドと所定距離が離隔されており、前記移動相が移送され、免疫分析のための抗原抗体反応が実行される第２のパッドと、前記第１及び第２のパッドの上部を覆う上部ケースと、前記第１及び第２のパッドの下部を覆う下部ケースと、前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記第１のパッドと第２のパッドの間に位置する液体不透過性突出部である連結部であって、前記下部ケース及び上部ケースの間に前記液状検体が移動する毛細管通路を形成する前記連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置が提供される。

本発明による免疫分析装置は、免疫分析に使用されるパッドを通じて液状検体などの移動相が移動する速度を調節することができるので、抗原抗体反応の種類によって抗原抗体反応時間を任意に調節することができる。

以下、添付の図面を参照して本発明による好ましい実施の形態について詳しく説明する。以下の説明において、同一の構成要素については出来るだけ同一の参照番号及び参照符号を使用する。

図２及び図３は、各々本発明の第１の実施形態による非連続式免疫分析装置の分解斜視図及び側断面図である。

図２及び図３に示したように、本発明の第１の実施形態による免疫分析装置は、空間的に所定距離が離隔されて（ｓｐａｔｉａｌｌｙｉｓｏｌａｔｅｄ）いる第１のパッド３２と、第２のパッド３４と、を具備し、第１及び第２のパッド３２、３４の上部及び下部は、各々上部ケース５２及び下部ケース７２により覆われる。

第１のパッド３２及び第２のパッド３４は、下部ケース７２に形成された多数のパッド固定ガイド７４に挿入固定するか、上部ケース５２または下部ケース７２に形成された溝（図示せず）に結合固定でき、下部ケース７２には、第１のパッド３２及び第２のパッド３４を支持するための板状のパッド支持部７６が緩衝部材として形成される。

図３に示したように、上部ケース５２には、第１のパッド３２と第２のパッド３４との間の空間３０に挿入される連結部６０が形成されている。

連結部６０は、下部ケース７２または必要によって形成されるパッド支持部７６と所定距離が離隔されている突出部に形成することができ、第１のパッド３２に流入された液状検体が連結部６０と下部ケース７２またはパッド支持部７６との間の空間によって毛細管現象により移動して第２のパッド３４に移送される。したがって、連結部６０は、第１のパッド３２と第２のパッド３４との間の空間３０に液状検体が移動する毛細管通路（すきま）を形成する。このような連結部６０は、上部ケース５２に形成された液体不透過性突出部の形態を有することができ、必要によっては上部ケース５２または下部ケース７２に形成するか、上部ケース５２及び下部ケース７２全部に形成することもできる。

本発明の第１の実施形態による免疫分析装置において、第１のパッド３２及び第２のパッド３４としては、（ｉ）分析物質（ａｎａｌｙｔｅ）を含有すると予想される液状検体及び／または測定希薄液を収容する検体パッド１２と、（ｉｉ）肉眼またはセンサーを利用して感知することができるシグナルを発生させるラベル（例えば、ゴールド粒子、有色ポリスチレンマイクロ粒子、酵素、蛍光性染料、伝導性高分子、磁性粒子など）を分析物質と反応する抗原、抗体などのリガンド（ｌｉｇａｎｄ）に接合させた接合体を含有する接合体パッドと、（ｉｉｉ）検体として全血（ｗｈｏｌｅｂｌｏｏｄ）を使用する時、抗原抗体反応を促進するか非特異反応を抑制するための物質を含有することで、必要によって使用される補助パッドと、（ｉｖ）検体内の分析物質及び／または接合体と特異的に結合する結合剤（抗原または抗体）を固定させた検出部（検査線）を少なくとも一つ以上含む多孔性メンブレンパッド１６と、（ｖ）液状検体を最終的に収容する吸湿パッド１８などの免疫分析用パッドが使用される。“パッド”は一つのパッド、二つのパッドまたはその以上のパッドを一緒に使用したことを意味する。

本発明の第１の実施形態において、第１のパッド３２は液状検体を収容する検体パッドを含み、第２のパッド３４は液状検体が移送される一つ以上のパッドを含む。例えば、図２に示したように、第１のパッド３２は検体パッド１２であり、第２のパッド３４はお互いに重畳されて連結された多孔性メンブレンパッド１６と吸湿パッド１８とを含むことができる。また、第１のパッド３２は、お互いに重畳されるか分離された二つ以上のパッド、例えば、（ｉ）検体パッド１２と接合体パッドと、（ｉｉ）全血用検体パッド１２と、各種補助パッド及び接合体パッドと、を含み、第２のパッド３４は、残りの免疫分析用パッドを含むことができる。補助パッドは、抗原抗体反応を促進するか非特異反応を抑制する物質を含有する。例えば、補助パッドは、全血（ｗｈｏｌｅｂｌｏｏｄ）検体と混合されると、赤血球を溶血させる成分の試薬を乾燥された状態で含有することにより、溶血された赤血球が多孔性メンブレンパッド１６に移動することを防止する役割をする。このような補助パッドは、検体パッド１２と接合体パッドの間に形成されて検体パッド１２により赤血球が濾過された液状検体と補助パッドに含有された物質が混合されるようにすることが好ましい。多孔性メンブレンパッド１６は、ニトロセルロース、ガラスファイバー、ポリエテルスルホン（ＰＥＳ）、セルロース、ナイロンなどで形成でき、５乃至１５μｍサイズの気孔を有するニトロセルロースからなることが好ましい。第１のパッド３２及び第２のパッド３４を構成する免疫分析パッドは、二つのプラスチック支持体２０ａ、２０ｂの上部に各々形成でき、このようなプラスチック支持体２０ａ、２０ｂを使用すれば、第１のパッド３２及び第２のパッド３４の製造及び装着が容易である。プラスチック支持体２０ａ、２０ｂは、ポリプロピレンフィルム、ポリエステルフィルム、ポリカーボネート（ｐｏｌｙｃａｒｂｏｎａｔｅ）フィルム、アクリル（ａｃｒｙｌｉｃ）フィルムなどにより形成することができ、好ましくは、ポリプロピレンフィルムにより形成する。

図４Ａ乃至図４Ｃは、本発明の第１の実施形態による非連続式免疫分析装置の上部ケース５２及び／または下部ケース７２に形成される連結部６０の拡大正面図、底面図及び側面図である。

図４Ａ〜４Ｃに示したように、連結部６０は、第１のパッド３２及び第２のパッド３４の方向に肩部（ｓｈｏｕｌｄｅｒ）６２ａ、６２ｂが形成された突出部６４の形態を有することができる。ここで、肩部６２ａ、６２ｂは、各々第１のパッド３２及び第２のパッド３４の末端を押して固定する役割をし、突出部６４は、第１のパッド３２と第２のパッド３４との間に毛細管通路を形成する役割をする。したがって、突出部６４は、第１のパッド３２と第２のパッド３４との間の空間３０に挿入される形態を有することが好ましい。肩部６２ａ、６２ｂには第１のパッド３２及び第２のパッド３４の固定を容易にするための多数の微細突起６６が形成されていることが好ましく、突出部６４には突出部６４とパッド支持部７６との間の距離を均一に維持して均一な毛細管通路を形成するための多数の微細突起６８が形成されていることが好ましい。このように突出部６４に微細突起６８を形成すれば、微細突起６８がパッド支持部７６に相接しても微細突起６８の周りに毛細管通路が形成される。図４Ａ〜図４Ｃに示したように、微細突起６６、６８は、液状検体の移動方向に形成された直線上の突起形態を有することもでき、半球型突起、六面体型突起などの多様な形態を有することができる。連結部６０、具体的には突出部６４とパッド支持部７６または下部ケース７２との間の距離は、突出部６４、微細突起６８などの高さを変更して調節することができ、この距離によって連結部６０を通過する液状検体などの移動相の移動速度を調節することができる。したがって、免疫分析の抗原抗体反応速度を調節することができる。

本発明において、お互いに分離された第１パッド３２と第２のパッド３４との間の距離と、上部ケース５２と下部ケース７２との間に形成される毛細管通路の高さは、使用する抗原抗体反応、検体の種類によって適切に設定することができる。例えば、第１パッド３２と第２のパッド３４との間の距離は、０．５乃至５ｍｍ、好ましくは、１乃至３ｍｍ、より好ましくは、約２ｍｍであり、毛細管通路の高さｈ（図４Ａ参照）は、０．００５乃至１ｍｍ、好ましくは、０．０１乃至０．５ｍｍ、より好ましくは、０．０１乃至０．２ｍｍである。もし、距離及び高さが非常に大きいか小さい場合には液状検体の移動が円滑に行われない。

連結部６０は、抗原抗体反応速度を調節するために疎水性（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ）または親水性（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ）物質により処理できる。ここで、水溶性溶液（ａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎ）は、疎水性領域を容易に通過できない。水溶性溶液中の特定成分が疎水性領域に結合して疎水性領域が親水性領域に変性されると、水溶性溶液の通過が円滑になる。したがって、連結部６０を疎水性または親水性物質により処理すれば、液状検体などの移動相が第１のパッド３２から第２のパッド３４に移動する時間を調節して第１のパッド３２が反応混合物（ｒｅａｃｔｉｏｎｍｉｘｔｕｒｅ）を一定時間の間に保有する反応チャンバ（ｒｅａｃｔｉｏｎｃｈａｍｂｅｒ）として役目を実行するようにすることができる。連結部６０を疎水性または親水性物質により処理する方法には、疎水性または親水性ラテックス粒子または化合物により連結部６０をコーティング処理するか、プラズマを利用して疎水性または親水性基を連結部６０に結合させる方法などがある。この時、疎水性ラテックス粒子としては、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエステルなどのポリマーを使用することができ、親水性ラテックス粒子としては、表面にカルボキシ基、アミン基、ヒドロキシ基などの親水性基を有するポリマーを使用することができる。疎水性化合物としては、パルミチン酸（ｐａｌｍｉｔｉｃａｃｉｄ）、ステアリン酸（ｓｔｅａｒｉｃａｃｉｄ）、オレイン酸（ｏｌｅｉｃａｃｉｄ）などの長い脂肪酸化合物とインクなどを使用することができ、親水性化合物としては、界面活性剤、グリセロール、ポリビニールアルコールなどの親水性重合体を使用することができる。プラズマを利用して親水性基を連結部６０に付着する方法としては、アクリル系、メタクリル系、不飽和アミド系、ジエン系、ツリエン系単量体などの親水性単量体を連結部６０の表面でプラズマグラフト重合するか、連結部６０の表面で酸素または窒素を水素プラズマにより処理して連結部６０の表面に親水性官能基のカルボキシ基やアミン基を導入する方法を使用することができる。プラズマを利用して疎水性基を連結部６０に付着する方法としては、連結部６０の表面でヘキサフルオロプロペン（ＣＦ_２＝ＣＦ−ＣＦ_３）をプラズマ重合してＣ−Ｆ結合を有する薄膜を連結部６０の表面に形成する方法を使用することができる。

また図２を参照すれば、上部ケース５２には、検体パッド１２と対応する位置に検体投入口５５が形成され、多孔性メンブレンパッド１６の検出部に対応する位置には結果確認窓５６が形成されている。また、検体パッド１２の下端に別の検体希薄液投入口５４を形成するか、吸湿パッド１８と対応する位置に換気口５８を形成することができる。

このように検体希薄液投入口５４を別に形成すれば、検査誤差を減少させて反応特異性及び感度を向上させることができるので好ましい。吸湿パッド１８の上部に形成される換気口５８は、吸湿パッド１８部分の通風を円滑にして結果確認窓５６側に液状検体及び接合体が逆流することを防止する。したがって、バックグラウンドクリアランス（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄｃｌｅａｒａｎｃｅ）を誘導して検査結果の判読を容易にする。このような換気口５８は、吸湿パッド１８の側面方向に形成するか対面及び側面方向全部に形成することもできる。上部ケース５２または下部ケース７２の内部には免疫分析用の各種パッドを適切に配置し、固定または圧着するための多数のガイド、突起などが形成でき、上部ケース５２または下部ケース７２は、結合溝、結合突起などの通常の手段により結合できる。場合によっては上部ケース５２及び下部ケース７２は統合された形態、即ち、一体に形成することもできる。

本発明の第１の実施形態による免疫分析装置の動作について説明すれば、液状検体が第１のパッド３２、例えば、上部ケース５２の検体投入口５５を通じて検体パッド１２に注入される。注入された液状検体は、上部ケース５２に形成された連結部６０により上部ケース５２と下部ケース７２との間に形成される毛細管通路を通じて多孔性メンブレンパッド１６と吸湿パッド１８からなった第２のパッド３４に移動する。この時、毛細管通路のサイズは、検体内の分析物質、接合体、多孔性メンブレンパッド１６の結合剤などが実行する抗原抗体反応によって予め調節されているので、第１のパッド３２から抗原抗体反応が充分に実行された後に次の区域（ｚｏｎｅ）である第２のパッド３４に移動して抗原抗体反応が実行される。したがって、連結部６０は、移動相の移送遅延（ｆｌｏｗｄｅｌａｙ）を誘導する反応障壁（ｒｅａｃｔｉｏｎｂａｒｒｉｅｒ）または抗原抗体反応速度調節部としての役割をする。多孔性メンブレンパッド１６に移送された液状検体及び／または接合体は、多孔性メンブレンパッド１６に固定されている結合剤と反応して肉眼またはセンサーを利用して感知することができるシグナルを発生する。

図５は、本発明の第２の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。

図５に示したように、本発明の第２の実施形態による免疫分析装置は、二つのプラスチック支持体２０ａ、２０ｂの上部に所定の距離を置いて第１乃至第３のパッド３２、３４、３６が順次に形成されており、第１のパッド３２と第２のパッド３４との間の空間３０ａ及び第２のパッド３４と第３のパッド３６との間の空間３０ｂに第１連結部６０ａ及び第２の連結部６０ｂが形成されていることの以外は、本発明の第１の実施形態と実質的に同一な構成を有する。本発明の第２の実施形態において、第１のパッド３２は検体パッド１２であり、第２のパッド３４は接合体パッド１４または補助パッドであり、第３のパッド３６は検出部が形成された多孔性メンブレンパッド１６及び吸湿パッド１８である。第１及び第２のパッド３２、３４は第１のプラスチック支持体２０ａの上部に形成され、第３のパッド３６は第２のプラスチック支持体２０ｂの上部に形成される。同様な方法で、第１のプラスチック支持体２０ａの上部に所定の距離を置いて３個のパッド、例えば、検体パッド１２、補助パッド及び接合体パッド１４を形成し、第２のプラスチック支持体２０ｂの上部に多孔性メンブレンパッド１６を形成した後、総合３個の連結部を利用してこれらを連結することができる。

このように二つ以上の連結部６０ａ、６０ｂを使用する場合には、各パッドを通過する移動相の移動速度を個別的に制御することができるので、免疫分析の感度を一層向上させるだけではなく、多数のパッドの中でいずれの一つに不良が発生しても不良パッドの交替が容易な長所がある。接合体パッド１４を使用する場合、免疫分析方法がサンドイッチ分析（ｓａｎｄｗｉｃｈａｓｓａｙ）である場合には、検体パッド１２に液状検体を滴下すれば、毛細管現象により検体は接合体パッド１４に移動し、検体内の分析物質（ａｎａｌｙｔｅ）と接合体のリガンド（ｌｉｇａｎｄ）部位は免疫学的反応により免疫複合体を形成する。この免疫複合体は、検体のフローによって多孔性メンブレンパッド１６に移動し、結合剤が固定化された部位である検出部（検査線）で免疫学的特異結合反応により捕獲される。分析形態が競争型または阻害型（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｏｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｓｓａｙ）分析である場合には、多孔性メンブレンパッド１６部分には接合体のリガンド（ｌｉｇａｎｄ）部位と反応する結合剤からなった検出部が形成され、この結合剤は分析物質と同一な物質やこれの類似体である。この免疫分析において、接合体のラベルが発生させるシグナルの強度は分析物質の量に比例するので、分析物質が存在するか否かを“陽性”または“陰性”のように定性的に検出することができ、さらにシグナルの強度を標準比色表と比較して分析物質の量を定量的に測定することもできる。

図６は、本発明の第３の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図であり、図７は、本発明の第３実施形態による非連続式免疫分析装置の変形例である。

本発明の第３の実施形態による免疫分析装置は、一つのストリップ型プラスチック支持体２０の上部に第１のパッド３２及び第２のパッド３４が所定距離が離隔されて各々形成され、必要によって第１のパッド３２と第２のパッド３４との間の空間の下部に液状検体の展開または移動を均一にするための緩衝溝７８がさらに形成されていることの以外は、本発明の第１の実施形態と実質的に同一な構成を有する。緩衝溝７８は、第１のパッド３２と第２のパッド３４との間の距離よりは大きいサイズに形成されることが好ましい。したがって、第１及び第２のパッド３２、３４の末端が連結部６０の肩部６２ａ、６２ｂにより押される時、第１及び第２のパッド３２、３４の末端が緩衝溝７８側に移動して液状検体が均一に移動するようにする。図６に示された免疫分析装置において、第１のパッド３２としては検体パッド１２が使用し、第２のパッド３４としては多孔性メンブレンパッド１６と吸湿パッド１８を使用することができる。

また、図７に示したように、一つのストリップ型プラスチック支持体２０の上部に多数のパッドを形成することができ、多数のパッドは少なくとも２個の部分で所定距離が離隔されている。図７に示した免疫分析装置では、一つのストリップ型プラスチック支持体２０の上部に第１乃至第４のパッド３２、３３、３４、３６がお互いに分離されて形成され、これらは３個の連結部６０ａ、６０ｂ、６０ｃにより連結される。図７に示された例において、第１乃至第４のパッド３２、３３、３４、３６は、各々検体パッド１２、補助パッド１３、接合体パッド１４及び吸湿パッド１８が重畳された多孔性メンブレンパッド１６の機能をする。ここで、補助パッド１３の使用が選択的であることは上述したようである。

図８は、本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置の分解斜視図であり、図９は、本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。図８及び図９に示したように、本発明の第４の実施形態による免疫分析装置は、空間的に所定距離が離隔されている第１、第２及び第３のパッド３２、３４、３６を具備し、第１及び第２のパッド３２、３４は第１のプラスチック支持体２０ａの上部に形成され、第３のパッド３６は第２のプラスチック支持体２０ｂの上部に形成されている。第１のパッド３２、第２のパッド３４及び第３のパッド３６は、お互いに独立的に形成されるので、上部ケース５２及び下部ケース７２の形態を必要によって変形することができる。図８及び図９に示したように、液状検体が投入される検体パッド１２の機能をする第１のパッド３２と接合体パッド１４または補助パッドの機能をする第２のパッド３４を覆う上部及び下部ケース５２、７２部分は地面に一直線になるように構成し、検出部が形成された多孔性メンブレンパッド１６の役割を実行する第３のパッド３６を覆う上部及び下部ケース５２、７２部分は第１のパッド３２に対して所定の角度、例えば、好ましくは水平面に対して８０度以下、より好ましくは５０度以下、更に好ましくは３０乃至５０度の角度で傾くように構成できる。したがって、検査者が結果確認ウィンドウ５６を通じて検出結果を容易に判読することができる。本発明の第４の実施形態において、第１のパッド３２と第２のパッド３４を連結する第１の連結部６０ａは、本発明の第１の実施形態と同一な構造を有する。

図１０Ａ〜図１０Ｃは、本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置に使用される所定の角度で傾くように位置した第３のパッド３６と第２のパッド３４を連結するための第２連結部６０ｃの拡大正面図、底面図及び側面図であり、図１１は、本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置の変形例である。図１０に示したように、第２の連結部６０ｃは下部ケース７２に形成された第１の傾斜型突出部６４ａ及び上部ケース５２に形成されており、第１の傾斜型突出部６４ａの傾斜面に相応する傾斜面を有した第２の傾斜型突出部６４ｂからなる。ここで、第２の傾斜型突出部６４ｂの側面には第２のパッド３４の末端を押して固定する肩部６２ａがさらに形成でき、第１の傾斜型突出部６４ａと第２の傾斜型突出部６４ｂの傾斜面はお互いに相応する形態で所定距離が離隔されてその間に毛細管通路を形成する。本発明による第１の実施形態と同様に、第１及び第２の傾斜型突出部６４ａ、６４ｂは、第２のパッド３４と第３のパッド３６の間の空間に正確に位置することが好ましい。また、第２のパッド３４の固定を容易にするために肩部６２ａには直線形状の微細突起６６が形成されており、第１及び第２の傾斜型突出部６４ａ、６４ｂの傾斜面には均一な毛細管通路を形成するための直線形状の微細突起６８が形成することがより好ましい。また、第１のプラスチック支持体２０ａの上部に２個以上のパッドが形成でき、図１１に示したように、第１のプラスチック支持体２０ａの上部に３個のパッド３２、３３、３４がお互いに分離されて形成され、これらの間の空間３０ａ、３０ｂは２個の連結部６０ａ、６０ｂにより連結さできる。図１１に示した例において、３個のパッド３２、３３、３４は各々検体パッド１２、補助パッド１３及び接合体パッド１４の機能をする。

図１２は、本発明の第５の実施形態による非連続式免疫分析装置の部分切開平面図である。本発明の第５の実施形態による非連続式免疫分析装置は、第１及び第２のパッド３２、３４が所定の距離を置いて分離され、第１及び第２のパッド３２、３４が第１パッド３２と第２のパッド３４との間の空間３０、即ち、連結部６０を中心として所定の角度で、図１２ではお互いに直角に離隔されて形成されることの以外は、本発明の第１の実施形態と同一な構成を有する。前記所定の角度には、第１パッド３２に対する第２のパッド３４の角度が、０度より大きく１８０度より小さい角度が含まれる。したがって、第１パッド３２と第２のパッド３４との間の空間３０には上部ケース５２に形成された連結部６０と下部ケース７２の間に形成された毛細管通路が存在し、毛細管通路に沿って第１のパッド３２から液状検体などの移動相が第２のパッド３４に移送する。図１２に示したように、第５の実施形態による免疫分析装置は、各々のパッド３２、３４がお互いに独立的に形成され、連結体を利用して各々のパッド３２、３４を連結することができるので、免疫分析装置の形態を多様に変形させることができる長所がある。

図１３は、本発明の第６の実施形態による非連続式免疫分析装置の分解斜視図である。本発明の第６の実施形態による免疫分析装置は、上部ケース５２に検体投入口を形成する代わりに検体パッド１２の役割をする第１のパッド３２の方向の上部及び／または下部ケース５２、７２の側面を貫通して第１のパッド３２と外部を連結する芯（ｗｉｃｋ）３８を装着したことの以外は、本発明の第１の実施形態と同一な構成を有する。このような免疫分析装置において、第１のパッド３２は検体パッド１２であり、装置外部にある液状検体は芯３８を通じて第１のパッド３２に流入される。したがって、検体投入口を上部ケース５２に形成する必要がない。芯３８を液状検体に浸漬させると、液状検体は芯３８に沿って第１のパッド３２に流入され、第１のパッド３２と第２のパッド３４の間に形成された連結体（図示せず）を通じて第２のパッド３４に流入されて抗原抗体反応による免疫分析を実行する。図１３に示した免疫分析装置は、多量の液状検体を使用することができ、液状検体を検体投入口に滴下するスポイトなどの別の装置を要しない長所がある。

図１４は、本発明の第７の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。本発明の第７の実施形態による免疫分析装置は、特に全血検体の免疫分析に有用である。図１４において、第１のパッド３２、第２のパッド３４、上部ケース５２、下部ケース７２、多数のガイド７４、パッド支持部７６、プラスチック支持体２０ａ、２０ｂ及び連結部６０は、本発明の第１の実施形態での説明と同一であるか類似な機能をする。本発明の第７の実施形態において、第１のパッド３２に流入された液状バッファーなどの移動相は連結部６０とパッド支持部７６の間の空間によって毛細管現象により移動して第２のパッド３４に移送する。したがって、連結部６０は第１のパッド３２と第２のパッド３４との間の空間３０に液状バッファーが移動する毛細管通路を形成する。

図１４に示したように、第１のパッド３２には液状バッファーを収容するバッファー収容部ａ１及びバッファーに溶解されて移動する接合体を含有する接合体収容部ａ２が形成されている。接合体収容部ａ２の接合体はバッファーに溶解されて移動する。したがって、液状バッファーは接合体を溶解及び移動させる移動相（ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ）の機能をし、必要によっては検体を希薄するか赤血球などの全血検体成分を溶血（ｌｙｓｉｓ）させる機能をする。抗原抗体反応のための通常の液状溶液は、抗原抗体反応によって適切に選択して使用することができ、１０ｍＭ乃至１Ｍ濃度のリン酸塩緩衝液を例示することができる。接合体が収容される第１のパッド３２は、ガラスファイバー、ポリエステル（Ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ）、ウッドパルプペーパー（ｗｏｏｄｐｕｌｐｐａｐｅｒ）、これらの混合物などからなる。バッファー収容部ａ１及び接合体収容部ａ２のサイズ及び位置は、使用する抗原抗体反応によって適切に設定できる。第２のパッド３４は、分析物質（ａｎａｌｙｔｅ）を含有すると予想される全血検体を収容する全血検体収容部ａ３と、検体内の分析物質及び／または接合体と抗原抗体反応により結合される結合剤（抗原または抗体）が固定された検査線ａ４または検出部が形成されている多孔性メンブレンパッド１６を含み、第１のパッドと所定距離が離隔されている。また、必要によって第２のパッド３４は液状バッファー及び検体を最終的に収容する吸湿パッド１８をさらに含むことができ、吸湿パッド１８はその連結末で多孔性メンブレンパッド１６と重畳できる。全血検体収容部ａ３及び検査線ａ４のサイズ及び位置も使用する抗原抗体反応によって適切に設定できる。

また、上部ケース５２には、バッファー収容部ａ１と対応する位置にバッファー投入口５４が形成されており、多孔性メンブレンパッド１６の全検体収容部ａ３に対応する位置に検体投入口５５が形成され、検査線ａ４に対応する位置に結果確認ウィンドウ５６が形成されている。また、吸湿パッド１８と対応する位置に換気口５８が形成でき、必要によって上部ケース５２の端部に溶血溝５９がさらに形成できる。溶血溝５９は、全血検体と全血検体の溶血のためのバッファーを混合するための所で、例えば、全血検体内の赤血球を溶血させるために提供される。溶血溝５９は予め溶血された全血検体を免疫分析に使用する場合に有用である。図１４のように、バッファー投入口５４ａと検体投入口５５を別に形成すれば、全血検体はバッファー収容部ａ１及び接合体収容部ａ２と接触しない。したがって、予め溶血された全血検体を使用すか、液状バッファーにより多孔性メンブレンパッド１６上で全血検体が溶血される場合にも、溶血された赤血球などの全血成分が細孔（ｐｏｒｅ）のサイズが大きい多孔性メンブレンパッド１６を迅速に通過して吸湿パッド１８方向に移動するので、判読時間内にバックグラウンド（Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）がきれいになって結果判読が容易である。また、このように全血検体を多孔性メンブレンパッド１６に直接投入すれば、抗原抗体反応時間が長くなって検査誤差を減少させ、反応特異性及び感度を向上させることができる。

本発明の第７の実施例による免疫分析装置の動作について説明すれば、まず、バッファー収容部ａ１に液状バッファーを注入して接合体収容部ａ２に含有された接合体を溶解させ、また多孔性メンブレンパッド１６の全血検体収容部ａ３に全血検体を注入する。この時、液状バッファー及び全血検体の注入順序及び注入間隔は、バッファー、検体、接合体、免疫分析装置のサイズ及び構造によって適切に設定することができる。次に、多孔性メンブレンパッド１６及びバッファー収容部ａ１を覆う上部ケース５２及び下部ケース７２の一つ以上に形成された突出部６０により上部ケース５２及び下部ケース７２の間に形成される毛細管通路を通じて液状バッファー及び接合体を多孔性メンブレンパッド１６に移動させる。それでは、毛細管通路を通過した液状バッファー及び接合体が全血検体と混合されて移動し、多孔性メンブレンパッド１６に固定されている結合剤と抗原抗体反応することにより検査線ａ４の色相が変化し、このような色相の変化を分析して免疫分析を実行することができる。

図１５は、本発明の第８の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。

本発明の第８の実施形態による免疫分析装置は、（Ｉ）第１及び第２のプラスチック支持体２０ａ、２０ｂの上部に所定の距離を置いて第１及び第２のパッド３２、３４が各々形成されており、（ＩＩ）第１のパッド３２は所定距離が離隔されたバッファーパッド１２ａ及び接合体パッド１４からなり、（ＩＩＩ）第１の連結部６０ａはバッファーパッド１２ａ及び接合体パッド１４の間の空間３０ａに位置し、第２の連結部６０ｂは第１のパッド３２及び第２のパッド３４の間の空間３０ｂに位置したことの以外は、本発明の第１の実施形態と実質的に同一な構成を有する。このように二つ以上の連結部６０ａ、６０ｂを使用する場合には、各パッドを通過する移動相の移動速度を個別的に制御することができるので、免疫分析の感度を一層向上させることができる。また、多数のパッドの中でいずれの一つに不良が発生しても不良パッドの交替が容易な長所がある。必要によってはバッファーパッド１２ａと接合体パッド１４はお互いに重畳することもできる。

本発明の第８の実施形態による免疫分析装置の動作について説明すれば、上部ケース５２の検体投入口５５を通じて多孔性メンブレンパッド１６に全血検体が注入されてバッファー投入口５４ａを通じてバッファーパッド１２ａに液状バッファーが注入されると、液状バッファーは上部ケース５２に形成された第１の連結部６０ａにより上部及び下部ケース５２、７２の間に形成される毛細管通路を通じて接合体パッド１４に移動して接合体と充分に混合される。混合されたバッファーはさらに第２の連結部６０ｂにより形成される毛細管通路を通じて第２のパッド３４に移動する。この時、毛細管通路のサイズは、バッファー、接合体、検体、多孔性メンブレンパッド１６の結合剤などが実行する抗原抗体反応によって予め調節されている。一方、液状バッファーが非特異抗原抗体反応を減少させるための化学物質またはタンパク質を含んでいる場合には、第１及び第２の連結部６０ａ、６０ｂによる移動速度調節により液状バッファーが接合体及び／または検体と充分に反応しながら移動するので、非特異抗原抗体反応を効果的に抑制することができる。したがって、第１及び第２の連結部６０ａ、６０ｂは移動相の移送遅延（ｆｌｏｗｄｅｌａｙ）を誘導する反応障壁（ｒｅａｃｔｉｏｎｂａｒｒｉｅｒ）または抗原抗体反応の速度調節部の役割をする。多孔性メンブレンパッド１６に移送した液状バッファー及び接合体は多孔性メンブレンパッド１６に投入された検体と混合され、多孔性メンブレンパッド１６に固定されている結合剤と反応して肉眼またはセンサーを利用して感知することができるシグナルを発生させる。

図１６は、本発明の第９の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。本発明の第９の実施形態による免疫分析装置は、一つのストリップ型プラスチック支持体２０の上部に第１及び第２のパッド３２、３４が所定距離が離隔されて各々形成されており、必要によって第１パッド３２と第２のパッド３４との間の空間の下部の下部ケース７２またはパッド支持部７６に液状バッファーの展開または移動を均一にするための緩衝溝７８がさらに形成されていることの以外は、本発明の第７の実施形態と実質的に同一な構成を有する。好ましくは、緩衝溝７８は第１及び第２のパッド３２、３４の間の距離よりは大きいサイズに形成されて第１及び第２のパッド３２、３４の末端が連結部６０の肩部６２ａ、６２ｂにより押される時、第１及び第２のパッド３２、３４の末端が緩衝溝７８側に移動して液状検体が均一に移動するようにする。

本発明による免疫分析装置は多様な迅速試験に利用できる。迅速試験は、血漿、血清、小便、鼻水、涙、唾などの体液を検体として利用して姙娠、排卵、インフルエンザウイルス、ロタウイルス、鳥類インフルエンザウイルス、クラミジアなどの存在確認、阿片、モルヒネ類、ヒロポン、ヘロイン、アンフェタミン類、コカイン、マリファナなどの麻薬類を投与したか否かについての確認、コレラ、ＳＥＢ（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎＢ）、ボツリヌス、リシン、炭疽菌、ブルセラ菌、バクシニア、サルモネラ、野兎などの検出による生化学テロ発生確認などを例示することができる。

特に、本発明の第７、８、９の実施形態による免疫分析装置は、全血を検体として利用してマラリア、エイズ、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、梅毒、胃潰瘍原因菌、腫瘍マーカー（ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＣＥＡ）、結核、サス、デング熱、癩病などの多様な迅速診断に使用できる。ここで、全血（ｗｈｏｌｅｂｌｏｏｄ）は人体または動物から直接得た未加工血液だけではなく、赤血球、血漿、血清など接合体パッドでの通過速度が遅い成分を一つ以上含む血液成分を全部含む。

以下、実験例を通じて本発明についてより詳しく説明するが、本発明はそれに限定されない。

［実験例１］
免疫分析装置を利用したインフルエンザウイルスの検査
（Ａ）抗体固定化ニトロセルロースパッドの製造
インフルエンザウイルスタイプＡ及びタイプＢのヌクレオカプシド（Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ）抗原に対する単クローン抗体をリン酸緩衝液に希薄した後、噴射器を利用してニトロセルロースパッド（幅２５ｍｍ、気孔サイズ：１０乃至１２μｍ）の第１の検査線及び第２の検査線の位置に各々噴射した。また、マウス兔疫グロブリンを山羊に兔疫して得た抗マウス兔疫クロブリン抗体をリン酸緩衝液に希薄してニトロセルロースパッドの対照線位置に噴射し、３７℃恒温器で乾燥して固定化した。抗体が固定された部分を除外した残りのニトロセルロースパッドの余白には牛の血清アルブミン０．０５重量％、スクロオス４重量％及びイオン性界面活性剤０．０６２５重量％を含有したリン酸塩緩衝液を噴霧して封鎖した後、３０℃恒温器で６０乃至１２０分間乾燥した。ニトロセルロースパッドを接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体（ｂａｃｋｉｎｇｐｌａｔｅ）に付着し、ニトロセルロースパッドの上端に吸湿パッド（アメリカ、ミリフォア社製品、アブゾーバントパッド（ａｂｓｏｒｂｅｎｔｐａｄ））を１ｍｍ重畳して付着した。

（Ｂ）検体パッド及び抗体ゴールド接合体パッド付着ストリップの製造
コロイダルゴールド水溶液１ｍｌにインフルエンザウイルスタイプＡ及びタイプＢのヌクレオカプシド（Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ）抗原に対する単クローン抗体を濃度別に添加した後、ゴールドコロイド水溶液量の１／１０に該当する１５０ｍＭの塩化ナトリウム水溶液を添加してゴールドコロイド安定化最小量を求めて、ここで決定された比率どおりに混合して接合した後、１重量％牛の血清アルブミンにより封鎖した。その接合体溶液を遠心分離機により８００ｒｐｍで４回遠心分離して上層を除去し、１重量％牛の血清アルブミンリン酸塩緩衝液により吸光度が１０になるように再浮遊した。製造されたゴールドコロイド抗体接合体溶液を０．５重量％スクロース（Ｓｕｃｒｏｓｅ）を含有した蒸溜水を使用して吸光度が２になるように希薄した後、ガラスファイバーパッドに１０μｌ／２５ｍｍ^２の比率に噴霧した。前記ゴールドコロイド抗体接合体を含有したパッドを液体窒素により急速凍結した後、凍結乾燥器内で２０時間の間に乾燥し、乾燥されたパッドを０．７Ｘ３０ｍｍサイズに切断した。得られた抗体ゴールド接合体パッド及び検体パッドを１ｍｍ間隔に分離して接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体に付着した。

（Ｃ）免疫分析装置の製造
Ａ及びＢ段階により製造されたストリップを下部ケースに２ｍｍ間隔に各々装着した。次に、抗体ゴールド接合体パッドと検体パッドの間及び抗体ゴールド接合体パッドとニトロセルロースパッドの間を連結する２個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の第４の実形態（図８参照）による免疫分析装置を製造した。

完成された免疫分析装置を利用してインフルエンザウイルスタイプＡ及びＢ型陽性及び陰性検体各１個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。

［実験例２］
免疫分析装置を利用した梅毒菌の検査
インフルエンザウイルスのヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体を使用する代わりに遺伝子組換え梅毒菌抗原を使用したことの以外は、実験例１と同一な方法によりニトロセルロースパッド及び抗原ゴール接合体パッドを製造した。ニトロセルロースパッドを接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体に付着し、ニトロセルロースパッドの上端に吸湿パッド（アメリカ、ミリフォア社製品）を１ｍｍ重畳して付着し、全血用検体パッド、補助パッド及び抗原ゴールド接合体パッドを各々１ｍｍずつの間隔を置いて接着剤が塗布された別のポリプロピレンプレート支持体に付着した。製造された２個のストリップを下部ケースに２ｍｍ間隔に各々装着した後、全血用検体パッド、補助パッド、抗原ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを連結する３個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の第４の実施形態（図８参照）による免疫分析装置を製造した。

完成された免疫分析装置を利用して梅毒陽性及び陰性検体各１個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。

［実験例３］
免疫分析装置を利用したＨＧＣの検査
インフルエンザウイルスのヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体を使用する代わりにアルファＨＣＧ抗原に対する単クローン抗体を使用したことの以外は、実験例１と同一な方法によりニトロセルロースパッド及び抗体ゴールド接合体パッドを製造した。検体パッド、抗体ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを各々１ｍｍの間隔に接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体に付着し、ニトロセルロースパッドの上端に吸湿パッド（アメリカ、ミリフォア社製品）を１ｍｍ重畳して付着した。製造されたストリップを下部ケースに装着した後、検体パッド、抗体ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを連結する２個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の緩衝溝７８を有する第３の実施形態による免疫分析装置を製造した。完成された免疫分析装置を利用してＨＧＣ陽性及び陰性検体各１個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。

［実験例４］
免疫分析装置を利用したＨＩＶウイルスの検査
インフルエンザウイルスのヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体をリン酸緩衝液に希薄して使用する代わりにＨＩＶウイルス１型及び２型のエンベロープ抗原（ＥｎｖｅｌｏｐｅＡｎｔｉｇｅｎ）であるｇｐ４ｌとｇｐ３６をカーボネート緩衝液により希薄して使用したことの以外は、実験例１と同一な方法によりニトロセルロースパッド及び抗原ゴールド接合体パッドを製造した。全血用検体パッド、補助パッド、抗原ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを各々１ｍｍずつの間隔を置いて接着剤が塗布された一つのポリプロピレンプレート膜に付着し、ニトロセルロースパッドの上端に吸湿パッド（アメリカ、ミリフォア社製品）を１ｍｍ重畳して付着した。製造されたストリップを下部ケースに各々装着した後、全血用検体パッド、補助パッド、抗原ゴールド接合体パッド及びニトロセルロースパッドを連結する３個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の第３の実施形態（図７参照）による免疫分析装置を製造した。完成された免疫分析装置を利用してＨＩＶウイルス１型及び２型の陽性及び陰性検体各１個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。

［実験例５］
免疫分析装置を利用したＨＧＣの検査
検体パッドの一端に外部と連結される芯（ｗｉｃｋ）を装着したことの以外は、実験例３と同一な方法により３つのパッド（検体パッド、抗体ゴールド接合体パッド、及びニトロセルロースパッド）をもつ本発明の第６の実施形態（図１３、芯３８参照）による免疫分析装置を製造した。芯を通じて液状検体を免疫分析装置の内部に注入してＨＧＣ陽性及び陰性検体各１個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。

［実験例６］
全血を利用したマラリア抗原抗体の検査
インフルエンザウイルスのヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体を使用する代わりにマラリアｐ．ｖ／ｐ．ｆ抗原とマラリアヌクレオカプシド抗原に対する単クローン抗体を使用したことの以外は、実験例１と同一な方法によりニトロセルロースパッド及び抗原ゴールド接合体パッドを製造した。バッファーパッド及び抗体ゴールド接合体パッドを各々１ｍｍの間隔に接着剤が塗布されたポリプロピレンプレート支持体に付着した。製造されたニトロセルロースパッド及びバッファーパッド及び抗体ゴールド接合体パッドを含むパッドを下部ケースに各々１ｍｍの間隔に付着した。次に、抗体ゴール接合体パッドとバッファーパッドの間及び抗体ゴールド接合体パッドとニトロセルロースパッドの間を連結する２個の連結部が形成された上部ケースを覆って本発明の第８の実施形態（図１５参照）による免疫分析装置を製造した。完成された免疫分析装置を利用してマラリアｐ．ｖ／ｐ．ｆ抗原とマラリア抗体陽性及び陰性検体各１個を試験した結果、良好な感度で分析が実行されることを確認した。ここで、バッファーとしては、１００ｍＭ濃度のリン酸塩緩衝液を使用し、検体としては、予め溶血されなかった全血をそのまま使用し、免疫分析装置の全血検体収容部に投入された全血検体がバッファー収容部に投入されたリン酸塩緩衝液により自然的に溶血されるようにした。

以上、本発明の好適な実施の形態について添付の図面を参照して詳細に説明したが、以上の説明及び添付図面における多くの特定詳細は本発明のより全般的理解のために提供されるだけ、これら特定事項が本発明の範囲内で所定の変形や変更が可能であることは、当該技術分野で通常の知識を有する者には自明なことであろう。

通常的な免疫クロマトグラフィー分析に使用される分析ストリップの断面図である。本発明の第１の実施形態による非連続式免疫分析装置の分解斜視図である。本発明の第１の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。本発明の第１の実施形態による非連続式免疫分析装置に使用される連結部の拡大正面図である。本発明の第１の実施形態による非連続式免疫分析装置に使用される連結部の底面図である。本発明の第１の実施形態による非連続式免疫分析装置に使用される連結部の側面図である。本発明の第２の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。本発明の第３の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。本発明の第３実施形態による非連続式免疫分析装置の変形例である。本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置の分解斜視図である。本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置に使用される連結部の拡大正面図である。本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置に使用される連結部の底面図である。本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置に使用される連結部の側面図である。本発明の第４の実施形態による非連続式免疫分析装置の変形例である。本発明の第５の実施形態による非連続式免疫分析装置の部分切開平面図である。本発明の第６の実施形態による非連続式免疫分析装置の分解斜視図である。本発明の第７の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。本発明の第８の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。本発明の第９の実施形態による非連続式免疫分析装置の側断面図である。

符号の説明

１２検体パッド
１２ａバッファーバッド
１３補助パッド
１４接合体パッド
１６多孔性メンブレンパッド
１８吸湿パッド
２０、２０ａ、２０ｂプラスチック支持体
３０、３０ａ、３０ｂ空間
３２第１のパッド
３４第２のパッド
３８芯
５２上部ケース
５４検体希薄液投入口
５４ａバッファー投入口
５５検体投入口
５６結果確認ウィンドウ
５８換気口
５９溶血溝
６０、６０ａ、６０ｂ、６０ｃ連結部
６２ａ、６２ｂ肩部
６４突出部
６４ａ第１の傾斜型突出部
６４ｂ第２の傾斜型突出部
６４ｃ傾斜型突出部
６６、６８微細突起
７２下部ケース
７４パッド固定ガイド
７６パッド支持部
７８緩衝溝
ａ１バッファー収容部
ａ２接合体収容部
ａ３全血検体収容部
ａ４検査線

Claims

液状検体を収容する検体パッドを含む第１のパッドと、
前記第１のパッドと所定距離が離隔されており、前記液状検体が移送される第２のパッドと、
前記第１及び第２のパッドの上部を覆う上部ケースと、
前記第１及び第２のパッドの下部を覆う下部ケースと、
前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記第１のパッドと第２のパッドとの間に位置する液体不透過性突出部である連結部であって、前記下部ケース及び上部ケースの間に前記液状検体が移動する毛細管通路を形成する前記連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置。
前記下部ケースには、第１及び第２のパッドを支持するための板状のパッド支持部がさらに形成されていることを特徴とする請求項１に記載の免疫分析装置。
前記連結部は、前記第１及び第２のパッドの末端を押して固定する肩部が形成された突出部であることを特徴とする請求項１又は２に記載の免疫分析装置。
前記突出部には、多数の円形微細突起が形成されていることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の免疫分析装置。
前記連結部は、疎水性または親水性物質により処理されていることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫分析装置。
前記疎水性または親水性物質により連結部を処理する過程は、疎水性若しくは親水性ラテックス粒子、または疎水性若しくは親水性化合物により前記連結部をコーティングするか、プラズマを利用して疎水性または親水性基を前記連結部に結合させることを特徴とする請求項５に記載の免疫分析装置。
前記第１のパッドは、検体パッドであり、前記第２のパッドは、お互いに重畳されて連結された多孔性メンブレンパッドと吸湿パッドとを含むことを特徴とする請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫分析装置。
前記第１及び第２のパッドは、各々別のプラスチック支持体の上部に形成されていることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の免疫分析装置。
前記第１のパッドは、第１のプラスチック支持体の上部に所定距離が離隔されて形成されている検体パッドと接合体パッドとを含み、前記第２のパッドは、第２のプラスチック支持体の上部に形成されている多孔性メンブレンパッドと吸湿パッドとを含むことを特徴とする請求項１〜８のいずれか一項に記載の免疫分析装置。
前記第２のパッドを覆う上部及び下部ケース部分は、前記第１パッドを覆う上部及び下部ケース部分に対して所定の角度で傾いていることを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載の免疫分析装置。
前記第１及び第２のパッドは、前記連結部を中心として所定の角度で離隔されていることを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載の免疫分析装置。
ストリップ型プラスチック支持体と、
各々所定距離が離隔されて前記プラスチック支持体の上部に位置する二つ以上の免疫分析用パッドと、
前記二つ以上の免疫分析用パッドの上部を覆う上部ケースと、
前記プラスチック支持体の下部を覆う下部ケースと、
前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記所定距離が離隔された各々のパッドの間に位置する液体不透過性突出部である連結部であって、前記下部ケース及び上部ケースの間に前記液状検体が移動する毛細管通路を形成する前記連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置。
前記二つ以上の免疫分析用パッドは、検体パッド、接合体パッド及び検出部が形成された多孔性メンブレンパッドを含むことを特徴とする請求項１２に記載の免疫分析装置。
検体パッドに液状検体を注入する段階と、
前記検体パッドを覆う上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成された液体不透過性突出部により前記上部ケース及び下部ケースの間に形成される毛細管通路を通じて前記液状検体を移動させる段階と、
前記毛細管通路を通過した液状検体を抗原抗体反応により検出する段階と、を含むことを特徴とする免疫分析方法。
（ａ）液状バッファーを収容するバッファー収容部及び、（ｂ）前記バッファーに溶解されて移動する接合体を含有する接合体収容部が形成されている第１のパッドと、
前記第１のパッドと所定距離が離隔されており、（ｃ）全血検体を収容する全血検体収容部及び、（ｄ）検体内の分析物質及び／または前記接合体と抗原抗体反応により結合する結合剤が固定された検査線が形成されている多孔性メンブレンパッドとを含む第２のパッドと、
前記第１及び第２のパッドの上部を覆う上部ケースと、
前記第１及び第２のパッドの下部を覆う下部ケースと、
前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記第１のパッドと第２のパッドの間に位置する液体不透過性突出部である連結部であって、前記下部ケース及び上部ケースの間に前記液状バッファー及び接合体が移動する毛細管通路を形成する前記連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置。
前記液状バッファーは、全血検体成分を溶血させることを特徴とする請求項１５に記載の免疫分析装置。
前記第１のパッドは、ガラスファイバー、ポリエステル及びウッドパルプペーパーよりなった群から選択される一つ以上の物質からなることを特徴とする請求項１５又は１６に記載の免疫分析装置。
前記多孔性メンブレンパッドは、５乃至１５μｍサイズの気孔を有するニトロセルロースからなることを特徴とする請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の免疫分析装置。
バッファー収容部に液状バッファーを注入して接合体を溶解させる段階と、
多孔性メンブレンパッドの全血検体収容部に全血検体を注入する段階と、
前記多孔性メンブレンパッド及び前記バッファー収容部を覆う上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成された液体不透過性突出部により前記上部ケース及び下部ケースの間に形成される毛細管通路を通じて前記液状バッファー及び接合体を前記多孔性メンブレンパッドに移動させる段階と、
前記毛細管通路を通過した液状バッファー及び接合体が前記全血検体と混合されて前記多孔性メンブレンパッドに固定されている結合剤と抗原抗体反応する段階と、を含むことを特徴とする免疫分析方法。
移動相を収容する第１のパッドと、
前記第１のパッドと所定距離が離隔されており、前記移動相が移送され、免疫分析のための抗原抗体反応が実行される第２のパッドと、
前記第１及び第２のパッドの上部を覆う上部ケースと、
前記第１及び第２のパッドの下部を覆う下部ケースと、
前記上部ケース及び下部ケースの中でいずれか一つ以上に形成されており、前記第１のパッドと第２のパッドの間に位置する液体不透過性突出部である連結部であって、前記下部ケース及び上部ケースの間に前記液状検体が移動する毛細管通路を形成する前記連結部と、を含むことを特徴とする免疫分析装置。