JP4132125B2

JP4132125B2 - ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤

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Publication number: JP4132125B2
Application number: JP09923797A
Authority: JP
Inventors: 裕二深水; 政博藤井; 国雄木村; 修子伊藤; 隆井狩; 容子巽; 信人小山; 道雄荻屋; 勝重猪飼; 郁之進加藤
Original assignee: Takara Bio Inc
Current assignee: Takara Bio Inc
Priority date: 1997-04-16
Filing date: 1997-04-16
Publication date: 2008-08-13
Anticipated expiration: 2017-04-16
Also published as: JPH10287571A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）接着阻害剤に関する。さらに詳しくは、胃粘膜上皮細胞へのヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、強酸性である胃内には細菌は棲息していないと考えられていた。しかし、オーストラリアのＷａｒｒｅｎ、Ｍａｒｓｈａｌｌらは、ヒトの胃粘膜からヘリコバクター・ピロリという鞭毛を有するグラム陰性桿菌を単離し、培養に成功した（Warren J R et al、Lancet、１、１２７３（１９８３）参照）。種々の研究の結果、この菌は胃炎（Morris. A et al、Am. J. Gastroenterol.、８２、１９２（１９８７）参照）や胃十二指腸潰瘍（Asaka. M et al、Gastroenterol. Jap.、２８（suppl. 5）１６３（１９９３）参照）、さらには胃癌（Personnet. J et al、N. Eng. J. Med.、３２５、１１２７（１９９１）参照）の発症に関与することが強く推察されている。さらにこの菌の除菌により胃炎や胃十二指腸潰瘍の再発が見られなくなることから（Marshall B J et al、Lancet、２、１４３７（１９８８）参照）、Ｈ₂ブロッカーなどを用いた従来型の治療で見られた再発という現象にこの細菌が大きく関与していることが明らかになった。
【０００３】
近年、抗生剤とプロトンポンプインヒビターを用いたヘリコバクター・ピロリの除菌治療が行なわれているが、大量の抗生剤を長期投与する必要があるため、副作用や耐性菌の出現などの問題が生じており（Maeyama. H et al、日本消化器病学会雑誌、９２、２３７（１９９５）参照）、より副作用の少ないヘリコバクター・ピロリ除菌剤の開発が求められている。そこで、我々は、新たなヘリコバクター・ピロリ除菌剤の開発を目指して、ヘリコバクター・ピロリと胃粘膜上皮細胞の接着過程に注目した。
【０００４】
ヘリコバクター・ピロリはアンモニアの産生源であるウレアーゼや重炭酸イオン、各種栄養物質に対する正の走化性（これらの物質、つまりウレアーゼや重炭酸イオン、各種栄養物質の産生源へ移動する）および、酸に対する負の走化性を有しており、これらの条件のえられる部位、つまり幽門部の上皮細胞（ｐＨ７〜８）に最初に接着する（中澤晶子、日本細菌学雑誌、５０（３）、７７７（１９９５）参照）。この際、ヘリコバクター・ピロリ側では、ｉｃｅ遺伝子（上皮と接触することにより誘導される遺伝子）由来の２０．６ｋＤａのタンパクの産生が高まり、接着能が亢進することが報告されている（杉山敏郎、Mebio、１３（１０）、２５（１９９６）参照）。また、ヘリコバクター・ピロリと細胞との接着には硫酸化糖（Sloamiany B L et al、Biochem. International、１９（４）、９２９（１９８９）参照）やフコース（Falk. P、Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.、９０、２０３５（１９９３）参照）、シアル酸糖（Evans D G et al、J. Bacteriol.、１７５、６７４（１９９３）参照）の関与が報告されている。
【０００５】
フコースはＡＢＯ式血液型のうちＯ型の血液型物質の糖鎖を構成する糖の中の１つであり、フコースを有するルイス血液型抗原Ｌｅｗｉｓｂにヘリコバクター・ピロリが結合したという報告がサイエンス誌（Boren. T et al、Science、２６２、１８９２（１９９３）参照）に掲載され注目を集めたが、Ｌｅｗｉｓｂ分泌型、非分泌型でヘリコバクター・ピロリ感染率に差違を認めないとの報告（Yaron. N et al、Am. J. Gastroenterol.、９１、１０１（１９９６）参照）が多く出され、現在では否定的である。また、シアル酸に関しては、Ｎ−アセチルノイラミニル−α（２，３）ラクトースに特異的な２０ｋＤａのＨｐａＡタンパクが菌体に認められている点（Evans D G、J. Bacteriol.、１７５、６７４（１９９３）参照）、シアル酸残基を多く持つフェツインによりヘリコバクター・ピロリと細胞の接着が阻害されたという報告（Kobayashi. Y et al、Infect. Immun.、６１、４０５８（１９９３）参照）から注目されているが、フェツインによりヘリコバクター・ピロリと細胞の接着は影響されなかった（Kobayashi. Y et al、Infect. Immun.、６１、４０５８（１９９３）参照）という先ほどの報告とは逆の結果が出されている点、細胞をシアリダーゼ処理してシアル酸を除いても接着に影響がなかったという報告（Kamisago. S et al、Infect. Immun.、６４、６２４（１９９６）参照）からシアル酸受容因子説には不明な点が多い。一方、硫酸化糖脂質であるスルファチドは酸性条件下でも安定であり、ヘリコバクター・ピロリが最初に生着する幽門部に多く存在する（Natomi. H et al、Biochim. Biophys. Acta、９６１、２１３（１９８８）参照）。また、ヒトの胃粘膜から抽出した糖脂質をＴＬＣで展開し、ヘリコバクター・ピロリとインキュベートしたところ、スルファチド画分に強い接着が見られたという報告（Saitoh. T et al、FEBS. Lett.、２８２、３８５（１９９１）参照）、細胞に対するヘリコバクター・ピロリの接着が抗スルファチド抗体で抑制されたという報告（Saitoh. T et al、FEBS. Lett.、２８２、３８５（１９９１）参照）、ヘリコバクター・ピロリを酸処理したところ様々な糖脂質のうちスルファチドに対する接着能が顕著に強くなったという報告（Huesca. M et al、Infect. Immun.、６４、２６４３（１９９６）参照）がある。
【０００６】
本発明者らは、スルファチドが有力なヘリコバクター・ピロリの胃粘膜上皮細胞側の接着因子ではないかと考え、ＥＬＩＳＡ法を用いたスルファチドに対するヘリコバクター・ピロリの接着系を確立し、さらに、砂ネズミを用いたヘリコバクター・ピロリ感染モデル（Hirayama. F et al、実験潰瘍、２３（１）、５６（１９９６）参照）を用いて、ヘリコバクター・ピロリ接着阻害物質の検討をした。
【０００７】
一方、フコイダンは褐藻類（たとえば、ヒバマタ（Fucus）属、コンブ（Laminaria）属またはエゾイシゲ（Pelvetia）属など）由来のフコース硫酸含有多糖類である。
【０００８】
このフコイダンは血液凝固阻止作用、抗高脂血症作用、制癌作用などの生理活性を示すことが報告されている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、ヘリコバクター・ピロリの胃粘膜上皮細胞への接着を阻害する物質を有効成分とするヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤を提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、新しいヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤を開発すべく、鋭意検討した結果、ガゴメコンブ（Kjellmaniella crassifolia）から、グルクロン酸含有フコイダンとグルクロン酸非含有フコイダンとを分離することに成功し、前記グルクロン酸含有フコイダンがヘリコバクター・ピロリのスルファチドに対する接着を強く阻害することを見いだし、本発明を完成した。
【００１１】
本発明は、グルクロン酸含有フコイダンを有効成分とするヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤に関する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明のヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤の有効成分であるフコイダンは海藻由来のフコイダンから調製されるグルクロン酸を有意に含有するグルクロン酸含有フコイダンであればよく、とくに制限はないが、ガゴメコンブ由来の多糖類から調製されるグルクロン酸含有フコイダンが好ましい。
【００１３】
以下、ガゴメコンブを出発物質とするばあいについて具体的に説明する。
【００１４】
ガゴメコンブは通常食用として用いられており、本発明で用いるガゴメコンブは、天然のものであっても加工されたものであってもいずれのものでもよい。
【００１５】
ガゴメコンブ由来のフコイダン中グルクロン酸含有フコイダンとグルクロン酸非含有フコイダンの存在比は約１：２であり、グルクロン酸含有フコイダンはフコース、マンノース、ガラクトース、グルクロン酸などを含み、該フコイダン中のグルクロン酸含量は１０〜３０重量％、通常１５〜２４重量％、硫酸含量は約２０重量％である。一方、グルクロン酸非含有フコイダンはフコースとガラクトースを含み、硫酸含量は約５０重量％である。分子量は両物質ともに約２０万を中心に分布している（第１８回糖質シンポジウム要旨集、１５９頁、（１９９６）参照）。
【００１６】
ガゴメコンブ由来のフコイダンは、通常のフコイダンの製造法にしたがって製造される。たとえば、エタノール洗浄、熱水抽出を行なったのちに、塩化セチルピリジニウムを用いてフコイダンを沈殿させることによりえられる。
【００１７】
グルクロン酸含有フコイダンおよびグルクロン酸非含有フコイダンはガゴメコンブから前記のようにしてフコイダンを調製したのち、陰イオン交換樹脂、界面活性剤などを用いて分離される。
【００１８】
前記陰イオン交換樹脂の具体例としては、ＤＥＡＥ−セルロース、ＤＥＡＥ−デキストランなどがあげられ、なかでもＤＥＡＥ−セルロファイン（Cellulofine、商品名、生化学工業（株）製、ＤＥＡＥ−セファデックス（Sephadex、商品名、ファルマシア社製）が好ましく、とりわけＤＥＡＥ−セルロファインＡ−８００（商品名、生化学工業（株）製）が好ましい。
【００１９】
陰イオン交換樹脂を用いる分離方法としては、前記樹脂を充填剤とするカラムクロマトグラフ法において緩衝液としてＣａＣｌ₂／酢酸ナトリウム、展開溶媒としてＮａＣｌ溶液を用いる勾配溶出法がよい。この分離法ではグルクロン酸含有フコイダンが１番目のピークとして、グルクロン酸非含有フコイダンが２番目のピークとして溶出する。
【００２０】
前記界面活性剤の好ましい具体例としては、陽イオン性界面活性剤があげられ、なかでも塩化セチルピリジニウムが好ましい。
【００２１】
界面活性剤を用いる分離方法としては、界面活性剤を溶解したＮａＣｌ溶液にフコイダンを溶解し、溶解性のグルクロン酸含有フコイダンを遠心分離上清として調製し、そののち限界ろ過、エタノール沈殿を行なう方法がよい。
【００２２】
本発明でいう、ヘリコバクター・ピロリの接着とは、胃粘膜上皮細胞に対するヘリコバクター・ピロリの接着を意味する。
【００２３】
本発明で用いるＥＬＩＳＡ法を用いたヘリコバクター・ピロリの接着系とは、胃粘膜上皮細胞のヘリコバクター・ピロリの接着因子の１つと考えられているスルファチドをＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、そこに各試験物質と前培養したヘリコバクター・ピロリを加え、接着したヘリコバクター・ピロリを抗原・抗体反応により検出する系である。
【００２４】
本発明の接着阻害剤は、一般的な医薬製剤の形態に調製される。前記製剤は、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤および滑沢剤などの希釈剤あるいは賦形剤を用いて通常の方法で調製される。これら医薬製剤は、各種の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表的なものとして、錠剤、丸剤、散剤、液剤、顆粒剤、カプセル剤またはシロップ剤などがあげられる。
【００２５】
本発明の医薬の投与方法は、各種製剤形態、患者の年齢、性別そのほかの条件、疾患の程度などに応じて経口投与されるほか、任意の飲食品に添加して日常的に摂取させることもできる。。
【００２６】
所望の治療的効果を達成するためには、有効成分の投与量は、用法、患者の年齢、性別およびそのほかの条件、疾患の程度などにより適宜選択されるが、通常、成人１日当り１〜５００００ｍｇの範囲にあり、好ましくは５〜１００００ｍｇから選択される。単位投与形態は少なくとも１日１回、好ましくは１日３回、より好ましくは１日５回投与することができる。
【００２７】
また、経口投与では１０００ｍｇ／ｋｇの投与量でも毒性が認められなかった。
【００２８】
本発明のヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤は、胃炎、胃十二指腸潰瘍の予防薬または治療薬として、さらには胃癌の発症を抑制する薬物として有用である。加えて、本発明に用いるガゴメコンブ由来フコイダンは工業的に供給可能である点、原料の褐藻類は日常的に食品として摂取しているものであり、安全性が高いという点でもすぐれている。
【００２９】
【実施例】
つぎに、実施例をあげて、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの記載に何ら限定されるものではない。なお、実施例における％は重量％を意味する。
【００３０】
実施例１
（１）市販のガゴメコンブ粉末２ｋｇを８０％エタノールで８０℃、２時間洗浄し、ろ過によりエタノール洗浄粉末を調製した。つぎに９５℃、２時間の熱水抽出を行ない、ろ過により熱水抽出液４０リットルをえた。この抽出液に塩化セチルピリジニウムをこれ以上沈殿が生成しなくなるまで添加し、生成した沈殿（フコイダン）を遠心分離し、えられた沈殿を８０％エタノールで洗浄したのち、２ＭのＮａＣｌ溶液に溶解し、３リットルの溶液を調製した。この溶液を陰イオン交換樹脂であるＤＥＡＥ−セルロファインＡ−８００（生化学工業（株）製）処理、ポアサイズ１０万の限外ろ過膜を用いる限外ろ過処理、１１０００ｇ、４０分間の遠心分離処理をし、精製フコイダン溶液４リットルを調製した。ついで凍結乾燥により精製乾燥フコイダン約８０ｇを調製した。
【００３１】
（２）前記（１）でえられた精製フコイダン８ｇをＤＥＡＥ−セルロファインＡ−８００カラムによりグルクロン酸含有フコイダンとグルクロン酸非含有フコイダンに分離し、脱塩後各フコイダンの凍結乾燥物を調製した。カラムサイズが１０．５×４６．５ｃｍのカラム、０．１ＭＣａＣｌ₂／２０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）の緩衝液、０．０〜１．５Ｍの濃度勾配のＮａＣｌを用いてクロマトグラフィーを行なった。結果を図１に示す。図１はグルクロン酸含有フコイダンとグルクロン酸非含有フコイダンの分離パターンを示す図であり、縦軸は吸光度、横軸は１画分５００ｍｌでの画分番号を示し、図中、黒丸はＤｕｂｏｉｓらの方法（Analytical Chemistry、２８、３５０〜３５６、（１９５６））のフェノール硫酸法により測定した各画分の４８０ｎｍでの吸光度、黒三角はＢｉｔｔｅｒらの方法（Analytical Biochemistry、４、３３０〜３３４、（１９６２））のカルバゾール硫酸法で測定した各画分の５３０ｎｍでの吸光度を示す。図中、前ピークがグルクロン酸含有フコイダン、後ろピークがグルクロン酸非含有フコイダンを示すピークである。
【００３２】
（３）前記（１）でえられた精製フコイダン１１７ｇを５８５０ｍｌの２ＭＮａＣｌ溶液に溶解後、陽イオン性界面活性剤である塩化セチルピリジニウムを２ＭＮａＣｌ溶液に１．２５％で溶解したもの１８．７２リットルを添加し、グルクロン酸含有フコイダンを溶解し、溶解性のグルクロン酸含有フコイダンを１１００ｇ、４０分間遠心分離処理することにより調製した。この遠心分離上清をポアサイズ１０万の限外ろ過膜を用いる限外ろ過法により濃縮し、限外ろ過内液中のグルクロン酸含有フコイダンを終濃度８０％のエタノールにより沈殿させた。エタノール沈殿を１００％エタノールで洗浄後、１０ｍＭＮａＣｌ３００ｍｌに溶解後、凍結乾燥によりグルクロン酸含有フコイダン１６．４ｇを調製した。
【００３３】
２ＭＮａＣｌ存在下で塩化セチルピリジニウムに非溶解性のグルクロン酸非含有フコイダンは、前記遠心分離により沈殿としてえたのち、１００％エタノールで洗浄し、１０ｍＭＮａＣｌ２リットルに溶解後、凍結乾燥により調製した（７７ｇ）。
【００３４】
実施例２
５ｇのグルクロン酸含有フコイダンを水などで溶解し、ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤とした。
【００３５】
実施例３
５ｇのグルクロン酸含有フコイダンと４００ｍｇのファモチジンを水などで溶解し、ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤とした。
【００３６】
実施例４
５ｇのグルクロン酸含有フコイダンと２０ｍｇのオメプラゾールを水などで溶解し、ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤とした。
【００３７】
実施例５
５ｇのグルクロン酸含有フコイダン、２０ｍｇのオメプラゾール、４００ｍｇのクラリスロマイシン、５００ｍｇのメトロニダゾールを水などで溶解し、ヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤とした。
【００３８】
つぎに、試験例によって本発明の接着阻害剤の作用効果を説明する。
【００３９】
［試験例］
実験動物
ヘリコバクター・ピロリ感染モデル用として６週齢のＭＧＳ／Ｓｅａ系砂ネズミ（セアック吉富（株）製）を１週間予備飼育したのち実験に供した。予備飼育期間中、滅菌済飼料であるＭＦ（オリエンタル酵母工業（株）製）および水（水道水、滅菌済）は自由摂取させた。
【００４０】
投与菌液の調製
ヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４株をＢＨＩＡ（ブレインハートインフュージョン寒天培地、日水製薬（株）製）を用いて３７℃、微好気性条件下で７２時間培養し、発育したコロニーを７％ＦＣＳ添加ブルセラブロスに懸濁した。懸濁液を３７℃、微好気性条件下で２４時間振とう培養した。培養菌液を新鮮７％ＦＣＳ添加ブルセラブロスで１００倍希釈してさらに３７℃、微好気性条件下で２４時間振とう培養したのち、２５００ｒｐｍ、４℃、１０分間遠心し、菌体を集めた。これを元の溶液量の１／４量のリン酸緩衝液で懸濁した。この菌液と表の各試験物質を等量混合し、１時間微好気性条件下で振とう培養した（約１０⁸ ＣＦＵ（コロニー形成単位））。
【００４１】
【表１】

【００４２】
実験方法
（Ａ）in vitro試験（ＥＬＩＳＡ法を用いたヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤の探索）
（１）スルファチド（シグマ社製）を９６ウェルマイクロプレートにコートし（１μｇ）、表１に示す各試験物質と振とう培養したヘリコバクター・ピロリ菌液をプレートに添加し、微好気性条件下で、３７℃、９０分間インキュベートした。そこにヘリコバクター・ピロリ抗血清を加え反応させた。つぎに、アフィニティ精製ぺルオキシダーゼ標識抗マウス免疫グロブリン抗体（オルガノン・テクニカ社製）を反応させた。発色試薬により発色をさせた。０．５Ｍ硫酸を加え反応を停止し、プレートリーダー（ＥＦＬＡＢ社製）で波長４５０ｎｍ〜６２０ｎｍの吸光度を測定した。
【００４３】
（２）ガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダンのヘリコバクター・ピロリ接着阻害作用（用量反応性の検討−１）
前記Ａ−（１）で効果の見られたガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダンについて用量反応性を調べた。測定は、表１に示す各試験物質を用いて前記Ａ−（１）と同様に行なった。
【００４４】
（３）ガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダンのヘリコバクター・ピロリ接着阻害作用（用量反応性の検討−２）
ガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダンについて、in vivoで効果がえられると考えられる用量を決めるために、前記Ａ−（１）および（２）よりもさらに高用量の前記フコイダンを用いてヘリコバクター・ピロリ接着阻害作用を調べた。測定は表１に示す各試験物質を用いて前記Ａ−（１）と同様に行なった。
【００４５】
（Ｂ）in vivo試験（ヘリコバクター・ピロリ感染モデル）
（１）ヘリコバクター・ピロリ感染砂ネズミモデル
表１に示す試験物質と振とう培養したヘリコバクター・ピロリ菌液０．５ｍｌを、７週齢の砂ネズミ４６匹に１日３回、４時間間隔で経口投与して感染させた。その後さらに、試験物質（実施例１（２）のグルクロン酸含有フコイダンおよびヒバマタ由来フコイダン（シグマ社製）各１０ｍｇ／匹、ならびにリン酸緩衝液（溶媒）０．５ｍｌ）を、８時間おきに２回（感染１日後に解剖する砂ネズミのばあい）または５回（感染２日後に解剖する砂ネズミのばあい）、経口投与した。最終投与の４時間後（感染１日後および２日後）に胃を摘出して感染率および生菌数をつぎの培養法で測定した。
【００４６】
（２）胃内菌数の測定
摘出した胃を大弯に沿って開き、スライドガラスで粘膜をかきとり、２．５％ＦＣＳ添加ブルセラブロスに浮遊させた。浮遊液をガラスホモジナイザーを用いて懸濁した。懸濁液を２．５％ＦＣＳ添加ブルセラブロスで適宜希釈して、選択培地上で７日間培養した。ヘリコバクター・ピロリのコロニーをカウントし、胃あたりの菌数とした。
【００４７】
データの表示法とその解析法
ヘリコバクター・ピロリ感染率（感染例）と生菌数を表示し、ＫＲＵＳＫＡＬ−ＷＡＬＬＩＳ（クラスカル−ワーリス）検定（分類値）を行なった。
【００４８】
実験結果
（Ａ）in vitro試験（ＥＬＩＳＡ法を用いたヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤の探索）
（１）ガゴメコンブ由来フコイダンのヘリコバクター・ピロリ接着阻害作用
結果を表２に示す。表２に示したように、実施例１（２）でえられたガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダン（陰イオン交換クロマト分離精製物）および実施例１（３）でえられたガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダン（界面活性剤分離精製物）は、ヘリコバクター・ピロリのスルファチドに対する接着をそれぞれ５４、５６％阻害した。しかし、ほかの試験物質では接着阻害作用は見られなかった。
【００４９】
【表２】

【００５０】
（２）ガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダンのヘリコバクター・ピロリ接着阻害作用（用量反応性の検討−１）
結果を表３に示す。実施例１（２）でえられたガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダン（陰イオン交換クロマト分離精製物）および実施例１（３）でえられたガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダン（界面活性剤分離精製物）のいずれも、試験物質の用量が３０、１００、３００、１０００μｇ／ｍｌと増加するにしたがい、３４、５７、５９、６９％（前者のばあい）、３３、４９、５８、７２（％）（後者のばあい）の接着阻害率で用量依存的にヘリコバクター・ピロリの接着を阻害した。
【００５１】
【表３】

【００５２】
（３）ガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダンのヘリコバクター・ピロリ接着阻害作用（用量反応性の検討−２）
結果を図２に示す。図中、縦軸は接着阻害（％）を、横軸は試験物質の用量（ｍｇ／ｍｌ）を示す。図２からわかるように、ガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダンは、試験物質の用量が０．３、０．６、１．２５、２．５、５、１０ｍｇ／ｍｌと増加するにしたがい、４０．５、５３．６、６１．５、７８．６、８５．５、９３．８（％）の接着阻害率で用量依存的にヘリコバクター・ピロリの接着を阻害し、１０ｍｇ／ｍｌでヘリコバクター・ピロリの接着をほぼ完全に阻害した。
【００５３】
（Ｂ）in vivo試験（ヘリコバクター・ピロリ感染砂ネズミモデル）
結果を表４に示す。表４に示したように溶媒群ではヘリコバクター・ピロリ感染１日後は７例中６例（感染率８５．７％）が感染し、その生菌数は９８ＣＦＵであった。それに対して、ガゴメコンブ由来フコイダン（陰イオン交換クロマト分離精製物）投与群では８例中２例（感染率２５．０％）、生菌数５５ＣＦＵと有意な（ｐ＝０．０２３２７）感染阻害効果がみられた。また、溶媒群ではヘリコバクター・ピロリ感染２日後は７例中６例（感染率８５．７％）が感染し、その生菌数は１８０ＣＦＵであり、生菌数の増加が見られた。それに対して、ガゴメコンブ由来フコイダン投与群（６例）のいずれも感染は認められなかった。一方、ヒバマタ由来フコイダン投与群ではヘリコバクター・ピロリ感染阻害効果は見られなかった。
【００５４】
【表４】

【００５５】
【発明の効果】
本発明によれば、ヘリコバクター・ピロリによる胃粘膜上皮細胞への接着を阻害しうるグルクロン酸含有フコイダンを有効成分とするヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤をえることができ、この阻害剤により、胃炎や胃十二指腸潰瘍さらには胃癌の発症を抑制する可能性を高めることができると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１（２）で行なった、ガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダンとグルクロン酸非含有フコイダンとの分離パターンを示す図である。
【図２】試験例Ａ−（３）で行なった、ガゴメコンブ由来グルクロン酸含有フコイダンのヘリコバクター・ピロリ接着阻害作用における用量反応性試験の結果を示す図である。

Claims

フコース、マンノース、ガラクトースおよびグルクロン酸を含有するガゴメコンブ由来のグルクロン酸含有フコイダンを有効成分とするヘリコバクター・ピロリ接着阻害剤。