JP3774043B2 - 悪性腫瘍診断剤 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は悪性腫瘍診断剤に関し、より詳細には悪性腫瘍細胞に特異的なオリゴペプチド輸送システムを用いた悪性腫瘍診断剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、悪性腫瘍は死亡原因のトップを占めるに至っており、悪性腫瘍の早期かつ適確な診断及びその治療薬の開発は極めて重要である。このうち、抗悪性腫瘍剤に関しては、有効性と安全性の分離に重点がおかれ、正常細胞になく悪性腫瘍細胞にのみ存在する機能、成分等に着目し、分子レベルで研究がなされている。
【０００３】
このような腫瘍細胞の特性の一つとして、腫瘍細胞には、（１）アミノ酸、（２）ヌクレオシド、（３）グルコース及び（４）葉酸等の栄養摂取のための輸送システムがあることが知られている。このような輸送システムに着目した抗腫瘍剤のデリバリーに関する研究が種々なされている。例えばフェニルアラニン結合ナイトロジェンマスタード系の抗腫瘍剤であるメルファラン（Ｍｅｌｐｈａｒａｎ）は、アミノ酸輸送システムによりＬ１２１０に取り込まれる（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４：９２９−９３２，１９７９）。また、糖結合ナイトロジェンマスタード誘導体が抗腫瘍剤として開発されている（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，５５０：３０９−３１７，１９７９）。更に、ジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤であるメトトレキサートは葉酸輸送システムを介して多くの腫瘍細胞に取り込まれる（ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３５：３６４−３７０，１９９５）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これら従来知られている輸送系は、一部を除いて腫瘍細胞に十分に特異的とは言えず、更に新たな輸送システムの解明が望まれていた。従って、本発明の目的は、腫瘍細胞に特異的な新たな輸送システムを見出し、これを利用した悪性腫瘍診断剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者は、上記課題を解決すべく、種々検討してきたところ、ヒト及びラットの小腸及び腎臓の上皮細胞にのみ存在すると言われているオリゴペプチド輸送系に類似したオリゴペプチド輸送系が悪性腫瘍細胞には存在するが、該輸送系は正常細胞には存在しないことを見出し、更に標識オリゴペプチドを用いれば悪性腫瘍の診断が容易にできることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、Ｇｌｙ−Ｓａｒ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ及びＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙの群から選ばれる標識されたオリゴペプチドを含有する、軟部肉腫、膀胱癌及び肝癌から選ばれる悪性腫瘍の診断剤を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明で用いるオリゴペプチドとしては、ジペプチド又はトリペプチドが好ましく、特にジペプチドが好ましい。なお、オリゴペプチドとしては、Ｇｌｙ−Ｓａｒ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ又はＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙが好ましい。
【００２７】
本発明の悪性腫瘍診断剤は、オリゴペプチドに検出可能な標識をしてなるものであり、該標識としては、123Ｉ、14Ｃ等のラジオアイソトープ；パーオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素類；染料ゾル、金属ゾル、着色ラテックス粒子等が挙げられる。
【００２８】
本発明の診断剤を用いて悪性腫瘍の診断をするには、例えばヒトから採取した体液、組織等の被検細胞を含む検体に標識されたオリゴペプチドを作用させ、その被検細胞中に取り込まれた標識オリゴペプチドの有無又は標識量を測定すればよい。
【００２９】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【００３０】
実施例１
腫瘍細胞としてヒト線維肉腫細胞ＨＴ−１０８０及び正常細胞としてヒト線維芽細胞ＩＭＲ−９０を用いて、オリゴペプチドの取り込み能を検討した。
ＮａＯＨでpH６．０に調整されたＨＢＳＳ培地（０．９５２mM ＣａＣｌ2，５．３６mM ＫＣｌ，０．４４１mM ＫＨ2ＰＯ4，０．８１２mM ＭｇＳＯ4，１３６．７mM ＮａＣｌ，０．３８５mM Ｎａ2ＨＰＯ4，２５mM Ｄ−グルコース，１０mM ＭＥＳ又はＨＥＰＥＳ）中で、ＨＴ−１０８０又はＩＭＲ−９０を３７℃でインキュベートして、14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みを検討した。ＨＢＳＳの浸透圧は３１０mOsm／kgに調整した。
２０μＭの14Ｃ−Ｇｌｙ−ＳａｒをＨＢＳＳに添加し、３７℃及び４℃、pH６．０でＨＴ−１０８０及びＩＭＲ−９０をインキュベートした。その後、細胞を洗浄し、５Ｎ ＮａＯＨ（０．２５ml）を添加して可溶化させ、２時間攪拌した。この液をＨＣｌで中和した後、シンチレーション液４mlを加えて、放射能を測定した。その結果、図１に示すように腫瘍細胞であるＨＴ−１０８０においては４℃の場合に比べて３７℃ではＧｌｙ−Ｓａｒの取り込みが顕著に増大していることが判明した。これに対し、図２に示すように正常細胞であるＩＭＲ−９０においては、４℃でも３７℃でもＧｌｙ−Ｓａｒの取り込み量に変化は見られず、その取り込み量は極めて少なかった。
【００３１】
実施例２
実施例１と同様に14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒ ２０μＭを培地に加え、更に図３に示す種々のオリゴペプチドを１０mM添加し、ＨＴ−１０８０をpH６．０、３７℃で１５分間インキュベートした。その後、実施例１と同様にして、14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込み量を測定した。その結果、図３に示すように、Ｇｌｙ−Ｓａｒ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ及びＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙを添加したときに、14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みを阻害したことから、これらのオリゴペプチドもＧｌｙ−Ｓａｒ同様に腫瘍細胞に取り込まれることが判明した。
【００３２】
実施例３
実施例１と同様にして、ＨＴ−１０８０以外の腫瘍細胞への14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みを検討したところ、膀胱癌細胞Ｔ２４及び肝癌細胞ＳＫ−ＨＥＰ１でも14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みが確認された。
【００３３】
【発明の効果】
本発明によれば悪性腫瘍が的確に診断できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＨＴ１０８０細胞への14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込み量を示す図である。
【図２】ＩＭＲ−９０細胞への14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込み量を示す図である。
【図３】ＨＴ１０８０細胞への14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みに対する各種オリゴペプチドの阻害効果を示す図である。
【発明の属する技術分野】
本発明は悪性腫瘍診断剤に関し、より詳細には悪性腫瘍細胞に特異的なオリゴペプチド輸送システムを用いた悪性腫瘍診断剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、悪性腫瘍は死亡原因のトップを占めるに至っており、悪性腫瘍の早期かつ適確な診断及びその治療薬の開発は極めて重要である。このうち、抗悪性腫瘍剤に関しては、有効性と安全性の分離に重点がおかれ、正常細胞になく悪性腫瘍細胞にのみ存在する機能、成分等に着目し、分子レベルで研究がなされている。
【０００３】
このような腫瘍細胞の特性の一つとして、腫瘍細胞には、（１）アミノ酸、（２）ヌクレオシド、（３）グルコース及び（４）葉酸等の栄養摂取のための輸送システムがあることが知られている。このような輸送システムに着目した抗腫瘍剤のデリバリーに関する研究が種々なされている。例えばフェニルアラニン結合ナイトロジェンマスタード系の抗腫瘍剤であるメルファラン（Ｍｅｌｐｈａｒａｎ）は、アミノ酸輸送システムによりＬ１２１０に取り込まれる（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４：９２９−９３２，１９７９）。また、糖結合ナイトロジェンマスタード誘導体が抗腫瘍剤として開発されている（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，５５０：３０９−３１７，１９７９）。更に、ジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤であるメトトレキサートは葉酸輸送システムを介して多くの腫瘍細胞に取り込まれる（ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３５：３６４−３７０，１９９５）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これら従来知られている輸送系は、一部を除いて腫瘍細胞に十分に特異的とは言えず、更に新たな輸送システムの解明が望まれていた。従って、本発明の目的は、腫瘍細胞に特異的な新たな輸送システムを見出し、これを利用した悪性腫瘍診断剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者は、上記課題を解決すべく、種々検討してきたところ、ヒト及びラットの小腸及び腎臓の上皮細胞にのみ存在すると言われているオリゴペプチド輸送系に類似したオリゴペプチド輸送系が悪性腫瘍細胞には存在するが、該輸送系は正常細胞には存在しないことを見出し、更に標識オリゴペプチドを用いれば悪性腫瘍の診断が容易にできることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、Ｇｌｙ−Ｓａｒ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ及びＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙの群から選ばれる標識されたオリゴペプチドを含有する、軟部肉腫、膀胱癌及び肝癌から選ばれる悪性腫瘍の診断剤を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明で用いるオリゴペプチドとしては、ジペプチド又はトリペプチドが好ましく、特にジペプチドが好ましい。なお、オリゴペプチドとしては、Ｇｌｙ−Ｓａｒ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ又はＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙが好ましい。
【００２７】
本発明の悪性腫瘍診断剤は、オリゴペプチドに検出可能な標識をしてなるものであり、該標識としては、123Ｉ、14Ｃ等のラジオアイソトープ；パーオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素類；染料ゾル、金属ゾル、着色ラテックス粒子等が挙げられる。
【００２８】
本発明の診断剤を用いて悪性腫瘍の診断をするには、例えばヒトから採取した体液、組織等の被検細胞を含む検体に標識されたオリゴペプチドを作用させ、その被検細胞中に取り込まれた標識オリゴペプチドの有無又は標識量を測定すればよい。
【００２９】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【００３０】
実施例１
腫瘍細胞としてヒト線維肉腫細胞ＨＴ−１０８０及び正常細胞としてヒト線維芽細胞ＩＭＲ−９０を用いて、オリゴペプチドの取り込み能を検討した。
ＮａＯＨでpH６．０に調整されたＨＢＳＳ培地（０．９５２mM ＣａＣｌ2，５．３６mM ＫＣｌ，０．４４１mM ＫＨ2ＰＯ4，０．８１２mM ＭｇＳＯ4，１３６．７mM ＮａＣｌ，０．３８５mM Ｎａ2ＨＰＯ4，２５mM Ｄ−グルコース，１０mM ＭＥＳ又はＨＥＰＥＳ）中で、ＨＴ−１０８０又はＩＭＲ−９０を３７℃でインキュベートして、14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みを検討した。ＨＢＳＳの浸透圧は３１０mOsm／kgに調整した。
２０μＭの14Ｃ−Ｇｌｙ−ＳａｒをＨＢＳＳに添加し、３７℃及び４℃、pH６．０でＨＴ−１０８０及びＩＭＲ−９０をインキュベートした。その後、細胞を洗浄し、５Ｎ ＮａＯＨ（０．２５ml）を添加して可溶化させ、２時間攪拌した。この液をＨＣｌで中和した後、シンチレーション液４mlを加えて、放射能を測定した。その結果、図１に示すように腫瘍細胞であるＨＴ−１０８０においては４℃の場合に比べて３７℃ではＧｌｙ−Ｓａｒの取り込みが顕著に増大していることが判明した。これに対し、図２に示すように正常細胞であるＩＭＲ−９０においては、４℃でも３７℃でもＧｌｙ−Ｓａｒの取り込み量に変化は見られず、その取り込み量は極めて少なかった。
【００３１】
実施例２
実施例１と同様に14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒ ２０μＭを培地に加え、更に図３に示す種々のオリゴペプチドを１０mM添加し、ＨＴ−１０８０をpH６．０、３７℃で１５分間インキュベートした。その後、実施例１と同様にして、14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込み量を測定した。その結果、図３に示すように、Ｇｌｙ−Ｓａｒ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ及びＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙを添加したときに、14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みを阻害したことから、これらのオリゴペプチドもＧｌｙ−Ｓａｒ同様に腫瘍細胞に取り込まれることが判明した。
【００３２】
実施例３
実施例１と同様にして、ＨＴ−１０８０以外の腫瘍細胞への14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みを検討したところ、膀胱癌細胞Ｔ２４及び肝癌細胞ＳＫ−ＨＥＰ１でも14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みが確認された。
【００３３】
【発明の効果】
本発明によれば悪性腫瘍が的確に診断できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＨＴ１０８０細胞への14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込み量を示す図である。
【図２】ＩＭＲ−９０細胞への14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込み量を示す図である。
【図３】ＨＴ１０８０細胞への14Ｃ−Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みに対する各種オリゴペプチドの阻害効果を示す図である。
Claims (1)
- Ｇｌｙ−Ｓａｒ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ及びＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙの群から選ばれる標識されたオリゴペプチドを含有する、軟部肉腫、膀胱癌及び肝癌から選ばれる悪性腫瘍の診断剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24889597A JP3774043B2 (ja) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | 悪性腫瘍診断剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24889597A JP3774043B2 (ja) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | 悪性腫瘍診断剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1180017A JPH1180017A (ja) | 1999-03-23 |
| JP3774043B2 true JP3774043B2 (ja) | 2006-05-10 |
Family
ID=17185045
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24889597A Expired - Fee Related JP3774043B2 (ja) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | 悪性腫瘍診断剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3774043B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2206288T3 (es) * | 1999-08-30 | 2004-05-16 | Debiopharm S.A. | Preparacion farmaceutica estable de oxiliplatino para su administracion por via parenteral. |
-
1997
- 1997-09-12 JP JP24889597A patent/JP3774043B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH1180017A (ja) | 1999-03-23 |
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