JP3357139B2 - 抗デオキシリボ核酸抗体の吸着剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はペプチドを担体上に固定
化してなる吸着剤に関する。本発明によって提供され
る、抗デオキシリボ核酸抗体（以下、抗ＤＮＡ抗体とい
う）と結合する能力を有したペプチドを担体上に固定化
してなる吸着剤は、抗ＤＮＡ抗体が関与している疾患の
治療に有用である。

【０００２】抗ＤＮＡ抗体は、主に自己免疫疾患である
全身性エリテマトーデス（以下、ＳＬＥという）患者体
液中に検出される自己抗体である。ＳＬＥ患者にみられ
る血管炎は、抗ＤＮＡ抗体とＤＮＡとの反応により形成
される免疫複合体が血管壁に沈着することにより、また
ＳＬＥ患者の予後を左右する腎炎は、該免疫複合体に加
えて抗ＤＮＡ抗体が直接腎糸球体に沈着することにより
引き起こされることが知られている。したがって、血
液、血漿などの体液から抗ＤＮＡ抗体を除去すること
は、ＳＬＥのように抗ＤＮＡ抗体の関与する疾患を治療
する上で必要となる。

【０００３】

【従来の技術】抗ＤＮＡ抗体用の吸着剤としては、疎水
性化合物を不溶性担体上に固定化してなる免疫吸着剤
（特開昭５７−１２２８７５号公報参照）、ＤＮＡを高
分子担体に固定化してなる吸着剤（特開昭６１−２２６
０５９号公報参照）、アニオン性官能基を有する化合物
を水不溶性多孔質体に固定化してなる吸着体（特開昭６
４−６８２７２号公報参照）などが知られている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】上記の特開昭５７−１
２２８７５号公報に記載されている免疫吸着剤の対象と
する吸着物質は、免疫グロブリンおよび／または免疫複
合体であり、免疫グロブリンとして抗ＤＮＡ抗体が例示
されているが、該吸着剤は抗ＤＮＡ抗体を選択的に吸着
除去する能力を有しておらず、人体にとって有用な免疫
グロブリンをも吸着除去してしまう。

【０００５】特開昭６１−２２６０５９号公報に記載さ
れているＤＮＡ固定化吸着剤は、原料として天然物から
抽出したＤＮＡを使用することとなるので、ＤＮＡの
純度にばらつきがあること、製品コストがかかるこ
と、血液、血漿などの体液と接触させて使用する際に
ＤＮＡが体液中に溶出した場合、体液中の抗ＤＮＡ抗体
と免疫複合体を形成して病状を悪化させる可能性がある
ことなどの欠点がある。

【０００６】特開昭６４−６８２７２号公報に記載され
ている抗ＤＮＡ抗体用の吸着体は、担体に固定化するア
ニオン性官能基を有する化合物として、ペプチドのポリ
グルタミン酸、ポリアスパラギン酸、あるいはアミノ酸
のグリシンが使用できることが記載されているが、該ペ
プチドあるいはアミノ酸を固定化した吸着剤は吸着能力
が十分でなく、さらなる吸着能力の向上が望まれてい
る。

【０００７】このように従来知られている抗ＤＮＡ抗体
用の吸着剤では、吸着特異性、安全性、製造コスト、吸
着能力などの観点から、抗ＤＮＡ抗体が体液中に出現し
ている疾患の治療に使用するには適していない。

【０００８】本発明の目的は、血液、血漿などの体液よ
り人体にとって有用な成分を吸着除去することなく、抗
ＤＮＡ抗体を選択的に吸着除去可能であり、かつ滅菌処
理時や保存時における吸着除去能力の低下が極めて少な
く、しかも安全性の高い吸着剤を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、上記の
目的は、下記の一般式（Ｉ） Ｈ−Ｘ−Ａ−Ｙ−Ｚ ………（Ｉ） 〔式中、Ａは式：Ala−Ｂ−Ｃ−Glu−Ile−Leu（式中、
ＢおよびＣはTrp、TyrまたはPheを表す。）で表される
アミノ酸配列を含有する、６〜１２個のアミノ酸残基か
らなるペプチド断片を表し；ＸおよびＹは一方が単結合
を表すか、またはAsp、Glu、Arg、LysおよびHisよりな
る群から選ばれるアミノ酸残基もしくは該群から選ばれ
る少なくとも１種のアミノ酸残基の２〜１０個からなる
ペプチド断片を表し、他方がAsp、Glu、Arg、Lysおよび
Hisよりなる群から選ばれるアミノ酸残基もしくは該群
から選ばれる少なくとも１種のアミノ酸残基の２〜１０
個からなるペプチド断片を表し；Ｚは水酸基またはアミ
ノ基を表す。〕で表されるペプチドを担体上に固定化し
てなる抗ＤＮＡ抗体の吸着剤を提供することによって達
成される。

【００１０】本明細書においては各種アミノ酸残基を次
の略号で記述する。 Ala： Ｌ−アラニン残基 Arg： Ｌ−アルギニン残基 Asp： Ｌ−アスパラギン酸残基 Asn： Ｌ−アスパラギン残基 Glu： Ｌ−グルタミン酸残基 Gln： Ｌ−グルタミン残基 His： Ｌ−ヒスチジン残基 Ile： Ｌ−イソロイシン残基 Leu： Ｌ−ロイシン残基 Lys： Ｌ−リジン残基 Met： Ｌ−メチオニン残基 Phe： Ｌ−フェニルアラニン残基 Pro： Ｌ−プロリン残基 Trp： Ｌ−トリプトファン残基 Tyr： Ｌ−チロシン残基

【００１１】また本明細書においては、常法に従ってペ
プチドのアミノ酸配列を、そのＮ末端のアミノ酸残基が
左側に位置し、Ｃ末端のアミノ酸残基が右側に位置する
ように記述する。

【００１２】一般式（Ｉ）におけるＡは、前述のように
式：Ala−Ｂ−Ｃ−Glu−Ile−Leu（式中、ＢおよびＣは
Trp、TyrまたはPheを表す。）で表されるアミノ酸配列
を必須成分とする、６〜１２個のアミノ酸残基からなる
ペプチド断片を表すが、かかるペプチド断片としてはプ
ロテインＡの部分ペプチド断片、もしくはそれを構成す
るアミノ酸残基において相同的置換を受けたものが好ま
しい。なお、プロテインＡは黄色ブドウ球菌（Staphyro
coccus aureus）由来の生理活性タンパク質であり、す
でにその一次構造は明らかにされている〔ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー（The Journal of
Biological Chemistry）、第２５９巻、１６９５頁
（１９８４年）参照〕。

【００１３】一般式（Ｉ）におけるＡとしては、式
（１）：Ala Phe Tyr Glu Ile Leu（配列番号：１）、
式（２）：Ala Trp Tyr Glu Ile Leu（配列番号：
２）、式（３）：Ala Tyr Tyr Glu Ile Leu（配列番
号：３）、式（４）：Ala Phe Trp Glu Ile Leu（配列
番号：４）、式（５）：Ala Phe Phe Glu Ile Leu（配
列番号：５）、式（６）：Gln Gln Asn Ala Phe Tyr Gl
u Ile Leu（配列番号：６）、式（７）：Gln Gln Asn A
la Trp Tyr Glu Ile Leu（配列番号：７）、式（８）：
GlnGln Asn Ala Tyr Tyr Glu Ile Leu（配列番号：
８）、式（９）：Gln Gln AsnAla Phe Trp Glu Ile Leu
（配列番号：９）、式（１０）：Gln Gln Asn Ala PheP
he Glu Ile Leu（配列番号：１０）、式（１１）：Ala
Phe Tyr Glu Ile LeuAsn Met Pro Asn Leu（配列番号：
１１）、式（１２）：Ala Trp Tyr Glu Ile Leu Asn Me
t Pro Asn Leu（配列番号：１２）、式（１３）：Ala T
yr Tyr Glu Ile Leu Asn Met Pro Asn Leu（配列番号：
１３）、式（１４）：Ala Phe Trp GluIle Leu Asn Met
Pro Asn Leu（配列番号：１４）または式（１５）：Al
a PhePhe Glu Ile Leu Asn Met Pro Asn Leu（配列番
号：１５）で表されるアミノ酸配列のペプチド断片がよ
り好ましい。

【００１４】プロテインＡは黄色ブドウ球菌由来の生理
活性タンパク質であるので、一般式（Ｉ）におけるＡ
が、たとえ式（１）で表されるアミノ酸配列を有するプ
ロテインＡの部分ペプチド、もしくはそれを構成するア
ミノ酸残基において相同的置換を受けたものであって
も、アミノ酸残基数が１３個以上の場合には、人体に対
する毒性および抗原性が高くなり、また合成も煩雑にな
る。

【００１５】一般式（Ｉ）におけるＸおよびＹは前記の
とおり定義されるが、ＡにＸおよびＹを付加することに
よりＡに親水性が付与されるため、一般式（Ｉ）で表さ
れるペプチドが担体上に効率良く固定化されるようにな
る。また、一般式（Ｉ）で表されるペプチドを担体上に
固定化した吸着剤を、血液、血漿などの体液と接触させ
て使用した場合、該ペプチドが遊離して体内に混入した
としても、ＸおよびＹの付加により該ペプチドに親水性
が付与されていることから尿中に排泄され易く、人体に
対する抗原性が低く安全である。ＸおよびＹの両方が単
結合である場合、またはＸおよびＹのいずれかが上記で
定義されたものと異なるアミノ酸残基またはペプチド断
片である場合には、一般式（Ｉ）で表されるペプチドを
担体上に固定化した吸着剤は、滅菌処理により抗ＤＮＡ
抗体の吸着除去能力が著しく低下する場合がある。

【００１６】一般式（Ｉ）におけるＸおよびＹが表すペ
プチド断片としては、例えば、次のペプチド断片を挙げ
ることができる。-Asp-Asp-，-Glu-Glu-，-Lys-Lys-，-
His-His-，-Arg-Arg-，-Asp-Glu-，-Glu-Asp-，-Glu-Ly
s-，-Lys-Glu-，-His-Asp-，-Asp-His-，-His-Lys-，-L
ys-His-，-Arg-Lys-，-Lys-Arg-，-(Asp)₅-，-(Arg)
₅-，-(Lys)₅-，-(Glu)₅-，-(His)₅-，-Lys-Glu-Glu-Asp
-，-Asp-Glu-His-Lys-，-(Asp)₁₀-，-(Arg)₁₀-，-(Lys)
₁₀-，-(Glu)₁₀-，-(His)₁₀-，-Lys-Glu-His-Arg-Asp-Ly
s-Lys-Glu-，-Lys-Glu-Glu-Asp-Arg-Lys-Lys-His-

【００１７】一般式（Ｉ）で表されるペプチドは、合成
の容易さや、人体に対する抗原性の低さなどの観点か
ら、アミノ酸残基数が２０個程度以下のものが好まし
い。

【００１８】一般式（Ｉ）で表されるペプチドの合成
は、ペプチド合成において通常用いられる方法、例えば
固相合成法、段階的伸長法またはフラグメント縮合法の
ような液相合成法により行われるが、固相合成法により
行うのが操作上簡便である〔例えば、ジャーナル・オブ
・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（Journalo
f the American Chemical Society）、第８５巻、第２
１４９〜２１５４頁（１９６３年）；日本生化学会編
「生化学実験講座１タンパク質の化学IV 化学修飾とペ
プチド合成」（昭和５２年１１月１５日、（株）東京化
学同人発行）、第２０７〜４９５頁；日本生化学会編
「続生化学実験講座２ タンパク質の化学（下）」（昭
和６２年５月２０日、（株）東京化学同人発行）、第６
４１〜６９４頁参照〕。

【００１９】一般式（Ｉ）で表されるペプチドの固相合
成法による製造は、例えば、反応溶媒に不溶性であるス
チレン−ジビニルベンゼン共重合体などの重合体に、目
的とするペプチドのＣ末端側からＮ末端方向に向かっ
て、対応するアミノ酸を該アミノ酸が有するα−カルボ
キシル基以外のα−アミノ基などの官能基を保護したう
えで縮合させて結合させる操作と、該結合したアミノ酸
におけるα−アミノ基などのペプチド結合を形成するア
ミノ基が有する保護基を除去する操作を順次繰返すこと
によってペプチド鎖を伸長させ、目的とするペプチドに
対応するペプチド鎖を形成し、次いで該ペプチド鎖を重
合体から脱離させ、かつ保護されている官能基から保護
基を除去することにより目的とするペプチドを得ること
ができる。必要に応じてこのペプチドをさらに精製する
ことによって純度の高いものが得られる。ペプチドの精
製は逆相高速液体クロマトグラフィーで行うのが効果的
である。

【００２０】一般式（Ｉ）で表されるペプチドは担体上
に効率的に固定化され、得られた吸着剤は抗ＤＮＡ抗体
が関与する疾病患者の血液、血漿などの体液より人体に
とって有用な成分を吸着除去することなく、抗ＤＮＡ抗
体を選択的に吸着除去することができる。一般式（Ｉ）
で表されるペプチドを固定化する際に使用する担体とし
ては、親水性の表面を有し、かつペプチドとの間で共有
結合を形成させるために利用し得るアミノ基、カルボキ
シル基、水酸基などの反応性の官能基を有するものが好
ましい。また、上記の担体は血液、血漿などの体液に不
溶性であり、多孔性であるものが好ましい。抗ＤＮＡ抗
体を吸着させ得る有効表面積が広い多孔性の担体として
は、排除限界タンパク質分子量が約１０⁶〜１０⁹の範囲
内であるか、または平均細孔径が約５０〜１０００nmの
範囲内であるものを使用するのが好ましい。担体は粒子
状、繊維状、シート状、中空糸状などの任意の形状であ
ることができる。

【００２１】かかる担体としては、例えば、ＣＭ−セル
ロファインＣＨ（排除限界タンパク質分子量：約３×１
０⁶、生化学工業（株）販売）などのセルロース系担
体、ＣＭ−トヨパール６５０Ｃ（排除限界タンパク質分
子量：５×１０⁶、東ソー（株）製）などのポリビニル
アルコール系担体、ＣＭ−トリスアクリルＭ（CM−Tris
acryl M）〔排除限界タンパク質分子量：１×１０⁷、ス
ウェーデン国ファルマシア−ＬＫＢ（Pharmacia−LKB）
社製〕などのポリアクリルアミド系担体、セファロース
ＣＬ−４Ｂ（Sepharose CL−4B）〔排除限界タンパク質
分子量：２×１０⁷、スウェーデン国ファルマシア−Ｌ
ＫＢ（Pharmacia−LKB）社製〕などのアガロース系担体
などの有機質担体、およびＣＰＧ−１０−１０００〔排
除限界タンパク質分子量：１×１０⁸、平均細孔径：１
００nm、米国エレクトロ−ニュークレオニクス（Electr
o−nucleonics）社製〕などの多孔性ガラスなどの無機
質担体が挙げられる。

【００２２】一般式（Ｉ）で表されるペプチドの担体上
への固定化は、一般にペプチドまたはタンパク質を担体
上に固定化する場合に採用される方法に従って行われ
る。その固定化方法としては、例えば、担体が有するカ
ルボキシル基をＮ−ヒドロキシコハク酸イミドと反応さ
せることによって、スクシンイミドオキシカルボニル基
に変換し、これに一般式（Ｉ）で表されるペプチドをア
ミノ基の部分で反応させる方法（活性エステル法）、担
体が有するアミノ基またはカルボキシル基にジシクロヘ
キシルカルボジイミドなどの縮合試薬の存在下で、一般
式（Ｉ）で表されるペプチドのカルボキシル基またはア
ミノ基を縮合反応させる方法（縮合法）、担体と一般式
（Ｉ）で表されるペプチドとをグルタルアルデヒドなど
の２個以上の官能基を有する化合物を用いて架橋する方
法（担体架橋法）などが挙げられる。なかでも、活性エ
ステル法による固定化方法が、一般式（Ｉ）で表される
ペプチドと抗ＤＮＡ抗体との結合能力をほとんど低下さ
せることなく該ペプチドを担体上に固定化することが可
能なため好ましい。

【００２３】一般式（Ｉ）で表されるペプチドの担体上
への固定化量としては、得られる吸着剤が抗ＤＮＡ抗体
の有意量を効果的に吸着し得るためには、通常約３×１
０^-8モル／ｇ（担体）以上であることが好ましく、担体
上に固定化された一般式（Ｉ）で表されるペプチドが抗
ＤＮＡ抗体の吸着に有効に利用されるためには、約１×
１０^-7〜５×１０^-5 モル／ｇ（担体）の範囲内である
のがより好ましい。

【００２４】抗ＤＮＡ抗体の除去は、一般式（Ｉ）で表
されるペプチドを担体上に固定化して得られる吸着剤
を、抗ＤＮＡ抗体を含有する血液、血漿などの体液と接
触させて、吸着剤に抗ＤＮＡ抗体を吸着させることによ
って行われる。例えば、吸着剤はカラムに充填して使用
する。この目的で使用するカラムは、血液回路と容易に
接続し得る形状の入口部と出口部を有し、かつ入口部と
吸着剤層の間および出口部と吸着剤層の間にそれぞれポ
リエステルなどの材質のフィルターを備えていることが
望ましい。

【００２５】カラムの材質としては、ポリエチレン、ポ
リプロピレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリ
メチルメタクリレートなどが例示される。これらのうち
ポリプロピレンおよびポリカーボネートのカラムが、オ
ートクレーブ滅菌、γ−線滅菌などの滅菌処理に付する
ことができる点において特に好適である。

【００２６】

【実施例】以下、実施例により本発明を説明するが、本
発明は実施例により限定されるものではない。

【００２７】合成例１ 式（１６）：Lys Lys Ala Phe Tyr Glu Ile Leu（配列
番号：１６）で表されるペプチドをペプチド自動合成装
置〔米国アプライド・バイオシステムズ（Applied Bios
ystems）社製モデル４３０Ａ（Model 430A）〕を用いて
固相合成法により合成した。４−ヒドロキシメチルフェ
ノキシメチル基を０．８５ミリモル／ｇ（樹脂）の割合
で有するスチレン−ジビニルベンゼン共重合体〔スチレ
ンとジビニルベンゼンの構成比（モル比）：９９対１〕
からなる粒状樹脂〔米国アプライド・バイオシステムズ
（Applied Biosystems）社製ＨＭＰレジン〕を０．２９
ｇ用い、これに表１に示す一連の操作に従って、目的と
するペプチドのＣ末端側からＮ末端方向に向かって、対
応する順序でＬ−アラニン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−イ
ソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リジン、Ｌ−フェニル
アラニンおよびＬ−チロシンを結合させた。縮合反応に
おいて上記のアミノ酸は、それぞれ９−フルオレニルメ
トキシカルボニル−Ｌ−アラニン、９−フルオレニルメ
トキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸−γ−ｔ−ブチル
エステル、９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｌ−
イソロイシン、９−フルオレニルメトキシカルボニル−
Ｌ−ロイシン、Ｎ↑α−９−フルオレニルメトキシカル
ボニル−Ｎ↑ε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リ
ジン、９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｌ−フェ
ニルアラニンおよび９−フルオレニルメトキシカルボニ
ル−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−チロシンとして用い、それら
の使用量は基質に対して約２倍モル量とした。

【００２８】

【表１】

【００２９】全てのアミノ酸についての反応操作が終了
した後、得られた樹脂をグラスフィルター上でジクロロ
メタンおよびメタノールを用いて順次洗浄し、次いで真
空乾燥することによって６００mgの乾燥樹脂を得た。バ
イアル瓶中で、乾燥樹脂６００mgとトリフルオロ酢酸１
０ml、水０．５ml、チオアニソール０．５ml、エタンジ
チオール０．２５mlおよびフェノール０．７５ｇを混合
した。室温で２０時間放置後、混合物をグラスフィルタ
ーで濾過し、濾液にジエチルエーテルを加え、遠心する
ことにより白い沈殿物を得た。得られた沈殿物を真空乾
燥した後、２規定の酢酸水溶液で抽出し、抽出液を凍結
乾燥することによりペプチドを得た。

【００３０】得られたペプチドを分析用高速液体クロマ
トグラフィー〔カラム：粒径５μｍのオクタデシル化シ
リカゲル充填カラム（内径：４．６mm、長さ：１００m
m、東ソー（株）製 TSKgel ODS-80TMCTR）；移動相：
トリフルオロ酢酸を０．０５容量％含有するアセトニト
リルと水の混合溶媒（アセトニトリルの濃度は３０分間
で５容量％から５０容量％になるように漸次変化させ
た。）；流速：１ml／分；検出法：波長２１０nmにおけ
る吸光度〕に付したところ、１６．２分に単一の鋭いピ
ークが示された。ＦＡＢ（高速原子衝撃）法マススペク
トルにより求めたペプチドの分子量は１０１０であった
（理論値１０１１．１８）。

【００３１】合成例２〜２９ 合成例１と同様な方法でペプチドの固相合成を行うこと
により、表２〜６に示すペプチドを得た。ただし、固相
用の樹脂として、合成例１０および１１ではアミドペプ
チド用レジン（国産化学社販売）を用いた。また縮合反
応においてＬ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−
アスパラギン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−
メチオニン、Ｌ−プロリンおよびＬ−トリプトファン
は、それぞれ９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ
−４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスル
ホニル−Ｌ−アルギニン、９−フルオレニルメトキシカ
ルボニル−Ｌ−アスパラギン酸−β−ｔ−ブチルエステ
ル、９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｌ−アスパ
ラギン、９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｌ−グ
ルタミン、９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ^im
−トリチル−Ｌ−ヒスチジン、９−フルオレニルメトキ
シカルボニル−Ｌ−メチオニン、９−フルオレニルメト
キシカルボニル−Ｌ−プロリンおよび９−フルオレニル
メトキシカルボニル−Ｌ−トリプトファンとして用い
た。

【００３２】

【表２】

【００３３】

【表３】

【００３４】

【表４】

【００３５】

【表５】

【００３６】

【表６】

【００３７】得られたペプチドを分析用逆相高速液体ク
ロマトグラフィーに付したところ、いずれも単一のピー
クが示された。それらのペプチドについてＦＡＢ法マス
スペクトルにより求めた分子量を表７に示す。

【００３８】

【表７】

【００３９】実施例１ 無水ジオキサン（市販のジオキサンを金属ナトリウムの
存在下で蒸留したもの）５０ml中に、セルロース粒子
（チッソ（株）製、ＣＭセルロファインＣＬ）１０ｇを
懸濁し、得られた懸濁液にＮ−ヒドロキシコハク酸イミ
ド０．５ｇおよびジシクロヘキシルカルボジイミド１．
０ｇを加え、混合物を室温下で一晩振盪攪拌した。得ら
れた混合物を０．０２モル／ｌのリン酸塩緩衝液（pH
７．４）で洗浄し、吸引濾過した。得られた粒子を、合
成例１で得られたペプチドを２０mg含有する０．０２モ
ル／ｌのリン酸塩緩衝液（pH７．４）２０mlと混合し、
この混合物を４℃で一晩攪拌した。得られた混合物を吸
引濾過し、その濾液を分析用逆相高速液体クロマトグラ
フィーに付したが、残存する未反応のペプチドは認めら
れなかった（担体上へのペプチドの固定化率：約１００
％）。このようにして、合成例１で得られたペプチドが
２０mg固定化された吸着剤を約１０ｇ得た。

【００４０】実施例２ 実施例１においてセルロース粒子１０ｇの代わりにポリ
ビニルアルコール粒子（東ソー（株）製ＣＭ−トヨパー
ル６５０Ｃ）１０ｇを用い、かつ合成例１で得られたペ
プチドの代わりに合成例２で得られたペプチドを２０mg
用いる以外は同様な方法により、合成例２で得られたペ
プチドが１８．８mg固定化されたポリビニルアルコール
粒子を約１０ｇ得た（担体上へのペプチドの固定化率：
約９４％）。

【００４１】実施例３ 多孔性ガラス粒子〔米国エレクトロ−ニュークレオニク
ス（Electro−nucleonics）社製ＣＰＧ−１０−１００
０〕１０ｇを、γ−アミノプロピルトリエトキシシラン
を５ml含有するトルエン溶液１００ml中で２４時間加熱
還流下に反応させた。得られた混合物を無水ジオキサン
で洗浄し、吸引濾過した。得られた粒子を無水ジオキサ
ン１００ml中に懸濁し、この懸濁液に無水コハク酸３ｇ
を加え、混合物を室温下で一晩攪拌した。得られた混合
物を無水ジオキサンで洗浄し、吸引濾過した。得られた
粒子を無水ジオキサン５０ml中に懸濁し、この懸濁液に
Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド０．５ｇおよびジシクロ
ヘキシルカルボジイミド１．０ｇを加え、混合物を室温
下で一晩攪拌した。得られた混合物を０．０２モル／ｌ
のリン酸塩緩衝液（pH７．４）で洗浄し、吸引濾過し
た。得られた粒子を合成例３で得られたペプチドを２０
mg含有する０．０２モル／ｌのリン酸塩緩衝液（pH７．
４）２０mlと混合し、この混合物を４℃で一晩攪拌し
た。得られた混合物を吸引濾過し、合成例３で得られた
ペプチドが２０mg固定化された吸着剤を約１０ｇ得た
（担体上へのペプチドの固定化率：約１００％）。

【００４２】実施例４〜２４、比較例１〜５ 表２〜６に示すペプチドの２０mgを用いる以外は、実施
例１〜３のいずれかと同様な方法により、ペプチドが固
定化された吸着剤をそれぞれ得た。使用したペプチドお
よび粒子状担体ならびに担体上へのペプチドの固定化率
をそれぞれ表８に示す。

【００４３】

【表８】

【００４４】表８より、比較例１〜５のように一般式
（Ｉ）においてＸおよびＹの両方が単結合であるペプチ
ドの場合は、担体上への固定化率が低いことが明らかで
ある。

【００４５】試験例１ 抗二重鎖デオキシリボ核酸抗体（以下、抗dsＤＮＡ抗体
という）が高値を示すＳＬＥ患者の血漿３mlに実施例１
〜２４で得られた吸着剤１ｇ、またはコントロールとし
て未処理の粒子状担体〔セルロース粒子：チッソ（株）
製 ＣＭ−セルロファイン、ポリビニルアルコール粒
子：東ソー（株）製 ＣＭ−トヨパール６５０Ｃ、多孔
性ガラス粒子：米国エレクトロ−ニュークレオニクス
（Electro-nucleonics）社製ＣＰＧ−１０−１０００〕
１ｇを加え、３７℃で２時間懸濁させた。得られた懸濁
物を遠心分離し、上清を得た。得られた上清中のグロブ
リン、アルブミン濃度をＡ／Ｇテストキット（Ａ／ＧＢ
テストワコー、和光純薬（株）製）を用いて、抗dsＤＮ
Ａ抗体濃度は鈴木らの方法〔ＳＲＬ宝函、第８巻、２４
頁（１９８４年）参照〕に従って測定し、吸着除去率を
次式の数１より算出した結果を表９に示す。

【００４６】

【数１】

【００４７】比較のために、実施例１〜２４で得られた
吸着剤の代わりに、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギ
ン酸あるいはグリシンを担体上に固定化した吸着剤を使
用して、上記と同様な実験を行った結果を合わせて表９
に示す。なお、ポリグルタミン酸固定化吸着剤およびポ
リアスパラギン酸固定化吸着剤は、合成例１と同様の方
法で合成した、ポリグルタミン酸（Glu Glu Glu Glu Gl
u Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu、ＦＡＢ法マススペク
トルにより求めた分子量：１５６７）およびポリアスパ
ラギン酸（Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp
Asp Asp、ＦＡＢ法マススペクトルにより求めた分子
量：１４００）２０mgを用いた以外には、実施例１と同
様な方法で調製したもの（担体上へのポリグルタミン酸
の固定化率：約９５％、ポリアスパラギン酸の固定化
率：約９３％）を使用し、グリシン固定化吸着剤は、グ
リシン（協和発酵工業社製）２０mgを用いた以外には実
施例１と同様な方法で調製したもの（担体上へのグリシ
ンの固定化率：約８０％）を使用した。

【００４８】

【表９】

【００４９】試験例２ 試験例１において、抗dsＤＮＡ抗体が高値のＳＬＥ患者
血漿を用いる代わりに、抗一重鎖デオキシリボ核酸抗体
（以下、抗ssＤＮＡ抗体という）が高値のＳＬＥ患者血
漿を用いた以外は同様な方法で血漿の懸濁処理を行い、
得られた上清中のアルブミン、グロブリン、抗ssＤＮＡ
抗体の濃度〔ＳＲＬ宝函、第８巻、２４頁（１９８４
年）参照〕を測定し、吸着除去率を算出した結果を表１
０に示す。

【００５０】

【表１０】

【００５１】表９および表１０から、本発明の吸着剤の
使用により、人体にとって有用なアルブミンおよびグロ
ブリンをほとんど吸着除去することなく、選択的に抗Ｄ
ＮＡ抗体を吸着除去できることが明らかである。

【００５２】試験例３ 試験例１において、実施例５、１４、１５、１６、１
７、１８、１９、２２、比較例１〜５で得られた吸着剤
およびオートクレーブ滅菌処理した上記吸着剤を用いる
以外は同様な方法で血漿の懸濁処理を行い、得られた上
清中のアルブミン、グロブリン、抗dsＤＮＡ抗体の濃度
を測定し、吸着除去率を算出した結果を表１１に示す。
なお、オートクレーブ滅菌処理した吸着剤としては、ペ
プチドを固定化した吸着剤１ｇを塩化ナトリウムを０．
１５モル／ｌ含有する０．０２モル／ｌのリン酸緩衝液
（pH７．４）５ml中に懸濁し、オートクレーブ滅菌器中
で加圧下に１２１℃で２０分間熱処理したものを使用し
た。

【００５３】

【表１１】

【００５４】この結果より、比較例１〜５の吸着剤のよ
うに一般式（Ｉ）においてＸおよびＹの両方が単結合で
あるペプチドを固定化した吸着剤は、オートクレーブ滅
菌処理により抗ＤＮＡ抗体の吸着除去能力が著しく低下
するのに対して、本発明の吸着剤はオートクレーブ滅菌
処理後も抗ＤＮＡ抗体の吸着除去能力を十分保持してい
ることが明らかである。

【００５５】

【発明の効果】本発明の吸着剤は、体液中より人体にと
って有用な成分を吸着除去することなく、抗ＤＮＡ抗体
を選択的に吸着除去することが可能であり、抗ＤＮＡ抗
体が関与する疾患の治療に有用である。

【００５６】

【配列表】配列番号：１ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００５７】配列番号：２ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００５８】配列番号：３ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００５９】配列番号：４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６０】配列番号：５ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６１】配列番号：６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６２】配列番号：７ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６３】配列番号：８ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６４】配列番号：９ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６５】配列番号：１０ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６６】配列番号：１１ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６７】配列番号：１２ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６８】配列番号：１３ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００６９】配列番号：１４ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００７０】配列番号：１５ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００７１】配列番号：１６ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００７２】配列番号：１７ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００７３】配列番号：１８ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００７４】配列番号：１９ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００７５】配列番号：２０ 配列の長さ：１６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Lys Lys Lys Lys Lys Ala Phe Tyr Glu Ile Leu Asp Asp Asp Asp Asp 1 5 10 15

【００７６】配列番号：２１ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Glu Glu Glu Glu Glu Ala Phe Tyr Glu Ile Leu Glu Lys 1 5 10

【００７７】配列番号：２２ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００７８】配列番号：２３ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００７９】配列番号：２４ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００８０】配列番号：２５ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００８１】配列番号：２６ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００８２】配列番号：２７ 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Ala Phe Tyr Glu Ile Leu 1 5 10 15 Glu

【００８３】配列番号：２８ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００８４】配列番号：２９ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００８５】配列番号：３０ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００８６】配列番号：３１ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｓｎ
Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｌｅｕ １ ５
１０

【００８７】配列番号：３２ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｍｅｔ Ｐｒｏ
Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｐ １ ５
１０

【００８８】配列番号：３３ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００８９】配列番号：３４ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００９０】配列番号：３５ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００９１】配列番号：３６ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００９２】配列番号：３７ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００９３】配列番号：３８ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

【００９４】配列番号：３９ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平６−192290（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−32680（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−58937（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−105909（ＪＰ，Ａ) 特開 昭64−68272（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−226059（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−122875（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−186558（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−41667（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−192560（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61M 1/36 500 A61K 38/00 ABA C07K 7/06

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式：Ｈ−Ｘ−Ａ−Ｙ−Ｚ 〔式中、Ａは式：Ala−Ｂ−Ｃ−Glu−Ile−Leu（式中、
   ＢおよびＣはTrp、TyrまたはPheを表す。）で表される
   アミノ酸配列を含有する、６〜１２個のアミノ酸残基か
   らなるペプチド断片を表し；ＸおよびＹは一方が単結合
   を表すか、またはAsp、Glu、Arg、LysおよびHisよりな
   る群から選ばれるアミノ酸残基もしくは該群から選ばれ
   る少なくとも１種のアミノ酸残基の２〜１０個からなる
   ペプチド断片を表し、他方がAsp、Glu、Arg、Lysおよび
   Hisよりなる群から選ばれるアミノ酸残基もしくは該群
   から選ばれる少なくとも１種のアミノ酸残基の２〜１０
   個からなるペプチド断片を表し；Ｚは水酸基またはアミ
   ノ基を表す。〕で表されるペプチドを担体上に固定化し
   てなる抗デオキシリボ核酸抗体の吸着剤。