JP3207912B2 - コラゲナーゼ活性阻害剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、歯周病の予防及び治療
に有用なコラゲナーゼ活性阻害剤に係り、更に詳細に
は、特にガム，洗口剤，歯磨等の口腔用組成物に好適な
コラゲナーゼ活性阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】歯周病は、歯周組織における種々の病態
を含む炎症性疾患の総称であるが、一般に炎症が歯肉部
分に限定される歯肉炎と、歯槽骨に達して慢性化する歯
周炎とに大別される。歯周炎は歯槽膿漏とよばれていた
が、慢性化に伴い歯肉及び歯槽骨の破壊をきたし歯の脱
落にいたる。歯を失う原因の５０％が歯周病であり、中
高年にかけては約８０％の人が罹患している。

【０００３】歯周病の原因として、歯周ポケットのプラ
ーク中の特定の細菌群、中でも黒色色素産生性のバクテ
ロイデス（Bacteroides)菌群病原説が有力視されている
（例えば、Journal of Clinical Periodontology，13
巻，912 頁，1986年参照）。その歯周組織破壊作用とし
ては、細菌由来の直接作用因子（酵素やエンドトキシン
等）や間接作用因子（宿主の免疫応答を介するもの）が
関与していると考えられているが、何れにせよ結果的に
歯肉および歯槽骨のコラーゲンが分解・吸収される点は
共通である（American Journal of Pathology ，92巻，
509 頁，1978年参照）。

【０００４】歯周病に関わるコラーゲン分解酵素（コラ
ゲナーゼ）としては、バクテロイデス由来のものと歯肉
の線維芽細胞由来のものが注目されている。前者は最近
部分精製された、金属とチオールを同時に要求する珍し
い酵素であるが、まだ不明な点が多い（Journal of Per
iodontal Research ，23巻，258 頁，1988年参照）。

【０００５】一方、線維芽細胞由来の間質型コラゲナー
ゼ（以下断りの無い限りコラゲナーゼと呼ぶ）は詳細に
解明され、１次構造も明らかにされている（The Journa
l ofBiological Chemistry，261 巻，6600頁，1986年参
照) 。

【０００６】コラゲナーゼは、結合組織中の間質型コラ
ーゲン（Ｉ型，ＩＩ型，およびＩＩＩ型コラーゲン）を
分解する際の律速酵素であり、コラーゲンの代謝に重要
な役割を果たしている。炎症の存在する歯肉ではコラゲ
ナーゼ活性が上昇すること(Journal of Periodontal Re
search，16巻，417 頁，1981年参照），またコラーゲン
が歯肉炎の初期の段階から減少していること(Archieves
of Oral Biology，18巻，899 頁，1973年参照) を考慮
すると、歯肉のコラゲナーゼが歯周病の進行に深く関わ
っていると考えられる。

【０００７】従来、歯周病の予防や治療には、スケーリ
ングやルートプレーニングによる歯周ポケット内のプラ
ークや歯石の除去、歯周ポケットの除去（歯肉切除）等
が用いられていた。

【０００８】また、最近薬物療法として抗菌剤ミノサイ
クリンを配合した治療剤が開発された。ミノサイクリン
には、抗菌活性のみならずバクテロイデスおよび好中球
由来コラゲナーゼをイン・ビトロで阻害する活性を有す
ることが報告されている（Journal of the Japanese As
sociation of Periodontology ，30巻，182 頁，1988年
参照）。

【０００９】上記公知の方法は、医師の指示に従った物
理的，外科的，あるいは薬剤による治療に基づくもので
ある。しかし、歯周病は日常的で罹患率の高い疾病であ
り、また、医師による治療に至るまでに病状が悪化し易
いことを考慮すると、ガム，飴，飲料のような食品や、
歯磨剤，洗口剤のような口腔素材に、前記の病因を除去
し歯周病の予防や治療に役立つ安全性の高い食品由来素
材を利用することが望まれる。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的と
するところは、歯周病の予防・治療効果が期待でき、し
かも安全性の高い、コラゲナーゼ活性阻害剤を提供する
ことにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】上述の目的は、コーヒー
酸又はその塩と、アスコルビン酸又はエリソルビン酸も
しくはこれらの塩とを含有することを特徴とするコラゲ
ナーゼ活性阻害剤によって達成される。

【００１２】本発明において用いられるコーヒー酸は、
コーヒー豆や茶葉など広く高等植物に配糖体，エステル
または遊離型として存在する化合物である。

【００１３】本発明で用いるコーヒー酸の製造方法は、
特に限定されるものではなく、通常用いられている方法
でよい。また、茶葉，コーヒー豆，果実等の植物体から
コーヒー酸含有抽出液として得るか、クロロゲン酸とし
て抽出後加水分解することにより得ることもできる。

【００１４】更に、得られたコーヒー酸を、通常使用可
能な塩基により中和し、例えばコーヒー酸ナトリウムの
ような塩として用いることもできる。

【００１５】本発明に於いて、コーヒー酸又はその塩
は、併用してもよい。

【００１６】コーヒー酸（塩）の適用組成物中における
含有量は、適用対象物により異なり、一概には規定出来
ないが、適用組成物全体を１００重量％として、0.001
〜5.０重量％程度が好ましく、更に好ましくは0.01〜3.
０重量％である。

【００１７】但し、後述するアスコルビン酸，エリソル
ビン酸又はこれらの塩と併用する際には、0.0001〜5.０
重量％が好ましく、更に好ましくは0.002 〜3.０重量％
である。

【００１８】本発明で用いるアスコルビン酸，エリソル
ビン酸，及びこれらの塩は、公知の化合物であり、その
製造方法は、特に限定されるものではなく、通常用いら
れている方法でよい。

【００１９】本発明に於いては、アスコルビン酸，エリ
ソルビン酸又はこれらの塩を併用することもできる。

【００２０】アスコルビン酸，エリソルビン酸，又はこ
れらの塩の、適用組成物中における含有量は、適用対象
物により異なり、一概には規定できないが、適用組成物
全体を１００重量％として、０．００１〜５．０重量％
程度が好ましく、更に好ましくは０．０１〜１．０重量
％である。

【００２１】本発明のコラゲナーゼ活性阻害剤は、アス
コルビン酸，エリソルビン酸，又はこれらの塩との併用
によって、相乗的に効果を奏するものである。

【００２２】本発明のコラゲナーゼ活性阻害剤を適用す
る対象は、液剤，固形剤，半固形剤のいずれであっても
よく、好ましい組成物として歯磨剤，洗口剤，チューイ
ンガム，トローチ剤，塗布液剤等の口腔用組成物，或い
は飴類，飲料等の食品等が挙げられる。

【００２３】これらの組成物を製造するのに使用される
賦形剤または補助剤は、通常同目的に使用されるものか
ら剤形に応じて適宜選択すればよく、特に限定されるも
のではないが、例えば乳糖，ステアリン酸マグネシウ
ム，ソルビット，マンニット，カルボキシメチルセルロ
ース，ハイドロキシプロピルセルロース，ハイドロキシ
プロピルメチルセルロース，サッカリン，ラウリル硫酸
ナトリウム，ラウロイルサルコシンナトリウム，グリセ
リン，ポリエチレングリコール，ポリビニルアルコー
ル，カラギナン，アラビアゴム，エタノール，メントー
ル，脂肪酸，クエン酸，無水ケイ酸，第二リン酸カルシ
ウム，ハイドロキシアパタイト，炭酸カルシウム，二酸
化チタン等が使用される。

【００２４】更に、通常食品に用いられる甘味料，着色
料，香料，保存料などを適宜使用することもできるし、
歯周病原因菌の増殖を抑制するビャクダン，カッシャ，
シンナモン，グアヤック，パチュリ等精油成分（特願平
２−１２６３３１号），クロルヘキシジンなどの殺菌
剤，アンピシリンなどの抗生物質を配合し、歯周病の予
防や改善効果を高めることもできる。

【００２５】

【発明の効果】本発明のコラゲナーゼ活性阻害剤は、歯
周病における歯肉および歯槽骨のコラーゲン吸収の原因
であるコラゲナーゼに対し優れた阻害活性を有し、歯周
病の予防および治療に有用で、且つ配合量の多少に関わ
らず使用上の安全性も極めて高いものである。

【００２６】

【実施例】

（試験例−１） コーヒー酸のコラゲナーゼ阻害活性作
用

【００２７】１. 試験薬 コーヒー酸（和光純薬工業（株）製）

【００２８】２. コラゲナーゼ コラゲナーゼとしては、ヒト線維肉腫細胞由来の足場非
依存性細胞に、無血清無蛋白質培地中で産生させたヒト
プロコラゲナーゼを、ＣＭセファロース^TM（ファルマシ
ア社製）および亜鉛キレーティングセファロース^TM（フ
ァルマシア社製）により精製して緩衝液に溶解し、これ
に活性化剤としてトリプシン（シグマ社製、Ｔｙｐｅ１
２）を添加して、３５℃にて５分間インキュベートした
後、ダイズトリプシン・インヒビター（メルク社製）を
添加してトリプシンを失活させたものを用いた（特願平
1-238941号公報参照）。

【００２９】３. コラゲナーゼ阻害活性の測定 コラゲナーゼに対するコーヒー酸の阻害活性の測定は、
以下の通り行った。先ず、試験薬をジメチルスルホキシ
ドにて溶解して８重量％溶液を得、ついで測定用緩衝液
〔0.2M食塩，5mM 塩化カルシウム，0.05容量％Brij-35
(ＩＣＩ社製ポリオキシエチレン(23)ラウリルエーテ
ル），および0.02容量％アジ化ナトリウムを含有する50
mMトリス塩酸緩衝液，pH7.5 〕にて２００〜２００００
倍希釈する。

【００３０】各希釈液と、既知量（0.7 単位; なお１単
位は、３５℃で１分間に１μｇのＩ型コラーゲンを分解
する酵素量を示す）の上記コラゲナーゼ溶液とを等量混
合し、フルオレッセインイソチオシアネートで標識され
たＩ型コラーゲン（コスモバイオ社製）を基質として、
永井らの方法（Japanese Journal of Inflamation，4
巻，123 頁，1984年参照）に準じコラゲナーゼ活性を測
定することにより、阻害曲線を求め、それより５０％阻
害するに必要な試験薬量をＩＣ₅₀値として読み取った。

【００３１】４. 試験結果 表１に結果を示す。コーヒー酸に用量依存的なコラゲナ
ーゼ阻害活性がみられ、ＩＣ₅₀値は約５０μｇ／ｍｌで
あった。

【００３２】

【表１】

【００３３】（試験例−２） アスコルビン酸又はエリ
ソルビン酸のヒトコラゲナーゼ阻害作用

【００３４】１. 試験薬 Ｌ（＋）−アスコルビン酸（関東化学（株）製） エリソルビン酸ナトリウム（和光純薬工業（株）製）

【００３５】２. コラゲナーゼ 試験例−１に同じ。

【００３６】３. コラゲナーゼ阻害活性の測定 試験薬を直接測定用緩衝液に溶解する他は試験例−１に
同じ。

【００３７】４. 試験結果 表２に結果を示す。両試験薬に用量依存的なコラゲナー
ゼ阻害活性がみられ、コーヒー酸ＩＣ₅₀値とほぼ同じ活
性を示した。

【００３８】

【表２】

【００３９】（試験例−３） コーヒー酸のヒトコラゲ
ナーゼ阻害作用に対する、アスコルビン酸およびエリソ
ルビン酸の増強効果。

【００４０】１. 試験薬 試験例−１および２に同じ。

【００４１】２. コラゲナーゼ 試験例−１に同じ。

【００４２】３. コラゲナーゼ阻害活性の測定 アスコルビン酸またはエリソルビン酸と、コーヒー酸と
の相乗効果を見るために、終濃度０. ０１重量％のアス
コルビン酸またはエリソルビン酸の存在下で、コーヒー
酸のコラゲナーゼ阻害活性（ＩＣ₅₀値）を調べた。な
お、用いた精製コラゲナーゼ量を試験例−１の約２倍量
（１. ２単位）とし、０. ０１重量％のアスコルビン酸
またはエリソルビン酸の存在下で、活性を有するコラゲ
ナーゼ量が、実質０．７単位となるように調製した。

【００４３】４. 試験結果 表３に結果を示す。アスコルビン酸およびエリソルビン
酸の存在下では、コーヒー酸のコラゲナーゼ阻害のＩＣ
₅₀値の低下（阻害活性の増加）が見られた。

【００４４】

【表３】

【００４５】以下に実施例を挙げる。なお、表中の値
は、重量％を表す。

【００４６】参考例１〜２、実施例３ （練歯磨き）

【００４７】

【表４】

【００４８】常法に従って製造する。即ち、水，グリセ
リン，カラギナン，サッカリン，パラオキシ安息香酸ブ
チル，クロルヘキシジンジグルコネート，香料，コーヒ
ー酸，エリソルビン酸ナトリウムの処方量を計量し、混
合して粘結剤を膨潤させたのち、第２リン酸カルシウ
ム，ラウリル硫酸ナトリウムを加え、更によく混合，脱
泡したのちチューブに充填して練歯磨き剤を得た。

【００４９】参考例４、実施例５ （トローチ剤）

【００５０】

【表５】

【００５１】常法に従い上記処方のトローチ剤を製造し
た。

【００５２】参考例６、実施例７〜８ （洗口剤）

【００５３】

【表６】

【００５４】常法に従い上記処方の洗口剤を製造した。

【００５５】参考例９、実施例１０〜１１ （チューインガム）

【００５６】

【表７】

【００５７】40℃に保温した全量のチューインガムベー
スおよび全量の水飴を、ニーダーに投入して10分間混練
し、粉糖の1/3 量および全量のブドウ糖を投入して５分
間、次いで粉糖の1/3 量を投入して５分間混練した。次
に、コーヒー酸，アスコルビン酸及び香料を残りの1/3
量の粉糖に混合したものを投入し、５分間混練してガム
ミックスを得た。

【００５８】参考例１２、実施例１３ （ヌガー）

【００５９】

【表８】

【００６０】を混合し泡立てる。は１３０℃まで煮
詰める。にを少しづつ加え、更に泡立てる。これ
に、を加え混合しながら９０℃まで冷却後、を加え
て良く混合したのち冷却盤上に広げ成型してヌガーを得
た。

【００６１】参考例１４、比較例１ （コーヒー飲料）

【００６２】

【表９】

【００６３】焙煎粉砕コーヒー豆（粒度２０メッシュ９
０％オン，中炒り）１００ｋｇをドリップ式抽出機に入
れた。水２００ｋｇをプレートヒーターで８０℃迄加熱
した後、上記抽出機の上部から流下させて熱水抽出し、
１５０ｋｇのコーヒー抽出液（Ｂｘ１８）を得た。この
抽出液に、上記組成で液糖，水，コーヒー酸及び重炭酸
水素ナトリウムを加え、調合液をＢｘ２７．９，ｐＨ
５．６５に調整した。

【００６４】得られた調合液を缶に充填密封し、１１５
℃で２５分殺菌し、コーヒー飲料を得、本飲料中のコー
ヒー酸量を、高速液体クロマトグラフィー〔山村化学
（株）製ＹＭＣ−Ａ３１２逆相Ｃ₁₈カラムを使用し、溶
離液として０．１容量％トリフルオロ酢酸を含む１５容
量％アセトニトリルを用いた。検知は３５０ｎｍ〕で測
定した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/341 Ａ６１Ｋ 31/341 Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 (56)参考文献 Ｃｉｂａ Ｆｏｕｎｄ．Ｓｙｍｐ. （1988）141（Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ) ｐｐ．193−210 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 31/191,31/375,31/341

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 コーヒー酸又はその塩と、アスコルビン
   酸又はエリソルビン酸もしくはこれらの塩とを含有する
   ことを特徴とするコラゲナーゼ活性阻害剤。