JP2916047B2 - ホエー蛋白分画の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ホエー蛋白分画の製造
法に関するものである。更に詳しくは、本発明は、高純
度で、かつ簡便にβ−ラクトグロブリン、及びα−ラク
トアルブミンをホエーから製造する方法に関するもので
ある。尚、本明細書において％の表示は、特に断りのな
い限り重量による値である。

【０００２】

【従来の技術】チーズ製造において副産物として生成す
るホエーは、ウルトラフィルトレーション（以下ＵＦと
記載することがある）により濃縮され、蛋白質濃度を増
加させるととも乳糖及び灰分の濃度を低下させ、いわゆ
るホエー蛋白質濃縮物（以下ＷＰＣと記載することがあ
る）として、育児用食品の製造における蛋白源、各種食
品の製造における原料等として利用されている。

【０００３】ところで、ＷＰＣの有する特性をより有効
に利用する方法として、従来からホエー蛋白質の各蛋白
質成分を分画、精製する種々の試みがなされている。例
えば、ホエーをＵＦで10倍に濃縮し、pHを2.0 〜 4.0に
調整し、食塩を2 〜 15%添加し、β−ラクトグロブリン
と、α−ラクトアルブミンとを分離する方法［ピー・メ
リジェー及びビー・リバデュー・デュマ：ジャーナル・
オブ・フード・サイエンス（P.Mailliart and B. Ribad
eau-Dumas:Journal of Food Science ），第53巻，第3
号，第743 ページ（1988年）、以下文献１と記載す
る］、ホエーをＵＦで濃縮し、pHを4.65に調整し、電気
透析により脱塩し、加熱せずにβ−ラクトグロブリン
と、α−ラクトアルブミンとを分離する方法［エー・ダ
ブリュウ・スラックら：ジャーナル・オブ・フード・プ
ロセッシング・アンド・プレザベーション（A.W. Slac
k, et al:Journal of Food Processing and Preservati
on ），第10巻，第19ページ（1986年）、以下文献２と
記載する］等が知られている。

【０００４】また、ホエーをＵＦで濃縮し、pHを4.2 に
調整し、64℃で加熱し、β−ラクトグロブリンと、α−
ラクトアルブミンとを分離する方法［アール・ジェイ・
ピールス：ブレティン・オブ・ザ・インターナショナル
・デイリー・フェデレーション（R.J. Pearce:Bulletin
of the International Dairy Federation），ドキュメ
ント第212 号（1987年）、以下文献３と記載する］が知
られている。

【０００５】更に、ホエー又はＷＰＣを90% 以上脱塩
し、pHを4.2 〜4.5 に調整し、45〜70℃で加熱し、その
温度に１時間保持し、α−ラクトアルブミンを沈澱物、
β−ラクトグロブリンを上清液として分離する方法（特
開昭61-268138 号公報、以下文献４と記載する）、ホエ
ー又は精製ホエー蛋白質を、灰分含量が 0〜1%のときpH
を 4〜 6に、灰分含量が 1〜3%のときpHを 6〜 8に、そ
れぞれ調整し、強塩基性陰イオン交換体と接触させ、β
−ラクトグロブリンを該イオン交換体に吸着させ、次い
で高イオン強度の溶液によりβ−ラクトグロブリンを該
イオン交換体から溶出させる方法（特開平3-19654 号公
報、以下文献５と記載する）等が知られている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記従
来の方法においては、工業的規模での実施において種々
の問題点があった。即ち、具体的には、文献１記載の方
法においては、pHを酸性にするため、中和により生じた
塩及び添加した食塩の効果的除去が必要とされる点、ま
た、文献２記載の方法においては、文献１記載の方法と
同様に中和により生じた塩の効果的除去が必要とされる
点、及び電気透析による歩留まりの低下と生産コストの
増加の点、文献３記載の方法においては、文献１及び文
献２記載の方法と同様に中和により生じた塩の効果的除
去が必要とされる点、及び加熱により分離したα−ラク
トアルブミン沈澱物の再溶解が必要とされる点等種々の
問題点があった。

【０００７】また、文献４記載の方法においては、文献
１、文献２及び文献３記載の方法と同様に中和により生
じた塩の効果的除去が必要とされる点、文献３記載の方
法と同様に加熱により分離したα−ラクトアルブミン沈
澱物の再溶解が必要とされる点、90% 以上の脱塩を行う
ため歩留まりの低下、及び生産コストの増加の点、更
に、文献５記載の方法においては、文献１、文献２及び
文献３記載の方法と同様に中和により生じた塩の効果的
除去が必要とされる点、及びβ−ラクトグロブリンのみ
を分離してα−ラクトアルブミンを廃棄している点等種
々の問題点があった。

【０００８】従って、従来種々の方法が提案されている
にもかかわらず、ホエー又は濃縮ホエーから工業的規模
で、高純度のβ−ラクトグロブリン、及びα−ラクトア
ルブミンの製造は、実施されていなかったのが実情であ
る。

【０００９】このような状況を踏まえ、本発明者らは、
ホエー又は濃縮ホエーから工業的規模で、高純度のβ−
ラクトグロブリン、及びα−ラクトアルブミンを簡便に
製造するための新しい方法を開発することを目標とし
て、鋭意研究を行った結果、陰イオン交換体、特に弱塩
基性陰イオン交換体が前処理をしないホエー又は濃縮ホ
エー中のβ−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン
を選択的に吸着し、塩溶液で容易に溶出し得ることを見
出し、本発明を完成した。

【００１０】すなわち、本発明は、ホエー又は濃縮ホエ
ーに何らの前処理も施さずにβ−ラクトグロブリンとα
−ラクトアルブミンとを同時に、変性させずに、高純度
で、かつ簡便に工業的規模で製造するための方法を提供
することを目的とするものである。

【００１１】

【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
の本発明の構成は、次の技術手段からなるものである。

【００１２】ホエー又は濃縮ホエーを、そのpHを調整せ
ずに、そのまま陰イオン交換体を充填したカラムに通液
し、β−ラクトグロブリンを選択的に当該陰イオン交換
体に吸着させ、当該陰イオン交換体に吸着せずに溶出し
た液を回収し、回収した溶出液を、そのpHを調整せず
に、そのまま陰イオン交換体を充填した別のカラムに通
液し、α−ラクトアルブミンを選択的に当該陰イオン交
換体に吸着させ、吸着したα−ラクトアルブミンを塩溶
液で溶出させることを特徴とするホエー蛋白分画の製造
法。

【００１３】

【００１４】

【００１５】

【００１６】次に本発明の方法について詳述する。本発
明の方法において出発物質として使用するホエー又は濃
縮ホエーは、通常のチーズ製造において副産物として生
成する甘性ホエー、又はこれを常法により濃縮した濃縮
ホエーである。通常、甘性ホエー、及び濃縮ホエーのｐ
Ｈは、それぞれ５．８〜６．６、及び５．８〜６．８で
あり、本発明の方法においては、当該ホエーのｐＨを調
整することなく、そのまま使用することを特徴とするも
のである。また、ホエー及び濃縮ホエーには、蛋白質の
他、各種ミネラル、乳糖等が含まれているが、本発明の
方法においては、これらの成分を予め除去する必要がな
く、そのまま使用することができる。

【００１７】本発明の方法において使用する陰イオン交
換体は、市販の弱塩基性陰イオン交換体であり、イオン
交換基としてジエチルアミノエチル基を有する弱塩基性
陰イオン交換体が好適であり、特に望ましい弱塩基性陰
イオン交換体としては、市販のDEAEセファデックスA50
（商標、ファルマシア社製）、インディオンHA（商標、
フェニックス・ケミカルズ社製）、DEAE−トヨパール 6
50M （商標、東ソー製）等を例示することができる（試
験例８及び試験例９参照）。

【００１８】陰イオン交換体は、常法により水洗、膨潤
し、例えばカラム等に所定量が充填される。陰イオン交
換体の量は、処理するホエー又は濃縮ホエーの量、及び
陰イオン交換体の種類により適宜決定されるが、通常ホ
エー又は濃縮ホエーの固形分（ただし、濃縮ホエーの場
合は濃縮前のホエーの固形分換算、以下同じ）１Kg当た
り10〜1700ｇの割合を例示できる。特に望ましい量を例
示すれば、ホエー又は濃縮ホエーの固形分１Kg当たりDE
AEセファデックスA50 では、10〜 45g、インディオンHA
では、140 〜650g、DEAE−トヨパール 650M では、370
〜1700g である。

【００１９】ホエー又は濃縮ホエーと陰イオン交換体と
の接触は、０〜20℃の温度で20〜60分間攪拌することに
よって行われ、この処理により陰イオン交換体にβ−ラ
クトグロブリンが選択的に吸着される。陰イオン交換体
へのβ−ラクトグロブリンの吸着は、０〜60℃の間でほ
とんど差異がないので、処理中の細菌の増殖を防止する
点から可及的に低い温度が望ましい。攪拌時間は、後記
する試験例１から20〜60分間、望ましくは40〜60分間で
ある（試験例１参照）。

【００２０】接触終了後、液を排出する。この排出液
は、次のα−ラクトアルブミンを分画する工程に利用す
る。液を排出した後、陰イオン交換体を水洗し、不要の
成分を除去する。次いで低濃度の塩溶液を通液し、不要
の蛋白質等を除去する。塩の種類は、一価の塩が望まし
く、特に食塩が好適である。塩の濃度は、0.2 〜1.0%、
特に0.8 〜1.0%が望ましい（試験例２参照）。使用する
塩溶液の量は、ホエー又は濃縮ホエーの固形分１Kg当た
り600 〜1500g であり、特にホエー又は濃縮ホエーの固
形分１Kg当たり800 〜1000g が望ましい（試験例３参
照）。

【００２１】本発明の方法において所望のホエー蛋白分
画の溶出は、イオン強度の差を利用して行われるので、
一価の塩がイオン強度の調整が容易である。特に食塩
は、安価であり、入手も容易であり、食品衛生上も安全
であり、望ましい。塩類の濃度は、後記する試験例２か
ら0.2 〜1.0%、望ましくは0.8 〜1.0%である。

【００２２】低濃度の塩溶液で洗浄した陰イオン交換体
に、高濃度の塩溶液を通液し、β−ラクトグロブリンを
溶出する。塩の種類は、一価の塩が望ましく、一価の塩
であれば、特にその種類は限定されないが、その中でも
特に食塩が好適である。塩の濃度は、2 〜5%、特に4 〜
5%が望ましい（試験例４参照）。使用する塩溶液の量
は、ホエー又は濃縮ホエーの固形分１Kg当たり1500〜27
00g であり、特にホエー又は濃縮ホエーの固形分１Kg当
たり2300〜2700g が望ましい（試験例５参照）。使用す
る塩の種類は、前記洗浄処理に使用する塩と同一の理由
である。

【００２３】β−ラクトグロブリンを含有する溶出液
を、常法により脱塩し、そのままβ−ラクトグロブリン
溶液とすることもでき、この溶液を常法により濃縮し、
β−ラクトグロブリン濃縮液とすることもでき、更にこ
の濃縮液を常法により乾燥し、粉末のβ−ラクトグロブ
リンとすることもできる。

【００２４】前記排出液を、前記と同一の陰イオン交換
体に通液し、α−ラクトアルブミンを選択的に吸着さ
せ、陰イオン交換体を水洗し、不要の成分を除去する。
次いで低濃度の塩溶液を通液し、陰イオン交換体に吸着
したα−ラクトアルブミンを溶出する。塩の種類は、一
価の塩が望ましく、一価の塩であれば、特にその種類は
限定されないが、その中でも特に食塩が好適である。塩
の濃度は、0.4 〜1.0%、特に0.4 〜0.7%が望ましい（試
験例６参照）。使用する塩溶液の量は、ホエー又は濃縮
ホエーの固形分１Kg当たり1500〜3000g であり、特にホ
エー又は濃縮ホエーの固形分１Kg当たり2000〜3000g が
望ましい（試験例７参照）。使用する塩の種類は、前記
β−ラクトグロブリンの溶出に使用する塩と同一の理由
である。

【００２５】α−ラクトアルブミンを含有する溶出液
を、常法により脱塩し、そのままα−ラクトアルブミン
溶液とすることもでき、この溶液を常法により濃縮し、
α−ラクトアルブミン濃縮液とすることもでき、更にこ
の濃縮液を常法により乾燥し、粉末のα−ラクトアルブ
ミンとすることもできる。

【００２６】以上のようにして製造したホエー蛋白分画
は、従来法により製造されたＷＰＣ等と同様に育児用食
品の製造における蛋白源、各種食品の製造における原料
等として使用することができる。

【００２７】次に試験例を示して本発明を詳述する。 （試験例１）この試験は、陰イオン交換体との接触処理
時間を調べるために行った。2lのカラム５個に、インデ
ィオンHA（商標、フェニックス・ケミカルズ社製）をそ
れぞれ10g を入れ、十分水洗し、次いで各カラムにエメ
ンタール・チーズ製造時副産物として生成した甘性ホエ
ー1200g をpH調整せずそのまま通液し、10℃で10、20、
40、60及び80分間攪拌し、次いでカラム内の液を回収
し、陰イオン交換体に吸着した蛋白質の量を次の方法に
より測定し、好適な攪拌時間を試験した。

【００２８】即ち、甘性ホエー及び回収液の蛋白質含量
をケールダール法により定量し、前者と後者の差を陰イ
オン交換体に吸着した蛋白質量とした。

【００２９】この試験の結果は、表１に示すとおりであ
る。表１から明らかなように20分未満の攪拌時間では、
蛋白質の陰イオン交換体への吸着量が少なく、60分を超
える攪拌時間では、蛋白質の陰イオン交換体への吸着量
の増加が認められなかった。従って、攪拌時間は、20〜
60分間が適当であり、特に40〜60分間が望ましい。尚、
陰イオン交換体の種類を変更して試験してもほぼ同様の
結果が得られた。

【００３０】

【表１】

【００３１】（試験例２） この試験は、陰イオン交換体に吸着した不要な蛋白質を
洗浄する塩の濃度を調べるために行った。3lのカラム６
個に、DEAEトヨパール650M（商標、東ソー製）をそれぞ
れ60g を入れ、各カラムにエメンタール・チーズ製造時
副産物として生成した甘性ホエー2500g をpH調整せずそ
のまま通液し、10℃で60分間攪拌し、カラム内の液を排
出し、次いでカラムを十分水洗し、0.1%、0.2%、0.6%、
0.8%、1.0%及び1.2%の濃度に調整した食塩水溶液各150g
を通液し、30分間攪拌し、カラム内の溶液を排出し、各
排出液のβ−ラクトグロブリンとその他の蛋白質の量を
後記する参考例と同一のSDS-PAGE電気泳動法により測定
し、好適な洗浄用塩の濃度を試験した。

【００３２】この試験の結果は、表２に示すとおりであ
る。表２から明らかなように食塩濃度が０．２％未満で
は陰イオン交換体に吸着した不要な蛋白質が溶出され
ず、β−ラクトグロブリンを精製することができない。
一方、１．０％を超える食塩濃度では陰イオン交換体に
吸着したβ−ラクトグロブリンも溶出され、β−ラクト
グロブリンの収量が低下することが判明した。

【００３３】従って、塩類の濃度は、0.2%〜1.0%が適当
であり、特に0.8%〜1.0%が望ましい。尚、陰イオン交換
体及び塩類の種類を変更して試験してもほぼ同様の結果
が得られた。

【００３４】

【表２】

【００３５】（試験例３） この試験は、陰イオン交換体に吸着した不要な蛋白質を
洗浄する塩類溶液の量を調べるために行った。3lのカラ
ム６個に、DEAEトヨパール650M（商標、東ソー製）をそ
れぞれ60g を入れ、十分水洗し、各カラムにエメンター
ル・チーズ製造時副産物として生成した甘性ホエー2500
g を通液し、10℃で60分間攪拌し、カラム内の液を排出
し、次いでカラムを十分水洗し、0.9%の濃度に調整した
食塩水溶液をホエーの固形分1Kg 当り400g、600g、800
g、1000g 、1500g 及び1700g の割合で通液し、30分間
攪拌し、カラム内の溶液を排出し、各排出液のβ−ラク
トグロブリン及びその他の蛋白質の量を後記する参考例
と同一のSDS-PAGE電気泳動法により測定し、好適な洗浄
用塩類溶液の量を試験した。

【００３６】この試験の結果は、表３に示すとおりであ
る。表３から明らかなように食塩溶液の量がホエーの固
形分1Kg 当り600g未満では陰イオン交換体に吸着した不
要な蛋白質が溶出されず、β−ラクトグロブリンを精製
することができない。一方、ホエーの固形分1Kg 当り15
00g を超える食塩溶液の量では陰イオン交換体に吸着し
た目的の蛋白質も溶出され、β−ラクトグロブリンの収
量が低下することが判明した。従って、塩類の量は、60
0 〜1500g が適当であり、特に800 〜1000g が望まし
い。尚、陰イオン交換体及び塩類の種類を変更して試験
してもほぼ同様の結果が得られた。

【００３７】

【表３】

【００３８】（試験例４） この試験は、陰イオン交換体に吸着したβ−ラクトグロ
ブリンを溶出する塩類溶液の濃度を調べるために行っ
た。前記試験例２において1%食塩溶液150gで洗浄した陰
イオン交換体を6gずつ200ml のビーカー５個に分注し、
1%、2%、4%、5%及び6%の食塩水溶液各15g を添加し、10
℃で60分間攪拌し、次いで食塩溶液を採取し、各採取液
のβ−ラクトグロブリン及びその他の蛋白質の含量を後
記する参考例と同一のSDS-PAGE電気泳動法により測定
し、好適な溶出用塩類溶液の濃度を試験した。

【００３９】この試験の結果は、表４に示すとおりであ
る。表４から明らかなように食塩の濃度が2%未満ではβ
−ラクトグロブリンが十分溶出されない。一方、5%を超
える食塩の濃度では、5%の食塩濃度の場合に比してβ−
ラクトグロブリンの溶出の増加がないことが判明した。
従って、塩類の濃度は、2 〜5%が適当であり、特に4 〜
5%が望ましい。尚、陰イオン交換体及び塩類の種類を変
更して試験してもほぼ同様の結果が得られた。

【００４０】

【表４】

【００４１】（試験例５） この試験は、陰イオン交換体に吸着したβ−ラクトグロ
ブリンを溶出する塩類溶液の量を調べるために行った。
前記試験例２において1%食塩溶液150gで洗浄した陰イオ
ン交換体を6gずつ200ml のビーカー５個に分注し、5%の
食塩水溶液をホエーの固形分1Kg 当り1000g 、1500g 、
2300g 、2700g 及び3000g の割合でそれぞれの容器に添
加し、10℃で30分間攪拌し、次いで食塩溶液を採取し、
各採取液のβ−ラクトグロブリン及びその他の蛋白質の
量を後記する参考例と同一のSDS-PAGE電気泳動法により
測定し、好適な溶出用塩類溶液の量を試験した。

【００４２】この試験の結果は、表５に示すとおりであ
る。表５から明らかなように食塩溶液の量がホエーの固
形分1Kg 当り1500g 未満ではβ−ラクトグロブリンが十
分溶出されない。一方、ホエーの固形分1Kg 当り2700g
を超える食塩溶液の量では、ホエーの固形分1Kg 当り27
00g の食塩溶液の場合に比してβ−ラクトグロブリンの
溶出の増加がないことが判明した。従って、塩類の量
は、1500〜2700g が適当であり、特に2300〜2700g が望
ましい。尚、陰イオン交換体及び塩類の種類を変更して
試験してもほぼ同様の結果が得られた。

【００４３】

【表５】

【００４４】（試験例６） この試験は、陰イオン交換体に吸着したα−ラクトアル
ブミンを溶出する塩類溶液の濃度を調べるために行っ
た。前記試験例２と同様に陰イオン交換体60g に甘性ホ
エー2500g を添加し、10℃で60分間攪拌し、次いでホエ
ーを採取し、５等分した。前処理済の前記と同一の陰イ
オン交換体12g が入っている1lの容器５個に採取したホ
エーを添加し、前記と同様に60分間攪拌し、ホエーを排
出し、陰イオン交換体を十分水洗した。0.2%、0.4%、0.
7%、1.0%及び1.2%の食塩水溶液各60g を添加し、10℃で
30分間攪拌し、次いで食塩溶液を採取し、各採取液のα
−ラクトアルブミン及びその他の蛋白質の含量を後記す
る参考例と同一のSDS-PAGE電気泳動法により測定し、好
適な溶出用塩類溶液の濃度を試験した。

【００４５】この試験の結果は、表６に示すとおりであ
る。表６から明らかなように食塩の濃度が0.4%未満では
α−ラクトアルブミンが十分溶出されない。一方、1.0%
を超える食塩の濃度では、1.0%の食塩濃度の場合に比し
てα−ラクトアルブミンの溶出量は増加するが、その他
の蛋白質の溶出量も増加し、α−ラクトアルブミンの純
度が低下することが判明した。従って、塩類の濃度は、
0.4 〜1.0%が適当であり、特に0.4 〜0.7%が望ましい。
尚、陰イオン交換体及び塩類の種類を変更して試験して
もほぼ同様の結果が得られた。

【００４６】

【表６】

【００４７】（試験例７） この試験は、陰イオン交換体に吸着したα−ラクトアル
ブミンを溶出する塩類溶液の量を調べるために行った。
前記試験例２と同様に陰イオン交換体60g に甘性ホエー
2500g を添加し、10℃で60分間攪拌し、次いでホエーを
採取し、５等分した。前処理済の前記と同一の陰イオン
交換体12g が入っている1lの容器５個に採取したホエー
を添加し、前記と同様に60分間攪拌し、ホエーを排出
し、陰イオン交換体を十分水洗した。次いで0.6%の食塩
水溶液をホエーの固形分1Kg 当り1000g 、1500g 、2000
g 、3000g及び3500g の割合でそれぞれの容器に添加
し、10℃で30分間攪拌し、次いで食塩溶液を採取し、各
採取液のα−ラクトアルブミン及びその他の蛋白質の量
を後記する参考例と同一のSDS-PAGE電気泳動法により測
定し、好適な溶出用塩類溶液の量を試験した。

【００４８】この試験の結果は、表７に示すとおりであ
る。表７から明らかなように食塩溶液の量がホエーの固
形分1Kg 当り1500g 未満ではα−ラクトアルブミンが十
分溶出されない。一方、ホエーの固形分1Kg 当り3000g
を超える食塩溶液の量では、ホエーの固形分1Kg 当り30
00g の食塩溶液の量の場合に比してα−ラクトアルブミ
ンの溶出の増加がないことが判明した。従って、塩類の
量は、1500〜3000g が適当であり、特に2000〜3000g が
望ましい。尚、陰イオン交換体及び塩類の種類を変更し
て試験してもほぼ同様の結果が得られた。

【００４９】

【表７】

【００５０】（試験例８） この試験は、本発明の第１段階、即ちβ−ラクトグロブ
リンの精製（分離）に好適な陰イオン交換体を調べるた
めに行った。1)試料の調製

【００５１】濃縮ホエーの調製 ゴーダ・チーズ製造時副産物として生成したホエー50Kg
を分画分子量20,000の限外瀘過膜（ＤＤＳ社製、GR61P
P）を装着した限外瀘過装置を用いたダイヤフィルトレ
ーションにより濃縮し、固形分含量6%、蛋白質含量4.8%
のＷＰＣ溶液約6.2Kg を得た。

【００５２】陰イオン交換体 次の市販陰イオン交換体を使用した。 a)強塩基性陰イオン交換体 QAE セファデックスA50 （商標、ファルマシア社製） インディオンQAE （商標、フェニックス・ケミカルズ社
製）

【００５３】b)弱塩基性陰イオン交換体 インディオンHA（商標、フェニックス・ケミカルズ社
製） DEAEセファデックスA50 （商標、ファルマシア社製） DEAEトヨパール（商標、東ソー製）

【００５４】2)試験方法 前処理済の前記５種類の陰イオン交換体（総交換容量を
等量に調整した）を入れた2lの容器に、前記濃縮ホエー
をpH調整せずにそのまま５等分して添加し、10℃で１時
間攪拌し、濃縮ホエーを排出し、各陰イオン交換体を十
分水洗し、次いで0.9%食塩水溶液各540gを添加し、10℃
で30分間攪拌し、食塩水溶液を排出した。

【００５５】次いで5%食塩水溶液各1500g を添加し、10
℃で30分間攪拌し、食塩水溶液を採取し、各食塩水溶液
β−ラクトグロブリン及びその他の蛋白質の含量を後記
する参考例と同一のSDS-PAGE電気泳動法により定量し、
β−ラクトグロブリンの純度（β−ラクトグロブリン及
びその他の蛋白質の含量に対するβ−ラクトグロブリン
含量の百分率）を算出し、陰イオン交換体の種類による
β−ラクトグロブリンの精製の程度を試験した。

【００５６】3)試験結果 この試験の結果は表８に示すとおりである。表８から明
らかなように弱塩基性陰イオン交換体は、強塩基性陰イ
オン交換体よりも高い純度でβ−ラクトグロブリンを分
離し得ることが判明した。尚、使用する原料、精製条件
を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００５７】

【表８】

【００５８】（試験例９）この試験は、本発明の第２段
階、即ちα−ラクトアルブミンの精製に好適な陰イオン
交換体を調べるために行った。試験例８において各容器
から排出した濃縮ホエーを、pH調整せずにそのまま別途
用意した前処理済の前記５種類の陰イオン交換体（総交
換容量を等量に調整した）を入れた2lの容器に添加し、
10℃で60分間攪拌し、液を排出し、陰イオン交換体を十
分水洗し、次いで0.6%食塩水溶液1800gを各容器に添加
し、10℃で30分間攪拌し、次いで食塩水溶液を採取し、
試験例８と同一の方法によりα−ラクトアルブミンの純
度（α−ラクトアルブミン及びその他の蛋白質の含量に
対するα−ラクトアルブミン含量の百分率）を算出し、
陰イオン交換体の種類によるα−ラクトアルブミンの精
製の程度を試験した。

【００５９】この試験の結果は表９に示すとおりであ
る。表９から明らかなように弱塩基性陰イオン交換体
は、強塩基性陰イオン交換体よりも高い純度でα−ラク
トアルブミンを分離し得ることが判明した。尚、使用す
る原料、精製条件を変更して試験したが、ほぼ同様の結
果が得られた。

【００６０】

【表９】

【００６１】参考例 インディオンHA（商標、フェニックス・ケミカルズ社
製）300gを充填した容積20l のカラムを十分水洗し、エ
メンタール・チーズ製造時副産物として生成したホエー
10KgをpH調整せずにそのまま通液し、20℃の温度で１時
間攪拌しながら保持し、次いで液を排出した。カラムを
水で洗浄し、1.0%塩化ナトリウム水溶液600gを15l/時の
流量で通液し、次いで4%塩化ナトリウム水溶液1600g を
15l/時の流量で通液し、溶出液を回収した。

【００６２】この溶出液を分画分子量6000の限外瀘過膜
（旭化成工業社製、SIP1013 ）を用いて限外瀘過し、ダ
イヤフィルトレーションにより食塩を除去し、常法によ
り濃縮し、凍結乾燥し、粉末状のホエー蛋白分画約20g
を得た。得られた粉末を常法により分析した結果、水分
5.1%、蛋白質91.7% 、灰分3.2%であり、SDS-PAGE電気泳
動法（日本生化学会編, 新生化学実験講座１, タンパク
質Ｉ, 第329 ページ, 1990年）による分析結果蛋白質に
占めるβ−ラクトグロブリンの割合は、84% であった。

【００６３】

【実施例】 次に実施例を示して本発明を更に詳述する
が、本発明は以下の実施例によって限定されるものでは
ない。 実施例１ DEAEセファデックスA50 （商標、ファルマシア社製）25
g を容積20l のカラム（カラム１）に充填し、陰イオン
交換体重量の約２００倍の水で24時間膨潤させて十分水
洗し、次いでエメンタール・チーズ製造時副産物として
生成したホエー10KgをpH調整せずにそのまま通液し、20
℃の温度で１時間攪拌しながら保持し、次いで液を排出
し、排出した液をpH調整せずにそのまま前記と同一のイ
オン交換体を充填した別のカラム（カラム２）に通液
し、15℃の温度で１時間攪拌しながら保持し、次いで液
を排出した。

【００６４】カラム１を水で洗浄し、０．９％塩化ナト
リウム水溶液６２５ｇを１５ｌ／時の流量で通液し、次
いで５％塩化ナトリウム水溶液１５００ｇを１５ｌ／時
の流量で通液し、溶出液を回収した。この溶出液を分画
分子量６０００の限外瀘過膜（旭化成工業社製、ＳＩＰ
１０１３）を用いて限外瀘過し、ダイヤフィルトレーシ
ョンにより食塩を除去し、常法により濃縮し、凍結乾燥
し、粉末状のホエー蛋白分画約１８ｇを得た。

【００６５】得られた粉末を常法により分析した結果、
水分4.5%、蛋白質92.1% 、灰分3.4%であり、参考例と同
一のSDS-PAGE電気泳動法による分析結果蛋白質に占める
β−ラクトグロブリンの割合は、86% であった。尚、SD
S-PAGE電気泳動法による分析結果は、HPLC法（日本分析
化学会関東支部編，高速液体クロマトグラフィーハンド
ブック，第309 ページ，昭和60年）による分析結果と一
致していた。

【００６６】カラム２を水で洗浄し、0.6%塩化ナトリウ
ム水溶液1250g を15l/時の流量で通液し、溶出液を回収
した。この溶出液を分画分子量6000の限外瀘過膜（旭化
成工業社製、SIP1013 ）を用いて限外瀘過し、ダイヤフ
ィルトレーションにより食塩を除去し、常法により濃縮
し、凍結乾燥し、粉末状のホエー蛋白分画約5gを得た。
得られた粉末を常法により分析した結果、水分5.0%、蛋
白質91.5% 、灰分3.5%であり、前記した参考例と同一の
SDS-PAGE電気泳動法による分析結果蛋白質に占めるα−
ラクトアルブミンの割合は、90% であった。

【００６７】

【００６８】

【００６９】

【００７０】実施例２ ゴーダ・チーズ製造時副産物として生成したホエー100K
g を分画分子量20,000の限外瀘過膜（ＤＤＳ社製、GR61
PP）を装着した限外瀘過装置を用いたダイヤフィルトレ
ーションにより濃縮し、固形分含量5%、蛋白質含量3.9%
のＷＰＣ溶液約15Kgを得た。この濃縮ホエーを、pH調整
せずにそのままDEAEセファデックスA50（商標、ファル
マシア社製）75g を充填し、陰イオン交換体重量の約２
００倍の水で24時間膨潤させ、十分水洗した容積20l の
カラム（カラム１）に通液し、15℃の温度で１時間攪拌
しながら保持し、次いで液を排出し、排出した液をpH調
整せずにそのまま前記と同一のイオン交換体を充填した
別のカラム（カラム２）に通液し、15℃の温度で１時間
攪拌しながら保持し、次いで液を排出した。

【００７１】カラム１を水で洗浄し、０．９％塩化ナト
リウム水溶液５４００ｇを１５ｌ／時の流量で通液し、
次いで５％塩化ナトリウム水溶液１４０００ｇを１５ｌ
／時の流量で通液し、溶出液を回収した。この溶出液を
分画分子量６０００の限外瀘過膜（旭化成工業社製、Ｓ
ＩＰ１０１３）を用いて限外瀘過し、ダイヤフィルトレ
ーションにより食塩を除去し、常法により濃縮し、凍結
乾燥し、粉末状のホエー蛋白分画約１８０ｇを得た。

【００７２】得られた粉末を常法により分析した結果、
水分4.9%、蛋白質 92.2%、灰分2.9%であり、参考例と同
一のSDS-PAGE電気泳動法による分析結果蛋白質に占める
β−ラクトグロブリンの割合は、87% であった。尚、SD
S-PAGE電気泳動法による分析結果は、実施例１と同一の
HPLC法による分析結果と一致していた。

【００７３】カラム２を水で洗浄し、０．６％塩化ナト
リウム水溶液１２５００ｇを１５ｌ／時の流量で通液
し、溶出液を回収した。この溶出液を分画分子量６００
０の限外瀘過膜（旭化成工業社製、ＳＩＰ１０１３）を
用いて限外瀘過し、ダイヤフィルトレーションにより食
塩を除去し、常法により濃縮し、凍結乾燥し、粉末状の
ホエー蛋白分画約４４ｇを得た。

【００７４】得られた粉末を常法により分析した結果、
水分5.3%、蛋白質91.1% 、灰分3.6%であり、参考例と同
一のSDS-PAGE電気泳動法による分析結果蛋白質に占める
α−ラクトアルブミンの割合は、91% であった。

【００７５】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明のホエー蛋
白分画の製造方法は、ホエー又は濃縮ホエーを、そのpH
を調整せずに、そのまま陰イオン交換体を充填したカラ
ムに通液し、段階的、かつ選択的にβ−ラクトグロブリ
ン、及びα−ラクトアルブミンを吸着させ、これを溶出
させることを特徴とするものであり、従来方法により得
られることのできない以下のような種々の効果を有す
る。

【００７６】即ち、本発明によって奏せられる効果は、
次のとおりである。 (1) 本発明の方法は、従来方法において必須の工程とさ
れていたホエー又は濃縮ホエーのpH調整、脱塩等の余分
な前処理を必要としないことからホエー蛋白分画を単純
な工程で簡便に製造できる長所を有する。 (2) ホエー又は濃縮ホエーを加熱しないので、未変性の
ホエー蛋白分画を得ることができる。

【００７７】(3) 単純な工程で、高純度のα−ラクトア
ルブミンを得ることができる。 (4) 単純な工程なので、大量のホエーを処理することが
でき、大量のホエー蛋白分画の製造手段として有用なも
のである。

フロントページの続き (56)参考文献 特開 平３−19654（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−104246（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A23J 1/00 - 7/00

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ホエー又は濃縮ホエーを、そのpHを調整
   せずに、そのまま陰イオン交換体を充填したカラムに通
   液し、β−ラクトグロブリンを選択的に当該陰イオン交
   換体に吸着させ、当該陰イオン交換体に吸着せずに溶出
   した液を回収し、回収した溶出液を、そのpHを調整せず
   に、そのまま陰イオン交換体を充填した別のカラムに通
   液し、α−ラクトアルブミンを選択的に当該陰イオン交
   換体に吸着させ、吸着したα−ラクトアルブミンを塩溶
   液で溶出させることを特徴とするホエー蛋白分画の製造
   法。