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JP2748134B2 - マグネシウムの定量方法 - Google Patents

マグネシウムの定量方法

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JP2748134B2
JP2748134B2 JP63299551A JP29955188A JP2748134B2 JP 2748134 B2 JP2748134 B2 JP 2748134B2 JP 63299551 A JP63299551 A JP 63299551A JP 29955188 A JP29955188 A JP 29955188A JP 2748134 B2 JP2748134 B2 JP 2748134B2
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magnesium
quantifying
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isocitrate dehydrogenase
present
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JP63299551A
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JPH02145196A (ja
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美子 砂原
卯 高田
勇 高河原
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ORIENTARU KOBO KOGYO KK
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ORIENTARU KOBO KOGYO KK
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    • G01—MEASURING; TESTING
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    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、微量のマグネシウムの定量方法に関するも
のである。
更に詳細には、本発明は、ヒト体液中のマグネシウム
の定量方法に関するものである。
一般に、マグネシウムは、動植物の細胞内に広く存在
し、成長と生命維持に不可欠なイオンである。
そして、生体内のマグネシウムはカルシウムと拮抗的
に変動し、中枢神経系や心臓の機能不全時にあるいは腎
不全、急性膵炎時などにその変動が観察されることから
マグネシウムの定量は重要な検査項目の一つになりつつ
ある。
本発明のマグネシウムの定量方法によれば、体液中の
マグネシウムが短時間に正確に定量できるので、臨床検
査に大いに貢献するものである。
（従来技術及び問題点） 従来、マグネシウムの測定方法としては、キシリジル
ブルーを用いてキレートを生成させる比色法や、原子吸
光法などが知られているが、これらの方法のうち、前者
は特異性の面で問題を有し、後者については、特殊な装
置を必要とするという欠点を持っていた。
（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、体液中のマグネシウムをすみやかに、
かつ、正確に定量するために、マグネシウムと各種酵素
活性との関係を詳細に検討した結果、イソクエン酸脱水
素酵素がその酵素活性を発現するために、マグネシウム
イオンあるいはマンガンイオンを要求し、マグネシウム
イオン濃度の増加に応じてイソクエン酸脱水素酵素の活
性が高まることを知り、本発明を完成するに至った。
本発明は、マグネシウムの定量を行うに際し、イソク
エン酸脱水素酵素の反応によってマグネシウム量を測定
することを特徴とするマグネシウムの定量方法である。
即ち、本発明はイソクエン酸脱水素酵素がマグネシウ
ムイオンの増加に応じて、活性が定量的に高まることを
利用して、マグネシウムの濃度を測定するものである。
具体的には、NAD（Ｐ）＋、イソクエン酸、イソクエ
ン酸脱水素酵素を適当な緩衝液に溶解したものに、検体
を加え、NAD（Ｐ）Ｈの生成による340nmにおける吸光度
の上昇度をレートアッセイするか、あるいは反応を一定
時間後に反応停止剤で停止した後に測定するものであ
る。
反応停止剤としてはマグネシウムイオンのキレート剤
および／またはアデノシントリリン酸（ATP）が用いら
れる。
また、イソクエン酸脱水素酵素はマンガンイオンによ
っても活性化されるが、これはマグネシウムイオンをト
ラップせず、マンガンイオンを選択的にトラップするキ
レート剤、例えば、GEDTAを反応溶媒に共存させること
によりマンガンイオンの影響を回避することができる。
本発明においては、マグネシウムイオンの量に応じて
イソクエン酸脱水素酵素の活性が高まる性質を利用し、
特異的に短時間に感度よくマグネシウムを定量するもの
である。
本発明の方法によれば、微量の検体を用いてマグネシ
ウムを正確に定量することができる。
次に本発明の実施例を示す。
実施例１ MgCl26H2O42.3mgを精製水10mlに溶解しMg2+として250
mg/dlの標準液を調整した。
さらに、この標準液を稀釈して０、５、10、15、20、
25、30、35、40、45、50mg/dlの溶液を調整した。
これらの溶液50μを各々、下記反応溶液3mlに加
え、25℃で340nmの吸光度変化をレートアッセイにより
測定した。
反応溶液組成 83mM Tris−HCl pH8.5 50mM GEDTA 1.67mM DL−isocitrate 1.0mM NADP+ 0.25u/ml iCDH（NADP） 結果は第１図に示されるようにマグネシウムが測定で
きた。
実施例２ MgCl26H2O42.3mgを精製水に溶解し、Mg2+として、250
mg/dlの標準液を調整した。
さらに、この標準液を稀釈して、０、１、３、５、
７、10mg/dlの溶液を調整した。
これらの溶液50μを各々、下記反応溶液3mlに加
え、25℃で340nmの吸光度変化をレートアッセイにより
測定した。
反応溶液組成 83mM Tris−HCl pH8.5 15mM ATP 1.67mM DL−isocitrate 1.0mM NADP+ 0.8u/ml iCDH（NADP） 結果は第２図に示されるとおり、マグネシウム濃度の
測定値が得られた。
【図面の簡単な説明】
第１図は、実施例１におけるマグネシウム定量の検量線
を示す図で、第２図は、実施例２におけるマグネシウム
定量の検量線を示す図である。

Claims (3)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】マグネシウムの定量を行うに際し、イソク
    エン酸脱水素酵素の反応によってマグネシウム量を測定
    することを特徴とするマグネシウムの定量方法。
  2. 【請求項２】第１項のイソクエン酸脱水素酵素の反応時
    に阻害剤として、マグネシウムイオンのキレート剤およ
    び／あるいはアデノシントリリン酸（ATP）を添加する
    ことを特徴とするマグネシウムの定量方法。
  3. 【請求項３】マンガンイオンのキレート剤としてグリコ
    ールエーテルジアミン四酢酸（GEDTA）を添加してマグ
    ネシウム量を測定することを特徴とする第１項のマグネ
    シウムの定量方法。
JP63299551A 1988-11-29 1988-11-29 マグネシウムの定量方法 Expired - Lifetime JP2748134B2 (ja)

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CA002000963A CA2000963A1 (en) 1988-11-29 1989-10-18 Method of assaying magnesium
EP89310881A EP0371600A1 (en) 1988-11-29 1989-10-23 Method of assaying magnesium
US07/690,420 US5108905A (en) 1988-11-29 1991-04-24 Method of assaying magnesium in human body fluid

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EP0371600A1 (en) 1990-06-06
CA2000963A1 (en) 1990-05-29
JPH02145196A (ja) 1990-06-04

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