JP2557797B2 - インターロイキン−１α誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はインターロイキン−１α
（ＩＬ−１α）の新しい誘導体及び該誘導体の医薬用途
に関する。

【０００２】

【従来の技術】第２回国際リンホカインワークショップ
において、かってリンパ球活性化因子（Lymphocyte Act
ivating Factor；ＬＡＦ）、マイトジェニックプロテイ
ン（Mitogenic Protein ）、ヘルパーピーク−１（Help
er peak -1）、Ｔリンパ球代替因子〔T-cell replacing
factor III （ＴＲＦ−III ），T-cell replacing fac
tor Ｍφ（ＴＲＦＭ）〕、Ｂセルアクチベーティング
フアクター（B-cell activating factor）、Ｂリンパ球
分化因子（B-cell differentiation factor ）等の呼称
で報告されてきた生理活性物質は、いずれもインターロ
イキン１（ＩＬ−１）なる呼称に統一されることが決定
された〔Cellular Immunol., 48, 433-436(1979) 〕。
この決定は、上記各生理活性物質は物質として区別でき
ず、生理活性を異なる角度から把えて表現しているにす
ぎないとの理由に基づいている。

【０００３】上記ＩＬ−１は、更に例えばＴリンパ球や
Ｂリンパ球を活性化し、インターロイキン２（ＩＬ−
２）の産生亢進作用や抗体産生を亢進させる作用を有
し、また肝細胞に作用して蛋白質合成を亢進させる作
用、プロスタグランディン産生を亢進させる作用等を有
することも報告されている〔Reviews of Infectious Di
sease, Vol. 6 ,No.1, 51-59 (1984) 、New England J.
of Med., 311, 1413 (1984)等参照〕。

【０００４】しかして、物質としてのＩＬ−１の本体に
関しては現在尚不明ではあるが、最近になってＬＡＦ活
性を有するポリペプチドもしくはその前駆体をコードす
る遺伝子の存在がようやく報告された〔Proc. Natl. Ac
ad. Sci., 81, 7907-7911(1984)、Nature, 315, 641 (1
985) 、Nucleic Acid Research, 13, (16) 5869(198
5)〕。

【０００５】上記によれば、遺伝子組換え技術に従い得
られた培養上清のＬＡＦ活性の確認より、下式（Ａ）で
表わされるポリペプチドをＬＡＦ活性を有するポリペプ
チドであると推定しこれを「ＩＬ−１α」と称してい
る。

【０００６】

【化２】

【０００７】本発明者らも、従来より均質な物質として
のＩＬ−１αにつき鋭意研究を重ねてきており、既にそ
の製造技術の確立と共に、物質としての特性、その有す
る生理活性等をも明らかにした。また、この研究結果に
伴い、上記式（Ａ）で表わされるポリペプチドがＬＡＦ
活性を有する事実も確認したが、該ポリペプチドは、前
記報告の通り、生体の遺伝子に対応するものであるにも
かかわらず、驚くべきことに物質としては尚不安定であ
ることも確認した。

【０００８】また従来より、ＩＬ−１αは医薬として人
体に投与した場合、副作用としての発熱を伴うことが知
られており、これが該ＩＬ−１αの医薬品としての応用
に当っては重大な弊害となっている。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
式（Ａ）で表わされるポリペプチド（ＩＬ−１α）とは
そのアミノ酸配列を異にし、且つ副作用としての発熱性
を確実に抑制され、殊に医薬用途に好適な新しいＩＬ−
１αの誘導体を提供することにある。

【００１０】本発明の他の目的は、上記ＩＬ−１α誘導
体を含有する医薬を提供することにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、下記式
（１）で表わされるＩＬ−１α誘導体のアミノ酸配列に
おいて、１６位ＡｒｇがＧｌｙで置換されていること、
１位Ｓｅｒから１４位Ｐｈｅに至るアミノ酸配列が欠失
されていること及び１位Ｓｅｒから１５Ｍｅｔに至るア
ミノ酸配列が欠失されていること、から選ばれる条件の
少なくともひとつを充足する改変されたアミノ酸配列を
有することを特徴とするＩＬ−１α誘導体が提供され
る。

【００１２】

【化３】

【００１３】 〔上記においてＸはＡｓｐを、ＹはＣｙ
ｓ又はＳｅｒを示す。〕 上記及び以下の本明細書におけるアミノ酸及びポリペプ
チドの表示は、ＩＵＰＡＣ及びＩＵＰＡＣ−ＩＵＢによ
る命名法又は規則における略号乃至当該分野で慣用され
ている略号によるアミノ酸残基の表示法に従うものと
し、塩基配列における核酸の表示も同様とする。

【００１４】また、アミノ酸残基の数及び位置は、欠落
がある場合であっても、すべて上記式（１）のアミノ酸
配列に従って表示するものとする。

【００１５】本発明のＩＬ−１α誘導体は、ＬＡＦ活
性、腫瘍細胞増殖抑制活性（即ち腫瘍細胞に対して特異
的にその増殖を抑制する活性）、ＣＳＦ（Colonystimul
atingfactor；コロニー刺激因子）、インターフエロン
（ＩＦＮ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、イン
ターロイキン−３（ＩＬ−３）等の種々のサイトカイン
類の産生促進活性（即ち例えばヒト細胞に作用してそれ
らサイトカイン類の産生を著しく促進させる活性）、抗
炎症活性、特に例えば関節炎モデル動物に投与すること
によって関節炎の進行を効果的に抑制する活性、放射線
障害防止作用（即ち骨髄移植時の放射線全身照射、癌治
療等における放射線照射、放射線事故時等における生体
障害乃至は重篤な副作用等を予防乃至防止する作用）、
血栓症防止作用、血小板増加作用（増血作用）等を有す
る。従って本発明誘導体は、例えば抗体産生促進やワク
チンの効果増強等の免疫系刺激剤、抗腫瘍剤、ＣＳＦ、
ＩＬ−２、ＩＬ−３等のサイトカイン類の産生促進剤、
抗炎症剤、放射線障害防止剤、抗血栓症剤、血小板減少
症治療剤等の医薬品として有用である。特に本発明誘導
体は、毒性が低いことは勿論のこと、従来知られている
ＩＬ−１の有する副作用としての発熱性が、非常に少な
い点において特徴づけられ、之等の点より、上記医薬品
として殊にその安全性が優れており好適なものである。

【００１６】より詳しくは、本発明誘導体を例えばＣＳ
Ｆ産生促進剤としてヒトに投与するときには、ウイルス
感染や抗原抗体反応等の危険性を生じることなく、癌化
学療法や放射線療法後の骨髄低形成による顆粒球減少を
有効に回復できる（顆粒球減少治療薬）。本発明誘導体
を利用したＣＳＦ産生促進剤は、その本来のＣＳＦ産生
促進作用により、ＣＳＦの作用に基づく各種疾病の予防
及び治療剤としても有効である。例えばＣＳＦは顆粒球
やマクロファージの機能を促進させる作用がある〔ロペ
ッツら(Lopez, A. F. et al.), J. Immunol., 131, 298
3 (1983)、ハンダム(Handam, E.et al.)，同122, 1134
(1979)及びバダスら(Vadas, M. A. et al.),同130, 795
(1983) 〕ので、種々の感染症の予防及び治療薬として
臨床応用が期待でき、上記ＣＳＦ産生促進剤も同様の臨
床応用が期待できる。

【００１７】また近年生体防御能が低下乃至障害された
個体（compromised host）に、それまで無害であった病
原体が病原性を発揮して惹起される所謂日和見感染症
（opportunistic infection 又はterminalinfection ）
は、臨床的に問題となる病原体（起炎菌）が、シュード
モナス（Pseudomonas ）、セラチア（Serratia) 等のグ
ラム陰性桿菌、ヘルペス（Herpes simplex, HSV ）、バ
リセラ−ゾースタ（Varicella-zoster, VZV ）、サイト
メガロウイルス（Cytomegalovirus, CMV）等のウイル
ス、キャンディダ（Candida albicans）、アスペルギル
ス（Aspergillus fumigatus ）、ノカルディア（Nocard
ia asteroidea ）等の真菌、カリニ原虫（Pneumocystis
carinii）、トキソプラズマ（Toxoplasma gondii ）等
の原虫等であり、現用の抗生物質は、之等の病原菌に対
して充分な効果を奏し難く、該日和見感染症に対する新
しい薬剤の研究開発が切望されており、本発明誘導体は
かかる日和見感染症の予防及び治療剤としても有効であ
る。特に本発明誘導体は、かかる日和見感染症が高頻度
に見られる抗癌剤投与時、即ち急性白血病の化学療法や
骨髄移植時等における各種の感染症、例えばガンジダ
症、クリプトコックス症、アスペルギルス症、接合菌
症、黒色真菌感染症、ウイルス感染症、サイトメガロウ
イルス肺炎、之等の合併症等の予防及び治療剤として有
用である。

【００１８】本発明誘導体は、またこれを有効成分とす
る抗炎症剤として、関節炎等の予防及び治療剤に有効で
ある。

【００１９】本発明誘導体は、更に後記実施例に示す方
法に従い測定される腫瘍細胞増殖抑制活性（以下これを
「ＧＩＦ活性」という）を有しており、種々の腫瘍細胞
の増殖を特異的に抑制する作用を発揮する。従ってこれ
を有効成分とする抗腫瘍剤は、癌の化学療法剤として、
特に各種抗悪性腫瘍剤との併用による寛解強化療法、寛
解維持療法に有利に用いられる。

【００２０】本発明誘導体は、また上記医薬用途以外に
そのサイトカイン産生促進活性に基づいて、例えば細胞
株からの各種有用サイトカイン類のインビトロ（in vit
ro）製造に際して有効に使用し得る。かかる細胞株から
の天然型サイトカインの製造は、殊に糖蛋白質であるサ
イトカインにおいて着目されており、本発明誘導体の利
用によればかかる有用サイトカインを効率的且つ大量に
収得できる。

【００２１】本発明誘導体は、更にＧＩＦ活性及びＣＳ
Ｆ産生促進活性を有し、かかる生理活性に基づく各種医
薬用途に用いることができる。

【００２２】加えて本発明誘導体は、血小板の減少を顕
著に抑制する作用（血小板増加作用乃至造血作用）を有
し、血小板減少症治療剤として非常に有効に利用でき
る。

【００２３】 前記式（１）で表わされる本発明のＩＬ
−１α誘導体において、３６位のＸはＡｓｐを、１４１
位のＹはＣｙｓ又はＳｅｒを示す。１６位Ａｒｇに置換
され得る他のアミノ酸残基は人体蛋白質を構成するα−
アミノ酸であればいずれでもよいが、特にＧｌｙが好ま
しい。

【００２４】本発明誘導体中、特に好ましいものとして
は、ＸがAsp でＹがSer を示し且つ１６位Arg がGly で
置換されているもの及びＸがAsp でＹがSer を示し且つ
Ｎ末端より１４個のアミノ酸配列が欠失されているもの
を例示できる。

【００２５】本発明誘導体は、例えば遺伝子工学的手法
により製造できる。即ち、前記式（１）で表わされる特
定のポリペプチドをコードする遺伝子を利用し、これを
微生物のベクターに組込んで該微生物細胞内で複製、転
写、翻訳させることにより製造できる。この方法は特に
大量生産が可能である点より有利である。

【００２６】上記方法において用いられる遺伝子は、通
常の方法、例えばホスファイト トリエステル法〔ネイ
チヤー(Nature), 310, 105 (1984) 〕等の常法に従って
核酸の化学合成により全合成することもできるが、ＩＬ
−１αもしくはその前駆体をコードする遺伝子を利用す
るのが簡便であり、該遺伝子より上記化学合成手段を含
む常法に従い、前記特定のアミノ酸配列をコードする核
酸配列に改変することにより容易に製造できる。上記Ｉ
Ｌ−１α又はその前駆体をコードする遺伝子は、公知
（記述）であり、我々も該遺伝子を得、これを用いて遺
伝子工学的手法によりＩＬ−１αを収得している。

【００２７】上記遺伝子の改変操作は、目的とするポリ
ペプチドのアミノ酸配列に応じて、公知方法に従い実施
され得る（遺伝子工学的手法としては例えば、Molecula
r Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory (1982) が
参照される）。

【００２８】例えばＤＮＡの切断、結合、リン酸化等に
は、各種制限酵素、ＤＮＡリガーゼ、ポリヌクレオチド
キナーゼ、ＤＮＡポリメラーゼ等の酵素を用いた常套手
段が採用でき、それらの酵素は市販品として容易に入手
できる。之等各操作における遺伝子乃至核酸の単離、精
製も常法、例えばアガロース電気泳動法等に従えばよ
い。得られる遺伝子の複製は、一部後述するように通常
のベクターを利用する方法に従い得る。所望のアミノ酸
配列をコードするＤＮＡ断片や合成リンカーは、上記し
た化学合成により容易に製造できる。尚、上記において
所望のアミノ酸に対応するコドンはそれ自体公知であ
り、その選択は任意でよく、例えば利用する宿主のコド
ン使用頻度等を考慮した常法に従えばよい〔Nucl.Acids
Res., 9, 43-74 (1981)〕。またこれらの核酸配列のコ
ドンを一部改変する操作には、例えば常法通り１５〜３
０マー程度の所望の改変をコードする合成ヌクレオチド
からなるプライマーを用いたサイト−スペシフィック
ミユータジェネシス(Site-Specific Mutagenesis) 〔Pr
oc. Natl. Acad. Sci., 81, 5662-5666 (1984)〕等の方
法を採用できる。

【００２９】上記方法により得られる所望の遺伝子の塩
基配列の決定及び確認は、例えばマキサム−ギルバート
の化学修飾法〔Maxam-Gilbert, Meth. Enzym.,65, 499-
560(1980)〕やＭ１３ファージを用いるジデオキシヌク
レオチド鎖終結法〔Messing,J. and Vieira, J., Gene,
19, 269-276 (1982)〕等により行ない得る。

【００３０】上記操作及び方法の具体例は、後記実施例
に記述するが、これに限定されず当業界における周知の
各種方法をいずれも採用できる。

【００３１】かくして、本発明によれば前記式（１）で
表わされる特定アミノ酸配列のポリペプチドをコードす
る新規な遺伝子も提供される（以下この遺伝子を「本発
明遺伝子」という）。

【００３２】本発明誘導体は、上記特定の遺伝子（本発
明遺伝子）を利用し、従来公知の一般的な遺伝子組換え
技術に従い製造できる。より詳細には、上記本発明遺伝
子が宿主細胞中で発現できるような組換えＤＮＡを作成
し、これを宿主細胞に導入して形質転換し、該形質転換
体を培養すればよい。

【００３３】ここで宿主細胞としては、真核生物及び原
核生物のいずれをも用い得る。該真核生物の細胞には、
脊椎動物、酵母等の細胞が含まれ、脊椎動物細胞として
は、例えばサルの細胞であるＣＯＳ細胞〔Y. Gluzman,
Cell, 23, 175-182 (1981)〕やチャイニーズ・ハムスタ
ー卵巣細胞のジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株〔G. Url
aub and L. A. Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.
A., 77, 4216-4220 (1980)〕等がよく用いられるが、之
等に限定される訳ではない。脊椎動物細胞の発現ベクタ
ーとしては、通常発現しようとする遺伝子の上流に位置
するプロモーター、ＲＮＡのスプライス部位、ポリアデ
ニル化部位及び転写終了配列等を保有するものを使用で
き、これは更に必要により複製起源を保有していてもよ
い。該発現ベクターの具体例としてはＳＶ４０の初期プ
ロモーターを保有するｐＳＶ２dhfr〔S. Subramani, R.
Mulligan and P. Berg, Mol. Cell. Biol., 1,(9), 85
4-864 (1981)〕等を例示できるが、これに限定されな
い。

【００３４】真核微生物としては酵母が一般によく用い
られ、その中でもサッカロミセス属酵母が有利に利用で
きる。該酵母等の真核微生物の発現ベクターとしては、
例えば酸性ホスファターゼ遺伝子に対するプロモーター
を持つｐＡＭ８２〔A. Miyanohara et al., Proc. Nat
l. Acad. Sci.,U.S.A., 80, 1-5 (1983) 〕等を好まし
く利用できる。

【００３５】原核生物の宿主としては、大腸菌や枯草菌
が一般によく用いられ、本発明では之等宿主菌中で複製
可能なプラスミドベクターを用い、このベクター中に本
発明遺伝子が発現できるように該遺伝子の上流にプロモ
ーター及びＳＤ（シヤイン・アンド・ダルガーノ）塩基
配列、更に蛋白合成開始に必要なＡＴＧを付与した発現
プラスミドを使用できる。上記宿主菌としての大腸菌と
してはエシェリヒア・コリ(Escherichia coli)Ｋ１２株
等がよく用いられ、ベクターとしては通常ｐＢＲ３２２
がよく用いられるが、これに限定されず、公知の各種の
菌株及びベクターをいずれも利用できる。プロモーター
としては例えばトリプトファン・プロモーター、Ｐ_Lプ
ロモーター、lac プロモーター、lpp プロモーター等を
使用でき、いずれの場合も本発明遺伝子を発現させ得
る。

【００３６】トリプトファン・プロモーターを用いる場
合を例にとり詳述すれば、発現ベクターとしてトリプト
ファン・プロモーター及びＳＤ配列を有するベクターｐ
ＴＭ１〔今本文男、代謝、Vol. 22, 289(1985)〕を使用
し、ＳＤ配列の下流に存在する制限酵素ClaI部位に、必
要に応じてＡＴＧを付与した所望のポリペプチドをコー
ドする遺伝子を連結させればよい。尚、本発明遺伝子の
発現は上記の如き直接発現系に限らず、例えばβ−ガラ
クトシダーゼやβ−ラクタマーゼ等を利用して融合蛋白
質発現系とすることもできる。

【００３７】かくして得られる発現ベクターの宿主細胞
への導入及びこれによる形質転換の方法は、一般に用い
られている方法によることができ、例えば主として対数
増殖期にある細胞を集め、ＣａＣｌ₂ 処理して自然にＤ
ＮＡを取り込みやすい状態にして、ベクターを取込ませ
る方法等を採用できる。上記方法では、通常知られてい
るように形質転換の効率を一層向上させるためにＭｇＣ
ｌ₂ やＲｂＣｌを更に共存させることもできる。また、
宿主細胞をスフエロプラスト又はプロトプラスト化して
から形質転換させる方法も採用できる。

【００３８】上記で得られる所望の形質転換株を常法に
従い培養することにより、所望のポリペプチドが生産、
蓄積される。該培養に用いられる培地は、通常の細胞培
養に慣用される各種の培地のいずれでもよい。その具体
例としては、例えばＬ培地、Ｅ培地、Ｍ９培地等及び之
等に通常知られている各種の炭素源、窒素源、無機塩、
ビタミン類等を添加した培地等を例示できる。尚、上記
トリプトファン・プロモーターを用いた場合には、一般
に該プロモーターが働くためのカザミノ酸を添加した、
例えばＭ９最小培地を用いて培養するのがよく、該培地
には培養の適当な時期にインドールアクリル酸等のトリ
プトファン・プロモーターの働きを強めるための薬剤を
添加することもできる。

【００３９】上記培養により得られる活性物質を含有す
る培養物からの目的ポリペプチド、即ち本発明誘導体の
精製、単離は常法に従い行なうことができる。尚、本発
明誘導体を宿主から抽出するに当っては、例えば浸透圧
シヨツク法等の温和な条件を採用するのが、その高次構
造保持の面からより好ましい。

【００４０】上記精製、単離は、例えば当該ポリペプチ
ドの物理、化学的性質を利用した各種の処理操作に従い
実施できる〔例えば「生化学データーブツクII」pp1175
-1259 、第１版第１刷、1980年 6月23日、株式会社東京
化学同人発行参照〕。該方法としては、具体的には例え
ば通常の蛋白沈澱剤による処理、限外濾過、分子篩クロ
マトグラフィー（ゲル濾過）、液体クロマトグラフィ
ー、遠心分離、電気泳動、アフィニティクロマトグラフ
ィー、透析法、之等の組合せ等を採用できる。

【００４１】より具体的には、上記操作は例えば以下の
如くして実施できる。即ちまず培養上清より目的とする
ポリペプチドを部分精製する。この部分精製は、例えば
アセトン、メタノール、エタノール、プロパノール、ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の有機溶媒や酢酸、過
塩素酸（ＰＣＡ）、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）等の酸を
蛋白沈澱剤として用いる処理、硫酸アンモニウム、硫酸
ナトリウム、リン酸ナトリウム等の塩析剤を用いる処理
及び／又は透析膜、平板膜、中空繊維膜等を用いる限外
濾過処理等により行なわれる。之等の各処理の操作及び
条件は、通常のこの種方法のそれらと同様のものとすれ
ばよい。

【００４２】次いで上記で得られた粗精製物を、ゲル濾
過に付すことにより目的物質の活性が認められる画分を
収得する。ここで用いられるゲル濾過剤としては特に限
定はなく、例えばデキストランゲル、ポリアクリルアミ
ドゲル、アガロースゲル、ポリアクリルアミド−アガロ
ースゲル、セルロース等を素材とするものをいずれも利
用できる。之等の具体例としては、セファデックスＧタ
イプ、同ＬＨタイプ、セファロースタイプ、セファクリ
ルタイプ（以上、ファルマシア社）、セルロファイン
（チツソ株式会社）、バイオゲルＰタイプ、同Ａタイプ
（バイオ−ラド社）、ウルトロゲル（ＬＫＢ社）、ＴＳ
Ｋ−Ｇタイプ（東ソー株式会社）等を例示できる。

【００４３】目的ポリペプチドは、上記ゲル濾過により
得られる活性画分を、例えばハイドロキシアパタイトカ
ラムを用いたアフィニティークロマトグラフィー、ＤＥ
ＡＥ法、ＣＭ法、ＳＰ法等のイオン交換カラムクロマト
グラフィー、クロマトフオーカシング法、逆相高速液体
クロマトグラフィー等に付すことにより、又は之等各操
作の組合せにより更に精製でき、均質な物質として単離
できる。

【００４４】かくして本発明誘導体を単離、収得でき
る。

【００４５】本発明誘導体は、これを有効成分として前
述した各種の医薬用途に有用な医薬製剤とすることがで
きる。該医薬製剤は通常本発明誘導体と共に適当な医薬
製剤担体を配合して製剤組成物の形態に調製される。該
製剤担体としては使用形態に応じた製剤を調製するのに
通常慣用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊
剤、表面活性剤等の賦形剤乃至は希釈剤をいずれも使用
できる。製剤組成物形態は、これが本発明誘導体を効果
的に含有する状態であれば特に限定はなく、例えば錠
剤、粉末剤、顆粒剤、丸剤等の固剤であってもよいが、
通常液剤、懸濁剤、乳剤等の注射剤形態とするのが好適
である。またこれは使用前に適当な担体の添加によって
液状となし得る乾燥品とすることもできる。之等はいず
れも常法に従い調製できる。

【００４６】特に本発明のＩＬ−１α誘導体を血小板減
少症治療剤として用いる場合、該治療剤は、一般に薬理
有効量の本発明ＩＬ−１α誘導体及び前記した適当な医
薬製剤担体と共に、必要に応じて他の配合成分を用い
て、常法に従い上記した各種の製剤組成物形態に調製さ
れる。

【００４７】上記薬理組成物に配合できる他の成分とし
ては、特にＩＬ−１活性物の安定化の面より、例えばヒ
ト血清アルブミン（ＨＳＡ）等のアルブミン類や通常の
Ｌ−型アミノ酸、好ましくはシステイン、グリシン等が
好ましい。之等の添加量は、特に制限されるものではな
いが、ＩＬ−１活性物１μｇ当たりアルブミン類では約
０．０１〜１０ｍｇ程度、アミノ酸は約０．００１〜１
０ｍｇ程度（２種以上のアミノ酸を併用する場合はそれ
らの合計量）とするのがよい。また上記薬理組成物には
更に必要に応じて、糖類例えばグルコース、マンノー
ス、ガラクトース、果糖等の単糖類、マンニトール、イ
ノシトール、キシリトール等の糖アルコール類、ショ
糖、マルトース、乳糖等の二糖類、デキストラン、ヒド
ロキシプロピルスターチ等の多糖等、好ましくはショ
糖、マルトース、マンニトール、イノシトール、デキス
トラン等や、イオン性及び非イオン性界面活性剤、就中
ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエス
テル系、ポリオキシエチレンアルキルエーテル系、ソル
ビタンモノアシルエステル系、脂肪酸グリセリド系等の
界面活性剤を配合することもできる。上記糖類はＩＬ−
１活性物１μｇ当たり約０．１ｍｇ程度以上、好ましく
は約１〜１００ｍｇ程度の範囲、界面活性剤はＩＬ−１
活性物１μｇ当たり約０．０００１ｍｇ程度以上、好ま
しくは約０．００１〜０．１ｍｇ程度の範囲で添加され
るのが適当である。

【００４８】尚、上記において担体として採用し得る緩
衝液としては、特に限定されるものではないが、例えば
クエン酸−リン酸ナトリウム、クエン酸−クエン酸ナト
リウム、酢酸−酢酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム−
リン酸一ナトリウム、クエン酸−ホウ砂等のｐＨ４〜
８、より好ましくはｐＨ５〜６の各緩衝液を好ましく例
示することができる。

【００４９】かくして得られる血小板減少症治療剤の投
与量は、該製剤の投与方法、投与形態、使用目的、これ
を適用される患者の症状等に応じて適宜選択され一定で
はないが、一般には有効成分を約０．００００１〜８０
重量％程度含有する製剤形態に調製して、この製剤をこ
れに含有される有効成分量が一日成人一人当り約０．０
１μｇ〜１０ｍｇ程度となる範囲で投与するのが望まし
い。

【００５０】上記血小板減少症治療剤以外の医薬製剤中
の有効成分の量及び該製剤の投与量も、該製剤の投与方
法、投与形態、使用目的、これを適用される患者の症状
等に応じて適宜選択されるが、通常有効成分を約１〜８
０重量％程度含有する製剤形態に調製して、この製剤を
その有効成分量が１日成人１人当り約０．１μｇ〜１０
ｍｇ程度となる範囲で投与するのが望ましく、該投与は
１日１回である必要はなく１日３〜４回に分けることも
できる。

【００５１】 上記各種形態の医薬製剤は、その形態に
応じた適当な投与経路、例えば注射剤形態の医薬製剤
は、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内投与等によ
り、固剤形態の医薬製剤は、経口乃至は経腸投与により
投与され得る。本発明は、また本発明ＩＬ−１α誘導体
を有効成分とする抗腫瘍剤をも提供するものであり、該
抗腫瘍剤もまた、上述した血小板減少症治療剤等の医薬
製剤と同様の各種製剤組成物形態に調製され、同様の投
与有効量にて各種投与経路より投与することができる。

【００５２】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を更に詳しく説
明する。尚、以下の例において生理活性は、次の方法に
より測定した。

【００５３】〈ＧＩＦ活性の測定〉９６ウェルマイクロ
プレート（コーニング社）に種々の濃度に希釈した供試
液０．１ｍｌを入れ、次に各ウェルにヒトメラノーマ細
胞Ａ３７５を２×１０⁴ 個／ｍｌの濃度で含有する１０
％ＦＣＳを含むイーグルスＭＥＭ浮遊液０．１ｍｌを加
え、炭酸ガス培養器（ナフコ社製）内で４日間培養す
る。培養終了後、０．０５％ニュウトラルレッド（和光
純薬社製）０．０５ｍｌを各ウェルに加え、３７℃で２
時間培養する。上澄液を除去した後、リン酸緩衝生理食
塩水０．３ｍｌを各ウェルに静かに加えてウェルを洗浄
する。洗浄液を除去した後、各ウェルにリン酸１ナトリ
ウム−エタノール等量混合液０．１ｍｌを加え、マイク
ロミキサーで数分間振盪し、細胞内に取込まれた色素量
を、９６ウェル−マイクロタイトレーションプレート用
光度計（タイターチェックマルチスキャン、フローラボ
ラトリーズ社製）を用いて、吸光度５４０ｍμにて測定
し、増殖抑制活性を求める。対照群（コントロール群）
の細胞増殖の５０％抑制を示す試験群、即ち対照群の吸
光度測定値の１／２の吸光度測定値を示す試験群、の希
釈率の逆数をとり、これをＧＩＦ活性単位とする。従っ
て例えばこのＧＩＦ活性が１０単位の場合、この供試液
は１０倍希釈してもなお細胞増殖を５０％抑制する活性
を有する。

【００５４】

【実施例１】 ＩＬ−１α［１６Ｇ・３６Ｄ・１４１
Ｓ］の製造 本発明誘導体発現用プラスミドの調製 この例に用いたプラスミドp trp ＩＬ−１α−１４１Ｓ
は、ヨーロッパ特許公開第２３７０７３号公報に記載さ
れる通り、ＩＬ−１α前駆体蛋白質をコードするｃＤＮ
Ａを有するプラスミドｐｃＤ−ＧＩＦ−２０７〔エッシ
ェリヒアコリχ１７７６／ｐｃＤ−ＧＩＦ−２０７（微
工研条寄第１２９４号）の保有するプラスミド）〕と、
ｐＴＭ１〔今本文男、代謝，Vol.22, 289 (1985)〕とか
ら得られるプラスミドp trp ＩＬ−１α−１１３を利用
して、サイトスペシフィックミュータジェネシス〔Site
-specific Mutagenesis,Proc. Natl. Acad. Sci., 81,5
662-5666 (1984) 〕に従い得られたものであり、前記式
（Ａ）で表わされるＩＬ−１αのアミノ酸配列の第１４
１番目のCys をSer に置換させたアミノ酸配列のＩＬ−
１α誘導体をコードする遺伝子を有している。

【００５５】上記プラスミドp trp ＩＬ−１α−１４１
Ｓより、ClaI−BamHI ＤＮＡフラグメント（５２７bp）
を切出し、これをＩＬ−１βサイトスペシフィック−ミ
ュータジェネシス用ベクターｆ１・ＩＬ−１β lppＴ
〔Biochem. Biophys. Res. Commun.,150, 1106-1114,
(1988) 〕のClaI−BamHI 長鎖フラグメントとライゲー
ションして、ｆ１・ＩＬ−１α−１４１Ｓを得た。これ
からヘルパーファージＭ１３ＫＯ７（宝酒造）を感染さ
せることにより、一本鎖ＤＮＡ（ssＤＮＡ）を得、これ
をミュータジェネシスの鋳型とした。

【００５６】Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼでリン酸化
された５′−リン酸化合成オリゴヌクレオチド〔５′−
ＡＣＴＴＴＡＴＧＧＧＧＡＴＣＡＴＣＡ−３′〕をプラ
イマーとし、オリゴヌクレオチド−ダイレクテッドイン
ビトロミュータジェネシス［Oligonucleotide-directed
in vitro mutagenesis 、アマシャム(Amersham UK)社
製、コードRPN.2322］を用いてサイトスペシフィック−
ミュータジェネシスを行なった。

【００５７】エシェリヒア・コリ（E.coli）ＭＶ１３０
４（宝酒造）にトランスフオームされたクローンからss
ＤＮＡを得、ジデオキシチェインターミネィション法に
よりＤＮＡシークエンシングを行ない、目的の遺伝子の
変異した組換え体（形質転換体）ｆ１・ＩＬ−１α−１
６Ｇ・１４１Ｓ／E.coli ＭＶ１３０４を得た。

【００５８】このプラスミドは前記式（１）のアミノ酸
配列の１６位Arg がGly に置換され、且つ３６位ＸがAs
n で、１４１位ＹがSer である本発明ポリペプチド発現
プラスミドである。

【００５９】上記形質転換体は、工業技術院微生物工業
技術研究所（微工研）に「Escherichia coli MV 1304/f
1.IL-1α・16G.141S」なる表示で寄託されており、その
寄託番号は微工研条寄第２４３４号（ＦＥＲＭＢＰ−２
４３４）である。

【００６０】 形質転換体の培養 上記で得た形質転換体（ＭＶ１３０４／ｆ１．ＩＬ−
１α・１６Ｇ・１４１Ｓ）をアンピシリン１００μｇ／
ｍｌを含む下記組成のＬＢ培地６００ｍｌに接種し、３
７℃で一晩振盪培養して、前培養液を得た。

【００６１】〈ＬＢ培地組成〉 バクト・トリプトン（ディフコ社） １０ｇ／ｌ バクト・イースト抽出物（同上社） ５ｇ／ｌ ＮａＣｌ（和光純薬社） １０ｇ／ｌ 上記前培養液６００ｍｌを、下記組成の生産培地３０ｌ
に接種し、５０ｌ容ジャーファーメンター（日立製作
所）で３６．５℃にて１４時間、通気量（０．５ＶＶ
Ｍ）、攪拌数（１２０rpm ）の条件で培養した。

【００６２】〈生産培地組成〉 Ｎａ₂ ＨＰＯ₄ ・１２Ｈ₂ Ｏ ６ ｇ／ｌ ＫＨ₂ ＰＯ₄ ３ ｇ／ｌ ＮａＣｌ ０．５ｇ／ｌ ＮＨ₄ Ｃｌ １ ｇ／ｌ バクト−カザミノ酸 １０ ｇ／ｌ バクト−イースト抽出物 ０．５ｇ／ｌ Ｌ−システィン・ＨＣｌ ７５ｍｇ／ｌ Ｌ−プロリン ７５ｍｇ／ｌ Ｌ−ロイシン ７５ｍｇ／ｌ ４Ｎ ＮａＯＨにてｐＨを７．４に調整後、１２１℃で
３０分間オートクレーブ処理又は１２３℃で２０分間蒸
気加熱処理し、次いで下記各成分の別滅菌液を接種時に
無菌的に培地に添加する。

【００６３】〈別滅菌液組成〉 １Ｍ ＭｇＳＯ₄ ・４Ｈ₂ Ｏ ２ ｍｌ／ｌ １Ｍ ＣａＣｌ₄ ・２Ｈ₂ Ｏ ０．１ｍｌ／ｌ ７．５ｍｇ／ｌチアミン・ＨＣｌ １ ｍｌ／ｌ ４０％ グルコース １８．７５ｍｌ／ｌ 培養終了後、大腸菌を１Ｍ Ｎａ₂ ＨＰＯ₄ ３００ｍｌ
に懸濁させ、一夜冷室に放置し、その後同冷室にて１０
ｍＭトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に対して２日間
透析し、得られた透析液を遠心分離（１６０００×ｇ）
して、上清と沈澱物とに分離した。

【００６４】 本発明誘導体の精製 上記で得た上清を、２Ｍ酢酸でｐＨ３に調整した後、
ＳＰ−ＨＰＬＣ［トーソー社製、ＴＳＫゲルＳＰ−５Ｐ
Ｗカラム（５．５×２０ｃｍ）使用］を用いて、以下の
条件で精製した。

【００６５】カラム：ＴＳＫゲルＳＰ−５ＰＷ（５．５
×２０ｃｍ、トーソー社製） 溶離液Ａ：５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５） 溶離液Ｂ：５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５） 流 速 ：３０ｍｌ／分 上記ＳＰ−ＨＰＬＣの結果、ＧＩＦ活性画分は、リテン
ションタイム１１４〜１３１分に認められた。

【００６６】次いで上記で得られた活性画分につき、同
条件下に再度ＳＰ−ＨＰＬＣを行なってＧＩＦ活性画分
を得た。

【００６７】更に上記で得られた活性画分を集め、これ
を以下のイオン交換クロマトグラフィー（ＤＥＡＥ−Ｈ
ＰＬＣ）に付して精製した。

【００６８】カラム：ＴＳＫゲルＤＥＡＥ−５ＰＷ
（５．５×２０ｃｍ、トーソー社製） 溶離液Ａ：２０ｍＭトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０） 溶離液Ｂ：０．５Ｍ ＮａＣｌ含有２０ｍＭトリスＨＣ
ｌ緩衝液（ｐＨ８．０） 流 速 ：３０ｍｌ／分 上記ＤＥＡＥ−ＨＰＬＣの結果、ＧＩＦ活性画分は、リ
テンションタイム９８．８〜１０２．８分に認められ
た。

【００６９】上記で得られた活性画分を集め、これを限
外濾過（ＹＭ−５メンブラン、アミコン社製使用）によ
って、２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）
の溶液組成となるように緩衝液を交換しつつ濃縮して、
濃縮精製品を得た。

【００７０】尚、このものの等電点は５．０であった。

【００７１】 本発明誘導体の確認 (1) アミノ酸組成 上記で得られた濃縮精製品３０μｌを、６ｍｍ×５０
ｍｍの肉厚硬質試験管の底部に注意深く入れ、該試験管
を反応バイアルに入れ、ピコタグワークステーション
（ウォーターズ社製）にて減圧乾燥した。上記試験管
に、６Ｎ塩酸２００μｌ（１％フェノールを含む）を加
え、注意深く脱気後、封管し、１３０℃で４時間加水分
解を行なった。

【００７２】次いで加水分解物に０．０２Ｎ塩酸４００
μｌを加え、これをアミノ酸分析用試料とした。

【００７３】アミノ酸分析は、アミノ酸アナライザー
（日立製作所製、日立８３５型分析計）を用い、上記試
料溶液２５０μｌを注入して行なった。分離されたアミ
ノ酸は、オルトフタルアルデヒド法で検出した。また定
量は、試料の前後に分析した標準アミノ酸で作成した検
量線によって行なった。

【００７４】その結果を、Phe を基準（１０モル）とし
て、各アミノ酸の含有モル比で下記表１に示す。尚、上
記分析条件下においては、Pro 、Cys 及びTrp は測定で
きない。

【００７５】

【表１】

【００７６】(2) アミノ酸配列 上記で得られた濃縮精製品５０μｌ（２９８p mol 相
当）を、アプライドバイオシステムズ社製プロテインシ
ークエンサー（モデル４７０Ａ）にて分析した。生じた
ＰＴＨ−アミノ酸を、３３％アセトニトリル水溶液１０
０〜５００μｌにて適宜希釈し、その５μｌをウォータ
ーズ７１０Ｂ型オートサンプラーにて注入した。クロマ
トグラフィーのシステムは、ベックマン１１２型ポンプ
２台を４２１型コントローラーで作働させた。カラムは
ウルトラスフェアーＯＤＳ−５μｍの充填された２ｍｍ
×２５０ｍｍを用い、カラムヒーターにて５５℃に保っ
た。流速は０．３ｍｌ／分とし、２０ｍＭ酢酸ナトリウ
ムとアセトニトリルとの混合液を用いてグラジェント溶
出法で分離し、２６９ｎｍでモニターした。分析は４５
分とした。

【００７７】その結果、Ｎ末端域３６個のアミノ酸配列
は以下の通りであった。

【００７８】Ser-Ala-Pro-Phe-Ser-Phe-Leu-Ser-Asn-Va
l-Lys-Tyr-Asn-Phe-Met-Gly-Ile-Ile-Lys-Tyr-Glu-Phe-
Ile-Leu-Asn-Asp-Ala-Leu-Asn-Gln-Ser-Ile-Ile-Arg-Al
a-Asp以上のことより、得られた精製品は、前記式
（Ａ）で表わされるＩＬ−１αの１６位アミノ酸（Arg
）がGly に置換されたポリペプチドであることが確認
された。

【００７９】また、遺伝子では３６位アミノ酸はAsn で
あったが、得られた精製品のそれはAsp であった。この
ことは既に天然型のＩＬ−１αでも観察されているよう
に３６位アミノ酸がAsp である誘導体が安定な誘導体で
あり、本発明の１６位Gly 置換−ＩＬ−１αにおいても
同様であることを意味している。

【００８０】

【実施例２】 ＩＬ−１α［Δ（１−１４）・３６Ｄ・
１４１Ｓ］の製造 本発明誘導体発現用プラスミドの調製 この例はプラスミドp trp ＩＬ−１α−３６Ｄ・１４１
Ｓ〔ヨーロッパ特許公開第２３７０７３号公報記載、こ
れを保有する大腸菌ＨＢ１０１株は、微工研に「Escher
ichia coli HB101/ IL-1α-36D 141S 」なる名称で微工
研条寄第１２９５号（ＦＥＲＭ ＢＰ１２９５）として
寄託されている〕を利用して、サイトスペシフィック−
ミュータジェネシスに従い、以下の通り実施された。

【００８１】即ち、上記プラスミドp trp ＩＬ−１α−
３６Ｄ・１４１Ｓより、ClaI−BamHI ＤＮＡフラグメン
ト（５２７bp）を切出し、実施例１と同じｆ１・ＩＬ−
１βlpp ＴのClaI−BamHI 長鎖フラグメントとライゲー
ションして、ｆ１・ＩＬ−１α−３６Ｄ・１４１Ｓを得
た。これからヘルパーファージＭ１３ＫＯ７（宝酒造）
を感染させることにより、一本鎖ＤＮＡを得、これをミ
ュータジェネシスの鋳型とした。

【００８２】プライマーとして、合成オリゴヌクレオチ
ド〔５′−ＡＡＧＧＧＴＡＴＣＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＡ
ＧＧＡＴＣＡＴＣ−３′〕を用い、実施例１と同様にオ
リゴヌクレオチド−ダイレクテッドインビトロミュータ
ジェネシスを用いて、サイトスペシフィック−ミュータ
ジェネシスを行なった。

【００８３】エシェリヒア・コリ（E.coli）ＭＶ１１８
４（宝酒造）にトランスフオームされたクローンからss
ＤＮＡを得、ジデオキシチェインターミネィション法に
よりＤＮＡシークエンシングを行ない、目的の遺伝子の
変異した組換え体（形質転換体）ｆ１・ＩＬ−１α−Δ
（１−１４）・３６Ｄ・１４１Ｓ／E.coli ＭＶ１１８
４を得た。

【００８４】このプラスミドは前記式（１）のアミノ酸
配列の１−１４位アミノ酸配列を欠落しており、且つ３
６位ＸがAsp で、１４１位ＹがSer である本発明ポリペ
プチド発現プラスミドである。

【００８５】上記形質転換体は、工業技術院微生物工業
技術研究所（微工研）に「Escherichia coli MV 1184 /
f1.IL-1α・Δ(1-14)36D.141S」なる表示で、微工研条
寄第２４３３号（ＦＥＲＭＢＰ−２４３３）として寄託
されている。

【００８６】上記プラスミドを用いて、実施例１と略々
同様にして本発明誘導体の発現及び精製を行なった。

【００８７】かくして、目的の本発明誘導体［ＩＬ−１
α−Δ（１−１４）・３６Ｄ・１４１Ｓ］を得た。その
比活性は１．０×１０⁶ ＧＩＦ単位／ｍｇ蛋白であっ
た。

【００８８】 本発明誘導体の確認 (1) アミノ酸組成 実施例１の(1) と同様にして、上記で得た本発明誘
導体のアミノ酸組成を分析した。Phe を７として得られ
た結果は下記表２に示す通りである。

【００８９】

【表２】

【００９０】(2) アミノ酸配列 実施例１の(2) と同様にして、上記で得た本発明誘
導体のＮ末端域アミノ酸配列を分析した。

【００９１】その結果、Ｎ末端域１５個のアミノ酸配列
は以下の通りであった。

【００９２】Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ
−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−
Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｌｅｕ 以上のことより、得られた誘導体は、前記式（Ａ）で表
わされるＩＬ−１αの１−１４番目のアミノ酸配列が欠
失されたポリペプチドであることが確認された。

【００９３】

【実施例３】 ＩＬ−１α誘導体［Δ（１−１５）］の
製造 ＩＬ−１α誘導体発現用プラスミドの調製 この例は、ＩＬ−１βサイトスペシフィック−ミュータ
ジェネシス用ベクターｆ１・ＩＬ−１βｌｐｐＴ〔Bioc
hem. Biophys. Res. Commun., 150,1106-1114 (1988)〕
を利用し、まず該ベクターｆ１・ＩＬ−１βlppTをEcoR
I で切断し、ＤＮＡポリメラーゼＩ（クレノー断片）で
処理し、セルフライゲーションすることによってEcoRI
サイトを欠落させたｆ１・ＩＬ−１βlppTΔＲＩを作成
し、このプラスミドからHpaI−BamHI 長鎖フラグメント
を切りだした。

【００９４】別に、プラスミドp trp ＩＬ−１α−１１
３〔ヨ―ロッパ特許公開第２３７０７３号公報記載〕か
らEcoRI −BamHI 短鎖フラグメントを切りだし、これと
上記HpaI−BamHI 長鎖フラグメントとを、合成リンカー
［５′−ＡＡＣＴＡＧＴＡＣＧＣＡＡＧＴＴＣＡＣＧＴ
ＡＡＧＧＡＧＧＴＴＴＡＡＴＡＴＴＡＴＧＡＧＡＡＴＣ
ＡＴＣＡＡＡＴＡＣＧ−３′及び５′−ＡＡＴＴＣＧＴ
ＡＴＴＴＧＡＴＧＡＴＴＣＴＣＡＴＡＡＴＡＴＴＡＡＡ
ＣＣＴＣＣＴＴＡＣＧＴＧＡＡＣＴＴＧＣＧＴＡＣＴＡ
ＧＴＴ−３′］を介して接続させて、目的の遺伝子を変
異した組換え体（形質転換体）ｆ１・ＩＬ−１α・Δ
（１−１５）／E.coli MV1184 を得た。

【００９５】このプラスミドは、前記式（１）のアミノ
酸配列の１−１５位アミノ酸配列を欠落しており、且つ
３６位ＸがAsn で、１４１位ＹがCys の本発明ＩＬ−１
α誘導体発現プラスミドである。

【００９６】 ＩＬ−１α誘導体の製造 上記プラスミドを用いて、実施例１と略々同様にして、
目的とするＩＬ−１α誘導体の発現及び精製を行なっ
た。

【００９７】即ち、上記プラスミドｆ１・ＩＬ−１α・
Δ（１−１５）を含む大腸菌（E. coli HB101 ）を、実
施例１と同じ条件で培養（６０ｌ）後、遠心分離（１６
０００×ｇ）により集菌した。得られた菌体を１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ６．０）に懸濁させ、一夜冷室に放置し
た後、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に対して
２日間透析した。得られた透析液を遠心分離（１６００
０×ｇ）して上清と沈渣を分離した。

【００９８】更に得られた沈渣につき上記と同一操作を
２回繰り返しそれぞれ上清を得た。得られた上清を合わ
せ、以下の精製操作に供した。

【００９９】 ＩＬ−１α誘導体の精製 まず上記で得た上清を、ＤＥＡＥ−ＨＰＬＣ［トーソ
ー社製、ＴＳＫゲルＤＥＡＥ−５ＰＷカラム（５．５×
２０ｃｍ）使用］を用いて、以下の条件で精製した。

【０１００】カラム：ＴＳＫゲルＤＥＡＥ−５ＰＷ
（５．５×２０ｃｍ、トーソー社製） 溶離液Ａ：２０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．０） 溶離液Ｂ：２０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．０）＋０．５
Ｍ ＮａＣｌ 流 速 ：３０ｍｌ／分 上記において、リテンションタイム８８〜９３分（これ
をフラクションＡとよぶ）及び９９〜１０３分（これを
フラクションＢとよぶ）をそれぞれ集め、別々に限外濾
過（ＹＭ−５メンブラン使用）して濃縮した後、ゲル濾
過ＨＰＬＣ［トーソー社製、ＴＳＫゲルＧ−２０００Ｓ
ＷＧカラム（２１．５×６００ｍｍ）使用、溶離液ＰＢ
Ｓ^- ］で精製した。

【０１０１】上記で精製したフラクションＡを更に２Ｍ
酢酸でｐＨ４とした後、ＳＰ−ＨＰＬＣ［トーソー社
製、ＴＳＫゲルＳＰ−５ＰＷ（２１．５×１５０ｍｍ）
カラム］に付し、下記条件で溶出させた。

【０１０２】カラム：ＴＳＫゲルＳＰ−５ＰＷ（２１．
５×１５０ｍｍ、トーソー社製） 溶離液Ａ：５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０） 溶離液Ｂ：５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）＋
０．５Ｍ ＮａＣｌ 流 速 ：３ｍｌ／分 リテンションタイム８７〜９３分の分画を集め、限外濾
過（ＹＭ−５メンブラン使用）によって２０ｍＭリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）の溶液組成となるよう
に緩衝液を交換しつつ濃縮して、濃縮精製品を得た。

【０１０３】 ＩＬ−１α誘導体の確認 (1) 上記で得た精製品のアミノ酸分析を、実施例１の
(1) と同様にして実施した。Ｐheを７として得られた
結果は下記表３に示す通りである。

【０１０４】

【表３】

【０１０５】(2) 実施例１の(2) と同様にして、上
記で得たＩＬ−１α誘導体のＮ末端域アミノ酸配列を
分析した。

【０１０６】その結果、Ｎ末端域２３個のアミノ酸配列
は以下の通りであった。

【０１０７】Met-Arg-Ile-Ile-Lys-Tyr-Glu-Phe-Ile-Le
u-Asn-Asp-Ala-Leu-Asn-Gln-Ser-Ile-Ile-Arg-Ala-Asn-
Asp- 以上のことより、得られた誘導体は前記式（１）で表わ
されるＩＬ−１α誘導体のアミノ酸配列の１−１５位ア
ミノ酸配列が欠失されており且つＸがAsn であることが
確認された。

【０１０８】(3) また上記で得たフラクションＢにつ
いて、フラクションＡと同様にして精製し、精製品のア
ミノ酸分析を同様に実施した。Phe を７として得られた
結果は下記表４に示す通りである。

【０１０９】

【表４】

【０１１０】(4) また上記フラクションＢの精製品につ
き、実施例１の(2) と同様にしてＮ末端域アミノ酸配
列を分析した結果、Ｎ末端域２３個のアミノ酸配列は以
下の通りであった。

【０１１１】Met-Arg-Ile-Ile-Lys-Tyr-Glu-Phe-Ile-Le
u-Asn-Asp-Ala-Leu-Asn-Gln-Ser-Ile-Ile-Arg-Ala-Asp-
Asp- 以上のことより、得られた誘導体は前記式（１）で表わ
されるＩＬ−１α誘導体のアミノ酸配列の１−１５位ア
ミノ酸配列が欠失されており且つＸがAsp であることが
確認された。

【０１１２】

【実施例４】 ＩＬ−１α誘導体［Δ（１−１５）・３
６Ｄ・１４１Ｓ］の製造 ＩＬ−１α誘導体発現用プラスミドの調製 この例はプラスミドp trp ＩＬ−１α・３６Ｄ・１４１
Ｓを利用して、サイトスペシフィック−ミュータジェネ
シスに従い、以下の通り実施された。即ち、プラスミド
p trp ＩＬ−１α・３６Ｄ・１４１Ｓより、ClaI−BamH
I ＤＮＡフラグメント（５２７ｂｐ）を切出し、実施例
１と同じｆ１・ＩＬ−１βlpp ＴのClaI−BamHI 長鎖フ
ラグメントとライゲーションしてｆ１・ＩＬ−１α・３
６Ｄ・１４１Ｓを得た。これからヘルパーファージＭ１
３ＫＯ７（宝酒造）を感染させて、一本鎖ＤＮＡ（ssＤ
ＮＡ）を得、これをミュータジェネシスの鋳型とした。

【０１１３】プライマーとして、合成オリゴヌクレオチ
ド〔５′−ＧＴＡＴＣＧＡＴＡＡＴＧＡＧＡＡＴＣＡＴ
Ｃ−３′〕を用い、実施例１と同様にオリゴヌクレオチ
ド−ダイレクテッドインビトロミュータジェネシスキッ
ト（アマシャム社）を用いて、サイトスペシフィック−
ミュータジェネシスを行なった。

【０１１４】エシェリヒア・コリＭＶ１１８４にトラン
スフォームされたクローンからssＤＮＡを得、ジデオキ
シチェインターミネィション法によりＤＮＡシークエン
シングを行ない、目的の遺伝子の変異した組換え体（形
質転換体）ｆ１・ＩＬ−１αΔ（１−１５）・３６Ｄ・
１４１Ｓ／Ｅ．coliＭＶ１１８４を得た。

【０１１５】更に、大量培養用の発現ベクターを次のよ
うに作製した。即ち、まず前記ｆ１・ＩＬ−１βlpp Ｔ
をMluI及びSalIで切断し、ＤＮＡポリメラーゼ（クレノ
ーフラグメント）で処理し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼでライ
ゲートし、ｆ１・ＩＬ−１βlpp ＴΔＭＳを得た。これ
を更にEcoRI 、ＤＮＡポリメラーゼ（クレノーフラグメ
ント）、セルフライゲーションを行ない、次にAatII 、
Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼ、BglII リンカー（ｐＧＡＡＧ
ＡＴＣＴＴＣ）処理し、AatII サイトをBglIIサイトに
変換した。同様に、SalI、ＤＮＡポリメラーゼ（クレノ
ーフラグメント）、XbaIリンカー（ｐＧＣＴＣＴＡＧＡ
ＧＣ）処理し、SalIサイトをXbaIサイトに変えた。これ
からClaI−BamHI ＤＮＡ長鎖フラグメント（５．５kb）
を切出し、先のｆ１・ＩＬ−１αΔ（１−１５）・３６
Ｄ・１４１ＳからのClaI−BamHIＤＮＡフラグメント
（４８２bp）とライゲーションして、ｆ１・ＩＬ−１α
Δ（１−１５）・３６Ｄ・１４１Ｓ（AatII →BglII, S
alI →XbaI）を得た。これから１１０９bp BglII−XbaI
ＤＮＡフラグメントを切出した。

【０１１６】別に、ｐＡＴ１５３のClaIサイトをBglII
サイトに、またDraIサイトをXbaIサイトに置き換え、Bg
lII 及びXbaIで切断して得た２５１４bpのBglII −XbaI
長鎖フラグメントと、先の１１０９bpのBglII −XbaIフ
ラグメントをライゲートし、目的の組換え体ｐＡＴ・Ｉ
Ｌ−１αΔ（１−１５）・３６Ｄ・１４１Ｓを得た。

【０１１７】このプラスミドは、前記式（１）のアミノ
酸配列の１−１５位アミノ酸配列を欠落しており（但
し、この組換え体を培養して蛋白質を作らせて、翻訳開
始コドンに由来するMet が付加した蛋白質ができる場合
は、実際上１−１４位アミノ酸配列が欠落したポリペプ
チドができる）、且つ３６位ＸがAsp で、１４１位Ｙが
Ser の本発明ＩＬ−１α誘導体発現プラスミドである。

【０１１８】上記形質転換体は、工業技術院微生物工業
研究所（微工研）に、「Escherichia coli HB101 /pAT
IL-1αΔ(1-15)36D141S 」なる表示で、微工研条寄第２
４８３号（ＦＥＲＭＢＰ−２４８３）として寄託されて
いる。

【０１１９】 形質転換体の培養 上記形質転換体をテトラサイクリン１０μｇ／ｍｌを含
む下記組成のＬＢ培地６００ｍｌに摂取し、３７℃で一
晩振盪培養して前培養液を得た。

【０１２０】〈ＬＢ培地組成〉 バクト・トリプトン（ディフコ社） １０ｇ／ｌ バクト・イースト抽出物（同上社） ５ｇ／ｌ ＮａＣｌ（和光純薬社） １０ｇ／ｌ 上記前培養液６００ｍｌを、下記組成の生産培地３０ｌ
に接種し、５０ｌ容ジャーファーメンター（日立製作
所）で３６．５℃にて１６時間、通気量（１ＶＶＭ）、
攪拌数（３００rpm ）の条件で培養した。

【０１２１】〈生産培地組成〉 Ｎａ₂ ＨＰＯ₄ ・１２Ｈ₂ Ｏ ６ ｇ／ｌ ＫＨ₂ ＰＯ₄ ３ ｇ／ｌ ＮａＣｌ ０．５ｇ／ｌ ＮＨ₄ Ｃｌ １ ｇ／ｌ カゼイン酸加水分解物（シグマ社）１０ ｇ／ｌ バクト−イースト抽出物 ０．５ｇ／ｌ ＭｎＣｌ₂ ・４Ｈ₂ Ｏ ２．５ｍｇ／ｍｌ Ｌ−システィン・ＨＣｌ ７５ ｍｇ／ｍｌ Ｌ−プロリン ７５ ｍｇ／ｍｌ Ｌ−ロイシン ７５ ｍｇ／ｍｌ ４Ｎ ＮａＯＨにてｐＨを７．４に調整後、１２１℃で
３０分間オートクレーブ処理し、次いで下記各成分の別
滅菌液を接種時に無菌的に培地に添加する。

【０１２２】〈別滅菌液組成〉 １Ｍ ＭｇＳＯ₄ ・４Ｈ₂ Ｏ ２ ｍｌ／ｌ １Ｍ ＣａＣｌ₂ ・２Ｈ₂ Ｏ ０．１ｍｌ／ｌ ７．５ｍｇ／ｌチアミン・ＨＣｌ １ ｍｌ／ｌ ４０％グルコース １８．７５ｍｌ／ｌ 培養後、遠心分離（１６０００×ｇ）により集菌し、得
られた菌体を１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）に懸濁さ
せ、一夜冷室に放置した後、１０ｍＭトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ８．０）に対して２日間透析した。得られた透析
液を遠心分離（１６０００×ｇ）して上清と沈渣を分離
し、更に得られた沈渣に上記と同一操作を繰り返して、
上清を得た。得られた各上清を合わせ、以下の精製操作
に供した。

【０１２３】 ＩＬ−１α誘導体の精製 まず上記で得た上清を、２Ｍ酢酸を用いてｐＨ３に調
節した後、ＳＰ−ＨＰＬＣ［トーソー社製、ＴＳＫゲル
ＳＰ−５ＰＷカラム（５．５×２０ｃｍ）使用］を用い
て、以下の条件で精製した。カラム：ＴＳＫゲルＳＰ−
５ＰＷ（５．５×２０ｃｍ、トーソー社製） 溶離液Ａ：５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０） 溶離液Ｂ：５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）＋
０．５Ｍ ＮａＣｌ 流 速 ：３０ｍｌ／分 上記において、リテンションタイム７０〜７５分の分画
を集め、これを１Ｍトリス塩酸緩衝液でｐＨ８．１に調
整した後、ＤＥＡＥ−ＨＰＬＣ［トーソー社製、ＴＳＫ
ゲルＤＥＡＥ−５ＰＷカラム（５．５×２０ｃｍ）に付
し、下記条件で溶出させた。

【０１２４】カラム：ＴＳＫゲルＤＥＡＥ−５ＰＷ
（５．５×２０ｃｍ、トーソー社製） 溶離液Ａ：２０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．０） 溶離液Ｂ：２０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．０）＋０．５
Ｍ ＮａＣｌ 流 速 ：３０ｍｌ／分 リテンションタイム９２〜９６分の分画を集め、限外濾
過（ＹＭ−５メンブラン使用）によって濃縮した後、ゲ
ル濾過ＨＰＬＣ［トーソー社製、ＴＳＫゲルＧ−２００
０ＳＷＧカラム（２１．５×６００ｍｍ）使用、溶離液
ＰＢＳ^- ］で精製した。

【０１２５】上記で精製したものを、更に２Ｍ酢酸でｐ
Ｈ４とした後、ＳＰ−ＨＰＬＣ［トーソー社製、ＴＳＫ
ゲルＳＰ−５ＰＷ（２１．５×１５０ｍｍ）カラム］に
付し、下記条件で溶出させた。

【０１２６】カラム：ＴＳＫゲルＳＰ−５ＰＷ（２１．
５×１５０ｍｍ、トーソー社製） 溶離液Ａ：５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０） 溶離液Ｂ：５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）＋
０．５Ｍ ＮａＣｌ 流 速 ：３ｍｌ／分 リテンションタイム８７〜９０分の分画を集め、限外濾
過（ＹＭ−５メンブラン使用）によって２０ｍＭリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）の溶液組成となるよう
に緩衝液を交換しつつ濃縮して、精製品を得た。

【０１２７】 ＩＬ−１α誘導体の確認 (1) 上記で得た精製品のアミノ酸分析を、実施例１の
(1) と同様にして実施した。Ｐheを７として得られた
結果は下記表５に示す通りである。

【０１２８】

【表５】

【０１２９】(2) 実施例１の(2) と同様にして、上
記で得たＩＬ−１α誘導体のＮ末端域アミノ酸配列を
分析した。

【０１３０】その結果、Ｎ末端域１５個のアミノ酸配列
は以下の通りであった。

【０１３１】Met-Arg-Ile-Ile-Lys-Tyr-Glu-Phe-Ile-Le
u-Asn-Asp-Ala-Leu-Asn- 以上のことより、得られた誘導体は前記式（Ａ）で表わ
されるＩＬ−１αのアミノ酸配列の１−１５位アミノ酸
配列が欠失されていることが確認された。

【０１３２】

【製剤例１】 血小板減少症治療剤の調製 実施例２で得られたポリペプチド［ＩＬ−１α・Δ（１
−１４）・３６Ｄ・１４１Ｓ］の生理活性食塩水（ＧＩ
Ｆ活性として１×１０⁶ 単位／ｍｌ）に、ヒト血清アル
ブミン（ＨＳＡ）を０．５％となるように添加して、濾
過（０．２２μｍメンブランフィルター使用）後、これ
を無菌的に１ｍｌずつバイアル瓶に分注して、凍結乾燥
し、注射用製剤を調整した。

【０１３３】かくして得られた製剤は、これを用時注射
用蒸留水１ｍｌに溶解して利用される。

【０１３４】

【薬理試験例１】 生物活性試験 本発明ＩＬ−１α誘導体のＧＩＦ活性を求めた結果は下
記表６に示す通りである。尚、表６には対照として天然
型ＩＬ−１αの同活性も併記する。

【０１３５】

【表６】

【０１３６】尚表中ＳＡは比活性を、ＲＡは相対活性を
示す。

【０１３７】また、本発明誘導体はＬＡＦ活性、抗腫瘍
活性、ＣＳＦ産生促進活性、放射線障害防止作用、日和
見感染症防御作用及びサイトカイン生産促進効果を有し
ている。

【０１３８】

【薬理試験例２】 発熱性試験 本発明ＩＬ−１α誘導体の発熱性を試験するため、ラッ
トを用いた以下の実験を行なった。

【０１３９】実験に用いたラットは６〜１０週齢の雄性
ＳＤラット（体重１６０〜２５０ｇ）（日本チャールス
リバー社）である。

【０１４０】本発明誘導体及び比較のための他の供試物
質は、それぞれ１００μｇ／ｍｌのラット血清アルブミ
ンを含むリン酸緩衝生理食塩水にて適当濃度に希釈して
供試液とした。また、対照としてはヒト血清アルブミン
（ＨＳＡ）を使用した。

【０１４１】上記供試液及び対照液の所定量を、予め体
重測定したラットに皮下投与し、投与直前並びに２、４
及び６時間後にそれぞれラットの直腸体温を、サーミス
ター温度集録装置Ｋ９２３（宝工業株式会社製）により
測定した。

【０１４２】供試物質として、各製造例で得られた本発
明誘導体並びに比較のためＩＬ−１β〔天然型、Bioche
m. Biophys. Res. Commun., 147 (1), 315-321 (1987)
〕及びＩＬ−１α誘導体〔ＩＬ−１α［３６Ｄ・１４
１Ｓ］、前記式（Ａ）の３６番目のアミノ酸（Asn ）を
Asp に、１４１番目のアミノ酸（Cys ）をSer に置換し
たもの、ヨーロッパ公開特許第２３７０７３号〕のぞれ
ぞれを用いて得られた結果（直腸温度が最も上昇する供
試物質投与４時間後の結果）を図１に示す。

【０１４３】図において、横軸は供試物質の投与量（μ
ｇ／ｋｇ）を、縦軸は供試液投与直前の直腸温度を基準
（０）とした該温度変化値（Δ℃）を示し、また図中
（１）は実施例１で得た本発明誘導体［ＩＬ−１α・１
６Ｇ・１４１Ｓ］を、（２）は実施例２で得た本発明誘
導体［ＩＬ−１α・Δ（１−１４）・３６Ｄ・１４１
Ｓ］を、（３）は天然型ＩＬ−１βを、（４）は上記ヨ
ーロッパ公開特許記載のＩＬ−１α誘導体［ＩＬ−１α
・３６Ｄ・１４１Ｓ］を、また（５）は対照とするＨＳ
Ａをそれぞれ示す。

【０１４４】上記図１より、本発明誘導体は、試験した
いずれの投与量においても発熱は実質的に起こらず、発
熱性が顕著に低減されているとが明らかである。これに
対してＩＬ−１βは、０．１μｇ／ｋｇの投与量におい
て既に発熱が認められ、投与量増加に従い高い発熱性が
観察される。またＩＬ−１α・３６Ｄ・１４１Ｓは、
０．１μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ及び１０μｇ／ｋｇの
投与量では発熱は認められないが、１００μｇ／ｋｇの
投与では発熱性がみられる。

【０１４５】また実施例２で得た本発明ＩＬ−１α誘導
体〔ＩＬ−１α［Δ（１−１４）・３６Ｄ・１４１Ｓ〕
と共に、実施例３で得た本発明ＩＬ−１α誘導体〔ＩＬ
−１α［Δ（１−１５）］及びＩＬ−１α［Δ（１−１
５）・３６Ｄ〕並びに実施例４で得た本発明ＩＬ−１α
誘導体〔ＩＬ−１α［Δ（１−１５）・３６Ｄ・１４１
Ｓ〕のそれぞれを用いて、上記と同一試験を行なった結
果を図２及び図３に示す。

【０１４６】図２中、（１）〜（４）は本発明誘導体で
あり、（１）はＩＬ−１α［Δ（１−１５）］を、
（２）はＩＬ−１α［Δ（１−１５）・３６Ｄ］を、
（３）はＩＬ−１α［Δ（１−１５）・３６Ｄ・１４１
Ｓ］を、（４）はＩＬ−１α［Δ（１−１４）・３６Ｄ
・１４１Ｓ］をそれぞれ示す。また図３中、（５）〜
（８）は、比較化合物であり、（５）はＩＬ−１αを、
（６）はＩＬ−１α［３６Ｄ］を、（７）はＩＬ−１α
［３６Ｄ・１４１Ｓ］を、また（８）は［⁷¹Ser ］ＩＬ
−１β〔ヨーロッパ公開特許第１８７９９１号参照〕を
それぞれ示す。

【０１４７】

【薬理試験例３】 ヘモポイエチン−１活性試験 ヘモポイエチン−１（Hemopoietin-1)活性を、スタンレ
ーら（Stanley, E. R.et al.)の方法〔Cell, 45, 667-6
74 (1986)〕に準じて行なった。

【０１４８】即ち、静動協より購入した雄性ＢＡＬＢ／
ｃマウスへ５−フルオロウラシル１５０ｍｇ／ｋｇを静
脈内投与し、３日後に大腿骨骨髄細胞（５−ＦＵ処置骨
髄細胞）を採取した。上記５−ＦＵ処置骨髄細胞１．５
×１０⁵ 個に、一定濃度（２００Ｕ／ｍｌ）のマウスＭ
−ＣＳＦと、種々の濃度のＩＬ−１α（対照）又は本発
明ＩＬ−１α誘導体を添加し、軟寒天培地中にて培養
し、７日目に培地中に形成されたコロニーを計数した。
尚、マウスＭ−ＣＳＦはＬ cell 培養上清より調製し
た。

【０１４９】得られた結果を表７に示す。

【０１５０】

【表７】

【０１５１】

【薬理試験例４】 造血作用試験 この例は、本発明ＩＬ−１α誘導体の造血作用（血小板
増加作用）を試験したものである。

【０１５２】この試験に用いた供試化合物（本発明ＩＬ
−１α誘導体及び比較化合物）は以下の通りである。

【０１５３】・ＩＬ−１α［３６Ｄ・１４１Ｓ］（比
較、ヨーロッパ特許公開第２３７０７３号参照） ・ＩＬ−１α［Δ（１−１４)・３６Ｄ・１４１Ｓ］（実
施例２で得た本発明誘導体） ・ＩＬ−１α［１６Ｇ・３６Ｄ・１４１Ｓ］（実施例１
で得た本発明誘導体） ・ＩＬ−１β［天然型ＩＬ−１β］〔Biochem. Biophy
s. Res. Commun., 147 (1),315-321 (1987)参照〕 また、この試験には静岡県実験動物農業協同組合より購
入した９週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いた。

【０１５４】上記各供試化合物は、之等をそれぞれマウ
ス血清アルブミン１００μｇ／ｍｌ含有注射用生理食塩
水［大塚製薬工場社製］にて所定濃度に希釈して用い
た。

【０１５５】試験開始日（０日）に、実験用小動物Ｘ線
照射装置（日立ＭＢＲ−１５０５Ｒ）を用いて、マウス
に４００ＲadのＸ線を全身照射して放射線による血小板
減少症を誘発させた。

【０１５６】その翌日より各供試試薬を連日１３回皮下
投与した。

【０１５７】１４日目に、マウスをエーテル麻酔し、開
腹後に下大静脈より採血し、マイクロティナー［ベクト
ンディッキンソン(BECTON DICKINSON)社製）に血液を採
取した。血球は自動血球分析装置（オルソＥＬＴ−８）
により分析した。

【０１５８】尚、実験は１群５匹のマウスを用いて行な
った。

【０１５９】上記試験において、各供試試薬の各種投与
量における１４日目の血小板数（平均値±ＳＥ，×１０
³ ／ｍｍ³ ）の結果を下記表８に示す。

【０１６０】

【表８】

【０１６１】尚、有意差検定は、溶媒投与群の値を対照
としてスチューデンツＴテストにより行なった。＊はｐ
≦０．００１を示す。

【０１６２】上記表８より、無処置正常群の血小板数は
１１６４±１０であるのに対し、溶媒投与群では４４７
±５２まで血小板数が減少しているが、本発明ＩＬ−１
α誘導体）の投与群では、０．１μｇ／ｋｇの投与量か
ら用量に依存して明白な血小板数の増加が認められ、従
って之等が血小板減少症の治療に有効であることが判
る。

【０１６３】また、下記ＩＬ−１α誘導体を用いて上記
と同一の薬理試験を実施した。

【０１６４】・ＩＬ−１α［天然型］（比較） ・ＩＬ−１α［３６Ｄ・１４１Ｓ］（比較） ・ＩＬ−１α［Δ（１−１５）］（実施例３で得た本発
明誘導体） ・ＩＬ−１α［Δ（１−１５）・３６Ｄ］（実施例３で
得た本発明誘導体） ・ＩＬ−１α［Δ（１−１５)・３６Ｄ・１４１Ｓ］（実
施例４で得た本発明誘導体） ・ＩＬ−１α［Δ（１−１４)・３６Ｄ・１４１Ｓ］（実
施例２で得た本発明誘導体） 上記試験において、各供試試薬の各種投与量における１
４日目の血小板数（平均値±ＳＥ，×１０³ ／ｍｍ³ ）
の結果を下記表９に、また好中球数（平均値±ＳＥ，×
１０³ ／ｍｍ³ ）の結果を下記表１０にそれぞれ示す。

【０１６５】

【表９】

【０１６６】

【表１０】

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明誘導体及び他の生理活性物質の発熱性を
調べた結果を示すグラフである。

【図２】本発明誘導体の発熱性を調べた結果を示すグラ
フである。

【図３】本発明誘導体以外の生理活性物質の発熱性を調
べた結果を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＧＺ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＥ Ｃ１２Ｎ 15/09 ＡＣＢ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＧＺ (72)発明者 平井 嘉勝 徳島県板野郡北島町新喜来字江古川５− 49 (56)参考文献 ＮＡＴＵＲＥ 315，〜20！Ｐ．641− 647（1985) ＰＲＯＣ．ＮＡＴＬ．ＡＣＡＤ．ＳＣ Ｉ．ＵＳＡ 81，Ｐ．7807−7911 （1984)

Claims (5)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式 【化１】 Ser-Ala-Pro-Phe-Ser-Phe-Leu-Ser-Asn-Val-Lys-Tyr-Asn-Phe-Met-Arg-Ile-Ile- Lys-Tyr-Glu-Phe-Ile-Leu-Asn-Asp-Ala-Leu-Asn-Gln-Ser-Ile-Ile-Arg-Ala- X - Asp-Gln-Tyr-Leu-Thr-Ala-Ala-Ala-Leu-His-Asn-Leu-Asp-Glu-Ala-Val-Lys-Phe- Asp-Met-Gly-Ala-Tyr-Lys-Ser-Ser-Lys-Asp-Asp-Ala-Lys-Ile-Thr-Val-Ile-Leu- Arg-Ile-Ser-Lys-Thr-Gln-Leu-Tyr-Val-Thr-Ala-Gln-Asp-Glu-Asp-Gln-Pro-Val- Leu-Leu-Lys-Glu-Met-Pro-Glu-Ile-Pro-Lys-Thr-Ile-Thr-Gly-Ser-Glu-Thr-Asn- Leu-Leu-Phe-Phe-Trp-Glu-Thr-His-Gly-Thr-Lys-Asn-Tyr-Phe-Thr-Ser-Val-Ala- His-Pro-Asn-Leu-Phe-Ile-Ala-Thr-Lys-Gln-Asp-Tyr-Trp-Val- Y -Leu-Ala-Gly- Gly-Pro-Pro-Ser-Ile-Thr-Asp-Phe-Gln-Ile-Leu-Glu-Asn-Gln-Ala 〔上記においてＸはAspを、ＹはCys又はSerを示す。〕 で表わされるインターロイキン−１α誘導体のアミノ酸
   配列において、１６位Arg がGlyで置換されているこ
   と、１位Serから１４位Pheに至るアミノ酸配列が欠失さ
   れていること及び１位Serから１５位Metに至るアミノ酸
   配列が欠失されていること、から選ばれる条件の少なく
   ともひとつを充足する改変されたアミノ酸配列を有する
   ことを特徴とするインターロイキン−１α誘導体。
2. 【請求項２】 １位Serから１４位Pheに至るアミノ酸配
   列が欠失されている改変されたアミノ酸配列を有する請
   求項１に記載のインターロイキン−１α誘導体。
3. 【請求項３】 １位Serから１５位Metに至るアミノ酸配
   列が欠失されている改変されたアミノ酸配列を有する請
   求項１に記載のインターロイキン−１α誘導体。
4. 【請求項４】ＹがSerである請求項２に記載のインター
   ロイキン−１α誘導体。
5. 【請求項５】請求項１に記載のインターロイキン−１α
   誘導体を有効成分として含有することを特徴とする抗腫
   瘍剤。