JP2524287B2 - 微生物固定化担体の再生方法 - Google Patents
微生物固定化担体の再生方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、多孔質粒状キトサン固
定化用担体内部で微生物を増殖させて、エタノール発酵
や各種有機酸発酵、酵素やペプチド等の生理活性物質と
いった有用物質を生産するバイオリアクターシステムの
再生方法に関するものである。
定化用担体内部で微生物を増殖させて、エタノール発酵
や各種有機酸発酵、酵素やペプチド等の生理活性物質と
いった有用物質を生産するバイオリアクターシステムの
再生方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】増殖する微生物を固定化する方法として
アルギン酸ソーダやκ−カラギーナン等の天然多糖類で
包括する方法や、光硬化性樹脂で包括する方法が一般に
知られている。しかしこの様な包括型の固定化方法は、
滅菌操作が煩雑な上に、担体のゲル構造の中に微生物が
包括されているために物質透過が悪く、担体の再生も不
可能であり、大規模スケールで工業的に用いるには不向
きな方法であった。
アルギン酸ソーダやκ−カラギーナン等の天然多糖類で
包括する方法や、光硬化性樹脂で包括する方法が一般に
知られている。しかしこの様な包括型の固定化方法は、
滅菌操作が煩雑な上に、担体のゲル構造の中に微生物が
包括されているために物質透過が悪く、担体の再生も不
可能であり、大規模スケールで工業的に用いるには不向
きな方法であった。
【０００３】上記の欠点を解決するために近年、繊維集
合体や多孔質担体内部に微生物を保持する方法が盛んに
検討されてきた。これは滅菌操作が極めて容易である上
に、物質透過に優れ、好気性微生物の固定化にも非常に
効果的な固定化方法である。
合体や多孔質担体内部に微生物を保持する方法が盛んに
検討されてきた。これは滅菌操作が極めて容易である上
に、物質透過に優れ、好気性微生物の固定化にも非常に
効果的な固定化方法である。
【０００４】この様な固定化方法では、微生物は担体表
面に存在する気孔から侵入し、担体内部で活発に増殖を
繰り返しながら、目的とする各種物質が効率的に生産さ
れるものである。しかし、微生物の変異や劣化、目的外
の微生物が侵入し担体内部が汚染された様な場合に、担
体内部の微生物を除去、洗浄し、担体を再生する必要が
あるが、この様な事態に対処する方法は全く開発されて
おらず、担体を廃棄しているのが現状である。
面に存在する気孔から侵入し、担体内部で活発に増殖を
繰り返しながら、目的とする各種物質が効率的に生産さ
れるものである。しかし、微生物の変異や劣化、目的外
の微生物が侵入し担体内部が汚染された様な場合に、担
体内部の微生物を除去、洗浄し、担体を再生する必要が
あるが、この様な事態に対処する方法は全く開発されて
おらず、担体を廃棄しているのが現状である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、固定化用担
体の物理的強度、多孔質構造、微生物の固定化能といっ
た固定化用担体の各種物性を損なう事無く、担体内部の
微生物を効率的に除去、洗浄し、担体を再利用できる状
態に再生する方法を提供するものである。
体の物理的強度、多孔質構造、微生物の固定化能といっ
た固定化用担体の各種物性を損なう事無く、担体内部の
微生物を効率的に除去、洗浄し、担体を再利用できる状
態に再生する方法を提供するものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、多孔質粒状キ
トサン微生物固定化担体を熱アルカリで処理した後、酵
素で処理する再生方法に係る。微生物の細胞壁は主とし
て表１に示される物質から構成されていることが、知ら
れている。（「新版微生物学Ｉ」ｐ８５〜１１６、朝倉
書店、１９８１）
トサン微生物固定化担体を熱アルカリで処理した後、酵
素で処理する再生方法に係る。微生物の細胞壁は主とし
て表１に示される物質から構成されていることが、知ら
れている。（「新版微生物学Ｉ」ｐ８５〜１１６、朝倉
書店、１９８１）
【０００７】
【表１】
【０００８】本発明者らは、多孔を有する微生物の固定
化用担体内部で増殖した微生物を熱アルカリ中で処理
し、水洗した後に、微生物の細胞壁の構成成分を溶解す
る酵素で処理することにより、担体内部の微生物を溶
解、除去し、担体の物性を何等損なうことの無い温和な
条件で、微生物固定化用担体を再生できることを見い出
した。
化用担体内部で増殖した微生物を熱アルカリ中で処理
し、水洗した後に、微生物の細胞壁の構成成分を溶解す
る酵素で処理することにより、担体内部の微生物を溶
解、除去し、担体の物性を何等損なうことの無い温和な
条件で、微生物固定化用担体を再生できることを見い出
した。
【０００９】本発明の多孔質粒状微生物固定化用担体
は、出願人が先に開示した特開平２−２２５５３９号記
載の方法により製造される多孔質粒状キトサンのよう
な、有機物質系固定化担体が好ましい。
は、出願人が先に開示した特開平２−２２５５３９号記
載の方法により製造される多孔質粒状キトサンのよう
な、有機物質系固定化担体が好ましい。
【００１０】本発明の微生物固定化担体の再生方法は、
再生しようとする担体に、担体容積と２倍量の０．１〜
２Ｎの水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムの水溶液を
加え、５０℃〜８０℃で１〜２４時間浸漬処理する。担
体内部で増殖した微生物を死滅させ、酵素が働きやすい
状態にした後、充分に水洗しアルカリを除去する。
再生しようとする担体に、担体容積と２倍量の０．１〜
２Ｎの水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムの水溶液を
加え、５０℃〜８０℃で１〜２４時間浸漬処理する。担
体内部で増殖した微生物を死滅させ、酵素が働きやすい
状態にした後、充分に水洗しアルカリを除去する。
【００１１】次で、アルカリ処理した担体を細胞壁溶解
酵素の水溶液に入れ処理する。加える酵素量は多い方が
好ましいが、通常は、酵素濃度が１００ｕ／ml以上の水
溶液を担体容積と等容量入れる事で処理できる。水溶液
のｐＨ及び温度を酵素の至適条件に合わせ、１〜２４時
間浸漬、振とうする。
酵素の水溶液に入れ処理する。加える酵素量は多い方が
好ましいが、通常は、酵素濃度が１００ｕ／ml以上の水
溶液を担体容積と等容量入れる事で処理できる。水溶液
のｐＨ及び温度を酵素の至適条件に合わせ、１〜２４時
間浸漬、振とうする。
【００１２】使用する酵素としては、酵母に対してはマ
ンノシダーゼ，グルカナーゼ，プロテアーゼ，キチナー
ゼ，リケナーゼが、糸状菌にはキチナーゼ，キトサナー
ゼ，セルラーゼ，グルカナーゼ，マンノシターゼ，リケ
ナーゼが、細菌及び放線菌に対しては、ムコペプチドを
分解するムレイン分解酵素，リゾチーム，キチナーゼ，
キトサナーゼ，グルカナーゼ，プロテアーゼが有効であ
り、１種類あるいは数種類を複合して使用する。
ンノシダーゼ，グルカナーゼ，プロテアーゼ，キチナー
ゼ，リケナーゼが、糸状菌にはキチナーゼ，キトサナー
ゼ，セルラーゼ，グルカナーゼ，マンノシターゼ，リケ
ナーゼが、細菌及び放線菌に対しては、ムコペプチドを
分解するムレイン分解酵素，リゾチーム，キチナーゼ，
キトサナーゼ，グルカナーゼ，プロテアーゼが有効であ
り、１種類あるいは数種類を複合して使用する。
【００１３】微生物の細胞壁を溶解させた後、細胞壁溶
解物，未溶解残渣そして酵素を完全に水洗除去すること
によって、担体の再生がなされる。
解物，未溶解残渣そして酵素を完全に水洗除去すること
によって、担体の再生がなされる。
【００１４】
【実施例】以下、本発明を実施例により説明するが、本
発明は、この範囲に限定されるものではない。 （Ａ）固定化用担体の各種物性値は以下の方法により測
定した。圧縮弾性率の測定 レオメータＮＲＭ−２０１０Ｊ−ＣＷ（不動工業（株）
製）を用い、直径１cm、深さ２cmのアダプタに試料を詰
め、直径０．８cmの棒を２cm／分の速度で押し込んだ時
の圧縮応力を測定し、弾性率の形で表した。細孔径の測定 試料を凍結乾燥後、走査電子顕微鏡で測定し、１００個
の細孔の平均値を計算した。細孔容積の測定 試料を凍結乾燥後、水銀圧入式ポアサイザ９３１０形
（（株）島津製作所製）によって乾燥試料１ｇ当りの細
孔容積を測定した。
発明は、この範囲に限定されるものではない。 （Ａ）固定化用担体の各種物性値は以下の方法により測
定した。圧縮弾性率の測定 レオメータＮＲＭ−２０１０Ｊ−ＣＷ（不動工業（株）
製）を用い、直径１cm、深さ２cmのアダプタに試料を詰
め、直径０．８cmの棒を２cm／分の速度で押し込んだ時
の圧縮応力を測定し、弾性率の形で表した。細孔径の測定 試料を凍結乾燥後、走査電子顕微鏡で測定し、１００個
の細孔の平均値を計算した。細孔容積の測定 試料を凍結乾燥後、水銀圧入式ポアサイザ９３１０形
（（株）島津製作所製）によって乾燥試料１ｇ当りの細
孔容積を測定した。
【００１５】（Ｂ）酵母固定化担体中の酵母数の測定は
以下の方法で行った。 １）酵母固定化用担体５mlを５０mlのメスシリンダーに
とり、０．９％の塩化ナトリウム水溶液を３０ml加え
る。 ２）ガラス棒で担体を良く砕いた後、０．９％塩化ナト
リウム水溶液を加え、全量を５０mlとする。 ３）良く攪拌した後、担体の破片が沈降するのを待って
上澄みを取り、トーマの血球計算盤で計数する。担体中
の固定化酵母数及び再生処理した担体中の残存酵母数は
次式で求めた。
以下の方法で行った。 １）酵母固定化用担体５mlを５０mlのメスシリンダーに
とり、０．９％の塩化ナトリウム水溶液を３０ml加え
る。 ２）ガラス棒で担体を良く砕いた後、０．９％塩化ナト
リウム水溶液を加え、全量を５０mlとする。 ３）良く攪拌した後、担体の破片が沈降するのを待って
上澄みを取り、トーマの血球計算盤で計数する。担体中
の固定化酵母数及び再生処理した担体中の残存酵母数は
次式で求めた。
【００１６】
【数１】 担体中の酵母数［個／ｍｌ−担体］＝（計数値×５０×
１０６）／５
１０６）／５
【００１７】（Ｃ）酵母残存率を下記の計算式より求め
た。
た。
【００１８】
【数２】
【００１９】《実施例１》 脱アセチル化度８０％、平均分子量３５，０００のキト
サン３５０ｇに、ポリエチレングリコール（分子量２
０，０００、三洋化成工業（株）製）５００ｇを加え、
総量が５．０００mlになる様に３．５％酢酸水溶液に溶
解した。このキトサン溶液を１％アンモニア水、２０％
エタノール、７９％水からなる混合溶液中に一定量づつ
滴下させて凝固再生させた後、中性になるまで充分に水
洗し、平均粒径１．２mmの多孔質粒状キトサン５，００
０ml（湿潤）を得た。多孔質粒状キトサンの付着水を除
去後、０．５％酢酸水溶液５，０００ml中に２５℃で３
０秒間浸漬処理した後、直ちに中性になるまで水洗を行
った。水洗後の多孔質粒状キトサンの容積は３，０００
mlであった。
サン３５０ｇに、ポリエチレングリコール（分子量２
０，０００、三洋化成工業（株）製）５００ｇを加え、
総量が５．０００mlになる様に３．５％酢酸水溶液に溶
解した。このキトサン溶液を１％アンモニア水、２０％
エタノール、７９％水からなる混合溶液中に一定量づつ
滴下させて凝固再生させた後、中性になるまで充分に水
洗し、平均粒径１．２mmの多孔質粒状キトサン５，００
０ml（湿潤）を得た。多孔質粒状キトサンの付着水を除
去後、０．５％酢酸水溶液５，０００ml中に２５℃で３
０秒間浸漬処理した後、直ちに中性になるまで水洗を行
った。水洗後の多孔質粒状キトサンの容積は３，０００
mlであった。
【００２０】１，０００mlの多孔質粒状キトサンに、
０．０６エポキシ当量／ｌのエチレングリコールジグリ
シジルエーテルを含む水２，０００mlを加え、８０℃で
３時間、反応させた後、充分に水洗した。
０．０６エポキシ当量／ｌのエチレングリコールジグリ
シジルエーテルを含む水２，０００mlを加え、８０℃で
３時間、反応させた後、充分に水洗した。
【００２１】次に、多孔質粒状キトサンに含まれる水を
エタノールで充分に置換した後、無水酢酸１モルを含む
エタノール２，０００ml中で２５℃、１２時間攪拌し、
アミノ基をアセチル化した。キトサンの水酸基に反応し
たアシル化剤を除くために、担体と等容積の１Ｎの水酸
化ナトリウムで４０℃、２時間、ケン化処理を行った
後、水洗し、脱離したアシル化剤を充分に除去し、９０
０mlの多孔質粒状キトサン微生物固定化用担体（試料
１）を得た。
エタノールで充分に置換した後、無水酢酸１モルを含む
エタノール２，０００ml中で２５℃、１２時間攪拌し、
アミノ基をアセチル化した。キトサンの水酸基に反応し
たアシル化剤を除くために、担体と等容積の１Ｎの水酸
化ナトリウムで４０℃、２時間、ケン化処理を行った
後、水洗し、脱離したアシル化剤を充分に除去し、９０
０mlの多孔質粒状キトサン微生物固定化用担体（試料
１）を得た。
【００２２】次いで、試料１を用い以下の方法で酵母固
定化担体を調製した。 １）グルコース５０ｇ／ｌ、リン酸二水素カリウム１ｇ
／ｌ、ポリペプトン１ｇ／ｌ、酵母エキス５ｇ／ｌ、硫
酸アンモニウム１ｇ／ｌ、硫酸マグネシウム７水和物
０．５ｇ／ｌを含むｐＨ７．０に調製した酵母増殖用培
地１００mlにサッカロマイセス セレビシエ ＩＦＯ−
０２２４を植菌した。 ２）３０℃、１６０ｒｐｍで２０時間、往復振とう培養
した。トーマの血球計算盤で酵母数を測定したところ、
１．５×１０９ 個／mlであった。 ３）酵母増殖用培地５００mlと多孔質粒状キトサン微生
物固定化用担体１００mlの入った三角フラスコに、上記
で得られた酵母懸濁液２５mlを加える。 ４）３０℃、１５０ｒｐｍで２４時間、回転振とう培養
した後、培地を吸引除去した。 ５）グルコース１５０ｇ／ｌ，リン酸二水素カリウム１
ｇ／ｌ，酵母エキス０．２ｇ／ｌ，硫酸アンモニウム１
ｇ／ｌ，硫酸マクネシウム７水和物０．１ｇ／ｌ，塩化
カルシウム０．０５ｇ／ｌ，硫酸銅５水和物０．００５
ｇ／ｌ，硫酸第１鉄７水和物０．００５ｇ／ｌ，塩化カ
リウム０．１ｇ／ｌ，硫酸亜鉛７水和物０．１ｇ／ｌを
含むｐＨ４．５に調整したエタノール発酵用培地５００
mlを加える。 ６）３０℃、５０ｒｐｍで４８時間振とう培養する。 ７）４８時間後、培地を吸引除去し新しいエタノール発
酵用培地５００mlを加え、同様の方法で４８時間培養す
る。この操作を更に１回、繰り返す。 以上の操作により酵母固定化担体（試料２）を得た。
定化担体を調製した。 １）グルコース５０ｇ／ｌ、リン酸二水素カリウム１ｇ
／ｌ、ポリペプトン１ｇ／ｌ、酵母エキス５ｇ／ｌ、硫
酸アンモニウム１ｇ／ｌ、硫酸マグネシウム７水和物
０．５ｇ／ｌを含むｐＨ７．０に調製した酵母増殖用培
地１００mlにサッカロマイセス セレビシエ ＩＦＯ−
０２２４を植菌した。 ２）３０℃、１６０ｒｐｍで２０時間、往復振とう培養
した。トーマの血球計算盤で酵母数を測定したところ、
１．５×１０９ 個／mlであった。 ３）酵母増殖用培地５００mlと多孔質粒状キトサン微生
物固定化用担体１００mlの入った三角フラスコに、上記
で得られた酵母懸濁液２５mlを加える。 ４）３０℃、１５０ｒｐｍで２４時間、回転振とう培養
した後、培地を吸引除去した。 ５）グルコース１５０ｇ／ｌ，リン酸二水素カリウム１
ｇ／ｌ，酵母エキス０．２ｇ／ｌ，硫酸アンモニウム１
ｇ／ｌ，硫酸マクネシウム７水和物０．１ｇ／ｌ，塩化
カルシウム０．０５ｇ／ｌ，硫酸銅５水和物０．００５
ｇ／ｌ，硫酸第１鉄７水和物０．００５ｇ／ｌ，塩化カ
リウム０．１ｇ／ｌ，硫酸亜鉛７水和物０．１ｇ／ｌを
含むｐＨ４．５に調整したエタノール発酵用培地５００
mlを加える。 ６）３０℃、５０ｒｐｍで４８時間振とう培養する。 ７）４８時間後、培地を吸引除去し新しいエタノール発
酵用培地５００mlを加え、同様の方法で４８時間培養す
る。この操作を更に１回、繰り返す。 以上の操作により酵母固定化担体（試料２）を得た。
【００２３】次に、以下の方法で酵母固定化担体の再生
を行った。 １）固定化酵母２０mlに１Ｎ−ＮａＯＨを４０ｍｌ加え
る。 ２）６０℃で２時間加熱し固定化されている菌体を熱処
理する。 ３）処理液を除去し充分に水洗した後、純水２０mlを加
え酵母細胞壁溶解酵素ＹＬ−１５（天野製薬工業製）２
００mg加え、ｐＨを７に調整する。 ４）３０℃で１２時間、反応させる。 ５）反応液を除去後、充分に水洗し再生担体（試料３）
を得た。 得られた再生担体５０mlを使い、上記と同様の方法で再
度、酵母固定化担体を調製した（試料４）。
を行った。 １）固定化酵母２０mlに１Ｎ−ＮａＯＨを４０ｍｌ加え
る。 ２）６０℃で２時間加熱し固定化されている菌体を熱処
理する。 ３）処理液を除去し充分に水洗した後、純水２０mlを加
え酵母細胞壁溶解酵素ＹＬ−１５（天野製薬工業製）２
００mg加え、ｐＨを７に調整する。 ４）３０℃で１２時間、反応させる。 ５）反応液を除去後、充分に水洗し再生担体（試料３）
を得た。 得られた再生担体５０mlを使い、上記と同様の方法で再
度、酵母固定化担体を調製した（試料４）。
【００２４】試料１の物性値は以下の通りであった。 圧縮弾性率 ５．５×１０５ ｄｙｎ／ｃｍ２ 細孔径 ７５μｍ 細孔容積 ３．３ml／ｇ 試料２の固定化酵母数は以下の通りであった。 固定化酵母数 １．１×１０１０個／ml−担体 試料３の物性値及び酵母残存率は以下の通りであった。 圧縮弾性率 ５．３×１０５ ｄｙｎ／ｃｍ２ 細孔径 ７５μｍ 細孔容積 ３．３ml／ｇ 酵母残存率 １０．１％ 試料４の固定化酵母数は以下の通りであった。 固定化酵母数 １．０×１０１０個／ml−担体
【００２５】上述の結果で明かな通り、本再生法による
微生物固定化用担体は、使用前の固定化用担体である試
料１と再生担体である試料３の結果より、担体の物理的
性質の劣化も無く、また酵母固定化担体である試料２と
再生後の酵母固定化担体である試料４より酵母固定化能
力に変化は見られず、優れた方法である。
微生物固定化用担体は、使用前の固定化用担体である試
料１と再生担体である試料３の結果より、担体の物理的
性質の劣化も無く、また酵母固定化担体である試料２と
再生後の酵母固定化担体である試料４より酵母固定化能
力に変化は見られず、優れた方法である。
【００２６】《比較例１》実施例１と同様の方法で得ら
れた多孔質粒状キトサンを用いて固定化酵母を調製した
後、熱アルカリ処理を行わずに単純に酵素のみを用い
て、以下の方法で再生処理を行った。 １）固定化酵母４０mlに、純水４０mlを加え酵母細胞壁
溶解酵素ＹＬ−１５、４００mgを加えて、ｐＨを７に調
整する。 ２）３０℃で１２時間、反応させる。 ３）反応液を除去後、充分に水洗する。 再生後の担体の圧縮弾性率は５．５×１０５ ｄｙｎ／
ｃｍ２ 、細孔径は７５μｍ、細孔容積は３．３ml／ｇ
であり、酵母残存率は５９％であり、再生が充分に行わ
れなかった。また再生担体２０mlを用い再度固定化酵母
を調製したところ、再生後の固定化酵母数６．５×１０
９ 個／ml−担体と低いものであった。
れた多孔質粒状キトサンを用いて固定化酵母を調製した
後、熱アルカリ処理を行わずに単純に酵素のみを用い
て、以下の方法で再生処理を行った。 １）固定化酵母４０mlに、純水４０mlを加え酵母細胞壁
溶解酵素ＹＬ−１５、４００mgを加えて、ｐＨを７に調
整する。 ２）３０℃で１２時間、反応させる。 ３）反応液を除去後、充分に水洗する。 再生後の担体の圧縮弾性率は５．５×１０５ ｄｙｎ／
ｃｍ２ 、細孔径は７５μｍ、細孔容積は３．３ml／ｇ
であり、酵母残存率は５９％であり、再生が充分に行わ
れなかった。また再生担体２０mlを用い再度固定化酵母
を調製したところ、再生後の固定化酵母数６．５×１０
９ 個／ml−担体と低いものであった。
【００２７】《比較例２》実施例１と同様の方法で得ら
れた粒状多孔質キトトサンを用いて固定化酵母を調製し
た後、酵素を使わずに熱アルカリ処理のみを行い、以下
の方法で再生処理を行なった。 １）固定化酵母４０mlに１Ｎ−ＮａＯＨを８０ml加え
る。 ２）６０℃で２時間加熱し固定化されている酵母を熱処
理する。 ３）処理液を除去し充分に水洗する。 再生後の圧縮弾性率は５．４×１０５ ｄｙｎ／ｃｍ２
、細孔径は７５μｍ、細孔容積は３．３ml／ｇであ
り、酵母残存率は６５％で再生が充分に行なわれなかっ
た。また再生担体２０mlを用い再度固定化酵母を調製し
たところ、再生後の固定化酵母７．１×１０９ 個／ml
−担体で低いものであった。
れた粒状多孔質キトトサンを用いて固定化酵母を調製し
た後、酵素を使わずに熱アルカリ処理のみを行い、以下
の方法で再生処理を行なった。 １）固定化酵母４０mlに１Ｎ−ＮａＯＨを８０ml加え
る。 ２）６０℃で２時間加熱し固定化されている酵母を熱処
理する。 ３）処理液を除去し充分に水洗する。 再生後の圧縮弾性率は５．４×１０５ ｄｙｎ／ｃｍ２
、細孔径は７５μｍ、細孔容積は３．３ml／ｇであ
り、酵母残存率は６５％で再生が充分に行なわれなかっ
た。また再生担体２０mlを用い再度固定化酵母を調製し
たところ、再生後の固定化酵母７．１×１０９ 個／ml
−担体で低いものであった。
【００２８】
【発明の効果】本発明は、微生物固定化担体の内部で増
殖した微生物を熱アルカリで処理した後、微生物の細胞
壁を溶解する酵素で処理するため、不要となった微生物
のほとんどが除去され、再生の前後で微生物の固定化能
に全く変化がなく、また、担体の物理的諸性質にも全く
変化は見られない優れた再生方法である。
殖した微生物を熱アルカリで処理した後、微生物の細胞
壁を溶解する酵素で処理するため、不要となった微生物
のほとんどが除去され、再生の前後で微生物の固定化能
に全く変化がなく、また、担体の物理的諸性質にも全く
変化は見られない優れた再生方法である。
Claims (1)
- 【請求項１】 多孔質粒状キトサン微生物固定化担体を
熱アルカリで処理した後、酵素で処理することを特徴と
する微生物固定化担体の再生方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4216636A JP2524287B2 (ja) | 1992-07-23 | 1992-07-23 | 微生物固定化担体の再生方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4216636A JP2524287B2 (ja) | 1992-07-23 | 1992-07-23 | 微生物固定化担体の再生方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0638755A JPH0638755A (ja) | 1994-02-15 |
| JP2524287B2 true JP2524287B2 (ja) | 1996-08-14 |
Family
ID=16691547
Family Applications (1)
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| JP (1) | JP2524287B2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| FR2755972B1 (fr) * | 1996-11-21 | 2004-04-02 | Merck Clevenot Laboratoires | Procede de preparation de microparticules de pigments mineraux enrobees d'une couche de chitine, microparticules obtenues et utilisation de ces microparticules |
-
1992
- 1992-07-23 JP JP4216636A patent/JP2524287B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0638755A (ja) | 1994-02-15 |
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