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JP2024534386A - 化学療法抵抗性癌の治療方法における使用のための抗体－薬物コンジュゲート - Google Patents

化学療法抵抗性癌の治療方法における使用のための抗体－薬物コンジュゲート Download PDF

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JP2024534386A JP2024516564A JP2024516564A JP2024534386A JP 2024534386 A JP2024534386 A JP 2024534386A JP 2024516564 A JP2024516564 A JP 2024516564A JP 2024516564 A JP2024516564 A JP 2024516564A JP 2024534386 A JP2024534386 A JP 2024534386A
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cancer
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acid sequence
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智枝美 齊藤
宏和 鈴木
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Daiichi Sankyo Co Ltd
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Abstract

本開示は、ＡＤＣを使用して癌を治療するための治療方法の分野に関する。本開示はまた、癌を治療するためのＡＤＣを含む医薬品の分野に関する。より具体的には、ＡＤＣは、トポイソメラーゼＩ阻害剤などの抗癌剤にリンカーを介して接続された抗カドヘリン－６（ＣＤＨ６）抗体で構成され、癌は化学療法に抵抗性であり得る。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年９月１５日に出願された米国仮特許出願第６３／２４４，４５８号の優先権及び利益を主張する。本出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表に関する説明
本出願に関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、本明細書に参照により組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名前は０９８０６５－０２９６＿ＳＬ．ｔｘｔである。テキストファイルのサイズは約１１２ｋｂであり、２０２１年９月９日に作成され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
本開示は、治療方法、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の使用、癌を治療するためのＡＤＣの医薬品などの分野に関する。
カドヘリンは、細胞膜表面に存在する糖タンパク質で、カルシウムイオン依存的にＮ末端側の細胞外ドメイン同士が結合することで、細胞間接着分子として、また細胞間相互作用を担うシグナル分子として機能する。カドヘリンスーパーファミリーの内、クラシックカドヘリンに分類される分子群は、細胞外に５個の細胞外ドメイン（ＥＣドメイン）と１個の膜貫通領域、及び細胞内ドメインから構成される１回膜貫通タンパク質である。クラシックカドヘリンはアミノ酸配列の相同性から、Ｅ－カドヘリンやＮ－カドヘリンに代表されるタイプＩファミリーと、タイプＩＩファミリーに分類される。
カドヘリン６（Ｃａｄｈｅｒｉｎ－６、ＣＤＨ６）は、タイプＩＩカドヘリンファミリーに分類される、７９０アミノ酸からなる１回膜貫通タンパク質であり、Ｎ末端側を細胞外、Ｃ末端側を細胞内に持つ。ヒトＣＤＨ６遺伝子は１９９５年に初めてクローニングされ（非特許文献１）、ＮＭ＿００４９３２、ＮＰ＿００４９２３（ＮＣＢＩ）等のアクセッション番号により参照可能である。
ＣＤＨ６は発生期において脳や腎臓で特異的に発現しており、中枢神経系の回路形成（非特許文献２、非特許文献３）や腎臓のネフロン発生時（非特許文献４、非特許文献５）に重要な役割を担うことが報告されている。成人の正常組織では、ＣＤＨ６の発現は腎尿細管や胆管上皮細胞などに限局されている。
一方、ＣＤＨ６は、いくつかのタイプのヒト成人癌において腫瘍部位で特異的に過剰発現されることが知られている。ヒト腎細胞癌、特に腎淡明細胞癌では、ＣＤＨ６発現と予後不良との相関や、腫瘍マーカーとしての利用可能性が報告されている（非特許文献６、非特許文献７）。ＣＤＨ６の高発現は、ヒト卵巣癌に関しても報告されている（非特許文献８）。また、ＣＤＨ６がヒト甲状腺癌の上皮間葉転換に関与することが報告されている（非特許文献９）。また、ＣＤＨ６は、ヒト胆管癌及びヒト小細胞肺癌でも発現していることが報告されている（非特許文献１２、１３）。
癌は死亡原因において上位に位置する。癌患者数は人口の高齢化と共に増加することが予想されているが、未だ治療ニーズは充分に満たされていない。従来の化学療法剤は、その選択性の低さから腫瘍細胞だけでなく正常細胞に対しても傷害性を持つことによる副作用や、充分な薬剤量を投与できないことで薬剤の効果を充分に得ることが出来ないことが問題となっている。このため近年では、癌細胞に特徴的な変異や高発現を示す分子、細胞の癌化に関与する特定の分子を標的としたより選択性の高い分子標的薬や抗体医薬の開発が行われている。
さらに、従来の化学療法剤（白金系化学療法など）を用いた一般的な癌治療が、しばしば１又は複数の化学療法剤に抵抗性の癌細胞の出現をもたらすことも大きな問題である。化学療法抵抗性癌細胞は、癌の再燃又は再発を引き起こし、これは癌の広がりの原因である。
抗体は血中安定性が高く、標的抗原に特異的に結合する。これらの理由から、副作用の軽減が期待されており、癌細胞表面に高発現している分子に対する抗体医薬が多数開発されている。抗体の抗原特異的な結合能を利用した技術の一つとして、抗体－薬物コンジュゲート（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ；ＡＤＣ）が挙げられる。ＡＤＣは、癌細胞表面に発現している抗原に結合し、その結合によって抗原を細胞内に内在化できる抗体に、細胞傷害活性を有する薬物を結合させたものである。ＡＤＣは、癌細胞に効率的に薬物を送達できることによって、癌細胞内に薬物を蓄積させ、癌細胞を死滅させることが期待できる（非特許文献１０、特許文献１及び２）。ＡＤＣとして例えば、抗ＣＤ３０モノクローナル抗体にモノメチルアウリスタチンＥを結合させたアドセトリス（商標）（ブレンツキシマブ ベドチン）がホジキンリンパ腫と未分化大細胞リンパ腫の治療薬として認可されている。また、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体にエムタンシンを結合させたカドサイラ（商標）（トラスツズマブ エムタンシン）がＨＥＲ２陽性の進行、再発乳癌の治療に用いられている。
抗腫瘍薬としてのＡＤＣに適した標的抗原の特徴としては、癌細胞表面で特異的に高発現し、正常細胞では低発現又は発現していないこと、細胞内に内在化できること、抗原が細胞表面から分泌されないことなどが挙げられる。抗体の内在化能は標的抗原と抗体の両方の性質に依存する。標的の分子構造から内在化に適した抗原結合部位を推定したり、抗体の結合強度や物性等から容易に内在化能の高い抗体を推測したりすることは困難である。このため、標的抗原に対して高い内在化能を有する抗体を取得することは、有効性の高いＡＤＣを開発する上で重要な課題となっている（非特許文献１１）。
ＣＤＨ６を標的としたＡＤＣとしては、ＣＤＨ６のＥＣドメイン５（ＥＣ５）に特異的に結合する抗ＣＤＨ６抗体にＤＭ４を結合させたＡＤＣが知られている（特許文献３、非特許文献１４及び１５）。
国際公開第２０１４／０５７６８７号 米国特許第２０１６／０２９７８９０号 国際公開第２０１６／０２４１９５号 国際公開第２０１８／２１２１３６号
Ｓｈｉｍｏｙａｍａ Ｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２０６－２２１１，５５，Ｍａｙ １５，１９９５ Ｉｎｏｕｅ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１８３－１９４，１９９７ Ｏｓｔｅｒｈｏｕｔ Ｊ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，６３２－６３９，７１，Ａｕｇ ２５，２０１１ Ｃｈｏ Ｅ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，８０３－８１２，１２５，１９９８ Ｍａｈ Ｓ Ｐ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３８－５３，２２３，２０００ Ｐａｕｌ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２７４１－２７４８，Ｊｕｌｙ １，５７，１９９７ Ｓｈｉｍａｚｕｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，９６３－９６８，１０１（５），Ｓｅｐ．１，２００４ Ｋｏｅｂｅｌ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１７４９－１７６０，５（１２），ｅ２３２，Ｄｅｃ．２００８ Ｇｕｇｎｏｎｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，６６７－６７７，３６，２０１７ Ｐｏｌａｋｉｓ Ｐ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ，３－１９，６８，２０１６ Ｐｅｔｅｒｓ Ｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ，１－２０，３５，２０１５ Ｇｏｅｐｐｅｒｔ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，７８０－７９０，１１（１１），２０１６ Ｙｏｋｏｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０７－２１６，１６１，１，２００２ Ｂｉａｌｕｃｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，１０３０－１０４５，７，９．２０１７． Ｓｃｈｏｆｆｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，５４７－５５６，４４，１０，２０２１．
本開示の目的は、ＡＤＣを用いて癌を治療する治療方法、及び癌を治療するためのＡＤＣを含む医薬品などを提供することである。より具体的には、ＡＤＣは、エキサテカンの誘導体などのトポイソメラーゼＩ阻害剤にリンカーを介して接続された抗カドヘリン－６（ＣＤＨ ６）抗体から構成され、癌は化学療法に抵抗性であり得る。
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意検討を行ったところ、驚くべきことに、本開示のＡＤＣは、優れた抗腫瘍効果及び安全性を示すことを見出した。より具体的には、本発明者らは、抗体が細胞外ドメイン３（本明細書では、ＥＣ３とも呼ばれる）に特異的に結合する抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートが、優れた抗腫瘍効果及び安全性を示すことを見出した。
本開示は、本発明の以下の態様を含む。
［１］癌を治療するための治療方法であって、それを必要とする対象に抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を投与することを含む、治療方法。
［２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［１］に記載の治療方法。
［３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［１］又は［２］に記載の治療方法。
［４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１］～［３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１］～［３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［６］癌が卵巣癌である、［１］～［３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［６］に記載の治療方法。
［８］卵巣癌が転移性である、［６］又は［７］に記載の治療方法。
［９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１］～［８］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１］～［９］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１］～［９］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［１］～［１１］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［１］～［１１］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［１］～［１３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［１］～［１４］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［１］～［１４］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［１］～［１４］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［１］～［１７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１］～［１８］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１］～［１８］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１］～［２０］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１］～［２０］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［１］～［２２］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［２３］に記載の治療方法。
［２５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［２３］に記載の治療方法。
［２６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［２３］に記載の治療方法。
［２７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［２３］～［２６］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１］～［２７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１］～［２７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１］～［２７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１］～［２７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［１］～［３１］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［１］～［３２］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［１］～［３３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［３４］に記載の治療方法。
［３６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［３４］に記載の治療方法。
［３７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［３４］に記載の治療方法。
［３８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［３４］に記載の治療方法。
［３９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［１］～［３８］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［３９］に記載の治療方法。
［４１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［３９］に記載の治療方法。
［４２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［３９］に記載の治療方法。
［４３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療方法。
［４４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療方法。
［４５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出すること及びＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与することを含む、［１］～［４４］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１］～［４５］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１］～［４５］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［１］～［４７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４９］白金系薬物がカルボプラチンである、［１］～［４７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［５０］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［１］～［４７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［５１］本明細書に開示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含む、癌の治療剤。
［５２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［５１］に記載の治療剤。
［５３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［５１］又は［５２］に記載の治療剤。
［５４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［５１］～［５３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［５５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［５１］～［５３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［５６］癌が卵巣癌である、［５１］～［５３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［５７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［５６］に記載の治療剤。
［５８］卵巣癌が転移性である、［５６］又は［５７］に記載の治療剤。
［５９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［５１］～［５８］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［５１］～［５９］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［５１］～［５９］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［５１］～［６１］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［５１］～［６１］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［５１］～［６３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［５１］～［６４］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［５１］～［６４］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［５１］～［６４］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［５１］～［６７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［５１］～［６８］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［５１］～［６８］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［５１］～［７０］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［５１］～［７０］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［５１］～［７２］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［７３］に記載の治療剤。
［７５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［７３］に記載の治療剤。
［７６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［７３］に記載の治療剤。
［７７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［７３］～［７６］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［５１］～［７７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［５１］～［７７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［５１］～［７７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［５１］～［７７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［５１］～［８１］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［５１］～［８２］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［５１］～［８３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［８４］に記載の治療剤。
［８６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［８４］に記載の治療剤。
［８７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［８４］に記載の治療剤。
［８８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［８４］に記載の治療剤。
［８９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［５１］～［８８］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［８９］に記載の治療剤。
［９１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［８９］に記載の治療剤。
［９２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［８９］に記載の治療剤。
［９３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象への投与のための医薬組成物を含む、癌の治療剤であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療剤。
［９４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象への投与のための医薬組成物を含む、癌を治療するための治療剤であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療剤。
［９５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、ＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与する前に、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出する、［５１］～［９４］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［５１］～［９５］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［５１］～［９５］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［５１］～［９７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９９］白金系薬物がカルボプラチンである、［５１］～［９７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［１００］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［５１］～［９７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［１０１］癌の治療に使用するための本明細書に開示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［１０１］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［１０１］又は［１０２］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１０１］～［１０３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１０１］～［１０３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０６］癌が卵巣癌である、［１０１］～［１０３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［１０６］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０８］卵巣癌が転移性である、［１０６］又は［１０７］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１０１］～［１０８］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１０１］～［１０９］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１０１］～［１０９］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［１０１］～［１１１］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［１０１］～［１１１］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［１０１］～［１１３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［１０１］～［１１４］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［１０１］～［１１４］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［１０１］～［１１４］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［１０１］～［１１７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１０１］～［１１８］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１０１］～［１１８］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１０１］～［１２０］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１０１］～［１２０］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［１０１］～［１２２］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［１２３］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［１２３］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［１２３］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［１２３］～［１２６］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１０１］～［１２７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１０１］～［１２７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１０１］～［１２７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１０１］～［１２７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［１０１］～［１３１］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［１０１］～［１３２］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［１０１］～［１３３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［１３４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［１３４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［１３４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［１３４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［１０１］～［１３８］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［１３９］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［１３９］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［１３９］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象において癌を治療するための抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象において癌を治療するための癌を治療するための抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、ＣＤＨ６が検出された試験対象にＡＤＣを投与する前に、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出する、［１０１］～［１４４］のいずれか１つに記載のＡＤＣ。
［１４６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１０１］～［１４５］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１０１］～［１４５］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［１０１］～［１４７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４９］白金系薬物がカルボプラチンである、［１０１］～［１４７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１５０］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［１０１］～［１４７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１５１］本明細書に開示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）又はその塩を活性成分として含み、薬学的に許容される製剤成分を含む、癌を治療するための医薬組成物。
［１５２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［１５１］に記載の医薬組成物。
［１５３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［１５１］又は［１５２］に記載の医薬組成物。
［１５４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１５１］～［１５３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１５５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１５１］～［１５３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１５６］癌が卵巣癌である、［１５１］～［１５３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１５７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［１５６］に記載の医薬組成物。
［１５８］卵巣癌が転移性である、［１５６］又は［１５７］に記載の医薬組成物。
［１５９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１５１］～［１５８］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１５１］～［１５９］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１５１］～［１５９］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［１５１］～［１６１］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［１５１］～［１６１］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［１５１］～［１６３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［１５１］～［１６４］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［１５１］～［１６４］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［１５１］～［１６４］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［１５１］～［１６７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１５１］～［１６８］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１５１］～［１６８］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１５１］～［１７０］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１５１］～［１７０］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［１５１］～［１７２］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［１７３］に記載の医薬組成物。
［１７５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［１７３］に記載の医薬組成物。
［１７６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［１７３］に記載の医薬組成物。
［１７７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［１７３］～［１７６］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１５１］～［１７７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１５１］～［１７７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１５１］～［１７７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１５１］～［１７７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［１５１］～［１８１］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［１５１］～［１８２］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［１５１］～［１８３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［１８４］に記載の医薬組成物。
［１８６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［１８４］に記載の医薬組成物。
［１８７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［１８４］に記載の医薬組成物。
［１８８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［１８４］に記載の医薬組成物。
［１８９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［１５１］～［１８８］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［１８９］に記載の医薬組成物。
［１９１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［１８９］に記載の医薬組成物。
［１９２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［１８９］に記載の医薬組成物。
［１９３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象において癌を治療するための医薬組成物であって、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、医薬組成物。
［１９４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象において癌を治療するための医薬組成物であって、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、医薬組成物。
［１９５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、ＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与する前に、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出する、［１５１］～［１９４］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１５１］～［１９５］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１５１］～［１９５］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［１５１］～［１９７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９９］白金系薬物がカルボプラチンである、［１５１］～［１９７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［２００］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［１５１］～［１９７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［２０１］癌を治療するための医薬の製造における、本明細書に開示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の使用。
［２０２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［２０１］に記載の使用。
［２０３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［２０１］又は［２０２］に記載の使用。
［２０４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［２０１］～［２０３］のいずれか１つに記載の使用。
［２０５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［２０１］～［２０３］のいずれか１つに記載の使用。
［２０６］癌が卵巣癌である、［２０１］～［２０３］のいずれか１つに記載の使用。
［２０７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［２０６］に記載の使用。
［２０８］卵巣癌が転移性である、［２０６］又は［２０７］に記載の使用。
［２０９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［２０１］～［２０８］のいずれか１つに記載の使用。
［２１０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［２０１］～［２０９］のいずれか１つに記載の使用。
［２１１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［２０１］～［２０９］のいずれか１つに記載の使用。
［２１２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［２０１］～［２１１］のいずれか１つに記載の使用。
［２１３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［２０１］～［２１１］のいずれか１つに記載の使用。
［２１４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［２０１］～［２１３］のいずれか１つに記載の使用。
［２１５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［２０１］～［２１４］のいずれか１つに記載の使用。
［２１６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［２０１］～［２１４］のいずれか１つに記載の使用。
［２１７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［２０１］～［２１４］のいずれか１つに記載の使用。
［２１８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［２０１］～［２１７］のいずれか１つに記載の使用。
［２１９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［２０１］～［２１８］のいずれか１つに記載の使用。
［２２０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［２０１］～［２１８］のいずれか１つに記載の使用。
［２２１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［２０１］～［２２０］のいずれか１つに記載の使用。
［２２２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［２０１］～［２２０］のいずれか１つに記載の使用。
［２２３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［２０１］～［２２２］のいずれか１つに記載の使用。
［２２４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［２２３］に記載の使用。
［２２５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［２２３］に記載の使用。
［２２６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［２２３］に記載の使用。
［２２７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［２２３］～［２２６］のいずれか１つに記載の使用。
［２２８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［２０１］～［２２７］のいずれか１つに記載の使用。
［２２９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［２０１］～［２２７］のいずれか１つに記載の使用。
［２３０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［２０１］～［２２７］のいずれか１つに記載の使用。
［２３１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［２０１］～［２２７］のいずれか１つに記載の使用。
［２３２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［２０１］～［２３１］のいずれか１つに記載の使用。
［２３３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［２０１］～［２３２］のいずれか１つに記載の使用。
［２３４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［２０１］～［２３３］のいずれか１つに記載の使用。
［２３５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［２３４］に記載の使用。
［２３６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［２３４］に記載の使用。
［２３７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［２３４］に記載の使用。
［２３８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、［２３４］に記載の使用。
［２３９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［２０１］～［２３８］のいずれか１つに記載の使用。
［２４０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［２３９］に記載の使用。
［２４１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［２３９］に記載の使用。
［２４２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［２３９］に記載の使用。
［２４３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための医薬組成物の使用であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、使用。
［２４４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための医薬組成物の使用であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、使用。
［２４５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出すること及びＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与することを含む、［２０１］～［２４４］のいずれか１つに記載の使用。
［２４６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［２０１］～［２４５］のいずれか１つに記載の使用。
［２４７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［２０１］～［２４５］のいずれか１つに記載の使用。
［２４８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［２０１］～［２４７］のいずれか１つに記載の使用。
［２４９］白金系薬物がカルボプラチンである、［２０１］～［２４７］のいずれか１つに記載の使用。
［２５０］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［２０１］～［２４７］のいずれか１つに記載の使用。
いくつかの態様では、開示される治療は、癌を治療するための治療的使用又は治療的方法に広く関しており、それを必要とする対象に抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を投与することを含む。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗体が細胞外ドメイン３に特異的に結合する抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである。
いくつかの態様では、癌は、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される。いくつかの態様では、癌は、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される。いくつかの態様では、癌は卵巣癌である。いくつかの態様では、卵巣癌は、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される。いくつかの態様では、卵巣癌は転移性である。
いくつかの態様では、抗体は、以下の組み合わせ（１）～（４）：（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である。
いくつかの態様では、抗体は、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である。いくつかの態様では、抗体は、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である。
いくつかの態様では、重鎖又は軽鎖は、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている。
いくつかの態様では、重鎖又は軽鎖は、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている。
いくつかの態様では、選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は１～１０の範囲である。いくつかの態様では、選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は２～８の範囲である。いくつかの態様では、選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は５～８の範囲である。いくつかの態様では、選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８の範囲である。
いくつかの態様では、癌は、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する。いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている。いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、１又は複数の化学療法剤の後に投与される。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与された後に投与される。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤は、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤は、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される。
いくつかの態様では、１又は複数の化学療法剤は、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である。いくつかの態様では、１又は複数の化学療法剤は、代謝拮抗物質である。いくつかの態様では、１又は複数の化学療法剤は、白金系薬物である。いくつかの態様では、１又は複数の化学療法剤は、白金系薬物及びタキサンの両方である。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している。
いくつかの態様では、対象は、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する。いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する。いくつかの態様では、対象は、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す。いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月以内に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月未満又は６ヶ月以内に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月未満に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月以内に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月又は約６ヶ月後に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月後に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月以内に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月未満又は６ヶ月以内に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月未満に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月以内に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月又は約６ヶ月後に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月後に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月又は６ヶ月後に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月後に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月又は６ヶ月後に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月後に起こる。
いくつかの態様では、対象には、ＡＤＣが第二の薬物とともに投与される。いくつかの態様では、ＡＤＣは第二の薬物の前に投与される。いくつかの態様では、ＡＤＣは第二の薬物の後に投与される。いくつかの態様では、ＡＤＣは第二の薬物と同時に投与される。
いくつかの態様では、本開示は一般に、白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法に関し、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、本開示は一般に、卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法に関し、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、本開示は一般に、癌を治療するための治療方法に関し、試験対象に由来する生体サンプルを用いて、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出すること及びＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与することを含む。
いくつかの態様では、癌は、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している。いくつかの態様では、癌は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している。
いくつかの態様では、代謝拮抗物質はゲムシタビンである。いくつかの態様では、白金系薬物はカルボプラチンである。いくつかの態様では、白金系薬物はカルボプラチンであり、タキサンはパクリタキセルである。
本発明は、本発明の以下の態様を含む。
［１Ａ］癌を治療するための治療方法であって、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を、それを必要とする対象に投与することを含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、治療方法。
［２Ａ］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１Ａ］に記載の治療方法。
［３Ａ］癌が卵巣癌である、［２Ａ］に記載の治療方法。
［４Ａ］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［３Ａ］に記載の治療方法。
［５Ａ］卵巣癌が転移性である、［３Ａ］に記載の治療方法。
［６Ａ］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１Ａ］に記載の治療方法。
［７Ａ］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１Ａ］に記載の治療方法。
［８Ａ］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１Ａ］に記載の治療方法。
［９Ａ］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１０Ａ］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１１Ａ］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１２Ａ］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［１１Ａ］に記載の治療方法。
［１３Ａ］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［１１Ａ］に記載の治療方法。
［１４Ａ］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［１１Ａ］に記載の治療方法。
［１５Ａ］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１６Ａ］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１７Ａ］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１８Ａ］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１９Ａ］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月以内に起こる、［１７Ａ］に記載の治療方法。
［２０Ａ］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月以内に起こる、［１７Ａ］に記載の治療方法。
［２１Ａ］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［１Ａ］に記載の治療方法。
［２２Ａ］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［２１Ａ］に記載の治療方法。
［２３Ａ］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［２１Ａ］に記載の治療方法。
［２４］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［２１Ａ］に記載の治療方法。
［２５Ａ］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列又は配列番号８８で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列を含む、治療方法。
本開示は、ＡＤＣを用いて癌を治療する治療方法、及び癌を治療するためのＡＤＣを含む医薬品などを提供する。本開示はまた、抗体がＥＣ３に特異的に結合する抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートを用いて、腫瘍退縮効果と安全性を発揮及び維持する両方の優れた抗腫瘍効果を有する化学療法抵抗性癌を治療するための治療方法を提供する。本開示はまた、抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。
図１は、ラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種（クローン番号は、ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又はラットＩｇＧコントロールの、コントロール細胞又はｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３Ｔ細胞に対する結合を調べたフローサイトメトリーの結果を示す。横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。 図２－１は、ラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種（ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又は陰性コントロール抗体ＲａｔＩｇＧ２ｂの、コントロール細胞又は全長ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。 図２－２は、ラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種（ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又はラットＩｇＧコントロールの、コントロール細胞又はＥＣ１欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。 図２－３は、ラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種（ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又はラットＩｇＧコントロールの、コントロール細胞又はＥＣ２欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。 図２－４は、ラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種（ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又はラットＩｇＧコントロールの、コントロール細胞又はＥＣ３欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。 図２－５は、ラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種（ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又はラットＩｇＧコントロールの、コントロール細胞又はＥＣ４欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。 図２－６は、ラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種（ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又はラットＩｇＧコントロールの、コントロール細胞又はＥＣ５欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。 図３は、４種類のヒト腫瘍細胞株（ヒト卵巣腫瘍細胞株ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３，ＰＡ－１，ＥＳ－２及びヒト腎細胞腫瘍細胞株７８６－Ｏ）の細胞膜表面でのＣＤＨ６の発現を評価したフローサイトメトリーの結果を示す。横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。 図４は、４種類のラット抗ＣＤＨ６抗体（ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又はラットＩｇＧコントロールの内在化活性を、タンパク質合成を阻害する毒素（サポリン）を結合させた抗ラットＩｇＧ試薬Ｒａｔ－ＺＡＰ又は陰性コントロールとして毒素を結合していないＧｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｒａｔ ＩｇＧ，Ｆｃ（ｇａｍｍａ）Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃを用いて、ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３細胞及び７８６－Ｏ細胞において評価したグラフを示す。グラフの縦軸は、ＡＴＰ活性（ＲＬＵ）を示す。各グラフの下に、Ｒａｔ－ＺＡＰの代わりに陰性コントロールを添加したウェルの生存細胞数を１００％とした相対生存率として算出された細胞生存率（％）を示す。 図５は、ヒトキメラ抗ＣＤＨ６抗体ｃｈＧ０１９のヒトＣＤＨ６及びサルＣＤＨ６に対する結合を示す。横軸は抗体濃度を示し、縦軸は結合量をＭｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（平均蛍光強度）で示す。 図６－１及び図６－２は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）又は陰性コントロール抗体ヒトＩｇＧ１の、ヒトＣＤＨ６、サルＣＤＨ６、マウスＣＤＨ６、ラットＣＤＨ６に対する結合性を示す。横軸は抗体濃度を示し、縦軸は結合量をＭｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（平均蛍光強度）で示す。 図６－１及び図６－２は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）又は陰性コントロール抗体ヒトＩｇＧ１の、ヒトＣＤＨ６、サルＣＤＨ６、マウスＣＤＨ６、ラットＣＤＨ６に対する結合性を示す。横軸は抗体濃度を示し、縦軸は結合量をＭｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（平均蛍光強度）で示す。 図７－１は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２又は陰性コントロール抗体ｈＩｇＧ１の、コントロール細胞又は全長ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３α細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＡＰＣの蛍光強度を示す。縦軸は細胞数を示す。 図７－２は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２又は陰性コントロール抗体ｈＩｇＧ１の、コントロール細胞又はＥＣ１欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３α細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＡＰＣの蛍光強度を示す。縦軸は細胞数を示す。 図７－３は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２又は陰性コントロール抗体ｈＩｇＧ１の、コントロール細胞又はＥＣ２欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３α細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＡＰＣの蛍光強度を示す。縦軸は細胞数を示す。 図７－４は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２又は陰性コントロール抗体ｈＩｇＧ１の、コントロール細胞又はＥＣ３欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３α細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＡＰＣの蛍光強度を示す。縦軸は細胞数を示す。 図７－５は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２又は陰性コントロールのｈＩｇＧ１の、コントロール細胞又はＥＣ４欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３α細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＡＰＣの蛍光強度を示す。縦軸は細胞数を示す。 図７－６は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２又は陰性コントロールのｈＩｇＧ１の、コントロール細胞又はＥＣ５欠失ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３α細胞に対する結合性を示す。横軸は抗体結合量を表すＡＰＣの蛍光強度を示す。縦軸は細胞数を示す。 図８は、７８６－Ｏ／ｈＣＤＨ６安定発現細胞株及び親細胞株７８６－ＯにおけるヒトＣＤＨ６の発現を調べたフローサイトメトリーの結果を示す。横軸は抗体結合量を表すＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。 図９は、（ａ）ラベル化ＮＯＶ０７１２又は（ｂ）ラベル化Ｈ０１Ｌ０２を用いた、ラベル化していないヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２又は陰性コントロールのｈＩｇＧ１との結合競合アッセイを示す。横軸はラベル化していない抗体の添加時の終濃度を示し、縦軸は結合量をＭｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（平均蛍光強度）で示す。 図１０－１は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２及び陰性コントロール抗体の内在化活性を、タンパク質合成を阻害する毒素（サポリン）を結合させた抗ヒトＩｇＧ試薬Ｈｕｍ－ＺＡＰ又は陰性コントロールとして毒素を結合していないＦ（ａｂ’）２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ，Ｆｃ（ｇａｍｍａ）Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃを用いて、ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３細胞において評価したグラフを示す。グラフの縦軸は、ＡＴＰ活性（ＲＬＵ）を示す。各グラフの下に、Ｈｕｍ－ＺＡＰの代わりに陰性コントロールを添加したウェルの生存細胞数を１００％とした相対生存率として算出された細胞生存率（％）を示す。 図１０－２は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２及び陰性コントロール抗体の内在化活性を、タンパク質合成を阻害する毒素（サポリン）を結合させた抗ヒトＩｇＧ試薬Ｈｕｍ－ＺＡＰ又は陰性コントロールとして毒素を結合していないＦ（ａｂ’）２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ，Ｆｃ（ｇａｍｍａ）Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃを用いて、７８６－Ｏ細胞において評価したグラフを示す。グラフの縦軸は、ＡＴＰ活性（ＲＬＵ）を示す。各グラフの下に、Ｈｕｍ－ＺＡＰの代わりに陰性コントロールを添加したウェルの生存細胞数を１００％とした相対生存率として算出された細胞生存率（％）を示す。 図１０－３は、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２及び陰性コントロール抗体の内在化活性を、タンパク質合成を阻害する毒素（サポリン）を結合させた抗ヒトＩｇＧ試薬Ｈｕｍ－ＺＡＰ又は陰性コントロールとして毒素を結合していないＦ（ａｂ’）２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ，Ｆｃ（ｇａｍｍａ）Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃを用いて、ＰＡ－１細胞において評価したグラフを示す。グラフの縦軸は、ＡＴＰ活性（ＲＬＵ）を示す。各グラフの下に、Ｈｕｍ－ＺＡＰの代わりに陰性コントロールを添加したウェルの生存細胞数を１００％とした相対生存率として算出された細胞生存率（％）を示す。 図１１は、ヒト化ｈＧ０１９－薬物コンジュゲート４種（Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄ、Ｈ０２Ｌ０２－ＤＸｄ、Ｈ０２Ｌ０３－ＤＸｄ及びＨ０４Ｌ０２－ＤＸｄ）、又はＮＯＶ０７１２－ＤＭ４のＰＡ－１細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞増殖抑制活性評価を示す。横軸は抗体－薬物コンジュゲートの濃度を示し、縦軸は細胞生存率（％）を示す。 図１２は、ヒト化ｈＧ０１９－薬物コンジュゲート４種（Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄ、Ｈ０２Ｌ０２－ＤＸｄ、Ｈ０２Ｌ０３－ＤＸｄ及びＨ０４Ｌ０２－ＤＸｄ）、又はＮＯＶ０７１２－ＤＭ４のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。ＣＤＨ６陽性ヒト腎細胞腫瘍細胞株７８６－Ｏを免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いて評価した。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲は標準誤差（ＳＥ）値を示す。 図１３は、ヒト化ｈＧ０１９－薬物コンジュゲートＨ０１Ｌ０２－ＤＸｄ又はＮＯＶ０７１２－ＤＭ４又はＮＯＶ０７１２－ＤＸｄのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。ＣＤＨ６陽性ヒト卵巣腫瘍細胞株ＰＡ－１を免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いて評価した。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す。 図１４は、ヒト化ｈＧ０１９－薬物コンジュゲートＨ０１Ｌ０２－ＤＸｄ又はＮＯＶ０７１２－ＤＭ４のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。ＣＤＨ６陽性ヒト卵巣腫瘍細胞株ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３を免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いて評価した。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す。 図１５は、ヒト化ｈＧ０１９－薬物コンジュゲートＨ０１Ｌ０２－ＤＸｄ又はＮＯＶ０７１２－ＤＭ４のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。ＣＤＨ６陽性ヒト腎細胞腫瘍細胞株７８６－Ｏを免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いて評価した。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す。 図１６は、ヒト化ｈＧ０１９－薬物コンジュゲートＨ０１Ｌ０２－ＤＸｄ又はＮＯＶ０７１２－ＤＭ４のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。ＣＤＨ６陰性ヒト卵巣腫瘍細胞株ＥＳ－２を免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いて評価した。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す。 図１７は、カルボプラチン及びパクリタキセルの長期治療後の抗体－薬物コンジュゲート（１）のインビボ抗腫瘍効果を示す。ＣＤＨ６陽性ヒト卵巣腫瘍細胞株ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３を免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いて評価した。カルボプラチン５０ｍｇ／ｋｇ及びパクリタキセル３０ｍｇ／ｋｇ（白三角）の９回の投与後、推定腫瘍体積が１５０ｍｍ３～５００ｍｍ３の範囲内であったマウスを選択し、抗体－薬物コンジュゲート（１）１０ｍｇ／ｋｇ（黒三角）の投与を受けた。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す（Ｖｅｈｉｃｌｅ群：Ｎ＝６。治療群：Ｎ＝５）。 図１８は、抗体－薬物コンジュゲート（１）及びカルボプラチンのそれぞれの単回投与群、並びに抗体－薬物コンジュゲート（１）及びカルボプラチンの併用投与群における、ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３細胞を皮下移植したマウスにおける腫瘍増殖抑制効果を示す図である。 図１９は、抗体－薬物コンジュゲート（１）及びカルボプラチンのそれぞれの単回投与群、並びに抗体－薬物コンジュゲート（１）及びカルボプラチンの併用投与群における、ＯＶ－９０細胞を皮下移植したマウスにおける腫瘍増殖抑制効果を示す図である。 図２０は、抗体－薬物コンジュゲート（１）の単回投与群、カルボプラチン及びパクリタキセルの併用投与群、並びに抗体－薬物コンジュゲート（１）、カルボプラチン及びパクリタキセルの併用投与群における、ＯＶ－９０細胞を皮下移植したマウスにおける腫瘍増殖抑制効果を示す図である。 図２１は、抗体－薬物コンジュゲート（１）及びゲムシタビンのそれぞれの単回投与群、並びに抗体－薬物コンジュゲート（１）及びゲムシタビンの併用投与群における、ＯＶ－９０細胞を皮下移植したマウスにおける腫瘍増殖抑制効果を示す図である。
以下、本発明を実施するための好適な実施形態について図面を参照しながら説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
本明細書中、「癌」と「腫瘍」は同じ意味に用いられる。
本明細書中、「遺伝子」という語には、ＤＮＡのみならずそのｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ及びそのｃＲＮＡも含まれる。
本明細書中、「ポリヌクレオチド」又は「ヌクレオチド」は、核酸と同じ意味で用いており、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プローブ、オリゴヌクレオチド、及びプライマーも含まれる。本明細書中、「ポリヌクレオチド」と「ヌクレオチド」は、特に指定されない限り、交換可能に使用され得る。
本明細書中、「ポリペプチド」と「タンパク質」は交換可能に使用され得る。
本明細書中、「細胞」には、動物個体内の細胞、培養細胞も含む。
本明細書中、「ＣＤＨ６」は、ＣＤＨ６タンパク質と同じ意味で使用され得る。本明細書中、ヒトＣＤＨ６を「ｈＣＤＨ６」と記載する場合がある。
本明細書では、「細胞傷害活性」という用語は、任意の所与の方法で細胞に病理学的変化が引き起こされることを意味するために使用される。この用語は、直接的な外傷にとどまらず、ＤＮＡの切断や塩基の二量体の形成、染色体の切断、細胞分裂装置の損傷、各種酵素活性の低下などあらゆる細胞の構造や機能上の損傷を引き起こすことをいう。
本明細書中、「細胞内で毒性を発揮する」とは、何らかの形で、細胞内で毒性を示すことをいう。この用語は、直接的な外傷にとどまらず、ＤＮＡの切断や塩基の二量体の形成、染色体の切断、細胞分裂装置の損傷、各種酵素活性の低下、細胞増殖因子の作用の抑制などあらゆる細胞の構造や機能、代謝に影響をもたらすことをいう。
本明細書中、「抗体の機能性断片」とは、「抗体の抗原結合断片」とも呼ばれ、抗原との結合活性を有する抗体の部分断片を意味しており、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄｉａｂｏｄｙ、線状抗体及び抗体断片より形成された多特異性抗体等を含む。また、Ｆ（ａｂ’）２を還元条件下で処理した抗体の可変領域の一価の断片であるＦａｂ’も抗体の抗原結合断片に含まれる。但し、抗体の抗原結合断片は、抗原との結合能を有している限りこれらの分子に限定されない。また、これらの抗原結合断片には、抗体蛋白質の全長分子を適当な酵素で処理したもののみならず、遺伝子工学的に改変された抗体遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された蛋白質も含まれる。
本明細書中、「エピトープ」とは、特定の抗ＣＤＨ６抗体の結合するＣＤＨ６の部分ペプチド又は部分立体構造を意味する。上記のＣＤＨ６の部分ペプチドであるエピトープは免疫アッセイ法等当業者にはよく知られている方法によって、決定することができる。まず、抗原の様々な部分構造を作製する。部分構造の作製にあたっては、公知のオリゴヌクレオチド合成技術を用いることができる。例えば、ＣＤＨ６のＣ末端又はＮ末端から適当な長さで順次短くした一連のポリペプチドが、当業者に周知の遺伝子組み換え技術を用いて作製される。その後、それらに対する抗体の反応性を検討し、大まかな認識部位を決定する。その後に、更に短いペプチドを合成してそれらのペプチドとの反応性を検討することによって、エピトープを決定することができる。また、複数の細胞外ドメインからなる膜タンパク質に結合する抗体が、複数のドメインからなる立体構造をエピトープとしている場合は、特定の細胞外ドメインのアミノ酸配列を改変することによって、立体構造を改変することによってどのドメインと結合するかを決定することができる。特定の抗体の結合する抗原の部分立体構造であるエピトープは、Ｘ線構造解析によって抗体と隣接する抗原のアミノ酸残基を特定することによっても決定することができる。
本明細書中、「同一のエピトープに結合する」とは、共通のエピトープに結合する抗体を意味している。第一の抗体の結合する部分ペプチド又は部分立体構造に第二の抗体が結合すれば、第一の抗体と第二の抗体が同一のエピトープに結合すると判定することができる。あるいは、第一の抗体の抗原に対する結合に第二の抗体が競合する（即ち、第二の抗体が第一の抗体と抗原の結合を妨げる）ことを確認することによって、具体的なエピトープの配列又は構造が決定されていなくても、第一の抗体と第二の抗体の同一のエピトープに結合すると判定することができる。本明細書中、「同一のエピトープに結合する」とは、第一の抗体と第二の抗体が、当該判定方法のいずれか一方又は両方により、共通のエピトープに結合すると判定された場合をいう。第一の抗体と第二の抗体が同一のエピトープに結合し、かつ第一の抗体が抗腫瘍活性や内在化活性等の特殊な効果を有する場合、第二の抗体も同様の活性を有することが期待できる。
本明細書中、「ＣＤＲ」とは、相補性決定領域（ＣＤＲ；Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｒｅｇｉｏｎ）を意味する。抗体分子の重鎖及び軽鎖にはそれぞれ３箇所のＣＤＲがあることが知られている。そのようなＣＤＲは超可変領域とも呼ばれ、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域に位置する。これらの領域は、特に可変性の高い一次構造を有し、重鎖及び軽鎖のそれぞれにおいて、ポリペプチド鎖の一次構造上の３つの部位に分離されている。本明細書中においては、抗体のＣＤＲについて、重鎖のＣＤＲを重鎖アミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３と表記し、軽鎖のＣＤＲを軽鎖アミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３と表記する。これらの部位は立体構造の上で相互に近接し、結合する抗原に対する特異性を決定している。
本明細書中、「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」とは、市販のハイブリダイゼーション溶液ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）中、６８℃でハイブリダイズすること、又はＤＮＡを固定したフィルターを用いて０．７～１．０ＭのＮａＣｌ存在下６８℃でハイブリダイゼーションを行った後、０．１～２倍濃度のＳＳＣ溶液（１倍濃度ＳＳＣとは１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸ナトリウムからなる）を用い、６８℃で洗浄することによって同定することができる条件又はそれと同等の条件でハイブリダイズすることをいう。
本明細書中、「１～数個」とは、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個又は１～２個を意味する。
本明細書において、用語「抵抗性（ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）」は、抗癌剤による治療に対して非応答性を有することを意味するために使用される。この用語は、「難治性（ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ）」、「非応答（ｎｏｎ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ）」、又は「無応答（ｕｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ）」と表現することもできる。さらに、この用語は、非応答特性のために腫瘍増殖を防ぐことができないので、「不耐性（ｉｎｔｏｌｅｒａｎｔ）」と表現することもできる。
本明細書において、「抵抗性」とは、「抗癌剤による治療により癌に獲得された抵抗性を有する」ことであってもよく、「抗癌剤による治療とは独立して癌に固有の抵抗性を有する」ことであってもよい。
本明細書において、用語「化学療法に抵抗性」は、化学療法による治療に対して非応答性を有することを意味するために使用される。
本明細書において、用語「化学療法レジメンに抵抗性」は、化学療法レジメンに従って行われた化学療法に対して非応答性を有することを意味するために使用される。
本明細書において、用語「白金系化学療法に抵抗性」は、白金系化学療法による治療に対して非応答性を有することを意味するために使用される。
本明細書では、「化学療法」という用語は、癌を治療するために使用される１又は複数の化学療法剤を使用する療法を意味するために使用される。
本明細書では、「化学療法剤」という用語は、癌を治療するために使用される化学療法剤を意味するために使用される。化学療法剤には、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン）、代謝拮抗物質（例えば、ゲムシタビン、メトトレキサート、フルオロウラシル、ドキシフルリジン、カペシタビン、フロクスウリジン、シタラビン、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン）、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド、テニポシド）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン）、白金錯体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン）、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、アントラセンジオン（例えば、ミトキサントロン）、置換尿素（例えば、ヒドロキシ尿素）、メチルヒドラジン（例えば、塩酸プロカルバジン）、ビタミンＡ代謝産物（例えば、トレチノイン）が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書では、「白金系化学療法」という用語は、他の１又は複数の化学療法剤を伴う／伴わない１又は複数の白金系薬物を使用する癌療法を意味するために使用される。
本明細書において、「白金系薬物」という用語は、癌の治療に使用される白金錯体を意味するために使用される。白金系薬物には、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書において、「癌の再発」という用語は、癌が検出できなかった期間の後に、癌が原発腫瘍と同じ場所又は体内の別の場所に戻ることを意味するために使用される。この用語は、以下の参考文献の「再発」に基づいて定義される。
ＮＣＩ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ、「ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ」、ＮＣＩ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｅｒｍｓ［オンライン］。Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ［検索：２０２２－０９－０６］。＜ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ／ｃａｎｃｅｒ－ｔｅｒｍｓ／ｄｅｆ／ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ＞から取得。
本明細書では、「化学療法レジメン」という用語は、薬物（複数可）、投与量、頻度などを定義する化学療法の治療計画を意味するために使用される。
本明細書において、「完全奏効（ＣＲ）」という用語は、治療に応答して消失した癌のすべての徴候を意味するために使用される。「完全奏効（ＣＲ）」は、必ずしも癌が治癒したことを意味しない。この用語は「完全寛解」と表現することもできる。この用語は、以下の参考文献の「完全奏効」に基づいて定義される。
ＮＣＩ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ、「ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ」、ＮＣＩ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｅｒｍｓ［オンライン］。Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ［検索：２０２２－０９－０６］。＜ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ／ｃａｎｃｅｒ－ｔｅｒｍｓ／ｄｅｆ／ｃｏｍｐｌｅｔｅ－ｒｅｓｐｏｎｓｅ＞から取得。
本明細書において、「部分奏効（ＰＲ）」という用語は、治療に反応して体内の腫瘍の大きさ又は癌の程度が減少することを意味するために使用される。この用語は「部分寛解」と表現することもできる。この用語は、以下の参考文献の「部分奏効」に基づいて定義される。
ＮＣＩ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ、「ｐａｒｔｉａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ」、ＮＣＩ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｅｒｍｓ［オンライン］。Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ［検索：２０２２－０９－０６］。＜ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ／ｃａｎｃｅｒ－ｔｅｒｍｓ／ｄｅｆ／ｐａｒｔｉａｌ－ｒｅｓｐｏｎｓｅ＞から取得。
本明細書において、「安定疾患（ＳＤ）」という用語は、癌の程度又は重症度が減少も増加もしていないことを意味するために使用される。この用語は、以下の参考文献の「部分奏効」に基づいて定義される。
ＮＣＩ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ、「ｓｔａｂｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ」、ＮＣＩ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｅｒｍｓ［オンライン］。Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ［検索：２０２２－０９－０６］。＜ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ／ｃａｎｃｅｒ－ｔｅｒｍｓ／ｄｅｆ／ｓｔａｂｌｅ－ｄｉｓｅａｓｅ＞から取得。
１．ＣＤＨ６
カドヘリンは、細胞膜表面に存在する糖タンパク質で、カルシウムイオン依存的にＮ末端側の細胞外ドメイン同士が結合することで、細胞間接着分子として、また細胞間相互作用を担うシグナル分子として機能する。カドヘリンスーパーファミリーの内、クラシックカドヘリンに分類される分子群は、細胞外に５個の細胞外ドメイン（ＥＣドメイン）と１個の膜貫通領域、及び細胞内ドメインから構成される１回膜貫通タンパク質である。
ＣＤＨ６（Ｃａｄｈｅｒｉｎ－６）は、タイプＩＩカドヘリンファミリーに分類される、７９０アミノ酸からなる１回膜貫通タンパク質であり、Ｎ末端側を細胞外、Ｃ末端側を細胞内に持つ。ヒトＣＤＨ６遺伝子は１９９５年に初めてクローニングされ（非特許文献１）、ＮＭ＿００４９３２、ＮＰ＿００４９２３（ＮＣＢＩ）等のアクセッション番号により参照可能である。
本発明で用いられるＣＤＨ６タンパク質は、ヒト又は非ヒト哺乳動物（例えば、ラット、マウス又はサル）のＣＤＨ６発現細胞から直接精製して用いることもできるし、前述の細胞の細胞膜画分を調製してＣＤＨ６タンパク質として用いることもできる。あるいは、ＣＤＨ６は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成することによって、又は遺伝子操作によって宿主細胞にＣＤＨ６を産生させることによっても得ることができる。遺伝子操作では、具体的には、ＣＤＨ６ ｃＤＮＡを発現可能なベクターにＣＤＨ６ ｃＤＮＡを組み込んだ後、転写と翻訳に必要な酵素、基質及びエネルギー物質を含む溶液中でＣＤＨ６を合成する、あるいは他の原核生物、又は真核生物の宿主細胞を形質転換させることによってＣＤＨ６を発現させることによって、ＣＤＨ６タンパク質を得ることが出来る。また、上記の遺伝子操作によるＣＤＨ６発現細胞、あるいはＣＤＨ６を発現している細胞株をＣＤＨ６タンパク質として使用することも可能である。また、ＣＤＨ６のｃＤＮＡを組み込んだ発現ベクターを直接被免疫動物に投与し被免疫動物の体内でＣＤＨ６を発現させることもできる。
また、上記ＣＤＨ６のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が置換、欠失及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、ＣＤＨ６タンパク質と同等の生物活性を有するタンパク質も用語「ＣＤＨ６」に含まれる。
ヒトＣＤＨ６タンパク質は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する。ヒトＣＤＨ６タンパク質の細胞外領域は、配列番号１に記載のアミノ酸配列の５４～１５９番目のアミノ酸配列を有する細胞外ドメイン１（本明細書中、ＥＣ１とも称する）、配列番号１に記載のアミノ酸配列の１６０～２６８番目のアミノ酸配列を有する細胞外ドメイン２（本明細書中、ＥＣ２とも称する。）、配列番号１に記載のアミノ酸配列の２６９～３８３番目のアミノ酸配列を有する細胞外ドメイン３（本明細書中、ＥＣ３とも称する。）、配列番号１に記載のアミノ酸配列の３８４～４８６番目のアミノ酸配列を有する細胞外ドメイン４（本明細書中、ＥＣ４とも称する。）、及び配列番号１に記載のアミノ酸配列の４８７～６０８番目のアミノ酸配列を有する細胞外ドメイン５（本明細書中、ＥＣ５とも称する。）から構成される。ＥＣ１～ＥＣ５のアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号２～６とする（表１）。
２．抗ＣＤＨ６抗体の製造
本発明の抗ＣＤＨ６抗体の一例として、配列番号４に示すアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を認識し、かつ内在化活性を有する抗ＣＤＨ６抗体を挙げることができる。本発明の抗ＣＤＨ６抗体の一例として、配列番号４に示すアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を特異的に認識し、かつ内在化活性を有する抗ＣＤＨ６抗体を挙げることができる。本発明の抗ＣＤＨ６抗体の一例として、配列番号４に示すアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を認識し、かつ内在化活性を有する抗ＣＤＨ６抗体を挙げることができる。本発明の抗ＣＤＨ６抗体の一例として、配列番号４に示すアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を特異的に認識し、かつ内在化活性を有する抗ＣＤＨ６抗体を挙げることができる。抗体が「配列番号４に示すアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を特異的に認識」する又は「ＥＣ３ドメインを特異的に認識」するとは、抗体が、ＣＤＨ６のＥＣ３ドメインをＣＤＨ６の他の細胞外ドメインと比較して強く認識する又は強く結合することをいう。
本発明の抗ＣＤＨ６抗体は、任意の種に由来し得る。種の好ましい例には、ヒト、サル、ラット、マウス及びウサギが含まれ得る。本発明の抗ＣＤＨ６抗体がヒト以外の種に由来する場合、周知の技術により抗ＣＤＨ６抗体をキメラ化又はヒト化することが好ましい。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。
本発明の抗ＣＤＨ６抗体は、腫瘍細胞を標的とすることができる抗体である。具体的には、本発明の抗ＣＤＨ６抗体は、腫瘍細胞を認識できる特性、腫瘍細胞に結合できる特性、及び／又は腫瘍細胞内に取り込まれて内在化する特性等を備えている。したがって、本発明の抗ＣＤＨ６抗体と抗腫瘍活性を有する化合物を、リンカーを介して結合させて抗体－薬物コンジュゲートとすることができる。
抗体の腫瘍細胞への結合性は、フローサイトメトリーを用いて確認できる。腫瘍細胞内への抗体の取り込みは、（１）治療抗体に結合する二次抗体（蛍光標識）を用いて細胞内に取り込まれた抗体を蛍光顕微鏡で可視化するアッセイ（Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，２００８，１５，７５１－７６１）、（２）治療抗体に結合する二次抗体（蛍光標識）を用いて細胞内に取り込まれた蛍光量を測定するアッセイ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ Ｖｏｌ．１５，５２６８－５２８２，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００４）又は（３）治療抗体に結合するイムノトキシンを用いて、細胞内に取り込まれると毒素が放出されて細胞増殖が抑制されるというＭａｂ－ＺＡＰアッセイ（Ｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２８：１６２－１６５，Ｊａｎｕａｒｙ ２０００）を用いて確認できる。イムノトキシンとしては、ジフテテリア毒素の触媒領域とプロテインＧとのリコンビナント複合タンパク質タンパク質も使用可能である。
本明細書で言う「高い内在化能」とは、当該抗体とサポリン標識抗ラットＩｇＧ抗体を投与したＣＤＨ６発現細胞の生存率（抗体未添加時の細胞生存率を１００％とした相対率で表したもの）が、好ましくは７０％以下、より好ましくは６０％以下であることを意味する。
本発明の抗腫瘍抗体－薬物コンジュゲートは、抗腫瘍効果を発揮するコンジュゲート化合物を含む。したがって、抗体自体が抗腫瘍効果を有することが好ましいが、必須ではない。抗腫瘍性化合物の細胞傷害性を腫瘍細胞において特異的及び／又は選択的に発揮させる目的からは、抗体が内在化して腫瘍細胞内に移行する性質のあることが重要であり、好ましい。
抗ＣＤＨ６抗体は、この分野で通常実施される方法を用いて、抗原となるポリペプチドを動物に免疫し、生体内に産生される抗体を採取、精製することによって得ることができる。立体構造を保持したＣＤＨ６を抗原として用いることが好ましい。そのような方法として、ＤＮＡ免疫法を挙げることができる。
抗原の由来はヒトに限定されず、マウス、ラット等のヒト以外の動物に由来する抗原を動物に免疫することもできる。この場合には、取得された異種抗原に結合する抗体とヒト抗原との交差性を試験することによって、ヒトの疾患に適用可能な抗体を選別できる。
また、公知の方法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）２５６，４９５－４９７、Ｋｅｎｎｅｔ，Ｒ．ｅｄ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，３６５－３６７，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８０））に従って、抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞とミエローマ細胞とを融合させることによってハイブリドーマを樹立し、モノクローナル抗体を得ることもできる。
以下、具体的にＣＤＨ６に対する抗体の取得方法を説明する。
（１）抗原の調製
抗原は抗原タンパク質をコードする遺伝子を遺伝子操作によって宿主細胞に産生させることによって得ることができる。具体的には、抗原遺伝子を発現可能なベクターを作製し、これを宿主細胞に導入して該遺伝子を発現させ、発現した抗原を精製すればよい。上記の遺伝子操作による抗原発現細胞、あるいは抗原を発現している細胞株を動物に免疫する方法を用いることによっても抗体を取得できる。
また、抗原タンパク質を用いずに、抗原タンパク質のｃＤＮＡを発現ベクターに組み込んで被免疫動物に投与し、被免疫動物の体内で抗原タンパク質を発現させ、抗原タンパク質に対する抗体を産生させることによっても抗体を取得することができる。
（２）抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体の製造
本発明で用いられる抗ＣＤＨ６抗体は、特に限定されない。例えば、本願の配列表で示されたアミノ酸配列で特定される抗体を好適に使用することができる。本発明で使用される抗ＣＤＨ６抗体は、以下の特性を有する抗体であることが望ましい。
（１）以下の特性を有する抗体：
（ａ）ＣＤＨ６に特異的に結合する、及び
（ｂ）ＣＤＨ６に結合することにより、ＣＤＨ６発現細胞に内在化する活性を有する；
（２）ＣＤＨ６がヒトＣＤＨ６である、上記（１）に記載の抗体；又は
（３）ヒトＣＤＨ６のＥＣ３を特異的に認識し、内在化活性を有する、上記（１）又は（２）に記載の抗体。
本発明のＣＤＨ６に対する抗体の取得方法は、抗ＣＤＨ６抗体を取得できる限りにおいて、特に制限されない。高次構造を保持したＣＤＨ６を抗原として用いることが好ましい。
好ましい抗体の取得方法の一例としてＤＮＡ免疫法を挙げることができる。ＤＮＡ免疫法とは、抗原発現プラスミドをマウスやラットなどの動物個体に遺伝子導入し、抗原を個体内で発現させることによって、抗原に対する免疫を誘導する手法である。遺伝子導入の手法には、直接プラスミドを筋肉に注射する方法や、リポソームやポリエチレンイミンなどの導入試薬を静脈注射する方法、ウイルスベクターを用いる手法、プラスミドを付着させた金粒子をＧｅｎｅ Ｇｕｎにより射ち込む手法、急速に大量のプラスミド溶液を静脈注射するＨｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ法などが存在する。発現プラスミドの筋注による遺伝子導入法に関して、発現量を向上させる手法として、プラスミドを筋注後、同部位にエレクトロポレーションを加えるｉｎ ｖｉｖｏ ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎという技術が知られている（Ａｉｈａｒａ Ｈ，Ｍｉｙａｚａｋｉ Ｊ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９８ Ｓｅｐ；１６（９）：８６７－７０ ｏｒ Ｍｉｒ ＬＭ，Ｂｕｒｅａｕ ＭＦ，Ｇｅｈｌ Ｊ，Ｒａｎｇａｒａ Ｒ，Ｒｏｕｙ Ｄ，Ｃａｉｌｌａｕｄ ＪＭ，Ｄｅｌａｅｒｅ Ｐ，Ｂｒａｎｅｌｌｅｃ Ｄ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ Ｂ，Ｓｃｈｅｒｍａｎ Ｄ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１９９９ Ａｐｒ １３；９６（８）：４２６２－７）。本手法はプラスミドの筋注前にヒアルロニダーゼで筋肉を処理することにより、さらに発現量が向上する（ＭｃＭａｈｏｎ ＪＭ１，Ｓｉｇｎｏｒｉ Ｅ，Ｗｅｌｌｓ ＫＥ，Ｆａｚｉｏ ＶＭ，Ｗｅｌｌｓ ＤＪ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００１ Ａｕｇ；８（１６）：１２６４－７０）。また、ハイブリドーマの作製は公知の方法によって行うことができ、例えば、Ｈｙｂｒｉｍｕｎｅ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃｙｔｏ Ｐｕｌｓｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて行うこともできる。
モノクローナル抗体を得る具体例としては、以下の手順を挙げることができる。
（ａ）ＣＤＨ６のｃＤＮＡを発現ベクター（例えば、ｐｃＤＮＡ３．１：Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に組み込み、エレクトロポレーションや遺伝子銃等の方法によって、そのベクターを直接被免疫動物（例えば、ラットやマウス）に投与することによって、動物体内においてＣＤＨ６を発現させることによって、免疫反応を誘起させることができる。エレクトロポレーション等によるベクターの投与は、必要に応じて、抗体価を高めるために１又は複数回、好ましくは複数回行ってもよい。
（ｂ）免疫応答が誘起された上述の動物からの、抗体産生細胞を含む組織（例えば、リンパ節）の採取；
（ｃ）ミエローマ細胞（以下「ミエローマ」という）（例えば、マウスミエローマＳＰ２／０－ａｇ１４細胞）の調製；
（ｄ）抗体産生細胞とミエローマとの間の細胞融合；
（ｅ）目的とする抗体を産生するハイブリドーマ群の選別；
（ｆ）単一細胞クローンへの分割（クローニング）；
（ｇ）場合によっては、モノクローナル抗体を大量に製造するのためのハイブリドーマの培養、又はハイブリドーマを移植した動物の飼育；及び／又は
（ｈ）産生されたモノクローナル抗体の生理活性（内在化活性）及び結合特異性の検討、又は標識試薬としての抗体の特性の検討。
ここで用いられる抗体価の測定法としては、例えば、フローサイトメトリー又はＣｅｌｌ－ＥＬＩＳＡ法を挙げることができるがこれらの方法に制限されない。
このようにして樹立されたハイブリドーマ株の例としては、抗ＣＤＨ６抗体産生ハイブリドーマｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１を挙げることができる。なお、本明細書中においては、抗ＣＤＨ６抗体産生ハイブリドーマｒＧ０１９が産生する抗体を、「ｒＧ０１９抗体」又は単に「ｒＧ０１９」と記載し、ハイブリドーマｒＧ０５５が産生する抗体を、「ｒＧ０５５抗体」又は単に「ｒＧ０５５」と記載し、ハイブリドーマｒＧ０５６が産生する抗体を、「ｒＧ０５６抗体」又は単に「ｒＧ０５６」と記載し、ハイブリドーマｒＧ０６１が産生する抗体を、「ｒＧ０６１抗体」又は単に「ｒＧ０６１」とする。
ｒＧ０１９抗体の軽鎖可変領域は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる。該ｒＧ０１９抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１１に示されるヌクレオチド配列でコードされる。ｒＧ０１９抗体の軽鎖可変領域は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１３に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１４に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３を有する。ｒＧ０１９抗体の重鎖可変領域は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列からなる。該ｒＧ０１９抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１６に示されるヌクレオチド配列でコードされる。ｒＧ０１９抗体の重鎖可変領域は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号１８に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１９に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３を有する。ｒＧ０１９抗体の配列を表１に示す。
ｒＧ０５５抗体の軽鎖可変領域は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列からなる。該ｒＧ０５５抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２１に示されるヌクレオチド配列でコードされる。ｒＧ０５５抗体の軽鎖可変領域は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号２４に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３を有する。ｒＧ０５５抗体の重鎖可変領域は、配列番号２５に示されるアミノ酸配列からなる。該ｒＧ０５５抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号２６に示されるヌクレオチド配列でコードされる。ｒＧ０５５抗体の重鎖可変領域は、配列番号２７に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号２８に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号２９に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３を有する。ｒＧ０５５抗体の配列を表１に示す。
ｒＧ０５６抗体の軽鎖可変領域は、配列番号３０に示されるアミノ酸配列からなる。該ｒＧ０５６抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号３１に示されるヌクレオチド配列でコードされる。ｒＧ０５６抗体の軽鎖可変領域は、配列番号３２に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号３３に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号３４に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３を有する。ｒＧ０５６抗体の重鎖可変領域は、配列番号３５に示されるアミノ酸配列からなる。該ｒＧ０５６抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号３６に示されるヌクレオチド配列でコードされる。ｒＧ０５６抗体の重鎖可変領域は、配列番号３７に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号３９に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３を有する。ｒＧ０５６抗体の配列を表１に示す。
ｒＧ０６１抗体の軽鎖可変領域は、配列番号４０に示されるアミノ酸配列からなる。該ｒＧ０６１抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４１に示されるヌクレオチド配列でコードされる。ｒＧ０６１抗体の軽鎖可変領域は、配列番号４２に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号４３に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号４４に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３を有する。ｒＧ０６１抗体の重鎖可変領域は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなる。該ｒＧ０６１抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４６に示されるヌクレオチド配列でコードされる。ｒＧ０６１抗体の重鎖可変領域は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号４９に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３を有する。ｒＧ０６１抗体の配列を表１に示す。
さらに、「２．抗ＣＤＨ６抗体の製造」（ａ）乃至（ｈ）の工程を再度実施して別途に独立してモノクローナル抗体を取得した場合や他の方法によって別途にモノクローナル抗体を取得した場合においても、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体と同等の内在化活性を有する抗体を取得することが可能である。このような抗体の一例として、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体と同一のエピトープに結合する抗体を挙げることができる。新たに作製されたモノクローナル抗体が、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体の結合する部分ペプチド又は部分立体構造に結合すれば、該モノクローナル抗体がｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体と同一のエピトープに結合すると判定することができる。また、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体のＣＤＨ６に対する結合に対して該モノクローナル抗体が競合する（即ち、該モノクローナル抗体が、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体とＣＤＨ６の結合を妨げる）ことを確認することによって、具体的なエピトープの配列又は構造が決定されていなくても、該モノクローナル抗体が抗ＣＤＨ６抗体と同一のエピトープに結合すると判定することができる。モノクローナル抗体が、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合することが確認されれば、該モノクローナル抗体はｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体と同等の抗原結合能、生物活性及び／又は内在化活性を有することが強く期待される。
（３）その他の抗体
本発明の抗体には、上記ＣＤＨ６に対するモノクローナル抗体に加え、ヒトに対する異種抗原性を低下させること等を目的として人為的に改変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ）抗体、ヒト化（Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）抗体又はヒト抗体等も含まれる。これらの抗体は、既知の方法を用いて製造することができる。
キメラ抗体としては、抗体の可変領域と定常領域が互いに異種である抗体、例えばマウス又はラット由来抗体の可変領域をヒト由来の定常領域に接合したキメラ抗体を挙げることができる（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１，６８５１－６８５５，（１９８４）参照）。
ラット抗ヒトＣＤＨ６抗体由来のキメラ抗体の例としては、例えば、本明細書に記載のラット抗ヒトＣＤＨ６抗体（例えば、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体）の各軽鎖可変領域とヒト由来の定常領域を含む軽鎖、及び、各重鎖可変領域とヒト由来の定常領域を含む重鎖からなる抗体が挙げられる。
ラット抗ヒトＣＤＨ６抗体由来のキメラ抗体の別の例としては、例えば、本明細書に記載のラット抗ヒトＣＤＨ６抗体（例えば、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体）の各軽鎖可変領域中の１～数残基、１～３残基、１～２残基、好ましくは１残基のアミノ酸を別のアミノ酸残基に置換した軽鎖可変領域を含む軽鎖、及び、各重鎖可変領域中の１～数残基、１～３残基、１～２残基、好ましくは１残基のアミノ酸を別のアミノ酸残基に置換した重鎖可変領域を含む重鎖からなる抗体が挙げられる。この抗体は、任意の所与のヒト由来定常領域を有し得る。
ラット抗ヒトＣＤＨ６抗体由来のキメラ抗体の別の例としては、例えば、本明細書に記載のラット抗ヒトＣＤＨ６抗体（例えば、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体又はｒＧ０６１抗体）の各軽鎖可変領域中のいずれか１～３個のＣＤＲ中の１～２残基、好ましくは１残基のアミノ酸を別のアミノ酸残基に置換した軽鎖可変領域を含む軽鎖、及び、各重鎖可変領域中のいずれか１～３個のＣＤＲ中の１～２残基、好ましくは１残基のアミノ酸を別のアミノ酸残基に置換した重鎖可変領域を含む重鎖からなる抗体が挙げられる。この抗体は、任意の所与のヒト由来定常領域を有し得る。
ｒＧ０１９抗体由来のキメラ抗体としては、例えば、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖、及び、配列番号１５に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖からなる抗体が挙げられる。この抗体は、任意の所与のヒト由来定常領域を有し得る。
ｒＧ０１９抗体由来のキメラ抗体の別の例としては、例えば、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域中の１～数残基、１～３残基、１～２残基、好ましくは１残基のアミノ酸を別のアミノ酸残基に置換した軽鎖可変領域を含む軽鎖、及び、配列番号１５に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域中の１～数残基、１～３残基、１～２残基、好ましくは１残基のアミノ酸を別のアミノ酸残基に置換した重鎖可変領域を含む重鎖からなる抗体が挙げられる。この抗体は、任意の所与のヒト由来定常領域を有し得る。
ｒＧ０１９抗体由来のキメラ抗体の別の例としては、例えば、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域中のいずれか１～３個のＣＤＲ中の１又は２残基（好ましくは１残基）のアミノ酸を別のアミノ酸残基に置換した軽鎖可変領域を含む軽鎖、及び、配列番号１５に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域中のいずれか１～３個のＣＤＲ中の１又は２残基（好ましくは１残基）のアミノ酸を別のアミノ酸残基に置換した重鎖可変領域を含む重鎖からなる抗体が挙げられる。この抗体は、任意の所与のヒト由来定常領域を有し得る。
ｒＧ０１９抗体由来のキメラ抗体の別の例としては、例えば、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖、及び、配列番号５８に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖からなる抗体が挙げられる。この抗体は、任意の所与のヒト由来定常領域を有し得る。配列番号５８に示されるアミノ酸配列は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列中のＣＤＲＨ２中のシステイン残基をプロリン残基に置換した配列である。
ｒＧ０１９抗体由来のキメラ抗体の具体例としては、配列番号５３に示す軽鎖全長アミノ酸配列からなる軽鎖と、配列番号５６に示す重鎖全長アミノ酸配列からなる重鎖とからなる抗体が挙げられる。本明細書では、このキメラ抗ヒトＣＤＨ６抗体を、「キメラＧ０１９抗体」、「ｃｈＧ０１９抗体」又は「ｃｈＧ０１９」という。ｃｈＧ０１９抗体の軽鎖全長アミノ酸配列は配列番号５４に示されるヌクレオチド配列でコードされ、ｃｈＧ０１９抗体の重鎖全長アミノ酸配列は配列番号５７に示されるヌクレオチド配列でコードされる。
ｃｈＧ０１９抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列は、ｒＧ０１９抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列と同一であり、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる。ｃｈＧ０１９抗体の軽鎖は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号１３に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列番号１４に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３を有し、それぞれ、ｒＧ０１９の軽鎖のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３と同一である。ｃｈＧ０１９抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列は、配列番号５５に示されるヌクレオチド配列でコードされる。
ｃｈＧ０１９抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列は、配列番号５８に示されるアミノ酸配列からなる。ｃｈＧ０１９抗体の重鎖は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号６０に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列番号１９に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３を有する。配列番号５８に示されるアミノ酸配列は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列中のＣＤＲＨ２中のシステイン残基をプロリン残基に置換した配列である。配列番号６０に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２は、配列番号１８に示されるｒＧ０１９ ＣＤＲＨ２中のシステイン残基をプロリン残基に置換した配列である。ｃｈＧ０１９抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列は、配列番号５９に示されるヌクレオチド配列でコードされる。
ｃｈＧ０１９抗体の配列を表１に示す。
ラット抗ヒトＣＤＨ６抗体ｒＧ０５５抗体由来のキメラ抗体としては、例えば、配列番号２０に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖、及び、配列番号２５に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖からなるキメラ抗体が挙げられる。この抗体は、任意の所与のヒト由来定常領域を有し得る。
ラット抗ヒトＣＤＨ６抗体ｒＧ０５６抗体由来のキメラ抗体としては、例えば、配列番号３０に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖、及び、配列番号３５に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖からなるキメラ抗体が挙げられる。この抗体は、任意の所与のヒト由来定常領域を有し得る。
ラット抗ヒトＣＤＨ６抗体ｒＧ０６１抗体由来のキメラ抗体としては、例えば、配列番号４０に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖、及び、配列番号４５に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖からなるキメラ抗体が挙げられる。この抗体は、任意の所与のヒト由来定常領域を有し得る。
ヒト化抗体としては、相補性決定領域（ＣＤＲ；Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｒｅｇｉｏｎ）のみをヒト由来の抗体に組み込んだ抗体（Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３２１，ｐ．５２２－５２５参照）、ＣＤＲ移植法によって、ＣＤＲの配列に加え一部のフレームワークのアミノ酸残基もヒト抗体に移植した抗体（国際公開第９０／０７８６１号）、更に、抗原に対する結合能を維持しつつ、一部のＣＤＲのアミノ酸配列を改変した抗体を挙げることができる。
本明細書において、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体、ｒＧ０６１抗体又はｃｈＧ０１９抗体由来のヒト化抗体とは、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体、ｒＧ０６１抗体又はｃｈＧ０１９抗体のいずれかについて、各々に固有の６つのＣＤＲ配列を全て保持し、かつ、内在化活性を有するヒト化抗体であればよく、特定のヒト化抗体に限定されない。当該ヒト化抗体は、内在化活性を有する限り、更に一部のＣＤＲの一部のアミノ酸配列が改変されていてもよい。
ｃｈＧ０１９抗体のヒト化抗体の実例としては、（１）配列番号６３又は６７に記載のアミノ酸配列、（２）上記（１）のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列（好ましくは、各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列）、及び（３）上記（１）のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれか１つに記載の軽鎖可変領域を含む軽鎖、並びに（４）配列番号７１、７５又は７９に記載のアミノ酸配列、（５）上記（４）のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列（好ましくは、各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列）、及び（６）上記（４）のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれか１つに記載の重鎖可変領域を含む重鎖の任意の組合せを挙げることができる。
また、重鎖又は軽鎖の一方をヒト化し、他方をラット抗体やキメラ抗体の軽鎖又は重鎖とした抗体も用いることができる。そのような抗体の例としては、（１）配列番号６３又は６７に記載のアミノ酸配列、（２）上記（１）のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列（好ましくは、各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列）、及び（３）上記（１）のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれか１つに記載の軽鎖可変領域を含む軽鎖、並びに（４）配列番号１５、２５、３５、４５又は５８に記載のアミノ酸配列、（５）上記（４）のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列（好ましくは、各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列）、及び（６）上記（４）のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれか１つに記載の重鎖可変領域を含む重鎖の任意の組合せを挙げることができる。他の例としては、（１）配列番号１０、２０、３０又は４０に記載のアミノ酸配列、（２）上記（１）のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列（好ましくは、各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列）、及び（３）上記（１）のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれか１つに記載の軽鎖可変領域を含む軽鎖、並びに（４）配列番号７１、７５又は７９に記載のアミノ酸配列、（５）上記（４）のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列（好ましくは、各ＣＤＲ配列以外のフレームワーク領域の配列に対して少なくとも９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列）、及び（６）上記（４）のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなる群から選択されるいずれか１つに記載の重鎖可変領域を含む重鎖の任意の組合せを挙げることができる。
また、本明細書中におけるアミノ酸の置換としては保存的アミノ酸置換が好ましい。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸側鎖に関連のあるアミノ酸グループ内で生じる置換である。好適なアミノ酸グループは、以下のとおりである：酸性グループ＝アスパギン酸、グルタミン酸；塩基性グループ＝リシン、アルギニン、ヒスチジン；非極性グループ＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；及び非帯電極性ファミリー＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン。他の好適なアミノ酸グループは次のとおりである：脂肪族ヒドロキシグループ＝セリン及びスレオニン；アミド含有グループ＝アスパラギン及びグルタミン；脂肪族グループ＝アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；並びに芳香族グループ＝フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン。かかるアミノ酸置換は元のアミノ酸配列を有する物質の特性を低下させない範囲で行うのが好ましい。
上記軽鎖及び重鎖の好適な組合せの抗体としては、配列番号６３に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列（本明細書中、ｈＬ０２軽鎖可変領域アミノ酸配列とも称する）を有する軽鎖又は配列番号６７に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列（本明細書中、ｈＬ０３軽鎖可変領域アミノ酸配列とも称する）を有する軽鎖、及び、配列番号７１に示される重鎖可変領域アミノ酸配列（本明細書中、ｈＨ０１重鎖可変領域アミノ酸配列とも称する）を有する重鎖、配列番号７５に示される重鎖可変領域アミノ酸配列（本明細書中、ｈＨ０２重鎖可変領域アミノ酸配列とも称する）を有する重鎖又は配列番号７９に示される重鎖可変領域アミノ酸配列（本明細書中、ｈＨ０４重鎖可変領域アミノ酸配列とも称する）を有する重鎖からなる抗体が挙げられる。好ましい例としては、配列番号６３に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７１に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体；配列番号６３に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７５に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体；配列番号６３に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７９に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体；配列番号６７に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７１に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体；配列番号６７に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７５に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体；又は、配列番号６７に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７９に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体が挙げられる。より好ましい例としては、配列番号６３に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７１に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体；配列番号６３に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７５に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体；配列番号６３に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７９に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体；又は、配列番号６７に示される軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号７５に示される重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖からなる抗体が挙げられる。
上記軽鎖及び重鎖の好適な組合せの抗体の別の例としては、配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列（本明細書中、ｈＬ０２軽鎖全長アミノ酸配列とも称する）の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖又は配列番号６５に示される軽鎖全長アミノ酸配列（本明細書中、ｈＬ０３軽鎖全長アミノ酸配列とも称する）の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖、及び、配列番号６９に示される重鎖全長アミノ酸配列（本明細書中、ｈＨ０１重鎖全長アミノ酸配列とも称する）の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、配列番号７３に示される重鎖全長アミノ酸配列（本明細書中、ｈＨ０２重鎖全長アミノ酸配列とも称する）の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖又は配列番号７７に示される重鎖全長アミノ酸配列（本明細書中、ｈＨ０４重鎖全長アミノ酸配列とも称する）の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体が挙げられる。好ましい例としては、配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；配列番号６５に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；配列番号６５に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；又は、配列番号６５に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体が挙げられる。より好ましい例としては、配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体（本明細書中、「Ｈ０１Ｌ０２抗体」又は「Ｈ０１Ｌ０２」とも称する）；配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体（本明細書中、「Ｈ０２Ｌ０２抗体」又は「Ｈ０２Ｌ０２」とも称する）；配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体（本明細書中、「Ｈ０４Ｌ０２抗体」又は「Ｈ０４Ｌ０２」とも称する）；又は、配列番号６５に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体（本明細書中、「Ｈ０２Ｌ０３抗体」又は「Ｈ０２Ｌ０３」とも称する）が挙げられる。Ｈ０１Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０３抗体又はＨ０４Ｌ０２抗体の配列を表１に示す。
上記の重鎖アミノ酸配列及び軽鎖アミノ酸配列と高い同一性を示す配列を組み合わせることによって、上記の各抗体と同等の生物活性を有する抗体を選択することが可能である。このような同一性は、一般的には８０％以上の同一性であり、好ましくは９０％以上の同一性であり、より好ましくは９５％以上の同一性であり、最も好ましくは９９％以上の同一性である。また、重鎖又は軽鎖のアミノ酸配列に１乃至数個のアミノ酸残基が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列を組み合わせることによっても、上記の各抗体と同等の生物活性を有する抗体を選択することが可能である。
二種類のアミノ酸配列間の同一性は、ＣｌｕｓｔａｌＷ ｖｅｒｓｉｏｎ２（Ｌａｒｋｉｎ ＭＡ，Ｂｌａｃｋｓｈｉｅｌｄｓ Ｇ，Ｂｒｏｗｎ ＮＰ，Ｃｈｅｎｎａ Ｒ，ＭｃＧｅｔｔｉｇａｎ ＰＡ，ＭｃＷｉｌｌｉａｍ Ｈ，Ｖａｌｅｎｔｉｎ Ｆ，Ｗａｌｌａｃｅ ＩＭ，Ｗｉｌｍ Ａ，Ｌｏｐｅｚ Ｒ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＪＤ，Ｇｉｂｓｏｎ ＴＪ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ ＤＧ（２００７），”Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ ａｎｄ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０”，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２３（２１）：２９４７－２９４８）のデフォルトパラメーターを使用して配列を整列させることによって決定することができる。
なお、配列番号６１に示されるｈＬ０２軽鎖全長アミノ酸配列中、１～２０番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列はシグナル配列であり、２１～１２８番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は可変領域であり、１２９～２３３番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は定常領域である。配列番号６２に示されるｈＬ０２軽鎖全長ヌクレオチド配列中、１～６０番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列はシグナル配列をコードし、６１～３８４番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は可変領域をコードし、３８５～６９９番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は定常領域をコードしている。
配列番号６５に示されるｈＬ０３軽鎖全長アミノ酸配列中、１～２０番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列はシグナル配列であり、２１～１２８番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は可変領域であり、１２９～２３３番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は定常領域である。配列番号６６に示されるｈＬ０３軽鎖全長ヌクレオチド配列中、１～６０番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列はシグナル配列をコードし、６１～３８４番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は可変領域をコードし、３８５～６９９番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は定常領域をコードしている。
配列番号６９に示されるｈＨ０１重鎖全長アミノ酸配列中、１～１９番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列はシグナル配列であり、２０～１４１番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は可変領域であり、１４２～４７１番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は定常領域である。配列番号７０に示されるｈＨ０１重鎖全長ヌクレオチド配列中、１～５７番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列はシグナル配列をコードし、５８～４２３番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は可変領域をコードし、４２４～１４１３番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は定常領域をコードしている。
配列番号７３に示されるｈＨ０２重鎖全長アミノ酸配列中、１～１９番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列はシグナル配列であり、２０～１４１番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は可変領域であり、１４２～４７１番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は定常領域である。配列番号７４に示されるｈＨ０２重鎖全長ヌクレオチド配列中、１～５７番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列はシグナル配列をコードし、５８～４２３番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は可変領域をコードし、４２４～１４１３番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は定常領域をコードしている。
配列番号７７に示されるｈＨ０４重鎖全長アミノ酸配列中、１～１９番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列はシグナル配列であり、２０～１４１番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は可変領域であり、１４２～４７１番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列は定常領域である。配列番号７８に示されるｈＨ０４重鎖全長ヌクレオチド配列で、１～５７番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列はシグナル配列であり、５８～４２３番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は可変領域をコードしており、４２４～１４１３番目のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列は定常領域をコードしている。
（本明細書中、表１－１～表１－１６を表１と総称する場合がある。）
本発明の抗体としては、さらに、ＣＤＨ６に結合する、ヒト抗体を挙げることができる。抗ＣＤＨ６ヒト抗体とは、ヒト染色体由来の抗体の遺伝子配列のみを有するヒト抗体を意味する。抗ＣＤＨ６ヒト抗体は、ヒト抗体の重鎖と軽鎖の遺伝子を含むヒト染色体断片を有するヒト抗体産生マウスを用いた方法（Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９７）１６，ｐ．１３３－１４３，；Ｋｕｒｏｉｗａ，Ｙ．ｅｔ．ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９８）２６，ｐ．３４４７－３４４８；Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｈ．ｅｔ．ａｌ．，Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｓｐｅｃｔｓ ｖｏｌ．１０，ｐ．６９－７３（Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｙ．，Ｍａｔｓｕｄａ，Ｔ．ａｎｄ Ｉｉｊｉｍａ，Ｓ．ｅｄｓ．），Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９９．；Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋ．ｅｔ．ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０００）９７，ｐ．７２２－７２７等を参照。）によって取得することができる。
このようなヒト抗体産生マウスは、具体的には、内在性免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の遺伝子座が破壊され、代わりに酵母人工染色体（Ｙｅａｓｔ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ＹＡＣ）ベクター等を介してヒト免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の遺伝子座が導入された遺伝子組み換え動物として、ノックアウト動物及びトランスジェニック動物の作製及びこれらの動物同士を掛け合わせることによって作り出すことができる。
あるいは、抗ＣＤＨ６ヒト抗体は、真核細胞を、そのようなヒト抗体の重鎖及び軽鎖のそれぞれをコードするｃＤＮＡで、又は好ましくはｃＤＮＡを含むベクターで、遺伝子組換え技術に従って形質転換し、次いで、遺伝子改変ヒトモノクローナル抗体を産生する形質転換細胞を培養することによって得ることもでき、その結果、抗体を培養上清から得ることができる。
ここで、宿主としては例えば真核細胞、好ましくはＣＨＯ細胞、リンパ球やミエローマ等の哺乳動物細胞を用いることができる。
また、ヒト抗体ライブラリーより選別したファージディスプレイ由来のヒト抗体を取得する方法（Ｗｏｒｍｓｔｏｎｅ，Ｉ．Ｍ．ｅｔ．ａｌ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ＆Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ．（２００２）４３（７），ｐ．２３０１－２３０８；Ｃａｒｍｅｎ，Ｓ．ｅｔ．ａｌ．，Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ ｉｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（２００２），１（２），ｐ．１８９－２０３；Ｓｉｒｉｗａｒｄｅｎａ，Ｄ．ｅｔ．ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（２００２）１０９（３），ｐ．４２７－４３１等参照。）も知られている。
例えば、ヒト抗体の可変領域を一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）としてファージ表面に発現させて、抗原に結合するファージを選択するファージディスプレイ法（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５），２３，（９），ｐ．１１０５－１１１６）を用いることができる。
抗原に結合することで選択されたファージの遺伝子を解析することによって、抗原に結合するヒト抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を決定することができる。
抗原に結合するｓｃＦｖのＤＮＡ配列が明らかになれば、当該配列を有する発現ベクターを作製し、適当な宿主に導入して発現させることによってヒト抗体を取得することができる（国際公開第９２／０１０４７号、同９２／２０７９１号、同９３／０６２１３号、同９３／１１２３６号、同９３／１９１７２号、同９５／０１４３８号、同９５／１５３８８号、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９４）１２，ｐ．４３３－４５５、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３（９），ｐ．１１０５－１１１６）。
新たに作製されたヒト抗体が、本明細書に記載のラット抗ヒトＣＤＨ６抗体、キメラ抗ヒトＣＤＨ６抗体又はヒト化抗ヒトＣＤＨ６抗体（例えば、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体、ｒＧ０６１抗体、ｃｈＧ０１９抗体、Ｈ０１Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０３抗体又はＨ０４Ｌ０２抗体）のいずれか１つが結合する部分ペプチド又は部分立体構造に結合すれば、該ヒト抗体が当該ラット抗ヒトＣＤＨ６抗体、キメラ抗ヒトＣＤＨ６抗体又はヒト化抗ヒトＣＤＨ６抗体と同一のエピトープに結合すると判定することができる。あるいは、本明細書に記載のラット抗ヒトＣＤＨ６抗体、キメラ抗ヒトＣＤＨ６抗体又はヒト化抗ヒトＣＤＨ６抗体（例えば、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体、ｒＧ０６１抗体、ｃｈＧ０１９抗体、Ｈ０１Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０３抗体又はＨ０４Ｌ０２抗体）のＣＤＨ６に対する結合に対して該ヒト抗体が競合する（例えば、該ヒト抗体が、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体、ｒＧ０６１抗体、ｃｈＧ０１９抗体、Ｈ０１Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０３抗体又はＨ０４Ｌ０２抗体とＣＤＨ６、好ましくは、ＣＤＨ６のＥＣ３への結合を妨げる）ことを確認することによって、具体的なエピトープの配列又は構造が決定されていなくても、該ヒト抗体が本明細書に記載のラット抗ヒトＣＤＨ６抗体、キメラ抗ヒトＣＤＨ６抗体又はヒト化抗ヒトＣＤＨ６抗体と同一のエピトープに結合すると判定することができる。本明細書において、当該判定方法の少なくともいずれか一方の方法により「同一のエピトープに結合する」と判定された場合、新たに作製されたヒト抗体が、本明細書に記載のラット抗ヒトＣＤＨ６抗体、キメラ抗ヒトＣＤＨ６抗体又はヒト化抗ヒトＣＤＨ６抗体と「同一のエピトープに結合する」といえる。エピトープが同一であることが確認された場合、該ヒト抗体がラット抗ヒトＣＤＨ６抗体、キメラ抗ヒトＣＤＨ６抗体又はヒト化抗ヒトＣＤＨ６抗体（例えば、ｒＧ０１９抗体、ｒＧ０５５抗体、ｒＧ０５６抗体、ｒＧ０６１抗体、ｃｈＧ０１９抗体、Ｈ０１Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０２抗体、Ｈ０２Ｌ０３抗体又はＨ０４Ｌ０２抗体）と同等の生物活性を有していることが期待される。
以上の方法によって得られたキメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体は、公知の方法等によって抗原に対する結合性を評価し、好適な抗体を選抜することができる。
抗体の性質を比較する際の別の指標の一例としては、抗体の安定性を挙げることができる。示差走査カロリメトリー（ＤＳＣ）は、蛋白の相対的構造安定性のよい指標となる熱変性中点（Ｔｍ）を素早く、また正確に測定することができる装置である。ＤＳＣを用いてＴｍ値を測定し、その値を比較することによって、熱安定性の違いを比較することができる。抗体の保存安定性は、抗体の熱安定性とある程度の相関を示すことが知られており（Ｌｏｒｉ Ｂｕｒｔｏｎ，ｅｔ．ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７）１２，ｐ．２６５－２７３）、熱安定性を指標に、好適な抗体を選抜することができる。抗体を選抜するための他の指標としては、適切な宿主細胞における収量が高いこと、及び水溶液中での凝集性が低いことを挙げることができる。例えば収量の最も高い抗体が最も高い熱安定性を示すとは限らないので、以上に述べた指標に基づいて総合的に判断して、ヒトへの投与に最も適した抗体を選抜する必要がある。
本発明の抗体には抗体の修飾体も含まれる。当該修飾体とは、本発明の抗体に化学的又は生物学的な修飾が施されてなるものを意味する。化学的な修飾体には、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ－結合又はＯ－結合炭水化物鎖の化学修飾体等が含まれる。生物学的な修飾体には、翻訳後修飾（例えば、Ｎ－結合又はＯ－結合への糖鎖付加、Ｎ末又はＣ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、又はＮ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化）されたもの、原核生物宿主細胞を用いて発現させることによってＮ末にメチオニン残基が付加したもの等が含まれる。また、本発明の抗体又は抗原の検出又は単離を可能にするために標識されたもの、例えば、酵素標識体、蛍光標識体、アフィニティ標識体もかかる修飾物の意味に含まれる。このような本発明の抗体の修飾物は、抗体の安定性及び血中滞留性の改善、抗原性の低減、抗体又は抗原の検出又は単離等に有用である。
また、本発明の抗体に結合している糖鎖修飾を調節すること（グリコシル化、脱フコース化等）によって、抗体依存性細胞傷害活性を増強することが可能である。抗体の糖鎖修飾の調節技術としては、国際公開第１９９９／５４３４２号、同２０００／６１７３９号、同２００２／３１１４０号等が知られているが、これらに限定されるものではない。本発明の抗体には当該糖鎖修飾を調節された抗体も含まれる。
抗体遺伝子を一旦単離した後、適当な宿主に導入して抗体を作製する場合には、適当な宿主と発現ベクターの組み合わせを使用することができる。抗体遺伝子の具体例としては、本明細書に記載された抗体の重鎖配列をコードする遺伝子、及び軽鎖配列をコードする遺伝子を組み合わせたものを挙げることができる。宿主細胞を形質転換する際には、重鎖配列遺伝子と軽鎖配列遺伝子は、同一の発現ベクターに挿入されていることが可能であり、又別々の発現ベクターに挿入されていることも可能である。
真核細胞を宿主として使用する場合、動物細胞、植物細胞、真核微生物を用いることができる。特に動物細胞としては、哺乳類細胞、例えば、サルの細胞であるＣＯＳ細胞（Ｇｌｕｚｍａｎ，Ｙ．Ｃｅｌｌ（１９８１）２３，ｐ．１７５－１８２、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６５０）、マウス線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ－１６５８）やチャイニーズ・ハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞、ＡＴＣＣ ＣＣＬ－６１）のジヒドロ葉酸還元酵素欠損株（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｌ．Ａ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９８０）７７，ｐ．４１２６－４２２０）、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を挙げることができる。
原核細胞を使用する場合は、例えば、大腸菌、枯草菌を挙げることができる。
これらの細胞に目的とする抗体遺伝子を形質転換によって導入し、形質転換された細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することによって抗体が得られる。当該培養においては抗体の配列によって収量が異なる場合があり、同等な結合活性を持つ抗体の中から収量を指標に医薬としての生産が容易なものを選別することが可能である。よって、本発明の抗体には、上記形質転換された宿主細胞を培養する工程、及び当該工程で得られた培養物から目的の抗体又は当該抗体の機能性断片を採取する工程を含むことを特徴とする当該抗体の製造方法によって得られる抗体も含まれる。
なお、哺乳類培養細胞で生産される抗体の重鎖のカルボキシル末端のリシン残基が欠失することが知られており（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ，７０５：１２９－１３４（１９９５））、また、同じく重鎖カルボキシル末端のグリシン、リシンの２アミノ酸残基が欠失し、新たにカルボキシル末端に位置するプロリン残基がアミド化されることが知られている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６０：７５－８３（２００７））。しかし、これらの重鎖配列の欠失及び修飾は、抗体の抗原結合能及びエフェクター機能（補体の活性化や抗体依存性細胞傷害作用等）には影響を及ぼさない。従って、本発明に係る抗体には、当該修飾を受けた抗体及び当該抗体の機能性断片も含まれ、重鎖カルボキシル末端において１又は２つのアミノ酸が欠失した欠失体、及びアミド化された当該欠失体（例えば、カルボキシル末端部位のプロリン残基がアミド化された重鎖）等も包含される。但し、抗原結合能及びエフェクター機能が保たれている限り、本発明に係る抗体の重鎖のカルボキシル末端の欠失体は上記の種類に限定されない。本発明に係る抗体を構成する２本の重鎖は、完全長及び上記の欠失体からなる群から選択される重鎖のいずれか一種であってもよいし、いずれか二種を組み合わせたものであってもよい。個々の欠失体の割合は、本発明の抗体を産生する培養哺乳動物細胞の種類及び培養条件に影響され得る。本発明の抗体の主成分としては、２つの重鎖のカルボキシル末端にそれぞれ１つずつアミノ酸残基が欠失した抗体を挙げることができる。
本発明の抗体のアイソタイプとしては、例えばＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）等を挙げることができる。なかでも、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４が好ましい。
抗体の生物活性としては、一般的には抗原結合活性、抗原と結合することによって該抗原を発現する細胞に内在化する活性、抗原の活性を中和する活性、抗原の活性を増強する活性、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性及び抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）を挙げることができる。本発明に係る抗体が有する機能は、ＣＤＨ６に対する結合活性であり、好ましくはＣＤＨ６と結合することによってＣＤＨ６発現細胞に内在化する活性である。さらに、本発明の抗体は、細胞内在化活性に加えて、ＡＤＣＣ活性、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＰ活性を併せ持っていても良い。
得られた抗体は、均一にまで精製することができる。抗体の分離、精製は通常のタンパク質で使用されている分離、精製方法を使用すればよい。例えばカラムクロマトグラフィー、フィルター濾過、限外濾過、塩析、透析、調製用ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動等を適宜選択、組み合わせれば、抗体を分離、精製することができる（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ，Ｄａｎｉｅｌ Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８））が、これらに限定されるものではない。
クロマトグラフィーとしては、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー等を挙げることができる。
これらのクロマトグラフィーは、ＨＰＬＣやＦＰＬＣ等の液体クロマトグラフィーを用いて行うことができる。
アフィニティークロマトグラフィーに用いるカラムとしては、プロテインＡカラム、プロテインＧカラムを挙げることができる。例えばプロテインＡカラムを用いたカラムとして、Ｈｙｐｅｒ Ｄ，ＰＯＲＯＳ，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆ．Ｆ．（ファルマシア）等を挙げることができる。
また抗原を固定化した担体を用いて、抗原への結合性を利用して抗体を精製することも可能である。
３．抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲート
（１）薬物
上記「２．抗ＣＤＨ６抗体の製造」にて取得された抗ＣＤＨ６抗体はリンカー構造部分を介して薬物を結合させることによって、抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートとすることができる。薬物としては、リンカー構造に結合できる置換基、部分構造を有するものであれば特に制限はない。抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートは結合する薬物に応じて種々の用途に用いることができる。そのような薬物の例としては、抗腫瘍活性を有する物質、血液疾患に対する効果を有する物質、自己免疫疾患に対する効果を有する物質、抗炎症物質、抗菌物質、抗真菌物質、抗寄生虫物質、抗ウイルス物質、抗麻酔物質等を挙げることができる。
（１）－１ 抗腫瘍化合物
本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートに結合される化合物として抗腫瘍性化合物を用いる例について以下に述べる。抗腫瘍性化合物としては、抗腫瘍効果を有する化合物であって、リンカー構造に結合できる置換基、部分構造を有するものであれば特に制限はない。抗腫瘍性化合物は、リンカーの一部又は全部が腫瘍細胞内で切断されて抗腫瘍性化合物部分が遊離されて抗腫瘍効果が発現される。リンカーが薬物との結合部分で切断されれば抗腫瘍性化合物が本来の構造で遊離され、その本来の抗腫瘍効果が発揮される。
上記「２．抗ＣＤＨ６抗体の製造」にて取得された抗ＣＤＨ６抗体はリンカー構造部分を介して抗腫瘍性化合物を結合させることによって、抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートとすることができる。
本発明で使用される抗腫瘍性化合物の一つの例として、カンプトテシン誘導体であるエキサテカン（（１Ｓ，９Ｓ）－１－アミノ－９－エチル－５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）－ジオン；次式）を好適に使用することができる。
同化合物は、例えば、米国特許公開公報ＵＳ２０１６／０２９７８９０号に記載の方法やその他の公知の方法で容易に取得でき、１位のアミノ基をリンカー構造への結合部位として好適に使用することができる。さらに、エキサテカンは、リンカーの一部が依然としてそれに結合している間に腫瘍細胞に放出され得る。しかしながら、このような状態であっても、この化合物は優れた抗腫瘍効果を発揮する。
エキサテカンはカンプトテシン構造を有するので、酸性水性媒体中（例えばｐＨ３程度）ではラクトン環が形成された構造（閉環体）に平衡が偏り、一方、塩基性水性媒体中（例えばｐＨ１０程度）ではラクトン環が開環した構造（開環体）に平衡が偏ることが知られている。このような閉環構造及び開環構造に対応するエキサテカン残基を導入した薬物コンジュゲートであっても同等の抗腫瘍効果が期待され、いずれのものも本発明の範囲に包含されることはいうまでもない。
他の抗腫瘍性化合物として例えば、文献（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ，６８，ｐ３－１９，２０１６）記載の抗腫瘍化合物を挙げることができ、その一例として、ドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、カリケマイシン（Ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ドラスタチン（Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）１０、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）等のアウリスタチン類（Ａｕｒｉｓｔａｔｉｎｓ）、ＤＭ１、ＤＭ４等のメイタンシノイド類（Ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ）、ピロロベンゾジアゼピン（Ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ）二量体のＳＧ２０００（ＳＪＧ－１３６）、カンプトテシンの誘導体であるＳＮ－３８、ＣＣ－１０６５等のデュオカルマイシン類（Ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎｓ）、アマニチン（Ａｍａｎｉｔｉｎ）、ダウノルビシン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、シクロシチジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキセート、白金系抗腫瘍剤（シスプラチン若しくはその誘導体）、タキソール若しくはその誘導体等を挙げることができる。
抗体－薬物コンジュゲートにおいて、抗体１分子への薬物分子の結合数は、その有効性、安全性に影響する重要因子である。抗体－薬物コンジュゲートの製造は、薬物分子の結合数が一定の数となるよう、反応させる原料・試薬の使用量等の反応条件を規定して実施される。低分子化合物の化学反応とは異なり、異なる数の薬物分子が結合した混合物として得られるのが通常である。抗体１分子への薬物分子の結合数は平均値、すなわち、薬物分子平均結合数として特定され、表記される。本発明でも原則として断りのない限り、すなわち、異なる薬物分子結合数をもつ抗体－薬物コンジュゲート混合物に含まれる特定の薬物分子結合数をもつ抗体－薬物コンジュゲートを示す場合を除き、薬物分子の結合数は平均値を意味する。抗体分子にコンジュゲートしたエキサテカン分子の数は制御可能であり、抗体あたりの薬物分子平均結合数として、およそ１～１０個のエキサテカン分子をコンジュゲートさせることができる。エキサテカン分子の数は、好ましくは２～８、３～８、４～８、５～８、６～８又は７～８であり、より好ましくは５～８であり、さらに好ましくは７～８であり、さらに好ましくは８である。なお、当業者であれば本願の実施例の記載から抗体に必要な数の薬物分子を結合させる反応を設計することができ、エキサテカンの結合数をコントロールした抗体－薬物コンジュゲートを取得することができる。
（２）リンカー構造
本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートにおいて薬物を抗ＣＤＨ６抗体に結合させるリンカー構造について述べる。
本願の抗体－薬物コンジュゲートにおいて、抗ＣＤＨ６抗体と薬物とを結合するリンカー構造は、抗体－薬物コンジュゲートとして用いることができる限りにおいて特に制限されない。リンカー構造は、使用目的に応じて適宜選択して用いることもできる。リンカー構造の一例としては、公知の文献（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ６８：３－１９，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１６，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ ＤＯＩ １０．１００７／ｓ１３２３８－０１６－０３２３－０など）に記載のリンカーを挙げることができる。更に具体的な例としては、ＶＣ（バリン－シトルリン：ｖａｌｉｎｅ－ｃｉｔｒｕｌｌｉｎｅ）、ＭＣ（マレインアミドカプロイル：ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ）、ＳＭＣＣ（スクシニミジル ４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート：ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４－（Ｎ－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ－１－ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、ＳＰＰ（Ｎ－スクシニミジル ４－（２－ピリジルジチオ）ペンタン酸：Ｎ－ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４－（２－ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ）ｐｅｎｔａｎｏａｔｅ、ＳＳ（ジスルフィド：ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシミジル ４－（２－ピリジルジチオ）ブチラート）Ｎ－ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ４－（２－ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ）ｂｕｔｙｒａｔｅ、ＳＳ／ヒドラゾン、ヒドラゾン、カルボネートを挙げることができる。
他の一例としては、例えば、米国特許公開公報ＵＳ２０１６／０２９７８９０に記載のリンカー構造（一例として、段落［０２６０］～［０２８９］に記載のもの）を挙げることができる。以下に示す任意のリンカー構造を好ましく用いることができる。なお以下に示す構造の左端が抗体との結合部位であり、右端が薬物との結合部位である。また、下記のリンカー構造中のＧＧＦＧは、グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシン（ＧＧＦＧ）からなるペプチド結合でつながっているアミノ酸配列を示す。
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、及び
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－。
より好ましいのは以下の通りである：
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、及び
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－。
さらにより好ましいのは以下の通りである：
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、及び
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－。
抗体は－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）の末端、（例えば、「－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－」においては、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－が結合するのとは反対側の末端（左末端））で結合し、抗腫瘍性化合物は－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）とは反対側の末端（上記例では右末端の、ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－のカルボニル基で結合する。「－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－」は、下記式で表される構造を有する。
この部分構造における３位が抗ＣＤＨ６抗体への結合部位である。この３位での該抗体との結合は、チオエーテルを形成して結合することが特徴である。この構造部分の１位の窒素原子は、この構造が含まれるリンカー内に存在するメチレンの炭素原子と結合する。
薬物をエキサテカンとする本発明の抗体－薬物コンジュゲートにおいては、下記の構造の薬物－リンカー構造部分を抗体に結合させたものが好ましい。これらの薬物－リンカー構造部分は、１抗体あたりの平均結合数として、１から１０を結合させればよいが、好ましくは２から８であり、より好ましくは５から８であり、更に好ましくは７から８であり、更により好ましくは８である。
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、及び
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。
より好ましいのは以下の通りである：
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、及び
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。
さらにより好ましいのは以下の通りである：
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、及び
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）。
－（ＮＨ－ＤＸ）は、次式で示される構造を有しており：
エキサテカンの１位のアミノ基の水素原子１個が除かれて生成する基を示す。
（３）抗体－薬物コンジュゲートの製造方法
本発明の抗体－薬物コンジュゲートに用いることができる抗体は、上記「２．抗ＣＤＨ６抗体の製造」の項及び実施例に記載の内在化活性を有する抗ＣＤＨ６抗体及び該抗体の機能性断片であれば特に制限がない。
次に、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの代表的な製造方法について説明する。なお、以下において、化合物を示すために、各反応式中に示される化合物の番号を用いる。すなわち、『式（１）の化合物』、『化合物（１）』等と称する。また、これ以外の番号の化合物についても同様に記載する。
（３）－１ 製造方法１
下記式（１）で示される抗体－薬物コンジュゲートのうち、チオエーテルを介して抗ＣＤＨ６抗体とリンカー構造が結合しているものは抗ＣＤＨ６抗体を還元してジスルフィド結合をスルヒドリル基に変換した抗体に対して、既知の方法によって入手しうる化合物（２）（例えば、ＵＳ２０１６／２９７８９０号公開特許公報に記載の方法（例えば段落［０３３６］～［０３７４］に記載の方法）で入手可能）を反応させることによって製造することができる。この抗体－薬物コンジュゲートは、例えば下記の方法によって製造することができる。
式中、ＡＢはスルフヒドリル基を有する抗体を表し、
Ｌ１は、－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－で表される構造を有し、
Ｌ１’は、下記式で表されるマレイミジル基を表す。
－Ｌ１－ＬＸは、下記式のいずれかで表される構造を有する：
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、及び
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－。
それらの中でも、より好ましいのは以下の通りである：
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、及び
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－。
さらに好ましいのは以下の通りである：
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、及び
－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－。
上記の反応スキームにおいて、抗体－薬物コンジュゲート（１）は、薬物からリンカー末端までの１つの構造部分が１つの抗体に結合した構造を有すると理解することができる。ただし、この説明は便宜上なされたものであり、実際には１つの抗体分子に複数の上記構造部分が連結している場合が多い。この状況は以下の製造方法の説明においても同様である。
すなわち、既知の方法によって入手しうる化合物（２）（例えば、ＵＳ２０１６／２９７８９０号公開特許公報に記載の方法（例えば段落［０３３６］～［０３７４］に記載の方法）で入手可能）で入手可能）と、スルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）を反応させることによって、抗体－薬物コンジュゲート（１）を製造することができる。
スルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）は、当業者周知の方法で得ることができる（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、ｐｐ．５６－１３６、ｐｐ．４５６－４９３、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９９６））。例えば、Ｔｒａｕｔ’ｓ試薬を抗体のアミノ基に作用させる；Ｎ－サクシンイミジルＳ－アセチルチオアルカノエート類を抗体のアミノ基に作用させた後、ヒドロキシルアミンを作用させる；Ｎ－サクシンイミジル３－（ピリジルジチオ）プロピオネートを作用させた後、還元剤を作用させる；ジチオトレイトール、２－メルカプトエタノール、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）等の還元剤を抗体に作用させて抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元しスルフヒドリル基を生成させる；等の方法を挙げることができるがこれらに限定されることはない。
具体的には、還元剤としてＴＣＥＰを、抗体内鎖間部ジスルフィド一個当たりに対して０．３乃至３モル当量用い、キレート剤を含む緩衝液中で、抗体と反応させることで、抗体内鎖間部ジスルフィドが部分的若しくは完全に還元された抗体を得ることができる。キレート剤としては、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）やジエチレントリアミン５酢酸（ＤＴＰＡ）等を挙げることができる。これ等を１ｍＭ乃至２０ｍＭの濃度で用いればよい。緩衝液としては、リン酸ナトリウムやホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム溶液等を用いることができる。具体的な例において、抗体は４℃乃至３７℃にて１乃至４時間ＴＣＥＰと反応させることで部分的若しくは完全に還元されたスルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）を得ることが出来る。
なお、ここでスルフヒドリル基を薬物－リンカー部分に付加させる反応を実施させることでチオエーテル結合によって薬物－リンカー部分を結合させることができる。
次に、スルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）一個あたり、２乃至２０モル当量の化合物（２）を使用して、抗体１個当たり２個乃至８個の薬物分子が結合した抗体－薬物コンジュゲート（１）を製造することができる。具体的には、スルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）を含む緩衝液に、化合物（２）を溶解させた溶液を加えて反応させればよい。ここで、緩衝液としては、酢酸ナトリウム溶液、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウムなどを用いることができる。反応のｐＨは５～９であり、より好ましくはｐＨ７付近で反応を行ってもよい。化合物（２）を溶解させる溶媒としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ－メチル－２－ピリドン（ＮＭＰ）等の有機溶媒を用いることができる。化合物（２）を溶解させた有機溶媒溶液を、スルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）を含む緩衝液に１乃至２０％ｖ／ｖを加えて反応させればよい。反応温度は、０乃至３７℃、より好適には１０乃至２５℃であり、反応時間は、０．５乃至２時間である。反応は、未反応の化合物（２）の反応性をチオール含有試薬によって失活させることによって終了できる。チオール含有試薬は例えば、システイン又はＮ－アセチル－Ｌ－システイン（ＮＡＣ）である。より具体的には、ＮＡＣを、用いた化合物（２）に対して、１乃至２モル当量加え、室温で１０乃至３０分インキュベートすることにより反応を終了できる。
（４）抗体－薬物コンジュゲートの同定
製造した抗体－薬物コンジュゲート（１）は、以下の共通操作によって濃縮、バッファー交換、精製、抗体濃度及び抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数の測定を行い、抗体－薬物コンジュゲート（１）の同定を行うことができる。
（４）－１ 共通操作Ａ：抗体若しくは抗体－薬物コンジュゲート水溶液の濃縮
Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ（５０，０００ ＭＷＣＯ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の容器内に抗体若しくは抗体－薬物コンジュゲート溶液を入れ、遠心機（Ａｌｌｅｇｒａ Ｘ－１５Ｒ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．）を用いた遠心操作（２０００Ｇ乃至３８００Ｇにて５乃至２０分間遠心）にて、抗体若しくは抗体－薬物コンジュゲート溶液を濃縮した。
（４）－２ 共通操作Ｂ：抗体の濃度測定
ＵＶ測定器（Ｎａｎｏｄｒｏｐ １０００，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を用いて、メーカー規定の方法に従い、抗体濃度の測定を行った。その際に、抗体ごとに異なる２８０ｎｍ吸光係数（１．３ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１乃至１．８ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１）を用いた。
（４）－３ 共通操作Ｃ：抗体のバッファー交換
Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５担体を使用したＮＡＰ－２５カラム（Ｃａｔ．Ｎｏ．１７－０８５２－０２，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｊａｐａｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を、メーカー規定の方法に従い、塩化ナトリウム（５０ｍＭ）及びＥＤＴＡ（２ｍＭ）を含むリン酸緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ６．０）（本明細書でＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡと称する。）にて平衡化させた。このＮＡＰ－２５カラム一本につき、抗体水溶液２．５ｍＬをのせたのち、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡ３．５ｍＬで溶出させた画分（３．５ｍＬ）を分取した。この画分を共通操作Ａによって濃縮し、共通操作Ｂを用いて抗体濃度の測定を行ったのちに、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡを用いて２０ｍｇ／ｍＬに抗体濃度を調整した。
（４）－４ 共通操作Ｄ：抗体－薬物コンジュゲートの精製
市販のＳｏｒｂｉｔｏｌ（５％）を含む酢酸緩衝液（１０ｍＭ，ｐＨ５．５；本明細書でＡＢＳと称する。）のいずれかの緩衝液でＮＡＰ－２５カラムを平衡化させた。このＮＡＰ－２５カラムに、抗体－薬物コンジュゲート反応水溶液（約２．５ｍＬ）をのせ、メーカー規定の量の緩衝液で溶出させることで、抗体画分を分取した。この分取画分を再びＮＡＰ－２５カラムにのせ緩衝液で溶出させるゲルろ過精製操作を計２乃至３回繰り返すことで、未結合の薬物リンカーや低分子化合物（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ），Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン（ＮＡＣ），ジメチルスルホキシド）を除いた抗体－薬物コンジュゲートを得た。
（４）－５ 共通操作Ｅ：抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体濃度及び抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数の測定
抗体－薬物コンジュゲートにおける結合薬物濃度は、抗体－薬物コンジュゲート水溶液の２８０ｎｍ及び３７０ｎｍの二波長におけるＵＶ吸光度を測定したのちに下記の計算を行うことで、算出することができる。
ある波長における全吸光度は系内に存在する全ての吸収化学種の吸光度の和に等しい［吸光度の加成性］。したがって、抗体と薬物のコンジュゲーション前後において、抗体及び薬物のモル吸光係数に変化がないと仮定すると、抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体濃度及び薬物濃度は、下記の関係式で示される。
Ａ２８０＝ＡＤ，２８０＋ＡＡ，２８０＝εＤ，２８０ＣＤ＋εＡ，２８０ＣＡ 式（１）
Ａ３７０＝ＡＤ，３７０＋ＡＡ，３７０＝εＤ，３７０ＣＤ＋εＡ，３７０ＣＡ 式（２）
ここで、Ａ２８０は２８０ｎｍにおける抗体－薬物コンジュゲート水溶液の吸光度を示し、Ａ３７０は３７０ｎｍにおける抗体－薬物コンジュゲート水溶液の吸光度を示し、ＡＡ，２８０は２８０ｎｍにおける抗体の吸光度を示し、ＡＡ，３７０は３７０ｎｍにおける抗体の吸光度を示し、ＡＤ，２８０は２８０ｎｍにおけるコンジュゲート前駆体の吸光度を示し、ＡＤ，３７０は３７０ｎｍにおけるコンジュゲート前駆体の吸光度を示し、εＡ，２８０は２８０ｎｍにおける抗体のモル吸光係数を示し、εＡ，３７０は３７０ｎｍにおける抗体のモル吸光係数を示し、εＤ，２８０は２８０ｎｍにおけるコンジュゲート前駆体のモル吸光係数を示し、εＤ，３７０は３７０ｎｍにおけるコンジュゲート前駆体のモル吸光係数を示し、ＣＡは抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体濃度を示し、ＣＤは抗体－薬物コンジュゲートにおける薬物濃度を示す。
ここで、εＡ，２８０、εＡ，３７０、εＤ，２８０、εＤ，３７０は、事前に用意した値（計算推定値若しくは化合物のＵＶ測定から得られた実測値）が用いられる。例えば、εＡ，２８０は、抗体のアミノ酸配列から公知の計算方法（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，ｖｏｌ．４，２４１１－２４２３）により推定することができる。εＡ，３７０は、通常、ゼロである。εＤ，２８０及びεＤ，３７０は、用いるコンジュゲート前駆体をあるモル濃度に溶解させた溶液の吸光度を測定することで、ランベルト・ベールの法則（吸光度＝モル濃度×モル吸光係数×セル光路長）によって、得ることができる。抗体－薬物コンジュゲート水溶液のＡ２８０及びＡ３７０を測定し、これらの値を式（１）及び（２）に代入して連立方程式を解くことによって、ＣＡ及びＣＤを求めることができる。さらにＣＤをＣＡで除することで１抗体あたりの薬物分子平均結合数が求めることができる。
（４）－６ 共通操作Ｆ：抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数の測定（２）
抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数は、前述の「（４）－５ 共通操作Ｅ」に加え、以下の方法を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によっても求めることができる。以下に、抗体と薬物リンカーがジスルフィド結合している場合のＨＰＬＣによる薬物分子平均結合数の測定方法を記載する。当業者は、この方法を参照して、抗体と薬物リンカーとの結合様式に依存して適宜、ＨＰＬＣにより薬物分子平均結合数を測定し得る。
Ｆ－１．ＨＰＬＣ分析用サンプルの調製（抗体－薬物コンジュゲートの還元）
抗体－薬物コンジュゲート溶液（約１ｍｇ／ｍＬ、６０μＬ）をジチオトレイトール（ＤＴＴ）水溶液（１００ｍＭ、１５μＬ）と混合する。混合物を３７℃で３０分インキュベートすることで、抗体－薬物コンジュゲートの軽鎖及び重鎖間のジスルフィド結合が切断される。得られたサンプルをＨＰＬＣ分析に用いる。
Ｆ－２．ＨＰＬＣ分析
ＨＰＬＣ分析を、下記の測定条件にて行う。
ＨＰＬＣシステム：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ ＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）
検出器：紫外吸光度計（測定波長：２８０ｎｍ）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｐｈｅｎｙｌ（２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ、１３０Å；Ｗａｔｅｒｓ、Ｐ／Ｎ １８６００２８８４）
カラム温度：８０℃
移動相Ａ：０．１０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１５％２－プロパノールを含む水溶液
移動相Ｂ：０．０７５％ＴＦＡ、１５％２－プロパノールを含むアセトニトリル溶液
グラジエントプログラム：１４％－３６％（０分－１５分）、３６％－８０％（１５分－１７分）、８０％－１４％（１７分－１７．０１分）、１４％（１７．０１分－２５分）
サンプル注入量：１０μＬ
Ｆ－３．データ解析
Ｆ－３－１．薬物の結合していない抗体の軽鎖（Ｌ０）及び重鎖（Ｈ０）に対して、薬物分子の結合した軽鎖（薬物分子がｉ個結合した軽鎖：Ｌｉ）及び薬物分子の結合した重鎖（薬物分子がｉ個結合した重鎖：Ｈｉ）は、結合した薬物分子の数に比例して疎水性が増し保持時間が大きくなる。したがって、これらの鎖は、例えば、Ｌ０及びＬ１又はＨ０、Ｈ１、Ｈ２及びＨ３の順序で溶出される。Ｌ０及びＨ０との保持時間比較により検出ピークをＬ０、Ｌ１、Ｈ０、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３のいずれかに割り当てることができる。薬物分子結合数は、当業者によって定義され得るが、好ましくは、Ｌ０、Ｌ１、Ｈ０、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３である。
Ｆ－３－２．薬物リンカーにＵＶ吸収があるため、薬物リンカーの結合数に応じて、軽鎖、重鎖及び薬物リンカーのモル吸光係数を用いて下式に従ってピーク面積値の補正を行う。
ここで、各抗体における軽鎖及び重鎖のモル吸光係数（２８０ｎｍ）は、既知の計算方法（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，ｖｏｌ．４，２４１１－２４２３）によって、各抗体の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列から推定される値を用いることができる。Ｈ０１Ｌ０２の場合、そのアミノ酸配列に従って、軽鎖のモル吸光係数として３１７１０を、重鎖のモル吸光係数として７９９９０を推定値として用いた。また、薬物リンカーのモル吸光係数（２８０ｎｍ）は、各薬物リンカーをメルカプトエタノール又はＮ－アセチルシステインで反応させ、マレイミド基をサクシニイミドチオエーテルに変換した化合物の実測のモル吸光係数（２８０ｎｍ）を用いた。吸光度を測定する波長は、当業者によって適宜設定され得るが、好ましくは、抗体のピークが測定され得る波長であり、より好ましくは２８０ｎｍである。
Ｆ－３－３．ピーク面積補正値合計に対する各鎖ピーク面積比（％）を下式に従って計算する。
Ｆ－３－４．抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数を、下式に従って計算する。
薬物分子平均結合数＝（Ｌ０ピーク面積比ｘ０＋Ｌ１ピーク面積比ｘ１＋Ｈ０ピーク面積比ｘ０＋Ｈ１ピーク面積比ｘ１＋Ｈ２ピーク面積比ｘ２＋Ｈ３ピーク面積比ｘ３）／１００ｘ２
なお、抗体－薬物コンジュゲートの量を確保するために、同様な条件で作製して得られた薬物分子平均結合数が同程度（例えば±１程度）の複数の抗体－薬物コンジュゲートを混合して新たなロットにすることができる。その場合、平均薬物分子数は混合前の平均薬物分子数の間に収まる。
本発明の抗体－薬物コンジュゲートの一つの具体例としては次式で示される構造を有するものを挙げることができる。
又は以下の式：
ここで、ＡＢは本明細書で開示される抗ＣＤＨ６抗体を示し、抗体由来のスルフヒドリル基を介して結合リンカーと結合している。ここで、ｎはいわゆるＤＡＲ（Ｄｒｕｇ－ｔｏ－Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｒａｔｉｏ）と同義であり、１抗体あたりの薬物抗体比を示す。すなわち、抗体１分子への薬物分子の結合数を示すが、これは平均値、すなわち、薬物分子平均結合数として特定され、表記される数値である。本発明の［化２５］及び［化２６］で示される抗体－薬物コンジュゲートの場合、共通操作Ｆによる測定で、ｎは、２から８であればよく、好ましくは５から８であり、更に好ましくは７から８であり、更により好ましく８である。
本発明の抗体薬物－コンジュゲートの一例として、上記式［化２５］及び［化２６］に示される構造において、ＡＢで示される抗体が、以下の（ａ）乃至（ｇ）からなる群から選択されるいずれか１項に記載の重鎖及び軽鎖の抗体又はその機能性断片を含む、抗体－薬物コンジュゲート又はその薬理学上許容される塩を挙げることができる：
（ａ）配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；
（ｂ）配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；
（ｃ）配列番号６１に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；
（ｄ）配列番号６５に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；
（ｅ）配列番号６５に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；
（ｆ）配列番号６５に示される軽鎖全長アミノ酸配列の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７に示される重鎖全長アミノ酸配列の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖からなる抗体；及び
（ｇ）重鎖又は軽鎖がＮ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミンやＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化などに代表される翻訳後修飾、及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群より選択される１又は２つ以上の修飾を含む、（ａ）～（ｆ）からなる群から選択されるいずれか１つに記載の抗体。
４．医薬
上記、「２．抗ＣＤＨ６抗体の製造」の項及び実施例に記載された本発明の抗ＣＤＨ６抗体及び当該抗体の機能性断片は、腫瘍細胞表面のＣＤＨ６に結合し、内在化活性を有することから、単独であるいは他の薬剤と組み合わせて、医薬として、腎細胞腫瘍及び卵巣腫瘍等のがん、例えば、腎細胞癌、腎淡明細胞癌、乳頭状腎細胞癌、卵巣癌、卵巣漿液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌又は非小細胞肺癌）、神経膠芽腫、中皮腫、子宮癌、膵臓癌、ウィルムス腫瘍又は神経芽腫の治療剤として用いることができる。
また、本発明の抗ＣＤＨ６抗体又はその該抗体の機能性断片は、ＣＤＨ６を発現する細胞の検出に用いることができる。
更に、本発明の抗ＣＤＨ６抗体及び当該抗体の機能性断片は、内在化活性を有することから、抗体－薬物コンジュゲートに用いる抗体として供することができる。
薬物として細胞障害活性等の抗腫瘍活性を有する薬物を用いる場合、本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートであって上記「３．抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲート」及び実施例に記載のものは、抗ＣＤＨ６抗体及び／又は内在化活性を有する抗体の機能性断片と、細胞障害活性等の抗腫瘍活性を有する薬物とのコンジュゲートである。この抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートは、ＣＤＨ６を発現する癌細胞に対して抗腫瘍活性を示すため、医薬として、特に癌の治療剤及び／又は予防剤として用いることができる。
本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートは、大気中に放置したり、又は再結晶や精製操作をしたりすることにより、水分を吸収し、あるいは吸着水が付着するなどして、水和物になる場合がある。そのような水を含む化合物又は薬理学的に許容され得る塩も本発明に包含される。
本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートが、アミノ基などの塩基性基を有する場合、所望により薬理学的に許容され得る酸付加塩を形成することができる。そのような酸付加塩としては、例えばフッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩；硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、燐酸塩などの無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などの低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩などのアリ－ルスルホン酸塩；蟻酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、りんご酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；又はオルニチン酸塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩などを挙げることができる。
本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートが、カルボキシ基などの酸性基を有する場合、所望により薬理学的に許容され得る塩基付加塩を形成することができる。そのような塩基付加塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩などの無機塩；ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ－メチルグルカミン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、シクロヘキシルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ－ベンジル－Ｎ－（２－フェニルエトキシ）アミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩などの有機アミン塩などを挙げることができる。
本発明はまた、抗体－薬物コンジュゲートを構成する原子の１又は複数が、その原子の同位体で置換された抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートを包含し得る。放射性同位体と安定同位体の２種類の同位体が存在する。同位体の例としては、例えば、水素の同位体（２Ｈ及び３Ｈ）、炭素の同位体（１１Ｃ、１３Ｃ及び１４Ｃ）、窒素の同位体（１３Ｎ及び１５Ｎ）、酸素の同位体（１５Ｏ、１７Ｏ及び１８Ｏ）、フッ素の同位体（１８Ｆ）などを挙げることができる。同位体で標識された抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物は、例えば、治療剤、予防剤、研究試薬、アッセイ試薬、診断剤、インビボ画像診断剤などとして有用である。同位体で標識された抗体－薬物コンジュゲート、及び、同位体で標識された抗体－薬物コンジュゲートの任意の割合の混合物もすべて本発明に包含される。同位体で標識された抗体－薬物コンジュゲートは、当該分野で公知の方法により、例えば、後述する本発明の製造方法における原料の代わりに同位体で標識された原料を用いることにより、製造することができる。
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの殺細胞活性は例えば、細胞の増殖抑制活性で測定することができる。例えば、ＣＤＨ６を過剰発現する癌細胞株を培養し、抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートを異なる濃度で培養系に添加する。その後、フォーカス形成、コロニー形成及びスフェロイド成長に対する抑制活性を測定することができる。ここで、例えば、腎細胞腫瘍及び卵巣腫瘍由来癌細胞株等を用いることで、腎細胞腫瘍及び卵巣腫瘍に対する細胞増殖抑制活性を調べることができる。
ｉｎ ｖｉｖｏでの実験動物を用いた癌に対する治療効果は、例えば、ＣＤＨ６を高発現している腫瘍細胞株を移植したヌードマウスに抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートを投与し、癌細胞の変化を測定することができる。ここで、例えば、腎細胞癌、腎淡明細胞癌、乳頭状腎細胞癌、卵巣癌、卵巣漿液性腺癌又は甲状腺癌由来の細胞を免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いることで、腎細胞癌、腎淡明細胞癌、乳頭状腎細胞癌、卵巣癌、卵巣漿液性腺癌又は甲状腺癌に対する治療効果を測定することができる。
本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートが適用される癌の種類としては、治療対象となる癌細胞においてＣＤＨ６を発現している癌であれば特に制限されないが、例えば、腎細胞癌（例えば、腎淡明細胞癌又は乳頭状腎細胞癌）、卵巣癌、卵巣漿液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌又は非小細胞肺癌）、神経膠芽腫、中皮腫、子宮癌、膵臓癌、ウィルムス腫瘍又は神経芽腫を挙げることができるが、ＣＤＨ６を発現している限りこれらに制限されない。例として、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌も挙げることができる。より好ましい癌の例としては、腎細胞癌（例えば、腎淡明細胞癌、乳頭状腎細胞癌）又は卵巣癌を挙げることができる。更に好ましい癌として、卵巣癌（例えば、上皮性卵巣癌、卵管癌、及び原発性腹膜癌）を挙げることができる。
本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートは、哺乳動物に対して好適に投与することができるが、より好ましくはヒトである。
本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートが含まれる医薬組成物において使用される物質としては、投与量や投与濃度において、この分野において通常使用される製剤添加物その他から適宜選択して適用することができる。
本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートは、１又は複数の薬学的に適合性の成分を含む医薬組成物として投与され得る。例えば、上記医薬組成物は、代表的には、１又は複数の薬学的キャリア（例えば、滅菌した液体（例えば、水及び油（石油、動物、植物、又は合成起源の油（例えば、ラッカセイ油、大豆油、鉱油、ごま油など）を含む））を含む。水は、上記医薬組成物が静脈内投与される場合に、より代表的なキャリアである。食塩水溶液、並びにデキストロース水溶液及びグリセロール水溶液もまた、液体キャリアとして、特に、注射用溶液のために使用され得る。適切な薬学的賦形剤は、当該分野で公知である。上記組成物はまた、所望であれば、微量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝化剤を含み得る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される。その処方は、投与の態様に対応する。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は化４を含む。いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、白金系癌治療に対する抵抗性を示す患者に投与される。いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、白金系癌治療の完了の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２ヶ月以内に癌が再発した白金抵抗性癌患者に投与される。いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、白金系癌治療の完了の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２ヶ月以内に疾患が再発した白金抵抗性癌患者に投与される。いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、カルボプラチン及び／又はパクリタキセルのレジメン完了の少なくとも２、３、４、５、６、８、８、９、１０、１１、又は１２ヶ月以内に疾患が再発した白金抵抗性癌患者に投与される。
いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、白金／タキサン化学療法、例えばカルボプラチン／パクリタキセル、カルボプラチン／ドセタキセル、シスプラチン／パクリタキセル、及びカルボプラチン／パクリタキセル／ベバシズマブのレジメンによる治療後に投与される。
いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、以下の白金系化学療法、例えばカルボプラチン／パクリタキセル、カルボプラチン／リポソームドキソルビシン、カルボプラチン／ゲムシタビン、シスプラチン／ゲムシタビン、カルボプラチン／イホスファミド、シスプラチン／イホスファミド、オキサリプラチン／５－ＦＵ／ルエコボリン及びオキサリプラチン／カペシタビンのレジメンの１又は複数による治療後に投与される。
いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、白金抵抗性の、好ましくは卵巣癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）、及びＣＤＨ６を発現する他の癌の疾患再発を有する、治療を必要とする患者に投与される。いくつかの態様では、卵巣癌には、上皮性卵巣癌、卵管癌及び原発性腹膜癌が含まれる。
いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、白金系化学療法後に疾患が進行又は再発した卵巣癌を有する患者の治療に適応される。いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、第一選択の白金系化学療法レジメンに失敗した女性における進行卵巣癌の治療に適応される。いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、化学療法後の疾患進行後の卵巣癌の治療に適応される。
いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、単剤として、初期又は後続の化学療法の際又はその後の疾患進行後の転移性卵巣癌を有する患者の治療に適応される。いくつかの態様では、化４を含むＡＤＣは、第一選択又はその後の療法の失敗後の卵巣の転移性癌を有する患者の治療に適応される。
種々の送達システムが公知であり、本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートを投与するために使用され得る。導入方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、及び皮下の経路が挙げられるが、これらに限定されない。投与は、例えば、注入又はボーラス注射によるものであり得る。特定の好ましい実施形態において、上記抗体－薬物コンジュゲートの投与は、注入によるものである。非経口的投与は、好ましい投与経路である。
代表的実施形態において、上記医薬組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合した医薬組成物として、常習的手順に従って処方される。代表的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌の等張性の水性緩衝液中の溶液である。必要である場合、上記医薬はまた、可溶化剤及び注射部位での疼痛を和らげるための局所麻酔剤（例えば、リグノカイン）を含み得る。一般に、上記成分は、（例えば、活性剤の量を示すアンプル又はサシェなどに密封してシールされた容器中の乾燥凍結乾燥粉末又は無水の濃縮物として、別個に、又は単位剤形中で一緒に混合して、のいずれかで供給される。上記医薬が注入によって投与される予定である場合、それは、例えば、滅菌の製薬グレードの水又は食塩水を含む注入ボトルで投薬され得る。上記医薬が注射によって投与される場合、注射用滅菌水又は食塩水のアンプルは、例えば、上記成分が投与前に混合され得るように、提供され得る。
本発明の医薬組成物には本願の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートのみを含む医薬組成物であってもよいし、抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲート及び少なくとも一つのこれ以外の癌治療剤を含む医薬組成物であってもよい。本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートは、他の癌治療剤と共に投与することもでき、これによって抗癌効果を増強させることができる。このような目的で使用される他の抗癌剤は、抗体－薬物コンジュゲートと同時に、別々に、あるいは連続して個体に投与されてもよいし、それぞれの投与間隔を変えて投与してもよい。そうでなければ、追加の抗癌剤及び抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートは、それぞれ異なる投与間隔で対象に投与され得る。本発明において、「第二の薬物」とは、本発明の抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲート以外の治療剤を意味する。追加の抗癌剤は、「第二の薬物」であり得る。しかしながら、本発明において、「第二の薬物」は、いわゆる「第二選択療法」に使用される薬物である必要はない。このような癌の治療剤や第二の薬物、あるいは追加の抗癌剤として、イマチニブ、スニチニブ、及びレゴラフェニブを含むチロシンキナーゼ阻害剤、パルボシクリブを含むＣＤＫ４／６阻害剤、ＴＡＳ－１１６を含むＨＳＰ９０阻害剤、ＭＥＫ１６２を含むＭＥＫ阻害剤、並びにニボルマブ、ペンブロリズマブ及びイピリムマブを含む免疫チェックポイント阻害剤を挙げることができるが、抗腫瘍活性を有する薬物であれば、これらに限定されるものではない。
このような医薬組成物は、選択された組成と必要な純度を持つ製剤として、凍結乾燥製剤あるいは液状製剤として製剤化すればよい。凍結乾燥製剤として調製される医薬組成物は、この分野で使用される適切な医薬添加物を含有する製剤であり得る。また液剤においても同様にして、この分野において使用される各種の製剤添加物を含む液状製剤として製剤化することができる。
医薬組成物の組成及び濃度は投与方法によっても変化する。抗原に対する本発明の医薬組成物に含まれる抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートの親和性、すなわち、抗原に対する抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートの解離定数（Ｋｄ値）に関して、親和性が増加するにつれて（すなわち、Ｋｄ値が低い）、医薬組成物は、その適用用量が減少しても、医薬組成物は薬効を発揮することができる。したがって、抗体－薬物コンジュゲートの投与量の決定に当たっては、抗体－薬物コンジュゲートと抗原との親和性の状況に基づいて投与量を設定することもできる。本発明の抗体－薬物コンジュゲートをヒトに対して投与する際には、例えば、約０．００１～１００ｍｇ／ｋｇを１回あるいは１～１８０日間に１回の間隔で複数回投与すればよい。好適には、０．１～５０ｍｇ／ｋｇを、さらに好適には、１～５０ｍｇ／ｋｇ、１～３０ｍｇ／ｋｇ、１～２０ｍｇ／ｋｇ、１～１５ｍｇ／ｋｇ、２～５０ｍｇ／ｋｇ、２～３０ｍｇ／ｋｇ、２～２０ｍｇ／ｋｇ又は２～１５ｍｇ／ｋｇを１～４週間に１回、好ましくは２～３週間に１回の間隔で複数回投与すればよい。
本開示で使用される白金系薬物又は化学療法剤がシスプラチンである場合、投与方法の例としては、以下の投与量及び投与が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、１５～２０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを５日間連続して１日１回投与し、続いて少なくとも２週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、５０～７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを１日１回投与した後、少なくとも３週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、２５～３５ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを１日１回投与した後、少なくとも１週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１０～２０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを５日間連続して１日１回投与し、続いて少なくとも２週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、７０～９０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを１日１回投与した後、少なくとも３週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、２０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを５日間連続して１日１回投与し、続いて少なくとも２週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを１日１回投与した後、少なくとも３週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを１日１回投与した後、少なくとも２０日間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば２５ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを６０分かけて静脈内点滴で投与し、２週間連続して毎週投与を続けた後、３週間目は休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、ドキソルビシン塩酸塩と組み合わせて、１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを１日１回投与した後、少なくとも３週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、ドキソルビシン塩酸塩と組み合わせて、５０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを１日１回投与した後、少なくとも３週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１又は複数他の抗新生物剤と組み合わせて、１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）／日のシスプラチンを、１日にわたる連続静脈内注入として投与し、続いて少なくとも２０日間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１又は複数他の抗新生物剤と組み合わせて、２５ｍｇ／ｍ２（体表面積）／日のシスプラチンを、４日間連続して連続静脈内注入として投与し、続いて少なくとも１７日間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１又は複数の他の抗新生物剤と組み合わせて、６０～１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを１日１回投与し、続いて少なくとも３週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１又は複数の他の抗新生物剤と組み合わせて、２０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンを５日間連続して１日１回投与し、続いて少なくとも２週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、メトトレキサート、硫酸ビンブラスチン及び塩酸ドキソルビシンと組み合わせて、７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のシスプラチンが通常、単回静脈内注入として投与される。
標準投薬及び投与方法として、１日目に３０ｍｇ／ｍ２のメトトレキサートを投与し、３ ｍｇ／ｍ２の硫酸ビンブラスチン、３０ｍｇ／ｍ２の塩酸ドキソルビシン（力価）及び７０ｍｇ／ｍ２のシスプラチンを２日目に投与する。３０ｍｇ／ｍ２のメトトレキサート及び３ｍｇ／ｍ２の硫酸ビンブラスチンを１５日目及び２２日目に静脈内に注入する。これを１コースとみなし、このコースを４週間ごとに繰り返す。
別の投薬及び投与量として、注射用シスプラチンを２０ ｍｇ／ｍ２でサイクルあたり５日間毎日静脈内投与した。
別の投薬及び投与量として、１日目に３～４週間に１回、注射用シスプラチンをサイクルあたり７５～１００ｍｇ／ｍ２で静脈内投与した。
別の投薬及び投与量として、３～４週間に１回、注射用シスプラチンをサイクルあたり５０～７０ｍｇ／ｍ２で静脈内投与した。重度に事前に治療された患者については、４週間ごとに繰り返されるサイクルあたり５０ｍｇ／ｍ２の初期用量が使用され得る。
本開示で使用される白金系薬物又は化学療法剤がカルボプラチンである場合、投与方法の例としては、以下の投与量及び投与が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、３００～４００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のカルボプラチンを１日１回投与し、続いて少なくとも４週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、トラスツズマブ（遺伝子組換え）及びタキサンと組み合わせて、３００～４００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のカルボプラチンを１日１回投与し、続いて少なくとも３週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えばペンブロリズマブ（遺伝子組換え）及びゲムシタビン塩酸塩と組み合わせて、２［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣに相当する用量でカルボプラチンを１日１回投与する。毎週の投与を２週間連続して継続し、続いて３週間目は休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、イホスファミド及びエトポシドと組み合わせて、６３５ｍｇ／ｍ２（体表面積）のカルボプラチンを１日にわたって静脈内点滴で投与するか、４００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のカルボプラチンを２日にわたって静脈内点滴で投与し、その後に少なくとも３～４週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、硫酸ビンクリスチン、エトポシドと組み合わせて、５６０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のカルボプラチンを１日にわたって静脈内点滴で投与し、少なくとも３～４週間薬物を中断する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、３６０ｍｇ／ｍ２のカルボプラチンを４週間ごとに１日目に静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、３００ｍｇ／ｍ２のカルボプラチンを４週間ごとに１日目に、６サイクル静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、カルボプラチンＡＵＣ １．０～１０［（ｍｇ／ｍＬ）・分］を０．１～４８時間かけて静脈内注入した後、１～１００ｍｇ／ｍ２のペグ化リポソームドキソルビシンを０．１～４８時間かけて静脈内投与し、この治療を２～４週間ごとに１～１０サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、カルボプラチンＡＵＣ ５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］を３０分かけて静脈内注入した後、３０ｍｇ／ｍ２のペグ化リポソームドキソルビシンを６０分かけて静脈内投与し、この治療を３又は４週間ごとに３又は６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、カルボプラチンＡＵＣ ５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］を３０分かけて静脈内注入した後、３０ｍｇ／ｍ２のペグ化リポソームドキソルビシンを６０分かけて静脈内投与し、この治療を３週間ごとに３サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、カルボプラチンＡＵＣ ５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］を３０分かけて静脈内注入した後、３０ｍｇ／ｍ２のペグ化リポソームドキソルビシンを６０分かけて静脈内投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、カルボプラチンＡＵＣ ５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］を３０分かけて静脈内注入した後、３０ｍｇ／ｍ２のペグ化リポソームドキソルビシンを６０分かけて静脈内投与し、この治療を４週間ごとに３サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、カルボプラチンＡＵＣ ５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］を３０分かけて静脈内注入した後、３０ｍｇ／ｍ２のペグ化リポソームドキソルビシンを６０分かけて静脈内投与し、この治療を４週間ごとに６サイクル繰り返す。
本開示で使用されるタキサン又は化学療法剤がパクリタキセルである場合、投与方法の例としては、以下の投与量及び投与が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、２１０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを３時間かけて静脈内点滴で１日１回投与し、その後少なくとも３週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを１時間かけて１日１回静脈内点滴で投与し、週１回の投与を６週間連続して継続した後、少なくとも２週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば８０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを１時間かけて１日１回静脈内点滴で投与し、週１回の投与を３週間連続して継続する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１３５ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを２４時間かけて静脈内点滴で１日１回投与し、その後少なくとも３週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば８０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを１時間かけて１日１回静脈内点滴で投与し、週１回の投与を３週間連続して継続した後、少なくとも２週間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、２６０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを３０分かけて静脈内点滴で１日１回投与し、その後少なくとも２０日間休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを３０分かけて静脈内点滴で１日１回投与し、その後少なくとも６日間休薬する。毎週の投与を３週間連続して継続する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、ゲムシタビンと組み合わせて、１２５ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを３０分かけて静脈内点滴で１日１回投与し、その後少なくとも６日間休薬する。毎週の投与を３週間連続して継続する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを３０分かけて静脈内点滴で１日１回投与し、その後少なくとも６日間休薬する。毎週の投与を３週間連続して継続し、４週間目は薬物を中断する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１又は複数の他の抗新生物剤と組み合わせて、１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）のパクリタキセルを３０分かけて静脈内点滴で１日１回投与し、その後少なくとも６日間休薬する。毎週の投与を３週間連続して継続し、続いて４週間目は休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、５０、９０、１００、１３５又は１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを、２又は３週間ごとに３又は２４時間にわたって静脈内投与する。
本開示で使用されるタキサン又は化学療法剤がドセタキセルである場合、投与方法の例としては、以下の投与量及び投与が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、６０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のドセタキセルを３～４週間に１回、１日１回１時間かけて静脈内点滴で投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）のドセタキセルを３～４週間に１回、１日１回１時間かけて静脈内点滴で投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２（体表面積）のドセタキセルを３週間に１回、１日１回１時間かけて静脈内点滴で投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、６０～１００ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを３週間ごとに１時間かけて静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、５０ｍｇ／ｍ２のドキソルビシン及び５００ｍｇ／ｍ２のシクロホスファミドの３週間ごとの６コースの１時間後に、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを３週間毎に１時間かけて静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内投与し、すぐに３週間ごとに３０～６０分間かけてシスプラチン７５ｍｇ／ｍ２を投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間の静脈内注入として３週間ごとに投与する。プレドニゾン５ｍｇを１日２回連続して経口投与してもよい。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間の静脈内注入として投与し、続いてシスプラチン７５ｍｇ／ｍ２を１～３時間の静脈内注入として投与し（両方とも１日目のみ）、続いてフルオロウラシル７５０ｍｇ／ｍ２を、シスプラチン注入の最後から開始して５日間の２４時間の連続静脈内注入として１日あたり投与する。治療を３週間ごとに繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間の静脈内注入として投与し、続いてシスプラチン７５ｍｇ／ｍ２を１時間かけて静脈内に、１日目に投与し、続いてフルオロウラシルを７５０ｍｇ／ｍ２／日で５日間の連続静脈内注入として投与する。このレジメンを３週間ごとに４サイクル投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１日目に１時間の静脈内注入として投与し、続いてシスプラチン１００ｍｇ／ｍ２を３０分～３時間の注入として投与し、続いてフルオロウラシル１０００ｍｇ／ｍ２／日を１日目から４日目までの連続注入として投与する。このレジメンを３週間ごとに３サイクル投与する。
本開示で使用される白金系薬物及びタキサンがシスプラチン及びパクリタキセルである場合、投与方法の例としては、以下の投与量及び投与が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、１日目に１０～３００ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを０．１～４８時間かけて持続静脈内注入した後、１日目又は２日目に１～２００ｍｇ／ｍ２のシスプラチンを腹腔内投与し、８日目に１０～３０ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを腹腔内投与し、この治療を２～５週間ごとに１～１０サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１日目に１３５～１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３又は２４時間かけて持続静脈内注入した後、１日目又は２日目に７５～１００ｍｇ／ｍ２のシスプラチンを腹腔内投与し、８日目に６０ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを腹腔内投与し、この治療を３週間ごとに３～６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１日目に１３５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを２４時間かけて持続静脈内注入した後、２日目に７５ｍｇ／ｍ２のシスプラチンを腹腔内投与し、８日目に６０ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを腹腔内投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１日目に１３５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを２４時間かけて持続静脈内注入した後、２日目に１００ｍｇ／ｍ２のシスプラチンを腹腔内投与し、８日目に６０ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを腹腔内投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、パクリタキセルを１７５ｍｇ／ｍ２の用量で３時間かけて静脈内投与し、続いてシスプラチンを７５ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内投与し、レジメンを３週間ごとに与えてもよい。
別の投薬及び投与として、例えば、パクリタキセルを１３５ｍｇ／ｍ２の用量で２４時間かけて静脈内投与し、続いてシスプラチンを７５ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内投与し、レジメンを３週間ごとに与えてもよい。
本開示で使用される白金系薬物及びタキサンがカルボプラチン及びパクリタキセルである場合、投与方法の例としては、以下の投与量及び投与が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、１０～３００ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを０．１～４８時間かけて静脈内注入した後、１日目に１．０～１０［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに１～１０サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２又は１８０ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に５～６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに３～６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに３サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに４サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］分のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに５サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに３サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに４サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に５．５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに５サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に５．５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに３サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに４サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに５サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１８０ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１８０ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に５．５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１８０ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１日目、８日目、及び１５日目に８０ｍｇ／ｍ２の用量高密度パクリタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に５～６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１日目、８日目、及び１５日目に８０ｍｇ／ｍ２の用量高密度パクリタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１日目、８日目、及び１５日目に８０ｍｇ／ｍ２の用量高密度パクリタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に５．５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１日目、８日目、及び１５日目に８０ｍｇ／ｍ２の用量高密度パクリタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、６０ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目、８日目、及び１５日目に２［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを３０分かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、このサイクルを２１日ごとに６サイクル繰り返す（１８週間）。
別の投薬及び投与として、例えば、８０ｍｇ／ｍ２の用量高密度パクリタキセルを毎週１時間かけて静脈内注入した後、３週間ごとに６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを静脈内注入としてカルボプラチンを投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、８０ｍｇ／ｍ２の用量高密度パクリタキセルを毎週１時間かけて静脈内投与し、ＡＵＣ ６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のカルボプラチンを３週間ごとに投与する。
本開示で使用される白金系薬物及びタキサンがカルボプラチン及びドセタキセルである場合、投与方法の例としては、以下の投与量及び投与が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、１０～３００ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを０．１～４８時間かけて静脈内注入した後、１日目に１．０～１０［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを０．１～４８時間かけて静脈内注入してカルボプラチンを投与し、この治療を２１日ごとに１～１０サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、６０～７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に５～６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、６０ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、６５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、７０ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、６０～７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、６０ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、６５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、７０ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルを１時間かけて静脈内注入した後、１日目に６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のＡＵＣを１時間かけて静脈内注入としてカルボプラチンを投与し、この治療を３週間ごとに６サイクル繰り返す。
本開示で使用される代謝拮抗物質又は化学療法剤がゲムシタビンである場合、投与方法の例としては、以下の投与量及び投与が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを３０分かけて単回静脈内点滴として投与し、毎週の投与を３週間連続して継続し、続いて４週間目は休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば１２５０ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを３０分かけて単回静脈内点滴で投与し、２週間連続して毎週投与を続けた後、３週間目は休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、シスプラチンと組み合わせて、１２５０ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを３０分かけて単回静脈内点滴で投与し、２週間連続して毎週投与を続けた後、３週間目は休薬する。これを１コースとみなし、投与を繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを、各２１日間サイクルの１日目及び８日目に３０分間にわたって静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、ゲムシタビン投与後１日目に静脈内投与されるカルボプラチンＡＵＣ４［（ｍｇ／ｍＬ）・分］と組み合わせて、１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを各２１日間サイクルの１日目及び８日目に３０分間かけて静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、ゲムシタビン投与後１日目に静脈内投与されるカルボプラチンＡＵＣ４［（ｍｇ／ｍＬ）・分］と組み合わせて、８００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを各２１日間サイクルの１日目及び８日目に３０分間かけて静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、ゲムシタビン投与後１日目に静脈内投与されるカルボプラチンＡＵＣ４［（ｍｇ／ｍＬ）・分］と組み合わせて、８００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを各２１日間サイクルの１日目及び８日目に３０分間かけて静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、ゲムシタビン投与後１日目に静脈内投与されるカルボプラチンＡＵＣ４［（ｍｇ／ｍＬ）・分］と組み合わせて、各２１日間サイクルの１日目に１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを３０分間かけて静脈内投与し、８日目に８００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを３０分間かけて静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、１２５０ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを、各２１日間サイクルの１日目及び８日目に３０分間にわたって静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、１２５０ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを、ゲムシタビン投与前の１日目に３時間の静脈内注入として投与されるパクリタキセル１７５ｍｇ／ｍ２と組み合わせて、各２１日間サイクルの１日目及び８日目に３０分間にわたって静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを、各２８日間サイクルの１日目、８日目及び１５日目に３０分間にわたって静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、ゲムシタビン投与後１日目に３時間静脈内投与されるシスプラチン１００ｍｇ／ｍ２と組み合わせて、１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを各２８日間サイクルの１日目、８日目及び１５日目に３０分間かけて静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、１２５０ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを、各２１日間サイクルの１及び８日目に３０分間にわたって静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、ゲムシタビン投与後１日目に静脈内投与されるシスプラチン１００ｍｇ／ｍ２と組み合わせて、１２５０ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを各２１日間サイクルの１日目及び８日目に３０分間かけて静脈内投与する。
別の投薬及び投与として、例えば、１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンを、最初の７週間にわたって毎週１回、３０分間かけて静脈内投与し、続いて、各２８日間サイクルの１日目、８日目及び１５日目に１週間の休薬及び毎週の投与を行う。
本開示で使用される白金系薬物及びタキサンがカルボプラチン及びパクリタキセルであり、第二の薬物がベバシズマブである場合、投与方法の例としては、以下の投与量及び投与が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、１０～３００ ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを０．１～４８時間かけて静脈内投与した後、ＡＵＣ １．０～１０［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のカルボプラチンを０．１～４８時間かけて静脈内投与し、１．０～５０ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを０．１～４８時間かけて静脈内投与する。治療は２～５週間ごとに１～１０サイクル繰り返す。ベバシズマブは、最大３０回のさらなるサイクルで投与され得る。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内投与した後、ＡＵＣ ５又は６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のカルボプラチンを３０～６０分かけて静脈内投与し、７．５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを１日目に３０～９０分かけて静脈内投与する。治療は、５又は６サイクルにわたって３週間ごとに繰り返す。ベバシズマブは、最大１２回のさらなるサイクルで投与され得る。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内投与した後、ＡＵＣ ６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のカルボプラチンを３０～６０分かけて静脈内投与し、７．５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを１日目に３０～９０分かけて静脈内投与する。治療は、６サイクルにわたって３週間ごとに繰り返す。ベバシズマブは、最大１２回のさらなるサイクルで投与され得る。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内投与した後、ＡＵＣ ６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のカルボプラチンを３０～６０分かけて静脈内投与し、７．５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを１日目に３０～９０分かけて静脈内投与する。治療は、５サイクルにわたって３週間ごとに繰り返す。ベバシズマブは、最大１２回のさらなるサイクルで投与され得る。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内投与した後、ＡＵＣ ５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のカルボプラチンを３０～６０分かけて静脈内投与し、７．５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを１日目に３０～９０分かけて静脈内投与する。治療は、６サイクルにわたって３週間ごとに繰り返す。ベバシズマブは、最大１２回のさらなるサイクルで投与され得る。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内投与した後、ＡＵＣ ５［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のカルボプラチンを３０～６０分かけて静脈内投与し、７．５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを１日目に３０～９０分かけて静脈内投与する。治療は、５サイクルにわたって３週間ごとに繰り返す。ベバシズマブは、最大１２回のさらなるサイクルで投与され得る。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内投与した後、１日目にＡＵＣ ６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のカルボプラチンを３０分かけて静脈内投与する。コース２から開始して、１５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを３０～９０分かけて１日目に静脈内投与する。治療を２１日ごとに６コース繰り返す。７コースから開始して、ベバシズマブ単独を１日目に３０～９０分間かけて静脈内投与する。ベバシズマブによる治療を２１日ごとに最大２２コース繰り返す。
別の投薬及び投与として、例えば、１７５ｍｇ／ｍ２のパクリタキセルを３時間かけて静脈内投与した後、１日目にＡＵＣ ６［（ｍｇ／ｍＬ）・分］のカルボプラチンを１時間かけて静脈内投与する。コース２から開始して、１５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを３０～９０分かけて１日目に静脈内投与する。治療を２１日ごとに６コース繰り返す。７コースから開始して、ベバシズマブ単独を１日目に３０～９０分間かけて静脈内投与する。ベバシズマブによる治療を２１日ごとに最大２２コース繰り返す。
以下、本発明を実施例により具体的に説明する。しかしながら、これらの実施例は、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。また、これらはいかなる意味においても限定的に解釈されるものではない。なお、下記実施例において遺伝子操作に関する各操作は特に明示がない限り、「モレキュラークローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）」（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．及びＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．著，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓより１９８９年発刊）に記載の方法及びその他の当業者が使用する実験書に記載の方法により行うか、又は、市販の試薬やキットを用いる場合には市販品の指示書に従って行った。また、本明細書において、特に記載のない試薬、溶媒及び出発材料は、市販の供給源から容易に入手可能である。
［参考例１：内在化活性を有するラット抗ヒトＣＤＨ６抗体の取得］
１）－１ ヒト、マウス、ラット及びカニクイザルＣＤＨ６発現ベクターの構築
ヒトＣＤＨ６タンパク質（ＮＰ＿００４９２３）をコードするｃＤＮＡ発現ベクター（ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＲＣ２１７８８９）を用いて、当業者に公知な方法に従い哺乳動物発現用ベクターに組み込むことによってヒトＣＤＨ６発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６が作製された。ヒトＣＤＨ６ ＯＲＦ（Ｏｐｅｎ Ｒｅａｄｉｎｇ Ｆｒａｍｅ）のアミノ酸配列を配列番号１に示す。
マウスＣＤＨ６タンパク質（ＮＰ＿０３１６９２）をコードするｃＤＮＡ発現ベクター（ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＭＣ２２１６１９）を用いて、当業者に公知な方法に従い哺乳動物発現用ベクターに組み込むことによってマウスＣＤＨ６発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１－ｍＣＤＨ６、及びｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ－９－ｍＣＤＨ６が作製された。マウスＣＤＨ６ ＯＲＦのアミノ酸配列を配列番号７に示す。
ラットＣＤＨ６タンパク質（ＮＰ＿０３７０５９）をコードするｃＤＮＡ発現ベクター（ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＲＮ２１１８５０）の各ｃＤＮＡ部分を用いて、当業者に公知な方法に従い哺乳動物発現用ベクターに組み込むことによってラットＣＤＨ６発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１－ｒＣＤＨ６、及びｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ－９－ｒＣＤＨ６が作製された。ラットＣＤＨ６ ＯＲＦのアミノ酸配列を配列番号８に示す。
カニクイザルＣＤＨ６タンパク質をコードするｃＤＮＡは、カニクイザル腎臓の全ＲＮＡより合成したｃＤＮＡを鋳型にプライマー１（５’－ＣＡＣＣＡＴＧＡＧＡＡＣＴＴＡＣＣＧＣＴＡＣＴＴＣＴＴＧＣＴＧＣＴＣ－３’）（配列番号８５）及びプライマー２（５’－ＴＴＡＧＧＡＧＴＣＴＴＴＧＴＣＡＣＴＧＴＣＣＡＣＴＣＣＴＣＣ－３’）（配列番号８６）を用いてクローニングを行った。得られた配列が、カニクイザルＣＤＨ６（ＮＣＢＩ，ＸＰ＿００５５５６６９１．１）の細胞外領域と一致することを確認した。また、ＥＭＢＬで登録されたカニクイザルＣＤＨ６（ＥＨＨ５４１８０．１）と全長配列が一致することを確認した。当業者に公知な方法に従い哺乳動物発現用ベクターに組み込むことによってカニクイザルＣＤＨ６発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１－ｃｙｎｏＣＤＨ６が作製された。カニクイザルＣＤＨ６ ＯＲＦのアミノ酸配列を配列番号９に示す。
作製したプラスミドＤＮＡの大量調製は、ＥｎｄｏＦｒｅｅ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｇｉｇａ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて行った。
１）－２ 免疫
免疫にはＷＫＹ／Ｉｚｍラットの雌（日本エスエルシー社）を使用した。まずラット両足下腿部をＨｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）にて前処理後、同部位に参考例１）－１で作製したヒトＣＤＨ６発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６を筋肉内注射した。続けて、ＥＣＭ８３０（ＢＴＸ）を使用し、２ニードル電極を用いて、同部位にインビボエレクトロポレーションを実施した。約二週間に一度、同様のインビボエレクトロポレーションを繰り返した後、ラットのリンパ節又は脾臓を採取しハイブリドーマ作製に用いた。
１）－３ ハイブリドーマ作製
リンパ節細胞あるいは脾臓細胞とマウスミエローマＳＰ２／０－ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ，Ｎｏ．ＣＲＬ－１ ５８１）とをＬＦ３０１ Ｃｅｌｌ Ｆｕｓｉｏｎ Ｕｎｉｔ（ＢＥＸ社）を用いて電気細胞融合した後、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ Ｄ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）に懸濁し、希釈して３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で培養した。出現した各々のハイブリドーマコロニーは、モノクローンとして回収され、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）に懸濁して３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で培養した。適度に細胞が増殖した後、各々のハイブリドーマ細胞の凍結ストックを作製すると共に、得られたハイブリドーマ培養上清を抗ヒトＣＤＨ６抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングに用いた。
１）－４ Ｃｅｌｌ－ＥＬＩＳＡ法による抗体産生ハイブリドーマのスクリーニング
１）－４－１ Ｃｅｌｌ－ＥＬＩＳＡ用抗原遺伝子発現細胞の調製
２９３α細胞（インテグリンαｖ及びインテグリンβ３を発現するＨＥＫ２９３由来の安定発現細胞株）を１０％ ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地中５ｘ１０５細胞／ｍＬになるよう調製した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いた形質移入手順に従って、この２９３α細胞に対して、ｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６若しくはｐｃＤＮＡ３．１－ｃｙｎｏＣＤＨ６又は、陰性コントロールとしてｐｃＤＮＡ３．１のＤＮＡを導入し、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に１００μＬずつ分注した。その後、１０％ ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地中で３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で細胞を２４～２７時間培養した。得られた遺伝子導入細胞を接着状態のまま、Ｃｅｌｌ－ＥＬＩＳＡに使用した。
１）－４－２ Ｃｅｌｌ－ＥＬＩＳＡ
参考例１）－４－１で調製した発現ベクター遺伝子導入２９３α細胞の培養上清を除去後、ｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６若しくはｐｃＤＮＡ３．１－ｃｙｎｏＣＤＨ６又はｐｃＤＮＡ３．１遺伝子導入２９３α細胞の各々に対しハイブリドーマ培養上清を添加した。細胞を４℃で１時間静置した。ウェル中の細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳ（＋）で１回洗浄後、５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳ（＋）で５００倍に希釈したＡｎｔｉ－Ｒａｔ ＩｇＧ－Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）を加えた。細胞を４℃で１時間静置した。ウェル中の細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳ（＋）で３回洗浄した後、ＯＰＤ発色液（ＯＰＤ溶解液（０．０５ Ｍ クエン酸３ナトリウム、０．１Ｍ リン酸水素２ナトリウム・１２水 ｐＨ４．５）にｏ－フェニレンジアミン二塩酸塩（和光純薬社）、Ｈ２Ｏ２をそれぞれ０．４ｍｇ／ｍｌ、０．６％（ｖ／ｖ）になるように溶解）を１００μＬ／ウェルで添加した。時々撹拌しながら着色反応を行った。その後、１Ｍ ＨＣｌを１００μＬ／ウェルで添加して発色反応を停止させた後、プレートリーダー（ＥＮＶＩＳＩＯＮ：ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）で４９０ｎｍの吸光度を測定した。コントロールのｐｃＤＮＡ３．１遺伝子導入２９３α細胞と比較し、ｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６又はｐｃＤＮＡ３．１－ｃｙｎｏＣＤＨ６発現ベクター遺伝子導入２９３α細胞の方でより高い吸光度を示す培養上清を産生するハイブリドーマを、ヒトＣＤＨ６及びカニクイザルＣＤＨ６に結合する抗体を産生するハイブリドーマとして選択した。
１）－５ フローサイトメトリーによるカニクイザルＣＤＨ６への選択的結合抗体のスクリーニング
１）－５－１ フローサイトメトリー解析用抗原遺伝子発現細胞の調製
２９３Ｔ細胞を２２５ｃｍ２フラスコ（Ｓｕｍｉｔｏｍｏ Ｂａｋｅｌｉｔｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）に５×１０４細胞／ｃｍ２で播種した後、１０％ ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地中、３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で細胞を一晩培養した。ｐｃＤＮＡ３．１－ｃｙｎｏＣＤＨ６又は陰性コントロールとしてｐｃＤＮＡ３．１を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を用いて２９３Ｔ細胞に導入し、さらに３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で一晩培養した。各ベクターを遺伝子導入した２９３Ｔ細胞をＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）で処理し、１０％ ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで細胞を洗浄した後、５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳに懸濁した。得られた細胞懸濁液をフローサイトメトリー解析に使用した。
１）－５－２ フローサイトメトリー解析
参考例１）－４のＣｅｌｌ－ＥＬＩＳＡで選択されたヒトＣＤＨ６及びカニクイザルＣＤＨ６に結合する抗体を産生するハイブリドーマが産生する抗体のカニクイザルＣＤＨ６に対する結合特異性をフローサイトメトリー法によりさらに確認した。参考例１）－５－１で調製した一過性発現２９３Ｔ細胞の懸濁液を遠心分離した後、上清を除去した。その後、各ハイブリドーマからの培養上清の添加により細胞を懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで５００倍に希釈したＡｎｔｉ－Ｒａｔ ＩｇＧ ＦＩＴＣ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）を加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、２μｇ／ｍｌの７－アミノアクチノマイシンＤ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社）を含む５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳに再懸濁し、フローサイトメーター（ＦＣ５００：ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ社）で検出した。データ解析はＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で行った。７－アミノアクチノマイシンＤ陽性の死細胞をゲートで除外した後、生細胞のＦＩＴＣ蛍光強度のヒストグラムを作成した。コントロールであるｐｃＤＮＡ３．１遺伝子導入２９３Ｔ細胞の蛍光強度ヒストグラムに対しｐｃＤＮＡ３．１－ｃｙｎｏＣＤＨ６遺伝子導入２９３Ｔ細胞のヒストグラムが強蛍光強度側にシフトしている抗体を産生するハイブリドーマを細胞膜表面上に発現するカニクイザルＣＤＨ６に特異的に結合する抗体産生ハイブリドーマとして選択した。
１）－６ ラットモノクローナル抗体のアイソタイプの決定
参考例１）－５で選択したラット抗ＣＤＨ６抗体産生ハイブリドーマの中から、ヒトＣＤＨ６及びサルＣＤＨ６に強く特異的に結合することが示唆されたクローンｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６、ｒＧ０６１を選抜し、各抗体のアイソタイプを同定した。抗体の重鎖のサブクラス、軽鎖のタイプは、ＲＡＴ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＹ ＩＳＯＴＹＰＩＮＧ ＴＥＳＴ ＫＩＴ（ＤＳ Ｐｈａｒｍａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社）により決定された。その結果、ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６、ｒＧ０６１の４クローンともサブクラスは、ＩｇＧ２ｂ、タイプはκ鎖であることが確認された。
１）－７ ラット抗ヒトＣＤＨ６抗体の調製
１）－７－１ 培養上清作製
ラット抗ヒトＣＤＨ６モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養上清から精製した。まず、ラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体産生ハイブリドーマをＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）で充分量まで増殖させた後、Ｕｌｔｒａ Ｌｏｗ ＩｇＧ ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を２０％添加したＨｙｂｒｉｄｏｍａ ＳＦＭ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）に培地交換した。その後、ハイブリドーマを４～５日間培養した。本培養上清を回収し、０．８μｍのフィルターに通した後、さらに０．２μｍのフィルターに通して不溶物を除去した。
１）－７－２ ラット抗ＣＤＨ６抗体の精製
参考例１）－７－１で作製したハイブリドーマの培養上清から抗体（ラット抗ＣＤＨ６抗体（ｒＧ０１９，ｒＧ０５５，ｒＧ０５６，ｒＧ０６１））をＰｒｏｔｅｉｎ Ｇアフィニティークロマトグラフィーで精製した。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）に抗体を吸着させ、ＰＢＳでカラムを洗浄後に０．１Ｍ グリシン／塩酸水溶液（ｐＨ２．７）で溶出した。溶出液に１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ９．０）を加えてｐＨ７．０～７．５に調整した。その後、Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ＵＦ Ｆｉｌｔｅｒ Ｄｅｖｉｃｅ ＶＩＶＡＳＰＩＮ２０（分画分子量ＵＦ３０Ｋ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）にてＨＢＳｏｒ（２５ｍＭ ヒスチジン／５％ ソルビトール、ｐＨ６．０）へのバッファー置換を行うとともに抗体の濃縮を行い、抗体濃度を１ｍｇ／ｍＬに調製した。最後にＭｉｎｉｓａｒｔ－Ｐｌｕｓ ｆｉｌｔｅｒ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）でろ過し、精製サンプルとした。
［参考例２：ラット抗ＣＤＨ６抗体のＩｎ ｖｉｔｒｏ評価］
２）－１ フローサイトメトリーによるラット抗ＣＤＨ６抗体の結合能評価
参考例１）－７で作製したラット抗ＣＤＨ６抗体のヒトＣＤＨ６結合性をフローサイトメトリー法により評価した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を用いて、参考例１）－１で作製したｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６を２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ）に一過性に導入した。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２条件下で一晩培養後、細胞懸濁液を調製した。遺伝子導入２９３Ｔ細胞懸濁液を遠心し、上清を除去した。その後、参考例１）－７で調製したラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種（クローン番号は、ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又はラットＩｇＧコントロール（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を終濃度１０ｎｇ／ｍＬで加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで５０倍に希釈したＡｎｔｉ－Ｒａｔ ＩｇＧ（ｗｈｏｌｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）－ＦＩＴＣ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）を加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、フローサイトメーター（ＦＣ５００：Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で検出を行った。データ解析はＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で行った。結果を図１に示す。図１のヒストグラムにおいて、横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。網掛けで示すヒストグラムはｈＣＤＨ６を遺伝子導入していない陰性コントロール２９３Ｔ細胞を用いた場合を示し、白抜き実線で示すヒストグラムは、ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３Ｔ細胞を用いた場合を示す。細胞表面のｈＣＤＨ６に抗体が結合したことによって蛍光強度が増強したことを示す。ラットＩｇＧコントロールはいずれの細胞にも結合しない。この結果、作製したラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種はｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６遺伝子導入２９３Ｔ細胞に結合することを確認した。
２）－２ フローサイトメトリーによるラット抗ＣＤＨ６抗体のＣＤＨ６結合部位の解析
２）－２－１ ヒトＣＤＨ６各ドメイン欠失体発現ベクターの構築
ヒトＣＤＨ６の細胞外全長には５つの細胞外ドメイン、ＥＣ１（配列番号２）、ＥＣ２（配列番号３）、ＥＣ３（配列番号４）、ＥＣ４（配列番号５）、ＥＣ５（配列番号６）が存在する。ヒトＣＤＨ６全長から、５つのＥＣドメインを各一箇所ずつ欠失発現した遺伝子をＧｅｎｅＡｒｔで合成し、当業者に公知な方法に従い哺乳動物発現用ベクターｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ－９ベクター（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）へ組み込み、ＥＣ１からＥＣ５をそれぞれ欠失した、各ドメイン欠失体発現ベクターを作製した。
２）－２－２ フローサイトメトリーによるドメイン欠失体を用いたラット抗ＣＤＨ６抗体のエピトープ解析
各ＥＣドメイン欠失ベクターを遺伝子導入した２９３α細胞株を用いたフローサイトメトリー解析により、ラット抗ヒトＣＤＨ６抗体の結合エピトープを同定した。インテグリンαｖ及びインテグリンβ３発現ベクターをＨＥＫ２９３細胞内に安定形質移入した細胞株２９３α細胞株に対して、参考例２）－２－１で作成した各ドメイン欠失体発現ベクター、及び全長ヒトＣＤＨ６を発現するｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６をＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて一過性に遺伝子導入した。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２条件下で一晩培養後、細胞懸濁液を調製した。遺伝子導入２９３α細胞懸濁液を遠心し、上清を除去した。その後、参考例１）－７で調製したラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種（クローン番号は、ｒＧ０１９、ｒＧ０５５、ｒＧ０５６及びｒＧ０６１）又はラットＩｇＧコントロール（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を終濃度２０ｎＭで加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで５０倍に希釈したＡｎｔｉ－Ｒａｔ ＩｇＧ（ｗｈｏｌｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）－ＦＩＴＣ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社）を加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、フローサイトメーター（ＣａｎｔｏＩＩ：ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で検出を行った。データ解析はＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で行った。結果を図２－１～図２－６に示す。図２－１～図２－６のヒストグラムにおいて、横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。網掛けで示すヒストグラムは遺伝子導入していない陰性コントロール２９３α細胞を用いた場合を示し、白抜き実線で示すヒストグラムは、全長ｈＣＤＨ６又は各ＥＣドメイン欠失体を発現する２９３細胞を用いた場合を示す。細胞表面の全長ｈＣＤＨ６又は各ＥＣドメイン欠失体に抗体が結合した場合は、蛍光強度が増強する。ラットＩｇＧコントロールはいずれの遺伝子導入細胞にも結合しない。作製したラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種は、全長ｈＣＤＨ６、ＥＣ１欠失体、ＥＣ２欠失体、ＥＣ４欠失体、及びＥＣ５欠失体には結合するが、ＥＣ３欠失体には結合しない。この結果から、ラット抗ＣＤＨ６モノクローナル抗体４種はｈＣＤＨ６のＥＣ３をエピトープとして特異的に結合することが示された。
２）－３ ラット抗ＣＤＨ６抗体の内在化活性
２）－３－１ ヒト腫瘍細胞株におけるＣＤＨ６の発現確認
取得抗体の評価に用いるＣＤＨ６陽性ヒト腫瘍細胞株を選抜するため、公知データベースからＣＤＨ６発現情報を検索し、フローサイトメトリー法により細胞膜表面でのＣＤＨ６の発現を評価した。ヒト卵巣腫瘍細胞株ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３，ＰＡ－１，ＥＳ－２及びヒト腎細胞腫瘍細胞株７８６－Ｏ（全てＡＴＣＣから入手）を３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で培養した後、細胞懸濁液を調製した。細胞を遠心分離し、次いで上清を除去した。その後、細胞を遠心し、上清を除去した後、市販抗ヒトＣＤＨ６抗体（ＭＡＢＵ２７１５，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）又は陰性コントロールとしてマウスＩｇＧ１（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を終濃度５０ｕｇ／ｍＬ加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで５０倍に希釈したＦ（ａｂ’）２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ＦＩＴＣ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ（Ｄａｋｏ）を加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、フローサイトメーター（ＣａｎｔｏＩＩ：ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で検出を行った。データ解析はＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で行った。結果を図３に示す。図３のヒストグラムにおいて、横軸は抗体結合量を表すＦＩＴＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。網掛けで示すヒストグラムは陰性コントロールｍＩｇＧ１で染色した場合を示し、白抜き実線で示すヒストグラムは抗ヒトＣＤＨ６抗体で染色した場合を示す。細胞表面のｈＣＤＨ６に抗体が結合したことによって蛍光強度が増強したことを示す。ｍＩｇＧ１コントロールはいずれの細胞にも結合しない。この結果、ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３，ＰＡ－１及び７８６－Ｏ細胞株は、内在的にＣＤＨ６を細胞表面上に発現することが示された。一方、ＥＳ－２細胞株はＣＤＨ６を全く発現しないことが示された。
２）－３－２ ラット抗ＣＤＨ６抗体の内在化活性評価
ラット抗ＣＤＨ６抗体の内在化活性は、タンパク質合成を阻害する毒素（サポリン）を結合させた抗ラットＩｇＧ試薬Ｒａｔ－ＺＡＰ（ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＴＡＲＧＥＴＩＮＧ ＳＹＳＴＥＭＳ）を用いて評価した。すなわち、ヒトＣＤＨ６陽性卵巣腫瘍細胞株ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３（ＡＴＣＣ）を４ｘ１０３細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種して３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で一晩培養した。ヒトＣＤＨ６陽性腎細胞腫瘍細胞株７８６－Ｏ（ＡＴＣＣ）は１ｘ１０３細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種して一晩培養した。翌日、ラット抗ＣＤＨ６抗体（終濃度：１ｎＭ）又は、陰性コントロール抗体としてラットＩｇＧ２ｂ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加した。さらに、Ｒａｔ－ＺＡＰ（終濃度：０．５ｎＭ）又は、陰性コントロールとして毒素を結合していないＧｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｒａｔ ＩｇＧ，Ｆｃ（ｇａｍｍａ）Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）（終濃度：０．５ｎＭ）を添加し、３日間３７℃、５％ＣＯ２条件下で細胞を培養した。生存細胞数は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＴＭ）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によるＡＴＰ活性（ＲＬＵ）の定量で測定した。この評価では、ラット抗ＣＤＨ６抗体の内在化活性に依存してＲａｔ－ＺＡＰが細胞内に取り込まれ、タンパク合成を阻害するサポリンが細胞内に放出されることで、細胞増殖が抑制される。抗ＣＤＨ６抗体添加による細胞増殖抑制作用は、Ｒａｔ－ＺＡＰの代わりに陰性コントロールを添加したウェルの生存細胞数を１００％とした相対生存率で表記した。図４にグラフ及び細胞生存率の表を示す。この結果、ラット抗ＣＤＨ６抗体はＣＤＨ６に結合して内在化を引き起こすことが示された。
［参考例３：ラット抗ＣＤＨ６抗体の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列の決定］
３）－１ ｒＧ０１９重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の遺伝子断片の増幅及び配列決定
３）－１－１ Ｇ０１９からの全ＲＮＡの調製
ｒＧ０１９の各可変領域をコードするｃＤＮＡを増幅するためＧ０１９よりＴＲＩｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ａｍｂｉｏｎ社）を用いて全ＲＮＡを調製した。
３）－１－２ ５’－ＲＡＣＥ ＰＣＲによるｒＧ０１９の重鎖可変領域をコードするｃＤＮＡの増幅とヌクレオチド配列の決定
重鎖可変領域をコードするｃＤＮＡの増幅は、参考例３）－１－１で調製した全ＲＮＡの約１μｇとＳＭＡＲＴｅｒ ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用いて実施した。ｒＧ０１９の重鎖遺伝子の可変領域のｃＤＮＡをＰＣＲで増幅するためのプライマーとして、ＵＰＭ（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｉｍｅｒ Ａ Ｍｉｘ：ＳＭＡＲＴｅｒ ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔに付属）、及び公知のラット重鎖の定常領域の配列から設計したプライマーを用いた。
５’－ＲＡＣＥ ＰＣＲで増幅した重鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡをプラスミドにクローニングし、次に重鎖の可変領域のｃＤＮＡのヌクレオチド配列のシークエンス解析を実施した。
決定されたｒＧ０１９の重鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を配列番号１６に示し、アミノ酸配列を配列番号１５に示した。
３）－１－３ ５’－ＲＡＣＥ ＰＣＲによるｒＧ０１９の軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡの増幅とヌクレオチド配列の決定
参考例３）－１－２と同様の方法で実施した。ただし、ｒＧ０１９の軽鎖遺伝子の可変領域のｃＤＮＡをＰＣＲで増幅するためのプライマーとして、ＵＰＭ（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｉｍｅｒ Ａ Ｍｉｘ：ＳＭＡＲＴｅｒ ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔに付属）、及び公知のラット軽鎖の定常領域の配列から設計したプライマーを用いた。
決定されたｒＧ０１９の軽鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を配列番号１１に示し、アミノ酸配列を配列番号１０に示した。
３）－２ ｒＧ０５５重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の遺伝子断片の増幅及び配列決定
参考例３）－１と同様の方法で配列を決定した。
決定されたｒＧ０５５の重鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を配列番号２６に示し、アミノ酸配列を配列番号２５に示した。ｒＧ０５５の軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を配列番号２１に示し、アミノ酸配列を配列番号２０に示す。
３）－３ ｒＧ０５６重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の遺伝子断片の増幅及び配列決定
参考例３）－１と同様の方法で配列を決定した。
決定されたｒＧ０５６の重鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を配列番号３６に示し、アミノ酸配列を配列番号３５に示した。ｒＧ０５６の軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を配列番号３１に示し、アミノ酸配列を配列番号３０に示す。
３）－４ ｒＧ０６１重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の遺伝子断片の増幅及び配列決定
参考例３）－１と同様の方法で配列を決定した。
決定されたｒＧ０６１の重鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を配列番号４６に示し、アミノ酸配列を配列番号４５に示した。ｒＧ０６１の軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を配列番号４１に示し、アミノ酸配列を配列番号４０に示す。
［参考例４：ヒトキメラ化抗ＣＤＨ６抗体ｃｈＧ０１９の作製］
４）－１ ヒトキメラ化抗ＣＤＨ６抗体ｃｈＧ０１９の発現ベクターの構築
４）－１－１ キメラ及びヒト化軽鎖発現ベクターｐＣＭＡ－ＬＫの構築
プラスミドｐｃＤＮＡ３．３－ＴＯＰＯ／ＬａｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を制限酵素ＸｂａＩ及びＰｍｅＩで消化して得られる約５．４ｋｂの断片と、配列番号５０に示すヒト軽鎖シグナル配列及びヒトκ鎖定常領域をコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ断片をＩｎ－Ｆｕｓｉｏｎ Ａｄｖａｎｔａｇｅ ＰＣＲクローニングキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用いて結合して、ｐｃＤＮＡ３．３／ＬＫを作製した。
ｐｃＤＮＡ３．３／ＬＫからネオマイシン発現ユニットを除去することによりｐＣＭＡ－ＬＫを構築した。
４）－１－２ キメラ及びヒト化ＩｇＧ１タイプ重鎖発現ベクターｐＣＭＡ－Ｇ１の構築
ｐＣＭＡ－ＬＫをＸｂａＩ及びＰｍｅＩで消化して軽鎖シグナル配列及びヒトκ鎖定常領域を取り除いたＤＮＡ断片と、配列番号５１で示されるヒト重鎖シグナル配列及びヒトＩｇＧ１定常領域をコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ断片をＩｎ－Ｆｕｓｉｏｎ Ａｄｖａｎｔａｇｅ ＰＣＲクローニングキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用いて結合して、ｐＣＭＡ－Ｇ１を構築した。
４）－１－３ ｃｈＧ０１９重鎖発現ベクターの構築
配列番号５７に示すｃｈＧ０１９重鎖のヌクレオチド配列のヌクレオチド番号３６乃至４４０に示されるＤＮＡ断片を合成した（ＧＥＮＥＡＲＴ）。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ＰＣＲクローニングキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用いて、ｐＣＭＡ－Ｇ１を制限酵素ＢｌｐＩで切断した箇所に合成したＤＮＡ断片を挿入することによりｃｈＧ０１９重鎖発現ベクターを構築した。なお、ｃｈＧ０１９重鎖は予期せぬジスルフィド結合を防ぐため、ＣＤＲ中のシステインをプロリンに置換した配列を用いた。
４）－１－４ ｃｈＧ０１９軽鎖発現ベクターの構築
配列番号５２に示すｃｈＧ０１９軽鎖をコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ断片を合成した（ＧＥＮＥＡＲＴ）。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ＰＣＲクローニングキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用いて、合成したＤＮＡ断片とｐＣＭＡ－ＬＫをＸｂａＩ及びＰｍｅＩで消化して軽鎖シグナル配列及びヒトκ鎖定常領域をコードするＤＮＡ断片を取り除いて得られたＤＮＡ断片を結合することにより、ｃｈＧ０１９軽鎖発現ベクターを構築した。
４）－２ ヒトキメラ化抗ＣＤＨ６抗体ｃｈＧ０１９の生産及び精製
４）－２－１ ｃｈＧ０１９の生産
ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）はマニュアルに従い、継代、培養をおこなった。対数増殖期の１．２×１０９個のＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を３Ｌ Ｆｅｒｎｂａｃｈ Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ Ｆｌａｓｋ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に播種し、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ２９３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で希釈して２．０×１０６細胞／ｍｌに調製した。４０ｍｌのＯｐｔｉ－Ｐｒｏ ＳＦＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に０．２４ｍｇの重鎖発現ベクターと０．３６ｍｇの軽鎖発現ベクターと１．８ｍｇのＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅ ＃２４７６５）を加えて穏やかに攪拌した。５分間のインキュベーション後、混合物をＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３Ｆ細胞に添加した。細胞を８％ ＣＯ２インキュベータ内で３７℃、９０ｒｐｍ、４時間振盪培養した後、６００ｍＬのＥＸ－ＣＥＬＬ ＶＰＲＯ培地（ＳＡＦＣ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．）、１８ｍＬのＧｌｕｔａＭＡＸ Ｉ（ＧＩＢＣＯ）、及び３０ｍＬのＹｅａｓｔｏｌａｔｅ Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｅ（ＧＩＢＣＯ）を培地に加えた。細胞をさらに８％ ＣＯ２インキュベータ内で３７℃、９０ｒｐｍで７日間振盪培養した。得られた培養上清をＤｉｓｐｏｓａｂｌｅ Ｃａｐｓｕｌｅ Ｆｉｌｔｅｒ（Ａｄｖａｎｔｅｃ ＃ＣＣＳ－０４５－Ｅ１Ｈ）でろ過した。
４）－２－２ ｃｈＧ０１９の精製
参考例４）－２－１で得られた培養上清をｒＰｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティークロマトグラフィーの１段階工程で精製した。培養上清をＰＢＳで平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅが充填されたカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）にアプライしたのちに、カラム容量の２倍以上のＰＢＳでカラムを洗浄した。次に２Ｍアルギニン塩酸塩溶液（ｐＨ４．０）で溶出し、抗体の含まれる画分を集めた。その画分を透析（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｃａｓｓｅｔｔｅ）によりＨＢＳｏｒ（２５ｍＭ ヒスチジン／５％ ソルビトール、ｐＨ６．０）へのバッファー置換を行った。Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ＵＦ Ｆｉｌｔｅｒ Ｄｅｖｉｃｅ ＶＩＶＡＳＰＩＮ２０（分画分子量ＵＦ１０Ｋ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）で抗体を濃縮し、ＩｇＧ濃度を５ｍｇ／ｍｌ以上に調製した。最後にＭｉｎｉｓａｒｔ－Ｐｌｕｓ ｆｉｌｔｅｒ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）でろ過し、精製サンプルとした。
４）－３ ヒトキメラ化抗ＣＤＨ６抗体ｃｈＧ０１９の結合性評価
４）－２で精製したヒトキメラ化抗ＣＤＨ６抗体ｃｈＧ０１９のＣＤＨ６結合性をフローサイトメトリー法により確認した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００を用いて、参考例１）－１で作製したｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６若しくはｐｃＤＮＡ３．１－ｃｙｎｏＣＤＨ６、又はｐｃＤＮＡ３．１を２９３α細胞に一過性に導入した。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２条件下で一晩培養後、細胞懸濁液を調製した。これらの各細胞の懸濁液にｃｈＧ０１９を添加した。細胞を４℃で１時間静置した。その後、５％ ＦＢＳを添加したＰＢＳで細胞を２回洗浄した後、５％ ＦＢＳを補充したＰＢＳで５００倍希釈したＰＥ標識Ｆ（ａｂ’）２断片抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を添加して懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳに再懸濁し、フローサイトメーター（ＣａｎｔｏＩＩ：ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で検出を行った。データ解析はＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で行った。図５に示すとおり、ｃｈＧ０１９は陰性コントロールであるｐｃＤＮＡ３．１遺伝子導入２９３α細胞には結合せず、ｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６及びｐｃＤＮＡ３．１－ｃｙｎｏＣＤＨ６遺伝子導入２９３α細胞に抗体濃度依存的に結合した。図５において横軸は抗体濃度を示し、縦軸は結合量をＭｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（平均蛍光強度）で示す。この結果から、ｃｈＧ０１９が、ヒトＣＤＨ６及びカニクイザルＣＤＨ６に対して特異的に結合し、結合活性はほぼ同等であることがわかる。
［参考例５：ヒト化抗ＣＤＨ６抗体の作製］
５）－１ 抗ＣＤＨ６抗体のヒト化体デザイン
５）－１－１ ｃｈＧ０１９の可変領域の分子モデリング
ｃｈＧ０１９の可変領域の分子モデリングは、ホモロジーモデリングとして公知の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２０３，１２１－１５３，（１９９１））を利用した。ｃｈＧ０１９の重鎖と軽鎖の可変領域に対して高い配列同一性を有するＰｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．３５，Ｄ３０１－Ｄ３０３（２００７））に登録されている構造（ＰＤＢ ＩＤ：２Ｉ９Ｌ）を鋳型に、市販のタンパク質立体構造解析プログラムＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅ（Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ社製）を用いて行った。
５）－１－２ ヒト化ｈＧ０１９に対するアミノ酸配列の設計
ｃｈＧ０１９は、ＣＤＲグラフティング（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６，１００２９－１００３３（１９８９））によりヒト化した。ＫＡＢＡＴ ｅｔ ａｌ．（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））において既定されるヒトのｇａｍｍａ鎖サブグループ１及びｋａｐｐａ鎖サブグループ１のコンセンサス配列が、ｃｈＧ０１９のフレームワーク領域に対して高い同一性を有することから、それぞれ、重鎖と軽鎖のアクセプターとして選択された。アクセプター上に移入すべきドナー残基は、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６，１００２９－１００３３（１９８９））によって与えられる基準などを参考に三次元モデルを分析することで選択された。
５）－２ ｃｈＧ０１９重鎖のヒト化
設計された３種の重鎖をｈＨ０１、ｈＨ０２及びｈＨ０４と命名した。ｈＨ０１の重鎖全長アミノ酸配列を、配列番号６９に記載する。配列番号６９のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を、配列番号７０に記載する。ｈＨ０２の重鎖全長アミノ酸配列を、配列番号７３に記載する。配列番号７３のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を、配列番号７４に記載する。ｈＨ０４の重鎖全長アミノ酸配列を、配列番号７７に記載する。配列番号７７のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を、配列番号７８に記載する。
５）－３ ｃｈＧ０１９軽鎖のヒト化
設計された２種の軽鎖をｈＬ０２及びｈＬ０３と命名した。ｈＬ０２の軽鎖全長アミノ酸配列を、配列番号６１に記載する。配列番号６１のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を、配列番号６２に記載する。ｈＬ０３の軽鎖全長アミノ酸配列を、配列番号６５に記載する。配列番号６５のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を、配列番号６６に記載する。
５）－４ 重鎖及び軽鎖の組み合わせによるヒト化ｈＧ０１９の設計
ｈＨ０１及びｈＬ０２からなる抗体を「Ｈ０１Ｌ０２抗体」又は「Ｈ０１Ｌ０２」と称する。ｈＨ０２及びｈＬ０２からなる抗体を「Ｈ０２Ｌ０２抗体」又は「Ｈ０２Ｌ０２」と称する。ｈＨ０２及びｈＬ０３からなる抗体を「Ｈ０２Ｌ０３抗体」又は「Ｈ０２Ｌ０３」と称する。ｈＨ０４及びｈＬ０２からなる抗体を「Ｈ０４Ｌ０２抗体」又は「Ｈ０４Ｌ０２」と称する。
５）－５ ヒト化抗ＣＤＨ６抗体の発現
５）－５－１ ヒト化ｈＧ０１９の重鎖発現ベクターの構築
５）－５－１－１ ヒト化ｈＧ０１９－Ｈ０１タイプ重鎖発現ベクターの構築
配列番号７０に示すヒト化ｈＧ０１９－Ｈ０１タイプ重鎖のヌクレオチド配列のヌクレオチド番号３６乃至４４０に示されるＤＮＡ断片を合成した（ＧＥＮＥＡＲＴ）。参考例４）－１－３と同様の方法でヒト化ｈＧ０１９－Ｈ０１タイプ重鎖発現ベクターを構築した。
５）－５－１－２ ヒト化ｈＧ０１９－Ｈ０２タイプ重鎖発現ベクターの構築
配列番号７４に示すヒト化ｈＧ０１９－Ｈ０２タイプ重鎖のヌクレオチド配列のヌクレオチド番号３６乃至４４０に示されるＤＮＡ断片を合成した（ＧＥＮＥＡＲＴ）。参考例４）－１－３と同様の方法でヒト化ｈＧ０１９－Ｈ０２タイプ重鎖発現ベクターを構築した。
５）－５－１－３ ヒト化ｈＧ０１９－Ｈ０４タイプ重鎖発現ベクターの構築
配列番号７８に示すヒト化ｈＧ０１９－Ｈ０４タイプ重鎖のヌクレオチド配列のヌクレオチド番号３６乃至４４０に示されるＤＮＡ断片を合成した（ＧＥＮＥＡＲＴ）。参考例４）－１－３と同様の方法でヒト化ｈＧ０１９－Ｈ０４タイプ重鎖発現ベクターを構築した。
５）－５－２ ヒト化ｈＧ０１９の軽鎖発現ベクターの構築
５）－５－２－１ ヒト化ｈＧ０１９－Ｌ０２タイプ軽鎖発現ベクターの構築
配列番号６２に示すヒト化ｈＧ０１９－Ｌ０２タイプ軽鎖のヌクレオチド配列のヌクレオチド番号３７乃至３９９に示されるヒト化ｈＧ０１９－Ｌ０２タイプ軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ断片を合成した（ＧＥＮＥＡＲＴ）。Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ ＰＣＲクローニングキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用いて、ｐＣＭＡ－ＬＫを制限酵素ＢｓｉＷＩで切断した箇所に合成したＤＮＡ断片を挿入することによりヒト化ｈＧ０１９－Ｌ０２タイプ軽鎖発現ベクターを構築した。
５）－５－２－２ ヒト化ｈＧ０１９－Ｌ０３タイプ軽鎖発現ベクターの構築
配列番号６６に示すヒト化ｈＧ０１９－Ｌ０３タイプ軽鎖のヌクレオチド配列のヌクレオチド番号３７乃至３９９に示されるヒト化ｈＧ０１９－Ｌ０３タイプ軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ断片を合成した（ＧＥＮＥＡＲＴ）。参考例５）－５－２－１と同様の方法でヒト化ｈＧ０１９－Ｌ０３タイプ軽鎖発現ベクターを構築した。
５）－５－３ ヒト化ｈＧ０１９の調製
５）－５－３－１ Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３、Ｈ０４Ｌ０２の生産
参考例４）－２－１と同様の方法で抗体を生産した。参考例５）－４に示した重鎖と軽鎖の組み合わせにより、Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３、Ｈ０４Ｌ０２を生産した。
５）－５－３－２ Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３、Ｈ０４Ｌ０２の２ｓｔｅｐ精製
参考例５）－５－３－１で得られた培養上清からｒＰｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティークロマトグラフィーとセラミックハイドロキシアパタイトの２段階工程で抗体を精製した。培養上清をＰＢＳで平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅが充填されたカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）にアプライした後に、カラム容量の２倍以上のＰＢＳでカラムを洗浄した。次に２Ｍアルギニン塩酸塩溶液（ｐＨ４．０）で抗体を溶出した。抗体の含まれる画分を透析（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｃａｓｓｅｔｔｅ）によりＰＢＳへのバッファー置換を行った。抗体溶液を５ｍＭリン酸ナトリウム／５０ｍＭ ＭＥＳ／ｐＨ７．０のバッファーで５倍希釈した後に、５ｍＭ ＮａＰｉ／５０ｍＭ ＭＥＳ／３０ｍＭ ＮａＣｌ／ｐＨ７．０のバッファーで平衡化したセラミックハイドロキシアパタイトカラム（日本バイオラッド、Ｂｉｏ－Ｓｃａｌｅ ＣＨＴ Ｔｙｐｅ－１ Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ Ｃｏｌｕｍｎ）にアプライした。塩化ナトリウムによる直線的濃度勾配溶出を実施し、抗体の含まれる画分を集めた。その画分を透析（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｃａｓｓｅｔｔｅ）によりＨＢＳｏｒ（２５ｍＭ ヒスチジン／５％ ソルビトール、ｐＨ６．０）へのバッファー置換を行った。Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ＵＦ Ｆｉｌｔｅｒ Ｄｅｖｉｃｅ ＶＩＶＡＳＰＩＮ２０（分画分子量ＵＦ１０Ｋ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）にて抗体を濃縮し、ＩｇＧ濃度を２０ｍｇ／ｍｌに調製した。最後にＭｉｎｉｓａｒｔ－Ｐｌｕｓ ｆｉｌｔｅｒ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）でろ過し、精製サンプルとした。
［参考例Ａ：抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２の作製］
参考例で用いた抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２は、国際公開第２０１６／０２４１９５号に記載のＮＯＶ０７１２の軽鎖全長、及び重鎖全長のアミノ酸配列（それぞれ、国際公開第２０１６／０２４１９５の配列番号２３５及び配列番号２３４）を参照して作製した。
参考例Ａ）－１抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２
参考例Ａ）－１－１ 抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２の重鎖発現ベクターの構築
配列番号８４に示すＮＯＶ０７１２の重鎖のヌクレオチド配列のヌクレオチド番号３６乃至４２８に示されるＮＯＶ０７１２の重鎖の可変領域をコードするＤＮＡ断片を合成した（ＧＥＮＥＡＲＴ）。参考例４）－１－３と同様の方法でＮＯＶ０７１２の重鎖発現ベクターを構築した。当該ＮＯＶ０７１２の重鎖発現ベクターにより発現するＮＯＶ０７１２の重鎖のアミノ酸配列を、配列番号８３に示す。配列番号８３に示されるアミノ酸配列中、１～１９番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列はシグナル配列である。
参考例Ａ）－１－２ 抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２の軽鎖発現ベクターの構築
配列番号８２に示すＮＯＶ０７１２の軽鎖のヌクレオチド配列のヌクレオチド番号３７乃至４０５に示されるＮＯＶ０７１２の軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ断片を合成した（ＧＥＮＥＡＲＴ）。参考例５）－５－２－１と同様の方法でＮＯＶ０７１２の軽鎖発現ベクターを構築した。当該ＮＯＶ０７１２の軽鎖発現ベクターにより発現するＮＯＶ０７１２の軽鎖のアミノ酸配列を、配列番号８１に示す。配列番号８１に示されるアミノ酸配列中、１～２０番目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列はシグナル配列である。
参考例Ａ）－２ 抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２の調製
参考例Ａ）－２－１ 抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２の生産
参考例４）－２－１と同様の方法でＮＯＶ０７１２を生産した。
参考例Ａ）－２－２ 抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２の１ｓｔｅｐ精製
参考例Ａ）－２－１で得られた培養上清から参考例４）－２－２と同様の方法で抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２を精製した（抗体濃度ＨＢＳｏｒで５ｍｇ／ｌ）。
［参考例６：ヒト化ｈＧ０１９及びＮＯＶ０７１２のｉｎ ｖｉｔｒｏ評価］
６）－１ ヒト化ｈＧ０１９の結合性評価
６）－１－１ ヒト化ｈＧ０１９のヒトＣＤＨ６抗原結合能
抗体と抗原（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ ＣＤＨ６ Ｆｃ Ｈｉｓ ｃｈｉｍｅｒａ，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）との解離定数測定は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス）を使用し、固定化した抗Ｈｉｓ抗体に抗原をリガンドとして捕捉（キャプチャー）し、抗体をアナライトとして測定するキャプチャー法にて行った。抗ヒスチジン抗体（Ｈｉｓ ｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ、ＧＥヘルスケアバイオサイエンス）は、センサーチップＣＭ５（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス）へ、アミンカップリング法にて約１０００ＲＵ共有結合させた。リファレンスセルにも同様に固定化した。ランニングバッファーとして１ｍＭ ＣａＣｌ２を添加したＨＢＳ－Ｐ＋（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０）を用いた。抗ヒスチジン抗体を固定化したチップ上に、抗原を６０秒間添加した後、抗体の希釈系列溶液（０．３９１－１００ｎＭ）を流速３０μｌ／分で３００秒間添加した。その後、解離相を６００秒間監視した。再生溶液として、５Ｍ ＭｇＣｌ２を添加したＧｌｙｃｉｎｅ溶液ｐＨ１．５を流速１０μｌ／分で３０秒間、２回添加した。データの解析は、分析ソフトウェア（ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅ，ｖｅｒｓｉｏｎ ４．１）のＳｔｅａｄｙ Ｓｔａｔｅ Ａｆｆｉｎｉｔｙモデルを用いて、解離定数（ＫＤ）を算出した。結果を表２に示す。
６）－１－２ ヒト、サル、マウス、ラットＣＤＨ６に対する結合性
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を用いて、参考例１）－１で作製したｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６、ｐｃＤＮＡ３．１－ｃｙｎｏＣＤＨ６、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ－９－ｍＣＤＨ６、又はｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ－９－ｒＣＤＨ６を２９３α細胞に一過性に導入した。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２条件下で一晩培養後、細胞懸濁液を調製した。陰性コントロールとして、遺伝子導入していない２９３α細胞を用いた。上記のようにして作成された２９３α細胞の懸濁液を遠心分離し、次いで上清を除去した。その後、参考例５）－５－３で調製したヒト化ｈＧ０１９抗体４種（クローン番号は、Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、ヒトＩｇＧ１コントロール（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで５００倍に希釈したａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ，Ｆｃ（ｇａｍｍａ）ＰＥ ｇｏａｔ Ｆ（ａｂ’）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、フローサイトメーター（ＣａｎｔｏＩＩ：ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で検出を行った。データ解析はＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で行った。図６－１及び図６－２において横軸は抗体濃度を示し、縦軸は結合量をＭｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（平均蛍光強度）で示す。図６－１及び図６－２に示すとおり、陰性コントロールであるヒトＩｇＧ１コントロールは、いずれのＣＤＨ６遺伝子導入細胞に対しても結合しない。ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（クローン番号は、Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）はヒトＣＤＨ６及びカニクイザルＣＤＨ６に結合するが、マウス及びラットＣＤＨ６には結合しない。いずれの抗体も、陰性コントロールである空ベクターｐｃＤＮＡ３．１遺伝子導入細胞には結合しない。一方、ＮＯＶ０７１２抗体はヒトＣＤＨ６、カニクイザルＣＤＨ６、マウスＣＤＨ６、及びラットＣＤＨ６全てに結合活性を示すことが国際公開第２０１６／０２４１９５号に示されている。この結果、本明細書で取得したヒト化ｈＧ０１９抗体４種は、ＮＯＶ０７１２抗体と異なる結合性質を示す抗ＣＤＨ６抗体であることが示された。
６）－２ ヒト化ｈＧ０１９及びＮＯＶ０７１２のＣＤＨ６結合部位の解析
６）－２－１ ドメイン欠失体を用いたエピトープ解析
参考例２）－２－１で作成した各ドメイン欠失体発現ベクター、及び全長ｈＣＤＨ６を発現するｐｃＤＮＡ３．１－ｈＣＤＨ６をＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて一過性に導入した。細胞を３７℃、５％ ＣＯ２条件下で一晩培養後、細胞懸濁液を調製した。遺伝子導入２９３α細胞懸濁液を遠心し、上清を除去した。その後、参考例５）－５－３で調製したヒト化ｈＧ０１９抗体４種（クローン番号は、Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、又は、参考例Ａで調製した抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２、又は、陰性コントロールとしてヒトＩｇＧ１（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで５００倍に希釈したＡＰＣ－ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ｇｏａｔ Ｆ（ａｂ’）２（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を加えて懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、フローサイトメーター（ＣａｎｔｏＩＩ：ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で検出を行った。データ解析はＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で行った。結果を図７－１～図７－６に示す。図７－１～図７－６のヒストグラムにおいて、横軸は抗体結合量を表すＡＰＣの蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。網掛けで示すヒストグラムは遺伝子導入していない陰性コントロール２９３α細胞を用いた場合を示し、白抜き実線で示すヒストグラムは、全長ｈＣＤＨ６又は各ＥＣドメイン欠失体を発現する２９３α細胞を用いた場合を示す。細胞表面の全長ｈＣＤＨ６又は各ＥＣドメイン欠失体に抗体が結合した場合は、蛍光強度が増強する。ヒトＩｇＧ１コントロールはいずれの遺伝子導入細胞にも結合しない。ヒト化ｈＧ０１９抗体４種（クローン番号は、Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）は、全長ｈＣＤＨ６、ＥＣ１欠失体、ＥＣ２欠失体、ＥＣ４欠失体、及びＥＣ５欠失体には結合するが、ＥＣ３欠失体には結合しない。すなわち、ヒト化ｈＧ０１９抗体４種はｈＣＤＨ６のＥＣ３をエピトープとして特異的に結合することが示された。一方、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２は、全長ｈＣＤＨ６、ＥＣ１欠失体、ＥＣ２欠失体、ＥＣ３欠失体、及びＥＣ４欠失体には結合するが、ＥＣ５欠失体には結合しない。すなわち、抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２は、ＥＣ５をエピトープとしてｈＣＤＨ６に特異的に結合することが実証された。これは、国際公開第２０１６／０２４１９５号に記載のＮＯＶ０７１２のエピトープ情報と一致する。この結果から、ＮＯＶ０７１２と本明細書で取得したヒト化ｈＧ０１９抗体４種は、異なる性質を示す抗ＣＤＨ６抗体であることが示された。
６）－２－２ 抗体の結合競合アッセイ
６）－２－２－１ ７８６－Ｏ／ｈＣＤＨ６安定発現細胞株の作製
７８６－Ｏ／ｈＣＤＨ６安定発現細胞株は、７８６－Ｏ細胞（ＡＴＣＣ）にヒトＣＤＨ６全長発現用組換えレトロウイルスを感染させることにより作製した。ヒトＣＤＨ６発現レトロウイルスベクター（ｐＱＣＸＩＮ－ｈＣＤＨ６）は、ヒトＣＤＨ６タンパク質（ＮＰ＿００４９２３）をコードするｃＤＮＡ発現ベクター（ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社ＲＣ２１７８８９）を用いて、当業者に公知な方法に従いレトロウイルスベクターｐＱＣＸＩＮ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）に組み込むことにより作製された。ＦｕＧｅｎｅ ＨＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）を使用して、ｐＱＣＸＩＮ－ｈＣＤＨ６をレトロウイルスパッケージング細胞ＲｅｔｒｏＰａｃｋ ＰＴ６７（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）に一過性に導入した。４８時間後、組換えレトロウイルスを含む培養上清を回収し、７８６－Ｏ細胞培養系に添加して感染させた。感染３日後から、Ｇ４１８（Ｇｉｂｃｏ）を終濃度５０ｍｇ／ｍＬで添加した培地で３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で培養を行い感染細胞の薬剤選抜を行うことで、ヒトＣＤＨ６を安定的に発現する細胞株７８６－Ｏ／ｈＣＤＨ６を樹立した。参考例２）－３－１と同様にフローサイトメトリーにて安定発現株でのヒトＣＤＨ６の高発現を確認した（図８）。検出用抗体には５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで５００倍に希釈したＧｏａｔ ａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ１ Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用した。結果を図８に示す。図８のヒストグラムにおいて、横軸は抗体結合量を表すＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光強度、縦軸は細胞数を示す。網掛けで示すヒストグラムは陰性コントロールｍＩｇＧ１で染色した場合を示し、白抜き実線で示すヒストグラムは抗ヒトＣＤＨ６抗体で染色した場合を示す。細胞表面のｈＣＤＨ６に抗体が結合したことによって蛍光強度が増強したことを示す。ｍＩｇＧ１コントロールはいずれの細胞にも結合しない。この結果、７８６－Ｏ／ｈＣＤＨ６安定発現細胞株では親株７８６－Ｏ細胞と比較して、ヒトＣＤＨ６を高発現することが示された。
６）－２－２－２ ラベル化Ｈ０１Ｌ０２及びラベル化ＮＯＶ０７１２を用いた結合競合アッセイ
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、ラベル化Ｈ０１Ｌ０２及びラベル化ＮＯＶ０７１２を作製した。６）－２－２－１で作製した７８６－Ｏ／ｈＣＤＨ６安定発現細胞株の細胞懸濁液を遠心分離した後、上清を除去した。その後、ラベル化ＮＯＶ０７１２又はラベル化Ｈ０１Ｌ０２を終濃度５ｎＭで添加し、さらに参考例５）－５－３で調製したヒト化ｈＧ０１９抗体４種（クローン番号は、Ｈ０１Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０２、Ｈ０２Ｌ０３及びＨ０４Ｌ０２）、又は、参考例Ａで調製した抗ＣＤＨ６抗体ＮＯＶ０７１２、又は、陰性コントロールとしてヒトＩｇＧ１（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を図９の横軸で示す終濃度で添加して懸濁した。細胞を４℃で１時間静置した。その後、細胞を５％ ＦＢＳ含有ＰＢＳで２回洗浄した後、フローサイトメーター（ＣａｎｔｏＩＩ：ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で検出を行った。データ解析はＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で行った。結果を図９に示す。横軸はラベル化していない抗体の添加時の終濃度を示し、縦軸は結合量をＭｅａｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（平均蛍光強度）で示す。ラベル化ＮＯＶ０７１２を添加した細胞にラベル化していないＮＯＶ０７１２を添加した場合は、同じエピトープを持ち結合が競合するため、添加濃度依存的にラベル化していない抗体に置き換わりラベル化抗体の結合量が減少する。一方、ラベル化ＮＯＶ０７１２を添加した細胞にヒト化ｈＧ０１９抗体４種、又は陰性コントロールとしてヒトＩｇＧ１を添加しても、ラベル化抗体の結合量に変化は無いことから、これらの抗体はエピトープが異なり結合が競合しないことが示される。同様に、ラベル化Ｈ０１Ｌ０２を添加した細胞にラベル化していないヒト化ｈＧ０１９抗体４種を添加した場合は、同じエピトープを持ち結合が競合するため、添加濃度依存的にラベル化していない抗体に置き換わりラベル化抗体の結合量が減少する。一方、ラベル化Ｈ０１Ｌ０２を添加した細胞にＮＯＶ０７１２、又は陰性コントロールとしてヒトＩｇＧ１を添加しても、ラベル化抗体の結合量に変化は無いことから、これらの抗体はエピトープが異なり結合が競合しないことが示される。
６）－３ ヒト化ｈＧ０１９及びＮＯＶ０７１２の内在化活性評価
ヒト化ｈＧ０１９及びＮＯＶ０７１２の内在化活性は、タンパク質合成を阻害する毒素（サポリン）を結合させた抗ヒトＩｇＧ試薬Ｈｕｍ－ＺＡＰ（ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＴＡＲＧＥＴＩＮＧ ＳＹＳＴＥＭＳ）を用いて評価した。すなわち、ヒトＣＤＨ６陽性卵巣腫瘍細胞株ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３（ＡＴＣＣ）を４ｘ１０３細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種して３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で一晩培養した。ヒトＣＤＨ６陽性腎細胞腫瘍細胞株７８６－Ｏ（ＡＴＣＣ）は１ｘ１０３細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種して一晩培養した。ヒトＣＤＨ６陽性卵巣腫瘍細胞株ＰＡ－１（ＡＴＣＣ）を１ｘ１０３細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種して３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で一晩培養した。翌日、抗ＣＤＨ６抗体（終濃度：１ｎＭ）、又は、陰性コントロール抗体としてヒトＩｇＧ１抗体（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を添加した。さらにＨｕｍ－ＺＡＰ（終濃度：０．５ｎＭ）又は、陰性コントロールとして毒素を結合していないＦ（ａｂ’）２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ，Ｆｃ（ｇａｍｍａ）Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）（終濃度：０．５ｎＭ）を添加し、３日間３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養した。生存細胞数は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＴＭ）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ＡｓｓａｙによるＡＴＰ活性（ＲＬＵ）の定量で測定した。この評価では、ヒト化抗ＣＤＨ６抗体の内在化活性に依存してＨｕｍ－ＺＡＰが細胞内に取り込まれ、タンパク合成を阻害するサポリンが細胞内に放出されることで、細胞増殖が抑制される。抗ＣＤＨ６抗体添加による細胞増殖抑制作用は、Ｈｕｍ－ＺＡＰの代わりに陰性コントロールを添加したウェルの生存細胞数を１００％とした相対生存率で表記した。図１０－１～図１０－３にグラフ及び細胞生存率の表を示す。本実験において内在化活性が強い抗体は低い細胞生存率を示すと考えられる。結果として、４つのヒト化ｈＧ０１９抗体は、３つの細胞株のすべてについての細胞生存率から予測される約５０～７５％の内在化率を有する。したがって、４つのヒト化ｈＧ０１９抗体は、非常に高い内在化活性を示し、ＮＯＶ０７１２よりもはるかに高い内在化活性を示す。ＡＤＣの薬効メカニズムから、高い内在化活性を有する抗体は、ＡＤＣ化抗体をして、より適していると考えられる。
［参考例７：ヒト化ｈＧ０１９－薬物コンジュゲートの作製］
７）－１ 抗体－薬物コンジュゲートの作製 Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄ
工程１：抗体－薬物コンジュゲート（１）
抗体の還元：参考例５にて作製したＨ０１Ｌ０２を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５３ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて９．８５ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（５．７ｍＬ）に１０ｍＭ ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．２３１ｍＬ；抗体一分子に対して６．０当量）及び１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．０８５５ｍＬ）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。
抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ ジメチルスルホキシド溶液（０．３８６ｍＬ；抗体一分子に対して１０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．０３４７ｍＬ；抗体一分子に対して９当量）を加え、さらに室温にて２０分間撹拌し、薬物リンカーの反応を停止させた。
精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「Ｈ０１Ｌ０２－ＡＤＣ」を含有する溶液を１９ｍＬ得た。
特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ（εＤ，２８０＝５４４０、εＤ，３７０＝２１２４０を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．２６ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：４２．９ｍｇ（７６％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：５．９；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：７．７。
７）－２ 抗体－薬物コンジュゲートの作製 Ｈ０２Ｌ０２－ＤＸｄ
工程１：抗体－薬物コンジュゲート（２）
抗体の還元：参考例５にて作製したＨ０２Ｌ０２を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５１ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて９．９５ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（５．７ｍＬ）に１０ｍＭ ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．２３４ｍＬ；抗体一分子に対して６．０当量）及び１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．０８５５ｍＬ）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。
抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ ジメチルスルホキシド溶液（０．３８９ｍＬ；抗体一分子に対して１０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．０３５０ｍＬ；抗体一分子に対して９当量）を加え、さらに室温にて２０分間撹拌し、薬物リンカーの反応を停止させた。
精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「Ｈ０２Ｌ０２－ＡＤＣ」を含有する溶液を１９ｍＬ得た。
特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ（εＤ，２８０＝５４４０、εＤ，３７０＝２１２４０を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．６１ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：４９．６ｍｇ（８７％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：５．９；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：７．６。
７）－３ 抗体－薬物コンジュゲートの作製 Ｈ０２Ｌ０３－ＤＸｄ
工程１：抗体－薬物コンジュゲート（３）
抗体の還元：参考例５にて作製したＨ０２Ｌ０３を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５３ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて９．８６ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（５．７ｍＬ）に１０ｍＭ ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．２７０ｍＬ；抗体一分子に対して７．０当量）及び１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．０８５５ｍＬ）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。
抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ ジメチルスルホキシド溶液（０．３８６ｍＬ；抗体一分子に対して１０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．０３４７ｍＬ；抗体一分子に対して９当量）を加え、さらに室温にて２０分間撹拌し、薬物リンカーの反応を停止させた。
精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「Ｈ０１Ｌ０２－ＡＤＣ」を含有する溶液を１９ｍＬ得た。
特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ（（εＤ，２８０＝５４４０、εＤ，３７０＝２１２４０を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．７１ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：５１．４ｍｇ（９１％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：５．７；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：７．６。
７）－４ 抗体－薬物コンジュゲートの作製 Ｈ０４Ｌ０２－ＤＸｄ
工程１：抗体－薬物コンジュゲート（４）
抗体の還元：参考例５にて作製したＨ０４Ｌ０２を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５３ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて９．８６ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（５．７ｍＬ）に１０ｍＭ ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．２３２ｍＬ；抗体一分子に対して６．０当量）及び１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．０８５５ｍＬ）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。
抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ ジメチルスルホキシド溶液（０．３８６ｍＬ；抗体一分子に対して１０当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．０３４７ｍＬ；抗体一分子に対して９当量）を加え、さらに室温にて２０分間撹拌し、薬物リンカーの反応を停止させた。
精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「Ｈ０４Ｌ０２－ＡＤＣ」を含有する溶液を１９ｍＬ得た。
特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ（εＤ，２８０＝５４４０、εＤ，３７０＝２１２４０を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．５６ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：４８．７ｍｇ（８７％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：５．８；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：７．６。
［参考例Ｂ：ＮＯＶ０７１２－薬物コンジュゲートの作製］
参考例Ｂ）－１ 抗体－薬物コンジュゲートの作製 ＮＯＶ０７１２－ＤＭ４
抗体－薬物コンジュゲート（５）
抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：参考例１にて作製したＮＯＶ０７１２を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５１ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１を使用）及びＣを用いて、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ８．１（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製 ＨＥＰＥＳ，１Ｍ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（２０ｍＬ）を１Ｍ水酸化ナトリウムでｐＨ８．１とした後、蒸留水にて１Ｌとした）にて９．７ｍｇ／ｍＬに調製した。溶液を２０℃で１０分間インキュベートした。次いでＷＯ２０１６／０２４１９５号公開特許公報に記載の１０ｍＭ １－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イルオキシ）－１－オキソ－４－（ピリジン－２－イルジスルファニル）ブタン－２－スルフォン酸のＤＭＡ溶液（０．３６６ｍＬ；抗体一分子に対して５．２当量）、１０ｍＭ Ｎ２－デアセチル－デアセチル－Ｎ２－（４－メチル－４－メルカプト－１－オキソペンチル）－メイタンシン（ＤＭ４）のＤＭＡ溶液（０．３６６ｍＬ；抗体一分子に対して６．８当量）、及び０．２４３ｍＬのＤＭＡを加え、２０℃で１６時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１Ｍ 酢酸水溶液を加えｐＨ５．０とし、さらに室温にて２０分間撹拌し、薬物リンカーの反応を停止させた。
精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「ＮＯＶ０７１２－ＤＭ４」を含有する溶液を２８ｍＬ得た。
特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ（εＡ，２８０＝２００５００、εＡ，２５２＝７６２９５、εＤ，２８０＝４３１７０、及びεＤ，２５２＝２３２２４を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．５８ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：７２．２ｍｇ（９３％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：３．０。
参考例Ｂ）－２ 抗体－薬物コンジュゲートの作製 ＮＯＶ０７１２－ＤＸｄ
工程１：抗体－薬物コンジュゲート（６）
抗体の還元：参考例１にて作製したＮＯＶ０７１２を、製造方法Ａに記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１を使用）及びＣを用いて、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡにて９．２６ｍｇ／ｍＬに調製した。本溶液（６．６ｍＬ）に１０ｍＭ ＴＣＥＰ（東京化成工業株式会社）水溶液（０．２５４ｍＬ；抗体一分子に対して６．０当量）及び１Ｍリン酸水素二カリウム水溶液（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．；０．０９９０ｍＬ）を加えた。本溶液のｐＨが７．０±０．１内であることを確認した後に、３７℃で２時間インキュベートすることによって、抗体内鎖間部のジスルフィド結合を還元した。
抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：上記溶液を１５℃で１０分間インキュベートした。次いでＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－［（２－｛［（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル］アミノ｝－２－オキソエトキシ）メチル］グリシンアミドの１０ｍＭ ジメチルスルホキシド溶液（０．３８１ｍＬ；抗体一分子に対して９当量）を加え、１５℃で１時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１００ｍＭ ＮＡＣ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ）水溶液（０．０３８１ｍＬ；抗体一分子に対して９当量）を加え、さらに室温にて２０分間撹拌し、薬物リンカーの反応を停止させた。
精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「ＮＯＶ０７１２－ＡＤＣ」を含有する溶液を２３．５ｍＬ得た。
特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ（εＤ，２８０＝５４４０、εＤ，３７０＝２１２４０を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：２．２６ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：５６．４ｍｇ（９２％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：６．４；共通操作Ｆにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：７．８。
［参考例Ｃ：Ｈ０１Ｌ０２－ＤＭ４の作製］
参考例Ｃ）－１ 抗体－薬物コンジュゲートの作製 Ｈ０１Ｌ０２－ＤＭ４
抗体－薬物コンジュゲート（７）
抗体と薬物リンカーのコンジュゲーション：参考例５にて作製したＨ０１Ｌ０２を、製造方法１に記載した共通操作Ｂ（２８０ｎｍ吸光係数として１．５３ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１を使用）及びＣを用いて、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ８．１（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製 ＨＥＰＥＳ，１Ｍ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（２０ｍＬ）を１Ｍ水酸化ナトリウムでｐＨ８．１とした後、蒸留水にて１Ｌとした）にて９．８ｍｇ／ｍＬに調製した。溶液を２０℃で１０分間インキュベートした。次いでＷＯ２０１６／０２４１９５号公開特許公報に記載の１０ｍＭ １－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イルオキシ）－１－オキソ－４－（ピリジン－２－イルジスルファニル）ブタン－２－スルフォン酸のＤＭＡ溶液（０．０６２ｍＬ；抗体一分子に対して１１．５当量）、１０ｍＭ Ｎ２－デアセチル－Ｎ２－（４－メチル－４－メルカプト－１－オキソペンチル）－メイタンシン（ＤＭ４）のＤＭＡ溶液（０．０８２ｍＬ；抗体一分子に対して１５．１当量）を加え、２０℃で１８時間インキュベートし、薬物リンカーを抗体へ結合させた。次に、１Ｍ 酢酸水溶液を加えｐＨ５．０とし、さらに室温にて２０分間撹拌し、薬物リンカーの反応を停止させた。
精製：上記溶液を、製造方法１に記載した共通操作Ｄによる精製を行い、標記抗体－薬物コンジュゲート「Ｈ０１Ｌ０２－ＤＭ４」を含有する溶液を３．５ｍＬ得た。
特性評価：製造方法１に記載した共通操作Ｅ（εＡ，２８０＝２２３４００、εＡ，２５２＝８５６４６、εＤ，２８０＝４３１７、及びεＤ，２５２＝２３２２４を使用）を使用して、下記の特性値を得た。
抗体濃度：１．９７ｍｇ／ｍＬ，抗体収量：６．９０ｍｇ（８８％），共通操作Ｅにて測定された抗体一分子あたりの薬物分子平均結合数（ｎ）：３．６。
［参考例８：抗体－薬物コンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性評価］
８）－１ ＣＤＨ６陽性ヒト腫瘍細胞株に対する抗体－薬物コンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞増殖抑制活性評価
ＣＤＨ６陽性ヒト卵巣腫瘍細胞株ＰＡ－１を１０％ ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地中２ｘ１０３細胞／１００μＬ／ウェルになるよう９６ウェルプレートに播種し、３７℃、５％ ＣＯ２の条件下で一晩培養した。翌日、参考例７で作製したヒト化ｈＧ０１９－薬物コンジュゲート４種（クローン名は、Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄ、Ｈ０２Ｌ０２－ＤＸｄ、Ｈ０２Ｌ０３－ＤＸｄ及びＨ０４Ｌ０２－ＤＸｄ）、又は参考例Ｂで作製したＮＯＶ０７１２－薬物コンジュゲート（ＮＯＶ０７１２－ＤＭ４）を終濃度０．０００１（ｎＭ）から１００（ｎＭ）となるように添加した。４日間培養後に生存細胞数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＴＭ）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によるＡＴＰの定量で測定した。図１１に抗体－薬物コンジュゲートを各々添加した際の濃度依存的な細胞増殖抑制活性を示す。この結果、ヒト化ｈＧ０１９－薬物コンジュゲート４種は、ＮＯＶ０７１２－薬物コンジュゲートと比較して、より低い添加濃度から腫瘍細胞の増殖抑制活性を示し、抗腫瘍活性が高いことが示される。
［参考例９：抗体－薬物コンジュゲートのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果］
抗体－薬物コンジュゲートの抗腫瘍効果は、ＣＤＨ６陽性ヒト腫瘍細胞株の細胞を免疫不全マウスに移植した動物モデルを用いて評価した。４－５週齢のＢＡＬＢ／ｃ ヌードマウス（ＣＡｎＮ．Ｃｇ－Ｆｏｘｎｌ［ｎｕ］／ＣｒｌＣｒｌｊ［Ｆｏｘｎｌｎｕ／Ｆｏｘｎｌｎｕ］、日本チャールス・リバー）及び、ＳＣＩＤマウス（ＣＢ１７／Ｉｃｒ－Ｐｒｋｄｃ［ｓｃｉｄ］／ＣｒｌＣｒｌｊ、日本チャールス・リバー）を実験使用前にＳＰＦ条件化で３日間以上馴化した。マウスには滅菌した固形飼料（ＦＲ－２，Ｆｕｎａｂａｓｈｉ Ｆａｒｍｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を給餌し、滅菌した水道水（５－１５ｐｐｍ次亜塩素酸ナトリウム溶液を添加して調製）を与えた。移植した腫瘍の長径及び短径を電子式デジタルノギス（ＣＤ－１５ＣＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ Ｃｏｒｐ．）で１週間に２回測定し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］２
抗体－薬物コンジュゲートは全てＡＢＳ緩衝液（１０ｍＭ－Ａｃｅｔａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒ，５％ Ｓｏｒｂｉｔｏｌ，ｐＨ５．５）（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ，Ｉｎｃ．）で希釈し、各参考例に示す用量にて尾静脈内投与した。また、コントロール群（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）としてＡＢＳ緩衝液を同様に投与した。１群あたり６匹のマウスを実験に用いた。
９）－１ 抗腫瘍効果－（１）
参考例２）－３－１にてＣＤＨ６発現を確認した、ＣＤＨ６陽性ヒト腎細胞腫瘍細胞株７８６－Ｏ（ＡＴＣＣ）をマトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に懸濁し、５×１０６細胞を雄ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植した（０日目）。１８日目にマウスを無作為に群分けした。群分け実施日に、参考例７で作製した抗体－薬物コンジュゲート４種（クローン名は、Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄ、Ｈ０２Ｌ０２－ＤＸｄ、Ｈ０２Ｌ０３－ＤＸｄ及びＨ０４Ｌ０２－ＤＸｄ）、又は参考例Ｂで作製したＮＯＶ０７１２－ＤＭ４を３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。結果を図１２に示す。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す。
ＮＯＶ０７１２－ＤＭ４は本腫瘍モデルにおいて顕著な抗腫瘍効果を示さなかった。参考例７で作成した抗体－薬物コンジュゲート４種はいずれも投与後腫瘍体積が減少し、顕著な腫瘍の退縮が認められ、投与後２４日の間、腫瘍退縮効果が持続した（図１２）。
９）－２ 抗腫瘍効果－（２）
参考例２）－３－１にてＣＤＨ６発現を確認した、ＣＤＨ６陽性ヒト卵巣腫瘍細胞株ＰＡ－１（ＡＴＣＣ）をマトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に懸濁し、８．５×１０６細胞を雌ヌードマウスの右側腹部に皮下移植した（０日目）。１１日目にマウスを無作為に群分けした。群分け実施日に、参考例７で作製した抗体－薬物コンジュゲートＨ０１Ｌ０２－ＤＸｄ又は参考例Ｂで作製したＮＯＶ０７１２－ＤＭ４若しくはＮＯＶ０７１２－ＤＸｄを、１及び３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。結果を図１３に示す。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す。
ＮＯＶ０７１２－ＤＭ４は本腫瘍モデルにおいて１及び３ｍｇ／ｋｇいずれの用量でも抗腫瘍効果を示さなかった。一方、Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄは１及び３ｍｇ／ｋｇいずれの用量でも投与後腫瘍体積が著しく減少し、腫瘍を縮退させる効果を発揮した（図１３）。本明細書で得られたＨ０１Ｌ０２抗体とＮＯＶ０７１２抗体を同じ薬物ＤＸｄにコンジュゲートし、得られたサンプルの薬効を比較した。その結果、Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄは、１及び３ｍｇ／ｋｇの両用量において、ＮＯＶ０７１２－ＤＸｄよりも強い抗腫瘍効果を示した。すなわち、本発明のＨ０１Ｌ０２抗体は、ＮＯＶ０７１２抗体に比べて、抗腫瘍剤としての抗体－薬物コンジュゲートの抗体としてより優れた抗体であることが示された（図１３）。
９）－３ 抗腫瘍効果－（３）
参考例２）－３－１にてＣＤＨ６発現を確認した、ＣＤＨ６陽性ヒト卵巣腫瘍細胞株ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３（ＡＴＣＣ）をマトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に懸濁し、１×１０７細胞を雌ヌードマウスの右側腹部に皮下移植した（０日目）。２２日目にマウスを無作為に群分けした。群分け実施日に、参考例７で作成した抗体－薬物コンジュゲートＨ０１Ｌ０２－ＤＸｄ又は参考例Ｂで作製したＮＯＶ０７１２－ＤＭ４を、１及び３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。結果を図１４に示す。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す。
ＮＯＶ０７１２－ＤＭ４は、１ｍｇ／ｋｇでは全く抗腫瘍効果を示さず、３ｍｇ／ｋｇでは抗腫瘍効果を示すものの、投与２週間後から腫瘍の再増殖が認められた。一方、Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄは１及び３ｍｇ／ｋｇいずれの用量でも、投与後腫瘍体積の増加を著しく抑制し、特に３ｍｇ／ｋｇでは投与後３１日間の長期にわたって腫瘍増殖抑制効果が持続した（図１４）。
また、ＰＡ－１細胞を用いて同様に、参考例Ｂで作製したＮＯＶ０７１２－ＤＭ４若しくは参考例Ｃで作成したＨ０１Ｌ０２－ＤＭ４の腫瘍増殖抑制効果を評価した。Ｈ０１Ｌ０２－ＤＭ４は、ＮＯＶ０７１２－ＤＭ４よりも腫瘍体積をさらに減少させた。したがって、本発明のＨ０１Ｌ０２抗体は、ＮＯＶ０７１２抗体に比べて、抗腫瘍剤としての抗体－薬物コンジュゲートの抗体としてより優れた抗体であった。
９）－４ 抗腫瘍効果－（４）
参考例２）－３－１にてＣＤＨ６発現を確認した、ＣＤＨ６陽性ヒト腎細胞腫瘍細胞株７８６－Ｏ（ＡＴＣＣ）をマトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に懸濁し、５×１０６細胞を雄ＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下移植した（０日目）。２０日目にマウスを無作為に群分けした。群分け実施日に、参考例７で作成した抗体－薬物コンジュゲートＨ０１Ｌ０２－ＤＸｄ又は参考例Ｂで作製したＮＯＶ０７１２－ＤＭ４を、１及び３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。結果を図１５に示す。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す。
ＮＯＶ０７１２－ＤＭ４は本腫瘍モデルにおいて１及び３ｍｇ／ｋｇいずれの用量でも顕著な抗腫瘍効果を示さなかった。一方、Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄは１及び３ｍｇ／ｋｇいずれの用量でも投与後腫瘍体積が減少し、特に３ｍｇ／ｋｇでは顕著な腫瘍の退縮が認められ、投与後２０日の間、腫瘍退縮効果が持続した（図１５）。
９）－５ 抗腫瘍効果－（５）
参考例２）－３－１にてＣＤＨ６を発現しないことを確認した、ＣＤＨ６陰性ヒト卵巣腫瘍細胞株ＥＳ－２（ＡＴＣＣ）を生理食塩水に懸濁し、１×１０６ｃｅｌｌｓを雌ヌードマウスの右側腹部に皮下移植した（０日目）。７日目にマウスを無作為に群分けした。群分け実施日に、参考例７で作成した抗体－薬物コンジュゲートＨ０１Ｌ０２－ＤＸｄ又は参考例Ｂで作製したＮＯＶ０７１２－ＤＭ４を、１及び３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈内投与した。結果を図１６に示す。横軸は日数を示し、縦軸は腫瘍体積を示す。誤差範囲はＳＥ値を示す。
ＣＤＨ６を発現しない本腫瘍モデルでは、Ｈ０１Ｌ０２－ＤＸｄ及びＮＯＶ０７１２－ＤＭ４はいずれの用量でも抗腫瘍効果を全く示さなかった。この結果から、参考例９）－１、９）－２、９）－３及び９）－４で示されたＣＤＨ６陽性腫瘍モデルにおける抗体－薬物コンジュゲートの抗腫瘍効果は、腫瘍細胞におけるＣＤＨ６発現に依存した効果である。したがって、本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、ＣＤＨ６陰性の正常組織に対する細胞毒性を引き起こすことなく、ＣＤＨ６陽性腫瘍に対して特異的に抗腫瘍効果を示す選択的かつ安全な抗腫瘍薬であると考えられる（図１６）。
［実施例１：カルボプラチン及びパクリタキセルの長期治療後の抗体－薬物コンジュゲート（１）のインビボ抗腫瘍効果］
マウス：雌５週齢ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（ＣＨＡＲＬＥＳ ＲＩＶＥＲ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＪＡＰＡＮ，ＩＮＣ．）を実験に供した。
測定及び計算式：本研究では、腫瘍の長径及び短径を週に３回まで電子デジタルキャリパー（ＣＤ１５－ＣＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ Ｃｏｒｐ．）で測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）を計算した。計算式は以下の通りである。腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］２。
カルボプラチンを生理的食塩水で希釈し、１０ｍＬ／ｋｇの液量で尾静脈に静脈内投与した。パクリタキセルをクレモフォールとエタノール（１：１）で溶解し、生理食塩水で希釈した後、１０ｍＬ／ｋｇの液量で尾静脈に静脈内投与した。抗体－薬物コンジュゲート（化４）をＡＢＳ緩衝液（１０ｍＭ酢酸緩衝液［ｐＨ５．５］、５％ソルビトール）で希釈し、１０ｍＬ／ｋｇの液量で尾静脈に静脈内投与した。
ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）より購入したヒト卵巣癌細胞株ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３を、マトリゲル基底膜マトリックス（マトリゲル、Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に懸濁し、雌ヌードマウスの右側に１．０×１０７細胞で皮下移植し（０日目）、移植から２２日後にマウスを無作為に群分けした。２２日目、６６日目、８８日目、１０９日目、１２８日目、１４９日目、１６９日目、１９２日目、及び２１２日目に、カルボプラチンを５０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。２２日目、６６日目、８８日目、１０９日目、１２８日目、１４９日目、１６９日目、１９２日目、及び２１２日目に、パクリタキセルを３０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。２２日目に、パクリタキセルの溶媒を尾静脈に静脈内投与した。カルボプラチンとパクリタキセルの併用投与群と、コントロール群として溶媒投与群を設定した。併用投与群では、２３２日目において腫瘍体積が１５０ｍｍ３～５００ｍｍ３の範囲内となるマウスを選択し、基本的に参考例７の７）－１に従って調製された配列番号８７及び８８でそれぞれ示される重鎖アミノ酸配列及び軽鎖アミノ酸配列を含む抗体－薬物コンジュゲート（１）（化４）（ＤＡＲ：７．８）を、２３２日目、２５３日目、及び２７４日目に１０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。明確にするために、投与される抗体－薬物コンジュゲート（１）に含まれる抗体は、本発明では「Ｈ０１Ｌ０２」と呼ばれる。
カルボプラチン及びパクリタキセルの長期治療後の抗体－薬物コンジュゲート（１）の腫瘍増殖抑制効果の結果を図１７に示す。平均腫瘍体積がおよそ２５０ｍｍ３に達したら、ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３腫瘍を有する１２匹のマウスにカルボプラチン及びパクリタキセルを繰り返し投与した。最初の投与では、腫瘍はすべての場合で退縮したが、ほとんどの場合６週間以内に再増殖した。９回目の投与後、腫瘍体積が１５０ｍｍ３～５００ｍｍ３の範囲内であった５匹のマウスを抗体－薬物コンジュゲート（１）治療のために群分けした。抗体－薬物コンジュゲート（１）は、投与後に腫瘍体積の減少を示し、有意な腫瘍退縮が認められ、腫瘍退縮効果を維持した。ここで、図中、横軸は細胞移植後の日数を表し、縦軸は腫瘍体積を表す。さらに、いずれの投与群も、重度の体重減少などの特定の注目すべき所見を示さなかった。
［実施例２：抗腫瘍試験（１）］
マウス：雌５週齢ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（ＣＨＡＲＬＥＳ ＲＩＶＥＲ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＪＡＰＡＮ，ＩＮＣ．）を実験に供した。
測定及び計算式：本研究では、腫瘍の長径及び短径を週に２回電子デジタルキャリパー（ＣＤ１５－ＣＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ Ｃｏｒｐ．）で測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）を計算した。計算式は以下の通りである。腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］２。
ＡＴＣＣより購入したヒト卵巣癌細胞株ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３を、マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に懸濁し、雌ヌードマウスの右側に１．０×１０７細胞で皮下移植し、移植から２４日後にマウスを無作為に群分けした（０日目）。抗体－薬物コンジュゲート（１）（化４）（ＤＡＲ：７．９）を、０日目に０．３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。０日目にカルボプラチンを５０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。各薬物の単独投与群、併用投与群、コントロール群として溶媒投与群を設定した。
抗体－薬物コンジュゲート（１）とカルボプラチンの組み合わせの結果を図１８に示す。カルボプラチンの単回投与は、２１日目に４７％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を示した。抗体－薬物コンジュゲート（１）の単回投与は、６５％のＴＧＩを示した。一方、抗体－薬物コンジュゲート（１）とカルボプラチンの併用投与は、カルボプラチンの単独投与よりも有意に優れた腫瘍増殖抑制効果を示し（Ｐ＜０．００１）、抗体－薬物コンジュゲート（１）の単独投与よりも有意に優れた腫瘍増殖抑制効果も示した（Ｐ＜０．００１）。ＴＧＩは９３％であった。さらに、単回投与群及び併用投与群のいずれも、体重減少などの特定の注目すべき所見を示さなかった。
［実施例３：抗腫瘍試験（２）］
マウス：雌５週齢ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（ＣＨＡＲＬＥＳ ＲＩＶＥＲ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＪＡＰＡＮ，ＩＮＣ．）を実験に供した。
測定及び計算式：本研究では、腫瘍の長径及び短径を週に２回電子デジタルキャリパー（ＣＤ１５－ＣＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ Ｃｏｒｐ．）で測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）を計算した。計算式は以下の通りである。腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］２。
ＡＴＣＣより購入したヒト卵巣癌細胞株ＯＶ－９０を、マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に懸濁し、雌ヌードマウスの右側に２．５×１０６細胞で皮下移植し、移植から１４日後にマウスを無作為に群分けした（０日目）。抗体－薬物コンジュゲート（１）（化４）（ＤＡＲ：７．９）を、０日目に１ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。０日目にカルボプラチンを５０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。各薬物の単独投与群、併用投与群、コントロール群として溶媒投与群を設定した。
抗体－薬物コンジュゲート（１）及びカルボプラチンの組み合わせの結果を図１９に示す。カルボプラチンの単回投与は、２１日目に２３％のＴＧＩを示した。抗体－薬物コンジュゲート（１）の単回投与は、６７％のＴＧＩを示した。一方、抗体－薬物コンジュゲート（１）とカルボプラチンの併用投与は、カルボプラチンの単独投与よりも有意に優れた腫瘍増殖抑制効果を示し（Ｐ＜０．００１）、抗体－薬物コンジュゲート（１）の単独投与よりも有意に優れた腫瘍増殖抑制効果も示した（Ｐ＜０．００１）。ＴＧＩは９２％であった。さらに、単回投与群及び併用投与群のいずれも、体重減少などの特定の注目すべき所見を示さなかった。
［実施例４：抗腫瘍試験（３）］
マウス：雌５週齢ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（ＣＨＡＲＬＥＳ ＲＩＶＥＲ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＪＡＰＡＮ，ＩＮＣ．）を実験に供した。
測定及び計算式：本研究では、腫瘍の長径及び短径を週に２回電子デジタルキャリパー（ＣＤ１５－ＣＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ Ｃｏｒｐ．）で測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）を計算した。計算式は以下の通りである。腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］２。
ＡＴＣＣより購入したヒト卵巣癌細胞株ＯＶ－９０を、マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に懸濁し、雌ヌードマウスの右側に２．５×１０６細胞で皮下移植し、移植から１５日後にマウスを無作為に群分けした（０日目）。抗体－薬物コンジュゲート（１）（化４）（ＤＡＲ：７．８）を、０日目に１０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。０日目にカルボプラチンを５０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。１日目にパクリタキセルを２０ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。抗体－薬物コンジュゲート（１）の単独投与群、カルボプラチン及びパクリタキセルの併用投与群、抗体－薬物コンジュゲート（１）、カルボプラチン及びパクリタキセルの併用投与群、並びにコントロール群としての溶媒投与群を設定した。
抗体－薬物コンジュゲート（１）、カルボプラチン及びパクリタキセルの組み合わせの結果を図２０に示す。カルボプラチン及びパクリタキセルの併用投与は、１５日目に６５％のＴＧＩを示した。抗体－薬物コンジュゲート（１）の単回投与は、１５日目に９５％のＴＧＩを示した；抗体－薬物コンジュゲート（１）、カルボプラチン及びパクリタキセルの併用投与は、１５日目に９７％のＴＧＩを示した。さらに、抗体－薬物コンジュゲート（１）、カルボプラチン及びパクリタキセルの併用投与は、１９日目ではカルボプラチン及びパクリタキセルの併用投与よりも有意に優れた腫瘍増殖抑制効果を示し（Ｐ＜０．００１）、また、１９日目では抗体－薬物コンジュゲート（１）の単独投与よりも有意に優れた腫瘍増殖抑制効果を示した（Ｐ＜０．００１）。さらに、単回投与群及び併用投与群のいずれも、体重減少などの特定の注目すべき所見を示さなかった。
［実施例５：抗腫瘍試験（４）］
マウス：雌５週齢ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（ＣＨＡＲＬＥＳ ＲＩＶＥＲ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＪＡＰＡＮ，ＩＮＣ．）を実験に供した。
測定及び計算式：本研究では、腫瘍の長径及び短径を週に３回まで電子デジタルキャリパー（ＣＤ１５－ＣＸ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ Ｃｏｒｐ．）で測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）を計算した。計算式は以下の通りである。腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×長径（ｍｍ）×［短径（ｍｍ）］２。
ＡＴＣＣより購入したヒト卵巣癌細胞株ＯＶ－９０を、マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．）に懸濁し、雌ヌードマウスの右側に２．５×１０６細胞で皮下移植し、移植から１７日後にマウスを無作為に群分けした（０日目）。抗体－薬物コンジュゲート（１）（化４）（ＤＡＲ：７．９）を、０日目に３ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。０日目、７日目及び１４日目にゲムシタビンを１５ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈に静脈内投与した。各薬物の単独投与群、併用投与群、コントロール群として溶媒投与群を設定した。
抗体－薬物コンジュゲート（１）及びゲムシタビンの組み合わせの結果を図２１に示す。ゲムシタビンの単回投与は、２１日目に２３％のＴＧＩを示した。抗体－薬物コンジュゲート（１）の単回投与は、７９％のＴＧＩを示した。一方、抗体－薬物コンジュゲート（１）とゲムシタビンの併用投与は、ゲムシタビンの単独投与よりも有意に優れた腫瘍増殖抑制効果を示し（Ｐ＜０．００１）、抗体－薬物コンジュゲート（１）の単独投与よりも有意に優れた腫瘍増殖抑制効果も示した（Ｐ＜０．００１）。ＴＧＩは９５％であった。さらに、単回投与群及び併用投与群のいずれも、体重減少などの特定の注目すべき所見を示さなかった。
本発明により、内在化活性を有する抗ＣＤＨ６抗体及び該抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートが提供された。該抗体－薬物コンジュゲートは癌に対する治療薬等として用いることができる。
本開示は、本発明の以下の態様を含む。
［１］癌を治療するための治療方法であって、それを必要とする対象に抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を投与することを含む、治療方法。
［２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［１］に記載の治療方法。
［３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［１］又は［２］に記載の治療方法。
［４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１］～［３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１］～［３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［６］癌が卵巣癌である、［１］～［３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［６］に記載の治療方法。
［８］卵巣癌が転移性である、［６］又は［７］に記載の治療方法。
［９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１］～［８］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１］～［９］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１］～［９］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［１］～［１１］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［１］～［１１］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［１］～［１３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［１］～［１４］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［１］～［１４］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［１］～［１４］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［１］～［１７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１］～［１８］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１］～［１８］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１］～［２０］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１］～［２０］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［１］～［２２］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［２３］に記載の治療方法。
［２５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［２３］に記載の治療方法。
［２６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［２３］に記載の治療方法。
［２７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［２３］～［２６］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１］～［２７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［２９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１］～［２７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１］～［２７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１］～［２７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［１］～［３１］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［１］～［３２］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［１］～［３３］のいずれか１つに記載の治療方法。
［３５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［３４］に記載の治療方法。
［３６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［３４］に記載の治療方法。
［３７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［３４］に記載の治療方法。
［３８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［３４］に記載の治療方法。
［３９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［１］～［３８］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［３９］に記載の治療方法。
［４１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［３９］に記載の治療方法。
［４２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［３９］に記載の治療方法。
［４３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療方法。
［４４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療方法。
［４５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出すること及びＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与することを含む、［１］～［４４］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１］～［４５］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１］～［４５］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［１］～［４７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［４９］白金系薬物がカルボプラチンである、［１］～［４７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［５０］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［１］～［４７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［５１］本明細書に開示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含む、癌の治療剤。
［５２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［５１］に記載の治療剤。
［５３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［５１］又は［５２］に記載の治療剤。
［５４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［５１］～［５３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［５５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［５１］～［５３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［５６］癌が卵巣癌である、［５１］～［５３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［５７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［５６］に記載の治療剤。
［５８］卵巣癌が転移性である、［５６］又は［５７］に記載の治療剤。
［５９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［５１］～［５８］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［５１］～［５９］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［５１］～［５９］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［５１］～［６１］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［５１］～［６１］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［５１］～［６３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［５１］～［６４］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［５１］～［６４］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［５１］～［６４］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［５１］～［６７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［６９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［５１］～［６８］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［５１］～［６８］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［５１］～［７０］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［５１］～［７０］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［５１］～［７２］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［７３］に記載の治療剤。
［７５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［７３］に記載の治療剤。
［７６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［７３］に記載の治療剤。
［７７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［７３］～［７６］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［５１］～［７７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［７９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［５１］～［７７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［５１］～［７７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［５１］～［７７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［５１］～［８１］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［５１］～［８２］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［５１］～［８３］のいずれか１つに記載の治療剤。
［８５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［８４］に記載の治療剤。
［８６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［８４］に記載の治療剤。
［８７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［８４］に記載の治療剤。
［８８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［８４］に記載の治療剤。
［８９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［５１］～［８８］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［８９］に記載の治療剤。
［９１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［８９］に記載の治療剤。
［９２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［８９］に記載の治療剤。
［９３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象への投与のための医薬組成物を含む、癌の治療剤であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療剤。
［９４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象への投与のための医薬組成物を含む、癌を治療するための治療剤であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療剤。
［９５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、ＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与する前に、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出する、［５１］～［９４］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［５１］～［９５］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［５１］～［９５］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［５１］～［９７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［９９］白金系薬物がカルボプラチンである、［５１］～［９７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［１００］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［５１］～［９７］のいずれか１つに記載の治療剤。
［１０１］癌の治療に使用するための本明細書に開示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［１０１］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［１０１］又は［１０２］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１０１］～［１０３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１０１］～［１０３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０６］癌が卵巣癌である、［１０１］～［１０３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［１０６］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０８］卵巣癌が転移性である、［１０６］又は［１０７］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１０９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１０１］～［１０８］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１０１］～［１０９］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１０１］～［１０９］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［１０１］～［１１１］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［１０１］～［１１１］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［１０１］～［１１３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［１０１］～［１１４］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［１０１］～［１１４］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［１０１］～［１１４］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［１０１］～［１１７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１１９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１０１］～［１１８］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１０１］～［１１８］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１０１］～［１２０］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１０１］～［１２０］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［１０１］～［１２２］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［１２３］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［１２３］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［１２３］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［１２３］～［１２６］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１０１］～［１２７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１２９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１０１］～［１２７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１０１］～［１２７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１０１］～［１２７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［１０１］～［１３１］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［１０１］～［１３２］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［１０１］～［１３３］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［１３４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［１３４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［１３４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［１３４］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１３９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［１０１］～［１３８］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［１３９］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［１３９］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［１３９］に記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象において癌を治療するための抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象において癌を治療するための癌を治療するための抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、ＣＤＨ６が検出された試験対象にＡＤＣを投与する前に、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出する、［１０１］～［１４４］のいずれか１つに記載のＡＤＣ。
［１４６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１０１］～［１４５］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１０１］～［１４５］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［１０１］～［１４７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１４９］白金系薬物がカルボプラチンである、［１０１］～［１４７］のいずれか１つに記載の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
［１５０］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［１０１］～［１４７］のいずれか１つに記載の治療方法。
［１５１］本明細書に開示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）又はその塩を活性成分として含み、薬学的に許容される製剤成分を含む、癌を治療するための医薬組成物。
［１５２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［１５１］に記載の医薬組成物。
［１５３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［１５１］又は［１５２］に記載の医薬組成物。
［１５４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１５１］～［１５３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１５５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１５１］～［１５３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１５６］癌が卵巣癌である、［１５１］～［１５３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１５７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［１５６］に記載の医薬組成物。
［１５８］卵巣癌が転移性である、［１５６］又は［１５７］に記載の医薬組成物。
［１５９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１５１］～［１５８］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１５１］～［１５９］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１５１］～［１５９］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［１５１］～［１６１］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［１５１］～［１６１］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［１５１］～［１６３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［１５１］～［１６４］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［１５１］～［１６４］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［１５１］～［１６４］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［１５１］～［１６７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１６９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１５１］～［１６８］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［１５１］～［１６８］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１５１］～［１７０］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［１５１］～［１７０］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［１５１］～［１７２］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［１７３］に記載の医薬組成物。
［１７５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［１７３］に記載の医薬組成物。
［１７６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［１７３］に記載の医薬組成物。
［１７７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［１７３］～［１７６］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１５１］～［１７７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１７９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１５１］～［１７７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［１５１］～［１７７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［１５１］～［１７７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［１５１］～［１８１］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［１５１］～［１８２］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［１５１］～［１８３］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１８５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［１８４］に記載の医薬組成物。
［１８６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［１８４］に記載の医薬組成物。
［１８７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［１８４］に記載の医薬組成物。
［１８８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［１８４］に記載の医薬組成物。
［１８９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［１５１］～［１８８］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［１８９］に記載の医薬組成物。
［１９１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［１８９］に記載の医薬組成物。
［１９２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［１８９］に記載の医薬組成物。
［１９３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象において癌を治療するための医薬組成物であって、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、医薬組成物。
［１９４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象において癌を治療するための医薬組成物であって、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、医薬組成物。
［１９５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、ＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与する前に、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出する、［１５１］～［１９４］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１５１］～［１９５］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［１５１］～［１９５］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［１５１］～［１９７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［１９９］白金系薬物がカルボプラチンである、［１５１］～［１９７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［２００］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［１５１］～［１９７］のいずれか１つに記載の医薬組成物。
［２０１］癌を治療するための医薬の製造における、本明細書に開示される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の使用。
［２０２］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、［２０１］に記載の使用。
［２０３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、［２０１］又は［２０２］に記載の使用。
［２０４］癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［２０１］～［２０３］のいずれか１つに記載の使用。
［２０５］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［２０１］～［２０３］のいずれか１つに記載の使用。
［２０６］癌が卵巣癌である、［２０１］～［２０３］のいずれか１つに記載の使用。
［２０７］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［２０６］に記載の使用。
［２０８］卵巣癌が転移性である、［２０６］又は［２０７］に記載の使用。
［２０９］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［２０１］～［２０８］のいずれか１つに記載の使用。
［２１０］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［２０１］～［２０９］のいずれか１つに記載の使用。
［２１１］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［２０１］～［２０９］のいずれか１つに記載の使用。
［２１２］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［２０１］～［２１１］のいずれか１つに記載の使用。
［２１３］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［２０１］～［２１１］のいずれか１つに記載の使用。
［２１４］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［２０１］～［２１３］のいずれか１つに記載の使用。
［２１５］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［２０１］～［２１４］のいずれか１つに記載の使用。
［２１６］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［２０１］～［２１４］のいずれか１つに記載の使用。
［２１７］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［２０１］～［２１４］のいずれか１つに記載の使用。
［２１８］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［２０１］～［２１７］のいずれか１つに記載の使用。
［２１９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［２０１］～［２１８］のいずれか１つに記載の使用。
［２２０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、［２０１］～［２１８］のいずれか１つに記載の使用。
［２２１］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［２０１］～［２２０］のいずれか１つに記載の使用。
［２２２］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、［２０１］～［２２０］のいずれか１つに記載の使用。
［２２３］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、［２０１］～［２２２］のいずれか１つに記載の使用。
［２２４］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤の後に投与される、［２２３］に記載の使用。
［２２５］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、［２２３］に記載の使用。
［２２６］抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、［２２３］に記載の使用。
［２２７］１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、［２２３］～［２２６］のいずれか１つに記載の使用。
［２２８］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［２０１］～［２２７］のいずれか１つに記載の使用。
［２２９］対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［２０１］～［２２７］のいずれか１つに記載の使用。
［２３０］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、［２０１］～［２２７］のいずれか１つに記載の使用。
［２３１］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、［２０１］～［２２７］のいずれか１つに記載の使用。
［２３２］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［２０１］～［２３１］のいずれか１つに記載の使用。
［２３３］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［２０１］～［２３２］のいずれか１つに記載の使用。
［２３４］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［２０１］～［２３３］のいずれか１つに記載の使用。
［２３５］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［２３４］に記載の使用。
［２３６］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、［２３４］に記載の使用。
［２３７］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［２３４］に記載の使用。
［２３８］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６カ月又は約６ヶ月後に起こる、［２３４］に記載の使用。
［２３９］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［２０１］～［２３８］のいずれか１つに記載の使用。
［２４０］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［２３９］に記載の使用。
［２４１］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［２３９］に記載の使用。
［２４２］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［２３９］に記載の使用。
［２４３］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための医薬組成物の使用であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、使用。
［２４４］卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための医薬組成物の使用であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、使用。
［２４５］試験対象に由来する生体サンプルを用いて、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出すること及びＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与することを含む、［２０１］～［２４４］のいずれか１つに記載の使用。
［２４６］癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［２０１］～［２４５］のいずれか１つに記載の使用。
［２４７］癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、［２０１］～［２４５］のいずれか１つに記載の使用。
［２４８］代謝拮抗物質がゲムシタビンである、［２０１］～［２４７］のいずれか１つに記載の使用。
［２４９］白金系薬物がカルボプラチンである、［２０１］～［２４７］のいずれか１つに記載の使用。
［２５０］白金系薬物がカルボプラチンであり、タキサンがパクリタキセルである、［２０１］～［２４７］のいずれか１つに記載の使用。
いくつかの態様では、開示される治療は、癌を治療するための治療的使用又は治療的方法に広く関しており、それを必要とする対象に抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を投与することを含む。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、下記式：
によって表される構造を有しており、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗体が細胞外ドメイン３に特異的に結合する抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである。
いくつかの態様では、癌は、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される。いくつかの態様では、癌は、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される。いくつかの態様では、癌は卵巣癌である。いくつかの態様では、卵巣癌は、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される。いくつかの態様では、卵巣癌は転移性である。
いくつかの態様では、抗体は、以下の組み合わせ（１）～（４）：（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である。
いくつかの態様では、抗体は、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である。いくつかの態様では、抗体は、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である。
いくつかの態様では、重鎖又は軽鎖は、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている。
いくつかの態様では、重鎖又は軽鎖は、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている。
いくつかの態様では、選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は１～１０の範囲である。いくつかの態様では、選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は２～８の範囲である。いくつかの態様では、選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は５～８の範囲である。いくつかの態様では、選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８の範囲である。
いくつかの態様では、癌は、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する。いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている。いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、１又は複数の化学療法剤の後に投与される。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与された後に投与される。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤は、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される。
いくつかの態様では、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び１又は複数の化学療法剤は、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される。
いくつかの態様では、１又は複数の化学療法剤は、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である。いくつかの態様では、１又は複数の化学療法剤は、代謝拮抗物質である。いくつかの態様では、１又は複数の化学療法剤は、白金系薬物である。いくつかの態様では、１又は複数の化学療法剤は、白金系薬物及びタキサンの両方である。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している。
いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している。
いくつかの態様では、対象は、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する。いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する。いくつかの態様では、対象は、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す。いくつかの態様では、対象は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月以内に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月未満又は６ヶ月以内に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月未満に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月以内に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月又は約６ヶ月後に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月後に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月以内に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月未満又は６ヶ月以内に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月未満に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月以内に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月又は約６ヶ月後に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月後に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月又は６ヶ月後に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月後に起こる。
いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月又は６ヶ月後に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月に起こる。いくつかの態様では、癌の再発は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の６ヶ月後に起こる。
いくつかの態様では、対象には、ＡＤＣが第二の薬物とともに投与される。いくつかの態様では、ＡＤＣは第二の薬物の前に投与される。いくつかの態様では、ＡＤＣは第二の薬物の後に投与される。いくつかの態様では、ＡＤＣは第二の薬物と同時に投与される。
いくつかの態様では、本開示は一般に、白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法に関し、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、本開示は一般に、卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法に関し、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの態様では、本開示は一般に、癌を治療するための治療方法に関し、試験対象に由来する生体サンプルを用いて、生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出すること及びＣＤＨ６が検出された試験対象に医薬組成物を投与することを含む。
いくつかの態様では、癌は、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している。いくつかの態様では、癌は、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している。
いくつかの態様では、代謝拮抗物質はゲムシタビンである。いくつかの態様では、白金系薬物はカルボプラチンである。いくつかの態様では、白金系薬物はカルボプラチンであり、タキサンはパクリタキセルである。
本発明は、本発明の以下の態様を含む。
［１Ａ］癌を治療するための治療方法であって、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を、それを必要とする対象に投与することを含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合している、治療方法。
［２Ａ］癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、［１Ａ］に記載の治療方法。
［３Ａ］癌が卵巣癌である、［２Ａ］に記載の治療方法。
［４Ａ］卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、［３Ａ］に記載の治療方法。
［５Ａ］卵巣癌が転移性である、［３Ａ］に記載の治療方法。
［６Ａ］抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
（１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
（３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
（４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１Ａ］に記載の治療方法。
［７Ａ］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１Ａ］に記載の治療方法。
［８Ａ］抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は抗体の機能性断片である、［１Ａ］に記載の治療方法。
［９Ａ］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１０Ａ］重鎖又は軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１１Ａ］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１２Ａ］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、［１１Ａ］に記載の治療方法。
［１３Ａ］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、［１１Ａ］に記載の治療方法。
［１４Ａ］選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、［１１Ａ］に記載の治療方法。
［１５Ａ］癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１６Ａ］対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１７Ａ］対象が、ＡＤＣの投与前に癌の再発を示す、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１８Ａ］対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、［１Ａ］に記載の治療方法。
［１９Ａ］癌の再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月以内に起こる、［１７Ａ］に記載の治療方法。
［２０Ａ］癌の再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月以内に起こる、［１７Ａ］に記載の治療方法。
［２１Ａ］対象にＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、［１Ａ］に記載の治療方法。
［２２Ａ］ＡＤＣを第二の薬物の前に投与する、［２１Ａ］に記載の治療方法。
［２３Ａ］ＡＤＣを第二の薬物の後に投与する、［２１Ａ］に記載の治療方法。
［２４］ＡＤＣを第二の薬物と同時に投与する、［２１Ａ］に記載の治療方法。
［２５Ａ］白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法であって、医薬組成物が、下記式：
によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
式中、ＡＢは抗体又は抗体の機能性断片を示し、ｎは抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、抗体は抗体由来のスルフヒドリル基を介してリンカーに結合しており；ＡＤＣはその塩又はＡＤＣ若しくは塩の水和物であり；薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列又は配列番号８８で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列を含む、治療方法。

Claims (50)

  1. 癌を治療するための治療方法であって、それを必要とする対象に抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を投与することを含む、治療方法。
  2. 前記抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、下記式：

    によって表される構造を有しており、
    式中、ＡＢは前記抗体又は前記抗体の機能性断片を示し、ｎは前記抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、前記抗体が前記抗体由来のスルフヒドリル基を介して前記リンカーに結合している、請求項１に記載の治療方法。
  3. 前記抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が抗ＣＤＨ６抗体－薬物コンジュゲートである、請求項１又は２に記載の治療方法。
  4. 前記癌が、腎細胞癌、卵巣癌、中皮腫、甲状腺癌、子宮癌、胆管癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、頭頸部癌、肉腫、骨肉腫、小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の治療方法。
  5. 前記癌が、卵巣癌、非小細胞肺癌、乳癌、膀胱癌、子宮内膜癌及び去勢抵抗性前立腺癌からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の治療方法。
  6. 前記癌が卵巣癌である、請求項１～３のいずれか一項に記載の治療方法。
  7. 前記卵巣癌が、上皮性卵巣癌、卵管癌、又は原発性腹膜癌からなる群から選択される、請求項６に記載の治療方法。
  8. 前記卵巣癌が転移性である、請求項６又は７に記載の治療方法。
  9. 前記抗体が、以下の組み合わせ（１）～（４）：
    （１）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
    （２）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
    （３）配列番号６５の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７３の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに
    （４）配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖、
    からなる群から選択されるいずれか１つの組み合わせに記載の軽鎖及び重鎖を含む抗体又は前記抗体の機能性断片である、請求項１～８のいずれか一項に記載の治療方法。
  10. 前記抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号６９の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は前記抗体の機能性断片である、請求項１～９のいずれか一項に記載の治療方法。
  11. 前記抗体が、配列番号６１の２１～２３３番目のアミノ酸配列からなる軽鎖及び配列番号７７の２０～４７１番目のアミノ酸配列からなる重鎖を含む抗体又は前記抗体の機能性断片である、請求項１～９のいずれか一項に記載の治療方法。
  12. 前記重鎖又は前記軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化、及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される１つ以上の修飾を受けている、請求項１～１１のいずれか一項に記載の治療方法。
  13. 前記重鎖又は前記軽鎖が、Ｎ－結合への糖鎖付加、Ｏ－結合への糖鎖付加、Ｎ末のプロセッシング、Ｃ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化、Ｎ末へのメチオニン残基の付加、プロリン残基のアミド化、Ｎ末グルタミン若しくはＮ末グルタミン酸のピログルタミン酸化、及びカルボキシル末端における１つ又は２つのアミノ酸欠失からなる群から選択される２つ以上の修飾を受けている、請求項１～１１のいずれか一項に記載の治療方法。
  14. 前記選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が１～１０の範囲である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の治療方法。
  15. 前記選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２～８の範囲である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の治療方法。
  16. 前記選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が５～８の範囲である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の治療方法。
  17. 前記選択された１種の薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が７～８の範囲である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の治療方法。
  18. 前記癌が、ＣＤＨ６を発現する１又は複数の腫瘍を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の治療方法。
  19. 前記対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の治療方法。
  20. 前記対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療歴を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の治療方法。
  21. 前記対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンで以前に治療されている、請求項１～２０のいずれか一項に記載の治療方法。
  22. 前記対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンで以前に治療されている、請求項１～２０のいずれか一項に記載の治療方法。
  23. 前記抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、同時又は異なる時間に１又は複数の化学療法剤と組み合わせて投与される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の治療方法。
  24. 前記抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が前記１又は複数の化学療法剤の後に投与される、請求項２３に記載の治療方法。
  25. 前記抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び前記１又は複数の化学療法剤が、異なる製剤中に活性成分として別々に含まれ、同時又は異なる時間に投与される、請求項２３に記載の治療方法。
  26. 前記抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び前記１又は複数の化学療法剤が、同じ製剤中に活性成分として一緒に含まれ、同時に投与される、請求項２３に記載の治療方法。
  27. 前記１又は複数の化学療法剤が、代謝拮抗物質、白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方である、請求項２３～２６のいずれか一項に記載の治療方法。
  28. 前記対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、請求項１～２７のいずれか一項に記載の治療方法。
  29. 前記対象が、白金系薬物を含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、請求項１～２７のいずれか一項に記載の治療方法。
  30. 前記対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）又は安定疾患（ＳＤ）を示している、請求項１～２７のいずれか一項に記載の治療方法。
  31. 前記対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンによる治療で完全奏効（ＣＲ）又は部分奏効（ＰＲ）を示している、請求項１～２７のいずれか一項に記載の治療方法。
  32. 前記対象が、白金系化学療法に抵抗性の癌を有する、請求項１～３１のいずれか一項に記載の治療方法。
  33. 前記対象が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに抵抗性の癌を有する、請求項１～３２のいずれか一項に記載の治療方法。
  34. 前記対象が、前記ＡＤＣの投与前に前記癌の再発を示す、請求項１～３３のいずれか一項に記載の治療方法。
  35. 前記癌の前記再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、請求項３４に記載の治療方法。
  36. 前記癌の前記再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了の約６ヶ月未満又は約６ヶ月以内に起こる、請求項３４に記載の治療方法。
  37. 前記癌の前記再発が、白金系薬物を含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、請求項３４に記載の治療方法。
  38. 前記癌の前記再発が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンの完了時又は約６ヶ月後に起こる、請求項３４に記載の治療方法。
  39. 前記対象に前記ＡＤＣを第二の薬物とともに投与する、請求項１～３８のいずれか一項に記載の治療方法。
  40. 前記ＡＤＣを前記第二の薬物の前に投与する、請求項３９に記載の治療方法。
  41. 前記ＡＤＣを前記第二の薬物の後に投与する、請求項３９に記載の治療方法。
  42. 前記ＡＤＣを前記第二の薬物と同時に投与する、請求項３９に記載の治療方法。
  43. 白金系化学療法に抵抗性の卵巣癌を有する対象及び／又は医薬組成物の投与前に卵巣癌の再発を示す対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法であって、前記医薬組成物が、下記式：

    によって表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、
    式中、ＡＢは前記抗体又は前記抗体の機能性断片を示し、ｎは前記抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、前記抗体が前記抗体由来のスルフヒドリル基を介して前記リンカーに結合しており；前記ＡＤＣはその塩又は前記ＡＤＣ若しくは前記塩の水和物であり；前記薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、前記抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療方法。
  44. 卵巣癌を有する対象、並びに白金系薬物、タキサン、又は白金系薬物及びタキサンの両方を含む化学療法レジメンで以前に治療されたことがある対象に、医薬組成物を投与することを含む、癌を治療するための治療方法であって、前記医薬組成物が、下記式で表される構造を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み：

    式中、ＡＢは前記抗体又は前記抗体の機能性断片を示し、ｎは前記抗体と結合している薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数を示し、前記抗体が前記抗体由来のスルフヒドリル基を介して前記リンカーに結合しており；前記ＡＤＣはその塩又は前記ＡＤＣ若しくは前記塩の水和物であり；前記薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数は７～８であり、前記抗体は、配列番号８７で表される重鎖アミノ酸配列又は配列番号８７で表されるアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であってそのカルボキシル末端から１個若しくは２個のアミノ酸が欠失されたアミノ酸配列；及び配列番号８８で表される軽鎖アミノ酸配列を含む、治療方法。
  45. 試験対象に由来する生体サンプルを用いて、前記生体サンプル中のＣＤＨ６の存在又は非存在を検出すること及びＣＤＨ６が検出された前記試験対象に医薬組成物を投与することを含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の治療方法。
  46. 前記癌が、白金系薬物を含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、請求項１～４５のいずれか一項に記載の治療方法。
  47. 前記癌が、白金系薬物及びタキサンを含む化学療法レジメンに対する抵抗性を獲得している、請求項１～４５のいずれか一項に記載の治療方法。
  48. 前記代謝拮抗物質がゲムシタビンである、請求項１～４７のいずれか一項に記載の治療方法。
  49. 前記白金系薬物がカルボプラチンである、請求項１～４７のいずれか一項に記載の治療方法。
  50. 前記白金系薬物がカルボプラチンであり、前記タキサンがパクリタキセルである、請求項１～４７のいずれか一項に記載の治療方法。
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