JP2024071346A - Tablet composition for preparing hemolytic solution and method for producing same - Google Patents
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Abstract
【課題】本発明の課題は、従来液体状態で供給されてきた血液の分析に用いられる溶血及び希釈液の輸送及び保管コストを低減し得る手段を提供することにある。
【解決手段】
キレート作用を有する少なくとも2種以上の有機酸塩と、
以下の特性:
(1)融点が30℃から80℃の範囲;
(2)平均分子量が1000~6000の範囲;
(3)pHが4から8(50g/L,25℃);
(4)水への溶解度が0.5g/L以上;及び
(5)非イオン性
を有する第三の成分と
を含む、塊として形成された、溶血用溶液を調製するための錠剤化組成物、及びそれを製造する方法を提供する。
【選択図】図1
An object of the present invention is to provide a means capable of reducing the transportation and storage costs of hemolyzing and diluting solutions used in the analysis of blood, which has conventionally been supplied in a liquid state.
SOLUTION
At least two or more organic acid salts having a chelating effect;
The following characteristics:
(1) a melting point in the range of 30°C to 80°C;
(2) an average molecular weight in the range of 1,000 to 6,000;
(3) pH 4 to 8 (50 g/L, 25° C.);
(4) a solubility in water of 0.5 g/L or more; and (5) a third component having non-ionic properties. The present invention provides a tableted composition for preparing a hemolyzing solution, which is formed as a mass, and a method for producing the same.
[Selected Figure] Figure 1
Description
本発明は、溶血用溶液を調製するための錠剤化組成物及びその製造方法に関する。また、本発明は、溶血用溶液、溶血用溶液を調製する方法およびそれにより得られる溶血用溶液を用いるグリコヘモグロビンを分析する方法に関する。 The present invention relates to a tablet composition for preparing a hemolytic solution and a method for producing the same. The present invention also relates to a hemolytic solution, a method for preparing the hemolytic solution, and a method for analyzing glycated hemoglobin using the hemolytic solution obtained thereby.
糖尿病の指標とされるヘモグロビンA1c(以下、「HbA1c」もしくは「SA1c」と称する)の測定法は、その目的や処理可能な検体数により複数存在する。そのなかで、HPLC(High Performance Liquid Chromatography:高速液体クロマトグラフィ)法は、患者血液検体の遠心分離等の前処理が必要なく、処理数も比較的多いことから頻繁に用いられる測定法であり、患者血液検体を溶血および希釈した後、陽イオン交換カラムに導入し、電荷の差によりヘモグロビンの各成分を分離定量し、HbA1cを算出する方法である(例えば、非特許文献1)。 There are several methods for measuring hemoglobin A1c (hereinafter referred to as "HbA1c" or "SA1c"), which is an indicator of diabetes, depending on the purpose and the number of samples that can be processed. Among them, the HPLC (High Performance Liquid Chromatography) method is a frequently used measurement method because it does not require pretreatment such as centrifugation of the patient's blood sample and can process a relatively large number of samples. In this method, the patient's blood sample is hemolyzed and diluted, then introduced into a cation exchange column, and each component of hemoglobin is separated and quantified based on the difference in charge, and HbA1c is calculated (for example, Non-Patent Document 1).
患者血液検体に含まれるHbA1cを測定するためには、通常、赤血球を溶血し、希釈する必要がある。HPLC法において、「溶血および希釈」の工程は、通常1種類の試薬溶液で、溶血と希釈を同時に行われる(以降、溶血と希釈を同時に行う試薬溶液を「溶血/希釈液」と呼ぶ)。溶血/希釈液は有機酸塩や各種界面活性剤で構成されることが多い(特許文献1)。溶血/希釈液は文字通り液体の状態であり、使用量も多いことから数L程度のプラスチック容器に封入した状態で提供される。溶血/希釈液は容量が大きく、常に輸送及び保管コストが問題視されている。更に、近年では、廃プラスチック削減が社会的に求められるようになっており、この溶血/希釈液を封入する廃プラスチック容器の処理も課題とされている。 In order to measure HbA1c contained in a patient's blood sample, it is usually necessary to hemolyze and dilute red blood cells. In the HPLC method, the "hemolysis and dilution" process is usually performed simultaneously with one type of reagent solution (hereinafter, the reagent solution that performs hemolysis and dilution simultaneously is called the "hemolysis/dilution solution"). The hemolysis/dilution solution is often composed of organic acid salts and various surfactants (Patent Document 1). The hemolysis/dilution solution is literally in a liquid state, and since it is used in large quantities, it is provided sealed in a plastic container of about several liters. The hemolysis/dilution solution has a large volume, and the transportation and storage costs are always considered to be problems. Furthermore, in recent years, there has been a social demand for reducing waste plastic, and the disposal of waste plastic containers that seal this hemolysis/dilution solution is also an issue.
従来、液体状態で供給されてきた血液の分析に用いられる溶血及び希釈液の輸送及び保管コストを低減し得る手段を提供することを課題とする。 The objective of the present invention is to provide a means for reducing the transportation and storage costs of hemolyzing and diluting solutions used in the analysis of blood, which has traditionally been supplied in a liquid state.
上記課題を解決するために本願発明者らが鋭意研究、開発を行った結果、本発明を開発するに至った。すなわち、本発明は、以下の態様を含む。 The inventors of the present application conducted intensive research and development to solve the above problems, and as a result, developed the present invention. That is, the present invention includes the following aspects.
[1] キレート作用を有する少なくとも2種以上の有機酸塩と、
以下の特性:
(1)融点が30℃から80℃の範囲;
(2)平均分子量が1000~6000の範囲;
(3)pHが4から8(50g/L,25℃);
(4)水への溶解度が0.5g/L以上;及び
(5)非イオン性
を有する第三の成分と
を含む、塊として形成された、溶血用溶液を調製するための錠剤化組成物を製造する方法であって、以下(i)~(vi)のいずれか:
(i)前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分とを混合して粉砕処理を施すことにより微粉末化し、それを前記第三の成分の融点以上に加熱して前記第三の成分を融解させ、その後25℃以下に冷却することで前記少なくとも2種以上の有機酸塩を包含する塊としての錠剤化組成物を形成すること;
(ii)粒形が均等になるように微粉末化された前記少なくとも2種以上の有機酸塩及び前記第三の成分を混合し、それを前記第三の成分の融点以上に加熱して前記第三の成分を融解させ、その後25℃以下の冷却することで、前記少なくとも2種以上の有機酸塩を包含する塊としての錠剤化組成物を形成すること;
(iii)前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分とを混合して粉砕処理を施すことにより微粉末化し、それを加圧することで塊としての錠剤化組成物を形成すること;
(iv)粒形が均等になるように微粉末化された前記少なくとも2種以上の有機酸塩及び前記第三の成分を混合し、それを加圧することで塊として錠剤化組成物を形成すること;
(v)前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分とを混合しして粉砕処理を施すことにより微粉末化し、それを前記第三成分の融点以下の温度を加えながら加圧することで塊としての錠剤化組成物を形成すること;又は
(vi)粒形が均等になるように微粉末化された前記少なくとも2種以上の有機酸塩及び前記第三の成分を混合し、それを前記第三成分の融点以下の温度を加えながら加圧することで塊としての錠剤化組成物を形成すること;
を含む、方法。
[2] 前記第三の成分がポリエチレングリコール又はポリオキシエチレンラウリルエーテルである、項目1に記載の方法。
[3] 前記少なくとの2種以上の有機酸塩が、エチレンジアミン四酢酸塩、グリコールエーテルジアミン四酢酸、エチレンジアミン-N,N’-ジコハク酸塩、クエン酸塩、フィチン酸塩、及びグルコン酸塩からなる群から選択される、項目1又は2に記載の方法。
[4] 前記少なくとの2種以上の有機酸塩が、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸三ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸二カリウム、エチレンジアミン四酢酸三カリウム、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム-カリウム、及びエチレンジアミン四酢酸トリエタノールアミンからなる群から選択される、項目1又は2に記載の方法。
[5] 前記少なくとの2種以上の有機酸塩が、エチレンジアミン四酢酸二カリウム及びエチレンジアミン四酢酸四ナトリウムを含む、項目1又は2に記載の方法。
[6] 前記錠剤化組成物が、さらに界面活性剤を含む項目1又は2に記載の方法。
[7] 前記錠剤化組成物が防腐剤を含まない、項目1又は2に記載の方法。
[8] 前記錠剤化組成物が防腐剤を含む、項目1又は2に記載の方法。
[9] 項目1又は2により作製される錠剤化組成物を水に溶解し、溶血用溶液を調製する方法。
[10] 項目9で得られる溶血用溶液を溶血および希釈液として用いるグリコヘモグロビンを分析する方法。
[1] At least two or more organic acid salts having a chelating effect;
The following characteristics:
(1) a melting point in the range of 30°C to 80°C;
(2) an average molecular weight in the range of 1,000 to 6,000;
(3) pH 4 to 8 (50 g/L, 25° C.);
(4) A method for producing a tableted composition for preparing a hemolysis solution, the tableted composition being formed as a mass and comprising: (4) a solubility in water of 0.5 g/L or more; and (5) a third component having non-ionic properties, the method comprising any one of the following (i) to (vi):
(i) mixing the at least two or more organic acid salts with the third component and pulverizing the mixture to obtain a fine powder, heating the mixture to a temperature equal to or higher than the melting point of the third component to melt the third component, and then cooling the mixture to 25° C. or lower to form a tableted composition as a mass containing the at least two or more organic acid salts;
(ii) mixing the at least two or more organic acid salts finely powdered to have a uniform particle size and the third component, heating the mixture to a temperature equal to or higher than the melting point of the third component to melt the third component, and then cooling the mixture to 25° C. or lower to form a tableted composition as a mass containing the at least two or more organic acid salts;
(iii) mixing the at least two or more organic acid salts with the third component, subjecting the mixture to a grinding treatment to obtain a fine powder, and then compressing the mixture to form a tableted composition as a mass;
(iv) mixing the at least two or more organic acid salts finely powdered to a uniform particle size and the third component, and compressing the mixture to form a tableted composition;
(v) mixing the at least two or more organic acid salts with the third component, subjecting the mixture to a grinding treatment to form a fine powder, and then pressing the mixture at a temperature not higher than the melting point of the third component to form a lump of tableted composition; or (vi) mixing the at least two or more organic acid salts and the third component, which have been finely powdered to have a uniform particle shape, and then pressing the mixture at a temperature not higher than the melting point of the third component to form a lump of tableted composition;
A method comprising:
[2] The method according to
[3] The method according to
[4] The method according to
[5] The method according to
[6] The method according to any one of the preceding claims, wherein the tableting composition further comprises a surfactant.
[7] The method of
8. The method of
[9] A method for preparing a hemolyzing solution by dissolving the tableted composition produced by
[10] A method for analyzing glycated hemoglobin, which uses the hemolyzing solution obtained in item 9 as a hemolyzing and diluting solution.
[11] キレート作用を有する少なくとも2種以上の有機酸塩と、
以下の特性:
(1)融点が30℃から80℃の範囲;
(2)平均分子量が1000~6000の範囲;
(3)pHが4から8(50g/L,25℃);
(4)水への溶解度が0.5g/L以上;及び
(5)非イオン性
を有する第三の成分と
を含み、
前記少なくとも2種以上の有機酸塩は、粒形が均等になるよう微粉末化された有機酸塩であって、
塊として形成されている溶血用溶液を調製するための錠剤化組成物。
[12] 前記第三の成分がポリエチレングリコール又はポリオキシエチレンラウリルエーテルである、項目11に記載の錠剤化組成物。
[13] 前記少なくとの2種以上の有機酸塩が、エチレンジアミン四酢酸塩、グリコールエーテルジアミン四酢酸、エチレンジアミン-N,N’-ジコハク酸塩、クエン酸塩、フィチン酸塩、及びグルコン酸塩からなる群から選択される、項目11又は12に記載の錠剤化組成物。
[14] 前記少なくとの2種以上の有機酸塩が、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸三ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸二カリウム、エチレンジアミン四酢酸三カリウム、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム-カリウム、及びエチレンジアミン四酢酸トリエタノールアミンからなる群から選択される、項目11又は12に記載の錠剤化組成物。
[15] 前記少なくとの2種以上の有機酸塩が、エチレンジアミン四酢酸二カリウム及びエチレンジアミン四酢酸四ナトリウムを含む、項目11又は12に記載の錠剤化組成物。
[16] 前記錠剤化組成物が、さらに界面活性剤を含む項目11又は12に記載の錠剤化組成物。
[17] 前記錠剤化組成物が防腐剤を含まない、項目11又は12に記載の錠剤化組成物。
[18] 前記錠剤化組成物が防腐剤を含む、項目11又は12に記載の錠剤化組成物。
[19] 項目11に記載の錠剤化組成物が水に溶解された、溶血用溶液。
[20] グリコヘモグロビン分析ための溶血および希釈液として用いられる、項目19に記載の溶血用溶液。
[11] At least two or more organic acid salts having a chelating effect;
The following characteristics:
(1) a melting point in the range of 30°C to 80°C;
(2) an average molecular weight in the range of 1,000 to 6,000;
(3) pH 4 to 8 (50 g/L, 25° C.);
(4) a solubility in water of 0.5 g/L or more; and (5) a third component having nonionic properties.
The at least two or more organic acid salts are organic acid salts finely powdered to have a uniform particle size,
A tableting composition for preparing a hemolytic solution formed as a mass.
12. The tableting composition according to claim 11, wherein the third component is polyethylene glycol or polyoxyethylene lauryl ether.
[13] The tableting composition according to item 11 or 12, wherein the at least two or more organic acid salts are selected from the group consisting of ethylenediaminetetraacetate, glycoletherdiaminetetraacetate, ethylenediamine-N,N'-disuccinate, citrate, phytate, and gluconate.
[14] The tableting composition according to item 11 or 12, wherein the at least two or more organic acid salts are selected from the group consisting of disodium ethylenediaminetetraacetate, trisodium ethylenediaminetetraacetate, tetrasodium ethylenediaminetetraacetate, dipotassium ethylenediaminetetraacetate, tripotassium ethylenediaminetetraacetate, disodium-potassium ethylenediaminetetraacetate, and triethanolamine ethylenediaminetetraacetate.
[15] The tableting composition according to item 11 or 12, wherein the at least two or more organic acid salts include dipotassium ethylenediaminetetraacetate and tetrasodium ethylenediaminetetraacetate.
[16] The tableting composition according to item 11 or 12, further comprising a surfactant.
17. The tableting composition of claim 11 or 12, wherein the tableting composition does not contain a preservative.
[18] The tableting composition according to claim 11 or 12, wherein the tableting composition comprises a preservative.
[19] A hemolyzing solution comprising the tableted composition according to item 11 dissolved in water.
[20] The hemolyzing solution according to Item 19, which is used as a hemolyzing and diluting solution for glycated hemoglobin analysis.
一般的に、溶血/希釈液は、文字通り液体の状態で、また、使用量も多いことから数L程度のプラスチック容器に封入した状態で提供される。容量が大きく、常に輸送/保管コストが問題視される。本発明の手法で得られた「溶血用溶液を調製するための錠剤化組成物」は、例えば、10mmφ程度と極端に小さくできることから、輸送/保管コストを大幅に圧縮することができる。 Generally, hemolysis/dilution solutions are literally in liquid form, and because they are used in large quantities, they are provided sealed in plastic containers of about several liters. Because of the large volume, transportation/storage costs are always an issue. The "tabletized composition for preparing a hemolysis solution" obtained by the method of the present invention can be made extremely small, for example, about 10 mm in diameter, which allows for significant reductions in transportation/storage costs.
また、近年では、廃プラスチック削減が社会的に求められるようになっており、本発明は、この要求にも大きく寄与するものである。 In recent years, there has been a social demand for reducing waste plastics, and this invention will contribute greatly to this demand.
以下に本発明を詳細に説明する。但し本発明は異なる形態による実施が可能であり、以下に示す実施形態、実施例の例示にのみ限定されるものでは無い。なお、本明細書で引用される文献は、その全内容を参照により本明細書の一部として援用される。 The present invention is described in detail below. However, the present invention can be implemented in various forms and is not limited to the following embodiments and examples. All documents cited in this specification are incorporated herein by reference in their entirety.
一実施態様において、本発明は、
キレート作用を有する少なくとも2種以上の有機酸塩と、
以下の特性:
(1)融点が30℃から80℃の範囲;
(2)平均分子量が1000~6000の範囲;
(3)pHが4から8(50g/L,25℃);
(4)水への溶解度が0.5g/L以上;及び
(5)非イオン性
を有する第三の成分と
を含む、塊として形成された、溶血用溶液を調製するための錠剤化組成物、及びそれを製造する方法を提供する。
In one embodiment, the present invention provides
At least two or more organic acid salts having a chelating effect;
The following characteristics:
(1) a melting point in the range of 30°C to 80°C;
(2) an average molecular weight in the range of 1,000 to 6,000;
(3) pH 4 to 8 (50 g/L, 25° C.);
(4) a solubility in water of 0.5 g/L or more; and (5) a third component having non-ionic properties. The present invention provides a tableted composition for preparing a hemolyzing solution, which is formed as a mass, and a method for producing the same.
なお、本明細書において、使用する第一の有機酸塩を「試薬A」、使用する第二の有機酸塩を「試薬B」、および、以下の特性、
(1)融点が30℃から80℃の範囲
(2)平均分子量が1000~6000の範囲
(3)pHが4から8(50g/L,25℃)
(4)水への溶解度が0.5g/L以上
(5)非イオン性
を有した第三の成分を「増量剤/増結剤」と称して説明することがある。
In this specification, the first organic acid salt used is referred to as "reagent A", the second organic acid salt used is referred to as "reagent B", and the following characteristics:
(1) Melting point in the range of 30°C to 80°C (2) Average molecular weight in the range of 1000 to 6000 (3) pH in the range of 4 to 8 (50 g/L, 25°C)
(4) The solubility in water is 0.5 g/L or more. (5) The third component having non-ionic properties is sometimes referred to as a "bulking agent/binding agent."
本発明の方法は、第一の様態として、
(i)前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分とを混合して粉砕処理を施すことにより微粉末化し、それを前記第三の成分の融点以上に加熱して前記第三の成分を融解させ、その後25℃以下に冷却することで前記少なくとも2種以上の有機酸塩を包含する塊としての錠剤化組成物を形成すること
を含むものである(図1参照)。
The method of the present invention, in a first aspect, comprises:
(i) mixing the at least two or more organic acid salts with the third component and pulverizing the mixture to obtain a fine powder, heating the mixture to a temperature equal to or higher than the melting point of the third component to melt the third component, and then cooling the mixture to 25° C. or lower to form a tabletable composition as a mass containing the at least two or more organic acid salts (see FIG. 1 ).
また、前記第一の態様において、前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分を混合する前に、粉砕し微粉末化するものであってもよく、例えば、本発明は、
(ii)粒形が均等になるように微粉末化された前記少なくとも2種以上の有機酸塩及び前記第三の成分を混合し、それを前記第三の成分の融点以上に加熱して前記第三の成分を融解させ、その後25℃以下の冷却することで、前記少なくとも2種以上の有機酸塩を包含する塊としての錠剤化組成物を形成すること
を含むものであってもよい。
In the first embodiment, the at least two or more organic acid salts and the third component may be pulverized and finely powdered before being mixed together. For example, the present invention provides the following:
(ii) mixing the at least two or more organic acid salts finely powdered to have a uniform particle shape and the third component, heating the mixture to a temperature equal to or higher than the melting point of the third component to melt the third component, and then cooling to 25° C. or lower to form a tableted composition as a mass containing the at least two or more organic acid salts.
本発明の方法は、第二の様態として、
(iii)前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分とを混合して粉砕処理を施すことにより微粉末化し、それを加圧することで塊としての錠剤化組成物を形成すること
を含むものであってもよい(図2参照)。
In a second aspect, the method of the present invention comprises the steps of:
(iii) mixing the at least two or more kinds of organic acid salts with the third component, pulverizing the mixture to obtain a fine powder, and then compressing the mixture to form a tableted composition as a mass (see FIG. 2).
また、前記第二の態様において、前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分を混合する前に、粉砕し微粉末化するものであってもよく、例えば、本発明は、
(iv)粒形が均等になるように微粉末化された前記少なくとも2種以上の有機酸塩及び前記第三の成分を混合し、それを加圧することで塊として錠剤化組成物を形成すること
を含むものであってもよい。
In the second embodiment, the at least two or more organic acid salts and the third component may be pulverized and finely powdered before being mixed together. For example, the present invention provides the following:
(iv) mixing the at least two or more organic acid salts finely powdered to a uniform particle size with the third component, and compressing the mixture to form a mass into a tableted composition.
本発明の方法は、第三の様態として、
(v)前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分とを混合しして粉砕処理を施すことにより微粉末化し、それを前記第三成分の融点以下の温度を加えながら加圧することで塊としての錠剤化組成物を形成すること
を含むものであってもよい(図3参照)。
The method of the present invention, in a third aspect, comprises:
(v) mixing the at least two or more kinds of organic acid salts with the third component, pulverizing the mixture to obtain a fine powder, and then compressing the mixture at a temperature equal to or lower than the melting point of the third component to form a lump of the tableted composition (see FIG. 3).
また、前記第三の態様において、前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分を混合する前に、粉砕し微粉末化するものであってもよく、例えば、本発明は、
(vi)粒形が均等になるように微粉末化された前記少なくとも2種以上の有機酸塩及び前記第三の成分を混合し、それを前記第三成分の融点以下の温度を加えながら加圧することで塊としての錠剤化組成物を形成すること
を含むものであってもよい。
In the third embodiment, the at least two or more organic acid salts and the third component may be pulverized and finely powdered before being mixed together. For example, the present invention provides the following:
(vi) mixing the at least two or more kinds of organic acid salts finely powdered to have a uniform particle shape with the third component, and pressing the mixture while applying a temperature not higher than the melting point of the third component to form a lump of the tableted composition.
本発明により提供される錠剤化組成物は、
キレート作用を有する少なくとも2種以上の有機酸塩と、
以下の特性:
(1)融点が30℃から80℃の範囲;
(2)平均分子量が1000~6000の範囲;
(3)pHが4から8(50g/L,25℃);
(4)水への溶解度が0.5g/L以上;及び
(5)非イオン性
を有する第三の成分と
を含み、
前記少なくとも2種以上の有機酸塩は、粒形が均等になるよう微粉末化された有機酸塩であって、塊として形成されているものである。
The tableted composition provided by the present invention comprises:
At least two or more organic acid salts having a chelating effect;
The following characteristics:
(1) a melting point in the range of 30°C to 80°C;
(2) an average molecular weight in the range of 1,000 to 6,000;
(3) pH 4 to 8 (50 g/L, 25° C.);
(4) a solubility in water of 0.5 g/L or more; and (5) a third component having nonionic properties.
The at least two or more organic acid salts are organic acid salts that have been finely powdered to have a uniform particle shape and are formed as lumps.
本発明により提供される錠剤化組成物を、水(例えば、蒸留水、純水、超純水、イオン交換水、RO水など)に投入し、攪拌などによって溶解することで、血液の溶血用溶液を調製することが可能となる。 The tableted composition provided by the present invention can be added to water (e.g., distilled water, pure water, ultrapure water, ion-exchanged water, RO water, etc.) and dissolved by stirring or the like to prepare a solution for hemolyzing blood.
また、前記溶血用溶液を、溶血および希釈液として用いるグリコヘモグロビンを分析する方法も、本発明により提供される。 The present invention also provides a method for analyzing glycated hemoglobin using the hemolysis solution as a hemolysis and dilution solution.
本発明を提供する際に用いられるキレート作用を有する少なくとも2種以上の有機酸塩は、血液を溶血させた際に放出されるタンパク質、特にヘモグロビンを安定化させるために、キレート作用を有する有機酸塩が用いられ得る。キレート作用を有する有機酸塩が溶解することで、溶液中でキレート剤として働き、金属イオン(例えば、カルシウムやマグネシウムなどの二価の金属イオン)と結合し、金属イオン要求性の酵素、例えばプロテアーゼを阻害する。これによりタンパク質(例えば、ヘモグロビン)が分化することが防止される。本発明に用いられ得る有機酸塩は、例えば、エチレンジアミン四酢酸塩、グリコールエーテルジアミン四酢酸、エチレンジアミン-N,N’-ジコハク酸塩、クエン酸塩、フィチン酸塩、及びグルコン酸塩からなる群から選択され得る。これらの塩は、例えばナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルミニウム塩などの金属塩や、例えばトリエチルアミン塩、グアニジン塩、アンモニウム塩、ヒドラジン塩、キニーネ塩、シンコニン塩などの塩基と形成される塩であってもよく、さらにこれらの溶媒和物もしくは水和物も含まれる。 At least two or more organic acid salts having a chelating effect used in providing the present invention may be organic acid salts having a chelating effect to stabilize proteins, particularly hemoglobin, released when blood is hemolyzed. When an organic acid salt having a chelating effect dissolves, it acts as a chelating agent in the solution, binds to metal ions (e.g., divalent metal ions such as calcium and magnesium), and inhibits enzymes that require metal ions, such as proteases. This prevents proteins (e.g., hemoglobin) from differentiating. Organic acid salts that can be used in the present invention may be selected from the group consisting of, for example, ethylenediaminetetraacetate, glycoletherdiaminetetraacetate, ethylenediamine-N,N'-disuccinate, citrate, phytate, and gluconate. These salts may be metal salts such as sodium salts, potassium salts, calcium salts, and aluminum salts, or salts formed with bases such as triethylamine salts, guanidine salts, ammonium salts, hydrazine salts, quinine salts, and cinchonine salts, and further include solvates or hydrates thereof.
本発明に用いられ得る有機酸塩は、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸三ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸二カリウム、エチレンジアミン四酢酸三カリウム、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム-カリウム、及びエチレンジアミン四酢酸トリエタノールアミンからなる群から選択されるものであってもよく、好ましくは、エチレンジアミン四酢酸二カリウム及びエチレンジアミン四酢酸四ナトリウムであり得る。 The organic acid salt that can be used in the present invention may be selected from the group consisting of disodium ethylenediaminetetraacetate, trisodium ethylenediaminetetraacetate, tetrasodium ethylenediaminetetraacetate, dipotassium ethylenediaminetetraacetate, tripotassium ethylenediaminetetraacetate, disodium-potassium ethylenediaminetetraacetate, and triethanolamine ethylenediaminetetraacetate, and is preferably dipotassium ethylenediaminetetraacetate and tetrasodium ethylenediaminetetraacetate.
本発明に用いられ得る有機酸塩は、溶解した時に、pHが4~8となるものが好ましい。また、本発明において提供される錠剤化組成物は、溶解した時に所望のpH、例えばpHが4~8になるようにさらに緩衝剤、例えばカルボン酸塩、リン酸塩、アンモニウム塩、又はアルキルアミン等を含むものであってもよい。 The organic acid salt that can be used in the present invention is preferably one that has a pH of 4 to 8 when dissolved. In addition, the tableting composition provided in the present invention may further contain a buffer, such as a carboxylate, a phosphate, an ammonium salt, or an alkylamine, so that the desired pH, for example, a pH of 4 to 8, is obtained when dissolved.
本発明において提供される錠剤化組成物に含まれる有機酸塩の濃度(場合によっては、その他の緩衝剤の濃度)は、錠剤化組成物を水に溶解して最終的に調整された溶血用溶液が、血液試料に含まれる赤血球を溶血させ得る濃度、すなわち生理的浸透圧よりも低い浸透圧となる濃度で含まれていればよい。ここで生理的浸透圧とは、溶血前の血液試料が有する浸透圧のことをいい、一般的には275mOsm/kg・H2O~315mOsm/kg・H2Oまでの範囲である。すなわち生理的浸透圧よりも低い浸透圧(低張)とは、一般的には315mOsm/kg・H2O未満の条件である。なお、本発明により調整される溶血用溶液は、生理的浸透圧よりも低い浸透圧(低張)条件であれば下限はなく、例えば、0mOsm/kg・H2O以上150mOsm/kg・H2O以下であてもよい。また、例えば、前記の生理的浸透圧よりも低い浸透圧とは、生理食塩水(0.9w/v%)の浸透圧よりも低いものであってもよく、例えば0.8w/v%以下、0.7w/v%以下、0.6w/v%以下、0.5w/v%以下、0.4w/v%以下、0.3w/v%以下、0.2w/v%以下、又は0.1w/v%以下の食塩水の浸透圧と同等もしくはそれ以下の浸透圧であってもよい。 The concentration of the organic acid salt (and possibly the concentration of other buffers) contained in the tableted composition provided by the present invention may be such that the hemolysis solution finally prepared by dissolving the tableted composition in water is capable of hemolyzing red blood cells contained in a blood sample, i.e., has an osmotic pressure lower than physiological osmotic pressure. Here, physiological osmotic pressure refers to the osmotic pressure of the blood sample before hemolysis, and generally ranges from 275 mOsm/kg·H 2 O to 315 mOsm/kg·H 2 O. That is, an osmotic pressure lower than physiological osmotic pressure (hypotonicity) generally refers to a condition of less than 315 mOsm/kg·H 2 O. The hemolysis solution prepared by the present invention has no lower limit as long as it is under an osmotic pressure (hypotonicity) condition lower than physiological osmotic pressure, and may be, for example, 0 mOsm/kg·H 2 O or more and 150 mOsm/kg·H 2 O or less. Furthermore, for example, the osmotic pressure lower than the physiological osmotic pressure may be lower than the osmotic pressure of physiological saline (0.9 w/v%), and may be, for example, an osmotic pressure equal to or lower than the osmotic pressure of saline that is 0.8 w/v% or less, 0.7 w/v% or less, 0.6 w/v% or less, 0.5 w/v% or less, 0.4 w/v% or less, 0.3 w/v% or less, 0.2 w/v% or less, or 0.1 w/v% or less.
本発明において提供される錠剤化組成物は、溶血作用を高めるためにさらに界面活性剤を含むものであってもよい。本発明に用いられる界面活性剤は、溶血作用を有する溶界面活性剤であればよく、例えば、特開2022-80390号に記載の界面活性剤、例えば、少なくとも1種以上の親水性基に糖アルコール又は糖分子(例えば、スクロース、ソルビトールなど)が含まれ、かつ親水性基と疎水性基(例えば、炭素数7~22)とがエステル結合を介して結合している界面活性剤が含まれるものであってもよい。そのような界面活性剤としては、例えば、スクロースラウリン酸エステル、スクロースミリスチン酸エステル、スクロースパルミチン酸エステル、スクロースオレイン酸エステル、スクロースステアリン酸エステル、ソルビトールカプリル酸エステルなどが挙げられる。本発明において提供される錠剤化組成物に含まれ得る界面活性剤の濃度は、錠剤化組成物を水に溶解して最終的に調整された溶血用溶液が血液試料に含まれる赤血球を溶血させ得る濃度であり、各種測定において用いられる際に測定を阻害しない濃度であればよく、例えば、調整された溶血用溶液において0.01~1.00wt%、好ましくは0.01~0.10wt%の濃度となるように含まれるものであってもよい。 The tableted composition provided in the present invention may further contain a surfactant to enhance the hemolytic activity. The surfactant used in the present invention may be any surfactant having a hemolytic activity, such as those described in JP 2022-80390 A, for example, a surfactant in which at least one or more hydrophilic groups contain sugar alcohols or sugar molecules (e.g., sucrose, sorbitol, etc.) and the hydrophilic group and the hydrophobic group (e.g., carbon number 7 to 22) are bonded via an ester bond. Examples of such surfactants include sucrose laurate, sucrose myristate, sucrose palmitate, sucrose oleate, sucrose stearate, and sorbitol caprylate. The concentration of the surfactant that can be contained in the tableted composition provided in the present invention is a concentration at which the hemolyzing solution finally prepared by dissolving the tableted composition in water can hemolyze red blood cells contained in a blood sample, and is a concentration that does not inhibit the measurement when used in various measurements. For example, the surfactant may be contained at a concentration of 0.01 to 1.00 wt %, preferably 0.01 to 0.10 wt %, in the prepared hemolyzing solution.
液体状の試薬には、保存時の腐食防止として、アジ化ナトリウムなどの防腐剤が添加されることが多い。アジ化ナトリウムは、毒物及び劇物取締法による「毒物」に指定されており、また、消防法による「第5類危険物(自己反応性物質)」に指定されていることから、近年では使用を制限する動きもある。本発明により提供される錠剤化組成物は、必要な時に水に溶解することにより溶血用溶液を調製可能とするものであり、保存時には非水系であって腐食のリスクが非常に低いことから、防腐剤、例えば、アジ化ナトリウム又はアジ化リチウムなどを含まないものであってもよい。この場合、防腐剤を含まないことから安全性が高くなるといった効果が期待できる。また他の態様において、本発明により提供される錠剤化組成物は、溶解後の長期保存時の腐食を防止するために防腐剤、例えば、アジ化ナトリウム又はアジ化リチウムなどを含むものであってもよい。 Liquid reagents are often supplemented with preservatives such as sodium azide to prevent corrosion during storage. Sodium azide is designated as a "poisonous substance" under the Poisonous and Deleterious Substances Control Law, and as a "Class 5 hazardous material (self-reactive substance)" under the Fire Service Law, and there has been a move to restrict its use in recent years. The tableted composition provided by the present invention is capable of preparing a hemolysis solution by dissolving it in water when necessary, and since it is non-aqueous during storage and has a very low risk of corrosion, it may not contain a preservative, such as sodium azide or lithium azide. In this case, the absence of a preservative can be expected to have the effect of increasing safety. In another embodiment, the tableted composition provided by the present invention may contain a preservative, such as sodium azide or lithium azide, to prevent corrosion during long-term storage after dissolution.
本発明において用いられる第三の成分(増量剤/増結剤)は、以下の特性:
(1)融点が30℃から80℃の範囲;
(2)平均分子量が1000~6000の範囲;
(3)pHが4から8(50g/L,25℃);
(4)水への溶解度が0.5g/L以上;及び
(5)非イオン性
を満たすものである。そのような成分としては、ポリエチレングリコールや又はポリオキシエチレンラウリルエーテル(例えば、Brij(登録商標)35など)などが挙げられ、好ましくはポリエチレングリコールである。
The third component (filler/binding agent) used in the present invention has the following properties:
(1) a melting point in the range of 30°C to 80°C;
(2) an average molecular weight in the range of 1,000 to 6,000;
(3) pH 4 to 8 (50 g/L, 25° C.);
(4) A solubility in water of 0.5 g/L or more; and (5) A non-ionic component. Examples of such components include polyethylene glycol and polyoxyethylene lauryl ether (e.g., Brij (registered trademark) 35, etc.), and preferably polyethylene glycol.
ここでは本願発明の溶血用溶液を調製するための錠剤化組成物を製造する方法について、さらに詳しく説明する。 Here, we will explain in more detail the method for producing the tableted composition for preparing the hemolyzing solution of the present invention.
まずは、第一の様態(図1参照)について説明する。第一の工程として、試薬A、試薬B、及び増量剤/増結剤を既定の一定量を秤量する。次に、混合容器(1)に前記試薬類と鋼球(2)を投入し、ボールミルにより微粉末化させる。次に、型容器(5)に前記の微粉末化された混合試料を規定量ずつ小分けする。 First, the first embodiment (see Figure 1) will be described. In the first step, predetermined amounts of reagent A, reagent B, and bulking agent/binding agent are weighed out. Next, the reagents and steel balls (2) are placed in a mixing container (1) and pulverized into fine powder using a ball mill. Next, the finely powdered mixed sample is divided into specified amounts and placed in a mold container (5).
次に、前記の小分けされた混合試料を、第三の成分、すなわち「増量剤/増結剤」の融点以上に加熱し融解させる。例えば、増量剤/増結剤としてポリエチレングリコール4000を用いた場合は、その融点が55℃であるため、55℃以上(例えば、60℃~100℃、60℃~90℃、60℃~85℃、又は60℃~80℃など)で加熱することで融解させることができる。これにより、混合試料中の「増量剤/増結剤」のみが融解し、試薬A、試薬Bはその中で浮遊する状態となる。一定時間加熱後、増量剤/増結剤の融点以下の温度、好ましくは5℃以下に冷却する。これにより、試薬A、試薬Bが包含された「増量剤/増結剤」が固化する。型容器から取り外すことで、試薬A、試薬Bを規定量含有した錠剤化組成物が得られることになる。つまり、前記「増量剤/増結剤」は、「増結剤」の役割も果たしている。 Next, the divided mixed sample is heated to a temperature equal to or higher than the melting point of the third component, i.e., the "bulking agent/binder", to melt it. For example, when polyethylene glycol 4000 is used as the bulking agent/binder, its melting point is 55°C, so it can be melted by heating it to 55°C or higher (for example, 60°C to 100°C, 60°C to 90°C, 60°C to 85°C, or 60°C to 80°C, etc.). As a result, only the "bulking agent/binder" in the mixed sample melts, and reagents A and B become floating therein. After heating for a certain period of time, it is cooled to a temperature equal to or lower than the melting point of the bulking agent/binder, preferably 5°C or lower. As a result, the "bulking agent/binder" containing reagents A and B solidifies. By removing it from the mold container, a tableted composition containing specified amounts of reagents A and B is obtained. In other words, the "bulking agent/binder" also plays the role of a "binder".
試薬はその物性により、形状(形態)が異なる。微粉末状のもの、微粒子状のもの、蝋状のもの、フレーク状のもの等、様々な状態で存在する。このように形態の異なる試薬を混合しても、均一に混ぜることは難しい。更に、混合した試料から一定量を取り出した場合は、各試薬の混合比率にばらつきが生じる原因にもなる(図4a参照)。本発明では、前記のように、試薬A、試薬B、増量剤/増結剤を混合してから、粉砕処理を行うことで、全ての成分が微粉末化することで、均等に混ざるようになる。それにより、混合した試料から一定量を取り出した場合でも、各試薬の混合比率にばらつきが生じ難くなる(図4b参照)。本明細書において、「微粉末化」とは、任意の固形の試薬を平均粒子径が約500μm以下、好ましくは200μm以下、より好ましくは100μm以下となるように微粉末化することをいい、例えば、平均粒子径が約1μm~約500μm、約5μm~約200μm、約5μm~約100μm、約5μm~約50μm、約5μm~約20μm、約10μm~約100μm又は約10μm~約50μmとなるように微粉末化されることをいう。 Reagents have different shapes (forms) depending on their physical properties. They exist in various forms, such as fine powder, fine particles, wax, and flakes. It is difficult to mix reagents of different forms uniformly. Furthermore, when a certain amount is taken from the mixed sample, it can cause variations in the mixing ratio of each reagent (see Figure 4a). In the present invention, as described above, Reagent A, Reagent B, and the bulking agent/binding agent are mixed and then crushed, so that all the components are finely powdered and mixed evenly. As a result, even when a certain amount is taken from the mixed sample, it is difficult for the mixing ratio of each reagent to vary (see Figure 4b). In this specification, "micronization" refers to micronizing any solid reagent so that the average particle size is about 500 μm or less, preferably 200 μm or less, and more preferably 100 μm or less. For example, it refers to micronizing so that the average particle size is about 1 μm to about 500 μm, about 5 μm to about 200 μm, about 5 μm to about 100 μm, about 5 μm to about 50 μm, about 5 μm to about 20 μm, about 10 μm to about 100 μm, or about 10 μm to about 50 μm.
ここまで、試薬A、試薬B、増量剤/増結剤を混合してから微粉末化させる方法を記述してきたが(図5a参照)、事前に、試薬A、試薬B、増量剤/増結剤を各々、微粉末しておき、混合する方法でも同じ効果が得られ、本発明に含まれる(図5b参照)。この場合、試薬A、試薬B、及び増量剤/増結剤は、それぞれが平均粒子径が約500μm以下、好ましくは200μm以下、より好ましくは100μm以下となるように微粉末化されたものを用いることが良く、例えば、平均粒子径が約1μm~約500μm、約5μm~約200μm、約5μm~約100μm、約5μm~約50μm、約5μm~約20μm、約10μm~約100μm又は約10μm~約50μmとなるように微粉末化されたものを用いることができる。 So far, we have described a method of mixing reagent A, reagent B, and the extender/binding agent and then pulverizing them into fine powder (see Figure 5a), but the same effect can be obtained by previously pulverizing each of reagent A, reagent B, and the extender/binding agent and then mixing them, which is included in the present invention (see Figure 5b). In this case, it is preferable to use reagent A, reagent B, and the extender/binding agent that have been pulverized to have an average particle size of about 500 μm or less, preferably 200 μm or less, and more preferably 100 μm or less. For example, it is possible to use reagents that have been pulverized to have an average particle size of about 1 μm to about 500 μm, about 5 μm to about 200 μm, about 5 μm to about 100 μm, about 5 μm to about 50 μm, about 5 μm to about 20 μm, about 10 μm to about 100 μm, or about 10 μm to about 50 μm.
次に、前記で得られた錠剤化組成物を一定量の水(例えば、蒸留水、純水、超純水、イオン交換水、RO水など)に投入することで、水への溶解度の高い増量剤/増結剤は容易に溶解する。つまり、試薬A、試薬B、増量剤/増結剤を一定量含んだ溶液が得られることになる。 Next, the tableted composition obtained above is added to a certain amount of water (e.g., distilled water, pure water, ultrapure water, ion-exchanged water, RO water, etc.), and the bulking agent/binding agent that is highly soluble in water is easily dissolved. In other words, a solution containing certain amounts of reagent A, reagent B, and bulking agent/binding agent is obtained.
例えば、最終的に、2Lの溶液で、試薬A:0.01wt%、試薬B:0.02wt%、増量剤/増結剤:0.05wt%となる錠剤を100個得ようとした場合、各試薬の量は以下の表1に示される量となる。
ここまで、第三の成分(増量剤/増結剤)の融点の差による「錠剤化」の方法を説明してきたが、加圧による「錠剤化」も、本発明に含まれる(上記の「第二の様態」に相当)。また、加熱および加圧による「錠剤化」の方法も本発明に含まれる(上記の「第三の様態」に相当)。但し、第三の様態の加熱および加圧による「錠剤化」の場合は、加熱温度は第三成分の融点より低い温度で行う必要がある。加圧は、常法に従って、錠剤化を可能とするのに十分な圧力で実施されればよく、特に限定されない。 So far, we have explained the method of "tabletting" based on the difference in melting point of the third component (bulking agent/binding agent), but "tabletting" by pressure is also included in the present invention (corresponding to the above-mentioned "second embodiment"). In addition, the present invention also includes a method of "tabletting" by heating and pressure (corresponding to the above-mentioned "third embodiment"). However, in the case of "tabletting" by heating and pressure in the third embodiment, the heating temperature must be lower than the melting point of the third component. Pressurization is not particularly limited as long as it is carried out according to conventional methods at a pressure sufficient to enable tableting.
このようにして得られる「錠剤化組成物」は、液体クロマトグラフィに適用することができる。液体クロマトグラフィでは、液体を溶離液として、混合成分からなる試料を分離し定性/定量する手法である。試料は、試料注入機構により分析カラムに導入される。試料注入機構は、試料を注入するだけでなく、試料の前処理を実施することもある。また、この試料注入機構は、コンタミを防止するため、専用の洗浄液で各部の洗浄を行う必要がある。液体クロマトグラフィで使用される溶液は、分離用の「溶離液」と試料注入機構で使用される「洗浄液」に大別される。 The "tabletized composition" obtained in this way can be applied to liquid chromatography. Liquid chromatography is a technique in which a sample consisting of mixed components is separated and qualitatively/quantitatively analyzed using a liquid as an eluent. The sample is introduced into the analytical column by a sample injection mechanism. The sample injection mechanism not only injects the sample, but may also perform sample pretreatment. In addition, each part of the sample injection mechanism must be washed with a dedicated washing solution to prevent contamination. The solutions used in liquid chromatography are broadly divided into "eluents" for separation and "washing solutions" used by the sample injection mechanism.
分離用の「溶離液」は、分離特性に大きな影響を与えることから、組成の精度が要求される。一方、「洗浄液」は分離に直接寄与するものではないことから、組成の精度の要求ははるかに低い。本発明で得られる「錠剤化組成物」は、液体クロマトグラフィの試料注入機構に適している。特に、液体クロマトグラフィを原理とした「グリコヘモグロビン分析計」に好適である。本法では、糖尿病の指標とされるHbA1cを測定するものであり、試料は患者血液検体(全血)である。患者血液検体に含まれるHbA1cを測定するためには、通常、赤血球を溶血し、希釈する必要がある。患者血液検体は、溶血と希釈を行った後、イオン交換カラムに導入し、電荷の差によりヘモグロビンの各成分を分離定量し、HbA1cを算出する方法である。 The "eluent" used for separation has a large effect on the separation characteristics, so the composition must be accurate. On the other hand, the "cleaning solution" does not directly contribute to the separation, so the requirement for the composition to be accurate is much lower. The "tabletized composition" obtained by the present invention is suitable for the sample injection mechanism of liquid chromatography. It is particularly suitable for a "glycohemoglobin analyzer" based on the principle of liquid chromatography. This method measures HbA1c, which is an index of diabetes, and the sample is a patient blood sample (whole blood). In order to measure HbA1c contained in the patient blood sample, it is usually necessary to hemolyze red blood cells and dilute them. After hemolysis and dilution, the patient blood sample is introduced into an ion exchange column, and each component of hemoglobin is separated and quantified based on the difference in charge, and HbA1c is calculated.
「溶血および希釈」の工程は、従来は1種類の試薬溶液で、溶血と希釈が同時に行われる(以降、「溶血/希釈液」と呼ぶ)。この溶血/希釈液は、前記の液体クロマトグラフィの「洗浄液」に相当する。 In the "hemolysis and dilution" process, conventionally, hemolysis and dilution are performed simultaneously using one type of reagent solution (hereafter referred to as the "hemolysis/dilution solution"). This hemolysis/dilution solution corresponds to the "washing solution" in liquid chromatography described above.
一般的には、溶血/希釈液は数L程度のプラスチック容器に封入した状態で提供されるが、使用量も多く、容器の廃プラスチック問題も抱えている。また、溶液状態で提供されることから、その腐食を防止するために溶血/希釈液には「アジ化ナトリウム」を含有することが多い。この物質は、「毒物」「第5類危険物(自己反応性物質)」であることから、使用が懸念されている。本発明の「錠剤化した試薬」を溶血/希釈液に適用した場合、容器の廃プラスチック問題は大幅の改善できるだけでなく、アジ化ナトリウムを添加する必要がないなど、大きな利点を有する。 Generally, hemolysis/dilution solutions are provided sealed in plastic containers of about several liters, but the amount used is large, and there is also the problem of waste plastic from the containers. In addition, since it is provided in a liquid state, hemolysis/dilution solutions often contain "sodium azide" to prevent corrosion. This substance is a "poisonous substance" and a "Class 5 hazardous material (self-reactive substance)," and there are concerns about its use. When the "tabletized reagent" of the present invention is applied to hemolysis/dilution solutions, not only can the problem of waste plastic from containers be significantly improved, but there are also great advantages, such as eliminating the need to add sodium azide.
本発明の効果を実証するため、糖尿病の診断に使用される液体クロマトグラフィを原理とした「グリコヘモグロビン分析計」にて検証を実施した。「グリコヘモグロビン分析計」には、東ソー(株)(東京、日本)製のグリコヘモグロビン分析計G11を用いた。溶離液3種、溶血/希釈液、分析カラム、キャリブレータ等は、全て同機種の専用品を用いた。なお、溶離液は、800mLの液状、溶血/希釈液は、2Lまたは4Lの液状で提供されている。 To demonstrate the effects of the present invention, verification was carried out using a "glycohemoglobin analyzer" based on the principle of liquid chromatography used in diagnosing diabetes. The "glycohemoglobin analyzer" used was a glycohemoglobin analyzer G11 manufactured by Tosoh Corporation (Tokyo, Japan). All of the three types of eluents, hemolysis/dilution solution, analytical column, calibrator, etc., were dedicated products for the same model. The eluent was provided in 800 mL liquid form, and the hemolysis/dilution solution was provided in 2 L or 4 L liquid form.
図10は、本分析計のサンプリング機構付近の構成の一部、図11は、本分析計の測定の流れを示したフローチャートである。測定開始により、自動で検体種別の判定を実施する。検体種別が「サンプルカップ」と判定された場合、「手希釈」により、既に希釈された検体として扱われ、検体をサンプリングニードル(12)により吸引し、そのまま、試料注入機構(11)により、分析カラムに導入され、HbA1cが測定される。また、検体種別が「採血管」と判定された場合、検体をサンプリングニードル(12)により吸引し、溶血/希釈ポート(13)にて自動で溶血/希釈を実施した後に、試料注入機構(11)により、分析カラムに導入され、HbA1cが測定される。ここで言う「溶血/希釈」とは、規定容量の溶血/希釈ポート(13)に、事前に溶血/希釈液を入れておき、全血を一定量添加し、吸引/吐出動作により、溶血と希釈を行うことである。溶血/希釈された検体の内、一定量液を分析に供する。図12に代表的なクロマトグラムを示す。約0.24分に溶出するのがSa1cピークであり、総面積に対する面積比からHbA1cを算出する。 Figure 10 shows a part of the configuration near the sampling mechanism of this analyzer, and Figure 11 is a flow chart showing the measurement flow of this analyzer. When the measurement starts, the type of sample is automatically determined. If the type of sample is determined to be "sample cup", it is treated as a sample that has already been diluted by "manual dilution", and the sample is aspirated by the sampling needle (12) and introduced directly into the analysis column by the sample injection mechanism (11), where HbA1c is measured. If the type of sample is determined to be "blood collection tube", the sample is aspirated by the sampling needle (12), and after automatic hemolysis/dilution is performed at the hemolysis/dilution port (13), it is introduced into the analysis column by the sample injection mechanism (11), where HbA1c is measured. The "hemolysis/dilution" referred to here means that a hemolysis/dilution solution is placed in advance in the hemolysis/dilution port (13) with a specified capacity, a certain amount of whole blood is added, and hemolysis and dilution are performed by the aspirating/discharging operation. A certain amount of the hemolyzed/diluted sample is used for analysis. A typical chromatogram is shown in Figure 12. The Sa1c peak elutes at approximately 0.24 minutes, and HbA1c is calculated from the area ratio to the total area.
一実施態様における本発明の「溶血/希釈液の錠剤化」の手順は以下の通りである。 In one embodiment, the procedure for "tableting the hemolysis/dilution solution" of the present invention is as follows:
「増量剤/増結剤」としては、ポリエチレングリコール(Polyethylene glycol)を使用した。ポリエチレングリコール(以降、「PEG」と称する)は、エチレンオキシドと水の縮合重合によって得られるポリマーで、重合度(分子量)の違い等で、多種が存在し、安価で容易に入手できる。表2はPEGの分子量の違いによる物性の一覧である。 Polyethylene glycol was used as the "bulking agent/binding agent." Polyethylene glycol (hereinafter referred to as "PEG") is a polymer obtained by condensation polymerization of ethylene oxide and water. There are many types with different degrees of polymerization (molecular weight), and they are cheap and easily available. Table 2 lists the physical properties of PEG depending on the molecular weight.
重合度(分子量)が高くなるにつれて、融点が高くなり、試薬の形状も変化していく。重合度(分子量)が低いPEGは液体状態であり「錠剤化」には適さない。また、重合度(分子量)が高いPEGは固体状態であるが、融点が高くなり、水への溶解度が低下することから「錠剤化」には適さない。今回は融点が比較的低く、固体状態である平均分子量3000程度の呼称「PEG4000」を「増量剤/増結剤」として選択した。 As the degree of polymerization (molecular weight) increases, the melting point increases and the shape of the reagent also changes. PEG with a low degree of polymerization (molecular weight) is in a liquid state and is not suitable for "tabletting." Also, PEG with a high degree of polymerization (molecular weight) is in a solid state, but has a high melting point and low solubility in water, making it unsuitable for "tabletting." In this case, "PEG 4000," which has a relatively low melting point and is in a solid state with an average molecular weight of about 3000, was selected as the "bulking agent/binding agent."
最終的に2Lを調液することを想定した「錠剤化」を実施した。錠剤化の流れを図6に示す。溶血/希釈液の基本組成として、Ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetrasodium salt, tetrahydrate(以下、「EDTA・4Na」と称する)及び、Ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, dipotassium salt, dihydrate (以下、「EDTA・2K」と称する)を主成分とした。
Tabletting was carried out with the aim of preparing 2L in the end. The tableting process is shown in Figure 6. The basic composition of the hemolysis/dilution solution was Ethylenediamine-N,N,N',N'-tetraacetic acid, tetrasodium salt, tetrahydrate (hereinafter referred to as "EDTA 4Na") and Ethylenediamine-N,N,N',N'-tetraacetic acid, dipotassium salt, dihydrate (hereinafter referred to as "
EDTA・4Na、EDTA・2K、PEG4000とも、最終濃度で0.05wt%とした。2L調製時では、各試薬はそれぞれ1g含まれることとなる。試薬の秤量誤差を抑えること、調製の手間を省くことから、大容量で調製を行った。
The final concentration of EDTA 4Na,
各試薬を20gずつ計量、混合し、混合した試薬を3g秤量すれば、目的の濃度に調製できることとなる(2L用)。しかしながら、試薬の形状は、EDTA・4Naは微粒形状、EDTA・2Kは微粉末、PEG4000はフレーク状であり、形状が異なる。このまま、試薬を混合しても、形状が異なるため均等には混合できない。今回は、前記3種の試薬を計量、混合した後、約12時間、ボールミルにて粉砕を実施した。この操作により、混合試薬は微粉末化し均等に分散した状態となる。 The desired concentration can be prepared by weighing out and mixing 20 g of each reagent and then weighing out 3 g of the mixed reagent (for 2 L). However, the reagents are different in shape: EDTA-4Na is in fine particle form, EDTA-2K is in fine powder form, and PEG 4000 is in flake form. Even if the reagents are mixed in this state, they will not be mixed evenly due to their different shapes. In this experiment, the three reagents were weighed and mixed, and then pulverized in a ball mill for approximately 12 hours. This operation turns the mixed reagent into a fine powder that is evenly dispersed.
次に、樹脂製の型容器(内径15mmφ、深さ27mm)に前記処理後の粉末試薬を3gずつ計量し、80℃に加熱した恒温槽に入れた(約2時間)。これにより、粉末試薬に含まれるPEG4000のみが溶解し、EDTA・4Na、EDTA・2Kはその中で浮遊する状態となる。次に、型容器を恒温槽から取り出し、冷蔵庫(約5℃)で冷却した。これにより、PEG4000はEDTA・4Na、EDTA・2Kを包含した状態で凝固する。完全に凝固した後、型容器から取り出し、「溶血/希釈錠剤」となる。図7は、最終的に得られた「溶血/希釈 錠剤」の写真である。PEG4000の融点が55℃程度であるため、完成した「溶血/希釈 錠剤」は、室温下(25℃)でも堅固な状態を保つことができる。 Next, 3 g of the powdered reagent after the above treatment was weighed into a resin mold container (inner diameter 15 mmφ, depth 27 mm) and placed in a thermostatic bath heated to 80°C (for about 2 hours). As a result, only the PEG4000 contained in the powdered reagent was dissolved, and EDTA-4Na and EDTA-2K were suspended in it. Next, the mold container was removed from the thermostatic bath and cooled in a refrigerator (about 5°C). As a result, the PEG4000 solidified while containing EDTA-4Na and EDTA-2K. After it was completely solidified, it was removed from the mold container and became a "hemolytic/dilution tablet". Figure 7 is a photograph of the final "hemolytic/dilution tablet". Since the melting point of PEG4000 is about 55°C, the completed "hemolytic/dilution tablet" can maintain a solid state even at room temperature (25°C).
次に、この「溶血/希釈 錠剤」を用いて、溶血/希釈液の調製を行った。容器に純水2Lを計量し、前記「溶血/希釈 錠剤」を1錠投入し、10分程度放置する。PEG4000は水への溶解度が高いことから、10分程度で錠剤は完全に崩壊する。容器を振とう攪拌することで溶血/希釈液が出来上がる(図8、9参照)。 Next, this "hemolysis/dilution tablet" was used to prepare a hemolysis/dilution solution. 2 L of pure water was measured out into a container, one tablet of the "hemolysis/dilution tablet" was added, and the container was left to stand for about 10 minutes. Since PEG4000 has high solubility in water, the tablet completely disintegrates in about 10 minutes. The container was shaken and stirred to prepare the hemolysis/dilution solution (see Figures 8 and 9).
次に、このように調製した溶血/希釈液の性能の確認を実施した。評価に使用した分析計は、前記の東ソー(株)製グリコヘモグロビン分析計G11を用いた。評価試料は真空採血管で採取した2種の全血検体を用いた。また、比較のため、EDTA・4Na、EDTA・2K及びアジ化ナトリウムを含む前記分析計専用の溶血/希釈液(東ソー社(東京、日本)、HSi溶血・洗浄液(#0018431))でも測定を実施した。 Next, the performance of the hemolysis/dilution solution prepared in this manner was confirmed. The analyzer used for the evaluation was the glycohemoglobin analyzer G11 manufactured by Tosoh Corporation. The evaluation samples were two types of whole blood specimens collected in vacuum blood collection tubes. For comparison, measurements were also performed using a hemolysis/dilution solution (HSi hemolysis/cleaning solution (#0018431), manufactured by Tosoh Corporation (Tokyo, Japan)) made specifically for the analyzer, which contains EDTA-4Na, EDTA-2K, and sodium azide.
本検証では、用手法で事前に希釈した検体、および、採血管(全血)の状態、の2つの条件で測定を行った。 In this verification, measurements were performed under two conditions: samples that had been diluted manually in advance, and samples from blood collection tubes (whole blood).
まず、用手法で事前に希釈した検体を測定した結果を示す。「用手法で希釈」とは、全血に溶血/希釈液を201倍になるように添加し、溶血/希釈液させ、サンプルカップに分注し測定を供することである。 First, we will show the results of measuring a sample that was diluted manually in advance. "Manual dilution" means adding hemolysis/dilution solution to whole blood at a concentration of 201 times, causing hemolysis/dilution, which was then dispensed into a sample cup for measurement.
表3に検体A、表4に検体Bの測定結果を示す。図13は得られたクロマトグラムを示している。なお、図/表中の「通常HW」は、メーカーから供給される標準の溶血/希釈液(HW:Hemolysis&Washer)を使用したことを示しており、「錠剤化HW」は、前記手法で作成した「溶血/希釈 錠剤」から調製した溶血/希釈液、を使用したことを示している。検体Aは、通常HWでHbA1c:5.6%、錠剤化HWで、HbA1c:5.6%、と同じ値が得られた。検体Bは、通常HWでHbA1c:6.1%、錠剤化HWで、HbA1c:6.1%、と同じ値が得られた。2つの検体で、通常HWと錠剤化HWで、HbA1cに差異は見られない。 Table 3 shows the measurement results for sample A, and Table 4 shows the measurement results for sample B. Figure 13 shows the obtained chromatogram. In the figure/tablet, "normal HW" indicates that the standard hemolysis/dilution solution (HW: Hemolysis & Washer) provided by the manufacturer was used, and "tabletized HW" indicates that the hemolysis/dilution solution prepared from the "hemolysis/dilution tablet" created by the above-mentioned method was used. For sample A, the same values of HbA1c were obtained with normal HW, HbA1c: 5.6%, and with tableted HW, HbA1c: 5.6%. For sample B, the same values of HbA1c were obtained with normal HW, HbA1c: 6.1%, and with tableted HW, HbA1c: 6.1%. No difference in HbA1c was observed between the two samples, normal HW and tableted HW.
表5に検体A、表6に検体Bの測定再現性を示す(n=10)。検体Aは、通常HWでHbA1cの変動は0.0%、錠剤化HWで、0.0%。検体Bは、通常HWでHbA1cの変動は0.0%、錠剤化HWで、0.0%。通常HWと錠剤化HWで、HbA1cの再現性に差異はなく、良好な値が得られている。 Table 5 shows the measurement reproducibility of sample A, and Table 6 shows the measurement reproducibility of sample B (n=10). For sample A, the variation in HbA1c was 0.0% with regular HW and 0.0% with tableted HW. For sample B, the variation in HbA1c was 0.0% with regular HW and 0.0% with tableted HW. There was no difference in the reproducibility of HbA1c between regular HW and tableted HW, and good values were obtained.
次に、自動で溶血/希釈し検体を測定した結果を示す。「自動で溶血/希釈」とは、分析計の機能により自動で採血管から全血を吸引し、自動で溶血/希釈液を添加し、溶血/希釈液させて測定することである。 Next, the results of automatically hemolyzing/diluting the sample and measuring it are shown. "Automatic hemolysis/dilution" means that the analyzer automatically draws whole blood from the blood collection tube, automatically adds hemolyzing/diluting solution, and then hemolyzes/dilutes the blood and measures it.
次に、採血管の検体をそのまま搭載し、自動希釈した検体を測定した結果を示す。
表7に検体A、表8に検体Bの測定結果を示す。図14は得られたクロマトグラムを示している。なお図/表中で「通常HW」は、メーカーから供給される標準の溶血/希釈液、表/図中で「錠剤化HW」は、前記手法で作成した「溶血/希釈 錠剤」から調製した溶血/希釈液、を使用したことを示している。
Next, the results of measuring the automatically diluted sample after loading the blood collection tube directly are shown.
Table 7 shows the measurement results for sample A, and Table 8 shows the measurement results for sample B. Figure 14 shows the obtained chromatograms. In the figures and tables, "normal HW" indicates that the standard hemolysis/dilution solution provided by the manufacturer was used, and in the tables and figures, "tabletized HW" indicates that the hemolysis/dilution solution prepared from the "hemolysis/dilution tablet" prepared by the above-mentioned method was used.
検体Aは、通常HWでHbA1c:5.6%、錠剤化HWで、HbA1c:5.5%、とほぼ同じ値が得られた。検体Bは、通常HWでHbA1c:6.2%、錠剤化HWで、HbA1c:6.2%、と同じ値が得られた。2つの検体で、通常HWと錠剤化HWで、HbA1cに差異は見られない。 Sample A had almost identical values of HbA1c: 5.6% with regular HW and 5.5% with tableted HW. Sample B had almost identical values of HbA1c: 6.2% with regular HW and 6.2% with tableted HW. No difference in HbA1c was observed between the two samples, regular HW and tableted HW.
表9に検体A、表10に検体Bの測定再現性を示す(n=10)。検体Aは、通常HWでHbA1cの変動は0.0%、錠剤化HWで、0.9%。検体Bは、通常HWでHbA1cの変動は0.0%、錠剤化HWで、0.0%。錠剤化HWで、HbA1cの再現性が0.9%になっている部分もあるが、1.0%以下であり、特に問題ない値が得られている。 Table 9 shows the measurement reproducibility of sample A, and Table 10 shows the measurement reproducibility of sample B (n=10). For sample A, the variation in HbA1c was 0.0% with regular HW and 0.9% with tableted HW. For sample B, the variation in HbA1c was 0.0% with regular HW and 0.0% with tableted HW. With tableted HW, the reproducibility of HbA1c was 0.9% in some areas, but it was below 1.0%, and values that are not particularly problematic were obtained.
表11に実施例で用いた両溶血/希釈液(通常HW、錠剤化HW)、検体A、Bの測定結果(HbA1c)を一覧で示す。ここから分かるように。用手法による測定、自動希釈による測定においても、差異なくHbA1cが得られていることが分かる。また、クロマトグラムに関しても、本発明の錠剤化により調製した溶血/希釈液であっても、メーカーから供給される標準の溶血/希釈液と同様なクロマトグラムパターンが得られていることが見てとれる(図13参照)。 Table 11 shows the measurement results (HbA1c) of both hemolysis/dilution solutions (normal HW, tableted HW) used in the examples, and samples A and B. As can be seen from this, there is no difference in HbA1c obtained whether measured manually or by automatic dilution. In addition, it can be seen that the chromatograms obtained with the hemolysis/dilution solution prepared by tableting according to the present invention are similar to the chromatogram pattern obtained with the standard hemolysis/dilution solution supplied by the manufacturer (see Figure 13).
このことから、本発明の「溶血/希釈 錠剤」によって調製された溶血/希釈液を使用しても、測定結果に影響がないことが分かる。また、必要に応じて、錠剤化の原料として、非イオン性界面活性剤を添加しても良い。 This shows that the use of a hemolysis/dilution solution prepared using the "hemolysis/dilution tablet" of the present invention does not affect the measurement results. In addition, if necessary, a nonionic surfactant may be added as a raw material for tableting.
以上説明したように、従来の液状で提供される溶血/希釈液と、本発明の錠剤化で調整した溶血/希釈液で、性能に差異は無い。また。錠剤化することで、試薬形態が大幅に縮小することが可能となった。図15は実施例で得られた「錠剤化組成物」と従来の溶血液/洗浄液のプラスチック容器を比較した写真である。左図が2Lボトル、右図が4Lボトルで、中央が本発明の錠剤化組成物である。見て明らかなように、容積は大幅に減少する。2Lボトルと比較した場合、1/600の容積となる。近年の脱炭素の流れに通じるが、輸送コスト/保管コストを大幅に削減でき、社会的貢献にもつながる。 As explained above, there is no difference in performance between the hemolysis/dilution solution provided in a conventional liquid form and the hemolysis/dilution solution prepared by tableting according to the present invention. In addition, tableting makes it possible to significantly reduce the size of the reagent. Figure 15 is a photograph comparing the "tabletized composition" obtained in the example with a conventional plastic container for hemolysis/cleaning solution. The left image is a 2L bottle, the right image is a 4L bottle, and the center is the tabletized composition of the present invention. As can be seen, the volume is significantly reduced. Compared to a 2L bottle, the volume is 1/600. This is in line with the recent trend toward decarbonization, but it also contributes to society by significantly reducing transportation and storage costs.
1.混合容器
2.鋼球
3.混合試料
4.ボールミル
5.型容器
6.錠剤化試薬
7.溶血/洗浄液用容器
8.キャップ
9.精製水
10.溶血/洗浄液
11.検体注入機構
12.サンプリングニードル
13.溶血/希釈ポート
14.洗浄ポート
15.サンプリングアーム
16.検体搬送機構
17.採血管
18.ドレイン
19.プレス型容器
20.プレス機
21.ヒーター
1. Mixing container 2. Steel balls 3. Mixed sample 4. Ball mill 5. Mold container 6. Tabletized reagent 7. Hemolysis/cleaning solution container 8. Cap 9. Purified water 10. Hemolysis/cleaning solution 11. Specimen injection mechanism 12. Sampling needle 13. Hemolysis/dilution port 14. Cleaning port 15. Sampling arm 16. Specimen transport mechanism 17. Blood collection tube 18. Drain 19. Press mold container 20. Press machine 21. Heater
Claims (16)
以下の特性:
(1)融点が30℃から80℃の範囲;
(2)平均分子量が1000~6000の範囲;
(3)pHが4から8(50g/L,25℃);
(4)水への溶解度が0.5g/L以上;及び
(5)非イオン性
を有する第三の成分と
を含む、塊として形成された、溶血用溶液を調製するための錠剤化組成物を製造する方法であって、以下(i)~(vi)のいずれか:
(i)前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分とを混合して粉砕処理を施すことにより微粉末化し、それを前記第三の成分の融点以上に加熱して前記第三の成分を融解させ、その後25℃以下に冷却することで前記少なくとも2種以上の有機酸塩を包含する塊としての錠剤化組成物を形成すること;
(ii)微粉末化された前記少なくとも2種以上の有機酸塩及び前記第三の成分を混合し、それを前記第三の成分の融点以上に加熱して前記第三の成分を融解させ、その後25℃以下の冷却することで、前記少なくとも2種以上の有機酸塩を包含する塊としての錠剤化組成物を形成すること;
(iii)前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分とを混合して粉砕処理を施すことにより微粉末化し、それを加圧することで塊としての錠剤化組成物を形成すること;
(iv)微粉末化された前記少なくとも2種以上の有機酸塩及び前記第三の成分を混合し、それを加圧することで塊として錠剤化組成物を形成すること;
(v)前記少なくとも2種以上の有機酸塩と前記第三の成分とを混合しして粉砕処理を施すことにより微粉末化し、それを前記第三成分の融点以下の温度を加えながら加圧することで塊としての錠剤化組成物を形成すること;又は
(vi)微粉末化された前記少なくとも2種以上の有機酸塩及び前記第三の成分を混合し、それを前記第三成分の融点以下の温度を加えながら加圧することで塊としての錠剤化組成物を形成すること;
を含む、方法。 At least two or more organic acid salts having a chelating effect;
The following characteristics:
(1) a melting point in the range of 30°C to 80°C;
(2) an average molecular weight in the range of 1,000 to 6,000;
(3) pH 4 to 8 (50 g/L, 25° C.);
(4) a solubility in water of 0.5 g/L or more; and (5) a third component having non-ionic properties. A method for producing a tableted composition for preparing a hemolyzing solution, which is formed as a mass, comprising any one of the following (i) to (vi):
(i) mixing the at least two or more organic acid salts with the third component and pulverizing the mixture to obtain a fine powder, heating the mixture to a temperature equal to or higher than the melting point of the third component to melt the third component, and then cooling the mixture to 25° C. or lower to form a tableted composition as a mass containing the at least two or more organic acid salts;
(ii) mixing the finely powdered at least two or more organic acid salts and the third component, heating the mixture to a temperature equal to or higher than the melting point of the third component to melt the third component, and then cooling the mixture to a temperature of 25° C. or lower to form a tableted composition as a mass containing the at least two or more organic acid salts;
(iii) mixing the at least two or more organic acid salts with the third component, subjecting the mixture to a grinding treatment to obtain a fine powder, and then compressing the mixture to form a tableted composition as a mass;
(iv) mixing the finely divided at least two or more organic acid salts and the third component and compressing the mixture to form a tableted composition;
(v) mixing the at least two or more organic acid salts with the third component, grinding the mixture to obtain a fine powder, and pressing the mixture at a temperature not higher than the melting point of the third component to form a lump of tableted composition; or (vi) mixing the at least two or more organic acid salts finely powdered with the third component, and pressing the mixture at a temperature not higher than the melting point of the third component to form a lump of tableted composition;
A method comprising:
以下の特性:
(1)融点が30℃から80℃の範囲;
(2)平均分子量が1000~6000の範囲;
(3)pHが4から8(50g/L,25℃);
(4)水への溶解度が0.5g/L以上;及び
(5)非イオン性
を有する第三の成分と
を含み、
前記少なくとも2種以上の有機酸塩は、粒形が均等になるよう微粉末化された有機酸塩であって、
塊として形成されている溶血用溶液を調製するための錠剤化組成物。 At least two or more organic acid salts having a chelating effect;
The following characteristics:
(1) a melting point in the range of 30°C to 80°C;
(2) an average molecular weight in the range of 1,000 to 6,000;
(3) pH 4 to 8 (50 g/L, 25° C.);
(4) a solubility in water of 0.5 g/L or more; and (5) a third component having nonionic properties.
The at least two or more organic acid salts are organic acid salts finely powdered to have a uniform particle size,
A tableting composition for preparing a hemolysis solution formed as a mass.
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