JP2024054284A

JP2024054284A - ガンの処置のための結合分子

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Publication number: JP2024054284A
Application number: JP2024018456A
Authority: JP
Inventors: ボルゲス，エリク; Borges Eric; グプタ，パンカジ; Pankaj P Gupta; ロウ，ダニエル・クリストファー; Christopher Rowe Daniel; シェアー，ジャスティン・エム; M Scheer Justin; スアブニ，アブダラ; Souabni Abdallah; ティラプ，イニゴ; Tirapu Inigo; トゥマン，ジョセフ・ロナルド; Ronald Tumang Joseph
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2020-05-19
Filing date: 2024-02-09
Publication date: 2024-04-16
Also published as: PE20230784A1; KR20230012559A; US20250136720A1; CA3180665A1; BR112022021447A2; CR20220586A; MX2022014538A; WO2021236658A1; CO2022016754A2; JP2023504675A; AU2021276332A1; EP4153316A1; US12146000B2; PH12022553153A1; ECSP22085835A; US20210363273A1; CL2022003213A1; CN116249555A; TW202214303A; IL298287A

Abstract

【課題】ＣＤ１３７及びＦＡＰに特異的に結合する結合分子並びにそれを含有する医薬、医薬組成物におけるその使用並びにガンの治療及び／又は予防のための薬剤としてそれを使用する方法を提供する。【解決手段】本発明の実施態様は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する結合部位を、単一の結合分子内のＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に特異的に結合する結合部位と低親和性結合部位と組み合わせた、二重特異性で二価の分子である。本発明の二重特異性分子は、ＦＡＰが発現される腫瘍微小環境のガン間質の状況においてのみ、Ｔ細胞上のＣＤ１３７を活性化させ、それと係合する。【選択図】図１Ａ

Description

配列表
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。２０２１年４月２２日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、０９－０７０３－ＷＯ－１＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、サイズは、８７３，２６３バイトである。

発明の分野
本発明は、ＴＮＦＲファミリーのメンバーであるＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する結合分子並びに医薬におけるその使用、それを含有する医薬組成物並びにそれをガンの治療及び／又は予防のための薬剤として使用する方法に関する。

発明の背景
ガンは、一般的には、異常な細胞増殖及びガン性細胞が全身に浸潤し又は広がる可能性に基づく疾患群である。ガンは、世界的に重篤な疾患であり、主な死因である。

外科手術、化学療法、放射線療法及びホルモン療法を含む、ガンを管理し又は場合により、ガンを処置する試みに、種々の処置方法が使用されてきた。免疫療法の近年の進歩により、ガンの処置状況が変化している。それでも、局所進行性又は転移性腫瘍を有する患者のほとんどは、疾患により死亡してしまうであろうから、新規な治療戦略の実質的な必要性が正当化される。

抗体系生体分子により、ガンの処置のための強力な治療剤である可能性が提供される。抗体は、細胞の表面上の特定のタンパク質（そのターゲット抗原）を認識し、結合するように設計されており、このようなタンパク質は、特定ガン細胞の表面上又は免疫細胞上にのみ存在する場合がある。この結合により、それらのターゲット抗原タンパク質の機能及び抗体自体の構造にも応じて、多くの異なる生物学的応答が引き起こされる場合がある。

例えば、一部の抗体により、ガン細胞に免疫細胞を引き寄せるか又は免疫系自体の活動に直接影響を及ぼすかのいずれかにより、ガン細胞を攻撃し、殺傷する免疫系が誘発される。更なるタイプの抗体系治療剤は、ガン細胞に結合して、細胞分裂を停止させ又は減少させ、このようにして、異常な細胞増殖を遅らせ、予防する。他のタイプの抗体は、それらに付着させた薬剤又は放射性粒子を有し、したがって、これらの治療剤をガン細胞自体に送達する。

ＦＡＰは、ジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）ファミリーのメンバーである（線維芽細胞活性化タンパク質アルファ、プロリルエンドペプチダーゼＦＡＰ、１７０ｋＤａメラノーマ膜結合ゼラチナーゼ、膜内在性セリンプロテアーゼとも呼ばれる）。ＦＡＰは、一部の胎児間葉組織では、一過性に発現され、健康な成体組織において稀に発現される。この場合、ＦＡＰの存在は、通常、子宮内膜細胞に限定されている。また、ＦＡＰは、創傷治癒、関節リウマチ、変形性関節症、肝硬変及び肺線維症を含む活性化された間質に関連する疾患中でも発現され、多くの場合、組織に対する外傷又は損傷後に活性化された線維芽細胞において誘導される。また、ＦＡＰは、全ての種類のヒト上皮性腫瘍の腫瘍間質組織並びに種々の骨及び軟組織肉腫の悪性細胞でも発現される。ＦＡＰは、結腸直腸、卵巣、乳房、膀胱及び肺を含むヒト上皮性悪性腫瘍の９０％以上で発現される。ＦＡＰは、新たに形成中の血管又は形成された血管に近接して発生し、腫瘍毛細血管内皮と実際の悪性上皮細胞及び細胞のクラスターとの間の特定の細胞区画を形成する線維芽細胞において優先的に見出される。

間質線維芽細胞は、ガン腫の発生、増殖及び転移に重要な役割を果たす。ＦＡＰの発現プロファイルから、ＦＡＰは、健康な組織への腫瘍浸潤並びに腫瘍の形成及び転移の一端を担っていることが示唆されている。ＦＡＰ阻害剤、すなわち、ＦＡＰのタンパク質分解活性を減少可能又は阻害可能な物質は、全ての種類の腫瘍疾患の処置に有用な治療剤である。ＦＡＰ阻害剤は、好ましくは、上皮由来の腫瘍、例えば、乳房腫瘍、非小細胞肺ガン、結腸直腸ガン及び軟組織ガンを処置するのに使用することができる。

ＦＡＰ抗体は、当技術分野において公知である。例えば、シブロツズマブは、ヒト化マウスＦＡＰであり、ヒト化後、ヒトＦＡＰに結合されたが、マウスＦＡＰへの検出可能な結合は示されず、マウスモデルにおいて腫瘍死滅を示さなかった（ＷＯ第１９９３００５８０４号、Cheng, et al. Tumors and their microenvironments: tilling the soil. Commentary re: A. M. Scott et al., A Phase I dose-escalation study of sibrotuzumab in patients with advanced or metastatic fibroblast activation protein-positive cancer. Clin. Cancer Res., 9: 1639-1647）。少なくとも１５種類の抗体が、ＦＡＰをターゲットとする商業的な前臨床又は臨床開発中である（例えば、ＵＳ第８９９９３４２号、Ludwig Institute for Cancer Research（ｍＡｂ／前臨床）；ＷＯ第２０１６１１０５９８号、ＵＳ第２０１７０３６９５９２号、Mabimmune Diagnostics/Univ Zurich（ｍＡｂ／前臨床）；ＷＯ第２０１５１１８０３０号、ＵＳ第１０１３７２０２号、Oncomatryx（ｍＡｂ－コンジュゲート／前臨床）；ＷＯ第１９９３００５８０４号、同第１９９９０５７１５１号、同第２００１０６８７０８号、同第２００２０８３１７１号、同第２００７０７７１７３号、ＵＳ第８５６８７２７号、シブロツズマブ、Boehringer Ingelheim（ヒト化マウスＦＡＰ／結腸直腸におけるＰＨ１後に終了）を参照のこと）。

また、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９、ＣＤｗ１３７、Ｔ細胞抗原４－１ＢＢホモロジー、Ｔ細胞抗原ＩＬＡ、ＣＤ＿抗原ＣＤ１３７）も、腫瘍壊死因子レセプタースーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ１３７は、活性化されたＴリンパ球で発現され、リガンドとの結合により、Ｔ細胞機能の増強がもたらされる。ＣＤ１３７の活性化は、レセプターのオリゴマー化により決まる。ＣＤ１３７は、活性化されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、ＤＣ、単球、マスト細胞及び好酸球上に発現される。ＣＤ１３７の活性化は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化及び生存において重要な役割を果たす。ＣＤ１３７の活性化により、エフェクター機能が開始されるのではなく、持続され、増強され、ＴＨ１サイトカイン産生が優先的に支持される。ＣＤ４＋Ｔ細胞では、ＣＤ１３７刺激により、最初に活性化が生じ、後に活性化誘導性細胞死が生じる。このことから、ＣＤ１３７アゴニスト抗体が何故、腫瘍免疫及び自己免疫において治療効果を有することができるのかが機構的に示唆されている。

さらに、ＣＤ１３７は、抗原提示細胞、例えば、樹状細胞及びマクロファージ上に発現され、これらの細胞種上でのＣＤ１３７の刺激により、腫瘍指向性免疫をもたらすことができる免疫活性化を誘引することができる。ＣＤ１３７は、免疫監視において必須の役割を果たす。ＣＤ１３７の欠損により、ノックアウトマウスにおけるＴ細胞免疫応答、例えば、サイトカイン産生及び細胞溶解性Ｔ細胞活性が低下する（Kwon, 2002、Narazaki, 2010）。ヒトでは、ＣＤ１３７の欠損は、免疫ディスレギュレーション、リンパ球反応の障害及びＥＢＶ関連リンパ腫発生と関連している（Somekh, 2019）。

また、ＣＤ１３７アゴニスト抗体は、腫瘍環境において内皮細胞を活性化し、ＩＣＡＭ－１及びＶＣＡＭ－１のアップレギュレーションをもたらし、Ｔ細胞リクルートを改善することが示されている。幾つかの研究から、アゴニストＣＤ１３７抗体による処置による腫瘍免疫の誘引が実証されている。これは、１９９７年にさかのぼる先駆的な研究である（Melero, 1997）。

ＣＤ１３７をターゲットとする２５以上の薬剤が、現在、前臨床又は臨床開発中であるが、このターゲットの進展は遅かった。Bristol-Myers Squibbにより開発された完全ヒトＩｇＧ４抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ－６６５１３）は、２００５年に臨床に入った最初のＣＤ１３７アゴニストであった。ペムブロリズマブとの併用で、メラノーマ患者に有望な有効性を示したが、肝毒性の懸念のために、幾つかの治験が中止された。ウレルマブの将来性は明らかではないが、多くのBMS支援治験が依然として進行中であるが、BMSパイプラインから脱落している。他の主なＣＤ１３７アゴニストであるPfizerの完全ヒトＩｇＧ２抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）は、種々の併用において、わずかな臨床的有効性しか示されていない。ウレルマブにより、更なる架橋なしに、Ｔ細胞を刺激することができるが、対照的に、ウトミルマブは、アゴニスト効果を開始するために、ＦｃγＲ媒介性架橋が必要である（Fisher, 2012）。後者の場合、ＦｃγＲ媒介性架橋は、予測可能なプロセスではなく、このプロセスは、ウトミルマブの抗腫瘍効力を制限している。２０１８年４月、Pfizerから、他の併用治験を進行させる場合があるが、ウトミルマブを単独療法又はペムブロリズマブとの併用として開発しなくなったと発表された。したがって、予備データから、ウトミルマブは忍容性があることが示唆されたが、ウレルマブとは対照的に、アベルマブ及びリツキシマブとの併用でも、わずかな腫瘍作用しか示さなかった。Pfizerの第ＩＩＩ相臨床試験は、近年、５００名から２９名に減った。

より新しいＣＤ１３７薬剤は、腫瘍抗原（例えば、ＨＥＲ２）を同時にターゲットとすることにより、腫瘍におけるフォーカス活性が開発され、毒性を増加させることなく、活性を向上させることができる可能性がある。ＣＤ１３７／Ｈｅｒ２二重特異性ＰＲＳ－３４３は、近年、複数の腫瘍タイプにわたって、多数の前処置を受けたガン患者を対象とした第Ｉ相試験において、有望な結果を示している。ＰＲＳ－３４３により、腫瘍活性、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞の増加及び良好な安全性プロファイルが示された。間質における腫瘍関連線維芽細胞上でのＦＡＰ発現は、ガン細胞上でのＨＥＲ２の発現より安定しており、したがって、共局在化ターゲットとしてのＣＤ１３７とＨＥＲ２との併用は、有効性を制限する場合があると考えられる。

別の二重特異性ＣＤ１３７／ＦＡＰＤＡＲＰｉｎ分子（AMGEN/Molecular PartnersからのＭＰ－０３１０）は、一価のＦＡＰ及び一価のＣＤ１３７バインダーとしてフォーマットされた別のこのような腫瘍ターゲット分子である。このフォーマットにより、ｉｎｖｉｖｏでの天然ＣＤ１３７リガンドとの結合が可能であるかどうか又は一価のＣＤ１３７エンゲージャーがＣＤ１３７を架橋し、このため、Ｔ細胞を十分に活性化可能であるかどうかは明らかではない。ＤＡＲＰｉｎ（設計されたアンキリン反復タンパク質）は抗体ではなく、遺伝子操作された抗体模倣タンパク質であり、薬剤発見及び薬剤開発におけるターゲット結合に対する抗体の代わりに利用されてきた新たなクラスの非免疫グロブリンタンパク質である（例えば、ＷＯ第２００２／０２０５６５号、ＵＳ第２０１３０２４４９４０号及びLink et al.「Preclinical pharmacology of MP0310: a 4-1BB/FAP bi-specific DARPin（登録商標） drug candidate promoting tumor restricted T cell co-stimulation.」 Poster 3572（https://investors.molecularpartners.com/~/media/Files/M/Molecular-Partners/documents /201804-mp0310-pharmacology-poster-3752.pdf）。

さらに、ＣＤ１３７－Ｌ／ＦＡＰ分子（Roche targetingからのＲＧ－７８２７）は、抗体アーム結合ではない三量体化ヒトＣＤ１３７リガンドである。このＣＤ１３７リガンドにより、アゴニスト活性の向上に必要であると考えられるＣＤ１３７の高次多量体化が可能となるかどうかは不明である。さらに、ＲＧ－７８２７は、内因性ＣＤ１３７リガンドと競合することが予想される（例えば、ＷＯ第２０１９１７５１２５号、同第２０１７０５５３９８号、同第２０１７０６０１４４号、ＵＳ第２０１７０１１４１４１号、同第２０１７０２４７４６７号及びJ. Sam, C. Claus, C. Ferrara, S. Lang, V. Nicolini, S. Colombetti, V. Teichgraber, S. Evers, M. Bacac, P. Umana, C. Klein.（AACR 2018, Poster 5621, FAP-4-1BBL: A novel versatile tumor-stroma targeted 4-1BB agonist for combination immunotherapy with checkpoint inhibitors, T-cell bispecific antibodies, and ADCC-mediating antibodiesを参照のこと）。

このように、アゴニスト４－１ＢＢ抗体の全身投与は、前臨床モデルにおいて有効な腫瘍ターゲティング剤であることが示された可能性があるが、臨床開発は、相当な用量制限肝毒性又は相対的に低い効力及び／又はＦｃγレセプター媒介性過剰クラスタリングへの依存性に起因する可能性がある限られた臨床的有効性のいずれかにより妨げられてきた過去の第ＩＩ相治験をうまく進められなかった。したがって、現在、種々の併用パートナーとの二重特異性ＣＤ１３７分子及びＣＤ１３７分子が開発中にあるが、この抗原についての安全性及び臨床的有効性は未だ実証されていない。

ガン処置の一般的な点では、近年の大きな進歩にもかかわらず、固形腫瘍の処置が困難な一部は、利用可能な治療法；現在の標準治療である薬剤又は現在臨床試験中のより新しく、最初は有望な薬剤のいずれにも応答しない。患者が最初は応答したとしても、多くの場合、長期にわたる応答を経験せず、完全寛解又は治癒に至ることはほとんどない。例えば、非小細胞肺ガンの場合、このようなアンメットニーズの１つでは、全ＮＳＣＬＣの約４０～５０％は、第１選択治療に応答しないが、応答した別の５０％は、現在の第１選択治療（例えば、抗ＰＤ１免疫療法を含む）で長期持続応答を経験しない。さらに、１２か月後も無増悪を維持している患者は、３０～４０％未満である。以前に抗ＰＤ－Ｌ１処置を受けた第２／第３選択中の患者に対する更なる治療ための選択肢は限られており、十分に確立されていない。化学療法選択肢、例えば、ドセタキセル又はプラチナ系レジメン（第１選択で使用しない場合）は、限られた有益性のものであるためである。

利用可能な前臨床データ及び臨床データ並びにこのようなガン患者についての不良な見通しを考慮すると、より有効な治療法、特に、患者に対する忍容性が改善され、現在利用可能な治療に抵抗性である腫瘍タイプに対するターゲット化特異性を有するような治療法を特定することが明らかに必要である。したがって、異なる作用様式を有する免疫学的に活性な薬剤を含む、新規なアプローチが必要とされている。

発明の概要
本発明は、腫瘍特異的ＴＩＬの腫瘍に制限された活性化がガンの処置に対する有望な様式を表わすという概念に基づいている。本発明の実施態様は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する結合部位を、単一の結合分子内のＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に特異的に結合する結合部位と低親和性結合部位と組み合わせた、二重特異性で二価の分子である。本発明の二重特異性分子は、ＦＡＰが発現される腫瘍微小環境のガン間質の状況においてのみ、Ｔ細胞上のＣＤ１３７を活性化させ、それと係合する。

以下により詳細に検討されるように、本発明の分子の１つの利点は、腫瘍反応性Ｔ細胞の活性化の改善及び腫瘍微小環境に対する既存の腫瘍応答の拡大であり、従来のＣＤ１３７アゴニストと比較して、安全性を改善しながら、患者における腫瘍退縮をもたらす。ＣＤ１３７の係合をその低い親和性のために、ＦＡＰの近位発現上で条件付けすることにより、ＣＤ１３７活性及びＴ細胞のリクルートは、多くのタイプのガンのＦＡＰ＋腫瘍環境においてのみ起こる。この低い親和性係合は、他のＣＤ１３７の一価アプローチを上回る改善である。本発明の二価の分子が、ＦＡＰの存在下で腫瘍帰属Ｔ細胞にのみ顕著に結合し、活性化し、それらを増殖させ、ＩＦＮγを分泌させ、これにより、より局在化した腫瘍指向性免疫応答を生じさせるためである。最終的に、ＣＤ１３７／ＦＡＰ抗体のターゲット化活性により、従来のＣＤ１３７アゴニストと比較して、忍容性が良好で、安全性プロファイルが改善された患者における腫瘍退縮がもたらされるであろう。

したがって、本発明の第１の態様は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位と、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位とを有する、免疫グロブリン様結合分子を提供する。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、該分子は、二重特異性かつ四価であり、ＣＤ１３７について二価かつＦＡＰについて二価である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に特異的に結合する抗原結合部位は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の一部であり、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部位は、好ましくは、ペプチドリンカーを介して、ＦｃドメインのＮ末端に融合された１つ以上のｓｃＦｖを含む。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、１つ以上のｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端へのＶＬ－ＶＨ配向を有する。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、１つ以上のｓｃＦｖは、Ｉｇ分子の重鎖のＣ末端に融合される。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、Ｉｇ分子は、ＩｇＧ１ＫＯである。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、１つ以上のｓｃＦｖは、ペプチドリンカー、好ましくは、約４～２０個のアミノ酸の長さを有するペプチドリンカーにより、Ｉｇ分子に融合される。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合する抗原結合部位は、下記：
ｉ）配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｉ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｉｉ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｖ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖｉ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖｉｉ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖｉｉｉ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｘ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｘ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９３（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｘｉ）配列番号：６７２（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ａ又はＳからなる群より選択される）、配列番号：３３５（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｇ又はＡからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｔ又はＫからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ６は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ７は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ８は、Ｓ又はＧからなる群より選択される）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３３６（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｋ又はＲからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｖ又はＩからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｓ又はＴからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｖ及びＬからなる群より選択される）、配列番号：３３７（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＡからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｙ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｒ又はＬからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｙ及びＱからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｓ又はＴからなる群より選択される）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｘｉｉ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：３３８（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｙ又はＩからなる群より選択される）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６６９（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択される）、配列番号：３３９（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｌ又はＧからなる群より選択される）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｘｉｉｉ）アミノ酸８７～１１８（配列番号：３５２）の細胞外ドメインＣＲＤ３でＣＤ１３７上のエピトープに結合し、上記抗原結合分子（ｉ）～（ｘｉｉ）のいずれかの結合を遮断しかつ／もしくはこれらと結合について競合するＣＤ１３７抗原結合分子又は
ｘｖｉ）アミノ酸４６～１１７（配列番号：３５６）の細胞外ドメインＣＲＤ２／ＣＲＤ３でＣＤ１３７上のエピトープに結合し、上記抗原結合分子（ｉ）～（ｘｖｉ）のいずれかの結合を遮断しかつ／もしくはこららと結合について競合するＣＤ１３７抗原結合分子
を含む群から選択される。

本発明の免疫グロブリン様結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合する抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含む免疫グロブリン分子の一部であり、
ここで、ＶＨ及びＶＬ領域は、下記：
ｉ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｉ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｉｉ）配列番号：３０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：３５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｖ）配列番号：４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：４５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖ）配列番号：５０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：５５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖｉ）配列番号：６０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：６５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖｉｉ）配列番号：７０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：７５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖｉｉｉ）配列番号：８０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：８５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｘ）配列番号：９０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：９５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｘ）配列番号：１００のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１０５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｘｉ）１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ１配列番号：６７２（ここで、Ｘ１は、Ａ又はＳからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは４つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３３５（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｇ又はＡからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｔ又はＫからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ６は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ７は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ８は、Ｓ又はＧからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖並びに４つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：３３６（ここで、Ｘ１は、Ｋ又はＲからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｖ又はＩからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｓ又はＴからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｖ及びＬからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは５つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ２配列番号：３３７（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＡからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｙ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｒ又はＬからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｙ及びＱからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｓ又はＴからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：１５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｘｉｉ）１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３３８（ここで、Ｘ１は、Ｙ又はＩからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：７０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：６６９（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ２配列番号：３３９（ここで、Ｘ１は、Ｌ又はＧからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：７５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｘｉｉｉ）配列番号：１０、配列番号：２０、配列番号：３０、配列番号：４０、配列番号：５０及び配列番号：６０からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域ＶＨ並びに配列番号：１５、配列番号：２５、配列番号：３５、配列番号：４５、配列番号：５５、配列番号：６５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ又は
ｘｉｖ）配列番号：７０、配列番号：８０、配列番号：９０及び配列番号：１００からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域ＶＨ並びに配列番号：７５、配列番号：８５、配列番号：９５及び配列番号：１０５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ又は
ｘｖ）アミノ酸８７～１１８（配列番号：３５２）の細胞外ドメインＣＲＤ３でＣＤ１３７上のエピトープに結合し、上記抗原結合分子（ｉ）～（ｘｉｖ）のいずれかの結合を遮断しかつ／もしくはこれらと結合について競合するＣＤ１３７抗原結合分子又は
ｘｖｉ）アミノ酸４６～１１７（配列番号：３５６）の細胞外ドメインＣＲＤ２／ＣＲＤ３でＣＤ１３７上のエピトープに結合し、上記抗原結合分子（ｉ）～（ｘｉｖ）のいずれかの結合を遮断しかつ／もしくはこららと結合について競合するＣＤ１３７抗原結合分子
を含む群から選択される。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部位は、下記：
ｉ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｉ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｉｉ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｖ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖｉ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：３４１（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥからなる群より選択される）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６９１（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｎ、Ｒ又はＳからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｎ又はＳからなる群より選択される）及び配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖｉｉ）配列番号：６９４（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＮからなる群より選択される）、配列番号：３４２（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥからなる群より選択される）及び配列番号：３４３（ＣＤＲ３）（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＥから選択される）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）及び配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
を含むｓｃＦｖの群から選択される。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部位は、下記：
ｉ）配列番号：１０６のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｉ）配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｉｉ）配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｖ）配列番号：１３３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１３７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖ）配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖｉ）１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３４１（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥから選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：１０６のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び２つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：６９１（ここで、Ｘ１は、Ｎ、Ｒ又はＳからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｎ又はＳから選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：１１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖｉｉ）１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ１配列番号：６９４（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＮからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３４２（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ３配列番号：３４３（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＥからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：１３３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１３７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖｉｉｉ）配列番号：１０６、配列番号：１１５及び配列番号：１２４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域ＶＨ並びに配列番号：１１０、配列番号：１１９及び配列番号：１２８からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ又は
ｖｉｖ）配列番号：１３３及び配列番号：１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域ＶＨ並びに配列番号：１３７及び配列番号：１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ
を含むｓｃＦｖの群から選択される。

本発明の免疫グロブリン様結合分子の好ましい実施態様は、下記：
ｉ）（ａ）配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
ｉｉ）（ａ）配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
ｉｉｉ）（ａ）配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
ｉｖ）（ａ）配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
ｖ）（ａ）配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｖｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｖｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｉｘ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｉｖ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｖ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｖｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｖｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｖｉｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｉｘ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１１（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１２１（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｉｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｉｖ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｖ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｖｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１１（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｖｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｖｉｉｉ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｉｘ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘ）（ａ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘｉｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘｉｉｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘｉｖ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘｖ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘｖｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘｖｉｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘｖｉｉｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｘｘｉｘ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌｉｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌｉｉｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌｉｖ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌｖ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌｖｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌｖｉｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌｖｉｉｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｘｌｉｘ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｌ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｌｉ）（ａ）配列番号：６７２（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ａ又はＳである）、配列番号：３３５（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｇ又はＡからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｔ又はＫからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ６は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ７は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ８は、Ｓ又はＧからなる群より選択される）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３３６（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｋ又はＲからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｖ又はＩからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｓ又はＴからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｖ及びＬからなる群より選択される）、配列番号：３３７（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＡからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｙ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｒ又はＬからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｙ及びＱからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｓ又はＴからなる群より選択される）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：３４１（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥから選択される）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６９１（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｎ、Ｒ又はＳからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｎ又はＳからなる群より選択される）及び配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｌｉｉ）（ａ）配列番号：６７２（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ａ又はＳからなる群より選択される）、配列番号：３３５（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｇ又はＡからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｔ又はＫからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ６は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ７は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ８は、Ｓ又はＧからなる群より選択される）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３３６（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｋ又はＲからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｖ又はＩからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｓ又はＴからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｖ及びＬからなる群より選択される）、配列番号：３３７（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＡからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｙ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｒ又はＬからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｙ及びＱからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｓ又はＴからなる群より選択される）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：６９４（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＮからなる群より選択される）、配列番号：３４２（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥからなる群より選択される）及び配列番号：３４３（ＣＤＲ３）（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＥから選択される）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｌｉｉｉ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：３３８（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｙ又はＩからなる群より選択される）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６６９（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択される）、配列番号：３３９（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｌ又はＧからなる群より選択される）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：３４１（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥからなる群より選択される）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６９１（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｎ、Ｒ又はＳからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｎ又はＳからなる群より選択される）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位又は
（ｌｉｘ）（ａ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：３３８（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｙ又はＩからなる群より選択される）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６６９（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択される）、配列番号：３３９（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｌ又はＧからなる群より選択される）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＣＤ１３７結合部位並びに
（ｂ）配列番号：６９４（ＣＤＲ１）（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＮからなる群より選択される）、配列番号：３４２（ＣＤＲ２）（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥからなる群より選択される）及び配列番号：３４３（ＣＤＲ３）（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＥから選択される）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含むＦＡＰ結合部位
を含む群より選択される、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合する第１の抗原結合部位及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する第２の抗原結合部位を含む。

本発明の更なる態様は、下記：
（ｉ）配列番号：１５１のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｉｉ）配列番号：１５３のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｉｉｉ）配列番号：１５５のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１５６のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｉｖ）配列番号：１５７のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１５８のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｖ）配列番号：１５９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｖｉ）配列番号：１６４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｖｉｉ）配列番号：１６９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１７０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｖｉｉｉ）配列番号：１７４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１７５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｉｘ）配列番号：１７９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘ）配列番号：１８４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉ）配列番号：１８９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉｉ）配列番号：１９４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１９５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉｉｉ）配列番号：１９９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２００のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉｖ）配列番号：２０４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２０５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖ）配列番号：２０９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２１０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖｉ）配列番号：２１４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２１５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖｉｉ）配列番号：２１９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２２１のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖｉｉｉ）配列番号：２２４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２２５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉｘ）配列番号：２２９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２３０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｘ）配列番号：２３４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２３５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖｉｉ）配列番号：２３９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖｉｉｉ）配列番号：２４４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２４５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉｘ）配列番号：２４９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２５０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｘ）配列番号：２５４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２５５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｘｉ）配列番号：２５９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２６０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｘｉｉ）配列番号：２６４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２６５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｘｉｉｉ）配列番号：２６９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２７０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｘｉｖ）配列番号：２７４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２７５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｘｖ）（ａ）配列番号：１５１のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖を含む第１のポリペプチドであって、ＣＤ１３７に特異的に結合する可変重鎖部は、１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ１配列番号：６７２（ここで、Ｘ１は、Ａ又はＳからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは４つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３３５（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｇ又はＡからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｔ又はＫからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ６は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ７は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ８は、Ｓ又はＧからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なり、ここで、前記ｓｃＦｖは、重鎖ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖ドメインを含むＦＡＰ結合ｓｃＦｖであり、ここで、前記ＦＡＰＶＨは、１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３４１（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥから選択される）とはアミノ酸配列が異なり、前記ＦＡＰＶＬは、２つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：６９１（ここで、Ｘ１は、Ｎ、Ｒ又はＳからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｎ又はＳからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる第１のポリペプチド並びに
（ｂ）４つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：３３６（ここで、Ｘ１は、Ｋ又はＲからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｖ又はＩからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｓ又はＴからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｖ及びＬからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは５つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ２配列番号：３３７（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＡからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｙ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｒ又はＬからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｙ及びＱからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｓ又はＴからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：１５２のアミノ酸配列を含むＣＤ１３７に特異的に結合する軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含む第２のポリペプチド又は
（ｘｘｖｉ）（ａ）配列番号：１５５のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖を含む第１のポリペプチドであって、ＣＤ１３７に特異的に結合する可変重鎖部は、１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ１配列番号：６７２（ここで、Ｘ１は、Ａ又はＳからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは４つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３３５（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｇ又はＡからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｔ又はＫからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ６は、Ｄ又はＥからなる群より選択され、Ｘ７は、Ｌ又はＶからなる群より選択され、Ｘ８は、Ｓ又はＧからなる群より選択される）とは異なり、ここで、前記ｓｃＦｖは、重鎖ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含むＦＡＰ結合ｓｃＦｖであり、ここで、前記ＦＡＰＶＨは、１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ１配列番号：６９４（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＮからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３４２（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ３配列番号：３４３（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＥからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる第１のポリペプチド並びに
（ｂ）４つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：３３６（ここで、Ｘ１は、Ｋ又はＲからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｄ又はＳからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｖ又はＩからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｓ又はＴからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｖ及びＬからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは５つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ２配列番号：３３７（ここで、Ｘ１は、Ｓ又はＡからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｓ又はＹからなる群より選択され、Ｘ３は、Ｓ又はＹからなる群より選択され、Ｘ４は、Ｙ又はＱからなる群より選択され、Ｘ５は、Ｓ又はＴからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：１５６のアミノ酸配列を含むＣＤ１３７に特異的に結合する軽鎖を含む第２のポリペプチド又は
（ｘｘｖｉｉ）（ａ）配列番号：１５３のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖を含む第１のポリペプチドであって、ＣＤ１３７に特異的に結合する可変重鎖部は、１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３３８（ここで、Ｘ１は、Ｙ又はＩからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なり、ここで、前記ｓｃＦｖは、重鎖ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖ドメインを含むＦＡＰ結合ｓｃＦｖであり、ここで、前記ＦＡＰＶＨは、１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３４１（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥから選択される）とはアミノ酸配列が異なり、前記ＦＡＰＶＬは、２つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：６９１（ここで、Ｘ１は、Ｎ、Ｒ又はＳからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｎ又はＳからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる第１のポリペプチド並びに
（ｂ）１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：６６９（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ２配列番号：３３９（ここで、Ｘ１は、Ｌ又はＧからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：１５４のアミノ酸配列を含むＣＤ１３７に特異的に結合する軽鎖を含む第２のポリペプチド又は
（ｘｘｖｉｉｉ）（ａ）配列番号：１５３のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖を含む第１のポリペプチドであって、ＣＤ１３７に特異的に結合する可変重鎖部は、１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３３８（ここで、Ｘ１は、Ｙ又はＩからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なり、ここで、前記ｓｃＦｖは、重鎖ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含むＦＡＰ結合ｓｃＦｖであり、ここで、前記ＦＡＰＶＨは、１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＨ２配列番号：３４１（ここで、Ｘ１は、Ｄ又はＥから選択される）とはアミノ酸配列が異なり、前記ＦＡＰＶＬは、２つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：６９１（ここで、Ｘ１は、Ｎ、Ｒ又はＳからなる群より選択され、Ｘ２は、Ｎ又はＳからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる第１のポリペプチド並びに
（ｂ）１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ１配列番号：６６９（ここで、Ｘ１は、Ｎ又はＱからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なりかつ／もしくは１つ以下のアミノ酸のアミノ酸置換によりＣＤＲＬ２配列番号：３３９（ここで、Ｘ１は、Ｌ又はＧからなる群より選択される）とはアミノ酸配列が異なる配列番号：１５４のアミノ酸配列を含むＣＤ１３７に特異的に結合する軽鎖を含む第２のポリペプチド
を含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。

このため、更なる態様では、本発明は、
（ｉ）ＣＤ１３７に特異的に結合可能なポリペプチドがそれぞれ、
（ａ）配列番号：１０、配列番号：２０、配列番号：３０、配列番号：４０、配列番号：５０及び配列番号：６０からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨ並びに配列番号：１５、配列番号：２５、配列番号：３５、配列番号：４５、配列番号：５５、配列番号：６５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ又は
（ｂ）配列番号：７０、配列番号：８０、配列番号：９０及び配列番号：１００からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域ＶＨ並びに配列番号：７５、配列番号：８５、配列番号：９５及び配列番号：１０５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ
を含み、
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合可能なポリペプチドがそれぞれ、
（ａ）配列番号：１０６、配列番号：１１５及び配列番号：１２４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域ＶＨ並びに配列番号：１１０、配列番号：１１９及び配列番号：１２８からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ又は
（ｂ）配列番号：１３３及び配列番号：１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域ＶＨ並びに配列番号：１３７及び配列番号：１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬ
を含む、二重特異性抗原結合分子を提供する。

本発明の更なる態様は、本発明の免疫グロブリン様結合分子をコードする１つ以上の核酸分子又はこのような核酸分子を含有する１つ以上の発現ベクターを提供する。「ベクター」又は「発現ベクター」という用語は、「発現構築物」と同義であり、ターゲット細胞において操作可能に関連する特定の遺伝子を導入し、その発現を指示するのに使用されるＤＮＡ分子を指す。この用語は、自己複製核酸構築物としてのベクター及びそれが導入されたホスト細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。本発明の発現ベクターは、発現カセットを含む。「発現カセット」という用語は、ターゲット細胞における特定の核酸の転写を可能にする一連の特定の核酸エレメントを伴ってリコンビナントに又は合成的に生成されたポリヌクレオチドを指す。リコンビナント発現カセットをプラスミド、染色体、ミトコンドリアＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ウイルス又は核酸フラグメントに組み込むことができる。典型的には、発現ベクターのリコンビナント発現カセット部は、他の配列の中でも、転写される核酸配列及びプロモーターを含む。特定の実施態様では、本発明の発現カセットは、本発明の二重特異性抗原結合分子又はそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含み、典型的には、本発明の免疫グロブリン様結合分子の種々の部分（例えば、重鎖及び軽鎖は、異なる発現ベクターでコードされる）をコードする複数の発現ベクターが、同時に同じホスト細胞にトランスフェクションされる。発現ベクターにより、大量の安定なｍＲＮＡの転写が可能となる。発現ベクターが、ターゲット細胞内に入ると、遺伝子によりコードされるリボ核酸分子又はタンパク質は、細胞の転写及び／又は翻訳装置により生成される。一実施態様では、本発明の発現ベクター又はベクターは、本発明の二重特異性抗原結合分子又はそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含む発現カセット又はカセットを含む。

本発明の更なる態様は、発現制御配列と機能的に会合した本発明の核酸分子を含有する、ホスト細胞を提供する。「ホスト細胞」、「ホスト細胞系統」及び「ホスト細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞（このような細胞の子孫を含む）を指す。ホスト細胞は、「トランスフォーマンと」及び「トランスフォーメーションされた細胞」を含み、これは、継代回数に関係なく、トランスフォーメーションされた初代細胞及びそれに由来する子孫を含む。子孫は、核酸含量において親細胞と完全に同一ではない場合があり、突然変異を含む場合がある。最初にトランスフォーメーションされた細胞においてスクリーニングされ又は選択されたものと同じ機能又は生物学的活性を有する突然変異体子孫が本明細書に含まれる。ホスト細胞は、本発明の二重特異性抗原結合分子を生成するのに使用することができる任意のタイプの細胞系である。ホスト細胞は、培養細胞、例えば、ほ乳類培養細胞、例えば、ＣＨＯ細胞又はハイブリドーマ細胞、酵母細胞、昆虫細胞及び植物細胞を含み、ほんの数例を挙げると、トランスジェニック動物又は動物組織内に含まれる細胞も含む。

本発明の更なる態様は、本明細書に記載された本発明の結合分子の製造方法であり、
（ａ）本発明のホスト細胞を該分子の発現を可能にする条件下で培養する工程と、
（ｂ）該分子を回収する工程とを含む、方法を提供する。

本発明の更なる態様は、薬剤に使用するための、本発明の免疫グロブリン様結合分子を提供する。

本明細書で使用する場合、「ガン」という用語は、増殖性疾患、例えば、リンパ腫、リンパ球性白血病、肺ガン、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）ガン、細気管支肺胞細胞肺ガン、骨ガン、膵臓ガン、皮膚がん、頭頸部のガン、皮膚又は眼内メラノーマ、子宮ガン、卵巣ガン、直腸ガン、肛門部のガン、胃ガン（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、胃ガン（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）、結腸ガン、乳ガン、子宮ガン、卵管のガン、子宮内膜のガン、子宮頸部のガン、膣のガン、外陰のガン、ホジキン病、食道のガン、小腸のガン、内分泌系のガン、甲状腺のガン、副甲状腺のガン、副腎のガン、軟組織の肉腫、尿道のガン、陰茎のガン、前立腺ガン、膀胱のガン、腎又は尿管のガン、腎細胞ガン、腎盂のガン、中皮腫、肝細胞ガン、胆道ガン、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、多形性神経膠芽腫、星状細胞腫、神経鞘腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮ガン、下垂体腺腫及びユーイング肉腫（上記ガンのいずれかの難治性版を含む）又は上記ガンのうちの１つ以上の組み合わせを含む。本発明の更なる態様は、ガン、好ましくは、結腸直腸ガン（ＣＲＣ）（例えば、結腸直腸腺ガン）、胃ガン（ＧＣ）（例えば、胃腺ガン）、膵臓ガン（ＰＡＣ）（例えば、膵臓腺ガン）及び肺ガン（ＬＣ）（例えば、肺扁平上皮ガン、肺腺ガン）の治療に使用するための、本発明の免疫グロブリン様結合分子を提供する。

本発明の更なる態様は、本発明の実施態様のいずれか１つ記載の免疫グロブリン様結合分子を薬学的に許容し得る担体並びに場合により、１種以上の更なる有効成分、例えば、科学療法剤、放射線及び／又はガン免疫療法に使用するための他の薬剤と共に含む、医薬組成物を提供する。

一態様では、Ｔ細胞応答の刺激、活性化されたＴ細胞の生存及び／もしくはリクルートの支持、免疫細胞のサプレッション及び／又はアネルギーの予防；感染の処置、ガンの処置、ガンの進行の遅延並びに／又はガンを患っている患者の生存の延長に使用するための、記載された実施態様のいずれか１つ記載の二重特異性免疫グロブリン様結合分子又は本発明の前記免疫グロブリン様結合分子を含む医薬組成物が提供される。

本発明の更なる態様は、有効量の本発明の免疫グロブリン様結合分子を、それを必要とする患者に投与することを含む、ガンの処置方法を提供する。

図１Ａ～図１Ｂ：Ａ．本発明のＤｏｐｐｅｌｍａｂ免疫グロブリン様結合分子の模式図。Ｂ．腫瘍間質におけるＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子の作用様式の模式図。この場合、ＣＤ１３７アゴニスト活性は、ＦＡＰ＋間質細胞を表現する微小環境に限定されるであろう。図１Ａ～図１Ｂ：Ａ．本発明のＤｏｐｐｅｌｍａｂ免疫グロブリン様結合分子の模式図。Ｂ．腫瘍間質におけるＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子の作用様式の模式図。この場合、ＣＤ１３７アゴニスト活性は、ＦＡＰ＋間質細胞を表現する微小環境に限定されるであろう。図２Ａ～図２Ｂ：Ａ．表面発現カニクイザルＣＤ１３７に対する抗ヒトＣＤ１３７抗体の結合：上昇するＡｂ濃度（nM）に対する平均蛍光強度として表現された代表的なクローンＣＤ１３７＃Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１９、Ｂ２０、Ｂ２１、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ３０及びＢ３１；Ｂ．表面発現ヒトＣＤ１３７に対する抗ヒトＣＤ１３７抗体の結合：上昇するＡｂ濃度（nM）に対する平均蛍光強度として表現された代表的なクローンＣＤ１３７＃Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１９、Ｂ２０、Ｂ２１、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ３０、Ｂ３１。図２Ａ～図２Ｂ：Ａ．表面発現カニクイザルＣＤ１３７に対する抗ヒトＣＤ１３７抗体の結合：上昇するＡｂ濃度（nM）に対する平均蛍光強度として表現された代表的なクローンＣＤ１３７＃Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１９、Ｂ２０、Ｂ２１、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ３０及びＢ３１；Ｂ．表面発現ヒトＣＤ１３７に対する抗ヒトＣＤ１３７抗体の結合：上昇するＡｂ濃度（nM）に対する平均蛍光強度として表現された代表的なクローンＣＤ１３７＃Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１９、Ｂ２０、Ｂ２１、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ３０、Ｂ３１。図３Ａ～図３Ｄ：ＣＤ１３７分子の架橋依存活性Ａ．二次抗体架橋有り（ＣＬ＋）及び無し（ＣＬ－）での抗ＣＤ１３７精製キメラＩｇＧアゴニスト活性化のＥＣ_５０グラフ。代表的なクローンＣＤ１３７＃Ａ１６、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２０、Ａ２１、Ａ４９、Ａ５１、Ａ５０、Ａ５３、Ａ５４及びＡ５７。Ｂ．二次抗体有り（＋）及び無し（－）での抗ＣＤ１３７精製キメラＩｇＧアゴニスト活性化の棒グラフ。（Ｃ）二次抗体架橋有りでのみアゴニスト活性を示すRLUとして測定されたＪｕｒｋａｔＮＦκＢアッセイにおける活性。陽性対照をウレルマブキメラＩｇＧ１－ＫＯ及びＩｇＧ１－ＫＯとしてのウトミルマブとする。代表的な抗ＣＤ１３７クローンは、＃Ｂ２、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１０、Ｂ１２、Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１９、Ｂ２７、Ｂ３０、Ｂ３１、Ａ１、Ａ１３、Ａ２、Ａ２５、Ａ３、Ａ３０、Ａ３９、Ａ４、Ａ４７、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ２１、Ａ１２、Ａ１６、Ａ１７、Ａ１９、Ａ２６、Ａ２７、Ａ４１、Ａ４４、Ａ４５、Ａ４６、Ａ４９、Ａ５７、Ａ８、Ａ３４及びＡ３５を含む。Ｃ．二次抗体架橋無しでのみアゴニスト活性を示すRLUとして測定されたＪｕｒｋａｔＮＦκＢアッセイにおける活性。図３Ａ～図３Ｄ：ＣＤ１３７分子の架橋依存活性Ａ．二次抗体架橋有り（ＣＬ＋）及び無し（ＣＬ－）での抗ＣＤ１３７精製キメラＩｇＧアゴニスト活性化のＥＣ_５０グラフ。代表的なクローンＣＤ１３７＃Ａ１６、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２０、Ａ２１、Ａ４９、Ａ５１、Ａ５０、Ａ５３、Ａ５４及びＡ５７。Ｂ．二次抗体有り（＋）及び無し（－）での抗ＣＤ１３７精製キメラＩｇＧアゴニスト活性化の棒グラフ。（Ｃ）二次抗体架橋有りでのみアゴニスト活性を示すRLUとして測定されたＪｕｒｋａｔＮＦκＢアッセイにおける活性。陽性対照をウレルマブキメラＩｇＧ１－ＫＯ及びＩｇＧ１－ＫＯとしてのウトミルマブとする。代表的な抗ＣＤ１３７クローンは、＃Ｂ２、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１０、Ｂ１２、Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１９、Ｂ２７、Ｂ３０、Ｂ３１、Ａ１、Ａ１３、Ａ２、Ａ２５、Ａ３、Ａ３０、Ａ３９、Ａ４、Ａ４７、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ２１、Ａ１２、Ａ１６、Ａ１７、Ａ１９、Ａ２６、Ａ２７、Ａ４１、Ａ４４、Ａ４５、Ａ４６、Ａ４９、Ａ５７、Ａ８、Ａ３４及びＡ３５を含む。Ｃ．二次抗体架橋無しでのみアゴニスト活性を示すRLUとして測定されたＪｕｒｋａｔＮＦκＢアッセイにおける活性。図３Ａ～図３Ｄ：ＣＤ１３７分子の架橋依存活性Ａ．二次抗体架橋有り（ＣＬ＋）及び無し（ＣＬ－）での抗ＣＤ１３７精製キメラＩｇＧアゴニスト活性化のＥＣ_５０グラフ。代表的なクローンＣＤ１３７＃Ａ１６、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２０、Ａ２１、Ａ４９、Ａ５１、Ａ５０、Ａ５３、Ａ５４及びＡ５７。Ｂ．二次抗体有り（＋）及び無し（－）での抗ＣＤ１３７精製キメラＩｇＧアゴニスト活性化の棒グラフ。（Ｃ）二次抗体架橋有りでのみアゴニスト活性を示すRLUとして測定されたＪｕｒｋａｔＮＦκＢアッセイにおける活性。陽性対照をウレルマブキメラＩｇＧ１－ＫＯ及びＩｇＧ１－ＫＯとしてのウトミルマブとする。代表的な抗ＣＤ１３７クローンは、＃Ｂ２、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１０、Ｂ１２、Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１９、Ｂ２７、Ｂ３０、Ｂ３１、Ａ１、Ａ１３、Ａ２、Ａ２５、Ａ３、Ａ３０、Ａ３９、Ａ４、Ａ４７、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ２１、Ａ１２、Ａ１６、Ａ１７、Ａ１９、Ａ２６、Ａ２７、Ａ４１、Ａ４４、Ａ４５、Ａ４６、Ａ４９、Ａ５７、Ａ８、Ａ３４及びＡ３５を含む。Ｃ．二次抗体架橋無しでのみアゴニスト活性を示すRLUとして測定されたＪｕｒｋａｔＮＦκＢアッセイにおける活性。図３Ａ～図３Ｄ：ＣＤ１３７分子の架橋依存活性Ａ．二次抗体架橋有り（ＣＬ＋）及び無し（ＣＬ－）での抗ＣＤ１３７精製キメラＩｇＧアゴニスト活性化のＥＣ_５０グラフ。代表的なクローンＣＤ１３７＃Ａ１６、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２０、Ａ２１、Ａ４９、Ａ５１、Ａ５０、Ａ５３、Ａ５４及びＡ５７。Ｂ．二次抗体有り（＋）及び無し（－）での抗ＣＤ１３７精製キメラＩｇＧアゴニスト活性化の棒グラフ。（Ｃ）二次抗体架橋有りでのみアゴニスト活性を示すRLUとして測定されたＪｕｒｋａｔＮＦκＢアッセイにおける活性。陽性対照をウレルマブキメラＩｇＧ１－ＫＯ及びＩｇＧ１－ＫＯとしてのウトミルマブとする。代表的な抗ＣＤ１３７クローンは、＃Ｂ２、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１０、Ｂ１２、Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１９、Ｂ２７、Ｂ３０、Ｂ３１、Ａ１、Ａ１３、Ａ２、Ａ２５、Ａ３、Ａ３０、Ａ３９、Ａ４、Ａ４７、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ２１、Ａ１２、Ａ１６、Ａ１７、Ａ１９、Ａ２６、Ａ２７、Ａ４１、Ａ４４、Ａ４５、Ａ４６、Ａ４９、Ａ５７、Ａ８、Ａ３４及びＡ３５を含む。Ｃ．二次抗体架橋無しでのみアゴニスト活性を示すRLUとして測定されたＪｕｒｋａｔＮＦκＢアッセイにおける活性。図４Ａ～図４Ｂ：Ａ．結合したＣＤ１３７Ｆａｂフラグメントをビオチン化ｈｕＣＤ１３７抗原の存在下でインキュベーションし、結合したビオチン化抗原をストレプトアビジンラベルフルロクロムで検出する２Ｄアッセイの模式図。Ｂ．キメラＢ２１Ｆａｂに対するグラフトＦａｂのＥＬＩＳＡ滴定。種々のグラフト調製物をＥＬＩＳＡ結合で評価し、キメラＦａｂは、グラフトＦａｂと比較して、より良好な結合を示した。２Ｈ１１ａ非関連Ｆａｂを陰性対照として保持した。図４Ａ～図４Ｂ：Ａ．結合したＣＤ１３７Ｆａｂフラグメントをビオチン化ｈｕＣＤ１３７抗原の存在下でインキュベーションし、結合したビオチン化抗原をストレプトアビジンラベルフルロクロムで検出する２Ｄアッセイの模式図。Ｂ．キメラＢ２１Ｆａｂに対するグラフトＦａｂのＥＬＩＳＡ滴定。種々のグラフト調製物をＥＬＩＳＡ結合で評価し、キメラＦａｂは、グラフトＦａｂと比較して、より良好な結合を示した。２Ｈ１１ａ非関連Ｆａｂを陰性対照として保持した。図５：ＣＤ１３７クローンのトップフレームワーク最適化ＦａｂのＥＬＩＳＡ。ＥＬＩＳＡアッセイにおける結合に基づいて特定されたＦａｂをキメラＣＤ１３７Ｂ２１クローンＦａｂに関する結合について評価した。親Ｂ２１親分子と比較して配置されたＶＫ／ＶＨコンビネーションライブラリー由来の２２個の候補分子（Ｂ２１．Ｖ５５、Ｖ４９、Ｖ５１、Ｖ６９、Ｖ４７、Ｖ６１、Ｖ７２、Ｖ４８、Ｖ５６、Ｖ７５、Ｖ５４、Ｖ５０、Ｖ７１、Ｖ５３、Ｖ７０、Ｖ６３、Ｖ７４、Ｖ５２、Ｖ６２及びＶ６１を含む）についてのヒトＣＤ１３７に対するＦａｂの結合分析を示す。図６Ａ～図６Ｂ：Ａ．Ｖｋ－ＣＤＲの突然変異改変後の抗ＣＤ１３７候補の結合分析。各バーは、可変軽鎖内のアミノ酸改変の位置を表わす。Ｂ．ＶＨ－ＣＤＲの突然変異改変後の抗ＣＤ１３７候補の結合分析。各バーは、可変重鎖及び対応するＯＤ内のアミノ酸改変の位置を表わす。図６Ａ～図６Ｂ：Ａ．Ｖｋ－ＣＤＲの突然変異改変後の抗ＣＤ１３７候補の結合分析。各バーは、可変軽鎖内のアミノ酸改変の位置を表わす。Ｂ．ＶＨ－ＣＤＲの突然変異改変後の抗ＣＤ１３７候補の結合分析。各バーは、可変重鎖及び対応するＯＤ内のアミノ酸改変の位置を表わす。図７．Ｖｋ及びＶＨアミノ酸改変の組み合わせを組み込んだ抗ＣＤ１３７Ｆａｂの結合を比較したＥＬＩＳＡの結果。ついで、結合一次ＥＬＩＳＡアッセイに基づいて特定されたＦａｂをキメラＢ２１－キメラ親Ｆａｂに関する結合について評価した。ヒトＣＤ１３７に対するＦａｂの結合分析が、親Ｂ２１キメラＦａｂ親と比較して配置されたＶ６８、Ｖ７３、Ｖ７４、Ｖ１４、Ｖ１８、Ｖ６４、Ｖ１５、Ｖ１７、Ｖ１６、Ｖ６７、Ｖ７５、Ｖ６６、Ｖ６２、Ｖ７１及びＶ７２を含むＶＫ／ＶＨコンビネーションライブラリーからの１５個の陽性バインダーについて示されている。図８Ａ～図８Ｂ．Ａ．Ｖｋ及びＶＨ最適化後の最適化された抗ＣＤ１３７候補の架橋依存活性。Ａ及びＢ：RLUとして表わされたＪｕｒｋａｔアッセイにおけるＮＦｋＢ活性により測定された二次抗体架橋無し（Ａ）及び有り（Ｂ）でのアゴニスト活性化。親クローンと比較した代表的なクローンＣＤ１３７Ｂ２１．Ｖ１－Ｖ．４０及びＡ４９．Ｖ４１－Ｖ．４８。図８Ａ～図８Ｂ．Ａ．Ｖｋ及びＶＨ最適化後の最適化された抗ＣＤ１３７候補の架橋依存活性。Ａ及びＢ：RLUとして表わされたＪｕｒｋａｔアッセイにおけるＮＦｋＢ活性により測定された二次抗体架橋無し（Ａ）及び有り（Ｂ）でのアゴニスト活性化。親クローンと比較した代表的なクローンＣＤ１３７Ｂ２１．Ｖ１－Ｖ．４０及びＡ４９．Ｖ４１－Ｖ．４８。図９．抗ＣＤ１３７結合候補のエピトープマッピングデータ。ＣＤ１３７抗体は、全長ヒトＣＤ１３７発現Ｊｕｒｋａｔ細胞系統に結合可能であったが、多様なヒトＣＲＤ（ｈｕＣＤ１３７）をマウスのもの（ｍＣＲＤ１、ｍＣＲＤ２、ｍＣＲＤ３及びｍＣＲＤ４）によりに系統的に置き換えた場合、結合が失われた。各ＣＤ１３７クローン変異体を左側のパネルでラベルする。エピトープ結合を勾配スケール（右側に示されるように）として図示する。ここで、「黒色」＝＋結合及び「白色」＝結合なしである。図１０Ａ～図１０Ｂ．ＣＤ１３７リガンド発現細胞により誘引されたヒトＣＤ１３７－Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を妨害するのにおけるＣＤ１３７結合分子の効果。（Ａ）種々のＣＤ１３７結合分子が、ヒトＣＤ１３７リガンドを発現する２９３細胞存在下でヒトＣＤ１３７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞の活性化に差異的に影響を及ぼす。ＢＭＳＡＢ、ＰｆｉｚｅｒＡｂ及びＲｏｃｈｅｓｐｌｉｔ－ｔｒｉｍｅｒｉｃ－４－１ＢＢＬ（７１～２４８）／ＦＡＰ（２８Ｈ１）分子（「構築物２．１１」、ＷＯ第２０１７／１９４４３８号を参照のこと）により、ＣＤ１３７リガンドにより誘引されるＪｕｒｋａｔ細胞の活性化が妨害されるが、ＣＤ１３７Ｂ２１変異体により、ＣＤ１３７リガンドの結合及びＣＤ１３７リガンドにより誘引される生産的Ｔ細胞活性化が可能となる。（Ｂ）（Ａ）に記載されたアッセイ系におけるＣＤ１３７Ｂ２１変異体及び構築物２．１１分子の広範な用量滴定。ＣＤ１３７Ｂ２１変量では、１００nMまで試験した場合、ヒトＣＤ１３７とヒトＣＤ１３７リガンドとの間の機能的相互作用は妨げられない。図１０Ａ～図１０Ｂ．ＣＤ１３７リガンド発現細胞により誘引されたヒトＣＤ１３７－Ｊｕｒｋａｔ細胞の活性化を妨害するのにおけるＣＤ１３７結合分子の効果。（Ａ）種々のＣＤ１３７結合分子が、ヒトＣＤ１３７リガンドを発現する２９３細胞存在下でヒトＣＤ１３７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞の活性化に差異的に影響を及ぼす。ＢＭＳＡＢ、ＰｆｉｚｅｒＡｂ及びＲｏｃｈｅｓｐｌｉｔ－ｔｒｉｍｅｒｉｃ－４－１ＢＢＬ（７１～２４８）／ＦＡＰ（２８Ｈ１）分子（「構築物２．１１」、ＷＯ第２０１７／１９４４３８号を参照のこと）により、ＣＤ１３７リガンドにより誘引されるＪｕｒｋａｔ細胞の活性化が妨害されるが、ＣＤ１３７Ｂ２１変異体により、ＣＤ１３７リガンドの結合及びＣＤ１３７リガンドにより誘引される生産的Ｔ細胞活性化が可能となる。（Ｂ）（Ａ）に記載されたアッセイ系におけるＣＤ１３７Ｂ２１変異体及び構築物２．１１分子の広範な用量滴定。ＣＤ１３７Ｂ２１変量では、１００nMまで試験した場合、ヒトＣＤ１３７とヒトＣＤ１３７リガンドとの間の機能的相互作用は妨げられない。図１１Ａ～図１１Ｃ．Ａ．Ｅｌｉｓａにより測定されたヒト、マウス及びカニクイザルＦＡＰａｓに対する交差反応性を示す種々のOminChicken（登録商標）由来抗ヒトＦＡＰ抗体からの血清力価。Ｂ．野生型ＨＴ１０８０野生型（ＷＴ）細胞と比較した場合のヒトＦＡＰを発現する安定細胞系統（ＨＴ１０８０－ＦＡＰ）に対する抗ＦＡＰ抗体の結合のＭＦＩ。代表的なクローン＃Ｄ６、Ｅ１１、Ｇ３、Ｈ１２、Ｈ３、Ａ９、Ｃ１２、Ｃ３、Ｃ８、Ｄ２、Ｅ１、Ｅ１１．２及びＨ９。Ｃ．野生型Ｂ１６野生型細胞と比較した場合のマウスＦＡＰを発現する安定細胞系統（Ｂ１６－ＦＡＰ）に対する抗ＦＡＰ抗体の結合のＭＦＩ。代表的なクローン＃Ｄ６、Ｅ１１、Ｇ３、Ｈ１２、Ｈ３、Ａ９、Ｃ１２、Ｃ３、Ｃ８、Ｄ２、Ｅ１、Ｅ１１．２及びＨ９。図１１Ａ～図１１Ｃ．Ａ．Ｅｌｉｓａにより測定されたヒト、マウス及びカニクイザルＦＡＰａｓに対する交差反応性を示す種々のOminChicken（登録商標）由来抗ヒトＦＡＰ抗体からの血清力価。Ｂ．野生型ＨＴ１０８０野生型（ＷＴ）細胞と比較した場合のヒトＦＡＰを発現する安定細胞系統（ＨＴ１０８０－ＦＡＰ）に対する抗ＦＡＰ抗体の結合のＭＦＩ。代表的なクローン＃Ｄ６、Ｅ１１、Ｇ３、Ｈ１２、Ｈ３、Ａ９、Ｃ１２、Ｃ３、Ｃ８、Ｄ２、Ｅ１、Ｅ１１．２及びＨ９。Ｃ．野生型Ｂ１６野生型細胞と比較した場合のマウスＦＡＰを発現する安定細胞系統（Ｂ１６－ＦＡＰ）に対する抗ＦＡＰ抗体の結合のＭＦＩ。代表的なクローン＃Ｄ６、Ｅ１１、Ｇ３、Ｈ１２、Ｈ３、Ａ９、Ｃ１２、Ｃ３、Ｃ８、Ｄ２、Ｅ１、Ｅ１１．２及びＨ９。図１１Ａ～図１１Ｃ．Ａ．Ｅｌｉｓａにより測定されたヒト、マウス及びカニクイザルＦＡＰａｓに対する交差反応性を示す種々のOminChicken（登録商標）由来抗ヒトＦＡＰ抗体からの血清力価。Ｂ．野生型ＨＴ１０８０野生型（ＷＴ）細胞と比較した場合のヒトＦＡＰを発現する安定細胞系統（ＨＴ１０８０－ＦＡＰ）に対する抗ＦＡＰ抗体の結合のＭＦＩ。代表的なクローン＃Ｄ６、Ｅ１１、Ｇ３、Ｈ１２、Ｈ３、Ａ９、Ｃ１２、Ｃ３、Ｃ８、Ｄ２、Ｅ１、Ｅ１１．２及びＨ９。Ｃ．野生型Ｂ１６野生型細胞と比較した場合のマウスＦＡＰを発現する安定細胞系統（Ｂ１６－ＦＡＰ）に対する抗ＦＡＰ抗体の結合のＭＦＩ。代表的なクローン＃Ｄ６、Ｅ１１、Ｇ３、Ｈ１２、Ｈ３、Ａ９、Ｃ１２、Ｃ３、Ｃ８、Ｄ２、Ｅ１、Ｅ１１．２及びＨ９。図１２Ａ～図１２Ｃ．細胞活性化における二重特異性ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）／線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）分子の効果。Ａ．ＦＡＰ＋ＨＴ１０８０細胞及びＦＡＰ－ｖｅＨＴ１０８０細胞をＣＤ１３７／ＦＡＰ二重特異性分子と２４時間インキュベーションした。Ｂ．ウレルマブ、一価のＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）抗体単独又はＣ．ウトミルマブ、一価のＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）抗体単独と比較。図１２Ａ～図１２Ｃ．細胞活性化における二重特異性ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）／線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）分子の効果。Ａ．ＦＡＰ＋ＨＴ１０８０細胞及びＦＡＰ－ｖｅＨＴ１０８０細胞をＣＤ１３７／ＦＡＰ二重特異性分子と２４時間インキュベーションした。Ｂ．ウレルマブ、一価のＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）抗体単独又はＣ．ウトミルマブ、一価のＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）抗体単独と比較。図１２Ａ～図１２Ｃ．細胞活性化における二重特異性ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）／線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）分子の効果。Ａ．ＦＡＰ＋ＨＴ１０８０細胞及びＦＡＰ－ｖｅＨＴ１０８０細胞をＣＤ１３７／ＦＡＰ二重特異性分子と２４時間インキュベーションした。Ｂ．ウレルマブ、一価のＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）抗体単独又はＣ．ウトミルマブ、一価のＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）抗体単独と比較。図１３Ａ～図１３ＤＡ．ＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞と共培養されたＣＤ１３７Ｂ２１変異体。ＨＴ１０８０－ＦＡＰ（Ａ、Ｃ）又はＨＴ１０８０－野生型細胞（Ｂ、Ｄ）と共培養された場合のＪｕｒｋａｔ－ＣＤ１３７細胞におけるルシフェラーゼレポーター遺伝子のＮＦ－κＢ依存誘引。レポーター遺伝子活性のレベルは、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５及びＢ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５含む代表的なクローン変異体と相関する。Ｂ．ＨＴ１０８０－野生型細胞との（Ａ）に示されたＣＤ１３７Ｂ２１変異体。Ｃ．ＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞と共培養されたＣＤ１３７Ａ４９変異体。代表的なクローン変異体は、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２及びＡ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５を含む。Ｄ．ＨＴ１０８０野生型細胞との（Ｃ）に示されたＣＤ１３７Ａ４９変異体。図１３Ａ～図１３ＤＡ．ＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞と共培養されたＣＤ１３７Ｂ２１変異体。ＨＴ１０８０－ＦＡＰ（Ａ、Ｃ）又はＨＴ１０８０－野生型細胞（Ｂ、Ｄ）と共培養された場合のＪｕｒｋａｔ－ＣＤ１３７細胞におけるルシフェラーゼレポーター遺伝子のＮＦ－κＢ依存誘引。レポーター遺伝子活性のレベルは、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５及びＢ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５含む代表的なクローン変異体と相関する。Ｂ．ＨＴ１０８０－野生型細胞との（Ａ）に示されたＣＤ１３７Ｂ２１変異体。Ｃ．ＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞と共培養されたＣＤ１３７Ａ４９変異体。代表的なクローン変異体は、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２及びＡ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５を含む。Ｄ．ＨＴ１０８０野生型細胞との（Ｃ）に示されたＣＤ１３７Ａ４９変異体。図１３Ａ～図１３ＤＡ．ＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞と共培養されたＣＤ１３７Ｂ２１変異体。ＨＴ１０８０－ＦＡＰ（Ａ、Ｃ）又はＨＴ１０８０－野生型細胞（Ｂ、Ｄ）と共培養された場合のＪｕｒｋａｔ－ＣＤ１３７細胞におけるルシフェラーゼレポーター遺伝子のＮＦ－κＢ依存誘引。レポーター遺伝子活性のレベルは、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５及びＢ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５含む代表的なクローン変異体と相関する。Ｂ．ＨＴ１０８０－野生型細胞との（Ａ）に示されたＣＤ１３７Ｂ２１変異体。Ｃ．ＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞と共培養されたＣＤ１３７Ａ４９変異体。代表的なクローン変異体は、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２及びＡ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５を含む。Ｄ．ＨＴ１０８０野生型細胞との（Ｃ）に示されたＣＤ１３７Ａ４９変異体。図１３Ａ～図１３ＤＡ．ＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞と共培養されたＣＤ１３７Ｂ２１変異体。ＨＴ１０８０－ＦＡＰ（Ａ、Ｃ）又はＨＴ１０８０－野生型細胞（Ｂ、Ｄ）と共培養された場合のＪｕｒｋａｔ－ＣＤ１３７細胞におけるルシフェラーゼレポーター遺伝子のＮＦ－κＢ依存誘引。レポーター遺伝子活性のレベルは、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５及びＢ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５含む代表的なクローン変異体と相関する。Ｂ．ＨＴ１０８０－野生型細胞との（Ａ）に示されたＣＤ１３７Ｂ２１変異体。Ｃ．ＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞と共培養されたＣＤ１３７Ａ４９変異体。代表的なクローン変異体は、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２及びＡ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５を含む。Ｄ．ＨＴ１０８０野生型細胞との（Ｃ）に示されたＣＤ１３７Ａ４９変異体。図１４Ａ～図１４Ｈ．ＰＢＭＣ、ＣＤ１３７／ＦＡＰ変異体存在下でのＩＦＮ－γ産生：Ａ．ＦＡＰ発現ＨＴ１０８０細胞と共培養された抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣは、ＣＤ１３７の共刺激を通して増加したＩＦＮ－γを産生した。代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｂ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｃ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｄ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３。Ｅ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３。Ｆ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３。Ｇ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３。Ｈ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３。図１４Ａ～図１４Ｈ．ＰＢＭＣ、ＣＤ１３７／ＦＡＰ変異体存在下でのＩＦＮ－γ産生：Ａ．ＦＡＰ発現ＨＴ１０８０細胞と共培養された抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣは、ＣＤ１３７の共刺激を通して増加したＩＦＮ－γを産生した。代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｂ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｃ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｄ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３。Ｅ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３。Ｆ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３。Ｇ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３。Ｈ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３。図１４Ａ～図１４Ｈ．ＰＢＭＣ、ＣＤ１３７／ＦＡＰ変異体存在下でのＩＦＮ－γ産生：Ａ．ＦＡＰ発現ＨＴ１０８０細胞と共培養された抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣは、ＣＤ１３７の共刺激を通して増加したＩＦＮ－γを産生した。代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｂ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｃ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｄ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３。Ｅ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３。Ｆ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３。Ｇ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３。Ｈ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３。図１４Ａ～図１４Ｈ．ＰＢＭＣ、ＣＤ１３７／ＦＡＰ変異体存在下でのＩＦＮ－γ産生：Ａ．ＦＡＰ発現ＨＴ１０８０細胞と共培養された抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣは、ＣＤ１３７の共刺激を通して増加したＩＦＮ－γを産生した。代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｂ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｃ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｄ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３。Ｅ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３。Ｆ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３。Ｇ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３。Ｈ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３。図１４Ａ～図１４Ｈ．ＰＢＭＣ、ＣＤ１３７／ＦＡＰ変異体存在下でのＩＦＮ－γ産生：Ａ．ＦＡＰ発現ＨＴ１０８０細胞と共培養された抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣは、ＣＤ１３７の共刺激を通して増加したＩＦＮ－γを産生した。代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｂ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｃ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｄ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３。Ｅ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３。Ｆ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３。Ｇ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３。Ｈ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３。図１４Ａ～図１４Ｈ．ＰＢＭＣ、ＣＤ１３７／ＦＡＰ変異体存在下でのＩＦＮ－γ産生：Ａ．ＦＡＰ発現ＨＴ１０８０細胞と共培養された抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣは、ＣＤ１３７の共刺激を通して増加したＩＦＮ－γを産生した。代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｂ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｃ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｄ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３。Ｅ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３。Ｆ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３。Ｇ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３。Ｈ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３。図１４Ａ～図１４Ｈ．ＰＢＭＣ、ＣＤ１３７／ＦＡＰ変異体存在下でのＩＦＮ－γ産生：Ａ．ＦＡＰ発現ＨＴ１０８０細胞と共培養された抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣは、ＣＤ１３７の共刺激を通して増加したＩＦＮ－γを産生した。代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｂ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｃ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｄ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３。Ｅ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３。Ｆ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３。Ｇ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３。Ｈ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３。図１４Ａ～図１４Ｈ．ＰＢＭＣ、ＣＤ１３７／ＦＡＰ変異体存在下でのＩＦＮ－γ産生：Ａ．ＦＡＰ発現ＨＴ１０８０細胞と共培養された抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣは、ＣＤ１３７の共刺激を通して増加したＩＦＮ－γを産生した。代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ１６（ＣＤ１３７＃２）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｂ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃３）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｃ．代表的なクローン変異体は、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２２（ＣＤ１３７＃４）／ＦＡＰ＃３を含む。Ｄ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ２９（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３７＃５）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ２５（ＣＤ１３５＃５）／ＦＡＰ＃３。Ｅ．代表的な変異体Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃５、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃２、Ｂ２１．Ｖ３７（ＣＤ１３７＃６）／ＦＡＰ＃３。Ｆ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４３（ＣＤ１３７＃８）／ＦＡＰ＃３。Ｇ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３５＃９）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４７（ＣＤ１３７＃９）／ＦＡＰ＃３。Ｈ．代表的な変異体Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃５、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃２、Ａ４９．Ｖ４８（ＣＤ１３７＃７）／ＦＡＰ＃３。図１５Ａ～図１５Ｂ．ＨＴ１０８０野生型（Ａ）又はＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞（Ｂ）の存在下で、例示的なＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ二重特異性分子の濃度を増加させながらインキュベーションされた個々のドナーＰＢＭＣのＩＦＮ－γ分泌。図１５Ａ～図１５Ｂ．ＨＴ１０８０野生型（Ａ）又はＨＴ１０８０－ＦＡＰ発現細胞（Ｂ）の存在下で、例示的なＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ二重特異性分子の濃度を増加させながらインキュベーションされた個々のドナーＰＢＭＣのＩＦＮ－γ分泌。図１６Ａ～図１６Ｂ．Ａ．ＦＡＰ酵素アッセイ：本発明の例示的な分子であるＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ａ１１は、ＦＡＰタンパク質の酵素活性を妨害しない。Ｂ．タラボスタットメシラート阻害アッセイ：ＦＡＰ阻害についての陽性対照。図１６Ａ～図１６Ｂ．Ａ．ＦＡＰ酵素アッセイ：本発明の例示的な分子であるＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ａ１１は、ＦＡＰタンパク質の酵素活性を妨害しない。Ｂ．タラボスタットメシラート阻害アッセイ：ＦＡＰ阻害についての陽性対照。図１７．CD137 KI HuGEMM（商標）マウスにおける皮下同系ＭＣ３８結腸直腸ガンモデルでの該分子の投与スケジュールの模式図。図１８Ａ～図１８Ｄ．ＣＤ１３７ＫＩＨｕＧＥＭＭマウスにおける皮下同系ＭＣ３８結腸直腸ガンモデルでのヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ａ１１単剤療法のｉｎｖｉｖｏ有効性。（Ａ）ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３による処置後の平均腫瘍成長曲線、（Ｂ）ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３による処置後の個々の腫瘍成長曲線、（Ｃ）マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１による処置後の平均腫瘍成長曲線及び（Ｄ）マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１による処置後の個々の腫瘍成長曲線。図１８Ａ～図１８Ｄ．ＣＤ１３７ＫＩＨｕＧＥＭＭマウスにおける皮下同系ＭＣ３８結腸直腸ガンモデルでのヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ａ１１単剤療法のｉｎｖｉｖｏ有効性。（Ａ）ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３による処置後の平均腫瘍成長曲線、（Ｂ）ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３による処置後の個々の腫瘍成長曲線、（Ｃ）マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１による処置後の平均腫瘍成長曲線及び（Ｄ）マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１による処置後の個々の腫瘍成長曲線。図１８Ａ～図１８Ｄ．ＣＤ１３７ＫＩＨｕＧＥＭＭマウスにおける皮下同系ＭＣ３８結腸直腸ガンモデルでのヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ａ１１単剤療法のｉｎｖｉｖｏ有効性。（Ａ）ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３による処置後の平均腫瘍成長曲線、（Ｂ）ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３による処置後の個々の腫瘍成長曲線、（Ｃ）マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１による処置後の平均腫瘍成長曲線及び（Ｄ）マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１による処置後の個々の腫瘍成長曲線。図１８Ａ～図１８Ｄ．ＣＤ１３７ＫＩＨｕＧＥＭＭマウスにおける皮下同系ＭＣ３８結腸直腸ガンモデルでのヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ａ１１単剤療法のｉｎｖｉｖｏ有効性。（Ａ）ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３による処置後の平均腫瘍成長曲線、（Ｂ）ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３による処置後の個々の腫瘍成長曲線、（Ｃ）マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１による処置後の平均腫瘍成長曲線及び（Ｄ）マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１による処置後の個々の腫瘍成長曲線。図１９Ａ～図１９Ｂ．ＣＤ１３７／ＦＡＰ分子によるＴＩＬのリクルート：本発明のヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１結合分子は、対照群と比較した場合、腫瘍微小環境へのＣＤ３＋（Ａ）又はＣＤ８＋（Ｂ）Ｔ細胞浸潤の増加を誘引可能である。図１９Ａ～図１９Ｂ．ＣＤ１３７／ＦＡＰ分子によるＴＩＬのリクルート：本発明のヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１結合分子は、対照群と比較した場合、腫瘍微小環境へのＣＤ３＋（Ａ）又はＣＤ８＋（Ｂ）Ｔ細胞浸潤の増加を誘引可能である。図２０Ａ～図２０Ｅ．併用処置ＰＤ－１及びＣＤ１３７／ＦＡＰＡ．マウスモデル及びＣＤ１３７／ＦＡＰ及びＰＤ－１の投与スケジュールの模式図。Ｂ．本発明の結合分子は、対照群と比較した場合、ＰＤ－１アンタゴニストｍＡｂとの併用において、腫瘍体積の減少を誘引可能であり、その効果は用量依存性である。（Ｂ）、（Ｄ）は、マウスＰＤ－１抗体とヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３との併用療法を示し又は（Ｃ）、（Ｅ）は、マウスＰＤ－１とマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１との併用療法を示す。両方とも、腫瘍体積の減少により実証されたように、強力かつ統計的に有意な（ｐ＜０．０００１）腫瘍成長の阻害をもたらした。図２０Ａ～図２０Ｅ．併用処置ＰＤ－１及びＣＤ１３７／ＦＡＰＡ．マウスモデル及びＣＤ１３７／ＦＡＰ及びＰＤ－１の投与スケジュールの模式図。Ｂ．本発明の結合分子は、対照群と比較した場合、ＰＤ－１アンタゴニストｍＡｂとの併用において、腫瘍体積の減少を誘引可能であり、その効果は用量依存性である。（Ｂ）、（Ｄ）は、マウスＰＤ－１抗体とヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３との併用療法を示し又は（Ｃ）、（Ｅ）は、マウスＰＤ－１とマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１との併用療法を示す。両方とも、腫瘍体積の減少により実証されたように、強力かつ統計的に有意な（ｐ＜０．０００１）腫瘍成長の阻害をもたらした。図２０Ａ～図２０Ｅ．併用処置ＰＤ－１及びＣＤ１３７／ＦＡＰＡ．マウスモデル及びＣＤ１３７／ＦＡＰ及びＰＤ－１の投与スケジュールの模式図。Ｂ．本発明の結合分子は、対照群と比較した場合、ＰＤ－１アンタゴニストｍＡｂとの併用において、腫瘍体積の減少を誘引可能であり、その効果は用量依存性である。（Ｂ）、（Ｄ）は、マウスＰＤ－１抗体とヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３との併用療法を示し又は（Ｃ）、（Ｅ）は、マウスＰＤ－１とマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１との併用療法を示す。両方とも、腫瘍体積の減少により実証されたように、強力かつ統計的に有意な（ｐ＜０．０００１）腫瘍成長の阻害をもたらした。図２０Ａ～図２０Ｅ．併用処置ＰＤ－１及びＣＤ１３７／ＦＡＰＡ．マウスモデル及びＣＤ１３７／ＦＡＰ及びＰＤ－１の投与スケジュールの模式図。Ｂ．本発明の結合分子は、対照群と比較した場合、ＰＤ－１アンタゴニストｍＡｂとの併用において、腫瘍体積の減少を誘引可能であり、その効果は用量依存性である。（Ｂ）、（Ｄ）は、マウスＰＤ－１抗体とヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３との併用療法を示し又は（Ｃ）、（Ｅ）は、マウスＰＤ－１とマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１との併用療法を示す。両方とも、腫瘍体積の減少により実証されたように、強力かつ統計的に有意な（ｐ＜０．０００１）腫瘍成長の阻害をもたらした。図２０Ａ～図２０Ｅ．併用処置ＰＤ－１及びＣＤ１３７／ＦＡＰＡ．マウスモデル及びＣＤ１３７／ＦＡＰ及びＰＤ－１の投与スケジュールの模式図。Ｂ．本発明の結合分子は、対照群と比較した場合、ＰＤ－１アンタゴニストｍＡｂとの併用において、腫瘍体積の減少を誘引可能であり、その効果は用量依存性である。（Ｂ）、（Ｄ）は、マウスＰＤ－１抗体とヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３との併用療法を示し又は（Ｃ）、（Ｅ）は、マウスＰＤ－１とマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１との併用療法を示す。両方とも、腫瘍体積の減少により実証されたように、強力かつ統計的に有意な（ｐ＜０．０００１）腫瘍成長の阻害をもたらした。図２１Ａ～図２１Ｇ．本発明の結合分子は、対照群と比較して、ＰＤ－１アゴニストと併用した場合、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞浸潤の両方を誘引可能である。（Ａ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後に測定された生存腫瘍面積。（Ｂ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ４＋細胞密度。（Ｃ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ８＋細胞密度。（Ｄ）腫瘍生存面積を媒体単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｅ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｆ）腫瘍生存面積をｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｇ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１と併用したｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。また、データから、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加が腫瘍生存面積の消失と正に相関することが実証される。図２１Ａ～図２１Ｇ．本発明の結合分子は、対照群と比較して、ＰＤ－１アゴニストと併用した場合、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞浸潤の両方を誘引可能である。（Ａ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後に測定された生存腫瘍面積。（Ｂ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ４＋細胞密度。（Ｃ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ８＋細胞密度。（Ｄ）腫瘍生存面積を媒体単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｅ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｆ）腫瘍生存面積をｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｇ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１と併用したｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。また、データから、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加が腫瘍生存面積の消失と正に相関することが実証される。図２１Ａ～図２１Ｇ．本発明の結合分子は、対照群と比較して、ＰＤ－１アゴニストと併用した場合、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞浸潤の両方を誘引可能である。（Ａ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後に測定された生存腫瘍面積。（Ｂ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ４＋細胞密度。（Ｃ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ８＋細胞密度。（Ｄ）腫瘍生存面積を媒体単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｅ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｆ）腫瘍生存面積をｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｇ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１と併用したｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。また、データから、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加が腫瘍生存面積の消失と正に相関することが実証される。図２１Ａ～図２１Ｇ．本発明の結合分子は、対照群と比較して、ＰＤ－１アゴニストと併用した場合、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞浸潤の両方を誘引可能である。（Ａ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後に測定された生存腫瘍面積。（Ｂ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ４＋細胞密度。（Ｃ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ８＋細胞密度。（Ｄ）腫瘍生存面積を媒体単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｅ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｆ）腫瘍生存面積をｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｇ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１と併用したｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。また、データから、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加が腫瘍生存面積の消失と正に相関することが実証される。図２１Ａ～図２１Ｇ．本発明の結合分子は、対照群と比較して、ＰＤ－１アゴニストと併用した場合、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞浸潤の両方を誘引可能である。（Ａ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後に測定された生存腫瘍面積。（Ｂ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ４＋細胞密度。（Ｃ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ８＋細胞密度。（Ｄ）腫瘍生存面積を媒体単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｅ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｆ）腫瘍生存面積をｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｇ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１と併用したｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。また、データから、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加が腫瘍生存面積の消失と正に相関することが実証される。図２１Ａ～図２１Ｇ．本発明の結合分子は、対照群と比較して、ＰＤ－１アゴニストと併用した場合、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞浸潤の両方を誘引可能である。（Ａ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後に測定された生存腫瘍面積。（Ｂ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ４＋細胞密度。（Ｃ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ８＋細胞密度。（Ｄ）腫瘍生存面積を媒体単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｅ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｆ）腫瘍生存面積をｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｇ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１と併用したｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。また、データから、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加が腫瘍生存面積の消失と正に相関することが実証される。図２１Ａ～図２１Ｇ．本発明の結合分子は、対照群と比較して、ＰＤ－１アゴニストと併用した場合、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞浸潤の両方を誘引可能である。（Ａ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後に測定された生存腫瘍面積。（Ｂ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ４＋細胞密度。（Ｃ）媒体単独、抗ＰＤ－１単独、ｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独又はｈｕＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３＋ＰＤ－１併用による処置後の生存腫瘍面積で測定されたＣＤ８＋細胞密度。（Ｄ）腫瘍生存面積を媒体単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｅ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｆ）腫瘍生存面積をｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３単独による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。（Ｇ）腫瘍生存面積を抗ＰＤ－１と併用したｈｕＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３による処置でのＣＤ８＋Ｔ細胞密度の関数としてプロットする。また、データから、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加が腫瘍生存面積の消失と正に相関することが実証される。

発明の詳細な説明
ＣＤ１３７は、造血コンパートメント及び非造血コンパートメント全体：活性化されたＴ細胞、レギュラトリーＴ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、活性化された単球、好中球、好酸球、マスト細胞、活性化されたＢ細胞、リードシュテルンベルク細胞及び血管壁（内皮層及び血管平滑筋細胞上）等にわたって広く発現される。前臨床試験で示されたように、強力な単特異性ＣＤ１３７アゴニスト抗体であるウレルマブの臨床試験では、死亡を含む重度の肝毒性が報告されている。肝臓常在性Ｔ細胞上のＦｃγＲを介した高いＣＤ１３７親和性と高クラスター化との両方が、ウレルマブ媒介性肝毒性に寄与すると考えられている。

本発明のＣＤ１３７／ＦＡＰ分子は、より低いＣＤ１３７結合親和性、減少したＦｃγＲ結合のためのＬＡＬＡ突然変異並びに活性のためのＣＤ１３７及び腫瘍間質特異的ＦＡＰへの同時結合の必要性を有するように操作されている。ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）は、アンカーターゲットである。ＦＡＰは、腫瘍間質内に位置する活性化された線維芽細胞にのみ発現される。したがって、ＦＡＰ二重特異性分子は、Ｔ細胞活性化及び活性化された線維芽細胞と物理的に密接に接触しているガン細胞の殺傷を促進するためにのみ機能するであろう。活性化された線維芽細胞と直接接触していない腫瘍細胞は、この処置により影響を受けず、増殖し続けるであろう。したがって、腫瘍部位のみでＣＤ１３７レセプター誘導活性化及びＴ細胞浸潤を媒介するためのアンカーターゲットとしてＦＡＰを使用することには明確な利点がある。

発明者らは、腫瘍におけるＣＤ１３７とＦＡＰとの共局在性発現を見出した。直結腸ガン（ＣＲＣ）、胃ガン（ＧＣ）及び膵臓ガン（ＰＡＣ）の大規模サブセットにおける共局在性発現の出現率を調査している。高い出現率が、ＣＲＣにおいて、ＣＤ１３７の発現（８８～１００％）及びＦＡＰの発現（８７～１００％）について一貫して示された。ＧＣでは、ＣＤ１３７についても。全症例の５６～９０％で実証され、びまん型と比較して腸型で顕著に高頻度であった。一方、ＦＡＰは、原発性及び転移性胃ガンにおいて、高レベルで恒常的に発現されることが示されている。ＰＡＣでは、ＣＤ１３７発現を全症例の５０～８２％、ＦＡＰを８１％で示すことができた。

したがって、ＣＤ１３７及びＦＡＰは、各種の腫瘍において共局在性発現を示し、非ガン性細胞では、ほとんど又は全く共発現を示さない。特に、ＦＡＰは、ＣＤ１３７活性化に対する報告された感受性を有する正常肝組織又は肝細胞では検出できなかった。

本明細書において具体的に定義されていない用語は、本開示及び文脈を考慮して、当業者によりそれらに与えられるであろう意味を与えられるべきである。ただし、本明細書で使用する場合、反対に指定されない限り、下記用語は、示された意味を有し、下記慣例が遵守される。

本発明の第１の態様は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位（ここで、ＣＤ１３７（４－１ＢＢリガンドレセプター）に特異的に結合する抗原結合部位は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の一部である）と、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位（ここで、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部位は、２つのｓｃＦｖを含む）とを有する、免疫グロブリン様結合分子を提供する。各タンパク質及びそれらに関連する遺伝子は、当技術分野において公知であり、生物学的データベースにおいて十分に表わされている。

「ヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）」は、ＮＣＢＩ：ＮＰ＿００１５５２及びＵｎｉｐｒｏｔ：Ｑ０７０１１で提供されるタンパク質（配列番号：１）及びそのタンパク質をコードする核酸配列として定義される。細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の種々のＣＲＤ領域を規定するアミノ酸は、以下の表１に規定されるとおりである。免疫化キャンペーンにおいて免疫原として使用されるヒトＣＤ１３７及びカニクイザルＣＤ１３７についてタグ化されたヒト－Ｆｃ－Ｈｉｓタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：３３５及び３４３に対応し、表１に含まれる。「カニクイザルＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）」は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ６Ｗ５Ｇ６で提供されるタンパク質（配列番号：２）及びそのタンパク質をコードする核酸配列として定義される。「マウスＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）」は、ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＰ２０３３４で提供されるタンパク質（配列番号：３）及びそのタンパク質をコードする核酸配列として定義される。

「ヒト線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）」は、ＮＣＢＩ：ＮＰ＿００４４５１及びＵｎｉｐｒｏｔ：Ｑ１２８８４で提供されるタンパク質（配列番号：４）並びにそのタンパク質をコードする核酸配列として定義される。また、「線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）」という用語は、プロリルエンドペプチダーゼＦＡＰ又はセプラーゼ（ＥＣ３．４．２１）としても公知である。一実施態様では、本発明の抗原結合分子は、ヒト、マウス及び／又はカニクイザルＦＡＰに特異的に結合可能である。ヒトＦＡＰの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）は、２６位から７６０位までのアミノ酸に広がっている。マウスＦＡＰのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ９７３２１（配列番号：４）又はＮＣＢＩＲｅｆＳｅｑＮＰ＿０３２０１２．１で示される。マウスＦＡＰの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）は、２６位から７６１位までのアミノ酸に広がっている。好ましくは、本発明の抗ＦＡＰ結合分子は、ＦＡＰの細胞外ドメインに結合する。

本発明は、少なくとも２つの異なる部位についての結合特異性を有する結合分子に関する。本発明に関して、免疫グロブリン様結合分子は、抗体に由来する。結合分子を調製するための技術は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖ペアのリコンビナント同時発現（Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)、ＷＯ第９３／０８８２９号及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照のこと）及び「ノブインホール」操作（例えば、ＵＳ第５，７３１，１６８号を参照のこと）を含むが、これらに限定されない。また、本発明の免疫グロブリン様結合分子を、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を調製するための静電ステアリング効果を操作すること（ＷＯ第２００９／０８９００４号）、２つ以上の抗体又はフラグメントを架橋すること（例えば、ＵＳ第４，６７６，９８０号及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照のこと）、二重特異性抗体を産生するためのロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., Immunol., 148(5): 1547-1553 (1992)を参照のこと）、二重特異性抗体フラグメントを調製するための「ディアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., PNAS. USA, 90:6444- 6448 (1993)を参照のこと）及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照のこと）並びに例えば、Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されるような三重特異性抗体を調製することによっても調製することができる。

本明細書で使用する場合、「抗原結合部位」という用語は、抗体に由来する重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む。「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗原結合分子の抗原への結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。ネイティブな抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般的には、類似する構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域を含む。このような場合、ＶＨ及びＶＬの各可変ドメインは、超可変領域又はループを構成する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一般的には、ネイティブな４本鎖抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の、６つの超可変領域を含む。抗原結合特異性を付与するのに、１つのＶＨ又はＶＬドメインで十分である場合がある。一態様では、本発明の抗原結合部位又はタンパク質の特定の部分は、一般的には、抗体に由来する。抗体又は免疫グロブリン分子の一般化された構造は、当業者に周知である。

「抗原結合分子」又は「抗原結合ポリペプチド」という用語は、その最も広い意味で、抗原決定基に特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子又はポリペプチドの例は、抗体及び抗体フラグメントである。

「抗体」又は「免疫グロブリン分子」（免疫グロブリンとしても公知である、Ｉｇと略される）は、脊椎動物の血液又は他の体液中に見出すことができるガンマグロブリンタンパク質であり、異物、例えば、細菌及びウイルスを特定し、中和するために、免疫系により使用される。それらは、典型的には、例えば、１つの単位を有する単量体、２つの単位を有する二量体又は５つの単位を有する五量体を形成するための基本的な構造単位で構成され、それぞれ、２つの大きな重鎖及び２つの小さな軽鎖を有する。抗体は、非共有相互作用により、抗原として公知の他の分子又は構造に結合することができる。この結合は、抗体が高い親和性で特定の構造にのみ結合するであろうという意味で特異的である。抗体により認識される抗原の固有の部分は、エピトープ又は抗原決定基と呼ばれる。エピトープに結合する抗体の部分は、パラトープと呼ばれる場合もあり、抗体のいわゆる可変ドメイン又は可変領域（Ｆｖ）に存在する。可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）により離間された３つのいわゆる相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。「免疫グロブリン様結合分子」は、免疫グロブリン分子に類似する抗原結合特徴を有し、抗体分子の同じ機能的戦略を使用する、すなわち、それらは、抗原に特異的に結合可能であり、少なくとも１つの抗原結合領域を有する。ただし、免疫グロブリン様分子は、天然に見出されるような構造及び配列には限定されない。

「二重特異性」という用語は、抗原結合分子が少なくとも２つの区別できる抗原決定基に特異的に結合可能であることを意味する。「価」という用語は、１つの区別できる抗原決定基について、抗原結合分子中の１つの区別できる抗原決定基に特異的な特定数の結合部位の存在を指す。したがって、「二価」という用語は、抗原結合分子中の特定の抗原決定基それぞれに特異的な２つの結合部位の存在を示す。本発明の特定の態様では、二重特異性抗原結合分子は、各抗原決定基について二価でもあり、これは、その文脈において、それらがＣＤ１３７に特異的な２つの結合部位及びＦＡＰに特異的な２つの結合部位を有することを意味する。

「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性及び結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を指すことが、当技術分野において公知である。一般的には、各重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）が存在し、各軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）が存在する。

所定のＣＤＲのアミノ酸配列境界を、Kabat et al. (1991), 「Sequences of Proteins of Immunological Interest,」 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）、MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), 「Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,」 J. Mol. Biol. 262, 732-745.（「Ｃｏｎｔａｃｔ」ナンバリングスキーム）、Lefranc M P et al.,「IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,」 Dev Comp Immunol, 2003 January; 27(1):55-77（「IMGT」又は「CCG」ナンバリングスキーム）及びHonegger A and Pltickthun A, 「Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,」 J Mol Biol, 2001 Jun. 8; 309(3):657-70を含む、多くの公知のスキームのいずれかを使用して決定することができる。

所定のＣＤＲの境界は、命名規則に応じて変化する場合がある。ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられるアミノ酸位置を例えば、ナンバリングシステムに従って定義することができる。ここで、本発明の抗体の可変領域の特定のアミノ酸は、分子のアミノ酸「１」としてのＮ末端から始まり、分子のＣ末端で終わる配列においてナンバリングされ、ここで、ＣＤＲの境界は、以下のアミノ酸ナンバリングにより定義される。

例えば、ＣＤ１３７＃１～６についてのＫａｂａｔ規則によれば、ＶＨＣＤＲは、以下のように配置される：残基３１～３５（ＣＤＲ１）、５０～６６（ＣＤＲ２）及び９９～１０８（ＣＤＲ３）。また、ＣＤ１３７＃１～６についてのＫａｂａｔナンバリングシステムによれば、ＶＬＣＤＲは、以下のように配置される：残基２４～３４（ＣＤＲ１）、５０～５６（ＣＤＲ２）及び８９～９７（ＣＤＲ３）。ＣＤ１３７ＶＨ＃７～１０についてのＫａｂａｔ規則によれば、ＶＨＣＤＲは、以下のように配置される：残基３１～３５（ＣＤＲ１）、５０～６５（ＣＤＲ２）及び９８～１０７（ＣＤＲ３）。また、ＣＤ１３７＃７～１０についてのＫａｂａｔナンバリングシステムによれば、ＶＬＣＤＲは、以下のように配置される：残基２４～３９（ＣＤＲ１）、５５～６１（ＣＤＲ２）及び９４～１０２（ＣＤＲ３）。

本発明の文脈内では、ＣＤＲへの言及は、Ｋａｂａｔ規則の定義に基づくが、本開示は、任意の１つのナンバリングシステムにより定義されたＦＲ及びＣＤＲには限定されず、上記検討されたものを含む全てのナンバリングシステムを含む。

このため、特に断りない限り、所定の抗体又はその領域、例えば、可変領域の「ＣＤＲ」及び「相補性決定領域」という用語及び個々のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２）並びに抗体又はその領域のフレームワーク領域（ＦＲ）は、本明細書において上記された公知のスキームのいずれかにより定義される各領域（例えば、相補性決定領域）を包含すると理解されたい。場合によっては、特定の１つ以上のＣＤＲ、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＣＣＧ、ＩＭＧＴ又は当技術分野において公知の他の方法により定義されるＣＤＲを特定するためのスキームが指定される。他の場合には、ＣＤＲの特定のアミノ酸配列が与えられる。本発明の各ＣＤＲ領域についての代替的な命名規則は、以下の表３Ａ～表３Ｈにある。

抗体のアミノ酸配列改変が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。「アミノ酸配列変異体」という用語は、親抗原結合分子（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基にアミノ酸置換が存在する実質的な変異体を含む。一般的には、更なる研究のために選択される得られた変異体は、意図された機能に適した特定の生物学的特性における改変を有するであろう。これらの改変は、親抗原結合分子に対する特定の生物学的特性における「改善」、例えば、親和性の向上又は免疫原性の低下を含むことができるが、これらに限定されずかつ／又は親抗原結合分子の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。アミノ酸配列変異体を、抗体変異体をコードする核酸に適切なヌクレオチド変化を導入することにより又はペプチド合成により調製することができる。このような改変は、例えば、抗体変異体のアミノ酸配列内の残基の欠失及び／又は同配列への残基の挿入及び／又は同残基の置換を含む。欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせが、最終構築体に到達されるようになされる。ただし、最終構築体は、所望の特徴を保有するという条件である。また、アミノ酸変化により、抗体変異体の翻訳後プロセシングを変化させる場合もある（例えば、グリコシル化部位の数又は位置の変化）。

例えば、１、２、３、４、５又は６個のアミノ酸を各ＣＤＲ（当然、それらの長さに応じて）において挿入し、置換し又は欠失させることができ、一方、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２５個のアミノ酸を各ＦＲにおいて挿入し、置換し又は欠失させることができる。好ましくは、抗体構築物へのアミノ酸配列挿入は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端融合及び／又はカルボキシル末端融合並びに１つ又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。さらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の残基の長さの範囲の、アミノ末端領域及び／又はカルボキシ末端領域での抗体構築物からのアミノ酸配列欠失は、ターゲット抗原に結合するその能力に加えて、抗体構築物において所望される特徴を最大化しかつ／又は何らかの方法で改変することが企図される。

置換突然変異誘発に最も興味深い部位は、重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ、特に、超可変領域を含む（が、これらに限定されない）が、重鎖及び／又は軽鎖におけるＦＲ改変も意図される。置換は、好ましくは、本明細書に記載されるような保存的置換である。好ましくは、ＣＤＲ又はＦＲの長さに応じて、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸をＣＤＲにおいて置換することができ、一方、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２５個のアミノ酸をフレームワーク領域（ＦＲ）において置換することができる。例えば、ＣＤＲ配列が、６個のアミノ酸を包含する場合、これらのアミノ酸のうちの１個、２個又は３個が置換されることが想定される。同様に、ＣＤＲ配列が、１５個のアミノ酸を包含する場合、これらのアミノ酸のうちの１、２、３、４、５又は６個が置換されることが想定される。

一般的には、アミノ酸が、重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲの１つ以上又は全てにおいて置換される場合、得られた「置換」配列は、「元の」ＣＤＲ配列と少なくとも６０％又は６５％、より好ましくは、７０％又は７５％、さらにより好ましくは、８０％又は８５％、特に好ましくは、９０％又は９５％同一であることが好ましい。これは、ＣＤＲが「置換」配列とどの程度同一であるかはＣＤＲの長さにより決まることを意味する。例えば、５個のアミノ酸を有するＣＤＲは、好ましくは、少なくとも１つの置換されたアミノ酸を有するために、その置換配列と８０％同一である。したがって、抗体構築物のＣＤＲは、それらの置換配列に対して種々の程度の同一性を有する場合があり、例えば、ＣＤＲＬ１は、８０％を有する場合があり、一方、ＣＤＲＬ３は、９０％を有する場合がある。

抗体の「Ｆｃ部分」は、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。「抗体のＦｃ部分」は、当業者に周知の用語であり、抗体のパパイン開裂に基づいて定義される。それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体又は免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭのクラスに分けられる。重鎖定常領域に従って、免疫グロブリンの種々のクラスはそれぞれ、α、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。これらのうちの幾つかをサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４、ＩｇＡｌ及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。抗体のＦｃ部分は、補体活性化、Ｃｌｑ結合及びＦｃレセプター結合に基づいて、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害）及びＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）に直接関与する。補体活性化（ＣＤＣ）は、ほとんどのＩｇＧ抗体サブクラスのＦｃ部分に補体因子Ｃｌｑが結合することにより開始される。補体系に対する抗体の影響は、特定の条件に依存するが、Ｃｌｑへの結合は、Ｆｃ部分における規定された結合部位により引き起こされる。このような結合部位は、当技術分野において公知であり、例えば、Boakle et al., Nature 282 (1975) 742-743、Lukas et al., J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560、Brunhouse and Cebra, Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917、Burton et al., Nature 288 (1980) 338-344、Thommesen et al., Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004、Idusogie et al., J. Immunol.164 (2000) 4178-4184、Hezareh et al., J. Virology 75 (2001) 12161- 12168、Morgan et al., Immunology 86 (1995) 319-324、ＥＰ第０３０７４３４号に記載されている。このような結合部位は、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１及びＰ３２９（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリング）である。ＩｇＧ１におけるＣ１ｑ及びＦｃガンマレセプター結合を媒介するのにおいてこれらの残基の中で最も重要なものは、Ｌ２３４及びＬ２３５である（Hezareh et al., J. Virology 75 (2001) 12161- 12168）。サブクラスＩｇＧｌ及びＩｇＧ３の抗体は、通常、補体活性化並びにＣｌｑ及びＣ３結合を示し、一方、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４は、補体系を活性化せず、Ｃｌｑ及びＣ３と結合しない。

本発明の実施態様では、本発明における結合分子による補体産物であるＣ１ｑ又はＦｃガンマレセプターへの結合は、２３４位及び２３５位（ヒトＩｇＧ１配列番号：２８３及びヒトＩｇＧ１ＫＯ配列番号：２８４のアミノ酸１１７及び１１８に対応）でのＬからＡへの突然変異誘発を伴うＩｇＧ１定常領域の利用により除去される。

当技術分野では、抗体がさらに開発され、抗体は、医学及び技術における多目的に使用できるツールとなっている。このため、本発明の文脈において、「抗体分子」又は「抗体」（本明細書において同義的に使用される）という用語は、例えば、２つの軽鎖及び２つの重鎖又はラクダ種におけるような２つの重鎖だけを含む天然に見出すことができる抗体を含むだけでなく、抗原に対する結合特異性及び免疫グロブリンの可変ドメインに対する構造的類似性を有する少なくとも１つのパラトープを含む全ての分子をさらに包含する。

このため、抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、抗体フラグメント、特に、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’又はＦ（ａｂ’）２フラグメント、一本鎖抗体、特に、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、小型モジュール免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、ドメイン抗体、ナノボディ、ディアボディを含むことができる。

モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、アミノ酸配列が同一の単特異性抗体である。それらを、特異的抗体産生Ｂ細胞とメラノーマ（Ｂ細胞ガン）細胞との融合物のクローンを表わすハイブリッド細胞系統（ハイブリドーマと呼ばれる）からハイブリドーマ技術により産生することができる（Kohler G, Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 1975; 256:495-7.）。代替的には、モノクローナル抗体をホスト細胞におけるリコンビナント発現により産生することができる（Norderhaug L, Olafsen T, Michaelsen TE, Sandlie I. (May 1997). 「Versatile vectors for transient and stable expression of recombinant antibody molecules in mammalian cells.」 J Immunol Methods 204 (1): 77-87、以下も参照のこと）。

ヒトへの適用のために、他の種、例えば、元はマウスに由来する抗体の免疫原性を減少させることが望ましい場合が多い。これをキメラ抗体の構築により又は「ヒト化」と呼ばれるプロセスにより行うことができる。この文脈において、「キメラ抗体」は、異なる種（例えば、ヒト）に由来する配列部分（例えば、定常ドメイン）に融合されたある種（例えば、マウス）に由来する配列部分（例えば、可変ドメイン）を含む抗体であると理解される。「ヒト化抗体」は、元は非ヒト種に由来する可変ドメインを含む抗体であり、ここで、特定のアミノ酸が、その可変ドメインの全体配列をヒト可変ドメインの配列により密接に類似させるように変異されている。抗体のキメラ化及びヒト化の方法は、当技術分野において周知である（Billetta R, Lobuglio AF. 「Chimeric antibodies」. Int Rev Immunol. 1993;10(2-3):165-76、Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G (1988). 「Reshaping human antibodies for therapy」. Nature: 332:323）。

さらに、ヒトゲノムに由来する配列に基づいて、例えば、ファージディスプレイ又はトランスジェニック動物の使用により、抗体を作製するための技術が開発されている（ＷＯ第９０／０５１４４号、D. Marks, H.R. Hoogenboom, T.P. Bonnert, J. McCafferty, A.D. Griffiths and G. Winter (1991) 「By-passing immunisation. Human antibodies from V-gene libraries displayed on phage.」 J.Mol.Biol., 222, 581-597、Knappik et al., J. Mol. Biol. 296: 57-86, 2000、S. Carmen and L. Jermutus, 「Concepts in antibody phage display」. Briefings in Functional Genomics and Proteomics 2002 1(2):189-203、Lonberg N, Huszar D. 「Human antibodies from transgenic mice」. Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93.、Bruggemann M, Taussig MJ. 「Production of human antibody repertoires in transgenic mice」. Curr Opin Biotechnol. 1997 Aug;8(4):455-8.）。このような抗体は、本発明の文脈において、「ヒト抗体」である。

また、抗体は、抗原結合特性を保持する免疫グロブリンフラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’又はＦ（ａｂ’）２フラグメントも含むことができる。このようなフラグメントを例えば、タンパク質分解消化による免疫グロブリンのフラグメント化により又はこのようなフラグメントのリコンビナント発現により得ることができる。例えば、免疫グロブリン消化を、例えば、パパイン又はペプシンを使用して、ルーチンな技術により達成することができる（ＷＯ第９４／２９３４８号）。抗体のパパイン消化により、典型的には、２つの同一の抗原結合フラグメント、いわゆる、Ｆａｂフラグメントが産生され、それぞれが、１つの抗原結合部位及び残留Ｆｃフラグメントを有する。ペプシン処理により、Ｆ（ａｂ’）２が生成される。Ｆａｂ分子において、可変ドメインはそれぞれ、好ましくは、ヒト起源の免疫グロブリン定常ドメインに融合される。このため、重鎖可変ドメインをＣＨ１ドメイン（いわゆる、Ｆｄフラグメント）に融合させることができ、軽鎖可変ドメインをＣＬドメインに融合させることができる。Ｆａｂ分子をホスト細胞における各核酸のリコンビナント発現により産生することができる。以下を参照のこと。

免疫グロブリンの可変ドメイン又はこのような可変ドメインに由来する分子を異なる分子的状況に置くための多くの技術が開発されている。これらは、本発明の「免疫グロブリン様」分子である。一部の例では、これらの免疫グロブリン様分子は、天然に存在する免疫グロブリンと比較してサイズがより小さくすることができ、例えば、１つのアミノ酸鎖又は複数のアミノ酸鎖を含むことができる。例えば、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）は、短いリンカー、通常、セリン（Ｓ）又はグリシン（Ｇ）と共に連結された免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の可変領域の融合物である（ＷＯ第８８／０１６４９号、同第９１／１７２７１号、Huston et al; International Reviews of Immunology, Volume 10, 1993, 195 - 217)。「単一ドメイン抗体」又は「ナノボディ」は、１つのＩｇ様ドメインに抗原結合部位を有する（ＷＯ第９４／０４６７８号、同第０３／０５０５３１号、Ward et al., Nature. 1989 Oct 12;341 (6242):544-6、Revets et al., Expert Opin Biol Ther. 5(1):111-24, 2005）。同じか又は異なる抗原についての結合特異性を有する１つ以上の単一ドメイン抗体同士を連結させることができる。ダイアボディは、２つの可変ドメインを含む２つのアミノ酸鎖からなる二価の抗体分子である（ＷＯ第９４／１３８０４号、Holliger et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 1993 Jul 15;90(14):6444-8）。抗体様分子の他の例は、免疫グロブリンスーパーファミリー抗体である（ＩｇＳＦ、Srinivasan and Roeske, Current Protein Pept. Sci. 2005, 6(2): 185-96）。異なる概念から、一本鎖ヒンジに連結されたＦｖドメイン及び定常ドメインＣＨ１を欠くエフェクタードメインを含む、いわゆる、小型モジュール免疫医薬品（ＳＭＩＰ）がもたらされる（ＷＯ第０２／０５６９１０号）。

本発明に関して、本発明の第１の態様は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位と、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位とを有する、免疫グロブリン様結合分子を提供する。

一態様では、本発明の免疫グロブリン様結合分子は、例えば、表面プラズモン共鳴分析（Malmqvist M., 「Surface plasmon resonance for detection and measurement of antibody-antigen affinity and kinetics.」, Curr Opin Immunol. 1993 Apr;5(2):282-6.）により測定される親和性（１pM～１００μM、好ましくは、１pM～１μMの範囲のＫＤ値を有する）でＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）又は線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）ターゲット抗原に結合する。抗体親和性を、動態排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）技術を使用して測定することもできる（Darling, R.J., and Brault P-A., 「Kinetic exclusion assay technology: Characterization of Molecular Interactions.」 ASSAY and Drug Development Technologies. 2004, Dec 2(6): 647-657）。

本明細書で使用する場合、「結合する」又は「特異的に結合する」という用語は、ｉｎｖｉｔｒｏアッセイ、好ましくは、表面プラズモン共鳴アッセイ（ＳＰＲ、BIAcore, GE-Healthcare Uppsala, Sweden）における、抗原のエピトープへの抗体及び／又は免疫グロブリン様分子の結合を指す。結合の親和性は、ｋ_ｏｎ（抗体／抗原複合体からの抗体の会合についての速度定数）、ｋ_ｏｆｆ（解離定数）及びＫＤ（ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）という用語により定義される。特異的に結合するは、一般的には、レセプター分子とそのリガンドとの間の複合体の形成を指す。抗体－抗原結合の文脈において、高親和性抗体は、典型的には、１０^－９M以下の親和性でそれらのターゲット抗原に結合する。

「ＣＤ１３７に特異的に結合する抗体」もしくは「ＣＤ１３７に特異的に結合する免疫グロブリン様結合分子」又は「ＦＡＰに特異的に結合する抗体」もしくは「ＦＡＰに特異的に結合する免疫グロブリン様結合分子」は、抗体及び／又は免疫グロブリン様結合分子がそれぞれＣＤ１３７又はＦＡＰをターゲット化するのにおける診断剤及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性で結合可能な分子を指す。一実施態様では、無関係の非ＣＤ１３７タンパク質への抗ＣＤ１３７結合分子の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又はフローサイトメトリー（ＦＡＣ）により測定された場合、抗体及び／又は免疫グロブリン様結合分子のＣＤ１３７への結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、ＣＤ１３７に結合する抗体及び／又は免疫グロブリン様結合分子は、≦１μM、≦１００nM、≦１０nM、≦１nM、≦０．１nM、≦０．０１nM、≦０．００１nMの解離定数（Ｋｄ）を有する。同様に、一実施態様では、無関係の非ＦＡＰタンパク質への抗ＦＡＰ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又はフローサイトメトリー（ＦＡＣ）により測定された場合、抗体及び／又は免疫グロブリン様結合分子のＦＡＰへの結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、ＦＡＰに結合する抗体及び／又は免疫グロブリン様結合分子は、≦１μM、≦１００nM、≦１０nM、≦１nM、≦０．１nM、≦０．０１nM、≦０．００１nM（例えば、１０^－６M以下、１０^－５０M～１０^－１３M、例えば、１０^－８M～１０^－１０M）の解離定数（Ｋｄ）を有する。

抗体分子の結合親和性を親和性成熟として公知のプロセスにより向上させることができる（Marks et al., 1992, Biotechnology 10:779-783、Barbas, et al., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813、Shier et al., 1995, Gene 169:147-155）。したがって、親和性成熟抗体及び／又は免疫グロブリン様結合分子も、本発明に包含される。

さらに好ましい実施態様では、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に特異的に結合する抗原結合部位は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の一部であり、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部位は、１つ以上のｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ又はＦｖ結合エレメントを含む。好ましくは、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部位は、２つのｓｃＦｖを含む。

「一本鎖Ｆｖフラグメント」（ｓｃＦｖ）は、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、リンカー及び抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含むポリペプチドであり、ここで、前記抗体ドメイン及び前記リンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向に下記順序：ａ）ＶＨ－リンカー－ＶＬ、ｂ）ＶＬ－リンカー－ＶＨのうちの一方を有し、ここで、前記リンカーは、長さが１５及び２５個のアミノ酸、好ましくは、２０個のアミノ酸のポリペプチドである。

加えて、これらの一本鎖Ｆａｂ分子を、システイン残基の取り込みを介して、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間、ＶＨドメイン内又はＶＬドメイン内にジスルフィド結合を取り込むことによりさらに安定化させることができる。Ｎ末端という用語は、ポリペプチド鎖の最初のアミノ酸を示し、一方、Ｃ末端という用語は、ポリペプチド鎖のＣ末端の最後のアミノ酸を示す。したがって、本発明の実施態様は、１つ以上のｓｃＦｖがジスルフィド結合を形成するための追加のシステイン残基を含むものである。

添付の実施例において実証されているように、本発明者らは、Ｎ末端からＣ末端へのＶＬ－ＶＨ配向を有するＦＡＰｓｃＦｖが本発明の結合分子において、ターゲット細胞においてＣＤ１３７架橋を誘引するように機能することができることを示した。Ｎ末端からＣ末端へのＶＨ－ＶＬ配向を有するＦＡＰｓｃＦｖも機能することができるが、その活性は、この配向において低下する場合がある。したがって、本発明の好ましい実施態様は、その順序がＮ末端からＣ末端にＶＬ－ＶＨである場合である。

本発明のさらに好ましい実施態様は、１つ以上のｓｃＦｖがペプチドリンカー、好ましくは、約４～２０個のアミノ酸の長さを有するペプチドリンカーにより、Ｉｇ分子に融合されているものである。好ましくは、ｓｃＦｖは、Ｉｇ分子の重鎖のＣ末端に融合される。好ましくは、Ｉｇ分子は、ＩｇＧである。

ｓｃＦｖ分子をＩｇＧ分子の重鎖のＣ末端に連結させる方法は、当技術分野において周知である。典型的には、グリシン及びセリンアミノ酸の小さなリンカー配列（ＧＳミニリンカーと呼ばれる）が使用される。リンカー中のアミノ酸の数を４（ＧＧＧＳ）（配列番号：２７９）、６（ＧＧＳＧＧＳ）（配列番号：２８０）、１０（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）（配列番号：２８１）、２０（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）（配列番号：２８２）又はそれ以上まで変化させることができる。実際には、通常、リンカーは、目的のＩｇＧをコードする核酸分子（これは、本件では、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）結合部位のための重鎖の可変ドメインをコードする核酸を含むであろう）を、リンカー配列をコードする核酸分子により間隔を空けられた所望のｓｃＦｖをコードする核酸（これは、本件では、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）結合部位のための重鎖の可変ドメインをコードする核酸を含むであろう）と組み合わせることにより形成される。ついで、以下でさらに説明されるように、この完全なＨＣ－ｓｃＦｖコード核酸分子を発現ベクター内に配置し、完全なＩｇＧ重鎖－ｓｃＦｖ単一ポリペプチドが形成されるように、適切なホスト細胞に導入する。

好ましくは、ＧＳリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：２８２）である。

免疫グロブリン様結合分子は、抗体分子の特性に所望の影響を有する他の分子実体に（融合タンパク質として）融合しているか又は何らかの方法で（共有結合又は非共有結合により）連結していることができる。例えば、抗体分子の薬物動態特性、例えば、体液、例えば、血液における安定性、特に、一本鎖抗体又はドメイン抗体の場合における安定性を改善することが望ましい場合がある。この点に関して、特に、循環中のこのような抗体分子の半減期を延長するための多くの技術、例えば、ペグ化（ＷＯ第９８／２５９７１号、同第９８／４８８３７号、同第２００４０８１０２６号）、血清タンパク質、例えば、アルブミンに対して親和性を有する別の抗体分子に抗体分子を融合させもしくは何らかの方法で共有的に付着させること（ＷＯ第２００４０４１８６５号、同第２００４００３０１９号）又は血清タンパク質、例えば、アルブミンもしくはトランスフェリンの全部又は一部との融合タンパク質として抗体分子を発現させること（ＷＯ第２００１０７９２５８号）が開発されている。

天然の抗体のＦｃ領域は、多くのＦｃレセプターと相互作用するため、その結果、多くの重要な機能的能力（「エフェクター機能」と呼ばれる）が生じる。本発明の免疫グロブリン様結合分子は、可溶性Ｆｃガンマレセプター又は補体Ｃ１ｑによる意図しない架橋を回避するように操作されたＦｃ領域の一部を含有する。一実施態様では、このような抗体変異体は、親抗体よりＦｃガンマレセプター及び補体Ｃ１ｑに対する非常に低い親和性を有する。したがって、本発明の実施態様は、Ｉｇ分子が野生型Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃガンマレセプターもしくは補体レセプター又はその両方に対して低下した親和性を有するＦｃ変異体を含むものである。

本発明の更なる実施態様は、本発明の結合分子が新生児Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）とのその相互作用を最適化することにより、血清レベル（半減期）を改変するように操作されたＦｃ領域又はその関連部分を含む。

特異的ターゲット抗原に結合する結合部位を調製する方法は、当技術分野において周知である。当業者であれば、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）又は線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）ターゲット抗原に必要な特異性を有する結合部位を考案するために、これらの方法を容易に使用することができる。

抗体及び抗体フラグメントを生成する方法は、当技術分野において周知である。例えば、抗体は、抗体分子のｉｎｖｉｖｏ産生の誘引、免疫グロブリンライブラリのスクリーニング（Orlandi et al, 1989. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:3833-3837；Winter et al 1991, Nature 349:293-299）又は培養中の細胞系統によるモノクローナル抗体分子の生成を利用する幾つかの方法のいずれか１つにより生成することができる。これらは、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術及びエプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）－ハイブリドーマ技術（Kohler et al 1975. Nature 256:4950497；Kozbor et al 1985. J. Immunol. Methods 81 :31 -42；Cote et al 1983. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:2026-2030；Cole et al 1984. Mol. Cell. Biol. 62:109-120）を含むが、これらに限定されない。

これらの方法を使用して、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）又は線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）ターゲット抗原に必要な特異性を有する結合部位を有する抗体を調製することは、当業者にとって日常的であろう。このような抗体からの結合ドメインの単離は、日常的な実務であり、実際に、使用することができる方法についての更なる情報は、添付の実施例において提供される。

本発明者らは、以下に列挙される本発明のＣＤ１３７及びＦＡＰについての例示的な抗原結合部位を利用して、特異的ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）／線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）免疫グロブリン様結合分子を調製した。これらは、添付の実施例において検討されている。

非限定的な例として、二重特異性分子を、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に特異的な例示的な抗原結合部位を使用して調製し、ＣＤ１３７＃１、ＣＤ１３７＃２、ＣＤ１３７＃３、ＣＤ１３７＃４、ＣＤ１３７＃５、ＣＤ１３７＃６、ＣＤ１３７＃７、ＣＤ１３７＃８、ＣＤ１３７＃９、ＣＤ１３７＃１０である。

非限定的な例として、二重特異性分子を、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的な例示的な抗原結合部位を使用して調製し、これらをＦＡＰ＃１、ＦＡＰ＃２、ＦＡＰ＃３、ＦＡＰ＃４及びＦＡＰ＃５と呼ぶ。

特異的抗原結合部位のアミノ酸配列は、本説明及び配列表に提供される。

以下に、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）又は線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）についての特異的結合部位を含む本発明の好ましい実施態様の詳細を提供する。

疑義を回避するために、本発明の第１の態様について以下に列記された各特定の実施態様はそれぞれ、本発明の独立した態様であると考えることもできる。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：２０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：３０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：３５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：４５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：５０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：５５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：６０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：６５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃７である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：７０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：７５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃７である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：８０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：８５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９である。好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：９０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：９５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９である。本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：１００のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１０５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃１である。

好ましくは、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１０６のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃１である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

好ましくは、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

好ましくは、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃４である。

好ましくは、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１３３のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１３７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃４である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

好ましくは、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃１である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１０６のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃１である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃７であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃１である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：７０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：７５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１０６のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃７であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃１である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃４である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１３３のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１３７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃４である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃７であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃４である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：７０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：７５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１３３のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１３７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃７であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃４である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：２０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：２０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：３０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：３５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：３０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：３５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：３０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：３５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：３０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：３５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：４５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：４５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：４５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：５０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：５５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：５０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：５５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：５０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：５５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：６０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：６５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：６０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：６５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：６０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：６４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：８０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：８５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：８０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：８５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：８０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：８５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：９０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：９５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：９０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：９５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：９０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：９５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：１００のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１０５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：１００のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１０５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の結合分子の好ましい実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、ここで、重鎖ＣＤＲは、配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲは、配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

好ましくは、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、配列番号：１００のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１０５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含み、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む。この実施態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。上記は、本発明の結合分子に使用することができるＣＤ１３７及びＦＡＰに特異的な抗原結合部位の具体的な組み合わせである。

これらの実施態様それぞれにおいて、抗原結合部位ＣＤ１３７を含有する可変重鎖は、ヒト重鎖定常領域に融合される。例えば、ＩｇＧ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ又はＩｇＭである。好ましくは、ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が使用される。

本発明の更なる実施態様は、抗原結合部位ＣＤ１３７を含有する可変軽鎖がヒト軽鎖定常領域カッパ又はラムダに融合される場合である。好ましくは、ヒトカッパの軽鎖定常領域が使用される。

野生型ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域についての例示的な配列は、配列番号：２８３に提供され、ＩｇＧ１ＫＯは、配列番号：２８４に提供される。

ヒトカッパの軽鎖定常領域についての例示的な配列は、配列番号：２８５に提供される。

以下に、本発明の結合分子を提供する。本発明の特異的分子はそれぞれ、ＣＤ１３７に特異的に結合する可変重鎖ドメインのアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含み、ＦＡＰに特異的に結合するｓｃＦｖも含み、ＣＤ１３７に特異的に結合する可変軽鎖ドメインのアミノ酸配列を含む抗体軽鎖を含む、改変免疫グロブリン分子を含む。

本発明の更なる態様は、配列番号：１５１のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃１である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１５３のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃７であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃１である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１５５のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃４である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１５７のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１５８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃７であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃４である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１５９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１６４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１６９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１７０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃２であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１７４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１７５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１７９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１８４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃３であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１８９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１９４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：１９５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の更なる態様は、配列番号：１９９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２００のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃４であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２０４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２０５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２０９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２１０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２１４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２１５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃５であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２１９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２２０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２２４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２２５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２２９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２３０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃６であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２３４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２３５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２３９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２４４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２４５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃８であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２４９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２５０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、＃５である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２５４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２５９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２６０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃９であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２６４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２６５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃５である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２６９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２７０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃２である。

本発明の更なる態様は、配列番号：２７４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖と、配列番号：２７５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、免疫グロブリン様結合分子を提供する。この態様では、ＣＤ１３７に特異的な抗原結合部位は、ＣＤ１３７＃１０であり、ＦＡＰに特異的な抗原結合部位は、ＦＡＰ＃３である。

本発明の更なる態様は、本発明の結合分子をコードする核酸分子又はこのような核酸分子を含有する発現ベクターを提供する。

一部の実施態様では、本発明の結合分子は、重鎖及び軽鎖ポリペプチドを含む。当業者であれば理解することができるように、重鎖ポリペプチド、軽鎖ポリペプチド又は重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドをコードする核酸分子を容易に調製することができる。

軽鎖及び重鎖をコードする核酸分子を、標準的な方法を使用して、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、化学的にかつ酵素的に合成することができる。まず、適切なオリゴヌクレオチドを、合成遺伝子を産生するのに使用することができる当技術分野において公知の方法（例えば、Gait, 1984）により合成することができる。オリゴヌクレオチドから合成遺伝子を生成する方法は、当技術分野において公知である（例えば、Stemmer et al., 1995；Ye et al., 1992；Hayden and Mandecki, 1988；Frank et al., 1987）。

本発明の核酸分子は、配列表に示されたポリペプチド配列をコードするＤＮＡ分子を含むが、これに限定されない。また、本発明は、ＷＯ第２００７／０４２３０９号に定義されているように、高ストリンジェンシー結合及び洗浄条件下で、配列表に示されたポリペプチド配列をコードするＤＮＡ分子にハイブリダイゼーションする核酸分子に関する。好ましい分子（ｍＲＮＡの観点から）は、本明細書に記載されたＤＮＡ分子のうちの１つと少なくとも７５％又は８０％（好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも８５％、最も好ましくは、少なくとも９５％）の相同性又は配列同一性を有するものである。例として、真核細胞における抗体の発現を考慮して、配列表に示されたＤＮＡ配列は、真核細胞におけるコドン利用に一致するように設計されている。E. coliにおいて抗体を発現させることが所望される場合、これらの配列をE. coliのコドン利用に一致するように変更することができる。本発明のＤＮＡ分子の変異体を例えば、ＷＯ第２００７／０４２３０９号に記載されているように、数種類の方法で構築することができる。

本明細書で使用する場合、「同一」又は「％同一性」という用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈において、最大の対応のために比較され、アライメントされた場合、同じであるか又は特定の割合の同じヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を有する、２つ以上の配列又はサブ配列を指す。％同一性を決定するために、配列は、最適な比較目的のためにアライメントされる（例えば、ギャップを第２のアミノ酸又は核酸配列との最適なアライメントのために、第１のアミノ酸又は核酸配列の配列に導入することができる）。ついで、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置のアミノ酸残基又はヌクレオチドが比較される。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドにより占められる場合には、分子は、その位置で同一である。２つの配列間の％同一性は、配列により共有される同一位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一位置の数／位置の合計数（例えば、重複位置）×１００）。一部の実施態様では、比較される２つの配列は、ギャップが配列内に適切に導入された後、同じ長さである（例えば、比較される配列を超えて伸長する更なる配列を除外する）。例えば、可変領域配列が比較される場合、リーダー及び／又は定常ドメイン配列は考慮されない。２つの配列間の配列比較のために、「対応する」ＣＤＲは、両方の配列中の同じ位置にあるＣＤＲ（例えば、各配列のＣＤＲ－Ｈ１）を指す。

２つの配列間の％同一性又は％類似性の決定を、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。２つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877におけるように改変されたKarlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索をＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２により行い、目的のタンパク質をコードする核酸に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索をＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３により行い、目的のタンパク質に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップアラインメントを得るために、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴをAltschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402に記載されているように利用することができる。代替的には、ＰＳＩ－Ｂｌａｓｔを使用して、分子間の遠い関係を検出する反復検索を行うことができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴ及びＰＳＩ－Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、各プログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、Myers and Miller, CABIOS(1989)のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティー及び４のギャップペナルティーを使用することができる。配列分析のための更なるアルゴリズムは当技術分野において公知であり、Torellis and Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5に記載されているＡＤＶＡＮＣＥ及びＡＤＡＭ並びにPearson and Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8に記載されているＦＡＳＴＡを含む。ＦＡＳＴＡ内では、ｋｔｕｐは、検索の感度及び速度を設定する制御オプションである。ｋｔｕｐ＝２の場合、比較される２つの配列における類似領域は、アライメントされた残基ペアを見ることにより見出され、ｋｔｕｐ＝１の場合、単一のアライメントされたアミノ酸が検査される。ｋｔｕｐをタンパク質配列について２もしくは１又はＤＮＡ配列について１～６に設定することができる。ｋｔｕｐが指定されていない場合のデフォルトは、タンパク質について２であり、ＤＮＡについて６である。代替的には、タンパク質配列アラインメントをHiggins et al., 1996, Methods Enzymol. 266:383-402に記載されているＣＬＵＳＴＡＬＷアルゴリズムを使用して行うことができる。

本発明の更なる態様は、先の特許請求の範囲のいずれか一項の結合分子の製造方法であり、
（ａ）本発明のホスト細胞を該分子の発現を可能にする条件下で培養することと、
（ｂ）該分子を回収することとを含む、方法を提供する。

本発明のこの態様の実施態様は、（ｃ）本発明の結合分子をさらに精製し／又は改変しかつ／又は製剤化する工程をさらに含む、該製造方法である。

本発明の結合分子を産生するために、全長の軽鎖及び／又は重鎖又はそのフラグメントをコードするＤＮＡ分子は、配列が転写及び翻訳制御配列に操作可能に連結されるように、発現ベクターに挿入される。

本発明の抗体を製造するために、当業者であれば、当技術分野において周知の非常に多様な発現系、例えば、Kipriyanov and Le Gall, 2004に概説されているものから選択することができる。

発現ベクターは、プラスミド、レトロウイルス、コスミド、ＥＢＶ由来エピソーム等を含む。発現ベクター及び発現制御配列は、ホスト細胞と適合するように選択される。抗体軽鎖遺伝子及び抗体重鎖遺伝子を別々のベクターに挿入することができる。特定の実施態様では、両ＤＮＡ配列が、同じ発現ベクターに挿入される。都合の良いベクターは、任意のＶＨ又はＶＬ配列を上記されたように、容易に挿入し、発現させることができるように操作された適切な制限部位を有し、機能的に完全なヒトＣＨ又はＣＬ免疫グロブリン配列をコードするベクターである。定常鎖は、通常、抗体軽鎖についてカッパ又はラムダであり、抗体重鎖について、任意のＩｇＧアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）又はアレル変異体を含む他の免疫グロブリンであることができるが、これらに限定されない。

また、リコンビナント発現ベクターにより、ホスト細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードすることもできる。シグナルペプチドが、成熟抗体鎖ＤＮＡのアミノ末端にインフレームで連結されるように、抗体鎖をコードするＤＮＡをベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は非免疫グロブリンタンパク質由来の異種ペプチドであることができる。代替的には、抗体鎖をコードするＤＮＡ配列は、シグナルペプチド配列を予め含有している場合がある。

リコンビナント発現ベクターは、抗体鎖をコードするＤＮＡ配列に加えて、プロモーター、エンハンサー、末端及びポリアデニル化シグナルを含むレギュラトリー配列並びにホスト細胞における抗体鎖の発現を制御する他の発現制御要素を有する。プロモーター配列（ほ乳類細胞における発現について例示される）の例は、（ＣＭＶ）（例えば、ＣＭＶ Simian Virus 40（ＳＶ４０）（例えば、ＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、ポリオーマに由来するプロモーター及び／又はエンハンサー並びに強力なほ乳類プロモーター、例えば、ネイティブな免疫グロブリン及びアクチンプロモーターである。ポリアデニル化シグナルについての例は、ＢＧＨポリＡ、ＳＶ４０後期又は初期ポリＡである。代替的には、免疫グロブリン遺伝子の３’ＵＴＲ等を使用することができる。

また、リコンビナント発現ベクターは、ホスト細胞におけるベクターの複製をレギュレーションする配列（例えば、複製起点）及び選択マーカー遺伝子を有することもできる。本発明の分子の重鎖もしくはその抗原結合部及び／又は軽鎖もしくはその抗原結合部をコードする核酸分子並びにこれらのＤＮＡ分子を含むベクターをリポソーム媒介性トランスフェクション、ポリカチオン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、マイクロインジェクション、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション又はウイルスベクターによる移入を含む当技術分野において周知のトランスフェクション法に従って、ホスト細胞、例えば、細菌細胞又は高等真核細胞、例えば、ほ乳類細胞に導入することができる。

好ましくは、重鎖及び軽鎖をコードする核酸分子は、ホスト細胞、好ましくは、ほ乳類細胞に同時トランスフェクションされる２つのベクター上に存在する。

したがって、本発明の更なる態様は、重鎖をコードする核酸分子を含む発現ベクター及び軽鎖をコードする核酸分子を含む発現ベクターを含む、ホスト細胞を提供する。

発現のためのホストとして利用可能なほ乳類細胞系統は、当技術分野において周知であり、特に、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ、ＣＨＯ－ＤＧ４４）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２／０細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒトガン細胞（例えば、ＨｅｐＧ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞又は任意のこのような細胞系統の派生体／子孫を含む。ヒト、マウス、ラット、サル及びげっ歯類細胞系統を含む（が、これらに限定されない）他のほ乳類細胞又は酵母、昆虫及び植物細胞含む（が、これらに限定されない）他の真核細胞又は原核細胞、例えば、細菌を使用することができる。本発明の結合分子は、ホスト細胞において結合分子の発現を可能にするのに十分な期間、ホスト細胞を培養することにより産生される。

抗体分子は、好ましくは、分泌ポリペプチドとして培養培地から回収されるか又は例えば、分泌シグナルなしで発現される場合、ホスト細胞ライゼートから回収される場合がある。抗体の実質的に均質な調製物が得られるように、リコンビナントタンパク質及びホスト細胞タンパク質に使用される標準的なタンパク質精製方法を使用して、抗体分子を精製する必要である。例として、本発明の結合分子を得るのに有用な最先端の精製方法は、第１の工程として、培養培地又はライゼートからの細胞及び／又は粒子状細胞デブリの除去を含む。ついで、抗体は、例えば、免疫親和性カラム又はイオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、Sephadexクロマトグラフィー、シリカ又はカチオン交換樹脂でのクロマトグラフィーにより、交雑可溶性タンパク質、ポリペプチド及び核酸から精製される。ＣＤ１３７及びＦＡＰ結合分子を得るための方法における最終工程として、精製された抗体分子を治療用途について以下に記載されているように、乾燥させ、例えば、凍結乾燥させることができる。

本発明の更なる態様は、医薬において使用するための、本発明の結合分子を提供する。

一態様では、本発明は、ＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子に関し、ここで、結合分子は、下記特性：
（ａ）１×１０－８M以下のＫ_ＤでヒトＣＤ１３７に結合する、
（ｂ）ヒトＣＤ１３７及びカニクイザルＣＤ１３７に結合する、
（ｃ）ＣＲＤ３エピトープ又はＣＲＤ２／３エピトープでヒト及びカニクイザルＣＤ１３７に結合する、
（ｄ）本明細書に記載された抗原結合分子のいずれかとのＣＲＤ３エピトープ又はＣＲＤ２／３エピトープでのヒト及びカニクイザルＣＤ１３７への結合を遮断しかつ／又はこの結合と競合する、
（ｄ）ＦＡＰ結合の不存在下では、ＣＤ１３７クラスター形成及びＴ細胞活性化を実質的に媒介しない、
（ｅ）（混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおける）Ｔ細胞増殖を増加させる、
（ｆ）ＭＬＲアッセイにおけるインターフェロンガンマ産生を増加させる、
（ｇ）ＭＬＲアッセイにおけるＩＬ－２分泌を増加させる、
（ｈ）ＣＤ１３７のＣＤ１３７Ｌへの結合を阻害しない、
（ｉ）抗原特異的記憶応答を刺激する、
（ｊ）抗体応答を刺激する、
（ｋ）ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍細胞成長を抑制する、及び
（ｌ）ｉｎｖｉｖｏでの肝毒性を示さない
のうちの少なくとも１つを示す。

好ましくは、結合分子は、１×１０^-８M～１×１０^-１０MのＫＤでヒト及びカニクイザルＣＤ１３７並びに１×１０^-８M及び１×１０^-１０MのＫＤでヒト、カニクイザル及びマウスＦＡＰタンパク質により弱く結合する。

さらに別の態様では、本発明は、ＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子を提供し、ここで、ＣＤ１３７結合部は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、
（ａ）重鎖可変領域は、配列番号：１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０及び１００からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含み、
（ｂ）軽鎖可変領域は、配列番号：１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５及び１０５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含み、
（ｃ）抗体は、１×１０－８M以下のＫ_ＤでヒトＣＤ１３７に結合し、
（ｄ）抗体は、ＦＡＰの不存在下で、ＣＤ１３７活性化を実質的に媒介しない。

本発明の好ましい実施態様は、１０^－１０MのＫ_ＤでヒトＣＤ１３７に結合し、１０^－１０MのＫ_ＤでカニクイザルＣＤ１３７に結合する。本発明の好ましい実施態様は、１０^－１０MのＫ_ＤでヒトＦＡＰ、１０^－１０MのＫ_ＤでカニクイザルＦＡＰ及び１０^－９MのＫ_ＤでマウスＦＡＰに結合する。

さらに別の態様では、本発明は、ＣＤ１３７結合分子を提供し、ここで、ＣＤ１３７重鎖可変領域は、ヒトＩＧＨＶ３－７^＊０１生殖細胞系統配列に由来するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ここで、ＣＤ１３７結合分子は、配列番号：１０、２０、３０、４０、５０及び６０からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも７８％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

さらに別の態様では、本発明は、ＣＤ１３７結合分子を提供し、ここで、ＣＤ１３７軽鎖可変領域は、ヒトＩＧＫＶ１－ＮＬ１^＊０１生殖細胞系統配列に由来するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ここで、軽鎖可変領域は、配列番号：１５、２５、３５、４５、５５及び６５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む。

さらに別の態様では、本発明は、ＦＡＰ結合分子を提供し、ここで、ＦＡＰ重鎖可変領域は、ヒトＩＧＨＶ３－２３^＊０４生殖細胞系統配列に由来するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ここで、ＦＡＰ結合分子は、配列番号：１０６、１１５、１２４、１３３又は１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも７８％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

さらに別の態様では、本発明は、ＦＡＰ結合分子を提供し、ここで、ＦＡＰ軽鎖可変領域は、ヒトＩＧＫＶ３－１１^＊０１生殖細胞系統配列に由来するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ここで、ＦＡＰ結合分子は、配列番号：１１０、１１９、１２８、１３７又は１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも７８％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

さらに別の態様では、本発明は、ＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子を提供し、ここで、ＦＡＰ結合部は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、
（ａ）重鎖可変領域は、配列番号：１０６、１１５、１２４、１３３及び１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含み、
（ｂ）軽鎖可変領域は、配列番号：１１０、１１９、１２８、１３７及び１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含み、
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の抗体は、１×１０－７M以下のＫ_ＤでヒトＣＤ１３７に結合し、
（ｄ）（ａ）～（ｃ）の抗体は、ＦＡＰ架橋の不存在下で、ヒトＣＤ１３７Ｌ又はＣＤ１３７に実質的に結合しない。

さらに別の態様では、本発明は、ＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子を提供し、ここで、ＦＡＰ結合部は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、
（ａ）重鎖可変領域は、配列番号：１０６、１１５、１２４、１３３及び１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含み、
（ｂ）軽鎖可変領域は、配列番号：１１０、１１９、１２８、１３７及び１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含み、
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の抗体は、アミノ酸８７～１１８（配列番号：３５２）間の細胞外ドメインＣＲＤ３におけるヒトＣＤ１３７上のエピトープに結合し又は
（ｄ）（ａ）及び（ｂ）の抗体は、アミノ酸４６～１１７（配列番号：３５６）間の細胞外ドメインＣＲＤ２－３におけるヒトＣＤ１３７上のエピトープに結合し、
（ｅ）（ａ）～（ｃ）の抗体は、ＦＡＰ結合の不存在下で、ＣＤ１３７クラスター形成及びＴ細胞活性化を実質的に媒介しない。

好ましい実施態様では、上記されたＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子は、下記特性：
（ａ）抗体が（ＭＬＲアッセイにおける）Ｔ細胞増殖を増加させる、
（ｂ）抗体が（ＭＬＲアッセイにおける）インターフェロンガンマ産生を増加させる、又は
（ｃ）抗体が（ＭＬＲアッセイにおける）ＩＬ－２分泌を増加させる
のうちの少なくとも１つをさらに含む。

加えて又は代替的に、ＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子は、上記列記された１つ以上の他の特徴を含むことができる。

本発明の更なる態様は、ガンの処置又は治療における使用のための、本発明の結合分子を提供する。本明細書で使用する場合、「処置」又は「治療」（並びにそのバリエーション、例えば、「処置する」又は「処置すること」、「治療的」）は、処置される個体の自然経過を変化させる試みにおける臨床的介入を指し、臨床病理学の経過の間に行うことができる。処置の望ましい効果は、疾患の発生又は再発の制限、症状の緩和及び疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の遅延、病状の改善又は緩和並びに寛解又は予後の改善を含むが、これらに限定されない。一部の実施態様では、本発明の分子は、疾患の発症を遅延させ又は疾患の進行を遅らせるのに使用される。一態様では、本発明は、Ｔ細胞浸潤／ＦＡＰ陽性腫瘍の処置に使用される。ガンは、結腸直腸ガン（ＣＲＣ）（例えば、結腸直腸腺ガン）、胃ガン（ＧＣ）（例えば、胃腺ガン）、膵臓ガン（ＰＡＣ）（例えば、膵臓腺ガン）、肺ガン（ＬＣ）（例えば、肺扁平上皮ガン、肺腺ガン、非小細胞肺ガン（ＮＳＣＬＣ））、頭頸部ガン、尿路上皮ガン又はメラノーマであることが好ましいが、全てのガンの９０％を構成する他の固形悪性腫瘍が企図される。これらの型の浸潤しにくい腫瘍に対する新規な処置のための満たされていない臨床的必要性のためである。

上記されたように、本発明者らは、本発明の結合分子がＴ細胞のＦＡＰ＋組織制限ＣＤ１３７活性化及び腫瘍殺傷に非常に有用性を有し、したがって、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）の両方の共局在発現を有するガンの治療に使用することができることを特定した。特定の腫瘍がＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）の共局在発現を有するかどうかを特定する方法は、当技術分野において周知である。例えば、免疫組織化学を、腫瘍組織がＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を発現するかどうかを決定するのに使用することができ、したがって、本発明の結合分子での処置に適切であろう。

ＣＲＣは、ＩＣＤ－１０に列記されている明確な悪性腫瘍疾患であり、世界的にガンの罹患率及び死亡率の主要原因の１つである。ＣＲＣ患者の約２５％は、明白な転移を呈し、転移疾患が、新たに診断された患者の４０～５０％に発生する。化学療法における近年の改善により、転移性ＣＲＣの生存期間は延長したが、ほとんどの患者は、その疾患により死亡するであろう。したがって、この疾患を処置するための更なる治療剤が大いに必要とされている。

更なる態様では、本発明は、ガンの治療又は予防のための方法であって、有効量の上記されたＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子のいずれかをヒトに投与することを含む、方法に関する。

好ましい適用様式は、注入又は注射（静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、皮内）による非経口であるが、例えば、吸入、経皮、鼻腔内、頬側、経口による他の適用様式も適用可能である場合がある。

投与される分子の「治療上有効量」は、ガンの臨床症状を予防し、改善し又は治療するのに必要な最少量、特に、これらの障害に有効な最少量である。

１日当たりの適用可能な本発明の抗体の用量範囲は、通常、１μg/kg～１００mg/kg、好ましくは、０．１mg/kg～２０mg/kgである。

実際の薬学上有効量又は治療用量は、当然、当業者に公知の要因、例えば、患者の年齢及び体重、投与経路並びに疾患の重症度により決まるであろう。いずれの場合でも、組み合わせは、患者の固有の状態に基づいて薬学上有効量が送達されることを可能にする用量及び様式で投与されるであろう。

本発明の結合分子を単独で又は他の薬理学上有効成分、例えば、最先端又は標準治療の化合物、例えば、細胞増殖阻害物質又は細胞傷害性物質、細胞増殖阻害剤、血管新生物質、ステロイド、免疫モデュレーター／チェックポイント阻害剤等と併用で使用することできる。

したがって、本発明の更なる態様は、本発明の実施態様のいずれか１つの結合分子を薬学的に許容し得る担体及び場合により、１つ以上の更なる有効成分と共に含む、医薬組成物を提供する。

本発明の更なる態様は、ガンの治療に使用するための、本発明の結合分子を提供し、ここで、前記治療は、１つ以上の薬理学上活性物質を含む。

更なる実施態様では、本発明は、上記された抗ＣＤ１３７／ＦＡＰの実施態様のいずれか１つの抗体もしくは抗原結合フラグメント又は医薬組成物又は疾患の処置に使用するための、抗ＣＤ１３７／ＦＡＰ抗体もしくは抗原結合フラグメントの使用を提供し、ここで、この使用は、ガン及び／又は腫瘍の治療のためのものである。

本発明の更なる態様は、ガン及び／又は腫瘍の治療のための医薬の製造における１つ以上の有効成分の使用を提供し、ここで、前記医薬は、本発明の実施態様のいずれか１つの結合分子を含む。

本発明の結合分子と併用して投与することができる細胞増殖阻害性及び／又は細胞傷害性活性物質は、ホルモン、ホルモン類似物及び抗ホルモン、アロマターゼ阻害剤、ＬＨＲＨアゴニスト及びアンタゴニスト、成長因子（例えば、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、ヒト上皮成長因子（ＨＥＲ、例えば、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４）が含まれるが、これらに限定されない。ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４）及び肝細胞成長因子等）の阻害剤（この阻害剤は、例えば、（）成長因子抗体、（）成長因子レセプター抗体及びチロシンキナーゼ阻害剤である）、例えば、セツキシマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ニンテダニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ボスチニブ及びトラスツズマブ、代謝拮抗剤（例えば、葉酸拮抗剤、例えば、メトトレキサート、ラルチトレキセド、ピリミジン類似物、例えば、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ゲムシタビン、イリノテカン、ドキソルビシン、ＴＡＳ－１０２、カペシタビン及びゲムシタビン、プリン及びアデノシン類似物、例えば、メルカプトプリン、チオグアニン、クラドリビン及びペントスタチン、シタラビン（ａｒａＣ）、フルダラビン）、抗腫瘍抗生物質（例えば、アントラサイクリン）、プラチナ誘導体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン）、アルキル化剤（例えば、エストラムスチン、メクロレタミン、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ダカルバジン、シクロホスファミド、イホスファミド、テモゾロミド、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン及びロムスチン、チオテパ等）、抗有糸分裂剤（例えば、ビンカアルカロイド、例えば、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン及びビンクリスチン等並びにタキサン、例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、ベバシズマブ、ラムシルマブ及びアフリベルセプトを含む血管新生阻害剤、チューブリン阻害剤、ＤＮＡ合成阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エピポドフィロトキシン、例えば、エトポシド等及びエトポフォス、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、ミトキサントロン）、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、Ａ－Ｒａｆ阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、Ｃ－Ｒａｆ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ｍＴＯＲＣ１／２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＰＩ３Ｋα阻害剤、二重ｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＳＴＫＴ３３阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＰＬＫ１阻害剤（例えば、ボラセルチブ）、ＣＤＫ９阻害剤を含むＣＤＫ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＰＴＫ２／ＦＡＫ阻害剤）、タンパク質タンパク質相互作用阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＢＲＤ４阻害剤、ＩＧＦ－１Ｒ阻害剤、Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤、Ｂｃｌ－２阻害剤、Ｂｃｌ－２／Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤、ＥｒｂＢレセプター阻害剤、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、Ｓｒｃ阻害剤、ラパマイシン類似物（例えば、エベロリムス、テルシロシムス、リダロリムス、シロリムス）、アンドロゲン合成阻害剤、アンドロゲンレセプター阻害剤、ＤＮＭＴ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ＡＮＧ１／２阻害剤、ＣＹＰ１７阻害剤、放射性医薬品、免疫療法剤、例えば、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ３及びＴＩＭ３結合分子／免疫グロブリン、例えば、イピリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ）並びに種々の化学療法剤、例えば、アミフォスチン、アナグレリッド、クロドロナット、フィルグラスチン、インターフェロン、インターフェロンアルファ、ロイコボリン、リツキシマブ、プロカルバジン、レバミゾール、メスナ、ミトタン、パミドロナート及びポルフィマー、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、Ｓｍａｃ及びＢＨ３模倣物、ｍｄｍ２－ｐ５３アンタゴニストを含むｐ５３機能を回復させる薬剤、Ｗｎｔ／ベータ－カテニンシグナル伝達経路の阻害剤並びに／又はサイクリン依存性キナーゼ９阻害剤を含むが、これらに限定されない。

ＰＤ－１シグナル伝達が、抗腫瘍免疫応答を逃れるために腫瘍により利用される重要なメカニズムであることを示唆する証拠が増えている（Dong, et al, 2002、Iwai et al, 2002、Shin and Ribas, 2015）。抗ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体による近年の臨床試験では、各種のガンを有する一部の患者において臨床的応答性が示されている。これらの免疫チェックポイント阻害剤により、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用が遮断され、刺激シグナルを回復させ、Ｔ細胞の活性化を促進する。Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞（ＴＩＬ）が多く、ＴＩＬは、ガン細胞を排除する強力な免疫応答を引き起こす場合がある。このような状況において、本発明のＣＤ１３７／ＦＡＰ分子により、腫瘍微小環境において、ＴＩＬを活性化しかつ／又はリクルートしかつ／又は維持することにより、ガン細胞の排除を増強することができる。残念なことに、現在の免疫療法処置に応答するのは、処置された患者全体の少数のみである。例えば、直腸結腸ガン（ＣＲＣ）細胞は、ＰＤ－Ｌ１の発現が少なく、ＭＳＳＣＲＣ（マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）腫瘍）におけるＰＤ－Ｌ１の発現は、主に腫瘍浸潤免疫細胞に限定されることが、Valentini et al.により報告されている（Oncotarget, 2018）。これにより、ＭＳＳＣＲＣ患者が抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に応答しなかったかという理由を説明することができた。このように、患者の応答率を潜在的に上昇させることができる治療法を開発することが最優先事項となっている。

研究から、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の存在（すなわち、「炎症性腫瘍（ｈｏｔｔｕｍｏｒ）」）又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の不存在（すなわち、「非炎症性腫瘍（ｃｏｌｄｔｕｍｏｒ）」）は、ＰＤ－１療法に対する応答を予測するのに重要であり、ＴＩＬの存在と種々の抗腫瘍療法中のより良好な患者アウトカムとを相関させることが示唆されている（Galon et al., 2006、Hwang et al., 2012、Mahmoud et al. 2011）。このため、本発明の一態様は、ＣＤ１３７／ＦＡＰ二重特異性分子と「非炎症性」腫瘍を「炎症性」にする治療法との併用である。例えば、本発明の実施態様は、ＰＤＬ－１阻害を弱める（かつ／又はチェックポイント遮断耐性を何らかの方法で克服する）ことができる免疫療法を、ＦＡＰ＋発現腫瘍を特異的にターゲットとするＣＤ１３７／ＦＡＰ二重特異性分子と併用する。これらの治療法の併用により、一方では、阻害が解除されるが、他方では、腫瘍部位への新たなＴ細胞浸潤が増加しかつ／又は腫瘍微小環境におけるＴ細胞の保持及び活性化が促進される（ｔｗｏ－ｐｒｏｎｇアプローチ）。治療法の併用により、いずれかの単独処置より良好な腫瘍制御がもたらされる。

上記を念頭に置いて、以下：
（ｉ）例えば、ＣＲＣ患者の処置のためのＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１剤を含む免疫療法剤、例えば、ペムブロリズマブ及びニボルマブ（以下で検討する）、
（ｉｉ）ＳＩＲＰα抗体（例えば、任意のＳＩＲＰアンタゴニスト、特に、抗体、好ましくは、例えば、参照により本明細書に組み入れられるＷＯ第２０１７／１７８６５３号に開示されているもの、同第２０２０００６８７５２号及び同第２０１９０２３３４７号に開示されている他の例）、
（ｉｉｉ）ＴｃＥｎｇａｇｅｒ（例えば、好ましくは、ＷＯ第２０１９２３４２２０号及びＥＰ第１９２０１２００．３号に開示されているもの）、
（ｉｖ）ＫＩＳＩＭＡワクチン（例えば、好ましくは、参照により本明細書に組み入れられるＷＯ第２０１６／１４６２６０号及び同第２０１８／０５５０６０号に開示されているもの）；
（ｖ）腫瘍溶解性ウイルス（例えば、好ましくは、特異的遺伝子カーゴを伴う又は伴わない水疱性口内炎ウイルス、例えば、参照により本明細書に組み入れられるＷＯ第２０１０／０４０５２６号及びＰＣＴ／ＥＰ第２０２０／０５１７０１号それぞれに開示されていれるＶＳＶ－ＧＰ及びＶＳＶ－ＣＣＬ２１）、
（ｖｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト（例えば、好ましくは、参照により本明細書に組み入れられるＷＯ第２０１８０６０３２３号及びＵＳ第１０，５３７，５９０号に開示されているもの）並びに
（ｖｉｉ）ＣＲＣの処置に使用される化学療法剤（５－フルオロウラシル、イリノテカン、ドキソルビシン及びＴＡＳ－１０２を含む）
から選択される薬剤との併用での本発明のＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子による処置が特に好ましい。

ＰＤ－１経路阻害剤は、本発明及びその実施態様の全ての意味において、ＰＤ－１とそのレセプターとの相互作用を阻害する化合物である。ＰＤ－１経路阻害剤は、好ましくは、ＰＤ－１レセプターにより媒介されるＰＤ－１経路シグナル伝達を障害することができる。ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１経路シグナル伝達と拮抗可能なＰＤ－１経路の任意のメンバーに対して向けられる任意の阻害剤であることができる。阻害剤は、好ましくは、ＰＤ－１レセプター、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２に対して向けられるＰＤ－１経路の任意のメンバーをターゲットとするアンタゴニスト抗体であることができる。また、ＰＤ－１経路阻害剤は、ＰＤ１リガンドの活性を遮断するＰＤ－１レセプターのフラグメント又はＰＤ－１レセプターであることもできる。

ＰＤ－１アンタゴニストは、当技術分野において周知であり、例えば、（参照により本明細書に組み入れられる）Li et al., Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1151に概説されている。任意のＰＤ－１アンタゴニスト、特に、抗体、例えば、Li et al.に開示されているもの及び本明細書において以下に開示される更なる抗体を本発明に従って使用することができる。好ましくは、本発明及びその全ての実施態様のＰＤ－１アンタゴニストが、下記抗体：ペンブロリズマブ（抗ＰＤ－１抗体）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１抗体）、ピジリズマブ（抗ＰＤ－１抗体）、ＰＤＲ－００１（抗ＰＤ－１抗体）、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４及びＰＤ１－５、好ましくは、本明細書において以下に開示されているＢＩ－７５４０１９（抗ＰＤ－１抗体）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、アベルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、デュルバルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）からなる群より選択される。

例えば、Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369(2):134-44に開示されているペンブロリズマブ（以前はラムブロリズマブとしても公知、商品名Keytruda、ＭＫ－３４７５としても公知）は、ＰＤ－１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体であり、Ｆｃ媒介性細胞殺傷を妨げるように設計されたＣ２２８Ｐに突然変異を含有する。ペンブロリズマブは、例えば、ＵＳ第８，３５４，５０９号及びＷＯ第２００９／１１４３３５号に開示されている。切除不能又は転移性メラノーマを患っている患者及び転移性ＮＳＣＬＣを有する患者の処置について、ＦＤＡにより承認されている。

ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４－９４－４、ＢＭＳ－９３６５５８又はＭＤＸ１１０６ｂ）は、検出可能な抗体依存性細胞殺傷性（ＡＤＣＣ）を欠いており、ＰＤ－１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブは、例えば、ＵＳ第８，００８，４４９号及びＷＯ第２００６／１２１１６８号に開示されている。切除不能又は転移性メラノーマ、転移性ＮＳＣＬＣ及び進行性腎細胞ガンを患っている患者の処置について、ＦＤＡにより承認されている。

ピジリズマブ（ＣＴ－０１１、Cure Tech）は、ＰＤ－１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピジリズマブは、例えば、ＷＯ第２００９／１０１６１１号に開示されている。

ＰＤＲ－００１又はＰＤＲ００１は、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２のＰＤ－１への結合を遮断する高親和性リガンド遮断ヒト化抗ＰＤ－１ＩｇＧ４抗体である。ＰＤＲ－００１は、ＷＯ第２０１５／１１２９００号及び同第２０１７／０１９８９６号に開示されている。

抗体ＰＤ１－１～ＰＤ１－５は、表４に示される配列により定義される抗体分子である。ここで、ＨＣは、（全長）重鎖を示し、ＬＣは、（全長）軽鎖を示す。

具体的には、本明細書において上記された抗ＰＤ－１抗体分子は、
（ＰＤ１－１）配列番号：６５２のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：６５３のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ＰＤ１－２）配列番号：６５４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：６５５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ＰＤ１－３）配列番号：６５６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：６５７のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ＰＤ１－４）配列番号：６５８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：６５９のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ＰＤ１－５）配列番号：６６０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号：６６１のアミノ酸配列を含む軽鎖
を有する。

アテゾリズマブ（Tecentriq、ＭＰＤＬ３２８０Ａとしても公知）は、ＰＤ－Ｌ１をターゲットとするファージ由来のヒトＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体であり、例えば、Deng et al. mAbs 2016;8:593-603に記載されている。尿路上皮ガンを患っている患者の処置について、ＦＤＡにより承認されている。

アベルマブは、完全ヒト抗ＰＤ－Ｌ１ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、例えば、Boyerinas et al. Cancer Immunol. Res. 2015; 3:1148-1157に記載されている。

デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）は、ＰＤ－Ｌ１に対して高い特異性を有するヒトＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体であり、例えば、Stewart et al. Cancer Immunol. Res. 2015;3:1052-1062又はIbrahim et al. Semin. Oncol. 2015; 42:474-483に記載されている。

Li et al.（上記）に開示さているか又は臨床試験中であることが公知の更なるＰＤ－１アンタゴニスト、例えば、ＡＭＰ－２２４、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＭＳ－９３６５５９、ＪＳ００１－ＰＤ－１、ＳＨＲ－１２１０、ＢＭＳ－９３６５５９、ＴＳＲ－０４２、ＪＮＪ－６３７２３２８３、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ及びＭＳＢ００１０７１８Ｃを上記言及されたアンタゴニストの代わりに又はそれに加えて使用することができる。

本明細書で使用する場合、ＩＮＮは、オリジネーター抗体（ｏｒｉｇｉｎａｔｏｒａｎｔｉｂｏｄｙ）と同じ又は実質的に同じアミノ酸配列を有する全てのバイオシミラー抗体も包含することを意味し、米国において４２ＵＳＣ §２６２サブセクション（ｋ）及び他の管轄区域における同等の規則の下で認可されたバイオシミラーを含むが、これらに限定されない。

上記列記されたＰＤ－１アンタゴニストは、それらの各製造、治療的使用及び特性と共に当技術分野において公知である。

一実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ペンブロリズマブである。

別の実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ニボルマブである。

別の実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ピジリズマブである。

別の実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、アテゾリズマブである。

別の実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、アベルマブである。

別の実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、デュルバルマブである。

別の実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤＲ－００１である。

好ましい実施態様では、本発明のタンパク質、例えば、ＣＤ１３７＃１／ＦＡＰ＃１、ＣＤ１３７＃７／ＦＡＰ＃１、ＣＤ１３７＃１／ＦＡＰ＃４、ＣＤ１３７＃７／ＦＡＰ＃４、ＣＤ１３７＃２／ＦＡＰ＃５、ＣＤ１３７＃２／ＦＡＰ＃２、ＣＤ１３７＃２／ＦＡＰ＃３、ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃５、ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃２、ＣＤ１３７＃３／ＦＡＰ＃３、ＣＤ１３７＃４／ＦＡＰ＃５、ＣＤ１３７＃４／ＦＡＰ＃２、ＣＤ１３７＃４／ＦＡＰ＃３、ＣＤ１３７＃５／ＦＡＰ＃５、ＣＤ１３７＃５／ＦＡＰ＃２、ＣＤ１３７＃５／ＦＡＰ＃３、ＣＤ１３７＃６／ＦＡＰ＃５、ＣＤ１３７＃６／ＦＡＰ＃２、ＣＤ１３７＃６／ＦＡＰ＃３、ＣＤ１３７＃８／ＦＡＰ＃５、ＣＤ１３７＃８／ＦＡＰ＃２、ＣＤ１３７＃８／ＦＡＰ＃３、ＣＤ１３７＃９／ＦＡＰ＃５、ＣＤ１３７＃９／ＦＡＰ＃２及びＣＤ１３７＃９／ＦＡＰ＃３、ＣＤ１３７＃１０／ＦＡＰ＃５、ＣＤ１３７＃１０／ＦＡＰ＃２、ＣＤ１３７＃１０／ＦＡＰ＃３は、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４及びＰＤ１－５からなる群より選択されるＰＤ－１アンタゴニストと併用してガンの処置に使用される。

治療に使用されるために、本発明の結合分子は、動物又はヒトへの投与を容易にするのに適した医薬組成物に製剤化される。抗体分子の典型的な製剤を凍結乾燥もしくは何等かの方法で乾燥させた製剤又は水溶液又は水性もしくは非水性懸濁液の形態で、抗体分子を生理学的に許容し得る担体、賦形剤又は安定剤と混合することにより調製することができる。担体、賦形剤、改質剤又は安定剤は、利用される用量及び濃度で無毒である。それらは、バッファー系、例えば、ホスファート、シトラート、アセタート及び他の無機もしくは有機酸及びそれらの塩；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤、例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール及びｍ－クレゾール；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドンもしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリシン；グルコース、マンノース、スクロース、トレハロース、デキストリンもしくはデキストランを含む単糖類、二糖類、オリゴ糖類もしくは多糖類及び他の淡水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールもしくはソルビトール；塩形成カウンターイオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）並びに／又はイオン性もしくは非イオン性界面活性剤、例えば、TWEEN（商標）（ポリソルベート）、PLURONICS（商標）もしくは脂肪酸エステル、脂肪酸エーテルもしくは糖エステルを含む。また、有機溶媒、例えば、エタノール又はイソプロパノールを抗体製剤に含有させることもできる。また、賦形剤は、放出改変又は吸収改変機能を有する場合がある。

ここから、本発明を下記非限定的な実施例により説明する。

実施例１：腫瘍微小環境との関連でのヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を認識する結合分子の設計
本発明者らは、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）と結合し、腫瘍間質におけるＣＤ１３７Ｔ細胞活性化及びＦＡＰ発現線維芽細胞へのリクルートをターゲットとする、結合分子を開発した。使用された分子設計は、１つのターゲット抗原についての特異性を有するＩｇＧ抗体（「マスター抗体」と呼ばれる）を有し、異なる特異性のｓｃＦｖが重鎖のＣ末端に連結している。設計の概略を図１Ａに示す。作用モードの概略を図１Ｂに示す。

好ましくは、結合分子は、二重特異性かつ四価である。

二重特異性分子は、ｓｃＦｖの可変重鎖（ＶＨ）ドメインと可変軽鎖（ＶＬ）ドメインとの間に柔軟なペプチド配列を含有し、ｓｃＦｖドメインは、更なる一連のリンカーを介して、マスターＩｇＧ抗体に連結している。１つの構成において、ｓｃＦｖは、ＶＬドメインがｓｃＦｖの「Ｎ末」端を形成し、このため、マスター抗体の重鎖のＣ末端に融合され、一方、ＶＨがｓｃＦｖのＣ末端、実際には、重鎖ポリペプチド全体を形成するように配向される。ただし、この「Ｎ－ＶＬ－ＶＨ－Ｃ」構造を逆にすることができる、すなわち、「Ｎ－ＶＨ－ＶＬ－Ｃ」とすることができると理解することができる。

下記実施例により、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性分子を生成するのに使用される方法並びにこれらの分子のフォーマット及び生物学的活性におけるバリエーションを説明する。

実施例２：ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）を認識する結合ドメインの調製
理解することができるように、ヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に結合する二重特異性分子を調製するには、個々のターゲット抗原に結合する可変ドメインを得る必要がある。

ａ．ＣＤ１３７についての免疫化キャンペーン
ヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に結合する二重特異性分子を調製するために、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）免疫マウスに由来するクローンハイブリドーマ又は単一Ｂ細胞をｉｎｖｉｔｒｏで培養した。上清をヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）に対する反応性についてスクリーニングした。ついで、免疫グロブリン（Ｉｇ）ＶＨ及びＶＬ遺伝子を特定された陽性クローンから増幅した。

簡潔に、野生型ＣＤ１マウスをヒト及びカニクイザルＣＤ１３７－Ｆｃ＿Ｈｉｓタンパク質（それぞれ配列番号：３４９及び３５９）で免疫化し、完全フロイントアジュバントを、抗体応答を増強するために、種々の時点で使用した。血清学的検査を、抗原としてヒト及びカニクイザルＣＤ１３７－Ｆｃ－Ｈｉｓタンパク質を使用するＥＬＩＳＡにより評価した。血清学的に陽性のマウスには、脾臓Ｂ細胞単離の１週間前に最終ブーストを与えた。マウスの脾臓を回収し、全脾細胞を回収するように処理した。全ての手順をＩＡＣＵＣにより承認されたプロトコールに従って行った。

ＣＤ１３７についてのバインダーを特定するために、６つの選別されたマウス脾臓を単離し、回収された脾細胞を標準的なＳＢＣ抗体生成手法に従って染色した。最初に、回収された脾細胞を製造業者の説明書に従って、マウスpan-T Dynabeads（Invitrogen 114.43D）を使用して、Ｔ細胞を枯渇させた。ついで、枯渇させた細胞調製物を、１nM ヒトＣＤ１３７＿ｈｕＴＮＦＲＳＦ９＿Ｈｕ－Ｈｉｓ開裂性＿タグ＿ビオチン（配列番号：３３５）及び１nM ＭｕＧＩＰＲ－ｈｕ．ＦＣ－ＡＦ６４７と共に、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＩｇＤ、ＩｇＭ、Ｂ２２０及び生きたメモリーＢ細胞の特定を支援するために染色に含ませたＳｙｔｏｘｂｌｕｅに対する蛍光色素コンジュゲート抗体と合わせてインキュベーションした。ストレプトアビジン－ＰＥをビオチン化ヒトＣＤ１３７に結合するＢ細胞の検出のために加えた。ついで、ヒトＣＤ１３７抗原陽性メモリーＢ細胞を３８４ウェルプレートに単独で選別し、３７℃、５％ＣＯ２で７日間培養した。Ｂ細胞上清を、製造業者の説明書に従って、ＡｌｐｈａＬＩＳＡによりビオチン化ヒト及びカニクイザルＣＤ１３７タンパク質への結合についてスクリーニングした。

ＣＤ１３７特異的バインダーを特定するために、ヒトＦｃにのみ反応した抗体を、カウンターＦｃベイトＭｕＧＩＰＲ－ｈｕ．ＦＣ－ＡＦ６４７及びｈｕＣＤ１３７ベイトｈｕＴＮＦＲＳＦ９＿Ｈｉｓ－ビオチンを使用して除去した。両方とも、ＣＤ１マウスＢ細胞脾細胞、ＦＭＯ１及びＦＭＯ２それぞれとは独立して良好な結合を示す。二重陽性ＭｕＧＩＰＲ－ｈｕ．ＦＣ／ｈｕＣＤ１３７Ｂ細胞を完全に染色されたサンプル中のＨｕＣＤ１３７陽性Ｂ細胞から完全に分離させ。ＣＤ１３７陽性マウスＢ細胞を含有する３０の３８４ウェルプレート（１０，５６０ウェル）を回収し、一次スクリーニングのために継代した。

一次スクリーニングにおいて、５５４のＢ細胞上清を、Ｓ／Ｂ＞２のヒトＣＤ１３７及びＳ／Ｂ＞２のカニクイザルＣＤ１３７の両方に対する特異的結合性について、ＩｇＧ＞１０ng/mlで陽性とアッセイした（図１）。５５４個の陽性Ｂ細胞クローンを、ＤＮＡの回収並びにマウスＶＨ及びＶＬ遺伝子セグメントの単離及び増幅のために、６つの９６ウェルプレートに分離した。５５４個のクローンのうち、０．６～７５ug/mlの範囲の力価で抗ＣＤ１３７を発現する３７６個のＢ細胞クローンを、ヒトＣＤ１３７を発現するリコンビナントＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｋ１）への単一点結合についてアッセイした。３７６個のＢ細胞クローンのうち、１６８個のＢ細胞クローンが、２～５７×Ｓ／Ｂの範囲で、バックグラウンドに対して＞２×のレベルで抗ＣＤ１３７抗体を発現した（データを示さず）。

ｂ．アゴニストＣＤ１３７抗体の特定
アゴニストバインダーを特定するために、ＮＦ－ｋＢ－Ｌｕｃ２／４－１ＢＢＪｕｒｋａｔアッセイ系（Promega）を使用した。ＮＦｋＢ活性アッセイは、細胞表面上にヒトＣＤ１３７を発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞系統を使用する。

簡潔に、リコンビナントＩｇＧ１（ＫＯ）抗体を含有するＨＴＰ上清をフローサイトメトリーにより、ＮＦ－ｋＢ－Ｌｕｃ２／４－１ＢＢＪｕｒｋａｔ細胞系統への結合についてアッセイした。ＣＤ１３７抗体対照を、ＣＤ１３７陽性対照抗体であるウレルマブ（ＢＭＳ）を含む染色バッファー中で希釈した。１６８個の抗ＣＤ１３７Ｂ細胞クローンから採取した上清（５０μl）（上記検討）をＪｕｒｋａｔ細胞と共に、９６ウェルプレート中、４℃で３０分間インキュベーションした。この細胞を染色バッファーで３回洗浄した。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ－ＦｃＰＥ二次抗体をこの細胞に加え、プレートを４℃で３０分間インキュベーションした。この細胞を染色バッファーで３回洗浄した。細胞を冷染色バッファー１００μl中に懸濁させ、フローサイトメーターにより分析した。抗ＣＤ１３７抗体上清を細胞系統へのバックグラウンド結合に対して２倍超について分析した。１６８個のスクリーニングされた抗ＣＤ１３７抗体含有上清のうち、１０個の抗ＣＤ１３７上清が、バックグラウンドに対して１．５倍（１．６４～５．２１倍）の抗ＣＤ１３７アゴニスト活性を示し、抗体力価は、０．７６～３１μg/mlの範囲であった。クローンＣＬ－１８６３３０からのシグナルは、５．６１Ｓ／Ｂであった（データを示さず）。

ｃ．ＣＤ１３７結合分子についてのＶ遺伝子回収
１０個のＢ細胞クローンは、更なる分析のために選択された特定の閾値を超えるアゴニスト活性を有すると特定された。まず、細胞ライゼートを収集し、９６ウェルプレートに再配列し、－２０℃で保存し、その後、Ｖ遺伝子を回収した。マウス重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードする遺伝子をＲＴ－ＰＣＲ（表４のプライマーを参照のこと）により回収し、ついで、ヒトＩｇＧ１（ＫＯ）及びκ定常領域それぞれをコードするｐＴＴ５発現ベクターにインフレームでクローニングした。

Ｂ細胞ライゼートを、Smarter ｃＤＮＡ合成キット（Clontech, Mount View, CA）を使用してｃＤＮＡ合成に供した。ｃＤＮＡ合成を容易にするために、オリゴ（ｄＴ）を使用して、全てのメッセンジャーＲＮＡの逆転写を開始し、続けて、Smarter IIAオリゴヌクレオチドで「５’キャッピング」した。ＶＨ及びＶＬフラグメントのその後の増幅を、Smarter IIAキャップをターゲットとする５’プライマー及びＣＨ１におけるコンセンサス領域をターゲットとする３’プライマーを使用する２ステップＰＣＲ増幅を使用して行った。簡潔に、各ＰＣＲ反応５０μlは、２０μM 各プライマー（フォワード及びリバース、最終濃度１μM）１μl、PrimeStar（登録商標）Max ＤＮＡポリメラーゼプレミックス（Clontech）２５μl、未精製ｃＤＮＡ２μl及び二重蒸留Ｈ２Ｏ２０μlからなる。サイクルプログラムが開始し、続けて、９４℃で１５秒間、５０℃で３０秒間、６８℃で５０秒間を３５サイクル、６８℃、７分間で終了する。第２ラウンドＰＣＲを、各ｐＴＴ５マザーベクター（ＶＨ及びＶＬ）中の各領域に「重複する」１５ｂｐ相補的延長部を含有するＶＬ及びＶＨ第２ラウンドプライマーを使用して行った。第２ラウンドＰＣＲを下記プログラム：３５サイクル（９４℃で４５秒間、５０℃で３０秒間、６８℃で５０秒間）を使用して行い、６８℃、７分間で終了する。

キメラＣＤ１３７を産生するために、マウスＶＨ及びＶＬ領域をヒトＩｇＧ１由来の重鎖及び軽鎖定常領域に融合させ、In-Fusion（登録商標）ＨＤクローニングキット（Clontech, U.S.A.）をｐＴ５ｈｕＩｇＫベクター（クローンＩＤ４０１０６４）へのＶＬ遺伝子及びｐＴ５ｈｕＩｇＧ１ＫＯベクター（クローンＩＤ４０３７７６）へのＶＨ遺伝子の方向性クローニングに使用した。In-Fusion（登録商標）ＨＤクローニングを容易にするために、ＰＣＲ産物を精製し、In-Fusion（登録商標）ＨＤクローニングの前に、クローニングエンハンサーで処理した。クローニング及びトランスフォーメーションを製造業者のプロトコール（Clontech, U.S.A.）に従って行った。サブクローニングされた遺伝子Ｖ－遺伝子フラグメントのＤＮＡ配列を、ミニプレップＤＮＡを単離し、単離されたＤＮＡをサンガー二本鎖配列決定に供することにより確認した。

ｄ．ＣＤ１３７発現リコンビナントＣＨＯ細胞系統ツール
ヒト及びカニクイザルＣＤ１３７の両方についての細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をｐｃＤＮＡ３．１ベクターにクローニングして、ほ乳類細胞系統、例えば、ＣＨＯ－Ｋ１において高レベルで構成的な発現を促した。このベクターは、タンパク質の高効率発現のためのＣＭＶプロモーター並びにｍＲＮＡ安定性を向上させるためのウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化シグナル及び転写終結配列を含む。ヒト及びカニクイザルＣＤ１３７のエクトドメインをコードするＤＮＡ配列は、配列番号：１及び２それぞれに対応する。

安定なクローン産生のために、ＣＨＯ－Ｋ１細胞を６ウェルプレート中のウェル当たりに０．２５×１０^６個の細胞濃度で播種し、２４時間後、完全培地中にトランスフェクションした。翌日、トランスフェクションの３時間前に、培地に完全培地１mLを補充した。２．５μg ＤＮＡをＤＭＥＭ培地中で総容量１５０μLに希釈し、Lipofectamine（登録商標）２０００試薬（Life Technologies、カタログ番号１１６６８－０１９）７．５μLをＤＭＥＭ培地１４３μL中で希釈した。希釈されたＤＮＡを希釈されたLipofectamine（登録商標）２０００試薬に加え、１５分間インキュベーションした。インキュベーション後、ＤＮＡ－脂質複合体を細胞に加え、さらに４８時間インキュベーションした。トランスフェクションの１時間後、細胞をトリプシン処理し、１０００μg/mL Ｇ４１８含有培地（Life Technologies、カタログ番号１０１３１－０２７）中で選択した。ＦＡＣＳ分析をＧ４１８の存在下での選択の１週間後のプールについて行った。クローンをヒト及びカニクイザルタンパク質への結合に基づいて選択し、ＣＤ１３７抗体を発現するハイブリドーマをスクリーニングするのに使用した。

ｅ．キメラＣＤ１３７ＩｇＧの単離及び特徴決定
本発明の目的で、抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には、２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変領域（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、場合により、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含むことができる。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。本発明に包含される「ヒト化抗体」の他の形態は、定常領域が特にＣ１ｑ結合及び／又はＦｃレセプター（ＦｃＲ）結合に関して、本発明の特性を生成するために、元の抗体のものからさらに改変され又は変化させたものである。

キメラヒト化抗体をＣＨＯ－Ｅ３７細胞を対応するキメラ重鎖及び軽鎖をコードするｐＴＴ５プラスミドで一過性トランスフェクションすることにより産生した。ここで、親抗ＣＤ１３７抗体由来のマウス可変領域を、ＦｃレセプターがＦｃ部分においてノックアウト突然変異Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａをさらに発現して、ＦｃＲ結合を遮断するように改変されたヒト定常領域とインフレームでクローニングした。陽性ＣＤ１３７結合対照を同様にヒトＩｇＧ定常領域とインフレームでクローニングし、ここで、ウレルマブ（ＶＨ、配列番号：３７１及びＶＬ、配列番号：３７２）及びウツリロマブ（ＶＨ、配列番号：３７３及びＶＬ、配列番号：３７４）由来のＶＨ及びＶＬ領域をクローニングした。

ＣＨＯ－Ｅ細胞を５０mLのBioreactorチューブ（Sigma）中の４mM グルタミンが補充されたIrvine培地中において、４×１０^６個/mLでトランスフェクションする。典型的なトランスフェクション体積３５mLについて、予め滅菌された軽鎖（ＬＣ）プラスミドＤＮＡ及び重鎖（ＨＣ）プラスミドＤＮＡ（２：１の比率）を、フィラーＤＮＡを含有するOptiPRO（商標）SFM（Gibco）の予め滅菌された１mL中に希釈する。TransIT-PRO（登録商標）（Mirus Bio LLC）トランスフェクション試薬をDNA+Opti-PRO（商標）ミックスに加え、調製されたＣＨＯ－Ｅ細胞に直ちに移し、bioreactorチューブを３７℃、５％ＣＯ２、３００rpmで振とう機に戻す。トランスフェクションの２４時間後、温度を３０℃に変化させる。トランスフェクションされた培養物を７日間維持する。培養物の収集を４７００rpmで２５分間遠心分離することにより完了させる。

培養上清からのキメラＣＤ１３７ＩｇＧ抗体分子の精製を、ForteBioのOctet（登録商標）RED96機器（ForteBio）においてプロテインＡセンサーチップを使用するアフィニティークロマトグラフィーにより行った。単離されたＣＤ１３７抗体が、ヒト及びカニクイザル細胞と交差反応可能であったかどうかを試験するために、キメラ抗ヒトＣＤ１３７ＩｇＧ１（ＫＯ）抗体をアッセイして、フローサイトメトリー結合曲線及びＣＨＯ－ヒトＣＤ１３７及びＣＨＯ－カニクイザルＣＤ１３７過剰発現細胞系統に対するＥＣ５０値を生成した。簡潔に、キメラＣＤ１３７ＩｇＧ抗体及び陽性ＩｇＧ対照を染色バッファーで希釈して、１２点希釈曲線を生成した。細胞及び抗体を９６ウェルプレート中において、４℃で３０分間インキュベーションした。細胞を染色バッファーで３回洗浄した。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ－ＦｃＰＥ二次抗体を細胞に加え、プレートを４℃で３０分間インキュベーションした。細胞を染色バッファーで３回洗浄した。細胞を冷染色バッファー１００μl中で懸濁させ、フローサイトメーターで分析した。結合曲線を分析し、抗ヒトＣＤ１３７抗体についてのＥＣ５０を計算した。

２７個のヒットを第１ラウンドの選択から特定し、追加のスクリーニングにより、異なる選択プールを示す「Ｂ」とラベルされた１８個の更なるヒットが提供された。表７を参照のこと。

表７（上記）に示されたように、ほぼ全ての抗ヒトＣＤ１３７結合クローンは、同等のＥＣ５０値により実証されたように、リコンビナントＣＨＯ細胞上に発現されたカニクイザルＣＤ１３７と交差反応性であり、ヒトＣＤ１３７を発現するＣＨＯ細胞系統と結合した。

ｆ．キメラ抗ＣＤ１３７ＩｇＧ１結合クローンの機能特性
ＣＤ１３７は、公知の共刺激レセプターであり、活性化Ｔ細胞上に発現された場合、Ｔ細胞の増殖、サイトカイン産生及び機能特性を改善する。本来、Ｔ細胞の活性化により、Ｔ細胞上のＣＤ１３７のアップレギュレーションが誘引され（Pollok et al.(1993)J. Immunol. 150(3):771-781）、係合後、増殖及びサイトカイン放出をブーストすることにより免疫応答が支持される（Hurtado et al.(1995)J Immunology 155(7), 3360-3367）。活性化Ｔ細胞の文脈における架橋ＣＤ１３７は、Ｔ細胞活性化を増強し、Ｔ細胞の増殖及びリクルートをもたらすことが期待される。

ＣＤ１３７抗体アゴニスト挙動を評価するために、二次抗体を使用して、細胞表面上のＣＤ１３７を架橋させた。理論的根拠は、抗ＣＤ１３７抗体を特定することであった。この抗体は、ＦＡＰについての二重特異性分子として組み合わせた場合にのみアゴニストとなる分子を特定する目的で架橋させた場合にのみアゴニストであった。

これを達成するために、７２nM 抗ＣＤ１３７抗体それぞれを、２．５倍モル過剰の架橋抗体と共に（＋ＣＬ）、架橋抗体無しで（－ＣＬ）、３７℃で３０分間インキュベーションした。抗ＣＤ１３７抗体上清又は実際の抗体を、培地２２０．５μlを各チューブに加えることにより、約４８nMに希釈した。この抗体混合物を培地（ＲＰＭＩ培地／１％ＦＢＳ）１６０μlのうちの８０μl中で連続希釈した。細胞５０μL（０．８×１０^５個）を平底９６ウェルプレートにおいて、希釈抗体２５μLと共に混合した（３×抗体希釈をそれぞれ全部で９つのデータ点について行った）。細胞を抗ＣＤ１３７抗体と共に、３７℃及び５％ＣＯ_２で５時間インキュベーションした。活性の検出をBio-Glo（商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬（G7940 Promega）７５μlの添加により達成し、得られた発光をEnVision（登録商標）プレートリーダー（Perkin-Elmer）により測定した。

ＣＤ１３７依存性係合及び架橋により、Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞系統においてＮＦκＢ媒介性ルシフェラーゼ活性化を誘引することができる。抗ＣＤ１３７アゴニスト結合曲線及びＥＣ_５０値を生成した。結合活性データを曲線としてプロットし（図３Ａ及び図３Ｂ）、ルシフェラーゼ活性データ（RLU）（図３Ｃ及び図３Ｄ）を棒グラフとしてプロットした。公知のＣＤ１３７バインダー（ウレルマブ（ＢＭＳ抗ＣＤ１３７Ａｂ）及びウトミルマブ（Pfizerの抗ＣＤ１３７Ａｂ））に基づく２つの陽性対照を本発明の新規なＣＤ１３７バインダーと比較した。ＮＦｋＢ－Ｊｕｒｋａｔアッセイにおけるアゴニスト活性に基づいて、候補ＣＤ１３７＃Ｂ２１（親を指す「ＣＤ１３７＃１」とも呼ばれる）及びＣＤ１３７＃Ａ４９（親を指す「ＣＤ１３７＃７」とも呼ばれる）を更なる最適化に選択した。

８．リード候補ＣＤ１３７抗体（ＣＤ１３７＃１）についてのキメラＦａｂの生成
抗原についての抗体の親和性を改善するために、公知の技術を使用して、ｉｎｖｉｖｏで天然にランダムに起こる親和性成熟及び過突然変異イベントをミラーリングする。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失及び／又は同配列への挿入及び／又は同残基の置換を含む。欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせを最終構築物に到達するように行うことができる。ただし、最終構築物が、所望の特徴、例えば、抗原結合を有するという条件である。置換的突然変異誘発に関心のある部位は、超可変領域（ＣＤＲ）及びフレームワーク領域（ＦＷ）を含む。親和性、結合力、安定性、溶解性、グリコシル化は、候補ＣＤ１３７バインダーを最適化すると考えられる幾つかの特徴である。

「アミノ酸配列変異体」という用語は、親抗原結合分子（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基にアミノ酸置換が存在する実質的な変異体を含む。一般的には、更なる研究のために選択された得られた変異体は、親抗原結合分子と比較して、特定の生物学的特性（例えば、親和性の向上、免疫原性の低下）における改変（例えば、改善）を有しかつ／又は親抗原結合分子の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。例示的な置換的変異体は、親和性成熟抗体であり、これは、例えば、ファージディスプレイ系親和性成熟技術、例えば、本明細書に記載されたものを使用して、都合良く生成することができる。簡潔に、１つ以上の可変領域残基が変異され、変異体抗原結合分子がファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。特定の実施態様では、置換、挿入又は欠失を、このような改変が抗原結合分子の抗原結合能を実質的に低下させない限り、１つ以上の超可変領域内で生じさせることができる。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書で提供された保存的置換）を超可変領域に行うことができる。最初の置換に対する機能的感受性を実証する更なる置換をアミノ酸位置に導入することができる。代替的には又は加えて、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原－抗原結合分子複合体の結晶構造。このような接触残基及び隣接残基を置換の候補としてのターゲットとし又は排除することができる。変異体をそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングすることができる。

「親和性成熟」抗体は、このような改変を有さない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域において１つ以上の改変を有する抗体を指し、このような改変により、抗原についての抗体の親和性の改善がもたらされる。

アミノ酸置換を、目的の分子に導入することができ、この産物を所望の活性、例えば、親マウス分子と比較して、保持された／改善された抗原結合についてスクリーニングすることができる。保存的置換及び非保存的置換の両方が企図される。

本発明の実施態様は、ＣＤ１３７抗原結合分子のアミノ酸配列変異体を含む。ＣＤ１３７結合分子のアミノ酸配列変異体を、この分子をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより又はペプチド合成により調製する。

選択された抗体候補のマウス配列を使用して、遺伝子フラグメントをマウスＶＫ及びＶＨについて設計し、合成した。マウスフレームワーク１領域に特異的な配列及び遺伝子ＩＩＩ配列の末端にアニーリングされたオーバーハング配列を含有するビオチン化フォワードプライマー並びにヒト定常領域（Ｃκ又はＣＨ１）と共に保存されたマウスフレームワーク４領域からのリバースプライマーを使用して、Ｖ領域を増幅する（表８を参照のこと）。

ＰＣＲを、テンプレートとして遺伝子フラグメントを使用して行い、ＤＮＡ産物を、標準的な社内プロトコールを使用して、Ｍ１３ＬＥ０１ベクター（New England Biolabs製のＭ１３ｍｐ１８の改変バージョン）にクローニングし、E. coli細胞にトランスフェクションした（図５）。Ｍ１３は、ＤＮＡをファージ粒子にパッケージングするのに必要なコンポーネントを供給する。ファージ粒子は、細胞壁を通して分泌され、培地中に放出され、ファージによる広範な感染により、E. coli細胞で溶解を生じさせることができる。このように、リコンビナントＭ１３ファージによる感染により、Ｌアガープレート上で増殖させると、E. coli細胞にプラークを形成することができる。目的のＤＮＡの特定の変化を表わす個々のプラークを取り上げ、E. coliで一晩増殖させ、対応する培養物をミニプレップして、配列決定分析によりＤＮＡ配列を得た。キメラＦａｂの正しいＤＮＡ配列を有するプラークを使用して、E. coli細胞を感染させた。培養物の適切な増殖後、E. coli細胞を０．５mM ＩＰＴＧで誘引して、培養培地中に分泌されるキメラＦａｂを発現させた。発現されたキメラＦａｂを培養上清及び／又は感染されたE.coli細胞のペリプラズム抽出物から得た。このキメラＦａｂをさらに使用して、ＥＬＩＳＡ結合アッセイを開発し、後述するヒト化変異体を特定するために、陽性対照として保持した。キメラＦａｂの配列を以下に記載する。

配列最適化Ｆａｂを、以下に記載されるように、ＥＬＩＳＡ結合アッセイにおいて評価した。

ｈ．ＣＤ１３７＃１最適化バインダーの特定
ヒト化／最適化抗ＣＤ１３７バインダーを特定するために、２ＤサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを、キメラ抗ＣＤ１３７Ｆａｂを使用して開発し、実験プロセス全体を通して、キメラ抗ＣＤ１３７Ｆａｂを、キメラＦａｂに存在するマウス可変領域と同様の結合を有するヒト化変異体を特定する陽性対照として維持した。アッセイを開発するために、プレートを培養上清及び／又はペリプラズム調製物（E. coli細胞を、キメラＣＤ１３７Ｆａｂを含有するファージに感染させ、０．５mM ＩＰＴＧで誘引し、４時間のインキュベーション後、上清を使用するか又は細胞を溶解して、ペリプラズム抽出物を得る）中に存在するキメラＣＤ１３７ＦａｂフラグメントにおけるＣＨ１領域に結合する抗Ｆｄ抗体で被覆した。

結合したＣＤ１３７Ｆａｂフラグメントをビオチン化ｈｕＣＤ１３７抗原の存在下でインキュベーションし、結合したビオチン化抗原をストレプトアビジンラベルフルロクロムで検出する。種々の量の抗原（ビオチン化ｈｕＣＤ１３７－６×Ｈｉｓを、Sulfo ChromaLink（商標）ビオチンキット（SoluLink、カタログ番号Ｂ－１００７、ＰＰＢ－１６７４８）（５０ng/mL及び８０ng/mL）を使用して生成し、キメラＦａｂ（ＣｈｉＦａｂ）の種々の希釈物（０．４μg/ml、０．２μg/ml及び０．１μg/ml）を２Ｄアッセイで評価した。プレートを種々の量の抗Ｆｄ（Meridian Life Sciences Inc., ヒツジ抗ヒト抗Ｆｄ＃Ｗ９００７５Ｃ）で被覆した；一次スクリーニング（分泌Ｆａｂ）のための１７００ng/mL 抗Ｆｄ抗体及び確認スクリーニング（ペリプラズムＦａｂ）のための９００ng/mL 抗Ｆｄ抗体（図４Ａを参照のこと）。

ｉ．ＣＤ１３７＃１由来のＣＤＲを使用した移植Ｆａｂの生成

リード最適化／ヒト化の目的は、ＡＤＡの可能性を低下させるために、多くの非ヒト残基をヒト生殖細胞系統配列に変換することにより、ＣＤＲ及びフレームワークの両方である可変ドメインにおいて最適なアミノ酸配列を有する分子を得ることであり、ＡＤＡは、薬剤の有効性及び安全性に影響を及ぼす場合があり、生成物の一貫性及び貯蔵寿命を改善するために可能性のあるＰＴＭの傾向を除去し、他のＣＭＣ特性を増強する。このため、「ヒト化」抗体は、非ヒト超可変領域由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含む抗体を指す。特定の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には、２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ドメイン（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てが、ヒト抗体のものに対応する。

親マウス分子の結合及び他の所望の特性を保持するだけでなく、潜在的な薬剤の特徴も有するヒト化抗体を生成するために、本発明者らは、ｉｎｓｉｌｉｃｏ分析により軽鎖及び重鎖の両方について密接に一致する生殖細胞系統を評価し、軽鎖及び重鎖それぞれについてＩＧＫＶ１－３９^＊０１及びＩＧＨＶ３－７＊０１を特定した。マウスＣＤ１３７＃Ｂ２１のＣＤＲをヒト生殖細胞系統のフレームワークと組み合わせた：ＶＫについてＩＧＫＶ１－３９^＊０１及びＶＨについてＩＧＨＶ３－７^＊０１。ＫＪ２をＶＫにおけるＪ領域として使用し、ＨＪ６をＶＨにおけるＪ領域として使用した。

ＣＤ１３７特異的クローン由来のＣＤＲをＶＫ生殖細胞系統上に移植し、ＶＨ生殖細胞系統ＤＮＡフラグメントを、公知の技術を使用するＰＣＲにより増幅する。以下の実施例では、表９の下記プライマーを使用した。

ＣＤ１３７ＶＨ又はＶＬ遺伝子セグメントに特異的な配列を含有するビオチン化フォワードプライマー及び遺伝子ＩＩＩ配列の末端にアニーリングされたオーバーハング配列及び保存された定常領域（Ｃκ又はＣＨ１）からのリバースプライマー。ＰＣＲ産物をＭ１３ＬＥ０１ベクターにクローニングして、マウスＦａｂと同じＣＤＲを含有するが、ヒトフレームワークにある移植Ｆａｂを生成する。移植Ｆａｂを結合滴定において親キメラＦａｂと比較して、ｈｕＣＤ１３７抗原への結合を決定した（図４Ｂ）。各候補について、ｈｕＣＤ１３７への特異的結合は、キメラ及び移植Ｆａｂ分子の両方についてアッセイされた抗原濃度範囲にわたって一致した。移植Ｆａｂ分子は、図４Ｂにおいて観察されたように、それらの結合においてわずかに低かったが、それらがヒトフレームワーク上でマウスＣＤＲを表わしたため、それらを更なる最適化のための基礎として使用した。ＣＤＲに加えて、特定のマウスフレームワーク残基、例えば、カノニカル及びバーニエゾーン残基は、ＣＤＲループの位置決めにおいて重要な役割を果たすことが公知である。

ｊ．ヒトＶＫ及びＶＨにおけるフレームワーク領域の最適化
抗原への結合において重要な役割を果たすことが公知の重要なマウス残基、例えば、カノニカル、界面及びバーニエゾーン残基を特定するために、本発明者らは、軽鎖可変領域における３つのフレームワーク位置及び重鎖可変領域における５つのフレームワーク位置を特定した。これらの位置は、軽鎖におけるＴ^２０Ｓ、Ｓ^６０Ｄ及びＴ^８５Ｖ並びにアミノ酸Ａ^２３Ｔ、Ｔ^６９Ｉ、Ｎ^７７Ｑ、Ｓ^７８Ｉ、Ｎ^８４Ｓ又はＱに対応する重鎖における５つの位置であった。マウスリード候補（ＣＤ１３７＃Ｂ２１）の同様の結合を保持したヒトフレームワークを特定するために、本発明者らは、Ｍ１３ＬＥ０１ベクターにファージライブラリーを作製した。突然変異／変化をオリゴヌクレオチド配列に行い、それらを、標準的な分子生物学技術を使用して組み立てた。

第１のファージライブラリーを、ＶＫ及びＶＨフレームワーク突然変異を組み合わせて構築した。ここで、ＶＫ変異体ライブラリーは、８つの可能性のあるバリエーションを表わし、ＶＨ変異体ライブラリーは、１２８の可能性のあるバリエーションを表わす。ＶＫ及びＶＨ変異体ライブラリーを併せて、第１の組み合わせたライブラリーについて、合計約１０２４の変異体を表わした。

E. coli細胞を、種々の組み合わせを含有するＤＮＡでトランスフォーメーションし、翌日、単一の変異体を表わす個々のプラークを採取した。先に記載されたように、約２７００個のクローン変異体を選択し、ＥＬＩＳＡによりｈｕＣＤ１３７への結合についてスクリーニングした。最初に、E. coli細胞に、各変異体を感染させ、続けて、０．５mM ＩＰＴＧで誘引し、培地上清を結合について評価した。これらの実験では、キメラ抗ＣＤ１３７Ｆａｂを、ＥＬＩＳＡ実験における陽性対照として保持した。陽性対照と同様の結合を示した分子を選択し、それらの結合活性について再度チェックした。第２の工程では、選択されたバインダーを表わすプラークを使用して、E. coli細胞に再度感染させ、培養物を０．５mM ＩＰＴＧで誘引した。必要なインキュベーション後、細胞を溶解させ、ペリプラズム抽出物を得た。これらのペリプラズム抽出物を使用して、ＣＤ１３７抗原への結合を確認した。以前のように、本発明者らは、本発明者らの実験において、キメラＦａｂを陽性対照として保持した。

ＥＬＩＳＡにより検出された結合結果に基づいて、最良のＶＫ及びＶＨフレームワーク配列の組み合わせを決定した。

図５から分かるように、クローンＢ２１～５５及びＢ２１～４９は、キメラ親Ｆａｂと同程度に良好な又はわずかに改善された結合特性を有した。これらの軽鎖フレームワークの配列分析から、ＦＷ３におけるアミノ酸突然変異Ｔ^８５Ｖが両方のクローンに存在し、このため、結合に対する重要な改善と考えられ、このため、最適化分子に含まれるべきであることが明らかとなった。ＶＨについて、ＦＷ３におけるアミノ酸突然変異Ｓ^７８Ｉも、両クローンに存在し、このため、最適化分子に重要であると考えられた。

第１のライブラリーからのトップバインダーの幾つかについての配列が提供される。

ｋ．キメラＶＫ及びキメラＶＨにおけるＣＤＲＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ１及びＨ－ＣＤＲ２の突然変異分析
ＣＤＲ中の特定のアミノ酸残基、例えば、アスパラギン及びアスパラギン酸により、薬剤候補の貯蔵寿命を短縮させてしまう場合がある翻訳後修飾、例えば、脱アミド化、グリコシル化及びイソアスパラギン酸異性化を受けることによって、薬剤候補における不均一性がもたらされる場合がある。加えて、抗薬剤抗体の生成を減少させるために、生殖細胞系統は、重要でないマウス残基をヒト生殖細胞系統残基で変化させるための新規なストラテジーとして進化してきた。本発明者らは、潜在的な傾向についてＣＤＲ残基を評価し、必要な結合／機能に影響を及ぼすことなく、それらの残基の変化を評価した。

突然変異分析を、軽鎖におけるＣＤＲ、Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２並びに重鎖におけるＣＤＲ、Ｈ－ＣＤＲ１及びＨ－ＣＤＲ２における点突然変異の影響を評価するために行い、得られた変異体を、マウス可変領域を有するが、ヒト定常領域を有する親キメラＩｇＧと比較して評価した。標準的な分子生物学技術を利用して、１つずつ別個に、１０個の点突然変異を軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１及びＣＤＲ２に導入し、１９個の点突然変異体を、重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１及びＣＤＲ２（図６Ａ及び図６Ｂ）に導入した。

ＶＬ及びＶＨ遺伝子を、上記検討された方法を使用して生成し、ｐＴＴ５ベクターにクローニングした。各ＶＬ及びＶＨ配列を標準的な方法により確認した。

単点突然変異体をキメラ「親」残基（ｌＣｈｉＩｇＶＫ）を「変異体」残基（「太字」のボックス）で置き換えて調製した。表１１及び表１２に、ＣＤＲ１におけるアミノ酸位置２４、２３、２９、３１及び３３並びにＣＤＲ２におけるアミノ酸位置５０、５３、５４、５５及び５６でのＶＫＣＤＲについての単点突然変異体を表わし、１０個の変異体構築物を生成する。表１３及び表１４に、ＣＤＲ１におけるアミノ酸位置３１、３２、３３及び３５並びにＣＤＲ２におけるアミノ酸位置５２、５３、５４、５５、５７、５８、６１、６２、６３、６４及び６６でのＶＨＣＤＲについての単点突然変異体を表わし、１９個の変異体構築物を生成する。

７日間のＣＨＯ－Ｅ細胞における発現分析のために、得られた軽鎖突然変異体を親キメラ重鎖と対合させ、重鎖突然変異体を親キメラ軽鎖と対合させた。親キメラＩｇＧを陽性対照として使用した。

７日後、抗体含有上清を回収し、ＥＬＩＳＡにおいてビオチン化ｈｕＣＤ１３７への結合について評価した。ＣＤ１３７特異的結合についての効果を変異体それぞれについてＶＨ及びＶＬ領域に導入された突然変異に基づいて評価した。ＣＤ１３７結合を測定し、ＯＤ単位として表わし、親キメラＩｇＧと比較して、ＣＤ１３７抗体結合における個々の残基の寄与を特定した（図６Ａ及び図６Ｂ）。

軽鎖変異体について、示された全ての位置における点突然変異体により、親キメラＩｇＧと同様の結合が実証された（図６Ａ）。重鎖について、位置Ａ^３５Ｓ、Ｔ^５８Ｋ、Ｌ^６１Ｖ、Ｌ^６４Ｖ及びＳ^６６Ｇの点突然変異体により、親キメラＩｇＧと同様の結合が示された（図６Ｂ）。

ｌ．Ｂ２１～５５におけるヒトＣＤ１３７ＶＫ及びＶＨについての突然変異ライブラリー
表１０及び図５から、Ｂ２１～５５を、Ｂ２１親キメラＦａｂと同じ結合を保持する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の両方について最良のヒト化フレームワーク配列として特定し、更なるＣＤＲ変化をこのフレームワークに組み込ませた。３つのファージＦａｂライブラリーをベクターＬＥ０１中に調製した。第１の（ファージＦａｂ）ライブラリーであるＬ４５８ＶＫは、複数のＦＷ及びＣＤＲ点突然変異を有する変異体を含むキメラヒト／マウスＶＫ軽鎖と複数のＦＷ及びＣＤＲ点突然変異を有する変異体との組み合わせであり、約１０２４個の変異体を表わす。第２のファージＦａｂライブラリーであるＬ４５９ＶＨは、ＣＤＲ点突然変異を含む移植ヒトＶＨと移植ヒトＶＫとの組み合わせであり、約５１２個のＶＨ変異体を表わす。第３のファージＦａｂライブラリーであるＬ４６０Ｃは、ヒトＶＫとヒトＶＨＦＷ突然変異との組み合わせであった。これらのライブラリーについて、ＶＫは、約１０２４個の可能性のあるバリエーションを有し、ＶＨは、約５１２個の可能性のあるバリエーションを有し、組み合わせたライブラリーであるＬ４６０Ｃについて、合計で約５２４，２８８個の変異体調製した。本発明者らは、約１９８０個の変異体を評価した。

位置Ｋ^２４Ｒ、Ｄ^２８Ｓ、Ｖ^２９Ｉ、Ｔ^３１Ｓ、Ｖ^３３Ｌ、Ｓ^５０Ａ、Ｙ^５３Ｓ、Ｒ^５４Ｌ、Ｙ^５５Ｑ及びＴ^５６Ｓに突然変異を有する、単離されたＶκ変異体クローンＣＤ１３７＃１．Ｖ５５Ａ－Ｊを、ベクターＬＥ０１でファージＦａｂを評価するために選択した。

位置Ａ^３５Ｓ、Ｎ^５２Ｑ、Ｄ^５４Ｅ、Ｇ^５５Ａ、Ｔ^５８Ｋ、Ｌ^６１Ｖ、Ｄ^６２Ｅ、Ｌ^６４Ｖ及びＳ^６６Ｇに突然変異を有する、単離されたＶＨ変異体クローンＣＤ１３７＃１Ｖ．５５．Ｎ、Ｖ５５．Ｔ、Ｖ５５．Ｖ、Ｖ５５．Ｗ、Ｖ５５．ＡＡ、Ｖ５５．ＢＢをベクターＬＥ０１において評価するために選択した。Ｈ－ＣＤＲ２における変化Ｎ^５２Ｑを、潜在的な脱アミド化部位の除去を評価するために選択した。Ｈ－ＣＤＲ２における変化Ｄ^５４Ｅ及びＤ^６２Ｅを、潜在的な異性化部位の除去を評価するために選択した。

変異体をキメラＣＤ１３７親と比較し、７５個の変異体の分析を行った。７５個の変異体のうち、５５個の変異体クローンは、キメラ分子への同様又はより良好な結合を有した（図７）。

ｍ．選択されたＣＤ１３７配列最適化候補をＩｇＧ１－ＫＯとしてフォーマットし、機能活性について評価した
ヒットのうちの３９個をＣＤ１３７＃Ｂ２１配列最適化キャンペーンから選択し、ＩｇＧ１－ＫＯとしてフォーマットし、図８Ａ及び図８Ｂに示されたように、ＮＦｋＢ－Ｊｕｒａｋａｔ細胞アッセイシステム（Promega）において、上記された二次抗体による架橋を伴わない及び同架橋を伴うアゴニスト挙動について評価した。

これら３９個のＩｇＧから、５つの例示的な候補を選択し、配列最適化ＦＡＰ分子と組み合わせた二重特異性「Ｄｏｐｐｅｌｍａｂ」としてフォーマットした。

ｎ．ＣＤ１３７候補クローンＣＤ１３７＃７（Ａ４９）の配列最適化
ヒト化マウスＡｌｉｖａｍａｂ由来の更なる候補分子を評価した。候補を配列最適化するために、軽鎖可変領域における潜在的な脱アミド化傾向ＮＧ～ＱＧ及び重鎖可変領域におけるＮＹ～ＱＹを突然変異させた。また、両鎖における凝集傾向領域を、ＬからＧ／Ａ又はＩからＭのいずれかに突然変異させた。

先に記載されたように（上記を参照のこと）、８つの最適化された突然変異体構築物を生成し、ＮＦｋＢ－Ｊｕｒａｋａｔ細胞アッセイ系（Promega）においてＣＤ１３７への結合について評価した。

結合活性をルシフェラーゼ活性（RLU）として表わし、棒グラフとしてプロットした。公知のＣＤ１３７バインダー（ウレルマブ（ＢＭＳ抗ＣＤ１３７Ａｂ）及びウトミルマブ（Pfizerの抗ＣＤ１３７Ａｂ））に基づく２つの陽性対照を上記単離された８つのＣＤ１３７バインダーと比較し、他の最適化候補とも比較した。

実施例３：抗ＣＤ１３７結合候補のエピトープマッピングデータ
ＣＤ１３７は、ＣＲＤ１、ＣＲＤ２、ＣＲＤ３及びＣＲＤ４と呼ばれる４つのシステイン－リッチドメイン（ＣＲＤ）からなり、これらはそれぞれ、細胞膜に対して遠位～近位に位置する。ＣＲＤ１は、Ｕｎｉｐｒｏｔの配列Ｑ０７０１１のアミノ酸２４～４５を指す。ＣＲＤ２は、アミノ酸４７～８６により形成され、ＣＲＤ３は、アミノ酸８７～１１８により形成され、ＣＲＤ４は、アミノ酸１１９～１５９により形成される。マウス及びヒトＣＤ１３７キメラタンパク質を発現するＪｕｒｋａｔ細胞を、ヒトＣＲＤを対応するマウス対応物で置き換えることにより生成した。ＣＤ１３７抗体をこれらのリコンビナント細胞系統とインキュベーションし、蛍光ラベル二次抗体を加えて、結合をフローサイトメトリーにより決定した。全ての抗体は、全長ヒトＣＤ１３７発現Ｊｕｒｋａｔ細胞系統に結合可能であったが、多様なヒトＣＲＤをマウスＣＲＤにより置き換えた場合、結合は失われた。このアプローチにより、本発明者らは、異なるＣＤ１３７抗体がヒトＣＤ１３７タンパク質内で結合するＣＲＤを解明することが可能となった（図９を参照のこと）。

ドメインマッピングにより、本発明者らは、本発明のＣＤ１３７バインダーがＣＲＤ３又はＣＲＤ２／３のジャンクションに結合することを決定した。ＣＤ１３７＃１及びその変異体は、ＣＲＤ３に結合する。ＣＤ１３７＃７及びその変異体は、ＣＲＤ２／３のジャンクションに結合する。対照的に、ＣＤ１３７についての天然リガンドであるＣＤ１３７Ｌは、ＣＲＤ２に結合する。

天然ＣＤ１３７リガンドの結合が本発明により改変されるかどうかに対処するために、本発明者らは、ヒトＣＤ１３７リガンド（ＣＤ１３７－Ｌ）を発現するＨＥＫ２９３細胞を生成した。この細胞を、ヒトＣＤ１３７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞と共に培養した。これらのＪｕｒｋａｔ細胞におけるＮＦｋＢ経路の活性化を、ルシフェラーゼ活性を介して測定した。本発明は、ＣＤ１３７Ｌにより誘引される機能的活性化と競合しないが、他の既存の分子ウレルマブ（ＢＭＳ）及びウトミルマブ（Pfizer）並びにＦＡＰターゲット化分割三量体４－１ＢＢリガンドＦｃ融合抗原結合分子クローン２．１１（本明細書に含まれる配列番号：１１３、１１４及び１１６としてＷＯ第２０１７１９４４３８号に記載され、配列番号：６６３、６６４、６６５及び６６６に対応する、Roche分割三量体４－１ＢＢＬ（７１－２４８）／ＦＡＰ（２８Ｈ１）分子構築物２．１１を指す）は、ＣＤ１３７－Ｌにより誘引される活性化を遮断する（図１０Ａ及び図１０Ｂ）。

ａ．ヒトマウスキメラの構築
ＣＤ１３７のキメラバージョンを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を、各ヒトＣＲＤ領域が続けて同等のマウスＣＲＤ領域により置き換えられるように生成した。簡潔に、ＣＤ１３７のキメラバージョンを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を、各ヒトＣＲＤ領域が続けて同等のマウスＣＲＤ領域により置き換えられるように生成した。

その目的で、レンチウイルス上清を、ヒトＣＤ１３７ｃＤＮＡの異なる改変を含有するプラスミドで２９３ＦＴ細胞をトランスフェクションして産生した。これらの改変されたヒトＣＤ１３７配列において、ヒトＣＲＤ１又はＣＲＤ２又はＣＲＤ３又はＣＲＤ４におけるシステイン間のアミノ酸が、マウス対応物により置き換えられていた。特に、１つの構築物において、ヒトＣＲＤ１のアミノ酸２３～４５に対応する配列番号：３５０を配列番号：３６０に対応するマウスＣＲＤ１により置き換えた。別の構築物において、ヒトＣＲＤ２のアミノ酸４６～８６に対応する配列番号：３５１を配列番号：３６１に対応するマウスＣＲＤ２により置き換えた。第３の構築物において、ヒトＣＲＤ３のアミノ酸８７～１１８に対応する配列番号：３５２を配列番号：３６２に対応するマウスＣＲＤ３により置き換えた。第４の構築物において、ヒトＣＲＤ４のアミノ酸１１９～１５９に対応する配列番号：３５３を配列番号：３６３に対応するマウスＣＲＤ４により置き換えた。

また、プラスミドに、構築物が発現されている細胞の選択を可能にするピューロマイシン耐性遺伝子を含ませた。１２ウェルプレートにおいて、１ウェル当たりに２．５×１０^５個の２９３ＦＴ細胞を完全ＤＭＥＭ１．５mLに播種した。翌日、トランスフェクション混合物を、JetPRIME（登録商標）トランスフェクションバッファー（Polyplus Transfection）７５マイクロリットル、０．５μg ＤＮＡ（ＣＤ１３７プラスミド）及びパッケージング混合物（ｐｓＰＡＸ２、ｐＭＤ２．Ｇ）１マイクロリットルを混合することにより調製した。ボルテックス後、JetPRIME（登録商標）試薬２μlを加え、この混合物を再度ボルテックスした。室温で１５分後、トランスフェクション混合物を細胞（７０～８０％コンフルエント）上に注いだ。３７℃で４時間後、培養培地を新鮮な培地により置き換えた。翌日、ウイルス上清を収集し、硫酸プロタミンの添加後、続けて、Ｊｕｒｋａｔ細胞をトランスダクションするのに使用した。正に荷電したポリカチオン硫酸プロタミンにより、細胞とウイルスとの間の反発力が低下し、より高いトランスダクション効率がもたらされる。Ｊｕｒｋａｔ細胞をレンチウイルス含有上清と共にインキュベーションし、ＣＯ_２インキュベーター中において、３７℃で４８時間培養した。その後、ピューロマイシン（最終濃度１μg/ml）を加えて、トランスダクションされた細胞を選択した。２回の後続ラウンドのウイルス除去細胞を使用して、種々のＣＤ１３７ターゲット抗体がヒトＣＤ１３７タンパク質に結合するドメインを決定した。

ｂ．ＣＤ１３７候補の種々のエピトープへの結合
バッファー５０μl中の２×１０^５個のＣＤ１３７のこれらの変異体を発現するＪｕｒｋａｔ細胞を、ＣＤ１３７抗体バインダー５０μlと共に４℃で２０分間インキュベーションした。その後、細胞を２回洗浄して、未結合抗体を除去し、サンプルをR-Phycoerythrin AffiniPure Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）と共にさらにインキュベーションした。暗所において４℃でさらに２０分間インキュベーションした後、サンプルを２回洗浄し、蛍光をフローサイトメーター（FACSCanto（商標）ＩＩ分析器、BD Biosciences）で測定した。ＣＤ１３７の特定の改変に対する結合の減少又は不存在は、ヒトＣＲＤがマウス対応物により置き換えられた場合、ＣＤ１３７抗体の結合の欠如を反映する。

ｃ．ＣＤ１３７リガンドを発現する細胞の生成
１２ウェルプレートにおいて、１ウェル当たりに２．５×１０^５個の２９３ＦＴ細胞を完全ＤＭＥＭ１．５mLに播種した。翌日、トランスフェクション混合物を、JetPRIME（登録商標）トランスフェクションバッファー７５μl、０．５μg ＤＮＡ（ＣＤ１３７プラスミド）及びパッケージング混合物（ｐｓＰＡＸ２、ｐＭＤ２．Ｇ）１μlを混合することにより調製した。ボルテックス後、JetPRIME（登録商標）試薬２μlを加え、この混合物を再度ボルテックスした。室温で１５分後、トランスフェクション混合物を細胞（７０～８０％コンフルエント）上に注いだ。３７℃で４時間後、培養培地を新鮮な培地により置き換えた。翌日、ウイルス上清を収集し、硫酸プロタミンの添加（最終濃度４μg/ml）後、続けて、２９３ＦＴ細胞をトランスダクションするのに使用した。正に荷電したポリカチオン硫酸プロタミンにより、細胞とウイルスとの間の反発力が低下し、より高いトランスダクション効率がもたらされる。２９３ＦＴ細胞（培地１．５ml中の０．５×１０^５個）をレンチウイルス含有上清と共にインキュベーションし、ＣＯ_２インキュベーター中において、３７℃で４８時間培養した。その後、ピューロマイシン（最終濃度１μg/ml）を加えて、トランスダクションされた細胞を選択した。２回の後続ラウンドのウイルス除去後、ＣＤ１３７－Ｌの発現をFACSCanto（登録商標）ＩＩ分析器（BD Biosciences）でのフローサイトメトリーにより確認した。

ｄ．ＣＤ１３７リガンド結合遮断の測定
０．２×１０^５個のヒトＣＤ１３７－Ｌを発現するＨＥＫ２９３細胞を９６ウェルプレートに播種した。５％ＣＯ２インキュベーター中において、３７℃で３０分間インキュベーションした後、種々のＣＤ１３７バインダーの連続希釈物１２．５μlをＣＤ１３７－Ｌ発現細胞に加えた。５％ＣＯ２インキュベーター中において、３７℃で３０分間インキュベーションした後、ＮＦｋＢプロモーター（Promega）下でヒトＣＤ１３７及びルシフェラーゼｃＤＮＡを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を加えた（１ウェル当たりに０．２×１０^５個）。５時間のインキュベーション後、プレートを室温に１０分間置き、Bio-Glo（商標）試薬（Promega）７５μlを各ウェルに加えた。ＣＤ１３７Ｌ－ＣＤ１３７相互作用により媒介されるＪｕｒｋａｔ細胞活性化の測定としての発光を、EnVision（登録商標）プレートリーダー（Perkin-Elmer）により検出した。

実施例４：線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を認識する結合ドメインの作製
抗ＦＡＰ抗体を、OmniAb（登録商標）プラットフォーム（Crystal Biosciences）を使用して生成した。ここで、トランスジェニックニワトリ又はOminChicken（登録商標）は、本質的にＵＳ第９，４０４，１２５号に記載されるように、ヒト生殖細胞系統可変領域、ＶＨ及びＶＬ遺伝子ＩｇＨＶ３－２３^＊０４／ＩｇＫＶ３－１１^＊０１それぞれを含有するそのゲノム免疫グロブリン重鎖及び軽鎖遺ローカスを発現するように遺伝子操作されている。１０羽のOmnichicken（登録商標）を、１００μg ヒトＦＡＰ（フロイント完全アジュバントを含む）で筋肉内免疫化した。２週間後、１０羽のうちの５羽に、１００μg ヒトＦＡＰ（不完全アジュバントを含む）を受けさせ、１０羽のうちの５羽に、１００μg マウスＦＡＰ（不完全アジュバントを含む）を受けさせた。後続の追加免疫を２週間ごとに行い、１０羽のうちの５羽に、ヒトＦＡＰのみを受けさせ、１０羽のうちの５羽に、ヒト及びマウスＦＡＰを交互に受けさせた。カニクイザルＦＡＰは、免疫化スケジュールには含ませなかった。ヒトＦＡＰとカニクイザルＦＡＰとの間で、ほぼ１００％の相同性が認められたためである。

ほ乳類の種に代わるものとして、鳥類（特に、ニワトリ）は、魅力的な選択肢を提示している。鳥類は、系統発生的にヒトから離れており、高い親和性及び特異性の抗体を産生し、マウスではアクセスし得ない固有のエピトープを認識することができるためである。拡張されたエピトープ範囲は、この事例の利点である。ターゲットの機能的に異なる領域にアクセスする機会が増えるためである。

免疫化後、免疫化されたトランスジェニック動物由来の血清を単離した。ＦＡＰに特異的な抗体の血清力価をＥＬＩＳＡにより隔週で測定した。十分な力価に達した時、１００μg ヒトＦＡＰ又は５０μg ヒトＦＡＰ及びマウスＦＡＰのいずれかの最終追加免疫をアジュバントなしで静脈内投与した。

ＦＡＰに特異的なモノクローナル抗体を調製するために、抗体産生脾細胞を、７羽の免疫化トランスジェニック鳥から、最終追加免疫の４日後に単離した。ＦＡＰ特異的抗体をコードするｃＤＮＡを標準的な分子生物学技術によりクローニングし、トランスフェクトされた細胞中で発現させる。クローニングされたｃＤＮＡ分子からのモノクローナル抗体のｉｎｖｉｔｒｏ産生は、Andris-Widhopf et al., J. Immunol Methods 242:159(2000)及びBurton, Immunotechnology 1:87(1995)に記載されている。これらの開示は、参照により本明細書に組み入れられる。

ａ．免疫化及びスクリーニング戦略による種交差反応性クローンについての濃縮
最初に、ゲルカプセル化微小環境（ＧＥＭ）スクリーニング（Crystal Biosciences）を、レポータービーズにより６羽の鳥から単離された脾細胞を使用して行った。一方のレポータービーズは、ヒトＦＡＰで被覆されており、他方のレポータービーズは、マウスＦＡＰで被覆されており、交差反応性について選択した。ヒトタンパク質とカニクイザルタンパク質は、９９％相同であるため、カニクイザルスクリーニングは行わなかった。

ｂ．ヒトＦＡＰ及びマウスＦＡＰを安定して発現する細胞系統の生成
ＦＡＰは、ガン関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の細胞表面に高度に発現され、これは、多くのガンの腫瘍微小環境における重要なコンポーネントを表わす。ＨＴ１０８０は、線維肉腫細胞系統であり、腫瘍微小環境におけるＦＡＰの潜在的役割についてのモデルとして広く使用されている。ＨＴ１０８０細胞を、高レベルのヒトＦＡＰを発現するようにトランスフェクションした。Ｂ１６メラノーマは、転移及び固形腫瘍形成の研究に有用なマウス腫瘍細胞系統である。Ｂ１６細胞を、高レベルのマウスＦＡＰを発現するようにトランスフェクションした。

その目的で、レンチウイルス上清を種々の種のＦＡＰｃＤＮＡを含有するプラスミドにより２９３ＦＴ細胞をトランスフェクションすることにより産生した。また、プラスミドに、構築物が発現されている細胞の選択を可能にするために、ピューロマイシン耐性遺伝子を含ませた。１０cm培養プレート当たりに５×１０^６個の２９３ＦＴ細胞を完全ＤＭＥＭ１０mLに播種した。翌日、トランスフェクション混合物を、JetPRIME（登録商標）バッファー５００μl、８μg ＤＮＡ（ＦＡＰプラスミド）及びパッケージング混合物（ｐｓＰＡＸ２、ｐＭＤ２．Ｇ）２０μlを混合することにより調製した。ボルテックス後、JetPRIME（登録商標）試薬３６μlを加え、この混合物を再度ボルテックスした。室温で１５分後、トランスフェクション混合物を細胞（７０～８０％コンフルエント）上に注いだ。３７℃で４時間後、培養培地を新鮮な培地により置き換えた。翌日、ウイルス上清を収集し、硫酸プロタミンの添加後、続けて、ＨＴ－１０８０又はＢ１６細胞をトランスダクションするのに使用した。正に荷電したポリカチオン硫酸プロタミンにより、細胞とウイルスとの間の反発力が低下し、より高いトランスダクション効率がもたらされる。Ｔ２５フラスコ（完全培地４ml）中における３０％コンフルエントでのＨＴ－１０８０又はＢ１６細胞をレンチウイルス含有上清と共にインキュベーションし、ＣＯ_２インキュベーター中において、３７℃で一晩培養した。翌日、細胞をＰＢＳですすぎ、トランスダクションされた細胞の選択を可能にするために、ピューロマイシン（最終濃度１μg/ml）を含有する完全培地中で再懸濁させた。２回の後続ラウンドのウイルス除去後、ＦＡＰの発現を、FACSCanto（登録商標）ＩＩ分析器（BD Biosciences）を使用することにより、フローサイトメトリーによって確認した。

ｃ．ＦＡＰ抗体のＳｃＦｖ－Ｆｃへの再フォーマット
本明細書で使用する場合、「一本鎖Ｆｖ」、「一本鎖抗体」及び「ｓｃＦｖ」という用語は、重鎖及び軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠く単一ポリペプチド鎖抗体フラグメントを指す。一般的には、一本鎖抗体は、ＶＨ及びＶＬドメインを連結するペプチドリンカーをさらに含む。同リンカーにより、抗原に結合するための所望の構造を形成することが可能となる。

一本鎖抗体は、PluckthunによりThe Pharmacology of Monoclonal Antibodies vol. 113. Rosenburg and Moore edsにおいて詳細に検討されている。一本鎖抗体を生成する種々の方法は公知であり、例えば、ＵＳ第４，９４６，７７８号及び同第５，２６０，２０３号、ＷＯ第８８／０１６４９号、Bird(1988) Science 242:423-442、Huston et al.(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883、Ward et al.(1989) Nature 5 334:54454、Skerra et al.(1988) Science 242:1038-1041に記載されている。特定の実施態様では、少なくとも１つ、ただし好ましくは、２つのｓｃＦｖ抗体フラグメントが、抗体Ｆｃ領域と会合している。

ＦＡＰ結合クローンのパネルを特定し、ＳｃＦｖ－Ｆｃとしてフォーマットし、この分子を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製し、ヒトＦＡＰ及びマウスＦＡＰ発現安定細胞系統への結合についてチェックした（図９Ａ、図９Ｂ及び図９Ｃ）。

線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）ｓｃＦｖをコードする遺伝子セグメントを構築するために、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）結合可変ドメインをコードするＶＬ及びＶＨ遺伝子ペアを、ペプチド配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：２８２）の柔軟なリンカーをコードする遺伝子セグメントにより連結させた。次に、得られたｓｃＦｖをコードする遺伝子セグメントを、ヒトＩｇＧ抗体の重鎖をコードする遺伝子の３’末端にインフレームでクローニングした。これらのコードセグメントをオーバーラップＰＣＲ法により合成し、発現ベクターｐＴＴ５にクローニングした。

ｄ．ヒトＦＡＰ及びマウスＦＡＰ発現細胞に結合するリコンビナントＦＡＰタンパク質
非ＦＡＰ発現細胞ＨＴ－１０８０及びＢ１６を対照として保持した。１４９個のＦＡＰ抗体を特定し、ついで、最初の工程の精製、Ｔｍ測定（＞６０℃）及び分析用ＨＩＣカラムからの溶出、種々のタンパク質の疎水性の測定（９分未満）後に、％単量体（＞８５％）含量に基づいてトリアージした。１４９個の候補のうち、下記１１個の抗体を、選択された抗ＣＤ１３７バインダーと組み合わせた二重特異性抗体の生成のために選択した。

実施例５：ＣＤ１３７及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）をターゲットとする二重特異性構築物の生成
ついで、抗ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）－抗体であるウレルマブをコードするＶＬ及びＶＨ遺伝子のペアを、先に上記検討されたように、実施例１に概説された二重特異性フォーマットにフォーマットした。ＶＨ遺伝子を、ヒトＩｇγをコードする遺伝子の５’末端でのフレーム融合としてｐＴＴ５発現ベクターにクローニングした。１１個のＦＡＰ候補（表２０）を選択し、二重特異性分子としてフォーマットした。ここで、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）結合ｓｃＦｖをコードする遺伝子を同じＩｇγコードセグメントの３’末端でのインフレームでクローニングした。同様に、ＶＬ遺伝子を、ヒトＩｇＧカッパ軽鎖をコードする遺伝子とのインフレーム融合としてｐＴＴ５発現ベクターにクローニングした。Ｌｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａの突然変異を重鎖の定常領域に導入して、Ｆｃ－ガンマレセプターへの結合を妨げた（ＷＯ第２０１２／１３０８３１号を参照のこと）。得られた二重特異性二価構築物の模式図を図１Ａに示す。

ａ．ＦＡＰクローンの選択
以下の表に、ＦＡＰ活性をスクリーニングするのに使用された成熟二重特異性二価抗ＣＤ１３７（ウレルマブ）／ＦＡＰ抗体のアミノ酸配列を示す。

In-Fusion（登録商標）HDクローニングキット（Clonetech, U.S.A.）を、ＶＨ及びＶＬ遺伝子の方向性クローニングのための上記手法に使用した。線状化ベクターの末端に相補的な１５ｂｐ伸長を有するＶＬ／ＶＨのためのＰＣＲプライマーを合成した。ＰＣＲを、製造業者の標準的なプロトコールを使用して行い、アンプリコンを精製するか又はクローニングエンハンサーで処理し、ついで、適切なベクターにクローニングした。ついで、E.coliを、製造業者の説明書（Clonetech, U.S.A.）に従ってトランスフォーメーションした。ＤＮＡプレップを配列決定した。

各発現ベクターは、鎖をコードする遺伝子のための真核生物プロモーターエレメント、シグナル配列及び重鎖又は軽鎖をコードする遺伝子、原核生物選択マーカー遺伝子、例えば、アンピシリンのための発現カセット並びに複製起点を含有する。これらのＤＮＡプラスミドをアンピシリン耐性E. coliコロニー中で増幅させ、精製した。

ｂ．ヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及びヒト線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を認識する二重特異性で四価の分子の発現及び精製
上記実施例のように調製された発現ベクターをＣＨＯ－Ｅ細胞にトランスフェクションした。無血清培地中の懸濁液中で増殖するトランスフェクションされたＣＨＯ－Ｅ細胞を振とうフラスコ中において、１４０rpm、３７℃及び５％ＣＯ_２で撹拌しながら培養し、指数増殖の条件下で維持した。トランスフェクションの日に、細胞を１mg 軽鎖プラスミド及び０．５mg 重鎖プラスミドで化学的にトランスフェクションした。ついで、それらを、Gibco（登録商標）FreeStyle（商標）ＣＨＯ発現培地（LifeTechnologies, NY, US）１Ｌ中に、１～２×１０^６個/mlで播種した。ついで、細胞を、タンパク質の発現を可能にするために、市販の供給溶液１５０mlを１回供給しながら、軌道振とう下で１０～１２日間インキュベーションした。細胞培養上清中の抗体力価を、Octet（登録商標）機器（Pall ForteBio, CA, US）及びprotAバイオセンサーチップを使用して、製造業者の説明書に従って測定した。

リコンビナント抗体を培養上清から、MabSelect（商標）（Amersham Biosciences）を使用するプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製し、６０mM ＮａＯＡｃバッファー（ｐＨ５．０）中に保存した。サンプルの純度及び不均一性の程度を質量分光法及び分析用超遠心分離により評価した。全てのサンプルを機能試験の前に、≧９０％のモノマー含量を有し、＜１０％の不純物を含有することを確認した。

ｃ．ＣＤ１３７／ＦＡＰ二重特異性Ａｂの機能活性
Ｔ細胞線維芽細胞共培養アッセイを使用して、ＦＡＰ媒介性ＣＤ１３７架橋に特異的なＴ細胞活性化を実証した。

簡潔に、ＦＡＰ＋ＨＴ１０８０及びＨＴ１０８０親細胞を培養培地（RPMI1640/Glutamax, Gibco 61870-010、プラス１０％ＦＣＳ、Gibco 26140）中に播種した。３７℃及び５％ＣＯ_２で一晩静置した後、細胞をＣＤ１３７＋Ｊｕｒｋａｔ細胞と共に、所望の濃度での種々の抗体希釈液５０μLと２４時間インキュベーションした。ＮＦＫＢレポーター遺伝子活性を、CellTiter-Glo（登録商標）Luminescent Cell Viability Assay（Promega G7571）を使用することにより、製造業者により提供される説明書に従って評価した。最後に、発光を、Perkin Elmer製のVICTOR（商標）X4 2030マルチラベルプレートリーダーを使用して記録した。

ルシフェラーゼレポーターアッセイ系を使用して、本発明者らは、本発明のＣＤ１３７／ＦＡＰ二重特異性分子がＦＡＰ陽性細胞の存在下でのみＪｕｒｋａｔ細胞を活性化するが、ＦＡＰ陰性細胞の存在下では活性化しないことを確認した（図１２Ａ～図１２Ｃ）。これは、ＦＡＰ陽性及びＦＡＰ陰性細胞の存在下において、同程度でＪｕｒｋａｔ細胞を活性化するウレルマブとは対照的であった（図１２Ｂ）。このアッセイ系では、ウトミルマブは何ら活性を示さなかった（図１２Ｃ）。

ＮＦｋＢ－Ｊｕｒｋａｔアッセイにおける活性に基づいて、３つのクローンＦＡＰ８４．Ａ１１（それぞれＶＨ、ＶＬ配列番号：６２９、６３０）、ＦＡＰ８４．Ｂ８（それぞれＶＨ、ＶＬ配列番号：６３５、６３６）及びＦＡＰ６３．Ｃ３（それぞれＶＨ、ＶＬ配列番号：６２３、６２４）を最適化ＦＡＰ候補として特定した。これらのうち、２つのＦＡＰ分子を、候補クローンＣＤ１３７＃Ｂ２１及びＣＤ１３７＃Ａ４９を有するｄｏｐｐｅｌｍａｂとして調製し、４種類の親二重特異性構築物を得た。４つの親二重特異性に対応する配列を表２４、行１～４に提供する。発展性についての予備製剤化評価を、４つの最初のタンパク質について行った（表２２を参照のこと）。

実施例６：調製されたヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及びヒト線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）分子を認識する二重特異性分子の詳細
下記実施例では、本発明の多数の異なる二重特異性ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）／線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）抗体分子を調製した。混乱を避けるために、これらの分子の特徴及び配列を以下に提供する。

ａ．ＦＡＰの配列最適化
ＦＡＰ８４．Ａ１１（「ＦＡＰ＃１」）及びＦＡＰ６３．Ｃ３（「ＦＡＰ＃４」）親変異体の配列最適化のために、潜在的傾向部位における点突然変異をヒトフレームワークにおいて形成した。以下に、ＦＡＰ候補についての配列を記載する。

機能アッセイにおける活性に基づいて、３つの抗ＦＡＰ候補であるＦＡＰ－Ａ１１－ＶＫ３－ＶＨ１３又は「ＦＡＰ＃２」、ＦＡＰ－Ａ１１－ＶＫ７－ＶＨ１又は「ＦＡＰ＃３」及びＦＡＰ－Ｃ３－ＶＫ１－ＶＨ４又は「ＦＡＰ＃５」を特定し、８つの配列最適化された抗ＣＤ１３７結合分子（以下の表２４に記載されているように、Ｂ２１変異体Ｖ．１６（「ＣＤ１３７＃２」）、Ｖ．２２（「ＣＤ１３７＃３」）、Ｖ．２５（「ＣＤ１３７＃４」）、Ｖ．２９（「ＣＤ１３７＃５」）、Ｖ．３７（「ＣＤ１３７＃６」）並びにＡ４９変異体Ｖ．４３（「ＣＤ１３７＃８」）、Ｖ．４７（「ＣＤ１３７＃９」）及びＶ．４８（「ＣＤ１３７＃１０」））でフォーマットし、２４個のＣＤ１３７－ＦＡＰ二重特異的分子を生じさせた。

実施例７：ｉｎｖｉｔｒｏアッセイ－ターゲットされたＣＤ１３７－ＦＡＰ結合分子の生物学的活性；ＪｕｒｋａｔＣｅｌｌｓにおけるＣＤ１３７のＦＡＰ依存性架橋
Ｔ細胞線維芽細胞共培養アッセイを使用して、ＦＡＰ媒介性ＣＤ１３７架橋に特異的なＴ細胞活性化を実証した。このために、内部で生成されたＦＡＰ＋ＨＴ１０８０又はＦＡＰ－ＨＴ１０８０親細胞をＪｕｒｋａｔ－ＣＤ１３７ＮＦκＢルシフェラーゼ細胞（Promega #CS196004）の培養物に加えた。Ｊｕｒｋａｔ－ＣＤ１３７の活性化は、ＮＦκＢ駆動ルシフェラーゼレポーターを介して測定される。細胞をＣＤ１３７／ＦＡＰ分子の存在下で培養して、ＦＡＰ選択的ＣＤ１３７アゴニストを特定した。ＥＣ９０／ＩＣ９０値を表２５及び表２６に示す。

ＥＣ_５０、ＩＣ_５０、ＥＣ_９０及びＩＣ_９０並びにその比率ＩＣ_５０／ＥＣ_５０及びＩＣ_９０／ＥＣ_９０を代表的なクローンについて計算し、表２６で比較した。全てのクローンは、比較的同等の挙動を示した。具体的には、これらの分子は、ベル型応答を示し、これは、このアッセイに固有であった。この応答は、統計的に類似したＩＣ５０／ＥＣ５０及びＩＣ９０／ＥＣ９０比を生じる分子間で一致した。

ルシフェラーゼレポーターアッセイ系を使用して、本発明者らは、本発明のＣＤ１３７／ＦＡＰ二重特異性分子がＦＡＰ陽性細胞の存在下でのみＪｕｒｋａｔ－ＣＤ１３７細胞を活性化するが、ＦＡＰ陰性細胞の存在下では活性化しないことを確認した。データから、ＣＤ１３７変異体分子のセットが多様なレベルの活性を示すことが示され、全てのＣＤ１３７係合、したがって、活性がＦＡＰ発現細胞の存在下でのみ生じるように限定されたことも示される（図１３Ａ～図１３Ｄ）。

実施例８：Ｔ細胞活性化に対する二重特異性ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）／線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）分子の影響
本発明のＣＤ１３７／ＦＡＰ分子は、ＦＡＰ依存的にＣＤ１３７レセプターを介してＴ細胞を活性化する非常に特異的かつ強力な分子である。本発明のＣＤ１３７／ＦＡＰ分子が初代ヒトＴ細胞に係合し、活性化する能力を評価するために、ＩＦＮ－γ分泌を測定するヒトＰＢＭＣ活性化アッセイを使用した。このアッセイを、上記実施例７に記載されたＪｕｒｋａｔＮＦκＢスクリーニングアッセイから選択されたＣＤ１３７／ＦＡＰ分子を使用して行った。

活性化を実証し、腫瘍微小環境をシミュレーションするために、抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）を０．５μg/mlの濃度でプレート上に被覆した。次に、マイトマイシンＣ処理ＨＴ１０８０－ＦＡＰ陽性細胞に、ヒトＰＢＭＣを加えた。Ｔ細胞活性化をＭＳＤ分析（Meso Scale Discovery）によるｈＩＦＮ－γレベルを定量することにより、２４時間後に測定した。各クローンについてのＥＣ_５０値を図１４Ａ～図１４Ｈに示す。ＣＤ３単独での刺激により、ＩＦＮ－γ分泌がもたらされるが、ＣＤ１３７／ＦＡＰ分子の存在下でＦＡＰ陽性ＨＴ１０８０細胞と共培養されたＰＢＭＣにより、ＣＤ３単独のレベルより５０％多いＩＦＮ－γが分泌された。このＩＦＮ－γの増加は、ＣＤ１３７ＦＡＰ分子により提供される共刺激活性によるものである場合がある。

さらに、８名の健康なドナー由来の初代ヒトＰＢＭＣも、ＨＴ１０８０－ＦＡＰ＋ｖｅ線維肉腫細胞の存在下で、本発明のＣＤ１３７／ＦＡＰ二重特異性分子のレベルを増加させて培養した場合、ＦＡＰ依存性ＩＦＮ－γ産生を示した。

図１５Ａ及び図１５Ｂに、例示的なＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ分子の濃度を増加させた個々のドナーのＰＢＭＣのｈＩＦＮ－γ分泌を示す（図１５Ｂ）。この例示は、ＦＡＰ発現細胞の存在下で、複数のドナーＰＢＭＣにわたって一貫した強力なＩＦＮ－γ応答であったこの一連の分子に理想的な特性を示した。さらに、この応答は、ＦＡＰ発現細胞の不存在下で失われた。

実施例９：ｉｎｖｉｔｒｏＦＡＰ酵素活性はＣＤ１３７／ＦＡＰ結合により阻害されない
ＦＡＰはエンドペプチダーゼ活性を有する表面局在糖タンパク質である。ＦＡＰの発現は、ほとんどの組織で低いが、活性化された線維芽細胞では活発な組織リモデリング部位及びガンでアップレギュレーションされている。幾つかの基質が、ＦＡＰにより開裂されることが報告されているが、この活性の生理学的重要性は十分に理解されていない。この目的で、ＦＡＰ酵素アッセイを使用して、本発明のＦＡＰターゲット抗体がＦＡＰ酵素活性を妨害するかどうかを決定した。

これを実証するために、蛍光ＦＡＰ活性アッセイ（BPS Bioscience #80210）を使用した。このアッセイを、阻害が濃度依存性であるＦＡＰ阻害についての陽性対照としてタラボスタットメシラートを使用して行った（図１６Ｂ）。図１６Ａでは、本発明の例示的な分子であるＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ａ１１がＦＡＰタンパク質の酵素活性を妨害せず、このため、ＦＡＰの生理学的活性を妨害しないようであることを実証されている。

実施例１０：ＣＲＣ異種移植モデルにおける二重特異性分子のｉｎｖｉｖｏ有効性
また、本発明者らは、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）及び線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を認識する結合分子のｉｎｖｉｖｏ有効性を調査した。この目的で、ヒト腫瘍モデルを開発した。

有効性試験をCD137 KI HuGEMM（商標）マウスの皮下同系ＭＣ３８結腸直腸ガンモデルで行った。このモデルでは、腫瘍細胞及び腫瘍間質細胞は、マウス由来のものであり、Ｔ細胞も、マウス由来であるが、細胞表面上にヒトＣＤ１３７抗原を発現する。簡潔に、ＭＣ３８マウス腫瘍細胞を腫瘍発生のために、約１×１０^６個の腫瘍細胞/マウスで右後側腹部に皮下接種した。処置を腫瘍が６３．６mm3の体積中央値であった７日目に開始し、マウス交差反応性ＣＤ１３７／ＦＡＰ、マウス最適化代替分子（ＶＨ及びＶＬそれぞれ、配列番号：１６９、１７０）又は媒体バッファー（５０mM ＮａＯＡｃ、１００mM ＮａＣｌ、ｐＨ５．０）を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）により、ｑ７ｄ投与計画で投与し、マウスＰＤ－１抗体（マウスＰＤ－１抗体は、Chen, S., Lee, L-F., Fisher, T.S, et al., Feb 2015, DOI: 10.1158/2326-6066.CIR-14-0118（参照により本明細書に組み入れられる）に記載されているクローンＲＭＰ１－１４に由来する）を週２回ｉ．ｐ．投与した。

腫瘍成長を外部キャリパー測定によりモニターし、腫瘍体積を、標準的な半楕円体式を使用して計算した。人道的エンドポイントに達した動物を倫理的理由から研究の初期に安楽死させた。エンドポイント腫瘍をＩＨＣ分析のために収集した。本発明者らは、媒体単独と比較して、腫瘍へのＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤の増加を見出した。

図１７に示された模式図に、CD137 KI HuGEMM（商標）マウスでの皮下同系ＭＣ３８結腸直腸ガンモデルにおける分子の投与スケジュールを表わす。

最初のｉｎｖｉｖｏ研究では、マウスをｑ７ｄ計画において１０mg/kgの用量でｉ．ｐ．投与された最適化されたヒトＣＤ１３７－Ｂ２１／ＦＡＰ－Ｃ３又はマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ａ１１分子のいずれかで処置した。両分子ともに、弱い腫瘍活性を示し、ＴＧＩは、２２日目にそれぞれ４３％及び４６％であった（図１８Ｂ）。

図１８Ａ～図１８Ｄに、CD137 KI HuGEMMマウスでの皮下同系ＭＣ３８結腸直腸ガンモデルにおけるヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１単剤療法のインビボ有効性を示す。図１８Ａに、ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３での処置後の平均腫瘍成長曲線を示し、図１８Ｂに、ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３での処置後の個々の腫瘍成長曲線を示す。同様に、図１８Ｃに、マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１での処置後の平均腫瘍成長曲線を示し、図１８Ｄに、マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１での処置後の個々の腫瘍成長曲線を示す。

図１８Ａ～図１８Ｄに提示されたデータから、本発明の結合分子が対照群と比較した場合、腫瘍体積の減少を誘引可能であり、その効果が用量依存性であることが実証される。

図１９Ａ及び図１９Ｂに提示されたデータから、本発明のヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＣ３及びマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰ－Ａ１１結合分子が対照群と比較した場合、腫瘍微小環境へのＣＤ３＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加を誘引可能であることが実証される。

実施例１１：ＰＤ－１Ａｂ及びＣＤ１３７／ＦＡＰによる相乗効果
本発明者らは、ｑ７ｄ計画において１０mg/kgで投与されるＣＤ１３７／ＦＡＰと、ｑ３ｄ／ｑ４ｄ計画において１０mg/kgでのマウスＰＤ－１抗体（マウスＰＤ－１抗体は、Chen, S., Lee, L-F., Fisher, T.S, et al., Feb 2015, DOI: 10.1158/2326-6066.CIR-14-0118（参照により本明細書に組み入れられる）に記載されているクローンＲＭＰ１－１４に由来する）との併用の可能性を調査した。

この研究では、単剤療法としてマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１での処置により、４４％のＴＧＩで同様の腫瘍活性がもたらされた。ただし、この実施例では、ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１は、単独療法として腫瘍活性を示さなかった。これは、マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１と比較して、ヒトＦＡＰに対する約１３０倍弱い親和性と組み合わせた典型的なバリエーションの生物学的モデルにより説明することができた。

図２０Ｂ～図２０Ｅに提示されたデータから、本発明の結合分子が対照群と比較した場合、ＰＤ－１アンタゴニストｍＡｂと併用して腫瘍体積の減少を誘引可能であり、その効果が用量依存性であることが実証される。

マウスＰＤ－１抗体とヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１（図２０Ｂ及び図２０Ｄ）又はマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１（図２０Ｃ及び図２０Ｅ）との併用療法により、腫瘍活性の強力かつ統計的に有意な（ｐ＜０．０００１）向上がもたらされ、２４日目のＴＧＩはそれぞれ、９２％及び９４％であった。このことから、ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１と抗ＰＤ－１との併用の相乗効果が示唆される。

また、マウスＰＤ－１抗体とヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１又はマウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１との併用療法によりそれぞれ、５０％及び３７．５％の顕著な数値の腫瘍の退縮（１００mm³未満の腫瘍体積と定義）ももたらされた。このことから、ＣＤ１３７／ＦＡＰ分子と抗ＰＤ－１との併用の相乗効果が示唆される（表２７）。この効果は、用量依存性であり、１mpk マウスＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１で腫瘍退縮の消失を伴う（表２７）。

表２７に提示されたデータから、本発明の結合分子が対照群と比較して、ＰＤ－１アゴニストと併用した場合、腫瘍退縮を誘引可能であり、その効果が用量依存性であることが実証される。

マウスＰＤ－１抗体とヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１との併用療法により、腫瘍生存面積の強力かつ統計的に有意な減少並びにＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤の両方の増加がもたらされた。このことから、ヒトＣＤ１３７Ｂ２１／ＦＡＰＡ１１と抗ＰＤ－１との併用の相乗効果が示唆された（図２１Ａ～図２１Ｇ）。ＣＤ８＋浸潤のこの増加（図２１Ｃ）は、腫瘍生存面積の減少（図２１Ｇ）と正に相関した。

図２１Ａ～図２１Ｇに提示されたデータから、本発明の結合分子が対照群と比較して、ＰＤ－１アゴニストと併用された場合、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞浸潤の両方を誘引可能であることが実証される。また、データから、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加が腫瘍生存領域の消失と正に相関することも実証される。

Claims

ＣＤ１３７（４－１ＢＢリガンドレセプター、４－１ＢＢ）に特異的に結合する２つの抗原結合部位と、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する２つの抗原結合部位とを有し、
ここで、ＣＤ１３７（４－１ＢＢリガンドレセプター）に特異的に結合する抗原結合部位は、免疫グロブリン分子の一部であり、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部位は、２つのｓｃＦｖを含む、
二重特異性かつ四価の結合分子。
２つ以上のｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端へのＶＬ－ＶＨ配向を有する、請求項１記載の結合分子。
２つのｓｃＦｖがそれぞれ、Ｉｇ分子の重鎖のＣ末端に融合される、請求項１記載の結合分子。
Ｉｇ分子が、ＩｇＧである、請求項１記載の結合分子。
２つのｓｃＦｖが、４～２０個のアミノ酸の長さを有するペプチドリンカーにより、Ｉｇ分子に融合される、請求項１記載の結合分子。
ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合する抗原結合部位が、下記：
ｉ）配列番号：２９０（ＣＤＲ１）、配列番号：８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２（ＣＤＲ１）、配列番号：１３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｉ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：１８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：２２（ＣＤＲ１）、配列番号：２３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｉｉ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：２８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：３２（ＣＤＲ１）、配列番号：３３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｖ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：３８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：４２（ＣＤＲ１）、配列番号：４３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：４８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：５２（ＣＤＲ１）、配列番号：５３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖｉ）配列番号：２９５（ＣＤＲ１）、配列番号：５８（ＣＤＲ２）及び配列番号：９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：６２（ＣＤＲ１）、配列番号：６３（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖｉｉ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：６８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖｉｉｉ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：７８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：７２（ＣＤＲ１）、配列番号：７３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｘ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：８８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｘ）配列番号：３０８（ＣＤＲ１）、配列番号：９８（ＣＤＲ２）及び配列番号：６９（ＣＤＲ３）を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：９２（ＣＤＲ１）、配列番号：９３（ＣＤＲ２）及び配列番号：７４（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ
を含む重鎖及び軽鎖可変領域を含む群より選択される免疫グロブリン分子の一部である、請求項１～５のいずれか一項記載の結合分子。
ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合する抗原結合部位が、下記：
ｉ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｉ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｉｉ）配列番号：３０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：３５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｖ）配列番号：４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：４５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖ）配列番号：５０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：５５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖｉ）配列番号：６０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：６５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖｉｉ）配列番号：７０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：７５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖｉｉｉ）配列番号：８０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：８５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｘ）配列番号：９０のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：９５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｘ）配列番号：１００のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１０５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖
を含む群より選択される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の一部である、請求項１～６のいずれか一項記載の結合分子。
線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部位が、下記：
ｉ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１０８（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１１１（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｉ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１７（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２０（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｉｉ）配列番号：３１９（ＣＤＲ１）、配列番号：１２６（ＣＤＲ２）及び配列番号：１０９（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１２９（ＣＤＲ１）、配列番号：１１２（ＣＤＲ２）及び配列番号：１１３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｉｖ）配列番号：３２８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３５（ＣＤＲ２）及び配列番号：１３６（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ又は
ｖ）配列番号：３３３（ＣＤＲ１）、配列番号：１４４（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４５（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ並びに配列番号：１３８（ＣＤＲ１）、配列番号：１３９（ＣＤＲ２）及び配列番号：１４０（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ
を含むｓｃＦｖの群より選択される、請求項１～７のいずれか一項記載の結合分子。
線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部位が、下記：
ｉ）配列番号：１０６のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｉ）配列番号：１１５のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１１９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｉｉ）配列番号：１２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１２８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｉｖ）配列番号：１３３のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１３７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖又は
ｖ）配列番号：１４２のアミノ酸配列を含む可変重鎖及び配列番号：１４６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖
を含む群より選択される、請求項１～８のいずれか一項記載の結合分子。
（ｉ）配列番号：１５９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｉｉ）配列番号：１６４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１６５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｉｉｉ）配列番号：１６９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１７０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｉｖ）配列番号：１７４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１７５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｖ）配列番号：１７９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｖｉ）配列番号：１８４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｖｉｉ）配列番号：１８９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｖｉｉｉ）配列番号：１９４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：１９５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｉｘ）配列番号：１９９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２００のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘ）配列番号：２０４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２０５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉ）配列番号：２０９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２１０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉｉ）配列番号：２１４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２１５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉｉｉ）配列番号：２１９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２２０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉｖ）配列番号：２２４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２２５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖ）配列番号：２２９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２３０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖｉ）配列番号：２３４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２３５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖｉｉ）配列番号：２３９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｖｉｉｉ）配列番号：２４４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２４５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｉｘ）配列番号：２４９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２５０のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｘ）配列番号：２５４のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２５５のアミノ酸配列を含む軽鎖又は
（ｘｘｉ）配列番号：２５９のアミノ酸配列を含み、そのＣ末端でｓｃＦｖに融合された免疫グロブリン重鎖及び配列番号：２６０のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、
免疫グロブリン様結合分子。
ＣＤ１３７結合部分は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
ここで、
（ｉ）重鎖可変領域は、配列番号：１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０及び１００からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含み又は
（ｉｉ）軽鎖可変領域は、配列番号：１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５及び１０５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含み又は
（ｉｉｉ）得られた分子は、１×１０－７M以下のＫ_ＤでヒトＣＤ１３７に結合し、
（ｉｖ）得られた分子は、ＦＡＰ結合の不存在下で、ＣＤ１３７クラスター化及びＴ細胞活性化を実質的に媒介せず又は
（ｖ）得られた分子は、アミノ酸８７～１１８（配列番号：３５２）の細胞外ドメインＣＲＤ３でＣＤ１３７上のエピトープに結合し、上記抗原結合分子（ｉ）～（ｉｖ）のいずれかの結合を遮断しかつ／もしくはこれらと結合について競合し又は
（ｖｉ）得られた分子は、アミノ酸４６～１１７（配列番号：３５６）の細胞外ドメインＣＲＤ２／ＣＲＤ３でＣＤ１３７上のエピトープに結合し、上記抗原結合分子（ｉ）～（ｉｖ）のいずれかの結合を遮断しかつ／もしくはこららと結合について競合する、
ＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子。
ＦＡＰ結合部分が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
ここで、
（ｉ）重鎖可変領域が、配列番号：１０６、１１５、１２４、１３３及び１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）軽鎖可変領域が、配列番号：１１０、１１９、１２８、１３７及び１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％相同なアミノ酸配列を含む、請求項１１記載のＣＤ１３７／ＦＡＰ結合分子。
請求項１～１２のいずれか一項記載の結合分子をコードする、核酸分子もしくは複数の核酸分子又はこのような１つ以上の核酸分子を含有する１つ以上の発現ベクター。
請求項１３記載の核酸分子を含有する、
ホスト細胞。
請求項１～１２のいずれか一項記載の結合分子の製造方法であり、
（ｉ）請求項１４記載のホスト細胞を該分子の発現を可能にする条件下で培養することと、
（ｉｉ）該分子を回収することとを含む、
方法。
医薬において使用するための、請求項１～１２のいずれか一項記載の結合分子。
ガン、好ましくは、結腸直腸ガン（ＣＲＣ）（例えば、結腸直腸腺ガン）、胃ガン（ＧＣ）（例えば、胃腺ガン）、膵臓ガン（ＰＡＣ）（例えば、膵臓腺ガン）及び肺ガン（ＬＣ）（例えば、肺扁平上皮ガン、肺腺ガン）の治療に使用するための、請求項１～１２のいずれか一項記載の結合分子。
請求項１～１２、１６又は１７のいずれか一項記載の結合分子を薬学的に許容し得る担体及び場合により、１種以上の更なる有効成分と共に含む、
医薬組成物。
有効量の請求項１～１２のいずれか一項記載の結合分子を、それを必要とする患者に投与することを含む、
ガンの処置方法。
前記方法が、ＣＤ１３７及びＦＡＰに特異的に結合可能なポリペプチドをＰＤ－１抗体と組み合わせて、それを必要とする患者に投与することを含む、請求項１９記載の方法。