JP2023545019A

JP2023545019A - タンパク質精製プロセスにおいて宿主細胞タンパク質含有量を減少させるための方法

Info

Publication number: JP2023545019A
Application number: JP2023520349A
Authority: JP
Inventors: デイビッドボウズ，ブライアン; エレンクレブス，ララ
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 2020-10-02
Filing date: 2021-10-04
Publication date: 2023-10-26
Anticipated expiration: 2041-10-04
Also published as: PE20231507A1; ECSP23024034A; AU2021355521A1; KR20230078748A; IL301572A; IL301584A; EP4222160A1; JP7668351B2; JP2023544399A; KR20230061462A; AU2021355518A1; AR123688A1; CA3193722A1; AU2021355518A9; CN116547292A; MX2023003836A; MX2023003863A; CN116348486A; CL2023000961A1; WO2022072934A1

Abstract

本開示は、患者への投与を意図したタンパク質の製造プロセスにおいて、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させるための方法に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、組換えタンパク質製造の分野に関する。より具体的には、本発明は、患者への投与を意図したタンパク質の製造プロセスにおいて、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させるための方法を提供する。

宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）は、細胞の維持及び増殖、並びにタンパク質の合成及びプロセシングに関与する宿主細胞のタンパク質である。しかしながら、治療用又は診断用タンパク質の領域では、ＨＣＰの存在は、凝集、触媒活性による生成物の断片化、及び／又は免疫原性等の問題を引き起こし、製品の品質及び患者の安全を脅かす。したがって、ＨＣＰは、タンパク質製剤の重要品質特性（ＣＱＡ）として特定されている。望ましくない凝集体の形成及び生成物の断片化は、ＨＣＰを減少させる／除去するための追加の精製ステップを必要とし、これらの追加の精製ステップは、多くの場合、所望のタンパク質の収量を減少させ、全体的な製造コストを増加させる。

製造プロセスからＨＣＰを排除するという課題、及びＨＣＰを減少させるプロセスを改善する試みが、例えば、Ｇｉｌｇｕｎｎｅｔａｌ；Ｇｏｅｙｅｔａｌ．，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡｄｖａｎｃｅｓ３６（２０１８）１２２３－１２３７、及びＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ２０１８，２２：９８－１０６に開示されている。しかしながら、ＨＣＰを除去するためのこれらのプロセスには限界がある。例えば、場合によっては、これらの開示は、ＨＣＰの不完全な除去、凝集につながるＨＣＰの除去におけるプロセスの不一致、所望のタンパク質及びＨＣＰの同時精製、製品機能の低下、患者における免疫原性の懸念、及び／又は半減期等の薬物動態特性の低下のうちの１つ以上を示している。更に、ＨＣＰを除去するために開発されたプロセスは、多くの場合、例えば、作業量が多く、追加の精製ステップを必要とし、製造コストが増加し、収率が低下することが多い。場合によっては、この方法の適用可能性は、特定の分子及び／又は形態に限定される。そのため、治療用又は診断用タンパク質の精製プロセスにおいてＨＣＰを減少させる代替方法が必要とされている。このような代替方法は、好ましくは、最終的に製品の品質を維持するために、製品の安定性、収率、又はコストに影響を与えることなくＨＣＰを減少させ、大規模な製造に適しており、患者の安全を保障する。

したがって、本発明は、治療用又は診断用タンパク質の調製においてＨＣＰを減少させる代替方法を提供することによって、上記の問題のうちの１つ以上に対応する。本発明の方法は、ＨＣＰの除去に非常に効果的である一方で、タンパク質の安定性を維持し、凝集を低減し、生成物の収率を維持し、免疫原性のリスクを低下させる可能性を有する、再現可能な方法を提供する。そのような方法は、タンパク質調製量を増加する必要なく、ＨＣＰを効果的に除去することができる。驚くべきことに、本発明の方法は、＜１００ｐｐｍの業界許容基準を十分に下回るＨＣＰ数を達成した。驚くべきことに、実施形態において、本発明の方法は、タンパク質の安定性を維持し、凝集を低減し、生成物の収率を維持しながら、＜５０ｐｐｍのＨＣＰ数を達成した。更に驚くべきことに、本発明の他の実施形態は、タンパク質の安定性を維持し、凝集を低減し、生成物の収率を維持しながら、＜２０ｐｐｍのＨＣＰ数を達成した。更に、本発明の実施形態は、広範囲の分子に適用可能なＨＣＰ除去の方法を提供する。本発明の他の実施形態は、追加の精製ステップの排除を可能にし、バッチ処理時間の短縮、及び製造コストの削減をもたらす。

したがって、特定の実施形態は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させることと、溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。いくつかの実施形態において、弱酸は７．０未満のｐＫａ値を１つのみ有し、強酸は７．０未満のｐＫａ値を１つのみ有する。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

したがって、特定の実施形態において、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることと、溶出液に対してウイルス不活性化を行うことと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させることと、溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法が提供される。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。いくつかの実施形態において、弱酸は７．０未満のｐＫａ値を１つのみ有し、強酸は７．０未満のｐＫａ値を１つのみ有する。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

したがって、特定の実施形態において、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることと、ウイルス不活性化を行うことであって、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからの溶出液のｐＨをｐＨ約４．０未満に調整することを含み、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、ウイルス不活性化を行うことと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法が提供される。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

したがって、特定の実施形態において、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が酢酸であり、強酸がリン酸又は乳酸である、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨをｐＨ約４．０未満に調整することであって、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法が提供される。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

本発明のいくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が酢酸であり、強酸がリン酸又は乳酸であり、酢酸の濃度が約２０ｍＭであり、リン酸の濃度が約５ｍＭ～約１０ｍＭである、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨをｐＨ約４．０未満に調整することであって、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

本発明のいくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が酢酸であり、強酸が乳酸であり、酢酸の濃度が約２０ｍＭであり、乳酸の濃度が約５ｍＭである、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨをｐＨ約４．０未満に調整することであって、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

いくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が酢酸であり、強酸がリン酸又は乳酸である、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨを調整することであって、溶出液のｐＨを調整する上記ステップが、約２０ｍＭのＨＣｌを溶出液に添加することを含み、溶出液のｐＨがｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に調整され、溶出液がｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

いくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が酢酸であり、強酸がリン酸又は乳酸である、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨを調整することであって、溶出液のｐＨを調整する上記ステップが、約２０ｍＭのＨＣｌを溶出液に添加することを含み、溶出液のｐＨがｐＨ約３．５に調整され、溶出液がｐＨ約３．５に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

いくつかの特定の実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が酢酸であり、強酸がリン酸又は乳酸である、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨをｐＨ約４．０未満に調整することであって、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、約２５０ｍＭのトリス緩衝液を溶出液に添加することを含む、溶出液のｐＨをｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、溶出液のｐＨをｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇させることは、約１００ｍＭ～約１０００ｍＭのトリス緩衝液を溶出液に添加することを含む。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．５超～ｐＨ約７．５に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

いくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が酢酸であり、強酸がリン酸又は乳酸である、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨをｐＨ約４．０未満に調整することであって、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、約２５０ｍＭのトリス緩衝液を溶出液に添加することを含む、溶出液のｐＨをｐＨ約７．０に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、溶出液のｐＨをｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇させることは、約１００ｍＭ～約１０００ｍＭのトリス緩衝液を溶出液に添加することを含む。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約７．０に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

いくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が酢酸であり、強酸がリン酸又は乳酸である、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨをｐＨ約４．０未満に調整することであって、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることであって、デプスフィルターにかけられる溶出液は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭのイオン強度を有する、得ることと、を含む方法を提供する。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

特定の実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が酢酸であり、強酸がリン酸又は乳酸である、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨをｐＨ約４．０未満に調整することであって、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持され、ウイルス不活性化が達成される、調整することと、を含む方法を提供する。

本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得ることであって、弱酸が、約２０ｍＭの濃度で酢酸を含み、強酸が、リン酸、ギ酸、又は乳酸のうちのいずれか１つを含み、強酸の濃度が約５ｍＭ～約１０ｍＭである、得ることと、クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨを調整することであって、溶出液のｐＨを調整する上記ステップが、ＨＣｌ、リン酸、クエン酸、又は酢酸及びリン酸の組み合わせのうちのいずれか１つを溶出液に添加することを含み、ｐＨがｐＨ約４．０未満に調整され、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超～ｐＨ７．５に上昇させることと、タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得ることと、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、ｐＨをｐＨ約６．０超～約７．５に上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満に減少する。更なる実施形態において、溶出ステップは、酢酸及びリン酸、酢酸及び乳酸、又は酢酸及びギ酸からなる酸の組み合わせを含み、ｐＨをｐＨ約４．０未満に調整するステップは、ＨＣｌ、リン酸、クエン酸、又は酢酸及びリン酸の組み合わせのうちのいずれか１つを添加することを含む。更なる実施形態において、溶出ステップは、約２０ｍＭの酢酸及び約１０ｍＭのリン酸、約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭのリン酸、又は約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭのギ酸のうちのいずれか１つの組み合わせを含み、ｐＨをｐＨ約４．０未満に調整するステップは、約２０ｍＭのＨＣｌ、約１５ｍＭ～約２００ｍＭのリン酸、約１０００ｍＭのクエン酸、又は約２０ｍＭの酢酸及び約１０ｍＭのリン酸の組み合わせのうちのいずれか１つを添加するステップを含む。そのような実施形態において、ｐＨを約６．０超のｐＨに上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。

本発明の一態様では、本発明は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、
宿主細胞内で組換えによって産生されたタンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供するステップと、
弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いてクロマトグラフィーカラムから目的のタンパク質を溶出して、目的のタンパク質を含む溶出液を得るステップであって、弱酸が酢酸であり、強酸がリン酸又は乳酸である、ステップと、
クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出する上記ステップからのタンパク質を含む溶出液のｐＨをｐＨ約４．０未満に調整するステップであって、溶出液がｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、ステップと、
溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップと、
タンパク質を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、
濾過されたタンパク質調製物を得るステップと、を含む方法を提供する。

好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は減少する。より好ましくは、濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満、約５０ｐｐｍ未満、又は約２０ｐｐｍ未満に減少する。

いくつかの実施形態において、タンパク質は、治療用又は診断用タンパク質、例えば、抗体、Ｆｃ融合タンパク質、ペプチド、イムノアドヘシン、酵素、成長因子、受容体、ホルモン、調節因子、サイトカイン、抗原、ペプチド、又は結合剤である。更なる実施形態において、タンパク質は、抗体、例えば、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、又は抗体フラグメントである。いくつかの実施形態において、タンパク質はＩｇＧ１抗体であるか、又はＩｇＧ１抗体のＦｃ部分を含有する。いくつかの実施形態において、タンパク質は抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体である。

本発明の別の態様において、本発明は、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、
宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を、アフィニティークロマトグラフィーカラム、例えば、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーカラムに供するステップと、
酢酸及びリン酸を含む酸の組み合わせ、又は酢酸及び乳酸の組み合わせを用いて抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を溶出して、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液を得るステップと、
約２０ｍＭＨＣｌの添加により抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを調整するステップであって、ｐＨがｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に調整され、溶出液がｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に約０分～約１８０分間維持される、ステップと、
約２５０ｍＭのトリス緩衝液の添加により抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを上昇させるステップであって、ｐＨがｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇される、ステップと、
抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を得るステップと、を含み、
デプス濾過後の濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量が、約０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍに減少し、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体がＩｇＧ１抗体である、方法を提供する。

本発明のいくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約１０ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭの乳酸を含む酸の組み合わせを用いて、クロマトグラフィーカラムからの抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を溶出して、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液を得ることと、約２０ｍＭＨＣｌの添加により抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを調整することであって、ｐＨがｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に低下され、溶出液がｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、約２５０ｍＭのトリス緩衝液の添加により抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを上昇させることであって、ｐＨがｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇される、上昇させることと、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を得ることと、を含み、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量が約０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍであり、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体がＩｇＧ１抗体である、方法を提供する。いくつかの実施形態において、溶出液のｐＨをｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇させることは、約１００ｍＭ～約１０００ｍＭのトリス緩衝液を溶出液に添加することを含む。

本発明のいくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約１０ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭの乳酸を含む酸の組み合わせを用いて、クロマトグラフィーカラムからの抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を溶出して、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液を得ることと、約２０ｍＭＨＣｌを用いて抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを調整することであって、ｐＨがｐＨ約３．５に調整され、溶出液がｐＨ約３．５に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、約２５０ｍＭのトリス緩衝液を用いて抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを上昇させることであって、ｐＨがｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇される、上昇させることと、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を得ることと、を含み、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量が約０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍであり、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体がＩｇＧ１抗体である、方法を提供する。いくつかの実施形態において、溶出液のｐＨをｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇させることは、約１００ｍＭ～約１０００ｍＭのトリス緩衝液を溶出液に添加することを含む。

本発明のいくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約１０ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭの乳酸を含む酸の組み合わせを用いて、クロマトグラフィーカラムからの抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を溶出して、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液を得ることと、約２０ｍＭＨＣｌの添加により抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを調整することであって、ｐＨがｐＨ約３．５に低下され、溶出液がｐＨ約３．５に約０分～約１８０分間維持され、ウイルス不活性化が達成される、調整することと、を含む、方法を提供する。

本発明のいくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約１０ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭの乳酸を含む酸の組み合わせを用いて、クロマトグラフィーカラムからの抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を溶出して、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液を得ることと、約２０ｍＭＨＣｌの添加により抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを調整することであって、ｐＨがｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に低下され、溶出液がｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、約２５０ｍＭのトリス緩衝液を用いて抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを上昇させることであって、ｐＨがｐＨ約７．２５に上昇される、上昇させることと、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を得ることと、を含み、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量が約０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍであり、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体がＩｇＧ１抗体である、方法を提供する。いくつかの実施形態において、溶出液のｐＨをｐＨ約７．２５に上昇させることは、約１００ｍＭ～約１０００ｍＭのトリス緩衝液を溶出液に添加することを含む。

本発明のいくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭのリン酸を含む酸の組み合わせ、又は約２０ｍＭの酢酸及び約５ｍＭの乳酸を含む酸の組み合わせを用いて、クロマトグラフィーカラムからの抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を溶出して、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液を得ることと、約２０ｍＭＨＣｌの添加により抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを調整することであって、ｐＨがｐＨ約３．５に低下され、溶出液がｐＨ約３．５に約０分～約１８０分間維持される、調整することと、約２５０ｍＭのトリス緩衝液の添加により抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液のｐＨを上昇させることであって、ｐＨがｐＨ約７．２５に上昇される、上昇させることと、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を得ることと、を含み、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量が約０ｐｐｍ～約１００ｐｐｍであり、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体がＩｇＧ１抗体である、方法を提供する。いくつかの実施形態において、溶出液のｐＨをｐＨ約７．２５に上昇させることは、約１００ｍＭ～約１０００ｍＭのトリス緩衝液を溶出液に添加することを含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法を提供する。
いくつかの実施形態において、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体はバムラニビマブである。いくつかの実施形態において、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重鎖と、配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。他の実施形態において、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体はエテセビマブである。更に他の実施形態において、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖と、配列番号６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む。なおも更なる実施形態において、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体はベブテロビマブである。更に他の実施形態において、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖とを含む。なおも更なる実施形態において、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

いくつかの実施形態において、タンパク質、例えば、治療用又は診断用タンパク質は、哺乳動物細胞において産生される。いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ネズミハイブリドーマ細胞、又はネズミ骨髄腫細胞である。いくつかの実施形態において、治療用又は診断用タンパク質は、最近細胞において産生される。他の実施形態において、治療用又は診断用タンパク質は、酵母細胞で産生される。

いくつかの実施形態において、本発明は、デプスフィルターに供した後に宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法が、更にイオン交換クロマトグラフィーに供される方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法を提供し、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００ｐｐｍ未満に減少する。他の実施形態において、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約５０ｐｐｍ未満に減少する。他の実施形態において、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約２０ｐｐｍ未満に減少する。他の実施形態において、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１０ｐｐｍ未満に減少する。他の実施形態において、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約０ｐｐｍに減少する。

いくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法を提供し、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量はＰＬＢＬ２を含み、ＰＬＢＬ２は約１００ｐｐｍ未満に減少する。他の実施形態において、ＰＬＢＬ２は約５０ｐｐｍ未満に減少する。他の実施形態において、ＰＬＢＬ２は約２０ｐｐｍ未満に減少する。他の実施形態において、ＰＬＢＬ２は約１０ｐｐｍ未満に減少する。他の実施形態において、ＰＬＢＬ２は約０ｐｐｍに減少する。

いくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法を提供し、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、タンパク質捕捉溶出液からのデプス濾過後に約９７％減少する。他の実施形態において、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約９９％減少する。他の実施形態において、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約９９．９％減少する。他の実施形態において、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約９９．９９％減少する。他の実施形態において、タンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量は、約１００％減少する。

いくつかの実施形態において、本発明は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法を提供し、タンパク質調製物はデプス濾過に供される。いくつかの実施形態において、デプスフィルターは、Ｘ０ＳＰ、Ｃ０ＳＰ、Ｘ０ＨＣ、Ｅｍｐｈａｚｅ（商標）ＡＥＸＨｙｂｒｉｄＰｕｒｉｆｉｅｒ、ＺｅｔａＰｌｕｓ（ＺＢＭｅｄｉａ）、例えば、ＺｅｔａＰｌｕｓ（６０ＺＢ０５Ａ）、ＺｅｔａＰｌｕｓ（９０ＺＢ０５Ａ）、又はＺｅｔａＰｌｕｓ（９０ＺＢ０８Ａ）のうちの１つ以上である。

いくつかの実施形態において、本開示は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法を提供し、ｐＨをｐＨ約６．０超のｐＨに上昇させるステップからの溶出液のイオン強度は、約１０ｍＭ～約４５ｍＭである。いくつかの実施形態において、イオン強度は約３０ｍＭ未満である。いくつかの実施形態において、イオン強度は約２０ｍＭ未満である。他の実施形態において、イオン強度は約１５ｍＭ未満である。

いくつかの実施形態において、本発明は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物がクロマトグラフィーカラムに供される方法を提供する。いくつかの実施形態において、クロマトグラフィーカラムは、アフィニティーカラム、イオン交換カラム、疎水性相互作用カラム、ヒドロキシアパタイトカラム、又は混合モードカラムのうちの１つ以上である。いくつかの実施形態において、アフィニティークロマトグラフィーカラムは、プロテインＡカラム、プロテインＧカラム、又はプロテインＬカラムである。他の実施形態において、イオン交換クロマトグラフィーカラムは、陰イオン交換カラム又は陽イオン交換カラムである。いくつかの実施形態において、本発明は、ＨＣＰが最終生成物から十分に除去される方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法を提供し、タンパク質は治療用又は診断用タンパク質である。更なる実施形態において、治療用又は診断用タンパク質は、抗体、Ｆｃ融合タンパク質、イムノアドヘシン、酵素、成長因子、受容体、ホルモン、調節因子、サイトカイン、抗原、又は結合剤である。更なる実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、又は抗体フラグメントである。

別の態様では、本明細書に記載のタンパク質調製物、核酸、又はベクターを含む医薬組成物が本明細書に提供される。更なる態様では、本開示は、本明細書に記載の方法によって生成される組成物を提供する。更に他の実施形態において、本開示は、本明細書に記載の方法によって生成される組成物を提供し、組成物中の宿主細胞タンパク質含有量は約１００ｐｐｍ未満である。

「宿主細胞タンパク質」（ＨＣＰ）という用語は、細胞の維持及び増殖、並びにタンパク質の合成及びプロセシングに関与する宿主細胞のタンパク質である。そのようなＨＣＰには、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞由来のもの、例えばホスホリパーゼＢ様２（ＰＬＢＬ２）、ｖＬＰＬ（リポタンパク質リパーゼ）、ｖＬＡＬ（リソソーム酸性リパーゼ、リソソームリパーゼ、ＬＩＰＡ）、ｖＰＬＡ２（ホスホリパーゼＡ２）、ｖＰＰＴ１（パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１）、ＰＬＢＤ２、及び／又はペルオキシレドキシンが含まれる。

「弱酸」という用語は、約４より大きい最低ｐＫａを有する酸を指す。弱酸の例としては、酢酸、コハク酸、及び２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸が挙げられるが、これらに限定されない。

「強酸」という用語は、約４未満の最低ｐＫａを有する酸を指す。強酸の例としては、リン酸、乳酸、ギ酸、リンゴ酸、マロン酸、グリコール酸、クエン酸、酒石酸、及び塩酸が挙げられるが、これらに限定されない。

「デプスフィルター」という用語は、媒体の表面だけでなく、媒体全体（媒体内及び媒体上）に粒子を保持する多孔性濾過媒体を使用するフィルター要素を指す。デプスフィルターは、それらが構成される材料の化学的特性に起因する吸着能力を更に有し得る。市販のデプスフィルターの例としては、Ｘ０ＳＰ、Ｃ０ＳＰ、Ｘ０ＨＣ、Ｅｍｐｈａｚｅ（商標）ＡＥＸＨｙｂｒｉｄＰｕｒｉｆｉｅｒ、ＺｅｔａＰｌｕｓ（６０ＺＢ０５Ａ）、ＺｅｔａＰｌｕｓ（９０ＺＢ０５Ａ）、及びＺｅｔａＰｌｕｓ（９０ＺＢ０８Ａ）が挙げられるが、これらに限定されない。「デプス濾過」という用語は、不均一又は均一であり得る液体材料をデプスフィルターに通過させる行為を指す。いくつかの実施形態において、液体材料は、目的のタンパク質を含むタンパク質調製物を含む。

溶液に言及する場合の「イオン強度」という用語は、その溶液中のイオン濃度の尺度である。イオン強度（Ｉ）は、全てのイオン種について、イオン濃度ｃ_ｉと正味電荷ｚ_ｉの関数である。イオン強度を決定するために、式１が使用される。

「タンパク質調製物」は、目的の治療用又は診断用タンパク質を含有し、また様々な不純物を含有し得る、精製プロセス又は方法のために提供される材料又は溶液である。非限定的な例としては、例えば、採取細胞培養液（ＨＣＣＦ）、採取細胞培養材料、浄化細胞培養液、浄化細胞培養材料、１つ以上の遠心分離ステップ、及び／又は濾過ステップ後に目的の治療用若しくは診断用タンパク質を含有する捕捉プール、回収プール、及び／又は収集プールを挙げることができ、この捕捉プール、回収タンパク質プール及び／又は収集プールは、１つ以上の精製ステップ後に目的の治療用若しくは診断用タンパク質を含有する。

「不純物」という用語は、所望のタンパク質製品とは異なる材料を指す。不純物としては、宿主細胞タンパク質ＣＨＯＰ等の宿主細胞材料；浸出したタンパク質Ａ；核酸；所望のタンパク質の変異体、サイズ変異体、フラグメント、凝集体又は誘導体；別のタンパク質；エンドトキシン；ウイルス汚染物質；細胞培養培地成分等が挙げられるが、これらに限定されない。

「タンパク質」及び「ポリペプチド」という用語は、本明細書では、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために交換可能に使用される。ポリマーは線状又は分枝状であってもよく、それは修飾されたアミノ酸を含んでもよく、それは非アミノ酸によって中断されてもよい。この用語はまた、自然に、又は介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、若しくは任意の他の操作若しくは修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションによって修飾されているアミノ酸ポリマーも包含する。また、定義には、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸等を含む）、及び当該技術分野で既知の他の修飾を含有するタンパク質も含まれる。タンパク質の例としては、抗体、ペプチド、酵素、受容体、ホルモン、調節因子、抗原、結合剤、サイトカイン、Ｆｃ融合タンパク質イムノアドヘシン分子等が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体の実施形態には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性若しくは多重特異性抗体、又はコンジュゲート抗体が含まれる。抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ）、及び任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）であってもよい。

本開示の例示的な抗体は、４つのポリペプチド鎖：鎖間ジスルフィド結合を介して架橋される２つの重鎖（ＨＣ）及び２つの軽鎖（ＬＣ）から構成された、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）型抗体である。４つのポリペプチド鎖の各々のアミノ末端部分は、抗原認識に主に関与する約１００～１２５個以上のアミノ酸の可変領域を含む。４つのポリペプチド鎖の各々のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を含有する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域から構成される。ＩｇＧアイソタイプは、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）に更に分割され得る。

ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変領域に更に細分され得る。ＣＤＲはタンパク質の表面上に露出しており、抗原結合特異性のための抗体の重要な領域である。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成されており、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置される。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲを「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称し、軽鎖の３つのＣＤＲを「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含有する。アミノ酸残基のＣＤＲへの割り当ては、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，“ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ”，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．，“Ｃａｎｏｎｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｆｏｒｔｈｅｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｓｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉｅｔａｌ．，“Ｓｔａｎｄａｒｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｃａｎｏｎｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８（１９９７））、Ｎｏｒｔｈ（Ｎｏｒｔｈｅｔａｌ．，“ＡＮｅｗＣｌｕｓｔｅｒｉｎｇｏｆＡｎｔｉｂｏｄｙＣＤＲＬｏｏｐＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ”，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８－２５６（２０１１））、又はＩＭＧＴ（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで利用可能な国際的なＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース；Ｌｅｆｒａｎｃｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．１９９９；２７：２０９－２１２を参照のこと）に記載されているものを含む、周知のスキームに従って行われ得る。

本開示の実施形態はまた、本明細書で使用される場合、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、ｓｃＦａｂ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄフラグメント等の、抗原又は抗原のエピトープと特異的に相互作用する能力を保持する抗体の少なくとも一部を含む、抗体フラグメント又は抗原結合フラグメントを含む。

本明細書で使用される「抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２抗体」という用語は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質に結合する抗体を指す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質のアミノ酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＹＰ＿００９７２４３９０．１に記載されている。

「限外濾過」又は「濾過」という用語は、静水圧が液体を半透膜に押し付ける膜濾過の一形態である。水及び低分子量の溶質が膜を通過する間、高分子量の浮遊物質及び溶質は保持される。いくつかの例では、限外濾過膜は、１μｍ～１００μｍの範囲の孔径を有する。「限外濾過膜」、「限外濾過フィルター」、「濾過膜」及び「濾過フィルター」という用語は、交換可能に使用され得る。濾過膜の例としては、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜、酢酸セルロース、硝酸セルロース、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ、テフロン）、塩化ポリビニル、ポリエーテルスルホン、ガラス繊維、又はｃＧＭＰ製造環境での使用に好適な他の濾過材料が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、数値範囲には、範囲を定義する数値が含まれる。

当該技術分野で認識されている「ＥＵ番号付け」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸残基の番号付けシステムを指す。ＥＵ番号付けは、例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）；Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ，ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５（１９６９）；及びｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／Ｈｕ＿ＩＧＨＧｎｂｅｒ．ｈｔｍｌ＃ｒｅｆｓに記載されている。「Ｋａｂａｔ番号付け」という用語は、重鎖及び軽鎖可変領域内の他のアミノ酸残基よりも可変的である（すなわち、超可変的）アミノ酸残基を番号付けするシステムを指すものとして当該技術分野で認識されている（例えば、Ｋａｂａｔ，ｅｔａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２－９３（１９７１）；Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１－３２４２（１９９１）を参照のこと）。「Ｎｏｒｔｈ番号付け」という用語は、重鎖及び軽鎖可変領域内の他のアミノ酸残基よりも可変的である（すなわち、超可変的）アミノ酸残基を番号付けするシステムを指し、少なくとも部分的に、（Ｎｏｒｔｈｅｔａｌ．，ＡＮｅｗＣｌｕｓｔｅｒｉｎｇｏｆＡｎｔｉｂｏｄｙＣＤＲＬｏｏｐＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，４０６：２２８－２５６（２０１１）に記載される多数の結晶構造との親和性伝播クラスター化に基づく。

本明細書で使用される場合、「アフィニティークロマトグラフィー」という用語は、生体分子間の特異的な可逆的相互作用に基づいて生化学的混合物（例えば、タンパク質と望ましくない生体分子種）を分離するためのクロマトグラフィー法を指す。アフィニティークロマトグラフィーの例示的な実施形態には、プロテインＡアフィニティー、プロテインＧアフィニティー、プロテインＬアフィニティー、カッパアフィニティーリガンドクロマトグラフィー（ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）、ＫａｐｐａＸＬ（商標）、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（商標）、ＫａｐｐａＸＰ（商標）等）又はラムダアフィニティーリガンドクロマトグラフィーが含まれる。

本開示のタンパク質は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができ、かつ、本開示のタンパク質と、１つ以上の薬学的に許容される担体及び／又は希釈剤とを含む医薬組成物に組み込むことができる（例えば、一般に開業医に知られている製剤化技術の概要を提供する、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２２^ｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＬｏｙｄＶ．，Ｅｄ．，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓ，２０１２）。医薬組成物に好適な担体には、タンパク質と組み合わせたときに、分子の活性を保持し、かつ患者の免疫系とは非反応性である、任意の材料が含まれる。

動作可能に連結されている遺伝子の発現を導くことができる発現ベクターは、当技術分野において周知である。発現ベクターは、宿主細胞からのポリペプチドの分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種性シグナルペプチドであり得る。発現されたポリペプチドの各々は、１つのベクター内でそれらが動作可能に連結している異なるプロモーターから独立して発現され得るか、又は複数のベクター内でそれらが動作可能に連結している異なるプロモーターから独立して発現され得る。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、又は宿主染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたそれらの細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、及びジヒドロ葉酸レダクターゼを含む。

宿主細胞は、本開示の１つ以上のタンパク質を発現する１つ以上の発現ベクターで安定に又は一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入又は感染された細胞を指す。本開示のタンパク質を産生する宿主細胞株の作製及び単離は、当該技術分野で既知の標準的な技術を用いて達成され得る。哺乳動物細胞は、本開示のタンパク質の発現に好ましい宿主細胞である。具体的な哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＤＧ－４４、及びＣＨＯを含む。好ましくは、タンパク質は、宿主細胞が培養される培地中に分泌され、そこからタンパク質が、例えば従来の技術を用いて回収又は精製され得る。例えば、培地は、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーカラム及び／又はカッパアフィニティーリガンド若しくはラムダアフィニティーリガンドクロマトグラフィーカラムに適用され、そこから溶出され得る。可溶性凝集体及び多量体を含む望ましくない生体分子種は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む、一般的な技術によって効率的に除去することができる。生成物は、例えば、－７０℃で直ちに凍結させてもよいか、又は凍結乾燥させてもよい。タンパク質精製の様々な方法が採用され得、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１８２：８３－８９（１９９０）、及びＳｃｏｐｅｓ，ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。

ＬＣＭＳによる宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）の測定：以下の実施例において宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）レベルに対する精製の影響を評価するために、例えば、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ質量分析計に連結された超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）によるペプチドマッピング／ＬＣ－ＭＳ／ＭＳＨＣＰプロファイリングによって試料を分析する。この分析では、試料をトリプシンによる消化に供し、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元／沈殿させた後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析用のＨＰＬＣバイアルに上清を移して酸性化する。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータは、ＰｒｏｔｅｏｍｅＤｉｓｃｏｖｅｒｅｒによって、抗体、スパイク、及び対照タンパク質配列を追加したＣＨＯ－Ｋ１タンパク質データベースに対して分析される。ＨＣＰ含有量は、総ＨＣＰ含有量（製品１ｍｇ当たりのＨＣＰのｎｇ）に対する試料当たりのＨＣＰの百万分率（ｐｐｍ）の合計として報告される。更に、ホスホリパーゼＢ様２（ＰＬＢＬ２）の含有量も提供される。

ＥＬＩＳＡによるＨＣＰ測定：試料中のＨＣＰ含有量は、以下の実施例において、Ｇｙｒｏｌａｂ（登録商標）ＣＨＯ－ＨＣＰキット１（ＣｙｇｎｕｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、製造者の指示に従って実施）を使用するＥＬＩＳＡアッセイによっても評価される。ＨＣＰ含有量は、総ＨＣＰ含有量に対する試料当たりのＨＣＰの百万分率（ｐｐｍ）の合計として報告される。

実施例１－ｍＡｂ１（エテセビマブ）精製プロセスにおけるＨＣＰの減少
タンパク質捕捉ステップ：殺菌したプロテインＡカラム（ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅプロテインＡ媒体）を平衡化し、ｍＡｂ１（エテセビマブ）無細胞バイオリアクターの回収物をプロテインＡカラムに負荷し、最終洗浄として２０ｍＭトリス（ｐＨ７．０）を使用してプロテインＡカラムの洗浄を３回行う。５カラム体積（ＣＶ）の２０ｍＭ酢酸＋５ｍＭリン酸を使用して、ｍＡｂ１をカラムから溶出する。前面及び背面での吸光度に基づくピークカットを用いて、主要な生成物画分を単一のバルク画分に回収する。

低ｐＨウイルス不活性化ステップ及び中和ステップ：ウイルス不活性化は、２０ｍＭＨＣｌの添加により、ｍＡｂ１を含有する回収された主要な生成物画分（タンパク質捕捉溶出液バルク画分）のｐＨを３．３０～３．６０のｐＨに調整することによって行われる。混合物を１８℃～２５℃で約１８０分間インキュベートする。次いで、２５０ｍＭトリス塩基ｐＨ未調整緩衝液を使用して、混合物をｐＨ７．０に中和する。

デプス濾過ステップ：デプスフィルター（Ｘ０ＳＰ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を注射用水（ＷＦＩ）で洗い流す。低ｐＨウイルス不活性化ステップ及び中和ステップから得られたｍＡｂ１混合物を、１２００ｇ／ｍ^２（デプスフィルター膜面積１ｍ^２当たりのｍＡｂのグラム数）の負荷量でデプスフィルターに適用する。負荷されたデプスフィルターをＷＦＩで洗い流す。デプスフィルターからの濾液は、任意選択的に負荷後のＷＦＩ洗浄液を含んでおり、２５０ｍＭトリス塩基ｐＨ未調整緩衝液を使用してｐＨ８．０に中和される。

陰イオン交換（ＡＥＸ）クロマトグラフィーステップ：殺菌したカラム（ＱＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ陰イオン交換クロマトグラフィー媒体、又はＱＦＦ）を２ＣＶの２０ｍＭトリス（ｐＨ８．０）で平衡化する。デプス濾過ステップから得られたｍＡｂ１溶液を、樹脂１リットル当たり２５ｇ～１００ｇの負荷量でカラムに負荷し、平衡緩衝液で追加の洗浄を行う。ｍＡｂ１は、非結合画分と追加の洗浄によって形成されたピーク領域の前面及び背面での吸光度に基づくピークカットによって回収される。

結果：記載した精製プロセスを用いて、ＬＣ－ＭＳで測定された総ＨＣＰレベルは以下の通りである：
・プロテインＡ溶出後２３２９９ｐｐｍ；
・Ｘ０ＳＰデプス濾過後１３ｐｐｍ；
・ＡＥＸクロマトグラフィー後２ｐｐｍ。

ｍＡｂ１のためのデプスフィルターセット１の評価：ｍＡｂ１を、本質的に上記のようなプロテインＡ、低ｐＨウイルス不活性化、中和、及びデプス濾過ステップによって処理する。４つの異なるデプスフィルター：Ｅｍｐｈａｚｅ（商標）ＡＥＸＨｙｂｒｉｄＰｕｒｉｆｉｅｒ、ＺｅｔａＰｌｕｓＢＣ２５－６０ＺＢ０５Ａ、ＺｅｔａＰｌｕｓＢＣ２５－９０ＺＢ０５Ａ、及びＺｅｔａＰｌｕｓＢＣ２５－９０ＺＢ０８Ａ（３Ｍ）を、表１に示すように２０００ｇ／ｍ^２の負荷量で試験する。表１の結果は、ＬＣＭＳ（２８９０１ｐｐｍ）及びＥｌｉｓａ（５２７ｐｐｍ）によるプロテインＡの溶出後に観察された総ＨＣＰ含有量と比較した場合、試験した４つのデプスフィルターで、ＬＣＭＳ（２４～３１ｐｐｍの範囲）及び／又はＥＬＩＳＡ（６～１６ｐｐｍの範囲）によるデプス濾過後に総ＨＣＰ含有量が有意に減少したことを示している。

実施例２－ｍＡｂ２（バムラニビマブ）精製プロセスにおけるＨＣＰの減少
プロテインＡ溶出緩衝液の比較：ｍＡｂ２（バムラニビマブ）は、以下の例外を除いて、本質的に実施例１でｍＡｂ１について記載したように調製される：１）ｍＡｂ２は、表２に列挙される緩衝液の組み合わせを使用して、プロテインＡ捕捉カラムから溶出する、２）低ｐＨウイルス不活性化ステップの後、かつデプス濾過ステップの前に、２５０ｍＭトリス塩基ｐＨ未調整緩衝液を使用して、ｍＡｂ２溶液を７．０ではなく７．２５のｐＨに中和する、及び３）ＡＥＸクロマトグラフィーはＰｏｒｏｓＸＱ樹脂を使用して行う。ＨＣＰ含有量（総ＨＣＰ含有量とＰＬＢＬ２含有量の両方）は、表２及び表３に列挙される精製単位操作の後に、ＬＣＭＳによって評価される。

表２及び表３の結果は、デプス濾過ステップ後の総ＨＣＰ及びＰＬＢＬ２含有量が、試験した３つ全ての酸の組み合わせで減少したことを示している。具体的には、２０ｍＭ酢酸＋５ｍＭリン酸及び２０ｍＭ酢酸＋５ｍＭＬ乳酸の組み合わせが、２０ｍＭ酢酸＋５ｍＭクエン酸の組み合わせと比較して、デプス濾過後に総ＨＣＰ含有量を２０ｐｐｍ未満まで大幅に減少させたことを示した。更に、２０ｍＭ酢酸＋５ｍＭリン酸及び２０ｍＭ酢酸＋５ｍＭＬ乳酸の組み合わせによるデプス濾過ステップ後のＰＬＢＬ２含有量は、定量限界未満まで減少した。

デプスフィルターセット２の評価：ｍＡｂ２は、以下の例外を除いて、本質的にｍＡｂ１について記載したように調製される：１）低ｐＨウイルス不活性化ステップの後、かつデプス濾過ステップの前に、２５０ｍＭトリス塩基ｐＨ未調整緩衝液を使用して、ｍＡｂ２溶液を７．０ではなく７．２５のｐＨに中和する、及び２）デプス濾過ステップは、表４に示すデプスフィルターを用いて行う。

表４の結果は、１５００ｇ／ｍ^２を負荷したセット２のデプスフィルター（Ｘ０ＳＰ、Ｃ０ＳＰ、Ｘ０ＨＣ、（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ））を３つ全部用いたデプス濾過後の総ＨＣＰ及びＰＬＢＬ２含有量が、デプス濾過ステップ後に２０ｐｐｍ未満に減少したことを示している。

実施例３．ｍＡｂ３（ベブテロビマブ）精製プロセスにおけるＨＣＰの減少
ｍＡｂ３（ベブテロビマブ）は、９００ｇ／ｍ^２の負荷量でＸ０ＳＰデプスフィルターを使用することを除いて、本質的に実施例１でｍＡｂ１について記載したように、タンパク質捕捉、低ｐＨウイルス不活性化、中和、及びデプス濾過ステップを用いて調製される。記載した精製プロセスを用いて、ＬＣＭＳで測定された総ＨＣＰレベルは以下の通りである：
・プロテインＡ溶出後１７９９６４ｐｐｍ、
・Ｘ０ＳＰ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）デプス濾過後７７ｐｐｍ。

実施例４．二重特異性抗体（ｍＡｂ４）精製プロセスにおけるＨＣＰの減少
二重特異性抗体ｍＡｂ４は、プロテインＬアフィニティー捕捉カラム（Ｃｙｔｉｖａ）を使用し、表５に示される緩衝系で溶出することを除いて、本質的に実施例１でｍＡｂ１について記載したように、タンパク質捕捉ステップを用いて調製される。総ＨＣＰ含有量は、約１３００～約２５００ｐｐｍの範囲が得られるＥＬＩＳＡによって測定される。タンパク質の捕捉に続いて、表５に列挙される滴定剤を使用することを除いて、本質的に実施例１でｍＡｂ１について記載したように低ｐＨウイルス不活性化を行い、続いて、５００ｍＭトリス塩基ｐＨ未調整緩衝液を使用してｐＨ７．０まで中和する。デプス濾過ステップは、Ｘ０ＳＰデプスフィルターを１２００ｇ／ｍ^２の負荷量で使用して、本質的に実施例１でｍＡｂ１について記載したように行われる。ＨＣＰ含有量は、ＥＬＩＳＡによるデプス濾過後に測定される。

表５の結果は、デプス濾過後に、エントリー１～７の総ＨＣＰ含有量が≦５０ｐｐｍ未満まで有意に減少し、デプスフィルターに適用された混合物のイオン強度が約４５ｍＭ未満であったことを示している。加えて、デプスフィルターに適用された混合物のイオン強度と、デプス濾過後の総ＨＣＰ含有量との間に相関関係が観察された。更に、エントリー２は、緩衝液を希釈することによりイオン強度を低下させることができ、デプス濾過後に低ＨＣＰ含有量をもたらすことができるが、希釈による体積の増加は製造プロセスに不利になる可能性があることを示している。

実施例５．ｍＡｂ５精製プロセスにおけるＨＣＰの減少
ｍＡｂ５は、溶出ステップが表６に示される緩衝系で行われることを除いて、本質的に実施例１でｍＡｂ１について記載したように、タンパク質捕捉ステップを用いて調製される。総ＨＣＰ含有量は、約２８００～約３２００ｐｐｍの範囲が得られるＥＬＩＳＡによって測定される。タンパク質捕捉に続いて、本質的に実施例１でｍＡｂ１について記載したように低ｐＨウイルス不活性化ステップを行い、続いて５００ｍＭトリス塩基ｐＨ未調整緩衝液を使用してｐＨ５．０又はｐＨ７．０のいずれかで中和ステップを行う。デプス濾過ステップは、Ｘ０ＳＰデプスフィルターを１０００ｇ／ｍ^２の負荷量で使用して、本質的に実施例１でｍＡｂ１について記載したように行われる。デプス濾過ステップ後のＨＣＰ含有量はＥＬＩＳＡによって測定される。

表６の結果は、デプスフィルターに適用される混合物のｐＨがｐＨ７．０である場合、デプス濾過後に、ｍＡｂ５の総ＨＣＰ含有量が≦５０ｐｐｍ未満まで有意に減少したことを示している。デプスフィルターに適用される混合物のｐＨがｐＨ５．０である場合、総ＨＣＰ含有量はそれほど減少しない。

実施例６．生体分子精製プロセス中のイオン強度の決定方法
ここでは、生体分子精製単位プロセス中に既知の緩衝液組成に基づいてイオン強度を推定する方法について説明する。溶液のイオン強度（Ｉ）は、その溶液中のイオンの濃度の尺度であり、全てのイオン種について、種濃度ｃ_ｉと正味電荷ｚ_ｉの関数である。イオン強度を決定するために、式１が使用される。

強電解質：低濃度（例えば、５０ｍＭ未満）の強電解質の場合、完全な解離が想定される。完全な解離では、組成が容易に算出され、イオン強度の計算が単純になる。例えば、５０ｍＭＮａＣｌの溶液が解離すると、０．５×［５０ｍＭ×１^２＋５０ｍＭ×（－１）^２］＝５０ｍＭのイオン強度を有する、それぞれ５０ｍＭのＮａ^＋及びＣｌ^－がもたらされる。別の例として、５０ｍＭＮａ_２ＳＯ_４が解離すると、１００ｍＭのＮａ^＋及び５０ｍＭのＳＯ_４ ^２－がもたらされ、０．５×［１００ｍＭ×１^２＋５０ｍＭ×（－２）^２］＝１５０ｍＭのイオン強度が得られる。緩衝種がない場合、これらの計算では中性に近いｐＨが予想されるため、水の解離によるイオン濃度はイオン強度に大きく寄与しない。水の解離定数は、［Ｈ^＋］＝１０^－ｐＨでＫ_ｗ＝［Ｈ＋］［ＯＨ^－］＝１０^－１４であるとみなされる（角括弧は濃度を示す）。ここでの計算のために、（例えば、ヒドロニウムイオンとは対照的に）Ｈ^＋イオンの物理的解釈は必要ではなく、同様に、Ｈ^＋濃度と活性を区別する必要もない。

緩衝系：緩衝系の場合、完全な解離を想定することはできない。緩衝液の酸解離定数を使用して、酸及び塩基形態の緩衝液の割合を決定する必要がある。Ｈ^＋及びＡ^－に解離する一般的な酸であるＨＡの場合、式２は酸解離定数Ｋ_ａ及び種濃度に関連している。

酸解離定数は、多くの場合、ｐＫ_ａ＝－ｌｏｇ_１０（Ｋ_ａ）の対数形式で使用される。ｐＫ_ａ，０として示される熱力学的ｐＫ_ａは、目的の多くの緩衝液について文献において入手可能である。しかしながら、活量係数が１から逸脱するため、非常に希薄な溶液を除いて、緩衝液の有効ｐＫ_ａは熱力学的値からそれる。本開示で考慮される適度に希薄な溶液については、拡張デバイ・ヒュッケル式又はデービス式を使用して、１ではない活量係数を説明した。文献に見られる定数のいくつかの値は若干異なる場合があるが、本開示における目的のイオン強度値の範囲で同様の結果が得られる。拡張デバイ・ヒュッケル式は、式３として提供される：

デービス式は式４として提供される：

式中、ｎ＝２ｚ－１であり、ｚはｎを算出するための酸性緩衝液形態の正味の電荷である（Ｓｃｏｐｅｓ，ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｓ，２０１３）。

ｐＫ_ａはイオン強度の関数であるため、組成とイオン強度は独立して決定することはできないが、方程式系の一部である。方程式系には、前述のイオン強度、各緩衝液の酸解離定数、及び各緩衝液のｐＫ_ａの方程式が含まれ、また、各緩衝液の電気的中性条件と全種のバランスも含まれる。この方程式系を用いて、いくつかの値を推定することができる。例えば、既知の溶液のｐＨを用いて緩衝液製剤の酸／塩基比を推定することができ、逆に、酸／塩基比を用いて溶液のｐＨ及び対応する滴定量を推定することができる。これらの用途のいずれにおいても、イオン強度を推定して、溶離液及び滴定剤のオプションを合理的に選択するのに役立てることができる。

本開示の緩衝系に関連するイオン強度、例えば、デプス濾過用の供給材料のイオン強度を算出するためには、溶液の緩衝液組成が必要である。この組成は、プロセスで使用される緩衝液及び滴定剤の量と組成に基づいて合理的に推定することができる。本分野で既知のイオン測定技術も、組成を推定するために使用することができる。

溶液組成を推定するための出発点として、考えられる方法の１つは、アフィニティーカラムの溶出液プールが、溶出液プールの測定されたｐＨで緩衝されることを除いて、溶離液と同じ緩衝液組成を有すると想定することである。例えば、目的のタンパク質がプロテインＡカラムから２０ｍＭ酢酸、５ｍＭ乳酸で溶出され、溶出液プールが４．２の測定ｐＨを有する場合、溶出液プールの緩衝液組成は、２０ｍＭ酢酸塩、５ｍＭ乳酸塩、及びｐＨを４．２にするのに十分なＮａＯＨ（これは約８．２ｍＭＮａＯＨに相当する）であると仮定される。ナトリウム陽イオンＮａ^＋の総含有量のみが計算に重要であるため、溶出液のナトリウム含有量が酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、又はそれらの組み合わせに由来すると想定するかどうかは問題ではなく、便宜上、ナトリウムをＮａＯＨに帰属させるという慣習が用いられる。

溶離液の組成及び溶出液のｐＨを用いて溶出液の緩衝液組成を推定した後、溶液の滴定を検討する。例えば、２０ｍＭ酢酸塩、５ｍＭ乳酸塩、ｐＨ４．２で約８．２ｍＭのＮａＯＨの推定溶出液組成では、ウイルス不活性化のためにｐＨを標的値の３．４５に低下させるのに必要な２０ｍＭＨＣｌの体積が開始体積の０．３０５倍に等しい場合、ｐＨ３．４５でのそのプロセス中間体の組成は希釈から分かるであろう。酢酸塩、乳酸塩、及びＮａＯＨは、滴定剤中に、それぞれの初期値の１／１．３０５倍（すなわち、約１５．３ｍＭ酢酸塩、約３．８ｍＭ乳酸塩、及び約６．２ｍＭのＮａＯＨ）で存在し、ＨＣｌは、その値の０．３０５／１．３０５（約４．７ｍＭＨＣｌ）で存在する。同様に、２５０ｍＭトリス塩基による中和の場合、ｐＨを標的であるｐＨ７．０に上昇させるための比率がｐＨ３．４５溶液の体積の０．０７４３倍である場合、１／１．０７４３と０．０７４３／１．０７４３の比率を適用して中和溶液の最終濃度を求める（約１４．３ｍＭの酢酸塩、約３．６ｍＭの乳酸塩、約５．８ｍＭのＮａＯＨ、約４．４ｍＭのＨＣｌ、約１７．３ｍＭのトリス）。全ての既知の値は、イオン強度を算出するために方程式系（式５～１５）に代入される。

トリス、酢酸塩、及び乳酸塩のそれぞれのｐＫ_ａ，ｏ値は、２２℃で８．１５、４．７６、及び３．８６であると見なされた。デプス濾過供給材料のイオン強度について得られた推定値は２２．１ｍＭである。

本明細書に記載されているように、タンパク質製品の緩衝能力は直接モデル化されていない。したがって、滴定に強酸又は強塩基を使用する場合、計算と経験的滴定結果の間に多少の偏差が生じる可能性がある。例えば、プロテインＡ溶出液をウイルス不活性化のための低いｐＨまで滴定する場合、緩衝液の計算は通常、必要な２０ｍＭＨＣｌの経験的量を過小評価する。必要な経験的量は、算出される推定値よりも５０％程度多くなる場合がある。この違いを説明する１つの方法は、より高いｐＨでアフィニティーカラム溶出液をモデル化し、推定滴定量が実験値と一致するまで経験的に値を調整することである。例えば、上記の例で、２０ｍＭＨＣｌの量が最初に推定された０．３０５の比率よりも５０％多かった場合、プロテインＡ溶出液はｐＨ４．２ではなくｐＨ約４．４５としてモデル化される。モデル化にこの経験的な変更を加えると、この例の推定イオン強度は一方向に低下するが、それはごくわずかであり、最初の推定値である２２．１ｍＭから２１．９ｍＭに低下する。したがって、本開示の好ましい実施形態を導くためのイオン強度を推定するためには、どちらのアプローチでも十分であると結論付けられる。

代替方法：イオン含有量測定方法を用いて、デプス濾過供給材料の緩衝液組成を決定し、イオン強度を算出することができる。これには、測定値が、添加される滴定剤の量等の任意の既知の量と一貫性のある結果をもたらすことを確認する必要がある。アフィニティーカラム溶出液の緩衝液組成は、溶離液の緩衝液組成と同等であると想定されるが、異なるｐＨであるため、実際の組成の違いは、イオン含有量測定値によって決定することができる。例えば、溶離液の組成に基づく量又は測定値のいずれかを使用して、溶離液中の緩衝液成分のイオン強度を算出することができる。

配列
以下の核酸配列及び／又はアミノ酸配列が本開示において言及され、参照のために以下に提供される。
配列番号：１－バムラニビマブ可変重鎖（ＶＨ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＮＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＩＰＩＬＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＹＥＡＲＨＹＹＹＹＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＡＶＴＶＳＳ
配列番号：２－バムラニビマブ可変軽鎖（ＶＬ）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＴＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号：３－バムラニビマブ重鎖（ＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＮＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＩＰＩＬＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＹＹＥＡＲＨＹＹＹＹＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＡＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号：４－バムラニビマブ軽鎖（ＬＣ）
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配列番号：５－エテセビマブ可変重鎖（ＶＨ）
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配列番号：６－エテセビマブ可変軽鎖（ＶＬ）
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配列番号：７－エテセビマブ重鎖（ＨＣ）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＮＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶＩＹＳＧＧＳＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＭＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＬＰＭＹＧＤＹＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号：８－エテセビマブ軽鎖（ＬＣ）
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配列番号：９－ベブテロビマブ可変重鎖（ＶＨ）
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配列番号：１０－ベブテロビマブ可変軽鎖（ＶＬ）
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配列番号：１１－ベブテロビマブ重鎖（ＨＣ）
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配列番号：１２－ベブテロビマブ軽鎖（ＬＣ）
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Claims

宿主細胞内で組換えによって産生された目的のタンパク質を含むタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、
ａ．前記タンパク質調製物をアフィニティークロマトグラフィーカラムに供するステップと、
ｂ．弱酸及び強酸を含む酸の組み合わせを用いて前記クロマトグラフィーカラムから前記目的のタンパク質を溶出して、前記目的のタンパク質を含む溶出液を得るステップと、
ｃ．前記溶出液のｐＨをｐＨ約６．０超に上昇させるステップと、
ｄ．前記溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過されたタンパク質調製物を得るステップとを含む、方法。
前記クロマトグラフィーカラムが、プロテインＡ、プロテインＧ又はプロテインＬアフィニティークロマトグラフィーカラムを含む、請求項１に記載の方法。
前記弱酸が、７．０未満のｐＫａ値を１つのみ有し、前記強酸が、７．０未満のｐＫａ値を１つのみ有する、請求項１に記載の方法。
前記弱酸が、酢酸であり、前記強酸が、リン酸又は乳酸である、請求項１に記載の方法。
前記酢酸の濃度が、約２０ｍＭであり、前記強酸が、リン酸であり、前記リン酸の濃度が、約５ｍＭ～約１０ｍＭである、請求項４に記載の方法。
前記酢酸の濃度が、約２０ｍＭであり、前記強酸が、乳酸であり、前記乳酸の濃度が、約５ｍＭである、請求項４に記載の方法。
ウイルス不活性化を行うステップを更に含む、請求項１に記載の方法。
ウイルス不活性化を行うステップであって、前記クロマトグラフィーカラムから前記タンパク質を溶出する前記ステップからの前記溶出液の前記ｐＨをｐＨ約４．０未満に調整することを含み、前記溶出液が、ｐＨ約４．０未満に約０分～約１８０分間維持される、ステップを更に含む、請求項１に記載の方法。
前記溶出液の前記ｐＨを調整する前記ステップが、前記溶出液の前記ｐＨをｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に調整することを含む、請求項８に記載の方法。
前記溶出液の前記ｐＨが、ｐＨ約３．５に調整される、請求項９に記載の方法。
前記溶出液の前記ｐＨを調整することが、ＨＣｌ、リン酸、又は酢酸及びリン酸の組み合わせのうちのいずれか１つを添加することを含む、請求項８～１０のいずれか一項に記載の方法。
前記溶出液の前記ｐＨを上昇させる前記ステップが、前記ｐＨをｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇させることを含む、請求項１に記載の方法。
前記溶出液の前記ｐＨが、ｐＨ約７．０に上昇される、請求項１２に記載の方法。
前記溶出液の前記ｐＨを上昇させる前記ステップが、トリスを添加することを含む、請求項１２又は１３に記載の方法。
前記ｐＨを約６．０超に上昇させる前記ステップにおける前記溶出液が、約１０ｍＭ～約４５ｍＭのイオン強度を有する、請求項１～１４のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記デプス濾過されたタンパク質調製物をイオン交換クロマトグラフィーに供するステップを更に含む、請求項１～１５のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記濾過されたタンパク質調製物中の宿主細胞タンパク質含有量が、１００ｐｐｍ未満に減少する、請求項１～１６のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記濾過されたタンパク質調製物中の前記宿主細胞タンパク質含有量が、ＰＬＢＬ２を含み、前記ＰＬＢＬ２が、１００ｐｐｍ未満に減少する、請求項１～１６のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記タンパク質調製物が、採取した細胞の培養液、捕捉プール、又は回収タンパク質プールを含む、請求項１～１８のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記タンパク質が、治療用又は診断用タンパク質である、請求項１～１９のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記タンパク質が、抗体、Ｆｃ融合タンパク質、ペプチド、イムノアドヘシン、酵素、成長因子、受容体、ホルモン、調節因子、サイトカイン、抗原、ペプチド、又は結合剤である、請求項１～１９のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、又は抗体フラグメントである、請求項２１に記載の方法。
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項２２に記載の方法。
前記タンパク質が、抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体である、請求項１～２３のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、バムラニビマブである、請求項２４に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、配列番号１のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む、請求項２４に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、配列番号３のＨＣ及び配列番号４のＬＣを含む、請求項２４に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、エテセビマブである、請求項２４に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、配列番号５のＶＨ及び配列番号６のＶＬを含む、請求項２４に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、配列番号７のＨＣ及び配列番号８のＬＣを含む、請求項２４に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、ベブテロビマブである、請求項２４に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、配列番号９のＶＨ及び配列番号１０のＶＬを含む、請求項２４に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、配列番号１１のＨＣ及び配列番号１２のＬＣを含む、請求項２４に記載の方法。
宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量を減少させる方法であって、
宿主細胞内で組換えによって産生された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーカラムに供することと、
ｂ．酢酸及びリン酸を含む酸の組み合わせ、又は酢酸及び乳酸の組み合わせを用いて前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を溶出して、前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む溶出液を得ることと、
ｃ．約２０ｍＭＨＣｌの添加により前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む前記溶出液のｐＨを調整するステップであって、前記ｐＨが、ｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に低下され、前記溶出液がｐＨ約３．３～ｐＨ約３．７に約０分～約１８０分間維持されることと、
ｄ．約２５０ｍＭのトリス緩衝液の添加により前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む前記溶出液の前記ｐＨを上昇させるステップであって、前記ｐＨが、ｐＨ約６．５～ｐＨ約７．５に上昇されることと、
ｅ．前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む前記溶出液をデプスフィルターにかけて、濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物を得ることとを含み、
前記濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物中の宿主細胞タンパク質含有量が、約０ｐｐｍ～約２０ｐｐｍに減少し、前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、ＩｇＧ１抗体である、方法。
ステップｂの酸の組み合わせが、２０ｍＭ酢酸及び５ｍＭリン酸、又は２０ｍＭ酢酸及び５ｍＭリン酸、又は２０ｍＭ酢酸及び５ｍＭ乳酸を含む、請求項３４に記載の方法。
前記溶出液の前記ｐＨを調整するステップｃが、前記溶出液の前記ｐＨを約３．５に調整することを含む、請求項３４に記載の方法。
約２０ｍＭＨＣｌの添加により前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体を含む前記溶出液の前記ｐＨを調整する前記ステップが、ウイルス不活性化を達成する、請求項３４～３６のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記溶出液の前記ｐＨを上昇させる前記ステップが、前記ｐＨをｐＨ約７．２５に上昇させることを含む、請求項３４に記載の方法。
前記ｐＨを上昇させる前記ステップ後の前記溶出液が、約１０ｍＭ～約４５ｍＭのイオン強度を有する、請求項３４又は３８に記載の方法。
前記デプス濾過された抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体調製物をイオン交換クロマトグラフィーに供するステップを更に含む、請求項３４～３９のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、バムラニビマブである、請求項３４～４０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、アミノ酸の配列番号１のＶＨ及びアミノ酸の配列番号２のＶＬを含む、請求項３４～４０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、アミノ酸の配列番号３のＨＣ及びアミノ酸の配列番号４のＬＣを含む、請求項３４～４０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、エテセビマブである、請求項３４～４０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、配列番号５のＶＨ及び配列番号６のＶＬを含む、請求項３４～４０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、配列番号７のＨＣ及び配列番号８のＬＣを含む、請求項３４～４０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、ベブテロビマブである、請求項３４～４０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、アミノ酸の配列番号９のＶＨ及びアミノ酸の配列番号１０のＶＬを含む、請求項３４～４０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２抗体が、アミノ酸の配列番号１１のＨＣ及びアミノ酸の配列番号１２のＬＣを含む、請求項３４～４０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記デプスフィルターが、Ｃ０ＳＰ、Ｘ０ＳＰ、Ｘ０ＨＣ、ＥｍｐｈａｚｅＡＥＸＨｙｂｒｉｄＰｕｒｉｆｉｅｒ、又はＺｅｔａＰｌｕｓ（ＺＢＭｅｄｉａ）を含む、請求項１～４９のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である、請求項１～５０のうちのいずれか一項に記載の方法。
前記哺乳動物細胞が、ＣＨＯである、請求項５１に記載の方法。
請求項１～５２のうちのいずれか一項に記載の方法によって生成される、組成物。
前記組成物中の宿主細胞タンパク質含有量が、約１００ｐｐｍ未満である、請求項５３に記載の組成物。