JP2023535024A - 抗ａベータ抗体 - Google Patents

Abstract

ヒトベータ－アミロイドペプチドに結合する抗体、前記抗体を用いてアミロイド原性障害を検出、測定および処置する方法、この抗体を含む医薬組成物、ならびに製造の方法が提供される。本発明は、例えば、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、表１Ａおよび表１Ｂ中の抗体のうち１つについて示される通りである、抗体またはその断片を提供する。

Description

関連出願
本出願は、２０２０年７月２３日出願の米国仮特許出願第６３／０５５，８１３号、２０２０年１０月１日出願の米国仮特許出願第６３／０８６，５８９号、２０２１年５月１１日出願の米国仮特許出願第６３／１８７，３７９号および２０２１年７月８日出願の米国仮特許出願第６３／２１９，６１１号の利益を主張し、これらは全て、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

配列表の陳述
コンピューター可読形態の配列表が、電子的提出によって本出願と共に提出されており、その全体が参照によって本出願に組み込まれる。配列表は、２０２１年７月２２日に作成されたファイル中に含有され、ファイル名「２０－１０３０－ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」を有し、サイズは１５５ｋｂである。

分野
本開示は、抗アミロイドベータ（Ａβ）抗体ならびに組成物およびそれらの使用の方法に関する。

背景
アルツハイマー病（ＡＤ）は、老人性認知症を生じる進行性の疾患である。この疾患は、一般に、老齢（６５＋歳）において生じる遅発型、および老人期のかなり前、即ち、３５歳と６０歳との間に発症する若年性として分類される。疾患病変は、両方の型の疾患について同じように見えるが、異常は、若年に開始する症例においてより重症であり、より広い範囲に及ぶ傾向がある。この疾患は、脳における少なくとも２つの型の病変：神経原線維変化および老人斑によって特徴付けられる。神経原線維変化は、互いに対になって巻き付いた２つのフィラメントからなる微小管関連タウタンパク質の細胞内沈着物である。老人斑（即ち、アミロイド斑）は、脳組織の切片の顕微鏡解析によって可視できる、中心に細胞外アミロイド沈着物を有する最大１５０μｍにわたる不規則な神経網の領域である。脳内のアミロイド斑の蓄積は、ダウン症候群および他の認知障害にも関連している。

斑の主な構成要素は、Ａβ（Ａベータ）またはβ－アミロイドペプチドと呼ばれるペプチドである。Ａβペプチドは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれるより大きい膜貫通糖タンパク質の３９～４３アミノ酸の４ｋＤａの内部断片である。異なるセクレターゼ酵素によるＡＰＰのタンパク質分解性プロセシングの結果として、Ａβは、４０アミノ酸長の短い形態、および４２～４３アミノ酸長の範囲の長い形態の両方で主に見出される。ＡＰＰの疎水性膜貫通ドメインの一部は、Ａβのカルボキシ末端において見出され、長い形態の場合には特に、Ａβが斑へと凝集する能力を説明し得る。脳におけるアミロイド斑の蓄積は、ニューロン細胞死を最終的にもたらす。この型の神経悪化に関連する身体的症状は、アルツハイマー病を特徴付ける。

概要
本開示は、Ａβに特異的に結合する抗体（および抗体断片）、かかる抗体および抗体断片ならびに関連の核酸を産生する方法、Ａβ関連の神経学的障害を有する患者の処置の方法、例えば、アミロイド原性疾患を処置する、アミロイド原性疾患のリスクを低減させる、またはアミロイド原性疾患の発生を遅延させるため、アミロイド原性疾患のマーカー、例えば、Ａβ斑を予防する、低減させるまたは阻害するため、および認知を改善するための予防的および／または治療的使用のための、Ａβに対して高い親和性の結合を示す抗体の医薬製剤および組成物に関する。本開示は、アミロイド斑を検出する方法、およびアミロイド原性疾患に関して処置されている患者において処置の有効性を測定する方法にさらに関する。本開示は、Ａβペプチドに特異的に結合し、斑負荷を低減させ、アミロイド原性障害に関連する可溶性Ａβ種を中和するのに有効なモノクローナル抗体の同定および特徴付けに、少なくとも一部基づく。

種々の態様では、本開示は、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片に関する。抗体および断片は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（light chain ariable region）を含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、表１中の抗体のうち１つについて示される通りである。さらに、本開示の抗体または断片または断片は、表１中の抗体のうち１つについて示される通りの重鎖可変領域を有し得、表１中の抗体のうち１つについて示される通りの軽鎖可変領域を有し得る。

本開示の種々の実施形態では、抗体およびその断片は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、
重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１６、１９または２０のうち１つを含み、
重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２０、２１、２２または２３のうち１つを含み、
重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８、２４または２５のうち１つを含み、
軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２６、２９、３１または３２のうち１つを含み、
軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３３、３４、３５または３６のうち１つを含み、
軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２８、３８または３９のうち１つを含む。

本開示の抗体またはその断片は、配列番号３、４、５、６および７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％または９８％同一な、ＣＤＲを除く重鎖可変領域、ならびに配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％または９８％同一な、ＣＤＲを除く軽鎖可変領域を含み得る。さらに、重鎖可変領域は、配列番号３、４、５、６および７から選択され得、軽鎖可変領域は、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５から選択され得る。

さらなる実施形態では、本開示は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、以下のアミノ酸配列：
重鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＮＸ_１ＧＭＳを含み、式中、Ｘ_１はＹまたはＦであり（配列番号８８）；
重鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＸ_１ＲＳＧＳＧＲＴＹＹＳＤＮＶＫＧを含み、式中、Ｘ_１はＩまたはＶであり（wherein is X₁ is I or V）（配列番号８９）；
重鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＹＤＨＹＸ_１ＧＸ_２ＳＤＹを含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり（配列番号９０）；
軽鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＤＹＤＧＫＴＹＬＮ（配列番号９１）を含み；
軽鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ_１ＶＸ_２ＮＲＤＸ_３を含み、式中、Ｘ_１はＫまたはＲであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり、Ｘ_３はＳまたはＴであり（配列番号９２）；
軽鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ_１を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴである（配列番号９３）
を有する、抗体またはその断片に関する。

さらに、軽鎖ＣＤＲ３は、ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ_１ＦＸ_２であり得、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＦまたはＹである（配列番号９４）。

なおさらに、本開示の実施形態は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、以下のアミノ酸配列：
重鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＸ_１ＮＸ_２ＧＭＳを含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＡであり、Ｘ_２はＹまたはＦであり（配列番号９５）；
重鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＸ_１ＲＳＧＸ_２Ｘ_３ＲＴＹＹＳＤＮＶＫＧを含み、式中、Ｘ_１はＩまたはＶであり、Ｘ_２はＳまたはＧであり、Ｘ_３はＳまたはＧであり（配列番号９６）；
重鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＹＤＨＹＸ_１ＧＸ_２ＳＤＹを含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり（配列番号９０）；
軽鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Ｘ_１ＳＳＱＳＬＸ_２ＤＸ_３ＤＧＫＴＹＬＮを含み、式中、Ｘ_１はＫまたはＲであり、Ｘ_２はＶ、ＭまたはＬであり、Ｘ_３はＹ、ＴまたはＳであり（配列番号９７）；
軽鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ_１ＶＸ_２ＮＲＸ_３Ｘ_４を含み、式中、Ｘ_１はＫまたはＲであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり、Ｘ_３はＥまたはＤであり、Ｘ_４はＳまたはＴであり（X₄ i S or T）（配列番号９８）；
軽鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＷＱＧＸ_１ＨＦＰＲＸ_２を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴである（配列番号９９）
を有する、抗体またはその断片に関する。

軽鎖ＣＤＲ３はまた、ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ_１ＦＸ_２Ｘ_３を含み得、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり、Ｘ_３はＦまたはＹである（配列番号１００）。

本開示のさらなる態様では、１つの抗体またはその断片は、ヒト化されており、ヒトＩｇＧ１であり、または完全抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体もしくは組換え抗体であり得る。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂｃまたはＦｖが含まれ得る。

なおさらに、本開示の抗体または断片は、配列番号４０と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含み得、配列番号４１と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含み得る。抗体または断片は、Ａβのアミノ酸１～７からの３つまたはそれよりも多くのアミノ酸位置を含むアミノ酸配列を有するエピトープに特異的に結合し得る。

さらなる態様では、本開示は、本明細書に記載される抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸に関する。

本開示は、本明細書に記載される抗体またはその断片を含む医薬組成物にも関する。

種々の実施形態では、本開示は、本明細書に記載される抗体またはその断片を産生する方法に関する。この方法は、（ａ）抗体またはその断片の重鎖および軽鎖をコードする核酸で形質転換された細胞がかかる抗体またはその断片を分泌するように、細胞を培養するステップ；ならびに（ｂ）抗体またはその断片を細胞培養物から精製するステップを含み得る。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載される抗体またはその断片を産生する細胞系を産生する方法に関する。この方法は、（ａ）抗体またはその断片の重鎖および軽鎖と選択可能なマーカーとをコードするベクターを、細胞中に導入するステップ；（ｂ）増加したコピー数のベクターを有する細胞について選択する条件下で、細胞を拡大増殖させるステップ；（ｃ）選択された細胞から単一の細胞を単離するステップ；ならびに（ｄ）抗体またはその断片の収量に基づいて選択された単一の細胞からクローニングされた細胞をバンキングするステップを含み得る。この方法は、選択条件下で細胞を拡大増殖させるステップ、ならびに少なくとも１００ｍｇ／Ｌ／１０^６細胞／２４時間を天然に発現および分泌する細胞系についてスクリーニングするステップもまた含み得る。

追加の追加態様は、患者においてアミロイド原性疾患を予防または処置する方法を含む。これらの方法は、本明細書に記載される抗体または断片の有効投与量を患者に投与するステップを含む。アミロイド原性疾患は、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病（ｍａｔｕｒｅ ｏｎｓｅｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ）、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害であり得る。

アミロイド原性疾患の場合、本開示の方法は、その疾患を処置するのに有効なレジメンにおいて、抗体またはその断片を、疾患を有する患者に投与するステップを含み得る。さらに、本開示の方法は、遺伝的または生化学的マーカーからアルツハイマー病のリスクが決定されている患者において、アルツハイマー病のリスクを低減させるまたはその発生を遅延させるステップを含む。この方法は、アルツハイマー病のリスクを低減させるまたはその発生を遅延させるのに有効なレジメンにおいて、本明細書に記載される抗体またはその断片を、疾患を有する患者に投与するステップを含む。

なおさらに、本開示は、状態または疾患関連アミロイド原性疾患を有する対象において認知の改善をもたらすための方法に関する。この方法は、本明細書に記載される抗体またはその断片の有効量を対象に投与するステップを含むことを含む。アミロイド原性疾患は、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害であり得る。

なおさらに、本開示は、ヒト対象においてダウン症候群または臨床的もしくは前臨床的アルツハイマー病を処置するための方法に関する。この方法は、本明細書に記載される抗体またはその断片の有効量を対象に投与するステップを含むことを含む。

本開示の方法は、ヒト対象においてアミロイド斑の形成を阻害するステップ、ヒト対象の脳においてアミロイド斑を低減させる、アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象においてアミロイド斑を阻害するまたは低減させるステップのうち１つまたは複数もまた含む。これらの方法は、本明細書に記載される抗体またはその断片の有効量を対象に投与するステップを含むことを含む。これらの方法の各々では、アミロイド斑は、Ａβ_１－４２、Ａβのピログルタメート種（例えば、Ａβ_{ｐＥ３－４２}）、またはそれらの組合せを含み得る。

さらに別の態様では、本開示は、アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患のリスクがある対象においてアミロイド斑を検出する方法に関する。この方法は、本明細書に記載される抗体または断片を対象に投与するステップ、および対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片を検出するステップを含む。アミロイド原性疾患は、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害である。検出方法では、抗体またはその断片は、例えば、蛍光標識、常磁性標識または放射性標識で標識され得る。放射性標識は、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）または単光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）を使用して検出され得る。

アミロイド原性疾患に関して処置されている対象において処置の有効性を測定する方法であって、
（ａ）請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の前の対象におけるアミロイド斑の第１のレベルを測定し、対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片の第１の量を検出するステップ、
（ｂ）処置を対象に投与するステップ、
（ｃ）抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の後の対象におけるアミロイド斑の第２のレベルを測定し、対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片を検出するステップ
を含み、アミロイド斑のレベルにおける減少が、処置に対する肯定的応答を示す、方法。

なおさらに、本開示の他の態様は、アミロイド原性疾患に関して処置されている対象において処置の有効性を測定する方法を含む。これらの方法は、（ａ）本明細書に記載される抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の前の対象におけるアミロイド斑の第１のレベルを測定し、対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片の第１の量を検出するステップ、（ｂ）処置を対象に投与するステップ、（ｃ）抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の後の対象におけるアミロイド斑の第２のレベルを測定し、対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片の第２の量を検出するステップを含む。アミロイド斑のレベルにおける変化なしまたはアミロイド斑における小さい増加は、処置に対する肯定的応答を示す。

本開示の方法は、ヒト対象において、Ａβを低減させる、Ａβを取り除く、もしくはＡβのクリアランスを促進するステップ、またはＡβの蓄積もしくは凝集を低減させるもしくは阻害するステップもまた含む。かかる方法は、本明細書に記載される抗体またはその断片の有効なレジメンを対象に投与するステップを含む。Ａβは、対象の脳組織中に存在し得る。

本開示の方法は、アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβを低減させる、Ａβのクリアランスを促進する、またはＡβを取り除くステップもまた含む。かかる方法は、本明細書に記載される抗体またはその断片の有効なレジメンを対象に投与するステップを含む。

本開示の方法は、アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を阻害するまたは低減させるステップもまた含む。かかる方法は、本明細書に記載される抗体またはその断片の有効なレジメンを対象に投与するステップを含む。

アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を阻害する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体の有効なレジメンを対象に投与し、それにより、対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を阻害するステップを含む、方法。アミロイド原性疾患は、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害であり得る。Ａβは、Ａβ_１－４２、Ａβのピログルタメート種（例えば、Ａβ_{ｐＥ３－４２}）、またはそれらの組合せであり得る。

本開示の上述の方法の各々では、抗体は、静脈内または皮下投与であり得る末梢投与によって投与される。

図１は、ヒト生殖系列フレームワーク残基をバピネオズマブ（bapineuzumab）（ｈＢＰ）ＶＬ配列中に取り込むことによって設計した３つの異なるバージョンのＶＬのアラインメントを示す。カノニカル残基も界面残基も変化させなかった。

図２は、バピネオズマブ（ｈＢＰ）と比較したＩＣ_５０比決定のための、４９１８、４９１７、４９２１、３８１８、４９ヒト３、２９３１およびバピネオズマブ対照についての競合ＥＬＩＳＡアッセイグラフを示す。

図３は、バピネオズマブ（ｈＢＰ）と比較したＩＣ_５０比決定のための、２９２６、２８３１、２９２７、２７２６、２７３１、２８２６およびバピネオズマブ対照についての競合ＥＬＩＳＡアッセイグラフを示す。

図４は、バピネオズマブ（ｈＢＰ）と比較したＩＣ_５０比決定のための、２７２７、２９３１およびバピネオズマブ対照についての競合ＥＬＩＳＡアッセイグラフを示す。

図５Ａおよび図５Ｂは、２９３１、２７３１およびバピネオズマブ（図５Ａ）ならびに２７２６、２８３１およびバピネオズマブ（図５Ｂ）についての競合ＥＬＩＳＡアッセイグラフを示す。

図６は、１００ｎＭから０．３９ｎＭまで（２倍段階希釈）の分析物濃度での、Ａβ_１－２８へのｈ２７２６（図６Ａ）、ｈ２７３１（図６Ｂ）、ｈ２８３１（図６Ｃ）および２９３１（図６Ｄ）の結合のＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す。 図６は、１００ｎＭから０．３９ｎＭまで（２倍段階希釈）の分析物濃度での、Ａβ_１－２８へのｈ２７２６（図６Ａ）、ｈ２７３１（図６Ｂ）、ｈ２８３１（図６Ｃ）および２９３１（図６Ｄ）の結合のＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す。 図６は、１００ｎＭから０．３９ｎＭまで（２倍段階希釈）の分析物濃度での、Ａβ_１－２８へのｈ２７２６（図６Ａ）、ｈ２７３１（図６Ｂ）、ｈ２８３１（図６Ｃ）および２９３１（図６Ｄ）の結合のＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す。 図６は、１００ｎＭから０．３９ｎＭまで（２倍段階希釈）の分析物濃度での、Ａβ_１－２８へのｈ２７２６（図６Ａ）、ｈ２７３１（図６Ｂ）、ｈ２８３１（図６Ｃ）および２９３１（図６Ｄ）の結合のＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す。

図７は、組換えＡベータ１－４２（Ａβ_１－４２）原線維へのヒト化抗体（ＰＢ－０５６９（アデュカヌマブ）、ＰＢ－０５７３（ｈ２７２６）、ＰＢ－０５７４（ｈ２７３１）、ＰＢ－０５７５（ｈ２８３１）、ＰＢ－０５７６（ｈ２９３１））の結合特徴を比較するＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す。

図８は、ｈ２９３１が、高い相対的親和性で可溶性Ａβオリゴマーに結合することを示す。

図９は、アデュカヌマブ対照と比較した、２７２６、２７３１、２８３１、２９３１のＡβ原線維結合活性を評価するグラフを示す。抗体を、一定濃度のＡβ原線維において滴定し（左パネル）、またはＡβ原線維を、一定濃度の抗体において滴定した（右パネル）ところ、共に、アデュカヌマブについてよりも、２７２６、２７３１、２８３１および２９３１について、実質的により良い結合が示された。

図１０は、ＡＤ脳におけるＡβ結合を示す。組織Ａβ病変への結合は、ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１抗体間で類似のように見える。０．３μｇ／ｍｌの４つの抗体ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１、ｈ２９３１で染色した画像の例は、異なる量のＡβ病変を有する、２つのＡＤ脳（ＡＤ １１－９７およびＡＤ １３－７５）における染色のパターンを示す。各脳について、画像は、切片の同じ領域からのものであり、４つ全ての抗体による、比較的類似の強度および分布の病変を示す。アデュカヌマブを用いた染色は、常に最も弱かった（スケールバー：５００μｍ）。

図１１は、対照のＡＤ脳におけるＡβ結合を示す。ヒトＩｇＧアイソタイプ対照抗体は、ＡＤ脳において染色を生じなかった。これらの例に示されるように、１μｇ／ｍｌのヒトＩｇＧアイソタイプと共にインキュベートしたＡＤ切片は、いずれの染色も欠いていた（スケールバー：５００μｍ）。

図１２は、ＡＤ脳におけるＡβ結合の定量を示す。ＡＤ組織におけるＡβ病理染色の定量により、ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１抗体の間での類似の結合が明らかになった。４つのＡＤ脳からの切片を、以下の濃度の抗体ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１、ｈ２９３１ならびにアデュカヌマブと共にインキュベートした：０．０３、０．１、０．３、１、３および９μｇ／ｍｌ。切片のイメージングの後、染色された組織面積のパーセントを、Ｈａｌｏ（登録商標）イメージング解析ソフトウェアを使用して形態計測的に決定した。各グラフは、５つの抗体を用いて得られた、ＡＤ脳における測定値を比較する。４つのグラフは、ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１、ｈ２９３１抗体の結合プロファイルが類似であることを一貫して示している。アデュカヌマブを用いて得られた測定値は、有意に低かった。

図１３は、ＡＤ脳におけるＡβ結合を示す。ｈＢＰは、組織Ａβ病変に、強く、用量依存的様式で結合する。類似の病変分布を有する、切片の比較的同じ領域からの画像（脳ＡＤ １３－７５）。ｈＢＰは、濃度と共に増加する染色の量を示し、Ａβ病変へのその結合は、各濃度におけるＢＡＮ２４０１またはアデュカヌマブの結合よりも強かった（スケールバー：５００μｍ）。

図１４は、初代マウスミクログリアによる、ＡＰＰ．ＰＳ１ Ｔｇマウス組織におけるｈ２９３１およびアデュカヌマブのｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシス研究からの個々の（図１４Ａ）およびプールした（図１４Ｂ）結果を示す。ｈ２９３１およびアデュカヌマブは共に、アイソタイプ対照を超えた、Ａβ_１－４２における高度に有意な低減を実証している。図１４Ｂ。

図１５は、アイソタイプ対照と比較し、＋／－Ａβ添加によって正規化した、漸増濃度のｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１を用いたときの、ラット海馬ニューロン上の神経突起への可溶性オリゴマー結合の低減を示すグラフを示す。図１５Ａは、ニューロン１つ当たりのスポットを示し、図１５Ｂは、総スポット計数を示す（ウェル１つ当たり４０個の視野）。

図１６は、＋／－Ａβ添加によって正規化した、漸増濃度の２７２６、２７３１、２８３１および２９３１を用いたときの、ニューロン１つ当たりのＡβスポットのパーセンテージを示すグラフを示す。

図１７は、バピネオズマブ可変重鎖配列と本開示の４つの配列２７２６、２７３１、２８３１および２９３１とのアラインメントを示す。ＣＤＲは太字である。

図１８は、バピネオズマブ軽鎖配列と本開示の４つの（可変軽鎖）配列２７２６、２７３１、２８３１および２９３１とのアラインメントを示す。ＣＤＲは太字である。

図１９は、本開示の抗体についての可変重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列を列挙するＣＤＲ表を示す。図１９Ａは、重鎖ＣＤＲを指し、図１９Ｂは、軽鎖ＣＤＲを指す。 図１９は、本開示の抗体についての可変重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列を列挙するＣＤＲ表を示す。図１９Ａは、重鎖ＣＤＲを指し、図１９Ｂは、軽鎖ＣＤＲを指す。

図２０は、競合ＥＬＩＳＡによる、不均一な凝集したＡβ４２種に結合することに関する抗体効力を測定するグラフを示す。図２０Ａは、ｈ２９３１、ｈ２７３１およびバピネオズマブ対照を示し、図２０ＢＡは、ｈ２８３１、ｈ２７２６およびバピネオズマブ対照を示す。

図２１は、ＥＬＩＳＡによる、原線維Ａβ４２への抗体の直接結合および相対的親和性を測定するグラフを示す。

図２２は、ＡＤ脳における、免疫組織化学的染色によってパーセント陽性組織として測定したＡβ斑面積結合の抗体用量応答を測定するグラフを示す。

図２３は、抗体の存在下でのラット海馬ニューロンへの可溶性Ａβの結合の定量を示す。

図２４は、初代マウスミクログリアによる、ＡＤ組織におけるｈ２７３１のｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシス研究からの結果を示す。ｈ２７３１は、Ａβ_１－４２における高度に有意な低減を実証し、これは、これらの種のファゴサイトーシスおよび除去をこの抗体がロバストに促進したことを示している。

図２５Ａおよび２５Ｂは、ｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシスアッセイに使用したＡＤ組織におけるピログルタメート－３ Ａβ（Ａβ_{ｐＥ３－４２}）の存在を確認し（図２３Ａ）、ピログルタメート－３ Ａβおよびｈ２９３１について類似の結合パターンを実証している（図２３ＡおよびＢ）。

図２６Ａおよび２６Ｂは、初代マウスミクログリアによる、ＡＤ組織におけるｈ２９３１およびｈ２７３１のｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシス研究からの結果を示す。ｈ２９３１およびｈ２７３１は共に、ピログルタメート－３ Ａβ（Ａβ_{ｐＥ３－４２}）における高度に有意な低減を実証し、これは、これらの種のファゴサイトーシスおよび除去を両方の抗体がロバストに促進することを示している。

図２７は、ｈ２７３１がＡβ_１－４２のＮ末端に結合するが、Ａβ_{ｐＥ３－４ ２}には結合しないことを示す。

図２８Ａおよび２８Ｂは、本発明の抗体が、ＴＨＰ－１ヒト単球においてｉｎ ｖｉｔｒｏでＡβ_１－４２前原線維のファゴサイトーシスを誘導することを示す。

図２９Ａおよび図２９Ｂは、Ｎ末端抗Ａｂ抗体によって測定したときの、ヒトＡＤ脳組織における、Ａβ_{ｐＥ３－４２}と比較した、Ａβ_１－ＸＸの分布パターンを示す。図２９Ｃは、ヒトＡＤ脳組織における、Ａβ_{ｐＥ３－４２}と比較した、Ａβ_１－ＸＸによって覆われたパーセント面積の定量を示す。 図２９Ａおよび図２９Ｂは、Ｎ末端抗Ａｂ抗体によって測定したときの、ヒトＡＤ脳組織における、Ａβ_{ｐＥ３－４２}と比較した、Ａβ_１－ＸＸの分布パターンを示す。図２９Ｃは、ヒトＡＤ脳組織における、Ａβ_{ｐＥ３－４２}と比較した、Ａβ_１－ＸＸによって覆われたパーセント面積の定量を示す。

図３０は、Ａβ斑へのｈ２７３１の局在化、Ａβ斑への抗Ａβ_{ｐＥ３－４２}抗体シグナルの局在化、ならびにＡβ斑へのｈ２７３１および抗Ａβ_{ｐＥ３－４２}抗体シグナルの共局在化を示す。

図３１Ａおよび図３１Ｂは、抗Ａβ抗体ｈ２７３１が、アデュカヌマブよりも高い効力で、用量依存的様式で、ＡＤ脳組織からのＡβ_{ｐＥ３－４２}クリアランスをｅｘ ｖｉｖｏで促進することを示す。

図３２Ａは、ＡＤ脳組織からのＡβ_{ｐＥ３－４２}の、ｈ２７３１およびアデュカヌマブによるクリアランスの濃度依存性を示し、図３２Ｂは、ｈ２７３１の効果がミクログリア依存的であることを示す。

図３３は、反復投与による、ｈ２７３１およびアデュカヌマブの予測されたＣＮＳ曝露を比較する。

図３４は、抗Ａβ抗体ｈ２７３１が、ＡＤ脳組織におけるＡβ_{ｐＥ３－４２}を含有する斑のクリアランスをｅｘ ｖｉｖｏで促進することを示す。

発明の詳細な説明
アミロイドベータ（Ａβ）のＮ末端を標的化するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、アミロイド斑負荷を低減させることが臨床的に実証されており、１つのかかる抗体であるアデュカヌマブは、斑負荷における有意な低減が、アルツハイマー病（ＡＤ）における認知低下の減速に関連したことを示した。前臨床研究は、ＡβのＮ末端エピトープを標的化するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）が、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの両方で、抗体依存的なミクログリア媒介性のＡβ斑クリアランスおよび可溶性毒性Ａβオリゴマーの中和を惹起することも示している。Ｎ末端Ａβ標的化ｍＡｂの投与が、ＡＤを有する患者におけるＡβ斑のクリアランスおよび可溶性Ａβ凝集体の中和を介して疾患進行を減速させると仮説が立てられる。

Ａβ抗体バピネオズマブ（ｈＢＰ）は、親マウス抗体３Ｄ６から開発されたヒト化抗体である。本開示の種々の態様に従って、多方面からのアプローチを適用して、ｈＢＰよりも優れた抗体を構築した。ｈＢＰのヒト性（ｈｕｍａｎｎｅｓｓ）を解析し、軽鎖ヒト化を最適化することができると決定した。

検索を、ＰＤＢデータベース中のタンパク質配列に対して行って［Deshpande et al, 2005］、ｈＢＰのラフな構造モデルを提供する構造を見出した。ｈＢＰ ｆａｂ ＰＤＢコード４ＨＩＸの結晶構造［Miles, et al., 2013］を、ＶｈおよびＶｋの両方の構造について利用したが、それは、これが、許容される分解能ならびにｈＢＰ ＶｈおよびＶｋとの正確な配列一致を有し、ループについて同じカノニカル構造を保持したからである。

ＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎｍｅｎｔを、入力配列としてのｈＢＰ ＶＬについて実施して、ヒト生殖系列ＶＫ遺伝子配列ＩＧＨＶ２－３０^＊０２を、ｈＢＰ ＶＬに最も一致していたと同定した。ｈＢＰ ＶＬのフレームワークは、ＩＧＨＶ２－３０^＊０２の対応するフレームワーク領域と、高い程度の配列類似性を共有する。したがって、ＩＧＨＶ２－３０^＊０２ ＶＬのフレームワーク領域を、ｈＢＰフレームワーク領域のさらなる最適化のためのガイダンス配列として選択した。また、ｈＢＰ ３Ｄ構造に従い、抗原と直接接触しないＣＤＲ－Ｌ２中のさらなる残基を、生殖系列配列へと変化させて、以下の変化をもたらした。

３つの異なるバージョンのＶＬを、ヒト生殖系列フレームワーク残基をｈＢＰ ＶＬ配列中に取り込むことによって設計した。カノニカル残基も界面残基も変化させなかった。また、Ｐ１５がターンに位置し、生殖系列遺伝子がこの位置においてＬｅｕを有するという構造観察に基づいて、Ｐ１５Ｌを、可変軽鎖の１つのバージョンにおいて試験した。

３Ｄ構造観察に基づいて、軽鎖および重鎖ＣＤＲおよびフレームワーク中のいくつかの残基における置換を設計した。変異体ＶＬおよびＶＨバージョンを生成し、合理的設計の第１のラウンドにおいて、結合について試験した。改善された結合を示した変異を、合理的設計の第２のラウンドにおいて組み合わせた。さらに、構造のさらなる解析によって導かれた新しい変異もまた、設計に取り込んだ。

したがって、本開示は、抗体（および抗体断片）、かかる抗体および抗体断片をコードする核酸、ならびにそれを産生する方法、医薬組成物、ならびにアミロイド原性疾患を予防または処置するための方法、アミロイド原性疾患のリスクを低減させるまたはアミロイド原性疾患の発生を遅延させるための方法、アミロイド原性疾患に関連する状態を有する対象において認知の改善をもたらすための方法、対象においてＡβ斑の形成を阻害するための方法、対象の脳においてＡβ斑を低減させるための方法、アミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象においてアミロイド斑を阻害するまたは低減させるための方法、アミロイド斑を検出するための方法、アミロイド原性疾患に関して処置されている対象において処置の有効性を測定するための方法を提供し、アミロイド原性疾患は、本明細書に記載されるアルツハイマーおよび他の疾患を含む。本開示は、ベータアミロイドタンパク質（Ａβ）に結合すること（例えば、可溶性および／または凝集したＡβに結合すること）、（例えば、凝集したＡβの）ファゴサイトーシスを媒介すること、斑負荷を低減させることおよび／または（例えば、患者において）神経突起ジストロフィーを低減させること、可溶性毒性Ａβ種を中和することにおいて有効なモノクローナル抗体の属の特徴付けに、少なくとも一部基づく。本開示の抗体および断片は、報告された現行の実験的治療よりも、病理学的原線維Ａβに対する高い結合強度（親和性および／またはアビディティ）、および可溶性毒性Ａβ形態に対する高い親和性を示す。これらの抗体は、より簡便な投与戦略および高められた患者アクセスを可能にし得る。

本開示の特定の態様をより詳細に記載する前に、いくつかの用語を定義する。

定義

用語「抗体」には、インタクトな抗体およびその結合断片が含まれる。典型的には、断片は、標的への特異的結合について、それが由来するインタクトな抗体と競合する。断片には、別々の重鎖、軽鎖 Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）ｃ、Ｆｖおよび単一ドメイン抗体が含まれる。単一（可変）ドメイン抗体は、従来の抗体中のそれらのＶＬパートナーから分離されたＶＨ領域（または逆もまた同様）（Ward et al., 1989, Nature 341: 544-546）、ならびにＶＨ領域がＶＬ領域に関連しない種、例えば、ラクダ科（ｃａｍｅｌｉｄａｅ）または軟骨魚類（例えば、コモリザメ）由来のＶＨ領域（ときどきＶＨＨとして公知）（例えば、ＷＯ９４０４６７８を参照されたい）を含む。１つの鎖がその天然のパートナーから分離されている単一ドメイン抗体は、ときどきＤａｂとして公知であり、ラクダ科（Caemelidae）または軟骨魚類由来の単一ドメイン抗体は、ときどきナノボディとして公知である。定常領域または定常領域の一部は、単一ドメイン抗体中に存在していてもいなくてもよい。例えば、ラクダ科由来の天然の単一可変領域抗体は、ＶＨＨ可変領域、ならびにＣＨ２およびＣＨ３定常領域を含む。単一ドメイン抗体は、従来の抗体と類似したアプローチによるヒト化を受けることができる。Ｄａｂ型の抗体は、通常、ヒト起源の抗体から得られる。ナノボディ型の抗体は、ラクダ科またはサメ起源のものであり、ヒト化を受けることができる。断片は、組換えＤＮＡ技法によって、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的分離によって、産生され得る。用語「抗体」には、二特異性抗体も含まれる。二特異性または二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である（例えば、Songsivilai and Lachmann, Clin. Exp. Immunol., 79:315-321 (1990)；Kostelny et al., J. Immunol., 148:1547-53 (1992)を参照されたい）。

免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域（ときどき、本明細書で、それぞれ「軽鎖可変ドメイン」（「ＶＬドメイン」）または「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨドメイン」）とも呼ばれる）は、３つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」によって中断された「フレームワーク」領域からなる。フレームワーク領域は、抗原のエピトープへの特異的結合のためにＣＤＲを整列させるように機能する。ＣＤＲは、抗体の、抗原結合を主に担うアミノ酸残基を含む。アミノ末端からカルボキシル末端へと、ＶＬドメインおよびＶＨドメインは共に、以下のフレームワーク（ＦＲ）およびＣＤＲ領域を含む：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４。ＶＬドメインのＣＤＲ１、２および３は、ときどき、本明細書で、それぞれＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３とも呼ばれ；ＶＨドメインのＣＤＲ１、２および３は、ときどき、本明細書で、それぞれＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３とも呼ばれる。本出願がＣ末端残基としてＲを有するＶＬ配列を開示する場合、このＲは、あるいは、軽鎖定常領域のＮ末端残基とみなされ得る。したがって、本出願は、Ｃ末端ＲなしのＶＬ配列を開示しているとも理解すべきである。

各ＶＬドメインおよびＶＨドメインへのアミノ酸の割り当ては、ＣＤＲの任意の従来の定義に従う。従来の定義には、Ｋａｂａｔ定義（Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987および1991）、Ｃｈｏｔｈｉａ定義（Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987；Chothia et al., Nature 342:878-883, 1989）；ＣＤＲ－Ｈ１がＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲおよびＫａｂａｔ ＣＤＲの複合である、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｋａｂａｔ ＣＤＲの複合；Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒの抗体モデリングソフトウェアによって使用されるＡｂＭ定義；ならびにMartin et alの接触定義（ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）（表Ａを参照されたい）が含まれる。Ｋａｂａｔは、異なる重鎖間または異なる軽鎖間の対応する残基に同じ番号が割り当てられる、広く使用される番号付け慣習（Ｋａｂａｔ番号付け）を提供する。抗体が、ＣＤＲのある特定の定義（例えば、Ｋａｂａｔ）によるＣＤＲを含むと言われる場合、その定義は、最小数の、抗体中に存在するＣＤＲ残基（即ち、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ）を特定する。これは、別の従来のＣＤＲ定義内に入るが、特定された定義の外側に入る他の残基もまた存在することを排除しない。例えば、Ｋａｂａｔによって定義されるＣＤＲを含む抗体には、他の可能性の中でも、以下が含まれる：ＣＤＲがＫａｂａｔ ＣＤＲ残基を含有し他のＣＤＲ残基を含有しない抗体、およびＣＤＲ Ｈ１が複合Ｃｈｏｔｈｉａ－Ｋａｂａｔ ＣＤＲ Ｈ１であり、他のＣＤＲがＫａｂａｔ ＣＤＲ残基を含有し他の定義に基づくさらなるＣＤＲ残基を含有しない抗体。

一部の実施形態では、本発明のヒト化抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合、ＡｂＭおよび接触の群から選択される定義のＣＤＲである。

軽鎖および／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端における１つまたはいくつかのアミノ酸、例えば、重鎖のＣ末端リシンは、分子の一部または全てにおいて欠けていても誘導体化されていてもよい。置換が、エフェクター機能、例えば、補体媒介性細胞傷害またはＡＤＣＣを低減もしくは増加させるため（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏら、米国特許第５，８３４，５９７号；およびLazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006を参照されたい）、またはヒトにおける半減期を延長させるため（例えば、Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004を参照されたい）に、定常領域においてなされ得る。例示的な置換には、抗体の半減期を増加させるための、２５０位におけるＧｌｎおよび／または４２８位におけるＬｅｕが含まれる（定常領域についてはＥＵ番号付けがこの段落で使用される）。２３４位、２３５位、２３６位および／または２３７位のいずれかまたは全てにおける置換は、Ｆｃγ受容体、特にＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を低減させる（例えば、ＵＳ６，６２４，８２１を参照されたい）。ヒトＩｇＧ１の２３４位、２３５位および２３７位におけるアラニン置換が、エフェクター機能を低減させるために使用され得る。一部の抗体は、エフェクター機能を低減させるために、ヒトＩｇＧ１の２３４位、２３５位および２３７位においてアラニン置換を有する。必要に応じて、ヒトＩｇＧ２における２３４位、２３６位および／または２３７位は、アラニンで置換され、２３５位は、グルタミンで置換される（例えば、ＵＳ５，６２４，８２１を参照されたい）。一部の抗体では、ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けによる２４１位、２６４位、２６５位、２７０位、２９６位、２９７位、３２２位、３２９位および３３１位のうち１つまたは複数における変異が使用される。一部の抗体では、ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けによる３１８位、３２０位および３２２位のうち１つまたは複数における変異が使用される。一部の抗体では、２３４位および／もしくは２３５位は、アラニンで置換され、ならびに／または３２９位は、グリシンで置換される。一部の抗体では、２３４位および２３５位は、アラニンで置換される。一部の抗体では、アイソタイプは、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。

用語「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのヒト化免疫グロブリンまたは抗体鎖（即ち、少なくとも１つのヒト化軽鎖または重鎖）を含む免疫グロブリンまたは抗体を指す。用語「ヒト化免疫グロブリン鎖」または「ヒト化抗体鎖」（即ち、「ヒト化免疫グロブリン軽鎖」または「ヒト化免疫グロブリン重鎖」）は、ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する可変フレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは２つのＣＤＲ、より好ましくは３つのＣＤＲ）とを含む可変領域を有し、定常領域（例えば、軽鎖の場合には、少なくとも１つの定常領域またはその部分、および重鎖の場合には、好ましくは３つの定常領域）をさらに含む免疫グロブリンまたは抗体鎖（即ち、それぞれ、軽鎖または重鎖）を指す。用語「ヒト化可変領域」（例えば、「ヒト化軽鎖可変領域」または「ヒト化重鎖可変領域」）は、ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する可変フレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリンまたは抗体に実質的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む可変領域を指す。

したがって、ＣＤＲを場合によって除く、ヒト化免疫グロブリンもしくは抗体の、またはヒト化免疫グロブリンもしくは抗体鎖の領域または残基は、１つまたは複数のネイティブヒト免疫グロブリン配列の対応する領域または残基と実質的に同一である。用語「対応する領域」または「対応する残基」は、第１の配列および第２の配列が比較目的のために最適にアラインされた場合に、第１のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基と同じ（即ち、等価な）位置を占める、第２のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基を指す。

用語「エピトープ」または「抗原決定基」は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続するアミノ酸、または１つもしくは複数のタンパク質の三次フォールディングによって並置された連続しないアミノ酸から形成され得る。連続するアミノ酸から形成されるエピトープは、変性溶媒への曝露の際に典型的には保持されるが、三次フォールディングによって形成されるエピトープは、変性溶媒による処置の際に典型的には喪失される。エピトープは、典型的には、独自の空間的コンフォメーション中に、少なくとも３個の、より通常は、少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を含む。エピトープがタンパク質中のある範囲のアミノ酸残基内（例えば、Ａβの残基１～６内）であると言われる場合、この範囲は、その境界を規定する残基を含んでいる。その範囲内のある特定の残基は、エピトープに寄与するが、他の残基は寄与しなくてもよい。エピトープを形成する残基は、互いに連続していてもいなくてもよい。同様に、抗体が、アミノ酸の特定の範囲内に見出されるエピトープに結合する場合、この抗体は、その範囲内の全てのアミノ酸残基と接触している必要はなく、抗体によって接触されるエピトープの残基は、互いに連続していてもいなくてもよい。エピトープの空間的コンフォメーションを決定する方法には、例えば、ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴が含まれる。例えば、Epitope Mapping Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed. (1996)を参照されたい。

同じエピトープを認識する抗体は、標的抗原への別の抗体の結合を遮断するまたはかかる結合と競合する１つの抗体の能力を示す単純なイムノアッセイ、即ち、競合結合アッセイにおいて同定することができる。競合結合は、共通する抗原、例えばＡβへの参照抗体の特異的結合を試験中の免疫グロブリンが阻害するアッセイにおいて決定される。例えば、以下のような多数の型の競合結合アッセイが公知である：固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)を参照されたい）；Ｉ－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Cheung et al., Virology 176:546 (1990)）；および直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)）。典型的には、かかるアッセイには、これらのいずれかを支える固体表面またはセルに結合した精製された抗原、未標識の試験免疫グロブリンおよび標識された参照免疫グロブリンの使用が関与する。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面またはセルに結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験免疫グロブリンは、過剰量で存在する。通常、競合抗体が過剰量で存在する場合、この競合抗体は、共通する抗原への参照抗体の特異的結合を、少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％、７０～７５％またはそれよりも大きく阻害する。

抗体間の競合は、共通する抗原への参照抗体（例えば、３Ｄ６、アデュカヌマブ、バピネオズマブ）の特異的結合を試験中の抗体が阻害するアッセイによって決定される（例えば、Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990を参照されたい）。試験抗体は、過剰量の試験抗体（例えば、少なくとも２×、５×、１０×、２０×または１００×）が、競合結合アッセイにおいて測定した場合に、参照抗体の結合を少なくとも５０％であるが、好ましくは７５％、９０％または９９％阻害する場合、参照抗体と競合する。競合アッセイによって同定された抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、および参照抗体によって結合されるエピトープに対して、立体障害が生じるのに十分に近位の隣接エピトープに結合する抗体が含まれる。

抗原に結合した抗体のＸ線結晶学によって抗体のエピトープを定義して、接触残基を同定することもできる。あるいは、１つの抗体の結合を低減させるまたは排除する抗原中の全てのアミノ酸変異が、他方の抗体の結合を低減させるまたは排除する場合、２つの抗体は同じエピトープを有している。１つの抗体の結合を低減させるまたは排除する一部のアミノ酸変異が、他方の抗体の結合を低減させるまたは排除する場合、２つの抗体は重複するエピトープを有している。

エピトープは、免疫細胞、例えば、Ｂ細胞および／またはＴ細胞によっても認識される。エピトープの細胞認識は、^３Ｈ－チミジン取り込みによって、サイトカイン分泌によって、抗体分泌によって、または抗原依存的殺傷（細胞傷害性Ｔリンパ球アッセイ）によって決定されるように、抗原依存的増殖を測定するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイによって決定され得る。

例示的なエピトープまたは抗原決定基は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）内で見出され得るが、好ましくは、ＡＰＰのＡβペプチド内で見出される。ＡＰＰの複数のアイソフォーム、例えば、ＡＰＰ^６９５、ＡＰＰ^７５１およびＡＰＰ^７７０が存在する。ＡＰＰ内のアミノ酸には、ＡＰＰ^７７０アイソフォームの配列に従って番号が割り当てられる（例えば、配列番号８５としても示されるＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｐ０５０６７を参照されたい）。

Ａβ（本明細書でベータアミロイドペプチドおよびＡ－ベータとも呼ばれる）ペプチドは、ＡＰＰの３９～４３アミノ酸の約４ｋＤａの内部断片（Ａβ３９、Ａβ４０、Ａβ４１、Ａβ４２およびＡβ４３）である。例えば、Ａβ４０は、ＡＰＰの残基６７２～７１１からなり、Ａβ４２は、ＡＰＰの残基６７３～７１３からなる。ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｓｉｔｕでの異なるセクレターゼ酵素によるＡＰＰのタンパク質分解性プロセシングの結果として、Ａβは、４０アミノ酸長の「短い形態」および４２～４３アミノ酸長の範囲の「長い形態」の両方で見出される。本明細書に記載される好ましいエピトープまたは抗原決定基は、ＡβペプチドのＮ末端内に位置し、Ａβのアミノ酸１～１０内の残基、好ましくは、Ａβ４２の残基１～３、１～４、１～５、１～６、１～７または３～７を含む。さらなる言及されるエピトープまたは抗原決定基は、Ａβの残基２～４、５、６、７もしくは８、Ａβの残基３～５、６、７、８もしくは９、またはＡβ４２の残基４～７、８、９もしくは１０を含む。

「可溶性」または「解離した」Ａβは、１００，０００×ｇでの遠心分離後に溶液（上清）中に残存する、モノマー性の、凝集した、オリゴマー性の、他のタンパク質および脂質に会合したまたは会合していないかのいずれかの、Ａβ種を指す。「不溶性」Ａβは、１００，０００×ｇでの遠心分離後に溶液中に残存しない、凝集したＡβ種、アミロイド（ベータ－シート）またはそれでないもの、例えば、非共有結合によって一緒に保持されたＡβを指す。Ａβ（例えば、Ａβ４２）は、ペプチドのＣ末端における疎水性残基（ＡＰＰの膜貫通ドメインの一部）の存在に少なくとも一部起因して、凝集すると考えられる。可溶性Ａβを調製するための１つの方法は、超音波処理を用いて、凍結乾燥されたペプチドを、純正のＤＭＳＯ中で溶解させることである。得られた溶液は、いずれの不溶性粒状物をも除去するために遠心分離される。

抗体の「特異的結合」は、抗体が、抗原または好ましいエピトープに対して感知できる親和性を示すこと、好ましくは、有意な交差反応性を示さないことを意味する。「感知できる」または好ましい結合には、少なくとも１０^６、１０^７、１０^８、１０^９Ｍ^－１、または１０^１０Ｍ^－１の親和性での結合が含まれる。１０^７Ｍ^－１よりも高い親和性、好ましくは、１０^８Ｍ^－１よりも高い親和性が、より好ましい。本明細書に示される値の中間の値もまた、本開示の範囲内であることが意図され、好ましい結合親和性は、親和性の範囲、例えば、１０^６～１０^１０Ｍ^－１、好ましくは１０^７～１０^１０Ｍ^－１、より好ましくは１０^８～１０^１０Ｍ^－１として示され得る。「有意な交差反応性を示さない」抗体は、望ましくない実体（例えば、望ましくないタンパク質性実体）に感知できるほどに結合しない抗体である。例えば、Ａβに特異的に結合する抗体は、Ａβに感知できるほどに結合するが、非Ａβタンパク質またはペプチド（例えば、斑中に含まれる非Ａβタンパク質またはペプチド）とは有意に反応しない。好ましいエピトープに特異的な抗体は、例えば、同じタンパク質またはペプチド上の遠いエピトープと有意に交差反応しない。特異的結合は、かかる結合を決定するための任意の当該分野で認識された手段に従って決定され得る。好ましくは、特異的結合は、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ解析および／または競合結合アッセイに従って決定される。

結合断片は、組換えＤＮＡ技法によって、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって、産生される。結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂｃ、Ｆｖ、単鎖および単鎖抗体が含まれる。

用語「患者」には、予防的処置または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物対象が含まれる。

用語「有効用量」または「有効投与量」は、所望の効果を達成するまたは少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。用語「治療有効用量」は、疾患にすでに罹患している患者において、疾患およびその合併症を治癒するまたは少なくとも部分的に停止させるのに十分な量として定義される。この使用のために有効な量は、感染の重症度および患者自身の免疫系の全般的状態に依存する。

用語「処置」は、本明細書で使用される場合、疾患、疾患の症状、または疾患になる素因を治癒する、癒す、緩和する、軽減する、変更する、治す、寛解させる、改善するまたはそれに影響を与えることを目的とした、疾患、疾患の症状、または疾患になる素因を有する患者への治療剤の適用もしくは投与、またはかかる患者から単離された組織もしくは細胞系への治療剤の適用もしくは投与として定義される。

用語「アミロイド原性疾患」には、不溶性アミロイド原線維またはアミロイド斑の形成または沈着に関連する（またはそれによって引き起こされる）任意の疾患が含まれる。例示的なアミロイド原性疾患には、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群、軽度認知障害、プリオン関連伝染性海綿状脳症（ヒトにおけるクールーおよびクロイツフェルト・ヤコブ病（Creutzfeldt-Jacob disease）ならびにそれぞれヒツジおよびウシにおけるスクレイピーおよびＢＳＥ）などが含まれるがこれらに限定されない。異なるアミロイド原性疾患は、沈着した原線維のポリペプチド構成成分の性質によって定義されるまたは特徴付けられる。例えば、アルツハイマー病を有する対象または患者では、β－アミロイドタンパク質（例えば、野生型、バリアントまたは短縮型のβ－アミロイドタンパク質）が、アミロイド沈着物の特徴的なポリペプチド構成成分である。したがって、アルツハイマー病は、例えば、対象または患者の脳における、「Ａβの沈着物によって特徴付けられる疾患」または「Ａβの沈着物に関連する疾患」の例である。用語「β－アミロイドタンパク質」、「β－アミロイドペプチド」、「β－アミロイド」、「Ａβ」および「Ａβペプチド」は、本明細書で相互交換可能に使用される。

個体は、リスクファクターを有する個体を、そのリスクファクターを有さない個体よりも、疾患を発症する統計的に有意なより高いリスクにさらす、少なくとも１つの既知のリスクファクター（例えば、遺伝的、生化学的、家族歴、状況曝露）を対象が有する場合、その疾患のリスクが増加している。

用語「症状」は、患者によって知覚される、疾患の主観的証拠、例えば、歩行の変化を指す。「徴候」は、医師によって観察される、疾患の客観的証拠を指す。

統計的有意性は、ｐ＜０．０５を意味する。

抗Ａβ抗体

ここで、本開示の種々の態様に目を転じると、第１の態様の開示は、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片に関する。抗体または断片は、本明細書でｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１、ｈ２９３１、ｈ２９２６、ｈ４９２１、ｈ２８２８、ｈ２９２９、ｈ３８１８Ｇ、ｈ２９２７、ｈ４９ｋ３Ｇ、ｈ４９１７Ｇ ｈ２７２７およびｈ４９１８Ｇと同定される構築物のうち１つからの、重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む。本開示の特定のモノクローナル抗体は、Ａβの残基１～６内のエピトープに結合し得る（天然のＡβの最初のＮ末端残基が１と指定される）。一部のモノクローナル抗体は、アミノ酸１～６内のエピトープに結合し、一部は、１～５内のエピトープに結合し、一部は、１～４内のエピトープに結合する。一部の抗体は、アミノ酸１～３、２～５、３～５、２～４、２～５、２～６、３～５または３～６内のエピトープに結合する。例えば、抗体が、特定された残基内、例えば、Ａβ １～６内などのエピトープに結合すると言われる場合、それが意味するのは、抗体が、特定された残基（即ち、この例ではＡβ １～６）を含有するポリペプチドに特異的に結合するということであり；かかる抗体は、Ａβ １～６内の全ての残基に必ずしも接触しない。

別の態様では、抗体または断片は、表１Ａ中に示される構築物からの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。

別の態様では、本開示の抗体または断片は、表１中の構築物のうち１つについて示される通りの重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。抗体または断片は、表１Ａ中の構築物のうち１つについて示される通りの軽鎖可変領域（ＶＬ）もまた含み得る。

表１Ａにおいて同定された重鎖および軽鎖配列の各々についてのＣＤＲと、バピネオズマブ（「Ｂａｐｉ」、「ｈＢＰ」）由来のＣＤＲとのアラインメントは、図１９Ａおよび１９Ｂに示される。一態様では、本開示は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗体またはその断片に関し、ＣＤＲ１は、配列番号１６、１９および２０のうちいずれか１つから選択され得、ＣＤＲ２は、配列番号１７、２０、２１、２２および２３のうちいずれか１つから選択され得、ＣＤＲ３は、配列番号１８、２４、２５のうちいずれか１つから選択され得る。さらに、抗体またはその断片は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ＣＤＲ１は、配列番号２６、２９、３１および３２のうちいずれか１つから選択され得、ＣＤＲ２は、配列番号２７、３３、３４および３５のうちいずれか１つから選択され得、ＣＤＲ３は、配列番号２８、３８および３９のうちいずれか１つから選択され得る。これらの実施形態の各々では、重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲは、組み合わせて同時に配列番号１６、１７、１８、２６、２７および２８であることはない。

上記抗体についてのタンパク質モデリング情報の解析により、とりわけ、本開示の抗体の増加したアビディティ／親和性特徴への寄与因子であった、ＣＤＲにおける２つの変化が同定された：
ＣＤＲ－Ｌ１：Ｓ３２Ｙ（３２位におけるＳｅｒからＴｙｒ）、および
ＣＤＲ－Ｈ２：Ｇ５５Ｓ（５４位におけるＧｌｙからＳｅｒ）。

本明細書に列挙される抗体が結合するのと同じエピトープに結合する、ＣＤＲ－Ｌ１中の３２位においてＴｙｒを有し、ＣＤＲ－Ｈ２中の５４位においてＳｅｒを有する抗Ａβ抗体は、列挙された同定された抗体と同じ特性を有すると予期される（表１Ａならびに図１９Ａおよび図１９Ｂを参照されたい）。ＣＤＲ－Ｌ１中の３２位においてＴｙｒを有さず、ＣＤＲ－Ｈ２中の５５位においてＳｅｒを有さない開示された抗体は、ＣＤＲ－Ｌ１中の３２位においてＴｙｒを有し、ＣＤＲ－Ｈ２中の５５位においてＳｅｒを有するように改変され得、本明細書で同定されたかかる抗体に、類似の結合特性を付与すると予期され得る。

３２位においてＴｙｒを有するＣＤＲ－Ｌ１の例には、配列番号２９および３１が含まれる。５５位においてＳｅｒを有するＣＤＲ－Ｈ２の例には、配列番号２０および２１が含まれる。

例として、３２位においてＴｙｒを有するＣＤＲ－Ｌ１および５５位においてＳｅｒを有するＣＤＲ－Ｈ２を含む抗体には、ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２７２７、ｈ２８２６、ｈ２８３１、ｈ２９２６、ｈ２９２７、ｈ２９３１、ｈ２９２９のＣＤＲを有する抗体が含まれる（表１Ａを参照されたい）。さらなるかかる抗体には、表１Ｂ中で以下の表に示されるＬＣ ＣＤＲ１、２、３およびＨＣ ＣＤＲ１、２、３を含む抗体が含まれる。

本明細書で同定された抗体について同定された結合特性の観点から、類似の結合特性を提供すると予期されるコンセンサス配列を同定することができる。例えば、本開示の実施形態では、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその結合断片は、以下のような、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み得る：
重鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＮＸ_１ＧＭＳを含み、式中、Ｘ_１はＹまたはＦである（配列番号８８）；
重鎖ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＸ_１ＲＳＧＳＧＲＴＹＹＳＤＮＶＫＧを含み、式中、Ｘ_１はＩまたはＶである（配列番号８９）；
重鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＹＤＨＹＸ_１ＧＸ_２ＳＤＹを含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴである（配列番号９０）；
軽鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＤＹＤＧＫＴＹＬＮを含む（配列番号９１）；
軽鎖ＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_１ＶＸ_２ＮＲＤＸ_３を含み、式中、Ｘ_１はＫまたはＲであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり、Ｘ_３はＳまたはＴである（配列番号９２）；
軽鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ_１を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴである（配列番号９３）。

一部の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ３は、ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ_１ＦＸ_２を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＦまたはＹである（配列番号９４）。

本明細書に記載される抗体と類似の結合特性を提供すると予期され得る類似のコンセンサス配列は、以下のような、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含む：
重鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＸ_１ＮＸ_２ＧＭＳを含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＡであり、Ｘ_２はＹまたはＦである（配列番号９５）；
重鎖ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＸ_１ＲＳＧＸ_２Ｘ_３ＲＴＹＹＳＤＮＶＫＧを含み、式中、Ｘ_１はＩまたはＶであり、Ｘ_２はＳまたはＧであり、Ｘ_３はＳまたはＧである（配列番号９６）；
重鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＹＤＨＹＸ_１ＧＸ_２ＳＤＹを含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴである（配列番号９０）；
軽鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｘ_１ＳＳＱＳＬＸ_２ＤＸ_３ＤＧＫＴＹＬＮを含み、式中、Ｘ_１はＫまたはＲであり、Ｘ_２はＶ、ＭまたはＬであり、Ｘ_３はＹ、ＴまたはＳである（配列番号９７）；
軽鎖ＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ_１ＶＸ_２ＮＲＸ_３Ｘ_４を含み、式中、Ｘ_１はＫまたはＲであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり、Ｘ_３はＥまたはＤであり、Ｘ_４はＳまたはＴである（配列番号９８）；
軽鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＷＱＧＸ_１ＨＦＰＲＸ_２を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴである（配列番号９９）。

一部の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ３は、ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ_１ＦＸ_２Ｘ_３を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり、Ｘ_３はＦまたはＹである（配列番号１００）。

さらに、軽鎖および重鎖可変領域は、表１Ａに示される軽鎖および重鎖可変領域と少なくとも（at least at least）７５％同一であり得る。例えば、軽鎖および重鎖可変領域は、表１Ａで同定されたＶＨおよび／またはＶＬ配列と７５％同一、８０％同一、８５％同一、９０％同一、９５％同一、９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一または（of）１００％同一であり得る。種々の態様では、本開示のＶＨおよびＶＬ配列が、表１Ａで同定されたＣＤＲを含むが、ＣＤＲの外側のＶＨおよびＶＬ配列の領域が、表１Ａ中のＶＨおよびＶＬ配列のＣＤＲの外側の領域と少なくとも７５％同一であり得るように、ＶＨおよびＶＬにおける任意の配列変形形態は、ＣＤＲの外側に存在し得る。

例えば、本開示の抗体または断片は、配列番号３、４、５、６および７のうち１つと少なくとも９５％同一な、ＣＤＲを除く重鎖可変領域、ならびに配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５のうち１つと少なくとも９５％同一な、ＣＤＲを除く軽鎖可変領域を含み得る。

本開示の抗体および断片はまた、配列番号４０と少なくとも７５％同一な重鎖定常領域を含み得る。例えば、重鎖定常領域は、配列番号４０と７５％同一、８０％同一、８５％同一、９０％同一、９５％同一、９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一または（of）１００％同一であり得る。

本開示の抗体および断片はまた、配列番号４１と少なくとも７５％同一な軽鎖定常領域を含み得る。例えば、重鎖定常領域は、配列番号４１と７５％同一、８０％同一、８５％同一、９０％同一、９５％同一、９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一または（of）１００％同一であり得る。

表１Ａに記載される配列（＋任意の定常領域）と１００％未満同一なバリアント抗体または断片は、わずか１～１５アミノ酸残基、わずか１～１０アミノ酸残基、例えば、６～１０、わずか５、わずか４、３、２、またはさらには１アミノ酸残基が、表１Ａの抗Ａβ抗体とは異なり得る。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられた置換である。類似の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ－分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。あるいは、変異は、コード配列の全てまたは一部に沿って、例えば、飽和変異誘発によってランダムに導入され得、得られた変異体は、活性（例えば、Ａβポリペプチドに結合する能力）を保持する変異体を同定するために、生物活性についてスクリーニングされ得る。

例えば、抗体分子のフレームワーク領域中のみに変異を導入することが可能である。導入された変異は、サイレントなまたは中性のミスセンス変異であり得る、即ち、抗体が抗原に結合する能力に対する影響を有さないまたはほとんど有さない。これらの型の変異は、コドン使用を最適化するため、またはハイブリドーマの抗体産生を改善するために有用であり得る。あるいは、非中性のミスセンス変異は、抗体が抗原に結合する能力を変更し得る。当業者は、所望の特性を有する、例えば、抗原結合活性における変更なしまたは結合活性における変更（例えば、抗原結合活性における改善または抗体特異性における変化）ありの変異体分子を設計および試験することが可能である。変異誘発の後、コードされるタンパク質は、慣用的に発現され得、コードされるタンパク質の機能的活性および／または生物活性（例えば、Ａβポリペプチドの少なくとも１つのエピトープに免疫特異的に結合する能力）は、本明細書に記載される技法を使用して、または当該分野で公知の技法を慣用的に改変することによって、決定され得る。

上述の実施形態の各々では、本開示の抗体または断片は、本明細書に記載されるように、ヒト化抗体であり得る。例えば、抗体は、ヒトＩｇＧ１抗体であり得る。さらに、抗体は、完全抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体または組換え抗体であり得る。抗体の断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂｃまたはＦｖであり得る。断片は、組換えＤＮＡ技法によって、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的分離によって、産生される。

本明細書で開示される抗体または結合断片、バリアントもしくは誘導体は、５×１０^－２ｓ^－１、１０^－２ｓ^－１、５×１０^－３ｓ^－１または１０^－３ｓ^－１未満またはそれと等しいオフレート（ｏｆｆ ｒａｔｅ）（ｋ（ｏｆｆ））で、Ａβ）またはその断片もしくはバリアントに結合すると言われ得る。ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、５×１０^４ｓ^－１、１０^－４ｓ^－１、５×１０^－５ｓ^－１、または１０^－５ｓ^－１、５×１０^－６ｓ^－１、１０^－６ｓ^－１、５×１０^－７ｓ^－１または１０^－７ｓ^－１未満またはそれと等しいオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で、Ａβまたはその断片もしくはバリアントに結合すると言われ得る。

本明細書で開示される抗体または抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、１０^３Ｍ^－１ｓ^－１、５×１０^３Ｍ^－１ｓ^－１、１０^４Ｍ^－１ｓ^－１または５×１０^４Ｍ^－１ｓ^－１よりも大きいまたはそれと等しいオンレート（ｏｎ ｒａｔｅ）（ｋ（ｏｎ））で、本明細書で開示される標的ポリペプチド（例えば、Ａβ）またはその断片もしくはバリアントに結合すると言われ得る。ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、１０^５Ｍ^－１ｓ^－１、５×１０^５Ｍ^－１ｓ^－１、１０^６Ｍ^－１ｓ^－１、または５×１０^６Ｍ^－１ｓ^－１または１０^７Ｍ^－１ｓ^－１よりも大きいまたはそれと等しいオンレート（ｋ（ｏｎ））で、本明細書で開示される標的ポリペプチド（例えば、Ａβ）またはその断片もしくはバリアントに結合すると言われ得る。

本明細書に記載される抗Ａβ抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、それらの結合親和性Ａβに関して、記載または特定することもできる。結合親和性には、５×１０^－２Ｍ、１０^－２Ｍ、５×１０^－３Ｍ、１０^－３Ｍ、５×１０^－４Ｍ、１０^－４Ｍ、５×１０^－５Ｍ、１０^－５Ｍ、５×１０^－６Ｍ、１０^－６Ｍ、５×１０^－７Ｍ、１０^－７Ｍ、５×１０^－８Ｍ、１０^－８Ｍ、５×１０^－９Ｍ、１０^－９Ｍ、５×１０^－１０Ｍ、１０^－１０Ｍ、５×１０^－１１Ｍ、１０^－１１Ｍ、５×１０^－１２Ｍ、１０^－１２Ｍ、５×１０^－１３Ｍ、１０^－１３Ｍ、５×１０^－１４Ｍ、１０^－１４Ｍ、５×１０^－１５Ｍまたは１０^－１５Ｍ未満の解離定数またはＫｄを有する結合親和性が含まれ得る。

組換え抗体の発現

本開示は、発現された場合に本開示の抗体の重鎖および軽鎖ＣＤＲを含む抗体をコードする組換えポリヌクレオチドにも関する。配列番号１～配列番号３９に従う可変軽鎖および重鎖ポリペプチド、ならびにそれらのＣＤＲをコードする、発現の際にモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖ＣＤＲを含むポリペプチド鎖をコードする例示的なポリヌクレオチド（例えば、配列番号４２～配列番号６９）が本明細書で提供される。コドン縮重に起因して、他のポリヌクレオチド配列が、容易に、これらの配列の代用になり得る。

ヒト化およびヒト抗体は、典型的には、組換え発現によって産生される。ヒト化軽鎖および重鎖可変領域をコードする核酸は、定常領域に連結され得、発現ベクター中に挿入される。軽鎖および重鎖は、同じまたは異なる発現ベクター中にクローニングされ得る。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発現ベクター（複数可）中で制御配列に作動可能に連結される。発現制御配列には、プロモーター（例えば、天然に関連するまたは異種のプロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメントおよび転写終結配列が含まれるがこれらに限定されない。好ましくは、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクター中の真核生物プロモーター系である。ベクターが適切な宿主中に取り込まれると、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベル発現、ならびに交差反応性抗体の収集および精製に適切な条件下で維持される。

これらの発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの不可欠な部分として、宿主生物において複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にするために、選択マーカー（例えば、アンピシリン耐性、ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性またはネオマイシン耐性）を含有する。

本開示のポリヌクレオチドをクローニングするために有用な１つの原核生物宿主は、Ｅ．ｃｏｌｉである。使用に適切な他の微生物宿主には、桿菌、例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｕｓ、ならびに他のｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａおよび種々のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種が含まれる。これらの原核生物宿主では、宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば、複製起点）を典型的には含有する発現ベクターを作製することもできる。さらに、いくつもの種々の周知のプロモーター、例えば、ラクトースプロモーターシステム、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステム、ベータ－ラクタマーゼプロモーターシステム、またはファージラムダ由来のプロモーターシステムが存在する。プロモーターは、必要に応じてオペレーター配列と共に、典型的には発現を制御し、転写および翻訳を開始および完了するためのリボソーム結合部位配列などを有する。

他の微生物、例えば酵母もまた、発現に有用である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓは、発現制御配列（例えば、プロモーター）、複製起点、終結配列などを所望により有する適切なベクターを有する、好ましい酵母宿主である。典型的なプロモーターには、３－ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の解糖酵素が含まれる。誘導性酵母プロモーターには、とりわけ、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソチトクロムＣ（ｉｓｏｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｃ）、ならびにマルトースおよびガラクトース利用を担う酵素由来のプロモーターが含まれる。さらに、植物（例えば、イネ、タバコ）が、発現に有用である。

哺乳動物組織細胞培養物もまた、本開示のポリペプチド（例えば、免疫グロブリンまたはその断片をコードするポリヌクレオチド）を発現および産生するために使用され得る。真核生物細胞は、異種のタンパク質（例えば、インタクトな免疫グロブリン）を分泌することが可能ないくつかの適切な宿主細胞系が当該分野で開発されているので、特に有用であり得、これには、ＣＨＯ細胞系、種々のＣｏｓ細胞系、ＨｅＬａ細胞、好ましくは、骨髄腫細胞系、または形質転換されたＢ細胞もしくはハイブリドーマが含まれる。好ましくは、細胞は、非ヒトである。これらの細胞のための発現ベクターは、発現制御配列、例えば、複製起点、プロモーターおよびエンハンサー、ならびに必要なプロセシング情報部位、例えば、リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位および転写ターミネーター配列を含み得る。好ましい発現制御配列は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、サイトメガロウイルスなどに由来するプロモーターである。

抗体コード配列は、トランスジェニック動物のゲノム中への導入およびトランスジェニック動物の乳汁中での引き続く発現のために、導入遺伝子中に取り込まれ得る。適切な導入遺伝子は、乳腺特異的遺伝子、例えば、カゼインまたはベータラクトグロブリン由来のプロモーターおよびエンハンサーと作動可能に連結した軽鎖および／または重鎖のためのコード配列を含む。

目的のポリヌクレオチド配列（例えば、重鎖および軽鎖コード配列ならびに発現制御配列）を含有するベクターは、細胞宿主の型に依存して変動する周知の方法によって、宿主細胞中に移入され得る。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは、原核生物細胞のために一般に利用されるが、リン酸カルシウム処理、電気穿孔、リポフェクション、遺伝子銃またはウイルスベースのトランスフェクションが、他の細胞宿主のために使用され得る。哺乳動物細胞を形質転換するために使用される他の方法は、ポリブレン、プロトプラスト融合、リポソーム、電気穿孔およびマイクロインジェクションの使用を含む（Sambrook et al.、上記を一般に参照されたい）。トランスジェニック動物の産生のために、導入遺伝子は、受精した卵母細胞中にマイクロインジェクションされ得るか、または胚性幹細胞のゲノム中に取り込まれ得、かかる細胞の核が、脱核卵母細胞中に移入され得る。

重鎖および軽鎖が別々の発現ベクター上にクローニングされる場合、これらのベクターは、インタクトな免疫グロブリンの発現およびアセンブリを得るために、共トランスフェクトされる。発現されると、本開示の全抗体、それらのダイマー、個々の軽鎖および重鎖、または他の免疫グロブリン形態は、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム（例えば、プロテインＡ）、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ精製、ゲル電気泳動などを含む、当該分野の標準手順に従って精製され得る。医薬品使用のためには、少なくとも約９０～９５％の均質性の、実質的に純粋な免疫グロブリンが好ましく、９８～９９％またはそれよりも高い均質性が最も好ましい。

目的のポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターのコピー数を増加させることは、抗体または抗体断片の産生を増加させるための方法として望ましい。この目的のために細胞を遺伝子操作し、最良の細胞を引き続いて選択するためのいくつかの方法が、当該分野で公知である。これらの方法は、所望のタンパク質について得られる収量を改善するために、取り込まれた発現ベクターのコピー数を増加させるための「増幅」ステップを含む場合が多い。増幅方法は、例えば、Bebbington and Hentschel (DNA Cloning Volume III (IRL press, 1987))によって、以前に報告されている。宿主細胞代謝に関与し、ある特定の培地条件下でのそれらの生存に必須である酵素をコードする核酸配列の形態である場合が多い、いくつかの選択可能なマーカーのいずれかが、発現ベクターに作動可能に連結され得、それにより、所望のタンパク質の発現が、選択可能なマーカーについての選択により促進され得る。高いコピー数について選択された細胞は、タンパク質の力価が容認できるほどには上昇しない場合、さらなる増幅方法に供され得る。かかる方法には、選択可能なマーカーを阻害するある特定の毒性薬物に細胞を供することが関与し得る（例えば、メトトレキサートとジヒドロ葉酸レダクターゼ、メチオニンスルホキシイミンとグルタミン合成酵素、多剤耐性／アドリアマイシン）。かかる阻害を介して、このマーカーの発現の増加したレベルを有する細胞集団が選択され得る。これは、同様に機能的に連結された発現カセットの増加した発現レベルをもたらす場合が多い。増幅方法に供された個々の細胞中のベクターコピー数は、タンパク質産生のプラトーが、好ましくは少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ／１０^６細胞／２４時間に達するまで、評価される。かかる選択および増幅を経て成長するクローンは、最良のクローンを選択するために、力価／収量について引き続いてスクリーニングされ、次いで、さらに評価される。かかる滴定およびスクリーニングから、１つまたは複数の所望のタンパク質の引き続く産生のために、１つのまたは少数のクローンを同定し、それを単独で引き続いて使用することが一般的である。

医薬組成物

抗Ａβ抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体を調製し、それを必要とする対象にそれを投与するいくつかの方法が、公知である。抗Ａβ抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体の投与経路は、例えば、末梢、経口、中枢（例えば、くも膜下腔内、頭蓋内）、非経口、吸入による、または外用であり得る。

本明細書で議論される場合、抗Ａβ抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、活性剤の投与を容易にし、その安定性を促進するために製剤化され得る。ある特定の実施形態では、本開示に従う医薬組成物は、薬学的に許容される非毒性の無菌担体、例えば、生理的食塩水、非毒性緩衝液、防腐剤などを含む。本出願の目的のために、抗Ａβ抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体の薬学的有効量は、標的への有効な結合を達成するのに、および利益を達成するのに、例えば、血管アミロイドに影響を与えることなしに脳アミロイド斑を低減させるのに、または抗Ａβ抗体もしくはその抗原結合断片の慢性投与の間の微小出血の発生を最小化するのに十分な量を意味すると考えるものとする。一部の実施形態では、抗Ａβ抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、脳アミロイド斑を低減させるための有効量で血液脳関門を横断することができる。

本開示で使用される医薬組成物は、例えば、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が含まれる、薬学的に許容される担体を含む。

微生物の作用の防止は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合には、等張剤、例えば、糖、ポリアルコールまたは塩が、組成物中に含まれ得る。注射可能な組成物の延長された吸収は、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらされ得る。

非経口製剤は、単一のボーラス用量、注入、または負荷ボーラス用量とその後の維持用量であり得る。これらの組成物は、特定の固定された間隔でもしくは変動する間隔で、例えば、１日１回、または「必要に応じた」基準で、投与され得る。

非経口投与のための調製物には、無菌の水性または非水性の液剤、懸濁剤および乳剤が含まれる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体には、食塩水および緩衝媒体を含む、水、アルコール性／水性の溶液、エマルジョンまたは懸濁剤が含まれる。非経口ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、または不揮発油が含まれる。静脈内ビヒクルには、体液および栄養素補給剤、電解質補給剤（例えば、リンゲルデキストロースに基づくもの）などが含まれる。防腐剤および他の添加物、例えば、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガスなどもまた存在し得る。さらに、本開示の医薬組成物は、その医薬組成物の意図した使用に依存して、さらなる薬剤、例えば、ドーパミンまたは精神薬理学的薬物を含み得る。

単一の投与量形態を産生するために担体材料と組み合わされる抗Ａβ抗体またはその断片、バリアントもしくは誘導体の量は、処置される宿主および特定の投与様式に依存して変動する。組成物は、単一の用量、複数の用量として、または注入では確立された期間にわたって、投与され得る。投与量レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療的または予防的応答）を提供するために調整することもできる。

用語「末梢投与」には、本明細書で使用される場合、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内、眼内／硝子体、直腸または腟投与が含まれる。投与のこれら全ての形態は、本開示の範囲内であることが明らかに企図されるが、投与のための形態の例は、注射のため、特に、皮下、静脈内または動脈内注射または点滴のための溶液である。注射に適切な医薬組成物は、緩衝液、界面活性剤、必要に応じて、安定化剤などを含み得る。末梢投与のための調製物には、無菌の水性または非水性の液剤、懸濁剤および乳剤が含まれる。防腐剤および他の添加物、例えば、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガスなどもまた存在し得る。

本開示の治療組成物は、典型的には、所望されない夾雑物から実質的に純粋である。これは、薬剤が、その産生または精製から生じる妨害タンパク質および他の夾雑物から典型的には少なくとも５０％ｗ／ｗ純粋であることを意味するが、その薬剤が、その使用を容易にするために意図される薬学的に許容される担体（複数可）または他のビヒクルの過剰量と組み合わされる可能性を排除しない。ときどき、モノクローナル抗体（または他の治療剤）は、産生または精製に故に、妨害タンパク質および夾雑物から少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％ｗ／ｗ純粋である。

処置を受け入れる患者

本開示は、例えば、アミロイド原性疾患の予防または処置のための、患者における有益な治療応答（例えば、Ａβのファゴサイトーシスの誘導、斑負荷の低減、斑形成の阻害、神経突起ジストロフィーの低減、可溶性毒性Ａβ種の中和、認知機能の改善、および／または認知低下の逆転、処置もしくは予防）を患者において生じる本開示の抗体、断片および医薬組成物の投与による、アルツハイマー病および他のアミロイド原性疾患の処置にも関する。本開示は、アミロイド原性疾患の処置または予防のための医薬の製造における開示された抗体および断片の使用にも関する。

一態様では、本開示は、患者においてＡβのアミロイド沈着物に関連する疾患を予防または処置する方法を提供する。一態様では、アミロイド沈着物は、脳または他のＣＮＳ領域中にある。かかる疾患には、アルツハイマー病、ダウン症候群、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）および認知障害が含まれる。後者は、アミロイド原性疾患の他の特徴ありまたはなしで生じ得る。本開示の一部の方法は、アミロイド沈着物の構成成分に特異的に結合する抗体の有効投与量を患者に投与するステップを伴う。かかる方法は、ヒト患者においてアルツハイマー病を予防または処置するために有用である。

これらの方法は、無症候性患者および疾患の症状を目下示している患者の両方に対して使用され得る。かかる方法において使用される抗体は、本明細書に記載されるように、ヒト化、ヒトまたはその断片（例えば、抗原結合断片）であり得、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。さらに別の態様では、本開示は、Ａβペプチドで免疫されたヒトから調製した抗体を投与することを特色とし、かかるヒトは、抗体で処置される患者であり得る。

別の態様では、本開示は、抗体を医薬品担体と共に医薬組成物として投与することを特色とする。あるいは、抗体は、少なくとも１つの抗体鎖をコードするポリヌクレオチドを投与することによって、患者に投与され得る。ポリヌクレオチドは、患者において抗体鎖を産生するために発現される。必要に応じて、ポリヌクレオチドは、抗体の重鎖および軽鎖をコードする。ポリヌクレオチドは、患者において重鎖および軽鎖を産生するために発現される。例示的な実施形態では、患者は、患者の血液中の投与された抗体のレベルについてモニタリングされる。

処置を受け入れる患者には、疾患のリスクがあるが症状を示していない個体、ならびに症状を目下示している患者が含まれる。アルツハイマー病の場合、長生きした人であれば潜在的にだれでも、アルツハイマー病のリスクがある。したがって、本発明の方法は、対象患者のリスクのいずれの評価も必要とせずに、一般集団に予防的に投与するステップを含む。本発明の方法は、アルツハイマー病の既知の遺伝的リスクを有する個体のために特に有用である。かかる個体には、この疾患を経験した親戚を有する個体、および遺伝的または生化学的マーカーの解析によってそのリスクが決定される個体が含まれる。アルツハイマー病に向かうリスクの遺伝的マーカーには、ＡＰＰ遺伝子中の変異、特に、それぞれ、ＨａｒｄｙならびにＳｗｅｄｉｓｈ変異と呼ばれる、７１７位ならびに６７０位および６７１位における変異が含まれる。リスクの他のマーカーは、プレセニリン遺伝子ＰＳ１およびＰＳ２、ならびにＡｐｏＥ４における変異、ＡＤ、高コレステロール血症またはアテローム動脈硬化症の家族歴である。アルツハイマー病に目下罹患している個体は、特徴的な認知症、ならびに上記リスクファクターの存在から認識することができる。さらに、いくつかの診断試験が、ＡＤを有する個体を同定するために利用可能である。これらには、ＣＳＦタウおよびＡβ４２レベルの測定が含まれる。上昇したタウおよび減少したＡβ４２レベルは、ＡＤの存在を示す。アルツハイマー病に罹患している個体は、実施例のセクションで議論されるように、ＡＤＲＤＡ基準によっても診断され得る。

無症候性患者における処置は、いずれの年齢（例えば、１０、２０、３０）でも開始できる。しかし、通常、患者が４０、５０、６０または７０に達するまで処置を開始する必要はない。処置は、典型的には、一定期間にわたる複数の投与量を伴う。処置は、抗体レベルを経時的にアッセイすることによってモニタリングされ得る。応答が低下する場合、追加投与量が示される。潜在的なダウン症候群患者の場合、処置は、母親に治療剤を投与することによって出産前に、または誕生直後に開始され得る。

ｉｎ ｖｉｖｏ検出

別の態様では、本開示は、アミロイド原性疾患を有する患者またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある患者においてアミロイド斑および沈着物を検出するための方法を提供する。かかる方法は、アミロイド原性疾患およびそれに対する感受性を診断または確認するために有用である。例えば、これらの方法は、認知症症状を有する患者において使用され得、異常なアミロイド沈着物の観察は、アルツハイマー病を示す可能性が高い。これらの方法は、無症候性患者においても使用できる。アミロイドの異常な沈着物の存在は、将来の症候性疾患に対する感受性を示す。

一部の実施形態では、この方法は、本開示の抗体またはその断片を対象／患者に投与するステップ、およびＡβに結合した抗体またはその断片を検出するステップを含む。

抗体および／またはその抗体断片は、可視化すべき組織への送達をもたらす任意の適切な手段によって投与され得る、例えば、患者の身体中への静脈内注射によってまたは頭蓋内注射によって、脳に直接投与され得る。抗体および／またはその断片の投与量は、治療用量、治療用量を下回る用量または治療用量を上回る用量を含み得る。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、蛍光標識、常磁性標識または放射性標識を含め、標識される。標識の選択は、検出の手段に依存する。例えば、蛍光標識は、視覚的検出に適切である。常磁性標識の使用は、外科的介入なしの断層撮影検出に適切である。一部の実施形態では、放射性標識は、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）または単光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）を使用して検出される。

別の態様では、本開示は、アミロイド原性疾患に関して処置されている対象において処置の有効性を測定するための方法を提供する。一部の実施形態では、対象におけるアミロイド斑の第１のレベルは、本開示の抗体またはその断片を投与することによる処置の前に測定され、対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片の第１の量を検出することである。次いで、処置が対象に投与され得、その後、対象におけるアミロイド斑の第２のレベルを測定し、対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片を検出することであり得る。一部の実施形態では、アミロイド斑のレベルにおける減少が、処置に対する肯定的応答を示し、一部の実施形態では、アミロイド斑のレベルにおける変化なしまたはアミロイド斑における小さい増加が、処置に対する肯定的応答を示す。一部の実施形態では、アミロイド斑のレベルは、本明細書に記載されるアミロイド斑を検出する方法を利用して測定され得る。

一部の実施形態では、アミロイド原性疾患の診断は、例えば、対象において測定された第１のレベル（即ち、ベースライン）からの標識された位置の数、サイズおよび／または強度を、アミロイド斑の引き続く第２のレベルと比較することによって、実施され得る。経時的な増加は、疾患進行を示し、経時的な、変化なし、およびアミロイド斑がより少ないまたはアミロイド斑の強度が低いことは、軽快を示す。

処置レジメン

予防的適用：医薬組成物または医薬は、疾患、その合併症、および疾患の発症の間に呈される中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的および／または行動的症状を含む疾患のリスクを排除するもしくは低減させる、疾患の重症度を低下させる、または疾患の発生を遅延させるのに十分な量で、アルツハイマー病もしくは他のアミロイド原性疾患に対して感受性の患者または他の点でそのリスクがある患者に投与される。患者の感受性またはアミロイド原性疾患を発症するリスクは、例えば、遺伝的マーカー、生化学的マーカー、未特定の遺伝的リスクまたは他の手段から決定され得る。治療的適用では、組成物または医薬は、その合併症、および疾患の発症における中間の病理学的表現型を含む疾患の症状（生化学的、組織学的および／または行動的）を治癒するまたは少なくとも部分的に停止させるのに十分な量で、かかる疾患の疑いがある患者またはかかる疾患にすでに罹患している患者に投与される。

一部の実施形態では、薬剤の投与は、特徴的なアルツハイマー病も他のアミロイド原性疾患の認知病理もいまだ発症していない患者において認知障害を低減させるまたは排除する。治療的または予防的処置を達成するために適切な量は、治療有効用量または予防有効用量として定義される。予防的レジメンおよび治療的レジメンの両方において、薬剤は通常、十分な免疫応答が達成されるまで、いくつかの投与量で投与され、ここで、「免疫応答」または「免疫学的応答」には、レシピエント対象における抗原に対する体液性（抗体媒介性）および／または細胞性（抗原特異的Ｔ細胞またはそれらの分泌産物によって媒介される）応答の発達を含む。かかる応答は、能動的応答であり得る、即ち、免疫原の投与によって誘導され得る、または受動的応答であり得る、即ち、免疫グロブリンもしくは抗体もしくはプライムされたＴ細胞の投与によって誘導され得る。

一部の実施形態では、抗体は、複数回投与される。単一の投与量間の間隔は、毎週、毎月または毎年であり得る。間隔はまた、患者におけるＡβに対する抗体の血中レベルを測定することによって示されるように、不規則であり得る。一部の方法では、投与量は、１～１０００μｇ／ｍｌの、一部の方法では２５～３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように調整される。あるいは、抗体は、低頻度の投与が要求される場合には、徐放性製剤として投与され得る。投与量および頻度は、患者における抗体の半減期に依存して変動する。一般に、ヒト抗体は、最も長い半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体がその後に続く。

投与量および投与の頻度は、処置が予防的か治療的かに依存して変動し得る。予防的適用では、本発明の抗体またはそのカクテルを含有する組成物は、患者の耐性を増強するために、まだ疾患状態にない患者に投与される。かかる量は、「予防有効用量」であると定義される。この使用では、正確な量は再び、患者の健康状態および全般的免疫に依存するが、一般には、１用量当たり０．１～２５ｍｇ／ｋｇ、特に、１用量当たり０．５～２．５ｍｇ／ｋｇの範囲である。比較的低い投与量が、長い期間にわたって、比較的稀な間隔で投与される。一部の患者は、残りの生涯にわたって、処置を受け続ける。

治療的適用では、比較的短い間隔での比較的高い投与量（例えば、１用量当たり約０．５～３００ｍｇ／ｋｇの抗体であるが、５～２５ｍｇ／ｋｇの投与量が、より一般的に使用される）が、ときどき、疾患の進行が低減または終結されるまで、好ましくは、患者が疾患の症状の部分的または完全な寛解を示すまで、要求される。その後、患者（patent）には、予防的レジメンが投与され得る。

投与：治療剤は、予防的および／または治療的処置のために、非経口、外用、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、眼内または筋肉内手段によって投与され得る。筋肉内注射は、最も典型的には、腕または脚の筋肉において実施される。一部の方法では、薬剤は、頭蓋内注射など、沈着物が蓄積した特定の組織に直接注射される。筋肉内注射または静脈内注入が、抗体の投与のために好ましい。一部の方法では、特定の治療的抗体は、頭蓋中に直接注射される。一部の方法では、抗体は、徐放性組成物またはデバイスとして投与される。

本開示の薬剤は、必要に応じて、アミロイド原性疾患の処置において少なくとも部分的に有効な他の薬剤と組み合わせて投与され得る。アミロイド沈着物が脳において生じるアルツハイマーおよびダウン症候群の場合、本開示の薬剤は、本開示の薬剤による血液脳関門の通過を増加させる他の薬剤と組み合わせても投与され得る。

本開示は、以下の非限定的な実施例によってより完全に記載される。

配列番号４０：ｈｕＩｇＧ１定常

配列番号４１：ｈｕＫａｐｐａ定常

配列番号４２：ｈ２７２６＿ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号４３：ｈ２７２６＿ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号４４：ｈ２９３１＿ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号４５：ｈ２９３１＿ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号４６：ｈ２７３１＿ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号４７：ｈ２７３１＿ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号４８：ｈ２８３１＿ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号４９：ｈ２８３１＿ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５０：ｈ２９２６＿ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５１：ｈ２９２６＿ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５２：ｈ４９２１Ｇ ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５３：ｈ４９２１Ｇ ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５４：ｈ２８２６ ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５５：ｈ２８２６ ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５６：ｈ２９２９ ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５７：ｈ２９２９ ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５８：ｈ３８１８Ｇ ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号５９：ｈ３８１８Ｇ ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６０：ｈ２９２７ ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６１：ｈ２９２７ ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６２：ｈ４９Ｋ３Ｇ ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６３：ｈ４９Ｋ３Ｇ ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６４：ｈ４９１７Ｇ ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６５：ｈ４９１７Ｇ ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６６：ｈ２７２７ ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６７：ｈ２７２７ ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６８：ｈ４９１８Ｇ ＶＨ（可変重鎖）ヌクレオチド配列

配列番号６９：ｈ４９１８Ｇ ＶＬ（可変軽鎖）ヌクレオチド配列

配列番号７０：アデュカヌマブ重鎖：

配列番号７１：アデュカヌマブ軽鎖：

配列番号７２：バピネオズマブＨＣ（重鎖）

配列番号７３：バピネオズマブＶＨ（可変重鎖）

配列番号１６：ＶＨ ＣＤＲ１ ＧＦＴＦＳＮＹＧＭＳ

配列番号１７：ＶＨ ＣＤＲ２ ＳＩＲＳＧＧＧＲＴＹＹＳＮＤＹＮＶＫＧ

配列番号１８：ＶＨ ＣＤＲ３ ＹＤＨＹＳＧＳＳＤＹ

配列番号７７：バピネオズマブＬＣ（軽鎖）

配列番号７８：バピネオズマブＶＬ（可変軽鎖）

配列番号２６：ＶＬ ＣＤＲ１ ＫＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＫＴＹＬＮ

配列番号２７：ＶＬ ＣＤＲ２ ＬＶＳＳＫＬＤＳ

配列番号２８：ＶＬ ＣＤＲ３ ＷＱＧＴＨＦＰＲＴ

配列番号８２：ガンテネルマブＨＣアミノ酸配列：

配列番号８３：ガンテネルマブＬＣアミノ酸配列：

配列番号８４：アミロイドベータ（Ａβ）１－４２：
ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ

配列番号８５：アミロイドベータ（Ａβ）前駆体タンパク質：

配列番号８６：ｈｕＩｇＧ１定常ヌクレオチド配列

配列番号８７：ｈｕＫａｐｐａ定常ヌクレオチド配列

実施例

以下の実施例は、本明細書で開示される様式を例示するために含められている。以下の実施例のある特定の態様は、本明細書で開示される実務において十分に機能することが本発明の共同発明者によって見出されたまたは企図された技法および手順に関して記載される。本開示および当該分野の技術の一般的な水準に照らして、当業者は、以下の実施例が例示に過ぎないことを意図していること、ならびに多数の変化、改変および変更が本開示の範囲から逸脱することなしに使用され得ることを理解する。

「アデュカヌマブ」または「Ａｄｕ」は、これらの実験において使用される場合、米国特許公開第ＵＳ２０１５／０３１５２６７号およびＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／０８９５００に示される通りの、配列番号７０の重鎖および配列番号７１の軽鎖を有する抗体を指す。

「ＢＡＮ－２４０１」および「ガンテネルマブ」は、これらの実験において使用される場合、例えば、欧州特許番号ＥＰ１９６０４２８Ｂ１に示される通りの、配列番号７９の重鎖および配列番号８０の軽鎖を有する抗体を指す。

以下の方法では、凝集したＡβまたは原線維Ａβに対する抗体結合プロファイルを、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）および免疫組織化学（ＩＨＣ）によって特徴付ける。ファゴサイトーシスによる斑クリアランスを媒介する能力を、免疫蛍光、ＥＬＩＳＡおよびＭＳＤ定量によって、初代マウスミクログリアを用いて、ＡＰＰ／ＰＳ１トランスジェニックマウス脳ならびにＡＤ脳においてｅｘ ｖｉｖｏで評価し、Ａβオリゴマーニューロン結合の中和を、ラット初代海馬培養物において評価する。

本明細書で提示される結果：他のＮ末端Ａβ抗体治療（バピネオズマブ、アデュカヌマブ）と比較して、本記載のｍＡｂは、競合ＥＬＩＳＡまたは標準的な結合ＥＬＩＳＡにおいて、凝集したＡβおよび原線維Ａβに対するより高い見かけの親和性を示した。原線維Ａβに対する本開示のｍＡｂの増強されたアビディティを、ＳＰＲ平衡結合反応速度論によって確認したところ、より遅いオフレート反応速度論（off-rate kinetics）に起因して、アデュカヌマブよりも５～１１倍高いアビディティが示された。凍結ヒトＡＤ脳切片に対するＩＨＣ用量応答評価により、試験した個々のＡＤドナー組織にかかわらず、アデュカヌマブよりも大きい見かけの親和性および斑面積結合が示された。ｅｘ ｖｉｖｏ活性アッセイでは、本開示のｍＡｂは、ＡＰＰ／ＰＳ１マウス組織におけるミクログリアファゴサイトーシスによるＡβ斑低減を有意に容易にし、ラット初代ニューロンへの可溶性Ａβオリゴマー結合を濃度依存的様式で遮断することが示された。ヒトＡＤ脳を用いたｅｘ ｖｉｖｏ機能的アッセイでは、本記載からのｍＡｂは、老人斑の翻訳後修飾された構成成分であるピログルタミル化（ｐｙｒｏｇｌｕｔａｍｙｌｅｄ）Ａβのクリアランスを有意に容易にすることが示された。

（実施例１）
Ａβ抗体設計

Ａβ抗体バピネオズマブ（ｈＢＰ）は、親マウス抗体３Ｄ６から開発されたヒト化抗体である。本明細書では、多方面からのアプローチを適用して、ｈＢＰよりも優れた抗体を構築した。ｈＢＰのヒト性を解析し、軽鎖ヒト化を最適化することができると決定した。

検索を、ＰＤＢデータベース中のタンパク質配列に対して行って［Deshpande et al, 2005］、ｈＢＰのラフな構造モデルを提供する構造を見出した。ｈＢＰ ｆａｂ ＰＤＢコード４ＨＩＸの結晶構造［Miles, et al., 2013］を、ＶｈおよびＶｋの両方の構造について利用したが、それは、これが、許容される分解能（２．２Å）ならびにｈＢＰ ＶｈおよびＶｋとの正確な配列一致を有し、ループについて同じカノニカル構造を保持したからである。

ＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎｍｅｎｔを、入力配列としてのｈＢＰ ＶＬについて実施した。ヒト生殖系列ＶＫ遺伝子配列ＩＧＨＶ２－３０^＊０２は、ｈＢＰ ＶＬに最も一致している。ｈＢＰ ＶＬのフレームワークは、ＩＧＨＶ２－３０^＊０２の対応するフレームワーク領域と、高い程度の配列類似性を共有する。したがって、ＩＧＨＶ２－３０^＊０２ ＶＬのフレームワーク領域を、ｈＢＰフレームワーク領域のさらなる最適化のためのガイダンス配列として選択した。さらに、また、ｈＢＰ ３Ｄ構造に従い、抗原と直接接触しないＣＤＲ－Ｌ２中の３つの残基を、生殖系列配列に変化させて、以下の変化Ｌ５０Ｋ、Ｋ５３ＮおよびＬ５４Ｒ（Ｋａｂａｔ）をもたらした。

３つの異なるバージョンのＶＬを、ヒト生殖系列フレームワーク残基をｈＢＰ ＶＬ配列中に取り込むことによって設計した。カノニカル残基も界面残基も変化させなかった。設計したＶＫバージョン（designed VK version designed）のアラインメントは、図１に示される。

Ｐ１５がターンに位置し、生殖系列遺伝子がこの位置においてＬｅｕを有するという構造観察に基づいて、Ｐ１５Ｌを、可変軽鎖の１つのバージョンにおいて試験した。

３Ｄ構造観察に基づいて、軽鎖および重鎖ＣＤＲおよびフレームワーク中のいくつかの残基における置換を設計した。合計で３１個の軽鎖および３２個の重鎖変異体ＶＬおよびＶＨバージョンを生成し、合理的設計の第１のラウンドにおいて、結合について試験した。改善された結合を示した変異を、合理的設計の第２のラウンドにおいて組み合わせた。さらに、構造のさらなる解析によって導かれた新しい変異もまた、設計に取り込んだ。

合理的設計ベースの変異誘発を、ＣＤＲ－Ｈ１内の以下の位置について実施した：Ｔ２８、Ｓ３０、Ｎ３１、Ｙ３２およびＧ３３（Ｋａｂａｔ）。ＣＤＲ－Ｈ２について、位置Ｉ５１、Ｇ５３、Ｇ５４、Ｔ５７、Ｓ６０、Ｄ６１およびＮ６２もまた変異させた（Ｋａｂａｔ）。ＣＤＲ－Ｈ３の位置Ｄ９６、Ｈ９７、Ｓ９９、Ｓ１００ａおよびＹ１０２を、合理的変異誘発に供した（Ｋａｂａｔ）。

可変軽鎖について、複数の置換を、ＣＤＲ－Ｌ１の位置Ｋ２４、Ｌ２７ｃ、Ｄ２７ｄおよびＳ２７ｅ（Ｋａｂａｔ）において試みた。軽鎖ＣＤＲ－Ｌ２の位置Ｋ５３およびＬ５４を、部位特異的かつ限定的な変異誘発に供した（Ｋａｂａｔ）。ＣＤＲ－Ｌ３の位置は、置換に供さなかった。

フレームワーク領域中の選択された数個の位置もまた、重鎖ならびに軽鎖についての合理的変異誘発に供した。

５７個のさらなる重鎖および３３個の軽鎖バリアントを設計し、ヒト可変重鎖および軽鎖のデータベースを解析し、コンピューター学習に基づいてクエリー配列特異的変化を提案するＡｔｕｍ ＧＰＳｐｒｏソフトウェアの支援によって解析した。

可変重鎖ドメインについて、位置Ａ２４、Ｓ２５、Ｇ２６、Ｆ２７、Ｔ２８、Ｆ２９、Ｓ３０、Ｎ３１、Ｙ３２、Ｇ３３およびＭ３４におけるいくつかの置換を設計し、解析した（Ｋａｂａｔ）。これらの位置の大部分は、ＣＤＲ－Ｈ１内にあった。同様に、多くのＣＤＲ－Ｈ２残基、例えば、位置Ａ４９、Ｓ５０、Ｉ５１、Ｒ５２、Ｓ５２ａ、Ｇ５３、Ｇ５４、Ｇ５５、Ｒ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｙ５９、Ｓ６０、Ｄ６１、Ｎ６２、Ｖ６３およびＫ６４（Ｋａｂａｔ）を、変異誘発に供した。さらに、ＣＤＲ－Ｈ３内のアミノ酸、例えば、位置Ｖ９３、Ｒ９４、Ｙ９５、Ｄ９６、Ｈ９７、Ｙ９８、Ｓ９９、Ｇ１００、Ｓ１００ａ、Ｓ１００ｂ、Ｄ１０１およびＹ１０２（Ｋａｂａｔ）について、複数の置換を行った。

複数の置換を、可変軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１の位置Ｋ２４、Ｓ２５、Ｓ２６、Ｑ２７、Ｓ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｌ２７ｃ、Ｄ２７ｄ、Ｓ２７ｅ、Ｄ２８、Ｇ２９、Ｋ３０、Ｔ３１、Ｙ３２、Ｌ３３およびＮ３４（Ｋａｂａｔ）についても設計した。ＣＤＲ－Ｌ２について、変異誘発を、位置Ｌ５０、Ｖ５１、Ｓ５２、Ｋ５３、Ｌ５４、Ｄ５５およびＳ５６（Ｋａｂａｔ）において実施した。ＣＤＲ－Ｌ３位置の大部分、例えば、Ｑ９０、Ｇ９１、Ｔ９２、Ｈ９３、Ｆ９４、Ｐ９５、Ｒ９６およびＴ９７もまた、複数のアミノ酸で合理的に置換した（Ｋａｂａｔ）。

合理的設計ならびにＧＰＳｐｒｏ設計から得られた全てのバリアント抗体を、発現、融点（Ｔｍ）、親和性およびアビディティについて解析した。合理的設計からの８つの抗体およびコンピューター学習キャンペーンからの６つの抗体を、上述のアッセイに基づいて、さらなる解析のために選択した。

（実施例２）
競合ＥＬＩＳＡアッセイによるＩＣ_５０比決定

抗原コーティングされたプレートへの標識された抗体の結合の競合（阻害）に基づくアッセイを使用して、本開示の抗体についてＩＣ_５０を決定した。

原線維を生成するために、ＨＦＩＰ（ヘキサフルオロイソプロパノール）であらかじめ処理し乾燥させたＡβ １－４２ポリペプチドを、ＤＭＳＯ中に再懸濁して５ｍＭにし、次いで、１０ｍＭ ＨＣｌを用いて１００ｕＭへとさらに希釈した。試料を３７℃で２４時間インキュベートし、次いで遠心分離して、可溶性種と原線維種とを分離した。ペレットを、１×Ｄ－ＰＢＳ中に再懸濁して元の体積にし、使用前に超音波処理した。

プレートを、０．５ｍｇ／ｍｌの原線維Ａβ ４２でコーティングし、例えば、１％ＢＳＡ／ＰＢＳでブロッキングした。０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に調製した１５０μｇ／ｍｌで出発するｈＢＰの７つの３倍希釈物（７５μｇ／ｍｌの最終濃度）および２０μｇ／ｍｌで出発する試験抗体の４つの３倍希釈物（１０μｇ／ｍｌの最終濃度）を、１ウェル当たり５０ｕｌで、三連でウェルに添加した。０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中に調製した０．７５μｇ／ｍｌのｈＢＰ－ビオチン５０ｕｌ（０．３５μｇ／ｍｌの最終濃度）を、全てのウェルに添加し、プレートを室温で２時間インキュベートし、次いで、ＴＴＢＳで３回洗浄した。次いで、１／１０，０００希釈したＧＥストレプトアビジンＨＲＰ １００ｕｌを添加し、３０分間インキュベートした。次いで、プレートを、ＴＴＢＳで６回洗浄した。Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒのｏ－フェニレンジアミン二塩酸塩（ＯＰＤ）基質を、製造業者の指示に従って新たに調製し、１ウェル当たり１００ｕｌを添加した。反応物を１５分間インキュベートし、反応を５０ｕｌ ２Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４で停止させた。試料を、Ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘで４９０ｎｍで読み取った。図２、図３および図４は、４９１８、４９１７、４９２１、３８１８、４９ヒト３、２９３１およびバピネオズマブ対照（図２）、２９２６、２８３１、２９２７、２７２６、２７３１、２８２６およびバピネオズマブ対照（図３）ならびに２７２７、２９２９およびバピネオズマブ対照（図４）についての競合ＥＬＩＳＡアッセイグラフを示す。各試験抗体についてのＩＣ_５０をｈＢＰについてのＩＣ_５０で除算して、５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）比を得る。１未満の比は、ｈＢＰよりも良好な性能を示す。表２を参照されたい。

（実施例３）
競合ＥＬＩＳＡによるモノクローナル抗体効力決定

本開示のある特定のモノクローナル抗体およびｈＢＰの結合効力を、競合ＥＬＩＳＡによって評価した、凝集したＡβ４２に結合したビオチン化バピネオズマブと競合するその能力によって測定した。１ｍｇのＡβ ４２を、１ｍｌのｄｉＨ_２Ｏに添加し、激しくボルテックスし、ニューテーター（ｎｕｔａｔｏｒ）上に室温で４８時間置いた。プレートを、０．５ｍｇ／ｍｌの不均一なＡβ ４２凝集体混合物でコーティングし、例えば、１％ＢＳＡ／ＰＢＳでブロッキングした。１５０μｇ／ｍｌで出発するｈＢＰの７つの３倍希釈物（ｈＢＰ－ビオチンでの希釈後に７５μｇ／ｍｌ）および２０μｇ／ｍｌで出発する試験抗体の４つの３倍希釈物（ｈＢＰ－ビオチンでの希釈後に１０μｇ／ｍｌ）を、１ウェル当たり５０ｕｌで、三連でウェルに添加した。０．７５μｇ／ｍｌのｈＢＰ－ビオチン５０ｕｌ（希釈後に０．３５μｇ／ｍｌ）を、全てのウェルに添加し、プレートを室温で２時間インキュベートし、次いで、ＴＴＢＳで３回洗浄した。次いで、１／１０，０００希釈したＧＥストレプトアビジンＨＲＰ １００ｕｌを添加し、３０分間インキュベートした。プレートを、ＴＴＢＳで６回洗浄した。Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒのｏ－フェニレンジアミン二塩酸塩（ＯＰＤ）基質を、製造業者の指示に従って新たに調製し、１ウェル当たり１００ｕｌを添加した。反応物を１５分間インキュベートし、反応を５０ｕｌ ２Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４で停止させた。試料を、Ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘで４９０ｎｍで読み取った。図５Ａは、２９３１、２７３１およびバピネオズマブ対照についての競合ＥＬＩＳＡアッセイグラフを示し；図５Ｂは、２７２６、２８３１およびバピネオズマブ対照についての競合ＥＬＩＳＡアッセイグラフを示す。図２０Ａは、２９３１、２７３１およびバピネオズマブ対照についての競合ＥＬＩＳＡアッセイグラフを示し（データは表３、１～２行目に示される）；図２０Ｂは、２８３１、２７２６およびバピネオズマブ対照についての競合ＥＬＩＳＡアッセイグラフを示す（データは表３、４～５行目に示される）。図２０Ａおよび図２０Ｂについて、曲線および得られたＩＣ_５０推定値（IC50 estimations）は、データの非線形３パラメーター最小二乗フィットを示す。個々のポイントは、三連試料の平均である（変動係数＜２０％）。

結果は、抗体２９３１、２７３１、２７２６および２８３１が、ｈＢＰよりも高い効力；ｈＢＰよりも約２分の１～４分の１の低さのＩＣ_５０値を示したことを示している。

（実施例４）
ＢＩＡｃｏｒｅによるヒト化ｍＡｂまたはＦａｂの特徴付け

組換えＡβ_１－４２原線維へのヒト化抗体またはヒト化抗原結合断片（Ｆａｂ）の結合特徴を比較するために、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して解析を実施した。

原線維を生成するために、ＨＦＩＰ（ヘキサフルオロイソプロパノール）であらかじめ処理し乾燥させたＡβ_１－４２ポリペプチドを、ＤＭＳＯ中に再懸濁して５ｍＭにし、次いで、１０ｍＭ ＨＣｌを用いて１００ｕＭへとさらに希釈した。試料を３７℃で２４時間インキュベートし、次いで遠心分離して、可溶性種と原線維種とを分離した。ペレットを、Ｄ－ＰＢＳ中に再懸濁して元の体積にし、使用前に超音波処理した。

原線維を、アミンカップリングを介してセンサーチップＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に固定して、およそ１００ＲＵの分析物の最大結合を確実にするレベルにした。種々の濃度の抗体またはＦａｂ（１ｎＭ～１００ｎＭの範囲）を、３００秒の会合時間および１２００秒の解離時間にわたって、ランニング緩衝液（ＨＢＳ＋０．０５％Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中で３０μＬ／分で、カップリングされたリガンド上を通過させた。チップ表面の再生を、ｐＨ１．７の１０ｍＭグリシン－ＨＣｌの２回の短い注入によって達成した。データを、リガンドを含有しないセンサーおよび０ｎＭの分析物濃度の両方に対してブランク減算した。解析を、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ｖ２．０）を、ゼロＲＵに設定したバルク屈折率と共に用いるグローバル１：１フィットを使用して実施した。オフレートデータ（ｋ_ｄｉｓｓ；ｋｄ）は、表４（Ｆａｂ）および表６（抗体）に示される。

類似の小さい解離定数が、アデュカヌマブと比較して、ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１のＦａｂおよび抗体について見られ得、有意に大きい解離定数が実証された。

（実施例５）
ＢＩＡｃｏｒｅによる見かけのヒト化ｍＡｂ親和性の特徴付け

Ａβ_１－２８（Ｂａｃｈｅｍ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）への抗Ａβ候補の結合親和性の決定を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用して実施した。抗ヒトＦｃ抗体を、アミンカップリングを介してＣＭ３センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に固定し、Ａβ抗体を捕捉するために使用した。

種々の濃度のＡβ_１－２８（分析物、１００ｎＭから下がって０．３９ｎＭまでの範囲の濃度、各希釈ステップで２倍段階希釈）を、２４０秒の会合時間および９００秒の解離時間にわたって、ランニング緩衝液（ＨＢＳ＋０．０５％Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中で５０μｌ／分で、捕捉されたリガンド上を通過させた。データを、リガンドを含有しない無関係のセンサー、および０ｎＭの分析物濃度を含有する実行緩衝液の両方に対してブランク減算した。解析を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ｖ３．０）を用いるグローバル１：１フィットを使用して実施した。

見かけの解離定数（ＫＤ）は表５に示され、表中、本開示のｍＡｂは、Ａβ_１－２８モノマーに対して４～７ｎＭの結合親和性を実証した。０．３９ｎＭ～１００ｎＭの濃度における結合のセンサーグラムは、図６Ａ（ｈ２７２６）、図６Ｂ（ｈ２７３１）、図６Ｃ（ｈ２８３１）および図６Ｄ（ｈ２９３１）に示される。

（実施例６）
ＢＩＡｃｏｒｅによる見かけのヒト化ｍＡｂ親和性の特徴付け

組換えＡβ_１－４２原線維へのヒト化抗体の結合特徴を比較するために、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００を使用して解析を実施した。

原線維を生成するために、ＨＦＩＰ（ヘキサフルオロイソプロパノール）であらかじめ処理し乾燥させたＡβ_１－４２ポリペプチドを、ＤＭＳＯ中に再懸濁して５ｍＭにし、次いで、１０ｍＭ ＨＣｌを用いて１００μＭへとさらに希釈した。試料を３７℃で２４時間インキュベートし、次いで遠心分離して、可溶性種と原線維種とを分離した。ペレットを、１×Ｄ－ＰＢＳ中に再懸濁して元の体積にし、使用前に超音波処理した。

原線維を、アミンカップリングを介してセンサーチップＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に固定して、およそ５０ＲＵの分析物の最大結合を確実にするレベルにした。種々の濃度の抗体（０．４１１ｎＭ～１００ｎＭの範囲）を、３００秒の会合時間および１２００秒の解離時間にわたって、ランニング緩衝液（ＨＢＳ＋０．０５％Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中で３０μＬ／分で、カップリングされたリガンド上を通過させた。チップ表面の再生を、１０ｍＭグリシン－ＨＣｌ ｐＨ１．７の２回の短い注入によって達成した。データを、リガンドを含有しないセンサーおよび０ｎＭの分析物濃度の両方に対してブランク減算した。解析を、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ｖ２．０）を、ゼロＲＵに設定したバルク屈折率と共に用いるグローバル１：１フィットを使用して実施した。見かけの解離定数（ＫＤ）は表６に示され、１００ｎＭにおける結合の比較センサーグラムは図７に示される。

ＥＬＩＳＡによって観察された、原線維Ａβに対する本開示のモノクローナル抗体の増強された相対的アビディティを、ＳＰＲ平衡結合反応速度論によって確認したところ（表６）、アデュカヌマブよりも５倍～１１倍高いアビディティ（見かけのＫＤ）が示された。

これは、ＳＰＲセンサーグラム（図７）において観察された異なる速度論的結合プロファイルによって説明される。アデュカヌマブは、より速い会合速度（ｋａ）でＡβ原線維に結合するが、本開示のモノクローナル抗体のかなり遅い解離速度（ｋｄ）は、アデュカヌマブよりも大きい測定されたアビディティ（即ち、より低いＫＤ^＊）を生じた。

（実施例７）
ＥＬＩＳＡによるＡβ原線維結合

Ａβ_１－４２原線維およびＡβ_{ｐＥ３－４２}原線維への本開示のある特定のモノクローナル抗体およびアデュカヌマブの直接結合を、ＥＬＩＳＡによって評価した。原線維を生成するために、ＨＦＩＰ（ヘキサフルオロイソプロパノール）であらかじめ処理し乾燥させたＡβ_１－４２またはＡβ_{ｐＥ３－４２}ポリペプチドを、ＤＭＳＯ中に再懸濁して５ｍＭにし、次いで、１０ｍＭ ＨＣｌを用いて１００ｕＭへとさらに希釈した。試料を３７℃で２４時間インキュベートし、次いで遠心分離して、可溶性種と原線維種とを分離した。ペレットを、１×Ｄ－ＰＢＳ中に再懸濁して元の体積にし、使用前に超音波処理した。

ＰＢＳ中１．０μｇ／ｍｌまたは２．５μｇ／ｍｌのＡβ原線維を、室温で一晩コーティングした。プレートを、１％ＢＳＡ／ＰＢＳで１時間ブロッキングした。抗体を、０．１％ＢＳＡ－ＰＢＳおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０中で１０μｇ／ｍｌから４．８ｎｇ／ｍｌまで段階希釈し、１００μｌの各希釈物を、各抗体に二連で添加し、室温で２時間インキュベートした。プレートをＴＢＳ／Ｔｗｅｅｎ ２０で４回洗浄し、１／５０００希釈のヤギ抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡまたはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）１００μｌを、各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを、ＴＢＳ／Ｔｗｅｅｎ ２０中で６回洗浄し、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒのｏ－フェニレンジアミン二塩酸塩（ＯＰＤ）錠剤およびＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ基質緩衝液を、製造業者の指示に従って調製した。１００ｕｌの基質を添加し、１５分間インキュベートした。反応を５０μｌ Ｈ_２ＳＯ_４で停止させた。プレートを、ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｖｉｃｅｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘで４９０ｎｍで読み取った。図９Ａおよび図２１。図２１について、曲線および得られたＥＣ_５０推定値は、データの非線形３パラメーター最小二乗フィットを示す（データは表７に示される）。

プレートを、１０μｇ／ｍｌから４．８ｎｇ／ｍｌまでのＰＢＳ中でのＡβ原線維の希釈物で、室温で一晩コーティングした。プレートを１％ＢＳＡ／ＰＢＳで１時間ブロッキングした。０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ ０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０中２μｇ／ｍｌの抗体を、適切なウェルに二連で添加し、室温で２時間インキュベートした。プレートを、ＴＢＳ／Ｔｗｅｅｎ ２０で４回洗浄し、次いで、１００μｌのＪａｃｋｓｏｎヤギ抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰ １／５０００希釈物を、各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを、ＴＢＳ／Ｔｗｅｅｎ ２０中で６回洗浄し、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒのｏ－フェニレンジアミン二塩酸塩（ＯＰＤ）錠剤およびＴｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ基質緩衝液を、製造業者の指示に従って調製した。１００μｌの基質を添加し、１５分間インキュベートした。反応を５０μｌ Ｈ_２ＳＯ_４で停止させた。プレートを、ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｖｉｃｅｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘで４９０ｎｍで読み取った。図９Ｂ、右パネル。

抗体ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１は全て、原線維に対する強い親和性を実証し、最良の性能のものと最悪の性能のものとの間の差異は、２５％以内であった。さらに、これら４つの抗体は全て、アデュカヌマブよりも有意に高いアビディティを実証した。図２１について、アッセイシグナル（ＯＤ４９０）における３倍の増加および１５分の１～２０分の１の低さの推定されたＥＣ_５０は、アデュカヌマブと比較した、原線維Ａβに対するｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１ ｍＡｂの全体的結合および相対的アビディティの増加を示した。

（実施例８）
ＥＬＩＳＡによるＡβオリゴマーのｈ２９３１結合

Ａβオリゴマーへのｈ２９３１の直接結合を、ＥＬＩＳＡによって評価した。オリゴマーを生成するために、第１の凍結乾燥されたビオチン化Ａβおよび未標識のＡβ（Ｂａｃｈｅｍ）を各々、１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ、Ｓｉｇｍａ）中に１ｍｇ／ｍＬで可溶化した。ＨＦＩＰを、ヒュームフード中で室温で一晩、試料から蒸発させた。次いで、アリコートを、ｓｐｅｅｄｖａｃ中で室温で遠心分離して全ての液体を除去して、２５０μｇアリコートのＨＦＩＰフィルムを生成し、これを、さらなる使用まで－８０℃で貯蔵した。

オリゴマーを、ビオチン化Ａβおよび未標識のＡβのＨＦＩＰペレット２５０μｇを乾燥ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ）中に可溶化して、５ｍＭの最終濃度にすることによって調製した。未標識：ビオチン化混合物について、試料を、無菌１．５ｍＬ低結合微小遠心管（Ａｘｙｇｅｎ）中で９：１の比（未標識：ビオチン化）で合わせた。次いで、ＤＭＳＯに可溶化した試料を、冷フェノールなしｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１００μＭに希釈し、４℃で２４時間インキュベートした。インキュベーションの後、オリゴマーを、１４，０００ｇで１５分間の遠心分離を介して、大きい不溶性材料から分離した。上清の上位９０％を、注意深く取り出し、新しい無菌低結合微小遠心管中に置き、使用まで氷上で貯蔵した。

ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍＬの各調製物を、Ｃｏｓｔａｒ ＥＬＩＳＡ高結合プレート中で１ウェル当たり１００ｕｌで室温で一晩コーティングした。プレートを吸引し、次いで、ＰＢＳ中１％ＢＳＡ ２００μｌを、各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。ｈ２９３１ ｍＡｂを、０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ ０．１％ｔｗｅｅｎ ２０緩衝液中で出発濃度１０μｇ／ｍｌで作製し、同じ緩衝液で７回段階希釈した（各回に１：２）。試料を、室温で２時間インキュベートした。プレートを、ＴＢＳ．０．１％ｔｗｅｅｎ ２０で４回洗浄した。ヤギ抗ヒト（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ＰＡ）を、０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ ０．１％ｔｗｅｅｎ ２０中に１／５０００希釈し、１００μｌ／ウェルで添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを４回洗浄し、ｏ－フェニレンジアミン二塩酸塩錠剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、製造業者の指示に従って調製した。１ウェル当たり１００μｌを添加し、室温で１５分間インキュベートした。反応を、５０μｌのＨ_２ＳＯ_４の添加によって停止させ、試料を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒｏＭａｘで４９０ｎｍで読み取った。曲線および得られたＥＣ_５０推定値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用した、データの非線形３パラメーター最小二乗フィットを示す。

ｍＡｂ ｈ２９３１は、２３ｎｇ／ｍＬまたは０．１５ｎＭの推定されたＥＣ_５０で、高い相対的親和性で可溶性オリゴマーに結合することが示された。図８。

（実施例９）
ＡＤ脳における抗Ａβ抗体結合

組織試料。凍結ヒトＡＤ脳試料は、Ｂａｎｎｅｒ Ｓｕｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｓｕｎ Ｃｉｔｙ、ＡＺから得た。組織は、高い量のＡβ病変を有することが確認され、提供者の施設においてＢｒａａｋシステムに従ってステージ分けされたドナーからのものである（表８）。さらに、品質管理を、全ての組織ブロックに対して社内で実施して、それらの病変のレベルおよび分布を確定した。

組織の切片化および固定。未固定の凍結脳組織試料を、２－メチルブタンおよびドライアイススラリーの混合物（－６０℃）中に浸したクリオモルド（ｃｒｙｏｍｏｌｄ）においてＴｉｓｓｕｅ－Ｔｅｋ ＯＣＴ（Ｓａｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ）中に包埋し、次いで、切片化まで－８０℃で貯蔵した。１０μｍ厚の連続凍結切片を、Ｌｅｉｃａ ３０５０Ｓクリオスタットを使用して生成した。切片を、正に荷電したガラススライド上に直接解凍マウントし、使用まで－２０℃で貯蔵した。免疫組織化学ＩＨＣ手順の前に、スライドを、１０％中性緩衝ホルマリン溶液中に４℃で１０分間浸漬し、ＰＢＳ中でリンスし、次いで、グルコースオキシダーゼ溶液（１×ＰＢＳ中、２０ｍＭベータＤ（＋）グルコース、２ｍＭアジ化ナトリウムおよび２単位／ｍＬグルコースオキシダーゼ）中で３７℃で１時間インキュベートした。スライドを、ＰＢＳ中で５分間にわたって３回リンスし、その後、自動染色機中での処理のために、染色ラック上に移した。

抗体ビオチン化。ヒト化ＩｇＧ抗体を、１：４の比でのビオチンコンジュゲートしたヤギ抗ヒト一価ｆａｂ断片（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）との室温で１時間のインキュベーションによって、非共有結合的方法を使用してビオチン化した。未結合の過剰なＦａｂを、使用前に、さらに１時間にわたるヒト血清とのプレインキュベーションによって吸収した。次いで、新たに調製した抗体を、組織切片への即座の適用のために、染色機中にロードした。

免疫染色。染色を、Ｂｏｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｋｉｔ（ＤＳ９８０、Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびアビジン－ビオチン増幅免疫－ペルオキシダーゼ検出システムを使用して、自動Ｌｅｉｃａ Ｂｏｎｄ Ｒｘ Ｓｔａｉｎｅｒ（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において実施した。各ビオチン化抗Ａβ抗体、またはヒトＩｇＧ対照を、指定された濃度で１時間にわたって切片に適用し、染色を、アビジン－ビオチン増幅システム（ＡＢＣ Ｅｌｉｔｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ、ＰＫ－６１００；Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して可視化した。核のヘマトキシリン対比染色を、切片に引き続いて適用し、その後、漸増系列のアルコール中で脱水し、キシレン中で取り除き、カバースリップを掛け、風乾した。

組織イメージング。染色されたスライドを、Ｈａｍａｍａｔｓｕ ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ ２．０ＨＴスライドスキャナー（Ｈａｍａｍａｔｓｕ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用してデジタルでイメージングし、画像を、ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙソフトウェア（ＮＤＰ．ｓｃａｎ、バージョン２．７．２５）を使用して、．ｎｄｐｉファイルフォーマットで捕捉した。この報告に含まれる画像は、ＮＤＰ．ｖｉｅｗから直接捕捉し、いずれの増強もなしに転写した。形態計測のために、デジタル化されたスライドを、Ｈａｌｏソフトウェア（Ｖ２．１．１５３７）を使用して解析して、染色された組織のパーセンテージを測定し、結果を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８を使用してプロットした。

ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１、ｈ２９３１およびアデュカヌマブを用いた結果。本開示の４つのヒト化抗Ａβ抗体ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１、ならびにアデュカヌマブを、漸増濃度：０．０３、０．１、０．３、１、３および９μｇ／ｍｌで、４つ全てのＡＤ脳に適用した。図１０に示されるように（０．３μｇ／ｍＬ）、これらの抗体と共にインキュベートしたＡＤ脳切片は、ＡＤにおけるＡβ病変に典型的な免疫陽性構造を示した。脳ＡＤ １３－７５およびＡＤ １４－１１は、高密度のＡβ斑を有するが、脳ＡＤ １１－９７およびＡＤ １５－１９における病変は、比較的まばらであった。各脳において、特定の濃度の４つの抗体ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１によって得られた染色は、強度および分布において匹敵していた。アデュカヌマブを用いた染色は、試料および濃度の間で最も弱かった。図１１に例示されるように、１または９μｇ／ｍｌの対照ヒトＩｇＧアイソタイプと共にインキュベートした４つ全ての脳からの切片は、病理染色を有さなかった。

図１２および図２２中のグラフは、４つ全てのＡＤ脳における５つの抗体による染色の定量のプロットである。染色された病変によって占められた組織表面積のパーセンテージの測定により、各ＡＤ脳において、４つの抗体ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１、ｈ２９３１が、試験した全ての濃度において、類似のレベルの結合を有することが確認されている。対応して、表９中のデータは、各脳で、曲線下面積およびＥＣ_５０値が、４つの抗体について同等なままであることを示している。アデュカヌマブを用いて得られた値は、試験した濃度範囲を通じて、ＡＤ脳間で一貫してより低かった。

図２２は、特に、１０ｍｇ／ｋｇアデュカヌマブによる脳脊髄液における臨床的に適切な曝露であると推定される抗体濃度で、アデュカヌマブよりも大きい斑領域結合（plaque area binding）（染色された陽性組織のパーセンテージとして）を示した。類似の斑領域染色が、試験した最も高い濃度において観察され、これは、このレベルでの結合の飽和を示唆している。

バピネオズマブ（ｈＢＰ）を用いた結果

脳ＡＤ １３－７５からの切片を、漸増濃度：０．０３、０．１、０．３、１、３および９μｇ／ｍｌのヒト化抗体ｈＢＰならびにアデュカヌマブおよびＢＡＮ２４０１と共にインキュベートした。抗体ｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１で見られたのと同様、ｈＢＰによる染色のレベルは、用量依存的様式で増加した。さらに、ｈＢＰ染色は、図１３に示されるように、試験した全ての濃度で、アデュカヌマブおよびＢＡＮ２４０１の染色よりも強かった。

（実施例１０）
（Ａβ_１－４２およびＡβ_{ｐＥ３－４２}）斑クリアランスの決定のためのｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシスアッセイ

ＡＤの初期ステージでは、ミクログリア機能は、神経保護的であり、アポトーシス細胞および病理学的タンパク質凝集体を取り除くように作用するだけでなく、シナプス毒性Ａβオリゴマーの成長および拡散を制限する障壁を斑周囲に形成する。ｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシスアッセイは、抗体媒介性のミクログリアクリアランス応答を定量する。

初代ミクログリア培養物生成：新生仔マウス脳組織の解剖のために、Ｐ１仔を、無菌はさみによって迅速に断頭する。髄膜を除去し、前脳を、１～５ｍｌの解剖培地（例えば、２０％ＦＢＳ、Ｐ／Ｓを含む高グルコースＤＭＥＭ）中に即座に浸漬させ、所望の数の仔脳が解剖されるまで氷上に置いた。好ましくは、総手順時間を１０分間以内に制限して、細胞損傷を最小化する。

組織を、２２Ｇ針および次に２５Ｇ針を使用して、新しい無菌ピペットを用いて連続して２回、注意深く吸引した。試料を、２，５００×ｇで４℃で５分間遠心分離した。上清を注意深く吸引し、５ｍｌの新鮮な成長培地（高グルコースＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、Ｐ／Ｓおよび２５ｎｇ／ｍｌ組換えマウスＧＭ－ＣＳＦ）を、細胞ペレットに添加した。細胞ペレットを、無菌１０ｍｌピペットを用いておよそ１０回、ピペッティングで上下させて、ペレットを解離させる。

セルストレーナー（１００μｍ孔）を、新たな５０ｍｌ円錐管上に置き、材料を、セルストレーナーを介して円錐管中に分配した。セルストレーナーを、４～５ｍｌの新たな培地でリンスし、その後、２００×ｇで４℃で５分間遠心分離した。

細胞を、Ｔ－７５プラスチック培養フラスコ１つ当たり２つのマウス脳の密度でプレーティングした。上清を注意深く吸引し、３ｍｌの新鮮な成長培地（高グルコースＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、Ｐ／Ｓおよび２５ｎｇ／ｍｌ組換えマウスＧＭ－ＣＳＦ）を、１０ｍｌ無菌ピペットを用いて各細胞ペレットに添加する。１０ｍｌピペットを用いて１０回、ピペッティングで上下させて、再懸濁する。６ｍｌの成長培地（高グルコースＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、Ｐ／Ｓおよび２５ｎｇ／ｍｌ組換えマウス顆粒球単球コロニー刺激因子）を各フラスコ中に添加し、その後、６ｍｌの再懸濁された細胞ペレットを添加して１２ｍｌの最終を得ることによって、５％ＣＯ_２インキュベーター中で３７℃で、１つの無菌Ｔ－７５フラスコを調製する。

フラスコを、５日間静置してインキュベートして、細胞を付着させる。５日目に、各フラスコ中の培養培地を、１２ｍｌの新鮮な成長培地（高グルコースＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、Ｐ／Ｓおよび２５ｎｇ／ｍｌ組換えマウスＧＭ－ＣＳＦ）で置き換えた。プレーティングした混合細胞のおよそ１０％が、プラスチック表面に付着し、その上で成長する。培地を１週間に２回交換して（３～４日毎）、コンフルエンスを達成した。かかる交換は、細胞が付着しているフラスコの底に触らないように、非常に注意深く実施する。

７～１１日後、フラスコを、１９ｍｍの軌道で３７℃で２時間、Ｌａｂ－Ｌｉｎｅオービタルシェーカーを使用して２００ｒｐｍで回転させた。細胞懸濁物を、２００×ｇで遠心分離し、アッセイ培地（ハイブリドーマ－無血清培地Ｈ－ＳＦＭ［Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ］＋１％ＦＢＳ、グルタミン、Ｐ／Ｓおよび５ｎｇ／ｍｌ組換えマウスＧＭ－ＣＳＦ）中に再懸濁した。

ｅｘ ｖｉｖｏアッセイ。ＡＰＰ／ＰＳ１マウスまたはヒトＡＤ脳（死後の間隔、３時間未満）のクリオスタット切片（厚さ１０μｍ；幅広の刃を使用する）を、ポリリシンコーティングされた円形ガラスカバースリップ上に「解凍マウント」し、２４ウェル組織培養プレートのウェル中に置いた（ＣＴ －３０Ｃ ＯＴ －２０Ｃ）。組織試料を、切片間に親指を当てて、またはＯＴを－１２Ｃに低減させることによって温めることができる。カバースリップを、アッセイ培地で２回洗浄した。抗体（対照抗体またはＡβに対する抗体）を、アッセイ培地中２倍濃度２５０μｌ（２０μｇ／ｍｌ最終）で、組織培養インキュベーター中で１時間添加した。

次いで、ミクログリア細胞を、アッセイ培地２５０μｌ中８００，０００細胞／ｍｌの最終密度（１，６００，０００細胞／ｍｌのストック）で播種した。培養物を、５％ＣＯ_２の雰囲気中で３７℃で加湿インキュベーター中で７２時間維持した。

総Ａβ（Ａβ_１－４２）の定量。培地を、注意深く吸引し、その後氷冷ＰＢＳで洗浄した。１００μｌの８Ｍ尿素を添加し、組織をピペッティングによって再懸濁し、ピペット先端を用いてこすり落とした。次いで、懸濁物を、解析の準備ができるまで、－２０℃で凍結した。懸濁物を氷上で解凍し、１６，０００×ｇで４℃で２０分間遠心分離し、その後、Ｖ－ＰＬＥＸ Ｔｏｔａｌ Ａβ４２ Ｐｅｐｔｉｄｅ（４Ｇ８）Ｋｉｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して希釈および解析した。結果は、図１４Ａ、図１４Ｂおよび（and and）図２４に示される。図１４Ａおよび図２４は、脳切片１つ当たりのＡβレベルを示し、図１４Ｂは、処置毎の散布図として、同じデータを示す（図１４Ｂについてのデータは表１０に示され；図２４についてのデータは表１１に示される）。ｈ２７３１、ｈ２９３１およびアデュカヌマブは、アイソタイプ対照を超えた、Ａβ斑種における高度に有意な低減を実証した。

ピログルタメート－３ Ａβ（Ａβ_{ｐＥ３－４２}）の定量。Ｎ末端短縮されかつピログルタメート改変されたＡβ（例えば、Ａβ_{ｐＥ３－４２}）は、ＡＤ脳中の成熟老人斑の構成成分として記載されている（Saido et al., Neuron 14, 1995）。Ｎ末端Ａβのピログルタメート改変が、本明細書に記載されるｈ２７３１などのＮ末端抗体の結合に影響を与えるかどうかは未知であった。同様に、これらの抗体が、Ａβ_{ｐＥ３－４２}のファゴサイトーシス媒介性クリアランスを促進する能力を有するかどうかも未知であった。

ｅｘ ｖｉｖｏ実験に使用したＡＤ脳中のピログルタメート（pyrogulatamate）－３ Ａβの存在、ならびにｈ２９３１と比較したその類似の染色パターンが、免疫組織化学によって確認された（図２５Ａおよび２５Ｂ）。ピログルタメート－３ Ａβの除去を実証するために、市販のＥＬＩＳＡ法を使用して、ｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシスの間のその除去を測定した。上記方法の後に収集した懸濁物を、氷上で解凍し、１６，０００×ｇで４℃で２０分間遠心分離し、その後、市販のＥＬＩＳＡキット（Ａｍｙｌｏｉｄ Ｂｅｔａ Ｎ３ｐＥ Ａβ、ＩＢＬ Ａｍｅｒｉｃａ）を使用して希釈および解析した。Ａβ_{ｐＥ３－４２}ＥＬＩＳＡアッセイは、未改変のＡβ_１－４２と比較した場合、Ａβ_{ｐＥ３－４２}に高度に特異的である（データ示さず）。

結果は、図２６Ａおよび図２６Ｂに示され（データはそれぞれ、表１２および表１３に示される）、これは、各々健常対照と比較した、およびＩｇＧ１アイソタイプ対照で処理したＡＤ脳と比較した、示された抗体、図２６Ａではｈ２９３１および図２６Ｂではｈ２７３１による処理の後の、脳切片中のピログルタメート－３ Ａβのレベルを示す。異なるＡＤ脳からの切片を、各処理に使用した。ｈ２７３１およびｈ２９３１は共に、アイソタイプ対照を超えた、ピログルタメート－３ Ａβにおける高度に有意な低減を実証している。

図２４および図２６Ｂは、合わせると、本発明の抗Ａβ抗体（例えば、ｈ２７３１）は、ＡＤ患者脳組織切片上で初代マウスミクログリアとインキュベートした場合、Ａβ_１－４２タンパク質およびＡβ_{ｐＥ３－４２}タンパク質の両方のクリアランスを促進することを示す。これらの結果により、これらの抗体が、ヒト病変背景においてＡβ_１－４２およびＡβ_{ｐＥ３－４２}の両方を取り除くことが確認される。

Ｎ末端標的化抗Ａβ抗体は、ＡＤ患者からの脳組織中の、ピログルタメート改変されたＡβを含むＡβ斑種の、十分なミクログリア媒介性クリアランスを容易にした。これらのデータは、アルツハイマー病に対して皮下投与される抗体免疫療法としての、本発明の抗体の開発をさらに支持している。

（実施例１１）
海馬結合アッセイにおけるオリゴマー遮断

ラット海馬ニューロンにおけるＡβ結合アッセイ

Ｅ１８初代ラット海馬ニューロンを、Zago et al. (J. Neurosci 22 February 2012, 32 (8) 2696-2702)に記載されるように培養した。可溶性Ａβを、培養物ＤＩＶ１４－２１上で抗体ありおよびなしでプレインキュベートして、初代ニューロンへの神経突起結合を遮断した。

新たな未標識の可溶性Ａβ、ビオチン化可溶性Ａβ、または（９：１）未標識：ビオチン化可溶性Ａβを、１日前に調製し、４℃で一晩インキュベートした。使用前に、Ａβを、１４，０００ＲＰＭで１５分間スピンダウンした。

ＮｅｕｒｏＢａｓａｌ－フェノールレッドなし（ＮＢ－ＮＰＲ）またはＮｂＡｃｔｉｖ４－ＮＰＲ培地を使用した、最終処理体積の半分中最終処理濃度の（２倍）のＡβ溶液および抗体の各希釈物を調製した。合わせた後に、混合物を、３～４回混合し、次いで、３７℃で３０分間プレインキュベートした。

結合アッセイの直前に、ニューロンを、予め温めたＮＢ－ＮＰＲで１５０μＬ／ウェルでリンスした。緩衝液を吸引し、次いで、抗体／Ａβ処理を６０μＬ／ウェルで細胞に添加し、次いで、通常のインキュベーター条件（５％ＣＯ_２；９％Ｏ_２）下で３７℃で３０～４０分間インキュベートした。

ニューロンを、１５０μＬ／ウェルのＮＢ－ＮＰＲ中で２回リンスし、次いで、１×ＤＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒドで室温で２０分間固定した。

細胞を、１×ＤＰＢＳ中０．１％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標） Ｘ－１００中で５分間透過処理し、次いで、１０％正常ヤギ血清（ＮＧＳ）中で室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした。

試料を、１％ＢＳＡ＋１％ＮＧＳを含有する１００μＬ／ウェルの１×ＤＰＢＳ中の微小管関連タンパク質２（ＭＡＰ２）およびニューロン核タンパク質（ＮｅｕＮ）一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。次の日、試料を、各洗浄について５分間、１５０μＬ／ウェルの１×ＤＰＢＳ中で２回リンスした。二次抗体を、１００μＬ／ウェルの１×ＤＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋１％ＮＧＳ中で、室温で１時間添加した。

ハイコンテントイメージング（ＨＣＩ）解析を実施して、Ｏｐｅｒｅｔｔａ ＨＣＩ ＣＬＳ機器（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ；改変型Ｎｅｕｒｉｔｅ Ｏｕｔｇｒｏｗｔｈアルゴリズム：４０倍Ｈ_２Ｏ対物レンズ；マイクロプレートフォーマットで１ウェル当たり２５～４０個の視野；１条件当たり（ｎ＝３））を使用して、可溶性Ａβ神経突起結合スポットを定量した。ＭＡＰ２およびＮｅｕＮニューロンマーカーを使用して各々、神経突起ツリーを確かめ、光学視野１つ当たりの細胞体数を計数した（例えば、微小管関連タンパク質２（Ａｂｃａｍ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）およびＮｅｕＮ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）一次抗体と、その後の、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）二次検出抗体とを用いて）。神経突起Ａβスポットを、種々のモノクローナルおよびポリクローナルＡβ抗体（例えば、マウスモノクローナル抗Ａβ抗体ＭａｂＮ２５４（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ））と、その後の、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）二次検出抗体、またはビオチン化Ａβ材料に対するストレプトアビジン－ＡＦ４８８とを使用して検出した。図１５Ａおよび図１５Ｂは、漸増濃度の抗Ａβ抗体が、ニューロン１つ当たりのスポットの数を低減させることを示しており、これは、Ａβに対する活性を示している。図２３は、ｈ２７３１が、ラット海馬シナプスへの可溶性Ａβ凝集体の結合（ニューロン１つ当たりのＡβ４２スポット）を、濃度依存的様式で効果的に遮断したことを示している。ｈ２７３１の効果は、Ａβ４２単独（ｍＡｂなしのプレインキュベーション）と比較して、１：５００程の低いｍＡｂ：Ａβ４２モル比で検出され（ｐ＜０．０５）、１：５０モル比で、結合の＞９０％遮断に達した（ｐ＜０．００１）。データは表１４に示される。

（実施例１２）
ネイティブＡβ種および改変されたＡβ種への抗Ａβ抗体の結合

ヒトＡＤ脳のクリオスタット切片を、ポリ－Ｄ－リシンコーティングされたカバースリップ上に解凍マウントし、２４ウェル組織培養プレート中に置き、試験抗体と共に３７℃、５％ＣＯ_２で１時間インキュベートした。次いで、初代マウスミクログリア細胞を、８００，０００細胞／ｍｌで播種し、培養物を、３７℃、５％ＣＯ_２で７２時間維持した。培地を注意深く吸引し、切片をＰＢＳで洗浄した。切片を、Ａβ_{ｐＥ３－４２}についてはＥＬＩＳＡ（Ｉｍｍｕｎｏ－Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）による、またはＡβ_１－４２についてはＭＳＤ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｏｃｋｌａｎｄ、ＭＤ）による定量のために、８Ｍ尿素中に再懸濁した。Ｉｍｍｕｎｏ－Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ａβ_{ｐＥ３－４２} ＥＬＩＳＡキットは、全長Ａβに対する検出可能なシグナルを伴わずに、ｐＥ３－４２種を特異的に検出する。

図２７は、ｈ２７３１が、全長ＡβのＮ末端に高い見かけの親和性で結合するが、ピログルタメート改変されたＡβ（Ａβ_{ｐＥ３－４２}）には直接結合しないことを実証している。ｈ２７３１は、未改変のＮ末端を有する原線維Ａβ種（Ａβ_１－４２）に、８．１ｎｇ／ｍＬ（５４ｐＭ）の５０％効果濃度（ＥＣ_５０）で結合した。ｈ２７３１は、最大で１００ｎｇ／ｍｌまで、Ａβ_{ｐＥ３－４２}への検出可能な結合を実証しなかった。

（実施例１３）
ｉｎ ｖｉｔｒｏファゴサイトーシス媒介性クリアランス － Ａβ_１－４２前原線維のＴＨＰ－１ヒト単球媒介性取込み

Ｓ２６Ｃ変異を含有するＡβ_１－４２の合成前原線維を、Paranjape et al., ACS Chem. Neurosci. 2012, 3, 302-311に記載されるように生成した。簡潔に述べると、Ａβペプチドを、１００％ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ）（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）中に１ｍＭで溶解させ、無菌微小遠心管中に等分し、ヒュームフード中で室温で一晩、蓋をせずに蒸発させた。次の日、アリコートを真空遠心分離して、いずれの残留ＨＦＩＰをも除去し、乾燥剤中で－２０℃で貯蔵した。一部のＡβペプチドを、１００％トリフルオロ酢酸で処理し、ＨＦＩＰ処理の前に真空遠心分離した。凍結乾燥されたアリコートから直接得られたＡβオリゴマーおよび原線維を、凍結乾燥されたＡβペプチドアリコートを無菌無水ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）中に５ｍＭで再懸濁することによって調製した。オリゴマー調製物のために、試料を、Ｌ－グルタミンを含む無菌氷冷フェノールレッドなしハムＦ－１２細胞培養培地（Ｆ－１２、Ｂｉｏｗｏｒｌｄ、Ｄｕｂｌｉｎ、ＯＨ）中に１００μＭになるように希釈し、４℃で２４時間インキュベートした。原線維調製物のために、試料を、１０ｍＭ ＨＣｌ中で１００μＭになるように希釈し、３７℃で２４時間インキュベートした。これらの調製物中のＡβ濃度は、乾燥ペプチド重量に基づいた。

成熟前原線維を、ｉｎ ｖｉｔｒｏファゴサイトーシス媒介性クリアランスアッセイにおける使用の前に、ｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄ Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）にコンジュゲートした。

６．２５、３．１３、１．５６、０．７８、０．３９、０．２０、０．０９８および０．０４９μｇ／ｍｌの濃度の抗体を、ｐＨｒｏｄｏ－Ａβ_１－４２前原線維と共に室温で３０分間プレインキュベートし、その後、ＴＨＰ－１食細胞を添加した。３７℃および５％ＣＯ_２での３時間のインキュベーションの後、抗体媒介性のファゴサイトーシス媒介性クリアランスを、フローサイトメトリーを介して細胞ｐＨｒｏｄｏシグナルを測定することによって評価した。

図２８Ａおよび図２８Ｂに示されるように、抗Ａβ抗体は、Ａβ_１－４２前原線維ファゴサイトーシス活性を濃度依存的様式で示した。これらの結果は、本発明の抗体が、脳組織におけるＡβ_１－４２クリアランスを駆動することができる可能性があることを示唆している。

（実施例１４）
進行したＡＤ患者からの脳組織中の、総Ａβおよびピログルタメート改変されたＡβの分布

上および本明細書に記載されるｅｘ ｖｉｖｏ ＩＨＣ法を、ＡＤ脳組織に対して実施して、Ａβ_１－ＸＸ（Ｎ末端抗Ａβ抗体を用いて検出する）および抗Ａβ_{ｐＥ３－４２}の分布を決定した。

Ａβ_１－ＸＸおよびＡβ_{ｐＥ３－４２}の評価により、進行したステージのＡＤを有する患者からの組織における両方の種の幅広い分布が確認された。分布パターン（図２９Ａ（１）および図２９Ａ（２）（ならびにそれぞれ拡大された図２９Ｂ（１）および図２９Ｂ（２）））、およびＡβ_{ｐＥ３－４２}と比較した、Ａβ_１－ＸＸによってカバーされるパーセント面積の定量（図２９Ｃ）は、以前の研究と一致しており、これは、Ａβ_{ｐＥ３－４２}が、Ｎ末端Ａβ抗体によって標的とされる未改変のＡβと混ざった改変されたＡβの比較的小さいプールを占めることを示唆している。Ａβ_{ｐＥ３－４２}は、図２９Ａ（２）および図２９Ｂ（２）に示され、インタクトなＮ末端Ａβは、図２９Ａ（１）および図２９Ｂ（１）に示される。抗Ａβ_{ｐＥ３－４２}抗体は、Ａβ_１－４２と交差反応しなかった（データ示さず）。

図２９Ａ（１）および図２９Ｂ（１）中のボックスは、血管に対して近位の、インタクトなＮ末端Ａβおよび改変されたＡβ_{ｐＥ３－４２}を有するＡβ斑を示している。以下の表１５は、図２９Ｃ中にグラフとして示される、図２９Ｂ（１）および図２９Ｂ（２）中の斑における染色の定量を報告する。平均値間の差異は、統計的に有意である（ｐ＝０．００７、対応のある両側ｔ検定）。

（実施例１５）
抗Ａβ抗体ｈ２７３１は、ＡＤ脳においてＡβｐＥ３－４２と共局在する

ｈ２７３１免疫染色とＡβ_{ｐＥ３－４２}との共局在化を、免疫蛍光顕微鏡法によって評価した。Ｎ末端抗Ａβ抗体（この場合にはｈ２７３１）を、組織への適用前に、Ｃｙ３－二次抗ヒト抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に事前にコンジュゲートした。Ａβ_{ｐＥ３－４２}を、マウス抗Ａβ_{ｐＥ３－４２}抗体を４８８－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒコンジュゲートした抗マウス二次抗体と共に使用して検出した。スライドを、Ｈａｍａｍａｔｓｕカメラ（Ｃ１０６００－１０Ｂ）に接続したＭｅｔａｍｏｒｐｈ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ＩＸ８１ Ｏｌｙｍｐｕｓ顕微鏡を使用して撮像した。

図３０（パネルＡ）は、Ａβ斑へのｈ２７３１の局在化を示し；図３０（パネルＢ）は、Ａβ斑への抗Ａβ_{ｐＥ３－４２}抗体シグナルの局在化を示し；図３０（パネルＣ）は、Ａβ斑へのｈ２７３１および抗Ａβ_{ｐＥ３－４２}抗体シグナルの共局在化を示す。重複するシグナルは、斑の高密度のコア領域においてより顕著であるように見える。

（実施例１６）
本発明の抗Ａβ抗体は、アデュカヌマブよりも高い有効性で、用量依存的様式でＡＤ脳組織からのＡβ_{ｐＥ３－４２}クリアランスをｅｘ ｖｉｖｏで促進する

本明細書の上および他の場所で記載された方法を使用して、アデュカヌマブおよび本発明の抗体（例えば、ｈ２７３１）がＡＤ脳組織からＡβ_{ｐＥ３－４２}タンパク質を取り除く能力を評価した。

ｈ２７３１の生理的に適切な用量応答シリーズ（３ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、３０ｎｇ／ｍｌおよび１００ｎｇ／ｍｌ）を、ＡＤ患者脳組織切片および初代マウスミクログリアと共に７２時間インキュベートした。ｈ２７３１は、濃度依存的様式でＡβ_{ｐＥ３－４２}クリアランスを促進した。結果は、以下の表１６および図３１Ａに示される。

ｈ２７３１は、比較的短いインキュベーション期間（７２時間）の間に、ミクログリアファゴサイトーシスによるＡＤ患者脳組織切片からのＡβ_{ｐＥ３－４２}のクリアランスを、濃度依存的様式でロバストに促進する。したがって、本発明の抗体は、皮下投与で到達されると予期される濃度範囲において、ＡＤ患者脳からのＡβ_{ｐＥ３－４２}のｅｘ ｖｉｖｏクリアランスを促進する。

２５ｎｇ／ｍｌおよび７５ｎｇ／ｍｌのｈ２７３１を２５ｎｇ／ｍｌおよび２２５ｎｇ／ｍｌのアデュカヌマブと比較する別のシリーズの実験を実施した。結果は、表１７および図３１Ｂに示される。

ｈ２７３１は、アデュカヌマブと比較した場合、９分の１の低い濃度であっても、優れたＡβ_{ｐＥ３－４２}クリアランス活性を示した。

ｈ２７３１およびアデュカヌマブの別の生理的に適切な用量応答シリーズ（３ｎｇ／ｍｌ、２５ｎｇ／ｍｌおよび２２５ｎｇ／ｍｌ）を、ＡＤ患者脳組織切片および初代マウスミクログリアと共に７２時間インキュベートし、両方をＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較した。ｈ２７３１およびアデュカヌマブは共に、Ａβ_{ｐＥ３－４２}クリアランスを濃度依存的様式で促進したが、ｈ２７３１は再び、有意により強力にそれを促進し、アデュカヌマブが０．０００５のｐ値に達するのに要求される濃度の９分の１の低い濃度で、＜０．０００１のｐ値であった。結果は、以下の表１８ならびに図３２Ａに示される。

ｈ２７３１媒介性のｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシス活性がミクログリア依存的であることを検証するために、＋／－ミクログリア実験を実施した。ミクログリア単独は、ＡＤ患者組織切片からのいくらかのＡβ_{ｐＥ３－４２}クリアランスを駆動するが、クリアランスは、ｈ２７３１とミクログリアとの組合せでは、有意によりロバストである。ｈ２７３１単独は、ミクログリアなしでは活性を示さないので、ｈ２７３１は、クリアランス活性のためにミクログリアの存在を要求するように見える。結果は、表１９および図３２Ｂに示される。

試験した抗体濃度は、ヒトにおける３ｍｇ／ｋｇの皮下ｈ２７３１（２５～７５ｎｇ／ｍｌ）または１０ｍｇ／ｋｇの静脈内アデュカヌマブ（２５～２２５ｎｇ／ｍｌ）の毎月の投与後の、モデル化された薬物速度論からの定常状態血漿最小および最大濃度の０．１％において推定されたＣＮＳ範囲に基づいた（図３３）。

本発明の抗体は、皮下投与で到達されると予期される濃度範囲において、アデュカヌマブよりも高い生物活性で、ＡＤ患者脳からのＡβ_{ｐＥ３－４２}のｅｘ ｖｉｖｏクリアランスを促進する。

抗体ｈ２７３１は、ＡＤ脳中のＡβ_{ｐＥ３－４２}染色を低減させる。図３４は、Ａβ_{ｐＥ３－４２}（白色の矢印によって示される染色）が、ヒトＩｇＧアイソタイプ対照抗体で処理したＡＤ脳（図３４Ａおよび図３４Ｂ）において、斑中で（白色の三角）、および血管に関連して（図３４Ａおよび図３４Ｃ中の円形の輪郭）観察されたことを示している。ｈ２７３１による処理は、斑における低減によって明らかなように、Ａβ_{ｐＥ３－４２}レベルのミクログリア媒介性の低減を増強した（図３４Ｃおよび図３４Ｄ）。ｈ２７３１によって例示される本発明の抗体は、組織中の、Ａβ_{ｐＥ３－４２}を含有する斑を低減させる。

（実施例１７）
ｈ２７３１標的係合

変異体ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ｈＡＰＰ［Ｖ７１７Ｉ］）および変異体ヒトプレセニリン１（ｈＰＳ１［Ａ２４６Ｅ］）を発現する雌性ＡＰＰ×ＰＳ１マウスを使用して、ｈ２７３１およびアデュカヌマブが末梢投与に引き続いて血液脳関門を横断し、脳中のアミロイド－ベータ（Ａβ）斑に結合する能力を評価した。研究の開始時の動物の平均齢は、６．７か月であった。薬物投与の１日前に、全ての動物に、抗ＣＤ４抗体の注射（２０ｍｇ／ｋｇ、静脈内）を与え、共に完全ヒト化抗体であるｈ２７３１またはアデュカヌマブが与えられるマウスにおける抗薬物抗体の形成を防止した。ｈ２７３１（３または１０ｍｇ／ｋｇ、皮下、ＳＣ）またはアデュカヌマブ（１０ｍｇ／ｋｇ、静脈内）を、３週間にわたって毎週投与し、動物を、１週間後に安楽死させた。氷冷食塩水による経心腔的灌流の後、脳をマウスから抽出し、ドライアイス上で２－メチルブタン中で急速凍結し、－８０℃で貯蔵した。

連続矢状１０μｍ厚の凍結切片を、Ｌｅｉｃａ ３０５０Ｓクリオスタットを使用して生成した。切片を、正に荷電したガラススライド上に直接解凍マウントし、使用まで－２０℃で貯蔵した。ＩＨＣの前に、スライドを、１０％中性緩衝ホルマリン溶液中に４℃で１０分間浸漬し、ＰＢＳ中でリンスし、次いで、グルコースオキシダーゼ溶液（１×ＰＢＳ中、２０ｍＭベータＤ（＋）グルコース、２ｍＭアジ化ナトリウムおよび２単位／ｍＬグルコースオキシダーゼ）中で３７℃で１時間インキュベートした。スライドを、ＰＢＳ中で５分間にわたって３回リンスし、その後、自動染色機中での処理のために、染色ラック上に移した。ビオチン－ＳＰコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＃１０９－０６５－０８８）を使用して、ＡＰＰ×ＰＳ１脳組織中のｈ２７３１またはアデュカヌマブを検出した。染色を、Ｂｏｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｋｉｔ（ＤＳ９８０、Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、自動Ｌｅｉｃａ Ｂｏｎｄ Ｒｘ Ｓｔａｉｎｅｒ（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において実施した。核のヘマトキシリン対比染色を、切片に引き続いて適用し、その後、漸増系列のアルコール中で脱水し、キシレン中で取り除き、カバースリップを掛け、風乾した。切片全体を、ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ ２．０ＨＴスライドスキャナー（Ｈａｍａｍａｔｓｕ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｊａｐａｎ）を使用してイメージングした。デジタル化された画像の形態学的解析を、Ｈａｌｏソフトウェア（Ｖ２．１．１５３７）を使用して実施した。目的の領域としての大脳皮質の描写の後、染色された組織面積のパーセントを決定した。データは表２０に示される。

アルツハイマー病におけるＡβ斑の数またはサイズにおける低減は、疾患進行の減速または逆転と相関し得る。本発明の抗Ａβ抗体が末梢投与後にｉｎ ｖｉｖｏでＡβに結合しそれを取り除く能力は、治療剤としてのこれらの抗体の潜在的有用性を支持している。

したがって、本発明の抗体は、ＡＤを有する患者からの脳組織においてミクログリア媒介性のＡβ_１－４２のクリアランスを促進する。本発明の抗体は、ピログルタメート改変を直接標的としない可能性があるが、これらは、ｈ２７３１によって例示されるように、臨床的に適切であると予測される濃度で、アデュカヌマブよりも高い効力および高い生物活性で、Ａβ_{ｐＥ３－４２}を効果的に取り除く可能性がある。これらの抗体によるピログルタメート種のクリアランスは、ミクログリアが、オプソニン化された斑を認識し、多様な内容物を有する大きい粒子を飲み込む能力に起因し得る。したがって、本発明の抗体は、この同じ機構によって、斑中に共沈着した他の神経毒性要素を取り除き得る。

引用される全ての刊行物（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号などを含む）、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許および特許出願が、全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれると具体的かつ個々に示されるのと同じ程度まで、全ての目的のためにそれらの全体が本明細書で参照により組み込まれる。Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号などに関連する配列中に相違がある場合、本出願は、関連する受託番号を開示する優先出願の実際の出願日または先の出願日を意味する出願の有効出願日の時点で引用された受託番号に関連する配列を指す。本開示の任意の特色、ステップ、要素、実施形態または態様は、具体的に他が示されない限り、任意の他の特色、ステップ、要素、実施形態または態様と組み合わせて使用され得る。本開示は、明確さおよび理解を目的とした例示および例として、いくらか詳細に記載されてきたが、ある特定の変化および変更が添付の特許請求の範囲内で実施され得ることが明らかである。

図６Ａ～６Ｄは、１００ｎＭから０．３９ｎＭまで（２倍段階希釈）の分析物濃度での、Ａβ_１－２８へのｈ２７２６（図６Ａ）、ｈ２７３１（図６Ｂ）、ｈ２８３１（図６Ｃ）および２９３１（図６Ｄ）の結合のＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す。 図６Ａ～６Ｄは、１００ｎＭから０．３９ｎＭまで（２倍段階希釈）の分析物濃度での、Ａβ_１－２８へのｈ２７２６（図６Ａ）、ｈ２７３１（図６Ｂ）、ｈ２８３１（図６Ｃ）および２９３１（図６Ｄ）の結合のＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す。 図６Ａ～６Ｄは、１００ｎＭから０．３９ｎＭまで（２倍段階希釈）の分析物濃度での、Ａβ_１－２８へのｈ２７２６（図６Ａ）、ｈ２７３１（図６Ｂ）、ｈ２８３１（図６Ｃ）および２９３１（図６Ｄ）の結合のＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す。 図６Ａ～６Ｄは、１００ｎＭから０．３９ｎＭまで（２倍段階希釈）の分析物濃度での、Ａβ_１－２８へのｈ２７２６（図６Ａ）、ｈ２７３１（図６Ｂ）、ｈ２８３１（図６Ｃ）および２９３１（図６Ｄ）の結合のＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す。

図１４Ａおよび１４Ｂは、初代マウスミクログリアによる、ＡＰＰ．ＰＳ１ Ｔｇマウス組織におけるｈ２９３１およびアデュカヌマブのｅｘ ｖｉｖｏファゴサイトーシス研究からの個々の（図１４Ａ）およびプールした（図１４Ｂ）結果を示す。ｈ２９３１およびアデュカヌマブは共に、アイソタイプ対照を超えた、Ａβ_１－４２における高度に有意な低減を実証している。

図１５Ａおよび１５Ｂは、アイソタイプ対照と比較し、＋／－Ａβ添加によって正規化した、漸増濃度のｈ２７２６、ｈ２７３１、ｈ２８３１およびｈ２９３１を用いたときの、ラット海馬ニューロン上の神経突起への可溶性オリゴマー結合の低減を示すグラフを示す。図１５Ａは、ニューロン１つ当たりのスポットを示し、図１５Ｂは、総スポット計数を示す（ウェル１つ当たり４０個の視野）。

図１９Ａおよび１９Ｂは、本開示の抗体についての可変重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列を列挙するＣＤＲ表を示す。図１９Ａは、重鎖ＣＤＲを指し、図１９Ｂは、軽鎖ＣＤＲを指す。 図１９Ａおよび１９Ｂは、本開示の抗体についての可変重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列を列挙するＣＤＲ表を示す。図１９Ａは、重鎖ＣＤＲを指し、図１９Ｂは、軽鎖ＣＤＲを指す。

図２０Ａおよび２０Ｂは、競合ＥＬＩＳＡによる、不均一な凝集したＡβ４２種に結合することに関する抗体効力を測定するグラフを示す。図２０Ａは、ｈ２９３１、ｈ２７３１およびバピネオズマブ対照を示し、図２０ＢＡは、ｈ２８３１、ｈ２７２６およびバピネオズマブ対照を示す。

上記抗体についてのタンパク質モデリング情報の解析により、とりわけ、本開示の抗体の増加したアビディティ／親和性特徴への寄与因子であった、ＣＤＲにおける２つの変化が同定された：
ＣＤＲ－Ｌ１：Ｓ３２Ｙ（３２位におけるＳｅｒからＴｙｒ）、および
ＣＤＲ－Ｈ２：Ｇ５５Ｓ（５５位におけるＧｌｙからＳｅｒ）。

本明細書に列挙される抗体が結合するのと同じエピトープに結合する、ＣＤＲ－Ｌ１中の３２位においてＴｙｒを有し、ＣＤＲ－Ｈ２中の５５位においてＳｅｒを有する抗Ａβ抗体は、列挙された同定された抗体と同じ特性を有すると予期される（表１Ａならびに図１９Ａおよび図１９Ｂを参照されたい）。ＣＤＲ－Ｌ１中の３２位においてＴｙｒを有さず、ＣＤＲ－Ｈ２中の５５位においてＳｅｒを有さない開示された抗体は、ＣＤＲ－Ｌ１中の３２位においてＴｙｒを有し、ＣＤＲ－Ｈ２中の５５位においてＳｅｒを有するように改変され得、本明細書で同定されたかかる抗体に、類似の結合特性を付与すると予期され得る。

本開示の抗体および断片はまた、配列番号４１と少なくとも７５％同一な軽鎖定常領域を含み得る。例えば、軽鎖定常領域は、配列番号４１と７５％同一、８０％同一、８５％同一、９０％同一、９５％同一、９６％同一、９７％同一、９８％同一、９９％同一または（of）１００％同一であり得る。

引用される全ての刊行物（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号などを含む）、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許および特許出願が、全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれると具体的かつ個々に示されるのと同じ程度まで、全ての目的のためにそれらの全体が本明細書で参照により組み込まれる。Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号などに関連する配列中に相違がある場合、本出願は、関連する受託番号を開示する優先出願の実際の出願日または先の出願日を意味する出願の有効出願日の時点で引用された受託番号に関連する配列を指す。本開示の任意の特色、ステップ、要素、実施形態または態様は、具体的に他が示されない限り、任意の他の特色、ステップ、要素、実施形態または態様と組み合わせて使用され得る。本開示は、明確さおよび理解を目的とした例示および例として、いくらか詳細に記載されてきたが、ある特定の変化および変更が添付の特許請求の範囲内で実施され得ることが明らかである。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、表１Ａおよび表１Ｂ中の抗体のうち１つについて示される通りである、抗体またはその断片。
（項目２）
前記重鎖可変領域が、表１Ａおよび表１Ｂ中の抗体のうち１つについて示される通りである、項目１に記載の抗体またはその断片。
（項目３）
前記軽鎖可変領域が、表１Ａおよび表１Ｂ中の抗体のうち１つについて示される通りである、項目１に記載の抗体またはその断片。
（項目４）
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、
重鎖ＣＤＲ１が、配列番号１６、１９または２０のうち１つを含み、
重鎖ＣＤＲ２が、配列番号２０、２１、２２または２３のうち１つを含み、
重鎖ＣＤＲ３が、配列番号１８、２４または２５のうち１つを含み、
軽鎖ＣＤＲ１が、配列番号２６、２９、３１または３２のうち１つを含み、
軽鎖ＣＤＲ２が、配列番号３３、３４、３５または３６のうち１つを含み、
軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号２８、３８または３９のうち１つを含む、
抗体またはその断片。
（項目５）
前記ＣＤＲを除く前記重鎖可変領域が、配列番号３、４、５、６および７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、前記ＣＤＲを除く前記軽鎖可変領域が、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、項目１または項目４に記載の抗体またはその断片。
（項目６）
前記ＣＤＲを除く重鎖可変領域が、配列番号３、４、５、６および７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であり、前記ＣＤＲを除く前記軽鎖可変領域が、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である、項目５に記載の抗体またはその断片。
（項目７）
重鎖可変領域が、配列番号３、４、５、６および７から選択され、前記軽鎖可変領域が、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５から選択される、項目６に記載の抗体またはその断片。
（項目８）
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、
重鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＮＸ _１ ＧＭＳを含み、式中、Ｘ _１ はＹまたはＦであり（配列番号８８）；
重鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＸ _１ ＲＳＧＳＧＲＴＹＹＳＤＮＶＫＧを含み、式中、Ｘ _１ はＩまたはＶであり（配列番号８９）；
重鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＹＤＨＹＸ _１ ＧＸ _２ ＳＤＹを含み、式中、Ｘ _１ はＳまたはＴであり、Ｘ _２ はＳまたはＴであり（配列番号９０）；
軽鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＤＹＤＧＫＴＹＬＮを含み（配列番号９１）；
軽鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ _１ ＶＸ _２ ＮＲＤＸ _３ を含み、式中、Ｘ _１ ＝ＫまたはＲであり、Ｘ _２ はＳまたはＴであり、Ｘ _３ はＳまたはＴであり（配列番号９２）；
軽鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ _１ を含み、式中、Ｘ _１ はＳまたはＴである（配列番号９３）、
抗体またはその断片。
（項目９）
軽鎖ＣＤＲ３がＷＱＧＴＨＦＰＲＸ _１ ＦＸ _２ を含み、式中、Ｘ _１ はＳまたはＴであり、Ｘ _２ はＦまたはＹである（配列番号９４）、項目８に記載の抗体またはその断片。
（項目１０）
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、
重鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＸ _１ ＮＸ _２ ＧＭＳを含み、式中、Ｘ _１ はＳまたはＡであり、Ｘ _２ はＹまたはＦであり（配列番号９５）；
重鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＸ _１ ＲＳＧＸ _２ Ｘ _３ ＲＴＹＹＳＤＮＶＫＧを含み、式中、Ｘ _１ はＩまたはＶであり、Ｘ _２ はＳまたはＧであり、Ｘ _３ はＳまたはＧであり（配列番号９６）；
重鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＹＤＨＹＸ _１ ＧＸ _２ ＳＤＹを含み、式中、Ｘ _１ はＳまたはＴであり、Ｘ _２ はＳまたはＴであり（配列番号９０）；
軽鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Ｘ _１ ＳＳＱＳＬＸ _２ ＤＸ _３ ＤＧＫＴＹＬＮを含み、式中、Ｘ _１ はＫまたはＲであり、Ｘ _２ はＶ、ＭまたはＬであり、Ｘ _３ はＹ、ＴまたはＳであり（配列番号９７）；
軽鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ _１ ＶＸ _２ ＮＲＸ _３ Ｘ _４ を含み、式中、Ｘ _１ ＝ＫまたはＲであり、Ｘ _２ はＳまたはＴであり、Ｘ _３ はＥまたはＤであり、Ｘ _４ はＳまたはＴであり（配列番号９８）；
軽鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＷＱＧＸ _１ ＨＦＰＲＸ _２ を含み、式中、Ｘ _１ はＳまたはＴであり、Ｘ _２ はＳまたはＴである（配列番号９９）、
抗体またはその断片。
（項目１１）
軽鎖ＣＤＲ３が、ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ _１ ＦＸ _２ Ｘ _３ を含み、式中、Ｘ _１ はＳまたはＴであり、Ｘ _２ はＳまたはＴであり、Ｘ _３ はＦまたはＹである（配列番号１００）、項目１０に記載の抗体またはその断片。
（項目１２）
前記抗体がヒト化されている、項目１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
（項目１３）
前記抗体がヒトＩｇＧ１である、項目１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
（項目１４）
前記抗体が、完全抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体または組換え抗体である、項目１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
（項目１５）
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂｃまたはＦｖである、項目１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
（項目１６）
配列番号４０と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む重鎖定常領域をさらに含む、項目１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
（項目１７）
配列番号４１と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、項目１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
（項目１８）
前記抗体が、Ａβのアミノ酸１～７からの３つまたはそれよりも多くのアミノ酸位置を含むアミノ酸配列を有するエピトープに特異的に結合する、項目１から１７の一項に記載の抗体またはその断片。
（項目１９）
項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の前記重鎖および／または軽鎖をコードする核酸。
（項目２０）
項目１から１９の一項に記載の抗体またはその断片と薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
（項目２１）
項目１から１８の一項に記載の抗体またはその断片を産生する方法であって、
（ａ）前記抗体またはその断片の前記重鎖および軽鎖をコードする核酸で形質転換された細胞が前記抗体またはその断片を分泌するように、前記細胞を培養するステップ；ならびに
（ｂ）前記抗体またはその断片を細胞培養物から精製するステップ
を含む、方法。
（項目２２）
項目１から１８の一項に記載の抗体またはその断片を産生する細胞系を産生する方法であって、
（ａ）前記抗体またはその断片の重鎖および軽鎖と選択可能なマーカーとをコードするベクターを、細胞中に導入するステップ；
（ｂ）増加したコピー数の前記ベクターを有する細胞について選択する条件下で、前記細胞を拡大増殖させるステップ；
（ｃ）前記選択された細胞から単一の細胞を単離するステップ；ならびに
（ｄ）抗体またはその断片の収量に基づいて選択された単一の細胞からクローニングされた細胞をバンキングするステップ
を含む、方法。
（項目２３）
選択条件下で前記細胞を拡大増殖させるステップ、ならびに少なくとも１００ｍｇ／Ｌ／１０ ^６ 細胞／２４時間を天然に発現および分泌する細胞系についてスクリーニングするステップをさらに含む、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
患者においてアミロイド原性疾患を予防または処置する方法であって、項目１から１８の一項に記載の抗体または断片の有効投与量を前記患者に投与するステップを含む、方法。
（項目２５）
前記アミロイド原性疾患が、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
アルツハイマー病と診断された患者を処置する方法であって、前記疾患を処置するのに有効なレジメンにおいて、項目１から１８の一項に記載の抗体またはその断片を、前記疾患を有する患者に投与するステップを含む、方法。
（項目２７）
遺伝的または生化学的マーカーからアルツハイマー病のリスクが決定されている患者において、前記アルツハイマー病のリスクを低減させるまたはその発生を遅延させる方法であって、前記アルツハイマー病のリスクを低減させるまたはその発生を遅延させるのに有効なレジメンにおいて、項目１から１８の一項に記載の抗体またはその断片を患者に投与するステップを含む、方法。
（項目２８）
状態または疾患関連アミロイド原性疾患を有する対象において認知の改善をもたらすための方法であって、項目１から１８の一項に記載の抗体またはその断片の有効量を前記対象に投与するステップを含む、方法。
（項目２９）
前記アミロイド原性疾患が、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
ヒト対象においてダウン症候群または臨床的もしくは前臨床的アルツハイマー病を処置する方法であって、項目１から１８の一項に記載の抗体または断片の有効量を前記ヒト対象に投与するステップを含む、方法。
（項目３１）
ヒト対象においてアミロイド斑の形成を阻害する方法であって、項目１から１８の一項に記載の抗体または断片の有効量を前記ヒト対象に投与するステップを含む、方法。
（項目３２）
ヒト対象の脳においてアミロイド斑を低減させる方法であって、項目１から１８の一項に記載のヒト化抗体または断片の有効量を前記ヒト対象に投与するステップを含む、方法。
（項目３３）
アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象においてアミロイド斑を阻害するまたは低減させる方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象においてアミロイド斑を阻害するまたは低減させるステップを含む、方法。
（項目３４）
前記アミロイド斑が、Ａβ _１－４２ 、Ａβのピログルタメート種（例えば、Ａβ _{ｐＥ３－４２} ）、またはそれらの組合せを含む、項目３１から３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患のリスクがある対象においてアミロイド斑を検出する方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を対象に投与するステップ、および前記対象におけるＡβに結合した前記抗体またはその断片を検出するステップを含む、方法。
（項目３６）
前記アミロイド原性疾患が、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害である、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記抗体またはその断片が標識されている、項目３５に記載の方法。
（項目３８）
前記抗体またはその断片が、蛍光標識、常磁性標識または放射性標識で標識されている、項目３５に記載の方法。
（項目３９）
前記放射性標識が、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）または単光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）を使用して検出される、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
アミロイド原性疾患に関して処置されている対象において処置の有効性を測定する方法であって、
（ａ）項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の前の前記対象におけるアミロイド斑の第１のレベルを測定し、前記対象におけるＡβに結合した前記抗体またはその断片の第１の量を検出するステップ、
（ｂ）前記処置を前記対象に投与するステップ、
（ｃ）前記抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の後の前記対象におけるアミロイド斑の第２のレベルを測定し、前記対象におけるＡβに結合した前記抗体またはその断片を検出するステップ
を含み、アミロイド斑の前記レベルにおける減少が、処置に対する肯定的応答を示す、方法。
（項目４１）
アミロイド原性疾患に関して処置されている対象において処置の有効性を測定する方法であって、
（ａ）項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の前の前記対象におけるアミロイド斑の第１のレベルを測定し、前記対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片の第１の量を検出するステップ、
（ｂ）前記処置を前記対象に投与するステップ、
（ｃ）前記抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の後の前記対象におけるアミロイド斑の第２のレベルを測定し、前記対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片の第２の量を検出するステップ
を含み、アミロイド斑の前記レベルにおける変化なしまたはアミロイド斑における小さい増加が、処置に対する肯定的応答を示す、方法。
（項目４２）
ヒト対象においてＡβのクリアランスを促進する方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
（項目４３）
前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
ヒト対象においてＡβを取り除く方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
（項目４５）
前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
ヒト対象においてＡβを低減させる方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
（項目４７）
前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
ヒト対象においてＡβの蓄積または凝集を低減させる方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
（項目４９）
前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
ヒト対象においてＡβの蓄積または凝集を阻害する方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
（項目５１）
前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβのクリアランスを促進する方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβのクリアランスを促進するステップを含む、方法。
（項目５３）
アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβを取り除く方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβを取り除くステップを含む、方法。
（項目５４）
アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβを低減させる方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβを低減させるステップを含む、方法。
（項目５５）
アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を低減させる方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を低減させるステップを含む、方法。
（項目５６）
アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を阻害する方法であって、項目１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を阻害するステップを含む、方法。
（項目５７）
前記アミロイド原性疾患が、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害である、項目５２から５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記Ａβが、Ａβ _１－４２ 、Ａβのピログルタメート種（例えば、Ａβ _{ｐＥ３－４２} ）、またはそれらの組合せを含む、項目４２から５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
前記抗体または断片が、末梢投与によって投与される、項目２４から５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記末梢投与が、静脈内または皮下である、項目５９に記載の方法。

Claims (60)

1. 重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、表１Ａおよび表１Ｂ中の抗体のうち１つについて示される通りである、抗体またはその断片。
2. 前記重鎖可変領域が、表１Ａおよび表１Ｂ中の抗体のうち１つについて示される通りである、請求項１に記載の抗体またはその断片。
3. 前記軽鎖可変領域が、表１Ａおよび表１Ｂ中の抗体のうち１つについて示される通りである、請求項１に記載の抗体またはその断片。
4. 重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、
   重鎖ＣＤＲ１が、配列番号１６、１９または２０のうち１つを含み、
   重鎖ＣＤＲ２が、配列番号２０、２１、２２または２３のうち１つを含み、
   重鎖ＣＤＲ３が、配列番号１８、２４または２５のうち１つを含み、
   軽鎖ＣＤＲ１が、配列番号２６、２９、３１または３２のうち１つを含み、
   軽鎖ＣＤＲ２が、配列番号３３、３４、３５または３６のうち１つを含み、
   軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号２８、３８または３９のうち１つを含む、
   抗体またはその断片。
5. 前記ＣＤＲを除く前記重鎖可変領域が、配列番号３、４、５、６および７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、前記ＣＤＲを除く前記軽鎖可変領域が、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、請求項１または請求項４に記載の抗体またはその断片。
6. 前記ＣＤＲを除く重鎖可変領域が、配列番号３、４、５、６および７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であり、前記ＣＤＲを除く前記軽鎖可変領域が、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である、請求項５に記載の抗体またはその断片。
7. 重鎖可変領域が、配列番号３、４、５、６および７から選択され、前記軽鎖可変領域が、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４および１５から選択される、請求項６に記載の抗体またはその断片。
8. 重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、
   重鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＮＸ_１ＧＭＳを含み、式中、Ｘ_１はＹまたはＦであり（配列番号８８）；
   重鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＸ_１ＲＳＧＳＧＲＴＹＹＳＤＮＶＫＧを含み、式中、Ｘ_１はＩまたはＶであり（配列番号８９）；
   重鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＹＤＨＹＸ_１ＧＸ_２ＳＤＹを含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり（配列番号９０）；
   軽鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＤＹＤＧＫＴＹＬＮを含み（配列番号９１）；
   軽鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ_１ＶＸ_２ＮＲＤＸ_３を含み、式中、Ｘ_１＝ＫまたはＲであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり、Ｘ_３はＳまたはＴであり（配列番号９２）；
   軽鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ_１を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴである（配列番号９３）、
   抗体またはその断片。
9. 軽鎖ＣＤＲ３がＷＱＧＴＨＦＰＲＸ_１ＦＸ_２を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＦまたはＹである（配列番号９４）、請求項８に記載の抗体またはその断片。
10. 重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、Ａβペプチドに特異的に結合する抗体またはその断片であって、
    重鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＸ_１ＮＸ_２ＧＭＳを含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＡであり、Ｘ_２はＹまたはＦであり（配列番号９５）；
    重鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＸ_１ＲＳＧＸ_２Ｘ_３ＲＴＹＹＳＤＮＶＫＧを含み、式中、Ｘ_１はＩまたはＶであり、Ｘ_２はＳまたはＧであり、Ｘ_３はＳまたはＧであり（配列番号９６）；
    重鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＹＤＨＹＸ_１ＧＸ_２ＳＤＹを含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり（配列番号９０）；
    軽鎖ＣＤＲ１が、アミノ酸配列Ｘ_１ＳＳＱＳＬＸ_２ＤＸ_３ＤＧＫＴＹＬＮを含み、式中、Ｘ_１はＫまたはＲであり、Ｘ_２はＶ、ＭまたはＬであり、Ｘ_３はＹ、ＴまたはＳであり（配列番号９７）；
    軽鎖ＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ_１ＶＸ_２ＮＲＸ_３Ｘ_４を含み、式中、Ｘ_１＝ＫまたはＲであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり、Ｘ_３はＥまたはＤであり、Ｘ_４はＳまたはＴであり（配列番号９８）；
    軽鎖ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＷＱＧＸ_１ＨＦＰＲＸ_２を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴである（配列番号９９）、
    抗体またはその断片。
11. 軽鎖ＣＤＲ３が、ＷＱＧＴＨＦＰＲＸ_１ＦＸ_２Ｘ_３を含み、式中、Ｘ_１はＳまたはＴであり、Ｘ_２はＳまたはＴであり、Ｘ_３はＦまたはＹである（配列番号１００）、請求項１０に記載の抗体またはその断片。
12. 前記抗体がヒト化されている、請求項１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
13. 前記抗体がヒトＩｇＧ１である、請求項１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
14. 前記抗体が、完全抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体または組換え抗体である、請求項１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
15. 前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂｃまたはＦｖである、請求項１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
16. 配列番号４０と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む重鎖定常領域をさらに含む、請求項１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
17. 配列番号４１と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１から１１の一項に記載の抗体またはその断片。
18. 前記抗体が、Ａβのアミノ酸１～７からの３つまたはそれよりも多くのアミノ酸位置を含むアミノ酸配列を有するエピトープに特異的に結合する、請求項１から１７の一項に記載の抗体またはその断片。
19. 請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の前記重鎖および／または軽鎖をコードする核酸。
20. 請求項１から１９の一項に記載の抗体またはその断片と薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
21. 請求項１から１８の一項に記載の抗体またはその断片を産生する方法であって、
    （ａ）前記抗体またはその断片の前記重鎖および軽鎖をコードする核酸で形質転換された細胞が前記抗体またはその断片を分泌するように、前記細胞を培養するステップ；ならびに
    （ｂ）前記抗体またはその断片を細胞培養物から精製するステップ
    を含む、方法。
22. 請求項１から１８の一項に記載の抗体またはその断片を産生する細胞系を産生する方法であって、
    （ａ）前記抗体またはその断片の重鎖および軽鎖と選択可能なマーカーとをコードするベクターを、細胞中に導入するステップ；
    （ｂ）増加したコピー数の前記ベクターを有する細胞について選択する条件下で、前記細胞を拡大増殖させるステップ；
    （ｃ）前記選択された細胞から単一の細胞を単離するステップ；ならびに
    （ｄ）抗体またはその断片の収量に基づいて選択された単一の細胞からクローニングされた細胞をバンキングするステップ
    を含む、方法。
23. 選択条件下で前記細胞を拡大増殖させるステップ、ならびに少なくとも１００ｍｇ／Ｌ／１０^６細胞／２４時間を天然に発現および分泌する細胞系についてスクリーニングするステップをさらに含む、請求項２２に記載の方法。
24. 患者においてアミロイド原性疾患を予防または処置する方法であって、請求項１から１８の一項に記載の抗体または断片の有効投与量を前記患者に投与するステップを含む、方法。
25. 前記アミロイド原性疾患が、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害である、請求項２４に記載の方法。
26. アルツハイマー病と診断された患者を処置する方法であって、前記疾患を処置するのに有効なレジメンにおいて、請求項１から１８の一項に記載の抗体またはその断片を、前記疾患を有する患者に投与するステップを含む、方法。
27. 遺伝的または生化学的マーカーからアルツハイマー病のリスクが決定されている患者において、前記アルツハイマー病のリスクを低減させるまたはその発生を遅延させる方法であって、前記アルツハイマー病のリスクを低減させるまたはその発生を遅延させるのに有効なレジメンにおいて、請求項１から１８の一項に記載の抗体またはその断片を患者に投与するステップを含む、方法。
28. 状態または疾患関連アミロイド原性疾患を有する対象において認知の改善をもたらすための方法であって、請求項１から１８の一項に記載の抗体またはその断片の有効量を前記対象に投与するステップを含む、方法。
29. 前記アミロイド原性疾患が、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害である、請求項２８に記載の方法。
30. ヒト対象においてダウン症候群または臨床的もしくは前臨床的アルツハイマー病を処置する方法であって、請求項１から１８の一項に記載の抗体または断片の有効量を前記ヒト対象に投与するステップを含む、方法。
31. ヒト対象においてアミロイド斑の形成を阻害する方法であって、請求項１から１８の一項に記載の抗体または断片の有効量を前記ヒト対象に投与するステップを含む、方法。
32. ヒト対象の脳においてアミロイド斑を低減させる方法であって、請求項１から１８の一項に記載のヒト化抗体または断片の有効量を前記ヒト対象に投与するステップを含む、方法。
33. アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象においてアミロイド斑を阻害するまたは低減させる方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象においてアミロイド斑を阻害するまたは低減させるステップを含む、方法。
34. 前記アミロイド斑が、Ａβ_１－４２、Ａβのピログルタメート種（例えば、Ａβ_{ｐＥ３－４２}）、またはそれらの組合せを含む、請求項３１から３３のいずれか一項に記載の方法。
35. アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患のリスクがある対象においてアミロイド斑を検出する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を対象に投与するステップ、および前記対象におけるＡβに結合した前記抗体またはその断片を検出するステップを含む、方法。
36. 前記アミロイド原性疾患が、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害である、請求項３５に記載の方法。
37. 前記抗体またはその断片が標識されている、請求項３５に記載の方法。
38. 前記抗体またはその断片が、蛍光標識、常磁性標識または放射性標識で標識されている、請求項３５に記載の方法。
39. 前記放射性標識が、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）または単光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）を使用して検出される、請求項３８に記載の方法。
40. アミロイド原性疾患に関して処置されている対象において処置の有効性を測定する方法であって、
    （ａ）請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の前の前記対象におけるアミロイド斑の第１のレベルを測定し、前記対象におけるＡβに結合した前記抗体またはその断片の第１の量を検出するステップ、
    （ｂ）前記処置を前記対象に投与するステップ、
    （ｃ）前記抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の後の前記対象におけるアミロイド斑の第２のレベルを測定し、前記対象におけるＡβに結合した前記抗体またはその断片を検出するステップ
    を含み、アミロイド斑の前記レベルにおける減少が、処置に対する肯定的応答を示す、方法。
41. アミロイド原性疾患に関して処置されている対象において処置の有効性を測定する方法であって、
    （ａ）請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の前の前記対象におけるアミロイド斑の第１のレベルを測定し、前記対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片の第１の量を検出するステップ、
    （ｂ）前記処置を前記対象に投与するステップ、
    （ｃ）前記抗体またはその断片を対象に投与することによる処置の後の前記対象におけるアミロイド斑の第２のレベルを測定し、前記対象におけるＡβに結合した抗体またはその断片の第２の量を検出するステップ
    を含み、アミロイド斑の前記レベルにおける変化なしまたはアミロイド斑における小さい増加が、処置に対する肯定的応答を示す、方法。
42. ヒト対象においてＡβのクリアランスを促進する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
43. 前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、請求項４２に記載の方法。
44. ヒト対象においてＡβを取り除く方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
45. 前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、請求項４４に記載の方法。
46. ヒト対象においてＡβを低減させる方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
47. 前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、請求項４６に記載の方法。
48. ヒト対象においてＡβの蓄積または凝集を低減させる方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
49. 前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、請求項４８に記載の方法。
50. ヒト対象においてＡβの蓄積または凝集を阻害する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与するステップを含む、方法。
51. 前記Ａβが、前記対象の脳組織中に存在する、請求項５０に記載の方法。
52. アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβのクリアランスを促進する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβのクリアランスを促進するステップを含む、方法。
53. アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβを取り除く方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβを取り除くステップを含む、方法。
54. アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβを低減させる方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβを低減させるステップを含む、方法。
55. アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を低減させる方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を低減させるステップを含む、方法。
56. アミロイド原性疾患を有する対象またはアミロイド原性疾患を発症するリスクがある対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を阻害する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体または断片の有効なレジメンを前記対象に投与し、それにより、前記対象の脳組織においてＡβの蓄積または凝集を阻害するステップを含む、方法。
57. 前記アミロイド原性疾患が、全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭葉型認知症、ダウン症候群または軽度認知障害である、請求項５２から５６のいずれか一項に記載の方法。
58. 前記Ａβが、Ａβ_１－４２、Ａβのピログルタメート種（例えば、Ａβ_{ｐＥ３－４２}）、またはそれらの組合せを含む、請求項４２から５７のいずれか一項に記載の方法。
59. 前記抗体または断片が、末梢投与によって投与される、請求項２４から５８のいずれか一項に記載の方法。
60. 前記末梢投与が、静脈内または皮下である、請求項５９に記載の方法。

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