JP2022532812A

JP2022532812A - 抗ｉｌ１ｒａｐ抗体組成物

Info

Publication number: JP2022532812A
Application number: JP2021507831A
Authority: JP
Inventors: ヨーラン・フォーシュバリ; ダーヴィド・リーバリ; シェル・ショーストローム; カーリン・ヴォン・ヴァーケンフェルト
Original assignee: カンタージアアクチエボラーグ
Priority date: 2018-08-16
Filing date: 2019-08-15
Publication date: 2022-07-20
Also published as: WO2020035577A1; US12209131B2; CN112638946A; EP3837283B1; EP3837283A1; US20220267454A1

Abstract

本発明は、インターロイキン１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）に対する抗体組成物、ならびに炎症性、自己免疫性、自己炎症性および腫瘍性の障害などのＩＬ１ＲＡＰに関連する疾患の治療および診断におけるそれらの使用に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、インターロイキン１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）に対する抗体、ならびに炎症性障害、自己免疫障害および腫瘍性障害など、ＩＬ１ＲＡＰに関連する疾患の治療および診断におけるそれらの使用に関する。

炎症性および自己免疫性の障害、およびある程度は腫瘍性障害もすべて、サイトカイン媒介性炎症に関連する病因を有する。サイトカインのインターロイキン－１ファミリーは、これらの徴候の病因に特に関連があると考えられている。

インターロイキン－１ファミリーのシグナル伝達におけるインターロイキン－１受容体関連タンパク質
サイトカインのインターロイキン－１（ＩＬ－１）ファミリーには、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１８、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γが含まれる。これらのサイトカインには構造的な関係があり、炎症誘発性効果を仲介する。各サイトカインは、特定の受容体に結合し、次に共受容体と二量体を形成してシグナル伝達を引き起こす。これらの受容体複合体を介したシグナル伝達は、ＭｙＤ８８アダプタータンパク質とそれに続くＮＦκＢの活性化を伴う。上記の炎症誘発性サイトカインに加えて、ＩＬ－１ファミリーには、２つの受容体アンタゴニストであるＩＬ－１ＲａおよびＩＬ－３６Ｒａも含まれ、それらの受容体への結合にＩＬ－１およびＩＬ－３６とそれぞれ競合する。受容体アンタゴニストの結合は非生産的であり、シグナルを誘発しない。

ＩＬ１ＲＡＰは、インターロイキン１受容体（ＩＬ１Ｒ１）、ＩＬ－３３受容体（ＳＴ２）、およびＩＬ－３６受容体（ＩＬ１Ｒｒｐ２）の共受容体であり、これらのサイトカインの効果を媒介するために重要である（非特許文献１）。ＩＬ１ＲＡＰとＩＬ－１受容体の構造が解明され（非特許文献２、非特許文献３）、ＩＬ１ＲＡＰとＳＴ２またはＩＬ１Ｒｒｐ２との相互作用は、ＩＬ１Ｒ１－ＩＬ１ＲＡＰ相互作用と非常に類似している可能性が最も高い（非特許文献４，非特許文献５）。

ＩＬ１ＲＡＰに対して産生された抗体は、ＩＬ１ＲＡＰを介したシグナル伝達を遮断する能力を有する（非特許文献６、図３）。ＩＬ１ＲＡＰに結合し、効率的なＡＤＣＣを媒介する能力を有するにもかかわらず、すべての抗体がシグナル伝達を遮断する能力を有するわけではないため、結合エピトープは効果に重要である（非特許文献７）。

ＩＬ１ＲＡＰの異なるドメインに結合する抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、特許文献１および特許文献２から知られている。これらのうち、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４は、ドメイン３および２にそれぞれ結合し、どちらもＩＬ－１シグナル伝達の完全な阻害およびＩＬ－３３シグナル伝達の部分的な阻害を示す。

インターロイキン－１の生物学
インターロイキン－１（ＩＬ－１）は、感染および炎症に反応して、単核貪食細胞を含む様々な細胞タイプによって産生され得る強力な炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ－１ファミリーは、ＩＬ－１αおよびＩＬ－１βを含む７つのアゴニスト、およびＩＬ－１受容体アンタゴニスト（ＩＬ－１Ｒａ）を含む３つの天然に存在する受容体アンタゴニストからなる（非特許文献８）。ＩＬ－１ＲタイプＩおよびＩＬ－１ＲタイプＩＩの２つのＩＬ－１受容体が同定されている。両受容体は、ＩＬ－１ファミリー分子の３つの形態すべてと相互作用することができる。ＩＬ－１ＲＩは、ＩＬ－１が誘導する細胞活性化の媒介を担っている。しかし、ＩＬ－１／ＩＬ－１ＲＩ複合体は、それ自体では、シグナルを伝達できないが、第２の受容体鎖であるＩＬ－１Ｒアクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）との関連に依存している（非特許文献８）。ＩＬ－１ＲＩとは対照的に、ＩＬ－１ＲＩＩはＩＬ－１に結合しても細胞活性化を誘導しないため、ＩＬ－１ＲＩＩは調節デコイ受容体として機能し、ＩＬ－１ＲＩに結合することができるＩＬ－１の純減をもたらす。

ＩＬ－１は、強力な炎症誘発性サイトカインであり、局所感染または炎症の部位で誘導され、様々な生理学的事象および細胞事象の調節に関与する（非特許文献９および非特許文献１０に要約されている）。白血球および内皮細胞を含むいくつかの細胞タイプを活性化することができる。ＩＬ－１は、接着分子、サイトカイン、ケモカイン、およびプロスタグランジンＥ_２および一酸化窒素（ＮＯ）などの他の炎症性メディエーターの産生および発現を促進することにより、免疫応答を誘導および増幅する。結果として、局所炎症は増幅され、持続する。さらに、ＩＬ－１が誘導する炎症性メディエーターの産生は、発熱、頭痛、低血圧、および体重減少を引き起こす。さらに、ＩＬ－１は造血成長因子であり、骨髄移植中の患者の白血球および血小板の最下点を低減させることが示されている。ＩＬ－１はまた、血管内皮成長因子の産生を誘導することにより血管新生を促進し、それによってリウマチ性関節におけるパンヌス形成および血液供給を促進することも示されている。最後に、ＩＬ－１はリウマチ性疾患の骨および軟骨の分解を促進することが示されている。

ＩＬ－１は、痛風からがんに至る、以下を含む幅広い疾患および状態に関与している（概説については、非特許文献１１および非特許文献１２を参照、この開示は参照により本明細書に組み込まれる）：
・関節リウマチおよび変形性関節症などの関節、骨、および筋肉の疾患；
・家族性地中海熱などの遺伝性全身性自己炎症性疾患；
・全身性若年性特発性関節炎および成人発症スティル疾患などの全身性自己炎症性疾患；
・痛風および２型糖尿病などの一般的な炎症性疾患；
・心筋梗塞などの急性発症の虚血性疾患；および
・がん。

ＩＬ－１活性を遮断するための多くの治療法が承認され、開発中である。ＩＬ－１の標的化は、１９９３年にアナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ；Ａｍｇｅｎ）の導入から始まり、これは、ＩＬ－１αおよびＩＬ－１βの両活性を遮断する天然に存在するＩＬ－１受容体アンタゴニスト（ＩＬ－１Ｒａ）の組換え型であり、それ以来、この治療法は、多くの疾患におけるＩＬ－１の役割を実証するために使用されてきた（上記を参照）。アナキンラは、その優れた安全性の記録、短い半減期、および複数の投与経路により、現在ＩＬ－１治療の分野を支配している。抗体または可溶性受容体によるＩＬ－１の中和も効果的であることが証明されており、可溶性デコイ受容体のリロナセプト（Ａｒｃａｌｙｓｔ；Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）および抗－ＩＬ－１β中和モノクローナル抗体のカナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が承認されている。ＩＬ－１α中和、ＩＬ－１βを標的とする治療ワクチン、およびキメラＩＬ－１Ｒａなどの他の治療アプローチは、初期の臨床試験にある。さらに、カスパーゼ１阻害剤など、経口活性のあるＩＬ－１産生の低分子阻害剤が開発され、試験されている。

インターロイキン－３３の生物学
インターロイキン－３３（ＩＬ－３３）は、Ｔヘルパー２（Ｔ_Ｈ２）細胞および肥満細胞のような細胞を活性化することにより、２型免疫応答を誘導するＩＬ－１ファミリーメンバーとして同定された（非特許文献１３）。しかし、その後の研究により、ＩＬ－３３の役割が拡大し、現在では他の炎症誘発性効果もあると考えられている（非特許文献１４）。ＩＬ－３３は、損傷細胞または壊死細胞からストレスシグナル、いわゆるアラーミンとして放出され、受容体ＳＴ２に結合することでその効果を発揮する。ＩＬ－３３のＳＴ２への結合は、ＩＬ１ＲＡＰを動員し、ＭＹＤ８８を介したシグナル伝達が誘導される。デコイ受容体として作用することが示唆されているＳＴ２の可溶型が存在する。興味深いことに、ＩＬ－３３は、免疫応答を制限し、組織修復を誘導する細胞、例えばＴ_ｒｅｇおよびＭ２マクロファージを誘導すると同時に、強力な炎症誘発性の役割を有する。

ＩＬ－３３は、ストレスまたは細胞死によって、または制御性応答の誘導（Ｔ_ｒｅｇおよびＭ２マクロファージの誘導など）の失敗から、放出される炎症性メディエーターとして炎症性疾患に関与している。ＩＬ－３３は、次のような多くの疾患と関連している（概説については、非特許文献１４を参照）。
・喘息
・アレルギー性鼻炎およびアトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患
・心血管疾患
・関節リウマチ
・ＩＢＤ
・糖尿病および肥満
・ＣＯＰＤ
・がん

ＩＬ－３３阻害抗体の開発が進行中であり（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、喘息およびアトピー性皮膚炎でＩＬ－３３機能を対象とした臨床試験が開始されている。

インターロイキン－３６の生物学
ＩＬ１Ｒｒｐ２は、ＩＬ－３６サイトカインによって誘導され、多くの炎症性サイトカインを産生するヒト単球および樹状細胞に発現する（非特許文献１５，非特許文献１６）。ＩＬ－３６は、乾癬などの皮膚疾患で特別な注目を集めており、ＩＬ－３６が上流で作用して、他の多くの病理学的サイトカインを誘導するという証拠がある（概説については、非特許文献１７を参照）。ＩＬ１Ｒｒｐ２機能を遮断する抗体でマウスを治療すると、ヒト乾癬性皮膚を移植された免疫不全マウスの皮膚病変が軽減され（非特許文献１８）、重度の生命を脅かす形態の乾癬（ＧＰＰ）は、天然のＩＬ－３６受容体アンタゴニスト（ＩＬ－３６Ｒａ）の変異によって引き起こされる。報告はまた、ＣＯＰＤおよび喘息を含む肺の病理におけるＩＬ－３６サイトカインの機能を裏付けるものであるが、これらの疾患におけるこれらのサイトカインの役割はあまり明確ではない。

炎症性疾患および自己免疫疾患の現在の治療では、協調して上記の主要なサイトカインを阻害することはできない。

ＷＯ２０１５／１３２６０２ＷＯ２０１６／０２０５０２

Ｇａｒｌａｎｄａｅｔａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０１３Ｄｅｃ１２；３９（６）：１００３－１８Ｗａｎｇ，Ｄ．，ｅｔａｌ．，ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ２０１０１１（１０）：９０５－１１Ｔｈｏｍａｓ，Ｃ．，ｅｔａｌ．，ＮａｔＳｔｒｕｃｔＭｏｌＢｉｏｌ２０１２１９（４）：４５５－７Ｌｉｕ，Ｘ．ｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ２０１３１１０（３７）：１４９１８－２３Ｇｕｎｔｈｅｒ，Ｓ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４１９３：９２１－３０Ｊａｒａｓ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ２０１０１０７（３７）：１６２８０－５Ａｇｅｒｓｔａｍ，Ｈ．ｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ２０１５１１２（３４）：１０７８６－９１Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，ＣＡ，Ｂｌｏｏｄ１９９６，８７（６）：２０９５－１４７ＤｉｎａｒｅｌｌｏＣＡ，ＣＨＥＳＴ，２０００，１１８：５０３－５０８Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，ＣＡ，ＣｌｉｎＥｘｐＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２００２，２０（５Ｓｕｐｐｌ２７）：Ｓ１－１３Ｄｉｎａｒｅｌｌｏｅｔａｌ．，２０１２，ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓ１１：６３３－６５２Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，２０１４，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０（ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ４３－Ｓ５８Ｓｃｈｍｉｔｚ，Ｊ．，ｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ２００５２３：４７９－９０ＹｅｗＬｉｅｗ，Ｆ．，ｅｔａｌ．，ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ２０１６１６：６７６－８９Ｆｏｓｔｅｒ，Ａ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ２０１４１９２：６０５３－６１Ｍｕｔａｍｂａ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ２０１２４２：６０７－１７ＧａｂａｙＣ．ａｎｄＯｗｎｅ，Ｅ．，ＪＬｅｕｋｏｃｙｔｅＢｉｏｌ２０１５９７：６４５－５２Ｂｌｕｍｂｅｒｇ．Ｈ．，ｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ２０１０１８５：４３５４－６２

本発明者らは、協調的かつ相乗的な方法で主要な炎症性サイトカインを介してＩＬ１ＲＡＰ媒介性シグナル伝達を遮断することが見出された、新規な抗体および抗体組成物を開発した。この予想外の特性により、本発明の薬剤は、炎症性疾患および自己免疫疾患、ならびにＩＬ１ＲＡＰに関連する、および／またはＩＬ－１シグナル伝達、ＩＬ－３３シグナル伝達および／またはＩＬ－３６シグナル伝達の阻害に応答する他の状態の治療に特に適している。

一態様において、本発明は、抗インターロイキン－１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）に特異性を有する第１の結合剤と、ＩＬ１ＲＡＰに特異性を有する第２の結合剤とを少なくとも含む組成物に関し、第１の結合剤および第２の結合剤は、ＩＬ１ＲＡＰの少なくとも２つの異なる細胞外ドメインに結合する。

別の態様において、本発明は、
第１の抗原結合領域、および
第２の抗原結合領域、を含む２エピトープ結合剤に関し、
第１の抗原結合領域および第２の抗原結合領域は、ヒトインターロイキン受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）の異なる細胞外ドメインに結合する。

一態様において、本発明は、１つ以上のポリヌクレオチドを含む組成物に関するものであり、該ポリヌクレオチドは、集合的または個別に、（ｉ）第１および第２の結合剤または（ｉｉ）本明細書で定義されるような２エピトープ結合剤のいずれかをコードする。別の態様において、本発明は、（ｉ）第１および第２の結合剤、または（ｉｉ）本明細書で定義されるような２エピトープ結合剤のいずれかをコードする単離ポリヌクレオチドに関する。さらに別の態様において、本発明は、集合的または個別に、（ｉ）第１および第２の結合剤または（ｉｉ）本明細書で定義されるような２エピトープ結合剤のいずれかをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む発現ベクターに関する。さらに別の態様において、本発明は、集合的または個別に、（ｉ）第１および第２の結合剤または（ｉｉ）本明細書で定義されるような２エピトープ抗体のいずれかをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む宿主細胞に関する。さらに別の態様において、本発明は、本明細書に記載されるような１つ以上の発現ベクターを含む宿主細胞に関する。

一態様において、本発明は、少なくとも２つの結合剤、または２エピトープ結合剤；またはポリヌクレオチド、またはベクター、または宿主細胞、または、医薬品として使用するための本明細書に記載の医薬組成物を含む組成物に関する。

一態様において、本発明は、少なくとも２つの結合剤、または２エピトープ結合剤、またはポリヌクレオチド、またはベクター、または宿主細胞、または診断剤および／または予後剤として使用するための本明細書に記載の医薬組成物を含む組成物に関する。

一態様において、本発明は、少なくとも２つの結合剤、または２エピトープ結合剤、またはポリヌクレオチド、またはベクター、または宿主細胞、または、ＩＬ１ＲＡＰ関連疾患または障害の治療、改善、予防、診断または予後に使用するための、本明細書に記載の医薬組成物を含む組成物に関する。

間接ＥＬＩＳＡにおける例示抗体のヒトＩＬ－１ＲＡＰへの結合。本発明の例示抗体、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４は、ヒトＩＬ－１ＲＡＰに対して最も高い親和性を有することが見出された。ヒトＩＬ１ＲＡＰを発現するＫＵ８１２ＣＭＬ細胞への例示抗体の結合。グラフは、０．１μｇ／ｍＬの濃度でＩＬ１ＲＡＰを標的とするモノクローナル抗体で染色されたＫＵ８１２細胞のフローサイトメトリーによって測定された平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示す。本発明の例示抗体、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４は、比較抗体の中で最も高いＭＦＩを有する。ＩＬ－１／ＩＬ－３３応答性ＨＥＫレポーターシステムにおける例示抗体ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４ならびにそれらの組み合わせがＩＬ－１βまたはＩＬ－３３のシグナル伝達を遮断する能力。（Ａ）ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４の両方がＩＬ－１βシグナル伝達を完全に遮断するが、ＣＡＮ０４はより優れた効力を有する。ＣＡＮ０３とＣＡＮ０４（１：１）との組み合わせは、ＣＡＮ０４自体と同じ有効性と効力を有する。（Ｂ）ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４は、７０％（ＣＡＮ０３）または５０％（ＣＡＮ０４）の有効性でＩＬ－３３シグナル伝達を阻害する。ＣＡＮ０３とＣＡＮ０４（１：１）の組み合わせは、抗体単独と比較して、効力および有効性の両方で相乗的な増加を示す。ＩＬ－３６応答性の改変ＨＥＫレポーターシステムにおける例示抗体ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４ならびにそれらの組み合わせがＩＬ－３６αシグナル伝達を遮断する能力。最大試験濃度のＣＡＮ０４は、１ｎｇ／ｍｌＩＬ－３６でシグナルの４５％までα（Ａ）、１０ｎｇ／ｍｌで７５％まで（Ｂ）、ＩＬ－３６αシグナル伝達を遮断し、ＣＡＮ０３は両濃度のＩＬ－３６でほとんど効果がないα。ただし、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４（１：１）の組み合わせは、抗体単独と比較して、効力および有効性の両方で相乗的な増加を示す。例示抗体ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４ならびにそれらの組み合わせがＩＬ－１βを遮断する能力により、Ｈｓ５７８Ｔ（ＨＴＢ－１２６）乳がん細胞株でＩＬ－６産生が誘導された。示された抗体の存在下または非存在下で、細胞をＩＬ１βで刺激した。１０μｇ／ｍｌのＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４は、ＩＬ－６産生を対照の７０％（ＣＡＮ０３）または５０％（ＣＡＮ０４）まで阻害するが、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４の組み合わせ（５＋５μｇ／ｍｌ）は、対照の１０％まで相乗的な阻害の増加を示す。ＩＬ－１／ＩＬ－３３応答性ＨＥＫレポーターシステムにおける例示的な２エピトープ抗体ｂｓＡＣＡＮ０３ｘＣＡＮ０４（１つのＣＡＮ０４ＶＨ／ＶＬドメインおよび１つのＣＡＮ０３ＶＨ／ＶＬドメインを含む）およびＣＡＮ０４がＩＬ－１βまたはＩＬ－３３シグナル伝達を遮断する能力。（Ａ）ＣＡＮ０４およびｂｓＡＣＡＮ０３ｘＣＡＮ０４は、ＩＬ－１βシグナル伝達を完全に遮断する。（Ｂ）ＣＡＮ０４は、部分的な有効性ではあるものの、ＩＬ－３３シグナル伝達を阻害する。ただし、２エピトープｂｓＡＣＡＮ０３ｘＣＡＮ０４抗体にＣＡＮ０３ドメインを含めると、ＩＬ－３３シグナル伝達を完全に阻害することができる。

本発明は、特許請求の範囲に定義されている通りである。

定義
本明細書における「薬剤」という用語は、インターロイキン－１アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）と相互作用することができる化合物または物質を指す。薬剤は、請求項に定義されている通りであり、好ましくは、抗体、抗体模倣物、または抗体の組成物である。

「親和性成熟抗体」という用語は、その１つ以上のＨＶＲにおいて、それらの変化を有さない親抗体と比較して、１つ以上の変化を有する抗体を指し、該変化は抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはさらにピコモルの親和性を有するであろう。親和性成熟の技術は、抗体の抗原中和能力を増強するための方法を提供し、抗体可変ドメインのＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域のアミノ酸残基に変異を導入することによって抗原結合活性を高めることができる。抗体の抗原結合特性の改善により、インビトロでの抗体の生物学的活性が改善されるか、または投与量が低減される可能性があり、インビボ（体内）での効力がさらに改善される可能性がある。

本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、標準的な２０個の遺伝的にコードされたアミノ酸およびそれらの対応する（天然の「Ｌ」型と比較して）「Ｄ」型の立体異性体、オメガ－アミノ酸および他の天然に存在するアミノ酸、非従来型アミノ酸（例えば、α、α－二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸など）および化学的に誘導体化されたアミノ酸（以下を参照）を含む。

アミノ酸が、「アラニン」または「Ａｌａ」または「Ａ」のように具体的に列挙される場合、該用語は、他に明示的に述べられていない限り、Ｌ－アラニンおよびＤ－アラニンの両方を指す。所望の機能特性がポリペプチドによって保持されている限り、他の非従来型アミノ酸も本発明のポリペプチドに適した構成要素であり得る。示されたペプチドについて、それぞれコードされるアミノ酸残基は、必要に応じて、従来型アミノ酸の慣用名に対応する一文字表記によって表される。

一実施形態において、本明細書に定義される抗体ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸を含むかまたはそれからなる。

「２エピトープ抗体」という用語は、同じ抗原の２つの異なるエピトープに対して特異性を有する抗体であり、例えば、２つのエピトープは、ＩＬ１ＲＡＰの異なるドメインである。

２エピトープ抗体は、全長抗体またはその低分子量形態として調製することができる（例えば、Ｆ（ａｂ’）２２エピトープ抗体、ｓｃ（Ｆｖ）２２エピトープ抗体、ダイアボディ２エピトープ抗体、トリボディおよびミニ抗体）。

２エピトープ抗体を作製するための方法は、当技術分野で知られている。伝統的に、２エピトープ抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の共発現に基づいており、２つの重鎖は異なる特異性を有する［ＭｉｌｓｔｅｉｎａｎｄＣｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７－５３９（１９８３）］。免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の任意組み合わせのため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、潜在的な１０種類の抗体分子の混合物を生成し、そのうち１つだけが正しい二重特異性構造を有する。クアドローマ技術のさらなる改善は、正しい２エピトープ構造を有する抗体の濃縮を促進するキメラクアドローマの創出を通じてなされた（Ｌｉｎｄｈｏｆｅｒｅｔａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：２１９－２２５（１９９５）。正しい分子の精製は、通常、アフィニティークロマトグラフィーのステップによって行われる。同様の手順は、１９９３年５月１３日に公開されたＷＯ第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．，１０：３６５５－３６５９（１９９１）に開示されている。

所望の結合特異性（抗体－抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させることができる。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域のうちの少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。融合物のうちの少なくとも１つに存在する軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨＩ）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物、および必要に応じて免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物にコトランスフェクションされる。二重特異性抗体の生成のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照されたい。

ＷＯ第９６／２７０１１号に記載されている別のアプローチによれば、１対の抗体分子間の接触面（ｉｎｔｅｒｆａｃｅ）は、組換え細胞培養から回収されるヘテロ二量体のパーセンテージが最大になるように設計され得る。好ましい接触面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域のうちの少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の接触面からの１つ以上の小さなアミノ酸側鎖が、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換される。大きなアミノ酸側鎖を小さな側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置換することにより、大きな側鎖と同一または類似のサイズの代償的「空洞」が第２の抗体分子の接触面に作り出される。これにより、ホモ二量体などの他の不要な最終生成物よりもヘテロ二量体の収率を増加させるメカニズムが提供される。

２エピトープ抗体は、全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２２エピトープ抗体）として調製することができる。

抗体断片から二重特異性抗体を生成するための技術は、文献に記載されている。例えば、２エピトープ抗体は、化学結合を使用して調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８１（１９８５）には、無傷（ｉｎｔａｃｔ）抗体をタンパク質分解で切断してＦ（ａｂ’）２断片を生成する手順が説明されている。２エピトープ抗体は、一実施形態において、一種の二重特異性抗体と見なすことができ、したがって、二重特異性抗体と同じ方法で調製することができる。上記の本明細書で言及された断片は、ジチオール錯化剤である亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元されて、隣接するジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を防止する。生成するＦａｂ’断片は、次いで、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次に、Ｆａｂ’－ＴＮＢ誘導体の１つは、メルカプトエチルアミンでの還元によってＦａｂ’－チオールに再変換され、等モル量の他のＦａｂ’－ＴＮＢ誘導体と混合されて、２エピトープ抗体を形成する。生成する２エピトープ抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用することができる。

Ｆａｂ’断片は、大腸菌から直接回収され、化学的に結合して２エピトープ抗体を形成する。Ｓｈａｌａｂｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７－２２５（１９９２）には、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生について説明されている。各Ｆａｂ’断片は、大腸菌から別々に分泌され、インビトロで直接化学共役を受けて２エピトープ抗体を形成した。このように形成された２エピトープ抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞および正常なヒトＴ細胞に結合し、ヒト乳房腫瘍の標的に対してヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。

組換え細胞培養物から直接二重特異性抗体断片を作製および単離するための様々な技術も記載されている。例えば、２エピトープ抗体はロイシンジッパーを使用して産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分と連結された。抗体ホモ二量体はヒンジ領域で還元されて単量体を形成し、次に再酸化されて抗体ヘテロ二量体を形成した。この方法は、抗体ホモ二量体の作製にも利用できる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－６４４８（１９９３）によって記述された「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体断片を作成するための代替メカニズムを提供している。該断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによって、軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に接続された重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む。したがって、１つの断片のＶ_ＨおよびＶ_Ｌドメインは、別の断片の相補的Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈドメインと対になることを強制され、それにより、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用して二重特異性抗体断片を作成するための別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照。３つ以上の結合価を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。二重特異性抗体を製造するためのより最近のアプローチは、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ＆Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，（２０１５）ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙＴｏｄａｙ２０（７）に記載されている。該文献に記載されている方法は、当業者によって、２エピトープ抗体を産生するために直接適用することができる。

二重特異性または多重特異性の構築物を作製および使用する別の方法は、ドックアンドロック技術として知られている（２００６年３月２４日に出願された米国特許出願第１１／３８９，３５８号；２００６年３月２８日に出願された第１１／３９１，５８４号；２００６年６月２９日に出願された第１１／４７８，０２１号；２００６年１２月５日に出願された第１１／６３３，７２９号）。ＤＮＬ二重特異性抗体は、ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＡ）の調節（Ｒ）サブユニットとＡキナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）のアンカードメインとの特異的相互作用を利用して設計されており、そのメカニズムは異なるタンパク質と非タンパク質分子との生物活性複合体の生成に応用されている。生成された二重特異性抗体にはＦｃ領域がなく、プレターゲティングアプローチに適したかなり短い半減期を有する。

別のアプローチは、２つの異なる抗体からの可変領域を天然に存在するリンカーによってタンデムに組み合わせる二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ）抗体の生成である。両可変領域の結合親和性は、有意な立体障害なしに保存され、独立して機能することができる（ＷｕＣ．ｅｔａｌ．，Ｎａｔ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２５；１２９０－１２９７（２００７））。このアプローチは、ＩＬ－１αおよびＩＬ－１βに同時に結合する抗体を生成するために使用されている（ＷｕＣ．ｅｔａｌ．ＭＡｂｓ１：３３９－３４７（２００９）。

本明細書で使用される「細胞外ドメイン」という用語は、ＩＬ１ＲＡＰがＩＬ１受容体（例えば、ＩＬ１ＲタイプＩまたはタイプＩＩ）と細胞膜結合複合体を形成する場合に、全体的または部分的に細胞外に位置するＩＬ１ＲＡＰのドメインを指す。ヒトＩＬ１ＲＡＰでは、次の３つの細胞外ドメインが存在することが知られている。
ドメイン１：アミノ酸２１～１３４
ドメイン２：アミノ酸１３５～２３４
ドメイン３：アミノ酸２３５から３６７
（アミノ酸の付番は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ内のアクセッション番号Ｑ９ＮＰＨ３に準拠している）。

ＩＬ１ＲＡＰの構造は、Ｗａｎｇｅｔａｌ．，２０１０，ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１１：９０５－９１２でさらに定義されている（その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。以下の実施例Ｃも参照）。

したがって、本発明の組成物の第１または第２の結合剤、または本発明の２エピトープ抗体の第１または第２の抗原結合領域は、ＩＬ１ＲＡＰのドメイン１に対して特異性を有し得る。例えば、抗体または抗原結合断片が結合するエピトープは、ＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸２１～３９、４０～５９、６０、～７９、８０、～９９、１００～１１９内、またはアミノ酸１２０～１３４間に位置し得る。しかしながら、エピトープが非線形であり得ることが理解されよう。

さらに、または代わりに、本発明の組成物の第１または第２の結合剤、または本発明の２エピトープ抗体の第１または第２の抗原結合領域は、ＩＬ１ＲＡＰのドメイン２に対して特異性を有し得る。例えば、抗体または抗原結合断片が結合するエピトープは、ＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸１３５～１５４、１５５～１７４、１７５～１９４、１９５～２１４内、またはアミノ酸２１５～２３４間に位置し得る。しかしながら、エピトープが非線形であり得ることが理解されよう。

さらに、または代わりに、本発明の組成物の第１または第２の結合剤、または本発明の２エピトープ抗体の第１または第２の抗原結合領域は、ＩＬ１ＲＡＰのドメイン３に対して特異性を有し得る。例えば、抗体または抗原結合断片が結合するエピトープは、ＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸２３５～２４９、２５０～２６９、２７０～２８９、２９０、～３０９、３１０、～３２９、３３０、～３４９内、またはアミノ酸３５０～３６７間に位置し得る。しかしながら、エピトープが非線形であり得ることが理解されよう。

本明細書で使用される「配列同一性」という用語は、２つのアミノ酸またはポリヌクレオチド配列の比較尺度を指す。配列同一性のレベルは、第１の配列が第２の配列から派生する可能性を示している。アミノ酸配列の同一性には、２つの整列した配列間で同一のアミノ酸配列が必要である。したがって、参照配列と７０％のアミノ酸同一性を共有する候補配列は、アラインメントに続いて、候補配列のアミノ酸の７０％が参照配列の対応するアミノ酸と同一であることを必要とする。同一性は、限定されないが、ＣｌｕｓｔａｌＷコンピュータアライメントプログラム（ＨｉｇｇｉｎｓＤ．，ＴｈｏｍｐｓｏｎＪ．，ＧｉｂｓｏｎＴ．，ＴｈｏｍｐｓｏｎＪ．Ｄ．，ＨｉｇｇｉｎｓＤ．Ｇ．，ＧｉｂｓｏｎＴ．Ｊ．，１９９４ＣＬＵＳＴＡＬＷ：ｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｍｕｌｔｉｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｔｈｒｏｕｇｈｓｅｑｕｅｎｃｅｗｅｉｇｈｔｉｎｇ，ｐｏｓｉｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｇａｐｐｅｎａｌｔｉｅｓａｎｄｗｅｉｇｈｔｍａｔｒｉｘｃｈｏｉｃｅ．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２２：４６７３－４６８０）、およびそこで提示されるデフォルトパラメータなどのコンピュータ分析の助けを借りて決定することができる。ＣｌｕｓｔａｌＷソフトウェアは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｃｌｕｓｔａｌｗから欧州バイオインフォマティクス研究所のＣｌｕｓｔａｌＷＷＷＷサービスとして入手できる。このプログラムをデフォルト設定で使用すると、クエリーおよび参照のポリペプチドの成熟（生物活性）部分が整列する。完全に保存された残基の数を計数し、参照ポリペプチドの長さで割る。

同様に、ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズムを使用してヌクレオチド配列を整列させることができる。配列同一性は、アミノ酸配列について示されているのと同様の方法で計算することができる。

抗体および抗原結合断片
一実施形態において、該結合剤の一方または両方は、個別に抗体または抗原結合断片である。

「抗体または抗原結合断片」とは、実質的に無傷な抗体分子だけではなく、キメラ抗体、ヒト化抗体、単離されたヒト抗体、単鎖抗体、２エピトープ抗体、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体重鎖および／または軽鎖のホモ二量体およびヘテロ二量体、ならびにそれらの抗原結合断片および誘導体を含む。好適な抗原結合断片および誘導体として、Ｆｖ断片（例えば、単鎖Ｆｖおよびジスルフィド結合Ｆｖ）、Ｆａｂ様断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片およびＦ（ａｂ）_２断片）、単一可変ドメイン（例えば、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメイン）およびドメイン抗体（ｄＡｂ、単一および二重形式［すなわち、ｄＡｂ－リンカー－ｄＡｂ］を含む）が挙げられるが、必ずしも限定されない。全抗体ではなく抗体断片を使用する潜在的な利点は、数倍ある。より小さいサイズの断片は、固形組織のより良好な透過性などの改善された薬理学的特性をもたらし得る。さらに、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、およびｄＡｂ抗体断片などの抗原結合断片は、大腸菌で発現し、分泌され得るため、該断片の容易な大量産生を可能にする。

「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の断片、またはそれらのいずれかの誘導体を指す。「免疫グロブリン分子」という用語は、次に、２対のポリペプチド鎖、１対の軽（Ｌ）低分子量鎖および１対の重（Ｈ）鎖からなる構造的に関連する糖タンパク質のクラスを指し、４つすべてがジスルフィド結合により相互連結されている。各重鎖は通常、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ）で構成される。重鎖定常領域は通常、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、およびＣ_Ｈ３の３つのドメインで構成される。各軽鎖は、通常、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）および軽鎖定常領域（Ｃ_Ｌ）で構成される。軽鎖定常領域は、通常、１つのドメイン、Ｃ_Ｌから構成される。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる超可変性の領域（または配列が超可変であり、および／または構造的に明確なループの形態であり得る超可変領域）にさらに細分され、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在している。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、通常、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置されている。

「抗原」という用語は、少なくとも１つのエピトープを含む分子を指す。抗原は、例えば、ポリペプチド、多糖、タンパク質、リポタンパク質または糖タンパク質であり得る。

「抗原結合断片」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の断片を指す。

本明細書で使用される「２エピトープ抗体」とは、２つの異なるエピトープに同時に結合することができる抗体を指す。２エピトープ抗体は、二重特異性抗体であり得る。本明細書で使用される「二重特異性抗体」とは、２つの異なる分子上の２つの異なるエピトープに結合することができる抗体を指す。

「キメラ抗体」という用語は、異なる種に由来する領域を含む抗体を指す。キメラ抗体は、例えば、１つの動物種からの可変領域および別の動物種からの定常領域を含み得る。例えば、キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒトの定常領域を有する抗体であり得る。このような抗体は、ヒト化抗体と呼ばれることもある。

抗体の抗原結合断片はまた、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片である「ダイアボディ」であり得る。ダイアボディは、好ましくは、同じポリペプチド鎖（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）において軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に接続した重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む。

「ドメイン抗体」（ｄＡｂ）という用語は、好ましくは１１ｋＤａ～１５ｋＤａの範囲の抗体の抗原結合断片を指す。

「二重可変ドメイン抗体」という用語は、２つの異なる結合特異性を有する抗体分子を指す。それぞれの軽鎖および重鎖には、短いリンカー配列によって連結された２つの異なる可変領域が含まれている。重鎖および軽鎖のＮ末端可変領域は１つの結合特異性を有するものであり、同じ重鎖および軽鎖の隣接する可変領域は異なる特異性を有するものである。これらの伸長した重鎖および軽鎖が合成され、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む共有結合分子に組み立てられる。

「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合することができる決定基を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチド、多糖、タンパク質、リポタンパク質、または糖タンパク質内に含まれ得る。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グループで構成され、通常、特定の３次元構造特性および特定の電荷特性を有する。エピトープは、立体構造または非立体構造であり、前者への結合は、変性溶媒の存在下で失われるが、後者への結合は失われない。エピトープは、連続的または不連続的であり、不連続的エピトープは、タンパク質の一次配列の少なくとも２つの別個の領域から形成されるタンパク質抗原上の立体構造エピトープである。

「Ｆａｂ断片」という用語は、抗体の抗原結合断片を指し、重鎖および軽鎖のそれぞれの１つの定常ドメインおよび１つの可変ドメインからなる。

「ヒト化抗体」という用語は、ヒトで天然に産生される抗体変異体との類似性を高めるためにタンパク質配列が改変されている非ヒト種由来の抗体を指す。

本発明による抗体は、ヒトまたはヒト化抗体であり得る。本明細書で使用されるヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列を使用するシステムから得られる抗体である。ヒト抗体は、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子またはそれから調製されたハイブリドーマについてトランスジェニックまたはトランス染色体である動物（例えば、マウス）から単離された抗体であり得る。ヒト抗体はまた、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクションーマから単離され得る。ヒト抗体はまた、組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離され得る。

ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかしながら、特定の実施形態において、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発またはインビボ体細胞変異誘発に供することができるため、組換え抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列に由来し、関連する一方、天然でインビボのヒト抗体生殖系レパートリー内に存在しない場合もある。

ヒト抗体は、野生型ヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列に対して、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列である。

トランス染色体動物の該トランスジェニックは、再編成されていないヒト重（μおよび／またはγ）鎖およびκ軽鎖の免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を含み得る。さらに、該動物は、内因性の重鎖および軽鎖の遺伝子座を不活性化する１つ以上の変異を含み得る。そのような動物の例は、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ３６８（６４７４）：８５６－８５９およびＷＯ第０２／４３４７８号に記載されている。

本発明による抗体は、キメラ抗体、すなわち、異なる種に由来する領域を含む抗体であり得る。キメラ抗体は、例えば、ある種の動物由来の可変領域および別種の動物由来の定常領域を含み得る。例えば、キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒトの定常領域を有する抗体であり得る。このような抗体は、ヒト化抗体と呼ばれることもある。

したがって、本発明による抗体はまた、ヒト化抗体であってもよく、部分的にヒト生殖系免疫グロブリン配列から得られる配列および部分的に他の配列から得られる配列によってコードされる。該他の配列は、好ましくは他の種からの、より好ましくは他の哺乳動物種からの生殖系免疫グロブリンである。特に、ヒト化抗体は、抗原結合部位が非ヒト種、好ましくは非ヒト哺乳動物、例えばマウスまたはラットからの免疫グロブリンに由来する抗体であってもよいが、該分子の残りの免疫グロブリン由来部分の一部または全部は、ヒト免疫グロブリンに由来する。該非ヒト種からの抗原結合部位は、例えば、完全なＶ_ＬまたはＶ_Ｈまたは両方、またはＶ_ＬまたはＶ_Ｈまたは両方の適切なヒトフレームワーク領域にグラフトされた一つ以上のＣＤＲから構成することができる。したがって、ヒト化抗体では、ＣＤＲは、マウスまたはラットのモノクローナル抗体に由来する可能性があり、抗体の他の領域はヒト起源である。

「参照抗体「ＣＡＮ０３」」には、配列番号１４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、配列番号３３のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域、および配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む無傷ＩｇＧ抗体が含まれる。あるいは、ＣＡＮ０３のヒト化版を参照抗体として使用することができる。参照抗体ＣＡＮ０３は、ＷＯ第２０１６／０２０５０２号に記載されている。

「参照抗体「ＣＡＮ０４」」には、配列番号４、配列番号５、配列番号６、および配列番号７からなる群から選択される重鎖可変領域、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択される軽鎖可変領域、配列番号３１のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域、配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む無傷ＩｇＧ抗体が含まれる。好ましい実施形態において、重鎖可変領域は配列番号４であり、軽鎖可変領域は配列番号１からなる群から選択される。あるいは、ＣＡＮ０４のヒト化版を参照抗体として使用することができる。参照抗体ＣＡＮ０４は、ＷＯ第２０１５／１３２６０２号に記載されている。

「ｓｃＦｖ」という用語は、一本鎖Ｆｖを指す。Ｆｖ断片は、重鎖（Ｖ_Ｈ）および軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域が結合して抗体の結合部位を形成する断片である。フレキシブルリンカーは、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ鎖を共有結合するために使用することができ、元の抗体の結合特異性を保持するｓｃＦｖを形成する。

「一本鎖抗体」という用語は、１つ以上の抗原結合部位を含む単一のポリペプチドである抗体を指す。単鎖抗体は、Ｆｖ断片の２つのドメイン、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈを含むことができる。

ＩＬ１ＲＡＰの細胞外ドメインへの結合
一態様において、本発明は、抗インターロイキン－１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）に特異性を有する第１の結合剤と、ＩＬ１ＲＡＰに特異性を有する第２の結合剤とを少なくとも含む組成物に関し、第１の結合剤および第２の結合剤は、ＩＬ１ＲＡＰの少なくとも２つの異なる細胞外ドメインに結合する。例えば、第１および第２の結合剤は、ＩＬ１ＲＡＰの下記の細胞外ドメインにそれぞれ結合し得る。
（ａ）ドメイン１およびドメイン２、
（ｂ）ドメイン１およびドメイン３、または
（ｃ）ドメイン２およびドメイン３。

一実施形態において、本組成物は、集合的に、ＩＬ１ＲＡＰの３つすべての細胞外ドメイン、すなわち、ドメイン１、２、および３に結合する結合剤を含む。

「インターロイキン－１受容体アクセサリータンパク質」、「ＩＬ１ＲＡＰ」および「ＩＬ１－ＲＡＰ」には、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＡＡＢ８４０５９、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００２１７３．１およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ登録番号：Ｑ９ＮＰＨ３－１に記載されているように、具体的には、ヒトＩＬ１ＲＡＰタンパク質が含まれる（Ｈｕａｎｇｅｔａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９４（２４），１２８２９－１２８３２も参照。この開示は参照により本明細書に組み込まれる）。ＩＬ１ＲＡＰは、科学文献において、ＩＬ１Ｒ３、Ｃ３ｏｒｆ１３、ＦＬＪ３７７８８、ＩＬ－１ＲＡｃＰおよびＥＧ３５５６としても知られている。

したがって、本発明の結合剤は、ＩＬ１ＲＡＰに対して特異性を有する。「特異性」とは、結合剤がインビボで、すなわち、ＩＬ１ＲＡＰが人体に存在する生理学的条件下でＩＬ１ＲＡＰに結合することができることを意味する。結合剤は、インビボで任意の他のタンパク質に結合しないことが好ましい。そのような結合特異性は、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、免疫沈降、ウェスタンブロット、およびＩＬ１ＲＡＰを発現するトランスフェクション細胞を用いたフローサイトメトリーなどの当該技術分野において周知の方法によって決定することができる。有利なことに、結合剤はＩＬ１ＲＡＰに選択的に結合することができ、すなわち、他のどのタンパク質よりもＩＬ１ＲＡＰに少なくとも１０倍強く結合する。

参照抗体「ＣＡＮ０４」は、ＩＬ１ＲＡＰのドメイン２（Ｗａｎｇｅｔａｌ．，２０１０，ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１１：９０５－９１２を参照。この開示は参照により本明細書に組み込まれる）、すなわちＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸１３５～２３４内に結合する。（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ内の登録番号Ｑ９ＮＰＨ３を参照）。例えば、抗体または抗原結合断片が、ＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸１３５～１５４、１５５～１７４、１７５～１９４、１９５～２１４内、またはアミノ酸２１５～２３４の間に位置し得るエピトープ。しかしながら、エピトープが非線形であり得ることが理解されよう。

一実施形態において、本発明の組成物の抗体または抗原結合断片は、ＩＬ１ＲＡＰの細胞外ドメイン上のエピトープに結合することができ、該エピトープは、参照抗体ＣＡＮ０４が結合可能であるＩＬ１ＲＡＰ上のエピトープと少なくとも部分的に重複する。したがって、抗体または抗原結合断片は、ＩＬ１ＲＡＰのドメイン２に／ドメイン２内に位置するエピトープに結合することができる可能性がある。

参照抗体「ＣＡＮ０３」はＩＬ１ＲＡＰのドメイン３に結合する。したがって、本発明の組成物の抗体または抗原結合断片はまた、ＩＬ１ＲＡＰのドメイン３にも結合することが理解されるであろう。

ＩＬ１ＲＡＰの「ドメイン３」には、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔの登録番号Ｑ９ＮＰＨ３で使用される付番に従ってＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸２３５～３６９で定義される構造領域が含まれる（Ｗａｎｇｅｔａｌ．，２０１０，ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１１：９０５－９１２も参照、この開示は参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、抗体または抗原結合断片が結合するエピトープは、ＩＬ１ＲＡＰのアミノ酸２３５～２３９、２４０～２４９、２５０～２５９、２６０～２６９、２７０～２７９、２８０～２８９、２９０～２９９、３００～３０９、３１０～３１９、３２０～３２９、３３０～２２９、２４０～３４９、３５０～３５９内、またはアミノ酸３６０～３６９の間に位置し得る。

「参照抗体「ＣＡＮ０４」（または「ＣＡＮ０３」）のヒトＩＬ１ＲＡＰへの結合を阻害することができる」という表現は、ヒトＩＬ１ＲＡＰへの「ＣＡＮ０４」（または「ＣＡＮ０３」）の結合を全体的または部分的に阻害する抗体ポリペプチドの存在を指す。抗体ＣＡＮ０４（またはＣＡＮ０３）の結合を阻害することができる抗体は、ＩＬ１ＲＡＰへの結合についてＣＡＮ０４（またはＣＡＮ０３）と競合する抗体として理解されるべきである。このような競合的結合阻害は、当技術分野で周知のアッセイおよび方法を使用して、例えば、表面プラズモン共鳴、またはフローサイトメトリー、またはＥＬＩＳＡを使用して決定することができる。

ＩＬ１ＲＡＰの少なくとも２つの異なる細胞外ドメインに結合する少なくとも２つの結合剤を含む組成物
一実施形態において、本発明は、組成物に関し、
ａ）第１の結合剤が、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片であり、
ｉ）参照抗体「ＣＡＮ０４」、
ｉｉ）可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＧＬＨＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＳＩＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号：１）および可変重鎖（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＳＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＧＥＧＹＬＤＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号：４）を含む抗体、
ｉｉｉ）以下の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも１つを含む抗体：
軽鎖ＣＤＲ１：ＳＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ（配列番号８）またはＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ（配列番号２９）
軽鎖ＣＤＲ２：ＹＴＳＧＬＨＡＧＶ（配列番号９）またはＹＴＳＧＬＨＡ（配列番号２２）
軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＹＳＩＬＰＷＴ（配列番号１０）またはＱＹＳＩＬＰＷＴ（配列番号２３）
重鎖ＣＤＲ１：ＧＹＡＦＴＳＳＳＷＭＮ（配列番号１１）またはＧＹＡＦＴＳＳ（配列番号２４）
重鎖ＣＤＲ２：ＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１２）またはＹＰＧＤＧＮ（配列番号２５）
重鎖ＣＤＲ３：ＧＹＬＤＰＭＤＹ（配列番号１３）；および
ｉｖ）上記（ｉ）の抗体と同じエピトープに結合する抗体、
ｖ）上記（ｉ）の抗体のヒトＩＬ１ＲＡＰへの結合を阻害することができる抗体、
ｖｉ）ＩＬ１ＲＡＰの細胞外ドメイン２に結合することができる抗体、および
ｖｉｉ）上記（ｉ）～（ｖｉ）の抗体の抗原結合断片、
からなる群から選択され、ならびに
ｂ）第２の結合剤が、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片であり、
ｉ）参照抗体「ＣＡＮ０３」；
ｉｉ）可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列：ＤＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳＦＳＣＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨＷＹＱＲＲＴＮＧＳＰＲＬＬＩＫＳＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＴＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１４）
および可変重鎖（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列：ＤＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＳＲＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号１５）を含む抗体；
ｉｉｉ）以下の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも１つを含む抗体：
軽鎖ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ
（配列番号１６）またはＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ（配列番号３０）
軽鎖ＣＤＲ２：ＳＡＳＥＳＩＳ（配列番号１７）
軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＳＮＳＷＰＴＴ（配列番号１８）またはＱＳＮＳＷＰＴＴ（配列番号２６）
重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳ（配列番号１９）またはＧＦＴＦＳＩＹ（配列番号２７）
重鎖ＣＤＲ２：ＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２０）またはＳＩＧＧＳＹ（配列番号２８）
重鎖ＣＤＲ３：ＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹ（配列番号２１）；
ｉｖ）上記（ｉ）の抗体と同じエピトープに結合する抗体；
ｖ）上記（ｉ）部の抗体のヒトＩＬ１ＲＡＰへの結合を阻害することができる抗体；
ｖｉ）ＩＬ１ＲＡＰの細胞外ドメイン３に結合することができる抗体、および
ｖｉｉ）上記ｉ）～ｖｉ）の抗体の抗原結合断片、からなる群から選択される。

一実施形態において、上記（ａ）（ｉｉｉ）の抗体は、ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、ＣＤＲのうちの例えば少なくとも２つ、例えば少なくとも３つ、例えば少なくとも４つ、例えば少なくとも５つ、例えば６つすべてを含む。別の実施形態において、該抗体は、３つすべての軽鎖ＣＤＲおよび／または３つすべての重鎖ＣＤＲを含む。

一実施形態において、（ｂ）（ｉｉｉ）の抗体は、ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、ＣＤＲのうちの例えば少なくとも２つ、例えば少なくとも３つ、例えば少なくとも４つ、例えば少なくとも５つ、例えば６つすべてを含む。別の実施形態において、該抗体は、３つすべての軽鎖ＣＤＲおよび／または３つすべての重鎖ＣＤＲを含む。

一実施形態において、第１の結合剤は、下記からなる群から選択される可変重鎖（Ｖ_Ｈ）および可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である：
ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｆ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｇ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｈ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｊ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｋ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ならびに
ｌ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）。

一実施形態において、該第１の結合剤は、
配列番号１、２、または３のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号４、５、６、または７のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片であり、
該第２の結合剤は、
配列番号１４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号１５のアミノ酸を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

好ましくは、該第１の結合剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）および配列番号４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片であり、該第２の結合剤は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）および配列番号１５のアミノ酸を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第１の結合剤は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１に対して少なくとも６０％の配列同一性、例えば少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第１の結合剤は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第１の結合剤は、配列番号４のアミノ酸配列、または配列番号４に対して少なくとも６０％の配列同一性、例えば少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第１の結合剤は、配列番号４のアミノ酸配列、または配列番号４のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第１の結合剤は、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８、配列番号９、配列番号：１０、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２９に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第１の結合剤は、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第１の結合剤は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２４、および配列番号２５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１１、配列番号１２、配列番号：１３、配列番号２４、および配列番号２５に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖ＣＤＲを含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第１の結合剤は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２４、および配列番号２５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第２の結合剤が、配列番号１４のアミノ酸配列、または配列番号１４に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第２の結合剤は、配列番号１４のアミノ酸配列、または配列番号１４のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第２の結合剤が、配列番号１５のアミノ酸配列、または配列番号１５に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第２の結合剤は、配列番号１５のアミノ酸配列、または配列番号１５のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第２の結合剤は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２６、および配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１６、配列番号１７、配列番号：１８、配列番号２６、および配列番号３０に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第２の結合剤は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２６、および配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第２の結合剤は、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２７、および配列番号２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９、配列番号２０、配列番号：２１、配列番号２７、および配列番号２８に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖ＣＤＲを含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該第２の結合剤は、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２７、および配列番号２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる重鎖ＣＤＲを含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である。

いくつかの実施形態において、該組成物中の該第２の結合剤に対する該第１の結合剤の比率は、１０：１～１：１０、例えば５：１～１：５、例えば２：１～１：２、例えば３：２～２：３、例えば１１：９～９：１１、例えば１：１である。

いくつかの実施形態において、該第１および第２の結合剤は、アイソタイプサブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の抗体分子である。

いくつかの実施形態において、該組成物は、細胞膜結合ＩＬ１ＲＡＰの内在化を誘導することができる。内在化とは、本発明の組成物内の結合剤が細胞の膜内に位置するＩＬ１ＲＡＰに結合すると、結合剤－ＩＬ１ＲＡＰ複合体が細胞内に内在化されることを意味する。

いくつかの実施形態において、該第１および／または第２の結合剤は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する能力を欠いている。

ＩＬ１ＲＡＰの少なくとも２つの異なる細胞外ドメインに結合する２エピトープ結合剤
一態様において、本発明は、
第１の抗原結合領域、および
第２の抗原結合領域、を含む２エピトープ結合剤に関し、
第１の別個の抗原結合領域および第２の別個の抗原結合領域は、ヒトインターロイキン受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）の２つの異なる細胞外ドメインに結合する。

本明細書で使用される「２エピトープ結合剤」とは、２つの異なるエピトープに同時に結合することができる分子を指す。２エピトープ結合剤は、二重特異性薬剤であり得る。本明細書で使用される「二重特異性薬剤」は、２つの異なる分子上の２つの異なるエピトープに結合することができる分子を指す。

いくつかの実施形態において、該２エピトープ結合剤は、二重可変ドメイン抗体、２エピトープＦａｂ断片、２エピトープｓｃＦｖ、二価二重特異性抗体（ＩｇＧ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体など）、一価二重特異性抗体（例えば、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）、ＧｅｎｍａｂＡＳ、コペンハーゲン、デンマーク）、「ノブインホール」二重特異性抗体（例えば、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、ｓｃＦｖ－ＫＩＨｒ、ＢｉＴＥ－ＫＩＨまたはＢｉＴＥ－ＫＩＨｒ。Ｘｕｅｔａｌ．，２０１５，ｍＡｂｓ７（１）：２３１－２４２を参照）、ｓｃＦｖ２－Ｆｃ二重特異性抗体、ＢｉＴＥ／ｓｃＦｖ２二重特異性抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ二重特異性抗体、ＩｇＧ－Ｆａｂ二重特異性抗体、ＦＡｂ－ＩｇＧ二重特異性抗体、ＤＡＲＴ系二重特異性抗体（ＤＡＲＴ２－Ｆｃ、ＤＡＲＴ２－Ｆｃ、またはＤＡＲＴなど）、ＤＮＬ－Ｆａｂ３二重特異性抗体、またはｓｃＦｖ－ＨＳＡ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体である。

一実施形態において、該２エピトープ結合剤は、抗体などのポリペプチドである。

一実施形態において、本発明は、該２エピトープ結合剤に関し、
ａ）該第１の抗原結合領域が、
ｉ）参照抗体「ＣＡＮ０４」と同じ抗原に結合する抗原結合領域；
ｉｉ）抗体ＣＡＮ０４と同じエピトープに結合する抗原結合領域；
ｉｉｉ）抗体ＣＡＮ０４のヒトＩＬ１ＲＡＰへの結合を阻害することができる抗原結合領域；
ｉｖ）ＩＬ１ＲＡＰのドメイン２に結合することができる抗原結合領域；
ｖ）下記を含むまたは下記からなるアミノ酸配列：
抗体ＣＡＮ０４の可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＧＬＨＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＳＩＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１）および
可変重鎖（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列：ＤＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＳＲＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号４）、
ｖｉ）下記の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの少なくとも１つを含む、またはそれからなるアミノ酸配列：
軽鎖ＣＤＲ１：ＳＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ（配列番号８）またはＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ（配列番号２９）
軽鎖ＣＤＲ２：ＹＴＳＧＬＨＡＧＶ（配列番号９）またはＹＴＳＧＬＨＡ（配列番号２２）
軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＹＳＩＬＰＷＴ（配列番号１０）またはＱＹＳＩＬＰＷＴ（配列番号２３）
重鎖ＣＤＲ１：ＧＹＡＦＴＳＳＳＷＭＮ（配列番号１１）またはＧＹＡＦＴＳＳ（配列番号２４）
重鎖ＣＤＲ２：ＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１２）またはＹＰＧＤＧＮ（配列番号２５）
重鎖ＣＤＲ３：ＧＹＬＤＰＭＤＹ（配列番号１３）；
ｖｉｉ）上記（ｉ）～（ｖｉ）の抗体の抗原結合断片、
からなる群から選択され、ならびに
ｂ）該第２の抗原結合領域が、
ｉ）参照抗体「ＣＡＮ０３」と同じ抗原に結合する抗原結合領域；
ｉｉ）抗体ＣＡＮ０３と同じエピトープに結合する抗原結合領域；
ｉｉｉ）抗体ＣＡＮ０３のヒトＩＬ１ＲＡＰへの結合を阻害することができる抗原結合領域；
ｉｖ）ＩＬ１ＲＡＰの細胞外ドメイン３に結合することができる抗原結合領域；
ｖ）抗体ＣＡＮ０３の可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列：ＤＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳＦＳＣＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨＷＹＱＲＲＴＮＧＳＰＲＬＬＩＫＳＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＴＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１４）、
および可変重鎖（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列：ＤＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＳＲＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号１５）を含むまたはそれからなるアミノ酸配列
ｖｉ）下記の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの少なくとも１つを含む抗原結合領域：
軽鎖ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ
（配列番号１６）またはＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ（配列番号３０）
軽鎖ＣＤＲ２：ＳＡＳＥＳＩＳ（配列番号１７）
軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＳＮＳＷＰＴＴ（配列番号１８）またはＱＳＮＳＷＰＴＴ（配列番号２６）
重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳ（配列番号１９）またはＧＦＴＦＳＩＹ（配列番号２７）
重鎖ＣＤＲ２：ＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２０）またはＳＩＧＧＳＹ（配列番号２８）
重鎖ＣＤＲ３：ＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹ（配列番号２１）；および
ｖｉｉ）上記ｉ）～ｖｉ）の抗体の抗原結合断片、からなる群から選択される。

一実施形態において、該第１の抗原結合領域は、配列番号３５の重鎖アミノ酸配列および配列番号３６の軽鎖アミノ酸配列を含むかまたはそれからなるアミノ酸配列を含み、該第２の抗原結合領域は、配列番号３７の重鎖アミノ酸配列および配列番号３８の軽鎖アミノ酸配列を含む。

一実施形態において、該第１の抗原結合領域は、下記からなる群から選択される可変重鎖（Ｖ_Ｈ）および可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む：
ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｆ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｇ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｈ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｊ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｋ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ならびに
ｌ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）。

一実施形態において、該第１の抗原結合領域は、配列番号１、２、または３のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、および配列番号４、５、６、または７のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含み、該第２の抗原結合領域は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、および配列番号１５のアミノ酸を含むか、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む。

好ましくは、該第１の抗原結合領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、および配列番号４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含み、該第２の抗原結合領域は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、および配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む。

いくつかの実施形態において、該第１の抗原結合領域は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１に対して少なくとも６０％の配列同一性、例えば少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を有する。

いくつかの実施形態において、該第１の抗原結合領域は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を有する。

いくつかの実施形態において、該第１の抗原結合領域は、配列番号４のアミノ酸配列、または配列番号４に対して少なくとも６０％の配列同一性、例えば少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を有する。

いくつかの実施形態において、該第１の抗原結合領域は、配列番号４のアミノ酸配列、または配列番号４のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を有する。

いくつかの実施形態において、該第１の抗原結合領域は、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８、配列番号９、配列番号：１０、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２９に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを有する。

いくつかの実施形態において、該第１の抗原結合領域は、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを有する。

いくつかの実施形態において、該第１の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２４、および配列番号２５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１１、配列番号１２、配列番号：１３、配列番号２４、および配列番号２５に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖ＣＤＲを有する。

いくつかの実施形態において、該第１の抗原結合領域は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２４、および配列番号２５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを有する。

いくつかの実施形態において、該第２の抗原結合領域は、配列番号１４のアミノ酸配列、または配列番号１４に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を有する。

いくつかの実施形態において、該第２の抗原結合領域は、配列番号１４のアミノ酸配列、または配列番号１４のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を有する。

いくつかの実施形態において、該第２の抗原結合領域は、配列番号１５のアミノ酸配列、または配列番号１５に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を有する。

いくつかの実施形態において、該第２の抗原結合領域は、配列番号１５のアミノ酸配列、または配列番号１５のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を有する。

いくつかの実施形態において、該第２の抗原結合領域は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２６、および配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１６、配列番号１７、配列番号：１８、配列番号２６、および配列番号３０に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを有する。

いくつかの実施形態において、該第２の抗原結合領域は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２６、および配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲを有する。

いくつかの実施形態において、該第２の抗原結合領域は、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２７、および配列番号２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１９、配列番号２０、配列番号：２１、配列番号２７、および配列番号２８に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖ＣＤＲを有する。

いくつかの実施形態において、該第２の抗原結合領域は、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２７、および配列番号２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列のうちの任意の１アミノ酸が別のアミノ酸に変更されているアミノ酸配列を、２個以下のアミノ酸残基がこのように変更されているという条件で、含むかまたはそれからなる重鎖ＣＤＲを有する。

一実施形態において、該２エピトープ結合剤は、２００ｐＭ以上のヒトＩＬ１ＲＡＰに対して結合親和性（Ｋ_Ｄ）を有する。

ポリヌクレオチド、ベクターおよび宿主細胞
一態様において、本発明は、１つ以上のポリヌクレオチドを含む組成物に関するものであり、該ポリヌクレオチドは、集合的または個別に、（ｉ）第１および第２の結合剤または（ｉｉ）本明細書で定義されるような２エピトープ結合剤のいずれかをコードする。別の態様において、本発明は、（ｉ）第１および第２の結合剤、または（ｉｉ）本明細書で定義されるような２エピトープ結合剤のいずれかをコードする単離ポリヌクレオチドに関する。さらに別の態様において、本発明は、集合的または個別に、（ｉ）第１および第２の結合剤または（ｉｉ）本明細書で定義されるような２エピトープ結合剤のいずれかをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む発現ベクターに関する。さらに別の態様において、本発明は、集合的または個別に、（ｉ）第１および第２の結合剤または（ｉｉ）本明細書で定義されるような２エピトープ抗体のいずれかをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む宿主細胞に関する。さらに別の態様において、本発明は、本明細書に記載されるような１つ以上の発現ベクターを含む宿主細胞に関する。

医薬組成物
本発明の結合剤または塩を上記のように未加工化合物として投与することは可能であるが、それらを医薬製剤の形態で提示することが好ましい。したがって、本発明はさらに、本発明の結合剤または本明細書で定義されるその薬学的に許容される塩もしくはエステル、およびその薬学的に許容される担体を含む医薬製剤を提供する。医薬製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ２００５，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓに記載されているような従来の技術によって調製することができる。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」とは、生理学的に適合する、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤、および吸収遅延剤などを含む。好ましくは、担体は、非経口、例えば、静脈内、筋内または皮下の投与（例えば、注射または点滴による）に好適である。投与経路に応じて、該結合剤は、ポリペプチドを不活性化または変性させ得る酸および他の自然条件の作用からポリペプチドを保護するための材料でコーティングされてもよい。

任意選択の薬学的に許容される担体は、水性担体または希釈剤を含む。本発明の組成物に用いられ得る好適な水性担体の例としては、水、緩衝水、および生理食塩水が挙げられる。他の担体の例としては、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合に必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。

本発明の組成物はまた、薬学的に許容される抗酸化剤も含み得る。これらの組成物はまた、保存料、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などの補助剤も含有し得る。微生物の存在防止は、前出の滅菌手順によって、および様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによっての両方で確保され得る。糖類、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含むことも望ましい場合がある。加えて、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含めることによって、注射用剤形の長期吸収をもたらすことができる。

治療用組成物は、典型的には、製造および貯蔵の条件下で滅菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬物濃度に好適な他の秩序構造として製剤化することができる。

滅菌注射用溶液は、必要量の活性薬剤（例えば、抗体）を、必要に応じて、上記に列挙した成分のうちの１つと、または組み合わせて、適切な溶媒に取り入れ、続いて滅菌精密濾過によって調製することができる。一般に、分散液は、活性薬剤を、基本的な分散媒および上記に列挙したものから必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに取り入れて調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、その予め滅菌濾過された溶液から活性薬剤の粉末と任意の追加所望成分を得る真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。

一実施形態では、本組成物は、全身投与または局所投与用に製剤化される。局所投与は、腫瘍の部位で、または腫瘍流入領域リンパ節へ投与されてもよい。本組成物は、任意選択で、ある期間にわたる徐放用に製剤化され得る。したがって、本組成物は、徐放を促進する基質中にまたは基質の一部として提供されてもよい。例示的な徐放性基質は、ｍｏｎｔａｎｉｄｅまたはγ－ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）ナノ粒子を含み得る。

本発明の組成物は、本発明の１つ以上の薬剤と同様に、追加の有効成分を含み得ることが当業者には理解されるであろう。

投与経路および投与量
本発明による医薬組成物は、当業者に知られている任意の好適な経路を介して投与され得る。したがって、可能な投与経路は、非経口（静脈内、皮下、および筋内）、局所、眼、鼻、肺、口腔、経口、非経口、膣内および直腸内を含む。また、インプラントからの投与も可能である。

以上で詳述したように、本発明の医薬組成物は、全身投与または局所投与用に製剤化することができる。局所投与は、腫瘍の部位で、または腫瘍流入領域リンパ節へ投与されてもよい。一実施形態において、本組成物は、ある期間にわたる徐放（例えば、１時間以上、例えば、２、３、４、５、６、１２、または２４時間以上）用に製剤化される。

本発明の結合剤および組成物は、治療または予防に使用することができる。治療用途では、結合剤および組成物は、すでに障害または状態に罹患している対象に、状態またはその症状の１つまたは複数を治癒、緩和、または部分的に阻止するのに十分な量で投与される。そのような治療的処置は、疾患症状の重篤度の減少、または無症状期間の頻度もしくは持続時間の増加をもたらし得る。これを達成するのに適切な量は、「治療有効量」として定義される。予防的用途では、結合剤および組成物は、症状の発症を予防または遅延させるのに十分な量で、障害または状態の症状をまだ示していない対象に投与される。そのような量は、「予防有効量」として定義される。対象は、任意の好適な手段によって疾患または状態を発症する危険性があると断定されている場合がある。

本発明の結合剤または組成物の適切な投与量は、熟練医によって決定され得る。本発明の医薬組成物における活性成分の実際の用量レベルは、特定の患者、組成、および投与方式で所望の治療応答を達成するのに有効でありかつ患者に対して毒性がない活性成分量を得るように異なり得る。選択される投与量レベルは、使用される特定の薬剤の活性、投与経路、投与時間、ポリペプチドの排泄速度、治療期間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康状態、および過去の病歴、および医療分野で周知の同様の要因を含む様々な薬物動態学的要因に依存するであろう。

投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整してもよい。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、数回に分けた用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例的に増減してもよい。投与の簡便性および用量の均一性のために、非経口組成物を単位剤形で製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形は、治療対象の単位用量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体とともに所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。

本結合剤および組成物は、単回投与または複数回投与で投与することができる。複数回用量は、同じまたは異なる経路を介して、同じまたは異なる位置に投与してもよい。あるいは、結合剤または組成物は、上記のように徐放性製剤として投与することができ、その場合、より少ない頻度の投与が必要とされる。用量および頻度は、患者のポリペプチドの半減期、および所望の治療期間に応じて異なり得る。投与の用量および頻度もまた、治療が予防的であるかまたは治療的であるかに応じて異なり得る。予防的用途では、比較的低用量を比較的低頻度の間隔で、長期間にわたって投与してもよい。治療的用途では、例えば患者が疾患症状の部分的または完全な改善を示すまで、比較的高用量を投与してもよい。

２つ以上の薬剤の併用投与は、多数の異なる方法で達成され得る。一実施形態において、第１の結合剤および他の薬剤は、単一の組成物で一緒に投与され得る。別の実施形態では、第１の結合剤および他の薬剤は、併用療法の一部として別々の組成物で投与してもよい。

治療、改善、予防、診断または予後のための方法
一態様において、本発明は、少なくとも２つの結合剤、または２エピトープ結合剤；またはポリヌクレオチド、またはベクター、または宿主細胞、または、医薬品として使用するための本明細書に記載の医薬組成物を含む組成物に関する。

一態様において、本発明は、哺乳動物におけるＩＬ１ＲＡＰ関連疾患または障害の治療、改善、予防、診断または予後に使用するための本明細書に記載する少なくとも２つの結合剤または２エピトープ結合剤、またはポリヌクレオチド、またはベクター、または宿主細胞、または医薬組成物を含む組成物に関する。いくつかの実施形態において、該ＩＬ１ＲＡＰ関連疾患または障害は、増殖性障害、自己免疫障害、および自己炎症性障害などの炎症性障害からなる群から選択される。

一実施形態において、本発明は、本明細書に記載の少なくとも２つの結合剤、または２エピトープ結合剤、またはポリヌクレオチド、またはベクター、または宿主細胞、または医薬組成物を含む組成物であって、リウマチ性関節炎、骨関節炎、多発性硬化症、関節硬化症、強皮症（全身性硬化症）、狼瘡、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、（急性）糸球体腎炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、炎症性腸疾患、大腸炎、血管炎、ブドウ膜炎、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、脱毛症、鼻炎（アレルギー）、アレルギー性結膜炎、重症筋無力症、強皮症、サルコイドーシス、乾癬性関節炎、乾癬、強直性脊椎炎、若年性特発性関節炎、グレーブス病、シェーグレン症候群、子宮内膜症、クローン病、ベーチェット病、セリアック病、１型真性糖尿病、グレーブス病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、高免疫グロブリンＤ血症および周期熱症（ＨＩＤＳ）、ＴＮＦ受容体関連周期症候群（ＴＲＡＰＳ）、クリオピリン関連周期症候群（ＣＡＰＳ、マックルウェルズ症候群、家族性寒冷蕁麻疹、新生児期発症など）、多系統炎症性疾患（ＮＯＭＩＤ）、周期性発熱、アフタ性口内炎、咽頭炎および腺炎（ＰＦＡＰＡ症候群）、ブラウ症候群、化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、にきび（ＰＡＰＡ）、インターロイキン１受容体拮抗薬（ＤＩＲＡ）の欠乏、成人－発症スティル病および全身発症若年性特発性関節炎からなる群から選択される疾患または障害の治療、改善、予防、診断または予後に使用するための組成物に関する。

一態様において、本発明は、哺乳動物におけるＩＬ１ＲＡＰ関連疾患または障害の治療、改善、予防、診断または予後において使用するための、本明細書で定義されるＩＬ１ＲＡＰに対する特異性を有する第１の結合剤に関し、該第１の結合剤は、ＩＬ１ＲＡＰに特異性を有する１つ以上のさらなる結合剤と組み合わせて使用するためのものであり、第１およびさらなる結合剤は、ＩＬ１ＲＡＰの少なくとも２つの異なる細胞外ドメインに結合する。

炎症性疾患および障害
一実施形態において、該ＩＬ１ＲＡＰ関連疾患または障害は、炎症性の疾患または障害である。

一実施形態において、該炎症性の疾患または障害は、リウマチ性関節炎、骨関節炎、多発性硬化症、関節硬化症、強皮症（全身性硬化症）、狼瘡、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、（急性）糸球体腎炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、炎症性腸疾患、大腸炎、血管炎、ブドウ膜炎、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、脱毛症、鼻炎（アレルギー）、アレルギー性結膜炎、重症筋無力症、強皮症、サルコイドーシス、乾癬性関節炎、乾癬、強直性脊椎炎、若年性特発性関節炎、グレーブス病、シェーグレン症候群、子宮内膜症、クローン病およびベーチェット病からなる群から選択される。

自己免疫疾患および障害
一実施形態において、該ＩＬ１ＲＡＰ関連疾患または障害は、自己免疫疾患または障害である。

一実施形態において、該自己免疫疾患は、セリアック病、１型糖尿病、グレーブス病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、および全身性紅斑性狼瘡からなる群から選択される。

自己炎症性疾患および障害
一実施形態において、該ＩＬ１ＲＡＰ関連疾患または障害は、自己炎症性疾患または障害である。

一実施形態において、該自己炎症性疾患または障害は、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、高免疫グロブリンＤ血症および周期熱症候群（ＨＩＤＳ）、ＴＮＦ受容体関連周期症候群（ＴＲＡＰＳ）、クリオピリン関連周期症候群（ＣＡＰＳ、マックルウェルズ症候群、家族性寒冷蕁麻疹、および新生児期発症など）、多系統炎症性疾患（ＮＯＭＩＤ）、周期性発熱、アフタ性口内炎、咽頭炎および腺炎（ＰＦＡＰＡ症候群）、ブラウ症候群、化膿性滅菌関節炎、壊疽性膿皮症、にきび（ＰＡＰＡ）、インターロイキン－１受容体拮抗薬（ＤＩＲＡ）の欠乏、成人発症スティル病および全身発症若年性特発性関節炎からなる群から選択される。

腫瘍性障害
一実施形態において、該ＩＬ１ＲＡＰ関連疾患または障害は、哺乳動物の腫瘍性障害である。

一実施形態において、該腫瘍性障害は、前立腺がん、乳がん、肺がん、結腸直腸がん、黒色腫、膀胱がん、脳／ＣＮＳがん、子宮頸がん、食道がん、胃がん、頭頸部がん、腎臓がん、肝臓がん、リンパ腫、卵巣がん、膵臓がん、肉腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される。

Ａ．ＩＬ１ＲＡＰタンパク質に対する例示抗体の結合親和性
（ｉ）Ｂｉａｃｏｒｅ研究－マウス起源の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体
材料および方法
ヤギ抗マウスＩｇＧは、捕捉キットの技術マニュアルおよびＢＩＡｃｏｒｅＴ２００（ＢｉａｃｏｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＥｕｒｏｐｅＧｍｂＨ、スウェーデン、ウプサラ）の標準操作原理に従ってＣＭ５チップに固定化された。

結合分析サイクルは、３つのステップで構成された。すなわち、（ｉ）固定化された抗マウス抗体によるチップ表面でのリガンドの捕捉、（ｉｉ）捕捉されたリガンドへの分析物の結合、および（ｉｉｉ）結合した分析物の解離。

捕捉分子の表面は、メーカーの推奨条件を使用して、各結合サイクルの後に再生された。

すべての結合サイクルは２５℃で実行した。

５サイクルの始動後、サイクルの開始時に各抗体（１００ｎＭ）を３０μｌ／分の流速で１２０秒間注入し、次に、分析対象物（１００ｎＭ）を３０μｌ／分の流速で１２０秒間注入した後、解離相を３００秒間監視した。

本発明の組成物の例示抗体（ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４）を、１つの比較基準である抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（ＣＡＮ０１）とともに試験した。

結果および結論
結果を以下の表２に示す。

本発明の例示抗体であるＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４は、ヒトＩＬ１ＲＡＰに対して高い親和性を示した。

（ｉｉ）ＥＬＩＳＡ研究－マウス起源の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体
材料および方法
間接ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。すべての試料を２回分析した。Ｎｕｎｃ－ＭａｘｉＳｏｒｐ９６ＭｉｃｒｏＷｅｌｌ（商標）プレートを、０．０１ＭＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈した１００ｎｇの組換えｈＩＬ１ＲＡＰ２１－３６７（１００μｌ／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベーションした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（０．０１ＭＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）で洗浄した後、１５０μｌ／ウェルのＥＬＩＳＡブロッキング溶液（ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）を使用してブロッキングステップを行った。撹拌しながら室温（ＲＴ）で１時間インキュベーションした後、ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液を使用してプレートを再度洗浄した。試料をＥＬＩＳＡブロッキング溶液で３倍段階希釈（１０００ｎｇ／ｍｌ～０．５ｎｇ／ｍｌの範囲）で希釈し、ＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／ウェルで移した。プレートを室温で１時間撹拌しながらインキュベーションし、ＥＬＩＳＡ洗浄液で洗浄した。アルカリホスファターゼ（ＤＡＫＯ、１：１０００）に結合したウサギ抗マウスＩｇＧ１００μｌ／ウェルを添加し、室温で１時間撹拌しながらインキュベーションした。プレートを洗浄した後、基質（４－ニトロフェニルは二ナトリウム塩六水和物ホスをリン酸塩にする、ＳＩＧＭＡ、１ｍｇ／ｍｌ）を１００μｌ／ウェルで添加した。その後、プレートを撹拌しながら室温でインキュベーションし、４０５ｎｍでの吸光度を３０分間連続して測定した。０分の吸光度をバックグラウンドシグナルとして採用した。

結果および結論
結果を図１に示す。

例示抗体、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４は、ヒトＩＬ１ＲＡＰに対して最も高い結合シグナルを有することが見出された。

Ｂ．ＩＬ１ＲＡＰ発現細胞への例示抗体の結合
（ｉ）フローサイトメトリー研究－マウス起源の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体
材料および方法
慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞株ＫＵ８１２細胞は、ＩＬ１ＲＡＰまたは関連するアイソタイプ対照に対して産生された抗体で染色した。検出には、二次抗ｍＩｇ－ＡＰＣを使用した。

２つの例示抗体（ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４）を、６つの比較基準の抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（ＣＡＮ０１、ＣＡＮ０２、ＣＡＮ０５、ＣＡＮ０７、ＣＡＮ０８およびＣＡＮ０９）とともに試験した。アイソタイプの陰性対照抗体も含まれていた。

結果および結論
ＩＬ１ＲＡＰを発現するＫＵ８１２白血病細胞を染色すると、アイソタイプ対照およびＩＬ１ＲＡＰを標的とする他の比較基準抗体と比較して、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４の平均蛍光強度（ＭＦＩ）が高いことが示される（図２）。

Ｃ．例示抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のエピトープ／ドメインマッピング
材料および方法
異なる抗体クローンがＩＬ１ＲＡＰのどこに結合するかを理解するために、タンパク質の構造解析を行い、受容体の細胞外部分が、以下ドメイン１、２、および３（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３）と呼ぶ３つの異なるドメインに分割できることを示した（Ｗａｎｇｅｔａｌ．，２０１０，ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１１：９０５－９１２を参照、この開示は参照により本明細書に組み込まれる）。異なる抗体クローンのドメイン結合パターンを決定するために、一連の受容体構築物を生成し、ＥＬＩＳＡアッセイでこれらへの結合を試験した。

間接ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。すべての試料を２回分析した。Ｎｕｎｃ－ＭａｘｉＳｏｒｐ９６ＭｉｃｒｏＷｅｌｌ（商標）プレートは、０．０１ＭＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈した１００ｎｇのＲｅｃｈＩＬ１ＲＡＰＤｏｍａｉｎ１２３（ａａ２１－３６７）（陽性対照）、ＲｅｃｈＩＬ１ＲＡＰＤｏｍａｉｎ１２（ａａ２１－２３４）、Ｄｏｍａｉｎ１（ａａ２１－１３４）、またはＲｅｃｈＩＬ１ＲＡＰＤｏｍａｉｎ３（ａａ２３５－３６７）（１００μｌ／ウェル）でコーティングし、４℃で一晩インキュベーションした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（０．０１ＭＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）で洗浄した後、１５０μｌ／ウェルのＥＬＩＳＡブロッキング溶液（ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）を使用したブロッキングステップを行った。撹拌しながら室温（ＲＴ）で１時間インキュベーションした後、ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液を使用してプレートを再度洗浄した。ＣＡＮ０１、ＣＡＮ０３、ＣＡＮ０４、ＣＡＮ０５、ＣＡＮ０７、ＣＡＮ０８、およびＫＭＴ－１（陽性対照）をＥＬＩＳＡブロッキング溶液で３倍段階希釈（１０００ｎｇ／ｍｌから０．５ｎｇ／ｍｌの範囲）で希釈し、ＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／で移した。プレートを室温で１時間撹拌しながらインキュベーションし、ＥＬＩＳＡ洗浄液で洗浄した。アルカリホスファターゼに結合したウサギ抗マウスＩｇＧ（ＤＡＫＯ、１：１０００）を１００μｌ／ウェルで添加し、室温で１時間撹拌しながらインキュベーションした。プレートを洗浄した後、基質（４－ニトロフェニルは二ナトリウム塩六水和物ホスをリン酸塩にする、ＳＩＧＭＡ、１ｍｇ／ｍｌ）を１００μｌ／ウェルで添加した。その後、プレートを撹拌しながら室温でインキュベーションし、４０５ｎｍでの吸光度を３０分間連続して測定した。０分の吸光度をバックグラウンドシグナルとして採用した。

本発明の組成物の例示抗体（ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４）を、８つの比較基準抗ＩＬ１ＲＡＰモノクローナル抗体（陽性対照としてのポリクローナル抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（ＫＭＴ－１）と一緒にＣＡＮ０１、ＣＡＮ０２、ＣＡＮ０５、ＣＡＮ０７、ＣＡＮ０８、ＣＡＮ１０、およびＣＡＮ１１とともに試験した。

結果および結論
標的検証のために試験した抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の大部分は、ドメイン３（Ｄ３）に結合するが、本発明の例示ＣＡＮ０４抗体はそれがドメイン２（Ｄ２）に結合するという点で異なる。したがって、例示抗体（ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４）は、ＩＬ１ＲＡＰの異なるドメイン（それぞれＤ３およびＤ２）に結合する。ドメインマッピングデータ全体は、以下の表４に要約されている。

Ｄ．例示抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体の特異性／交差反応性
材料および方法
優れたリード候補抗体の重要な特徴は、関連する毒性学種の相同タンパク質と同等またはほぼ同等の効力で交差反応することである。一般的な規制ガイドラインによると、１匹のげっ歯類と１匹の非げっ歯類に結合することが好ましいシナリオであるが、抗体の場合、これが当てはまることはめったになく、むしろ、多くの研究室が、霊長類を除く関連する毒性学種を同定するのに苦闘している。

本研究では、Ｍａｃａｃａｍｕｌａｔｔａ（アカゲザル）またはＭａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル）などの非ヒト霊長類に対する交差反応性が予想された。これらの種のＩＬ１ＲＡＰタンパク質は、ヒトＩＬ１ＲＡＰタンパク質と９９％の相同性を共有しているためである。

いくつかの潜在的なリード抗体が選択され、ＥＬＩＳＡアッセイで組換えＭ．ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓＩＬ１ＲＡＰ（ａａ２１－３６７）への結合について試験された。

例示抗体（ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４）は、７つの比較基準抗ＩＬ１ＲＡＰモノクローナル抗体（ＣＡＮ０１、ＣＡＮ０２、ＣＡＮ０７、ＣＡＮ０８、ＣＡＮ０９、Ｒ＆ＤのＭａｂ６７６、およびポリクローナル抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体（ＫＭＴ－１）とともに試験された。

結果および結論
意外にも、試験された比較基準抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体のいくつかは、カニクイザルＩＬ１ＲＡＰと交差反応しないことがわかった。その中には、Ｒ＆Ｄの市販の参照抗体ｍＡｂ６７６がある（表５）。ただし、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４はどちらもカニクイザルタンパク質と反応する。

Ｅ．例示抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体によるＩＬ－１β、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６αのシグナル伝達の阻害
（ｉ）ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１β細胞株におけるＩＬ－１およびＩＬ－３３のシグナル伝達に及ぼす異なる抗体および抗体の組み合わせの影響
材料および方法
ＩＬ１ＲＡＰはＩＬ－１およびＩＬ－３３受容体複合体の両方の機能部分であるため、ＩＬ１ＲＡＰに結合する抗体もＩＬ－１およびＩＬ－３３のシグナル伝達を阻害する可能性がある。

ＩＬ－１およびＩＬ－３３のシグナル伝達を遮断する潜在的なリード候補抗体の能力を試験するために、ＩＬ－１およびＩＬ－３３依存性レポーター遺伝子アッセイを設定した。ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）は、比色分析によって定量化できるアルカリホスファターゼの放出により、ＩＬ－１またはＩＬ－３３のシグナル伝達に応答する。リード候補の阻害能力を試験するために、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞を５００００細胞／ウェルで播種し、各リガンドごとに０．３ｎｇ／ｍｌのアッセイでの最終濃度で、ＩＬ－１βまたはＩＬ－３３で刺激する４５分前に試験抗体とインキュベーションした。抗体の最終アッセイ濃度は２００ｎＭ～０．０１ｎＭであった。対照ウェルでは、抗体をＰＢＳに置き換えた。細胞を、放出されるアルカリホスファターゼの量を測定する前に３７℃で一晩インキュベーションした。

本発明の例示抗体（ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４）を、ＩＬ－１βおよびＩＬ－３３のシグナル伝達阻害について単独でおよび１：１の組み合わせで試験した。

結果および結論
図３Ａに示されるように、例示抗体ＣＡＮ０４は、ＩＬ－１βシグナル伝達の明白な阻害を誘導した。例示抗体ＣＡＮ０３もシグナル伝達を阻害したが、ＣＡＮ０４よりも効力が低かった。ＣＡＮ０４とＣＡＮ０３を組み合わせた場合、ＣＡＮ０４単独と同様の阻害が検出された。

ＩＬ－１βシグナル伝達の阻害とは対照的に、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４は、単独投与の場合、ＩＬ－３３シグナル伝達を完全には阻害しなかった。両抗体は同等の効力でシグナル伝達を遮断したが、シグナルの約７０％（ＣＡＮ０３）または約５０％（ＣＡＮ０４）しか阻害できなかった（図３Ｂ）。しかし、意外にも、ＣＡＮ０３とＣＡＮ０４（１：１）の組み合わせは、シグナルを１００％阻害し、各抗体単独と比較してより強力であった。したがって、ＩＬ１ＲＡＰの異なるドメインに結合する２つの抗体（ＣＡＮ０３がＤ３、ＣＡＮ０４がＤ２）は、相乗的に作用してＩＬ１ＲＡＰシグナル伝達を阻害する。

（ｉｉ）ＩＬ－１Ｒｒｐ２をトランスフェクションしたＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１β細胞株におけるＩＬ－３６シグナル伝達に及ぼす異なる抗体および抗体の組み合わせの影響
材料および方法
ＩＬ１ＲＡＰは両方のＩＬ－３６受容体複合体の機能部分でもあるため、ＩＬ１ＲＡＰに結合する抗体もＩＬ－３６シグナル伝達を阻害する可能性がある。

ＨＥＫ－ブルーＩＬ－３３／ＩＬ－１βシステム（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）は、ＩＬ－３６受容体（ＩＬ１Ｒｒｐ２）を欠いているため、ＩＬ－３６に応答しない。ＩＬ－３６シグナル伝達を遮断する潜在的なリード候補抗体の能力を試験するために、ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１βシステムは、ＩＬ－３６で誘導されるレポーター遺伝子の発現を可能にするＩＬ１Ｒｒｐ２（ＩＬ３６受容体）でのトランスフェクションによって改変された。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞は、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してＩＬ１Ｒｒｐ２発現ベクターで一過性にトランスフェクションされ、２４時間培養し、５００００細胞／ウェルで播種し、異なる濃度のＩＬ－３６αで刺激する４５分前に試験抗体とインキュベーションした。抗体のアッセイ濃度は、０．１、１、および１０μｇ／ｍｌであった。対照ウェルでは、抗体をＰＢＳに置き換えた。細胞を、放出されるアルカリホスファターゼの量を測定する前に３７℃で一晩インキュベーションした。

例示抗体（ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４）は、シグナル伝達の阻害について、単独および１：１の組み合わせで試験した。

結果および結論
図４Ａおよび図４Ｂに示されるように、例示抗体ＣＡＮ０４は、それ自体で、ＩＬ－３６αシグナル伝達の中程度の阻害を１ｎｇ／ｍｌＩＬ－３６αで誘導し、１０ｎｇ／ｍｌＩＬ－３６αではほとんど阻害されなかった。例示抗体ＣＡＮ０３は、それ自体では、これらの濃度のＩＬ－３６αでシグナル伝達を阻害しなかった。ただし、ＣＡＮ０３とＣＡＮ０４（１：１）の組み合わせは、各抗体単独と比較してより強力であり、ＩＬ－３６αシグナルの相乗的阻害をもたらした。したがって、ＩＬ－３６シグナル伝達についても、ＩＬ１ＲＡＰの異なるドメインに結合する２つの抗体が相乗的に作用して、ＩＬ１ＲＡＰシグナル伝達を阻害する。

（ｉｉｉ）細胞株における効果
材料および方法
がん細胞モデルにおいてＩＬ１ＲＡＰ依存性シグナル伝達を阻害する能力を試験するために、ＩＬ－１依存性細胞アッセイを設定した。ＩＬ１ＲＡＰを発現する乳がん細胞株Ｈｓ５７８Ｔは、ＩＬ－６産生によるＩＬ－１β刺激に応答し、例示抗体およびアイソタイプ対照の阻害効果を試験するために使用された。細胞を１２ウェルプレートに２００００細胞／ウェルで播種し、０．１ｎｇ／ｍｌＩＬ１βと２４時間インキュベーションした。上清中のＩＬ－６をＥＬＩＳＡで測定した。細胞は、示された抗体の有無にかかわらずインキュベーションされ、ＩＬ－１βで刺激された。抗体の最終アッセイ濃度は１０μｇ／ｍｌであった（単独で試験した場合は各抗体を１０μｇ／ｍｌ、１：１の組み合わせで試験した場合は各抗体を５μｇ／ｍｌ）。

結果および結論
図５に示すように、１０μｇ／ｍｌのＣＡＮ０４またはＣＡＮ０３の存在下でのＩＬ－１による刺激βは、２４時間後にＩＬ－６産生が５０％（ＣＡＮ０４）または３０％（ＣＡＮ０３）阻害されたが、アイソタイプ対照抗体は効果がなかった。実施例ＤのＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１βシステムと同様に、ＣＡＮ０４とＣＡＮ０３の組み合わせ（５μｇ／ｍｌＣＡＮ０４＋５μｇ／ｍｌＣＡＮ０３）は相乗的増加をもたらし、シグナル伝達の９０％が阻害できた。したがって、ＣＡＮ０３およびＣＡＮ０４は、組み合わせた場合、相乗的に作用して、乳がん細胞株におけるＩＬ－１β刺激に対する自然な反応を低下させる。

Ｆ．ＩＬ１ＲＡＰのドメイン１、２、および３に対する抗体のスクリーニング
（ｉ）ＩＬ１ＲＡＰへの結合についてのスクリーニング
ＩＬ１ＲＡＰに対して生成した抗体は、ＩＬ１ＲＡＰへの結合について上記の実施例Ａ（ｉｉ）のようにスクリーニングされ、続いて、高レベルの細胞表面ＩＬ１ＲＡＰを発現する細胞（ＫＵ８１２ＣＭＬ細胞またはＳＫ－ＭＥＬ－５黒色腫細胞など）への結合について実施例Ｂ（ｉ）のようにスクリーニングされる。
（ｉｉ）異なるドメインへの結合の分析
ＩＬ１ＲＡＰと反応する抗体は、実施例Ｃに記載されるように、Ｄ１、Ｄ２およびＤ３との相互作用について試験される。
（ｉｉｉ）ＥＬＩＳＡによる競合的結合の分析
ＣＡＮ０３（Ｄ３）またはＣＡＮ０４（Ｄ４）と同様のＩＬ１ＲＡＰ領域への結合を確認するために、以下に説明するように競合ＥＬＩＳＡを実施できる。

プロトコル
・すべての試料は重複して分析される。
・Ｎｕｎｃ－ＭａｘｉＳｏｒｐ９６ＭｉｃｒｏＷｅｌｌ（商標）プレートを、０．０１ＭＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈した１００ｕｌ／ウェルの組換えｈＩＬ１ＲＡＰ２１－３６７（１ｕｇ／ｍｌ）でコーティングする。
・プレートを４℃で一晩インキュベーションする。
・ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液でプレートを洗浄する
（０．０１ＭＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）。
・１５０μｌ／ウェルのＥＬＩＳＡブロッキング溶液を添加する
（ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４）。
・プレートを撹拌しながら室温（ＲＴ）で１時間インキュベーションする。
・ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液でプレートを洗浄する。
・試験項目の試料（例えば、ｍＡｂ１、ｍＡｂ２）をウェル（１００ｕｌ／ウェル、１０ｕｇ／ｍｌ）に添加する。
・プレートを室温で１時間インキュベーションする。
・ＥＬＩＳＡ洗浄液でプレートを洗浄する。
・参照抗体ＣＡＮ０３またはＣＡＮ０４（１００ｕｌ／ウェル、１ｕｇ／ｍｌ）の溶液を全ウェルに添加する。
・プレートを室温で１時間インキュベーションする。
・ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液でプレートを洗浄する。
・アルカリホスファターゼに結合したアルカリ性ウサギ抗マウスＩｇＧに結合した適切な二次抗体を１００μｌ／ウェルで添加する（試験項目がヒト抗体である場合、適切な二次抗体はヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ特異的）－アルカリホスファターゼ抗体になる、ＳＩＧＭＡ、Ａ１４１８）。
・プレートを撹拌しながら室温で１時間インキュベーションする。
・プレートを洗浄緩衝液で洗浄する。
・ウェルあたり１００μｌのｐＮＰＰ基質を添加する
（４－ニトロフェニルは二ナトリウム塩六水和物ホスをリン酸塩にする、ＳＩＧＭＡ、１ｍｇ／ｍｌ）。
・プレートを室温で撹拌しながらインキュベーションし、４０５ｎｍでの吸光度を３０分間連続して測定する。０分の吸光度をバックグラウンドシグナルとして採用する。

Ｇ．抗体の親和性成熟
ＩＬ１ＲＡＰに対して生成し、ＩＬ１ＲＡＰおよびＤ２またはＤ３にそれぞれ結合するために選択された抗体は、親和性を高めるために「親和性成熟」している可能性がある。

親和性成熟抗体は、当技術分野で知られている手順によって産生される。これらの方法の多くは、変異誘発とそれに続く改善された親和性の選択および／またはスクリーニングによって、変異タンパク質のパネルまたはライブラリーを生成するという一般的な戦略に基づいている。変異誘発は、例えばエラープローンＰＣＲ（Ｔｈｉｅ，Ｖｏｅｄｉｓｃｈｅｔａｌ．２００９，ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ５２５：３０９－３２２）により、遺伝子シャッフリング（ＫｏｌｋｍａｎａｎｄＳｔｅｍｍｅｒ２００１，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｍａｙ；１９（５）：４２３－８）により、変異原性化学物質または照射の使用、エラープローン複製機構を備えた「ミューテーター」株の使用（Ｇｒｅｅｎｅｒ１９９６，ＩｎＶｉｔｒｏＭｕｔａｇｅｎｅｓｉｓＰｒｏｔｏｃｏｌｓ．Ｈｕｍａｎａｐｒｅｓｓ，ＮＪ）または自然の親和性成熟機構を利用する体細胞超変異アプローチ（Ｐｅｌｅｄ，Ｋｕａｎｇｅｔａｌ．２００８，ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ．２６：４８１－５１１）により実施される場合が多い。変異誘発は、例えば、Ｑ１３レプリカーゼを使用することにより、ＲＮＡレベルで実施することもできる（Ｋｏｐｓｉｄａｓ，Ｒｏｂｅｒｔｓｅｔａｌ．２００６，ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ．２００６Ｎｏｖ．１５；１０７（２）：１６３－８）。ＨＶＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、Ｂａｒｂａｓｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：３８０９－１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒｅｔａｌ．Ｇｅｎｅ１６９：１４７－５５（１９９５）、Ｙｅｌｔｏｎｅｔａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４－２００４（１９９５）、Ｊａｃｋｓｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０－１９（１９９５）、およびＨａｗｋｉｎｓｅｔａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－９６（１９９２）；Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｈａｗｋｉｎｓ，ＡｆｆｉｎｉｔｙＭａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＵｓｉｎｇＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙ，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ１９９６に記載されている。

改良された変異タンパク質のスクリーニングを可能にするライブラリー系の方法は、ファージ、酵母、リボソーム、細菌または哺乳動物細胞などの様々なディスプレイ技術に基づくことができ、当技術分野で周知である（Ｂｅｎｈａｒ２００７，ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＢｉｏｌＴｈｅｒ．Ｍａｙ；７（５）：７６３－７９）。親和性の成熟は、より定方向／予測的な方法によって、例えば、部位特異的変異誘発または３Ｄタンパク質モデリングからの知見によって導かれる遺伝子合成によって、達成することができる（例えば、Ｑｕｅｅｎ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒｅｔａｌ．１９８９，ＰＮＡＳ，８６（２４）：１００２９－３３または米国特許第６，１８０，３７０号または米国特許第５，２２５，５３９号を参照）。

Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：７７９－８３（１９９２）には、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載されている。

Ｈ．ＩＬ１ＲＡＰの異なるドメインに結合するための２エピトープ抗体の産生
材料および方法
二重特異性抗体２Ｃ９ｘ３Ｆ８は、Ｌａｂｒｉｊｎら（ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．２０１３Ｍａｒ２６；１１０（１３）：５１４５－５１５０）によって記述された制御Ｆａｂアーム交換（ｃＦＡＥ）によって産生された。このプロセスは、２つの別個の親抗体の発現を伴い、それぞれが各ＣＨ３ドメインに単一点変異のＦ４０５ＬおよびＫ４０９Ｒを含む（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）に記載されるようなＥＵ付番協定）。親抗体を混合し、抗体を重鎖／軽鎖半分子（Ｆａｂアーム）に分離するインビトロの制御された還元条件に曝した。再酸化後、Ｆａｂアームは再構築される。上記で説明したように、抗体ＣＨ３ドメインの点変異は、高純度のｂｓＡｂｓが形成されるように再構築プロセスに影響を及ぼす。

ｂｓａｂ２Ｃ９ｘ３Ｆ８の場合、親抗体は、ｃｈ２Ｃ９（ＣＡＮ０３を表す）およびｈｕ３Ｆ８（ＣＡＮ０４を表す）であった。ｃｈ２Ｃ９は、マウスのＶＬおよびＶＨならびにヒト定常部分（ＩｇＧ１／カッパ）を含むキメラモノクローナル抗体である。ｈｕ３Ｆ８は、ヒト化ＩｇＧ１／カッパモノクローナル抗体である。ｐ２Ｃ９Ｈ４ｈＧ１は、哺乳類細胞でｃｈ２Ｃ９重鎖を発現させるために必要なすべての遺伝的要素を含む発現ベクターである。点変異Ｆ４０５Ｌは、ｐ２Ｃ９Ｈ４ｈＧ１に導入され、新しい発現ベクターは、ｐ２Ｃ９－ＨＣ－ｈＩｇＧ１－Ｆ４０５Ｌと命名された。ｐ３Ｆ８－ＶＨ－ｖ２は、哺乳類細胞でｈｕ３Ｆ８重鎖を発現させるために必要なすべての遺伝的要素を含む発現ベクターである。点変異Ｋ４０９Ｒは、ｐ３Ｆ８－ＶＨ－ｖ２に導入され、新しい発現ベクターは、ｐ３Ｆ８－ＨＣ－ｈＩｇＧ１－Ｋ４０９Ｒと命名された。ｐ２Ｃ９Ｋ９ｈＫは、哺乳類細胞でｃｈ２Ｃ９軽鎖を発現するために必要なすべての遺伝的要素を含む発現ベクターであり、ｐ３Ｆ８－ＶＬ－ｖ２は、哺乳類細胞でｈｕ３Ｆ８軽鎖を発現させるために必要なすべての遺伝的要素を含む発現ベクターである。

変異誘発：Ｆ４０５ＬまたはＫ４０９Ｒ変異を導入するために、ｐ２Ｃ９Ｈ４ｈＧ１およびｐ３Ｆ８－ＶＨ－ｖ２をＢｓｔＥＩＩおよびＮｓｉＩで二重消化し、点変異を含む合成遺伝子ストリング（Ｇｅｎｅａｒｔ）をＩｎ－Ｆｕｓｉｏｎクローニング方法（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）により線状化ベクターにクローニングした。

抗体産生：ｃｈ２Ｃ９－Ｆ４０５Ｌおよびｈｕ３Ｆ８－Ｋ４０９Ｒモノクローナル抗体は、メーカーの指示に従って、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３Ｆ細胞（ＬｉｆｅＴｅｃｈｏｌｏｇｉｅｓ）で関連する重鎖および軽鎖の発現ベクターをコトランスフェクションすることによって産生された。下記のベクターを使用した：ｃｈ２Ｃ９－Ｆ４０５Ｌ、ＨＣベクターｐ２Ｃ９－ＨＣ－ｈＩｇＧ１－Ｆ４０５ＬおよびＬＣベクターｐ２Ｃ９Ｋ９ｈＫ、ｈｕ３Ｆ８－Ｋ４０９Ｒ、ＨＣベクターｐ３Ｆ８－ＨＣ－ｈＩｇＧ１－Ｋ４０９ＲおよびＬＣベクターｐ３Ｆ８－ＶＬ－ｖ２。

精製：抗体はタンパク質Ａアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。細胞培養上清をＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）にアプライし、ＰＢＳで洗浄し、０．１Ｍグリシン、ｐＨ３．０で溶出した。溶出液は、１．０ＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ９．０による画分収集中に直接中和された。精製直後に、ＰＤ－１０カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いたゲル濾過により、緩衝液をＰＢＳ、ｐＨ７．４に交換した。純度はＳＤＳ－ＰＡＧＥで測定し、濃度は２８０ｎｍでの吸光度で測定した。精製抗体は４℃で保存した。

制御されたＦａｂアーム交換：二重特異性抗体は、等モル量のｃｈ２Ｃ９－Ｆ４０５Ｌおよびｈｕ３Ｆ８－Ｋ４０９Ｒを、７５ｍＭ２－メルカプトエチルアミン－ＨＣＬ（２－ＭＡＥ、Ｓｉｇｍａ）の存在下で、それぞれ０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度に混合した化学反応により生成し、３１℃で５時間インキュベーションした。限外濾過（Ｖｉｖａ－ｓｐｉｎ６，１０ｋＤａ、Ｓａｔｏｒｉｕｓ）により２－ＭＡＥを除去した後、ジスルフィド結合の再酸化を可能にするため、試料を４℃で一晩保存した。

結果および結論
本実施例は、ＩＬ１ＲＡＰの２つの異なるドメインに対して純粋な抗体を生成できることを証明する。

Ｉ．単一特異性抗体および２エピトープ抗体のヒト化
ヒトの治療に非ヒト抗体を使用することは必ずしも望ましいとは限らないため、本発明による抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体であり得る。

ヒト化は、例えば、Ｗｉｎｔｅｒと共同研究社の方法に従うことによって（Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８））、げっ歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置き換えられることによって、実施される（米国特許第５，２２５，５３９号も参照）。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。ヒト化抗体はまた、例えば、レシピエント抗体にも、インポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られない残基を含む。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ここで、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれを含む（Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，１９８６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，１９８８；ａｎｄＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３－５９６（１９９２））。

Ｊ．二重特異性または単一特異性抗体の組み合わせのインビトロ活性およびインビボ活性
単一特異性抗体、単一特異性抗体の組み合わせ、または二重特異性抗体は、ＩＬ－１、ＩＬ－３３またはＩＬ－３６のシグナル伝達の阻害について、実施例Ｅに記載のＨＥＫシステムで試験することができる。単一特異性抗体、単一特異性抗体の組み合わせまたは二重特異性抗体はまた、細胞株（例えば実施例Ｅのように）または適切な受容体を有する初代細胞におけるＩＬ－１、ＩＬ－３３またはＩＬ－３６のシグナル伝達の阻害について試験され得る。後者のシステムでの読み出しは、細胞内シグナル伝達経路（ＮＦκＢを含む）または下流のサイトカインまたは他の誘導タンパク質の活性化である可能性がある。

単一特異性抗体、単一特異性抗体の組み合わせまたは二重特異性抗体もまた、エクスビボでのヒト細胞のＬＰＳ誘発性炎症の阻害について試験することができる。ＬＰＳは、単一特異性抗体、単一特異性抗体の組み合わせまたは二重特異性抗体の不在下または存在下で２ｘ１０^５のヒトＰＢＭＣに投与され、上清は、３７℃で６、２４および４８時間のインキュベーション後、ＩＬ－６および他のサイトカイン（ＩＬ－１β、ＴＮＦαおよびＩＬ－８など）について分析される。このシステムでＩＬ－１シグナル伝達を遮断すると、炎症性シグナル伝達およびＩＬ－６などのサイトカインの分泌が減少する。

単一特異性抗体、単一特異性抗体の組み合わせまたは二重特異性抗体はまた、インビボでＩＬ－１、ＩＬ－３３および／またはＩＬ－３６依存性疾患モデルで試験することができる。そのような例の１つは、乾癬の異種移植モデルであり、例えばＷＯ第２０１３／０７４５６９号に記載されているように実施され、乾癬患者からのヒト皮膚生検が免疫不全マウス（例えば、ＳＣＩＤマウス）に移植され、少なくとも４週間生着させられる。移植された移植片は、治療効果の尺度として使用できる表皮肥厚などの特徴を含む、乾癬に類似した組織学的特徴を示す。炎症および乾癬の病理学的特徴を増加させるために、ドナーの乾癬プラークに由来する自己Ｔ細胞を、移植マウスに皮内または静脈内投与することができる。Ｔ細胞の注射の代替手段は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓエンテロトキシン（ＳＥＢおよび／またはＳＥＣ）およびＩＬ－２で刺激された自己ＰＢＭＣの皮内注射である。細胞を注入してから数週間後、移植片を組織学で分析し、表皮の厚さを測定し、治療効果を計算する。本発明に適用可能な他の乾癬モデルは、Ｇｕｄｊｏｎｓｓｏｎｅｔａｌ（２００７）ＪＩｎｖｅｓｔＤｅｒ，１２７：１２９２－１３０８およびＫｕｎｄｕ－Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉｅｔａｌ（２０１４）ＩｎｄｉａｎＪＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｖｅｎｅｒｅｏｌｏｇｙ，ａｎｄＬｅｐｒｏｌｏｇｙ８０（３）：２０４－２１３に記載されている。

材料
下記の研究は、モノエピトープ抗体ＣＡＮ０４および２エピトープ抗体ｂｓＡＣＡＮ０３ｘＣＡＮ０４がＩＬ－１βおよびＩＬ－３３のシグナル伝達を阻害することができるか否かを決定するために実施された。

抗体の調製
試験のために、すべての抗体をＰＢＳで希釈した。レポーター遺伝子アッセイの希釈標準溶液、ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１βは、ＰＢＳで２０倍に最終アッセイ濃度で作成した。最終的なアッセイ容量は２００μｌ（１０μｌの抗体または希釈液（ＰＢＳ）＋１８０μｌの細胞＋１０μｌのリガンドを含む）であった。抗体の最終アッセイ濃度は、次の通りであり、１０～０．０００１ｎＭ（３倍希釈ステップでの段階希釈による）であった。

ヒトリガンド（ＩＬ－１βおよびＩＬ－３３）の調製
ＩＬ－１βおよびＩＬ－３３は、ＰＢＳで１０μｇ／ｍＬのストック濃度に希釈した。１０μｇ／ｍＬのリガンドのストック濃度は、使用するまで－８０℃でアリコートで保存した。レポーター遺伝子アッセイでは、リガンドを最終濃度１００ｎｇ／ｍＬ（ｈＩＬ－１β）および２ｎｇ／ｍＬ（ｈＩＬ－３３）で使用し、これらの濃度は、試験前の実験で決定されたように、アッセイで最大効果の７０－８０％を与えた。

最終アッセイ濃度へのリガンドの希釈
（ａ）ｈＩＬ－１β、１００ｎｇ／ｍＬ
・リガンドのストック１０μｇ／ｍＬを１：５に希釈した（２００μｌ＋８００μｌ選択培地、以下を参照）＝２０００ｎｇ／ｍＬ。
・アッセイでは２０００ｎｇ／ｍＬを１：２０に希釈し、１０μｌのＬＰＳ２０００ｎｇ／ｍＬ＋１９０μｌの細胞および化合物／ウェルで１００ｎｇ／ｍＬの最終濃度を得た。
（ｂ）ｈＩＬ－３３、２ｎｇ／ｍＬ
・リガンドのストック１０μｇ／ｍＬを１：２５０に希釈した（１０μｌ＋２４９０μｌ選択培地、以下を参照）＝４０ｎｇ／ｍＬ。
・アッセイでは４０ｎｇ／ｍＬを１：２０に希釈し、１０μｌのＬＰＳ２００ｎｇ／ｍＬ＋１９０μｌの細胞および化合物／ウェルで２ｎｇ／ｍＬの最終濃度を得た。

細胞株
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ－１β細胞にＩＬ１ＲＬ１を安定的にトランスフェクションすることにより生成したＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１β細胞をＩＬ－３３／ＩＬ－１βセンサー細胞として使用した（カタログ番号ｈｋｂ－ＩＬ－３３、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、サンディエゴ、米国）。

方法
研究デザイン
抗体のストック溶液はＰＢＳで調製した。レポーター遺伝子アッセイの希釈標準溶液、ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１βは、ＰＢＳで２０倍に最終アッセイ濃度で作成された。最終的なアッセイ容量は２００μｌ（１０μｌの抗体または希釈液（ＰＢＳ）＋１８０μｌの細胞＋１０μｌのリガンドを含む）であった。抗体の最終アッセイ濃度は次の通りであり、１０～０．０００１ｎＭであった（３倍希釈ステップでの段階希釈による。対照ウェル（刺激／非刺激細胞）では、抗体を１０μｌのＰＢＳに置き換えた。

ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１β細胞の培養および刺激
ＩＬ１ＲＡＰはＩＬ－１受容体複合体の機能部分であるため、ＩＬ１ＲＡＰに結合する抗体はＩＬ－１シグナル伝達を阻害する潜在力を有する。腫瘍細胞は、ＩＬ－１βおよびＩＬ－３３などのＩＬ１ＲＡＰ依存性リガンドを成長因子として使用することが報告されているため、このシグナルを遮断すると、抗腫瘍効果を媒介するための重要なメカニズムが提供される可能性がある（個別にあるいはＡＤＣＣ効果と組み合わせて）。ＩＬ－１シグナル伝達を遮断する抗体の能力を試験するために、ＩＬ－１依存性レポーター遺伝子アッセイを設定した。ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）は、比色分析によって定量化できるアルカリホスファターゼの放出により、ＩＬ－１シグナル伝達に応答する。リード候補の阻害能力を試験するために、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞を５００００細胞／ウェルで播種し、最適な刺激を与えるための最終濃度でヒトＩＬ－１α、ＩＬ－１β、およびＩＬ－３３で刺激する４５分前に試験抗体とインキュベーションした。抗体の最終アッセイ濃度は、１０ｎＭ～０．０００１ｎＭであった。対照ウェルでは、抗体をＰＢＳに置き換えた。アルカリホスファターゼの検出および定量化のため、ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ－培地から放出されるアルカリホスファターゼの量を測定する前に、細胞を３７℃で一晩インキュベーションした。

ＨＥＫ－ＢｌｕｅＩＬ－３３／ＩＬ－１β細胞を解凍し、ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ（ＨＩ）、およびＰＥＳＴおよびノルモシンで２継代培養した。２継代後、実験前および実験中の少なくとも１継代の間、上記の培地に選択抗生物質（Ｚｅｏｃｉｎ、ＨｙｇｒｏＧｏｌｄ、およびＢｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ）を添加して細胞を培養した。ＨｙｇｒｏＧｏｌｄは細胞株に対するＩＬ－１βの特異性を維持するために必要であり、ＢｌａｓｔｉｃｉｄｉｎおよびＺｅｏｃｉｎは、ＩＬ１ＲＬ１とＳＥＡＰをそれぞれコードするプラスミドを維持するために必要である。実験は、７０％の集密度の細胞で行った。細胞は週に２～３回、または８０～９０％の集密度に達したときに分割した。

リガンドは、３００ｎｇ／ｍｌから０．０１ｎｇ／ｍｌの用量範囲で滴定した。ＩＬ－１シグナル伝達に影響を及ぼす（アルカリホスファターゼ放出の量を刺激または阻害する）抗体の能力を試験するための優れたアッセイを生成するには、用量反応曲線の線形勾配でロバストなシグナルをもたらす濃度が好ましい。このシステムでは、ｈＩＬ－１βの場合は１００ｎｇ／ｍＬ、ｈＩＬ－３３の場合は２ｎｇ／ｍＬの濃度が選択された。

結果の評価
式１を使用して、生データを％阻害に変換した。

％抑制＝（１－（Ａ－Ｂ）／（Ｃ－Ｂ））ｘ１００
式中、
Ａ＝ＰＢＳに溶解した化合物を添加した場合のリガンド活性
Ｂ＝陰性対照、リガンドなし、ＰＢＳのみ（ビヒクル）
Ｃ＝陽性対照、ＰＢＳを含むリガンド（ビヒクル）、
ＩＣ５０は、最大応答を５０％阻害する濃度を表す。

ＥＣ５０は、曲線の頂部および底部の計算値に対して５０％の阻害を表す阻害をもたらす濃度を表す。

結論および結果
本実施例は、モノエピトープ抗体ＣＡＮ０４および２エピトープｂｓＡＣＡＮ０３ｘＣＡＮ０４がＩＬ－１βシグナル伝達を完全に遮断することを証明している。ＣＡＮ０４もＩＬ－３３シグナル伝達を阻害するが、部分的な有効性である。ただし、２エピトープｂｓＡＣＡＮ０３ｘＣＡＮ０４抗体は、図６に示すように、ＩＬ－３３シグナル伝達の完全な阻害を可能にする。

配列の概要
配列番号１：ＣＡＮ０４変異体６可変軽鎖（ＶＬ）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＧＬＨＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＳＩＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号２：ＣＡＮ０４可変軽鎖（ＶＬ）ＶＬ１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＧＬＨＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＳＩＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３：ＣＡＮ０４可変軽鎖（ＶＬ）ＶＬ３
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＧＬＨＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＳＩＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号４：ＣＡＮ０４変異体６可変重鎖（ＶＨ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＳＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＧＥＧＹＬＤＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５：ＣＡＮ０４可変重鎖（ＶＨ）ＶＨ１ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＳＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＧＥＧＹＬＤＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６：ＣＡＮ０４可変重鎖（ＶＨ）ＶＨ３
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＳＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＤＧＱＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＧＥＧＹＬＤＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号７：ＣＡＮ０４可変重鎖（ＶＨ）ＶＨ４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＳＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＤＧＱＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＧＥＧＹＬＤＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号８：ＣＡＮ０４変異体６軽鎖ＣＤＲ１（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＳＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ
配列番号９：ＣＡＮ０４変異体６軽鎖ＣＤＲ２（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＹＴＳＧＬＨＡＧＶ
配列番号１０：ＣＡＮ０４変異体６軽鎖ＣＤＲ３（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＱＱＹＳＩＬＰＷＴ
配列番号１１：ＣＡＮ０４変異体６重鎖ＣＤＲ１（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＧＹＡＦＴＳＳＳＷＭＮ
配列番号１２：ＣＡＮ０４変異体６重鎖ＣＤＲ２（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号１３：ＣＡＮ０４変異体６重鎖ＣＤＲ３（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＧＹＬＤＰＭＤＹ
配列番号１４：ＣＡＮ０３可変軽鎖（ＶＬ）
ＤＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳＦＳＣＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨＷＹＱＲＲＴＮＧＳＰＲＬＬＩＫＳＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＴＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ
配列番号１５：ＣＡＮ０３可変重鎖（ＶＨ）
ＤＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＳＲＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
配列番号１６：ＣＡＮ０３軽鎖ＣＤＲ１（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ
配列番号１７：ＣＡＮ０３軽鎖ＣＤＲ２（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＳＡＳＥＳＩＳ
配列番号１８：ＣＡＮ０３軽鎖ＣＤＲ３（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＱＱＳＮＳＷＰＴＴ
配列番号１９：ＣＡＮ０３重鎖ＣＤＲ１（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳ
配列番号２０：ＣＡＮ０３重鎖ＣＤＲ２（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧ
配列番号２１：ＣＡＮ０３重鎖ＣＤＲ３（Ｃｈｏｔｉａによる）
ＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹ
配列番号２２：ＣＡＮ０４変異体６可変軽鎖ＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）
ＹＴＳＧＬＨＡ
配列番号２３：ＣＡＮ０４変異体６可変軽鎖ＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）
ＱＹＳＩＬＰＷＴ
配列番号２４：ＣＡＮ０４変異体６可変重鎖ＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）
ＧＹＡＦＴＳＳ
配列番号２５：ＣＡＮ０４変異体６可変重鎖ＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）
ＹＰＧＤＧＮ
配列番号２６：ＣＡＮ０３可変軽鎖ＣＤＲ３（Ｋａｂａｔによる）
ＱＳＮＳＷＰＴＴ
配列番号２７：ＣＡＮ０３可変重鎖ＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）
ＧＦＴＦＳＩＹ
配列番号２８：ＣＡＮ０３可変重鎖ＣＤＲ２（Ｋａｂａｔによる）
ＳＩＧＧＳＹ
配列番号２９：ＣＡＮ０４変異体６軽鎖ＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）
ＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ
配列番号３０：ＣＡＮ０３軽鎖ＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによる）
ＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ
配列番号３１：ＣＡＮ０４重鎖定常領域
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３２：ＣＡＮ０４軽鎖定常領域
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３３：ＣＡＮ０３重鎖定常領域、Ｉｇガンマ－１鎖Ｃ領域（ホモサピエンス）（ＵｎｉｔＰｒｏｔ登録番号Ｐ０１８５７）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ
配列番号３４：ＣＡＮ０３軽鎖定常領域、Ｉｇカッパ鎖Ｃ領域（ホモサピエンス）（ＵｎｉｔＰｒｏｔ登録番号Ｐ０１８３４）
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３５：＞ｈｕ３Ｆ８－ＨＣ－ｈＩｇＧ１－Ｋ４０９Ｒ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＳＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＧＥＧＹＬＤＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３６：＞ｈｕ３Ｆ８－ＬＣ－ｈｋ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＧＬＨＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＳＩＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３７：＞ｃｈ２Ｃ９－ＨＣ－ｈＩｇＧ１－Ｆ４０５Ｌ
ＤＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＳＲＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３８：＞ｃｈ２Ｃ９－ＬＣ－ｈｋ
ＤＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳＦＳＣＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨＷＹＱＲＲＴＮＧＳＰＲＬＬＩＫＳＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＴＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

Claims

インターロイキン－１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）に特異性を有する第１の結合剤およびＩＬ１ＲＡＰに特異性を有する第２の結合剤を少なくとも含む組成物であって、前記第１および第２の結合剤がＩＬ１ＲＡＰの少なくとも２つの異なる細胞外ドメインに結合する、組成物。
前記第１および第２の結合剤のそれぞれが、抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体または抗原結合断片である、請求項１に記載の組成物。
ａ）第１の結合剤が、
ｉ）参照抗体「ＣＡＮ０４」；
ｉｉ）可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＧＬＨＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＳＩＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１）および可変重鎖（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＳＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＧＥＧＹＬＤＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４）を含む抗体；
ｉｉｉ）下記の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの少なくとも１つを含む抗体：
軽鎖ＣＤＲ１：ＳＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ（配列番号８）またはＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ（配列番号２９）
軽鎖ＣＤＲ２：ＹＴＳＧＬＨＡＧＶ（配列番号９）またはＹＴＳＧＬＨＡ（配列番号２２）
軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＹＳＩＬＰＷＴ（配列番号１０）またはＱＹＳＩＬＰＷＴ（配列番号２３）
重鎖ＣＤＲ１：ＧＹＡＦＴＳＳＳＷＭＮ（配列番号１１）またはＧＹＡＦＴＳＳ（配列番号２４）
重鎖ＣＤＲ２：ＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１２）またはＹＰＧＤＧＮ（配列番号２５）
重鎖ＣＤＲ３：ＧＹＬＤＰＭＤＹ（配列番号１３）；および
ｉｖ）上記（ｉ）の抗体と同じエピトープに結合する抗体；
ｖ）上記（ｉ）の抗体のヒトＩＬ１ＲＡＰへの結合を阻害することができる抗体；
ｖｉ）ＩＬ１ＲＡＰの細胞外ドメイン２に結合することができる抗体、および
ｖｉｉ）上記ｉ）～ｖｉ）の抗体の抗原結合断片、
からなる群から選択される抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片であり；
ならびに
ｂ）第２の結合剤が、
ｉ）参照抗体「ＣＡＮ０３」；
ｉｉ）可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列：ＤＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳＦＳＣＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨＷＹＱＲＲＴＮＧＳＰＲＬＬＩＫＳＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＴＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１４）、
および可変重鎖（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列：ＤＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＳＲＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号１５）を含む抗体；
ｉｉｉ）下記の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの少なくとも１つを含む抗体：
軽鎖ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ
（配列番号１６）またはＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ（配列番号３０）
軽鎖ＣＤＲ２：ＳＡＳＥＳＩＳ（配列番号１７）
軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＳＮＳＷＰＴＴ（配列番号１８）またはＱＳＮＳＷＰＴＴ（配列番号２６）
重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳ（配列番号１９）またはＧＦＴＦＳＩＹ（配列番号２７）
重鎖ＣＤＲ２：ＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２０）またはＳＩＧＧＳＹ（配列番号２８）
重鎖ＣＤＲ３：ＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹ（配列番号２１）；
ｉｖ）上記（ｉ）の抗体と同じエピトープに結合する抗体；
ｖ）上記（ｉ）の抗体のヒトＩＬ１ＲＡＰへの結合を阻害することができる抗体；
ｖｉ）ＩＬ１ＲＡＰの細胞外ドメイン３に結合することができる抗体、および
ｖｉｉ）上記ｉ）～ｖｉ）の抗体の抗原結合断片、
からなる群から選択される抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～２のいずれか１項に記載の組成物。
前記（ａ）（ｉｉｉ）の抗体が、前記ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、例えば少なくとも２つ、例えば少なくとも３つ、例えば少なくとも４つ、例えば少なくとも５つ、例えば前記ＣＤＲのうちの６つすべてを含む、請求項３に記載の組成物。
前記抗体が、３つすべての軽鎖ＣＤＲおよび／または３つすべての重鎖ＣＤＲを含む、請求項４に記載の組成物。
前記（ｂ）（ｉｉｉ）の抗体が、前記ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、例えば少なくとも２つ、例えば少なくとも３つ、例えば少なくとも４つ、例えば少なくとも５つ、例えば前記ＣＤＲのうちの６つすべてを含む、請求項３に記載の組成物。
前記抗体が、３つすべての軽鎖ＣＤＲおよび／または３つすべての重鎖ＣＤＲを含む、請求項６に記載の組成物。
前記第１の結合剤が、
ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｆ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｇ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｈ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｊ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｋ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ならびに
ｌ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）
からなる群から選択される可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
ａ）前記第１の結合剤が、
配列番号１、２、または３のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号４、５、６、または７のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片であり；ならびに
ｂ）前記第２の結合剤が、
配列番号１４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号１５のアミノ酸を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。
ａ）前記第１の結合剤が、
配列番号１のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片であり；ならびに
ｂ）前記第２の結合剤が、
配列番号１４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号１５のアミノ酸を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合剤が、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１に対して少なくとも６０％の配列同一性、例えば少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合剤が、配列番号４のアミノ酸配列、または配列番号４に対して少なくとも６０％の配列同一性、例えば少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１から１１のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合剤が、配列番号８または配列番号２９のアミノ酸配列、または配列番号８または配列番号２９に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合剤が、配列番号９または配列番号２２のアミノ酸配列、または配列番号９または配列番号２２に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合剤が、配列番号１０または配列番号２３のアミノ酸配列、または配列番号１０または配列番号２３に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合剤が、配列番号１１または配列番号２４のアミノ酸配列、または配列番号１１または配列番号２４に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ１を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合剤が、配列番号１２または配列番号２５のアミノ酸配列、または配列番号１２または配列番号２５に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ２を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合剤が、配列番号１３のアミノ酸配列、または配列番号１３に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合剤が、配列番号１４のアミノ酸配列、または配列番号１４に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合剤が、配列番号１５のアミノ酸配列、または配列番号１５に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１９のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合剤が、配列番号１６または配列番号３０のアミノ酸配列、または配列番号１６または配列番号３０に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～２０のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合剤が、配列番号１７のアミノ酸配列、または配列番号１７に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合剤が、配列番号１８または配列番号２６のアミノ酸配列、または配列番号１８または配列番号２６に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～２２のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合剤が、配列番号１９または配列番号２７のアミノ酸配列、または配列番号１９または配列番号２７に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ１を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～２３のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合剤が、配列番号２０または配列番号２８のアミノ酸配列、または配列番号２０または配列番号２８に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ２を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～２４のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合剤が、配列番号２１のアミノ酸配列、または配列番号２１に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を含む抗ＩＬ１ＲＡＰ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～２５のいずれか１項に記載の組成物。
前記組成物中の前記第２の結合剤に対する前記第１の結合剤の比率が、１０：１～１：１０、例えば５：１～１：５、例えば２：１～１：２、例えば３：２～２：３、例えば１１：９～９：１１、例えば１：１である、請求項１～２６のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１および第２の結合剤が、アイソタイプサブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の抗体分子である、請求項１～２７のいずれか１項に記載の組成物。
前記組成物が、細胞膜に結合したＩＬ１ＲＡＰの内在化を誘導することができる、請求項１～２８のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１および／または前記第２の結合剤が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する能力を欠いている、請求項１～２９のいずれか１項に記載の組成物。
第１の抗原結合領域、および
第２の抗原結合領域を含む２エピトープ結合剤であって、
前記第１の抗原結合領域および前記第２の抗原結合領域が、ヒトインターロイキン受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１ＲＡＰ）の異なる細胞外ドメインに結合する、２エピトープ結合剤。
前記２エピトープ結合剤が、ポリペプチドである、請求項３１に記載の２エピトープ結合剤。
前記２エピトープ結合剤が抗体である、請求項３１～３２のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
ａ）前記第１の抗原結合領域が、
ｉ）参照抗体「ＣＡＮ０４」と同じ抗原に結合する抗原結合領域；
ｉｉ）抗体ＣＡＮ０４と同じエピトープに結合する抗原結合領域；
ｉｉｉ）抗体ＣＡＮ０４のヒトＩＬ１ＲＡＰへの結合を阻害することができる抗原結合領域；
ｉｖ）ＩＬ１ＲＡＰのドメイン２に結合することができる抗原結合領域；
ｖ）抗体ＣＡＮ０４の
可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＧＬＨＡＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＳＩＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１）および
可変重鎖（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列：
ＤＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＳＲＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号４）を含む、またはそれからなるアミノ酸配列；
ｖｉ）配列番号３５の重鎖アミノ酸配列および配列番号３６の軽鎖アミノ酸配列を含むまたはそれからなるアミノ酸配列；
ｖｉｉ）下記の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの少なくとも１つを含む、またはそれからなるアミノ酸配列：
軽鎖ＣＤＲ１：ＳＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ（配列番号８）またはＡＳＱＧＩＮＮＹＬＮ（配列番号２９）
軽鎖ＣＤＲ２：ＹＴＳＧＬＨＡＧＶ（配列番号９）またはＹＴＳＧＬＨＡ（配列番号２２）
軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＹＳＩＬＰＷＴ（配列番号１０）またはＱＹＳＩＬＰＷＴ（配列番号２３）
重鎖ＣＤＲ１：ＧＹＡＦＴＳＳＳＷＭＮ（配列番号１１）またはＧＹＡＦＴＳＳ（配列番号２４）
重鎖ＣＤＲ２：ＲＩＹＰＧＤＧＮＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１２）またはＹＰＧＤＧＮ（配列番号２５）
重鎖ＣＤＲ３：ＧＹＬＤＰＭＤＹ（配列番号１３）；
および
ｖｉｉ）上記（ｉ）～（ｖｉ）の抗体の抗原結合断片からなる群から選択され；ならびに
ｂ）前記第２の抗原結合領域が、
ｉ）参照抗体「ＣＡＮ０３」と同じ抗原に結合する抗原結合領域；
ｉｉ）抗体ＣＡＮ０３と同じエピトープに結合する抗原結合領域；
ｉｉｉ）抗体ＣＡＮ０３のヒトＩＬ１ＲＡＰへの結合を阻害することができる抗原結合領域；
ｉｖ）ＩＬ１ＲＡＰの細胞外ドメイン３に結合することができる抗原結合領域；
ｖ）抗体ＣＡＮ０３の
可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列：
ＤＩＬＬＴＱＳＰＡＩＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳＦＳＣＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨＷＹＱＲＲＴＮＧＳＰＲＬＬＩＫＳＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＴＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１４）、および可変重鎖（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列：
ＤＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＫＳＥＤＴＡＩＹＹＣＳＲＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号１５）を含むまたはそれからなるアミノ酸配列；
ｖｉ）配列番号３７の重鎖アミノ酸配列および配列番号３８の軽鎖アミノ酸配列を含む、またはそれからなるアミノ酸配列；
ｖｉｉ）下記の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの少なくとも１つを含む抗原結合領域：
軽鎖ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ（配列番号１６）またはＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ（配列番号３０）
軽鎖ＣＤＲ２：ＳＡＳＥＳＩＳ（配列番号１７）
軽鎖ＣＤＲ３：ＱＱＳＮＳＷＰＴＴ（配列番号１８）またはＱＳＮＳＷＰＴＴ（配列番号２６）
重鎖ＣＤＲ１：ＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳ（配列番号１９）またはＧＦＴＦＳＩＹ（配列番号２７）
重鎖ＣＤＲ２：ＴＩＳＩＧＧＳＹＩＮＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２０）またはＳＩＧＧＳＹ（配列番号２８）
重鎖ＣＤＲ３：ＥＶＤＧＳＹＡＭＤＹ（配列番号２１）；および
ｖｉｉ）上記ｉ）～ｖｉ）の抗体の抗原結合断片、からなる群から選択される、請求項３１～３３のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、配列番号３５の重鎖アミノ酸配列および配列番号３６の軽鎖アミノ酸配列を含む、またはそれからなるアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合領域が、配列番号３７の重鎖アミノ酸配列および配列番号３８の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項３１～３３のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、
ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｆ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｇ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｈ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｊ）配列番号５のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ｋ）配列番号６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）；
ならびに
ｌ）配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）、および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）からなる群から選択される、可変重鎖（Ｖ_Ｈ）および可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む、請求項３１～３４のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
ａ）前記第１の抗原結合領域が、
配列番号１、２、または３のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号４、５、６、または７のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含み；ならびに
ｂ）前記第２の抗原結合領域が、
配列番号１４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号１５のアミノ酸を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む、請求項３１～３６のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
ａ）前記第１の抗原結合領域が、
配列番号１のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含み；ならびに
ｂ）前記第２の抗原結合領域が、
配列番号１４のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）；および
配列番号１５のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む、請求項３１～３７のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１に対して少なくとも６０％の配列同一性、例えば少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を有する、請求項３１～３８のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、配列番号４のアミノ酸配列、または配列番号４に対して少なくとも６０％の配列同一性、例えば少なくとも７０％の配列同一性、例えば少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を有する、請求項３１～３９のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、配列番号８もしくは配列番号２９のアミノ酸配列、または配列番号８もしくは配列番号２９に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１を有する、請求項３１～４０のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、配列番号９もしくは配列番号２２のアミノ酸配列、または配列番号９もしくは配列番号２２に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２を有する、請求項３１～４１のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、配列番号１０もしくは配列番号２３のアミノ酸配列、または配列番号１０もしくは配列番号２３に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、請求項３１～４２のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、配列番号１１もしくは配列番号２４のアミノ酸配列、または配列番号１１もしくは配列番号２４に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ１を有する、請求項３１～４３のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、配列番号１２もしくは配列番号２５のアミノ酸配列、または配列番号１２もしくは配列番号２５に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ２を有する、請求項３１～４４のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第１の抗原結合領域が、配列番号１３のアミノ酸配列、または配列番号１３に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有する、請求項３１～４５のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第２の抗原結合領域が、配列番号１４のアミノ酸配列、または配列番号１４に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を有する、請求項３１～４６のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第２の抗原結合領域が、配列番号１５のアミノ酸配列、または配列番号１５に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）を有する、請求項３１～４７のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第２の抗原結合領域が、配列番号１６もしくは配列番号３０のアミノ酸配列、または配列番号１６もしくは配列番号３０に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１を有する、請求項３１～４８のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第２の抗原結合領域が、配列番号１７のアミノ酸配列、または配列番号１７に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２を有する、請求項３１～４９のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第２の抗原結合領域が、配列番号１８もしくは配列番号２６のアミノ酸配列、または配列番号１８もしくは配列番号２６に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、請求項３１～５０のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第２の抗原結合領域が、配列番号１９もしくは配列番号２７のアミノ酸配列、または配列番号１９もしくは配列番号２７に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ１を有する、請求項３１～５１のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第２の抗原結合領域が、配列番号２０もしくは配列番号２８のアミノ酸配列、または配列番号２０もしくは配列番号２８に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性をそれぞれ有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ２を有する、請求項３１～５２のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記第２の抗原結合領域が、配列番号２１のアミノ酸配列、または配列番号２１に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも９０％の配列同一性、例えば少なくとも９５％の配列同一性、例えば少なくとも９７％の配列同一性、例えば少なくとも９８％の配列同一性、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有する、請求項３１～５３のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤。
前記２エピトープ結合剤が、二重可変ドメイン抗体、２エピトープＦａｂ断片、２エピトープｓｃＦｖ、二価二重特異性抗体、一価二重特異性抗体、「ノブインホール」二重特異性抗体、ｓｃＦｖ２＿Ｆｃ二重特異性抗体、ＢｉＴＥ／ｓｃＦｖ２二重特異性抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ二重特異性抗体、ＩｇＧ－Ｆａｂ二重特異性抗体、ＦＡｂ－ＩｇＧ二重特異性抗体、ＤＡＲＴ系二重特異性抗体、ＤＮＬ－Ｆａｂ３二重特異性抗体またはｓｃＦｖ－ＨＡＳ－ｓｃＦｖ二重特異性抗体である、請求項３１～５４のいずれか１項記載の２エピトープ結合剤。
（ｉ）請求項１に記載の第１および第２の結合剤、または（ｉｉ）請求項３１に記載の２エピトープ結合剤のいずれかを集合的または個別にコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組成物。
（ｉ）請求項１に記載の第１および第２の結合剤、または（ｉｉ）請求項３１に記載の２ピトープ結合剤のいずれかをコードする単離ポリヌクレオチド。
（ｉ）請求項１に記載の第１および第２の結合剤、または（ｉｉ）請求項３１に記載の２エピトープ結合剤のいずれかを集合的または個別にコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（ｉ）請求項１に記載の第１および第２の結合剤、または（ｉｉ）請求項３１に記載の２エピトープ結合剤のいずれかを集合的または個別にコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
請求項５８に記載の１つ以上の発現ベクターを含む宿主細胞。
前記宿主細胞が、真核生物または原核生物の宿主細胞である、請求項５９～６０のいずれか１項に記載の宿主細胞。
請求項１～３０のいずれか１項に記載の組成物、請求項３１～５５のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤、請求項５６～５７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項５８に記載のベクター、または請求項５９～６１のいずれか１項に記載の宿主細胞と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
医薬品として使用するための請求項１～請求項３０のいずれか１項に記載の組成物、請求項３１～５５のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤、請求項５６～５７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項５８に記載のベクター、請求項５９～６１のいずれか１項に記載の宿主細胞、または請求項６２に記載の医薬組成物。
診断および／または予後の薬剤として使用するための請求項１～請求項３０のいずれか１項に記載の組成物、請求項３１～５５のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤、請求項５６～５７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項５８に記載のベクター、請求項５９～６１のいずれか１項に記載の宿主細胞、または請求項６２に記載の医薬組成物。
哺乳動物におけるＩＬ１ＲＡＰ関連の疾患または障害の治療、改善、予防、診断または予後に使用するための請求項１～請求項３０のいずれか１項に記載の組成物、請求項３１～５５のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤、請求項５６～５７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項５８に記載のベクター、請求項５９～６１のいずれか１項に記載の宿主細胞、請求項６２に記載の医薬組成物。
前記ＩＬ１ＲＡＰ関連の疾患または障害が、増殖性障害、自己免疫障害、および自己炎症性障害などの炎症性障害からなる群から選択される、請求項６５に記載の組成物。
増殖性障害、自己免疫障害、および自己炎症性障害などの炎症性障害からなる群から選択される疾患または障害の治療に使用するための請求項１～請求項３０または請求項６５～６６のいずれか１項に記載の組成物、請求項３１～５５のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤、請求項５６～５７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項５８に記載のベクター、請求項５９～６１のいずれか１項に記載の宿主細胞、または請求項６２に記載の医薬組成物。
前記疾患または障害が、関節リウマチ、骨関節炎、多発性硬化症、関節硬化症、強皮症（全身性硬化症）、狼瘡、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、（急性）糸球体腎炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、炎症性腸疾患、大腸炎、血管炎、ブドウ膜炎、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、脱毛症、鼻炎（アレルギー）、アレルギー性結膜炎、重症筋無力症、強皮症、サルコイドーシス、乾癬性関節炎、乾癬、強直性脊椎炎、若年性特発性関節炎、グレーブス病、シェーグレン症候群、子宮内膜症、クローン病、ベーチェット病、セリアック病、１型真性糖尿病、グレーブス病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、高免疫グロブリンＤ血症および周期熱症候群（ＨＩＤＳ）、ＴＮＦ受容体関連周期症候群（ＴＲＡＰＳ）、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ、マックルウェルズ症候群、家族性寒冷蕁麻疹、新生児期発症など）、多系統炎症性疾患（ＮＯＭＩＤ）、周期性発熱、アフタ性口内炎、咽頭炎および腺炎（ＰＦＡＰＡ症候群）、ブラウ症候群、化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、にきび（ＰＡＰＡ）、インターロイキン１受容体拮抗薬（ＤＩＲＡ）の欠乏、成人－発症スティル病および全身発症若年性特発性関節炎、心血管疾患からなる群から選択される、請求項６６および６８のいずれか１項に記載の組成物、２エピトープ結合剤、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または医薬組成物。
前記疾患または障害が、腫瘍性障害である、請求項６６および６８のいずれか１項に記載の組成物、２エピトープ結合剤、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または医薬組成物。
前記腫瘍性障害が、前立腺がん、乳がん、肺がん、結腸直腸がん、黒色腫、膀胱がん、脳／ＣＮＳがん、子宮頸がん、食道がん、胃がん、頭頸部がん、腎臓がん、肝がん、リンパ腫、卵巣がん、膵臓がん、肉腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される、請求項６９に記載の組成物、２エピトープ結合剤、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または医薬組成物。
哺乳動物のＩＬ１ＲＡＰ関連の疾患または障害の治療、改善、予防、診断または予後のための医薬品の製造における請求項１～請求項３０のいずれか１項に記載の組成物、または請求項３１～５５のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤、または請求項５６～５７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、または請求項５８に記載のベクター、または請求項５９～６１のいずれか１項に記載の宿主細胞、または請求項６２に記載の医薬組成物の使用。
ＩＬ１ＲＡＰ関連の疾患または障害の治療、改善、予防、診断または予後の方法であって、請求項１～３０のいずれか１項に記載の組成物、または請求項３１～５５のいずれか１項に記載の２エピトープ結合剤、または請求項５６～５７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、または請求項５８に記載のベクター、または請求項５９～６１のいずれか１項に記載の宿主細胞、または請求項６２に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
哺乳動物におけるＩＬ１ＲＡＰ関連の疾患または障害の治療、改善、予防、診断または予後に使用するための請求項１～３０のいずれか１項に記載のＩＬ１ＲＡＰに特異性を有する第１の結合剤であって、前記第１の結合剤が、ＩＬ１ＲＡＰに特異性を有する１つ以上のさらなる結合剤と組み合わせて使用するためのものであり、前記第１の結合剤およびさらなる結合剤が、ＩＬ１ＲＡＰの少なくとも２つの異なる細胞外ドメインに結合する、第１の結合剤。