[go: up one dir, main page]

JP2022531461A - 免疫細胞活性を破壊するポリヌクレオチド及びその使用方法 - Google Patents

免疫細胞活性を破壊するポリヌクレオチド及びその使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2022531461A
JP2022531461A JP2021565918A JP2021565918A JP2022531461A JP 2022531461 A JP2022531461 A JP 2022531461A JP 2021565918 A JP2021565918 A JP 2021565918A JP 2021565918 A JP2021565918 A JP 2021565918A JP 2022531461 A JP2022531461 A JP 2022531461A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
domain
compound
polynucleotide
human
polynucleotide according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2021565918A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2020227510A5 (ja
Inventor
イン フー，
ローリー ケニー，
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ModernaTx Inc
Original Assignee
ModernaTx Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ModernaTx Inc filed Critical ModernaTx Inc
Publication of JP2022531461A publication Critical patent/JP2022531461A/ja
Publication of JPWO2020227510A5 publication Critical patent/JPWO2020227510A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/13—B-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/20—Cellular immunotherapy characterised by the effect or the function of the cells
    • A61K40/22—Immunosuppressive or immunotolerising
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/20—Cellular immunotherapy characterised by the effect or the function of the cells
    • A61K40/24—Antigen-presenting cells [APC]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/416—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/418—Antigens related to induction of tolerance to non-self
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C12N15/625—DNA sequences coding for fusion proteins containing a sequence coding for a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/10—Protein-tyrosine kinases (2.7.10)
    • C12Y207/10002—Non-specific protein-tyrosine kinase (2.7.10.2), i.e. spleen tyrosine kinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
    • C12Y301/03048—Protein-tyrosine-phosphatase (3.1.3.48)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
    • C12Y301/03086—Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase (3.1.3.86)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/04—Phosphoric diester hydrolases (3.1.4)
    • C12Y301/04011—Phosphoinositide phospholipase C (3.1.4.11)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y306/00—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6)
    • C12Y306/05—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6) acting on GTP; involved in cellular and subcellular movement (3.6.5)
    • C12Y306/05002—Small monomeric GTPase (3.6.5.2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)

Abstract

本開示は、Ｔ細胞またはＢ細胞活性などの免疫細胞活性を破壊するポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡ、例えば、１つ以上の修飾核酸塩基を含むｍＲＮＡを特徴とする。免疫細胞破壊因子ポリヌクレオチドは、ポリペプチドの免疫細胞成分との会合を媒介する第１のドメイン、及びポリペプチドが免疫細胞内で発現される際に免疫細胞活性の阻害を媒介する第２のドメインを含むポリペプチドをコードする。本開示は、例えば、対象に投与した際に免疫応答を阻害するための、例えば、自己免疫反応を阻害するための上記単離ポリペプチドの使用方法も特徴とする。
【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年５月７日に出願された米国仮出願第６２／８４４，５８８号の優先権を主張し、その内容全体は、参照することにより本明細書に組み込まれる。
免疫応答を下方調節する能力は、自己免疫疾患、アレルギー及び炎症反応の治療、臓器移植拒絶反応の予防、及び移植片対宿主病の阻害を含む、様々な臨床状況において有益である。異常な免疫応答に関与する生物学的経路及び／または分子の機能を下方調節するための、いくつかの治療ツールが存在する。これらのツールとしては、例えば、小分子阻害剤、サイトカイン、ステロイド、及び治療用抗体が挙げられる。典型的には、これらのツールは、対象における免疫及び／または炎症反応の抑制を通じて機能し、例えば、免疫系内の細胞の活性を調節する小分子阻害剤（例えば、シクロスポリン、アザチオプリン）、免疫応答を下方調節するサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－β）、または、免疫及び／または炎症反応を下方調節する抗体、例えば、抗ＴＮＦα及び抗ＩＬ２Ｒが挙げられる。しかしながら、そのような薬剤の免疫抑制効果を、特に、長期間の全身投与中に制御することが困難であり得る。したがって、多くの免疫抑制薬の一般的な副作用は、これらの薬物の大部分は非選択的に作用するため、免疫不全であり、感染症への感受性の増加、及びがん免疫監視機構の低下をもたらす。免疫細胞枯渇がまた、ある特定の免疫抑制剤の望ましくない副作用であり得る。
免疫応答を下方調節するさらなる効果的な薬物の必要性が当該技術分野において存在する。
本開示は、細胞における正常なシグナル伝達活性を破壊することによって、免疫細胞活性を阻害するポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を提供し、これは、本明細書で免疫細胞破壊因子構築物と呼ばれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ポリペプチドの免疫細胞成分との細胞内会合を媒介する第１の部分（すなわち、ドメインまたはモチーフ）を含む、キメラポリペプチドである。いくつかの実施形態では、免疫細胞成分は、膜受容体、膜関連タンパク質、膜貫通関連タンパク質または細胞内タンパク質、例えば、免疫細胞内の膜タンパク質と会合する細胞内タンパク質である。いくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、例えば、免疫細胞における正常なシグナル伝達活性を破壊（例えば、変化または阻害）することによって、免疫細胞活性の阻害を媒介する、第２の部分（すなわち、ドメインまたはモチーフ）を含む。
一実施形態では、本開示は、Ｔ細胞の活性を破壊、変化、または阻害するキメラポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、これは、本明細書でＴ細胞破壊因子（ＴＣＤ）構築物と呼ばれる。いくつかの実施形態では、本開示のＴＣＤ構築物は、１つ以上のＴ細胞活性、例えば、Ｔ細胞増殖、及び／またはＴ細胞サイトカイン産生を阻害する。他の実施形態では、本開示は、Ｂ細胞の活性を破壊、変化、または阻害するキメラポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、これは、本明細書でＢ細胞破壊因子（ＢＣＤ）構築物と呼ばれる。いくつかの実施形態では、本開示のＢＣＤ構築物は、１つ以上のＢ細胞活性、例えば、免疫グロブリン産生、及び／またはＢ細胞サイトカイン産生を阻害する。さらに他の実施形態では、本開示は、ＮＫ細胞、例えば、樹状細胞、またはマクロファージの活性を破壊、変化、または阻害するキメラポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。いくつかの実施形態では、免疫細胞活性は、免疫細胞を実質的または有意に枯渇させることなく、免疫細胞破壊因子キメラポリペプチドにより阻害される。
一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞であり、本開示は、Ｔ細胞の活性を阻害するＴ細胞破壊因子（ＴＣＤ）構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。一実施形態では、ＴＣＤをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｔ細胞内で発現される際に、Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、ＴＣＤをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、Ｔ細胞内で発現される際に、Ｔ細胞サイトカイン産生を阻害する。
一実施形態では、本開示は、Ｆｙｎ、ＳｒｃまたはＫＲＡＳなどの、Ｔ細胞内で発現される膜関連タンパク質のＴＣＤの第１のドメイン（会合ドメイン）をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＣＤの第１のドメイン（会合ドメイン）は、ヒトＦｙｎのＮ末端膜結合部分である。いくつかの実施形態では、ＴＣＤの第１のドメイン（会合ドメイン）は、ヒトＳｒｃのＮ末端膜結合部分である。いくつかの実施形態では、ＴＣＤの第１のドメイン（会合ドメイン）は、であるかまたはヒトＫＲＡＳのＣ末端膜結合部分である。
他の実施形態では、本開示は、Ｔ細胞内で発現される膜貫通関連タンパク質の第１のドメインをコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。いくつかの実施形態では、第１のドメインは、ＰＡＧ、例えば、ヒトＰＡＧのＮ末端膜結合部分である。いくつかの実施形態では、本開示は、膜受容体と会合するＴ細胞内で発現されるタンパク質の第１のドメインをコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。いくつかの実施形態では、第１のドメインは、Ｌｃｋ、例えば、ＳＨ２及びＳＨ３ドメインを含むヒトＬｃｋポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１のドメインは、少なくとも１つのＳＨ２ドメインを含むヒトＺＡＰ－７０ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＡＴ、Ｇｒｂ２、Ｇｒａｐ、ＰＩ３Ｋ．ｐ８５α、ＰＬＣγ１、ＧＡＤＳ、ＡＤＡＰ、ＮＣＫ、ＶＡＶ、ＳＯＳ、ＩＴＫ及びＳＬＰ７６などの、Ｔ細胞内で発現される細胞内タンパク質の第１のドメインをコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。いくつかの実施形態では、第１のドメインは、全長ヒトＬＡＴタンパク質、ヒトＬＡＴのＮ末端部分、及びヒトＬＡＴのＺＡＰ－７０結合部分から選択されるヒトＬＡＴポリペプチドである。他の実施形態では、第１のドメインは、ＳＨ２ドメインを含むＧｒｂ２ポリペプチド、ＳＨ２ドメインを含むＧｒａｐポリペプチド、ｉＳＨ２ドメインを含有する内部領域が欠失しているＰＩ３Ｋ．ｐ８５αポリペプチド、またはＳＨ２及びＳＨ３ドメインを含むＰＬＣγ１ポリペプチドである。一実施形態では、本開示は、配列番号１～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のドメインをコードする、ｍＲＮＡを提供する。
一実施形態では、本開示は、ＴＣＤの第１のドメイン及び少なくとも１つの第２のドメインをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）であって、第２のドメインは、ＩＴＩＭモチーフを含む阻害性ドメインである、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。一実施形態では、第２のドメインは、ヒトＬＡＩＲ１ ＩＴＩＭ１モチーフ、ヒトＬＡＩＲ１ ＩＴＩＭ２モチーフ、またはヒトＣＴＬＡ４ ＩＴＩＭ様モチーフである。一実施形態では、第２のドメインは、阻害性キナーゼドメイン、例えば、構成的に活性なＣｓｋポリペプチド、例えば、Ｗ４７Ａ、Ｒ１０７Ｋ及びＥ１４Ａ変異を含む構成的に活性なヒトＣｓｋポリペプチドを含む。一実施形態では、第２のドメインは、ホスファターゼドメイン、例えば、ホスファターゼ活性を有するＳＨＰ１ポリペプチド、ホスファターゼ活性を有するＳＨＩＰ１ポリペプチド、ホスファターゼ活性を有するＰＴＰＮ２２ポリペプチド、またはホスファターゼ活性を有するＰＴＰＮ１ポリペプチドを含む。一実施形態では、第２のドメインが、Ｔ細胞内のＰＩ３Ｋ活性を阻害し、例えば、第２のドメインは、ヒトＰＴＥＮタンパク質由来であり得る。一実施形態では、本開示は、配列番号２１～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第２のドメインをコードする、ｍＲＮＡを提供する。
本開示のＴＣＤをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の様々な実施形態では、キメラポリペプチドは、ヒトＬＡＴタンパク質由来の第１のドメイン、及びＬＡＩＲ１またはＣＴＬＡ４ ＩＴＩＭモチーフを含む第２のドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＴＣＤをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＬＡＴ、ＰＡＧ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ及びＳｒｃからなる群から選択されるヒトタンパク質の第１のドメイン、及び構成的に活性なヒトＣＳＫタンパク質を含む第２のドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＴＣＤをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＬＡＴ、Ｓｒｃ、ＰＩ３Ｋ．ｐ８５及びＰＬＣγ１からなる群から選択されるヒトタンパク質由来の第１のドメイン、及びＳＨＰ１、ＳＨＩＰ１及びＰＴＰＮ２２からなる群から選択されるヒトタンパク質由来の第２のドメインを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＴＣＤをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）は、ヒトＰＬＣγ１タンパク質由来の第１のドメイン、及びヒトＰＴＥＮタンパク質由来の第２のドメインを含む。
一実施形態では、本開示のＴＣＤをコードするｍＲＮＡは、配列番号３５～８０のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、本開示のＴＣＤをコードするｍＲＮＡは、配列番号８１～１２６のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むキメラポリペプチドをコードする。
一実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞であり、本開示は、Ｂ細胞の活性を阻害するＢ細胞破壊因子（ＢＣＤ）構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。一実施形態では、ＢＣＤは、Ｂ細胞内で発現される際に、Ｂ細胞免疫グロブリン産生を阻害する。一実施形態では、ＢＣＤは、Ｂ細胞内で発現される際に、Ｂ細胞サイトカイン産生を阻害する。
一実施形態では、本開示は、ＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂなどの、Ｂ細胞内で発現される膜関連タンパク質第１のドメインを含むＢＣＤ構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。一実施形態では、本開示は、ＩＴＡＭを欠いているかまたはＩＴＡＭが不活化しているヒトＣＤ７９ポリペプチドの第１のドメインを含むＢＣＤ構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、または第１のドメインは、ＩＴＡＭを欠いているかまたはＩＴＡＭが不活化しているヒトＣＤ７９ｂポリペプチドである。一実施形態では、本開示は、ＣＤ１９またはＣＤ６４などの、Ｂ細胞内で発現される膜受容体の第１のドメインを含むＢＣＤ構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。一実施形態では、本開示は、ＩＴＡＭを欠いているかまたはＩＴＡＭが不活化しているヒトＣＤ１９ポリペプチドの第１のドメインを含むＢＣＤ構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供し、または第１のドメインは、ヒトＣＤ６４のＮ末端部分である。一実施形態では、本開示は、Ｓｙｋなどの、膜受容体と会合するＢ細胞内で発現されるタンパク質の第１のドメインを含むＢＣＤ構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。一実施形態では、本開示は、配列番号１２７～１４３及び２２９～２３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のドメインを含むＢＣＤ構築物をコードする、ｍＲＮＡを提供する。
一実施形態では、本開示は、Ｂ細胞内のＣＤ１９／ＣＤ２２均衡を変化させる第２のドメインを含むＢＣＤ構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。一実施形態では、第２のドメインは、ＣＤ２２またはＳＨＰ１由来であり、例えば、第２のドメインは、ヒトＣＤ２２ ＩＴＩＭモチーフまたはヒトＳＨＰ１ホスファターゼドメインを含む。一実施形態では、第２のドメインが、Ｂ細胞内のＢ細胞受容体（ＢＣＲ）活性を阻害する、例えば、第２のドメインは、ＣＤ２２ ＩＴＩＭモチーフを含む。一実施形態では、第２のドメインが、Ｂ細胞内のＦｃＲ活性を変化させる、例えば、第２のドメインは、ＣＤ３２ｂ由来であり、例えば、ヒトＣＤ３２ｂ ＩＴＩＭモチーフを含む。一実施形態では、第２のドメインは、阻害性キナーゼドメイン、例えば、構成的に活性なＣｓｋポリペプチド、例えば、Ｗ４７Ａ、Ｒ１０７Ｋ及びＥ１４Ａ変異を含む構成的に活性なヒトＣｓｋポリペプチドを含む。一実施形態では、本開示は、配列番号２５、２６及び１４４～１４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第２のドメインを含むＢＣＤ構築物をコードする、ｍＲＮＡを提供する。
様々な実施形態では、本開示は、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１９及びＳｙｋからなる群から選択されるヒトタンパク質の第１のドメイン、及びヒトＣＤ２２、ヒトＳＨＰ１またはヒトＣｓｋの第２のドメインを含むキメラポリペプチドを含むＢＣＤ構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトＣＤ６４由来の第１のドメイン、及びヒトＣＤ３２ｂ由来の第２のドメインを含むキメラポリペプチドを含むＢＣＤ構築物をコードする、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を提供する。
一実施形態では、本開示は、配列番号１５０～１６７及び２３２～２３７のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列を含む本開示のＢＣＤをコードする、ｍＲＮＡを提供する。一実施形態では、本開示は、配列番号１６８～１８５及び２３８～２４３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むキメラポリペプチドを含むＢＣＤをコードする、ｍＲＮＡを提供する。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、化学修飾され、本明細書で修飾ｍＲＮＡと呼ばれ、ｍＲＮＡは、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。あるいは、ｍＲＮＡは、全体が未修飾核酸塩基を含み得る。一実施形態では、本開示のｍＲＮＡまたは修飾ｍＲＮＡ構築物は、例えば、５’ＵＴＲ、ポリペプチドをコードするコドン最適化オープンリーディングフレーム、３’ＵＴＲ、及び連結ヌクレオシドの３’尾部領域を含む。一実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上のマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位をさらに含む。
一実施形態では、本開示の修飾ｍＲＮＡ構築物は、完全に修飾される。例えば、一実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（Ψ）、シュードウリジン（Ψ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）、２－チオウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、２’－Ｏ－メチルウリジン、２’－Ｏ－メチルウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）またはＮ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。別の実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）、２－チオウリジン、４’－チオウリジン、５－メチルシトシン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、４－チオ－シュードウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５－メトキシウリジン、または２’－Ｏ－メチルウリジン、またはそれらの組み合わせを含む。さらに別の実施形態では、ｍＲＮＡは、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、シュードウリジン（Ψ）、α－チオ－グアノシン、またはα－チオ－アデノシン、またはそれらの組み合わせを含む。
別の態様では、本開示は、ポリヌクレオチド、例えば、本開示のｍＲＮＡ（例えば、修飾ｍＲＮＡ）を含む、脂質ナノ粒子に関する。一実施形態では、脂質ナノ粒子は、リポソームである。別の実施形態では、脂質ナノ粒子は、カチオン性及び／またはイオン化可能脂質を含む。一実施形態では、脂質ナノ粒子は、ｍＲＮＡの免疫細胞への送達を促進する免疫細胞送達増強脂質を含む。一実施形態では、ＬＮＰは、フィトステロール、またはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む。一実施形態では、フィトステロールは、β－シトステロール、スチグマステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、β－シトステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ－１４０、化合物Ｓ－１５１、化合物Ｓ－１５６、化合物Ｓ－１５７、化合物Ｓ－１５９、化合物Ｓ－１６０、化合物Ｓ－１６４、化合物Ｓ－１６５、化合物Ｓ－１７０、化合物Ｓ－１７３、化合物Ｓ－１７５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
一実施形態では、脂質ナノ粒子は、本開示の２つ以上のｍＲＮＡ構築物と共製剤化される。例えば、ＬＮＰは、少なくとも１つのＴ細胞破壊因子構築物（ＴＣＤ）、及び少なくとも１つのＢ細胞破壊因子構築物（ＢＣＤ）と共製剤化され得る。一実施形態では、ＬＮＰは、１つのＴＣＤ及び３つのＢＣＤと共製剤化される。
別の態様では、本開示は、本開示のｍＲＮＡ（例えば、修飾ｍＲＮＡ）または本開示の脂質ナノ粒子、及び薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物に関する。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示は、脂質ナノ粒子、及び任意の薬学的に許容される担体、及び個体における免疫応答を阻害するための脂質ナノ粒子または医薬組成物の投与のための説明書を含む容器を含む、キットを提供する。いくつかの態様では、添付文書は、個体における免疫応答を阻害するための脂質ナノ粒子または医薬組成物を単独で、または、別の免疫調節剤、及び任意の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせて投与するための説明書をさらに含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示は、個体における免疫応答を阻害するための医薬の製造における、本開示の脂質ナノ粒子、及び任意の薬学的に許容される担体の使用を提供し、医薬は、脂質ナノ粒子及び任意の薬学的に許容される担体を含み、処置は、医薬及び任意の薬学的に許容される担体の投与を含む。
別の態様では、本開示は、個体における免疫応答の阻害方法に関し、当該方法は、免疫応答が対象において阻害されるように、免疫細胞の活性を阻害する本開示のポリヌクレオチド組成物（例えば、ｍＲＮＡまたは修飾ＲＮＡ）、またはその脂質ナノ粒子、またはその医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。一態様では、個体における免疫応答を阻害することは、サイトカイン産生を阻害することを含む。別の態様では、個体における免疫応答を阻害することは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＢ細胞）増殖を阻害することを含む。別の態様では、個体における免疫応答を阻害することは、免疫グロブリン産生（例えば、抗原特異的抗体産生）を阻害することを含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示は、対象、例えば、対象における免疫応答の阻害から恩恵を受ける疾患または病態を有する対象の治療方法を提供する。治療方法は、前述または関連の免疫阻害治療組成物のいずれかまたは前述または関連の脂質ナノ粒子担体のいずれかを、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、免疫調節治療組成物または脂質ナノ粒子担体は、別の治療剤（例えば、自己免疫治療剤、免疫抑制剤など）と組み合わせて投与される。
一実施形態では、対象は、自己免疫疾患、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む）、１型糖尿病、多発性硬化症、乾癬、グレーブス病、橋本甲状腺炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、糸球体腎炎または血管炎を有する。一実施形態では、対象は、アレルギー疾患を有する。一実施形態では、対象は、炎症反応を有する。一実施形態では、対象は、移植レシピエント（例えば、ＧＶＨＤを罹患している対象を含む、固形臓器移植または骨髄移植のレシピエント）である。一実施形態では、対象は、免疫療法（例えば、養子Ｔ細胞療法）を受けており、免疫療法によって、対象において刺激されている免疫応答を下方調節するために、方法を使用する。
他の実施形態では、本開示は、
（ｉ）イオン化可能脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）本開示のポリヌクレオチド、
（ｉｖ）任意に、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、及び
（ｖ）任意に、ＰＥＧ脂質、
を含む、免疫細胞送達ＬＮＰを提供し、
（ｉ）イオン化可能脂質または（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質のうちの１つ以上は、ＬＮＰの標的免疫細胞への送達を強化するのに有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、標的免疫細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞である。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロール、またはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、フィトステロールは、β－シトステロール、スチグマステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、フィトステロールは、シトステロール、またはその塩もしくはエステルを含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、フィトステロールは、スチグマステロール、またはその塩もしくはエステルを含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、フィトステロールは、β－シトステロール
Figure 2022531461000001
またはその塩もしくはエステルである。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、フィトステロールまたはその塩もしくはエステルは、β－シトステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ－１４０、化合物Ｓ－１５１、化合物Ｓ－１５６、化合物Ｓ－１５７、化合物Ｓ－１５９、化合物Ｓ－１６０、化合物Ｓ－１６４、化合物Ｓ－１６５、化合物Ｓ－１７０、化合物Ｓ－１７３、化合物Ｓ－１７５及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、フィトステロールは、β－シトステロールである。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、フィトステロールは、β－シトスタノールである。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、フィトステロールは、カンペステロールである。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、フィトステロールは、ブラシカステロールである。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、イオン化可能脂質を含み、イオン化可能脂質は、式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＩＸ）、（Ｉ ＩＸａ１）、（Ｉ ＩＸａ２）、（Ｉ ＩＸａ３）、（Ｉ ＩＸａ４）、（Ｉ ＩＸａ５）、（Ｉ ＩＸａ６）、（Ｉ ＩＸａ７）、または（Ｉ ＩＸａ８）のいずれか１つの化合物を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、イオン化可能脂質を含み、イオン化可能脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ－４８、化合物Ｉ－５０、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、化合物Ｉ－１１３、化合物Ｉ－１８１、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－２４４、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３０９、化合物Ｉ－３１７、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－３２２、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－３２８、化合物Ｉ－３３０、化合物Ｉ－３３１、化合物Ｉ－３３２、化合物Ｉ－３４７、化合物Ｉ－３４８、化合物Ｉ－３４９、化合物Ｉ－３５０、化合物Ｉ－３５２、及び化合物Ｉ－Ｍからなる群から選択される化合物を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、イオン化可能脂質を含み、イオン化可能脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－４８、化合物Ｉ－５０、化合物Ｉ－３２８、化合物Ｉ－３３０、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、及び化合物Ｉ－１８１からなる群から選択される化合物を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、リン脂質を含み、リン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ－４０９からなる群から選択される化合物を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含み、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含み、ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ－４１５、化合物Ｐ－４１６、化合物Ｐ－４１７、化合物Ｐ－４１９、化合物Ｐ－４２０、化合物Ｐ－４２３、化合物Ｐ－４２４、化合物Ｐ－４２８、化合物Ｐ－Ｌ１、化合物Ｐ－Ｌ２、化合物Ｐ－Ｌ３、化合物Ｐ－Ｌ４、化合物Ｐ－Ｌ６、化合物Ｐ－Ｌ８、化合物Ｐ－Ｌ９、化合物Ｐ－Ｌ１６、化合物Ｐ－Ｌ１７、化合物Ｐ－Ｌ１８、化合物Ｐ－Ｌ１９、化合物Ｐ－Ｌ２２、化合物Ｐ－Ｌ２３、及び化合物Ｐ－Ｌ２５からなる群から選択される化合物を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、ＰＥＤ脂質を含み、ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ－４２８、化合物ＰＬ－１６、化合物ＰＬ－１７、化合物ＰＬ－１８、化合物ＰＬ－１９、化合物ＰＬ－１、及び化合物ＰＬ－２からなる群から選択される化合物を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン化可能脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン化可能脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン化可能脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、１８．５％のフィトステロールを含み、総ｍｏｌ％の構造脂質は、３８．５％である。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、２８．５％のフィトステロールを含み、総ｍｏｌ％の構造脂質は、３８．５％である。
いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、以下を含む：
（ｉ）約５０ｍｏｌ％のイオン化可能脂質（イオン化可能脂質は、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３２１、及び化合物Ｉ－３２６からなる群から選択される化合物である）、
（ｉｉ）約１０ｍｏｌ％のリン脂質（リン脂質は、ＤＳＰＣである）、
（ｉｉｉ）約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質（構造脂質は、β－シトステロール及びコレステロールから選択される）、及び
（ｉｖ）約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質（ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ－４２８である）。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示は、個体における免疫応答を阻害するための医薬の製造における、本開示の免疫細胞送達ＬＮＰ、及び任意の薬学的に許容される担体の使用を提供し、当該医薬は、ＬＮＰ及び任意の薬学的に許容される担体を含み、処置は、医薬及び任意の薬学的に許容される担体の投与を含む。
別の態様では、本開示は、個体における免疫応答の阻害方法に関し、当該方法は、免疫応答が対象において阻害されるように、本開示の免疫細胞送達ＬＮＰまたはその医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。一態様では、個体における免疫応答を阻害することは、サイトカイン産生を阻害することを含む。別の態様では、個体における免疫応答を阻害することは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＢ細胞）増殖を阻害することを含む。別の態様では、個体における免疫応答を阻害することは、免疫グロブリン産生（例えば、抗原特異的抗体産生）を阻害することを含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示は、対象、例えば、対象における免疫応答の阻害から恩恵を受ける疾患または病態を有する対象の治療方法を提供する。治療方法は、前述または関連の免疫細胞送達ＬＮＰを、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの態様では、免疫細胞送達ＬＮＰは、別の治療剤（例えば、自己免疫治療剤、免疫抑制剤など）と組み合わせて投与される。
Ａ～Ｆは、Ｔ細胞破壊因子（ＴＣＤ）をコードするｍＲＮＡ構築物によるＴ細胞増殖の阻害を示すグラフである。Ａ～Ｃは、Ｘ軸上に示す、０．３μｌ（Ａ）、１．０μｌ（Ｂ）または３．０μｌ（Ｃ）のいずれかのＴ細胞活性化ビーズ及びＴＣＤ構築物で処理したＣＤ４＋Ｔ細胞の結果を示す。Ｄ～Ｆは、Ｘ軸上に示す、０．３μｌ（Ｄ）、１．０μｌ（Ｅ）または３．０μｌ（Ｆ）のＴ細胞活性化ビーズ及びＴＣＤ構築物で処理したＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。各グラフの上の点線は、陰性対照ｍＲＮＡ構築物で処理した細胞について観察された増殖レベルを表し（１００％増殖として設定）、各グラフの下の点線は、その５０％（すなわち、増殖の５０％阻害）を表す。 Ａ～Ｄは、Ｔ細胞破壊因子（ＴＣＤ）をコードするｍＲＮＡ構築物による、事前に活性化されたＴ細胞の増殖の阻害を示すグラフである。Ａ～Ｂは、Ｔ細胞活性化後の０時間（Ａ）または２４時間（Ｂ）のいずれかで、示されたＴＣＤ構築物で処理したＣＤ４＋Ｔ細胞の結果を示す。Ｃ～Ｄは、Ｔ細胞活性化後の０時間（Ｃ）または２４時間（Ｄ）のいずれかで、示されたＴＣＤ構築物で処理したＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。各グラフの上の点線は、陰性対照ｍＲＮＡ構築物で処理した細胞について観察された増殖レベルを表し（１００％増殖として設定）、各グラフの下の点線は、その５０％（すなわち、増殖の５０％阻害）を表す。 Ａ～Ｂは、Ｔ細胞破壊因子（ＴＣＤ）をコードするｍＲＮＡ構築物によるＴ細胞におけるＴＮＦα産生の阻害を示すグラフである。Ａは、示されたＴＣＤ構築物で処理したＣＤ４＋Ｔ細胞の結果を示す。Ｂは、示されたＴＣＤ構築物で処理したＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。各グラフの上の点線は、陰性対照ｍＲＮＡ構築物で処置したＴ細胞におけるＴＮＦα産生レベルを表す（１００％増殖として設定）。Ａの中及び下の点線は、それぞれ、その５０％及び２５％（すなわち、ＴＮＦα産生の５０％または７５％阻害）を表す。Ｂの下の点線は、最大値の５０％（すなわち、ＴＮＦα産生の５０％阻害）を表す。 Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、異種ＧＶＨＤ動物モデルの死亡を遅らせることを示すグラフである。示されたＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物または対照で処置したマウスの時間（Ｘ軸）の経過に伴う生存率（Ｙ軸）を示す。 Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、異種ＧＶＨＤ動物モデルの死亡を遅らせることを示すグラフである。示されたＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物または対照で処置したマウスの時間（Ｘ軸）の経過に伴う生存率（Ｙ軸）を示す。 Ａ～Ｂは、ＣｐＧによるＢ細胞の事前活性化が、ＣＤ２０＋Ｂ細胞上のｍＲＮＡによりコードされたＢ細胞破壊因子のインビトロ発現レベルを増加させることを示すグラフである。Ａは、ＩＬ－２１、ＣｐＧ、または抗ＣＤ４０のいずれかで２４時間事前活性化されたｈＰＢＭＣの結果を示す。Ｂは、ＣｐＧで２４時間または７２時間事前活性化されたｈＰＢＭＣの結果を示す。 ヒトＢ細胞内で発現されるＢ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、インビトロで用量依存的効果を示すことを示すグラフである。培地またはＣｐＧで７２時間事前活性化され、かつ、５μＭまたは１μＭのいずれかのＬＮＰ封入されたＢＣＤ ｍＲＮＡで２４時間処理されたヒトＰＢＭＣの結果を示す。 Ａ～Ｉは、Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、Ｂ細胞によるｈＩｇＭ、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０の分泌をインビトロで阻害することを示すグラフである。Ａ～Ｃは、５μＭ ｍＲＮＡによる細胞の処理の結果を示す。Ｄ～Ｆは、１μＭ ｍＲＮＡによる細胞の処理の結果を示す。Ｇ～Ｉは、２００ｎＭ ｍＲＮＡによる細胞の処理の結果を示す。Ａ、Ｄ及びＧは、ｈＩｇＭの分泌の結果を示す。Ｂ、Ｅ及びＨは、ＩＬ－６の分泌の結果を示す。Ｃ、Ｆ及びＩは、ＩＬ－１０の分泌の結果を示す。 同上。 同上。 Ａ～Ｂは、Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、ヒトＰＢＭＣまたはＢ細胞上のＳｙｋのリン酸化を低下させることを示すグラフである。Ａは、休止ヒトＰＢＭＣの結果を示す。Ｂは、活性Ｂ細胞の結果を示す。 Ａ～Ｂは、Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、ＮＳＧマウスモデルにおけるｈＩｇＭ及びｈＩｇＧ分泌をインビボで低下させることを示すグラフである。Ａは、細胞投与後２日目及び７日目のｈＩｇＭの結果を示す。Ｂは、細胞投与後２日目及び７日目のｈＩｇＭの結果を示す。示される点は、重複試料からの平均を表す。対応のあるスチューデントｔ検定のｐ値を示す。エラーバーは、ＳＥＭを表す。 Ａ～Ｂは、Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、ＮＳＧマウスモデルにおけるｈＩｇＭ及びｈＩｇＧ分泌をインビボで低下させることを示すグラフである。Ａは、細胞投与後２～１５日目のｈＩｇＭの結果を示す。Ｂは、細胞投与後２～１５日目のｈＩｇＭの結果を示す。示される点は、１群当たり８頭のマウスからの平均を表す。エラーバーは、ＳＥＭを表す。 Ａ～Ｂは、Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、ＮＳＧマウスモデルにおけるｈＩｇＭ及びｈＩｇＧ分泌をインビボで低下させることを示すグラフである。Ａは、細胞投与後２、４、７、９及び１５日目に測定されたｈＩｇＭレベルの結果を示す。Ｂは、細胞投与後２、４、７、９及び１５日目のｈＩｇＧレベルの結果を示す。 Ａ～Ｂは、Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、抗原チャレンジ後のＮＳＧマウスモデルにおける抗ＴＴｄ ｈＩｇＧの蓄積をインビボで抑制することを示すグラフである。Ａは、細胞投与後２～１５日目の抗ＴＴｄ ｈＩｇＧの結果を示す。Ｂは、細胞投与後２～１５日目の総血清ｈＩｇＧの結果を示す。示される点は、１群当たり頭のマウスからの平均を表す。エラーバーは、ＳＥＭを表す。 Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、抗原チャレンジ後のＮＳＧマウスモデルにおける抗ＴＴｄ ｈＩｇＧの蓄積をインビボで抑制すること、及び細胞投与後２、４、７、９及び１５日目に測定された抗ＴＴｄ ｈＩｇＧレベルの結果を示すグラフを提供する。 Ａ～Ｂは、ネズミＢ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、活性化ラットＢ細胞におけるＩｇＧ分泌をインビトロで低下させることを示すグラフである。Ａは、活性化ラットＢ細胞によるＩｇＧ分泌の結果を示す。Ｂは、休止ラットＢ細胞によるＩｇＧ分泌の結果を示す。 Ａ～Ｂは、ネズミＢ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、活性化ラットＢ細胞におけるＩｇＭ分泌をインビトロで低下させることを示すグラフである。Ａは、活性化ラットＢ細胞によるＩｇＭ分泌の結果を示す。Ｂは、休止ラットＢ細胞によるＩｇＭ分泌の結果を示す。 Ａ～Ｂは、ネズミＢ細胞破壊因子ｍＲＮＡが、活性化ラットＢ細胞におけるＩＬ－１０分泌をインビトロで低下させることを示すグラフである。Ａは、活性化ラットＢ細胞によるＩＬ－１０分泌の結果を示す。Ｂは、休止ラットＢ細胞によるＩＬ－１０分泌の結果を示す。 免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、インビボ動物モデルにおけるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を阻害することを示すグラフである。結果は、示された処置で処置されたラットの経時的な集計ＣＩＡスコアを示す。 免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）動物モデルにおける抗コラーゲンＩＩ型血清抗体を阻害することを示す棒グラフである。結果は、ＥＬＩＳＡにより決定された血清抗体レベルを示す。 示された免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物によるＲａｍｏｓ－ｂｌｕｅ細胞のトランスフェクションによるレポーター遺伝子（ＳＥＡＰ）発現の阻害を示す棒グラフである。 免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩｇＭ分泌を抑制することを示す棒グラフである。 免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ－６分泌を抑制することを示す棒グラフである。 免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ－１０分泌を抑制することを示す棒グラフである。 免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、ヒトクラススイッチＢ細胞によるＩｇＧ分泌を抑制することを示す棒グラフである。
本開示は、免疫細胞内で細胞内発現される際に、免疫細胞活性を阻害するポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド構築物、例えば、ｍＲＮＡ及び修飾ｍＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、コードされたポリペプチドは、例えば、抗原刺激に応答して、免疫細胞の少なくとも１つの細胞成分と相互作用して、細胞の活性化をもたらす細胞内の通常のシグナル形質導入経路を破壊（すなわち、変化または阻害）し、それにより免疫細胞の活性を阻害する、キメラポリペプチドである。いくつかの実施形態では、コードされたキメラポリペプチドは、少なくとも２つの部分（すなわち、ドメインまたはモチーフ）、すなわち免疫細胞の少なくとも１つの細胞成分とキメラポリペプチドの相互作用（例えば、結合または会合）を媒介する第１の部分、及び免疫細胞における通常のシグナル形質導入の破壊を媒介する第２の部分を含む。したがって、これらの構築物は、免疫細胞破壊因子構築物と本明細書で呼ばれる。
いくつかの実施形態では、本開示の免疫細胞破壊因子構築物は、免疫細胞活性の阻害を媒介することで、実質的な免疫細胞枯渇を引き起こさずに、対象における免疫応答を阻害する点で有利である。さらに、免疫細胞破壊因子をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の発現レベルは、それらが用量依存的な阻害を呈するため、標的細胞内で制御することができ、それにより所望の阻害レベルに制御することができる。さらに、免疫細胞破壊因子は、一時的かつ制御可能な方法で免疫細胞内で発現することができるため、非特異的薬剤を用いた長期の全身免疫抑制で観察される負の副作用を回避し得る。
免疫細胞破壊因子ポリヌクレオチド
一態様では、本開示は、免疫細胞内で発現される際に免疫細胞の通常のシグナル伝達形質導入経路の破壊を介して免疫細胞活性を阻害するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。このようなポリヌクレオチド及びコードされたポリペプチドは、免疫細胞破壊因子（ＩＣＤ）構築物と本明細書で呼ばれる。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。別の実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞である。別の実施形態では、免疫細胞は、ＮＫ細胞である。別の実施形態では、免疫細胞は、樹状細胞である。別の実施形態では、免疫細胞は、マクロファージである。
本開示のポリヌクレオチドは、典型的には、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であるが、ＤＮＡ分子であるポリヌクレオチドも包含される。ｍＲＮＡ構築物は、修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）と本明細書で呼ばれる１つまたは修飾されたヌクレオチドを含み得る。キメラポリペプチドをコードするコード領域に加えて、ＩＣＤ構築物は、コードされたポリペプチドの発現を調節する非コード要素を含み得る。例えば、ｍＲＮＡ構築物は、典型的には、コード領域に加えて、少なくとも５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、及びポリＡ尾部を含む。ＤＮＡ構築物は、典型的には、コード領域に加えて、プロモーター及びエンハンサー要素を含む。
ＩＣＤ構築物によりコードされるキメラポリペプチドは、少なくとも２つの部分（すなわち、ドメインまたはモチーフ）、すなわち免疫細胞の少なくとも１つの膜またはシグナル伝達複合体成分とキメラポリペプチドの会合を媒介する第１の部分（本明細書中で、「会合ドメイン」、またはＡＤとも呼ばれる）、及び免疫細胞における通常のシグナル形質導入の破壊を通じて、免疫細胞破壊因子構築物の阻害効果を媒介する第２の部分（本明細書中で、「阻害性ドメイン」またはＩＤとも呼ばれる）を含む。一実施形態では、ＡＤは、キメラポリペプチドのＮ末端であり、ＩＤは、Ｃ末端である。別の実施形態では、ＩＤは、キメラポリペプチドのＮ末端であり、ＡＤは、キメラポリペプチドのＣ末端である。ある特定の実施形態では、ＡＤ及びＩＤは、リンカーポリペプチドにより分離される。２つのタンパク質ドメイン間の距離を増すための適当なリンカーポリペプチドは、当該技術分野において公知である。一実施形態では、リンカーは、配列（ＧＧＧＧＳ）ｎであり、式中、ｎ＝１～４（配列番号１８８）である。別の実施形態では、ＡＤとＩＤを分離するリンカーはない。ある特定の実施形態では、ＡＤまたはＩＤは、シグナル配列を含む。一実施形態では、シグナル配列は、ＡＤまたはＩＤが由来するタンパク質由来の天然のシグナル配列である。別の実施形態では、シグナル配列は、ＡＤまたはＩＤが由来するタンパク質とは異なるタンパク質由来の異種シグナル配列である。
Ｔ細胞破壊因子構築物
一実施形態では、本開示の免疫細胞破壊因子ポリヌクレオチドは、Ｔ細胞内で細胞内発現される際にＴ細胞の活性を阻害するＴ細胞破壊因子（ＴＣＤ）構築物である。Ｔ細胞活性を阻害することは、例えば、Ｔ細胞増殖の減少（例えば、抗原刺激に応答した増殖の減少）、Ｔ細胞サイトカイン産生の減少（例えば、ＴＮＦα及び／またはＩＦＮγの産生の減少）、及び／またはＴ細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞活性、細胞傷害性Ｔ細胞活性）の他のエフェクター機能の阻害をもたらし得る。
ＴＣＤポリヌクレオチド構築物は、Ｔ細胞の少なくとも１つの成分と会合し、Ｔ細胞における通常のシグナル形質導入活性を破壊するキメラポリペプチドをコードする。Ｔ細胞における通常のシグナル形質導入活性に干渉（すなわち、破壊、変化、阻害）することによって、ＴＣＤポリペプチドは、Ｔ細胞活性化の閾値を増加させることができ、その結果、Ｔ細胞が応答するのに、より大きな刺激が必要になることで、ＴＣＤの不在下における活性レベルと比較して、ＴＣＤの存在下におけるＴ細胞活性の阻害をもたらす。
ＴＣＤポリペプチドは、少なくとも２つの部分（すなわち、ドメインまたはモチーフ）、すなわちＴ細胞の少なくとも１つの膜またはシグナル伝達複合体成分とキメラポリペプチドの会合を媒介する第１の部分（「会合ドメイン」またはＡＤ）、及びＴ細胞における通常のシグナル形質導入の破壊を通じてＴＣＤの阻害効果を媒介する第２の部分（「阻害性ドメイン」またはＩＤ）を含む、キメラポリペプチドである。
抗原特異的Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を介して媒介される。ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／ε及びζ／ζシグナル伝達分子と複合化したＴＣＲα及びβ鎖からなる。共受容体であるＣＤ４（ヘルパーＴ細胞上）、及びＣＤ８（細胞傷害性Ｔ細胞上）も、ＴＣＲ複合体からのシグナル伝達を補助する。ＴＣＲが、ＭＨＣにより提示される抗原と作用すると、チロシンキナーゼＬｃｋ（ＣＤ４及びＣＤ８の細胞質尾部と関連する）は、ＴＣＲ複合体のＣＤ３及びζ鎖の細胞内鎖をリン酸化することで、別の細胞質チロシンキナーゼであるＺＡＰ－７０が、それらの細胞内鎖と結合することができる。その後、Ｌｃｋは、ＺＡＰ－７０をリン酸化し、活性化し、次いで、シグナル伝達カスケードにおける別の分子であるＬＡＴ（活性化Ｔ細胞のリンカーとしても知られる）をリン酸化する。ＬＡＴは、ＴＣＲシグナル伝達カスケードに関与する多くの他のタンパク質（例えば、ＰＬＣγ、ＳＯＳ、ＧＡＤＳ、ＧＲＢ２、ＳＬＰ７６、ＩＴＫ、ＶＡＶ、ＮＣＫ、ＡＤＡＰ、及びＰＩ３Ｋ）のドッキング部位として機能する。
さらに、Ｔ細胞が活性化すると、キナーゼ活性型Ｌｃｋの小部分が、細胞膜内の脂質ラフトの外側から脂質ラフトの内側に転座し、ここで、その画分は、脂質ラフトに存在しているキナーゼＦｙｎと相互作用し、活性化させる。その後、Ｆｙｎは、さらに下流のシグナル伝達活性化に関与する。
受容体関連シグナル伝達サブユニットに加えて、Ｔ細胞は、受容体と直接関連しないが、受容体シグナル伝達の調節に直接的または間接的に関与する膜貫通アダプタータンパク質（ＴＲＡＰ）も含有する。このようなＴＲＡＰの一例は、Ｃｓｋ結合タンパク質（Ｃｂｐ）としても知られるＰＡＧ（スフィンゴ糖脂質マイクロドメインと関連するホスホタンパク質）である。さらに、Ｔ細胞は、Ｔ細胞シグナル伝達成分、例えば、膜関連Ｓｒｃと相互作用する他の膜関連タンパク質を含有する。
ＴＣＲ媒介性シグナル伝達カスケードの調節における重要な成分は、シグナル伝達カスケードの活性化物質成分を阻害するキナーゼ及びホスファターゼである。例えば、サイトゾルキナーゼＣｓｋ（Ｃ末端Ｓｒｃキナーゼ）は、阻害性チロシン５０５上のリン酸化を介するＬｃｋの負の調節因子である。また、Ｌｃｋは、ホスファターゼＳＨＰ－１（Ｓｒｃホモロジー領域２ドメイン含有ホスファターゼ－１及びチロシンタンパク質ホスファターゼ非受容体６型、またはＰＴＰＮ６としても知られる）によって阻害され、そのホスファターゼ活性は、活性化チロシン３９４上のＬｃｋを脱リン酸化する。ホスファターゼＰＴＰＮ２２は、活性化チロシン３９４上のＬｃｋ、ならびに活性化チロシン４９３上のＺＡＰ－７０も脱リン酸化する。ホスファターゼＰＴＰＮ１及びＰＴＥＮは、例えば、細胞内シグナル伝達分子Ｇｒｂ２及びＰＩＰ３のそれぞれの脱リン酸化を介して、ＴＣＲ媒介性シグナル伝達の阻害にも関与する。さらに、ＳＨＩＰ１ホスファターゼは、ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路の負の調節を介した細胞内シグナル伝達の阻害剤でもある。
さらに、ＧＴＰａｓｅ ＫＲＡＳは、Ｔ細胞のシグナル伝達に役割を果たす。ＫＲＡＳは、典型的には、そのＣ末端にイソプレン基が存在するため、細胞膜に繋がれている。
ＴＣＲ媒介性シグナル伝達カスケードの調節における他の重要な成分は、阻害性受容体であり、その例としては、ＣＴＬＡ４及びＬＡＩＲ１が挙げられる。これらは両方とも、阻害性シグナルをＴ細胞に送達する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである表面受容体である。ＬＡＩＲ１は、その細胞質尾部において２つのＩＴＩＭを含む一方、ＣＴＬＡ４は、その細胞質尾部においてＩＴＩＭ様モチーフを含む。
ＴＣＤ会合ドメイン
本開示のＴ細胞破壊因子構築物の会合ドメイン（ＡＤ）は、Ｔ細胞内の他の成分と相互作用する多くの異なる種類のＴ細胞成分、例えば、膜受容体関連成分、膜受容体成分、膜貫通関連成分、または細胞内関連成分のいずれかに由来することができる。
会合ドメインが由来し得る膜受容体関連Ｔ細胞成分の非限定例としては、Ｌｃｋ（ＣＤ４及びＣＤ８受容体と会合する）、及びＺＡＰ－７０（ＣＤ３と会合する）が挙げられる。
したがって、一実施形態では、ＡＤは、Ｌｃｋタンパク質、例えば、Ｌｃｋタンパク質のＣＤ４結合またはＣＤ８結合部分に由来する。一実施形態では、ＡＤは、Ｌｃｋタンパク質（例えば、ヒトＬｃｋ）のＮ末端部分、例えば、ヒトＬｃｋのアミノ酸残基１～５０（例えば、配列番号１３に示すアミノ酸配列を有する）、またはヒトＬｃｋのアミノ酸残基１～７２（例えば、配列番号２０に示すアミノ酸配列を有する）である。別の実施形態では、ＡＤは、Ｌｃｋタンパク質に由来し、ＬｃｋのＳＨ２及びＳＨ３ドメイン、例えば、ヒトＬｃｋ ＳＨ２－ＳＨ３ドメイン（例えば、配列番号７に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、ＡＤは、ＺＡＰ－７０のＣＤ３結合部分などのＺＡＰ－７０タンパク質（例えば、ヒトＺＡＰ－７０タンパク質）に由来する。一実施形態では、ＡＤは、少なくとも１つのＳＨ２ドメインを含むＺＡＰ－７０の部分を含む。一実施形態では、ＡＤは、Ｎ末端ＳＨ２ドメイン、インタードメインＡ（Ｉ－Ａ）、Ｃ末端ＳＨ２ドメイン、及びインタードメインＢ（Ｉ－Ｂ）（例えば、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する）を含むＺＡＰ－７０（例えば、ヒトＺＡＰ－７０）の部分を含む。一実施形態では、ＡＤは、Ｎ末端ＳＨ２ドメイン、インタードメインＡ（Ｉ－Ａ）、Ｃ末端ＳＨ２ドメイン及びインタードメインＢ（Ｉ－Ｂ）を含み、Ｉ－Ｂドメインにおいて以下の変異：Ｙ２９２Ａ／Ｙ３１５Ａ／Ｙ３１９Ａ（例えば、配列番号２に示すアミノ酸配列を有する）をさらに含む、ＺＡＰ－７０（例えば、ヒトＺＡＰ－７０）の部分を含む。一実施形態では、ＡＤは、Ｎ末端ＳＨ２ドメイン、インタードメインＡ（Ｉ－Ａ）、Ｃ末端ＳＨ２ドメイン（例えば、配列番号３に示すアミノ酸配列を有する）を含むＺＡＰ－７０（例えば、ヒトＺＡＰ－７０）の部分を含む。一実施形態では、ＡＤは、Ｎ末端ＳＨ２ドメイン及びＣ末端ＳＨ２ドメインを含むＺＡＰ－７０（例えば、ヒトＺＡＰ－７０）の部分を含み、任意選択で、リンカーポリペプチド（例えば、Ｇ４Ｓリンカーポリペプチド）（例えば、配列番号４に示すアミノ酸配列を有する）により分離される。
会合ドメインが由来し得る膜関連Ｔ細胞成分の非限定例としては、Ｆｙｎ、Ｓｒｃ、及びＫＲＡＳタンパク質が挙げられる。
したがって、一実施形態では、ＡＤは、Ｆｙｎタンパク質（例えば、ヒトＦｙｎ）、例えば、その膜結合部分に由来する。一実施形態では、ＡＤは、ＦｙｎのＮ末端部分、例えば、ヒトＦｙｎのアミノ酸残基１～５０（例えば、配列番号１４に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、ＡＤは、Ｓｒｃタンパク質（例えば、ヒトＳｒｃ）、例えば、その膜結合部分に由来する。一実施形態では、ＡＤは、ＳｒｃのＮ末端部分、例えば、ヒトＳｒｃのアミノ酸残基１～１０（例えば、配列番号１５に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、ＡＤは、ＫＲＡＳタンパク質（例えば、ヒトＫＲＡＳ）、例えば、その膜結合部分に由来する。一実施形態では、ＡＤは、ＫＲＡＳのＣ末端部分、例えば、ヒトＫＲＡＳのアミノ酸残基１６６～１８６（例えば、配列番号１９に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
会合ドメインが由来し得る膜貫通関連Ｔ細胞成分の非限定例は、ＰＡＧタンパク質である。したがって、一実施形態では、ＡＤは、その膜結合部分などのＰＡＧタンパク質（例えば、ヒトＰＡＧ）に由来する。一実施形態では、ＡＤは、ＰＡＧのＮ末端部分、例えば、ヒトＰＡＧのアミノ酸残基１～４７（例えば、配列番号１２に示すアミノ酸配列を有する）を含む
会合ドメインが由来し得る細胞内関連Ｔ細胞成分の非限定例としては、ＬＡＴ、Ｇｒｂ２、Ｇｒａｐ、ＰＩ３Ｋ、ＰＬＣγ１、ＧＡＤＳ、ＡＤＡＰ、ＮＣＫ、ＶＡＶ、ＳＯＳ、ＩＴＫ、及びＳＬＰ７６タンパク質が挙げられる。
したがって、一実施形態では、ＡＤは、ＬＡＴタンパク質（例えば、ヒトＬＡＴ）、例えば、全長ＬＡＴタンパク質またはそのＺＡＰ－７０結合部分に由来する。一実施形態では、ＡＤは、全長ＬＡＴタンパク質、例えば、全長ヒトＬＡＴ（例えば、配列番号８に示すアミノ酸配列を有する）を含む。一実施形態では、ＡＤは、ＬＡＴのＮ末端部分、例えば、ヒトＬＡＴのアミノ酸残基１～１６０（例えば、配列番号９に示すアミノ酸配列を有する）、またはヒトＬＡＴのアミノ酸残基１～３８（例えば、配列番号１０に示すアミノ酸配列を有する）、またはヒトＬＡＴのアミノ酸残基１～３３（例えば、配列番号１１に示すアミノ酸配列を有する）、またはマウスＬＡＴのアミノ酸残基１～３８（例えば、配列番号１６に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、ＡＤは、Ｇｒｂ２タンパク質（例えば、ヒトＧｒｂ２）、例えば、そのＬＡＴ結合部分に由来する。一実施形態では、ＡＤは、ＳＨ２ドメインを含有するＧｒｂ２の部分、例えば、ヒトＧｒｂ２のアミノ酸残基５９～１５２（例えば、配列番号５に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、ＡＤは、Ｇｒａｐタンパク質（例えば、ヒトＧｒａｐ）、例えば、そのＬＡＴ結合部分に由来する。一実施形態では、ＡＤは、ＳＨ２ドメインを含有するＧｒａｐの部分、例えば、ヒトＧｒａｐのアミノ酸残基６０～１５４（例えば、配列番号６に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、ＡＤは、ＰＩ３Ｋタンパク質、例えば、ＰＩ３Ｋ．ｐ８５αタンパク質（ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ調節性サブユニットアルファとしても知られる）（例えば、ヒトＰＩ３Ｋ．ｐ８５α）に由来する。一実施形態では、ＡＤは、ｉＳＨ２ドメインを含有する内部領域が欠失しているＰＩ３Ｋ．ｐ８５αの部分、例えば、残基１１２～３０２が欠失しているヒトＰＩ３Ｋ．ｐ８５αのアミノ酸残基１～１１１、３０３～７２４（例えば、配列番号１７に示すアミノ酸配列を有する部分）を含む。
別の実施形態では、ＡＤは、ＰＬＣγ１タンパク質、（例えば、ヒトＰＬＣγ１）、例えば、そのＬＡＴ結合部分に由来する。一実施形態では、ＡＤは、ＳＨ２及びＳＨ３ドメインを含有するＰＬＣγ１の部分、例えば、ヒトＰＬＣγ１のアミノ酸残基５５０～８５０（例えば、配列番号１８に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
一実施形態では、Ｔ細胞破壊因子のＡＤは、配列番号１～２０に示す配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
ＴＣＤ阻害性ドメイン
本開示のＴ細胞破壊因子構築物の阻害性ドメインは、シグナル形質導入及びその後のＴ細胞活性化に関与する多くの異なるＴ細胞成分のいずれかに由来し得る。例えば、一実施形態では、阻害性ドメインは、ＩＴＩＭ／ＩＴＡＭ極性を逆にすることで、阻害性シグナル伝達を支持するように機能する。別の実施形態では、阻害性ドメインは、調節性Ｃｓｋを動員することで、阻害性シグナル伝達を促進するように機能する。別の実施形態では、阻害性ドメインは、調節性ホスファターゼを動員することで、阻害性シグナル伝達を促進するように機能する。さらに別の実施形態では、阻害性ドメインは、ＰＩ３Ｋシグナル伝達を変化（例えば、阻害、下方調節）させることで、Ｔ細胞活性を阻害する。その阻害性機能を媒介するため、一実施形態では、阻害性ドメインは、１つ以上のホスファターゼドメインを含む。別の実施形態では、阻害性ドメインは、１つ以上のキナーゼドメインを含む。別の実施形態では、阻害性ドメインは、１つ以上のＩＴＩＭを含む。
したがって、一実施形態では、Ｔ細胞破壊因子の阻害性ドメイン（ＩＤ）は、ＳＨＰ１タンパク質（ＳＨ２含有ホスファターゼ－１及びチロシンタンパク質ホスファターゼ非受容体６型としても知られる）（例えば、ヒトＳＨＰ１タンパク質）に由来し、ＳＨＰ１ホスファターゼドメインを含む。例えば、一実施形態では、ＩＤは、ヒトＳＨＰ１のアミノ酸２４４～５１５（例えば、配列番号２１に示すアミノ酸配列を有する）を含む。別の実施形態では、ＩＤは、ヒトＳＨＰ１のアミノ酸２～５１５（例えば、配列番号２７に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、Ｔ細胞破壊因子の阻害性ドメイン（ＩＤ）は、ＳＨＩＰ１タンパク質（ＳＨ２含有するイノシトールホスファターゼ－１としても知られる）（例えば、ヒトＳＨＩＰ１タンパク質）に由来し、ＳＨＩＰ１ホスファターゼドメインを含む。例えば、一実施形態では、ＩＤは、ヒトＳＨＩＰ１のアミノ酸１１１～９１０（例えば、配列番号３１に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、Ｔ細胞破壊因子の阻害性ドメイン（ＩＤ）は、ＰＴＰＮ２２タンパク質（タンパク質チロシンホスファターゼ、非受容体２２型としても知られる）（例えば、ヒトＰＴＰＮ２２タンパク質）に由来し、ＰＴＰＮ２２ホスファターゼドメインを含む。一実施形態では、ＩＤは、ＰＴＰＮ２２のＮ末端部分、例えば、ヒトＰＴＰＮ２２のアミノ酸残基１～２９０（例えば、配列番号３２に示すアミノ酸配列を有する）を含む。別の実施形態では、ＩＤは、ＰＴＰＮ２２のＮ末端部分を含み、ＰＴＰＮ２２活性の調節に関与する触媒ドメイン内のセリン残基に変異をさらに含み、例えば、Ｓ３５Ａ変異を有するヒトＰＴＰＮ２２のアミノ酸残基１～２９０（例えば、配列番号３３に示すアミノ酸配列を有する）、またはＳ３５Ａ変異を有するヒトＰＴＰＮ２２のアミノ酸残基２４～２８９（例えば、配列番号３４に示すアミノ酸配列を有する）である。
別の実施形態では、Ｔ細胞破壊因子の阻害性ドメイン（ＩＤ）は、ＰＴＰＮ１タンパク質（タンパク質チロシンホスファターゼ非受容体１型としても知られる）（例えば、ヒトＰＴＰＮ１タンパク質）に由来し、ＰＴＰＮ１ホスファターゼドメインを含む。一実施形態では、ＩＤは、ＰＴＰＮ１のＮ末端部分、例えば、ヒトＰＴＰＮ１のアミノ酸残基３～２７７（例えば、配列番号２９に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、Ｔ細胞破壊因子の阻害性ドメイン（ＩＤ）は、ＰＴＥＮタンパク質（例えば、ヒトＰＴＥＮタンパク質）に由来し、ＰＴＥＮホスファターゼドメインを含む。一実施形態では、ＩＤは、変異型ＰＴＥＮポリペプチドを含む。一実施形態では、ＩＤは、１つ以上のリジン→グルタミン酸変異を含むＰＴＥＮポリペプチド、例えば、Ｋ１３Ｅ及びＫ２８９Ｅ変異を有するヒトＰＴＥＮのアミノ酸残基１～３５０（例えば、配列番号３０に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、Ｔ細胞破壊因子の阻害性ドメイン（ＩＤ）は、Ｃｓｋタンパク質（例えば、ヒトＣｓｋタンパク質）に由来し、Ｃｓｋキナーゼドメインを含む。例えば、一実施形態では、ＩＤは、ヒトＣｓｋのアミノ酸残基１９５～４４９（例えば、配列番号２６に示すアミノ酸配列を有する）を含む。別の実施形態では、ＩＤは、Ｃｓｋの構成的に活性な形態、例えば、以下の変異、すなわちＷ４７Ａ／Ｒ１０７Ｋ／Ｅ１５４Ａを有する全長ヒトＣｓｋタンパク質（例えば、配列番号２５に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、Ｔ細胞破壊因子の阻害性ドメイン（ＩＤ）は、ＬＡＩＲ１タンパク質（白血球関連免疫グロブリン様受容体１としても知られる）（例えば、ヒトＬＡＩＲ１タンパク質）に由来し、少なくとも１つのＩＴＩＭモチーフを含む。一実施形態では、ＩＤは、ＬＡＩＲ１のＩＴＩＭ１（ヒトＬＡＩＲ１のアミノ酸残基２４９～２５４に位置する）を含む。別の実施形態では、ＩＤは、ＬＡＩＲ１のＩＴＩＭ２（ヒトＬＡＩＲ１のアミノ酸残基２７９～２８４に位置する）を含む。別の実施形態では、ＩＤは、ＬＡＩＲのＩＴＩＭ１及びＩＴＩＭ２の両方を含む。例えば、一実施形態では、ＩＤは、ヒトＬＡＩＲ１のアミノ酸残基１８７～２８７（例えば、配列番号２４に示すアミノ酸配列を有する）を含む。別の実施形態では、ＩＤは、ＬＡＩＲ１ ＩＴＩＭ１及び／またはＩＴＩＭ２配列が挿入されているポリペプチドを含む。例えば、一実施形態では、ＩＤは、ＬＡＩＲ１ ＩＴＩＭ１モチーフをＬＡＴのＣ末端領域内で１つ以上のアラニン含有領域（例えば、３つの領域）に置き換えるＬＡＴポリペプチド（例えば、配列番号２２に示すアミノ酸配列を有する）を含む。別の実施形態では、ＩＤは、ＬＡＴのＣ末端領域内で１つ以上のアラニン含有領域（例えば、３つの領域）がＬＡＩＲ１ ＩＴＩＭ２モチーフに置き換えられるＬＡＴポリペプチド（例えば、配列番号２３に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、Ｔ細胞破壊因子の阻害性ドメイン（ＩＤ）は、ＣＴＬＡ４タンパク質（例えば、ヒトＣＴＬＡ４タンパク質）に由来し、ＣＴＬＡ４のＩＴＩＭ様モチーフを含む。一実施形態では、ＩＤは、ＣＴＬＡ４のＣ末端部分を含む。例えば、一実施形態では、ＩＤは、ヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸残基１８２～２２３（例えば、配列番号２８に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
一実施形態では、Ｔ細胞破壊因子のＩＤは、配列番号２１～３４に示す配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
Ｔ細胞破壊因子構築物の代表的な例の調製は、実施例１に詳細に記載される。構築物が、Ｔ細胞活性をインビトロで阻害する、例えば、阻害Ｔ細胞増殖及びサイトカイン分泌を阻害する能力は、実施例２及び３にそれぞれ記載される。構築物が、Ｔ細胞活性をインビトロで阻害する、例えば、ＧＶＨＤモデルの死亡を遅延させる能力は、実施例４に記載される。
一実施形態では、本開示は、ＺＡＰ－７０由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号３５～３８に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号８１～８４に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｇｒｂ２由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号３９に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号８５に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｇｒａｐ由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号４０に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号８６に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｌｃｋ由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号４１、６０及び６５に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号８７、１０６及び１１１に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｌｃｋ由来の会合ドメイン、及びＣｓｋ由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号５０及び５５に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号９６及び１０１に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｌｃｋ由来の会合ドメイン、及びＰＴＰＴＮ２２由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号８０に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１２６に示される。
一実施形態では、本開示は、ＬＡＴ由来の会合ドメイン、及びＬＡＩＲ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号４２～４４及び４７に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号８８～９０及び９３に示される。
一実施形態では、本開示は、ＬＡＴ由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号４５、４６、５８及び６３に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号９１、９２、１０４及び１０９に示される。
一実施形態では、本開示は、ＬＡＴ由来の会合ドメイン、及びＣｓｋ由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号４８及び５３に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号９４及び９９に示される。
一実施形態では、本開示は、ＬＡＴ由来の会合ドメイン、及びＣＴＬＡ４由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号６８及び６９に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１１４及び１１５に示される。
一実施形態では、本開示は、ＬＡＴ由来の会合ドメイン、及びＰＴＰＮ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号７０に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１１６に示される。
一実施形態では、本開示は、ＰＡＧ由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号５９及び６４に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１０５及び１１０に示される。
一実施形態では、本開示は、ＰＡＧ由来の会合ドメイン、及びＣｓｋ由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号４９及び５４に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号９５及び１００に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｆｙｎ由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号６１及び６６に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１０７及び１１２に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｆｙｎ由来の会合ドメイン、及びＣｓｋ由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号５２及び５７に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号９８及び１０３に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｓｒｃ由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号６２及び６７に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１０８及び１１３に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｓｒｃ由来の会合ドメイン、及びＣｓｋ由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号５１及び５６に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号９７及び１０２に示される。
一実施形態では、本開示は、ＰＩ３Ｋ．ｐ８５α由来の会合ドメイン、及びＰＴＥＮ由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号７１に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１１７に示される。
一実施形態では、本開示は、ＰＩ３Ｋ．ｐ８５α由来の会合ドメイン、及びＳＨＩＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号７２に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１１８に示される。
一実施形態では、本開示は、ＰＬＣγ１由来の会合ドメイン、及びＳＨＩＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号７３及び７４に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１１９及び１２０に示される。
一実施形態では、本開示は、ＰＬＣγ１由来の会合ドメイン、及びＰＴＥＮ由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号７５及び７６に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１２１及び１２２に示される。
一実施形態では、本開示は、ＫＲＡＳ由来の会合ドメイン、及びＰＴＥＮ由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号７７に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１２３に示される。
一実施形態では、本開示は、ＫＲＡＳ由来の会合ドメイン、及びＰＴＰＮ２２由来の阻害性ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号７８及び７９に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、に示される。配列番号１２４及び１２５に示される。
一実施形態では、本開示は、ＳＨＰ１由来の阻害性ドメイン、及びＺＡＰ－７０、Ｇｒｂ２、Ｇｒａｐ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＰＡＧ、Ｆｙｎ、Ｓｒｃ、ＰＩ３Ｋ．ｐ８５α、及びＰＬＣγ１からなる群から選択されるタンパク質由来の会合ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号３５～４１、４５、４６、５８～６７及び７２～７４に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号８１～８７、９１、９２、１０４－１１３及び１１８～１２０に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｃｓｋ由来の阻害性ドメイン、及びＬＡＴ、ＰＡＧ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｓｒｃ及びＰＬＣγ１からなる群から選択されるタンパク質由来の会合ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号４８～５７に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号９４～１０３に示される。
一実施形態では、本開示は、ＰＴＥＮ由来の阻害性ドメイン、及びＰＩ３Ｋ．ｐ８５α及びＰＬＣγ１からなる群から選択されるタンパク質由来の会合ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号７１、７５及び７６に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１１７、１２１及び１２２に示される。
一実施形態では、本開示は、ＰＴＰＮ２２由来の阻害性ドメイン、及びＫＲＡＳ及びＬｃｋからなる群から選択されるタンパク質由来の会合ドメインを含む、ＴＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号７８～８０に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１２４～１２６に示される。
Ｂ細胞破壊因子構築物
一実施形態では、本開示の免疫細胞破壊因子ポリヌクレオチドは、Ｂ細胞内で細胞内発現される際にＢ細胞の活性を阻害するＢ細胞破壊因子（ＢＣＤ）構築物である。Ｂ細胞活性を阻害することは、例えば、Ｂ細胞増殖の減少（例えば、抗原刺激に応答した増殖の減少）、Ｂ細胞サイトカイン産生の減少（例えば、ＩＬ－６及び／またはＩＬ－１０の産生の減少）、及び／または免疫グロブリン産生の減少（例えば、ＩｇＭ及び／またはＩｇＧ産生の減少）をもたらし得る。
ＢＣＤポリヌクレオチド構築物は、Ｂ細胞の少なくとも１つの成分と会合し、Ｂ細胞における通常のシグナル形質導入活性を破壊するキメラポリペプチドをコードする。Ｂ細胞における通常のシグナル形質導入活性に干渉（すなわち、破壊、変化、阻害）することによって、ＢＣＤポリペプチドは、Ｂ細胞活性化の閾値を増加させることができ、その結果、Ｂ細胞が応答するのに、より大きな刺激が必要になることで、ＢＣＤの不在下における活性レベルと比較して、ＢＣＤの存在下におけるＢ細胞活性の阻害をもたらす。
ＢＣＤポリペプチドは、少なくとも２つの部分（すなわち、ドメインまたはモチーフ）、すなわちＢ細胞の少なくとも１つの膜またはシグナル伝達複合体成分とキメラポリペプチドの会合を媒介する第１の部分（「会合ドメイン」またはＡＤ）、及びＢ細胞における通常のシグナル形質導入の破壊を通じて、ＢＣＤの阻害効果を媒介する第２の部分（「阻害性ドメイン」またはＩＤ）を含む、キメラポリペプチドである。
抗原特異的Ｂ細胞活性化は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）複合体を介して媒介される。ＢＣＲ複合体は、表面膜結合免疫グロブリン軽鎖及び重鎖、及びシグナル伝達ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂヘテロダイマーからなる。ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂの細胞質尾部の各々は、２つの保存チロシンを有する免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。ＢＣＲを介した通常のシグナル伝達の場合、細胞表面ＢＣＲの抗原連結後に、ＩＴＡＭ中の２つのチロシン残基が、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）を引き付けて、活性化させるｓｒｃファミリーキナーゼＬｙｎによってリン酸化される。得られたＩＴＡＭ／Ｓｙｋ複合体は、ＢＣＲシグナルを増幅させ、ＢＣＲをいくつかの下流シグナル伝達経路に接続させることで、Ｂ細胞の活性化、増殖、及び分化をもたらす。
Ｂ細胞における別の重要なシグナル伝達ハブは、ＣＤ１９共受容体である。これは、細胞表面上のＣＤ８１及びＣＤ２１と会合し、ＢＣＲシグナル伝達の増幅因子または伝播因子として機能する。ＣＤ１９は、９つのチロシン部位を有する長い細胞質尾部を有する。それらのほとんどは、Ｌｙｎによりリン酸化される。いったんリン酸化されると、これらのチロシンは、アダプタータンパク質ＰＩ３Ｋ及びＰＬＣγの結合先として機能し、ＰＩ３Ｋシグナル伝達及び細胞骨格再構築をもたらす。休止Ｂ細胞では、成熟Ｂ細胞は、ＢＣＲ及びＣＤ１９を共発現するが、当該タンパク質は、細胞膜上の異なるタンパク質アイランドに存在する。Ｂ細胞が活性化すると、ＣＤ１９複合体は、ＢＣＲオープンアイランドに移動し、順次Ｓｙｋと作用し、ＢＣＲ－ＩＴＡＭシグナル伝達にアクセスすることで、ＢＣＲ媒介性シグナル伝達を増幅または伝播させる。
ＣＤ２２は、従来型Ｂ細胞（Ｂ－２細胞）のＢＣＲシグナル伝達の別の調節因子であり、阻害性機能を有する。ＣＤ２２は、糖結合膜貫通タンパク質であり、そのＮ末端は、シアル酸に結合し、そのＣ末端細胞質ドメインは、３つの免疫受容体チロシンベース阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。通常、ＣＤ２２及びＢＣＲは、Ｂ細胞表面上で互いに分離している。ＢＣＲへの抗原結合後、ＣＤ２２分子がＢＣＲアイランドに動員され、ＬｙｎによるＩＴＩＭのリン酸化をもたらす。その後、リン酸化したＩＴＩＭは、ホスファターゼＳＨＰ－１をＢＣＲに動員し、これはＢＣＲシグナル伝達を強力に鈍くさせる。したがって、ＣＤ１９及びＣＤ２２は、異なる下流タンパク質を動員し、刺激性／阻害性均衡を提供して、ＢＣＲ活性化を調節する。
ＢＣＤ会合ドメイン
本開示のＢ細胞破壊因子構築物の会合ドメインは、Ｂ細胞内の他の成分と相互作用する多くの異なる種類のＢ細胞成分、例えば、膜受容体関連成分、膜受容体成分、膜貫通関連成分、または細胞内関連成分のいずれかに由来であり得る。
会合ドメインが由来し得る膜受容体関連Ｂ細胞成分の非限定例としては、ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂタンパク質が挙げられる。これらのタンパク質は、Ｂ細胞におけるＢＣＲの細胞質領域と会合する。一実施形態では、ＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂのＮ末端部分は、ＢＣＲと相互作用することができるが、下流活性化ＩＴＡＭを欠いているＡＤとして使用される。別の実施形態では、全長ＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂタンパク質は、ＡＤとして使用されるが、ＡＤが、ＢＣＲと相互作用することができるが、Ｌｙｎによりリン酸化することができないように、ＩＴＡＭは、変異されている。
したがって、一実施形態では、Ｂ細胞破壊因子のＡＤは、ＣＤ７９タンパク質に由来する。一実施形態では、ＣＤ７９ａ（例えば、ヒトＣＤ７９ａ）のＮ末端部分、例えば、ヒトＣＤ７９ａのアミノ酸残基１～１７６（例えば、配列番号１２８に示すアミノ酸配列を有する）、またはマウスＣＤ７９ａのアミノ酸残基１～１７０（例えば、配列番号１３９に示すアミノ酸配列を有する）、またはラットＣＤ７９ａのアミノ酸残基１～１７１（例えば、配列番号１４２に示すアミノ酸配列を有する）を使用する。別の実施形態では、全長ＣＤ７９タンパク質がＡＤとして使用され、ＩＴＡＭが変異されている（例えば、ＩＴＡＭ内のチロシン残基は、例えば、アラニンに変異している）。例えば、一実施形態では、Ｙ１８８Ａ／Ｙ１９９Ａを有する（例えば、配列番号１２７に示すアミノ酸配列を有する）全長ヒトＣＤ７９ａ変異を使用する。一実施形態では、変異Ｙ１８２Ａ／Ｙ１９３Ａを有する（例えば、配列番号１３５に示すアミノ酸配列を有する）全長マウスＣＤ７９ａを使用する。
別の実施形態では、Ｂ細胞破壊因子のＡＤは、ＣＤ７９ｂタンパク質に由来する。一実施形態では、ＣＤ７９ｂ（例えば、ヒトＣＤ７９ｂ）のＮ末端部分、例えば、ヒトＣＤ７９ｂのアミノ酸残基１～１８４（例えば、配列番号１３０に示すアミノ酸配列を有する）、またはマウスＣＤ７９ｂのアミノ酸残基１～１８３（例えば、配列番号１４０に示すアミノ酸配列を有する）、またはラットＣＤ７９ｂのアミノ酸残基１～１８３（例えば、配列番号１４３に示すアミノ酸配列を有する）を使用する。別の実施形態では、全長ＣＤ７９ｂタンパク質がＡＤとして使用され、ＩＴＡＭが変異されている（例えば、ＩＴＡＭ内のチロシン残基は、例えば、アラニンに変異している）。例えば、一実施形態では、変異Ｙ１９６Ａ／Ｙ２０７Ａを有する（例えば、配列番号１２９に示すアミノ酸配列を有する）全長ヒトＣＤ７９ｂを使用する。別の実施形態では、変異Ｙ１９５Ａ／Ｙ２０６Ａを有する（例えば、配列番号１３６に示すアミノ酸配列を有する）全長マウスＣＤ７９ｂを使用する。
会合ドメインが由来し得る膜受容体Ｂ細胞成分の非限定例は、ＣＤ１９タンパク質である。ＣＤ１９は、Ｂ細胞においてＣＤ２１及びＣＤ８１と会合する。一実施形態では、ＣＤ１９のＮ末端部分が、ＣＤ２１及び／またはＣＤ８１と相互作用することができるが、下流活性化ＩＴＡＭを欠いているＡＤとして使用される。別の実施形態では、全長ＣＤ１９タンパク質がＡＤとして使用されるが、ＡＤがＣＤ２１及び／またはＣＤ８１と相互作用することができるが、Ｌｙｎによりリン酸化することができないように、ＩＴＡＭが変異されている。
したがって、一実施形態では、Ｂ細胞破壊因子のＡＤは、ＣＤ１９タンパク質に由来する。一実施形態では、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）のＮ末端部分、例えば、ヒトＣＤ１９のアミノ酸残基１～３１３（例えば、配列番号１３１に示すアミノ酸配列を有する）、またはマウスＣＤ１９のアミノ酸残基１～３１１（例えば、配列番号１３７に示すアミノ酸配列を有する）、またはラットＣＤ１９のアミノ酸残基１～３１１（例えば、配列番号１４１に示すアミノ酸配列を有する）を使用する。別の実施形態では、全長ＣＤ１９タンパク質がＡＤとして使用され、ＩＴＡＭが変異されている（例えば、ＩＴＡＭ内のチロシン残基は、例えば、アラニンに変異している）。例えば、一実施形態では、変異Ｙ３７８Ａ／Ｙ４０９Ａ／Ｙ４３９Ａ／Ｙ５００Ａを有する（例えば、配列番号１３２に示すアミノ酸配列を有する）全長ヒトＣＤ１９を使用する。一実施形態では、変異Ｙ３７６Ａ／Ｙ４０２Ａ／Ｙ４３２Ａ／Ｙ４９３Ａを有する（例えば、配列番号１３８に示すアミノ酸配列を有する）全長マウスＣＤ１９を使用する。
会合ドメインが由来し得る膜受容体Ｂ細胞成分の別の非限定例は、ＣＤ６４タンパク質である。Ｆｃ－γ受容体１（ＦｃγＲ１）としても知られるＣＤ６４は、ＩｇＧと結合するＢ細胞表面受容体である。ＩｇＧと結合後、ＣＤ６４は、細胞活性化を惹起するために必要なＩＴＡＭモチーフを保有する共通γ鎖（γ鎖）として知られる補助鎖と相互作用する。したがって、一実施形態では、ＣＤ６４のＮ末端部分が、Ｂ細胞表面と相互作用し、ＩｇＧと結合することができるが、γ鎖と相互作用する能力を欠いているＡＤとして使用される。例えば、一実施形態では、ヒトＣＤ６４のＮ末端部分、例えば、アミノ酸残基１～３１３（例えば、配列番号１３３に示すアミノ酸配列を有する）を使用する。別の実施形態では、マウスＣＤ６４のＮ末端部分、例えば、アミノ酸残基１～３２０（例えば、配列番号１３４に示すアミノ酸配列を有する）を使用する。
会合ドメインが由来し得る膜受容体関連Ｂ細胞成分の別の非限定例は、Ｓｙｋタンパク質である。ＢＣＲを介した通常のシグナル伝達の場合、細胞表面ＢＣＲの抗原連結後に、ＩＴＡＭ中の２つのチロシン残基が、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）を引き付けて、活性化させるｓｒｃファミリーキナーゼＬｙｎによってリン酸化される。得られたＩＴＡＭ／Ｓｙｋ複合体は、ＢＣＲシグナルを増幅させ、ＢＣＲをいくつかの下流シグナル伝達経路に接続させることで、Ｂ細胞の活性化、増殖、及び分化をもたらす。したがって、一実施形態では、Ｓｙｋまたはその部分が、ＢＣＤ構築物中のＡＤとして使用される。例えば、様々な実施形態では、配列番号２２９、２３０または２３１を有するアミノ酸配列に示すＳｙｋポリペプチドが、ＡＤとして使用され得る。
一実施形態では、Ｂ細胞破壊因子のＡＤは、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１９、ＣＤ６４、及びＳｙｋからなる群から選択されるタンパク質由来である。一実施形態では、Ｂ細胞破壊因子のＡＤは、ＩＴＡＭを欠いているＣＤ７９ａのＮ末端部分、ＩＴＡＭを欠いているＣＤ７９ｂのＮ末端部分、非機能的（例えば、変異型）ＩＴＡＭを有するＣＤ７９ａポリペプチド、非機能的（例えば、変異型）ＩＴＡＭを有するＣＤ７９ｂポリペプチド、ＩＴＡＭを欠いているＣＤ１９のＮ末端部分、非機能的（例えば、変異型）ＩＴＡＭを有するＣＤ１９ポリペプチド、及びＣＤ６４のＮ末端部分からなる群から選択される。
一実施形態では、Ｂ細胞破壊因子のＡＤは、配列番号１２７～１４３及び２２９～２３１に示す配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
ＢＣＤ阻害性ドメイン
本開示のＢ細胞破壊因子構築物の阻害性ドメインは、シグナル形質導入及びその後のＢ細胞活性化に関与するいくつか異なるＢ細胞成分のいずれかに由来し得る。例えば、一実施形態では、阻害性ドメインは、Ｂ細胞中のＣＤ１９／ＣＤ２２均衡を変化させることで、活性性シグナル対阻害性シグナルの均衡をこれらの分子から変化させて、Ｂ細胞阻害を増加（例えば、促進上方調節、刺激）するように機能する。別の実施形態では、阻害性ドメインは、ＢＣＲ複合体を介したシグナル伝達、特に、ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂを介して媒介したシグナル伝達を阻害することで、Ｂ細胞活性を阻害するように機能する。さらに別の実施形態では、阻害性ドメインは、Ｆｃ受容体活性／シグナル伝達を変化させることで、Ｂ細胞活性化を阻害するように機能する。さらに別の実施形態では、阻害性ドメインは、ＰＩ３Ｋシグナル伝達を変化（例えば、阻害、下方調節）させることで、Ｂ細胞活性を阻害する。その阻害性機能を媒介するため、一実施形態では、阻害性ドメインは、１つ以上のＩＴＩＭを含む。別の実施形態では、阻害性ドメインは、１つ以上のホスファターゼドメインを含む。
したがって、一実施形態では、Ｂ細胞破壊因子の阻害性ドメインは、ＣＤ２２タンパク質（例えば、ヒトＣＤ２２タンパク質）に由来し、１つ以上のＩＴＩＭを含む。例えば、ＩＤは、ＣＤ２２タンパク質のＣ末端部分であり得、これは、３つのＩＴＩＭ、例えば、ヒトＣＤ２２のアミノ酸残基５８０～６７５（例えば、配列番号１４４に示すアミノ酸配列を有する）、またはマウスＣＤ２２のアミノ酸残基７７３～８６８（例えば、配列番号１４８に示すアミノ酸配列を有する）、またはラットＣＤ２２のアミノ酸残基７５７～８５２（例えば、配列番号１４９に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
別の実施形態では、ＢＣＤの阻害性ドメインは、ＳＨＰ１タンパク質（Ｓｒｃホモロジー領域２ドメイン含有ホスファターゼ－１及びチロシンタンパク質ホスファターゼ非受容体６型としても知られる）に由来する。例えば、ＳＨＰ１のホスファターゼドメインは、例えば、ヒトＳＨＰ１のアミノ酸残基２４４～５１５（例えば、配列番号１４５に示すアミノ酸配列を有する）がＩＤとして使用され得る。
さらに別の実施形態では、ＢＣＤの阻害性ドメインは、ＩＴＩＭを保持する、Ｆｃ－γ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）としても知られる、ＣＤ３２ｂタンパク質に由来する。例えば、ＩＴＩＭを含むＣＤ３２ｂのＣ末端部分、例えば、ヒトＣＤ３２ｂのアミノ酸残基２４１～３１０（例えば、配列番号１４６に示すアミノ酸配列を有する）、またはマウスＣＤ３２ｂのアミノ酸残基２４１～３４０（例えば、配列番号１４７に示すアミノ酸配列を有する）を使用し得る。
別の実施形態では、Ｂ細胞破壊因子の阻害性ドメイン（ＩＤ）は、Ｃｓｋタンパク質（例えば、ヒトＣｓｋタンパク質）に由来し、Ｃｓｋキナーゼドメインを含む。例えば、一実施形態では、ＩＤは、ヒトＣｓｋのアミノ酸残基１９５～４４９（例えば、配列番号２６に示すアミノ酸配列を有する）を含む。別の実施形態では、ＩＤは、Ｃｓｋの構成的に活性な形態、例えば、以下の変異、すなわちＷ４７Ａ／Ｒ１０７Ｋ／Ｅ１５４Ａを有する全長ヒトＣｓｋタンパク質（例えば、配列番号２５に示すアミノ酸配列を有する）を含む。
一実施形態では、Ｂ細胞破壊因子のＩＤは、ＣＤ２２、ＳＨＰ１、ＣＤ３２ｂ、及びＣｓｋからなる群から選択されるタンパク質由来である。一実施形態では、Ｂ細胞破壊因子のＩＤは、少なくとも１つのＩＴＩＭを含むＣＤ２２のＣ末端部分、少なくとも１つのＩＴＩＭを含むＣＤ３２ｂのＣ末端部分、及びホスファターゼドメインを含むＳＨＰ１の部分からなる群から選択される。
一実施形態では、Ｂ細胞破壊因子のＩＤは、配列番号２５、２６及び１４４～１４９に示す配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
Ｂ細胞破壊因子構築物の代表的な例の調製は、実施例５及び１１に詳細に記載される。構築物が、Ｂ細胞活性をインビトロで阻害する、例えば、免疫グロブリン産生及びサイトカイン分泌を阻害する能力は、実施例７、９及び１２に記載される。構築物が、Ｂ細胞活性をインビトロで阻害する、例えば、ＩｇＭ及びＩｇＧ産生、ならびに抗原特異的抗体の蓄積を阻害する能力は、実施例８及び１０に記載される。
一実施形態では、本開示は、ＣＤ７９ａ由来の会合ドメイン、及びＣＤ２２由来の阻害性ドメインを含む、ＢＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号１５０～１５１、１５９、１６３及び１６６に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１６８～１６９、１７７、１８１及び１８４に示される。
一実施形態では、本開示は、ＣＤ７９ｂ由来の会合ドメイン、及びＣＤ２２由来の阻害性ドメインを含む、ＢＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号１５２～１５３、１６０、１６４及び１６７に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１７０～１７１、１７８、１８２及び１８５に示される。
一実施形態では、本開示は、ＣＤ１９由来の会合ドメイン、及びＣＤ２２由来の阻害性ドメインを含む、ＢＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号１５４、１５６、１６１、１６２及び１６５に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１７２、１７４、１７９、１８０及び１８３に示される。
一実施形態では、本開示は、ＣＤ１９由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＢＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号１５５に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１７３に示される。
一実施形態では、本開示は、ＣＤ６４由来の会合ドメイン、及びＣＤ３２ｂ由来の阻害性ドメインを含む、ＢＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号１５７及び１５８に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号１７５及び１７６に示される。
一実施形態では、本開示は、Ｓｙｋ由来の会合ドメイン、及びＳＨＰ１由来の阻害性ドメインを含む、ＢＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号２３２～２３４に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号２３８～２４０に示される。
一実施形態では、本開示は、ＣＤ１９、ＣＤ７９ａ、またはＣＤ７９ｂ由来の会合ドメイン、及びＣｓｋ由来の阻害性ドメイン（例えば、構成的に活性なＣｓｋ）を含む、ＢＣＤ構築物を提供する。このような構築物の代表的なヌクレオチド配列は、配列番号２３５～２３７に示される。このような構築物の代表的なアミノ酸配列は、配列番号２４１～２４３に示される。
ＮＫ細胞破壊因子構築物
一実施形態では、本開示の免疫細胞破壊因子ポリヌクレオチドは、ＮＫ細胞内で細胞内発現される際にＮＫ細胞の活性を阻害する、ＮＫ細胞破壊因子（ＮＫＣＤ）構築物である。ＮＫ活性を阻害することは、例えば、ＮＫ細胞増殖の減少、ＮＫ細胞サイトカイン産生の減少、及び／またはＮＫ細胞細胞溶解活性の減少をもたらし得る。
ＮＫＣＤポリヌクレオチド構築物は、ＮＫ細胞の少なくとも１つの成分と会合し、ＮＫ細胞における通常のシグナル形質導入活性を破壊するキメラポリペプチドをコードする。ＮＫ細胞における通常のシグナル形質導入活性に干渉（すなわち、破壊、変化、阻害）することによって、ＮＫＣＤポリペプチドは、ＮＫ細胞活性化の閾値を増加させることができ、その結果、ＮＫ細胞が応答するのに、より大きな刺激が必要になることで、ＮＫＣＤの不在下における活性レベルと比較して、ＮＫＣＤの存在下におけるＮＫ細胞活性の阻害をもたらす。
ＮＫＣＤポリペプチドは、少なくとも２つの部分（すなわち、ドメインまたはモチーフ）すなわちＮＫ細胞の少なくとも１つの膜またはシグナル伝達複合体成分とキメラポリペプチドの会合を媒介する第１の部分（「会合ドメイン」またはＡＤ）、及びＮＫ細胞における通常のシグナル形質導入の破壊を通じて、ＮＫＣＤの阻害効果を媒介する第２の部分（「阻害性ドメイン」またはＩＤ）を含む、キメラポリペプチドである。
ＮＫＣＤの会合ドメインは、ＮＫ細胞内の他の成分と相互作用するいくつかの異なる種類のＮＫ細胞成分、例えば、膜受容体関連成分、膜受容体成分、膜貫通関連成分、または細胞内関連成分のいずれかに由来であり得る。ＮＫＣＤの阻害性ドメインは、ＮＫ細胞におけるシグナル伝達経路活性の調節に関与する多くの異なる種類のＮＫ細胞成分、例えば、ホスファターゼ、阻害性キナーゼ、及びＩＴＩＭ含有タンパク質のいずれかに由来し得る。
ＮＫ細胞活性化は、潜在的な標的細胞との相互作用の際に開始される相補経路と拮抗経路との動的均衡によって制御される。ＮＫ細胞は、細胞溶解プログラム、ならびにサイトカインまたはケモカイン代謝、例えば、２Ｂ４を惹起することができる一連の活性化細胞表面受容体を発現する。これらの活性化細胞表面受容体のいくつかは、細胞質内ＩＴＡＭ（免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ）を持つ膜貫通シグナル伝達アダプターとの非共有会合を介して、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）依存性経路を開始する。ＩＴＡＭに直接カップリングしないさらなる細胞表面受容体もまた、ＮＫ細胞活性化に参加する。これらには、ＤＡＰ１０膜貫通シグナル伝達アダプターに非共有的に会合するＮＫＧ２Ｄ、ならびにインテグリン及びサイトカイン受容体が含まれる。また、ＮＫ細胞は、タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）を介する活性化経路に拮抗する細胞表面阻害性受容体を発現する。これらの阻害性細胞表面受容体は、細胞質内ＩＴＩＭ（免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ）によって特徴付けられる。
ＮＫＣＤの会合ドメインが由来し得るシグナル伝達経路の活性化に関与するＮＫタンパク質としては、２Ｂ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＤＡＰ１０、Ｓｒｃファミリーキナーゼ（例えば、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｓｒｃ、Ｌｙｎ、Ｙｅｓ、及びＦｇｒ）、ＰＬＣγ２及びＶａｖが挙げられる。
ＮＫＣＤの阻害性ドメインが由来し得るシグナル伝達経路の阻害に関与するＮＫタンパク質としては、ＣＤ１５８、ＣＤ９４－ＮＫＧ２Ａ、ＬＩＬＲ、ＳＨＰ１ ＳＨＰ２、及びＬＡＩＲ１が挙げられる。
樹状細胞破壊因子構築物
一実施形態では、本開示の免疫細胞破壊因子ポリヌクレオチドは、樹状細胞内で細胞内発現される際に樹状細胞の活性を阻害する、樹状細胞破壊因子（ＤＣＤ）構築物である。樹状細胞活性を阻害することは、例えば、樹状細胞増殖の減少、樹状細胞サイトカイン産生の減少、及び／または樹状細胞のエフェクター機能（例えば、抗原提示）の減少をもたらし得る。
ＤＣＤポリヌクレオチド構築物は、ＤＣの少なくとも１つの成分と会合し、ＤＣにおける通常のシグナル形質導入活性を破壊するキメラポリペプチドをコードする。ＤＣにおける通常のシグナル形質導入活性に干渉（すなわち、破壊、変化、阻害）することによって、ＤＣＤポリペプチドは、ＤＣ活性化の閾値を増加させることができ、その結果、ＤＣが応答するのに、より大きな刺激が必要になることで、ＤＣＤの不在下における活性レベルと比較して、ＤＣＤの存在下におけるＤＣ活性の阻害をもたらす。
ＤＣＤポリペプチドは、少なくとも２つの部分（すなわち、ドメインまたはモチーフ）、すなわち樹状細胞の少なくとも１つの膜またはシグナル伝達複合体成分とキメラポリペプチドの会合を媒介する第１の部分（「会合ドメイン」またはＡＤ）、及び樹状細胞における通常のシグナル形質導入の破壊を通じて、ＤＣＤの阻害効果を媒介する第２の部分（「阻害性ドメイン」またはＩＤ）を含む、キメラポリペプチドである。
ＤＣＤの会合ドメインは、ＤＣ内の他の成分と相互作用するいくつかの異なる種類のＤＣ成分、例えば、膜受容体関連成分、膜受容体成分、膜貫通関連成分、または細胞内関連成分のいずれかに由来であり得る。ＤＣＤの阻害性ドメインは、ＤＣにおけるシグナル伝達経路活性の調節に関与するいくつかの異なる種類のＤＣ成分、例えば、ホスファターゼ、阻害性キナーゼ、及びＩＴＩＭ含有タンパク質のいずれかに由来であり得る。
ＤＣは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と呼ばれる様々な分子構造、例えば、リポ多糖、リポテイコ酸、フラジェリン、及び核酸を認識するパターン認識受容体（ＰＲＲ）を介して、病原体を検出する。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）及びＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）のような膜関連ＰＲＲは、細胞外病原体に応答するが、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）及びＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）を含むサイトゾルＰＲＲは、細胞内病原体を感知する。これらの受容体はまた、細胞内アダプタータンパク質と相互作用し、活性化キナーゼの活性化を刺激する。ＤＣ活性化は、シグナル伝達活性の様々な負の調節因子により阻害される。
ＤＣＤの会合ドメインが由来し得るシグナル伝達経路の活性化に関与するＤＣタンパク質としては、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＲＩＧ－１、ＭＤＡ－５、アダプタータンパク質ＭｙＤ８８、ＴＲＩＦ、ＴＲＡＭ及びＴＩＲＡＰ、及びＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路に関与するＪＡＫ及びＳＴＡＴ分子が挙げられる。
ＤＣＤの阻害性ドメインが由来し得るシグナル伝達経路の阻害に関与するＤＣタンパク質としては、Ａ２０、ＳＩＫＥ、ＰＩＮ１、ＲＮＦ１２５、ＮＬＲＸ１、及びＳＯＣＳ１が挙げられる。
マクロファージ細胞破壊因子構築物
一実施形態では、本開示の免疫細胞破壊因子ポリヌクレオチドは、マクロファージ内で細胞内発現される際にマクロファージの活性を阻害する、マクロファージ破壊因子（ＭＰＤ）構築物である。マクロファージ活性を阻害することは、例えば、マクロファージ増殖の減少、マクロファージサイトカイン産生の減少、及び／またはマクロファージエフェクター機能（例えば、抗原提示）の減少をもたらし得る。
ＭＰＤポリヌクレオチド構築物は、マクロファージの少なくとも１つの成分と会合し、マクロファージにおける通常のシグナル形質導入活性を破壊するキメラポリペプチドをコードする。マクロファージにおける通常のシグナル形質導入活性に干渉（すなわち、破壊、変化、阻害）することによって、ＭＰＤポリペプチドは、マクロファージ活性化の閾値を増加させることができ、その結果、マクロファージが応答するのに、より大きな刺激が必要になることで、ＭＰＤの不在下における活性レベルと比較して、ＭＰＤの存在下におけるマクロファージ活性の阻害をもたらす。
ＭＰＤポリペプチドは、少なくとも２つの部分（すなわち、ドメインまたはモチーフ）、すなわちマクロファージの少なくとも１つの膜またはシグナル伝達複合体成分とキメラポリペプチドの会合を媒介する第１の部分（「会合ドメイン」またはＡＤ）、及びマクロファージ（「阻害性ドメイン」またはＩＤ）における通常のシグナル形質導入の破壊を通じて、ＭＰＤの阻害効果を媒介する第２の部分を含む、キメラポリペプチドである。
ＭＰＤの会合ドメインは、マクロファージ内の他の成分と相互作用するいくつかの異なる種類のマクロファージ成分、例えば、膜受容体関連成分、膜受容体成分、膜貫通関連成分、または細胞内関連成分のいずれかに由来であり得る。ＭＰＤの阻害性ドメインは、マクロファージにおけるシグナル伝達経路活性の調節に関与するいくつかの異なる種類のマクロファージ成分、例えば、ホスファターゼ、阻害性キナーゼ、及びＩＴＩＭ含有タンパク質のいずれかに由来であり得る。
マクロファージの古典的な活性化は、典型的には、ＭｙＤ８８依存的に作用するＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）及びＴＬＲリガンドを伴う。ＭｙＤ８８に加えて、いくつかのＴＬＲリガンドもまた、ＩＦＮ調節性因子３（ＩＲＦ３）を介してシグナルを送る、ＩＦＮβ（ＴＲＩＦ）依存性経路を誘発するＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質を活性化することができる。遺伝子活性化は、転写因子の組み合わせ、例えば、ＩＦＮγ受容体連結後に活性化される、転写（ＳＴＡＴ）分子のシグナル伝達物質及び活性化物質、ならびにＴＬＲまたはＴＮＦ受容体連結に応答して活性化される、核因子－κＢ（ＮＦκＢ）及びマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）によって誘発される。マクロファージ活性化の下方調節は、ＳＨＰ１及びＰＴＰ－１Ｂを含むホスファターゼにより媒介される。
ＭＰＤの会合ドメインが由来し得るシグナル伝達経路の活性化に関与するマクロファージタンパク質としては、ＴＬＲ、ＭｙＤ８８、ＴＲＩＦ、ＩＲＦ３、ＳＴＡＴ、ＪＡＫ、ＭＡＰＫ、及びＥＲＫが挙げられる。
ＭＰＤの阻害性ドメインが由来し得るシグナル伝達経路の阻害に関与するマクロファージタンパク質としては、ＳＨＰ－１及びＰＴＰ－１Ｂが挙げられる。
メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載される構築物、製剤及び方法に使用されるｍＲＮＡを提供する。ｍＲＮＡは、天然または非天然に存在するｍＲＮＡであってもよい。ｍＲＮＡは、以下に記載されるように、１つ以上の修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含んでもよく、その場合、それは、「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と称され得る。本明細書において記載される場合、「ヌクレオシド」とは、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも呼ばれる）と組み合わせた、糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を含む化合物として定義される。本明細書において記載される場合、「ヌクレオチド」とは、リン酸塩基を含むヌクレオシドとして定義される。
ｍＲＮＡは、５’非翻訳領域（５’－ＵＴＲ）、３’非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）、及び／またはコード領域（例えば、オープンリーディングフレーム）を含んでもよい。構築物で使用される例示的な５’ＵＴＲを、配列番号１８６に示す。構築物で使用される別の例示的５’ＵＴＲを、配列番号１８７に示す。構築物で使用されるｍｉＲ結合部位を含む例示的な３’ＵＴＲが、配列番号２１２～２２１に示される。一実施形態では、肝細胞発現が、ｍｉＲ１２２結合部位を含めることによって低下する。ｍＲＮＡは、任意の適切な数の塩基対を含んでもよく、これには、数十（例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００）、数百（例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、または９００）または数千（例えば、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００）の塩基対を含む。任意の数（例えば、全部、いくつか、または全くない）の核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドは、置換、修飾、またはそうでなければ天然に存在しない標準的な種の類似体であってもよい。ある特定の実施形態では、特定の核酸塩基型の全てを修飾してもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｍＲＮＡは、５’キャップ構造、鎖終結ヌクレオチド、必要に応じてＫｏｚａｋ配列（Ｋｏｚａｋコンセンサス配列としても知られる）、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでもよい。
５’キャップ構造またはキャップ種は、リンカーによって結合された２つのヌクレオシド部分を含む化合物であり、天然に存在するキャップ、天然に存在しないキャップもしくはキャップ類似体、または抗逆キャップ類似体（ＡＲＣＡ）から選択されてもよい。キャップ種は、１つ以上の修飾ヌクレオシド及び／またはリンカー部分を含んでもよい。例えば、天然のｍＲＮＡキャップは、グアニンヌクレオチド及びその５’位において三リン酸結合によって結合された７位においてメチル化されたグアニン（Ｇ）ヌクレオチド、例えば、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（通常はｍ７ＧｐｐｐＧと書かれている）を含んでもよい。キャップ種はまた、抗逆キャップ類似体であってもよい。可能性のあるキャップ種の非限定的なリストとしては、ｍ７ＧｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、及びｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧが挙げられる。
ｍＲＮＡは、代わりにまたは加えて、連鎖停止ヌクレオシドを含んでもよい。例えば、連鎖停止ヌクレオシドは、それらの糖基の２’及び／または３’位で脱酸素化されたヌクレオシドを含んでもよい。そのような種としては、３’デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’－デオキシウリジン、３’－デオキシシトシン、３’－デオキシグアノシン、３’－デオキシチミン、及び２’、３’－ジデオキヌクレオシド、例えば、２’，３’－ジデオキシアデノシン、２’，３’－ジデオキシウリジン、２’，３’－ジデオキシシトシン、２’，３’－ジデオキシグアノシン、及び２’，３’－ジデオキシチミンが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、例えば、国際特許公開第ＷＯ２０１３／１０３６５９号に記載されているように、例えば、３’末端での鎖停止ヌクレオチドのｍＲＮＡへの組み込みは、ｍＲＮＡの安定化を生じ得る。
ｍＲＮＡは、代わりにまたは加えて、ヒストンステムループなどのステムループを含んでもよい。ステムループは、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のヌクレオチド塩基対を含んでもよい。例えば、ステムループは、４、５、６、７、または８ヌクレオチド塩基対を含んでもよい。ステムループは、ｍＲＮＡの任意の領域に位置し得る。例えば、ステムループは、非翻訳領域（５’非翻訳領域または３’非翻訳領域）、コード領域、またはポリＡ配列もしくはテールの中、前または後に位置し得る。いくつかの実施形態では、ステムループは、翻訳の開始、翻訳効率、及び／または転写終結などのｍＲＮＡの１つ以上の機能（複数可）に影響を及ぼし得る。
ｍＲＮＡは、代わりにまたは加えて、ポリＡ配列及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでもよい。ポリＡ配列は、全体がアデニンヌクレオチドまたはその類似体もしくは誘導体から構成されてもよいし、またはほとんど構成されてもよい。ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの３’非翻訳領域に隣接して位置するテールであってもよい。いくつかの実施形態では、ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの核外輸送、翻訳、及び／または安定性に影響を及ぼし得る。
ｍＲＮＡは、代わりにまたは加えて、マイクロＲＮＡ結合部位を含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、第１のコード領域と第２のコード領域との間の内部翻訳開始を可能にする、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む介在配列を有するかまたは２Ａペプチドなどの自己切断ペプチドをコードする介在配列を有する、第１のコード領域及び第２のコード領域を含むバイシストロン性ｍＲＮＡである。ＩＲＥＳ配列及び２Ａペプチドが、典型的には同じベクターからの複数のタンパク質の発現を増強するために使用される。例えば、脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳを含む様々なＩＲＥＳ配列が当該分野で公知であり利用可能であり得、使用されてもよい。
一実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、自己切断ペプチドをコードする配列を含んでもよい。自己切断ペプチドは、限定するものではないが、２Ａペプチドであってもよい。様々な２Ａペプチドが当該技術分野において公知であり入手可能であり、用いられてもよく、これには、例としては、例えば、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス２Ａペプチド、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａペプチド、及びブタテスコウイルス－１２Ａペプチドが挙げられる。２Ａペプチドは、通常のペプチド結合が２Ａペプチド配列で損なわれ、１つの翻訳事象から２つの不連続タンパク質が生じるように、いくつかのウイルスによって使用され、リボソームスキッピングによって１つの転写物から２つのタンパク質を生成する。非限定的な例として、２Ａペプチドは、タンパク質配列：ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２２６）、それらの断片またはバリアントを有し得る。一実施形態では、２Ａペプチドは、最後のグリシンと最後のプロリンとの間で切断する。別の非限定的な例として、本開示のポリヌクレオチドは、タンパク質配列ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２２６）の断片またはそのバリアントを有する２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含んでもよい。２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の一例は、ＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴ（配列番号２２７）である。例示的な一実施形態では、２Ａペプチドは以下の配列によってコードされる：５’－ＴＣＣＧＧＡＣＴＣＡＧＡＴＣＣＧＧＧＧＡＴＣＴＣＡＡＡＡＴＴＧＴＣＧＣＴＣＣＴＧＴＣＡＡＡＣＡＡＡＣＴＣＴＴＡＡＣＴＴＴＧＡＴＴＴＡＣＴＣＡＡＡＣＴＧＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＴＡＧＡＡＡＧＣＡＡＴＣＣＡＧＧＴＣＣＡＣＴＣ－３’（配列番号２２８）。２Ａペプチドのポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載される方法によって修飾されてもよいし、またはコドン最適化されてもよいし、及び／または当該技術分野において公知である。
一実施形態では、この配列を使用して、目的の２つ以上のポリペプチドのコード領域を分離し得る。非限定的な例として、Ｆ２Ａペプチドをコードする配列は、第１のコード領域Ａと第２のコード領域Ｂとの間にあってもよい（Ａ－Ｆ２Ａｐｅｐ－Ｂ）。Ｆ２Ａペプチドの存在は、Ｆ２Ａペプチド配列の末端でグリシンとプロリンとの間の１つの長いタンパク質の開裂をもたらし（ＮＰＧＰは、開裂されてＮＰＧ及びＰをもたらす）、したがって分離したプロテインＡ（ＮＰＧで終わる、結合されたＦ２Ａペプチドの２１アミノ酸を有する）、及び分離したタンパク質Ｂ（結合したＦ２Ａペプチドの１個のアミノ酸、Ｐを有する）を作り出す。同様に、他の２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ及びＥ２Ａ）については、長いタンパク質中の当該ペプチドの存在は、２Ａペプチド配列の末端でグリシンとプロリンの間の切断をもたらす（ＮＰＧＰは、ＮＰＧ及びＰをもたらすために切断される）。プロテインＡ及びプロテインＢは、目的の同一または異なるペプチドまたはポリペプチドであってもよい。特定の実施形態では、プロテインＡは、免疫原性細胞死を誘導するポリペプチドであり、プロテインＢは、炎症性及び／または免疫応答を刺激するか、及び／または免疫応答性を調節する別のポリペプチドである（以下にさらに記載）。
非翻訳領域（ＵＴＲ）
ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチドの翻訳は、様々なシス作用性核酸構造によってもたらされる様々な機序によって調整及び制御され得る。例えば、ヘアピンまたは他の高次（例えば、シュードノット）分子内ｍＲＮＡ二次構造を形成する天然に存在するシス作用性ＲＮＡ要素は、ポリヌクレオチドに翻訳制御活性を提供することができ、ここで、特にＲＮＡ要素が５’キャップ構造に近い５’ＵＴＲに位置する場合、ＲＮＡ要素は、ポリヌクレオチドの翻訳開始に影響するか、またはこれを調節する（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ ａｎｄ Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ（１９８５）Ｃｅｌｌ ４０（３）：５１５－５２６、Ｋｏｚａｋ（１９８６）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８３：２８５０－２８５４）。非翻訳領域（ＵＴＲ）は、翻訳されない、開始コドン（５’ＵＴＲ）前及び終止コドン（３’ＵＴＲ）後のポリヌクレオチドの核酸部分である。いくつかの実施形態では、ＡＲＧ１ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む、本発明のポリヌクレオチド（例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））は、ＵＴＲ（例えば、５’ＵＴＲもしくはその機能的断片、３’ＵＴＲもしくはその機能的断片またはそれらの組み合わせ）をさらに含む。
シス作用性ＲＮＡ要素はまた、翻訳伸長に影響し得、多数のフレームシフトイベントに関与する（Ｎａｍｙ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ １３（２）：１５７－１６８）。配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）は、別のタイプのシス作用性ＲＮＡ要素であり、典型的には、５’ＵＴＲ内に位置するが、天然に存在するｍＲＮＡのコーディング領域内に認められることも報告されている（Ｈｏｌｃｉｋ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ １６（１０）：４６９－４７３）。細胞ｍＲＮＡでは、ＩＲＥＳは、多くの場合、５’キャップ構造とともに存在し、キャップ依存性翻訳が損なわれた条件下で翻訳される、機能的能力をｍＲＮＡに提供する（Ｇｅｂａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｂｉｏｌ ４（７）：ａ０１２２４５）。別のタイプの天然に存在するシス作用性ＲＮＡ要素には、上流オープンリーディングフレーム（ｕＯＲＦ）が含まれる。天然に存在するｕＯＲＦは、多数のｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内に単独または複数で存在し、主要な下流ＯＲＦの翻訳に対して、通常は負の影響を与える（酵母のＧＣＮ４ ｍＲＮＡ及び哺乳類のＡＴＦ４ ｍＲＮＡの顕著な例外を除く。そこでは、ｕＯＲＦは、ｅＩＦ２リン酸化が増加した条件下で、主要な下流ＯＲＦの翻訳を促進する働きをする（Ｈｉｎｎｅｂｕｓｃｈ（２００５）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ５９：４０７－４５０））。ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）に含まれる成分、構造、要素、モチーフ、及び／または特定配列によって提供されるさらなる翻訳制御活性の例には、ｍＲＮＡの安定化または不安定化（Ｂａｋｅｒ ＆ Ｐａｒｋｅｒ（２００４）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １６（３）：２９３－２９９）、翻訳活性化（Ｖｉｌｌａｌｂａ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ ２１（４）：４５２－４５７）、及び翻訳抑制（Ｂｌｕｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｍｅｃｈ Ｄｅｖ １１０（１－２）：９７－１１２）が挙げられるが、これらに限定されない。研究により、天然に存在するシス作用性ＲＮＡ要素は、当該要素を使用して、組み込みにより異種ポリヌクレオチドを修飾する場合、それぞれの機能を付与することができることが示されている（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ－Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７（１６）：１３６３５－１３６４０）。
機能的ＲＮＡ要素を含む修飾ｍＲＮＡ
本開示は、修飾（例えば、ＲＮＡ要素）を含む合成ポリヌクレオチドを提供し、ここで修飾は所望の翻訳制御活性を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、開始コドン、ポリペプチドをコードする全オープンリーディングフレーム、３’ＵＴＲ、及び少なくとも１つの修飾を含むポリヌクレオチドを提供し、ここでこの少なくとも１つの修飾は、所望の翻訳制御活性、例えば、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を促進及び／または増強する修飾を提供する。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、シス作用性調節活性である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、開始コドンにおける、またはその近く４の３Ｓ開始前複合体（ＰＩＣ）またはリボソームの滞留時間の増大である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、開始コドンにおける、または開始コドンからのポリペプチド合成の開始の増大である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、完全オープンリーディングフレームから翻訳されたポリペプチドの量の増大である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる開始コドンの解読の忠実度の増大である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、ＰＩＣまたはリボソームによるリーキースキャニングの阻害または低減である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる開始コドンの解読速度の低下である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、開始コドン以外のｍＲＮＡ内の任意のコドンにおけるポリペプチド合成の開始の阻害または減少である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、完全オープンリーディングフレーム以外のｍＲＮＡ内の任意のオープンリーディングフレームから翻訳されたポリペプチドの量の阻害または減少である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、異常な翻訳産物の産生の阻害または減少である。いくつかの実施形態では、所望の翻訳制御活性は、前述の翻訳制御活性のうちの１つ以上の組み合わせである。
したがって、本開示は、本明細書に記載される所望の翻訳制御活性を提供する、配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡ要素を含むポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡを提供する。いくつかの態様では、ｍＲＮＡは、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を促進及び／または増強する、配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡ要素を含む。いくつかの態様では、ｍＲＮＡは、リーキースキャニングの阻害及び／または低減などの所望の翻訳制御活性を提供する、配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡ要素を含む。いくつかの態様では、本開示は、リーキースキャニングを阻害及び／または低減し、それによってｍＲＮＡの翻訳忠実度を促進する、配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡ要素を含むｍＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ要素は、天然及び／または修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ要素は、本明細書に記載されるように所望の翻訳制御活性を提供する、連結ヌクレオチドの配列、またはその誘導体もしくは類似体を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ要素は、安定なＲＮＡ二次構造を形成または折り畳む連結ヌクレオチドの配列、またはその誘導体もしくは類似体を含み、ここでＲＮＡ二次構造は、本明細書に記載される所望の翻訳制御活性を提供する。ＲＮＡ要素は、その要素の一次配列（例えば、ＧＣリッチ要素）に基づいて、その要素によって形成されるＲＮＡ二次構造（例えば、ステムループ）によって、ＲＮＡ分子内の要素の位置によって（例えば、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内に位置する）、要素の生物学的機能及び／または活性によって（例えば、「翻訳エンハンサー要素」）、ならびにそれらの任意の組み合わせによって、同定されてもよく、及び／または特徴付けされてもよい。
いくつかの態様では、本開示は、リーキースキャニングを阻害するか、及び／またはｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を促進する１つ以上の構造修飾を有するｍＲＮＡを提供し、ここで構造修飾の少なくとも１つはＧＣリッチＲＮＡ要素である。いくつかの態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、ここで、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ中のＫｏｚａｋコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列、またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡ要素である。一実施形態では、ＧＣリッチのＲＮＡ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣリッチのＲＮＡ要素は、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列の１５～３０、１５～２０、１５～２５、１０～１５、または５～１０ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣリッチのＲＮＡ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のＫｏｚａｋコンセンサス配列に直接隣接して位置する。任意の前述のまたは関連する態様では、本開示は、任意の順序で連結された、３～３０、５～２５、１０～２０、１５～２０、約２０、約１５、約１２、約１０、約７、約６または約３ヌクレオチドの配列、それらの誘導体または類似体を含むＧＣリッチのＲＮＡ要素を提供し、ここで、この配列組成は、７０～８０％シトシン、６０～７０％シトシン、５０％～６０％シトシン、４０～５０％シトシン、３０～４０％シトシン塩基である。任意の前述のまたは関連する態様では、本開示は、任意の順序で連結された、３～３０、５～２５、１０～２０、１５～２０、約２０、約１５、約１２、約１０、約７、約６または約３ヌクレオチドの配列、それらの誘導体または類似体を含むＧＣリッチのＲＮＡ要素を提供し、ここで、この配列組成は、約８０％シトシン、約７０％シトシン、約６０％シトシン、約５０％シトシン、約４０％シトシン、または約３０％シトシンである。
任意の前述のまたは関連の態様では、本開示は、任意の順序で連結された、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４もしくは３ヌクレオチドの配列、またはそれらの誘導体または類似体を含むＧＣリッチのＲＮＡ要素を提供し、ここで、この配列組成は、７０～８０％シトシン、６０～７０％シトシン、５０％～６０％シトシン、４０～５０％シトシン、または３０～４０％シトシンである。任意の前述のまたは関連の態様では、本開示は、任意の順序で連結された、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４もしくは３ヌクレオチドの配列、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチのＲＮＡ要素を提供し、ここで、この配列組成は、約８０％シトシン、約７０％シトシン、約６０％シトシン、約５０％シトシン、約４０％シトシン、または約３０％シトシンである。
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、ここで、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ中のＫｏｚａｋコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列、またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡ要素であり、このＧＣリッチのＲＮＡ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ中のＫｏｚａｋコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド上流に位置し、ここで、このＧＣリッチのＲＮＡ要素は、任意の順序で連結された、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０ヌクレオチドの配列、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、ここでこの配列組成は＞５０％シトシンである。いくつかの実施形態では、配列組成は、５５％超シトシン、６０％超シトシン、６５％超シトシン、７０％超シトシン、７５％超シトシン、８０％超シトシン、８５％超シトシン、または９０％超シトシンである。
他の態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、ここで、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列、またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡ要素であり、ここで、ＧＣリッチのＲＮＡ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ中のＫｏｚａｋコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド上流に位置し、ここで、このＧＣリッチＲＮＡ要素は、約３～３０、５～２５、１０～２０、１５～２０または約２０、約１５、約１２、約１０、約６もしくは約３ヌクレオチドの配列、またはその誘導体もしくは類似体を含み、ここで、この配列は反復ＧＣモチーフを含み、ここでこの反復ＧＣモチーフは［ＣＣＧ］ｎであり、ここでｎ＝１～１０、ｎ＝２～８、ｎ＝３～６、またはｎ＝４～５である。いくつかの実施形態では、配列は、反復ＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、ここでｎ＝１、２、３、４または５である。いくつかの実施形態では、この配列は、反復ＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、ここでｎ＝１、２または３である。いくつかの実施形態では、この配列は、反復ＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、ここでｎ＝１である。いくつかの実施形態では、この配列は、反復ＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、ここでｎ＝２である。いくつかの実施形態では、この配列は、反復ＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、ここでｎ＝３である。いくつかの実施形態では、この配列は、反復ＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、ここでｎ＝４である（配列番号１３８４）。いくつかの実施形態では、この配列は、反復ＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、ｎ＝５である（配列番号１３８２）。
別の態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、ここで少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列、またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡ要素であり、このＧＣリッチＲＮＡ要素は、表１に記載の配列のいずれか１つを含む。一実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣリッチのＲＮＡ要素は、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列の約１５～３０、１５～２０、１５～２５、１０～１５、または５～１０ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、ＧＣリッチのＲＮＡ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のＫｏｚａｋコンセンサス配列に直接隣接して位置する。
他の態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、ここで、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列に先行する、表１に記載の配列Ｖ１［ＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣ（配列番号１９４）］、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡ要素である。いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のＫｏｚａｋコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する表１に記載の配列Ｖ１を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲのＫｏｚａｋコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０塩基上流に位置する、表１に記載の配列Ｖ１を含む。他の実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ中のＫｏｚａｋコンセンサス配列の１～３、３～５、５～７、７～９、９～１２、または１２～１５塩基上流に位置する表１に記載の配列Ｖ１を含む。
他の態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、ここで、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列に先行する、表１に記載の配列Ｖ２［ＣＣＣＣＧＧＣ（配列番号１９５）］、またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡ要素である。いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のＫｏｚａｋコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する表１に記載の配列Ｖ２を含む。いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ中のＫｏｚａｋコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０塩基上流に位置する表１に記載の配列Ｖ２を含む。他の実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ中のＫｏｚａｋコンセンサス配列の１～３、３～５、５～７、７～９、９～１２、または１２～１５塩基上流に位置する表１に記載の配列Ｖ２を含む。
他の態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、ここで、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列に先行する、表１に記載の配列ＥＫ［ＧＣＣＧＣＣ（配列番号１９３）］、またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡ要素である。いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のＫｏｚａｋコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する表１に記載の配列ＥＫを含む。いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０塩基上流に位置する表１に記載の配列ＥＫを含む。他の実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ中のＫｏｚａｋコンセンサス配列の１～３、３～５、５～７、７～９、９～１２、または１２～１５塩基上流に位置する表１に記載の配列ＥＫを含む。
さらに他の態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、ここで少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列に先行する、表１に記載の配列Ｖ１［ＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣ（配列番号１９４）］、またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡ要素であり、ここでこの５’ＵＴＲは、表１に示される以下の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡ（配列番号１８９）。当業者であれば当然のことであるが、本明細書に記載されるＲＮＡ配列中の全てのＵは、対応するテンプレートＤＮＡ配列において、例えば、本開示のｍＲＮＡが、例えば、ＩＶＴを介して転写されるＤＮＡテンプレートまたは構築物において、Ｔであることが認識されるであろう。
いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ要素は、表１に示す５’ＵＴＲ配列内のＫｏｚａｋコンセンサス配列の上流に直接隣接して位置する表１に記載の配列Ｖ１を含む。いくつかの実施形態では、このＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＫｏｚａｋコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０塩基上流に位置する表１に記載の配列Ｖ１を含み、ここでこの５’ＵＴＲは、表１に示す以下の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡ（配列番号１８９）。
他の実施形態では、ＧＣリッチ要素は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ中にＫｏｚａｋコンセンサス配列の１～３、３～５、５～７、７～９、９～１２、または１２～１５塩基上流に位置する表１に記載の配列Ｖ１を含み、ここで５’ＵＴＲは、表１に示す以下の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡ（配列番号１８９）。
いくつかの実施形態では、この５’ＵＴＲは、表１に示される以下の配列を含む：
ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号１８６）。
Figure 2022531461000002
別の態様では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、ここで、少なくとも１つの修飾は、ヘアピンまたはステムループを形成する、ある順番で連結されたヌクレオチドの配列、またはその誘導体もしくは類似体を含む安定なＲＮＡ二次構造を含むＧＣリッチＲＮＡ要素である。一実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列の上流にある。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、または約５ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列の約２０、約１５、約１０、または約５ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列の約５、約４、約３、約２、約１ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列の約１５～３０、約１５～２０、約１５～２５、約１０～１５、または約５～１０ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列の１２～１５ヌクレオチド上流に位置する。別の実施形態では、安定なＲＮＡ二次構造は、約－３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－２０～－３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－１０～－２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約－５～－１０ｋｃａｌ／ｍｏｌのデルタＧを有する。
別の実施形態では、修飾は、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームに機能的に連結されており、ここで修飾とオープンリーディングフレームとは異種である。
別の実施形態では、ＧＣリッチのＲＮＡ要素の配列は、グアニン（Ｇ）、及びシトシン（Ｃ）核酸塩基のみから構成される。
本明細書中に記載されるような所望の翻訳制御活性を提供するＲＮＡ要素は、リボソームプロファイリングのような公知の技術を用いて同定され特徴付けられ得る。リボソームプロファイリングは、ｍＲＮＡに結合したＰＩＣ及び／またはリボソームの位置の決定を可能にする技術である（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＩｎｇｏｌｉａ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２４（５９２４）：２１８～２３を参照されたい）。この技術は、ヌクレアーゼ消化から、ＰＩＣ及び／またはリボソームによって、ｍＲＮＡの領域またはセグメントを保護することに基づいている。保護により、「フットプリント」と呼ばれる３０ｂｐのＲＮＡ断片が生成される。ＲＮＡフットプリントの配列及び頻度は、当該分野で公知の方法（例えば、ＲＮＡ－ｓｅｑ）によって分析され得る。フットプリントは、リボソームのＡ部位にほぼ中心がある。ＰＩＣまたはリボソームが、ｍＲＮＡに沿った特定の場所または位置に滞留する場合、これらの位置に生じるフットプリントは比較的一般的であろう。ＰＩＣ及び／またはリボソームが加工性の低下を示す場所でより多くのフットプリントが生成し、ＰＩＣ及び／またはリボソームが加工性の増大を示す位置でより少ないフットプリントが生成されることが、研究により示されている（Ｇａｒｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）ｅＬｉｆｅ ３：ｅ０３７３５）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡ要素のうちの任意の１つ以上を含むポリヌクレオチドに沿った別々の場所または位置でのＰＩＣまたはリボソームの滞留時間または占有時間は、リボソームプロファイリングによって決定される。
ＵＴＲは、ポリヌクレオチドのコード領域に相同であっても異種であってもよい。いくつかの実施形態では、ＵＴＲは、ＡＲＧ１ポリペプチドをコードするＯＲＦに相同である。いくつかの実施形態では、ＵＴＲは、ＡＲＧ１ポリペプチドをコードするＯＲＦに対して異種である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つまたはそれ以上の５’ＵＴＲまたはその機能的断片を含み、これらのそれぞれは、同じかまたは異なるヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つまたはそれ以上の３’ＵＴＲまたはその機能的断片を含み、これらのそれぞれは、同じかまたは異なるヌクレオチド配列を有する。
いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲもしくはその機能的断片、３’ＵＴＲもしくはその機能的断片、またはこれらの任意の組み合わせは、配列最適化される。
いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲもしくはその機能的断片、３’ＵＴＲもしくはその機能的断片、またはこれらの任意の組み合わせは、少なくとも１つの化学的に修飾された核酸塩基、例えば、Ｎ１メチルシュードウラシルまたは５－メトキシウラシルを含む。
ＵＴＲは、制御上の役割、例えば、増大または減少した安定性、局在化、及び／または翻訳効率を提供する、特徴を有し得る。ＵＴＲを含むポリヌクレオチドは、細胞、組織、または生物に投与することができ、１つ以上の制御上の特徴は、日常的な方法を使用して測定することができる。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲの機能的断片は、それぞれ完全長５’または３’ＵＴＲの１つ以上の制御上の特徴を含む。天然の５’ＵＴＲは、翻訳開始において役割を果たす特徴を有する。それらは、リボソームが多数の遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与することが一般に公知である、Ｋｏｚａｋ配列のようなものを特徴としている。Ｋｏｚａｋ配列は、コンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧ（配列番号１９６）を有し、式中Ｒは、開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流にあるプリン（アデニンまたはグアニン）であり、もう１つの「Ｇ」が後に続く。５’ＵＴＲはまた、伸長因子の結合に関与する二次構造を形成することも公知である。
特定の標的器官の豊富に発現される遺伝子において典型的に見出される特徴を操作することによって、ポリヌクレオチドの安定性及びタンパク質産生を増強することができる。例えば、肝臓に発現されるｍＲＮＡ、例えば、アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、アルファフェトプロテイン、エリスロポエチン、または第ＶＩＩＩ因子の５’ＵＴＲの導入により、肝細胞株または肝臓におけるポリヌクレオチドの発現を増強することができる。同様に、他の組織特異的ｍＲＮＡに由来する５’ＵＴＲを、その組織における発現を向上させるために使用することが、筋肉（例えば、ＭｙｏＤ、ミオシン、ミオグロビン、ミオゲニン、ハーキュリン）、内皮細胞（例えば、Ｔｉｅ－１、ＣＤ３６）、骨髄系細胞（例えば、Ｃ／ＥＢＰ、ＡＭＬ１、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１１ｂ、ＭＳＲ、Ｆｒ－１、ｉ－ＮＯＳ）、白血球（例えば、ＣＤ４５、ＣＤ１８）、脂肪組織（例えば、ＣＤ３６、ＧＬＵＴ４、ＡＣＲＰ３０、アディポネクチン）、及び肺上皮細胞（例えば、ＳＰ－Ａ／Ｂ／Ｃ／Ｄ）に可能である。
いくつかの実施形態では、ＵＴＲは、タンパク質が共通の機能、構造、特徴、または特性を共有している転写物のファミリーから選択される。例えば、コードされるポリペプチドは、特定の細胞、組織において、または発達中の何らかの時点で、発現される、タンパク質のファミリーに属し得る（すなわち、少なくとも１つの機能、構造、特徴、局在化、起源、または発現パターンを共有する）。遺伝子またはｍＲＮＡのいずれかに由来するＵＴＲを、同じかまたは異なるタンパク質のファミリーの他の任意のＵＴＲと交換して、新しいポリヌクレオチドを作製することができる。
いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、異種であり得る。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、３’ＵＴＲとは異なる種に由来し得る。いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲは、５’ＵＴＲとは異なる種に由来し得る。共同所有の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２１５２２号（公開第ＷＯ／２０１４／１６４２５３号、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、本開示のポリヌクレオチドにおいて、ＯＲＦに隣接する領域として利用することができる例示的なＵＴＲの一覧を提供する。
本出願の例示的なＵＴＲとしては、グロビン、例えば、α－またはβ－グロビン（例えば、Ｘｅｎｏｐｕｓ、マウス、ウサギ、またはヒトグロビン）、強力なＫｏｚａｋ翻訳開始シグナル、ＣＹＢＡ（例えば、ヒトシトクロムｂ－２４５αポリペプチド）、アルブミン（例えば、ヒトアルブミン７）、ＨＳＤ１７Ｂ４（水酸化ステロイド（１７－β）デヒドロゲナーゼ）、ウイルス（例えば、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）、デングウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、ＣＭＶ最初期１（ＩＥ１））、肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、シンドビスウイルス、またはＰＡＶオオムギ黄化萎縮ウイルス）；熱ショックタンパク質（例えば、ｈｓｐ７０）；翻訳開始因子（例えば、ｅｌＦ４Ｇ）；グルコース輸送体（例えば、ｈＧＬＵＴ１（ヒトグルコース輸送体１））；アクチン（例えば、ヒトαまたはβアクチン）；ＧＡＰＤＨ；チューブリン；ヒストン；クエン酸回路酵素；トポイソメラーゼ（例えば、５’ＴＯＰモチーフ（オリゴピリミジントラクト）を欠くＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ）；リボソームタンパク質大型３２（Ｌ３２）；リボソームタンパク質（例えば、ヒトまたはマウスリボソームタンパク質、例えば、ｒｐｓ９など）；ＡＴＰシンターゼ（例えば、ＡＴＰ５Ａ１またはミトコンドリアＨ＋－ＡＴＰシンターゼのβサブユニット）；成長ホルモンｅ（例えば、ウシ（ｂＧＨ）またはヒト（ｈＧＨ））；伸長因子（例えば、伸長因子１α１（ＥＥＦ１Ａ１））；マンガンスーパーオキシドジスムターゼ（ＭｎＳＯＤ）；筋細胞エンハンサー因子２Ａ（ＭＥＦ２Ａ）；β－Ｆ１－ＡＴＰａｓｅ、クレアチンキナーゼ、ミオグロビン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）；コラーゲン（例えば、Ｉ型コラーゲンアルファ２（Ｃｏｌ１Ａ２）、Ｉ型コラーゲンアルファ１（Ｃｏｌ１Ａ１）、ＶＩ型コラーゲンアルファ２（Ｃｏｌ６Ａ２）、ＶＩ型コラーゲンアルファ１（Ｃｏｌ６Ａ１））；リボフォリン（例えば、リボフォリンＩ（ＲＰＮＩ））；低比重リポタンパク質受容体関連タンパク質（例えば、ＬＲＰ１）；カルジオトロフィン様サイトカイン因子（例えば、Ｎｎｔ１）；カルレティキュリン（Ｃａｌｒ）；プロコラーゲン－リジン、２－オキソグルタレート５－ジオキシゲナーゼ１（Ｐｌｏｄ１）；及びヌクレオバインディン（例えば、Ｎｕｃｂ１）の核酸配列に由来する１つ以上の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、β－グロビン５’ＵＴＲ、強力なＫｏｚａｋ翻訳開始シグナルを含有する５’ＵＴＲ、シトクロムｂ－２４５αポリペプチド（ＣＹＢＡ）５’ＵＴＲ、水酸化ステロイド（１７－β）デヒドロゲナーゼ（ＨＳＤ１７Ｂ４）５’ＵＴＲ、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）５’ＵＴＲ、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＴＥＥＶ）５’ＵＴＲ、非構造的タンパク質をコードする風疹ウイルス（ＲＶ）ＲＮＡの５’近位オープンリーディングフレーム、デングウイルス（ＤＥＮ）５’ＵＴＲ、熱ショックタンパク質７０（Ｈｓｐ７０）５’ＵＴＲ；ｅＩＦ４Ｇ ５’ＵＴＲ、ＧＬＵＴ１ ５’ＵＴＲ、これらの機能的断片及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲは、β－グロビン３’ＵＴＲ、ＣＹＢＡ ３’ＵＴＲ、アルブミン３’ＵＴＲ、成長ホルモン（ＧＨ）３’ＵＴＲ、ＶＥＥＶ ３’ＵＴＲ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）３’ＵＴＲ、α－グロビン３’ＵＴＲ、ＤＥＮ ３’ＵＴＲ、ＰＡＶオオムギ黄化萎縮ウイルス（ＢＹＤＶ－ＰＡＶ）３’ＵＴＲ、伸長因子１ α１（ＥＥＦ１Ａ１）３’ＵＴＲ、マンガンスーパーオキシドジスムターゼ（ＭｎＳＯＤ）３’ＵＴＲ、ミトコンドリアＨ（＋）－ＡＴＰシンターゼのβサブユニット（β－ｍＲＮＡ）３’ＵＴＲ、ＧＬＵＴ１ ３’ＵＴＲ；ＭＥＦ２Ａ ３’ＵＴＲ、β－Ｆ１－ＡＴＰａｓｅ ３’ＵＴＲ、これらの機能的断片及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
任意の遺伝子またはｍＲＮＡに由来する野生型ＵＴＲが、本開示のポリヌクレオチドに組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、ＵＴＲは、例えば、ＯＲＦに対するＵＴＲの配向または位置を変更することによって、または追加のヌクレオチドの包含、ヌクレオチドの欠失、ヌクレオチドの交換もしくは転位によって、野生型または天然のＵＴＲに対して変化させて、バリアントＵＴＲを産生することができる。いくつかの実施形態では、５’または３’ＵＴＲのバリアント、例えば、野生型ＵＴＲの変異体、または１つ以上のヌクレオチドがＵＴＲの末端に付加されたかもしくはそこから除去されたバリアントが、利用され得る。
加えて、１つ以上の合成ＵＴＲを、１つ以上の非合成ＵＴＲと組み合わせて使用してもよい。例えば、Ｍａｎｄａｌ及びＲｏｓｓｉ，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２０１３ ８（３）：５６８－８２（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
ＵＴＲまたはその部分は、それらが選択された転写物と同じ配向で配置されてもよく、または配向もしくは位置を変化させてもよい。それゆえ、５’及び／または３’ＵＴＲは、逆転されるか、短くされるか、延長されるか、または１つ以上の他の５’ＵＴＲもしくは３’ＵＴＲと組み合わされてもよい。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、複数のＵＴＲ、例えば、二重、三重、または四重の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲを含む。例えば、二重ＵＴＲは、直列または実質的に直列のいずれかで、同じＵＴＲの２つのコピーを含む。例えば、二重β－グロビン３’ＵＴＲを使用することができる（ＵＳ２０１０／０１２９８７７を参照されたく、この内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるＵＴＲのいずれかから選択される５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲを含む。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、以下を含む：
５’ＵＴＲ－００１（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号１９０）、５’ＵＴＲ－００２（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＧＡＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号１９７）、
５’ＵＴＲ－００３（上流ＵＴＲ）（ＷＯ２０１６／１００８１２を参照されたい）、
５’ＵＴＲ－００４（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＧＡＣＡＡＧＣＵＵＧＧＣＡＵＵＣＣＧＧＵＡＣＵＧＵＵＧＧＵＡＡＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号１９８）、
５’ＵＴＲ－００５（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＧＡＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号１９９）、
５’ＵＴＲ－００６（上流ＵＴＲ）（ＷＯ２０１６／１００８１２を参照されたい）、
５’ＵＴＲ－００７（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＧＡＣＡＡＧＣＵＵＧＧＣＡＵＵＣＣＧＧＵＡＣＵＧＵＵＧＧＵＡＡＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２００）、５’ＵＴＲ－００８（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＵＵＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２０１）、
５’ＵＴＲ－００９（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＵＡＧＡＣＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２０２）、
５’ＵＴＲ－０１０、Ｕｐｓｔｒｅａｍ（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＵＡＡＡＧＡＡＣＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２０３）、
５’ＵＴＲ－０１１（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＣＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２０４）、
５’ＵＴＲ－０１２（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＵＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２０５）、
５’ＵＴＲ－０１３（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＣＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２０６）、
５’ＵＴＲ－０１４（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＵＡＧＡＧＡＧＵＡＡＡＧＡＡＣＡＧＵＡＡＧＵＡＧＡＡＵＵＡＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２０７）、
５’ＵＴＲ－０１５（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＵＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２０８）、
５’ＵＴＲ－０１６（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＡＵＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２０９）、
５’ＵＴＲ－０１７（上流ＵＴＲ）、または（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＵＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２１０）、
５’ＵＴＲ－０１８（上流ＵＴＲ）５’ＵＴＲ
（ＵＣＡＡＧＣＵＵＵＵＧＧＡＣＣＣＵＣＧＵＡＣＡＧＡＡＧＣＵＡＡＵＡＣＧＡＣＵＣＡＣＵＡＵＡＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号２１１）。
いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲは、以下を含む：
１４２－３ｐ ３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２－３ｐ結合部位を含むＵＴＲ）（ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＡＵＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ）（配列番号２１２）、
１４２－３ｐ ３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２－３ｐ結合部位を含むＵＴＲ）（ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＣＡＵＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ）（配列番号２１３）、または
１４２－３ｐ ３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２－３ｐ結合部位を含むＵＴＲ）（ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＡＵＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ）（配列番号２１４）、
１４２－３ｐ ３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２－３ｐ結合部位を含むＵＴＲ）（ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＡＵＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ）（配列番号２１５）、
１４２－３ｐ ３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２－３ｐ結合部位を含むＵＴＲ）（ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＡＵＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ）（配列番号２１６）、
１４２－３ｐ ３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２－３ｐ結合部位を含むＵＴＲ）（ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＡＵＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ）（配列番号２１７）、
１４２－３ｐ ３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２－３ｐ結合部位を含むＵＴＲ）（ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＡＵＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ）（配列番号２１８）、
３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２及びｍｉＲ１２６結合部位バリアント１）
（ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＡＵＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＣＧＣＡＵＵＡＵＵＡＣＵＣＡＣＧＧＵＡＣＧＡＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ）（配列番号２１９）、
３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２及びｍｉＲ１２６結合部位バリアント２）
（ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＵＡＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＣＧＣＡＵＵＡＵＵＡＣＵＣＡＣＧＧＵＡＣＧＡＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ）（配列番号２２０）、または
３’ＵＴＲ（ｍｉＲ１４２－３ｐ結合部位バリアント３）
ＵＧＡＵＡＡＵＡＧＧＣＵＧＧＡＧＣＣＵＣＧＧＵＧＧＣＣＵＡＧＣＵＵＣＵＵＧＣＣＣＣＵＵＧＧＧＣＣＵＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＵＣＣＵＣＣＣＣＵＵＣＣＵＧＣＡＣＣＣＧＵＡＣＣＣＣＣＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡＧＵＧＧＵＣＵＵＵＧＡＡＵＡＡＡＧＵＣＵＧＡＧＵＧＧＧＣＧＧＣ（配列番号２２１）。
ある特定の実施形態では、本開示の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ配列は、配列番号１８６、１８９～１９１及び１９７～２１１のいずれかを含む５’ＵＴＲ配列からなる群から選択される配列に少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、及び／または３’ＵＴＲ配列は、配列番号１８７及び２１２～２２１のいずれか、及びそれらの任意の組み合わせを含む。ある特定の実施形態では、本開示の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ配列は、配列番号１８６、１８９～１９１及び１９７～２１１のいずれかを含む５’ＵＴＲ配列からなる群から選択される配列に少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む、及び／または３’ＵＴＲ配列は、配列番号１８７及び２１２～２２１のいずれか、及びそれらの任意の組み合わせを含む。
本開示のポリヌクレオチドは、特徴の組み合わせを含み得る。例えば、ＯＲＦには、強力なＫｏｚａｋ翻訳開始シグナルを含む５’ＵＴＲ及び／またはポリ－Ａ尾部の鋳型付加のためのオリゴ（ｄＴ）配列を含む３’ＵＴＲが、隣接していてもよい。５’ＵＴＲは、同じ及び／または異なるＵＴＲに由来する第１のポリヌクレオチド断片及び第２のポリヌクレオチド断片を含み得る（例えば、ＵＳ２０１０／０２９３６２５を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
他の非ＵＴＲ配列を、本開示のポリヌクレオチド内の領域または部分領域として使用してもよい。例えば、イントロンまたはイントロン配列の部分が、本開示のポリヌクレオチドに組み込まれ得る。イントロン配列の組込みにより、タンパク質の産生及びポリヌクレオチドの発現レベルを増大させることができる。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ＵＴＲの代わりまたはそれに加えて、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む（例えば、Ｙａｋｕｂｏｖ ｅｔ．，ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１０ ３９４（１）：１８９－１９３を参照されたく、この内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、５’ＵＴＲ配列の代わりにＩＲＥＳを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＯＲＦ及びウイルスキャプシド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、合成５’ＵＴＲを、非合成３’ＵＴＲと組み合わせて含む。
いくつかの実施形態では、ＵＴＲはまた、少なくとも１つの翻訳エンハンサーポリヌクレオチド、１つの翻訳エンハンサー要素、または複数の翻訳エンハンサー要素（集合的に「ＴＥＥ」、これはポリヌクレオチドから産生されるポリペプチドまたはタンパク質の量を増大させる核酸配列を指す）を含み得る。非限定的な例として、ＴＥＥは、転写プロモーターと開始コドンとの間に位置してもよい。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、ＴＥＥを含む。一態様では、ＴＥＥは、核酸の翻訳活性、例えば、限定されないが、キャップ依存性またはキャップ非依存性翻訳を促進し得る、ＵＴＲ内の保存された要素である。
５’キャッピング
インビトロ転写（ＩＶＴ）を用いて、治療用ＲＮＡを酵素的に製造することが望ましい。一般に、ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼは、適切なプロモーターを含有するＤＮＡテンプレートをＲＮＡ転写物に転写する。ポリ（Ａ）尾部は、ポリ（Ｔ）トラクトをテンプレートＤＮＡに組み込むことによって同時転写的に、またはポリ（Ａ）ポリメラーゼを用いることで別々に生成することができる。真核細胞ｍＲＮＡは、５’キャップ（例えば、５’ｍ７ＧｐｐｐＸキャップ）で開始する。典型的には、５’キャップは、（ｅＩＦ４Ｅ結合に必要な）Ｎ７Ｍｅを有する反転Ｇで始まる。好ましいキャップであるＣａｐ１は、＋１位置に２’ＯＭｅ、続いて、＋２位置に任意のヌクレオシドを含有する。このキャップを転写後に、例えば、酵素的（転写後）または同時転写的（転写中）に挿入することができる。
転写後キャッピングは、ワクチニアキャッピング酵素を用いて実行することができ、ＲＮＡの完全なキャッピングが可能になり、５’末端三リン酸または二リン酸基を運ぶＲＮＡ上にキャップ０構造を生成する。このキャップ０構造は、ｍＲＮＡの効率的なインビボ翻訳に必要である。その後、キャップ０構造は、キャップ特異的２’Ｏメチルトランスフェラーゼを用いて、キャップ１にさらに修飾することができる。ワクチニアキャッピング酵素及び２’Ｏメチルトランスフェラーゼは、例えば、真核細胞のトランスフェクトにおいてまたはタンパク質合成を駆動するためのｍＲＮＡ治療用途において使用される、インビトロ転写物上にキャップ０及びキャップ１構造を生成するために使用されている。ワクチニアキャッピング酵素による転写後キャッピングにより、キャップ０またはキャップ１構造のいずれかを生成することができるが、大規模なｍＲＮＡ産生に使用される場合に高価なプロセスである。例えば、ワクシニアは、費用がかかり、かつ、供給量が限られており、ＩＶＴ ｍＲＮＡを精製すること（例えば、Ｓ－アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）、及び２’Ｏ－メチルトランスフェラーゼを除去すること）は困難であり得る。さらに、キャッピングは、構造化された５’末端にアクセスできないため不完全になり得る。
キャップ類似体を用いた同時転写キャッピングは、例えば、プロセスには、より簡単なワークフローを要する（例えば、転写とキャッピングの間に精製ステップを必要としない）ため、ワクシニアキャッピングを上回るある特定の利点を有する。従来の同時転写キャッピング法は、ジヌクレオチドＡＲＣＡ（抗逆キャップ類似体）を利用し、キャップ０構造を生成する。しかしながら、ＡＲＣＡキャッピングは、欠点を有する。例えば、得られたキャップ０構造は、免疫原性であり得、プロセスは、低収率及び／またはキャップが不十分な材料をもたらすことが多い。このアプローチの別の潜在的な欠点は、出発ヌクレオチドのＧＴＰからの競合により、理論的なキャッピング効率が１００％未満である。例えば、ＡＲＣＡを用いた同時転写キャッピングは、典型的には、（開始のために、ＧＴＰを打ち負かすのに必要とされる）９０％超のキャッピングを達成するため、１０：１のＡＲＣＡ：ＧＴＰ比を必要とする。
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ｍＲＮＡのインビトロ合成のために（例えば、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼを特徴とする）同時転写キャッピング法を用いて調製されたトリヌクレオチドｍＲＮＡキャップ類似体からなる。トリヌクレオチドキャップ類似体の使用は、ワクシニアまたはＡＲＣＡキャッピングに関連する上述の問題のいくつかに対する解決策を提供し得る。加えて、上述の同時転写キャッピング法は、結合挙動を変化させ得る、または脱キャッピング酵素に対するこれらのキャップの親和性に影響を及ぼし得る、またはその両方であり得る、最後から２番目の核酸塩基の修飾に柔軟性をもたらすため、それぞれのｍＲＮＡの安定性を潜在的に改善させる。本明細書に記載される同時転写キャッピング法で使用される例示的なトリヌクレオチドは、ｍ７ＧｐｐｐＡＧ（ＧＡＧ）トリヌクレオチドである。このトリヌクレオチドの使用により、＋１位置がＧの代わりにＡであるヌクレオチドが得られる。＋１Ｇ及び＋１Ａは両方とも、天然に存在するｍＲＮＡに見られ得るキャップである。
Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼは、５’ＧＴＰで始まるのが好ましい。したがって、最も従来型のｍＲＮＡ転写物は、
Figure 2022531461000003
で始まる
Figure 2022531461000004
（ＴＡＴＡは、「ＴＡＴＡボックス」と呼ばれる）。Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼは、典型的には、Ｔ７プロモーター
Figure 2022531461000005
の下流のＤＮＡを転写する。Ｔ７ポリメラーゼは、プロモーター配列中の下線付きのＧで転写を開始する。その後、ポリメラーゼは、５’→３’からのテンプレートとして逆鎖を用いて転写する。転写物中の最初の塩基は、Ｇである。
本明細書に記載されるプロセスは、Ｔ７酵素が、単一ヌクレオチドＡＴＰでは限定された開始活性をを有し、Ｔ７をＡＴＰではなくトリヌクレオチドで開始するように駆動させるという事実を利用する。従って、プロセスは、機能的キャップ転写後に９０％超のｍＲＮＡ産物を生成する。プロセスは、例えば、ＮＴＰ、ＧＴＰ、ＡＴＰ、ＣＴＰ、及びＵＴＰと等モル濃度でＧＡＧトリヌクレオチド（ＧｐｐｐＡＧ；ｍＧｐｐｐＡｍＧ）を含む、効率的な「ワンポット」ｍＲＮＡ生成法である。プロセスは、５’アデノシン（Ａ）で転写を開始する「Ａ開始」ＤＮＡテンプレートを特徴とする。本明細書で定義する場合、「Ａ開始」及び「Ｇ開始」ＤＮＡテンプレートは、コード鎖（及び対応するｍＲＮＡ）が、ＡまたはＧでそれぞれ始まるように、テンプレート鎖中に必要なヌクレオシドを有する二本鎖ＤＮＡである。例えば、Ｇ開始ＤＮＡテンプレートは、（コード鎖を参照する）Ｔ７プロモーターにおけるＴＡＴＡボックスのすぐ下流のＧＧに相補的な核酸塩基ＣＣを有するテンプレート鎖を特徴とし、Ａ開始ＤＮＡテンプレートは、（コード鎖を参照する）Ｔ７プロモーターにおけるＴＡＴＡボックスのすぐ下流のＡＧに相補的な核酸塩基ＴＣを有するテンプレート鎖を特徴する。
本開示のＡ開始ＤＮＡテンプレートにおいて特徴とする例示的なＴ７プロモーター配列をここに示す：
Figure 2022531461000006
本明細書に記載されるトリヌクレオチドベースキャッピング法は、最後から２番目の核酸塩基を定めることにおいて柔軟性をもたらす。本開示のトリヌクレオチドキャッピング法は、キャップされたｍＲＮＡの効率的な産生、例えば、天然キャップ１構造を有する、９５～９８％のキャップされたｍＲＮＡをもたらす。
ポリ－Ａ尾部
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドをコードするｍＲＮＡを含むポリヌクレオチドは、ポリ－Ａ尾部をさらに含む。さらなる実施形態では、ポリ－Ａ尾部の末端基が、安定化のために組み込まれ得る。他の実施形態では、ポリ－Ａ尾部は、デス－３’ヒドロキシル尾部を含む。有用なポリ－Ａ尾部は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ １５：１５０１－１５０７により教示されるように、構造部分または２’－Ｏメチル修飾も含み得る。
一実施形態では、ポリ－Ａ尾部の長さは、存在する場合、３０ヌクレオチド長より長い。別の実施形態では、ポリ－Ａ尾部は、３５ヌクレオチド長より長い（例えば、少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、及び３，０００ヌクレオチド、またはそれらより長い）。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドまたはその領域は、約３０～約３，０００ヌクレオチド（例えば、３０～５０、３０～１００、３０～２５０、３０～５００、３０～７５０、３０～１，０００、３０～１，５００、３０～２，０００、３０～２，５００、５０～１００、５０～２５０、５０～５００、５０～７５０、５０～１，０００、５０～１，５００、５０～２，０００、５０～２，５００、５０～３，０００、１００～５００、１００～７５０、１００～１，０００、１００～１，５００、１００～２，０００、１００～２，５００、１００～３，０００、５００～７５０、５００～１，０００、５００～１，５００、５００～２，０００、５００～２，５００、５００～３，０００、１，０００～１，５００、１，０００～２，０００、１，０００～２，５００、１，０００～３，０００、１，５００～２，０００、１，５００～２，５００、１，５００～３，０００、２，０００～３，０００、２，０００～２，５００、及び２，５００～３，０００）を含む。
いくつかの実施形態では、ポリ－Ａ尾部は、ポリヌクレオチドの全体の長さまたはポリヌクレオチドの特定の領域の長さに対して設計される。この設計は、コード領域の長さ、特定の特徴もしくは領域の長さに基づき得るか、またはポリヌクレオチドから発現される最終的な産物の長さに基づき得る。
この文脈においては、ポリ－Ａ尾部は、ポリヌクレオチドまたはその特徴よりも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００％長くてもよい。ポリ－Ａ尾部はまた、それが属するポリヌクレオチドの小部分として設計してもよい。この文脈においては、ポリ－Ａ尾部は、構築物の全長、構築物の領域、または構築物の全長からポリ－Ａ尾部を差し引いたものの１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、または９０％、またはそれ以上でもよい。さらに、ポリ－Ａ結合タンパク質のためのポリヌクレオチドの結合部位の操作及びコンジュゲーションにより、発現を増強してもよい。
加えて、ポリ－Ａ尾部の３’末端において修飾されたヌクレオチドを使用して、複数の異なるポリヌクレオチドを、ＰＡＢＰ（ポリ－Ａ結合タンパク質）を介して３’末端を通じて一緒に連結してもよい。トランスフェクション実験を、適切な細胞株において行うことができ、タンパク質産生を、ＥＬＩＳＡによって、トランスフェクションの１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、及び７日後にアッセイすることができる。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ポリＡ－Ｇカルテット領域を含むように設計される。Ｇカルテットは、環状水素結合された４つのグアニンヌクレオチドの配列されたものであり、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方においてＧリッチ配列によって形成することができる。本実施形態では、Ｇカルテットは、ポリ－Ａ尾部の末端に組み込まれる。結果として得られるポリヌクレオチドを、様々な時点において、安定性、タンパク質産生、及び半減期を含む他のパラメーターについてアッセイする。ポリＡ－Ｇカルテットが、１２０ヌクレオチドのポリ－Ａ尾部を単独で使用した場合に確認されるタンパク質産生の少なくとも７５％に相当する、ｍＲＮＡからのタンパク質産生をもたらすことが見出されている。
開始コドン領域
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、開始コドン領域に類似であるか、またはそれと同様の機能を果たす領域をさらに含む。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの翻訳は、開始コドンＡＵＧではないコドンで開始され得る。ポリヌクレオチドの翻訳は、ＡＣＧ、ＡＧＧ、ＡＡＧ、ＣＴＧ／ＣＵＧ、ＧＴＧ／ＧＵＧ、ＡＴＡ／ＡＵＡ、ＡＴＴ／ＡＵＵ、ＴＴＧ／ＵＵＧなどであるがこれらに限定されない代替の開始コドンで開始され得る。Ｔｏｕｒｉｏｌ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ ９５（２００３）１６９－１７８及びＭａｔｓｕｄａ ａｎｄ Ｍａｕｒｏ ＰＬｏＳ ＯＮＥ，２０１０ ５：１１を参照されたい。非限定的な例として、ポリヌクレオチドの翻訳は、代替の開始コドンＡＣＧで開始される。別の非限定的な例として、ポリヌクレオチドの翻訳は、代替の開始コドンＣＵＧで開始される。さらに別の非限定的な例として、ポリヌクレオチドの翻訳は、代替の開始コドンＧＵＧで開始される。
翻訳を開始するコドン、例えば、限定されないが、開始コドンまたは代替の開始コドンに隣接するヌクレオチドが、ポリヌクレオチドの翻訳効率、長さ、及び／または構造に影響を及ぼすことが知られている。例えば、Ｍａｔｓｕｄａ ａｎｄ Ｍａｕｒｏ ＰＬｏＳ ＯＮＥ，２０１０ ５：１１を参照されたい。翻訳を開始するコドンに隣接するヌクレオチドのいずれかのマスキングを使用して、ポリヌクレオチドの翻訳開始位置、翻訳効率、長さ、及び／または構造を変化させることができる。
いくつかの実施形態では、マスキングされた開始コドンまたは代替の開始コドンにおける翻訳開始の確率を低減するようにコドンをマスキングまたは遮蔽するために、マスキング剤が、開始コドンまたは代替の開始コドンの付近で使用され得る。マスキング剤の非限定的な例としては、アンチセンスロックド核酸（ＬＮＡ）ポリヌクレオチド及びエクソン－ジャンクション複合体（ＥＪＣ）が挙げられる。例えば、マスキング剤ＬＮＡポリヌクレオチド及びＥＪＣについて記載しているＭａｔｓｕｄａ及びＭａｕｒｏ（ＰＬｏＳ ＯＮＥ，２０１０ ５：１１）を参照されたい。
別の実施形態では、翻訳が、代替の開始コドンで開始される可能性を増大させるために、マスキング剤を使用して、ポリヌクレオチドの開始コドンをマスキングすることができる。いくつかの実施形態では、翻訳が、マスキングした開始コドンまたは代替の開始コドンの下流の開始コドンまたは代替の開始コドンで開始される機会を増大させるために、マスキング剤を使用して、第１の開始コドンまたは代替の開始コドンをマスキングしてもよい。
いくつかの実施形態では、開始コドンまたは代替の開始コドンは、ｍｉＲ結合部位の完璧な相補体内に位置する。ｍｉＲ結合部位の完全な相補体は、マスキング剤と同様に、ポリヌクレオチドの翻訳、長さ、及び／または構造の調節を補助し得る。非限定的な例として、開始コドンまたは代替の開始コドンは、ｍｉＲ－１２２結合部位の完全な相補体の中央に位置する。開始コドンまたは代替の開始コドンは、第１のヌクレオチド、第２のヌクレオチド、第３のヌクレオチド、第４のヌクレオチド、第５のヌクレオチド、第６のヌクレオチド、第７のヌクレオチド、第８のヌクレオチド、第９のヌクレオチド、第１０のヌクレオチド、第１１のヌクレオチド、第１２のヌクレオチド、第１３のヌクレオチド、第１４のヌクレオチド、第１５のヌクレオチド、第１６のヌクレオチド、第１７のヌクレオチド、第１８のヌクレオチド、第１９のヌクレオチド、第２０のヌクレオチド、または第２１のヌクレオチドの後に位置し得る。
別の実施形態では、ポリヌクレオチドの翻訳を、開始コドンではないコドンで開始させるために、ポリヌクレオチドの開始コドンを、ポリヌクレオチド配列から除去する。ポリヌクレオチドの翻訳は、除去された開始コドンの次のコドンまたは下流の開始コドンもしくは代替の開始コドンで開始され得る。非限定的な実施例では、翻訳を、下流の開始コドンまたは代替の開始コドンで開始させるために、開始コドンＡＴＧまたはＡＵＧを、ポリヌクレオチド配列の最初の３つのヌクレオチドとして、除去する。開始コドンが除去されたポリヌクレオチド配列は、翻訳の開始、ポリヌクレオチドの長さ、及び／またはポリヌクレオチドの構造を調節するため、またはその調節を試みるために、下流の開始コドン及び／または代替の開始コドンのための少なくとも１つのマスキング剤を、さらに含んでもよい。
終止コドン領域
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の前に、少なくとも１つの終止コドンまたは少なくとも２つの終止コドンをさらに含み得る。終止コドンは、ＵＧＡ、ＵＡＡ、及びＵＡＧから選択され得る。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、終止コドンＵＧＡ、及び１の追加の終止コドンを含む。さらなる実施形態では、追加の終止コドンは、ＵＡＡであり得る。別の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、３つの終止コドン、４つの終止コドン、またはそれ以上の終止コドンを含む。
調整されたウラシル含有量
本開示のいくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ウラシル含有量が調整されていてもよい。いくつかの実施形態では、治療薬ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最小ウラシル含有量（％ＵＴＭ）に対する、治療薬ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）のウラシル含有量は、約１００％～約１５０％である。いくつかの実施形態では、ＯＲＦのウラシル含有量は、対応する野生型ＯＲＦ（％ＵＴＭ）中の理論的最小ウラシル含有量の約１０５％～約１４５％、約１０５％～約１４０％、約１１０％～約１４０％、約１１０％～約１４５％、約１１５％～約１３５％、約１０５％～約１３５％、約１１０％～約１３５％、約１１５％～約１４５％、または約１１５％～約１４０％である。他の実施形態では、ＯＲＦのウラシル含有量は、約１１７％～約１３４％または１１８％～１３２％の％ＵＴＭである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするＯＲＦのウラシル含有量は、約１１５％、約１２０％、約１２５％、約１３０％、約１３５％、約１４０％、約１４５％、または約１５０％の％ＵＴＭである。これに関連して、「ウラシル」という用語は、代替ウラシル及び／または天然に存在するウラシルを指し得る。
いくつかの実施形態では、対応する野生型ＯＲＦのウラシル含有量（％ＵＷＴ）に対するポリヌクレオチドのＯＲＦのウラシル含有量は、１００％未満である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの％ＵＷＴは、約９５％未満、約９０％未満、約８５％未満、８０％未満、７９％未満、７８％未満、７７％未満、７６％未満、７５％未満、７４％未満、または７３％未満である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの％ＵＷＴは、６５％～７３％である。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約５０％、約４０％、約３０％、または約２０％未満である。いくつかの実施形態では、ＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約１５％～約２５％である。他の実施形態では、ＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約２０％～約３０％である。一実施形態では、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中のウラシル含有量は、オープンリーディングフレーム中の総核酸塩基含有量の約２０％未満である。これに関連して、「ウラシル」という用語は、代替ウラシル及び／または天然に存在するウラシルを指し得る。
さらなる実施形態では、ウラシル含有量が調整されている、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、またはグアニン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含有量（絶対または相対）が増加している。いくつかの実施形態では、ＯＲＦのＣ含有量、Ｇ含有量、またはＧ／Ｃ含有量（絶対または相対）の全体的な増加は、野生型ＯＲＦのＧ／Ｃ含有量（絶対または相対）を基準にして少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態では、ＯＲＦ中のＧ含有量、Ｃ含有量またはＧ／Ｃ含有量は、ＰＢＤＧポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最大Ｇ含有量、Ｃ含有量またはＧ／Ｃ含有量（％ＧＴＭＸ、％ＣＴＭＸ、もしくは％Ｇ／ＣＴＭＸ）の約１００％未満、約９０％未満、約８５％未満、または約８０％未満である。他の実施形態では、ＯＲＦ中のＧ含有量、Ｃ含有量またはＧ／Ｃ含有量は、％ＧＴＭＸ、％ＣＴＭＸ、または％Ｇ／ＣＴＭＸの約７０％～約８０％、約７１％～約７９％、約７１％～約７８％、または約７１％～約７７％である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最大グアニン含有量（％ＧＴＭＸ）に対する、ポリヌクレオチドのＯＲＦのグアニン含有量は、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの％ＧＴＭＸは、約７０％～約８０％、約７１％～約７９％、約７１％～約７８％、または約７１％～約７７％である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最大シトシン含有量（％ＣＴＭＸ）に対する、ポリヌクレオチドのＯＲＦのシトシン含有量は、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのＯＲＦの％ＣＴＭＸは、約６０％～約８０％、約６２％～約８０％、約６３％～約７９％、または約６８％～約７６％である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最大Ｇ／Ｃ含有量（％Ｇ／ＣＴＭＸ）に対する、ポリヌクレオチドのＯＲＦのグアニン及びシトシン含有量（Ｇ／Ｃ）は、少なくとも約８１％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのＯＲＦの％Ｇ／ＣＴＭＸは、約８０％～約１００％、約８５％～約９９％、約９０％～約９７％、または約９１％～約９６％である。いくつかの実施形態では、対応する野生型ＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量（％Ｇ／ＣＷＴ）に対する、ポリヌクレオチドのＯＲＦ中のＧ／Ｃ含有量は、少なくとも１０２％、少なくとも１０３％、少なくとも１０４％、少なくとも１０５％、少なくとも１０６％、少なくとも１０７％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、または少なくとも１２０％である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのＯＲＦ中の第３のコドン位置における平均Ｇ／Ｃ含有量は、対応する野生型ＯＲＦの第３のコドン位置の平均Ｇ／Ｃ含有量よりも少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、または少なくとも３０％多い。いくつかの実施形態では、Ｇ含有量、Ｃ含有量またはＧ／Ｃ含有量の低い同義コドンをＣ含有量、Ｇ含有量、またはＧ／Ｃ含有量の高い同義コドンで置換することによって、本明細書に記載されるＧ含有量及び／またはＣ含有量（絶対または相対）を増加させることができる。他の実施形態では、Ｕで終わるコドンを、ＧもしくはＣで終わる同義コドンで置換することによって、Ｇ含有量及び／またはＣ含有量（絶対または相対）を増加させることができる。
さらなる実施形態では、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、ウラシルペア（ＵＵ）及び／またはウラシルトリプレット（ＵＵＵ）及び／またはウラシルクアドラプレット（ＵＵＵＵ）を、ポリペプチドをコードする対応する野生型ヌクレオチド配列未満で含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦには、ウラシルペア及び／またはウラシルトリプレット及び／またはウラシルクアドラプレットが全く含まれない。いくつかの実施形態では、ウラシルペア及び／またはウラシルトリプレット及び／またはウラシルクアドラプレットが、ある特定の閾値未満、例えば、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中における出現数が、１以下、２以下、３以下、４以下、５以下、６以下、７以下、８以下、９以下、１０以下、１１以下、１２以下、１３以下、１４以下、１５以下、１６以下、１７以下、１８以下、１９以下、または２０以下に低減される。特定の実施形態では、本開示のポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦには、２０未満、１９未満、１８未満、１７未満、１６未満、１５未満、１４未満、１３未満、１２未満、１１未満、１０未満、９未満、８未満、７未満、６未満、５未満、４未満、３未満、２未満もしくは１未満の非フェニルアラニンウラシルペア及び／またはトリプレットが含まれる。別の実施形態では、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦには、非フェニルアラニンウラシルペア及び／またはトリプレットが全く含まれない。
さらなる実施形態では、本開示のポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦには、ウラシル富化クラスターを、ポリペプチドをコードする対応する野生型ヌクレオチド配列未満で含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦは、ポリペプチドをコードする対応する野生型ヌクレオチド配列中の対応するウラシル富化クラスターよりも長さが短いウラシル富化クラスターを含む。
さらなる実施形態では、低頻度の代替コドンが用いられる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのＯＲＦは、少なくとも１つの低頻度のコドンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡのポリペプチドをコードするＯＲＦ中のコドンの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または１００％が、同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度よりもコドン頻度が低い各代替コドンでそれぞれ置換される。ＯＲＦはまた、上述されているように、ウラシル含有量が調整されていてもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中の少なくとも１つのコドンが、同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度よりもコドン頻度が低い、代替コドンで置換される。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ポリペプチドをコードするＯＲＦを含むｍＲＮＡであり、ＯＲＦのウラシル含有量は、対応する野生型ＯＲＦ中の理論的最小ウラシル含有量の約１１５％～約１３５％であり、ポリペプチドをコードするＯＲＦ中のウラシル含有量は、ＯＲＦ中の総核酸塩基含有量の約３０％未満である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするＯＲＦは、ＯＲＦのＧ／Ｃ含有量（絶対または相対）を対応する野生型ＯＲＦと比較して少なくとも約４０％増加させるように、さらに修飾されている。さらに他の実施形態では、ポリペプチドをコードするＯＲＦに含まれる非フェニルアラニンウラシルペア及び／またはトリプレットは、２０未満である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡのＯＲＦ中の少なくとも１つのコドンはさらに、同義コドンセット中の置換コドンのコドン頻度よりもコドン頻度が低い、代替コドンで置換される。
いくつかの実施形態では、ＯＲＦを含むｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドの発現は、ＯＲＦのウラシル含有量が調整されている（例えば、ウラシル含有量が対応する野生型ＯＲＦ中の理論的最小ウラシル含有量の約１１５％～約１３５％である）場合に、対応する野生型ｍＲＮＡ由来のポリペプチドの発現と比較して少なくとも約１０倍増加する。いくつかの実施形態では、オープンＯＲＦを含むｍＲＮＡにより誘発される自然免疫応答は、ウラシル含有量が調整されている（例えば、ＯＲＦのウラシル含有量が対応する野生型ＯＲＦ中の理論的最小ウラシル含有量の約１１５％～約１３５％である）場合に、対応する野生型ｍＲＮＡ由来のポリペプチドの発現と比較して少なくとも約１０倍減少する。いくつかの実施形態では、ウラシル含有量が調整されたｍＲＮＡは、ｍＲＮＡが導入される哺乳動物細胞の自然免疫応答を実質的に誘導しない。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡのウラシル含有量は、本明細書に記載されるように調整され、修飾ヌクレオシドが、調整後にｍＲＮＡ中に残っているウラシルを部分的または完全に置換する。非限定的な例として、天然ヌクレオチドウリジンが、本明細書に記載されるように、修飾ヌクレオシドで置換され得る。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、シュードウリジン（Ψ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）、及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２－チオウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２’－Ｏ－メチルウリジンを含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２’－Ｏ－メチルウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
ｍＲＮＡの化学修飾
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１つ以上の修飾核酸塩基、ヌクレオシドまたはヌクレオチドを含む（「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれる）。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、参照未修飾ｍＲＮＡと比較して、安定性の向上、細胞内保持、翻訳の向上、及び／またはｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫応答の実質的な誘導の欠如などの有用な特性を有し得る。したがって、修飾ｍＲＮＡの使用は、タンパク質産生の効率、細胞内での核酸の保持を促進し得、同様に免疫原性の低下を保有し得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上（例えば、１、２、３または４）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれ以上の）異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、対応する未修飾ｍＲＮＡと比較して、ｍＲＮＡが導入された細胞内では分解が低下している場合がある。
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたウラシルである。修飾されたウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、シュードウリジン（Ψ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジンまたは５－ブロモ－ウリジン）、３－メチル－ウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－シュードウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－シュードウリジン（ｍ１ｓ４Ψ）、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、３－メチル－シュードウリジン（ｍ３Ψ）、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、Ｎ１－メチル－シュードウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３Ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－シュードウリジン（Ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－アラ－ウリジン、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－アラ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、及び５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）］ウリジンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたシトシンである。修飾されたシトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、５－アザ－シチジン、６－アザ－シチジン、シュードイソシチジン、３－メチル－シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－ホルミル－シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シチジン（ｍ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α－チオ－シチジン、２’－Ｏ－メチル－シチジン（Ｃｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１－チオ－シチジン、２’－Ｆ－アラ－シチジン、２’－Ｆ－シチジン、及び２’－ＯＨ－アラ－シチジンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたアデニンである。修飾されたアデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、α－チオ－アデノシン、２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジド－アデノシン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｉ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－アデノシン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデノシン（ａｃ６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデニン、２－メトキシ－アデニン、α－チオ－アデノシン、２’－Ｏ－メチル－アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチル－アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸塩）（Ａｒ（ｐ））、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデノシン、８－アジド－アデノシン、２’－Ｆ－アラ－アデノシン、２’－Ｆ－アデノシン、２’－ＯＨ－アラ－アデノシン、及びＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデノシンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたグアニンである。例示的な修飾されたグアニンを有する核酸塩基及びヌクレオシドには、ａ－チオ－グアノシン、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４－デメチル－ワイオシン（ｉｍＧ－１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、不完全修飾型ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７－デアザ－グアノシン、キューオシン（Ｑ）、エポキシキューオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－キューオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－キューオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ），６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアノシン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン、α－チオ－グアノシン、２’－Ｏ－メチル－グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸塩）（Ｇｒ（ｐ））、１－チオ－グアノシン、Ｏ６－メチル－グアノシン、２’－Ｆ－アラ－グアノシン、及び２’－Ｆ－グアノシンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１つ以上の前述の修飾核酸塩基の組み合わせ（例えば、２つ、３つまたは４つの前述の修飾核酸塩基の組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、シュードウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）、２－チオウリジン、４’－チオウリジン、５－メチルシトシン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、４－チオ－シュードウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５－メトキシウリジン、または２’－Ｏ－メチルウリジンである。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１つ以上の上述の修飾された核酸塩基の組み合わせ（例えば、上述の修飾された核酸塩基のうち２、３または４つの組み合わせ）を包含する。いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）であり、本開示のｍＲＮＡは、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）で完全に修飾される。いくつかの実施形態では、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）は、ｍＲＮＡ中の７５～１００％のウラシルに相当する。いくつかの実施形態では、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）は、ｍＲＮＡ中の１００％のウラシルに相当する。
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたシトシンである。修飾されたシトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシド（）には、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジンが挙げられる。いくつかの実施形態では、開示のｍＲＮＡは、上述の修飾された核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、上述の修飾された核酸塩基の２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたアデニンである。例示的な核酸塩基及びヌクレオシド（修飾されたアデニンを有する）としては、７－デアザ－アデニン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１つ以上の上述の修飾された核酸塩基の組み合わせ（例えば、上述の修飾された核酸塩基の２、３または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、修飾されたグアニンである。修飾されたグアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７－デアザ－グアノシン、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、上述の修飾された核酸塩基の１つ以上の組み合わせ（例えば、上述の修飾された核酸塩基の２、３または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾された核酸塩基は、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、シュードウリジン（Ψ）、α－チオ－グアノシン、またはα－チオ－アデノシンである。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、上述の修飾された核酸塩基の１つ以上の組み合わせ（例えば、上述の修飾された核酸塩基の２、３または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（Ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（Ψ）、及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）、及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２－チオウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’－Ｏ－メチルウリジンを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’－Ｏ－メチルウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
ある特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、特定の修飾について均一に修飾されている（すなわち、完全に修飾され、配列全体にわたって修飾されている）。例えば、ｍＲＮＡは、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）または５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾されてもよく、このことは、ｍＲＮＡ配列中の全てのウリジンまたは全てのシトシンヌクレオシドが、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）または５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で置き換えられていることを意味する。同様に、本開示のｍＲＮＡは、上記で示される残基のような修飾された残基との置換によって、配列中に存在する任意の種類のヌクレオシド残基について均一に修飾され得る。
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、コード領域（例えば、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム）において修飾され得る。他の実施形態では、ｍＲＮＡは、コード領域以外の領域で修飾されていてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、５’－ＵＴＲ及び／または３’－ＵＴＲが提供され、ここで一方または両方は、独立して１つ以上の異なるヌクレオシド修飾を含んでもよい。そのような実施形態では、ヌクレオシド修飾はまたコード領域にも存在し得る。
本開示のｍｍＲＮＡ中に存在し得る、ヌクレオシド修飾及びそれらの組み合わせの例としては、限定するものではないが、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１２０４５０７５、ＷＯ２０１４０８１５０７、ＷＯ２０１４０９３９２４、ＷＯ２０１４１６４２５３、及びＷＯ２０１４１５９８１３に記載されるものが挙げられる。
本開示のｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間結合に対する修飾の組み合わせを含み得る。これらの組み合わせは、本明細書に記載される任意の１つ以上の改変を含み得る。
ある特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、本開示のｍＲＮＡの天然ヌクレオチドを部分的にまたは完全に置換し得る。非限定的な例として、天然のヌクレオチドウリジンが、本明細書に記載される修飾ヌクレオシドで置換されていてもよい。別の非限定的な例では、天然ヌクレオシドウリジンが、部分的に（例えば、約０．１％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９．９％の天然ウリジンが）本明細書に開示される修飾ヌクレオシドの少なくとも１つによって置換されていてもよい。
本開示のｍＲＮＡ、またはその領域は、コドン最適化されてもよい。コドン最適化法は、当該技術分野において公知であり、以下の種々の目的に有用であり得る：適切な折り畳みを保証するための宿主生物におけるコドン頻度の一致、ｍＲＮＡ安定性の向上または二次構造の低減のためのバイアスＧＣ含量、遺伝子構築または発現を障害し得るタンデムリピートコドンまたはベースランを最小化する、転写及び翻訳制御領域をカスタマイズする、タンパク質輸送配列を挿入または除去する、コードされたタンパク質中の翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／追加する、タンパク質ドメインを追加、除去またはシャッフルする、制限部位を挿入または削除する、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾する、翻訳速度を調節してタンパク質の種々のドメインが適切に折り畳まれることを可能にするか、またはポリヌクレオチド内の問題の二次構造を減少もしくは排除する。コドン最適化ツール、アルゴリズム及びサービスは、当該技術分野において公知であり；非限定的な例としては、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）のサービス、及び／または独自の方法が挙げられる。一実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、例えば、哺乳動物細胞における発現を最適化するため、またはｍＲＮＡの安定性を高めるために、最適化アルゴリズムを使用して最適化される。
ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載される任意のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む。
本開示のｍＲＮＡは、インビトロ転写（ＩＶＴ）、及び合成方法を含むがこれらに限定されない、当該技術分野において利用可能な手段によって産生され得る。酵素的（ＩＶＴ）、固相、液相、複合合成法、小領域合成、及び連結法を利用してもよい。一実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＶＴ酵素合成法を用いて作製される。ＩＶＴによるポリヌクレオチドの製造方法は、当該技術分野において公知であり、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２に記載されている。したがって、本開示はまた、本明細書に記載されるｍＲＮＡをインビトロ転写するために使用され得るポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡ、構築物及びベクターを含む。
合成中または合成後に、非天然修飾核酸塩基をポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡに導入してもよい。ある特定の実施形態では、修飾は、ヌクレオシド間結合、プリンもしくはピリミジン塩基、または糖にあってもよい。特定の実施形態では、修飾は、ポリヌクレオチド鎖の末端に導入しても、またはポリヌクレオチド鎖内の他のどこかに導入してもよい（化学合成によるかまたはポリメラーゼ酵素による）。修飾された核酸及びそれらの合成の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５８５１９号に開示されている。修飾ポリヌクレオチドの合成はまた、Ｖｅｒｍａ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｅｒｇｙ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７６，９９－１３４（１９９８）にも記載される。
酵素的または化学的ライゲーション方法のいずれかを使用して、標的化剤または送達剤、蛍光標識、液体、ナノ粒子などのような、異なる機能部分とポリヌクレオチドまたはそれらの領域とをコンジュゲートさせてもよい。ポリヌクレオチド及び修飾ポリヌクレオチドのコンジュゲートは、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．１（３），１６５～１８７（１９９０）に概説されている。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位
本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、調節要素、例えば、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位、転写因子結合部位、構造化ｍＲＮＡ配列及び／またはモチーフ、内因性核酸結合分子に対する偽受容体として作用するように設計された人工結合部位、及びそれらの組み合わせを含んでもよい。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、さらに１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含む。ｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）の包含もしくは組込みは、天然に存在するｍｉＲＮＡの組織特異的及び／または細胞型特異的な発現に基づいて、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）、次いで、それからコードされるポリペプチドの調節を提供する。
ｍｉＲＮＡ、例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に結合し、安定性を低下させることによってまたはポリヌクレオチドの翻訳を阻害することによって、遺伝子発現を下方調節する１９～２５ヌクレオチド長の非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡ配列は、「シード」領域、すなわち、成熟ｍｉＲＮＡの２～８位の領域内の配列を含む。ｍｉＲＮＡシードは、成熟ｍｉＲＮＡの２～８位または２～７位を含み得る。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは、７ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２～８）を含んでもよく、ここで対応するｍｉＲＮＡ結合部位内のシード相補的部位には、ｍｉＲＮＡ位置１とは反対側のアデノシン（Ａ）が隣接している。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは、６ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２～７）を含んでもよく、ここで対応するｍｉＲＮＡ結合部位内のシード相補的部位には、ｍｉＲＮＡ位置１とは反対側のアデノシン（Ａ）が隣接している。例えば、Ｇｒｉｍｓｏｎ Ａ，Ｆａｒｈ ＫＫ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＷＫ，Ｇａｒｒｅｔｔ－Ｅｎｇｅｌｅ Ｐ，Ｌｉｍ ＬＰ，Ｂａｒｔｅｌ ＤＰ；Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ２００７ Ｊｕｌ ６；２７（１）：９１－１０５を参照されたい。標的細胞または組織のｍｉＲＮＡプロファイリングが細胞または組織中のｍｉＲＮＡの有無を決定するために行われ得る。いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、１つ以上のマイクロＲＮＡ結合部位、マイクロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ相補的配列、またはマイクロＲＮＡシード相補的配列を含む。そのような配列は、例えば、それらの内容全体が参照によって本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第２００５／０２６１２１８号及び米国特許出願公開第２００５／００５９００５号に教示されているものなどの任意の既知のマイクロＲＮＡに相当し得、例えば、それに対する相補性を有し得る。
本明細書で使用する場合、「マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）結合部位」という用語は、ｍｉＲＮＡと相互作用、会合または結合するのにｍｉＲＮＡの全部または領域に対する十分な相補性を有する、核酸分子内、例えば、ＤＮＡ内またはＲＮＡ転写物内の配列（５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ中を含む）を指す。いくつかの実施形態では、目的のポリペプチドをコードするＯＲＦを含む本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、さらに１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含む。例示的な実施形態では、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）のｍｉＲＮＡ媒介調節、例えば、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）のｍｉＲＮＡ媒介の翻訳抑制または分解を促進するのに十分な程度の相補性を指す。本開示の例示的な態様では、ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）のｍｉＲＮＡ媒介性分解、例えば、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡ誘導型ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介切断を促進するのに十分な程度の相補性を指す。ｍｉＲＮＡ結合部位は、例えば、１９～２５ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列、１９～２３ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列、または２２ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列に対して相補性を有し得る。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡの一部分のみに対して、例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡ配列の全長の１、２、３、または４ヌクレオチド未満の部分に対して相補性であり得る。所望の調節がｍＲＮＡ分解である場合、全相補性もしくは完全相補性（例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡの長さの全部もしくはかなりの部分にわたる全相補性、または完全相補性）が好ましい。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列と相補性（例えば、部分的または完全相補性）を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列と完全な相補性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列と相補性（例えば、部分的または完全相補性）を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列と完全な相補性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列と完全な相補性を有するが、１、２、または３個のヌクレオチド置換、末端付加、及び／または切断がある。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡと同じ長さである。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、またはその両方において対応するｍｉＲＮＡよりも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２ヌクレオチド（複数可）短い。さらに他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、または、その両方において、対応するマイクロＲＮＡよりも２ヌクレオチド短い。対応するｍｉＲＮＡよりも短いｍｉＲＮＡ結合部位は依然として、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を組み込んでいるｍＲＮＡを分解するか、またはｍＲＮＡの翻訳を妨げ得る。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、活性ＲＩＳＣ含有Ｄｉｃｅｒの一部である対応する成熟ｍｉＲＮＡと結合する。別の実施形態では、ＲＩＳＣ中の対応するｍｉＲＮＡへのｍｉＲＮＡ結合部位の結合は、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むｍＲＮＡを分解するか、またはｍＲＮＡが翻訳されるのを妨げる。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体がｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を切断するように、ｍｉＲＮＡに対して十分な相補性を有する。他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体がｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の不安定性を誘発するように、不完全な相補性を有する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体がｍｉＲＮＡ結合部位を含む核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の転写を抑制するように、不完全な相補性を有する。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡから１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個のミスマッチ（複数可）を有する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡのそれぞれ、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１の連続ヌクレオチドに対して相補的な、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１の連続ヌクレオチドを有する。
１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作することによって、問題のｍｉＲＮＡが利用可能であるという条件下で、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を分解または翻訳の減少の標的とし得る。これは、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の送達に対するオフターゲット効果を減少し得る。例えば、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）が組織または細胞に送達されることを意図しないが、最終的に前記組織または細胞であるならば、ｍｉＲＮＡの１つ以上の結合部位が、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに操作されるならば、組織または細胞に豊富に存在するｍｉＲＮＡは、目的の遺伝子の発現を阻害し得る。
例えば、当業者であれば、１つ以上のｍｉＲ結合部位が、リンパ系細胞以外の細胞型における発現を最小にするため、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に含まれ得ることが理解されるであろう。一実施形態では、ｍｉＲ１２２結合部位を使用し得る。別の実施形態では、ｍｉＲ１２６結合部位を使用し得る。さらに別の実施形態では、これらのｍｉＲ結合部位または組み合わせの複数のコピーを使用し得る。
逆に、特定の組織におけるタンパク質発現を増大させるために、ｍｉＲＮＡ結合部位を、それらが天然に存在する核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）配列から除去し得る。例えば、特定のｍｉＲＮＡの結合部位を核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）配列から除去して、ｍｉＲＮＡを含む組織または細胞におけるタンパク質発現を改善し得る。
複数の組織における発現の調節は、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、１つ以上の異なるｍｉＲＮＡ結合部位の導入または除去によって達成され得る。ｍｉＲＮＡ結合部位を除去するかまたは挿入するかの決定は、ｍｉＲＮＡ発現パターン及び／または発生中の組織及び／または細胞及び／または疾患におけるそれらのプロファイリングに基づいて行い得る。ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、ならびにそれらの発現パターン及び生物学における役割の同定が報告されている（例えば、Ｂｏｎａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ２０１０ １１：９４３－９４９；Ａｎａｎｄ ａｎｄ Ｃｈｅｒｅｓｈ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１１ １８：１７１－１７６；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ ａｎｄ Ｒａｏ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２０１２ ２６：４０４－４１３（２０１１ Ｄｅｃ ２０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１１．３５６）；Ｂａｒｔｅｌ Ｃｅｌｌ ２００９ １３６：２１５－２３３；Ｌａｎｄｇｒａｆ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２００７ １２９：１４０１－１４１４；Ｇｅｎｔｎｅｒ ａｎｄ Ｎａｌｄｉｎｉ，Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ．２０１２ ８０：３９３－４０３及びその中の全ての引用文献。それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ｍｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ結合部位は、その各々が、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１４／０２００２６１号、同第２００５／０２６１２１８号、及び同第２００５／００５９００５号に記載されている非限定的な例を含む、任意の公知の配列に相当し得る。ｍｉＲＮＡがｍＲＮＡを調節し、それによってタンパク質発現を調節することが公知である組織の例としては、限定するものではないが、肝臓（ｍｉＲ－１２２）、筋肉（ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ－１７－９２、ｍｉＲ－１２６）、骨髄細胞（ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２４、ｍｉＲ－２７）、脂肪組織（ｌｅｔ－７、ｍｉＲ－３０ｃ）、心臓（ｍｉＲ－１ｄ、ｍｉＲ－１４９）、腎臓（ｍｉＲ－１９２、ｍｉＲ－１９４、ｍｉＲ－２０４）、及び肺上皮細胞（ｌｅｔ－７、ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－１２６）が挙げられる。具体的には、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞（造血細胞とも呼ばれる）、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞及びマクロファージ）、マクロファージ、単球、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒球、ナチュラルキラー細胞などにおいて示差的に発現されることが公知である。免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡは、免疫原性、自己免疫、感染に対する免疫応答、炎症、ならびに遺伝子治療及び組織／臓器移植後の望ましくない免疫応答に関与している。免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡはまた、造血細胞（免疫細胞）の発生、増殖、分化及びアポトーシスの多くの側面を調節する。例えば、ｍｉＲ－１４２及びｍｉＲ－１４６は、免疫細胞において排他的に発現され、特に骨髄性樹状細胞において豊富に発現される。核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に対する免疫応答は、ｍｉＲ－１４２結合部位をポリヌクレオチドの３’－ＵＴＲに付加することによって遮断され得、組織及び細胞におけるより安定な遺伝子導入を可能にすることが実証されている。ｍｉＲ－１４２は、抗原提示細胞中の外因性核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を効率的に分解し、形質導入細胞の細胞傷害性除去を抑制する（例えば、各々が、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｎｎｏｎｉ Ａ ｅｔ ａｌ．，ｂｌｏｏｄ，２００９，１１４，５１５２－５１６１、Ｂｒｏｗｎ ＢＤ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ ｍｅｄ．２００６，１２（５），５８５～５９１；Ｂｒｏｗｎ ＢＤ，ｅｔ ａｌ．，ｂｌｏｏｄ，２００７，１１０（１３）：４１４４～４１５２を参照されたい）。
抗原媒介免疫応答は、外来抗原によって引き起こされる免疫応答を指す場合があり、それは、生物に入ると、抗原提示細胞によって処理され、抗原提示細胞の表面に表示される。Ｔ細胞は、提示された抗原を認識し、抗原を発現する細胞の細胞傷害性除去を誘導し得る。
本開示の核酸分子の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲへのｍｉＲ－１４２結合部位の導入は、ｍｉＲ－１４２媒介分解を通して抗原提示細胞における遺伝子発現を選択的に抑制し、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）における抗原提示を制限し、それによって、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の送達後、抗原媒介性免疫応答を妨げる。次いで、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、細胞傷害性排除を引き起こすことなく、標的組織または細胞において安定的に発現される。
一実施形態では、免疫細胞、特に抗原提示細胞において発現されることが知られているｍｉＲＮＡの結合部位を、ｍｉＲＮＡ媒介ＲＮＡ分解を通じて抗原提示細胞における核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現を抑制して、抗原媒介性の免疫応答を抑制するために本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に操作してもよい。核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の発現は、免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡが発現されていない非免疫細胞において維持される。例えば、いくつかの実施形態では、肝臓特異的タンパク質に対する免疫原性反応を防ぐために、任意のｍｉＲ－１２２結合部位を除去してもよく、ｍｉＲ－１４２（及び／またはｍｉｒＲ－１４６）結合部位を、本開示の核酸分子の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに操作してもよい。
ＡＰＣ及びマクロファージにおける選択的分解及び抑制をさらに駆動するために、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、単独で、またはｍｉＲ－１４２及び／またはｍｉＲ－１４６の結合部位と組み合わせて、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲにさらなる負の調節要素を含んでもよい。非限定的な例として、さらなる負の調節要素は、構成的分解要素（Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ Ｄｅｃａｙ Ｅｌｅｍｅｎｔ）（ＣＤＥ）である。
免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡとしては、限定するものではないが、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ａ－２－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ａ－３ｐ、ｈｓａ－７ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｃ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｅ－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｅ－５ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｇ－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｇ－５ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｉ－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｉ－５ｐ、ｍｉＲ－１０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１１８４、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｆ－－１－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｆ－２－－５ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｆ－５ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－１－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－２－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２７９、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－５ｐ、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｍｉＲ－１４３－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－５ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１４６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４６ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１４７ａ、ｍｉＲ－１４７ｂ、ｍｉＲ－１４８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１４８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１５０－３ｐ、ｍｉＲ－１５０－５ｐ、ｍｉＲ－１５１ｂ、ｍｉＲ－１５５－３ｐ、ｍｉＲ－１５５－５ｐ、ｍｉＲ－１５ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１５ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１６－１－３ｐ、ｍｉＲ－１６－２－３ｐ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－１７－５ｐ、ｍｉＲ－１８１ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１８１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１８１ａ－２－３ｐ、ｍｉＲ－１８２－３ｐ、ｍｉＲ－１８２－５ｐ、ｍｉＲ－１９７－３ｐ、ｍｉＲ－１９７－５ｐ、ｍｉＲ－２１－５ｐ、ｍｉＲ－２１－３ｐ、ｍｉＲ－２１４－３ｐ、ｍｉＲ－２１４－５ｐ、ｍｉＲ－２２３－３ｐ、ｍｉＲ－２２３－５ｐ、ｍｉＲ－２２１－３ｐ、ｍｉＲ－２２１－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２４－１－５ｐ、ｍｉＲ－２４－２－５ｐ、ｍｉＲ－２４－３ｐ、ｍｉＲ－２６ａ－１－３ｐ、ｍｉＲ－２６ａ－２－３ｐ、ｍｉＲ－２６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２６ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２７ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２７ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２７ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２７ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２８－３ｐ、ｍｉＲ－２８－５ｐ、ｍｉＲ－２９０９、ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２９ｂ－１－５ｐ、ｍｉＲ－２９ｂ－２－５ｐ、ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－２９ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｅ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ、ｍｉＲ－３３１－５ｐ、ｍｉＲ－３３９－３ｐ、ｍｉＲ－３３９－５ｐ、ｍｉＲ－３４５－３ｐ、ｍｉＲ－３４５－５ｐ、ｍｉＲ－３４６、ｍｉＲ－３４ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３６３－３ｐ、ｍｉＲ－３６３－５ｐ、ｍｉＲ－３７２、ｍｉＲ－３７７－３ｐ、ｍｉＲ－３７７－５ｐ、ｍｉＲ－４９３－３ｐ、ｍｉＲ－４９３－５ｐ、ｍｉＲ－５４２、ｍｉＲ－５４８ｂ－５ｐ、ｍｉＲ５４８ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ｉ、ｍｉＲ－５４８ｊ、ｍｉＲ－５４８ｎ、ｍｉＲ－５７４－３ｐ、ｍｉＲ－５９８、ｍｉＲ－７１８、ｍｉＲ－９３５、ｍｉＲ－９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－９９ｂ－３ｐ、及びｍｉＲ－９９ｂ－５ｐが挙げられる。さらに、新規なｍｉＲＮＡが、マイクロアレイハイブリダイゼーション及びマイクロトーム分析を通じて免疫細胞において特定され得る（例えば、Ｊｉｍａ ＤＤ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１１６：ｅ１１８－ｅ１２７、Ｖａｚ Ｃ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２０１０，１１，２８８。その各々の内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位が、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の任意の位置（例えば、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ）で本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に挿入される。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲがｍｉＲＮＡ結合部位を含む。いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲがｍｉＲＮＡ結合部位を含む。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲがｍｉＲＮＡ結合部位を含む。核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）中のｍｉＲＮＡ結合部位の挿入が対応するｍｉＲＮＡの非存在下で機能的ポリペプチドの翻訳を妨害しない限り、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）中の挿入部位は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）中のどこにあってもよい。ｍｉＲＮＡの存在下で、核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）へのｍｉＲＮＡ結合部位の挿入、及び対応するｍｉＲＮＡへのｍｉＲＮＡ結合部位の結合は、ポリヌクレオチドを分解することができる、または核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の翻訳を妨げることができる。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位が、ＯＲＦを含む本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）中のＯＲＦの終止コドンから下流の少なくとも約３０ヌクレオチドに挿入される。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位が、本開示のポリヌクレオチド中のＯＲＦの終止コドンから、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約１５ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約２５ヌクレオチド、少なくとも約３０ヌクレオチド、少なくとも約３５ヌクレオチド、少なくとも約４０ヌクレオチド、少なくとも約４５ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約５５ヌクレオチド、少なくとも約６０ヌクレオチド、少なくとも約６５ヌクレオチド、少なくとも約７０ヌクレオチド、少なくとも約７５ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、または少なくとも約１００ヌクレオチド下流に挿入される。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位が、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）中のＯＲＦの終止コドンから、約１０ヌクレオチド～約１００ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド～約９０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド～約８０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド～約７０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド～約６０ヌクレオチド、約４５ヌクレオチド～約６５ヌクレオチド下流に挿入される。ｍｉＲＮＡ遺伝子調節は、ｍｉＲＮＡを取り巻く配列、例えば、限定するものではないが、周囲の配列の種類、配列の種類（例えば、異種、同種、外因性、内因性、または人工）、周囲の配列中の調節要素及び／または周囲の配列中の構造要素などの影響を受け得る。ｍｉＲＮＡは、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲによって影響を受け得る。非限定的な例として、非ヒト３’ＵＴＲは、同じ配列型のヒト３’ＵＴＲと比較して、目的のポリペプチドの発現に対するｍｉＲＮＡ配列の調節効果を増大し得る。
一実施形態では、５’ＵＴＲの他の調節要素及び／または構造要素が、ｍｉＲＮＡ媒介遺伝子調節に影響し得る。調節要素及び／または構造要素の一例は、５’ＵＴＲ中の構造化ＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）であり、これは、翻訳延長因子の結合がタンパク質翻訳を開始するのに必要である。５’－ＵＴＲにおけるこの二次構造化要素へのＥＩＦ４Ａ２の結合は、ｍｉＲＮＡ媒介遺伝子発現に必要である（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｅｉｊｅｒ ＨＡ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，３４０，８２－８５）。本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、マイクロＲＮＡ媒介遺伝子調節を増強するために、この構造化５’ＵＴＲをさらに含んでもよい。
少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を、本開示のポリヌクレオチドの３’ＵＴＲに操作してもよい。これに関連して、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲに操作してもよい。例えば、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、２、または１つのｍｉＲＮＡ結合部位を、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲに操作してもよい。一実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に組み込まれるｍｉＲＮＡ結合部位は、同じでもよいし、異なるｍｉＲＮＡ部位であってもよい。本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に組み込まれた異なるｍｉＲＮＡ結合部位の組み合わせは、任意の異なるｍｉＲＮＡ部位の２つ以上のコピーが組み込まれている組み合わせを含み得る。別の実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）に組み込まれるｍｉＲＮＡ結合部位は、体内の同じまたは異なる組織を標的とし得る。非限定的な例として、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）の３’－ＵＴＲへの組織、細胞型、または疾患特異的ｍｉＲＮＡ結合部位の導入を通して、特定の細胞型（例えば、肝細胞、骨髄細胞、内皮細胞、癌細胞など）における発現の程度を減らし得る。
一実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）における、３’ＵＴＲの５’末端付近、３’ＵＴＲの５’末端と３’末端との間のほぼ中間、及び／または３’ＵＴＲの３’末端付近に操作され得る。非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、３’ＵＴＲの５’末端付近及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端との間のほぼ中間の位置に操作され得る。別の非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、３’ＵＴＲの５’末端付近及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端との間のほぼ中間の位置に操作され得る。さらに別の非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、３’ＵＴＲの５’末端付近及び３’ＵＴＲの３’末端付近に操作され得る。
別の実施形態では、３’ＵＴＲは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のｍｉＲＮＡ結合部位を含み得る。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡシード配列、及び／またはこのシード配列に隣接するｍｉＲＮＡ配列に対して相補的であり得る。
本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、異なる組織、細胞型、または生物学的条件におけるｍｉＲＮＡの発現パターンに基づいて、特定の組織、細胞型、または生物学的条件における、より標的化された発現のために操作され得る。組織特異的ｍｉＲＮＡ結合部位の導入を通じて、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、組織もしくは細胞における、または生物学的条件の状況における最適なタンパク質発現のために設計され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、治療的送達によって引き起こされる望ましくない免疫原性反応を抑えるために免疫細胞中のｍＲＮＡ治療薬を選択的に分解するために、３’ＵＴＲ中に少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含み得る。非限定的な例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、抗原提示細胞において本開示の核酸分子（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）をより不安定にし得る。これらのｍｉＲＮＡの非限定的な例としては、ｍｉｒ－１４２－５ｐ、ｍｉｒ－１４２－３ｐ、ｍｉｒ－１４６ａ－５ｐ、及びｍｉｒ－１４６－３ｐが挙げられる。
脂質ナノ粒子
本開示のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチド配列の免疫細胞への送達を容易にするため、脂質ナノ粒子内に封入することができる。したがって、一組の実施形態では、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）が提供される。本明細書に記載されるＬＮＰの各々は、本明細書に記載されるｍＲＮＡの製剤として使用され得る。一実施形態では、脂質ナノ粒子は、イオン化可能脂質、ステロールまたは他の構造脂質、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、任意選択で、ＰＥＧ脂質、及び１つ以上のポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡを含む、脂質を含む。
ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、ｍＲＮＡの免疫細胞への送達を促進する免疫細胞送達増強脂質を含む。一実施形態では、ＬＮＰは、フィトステロール、またはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む。一実施形態では、フィトステロールは、β－シトステロール、スチグマステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、フィトステロールは、β－シトステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ－１４０、化合物Ｓ－１５１、化合物Ｓ－１５６、化合物Ｓ－１５７、化合物Ｓ－１５９、化合物Ｓ－１６０、化合物Ｓ－１６４、化合物Ｓ－１６５、化合物Ｓ－１７０、化合物Ｓ－１７３、化合物Ｓ－１７５及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
免疫細胞送達ＬＮＰ
免疫細胞送達ＬＮＰは、対照ＬＮＰ（例えば、免疫細胞送達増強脂質を欠いているＬＮＰ）と比較して、薬剤の免疫細胞への送達の増加をもたらすことを特徴とし得る。特に、一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、対照ＬＮＰと比較して、免疫細胞と会合するＬＮＰのパーセンテージの増加（例えば、２倍またはそれ以上の増加）、または、対照ＬＮＰと比較して、ＬＮＰによって運ばれる薬剤を発現する（例えば、ＬＮＰと会合する／ＬＮＰによって封入されるｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する）免疫細胞のパーセンテージの増加（例えば、２倍またはそれ以上の増加）をもたらす。別の実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、対照ＬＮＰ（例えば、免疫細胞送達増強脂質を欠いているＬＮＰ）と比較して、Ｃ１ｑへの結合の増加、及び／または（例えば、オプソニン化を介する）Ｃ１ｑ結合ＬＮＰの免疫細胞への取り込みの増加をもたらす。
別の実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、対照ＬＮＰと比較して、薬剤（例えば、核酸分子）の免疫細胞への送達の増加をもたらす。一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、対照ＬＮＰと比較して、核酸分子剤のＴ細胞への送達の増加をもたらす。一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、対照ＬＮＰと比較して、核酸分子剤のＢ細胞への送達の増加をもたらす。一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、対照ＬＮＰと比較して、核酸分子剤のＢ細胞への送達の増加をもたらす。一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、対照ＬＮＰと比較して、核酸分子剤の骨髄細胞への送達の増加をもたらす。
一実施形態では、核酸分子が、ｍＲＮＡである場合、核酸剤の免疫細胞への送達の増加は、対照ＬＮＰと比較して、免疫細胞、（例えば、Ｔ細胞）中のｍＲＮＡによってコードされるタンパク質分子の少なくとも約２倍を超える発現の効果をもたらすＬＮＰの能力によって測定することができる。
免疫細胞送達ＬＮＰは、（ｉ）イオン化可能脂質、（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、及び（ｖ）ＬＮＰ内に封入される及び／またはＬＮＰと会合する薬剤（例えば、核酸分子）を含み、免疫細胞送達ＬＮＰ中の（ｉ）イオン化可能脂質または（ｉｉ）構造脂質またはステロールのうちの１つ以上は、有効量の免疫細胞送達増強脂質を含む。
別の実施形態では、本開示の免疫細胞送達脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）免疫細胞への送達のための薬剤、及び
（ｖ）任意に、ＰＥＧ脂質
を含み、（ｉ）イオン化可能脂質または（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質のうちの１つ以上は、脂質ナノ粒子の免疫細胞への送達を強化するのに有効な量で、免疫細胞送達増強脂質を含む。一実施形態では、強化送達は、免疫細胞送達増強脂質を欠いている脂質ナノ粒子に比べてである。別の実施形態では、強化送達は、適切な対照に比べてである。
別の実施形態では、本開示の免疫細胞送達脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）免疫細胞への送達のための薬剤、及び
（ｖ）任意に、ＰＥＧ脂質
を含み、（ｉ）イオン化可能脂質、または（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、または（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、または（ｖ）ＰＥＧ脂質のうちの１つ以上は、Ｃ１ｑ結合脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、Ｃ１ｑに結合するＣ１ｑ結合脂質、またはＬＮＰのＣ１ｑへの結合を促進する（例えば、増加する、刺激する、強化する）Ｃ１ｑ結合脂質である。
別の実施形態では、本開示の免疫細胞送達脂質ナノ粒子は、
（ｉ）イオン化可能脂質、
（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、
（ｉｖ）免疫細胞への送達のための薬剤、及び
（ｖ）任意に、ＰＥＧ脂質
を含み、（ｉ）イオン化可能脂質、または（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質のうちの１つ以上は、Ｃ１ｑに結合する、または、対照ＬＮＰ（例えば、（ｉ）イオン化可能脂質、または（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質を欠いているＬＮＰ）と比較して、ＬＮＰのＣ１ｑへの結合を促進する（例えば、増加する、刺激する、強化する）。
別の態様では、本開示は、免疫細胞送達脂質をスクリーニングする方法を提供し、当該方法は、試験免疫細胞送達脂質を含む試験ＬＮＰをＣ１ｑと接触させること、及びＣ１ｑへの結合を測定することを含み、試験免疫細胞送達脂質がＣ１ｑに結合する、または免疫細胞送達脂質を含むＬＮＰのＣ１ｑへの結合を促進する（例えば、増加する、刺激する、強化する）場合、免疫細胞送達脂質として選択される。
ＬＮＰの脂質成分
上記のように、脂質に関し、免疫細胞送達ＬＮＰは、（ｉ）イオン化可能脂質、（ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質を含み、免疫細胞送達ＬＮＰ中の（ｉ）イオン化可能脂質または（ｉｉ）構造脂質またはステロールのうちの１つ以上は、有効量の免疫細胞送達増強脂質を含む。脂質のこれらのカテゴリーは、以下により詳細に記載される。
（ｉ）イオン化可能脂質
本開示の脂質ナノ粒子は、１つ以上のイオン化可能脂質を含む。ある特定の実施形態では、本開示のイオン化可能脂質は、中心のアミン部分、及び少なくとも１つの生分解性基を含む。本明細書に記載されるイオン化可能脂質は、核酸分子を哺乳動物細胞または臓器に送達するための本開示の脂質ナノ粒子で有利に使用され得る。以下に記載のイオン化可能脂質の構造には、それらを本開示の他の脂質と区別するため、接頭辞Ｉを含む。
本開示の第１の態様では、本明細書に記載される化合物は、式（Ｉ Ｉ）：
Figure 2022531461000007
の化合物、またはそれらのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、
式中、
Ｒ１は、Ｃ５－３０アルキル、Ｃ５－２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択される、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１－６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、及び各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキルまたはＣ２－１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３－６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１－６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ３－６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、及びＣ２－３アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から選択され、
及び各ｑは、独立して、１、２、及び３から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１－１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３－１５アルキル及びＣ３－１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３－６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、及び
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、及び式中、Ｒ４が、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、または－ＣＱ（Ｒ）２である場合、（ｉ）ｎが１、２、３、４または５である場合、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）２ではなく、または（ｉｉ）ｎが１または２である場合、Ｑは、５、６、または７員ヘテロシクロアルキルではない。
別の態様では、本開示は、式（Ｉ ＩＩＩ）の化合物：
Figure 2022531461000008
またはそのＮオキシド、またはその塩もしくは異性体に関し、
式中、
Ｒ１は、Ｃ５－３０アルキル、Ｃ５－２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択される、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１－６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、及び各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され
Ｒｘは、Ｃ１－６アルキル、Ｃ２－６アルケニル、－（ＣＨ２）ＶＯＨ、及び－（ＣＨ２）ＶＮ（Ｒ）２からなる群から選択され、
式中、ｖは、１、２、３、４、５、及び６から選択され、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキルまたはＣ２－１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３－６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１－６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２－６アルケニル、Ｃ３－６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、及びＣ２－３アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から選択され、
及び各ｑは、独立して、１、２、及び３から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１－１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３－１５アルキル及びＣ３－１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３－６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、及び
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＡ）：
Figure 2022531461000009
の化合物、またはそのＮオキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１－３アルキル、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、及びＲ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。例えば、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。例えば、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＢ）：
Figure 2022531461000010
の化合物、またはそのＮオキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、ここで、全ての可変要素は、本明細書で定義される通りである。例えば、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、及びＲ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｍは、５、７、または９である。ある特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＩ）：
Figure 2022531461000011
の化合物、またはそのＮオキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、ｌは、１、２、３、４及び５から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１－３アルキル、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎは、２、３、または４であり、及びＱは、－ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、及びＲ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。
別の態様では、本開示は、式（Ｉ ＶＩ）の化合物：
Figure 2022531461000012
またはそのＮオキシド、またはその塩もしくは異性体に関し、式中、
Ｒ１は、Ｃ５－３０アルキル、Ｃ５－２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択される、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環または炭素環を形成し、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキルまたはＣ２－１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１－３アルキル、Ｃ２－３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１－３アルキル、及びＣ２－３アルケニルからなる群から選択され、
ＲＮは、Ｈ、またはＣ１－３アルキルであり、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１-１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３－１５アルキル及びＣ３－１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３－６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘａ及びＸｂは各々独立して、ＯまたはＳであり、
Ｒ１０は、Ｈ、ハロ、－ＯＨ、Ｒ、－Ｎ（Ｒ）２、－ＣＮ、－Ｎ３、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＯＲ、－ＳＲ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、－ＮＯ２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、炭素環、複素環、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択され、
ｒは、０または１であり、
ｔ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｐ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｑ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、及び
ｓ１は、１、２、３、４、及び５から選択される。
一実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩ－ａ）：
Figure 2022531461000013
の化合物、またはそのＮオキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、
Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、独立して、Ｃ１－１４アルキル及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択され、及び
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ１－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択される、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環または炭素環を形成する。
別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩ）：
Figure 2022531461000014
の化合物、またはそのＮオキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、式中
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、及び
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ ＶＩＩＩ）：
Figure 2022531461000015
の化合物、またはそのＮオキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、式中
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、及び
Ｒａ’及びＲｂは、独立して、Ｃ１－１４アルキル及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択され、及び
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。
式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）または（Ｉ ＶＩＩＩ）のいずれか１つの化合物は、該当する場合、以下の特徴の１つ以上を含む。
いくつかの実施形態では、Ｍ１は、Ｍ’である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも１つは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも１つは、－ＯＣ（Ｏ）－である。
ある特定の実施形態では、Ｍは、－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、Ｍ’は、－ＯＣ（Ｏ）－である。ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’は各々、－ＯＣ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は各々、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも１つは、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｓ－Ｓ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の少なくとも１つは、－Ｓ－Ｓ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の一方は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、他方は、－Ｓ－Ｓ－である。例えば、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ’は、－Ｓ－Ｓ－であるか、またはＭ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍは、－Ｓ－Ｓ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’の一方は、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１－１３アルキルまたはＣ２－１３アルケニルである。他の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－６アルキルまたはＣ２－６アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－４アルキルまたはＣ２－４アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ４アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ２アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ３アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、ｌは、１、３、または５である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、水素である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、水素ではない。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、非置換メチルまたは－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、ＯＨである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。
いくつかの実施形態では、ｎは、２である。
いくつかの実施形態では、ｎは、３である。
いくつかの実施形態では、ｎは、４である。
いくつかの実施形態では、Ｍ１は、存在しない。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ５は、ヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５は、ヒドロキシルである。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ６は、ヒドロキシルである。例えば、１つのＲ６は、ヒドロキシルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の１つは、ヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５は、ヒドロキシルであり、各Ｒ６は、水素である。例えば、１つのＲ６は、ヒドロキシルであり、各Ｒ５は、水素である。
いくつかの実施形態では、Ｒｘは、Ｃ１－６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｘは、Ｃ１－３アルキルである。例えば、Ｒｘは、メチルである。例えば、Ｒｘは、エチルである。例えば、Ｒｘは、プロピルである。
いくつかの実施形態では、Ｒｘは、－（ＣＨ２）ｖＯＨであり、ｖは、１、２または３である。例えば、Ｒｘは、メタノイルである。例えば、Ｒｘは、エタノイルである。例えば、Ｒｘは、プロパノイルである。
いくつかの実施形態では、Ｒｘは、－（ＣＨ２）ｖＮ（Ｒ）２であり、ｖは、１、２または３であり、各Ｒは、Ｈまたはメチルである。例えば、Ｒｘは、メタンアミノ、メチルメタンアミノ、またはジメチルメタンアミノである。例えば、Ｒｘは、アミノメタニル、メチルアミノメタニル、またはジメチルアミノメタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノエタニル、メチルアミノエタニル、またはジメチルアミノエタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノプロパニル、メチルアミノプロパニル、またはジメチルアミノプロパニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１－１８アルキル、Ｃ２－１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、または－ＹＲ”である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ３－１４アルキルまたはＣ３－１４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１－１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ２－１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ３－１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１－８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１－５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１－３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ４アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ５アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、－（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ－Ｍ－ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
いくつかの実施形態では、－ＣＨＲ１ａＲ１ｂ－は、－（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ－Ｍ－ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１－３アルキルから選択される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１－１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ２－１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ３－１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１－８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１－５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１－３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ４アルキルである。
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩａ）：
Figure 2022531461000016
の化合物、またはそれらのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｂ）：
Figure 2022531461000017
の化合物、またはそれらのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｃ）または（ＩＩｅ）：
Figure 2022531461000018
の化合物、またはそれらのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載される通りである。
別の実施形態では、式（Ｉ Ｉ）の化合物は、式（Ｉ ＩＩｆ）：
Figure 2022531461000019
の化合物、またはそれらのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ”は、Ｃ１－６アルキルまたはＣ２－６アルケニルであり、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５－１４アルキル及びＣ５－１４アルケニルからなる群から選択され、ｎは、２、３、及び４から選択される。
さらなる実施形態では、式（Ｉ Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｄ）：
Figure 2022531461000020
の化合物またはそれらのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、ｎは、２、３、または４であり、及びｍ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ２～Ｒ６は、本明細書に記載される通りである。例えば、Ｒ２及びＲ３の各々は、独立して、Ｃ５－１４アルキル及びＣ５－１４アルケニルからなる群から選択され得る。
さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｇ）：
Figure 2022531461000021
の化合物、またはそれらのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、及びＲ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。例えば、Ｍ”は、Ｃ１－６アルキル（例えば、Ｃ１－４アルキル）またはＣ２－６アルケニル（例えば、Ｃ２－４アルケニル）である。例えば、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５－１４アルキル及びＣ５－１４アルケニルからなる群から選択される。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ ＶＩＩａ）：
Figure 2022531461000022
の化合物、またはそのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ ＶＩＩＩａ）：
Figure 2022531461000023
化合物、またはそのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ ＶＩＩＩｂ）：
Figure 2022531461000024
の化合物、またはそのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ ＶＩＩｂ－１）：
Figure 2022531461000025
の化合物、またはそのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ ＶＩＩｂ－２）：
Figure 2022531461000026
の化合物、またはそのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ ＶＩＩｂ－３）：
Figure 2022531461000027
の化合物、またはそのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩｃ）：
Figure 2022531461000028
の化合物を含む。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩｄ）：
Figure 2022531461000029
の化合物、またはそのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ ＶＩＩＩｃ）：
Figure 2022531461000030
の化合物を含む。
別の実施形態では、式（Ｉ ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ ＶＩＩＩｄ）：
Figure 2022531461000031
の化合物、またはそのＮオキシド、またはそれらの塩もしくは異性体を含む。
式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、Ｉ（ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、または（Ｉ ＶＩＩＩｄ）のいずれの１つの化合物も、該当する場合、以下の特徴の１つ以上を含む。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３－６炭素環、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員芳香族または非芳香族複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、及び各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択される。
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３－６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員ヘテロアリール、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、及び、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有し、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、及びＣ１－３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換される５～１４員ヘテロシクロアルキルから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、及び各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択される。
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３－６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、及び各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、及びＱが５～１４員複素環であり、かつ、（ｉ）Ｒ４が（ＣＨ２）ｎＱであり（ｎは、１または２である）、または（ｉｉ）Ｒ４が（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり（ｎは、１である）、または（ｉｉｉ）Ｒ４が－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２である場合、Ｑは、５～１４員ヘテロアリールまたは８～１４員ヘテロシクロアルキルのいずれかである。
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、Ｃ３－６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員ヘテロアリール、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、及び各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択される。
別の実施形態では、Ｒ４は、（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。さらなる実施形態では、Ｒ４は、（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８であり、ここで、Ｒ８は、Ｃ３－６シクロアルキルなどのＣ３－６炭素環であり、及びｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。例えば、Ｒ４は、－（ＣＨ２）３ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ８であり、及びＲ８は、シクロプロピルである。
別の実施形態では、Ｒ４は、（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱであり、ここで、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択され、及びｏは、１、２、３、及び４から選択される。さらなる実施形態では、Ｒ４は、（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱであり、ここで、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、Ｒは、Ｃ１－Ｃ３アルキルであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択され、及びｏは、１、２、３、及び４から選択される。別の実施形態では、Ｒ４は、（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱであり、ここで、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、Ｒは、Ｃ１－Ｃ３アルキルであり、ｎは、３、及びｏは、１である。いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル、またはＣ２－３アルケニルである。例えば、Ｒ４は、３－アセトアミド－２，２－ジメチルプロピルである。
いくつかの実施形態では、１つのＲ１０は、Ｈであり、１つのＲ１０は、Ｃ１－３アルキルまたはＣ２－３アルケニルである。別の実施形態では、各Ｒ１０は、Ｃ１－３アルキルまたはＣ２－３アルケニルである。別の実施形態では、各Ｒ１０は、Ｃ１－３アルキル（例えば、メチル、エチルまたはプロピル）である。例えば、１つのＲ１０は、メチルであり、１つのＲ１０は、エチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ１０は、エチルであり、１つのＲ１０は、メチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ１０は、プロピルであり、１つのＲ１０は、メチルまたはエチルである。例えば、各Ｒ１０は、メチルである。例えば、各Ｒ１０は、エチルである。例えば、各Ｒ１０は、プロピルである。
いくつかの実施形態では、１つのＲ１０は、Ｈであり、１つのＲ１０は、－ＯＨである。別の実施形態では、各Ｒ１０は、－ＯＨである。
別の実施形態では、Ｒ４は、非置換Ｃ１－４アルキル、例えば、非置換メチルである。
別の実施形態では、Ｒ４は、水素である。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ４は、－（ＣＨ２）ｎＱまたは－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここで、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）２であり、及びｎは、３、４、及び５から選択される。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ４は、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）２であり、及びｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ２－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択される、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環または炭素環を形成し、及びＲ４は、（ＣＨ２）ｎＱまたは（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここで、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）２であり、及びｎは、３、４、及び５から選択される。
ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ２－１４アルキル、Ｃ２－１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択される、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環または炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ２－１４アルキル、及びＣ２－１４アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環または炭素環を形成する。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ５－２０アルキル及びＣ５－２０アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシルで置換されたＣ５－２０アルキルである。
他の実施形態では、Ｒ１は、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、－Ｒ＊ＹＲ”及び－ＹＲ”から選択される。いくつかの実施形態では、Ｙは、シクロプロピル基である。いくつかの実施形態では、Ｒ＊は、Ｃ８アルキルまたはＣ８アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３－１２アルキルである。例えば、Ｒ”は、Ｃ３アルキルであり得る。例えば、Ｒ”は、Ｃ４－８アルキル（例えば、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、またはＣ８アルキル）であり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒは、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、及びＲ＊は、アミノ、Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ、及びＣ１－Ｃ６ジアルキルアミノからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されたＣ１－１２アルキルである。例えば、Ｒは、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、及びＲ＊は、Ｃ１－Ｃ６ジアルキルアミノで置換されたＣ１－１２アルキルである。例えば、Ｒは、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、及びＲ＊は、Ｃ１－Ｃ６ジアルキルアミノで置換されたＣ１－３アルキルである。例えば、Ｒは、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、及びＲ＊は、ジメチルアミノ（例えば、ジメチルアミノエタニル）で置換されたＣ１－３アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ５－２０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ８アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ９アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１８アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ２１－３０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ２６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ２８アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2022531461000032
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ５－２０アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１８アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、リノレイルである。
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、分枝鎖（例えば、デカン－２－イル、ウンデカン－３－イル、ドデカン－４－イル、トリデカン－５－イル、テトラデカン－６－イル、２－メチルウンデカン－３－イル、２－メチルデカン－２－イル、３－メチルウンデカン－３－イル、４－メチルドデカン－４－イル、またはヘプタデカ－９－イル）である。ある特定の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2022531461000033
である。
ある特定の実施形態では、Ｒ１は、非置換Ｃ５－２０アルキルまたはＣ５－２０アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、置換Ｃ５－２０アルキルまたはＣ５－２０アルケニル（例えば、１－シクロプロピルノニルなどのＣ３－６炭素環で置換された、または－ＯＨまたはアルコキシで置換された）である。例えば、Ｒ１は、
Figure 2022531461000034
である。
他の実施形態では、Ｒ１は、－Ｒ”Ｍ’Ｒ’である。ある特定の実施形態では、Ｍ’は、－ＯＣ（Ｏ）Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。例えば、Ｒ１は、
Figure 2022531461000035
であり、式中、ｘ１は、１～１３の（例えば、３、４、５、及び６から選択される）整数であり、ｘ２は、１～１３の（例えば、１、２、及び３から選択される）整数であり、及びｘ３は、２～１４の（例えば、４、５、及び６から選択される）整数である。例えば、ｘ１は、３、４、５、及び６から選択され、ｘ２は、１、２、及び３から選択され、及びｘ３は、４、５、及び６から選択される。
他の実施形態では、Ｒ１は、－（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ－Ｍ－ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、－Ｒ＊ＹＲ”及び－ＹＲ”から選択される。いくつかの実施形態では、Ｙは、Ｃ３－８シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、Ｙは、Ｃ６－１０アリールである。いくつかの実施形態では、Ｙは、シクロプロピル基である。いくつかの実施形態では、Ｙは、シクロヘキシル基である。ある特定の実施形態では、Ｒ＊は、Ｃ１アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３－１２アルキル及びＣ３－１２アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｙに隣接するＲ”は、Ｃ１アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｙに隣接するＲ”は、Ｃ４－９アルキル（例えば、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７またはＣ８またはＣ９アルキル）である。
いくつかの実施形態では、Ｒ”は、置換Ｃ３－１２（例えば、ヒドロキシルで置換された、例えば、Ｃ３－１２アルキル）である。例えば、Ｒ”は、
Figure 2022531461000036
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ４アルキル及びＣ４アルケニルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ５アルキル及びＣ５アルケニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ６アルキル及びＣ６アルケニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ７アルキル及びＣ７アルケニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ９アルキル及びＣ９アルケニルから選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択され、これらの各々は、直鎖または分枝鎖のいずれかである。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、直鎖である。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、分枝鎖である。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、
Figure 2022531461000037
である。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、
Figure 2022531461000038
及びＭ’は、－ＯＣ（Ｏ）－である。他の実施形態では、Ｒ’は、
Figure 2022531461000039
及びＭ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１１アルキル及びＣ１１アルケニルから選択される。他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１２アルキル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、直鎖Ｃ４－１８アルキルまたはＣ４－１８アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、分枝鎖（例えば、デカン－２－イル、ウンデカン－３－イル、ドデカン－４－イル、トリデカン－５－イル、テトラデカン－６－イル、２－メチルウンデカン－３－イル、２－メチルデカン－２－イル、３－メチルウンデカン－３－イル、４－メチルドデカン－４－イルまたはヘプタデカ－９－イル）である。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、
Figure 2022531461000040
である。
ある特定の実施形態では、Ｒ’は、非置換Ｃ１－１８アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ’は、置換Ｃ１－１８アルキル（例えば、メトキシなどのアルコキシで置換された、例えば、Ｃ１－１５アルキル、またはＣ３－６炭素環、例えば、１－シクロプロピルノニル、またはＣ（Ｏ）Ｏ－アルキルまたはＯＣ（Ｏ）－アルキル、例えば、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３またはＯＣ（Ｏ）ＣＨ３）である。例えば、Ｒ’は、
Figure 2022531461000041
である。
ある特定の実施形態では、Ｒ’は、分枝鎖Ｃ１－１８アルキルである。例えば、Ｒ’は、
Figure 2022531461000042
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３－１５アルキル及びＣ３－１５アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、またはＣ８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ”は、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１４アルキル、またはＣ１５アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｍ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｍ’は、－ＯＣ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、Ｍ’は、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、または－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。Ｍ’が、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であるいくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－４アルキルまたはＣ２－４アルケニルである。
他の実施形態では、Ｍ’は、アリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍ’は、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択され得る。
いくつかの実施形態では、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｍは、－ＯＣ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－である。いくつかの実施形態では、Ｍは、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｍは、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）である。いくつかの実施形態では、Ｍは、－ＯＣ（Ｏ）－、及びＭ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、Ｍ’は、－ＯＣ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、各々、－ＯＣ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、各々、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
他の実施形態では、Ｍは、アリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍは、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択され得る。
いくつかの実施形態では、Ｍは、Ｍ’と同じである。他の実施形態では、Ｍは、Ｍ’とは異なる。
いくつかの実施形態では、Ｍ”は、結合である。いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－１３アルキルまたはＣ２－１３アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１－６アルキルまたはＣ２－６アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、直鎖アルキルまたはアルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、分枝鎖、例えば、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－である。
いくつかの実施形態では、各Ｒ５は、Ｈである。いくつかの実施形態では、各Ｒ６は、Ｈである。ある特定のかかる実施形態では、各Ｒ５及び各Ｒ６は、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｈである。他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１－３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはｉ－プロピル）である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５－１４アルキルまたはＣ５－１４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、同じである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ８アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ４アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５アルキルである。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ７アルキルである。
他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、異なる。ある特定の実施形態では、Ｒ２は、Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１－７（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、またはＣ７アルキル）またはＣ９アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ２アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ７アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｃ９アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ７及びＲ３は、Ｈである。
ある特定の実施形態では、Ｒ２は、Ｈである。
いくつかの実施形態では、ｍは、５、６、７、８、または９である。いくつかの実施形態では、ｍは、５、７、または９である。例えば、いくつかの実施形態では、ｍは、５である。例えば、いくつかの実施形態では、ｍは、７である。例えば、いくつかの実施形態では、ｍは、９である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、－（ＣＨ２）ｎＱ及び－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＯＲ、－ＯＨ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、炭素環、及び複素環からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、または－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、または－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、チオ尿素またはそのアイソスター、例えば、
Figure 2022531461000043
または－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。例えば、Ｑが、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である場合、ｎは、４または５である。例えば、Ｒ９は、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒまたは－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、例えば、－ＣＨ（＝Ｎ－ＯＣＨ３）、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－ＯＣＨ３、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）－ＯＨ、または－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）－ＯＣＨ３である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－ＯＨである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、置換または非置換の５～１０員ヘテロアリールであり、例えば、Ｑは、トリアゾール、イミダゾール、ピリミジン、プリン、２－アミノ－１，９－ジヒドロ－６Ｈ－プリン－６－オン－９－イル（またはグアニン－９－イル）、アデニン－９－イル、シトシン－１－イル、またはウラシル－１－イルであり、これらの各々は、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、－アルキル－ＯＨ、－アルキル－Ｏ－アルキルから選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換され、置換基は、さらに置換され得る。ある特定の実施形態では、Ｑは、例えば、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、モノ－またはジ－アルキルアミノ、及びＣ１－３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換されている、置換５～１４員ヘテロシクロアルキルである。例えば、Ｑは、４－メチルピペラジニル、４－（４－メトキシベンジル）ピペラジニル、イソインドリン－２－イル－１，３－ジオン、ピロリジン－１－イル－２，５－ジオン、またはイミダゾリジン－３－イル－２，４－ジオンである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－ＮＨＲ８であり、ここで、Ｒ８は、オキソ（＝Ｏ）、アミノ（ＮＨ２）、モノ－またはジ－アルキルアミノ、Ｃ１－３アルキル及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されているＣ３－６シクロアルキルである。例えば、Ｒ８は、シクロブテニル、例えば、３－（ジメチルアミノ）－シクロブタ－３－エン－４－イル－１，２－ジオンである。さらなる実施形態では、Ｒ８は、オキソ（＝Ｏ）、チオ（＝Ｓ）、アミノ（ＮＨ２）、モノ－またはジ－アルキルアミノ、Ｃ１－３アルキル、ヘテロシクロアルキル、及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されているＣ３－６シクロアルキルであり、式中、モノ－またはジ－アルキルアミノ、Ｃ１－３アルキル、及びヘテロシクロアルキルは、さらに置換される。例えば、Ｒ８は、オキソ、アミノ、及びアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、式中、アルキルアミノは、例えば、Ｃ１－３アルコキシ、アミノ、モノ－またはジ－アルキルアミノ、及びハロのうちの１つ以上でさらに置換される。例えば、Ｒ８は、３－（（（ジメチルアミノ）エチル）アミノ）シクロブタ－３－エニル－１，２－ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、及びアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（エチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、チオ、及びアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（エチルアミノ）－４－チオキソシクロブタ－２－エン－１－オンまたは２－（エチルアミノ）－４－チオキソシクロブタ－２－エン－１－オンである。例えば、Ｒ８は、チオ、及びアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（エチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジチオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びジアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（ジエチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、チオ、及びジアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、２－（ジエチルアミノ）－４－チオキソシクロブタ－２－エン－１－オンまたは３－（ジエチルアミノ）－４－チオキソシクロブタ－２－エン－１－オンである。例えば、Ｒ８は、チオ、及びジアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、３－（ジエチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジチオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びアルキルアミノまたはジアルキルアミノのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、式中、アルキルアミノまたはジアルキルアミノは、例えば、１つ以上のアルコキシでさらに置換される。例えば、Ｒ８は、３－（ビス（２－メトキシエチル）アミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、及びヘテロシクロアルキルのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、オキソ、及びピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニルのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、オキソ、及びヘテロシクロアルキルのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、式中、ヘテロシクロアルキルは、例えば、１つ以上のＣ１－３アルキルでさらに置換される。例えば、Ｒ８は、オキソ、及びヘテロシクロアルキルのうちの１つ以上で置換されたシクロブテニルであり、式中、ヘテロシクロアルキル（例えば、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニル）は、メチルでさらに置換される。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－ＮＨＲ８であり、ここで、Ｒ８は、アミノ（ＮＨ２）、モノ－またはジ－アルキルアミノ、Ｃ１－３アルキル及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されているヘテロアリールである。例えば、Ｒ８は、チアゾールまたはイミダゾールである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、ここで、Ｒ９は、ＣＮ、Ｃ１－６アルキル、ＮＯ２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）ＮＨＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）ＮＨ２である。いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、ここで、Ｒ９は、ＣＮ及びＲは、モノ－またはジ－アルキルアミノで置換されたＣ１－３アルキルであり、例えば、Ｒは、（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、ここで、Ｒ９は、Ｃ１－６アルキル、ＮＯ２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒであり、またはＨ及びＲは、モノ－またはジ－アルキルアミノで置換されたＣ１－３アルキルであり、例えば、Ｒは、（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、ここで、Ｒ９は、－ＮＯ２、ＣＮ、Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）ＮＨＣＨ３、または－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）ＮＨ２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、例えば、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、－Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、－Ｎ（ＯＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、－Ｎ（ＯＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、－Ｎ（ＯＨ）Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ３である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、ここで、Ｒは、Ｃ１－３アルコキシルまたはＳ（Ｏ）ｚＣ１－３アルキルで任意選択により置換されたアルキルであり、ここで、ｚは、０、１、または２である。
ある特定の実施形態では、Ｑは、非置換または置換のＣ６－１０アリール（例えば、フェニル）またはＣ３－６シクロアルキルである。
いくつかの実施形態では、ｎは、１である。他の実施形態では、ｎは、２である。さらなる実施形態では、ｎは、３である。ある特定の他の実施形態では、ｎは、４である。例えば、Ｒ４は、－（ＣＨ２）２ＯＨであり得る。例えば、Ｒ４は、－（ＣＨ２）３ＯＨであり得る。例えば、Ｒ４は、－（ＣＨ２）４ＯＨであり得る。例えば、Ｒ４は、ベンジルであり得る。例えば、Ｒ４は、４－メトキシベンジルであり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６炭素環である。いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３－６シクロアルキルである。例えば、Ｒ４は、例えば、ＯＨ、ハロ、Ｃ１－６アルキルなどで任意選択により置換されたシクロヘキシルであり得る。例えば、Ｒ４は、２－ヒドロキシシクロヘキシルであり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒは、モノ－またはジ－アルキルアミノで置換されたＣ１－３アルキルであり、例えば、Ｒは、（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。
いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｃ１－３アルコキシル、アミノ、及びＣ１－Ｃ３ジアルキルアミノからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されたＣ１－６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒは、非置換Ｃ１－３アルキルまたは非置換Ｃ２－３アルケニルである。例えば、Ｒ４は、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨ、または－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ３であり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒは、置換Ｃ１－３アルキル、例えば、ＣＨ２ＯＨである。例えば、Ｒ４は、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＨ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＢｎ、－（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２ＯＨ、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＯＣＨ３、－（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＳＣＨ３、ＣＨ２Ｓ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または－ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２であり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、以下の基のいずれかから選択される：
Figure 2022531461000044
Figure 2022531461000045
Figure 2022531461000046
Figure 2022531461000047
Figure 2022531461000048
Figure 2022531461000049
Figure 2022531461000050
Figure 2022531461000051
いくつかの実施形態では、
Figure 2022531461000052
は、以下の基のいずれかから選択される：
Figure 2022531461000053
Figure 2022531461000054
Figure 2022531461000055
Figure 2022531461000056
Figure 2022531461000057
Figure 2022531461000058
Figure 2022531461000059
Figure 2022531461000060
Figure 2022531461000061
Figure 2022531461000062
Figure 2022531461000063
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、以下の基のいずれかから選択される：
Figure 2022531461000064
Figure 2022531461000065
いくつかの実施形態では、
Figure 2022531461000066
は、以下の基のいずれかから選択される：
Figure 2022531461000067
いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、アニオンをさらに含む。本明細書に記載されるように、アニオンは、アミンと反応して、アンモニウム塩を形成することが可能な任意のアニオンであり得る。例としては、限定はされないが、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、酢酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ジフルオロ酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、及びリン酸塩が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される式のいずれかの化合物は、筋肉内投与用のナノ粒子組成物を作製するのに好適である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環または炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５員～１４員の芳香族または非芳香族複素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、芳香族または非芳香族のいずれかの、任意に置換されるＣ３－２０炭素環（例えば、Ｃ３－１８炭素環、Ｃ３－１５炭素環、Ｃ３－１２炭素環、またはＣ３－１０炭素環）を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、Ｃ３－６炭素環を形成する。他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、Ｃ６炭素環、例えば、シクロヘキシルまたはフェニル基を形成する。ある特定の実施形態では、複素環またはＣ３－６炭素環は、（例えば、同じ環原子または隣接または非隣接環原子において）１つ以上のアルキル基で置換される。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、１つ以上のＣ５アルキル置換を有するシクロヘキシルまたはフェニル基を形成し得る。ある特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３によって形成される複素環またはＣ３－６炭素環は、炭素環基で置換される。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、シクロヘキシルで置換されるシクロヘキシルまたはフェニル基を形成し得る。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、それらが結合される原子と一緒に、Ｃ７－１５炭素環、例えば、シクロヘプチル、シクロペンタデカニル、またはナフチル基を形成する。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、－（ＣＨ２）ｎＱ及び－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＯＲ、－ＯＨ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、及び複素環からなる群から選択される。他の実施形態では、Ｑは、イミダゾール、ピリミジン、及びプリンからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環または炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、Ｃ３－６炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、Ｃ６炭素環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、フェニル基を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、シクロヘキシル基を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、複素環を形成する。ある特定の実施形態では、複素環またはＣ３－６炭素環は、（例えば、同じ環原子または隣接または非隣接環原子において）１つ以上のアルキル基で置換される。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒に、１つ以上のＣ５アルキル置換を有するフェニル基を形成し得る。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の少なくとも１つの存在は、Ｃ１－３アルキル、例えば、メチルである。いくつかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方は、Ｃ１－３アルキル、例えば、メチルであり、他方は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方は、Ｃ１－３アルキル、例えば、メチルであり、他方は、Ｈであり、Ｍは、－ＯＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の最大で１つの存在は、Ｃ１－３アルキル、例えば、メチルである。いくつかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方は、Ｃ１－３アルキル、例えば、メチルであり、他方は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｍに隣接するＲ５及びＲ６の一方は、Ｃ１－３アルキル、例えば、メチルであり、他方は、Ｈであり、Ｍは、－ＯＣ（Ｏ）－または－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の少なくとも１つの存在は、メチルである。
式（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩＩｃ）または（ＶＩＩＩｄ）のいずれか１つの化合物は、該当する場合、以下の特徴の１つ以上を含む。
いくつかの実施形態では、ｒは、０である。いくつかの実施形態では、ｒは、１である。
いくつかの実施形態では、ｎは、２、３、または４である。いくつかの実施形態では、ｎは、２である。いくつかの実施形態では、ｎは、４である。いくつかの実施形態では、ｎは、３ではない。
いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｈである。いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｃ１－３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｃ２アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｘａは、Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｘａは、Ｓである。いくつかの実施形態では、Ｘｂは、Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｘｂは、Ｓである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、及び複素環からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、－ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、及び複素環からなる群から選択される。
Ｒ１０が、－ＮＨ（ＣＨ２）ｏＮ（Ｒ）２であるいくつかの実施形態では、ｏは、２、３、または４である。
－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２であるいくつかの実施形態では、ｐ１は、２である。－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２であるいくつかの実施形態では、ｑ１は、２である。
Ｒ１０が、－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２であるいくつかの実施形態では、ｓ１は、２である。
Ｒ１０が、－ＮＨ（ＣＨ２）ｏＮ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＮ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓＯＲ、または－Ｎ（（ＣＨ２）ｓＯＲ）２であるいくつかの実施形態では、Ｒは、ＨまたはＣ１－Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈであり、１つのＲは、Ｃ１－Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈであり、１つのＲは、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｈであり、１つのＲは、Ｃ２アルキルである。Ｒ１０が、－ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、または－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２であるいくつかの実施形態では、各Ｒは、Ｃ２－Ｃ４アルキルである。
例えば、いくつかの実施形態では、１つのＲは、Ｈであり、１つのＲは、Ｃ２－Ｃ４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、複素環である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、モルホリニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１０は、メチルピペラジニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６の各存在は、Ｈである。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
Figure 2022531461000068
Figure 2022531461000069
Figure 2022531461000070
Figure 2022531461000071
さらなる実施形態では、
式（Ｉ Ｉ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
Figure 2022531461000072
いくつかの実施形態では、式（Ｉ Ｉ）または式（Ｉ ＩＶ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
Figure 2022531461000073
Figure 2022531461000074
Figure 2022531461000075
Figure 2022531461000076
Figure 2022531461000077
Figure 2022531461000078
Figure 2022531461000079
Figure 2022531461000080
Figure 2022531461000081
Figure 2022531461000082
Figure 2022531461000083
Figure 2022531461000084
Figure 2022531461000085
Figure 2022531461000086
Figure 2022531461000087
Figure 2022531461000088
Figure 2022531461000089
Figure 2022531461000090
Figure 2022531461000091
Figure 2022531461000092
Figure 2022531461000093
Figure 2022531461000094
Figure 2022531461000095
Figure 2022531461000096
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、化合物Ｉ－３４０Ａ：
Figure 2022531461000097
を含む。
式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、Ｉ（ＩＢ）、Ｉ（ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、または（Ｉ ＶＩＩＩｄ）で表される脂質の中心のアミン部分は、生理学的ｐＨでプロトン化され得る。従って、脂質は、生理学的ｐＨで正電荷または部分正電荷を有し得る。このような脂質は、カチオン性またはイオン性（アミノ）脂質と呼ばれ得る。脂質はまた、両性イオン性、すなわち、正電荷及び負電荷の両方を有する中性分子であり得る。
いくつかの態様では、本開示のイオン性脂質は、式Ｉ（Ｉ ＩＸ）の化合物の１つ以上：
Figure 2022531461000098
またはその塩もしくは異性体であり得、式中、
Ｗは、
Figure 2022531461000099
であり、
環Ａは、
Figure 2022531461000100
であり、
ｔは、１または２であり、
Ａ１及びＡ２は各々独立して、ＣＨまたはＮから選択され、
Ｚは、ＣＨ２または不在であり、式中、ＺがＣＨ２である場合、破線（１）、及び（２）は、各々、単結合を表し、及びＺが不在である場合、破線（１）、及び（２）は、両方とも不在であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、独立して、Ｃ５－２０アルキル、Ｃ５－２０アルケニル、－Ｒ”ＭＲ’、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択され、
Ｒｘ１及びＲｘ２は各々独立して、ＨまたはＣ１－３アルキルであり、
各Ｍは、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
Ｍ＊は、Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｗ１及びＷ２は各々独立して、－Ｏ－及び－Ｎ（Ｒ６）－からなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣ１－５アルキルからなる群から選択され、
Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－ＣＨＲ－、－ＣＨＹ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２）ｎ－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－（ＣＨ２）ｎ－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｃ（Ｓ）－、及び－ＣＨ（ＳＨ）－からなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３－６炭素環であり、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１－１２アルキル及びＣ２－１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１－３アルキル及びＣ３－６炭素環からなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１－１２アルキル、Ｃ２－１２アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３－１２アルキル、Ｃ３－１２アルケニル及び－Ｒ＊ＭＲ’からなる群から選択され、
ｎは、１～６の整数であり、
式中、環Ａが、
Figure 2022531461000101
である場合、
ｉ）Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３の少なくとも１つは、－ＣＨ２－でなく、及び／または
ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５の少なくとも１つは、－Ｒ”ＭＲ’である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式（Ｉ ＩＸａ１）～（Ｉ ＩＸａ８）：
Figure 2022531461000102
Figure 2022531461000103
のいずれかである。
いくつかの実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／２７１，１４６号、同第６２／３３８，４７４号、同第６２／４１３，３４５号、及び同第６２／５１９，８２６号、及びＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６８３００号に記載される化合物の１つ以上である。
いくつかの実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載される化合物１～１５６から選択される。
いくつかの実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載される化合物１～１６、４２～６６、６８～７６、及び７８～１５６から選択される。
いくつかの実施形態では、イオン性脂質は、
Figure 2022531461000104
（本明細書中で、化合物Ｍとも呼ばれる）、またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン性脂質は、
Figure 2022531461000105
またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン性脂質は、
Figure 2022531461000106
またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン性脂質は、
Figure 2022531461000107
またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン性脂質は、
Figure 2022531461000108
またはその塩である。
本明細書の式のいずれかによる脂質、例えば、式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの各々は、明確にするために、文字Ｉを先に付けている）を有する化合物の中心のアミン部分は、生理学的ｐＨでプロトン化され得る。従って、脂質は、生理学的ｐＨで正電荷または部分正電荷を有し得る。このような脂質は、カチオン性またはイオン性（アミノ）脂質と呼ばれ得る。脂質はまた、両性イオン性、すなわち、正電荷及び負電荷の両方を有する中性分子であり得る。
いくつかの実施形態では、本開示のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８））（これらの各々は、明確にするために、文字Ｉを先に付けている）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中で約１ｍｏｌ％～９９ｍｏｌ％の範囲である。
一実施形態では、本開示のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの各々は、明確にするために、文字Ｉを先に付けている）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中で少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本開示のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの各々は、明確にするために、文字Ｉを先に付けている）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中で約３０ｍｏｌ％～約７０ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％～約６５ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％、及び約４５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％の範囲である。
１つの特定の実施形態では、本開示のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの各々は、明確にするために、文字Ｉを先に付けている）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中で約４５ｍｏｌ％である。
１つの特定の実施形態では、本開示のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの各々は、明確にするために、文字Ｉを先に付けている）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中で約４０ｍｏｌ％である。
１つの特定の実施形態では、本開示のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの各々は、明確にするために、文字Ｉを先に付けている）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中で約５０ｍｏｌ％である。
本明細書に開示されるイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）、（これらの各々は、明確にするために、文字Ｉを先に付けている）のいずれかを有する化合物に加えて、本明細書に開示される脂質ベース組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、追加の成分、例えば、コレステロール及び／またはコレステロール類似体、非カチオン性ヘルパー脂質、構造脂質、ＰＥＧ脂質、及びそれらの任意の組み合わせを含み得る。
本開示のさらなるイオン性脂質は、３－（ジドデシルアミノ）－Ｎ１，Ｎ１，４－トリドデシル－１－ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１－［２－（ジドデシルアミノ）エチル］－Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４－トリドデシル－１，４－ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５－ジトリデシル－１５，１８，２１，２４－テトラアザ－オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミンプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミンプロパン（ＤＯＤＭＡ）、（１３Ｚ，１６５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－ノニドコサ－１３－１６－ジエン－１－アミン（Ｌ６０８）、２－（｛８－［（３β）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）－２－（｛８－［（３β）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）－２－（｛８－［（３β）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる非限定群から選択され得る。これらに加えて、イオン性アミノ脂質は、環状アミン基を含む脂質でもあり得る。
本開示のイオン性脂質は、国際公開第ＷＯ２０１７／０７５５３１ Ａ１号に記載されている化合物でもあり得、その内容はその参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、イオン性アミノ脂質としては、
Figure 2022531461000109
及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
本開示のイオン性脂質は、国際公開第ＷＯ２０１５／１９９９５２ Ａ１号に記載されている化合物でもあり得、その内容はその参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、イオン性アミノ脂質としては、
Figure 2022531461000110
Figure 2022531461000111
及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、いずれかに含まれる化合物、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ－ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ－１）、（ＶＩＩｂ－２）、（ＶＩＩｂ－３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの各々は、明確にするために、文字Ｉを先に付けている）のいずれかを有する化合物を含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ １～３５６のいずれかを含む化合物を含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ ４８、Ｉ ５０、Ｉ １０９、Ｉ １１１、Ｉ １１３、Ｉ １８１、Ｉ １８２、Ｉ ２４４、Ｉ ２９２、Ｉ ３０１、Ｉ ３２１、Ｉ ３２２、Ｉ ３２６、Ｉ ３２８、Ｉ ３３０、Ｉ ３３１、及びＩ ３３２からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ ４８、Ｉ ５０、Ｉ １０９、Ｉ １１１、Ｉ １８１、Ｉ １８２、Ｉ ２９２、Ｉ ３０１、Ｉ ３２１、Ｉ ３２６、Ｉ ３２８、及びＩ ３３０からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ １８２、Ｉ ３０１、Ｉ ３２１、及びＩ ３２６からなる群から選択される化合物を含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示の化合物、例えば、化合物番号１～３５６のいずれかを含む化合物の合成は、２０１８年９月１９日に提出された米国仮特許出願第６２／７３３，３１５号の合成の説明に従う。
代表的な合成経路：
化合物Ｉ－１８２：ヘプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
３－メトキシ－４－（メチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン
Figure 2022531461000112
１００ｍＬジエチルエーテル中の３，４－ジメトキシ－３－シクロブテン－１，２－ジオン（１ｇ、７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（３．８ｍＬ、７．６ｍｍｏｌ）中の２Ｍメチルアミン溶液を加え、沈殿物がほぼ即座に形成された。混合物を室温で２４時間攪拌した後、濾過し、フィルター固体をジエチルエーテルで洗浄し、空気乾燥させた。フィルター固体を温ＥｔＯＡｃ中に溶解し、濾過し、濾液を室温に冷却させた後、０℃に冷却し、沈殿物を得た。これを濾過を介して単離し、冷ＥｔＯＡｃで洗浄し、空気乾燥させた後、真空下で乾燥させ、３－メトキシ－４－（メチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン（０．７０ｇ、５ｍｍｏｌ、７３％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：ｐｐｍ ８．５０（ｂｒ．ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６９Ｈｚ）；４．２７（ｓ，３Ｈ）；３．０２（ｓｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝４２Ｈｚ，４．５Ｈｚ）。
ヘプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
Figure 2022531461000113
１０ｍＬエタノール中のヘプタデカン－９－イル８－（（３－アミノプロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（２００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、３－メトキシ－４－（メチルアミノ）シクロブタ－３－エン－１，２－ジオン（３９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加え、得られた無色溶液を室温で２０時間攪拌した後、ＬＣ／ＭＳにより出発アミンは残っていなかった。溶液を真空濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中で０～１００％（ジクロロメタン中の１％ＮＨ４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨの混合物））により精製し、ヘプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（１３８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、６０％）を粘着性の白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ５１Ｈ９５Ｎ３Ｏ６に対するｍ／ｚ（ＭＨ＋）８３３．４。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：ｐｐｍ ７．８６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）；４．８６（五重線，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）；４．０５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）；３．９２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）；３．２０（ｓ，６Ｈ）；２．６３（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）；２．４２（ｂｒ．ｓ，３Ｈ）；２．２８（ｍ，４Ｈ）；１．７４（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）；１．６１（ｍ，８Ｈ）；１．５０（ｍ，５Ｈ）；１．４１（ｍ，３Ｈ）；１．２５（ｂｒ．ｍ，４７Ｈ）；０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）。
化合物Ｉ－３０１：ヘプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－オキソ－８－（ウンデカン－３－イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート
Figure 2022531461000114
化合物Ｉ－３０１は、ヘプタデカン－９－イル８－（（３－アミノプロピル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエートの代わりにヘプタデカン－９－イル８－（（３－アミノプロピル）（８－オキソ－８－（ウンデカン－３－イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（５００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、化合物１８２と同様に調製した。水性後処理の後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中で０～５０％（ジクロロメタン中の１％ＮＨ４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨの混合物））により精製し、ヘプタデカン－９－イル８－（（３－（（２－（メチルアミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）プロピル）（８－オキソ－８－（ウンデカン－３－イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（１８０ｍｇ、３２％）を白色のワックス状の固体として得た。ＨＰＬＣ／ＵＶ（２５４ｎｍ）：ＲＴ＝６．７７分。ＭＳ（ＣＩ）：Ｃ５２Ｈ９７Ｎ３Ｏ６に対するｍ／ｚ（ＭＨ＋）８６０．７。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ：ｐｐｍ ４．８６－４．７９（ｍ，２Ｈ）；３．６６（ｂｓ，２Ｈ）；３．２５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）；２．５６－２．５２（ｍ，２Ｈ）；２．４２－２．３７（ｍ，４Ｈ）；２．２８（ｄｄ，４Ｈ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，７．４Ｈｚ）；１．７８－１．６８（ｍ，３Ｈ）；１．６４－１．５０（ｍ，１６Ｈ）；１．４８－１．３８（ｍ，６Ｈ）；１．３２－１．１８（ｍ，４３Ｈ）；０．８８－０．８４（ｍ，１２Ｈ）。
（ｉ）コレステロール／構造脂質
本明細書に記載される免疫細胞送達ＬＮＰは、１つ以上の構造脂質を含む。
本明細書で使用する場合、「構造脂質」という用語は、ステロールを指し、ステロール部分を含む脂質をも指す。脂質ナノ粒子への構造脂質の組み込みは、粒子内の他の脂質の凝集を緩和するのを助け得る。構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、エルゴステロール、バシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、及びそれらの混合物を含み得るがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロール及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、ステロールである。本明細書で定義される場合、「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドのサブグループである。いくつかの実施形態では、構造脂質は、ステロイドである。いくつかの実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。いくつかの実施形態では、構造脂質は、コレステロールの類似体である。ある特定の実施形態では、構造脂質は、アルファ－トコフェロールである。構造脂質の例としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：
Figure 2022531461000115
本明細書に記載される免疫細胞送達ＬＮＰは、１つ以上の構造脂質を含む。
本明細書で使用する場合、「構造脂質」という用語は、ステロールを指し、ステロール部分を含む脂質をも指す。脂質ナノ粒子への構造脂質の組み込みは、粒子内の他の脂質の凝集を緩和するのを助け得る。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロール及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、ステロールである。本明細書で定義される場合、「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドのサブグループである。構造脂質は、ステロール（例えば、フィトステロールまたは動物ステロール）を含み得るがこれらに限定されない。
ある特定の実施形態では、構造脂質は、ステロイドである。例えば、ステロールは、コレステロール、β－シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、または本明細書の表１～１６の化合物Ｓ１～１４８のいずれか１つを含み得るがこれらに限定されない。
ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールの類似体である。
ある特定の実施形態では、構造脂質は、アルファ－トコフェロールである。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＩであって：
Figure 2022531461000116
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、－ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または
Figure 2022531461000117
であり、
Ｒｂ１、Ｒｂ２、及びＲｂ３の各々は、独立して、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルまたは任意選択により置換されたＣ６－Ｃ１０アリールであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000118
であり、
各
Figure 2022531461000119
は、独立して、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000120
を形成し、
Ｌ１ａは、不在、
Figure 2022531461000121
であり、
Ｌ１ｂは、不在、
Figure 2022531461000122
であり、
ｍは、１、２、または３であり、
Ｌ１ｃは、不在、
Figure 2022531461000123
であり、及び
Ｒ６は、任意選択により置換されたＣ３－Ｃ１０シクロアルキル、任意選択により置換されたＣ３－Ｃ１０シクロアルケニル、任意選択により置換されたＣ６－Ｃ１０アリール、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ９ヘテロシクリル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ９ヘテロアリールである、式ＳＩ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩａ：
Figure 2022531461000124
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩｂ：
Figure 2022531461000125
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩｃ：
Figure 2022531461000126
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩｄ：
Figure 2022531461000127
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｌ１ａは、不在である。いくつかの実施形態では、Ｌ１ａは、
Figure 2022531461000128
である。いくつかの実施形態では、Ｌ１ａは、
Figure 2022531461000129
である。
いくつかの実施形態では、Ｌ１ｂは、不在である。いくつかの実施形態では、Ｌ１ｂは、
Figure 2022531461000130
である。いくつかの実施形態では、Ｌ１ｂは、
Figure 2022531461000131
である。
いくつかの実施形態では、ｍは、１または２である。いくつかの実施形態では、ｍは、１である。いくつかの実施形態では、ｍは、２である。
いくつかの実施形態では、Ｌ１ｃは、不在である。いくつかの実施形態では、Ｌ１ｃは、
Figure 2022531461000132
である。いくつかの実施形態では、Ｌ１ｃは、
Figure 2022531461000133
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択により置換されたＣ６－Ｃ１０アリールである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2022531461000134
であり、ここで、
ｎ１は、０、１、２、３、４、または５であり、及び
各Ｒ７は、独立して、ハロまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、各Ｒ７は、独立して、
Figure 2022531461000135
である。
いくつかの実施形態では、ｎ１は、０、１、または２である。いくつかの実施形態では、ｎは、０である。いくつかの実施形態では、ｎ１は、１である。いくつかの実施形態では、ｎ１は、２である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択により置換されたＣ３－Ｃ１０シクロアルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択により置換されたＣ３－Ｃ１０モノシクロアルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2022531461000136
であり、ここで、
ｎ２は、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ３は、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ４は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ５は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、
ｎ６は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３であり、及び
各Ｒ８は、独立して、ハロまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、各Ｒ８は、独立して、
Figure 2022531461000137
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択により置換されたＣ３－Ｃ１０ポリシクロアルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2022531461000138
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択により置換されたＣ３－Ｃ１０シクロアルケニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2022531461000139
であり、ここで、
ｎ７は、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ８は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ９は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、及び
各Ｒ９は、独立して、ハロまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2022531461000140
である。
いくつかの実施形態では、各Ｒ９は、独立して、
Figure 2022531461000141
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ９ヘテロシクリルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2022531461000142
であり、ここで、
ｎ１０は、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１１は、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１２は、０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ１３は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
各Ｒ１０は、独立して、ハロまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
Ｙ１及びＹ２の各々は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲＢ、またはＣＲ１１ａＲ１１ｂであり、ここで、ＲＢは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
Ｙ２が、ＣＲ１１ａＲ１１ｂである場合、Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、またはＮＲＢである。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、Ｏである。
いくつかの実施形態では、Ｙ２は、Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｙ２は、ＣＲ１１ａＲ１１ｂである。
いくつかの実施形態では、各Ｒ１０は、独立して、
Figure 2022531461000143
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ９ヘテロアリールである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2022531461000144
であり、ここで、
Ｙ３は、ＮＲＣ、Ｏ、またはＳであり、
ｎ１４は、０、１、２、３、または４であり、
ＲＣは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
各Ｒ１２は、独立して、ハロまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2022531461000145
である。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、
Figure 2022531461000146
である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＩＩであって：
Figure 2022531461000147
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000148
であり、
Figure 2022531461000149
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000150
を形成し、
Ｌ１は、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキレンであり、及び
Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、及びＲ１３ｃの各々は、独立して、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルまたは任意選択により置換されたＣ６－Ｃ１０アリールである、式ＳＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩａ：
Figure 2022531461000151
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩｂ：
Figure 2022531461000152
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、
Figure 2022531461000153
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、及びＲ１３ｃの各々は、独立して、
Figure 2022531461000154
である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＩＩＩであって：
Figure 2022531461000155
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000156
であり、
各
Figure 2022531461000157
は、独立して、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、－ＯＳ（Ｏ）２Ｒ４ｃであり、ここで、Ｒ４ｃは、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルまたは任意選択により置換されたＣ６－Ｃ１０アリールであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000158
を形成し、
Ｒ１４は、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
Ｒ１５は、
Figure 2022531461000159
であり、ここで、
Ｒ１６は、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１７ｂは、Ｈ、ＯＲ１７ｃ、任意選択により置換されたＣ６－Ｃ１０アリール、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１７ｃは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｏ１は、０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、
ｐ１は、０、１、または２であり、
ｐ２は、０、１、または２であり、
Ｚは、ＣＨ２Ｏ、Ｓ、またはＮＲＤであり、ここで、ＲＤは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
各Ｒ１８は、独立して、ハロまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである、式ＳＩＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩａ：
Figure 2022531461000160
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩｂ：
Figure 2022531461000161
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｒ１４は、Ｈ、
Figure 2022531461000162
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１４は、
Figure 2022531461000163
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１５は、
Figure 2022531461000164
である。いくつかの実施形態では、Ｒ１５は、
Figure 2022531461000165
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１６は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ１６は、
Figure 2022531461000166
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１７ａは、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ａは、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｂは、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｂは、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｂは、ＯＲ１７ｃである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｃは、Ｈ、
Figure 2022531461000167
である。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｃは、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ１７ｃは、
Figure 2022531461000168
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１５は、
Figure 2022531461000169
である。
いくつかの実施形態では、各Ｒ１８は、独立して、
Figure 2022531461000170
である。
いくつかの実施形態では、Ｚは、ＣＨ２である。いくつかの実施形態では、Ｚは、Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｚは、ＮＲＤである。
いくつかの実施形態では、ｏ１は、０、１、２、３、４、５、または６である。
いくつかの実施形態では、ｏ１は、０である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、１である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、２である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、３である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、４である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、５である。いくつかの実施形態では、ｏ１は、６である。
いくつかの実施形態では、ｐ１は、０または１である。いくつかの実施形態では、ｐ１は、０である。いくつかの実施形態では、ｐ１は、１である。
いくつかの実施形態では、ｐ２は、０または１である。いくつかの実施形態では、ｐ２は、０である。いくつかの実施形態では、ｐ２は、１である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＩＶであって：
Figure 2022531461000171
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000172
であり、
Figure 2022531461000173
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000174
を形成し、
ｓは、０または１であり、
Ｒ１９は、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２０は、Ｃ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２１は、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルである、式ＳＩＶ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＶａ：
Figure 2022531461000175
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＶｂ：
Figure 2022531461000176
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｒ１９は、Ｈ、
Figure 2022531461000177
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１９は、
Figure 2022531461000178
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２０は、
Figure 2022531461000179
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２１は、Ｈ、
Figure 2022531461000180
である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＶであって：
Figure 2022531461000181
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000182
であり、
Figure 2022531461000183
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000184
を形成し、
Ｒ２２は、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
Ｒ２３は、ハロ、ヒドロキシル、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６ヘテロアルキルである、式ＳＶ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶａ：
Figure 2022531461000185
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶｂ：
Figure 2022531461000186
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２２は、Ｈ、
Figure 2022531461000187
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２２は、
Figure 2022531461000188
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２３は、
Figure 2022531461000189
である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＶＩであって：
Figure 2022531461000190
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000191
であり、
Figure 2022531461000192
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000193
を形成し、
Ｒ２４は、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂの各々は、Ｃ１－Ｃ６アルキルである、式ＳＶＩ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩａ：
Figure 2022531461000194
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩｂ：
Figure 2022531461000195
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２４は、Ｈ、
Figure 2022531461000196
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２４は、
Figure 2022531461000197
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂの各々は、独立して、
Figure 2022531461000198
である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＶＩＩであって：
Figure 2022531461000199
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニル、または
Figure 2022531461000200
であり、ここで、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄ、及びＲ１ｅの各々は、独立して、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルまたは任意選択により置換されたＣ６－Ｃ１０アリールであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000201
であり、
Figure 2022531461000202
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000203
を形成し、
ｑは、０または１であり、
Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂの各々は、独立して、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、またはＲ２６ａ及びＲ２６ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000204
を形成し、ここで、Ｒ２６ｃ及びＲ２６の各々は、独立して、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂの各々は、Ｈ、ヒドロキシル、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである、式ＳＶＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩａ：
Figure 2022531461000205
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩｂ：
Figure 2022531461000206
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、独立して、Ｈ、
Figure 2022531461000207
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000208
を形成する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000209
を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000210
を形成する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ｃ及びＲ２６の各々は、独立して、Ｈ、
Figure 2022531461000211
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂの各々は、Ｈ、ヒドロキシル、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ３アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂの各々は、独立して、Ｈ、ヒドロキシル、
Figure 2022531461000212
である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＶＩＩＩであって：
Figure 2022531461000213
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000214
であり、
Figure 2022531461000215
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000216
を形成し、
Ｒ２８は、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｒは、１、２、または３であり、
各Ｒ２９は、独立して、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
Ｒ３０ａ、Ｒ３０ｂ、及びＲ３０ｃの各々は、Ｃ１－Ｃ６アルキルである、式ＳＶＩＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩａ：
Figure 2022531461000217
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩｂ：
Figure 2022531461000218
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２８は、Ｈ、
Figure 2022531461000219
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２８は、
Figure 2022531461000220
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３０ａ、Ｒ３０ｂ、及びＲ３０ｃの各々は、独立して、
Figure 2022531461000221
である。
いくつかの実施形態では、ｒは、１である。いくつかの実施形態では、ｒは、２である。いくつかの実施形態では、ｒは、３である。
いくつかの実施形態では、各Ｒ２９は、独立して、Ｈ、
Figure 2022531461000222
である。
いくつかの実施形態では、各Ｒ２９は、独立して、Ｈまたは
Figure 2022531461000223
である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＩＸであって：
Figure 2022531461000224
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000225
であり、
Figure 2022531461000226
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000227
を形成し、
Ｒ３１は、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
Ｒ３２ａ及びＲ３２ｂの各々は、Ｃ１－Ｃ６アルキルである、式ＳＩＸ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＸａ：
Figure 2022531461000228
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＩＸｂ：
Figure 2022531461000229
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｒ３１は、Ｈ、
Figure 2022531461000230
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３１は、
Figure 2022531461000231
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３２ａ及びＲ３２ｂの各々は、独立して、
Figure 2022531461000232
である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＸであって：
Figure 2022531461000233
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000234
であり、
Figure 2022531461000235
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000236
を形成し、
Ｒ３３ａは、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルまたは
Figure 2022531461000237
であり、ここで、Ｒ３５は、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルまたは任意選択により置換されたＣ６－Ｃ１０アリールであり、
Ｒ３３ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、または
Ｒ３５及びＲ３３ｂは、それらが結合される原子と一緒になって、任意選択により置換されたＣ３－Ｃ９ヘテロシクリルを形成し、及び
Ｒ３４は、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６ヘテロアルキルである、式ＳＸ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸａ：
Figure 2022531461000238
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸｂ：
Figure 2022531461000239
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｒ３３ａは、
Figure 2022531461000240
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３５は、
Figure 2022531461000241
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３５は、
Figure 2022531461000242
であり、ここで、
ｔは、０、１、２、３、４、または５であり、及び
各Ｒ３６は、独立して、ハロ、ヒドロキシル、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６ヘテロアルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ３４は、
Figure 2022531461000243
であり、ここで、ｕは、０、１、２、３、または４である。
いくつかの実施形態では、ｕは、３または４である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＸＩであって：
Figure 2022531461000244
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000245
であり、
Figure 2022531461000246
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000247
を形成し、及び
Ｒ３７ａ及びＲ３７ｂの各々は、独立して、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、またはヒドロキシルである、式ＳＸＩ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩａ：
Figure 2022531461000248
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩｂ：
Figure 2022531461000249
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｒ３７ａは、ヒドロキシルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ３７ｂは、
Figure 2022531461000250
である。
態様では、本開示の構造脂質は、式ＳＸＩＩであって：
Figure 2022531461000251
ここで、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルケニル、または任意選択により置換されたＣ２－Ｃ６アルキニルであり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、ＨまたはＯＲＡであり、ここで、ＲＡは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは
Figure 2022531461000252
であり、
Figure 2022531461000253
は、単結合または二重結合を表し、
Ｗは、ＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、ここで、二重結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａであり、及び単結合が、Ｗと隣接炭素の間に存在する場合、Ｗは、ＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂの各々は、独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂの各々は、独立して、ＨまたはＯＲＡであり、またはＲ５ａ及びＲ５ｂは、各々が結合される原子と一緒になって、組み合わされて、
Figure 2022531461000254
を形成し、及び
Ｑは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲＥであり、ここで、ＲＥは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
Ｒ３８は、任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである、式ＳＸＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩａ：
Figure 2022531461000255
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩｂ：
Figure 2022531461000256
またはその薬学的に許容される塩の構造を有する。
いくつかの実施形態では、Ｑは、ＮＲＥである。
いくつかの実施形態では、ＲＥは、Ｈまたは
Figure 2022531461000257
である。
いくつかの実施形態では、ＲＥは、Ｈである。いくつかの実施形態では、ＲＥは、
Figure 2022531461000258
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３８は、
Figure 2022531461000259
であり、ここで、ｕは、０、１、２、３、または４である。
いくつかの実施形態では、Ｘは、Ｏである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ａは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ａは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｈまたは任意選択により置換されたＣ１－Ｃ６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ４ａは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ４ｂは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、
Figure 2022531461000260
は、二重結合を表す。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、
Figure 2022531461000261
である。
いくつかの実施形態では、Ｒ５ａは、Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ５ｂは、Ｈである。
態様では、本開示は、表１Ａの化合物Ｓ－１～４２、Ｓ－１５０、Ｓ－１５４、Ｓ－１６２～１６５、Ｓ－１６９～１７２及びＳ－１８４のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。本明細書で使用する場合、「ＣＭＰＤ」とは、「化合物」を指す。
Figure 2022531461000262
Figure 2022531461000263
Figure 2022531461000264
Figure 2022531461000265
Figure 2022531461000266
態様では、本開示は、表２の化合物Ｓ－４３～５０及びＳ－１７５～１７８のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000267
態様では、本開示は、表３の化合物Ｓ－５１～６７、Ｓ－１４９及びＳ－１５３のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000268
Figure 2022531461000269
態様では、本開示は、表４の化合物Ｓ－６８～７３のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000270
態様では、本開示は、表５の化合物Ｓ－７４～７８のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000271
態様では、本開示は、表６の化合物Ｓ－７９またはＳ－８０のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000272
態様では、本開示は、表７の化合物Ｓ－８１～８７、Ｓ－１５２及びＳ－１５７のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000273
態様では、本開示は、表８の化合物Ｓ－８８～９７のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000274
態様では、本開示は、表９の化合物Ｓ－９８～１０５及びＳ－１８０～１８２のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000275
態様では、本開示は、表１０の化合物Ｓ－１０６、またはその任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000276
態様では、本開示は、表１１の化合物Ｓ－１０７またはＳ－１０８、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000277
態様では、本開示は、表１２の化合物Ｓ－１０９、またはその任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000278
態様では、本開示は、表１３の化合物Ｓ－１１０～１３０、Ｓ－１５５、Ｓ－１５６、Ｓ－１５８、Ｓ－１６０、Ｓ－１６１、Ｓ－１６６～１６８、Ｓ－１７３、Ｓ－１７４及びＳ－１７９のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000279
Figure 2022531461000280
Figure 2022531461000281
態様では、本開示は、表１４の化合物Ｓ－１３１～１３３のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000282
態様では、本開示は、表１５の化合物Ｓ－１３４～１４８、Ｓ－１５１及びＳ－１５９のいずれか１つ、またはそれらの任意の薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を特徴とする。
Figure 2022531461000283
Figure 2022531461000284
本開示の脂質ナノ粒子の１つ以上の構造脂質は、構造脂質の組成物（例えば、２つ以上の構造脂質の混合物、３つ以上の構造脂質の混合物、４つ以上の構造脂質の混合物、または５つ以上の構造脂質の混合物）であり得る。構造脂質の組成物は、ステロール（例えば、コレステロール、β－シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、または表１５の化合物１３４～１４８、１５１、及び１５９のいずれか１つ）の任意の組み合わせを含み得るがこれらに限定されない。例えば、本開示の脂質ナノ粒子の１つ以上の構造脂質は、表１６の組成物１８３であり得る。
Figure 2022531461000285
組成物Ｓ－１８３は、化合物Ｓ－１４１、Ｓ－１４０、Ｓ－１４３、及びＳ－１４８の混合物である。いくつかの実施形態では、組成物Ｓ－１８３は、約３５％～約４５％の化合物Ｓ－１４１、約２０％～約３０％の化合物Ｓ－１４０、約２０％～約３０％の化合物Ｓ－１４３、及び約５％～約１５％の化合物Ｓ－１４８を含む。いくつかの実施形態では、組成物１８３は、約４０％の化合物Ｓ－１４１、約２５％の化合物Ｓ－１４０、約２５％の化合物Ｓ－１４３、及び約１０％の化合物Ｓ－１４８を含む。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、フィトステロールである。いくつかの実施形態では、フィトステロールは、シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、β－シトステロール、スチグマスタノール、β－シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５－アベナセロール、Δ７－アベナセロールまたはΔ７－スチグマステロールであり、それらの類似体、塩もしくはエステルを単独または組み合わせで含む。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、フィトステロール単体である。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、異なるフィトステロール（例えば、２、３、４、５または６つの異なるフィトステロール）の混合物である。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、１つ以上のフィトステロール及び１つ以上の動物ステロールの混合物、例えば、フィトステロール（例えば、β－シトステロールなどのシトステロール）、及びコレステロールの混合物である。
化合物の比率
本開示の脂質ナノ粒子は、本明細書に記載されるように、構造成分を含み得る。脂質ナノ粒子の構造成分は、化合物Ｓ－１～１４８のいずれか１つ、本開示の１つ以上の構造化合物の混合物、及び／またはコレステロール及び／またはフィトステロールと組み合わせた化合物Ｓ－１～１４８のいずれか１つであり得る。
例えば、脂質ナノ粒子の構造成分は、本開示の１つ以上の構造化合物（例えば、化合物Ｓ－１～１４８のいずれか）とコレステロールの混合物であり得る。コレステロールに対する脂質ナノ粒子中に存在する構造化合物のｍｏｌ％は、０～９９ｍｏｌ％であり得る。コレステロールに対する脂質ナノ粒子中に存在する構造化合物のｍｏｌ％は、約１０ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％、４０ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、６０ｍｏｌ％、７０ｍｏｌ％、８０ｍｏｌ％、または９０ｍｏｌ％であり得る。
一態様では、本開示は、２つ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２つ以上のステロールは、β－シトステロール、シトスタノール、カンペステロール、スチグマステロール、及びブラシカステロールのうちの少なくとも２つを含む。組成物は、コレステロールをさらに含み得る。一実施形態では、β－シトステロールは、組成物中に約３５～９９％、例えば、約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上の非コレステロールステロールを含む。
別の態様では、本開示は、２つ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２つ以上のステロールは、β－シトステロール及びカンペステロールを含み、β－シトステロールは、組成物中に９５～９９．９％のステロールを含み、カンペステロールは、組成物中に０．１～５％のステロールを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、シトスタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物中に、β－シトステロールは、９５～９９．９％、カンペステロールは、０．０５～４．９５％、シトスタノールは、０．０５～４．９５％のステロールを含む。
別の態様では、本開示は、２つ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２つ以上のステロールは、β－シトステロール及びシトスタノールを含み、β－シトステロールは、組成物中に９５～９９．９％のステロールを含み、シトスタノールは、組成物中に０．１～５％のステロールを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、カンペステロールをさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物中に、β－シトステロールは、９５～９９．９％、カンペステロールは、０．０５～４．９５％、及びシトスタノールは、０．０５～４．９５％のステロールを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、カンペステロールをさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物中に、β－シトステロールは、７５～８０％、カンペステロールは、５～１０％、及びシトスタノールは、１０～１５％のステロールを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、さらなるステロールをさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物中に、β－シトステロールは、３５～４５％、スチグマステロールは、２０～３０％、及びカンペステロールは、２０～３０％、及びブラシカステロールは、１～５％のステロールを含む。
別の態様では、本開示は、複数の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数の脂質ナノ粒子は、イオン性脂質及び２つ以上のステロールを含み、２つ以上のステロールは、β－シトステロールを含み、カンペステロール及びβ－シトステロールは、組成物中に９５～９９．９％のステロールを含み、及びカンペステロールは、組成物中に０．１～５％のステロールを含む。
いくつかの実施形態では、２つ以上のステロールは、シトスタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物中に、β－シトステロールは、９５～９９．９％、カンペステロールは、０．０５～４．９５％、及びシトスタノールは、０．０５～４．９５％のステロールを含む。
別の態様では、本開示は、複数の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数の脂質ナノ粒子は、イオン性脂質及び２つ以上のステロールを含み、２つ以上のステロールは、β－シトステロールを含み、シトスタノール及びβ－シトステロールは、組成物中に９５～９９．９％のステロールを含み、及びシトスタノールは、組成物中に０．１～５％のステロールを含む。
いくつかの実施形態では、２つ以上のステロールは、カンペステロールをさらに含む。いくつかの実施形態では、β－シトステロールは、９５～９９．９％を含み、カンペステロールは、０．０５～４．９５％を含み、及びシトスタノールは、組成物中に０．０５～４．９５％のステロールを含む。
（ｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質／リン脂質
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される脂質ベース組成物（例えば、ＬＮＰ）は、１つ以上の非カチオン性ヘルパー脂質を含む。いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質である。いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質置換体または代替物である。
本明細書で使用する場合、「非カチオン性ヘルパー脂質」という用語は、少なくとも８つの炭素長の少なくとも１つの脂肪酸鎖、及び少なくとも１つの極性頭部基部分を含む脂質を指す。一実施形態では、ヘルパー脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）ではない。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質またはリン脂質置換体である。いくつかの実施形態では、リン脂質またはリン脂質置換は、例えば、１つ以上の飽和または（ポリ）不飽和リン脂質、またはリン脂質置換体、またはそれらの組み合わせであり得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つ以上の脂肪酸部分を含む。
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択することができる。
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択することができる。
リン脂質には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジグリセロール、及びホスファチジン酸などのグリセロリン脂質が挙げられるが、これらに限定されない。リン脂質には、スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質も含まれる。
いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ類似体、ＤＳＰＣ置換体、オレイン酸、またはオレイン酸類似体である。
いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、非ホスファチジルコリン（ＰＣ）双性イオン性脂質、ＤＳＰＣ類似体、オレイン酸、オレイン酸類似体、または１，２－ジステアロイル－ｉ７７－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）置換体である。
リン脂質
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、１つ以上の非カチオン性ヘルパー脂質を含み得る。いくつかの実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質、例えば、１つ以上の飽和または（ポリ）不飽和リン脂質またはそれらの組み合わせである。一般に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つ以上の脂肪酸部分を含む。本明細書で使用する場合、「リン脂質」は、ホスフェート部分及び１つ以上の炭素鎖、例えば、不飽和脂肪酸鎖を含む脂質である。リン脂質は、１つ以上の多重（例えば、二重または三重）結合（例えば、１つ以上の不飽和）を含み得る。リン脂質またはその類似体または誘導体は、コリンを含み得る。リン脂質またはその類似体または誘導体は、コリンを含まなくてもよい。特定のリン脂質は、膜への融合を促進し得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つ以上の負に帯電したリン脂質と相互作用し得る。膜へのリン脂質の融合は、脂質含有組成物の１つ以上の要素が、膜を通過することを可能にし、例えば、細胞への当該１つ以上の要素の送達を可能にする。
リン脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リソフォスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。
脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、α－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。
特定のリン脂質は、膜への融合を促進し得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つ以上の負に帯電したリン脂質と相互作用し得る。膜へのリン脂質の融合は、脂質含有組成物（例えば、ＬＮＰ）の１つ以上の要素（例えば、治療剤）が、膜を通過することを可能にし、例えば、標的組織への当該１つ以上の要素の送達を可能にする。
本開示の脂質ナノ粒子の脂質成分は、１つ以上の（ポリ）不飽和脂質などの１つ以上のリン脂質を含み得る。リン脂質は、集合して１つ以上の脂質二重層になり得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つ以上の脂肪酸部分を含み得る。例えば、リン脂質は、式（Ｈ ＩＩＩ）：
Figure 2022531461000286
（式中、Ｒｐが、リン脂質部分を表し、Ｒ１及びＲ２が、同じかまたは異なり得る不飽和を含むかまたは含まない脂肪酸部分を表す）で表される脂質であり得る。リン脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リソフォスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、α－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。分枝、酸化、環化、及びアルキンを含む、修飾及び置換を含む天然種を含む非天然種も考えられる。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキンと官能化されるかまたはそれに架橋され得る（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合で置換されたアルケニル基）。適切な反応条件下で、アルキン基が、アジドに曝露されると、銅触媒付加環化を起こし得る。このような反応は、膜透過または細胞認識を促進するためにＬＮＰの脂質二重層を官能化するか、またはＬＮＰを、標的化またはイメージング部分（例えば、色素）などの有用な成分に結合するのに有用であり得る。各可能性は、本開示の別個の実施形態を表す。
本明細書に記載される組成物及び方法に有用なリン脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：３（シス）ＰＣ）、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（２２：６（シス）ＰＣ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（４ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＥ（１８：２／１８：２）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＥ １８：３（９Ｚ、１２Ｚ、１５Ｚ）、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＡＰＥ １８：３（９Ｚ、１２Ｚ、１５Ｚ）、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（２２：６（シス）ＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。各可能性は、本開示の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＳＰＣを含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、ＤＯＰＥを含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＭＰＥを含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＳＰＣ及びＤＯＰＥの両方を含む。
一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰで使用される非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及びＤＯＰＣまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される。
リン脂質には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸などのグリセロリン脂質が挙げられるが、これらに限定されない。リン脂質には、スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質も含まれる。
リン脂質の例としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：
Figure 2022531461000287
Figure 2022531461000288
Figure 2022531461000289
Figure 2022531461000290
ある特定の実施形態では、本開示において有用または潜在的に有用なリン脂質は、ＤＳＰＣ（１，２－ジオクタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）の類似体またはバリアントである。ある特定の実施形態では、本開示において有用または潜在的に有用なリン脂質は、式（Ｈ ＩＸ）：
Figure 2022531461000291
の化合物またはその塩であり、式中、
各々のＲ１は、独立して、任意選択により置換されたアルキルであるか、または任意に、２つのＲ１は、介在原子と一緒になって、任意選択により置換された単環式カルボシクリルもしくは任意選択により置換された単環式ヘテロシクリルを形成するか、または、任意選択により３つのＲ１が介在原子と一緒になって、任意選択により置換された二環式カルボシクリルもしくは任意選択により置換された二環式ヘテロシクリルを形成し、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
Figure 2022531461000292
のものであり、
Ｌ２の各々の例は、独立して、結合または任意選択により置換されたＣ１－６アルキレンであり、式中、任意選択により置換されたＣ１－６アルキレンの１つのメチレン単位は、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）によって任意選択により置き換えられ、
Ｒ２の各々の例は、独立して、任意選択により置換されたＣ１－３０アルキル、任意選択により置換されたＣ１－３０アルケニル、または任意選択により置換されたＣ１－３０アルキニルであり、任意に、式中、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、任意選択により置換されたカルボシクリレン、任意選択により置換されたヘテロシクリレン、任意選択により置換されたアリーレン、任意選択により置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏによって独立して置き換えられ、
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、任意選択により置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択により置換されたカルボシクリル、任意選択により置換されたヘテロシクリル、任意選択により置換されたアリール、または任意選択により置換されたヘテロアリールであり、及び
ｐは、１または２であり、
但し、この化合物は、式：
Figure 2022531461000293
のものではなく、
式中、Ｒ２の各例は、独立して、非置換アルキル、非置換アルケニル、または非置換アルキニルである。
ｉ）リン脂質頭部の修飾
ある特定の実施形態では、本開示において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾リン脂質頭部（例えば、修飾コリン基）を含む。ある特定の実施形態では、修飾された頭部を有するリン脂質は、修飾された第４級アミンを有するＤＳＰＣまたはその類似体である。例えば、式（ＩＸ）の実施形態では、Ｒ１のうちの少なくとも１つはメチルではない。ある特定の実施形態では、Ｒ１の少なくとも１つは、水素でもメチルでもない。ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000294
のうちの１つのものまたはその塩であり、式中、
各ｔは、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
各ｕは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
各ｖは、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000295
のうちの１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、以下：
Figure 2022531461000296
Figure 2022531461000297
Figure 2022531461000298
のうちの１つまたはその塩である。
一実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質として化合物Ｈ－４０９を含む。
（ｉｉ）リン脂質尾部の修飾
ある特定の実施形態では、本開示において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾された尾部を含む。ある特定の実施形態では、本開示において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾された尾部を有するＤＳＰＣ（１，２－ジオクタデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）またはその類似体である。本明細書に記載される場合、「修飾された尾部」は、より短いまたはより長い脂肪族鎖、分岐が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つ以上のメチレンが環状またはヘテロ原子基で置換された脂肪族鎖、またはそれらの任意の組み合わせを有する尾部であり得る。例えば、ある特定の実施形態では、（Ｈ ＩＸ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ａ）のものまたはその塩であり、式中、Ｒ２の少なくとも１つの例は、任意選択により置換されたＣ１－３０アルキルであるＲ２の各々の例であり、式中、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、任意選択により置換されたカルボシクリレン、任意選択により置換されたヘテロシクリレン、任意選択により置換されたアリーレン、任意選択により置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏによって独立して置き換えられる。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）：
Figure 2022531461000299
のものまたはその塩であり、式中、
各ｘは、独立して、０～３０の整数であり、及び
Ｇの各例は、独立して、任意選択により置換されたカルボシクリレン、任意選択により置換されたヘテロシクリレン、任意選択により置換されたアリーレン、任意選択により置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏからなる群から独立して選択される。各可能性は、本開示の別個の実施形態を表す。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ｃ－１）：
Figure 2022531461000300
のものまたはその塩であり、式中、
ｖの各例は、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ｃ－２）：
Figure 2022531461000301
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000302
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下：
Figure 2022531461000303
またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ ＩＸ－ｃ－３）：
Figure 2022531461000304
 のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000305
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下：
Figure 2022531461000306
またはその塩である。
ある特定の実施形態では、本開示において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾ホスホコリン部分を含み、第４級アミンをホスホリル基に連結するアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。従って、ある特定の実施形態では、本開示において有用または潜在的に有用なリン脂質は、式（Ｈ ＩＸ）の化合物であり、式中、ｎは１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、以下の式のうちの１つ：
Figure 2022531461000307
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ ＩＸ）の化合物は、以下：
Figure 2022531461000308
Figure 2022531461000309
のうちの１つまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、代替的な脂質は、本開示のリン脂質の代わりに使用される。このような代替的な脂質の非限定例としては、以下：
Figure 2022531461000310
が挙げられる。
リン脂質尾部の修飾
ある特定の実施形態では、本開示において有用なリン脂質は、修飾された尾部を含む。ある特定の実施形態では、本開示において有用なリン脂質は、修飾された尾部を有するＤＳＰＣまたはその類似体である。本明細書に記載される場合、「修飾された尾部」は、より短いまたはより長い脂肪族鎖、分岐が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つ以上のメチレンが環状またはヘテロ原子基で置換された脂肪族鎖、またはそれらの任意の組み合わせを有する尾部であり得る。例えば、ある特定の実施形態では、（Ｈ Ｉ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ａ）のものまたはその塩であり、式中、Ｒ２の少なくとも１つの例は、任意選択により置換されたＣ１－３０アルキルであるＲ２の各々の例であり、式中、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、任意選択により置換されたカルボシクリレン、任意選択により置換されたヘテロシクリレン、任意選択により置換されたアリーレン、任意選択により置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－によって独立して置き換えられる。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ａ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ｃ）：
Figure 2022531461000311
のものまたはその塩であり、式中、
各ｘは、独立して、０～３０の整数であり、及び
Ｇの各例は、独立して、任意選択により置換されたカルボシクリレン、任意選択により置換されたヘテロシクリレン、任意選択により置換されたアリーレン、任意選択により置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－からなる群から独立して選択される。各可能性は、本開示の別個の実施形態を表す。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ｃ－１）：
Figure 2022531461000312
のものまたはその塩であり、式中、
ｖの各例は、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ｃ－２）：
Figure 2022531461000313
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ－ｃ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000314
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、以下：
Figure 2022531461000315
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、式（Ｈ Ｉ－ｃ－３）：
Figure 2022531461000316
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000317
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ－ｃ）の化合物は、以下：
Figure 2022531461000318
またはその塩である。
ホスホコリンリンカー修飾
ある特定の実施形態では、本開示において有用なリン脂質は、修飾ホスホコリン部分を含み、第四級アミンをホスホリル基に連結するアルキル鎖は、エチレンではない（例えば、ｎは、２でない）。従って、ある特定の実施形態では、本開示において有用なリン脂質は、式（Ｈ Ｉ）の化合物であり、式中、ｎは、１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000319
のうちの１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（Ｈ Ｉ）の化合物は、以下：
Figure 2022531461000320
Figure 2022531461000321
のうちの１つまたはその塩である。
ＤＳＰＣ以外のリン脂質を有する多数のＬＮＰ製剤を調製し、以下の実施例で示すように、それらの活性を試験した。
リン脂質置換または交換
いくつかの実施形態では、脂質ベース組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりに、オレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、オレイン酸類似体は、修飾オレイン酸尾部、修飾カルボン酸部分、または両方を含む。いくつかの実施形態では、オレイン酸類似体は、化合物であり、オレイン酸のカルボン酸部分は、異なる基に交換される。
いくつかの実施形態では、脂質ベース組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりに、異なる双性イオン性基を含む。
例示的なリン脂質置換体及び／または代替物は、参照により本明細書に組み込まれる公開ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１７／０９９８２３号に提供される。
例示的なリン脂質置換体及び／または代替物は、参照により本明細書に組み込まれる公開ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１７／０９９８２３号に提供される。
（ｉｉｉ）ＰＥＧ脂質
ＰＥＧ脂質の非限定例としては、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸、ＰＥＧ－セラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ－ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ－ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、及びＰＥＧ修飾１，２－ジアシルオキシプロパン－３－アミンが挙げられる。このような脂質は、ＰＥＧ化脂質とも呼ばれる。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質には、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＰＥＧ－ＤＳＰＥ）、ＰＥＧ－ジステリルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＳＧ）、ＰＥＧ－ジパルメトレイル、ＰＥＧ－ジオレイル、ＰＥＧ－ジステアリル、ＰＥＧ－ジアシルグリカミド（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、ＰＥＧ－ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＤＰＰＥ）、またはＰＥＧ－１，２－ジミリスチルオクスルプロピル－３－アミン（ＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質の脂質部分には、約Ｃ１４～約Ｃ２２、好ましくは約Ｃ１４～約Ｃ１６の長さを有するものが含まれる。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分、例えば、ｍＰＥＧ－ＮＨ２は、約１０００、２０００、５０００、１０，０００、１５，０００、または２０，０００ダルトンのサイズを有する。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧである。
一実施形態では、本明細書に記載される脂質ナノ粒子は、非拡散性ＰＥＧであるＰＥＧ脂質を含むことができる。非拡散性ＰＥＧの非限定例としては、ＰＥＧ－ＤＳＧ及びＰＥＧ－ＤＳＰＥが挙げられる。
ＰＥＧ脂質は、米国特許第８１５８６０１号及び国際公開第ＷＯ２０１５／１３０５８４ Ａ２号に記載されているものなど、当該技術分野で知られており、これらは、その参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
一般に、本明細書に記載される様々な式の他の脂質成分のいくつか（例えば、ＰＥＧ脂質）は、２０１６年１２月１０日に出願された「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ」と題する国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０００１２９に記載のように合成することができ、その参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
脂質ナノ粒子組成物の脂質成分は、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質などのポリエチレングリコールを含む１つ以上の分子を含んでもよい。そのような種は、代替的にＰＥＧ化脂質と呼ばれる場合がある。ＰＥＧ脂質は、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物を含む非限定的な群から選択され得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ ＤＭＧの修飾形態である。ＰＥＧ－ＤＭＧは、以下の構造を有する：
Figure 2022531461000322
一実施形態では、本開示において有用なＰＥＧ脂質は、国際公開第ＷＯ２０１２０９９７５５号に記載されているＰＥＧ化脂質であり得、その内容はその参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるこれらの例示的なＰＥＧ脂質のいずれも、ＰＥＧ鎖上にヒドロキシル基を含むように修飾され得る。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ＯＨ脂質である。本明細書で一般的に定義されるように、「ＰＥＧ－ＯＨ脂質」（本明細書では「ヒドロキシ－ＰＥＧ化脂質」とも呼ばれる）は、脂質上に１つ以上のヒドロキシル（－ＯＨ）基を有するＰＥＧ化脂質である。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ－ＯＨ脂質には、ＰＥＧ鎖に１つ以上のヒドロキシル基が含まれる。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ－ＯＨまたはヒドロキシ－ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ鎖の末端に－ＯＨ基を含む。各可能性は、本開示の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ）の化合物：
Figure 2022531461000323
またはその塩もしくは異性体であり、式中、
ｒは、１～１００の整数であり、
Ｒ５ＰＥＧは、Ｃ１０－４０アルキル、Ｃ１０－４０アルケニル、またはＣ１０－４０アルキニルであり、及び任意選択によりＲ５ＰＥＧの１つ以上のメチレン基は、独立して、Ｃ３－１０カルボシクリレン、４～１０員ヘテロシクリレン、Ｃ６－１０アリーレン、４～１０員ヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－によって置き換えられ、及び
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、Ｃ１－６アルキル、または窒素保護基である。
例えば、Ｒ５ＰＥＧは、Ｃ１７アルキルである。例えば、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ－ａ）の化合物：
Figure 2022531461000324
またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｒは、１～１００の整数である。
例えば、ＰＥＧ脂質は、以下の式の化合物：
Figure 2022531461000325
またはその塩もしくは異性体である。
ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ）の化合物：
Figure 2022531461000326
またはその塩もしくは異性体であり得、式中、
ｓは、１～１００の整数であり、
Ｒ”は、水素、Ｃ１－１０アルキル、または酸素保護基であり、
Ｒ７ＰＥＧは、Ｃ１０－４０アルキル、Ｃ１０－４０アルケニル、またはＣ１０－４０アルキニルであり、及び任意選択によりＲ５ＰＥＧの１つ以上のメチレン基は、独立して、Ｃ３－１０カルボシクリレン、４～１０員ヘテロシクリレン、Ｃ６－１０アリーレン、４～１０員ヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－によって置き換えられ、及び
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、Ｃ１－６アルキル、または窒素保護基である。
いくつかの実施形態では、Ｒ７ＰＥＧは、Ｃ１０－６０アルキルであり、及びＲ７ＰＥＧのメチレン基のうちの１つ以上は、－Ｃ（Ｏ）－と置き換えられる。例えば、Ｒ７ＰＥＧは、Ｃ３１アルキルであり、及びＲ７ＰＥＧのメチレン基のうちの２つは、－Ｃ（Ｏ）－と置き換えられる。
いくつかの実施形態では、Ｒ”は、メチルである。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ－ａ）の化合物：
Figure 2022531461000327
またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｓは、１～１００の整数である。
例えば、ＰＥＧ脂質は、以下の式の化合物：
Figure 2022531461000328
またはその塩もしくは異性体である。
ある特定の実施形態では、本開示において有用なＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩＩ）の化合物である。本明細書に提供されるのは、式（ＰＩＩＩ）の化合物：
Figure 2022531461000329
またはその塩であり、式中、
Ｒ３は、－ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択により置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１～１００の整数であり、
Ｌ１は、任意選択により置換されたＣ１－１０アルキレン、式中、任意選択により置換されたＣ１－１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは、任意選択により置換されたカルボシクリレン、任意選択により置換されたヘテロシクリレン、任意選択により置換されたアリーレン、任意選択により置換されたヘテロアリーレン、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）によって独立して置き換えられ、
Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分または生理学的条件下で切断可能な部分であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
Figure 2022531461000330
のものであり、
Ｌ２の各々の例は、独立して、結合または任意選択により置換されたＣ１－６アルキレンであり、式中、任意選択により置換されたＣ１－６アルキレンの１つのメチレン単位は、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）によって任意選択により置き換えられ、
Ｒ２の各々の例は、独立して、任意選択により置換されたＣ１－３０アルキル、任意選択により置換されたＣ１－３０アルケニル、または任意選択により置換されたＣ１－３０アルキニルであり、任意選択により、式中、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、任意選択により置換されたカルボシクリレン、任意選択により置換されたヘテロシクリレン、任意選択により置換されたアリーレン、任意選択により置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏによって独立して置き換えられ、
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、任意選択により置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択により置換されたカルボシクリル、任意選択により置換されたヘテロシクリル、任意選択により置換されたアリール、または任意選択により置換されたヘテロアリールであり、
ｐは、１または２である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、ＰＥＧ－ＯＨ脂質（すなわち、Ｒ３は、－ＯＲＯであり、ＲＯは、水素である）である。ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ－ＯＨ）：
Figure 2022531461000331
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分（例えば、トリアゾール）である。ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ－ａ－１）または（ＰＩＩＩ－ａ－２）：
Figure 2022531461000332
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000333
のうちの１つのものまたはその塩であり、式中、
ｓは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000334
のうちの１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000335
のうちの１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000336
のうちの１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、Ｄは、生理学的条件下で切断可能な部分であり（例えば、エステル、アミド、炭酸塩、カルバミン酸塩、尿素）である。ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ－ｂ－１）または（ＰＩＩＩ－ｂ－２）：
Figure 2022531461000337
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ－ｂ－１－ＯＨ）または（ＰＩＩＩ－ｂ－２－ＯＨ）：
Figure 2022531461000338
のものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000339
のうちの１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000340
のうちの１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000341
のうちの１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000342
のうちの１つのものまたはその塩である。
ある特定の実施形態では、本開示において有用なＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ化脂肪酸である。ある特定の実施形態では、本開示において有用なＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＶ）の化合物である。本明細書に提供されるのは、式（ＰＩＶ）の化合物：
Figure 2022531461000343
またはその塩であり、式中、
Ｒ３は、－ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択により置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１～１００の整数であり、
Ｒ５は、任意選択により置換されたＣ１０－４０アルキル、任意選択により置換されたＣ１０－４０アルケニル、または任意選択により置換されたＣ１０－４０アルキニルであり、及び任意選択により、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意選択により置換されたカルボシクリレン、任意選択により置換されたヘテロシクリレン、任意選択により置換されたアリーレン、任意選択により置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、－ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏによって置き換えられ、及び
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、任意選択により置換されたアルキル、または窒素保護基である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、式（ＰＩＶ－ＯＨ）：
Figure 2022531461000344
のものまたはその塩である。いくつかの実施形態では、ｒは、４０～５０である。いくつかの実施形態では、ｒは、４５である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、以下の式：
Figure 2022531461000345
のうちの１つのものまたはその塩である。いくつかの実施形態では、ｒは、４０～５０である。いくつかの実施形態では、ｒは、４５である。
さらに他の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、
Figure 2022531461000346
またはその塩である。
一実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、
Figure 2022531461000347
である。
一態様では、本明細書に提供されるのは、式（ＰＶ）：
Figure 2022531461000348
のＰＥＧ脂質を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｌ１は、結合、任意選択により置換されたＣ１－３アルキレン、任意選択により置換されたＣ１－３ヘテロアルキレン、任意選択により置換されたＣ２－３アルケニレン、任意選択により置換されたＣ２－３アルキニレンであり、
Ｒ１は、任意選択により置換されたＣ５－３０アルキル、任意選択により置換されたＣ５－３０アルケニル、または任意選択により置換されたＣ５－３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、任意選択により置換されたアルキル、任意選択により置換されたアシル、または酸素保護基であり、及び
ｒは、２～１００の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000349
のものまたはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｙ１は、結合、－ＣＲ２－、－Ｏ－、－ＮＲＮ－、または－Ｓ－であり、
Ｒの各例は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択により置換されたアルキルであり、及び
ＲＮは、水素、任意選択により置換されたアルキル、任意選択により置換されたアシル、または窒素保護基である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000350
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒの各例は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択により置換されたアルキルである。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000351
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ｓは、５～２５の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000352
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下：
Figure 2022531461000353
Figure 2022531461000354
及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
別の態様では、本明細書に提供されるのは、式（ＰＶＩ）：
Figure 2022531461000355
のＰＥＧ脂質を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
ＲＯは、水素、任意選択により置換されたアルキル、任意選択により置換されたアシル、または酸素保護基であり、及び
ｒは、２～１００の整数であり、及び
ｍは、５～１５の整数であり、または、１９～３０の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000356
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000357
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩である。
別の態様では、本明細書に提供されるのは、式（ＰＶＩＩ）：
Figure 2022531461000358
のＰＥＧ脂質を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｙ２は、－Ｏ－、－ＮＲＮ－、または－Ｓ－であり、
Ｒ１の各例は、独立して、任意選択により置換されたＣ５－３０アルキル、任意選択により置換されたＣ５－３０アルケニル、または任意選択により置換されたＣ５－３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、任意選択により置換されたアルキル、任意選択により置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ＲＮは、水素、任意選択により置換されたアルキル、任意選択により置換されたアシル、または窒素保護基であり、及び
ｒは、２～１００の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000359
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000360
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ｓの各例は、独立して、５～２５の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000361
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下：
Figure 2022531461000362
及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
別の態様では、本明細書に提供されるのは、式（ＰＶＩＩＩ）：
Figure 2022531461000363
のＰＥＧ脂質を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｌ１は、結合、任意選択により置換されたＣ１－３アルキレン、任意選択により置換されたＣ１－３ヘテロアルキレン、任意選択により置換されたＣ２－３アルケニレン、任意選択により置換されたＣ２－３アルキニレンであり、
Ｒ１の各例は、独立して、任意選択により置換されたＣ５－３０アルキル、任意選択により置換されたＣ３－３０アルケニル、または任意選択により置換されたＣ５－３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、任意選択により置換されたアルキル、任意選択により置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２～１００の整数であり、及び
但し、Ｌ１が、－ＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である場合、ＲＯは、メチルではない。
ある特定の実施形態では、Ｌ１が、任意選択により置換されたＣ２またはＣ３アルキレンである場合、ＲＯは、任意選択により置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が、任意選択により置換されたＣ２またはＣ３アルキレンである場合、ＲＯは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｌ１が、－ＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である場合、ＲＯは、任意選択により置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が、－ＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－である場合、ＲＯは、水素である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000364
のものまたはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｙ１は、結合、－ＣＲ２－、－Ｏ－、－ＮＲＮ－、または－Ｓ－であり、
Ｒの各例は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択により置換されたアルキルであり、
ＲＮは、水素、任意選択により置換されたアルキル、任意選択により置換されたアシル、または窒素保護基であり、
但し、Ｙ１が、結合または－ＣＨ２－である場合、ＲＯは、メチルではない。
ある特定の実施形態では、Ｌ１が、－ＣＲ２－である場合、ＲＯは、任意選択により置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が、－ＣＲ２－である場合、ＲＯは、水素である。ある特定の実施形態では、Ｌ１が、－ＣＨ２－である場合、ＲＯは、任意選択により置換されたアルキルではない。ある特定の実施形態では、Ｌ１が、－ＣＨ２－である場合、ＲＯは、水素である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000365
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒの各例は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択により置換されたアルキルである。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000366
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒの各例は、独立して、水素、ハロゲン、または任意選択により置換されたアルキルであり、及び
各ｓは、独立して、５～２５の整数である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2022531461000367
のうちの１つのものまたはその薬学的に許容される塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下：
Figure 2022531461000368
Figure 2022531461000369
及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＰＥＧ脂質は、ｒが、４０～５０であることを特徴とする。
本明細書に提供されるＬＮＰは、ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質を含む既存のＬＮＰ製剤に比べて、ＰＥＧ排出の増加を呈する。「ＰＥＧ排出」は、本明細書で使用する場合、ＰＥＧ脂質からのＰＥＧ基の開裂を指す。多くの例では、ＰＥＧ脂質からのＰＥＧ基の開裂は、血清駆動のエステラーゼ開裂または加水分解を介して生じる。本明細書に提供されるＰＥＧ脂質は、ある特定の実施形態では、ＰＥＧ排出速度を制御するように設計されている。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％超のＰＥＧ排出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に５０％超のＰＥＧ排出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に６０％超のＰＥＧ排出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に７０％超のＰＥＧ排出を呈する。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に８０％超のＰＥＧ排出を呈する。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に９０％超のＰＥＧ排出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に９０％超のＰＥＧ排出を呈する。
他の実施形態では、本明細書に提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％未満のＰＥＧ排出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に６０％未満のＰＥＧ排出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に７０％未満のＰＥＧ排出を呈する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＬＮＰは、ヒト血清中で約６時間後に８０％未満のＰＥＧ排出を呈する。
本明細書に提供されるＰＥＧ脂質に加えて、ＬＮＰは、１つ以上のさらなる脂質成分を含み得る。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して、０．１５～１５％のモル比でＬＮＰ中に存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して、０．１５～５％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して、１～５％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して、０．１５～２％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して、１～２％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して、およそ１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、または２％のモル比で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、他の脂質に対して、およそ１．５％のモル比で存在する。
一実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、約０．１ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％～約４ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％、または約１ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％の範囲である。
一実施形態では、本明細書に開示される脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、約２ｍｏｌ％である。一実施形態では、本明細書に開示される脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、約１．５ｍｏｌ％である。
一実施形態では、本明細書に開示される脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５ｍｏｌ％である。
例示的な合成：
化合物：ＨＯ－ＰＥＧ２０００－エステル－Ｃ１８
Figure 2022531461000370
パラジウム炭素（１０重量％、７４ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を含有する窒素充填フラスコに、ベンジル－ＰＥＧ２０００－エステル－Ｃ１８（８２２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、及びＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を加えた。フラスコを真空にし、Ｈ２を３回再充填し、室温及び１ａｔｍ Ｈ２で１２時間攪拌させた。混合物をセライトに通して濾過し、ＤＣＭですすぎ、濾液を真空濃縮し、所望の生成物（６９２ｍｇ、８８％）を得た。この方法論を用いて、ｎ＝４０～５０である。一実施形態では、得られた多分散混合物のｎは、平均４５によって参照される。
例えば、ｒの値は、ＰＥＧ脂質内のＰＥＧ部分の分子量に基づいて決定することができる。例えば、２，０００の分子量（例えば、ＰＥＧ２０００）は、およそ４５のｎの値に対応する。所与の組成物について、ポリマーは、異なるポリマー鎖長の分布として見出されることが多いため、ｎの値は、当該技術分野で受け入れられる範囲内の値の分布を暗示し得る。例えば、このようなポリマー組成物の多分散性を理解している当業者であれば、（例えば、構造式における）４５のｎ値が、実際のＰＥＧ含有組成物、例えば、ＤＭＧ ＰＥＧ２００ ｐｅｇ脂質組成物中の４０～５０の値の分布を表し得ることが理解されよう。
いくつかの態様では、本明細書に開示される医薬組成物の免疫細胞送達脂質は、ＰＥＧ脂質を含まない。
一実施形態では、本開示の免疫細胞送達ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含む。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ ＤＭＧではない。いくつかの態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。いくつかの態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ及びＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される。他の態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ＤＭＧである。
一実施形態では、本開示の免疫細胞送達ＬＮＰは、約１４より長い、または分枝鎖である場合、約１０より長い鎖を有するＰＥＧ脂質を含む。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１６、Ｐ４１７、Ｐ４１９、Ｐ４２０、Ｐ４２３、Ｐ４２４、Ｐ４２８、ＰＬ１、ＰＬ２、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ２２、及びＰＬ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１７、Ｐ４２０、Ｐ４２３、Ｐ４２４、Ｐ４２８、ＰＬ１、ＰＬ２、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ２２、及びＰＬ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、Ｃｍｐｄ ４２８、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ１、及びＰＬ２からなる群から選択される。
免疫細胞送達増強脂質
ＬＮＰ中の有効量の免疫細胞送達増強脂質は、免疫細胞送達増強脂質を欠いているＬＮＰに比べて、薬剤の免疫細胞（例えば、ヒトまたは霊長類免疫細胞）への送達を強化することで、免疫細胞送達ＬＮＰを生成する。免疫細胞送達増強脂質は、ＬＮＰ中に存在する時に、免疫細胞送達増強脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、ＬＮＰ中に存在する薬剤の免疫細胞への送達を促進することを特徴とし得る。
一実施形態では、ＬＮＰ中の少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質の存在は、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、免疫細胞と関連するＬＮＰのパーセンテージの増加をもたらす。別の実施形態では、ＬＮＰ中の少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質の存在は、免疫細胞送達増強脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、核酸分子剤の免疫細胞への送達の増加をもたらす。一実施形態では、ＬＮＰ中の少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質の存在は、免疫細胞送達増強脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、核酸分子剤のＢ細胞への送達の増加をもたらす。特に、一実施形態では、ＬＮＰ中の少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質の存在は、免疫細胞送達増強脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、核酸分子剤の骨髄細胞への送達の増加をもたらす。一実施形態では、ＬＮＰ中の少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質の存在は、免疫細胞送達増強脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、核酸分子剤のＴ細胞への送達の増加をもたらす。
一実施形態では、ＬＮＰ中の少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質の存在は、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、Ｃ１ｑに結合するＬＮＰのパーセンテージの増加をもたらす。一実施形態では、ＬＮＰ中の少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質の存在は、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、免疫細胞によって取り込まれた（例えば、免疫細胞によってオプソニン化された）Ｃ１ｑ結合ＬＮＰのパーセンテージの増加をもたらす。
一実施形態では、核酸分子が、ｍＲＮＡである時に、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質の存在は、免疫細胞送達増強脂質を欠いている対照ＬＮＰと比較して、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球）中のｍＲＮＡによってコードされるタンパク質分子の少なくとも約２倍を超える発現をもたらす。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、イオン性脂質である。任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質（Ｉで示される）は、例えば、式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＩＸ）、（Ｉ ＩＸａ１）、（Ｉ ＩＸａ２）、（Ｉ ＩＸａ３）、（Ｉ ＩＸａ４）、（Ｉ ＩＸａ５）、（Ｉ ＩＸａ６）、（Ｉ ＩＸａ７）、または（Ｉ ＩＸａ８）のいずれかを有する化合物のいずれか、及び／または化合物Ｘ、Ｙ、Ｉ ４８、Ｉ ５０、Ｉ １０９、Ｉ １１１、Ｉ １１３、Ｉ １８１、Ｉ １８２、Ｉ ２４４、Ｉ ２９２、Ｉ ３０１、Ｉ ３２１、Ｉ ３２２、Ｉ ３２６、Ｉ ３２８、Ｉ ３３０、Ｉ ３３１、Ｉ ３３２またはＩ Ｍのいずれかに含まれる化合物を含む。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、イオン性脂質である。任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－４８、化合物Ｉ－５０、化合物Ｉ－３２８、化合物Ｉ－３３０、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１または化合物Ｉ－１８１として本明細書に記載される化合物を含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ ４８、Ｉ ５０、Ｉ １０９、Ｉ １１１、Ｉ １１３、Ｉ １８１、Ｉ １８２、Ｉ ２４４、Ｉ ２９２、Ｉ ３０１、Ｉ ３０９、Ｉ ３１７、Ｉ ３２１、Ｉ ３２２、Ｉ ３２６、Ｉ ３２８、Ｉ ３３０、Ｉ ３３１、Ｉ ３３２、Ｉ ３４７、Ｉ ３４８、Ｉ ３４９、Ｉ ３５０、Ｉ ３５１及びＩ ３５２からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ １８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ ４８、Ｉ ５０、Ｉ １０９、Ｉ １１１、Ｉ １８１、Ｉ １８２、Ｉ ２９２、Ｉ ３０１、Ｉ ３２１、Ｉ ３２６、Ｉ ３２８、及びＩ ３３０からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ １８２、Ｉ ３０１、Ｉ ３２１、及びＩ ３２６からなる群から選択される化合物を含む。
免疫細胞送達増強脂質が、イオン性脂質を含む実施形態では、ＬＮＰ中に存在する唯一のイオン性脂質であり得るかまたは、少なくとも１つのさらなるイオン性脂質との混合物として存在し得ることを理解されたい。すなわち、イオン性脂質の混合物（例えば、免疫細胞送達増強効果を有する１つ以上、または免疫細胞送達増強効果を有する１つ、及び効果を有さない少なくとも１つ）を採用し得る。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、ステロールを含む。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、天然に存在するステロールを含む。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、修飾ステロールを含む。一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、１つ以上のフィトステロールを含む。一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、フィトステロール／コレステロールの混合物を含む。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、有効量のフィトステロールを含む。
「フィトステロール」という用語は、フィトステロイドである植物ベースのステロール及びスタノール（その塩もしくはエステルを含む）の群を指す。
「ステロール」という用語は、ステロイドアルコールとしても知られるステロイドのサブグループを指す。ステロールは、通常、２つのクラスに分割される：（１）「フィトステロール」としても知られる植物ステロール、及び（２）コレステロールなどの「動物ステロール（ｚｏｏｓｔｅｒｏｌ）」としても知られる動物ステロール（ａｎｉｍａｌ ｓｔｅｒｏｌ）である。「スタノール」という用語は、ステロール環構造中に二重結合を有さない飽和ステロールのクラスを指す。
「有効量のフィトステロール」という用語は、所望の活性（例えば、強化送達、免疫細胞取り込み強化、核酸活性強化）誘発する、ＬＮＰを含む、脂質ベース組成物中の１つ以上のフィトステロールの量を意味することが意図される。いくつかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子中のステロールの全てまたは実質的に全て（すなわち、約９９～１００％）である。いくつかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子中のステロールの全てまたは実質的に全て未満（約９９～１００％未満）であるが、脂質ナノ粒子中の非フィトステロールステロールの量より多い。いくつかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子中のステロールの総量の５０％超、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超または９５％超である。いくつかの実施形態では、有効量のフィトステロールは、脂質ナノ粒子中のステロールの総量の９５～１００％、７５～１００％、または５０～１００％である。
いくつかの実施形態では、フィトステロールは、シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、β－シトステロール、スチグマスタノール、β－シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５－アベナセロール、Δ７－アベナセロール、またはΔ７－スチグマステロールであり、それらの類似体、塩もしくはエステルを単独または組み合わせで含む。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、フィトステロール単体である。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、異なるフィトステロール（例えば、２、３、４、５または６つの異なるフィトステロール）の混合物である。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール成分は、１つ以上のフィトステロール及び１つ以上の動物ステロールの混合物、例えば、フィトステロール（例えば、β－シトステロールなどのシトステロール）、及びコレステロールの混合物である。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、β－シトステロールである。
いくつかの実施形態では、β－シトステロールは、以下の式を有し：
Figure 2022531461000371
その類似体、塩もしくはエステルを含む。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、スチグマステロールである。
いくつかの実施形態では、スチグマステロールは、以下の式を有し：
Figure 2022531461000372
その類似体、塩もしくはエステルを含む。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、カンペステロールである。
いくつかの実施形態では、カンペステロールは、以下の式を有し：
Figure 2022531461000373
その類似体、塩もしくはエステルを含む。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、シトスタノールである。
いくつかの実施形態では、シトスタノールは、以下の式を有し：
Figure 2022531461000374
その類似体、塩もしくはエステルを含む。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、カンペスタノールである。
いくつかの実施形態では、カンペスタノールは、以下の式を有し：
Figure 2022531461000375
その類似体、塩もしくはエステルを含む。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、ブラシカステロールである。
いくつかの実施形態では、ブラシカステロールは、以下の式を有し：
Figure 2022531461000376
その類似体、塩もしくはエステルを含む。
いくつかの実施形態では、シトステロールは、フコステロールである。
いくつかの実施形態では、フコステロールは、以下の式を有し：
Figure 2022531461000377
その類似体、塩もしくはエステルを含む。
いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、β－シトステロール）は、７０％超の純度を有する。いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、β－シトステロール）は、８０％超の純度を有する。いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、β－シトステロール）は、９０％超の純度を有する。いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、β－シトステロール）は、９５％超の純度を有する。いくつかの実施形態では、フィトステロール（例えば、β－シトステロール）は、９７％、９８％または９９％超の純度を有する。
一実施形態では、免疫細胞強化送達ＬＮＰは、２種類以上の構造脂質を含む。
例えば、一実施形態では、免疫細胞強化送達ＬＮＰは、フィトステロールである少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を含む。一実施形態では、フィトステロールは、ＬＮＰ中に存在する唯一の構造脂質である。別の実施形態では、免疫細胞送達ＬＮＰは、構造脂質の混合物を含む。
一実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物中のフィトステロール及び構造脂質（例えば、β－シトステロール及びコレステロール）の合計量は、約２０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％～約４５ｍｏｌ％の範囲である。
一実施形態では、本明細書に開示される脂質組成物中のフィトステロール及び構造脂質（例えば、β－シトステロール及びコレステロール）の合計量は、約２５ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％～約３５ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％の範囲である。
一実施形態では、本明細書に開示される脂質組成物中のフィトステロール及び構造脂質（例えば、β－シトステロール及びコレステロール）の量は、約２４ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、または約３９ｍｏｌ％である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される脂質組成物中のフィトステロール及び構造脂質（例えば、β－シトステロール及びコレステロール）の合計量は、少なくとも約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または６０ｍｏｌ％である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１つ以上のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び１つ以上の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、ｍｏｌ％の構造脂質は、脂質ナノ粒子中に存在する約１％～５０％のｍｏｌ％のフィトステロールである。いくつかの実施形態では、ｍｏｌ％の構造脂質は、脂質ベース組成物（例えば、ＬＮＰ）中に存在する約１０％～４０％のｍｏｌ％のフィトステロールである。いくつかの実施形態では、ｍｏｌ％の構造脂質は、脂質ベース組成物（例えば、ＬＮＰ）中に存在する約２０％～３０％のｍｏｌ％のフィトステロールである。いくつかの実施形態では、ｍｏｌ％の構造脂質は、脂質ベース組成物（例えば、脂質ナノ粒子）中に存在する約３０％のｍｏｌ％のフィトステロールである。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１５～４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３０または４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７，１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、フィトステロール及び構造脂質の総ｍｏｌ％が、約３０～４０ｍｏｌ％になるように、脂質ナノ粒子は、２０ｍｏｌ％超のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び２０ｍｏｌ％未満の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％または約４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％の約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％または約０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）をそれぞれ含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２８ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び約１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、３８．５％の総ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び２０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。
ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、１０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、１０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、４０％のイオン性脂質、３０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、４０％のイオン性脂質、３０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、４５％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３３．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、４５％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３３％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。
一態様では、免疫細胞強化送達ＬＮＰは、フィトステロールを含み、ＬＮＰは、さらなる構造脂質を含まない。したがって、ＬＮＰの構造脂質（ステロール）成分は、フィトステロールからなる。別の態様では、免疫細胞強化送達ＬＮＰは、フィトステロール及びさらなる構造脂質を含む。したがって、ＬＮＰのステロール成分は、フィトステロール、及び１つ以上のさらなるステロールまたは構造脂質を含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロールの混合物）は、コレステロール、β－シトステロール（本明細書中で、Ｃｍｐｄ Ｓ １４１とも呼ばれる）、カンペステロール（本明細書中で、Ｃｍｐｄ Ｓ １４３とも呼ばれる）、β－シトスタノール（本明細書中で、Ｃｍｐｄ Ｓ １４４とも呼ばれる）、ブラシカステロール、またはスチグマステロール、またはそれらの組み合わせもしくは混合物として本明細書に記載される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロールの混合物）は、コレステロール、β－シトステロール、カンペステロール、β－シトスタノール、ブラシカステロール、スチグマステロール、β－シトステロール－ｄ７、化合物Ｓ－３０、化合物Ｓ－３１、化合物Ｓ－３２、またはそれらの組み合わせもしくは混合物から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロールの混合物）は、コレステロール、β－シトステロール（本明細書中で、Ｃｍｐｄ Ｓ １４１とも呼ばれる）、カンペステロール（本明細書中で、Ｃｍｐｄ Ｓ １４３とも呼ばれる）、β－シトスタノール（本明細書中で、Ｃｍｐｄ Ｓ １４４とも呼ばれる）、化合物Ｓ－１４０、化合物Ｓ－１４４、ブラシカステロール（本明細書中で、Ｃｍｐｄ Ｓ １４８とも呼ばれる）、または組成物Ｓ－１８３（約４０％の化合物Ｓ－１４１、約２５％の化合物Ｓ－１４０、約２５％の化合物Ｓ－１４３、及び約１０％のブラシカステロール）として本明細書に記載される化合物を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質は、化合物Ｓ－１５９、化合物Ｓ－１６０、化合物Ｓ－１６４、化合物Ｓ－１６５、化合物Ｓ－１６７、化合物Ｓ－１７０、化合物Ｓ－１７３、または化合物Ｓ－１７５として本明細書に記載される化合物を含む。
一実施形態では、免疫細胞強化送達ＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質、例えば、リン脂質を含む。任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、またはＨ－４０９として本明細書に記載される化合物を含む。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質、例えば、リン脂質は、ＤＳＰＣである。他の実施形態では、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＰＭＰＣ、Ｈ－４０９、Ｈ－４１８、Ｈ－４２０、Ｈ－４２１、またはＨ－４２２として本明細書に記載される化合物を含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰのＰＥＧ脂質は、本明細書に記載される化合物を含み、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択され得る。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１６、Ｐ４１７、Ｐ４１９、Ｐ４２０、Ｐ４２３、Ｐ４２４、Ｐ４２８、ＰＬ５、ＰＬ１、ＰＬ２、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ２２、ＰＬ２３、ＤＭＧ、ＤＰＧ、及びＤＳＧからなる群から選択される。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、Ｃｍｐｄ ４２８、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ １８、ＰＬ１９、ＰＬ５、ＰＬ １、及びＰＬ ２からなる群から選択される。
一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質は、イオン性脂質及びフィトステロールの有効量の組み合わせを含む。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｘ、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｘ含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。別の実施形態では、構造脂質は、３８．５％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８．５％のβ－シトステロール、または（ｉｉ）１０％のコレステロール及び２８．５％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｙ、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｙ含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－１８２、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－１８２含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－３２１、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－３２１含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－２９２、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－２９２含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－３２６、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－３２６含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－３０１、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－３０１含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－４８、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－４８含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－５０、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－５０含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－３２８、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－３２８含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－３３０、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－３３０含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－１０９、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－１０９含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－１１１、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－１１１含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－１８１、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｉ－１８１含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であり得る。構造脂質成分について、一実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％で全体的にコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の合計パーセンテージで、コレステロール／β－シトステロールであり、混合物は、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ－シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ－シトステロールを含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｘ、Ｙ、Ｉ－３２１、Ｉ－２９２、Ｉ－３２６、Ｉ－１８２、Ｉ－３０１、Ｉ－４８、Ｉ－５０、Ｉ－３２８、Ｉ－３３０、Ｉ－１０９、Ｉ－１１１またはＩ－１８１のいずれか、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロール、コレステロール／β－シトステロールの混合物、β－シトステロール／β－シトスタノールの混合物、β－シトステロール／カンポステロールの混合物、β－シトステロール／β－シトスタノール／カンポステロールの混合物、コレステロール／カンポステロールの混合物、コレステロール／β－シトスタノールの混合物、コレステロール／β－シトスタノール／カンポステロールの混合物またはコレステロール／β－シトステロール／β－シトスタノール／カンポステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。これらの組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比は、例えば、以下の通り：（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２、（ｖ）４０：１８．５：４０：１．５、または（ｖｉ）４５：２０：３３．５：１．５であり得る。一実施形態では、構造脂質成分について、ＬＮＰは、例えば、（ｉ）１０％のコレステロール及び３０％のβ－シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び３０％のカンペステロール、（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び３０％のβ－シトスタノール、（ｉｖ）１０％のコレステロール、２０％のβ－シトステロール及び１０％のカンペステロール、（ｖ）１０％のコレステロール、２０％のβ－シトステロール及び１０％のβ－シトスタノール、（ｖｉ）１０％のコレステロール、１０％のβ－シトステロール及び２０％のカンペステロール、（ｖｉｉ）１０％のコレステロール、１０％のβ－シトステロール及び２０％のカンペステロール、（ｖｉｉｉ）１０％のコレステロール、２０％のカンペステロール及び１０％のβ－シトスタノール、（ｉｘ）１０％のコレステロール、１０％のカンペステロール及び２０％のβ－シトスタノール、または（ｘ）１０％のコレステロール、１０％のβ－シトステロール、１０％のカンペステロール及び１０％のβ－シトスタノールからなる４０％の構造脂質を含み得る。別の実施形態では、構造脂質成分について、ＬＮＰは、例えば、（ｉ）３３．５％のコレステロール、（ｉｉ）１８．５％のコレステロール、１５％のβ－シトステロール、（ｉｉｉ）１８．５％のコレステロール、１５％のカンペステロール、または（ｉｖ）１８．５％のコレステロール、１５％のカンペステロールからなる３３．５％の構造脂質を含み得る。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、イオン性脂質として化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３２１または化合物Ｉ－３２６、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８を含む、脂質ナノ粒子を提供する。一実施形態では、ＬＮＰは、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋Ｔ細胞）への送達を強化する。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、化合物Ｘ、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、化合物Ｉ－１８１、化合物Ｉ－１８２または化合物Ｉ－２４４を含み、ＬＮＰが、単球への送達を強化する、脂質ナノ粒子を提供する。ＬＮＰの他の成分は、本明細書に開示されるものから選択され得、例えば、リン脂質としてＤＳＰＣ、構造脂質としてコレステロールまたはコレステロール／β－シトステロールの混合物、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８である。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であってＬＮＰが、構造脂質としてカンポステロール、β－シトスタノールまたはスチグマステロールを含み、ＬＮＰが、単球への送達を強化する、脂質ナノ粒子を提供する。ＬＮＰの他の成分は、本明細書に開示されるものから選択され得、例えば、イオン性脂質として化合物Ｘ、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、化合物Ｉ－１８１、化合物Ｉ－１８２または化合物Ｉ－２４４、リン脂質としてＤＳＰＣ、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８である。
他の実施形態では、本開示は、１つ以上の免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子であって、ＬＮＰが、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）としてＤＯＰＣ、ＤＭＰＥまたはＨ－４０９を含み、ＬＮＰが、単球への送達を強化する、脂質ナノ粒子を提供する。ＬＮＰの他の成分は、本明細書に開示されるものから選択され得、例えば、イオン性脂質として化合物Ｘ、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、化合物Ｉ－１８１、化合物Ｉ－１８２または化合物Ｉ－２４４、構造脂質としてコレステロール、コレステロール／β－シトステロールの混合物、カンポステロール、β－シトスタノールまたはスチグマステロール、及びＰＥＧ脂質として化合物４２８である。
例示的な追加のＬＮＰ成分
界面活性剤
ある特定の実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子は、１つ以上の界面活性剤を任意に含む。
ある特定の実施形態では、界面活性剤は、両親媒性ポリマーである。本明細書で使用する場合、両親媒性「ポリマー」は、オリゴマーまたはポリマーを含む両親媒性化合物である。例えば、両親媒性ポリマーは、２つ以上のＰＥＧモノマー単位などのオリゴマー断片を含み得る。例えば、本明細書に記載される両親媒性ポリマーは、ＰＳ ２０であり得る。
例えば、両親媒性ポリマーは、ブロック共重合体である。
例えば、両親媒性ポリマーは、凍結防止剤である。
例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃及び大気圧で、水中で２×１０－４Ｍ未満の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。
例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃及び大気圧で、水中で約０．１×１０－４Ｍ～約１．３×１０－４Ｍの範囲の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。
例えば、両親媒性ポリマーの濃度は、例えば、凍結または凍結乾燥前に、製剤中の約そのＣＭＣ～ＣＭＣの約３０倍（例えば、そのＣＭＣの最大で約２５倍、約２０倍、約１５倍、約１０倍、約５倍、または約３倍）の範囲である。
例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標））、ポロキサミン（Ｔｅｔｒｏｎｉｃ（登録商標））、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル（ポリソルベート）、及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）から選択される。
例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサマーである。例えば、両親媒性ポリマーは、以下の構造：
Figure 2022531461000378
のものであり、式中、ａは、１０～１５０の整数であり、ｂは、２０～６０の整数である。例えば、ａは、約１２であり、ｂは、約２０であり、またはａは、約８０であり、ｂは、約２７であり、またはａは、約６４であり、ｂは、約３７であり、またはａは、約１４１であり、ｂは、約４４であり、またはａは、約１０１であり、ｂは、約５６である。
例えば、両親媒性ポリマーは、Ｐ１２４、Ｐ１８８、Ｐ２３７、Ｐ３３８、またはＰ４０７である。
例えば、両親媒性ポリマーは、Ｐ１８８（例えば、ポロキサマー１８８、ＣＡＳ番号９００３－１１－６、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ Ｐ１８８としても知られる）である。
例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサミン、例えば、ｔｅｔｒｏｎｉｃ ３０４またはｔｅｔｒｏｎｉｃ ９０４である。
例えば、両親媒性ポリマーは、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、例えば、３ｋＤａ、１０ｋＤａ、または２９ｋＤａの分子量を有するＰＶＰである。
例えば、両親媒性ポリマーは、ポリソルベート、例えば、ＰＳ ２０である。
ある特定の実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、両親媒性ポリマーである。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。
例えば、非イオン性界面活性剤は、ポリエチレングリコールエーテル（Ｂｒｉｊ）、ポロキサマー、ポリソルベート、ソルビタン、及びそれらの誘導体からなる群から選択される。
例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ）の化合物：
Figure 2022531461000379
またはその塩もしくは異性体であり、
式中、
ｔは、１～１００の整数であり、
Ｒ１ＢＲＩＪは、独立して、Ｃ１０－４０アルキル、Ｃ１０－４０アルケニル、またはＣ１０－４０アルキニルであり、及び任意選択で、Ｒ５ＰＥＧの１つ以上のメチレン基は、独立して、Ｃ３－１０カルボシクリレン、４～１０員ヘテロシクリレン、Ｃ６－１０アリーレン、４～１０員ヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－によって独立して置き換えられ、
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、Ｃ１－６アルキル、または窒素保護基である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ＢＲＩＪは、Ｃ１８アルキルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ－ａ）の化合物：
Figure 2022531461000380
またはその塩もしくは異性体である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ＢＲＩＪは、Ｃ１８アルケニルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ－ｂ）の化合物：
Figure 2022531461000381
またはその塩もしくは異性体である。
いくつかの実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー１０１、ポロキサマー１０５、ポロキサマー１０８、ポロキサマー１２２、ポロキサマー１２３、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８３、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８５、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２１２、ポロキサマー２１５、ポロキサマー２１７、ポロキサマー２３１、ポロキサマー２３４、ポロキサマー２３５、ポロキサマー２３７、ポロキサマー２３８、ポロキサマー２８２、ポロキサマー２８４、ポロキサマー２８８、ポロキサマー３３１、ポロキサマー３３３、ポロキサマー３３４、ポロキサマー３３５、ポロキサマー３３８、ポロキサマー４０１、ポロキサマー４０２、ポロキサマー４０３、及びポロキサマー４０７からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、６０、またはＴｗｅｅｎ（登録商標）８０である。
いくつかの実施形態では、ソルビタンの誘導体は、Ｓｐａｎ（登録商標）２０、Ｓｐａｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）６５、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、またはＳｐａｎ（登録商標）８５である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子中の非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．００００１％ｗ／ｖ～約１％ｗ／ｖ、例えば、約０．００００５％ｗ／ｖ～約０．５％ｗ／ｖ、または約０．０００１％ｗ／ｖ～約０．１％ｗ／ｖの範囲である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子中の非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．０００００１重量％～約１重量％、例えば、約０．０００００２重量％～約０．８重量％、または約０．０００００５重量％～約０．５重量％の範囲である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子中のＰＥＧ脂質の濃度は、約０．０１モル％～約５０モル％、例えば、約０．０５モル％～約２０モル％、約０．０７モル％～約１０モル％、約０．１モル％～約８モル％、約０．２モル％～約５モル％、または約０．２５モル％～約３モル％の範囲である。
アジュバント
いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰは、１つ以上のアジュバント、例えば、グルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（例えば、クラスＡまたはＢ）、ポリ（Ｉ：Ｃ）、水酸化アルミニウム、及びＰａｍ３ＣＳＫ４を任意に含む。
他の成分
本開示のＬＮＰは、前の部分に記載されるものに加えて、１つ以上の成分を任意に含み得る。例えば、脂質ナノ粒子は、ビタミン（例えば、ビタミンＡもしくはビタミンＥ）またはステロールなどの１つ以上の疎水性小分子を含み得る。
脂質ナノ粒子は、１つ以上の透過性促進剤分子、炭水化物、ポリマー、表面改質剤、または他の成分も含み得る。透過性促進剤分子は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６４号に記載される分子であり得る。炭水化物は、単糖類（例えば、グルコース）、及び多糖類（例えば、グリコーゲン及びその誘導体及び類似体）を含み得る。
ポリマーは、脂質ナノ粒子に含まれてもよく、及び／または脂質ナノ粒子を封入または部分的に封入するのに使用され得る。ポリマーは、生分解性及び／または生体適合性であり得る。ポリマーは、限定はされないが、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル、及びポリアリレートから選択され得る。例えば、ポリマーとしては、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ－乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ－乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン－コ－グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－ＰＥＯ－コ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－ＰＰＯ－コ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリウレタン、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ－Ｌ－グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えば、ポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール、例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリアルキレンテレフタレート、例えば、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、例えば、ポリ（酢酸ビニル）、ポリハロゲン化ビニル、例えば、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリシロキサン、ポリスチレン、ポリウレタン、誘導体化セルロース、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリル酸のポリマー、例えば、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）ならびにそれらのコポリマー及び混合物、ポリジオキサノン及びそのコポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポリオキサミン、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド－コ－カプロラクトン）、炭酸トリメチレン、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）（ＰＡｃＭ）、ポリ（２－メチル－２－オキサゾリン）（ＰＭＯＸ）、ポリ（２－エチル－２－オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、及びポリグリセロールが挙げられる。
表面改質剤としては、限定はされないが、アニオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、ジメチルジオクタデシル－アンモニウムブロミドなどのカチオン性界面活性剤）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール、及びポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、アセチルシステイン、オオヨモギ、ブロメライン、パパイン、クサギ属の木（ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｕｍ）、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルゾリン、チモシンβ４、ドルナーゼアルファ、ネルテネキシン、及びエルドステイン）、及びＤＮａｓｅ（例えば、ｒｈＤＮａｓｅ）が挙げられる。表面改質剤は、ナノ粒子内に、及び／またはＬＮＰの表面に（例えば、コーティング、吸着、共有結合、または他のプロセスによって）配置され得る。
脂質ナノ粒子は、１つ以上の官能化脂質も含み得る。例えば、脂質は、適切な反応条件下でアジドに曝露されると、環状付加反応を起こし得るアルキン基で官能化され得る。特に、脂質二重層は、膜透過、細胞認識、またはイメージングを促進するのに有用な１つ以上の基で、このように官能化され得る。ＬＮＰの表面はまた、１つ以上の有用な抗体と結合され得る。標的細胞送達、イメージング、及び膜透過に有用な官能基及びコンジュゲートは、当該技術分野において周知である。
これらの成分に加えて、脂質ナノ粒子は、医薬組成物に有用な任意の物質を含み得る。例えば、脂質ナノ粒子は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または補助成分、例えば、限定はされないが、１つ以上の溶媒、分散媒、希釈剤、分散助剤、懸濁助剤、造粒助剤、崩壊剤、充填剤、滑剤、液体ビヒクル、結合剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、緩衝剤、滑沢剤、油、防腐剤、及び他の種を含み得る。ワックス、バター、着色剤、コーティング剤、香味料、及び芳香剤などの賦形剤も含まれ得る。薬学的に許容される賦形剤は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６を参照されたい）。
希釈剤の例としては、限定はされないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウムラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、トウモロコシデンプン、粉砂糖、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられる。造粒剤及び分散剤は、ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、粘土、アルギン酸、グアーガム、シトラスパルプ、寒天、ベントナイト、セルロース及び木製品、天然海綿、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル－ピロリドン）（クロスポビドン）、ナトリウムカルボキシメチルデンプン（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファデンプン（スターチ１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルシウムカルボキシメチルセルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、第四級アンモニウム化合物、及び／またはそれらの組み合わせからなる非限定的な一覧から選択され得る。
表面活性剤及び／または乳化剤としては、限定はされないが、天然の乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイド性粘土（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］及びＶＥＥＧＵＭ（登録商標）［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、エチレングリコールジステアレート、モノステアリン酸グリセリル、及びプロピレングリコールモノステアレート、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアレート［ＳＰＡＮ（登録商標）６０］、ソルビタントリステアレート［ＳＰＡＮ（登録商標）６５］、モノオレイン酸グリセリル、ソルビタンモノオレエート［ＳＰＡＮ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ポリエトキシル化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、及びＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル、（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル－ピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウム、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられる。
結合剤は、デンプン（例えば、トウモロコシデンプン及びデンプンペースト）、ゼラチン、糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）、天然及び合成ゴム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモスの抽出物、パンワルガム、ガティガム、イサポール皮の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル－ピロリドン）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、及びカラマツアラボガラクタン）、アルギン酸塩、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール、無機カルシウム塩、ケイ酸、ポリメタクリレート、ワックス、水、アルコール、及びそれらの組み合わせ、または任意の他の適切な結合剤であり得る。
防腐剤の例としては、限定はされないが、酸化防止剤、キレート剤、抗菌防腐剤、抗真菌防腐剤、アルコール防腐剤、酸性防腐剤、及び／または他の防腐剤が挙げられる。酸化防止剤の例としては、限定はされないが、αトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及び／または亜硫酸ナトリウムが挙げられる。キレート剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／またはエデト酸三ナトリウムが挙げられる。抗菌防腐剤の例としては、限定はされないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／またはチメロサールが挙げられる。抗真菌防腐剤の例としては、限定はされないが、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、及び／またはソルビン酸が挙げられる。アルコール防腐剤の例としては、限定はされないが、エタノール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシ安息香酸塩、及び／またはフェニルエチルアルコールが挙げられる。酸性防腐剤の例としては、限定はされないが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β－カロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／またはフィチン酸が挙げられる。他の防腐剤としては、限定はされないが、トコフェロール、酢酸トコフェロール、デテロキシムメシレート、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、及び／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が挙げられる。
緩衝剤の例としては、限定はされないが、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ－グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、ラクトビオン酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、第二リン酸カルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、リン酸水酸化カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、アミノ－スルホン酸緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ）、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱性物質除去蒸留水、等張生理食塩水、リンゲル液、エチルアルコール、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられる。滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル、水添植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせからなる非限定的な群から選択され得る。
油の例としては、限定はされないが、アーモンド、杏仁、アボカド、ババス、ベルガモット、クロスグリの種子、ルリジサ、ケード、カモミール、キャノーラ、キャラウェイ、カルナウバ、ヒマシ、シナモン、カカオ脂、ココナッツ、タラの肝臓、コーヒー、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユーカリ、月見草、魚、亜麻仁、ゲラニオール、ヒョウタン、ブドウの種子、ハシバミの実、ヒソップ、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ、ククイの実、ラバンジン、ラベンダー、レモン、リツェアクベバ、マカデミアナッツ、マロー、マンゴーの種子、メドウフォームの種子、ミンク、ナツメグ、オリーブ、オレンジ、オレンジラフィー、パーム、パーム核、桃仁、ピーナッツ、ケシの実、カボチャの種子、ナタネ、米ぬか、ローズマリー、ベニバナ、サンダルウッド、サスクアナ（ｓａｓｑｕａｎａ）、セイボリー、サジー、ゴマ、シアバター、シリコーン、ダイズ、ヒマワリ、ティーツリー、アザミ、ツバキ、ベチバー、クルミ、及び小麦胚芽油ならびにステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、シメチコン、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられる。
ＬＮＰ組成物
本明細書に記載される脂質ナノ粒子は、１つ以上の特定の用途または標的のために設計され得る。脂質ナノ粒子の要素及びそれらの相対量は、特定の用途または標的に基づいて、及び／または有効性、毒性、費用、使用の容易さ、入手可能性、または１つ以上の要素の他の特徴に基づいて選択され得る。同様に、脂質ナノ粒子の特定の製剤は、例えば、要素の特定の組み合わせの有効性及び毒性に応じて、特定の用途または標的のために選択され得る。脂質ナノ粒子製剤の有効性及び忍容性は、製剤の安定性によって影響され得る。
本開示のＬＮＰは、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を含む。本ＬＮＰは、ＬＮＰの成分として有効量の免疫細胞送達増強脂質を含み、ＬＮＰは、（ｉ）イオン性脂質、（ｉｉ）コレステロールまたは他の構造脂質、（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、及び（ｖ）ＬＮＰ内に封入される及び／またはＬＮＰと会合する薬剤（例えば、核酸分子）を含み、有効量の免疫細胞送達増強脂質は、免疫細胞送達増強脂質を欠いているＬＮＰに比べて、薬剤の免疫細胞（例えば、ヒトまたは霊長類免疫細胞）への送達を強化する。
種々の成分の要素は、特定の割合、例えば、モル％分率で提供され得る。
例えば、任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰは、構造脂質またはその塩を含む。いくつかの態様では、構造脂質は、コレステロールまたはその塩である。さらなる態様では、ｍｏｌ％のコレステロールは、ＬＮＰ中に存在する約１％～５０％のモル％のフィトステロールである。他の態様では、ｍｏｌ％のコレステロールは、ＬＮＰ中に存在する約１０％～４０％のｍｏｌ％のフィトステロールである。いくつかの態様では、ｍｏｌ％のコレステロールは、ＬＮＰ中に存在する約２０％～３０％のｍｏｌ％のフィトステロールである。さらなる態様では、ｍｏｌ％のコレステロールは、ＬＮＰ中に存在する約３０％のｍｏｌ％のフィトステロールである。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％のリン脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％のリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン性脂質成分は、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロールを含み、１つ以上の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を任意に含むが、但し、総ｍｏｌ％は、１００％を超えない。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン性脂質成分は、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のフィトステロールを含み、１つ以上の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を任意に含む。特定の実施形態では、脂質成分は、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロールを含み、１つ以上の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を任意に含む。別の特定の実施形態では、脂質成分は、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロールを含み、１つ以上の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を任意に含む。いくつかの実施形態では、フィトステロールは、β－シトステロールであり得、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質、例えば、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、またはオレイン酸などのリン脂質置換であり得る。他の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ＤＭＧであり得、及び／または構造脂質は、コレステロールであり得る。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
本明細書の実施形態に関するいくつかの態様では、フィトステロール及び本開示のＬＮＰの構造脂質成分は、約１０：１～１：１０のフィトステロール対構造脂質、例えば、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９及び１：１０のフィトステロール対構造脂質（例えば、β－シトステロール対コレステロール）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰのフィトステロール成分は、フィトステロールとコレステロールなどの構造脂質との混合物であり、フィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び構造脂質（例えば、コレステロール）は、特定のｍｏｌ％で各々存在する。例えば、いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１５～４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３０、または４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７，１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、フィトステロール及び構造脂質の総ｍｏｌ％が、約３０～４０ｍｏｌ％になるように、脂質ナノ粒子は、２０ｍｏｌ％超のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び２０ｍｏｌ％未満の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％または約４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％ 約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％または約０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）をそれぞれ含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２８ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び約１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、３８．５％の総ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β－シトステロール）、及び２０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。
本開示の脂質ナノ粒子は、１つ以上の特定の用途または標的のために設計され得る。例えば、本脂質ナノ粒子は、ＲＮＡなどの核酸分子の、哺乳動物、例えば、ヒトの身体における特定の免疫細胞（例えば、リンパ系細胞または骨髄細胞）、組織、器官、またはそれらの系もしくは群への送達をさらに強化するように任意に設計され得る。脂質ナノ粒子の生理化学的特性は、特定の身体上の標的に対する選択性を高めるために改変され得る。例えば、粒径は、免疫細胞取り込みを促進するために調整され得る。上記のように、脂質ナノ粒子に含まれる核酸分子はまた、免疫細胞への所望の送達に基づいて選択され得る。例えば、核酸分子は、特定の適応症、病態、疾患、または障害のために、及び／または特定の細胞、組織、器官、またはそれらの系もしくは群への送達（例えば、局所的または特異的送達）のために選択され得る。
ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子は、目的のポリペプチドを生成するように細胞内で翻訳されることが可能な目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含み得る。他の実施形態では、脂質ナノ粒子は、他の種類の薬剤、例えば、本明細書に記載されるように、ＤＮＡ及び／またはＲＮＡ剤、例えば、以下でさらに詳述されるように、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンス核酸などを含む、他の核酸剤を含み得る。
脂質ナノ粒子中の核酸分子の量は、脂質ナノ粒子のサイズ、組成、所望の標的及び／または用途、または他の特性、ならびに治療薬及び／または予防薬の特性に左右され得る。例えば、脂質ナノ粒子に有用なＲＮＡの量は、ＲＮＡのサイズ、配列、及び他の特性に左右され得る。脂質ナノ粒子中の核酸分子及び他の要素（例えば、脂質）の相対量も変化し得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子中の、核酸分子に対するイオン性脂質成分のｗｔ／ｗｔ比は、約５：１～約６０：１、例えば、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、及び６０：１であり得る。例えば、核酸分子に対するイオン性脂質成分のｗｔ／ｗｔ比は、約１０：１～約４０：１であり得る。ある特定の実施形態では、ｗｔ／ｗｔ比は、約２０：１である。ＬＮＰ中の核酸分子の量は、例えば、吸収分光法（例えば、紫外－可視分光法）を用いて測定され得る。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１つ以上のＲＮＡ、及び１つ以上のイオン性脂質を含み、それらの量は、特定のＮ：Ｐ比をもたらすように選択され得る。組成物のＮ：Ｐ比は、ＲＮＡ中のリン酸基の数に対する１つ以上の脂質中の窒素原子のモル比を指す。一般に、より低いＮ：Ｐ比が好ましい。１つ以上のＲＮＡ、脂質、及びそれらの量は、約２：１～約３０：１、例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１２：１、１４：１、１６：１、１８：１、２０：１、２２：１、２４：１、２６：１、２８：１、または３０：１のＮ：Ｐ比をもたらすように選択され得る。ある特定の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約２：１～約８：１であり得る。他の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５：１～約８：１である。例えば、Ｎ：Ｐ比は、約５．０：１、約５．５：１、約５．６７：１、約５．７：１、約５．８：１、約５．９：１、約６．０：１、約６．５：１、または約７．０：１であり得る。例えば、Ｎ：Ｐ比は、約５．６７：１であり得る。別の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５．８：１であり得る。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、塩、例えば、塩化物塩をさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、糖、例えば、二糖をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化物塩のような塩ではなく、糖をさらに含む。
物理的特徴
脂質ナノ粒子の特徴は、その成分に依存し得る。例えば、構造脂質としてコレステロールを含む脂質ナノ粒子は、異なる構造脂質を含む脂質ナノ粒子とは異なる特徴を有し得る。同様に、脂質ナノ粒子の特徴は、その成分の絶対量または相対量に依存し得る。例えば、より高いモル分率のリン脂質を含む脂質ナノ粒子は、より低いモル分率のリン脂質を含む脂質ナノ粒子とは異なる特徴を有し得る。また、特徴は、脂質ナノ粒子を調製する方法及び条件に応じて変化し得る。
脂質ナノ粒子は、様々な方法によって特徴付けられ得る。例えば、顕微鏡法（例えば、透過電子顕微鏡法または走査電子顕微鏡法）は、脂質ナノ粒子の形態及びサイズ分布を調べるのに使用され得る。動的光散乱または電位差測定法（例えば、電位差滴定法）が、ゼータ電位を測定するのに使用され得る。動的光散乱はまた、粒径を決定するのに用いられ得る。Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）などの機器はまた、脂質ナノ粒子の複数の特性、例えば、粒径、多分散指数、及びゼータ電位を測定するのに使用され得る。
脂質ナノ粒子の平均サイズは、例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定して、数１０ｎｍ～数１００ｎｍであり得る。例えば、平均サイズは、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、例えば、約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍであり得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子の平均サイズは、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約９０ｎｍ、約５０ｎｍ～約８０ｎｍ、約５０ｎｍ～約７０ｎｍ、約５０ｎｍ～約６０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１００ｎｍ、約６０ｎｍ～約９０ｎｍ、約６０ｎｍ～約８０ｎｍ、約６０ｎｍ～約７０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０ｎｍ～約９０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、または約９０ｎｍ～約１００ｎｍであり得る。ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子の平均サイズは、約７０ｎｍ～約１００ｎｍであり得る。特定の実施形態では、平均サイズは、約８０ｎｍであり得る。他の実施形態では、平均サイズは、約１００ｎｍであり得る。
脂質ナノ粒子は、比較的均一であり得る。多分散指数は、ＬＮＰの均一性、例えば、脂質ナノ粒子の粒径分布を示すのに使用され得る。本明細書で使用する場合、「多分散指数」は、系の粒径分布の均質性を記載する比である。例えば、０．３未満の小さな値は、狭い粒径分布を示す。小さい（例えば、０．３未満）多分散指数は、一般に、狭い粒径分布を示す。脂質ナノ粒子は、約０～約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５の多分散指数を有し得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子の多分散指数は、約０．１０～約０．２０であり得る。
脂質ナノ粒子のゼータ電位は、組成物の界面動電電位を示すのに使用され得る。本明細書で使用する場合、「ゼータ電位」は、例えば、粒子組成物中の脂質の界面動電電位である。
例えば、ゼータ電位は、脂質ナノ粒子の表面電荷を表し得る。比較的低い電荷（正電荷か負電荷かにかかわらず）を有する脂質ナノ粒子が一般に望ましいが、これは、より高度に帯電した種は、細胞、組織、及び体内の他の要素と不必要に相互作用し得るためである。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子のゼータ電位は、約－１０ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋５ｍＶ、約－１０ｍＶ～約０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約－５ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋５ｍＶ、約－５ｍＶ～約０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約０ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋５ｍＶ、約＋５ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約＋５ｍＶ～約＋１５ｍＶ、または約＋５ｍＶ～約＋１０ｍＶであり得る。
核酸分子の封入の効率は、提供される最初の量と比べた、調製後に封入されるかまたは他の形で脂質ナノ粒子と会合する核酸分子の量を表す。封入効率は、高いのが望ましい（例えば、ほぼ１００％）である。封入効率は、例えば、１つ以上の有機溶媒または洗浄剤で脂質ナノ粒子を分解する前及び後の脂質ナノ粒子を含有する溶液中の核酸分子の量を比較することによって測定され得る。蛍光は、溶液中の遊離核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の量を測定するのに使用され得る。本明細書に記載される脂質ナノ粒子では、核酸分子の封入効率は、少なくとも５０％、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であり得る。いくつかの実施形態では、封入効率は、少なくとも８０％であり得る。ある特定の実施形態では、封入効率は、少なくとも９０％であり得る。
脂質ナノ粒子は、任意に、１つ以上のコーティングを含み得る。例えば、脂質ナノ粒子は、コーティングを有するカプセル、フィルム、または錠剤において製剤化され得る。本明細書に記載される組成物を含むカプセル、フィルム、または錠剤は、任意の有用なサイズ、張力、硬度、または密度を有し得る。
医薬複合物
本開示の脂質ナノ粒子を含む製剤は、医薬組成物として全体的にまたは部分的に製剤化され得る。医薬組成物は、１つ以上の脂質ナノ粒子を含み得る。例えば、医薬組成物は、１つ以上の異なる治療薬及び／または予防薬を含む１つ以上の脂質ナノ粒子を含み得る。医薬組成物は、本明細書に記載されるものなどの１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または補助成分をさらに含み得る。医薬組成物及び薬剤の製剤化及び製造についての一般的な指針は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６において入手可能である。任意の従来の賦形剤または補助成分が、本開示の製剤中のＬＮＰの１つ以上の成分と不適合である場合を除いて、従来の賦形剤及び補助成分が、任意の医薬組成物において使用され得る。賦形剤または補助成分は、成分またはＬＮＰとのその組み合わせが、何らかの望ましくない生物学的作用、または他の形の有害な作用をもたらし得る場合、製剤のＬＮＰの成分と不適合であり得る。
医薬組成物に製剤化された本開示の脂質ナノ粒子は、単一核酸または複数の核酸を封入し得る。複数の核酸を封入する場合、核酸は、同じ種類（例えば、全てｍＲＮＡ）であってもよく、または異なる種類（例えば、ｍＲＮＡ及びＤＮＡ）であってもよい。さらに、複数のＬＮＰは、同じまたは別々の医薬組成物に製剤化することができる。例えば、同じまたは別々の医薬組成物は、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを含み得、第１及び第２のＬＮＰは、同じかまたは異なる核酸分子を封入し、第１及び第２のＬＮＰは、成分として免疫細胞送達増強脂質を含む。他の実施形態では、同じまたは別々の医薬組成物は、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを含み得、第１及び第２のＬＮＰは、同じかまたは異なる核酸分子を封入し、第１のＬＮＰは、成分として免疫細胞送達増強脂質を含み、第２のＬＮＰは、免疫細胞送達増強脂質を欠いている。
いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤または補助成分は、ＬＮＰを含む医薬組成物の総質量または体積の５０％超を構成し得る。例えば、１つ以上の賦形剤または補助成分は、医薬品の慣例の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上を構成し得る。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％純粋である。いくつかの実施形態では、賦形剤は、ヒトへの使用及び獣医学用途のために承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は、医薬品グレードである。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／または国際薬局方の基準を満たしている。
本開示に係る医薬組成物中の１つ以上の脂質ナノ粒子、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、及び／または任意のさらなる成分の相対量は、治療対象の属性、サイズ、及び／または状態に応じて、さらには、組成物が投与される経路に応じて変化する。例として、医薬組成物は、０．１％～１００％（ｗｔ／ｗｔ）の１つ以上の脂質ナノ粒子を含み得る。別の例として、医薬組成物は、０．１％～１５％（ｗｔ／ｖｏｌ）の１つ以上の両親媒性ポリマー（例えば、０．５％、１％、２．５％、５％、１０％、または１２．５％ｗ／ｖ）を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子及び／または医薬組成物は、貯蔵及び／または輸送のために冷蔵または冷凍される（例えば、約－１５０℃～約０℃または約－８０℃～約－２０℃の温度（例えば、約－５℃、－１０℃、－１５℃、－２０℃、－２５℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、－８０℃、－９０℃、－１３０℃または－１５０℃）など４℃以下の温度で貯蔵される）。例えば、１つ以上の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、例えば、約－２０℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、または－８０℃で、貯蔵及び／または輸送のために冷蔵される溶液または固体（例えば、凍結乾燥を介して）である。ある特定の実施形態では、本開示はまた、脂質ナノ粒子及び／またはその医薬組成物を、４℃以下の温度、例えば、約－１５０℃～約０℃または約－８０℃～約－２０℃の温度、例えば、約－５℃、－１０℃、－１５℃、－２０℃、－２５℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、－８０℃、－９０℃、－１３０℃または－１５０℃）で貯蔵することによって、脂質ナノ粒子の安定性を高める方法にも関する。
脂質ナノ粒子及び／または１つ以上の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、１つ以上の特定の細胞、組織、器官、またはそれらの系もしくは群（腎臓系など）への治療薬及び／または予防薬の送達によって提供される治療効果から利益を受け得る患者または対象を含む任意の患者または対象に投与され得る。脂質ナノ粒子及び脂質ナノ粒子を含む医薬組成物の本明細書において提供される説明は、主に、ヒトへの投与に適切な組成物に関するが、このような組成物は、一般に、任意の他の哺乳動物への投与に好適であることが当業者によって理解されよう。組成物を様々な動物への投与に好適にするための、ヒトへの投与に適切な組成物の修飾は、十分に理解されており、通常の獣医学薬理学者は、もし実験があるとすれば単なる通常の実験を用いて、このような修飾を設計及び／または実施することができる。組成物の投与が想定される対象としては、限定はされないが、ヒト、他の霊長類、及びウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び／またはラットなどの商業的に価値のある哺乳動物を含む他の哺乳動物が挙げられる。
１つ以上の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、薬理学分野において公知であるかまたは今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、このような調製方法は、活性成分を、賦形剤及び／または１つ以上の他の補助成分と結合させることと、次に、望ましい場合または任意に、生成物を、所望の単回または複数回投与単位に、分割、成形及び／または包装することとを含む。
本開示に係る医薬組成物は、単一単位用量、及び／または複数の単一単位用量として、調製、包装、及び／または大量販売され得る。本明細書で使用する場合、「単位用量」は、所定の量の活性成分（例えば、脂質ナノ粒子）を含む医薬組成物の個別の量である。活性成分の量は、一般に、対象に投与され得る活性成分の投与量、及び／またはこのような投与量の好都合な割合、例えば、このような投与量の２分の１もしくは３分の１に等しい。
医薬組成物は、様々な投与経路及び方法に適切な様々な形態で調製され得る。一実施形態では、このような組成物は、液体形態で調製されるかまたは凍結乾燥される（例えば、４℃以下または氷点下で保存される）。例えば、医薬組成物は、液体剤形（例えば、乳剤、マイクロエマルション、ナノエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、及びエリキシル剤）、注射用形態、固体剤形（例えば、カプセル、錠剤、丸剤、粉剤、及び顆粒剤）、局所及び／または経皮投与のための剤形（例えば、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉剤、溶液、スプレー、吸入剤、及びパッチ剤）、懸濁液、粉剤、及び他の形態で調製され得る。
経口及び非経口投与のための液体剤形としては、限定はされないが、薬学的に許容される乳剤、マイクロエマルション、ナノエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、及び／またはエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加えて、液体剤形は、当該技術分野において一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ピーナッツ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、及びそれらの混合物を含み得る。不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、さらなる治療薬及び／または予防薬、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味料、香味料、及び／または芳香剤などのさらなる薬剤を含み得る。非経口投与のための特定の実施形態では、組成物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及び／またはそれらの組み合わせなどの可溶化剤と混合される。
注射用製剤、例えば、滅菌注射用水性または油性懸濁液が、適切な分散剤、湿潤剤、及び／または懸濁化剤を用いて、公知の技術に従って製剤化され得る。滅菌注射用製剤は、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液のような、非毒性の非経口的に許容できる希釈剤及び／または溶媒中の滅菌注射用溶液、懸濁液、及び／または乳剤であり得る。用いられ得る許容可能なビヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液（Ｕ．Ｓ．Ｐ．）、及び等張性塩化ナトリウム溶液がある。滅菌固定油は、通常、溶媒または懸濁媒体として用いられる。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油が用いられ得る。オレイン酸などの脂肪酸が、注射薬の調製に使用され得る。
注射用製剤は、例えば、細菌捕捉フィルタを介した濾過によって、及び／または使用前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体に溶解または分散され得る滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって滅菌され得る。
活性成分の効果を長く持続させるために、多くの場合、皮下または筋肉内注射から活性成分の吸収を遅らせるのが望ましい。これは、難水溶性の結晶性または非晶質材料の液体懸濁液の使用によって達成することができる。その際、薬剤の吸収速度は、その溶解速度に左右されるが、この溶解速度は、今度は、結晶サイズ及び結晶形態に左右され得る。あるいは、非経口投与された薬剤形態の吸収の遅延は、薬剤を油媒体に溶解または懸濁させることによって達成される。注入可能なデポー形態は、ポリラクチド－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中で薬剤のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製される。薬剤対ポリマーの比率及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬剤放出の速度が制御され得る。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）、及びポリ（無水物）が挙げられる。デポー注入可能製剤は、身体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルション中に薬剤を閉じ込めることによって調製される。
直腸または膣投与のための組成物は、典型的に、坐薬であり、これは、周囲温度では固体であるが、体温では液体であるため、直腸または膣腔において溶解し、活性成分を放出する、カカオ脂、ポリエチレングリコールまたは坐薬ワックスなどの適切な無刺激の賦形剤と組成物を混合することによって調製され得る。
組成物の局所及び／または経皮投与のための剤形としては、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉剤、溶液、スプレー、吸入剤、及び／またはパッチ剤が挙げられる。一般に、活性成分は、任意に、滅菌条件下で、薬学的に許容される賦形剤及び／または任意の必要な防腐剤及び／または緩衝剤と混合される。さらに、本開示は、経皮パッチ剤の使用を想定し、経皮パッチ剤は、多くの場合、身体への化合物の制御送達をもたらすという追加の利点を有する。このような剤形は、例えば、化合物を適切な媒体に溶解及び／または分散させることによって調製され得る。その代わりにまたはそれに加えて、速度制御膜を提供するか、及び／または化合物をポリマーマトリックス及び／またはゲルに分散させるかのいずれかによって、速度が制御され得る。
本明細書に記載される皮内医薬組成物を送達するのに使用するための適切な装置としては、米国特許第４，８８６，４９９号、同第５，１９０，５２１号、同第５，３２８，４８３号、同第５，５２７，２８８号、同第４，２７０，５３７号、同第５，０１５，２３５号、同第５，１４１，４９６号、及び同第５，４１７，６６２号に記載されるものなどの短針装置が挙げられる。皮内組成物は、ＰＣＴ公開ＷＯ９９／３４８５０に記載されるものなどの、皮膚への針の有効貫入長さを制限する装置及びその機能的同等物によって投与され得る。角質層を貫通し、真皮に到達する噴流を生成する液体ジェット式注射器及び／または針を介して液体組成物を真皮に送達するジェット式注射装置が好適である。ジェット式注射装置は、例えば、米国特許第５，４８０，３８１号、同第５，５９９，３０２号、同第５，３３４，１４４号、同第５，９９３，４１２号、同第５，６４９，９１２号、同第５，５６９，１８９号、同第５，７０４，９１１号、同第５，３８３，８５１号、同第５，８９３，３９７号、同第５，４６６，２２０号、同第５，３３９，１６３号、同第５，３１２，３３５号、同第５，５０３，６２７号、同第５，０６４，４１３号、同第５，５２０，６３９号、同第４，５９６，５５６号、同第４，７９０，８２４号、同第４，９４１，８８０号、同第４，９４０，４６０号、及びＰＣＴ公開ＷＯ９７／３７７０５及びＷＯ９７／１３５３７に記載されている。圧縮ガスを用いて、粉末状のワクチンを皮膚の外層から真皮へと加速させる弾道粉末／粒子送達装置が好適である。その代わりにまたはそれに加えて、従来の注射器が、皮内投与の古典的なマントー法に使用され得る。
局所投与に適切な製剤としては、限定はされないが、塗布剤、ローション、水中油型及び／または油中水型エマルション（クリーム、軟膏及び／またはペーストなど）、及び／または溶液及び／または懸濁液などの液体及び／または半液体製剤が挙げられる。局所投与可能な製剤は、例えば、約１％～約１０％（ｗｔ／ｗｔ）の活性成分を含み得るが、活性成分の濃度は、溶媒への活性成分の溶解限度と同程度に高くてもよい。局所投与用の製剤は、本明細書に記載されるさらなる成分の１つ以上をさらに含み得る。
医薬組成物は、口腔を介した経肺投与に適切な製剤として調製、包装、及び／または販売され得る。このような製剤は、活性成分を含む乾燥粒子を含み得る。このような組成物は、好都合には、推進剤の流れを誘導して、粉末を分散させ得る乾燥粉末リザーバを含む装置を用いた、及び／または密閉容器内で低沸点推進剤に溶解及び／または懸濁された活性成分を含む装置などの自己推進溶媒／粉末分配容器を用いた投与のための乾燥粉末の形態である。乾燥粉末組成物は、糖などの固体微粉希釈剤を含んでもよく、好都合には、単位剤形で提供される。
低沸点推進剤は、一般に、大気圧で６５°Ｆ未満の沸点を有する液体推進剤を含む。一般に、推進剤は、組成物の５０％～９９．９％（ｗｔ／ｗｔ）を構成してもよく、活性成分は、組成物の０．１％～２０％（ｗｔ／ｗｔ）を構成してもよい。推進剤は、液体の非イオン性及び／または固体のアニオン性界面活性剤及び／または固体の希釈剤（活性成分を含む粒子と同程度の粒径を有し得る）などのさらなる成分をさらに含み得る。
肺送達のために製剤化される医薬組成物は、溶液及び／または懸濁液の液滴の形態で活性成分を提供し得る。このような製剤は、活性成分を含む、任意選択により滅菌した水性及び／または希薄アルコール性溶液及び／または懸濁液として調製、包装、及び／または販売され得、好都合には、任意の噴霧及び／または霧化装置を用いて投与され得る。このような製剤は、限定はされないが、サッカリンナトリウムなどの香味料、揮発性油、緩衝剤、表面活性剤、及び／またはメチルヒドロキシ安息香酸塩などの防腐剤を含む１つ以上のさらなる成分をさらに含み得る。この投与経路によって提供される液滴は、約１ｎｍ～約２００ｎｍの範囲の平均直径を有し得る。
肺送達に有用であることが本明細書に記載される製剤は、医薬組成物の鼻内送達に有用である。鼻内投与に適切な別の製剤は、活性成分を含み、かつ約０．２μｍ～５００μｍの平均粒子を有する粗粉末である。このような製剤は、鼻から吸い込む方法で、すなわち、鼻の近くに保持した粉末の容器から鼻腔を介した高速吸入によって投与される。
経鼻投与に適切な製剤は、例えば、わずか約０．１％（ｗｔ／ｗｔ）程度から１００％（ｗｔ／ｗｔ）もの活性成分を含んでもよく、本明細書に記載されるさらなる成分の１つ以上を含み得る。医薬組成物は、口腔投与に適切な製剤として調製、包装、及び／または販売され得る。このような製剤は、例えば、従来の方法を用いて作製される錠剤及び／またはトローチ剤の形態であってもよく、例えば、０．１％～２０％（ｗｔ／ｗｔ）の活性成分を含んでもよく、残りが、経口溶解性及び／または分解性組成物ならびに、任意に、本明細書に記載されるさらなる成分の１つ以上を含む。あるいは、口腔投与に適切な製剤は、活性成分を含む、粉末及び／またはエアロゾル化及び／または霧化溶液及び／または懸濁液を含み得る。このような粉末化、エアロゾル化、及び／またはエアロゾル化製剤は、分散されると、約０．１ｎｍ～約２００ｎｍの範囲の平均粒径及び／または液滴径を有してもよく、本明細書に記載される任意のさらなる成分の１つ以上をさらに含み得る。
医薬組成物は、眼投与に適切な製剤として調製、包装、及び／または販売され得る。このような製剤は、例えば、水性または油性液体賦形剤中の活性成分の０．１／１．０％（ｗｔ／ｗｔ）の溶液及び／または懸濁液を含む、例えば、点眼薬の形態であり得る。このような点眼薬は、緩衝剤、塩、及び／または本明細書に記載される任意のさらなる他の成分の１つ以上をさらに含み得る。有用である他の眼投与可能な製剤としては、微結晶形態及び／またはリポソーム製剤として活性成分を含むものが挙げられる。点耳薬及び／または点眼薬は、本開示の範囲内であると考えられる。
脂質ベース組成物の使用
本開示は、核酸の免疫細胞への送達を強化した、改善された脂質ベース組成物、特に、ＬＮＰ組成物を提供する。本開示は、少なくとも一部には、ＬＮＰの成分が、封入された核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）の免疫細胞、例えば、リンパ系細胞及び骨髄細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、及び樹状細胞）への送達を強化する免疫細胞送達増強脂質として作用するという発見に基づく。
本開示の改善された脂質ベース組成物、特に、ＬＮＰは、様々な目的のために、インビトロ及びインビボの両方で、例えば、免疫細胞への核酸の送達、免疫細胞内または上のタンパク質発現、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、及び／または樹状細胞）活性化または活性の調節、及び免疫細胞応答を減少させて、自己免疫を低下させること（例えば、Ｔ細胞を寛容化すること）に有用である。
様々な実施形態では、単一の免疫細胞破壊因子構築物を使用し得るか、あるいは、複数の免疫細胞破壊因子構築物を組み合わせて使用し得る。組み合わせて使用する場合、ｍＲＮＡ構築物を同じＬＮＰ中に共製剤化してもよく（例えば、実施例１０に記載されるように）、あるいは、別々のＬＮＰを別々のｍＲＮＡ構築物に使用してもよい。使用される特定の免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡは、インビトロ及び／またはインビボでの意図または所望の活性／効果に基づいて選択され得る。例えば、Ｔ細胞及びＢ細胞の両方が関与し、阻害されることが所望される状況におけるインビボ使用では、１つ以上のＴＣＤ及び１つ以上のＢＣＤの組み合わせを使用し得る、例えば、共製剤化し得る（例えば、実施例１０を参照されたい）。複数の免疫細胞型（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、及び樹状細胞）に影響を及ぼすこのような併用療法は、本明細書に記載される様々な種類の免疫細胞破壊因子構築物に基づいて考案され得る。あるいは、単一種類の免疫細胞が、目的の特定の活性または疾患（例えば、Ｔ細胞により媒介されることが知られる障害）を媒介することが公知または考えられる状況では、単一種類の免疫細胞破壊因子構築物（例えば、ＴＣＤ）を使用するために選択してもよいが、この種類の破壊因子の複数の形態（例えば、複数のＴＣＤ）を組み合わせて使用してもよい。
インビトロのタンパク質発現について、ＬＮＰ及び免疫細胞をエクスビボでインキュベートすることによって、免疫細胞をＬＮＰと接触させる。続いて、このような免疫細胞をインビボで導入してもよい。
インビボのタンパク質発現について、ＬＮＰを対象に投与することによって、免疫細胞をＬＮＰと接触させることで、対象内の免疫細胞内または上のタンパク質発現を増加または誘発させる。例えば、一実施形態では、ＬＮＰは、静脈内投与される。別の実施形態では、ＬＮＰは、筋肉内投与される。さらに他の実施形態では、ＬＮＰは、皮下、リンパ節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路で投与される。
インビトロの送達について、一実施形態では、ＬＮＰ及び免疫細胞をエクスビボでインキュベートすることによって、免疫細胞をＬＮＰと接触させる。一実施形態では、免疫細胞は、ヒト免疫細胞である。別の実施形態では、免疫細胞は、霊長類免疫細胞である。別の実施形態では、免疫細胞は、ヒトまたは非ヒト霊長類免疫細胞である。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７低Ｔｒｅｇ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞（例えば、ＣＤ１９＋Ｂ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、樹状細胞（例えば、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１１ｂ－樹状細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、単球／マクロファージ（例えば、ＣＤ１１ｃ－ＣＤ１１ｂ＋単球／マクロファージ）である。一実施形態では、免疫細胞は、未成熟ＮＫ細胞（例えば、ＣＤ５６高未成熟ＮＫ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、活性化ＮＫ細胞（例えば、ＣＤ５６ＤＩＭ活性化ＮＫ細胞）である。一実施形態では、免疫細胞は、ＮＫ Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋ＣＤ５６＋ＮＫ Ｔ細胞）である。
一実施形態では、血清またはＣ１ｑの存在下で、少なくとも１５分間（エクスビボでの細胞のトランスフェクションに十分な時間であることが示されている）、免疫細胞をＬＮＰと接触させる。別の実施形態では、例えば、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間、免疫細胞をＬＮＰと接触させる。
一実施形態では、単回処置／トランスフェクションのために、免疫細胞をＬＮＰと接触させる。別の実施形態では、複数の処置／トランスフェクション（例えば、同じ細胞の２、３、４回またはそれ以上の処置／トランスフェクション）のために、免疫細胞をＬＮＰと接触させる。同じ細胞の反復トランスフェクションは、細胞生存率に影響を与えずに、トランスフェクトされる細胞のパーセンテージ及びトランスフェクトされた核酸によりコードされるタンパク質の発現レベルの用量依存的な増加をもたらすことが実証されている。
別の実施形態では、インビボの送達について、ＬＮＰを対象に投与することで、対象内の免疫細胞に核酸を送達することによって、免疫細胞をＬＮＰと接触させる。例えば、一実施形態では、ＬＮＰは、静脈内投与される。別の実施形態では、ＬＮＰは、筋肉内投与される。さらに他の実施形態では、ＬＮＰは、皮下、リンパ節内、及び腫瘍内からなる群から選択される経路で投与される。
一実施形態では、免疫細胞中の核酸分子の細胞内濃度が強化される。一実施形態では、免疫細胞中の核酸分子の活性が強化される。一実施形態では、免疫細胞中の核酸分子の発現が強化される。一実施形態では、核酸分子は、免疫細胞の活性化または活性を調節する。一実施形態では、核酸分子は、免疫細胞の活性化または活性を減少させる。
ある特定の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによる免疫細胞への核酸の送達は、例えば、対象への投与後にインビボで検出可能な量の免疫細胞への送達（例えば、ある特定のパーセンテージの免疫細胞への送達）をもたらす。いくつかの実施形態では、免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰは、免疫細胞の標的化部分を含まない（例えば、免疫細胞マーカーに対する特異性を有する抗体、またはＬＮＰを免疫細胞に標的化する受容体リガンドを含まない）。例えば、一実施形態では、免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰの投与は、単回静脈内注射後に、少なくとも約１５％の脾臓Ｔ細胞への核酸のインビボ送達をもたらす。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰの投与は、単回静脈内注射後に、少なくとも約１５％～２５％の脾臓Ｂ細胞への核酸のインビボ送達をもたらす。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰの投与は、単回静脈内注射後に、少なくとも約３５％～４０％の脾臓樹状細胞への核酸のインビボ送達をもたらす。別の実施形態では、免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰの投与は、単回静脈内注射後に、少なくとも約５％～２０％の骨髄細胞（大腿骨及び／または上腕骨）への核酸のインビボ送達をもたらす。本明細書で示される送達レベルにより、インビボの免疫療法が可能になる。
一実施形態では、免疫細胞による核酸分子の取り込みが強化される。取り込みは、当該技術分野において公知の方法によって判断することができる。例えば、会合／結合及び／または取り込み／内在化は、検出可能に標識された、例えば、蛍光標識されたＬＮＰを用いて、様々なインキュベーション期間後に免疫細胞内または上のこのようなＬＮＰの位置を追跡することによって評価され得る。加えて、数理モデル、例えば、Ｒａｄｕ Ｍｉｈａｉｌａ，ｅｔ ａｌ．，（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｖｏｌ．７：２４６－２５５，２０１７、参照により本明細書に組み込まれる）に記載される常微分方程式（ＯＤＥ）ベースモデルにより、送達及び取り込みの定量化が可能になる。
別の実施形態では、核酸分子の機能または活性は、核酸分子の送達を示すものとして使用され得る。例えば、ｍＲＮＡの場合には、ある特定の割合の免疫細胞におけるタンパク質発現の増加は、その割合の細胞へのｍＲＮＡの送達を示すために測定することができる。当業者であれば、免疫細胞への他の核酸分子の送達を測定するための種々の方法が認識されるであろう。
一実施形態では、免疫細胞内の核酸分子によりコードされる免疫破壊因子の活性が強化される。一実施形態では、免疫細胞内の核酸分子によりコードされるタンパク質の発現が強化される。一実施形態では、タンパク質は、免疫細胞の活性化または活性を調節する。一実施形態では、タンパク質は、免疫細胞の活性化または活性を減少させる。
一実施形態では、様々な薬剤を使用して、細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、または樹状細胞）を標識し、その特異的免疫細胞集団への送達を測定することができる。例えば、ＬＮＰは、レポーター核酸（例えば、検出可能なレポータータンパク質をコードするｍＲＮＡ）を封入することができ、レポーター核酸の発現は、レポーター核酸が送達される細胞集団の標識化をもたらす。検出可能なレポータータンパク質の非限定例としては、高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）、及びルシフェラーゼが挙げられる。
免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによる免疫細胞への核酸の送達は、例えば、ＬＮＰと会合する／ＬＮＰにより封入される核酸によりコードされるタンパク質の発現を検出すること、またはＬＮＰと会合する／ＬＮＰにより封入される核酸により媒介される効果（例えば、生物学的効果）を検出することによって、インビトロまたはインビボで測定することができる。タンパク質検出について、タンパク質は、例えば、細胞表面タンパク質に特異的に結合する抗体を用いて免疫蛍光またはフローサイトメトリーにより検出可能な、例えば、細胞表面タンパク質であり得る。あるいは、検出可能なレポータータンパク質をコードするレポーター核酸を使用することができ、レポータータンパク質の発現は、当該技術分野において公知の標準方法により測定することができる。
本開示の方法は、様々な免疫細胞型に核酸分子を送達するのに有用である。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、及びマクロファージからなる群から選択される。
本方法は、例えば、脾臓、末梢血、及び／または骨髄内に位置する免疫細胞に核酸を送達するのに使用することができる。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、当該技術分野において公知の１つ以上のＴ細胞マーカー、典型的には、ＣＤ３の発現により同定することができる。さらなるＴ細胞マーカーには、ＣＤ４またはＣＤ８が含まれる。一実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞である。Ｂ細胞は、当該技術分野において公知の１つ以上のＢ細胞マーカー、典型的には、ＣＤ１９の発現により同定することができる。さらなるＢ細胞マーカーには、ＣＤ２４及びＣＤ７２が含まれる。一実施形態では、免疫細胞は、単球及び／または組織マクロファージである。単球及び／またはマクロファージは、当該技術分野において公知の１つ以上の単球及び／またはマクロファージマーカー、例えば、ＣＤ２、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、及び／またはＣＤ１６の発現により同定することができる。一実施形態では、免疫細胞は、樹状細胞である。樹状細胞は、当該技術分野において公知の１つ以上の樹状細胞マーカー、典型的には、ＣＤ１１ｃの発現により同定することができる。さらなる樹状細胞マーカーには、ＢＤＣＡ－１及び／またはＣＤ１０３が含まれる。
改善された脂質ベース組成物、例えば、本開示のＬＮＰは、例えば、２つ以上の異なるＬＮＰの投与によって、２つ以上の核酸分子を免疫細胞または免疫細胞の異なる集団に送達するのに有用である。一実施形態では、本開示の方法は、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを同時に、または連続して、免疫細胞に接触させること（または対象に投与すること）を含み、第１及び第２のＬＮＰは、同じかまたは異なる核酸分子を封入し、第１及び第２のＬＮＰは、成分としてフィトステロールを含む。他の実施形態では、本開示の方法は、第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを同時に、または連続して、免疫細胞に接触させること（または対象に投与すること）を含み、第１及び第２のＬＮＰは、同じかまたは異なる核酸分子を封入し、第１のＬＮＰは、成分としてフィトステロールを含み、第２のＬＮＰは、フィトステロールを欠いている。
免疫細胞活性を阻害する方法
本開示は、免疫細胞活性（例えば、Ｔ細胞活性、Ｂ細胞活性、ＮＫ細胞活性、樹状細胞活性、及び／またはマクロファージ活性）を阻害する方法を提供する。一実施形態では、免疫細胞活性は、インビトロで阻害される。別の実施形態では、免疫細胞活性は、例えば、対象、例えば、ヒト対象において、インビボで阻害される。一実施形態では、方法は、免疫細胞の活性が阻害されるように、免疫細胞破壊因子（例えば、ＴＣＤ、ＢＣＤ）をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）構築物を含む本開示の組成物（またはその脂質ナノ粒子、またはその医薬組成物）を免疫細胞に投与すること（例えば、対象に投与すること）を含む。一実施形態では、免疫細胞活性を阻害することは、免疫細胞増殖を阻害することを含む。一実施形態では、免疫細胞活性を阻害することは、サイトカイン産生を阻害することを含む。一実施形態では、免疫細胞活性を阻害することは、免疫グロブリン産生、例えば、抗原特異的抗体産生を阻害することを含む。
インビトロまたは対象内での免疫細胞活性の阻害は、免疫応答を評価するための当該技術分野で確立された、限定されないが、実施例に記載の方法を含む、様々な方法によって評価することができる。例えば、様々な実施形態では、阻害は、例えば、標準ＥＬＩＳＡによって、サイトカイン産生及び／または抗体産生のレベルを測定することによって、及び／または、当該技術分野において公知の標準方法によって細胞増殖を評価することによって評価される。
免疫細胞への送達を強化するため、本明細書に記載されるように、少なくとも１つの免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子内に封入される本開示のポリヌクレオチド組成物を、免疫細胞または対象に投与することができる。Ｂ細胞へのインビトロ送達について、Ｂ細胞は、実施例６に記載されるように事前に活性化することができる。
本開示の組成物は、有効量で対象に投与される。一般に、有効量の組成物は、細胞内でのコードされたポリペプチドの効率的な産生を可能にする。効率のための測定基準は、ポリペプチド翻訳（ポリペプチド発現によって示される）、ｍＲＮＡ分解のレベル、及び免疫応答指標を含み得る。
治療方法
対象内の免疫細胞活性を阻害する本開示の方法は、様々な臨床、予防または治療用途において使用することができる。例えば、方法は、異常な免疫活性を有する対象、例えば、自己免疫疾患、アレルギー疾患、または炎症反応に苦しんでいる対象における免疫応答（例えば、抗原特異的免疫応答）を阻害するために使用することができる。さらに、方法は、臓器移植レシピエントにおける移植拒絶反応を阻害し、例えば、骨髄移植レシピエントにおける移植片対宿主病を阻害するために使用することができる。さらに、方法は、免疫療法レジメンにおける免疫細胞活性を下方調節することで、治療目的のために刺激される免疫活性化の程度を制御するために使用することができる。特に、免疫療法レジメンが、免疫応答の過剰刺激をもたらし、有害な副作用をその結果として生じる状況では、本開示の免疫阻害方法は、免疫療法レジメンにより提供される免疫刺激の程度を「弱める（ｔａｍｐ ｄｏｗｎ）」ことで、この刺激からの有害な副作用を軽減するために使用することができる。
したがって、一態様では、本開示は、免疫応答の阻害を必要とする対象においてそれを行う方法であって、本開示の組成物（またはその脂質ナノ粒子、またはその医薬組成物）を対象に投与することを含む、方法に関する。方法は、１つ以上のさらなる薬剤、例えば、１つ以上のさらなる免疫阻害剤または免疫抑制剤を対象に投与することをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡ（複数可）、ナノ粒子、または医薬組成物は、患者に非経口的に投与される。特定の実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、ヒトである。様々な実施形態では、対象には、有効量のｍＲＮＡ（複数可）を提供する。
本開示の方法に従って処置することができる自己免疫疾患の非限定例としては、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む）、１型糖尿病、多発性硬化症、乾癬、グレーブス病、橋本甲状腺炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、糸球体腎炎、及び血管炎が挙げられる。
本開示の方法に従って調節することができる臨床免疫療法レジメンの非限定例としては、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、またはＰＤ－Ｌ１を標的にする薬剤）による処置、及びＣＡＲ－Ｔ細胞（養子Ｔ細胞移入免疫療法）による処置が挙げられる。
本開示の１つ以上のｍＲＮＡを含む医薬組成物は、任意の適切な経路によって対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、非経口（例えば、皮下、皮内、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液内、胸骨内、髄腔内、病巣内または頭蓋内注射ならびに任意の適切な注入技術）、経口、経皮または皮内、皮内、直腸内、膣内、局所（例えば、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／またはドロップによる）、粘膜、経鼻、口腔内、経腸、硝子体、腫瘍内、舌下、鼻腔内を含む経路、気管内注入、気管支注入、及び／または吸入により、経口スプレー及び／または粉末、鼻腔スプレー、及び／またはエアロゾルとして、及び／または門脈カテーテルを含む種々の経路のうち１つ以上によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内、筋肉内、皮内、動脈内、腫瘍内、皮下または吸入によって投与してもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、筋肉内投与される。しかしながら、本開示は、薬物送達の科学における可能性のある進歩を考慮に入れた任意の適切な経路による本開示の組成物の送達を包含する。一般に、最も適切な投与経路は、１つ以上のｍＲＮＡを含む医薬組成物の性質（例えば、血流及び胃腸管などの様々な身体環境におけるその安定性）、及び患者の状態（例えば、患者が特定の投与経路に耐えることができるか否か）を含む様々な要因に依存する。
ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、所定の用量中で、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇを送達するのに十分な投薬レベルで投与されてもよいが、１ｍｇ／ｋｇの用量では、対象の体重１ｋｇあたり１ｍｇのｍＲＮＡまたはナノ粒子が得られる。特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡまたはナノ粒子の約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇの用量が投与され得る。
いくつかの実施形態では、治療組成物中のＲＮＡポリヌクレオチドの投与量は、１用量あたり１～５μｇ、５～１０μｇ、１０～１５μｇ、１５～２０μｇ、１０～２５μｇ、２０～２５μｇ、２０～５０μｇ、３０～５０μｇ、４０～５０μｇ、４０～６０μｇ、６０～８０μｇ、６０～１００μｇ、５０～１００μｇ、８０～１２０μｇ、４０～１２０μｇ、４０～１５０μｇ、５０～１５０μｇ、５０～２００μｇ、８０～２００μｇ、１００～２００μｇ、１００～３００μｇ、１２０～２５０μｇ、１５０～２５０μｇ、１８０～２８０μｇ、２００～３００μｇ、３０～３００μｇ、５０～３００μｇ、８０～３００μｇ、１００～３００μｇ、４０～３００μｇ、５０～３５０μｇ、１００～３５０μｇ、２００～３５０μｇ、３００～３５０μｇ、３２０～４００μｇ、４０～３８０μｇ、４０～１００μｇ、１００～４００μｇ、２００～４００μｇ、または３００～４００μｇである。いくつかの実施形態では、免疫調節治療組成物は、皮内注射または筋肉内注射によって対象に投与される。いくつかの実施形態では、免疫調節治療組成物は、０日目に対象に投与される。いくつかの実施形態では、免疫調節治療組成物の第２の用量は、７日目、または１４日目または２１日目に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、２５マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、１０マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、３０マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、１００マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、５０マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、７５マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、１５０マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、４００マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、３００マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、２００マイクログラムの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される免疫調節治療組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡポリヌクレオチドは、遠位リンパ節と比較して局所リンパ節において１００倍高いレベルで蓄積する。他の実施形態では、免疫調節治療組成物は、化学的に修飾されており、他の実施形態では、免疫調節治療組成物は、化学的に修飾されていない。
いくつかの実施形態では、有効量は１～１００μｇの総用量である。いくつかの実施形態では、有効量は１００μｇの総用量である。いくつかの実施形態では、有効量は、対象に合計１回または２回投与される２５μｇの用量である。いくつかの実施形態では、有効量は、対象に合計２回投与される１００μｇの用量である。いくつかの実施形態では、この有効量は、１μｇ～１０μｇ、１μｇ～２０μｇ、１μｇ～３０μｇ、５μｇ～１０μｇ、５μｇ～２０μｇ、５μｇ～３０μｇ、５μｇ～４０μｇ、５μｇ～５０μｇ、１０μｇ～１５μｇ、１０μｇ～２０μｇ、１０μｇ～２５μｇ、１０μｇ～３０μｇ、１０μｇ～４０μｇ、１０μｇ～５０μｇ、１０μｇ～６０μｇ、１５μｇ～２０μｇ、１５μｇ～２５μｇ、１５μｇ～３０μｇ、１５μｇ～４０μｇ、１５μｇ～５０μｇ、２０μｇ～２５μｇ、２０μｇ～３０μｇ、２０μｇ～４０μｇ、２０μｇ～５０μｇ、２０μｇ～６０μｇ、２０μｇ～７０μｇ、２０μｇ～７５μｇ、３０μｇ～３５μｇ、３０μｇ～４０μｇ、３０μｇ～４５μｇ、３０μｇ～５０μｇ、３０μｇ～６０μｇ、３０μｇ～７０μｇ、３０μｇ～７５μｇの用量であり、対象に合計１回または２回、またはそれ以上投与され得る。
用量は、所望のレベルのｍＲＮＡ発現及び／または効果（例えば、治療効果）を得るために、１日に１回以上同じ量または異なる量で投与されてもよい。所望の投与量は、例えば、１日３回、１日２回、１日１回、隔日、３日ごと、毎週、２週間ごと、３週間ごと、または４週間ごとに送達されてもよい。ある特定の実施形態では、所望の投与量は、複数回投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４またはそれ以上の投与）を用いて送達され得る。例えば、ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、少なくとも２回投与され、ここで第２の用量は、第１の用量が投与された後、少なくとも１日、または少なくとも３日、または少なくとも７日、または少なくとも１０日、または少なくとも１４日、または少なくとも２１日、または少なくとも２８日、または少なくとも３５日、または少なくとも４２日、または少なくとも４８日経ってから投与される。ある特定の実施形態では、第１及び第２の用量は、それぞれ０日目及び２日目に、またはそれぞれ０日目及び７日目に、またはそれぞれ０日目及び１４日目に、またはそれぞれ０日目及び２１日目に、またはそれぞれ０日目及び４８日目に投与される。追加の投与量（すなわち、３回目の投与量、４回目の投与量など）は、最初の２回投与量が投与されたのと同じスケジュールで投与されてもまたは異なるスケジュールで投与されてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、第１及び第２の投与量は、７日間隔で投与され、次いで１回以上の追加投与量がその後毎週投与される。別の実施形態では、第１及び第２の投与量は７日間隔で投与され、次いで、２週間ごとに１回以上のさらなる投与量がその後に投与される。
いくつかの実施形態では、単回用量は、例えば、外科的手順の前もしくは後に、または急性の疾患、障害もしくは病態の場合、投与され得る。任意の特定の患者に対する具体的な治療上有効、予防上有効、またはそれ以外の適切な用量レベルは、もしあれば、治療される障害の重症度及び同定、使用された１つ以上のｍＲＮＡ、採用した特定の組成物、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別、及び食事、使用した特定の医薬組成物の投与時間、投与経路、及び排泄速度、処置期間、使用される特定の医薬組成物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物、医学の分野で周知の同様の要因を含む様々な要因に依存する。
いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、別の薬剤、例えば、別の治療剤、予防剤、及び／または診断剤と組み合わせて投与されてもよい。「と組み合わせて」とは、薬剤を同時に投与しなければならない、及び／または一緒に送達するために処方しなければならないことを示唆することを意図するものではないが、これらの送達方法は、本開示の範囲内である。例えば、１つ以上の異なるｍＲＮＡを含む１つ以上の組成物を組み合わせて投与してもよい。組成物は、１つ以上の他の所望の治療薬または医療手順と同時に、その前に、またはその後に投与されてもよい。一般に、各薬剤はその薬剤について決定された用量及び／またはタイムスケジュールで投与されるであろう。いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の組成物、またはそのイメージング、診断もしくは予防組成物の送達であって、それらのバイオアベイラビリティーを改善し、それらの代謝を低減及び／または改変し、それらの排泄を阻害し、及び／または体内でのそれらの分布を改変する薬剤と組み合わせた送達を包含する。
併用レジメンで使用する療法（治療薬または手順）の特定の組み合わせは、所望の治療薬及び／または手順の適合性、ならびに達成されるべき所望の治療効果を考慮に入れる。使用される療法が同じ障害に対して所望の効果を達成し得る（例えば、がんを処置するのに有用な組成物は、化学療法剤と同時に投与され得る）、またはそれらは異なる効果（例えば、有害作用の制御）を達成し得ることも理解される。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示は、個体における免疫応答を阻害するための、脂質ナノ粒子、及び任意の薬学的に許容される担体、または医薬組成物、ならびに脂質ナノ粒子または医薬組成物の投与の説明書を含む添付文書を備える容器を備えるキットを提供する。
任意の前述のまたは関連する態様では、本開示は、個体における免疫応答を阻害するための、脂質ナノ粒子、及び任意の薬学的に許容される担体、または医薬組成物、を含む医薬、ならびに脂質ナノ粒子または医薬の投与の説明書を含む添付文書を備える容器を備えるキットを提供する。
定義
「自己免疫障害」は、本明細書で使用する場合、白血球（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、単球、または樹状細胞）の作用を介して、１つ以上の内在性抗原、すなわち、１つ以上の自己抗原に対する病的免疫応答（例えば、持続時間及び／または大きさが病理学的）が、１つ以上の自己抗原を担持する細胞への直接の攻撃、免疫複合体形成、または局所炎症から生じ得る組織の損傷を結果として生じる病状を指す。自己免疫疾患は、自己抗原に対する免疫系活性化による炎症の増加によって特徴付けられる。
「同種移植（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）」、「同種移植（ｈｏｍｏｇｒａｆｔ）」及び「同種異系移植片」という用語は、異なる遺伝子型を有する同じ種のある個体から別の個体への臓器または組織の移植、例えば、死体、生体血縁、及び生体非血縁ドナーからの移植を指す。ある個体から同じ個体に移植された移植片は、「自家移植片」または「自己移植片」と呼ばれる。２つの遺伝的に同一または同系の個体間で移植された移植片は、「同系移植片」と呼ばれる。異なる種の個体間で移植された移植片は、「異種移植片」または「ゼノグラフト」と呼ばれる。
本明細書で使用する場合、「免疫応答」またはその等価物「免疫学的応答」という語句は、自己抗原または自己抗原の関連エピトープに向けられた細胞性（抗原特異的Ｔ細胞またはそれらの分泌産物によって媒介される）の発生を指す。細胞性免疫応答は、クラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣ分子と会合したポリペプチドエピトープの提示によって誘発されて、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞及び／またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する。応答はまた、他の成分の活性化を含み得る。
本明細書で使用する場合、「免疫細胞」という用語は、免疫応答に役割を果たす細胞を指し、リンパ球（例えば、Ｂ細胞及びＴ細胞）、ナチュラルキラー細胞、骨髄細胞（例えば、単球、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球、及び顆粒球）が挙げられる。
「免疫応答」とは、外来物質に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、この応答が、これらの物質及びそれらによって引き起こされる疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞または好中球）及びこれらの細胞のいずれかまたは肝臓によって産生される可溶性高分子（抗体、サイトカイン及び補体を含む）の作用によって媒介され、これは、進入する病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、癌性もしくは他の異常な細胞、または自己免疫もしくは病的炎症の場合には、正常なヒト細胞もしくは組織の選択的標的化、結合、損傷、破壊及び／またはそれらの脊椎動物の身体からの排除をもたらす。免疫反応には、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞またはＴｈ細胞（ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞など）の活性化または阻害、またはＴｒｅｇ細胞の阻害が含まれる。
「免疫療法」とは、免疫応答を誘導、増強、抑制またはそれ以外に修飾することを含む方法による、疾患に苦しむ対象、それを起こすリスクがある対象、またはその再発に悩む対象の治療を指す。
「自己免疫障害を発症する危険性がある」ヒトとは、自己免疫障害の家族歴（例えば、１つ以上の炎症性障害に対する遺伝的素因）を有するヒト、または１つ以上の自己免疫障害／自己抗体誘導性状態に曝露されたヒトを指す。例えば、志賀毒素に曝露されたヒトは、典型的ＨＵＳを発症する危険性がある。ある特定のがん（例えば、多発性骨髄腫または慢性リンパ性白血病などの液性腫瘍）を有するヒトは、ある特定の自己免疫溶血性疾患を発症する素因がある患者であり得る。例えば、ＰＣＨは、様々な感染症（例えば、梅毒）または非ホジキンリンパ腫などの新生物を辿り得る。別の例では、ＣＡＤは、ＨＩＶ感染、マイコプラズマ肺炎感染、非ホジキンリンパ腫、またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症と関連し得る。さらに別の例では、自己免疫溶血性貧血は、ヒト慢性リンパ性白血病の周知の合併症であり、疾患が進行したＣＬＬ患者のおよそ１１％は、ＡＩＨＡを発症する。３０％程度のＣＬＬは、ＡＩＨＡを発症する危険性があり得る。例えば、Ｄｉｅｈｌ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２５（１）：８０－９７及びＧｕｐｔａ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｌｅｕｋｅｍｉａ １６（１０）：２０９２－２０９５を参照されたい。
「自己免疫障害を有することが疑われる」ヒトは、自己免疫障害の１つ以上の症状を示すヒトである。自己免疫障害の症状は、特定の自己免疫障害の重篤度及び種類において変化し得、発赤、腫脹（例えば腫脹関節）、触れると温かい関節、関節痛、こわばり、関節機能の喪失、発熱、悪寒、疲労、活力消失、疼痛、発熱、蒼白、黄疸、蕁麻疹の皮膚の発疹、血色素尿症、ヘモグロビン血症、及び貧血（例えば、重度の貧血）、頭痛、食欲不振、筋硬直、不眠症、そう痒、鼻づまり、くしゃみ、咳、１つ以上の神経性の症状（めまい、発作または疼痛など）を含むが、これらに限定されない。上記のことから、全てのヒトが、「自己免疫障害を有することが疑われる」わけではないことが明らかである。
投与：本明細書で使用する場合、「投与する」とは、組成物を対象または患者に送達する方法を指す。投与方法は、身体の特定の領域または系に送達を標的化する（例えば、特異的に送達する）ために選択され得る。例えば、投与は、非経口（例えば、皮下、皮内、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液内、胸骨内、髄腔内、病巣内、または頭蓋内注射、ならびに任意の適切な注入技術）、経口、経皮、もしくは皮内、皮内、直腸内、膣内、局所用（例えば、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／またはドロップによる）、粘膜、鼻腔、口腔内、経腸、硝子体、腫瘍内、舌下、鼻腔内であってもよく、気管内注入、気管支注入、及び／または吸入によるものであってもよく、経口スプレー及び／または粉末、鼻腔スプレー、及び／またはエアロゾルとして、及び／または門脈カテーテルを通してであってもよい。
おおよそ、約：本明細書で使用する場合、「ほぼ、おおよそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約、ほぼ（ａｂｏｕｔ）」とは、１つ以上の目的の値に適用される場合、述べられた参照値と同様の値を指す。ある特定の実施形態では、「ほぼ、おおよそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約、ほぼ（ａｂｏｕｔ）」という用語は、特に明記しない限り、または文脈から明らかな場合を除き、いずれかの方向（超えるかまたは下回る）で、言及した参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以内におさまる値の範囲を指す（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。例えば、ＬＮＰの脂質成分中の所与の化合物の量という文脈において、「約、ほぼ（ａｂｏｕｔ）」は、列挙される値の＋／－５％を意味し得る。例えば、約４０％の所与の化合物を有する脂質成分を含むＬＮＰは、３０～５０％の化合物を含み得る。別の例では、少なくとも約１５％のＴ細胞への送達は、１０～２０％のＴ細胞への送達を含み得る。
がん：本明細書で使用する場合、「がん」とは、異常な及び／または未制御の細胞増殖を含む状態、例えば、Ｇ１進行が無秩序に制御されている細胞である。例示的な非限定的ながんとしては、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質性腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭癌及び下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、骨髄異形成症候群（難治性貧血及び難治性血球減少症を含む）、骨髄増殖性新生物または疾患（真性多血症、本態性血小板増多症及び原発性骨髄線維症を含む）、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部肉腫、基底及び扁平上皮癌、黒色腫、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、及びがん処置による二次がんが挙げられる。特定の実施形態では、がんは、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）または結腸直腸癌である。他の実施形態では、がんは、血液系癌または造血系癌である。
コンジュゲートされた：本明細書で使用する場合、「コンジュゲートされた」という用語は、２つ以上の部分に関して使用される場合、その部分が直接、または連結剤として働く１つ以上の追加の部分を介して物理的に会合または互いに結合して、構造が使用される条件下、例えば、生理学的条件下で、その部分が物理的に会合したままであるように十分に安定な構造を形成することを意味する。いくつかの実施形態では、２つ以上の部分が直接共有化学結合によってコンジュゲートされてもよい。他の実施形態では、２つ以上の部分がイオン結合または水素結合によってコンジュゲートされてもよい。
接触：本明細書で使用する場合、「接触する」という用語は、２つ以上の実体の間の物理的接続を確立することを意味する。例えば、細胞をｍＲＮＡまたは脂質ナノ粒子組成物と接触させることは、その細胞及びｍＲＮＡまたは脂質ナノ粒子が物理的結合を共有するように作られることを意味する。インビボ、インビトロで、及びエクスビボの両方で細胞を外部実体と接触させる方法は、生物学的分野において周知である。本開示の例示的な実施形態では、哺乳動物細胞を組成物（例えば、本開示のナノ粒子、または医薬組成物）と接触させるステップはインビボで行われる。例えば、脂質ナノ粒子組成物と生物（例えば、哺乳動物）内に配置され得る細胞（例えば、哺乳動物細胞）とを接触させることは、任意の適切な投与経路（例えば、静脈内、筋肉内、皮内及び皮下投与を含む、生物への非経口投与）によって行われ得る。インビトロで存在する細胞の場合、例えば、組成物を細胞の培地に添加することによって組成物（例えば、脂質ナノ粒子）と細胞とを接触させてもよく、トランスフェクションを伴う場合もあるし、生じる場合もある。さらに、２つ以上の細胞がナノ粒子組成物によって接触されてもよい。
送達：本明細書で使用する場合、用語「送達」は、目的地に実体を提供することを意味する。例えば、対象への治療薬及び／または予防薬の送達は、治療薬及び／または予防薬を含むＬＮＰを対象に投与すること（例えば静脈内、筋肉内、皮内、または皮下経路による）を含んでもよい。哺乳動物または哺乳動物細胞へのＬＮＰの投与は、１つまたは複数の細胞と、脂質ナノ粒子とを接触させることを含んでもよい。
封入する：本明細書で使用する場合、「封入する」という用語は、包み込む、囲む、または内包することを意味する。いくつかの実施形態では、化合物、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、または他の組成物は、完全に封入されていても、部分的に封入されていても、または実質的に封入されていてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子、例えば、リポソーム中に封入されてもよい。
封入効率：本明細書で使用する場合、「封入効率」とは、ＬＮＰの調製において使用される治療薬及び／または予防薬の初期総量と比較して、ＬＮＰの一部になる治療薬及び／または予防薬の量を指す。例えば、組成物に最初に提供される合計１００ｍｇの治療薬及び／または予防薬のうち、９７ｍｇの治療薬及び／または予防薬がＬＮＰ中に封入される場合、封入効率は、９７％として与えることができる。本明細書で使用する場合、「封入」は、完全、実質的、または部分的な封止、閉じ込め、包囲、または内包を指し得る。
強化送達：本明細書で使用する場合、「強化送達」という用語は、目的の標的細胞（例えば、免疫細胞）への対照ナノ粒子による核酸（例えば、治療薬及び／または予防薬ｍＲＮＡ）の送達のレベルと比較して、目的の標的細胞（例えば、免疫細胞）へのナノ粒子による核酸（例えば、治療薬及び／または予防薬ｍＲＮＡ）の、より多い（例えば、少なくとも１０％多い、少なくとも２０％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも４０％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも１．５倍多い、少なくとも２倍多い、少なくとも３倍多い、少なくとも４倍多い、少なくとも５倍多い、少なくとも６倍多い、少なくとも７倍多い、少なくとも８倍多い、少なくとも９倍多い、少なくとも１０倍多い）送達を意味する。例えば、本開示の免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによる「強化送達」は、免疫細胞送達増強脂質を欠いている同じＬＮＰとの比較によって評価することができる。特定の細胞（例えば、免疫細胞）への免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰの送達レベルは、（例えば、フローサイトメトリーを用いた平均蛍光強度によって）フィトステロール含有ＬＮＰ対免疫細胞送達増強脂質を欠いている同じＬＮＰを用いて、標的細胞中で産生されたタンパク質の量を比較すること、（例えば、定量的フローサイトメトリーによって）免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰ対免疫細胞送達増強脂質を欠いている同じＬＮＰを用いて、トランスフェクトされた標的細胞の％を比較すること、または免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰ対免疫細胞送達増強脂質を欠いている同じＬＮＰを用いて、標的細胞中の治療薬及び／または予防薬の量をインビボで比較することによって測定され得る。ナノ粒子の標的細胞への強化送達が、治療される対象において決定される必要はなく、動物モデル（例えば、マウスまたは非ヒト霊長類モデル）などの代理において決定され得ることが理解されよう。例えば、免疫細胞への強化送達を決定するために、マウスまたはＮＨＰモデルを使用することができ、免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによる目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡの送達は、免疫細胞送達増強脂質を欠いている同じＬＮＰと比較して、免疫細胞（例えば、脾臓、末梢血、及び／または骨髄）中で評価することができる（例えば、フローサイトメトリー、顕微鏡検査法など）。
有効量：本明細書で使用する場合、ある因子の「有効量」という用語は、有益なまたは所望の結果、例えば、臨床結果をもたらすのに十分な量であり、したがって、「有効量」とは、それが関係する文脈次第である。例えば、本開示の脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）中の免疫細胞送達増強脂質の量という文脈において、有効量の免疫細胞送達増強脂質は、免疫細胞送達増強脂質を欠いている脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）と比較して、有益または所望の結果をもたらすのに十分な量である。脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）によってもたらされる有益または所望の結果の非限定例としては、トランスフェクトされた細胞のパーセンテージの増加、及び／または脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）と会合する／脂質組成物（例えば、ＬＮＰ）によって封入された核酸によってコードされるタンパク質の発現レベルの増加が挙げられる。有効量の脂質ナノ粒子が対象内の免疫細胞に取り込まれるように、免疫細胞送達増強脂質を含有する脂質ナノ粒子を投与することという文脈において、有効量の免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰは、免疫細胞送達増強脂質を欠いているＬＮＰと比較して、有益または所望の結果をもたらすのに十分な量である。対象内の有益または所望の結果の非限定例としては、免疫細胞送達増強脂質を欠いているＬＮＰと比較して、トランスフェクトされた細胞のパーセンテージの増加、免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰと会合する／免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによって封入される核酸によってコードされるタンパク質の発現レベルの増加、及び／または免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰと会合する／免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰによって封入される核酸またはそのコードタンパク質の予防または治療効果のインビボの増加が挙げられる。いくつかの実施形態では、治療有効量の免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰは、感染、疾患、障害、及び／または病態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象に投与した場合、感染、疾患、障害、及び／または病態を治療する、その症状を改善する、その発症を診断する、予防する、及び／または遅らせるのに十分である。別の実施形態では、有効量の脂質ナノ粒子は、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％またはそれ以上の免疫細胞における所望のタンパク質の発現をもたらすのに十分である。例えば、有効量の免疫細胞送達増強脂質を含有するＬＮＰは、単回静脈内注射後に、少なくとも５％、１０％または１５％の脾臓Ｔ細胞、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％または２５％の脾臓Ｂ細胞、及び／または少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％または４０％の脾臓樹状細胞のトランスフェクションをもたらす量であり得る。
発現：本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」とは、以下の事象のうちの１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からの（例えば、転写による）ＲＮＡテンプレートの生成；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシングによる）；（３）ＲＮＡのポリペプチドまたはタンパク質への翻訳であり；ならびに（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。
エクスビボ：本明細書で使用する場合、用語「エクスビボ」とは、生物（例えば動物、植物、もしくは微生物またはその細胞もしくは組織）の外部で起こる事象を指す。エクスビボでの事象は、天然の（例えば、インビボ）環境から最小限に変化した環境中で起こってもよい。
断片：「断片」とは、本明細書において用いる場合、ある部分を指す。例えば、タンパク質の断片は、培養細胞から単離された全長タンパク質を消化することによって得られるか、または組換えＤＮＡ技術によって得られるポリペプチドを含んでもよい。タンパク質の断片がタンパク質の機能的活性を保持するように、タンパク質の断片は、例えば、１つ以上の機能的ドメインを含むタンパク質の部分であり得る。
ＧＣリッチ：本明細書で使用する場合、「ＧＣリッチ」という用語は、グアニン（Ｇ）、及び／またはシトシン（Ｃ）核酸塩基を含む、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）、またはその任意の部分（例えば、ＲＮＡ要素）の核酸塩基組成物、またはその誘導体もしくは類似体（ここで、ＧＣ含有量は、約５０％を超える）を指す。「ＧＣリッチ」という用語は、限定するものではないが、遺伝子、非コード領域、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、ＲＮＡ要素、配列モチーフ、またはそれらの任意の個別の配列、断片、もしくはセグメント（約５０％のＧＣ含有量を含む）を含む、ポリヌクレオチドの全部または一部を指す。本開示のいくつかの実施形態では、ＧＣリッチのポリヌクレオチド、またはその任意の部分は、グアニン（Ｇ）、及び／またはシトシン（Ｃ）核酸塩基のみから構成される。
ＧＣ含量：本明細書で使用する場合、「ＧＣ含有量」という用語は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）またはその一部（例えば、ＲＮＡ要素）の中の核酸塩基（グアニン（Ｇ）、及びシトシン（Ｃ）核酸塩基、またはその誘導体もしくは類似体のいずれかである）の割合を指す（ＤＮＡ中及びＲＮＡ中の、アデニン（Ａ）、及びチミン（Ｔ）もしくはウラシル（Ｕ）ならびにそれらの誘導体もしくは類似体を含む可能性のある核酸塩基の総数から）である。「ＧＣ含量」という用語は、限定するものではないが、遺伝子、非コード領域、５’または３’ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、ＲＮＡ要素、配列モチーフ、またはそれらの任意の別個の配列、断片、もしくはセグメントを含むポリヌクレオチドの全部または一部を指す。
異種：本明細書で使用する場合「異種」とは、配列（例えば、アミノ酸配列またはアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド）が通常、所与のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに存在しないことを示す。例えば、あるタンパク質のドメインまたはモチーフに相当するアミノ酸配列は、第２のタンパク質に対して異種であってもよい。
単離された：本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、それが関連した（自然界でも実験環境でも）構成要素の少なくともいくつかから分離されている物質または実体を指す。単離された物質は、それらが関連している物質に関連して様々なレベルの純度を有し得る。単離された物質及び／または実体は、それらが最初に関連していた他の構成要素の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれ以上から分離され得る。いくつかの実施形態では、単離された因子は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超純粋である。本明細書において用いる場合、他の構成要素を実質的に含まないならば、その物質は「純粋」である。
Ｋｏｚａｋ配列：「Ｋｏｚａｋ配列」（「Ｋｏｚａｋコンセンサス配列」とも呼ばれる）という用語は、遺伝子またはオープンリーディングフレームの発現を増強するための翻訳開始エンハンサー要素を指し、これは、真核生物においては５’ＵＴＲに位置する。プレプロインスリン遺伝子の翻訳に対する開始コドン（ＡＵＧ）を囲む単一の変異の影響の分析に続いて、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列はもともと配列ＧＣＣＲＣＣ（Ｒ＝プリン）として定義された（Ｋｏｚａｋ（１９８６）Ｃｅｌｌ ４４：２８３－２９２）である。本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列、またはその誘導体もしくは改変体を含む。（翻訳エンハンサー組成物及びその使用方法の例、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＡｎｄｒｅｗｓらの米国特許第５，８０７，７０７号であり；その全体が参照により本明細書に組み込まれるＣｈｅｒｎａｊｏｖｓｋｙの米国特許第５，７２３，３３２号であり；その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｉｌｓｏｎの米国特許第５，８９１，６６５号を参照されたい）である。
リーキースキャニング：「リーキースキャニング」として知られる現象が起こり得、それによってＰＩＣは開始コドンを迂回し、代わりに、代替のまたは代わりの開始コドンが認識されるまで下流へのスキャニングを続ける。発生頻度に応じて、ＰＩＣによる開始コドンの迂回は、翻訳効率の低下をもたらし得る。さらに、この下流のＡＵＧコドンからの翻訳が起こり得るが、それは所望の処置反応を引き出すことができないかもしれない、所望されない、異常な翻訳産物の産生をもたらすであろう。ある場合、異常な翻訳産物が実際に有害な反応を生じ得る（Ｋｒａｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｎａｔ Ｍｅｄ ２３（４）：５０１－５０７）である。
リポソーム：本明細書で使用する場合、「リポソーム」とは、水性内部を囲む脂質含有膜を含む構造を意味する。リポソームは、１つ以上の脂質膜を有してもよい。リポソームとしては、単層リポソーム（ｓｉｎｇｌｅ－ｌａｙｅｒｅｄ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）（当該技術分野において単層リポソーム（ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）としても知られている）、及び多層リポソーム（ｍｕｌｔｉ－ｌａｙｅｒｅｄ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）（当該技術分野において多層リポソーム（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）としても知られている）が挙げられる。
転移：本明細書で使用する場合、「転移」という用語は、がんが最初に発生した場所から原発腫瘍として身体内の離れた場所に拡がる過程を意味する。このプロセスの結果として生じた二次腫瘍は、「転移」と呼ばれる場合もある。
修飾：本明細書で使用される「修飾された」または「修飾」とは、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の変化した状態または組成もしくは構造の変化を指す。ポリヌクレオチドは、様々な方法で、例えば、化学的に、構造的に、及び／または機能的に修飾され得る。例えば、ポリヌクレオチドは、１つ以上の機能（例えば、翻訳制御活性）を提供する配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含む、１つ以上のＲＮＡ要素の組み込みによって構造的に修飾されてもよい。したがって、本開示のポリヌクレオチドは、１つ以上の修飾（例えば、１つ以上の化学的修飾、構造的修飾、または機能的修飾（それらの任意の組み合わせを含む）を含み得る）から構成されてもよい。
修飾された：本明細書で使用する場合、「修飾された」とは、本開示の分子の状態または構造の変化を指す。化学的、構造的、及び機能的などの多くの方法で分子を修飾することができる。一実施形態では、本開示のｍＲＮＡ分子は、例えば、それが天然のリボヌクレオチド、Ａ、Ｕ、Ｇ及びＣに関する場合、非天然ヌクレオシド及び／またはヌクレオチドの導入によって修飾される。キャップ構造などの非標準ヌクレオチドは、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕリボヌクレオチドの化学構造とは異なるが、「修飾された」とは考えられない。
ｍＲＮＡ：本明細書で使用する場合、「ｍＲＮＡ」とは、メッセンジャーリボ核酸を指す。ｍＲＮＡは、天然のものであっても、天然のものでなくてもよい。例えば、ｍＲＮＡは、１つ以上の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーなどの修飾された構成要素を含んでも、及び／または天然に存在しない構成要素を含んでもよい。ｍＲＮＡは、キャップ構造、鎖終結ヌクレオシド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでもよい。ｍＲＮＡは、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有し得る。ｍＲＮＡの翻訳、例えば、哺乳動物細胞内でのｍＲＮＡのインビボ翻訳は、ポリペプチドを産生し得る。伝統的に、ｍＲＮＡ分子の基本的な構成要素としては、少なくともコード領域、５’－非翻訳領域（５’－ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、５’キャップ及びポリＡ配列が挙げられる。
ナノ粒子：本明細書で使用する場合、「ナノ粒子」とは、同じ材料のバルク試料と比較して新規な特性を示す、約１０００ｎｍ未満のスケールのいずれか１つの構造的特徴を有する粒子を指す。通常、ナノ粒子は、約５００ｎｍ未満、約２００ｎｍ未満、または約１００ｎｍのスケールでいずれか１つの構造的特徴を有する。また、通常、ナノ粒子は、約５０ｎｍ～約５００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、または約７０～約１２０ｎｍのスケールのいずれか１つの構造的特徴を有する。例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約１～１０００ｎｍ程度の１つ以上の寸法を有する粒子である。他の例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約１０～５００ｎｍ程度の１つ以上の寸法を有する粒子である。他の例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約５０～２００ｎｍ程度の１つ以上の寸法を有する粒子である。球状ナノ粒子は、例えば、約５０～１００または７０～１２０ナノメートルの直径を有するであろう。ナノ粒子は、ほとんどの場合、その輸送と特性の観点から１つの単位として挙動を示す。ナノ粒子を対応するバルク材料と区別する新規な特性は、典型的には１０００ｎｍ未満のサイズスケール、または約１００ｎｍのサイズで発達するが、ナノ粒子は、例えば、長楕円形、管状などの粒子の場合、より大きなサイズであり得ることに留意されたい。大部分の分子のサイズは上記の概要に適合するが、個々の分子は通常ナノ粒子とは呼ばれない。
核酸：本明細書で使用する場合、「核酸」という用語はその最も広い意味で使用され、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／または物質を包含する。これらのポリマーは、しばしばポリヌクレオチドと呼ばれる。本開示の例示的な核酸またはポリヌクレオチドとしては、限定するものではないが、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒性ＤＮＡ、三重らせん形成を誘導するＲＮＡ、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ、例としては、β－Ｄ－リボ立体配置を有するＬＮＡ、α－Ｌ－リボ立体配置を有するα－ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’－アミノ官能化を有する２’－アミノ－ＬＮＡ、及び２’－アミノ官能化を有する２’－アミノ－α－ＬＮＡ）またはそれらのハイブリッドが挙げられる。
核酸構造：本明細書で使用する場合、「核酸構造」（「ポリヌクレオチド構造」と互換可能に使用される）」という用語は、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）に含まれる、原子、化学成分、要素、モチーフ、及び／または連結ヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体の配列の配置または編成を指す。この用語は、核酸の二次元または三次元の状態も指す。したがって、「ＲＮＡ構造」という用語は、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）に含まれる、原子、化学成分、要素、モチーフ、及び／または連結ヌクレオチドまたはその誘導体もしくは類似体の配列の配置または編成を指し、及び／またはＲＮＡ分子の二次元及び／または三次元の状態を指す。核酸構造は、編成上の複雑さの増大に基づいて、本明細書で「分子構造」、「一次構造」、「二次構造」、及び「三次構造」と称される４つの編成分類にさらに分類され得る。
核酸塩基：本明細書で使用する場合、「核酸塩基」という用語（あるいは「ヌクレオチド塩基」または「窒素含有塩基」）とは、核酸またはその一部もしくはセグメントに対する改善された特性（例えば、結合親和性、ヌクレアーゼ耐性、化学的安定性）を付与する、天然に存在するプリン及びピリミジンの任意の誘導体または類似体を含む、核酸中に見られるプリンまたはピリミジン複素環式化合物を指す。アデニン、シトシン、グアニン、チミン、及びウラシルは、主に天然核酸に見られる核酸塩基である。当該技術分野において公知であるか、及び／または本明細書に記載されるような他の天然、非天然及び／または合成核酸塩基を核酸に組み込んでもよい。
ヌクレオシド／ヌクレオチド：本明細書で使用する場合、「ヌクレオシド」という用語は、核酸塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはそれらの誘導体もしくは類似体（本明細書では「核酸塩基」とも呼ばれる）に共有結合した糖分子（例えば、ＲＮＡ中のリボースまたはＤＮＡ中のデオキシリボース）、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含むが、ヌクレオシド間連結基（例えば、リン酸基）を欠く化合物を指す。本明細書で使用する場合、「ヌクレオチド」という用語は、核酸またはその一部もしくはセグメントに対する、化学的及び／または機能的特性（例えば、結合親和性、ヌクレアーゼ耐性、化学的安定性）の改善を付与する、ヌクレオシド間連結基（例えば、リン酸基）に共有結合したヌクレオシド、またはその任意の誘導体、類似体もしくは修飾を指す。
オープンリーディングフレーム：本明細書で使用する場合、「オープンリーディングフレーム」という用語（「ＯＲＦ」と略される）は、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子のセグメントまたは領域を指す。ＯＲＦは、開始コドンで始まり終止コドンで終わる連続した一続きの重ならないインフレームコドンを含み、リボソームによって翻訳される。
患者：本明細書で使用する場合、「患者」とは、処置を求めているかもしくは処置を必要とするか、処置が必要であるか、処置を受けているか、処置を受ける対象、または特定の疾患もしくは状態に関して訓練を受けた専門家による治療中の対象を指す。特定の実施形態では、患者は、ヒト患者である。いくつかの実施形態では、患者は、がん（例えば、肝臓癌または結腸直腸癌）に罹患している患者である。
薬学的に許容される：「薬学的に許容される」という語句は、健全な医学的判断の範囲内で、合理的な利益／危険率に見合った、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症がなく、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに適している化合物、材料、組成物及び／または剤形を指すように本明細書で使用される。
薬学的に許容される賦形剤：本明細書で使用する場合「薬学的に許容される賦形剤」という句は、本明細書に記載の化合物以外の任意の構成要素（例えば、活性化合物を懸濁または溶解し得るビヒクル）であって、患者において、実質的に無毒かつ非炎症性であるという特性を有する構成要素を指す。賦形剤としては、例えば：付着防止剤、酸化防止剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、色素（着色剤）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、フィルム形成剤またはコーティング剤、香料、芳香剤、流動促進剤（流動増強剤）、潤滑剤、防腐剤、印刷インキ、吸収剤、懸濁剤または分散剤、甘味料、及び水和水が挙げられ得る。例示的な賦形剤としては、限定するものではないが、以下が挙げられる：ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶性セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、レチニルパルミテート、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、ナトリウムグリコール酸デンプン、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールである。
薬学的に許容される塩：本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」とは、既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することによって（例えば、遊離の塩基基と適切な有機酸とを反応させることによって）親化合物が修飾される開示された化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、限定するものではないが、アミンなどの塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩であり；カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩であり；などが挙げられる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシルスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム塩、リチウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩など、ならびに無毒性アンモニウム塩、第四級アンモニウム塩及びアミンカチオンの塩が挙げられ、これらには、限定するものではないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどの塩を含む。本開示の薬学的に許容される塩としては、例えば、無毒性の無機または有機の酸から形成された親化合物の従来の無毒性の塩が挙げられる。本開示の薬学的に許容される塩は、塩基性部分または酸性部分を含む親化合物から、従来の化学的方法によって合成され得る。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を化学量論的量の適当な塩基または酸と、水中もしくは有機溶媒中、またはその２つの混合物中で反応させることによって調製され得る（一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい）である。適切な塩の列挙は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８、及びＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１－１９（１９７７）（その各々がその全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に見出される。
ポリペプチド：本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」または「目的のポリペプチド」という用語は、天然に（例えば、単離または精製され）または合成によって産生され得るペプチド結合によって典型的に連結されるアミノ酸残基のポリマーを指す。
開始前複合体（ＰＩＣ）：本明細書で使用する場合、「開始前複合体」という用語（あるいは「４３Ｓ開始前複合体」であり；「ＰＩＣ」と略される）は、４０Ｓリボソームサブユニット、真核生物開始因子（ｅＩＦ１、ｅＩＦ１Ａ、ｅＩＦ３、ｅＩＦ５）、及びｅＩＦ２－ＧＴＰ－Ｍｅｔ－ｔＲＮＡｉＭｅｔ三元複合体（これは本質的にｍＲＮＡ分子の５’キャップに結合し得、結合後に５’ＵＴＲのリボソームスキャニングを行い得る）を含むリボ核タンパク質複合体を指す。
ＲＮＡ：本明細書で使用する場合、「ＲＮＡ」は、天然に存在するかまたは天然に存在しないリボ核酸を指す。例えば、ＲＮＡは、１つ以上の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーなどの修飾された及び／または天然に存在しない成分を含み得る。ＲＮＡは、キャップ構造、鎖終止ヌクレオシド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。ＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有し得る。例えば、ＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であり得る。特定のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの翻訳、例えば、哺乳動物細胞内のｍＲＮＡのインビボ翻訳は、コードされたポリペプチドを生成し得る。ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、長い非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる非限定的な群から選択され得る。
ＲＮＡ要素：本明細書で使用する場合、「ＲＮＡ要素」という用語は、生物学的機能を提供するか、及び／または生物学的活性（例えば、翻訳制御活性）を有するＲＮＡ分子の部分、断片、またはセグメントを指す。本明細書に記載のものなどの１つ以上のＲＮＡ要素の組み込みによるポリヌクレオチドの修飾は、修飾されたポリヌクレオチドに１つ以上の望ましい機能的特性を提供する。本明細書に記載のＲＮＡ要素は、天然に存在するものであっても、天然に存在しないものであっても、合成であっても、遺伝子操作であっても、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。例えば、調節活性を提供する天然に存在するＲＮＡ要素としては、ウイルス、原核生物及び真核生物（例えば、ヒト）のトランスクリプトーム全体に見られる要素が挙げられる。ＲＮＡ要素、特に真核生物ｍＲＮＡ及び翻訳されたウイルスＲＮＡは、細胞内の多くの機能を媒介することに関与していることが示されている。例示的な天然のＲＮＡ要素としては、限定するものではないが、翻訳開始要素（例えば、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、Ｋｉｅｆｔ ｅｔ ａｌ．，（２００１）ＲＮＡ７（２）：１９４～２０６を参照）、翻訳エンハンサー要素（例えば、ＡＰＰ ｍＲＮＡ翻訳エンハンサー要素、Ｒｏｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７４（１０）：６４２１－６４３１を参照されたい）、ｍＲＮＡ安定性要素（例えば、ＡＵリッチ要素（ＡＲＥ）、Ｇａｒｎｅａｕ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８（２）：１１３－１２６を参照されたい）、翻訳抑制要素（例えば、Ｂｌｕｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｍｅｃｈ Ｄｅｖ１１０（１－２）：９７－１１２を参照されたい）、タンパク質結合ＲＮＡ要素（例えば、鉄応答要素、Ｓｅｌｅｚｎｅｖａ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ４２５（１８）：３３０１－３３１０を参照されたい）、細胞質ポリアデニル化要素（Ｖｉｌｌａｌｂａ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ ２１（４）：４５２－４５７）、及び触媒性ＲＮＡ要素（例えば、リボザイム、Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １７８９（９－１０）：６３４－６４１を参照されたい）が挙げられる。
滞留時間：本明細書で使用する場合、「滞留時間」という用語は、ｍＲＮＡ分子に沿った別々の位置または場所での開始前複合体（ＰＩＣ）またはリボソームの占有時間を指す。
特異的送達：本明細書で使用する場合、「特異的送達」、「特異的に送達する」、または「特異的に送達すること」という用語は、オフターゲット細胞（例えば、非免疫細胞）と比較して、目的の標的組織（例えば、哺乳動物の免疫細胞）へのナノ粒子による治療薬及び／または予防薬の、より多い（例えば、少なくとも１０％多い、少なくとも２０％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも４０％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも１．５倍多い、少なくとも２倍多い、少なくとも３倍多い、少なくとも４倍多い、少なくとも５倍多い、少なくとも６倍多い、少なくとも７倍多い、少なくとも８倍多い、少なくとも９倍多い、少なくとも１０倍多い）送達を意味する。特定の組織へのナノ粒子の送達のレベルは、（例えば、フローサイトメトリーを用いた平均蛍光強度によって）標的細胞対非標的細胞中で産生されたタンパク質の量を比較すること、（例えば、定量的フローサイトメトリーによって）タンパク質を発現する標的細胞対非標的細胞の％を比較すること、標的細胞対非標的細胞中で産生されたタンパク質の量を前記標的細胞対非標的細胞中のタンパク質の総量と比較すること、または標的細胞対非標的細胞中の治療薬及び／または予防薬の量を前記標的細胞対非標的細胞中の治療薬及び／または予防薬の総量と比較することによって測定され得る。標的組織に特異的に送達するナノ粒子の能力が、治療される対象において決定される必要はなく、動物モデル（例えば、マウスまたはＮＨＰモデル）などの代理において決定され得ることが理解されよう。例えば、免疫細胞への特異的送達を決定するために、マウスまたはＮＨＰモデル（例えば、実施例に記載される）を使用することができ、目的のタンパク質をコードするｍＲＮＡの送達は、標準方法（例えば、フローサイトメトリー、顕微鏡検査法など）による非免疫細胞と比較して、免疫細胞（例えば、脾臓、末梢血、及び／または骨髄）中で評価することができる。
実質的に：本明細書で使用する場合、「実質的に」という用語は、目的のある特徴または特性の全体的またはほぼ全体的な度合もしくは程度を示す定性的状態を指す。生物学的分野の当業者は、生物学的及び化学的現象が、完成するまで進行するか、及び／または完全になるか、または絶対的な結果を達成もしくは回避する場合があっても、めったにないことを理解するであろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物学的及び化学的現象に固有の完全性の潜在的な欠如を捉えるために本明細書で使用される。
罹患している：疾患、障害、及び／または病態に「罹患している」個体は、疾患、障害、及び／または病態の１つ以上の症状と診断されているか、またはそれらの症状を示している。
標的細胞：本明細書で使用する場合、「標的細胞」とは、目的の任意の１つまたは複数の細胞を指す。この細胞を、インビトロ、インビボ、インサイチュ、または生物の組織もしくは器官中に見出すことができる。生物は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト、最も好ましくは患者であってもよい。標的免疫細胞には、例えば、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１９＋Ｂ細胞及びＣＤ１１ｃ＋樹状細胞、ならびに単球、組織マクロファージ、及び骨髄細胞（例えば、骨髄内の免疫細胞、造血幹細胞、免疫細胞前駆体、及び線維芽細胞）が含まれる。
標的化部分：本明細書で使用する場合、「標的化部分」とは、ナノ粒子を特定の細胞、組織、及び／または器官型に標的化し得る化合物または薬剤である。
治療剤：「治療剤」という用語は、対象に投与したときに、治療的、診断的、及び／もしくは予防的効果を有するか、ならびに／または所望の生物学的効果及び／もしくは薬理学的効果を引き出す任意の薬剤を指す。
トランスフェクション：本明細書で使用する場合、「トランスフェクション」という用語は、種（例えば、ｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド）を細胞に導入するための方法をいう。
翻訳制御活性：本明細書で使用する場合、「翻訳制御活性」という用語（「翻訳調節機能」と交換可能に使用される）は、ＰＩＣ及び／またはリボソームの活性を含む翻訳装置の活性を調節する（例えば、調節する、影響する、制御する、変化させる）生物学的な機能、機構、またはプロセスを指す。いくつかの態様では、所望の翻訳制御活性は、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を促進及び／または増強する。いくつかの態様では、所望の翻訳制御活性は、リーキースキャニングを低減及び／または阻害する。対象：本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、例えば、実験的、診断的、予防的及び／または治療的な目的のために、本開示による組成物が投与され得る任意の生物を指す。典型的な対象としては動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及びヒトなどの哺乳動物）、及び／または植物が挙げられる。いくつかの実施形態では、対象は、患者であり得る。
治療：本明細書で使用する場合、「処置する」という用語は、特定の感染、疾患、障害、及び／または病態の１つ以上の症状または特徴を、部分的または完全に緩和、軽減、改善、救済、発症の遅延、進行の抑制、重症度の低下、及び／またはその頻度の低減を指す。例えば、がんを「処置する」とは、腫瘍の生存、成長、及び／または拡大を阻害することを指す場合がある。疾患、障害、及び／または病態に関連する病理の発症の危険性を減少させる目的で、疾患、障害、及び／または病態の徴候を示さない対象に対して、及び／または疾患、障害、及び／または病態の初期徴候のみを示す対象に対して、処置を施してもよい。
予防：本明細書で使用する場合、「予防する」という用語は、特定の感染、疾患、障害、及び／または病態の１つ以上の症状または特徴の発症を部分的または完全に阻害することを指す。
腫瘍：本明細書で使用する場合、「腫瘍」とは、良性または悪性にかかわらず、組織の異常な増殖である。
未修飾：本明細書で使用する場合、「未修飾」とは、何らかの形で変更される前の任意の物質、化合物または分子を指す。未修飾とは、必ずしもそうとは限らないが、野生型または天然型の生体分子を指すことがある。分子は一連の修飾を受けてもよく、それにより各修飾分子は、その後の修飾のための「未修飾」出発分子として役立ち得る。
ウリジン含有量：「ウリジン含有量」または「ウラシル含有量」という用語は互換的であり、特定の核酸配列中に存在するウラシルまたはウリジンの量を指す。ウリジン含有量またはウラシル含有量は、絶対値（配列中のウリジンまたはウラシルの総数）または相対値（核酸配列中の核酸塩基の総数に対するウリジンまたはウラシルの割合）として表され得る。
ウリジン修飾配列：「ウリジン修飾配列」という用語は、候補核酸配列のウリジン含有量及び／またはウリジンパターンに関して、異なる全体もしくは局所ウリジン含有量（より高いまたはより低いウリジン含有量）を有するか、または異なるウリジンパターン（例えば、勾配分布またはクラスタリング）を有する配列最適化核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）を指す。本開示の内容において、「ウリジン修飾配列」及び「ウラシル修飾配列」という用語は、同等であり互換的であると見なされる。
「高ウリジンコドン」とは、２つまたは３つのウリジンを含むコドンとして定義され、「低ウリジンコドン」とは、１つのウリジンを含むコドンとして定義され、「無ウリジンコドン」とは、ウリジンを含まないコドンである。いくつかの実施形態では、ウリジン修飾配列は、低ウリジンコドンによる高ウリジンコドンの置換、無ウリジンコドンによる高ウリジンコドンの置換、高ウリジンコドンによる低ウリジンコドンの置換、無ウリジンコドンによる低ウリジンコドンの置換、低ウリジンコドンによる無ウリジンコドンの置換、高ウリジンコドンによる無ウリジンコドンの置換、及びそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、高ウリジンコドンは別の高ウリジンコドンで置き換えてもよい。いくつかの実施形態では、低ウリジンコドンは、別の低ウリジンコドンで置き換えてもよい。いくつかの実施形態では、無ウリジンコドンは別の無ウリジンコドンと置き換えられてもよい。ウリジン修飾配列は、ウリジン富化されても、またはウリジン希薄化されてもよい。
ウリジン富化：本明細書で使用する場合、「ウリジン富化」という用語及び文法的変形は、対応する候補核酸配列のウリジン含量に関して、配列最適化核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）中のウリジン含有量の増大（絶対値または割合値として表される）を指す。ウリジン富化は、候補核酸配列中のコドンを、含んでいるウリジン核酸塩基が少ない同義コドンで置換することによって実施され得る。ウリジン富化は、全体的（すなわち、候補核酸配列の全長に対して）であっても、または局所的（すなわち、候補核酸配列の部分配列または領域に対して）であってもよい。
ウリジン希薄化：本明細書で使用する場合、「ウリジン希薄化」という用語及び文法上の変形は、対応する候補核酸配列のウリジン含量に関して、配列最適化核酸（例えば、合成ｍＲＮＡ配列）中のウリジン含有量の減少（絶対値または割合値として表される）を指す。ウリジン希薄化は、候補核酸配列中のコドンを、含んでいるウリジン核酸塩基が少ない同義コドンで置換することによって実施され得る。ウリジン希薄化は、全体的（すなわち、候補核酸配列の全長に対して）であっても、または局所的（すなわち、候補核酸配列の部分配列または領域に対して）であってもよい。
等価物及び範囲
当業者であれば、本明細書に記載の開示による具体的な実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または通常の実験のみを用いて確認し得るであろう。本開示の範囲は、以下の説明に限定されることを意図するものではなく、むしろ添付の特許請求の範囲に記載のとおりである。
特許請求の範囲において、「１つの、ある（ａ、ａｎ）」、及び「この、その（ｔｈｅ）」などの冠詞は、反対の指示がない限り、または文脈から明らかでない限り、１つまたは２つ以上を意味し得る。１つ、２つ以上、または全てのグループメンバーが、反対の指示がない限り、そうでなければその文脈から明らかでない限り、所定の生成物またはプロセスに存在するか、使用されるか、またはそうでなければ関連がある場合、グループの１つ以上のメンバー間に「または」を含む請求項または説明は、満たされると見なされる。本開示は、その群の正確に１つのメンバーが所定の生成物またはプロセス中に存在するか、使用されるか、またはそうでなければ関連する実施形態を包含する。本開示は、１つより多く、または全てのグループメンバーが所定の生成物またはプロセス中に存在するか、使用されるか、またはそうでなければ関連する実施形態を包含する。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、開放的で許容されることを意図しているが、追加の要素またはステップを含めることを必要としないことにも留意されたい。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）という用語が本明細書で使用する場合、したがって、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語も包含され開示される。
範囲が指定されている場合は、エンドポイントが含まれる。さらに、当業者の文脈及び理解から他に示されていないかまたはさもなければ明白でない限り、範囲として表される値は、本開示の異なる実施形態において述べられた範囲内の任意の特定の値または部分範囲から、文脈上明らかにそうでないと示されない限り、その範囲の下限の単位の１０分の１までを仮定し得ることが理解される。
全ての引用された出典、例えば、本明細書に引用された引用文献、出版物、データベース、データベースエントリー、及び技術は、その引用文献中に明示的に表現されない場合でさえ、参照により本出願に組み込まれる。引用された出典の記載と本出願の記載とが矛盾する場合、本出願における記載が優先するものとする。
本開示は、以下の実施例を参照することによってより完全に理解されるであろう。しかしながら、それらは本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に記載される実施例及び実施形態は、例示目的のみに過ぎず、それを考慮した様々な修正または変更が当業者に示唆され、本出願及び添付の特許請求の範囲の趣旨及び範囲内に含まれるべきであることが理解される。
実施例１：Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物の調製
本実施例では、Ｔ細胞破壊因子（ＴＣＤ）をコードした一連のｍＲＮＡ構築物を調製した。各ＴＣＤは、阻害性モチーフに作動的に連結した膜／シグナル伝達複合体関連モチーフを含むキメラタンパク質である。調製した代表的なＴＣＤの構造を以下の表１７に示す：
Figure 2022531461000382
Figure 2022531461000383
Figure 2022531461000384
Figure 2022531461000385
ｍＲＮＡ構築物は、当該技術分野において公知の標準方法によって調製され、典型的には、検出を容易にするためにＮ末端及び／またはＣ末端でエピトープタグ（例えば、Ｖ５及び／またはＦＬＡＧ）もコードした。さらに、全ての構築物は、キャップ１ ５’キャップ（７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ）、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、１００ヌクレオチドのポリＡ尾部を含み、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）で完全に修飾された。構築物に使用するための会合ドメインのアミノ酸配列を、配列番号１～２０に示す。構築物に使用するための阻害性ドメインのアミノ酸配列を、配列番号２１～３４に示す。いずれのエピトープタグを有さない、代表的なＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物のコード領域のヌクレオチド配列を、配列番号３５～８０に示し、いずれのエピトープタグを有さないＴＣＤ構築物のＯＲＦアミノ酸配列を、配列番号８１～１２６に示す。構築物に使用するための例示的な５’ＵＴＲを、配列番号１８６に示す。構築物に使用するための例示的な３’ＵＴＲを、配列番号１８７に示す。ある特定の構築物では、会合ドメイン及び阻害性ドメインは、リンカー配列により分離された。構築物に使用するための例示的なリンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎを有し、式中、ｎ＝１～４（配列番号１８８）である。
ＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物は、化合物Ｘ／ＤＳＰＣ／コレステロール／β－シトステロール／ＰＥＧ ＤＭＧを５０：１０：１０：２８．５：１．５の比で含む脂質ナノ粒子中に製剤化した。免疫細胞送達増強脂質としてβ－シトステロールを含有する、このような脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、その内容全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる、２０１９年１月３０日に提出された、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９／１５９１３号にさらに記載されている。
実施例２：Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物は、Ｔ細胞増殖をインビトロで低下させる
最初の一連の実験では、Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、活性化Ｔ細胞の増殖を阻害する能力についてインビトロで調べた。ヒトＴ細胞は、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞強化キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ヒト末梢血単核細胞から濃縮した。その後、単離されたヒトＴ細胞を、５μＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミドエステル（ＣＦＳＥ）で蛍光標識し、３７℃の水浴中で６分間、標識でインキュベートし、管を逆にして３分間混合した後、１０％のＦＣＳを有する完全ＲＰＭＩによるラベリングを急冷した。その後、細胞を、完全ＲＰＭＩ培地中の丸底９６ウェルプレートにおいて、１×１０５個の細胞／１００μｌで載置した。
その後、ヒトＴ細胞活性化ビーズ（抗ＣＤ３／ＣＤ２８／ＣＤ２；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ；カタログ番号１３０－０９１－４４１）を５０μｌ培地中の様々な濃度（０．３～３μｌビーズ）で用いて、Ｔ細胞を活性化させた。対照ウェルは、５０μｌの完全ＲＰＭＩ培地でのみ処置した。ＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物を封入する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）をＴ細胞に添加した（１％のヒト血清で補充した５０μｌの完全ＲＰＭＩ培地中の１００ｎｇ ＬＮＰ／ウェル）。５０μｌ培地中でＴ細胞増殖に影響を及ぼさない対照ＬＮＰで対照ウェルを処置した。細胞を７２時間インキュベートした後、細胞生存率、ＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８について染色した。ＣＳＦＥ－低ＣＤ４＋及びＣＳＦＥ－低ＣＤ８＋細胞のパーセンテージは、細胞増殖の尺度として決定した。
その結果を、図１Ａ～ＡＦに示し、図１Ａ～１Ｃは、０．３μｌ、１．０μｌ、または３μｌの活性化ビーズでそれぞれ処置したＣＤ４＋細胞のデータを示し、図１Ｄ～１Ｆは、０．３μｌ、１．０μｌ、または３μｌの活性化ビーズでそれぞれ処置したＣＤ８＋細胞のデータを示す。上の点線は、対照ＬＮＰで処置したＴ細胞が呈する細胞増殖の程度（すなわち、最も高い割合のＣＳＦＥ低細胞が観察された）を表す一方、下の点線は、細胞増殖の最高度の５０％阻害を表す。図１の結果は、Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、試験した高濃度の活性化ビーズであっても、活性化Ｔ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞の両方）の増殖を低下させることを示している。特に、多くのＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物は、対照構築物と比較して、Ｔ細胞増殖の５０％を上回る阻害を呈した。
第２の一連の実験では、ＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物が、事前に活性化されたＴ細胞の増殖を阻害する能力について試験した。ＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物を封入するＬＮＰを、Ｔ細胞活性化ビーズの添加後０時間または２４時間のいずれかで添加したことを除いて、増殖アッセイは、第１の一連の実験について上述のように実施した。結果を、図２Ａ～２Ｄに示し、図２Ａ～２Ｂは、活性化後０時間または２４時間のいずれかで、ＬＮＰで処置したＣＤ４＋細胞のデータをそれぞれ示し、図２Ｃ～２Ｄは、活性化後０時間または２４時間のいずれかで、ＬＮＰで処置したＣＤ８＋細胞のデータをそれぞれ示す。上の点線は、対照ＬＮＰで処置したＴ細胞が呈する細胞増殖の程度（すなわち、最も高い割合のＣＳＦＥ低細胞が観察された）を再び表す一方、下の点線は、細胞増殖の最高度の５０％阻害を表す。図２Ａ～２Ｄの結果は、ＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物が、２４時間事前に活性化されているＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞の両方）の増殖を低下させることが可能であることを示している。
実施例３：Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物は、Ｔ細胞によるＴＮＦα産生を低下させる
この実施例では、Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が活性化Ｔ細胞によるＴＮＦαの産生を阻害する能力についてインビトロで調べた。ヒト末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）を、完全ＲＰＭＩ培地中の９６ウェルプレートにおいて、１×１０６個の細胞／ウェルで載置した。ヒトＰＢＭＣを、ヒトＴ細胞活性化ビーズ（抗ＣＤ３／ＣＤ２８／ＣＤ２；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ；カタログ番号１３０－０９１－４４１）（１．０μｌビーズ／ウェル）で２４時間刺激した。ＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物を封入するＬＮＰを２４時間添加した（１％のヒト血清で補充した５０μｌの完全ＲＰＭＩ培地中の１００ｎｇ ＬＮＰ／ウェル）。Ｔ細胞サイトカイン産生に影響を及ぼさない対照ＬＮＰで対照ウェルを処置した。染色の朝に、ブレフェルジンＡ（ＢＦＡ）（５μｇ／ｍＬ）及びモネンシン（２．０μＭ）を、染色の４～５時間前に細胞に添加した。細胞を、ＣＤ３、ＣＤ４、及びＣＤ８表面マーカーについて４℃で２０分間染色した後、細胞を濾過し、透過処理した。その後、細胞を、標準的な方法論によって細胞内ＴＮＦαについて染色した。
その結果を、図３Ａ～３Ｂに示し、図３Ａは、ＣＤ４＋Ｔのデータを示し、図３Ｂは、ＣＤ８＋Ｔ細胞のデータを示す。各グラフの上の点線は、対照ＬＮＰ処置からのＴＮＦα陽性Ｔ細胞のパーセンテージ（すなわち、最も高い割合のＴＮＦα陽性細胞が観察された）を表す。図３Ａでは、中及び下の点線は、ＴＮＦα陽性Ｔ細胞の最高度の５０％及び７５％阻害をそれぞれ表す。図３Ｂでは、下の点線は、ＴＮＦα陽性Ｔ細胞の最高度の５０％阻害を表す。図３Ａ～３Ｂの結果は、ＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物が、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方におけるＴＮＦα産生を低下させることが可能であることを示している。
実施例４：Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物は、Ｔ細胞活性をインビボで阻害する
この実施例では、異種移植片対宿主病（異種ＧＶＨＤ）動物モデルを使用して、Ｔ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物の効果についてインビボで調べた。この動物モデル系は、当該技術分野において記載されている（Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：１０４－１１８）。
モデル系で使用される動物は、ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）であり、これは、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）重症複合免疫不全（ｓｃｉｄ）ＩＬＲｒγ欠損マウスであり、ガンマ線照射を受けた後、ヒト末梢血単核細胞（ＰＭＣ）を投与し、ヒト化免疫系を再構成する。ヒトＴ細胞は、マウス抗原に対して活性化され、末梢組織に広がり、免疫病理を誘発し、体重減少及び死につながる。異種ＧＶＨＤ動物モデルにおけるＴ細胞活性に対するＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物の効果を試験するため、ヒトＰＢＭＣを、ＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物（１μｇ ＬＮＰ／１×１０６個の細胞）またはＰＢＳで一晩インビトロでトランスフェクトした。その後、ＮＳＧマウス（ｎ＝８）に２００Ｒを照射し、０日目に、１０×１０６個のトランスフェクトされたヒトＰＢＭＣを静脈内投与した。３日目及び６日目に、マウスは、追加用量のＬＮＰ封入されたｍＲＮＡを静脈内（０．５ｍｇ／ｋｇ）に受けた。陽性対照として、マウスをタクロリムス（ＴＡＣ）（１週目では、１．５ｍｇ／ｋｇ、実験の残りの部分では、３．０ｍｇ／ｍｇを皮下に）で処置した。時間の経過に伴うマウスの生存率は、ＰＢＭＣ注射後３０日間モニタリングした。
第１の一連の実験からの結果を、図４に示す。第２の一連の実験からの結果を、図５に示す。第２の実験では、マウスは、７、１４、及び２１日目に、ＬＮＰ封入されたｍＲＮＡを週１回受けた。これらの結果は、ある特定のＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物、特に、ＴＣＤ＃９、ＴＣＤ＃１７及びＴＣＤ＃１８（図４）、及びＴＣＤ＃４０及びＴＣＤ＃４１（図５）が、ＰＢＳ陰性対照処置群と比較して、異種ＧＶＨＤモデルの死亡率を遅らせたことを示している。ことによって、ＴＣＤ ｍＲＮＡ構築物が、Ｔ細胞活性をインビボで阻害することができることを示している。
実施例５：Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物の調製
この実施例では、Ｂ細胞破壊因子（ＢＣＤ）をコードした一連のｍＲＮＡ構築物を調製した。各ＢＣＤは、阻害性モチーフに作動的に連結した膜／シグナル伝達複合体関連モチーフを含むキメラタンパク質である。調製した代表的なＢＣＤの構造を、以下の表１８に示す：
Figure 2022531461000386
Figure 2022531461000387
ｍＲＮＡ構築物は、当該技術分野において公知の標準方法によって調製され、典型的には、検出を容易にするために構築物のＮ末端及び／またはＣ末端（例えば、Ｎ末端でＦＬＡＧタグ、及びＣ末端でＶ５タグ）でエピトープタグ（例えば、Ｖ５及び／またはＦＬＡＧ）もコードした。さらに、全ての構築物は、典型的には、キャップ１ ５’キャップ（７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ）、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、１００ヌクレオチドのポリＡ尾部を含み、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）で完全に修飾された。構築物に使用するための会合ドメインのアミノ酸配列を、配列番号１２７～１４３に示す。構築物に使用するための阻害性ドメインのアミノ酸配列を、配列番号１４４～１４９に示す。いずれのエピトープタグを有さない、代表的なＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物のコード領域のヌクレオチド配列を、配列番号１５０～１６７に示し、いずれのエピトープタグを有さない、ＢＣＤ構築物のＯＲＦアミノ酸配列を、配列番号１６８～１８５に示す。構築物に使用するための例示的な５’ＵＴＲを、配列番号１８６に示す。構築物に使用するための例示的な３’ＵＴＲを、配列番号１８７に示す。ある特定の構築物では、会合ドメイン及び阻害性ドメインは、リンカー配列により分離された。構築物に使用するための例示的なリンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎを有し、式中、ｎ＝１～４（配列番号１８８）である。
ＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物は、化合物Ｘ／ＤＳＰＣ／コレステロール／β－シトステロール／ＰＥＧ ＤＭＧを５０：１０：１０：２８．５：１．５の比で含む脂質ナノ粒子中に製剤化した。免疫細胞送達増強脂質としてβ－シトステロールを含有する、このような脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、その内容全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる、２０１９年１月３０日に提出された、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９／１５９１３号にさらに記載されている。
実施例６：Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物のインビトロ発現
この実施例では、Ｂ細胞におけるＢ細胞破壊因子（ＢＣＤ）ｍＲＮＡ構築物のインビトロ発現に影響を及ぼす因子について調べた。
最初の一連の実験では、Ｂ細胞を事前活性化する効果について調べた。ヒトＰＢＭＣを、２×１０５個の細胞／ウェルで９６ウェルプレートに載置し、細胞を、５μＭ ＬＮＰ封入されたＦＬＡＧ標識ＢＣＤ ｍＲＮＡと一緒に、活性化剤として、培地、ＩＬ－２１（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＣｐＧ ７９０９（５μｇ／ｍｌ）または抗ＣＤ４０（５μｇ／ｍｌ）のいずれかと共培養した。細胞を、活性化剤及びＢＣＤ ｍＲＮＡで２４時間インキュベートした後、抗ｈＣＤ２０、抗ｈＣＤ１４、抗ｈＣＤ４、抗ｈＣＤ８及び抗ＦＬＡＧ抗体で染色し、ＦＡＣＳ分析を行った。結果を、図６Ａに示し、試験した３つの活性化剤のうち、ＣｐＧで事前活性化されたＣＤ２０＋Ｂ細胞が、培地対照と比較して、ｍＲＮＡによりコードされたＢＣＤの発現増加を呈したことを示す。Ｂ細胞のＣｐＧ媒介性事前活性化の効果をさらに調べるため、ヒトＰＢＭＣを、図６Ａについて上述のように培養し、ＣｐＧ（５μｇ／ｍｌ）を、２４時間または７２時間のいずれかで培養に加えた後、５μＭのＬＮＰ封入されたＦＬＡＧ標識ＢＣＤ ｍＲＮＡを最後の２４時間で加えた。培養後、細胞を抗ｈＣＤ２０、抗ｈＣＤ１４、抗ｈＣＤ４、抗ｈＣＤ８及び抗ＦＬＡＧ抗体で再び染色し、ＦＡＣＳ分析で解析した。結果を、図６Ｂに示し、ＣｐＧによるＢ細胞の７２時間の事前活性化が、２４時間の事前活性化よりも、ｍＲＮＡによりコードされたＢＣＤのより高い発現レベルをもたらしたことを示す。
第２の一連の実験では、ＢＣＤ発現に対するｍＲＮＡ濃度の効果について調べた。ヒトＰＢＭＣを、培地またはＣｐＧ ７９０９（５μｇ／ｍｌ）のいずれかで７２時間培養した後、ＬＮＰ封入されたＢＣＤ ｍＲＮＡを５μＭまたは１μＭのいずれかで最後の２４時間で加えた。培養後、細胞を抗ＣＤ２０及び抗ＦＬＡＧ抗体で染色し、ＦＡＣＳ分析で解析した。結果を、図７に示し、ヒトＢ細胞上に発現したＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物が、インビトロで用量依存的効果を示すことを示す。
実施例７：Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物は、Ｂ細胞活性をインビトロで阻害する
最初の一連の実験では、Ｂ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物が、Ｂ細胞によるＩｇＭ、ＩＬ－６及びＩＬ－１０の分泌を阻害する能力についてインビトロで調べた。ヒトＰＢＭＣを、ＬＮＰ封入されたＢＣＤをコードするｍＲＮＡ（５μＭ、１μＭ、または２００ｎＭ）の濃度を変化させて処理し、ｈＩｇＭ、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０の発現 レベルを、３～５日間にわたって評価した。より具体的には、ヒトＰＢＭＣを、２×１０５個の細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。細胞をＣｐＧ（実施例６に記載されるように）で７２時間刺激し、ＬＮＰ封入されたｍＲＮＡで２４時間トランスフェクトさせた後、培養培地を、抗ヒトＩｇＫ抗体を有するかまたは有さない新鮮な培地に１～５日間で置き換えた。上清を収集し、ヒトＩｇＭ、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０のレベルを標準ＥＬＩＳＡにより測定した。同じＬＮＰ製剤内に封入されるマウスＯＸ４０Ｌ ｍＲＮＡは、陰性対照として使用した。
その結果を、図８Ａ～８Ｉに示し、図８Ａ～８Ｃは、５μＭ ｍＲＮＡの結果を示し、図８Ｄ～８Ｆは、１μＭ ｍＲＮＡの結果を示し、図８Ｇ～８Ｉは、２００ｎＭ ｍＲＮＡの結果を示す。図８Ａ、８Ｄ、及び８Ｇは、ｈＩｇＭの結果を示し、図８Ｂ、８Ｅ、及び８Ｈは、ＩＬ－６の結果を示し、図８Ｃ、８Ｆ、及び８Ｉは、ＩＬ－１０の結果を示す。結果は、試験した全てのｍＲＮＡ構築物が、試験した高濃度（１μＭ及び５μＭ）で、Ｂ細胞によるｈＩｇＭ、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０分泌を有意に阻害したことを示している。
第２の一連の実験では、休止ＰＢＭＣまたは活性Ｂ細胞を、ＬＮＰ封入されたＢＣＤをコードするｍＲＮＡで処理した後、Ｓｙｋのリン酸化レベルを評価した。より具体的には、ヒトＰＢＭＣまたは単離ヒトＢ細胞を、ＬＮＰ封入されたｍＲＮＡで２４時間トランスフェクトし、培地を、抗ヒトＩｇＫ抗体（図９Ｂ）を有するかまたは有さない新鮮な培地に６時間または２４時間でそれぞれ置き換えた。細胞を溶解し、Ｓｙｋ（ｐ－Ｓｙｋ）、Ｓｙｋ、及びＧＡＰＤＨのリン酸化レベルを、標準ＥＬＩＳＡにより測定した。ｐＳｙｋ及びＳｙｋの読み取りをＧＡＰＤＨに正規化した。
その結果を、図９Ａ～９Ｂに示し、図９Ａは、休止ＰＢＭＣに対するｐＳｙｋとＳｙｋの比を示し、図９Ｂは、活性Ｂ細胞に対するｐＳｙｋとＳｙｋの比を示す。図９Ａの結果は、全てのＢＣＤ構築物が、休止ＰＢＭＣ上のＳｙｋのリン酸化レベルを低下させたことを示している。図９Ｂの結果は、ＢＣＤ構築物＃５（ｈＣＤ１９の切断型を含む）、＃２（ＣＤ７９ａの切断型を含む）、及び＃４（ＣＤ７９ｂの切断型を含む）は、活性Ｂ細胞内のＳｙｋリン酸化のより強力な阻害を示したことを示している。
実施例８：ヒトＢ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物は、Ｂ細胞活性をインビトロで阻害する
この実施例では、実施例４に記載されるＮＳＧ動物モデルを使用して、Ｂ細胞活性に対するヒトＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物のインビボ効果について調べた。最初の一連の実験では、ＮＳＧマウス（ｎ＝５）に、６×１０６個の細胞を１日目に投与し、３×１０６個の細胞は、ｍＲＮＡ（ＢＣＤコードｍＲＮＡ ＢＣＤ２、ＢＣＤ４またはＢＣＤ５、または陰性対照ｍＲＮＡのいずれか）によりエクスビボでトランスフェクトされたヒトＢ細胞であり、３×１０６個の細胞は、同じドナー由来の非トランスフェクトヒトＴ細胞であった。２日目及び７日目に、血清を収集し、ヒト総ＩｇＭ及びＩｇＧについてＥＬＩＳＡにより評価した。また、２日目及び７日目に、ＰＢＭＣ及び脾臓細胞を収集し、ｍＲＮＡ発現及びヒト細胞分布についてＦＡＣＳにより評価した。ｍＲＮＡ発現及び細胞分布分析により、ｈＣＤ４５細胞が、７日目に脾臓に生着し、Ｔ細胞増殖が、末梢血リンパ球よりも脾臓でより多く観察され、Ｂ細胞は、脾臓よりも末梢血リンパ球により多く残存したことが判明した。２日目までに、ＢＣＤは、脾臓細胞及び末梢血リンパ球の両方の５０％で発現された。７日目に、ＢＣＤは、３８．２％の脾臓細胞、１６．５％の末梢血リンパ球で発現された。ｈＩｇＭ及びｈＩｇＧ分析の結果を、図１０Ａ（ＩｇＭ）及び１０Ｂ（ＩｇＧ）に示し、ＢＣＤが、陰性対照ｍＲＮＡと比較して、２日目及び７日目にｈＩｇＭ及びｈＩｇＧ分泌の両方をインビボで低下させたことを示している。
第２の一連の実験では、ヒトＢ細胞召集機能に対するＢＣＤ ｍＲＮＡの効果についてインビボで調べた。ＮＳＧマウス（ｎ＝８）に、ｈＰＢＭＣ（２０×１０６個の細胞）、またはＢＣＤ ｍＲＮＡ（５×１０６個の細胞）＋非トランスフェクトＴ細胞（５×１０６個の細胞）によりエクスビボでトランスフェクトされたＢ細胞のいずれかを１日目に静脈内投与し、破傷風トキソイド（１５μｇ）を２日目に腹腔内投与した。全血試料を４、７及び９日目に採取した。動物を１５日目に犠牲にし、脾臓及びＰＢＭＣを収穫した。試験には、以下の表１９に記載されるように５つの異なる処置群を使用した：
Figure 2022531461000388
２群で使用したＢ細胞破壊因子Ｉ調製物は、表１８に示すように、以下の３つの異なるＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物：ＢＣＤ２、ＢＣＤ４、及びＢＣＤ５を含有した。３群で使用したＢ細胞破壊因子ＩＩ調製物は、表１８に示すように、以下の３つの異なるＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物：ＢＣＤ１、ＢＣＤ３、及びＢＣＤ７を含有した。Ｂ細胞破壊因子Ｉ調製物は、０．８ｍｇの用量（「低用量」）でトランスフェクションに使用し、Ｂ細胞破壊因子ＩＩ調製物は、３ｍｇの用量（「高用量」）でトランスフェクションに使用した。２群及び３群からのエクスビボトランスフェクトＢ細胞ＦＡＣＳ分析により、ＢＣＤの低（ＣＤ２０＋Ｂ細胞中の２０％）発現及び高（ＣＤ２０＋細胞中の５０％）発現がそれぞれ確認された。
５つの異なる処置群からの脾臓及び血液の分析により、ヒトＰＢＭＣ及びエクスビボトランスフェクトＢ細胞の両方が、ＮＳＧマウスに生着したことが確認された。脾臓腫大は、ヒトＰＢＭＣを移植した５群で有意であった。総血清ＩｇＭ及びＩｇＧを測定し、その結果を、図１１Ａ（ＩｇＭ）、及び１１Ｂ（ＩｇＧ）に示す。図１１Ａ～１１Ｂのデータは、総血清ｈＩｇＭ及びｈＩｇＧが、ＰＢＭＣ生着マウス（５群）、及びトランスフェクトＢ細胞生着マウス（１～３群）の両方で増加したことを示した。エクスビボトランスフェクトＢ細胞は、総ｈＩｇＧ分泌の遅延を示した。さらに、陰性対照ｍＲＮＡトランスフェクトＢ細胞（１群）と比較して、ＢＣＤトランスフェクトＢ細胞の両方（２群及び３群）が、総ＩｇＭ及びＩｇＧの低下を示し、第１の一連の実験で観察された結果（図１０に示す結果）が確認された。
対照、２群、及び３群マウスにおけるＩｇＭ及びＩｇＧ濃度を、注射後２、４、７、９、及び１５日目にモニタリングし、その結果を、図１２Ａ及び１２Ｂにそれぞれ示す。総ｈＩｇＭ／ｈＩｇＧのインビボ抑制が、Ｂ細胞上のＢＣＤ発現レベルに関連することが判明したことが、これらの結果により示された。特に、低発現されたＢＣＤ群（２群）は、高発現されたＢＣＤ群（３群）と比較して、細胞注射後９日目に、ｈＩｇＭ／ｈＩｇＧレベルのより迅速な回復を示した。
抗原特異的抗体反応に対するＢＣＤの効果を調べるため、抗破傷風トキソイド（ＴＴｄ）抗体レベルを測定し、その結果を、図１３Ａに示し、比較のために、総ｈＩｇＧを図１３Ｂに示す。ＰＢＭＣ生着した５群マウスが、７日目から１５日目まで、ＴＴｄに対する迅速かつ強力な抗体反応を示した一方、抗ＣＤ２０処理され、Ｂ細胞枯渇した４群マウスが、細胞注射後７日目から１５日目まで、抗ＴＴｄ応答を有さなかったことが、これらの結果により示された。
対照、２群、及び３群マウスにおける抗ＴＴｄ ｈＩｇＧ濃度を、注射後２、４、７、９、及び１５日目にモニタリングし、その結果を、図１４に示す。エクスビボトランスフェクトＢ細胞生着マウス（１～３群）は、細胞注射後９日目（抗原刺激後７日目）に抗ＴＴｄ ｈＩｇＧの増加を示し、これらの処置群において９日目に観察された総ｈＩｇＧ産生の増加と相関した。陰性対照ｍＲＮＡトランスフェクト群（１群）と比較して、ＢＣＤトランスフェクトＢ細胞の両方（２群及び３群）が、細胞注射後９～１５日目に抗ＴＴｄ ｈＩｇＧの低下を示し、ＢＣＤが、抗原チャレンジ後に血清中の抗原特異的抗体蓄積の阻害に有効であることが示された。インビボで観察された抗ＴＴｄ ｈＩｇＧ抑制は、Ｂ細胞上のＢＣＤの発現レベルに関連することが判明し、高発現ＢＣＤ群（３群）は、低発現ＢＣＤ群（２群）よりも、細胞注射後１５日目に、抗ＴＴｄ ｈＩｇＧの抑制をより多く示した。
実施例９：ネズミＢ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物によるインビトロ試験
この実施例では、一連の実験は、ネズミＢ細胞破壊因子をコードするｍＲＮＡ構築物を用いて行った。ネズミＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物の構造及び配列は、表１８に、ＢＣＤ９、ＢＣＤ１０、ＢＣＤ１１、ＢＣＤ１２、ＢＣＤ１３、ＢＣＤ１４及びＢＣＤ１５として記載される。
ネズミＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物は、休止及び活性化ラットＢ細胞内で発現された後、ＩｇＧ分泌、ＩｇＭ分泌及びＩＬ－１０分泌の分析を行った。より具体的には、ラット脾臓細胞を、２×１０５個の細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。細胞をＣｐＧ（実施例６に記載されるように）で４８時間刺激し、ＬＮＰ封入されたｍＲＮＡで２４時間トランスフェクトさせた後、培養培地を、ヤギ抗ラットＩｇ抗体を有する（活性Ｂ細胞）かまたは有さない（休止Ｂ細胞）新鮮な培地に１～３日間で置き換えた。上清を収集し、ラットＩｇＭ、ＩｇＧ、及びＩＬ－１０のレベルを標準ＥＬＩＳＡにより測定した。マウスｍＲＮＡ構築物は、実施例５に記載されるように、ＬＮＰ中に製剤化した。
ＩｇＧ分泌の結果を、図１５Ａ（活性化ラットＢ細胞）及び１５Ｂ（休止ラットＢ細胞）に示し、ネズミＢＣＤ構築物が、活性化ラットＢ細胞へのＩｇＧ分泌を低下させることを示している。ＩｇＭ分泌の結果を、図１６Ａ（活性化ラットＢ細胞）及び１６Ｂ（休止ラットＢ細胞）に示し、ネズミＢＣＤ構築物が、活性化ラットＢ細胞へのＩｇＭ分泌を低下させることを示している。ＩＬ－１０分泌の結果を、図１７Ａ（活性化ラットＢ細胞）及び１７Ｂ（休止ラットＢ細胞）に示し、ネズミＢＣＤ構築物が、活性化ラットＢ細胞へのＩＬ－１０分泌を低下させることを示している。したがって、ネズミＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物及びラットＢ細胞を用いたこれらのインビトロ試験により、ネズミＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物が、抗体産生またはサイトカイン分泌のいずれかにより測定されたＢ細胞活性を阻害することを示したことが、ヒトＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物によるインビトロ及びインビボで観察された以前の結果により確認された。
実施例１０：免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物は、自己免疫をインビボで低下させる
この実施例では、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）ラットモデルを使用して、免疫活性に対する免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物のインビボ効果について調べた。最初の一連の実験では、ウィスターラット（ｎ＝３または５）は、以下のように、１～６つの処置群に割り当てた：（ｉ）ナイーブ（未処置対照）；（ｉｉ）ＰＢＳ（陰性対照）；（ｉｉｉ）陰性対照ｍＲＮＡ（２ｍｇ／ｋｇ；静脈内）；（ｉｖ）デキサメタゾン（５ｍｇ／ｋｇ；腹腔内）；（ｖ）抗ＣＤ２０（１０ｍｇ／ｋｇ；腹腔内）；または（ｖｉ）免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ（２ｍｇ／ｋｇ；静脈内）。
免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物ＴＣＤ１８、ＢＣＤ１６、ＢＣＤ１７及びＢＣＤ１８は、単一ＬＮＰ調製物中に共製剤化した。ｍＲＮＡ構築物は、５０：１０：１０：２８．５：１．５の比で、化合物Ｘ／ＤＳＰＣ／コレステロール／β－シトステロール／ＰＥＧ ＤＭＧを含む脂質ナノ粒子中に製剤化した。
－７及び０日目に、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、及び（ｖ）群のラットは、示された処置を受け、抗ＣＤ２０処置群（（ｖ））から１日目に採血し、ＣＤ２０＋細胞の枯渇を確認した。全てのラットは、（ｉ）群（ナイーブ対照）を除いて、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のコラーゲンＩＩ型（ＣＩＩ）で１日目に処置した。（ｉｖ）群のラットは、デキサメタゾンで毎日処置した。（ｖ）群のラットは、－７日目に抗ＣＤ２０で処置した。（ｖｉ）群のラットは、週２回、免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡで処置した。血液を４、１１、１７及び２１日目に収集し、血清Ｉｇ分析を行った。２１日目に、血液及び脾臓細胞も収集し、ＦＡＣＳ及びＩＨＣ分析を行った。
集計スコアは、標準方法によって経時的に決定し、その結果を、図１８に示す。結果は、予想通り、ナイーブラットは、ＣＩＡの徴候を全く呈さなかった一方、ＰＢＳまたは陰性対照ＬＮＰ調製物のいずれかで処置したコラーゲン誘導動物は、有意な集計スコアを経時的に呈したことを示している。また予想通り、抗ＣＤ２０を用いたデキサメタゾンまたはＢ細胞枯渇のいずれかの免疫阻害性処置は、集計スコアの経時的に有意な低下をもたらした。最終的に、免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物で処置したコラーゲン誘導動物は、ＰＢＳ群及び陰性対照ｍＲＮＡ群と比較して、集計スコアの経時的に有意な低下を呈し（ｐ＜０．０００１）、ｍＲＮＡ構築物が、この自己免疫モデルにおいて、免疫活性のインビボ阻害に効果的であったことを示した。
第２セットの実験では、免疫破壊因子処置ラットにおけるＣＩＡ発症の阻害が、ＩＩ型コラーゲンに対する抗体反応の欠如によるものであったかどうか調査するため、血清中のＩｇＧの抗ＣＩＩ特異的レベルをＣＩＡ実験の様々な時点で決定した。ＩＩ型コラーゲンに対するラットＩｇＧ抗体レベルは、スルホタグコンジュゲート二次ヤギ抗ラットＩｇＧ抗体を用いて、ＭＳＤベースの酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）方法論により測定した。各ラットの血清希釈、１：１６０００は、予備アッセイ後に選択した。光学密度は、ＭＥＳＯ－ＳＥＣＴＯＲ Ｓ６００ ３８４プレートリーダーを用いて測定した。抗ＩＩ型コラーゲン濃度は、標準抗コラーゲンＩＩラット抗体（ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＬＳ－Ｆ６７３９８）ＣＩＡ血清の１：２連続希釈から生成された標準曲線を参照して、抗体含有量（任意単位／ｍＬ）を算出して決定した。
抗ＣＩＩ特異的ＥＬＩＳＡ結果を、図１９に示す。抗ＣＩＩ抗体レベルが、免疫付与後２１日目に、ＰＢＳ処置群及び対照ｍＲＮＡ処置群と比較して、陽性対照群（デキサメタゾンまたは抗ＣＤ２０で処置して、Ｂ細胞を枯渇させた）及び免疫細胞破壊因子処置群において有意に低かった（ｐ＝０．０４０３）が、４、１１、及び１７日目に２群の間に統計的有意差は観察されなかったことが、結果により示された。これらの結果は、免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物による処置が、経時的に（例えば、２１日目まで）、ＣＩＡモデルにおける抗原特異的抗体産生を阻害したことを示唆する。
実施例１１：追加のＢ細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物
この実施例では、Ｂ細胞破壊因子の追加パネルを調製し、それらの構造を以下の表２０に示す：
Figure 2022531461000389
ｍＲＮＡ構築物は、当該技術分野において公知の標準方法によって調製され、典型的には、検出を容易にするために構築物のＮ末端及び／またはＣ末端（例えば、Ｎ末端でＦＬＡＧタグ、及びＣ末端でＶ５タグ）でエピトープタグ（例えば、Ｖ５及び／またはＦＬＡＧ）もコードした。さらに、全ての構築物は、典型的には、キャップ１ ５’キャップ（７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ）、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、１００ヌクレオチドのポリＡ尾部を含み、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）で完全に修飾された。構築物に使用するための会合ドメインのアミノ酸配列を、配列番号１２８、１３０、１３１、及び２２９～２３１に示す。構築物に使用するための阻害性ドメインのアミノ酸配列を、配列番号１４５及び２５に示す。いずれのエピトープタグを有さない、代表的なＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物のコード領域のヌクレオチド配列を、配列番号２３２～２３７に示し、いずれのエピトープタグを有さない、ＢＣＤ構築物のＯＲＦアミノ酸配列を、配列番号２３８～２４３に示す。構築物に使用するための例示的な５’ＵＴＲを、配列番号１８６に示す。構築物に使用するための例示的な３’ＵＴＲを、配列番号１８７に示す。ある特定の構築物では、会合ドメイン及び阻害性ドメインは、リンカー配列により分離された。構築物に使用するための例示的なリンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎを有し、式中、ｎ＝１～４（配列番号１８８）である。
ＢＣＤ ｍＲＮＡ構築物は、化合物Ｘ／ＤＳＰＣ／コレステロール／β－シトステロール／ＰＥＧ ＤＭＧを５０：１０：１０：２８．５：１．５の比で含む脂質ナノ粒子中に製剤化した。免疫細胞送達増強脂質としてβ－シトステロールを含有する、このような脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、その内容全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる、２０１９年１月３０日に提出された、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９／１５９１３号にさらに記載されている。
実施例１２：追加の免疫細胞破壊因子ｍＲＮＡ構築物のインビトロ活性
この実施例では、実施例１１に記載される追加のＢＣＤ構築物をインビトロアッセイで使用して、ＢＣＤ５、陰性対照ｍＲＮＡ構築物、及び陽性対照ｍＲＮＡ構築物と一緒に、それらの免疫調節性活性を評価した。第１セットの実験では、Ｂ細胞受容体架橋に応答した分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子系を担持したＲａｍｏｓ－ｂｌｕｅ細胞を使用した。したがって、ＳＥＡＰ発現の阻害は、ＢＣＲ架橋からのシグナル伝達の阻害の指標として使用した。これらのアッセイでは、２×１０５個のＲａｍｏｓ－ｂｌｕｅ細胞を、ＢＣＤ構築物または対照ｍＲＮＡを含むＬＮＰでトランスフェクトした。ＬＮＰは、１μｇ、０．５μｇ、０．２５μｇ、及び０．１２５μｇで使用した。細胞は、ＬＮＰで２４時間処置した。その後、細胞を、抗ＩｇＫを含有する新鮮な培地（ＢＣＲを架橋するため）で２４時間インキュベートした。処置細胞のＳＥＡＰ発現の発現％は、未処置対照細胞と比較して決定した。
４つ全ての処置用量の結果を、図２０に示す。０．１２５μｇ用量のＳＥＡＰ阻害％を以下の表２１にまとめる：
Figure 2022531461000390
図２０及び表２１のこれらの結果により、免疫細胞破壊因子構築物のパネルが、Ｒａｍｏｓ－ｂｌｕ細胞におけるＳＥＡＰレポーター遺伝子の発現を阻害することで、構築物が、ＢＣＲ架橋により誘導されたシグナル伝達を阻害したことを示唆することが確認される。
第２の一連の実験では、ヒトＰＢＭＣによるＩｇＭ及びサイトカイン（ＩＬ－６及びＩＬ－１０）分泌に対する構築物の効果について調べた。これらのアッセイでは、３×１０５個のヒトＰＢＭＣをＣｐＧで７２時間刺激した後、ＢＣＤ構築物（５μｇ／ｍｌ）を含むＬＮＰで２４時間トランスフェクトした。その後、細胞を、抗ＩｇＫ（１μｇ／ｍｌ）を有するかまたは有さない新鮮な培地（ＢＣＲを架橋するため）で２４時間インキュベートした。４つの異なるＰＢＭＣドナーは、別々に実行し、各時点を重複した。ＩｇＭ分泌、ＩＬ－６分泌、及びＩＬ－１０分泌の結果を、図２１、２２、及び２３にそれぞれ示す。結果は、ＢＣＤ構築物が、ＰＢＭＣによるＩｇＭ、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０の分泌を効果的に阻害することを示している。
第３の一連の実験では、ヒトＰＢＭＣによるＩｇＧ分泌に対する構築物の効果について調べた。これらのアッセイでは、３×１０４個のヒトＰＢＭＣを照射ＥＬ４Ｂ５フィーダー細胞と共培養し、ＣｐＧで７２時間刺激した後、ＢＣＤ構築物（５μｇ／ｍｌ）を含むＬＮＰで２４時間トランスフェクトした。その後、細胞を、抗ＩｇＫ（１μｇ／ｍｌ）を有するかまたは有さない新鮮な培地（ＢＣＲを架橋するため）で２４時間インキュベートした。４つの異なるＰＢＭＣドナーは、別々に実行し、各時点を重複した。ＩｇＧ分泌の結果を、図２４にそれぞれ示す。結果は、ＢＣＤ構築物が、ＰＢＭＣによるＩｇＧの分泌も効果的に阻害することを示している。
他の実施形態
本開示をその詳細な説明と併せて開示してきたが、前述の説明は例示を意図したものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲を限定するものではないことが理解されるべきである。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内にある。
本明細書に記載の全ての引用文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
Figure 2022531461000391
Figure 2022531461000392
Figure 2022531461000393
Figure 2022531461000394
Figure 2022531461000395
Figure 2022531461000396
Figure 2022531461000397
Figure 2022531461000398
Figure 2022531461000399
Figure 2022531461000400
Figure 2022531461000401
Figure 2022531461000402
Figure 2022531461000403
Figure 2022531461000404
Figure 2022531461000405
Figure 2022531461000406
Figure 2022531461000407
Figure 2022531461000408
Figure 2022531461000409
Figure 2022531461000410
Figure 2022531461000411
Figure 2022531461000412
Figure 2022531461000413
Figure 2022531461000414
Figure 2022531461000415
Figure 2022531461000416
Figure 2022531461000417
Figure 2022531461000418
Figure 2022531461000419
Figure 2022531461000420
Figure 2022531461000421
Figure 2022531461000422
Figure 2022531461000423
Figure 2022531461000424
Figure 2022531461000425
Figure 2022531461000426
Figure 2022531461000427
Figure 2022531461000428
Figure 2022531461000429
Figure 2022531461000430
Figure 2022531461000431
Figure 2022531461000432
Figure 2022531461000433
Figure 2022531461000434
Figure 2022531461000435
Figure 2022531461000436
Figure 2022531461000437
Figure 2022531461000438
Figure 2022531461000439
Figure 2022531461000440
Figure 2022531461000441
Figure 2022531461000442
Figure 2022531461000443
Figure 2022531461000444
Figure 2022531461000445
Figure 2022531461000446
Figure 2022531461000447
Figure 2022531461000448
Figure 2022531461000449
Figure 2022531461000450
Figure 2022531461000451
Figure 2022531461000452
Figure 2022531461000453
Figure 2022531461000454
Figure 2022531461000455
Figure 2022531461000456
Figure 2022531461000457
Figure 2022531461000458
Figure 2022531461000459
Figure 2022531461000460
Figure 2022531461000461
Figure 2022531461000462
Figure 2022531461000463
Figure 2022531461000464
Figure 2022531461000465
Figure 2022531461000466
Figure 2022531461000467
Figure 2022531461000468
Figure 2022531461000469
Figure 2022531461000470
Figure 2022531461000471
Figure 2022531461000472
Figure 2022531461000473
Figure 2022531461000474
Figure 2022531461000475
Figure 2022531461000476
Figure 2022531461000477
Figure 2022531461000478
Figure 2022531461000479
Figure 2022531461000480
Figure 2022531461000481

Claims (115)

  1. 免疫細胞活性を阻害するキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記ポリペプチドは、前記ポリペプチドと免疫細胞成分との会合を媒介する第１のドメインと、前記ポリペプチドが前記免疫細胞内で発現される際に免疫細胞活性の阻害を媒介する第２のドメインとを含む、前記ポリヌクレオチド。
  2. メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
  3. 修飾メッセンジャーＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）である、請求項２に記載のポリヌクレオチド。
  4. 免疫細胞活性が、前記免疫細胞を枯渇させずに阻害される、請求項１～３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  5. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、請求項１～４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  6. 前記第１のドメインが、Ｔ細胞内で発現される膜関連タンパク質由来である、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  7. 前記第１のドメインが、Ｆｙｎ、ＳｒｃまたはＫＲＡＳ由来である、請求項６に記載のポリヌクレオチド。
  8. 第１のドメインが、ヒトＦｙｎのＮ末端膜結合部分である、請求項７に記載のポリヌクレオチド。
  9. 前記第１のドメインが、ヒトＳｒｃのＮ末端膜結合部分である、請求項７に記載のポリヌクレオチド。
  10. 前記第１のドメインが、ヒトＫＲＡＳのＣ末端膜結合部分である、請求項７に記載のポリヌクレオチド。
  11. 前記第１のドメインが、Ｔ細胞内で発現される膜貫通関連タンパク質由来である、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  12. 前記第１のドメインが、ヒトＰＡＧのＮ末端膜結合部分である、請求項１１に記載のポリヌクレオチド。
  13. 前記第１のドメインが、膜受容体と会合する、Ｔ細胞内で発現されるタンパク質由来である、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  14. 前記第１のドメインが、ＬｃｋまたはＺＡＰ－７０由来である、請求項１３に記載のポリヌクレオチド。
  15. 前記第１のドメインが、ＳＨ２及びＳＨ３ドメインを含むヒトＬｃｋポリペプチドである、請求項１４に記載のポリヌクレオチド。
  16. 前記第１のドメインが、少なくとも１つのＳＨ２ドメインを含むヒトＺＡＰ－７０ポリペプチドである、請求項１４に記載のポリヌクレオチド。
  17. 前記第１のドメインが、Ｔ細胞内で発現される細胞内タンパク質由来である、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  18. 前記第１のドメインが、ＬＡＴ、Ｇｒｂ２、Ｇｒａｐ、ＰＩ３Ｋ．ｐ８５α、ＰＬＣγ１、ＧＡＤＳ、ＡＤＡＰ、ＮＣＫ、ＶＡＶ、ＳＯＳ、ＩＴＫ及びＳＬＰ７６からなる群から選択されるタンパク質由来である、請求項１７に記載のポリヌクレオチド。
  19. 前記第１のドメインが、全長ヒトＬＡＴタンパク質、ヒトＬＡＴのＮ末端部分、及びヒトＬＡＴのＺＡＰ－７０結合部分からなる群から選択されるヒトＬＡＴポリペプチドである、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
  20. 前記第１のドメインが、ＳＨ２ドメインを含むＧｒｂ２ポリペプチドである、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
  21. 前記第１のドメインが、ＳＨ２ドメインを含むＧｒａｐポリペプチドである、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
  22. 前記第１のドメインが、ｉＳＨ２ドメインを含有する内部領域が欠失しているＰＩ３Ｋ．ｐ８５αポリペプチドである、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
  23. 前記第１のドメインが、ＳＨ２及びＳＨ３ドメインを含むＰＬＣγ１ポリペプチドである、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
  24. 前記第２のドメインが、ＩＴＩＭモチーフを含む、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  25. 前記第２のドメインが、ヒトＬＡＩＲ１ ＩＴＩＭ１モチーフを含む、請求項２４に記載のポリヌクレオチド。
  26. 前記第２のドメインが、ヒトＬＡＩＲ１ ＩＴＩＭ２モチーフを含む、請求項２４に記載のポリヌクレオチド。
  27. 前記第２のドメインが、ヒトＣＴＬＡ４ ＩＴＩＭ様モチーフを含む、請求項２４に記載のポリヌクレオチド。
  28. 前記第２のドメインが、阻害性キナーゼドメインを含む、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  29. 前記第２のドメインが、構成的に活性なＣｓｋポリペプチドを含む、請求項２８に記載のポリヌクレオチド。
  30. 前記第２のドメインが、Ｗ４７Ａ、Ｒ１０７Ｋ及びＥ１４Ａ変異を含む、構成的に活性なヒトＣｓｋポリペプチドを含む、請求項２９に記載のポリヌクレオチド。
  31. 前記第２のドメインが、ホスファターゼドメインであるを含む、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  32. 前記第２のドメインが、ホスファターゼ活性を有するＳＨＰ１ポリペプチドを含む、請求項３１に記載のポリヌクレオチド。
  33. 前記第２のドメインが、ホスファターゼ活性を有するＳＨＩＰ１ポリペプチドを含む、請求項３１に記載のポリヌクレオチド。
  34. 前記第２のドメインが、ホスファターゼ活性を有するＰＴＰＮ２２ポリペプチドを含む、請求項３１に記載のポリヌクレオチド。
  35. 前記第２のドメインが、ホスファターゼ活性を有するＰＴＰＮ１ポリペプチドを含む、請求項３１に記載のポリヌクレオチド。
  36. 前記第２のドメインが、前記Ｔ細胞内のＰＩ３Ｋ活性を阻害する、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  37. 前記第２のドメインが、ヒトＰＴＥＮタンパク質由来である、請求項３６に記載のポリヌクレオチド。
  38. 前記第１のドメインが、配列番号１～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  39. 前記第２のドメインが、配列番号２１～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  40. ヒトＬＡＴタンパク質由来の第１のドメインと、ＬＡＩＲ１またはＣＴＬＡ４ ＩＴＩＭモチーフを含む第２のドメインとを含むキメラポリペプチドをコードする、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  41. ＬＡＴ、ＰＡＧ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ及びＳｒｃからなる群から選択されるヒトタンパク質由来の第１のドメインと、構成的に活性なヒトＣＳＫタンパク質を含む第２のドメインとを含むキメラポリペプチドをコードする、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  42. ＬＡＴ、Ｓｒｃ、ＰＩ３Ｋ．ｐ８５及びＰＬＣγ１からなる群から選択されるヒトタンパク質由来の第１のドメインと、ＳＨＰ１、ＳＨＩＰ１及びＰＴＰＮ２２からなる群から選択されるヒトタンパク質由来の第２のドメインとを含むキメラポリペプチドをコードする、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  43. ヒトＰＬＣγ１タンパク質由来の第１のドメインと、ヒトＰＴＥＮタンパク質由来の第２のドメインとを含むキメラポリペプチドをコードする、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  44. 配列番号３５～８０のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列を含む、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  45. 配列番号８１～１２６のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むキメラポリペプチドをコードする、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  46. 前記Ｔ細胞内で発現される際にＴ細胞増殖を阻害する、請求項５～４５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  47. 前記Ｔ細胞内で発現される際にＴ細胞サイトカイン産生を阻害する、請求項５～４５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  48. 前記免疫細胞が、Ｂ細胞である、請求項１～４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  49. 前記第１のドメインが、Ｂ細胞内で発現される膜関連タンパク質由来である、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  50. 前記第１のドメインが、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂまたはＳｙｋ由来である、請求項４９に記載のポリヌクレオチド。
  51. 前記第１のドメインが、ＩＴＡＭを欠いているかまたはＩＴＡＭが不活化しているヒトＣＤ７９ａポリペプチドである、請求項５０に記載のポリヌクレオチド。
  52. 前記第１のドメインが、ＩＴＡＭを欠いているかまたはＩＴＡＭが不活化しているヒトＣＤ７９ｂポリペプチドである、請求項５０に記載のポリヌクレオチド。
  53. 前記第１のドメインが、Ｂ細胞内で発現される膜受容体由来である、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  54. 前記第１のドメインが、ＣＤ１９またはＣＤ６４由来である、請求項５３に記載のポリヌクレオチド。
  55. 前記第１のドメインが、ＩＴＡＭを欠いているかまたはＩＴＡＭが不活化しているヒトＣＤ１９ポリペプチドである、請求項５４に記載のポリヌクレオチド。
  56. 前記第１のドメインが、ヒトＣＤ６４のＮ末端部分である、請求項５４に記載のポリヌクレオチド。
  57. 前記第２のドメインが、前記Ｂ細胞内のＣＤ１９／ＣＤ２２均衡を変化させる、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  58. 前記第２のドメインが、ＣＤ２２またはＳＨＰ１由来である、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  59. 前記第２のドメインが、ヒトＣＤ２２ ＩＴＩＭモチーフを含む、請求項５８に記載のポリヌクレオチド。
  60. 前記第２のドメインが、ヒトＳＨＰ１ホスファターゼドメインを含む、請求項５８に記載のポリヌクレオチド。
  61. 前記第２のドメインが、前記Ｂ細胞内のＢ細胞受容体（ＢＣＲ）活性を阻害する、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  62. 前記第２のドメインが、ＣＤ２２ ＩＴＩＭモチーフを含む、請求項６１に記載のポリヌクレオチド。
  63. 前記第２のドメインが、前記Ｂ細胞内のＦｃＲ活性を変化させる、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  64. 前記第２のドメインが、ＣＤ３２ｂ由来である、請求項６３に記載のポリヌクレオチド。
  65. 前記第２のドメインが、ヒトＣＤ３２ｂ ＩＴＩＭモチーフを含む、請求項６４に記載のポリヌクレオチド。
  66. 前記第１のドメインが、配列番号１２７～１４３及び２２９～２３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  67. 前記第２のドメインが、配列番号２５、２６及び１４４～１４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  68. 前記第１のドメインが、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１９及びＳｙｋからなる群から選択されるヒトタンパク質由来であり、前記第２のドメインが、ヒトＣＤ２２、ヒトＳＨＰ１またはヒトＣｓｋ由来である、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  69. 前記第１のドメインが、ヒトＣＤ６４由来であり、前記第２のドメインが、ヒトＣＤ３２ｂ由来である、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  70. 配列番号１５０～１６７または２３２～２３７のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列を含む、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  71. 配列番号１６８～１８５または２３８～２４３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むキメラポリペプチドをコードする、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
  72. 前記Ｂ細胞内で発現される際に、Ｂ細胞免疫グロブリン産生を阻害する、請求項４８～７１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  73. 前記Ｂ細胞内で発現される際に、Ｂ細胞サイトカイン産生を阻害する、請求項４８～７１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  74. 前記免疫細胞が、ＮＫ細胞である、請求項１～４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  75. 前記免疫細胞が、樹状細胞である、請求項１～４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  76. 前記免疫細胞が、マクロファージである、請求項１～４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
  77. 請求項１～７６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、脂質ナノ粒子。
  78. 免疫細胞送達増強脂質を含む、請求項７７に記載の脂質ナノ粒子。
  79. 請求項７７または請求項７８に記載の脂質ナノ粒子、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  80. 個体における免疫応答を阻害するための医薬の製造における、請求項７７または請求項７８に記載の脂質ナノ粒子、及び任意の薬学的に許容される担体の使用であって、前記医薬が、前記脂質ナノ粒子及び任意の薬学的に許容される担体を含み、前記処置が、前記医薬及び任意の薬学的に許容される担体の投与を含む、前記使用。
  81. 請求項７７または請求項７８に記載の脂質ナノ粒子、及び任意の薬学的に許容される担体、及び個体における免疫応答を阻害するための前記脂質ナノ粒子の投与のための説明書を含む添付文書を含む、キット。
  82. 対象における免疫応答の阻害方法であって、免疫応答が前記対象で阻害されるように、請求項７７または請求項７８に記載の脂質ナノ粒子、及び任意の薬学的に許容される担体を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  83. 対象におけるＴ細胞応答の阻害方法であって、請求項５～４７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記ポリヌクレオチドが、免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子内に封入されており、前記投与により、Ｔ免疫応答が前記対象で阻害される、前記方法。
  84. 対象におけるＢ細胞応答の阻害方法であって、請求項４８～７３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含み、前記ポリヌクレオチドが、免疫細胞送達増強脂質を含む脂質ナノ粒子内に封入されており、前記投与により、Ｂ細胞応答が前記対象で阻害される、前記方法。
  85. 前記対象が、自己免疫疾患を有する、請求項８２～８４のいずれか１項に記載の方法。
  86. 前記自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む）、１型糖尿病、多発性硬化症、乾癬、グレーブス病、橋本甲状腺炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、糸球体腎炎、及び血管炎からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
  87. 前記対象が、アレルギー疾患を有する、請求項８２～８４のいずれか１項に記載の方法。
  88. 前記対象が、炎症反応を有する、請求項８２～８４のいずれか１項に記載の方法。
  89. 前記対象が、移植レシピエントである、請求項８２～８４のいずれか１項に記載の方法。
  90. 前記対象が、免疫療法を受けている、請求項８２～８４のいずれか１項に記載の方法。
  91. （ｉ）イオン化可能脂質、
    （ｉｉ）ステロールまたは他の構造脂質、
    （ｉｉｉ）請求項１～７６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、
    （ｉｖ）任意に、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、及び
    （ｖ）任意に、ＰＥＧ脂質、
    を含み、
    （ｉ）前記イオン化可能脂質または（ｉｉ）前記ステロールまたは他の構造脂質のうちの１つ以上が、前記ＬＮＰの標的免疫細胞への送達を強化するのに有効な量で免疫細胞送達増強脂質を含み、前記標的免疫細胞が、Ｔ細胞またはＢ細胞である、免疫細胞送達ＬＮＰ。
  92. フィトステロール、またはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む、請求項９１に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  93. 前記フィトステロールが、β－シトステロール、スチグマステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９２に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  94. 前記フィトステロールが、シトステロール、またはその塩もしくはエステルを含む、請求項９２に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  95. 前記フィトステロールが、スチグマステロール、またはその塩もしくはエステルを含む、請求項９２に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  96. 前記フィトステロールが、β－シトステロール
    Figure 2022531461000482
    またはその塩もしくはエステルである、請求項９２に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  97. 前記フィトステロールまたはその塩もしくはエステルが、β－シトステロール、β－シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ－１４０、化合物Ｓ－１５１、化合物Ｓ－１５６、化合物Ｓ－１５７、化合物Ｓ－１５９、化合物Ｓ－１６０、化合物Ｓ－１６４、化合物Ｓ－１６５、化合物Ｓ－１７０、化合物Ｓ－１７３、化合物Ｓ－１７５及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９１に記載の免疫細胞送達脂質ＬＮＰ。
  98. 前記フィトステロールが、β－シトステロールである、請求項９７に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  99. 前記フィトステロールが、β－シトスタノールである、請求項９７に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  100. 前記フィトステロールが、カンペステロールである、請求項９７に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  101. 前記フィトステロールが、ブラシカステロールである、請求項９７に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  102. 前記イオン化可能脂質が、式（Ｉ Ｉ）、（Ｉ ＩＡ）、（Ｉ ＩＢ）、（Ｉ ＩＩ）、（Ｉ ＩＩａ）、（Ｉ ＩＩｂ）、（Ｉ ＩＩｃ）、（Ｉ ＩＩｄ）、（Ｉ ＩＩｅ）、（Ｉ ＩＩｆ）、（Ｉ ＩＩｇ）、（Ｉ ＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩ）、（Ｉ ＶＩ－ａ）、（Ｉ ＶＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩＩ）、（Ｉ ＶＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩａ）、（Ｉ ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ ＶＩＩｂ－１）、（Ｉ ＶＩＩｂ－２）、（Ｉ ＶＩＩｂ－３）、（Ｉ ＶＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩｄ）、（Ｉ ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ ＩＸ）、（Ｉ ＩＸａ１）、（Ｉ ＩＸａ２）、（Ｉ ＩＸａ３）、（Ｉ ＩＸａ４）、（Ｉ ＩＸａ５）、（Ｉ ＩＸａ６）、（Ｉ ＩＸａ７）、または（Ｉ ＩＸａ８）のいずれか１つの化合物を含む、請求項９１～１０１のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  103. 前記イオン化可能脂質が、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ－４８、化合物Ｉ－５０、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１、化合物Ｉ－１１３、化合物Ｉ－１８１、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－２４４、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３０９、化合物Ｉ－３１７、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－３２２、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－３２８、化合物Ｉ－３３０、化合物Ｉ－３３１、化合物Ｉ－３３２、化合物Ｉ－３４７、化合物Ｉ－３４８、化合物Ｉ－３４９、化合物Ｉ－３５０、化合物Ｉ－３５２及び化合物Ｉ－Ｍからなる群から選択される化合物を含む、請求項９１～１０１のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  104. 前記イオン化可能脂質が、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ－３２１、化合物Ｉ－２９２、化合物Ｉ－３２６、化合物Ｉ－１８２、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－４８、化合物Ｉ－５０、化合物Ｉ－３２８、化合物Ｉ－３３０、化合物Ｉ－１０９、化合物Ｉ－１１１及び化合物Ｉ－１８１からなる群から選択される化合物を含む、請求項９１～１０１のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  105. 前記ＬＮＰが、リン脂質を含み、前記リン脂質が、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ－４０９からなる群から選択される化合物を含む、請求項９１～１０４のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  106. 前記ＬＮＰが、ＰＥＧ脂質を含む、請求項９１～１０５のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  107. 前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１０６に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  108. 前記ＰＥＧ脂質が、化合物Ｐ－４１５、化合物Ｐ－４１６、化合物Ｐ－４１７、化合物Ｐ－４１９、化合物Ｐ－４２０、化合物Ｐ－４２３、化合物Ｐ－４２４、化合物Ｐ－４２８、化合物Ｐ－Ｌ１、化合物Ｐ－Ｌ２、化合物Ｐ－Ｌ３、化合物Ｐ－Ｌ４、化合物Ｐ－Ｌ６、化合物Ｐ－Ｌ８、化合物Ｐ－Ｌ９、化合物Ｐ－Ｌ１６、化合物Ｐ－Ｌ１７、化合物Ｐ－Ｌ１８、化合物Ｐ－Ｌ１９、化合物Ｐ－Ｌ２２、化合物Ｐ－Ｌ２３及び化合物Ｐ－Ｌ２５からなる群から選択される化合物を含む、請求項１０７に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  109. 前記ＰＥＧ脂質が、化合物Ｐ－４２８、化合物ＰＬ－１６、化合物ＰＬ－１７、化合物ＰＬ－１８、化合物ＰＬ－１９、化合物ＰＬ－１、及び化合物ＰＬ－２からなる群から選択される化合物を含む、請求項１０８に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  110. 約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン化可能脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、請求項９１～１０９のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  111. 約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン化可能脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、請求項９１～１０９のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  112. 約５０ｍｏｌ％のイオン化可能脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、請求項９１～１０９のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  113. 前記ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質が、１８．５％のフィトステロールであり、前記総ｍｏｌ％の構造脂質が、３８．５％である、請求項１０９～１１２のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  114. 前記ｍｏｌ％のステロールまたは他の構造脂質が、２８．５％のフィトステロールであり、前記総ｍｏｌ％の構造脂質が、３８．５％である、請求項１０９～１１２のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ。
  115. 以下を含む、請求項９１～１０９のいずれか１項に記載の免疫細胞送達ＬＮＰ：
    （ｉ）約５０ｍｏｌ％のイオン化可能脂質（前記イオン化可能脂質は、化合物Ｉ－３０１、化合物Ｉ－３２１、及び化合物Ｉ－３２６からなる群から選択される化合物である）、
    （ｉｉ）約１０ｍｏｌ％のリン脂質（前記リン脂質は、ＤＳＰＣである）、
    （ｉｉｉ）約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質（前記構造脂質は、β－シトステロール及びコレステロールから選択される）、及び
    （ｉｖ）約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質（前記ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ－４２８である）。
JP2021565918A 2019-05-07 2020-05-07 免疫細胞活性を破壊するポリヌクレオチド及びその使用方法 Pending JP2022531461A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962844588P 2019-05-07 2019-05-07
US62/844,588 2019-05-07
PCT/US2020/031847 WO2020227510A1 (en) 2019-05-07 2020-05-07 Polynucleotides for disrupting immune cell activity and methods of use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022531461A true JP2022531461A (ja) 2022-07-06
JPWO2020227510A5 JPWO2020227510A5 (ja) 2023-05-09

Family

ID=70969014

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021565918A Pending JP2022531461A (ja) 2019-05-07 2020-05-07 免疫細胞活性を破壊するポリヌクレオチド及びその使用方法

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20230085318A1 (ja)
EP (1) EP3966333A1 (ja)
JP (1) JP2022531461A (ja)
AU (1) AU2020268388A1 (ja)
CA (1) CA3139321A1 (ja)
MA (1) MA55896A (ja)
WO (1) WO2020227510A1 (ja)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MA53660A (fr) * 2018-09-19 2021-07-28 Modernatx Inc Analogues de stérol et leurs utilisations
PL3864163T3 (pl) 2018-10-09 2024-05-20 The University Of British Columbia Kompozycje i układy zawierające pęcherzyki zdolne do transfekcji wolne od rozpuszczalników organicznych i detergentów oraz związane z nimi sposoby postępowania
CA3200234A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Daryl C. Drummond Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use
CA3203883A1 (en) * 2021-01-19 2022-07-28 Marco Ciufolini Sulfur-containing lipids
US20240173267A1 (en) * 2021-02-10 2024-05-30 Oncorus, Inc. Compounds, compositions, and methods of using thereof
WO2022212393A1 (en) * 2021-03-30 2022-10-06 The Regents Of The University Of California Transplanted cell protection via modified fc receptors
KR20250031230A (ko) 2022-05-25 2025-03-06 아카제라 메디신즈, 인크. 핵산 전달을 위한 지질 나노입자 및 이의 사용 방법
WO2024226723A1 (en) * 2023-04-26 2024-10-31 Northwestern University Active loading of biomolecular cargo into engineered vesicles

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017046692A (ja) * 2010-04-13 2017-03-09 セルデックス・セラピューティクス・インコーポレイテッド ヒトｃｄ２７に結合する抗体およびその使用

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4371812B2 (ja) 2001-09-28 2009-11-25 マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ マイクロｒｎａ分子
EP2530157B1 (en) 2003-07-31 2016-09-28 Regulus Therapeutics Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of miRNAs
DE102005046490A1 (de) 2005-09-28 2007-03-29 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen
EP2535419A3 (en) 2007-09-26 2013-05-29 Intrexon Corporation Synthetic 5'UTRs, expression vectors, and methods for increasing transgene expression
EP3431076B1 (en) 2009-06-10 2021-10-06 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
DE19177059T1 (de) 2010-10-01 2021-10-07 Modernatx, Inc. N1-methyl-pseudouracile enthältendes ribonucleinsäuren sowie ihre verwendungen
JP5902197B2 (ja) 2011-01-11 2016-04-13 アルニラム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド Ｐｅｇ化脂質および薬剤送達のためのそれらの使用
WO2013103659A1 (en) 2012-01-04 2013-07-11 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Stabilizing rna by incorporating chain-terminating nucleosides at the 3'-terminus
SI2922554T1 (sl) 2012-11-26 2022-06-30 Modernatx, Inc. Terminalno modificirana RNA
EP2931319B1 (en) 2012-12-13 2019-08-21 ModernaTX, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
CA2897941A1 (en) 2013-01-17 2014-07-24 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
HK1220122A1 (zh) 2013-03-09 2017-04-28 Modernatx, Inc. Mrna的異源未轉錄區域
US20160024181A1 (en) 2013-03-13 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
EP3110401A4 (en) 2014-02-25 2017-10-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems
CN106795096B (zh) 2014-06-25 2020-05-29 爱康泰生治疗公司 用于递送核酸的新型脂质和脂质纳米颗粒制剂
GB201509413D0 (en) * 2015-06-01 2015-07-15 Ucl Business Plc Fusion protein
LT3368507T (lt) 2015-10-28 2023-03-10 Acuitas Therapeutics Inc. Nauji lipidai ir lipidų nanodalelių kompozicijos, skirtos nukleorūgščių tiekimui
MD3386484T2 (ro) 2015-12-10 2022-11-30 Modernatx Inc Compoziții și metode de livrare a unor agenți terapeutici
CN115558030A (zh) * 2016-03-31 2023-01-03 百欧恩泰美国公司 新抗原及其使用方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017046692A (ja) * 2010-04-13 2017-03-09 セルデックス・セラピューティクス・インコーポレイテッド ヒトｃｄ２７に結合する抗体およびその使用

Also Published As

Publication number Publication date
CA3139321A1 (en) 2020-11-12
EP3966333A1 (en) 2022-03-16
MA55896A (fr) 2022-03-16
US20230085318A1 (en) 2023-03-16
WO2020227510A1 (en) 2020-11-12
AU2020268388A1 (en) 2021-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2022531461A (ja) 免疫細胞活性を破壊するポリヌクレオチド及びその使用方法
JP7556848B2 (ja) ｍＲＮＡ治療薬を使用したがんを治療するための方法及び組成物
JP7285220B2 (ja) 連結したインターロイキン－１２（ｉｌ１２）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子
CA3089117A1 (en) Compositions and methods for delivery of agents to immune cells
JP2022519557A (ja) 脂質ナノ粒子の調製方法
JP2022543467A (ja) 強化された薬剤送達のための組成物及び方法
TW202139976A (zh) 製備脂質奈米顆粒之方法
WO2023107669A1 (en) Compounds and compositions for delivery of therapeutic agents
JP2022501367A (ja) 脂質ナノ粒子の調製及びその投与方法
JP2023510308A (ja) 寛容原性樹状細胞を作る方法
JP2022543773A (ja) 免疫細胞へのｒｎａ干渉剤の送達のための組成物及び方法
KR20190020299A (ko) 면역 조정 폴리펩타이드를 암호화하는 mRNA의 조합물 및 이의 용도
CA3187261A1 (en) Lnp compositions comprising mrna therapeutics with extended half-life
US20230086537A1 (en) Differentially expressed immune cell micrornas for regulation of protein expression
CN111587114A (zh) 用于调节人免疫应答的咪唑并嘧啶的用途
CN118240844A (zh) 带状疱疹mRNA疫苗及其制备方法和应用
US20240401006A1 (en) Mrnas encoding chimeric metabolic reprogramming polypeptides and uses thereof
US20250213664A1 (en) Mrnas encoding checkpoint cancer vaccines and uses thereof
US20250041393A1 (en) Polynucleotides encoding integrin beta-6 and methods of use thereof
WO2024259373A1 (en) Compounds and compositions for delivery of therapeutic agents
CN118946365A (zh) 编码检查点癌症疫苗的mRNA及其用途
CN119317636A (zh) 编码活化EGFR突变肽的免疫调节治疗性mRNA组合物
HK40050969A (en) Methods and compositions for treating cancer using mrna therapeutics

Legal Events

Date Code Title Description
RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20211206

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20211215

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230426

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230426

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20240423

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20240719

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20241119