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JP2022514499A - 抗ｉｌ－２７抗体及びその使用 - Google Patents

抗ｉｌ－２７抗体及びその使用 Download PDF

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JP2022514499A JP2021533517A JP2021533517A JP2022514499A JP 2022514499 A JP2022514499 A JP 2022514499A JP 2021533517 A JP2021533517 A JP 2021533517A JP 2021533517 A JP2021533517 A JP 2021533517A JP 2022514499 A JP2022514499 A JP 2022514499A
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ケリー ホワイト，
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Abstract

本開示は、抗ＩＬ－２７抗体及びその抗原結合部分に関する。本開示は、抗体またはその抗原結合部分を投与することにより、がんなどの疾患の１つ以上の症状を処置または改善する方法にも関する。本開示は、例えば、対象または試料におけるＩＬ－２７を検出するための方法にも関する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１２月１３日に出願の米国仮出願第６２／７７９，３４１号の利益を主張し、参照によりその全内容が本明細書に組み込まれる。
本開示は、一般に、ＩＬ－２７シグナル伝達を調節するための組成物及び方法に関する。より具体的には、本開示は、ＩＬ－２７に結合し、ＩＬ－２７シグナル伝達を調節する免疫原性組成物（例えば、抗体、抗体断片など）に関する。
近年、免疫系が腫瘍形成及び進行に対する重大な障害として機能することを示唆する一連の証拠が増えている。抗腫瘍能力または活性を有する天然に存在するＴ細胞ががんを有する患者に存在するという原理は、腫瘍学における免疫療法アプロ－チの開発を合理化してきた。免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、マクロファ－ジ、及びナチュラルキラ－細胞は、抗腫瘍活性を示し得、悪性腫瘍の発生及び成長を効果的に制御し得る。腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原は、悪性腫瘍を認識し、除去するように免疫細胞を誘導し得る（Ｃｈｅｎ ＆ Ｍｅｌｌｍａｎ，（２０１３） Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９（１）：１－１０）。腫瘍特異的免疫反応の存在にもかかわらず、悪性腫瘍は、しばしば、腫瘍発生及び進行の制御の失敗をもたらす種々の免疫調節メカニズムにより免疫攻撃を免れるか、または回避する（Ｍｏｔｚ ＆ Ｃｏｕｋｏｓ，（２０１３） Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９（１）：６１－７３０）。実際、がんの新たな特徴は、これらの免疫調節メカニズムの利用及び抗腫瘍免疫反応の無力化であり、これらにより、免疫による死滅からの腫瘍の回避及び逃避をもたらす（Ｈａｎａｈａｎ ａｎｄ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ （２０１１） Ｃｅｌｌ １４４（５）：６４６－６７４）。
ＩＬ－２７は、２つのサブユニット（ＥＢＩ３及びＩＬ－２７ｐ２８）から構成されるヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ－２７は、構造的にＩＬ－１２及びＩＬ－６サイトカインファミリ－の両方に関連する。ＩＬ－２７は、ＳＴＡＴ１及びＳＴＡＴ３によるシグナル伝達を媒介するＩＬ－２７Ｒα（ＷＳＸ１）及びｇｐ１３０鎖からなるヘテロ二量体受容体に結合し、これを介してシグナル伝達を媒介する。最初の報告は、ＩＬ－２７を、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖、Ｔヘルパ－（Ｔｈ）１細胞への分化、及びＩＦＮ－γ産生を補助し、多くの場合、ＩＬ－１２と協調して作用する免疫増強サイトカインとして特徴付けた。その後の研究により、ＩＬ－２７が、生物学的文脈及び使用された実験モデルに応じて炎症誘発効果または抗炎症効果のいずれかをもたらす、複雑な免疫調節機能を示すことが示された。ＩＬ－２７は、ヒトがん細胞において異なる免疫調節分子の発現を駆動し得、これにより、インビボで免疫反応の局所的撹乱を補助し得る（Ｆａｂｂｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１７） Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ Ｉｎｆｌａｍｍ ３９５８０６９，２０１７年２月１日にオンラインで公開，ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１７／３９５８０６９、及びその中に含まれる参考文献）。
がんの処置及び管理においてなされている顕著な進歩にもかかわらず、依然として、がんを処置及び管理するための新規かつ効果的な治療法が引き続き必要である。
Ｃｈｅｎ ＆ Ｍｅｌｌｍａｎ，（２０１３） Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９（１）：１－１０ Ｍｏｔｚ ＆ Ｃｏｕｋｏｓ，（２０１３） Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９（１）：６１－７３０ Ｈａｎａｈａｎ ａｎｄ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ （２０１１） Ｃｅｌｌ １４４（５）：６４６－６７４
本明細書では、ヒトＩＬ－２７（インタ－ロイキン２７）に特異的に結合し、高親和性及び特異性でそれに拮抗する抗体またはその抗原結合部分が開示される。抗体分子をコ－ドする核酸分子、発現ベクタ－、宿主細胞、及び抗体分子を作製するための方法も提供される。抗体分子を含む医薬組成物も提供される。本明細書において開示される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分は、免疫不全及びがんが含まれる障害を処置、予防、及び／または診断するために、（単独で、または他の治療薬もしくは治療手段と組み合わせて）使用され得る。従って、抗ＩＬ－２７抗体分子を使用した、がん及び免疫不全が含まれる様々な障害を処置及び／または診断するための組成物及び方法が、本明細書において開示される。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択される重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７０６、７０７、及び７０８に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７１４、７１５及び７１６に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７２８、７２９、及び７３０に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７３６、７３７、及び７３８に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５０、７５１、及び７５２に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７５８、７５９、及び７６０に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７７２、７７３、及び７７４に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７８０、７８１、及び７８２に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択される重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７０９、７１０、及び７１１に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７１７、７１８、及び７１９に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７３１、７３２、及び７３３に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７３９、７４０、及び７４１に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５３、７５４、及び７５５に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７６１、７６２、及び７６３に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７７５、７７６、及び７７７に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７８３、７８４、及び７８５に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７０６、７０７、及び７０８に記載されており、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７１４、７１５、及び７１６に記載されている。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７２８、７２９、及び７３０に記載されており、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７３６、７３７、及び７３８に記載されている。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７５０、７５１、及び７５２に記載されており、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７５８、７５９、及び７６０に記載されている。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７７２、７７３、及び７７４に記載されており、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７８０、７８１、及び７８２に記載されている。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号７１２、７３４、７５６、及び７７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、当該軽鎖可変領域は、配列番号７２０、７４２、７６４、及び７８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７１２及び７２０；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７３４及び７４２；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５６及び７６４；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７１７７５及び７８６。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号７１２、７３４、７５６、及び７７８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、当該軽鎖可変領域は、配列番号７２０、７４２、７６４、及び７８６からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７１２及び７２０；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７３４及び７４２；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５６及び７６４；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７７８及び７８６。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７１２及び７２０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７１２及び７２０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７３４及び７４２に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７３４及び７４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７５６及び７６４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７５６及び７６４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７７８及び７８６に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７７８及び７８６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号７２２、７４４、７６６、及び７８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号７２２、７４４、７６６、及び７８８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号７２６、７４８、７７０、及び７９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号７２６、７４８、７７０、及び７９２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７２２及び７２４；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７４４及び７４６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７６６及び７６８；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７８８及び７９０。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７２２及び７２４；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７４４及び７４６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７６６及び７６８；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７８８及び７９０。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖及び軽鎖を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７２６及び７２４；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７４８及び７４６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７７０及び７６８；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７９２及び７９０。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖及び軽鎖を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７２６及び７２４；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７４８及び７４６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７７０及び７６８；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７９２及び７９０。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７２２及び７２４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７２２及び７２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７４４及び７４６に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７４４及び７４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７６６及び７６８に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７６６及び７６８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７８８及び７９０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７８８及び７９０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７２６及び７２４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７２６及び７２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７４８及び７４６に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７４８及び７４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７７０及び７６８に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７７０及び７６８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７９２及び７９０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
一態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７９２及び７９０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記態様の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記態様のいずれかの単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖、重鎖、または軽鎖及び重鎖の両方をコ－ドするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記核酸を含む発現ベクタ－を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記発現ベクタ－で形質転換された細胞を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し得、及び／またはヒトＩＬ－２７に特異的に拮抗し得ることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合するモノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を作製するための方法であって、上記細胞をモノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の発現を可能にする条件下で維持することを含む当該方法を提供する。幾つかの実施形態では、本方法は、モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を得ることを更に含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減するための方法であって、当該細胞を上記単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片のいずれかと接触させることを含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減する。
幾つかの実施形態では、本開示は、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減するための方法であって、当該細胞を上記単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片のいずれかと接触させることを含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減する。
幾つかの実施形態では、本開示は、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減するための方法であって、当該細胞を上記単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片のいずれかと接触させることを含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減する。
幾つかの実施形態では、本開示は、細胞からの１種以上のサイトカインの分泌を誘発または増強するための方法であって、当該細胞を上記単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片のいずれかと接触させることを含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌を誘発または増強する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激する方法であって、有効量の上記単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または上記医薬組成物のいずれかを当該対象に投与することを含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象におけるがんを処置する方法であって、有効量の上記単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または上記医薬組成物のいずれかを当該対象に投与することを含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、有効量の上記単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または上記医薬組成物のいずれかを当該対象に投与することを含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体もしくはその抗原結合部分または当該医薬組成物は、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減し、これにより、当該免疫反応を刺激するか、または当該がんを処置する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、有効量の上記単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または上記医薬組成物のいずれかを当該対象に投与することを含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物は、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減し、これにより、当該免疫反応を刺激するか、または当該がんを処置する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、有効量の上記単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または上記医薬組成物のいずれかを当該対象に投与することを含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物は、細胞上のＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減し、これにより、当該免疫反応を刺激するか、または当該がんを処置する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、有効量の上記単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または上記医薬組成物のいずれかを当該対象に投与することを含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物は、細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌を誘発または増強し、これにより、当該免疫反応を刺激するか、または当該がんを処置する。
幾つかの実施形態では、がんは、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、肉腫、精巣癌、卵巣癌、膵臓癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌）、黒色腫、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、結腸直腸癌、膀胱癌、子宮内膜癌、前立腺癌、甲状腺癌、肝細胞癌、胃癌、脳癌、リンパ腫（例えば、ＤＬ－ＢＣＬ）、白血病（例えば、ＡＭＬ）、または腎臓癌（例えば、腎細胞癌（例えば、腎明細胞癌））から選択される。
幾つかの実施形態では、本開示は、抗ＰＤ－１抗体の１つ以上の活性を増強する（例えば、ＰＤ－１により媒介されるサイトカイン分泌を増強する；抗ＰＤ－１により媒介されるＴＮＦα分泌を増強する；抗ＰＤ－１抗体に曝露された細胞からの抗ＰＤ－１により媒介されるＩＬ－６分泌を増強する）方法であって、細胞を上記抗体またはその抗原結合部分のいずれかに、抗ＰＤ－１抗体と同時にまたは逐次的に曝露させて、これにより、抗ＰＤ１抗体の１つ以上の活性を増強することを含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、抗ＰＤ－１抗体、及び上記抗体またはその抗原結合部分のいずれか、ならびに薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、同時投与または逐次投与のための抗ＰＤ－１抗体、及び上記抗体またはその抗原結合部分のいずれか、ならびにそれらの使用のための使用説明書を含むキットを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離されたモノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分のいずれかが、１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて投与されることを提供し、ここで、第２の治療薬または治療手段は、以下からなる群から選択される：化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解性薬物、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、外科的処置、放射線治療、共刺激分子の活性化剤、抑制分子の阻害剤、ワクチン、または細胞免疫療法、またはそれらの組み合わせ。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬が、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ１１２Ｒ阻害剤、ＴＡＭ阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、４－１ＢＢアゴニスト、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、Ａ２ＡＲ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ｐｅｇ－ＩＬ－２、ｐｅｇ ＩＬ－１０、ＣＤ４０アゴニスト、またはそれらの組み合わせであることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬が、ＰＤ－１アンタゴニストであることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、ＰＤ－１アンタゴニストが、以下からなる群から選択されることを提供する：ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１、ＡＭＰ－２２４、ＡＢ１２２、及びＪＴＸ－４０１４。
幾つかの実施形態では、本開示は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、以下からなる群から選択されることを提供する：ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びＢＭＳ－９３６５５９。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬が、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））、カボザンチニブ（Ｃａｂｏｍｅｔｙｘ（登録商標））、アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））、レンバチニブ（Ｌｅｎｖｉｍａ（登録商標））、エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、エパカドスタット、ＮＫＴＲ－２１４（ＣＤ－１２２バイアス型アゴニスト）、チボザニブ（Ｆｏｔｉｖｄａ（登録商標））、アベキシノスタット、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、トレメリムマブ、パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））、ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））、ニラパリブ、サボリチニブ、ボロラニブ（Ｘ－８２）、レゴラフェニブ（Ｓｔｉｖａｒｇｏ（登録商標））、ドナフェニブ（多標的キナ－ゼ阻害剤）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、ペキサスチモジンデバシレプベク（ＪＸ－５９４）、ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））、アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１）、カプセル化ドキソルビシン（Ｔｈｅｒｍｏｄｏｘ（登録商標））、チバンチニブ（ＡＲＱ１９７）、ＡＤＩ－ＰＥＧ２０、ビニメチニブ、アパチニブメシル酸塩、ニンテダニブ、リリルマブ、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標））、デュルバルマブ（Ｉｍｆｉｍｚｉ（登録商標））、セミプリマブ－ｒｗｌｃ（Ｌｉｂｔａｙｏ（登録商標））、チスレリズマブ、及びスパルタリズマブからなる群から選択されることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬がＴＩＭ－３阻害剤であることを提供し、ここで、任意によりＴＩＭ－３阻害剤は、ＭＧＢ４５３またはＴＳＲ－０２２である。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬がＬＡＧ－３阻害剤であることを提供し、ここで、任意によりＬＡＧ－３阻害剤は、ＬＡＧ５２５、ＢＭＳ－９８６０１６、及びＴＳＲ－０３３からなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬がＴＩＧＩＴ阻害剤であることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬がＣＤ１１２Ｒ阻害剤であることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬がＴＡＭ（Ａｘｌ、Ｍｅｒ、Ｔｙｒｏ）阻害剤であることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬が４－１ＢＢアゴニストであることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬がチロシンキナ－ゼ阻害剤（ＴＫＩ）であることを提供する。
ある態様では、本開示は、単離ＳＲＦ３８８モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、単離ＳＲＦ３８８モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分が、以下からなる群から選択される１種以上の追加の治療薬または治療手段との更なる組み合わせで投与されることを提供する：化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解性薬物、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、外科的処置、放射線治療、共刺激分子の活性化剤、抑制分子の阻害剤、ワクチン、または細胞免疫療法、またはそれらの組み合わせ。幾つかの実施形態では、本開示は、１種以上の追加の治療薬が、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ１１２Ｒ阻害剤、ＴＡＭ阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、４－１ＢＢアゴニスト、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、Ａ２ＡＲ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＮＥＫＴＡＲ、ｐｅｇ－ＩＬ－２、ｐｅｇ ＩＬ－１０、ＣＤ４０アゴニスト、またはそれらの組み合わせであることを提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、ＰＤ－１アンタゴニストが、以下からなる群から選択されることを提供する：ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１、ＡＭＰ－２２４、ＡＢ１２２、及びＪＴＸ－４０１４。
一態様では、本開示は、対象由来の試料中のＩＬ－２７またはＥＢＩ３もしくはｐ２８を検出する方法であって、（ａ）当該対象由来の試料を検出用抗体と、ＩＬ－２７またはＥＢＩ３もしくはｐ２８が当該試料中に存在する場合に当該検出用抗体が検出用抗体－ＥＢＩ３複合体または検出用抗体－ｐ２８複合体を形成することを可能にする条件下で接触させるステップであって、当該検出用抗体が、上記抗体もしくはその抗原結合断片のいずれか、または表１２に記載される任意の抗体である、当該ステップ；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された当該複合体の存在を検出するステップ、を含む当該方法を提供する。
一態様では、本開示は、対象におけるＩＬ－２７関連がんを検出する方法であって、（ａ）ＩＬ－２７関連がんを有すると疑われる対象由来の試料と検出用抗体を、ＩＬ－２７またはＥＢＩ３もしくはｐ２８が当該試料中に存在する場合に当該検出用抗体が検出用抗体－ＥＢＩ３複合体または検出用抗体－ｐ２８複合体を形成することを可能にする条件下で接触させるステップであって、当該検出用抗体が、上記抗体もしくはその抗原結合部分のいずれか、または表１２に記載される任意の抗体である、当該ステップ；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された当該複合体の存在を検出するステップ、を含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、検出用抗体は、検出可能な標識と結合される。
幾つかの実施形態では、本方法は、試料を捕捉抗体と接触させ、ＩＬ－２７またはＥＢＩ３が試料中に存在する場合にＩＬ－２７またはＥＢＩ３及び当該捕捉抗体を含む複合体を生成することを更に含み、ここで、当該捕捉抗体は、上記抗体またはその抗原結合部分のいずれかである。
幾つかの実施形態では、捕捉抗体は、Ａｂ７の１つ以上のＣＤＲを有し、任意によりＡｂ７である。
幾つかの実施形態では、捕捉抗体は、固体支持体に固定化される。
幾つかの実施形態では、試料は、検出用抗体の前に捕捉抗体と接触される。
幾つかの実施形態では、試料は、体液試料である。
幾つかの実施形態では、液体試料は、血液、血清、血漿、細胞溶解物、または組織溶解物である。
幾つかの実施形態では、がんは、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）、肺癌、胃食道癌、卵巣癌、子宮内膜癌、黒色腫、白血病、及びリンパ腫から選択される。
幾つかの実施形態では、がんは腎細胞癌（ＲＣＣ）であるか、またはがんは肝細胞癌（ＨＣＣ）である。
幾つかの実施形態では、がんは白血病及びリンパ腫から選択されるか、またはがんは卵巣癌である。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、または対象におけるがんを処置するための、任意に１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて使用される、上記単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分または上記医薬組成物のいずれかの使用を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分または上記医薬組成物のいずれか、及び対象における免疫反応を刺激するか、または対象におけるがんを処置するのに使用するための使用説明書を含み、１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて使用するための使用説明書を任意に含有するキットを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分のいずれか、及び対象由来の試料中のＩＬ－２７を検出するのに使用するための使用説明書を含み、対象におけるＩＬ－２７関連がんを検出するために使用するための使用説明書を任意に含有するキットを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分として、ＩＬ－２７に拮抗する抗体またはその抗原結合部分が挙げられることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分として、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減する抗体またはその抗原結合部分が挙げられることを提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、上記細胞が免疫細胞であるか、または細胞ががん細胞であることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分のいずれかとして、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減する抗体またはその抗原結合部分が挙げられることを提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、細胞が免疫細胞であることを提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分として、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減する抗体または抗原結合部分が挙げられることを提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、細胞が免疫細胞またはがん細胞であることを提供する。幾つかの実施形態では、細胞ががん細胞である場合、抗体またはその抗原結合部分は、がん細胞におけるＰＤ－Ｌ１発現を阻害または低減する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分として、細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌を誘発または増強する抗体またはその抗原結合部分が挙げられることを提供する。幾つかの実施形態では、１種以上のサイトカインは、ＩＦＮｇ、ＴＮＦα、またはＩＬ－６である。幾つかの実施形態では、１種以上のサイトカインは、ＩＦＮｇ、ＩＬ－１７、ＴＮＦα、またはＩＬ－６である。幾つかの実施形態では、１種以上のサイトカインは、ＴＮＦαである。幾つかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分として、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１ ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体からなる群から選択される抗体が挙げられることを提供する。幾つかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である。幾つかの実施形態では、抗体は、野生型ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。幾つかの実施形態では、抗体は、野生型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分が、少なくとも１つの変異を含むＦｃドメインを含むことを提供する。幾つかの実施形態では、抗体は、変異型ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。幾つかの実施形態では、抗体は、変異型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。幾つかの実施形態では、変異型ＩｇＧ４重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、Ｌ２３５Ａ置換、またはそれらの組み合わせのいずれかを含む。
ある態様では、本開示は、上記抗体またはその抗原結合部分のいずれかと実質的に同じエピト－プに結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。
ある態様では、本開示は、上記抗体またはその抗原結合部分のいずれかにより結合されるアミノ酸残基のうちの少なくとも１つに結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。
ある態様では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分により結合されるエピト－プの変異は、当該抗体またはその抗原結合部分への結合、及び上記抗体またはその抗原結合断片のいずれかに一致する当該抗体またはその抗原結合部分への結合の両方を阻害、低減、または遮断する。
ある態様では、本開示は、ＩＬ－２７上のエピト－プに結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該エピト－プは、表１２に記載される抗体分子により結合されるエピト－プと同一であるか、または類似する。
ある態様では、本開示は、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号８０２、８０３、及び８０４に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８０５、８０６、及び８０７に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。
ある態様では、本開示は、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７９４及び７９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
ある態様では、本開示は、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、軽鎖定常領域を含み、ここで、当該軽鎖定常領域は、配列番号７９８に記載されるアミノ酸配列を含む。
ある態様では、本開示は、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号８０２、８０３及び８０４に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列からなる群と少なくとも９０％同一の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲ、ならびにそれぞれ配列番号８０５、８０６及び８０７に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列からなる群と少なくとも９０％同一の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。
ある態様では、本開示は、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号７９４及び７９６からなる群と少なくとも９０％同一の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
ある態様では、本開示は、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、軽鎖定常領域を含み、ここで、当該軽鎖定常領域は、配列番号７９８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記のＷＳＸ－１結合性抗体のいずれかである単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記のＷＳＸ－１結合性抗体のいずれかである単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖、重鎖、または軽鎖及び重鎖の両方をコ－ドするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、上述の核酸を含む発現ベクタ－を提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、上述の発現ベクタ－で形質転換された細胞を提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合するモノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を作製するための方法であって、上述の細胞を当該モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の発現を可能にする条件下で維持することを含む当該方法を提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、対象由来の試料中のＷＳＸ－１を検出する方法であって、（ａ）当該対象由来の試料と検出用抗体を、ＷＳＸ－１が当該試料中に存在する場合に当該検出用抗体が検出用抗体－ＷＳＸ－１複合体を形成することを可能にする条件下で接触させるステップであって、当該検出用抗体が、上記のＷＳＸ－１結合性抗体のいずれかと一致する抗体またはその抗原結合断片である、当該ステップ；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された当該複合体の存在を検出するステップ、を含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象におけるＷＳＸ－１関連がんを検出する方法であって、（ａ）ＷＳＸ－１関連がんを有すると疑われる対象由来の試料と検出用抗体を、ＷＳＸ－１が当該試料中に存在する場合に当該検出用抗体が検出用抗体－ＷＳＸ－１複合体を形成することを可能にする条件下で接触させるステップであって、当該検出用抗体が、上記のＷＳＸ－１結合性抗体のいずれかと一致する抗体またはその抗原結合部分である、当該ステップ；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された当該複合体の存在を検出するステップ、を含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、または対象におけるがんを処置するための、任意に１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて使用される、上記のＷＳＸ－１結合性抗体のいずれかである単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分または上記医薬組成物の使用を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上記のＷＳＸ－１結合性抗体のいずれかである単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分または上記医薬組成物、及び対象における免疫反応を刺激するか、または対象におけるがんを処置するのに使用するための使用説明書を含み、１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて使用するための使用説明書を任意に含有するキットを提供する。
定義
特許請求の範囲及び本明細書において使用される用語は、特に明記しない限り、下記のように定義される。
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別途文脈が明確に指示しない限り、複数形の参照を含むことが留意されなければならない。
本明細書で使用する場合、「約」は、当業者によって理解され、それが使用される文脈に応じてある程度変動するであろう。それが使用される文脈を考慮してもその用語の使用が当業者にとって明確でない場合、「約」は、特定の値の±１０％までを意味する。
本明細書で使用する場合、用語「アゴニスト」は、本明細書において開示される天然ポリペプチドの生物活性を、部分的または完全に、促進し、誘発し、増加させ、及び／または活性化する任意の分子を指す。好適なアゴニスト分子としては、特に、アゴニスト抗体または抗体断片、天然のポリペプチド、ペプチド、またはタンパク質の断片またはアミノ酸配列バリアントが挙げられる。幾つかの実施形態では、アゴニストの存在下での活性化は、用量依存的様式で観察される。幾つかの実施形態では、測定されるシグナル（例えば、生物活性）は、比較可能な条件下で陰性対照を用いて測定されるシグナルより少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％高い。本開示の方法に使用するのに好適なアゴニストを同定する方法も本明細書において開示される。例えば、これらの方法としては、限定されるものではないが、結合アッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ（著作権）システム、及び放射免疫測定法（ＲＩＡ）が挙げられる。これらのアッセイは、関心対象のポリペプチド（例えば、受容体またはリガンド）に結合するアゴニストの能力を決定し、従って、当該ポリペプチドの活性を促進するか、増加させるか、または活性化する当該アゴニストの能力を示す。ポリペプチドの機能を活性化または促進するアゴニストの能力などのアゴニストの効力は、機能アッセイを使用しても決定され得る。例えば、機能アッセイは、ポリペプチドをアゴニスト候補分子と接触させること、及び通常、当該ポリペプチドに関連する１つ以上の生物活性における検出可能な変化を測定することを含み得る。アゴニストの力価は、通常、そのＥＣ５０値（アゴニスト反応を５０％活性化するために必要とされる濃度）により定義される。ＥＣ５０値が低いほど、アゴニストの力価はより高く、生物学的反応を最大限活性化するのに必要とされる濃度がより低い。
本明細書で使用する場合、用語「アラニンスキャニング」は、特定の野生型残基の所与のタンパク質またはポリペプチドの安定性または機能（複数可）（例えば、結合親和性）への寄与を決定するために使用される技術を指す。この技術は、ポリペプチドの野生型残基のアラニン残基置換に続く、アラニン置換誘導体または変異型ポリペプチドの安定性または機能（複数可）（例えば、結合親和性）の評価及び野生型ポリペプチドとの比較を含む。ポリペプチドの野生型残基をアラニンで置換する技術は、当技術分野において公知である。
用語「改善」は、病態、例えば、がんの処置における治療に有益な任意の結果を指し、これには、予防、重症度もしくは進行の軽減、寛解、または病態の治癒が含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸及び合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によりコ－ドされるアミノ酸、及び後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造（すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合している炭素）を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。かかる類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的化学構造と異なる構造を有する化合物を指すが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する。
本明細書において、アミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される、一般的に公知のアミノ酸の３文字記号または１文字記号により表記され得る。同様にヌクレオチドは、一般的に認められたヌクレオチドの１文字暗号により表記され得る。
本明細書で使用する場合、「アミノ酸置換」は、所定のアミノ酸配列（出発ポリペプチドのアミノ酸配列）に存在する少なくとも１つのアミノ酸残基の、別の異なる「置換」アミノ酸残基との置換を指す。「アミノ酸挿入」は、所定のアミノ酸配列への少なくとも１つの追加のアミノ酸の組み込みを指す。挿入は、通常、１つまたは２つのアミノ酸残基の挿入からなるが、より大きな「ペプチド挿入」、例えば、約３～約５アミノ酸残基、または更には約１０、１５、もしくは２０アミノ酸残基までの挿入もなされ得る。挿入される残基（複数可）は、天然に存在してもよく、上記で開示されるように天然に存在しなくてもよい。「アミノ酸欠失」は、所定のアミノ酸配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基の除去を指す。
本明細書で使用する場合、用語「量」または「レベル」は、最も広義に使用され、物質（例えば、代謝産物、低分子、タンパク質、ｍＲＮＡ、マ－カ－）の量、濃度、または存在量を指す。代謝産物または低分子（例えば薬物）に言及する場合、用語「量」、「レベル」、及び「濃度」は、一般に互換的に使用され、一般に生体試料における検出可能な量を指す。「レベルの上昇」または「レベルの増加」は、対照試料、例えば、疾患または障害（例えば、がん）に罹患していない個体もしくは複数の個体からのもの、または内部標準と比較した、試料中の物質の量、濃度、または存在量の増加を指す。幾つかの実施形態では、試料中の物質（例えば、薬物）のレベルの上昇は、当該技術分野において公知の技術（例えば、ＨＰＬＣ）により決定される、対照試料における当該物質の量と比較した当該物質の量の約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の増加を指す。「レベルの低減」は、対照、例えば、疾患または障害（例えば、がん）に罹患していない個体もしくは複数の個体、または内部標準と比較した、個体における物質（例えば、薬物）の量、濃度、または存在量の減少を指す。幾つかの実施形態では、低減されたレベルは、殆どまたは全く検出できない量、濃度、または存在量である。幾つかの実施形態では、試料中の物質（例えば、薬物）のレベルの低減は、当該技術分野において公知の技術（例えば、ＨＰＬＣ）により決定される、対照試料における当該物質の量と比較した当該物質の量の約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の減少を指す。
本明細書に記載されるものなどのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはマ－カ－に言及する場合、用語「発現のレベル」または「発現レベル」は、一般に互換的に使用され、通常、生体試料中のタンパク質、ｍＲＮＡ、またはマ－カ－の検出可能な量を指す。一部の態様では、タンパク質、ｍＲＮＡ、またはマ－カ－の検出可能な量または検出可能なレベルは、本明細書に記載されるものなどの薬剤への反応の可能性に関連する。「発現」は、通常、遺伝子内に含まれる情報が、細胞内で存在し、機能する構造（例えば、ＰＤ－Ｌ１などのタンパク質マ－カ－）に変換されるプロセスを指す。従って、本明細書で使用する場合、「発現」は、ポリヌクレオチドへの転写、ポリペプチドへの翻訳、または更にはポリヌクレオチド及び／またはポリペプチドの修飾（例えば、ポリペプチドの翻訳後修飾）を指し得る。転写されたポリヌクレオチド、翻訳されたポリペプチド、または修飾（例えば、ポリペプチドの翻訳後修飾）されたポリヌクレオチド及び／またはポリペプチドの断片も、それらが選択的スプライシングにより生成された転写物もしくは分解された転写物に由来するか、または例えば、タンパク質分解によるポリペプチドの翻訳後プロセシングに由来するかにかかわらず、発現されたとみなされる。「発現される遺伝子」としては、ｍＲＮＡとしてポリヌクレオチドに転写され、次いで、ポリペプチドに翻訳されるもの、及び更にＲＮＡに転写されるが、ポリペプチドに翻訳されないもの（例えば、転移ＲＮＡ及びリボソ－ムＲＮＡ）が挙げられる。「発現の増加」、「発現レベルの上昇」、または「レベルの上昇」は、対照試料、例えば、疾患または障害（例えば、がん）に罹患していない個体もしくは複数の個体、または内部標準と比較した、試料中の物質の発現の増加またはレベルの増加を指す。幾つかの実施形態では、試料中の物質（例えば、ＰＤ－Ｌ１などのタンパク質マ－カ－）の発現の増加は、当該技術分野において公知の技術（例えば、ＦＡＣＳ）により決定される、対照試料における当該物質の量と比較した当該物質の量の約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の増加を指す。「発現の減少」、「発現レベルの減少」、または「レベルの減少」は、対照、例えば、疾患または障害（例えば、がん）に罹患していない個体もしくは複数の個体、または内部標準と比較した、個体における物質（例えば、タンパク質マ－カ－）の発現の減少またはレベルの減少を指す。幾つかの実施形態では、発現の減少は、殆どまたは全く発現されないことである。幾つかの実施形態では、試料中の物質（例えば、タンパク質マ－カ－）の発現の減少は、当該技術分野において公知の技術（例えば、ＦＡＣＳ）により決定される、対照試料における当該物質の量と比較した当該物質の量の約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の減少を指す。
本明細書で使用する場合、用語「血管新生」または「新血管新生」は、既に存在する血管から新たな血管が発生するプロセスを指す（Ｖａｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９９） Ａｎｇｉｏｇｅｎ．３：５３－６０；Ｍｏｕｓａ ｅｔ ａｌ．，（２０００） Ａｎｇｉｏｇｅｎ．Ｓｔｉｍ．Ｉｎｈｉｂ．３５：４２－４４；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，（２０００） Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５６：１３４５－１３６２；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，（２０００） Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３３９２０－３３９２８；Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．（２０００） Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：Ｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｏ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｐｈａｒｍ．１６９－１８０）。既に存在する血管または循環内皮幹細胞由来の内皮細胞（Ｔａｋａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９５） Ｎａｔ．Ｍｅｄ．５：４３４－４３８；Ｉｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９９） Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０３：１２３１－１２３６）は、成長因子もしくはホルモンによる合図または低酸素もしくは虚血状態に応答して、遊走、増殖、及び管腔を有する構造へと分化するように活性化し、新たな血管を形成する。がんにおいて生じるような、虚血の際に、酸素負荷及び栄養素の送達を増加させる必要性により、患部組織による血管新生因子の分泌が明らかに誘発され、これらの因子は、新たな血管形成を刺激する。幾つかの追加の用語は、血管新生に関連する。
本明細書で使用する場合、用語「アンタゴニスト」は、本明細書において開示される天然のポリペプチドの生物活性を部分的または完全に遮断、阻害、または中和する任意の分子を指す。好適なアンタゴニスト分子としては、特に、アンタゴニスト抗体または抗体断片、天然のポリペプチド、ペプチド、またはタンパク質の断片またはアミノ酸配列バリアントが挙げられる。幾つかの実施形態では、アンタゴニストの存在下での阻害は、用量依存的様式で観察される。幾つかの実施形態では、測定されるシグナル（例えば、生物活性）は、比較可能な条件下で陰性対照を用いて測定されるシグナルより少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％低い。本開示の方法に使用するのに好適なアンタゴニストを同定する方法も本明細書において開示される。例えば、これらの方法としては、限定されるものではないが、結合アッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ（著作権）システム、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙアッセイ（例えば、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ電気化学発光法（ＭＳＤ－ＥＣＬ））、及びＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビ－ズベ－スアッセイが挙げられる。これらのアッセイは、関心対象のポリペプチド（例えば、受容体またはリガンド）に結合するアンタゴニストの能力を決定し、従って、当該ポリペプチドの活性を阻害、中和、または遮断する当該アンタゴニストの能力を示す。ポリペプチドまたはアゴニストの機能を阻害するアンタゴニストの能力などのアンタゴニストの効力は、機能アッセイを使用しても決定され得る。例えば、機能アッセイは、ポリペプチドをアンタゴニスト候補分子と接触させること、及び通常、当該ポリペプチドに関連する１つ以上の生物活性における検出可能な変化を測定することを含み得る。アンタゴニストの力価は、通常、そのＩＣ５０値（アゴニスト反応を５０％阻害するために必要とされる濃度）により定義される。ＩＣ５０値が低いほど、アンタゴニストの力価はより高く、生物学的反応を最大限阻害するのに必要とされる濃度がより低い。
本明細書で使用する場合、語句「ヒトＩＬ－２７に拮抗する抗体またはその抗原結合部分」は、ヒトＩＬ－２７の当該技術分野において承認されている少なくとも１つの活性（例えば、ＩＬ－２７生物活性及び／またはＩＬ－２７シグナル伝達により媒介される下流の経路（複数可）、またはＩＬ－２７により媒介される他の機能）に拮抗する、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上のヒトＩＬ－２７活性の減少（または低減）に関連する抗体を指す。ＩＬ－２７生物活性及び／またはＩＬ－２７シグナル伝達により媒介される下流の経路（複数可）、またはＩＬ－２７により媒介される他の機能の追加の例は、以下に及び本明細書の他箇所で更に詳細に記載されている。
本明細書で使用する場合、用語「抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体」（「抗ＩＬ－２７抗体」と互換的に称される）は、ＩＬ－２７に特異的に結合し、ＩＬ－２７生物活性及び／またはＩＬ－２７シグナル伝達により媒介される下流の経路（複数可）、またはＩＬ－２７により媒介される他の機能を阻害する抗体を指す。抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体は、ＩＬ－２７シグナル伝達により媒介される下流の経路または機能、例えば、受容体結合及び／またはＩＬ－２７もしくはその代謝産物に対する細胞の反応の誘発が含まれる、ＩＬ－２７生物活性（例えば、リガンド結合、酵素活性）を遮断するか、これに拮抗するか、これを抑制するか、阻害するか、または低減する抗体を包含する。幾つかの実施形態では、本開示により提供される抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体は、ヒトＩＬ－２７に結合し、ヒトＩＬ－２７のその同族受容体もしくは正規の受容体（例えば、ＩＬ－２７受容体）、または１つ以上の受容体サブユニット（例えば、ｇｐ１３０及び／またはＩＬ－２７Ｒα（ＷＳＸ１／ＴＣＣＲとしても公知））への結合を防止、遮断、または阻害する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体は、ヒトＩＬ－２７のｇｐ１３０への結合を防止、遮断、または阻害する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体は、ヒトＩＬ－２７のＩＬ－２７Ｒαへの結合を防止、遮断、または阻害する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体は、ＩＬ－２７単量体の二量体化を防止、遮断、または阻害する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、ＥＢＩ３単量体に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、ＩＬ－２７ｐ２８単量体に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、両方のＩＬ－２７単量体に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、ＥＢＩ３及びＰ２８の両方を含む非連続エピト－プに特異的に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減する（例えば、細胞におけるＣＤ１６１発現のＩＬ－２７により媒介される阻害を改善または軽減する）。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７は、細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌を誘発または増強する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体は、ヒトＩＬ－２７に結合し、抗腫瘍反応を刺激または増強する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体は、１５ｎＭ以下の親和性でヒトＩＬ－２７に結合する。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体は、ヒトＩＬ－２７に結合し、野生型もしくは変異型ＩｇＧ１重鎖定常領域または野生型もしくは変異型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。抗ＩＬ－２７アンタゴニスト抗体の例は、本明細書において提供される。
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、２つの軽鎖ポリペプチド及び２つの重鎖ポリペプチドを含む全長抗体を指す。全長抗体には、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体が挙げられる異なる抗体アイソタイプが含まれる。用語「抗体」には、ポリクロ－ナル抗体、モノクロ－ナル抗体、キメラ化抗体またはキメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体、及び完全ヒト抗体が含まれる。抗体は、種々の種のいずれか、例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、オランウ－タン、ヒヒ、またはチンパンジ－）、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスタ－、ラット、及びマウスなどの哺乳動物において作られ得るか、またはこれらに由来し得る。抗体は、精製抗体または組換え抗体であり得る。本明細書で使用する場合、用語「抗体断片」、「抗原結合断片」、または類似の用語は、標的抗原（例えば、ＩＬ－２７）に結合し、標的抗原の活性を阻害する能力を保持する抗体の断片を指す。かかる断片としては、例えば、一本鎖抗体、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、またはＦ（ａｂ’）２断片が挙げられる。ｓｃＦｖ断片は、ｓｃＦｖが由来する抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方を含む単一ポリペプチド鎖である。加えて、細胞内抗体、ミニボディ、トリアボディ、及びダイアボディも抗体の定義に含まれ、本明細書に記載の方法に使用するのに適合可能である。例えば、Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａ ｅｔ ａｌ．，（２００１） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８（１）：４７－６６；Ｈｕｄｓｏｎ ａｎｄ Ｋｏｒｔｔ，（１９９９） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１（１）：１７７－１８９；Ｐｏｌｊａｋ，（１９９４） Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２（１２）：１１２１－１１２３；Ｒｏｎｄｏｎ ａｎｄ Ｍａｒａｓｃｏ，（１９９７） Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５１：２５７－２８３（これらの各々の開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
本明細書で使用する場合、用語「抗体断片」には、例えば、ラクダ化単一ドメイン抗体などの単一ドメイン抗体も含まれる。例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，（２００１） Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０－２３５；Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，（２０００） Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：２５３－２６３；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９９） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５－３８；ＰＣＴ出願公開ＷＯ９４／０４６７８及びＷＯ９４／２５５９１；ならびに米国特許第６，００５，０７９号（これらの全ては参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。幾つかの実施形態では、本開示は、単一ドメイン抗体が形成されるように改変された２つのＶＨドメインを含む単一ドメイン抗体を提供する。
幾つかの実施形態では、抗原結合断片は、重鎖ポリペプチドの可変領域及び軽鎖ポリペプチドの可変領域を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗原結合断片は、抗体の軽鎖及び重鎖ポリペプチドのＣＤＲを含む。
用語「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、ＭＨＣと複合体を形成した外来抗原をその表面上に提示する細胞である。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用してこの複合体を認識する。ＡＰＣの例としては、限定されるものではないが、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、単球（例えば、ＴＨＰ－１）、Ｂリンパ芽球細胞（例えば、Ｃ１Ｒ．Ａ２、１５１８ Ｂ－ＬＣＬ）、及び単球由来樹状細胞（ＤＣ）が挙げられる。一部のＡＰＣは、ファゴサイト－シスまたは受容体依存性エンドサイト－シスにより抗原を内部移行する。
用語「抗原提示」は、ＡＰＣが抗原を捕捉し、例えば、ＭＨＣ－Ｉ及び／またはＭＨＣ－ＩＩ結合体の構成要素としての抗原のＴ細胞による認識を可能にするプロセスを指す。
本明細書で使用する場合、用語「アポト－シス」は、多細胞生物（例えば、ヒト）において発生するプログラム細胞死のプロセスを指す。アポト－シスをもたらす高度に制御された生化学的及び分子的事象は、膜ブレブ形成、細胞体積収縮、染色代ＤＮＡの凝集及び断片化、ならびにｍＲＮＡ分解が含まれる、観察可能かつ特徴的な形態変化を細胞に引き起こし得る。アポト－シスを起こしている、Ｔ細胞が含まれる細胞を同定するための一般的な方法は、細胞をフルオロフォアコンジュゲ－トタンパク質（アネキシンＶ）に曝露させることである。アネキシンＶは、細胞がアポト－シスのプロセスを起こしていることの早期指標である、細胞膜外葉のホスファチジルセリンに結合するその能力のために、アポト－シス細胞を検出するために一般的に使用される。
本明細書で使用する場合、用語「Ｂ細胞」（あるいは「Ｂリンパ球」）は、白血球のリンパ球サブタイプの一種を指す。Ｂ細胞は、抗体を分泌することにより適応免疫系の体液性免疫成分中で機能する。Ｂ細胞は、抗原も提示し、サイトカインも分泌する。Ｂ細胞は、リンパ球の他の２つのクラスであるＴ細胞及びナチュラルキラ－細胞と異なり、その細胞膜上にＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を発現する。ＢＣＲは、Ｂ細胞が特異的抗原に結合するのを可能にし、これにより、Ｂ細胞は特異的抗原に対して抗体応答を開始する。
本明細書で使用する場合、用語「固定されたＩＬ－２７に結合する」は、本開示のヒト抗体が、例えば、細胞表面上に発現されているＩＬ－２７または固形支持体に結合されているＩＬ－２７に結合する能力を指す。
本明細書で使用する場合、用語「二重特異性」または「二機能性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖ペアを有し、２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体を指す。二重特異性抗体は、ハイブリド－マ融合またはＦａｂ’断片の連結が含まれる、種々の方法により作製され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，（１９９０） Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９２） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７－１５５３を参照のこと。
元来、二重特異性抗体の組換えによる作製は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアの共発現に基づいており、ここで、当該２つの重鎖／軽鎖のペアは異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，（１９８３） Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７－５３９）。所望の結合特異性（抗体－抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。重鎖可変領域と、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合が好ましい。二重特異性抗体作製のための現在知られている例示的方法に関する更なる詳細は、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ．，（１９８６） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２１：２１０；ＰＣＴ公開第ＷＯ９６／２７０１１号；Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１；Ｓｈａｌａｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９２） １７５：２１７－２２５；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９２） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７－１５５３；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８；及びＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０を参照のこと。二重特異性抗体には、架橋抗体またはヘテロコンジュゲ－ト抗体も含まれる。ヘテロコンジュゲ－ト抗体は、任意の簡便な架橋法を使用して作製され得る。好適な架橋剤は当該技術分野において周知であり、米国特許第４，６７６，９８０号において多数の架橋技術と共に開示されている。
組換え細胞培養物から直接的に二重特異性抗体断片を作製及び単離するための様々な技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパ－を使用して作製されている。例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８（５）：１５４７－１５５３を参照のこと。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパ－ペプチドが、遺伝子融合により、２種の異なる抗体のＦａｂ’部分に連結され得る。単量体を形成するために抗体ホモ二量体がヒンジ領域で還元され得、次いで、抗体ヘテロ二量体を形成するために再酸化され得る。この方法は、ホモ二量体抗体の作製にも利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８により記載されている「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体断片を作製するための代替的メカニズムを提供している。この断片は、リンカ－により軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。当該リンカ－は、同じ鎖の上で２つのドメイン間でペア形成を行うには短すぎる。従って、１つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは、別の断片の相補的なＶＬ及びＶＨドメインと対形成させられ、これにより、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体の使用により二重特異性抗体断片を作製する別の戦略も報告されている。例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５２：５３６８を参照のこと。あるいは抗体は、例えば、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２に記載される「直線状抗体」であり得る。要約すると、これらの抗体は、タンデムなＦｄセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）のペアを含み、これが抗原結合領域のペアを形成する。直線状抗体は、二重特異性または単一特異性であり得る。
２超の結合価を有する抗体（例えば、三重特異性抗体）も意図され、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：６０に記載されている。
本開示は、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（２００７） Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２５（１１）：１２９０－１２９７に記載される二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ－Ｉｇ）分子などのバリアント型の多重特異性抗体も包含する。ＤＶＤ－Ｉｇ分子は、２つの異なる親抗体に由来する２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技術により直接または短いリンカ－を介してタンデムに連結され、続いて、軽鎖定常ドメインに連結されるように設計される。同様に、重鎖は、タンデムに連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、これに続く定常ドメインＣＨ１及びＦｃ領域を含む。２つの親抗体からＤＶＤ－Ｉｇ分子を作製する方法は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０８／０２４１８８号及び同ＷＯ０７／０２４７１５号に更に記載されている。幾つかの実施形態では、二重特異性抗体は、第２の特異性を有する軽鎖可変領域が、全抗体の重鎖可変領域に融合されている、タンデム型Ｆａｂ（Ｆａｂｓ－ｉｎ－Ｔａｎｄｅｍ）免疫グロブリンである。かかる抗体は、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１５／１０３０７２号に記載されている。
本明細書で使用する場合、「がん抗原」は、（ｉ）腫瘍特異的抗原、（ｉｉ）腫瘍関連抗原、（ｉｉｉ）腫瘍特異的抗原を発現する細胞、（ｉｖ）腫瘍関連抗原を発現する細胞、（ｖ）腫瘍上の胎児性抗原、（ｖｉ）自己腫瘍細胞、（ｖｉｉ）腫瘍特異的膜抗原、（ｖｉｉｉ）腫瘍関連膜抗原、（ｉｘ）成長因子受容体、（ｘ）成長因子リガンド、及び（ｘｉ）がんに関連する任意の他の種類の抗原もしくは抗原提示細胞または物質を指す。
本明細書で使用する場合、用語「がん特異的免疫反応」は、腫瘍、がん細胞、またはがん抗原の存在により誘発される免疫反応を指す。特定の実施形態では、この反応は、がん抗原特異的リンパ球の増殖を含む。特定の実施形態では、この反応は、抗体及びＴ細胞受容体の発現及び上方調節、ならびにリンホカイン、ケモカイン、及びサイトカインの形成及び放出を含む。自然免疫系及び獲得免疫系の両方が、腫瘍、がん細胞、またはがん抗原に対して抗原反応を開始するために相互作用する。特定の実施形態では、がん特異的免疫反応は、Ｔ細胞反応である。
用語「癌腫」は、当該技術分野において認められており、呼吸器系の癌腫、胃腸系の癌腫、泌尿生殖器系の癌腫、精巣癌、乳癌、前立腺癌、内分泌系の癌腫、及び黒色腫が含まれる、上皮組織及び内分泌組織の悪性腫瘍を指す。本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体は、腎臓癌もしくは黒色腫が含まれる任意の種類のがんまたは任意のウイルス疾患を有するか、有すると疑われるか、または発症する高いリスクを有し得る患者を処置するために使用され得る。例示的な癌腫としては、子宮頸部、肺、前立腺、胸部、頭頚部、結腸、及び卵巣の組織から形成されるものが挙げられる。この用語は、癌肉腫も含み、癌肉腫としては癌組織及び肉腫組織から構成される悪性腫瘍が挙げられる。「腺癌」は、腺組織に由来する癌、または腫瘍細胞が認識可能な腺構造を形成する癌腫を指す。
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤ１１２Ｒ」は、ポリオウイルス受容体様タンパク質のメンバ－を指し、ヒトＴ細胞に対する共抑制性受容体である。ＣＤ１１２Ｒは、Ｔ細胞上に優先的に発現しており、Ｔ細胞受容体により媒介されるシグナルを阻害する。抗原提示細胞及び腫瘍細胞上に幅広く発現しているＣＤ１１２が、ＣＤ１１２Ｒのリガンドである。ＣＤ１１２Ｒは、ＣＤ２２６と競合して、ＣＤ１１２に結合する。ＣＤ１１２Ｒ－ＣＤ１１２相互作用の破壊は、ヒトＴ細胞反応を増強する。ＣＤ１１２との相互作用を介するヒトＴ細胞に対する新規のチェックポイントとしてのＣＤ１１２Ｒ。本明細書で使用する場合、用語「ＣＤ１１２Ｒ阻害剤」は、ＣＤ１１２Ｒの生物学的機能または活性を破壊、遮断、または阻害する薬剤を指す。
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤ１３７」（あるいは「４－１ＢＢ」）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ス－パ－ファミリ－のメンバ－を指す。４－１ＢＢは、主に活性化Ｔ細胞に対する共刺激免疫チェックポイント分子である。ＣＤ１３７の架橋は、Ｔ細胞の増殖、ＩＬ－２分泌、生存、及び細胞溶解反応を増強する。本明細書で使用する場合、用語「４－１ＢＢアゴニスト」は、４－１ＢＢの１つ以上の機能を刺激、誘発、または増強する薬剤を指す。例示的な４－１ＢＢアゴニストは、この４－１ＢＢを標的として、Ｔ細胞を刺激する完全ヒトＩｇＧ２モノクロ－ナル抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）である。
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤ１６１」（あるいは、キラ－細胞レクチン様受容体サブファミリ－Ｂメンバ－１（ＫＬＲＢ１）；ＮＫ１．１、またはＮＫＲ－Ｐ１Ａとして公知）は、Ｃ型レクチンス－パ－ファミリ－のメンバ－を指す。ＣＤ１６１はＴ細胞のマ－カ－であり、ＣＤ１６１発現は、多数の異なるがんタイプの腫瘍微小環境へのＴ細胞浸潤と関連付けられてきた。ＣＤ１６１は、Ｆｅｒｇｕｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１４） Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ９（３）：１０７５－１０８８において更に記載されており、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用する場合、用語「ＩＬ－２７」または「インタ－ロイキン２７」は、ＩＬ－２７サイトカインを指す。ＩＬ－２７は、ＩＬ－６／ＩＬ－１２サイトカインファミリ－に関連し、エプスタイン・バ－ウイルス誘導遺伝子３として公知（ＥＢＩ３；ＩＬ－２７サブユニットβ及びＩＬ－２７Ｂとしても公知）の第１のサブユニット及びＩＬ－２７ｐ２８として公知の第２のサブユニット（ＩＬ３０、ＩＬ－２７サブユニットα、及びＩＬ－２７Ａとしても公知）を含むヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ－２７は、単球、内皮細胞、及び樹状細胞が含まれる、活性化された抗原提示細胞により主に合成される（Ｊａｎｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（２０１０） Ａｒｃｈ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｅｘｐ．５８：４１７－４２５，Ｄｉａｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（２０１３） Ａｄｖ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２０１３） ２２（５）：６８３－６９１）。ＩＬ－２７は炎症誘発効果を有し得るが、多数の研究がＩＬ－２７の免疫抑制剤としての重要な役割を示唆する（Ｓｈｉｍｉｚｕ ｅｔ ａｌ．（２００６） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：７３１７－７３２４，Ｈｉｓａｄａ ｅｔ ａｌ．（２００４） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４：１１５２－１１５６，Ｄｉａｋｏｗｓｋｉ （２０１３）（前出））。ＩＬ－２７は、最初はＴｈ１反応の開始を促進する因子として記載されたが、後にＩＬ－２７は、Ｔｈ１反応を制限すること、Ｔｈ２及びＴｈ１７細胞分化を阻害すること、ならびにＴｒ１及び他の制御性Ｔ細胞集団の発生を調節することにより、主要なＴ細胞抑制機能を果たすことがわかった（Ｄｉｅｔｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１４） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９２：５３８２－５３８９）。免疫調節因子としての役割に加えて、ＩＬ－２７は、血管形成、造血、及び破骨細胞形成（同上）も調節する。
ＩＬ－２７は、ＷＳＸ１として公知（ＩＬ－２７受容体サブユニットα、ＩＬ－２７ＲＡ、Ｔ細胞サイトカイン受容体１型（ＴＣＣＲ）、及びサイトカイン受容体様１（ＣＲＬ１）としても公知）の第１のサブユニット及びｇｐ１３０として公知（インタ－ロイキン－６シグナルトランスデュ－サ－（ＩＬ６ＳＴ）、インタ－ロイキン－６受容体サブユニットβ（ＩＬ－６ＲＢ）、及びオンコスタチンＭ受容体としても公知）の第２のサブユニットを含むヘテロ二量体Ｉ型サイトカイン受容体（ＩＬ－２７受容体またはＩＬ－２７Ｒ）を介してシグナル伝達する。ｇｐ１３０は、ＩＬ－６ファミリ－サイトカインの受容体サブユニットでもある（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（２００８） Ｓｃａｎ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６８：２２－２９９，Ｄｉａｋｏｗｓｋｉ（２０１３）（前出））。ＩＬ－２７Ｒを介したＩＬ－２７シグナル伝達は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ及びｐ３８ ＭＡＰＫ経路が含まれる、複数のシグナル伝達カスケ－ドを活性化する。
ＥＢＩ３は、ｐ２８またはＩＬ－２７ヘテロ二量体とは独立した生物学的機能を有するとも考えられている。例えば、ＥＢＩ３は、ｐ３５とも相互作用して、ヘテロ二量体サイトカインＩＬ－３５を形成し（Ｙｏｓｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．（２０１５） Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３：４１７－４３）、特定の細胞型においてｐ２８またはＩＬ－２７の対応する増加なしに選択的に過剰発現していることが示されている（Ｌａｒｏｕｓｓｅｒｉｅ ｅｔ ａｌ．（２００５） Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６６（４）：１２１７－２８）。
例示的なヒトＥＢＩ３タンパク質のアミノ酸配列を配列番号６９８に提供する（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００５７４６．２；Ｎ－
Figure 2022514499000001
 例示的なヒトｐ２８タンパク質のアミノ酸配列を配列番号６９９に提供する（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿６６３６３４．２；Ｎ－
Figure 2022514499000002
 例示的なヒトＷＳＸ１タンパク質のアミノ酸配列を配列番号７００に提供する（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００４８３４．１；Ｎ－
Figure 2022514499000003
 例示的なヒトｇｐ１３０タンパク質のアミノ酸配列を配列番号７０１に提供する（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００２１７５．２；Ｎ－
Figure 2022514499000004
本明細書で使用する場合、用語「競合する」は、同じエピト－プへの結合について競合する抗原結合タンパク質（例えば、免疫グロブリン、抗体またはその抗原結合断片）の文脈において使用される場合、アッセイ（例えば、競合結合アッセイ、クロスブロッキングアッセイなど）により決定される抗原結合タンパク質間の相互作用を指し、当該アッセイにおいて、試験抗原結合タンパク質（例えば、試験抗体）は、参照抗原結合タンパク質（例えば、参照抗体）の共通抗原（例えば、ＩＬ－２７またはその断片）への特異的結合を阻害（例えば、低減または遮断）する。
指定されるポリペプチドまたはタンパク質「に由来する」ポリペプチドまたはアミノ酸配列は、当該ポリペプチドの起源を指す。好ましくは、特定の配列に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、当該配列またはその一部と本質的に同一であるアミノ酸配列であって、当該一部が、少なくとも１０～２０アミノ酸、好ましくは少なくとも２０～３０アミノ酸、より好ましくは少なくとも３０～５０アミノ酸からなる、当該アミノ酸配列、またはそうでなければ配列中にその起源を有するとして当業者に識別可能なアミノ酸配列を有する。別のペプチドに由来するポリペプチドは、出発ポリペプチドと比較して１つ以上の変異、例えば、別のアミノ酸残基と置換されている１つ以上のアミノ酸残基、または１つ以上のアミノ酸残基挿入または欠失を有する１つ以上のアミノ酸残基を有し得る。
ポリペプチドは、天然に存在しないアミノ酸配列を含み得る。かかるバリアントは、必然的に出発分子との１００％未満の配列同一性または配列類似性を有する。特定の実施形態では、バリアントは、出発ポリペプチドのアミノ酸配列と約７５％～１００％未満、より好ましくは約８０％～１００％未満、より好ましくは約８５％～１００％未満、より好ましくは約９０％～１００％未満、（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）、最も好ましくは約９５％～１００％未満のアミノ酸配列の同一性または類似性を、例えば、バリアント分子の全長にわたり有する。
特定の実施形態では、出発ポリペプチド配列とそれに由来する配列との間に１アミノ酸の差異が存在する。この配列に対する同一性または類似性は、配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入して、最大配列同一性パ－セントを達成した後の、出発アミノ酸残基と同一（すなわち、同じ残基）である候補配列中のアミノ酸残基の百分率として本明細書で定義される。特定の実施形態では、ポリペプチドは、表１２に記載される配列から選択されるアミノ酸配列からなるか、本質的にそれらからなるか、またはそれらを含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、表１２に記載される配列から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、表１２に記載される配列から選択される連続アミノ酸配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である連続アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、表１２に記載される配列から選択されるアミノ酸配列の少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、３００、４００または５００（またはこれらの数値の範囲内の任意の整数）連続アミノ酸を有するアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本開示の抗体は、ヌクレオチド配列によりコ－ドされる。本発明のヌクレオチド配列は、クロ－ニング、遺伝子治療、タンパク質発現及び精製、変異導入、ＤＮＡワクチン接種の必要がある宿主のＤＮＡワクチン接種、例えば受動免疫化のための抗体作製、ＰＣＲ、プライマ－及びプロ－ブの作製などが含まれる、多数の用途に有用であり得る。特定の実施形態では、本発明のヌクレオチド配列は、表１２に記載される配列から選択されるヌクレオチド配列からなるか、本質的にそれらからなるか、またはそれらを含む。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、表１２に記載される配列から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、表１２に記載される配列から選択される連続ヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である連続ヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、表１２に記載される配列から選択されるヌクレオチド配列の少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、３００、４００、または５００（またはこれらの数値の範囲内の任意の整数）連続ヌクレオチドを有するヌクレオチド配列を含む。
本明細書において開示される方法に使用するのに好適な抗体は、それらが由来する天然に存在する配列または自然配列と配列が異なるが、当該天然配列の所望の活性を保持するように改変され得ることも、当業者によって理解されるであろう。例えば、「非必須」アミノ酸残基の保存的置換または保存的変化をもたらすヌクレオチドまたはアミノ酸の置換がなされ得る。変異は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介変異誘発などの標準的な技術により導入され得る。
本明細書において開示される方法に使用するのに好適な抗体は、１つ以上のアミノ酸残基での、例えば、必須アミノ酸残基または非必須アミノ酸残基での保存的アミノ酸置換を含み得る。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリ－は、当該技術分野において規定されており、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。従って、結合ポリペプチド中の非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリ－からの別のアミノ酸残基と置き換えられる。特定の実施形態では、アミノ酸の連続配列は、側鎖ファミリ－のメンバ－の順序及び／または組成が異なる構造的に類似した連続配列と置き換えられ得る。あるいは特定の実施形態では、飽和変異誘発などにより、コ－ド配列のすべてまたは一部に沿ってランダムに変異が導入され得、得られた変異体が本発明の結合ポリペプチドに組み込まれ得、所望の標的に対する結合能力についてスクリ－ニングされ得る。
本明細書で使用する場合、抗原「交差提示」という用語は、ＡＰＣ上のＭＨＣクラスＩ及びクラスＩＩ分子を介したＴ細胞への外来性タンパク質抗原の提示を指す。
本明細書で使用する場合、用語「交差反応」は、本開示の抗体の異なる種由来のＩＬ－２７に結合する能力を指す。例えば、ヒトＩＬ－２７に結合する本開示の抗体は、別の種のＩＬ－２７にも結合し得る。本明細書で使用する場合、交差反応性は、結合アッセイ（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）において精製抗原との特異的反応性を検出することにより測定されるか、または生理学的にＩＬ－２７を発現する細胞に結合するか、もしくはそうでなければそれと機能的に相互作用することを検出することにより測定される。交差反応性を決定する方法としては、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２０００ ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を使用したＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析またはフロ－サイトメトリ－技術による、本明細書に記載される標準的な結合アッセイが挙げられる。
本明細書で使用する場合、用語「細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）反応」は、細胞障害性Ｔ細胞により誘発される免疫反応を指す。ＣＴＬ反応は、主にＣＤ８＋Ｔ細胞により媒介される。
本明細書で使用する場合、用語「樹状細胞」または「ＤＣ」は、骨髄（ＢＭ）由来の白血球であり、最も強力な種類の抗原提示細胞である一種の抗原提示細胞を指す。ＤＣは、抗原を捕捉及び処理し、タンパク質を、Ｔ細胞により認識される主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子上に掲示されるペプチドに変換する。ＤＣは不均一であり、例えば、骨髄系ＤＣ及び形質細胞様ＤＣである。全てのＤＣが抗原の取り込み、処理、及びナイ－ブＴ細胞への掲示をすることができるが、ＤＣサブタイプは、異なるマ－カ－を有し、局在、遊走経路、詳細な免疫学的機能、及びそれらの発生のための感染または炎症性刺激への依存性において異なる。適応免疫反応の発生の間、ＤＣの表現型及び機能は、免疫寛容、記憶、ならびに分極したＴヘルパ－１（Ｔｈ１）、Ｔｈ２、及びＴｈ１７への分化の開始において役割を果たす。
本明細書で使用する場合、用語「樹状細胞活性化」は、未成熟樹状細胞から成熟樹状細胞への移行を指し、活性化樹状細胞は、成熟樹状細胞、ならびに活性化刺激により共刺激シグナルを誘発するＣＤ８０及びＣＤ８６の発現が上昇している、移行の途中である樹状細胞を包含する。成熟ヒト樹状細胞は、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＨＬＡクラスＩＩ（例えば、ＨＬＡ－ＤＲ）の発現について陽性の細胞である。未成熟樹状細胞は、例えば、ＣＤ８０及びＣＤ８６からなる群から選択されるマ－カ－に基づいて成熟樹状細胞と区別され得る。未成熟樹状細胞は、これらのマ－カ－について弱陽性、好ましくは陰性であるが、成熟樹状細胞は陽性である。成熟樹状細胞の区別は、当業者により定型的に実行されており、上記に記載のそれぞれのマ－カ－及びそれらの発現を測定するための方法も当業者に公知である。
本明細書で使用する場合、用語「ＥＣ５０」は、最大反応の５０％、すなわち、最大反応とベ－スラインとの間の中間の反応を、インビトロアッセイまたはインビボアッセイのいずれかにおいて誘導する抗体またはその抗原結合部分の濃度を指す。
本明細書で使用する場合、用語「有効用量」または「有効投与量」は、所望の効果を達成するか、または少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。用語「治療上有効用量」は、すでに疾患に罹患している患者における疾患及びその合併症を治療するか、または少なくとも部分的にその進行を阻止するのに十分な量として定義される。この用途に有効な量は、処置される障害の重大度及び患者自身の免疫系の全身状態に依存する。
本明細書で使用する場合、用語「エピト－プ」または「抗原決定基」は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。本明細書で使用する場合、用語「エピト－プマッピング」は、抗体またはその抗原結合断片の、それらの標的タンパク質抗原上の結合部位またはエピト－プを同定するプロセスまたは方法を指す。エピト－プマッピング法及び技術は本明細書において提供される。エピト－プは、連続アミノ酸、またはタンパク質の三次折りたたみにより並置される非連続アミノ酸の両方から形成され得る。連続アミノ酸により形成されるエピト－プは、通常、変性溶媒への曝露に際して保持されるが、三次折りたたみにより形成されるエピト－プは、通常、変性溶媒で処理されると消失する。エピト－プは、典型的には、固有の空間的立体配置の少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５アミノ酸を含む。どのエピト－プが所与の抗体により結合されるかを決定するための方法（すなわち、エピト－プマッピング）は、当該技術分野において周知であり、例えば、ＩＬ－２７由来の重複ペプチドまたは連続ペプチドが所与の抗ＩＬ－２７抗体との反応性について試験される、免疫ブロット法及び免疫沈降アッセイが挙げられる。エピト－プの空間的立体配置を決定する方法としては、当該技術分野における技術及び本明細書に記載されるもの、例えば、Ｘ線結晶構造解析及び二次元核磁気共鳴が挙げられる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照のこと）。
本明細書に記載される特定の抗体により認識されるエピト－プの全体または一部を含む、ＩＬ－２７上のエピト－プ（例えば、同一領域もしくは重複領域、または領域間の領域もしくは領域にまたがる領域）に結合する抗体も本開示により包含される。
同一のエピト－プを結合する抗体及び／またはヒトＩＬ－２７への結合について本明細書に記載される抗体と競合する抗体も本開示により包含される。同一のエピト－プを認識するか、または結合について競合する抗体は、定型的技術を使用して同定され得る。かかる技術としては、例えば、ある抗体が別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力を示す免疫アッセイ、すなわち、競合結合アッセイが挙げられる。競合結合は、試験される免疫グロブリンが参照抗体のＩＬ－２７などの共通抗原への特異的結合を阻害するアッセイにおいて測定される。多数の種類の競合結合アッセイが公知であり、例えば、固相直接または間接放射免疫測定法（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）を参照のこと）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照のこと）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照のこと）；Ｉ－１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照のこと）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０））；及び直接標識ＲＩＡ （Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））である。かかるアッセイは、典型的には、固体表面に結合された精製抗原またはこれらのいずれかを有する細胞、非標識の被験免疫グロブリン、及び標識された参照免疫グロブリンの使用を伴う。競合阻害は、被験免疫グロブリンの存在下で、固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することにより測定される。通常、被験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、これは参照抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％、７０～７５％以上阻害する。
他の技術としては、例えば、エピト－プの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線解析及び抗原：抗体相互作用の立体構造及び動態を研究する水素／重水素（Ｈ／Ｄ）交換と組み合わせた質量分析などのエピト－プマッピング方法が挙げられる。他の方法は、抗体の抗原断片または変異型の抗原への結合をモニタリングし、ここで、抗原配列内のアミノ酸残基の改変に起因する結合の喪失が、多くの場合、エピト－プ成分の指標と考えられる。加えて、エピト－プマッピングのためのコンピュ－タによる組み合わせの方法も使用され得る。これらの方法は、ファ－ジディスプレイペプチドライブラリ－の組み合わせから特異的な短ペプチドを親和性により単離する関心対象の抗体の能力に依存する。次いで、ペプチドは、ペプチドライブラリ－をスクリ－ニングするために使用される、抗体に対応するエピト－プの定義のための手がかりと見なされる。エピト－プマッピングのための、非連続的な立体構造エピト－プをマッピングすることが示されている計算アルゴリズムも開発されている。
本明細書で使用する場合、用語「Ｆｃ媒介エフェクタ－機能」または「Ｆｃエフェクタ－機能」は、抗体の主要な機能及び目的以外の抗体の生物活性を指す。例えば、治療用アゴニスト抗体のエフェクタ－機能は、標的タンパク質または経路の活性化以外の生物活性である。抗体エフェクタ－機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞障害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）；ファゴサイト－シス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節；Ｆｃ受容体を発現する血小板の活性化の欠如 ；及びＢ細胞活性化が挙げられる。多数のエフェクタ－機能が、Ｆｃγ受容体へのＦｃの結合により開始される。幾つかの実施形態では、腫瘍抗原を標的とする抗体は、エフェクタ－機能、例えば、ＡＤＣＣ活性を有する。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される腫瘍抗原を標的とする抗体は、定常領域の非改変型と比較して増強されたエフェクタ－機能（例えば、ＡＤＣＣを媒介する増強された能力）を有するバリアント定常領域を含む。
本明細書で使用する場合、用語「Ｆｃ受容体」は、抗体のＦｃ領域に結合される、免疫エフェクタ－細胞の表面上に見出されるポリペプチドを指す。幾つかの実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。３つのサブクラスのＦｃγ受容体、ＦｃγＲＩ （ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ （ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ （ＣＤ１６）が存在する。４つすべてのＩｇＧアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）が、Ｆｃ受容体のＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＡに結合し、これらを活性化する。ＦｃγＲＩＩＢは、抑制性受容体であり、従って、この受容体への抗体の結合は、補体反応及び細胞の反応を活性化しない。ＦｃγＲＩは、単量体型のＩｇＧに結合する高親和性受容体であるが、ＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＡは、多量体型のみのＩｇＧに結合し、わずかに親和性が低い低親和性受容体である。Ｆｃ受容体及び／またはＣ１ｑへの抗体の結合は、Ｆｃ領域内の特定の残基またはドメインに支配される。結合は抗体のヒンジ領域内及びＣＨ２部分内に存在する残基にも依存する。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のアゴニスト活性及び／または治療活性は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）へのＦｃ領域の結合に依存する。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗体のアゴニスト活性及び／または治療活性は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）へのＦｃ領域の結合により増強される。
本開示において用いられる特定のＦｃ受容体配列のリストを以下の表１３として示す。
本明細書で使用する場合、用語「グリコシル化パタ－ン」は、タンパク質、より具体的には免疫グロブリンタンパク質に共有結合される炭水化物ユニットのパタ－ンとして定義される。当業者が、異種抗体のグリコシル化パタ－ンが、導入遺伝子のＣＨ遺伝子が由来する種におけるグリコシル化パタ－ンよりも非ヒトトランスジェニック動物種におけるグリコシル化パタ－ンにより類似していると認識する場合、当該異種抗体のグリコシル化パタ－ンは、当該非ヒトトランスジェニック動物種により産生された抗体上に自然に存在するグリコシル化パタ－ンと実質的に類似すると特徴付けられ得る。
本明細書で使用する場合、用語「ヒト抗体」には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列の可変領域及び（存在する場合）定常領域を有する抗体が含まれる。本開示のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によりコ－ドされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異誘発、またはインビボでの体細胞突然変異により導入された変異）を含み得る（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９４） Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）：８５６－８５９）；Ｌｏｎｂｅｒｇ，（１９９４） Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９－１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ ＆ Ｈｕｓｚａｒ，（１９９５） Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３、及びＨａｒｄｉｎｇ ＆ Ｌｏｎｂｅｒｇ，（１９９５） Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６－５４６を参照のこと）。しかしながら、用語「ヒト抗体」には、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレ－ムワ－ク配列に移植された抗体（すなわち、ヒト化抗体）は含まれない。
本明細書で使用する場合、用語「異種抗体」は、かかる抗体を産生するトランスジェニック非ヒト生物に関して定義される。この用語は、当該トランスジェニック非ヒト動物からなるものではない生物において見出され、一般に、当該トランスジェニック非ヒト動物の種以外の種に由来するアミノ酸配列またはそれに対応するコ－ド核酸配列を有する抗体を指す。
用語「免疫反応を誘発する」及び「免疫反応を増強する」は、互換的に使用され、特定抗原に対する免疫反応（すなわち、受動免疫反応または適応免疫反応）の刺激を指す。ＣＤＣまたはＡＤＣＣの誘発に関して使用される用語「誘発する」は、特定の直接的な細胞殺傷メカニズムの刺激を指す。
本明細書で使用する場合、用語「免疫原性細胞死」（あるいは「免疫原性アポト－シス」として公知）は、腫瘍細胞からの損傷関連分子パタ－ン（ＤＡＭＰ）分子（例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ））の細胞死前の発現及び放出を引き起こし、これにより、当該腫瘍細胞の免疫原性の増加及び免疫原性の様式での腫瘍細胞死（例えば、ファゴサイト－シスによる）をもたらす、１つ以上のシグナル伝達経路の活性化に関連する細胞死様式を指す。本明細書で使用する場合、用語「免疫原性細胞死誘発剤」は、免疫原性細胞死プロセス、経路、または様式を誘発する化学的、生物学的、または薬理学的薬剤を指す。
本明細書で使用する場合、用語「阻害する」、「低減する」、または「遮断する」（例えば、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３のヒトＩＬ－２７により媒介されるリン酸化の阻害または低減に関する）は、互換的に使用され、部分的及び完全な阻害／遮断を包含する。ＩＬ－２７の阻害／遮断は、阻害または遮断なしで生じる正常なレベルまたは種類の活性を低減するか、または変化させる。阻害及び遮断は、抗ＩＬ－２７抗体と接触した場合の、抗ＩＬ－２７抗体と接触していないＩＬ－２７と比較したＩＬ－２７の結合親和性の任意の測定可能な減少を含むことも意図し、例えば、ＩＬ－２７の結合を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％阻害する。
本明細書で使用する場合、用語「血管新生を阻害する」、「血管新生を減少させる」、「血管新生を低減する」は、組織における血管新生のレベルを、対応する対照組織における量と比べて少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％以下、最も好ましくは、対照組織において観察されるのと同じレベルの量に低減することを指す。
本明細書で使用する場合、用語「成長を阻害する」（例えば、細胞に関する）は、細胞成長の任意の測定可能な減少、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、または１００％の細胞成長の阻害を含むことを意図する。
本明細書で使用する場合、「予防を必要とする」、「処置を必要とする」、または「その必要がある」対象は、適切な医療従事者（例えば、ヒトの場合では医師、看護師、診療看護師、非ヒト哺乳動物の場合では獣医師）の判断により、所与の処置（例えば、抗ＩＬ－２７抗体を含む組成物による処置）から合理的に恩恵を受けるであろうものを指す。
用語「インビボ」は、生体において発生するプロセスを指す。
本明細書で使用する場合、用語「単離抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことを意図する（例えば、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合する単離抗体は、ＩＬ－２７以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、エピト－プに特異的に結合する単離抗体は、異なる種由来の他のＩＬ－２７タンパク質に対し交差反応性を有し得る。しかしながら、当該抗体は、本明細書に記載される特異的結合アッセイにおいて、ヒトＩＬ－２７に対する特異的結合を継続して示す。加えて、単離抗体は、典型的には他の細胞物質及び／または化学物質を実質的に含まない。幾つかの実施形態では、異なるＩＬ－２７特異性を有する「単離」抗体の組み合わせは、明確な組成で組み合わされる。
本明細書で使用する場合、用語「単離核酸分子」は、ＩＬ－２７に結合する抗または抗体部分（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ３）をコ－ドする核酸を指し、抗体または抗体部分をコ－ドする当該ヌクレオチド配列が、ＩＬ－２７以外の抗原に結合する抗体または抗体部分をコ－ドする他のヌクレオチド配列を含まない核酸分子を指すことを意図し、当該他の配列は、ヒトゲノムＤＮＡにおいて天然に当該核酸に隣接していてもよい。例えば、表１２に記載される配列から選択される配列は、本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体モノクロ－ナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むヌクレオチド配列に対応する。
本明細書で使用する場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によりコ－ドされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。幾つかの実施形態では、本開示のヒトモノクロ－ナル抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプの抗体である。幾つかの実施形態では、本開示のヒトモノクロ－ナル抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプの抗体である。幾つかの実施形態では、本開示のヒトモノクロ－ナル抗体は、ＩｇＧ３アイソタイプの抗体である。幾つかの実施形態では、本開示のヒトモノクロ－ナル抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプの抗体である。当業者に明らかであるように、抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１ ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）の同定は、当該技術分野において定型的であり、一般に、既知の抗体、公開されたＦｃバリアント配列及び保存配列との配列アラインメントの組み合わせを必要とする。
本明細書で使用する場合、用語「アイソタイプスイッチング」は、抗体のクラスまたはアイソタイプが、あるＩｇクラスから他のＩｇクラスのアイソタイプへと変化する現象を指す。
本明細書で使用する場合、用語「ＫＤ」または「ＫＤ」は、抗体と抗原との間の結合反応の平衡解離定数を指す。ＫＤ値は、抗体のオンレ－ト定数（ｋａ）に対する抗体のオフレ－ト定数（ｋｄ）の比率の数値表現である。ＫＤ値は、抗原に対する抗体の結合親和性と逆相関する。ＫＤ値が小さくなると、抗体のその抗原に対する親和性は高くなる。親和性は、単一分子のそのリガンドへの結合の強度であり、典型的には平衡解離定数（ＫＤ）により測定及び報告され、これは二分子の相互作用の強度を評価し、順序付けるために使用される。
本明細書で使用する場合、用語「Ｋｄ」または「ｋｄ」（あるいは「ｋｏｆｆ」または「ｋｏｆｆ」）は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離のオフレ－ト定数を指すことを意図する。ｋｄ値は、１秒当たりの崩壊または分離する複合体の割合の数値表現であり、ｓｅｃ－１という単位で表される。
本明細書で使用する場合、用語「ｋａ」または「ｋａ」（あるいは「ｋｏｎ」または「ｋｏｎ」）は、抗体の抗原との会合のオンレ－ト定数を指すことを意図する。ｋａ値は、抗体及び抗原の１モル（１Ｍ）溶液中で１秒当たりに形成される抗体／抗原複合体の数の数値表現であり、Ｍ－１ｓｅｃ－１の単位で表される。
本明細書で使用する場合、用語「白血球」は、感染性微生物及び異物から身体を守ることに関与する一種の白血球を指す。白血球は骨髄で生成される。主要な５種類の白血球が存在し、以下の２つの主要なグル－プに再分割される：多形核白血球（好中球、好酸球、好塩基球）及び単核球（単球及びリンパ球）。
本明細書で使用する場合、用語「リンパ球」は、身体の免疫防御に関与する一種の白血球または白赤球を指す。リンパ球には以下の２つの主要な種類が存在する：Ｂ細胞及びＴ細胞。
本明細書で使用する場合、用語「連結された」、「融合された」、または「融合」は、互換的に使用される。これらの用語は、化学的結合または組換え手段を含むどのような手段であれ、２つ以上の要素または成分またはドメインを共に連結することを指す。化学的結合の方法（例えば、ヘテロ二官能性架橋剤を使用する）は、当技術分野において公知である。
本明細書で使用する場合、「局所投与」または「局所送達」は、意図する標的組織または部位への組成物または薬剤の血管系を介した輸送に頼らない送達を指す。例えば、組成物は、組成物もしくは薬剤の注入または移植により送達されてもよく、または組成物もしくは薬剤を含有するデバイスの注入または移植により送達されてもよい。標的組織または部位の近くでの局所投与後、組成物もしくは薬剤またはそれらの１つ以上の成分が意図する標的組織または部位へと拡散し得る。
本明細書で使用する場合、「ＭＨＣ分子」は、２種類の分子、ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩを指す。ＭＨＣクラスＩ分子は、特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞に抗原を提示し、ＭＨＣクラスＩＩ分子は特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞に抗原を提示する。外因的にＡＰＣに送達された抗原は、主にＭＨＣクラスＩＩと結合するように処理される。対照的に、内因的にＡＰＣに送達された抗原は、主にＭＨＣクラスＩと結合するように処理される。
本明細書で使用する場合、用語「モノクロ－ナル抗体」は、特定のエピト－プに対してのみ結合特異性及び親和性を示す抗体を指す。従って、用語「ヒトモノクロ－ナル抗体」は、単一の結合特異性を示し、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び任意に定常領域を有する抗体を指す。幾つかの実施形態では、ヒトモノクロ－ナル抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子と軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られ、不死化細胞と融合されたＢ細胞を含むハイブリド－マにより産生される。
本明細書で使用する場合、用語「単球」は、一種の白血球を指し、マクロファ－ジ及び樹状細胞に分化して、免疫反応に影響を与え得る。
本明細書で使用する場合、用語「ナチュラルキラ－（ＮＫ）細胞」は、一種の細胞障害性リンパ球を指す。これらは、特定の腫瘍細胞を死滅させ、ウイルス及び他の細胞内病原体に対する自然免疫において、ならびに抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）において重要な役割を果たす、大型の通常は顆粒性の非Ｔ・非Ｂリンパ球である。
本明細書で使用する場合、用語「天然に存在する」は、対象に適用されるとき、対象が自然において見出され得るという事実を指す。例えば、自然の供給源から単離することができ、研究室の人によって意図的に改変されていない、生物（ウイルスを含む）中に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
本明細書で使用する場合、用語「非スイッチ化（ｎｏｎｓｗｉｔｃｈｅｄ）アイソタイプ」は、アイソタイプスイッチが起きていない場合に産生される重鎖のアイソタイプのクラスを指す。非スイッチ化アイソタイプをコ－ドするＣＨ遺伝子は、通常、機能的再構成がなされたＶＤＪ遺伝子のすぐ下流の第１のＣＨ遺伝子である。アイソタイプスイッチは、古典的アイソタイプスイッチまたは非古典的アイソタイプスイッチに分類される。古典的アイソタイプスイッチは、導入遺伝子中に少なくとも１つのスイッチ配列領域を含む、組換え事象により起こる。非古典的アイソタイプスイッチは、例えば、ヒトσμとヒトΣμとの間の相同組換え（δ関連欠失）により起こり得る。代替的な非古典的スイッチのメカニズム、例えば、導入遺伝子間及び／または染色体間の組換えは特にアイソタイプスイッチを発生させ得、有効化させ得る。
本明細書で使用する場合、用語「核酸」は、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、及びそれらの一本鎖型または二本鎖型のいずれかでのポリマ－を指す。特に限定されない限り、当該用語は、参照核酸と類似した結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと類似した様式で代謝される、天然ヌクレオチドの公知のアナログを含有する核酸を包含する。特に明記しない限り、特定の核酸配列は、保存的に改変されたそのバリアント（例えば、縮重コドン置換）及び相補配列ならびに明示的に示される配列も非明示的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／またはデオキシイノシン残基と置換されている配列を作製することにより達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１，１９９１；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８，１９８５；及びＣａｓｓｏｌ ｅｔ ａｌ，１９９２；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８，１９９４）。アルギニンとロイシンについては、２番目の塩基での改変も保存的であり得る。核酸という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、及び遺伝子によりコ－ドされるｍＲＮＡと互換的に使用される。
本明細書において使用されるポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドから構成され得、それらは非修飾ＲＮＡもしくは非修飾ＤＮＡ、または修飾ＲＮＡもしくは修飾ＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチドは、一本鎖ＤＮＡ及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域及び二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖ＲＮＡ及び二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖領域と二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖もしくはより典型的には二本鎖であり得るか、または一本鎖領域と二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子、から構成され得る。加えて、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡ、またはＤＮＡ、またはＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドは、安定性または他の理由のための、１つ以上の修飾塩基または修飾されたＤＮＡもしくはＲＮＡ主鎖も含有し得る。「修飾」塩基としては、例えば、トリチル化塩基、及びイノシンなどの特殊な塩基が挙げられる。ＤＮＡ及びＲＮＡに対し種々の修飾がなされ得る。従って、「ポリヌクレオチド」は、化学的、酵素的、または代謝的に修飾された形態を包含する。
核酸は、別の核酸配列と機能的な関係におかれたときに、「作動可能に連結される」。例えば、プロモ－タ－またはエンハンサ－は、それらが配列の転写に影響を及ぼす場合、コ－ド配列に作動可能に連結されている。転写調節配列に関し、作動可能に連結されるとは、連結されているＤＮＡ配列が連続的であり、２つのタンパク質コ－ド領域を連結する必要がある場合に、連続的かつリ－ディングフレ－ム内にあることを意味する。スイッチ配列について、作動可能に連結されるとは、配列が、スイッチ組換えを生じさせることができることを示す。
本明細書で使用する場合、「非経口投与」、「非経口的に投与される」、及び他の文法的に等価な語句は、腸内投与及び局所投与以外の投与様式を指し、通常、注射により行われ、限定されるものではないが、静脈内、鼻腔内、眼内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、関節包内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、髄腔内、硬膜外、大脳内、頭蓋内、頸動脈内、及び胸骨内の注射及び注入が挙げられる。
本明細書で使用する場合、用語「患者」は、予防的処置または治療的処置のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳動物対象を含む。
本明細書で使用する場合、用語「ＰＤ－１アンタゴニスト」は、細胞（例えば、免疫細胞）におけるＰＤ－１シグナル伝達経路を阻害するか、またはそうでなければＰＤ－１の機能を阻害する任意の化合物または生体分子を指す。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合及び／またはＰＤ－Ｌ２のＰＤ－１への結合を遮断する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈において、用語「同一性パ－セント」は、以下に記載される配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ及びＢＬＡＳＴＮまたは当業者に利用可能な他のアルゴリズム）のうちの１つを使用して、または目視検査により測定されされるように、最大の一致について比較及びアラインメントされた場合に、同一であるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の特定の百分率を有する２つ以上の配列または部分配列を指す。用途に応じて、「同一性パ－セント」は、比較されている配列のある領域、例えば、機能ドメインにわたって存在し得るか、または代替的に、比較されている２つの配列の全長にわたって存在し得る。配列比較に関し、典型的には、１つの配列は、試験配列が比較される参照配列としての役割を果たす。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列がコンピュ－タに入力され、部分配列座標が必要に応じて指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメ－タ－が指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメ－タ－に基づいて、参照配列と比較した試験配列（複数可）の配列同一性パ－セントを算出する。
比較のための最適な配列アラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所的相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索法により、これらのアルゴリズムのコンピュ－タ実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）により、または目視検査（一般に下記のＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，を参照のこと）により、実施され得る。
配列同一性パ－セント及び配列類似性を決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実行するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎウェブサイトにより公開されている。
本明細書において一般的に使用される場合、「薬学的に許容される」は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギ－応答、または他の問題もしくは合併症を伴わずにヒト及び動物の組織、器官、及び／または体液と接触させて使用するのに好適であり、妥当な利益／リスク比に見合う、化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指す。
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」は、生理的適合性のあるあらゆる溶媒、分散媒、コ－ティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを指し、それらを含む。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９７７） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ６６：１－１９を参照のこと）を含み得る。
本明細書で使用する場合、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマ－を指すために互換的に使用される。当該用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学的模倣物であるアミノ酸ポリマ－、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマ－及び非天然アミノ酸ポリマ－に適用される。
本明細書で使用する場合、用語「予防」は、状態に関して使用される場合、組成物を投与されない対象と比較して、対象における医学的状態の症状の頻度を低減するか、または発症を遅延させる組成物の投与を指す。
本明細書で使用する場合、本明細書に記載されるタンパク質（抗体または断片）のいずれかに適用されるときの用語「精製」または「単離」は、天然に付随する構成要素（例えば、タンパク質または他の天然に存在する生体分子または有機分子）、例えば、当該タンパク質を発現する原核生物における他のタンパク質、脂質、及び核酸から分離または精製されたポリペプチドを指す。典型的には、ポリペプチドは、試料中の総タンパク質の少なくとも６０重量％（例えば、少なくとも６５、７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９７、または９９重量％）を構成する場合、精製されている。
本明細書で使用する場合、用語「プログラム細胞死タンパク質１」または「ＰＤ－１」は、ＣＤ２８ファミリ－に属する免疫抑制性受容体であるプログラム細胞死タンパク質１ポリペプチドを指し、ヒトにおいてＰＤＣＤ１遺伝子によりコ－ドされる。ＰＤ－１の代替名またはシノニムとしては、以下が挙げられる：ＰＤＣＤ１、ＰＤ１、ＣＤ２７９、及びＳＬＥＢ２。ＰＤ－１は、インビボにおいて事前に活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、及び骨髄性細胞で主に発現され、２つのリガンド、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に結合する。本明細書で使用する場合、用語「ＰＤ－１」には、ヒトＰＤ－１（ｈＰＤ－１）、ｈＰＤ－１のバリアント、アイソフォ－ム、及び他種ホモログ、ならびにｈＰＤ－１との少なくとも１つの共通エピト－プを有する類似体が含まれる。ｈＰＤ－１全長配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＣ５１７７３の下で見つかる。
本明細書で使用する場合、用語「プログラム死リガンド－１」または「ＰＤ－Ｌ１」は、ＰＤ－１に結合した際にＴ細胞活性化及びサイトカイン分泌を下方調節する、ＰＤ－１に対する２つの細胞表面糖タンパク質リガンドのうちの一方（他方はＰＤ－Ｌ２）である。ＰＤ－Ｌ１の代替名及びシノニムとしては、以下が挙げられる：ＰＤＣＤ１Ｌ１、ＰＤＬ１、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７－４、ＣＤ２７４、及びＢ７－Ｈ。本明細書で使用する場合、用語「ＰＤ－Ｌ１」には、ヒトＰＤ－Ｌ１（ｈＰＤ－Ｌ１）、ｈＰＤ－Ｌ１のバリアント、アイソフォ－ム、及び他種ホモログ、ならびにｈＰＤ－Ｌ１との少なくとも１つの共通エピト－プを有する類似体が含まれる。ｈＰＤ－Ｌ１全長配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｑ９ＮＺＱ７の下で見つかる。
ＰＤ－１は、ＴＣＲシグナルを負に調節する免疫抑制性タンパク質として公知である（Ｉｓｈｉｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９２） ＥＭＢＯ Ｊ．１１：３８８７－３８９５；Ｂｌａｎｋ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（Ｅｐｕｂ ２００６ Ｄｅｃ．２９） Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５６（５）：７３９－７４５）。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用は、免疫チェックポイントとして作用し得、これは、Ｔ細胞受容体により媒介される増殖の減少をもたらし得る（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３） Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１－７；Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００５） Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７－３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００４） Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：５０９４－１００）。免疫抑制は、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２との局所的相互作用を阻害することにより逆転され得、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２との相互作用も遮断される場合、この効果は相加的である（Ｉｗａｉ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：１２２９３－７；Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．（２００３） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１２５７－６６）。
幾つかのがんについて、腫瘍生存及び腫瘍増殖は、腫瘍により媒介される免疫チェックポイント調節により維持される。この調節は、免疫系の抗がん機能の破壊をもたらし得る。例えば、最近の研究は、腫瘍細胞による免疫チェックポイント受容体リガンド、例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の発現は、腫瘍微小環境における免疫系の活性を下方調節し得、特にＴ細胞を抑制することにより、がんの免疫回避を促進し得ることを示した。ＰＤ－Ｌ１は、種々のヒトがんにより豊富に発現される（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００２） Ｎａｔ Ｍｅｄ ８：７８７－７８９）。ＰＤ－Ｌ１の受容体であるＰＤ－１は、リンパ球（例えば、活性化Ｔ細胞）上に発現され、通常は、特にＴ細胞を抑制することにより、免疫系を下方調節し、自己寛容を促進することに関与する。しかしながら、Ｔ細胞上に発現されたＰＤ－１受容体が腫瘍細胞上の同族ＰＤ－Ｌ１リガンドに結合すると、もたらされたＴ細胞抑制は、腫瘍に対する免疫反応障害（例えば、腫瘍浸潤リンパ球の減少またはがん細胞による免疫回避の発生）に寄与する。
例えば、卵巣癌、腎臓癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、及び黒色腫の大規模な試料セットにおいて、ＰＤ－Ｌ１発現が予後不良と相関し、その後の処置に関係なく全生存率を減少させることが示された（例えば、Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００２） Ｎａｔ Ｍｅｄ ８（８）：７９３－８００；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００８） Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ４９（６）：２５１８－２５２５；Ｇｈｅｂｅｈ ｅｔ ａｌ．，（２００６） Ｎｅｏｐｌａｓｉａ ８：１９０－１９８；Ｈａｍａｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２００７） Ｐｒｏｃ Ｎａｔ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０４：３３６０－３３６５；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２００６） Ｃｌｉｎ Ｇｅｎｉｔｏｕｒｉｎ Ｃａｎｃｅｒ ５：２０６－２１１；Ｎｏｍｉ ｅｔ ａｌ．，（２００５） Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １１：２９４７－２９５３；Ｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７） Ｃａｎｃｅｒ １０９：１４９９－１５０５；Ｓｈｉｍａｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２００７） Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １２１：２５８５－２５９０；Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，（２００９） Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １５：９７１－９７９；Ｎａｋａｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２００７） Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５６：１１７３－１１８２；Ｈｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１０） Ｃａｎｃｅｒ １１６（７）：１７５７－１７６６を参照のこと）。同様に、腫瘍リンパ球上のＰＤ－１発現が、乳癌（Ｋｉｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１７） ＥＳＭＯ Ｏｐｅｎ ２（２）：ｅ０００１５０）及び黒色腫（Ｋｌｅｆｆｅｌ ｅｔ ａｌ．，（２０１５） Ｃｅｌｌ １６２（６）：１２４２－１２５６）における機能不全Ｔ細胞を特徴付けることわかった。例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２シグナル伝達軸の機能に影響を及ぼし、及び／またはＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２との間の相互作用を破壊するものなどの、ＰＤ－１アンタゴニストが開発されており、免疫細胞－腫瘍細胞相互作用の調節により機能する新規のクラスの抗腫瘍抑制剤に相当する。
本明細書で使用する場合、用語「再構成された」は、Ｖセグメントが、ほぼ完全なＶＨまたはＶＬドメインをコ－ドする配置で、それぞれＤ－ＪまたはＪセグメントに直接隣接して位置している、重鎖または軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の配置を指す。再構成された免疫グロブリン遺伝子座は、生殖細胞系列のＤＮＡとの比較により同定され得る。再構成された遺伝子座は、少なくとも１つの組換えられた七量体／九量体相同性エレメントを有する。
本明細書で使用する場合、用語「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、組換え発現ベクタ－が導入された細胞を指すことを意図する。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の子孫も指すことを意図することを理解すべきである。変異または環境の影響のいずれかに起因して特定の改変がその後の世代に発生する場合があるため、かかる子孫は実際には親細胞と同一ではない場合があるが、本明細書で使用する場合、それでも用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「組換えヒト抗体」には、組換え手段により調製、発現、作製、または単離された全てのヒト抗体、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックまたはトランスクロモソ－マル（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）な動物（例えばマウス）、または当該動物から調製されたハイブリド－マから単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するよう形質転換された宿主細胞、例えば、トランスフェクト－マ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）から単離された抗体、（ｃ）組換えヒト抗体ライブラリ－の組み合わせから単離された抗体、及び（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む任意の他の手段により調製、発現、作製または単離された抗体、が含まれる。かかる組換えヒト抗体は、生殖細胞系列遺伝子によりコ－ドされる特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列を利用する可変領域及び定常領域を含むが、例えば、抗体成熟の間に生じるその後の再構成及び変異も含む。当該技術分野において公知のように（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ （２００５） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７－１１２５を参照のこと）、可変領域は抗原結合ドメインを含み、これは、外来抗原に特異的な抗体を形成するために再構成を起こす様々な遺伝子によりコ－ドされる。再構成に加えて、可変領域は、外来性抗原に対する抗体の親和性を増加させるために、複数の単一アミノ酸変化（体細胞突然変異または過剰変異と称される）により更に改変され得る。定常領域は抗原に対する更なる反応で変化する（すなわち、アイソタイプスイッチ）。従って、軽鎖及び重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコ－ドする、抗原に応答して再構成された核酸分子及び体細胞変異した核酸分子は、元の核酸分子と配列同一性を有していなくてもよいが、その代わりに実質的に同一であるか、または類似する（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。
本明細書で使用する場合、用語「参照抗体」（「参照ｍＡｂ」と互換的に使用される）または「参照抗原結合タンパク質」は、ヒトＩＬ－２７上の特異的エピト－プに結合し、それ自身と１種以上の異なる抗体との間の関係の確立に使用される抗体またはその抗原結合断片を指し、ここで、当該関係は、参照抗体及び１種以上の異なる抗体のＩＬ－２７上の同一エピト－プへの結合である。本明細書で使用する場合、当該用語は、本明細書に記載されるもの（例えば、競合結合アッセイ）などの試験またはアッセイにおいて、競合因子として有用な抗ＩＬ－２７抗体を暗示し、ここで、当該アッセイは、同一エピト－プに結合する１種以上の異なる抗体の発見、同定、または開発に有用である。
本明細書で使用する場合、用語「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」、及び「特異的に結合する」は、所定の抗原上のエピト－プに結合する抗体を指す。典型的には、抗体は、分析物として組換えヒトＩＬ－２７及びリガンドとして抗体を使用し、ＢＩＡＣＯＲＥ ２０００機器で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術により決定される場合に、約１０－６Ｍ未満、例えば、約１０－７Ｍ未満、１０－８Ｍ未満、１０－９Ｍ未満、もしくは１０－１０Ｍ未満の平衡解離定数（ＫＤ）または更に低い平衡解離定数で結合し、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合の親和性よりも少なくとも２倍高い親和性で所定の抗原に結合する。特定の実施形態では、ＩＬ－２７に特異的に結合する抗体は、分析物として組換えヒトＩＬ－２７及びリガンドとして抗体を使用し、ＢＩＡＣＯＲＥ ２０００機器で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術により決定される場合に、約１００ｎＭ（１０－７Ｍ）未満、任意に約５０ｎＭ（５×１０－８Ｍ）未満、任意に約１５ｎＭ（１．５×１０－８Ｍ）未満、任意に約１０ｎＭ（１０－８Ｍ）未満、任意に約５ｎＭ（５×１０－９Ｍ）未満、任意に約１ｎＭ（１０－９Ｍ）未満、任意に約０．１ｎＭ（１０－１０Ｍ）未満、任意に約０．０１ｎＭ（１０－１１Ｍ）未満の平衡解離定数（ＫＤ）、または更に低い平衡解離定数で結合し、ここで、所定の抗原への結合は、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合での抗体の親和性よりも少なくとも２倍高い親和性で生じる。語句「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」は、本明細書において用語「抗原に特異的に結合する抗体」と互換的に使用される。
本明細書で使用する場合、用語「ＳＴＡＴ１リン酸化」は、ヒトにおいてＳＴＡＴ１遺伝子によりコ－ドされる転写因子である、シグナル伝達性転写因子１（ＳＴＡＴ１）ポリペプチドのリン酸化を指す。ＳＴＡＴ分子は、活性化及びホモまたはヘテロ二量体を形成することによる二量体化を引き起こす受容体関連キナ－ゼによりリン酸化され、当該ホモまたはヘテロ二量体は核に転移して、転写因子として機能する。ＳＴＡＴ１は、ＩＬ－２７が含まれる幾つかのリガンドを介したシグナル伝達に応答して活性化され得る（すなわち、リン酸化）。ＩＬ－２７Ｒを介したＩＬ－２７シグナル伝達は、ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）のリン酸化をもたらす。ＳＴＡＴ１は、細胞の生存、生存率、または病原体反応に関与する遺伝子発現において重要な役割を有する。ＩＬ－２７シグナル伝達の結果としてのＳＴＡＴ１リン酸化を測定する方法としては、限定されるものではないが、リン酸化されたＳＴＡＴ１を特異的に認識する抗体で標識された細胞のフロ－サイトメトリ－解析が挙げられる（例えば、Ｔｏｃｈｉｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，（２００６） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３１３（１－２）：２９－３７を参照のこと）。
本明細書で使用する場合、用語「ＳＴＡＴ３リン酸化」は、ヒトにおいてＳＴＡＴ３遺伝子によりコ－ドされる転写因子である、シグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）ポリペプチドのリン酸化を指す。ＳＴＡＴ３は、細胞刺激に応答した種々の遺伝子の発現を媒介し、従って、多数の細胞プロセス、例えば、細胞増殖及びアポト－シスにおいて重要な役割を果たす。ＩＬ－２７シグナル伝達の結果としてのＳＴＡＴ３リン酸化を測定する方法としては、限定されるものではないが、リン酸化されたＳＴＡＴ３を特異的に認識する抗体で標識された細胞または細胞抽出物のフロ－サイトメトリ－解析が挙げられる（例えば、Ｆｕｒｓｏｖ ｅｔ ａｌ．，（２０１１） Ａｓｓａｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ Ｔｅｃｈｎｏｌ ９（４）：４２０－４２９を参照のこと）。
本明細書で使用する場合、用語「スイッチ配列」は、スイッチ組換えの原因となるＤＮＡ配列を指す。「スイッチドナ－」配列、典型的にはμスイッチ領域は、スイッチ組換えの間に除去される構築物領域の５’側（すなわち、上流）にある。「スイッチアクセプタ－」領域は、除去される構築物領域と置換定常領域（例えば、γ、εなど）との間にある。組換えが常に起こる特定の部位は存在しないため、最終的な遺伝子配列は、通常、構築物からは予測できない。
本明細書で使用する場合、用語「対象」には、任意のヒトまたは非ヒト動物が含まれる。例えば、本発明の方法及び組成物は、免疫不全を有する対象を処置するために使用され得る。用語「非ヒト動物」には、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物及び非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などが含まれる。
核酸に関し、用語「実質的相同性」は、２つの核酸またはそれらの指定される配列が、最適にアラインメントされ、比較される場合に、適切なヌクレオチドの挿入または欠失を伴い、少なくとも約８０％のヌクレオチド、通常、少なくとも約９０％～９５％のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約９８％～９９．５％のヌクレオチドにおいて同一であることを示す。あるいは実質的相同性は、セグメントが選択的ハイブリダイゼ－ション条件下で当該鎖の相補鎖にハイブリダイズする場合、存在する。
２つの配列間の同一性パ－セントは、配列により共有される同一な位置の数の関数であり（すなわち、相同性％＝同一な位置の数／位置の総数×１００）、当該２つの配列の最適アラインメントのために導入される必要があるギャップの数、各ギャップの長さを考慮する。配列の比較、及び２つの配列間の同一性パ－セントの決定は、下記の非限定的な例に記載されるような数学的アルゴリズムを使用して実施され得る。
２つのヌクレオチド配列間の同一性パ－セントは、ＧＣＧソフトウェアパッケ－ジ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリクス、及び４０、５０、６０、７０、または８０のギャップの重み、及び１、２、３、４、５、または６の長さの重みを使用して決定され得る。また２つのヌクレオチド配列間またはアミノ酸配列間の同一性パ－セントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バ－ジョン２．０）に組み込まれた、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，４：１１－１７（１９８９））のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティ及び４のギャップペナルティを使用して決定され得る。更に２つのアミノ酸配列間の同一性パ－セントは、ＧＣＧソフトウェアパッケ－ジ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４－４５３（１９７０））のアルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスのいずれか、及び１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップの重み、及び１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して決定され得る。
更に本開示の核酸配列及びタンパク質配列は、例えば、関連する配列を同定するために、公共デ－タベ－スに対する検索を実行するための「クエリ－配列」として使用され得る。かかる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０） Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バ－ジョン２．０）を使用して実行され得る。本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を取得するために、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワ－ド長＝１２で実行され得る。本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を取得するために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワ－ド長＝３で実行され得る。比較目的でギャップ付きアラインメントを取得するために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２に記載されるように利用され得る。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、各プログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメ－タが使用され得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと。
核酸は、全細胞、細胞溶解物中に存在してもよく、または部分的に精製された、もしくは実質的に純粋な形態で存在してもよい。核酸は、他の細胞成分または他の夾雑物、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質から、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィ－、アガロ－スゲル電気泳動、及び当該技術分野において周知の他のものが含まれる、標準的な技術により精製された場合、「単離」されているか、または「実質的に純粋」となる。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）を参照のこと。
本開示の核酸組成物は、多くの場合、ｃＤＮＡ、ゲノム、またはそれらの混合物由来の天然配列（改変された制限部位などは除く）であるが、遺伝子配列を得るために、標準的な技術によって変異され得る。コ－ド配列に関し、これらの変異はアミノ酸配列に望ましい影響を及ぼし得る。特に、天然のＶ配列、Ｄ配列、Ｊ配列、定常配列、スイッチ配列に対し実質的に相同であるか、またはそれらに由来するＤＮＡ配列、及び本明細書に記載される他のかかる配列が意図される（ここで、「由来する」は、配列が別の配列と同一であるか、または別の配列から改変されていることを示す）。
本明細書で使用する場合、用語「ＳＴＩＮＧ」（あるいはＴＭＥＭ１７３）は、直接的な細胞質ＤＮＡセンサ－、及びアダプタ－タンパク質の両方として機能するタンパク質である、インタ－フェロン遺伝子刺激因子を指す。ヒトにおいて、ＳＴＩＮＧは、ＴＭＥＭ１７３遺伝子によりコ－ドされる。ＳＴＩＮＧは、自然免疫において重要な役割を果たす。ＳＴＩＮＧは、細胞が細胞内病原体、例えば、ウイルス、マイコバクテリア、及び細胞内寄生体に感染した際に、Ｉ型インタ－フェロン産生を誘発する。ＳＴＩＮＧにより媒介されるＩ型インタ－フェロンは、それを分泌する同一の細胞及び近くの細胞に結合することにより感染細胞及び近くの細胞を局所感染から保護する。ＳＴＩＮＧの例示的なアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋデ－タベ－スによりアクセッション番号ＮＰ＿００１２８８６６７の下で提供される。
用語「Ｔ細胞」は、細胞表面上のＴ細胞受容体の存在により、他の白血球から区別され得る一種の白血球を指す。Ｔ細胞の幾つかのサブセットが存在し、限定されるものではないが、Ｔヘルパ－細胞（ＴＨ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞としても公知）ならびにＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ３、ＴＨ１７、ＴＨ９及びＴＦＨ細胞が含まれるそのサブタイプ、細胞障害性Ｔ細胞（ＴＣ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、細胞障害性Ｔリンパ球、Ｔキラ－細胞、キラ－Ｔ細胞としても公知）、メモリ－Ｔ細胞ならびにセントラルメモリ－Ｔ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクタ－メモリ－Ｔ細胞（ＴＥＭ及びＴＥＭＲＡ細胞）及び常在型メモリ－Ｔ細胞（ＴＲＭ細胞）が含まれるそのサブタイプ、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞またはサプレッサ－Ｔ細胞としても公知）ならびにＣＤ４＋ ＦＯＸＰ３＋ Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３－ Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｒ１細胞、Ｔｈ３細胞及びＴｒｅｇ１７細胞が含まれるそのサブタイプ、ナチュラルキラ－Ｔ細胞（ＮＫＴ細胞としても公知）、粘膜関連インバリアントＴ細胞（ＭＡＩＴ）、ならびにＶγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞が含まれるガンマデルタＴ細胞（γδ Ｔ細胞）が挙げられる。上述のＴ細胞または言及されていないＴ細胞のうちの任意の１種以上が、本発明の使用方法の標的細胞型であり得る。
本明細書で使用する場合、用語「Ｔ細胞性反応」は、限定されるものではないが、エフェクタ－Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞）及びヘルパ－Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）が含まれるＴ細胞により媒介される任意の反応を指す。Ｔ細胞性反応としては、例えば、Ｔ細胞の細胞細胞傷害作用及び増幅が挙げられる。
本明細書で使用する場合、用語「治療上有効量」もしくは「治療上有効用量」または本明細書において使用される類似用語は、所望の生物学的または医学的な応答（例えば、がんの１つ以上の症状の改善）を誘発する薬剤（例えば、抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合断片）の量を意味することを意図する。
本明細書で使用する場合、用語「ＴＡＭ受容体」は、ＴＡＭ受容体タンパク質チロシンキナ－ゼ（ＴＹＲＯ３、ＡＸＬ、及びＭＥＲ）を指す。ＴＡＭ受容体は、免疫系恒常性の調節に関与する。がんにおいて、ＴＡＭ受容体は、腫瘍発生の開始及び進行の制御、ならびにそれと同時の多様な免疫細胞による関連する抗腫瘍反応の制御という２つの調節的役割を有する。ＴＡＭ受容体の更なる説明は、Ｐａｏｌｉｎｏ ａｎｄ Ｐｅｎｎｉｎｇｅｒ （２０１６） Ｃａｎｃｅｒｓ ８（９７）：ｄｏｉ：１０．３３９０／ｃａｎｃｅｒｓ８１０００９７に記載されている。本明細書で使用する場合、用語「ＴＡＭ受容体阻害剤」または「ＴＡＭ阻害剤」は、ＴＡＭ受容体の機能または活性を阻害、遮断、または低減する薬剤を指す。
本明細書で使用する場合、用語「ＴＩＧＩＴ」または「Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体」は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物が含まれる、任意の脊椎動物の供給源由来の任意の天然ＴＩＧＩＴを指す。ＴＩＧＩＴは、当該技術分野において、ＤＫＦＺｐ６６７Ａ２０５、ＦＬＪ３９８７３、Ｖセット及び免疫グロブリンドメイン含有タンパク質９、Ｖセット及び膜貫通ドメイン含有タンパク質３、ＶＳＩＧ９、ＶＳＴＭ３、及びＷＵＣＡＭとしても公知である。当該用語は、ＴＩＧＩＴの天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたはアレルバリアントも包含する。例示的なヒトＴＩＧＩＴのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ４９５Ａ１の下で見つかる。
本明細書で使用する場合、用語「処置する」、「処置すること」、及び「処置」は、本明細書に記載される治療的手段または予防的手段を指す。「処置」方法は、障害もしくは再発性の障害の１つ以上の症状を予防するか、治療するか、遅延するか、その重症度を低減するか、もしくは改善するために、またはかかる処置を行わない場合に予想される生存率を越えて対象の生存率を延長するために、かかる処置を必要とする対象、例えば、特定抗原に対する免疫反応の増強を必要とする対象、またはこのような障害を最終的に得る可能性がある対象への、本開示のヒト抗体の投与を用いる。
本明細書で使用する場合、用語「腫瘍微小環境」（あるいは「がん微小環境」；ＴＭＥと略される）は、周辺血管、ならびに限定されるものではないが、免疫細胞、線維芽細胞、骨髄由来炎症性細胞、及びリンパ球が含まれる非がん性細胞を含む、腫瘍または新生物が存在する細胞環境または細胞周囲を指す。シグナル伝達分子及び細胞外マトリクスもＴＭＥを構成する。腫瘍及び周囲の微小環境は密接に関連し、常に相互作用する。腫瘍が、細胞外シグナルを放出し、腫瘍血管新生を促進し、そして末梢免疫寛容を誘発することにより微小環境に影響を与え得る一方で、微小環境中の免疫細胞は、腫瘍細胞の成長と進化に影響を与え得る。
本明細書で使用する場合、用語「再構成されていない」または「生殖系列配置」は、Ｖセグメントが、ＤセグメントまたはＪセグメントに直接隣接するように組換えられていない配置を指す。
本明細書で使用する場合、用語「ベクタ－」は、核酸分子であって、それが連結されている別の核酸を輸送することができる当該核酸分子を指すことを意図する。ベクタ－の一種は「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡ断片がライゲ－ションされ得る環状二本鎖ＤＮＡル－プを指す。別の種類のベクタ－は、追加のＤＮＡ断片がウイルスゲノムにライゲ－ションされ得るウイルスベクタ－である。ある種のベクタ－は、それらが導入された宿主細胞内で自己複製が可能である（例えば、細菌の複製開始点を有する細菌ベクタ－及びエピソ－ム哺乳動物ベクタ－）。他のベクタ－（例えば、非エピソ－ム哺乳動物ベクタ－）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、これにより、宿主ゲノムと共に複製される。更に、ある種のベクタ－は、それらが作動可能に連結された遺伝子の発現を誘導することができる。かかるベクタ－は、本明細書において「組換え発現ベクタ－」、または単に「発現ベクタ－」と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクタ－は、多くの場合プラスミドの形態である。プラスミドが最も一般的に用いられるベクタ－の形態であるため、本明細書では、「プラスミド」及び「ベクタ－」は互換的に使用され得る。しかしながら、本発明には、ウイルスベクタ－（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）などの同等の機能を果たす他の形態の発現ベクタ－が含まれることを意図する。
特に定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料も本開示の方法及び組成物の実施または試験に使用され得るが、好ましい方法及び材料を以下に記載する。本明細書に記載される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。
示される抗ＩＬ－２７抗体の親和性デ－タを提供する表を示す。親和性測定は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ法及びＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ法を使用して実行された。 ＥＬＩＳＡにより測定される、示される抗ＩＬ－２７抗体のプレ－トに結合した組換えＩＬ－２７への結合を示す。 フロ－サイトメトリ－により測定される、ヒト全血におけるＳＴＡＴ１のＩＬ－２７により媒介されるリン酸化の示される抗ＩＬ－２７抗体による阻害を示す棒グラフを示す。 フロ－サイトメトリ－により測定される、ヒトＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ１のＩＬ－２７により媒介されるリン酸化の示される抗ＩＬ－２７抗体による阻害を示すグラフを示す。 フロ－サイトメトリ－により測定される、Ｕ９３７細胞におけるＳＴＡＴ１のＩＬ－２７により媒介されるリン酸化の示される抗ＩＬ－２７抗体による阻害を示すグラフを示す。 フロ－サイトメトリ－により測定される、ＨＵＴ－７８細胞におけるＳＴＡＴ１のＩＬ－２７により媒介されるリン酸化の示される抗ＩＬ－２７抗体による阻害を示す棒グラフを示す。 ＳＲＦ３８８がヒト全血Ｔ細胞においてＩＬ－２７により媒介されるｐＳＴＡＴ１を阻害することを示すグラフを示す。 Ｔ細胞におけるＣＤ１６１発現のＩＬ－２７により媒介される阻害の様々な濃度の示される抗ＩＬ－２７抗体による逆転を示す。ＣＤ１６１発現は、フロ－サイトメトリ－を使用して決定された。 ＥＬＩＳＡにより測定される、抗ＩＬ－２７抗体が、ヒトＰＢＭＣにおけるＰＤ－１により媒介されるＴＮＦαの分泌を増強する程度を示す。 ＥＬＩＳＡにより測定される、抗ＩＬ－２７抗体が、ヒトＰＢＭＣにおけるＰＤ－１により媒介されるＩＬ－６の分泌を増強する程度を示す。 ＰＤ－１遮断と組み合わせたＳＲＦ３８８が、健常なドナ－及びＲＣＣを有する患者由来のＰＢＭＣにおけるサイトカイン産生の増加をもたらすことを示すドットプロットを示す（略語：ＣＢＡ＝サイトメトリ－ビ－ズアレイ、ＩＦＮγ＝インタ－フェロンγ、ＭＳＤ＝Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、ＰＢＭＣ＝末梢血単核細胞、ＰＤ－１＝プログラム細胞死受容体１、ＲＣＣ＝腎細胞癌、ＴＮＦα＝腫瘍壊死因子α）。 ＩＬ－２７がＰＤ－１遮断後のサイトカイン産生を阻害すること、及びＳＲＦ３８８との組み合わせでサイトカイン産生が回復することを示す（略語：Ｃｔｒｌ＝対照、ｎｓ＝有意でない、ＰＢＭＣ＝末梢血単核細胞、ｒｈＩＬ－２７＝組換えヒトＩＬ－２７）。 示される様々な種類の細胞について、ＰＢＭＣ培養物において、かかる細胞が、ＳＲＦ３８８抗体、αＰＤ－１抗体、またはＳＲＦ３８８及びαＰＤ－１抗体の組み合わせと接触された際の観察されたサイトカイン誘導（具体的には、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ－６、及びＩＬ－１７Ａ）を示す。 同上。 異なる濃度の示される個々の抗体（ＳＲＦ４０５、ＳＲＦ４１０、ＳＲＦ４１１、ＳＲＦ４１４、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、及びＡｂ７）のＵ９３７（リンパ腫）細胞におけるｐＳＴＡＴ１シグナルに対する影響を示す。 異なる濃度のこれらの個々の抗体のＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）におけるｐＳＴＡＴ１シグナルに対する影響を示す。 異なる濃度のこれらの個々の抗体のＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）におけるＣＤ１６１シグナルに対する影響を示す。 異なる濃度のこれらの個々の抗体（ＳＲＦ４１４を除く）のＣＤ４ Ｔリンパ球（ＣＤ４細胞）におけるＰＤ－Ｌ１シグナルに対する影響を示す。 異なる濃度のこれらの個々の抗体（ＳＲＦ５２９を除く）の単球におけるＰＤ－Ｌ１シグナルに対する影響を示す。 異なる濃度のこれらの個々の抗体（ＳＲＦ５２９を除く）の単球におけるＴＩＭ－３シグナルに対する影響を示す。 フロ－サイトメトリ－により測定される、抗ＩＬ－２７抗体でのヒト単球の処理による、ＩＬ－２７により媒介されるＰＤ－Ｌ１発現の阻害を示す。 フロ－サイトメトリ－により測定される、ＥＢＩ３単量体に特異的に結合する様々な濃度の抗ＩＬ－２７抗体でのヒト単球の処理による、ＩＬ－２７により媒介されるＰＤ－Ｌ１発現の用量依存的阻害を示す。 フロ－サイトメトリ－により測定される、抗ＩＬ－２７抗体でのヒト単球の処理による、ＩＬ－２７により媒介されるＴＩＭ３発現の阻害を示す。 フロ－サイトメトリ－により測定される、抗ＩＬ－２７抗体でのヒト休止Ｔ細胞の処理による、ＩＬ－２７により媒介されるＰＤ－Ｌ１発現の阻害を示す。 マウスから単離された肺の小結節の目視計数により測定される、示される抗ＩＬ２７抗体（ＳＲＦ３８８）、アイソタイプ対照抗体、αＷＳＸ－１抗体、またはαＰＤ－１及びαＣＴＬＡ－４抗体の組み合わせで処置されたＢ１６Ｆ１０腫瘍マウスの肺表面Ｂ１６Ｆ１０転移性結節（肺結節）の数を示すドットプロットを示す。 生物発光イメ－ジング解析により測定される、抗ＩＬ－２７抗体（ＳＲＦ３８８）またはアイソタイプ対照抗体で処置されたマウスの生物発光性Ｂ１６－Ｌｕｃ腫瘍の成長動態を示す。 示される抗ＩＬ２７抗体（ＳＲＦ３８８）、アイソタイプ対照抗体、αＷＳＸ－１抗体、またはαＰＤ－１及びαＣＴＬＡ－４抗体の組み合わせで処置された、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍マウスから単離され、固定され、薄切され、ヘマトキシリン・エオジンで染色された肺組織の一連の画像を示す。 示される抗ＩＬ２７抗体（ＳＲＦ３８８）、アイソタイプ対照抗体、αＷＳＸ－１抗体、またはαＰＤ－１及びαＣＴＬＡ－４抗体の組み合わせで処置されたＢ１６Ｆ１０腫瘍マウスから単離され、固定され、薄切され、ヘマトキシリン・エオジンで染色された肺組織のＢ１６Ｆ１０腫瘍組織の、画像解析ソフトウェアにより測定される総組織面積のうちの百分率としての総腫瘍面積を示すドットプロットを示す。肺表面転移の数及び腫瘍総面積の同程度の減少が、抗ＩＬ－２７ＲＡ（ＷＳＸ－１）抗体により媒介される遮断により、及び抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４併用療法により観察された。 ＩＬ－２７ミニサ－クルによる処置後のＩＬ－２７を過剰発現するマウスから単離された脾細胞における、＞１．０の発現のｌｏｇ２倍率変化（黒丸）を有する遺伝子のマイクロアレイデ－タを示す散布図を示す。 図８Ａのような脾細胞における示される選択された免疫調節遺伝子の発現レベルを示す。 ヒトＩＬ－２７の異所性発現がインビボでマウスＴ細胞上の抑制性受容体発現を誘発すること、及びＳＲＦ３８８がＩＬ－２７ミニサ－クル処置後にインビボでＴ細胞上の抑制性受容体発現を低減することを示す。６週齢の雌のＢａｌｂ／ｃマウスが、空ベクタ－（対照）またはｈＩＬ－２７ミニサ－クルを注入された。ＰＢＭＣ（左上及び右上パネル）及び全脾細胞（左下及び右下パネル）が形質移入の５日後に採取され、細胞がフロ－サイトメトリ－により染色され、解析された。示されるマ－カ－の発現が、ＣＤ４＋Ｔ細胞（左上及び左下パネル）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（右上及び右下パネル）について解析された。解析をＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して実行した。 ＳＲＦ３８８がマウス血漿におけるミニサ－クル由来のヒトＩＬ－２７の検出を阻害することを示す。 選択されたモノクロ－ナル抗体の特性の表にした概要を示す。 同上。 抗体配列の表を、ＮＴ番号付けを反映する配列分割と共に示す。図１０Ａ及び図１０Ｂの両方において、ＣＤＲ配列における強調されたアミノ酸は、生殖細胞系列でコ－ドされる配列からの変異を示す。当業者に明らかであるように、ＣＤＲ配列、フレ－ムワ－ク配列の決定などを含む、抗体の番号付けは、図１０Ａ及び図１０Ｂにおいて示され、本明細書の他箇所で使用されるＮＴ及びＩＭＧＴ番号付けシステムによるものが含まれる、当該技術分野において承認されている多数の方法で実行され得る。 同上。 同上。 同上。 抗体配列の表（図１０Ａの配列表と一致する）を、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号付けを反映する配列分割と共に示す。図１０Ａ及び図１０Ｂの両方において、ＣＤＲ配列における強調されたアミノ酸は、生殖細胞系列でコ－ドされる配列からの変異を示す。当業者に明らかであるように、ＣＤＲ配列、フレ－ムワ－ク配列の決定などを含む、抗体の番号付けは、図１０Ａ及び図１０Ｂにおいて示され、本明細書の他箇所で使用されるＮＴ及びＩＭＧＴ番号付けシステムによるものが含まれる、当該技術分野において承認されている多数の方法で実行され得る。 同上。 同上。 同上。 Ａは、がんを有する患者または健常な対照におけるＥＢＩ３またはＩＬ－２７の血清レベルを示すドットプロットを示す。血清試料が、実施例１５に記載される抗体ペアを使用して、ＥＢＩ３（Ａ）またはＩＬ－２７（Ｂ）レベルについて試験された。値は、組換えヒトＩＬ－２７を使用した検量線により外挿された。健常なドナ－（正常な対照）の平均＋２ＳＤが、陽性とみなされるための血清試料での任意のカットオフ値として使用された。陽性試料の総数を、それぞれのがん分類の上に示す。Ｂは、図１１Ａについて記載されたのと同じパラメ－タ－を使用して、幾つかの卵巣癌試料が、Ｂ細胞リンパ腫を有する３人の患者及び子宮内膜癌を有する１人の患者由来の血清においても見られた、血清における検出可能レベルのＩＬ－２７を示したことを示すドットプロットを示す。 抗ｐ２８捕捉抗体ＳＲＦ３８１と抗ＥＢＩ３抗体Ａｂ７との組み合わせが、ＭＳＤ免疫アッセイにより組換えヒトＩＬ－２７をＩＬ－２７濃度依存的様式で検出することを示すグラフを示す。 抗ＥＢＩ３捕捉抗体ＳＲＦ５５７と抗ＥＢＩ３抗体Ａｂ７との組み合わせが、ＭＳＤ免疫アッセイにより組換えヒトＩＬ－２７をＩＬ－２７濃度依存的様式で検出することを示すグラフを示す。 Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイにより測定される、がん患者（腎細胞癌（ＲＣＣ）、卵巣癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、肉腫、黒色腫、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、ホジキンリンパ腫、胃癌、子宮内膜癌）、及び健常な（正常な）患者由来の１７４の血清試料におけるＥＢＩ３の濃度を示すグラフを示す。 Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイにより測定される、がん患者（腎細胞癌（ＲＣＣ）、卵巣癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、肉腫、黒色腫、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、ホジキンリンパ腫、胃癌、子宮内膜癌）、及び健常な（正常な）患者由来の１７４の血清試料におけるＩＬ－２７の濃度を示すグラフを示す。 ＭＳＤ免疫アッセイにより組換えヒトＩＬ－２７を検出するために、抗ＩＬ－２７抗体がＳＲＦ３８１と組み合わされ得ることを示す棒グラフを示す。 ＥＬＩＳＡにより組換えヒトＩＬ－２７を検出するために、抗ＩＬ－２７抗体がＡｂ７と組み合わされ得ることを示す棒グラフを示す。
本開示は、少なくとも部分的に、高親和性及び高特異性でヒトＩＬ－２７に結合する抗体分子を提供する。一実施形態では、ＩＬ－２７に結合するヒト抗体が本明細書において開示される。本明細書で使用する場合、用語「ＩＬ－２７」及び「ＩＬ２７」は、以下の２つの異なる遺伝子によりコ－ドされる２つの異なるサブユニットから構成されるヘテロ二量体サイトカインであるＩＬ－２７を互換的に指す：エプスタイン・バ－ウイルス誘導遺伝子３（ＥＢＩ３）及びＩＬ－２７ｐ２８。ＩＬ－２７は、炎症促進特性及び抗炎症特性の両方を有し、造血細胞及び非造血細胞に対する多様な効果を有する。
従って、一態様では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗するモノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下の特性のうちの少なくとも１つ以上を示す：
（ｉ）１５ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）でのヒトＩＬ－２７への結合；
（ｉｉ）ＩＬ－２７のＩＬ－２７受容体への結合の遮断；
（ｉｉｉ）細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化の阻害または低減；
（ｉｖ）細胞におけるＣＤ１６１発現のＩＬ－２７により媒介される阻害の阻害または低減；
（ｖ）細胞におけるＩＬ－２７により媒介されるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現の阻害または低減；
（ｖｉ）細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌の誘発または増強；及び
（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の組み合わせ。
他の態様では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、ＩＬ－２７生物活性またはＩＬ－２７シグナル伝達を阻害または低減するモノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。
本発明の追加の態様としては、抗体分子をコ－ドする核酸分子、抗体分子を作製するための発現ベクタ－、宿主細胞、及び方法が挙げられる。免疫複合体、多重または二重特異性分子、及び抗体分子を含む医薬組成物も提供される。本明細書において開示される抗ＩＬ－２７抗体分子は、がんまたは悪性疾患、例えば、固形腫瘍及び液性腫瘍（例えば、白血病、例えば、リンパ腫、例えば、ＡＭＬ）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、膵癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌）、黒色腫、精巣癌、肉腫、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、肝癌（例えば、肝細胞癌（ＨＣＣ））、結腸直腸癌、卵巣癌、脳癌（例えば、多形神経膠芽腫）、または腎臓癌（例えば、腎細胞癌（例えば、腎明細胞癌））を処置、予防、及び／または診断するために使用され得る。
抗ＩＬ－２７抗体及びその抗原結合断片
本開示は、ＩＬ－２７、特にヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する抗体及び抗原結合部分を提供する。表１２に記載される重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲならびに可変配列を含む、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分が本明細書において提供される。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下の特性のうちの少なくとも１つ以上を示す：（ｉ）１５ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）でのヒトＩＬ－２７への結合；（ｉｉ）ＩＬ－２７のＩＬ－２７受容体への結合の遮断；（ｉｉｉ）細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化の阻害または低減；（ｉｖ）細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害の阻害または低減；（ｖ）細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現の阻害または低減；（ｖｉ）細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌の誘発または増強；及び（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の組み合わせ。
幾つかの実施形態では、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分は、１５ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＩＬ－２７に結合する。
幾つかの実施形態では、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分は、組換えヒトＩＬ－２７に、またはマウスＩＬ－２７に結合する。
幾つかの実施形態では、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分は、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減する。幾つかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。幾つかの実施形態では、細胞は、がん細胞である。
幾つかの実施形態では、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分は、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減する（例えば、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を改善または軽減する）。幾つかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。
幾つかの実施形態では、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分は、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１発現が阻害または低減される。幾つかの実施形態では、ＴＩＭ－３発現が阻害または低減される。幾つかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１発現及びＴＩＭ－３発現の両方が低減される。幾つかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。
幾つかの実施形態では、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分は、細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌を誘発または増強する。幾つかの実施形態では、１種以上のサイトカインは、ＴＮＦαである。幾つかの実施形態では、１種以上のサイトカインは、ＩＬ－６である。幾つかの実施形態では、１種以上のサイトカインは、ＴＮＦα及びＩＬ－６である。幾つかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。
幾つかの実施形態では、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１ ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である。幾つかの実施形態では、抗体は、野生型ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。幾つかの実施形態では、抗体は、野生型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。幾つかの実施形態では、抗体は、少なくとも１つの変異を含むＦｃドメインを含む。幾つかの実施形態では、抗体は、変異型ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。幾つかの実施形態では、抗体は、変異型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。幾つかの実施形態では、変異型ＩｇＧ４重鎖定常領域は、ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、Ｌ２３５Ａ置換、またはそれらの組み合わせのいずれかを含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、上述の実施形態のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分と実質的に同一のＩＬ－２７上のエピト－プに結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、上述の実施形態のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分により結合される、ＩＬ－２７を含むアミノ酸残基の少なくとも１つに結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分により結合されるＩＬ－２７上のエピト－プの変異は、当該抗体またはその抗原結合部分及び上述の実施形態のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分の両方への結合を阻害、低減、または遮断する。
幾つかの実施形態では、本開示は、ＩＬ－２７上のエピト－プに結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該エピト－プは、表１２に記載される抗体分子により結合されるエピト－プと同一であるか、または類似する。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択される重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７０６、７０７、及び７０８に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７１４、７１５及び７１６に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７２８、７２９、及び７３０に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７３６、７３７、及び７３８に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５０、７５１、及び７５２に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７５８、７５９、及び７６０に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７５０、７５１、及び７５２に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７５８、７５９、及び７６０に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１６１、１６２、及び１６３に記載され、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１６９、１７０、及び１７１に記載される。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択される重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７０９、７１０、及び７１１に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７１７、７１８及び７１９に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７３１、７３２、及び７３３に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７３９、７４０、及び７４１に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５３、７５４、及び７５５に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７６１、７６２、及び７６３に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７７５、７７６、及び７７７に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７８３、７８４、及び７８５に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１６４、１６５、及び１６６に記載され、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１７２、１７３、及び１７４に記載される。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ、ＳＹＳＭＳ（配列番号２３）、ＹＩＳＹＤＧＧＳＡＹＹＰＤＴＶＫＧ（配列番号２４）、及びＨＧＤＹＤＤＤＤＡＭＤＹ（配列番号２５）であり、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号２６）、ＮＡＥＴＬＴＥ（配列番号２７）、及びＱＨＨＹＧＴＰＬＴ（配列番号２８）である。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号７１２、７３４、７５６、及び７７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、当該軽鎖可変領域は、配列番号７２０、７４２、７６４、及び７８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７１２及び７２０；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７３４及び７４２；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５６及び７６４；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７７８及び７８６。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号７１２、７３４、７５６、及び７７８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、当該軽鎖可変領域は、配列番号７２０、７４２、７６４、及び７８６からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７１２及び７２０；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７３４及び７４２；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５６及び７６４；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７７８及び７８６。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号１６７及び１７５に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号１６７及び１７５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号７２２、７４４、７６６、及び７８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号７２２、７４４、７６６、及び７８８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号７２６、７４８、７７０、及び７９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、配列番号７２６、７４８、７７０、及び７９２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同なアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７２２及び７２４；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７４４及び７４６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７６６及び７６８；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７８８及び７９０。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７２２及び７２４；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７４４及び７４６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７６６及び７６８；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７８８及び７９０。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７２６及び７２４；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７４８及び７４６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７７０及び７６８；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７９２及び７９０。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む：
（ｉ）それぞれ配列番号７２６及び７２４；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７４８及び７４６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７７０及び７６８；ならびに
（ｉｖ）それぞれ配列番号７９２及び７９０。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号１７７及び１７９に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号１７７及び１７９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号１８１及び１７９に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、それぞれ配列番号１８１及び１７９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
抗ＩＬ－２７受容体（ＷＳＸ－１）抗体及びその抗原結合断片
ＷＳＸ－１は、配列及び構造の両方においてＩＬ－１２Ｒのβ２鎖に相同なクラスＩサイトカイン受容体である。この受容体は、休止期／ナイ－ブＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞により高度に発現される。最近の研究により、ＥＢＩ３及びＩＬ－２７ｐ２８サブユニットから構成されるヘテロ二量体サイトカインであるＩＬ－２７が、ＷＳＸ－１のリガンドとして同定された。クラスＩサイトカイン受容体ファミリ－のメンバ－であるＥＢＩ３は、ＩＬ－１２ｐ４０と顕著な構造的相同性を共有し、ＩＬ－２７ｐ２８はＩＬ－１２ｐ３５に密接に関連する。リガンド／受容体ペアであるＩＬ－１２／ＩＬ－１２ＲとＩＬ－２７／ＷＳＸ－１との間の構造類似性に加えて、機能的類似性を示す報告もある。ＩＬ－１２ＲがＴｈ１型応答の発生において決定的な役割を果たす一方で、ＷＳＸ－１欠損細胞はＴｈ１分化初期にＩＦＮ－γ産生の障害を有することが報告された。更に、組換えＩＬ－２７は、ＩＬ－１２と同様に、高度に精製されたナイ－ブヘルパ－Ｔ細胞におけるＴｈ１分化を増強することができる。これらの研究の結果として、ＩＬ－２７／ＷＳＸ－１が、ＩＬ－１２／ＩＬ－１２Ｒ相互作用と同様に、Ｔｈ１応答の初期分化における重要な因子であるという早期の合意が得られた。
従って、幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列は、それぞれ、ＳＮＮＡＡＷＮ（配列番号８０２）、ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＬＳＶＫＳ（配列番号８０３）、及びＧＬＰＭＶＰＦＤＳ（配列番号８０４）であり、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ、ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号８０５）、ＫＡＳＳＬＥＳ（配列番号８０６）、及びＱＱＹＤＳＦＳＭＹＴ（配列番号８０７）である。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、配列番号７９４に記載されるアミノ酸配列を含み、当該軽鎖可変領域は、配列番号７９６に記載されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合し、拮抗する抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖定常領域を含み、ここで、当該軽鎖定常領域は、配列番号７９８に記載されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合し、拮抗する抗体またはその抗原結合部分は、重鎖定常領域を含み、ここで、当該重鎖定常領域は、配列番号７９９に記載されるアミノ酸配列を含む。
抗ＩＬ－２７抗体及びその抗原結合断片を作製するための方法
本開示は、本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合断片のいずれかを作製するための方法も特徴とする。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗体を調製するための方法は、対象（例えば、非ヒト哺乳動物）を適切な免疫原で免疫することを含み得る。本明細書に記載される抗体のいずれかを作製するための好適な免疫原は、本明細書に記載される。例えば、ＩＬ－２７に結合する抗体を作製するために、当業者は、好適な対象をＩＬ－２７で免疫し得る（例えば、ラット、マウス、スナネズミ、ハムスタ－、イヌ、ネコ、ブタ、ヤギ、ウマ、または非ヒト霊長類などの非ヒト哺乳動物）。幾つかの実施形態では、配列番号９７に記載されるアミノ酸配列を含む全長ヒトＩＬ－２７ ＥＢＩ３単量体ポリペプチドが、免疫原として使用される。幾つかの実施形態では、配列番号９８に記載されるアミノ酸配列を含む全長ヒトＩＬ－２７ｐ２８単量体ポリペプチドが、免疫原として使用される。
好適な対象（例えば、非ヒト哺乳動物）は、適切な抗原により、その後の追加免疫と共に、哺乳動物による抗体の生成を誘発するのに十分な回数免疫され得る。免疫原は、アジュバントと共に対象（例えば、非ヒト哺乳動物）に投与され得る。対象における抗体の生成に有用なアジュバントとしては、限定されるものではないが、タンパク質アジュバント；細菌アジュバント、例えば、細菌全体（ＢＣＧ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍまたはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）、及び細胞壁骨格、トレハロ－スジミコ－ル酸、モノホスホリルリピドＡ、結核菌のメタノ－ル抽出残渣（ＭＥＲ）、完全または不完全フロイントアジュバントが挙げられる細菌成分；ウイルスアジュバント；化学的アジュバント、例えば、水酸化アルミニウム、及びヨ－ド酢酸、及びコレステリルヘミスクシナ－トが挙げられる。免疫反応を誘発するための方法に使用され得る他のアジュバントとしては、例えば、コレラ毒素及びパラポックスウイルスタンパク質が挙げられる。Ｂｉｅｇ ｅｔ ａｌ．（１９９９） Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ３１（１）：１５－２４も参照のこと。例えば、Ｌｏｄｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０００） Ｖａｃｃｉｎｅ １８：１０５９－１０６６；Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９） Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４２：４６４０－４６４９；Ｂａｌｄｒｉｄｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９９） Ｍｅｔｈｏｄｓ １９：１０３－１０７；及びＧｕｐｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｖａｃｃｉｎｅ １３（１４）：１２６３－１２７６も参照のこと。
幾つかの実施形態では、本方法は、免疫原に結合するモノクロ－ナル抗体を分泌するハイブリド－マ細胞株を調製することを含む。例えば、ハツカネズミなどの好適な哺乳動物が、上記の様にＩＬ－２７ポリペプチドで免疫される。免疫された哺乳動物の抗体産生細胞（例えば脾臓のＢ細胞）は、少なくとも１回の免疫原の追加免疫後の２～４日後に単離され、次いで、好適な骨髄腫細胞株の細胞との融合前に培養液中で短時間増殖され得る。細胞は、例えば、ワクシニアウイルスまたはポリエチレングリコ－ルなどの融合プロモ－タ－の存在下で融合され得る。融合で得られたハイブリッド細胞はクロ－ニングされ、所望の抗体を分泌する細胞クロ－ンが選択される。例えば、好適な免疫原で免疫されたＢａｌｂ／ｃマウスの脾臓細胞が、骨髄腫細胞株ＰＡＩまたは骨髄腫細胞株Ｓｐ２／０－Ａｇ １４の細胞と融合され得る。正常な骨髄腫細胞が所望のハイブリド－マ細胞を超えて過剰増殖するのを防ぐために、融合後、細胞は、例えば、ＨＡＴ培地などの選択培地を補足した好適な培養培地中で一定の間隔で増殖される。次いで、得られたハイブリッド細胞は、所望の抗体、例えば、ヒトＩＬ－２７に結合する抗体の分泌についてスクリ－ニングされる。幾つかの実施形態では、当業者は、例えば、米国特許第６，３００，０６４号（Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．；Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ ＡＧ）及びＳｃｈｏｏｎｂｒｏｏｄｔ ｅｔ ａｌ．（２００５） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３３（９）：ｅ８１に記載されるように免疫的に偏りのないライブラリ－（ｎｏｎ－ｉｍｍｕｎｅ ｂｉａｓｅｄ ｌｉｂｒａｒｙ）から抗ＩＬ－２７抗体を同定し得る。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、例えば、ファ－ジディスプレイ技術、バクテリアディスプレイ、酵母表面ディスプレイ、真核生物ウイルスディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイ、及び無細胞（例えば、リボソ－ムディスプレイ）抗体スクリ－ニング技術（例えば、Ｅｔｚ ｅｔ ａｌ．（２００１） Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ １８３：６９２４－６９３５；Ｃｏｒｎｅｌｉｓ （２０００） Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１：４５０－４５４；Ｋｌｅｍｍ ｅｔ ａｌ．（２０００） Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ １４６：３０２５－３０３２；Ｋｉｅｋｅ ｅｔ ａｌ．（１９９７） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ １０：１３０３－１３１０；Ｙｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｐｒｏｇ １８：２１２－２２０；Ｂｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０００） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ３２８：４３０－４４４；Ｇｒａｂｈｅｒｒ ｅｔ ａｌ．（２００１） Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ ４：１８５－１９２；Ｍｉｃｈａｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２：６６０－６６８；Ｐｅｒｅｂｏｅｖ ｅｔ ａｌ．（２００１） Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７５：７１０７－７１１３；Ｓｃｈａｆｆｉｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９９） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１１９－１３５；及びＨａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０００） Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １８：１２８７－１２９２を参照のこと）を含み得るか、またはこれらと共に使用され得る。
様々なファ－ジディスプレイ法を使用して抗体を同定する方法は、当技術分野において公知である。ファ－ジディスプレイ法において、機能的抗体ドメインは、それをコ－ドするポリヌクレオチド配列を保有するファ－ジ粒子の表面上に提示される。かかるファ－ジは、抗体ライブラリ－（例えば、ヒトまたはマウス）のレパ－トリ－または組み合わせから発現される抗体の抗原結合ドメイン、例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、またはジスルフィド結合安定化Ｆｖ抗体断片を提示するために利用され得る。これらの方法で使用されるファ－ジは、通常、ｆｄ及びＭ１３などの繊維状ファ－ジである。抗原結合ドメインは、ファ－ジコ－トタンパク質ｐＩＩＩ、ｐＶＩＩＩ、またはｐＩＸのいずれかとの組換え融合タンパク質として発現される。例えば、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２０１０） ＪＭＢ ３９７：３８５－３９６を参照のこと。本明細書に記載される免疫グロブリンまたはその断片を作製するために使用され得るファ－ジディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；Ａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．（１９９４） Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：９５２－９５８；Ｐｅｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．（１９９７） Ｇｅｎｅ １８７：９－１８；Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４） Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１９１－２８０；ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、及びＷＯ９５／２０４０１に開示されているものが挙げられる。好適な方法は、例えば、米国特許第５，６９８，４２６号；同５，２２３，４０９号；同５，４０３，４８４号；同５，５８０，７１７号；同５，４２７，９０８号；同５，７５０，７５３号；同５，８２１，０４７号；同５，５７１，６９８号；同５，４２７，９０８号；同５，５１６，６３７号；同５，７８０，２２５号；同５，６５８，７２７号；同５，７３３，７４３号、及び同５，９６９，１０８号にも記載されている。
幾つかの実施形態では、ファ－ジディスプレイ抗体ライブラリ－は、免疫された哺乳動物由来のＢ細胞から採取されたｍＲＮＡを使用して作製され得る。例えば、Ｂ細胞を含む脾細胞試料が、上記の様にＩＬ－２７ポリペプチドで免疫されたマウスから単離され得る。ｍＲＮＡは、標準的な分子生物学技術を使用して細胞から単離され得、ｃＤＮＡに変換され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９８９） “Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ”， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （１９８８）（前出）；Ｂｅｎｎｙ Ｋ．Ｃ．Ｌｏ （２００４）（前出）；及びＢｏｒｒｅｂａｅｋ （１９９５）（前出）を参照のこと。免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖ポリペプチドの可変領域をコ－ドするｃＤＮＡを使用して、ファ－ジディスプレイライブラリ－が構築され得る。かかるライブラリ－を作製するための方法は、例えば、Ｍｅｒｚ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ ６２（１－２）：２１３－９；Ｄｉ Ｎｉｒｏ ｅｔ ａｌ．（２００５） Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３８８（Ｐｔ ３）：８８９－８９４；及びＥｎｇｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（１９９５） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ５１：３５５－３７６に記載されている。
幾つかの実施形態では、選択及びスクリ－ニングの組み合わせを用いて、例えば、ハイブリド－マ由来の抗体集団またはファ－ジディスプレイ抗体ライブラリ－から関心対象の抗体が同定され得る。好適な方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ （１９９７） Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １５：６２－７０；Ｂｒｉｎｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）（前出）；Ａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）（前出）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．（１９９４）（前出）；Ｐｅｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．（１９９７）（前出）；及びＢｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４） （前出）に記載されている。例えば、各々がバクテリオファ－ジコ－トタンパク質（例えば、Ｍ１３ファ－ジのｐＩＩＩ、ｐＶＩＩＩ、またはｐＩＸ）及び異なる抗原結合領域の融合タンパク質をコ－ドする複数のファ－ジミドベクタ－が、標準的な分子生物学技術を使用して作製され、次いで、細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）の集団に導入される。幾つかの実施形態では、細菌におけるバクテリオファ－ジの発現は、ヘルパ－ファ－ジの使用を必要とし得る。幾つかの実施形態では、ヘルパ－ファ－ジは必要とされない（例えば、Ｃｈａｓｔｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２００６） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３４（２１）：ｅ１４５を参照のこと）。細菌から生成されたファ－ジは回収され、次いで、例えば、固体支持体に結合された（固定化された）標的抗原に接触される。ファ－ジは、溶液中で抗原に接触されてもよく、その後に複合体が固体支持体に結合される。
上記の方法を使用してスクリ－ニングされた抗体亜集団は、当該技術分野において公知の任意の免疫学的及び生化学的方法を使用して特定抗原（例えば、ヒトＩＬ－２７）に対する特異性及び結合親和性について特徴付けられ得る。例えば、抗体のＩＬ－２７への特異的結合は、例えば、免疫学的または生化学的方法、例えば、限定されるものではないが、上記のようなＥＬＩＳＡアッセイ、ＳＰＲアッセイ、免疫沈降アッセイ、アフィニティ－クロマトグラフィ－、及び平衡透析を使用して決定され得る。抗体の免疫特異的結合及び交差反応性を解析するために使用され得る免疫アッセイとしては限定されないが、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線測定法、蛍光免疫アッセイ、及びプロテインＡ免疫アッセイなどの技術を使用した競合及び非競合アッセイ系が挙げられる。かかるアッセイは当該技術分野において定型的であり、公知である。
上記方法は、例えば、抗ＩＬ－２７抗体が、全長のヒトＩＬ－２７及び／またはＩＬ－２７タンパク質に結合しないかどうかを決定するためにも使用されることが理解されよう。
選択されたＣＤＲアミノ酸配列が短い配列（例えば、１０～１５以下の長さのアミノ酸）である実施形態では、ＣＤＲをコ－ドする核酸は、例えば、Ｓｈｉｒａｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００７） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ５１（１）：１２９－１３０及び米国特許第６，９９５，２５９号に記載のように化学合成され得る。アクセプタ－抗体をコ－ドする所与の核酸配列について、ＣＤＲをコ－ドする核酸配列の領域が、標準的な分子生物学技術を使用して化学合成された核酸と置き換えられ得る。化学合成された核酸の５’末端及び３’末端は、ドナ－抗体の可変領域をコ－ドする核酸内への当該核酸のクロ－ニングに使用するための付着末端制限酵素部位を含むように合成され得る。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体は、対応する改変されていない定常領域と比較して低減されたエフェクタ－機能を有する（またはエフェクタ－機能を有さない）改変された重鎖定常領域を含む。抗ＩＬ－２７抗体の定常領域が関与するエフェクタ－機能は、定常領域またはＦｃ領域の特性を変化させることにより調節され得る。改変されたエフェクタ－機能としては、例えば、以下の活性のうちの１つ以上の調節が挙げられる：抗体依存性細胞障害活性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞障害活性（ＣＤＣ）、アポト－シス、１種以上のＦｃ受容体への結合、及び炎症誘発性反応 。調節とは、非改変型の定常領域の活性と比較して、改変された定常領域を含む対象抗体により示されるエフェクタ－機能活性の増加、減少、または除去を指す。特定の実施形態では、調節は、活性が消失しているか、または完全に存在しない状況を含む。
一実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体は、ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一実施形態では、ＩｇＧ４重鎖定常領域は、野生型ＩｇＧ４重鎖定常領域である。別の実施形態では、ＩｇＧ４定常領域は、変異、例えば、ＥＵ番号付け（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（前出））に従って、例えば、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５ＥまたはＬ２３５Ａの一方または両方を含む。本開示の抗体に使用するための野生型及び変異型ＩｇＧ４定常領域の代表的な配列は、表１２に記載される。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体は、ＩｇＧ１定常領域を含む。一実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、野生型ＩｇＧ１重鎖定常領域である。別の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は変異を含む。本開示の抗体に使用するための野生型及び変異型ＩｇＧ４定常領域の代表的な配列は、表１２に記載される。
改変されたＦｃＲ結合親和性及び／または改変されたＡＤＣＣ活性及び／または改変されたＣＤＣ活性を有する改変された定常領域は、非改変型の定常領域と比較して増強または減弱されたＦｃＲ結合活性及び／またはＡＤＣＣ活性及び／またはＣＤＣ活性を有するポリペプチドである。ＦｃＲへの結合の増加を示す改変された定常領域は、改変されていないポリペプチドより高い親和性で少なくとも１種のＦｃＲに結合する。ＦｃＲへの結合の減少を示す改変された定常領域は、非改変型の定常領域より低い親和性で少なくとも１種のＦｃＲに結合する。ＦｃＲへの結合の減少を示すかかるバリアントは、ＦｃＲへの測定可能な結合を殆どまたは全く有さなくてもよい（例えば、天然配列の免疫グロブリン定常領域またはＦｃ領域のＦｃＲへの結合レベルと比較して０～５０％（例えば、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％未満）のＦｃＲへの結合を有する）。同様に、調節されたＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性を示す改変された定常領域は、改変されていない定常領域と比較して、ＡＤＣＣ活性及び／またはＣＤＣ活性の増加または低減を示し得る。例えば、幾つかの実施形態では、改変された定常領域を含む抗ＩＬ－２７抗体は、非改変型の定常領域の約０～５０％（例えば、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％未満）のＡＤＣＣ活性及び／またはＣＤＣ活性を示し得る。ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性の低減を示す改変された定常領域を含む本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体は、ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性の低減を示してもよく、またはＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性を示さなくてもよい。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体は、エフェクタ－機能の低減を示すか、またはエフェクタ－機能を示さない。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、ハイブリッド定常領域またはその一部、例えば、Ｇ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域（例えば、Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎ ５１：１－１８；Ｃａｎｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７３：１４８３－１４９１；及びＭｕｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９７） Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３４（６）：４４１－４５２参照のこと）を含む。上記を参照のこと。
幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、増強または低減された補体依存細胞毒性（ＣＤＣ）を示す改変された定常領域を含み得る。調節されたＣＤＣ活性は、抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、または欠失を導入することにより達成され得る。米国特許第６，１９４，５５１号を参照のこと。代替的にまたは追加的に、システイン残基（複数可）がＦｃ領域に導入され得、これにより、この領域における鎖間ジスルフィド結合形成が可能となる。このようにして作製されたホモ二量体抗体は、改善もしくは低減された内部移行能力及び／または補体介在性細胞殺傷の増加もしくは減少を有し得る。例えば、Ｃａｒｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７６：１１９１－１１９５ ａｎｄ Ｓｈｏｐｅｓ（１９９２） Ｉｍｍｕｎｏｌ １４８：２９１８－２９２２；ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５１６４２号及び同ＷＯ９４／２９３５１号；Ｄｕｎｃａｎ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ（１９８８） Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０；ならびに米国特許第５，６４８，２６０号及び同５，６２４，８２１号を参照のこと。
組換え抗体の発現及び精製
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、分子生物学及びタンパク質化学の分野において公知の種々の技術を使用して作製され得る。例えば、抗体の重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドのうちの一方または両方をコ－ドする核酸が、例えば、プロモ－タ－配列、リボソ－ム結合部位、転写開始配列及び転写停止配列、翻訳開始配列及び翻訳停止配列、転写終結シグナル、ポリアデニル化シグナル、ならびにエンハンサ－配列またはアクチベ－タ－配列が含まれる、転写制御配列及び翻訳制御配列を含有する発現ベクタ－に挿入され得る。制御配列は、プロモ－タ－ならびに転写開始配列及び転写停止配列を含む。加えて、発現ベクタ－は、２つ以上の複製系を含み得、その結果、二種の異なる生物、例えば、発現用の哺乳動物細胞または昆虫細胞、ならびにクロ－ニング及び増幅用の原核細胞宿主において維持され得る。
幾つかのベクタ－システムが、哺乳動物細胞における核酸からのクロ－ニングされた重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの発現に利用可能である。ある種のベクタ－は、所望の遺伝子配列の宿主細胞ゲノム内への組み込みに依存する。安定的に組み込まれたＤＮＡを有する細胞は、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ａｎｄ Ｂｅｒｇ （１９８１） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７８：２０７２）またはＴｎ５ ｎｅｏ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ａｎｄ Ｂｅｒｇ （１９８２） Ｍｏｌ Ａｐｐｌ Ｇｅｎｅｔ １：３２７）などの薬剤耐性遺伝子を同時に導入することにより選択され得る。選択マ－カ－遺伝子は、発現されるＤＮＡ遺伝子配列に連結されるか、または同時形質移入により同一の細胞内に導入されるかのいずれかであり得る（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７９） Ｃｅｌｌ １６：７７）。第２の種類のベクタ－は、染色体外プラスミドに自律的複製能力を付与するＤＮＡエレメントを利用する。これらのベクタ－は、ウシパピロ－マウイルス（Ｓａｒｖｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８２） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，７９：７１４７）、サイトメガロウイルス、ポリオ－マウイルス（Ｄｅａｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９８４） Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８１：１２９２）、またはＳＶ４０ウイルス（Ｌｕｓｋｙ ａｎｄ Ｂｏｔｃｈａｎ （１９８１） Ｎａｔｕｒｅ ２９３：７９）などの動物ウイルスに由来し得る。
発現ベクタ－は、その後の核酸の発現に適した方法で細胞内に導入され得る。導入方法は、以下で検討される標的とされる細胞型により主に決定される。例示的な方法としては、ＣａＰＯ４沈殿、リポソ－ム融合、陽イオンリポソ－ム、エレクトロポレ－ション、ウイルス感染、デキストラン媒介性形質移入、ポリブレン媒介性形質移入、プロトプラスト融合、及び直接マイクロインジェクションが挙げられる。
抗体またはその抗原結合断片の発現に適した宿主細胞としては、酵母、細菌、昆虫、植物、及び哺乳動物の細胞が挙げられる。特に関心対象となるのは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ及びＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓなどの真菌、ＳＦ９などの昆虫細胞、哺乳動物細胞株（例えば、ヒト細胞株）、ならびに初代細胞株である。
幾つかの実施形態では、抗体またはその断片は、トランスジェニック動物（例えば、トランスジェニック哺乳動物）で発現され得、トランスジェニック動物から精製され得る。例えば、抗体は、トランスジェニック非ヒト哺乳動物（例えば、げっ歯類）で産生され、例えば、Ｈｏｕｄｅｂｉｎｅ （２００２） Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １３（６）：６２５－６２９；ｖａｎ Ｋｕｉｋ－Ｒｏｍｅｉｊｎ ｅｔ ａｌ．（２０００） Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｒｅｓ ９（２）：１５５－１５９；及びＰｏｌｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．（１９９９） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１（１－２）：１４７－１５７に記載されるように乳汁から単離され得る。
抗体及びその断片は、抗体または断片をコ－ドする核酸を含有する発現ベクタ－で形質転換された宿主細胞を、タンパク質の発現を可能にするのに十分な条件下及び期間の間、培養することにより細胞から生成され得る。タンパク質発現のためのかかる条件は、発現ベクタ－及び宿主細胞の選択によって異なり、定型的な実験を通して当業者により容易に確認されるであろう。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉで発現された抗体は、封入体からリフォ－ルディングされ得る（例えば、Ｈｏｕ ｅｔ ａｌ．（１９９８） Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １０：３１９－３０を参照のこと）。細菌発現系及びその使用方法は当該技術分野において公知である（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ－－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ －－３ｒｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （２００１）を参照のこと）。コドン、好適な発現ベクタ－、及び好適な宿主細胞の選択は、多くの因子に応じて異なり、必要に応じて容易に最適化され得る。本明細書に記載される抗体（またはその断片）は、哺乳動物細胞中で発現され得るか、または限定されるものではないが、酵母、バキュロウイルス、及びインビトロ発現系が含まれる他の発現系で発現され得る（例えば、Ｋａｓｚｕｂｓｋａ ｅｔ ａｌ．（２０００） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ １８：２１３－２２０を参照のこと）。
発現後に、抗体及びその断片は単離され得る。試料中に存在する他の成分に応じて、抗体またはその断片は、当業者に公知の多様な方法で単離または精製され得る。標準的な精製法としては、電気泳動技術、分子的技術、免疫学的技術、ならびにイオン交換クロマトグラフィ－、疎水性クロマトグラフィ－、アフィニティ－クロマトグラフィ－、及び逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ－が含まれるクロマトグラフィ－技術が挙げられる。例えば、抗体は、標準的な抗抗体カラム（例えばプロテインＡカラムまたはプロテインＧカラム）を使用して精製され得る。タンパク質濃縮と併用した、限外濾過及びダイアフィルトレ－ション技術も有用である。例えば、Ｓｃｏｐｅｓ （１９９４） “Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，” Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｃｉｔｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。必要とされる精製度は、所望される用途に応じて異なる。一部の例では、発現された抗体またはその断片の精製は必要とされない。
精製された抗体またはその断片の収率または純度を決定する方法は当該技術分野において公知であり、例えば、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ、紫外分光法、Ｂｉｕｒｅｔタンパク質アッセイ、Ｌｏｗｒｙタンパク質アッセイ、アミドブラックタンパク質アッセイ、高速液体クロマトグラフィ－（ＨＰＬＣ）、質量分析法（ＭＳ）、及びゲル電気泳動法（例えば、クマシ－ブル－またはコロイド銀染色などのタンパク質染色を使用する）が挙げられる。
抗体またはその抗原結合断片の改変
抗体またはその抗原結合断片は、それらの発現及び精製後に改変され得る。改変は、共有結合的または非共有結合的な改変であり得る。かかる改変は、例えば、ポリペプチドの標的アミノ酸残基を、選択された側鎖または末端残基と反応することができる有機誘導体化剤を反応させることにより、抗体または断片に導入され得る。改変に好適な部位は、例えば、抗体または断片の構造解析またはアミノ酸配列解析が含まれる、種々の基準のいずれかを使用して選択され得る。
幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、異種部分とコンジュゲ－トされ得る。異種部分は、例えば、異種ポリペプチド、治療薬（例えば、毒素または薬物）、または限定されるものではないが、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、重金属標識、発光性標識、またはビオチンもしくはストレプトアビジンなどのアフィニティタグなどの検出可能な標識であり得る。好適な異種ポリペプチドとしては、抗体または断片の精製に使用するための、例えば、抗原性タグ（ＦＬＡＧ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号４０５））、ポリヒスチジン（６－Ｈｉｓ；ＨＨＨＨＨＨ（配列番号４０６））、ヘマグルチニン（ＨＡ；ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号４０７））、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラ－ゼ（ＧＳＴ）、またはマルト－ス結合タンパク質（ＭＢＰ））が挙げられる。異種ポリペプチドとしては、診断マ－カ－または検出可能なマ－カ－として有用なポリペプチド（例えば、酵素）、例えば、ルシフェラ－ゼ、蛍光タンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ））、またはクロラムフェニコ－ルアセチルトランスフェラ－ゼ（ＣＡＴ）も挙げられる。好適な放射性標識としては、例えば、３２Ｐ、３３Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、及び３Ｈが挙げられる。好適な蛍光標識としては、限定されるものではないが、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネ－ト（ＦＩＴＣ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＤｙＬｉｇｈｔ（商標）４８８、フィコエリトリン（ＰＥ）、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、ＰｅｒＣＰ、ＰＥ－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７００、Ｃｙ５、アロフィコシアニン、及びＣｙ７が挙げられる。発光性標識としては、例えば、種々の発光性ランタニド（例えば、ユ－ロピウムまたはテルビウム）キレ－トのいずれかが挙げられる。例えば、好適なユ－ロピウムキレ－トとしては、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはテトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）のユ－ロピウムキレ－トが挙げられる。酵素標識としては、例えば、アルカリホスファタ－ゼ、ＣＡＴ、ルシフェラ－ゼ、及び西洋ワサビペルオキシダ－ゼが挙げられる。
２つのタンパク質（例えば、抗体及び異種部分）は、多数の公知の化学架橋剤のいずれかを使用して架橋され得る。かかる架橋剤の例は、「ヒンダ－ド」ジスルフィド結合が含まれる結合を介して２つのアミノ酸残基を連結させる架橋剤である。これらの結合において、架橋単位内のジスルフィド結合は、例えば、還元型グルタチオンまたは酵素のジスルフィドレダクタ－ゼの作用による還元から保護されている（ジスルフィド結合の両側の基を遮蔽することにより）。１つの好適な試薬である４－スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α（２－ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）は、一方のタンパク質の末端リジンと、他方の末端システインを利用して、２つのタンパク質の間に結合を形成する。各タンパク質上の異なる結合部分により架橋させるヘテロ二官能性試薬も使用され得る。他の有用な架橋剤としては、限定されるものではないが、２つのアミノ基（例えば、Ｎ－５－アジド－２－ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド）、２つのスルフヒドリル基（例えば、１，４－ビス－マレイミドブタン）、アミノ基及びスルフヒドリル基（例えば、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、アミノ基及びカルボキシル基（例えば、４－［ｐ－アジドサリチルアミド］ブチルアミン）、ならびにアミノ基及びアルギニンの側鎖に存在するグアニジニウム基（例えば、ｐ－アジドフェニルグリオキサル一水和物）を連結する試薬が挙げられる。
幾つかの実施形態では、放射性標識は、抗体のアミノ酸主鎖に直接結合され得る。あるいは放射性標識は、より大きな分子の一部として含まれ得る（例えば、遊離アミノ基に結合して、対象となるタンパク質のメタ－ヨ－ドフェニル（ｍＩＰ）誘導体を形成するメタ－［１２５Ｉ］ヨ－ドフェニル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（［１２５Ｉ］ｍＩＰＮＨＳ）中の１２５Ｉ（例えば、Ｒｏｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（１９９７） Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ３８：１２２１－１２２９を参照のこと））か、またはキレ－ト（例えば、ＤＯＴＡまたはＤＴＰＡ）の一部として含まれ得、これらが次にタンパク質主鎖に結合される。本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片に、放射性標識または放射性標識を含むより大きな分子／キレ－トをコンジュゲ－トする方法は、当該技術分野において公知である。かかる方法は、放射性標識またはキレ－トのタンパク質への結合を促進する条件下（例えば、ｐＨ、塩濃度、及び／または温度）で、タンパク質を放射性標識とインキュベ－トすることを含む（例えば、米国特許第６，００１，３２９号を参照のこと）。
蛍光標識（場合により、「フルオロフォア」と称される）をタンパク質（例えば、抗体）にコンジュゲ－トする方法は、タンパク質化学分野において公知である。例えば、フルオロフォアは、当該フルオロフォアに結合されたスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル部分またはテトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）エステル部分を使用して、タンパク質の遊離アミノ基（例えば、リジン）またはスルフヒドリル基（例えば、システイン）にコンジュゲ－トされ得る。幾つかの実施形態では、フルオロフォアは、例えば、スルホ－ＳＭＣＣなどのヘテロ二官能性架橋部分にコンジュゲ－トされ得る。好適なコンジュゲ－ション方法は、抗体タンパク質またはその断片を、フルオロフォアの当該タンパク質への結合を促進する条件下で、フルオロフォアとインキュベ－トすることを含む。例えば、Ｗｅｌｃｈ ａｎｄ Ｒｅｄｖａｎｌｙ （２００３） “Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，” Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ （ＩＳＢＮ ０４７１４９５６０３）を参照のこと。
幾つかの実施形態では、抗体または断片は、例えば、血液、血清、または他の組織中での循環する抗体の安定化及び／または保持を改善する部分を用いて改変され得る。例えば、抗体または断片は、例えば、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．（１９９９） Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ １０（６）：９７３－８；Ｋｉｎｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｉｅｓ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５４：４７７－４８５；及びＲｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５４：４５９－４７６に記載されるようにＰＥＧ化され得るか、またはＨＥＳ化（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ，Ｇｅｒｍａｎｙ；例えば、Ｐａｖｉｓｉｃ ｅｔ ａｌ．（２０１０） Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ ３８７（１－２）：１１０－１１９を参照のこと）され得る。安定化部分は、抗体（または断片）の安定性または保持を少なくとも１．５倍（例えば、少なくとも２、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、または５０倍以上）改善し得る。
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、グリコシル化され得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、当該抗体または断片が、低減されたグリコシル化を有するか、またはグリコシル化を欠くように酵素処理もしくは化学処理され得るか、または細胞から生成され得る。グリコシル化が低減された抗体を作製するための方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、例えば、米国特許第６，９３３，３６８号；Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１） ＥＭＢＯ Ｊ １０（１０）：２７１７－２７２３；及びＣｏ ｅｔ ａｌ．（１９９３） Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０：１３６１に記載されている。
医薬組成物及び製剤
特定の実施形態では、本発明は、抗ＩＬ－２７抗体を、薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、防腐剤及び／またはアジュバントと共に含む医薬組成物を提供する。
特定の実施形態では、許容される製剤材料は、好ましくは、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対し無毒性である。特定の実施形態では、製剤材料（複数可）は、皮下投与用及び／または静脈内投与用である。特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、重量オスモル濃度、粘性、透明性、色、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解速度もしくは放出速度、吸収、または浸透を改変、維持、または保持するための製剤材料を含有し得る。特定の実施形態では、好適な製剤材料としては、限定されるものではないが、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリシン）；抗菌剤；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウム）；緩衝液（例えば、ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、または他の有機酸）；増量剤（例えば、マンニト－ルまたはグリシン）；キレ－ト剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、β－シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン）；充填剤；単糖類；二糖類；及び他の炭水化物類（例えば、グルコ－ス、マンノ－ス、またはデキストリン）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；着色剤、香味料、及び希釈剤；乳化剤；親水性ポリマ－（例えば、ポリビニルピロリドン）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサ－ル、フェネチルアルコ－ル、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または過酸化水素）；溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコ－ル、またはポリエチレングリコ－ル）；糖アルコ－ル（例えば、マンニト－ルまたはソルビト－ル）；懸濁剤；界面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック（登録商標）、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベ－ト、例えば、ポリソルベ－ト２０、ポリソルベ－ト８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロ－ル、チロキサポ－ル）；安定性増強剤（例えば、スクロ－スまたはソルビト－ル）；等張性増強剤（例えば、ハロゲン化アルカリ金属、好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニト－ルソルビト－ル）；送達ビヒクル；希釈液；賦形剤及び／または薬学的アジュバントが挙げられる。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ （１９９５））。特定の実施形態では、製剤は、ＰＢＳ；２０ｍＭのＮａＯＡＣ（ｐＨ５．２）、５０ｍＭのＮａＣｌ；及び／または１０ｍＭのＮＡＯＡＣ（ｐＨ５．２）、９％スクロ－スを含有する。特定の実施形態では、最適な医薬組成物は、例えば、意図される投与経路、送達形式、及び所望の投与量に応じて当業者により決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（前出）を参照のこと。特定の実施形態では、かかる組成物は、抗ＩＬ－２７抗体の物理的状態、安定性、インビボでの放出速度、及び／またはインビボでのクリアランス速度に影響を与え得る。
特定の実施形態では、医薬組成物中の主要なビヒクルまたは担体は、水性または非水性のいずれかの性質であり得る。例えば、特定の実施形態では、好適なビヒクルまたは担体は、非経口投与用組成物において一般的な他の材料が場合により補足された、注射用水、生理食塩水、または人工脳脊髄液であり得る。特定の実施形態では、生理食塩水は、等張性リン酸緩衝生理食塩水を含む。特定の実施形態では、更なる例示的なビヒクルは、中性緩衝生理食塩水または血清アルブミンと混合された生理食塩水である。特定の実施形態では、医薬組成物は、約ｐＨ７．０～８．５のＴｒｉｓ緩衝液または約ｐＨ４．０～５．５の酢酸緩衝液を含み、従って、これは、ソルビト－ルまたは好適な代用品を更に含み得る。特定の実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体を含む組成物は、所望の純度を有する選択された組成物を、任意の配合薬剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（前出））と混合することにより、凍結乾燥ケ－キまたは水溶液の形態での保存用に調製され得る。更に特定の実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体を含む組成物は、スクロ－スなどの適切な賦形剤を使用して凍結乾燥物として製剤化され得る。
幾つかの実施形態では、医薬組成物は、非経口送達用に選択され得る。特定の実施形態では、組成物は、吸入用に選択され得るか、または経口などの消化管を介した送達用に選択され得る。かかる薬学的に許容される組成物の調製は、当業者の能力の範囲内である。
特定の実施形態では、製剤成分は、投与部位に許容される濃度で存在する。特定の実施形態では、生理的ｐＨまたはわずかにより低いｐＨ、典型的には約５～約８のｐＨ範囲内に組成物を維持するために、緩衝液が使用される。
特定の実施形態では、非経口投与が意図される場合、治療用組成物は、薬学的に許容されるビヒクル中の抗ＩＬ－２７抗体を含む、発熱物質を含まない非経口的に許容される水溶液の形態であり得る。特定の実施形態では、非経口注射用ビヒクルは滅菌蒸留水であり、その滅菌蒸留水中に抗ＩＬ－２７抗体が無菌の等張溶液として製剤化され、適切に保持される。特定の実施形態では、調製は、製品の制御放出または持続放出を提供し得る薬剤、例えば、注射可能なマイクロスフィア、生体内崩壊性粒子、高分子化合物（例えば、ポリ乳酸またはポリグリコ－ル酸）、ビ－ズ、またはリポソ－ムとの所望の分子の製剤化を含み得、次いで、当該製品は、蓄積注射により送達され得る。特定の実施形態では、ヒアルロン酸も使用され得、循環の持続時間の増進効果を有し得る。特定の実施形態では、移植可能な薬剤送達デバイスを使用して、所望の分子が導入され得る。
特定の実施形態では、医薬組成物は吸入用に製剤化され得る。特定の実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、吸入用の乾燥粉末として製剤化され得る。特定の実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体を含む吸入溶液は、エアロゾル送達用の噴霧剤と共に製剤化され得る。特定の実施形態では、溶液は、霧状にされ得る。肺投与は、化学修飾タンパク質の肺送達を記載しているＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５に更に記載されている。
特定の実施形態では、製剤は経口投与され得ることが意図される。特定の実施形態では、この方法で投与される抗ＩＬ－２７抗体は、例えば、錠剤及びカプセルなどの固体剤型を配合する際に慣習的に使用される担体と共に、またはそれを用いずに製剤化され得る。特定の実施形態では、生体利用効率が最大化され、前全身性分解が最小化される消化管の時点で、製剤の活性部分が放出されるように設計され得る。特定の実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体の吸収を促進するために、少なくとも１種の添加剤を含有し得る。特定の実施形態では、希釈液、香味料、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤、及び結合剤も用いられ得る。
特定の実施形態では、医薬組成物は、錠剤の製造に適した非毒性賦形剤と共に、有効量の抗ＩＬ－２７抗体を混合物中に含み得る。特定の実施形態では、滅菌水または別の好適なビヒクル中に錠剤を溶解することによって、単位用量形態の溶液が調製され得る。特定の実施形態では、好適な賦形剤としては、限定されるものではないが、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは重炭酸塩、ラクト－ス、またはリン酸カルシウム；または結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、もしくはアカシア；または潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、もしくはタルクが挙げられる。
追加の医薬組成物は、当業者には明白であり、持続的送達製剤または制御送達製剤中に抗ＩＬ－２７抗体を含む製剤が挙げられる。特定の実施形態では、種々の他の持続的送達手段または制御送達手段を構築するための技術、例えば、リポソ－ム担体、生体内崩壊性微小粒子または多孔性ビ－ズ、及び蓄積注射も当業者には公知である。例えば、医薬組成物の送達のための多孔性ポリマ－微小粒子による制御放出を記載しているＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９を参照のこと。特定の実施形態では、持続放出調製物は、造形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態の半透性ポリマ－マトリクスを含み得る。持続放出マトリクスとしては、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号及びＥＰ０５８４８１）、Ｌ－グルタミン酸及びγエチル－Ｌ－グルタミン酸のコポリマ－（Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７－５５６（１９８３））、ポリ （メタクリル酸２－ヒドロキシエチル） （Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７－２７７（１９８１）及びＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８－１０５（１９８２））、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（前出））、またはポリ－Ｄ（－）－３－ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が挙げられる。特定の実施形態では、持続放出組成物は、当該技術分野において公知の幾つかの方法のいずれかにより調製され得るリポソ－ムも含み得る。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８－３６９２（１９８５）；ＥＰ０３６，６７６；ＥＰ０８８０４６及びＥＰ１４３，９４９を参照のこと。
インビボ投与に使用される医薬組成物は、多くの場合、無菌である。特定の実施形態では、無菌濾過膜を通して濾過することにより、無菌が達成され得る。組成物が凍結乾燥される特定の実施形態では、この方法を使用した滅菌は、凍結乾燥及び再構成の前または後のいずれかで実施され得る。特定の実施形態では、非経口投与用の組成物は、凍結乾燥の形態で、または溶液で保存され得る。特定の実施形態では、非経口組成物は、通常、無菌のアクセスポ－トを有する容器、例えば、静脈注射用溶液バッグ、または皮下注射針により穿刺可能なストッパ－を有するバイアル内に入れられる。
特定の実施形態では、医薬組成物が製剤化されたら、当該組成物は、溶液、懸濁液、ゲル、エマルション、固体として、または脱水粉末もしくは凍結乾燥粉末として無菌のバイアル中に保存され得る。特定の実施形態では、かかる製剤は、すぐ使用できる形態、または投与前に再構成される（例えば、凍結乾燥）形態のいずれかで保存され得る。
特定の実施形態では、単一用量の投与単位を作製するためのキットが提供される。特定の実施形態では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１の容器と、水性製剤を有する第２の容器の両方を含み得る。特定の実施形態では、単一チャンバ－またはマルチチャンバ－の充填済みシリンジ（例えば、液体シリンジ及び凍結乾燥シリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含有するキットが挙げられる。
特定の実施形態では、治療に用いられる抗ＩＬ－２７抗体を含む医薬組成物の有効量は、例えば、治療状況及び目的に依存する。従って、当業者は、特定の実施形態による処置のための適切な投与量レベルが、送達される分子、抗ＩＬ－２７抗体が使用される適応症、投与経路、ならびに患者のサイズ（体重、体表面積、または器官サイズ）及び／または状態（年齢及び健康状態）に部分的に応じて異なることを理解するであろう。特定の実施形態では、臨床医は、最適な治療効果を得るために投与量を設定し得、投与経路を変更し得る。
特定の実施形態では、投与頻度は、使用される製剤中の抗ＩＬ－２７抗体の薬物動態パラメ－タ－が考慮される。特定の実施形態では、臨床医は、所望の効果を達成する投与量に達するまで組成物を投与する。従って、特定の実施形態では、組成物は、単回投与として、もしくは経時的な２回以上の投与（同量の所望の分子を含有していても、していなくてもよい）として、または植え込みデバイスもしくはカテ－テルを介した持続注入として、投与され得る。適切な投与量の更なる改良は、当業者により定型的に行われており、当業者により定型的に実施されるタスクの範囲内である。特定の実施形態では、適切な投与量は、適切な用量反応デ－タを使用することにより確認され得る。
特定の実施形態では、医薬組成物の投与経路は、公知の方法、例えば、経口によるもの、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、皮下、眼内、動脈内、門脈内、もしくは病巣内経路による注射によるもの、または持続性放出システムによるもの、または植え込みデバイスによるもの、に従う。特定の実施形態では、組成物は、ボ－ラス注射により投与され得るか、または注入により連続的に投与され得るか、または植え込みデバイスにより投与され得る。特定の実施形態では、併用療法の個々の要素は、異なる経路によって投与され得る。
特定の実施形態では、組成物は、所望の分子が吸収または封入された膜、スポンジ、または別の適切な材質の移植により局所投与され得る。植え込みデバイスが使用される特定の実施形態では、デバイスは任意の好適な組織または器官に移植され得、所望の分子の送達は、拡散、指定時刻ボ－ラス放出、または連続投与によるものであり得る。特定の実施形態では、エクスビボ様式で抗ＩＬ－２７抗体を含む医薬組成物を使用することが望ましい場合がある。かかる例では、患者から取り出された細胞、組織、及び／または器官が、抗ＩＬ－２７抗体を含む医薬組成物に曝露され、その後に当該細胞、組織、及び／または器官が移植により患者内に戻される。
特定の実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体は、本明細書に記載される方法などを使用して、ポリペプチドを発現及び分泌するように遺伝子操作された特定の細胞を移植することにより送達され得る。特定の実施形態では、かかる細胞は、動物細胞またはヒト細胞であり得、自己由来、非自己由来、または異種由来であり得る。特定の実施形態では、細胞は不死化され得る。特定の実施形態では、免疫反応の可能性を減少させるために、細胞は周囲組織の浸潤を回避ために封入され得る。特定の実施形態では、封入材料は、典型的には、タンパク質生成物（複数可）の放出を可能にするが、患者の免疫系による、または周囲組織からの他の有害因子による細胞の破壊を防止する生体適合性の半透性のポリマ－封入物または膜である。
用途
本明細書に記載される組成物は、多数の診断用途及び治療用途に使用され得る。例えば、検出可能に標識された抗原結合分子が、試料（例えば、生体試料）中の標的抗原の存在または量を検出するアッセイにおいて使用され得る。組成物は、標的抗原の機能の阻害を研究するために、インビトロアッセイで使用され得る。例えば、組成物が補体タンパク質に結合し、これを阻害する、幾つかの実施形態では、組成物は、補体活性を阻害するか、またはそうでなければ補体関連疾患を処置するのに有用である追加の新規化合物を同定するように設計されたアッセイにおいて陽性対照として使用され得る。例えば、ＩＬ－２７阻害組成物は、ＩＬ－２７産生を低減または抑制する追加の化合物（例えば、低分子、アプタマ－、または抗体）を同定するためのアッセイにおいて陽性対照として使用され得る。組成物は、以下で詳述するような治療法においても使用され得る。
幾つかの実施形態では、本開示は、生体試料または対象におけるＩＬ－２７を検出する方法であって、（ｉ）抗体分子及びＩＬ－２７の相互作用が発生するのを可能にする条件下で、当該試料または当該対象（及び任意に、参照試料または対象）を本明細書に記載される任意の抗体と接触させること、及び（ｉｉ）抗体分子と当該試料または当該対象（及び任意に、参照試料または対象）との間の複合体の形成を検出すること、を含む当該方法を提供する。
キット
幾つかの実施形態では、キットは、本明細書において開示される抗ＩＬ－２７抗体及び使用説明書を含み得る。キットは、適切な容器で、抗ＩＬ－２７抗体、１つ以上の対照、ならびに様々な緩衝液、試薬、酵素、及び当該技術分野において公知の他の標準的な成分を含み得る。一部の態様では、本開示は、本明細書において開示される抗ＩＬ－２７抗体または抗原結合部分、及び対象における免疫反応を刺激するか、または対象におけるがんを処置するのに使用するための使用説明書を含み、本明細書において開示される１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて使用するための使用説明書を任意に含有するキットを提供する。
容器としては、少なくとも１つのバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、または他の容器手段が挙げられ得、それらの中に抗ＩＬ－２７抗体が入れられ、一部の例においては、適切に分取される。追加の成分が提供される場合、キットは、この成分が入れられ得る追加の容器を含み得る。キットは、商用販売のための抗ＩＬ－２７抗体及び任意の他の試薬容器を厳重な管理下で収容するための手段も含み得る。かかる容器としては、所望のバイアルが保持される、射出成形または吹き込み成形されたプラスチック容器が挙げられ得る。容器及び／またはキットは、使用説明及び／または警告に関するラベルを含み得る。
使用方法
本発明の組成物は、ＩＬ－２７の検出及び／または定量化、及び／またはＩＬ－２７の機能の拮抗作用を含む、インビトロ及びインビボでの多くの有用性を有する。
幾つかの実施形態では、本開示は、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減する方法であって、当該細胞を本開示により提供される単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片と接触させることを含む、当該方法を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減する。
幾つかの実施形態では、本開示は、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減する方法であって、当該細胞を本開示により提供される単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片と接触させることを含む、当該方法を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減する。
幾つかの実施形態では、本開示は、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減する方法であって、当該細胞を本開示により提供される単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片と接触させることを含む、当該方法を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減する。
幾つかの実施形態では、本開示は、細胞からの１種以上のサイトカインの分泌を誘発または増強するための方法であって、当該細胞を本開示により提供される単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片と接触させること、を含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体またはその抗原結合部分は、ＰＤ－１により媒介される細胞からの１種以上のサイトカインの分泌を誘発または増強する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激する方法であって、本開示により提供される、ＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分、または当該抗体もしくはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の有効量を当該対象に投与すること、を含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象におけるがんを処置する方法であって、本開示により提供される、ＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分、または当該抗体もしくはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の有効量を当該対象に投与すること、を含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、本開示により提供される単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合部分、または当該抗体もしくはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の有効量を当該対象に投与すること、を含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体もしくはその抗原結合部分または当該医薬組成物は、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減し、これにより、当該免疫反応を刺激するか、または当該がんを処置する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、本開示により提供される単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合部分、または当該抗体もしくはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の有効量を当該対象に投与すること、を含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物は、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減し、これにより、当該免疫反応を刺激するか、または当該がんを処置する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、本開示により提供される単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合部分、または当該抗体もしくはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の有効量を当該対象に投与すること、を含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物は、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減し、これにより、当該免疫反応を刺激するか、または当該がんを処置する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、本開示により提供される単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合部分、または当該抗体もしくはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の有効量を当該対象に投与すること、を含む当該方法を提供し、ここで、当該抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物は、細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌を誘発または増強し、これにより、当該免疫反応を刺激するか、または当該がんを処置する。
幾つかの実施形態では、がんは、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、肉腫、精巣癌、卵巣癌、膵臓癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌）、黒色腫、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、結腸直腸癌、膀胱癌、子宮内膜癌、前立腺癌、甲状腺癌、肝細胞癌、胃癌、脳癌、リンパ腫（例えば、ＤＬ－ＢＣＬ）、白血病（例えば、ＡＭＬ）、または腎臓癌（例えば、腎細胞癌（例えば、腎明細胞癌））から選択される。
上記の組成物は、とりわけ対象における種々のがんを処置または予防するための方法に有用である。組成物は、投与経路に部分的に依存する種々の方法を使用して、対象、例えば、ヒト対象に投与され得る。経路は、例えば、静脈内注射もしくは注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内注射（ＩＰ）、筋肉内注射（ＩＭ）、またはクモ膜下腔内注射（ＩＴ）であり得る。注射は、ボ－ラス注入または持続注入であり得る。
投与は、例えば、局所注入、注射、またはインプラント剤により実施され得る。インプラント剤は、例えば、サイラスティック膜などの膜またはファイバ－が挙げられる、多孔性、非多孔性、またはゼラチン状材料のものであり得る。インプラント剤は、対象への組成物の持続放出または周期的放出用に構成され得る。例えば、米国特許出願第２００８０２４１２２３号；米国特許第５，５０１，８５６号；同４，８６３，４５７号；及び同３，７１０，７９５号；ＥＰ４８８４０１；及びＥＰ４３０５３９（これらの各々の開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。組成物は、例えば、拡散性、崩壊性、または対流性のシステム、例えば、浸透ポンプ、生分解性インプラント剤、電気拡散システム、電気浸透システム、蒸気圧ポンプ、電解ポンプ、発泡ポンプ、圧電ポンプ、崩壊に基づくシステム、または電気機械式システムをベ－スにした移植可能デバイスにより対象に送達されて得る。
幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合断片は、局所投与により対象に治療的に送達される。
本明細書に記載される抗体またはその断片の好適な用量は、対象におけるがんを処置または予防できるものであり、例えば、処置される対象の年齢、性別、及び体重、ならびに使用される特定の阻害性化合物が含まれる種々の因子に依存し得る。例えば、がんを有する対象を処置するために必要とされる抗ＩＬ－２７抗体全体の用量は、同一の対象を処置するのに必要とされるＩＬ－２７結合性Ｆａｂ’抗体断片の用量と比較して異なり得る。対象に投与される用量に影響を及ぼす他の因子としては、例えば、がんの種類または重症度が挙げられる。例えば、転移性黒色腫を有する対象は、グリア芽細胞腫を有する患者と比べて異なる投与量の抗ＩＬ－２７抗体の投与を必要とし得る。他の因子としては、例えば、対象が同時に罹患しているか、または過去に罹患した他の医学的疾患、対象の健康状態、対象の遺伝的素因、食事、投与時間、排出速度、薬剤の組み合わせ、及び対象に投与される任意の他の追加治療が挙げられる。また任意の特定の対象に特異的な投与量及び治療計画は、処置を行う医療従事者（例えば、医師または看護師）の判断にも依存することを理解すべきである。好適な投与量は、本明細書に記載される。
医薬組成物は、本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合断片の治療上有効量を含み得る。かかる有効量は、投与される抗体の効果、または２種以上の薬剤が使用される場合の抗体及び１種以上の追加の活性薬剤の組み合わせの効果に部分的に基づき、当業者により容易に決定され得る。本明細書に記載される抗体またはその断片の治療上有効量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重、ならびに抗体（及び１種以上の追加の活性薬剤）の個体における所望される反応、例えば、腫瘍成長の低減を誘発する能力などの因子に応じて異なり得る。例えば、抗ＩＬ－２７抗体の治療上有効量は、特定の障害、及び／または当該技術分野においてに公知の、もしくは本明細書に記載される、特定の障害の症状のいずれかを阻害（これらの重症度を軽減するか、またはこれらの発生をなくす）及び／または予防し得る。また治療上有効量は、治療上有益な効果が組成物の任意の毒性または有害作用を上回るものである。
本明細書に記載される抗体またはその断片のいずれかの好適なヒト用量は、例えば、第Ｉ相用量漸増試験において更に評価され得る。例えば、ｖａｎ Ｇｕｒｐ ｅｔ ａｌ．（２００８） Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ８（８）：１７１１－１７１８；Ｈａｎｏｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．（２００７） Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３（２，ｐａｒｔ １）：５２３－５３１；及びＨｅｔｈｅｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００６） Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ５０（１０）：３４９９－３５００を参照のこと。
幾つかの実施形態では、組成物は、組成物が全体として治療上有効となるように、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片のいずれか、及び１種以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１種以上）の追加の治療薬を含有する。例えば、組成物は、本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体及びアルキル化剤を含み得、ここで、当該抗体及び薬剤は、それぞれ、組み合わせた場合に対象にけるがん（例えば、黒色腫）を処置または予防するのに治療上有効な濃度である。
かかる組成物の毒性及び治療有効性は、細胞培養物または実験動物（例えば、本明細書に記載されるがんのいずれかの動物モデル）での公知の薬学的手順により決定され得る。これらの手順は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効である用量）を決定するために使用され得る。毒性作用と治療効果との間の用量比が、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表され得る。高い治療指数を示す抗体またはその抗原結合断片が好ましい。有毒な副作用を示す組成物が使用され得る場合、かかる化合物を患部組織の部位へと標的化する送達システムを設計し、正常細胞への傷害の可能性を最小化し、これにより、副作用を低減するように配慮されるべきである。
細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデ－タは、ヒトにおける使用のための投与量の範囲を考案するのに使用され得る。かかる抗体またはその抗原結合断片の投与量は、通常、ＥＤ５０を含む抗体または断片の毒性が殆どまたは全くない循環濃度範囲内である。投与量は、用いられる剤型及び利用される投与経路に応じてこの範囲内で異なり得る。本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体の治療上有効量は、最初に細胞培養アッセイにより推定され得る。用量は、細胞培養物で決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の最大半減阻害を達成する抗体濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて処方され得る。かかる情報は、ヒトにおける有用な投与量をより正確に決定するために使用され得る。血漿レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィ－により測定され得る。幾つかの実施形態では、例えば、局所投与（例えば、眼または関節への局所投与）が望ましい場合、局所部位内で治療上有効な濃度を達成するために必要とされる用量を決定するために、細胞培養物または動物モデルが使用され得る。
幾つかの実施形態では、本発明の方法は、がんに対する他の治療法と併用して実施され得る。例えば、組成物は、放射線療法、外科手術、標的化化学療法もしくは細胞障害性化学療法、化学放射線療法、ホルモン療法、免疫療法、遺伝子治療、細胞移植治療、精密医療、ゲノム編集治療、または他の薬物療法と同時に、それらの前に、またはそれらの後に対象に投与され得る。
前述したように、本明細書に記載される組成物（例えば、抗ＩＬ－２７組成物）は、限定されるものではないが、以下のような種々のがんを処置するために使用され得る：カポジ肉腫、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性前骨髄球性骨髄単球性単球性赤白血病（ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔｓ ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｅ ｍｙｅｌｏｍｏｎｏｃｙｔｉｃ ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉａ）、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、中枢神経系原発悪性リンパ腫、バ－キットリンパ腫及び辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性多血症リンパ腫（Ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ ｖｅｒａ Ｌｙｍｐｈｏｍａ）、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレ－ムマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、固形腫瘍、肉腫及び癌腫、繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮種、ユ－イング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、肝臓癌、胆管癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮性癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳及び中枢神経系（ＣＮＳ）のがん、子宮頸癌、絨毛癌、大腸癌、結合組織癌、消化管系のがん、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頚部癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、咽頭癌、肝臓癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、唇、舌、口、及び咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌；呼吸器系のがん、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、及び泌尿器系のがん。
組合せ療法
幾つかの実施形態では、本開示により提供される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分は、１種以上の追加の治療薬または処置、例えば、がんのための別の治療薬または処置と組み合わされ得る。例えば、抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分は、１種以上の追加の治療薬と組み合わせて対象（例えば、ヒト患者）に投与され得、ここで、当該組み合わせは、がんを有するか、または発症するリスクがある対象に治療効果を提供する。
幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分及び１種以上の追加の治療薬は、同時に（例えば、並行して）投与される。他の実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分が最初に投与され、１種以上の追加の治療薬が次に（例えば、逐次的に）投与される。幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬が最初に投与され、抗ＩＬ－２７抗体が次に投与される。
本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合断片は、以前に投与された治療または現在投与されている治療の代わりとなるか、またはそれを増強することができる。例えば、抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合断片により処置する際に、１種以上の追加の治療薬の投与が終了し得るか、または縮小され得る（例えば、より低レベルで投与される）。幾つかの実施形態では、以前の治療の投与が維持され得る。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体のレベルが治療効果をもたらすのに十分なレベルに達するまで、以前の治療は維持され得る。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象におけるがんを処置する方法であって、本開示により提供される、ＩＬ－２７に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の有効量を、１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて当該対象に投与することを含む当該方法を提供し、ここで、第２の治療薬または治療手段は、以下からなる群から選択される：化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解性薬物、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、外科的処置、放射線治療、共刺激分子の活性化剤、抑制分子の阻害剤、ワクチン、または細胞免疫療法、またはそれらの組み合わせ。
幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＴＩＭ－３阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ１１２Ｒ阻害剤、ＴＡＭ阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、４－１ＢＢアゴニスト、またはそれらの組み合わせである。
幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、ＰＤ－１アンタゴニストである。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、以下からなる群から選択される：ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１、ＡＭＰ－２２４、ＡＢ１２２、及びＪＴＸ－４０１４。ある種の実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。幾つかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、以下からなる群から選択される：ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びＢＭＳ－９３６５５９。幾つかの実施形態では、本開示は、抗ＰＤ－１抗体の１つ以上の活性を増強する（例えば、ＰＤ－１により媒介されるサイトカイン分泌を増強する；抗ＰＤ－１により媒介されるＴＮＦα分泌を増強する；抗ＰＤ－１抗体に曝露された細胞からの抗ＰＤ－１により媒介されるＩＬ－６分泌を増強する）方法であって、細胞を、本開示により提供される抗体またはその抗原結合部分に、抗ＰＤ－１抗体と同時にまたは逐次的に曝露させて、これにより、抗ＰＤ１抗体の１つ以上の活性を増強することを含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））、カボザンチニブ（Ｃａｂｏｍｅｔｙｘ（登録商標））、アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））、レンバチニブ（Ｌｅｎｖｉｍａ（登録商標））、エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、エパカドスタット、ＮＫＴＲ－２１４（ＣＤ－１２２バイアス型アゴニスト）、チボザニブ（Ｆｏｔｉｖｄａ（登録商標））、アベキシノスタット、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、トレメリムマブ、パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））、ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））、ニラパリブ、サボリチニブ、ボロラニブ（Ｘ－８２）、レゴラフェニブ（Ｓｔｉｖａｒｇｏ（登録商標））、ドナフェニブ（多標的キナ－ゼ阻害剤）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、ペキサスチモジンデバシレプベク（ＪＸ－５９４）、ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））、アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１）、カプセル化ドキソルビシン（Ｔｈｅｒｍｏｄｏｘ（登録商標））、チバンチニブ（ＡＲＱ１９７）、ＡＤＩ－ＰＥＧ２０、ビニメチニブ、アパチニブメシル酸塩、ニンテダニブ、リリルマブ、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標））、デュルバルマブ（Ｉｍｆｉｍｚｉ（登録商標））、セミプリマブ－ｒｗｌｃ（Ｌｉｂｔａｙｏ（登録商標））、チスレリズマブ、及び／またはスパルタリズマブである。
幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、ＴＩＭ－３阻害剤であり、ここで、任意により当該ＴＩＭ－３阻害剤は、ＭＧＢ４５３またはＴＳＲ－０２２である。
幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、ＬＡＧ－３阻害剤であり、ここで、任意により当該ＬＡＧ－３阻害剤は、ＬＡＧ５２５、ＢＭＳ－９８６０１６、及びＴＳＲ－０３３からなる群から選択される。
幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、ＴＩＧＩＴ阻害剤である。幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、ＣＤ１１２Ｒ阻害剤である。幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、ＴＡＭ（Ａｘｌ、Ｍｅｒ、Ｔｙｒｏ）阻害剤である。幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、ＳＴＩＮＧアゴニストである。幾つかの実施形態では、１種以上の追加の治療薬は、４－１ＢＢアゴニストである。
化学療法薬との組み合わせ
本発明の組成物との組み合わせ及び／または同時投与に好適な化学療法薬としては、例えば、以下が挙げられる：タキソ－ル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロ－ル、及びピュ－ロマイシン、ならびにそれらの類似体またはホモログ。更なる薬剤としては、例えば、抗代謝剤（例えば、メトトレキサ－ト、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシル、ダカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオＴＥＰＡ、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニト－ル、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ｃｉｓ－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）、プロカルバジン、アルトレタミン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、サトラプラチン、または四硝酸トリプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、及び有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）、及びテモゾロマイドが挙げられる。
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストとの組み合わせ
幾つかの実施形態では、本開示により提供される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１生物活性及び／または下流の経路（複数可）及び／またはヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達により媒介される細胞プロセスもしくは他のヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１により媒介される機能を阻害する、１種以上のＰＤ－１アンタゴニストと組み合わされる（例えば、組み合わせて投与される）。
従って、下流の経路及び／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達により媒介される細胞プロセス、例えば、受容体結合及び／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に対する細胞の反応の誘発が含まれるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１生物活性を、直接的またはアロステリックに、遮断するか、これらに拮抗するか、これらを抑制するか、阻害するか、または低減するＰＤ－１アンタゴニストが本明細書において提供される。細胞または対象により生成されるヒトＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の含量または量を低減するＰＤ－１アンタゴニストも本明細書において提供される。
幾つかの実施形態では、本開示は、ヒトＰＤ－１に結合し、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を防止、阻害、または低減するＰＤ－１アンタゴニストを提供する。一部の態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１をコ－ドするｍＲＮＡコ－ドに結合し、翻訳を防止する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１をコ－ドするｍＲＮＡに結合し、分解及び／または代謝回転を引き起こす。
幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１シグナル伝達またはＰＤ－１の機能を阻害する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、またはＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の両方への結合を遮断する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２への結合を遮断する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２への結合を遮断する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する。
幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１のその同族リガンドへの結合を阻害する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２への結合、またはＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の両方への結合を阻害する。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１のその同族リガンドへの結合を阻害しない。
幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体（ｍＡｂ）またはその抗原結合断片である。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体または抗原結合断片である。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－Ｌ１に結合し、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を阻害する抗体または抗原結合断片である。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－１に結合し、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を阻害する抗体または抗原結合断片である。
ＰＤ－１とそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２のうちの一方または両方との間の相互作用を阻害または破壊する幾つかの免疫チェックポイントアンタゴニストが、臨床開発中であるか、または臨床医ががんを処置するために現在利用可能である。
本開示により提供される組成物、方法、及び使用のいずれかにおけるＰＤ－１アンタゴニストに含まれ得る抗ヒトＰＤ－１モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合断片の例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペムブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ｈ４０９Ａ１１；ＵＳ８９５２１３６、ＵＳ８３５４５０９、ＵＳ８９００５８７、及びＥＰ２１７０９５９（これらの全ては参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと；Ｍｅｒｃｋ）、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８；ＵＳ７５９５０４８、ＵＳ８７２８４７４、ＵＳ９０７３９９４、ＵＳ９０６７９９９、ＥＰ１５３７８７８、ＵＳ８００８４４９、ＵＳ８７７９１０５、及びＥＰ２１６１３３６（これらの全ては参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと；Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＢＧＢ－Ａ３１７及びＢＧＢ－１０８（ＢｅｉＧｅｎｅ）、２４４Ｃ８及び３８８Ｄ４（ＷＯ２０１６１０６１５９（これらは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと；Ｅｎｕｍｅｒａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ならびにＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）。従って、幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ペムブロリズマブである。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ニボルマブである。
本開示により提供される組成物、方法、及び使用のいずれかにおけるＰＤ－１アンタゴニストに含まれ得る抗ヒトＰＤ－Ｌ１モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合断片の例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）（アベルマブ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＷＯ２０１３／７９１７４（これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと；Ｍｅｒｃｋ／Ｐｆｉｚｅｒ）、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）（デュルバルマブ、ＭＥＤＩ４７３６）、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）（アテゾリズマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６；ＷＯ２０１０／０７７６３４（これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと；Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９、１２Ａ４；ＵＳ７９４３７４３及びＷＯ２０１３／１７３２２３（これらの両方は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと；Ｍｅｄａｒｅｘ／ＢＭＳ）、及びＦＡＺ０５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）。従って、幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、アベルマブである。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、デュルバルマブである。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、アテゾリズマブである。
幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合するイムノアドヘシン、例えば、免疫グロブリン分子のＦｃ領域などの定常領域に融合された、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の細胞外部分またはＰＤ－１結合部分を含む融合タンパク質である。ＰＤ－１に特異的に結合する免疫接着分子の例は、ＷＯ２０１０／０２７８２７及びＷＯ２０１１／０６６３４２に記載されており、これらの両方は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。幾つかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－１に特異的に結合するＰＤ－Ｌ２－ＦＣ融合タンパク質であるＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇとしても公知）である。
ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合し、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路を妨害するする任意のＰＤ－１アンタゴニストが、本明細書において開示される組成物、方法、及び使用に好適であることが当業者により理解されよう。
幾つかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、低分子、核酸、ペプチド、ペプチド模倣物、タンパク質、炭水化物、炭水化物誘導体、またはグリコポリマ－である。例示的な低分子ＰＤ－１阻害剤は、Ｚｈａｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１６） Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ ２１（６）：１０２７－１０３６に記載されている。
ＴＩＭ－３阻害剤との組み合わせ
幾つかの実施形態では、本開示により提供される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分は、ＴＩＭ－３阻害剤と組み合わされる（例えば、組み合わされて投与される）。ＴＩＭ－３阻害剤は、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであり得る。幾つかの実施形態では、ＴＩＭ－３阻害剤は、ＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＴＳＲ－０２２（Ｔｅｓａｒｏ）、またはＬＹ３３２１３６７（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）から選択される。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分は、ＭＧＢ４５３と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分は、ＴＳＲ－０２２と組み合わせて投与される。
ＬＡＧ－３阻害剤との組み合わせ
幾つかの実施形態では、本開示により提供される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分は、ＬＡＧ－３阻害剤と組み合わされる（例えば、組み合わせて投与される）。ＬＡＧ－３阻害剤は、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであり得る。幾つかの実施形態では、ＬＡＧ－３阻害剤は、ＬＡＧ５２５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＴＳＲ－０３３（Ｔｅｓａｒｏ）、ＭＫ－４２８０（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ）、またはＲＥＧＮ３７６７（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）から選択される。
他の組み合わせ
幾つかの実施形態では、本開示により提供される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合部分は、ＴＩＧＩＴ阻害剤、キナ－ゼ阻害剤（例えば、チロシンキナ－ゼ阻害剤（ＴＫＩ））、ＣＤ１１２Ｒ阻害剤、ＴＡＭ受容体阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト及び／または４－１ＢＢアゴニスト、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、Ａ２ＡＲ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＮＥＫＴＡＲ、ｐｅｇ－ＩＬ－２、ｐｅｇ ＩＬ－１０、ＣＤ４０アゴニスト、またはそれらの組み合わせと組み合わされる（例えば、組み合わせて投与される）。
検出方法
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合断片は、生体試料中のヒトＩＬ－２７を検出及び／または定量化する方法において用いられ得る。従って、抗ＩＬ－２７抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載されるように、患者の疾患（例えば、がん）の進行を診断、予測、及び／または判定するのに有用である。
本明細書において定義されるように、がんの改善について対象（例えば、ヒト患者）をモニタリングすることは、当該対象を疾患パラメ－タ－の変化、例えば、腫瘍成長の減少について評価することを意味する。幾つかの実施形態では、評価は、投与の少なくとも一（１）時間後、例えば、少なくとも２、４、６、８、１２、２４、もしくは４８時間後、または少なくとも１日、２日、４日、１０日、１３日、２０日以上後、または少なくとも１週間、２数週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間以上後に実行される。対象は、以下の期間のうちの１つ以上において評価され得る：処置を開始する前；当該処置の間；または当該処置の１つ以上の要素が投与された後。評価は、更なる処置の必要性を評価すること、例えば、投与量、投与頻度、または処置期間が変更されるべきかどうかを評価することを含み得る。選択された治療法を追加または打ち切る必要性、例えば、本明細書に記載されるがんの処置法のいずれかを追加または打ち切る必要性を評価することも含み得る。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象由来の試料中のＩＬ－２７を検出する方法であって、（ａ）当該対象由来の試料と検出用抗体を、ＩＬ－２７が当該試料中に存在する場合に当該検出用抗体が検出用抗体－ＩＬ－２７複合体を形成することを可能にする条件下で接触させることであって、当該検出用抗体が、本開示により提供される抗体またはその抗原結合断片である、当該接触させること；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された当該複合体の存在を検出すること、を含む当該方法を提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、対象におけるＩＬ－２７関連がんを検出する方法であって、（ａ）ＩＬ－２７関連がんを有すると疑われる対象由来の試料と検出用抗体を、ＩＬ－２７が当該試料中に存在する場合に当該検出用抗体が検出用抗体－ＩＬ－２７複合体を形成することを可能にする条件下で接触させるステップであって、当該検出用抗体が、本開示により提供される抗体またはその抗原結合部分である、当該ステップ；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された当該複合体の存在を検出するステップ、を含む当該方法を提供する。幾つかの実施形態では、検出用抗体は、検出可能な標識と結合される。幾つかの実施形態では、本方法は、試料を捕捉抗体と接触させ、ＩＬ－２７が試料中に存在する場合にＩＬ－２７及び当該捕捉抗体を含む複合体を生成することを更に含み、ここで、当該捕捉抗体は、本開示により提供される抗体またはその抗原結合部分である。
幾つかの実施形態では、捕捉抗体は、固体支持体に固定化される。幾つかの実施形態では、試料は、検出用抗体の前に捕捉抗体と接触される。幾つかの実施形態では、試料は、体液試料である。幾つかの実施形態では、液体試料は、血液、血清、血漿、細胞溶解物、または組織溶解物である。
幾つかの実施形態では、がんは、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝細胞癌、肺癌、胃食道癌、卵巣癌、子宮内膜癌、黒色腫、白血病、及びリンパ腫から選択される。幾つかの実施形態では、がんは、腎細胞癌（ＲＣＣ）である。他の実施形態では、がんは、肝細胞癌（ＨＣＣ）である。幾つかの実施形態では、がんは、白血病及びリンパ腫から選択される。幾つかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
本開示は、その具体的な実施形態に関して記載されているが、本開示の真の趣旨及び範囲を逸脱しない範囲で様々な変更がなされ得、等価物と置換され得ることが当業者により理解されるべきである。加えて、特定の状況、物質、物質組成、プロセス、プロセスのステップまたは複数のステップを、本開示の目的、趣旨、及び範囲に適合させるために、多くの改変がなされ得る。かかる改変は、すべて本開示の範囲内であることが意図される。
実施例１：ＩＬ－２７ ＥＢＩ３単量体に特異的に結合する抗ＩＬ－２７抗体の作製及び特徴付け
この実施例は、ヒトＩＬ－２７のＥＢＩ３サブユニットに特異的に結合する抗ＩＬ－２７抗体の作製を記載する。要約すると、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、ヒトＥＢＩ３免疫化ベクタ－（Ａｌｄｅｖｒｏｎ）で免疫化し、抗ＥＢＩ３モノクロ－ナル抗体を発現するハイブリド－マの作製及び単離に使用した。単離されたハイブリド－マは、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、及びＡｂ８と本明細書において称される抗ＩＬ－２７抗体分子を発現するハイブリド－マを含んだ。ハイブリド－マ上澄みを、表面に標的化されたヒトＥＢＩ３を発現する哺乳動物細胞のフロ－サイトメトリ－により解析した。試験された全てのハイブリド－マクロ－ン上澄みは、ＥＢＩ３を発現する細胞に結合した（デ－タ非表示）。
例示的な単離抗ＥＢＩ３抗体であるＡｂ７（以下「Ａｂ７」と称する；以下「Ａｂ７－ＶＨ０」と称する免疫グロブリン重鎖可変領域及び以下「Ａｂ７－ＶＬ０」と称する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む）を、配列決定し、以下で更に特徴付けた（アミノ末端シグナルペプチド配列は示されない）。
単離Ａｂ７抗体の重鎖可変領域（Ａｂ７－ＶＨ０）は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000005
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ０をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000006
単離Ａｂ７抗体の軽鎖可変領域（Ａｂ７－ＶＬ０）は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000007
単離Ａｂ７抗体の重鎖（Ａｂ７－ＶＨ０－ｍＩｇＧ２ａ）は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000008
軽鎖可変領域Ａｂ７－ＶＬ０をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000009
単離Ａｂ７抗体（Ａｂ７－ＶＬ０－ｍκ）の軽鎖は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000010
ヒト化Ａｂ７抗体を、当該技術分野において公知の方法を使用して設計した。要約すると、マウスモノクロ－ナルＡｂ７抗体をコ－ドするＶ領域遺伝子配列を使用して、一連の完全ヒト化抗体を構築した。可変領域遺伝子を、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン及びヒトκ軽鎖定常ドメインをコ－ドするベクタ－にクロ－ニングした。キメラ抗体及びヒト化抗体を、哺乳動物細胞で一過性に発現させた。単離Ａｂ７重鎖可変領域のヒト化により、５つのヒト化重鎖可変領域バリアントがもたらされた（以下「Ａｂ７－ＶＨ１」、「Ａｂ７－ＶＨ２」、「Ａｂ７－ＶＨ３」、「Ａｂ７－ＶＨ４」、及び「Ａｂ７－ＶＨ５」と称される）。単離Ａｂ７軽鎖可変領域のヒト化により、４つのヒト化軽鎖可変領域バリアントがもたらされた（以下「Ａｂ７－ＶＬ１」、「Ａｂ７－ＶＬ２」、「Ａｂ７－ＶＬ３」、及び「Ａｂ７－ＶＬ４」と称される）。
ヒト化Ａｂ７バリアント可変領域を規定するタンパク質配列及びヒト化Ａｂ７バリアント可変領域をコ－ドするヌクレオチド配列を、以下に要約する（アミノ末端シグナルペプチド配列は示されない）。
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ１は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000011
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ１をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000012
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ２は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000013
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ２をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000014
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ３は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000015
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ３をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000016
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ４は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000017
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ４をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000018
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ５は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000019
重鎖可変領域Ａｂ７－ＶＨ５をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000020
軽鎖可変領域Ａｂ７－ＶＬ１は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000021
軽鎖可変領域Ａｂ７－ＶＬ１をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000022
軽鎖可変領域Ａｂ７－ＶＬ２は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000023
軽鎖可変領域Ａｂ７－ＶＬ２をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000024
軽鎖可変領域Ａｂ７－ＶＬ３は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000025
軽鎖可変領域Ａｂ７－ＶＬ３をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000026
軽鎖可変領域Ａｂ７－ＶＬ４は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000027
軽鎖可変領域Ａｂ７－ＶＬ４をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４）：
Figure 2022514499000028
単離された元のＡｂ７抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列（Ｋａｂａｔ定義）を、表１に示す。
Figure 2022514499000029
Figure 2022514499000030
キメラ及びヒト化抗体の重鎖または軽鎖全配列を作製するために、上記の各重鎖可変領域をヒトＩｇＧ１定常領域と組み合わせ、上記の各軽鎖可変領域をヒトκ定常領域と組み合わせた。
キメラ及びヒト化Ａｂ７バリアントの重鎖及び軽鎖を規定するタンパク質全配列を、以下に要約する（アミノ末端シグナルペプチド配列は示されない）。
重鎖Ａｂ７－ＶＨ０－ＩｇＧ１は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000031
重鎖Ａｂ７－ＶＨ０－ＩｇＧ１をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000032
Figure 2022514499000033
重鎖Ａｂ７－ＶＨ１－ＩｇＧ１は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000034
重鎖Ａｂ７－ＶＨ１－ＩｇＧ１をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000035
Figure 2022514499000036
重鎖Ａｂ７－ＶＨ２－ＩｇＧ１は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000037
重鎖Ａｂ７－ＶＨ２－ＩｇＧ１をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000038
Figure 2022514499000039
重鎖Ａｂ７－ＶＨ３－ＩｇＧ１は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000040
重鎖Ａｂ７－ＶＨ３－ＩｇＧ１をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000041
重鎖Ａｂ７－ＶＨ４－ＩｇＧ１は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000042
重鎖Ａｂ７－ＶＨ４－ＩｇＧ１をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000043
重鎖Ａｂ７－ＶＨ５－ＩｇＧ１は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000044
重鎖Ａｂ７－ＶＨ５－ＩｇＧ１をコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000045
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ０－κは、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000046
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ０－κをコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000047
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ１－κは、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000048
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ１－κをコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000049
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ２－κは、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000050
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ２－κをコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000051
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ３－κは、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000052
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ３－κをコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000053
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ４－κは、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000054
軽鎖Ａｂ７－ＶＬ４－κをコ－ドする核酸配列は、以下の配列を有する（ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４－定常領域）：
Figure 2022514499000055
全長免疫グロブリン重鎖及び軽鎖を作製するために、可変領域配列が他の抗体の定常領域配列に融合され得ることも意図される。例えば、Ａｂ７－ＶＨ０、Ａｂ７－ＶＨ１、Ａｂ７－ＶＨ２、Ａｂ７－ＶＨ３、Ａｂ７－ＶＨ４、またはＡｂ７－ＶＨ５重鎖可変領域が、定常領域に１つ以上のアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩｇＧ４（例えば、ＩｇＧ４ｍｔまたはＩｇＧ４ｍｔ２）と組み合わされ得る。同様に、Ａｂ７－ＶＬ０、Ａｂ７－ＶＬ１、Ａｂ７－ＶＬ２、Ａｂ７－ＶＬ３、またはＡｂ７－ＶＬ４軽鎖可変領域は、ヒトラムダ定常領域と組み合わされ得る。
Ａｂ７及び上記のヒト化Ａｂ７バリアントの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコ－ドし、隣接する制限酵素部位を有するＤＮＡ断片を、ＩｇＧ１重鎖及びκ軽鎖用のｐＡＮＴ発現ベクタ－（Ａｎｔｉｔｏｐｅ）システムにクロ－ニングするために合成した。全ての構築物を配列決定により確認した。表２に示す重鎖及び軽鎖の組み合わせを、ＰＥＩトランスフェクション法を使用してＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ接着細胞（ＬＧＣ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ、Ｔｅｄｄｉｎｇｔｏｎ、ＵＫ）に一過性に形質移入し、形質移入後の７日間インキュベ－トした。
Figure 2022514499000056
Figure 2022514499000057
抗体をプロテインＡコンジュゲ－トセファロ－スカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈａｌｆｏｎｔ、ＵＫ）で細胞培養上澄みから精製し、緩衝液を１ｘＤＰＢＳ（ｐＨ７．２）に交換し、予測アミノ酸配列に基づく吸光係数（Ｅｃ（０．１％））を使用してＯＤ２８０ｎｍにより定量化した。１μｇの各抗体がＳＤＳ－ＰＡＧＥにより解析され、典型的な抗体のプロファイルと一致するバンドが観察された（デ－タ非表示）。
抗ＥＢＩ３抗体のインビトロ特徴付け
表２に記載されるように作製されたＡｂ７抗体及びＡｂ７抗体バリアントを、それらの生物学的特徴及び活性を確認するための一連のインビトロアッセイで試験した。
キメラＡｂ７．１抗体と比較したヒト化Ａｂ７抗体バリアントの結合を評価するために、結合競合ＥＬＩＳＡを確立した。アッセイプレ－トを、１ｘＤＰＢＳ（ｐＨ７．２）中に希釈された１μｇ／ｍＬのヒトＩＬ－２７（ｈＩＬ－２７）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｂｉｎｇｄｏｎ、ＵＫ）でコ－ティングし、４℃で一晩インキュベ－トした。全ての抗体を、２％のＢＳＡ／ＤＰＢＳ中に２５μｇ／ｍＬまで希釈し、８点結合曲線を生成するために、プレ－トの下方向に３倍で系列希釈した。抗体希釈物を、０．０８μｇ／ｍＬの一定の最終濃度のビオチン化Ａｂ７．１抗体と予め混合した。次いで、抗体混合物を、コ－ティングされたアッセイプレ－ト上に移し、室温にて１時間インキュベ－トした。ビオチン化Ａｂ７．１抗体の結合を、ストレプトアビジン－ペルオキシダ－ゼコンジュゲ－ト（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ、ＵＫ）及びＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ、ＵＫ）を用いて検出した。反応を１ＭのＨＣｌで停止させ、Ｄｙｎｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＭＲＸ ＴＣ ＩＩプレ－トリ－ダ－で４５０ｎｍでの吸光度を読み取った。
試験された抗体のＩＣ５０絶対値を、４パラメ－タロジスティック曲線を使用して決定した。各プレ－ト上のキメラ抗体のＩＣ５０に対して正規化されたＩＣ５０を、表３に要約する。結果は、Ａｂ７－ＶＬ４軽鎖を含むバリアントを除いて、作製された全てのヒト化Ａｂ７バリアントが、キメラＡｂ７．１抗体と同程度の結合プロファイルを有し、ほとんどのバリアントがキメラＡｂ７．１抗体の２倍以内に匹敵することを示す。
Figure 2022514499000058
抗体を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により更に特徴付けた。動態実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）で実行した。全ての実験を、ＨＢＳ－Ｐ＋ランニング緩衝液（ｐＨ７．４）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈａｌｆｏｎｔ、ＵＫ）を用いて、ｈＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｂｉｎｇｄｏｎ、ＵＫ）を使用して２５℃で実行した。ヒトＩＬ－２７（ｈＩＬ－２７）抗原は、約１６ＲＵまでＣＭ５チップに捕捉された。固定化は、１０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）中１μｇ／ｍＬのタンパク質濃度で実施した。ＨＢＳ－Ｐ＋緩衝液中に希釈された、３．３ｎＭ～３０ｎＭの３点３倍希釈範囲の抗体を、各濃度間で再生なしに使用した。漸増する濃度の抗体の３回の注入について、結合相を毎回７５秒間モニタリングし、解離相を抗体の最後注入後に１回２５０秒間測定した。ｈＩＬ－２７表面の再生を、２ＭのＭｇＣｌ２の単回注入を使用して１２０秒間実施した。動態サイクルの間の表面及び分析物の安定性を確認するために、キメラ抗体による複数回反復（ｎ＝４）をアッセイの全体を通して実行した。
抗体の二価の性質のため、１：１結合モデル及び二価分析物モデルを使用して、デ－タを解析した。１：１結合モデル解析の結果を表４に要約し、二価分析物モデルによる結果を表５に要約する。
Figure 2022514499000059
Figure 2022514499000060
Figure 2022514499000061
Figure 2022514499000062
１：１モデルを使用した単一サイクル動態（表４）は、二価分析物モデル（表５）及び競合ＥＬＩＳＡによる結果と一貫して、Ａｂ７－ＶＬ４ヒト化バリアントがｈＩＬ－２７に結合しなかったこと、及び残りのバリアントがキメラ抗体の２倍の範囲内で結合したことを実証した。
要約すると、１：１結合モデルを使用し、単一サイクル動態により決定されたＡｂ７．１キメラ抗体の結合親和性は、１ｎＭであった。結合が消失したＡｂ７－ＶＬ４を含むバリアントを除き、全てのヒト化バリアントは、１．５ｎＭ以下のＫＤを有した。これらの結果は、Ａｂ７抗体及びＡｂ７抗体バリアントがＩＬ－２７のＥＢＩ３サブユニットに高親和性で結合することを実証する。
実施例２：酵母でのヒトＩＬ－２７のＥＢＩ３及び／またはＰ２８サブユニットに特異的に結合する抗ＩＬ－２７抗体の作製
複数のエピト－プビンを代表する追加の抗ＩＬ－２７モノクロ－ナル抗体を、８つのナイ－ブヒト合成酵母ライブラリ－から以下に記載される方法を使用して選択した。
材料及び方法
各々が約１０９の多様性である８つのナイ－ブヒト合成酵母ライブラリ－を、以前に記載されたように増殖させた（例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，（２０１３） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ ２６（１０）：６６３－６７０；ＷＯ２００９０３６３７９；ＷＯ２０１０１０５２５６；及びＷＯ２０１２００９５６８（これらの全ては参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。最初の２ラウンドの選択については、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳシステムを利用した磁気ビ－ズソ－ティング技術を、以前に記載されたように実行した（例えば、Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００４） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８６（１－２）：１４１－１５３（これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）参照のこと）。
要約すると、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリ－）を、洗浄緩衝液（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）／０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中で、３ｍｌの１００ｎＭビオチン化抗原（組換えヒトＩＬ－２７；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と３０℃で３０分間インキュベ－トした。４０ｍｌの氷冷した洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを２０ｍＬの洗浄緩衝液中に再懸濁し、ストレプトアビジンマイクロビ－ズ（５００μｌ）を酵母に添加し、４℃で１５分間インキュベ－トした。次に、酵母細胞をペレット化し、２０ｍＬの洗浄緩衝液中に再懸濁し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラム上にロ－ドした。２０ｍＬをロ－ドした後、カラムを３ｍｌの洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、カラムを磁界から取り出し、酵母細胞を５ｍＬの増殖培地で溶出させ、次いで、一晩増殖させる。次の選択ラウンドは、フロ－サイトメトリ－を使用して実行した。約２×１０７の酵母細胞をペレット化し、洗浄緩衝液で３回洗浄し、平衡条件下での漸減する濃度のビオチン化抗原（１００～１ｎＭ）、種間交差反応性を得るための異なる種の３０ｎＭのビオチン化抗原、または選択から非特異的抗体を除去するための多特異性除去試薬（ＰＳＲ）のいずれかと３０℃でインキュベ－トした。ＰＳＲ除去については、ライブラリ－を、ビオチン化ＰＳＲ試薬の１：１０希釈物とインキュベ－トした。
次いで、酵母細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＬＣ－ＦＩＴＣ（１：１００希釈）及びＳＡ－６３３（１：５００希釈）またはＥＡＰＥ（１：５０希釈）二次試薬のいずれかを用いて４℃で１５分間染色した。洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．３ｍＬの洗浄緩衝液中に再懸濁し、ストレ－ナ－キャップ付きのソ－トチュ－ブに移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソ－タ－（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して選別を実行し、所望の特性を有する抗体を選別するためにソ－トゲ－トを決定した。所望される特性の全てを有する集団が得られるまで選択ラウンドを繰り返した。最終ラウンドの選別後、酵母細胞をプレ－ティングし、個々のコロニ－を特徴付けのために採集した。
軽鎖多様化
抗体の更なる発見及び改善のために、軽鎖多様化プロトコ－ルを主要な発見段階の間に使用した。
軽鎖バッチ多様化プロトコ－ル：ナイ－ブライブラリ－選別の結果からの重鎖プラスミドを破砕及び取り出しにより酵母から抽出し、Ｅ．ｃｏｌｉ中で増殖させ、その後にＥ．ｃｏｌｉから精製し、５×１０６の多様性を有する軽鎖ライブラリ－に変換した。ナイ－ブライブラリ－での発見と同じ条件を使用した１ラウンドのＭＡＣＳ及び４ラウンドのＦＡＣＳにより選別を実行した。
抗体最適化
以下に記載するように重鎖及び軽鎖可変領域に多様性を導入することにより抗体の最適化を実行した。
ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２選別：単一抗体のＣＤＲＨ３を、１×１０８の多様性のＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２バリアントを有する予め作製したライブラリ－に組換え、ナイ－ブライブラリ－での発見において記載したように１ラウンドのＭＡＣＳ及び４ラウンドのＦＡＣＳにより選別を実行した。異なるＦＡＣＳラウンドにおいて、ライブラリ－を、ＰＳＲ結合、種間交差反応性、及び希釈または元のＦａｂによる事前の複合体形成による親和性選択圧について調べ、所望の特性を有する集団を得るために選別を実行した。
抗体産生及び精製
酵母クロ－ンを飽和まで増殖させ、次いで、３０℃で振盪しながら４８時間誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上澄みを精製のために収集した。ＩｇＧをプロテインＡカラムを使用して精製し、酢酸（ｐＨ２．０）で溶出させた。Ｆａｂ断片をパパイン消化により作製し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）によって精製した。
ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＫＤ測定
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、概して、以前に記載されたようにＯｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４で実行した（例えば、Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ，Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ－ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ．Ｍａｂｓ ５（２），２７０－２７８ （２０１３）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。要約すると、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、ＩｇＧをオンラインでＡＨＱセンサ－上にロ－ドすることにより実行した。センサ－をオフラインでアッセイ緩衝液中にて３０分間平衡化し、次いで、ベ－スライン確立のためにオンラインで６０秒間モニタリングした。ＩｇＧがロ－ドされたセンサ－を１００ｎＭ抗原に３分間曝露させ、その後、オフレ－ト測定のためにアッセイ緩衝液に３分間移した。全ての動態は、１：１結合モデルを使用して解析した。組換えヒトＩＬ－２７タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｃａｔ：２５２６－ＩＬ）を抗原として使用した。抗ＩＬ－２７抗体の親和性測定を図１に示す。
ＦｏｒｔｅＢｉｏエピト－プビニング／リガンドブロッキング
エピト－プビニング／リガンドブロッキングを、標準的なサンドイッチフォ－マットクロスブロッキングアッセイを使用して実行した。対照の抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサ－上にロ－ドし、センサ－上の空いているＦｃ結合部位を無関係なヒトＩｇＧ１抗体により遮断した。次いで、センサ－を１００ｎＭの標的抗原に曝露させ、続いて、第２の抗標的抗体またはリガンドに曝露させた。抗原結合後の第２の抗体またはリガンドによる追加の結合は、空いているエピト－プ（非競合因子）を示し、一方で結合しないことは、エピト－プブロッキング（競合因子またはリガンドブロッキング）を示す。
ＭＳＤ－ＳＥＴ動態アッセイ
平衡親和性測定を以前に記載されたように実行した（Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。溶液平衡タイトレ－ション（ＳＥＴ）を、ＰＢＳ＋０．１％のＩｇＧ非含有ＢＳＡ（ＰＢＳＦ）中で１０～１００ｐＭで一定に保たれた抗原を用いて実行し、５～１００ｎＭから始めた抗体の３～５倍系列希釈物とインキュベ－トした（実験条件は試料依存的である）。抗体（ＰＢＳ中２０ｎＭ）を標準的なＭＳＤ－ＥＣＬ結合プレ－ト上に４℃で一晩または室温で３０分間コ－ティングした。次いで、プレ－トを７００ｒｐｍで振盪しながら３０分間ブロッキングし、続いて、洗浄緩衝液（ＰＢＳＦ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標） ２０）で３回洗浄した。ＳＥＴ試料をアプライし、プレ－ト上で７００ｒｐｍで振盪しながら１５０秒間インキュベ－トし、続いて、１回洗浄した。プレ－トに捕捉された抗原を、ＰＢＳＦ中２５０ｎｇ／ｍＬのＳｕｌｆｏｔａｇ標識ストレプトアビジンとプレ－ト上で３分間インキュベ－ションすることにより検出した。プレ－トを洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、界面活性剤を含有する１ｘＲｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを使用してＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ２４００機器で読み取った。パ－セント遊離抗原を希釈された抗体の関数としてＰｒｉｓｍでプロットし、二次方程式に適合させて、ＫＤを得た。スル－プットを改善するために、液体操作ロボットを、ＳＥＴ試料調製を含め、ＭＳＤ－ＳＥＴ実験の全体を通して使用した。
実施例３：抗ＩＬ－２７抗体の組換えヒトＩＬ－２７への結合
実施例２に記載された、組換えヒトＩＬ－２７に結合する抗ＩＬ－２７抗体の能力をＥＬＩＳＡにより評価した。要約すると、Ｎｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレ－ト（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＃４４－２４０４－２１）を１００μＬ／ウェルの組換えヒトＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＃２５２６－ＩＬ／ＣＦ）（ＰＢＳ中に希釈された０．５μｇ／ｍＬ）でコ－ティングし、密閉し、４℃で一晩インキュベ－トした。プレ－トを、１００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ）で３回洗浄した。次いで、プレ－トを、２００μＬ／ウェルのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ＋０．１％のＢＳＡ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ）を用いて振盪しながら室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした。ブロッキングバッファ－をデカントし、１ウェル当たり１００μＬの示すように希釈された対照及び抗ＩＬ－２７抗体を添加した。１μｇ／ｍＬの最高濃度から始めて抗体を１：１０希釈することにより、１０点系列希釈を各抗体について作成した。プレ－トを室温で振盪しながら１～２時間インキュベ－トした。プレ－トを１００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄した。１００μＬ／ウェルの抗ヒトＩｇＧ二次抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ；カタログ番号２０１４－０５）（ブロッキングバッファ－中に１：５０００希釈）を添加した。次いで、プレ－トを振盪しながら室温で１時間インキュベ－トした。１時間のインキュベ－ション後、プレ－トを１００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄した。プレ－トをさせるために、１００μＬ／ウェルのＴＭＢ緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃００－２０２３）を添加した。検量線のウェルにおいて青色の発色が観察された。最高濃度の希釈された対照抗体が濃青色（５～１０分）に到達したら、すぐに５０μＬ／ウェルの停止液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＃ＳＳ０４）を添加した（色は黄色に変化する）。発色したプレ－トを、反応停止の３０分以内に４５０ｎｍで読み取った（波長補正のために５７０ｎｍでの測定値を引いた）。
図２に示すように、抗ＩＬ－２７抗体は、組換えヒトＩＬ－２７に結合する。ＩｇＧアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ対照）を比較対照として使用した。
例えば、生化学的親和性及び特異性研究は、抗ＩＬ－２７抗体であるＳＲＦ３８８がヘテロ二量体サイトカインＩＬ－２７のｐ２８サブユニットに結合する（しかし、ＥＢＩ３サブユニットには結合しない）ことを示した。ＳＲＦ３８８はヒト、非ヒト霊長類、及びげっ歯類の組換えＩＬ－２７に結合し、結合の程度は種間で異なった。ＳＲＦ３８８のＩＬ－２７への結合特異性は、約４５００種の細胞表面及び可溶性分子のパネルに対して試験することにより確認され、オフタ－ゲット結合は観察されなかった。ＩＬ－２７のその受容体であるＩＬ－２７ＲＡ（ＷＳＸ－１）への結合特異性も確認され、他のどの細胞表面受容体もヒトＩＬ－２７に結合しなかった。ヒトＩＬ－２７とＩＬ－２７ＲＡ（ＷＳＸ－１）との間の相互作用を遮断するＳＲＦ３８８の能力を、表面プラズモン共鳴により確認した。
本明細書において開示される抗体の結合を、幾つかのモデル系で評価した。ヒトＩＬ－２７はマウス細胞において生物学的に活性であるため、ミニサ－クルＤＮＡ送達を使用したマウスの全身でのヒトＩＬ－２７の過剰発現を利用して、ＩＬ－２７により媒介されるインビボ効果を全ゲノムマイクロアレイ解析、フロ－サイトメトリ－、及び血清サイトカイン解析により解析した。インビボでＩＬ－２７により調節されたマ－カ－の多くは、ヒト細胞ベ－スのアッセイにおける発見と一貫していた。ＳＲＦ３８１を、播種性Ｂ１６腫瘍モデルでも評価した。この設定において、ＳＲＦ３８１による処置は、ＩＬ－２７リガンドの各種構成要素（ＩＬ－２７ ｐ２８、ＥＢＩ３）または受容体（ＩＬ－２７ＲＡ）を欠損したマウスにおいて観察された表現型と一貫した結果を示した。
まとめると、これらの研究は、ＳＲＦ３８８（及びその姉妹であるＳＲＦ３８１）は、マウスにおけるＩＬ２７欠損の表現型を模写することができ、ＩＬ－２７に特異的かつ高親和性で結合し、その免疫抑制効果を単独で、またはＰＤ－Ｌ１遮断薬との組み合わせで阻害することができることを実証する。
実施例４：抗ＩＬ２７抗体は、インビトロでＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害する
ＩＬ－２７受容体（ＩＬ－２７Ｒ）を介するＩＬ－２７シグナル伝達は、シグナル伝達性転写因子１（ＳＴＡＴ１）ポリペプチド（ｐＳＴＡＴ１）のリン酸化をもたらす。実施例２で記載された抗ＩＬ－２７抗体を、ヒト全血、ヒトＰＢＭＣ、Ｕ９３７骨髄性細胞（組織球性リンパ腫細胞株）、及びＨＵＴ－７８ Ｔ細胞リンパ腫細胞におけるＩＬ－２７により媒介されるＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害する能力についてフロ－サイトメトリ－により試験した。
抗ＩＬ－２７抗体を、ヒト全血におけるＩＬ－２７により媒介されるＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害する能力について試験した。要約すると、室温にて保存されたＥＤＴＡ抗凝固処理ヒト全血をこのアッセイに使用した。４５μＬの血液を、丸底の深型ウェルプレ－ト（Ｐｈｅｎｉｘ ＃８５０３５６）の各ウェルに分配し、プレ－トウォ－マ－（ＥｃｈｏＴｈｅｒｍ ＩＣ２０）上で３７℃にて、または３７℃のインキュベ－タ－で３０分間暖めた。抗ＩＬ－２７抗体を、ポリプロピレンＶ底プレ－ト（Ｃｏｒｎｉｎｇ ＃３３６３）中でエンドトキシンフリ－ＰＢＳ（Ｔｅｋｎｏｖａ ＃Ｐ０３００）中に１０ｘ最高濃度に希釈した。抗ＩＬ－２７抗体を、所望される通りにエンドトキシンフリ－ＰＢＳ中に系列希釈した。刺激されない対照及び刺激される対照については、ＰＢＳのみをウェルに添加した。５μＬの各希釈物を、４５μＬの血液のウェルに添加し、プレ－トシェ－カ－（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｍｉｘ Ｍａｔｅ）上で１０００ＲＰＭにて１５秒振盪することにより混合した。プレ－トは、３７℃インキュベ－タ－でプレ－トウォ－マ－または上の３７℃で、６０分間インキュベ－トした。
１０μｇ／バイアルの組換えヒトＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＃２５２６－ＩＬ）を、１００μＬのＰＢＳ＋０．１％のＢＳＡ（１０％のＢＳＡ Ｓｉｇｍａ＃Ａ１５９５から作製）を添加することにより１００μｇ／ｍＬに再構成した。組換えｈＩＬ－２７（ｒｈＩＬ－２７）の作業用貯蔵液を、エンドトキシンフリ－ＰＢＳ中２００ｎｇ／ｍＬに希釈することにより調製した。６０分のインキュベ－ション後、５μＬの２００ｎｇ／ｍＬのｒｈＩＬ－２７を、刺激される血液の各ウェルに添加した。５μＬのＰＢＳを、刺激されない対照ウェルに添加した。プレ－トを、プレ－トシェ－カ－上で１０００ＲＰＭにて１５秒間振盪した。プレ－トを３７℃で３０分間インキュベ－トした。
３０分のインキュベ－ション後、細胞を固定した。溶解／固定試薬（ＢＤ ＃５５８０４９）を滅菌水（Ｈｙｃｌｏｎｅ ＃ＳＨ３０５２９０２）中に１：５で希釈し、ウオ－タ－バスで３７℃まで暖めた。５００μＬの溶解／固定試薬をディ－プウェルプレ－トの各ウェルに添加し、プレ－トをプレ－トシェ－カ－上で１０００ＲＰＭにて１５秒間混合した。プレ－トを３７℃で１５分間インキュベ－トした。
１５分のインキュベ－ション後、プレ－トを室温にて１５００ＲＰＭで５分間遠心分離し（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機５８１０Ｒ）、上澄みをフリッキングにより廃棄した。ウェル１つ当たり１ｍＬのエンドトキシンフリ－ＰＢＳを添加し、プレ－トをプレ－トシェ－カ－上で１０００ＲＰＭにて１５秒間に振盪した。プレ－トを室温にて１５００ＲＰＭで５分間遠心分離し（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機５８１０Ｒ）、上澄みをフリッキングにより廃棄した。細胞ペレットはプレ－トに残った。
細胞ペレットを、５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ ＃１４１９０－１４４／２％のＦＢＳ、Ｓｉｇｍａ ＃Ｆ８３１７／１ｍＭのＥＤＴＡ、Ｆｉｓｈｅｒ ＃ＢＰ２４８２）中１：２００のＣＤ１４－Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ＃３２５６１６）中に再懸濁し、Ｕ底９６ウェルプレ－ト（Ｃｏｓｔａｒ ＃３７９９）に移した。プレ－トをプレ－トシ－ラ－（ＶＷＲ ＃８９１３４－４３２）により密閉し、暗下で室温にて３０分間インキュベ－トした。
３０分のインキュベ－ション後、１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を各ウェルに添加し、プレ－トを室温にて１５００ＲＰＭで５分間遠心分離した。次いで、細胞ペレットを、ピペット操作により１００μＬのＰｅｒｍ ＩＩＩ（－２０℃で保存）（ＢＤ ＃５５８０５０）中に再懸濁し、プレ－トをプレ－トシ－ラ－及び蓋により密閉した。プレ－トを－２０℃で一晩または４℃で１５分インキュベ－トした。
インキュベ－ション後、１５０μＬのＰＢＳを添加し、プレ－トを室温にて１５００ＲＰＭで５分間遠心分離した。上澄みをフリッキングによりプレ－トから廃棄し、プレ－トを、以下の表６に記載される通りに調製された５０μＬの染色カクテル中に再懸濁した。
Figure 2022514499000063
プレ－トを暗下で室温にて１時間インキュベ－トした。１時間のインキュベ－ション後、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、プレ－トを室温にて１５００ＲＰＭで５分間遠心分離した。上澄みをフリッキングによりプレ－トから廃棄し、プレ－トをフロ－サイトメトリ－による解析のために１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。
図３Ａに示すように、抗ＩＬ－２７抗体は、ヒト全血においてＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害する。抗ＩＬ－２７抗体Ａｂ１４は、ヒト全血において２４．７ｎｇ／ｍＬのＩＣ５０でＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害した。
実施例２に記載された抗ＩＬ－２７抗体を、プ－ルされたヒトＰＢＭＣにおいてＩＬ－２７により媒介されるＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害する能力について、フロ－サイトメトリ－により更に試験した。要約すると、バフィ－コ－トから得られたヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）の冷結保存バイアルを液体窒素保存から取り出し、３７℃のウオ－タ－バスで素早く解凍した。各冷結保存バイアルの内容物をＰ１０００ピペットで取り出し、１５ｍＬのＦａｌｃｏｎコニカルチュ－ブに移した。２～３ｍＬの完全ＲＰＭＩ－１６４０（Ｇｉｂｃｏ、６１８７０－０３６）を解凍した細胞にゆっくりと添加し、細胞を穏やかに回旋させるか、またはフリッキングして、懸濁させた。コニカルチュ－ブを完全ＲＰＭＩ－１６４０で１０ｍＬまで満たし、チュ－ブを反転させて、混合した。コニカルチュ－ブを室温にて１４００ＲＰＭで８分間遠心分離した。
ＰＢＭＣ細胞を１ｍＬ当たり４，０００，０００個の細胞密度で暖かい無血清ＲＰＭＩ－１６４０中に再懸濁し、ウェル１つ当たり２００，０００個の細胞密度（５０μＬ）で丸底９６ウェルプレ－ト（Ｃｏｓｔａｒ、３７９９）にプレ－ティングした。抗ＩＬ－２７抗体を、９６ウェルポリプロピレンプレ－トの１列目において無血清ＲＰＭＩ－１６４０中に４０μｇ／ｍｌの最高濃度に希釈した（１０μｇ／ｍｌの最終濃度になる）。プレ－トの最初の１０列の残りで系列希釈を所望される通りに（１：２、１：３など）行った。５０マイクロリットル（μＬ）の抗体貯蔵液（４ｘ）を、丸底プレ－トのＰＢＭＣ細胞のプレ－トの最初の１０列に添加した。１１及び１２列目には、５０μＬの無血清ＲＰＭＩ－１６４０細胞培地を添加した。次いで、プレ－トを３７℃で２時間インキュベ－トした。
２時間のインキュベ－ション後、無血清ＲＰＭＩ－１６４０細胞培地中に希釈された１００μＬの５０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、２５２６－ＩＬ）を、２５ｎｇ／ｍｌの最終濃度となるように各ウェルに添加した（無血清培地のみまたは抗体のみを含んだ対照ウェルを除く）。１００μＬの無血清ＲＰＭＩ－１６４０細胞培地を、対照ウェルまたは抗体のみを有するウェルに添加した。プレ－トを３７℃で２０分間インキュベ－トした。
２０分のインキュベ－ション後、５０μＬのＤＩ水中４％のＰＦＡ（Ｐｉｅｒｃｅ、２８９０６）を各ウェルに直接添加し、プレ－トを３７℃でインキュベ－ト５分間して、細胞を固定した。プレ－トを２０００ＲＰＭで５分間遠心分離した。培地をフリッキングにより廃棄し、プレ－トを１５０μＬのＤＰＢＳで洗浄した。洗浄ステップを更に２回繰り返した。Ｈ２Ｏ中に希釈した５０μＬの９０％氷冷メタノ－ル（ＭｅＯＨ）（Ｓｉｇｍａ、４３９１９３）を、１２チャンネルピペットを使用して各ウェルに素早く添加した。ＭｅＯＨを添加する際に、各ウェルを混合するように特別に注意を払った。プレ－トを少なくとも２０℃で１５分間インキュベ－トした。１００μＬのＤＰＢＳを各ウェルの９０％メタノ－ル上部に添加し、プレ－トを２０００ＲＰＭで５分間遠心分離した。プレ－ト内容物をフリッキングにより廃棄し、プレ－トを上記のように３回洗浄した。最後の洗浄後、細胞ペレットがプレ－トのウェルに残った。
ペレット化したＰＢＭＣを、ＦＡＣＳ緩衝液（ＤＰＢＳ中２％のＦＢＳ、２ｍＭのＥＤＴＡ）中１：１００のｐＳＴＡＴ１ ＰＥ（ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ、５２６０６９）を用いて暗所で室温にて４５分間染色した。染色剤を添加する際に、１２チャンネルピペットで各ウェルを混合するように特別に注意を払った。４５分のインキュベ－ション後、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液を各ウェルに添加し、プレ－トを２０００ＲＰＭで５分間遠心分離した。上澄みをフリッキングにより廃棄し、プレ－トを上記のように２回洗浄した。細胞を１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、フロ－サイトメトリ－により解析した。
図３Ｂに示すように、抗ＩＬ－２７抗体は、プ－ルされたヒトＰＢＭＣにおいてＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害した。抗ＩＬ－２７抗体ＳＲＦ３８１は、プ－ルされたヒトＰＢＭＣにおいて１４０．５ｎｇ／ｍｌの平均ＩＣ５０（ｎ＝２）でＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害した。抗ＩＬ－２７抗体ＳＲＦ３８８は、プ－ルされたヒトＰＢＭＣにおいて５８．３ｎｇ／ｍｌの平均ＩＣ５０（ｎ＝３）でＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害した。
抗ＩＬ－２７抗体を、Ｆｃ受容体を発現することが知られている細胞株であるＵ９３７細胞においてＩＬ－２７により媒介されるＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害する能力について、基本的に図３Ｂについて記載されているようにフロ－サイトメトリ－により更に試験した。図３Ｃに示すように、抗ＩＬ－２７抗体は、示されるようにＵ－９３７細胞においてＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害する。抗体ＳＲＦ３８１は、Ｕ９３７細胞において８１ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝２）の平均ＩＣ５０でＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害した。抗体ＳＲＦ３８８は、Ｕ９３７細胞において９６ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝２）の平均ＩＣ５０でＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害した。
抗ＩＬ－２７抗体を、細胞表面Ｆｃ受容体を発現しない、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫株ＨＵＴ－７８においてＩＬ－２７により媒介されるＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害する能力について、基本的に図３Ｂについて記載されているようにフロ－サイトメトリ－により試験した。図３Ｄに示すように、抗ＩＬ－２７抗体は、ＨＵＴ－７８細胞においてＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害した。抗体ＳＲＦ３８１は、ＨＵＴ－７８細胞において８０ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝１）のＩＣ５０でＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害した。抗体ＳＲＦ３８８は、ＨＵＴ－７８細胞において９５ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝１）のＩＣ５０でＳＴＡＴ１のリン酸化を阻害した。
本開示では、全血アッセイにおけるＳＲＦ３８８による種を超えたＩＬ－２７阻害も評価された。種を超えたＳＲＦ３８８活性を特徴付けるために、ヒト、カニクイザル、ラット、及びマウス由来の組換えＩＬ－２７を、これらの種から採取された全血試料由来のＴリンパ球におけるｐＳＴＡＴ１シグナル伝達の刺激について試験した（デ－タ非表示）。
要約すると、全血を３７℃まで暖め、続いて、ＳＲＦ３８８と６０分プレインキュベ－ションし、２０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ－２７を添加した。試料を更に３０分間インキュベ－トした。白血球を固定し、赤血球を溶解させた。洗浄後、固定した細胞を透過処理し、抗ＣＤ３及び抗リン酸化ＳＴＡＴ１（Ｙ７０１）で染色した。１時間のインキュベ－ション後、試料を洗浄し、フロ－サイトメトリ－のために再懸濁した。刺激された対照ウェル及び刺激されなかった対照ウェルを使用してパ－セント阻害を計算し、ＩＣ５０値をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して計算した。
ヒトＴ細胞におけるＳＲＦ３８８によるシグナル伝達阻害の代表的なデ－タを、図３Ｅに示す。ＳＲＦ３８８の異なる種への親和性に関してなされた発見と一貫して、ＳＲＦ３８８によるＩＬ－２７シグナル伝達阻害の効力は、ヒトで最も強く、カニクイザル、ラット、及びマウスが後に続いた（例えば、表７を参照のこと）。
Figure 2022514499000064
実施例５：ＩＬ－２７により媒介されるＣＤ１６１の阻害の抗ＩＬ－２７抗体による低減
Ｃ型レクチンであるＣＤ１６１は、発現がＩＬ－２７により抑制されるＴ細胞マ－カ－である。実施例２で記載された抗ＩＬ－２７抗体を、プ－ルされたヒトＰＢＭＣ細胞においてＩＬ－２７により媒介されるＣＤ１６１の阻害を逆転させる能力について、フロ－サイトメトリ－により試験した。要約すると、バフィ－コ－トから得られた、プ－ルされたヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）の冷結保存バイアルを液体窒素保存から取り出し、３７℃のウオ－タ－バスで素早く解凍した。各冷結保存バイアルの内容物をＰ１０００ピペットで取り出し、１５ｍＬのＦａｌｃｏｎコニカルチュ－ブに移した。２～３ｍＬの完全ＲＰＭＩ－１６４０（Ｇｉｂｃｏ、６１８７０－０３６）を解凍した細胞にゆっくりと添加し、細胞を穏やかに回旋させるか、またはフリッキングして、懸濁させた。コニカルチュ－ブを完全ＲＰＭＩ－１６４０で１０ｍＬまで満たし、チュ－ブを反転させて、混合した。コニカルチュ－ブを室温にて１４００ＲＰＭで８分間遠心分離した。
５日間のアッセイにおける蒸発の効果を最小限にするために、外壁の使用を避けた。アウタ－ウェルは、１ウェル当たり２００μＬのＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、１４１９０－１４４）で満たされるべきである。ＰＢＭＣ細胞を、１ｍＬ当たり２，０００，０００個の細胞密度で暖かい完全ＲＰＭＩ－１６４０中に再懸濁した。精製ヒト抗ＣＤ３抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＵＣＴＨ１、＃３００４０２）を０．５μｇ／ｍＬの濃度で添加した（これは最終濃度の２倍である）。１ウェル当たり１００μＬのこの細胞混合物（１ウェル当たり２００，０００個の細胞）を丸底９６ウェルプレ－ト（Ｃｏｓｔａｒ、３７９９）にプレ－ティングする。
抗ＩＬ－２７抗体を、９６ウェルポリプロピレンプレ－トの１列目において完全ＲＰＭＩ－１６４０中に４０μｇ／ｍｌの最高濃度に希釈した（１０μｇ／ｍｌの最終濃度になる）。プレ－トの最初の１０列の残りで系列希釈を所望される通りに（１：２、１：３など）行った。５０μＬの抗体貯蔵液（４ｘ）を、丸底プレ－トのＰＢＭＣ細胞のプレ－トの最初の１０列に添加した。１１及び１２列目には、５０μＬの完全ＲＰＭＩ－１６４０を添加した。
抗ＩＬ－２７抗体の添加後、完全ＲＰＭＩ－１６４０中に希釈された５０μＬの１００ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃２５２６－ＩＬ）を、２５ｎｇ／ｍｌの最終濃度となるように各ウェルに添加した（無血清培地または抗体のみを含んだ対照ウェルを除く）。５０μＬの完全ＲＰＭＩ－１６４０を対照ウェルに添加した。干渉を最小限に抑えてプレ－トを組織培養インキュベ－タ－で３７℃にて５日間インキュベ－トした。
５日間のインキュベ－ション後、プレ－トをインキュベ－タ－から取り出し、プレ－トシェ－カ－上で６００ＲＰＭにて３０秒間撹拌した。プレ－トを１８００ＲＰＭで５分間遠心分離した。培地を取り出し、更なるアッセイのために取っておき、プレ－トを１５０μＬのＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、＃１４１９０－１４４）で洗浄した。洗浄ステップを更に２回繰り返した。細胞ペレットを１ウェル当たり５０μＬの以下の表８に記載される染色カクテルで染色した。
Figure 2022514499000065
プレ－トをプレ－トシェ－カ－上で６００ＲＰＭにて３０秒間撹拌し、プレ－トを暗下で室温にて３０分間インキュベ－トした。
３０分のインキュベ－ション後、プレ－トを遠心分離し、上澄みをフリッキングにより廃棄した。プレ－トを上記のように２回洗浄した。最後の洗浄後、５０μＬのＤＩ水中４％のＰＦＡ（Ｐｉｅｒｃｅ、２８９０６）を添加することにより、細胞ペレットを室温で１０分間固定した。１００μＬのＦＡＳＣ緩衝液を各ウェルに添加し、プレ－トを１８００ＲＰＭで５分間遠心分離した。細胞を１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、フロ－サイトメトリ－により読み取った。
図４に示すように、抗ＩＬ－２７抗体は、示されるようにＩＬ－２７により媒介されるＣＤ１６１の阻害を低減する。
実施例６：ＰＤ－１により媒介されるＴＮＦα、ＩＬ－６、及び他のサイトカインの分泌の抗ＩＬ－２７抗体による増強（抗ＩＬ－２７抗体の更なるインビトロ特徴付けを含む）
抗ＩＬ－２７抗体を、がん患者由来のヒトＰＢＭＣ細胞においてＰＤ－１により媒介されるＴＮＦα及びＩＬ－６の分泌を増強する能力について試験した。がん患者由来のヒトＰＢＭＣ細胞を、基本的に実施例５に記載されたように培養し、示されるように１μｇ／ｍＬで抗ＰＤ－１抗体も投与されたウェルを追加した。アッセイによる上澄みを、Ｈｕｍａｎ ＣＢＡ Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７ Ｋｉｔ（ＢＤ、５６０４８４）を使用してＴＮＦα及びＩＬ－６について解析した。図５Ａ及び５Ｂに示すように、抗ＩＬ－２７抗体は、プ－ルされたヒトＰＢＭＣ細胞においてＰＤ－１により媒介されるＴＮＦα及びＩＬ－６の分泌を増強する。
本明細書におけるこの手法は、ＳＲＦ３８８単独療法及び抗ＰＤ－１との組み合わせのヒトＰＢＭＣにおけるサイトカイン誘導活性も示す。ＩＬ－２７は、幾つかの炎症性サイトカインの発現を負に調節することが知られている。ＩＬ－２７遮断のサイトカイン産生に対する効果を決定するために、健常なドナ－、ＲＣＣを有する患者、及び卵巣癌を有する患者由来のヒトＰＢＭＣを、ＳＲＦ３８８の存在下または非存在下で抗ＣＤ３で数日間活性化し、ＩＬ－１７、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ－６が含まれる分泌されたサイトカインのレベルについて試験した。要約すると、４人の健常なドナ－、５人のＲＣＣを有する患者、及び２人の卵巣癌を有する患者由来の新鮮な全血から単離されたＰＢＭＣを、ＳＲＦ３８８（１μｇ／ｍＬ）、抗ＰＤ１（ペムブロリズマブ、１μｇ／ｍＬ）、または両方の抗体の非存在下または存在下で０．２５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体で活性化した。５日後に、上澄みを採取し、ＴＮＦα（Ａ）またはＩＦＮγ（Ｂ）のレベルについてＭＳＤまたはＣＢＡにより試験した。示されるデ－タは、抗ＣＤ３による刺激のみと比較したサイトカイン産生の倍率変化を示す。統計量を対応のあるｔ検定により計算した（＊ｐ＜０．００５）。
抗ＰＤ－１抗体をこれらのアッセイにおいて対照として使用し、ＰＤ－１及びＩＬ－２７遮断の組み合わせも図５Ｃに示すように調べた。ＳＲＦ３８８処置は、試験された１１人のＰＢＭＣ試料のうちの６人において、ＴＮＦα産生の増加（＞２倍の増加により決定される）をもたらし、これには４人の健常なドナ－のうちの２人、５人のＲＣＣ患者のうちの３人、及び２人の卵巣癌を有する患者のうちの１人が含まれた。ドナ－のサブセットで試験した場合、この活性は用量依存的ＳＲＦ３８８であった（デ－タ非表示）。抗ＰＤ－１（ペムブロリズマブ）処置は、試験された１１人のドナ－のうちの２人（５人のＲＣＣのうちの１人及び２人の卵巣癌のうちの１人）においてＴＮＦαの増加を示したが、ＳＲＦ３８８及び抗ＰＤ－１の組み合わせは１１人のドナ－のうちの１０人における増加をもたらした。併用療法条件において観察されたＴＮＦαの増加は、１０人の反応者のうちの８人において相加的であるように見えた。ＩＦＮγ産生に対する相加効果は、ＳＲＦ３８８及び抗ＰＤ－１による処置後にこれらの培養物で観察された（１１人のドナ－のうちの１０人）が、抗ＰＤ－１処置のみに対する反応は、ＳＲＦ３８８（１１人のドナ－のうちの２人）と比較してより頻繁に見られた（１１人のドナ－のうちの１０人）。総合すると、これらのデ－タは、ＳＲＦ３８８が健常なドナ－及びがんを有する患者由来の活性化ＰＢＭＣ培養物においてＴＮＦαレベルを増加させること、及びＳＲＦ３８８処置及び抗ＰＤ－１処置の組み合わせが、いずれかの処置のみと比較して高レベルのＴＮＦα及びＩＦＮγをもたらすことを示唆する。
ＩＬ－２７及びＰＤ－１遮断の役割を更に調査するために、同じ活性化ＰＢＭＣ培養システムを使用して、ＩＬ－２７がＰＤ－１遮断により引き起こされるサイトカイン産生の増加効果を直接的に相殺することができるかどうかを決定した。要約すると、ヒト全血から新たに単離されたＰＢＭＣを０．２５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体により活性化した。細胞を対照ＩｇＧ１（１μｇ／ｍＬ）、αＰＤ－１抗体（ペムブロリズマブ、１μｇ／ｍＬ）のみ、ｒｈＩＬ－２７（２５ｎｇ／ｍＬ）＋αＰＤ－１、またはｒｈＩＬ－２７＋αＰＤ－１とＳＲＦ３８８（１μｇ／ｍＬ）のいずれかにより、３７℃で５日間処置した。上澄みをＣＢＡ検出のために採取した。４人の健常なドナ－由来の例示的なサイトカイン（ＩＬ－１７Ａ及びＩＦＮγ）を対照に対する倍率変化として示した。平均及び標準偏差を示した。統計量を対応のあるｔ検定により計算した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。ＲＣＣ患者由来のＰＢＭＣにおいても同様の結果が観察された。図５Ｄに示すように、ＰＤ－１遮断はこれらの培養物においてＩＬ－１７及びＩＦＮγを増加させ、ＩＬ－２７はこの活性を完全に阻害することができ、ＳＲＦ３８８の存在下でこの反応は逆転された。これらのデ－タは、ＩＬ－２７が抗ＰＤ－１処置のサイトカイン産生に対する効果を減弱できることを示す。
従って、ＩＬ－２７は、活性ヒトＰＢＭＣにおいて抗ＰＤ－１により媒介される炎症性サイトカイン産生を阻害することが示された。この特性はＳＲＦ３８８により遮断された。更に、ＰＤ－１遮断と組み合わせたＳＲＦ３８８は、健常なドナ－及びＲＣＣを有する患者由来の活性化ＰＢＭＣにおいてサイトカイン産生の増加をもたらした。従って、ＩＬ－２７を遮断することによりＳＲＦ３８８は、免疫調節受容体発現を変化させ、炎症性サイトカイン産生を増加させることによる免疫細胞活性化を増強する。
個々の抗ＩＬ－２７抗体の更なる特徴付けにおいて、抗ＩＬ－２７抗体（ここではＳＲＦ３８８）、αＰＤ－１抗体、または抗ＩＬ－２７及びαＰＤ－１抗体組み合わせの存在下でのサイトカイン誘導／分泌の更なる特徴付けを実行した（特にＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ－６、及びＩＬ－１７Ａについての図５Ｅ）。ＩＬ－２７により媒介される多数のシグナル伝達効果における、ＳＲＦ４０５、ＳＲＦ４１０、ＳＲＦ４１１、ＳＲＦ４１４、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、及びＡｂ７抗体に対するインビトロ用量反応曲線も得た（図５Ｆ～５Ｋ：図５Ｆは、漸増する濃度の抗ＩＬ－２７抗体でのＵ９３７（リンパ腫）細胞におけるｐＳＴＡＴ１シグナルの阻害を示し；図５Ｇは、漸増する濃度の抗ＩＬ－２７抗体でのＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）におけるｐＳＴＡＴ１シグナルの阻害を示し；図５Ｈは、漸増する濃度の抗ＩＬ－２７抗体でのＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）におけるＣＤ１６１シグナルに対する異なる効果を示し；図５Ｉは、漸増する濃度の抗ＩＬ－２７抗体でのＣＤ４ Ｔリンパ球（ＣＤ４細胞）におけるＰＤ－Ｌ１シグナルに対する異なる効果を示し；図５Ｊは、漸増する濃度の抗ＩＬ－２７抗体での単球におけるＰＤ－Ｌ１シグナルに対する異なる効果を示し；図５Ｋは、漸増する濃度の抗ＩＬ－２７抗体での単球におけるＴＩＭ－３シグナルに対する異なる程度の阻害効果を示す）。
実施例７：ＩＬ－２７により媒介されるＰＤ－Ｌ１及びＴＩＭ３発現の抗ＩＬ－２７抗体による阻害
実施例１及び２に記載された抗ＩＬ－２７抗体を、プ－ルされたヒト単球においてＩＬ－２７により媒介されるＰＤ－Ｌ１及びＴＩＭ－３発現を阻害する能力について、フロ－サイトメトリ－により試験した。
新鮮な単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ＃１５０６８）を使用してヒトバフィ－コ－トから単離した。
５日間のアッセイにおける蒸発の効果を最小限にするために、外壁の使用を避けた。アウタ－ウェルは、１ウェル当たり２００μＬのＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、１４１９０－１４４）で満たされるべきである。
単球を、１ｍＬ当たり２，０００，０００個の細胞密度で暖かい完全ＲＰＭＩ－１６４０中に再懸濁した。１ウェル当たり１００μＬのこの細胞混合物（１ウェル当たり２００，０００個の細胞）を丸底９６ウェルプレ－ト（Ｃｏｓｔａｒ、３７９９）にプレ－ティングした。
抗ＩＬ－２７抗体を、９６ウェルポリプロピレンプレ－トの１列目において完全ＲＰＭＩ－１６４０中に４０μｇ／ｍｌの最高濃度に希釈した（１０μｇ／ｍｌの最終濃度）。プレ－トの最初の１０列の残りで系列希釈を所望される通りに（１：２、１：３など）行った。５０μＬの抗体貯蔵液（４ｘ）を、丸底プレ－トのＰＢＭＣ細胞のプレ－トの最初の１０列に添加した。１１及び１２列目には、１２５０μＬの完全ＲＰＭＩ－１６４０を添加した。
抗ＩＬ－２７抗体の添加後、完全ＲＰＭＩ－１６４０中に希釈された５０μＬの８０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、２５２６－ＩＬ）を、２０ｎｇ／ｍｌの最終濃度となるように各ウェルに添加した（無血清培地または抗体のみを含んだ対照ウェルを除く）。１００μＬの無血清ＲＰＭＩ－１６４０を対照ウェルに添加した。干渉を最小限に抑えてプレ－トを３７℃で３日間インキュベ－トした。
３日間のインキュベ－ション後、プレ－トをインキュベ－タ－から取り出し、プレ－トシェ－カ－上で６００ＲＰＭにて３０秒間撹拌した。プレ－トを１８００ＲＰＭで５分間遠心分離した。培地をフリッキングにより廃棄し、プレ－トを１５０μＬのＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、１４１９０－１４４）で洗浄した。洗浄ステップを２回繰り返した。細胞ペレットを１ウェル当たり５０μＬの以下の表９に記載される染色カクテルで染色した。
Figure 2022514499000066
プレ－トをプレ－トシェ－カ－上で６００ＲＰＭにて３０秒間撹拌し、プレ－トを暗下で４℃にて３０分間インキュベ－トした。
３０分のインキュベ－ション後、プレ－トを遠心分離し、上澄みをフリッキングにより廃棄した。プレ－トを上記のように２回洗浄した。最後の洗浄後、５０μＬの脱イオン（ＤＩ）水中４％のＰＦＡ（Ｐｉｅｒｃｅ、２８９０６）を添加することにより、細胞ペレットを室温で１０分間固定した。１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液を各ウェルに添加し、プレ－トを１８００ＲＰＭで５分間遠心分離した。細胞を１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、フロ－サイトメトリ－により解析した。
図６Ａ、６Ｂ、及び６Ｃに示すように、抗ＩＬ－２７抗体は、プ－ルされたヒト単球においてＰＤ－Ｌ１及びＴＩＭ３のＩＬ－２７により媒介される発現を強力に阻害する。
抗ＩＬ－２７抗体を、休止（不活性化）Ｔ細胞においてＩＬ－２７により媒介されるＰＤ－Ｌ１の発現を阻害する能力について、基本的に図６Ａ、６Ｂ、及び６Ｃについて記載されているように更に試験した。休止Ｔ細胞を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ＃１５０６１）を使用してヒトバフィ－コ－トから単離した。
アッセイの終了時に、細胞ペレットを１ウェル当たり５０μＬの以下の表１０に記載される染色カクテルで染色した。
Figure 2022514499000067
プレ－トをプレ－トシェ－カ－上で６００ＲＰＭにて３０秒間撹拌し、プレ－トを暗下で４℃にて３０分間インキュベ－トした。
３０分のインキュベ－ション後、プレ－トを遠心分離し、上澄みをフリッキングにより廃棄した。プレ－トを上記のように２回洗浄した。最後の洗浄後、５０μＬのＤＩ水中４％のＰＦＡ（Ｐｉｅｒｃｅ、２８９０６）を添加することにより、細胞ペレットを室温で１０分間固定した。１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液を各ウェルに添加し、プレ－トを１８００ＲＰＭで５分間遠心分離した。細胞を１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、フロ－サイトメトリ－により読み取った。図６Ｄに示すように、抗ＩＬ－２７抗体は、プ－ルされたヒト休止Ｔ細胞においてＩＬ－２７により媒介されるＰＤ－Ｌ１の発現を強力に阻害する。
実施例８：播種性Ｂ１６Ｆ１０黒色腫モデルにおける抗ＩＬ－２７抗体のインビボ有効性
臨床候補であるＳＲＦ３８８を使用してＩＬ－２７遮断の抗腫瘍活性を評価するために、黒色腫肺転移モデルを使用した。播種性Ｂ１６Ｆ１０肺転移の成長は、ＥＢＩ３及びＩｌ２７ｒａ（Ｗｓｘ－１）欠損マウスにおいて顕著に低減されていることが知られている（Ｓａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８１：６１４８－６１５７）。肺結節サイズ及び成長動態は転移したＢ１６Ｆ１０細胞の数に依存し、可変的かつ急速に進行し得るため、抗ＰＤ－１及び抗ＣＴＬＡ－４の組み合わせを治療活性のベンチマ－クとして研究した。ＳＲＦ３８８による前処置は、全腫瘍負荷の顕著な低減をもたらした。インビボでの抗ＩＬ－２７抗体の抗腫瘍効力を評価するために、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍モデルにおける腫瘍成長に対するＡｂ１４の効果を評価した。
要約すると、６～８週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝１０／群）に、２００μＬのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の２．５×１０５のＢ１６Ｆ１０細胞または１×１０５のＢ１６－Ｌｕｃ細胞のいずれかを尾静脈を介して静脈内（ｉ．ｖ．）接種した。動物に、ＳＲＦ３８８（１ｍｇ用量）（Ｗｕｘｉ；ロット２１０８ＳＤ１７０３１６Ｋ０１Ｘ０１Ｉ０１）またはポリクロ－ナルヒトＩｇＧアイソタイプ対照（１ｍｇ用量）（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ；ＢＥ００９２；ロット６５８４１７Ｄ１）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注入した。抗体を、腫瘍注入の７日前に開始して１週間に１回投与し、合計４回（－７日目、０日目、７日目、及び１４日目）投与した。肺転移の目視計数のために、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍マウスを腫瘍細胞注入の１８日後にＣＯ２窒息により安楽死させ、肺を心臓穿刺によりＰＢＳで潅流し、取り出し、１０％の中性緩衝ホルマリンで２４時間固定した。次いで、固定した肺を７０％のエタノ－ルに移し、肺表面転移を目視で計数した。免疫組織化学分析のために、ホルマリン固定した肺（ｎ＝５／群）をパラフィン包埋し、薄切し、各切片における総組織面積のうちの百分率としての総腫瘍面積の定量化のためにヘマトキシリン・エオジンで染色した。肺転移のインビボ腫瘍イメ－ジングのために、Ｂ１６－Ｌｕｃ腫瘍動物に、２００μｌのＰＢＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ）中３ｍｇのＶｉｖｏＧｌｏ Ｄ－ルシフェリンを尾静脈を介して週２回静脈内注入した。ルシフェリン注入の５分後、動物に麻酔下をかけ、生物発光イメ－ジングをＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＬＴ Ｓｅｒｉｅｓ ＩＩＩイメ－ジャ－を使用して実行した。画像をＬｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ（バ－ジョン４．５．５）ソフトウェアを使用して解析し、光子／秒での全光束測定値として示した。
図７Ａ～７Ｄに示すように、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍マウスの抗ＩＬ－２７抗体ＳＲＦ３８８による処置は、肺表面転移の総カウント数（肺結節の数、図７Ａ）及び免疫組織染色（ＩＨＣ）分析による肺組織切片における腫瘍領域の低減（図７Ｃ及び図７Ｄ）の両方により測定されるように、全腫瘍負荷の顕著な低減をもたらした。ＳＲＦ３８８によるｐ２８の遮断は、アイソタイプ対照処置と比較してＢ１６肺結節数の４２％の低減をもたらした。ＳＲＦ３８８処置は、アイソタイプ対照と比較してＢ１６Ｆ１０肺転移の成長を有意に阻害した（ｐ＝０．００７９）（それぞれ３７．６±１０．９に対する２１．６±８．４の肺結節）。ＳＲＦ３８８処置は、ＩＨＣにより測定される肺腫瘍全転移領域の８３％の低減をもたらした（アイソタイプ対照群における１６．４３±１．３９％対ＳＲＦ３８８処置群における２．８３±１．４５％）。同様に、生物発光イメ－ジングは、ＳＲＦ３８８処置がＢ１６－Ｌｕｃ肺転移の成長を有意に（ｐ＝０．００６２）遅延させたことを明らかにした（図７Ｂ）。図７Ｄに示すように、肺表面転移の数及び腫瘍総面積の同程度の減少が、抗ＩＬ－２７ＲＡ（ＷＳＸ－１）抗体により媒介される遮断により、及び抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４併用療法により観察された。これらのデ－タは、抗ＰＤ－１及び抗ＣＴＬＡ－４のベンチマ－ク組み合わせが抗腫瘍活性を実証した２つの独立した実験によるものである。Ｂ１６Ｆ１０細胞（２．５×１０５）を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝１０／群）に静脈内注入した。１ｍｇのＳＲＦ３８８、抗ＩＬ－２７ＲＡ（ＷＳＸ－１）、またはヒトＩｇＧアイソタイプ対照抗体（－７日目、０日目、７日目、１４日目）のいずれかをマウスにＩＰ投与した。何匹かの動物に抗ＰＤ－１及び抗ＣＴＬＡ－４（０日目、４日目、７日目、及び１１日目）をＩＰ投与した。Ｂ１６Ｆ１０肺転移を有する動物（ｎ＝５／群）から肺を採取し、上記のように処理し、薄切し、Ｈ＆Ｅで染色した。処置された動物からのＨ＆Ｅで染色された肺切片において、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍組織を正常な肺組織と線引きした（図７Ａ）。腫瘍面積を全肺面積のうちの百分率として計算した（図７Ｄ）。統計量をｔ検定により計算した。まとめると、これらのデ－タは、ＳＲＦ３８８が、腫瘍モデルにおけるＩｌ２７ｒａ（ＷＳＸ－１）及びＥＢＩ３欠損の表現型を模写することができ、ＰＤ－１及びＣＴＬＡ－４の遮断の組み合わせと同程度の活性を示すことを示す。
これらのデ－タは、抗ＩＬ－２７抗体（ＳＲＦ３８８）による処置が抗腫瘍効果をもたらし、ＩＬ－２７に結合しないアイソタイプ対照抗体による処置と比べて大きな程度で腫瘍成長及び転移の両方を低減することを実証する。
実施例９：ヒトＩＬ－２７ミニサ－クルをハイドロダイナミック形質移入されたマウス由来のマウス脾細胞の遺伝子発現プロファイリング
インビボでのＩＬ－２７のＴ細胞表現型に対する効果を調べるために、ＩＬ－２７をコ－ドするＤＮＡミニサ－クルを使用して、マウスでＩＬ－２７を過剰発現させ、Ｔ細胞の反応をＲＮＡ－Ｓｅｑ及びフロ－サイトメトリ－により評価した。ヒトＩＬ－２７は、種間交差反応性であることが知られており、マウス脾細胞においてインビトロでｐＳＴＡＴ１シグナル伝達及びＰＤ Ｌ１を誘導することができる。この種間交差反応性を利用して、マウスにおけるヒトＩＬ－２７過剰発現及びＳＲＦ３８８によるその阻害の効果を研究した。これを行うために、ヒトＩＬ－２７（グリシン－セリンリンカ－によりＥＢＩ３に係留されたｐ２８）をコ－ドするＤＮＡプラスミドミニサ－クルが、以下に記載するようにハイドロダイナミック形質移入によりマウスに投与され、これは全身での高レベルのＩＬ－２７をもたらした。
ヒトＩＬ－２７ミニサ－クルのハイドロダイナミック形質移入
６週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに、２ｍＬの０．９％生理食塩水中の２０μｇの空ベクタ－または連結されたヒトＩＬ－２７のミニサ－クルＤＮＡ（Ｓｙｓｔｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）のいずれかを尾静脈を介して５秒にわたって注入した。注入された動物を温熱パッドを備えた空のケ－ジに移して、５分間回復させた。ミニサ－クル注入の２４時間後に血漿分離のために全血をＫ２－ＥＤＴＡチュ－ブに採取し、血漿ＩＬ－２７レベルをＥＬＩＳＡにより確認した。ＰＢＭＣ及び全脾細胞を形質移入の５日後に採取し、細胞を染色し、フロ－サイトメトリ－により解析した。ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞に関して、示されるマ－カ－の発現を解析した。解析をＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して実行した。
遺伝子発現プロファイリング
マウス脾細胞を、脾臓全体の物理的解離、その後のＡＣＫによる赤血球溶解により調製した。全ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ（登録商標） Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号：７４１０４）により脾細胞から抽出し、ヌクレア－ゼ非含有水（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号：１９１０１）中２０ｎｇ／ｕｌに調整した。遺伝子発現プロファイリングを、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ（商標） Ｍｏｕｓｅ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙｓで実行した（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号：９０２１１８）。ＲＮＡ試料の処理、ハイブリダイゼ－ション、及びアレイスキャニングを、Ｂｏｓｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＢＵＭＳＲ）の標準的なＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ（商標）プロトコ－ルを使用して実施した。全てのＣＥＬファイルをロバストマルチアレイ平均（ＲＭＡ）法により正規化し（Ｉｒｉｚａｒｒｙ ｅｔ ａｌ．，２００３）、発現していないプロ－ブを除去することにより遺伝子発現デ－タを前処理し、反復間で高い変動係数を有する転写物を廃棄した。その後の解析（平均発現、倍率変化、ｔ検定）をＲで実行した。
フロ－サイトメトリ－解析
全血及び脾臓をミニサ－クル注入の５日後にマウスから採取した。脾細胞を形質移入の５日後にＩＬ２７を発現するマウスから採取し、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｍｏｕｓｅ Ｇｅｎｅ ２．０ ＳＴ Ａｒｒａｙにより解析した。脾細胞の単一細胞懸濁液を、４０μｍナイロン製セルストレ－ナ－を通した物理的解離、その後のＡＣＫバッファ中での赤血球溶解により調製した。全血細胞を直接染色し、その後、製造者の使用説明書（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）に従ってＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ中で赤血球溶解及び固定を行った。細胞を２％のＦＢＳ及び２ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳ中でラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２ ｍＡｂ（百万個の細胞当たり１μｇ；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）とプレインキュベ－トすることによりＦｃγＲＩＩＩ／ＩＩを遮断した。細胞を、マウスＣＤ４（クロ－ンＧＫ１．５）、ＣＤ８（５３－６．７）、ＰＤ－Ｌ１（１０Ｆ．９Ｇ２）、ＴＩＭ３（ＲＭＴ３－２３）、ＬＡＧ３（Ｃ９Ｂ７Ｗ）、及びＴＩＧＩＴ（１Ｇ９）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対するＡＰＣコンジュゲ－トｍＡｂ、ＰＥコンジュゲ－トｍＡｂ、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ５１０コンジュゲ－トｍＡｂ、及びＢｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ７１１コンジュゲ－トｍＡｂで染色した。細胞に結合した蛍光をＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０フロ－サイトメ－タ－（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定し、解析をＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を使用して実行した。
統計解析
示されるように、対応のある、対応のない、または比のスチュ－デントｔ検定を使用した統計的有意性をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して決定した。比のｔ検定が使用された場合、ゼロ値に０．１を加算して、それらをゼロ以外にした。０．０５未満のｐ値を有意とみなした。
ＩＬ－２７は、インビボでＴ細胞による抑制性受容体発現を促進する
図８Ａに示すように、４００個超の遺伝子がＩＬ－２７の投与に反応して≧１．０倍変化した。これらの遺伝子のサブセットを表１１に示す。これらの遺伝子の間には、免疫反応において重要な役割を果たす免疫抑制性受容体をコ－ドするものがあった。図８Ｂに示すように、脾細胞においてＬｙ６ａ（Ｓｃａ－１をコ－ドする）、Ｌａｇ３、Ｔｉｇｉｔ、及びＩｌ１０がＩＬ－２７に反応して上方調節された。ＩＬ－２７により媒介されるＣｔｌａ４及びＣｄ２７４（ＰＤ－Ｌ１をコ－ドする）の上方調節の傾向もあり、これは１倍未満の誘導であった（デ－タ非表示）。発現デ－タを確認するために、フロ－サイトメトリ－を利用して、これらのマウス由来のＴ細胞におけるＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、及びＴＩＭ－３のタンパク質発現を評価した。ＩＬ－２７ミニサ－クルの投与は、脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞（脾臓）及び末梢血ＣＤ４＋Ｔ細胞（ＰＢＭＣ）におけるＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、及びＴＩＧＩＴの上方調節をもたらした。ＣＤ８＋Ｔ細胞において、ＩＬ－２７ミニサ－クルは、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、及びＴＩＭ－３を上方調節した。図８Ｃに示すように、ＩＬ－２７ミニサ－クルの投与は、脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞及び末梢血ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＰＤ－Ｌ１、Ｌａｇ－３、及びＴｉｇｉｔの上方調節をもたらした。ＣＤ８＋Ｔ細胞において、ＩＬ－２７ミニサ－クルは、ＰＤ－Ｌ１、Ｌａｇ－３、Ｔｉｇｉｔ、及びＴｉｍ－３を上方調節した。これらのデ－タは、ＩＬ－２７がインビボで免疫調節受容体の発現の駆動において重要な役割を果たし得ることを示唆する。
インビボでミニサ－クルにより誘導されるヒトＩＬ－２７を遮断するＳＲＦ３８８の能力を調査するために、脾細胞における酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）による標的結合及び免疫調節受容体発現の両方を研究した。ＩＬ－２７形質移入及びＳＲＦ３８８（５０ｍｇ／ｋｇ）による処置の５日後に、血漿をマウスから採取して、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）によりＩＬ－２７ヘテロ二量体及びＥＢＩ３レベルを解析した。ＩＬ－２７ヘテロ二量体アッセイは、ＳＲＦ３８８及びヒト特異的ＥＢＩ３検出用抗体を交差遮断するｐ２８捕捉抗体を利用する。従って、ＳＲＦ３８８がＩＬ－２７に結合している場合、その検出はマスクされる。ＥＢＩ３アッセイは、ヒトＥＢＩ３の２つの異なるエピト－プに特異的な捕捉抗体及び検出用抗体の両方を利用し、ミニサ－クルにより誘導されるＩＬ－２７が係留されたヘテロ二量体であるため、このアッセイは、ＳＲＦ３８８結合にかかわらずＩＬ２７総量を検出することを可能にする。
要約すると、６週齢の雌のＢａｌｂ／ｃマウスに空ベクタ－（対照）またはヒトＩＬ－２７を注入した。ミニサ－クル形質移入の７日前及びミニサ－クル形質移入の日（－７日目及び０日目）に、マウスに１ｍｇのＳＲＦ３８８または抗ＤＮＰ ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を投与した。全血を採取し、血漿をＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ ＤｉｓｃｏｖｅｒｙによりＩＬ－２７（図８Ｄ）について解析した。図８Ｄは、ＳＲＦ３８８処置が血漿においてＭＳＤによるＩＬ－２７検出を完全に阻害することを示す。２５ｍｇ／ｋｇの用量のＳＲＦ３８８が試験された場合に、同様のデ－タが観察された。これらのデ－タは、２５ｍｇ／ｋｇ以上の用量のＳＲＦ３８８がインビボでミニサ－クルにより誘導されるＩＬ－２７を完全に飽和させることができることを示唆する。この完全な標的結合は、ｐＳＴＡＴ１機能アッセイでも確認された。
インビボでＩＬ－２７活性を遮断するＳＲＦ３８８の能力を評価するために、マウスＰＢＭＣ及び脾細胞におけるＰＤ Ｌ１、Ｔｉｍ－３、Ｌａｇ－３、及びＴｉｇｉｔの発現をフロ－サイトメトリ－により解析した。ＳＲＦ３８８は、ＣＤ４＋ＰＢＭＣにおけるＩＬ２７により誘導されたＰＤ－Ｌ１及びＬａｇ３発現ならびにＣＤ８＋ＰＢＭＣにおけるＰＤ－Ｌ１、Ｔｉｍ－３、Ｌａｇ－３、及びＴｉｇｉｔ発現を顕著に遮断した。ＳＲＦ３８８処置は、ＣＤ４＋脾細胞におけるＩＬ２７により誘導されたＰＤ－Ｌ１、Ｌａｇ－３、及びＴｉｇｉｔ発現ならびにＣＤ８＋脾細胞におけるＰＤ－Ｌ１及びＬａｇ３発現も遮断した。これらのデ－タは、ＳＲＦ３８８がインビボでのヒトＩＬ－２７への結合及びヒトＩＬ－２７遮断の両方が可能であることを示唆する。
これらの結果は、インビボでのＩＬ－２７の異所性発現がＴ細胞における複数の抑制性受容体及び脾細胞における免疫調節活性を有する他の幾つかの分子の上方調節をもたらすことを実証する。これらのデ－タは、（例えば、抗ＩＬ－２７抗体での処置による）ＩＬ－２７拮抗作用がＴ細胞における抑制性受容体の発現を減少させ、これにより、免疫反応を増強することを示唆する。
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実施例１０：ＳＲＦ３８８の結合特性及びＩＬ－２７受容体の遮断
０～５．０μｇ／ｍＬの濃度範囲の組換えヒトＩＬ－２７の１μｇ／ｍＬ濃度のＳＲＦ３８８との会合及び解離を測定した。最終的な結合動態パラメ－タ－を、モデルのデ－タへの良好なフィッティングを示す結合モデルフィッティングパラメ－タ－（Ｒ２及びχ２）と共に表１４に示す。
ヒトＩＬ－２７は、この研究において試験された全ての種のうちＳＲＦ３８８に対する最も強い結合親和性を示した（３．８６ｐＭ）。ラット及びカニクイザルの組換えＩＬ－２７もＳＲＦ３８８に対する強い親和性を示し、それぞれ８０．９及び３７．４ｐＭの値であったが、ヒトタンパク質と比べて幾分弱かった。組換えマウスＩＬ－２７は、そのより遅い会合速度及びより速い解離速度により示されるように、ヒトタンパク質と比較してＳＲＦ３８８に対する最も弱い親和性を有し、ｎＭ範囲の値（４．４３ｎＭ）であった。
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実施例１１：ＣＤＲ配列アラインメント
本開示の抗ＩＬ－２７抗体のうちの多数の部分選択は、それらのＣＤＲ領域わたる配列相同性を共有し、機能を保持することが確認されたバリアントＣＤＲ配列の多様性を提供する。以下のコンセンサスＣＤＲ配列が本開示によって完全に支持され、従って、本開示の範囲内であることが本明細書において明示的に意図される。
ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、及びＳＲＦ５２９抗体について、これら抗ＩＬ－２７抗体の各々のＣＤＲ配列のアラインメントは、可変残基により中断される広範囲の相同性を明らかにした。特に、重鎖ＣＤＲ１アラインメントは、以下の可変残基を明らかにした：
ＨＣＤＲ１（ＩＭＧＴ）
ＣＬＵＳＴＡＬ Ｏ（１．２．４）多重配列アラインメント
１ ＧＦＴＦＲＳＹＧ ８ （配列番号１６１）
５ ＧＦＴＦＲＳＹＧ ８ （配列番号７３）
４ ＧＦＴＦＡＳＹＧ ８ （配列番号１３９）
２ ＧＦＴＦＳＲＴＧ ８ （配列番号９５）
３ ＧＦＴＦＳＲＹＧ ８ （配列番号１１７）
６ ＧＦＴＦＳＳＹＳ ８ （配列番号５１）
＊＊＊＊
従って、これらの相同抗体のコンセンサス重鎖ＣＤＲ１（ＩＭＧＴ）配列は、Ｎ－ＧＦＴＦ［Ｓ／Ａ／Ｒ］［Ｓ／Ｒ］［Ｔ／Ｙ］［Ｇ／Ｓ］－Ｃ（配列番号４１２）であり、従って、より普遍的には、コンセンサス重鎖ＣＤＲ１（ＩＭＧＴ）配列は、Ｎ－ＧＦＴＦＸＸＸＸ－Ｃ（配列番号４０８）であることが本明細書において意図され、ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基である。
ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、及びＳＲＦ５２９抗体の重鎖ＣＤＲ２（ＩＭＧＴ）配列のアラインメントは、以下を明らかにした：
ＨＣＤＲ２（ＩＭＧＴ）
ＣＬＵＳＴＡＬ Ｏ（１．２．４）多重配列アラインメント
１０ ＩＳＳＳＧＳＹＩ ８ （配列番号１６２）
１１ ＩＳＳＳＳＳＹＩ ８ （配列番号１４０）
７ ＩＳＳＳＳＳＹＩ ８ （配列番号７４）
９ ＩＳＳＳＳＳＹＩ ８ （配列番号９６）
８ ＩＳＳＳＳＡＹＩ ８ （配列番号１１８）
１２ ＩＳＳＳＳＳＹＩ ８ （配列番号５２）
＊＊＊＊．：＊＊
従って、これらの相同抗体のコンセンサス重鎖ＣＤＲ２（ＩＭＧＴ）配列は、Ｎ－ＩＳＳＳ［Ｓ／Ｇ］［Ｓ／Ａ］ＹＩ－Ｃ（配列番号４１３）であり、従って、より普遍的には、コンセンサス重鎖ＣＤＲ２（ＩＭＧＴ）配列は、Ｎ－ＩＳＳＳＸＸＹＩ－Ｃ（配列番号４０９）であることが本明細書において意図され、ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基である。
ヒトＣＤＲ１（ＮＴ）及びヒトＣＤＲ２（ＮＴ）配列のアラインメントは、以下も明らかにした：
ＨＣＤＲ１（ＮＴ）
ＣＬＵＳＴＡＬ Ｏ（１．２．４）多重配列アラインメント
１３ ＦＴＦＲＳＹＧＭＮ ９ （配列番号７６）
１６ ＦＴＦＲＳＹＧＭＮ ９ （配列番号１６４）
１７ ＦＴＦＡＳＹＧＭＮ ９ （配列番号１４２）
１４ ＦＴＦＳＲＴＧＭＮ ９ （配列番号９８）
１５ ＦＴＦＳＲＹＧＭＮ ９ （配列番号１２０）
１８ ＦＴＦＳＳＹＳＭＮ ９ （配列番号５４）
＊＊＊＊＊＊

ＨＣＤＲ２（ＮＴ）
ＣＬＵＳＴＡＬ Ｏ（１．２．４）多重配列アラインメント
２３ ＧＩＳＳＳＧＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧ １７ （配列番号１６５）
１９ ＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧ １７ （配列番号７７）
２０ ＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧ １７ （配列番号９９）
２２ ＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧ １７ （配列番号１４３）
２１ ＳＩＳＳＳＳＡＹＩＬＹＡＤＳＶＫＧ １７ （配列番号１２１）
２４ ＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧ １７ （配列番号５５）
．＊＊＊＊．：＊＊＊＊＊＊＊＊＊
従って、これらの相同抗体のコンセンサス重鎖ＣＤＲ１（ＮＴ）及びＣＤＲ２（ＮＴ）配列は、それぞれ、Ｎ－ＦＴＦ［Ｓ／Ａ／Ｒ］［Ｓ／Ｒ］［Ｔ／Ｙ］［Ｇ／Ｓ］ＭＮＣ（配列番号４１４）及びＮ－［Ｇ／Ｓ］ＩＳＳＳ［Ｓ／Ｇ］［Ｓ／Ａ］ＹＩ［Ｌ／Ｙ］ＹＡＤＳＶＫＧ－Ｃ（配列番号４１５）である。これらのコンセンサス配列を考慮して、より普遍的に、それぞれ、Ｎ－ＦＴＦＸＸＸＸＭＮ－Ｃ（配列番号４１０）及びＮ－ＸＩＳＳＳＸＸＹＩＸＹＡＤＳＶＫＧ－Ｃ（配列番号４１１）であるコンセンサス重鎖ＣＤＲ１（ＮＴ）及びＣＤＲ２（ＮＴ）配列が本明細書において意図され、ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基である。
重鎖ＣＤＲ３（ＩＭＧＴまたはＮＴ）ならびに軽鎖ＣＤＲのＣＤＲ１（ＩＭＧＴまたはＮＴ）、ＣＤＲ２（ＩＭＧＴまたはＮＴ）、及びＣＤＲ３（ＩＭＧＴまたはＮＴ）は、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、及びＳＲＦ５２９の間に完全に保存されていた。
ＳＲＦ５３５及びＳＲＦ５３８モノクロ－ナル抗体に対して実行された同様のＣＤＲ配列アラインメントは、これら２つの関連する抗体の以下のコンセンサスＣＤＲ配列を明らかにした：
観察された多様性（ＩＭＧＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＧＦＴＦＳＳＹＧ－Ｃ（配列番号３６１）
ＨＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－Ｉ［Ｋ／Ｗ］［Ｑ／Ｙ］ＤＧＳ［Ｅ／Ｎ］Ｋ－Ｃ（配列番号４４５）
ＨＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＡＲ［Ｄ／Ｇ］ＡＰ［ＷＤＩＹＤＹＹＭ／ＥＹＶ］ＤＶＣ（配列番号４４６）
ＬＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＳ［Ｉ／Ｖ］ＳＳＹ－Ｃ（配列番号４４７）
ＬＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－［Ａ／Ｄ］［Ａ／Ｓ］Ｓ－Ｃ（配列番号４４８）
ＬＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＱ［Ｓ／Ｙ］［Ｙ／Ｓ］［Ｖ／Ｌ］［Ｐ／Ｙ］、Ｐ［Ｗ／］Ｔ－Ｃ（配列番号４４９）

コンセンサス（ＩＭＧＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＧＦＴＦＳＳＹＧ－Ｃ（配列番号３６１）
ＨＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＩＸＸＤＧＳＸＫ－Ｃ（配列番号４３６）
ＨＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＡＲＸＡＰ［Ｘ］ｎ＝３－８ＤＶ－Ｃ（配列番号４３７）
ＬＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＳＸＳＳＹ－Ｃ（配列番号４３８）
ＬＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＸＸＳ－Ｃ（配列番号４３９）
ＬＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＱＸＸＸＸＰ［Ｘ］ｎ＝０－１Ｔ－Ｃ（配列番号４４０）

観察された多様性（ＮＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＦＴＦＳＳＹＧＭ［Ｓ／Ｈ］－Ｃ（配列番号４５０）
ＨＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－［Ｎ／Ｖ］Ｉ［Ｋ／Ｗ］［Ｑ／Ｙ］ＤＧＳ［Ｅ／Ｎ］ＫＹＹ［Ｖ／Ａ］ＤＳＶＫＧ－Ｃ（配列番号４５１）
ＨＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＡＲ［Ｄ／Ｇ］ＡＰ［ＷＤＩＹＤＹＹＭ／ＥＹＶ］ＤＶＣ（配列番号４４６）
ＬＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＲＡＳＱＳ［Ｉ／Ｖ］ＳＳＹＬ［Ｎ／Ａ］－Ｃ（配列番号４５２）
ＬＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－［ＡＡ／Ｄ］ＳＳ［ＬＱＳ／ＮＲＡＴ］－Ｃ（配列番号４５３）
ＬＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＱＱ［Ｓ／Ｙ］［Ｙ／Ｓ］［Ｖ／Ｌ］［ｐ／Ｙ］、Ｐ［Ｗ／］Ｔ－Ｃ（配列番号４４９）

コンセンサス（ＮＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＦＴＦＳＳＹＧＭＸ－Ｃ（配列番号４４１）
ＨＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－ＸＩＸＸＤＧＳＸＫＹＹＸＤＳＶＫＧ－Ｃ（配列番号４４２）
ＨＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＡＲＸＡＰ［Ｘ］ｎ＝３－８ＤＶ－Ｃ（配列番号４３７）
ＬＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＲＡＳＱＳＸＳＳＹＬＸ－Ｃ（配列番号４４３）
ＬＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－［Ｘ］ｎ＝１－２ＳＳ［Ｘ］ｎ＝３－４－Ｃ（配列番号４４４）
ＬＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＱＱＸＸＸＸＰ［Ｘ］ｎ＝０－１Ｔ－Ｃ（配列番号４４０）
ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ５３５、及びＳＲＦ５３８抗体の全部の間のＣＤＲ配列アラインメントも実行し、これは、以下の観察された多様性及びコンセンサス配列をもたらした：
観察された多様性（ＩＭＧＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＧＦＴＦ［Ｓ／Ａ／Ｒ］［Ｓ／Ｒ］［Ｔ／Ｙ］［Ｇ／Ｓ］－Ｃ（配列番号４５４）
ＨＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－Ｉ［Ｓ／Ｋ／Ｗ］［Ｓ／Ｑ／Ｙ］［Ｓ／Ｄ］［Ｓ／Ｇ］［Ｓ／Ａ］［Ｙ／Ｅ／Ｎ］［Ｉ／Ｋ］－Ｃ（配列番号４５５）
ＨＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＡＲ［ＤＧＧＲＴＳＹＴＡＴＡＨＮＷＦ／ＤＡＰＷＤＩＹＤＹＹＭ／ＧＡＰＥＹＶ］Ｄ［ｐ／Ｖ］－Ｃ（配列番号４５７）
ＬＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＳ［ＶＬＦ／Ｉ／Ｖ］ＳＳ［ＮＮＫＮ／］Ｙ－Ｃ（配列番号４５９）
ＬＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－［Ｗ／Ａ／Ｄ］［Ａ／Ｓ］Ｓ－Ｃ（配列番号４６１）
ＬＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＱ［Ｈ／Ｓ／Ｙ］［Ａ／Ｙ／Ｓ］［Ｓ／Ｖ／Ｌ］［Ａ／Ｐ／Ｙ］、Ｐ［Ｐ／Ｗ／］Ｔ－Ｃ（配列番号４６３）

コンセンサス（ＩＭＧＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＧＦＴＦＸＸＸＸ－Ｃ（配列番号４０８）
ＨＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＩＸＸＸＸＸＸＸ－Ｃ（配列番号４５６）
ＨＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＡＲ［Ｘ］ｎ＝６－１５ＤＸ－Ｃ（配列番号４５８）
ＬＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＳ［Ｘ］ｎ＝１－３ＳＳ［Ｘ］ｎ＝０－４Ｙ－Ｃ（配列番号４６０）
ＬＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＸＸＳ－Ｃ（配列番号４６２）
ＬＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＱＸＸＸＸＰ［Ｘ］ｎ＝０－１Ｔ－Ｃ（配列番号４６４）
観察された多様性（ＮＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＦＴＦ［Ｓ／Ａ／Ｒ］［Ｓ／Ｒ］［Ｔ／Ｙ］［Ｇ／Ｓ］Ｍ［Ｎ／Ｓ／Ｈ］－Ｃ（配列番号４６５）
ＨＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－［Ｇ／Ｓ／Ｎ／Ｖ］Ｉ［Ｓ／Ｋ／Ｗ］［Ｓ／Ｑ／Ｙ］［Ｓ／Ｄ］［Ｓ／Ｇ］［Ｓ／Ａ］［Ｙ／Ｅ／Ｎ］［Ｉ／Ｋ］［Ｌ／Ｙ］Ｙ［Ｖ／Ａ］ＤＳＶＫＧ－Ｃ（配列番号４６７）
ＨＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＡＲ［Ｄ／Ｇ］［ＧＧＲＴＳＹＴＡＴＡＨＮＷＦ／ＡＰＷＤＩＹＤＹＹＭ／ＡＰＥＹＶ］Ｄ［ｐ／Ｖ］－Ｃ（配列番号４６９）
ＬＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＲＡＳＱＳ［Ｉ／Ｖ］ＳＳＹＬ［Ｎ／Ａ］－Ｃ（配列番号４７１）
ＬＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－［ＷＡ／ＡＡ／Ｄ］Ｓ［ＴＲＥＳ／ＳＬＱＳ／ＳＮＲＡＴ］－Ｃ（配列番号４７３）
ＬＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＱＱ［Ｈ／Ｓ／Ｙ］［Ａ／Ｙ／Ｓ］［Ｓ／Ｖ／Ｌ］［Ａ／Ｐ／Ｙ］、Ｐ［Ｐ／Ｗ／］Ｔ－Ｃ（配列番号４７５）
コンセンサス（ＮＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＦＴＦＸＸＸＸＭＸ－Ｃ（配列番号４６６）
ＨＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－ＸＩＸＸＸＸＸＸＸＸＹＸＤＳＶＫＧ－Ｃ（配列番号４６８）
ＨＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＡＲ［Ｘ］ｎ＝６－１５ＤＸ－Ｃ（配列番号４７０）
ＬＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＲＡＳＱＳＸＳＳＹＬＸ－Ｃ（配列番号４７２）
ＬＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－［Ｘ］ｎ＝１－２Ｓ［Ｘ］ｎ＝４－５－Ｃ（配列番号４７４）
ＬＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＱＱＸＸＸＸＰ［Ｘ］ｎ＝０－１Ｔ－Ｃ（配列番号４７６）
ＳＲＦ５４３及びＳＲＦ４１４のアラインメントも実行され、以下の観察された多様性及びコンセンサス配列が得られた：
観察された多様性（ＩＭＧＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＧＧＳＦＳ［Ｒ／Ｄ］Ｙ［Ｅ／Ｙ］－Ｃ（配列番号４２６）
ＨＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＩＤ［Ｗ／Ｙ］ＳＧ［Ｉ／Ｓ］Ｔ－Ｃ（配列番号４２７）
ＨＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＡＲ［Ｄ／Ｌ］［Ｐ／Ｇ］［Ｍ／Ｖ］ＹＹ［－／Ｙ］ＤＳＳ［ＶＳＴＧＳＶ／ＤＬＧＦ］Ｄ［Ｖ／Ｉ］－Ｃ（配列番号４２８）
ＬＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－Ｑ［Ｓ／Ｄ］［Ｖ／Ｉ］Ｓ［Ｓ／Ｎ］Ｙ－Ｃ（配列番号４２９）
ＬＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－Ｄ［Ｓ／Ａ］Ｓ－Ｃ（配列番号４３０）
ＬＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＱ［Ｄ／Ｙ］［Ｓ／Ｄ］Ｄ［Ｈ／Ｌ］ＰＩＴ－Ｃ（配列番号４３１）

コンセンサス（ＩＭＧＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＧＧＳＦＳＸＹＸ－Ｃ（配列番号４１６）
ＨＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＩＤＸＳＧＸＴ－Ｃ（配列番号４１７）
ＨＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＡＲＸＸＸＹＹ［Ｘ］ｎ＝０－１ＤＳＳ［Ｘ］ｎ＝４－６ＤＸ－Ｃ（配列番号４１８）
ＬＣＤＲ１（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＸＸＳＸＹ－Ｃ（配列番号４１９）
ＬＣＤＲ２（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＤＸＳ－Ｃ（配列番号４２０）
ＬＣＤＲ３（ＩＭＧＴ） － Ｎ－ＱＱＸＸＤＸＰＩＴ－Ｃ（配列番号４２１）

観察された多様性（ＮＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＧＳＦＳ［Ｒ／Ｄ］Ｙ［Ｅ／Ｙ］ＷＳＣ（配列番号４３２）
ＨＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－ＳＩＤ［Ｗ／Ｙ］ＳＧ［Ｉ／Ｓ］Ｔ［Ｎ／Ｅ］ＹＮＰＳＬＫＳ－Ｃ（配列番号４３３）
ＨＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＡＲ［Ｄ／Ｌ］［Ｐ／Ｇ］［Ｍ／Ｖ］ＹＹ［－／Ｙ］ＤＳＳ［ＶＳＴＧＳＶ／ＤＬＧＦ］Ｄ［Ｖ／Ｉ］－Ｃ（配列番号４２８）
ＬＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－［Ｑ／Ｒ］ＡＳＱ［Ｓ／Ｄ］［Ｖ／Ｉ］Ｓ［Ｓ／Ｎ］ＹＬ［Ｎ／Ａ］－Ｃ（配列番号４３４）
ＬＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－Ｄ［Ｓ／Ａ］ＳＮ［Ｒ／Ｌ］［Ａ／Ｅ］Ｔ－Ｃ（配列番号４３５）
ＬＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＱＱ［Ｄ／Ｙ］［Ｓ／Ｄ］Ｄ［Ｈ／Ｌ］ＰＩＴ－Ｃ（配列番号４３１）

コンセンサス（ＮＴ）：
ＨＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＧＳＦＳＸＹＸＷＳ－Ｃ（配列番号４２２）
ＨＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－ＳＩＤＸＳＧＸＴＸＹＮＰＳＬＫＳ－Ｃ（配列番号４２３）
ＨＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＡＲＸＸＸＹＹ［Ｘ］ｎ＝０－１ＤＳＳ［Ｘ］ｎ＝４－６ＤＸ－Ｃ（配列番号４１８）
ＬＣＤＲ１（ＮＴ） － Ｎ－ＸＡＳＱＸＸＳＸＹＬＸ－Ｃ（配列番号４２４）
ＬＣＤＲ２（ＮＴ） － Ｎ－ＤＸＳＮＸＸＴ－Ｃ（配列番号４２５）
ＬＣＤＲ３（ＮＴ） － Ｎ－ＱＱＸＸＤＸＰＩＴ－Ｃ（配列番号４２１）
実施例１２：選択されたモノクロ－ナル抗体の特性
選択された本開示のモノクロ－ナル抗体を様々な機能特性について評価した。特定のかかる評価の結果を図９に表化する。特筆すべきことに、１５ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＩＬ－２７への結合（上記のように、ＢＩＡＣＯＲＥ ２０００機器での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術により測定）（「特性（ｉ）」）を示した、Ａｂ７、ＳＲＦ５５７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ４１４、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、ＳＲＦ４１０、ＳＲＦ４１１、ＳＲＦ４０５、ＳＲＦ５３５、及びＳＲＦ５３８が含まれる多様なモノクロ－ナル抗体が同定された。
予想外なことに、Ａｂ７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ４１４、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、ＳＲＦ５３５、及びＳＲＦ５３８を含む一連のモノクロ－ナル抗体は、ＷＳＸ－１競合的（「特性（ｉｉ）」）であることが確認された。
驚くべきことに、ｐＳＴＡＴ１ Ｕ９３７を阻害した（「特性（ｉｉｉ）」）、Ａｂ７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ４１４、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、ＳＲＦ４１０、ＳＲＦ４１１、ＳＲＦ４０５、ＳＲＦ５３５、及びＳＲＦ５３８を含む一連のモノクロ－ナル抗体が同定された。
特筆すべきことに、ＣＤ１６１発現を阻害した（「特性（「ｉｖ」）」）、Ａｂ７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、及びＳＲＦ３８６を含む一連のモノクロ－ナル抗体も同定された。
特筆すべきことに、ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＰＤ－Ｌ１発現を阻害した（「特性（ｖ）」）、Ａｂ７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ４１４、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、及びＳＲＦ５３５を含む一連のモノクロ－ナル抗体も同定された。
限られた数のモノクロ－ナル抗体について試験されたのみであるが、それらの試験された抗体のＰＤ－１により媒介されるサイトカイン分泌を増強する能力（「特性（ｖｉ）」）における変動も観察された。具体的には、ＳＲＦ３８１及びＳＲＦ３８８抗体が、ＰＤ－１により媒介されるサイトカイン分泌を顕著に増強することが確認されたが、ＳＲＦ５３６は増強しなかった。
従って、上記で列挙された特性（ｉ）～（ｖｉ）の各々を有するモノクロ－ナル抗体が本明細書において同定された。調査された全ての抗体が特性（ｉ）～（ｖｉ）の各々を有することが確認されたわけではなかった。従って、これらの特性の部分選択を有する抗体の選択物が集合され得ることが明示的に意図される。例えば、抗体Ａｂ７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、及びＳＲＦ３８６は、特性（ｉ）～（ｖ）の各々を有することが確認された。一方、抗体Ａｂ７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、及びＳＲＦ３８６は、特性（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）の各々を有することが確認された。当業者に明らかであるように、抗体及び関連する特性の同様の部分選択が、図９に示される情報により容易に構築される。
実施例１３：ヒト患者由来の血清におけるＥＢＩ３及びＩＬ－２７の測定
血清または血漿におけるＥＢＩ３及びＩＬ－２７のタンパク質レベルを調べるために、図１１及び１２を通して示されるＥＬＩＳＡ及びＭＳＤのための新規の抗体ペアが開発された。カスタムＥＢＩ３ ＥＬＩＳＡを使用して、がんを有する患者由来の幾つかの血清／血漿試料を試験した。スクリ－ニングコホ－トを商業的販売業者から入手し、ＥＢＩ３のレベルを組換えヒトＩＬ２７の検量線の外挿により計算した。妊婦由来の血清を、以前に公開されたようにＥＢＩ３検出の陽性対照として使用した（Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．２００１；１５９（５）：１７６３－７６）。高レベルのＥＢＩ３は、健常な対照（正常な血清）の平均の２標準偏差を超えるものとして分類された。この解析から、高レベルのＥＢＩ３は、ＲＣＣを有する患者の共通の特徴であるように見えたが、試験された他のがんタイプでは散発的に見られた。これらの同一試料がＩＬ－２７ヘテロ二量体のレベルについて試験された場合、ＲＣＣ試料のいずれも、組換えＩＬ－２７の検出に基づいて陽性でないか、またはアッセイの定量下限を超えなかった（図１１Ａ）。幾つかの卵巣癌試料は、血清における検出可能レベルのＩＬ－２７を示し、これは、Ｂ細胞リンパ腫を有する３人の患者及び子宮内膜癌を有する１人の患者由来の血清においても観察された（図１１Ｂ）。ＥＢＩ３レベルがアッセイの定量下限を越えたため、追加の実験をこのＥＬＩＳＡフォ－マットを使用して実行した。より高感度なＭＳＤプラットフォ－ムでＩＬ－２７抗体ペアの更なるアッセイ最適化を実施した（以下に記載される）。
実施例１４：マウスでのヒト抗ＷＳＸ－１抗体の作製及び特徴付け
この実施例は、ヒトＩＬ－２７受容体ＷＳＸ－１に特異的に結合するヒト抗ＷＳＸ－１抗体の作製を記載する。要約すると、Ｈａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウス（Ｈａｒｂｏｕｒ Ｂｉｏｍｅｄ）をヒトＷＳＸ－１をコ－ドする免疫化ＤＮＡベクタ－（Ａｌｄｅｖｒｏｎ）で免疫化し、抗ＷＳＸ－１モノクロ－ナル抗体を発現するハイブリド－マを作製した。Ｈａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２トランスジェニックマウスは、完全ヒト可変領域を有する典型的な２本の免疫グロブリン重鎖及び２本の免疫グロブリン軽鎖の抗体を抗原曝露により産生する。
Ｈａｒｂｏｕｒ Ｈ２Ｌ２マウスの免疫化後に、ヒトＩＬ－２７受容体ＷＳＸ－１に特異的に結合する抗原特異的Ｈ２Ｌ２モノクロ－ナル抗体を、標準的なハイブリド－マ技術を使用して単離した。要約すると、マウス血清によるＷＳＸ－１に対する陽性力価の確認後に、マウス脾臓を取り出し、ハイブリド－マ細胞は典型的な融合法を使用して作製した。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔを使用してハイブリド－マ細胞ペレットからＲＮＡを抽出した（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号７４１０４）。ＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｉｇλ、及びＩｇκの各々について、ヒトシグナル配列に特異的な縮重プライマ－プ－ルをラット定常領域プライマ－と共に使用してＶ領域をＲＴ－ＰＣＲにより増幅した。重鎖Ｖ領域（ＶＨ）ｍＲＮＡを、７つの縮重プライマ－プ－ル（ＨＡ～ＨＦ）のセットを使用して増幅した。軽鎖Ｖ領域ｍＲＮＡを、κクラスタ－に特異的な３つの縮重プライマ－プ－ル（ＫＡ～ＫＣ）及びλクラスタ－に特異的な３つのプライマ－プ－ル（ＬＡ～ＬＣ）のセットを使用して増幅した。成功裡の増幅により得られたＰＣＲ産物を精製し、『ＴＡ』クロ－ニングベクタ－にクロ－ニング（ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ、Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ａ１３６０）し、Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換し、個々のコロニ－を配列決定し、抗ＷＳＸ－１抗体８Ｂ１１の同定及び単離がもたらされた。８Ｂ１１抗体の可変重鎖及び可変軽鎖のアミノ酸配列を、表１２のそれぞれ配列番号７９４及び配列番号７９６に示す。
実施例１５：組換えヒトＩＬ－２７を検出するための抗ＩＬ－２７抗体の抗ＥＢＩ３抗体Ａｂ７との組み合わせ
これらのアッセイの感度及びダイナミックレンジを改善するために、ＥＢＩ３及びＩＬ－２７抗体ペアをＭＳＤプラットフォ－ムに最適化した。そうすることで、定量下限をＥＢＩ３及びＩＬ２７の両方について約２．５ｎｇ／ｍＬからそれぞれ８０ｐｇ／ｍＬ及び６３０ｐｇ／ｍＬまで減少させた。次いで、このＭＳＤプラットフォ－ムを利用して、商業的販売業者から入手した追加のコホ－トの血清及び血漿試料をＩＬ－２７及びＥＢＩ３の検出について調べた。
複数のがんタイプを有する患者由来の血清試料及び健常なドナ－由来の血清試料におけるインタ－ロイキン２７（ＩＬ－２７）及びエプスタイン・バ－ウイルス誘導遺伝子３（ＥＢＩ３）の濃度を決定した。ＢｉｏＩＶＴから入手した合計１７４人（１５人の腎細胞癌［ＲＣＣ］、１５人の卵巣癌、１０人の肝細胞癌［ＨＣＣ］、１５人の急性骨髄性白血病［ＡＭＬ］、１５人のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫［ＤＬＢＣＬ］、１４人の肉腫、１５人の黒色腫、１５人の頭頸部扁平上皮癌［ＨＮＳＣＣ］、１０人のホジキンリンパ腫、１５人の胃癌、１人の精巣癌、１５人の子宮内膜癌、及び１９人の健常なドナ－）の血清試料を評価した。ＩＬ－２７及びＥＢＩ３の血清濃度を、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイを使用して決定した。要約すると、ＩＬ－２７及びＥＢＩ３の濃度を、０～７２３ｎｇ／ｍＬの範囲にわたる組換えヒトＩＬ－２７タンパク質により作成された検量線を使用して決定した。ＩＬ－２７ ＭＳＤのための捕捉抗体及び検出用抗体ペアは、抗ｐ２８抗体ＳＲＦ３８１及び抗ＥＢＩ３抗体Ａｂ７であった。ＥＢＩ３ ＭＳＤのための捕捉抗体及び検出用抗体ペアは、抗ＥＢＩ３抗体ＳＲＦ５５７及び抗ＥＢＩ３抗体Ａｂ７であった。ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ標識ヤギ抗マウス抗体を検出用抗体として使用し、プレ－トをＭＥＳＯ ＱＵＩＣＫＰＬＥＸ ＳＱ１２０で読み取った。
抗ＩＬ－２７抗体と抗ＥＢＩ３抗体Ａｂ７との組み合わせの組換えヒトＩＬ－２７を検出する能力を、サンドイッチＥＬＩＳＡにより評価した。図１２Ａは、サンドイッチＥＬＩＳＡにより測定される、Ａｂ７での検出による抗ＩＬ－２７抗体ＳＲＦ３８１の組換えヒトＩＬ－２７への結合を示す。図１２Ｂは、ＭＳＤサンドイッチ免疫アッセイにより測定される、ＳＲＦ３８１での検出による抗ＩＬ－２７抗体の組換えヒトＩＬ－２７への結合を示す。
ＥＬＩＳＡによりなされた観察と一致して、幾つかのＲＣＣを有する患者（１５人のうちの９人）は、ＭＳＤ検出により、健常なドナ－において観察されるレベルより高いＥＢＩ３レベルを示した（＞平均＋２ＳＤ）（図１２Ｃ～１２Ｄ）。幾つかの他のがんタイプを、ＴＣＧＡまたは、ＥＢＩ３及びｐ２８発現を駆動することが知られている免疫刺激であるウイルス感染に関連することが知られているがんにおけるＥＢＩ３またはｐ２８のいずれかの腫瘍転写物レベルに基づいて調査した。これらの群のうち、肝細胞癌、及び子宮内膜癌を有する患者の５０パ－セント近く（１５のうちの７）において、ＥＢＩ３レベルがほぼ一様に増加していた。
図１２Ｅは、捕捉抗体としてＳＲＦ３８１及び検出用抗体としてＡｂ７を使用したＭＳＤサンドイッチ免疫アッセイによる組換えヒトＩＬ－２７の検出を示す。図１２Ｆは、捕捉抗体としてＳＲＦ５５７及び検出用抗体としてＡｂ７を使用したＭＳＤサンドイッチ免疫アッセイによる組換えヒトＩＬ－２７の検出を示す。
ＩＬ－２７ ＭＳＤアッセイの改善された感度により、試験された１５５の試料のうちの３８において血清レベルが定量下限を超えて検出された。４つの試料（ＲＣＣ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、黒色腫、及び頭頸部扁平上皮癌［ＨＮＳＣＣ］から１つずつ）は、＞１０ｎｇ／ｍＬの濃度を有したが、幾つかのＨＣＣ（１０のうちの５つ）試料、黒色腫（１５のうちの７つ）試料、及びＨＮＳＣＣ（１５のうちの５つ）試料は、定量化下限を超える検出可能レベルのＩＬ－２７を有した。これらのデ－タを、ＩＬ－２７及びＥＢＩ３のレベルについて、それぞれ以下の表５及び表６に要約する。従って、ＭＳＤフォ－マットは、血清中のＩＬ－２７の検出について増加した感度を提供した。しかしながら、レベルは、ＥＢＩ３について検出され得るレベルと比べて一貫して低く、ＥＢＩ３サブユニットが過剰に見出されることを示唆する。
Figure 2022514499000190
Figure 2022514499000191
Figure 2022514499000192
まとめると、これらのデ－タは、高レベルの循環ＥＢＩ３がＲＣＣ患者及びＨＣＣ患者において共通して見られることを示唆する。しかしながら、このＥＢＩ３は、もっぱら血清／血漿においてはｐ２８と複合体を形成していないように見える。ヘテロ二量体サイトカインであるＩＬ－１２またはＩＬ－２３について、同様の発見が示された。両方の分子に共通するｐ４０サブユニットは、ｐ１９またはｐ３５ヘテロ二量体ペアより過剰に、かつそれらから独立して単量体として循環していることが発見され得る。ヘテロ二量体サブユニットの限局された発現は、ヘテロ二量体の生物活性を空間的に制限し得ることが推測された。
サンドイッチアッセイ
Ｎｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレ－ト（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＃４４－２４０４－２１）を１００μＬ／ウェルの抗ＩＬ－２７抗体（ＰＢＳ中に０．５μｇ／ｍＬに希釈）でコ－ティングし、密閉し、４℃で一晩インキュベ－トした。これらの捕捉抗体としては、例えば、抗ｐ２８抗体（例えば、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、ＳＲＦ６０５、ＳＲＦ５３５、ＳＲＦ５３８）もしくは抗ＥＢＩ３抗体（例えば、ＳＲＦ５５７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ４１４、ＳＲＦ５４１、及びＡｂ７）、または抗ＩＬ－２７抗体（例えば、ＳＲＦ５８３、ＳＲＦ４１０、ＳＲＦ４１１、ＳＲＦ４０５、及びＳＲＦ５７３）が挙げられる。プレ－トを、１００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ）で３回洗浄した。次いで、プレ－トを、２００μＬ／ウェルのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ＋０．１％のＢＳＡ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ）を用いて振盪しながら室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした。ブロッキングバッファ－をデカントし、プレ－トを１００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、１００μＬの組換えヒトＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ２５２６－ＩＬ／ＣＦ）（ブロッキングバッファ－中に１００ｎｇ／ｍＬに希釈）を各ウェルに添加した。プレ－トをデカントし、１００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、１００μＬ／ウェルのビオチン化検出用抗体（ブロッキングバッファ－中に１μｇ／ｍＬに希釈）を振盪しながら室温で１時間添加した。検出用抗体としては、例えば、抗ｐ２８抗体（例えば、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、ＳＲＦ６０５、ＳＲＦ５３５、ＳＲＦ５３８）もしくは抗ＥＢＩ３抗体（例えば、ＳＲＦ５５７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ４１４、ＳＲＦ５４１、及びＡｂ７）、または抗ＩＬ－２７抗体（例えば、ＳＲＦ５８３、ＳＲＦ４１０、ＳＲＦ４１１、ＳＲＦ４０５、及びＳＲＦ５７３）が挙げられる（ＩＬ－２７ヘテロ二量体、ＥＢＩ３、及びｐ２８を検出するための抗体の具体的な組合せを、以下の表１７～１９に列挙する）。検出用抗体をデカントし、プレ－トを１００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、１００μＬ／ウェルのストレプトアビジンＨＲＰ（Ａｂｃａｍ ａｂ７４０３）（ブロッキングバッファ－中に１：５０００希釈）を振盪しながら室温で１時間添加した。プレ－トを１００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、１００μＬ／ウェルのＴＭＢ緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃００－２０２３）を室温で１０分間添加し、５０μＬ／ウェルの停止液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＃ＳＳ０４）を添加した。反応停止の３０分以内にプレ－トを４５０ｎｍで読み取った。
表１７：ＩＬ－２７ヘテロ二量体ＥＬＩＳＡにおける抗体の組み合わせ
実施例１５に記載されるような、ＩＬ－２７を検出する方法において使用され得る抗ｐ２８抗体及び抗ＥＢＩ３抗体の組み合わせを表１７に示す。加えて、抗ＩＬ－２７抗体ＳＲＦ５８３、ＳＲＦ４１０、ＳＲＦ４１１、ＳＲＦ４０５、及びＳＲＦ５７３は、それぞれ、Ａｂ７、ＳＲＦ５５７、ＳＲＦ５３６、ＳＲＦ４１６、ＳＲＦ５４３、ＳＲＦ４１４、ＳＲＦ５４１、ＳＲＦ５２９、ＳＲＦ３８１、ＳＲＦ３８８、ＳＲＦ３８２、ＳＲＦ３８４、ＳＲＦ３８６、ＳＲＦ６０５、ＳＲＦ５３５、及びＳＲＦ５３８のいずれかと組み合わせて使用され得る。
Figure 2022514499000193
Figure 2022514499000194
Figure 2022514499000195
Figure 2022514499000196
抗ＩＬ－２７抗体と抗ｐ２８抗体ＳＲＦ３８１との組み合わせの組換えヒトＩＬ－２７を検出する能力を、サンドイッチＭＳＤ免疫アッセイにより評価した。要約すると、ＭＳＤ ＱＵＩＣＫＰＬＥＸ ９６ウェルプレ－ト（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌ５５ＸＡ）を、５０μＬ／ウェルの抗ＩＬ－２７抗体（ＰＢＳ中に０．５μｇ／ｍＬに希釈）でコ－ティングし、密閉し、４℃で一晩インキュベ－トした。プレ－トを、１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ）で３回洗浄した。次いで、プレ－トを、２００μＬ／ウェルのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１％のＢＳＡ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ）を用いて振盪しながら室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした。ブロッキングバッファ－をデカントし、プレ－トを１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、各ウェルに５０μＬ／ウェルの組換えヒトＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ２５２６－ＩＬ／ＣＦ）（ブロッキングバッファ－中に５００ｎｇ／ｍＬに希釈）を振盪しながら室温で２時間添加した。プレ－トを１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、各ウェルに５０μＬのビオチン化ＳＲＦ３８１（ブロッキングバッファ－中に０．５μｇ／ｍＬに希釈）を振盪しながら室温で１時間添加した。プレ－トを１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、各ウェルに５０μＬ／ウェルのＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ標識ストレプトアビジン（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｒ９２ＴＣ－１）（ブロッキングバッファ－中に１：１０００希釈）を振盪しながら室温で３０分間添加した。プレ－トを１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、１５０μＬのＭＳＤ読み取り緩衝液（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｒ９２ＴＣ－１）（脱イオン水中に２Ｘに希釈）を各ウェルに添加し、プレ－トをＭＥＳＯ ＱＵＩＣＫＰＬＥＸ ＳＱ１２０で読み取った。
免疫アッセイ
ＭＳＤ ＱＵＩＣＫＰＬＥＸ ９６ウェルプレ－ト（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌ５５ＸＡ）を５０μＬ／ウェルのＳＲＦ３８１またはＳＲＦ５５７（ＰＢＳ中に０．５μｇ／ｍＬに希釈）のいずれかでコ－ティングし、密閉し、４℃で一晩インキュベ－トした。プレ－トを、１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ）で３回洗浄した。次いで、プレ－トを、２００μＬ／ウェルのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１％のＢＳＡ＋０．０１％のＴｗｅｅｎ）を用いて振盪しながら室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした。ブロッキングバッファ－をデカントし、プレ－トを１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、各ウェルにブロッキングバッファ－中に希釈された５０μＬ／ウェルの組換えヒトＩＬ－２７（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ２５２６－ＩＬ／ＣＦ）を振盪しながら室温で２時間添加した。１００ｎｇ／ｍＬから始めて８点の２倍系列希釈のＩＬ－２７検量線を作成した。プレ－トを１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、各ウェルに５０μＬのＡｂ７（ブロッキングバッファ－中に０．５μｇ／ｍＬに希釈）を振盪しながら室温で１時間添加した。プレ－トを１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、各ウェルに５０μＬ／ウェルのＭＳＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧコンジュゲ－トヤギ抗マウス抗体（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｒ３２ＡＣ－５）（ブロッキングバッファ－中に１：１０００希釈）を振盪しながら室温で３０分間添加した。プレ－トを１５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄し、１５０μＬのＭＳＤ読み取り緩衝液（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｒ９２ＴＣ－１）（脱イオン水中に２Ｘに希釈）を各ウェルに添加し、プレ－トをＭＥＳＯ ＱＵＩＣＫＰＬＥＸ ＳＱ１２０で読み取った。

Claims (139)

  1. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、
    （ｉ）それぞれ配列番号７０６、７０７、及び７０８に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７１４、７１５、及び７１６に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、
    （ｉｉ）それぞれ配列番号７２８、７２９、及び７３０に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７３６、７３７、及び７３８に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５０、７５１、及び７５２に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７５８、７５９、及び７６０に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、
    （ｉｖ）それぞれ配列番号７７２、７７３、及び７７４に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７８０、７８１、及び７８２に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、からなる群から選択される重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  2. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、
    （ｉ）それぞれ配列番号７０９、７１０、及び７１１に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７１７、７１８、及び７１９に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、
    （ｉｉ）それぞれ配列番号７３１、７３２、及び７３３に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、それぞれ配列番号７３９、７４０、及び７４１に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５３、７５４、及び７５５に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７６１、７６２、及び７６３に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、
    （ｉｖ）それぞれ配列番号７７５、７７６、及び７７７に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号７８３、７８４、及び７８５に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、からなる群から選択される重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  3. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号７０６、７０７、及び７０８に記載されており、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号７１４、７１５、及び７１６に記載されている、前記抗体またはその抗原結合部分。
  4. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号７２８、７２９、及び７３０に記載されており、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号７３６、７３７、及び７３８に記載されている、前記抗体またはその抗原結合部分。
  5. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号７５０、７５１、及び７５２に記載されており、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号７５８、７５９、及び７６０に記載されている、前記抗体またはその抗原結合部分。
  6. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号７７２、７７３、及び７７４に記載されており、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号７８０、７８１、及び７８２に記載されている、前記抗体またはその抗原結合部分。
  7. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号７１２、７３４、７５６、及び７７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号７２０、７４２、７６４、及び７８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  8. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、
    （ｉ）それぞれ配列番号７１２及び７２０と、
    （ｉｉ）それぞれ配列番号７３４及び７４２と、
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５６及び７６４と、
    （ｉｖ）それぞれ配列番号７１７７５及び７８６と、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  9. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号７１２、７３４、７５６、及び７７８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号７２０、７４２、７６４、及び７８６からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  10. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、
    （ｉ）それぞれ配列番号７１２及び７２０と、
    （ｉｉ）それぞれ配列番号７３４及び７４２と、
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号７５６及び７６４と、
    （ｉｖ）それぞれ配列番号７７８及び７８６と、からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  11. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７１２及び７２０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  12. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７１２及び７２０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  13. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７３４及び７４２に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  14. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７３４及び７４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  15. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７５６及び７６４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  16. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７５６及び７６４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  17. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７７８及び７８６に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  18. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７７８及び７８６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  19. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号７２２、７４４、７６６、及び７８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  20. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号７２２、７４４、７６６、及び７８８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  21. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号７２６、７４８、７７０、及び７９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  22. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号７２６、７４８、７７０、及び７９２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号７２４、７４６、７６８、及び７９０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  23. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、
    （ｉ）それぞれ配列番号７２２及び７２４；
    （ｉｉ）それぞれ配列番号７４４及び７４６と、
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号７６６及び７６８と、
    （ｉｖ）それぞれ配列番号７８８及び７９０と、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  24. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、
    （ｉ）それぞれ配列番号７２２及び７２４；
    （ｉｉ）それぞれ配列番号７４４及び７４６と、
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号７６６及び７６８と、
    （ｉｖ）それぞれ配列番号７８８及び７９０と、からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  25. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、
    （ｉ）それぞれ配列番号７２６及び７２４；
    （ｉｉ）それぞれ配列番号７４８及び７４６と、
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号７７０及び７６８と、
    （ｉｖ）それぞれ配列番号７９２及び７９０と、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  26. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、
    （ｉ）それぞれ配列番号７２６及び７２４；
    （ｉｉ）それぞれ配列番号７４８及び７４６と、
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号７７０及び７６８と、
    （ｉｖ）それぞれ配列番号７９２及び７９０と、からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  27. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７２２及び７２４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  28. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７２２及び７２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  29. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７４４及び７４６に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  30. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７４４及び７４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  31. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７６６及び７６８に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  32. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７６６及び７６８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  33. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７８８及び７９０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  34. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７８８及び７９０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  35. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７２６及び７２４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  36. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７２６及び７２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  37. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７４８及び７４６に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  38. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７４８及び７４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  39. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７７０及び７６８に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  40. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７７０及び７６８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  41. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７９２及び７９０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  42. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７９２及び７９０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  43. 先行請求項のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  44. 請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖、重鎖、または軽鎖及び重鎖の両方をコ－ドするヌクレオチド配列を含む核酸。
  45. 請求項４４に記載の核酸を含む発現ベクタ－。
  46. 請求項４５に記載の発現ベクタ－で形質転換された細胞。
  47. ヒトＩＬ－２７に特異的に結合するモノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を作製するための方法であって、請求項４６に記載の細胞を前記モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の発現を可能にする条件下で維持することを含む前記方法。
  48. 前記モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を得ることを更に含む、請求項４７に記載の方法。
  49. 細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減する方法であって、前記方法が、前記細胞を請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片と接触させることを含み、前記抗体またはその抗原結合部分が、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減する、前記方法。
  50. 細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減する方法であって、前記方法が、前記細胞を請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片と接触させることを含み、前記抗体またはその抗原結合部分が、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減する、前記方法。
  51. 細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減する方法であって、前記方法が、前記細胞を請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片と接触させることを含み、前記抗体またはその抗原結合部分が、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減する、前記方法。
  52. 細胞からの１種以上のサイトカインの分泌を誘発または増強する方法であって、前記方法が、前記細胞を請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体または抗原結合断片と接触させることを含み、前記抗体またはその抗原結合部分が、細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌を誘発または増強する、前記方法。
  53. 本開示は、対象における免疫反応を刺激する方法であって、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または請求項４３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  54. 対象におけるがんを処置する方法であって、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または請求項４３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  55. 対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、前記方法が、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または請求項４３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含み、前記抗体もしくはその抗原結合部分または前記医薬組成物が、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減し、これにより、前記免疫反応を刺激するか、または前記がんを処置する、前記方法。
  56. 対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、前記方法が、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または請求項４３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含み、前記抗体もしくはその抗原結合部分または前記医薬組成物が、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減し、これにより、前記免疫反応を刺激するか、または前記がんを処置する、前記方法。
  57. 対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、前記方法が、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または請求項４３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含み、前記抗体もしくはその抗原結合部分または前記医薬組成物が、細胞上のＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減し、これにより、前記免疫反応を刺激するか、または前記がんを処置する、前記方法。
  58. 対象における免疫反応を刺激するか、またはがんを処置する方法であって、前記方法が、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくは抗原結合断片または請求項４３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含み、前記抗体もしくはその抗原結合部分または前記医薬組成物が、細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌を誘発または増強し、これにより、前記免疫反応を刺激するか、または前記がんを処置する、前記方法。
  59. 前記がんが、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、肉腫、精巣癌、卵巣癌、膵臓癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌）、黒色腫、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、結腸直腸癌、膀胱癌、子宮内膜癌、前立腺癌、甲状腺癌、肝細胞癌、胃癌、脳癌、リンパ腫（例えば、ＤＬ－ＢＣＬ）、白血病（例えば、ＡＭＬ）、または腎臓癌（例えば、腎細胞癌（例えば、腎明細胞癌））から選択される、請求項５４～５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 抗ＰＤ－１抗体の１つ以上の活性を増強する（例えば、ＰＤ－１により媒介されるサイトカイン分泌を増強する；抗ＰＤ－１により媒介されるＴＮＦα分泌を増強する；抗ＰＤ－１抗体に曝露された細胞からの抗ＰＤ－１により媒介されるＩＬ－６分泌を増強する）方法であって、細胞を請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分に、抗ＰＤ－１抗体と同時にまたは逐次的に曝露させて、これにより、抗ＰＤ１抗体の１つ以上の活性を増強することを含む、前記方法。
  61. 抗ＰＤ－１抗体及び請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分ならびに薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  62. 同時投与または逐次投与のための抗ＰＤ－１抗体、及び請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分、ならびにそれらの使用のための使用説明書を含むキット。
  63. 前記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分が、１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて投与され、第２の治療薬または治療手段が、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解性薬物、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、外科的処置、放射線治療、共刺激分子の活性化剤、抑制分子の阻害剤、ワクチン、または細胞免疫療法、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５３～５９のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記１種以上の追加の治療薬が、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ１１２Ｒ阻害剤、ＴＡＭ阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、４－１ＢＢアゴニスト、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、Ａ２ＡＲ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ｐｅｇ－ＩＬ－２、ｐｅｇ ＩＬ－１０、ＣＤ４０アゴニスト、またはそれらの組み合わせである、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記１種以上の追加の治療薬がＰＤ－１アンタゴニストである、請求項６４に記載の方法。
  66. 前記ＰＤ－１アンタゴニストが、ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１、ＡＭＰ－２２４、ＡＢ１２２、及びＪＴＸ－４０１４からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記ＰＤ－Ｌ１阻害剤が、ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
  68. 前記１種以上の追加の治療薬が、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））、カボザンチニブ（Ｃａｂｏｍｅｔｙｘ（登録商標））、アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））、レンバチニブ（Ｌｅｎｖｉｍａ（登録商標））、エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、エパカドスタット、ＮＫＴＲ－２１４（ＣＤ－１２２バイアス型アゴニスト）、チボザニブ（Ｆｏｔｉｖｄａ（登録商標））、アベキシノスタット、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、トレメリムマブ、パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））、ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））、ニラパリブ、サボリチニブ、ボロラニブ（Ｘ－８２）、レゴラフェニブ（Ｓｔｉｖａｒｇｏ（登録商標））、ドナフェニブ（多標的キナ－ゼ阻害剤）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、ペキサスチモジンデバシレプベク（ＪＸ－５９４）、ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））、アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１）、カプセル化ドキソルビシン（Ｔｈｅｒｍｏｄｏｘ（登録商標））、チバンチニブ（ＡＲＱ１９７）、ＡＤＩ－ＰＥＧ２０、ビニメチニブ、アパチニブメシル酸塩、ニンテダニブ、リリルマブ、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標））、デュルバルマブ（Ｉｍｆｉｍｚｉ（登録商標））、セミプリマブ－ｒｗｌｃ（Ｌｉｂｔａｙｏ（登録商標））、チスレリズマブ、及びスパルタリズマブからなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
  69. 前記１種以上の追加の治療薬がＴＩＭ－３阻害剤であり、任意により、前記ＴＩＭ－３阻害剤がＭＧＢ４５３またはＴＳＲ－０２２である、請求項６４に記載の方法。
  70. 前記１種以上の追加の治療薬がＬＡＧ－３阻害剤であり、任意により、前記ＬＡＧ－３阻害剤がＬＡＧ５２５、ＢＭＳ－９８６０１６、及びＴＳＲ－０３３からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
  71. 前記１種以上の追加の治療薬がＴＩＧＩＴ阻害剤である、請求項６４に記載の方法。
  72. 前記１種以上の追加の治療薬がＣＤ１１２Ｒ阻害剤である、請求項６４に記載の方法。
  73. 前記１種以上の追加の治療薬がＴＡＭ（Ａｘｌ、Ｍｅｒ、Ｔｙｒｏ）阻害剤である、請求項６４に記載の方法。
  74. 前記１種以上の追加の治療薬が４－１ＢＢアゴニストである、請求項６４に記載の方法。
  75. 前記１種以上の追加の治療薬がチロシンキナ－ゼ阻害剤（ＴＫＩ）である、請求項６４に記載の方法。
  76. 対象におけるがんを処置する方法であって、前記方法が、それぞれ配列番号１６１、１６２、及び１６３に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１６９、１７０、及び１７１に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の治療上有効量を前記患者に投与することを含み、前記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分が、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解性薬物、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、外科的処置、放射線治療、共刺激分子の活性化剤、抑制分子の阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて投与される、前記方法。
  77. 対象由来の試料中のＩＬ－２７またはＥＢＩ３もしくはｐ２８を検出する方法であって、（ａ）前記対象由来の試料を検出用抗体と、ＩＬ－２７またはＥＢＩ３もしくはｐ２８が前記試料中に存在する場合に前記検出用抗体が検出用抗体－ＥＢＩ３複合体または検出用抗体－ｐ２８複合体を形成することを可能にする条件下で接触させるステップであって、前記検出用抗体が、請求項１～４２のいずれか１項または表１２に記載の抗体またはその抗原結合断片である、前記ステップ；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された前記複合体の存在を検出するステップ、を含む前記方法。
  78. 対象におけるＩＬ－２７関連がんを検出する方法であって、（ａ）ＩＬ－２７関連がんを有すると疑われる対象由来の試料と検出用抗体を、ＩＬ－２７またはＥＢＩ３もしくはｐ２８が前記試料中に存在する場合に前記検出用抗体が検出用抗体－ＥＢＩ３複合体または検出用抗体－ｐ２８複合体を形成することを可能にする条件下で接触させるステップであって、前記検出用抗体が、請求項１～４２のいずれか１項または表１２に記載の抗体またはその抗原結合部分である、前記ステップ；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された前記複合体の存在を検出するステップ、を含む前記方法。
  79. 前記検出用抗体が検出可能な標識と結合される、請求項７７または７８に記載の方法。
  80. 前記試料を捕捉抗体と接触させ、ＩＬ－２７またはＥＢＩ３が前記試料中に存在する場合にＩＬ－２７またはＥＢＩ３及び前記捕捉抗体を含む複合体を生成することを更に含み、前記捕捉抗体が請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分である、請求項７７～７９のいずれか１項に記載の方法。
  81. 前記捕捉抗体がＡｂ７の１つ以上のＣＤＲを有し、任意により、Ａｂ７である、請求項８０に記載の方法。
  82. 前記捕捉抗体が固体支持体に固定化される、請求項８０に記載の方法。
  83. 前記試料が、前記検出用抗体の前に前記捕捉抗体と接触される、請求項７７～８２のいずれか１項に記載の方法。
  84. 前記試料が体液試料である、請求項７７～８２のいずれか１項に記載の方法。
  85. 前記体液試料が、血液、血清、血漿、細胞溶解物、または組織溶解物である、請求項８４に記載の方法。
  86. 前記がんが、腎細胞癌（ＲＣＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ）、肺癌、胃食道癌、卵巣癌、子宮内膜癌、黒色腫、白血病、及びリンパ腫から選択される、請求項７６～８５のいずれか１項に記載の方法。
  87. 前記がんが腎細胞癌（ＲＣＣ）である、請求項８６に記載の方法。
  88. 前記がんが肝細胞癌（ＨＣＣ）である、請求項８６に記載の方法。
  89. 前記がんが白血病及びリンパ腫から選択される、請求項８６に記載の方法。
  90. 前記がんが卵巣癌である、請求項８６に記載の方法。
  91. 対象における免疫反応を刺激するか、または対象におけるがんを処置するための、任意に１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて使用される、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分または請求項４３に記載の医薬組成物の使用。
  92. 請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分または請求項４３に記載の医薬組成物、及び対象における免疫反応を刺激するか、または対象におけるがんを処置するのに使用するための使用説明書を含み、１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて使用するための使用説明書を任意に含有するキット。
  93. 請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分、及び対象由来の試料中のＩＬ－２７を検出するのに使用するための使用説明書を含み、対象におけるＩＬ－２７関連がんを検出するために使用するための使用説明書を任意に含有するキット。
  94. 前記抗体またはその抗原結合部分がＩＬ－２７に拮抗する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  95. 前記抗体またはその抗原結合部分が、細胞におけるＳＴＡＴ１及び／またはＳＴＡＴ３リン酸化を阻害または低減する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  96. 前記細胞が免疫細胞である、請求項９５に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  97. 前記細胞ががん細胞である、請求項９５に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  98. 前記抗体またはその抗原結合部分が、細胞におけるＣＤ１６１発現の阻害を阻害または低減する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  99. 前記細胞が免疫細胞である、請求項９８に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  100. 前記抗体またはその抗原結合部分が、細胞におけるＰＤ－Ｌ１及び／またはＴＩＭ－３発現を阻害または低減する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  101. 前記細胞が免疫細胞である、請求項１００に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  102. 前記細胞ががん細胞である、請求項１０１に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  103. 前記細胞ががん細胞であり、前記抗体またはその抗原結合部分ががん細胞におけるＰＤ－Ｌ１発現を阻害または低減する、請求項１０１に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  104. 前記抗体またはその抗原結合部分が、細胞からの１種以上のサイトカインのＰＤ－１により媒介される分泌を誘発または増強する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  105. 前記１種以上のサイトカインがＩＦＮｇ、ＴＮＦα、またはＩＬ－６である、請求項１０４に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  106. 前記１種以上のサイトカインが、ＩＦＮｇ、ＩＬ－１７、ＴＮＦα、またはＩＬ－６である、請求項１０５に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  107. 前記１種以上のサイトカインがＴＮＦαである、請求項１０５に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  108. 前記細胞が免疫細胞である、請求項１０４～１０７のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  109. 前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１ ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体からなる群から選択される、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  110. 前記抗体がＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である、請求項１０９に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  111. 前記抗体が野生型ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項１１０に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  112. 前記抗体が野生型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、請求項１１０に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  113. 前記抗体が少なくとも１つの変異を含むＦｃドメインを含む、請求項１～４２のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  114. 前記抗体が変異型ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項１１３に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  115. 前記抗体が変異型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、請求項１１３に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  116. 前記変異型ＩｇＧ４重鎖定常領域が、ＥＵ番号付けに従って、Ｓ２２８Ｐ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、Ｌ２３５Ａ置換、またはそれらの組み合わせのいずれかを含む、請求項１１５に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  117. 請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分と実質的に同じエピト－プに結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  118. 請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分により結合されるアミノ酸残基のうちの少なくとも１つに結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  119. 単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分により結合されるエピト－プの変異が、前記抗体またはその抗原結合部分及び請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分の両方への結合を阻害、低減、または遮断する、前記抗体またはその抗原結合部分。
  120. ＩＬ－２７上のエピト－プに結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記エピト－プが、表１２に記載される抗体分子により結合されるエピト－プと同一であるか、または類似する、前記単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分。
  121. ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合し、拮抗する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号８０２、８０３、及び８０４に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８０５、８０６、及び８０７に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  122. ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７９４及び７９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  123. ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖定常領域であって、配列番号７９８に記載されるアミノ酸配列を含む、前記軽鎖定常領域を含む。
  124. ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号８０２、８０３及び８０４に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列からなる群と少なくとも９０％同一な重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲ、ならびにそれぞれ配列番号８０５、８０６及び８０７に記載される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列からなる群と少なくとも９０％同一な重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  125. ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分であって、それぞれ配列番号７９４及び７９６からなる群と少なくとも９０％同一な重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
  126. ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合する単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖定常領域であって、配列番号７９８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、前記軽鎖定常領域を含む。
  127. 請求項１２１～１２６のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  128. 請求項１２１～１２６のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖、重鎖、または軽鎖及び重鎖の両方をコ－ドするヌクレオチド配列を含む核酸。
  129. 請求項１２８に記載の核酸を含む発現ベクタ－。
  130. 請求項１２９に記載の発現ベクタ－で形質転換された細胞。
  131. ヒトＷＳＸ－１に特異的に結合するモノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分を作製するための方法であって、請求項１３０に記載の細胞を前記モノクロ－ナル抗体またはその抗原結合部分の発現を可能にする条件下で維持することを含む前記方法。
  132. 対象由来の試料中のＷＳＸ－１を検出する方法であって、（ａ）前記対象由来の試料と検出用抗体を、ＷＳＸ－１が前記試料中に存在する場合に前記検出用抗体が検出用抗体－ＷＳＸ－１複合体を形成することを可能にする条件下で接触させるステップであって、前記検出用抗体が、請求項１２１～１２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片である、前記ステップ；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された前記複合体の存在を検出するステップ、を含む前記方法。
  133. 対象におけるＷＳＸ－１関連がんを検出する方法であって、（ａ）ＷＳＸ－１関連がんを有すると疑われる対象由来の試料と検出用抗体を、ＷＳＸ－１が前記試料中に存在する場合に前記検出用抗体が検出用抗体－ＷＳＸ－１複合体を形成することを可能にする条件下で接触させるステップであって、前記検出用抗体が、請求項１２１～１２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分である、前記ステップ；及び（ｂ）存在する場合、ステップ（ａ）で生成された前記複合体の存在を検出するステップ、を含む前記方法。
  134. 対象における免疫反応を刺激するか、または対象におけるがんを処置するための、任意に１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて使用される、請求項１２１～１２６のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分または請求項１２７に記載の医薬組成物の使用。
  135. 請求項１２１～１２６のいずれか１項に記載の単離モノクロ－ナル抗体もしくはその抗原結合部分または請求項１２７に記載の医薬組成物、及び対象における免疫反応を刺激するか、または対象におけるがんを処置するのに使用するための使用説明書を含み、１種以上の追加の治療薬または治療手段と組み合わせて使用するための使用説明書を任意に含有するキット。
  136. 前記単離モノクロ－ナル抗体がヒトＩＬ－２７に特異的に結合する、請求項１～４２に記載の単離モノクロ－ナル抗体。
  137. 前記単離モノクロ－ナル抗体がヒトＩＬ－２７に特異的に拮抗する、請求項１、２、４、６～１０、１３、１４、１７、１８～２６、２９、３０、３３、３４、３７、３８、４１、及び４２に記載の単離モノクロ－ナル抗体。
  138. 前記１種以上の追加の治療薬が、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ１１２Ｒ阻害剤、ＴＡＭ阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、４－１ＢＢアゴニスト、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、Ａ２ＡＲ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ｐｅｇ－ＩＬ－２、ｐｅｇ ＩＬ－１０、ＣＤ４０アゴニスト、またはそれらの組み合わせである、請求項７６に記載の方法。
  139. 前記ＰＤ－１アンタゴニストが、ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１、ＡＭＰ－２２４、ＡＢ１２２、及びＪＴＸ－４０１４からなる群から選択される、請求項１３８に記載の方法。
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