JP2022513350A - がんの併用療法 - Google Patents

Abstract

本開示は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を、抗ＰＤ－１抗体などのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストと組み合わせて、それを必要とする対象、例えば、がん患者に投与する方法を提供する。治療有効量レジメンを使用して、抗Ｂ７－Ｈ４抗体及びその抗原結合断片をＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストと組み合わせて投与する方法が本明細書で提供される。抗Ｂ７－Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は、２０５０２抗体もしくはその抗原結合断片、または２０５０２抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域ＣＤＲを含む抗体もしくは抗原結合断片、または前述のいずれかのアフコシル化形態を含む２０５０２抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域を含む抗体もしくは抗原結合断片であり得る。

Description

本開示は、がんなどの疾患の治療のために、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合する抗体を、ペムブロリズマブなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストと組み合わせて投与する方法に関する。有利な用量レジメンが提供される。

１．背景技術
Ｂ７－Ｈ４（Ｂ７ｘ、Ｂ７－Ｓ１、及びＶＴＣＮ１としても知られる）は、ＰＤ－Ｌ１を含む他のＢ７ファミリーメンバーと相同性を共有する免疫調節分子である。それはＩ型膜貫通タンパク質であり、ＩｇＶ及びＩｇＣの両方のエクトドメインから構成される。健常組織におけるＢ７－Ｈ４発現は、タンパク質レベルで比較的限定されているが、Ｂ７－Ｈ４は、乳房、卵巣、及び子宮内膜の婦人科癌などのいくつかの固形腫瘍において発現されている。腫瘍におけるＢ７－Ｈ４の発現は、予後不良と相関する傾向がある。Ｂ７－Ｈ４の受容体は不明であるが、Ｔ細胞上で発現されると考えられている。Ｂ７－Ｈ４は、Ｔ細胞活性を直接阻害すると考えられる。

Ｂ７－Ｈ４の発現及び機能を考慮すると、Ｂ７－Ｈ４に特異的に結合する抗体は、例えば、がん治療のためのＢ７－Ｈ４活性の調節を伴う療法のために開発されている。

ＰＤ－１は、活性化されたＴ細胞及びＢ細胞によって発現される重要な免疫チェックポイント受容体であり、免疫抑制を仲介する。ＰＤ－１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、及びＢＴＬＡを含む受容体のＣＤ２８ファミリーのメンバーである。ＰＤ－１の２つの細胞表面糖タンパク質リガンドは、プログラム死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）及びプログラム死リガンド－２（ＰＤ－Ｌ２）が同定されており、これらは、抗原提示細胞だけでなく多くのヒトがん上で発現され、及びＰＤ－１に結合するとＴ細胞活性化及びサイトカイン分泌を下方制御することが示されている。例えば、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体によるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の阻害は、強力な抗腫瘍活性を仲介する。

したがって、Ｂ７－Ｈ４に結合する抗体及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の阻害剤の投与についての有効な投与レジメンの必要性が存在する。

２．発明の概要
治療有効量レジメンを使用して、抗Ｂ７－Ｈ４抗体及びその抗原結合断片をＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストと組み合わせて投与する方法が本明細書で提供される。抗Ｂ７－Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は、２０５０２抗体もしくはその抗原結合断片、または２０５０２抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域ＣＤＲを含む抗体もしくは抗原結合断片、または前述のいずれかのアフコシル化形態を含む２０５０２抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域を含む抗体もしくは抗原結合断片であり得る。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ペムブロリズマブなどの抗ＰＤ－１抗体、またはペムブロリズマブの重鎖及び軽鎖の可変領域ＣＤＲを含む抗体もしくは抗原結合断片、またはペムブロリズマブの重鎖及び軽鎖の可変領域を含む抗体もしくは抗原結合断片であり得る。

ある特定の態様において、ヒト対象における固形腫瘍を治療する方法は、対象に（ａ）ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、２０５０２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列を含む約０．１～約２０ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片と、（ｂ）約２００ｍｇのペムブロリズマブと、を投与することを含む。ある特定の実施形態において、（ａ）及び（ｂ）は同時にまたは連続的に投与される。

ある特定の態様において、ヒト対象の固形腫瘍を治療する方法は、（ａ）抗体またはその抗原結合断片であって、（ｉ）ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、２０５０２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物であって、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％がアフコシル化され、約０．１～約２０ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片が投与される医薬組成物と、（ｂ）約２００ｍｇのペムブロリズマブを投与する、ペムブロリズマブを含む医薬組成物と、を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態において、（ａ）及び（ｂ）は同時にまたは連続的に投与される。

ある特定の態様において、抗体または抗原結合断片のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義ＣＤＲ、またはＡｂＭ定義ＣＤＲである。ある特定の態様において、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、それぞれ、配列番号５～１０に記載されるアミノ酸配列を含む。

ある特定の態様において、約２０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。ある特定の態様において、約１０ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。ある特定の態様において、約３ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。ある特定の態様において、約１ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。ある特定の態様において、約０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。特定の態様において、約０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が対象に投与される。

ある特定の態様において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片及び／またはペムブロリズマブは、３週間に約１回投与される。

ある特定の態様において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片及び／またはペムブロリズマブは、静脈内投与される。

ある特定の態様において、Ｂ７－Ｈ４は、投与前に免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用して固形腫瘍中で検出されている。

ある特定の態様において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の態様において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域及び／または軽鎖定常領域を含む。ある特定の態様において、重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１重鎖定常領域であり、及び／または軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧκ軽鎖定常領域である。ある特定の態様において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／または配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。ある特定の態様において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

ある特定の態様において、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト抗体またはその抗原結合断片である。

ある特定の態様において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、アフコシル化される。

ある特定の態様において、抗体またはその抗原結合断片は、完全長抗体である。ある特定の態様において、抗体またはその抗原結合断片は、抗原結合断片である。ある特定の態様において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ^２、（ｓｃＦｖ）_２、もしくはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む、またはそれらである。

ある特定の態様において、フコシル化は、抗Ｂ７－Ｈ４抗体を含む組成物中では検出されない。

ある特定の態様において、固形腫瘍はＢ７－Ｈ４を発現する。

ある特定の態様において、固形腫瘍は、切除不能、局所進行性、または転移性である。

ある特定の態様において、固形腫瘍は、乳癌、腺管癌、子宮内膜癌、卵巣癌、尿路上皮癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌、及び膀胱癌からなる群から選択される。ある特定の態様において、固形腫瘍は、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、または尿路上皮癌である。ある特定の態様において、乳癌は、進行性乳癌である。ある特定の態様において、乳癌は、ＨＥＲ２ネガティブである。ある特定の態様において、乳癌は、トリプルネガティブ乳癌である。ある特定の態様において、乳癌は、ホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌である。特定の態様において、非小細胞肺癌は、扁平上皮細胞癌である。ある特定の態様において、対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストによるこれまでの療法を受けていない。

ある特定の態様において、本方法は、腫瘍中の免疫細胞の数を監視することをさらに含む。ある特定の態様において、本方法は、腫瘍中のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＣＤ４＋細胞、及び／またはＣＤ８＋細胞の数を監視することをさらに含む。ある特定の態様において、本方法は、対象におけるサイトカインレベルを監視することをさらに含む。ある特定の態様において、本方法は、対象におけるＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＮＦ、及び／またはインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）レベルを監視することをさらに含む。

ある特定の態様において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、及び抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片の投与は、相乗効果を生じる。

ある特定の態様において、ヒト対象の固形腫瘍を治療する方法は、（ｉ）ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体と、（ｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む約２００ｍｇの抗ＰＤ－１抗体とを対象に投与することを含み、抗Ｂ７－Ｈ４抗体及び抗ＰＤ－１抗体が、３週間に約１回静脈内投与される。

ある特定の態様において、ヒト対象の固形腫瘍を治療する方法は、（ａ）（ｉ）ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗Ｂ７－Ｈ４抗体と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む医薬組成物であって、その組成物中のその抗Ｂ７－Ｈ４抗体の少なくとも９５％がアフコシル化され、かつ約２０ｍｇ／ｋｇの抗体が投与される医薬組成物と、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物であって、約２００ｍｇのその抗体または抗原結合断片が投与される医薬組成物とを対象に投与することを含み、抗Ｂ７－Ｈ４抗体及び抗ＰＤ－１抗体が３週間に約１回静脈内投与される。

ある特定の態様において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。ある特定の態様において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

ある特定の態様において、固形腫瘍は、乳癌であって、任意に、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である乳癌、または卵巣癌である。

３．図面の簡単な説明
図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせた抗Ｂ７－Ｈ４抗体のインビボ抗腫瘍有効性を示す。（実施例４参照） 抗Ｂ７－Ｈ４抗体の用量依存的な抗腫瘍活性を示す。（実施例４参照） 抗Ｂ７－Ｈ４抗体が単剤療法として有効ではない用量で投与される場合でも、抗Ｂ７－Ｈ４抗体が、抗ＰＤ１抗体と相乗的に組み合わされることを示す。（実施例４参照）

４．発明を実施するための形態
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト（例えばペムブロリズマブ）と組み合わせて、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を投与する方法が本明細書で提供される。抗Ｂ７－Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は、対象の固形腫瘍を治療するために、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト（例えば、ペムブロリズマブ）と組み合わせて投与され得る。特定の実施形態において、対象に、約２０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇの抗体またはその抗原結合断片を、約２００ｍｇのペムブロリズマブと組み合わせて投与され、例えば、投与は約３週間毎に行われる。

４．１専門用語
本明細書で使用される場合、「Ｂ７－Ｈ４」という用語は、これに限定されないが、天然Ｂ７－Ｈ４ポリペプチド及びＢ７－Ｈ４ポリペプチドのアイソフォームを含む哺乳動物Ｂ７－Ｈ４ポリペプチドを指す。「Ｂ７－Ｈ４」は、完全長の未処理Ｂ７－Ｈ４ポリペプチド、ならびに細胞内での処理から生じるＢ７－Ｈ４ポリペプチドの形態を包含する。本明細書で使用される場合、「ヒトＢ７－Ｈ４」という用語は、配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。「Ｂ７－Ｈ４ポリヌクレオチド」、「Ｂ７－Ｈ４ヌクレオチド」、または「Ｂ７－Ｈ４核酸」は、Ｂ７－Ｈ４をコードするポリヌクレオチドを指す。

「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせの標的を認識し、それに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗体が所望の生物学的活性を示す限り、無傷のポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、及び任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、任意の５つの主要クラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）であり得、それらは、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューとそれぞれ称されるそれらの重鎖定常ドメインの同一性に基づく。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なる周知のサブユニット構造及び３次元構成を有する。抗体は、裸であるか、または毒素、放射性同位体などの他の分子に結合され得る。

「抗体断片」という用語は、無傷の抗体の一部分を指す。「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、または「抗原結合領域」は、抗原に結合する無傷の抗体の一部分を指す。抗原結合断片は、無傷の抗体の抗原認識部位（例えば、抗原に特異的に結合するのに十分な相補性決定領域（ＣＤＲ））を含有することができる。抗体の抗原結合断片の例としては、これに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、直鎖抗体、及び単鎖抗体を含む。抗体の抗原結合断片は、げっ歯動物（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）及びヒトなどの任意の動物種由来であってもよく、または人工的に産生されてもよい。

「抗Ｂ７－Ｈ４抗体」、「Ｂ７－Ｈ４抗体」、及び「Ｂ７－Ｈ４に結合する抗体」という用語は、抗体がＢ７－Ｈ４を標的とする診断剤及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＢ７－Ｈ４に特異的に結合することができる抗体を指す。本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、及び「特異的に認識する」という用語は、抗体またはその抗原結合断片の文脈において類似の用語である。これらの用語は、抗体またはその抗原結合断片が、その抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び結合が、抗原結合ドメイン及びエピトープの間のある程度の相補性を伴うことを示す。したがって、ヒトＢ７－Ｈ４（配列番号１）に「特異的に結合する」抗体は、他の種からのＢ７－Ｈ４（例えば、カニクイザル、マウス、及び／またはラットのＢ７－Ｈ４）、及び／または他のヒト対立遺伝子から産生されるＢ７－Ｈ４タンパク質にも結合し得るが、非関連の非Ｂ７－Ｈ４タンパク質（例えば、ＰＤ－Ｌ１などの他のＢ７タンパク質ファミリーメンバー）への結合の程度は、例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるように、抗体のＢ７－Ｈ４への結合の約１０％未満である。特定の実施形態において、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＢ７－Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が本明細書で提供される。

「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な結合に関与する均質な抗体または抗原結合断片集団を指す。これは、典型的には、異なる抗原決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片という用語は、無傷及び完全長のモノクローナル抗体の両方だけでなく、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、これらに限定されないが、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物を含む任意の方法で作製されるそのような抗体及びその抗原結合断片を指す。

本明細書で使用される場合、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、互換的に使用され、当該技術分野で一般的である。可変領域は、典型的には、抗体の一部分、概して軽鎖または重鎖の一部分を指し、典型的には、成熟重鎖における約アミノ末端１１０～１２０アミノ酸または１１０～１２５アミノ酸、及び成熟軽鎖における約９０～１１５アミノ酸であり、これらは抗体間で配列が異なり、その特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性において使用される。配列の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される領域に濃縮され、一方、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。いずれかの特定の機構または理論に拘束されることを望むものではないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗体と抗原との相互作用及び特異性に主に関与していると考えられている。ある特定の実施形態において、可変領域は、ヒト可変領域である。ある特定の実施形態において、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態において、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。ある特定の実施形態において、可変領域は、げっ歯類またはマウスＣＤＲ及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。

「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、互換的に使用され、抗体の軽鎖可変領域を指す。

「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、互換的に使用され、抗体の重鎖可変領域を指す。

「Ｋａｂａｔ付番」という用語及び同様の用語は、当該技術分野で認識され、抗体またはその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖の可変領域内のアミノ酸残基に付番するシステムを指す。ある特定の態様において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番システムに従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ＆Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参照）。Ｋａｂａｔ付番システムを使用して、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸３１～３５位、３５に続いて任意に１つまたは２つの追加のアミノ酸を含み得（Ｋａｂａｔ付番スキームでは３５Ａ及び３５Ｂと称される）（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０～６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸９５～１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ付番システムを使用して、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸２４～３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０～５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸８９～９７位（ＣＤＲ３）に存在する。特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲが、Ｋａｂａｔ付番スキームに従って決定されている。

Ｃｈｏｔｈｉａは代わりに、構造ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ付番規則を使用して付番されるときのＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの終了は、ループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４の間で変化する（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームが挿入をＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに配置するためであり、３５Ａ及び３５Ｂが存在しない場合、ループは３２で終了し、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ構造ループの間の妥協を表し、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。

本明細書で使用される場合、「定常領域」及び「定常ドメイン」という用語は、互換性があり、及び当該技術分野でそれらの共通の意味を有する。定常領域は、抗体部分、例えば、軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端部分であり、それは抗体の抗原への結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示すことができる。免疫グロブリン分子の定常領域は、概して、免疫グロブリン可変ドメインと比較してより保存されたアミノ酸配列を有する。ある特定の態様において、抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に十分な定常領域またはその一部を含む。

本明細書で使用される場合、「重鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づく任意の別個の型、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指し得、これらは、それぞれ、ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４を含む、抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭクラスをもたらす。重鎖アミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。特定の実施形態において、重鎖は、ヒト重鎖である。

本明細書で使用される場合、「軽鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づく任意の別個の型、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）を指し得る。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。特定の実施形態において、軽鎖は、ヒト軽鎖である。

「キメラ」抗体またはその抗原結合断片という用語は、アミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体またはその抗原結合断片を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する哺乳動物の１つの種（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体またはその抗原結合断片の可変領域に対応し、一方、定常領域は、その種において免疫応答を誘発することを避けるために、別の種（通常はヒト）に由来する抗体またはその抗原結合断片中の配列と相同である。

「ヒト化」抗体またはその抗原結合断片という用語は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有する、特異的免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはその断片である、非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合断片の形態を指す。典型的には、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、相補的決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基に置き換えられる（「ＣＤＲ移植された」）ヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８））。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのある特定のＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種由来の抗体または断片中の対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、Ｆｖフレームワーク領域内及び／または非ヒトＣＤＲ残基内のいずれかの追加の残基の置換によってさらに修飾され、抗体またはその抗原結合断片の特異性、親和性、及び／または能力を精製及び最適化し得る。概して、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてを含有する可変ドメインを含むが、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体またはその抗原結合断片はまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分も含み得る。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９－９７３（１９９４）、及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５－９０４（１９９６）に記載されている。いくつかの実施形態において、「ヒト化抗体」は、再表面化抗体である。

「ヒト」抗体またはその抗原結合断片という用語は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合断片を意味し、そのような抗体または抗原結合断片は、当該技術分野で既知の任意の技術を使用して作製される。ヒト抗体またはその抗原結合断片のこの定義は、無傷または完全長の抗体及びその断片を含む。

「アフコシル化」抗体もしくはその抗原結合断片、または「フコースを欠く」抗体もしくはその抗原結合断片は、その定常領域グリコシル化にフコースを欠くＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３アイソタイプ抗体もしくはその抗原結合断片を指す。ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３のグリコシル化は、最大２Ｇａｌ残基で終了するコアフコシル化二分岐複合体オリゴ糖グリコシル化としてＡｓｎ２９７で生じる。いくつかの実施形態において、アフコシル化抗体はＡｓｎ２９７でフコースを欠く。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じてＧ０、Ｇ１（１，６または１，３）、またはＧ２グリカン残基として指定される。例えば、Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．１：４４－５３（２００３）を参照されたい。抗体ＦｃのＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｆ．ＦＬ，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．１４：２０１－２０７（１９９７）に記載されている。

フコースを測定する方法は、当該技術分野で既知の任意の方法を含む。本明細書における目的のために、フコースは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／０１７６００の実施例１に記載される方法によって検出される。簡潔には、グリカン分析は、抗体からグリカンを放出すること（例えば、酵素放出によって）、グリカンをアントラニン酸（２－ＡＡ）で標識すること、次いで標識されたグリカンを精製することによって実行される。蛍光検出を備えた順相ＨＰＬＣを使用して、グリカンを分離し、そして抗体中の各グリカンの相対量を測定する。グリカンは、質量分析によってフコースを欠くか、または含むものとして確実に同定され得る。いくつかの実施形態において、フコースは、複数のアフコシル化抗体またはその抗原結合断片を含む組成物中では検出できない。いくつかの実施形態において、アフコシル化抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性が増強している。いくつかの実施形態において、アフコシル化抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する親和性が増強している。いくつかの実施形態において、アフコシル化抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する親和性が増強している。

「結合親和性」は、概して、分子（例えば、抗体またはその抗原結合断片）の単一の結合部位及びその結合パートナー（例えば、抗原）の間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体またはその抗原結合断片及び抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、概して、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表し得る。親和性は、これらに限定されないが、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）及び平衡会合定数（Ｋ_Ａ）を含む当該技術分野で既知のいくつかの方法で測定及び／または表すことができる。Ｋ_Ｄは、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの商から計算され、Ｋ_Ａは、ｋ_ｏｎ／ｋ_ｏｆｆの商から計算される。ｋ_ｏｎは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原への会合速度定数を指し、ｋ_ｏｆｆは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原からの解離を指す。ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡなどの当業者に既知の技法によって決定され得る。

本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当技術分野での用語であり、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合することができる抗原の局所領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチド（直鎖状または連続的なエピトープ）の連続的なアミノ酸であり得、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（１つまたは複数）の２つ以上の非連続領域（立体配座、非直鎖状、不連続、または非連続的エピトープ）から一体となり得る。ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例えば、液体クロマトグラフィー質量分析）を伴う水素／重水素交換、アレイベースオリゴペプチド走査アッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定され得る。Ｘ線結晶学について、結晶化は、当該技術分野で既知の方法のいずれかを使用して達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ４）：３３９－３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３、Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３）。抗体／その抗原結合断片：抗原の結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究され得、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって分配されている、Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４ ＆ １１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ．，ＵＳ２００４／００１４１９４参照）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ１）：３７－６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ１０）：１３１６－１３２３）などのコンピュータソフトウェアを使用して精製され得る。変異誘発マッピング研究は、当業者に知られる任意の方法を使用して達成され得る。例えば、アラニン走査変異誘発技法を含む変異誘発技法の説明について、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ ＆ Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。

「プログラム細胞死タンパク質１」及び「ＰＤ－１」という用語は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫抑制性受容体を指す。ＰＤ－１は、主にインビボで以前に活性化されたＴ細胞上で発現し、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の２つのリガンドに結合する。本明細書で使用される「ＰＤ－１」という用語は、ヒトＰＤ－１（ｈＰＤ－１）、ｈＰＤ－１の天然に発生する変異体及びアイソフォーム、ならびにｈＰＤ－１の種ホモログを含む。

「プログラム細胞死１リガンド１」及び「ＰＤ－Ｌ１」という用語は、ＰＤ－１に結合するとＴ細胞活性化及びサイトカイン分泌を下方制御する、ＰＤ－１のための２つの細胞表面糖タンパク質リガンドのうちの１つを指す（他方はＰＤ－Ｌ２である）。「ＰＤ－Ｌ１」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒトＰＤ－Ｌ１（ｈＰＤ－Ｌ１）、ｈＰＤ－１の天然に発生する変異体及びアイソフォーム、ならびにｈＰＤ－Ｌ１の種ホモログを含む。

「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路を破壊する部分を指す。いくつかの実施形態において、アンタゴニストはＰＤ－１及び／またはＰＤ－Ｌ１に結合することによってＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路を阻害する。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストはＰＤ－Ｌ２にも結合する。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合、及び任意にＰＤ－Ｌ２への結合を遮断する。非限定的な例示的なＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１に結合する抗体など、例えば、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ）及びペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ）といったＰＤ－１アンタゴニスト；ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体など（例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ）、デュルバルマブ、及びアベルマブ）のＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト；ＡＭＰ－２２４などの融合タンパク質；ならびにＡＵＲ－０１２などのペプチドを含む。

「ペムブロリズマブ」は、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．によって市販されているＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）と称される市販の医薬調製物中の活性成分であるヒト化抗ＰＤ－１モノクローナル抗体を指す。

「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然に見られない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、それらがもはや天然に見られる形態ではない程度に精製されたものを含む。いくつかの実施形態において、単離される抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。本明細書で使用される場合、「実質的に純粋」は、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％純粋である材料を指す。

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書で互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。そのポリマーは、直鎖状または分枝状であってよく、修飾されたアミノ酸を含み得、非アミノ酸によって中断され得る。また、この用語は、天然にまたは介入、例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合などのその他の操作もしくは修飾によって修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。定義には、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）だけでなく当該技術分野で既知である他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。本発明のポリペプチドは抗体に基づくため、ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、単鎖または関連鎖として生じ得ることを理解されたい。

本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、任意の種類の細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞株由来の細胞であり得る。特定の実施形態において、「宿主細胞」という用語は、核酸分子を導入した細胞、及びそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、例えば、後世に生じ得る変異もしくは環境影響、または核酸分子の宿主細胞ゲノムへの統合のために、核酸分子を導入された親細胞と同一ではない場合がある。

「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物活性が有効であることを可能にするような形態であり、その製剤が投与される対象に対して許容できないほど毒性のある追加の成分を含有しない調製物を指す。製剤は無菌であり得る。

「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」などの用語は、本明細書で使用される場合、薬物、例えば、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を所望の生物学的作用部位に送達することを可能にするために使用され得る方法を指す（例えば、静脈内投与）。本明細書に記載の薬剤及び方法とともに用いられ得る投与技術は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．に見出される。

本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、相互的に使用される。対象は、動物であり得る。いくつかの実施形態において、対象は、非ヒト動物（例えば、雌ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サル、または他の霊長類など）などの哺乳動物である。いくつかの実施形態において、対象はカニクイザルである。いくつかの実施形態において、対象は、ヒトである。

「治療有効量」という用語は、対象において疾患または障害を治療するのに有効な、薬物、例えば、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の量を指す。がんの場合、薬物の治療有効量は、がん細胞の数を減少させ得る、腫瘍サイズもしくは負担を減少させ得る、末梢臓器へのがん細胞浸潤をある程度阻害し得る；腫瘍転移をある程度阻害し得る、腫瘍成長をある程度阻害し得る、がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度緩和し得る、及び／または増加した無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、または場合によっては安定性疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、減少した進行までの時間（ＴＴＰ）、またはそれらの任意の組み合わせなどの良好な奏効をもたらし得る。薬物が既存のがん細胞の成長を防止及び／または死滅させることができる範囲で、それは、細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性であり得る。

「治療すること」、「治療」、「治療する」、「緩和すること」及び「緩和する」などの用語は、病理学的状態または障害を治癒する、減速させる、症状を軽減させる、及び／または進行を停止させる治療手段を指す。したがって、治療を必要としているものには、障害と既に診断されているもの、または障害を有する疑いがあるものが含まれる。ある特定の実施形態において、患者が、以下のうちの１つ以上を示す場合、本発明の方法に従って、対象はがんについてうまく「治療」される：がん細胞の数の減少または完全な不在；腫瘍サイズの減少；例えば、がんの軟組織及び骨への拡散を含むがん細胞の末梢臓器への浸潤の阻害または不在；腫瘍転移の阻害または不在；腫瘍増殖の阻害または不在；腫瘍増殖の阻害または不在；特定のがんに関連する１つ以上の症状の緩和；罹患率及び死亡率の減少；生活の質の改善；腫瘍の腫瘍原性、腫瘍発生頻度、または腫瘍発生能力の減少；腫瘍における腫瘍幹細胞の数または頻度の減少；腫瘍発生状態への腫瘍細胞の分化；増加した無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定性疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、減少した進行までの時間（ＴＴＰ）、またはそれらの任意の組み合わせ。

「がん」及び「がん性」という用語は、細胞集団が調節されていない細胞増殖によって特徴付けられる哺乳動物の生理学的状態を指すか、または説明する。がんの例としては、これらに限定されないが、婦人科癌（例えば、乳癌（トリプルネガティブ乳癌、ホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌、腺管癌、卵巣癌、及び子宮内膜癌を含む））、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）及び膀胱癌（例えば、尿路上皮細胞癌）を含む。がんは、「Ｂ７－Ｈ４を発現する癌」または「Ｂ７－Ｈ４発現癌」または「Ｂ７－Ｈ４陽性癌」であり得る。そのような用語は、Ｂ７－Ｈ４を発現する細胞を含むがんを指す。がんは、Ｂ７－Ｈ４を発現する固形腫瘍であり得る。がんは、原発性腫瘍であり得るか、または進行性もしくは転移性癌であり得る。

「難治性」がんは、化学療法などの抗腫瘍治療ががん患者に施されても進行するがんである。

「再発」がんは、初期治療に対する応答後に、初期部位または遠隔部位のいずれかで再成長したがんである。

本明細書で実証されるように、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、及び抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片の投与は、「相乗効果」を提供し得る、または「相乗的」であり得る、すなわち、活性成分が一緒に使用されるときに達成される効果は、活性成分を別々に使用することから生じる効果の合計よりも大きい。有効成分が以下である場合、相乗効果を獲得し得る：（１）併用単位用量製剤において、共製剤化され、及び同時に投与され、または送達されるか、（２）別個の製剤として連続的に、交互に、または並行して送達されるか、または（３）いくつかの他のレジメンによる。交互療法で送達される場合、化合物が、例えば、別個のシリンジ内の異なる注射によって、連続的に投与または送達される場合、相乗効果は獲得され得る。

本開示及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上別途明確に指示されない限り、複数の形態を含む。

実施形態が「含む」という言葉で本明細書に記載されている場合はそうでければ、「からなる」及び／または「から本質的になる」に関して記載されている類似の実施形態も提供されることが理解される。本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などは、米国特許法でそれらに帰属する意味を有し得、ならびに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」も同様に、米国特許法で帰属する意味を有し、この用語は制限がなく、記載されているものの基本的または新規の特性である限り、記載されているものよりも多く存在することができ、記載されている以上の存在によって変化しないが、先行技術の実施形態を除外する。

本明細書で使用される場合、文脈から特に記載または明らかでない限り、「または（ｏｒ）」という用語は、包含的であると理解される。本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」、及び「Ｂ」の両方を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、以下の実施形態のそれぞれを包含することが意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。

本明細書で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修正するために使用される場合、値または範囲の上方５％～１０％及び下方５％～１０％の偏差が記載された値または範囲の意図された意味内にとどまることを示す。

本明細書で提供される任意の組成物または方法は、本明細書で提供される他の組成物及び方法のうちのいずれかのうちの１つ以上と組み合わせることができる。

４．２がんを治療するための方法
一態様において、（ｉ）本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のそれらの医薬組成物を、（ｉｉ）本明細書に記載のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤または本明細書に記載のその医薬組成物と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含む、ヒト対象においてがんを治療するための方法であって、（ｉ）及び（ｉｉ）は、同時にまたは連続的に投与される、方法が提示される。「同時に」投与について、いくつかの実施形態において、（ｉ）及び（ｉｉ）のような薬剤が、一方が他方の後に投与されて同じ日に別個の製剤として投与され、または他の実施形態において、（ｉ）及び（ｉｉ）のような薬剤が、投与前に一緒に混合され、したがって、混合物として投与される。例えば、いくつかの実施形態において、（ｉ）及び（ｉｉ）中の薬剤は、同じバイアル（すなわち、固定用量製剤）中に梱包及び保管され得、または代替的に、各別個の薬剤を含むバイアルは、投与の直前に一緒に混合され得る。「連続的に」投与について、（ｉ）及び（ｉｉ）のような薬剤は、異なる日に別個の製剤として投与される。様々な実施形態において、薬剤は、これに限定されないが、静脈内を含む様々な経路によってインビボで投与され得る。

抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片とＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤との組み合わせは、相乗的であり得る。

一態様において、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブである。ペムブロリズマブの重鎖及び軽鎖の配列を以下の表に列挙した。重鎖及び軽鎖の配列の文脈において、ＣＤＲ配列は太字で示され、可変領域配列は下線が引かれている。

一態様において、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブの重鎖及び軽鎖の可変領域ＣＤＲを含む抗体もしくは抗原結合断片、またはペムブロリズマブの重鎖及び軽鎖の可変領域を含む抗体もしくは抗原結合断片である。

一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）約０．００５～約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）約２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、例えば、３週間に約１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。

一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）約０．１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）約２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、例えば、３週間に約１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）約０．３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）約２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、例えば、３週間に約１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）約１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）約２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、例えば、３週間に約１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）約３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）約２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、例えば、３週間に約１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）約１０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）約２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、例えば、３週間に約１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）約２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、例えば、３週間に約１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。

一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）０．１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、３週間に１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）０．３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、例えば、３週間に１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）１ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、３週間に１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）３ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、３週間に１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が、３週間に１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。一態様において、ヒト対象におけるがんを治療する方法は、それを必要とする対象に、（ｉ）２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書に記載のその医薬組成物と、（ｉｉ）２００ｍｇのペンブロリズマブが投与される、ペンブロリズマブまたは本明細書に記載のその医薬組成物と、を投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が３週間に１回の頻度で同時にまたは連続的に投与される。

本明細書で提供される方法のある特定の実施形態において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物は、静脈内に投与される。本明細書で提供される方法のある特定の実施形態において、ペムブロリズマブまたはその医薬組成物は、静脈内に投与される。

ある特定の実施形態において、乳癌（例えば、進行性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、ホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌、または腺管癌）、子宮内膜癌、卵巣癌、尿路上皮癌、非小細胞肺癌（例えば、扁平上皮癌）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、ホジキンリンパ腫（例えば、古典的ホジキンリンパ腫）、黒色腫、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）、膀胱癌（例えば、尿路上皮癌）、胃癌、子宮頸癌及び高頻度マイクロサテライト不安定性癌からなる群から選択されるがんを治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、進行性乳癌（トリプルネガティブ乳癌、ホルモン受容体（ＨＲ）陽性を含む）、卵巣癌、子宮内膜癌、または尿路上皮癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、乳癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。特定の実施形態において、ホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、卵巣癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、子宮内膜癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、尿路上皮癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、消化管癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、婦人科癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、頭頸部癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、泌尿生殖器癌を治療する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される、対象は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストによる以前の療法を受けたことがない。ある特定の実施形態において、そのような方法は、本明細書で提供される抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書で提供される抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、本明細書で提供されるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤またはその医薬組成物と組み合わせて、それを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含む。

いくつかの実施形態において、がんは、Ｂ７－Ｈ４発現癌である。ある特定の実施形態において、がんは、Ｂ７－Ｈ４を発現する固形腫瘍である。ある特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４は、対象から得られた生物学的試料中で検出されている（例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ））。

生物学的試料は、対象、細胞株、組織、またはＢ７－Ｈ４を潜在的に発現する他の細胞の供給源から得られる任意の生物学的試料であり得る。ヒトから組織生検及び体液を得るための方法は、当該技術分野で周知である。生物学的試料は、末梢単核血細胞を含む。生物学的試料はまた、循環腫瘍細胞（または「ＣＴＣ」）がＢ７－Ｈ４を発現し、検出され得る血液試料であり得る。

Ｂ７－Ｈ４タンパク質の発現レベルのアッセイは、第１の生物学的試料中のＢ７－Ｈ４タンパク質のレベルを、直接的に（例えば、絶対的なタンパク質レベルを決定または推定することによって）または相対的に（例えば、第２の生物学的試料中のタンパク質レベルと比較することによって）定性的または定量的に測定または推定することを含むことが意図される。第１の生物学的試料中のＢ７－Ｈ４ポリペプチド発現レベルを測定または推定し、標準的なＢ７－Ｈ４タンパク質レベルと比較することができ、標準は、罹患していない第２の生物学的試料から決定されるか、または罹患していない試料の集団からのレベルを平均化することによって決定される。当該技術分野では理解されるように、「標準」Ｂ７－Ｈ４ポリペプチドレベルが既知であれば、比較のための標準として繰り返し使用され得る。

別の実施形態において、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物は、がんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与され、患者におけるＴ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、またはＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を増加させる。_Hlk527272340そのような実施形態において、本明細書に記載のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、例えば、ペムブロリズマブも、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２への結合を遮断し、Ｔ細胞を活性化するために患者に投与される。_Hlk527272340別の実施形態において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物は、がんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与され、患者におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮγ）産生を増加させる。そのような実施形態において、本明細書に記載のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、例えば、ペムブロリズマブも、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２への結合を遮断し、Ｔ細胞を活性化するために患者に投与される。別の実施形態において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物は、がんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与され、患者のＴ細胞に対するＢ７－Ｈ４の阻害活性を遮断する。そのような実施形態において、本明細書に記載のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、例えば、ペムブロリズマブも、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２への結合を遮断し、Ｔ細胞を活性化するために患者に投与される。別の実施形態において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、または医薬組成物は、がんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与され、患者におけるＢ７－Ｈ４発現がん細胞を枯渇させる。そのような実施形態において、本明細書に記載のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、例えば、ペムブロリズマブも、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２への結合を遮断し、Ｔ細胞を活性化するために患者に投与される。

いくつかの実施形態において、本発明は、薬剤として、ペムブロリズマブなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたはその医薬組成物と組み合わせて使用するための、本明細書で提供される抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、または医薬組成物に関し、薬剤は、その抗体もしくはその抗原結合断片を約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇ）で、及び約２００ｍｇのペムブロリズマブを投与するためのものである。そのような実施形態において、抗体またはその抗原結合断片、及びペムブロリズマブは、同時にまたは連続的に投与するために共製剤化または別個に製剤化され得る。いくつかの態様において、本発明は、がんの治療方法において、ペンブロリズマブなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたはその医薬組成物と組み合わせて使用するための、本明細書で提供される抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物に関し、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体またはその抗原結合断片が投与され、約２００ｍｇのペンブロリズマブが投与され、投与は連続または同時である。いくつかの態様において、本発明は、対象のがんの治療方法において、ペムブロリズマブなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスと組み合わせて使用するための、本明細書で提供されるアント－Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物に関し、対象に、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書で提供される医薬組成物、及び約２００ｍｇペンブロリズマブを投与することを含み、投与は、連続または同時である。

いくつかの実施形態において、本発明は、薬剤として、ペムブロリズマブなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたはその医薬組成物と組み合わせて使用するための本明細書で提供される抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片、またはその医薬組成物に関し、薬剤は、抗体もしくはその抗原結合断片を０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇ）で、及び２００ｍｇのペムブロリズマブを投与するためのものである。そのような実施形態において、抗体またはその抗原結合断片、及びペムブロリズマブは、同時にまたは連続的に投与するために共製剤化または別個に製剤化され得る。いくつかの態様において、本発明は、がんの治療方法において、ペンブロリズマブなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたはその医薬組成物と組み合わせて使用するための、本明細書で提供される抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物に関し、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体またはその抗原結合断片が投与され、２００ｍｇのペンブロリズマブが投与され、投与は連続または同時である。いくつかの態様において、本発明は、対象のがんの治療方法において、ペムブロリズマブなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスと組み合わせて使用するための、本明細書で提供されるアント－Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物に関し、対象に、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体もしくはその抗原結合断片または本明細書で提供される医薬組成物、及び２００ｍｇペンブロリズマブを投与することを含み、投与は、連続または同時である。

ある特定の態様において、ヒトＰＤ－１のアミノ酸は、
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号４０）である。

ある特定の態様において、ヒトＰＤ－Ｌ１のアミノ酸配列は、
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号４１）である。

４．３ Ｂ７－Ｈ４抗体及びその抗原結合断片
対象に、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に特異的に結合する抗体（例えば、キメラ、ヒト化、またはヒトの抗体などのモノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を、ペムブロリズマブなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストと組み合わせて投与することを含む、ヒト対象のがんを治療する方法が本明細書で提供される。本明細書で提供される方法において使用され得る例示的なＢ７－Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は、当該技術分野で既知である。ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＢ７－Ｈ４についてのアミノ酸配列が当該技術分野で既知であり、それぞれ配列番号１～４によって表されるように本明細書でも提供される。
ヒトＢ７－Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＦＡＩＳＷＡＬＬＰＬＳＰＹＬＭＬＫ（配列番号１）
カニクイザルＢ７－Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＦＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＩＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＬＡＩＳＷＡＬＬＰＬＡＰＹＬＭＬＫ（配列番号２）
マウスＢ７－Ｈ４
ＭＡＳＬＧＱＩＩＦＷＳＩＩＮＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＫＨＦＩＴＶＴＴＦＴＳＡＧＮＩＧＥＤＧＴＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＮＧＩＶＩＱＷＬＫＥＧＩＫＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＤＬＳＱＱＨＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＶＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＴＣＹＩＲＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＩＮＶＤＹＮＡＳＳＥＳＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＡＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＤＳＥＶＫＲＲＳＱＬＱＬＬＮＳＧＰＳＰＣＶＦＳＳＡＦＶＡＧＷＡＬＬＳＬＳＣＣＬＭＬＲ（配列番号３）
ラットＢ７－Ｈ４
ＭＡＳＬＧＱＩＩＦＷＳＩＩＮＶＩＩＩＬＡＧＡＩＶＬＩＩＧＦＧＩＳＧＫＨＦＩＴＶＴＴＦＴＳＡＧＮＩＧＥＤＧＴＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＮＧＩＶＩＱＷＬＫＥＧＩＫＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＤＬＳＱＱＨＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＶＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＴＣＹＩＨＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＩＮＶＤＹＮＡＳＳＥＳＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＡＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＤＳＥＶＫＲＲＳＱＬＥＬＬＮＳＧＰＳＰＣＶＳＳＶＳＡＡＧＷＡＬＬＳＬＳＣＣＬＭＬＲ（配列番号４）

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒト及びカニクイザルのＢ７－Ｈ４に特異的に結合する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒト、マウス、及びラットのＢ７－Ｈ４に特異的に結合する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＢ７－Ｈ４に特異的に結合する。

Ｂ７－Ｈ４は、ＩｇＣエクトドメイン（配列番号１のアミノ酸１５３～２４１）及びＩｇＶエクトドメイン（配列番号１のアミノ酸３５～１４６）を含有する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４のＩｇＶドメインに特異的に結合する。したがって、配列番号１のアミノ酸３５～１４６からなるポリペプチドに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を投与する方法が本明細書で提供される。

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表１及び表２において提供され列挙される２０５０２抗体の６つのＣＤＲを含む。「２０５０２」は、本明細書に記載される２０５０２抗体を指す。
表１．ＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列^１

^１表１のＶＨ ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定される。
表２．ＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列^２

^２表２のＶＬ ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定される。

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表３に列挙される２０５０２抗体のＶＨを含む。
表３：可変重鎖（ＶＨ）アミノ酸配列

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表４に列挙される２０５０２抗体のＶＬを含む。
表４：可変軽鎖（ＶＬ）アミノ酸配列

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表３及び表４に列挙される２０５０２抗体のＶＨ及びＶＬを含む。

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表５に列挙される２０５０２抗体のＶＨフレームワーク領域を含む。
表５ＶＨ ＦＲアミノ酸配列^３

^３表５に記載されるＶＨフレームワーク領域は、ＣＤＲについてのＫａｂａｔ付番システムの境界に基づいて決定される。したがって、ＶＨ ＣＤＲはＫａｂａｔによって決定され、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４の形式の可変領域におけるＣＤＲを取り囲むアミノ酸残基である。

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表６に列挙される２０５０２抗体のＶＬフレームワーク領域を含む。
表６．ＶＬ ＦＲアミノ酸配列^４

^４表６に記載されるＶＬフレームワーク領域は、ＣＤＲに対するＫａｂａｔ付番システムの境界に基づいて決定される。したがって、ＶＬ ＣＤＲはＫａｂａｔによって決定され、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の形式の可変領域におけるＣＤＲを取り囲むアミノ酸残基である。

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表５及び表６に列挙される２０５０２抗体の４つのＶＨフレームワーク領域ならびに４つのＶＬフレームワーク領域を含む。

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表７に列挙される２０５０２抗体の重鎖配列を含む。
表７：完全長重鎖アミノ酸配列

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表８に列挙される２０５０２抗体の軽鎖配列を含む。
表８：完全長軽鎖アミノ酸配列

ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体または抗原結合断片は、ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、表７及び表８に列挙される２０５０２抗体の重鎖配列及び軽鎖配列を含む。

ある特定の態様において、本明細書に記載の方法において使用するための抗体またはその抗原結合断片は、そのＶＬドメイン単独、またはそのＶＨドメイン単独、またはその３ＶＬ ＣＤＲ単独、またはその３ＶＨ ＣＤＲ単独によって記載される。例えば、Ｒａｄｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ ９５：８９１０－８９１５を参照されたく、それは参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、ヒト軽鎖または重鎖ライブラリからそれぞれ補完的な軽鎖または重鎖を同定し、元の抗体の親和性よりも高いまたは高い親和性を有するヒト化抗体変異体をもたらすことによって、マウス抗αｖβ３抗体のヒト化を説明している。Ｃｌａｃｋｓｏｎ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８を参照されたく、それは参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、特定のＶＬドメイン（またはＶＨドメイン）を使用し、相補的なＶＨドメインまたは（ＶＬドメイン）についてライブラリをスクリーニングすることによって、特定の抗原に特異的に結合する抗体を産生する方法を記載している。スクリーンは、ＥＬＩＳＡによって決定されるように、強力な結合剤であった、特定のＶＨドメインのための１４の新しいパートナー及び特定のＶＬドメインのための１３の新しいパートナーを産生した。Ｋｉｍ ＳＪ＆Ｈｏｎｇ ＨＪ，（２００７）Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ４５：５７２－５７７もまた参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、特定のＶＨドメインを使用し、ライブラリ（例えば、ヒトＶＬライブラリ）を相補的ＶＬドメイン、選択されたＶＬドメインについてスクリーニングし、次いで、追加の相補的（例えば、ヒト）ＶＨドメインの選択を導くために使用され得ることによって、特定の抗原に特異的に結合する抗体を産生する方法を記載している。

ある特定の態様において、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、免疫グロブリン構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ付番スキームに従って決定され得る（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ＆Ｌｅｓｋ ＡＭ，（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：７９９－８１７、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５（１）：１７５－８２、及び米国特許第７，７０９，２２６号参照）。典型的には、Ｋａｂａｔ付番規則を使用する場合、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループは、重鎖アミノ酸２６～３２、３３、または３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２ループは、重鎖アミノ酸５２～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ３ループは、重鎖アミノ酸９５～１０２に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ１ループは、軽鎖アミノ酸２４～３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２ループは、軽鎖アミノ酸５０～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ３ループは、軽鎖アミノ酸８９～９７に存在する。Ｋａｂａｔ付番規則を使用して付番されるときのＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの終了は、ループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４の間で変化する（これは、Ｋａｂａｔ付番スキームが挿入をＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに配置するためであり、３５Ａ及び３５Ｂが存在しない場合、ループは３２で終了し、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。

ある特定の態様において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に特異的に結合し、表３及び表４に列挙される２０５０２抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片を投与する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に特異的に結合し、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔ ＣＤＲが同じアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を投与する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に特異的に結合し、かつ、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組み合わせを含む抗体及びその抗原結合断片を投与する方法が本明細書で提供される。

ある特定の態様において、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７：１３２－１３６及びＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７：２０９－２１２に記載されているＩＭＧＴ付番システムに従って決定され得る。ＩＭＧＴ付番スキームによれば、ＶＨ－ＣＤＲ１は２６～３５位にあり、ＶＨ－ＣＤＲ２は５１～５７位にあり、ＶＨ－ＣＤＲ３は９３～１０２位にあり、ＶＬ－ＣＤＲ１は２７～３２位にあり、ＶＬ－ＣＤＲ２は５０～５２位にあり、ＶＬ－ＣＤＲ３は８９～９７位にある。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に特異的に結合し、例えば、上記のＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ（１９９９）及び上記のＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）に記載されるように、表３及び４に列挙される２０５０２抗体のＩＭＧＴ ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片を投与する方法が本明細書で提供される。

ある特定の態様において、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２：７３２－７４５に従って決定され得る。例えば、Ｍａｒｔｉｎ Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｕｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ”Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）を参照されたい。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に特異的に結合し、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ ｅｔ ａｌ．の方法によって決定される表３及び表４に記載された２０５０２抗体のＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を投与する方法が本明細書で提供される。

ある特定の態様において、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＡｂＭ付番スキームに従って決定され得、それはＫａｂａｔ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ構造ループの間の妥協を表すＡｂＭ超可変領域を指し、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用される。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に特異的に結合し、ＡｂＭ付番スキームによって決定される表３及び表４に列挙される２０５０２抗体のＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を投与する方法が本明細書で提供される。

特定の態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗体を投与する方法が本明細書で提供される。

軽鎖に関して、特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、カッパ軽鎖である。ヒトカッパ軽鎖の定常領域は、以下のアミノ酸配列を含み得る：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）。

ヒトカッパ軽鎖の定常領域は、以下のヌクレオチド配列によってコードされ得る：
ＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ（配列番号２４）。

特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するためのＢ７－Ｈ４ポリペプチド（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、表４に示される配列を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。

特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するためのＢ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、重鎖を含み、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表３に示されるアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。

ヒトＩｇＧ_１重鎖の定常領域は、以下のアミノ酸配列を含み得る：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２５）。

ヒトＩｇＧ_１重鎖の定常領域は、以下のヌクレオチド配列によってコードされ得る：
ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ。（配列番号２６）

特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するためのＢ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、本明細書に記載の任意のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、定常領域は、ＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ）免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態において、本明細書に記載の方法において使用するためのＢ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、本明細書に記載の任意のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、定常領域は、ＩｇＧ_１（例えば、ヒトＩｇＧ_１）免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。

フコース含有量が減少した抗体は、Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡなどに対する親和性が増加することが報告されている。したがって、特定の実施形態において、本明細書に記載の方法で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、フコース含有量が減少されるか、またはフコースを欠く（すなわち、「アフコシル化される」）。そのような抗体またはその抗原結合断片は、当業者に既知の技法を使用して産生され得る。例えば、それらは、フコシル化能力が不十分かまたは欠く細胞において発現され得る。特定の例において、α１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）の両方の対立遺伝子をノックアウトした細胞株が素使用され得、フコース含有量が減少した抗体またはその抗原結合断片を産生される。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含有量が減少した抗体及びその抗原結合断片を産生するために使用され得るそのようなシステムの例である。あるいは、フコース含有量が減少したまたはフコース含有量がない抗体またはその抗原結合断片は、例えば、（ｉ）フコシル化を防止もしくは減少する条件下で細胞を培養すること、（ｉｉ）フコシダーゼの翻訳後除去（例えば、フコシダーゼ酵素で）、（ｉｉｉ）例えば、非グリコシル化糖タンパク質の組換え発現後、所望の炭水化物の翻訳後付加、または（ｉｖ）フコシル化されていない抗体もしくはその抗原結合断片を選択するための糖タンパク質の精製によって産生され得る。フコース含有量がないまたはフコース含有量が減少したその抗体を産生するための方法について、例えば、Ｌｏｎｇｍｏｒｅ ＧＤ＆Ｓｃｈａｃｔｈｔｅｒ Ｈ（１９８２）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ １００：３６５－９２及びＩｍａｉ－Ｎｉｓｈｉｙａ Ｈ ｅｔ ａｌ．，（２００７）ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：８４を参照されたい。

いくつかの実施形態において、アフコシル化Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、フコシル化Ｂ７－Ｈ４抗体または同じアミノ酸配列を有するその抗原結合断片と比較して、インビトロでの増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施形態において、アフコシル化Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、フコシル化Ｂ７－Ｈ４抗体による特異的溶解よりも少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５パーセント高い特異的溶解を引き起こす。特異的溶解は、本明細書の実施例２に記載されるように決定され得る。

いくつかの実施形態において、Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する強化され親和性を有する。いくつかの実施形態において、アフコシル化Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、フコシル化Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１５倍、少なくとも１７倍、または少なくとも２０倍高い親和性でＦｃガンマＲＩＩＩＡに結合する。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性は、表面プラズモン共鳴を使用して決定される。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及びＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）から選択される。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡはＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）である。

いくつかの実施形態において、フコースの存在は、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動、またはＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析を含む方法によって決定され得る。

特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）２０５０２のＣＤＲ配列、２０５０２のＶＨ及びＶＬ配列、または２０５０２の重及び軽鎖の配列を含み、（ｉｉ）アフコシル化されている。

特定の実施形態において、組成物は、（ｉ）２０５０２のＣＤＲ配列、２０５０２のＶＨ及びＶＬ配列、または２０５０２の重鎖及び軽鎖の配列を含み、かつ（ｉｉ）アフコシル化されている、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９５％がアフコシル化されているか、またはフコシル化が組成物中で検出できない、抗体またはその抗原結合断片を含む。

操作された糖型は、これらに限定されないが、エフェクター機能を増強または低下させることを含む様々な目的に有用であり得る。本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片における操作された糖型の生成方法は、これに限定されないが、例えば、Ｕｍａｎａ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７：１７６－１８０、Ｄａｖｉｅｓ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ７４：２８８－２９４、Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２６７３３－２６７４０、Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３４６６－３４７３、Ｎｉｗａ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １：６２４８－６２５５、Ｐｒｅｓｔａ ＬＧ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ ３０：４８７－４９０、Ｋａｎｄａ Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １７：１０４－１１８、米国特許第６，６０２，６８４号、同第６，９４６，２９２号、及び同第７，２１４，７７５号、米国特許公開第ＵＳ２００７／０２４８６００号、同２００７／０１７８５５１号、同２００８／００６００９２号、及び同２００６／０２５３９２８号、国際公開ＷＯ００／６１７３９号、同ＷＯ０１／２９２２４６号、同ＷＯ０２／３１１１４０号、及び同ＷＯ０２／３０９５４号、Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（商標）技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ならびにＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）グリコシル化工学技術（Ｇｌｙｃａｒｔ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）において開示されたものを含む。例えば、Ｆｅｒｒａｒａ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９３：８５１－８６１、国際公開第ＷＯ０７／０３９８１８号、同ＷＯ１２／１３０８３１号、同ＷＯ９９／０５４３４２号、同ＷＯ０３／０１１８７８号、及び同ＷＯ０４／０６５５４０を参照されたい。

ある特定の実施形態において、本明細書に記載される定常領域変異または修飾のいずれかは、２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片の１つまたは両方の重鎖定常領域に導入され得る。

別の特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、重鎖及び軽鎖を含み、（ｉ）重鎖が、表１（それぞれ配列番号５、６、及び７）に列挙される２０５０２抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み、（ｉｉ）軽鎖が、表２に記載されている２０５０２抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列（それぞれ配列番号８、９、及び１０）を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉｉ）重鎖が、ヒトＩｇＧ_１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインをさらに含み、及び（ｉｖ）軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインをさらに含む。

別の特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、重鎖及び軽鎖を含み、（ｉ）重鎖が、表３（配列番号１１）に列挙される２０５０２抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み、（ｉｉ）軽鎖が、表４（配列番号１２）に列挙される２０５０２抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉｉ）重鎖が、ヒトＩｇＧ_１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインをさらに含み、（ｉｖ）軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインをさらに含む。

特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞チェックポイント遮断活性を示す。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞におけるインターフェロン－γ（ＩＦＮγ）産生を増加させる。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞増殖を増加させる。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させる。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を増加させる。

特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも３００，０００個の細胞表面Ｂ７－Ｈ４分子を有する細胞株（例えば、ＳＫ－ＢＲ－３細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１００，０００個の細胞表面Ｂ７－Ｈ４分子を有する細胞株（例えば、ＨＣＣ１５６９細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも５０，０００個の細胞表面Ｂ７－Ｈ４分子を有する細胞株（例えば、ＺＲ－７５－１細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも３０，０００個の細胞表面Ｂ７－Ｈ４分子を有する細胞株（例えば、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。特定の実施形態において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１５，０００個の細胞表面Ｂ７－Ｈ４分子を有する細胞株（例えば、ＨＣＣ１９６４細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。

特定の態様において、Ｂ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びｓｃＦｖからなる群から選択され、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、またはｓｃＦｖは、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、当業者に既知の任意の技法によって産生され得る。ある特定の実施形態において、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、またはｓｃＦｖは、インビボで抗体の半減期を延長する部分をさらに含む。この部分は「半減期延長部分」とも称される。インビボでＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、またはｓｃＦｖの半減期を延長するための当業者に既知の任意の部分が使用され得る。例えば、半減期延長部分は、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブミン、またはアルブミン結合タンパク質もしくは化合物を含み得る。ポリマーは、天然または合成の、任意に置換された直鎖または分枝鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシルアルキレン、多糖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、またはそれらの誘導体を含み得る。置換基は、１つ以上のヒドロキシ基、メチル基、またはメトキシ基を含み得る。ある特定の実施形態において、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、またはｓｃＦｖは、半減期延長部分の結合のための１つ以上のＣ末端アミノ酸の付加によって修飾され得る。ある特定の実施形態において、半減期延長部分は、ポリエチレングリコールまたはヒト血清アルブミンである。ある特定の実施形態において、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、またはｓｃＦｖは、Ｆｃ領域に融合される。

４．４医薬組成物
生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤において所望の純度を有する抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を投与する方法が本明細書で提供される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いる投薬量及び濃度で受容者に対し無毒である。（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）、Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．、Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）、Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）参照）。インビボ投与のために使用されることになる組成物は無菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を介した濾過によって容易に達成される。

いくつかの実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、及び薬学的に許容される担体を含む。特定の実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも８０％がアフコシル化される。特定の実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも８５％がアフコシル化される。特定の実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９０％がアフコシル化される。特定の実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９５％がアフコシル化される。特定の実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９６％がアフコシル化される。特定の実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９７％がアフコシル化される。特定の実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９８％がアフコシル化される。特定の実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９９％がアフコシル化される。特定の実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、アフコシル化抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、フコースは組成物中で検出できない。

いくつかの実施形態において、医薬組成物を投与する方法が提供され、医薬組成物は、（ｉ）（ａ）配列番号５～１０それぞれの重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域、または（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖、を含むヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。

医薬組成物を投与する方法が本明細書で提供され、その医薬組成物は、（ｉ）ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、配列番号５～１０それぞれの重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む抗体またはその抗原結合断片、ならびに（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含み、その組成物中の抗体または抗原結合断片の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％がアフコシル化される。一実施形態において、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む、または（ｉｉ）抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物に加えて、さらなる医薬組成物を投与する方法も本明細書で提供される。そのような実施形態において、さらなる医薬組成物は、ペムブロリズマブなどのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストを含む。そのような実施形態において、ペムブロリズマブを含むさらなる医薬組成物は、再構成用の単回用量バイアル中の５０ｍｇの凍結乾燥粉末として、または単回用量バイアル中の１００ｍｇ／４ｍｌ（２５ｍｇ／ｍｌ）溶液として提供される。そのような実施形態において、所与の投与において２００ｍｇのペムブロリズマブを患者に送達するために、さらなる医薬組成物の量が提供される。さらなる医薬組成物は、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物と同時にまたは連続的に投与され得る。

４．５抗体産生及びポリヌクレオチド
免疫特異的にＢ７－Ｈ４（例えば、ヒトＢ７－Ｈ４）に結合する抗体及びその抗原結合断片は、抗体及びその抗原結合断片の合成について当該技術分野で知られている任意の方法、例えば、化学合成または組換え発現技術によって産生され得る。別段の指示がない限り、本明細書に記載の方法は、当該技術分野の範囲内の分子生物学、微生物学、遺伝解析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに関連分野における従来の技法を使用する。これらの技術は、例えば、本明細書に引用される参考文献に記載され、文献中で完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７ ａｎｄ ａｎｎｕａｌ ｕｐｄａｔｅｓ）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７ ａｎｄ ａｎｎｕａｌ ｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい。

特定の態様において、抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのような抗体または断片を含む医薬組成物を投与する方法を本明細書で提供し、抗体または断片は、宿主細胞中のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドの組換え発現によって産生される。

ある特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域、及びヌクレオチド配列にコードされるヒトガンマ（γ）重鎖定常領域を含む。ある特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号２６のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖定常ドメインを含む。
表９：重鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列

ある特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表１０に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表１０に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域、及びヌクレオチド配列にコードされるヒトラムダ軽鎖定常領域を含む。ある特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表１０に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域、及び配列番号２４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖定常ドメインを含む。
表１０：軽鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列

ある特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示される可変重鎖コードヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる可変重鎖、及び表１０に示される可変軽鎖コードヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる可変軽鎖を含む。

ある特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、（ｉ）表９に示される可変重鎖コードヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖、及びヌクレオチド配列にコードされるヒトガンマ（γ）重鎖定常領域、ならびに（ｉｉ）表１０に示される可変軽鎖コードヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖、及びヌクレオチド配列にコードされるヒトラムダ軽鎖定常領域を含む。

ある特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、（ｉ）表９に示される可変重鎖コードヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）、及び配列番号２６に示される重鎖定常ドメインコードヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖、ならびに（ｉｉ）表１０に示される可変軽鎖コードヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）、及び配列番号２４に示される軽鎖定常ドメインコードヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖を含む。

特定の態様において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片は、例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列での置き換え、及びｍＲＮＡ不安定性要素の除去によって最適化される抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドによってコードされる。コドン変化（例えば、遺伝子コードの縮重による同じアミノ酸をコードするコドン変化）を導入すること、及び／またはｍＲＮＡ中の阻害領域を排除することによって、組換え発現のための抗Ｂ７－Ｈ４抗体もしくはその抗原結合断片もしくはそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨドメイン、もしくはＶＬドメイン）をコードする最適化核酸を生成する方法は、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号、同第６，１７４，６６６号、同第６，２９１，６６４号、同第６，４１４，１３２号、及び同第６，７９４，４９８号に記載される最適化方法を適合させることによって実行され得る。

ポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡを含む。ＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であり得る。一本鎖である場合、ＤＮＡは、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡまたは１つ以上のイントロンを欠くＤＮＡである。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、非天然に発生するポリヌクレオチドである。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは組換えで産生される。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、単離される。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、天然成分から精製される。

ある特定の態様において、ベクター（例えば、発現ベクター）は、宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞における組換え発現のための抗Ｂ７－Ｈ４抗体及びその抗原結合断片、またはそのドメインをコードするヌクレオチド配列を含む。ある特定の態様において、細胞、例えば宿主細胞は、本明細書に記載の抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合断片）を組換え発現するためのそのようなベクターを含む。したがって、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片の産生方法は、宿主細胞においてそのような抗体またはその抗原結合断片を発現させることを含み得る。

発現ベクターは、従来の技法によって細胞（例えば、宿主細胞）に移行され得、次いで、得られた細胞は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２の６つのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖、軽鎖、または重鎖及び軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片）、またはそのドメイン（例えば、２０５０２のＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖、または軽鎖）を産生するために、従来の技法によって培養され得る。

ある特定の実施形態において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）は、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞において産生される。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）は、機能的アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）遺伝子を欠く宿主細胞において産生される。いくつかの実施形態において、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。

特定の実施形態において、本明細書で提供される方法に従って投与される抗体またはその抗原結合断片は、単離または精製される。概して、単離された抗体またはその抗原結合断片は、単離された抗体またはその抗原結合断片とは異なる抗原特異性を有する他の抗体またはその抗原結合断片を実質的に含まないものである。例えば、特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の調製物は、細胞材料及び／または化学前駆体を実質的に含まない。

以下の実施例は、説明のために提示され、限定するためではない。

５．実施例
このセクションの実施例は、説明のために提示され、限定するためではない。

５．１実施例１：複数の症状におけるＢ７－Ｈ４発現の有病率の評価
アーカイブ試料、全セクションの混合物、及び腫瘍マイクロアレイ上のＢ７－Ｈ４の存在を検出するために、Ｂ７－Ｈ４マウスモノクローナル抗体Ａ５７．１（ＡＴＣＣカタログ番号ＰＴＡ－５１８０）が使用された。試料は一次抗体で処置され、ＤＡＢに結合したポリマー検出システム（Ｖｅｎｔａｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して検出された。

Ｂ７－Ｈ４は、侵襲性腺管癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、及び子宮内膜癌を含む様々ながん患者から採取された腫瘍組織中の、膜及び細胞溶質中で容易に検出された。さらに、発現頻度は、表１１に列挙される症状においても高かった。
表１１：腫瘍におけるＢ７－Ｈ４検出

Ｂ７－Ｈ４は、乳癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）、膀胱癌（例えば、尿路上皮細胞癌）、膵臓癌、及び甲状腺癌などの他の癌において発現される。例えば、Ｚｈｕ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｓｉａｎ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ．１４：３０１１－３０１５（２０１１），Ｋｒａｍｂｅｃｋ Ａ，ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １０３：１０３９１－１０３９６（２００６）、Ｆａｎ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ．７：６７６８－６７７５（２０１４），Ｘｕ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １１：１８４１－１８４６（２０１６）、及びＬｉｕ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ８：２５２７－２５３４（２０１４）を参照されたい。

５．２実施例２：アフコシル化及びフコシル化２０５０２抗体
グリカン部分中のフコース含有量が低減したＦｃ領域を有する抗体は、完全フコシル化抗体と比較してより高いＡＤＣＣ活性を示し得る（Ｎｉｗａ Ｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１（６）：２３２７－３６（２００５））。Ｂ７－Ｈ４抗体は、通常フコシル化抗体を産生するためのＣＨＯ－ｘ細胞中で（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ８７（５）：６１４－２２（２００４））、及びアフコシル化抗体を産生するように操作されたＣＨＯ細胞株（ＣＨＯ－ｙ細胞）（ｉｄ．）中で産生された。

フコシル化及びアフコシル化２０５０２抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって特徴付けられた。簡潔に述べると、抗ヒトＦａｂ抗体をカルボキシル誘導体化ＳＰＲチップ表面に固定化し、その結果として生じる表面上に３０秒間、５ｕｇ／ｍｌで抗Ｂ７－Ｈ４抗体が捕捉された。次いで、様々な濃度（０ｎＭ、３．７ｎＭ、１１．１ｎＭ、３３．３ｎＭ、１００ｎＭ、及び３００ｎＭ）でＢ７－Ｈ４ ＩｇＶ－ｈｕＩｇＧ１が表面上に流され、会合フェーズ中に抗Ｂ７－Ｈ４抗体に結合させた後、解離フェーズ中に緩衝液洗浄した。
Ｂ７－Ｈ４ ＩｇＶ－ｈｕＩｇＧ１：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２９）

データは１：１結合モデルを使用して適合され、フコシル化及びアフコシル化２０５０２は、ヒトＢ７－Ｈ４タンパク質へ同様の結合を示した。したがって、結合に対するグリコシル化の影響は存在しない。

ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）に対するフコシル化２０５０２（Ａｂ－Ｆ）及びアフコシル化２０５０２（Ａｂ－Ａ）のＦｃ領域の結合親和性は、また、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって特徴付けられた。簡潔に述べると、ブロッキング試薬として、タンパク質Ａが、１００ｍＭのホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）中の１００ｍＭのエチレンジアミンでアミンカップリングキットを使用して、デキストランチップ上に共有結合された。Ａｂ－ＡまたはＡｂ－Ｆは、別個のフローセル上で２密度で捕捉され、タンパク質Ａ誘導化したフローが参照対照としての役割を果たした。ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）はＨＢＳ－Ｐ＋実行緩衝液中で希釈され、６濃度（０ｎＭ、１．３７ｎＭ、１２．３ｎＭ、３７ｎＭ、１１１ｎＭ、３３３ｎＭ、及び１０００ｎＭ）で二重で注入された。Ａｂ－Ａ結合についての会合定数、解離定数、及び親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ １：１結合モデルを使用して計算された。Ａｂ－Ａ及びＡｂ－Ｆ結合についての親和性定数は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ定常状態親和性モデルを使用して決定された。アフコシル化Ｂ７－Ｈ４抗体は、フコシル化Ｆｃを有する同じ抗体（Ａｂ－Ｆ）よりもＦｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（Ｖ１５８）についての親和性が１４０倍高い（表１２）。
表１２：Ｆｃγ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）Ｖ１５８対立遺伝子結合

フコシル化及びアフコシル化２０５０２抗体のＴ細胞チェックポイント遮断活性もまた、特徴付けた。これらの実験において、初代ヒトＴ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞富化キットを製造業者の指示に基づいて使用してＰＢＭＣから富化した。濃縮されたＴ細胞を、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ダイナベッドで、１細胞あたり１つのビーズ比で、３７℃で２×１０^５細胞／ｍＬでインキュベートした。６日後、ビーズを磁気的に除去し、Ｔ細胞を洗浄し、１×１０^６細胞／ｍＬで３７℃で１０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２とインキュベーションした。４日後、Ｔ細胞を洗浄し、Ｂ７－Ｈ４抗体用量滴定の存在下で３７℃で２×１０^６細胞／ｍＬ濃度で人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともに１×１０^６細胞／ｍＬでインキュベートした。ａＡＰＣを３７℃で１時間マイトマイシンＣで処理した後、Ｔ細胞共培養物に添加する前に完全に洗浄した。Ｔ細胞、ａＡＰＣ、及びＢ７－Ｈ４抗体の共培養の７２時間後、プレートを遠心分離し、上清を回収し、ＥＬＩＳＡによるＩＦＮγ産生について評価した。ＩＦＮγ産生を抗体濃度と比較してプロットし、ＥＣ５０効力を、非線形回帰曲線適合（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）を使用して計算した。

Ｂ７－Ｈ４抗体は、ＩＦＮγ産生の増加によって測定したときに、強力なＴ細胞チェックポイント遮断活性を示した。さらに、アフコシル化抗体とフコシル化抗体との間に、明らかな効力差はなかった（表１３）。
表１３：Ｔ細胞チェックポイント遮断効力

さらなる実験において、フコシル化及びアフコシル化２０５０２抗体のＡＤＣＣ活性は、Ｂ７－Ｈ４発現標的細胞株に対しても特徴付けられた。具体的には、初代ヒトＰＢＭＣ細胞は、３７℃で２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２で１×１０^６細胞／ｍＬでサイトカイン活性化された。翌日、細胞は洗浄され、カルセイン－ＡＭで標識したＳＫ－ＢＲ－３標的細胞と、４０：１のエフェクター：標的比でインキュベートされた。インキュベーションの４時間後、フルオリメータを使用して標的細胞溶解が定量化された。トリトン／Ｘ処理試料は最大溶解対照試料としての役割を果たし、培地単独で処置した試料はバックグラウンド溶解対照試料としての役割を果たした。パーセント（％）の特異的溶解は以下のように計算された：［１－（（試料－培地対照）／（最大溶解－培地対照））］×１００。パーセント（％）の特異的溶解は、抗体濃度に対してプロットされ、ＥＣ５０効力は、非線形回帰曲線適合（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）を使用して計算された。

Ｂ７－Ｈ４抗体は、内因性Ｂ７－Ｈ４発現乳房細胞株ＳＫ－ＢＲ－３に対して強力な用量依存的なＡＤＣＣ活性を示した。さらに、アフコシル化抗体は、フコシル化抗体と比較して著しく強力なＡＤＣＣ活性を示した（表１４）。
表１４：ＡＤＣＣ活性

５．３実施例３：ＡＤＣＣ活性と受容体密度の相関
製造業者の仕様に従ってＦＡＣＳによってＳＫ－ＢＲ－３、ＨＣＣ１５６９、ＺＲ－７５－１、ＭＤＡ－ＭＢ－４８、及びＨＣＣ１９６４細胞の表面上のＢ７－Ｈ４密度が定量された。具体的には、１×１０^５細胞が氷上で１５ｕｇ／ｍＬのＢ７－Ｈ４抗体とともに２５分間インキュベートされた。並行して、１滴のＱｕａｎｔｕｍ（商標）Ｓｉｍｐｌｙ Ｃｅｌｌｕｌａｒ（ＱＳＣ）マイクロスフィア（増大する濃度の抗マウスＩｇＧ捕捉抗体でプレコーティング）も、氷上で１５ｕｇ／ｍＬのＢ７－Ｈ４抗体とともに２５分間インキュベートされた。インキュベーション後、細胞及びＱＳＣ微粒子はペレット化され、洗浄され、試料はフローサイトメーター上で得られた。データは、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して解析された。平均蛍光強度（ＭＦＩ）が計算され、ＱｕｉｃｋＣａｌ（登録商標）スプレッドシートに入力された。各ビーズの蛍光チャネル値をその事前に割り当てられた抗体結合容量（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｃａｐａｃｉｔｙ）（ＡＢＣ）値に関連付ける回帰は、自動的に計算される。標識された細胞のＭＦＩ値もテンプレートに追加されると、ＡＢＣ値が割り当てられた。

Ｂ７－Ｈ４抗体は、異なるレベルのＢ７－Ｈ４細胞表面密度を有するＢ７－Ｈ４発現標的細胞株に対するＡＤＣＣ活性について評価された。具体的には、１×１０^４ＳＫ－ＢＲ－３、ＨＣＣ１５６９、ＺＲ－７５－１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、またはＨＣＣ１９６４標的細胞が、Ｂ７－Ｈ４抗体の用量滴定で、４℃で共インキュベートされた。２５分後、ＰｒｏｍｅｇａからのＪｕｒｋａｔ－ｈｕＣＤ１６レポーター細胞の単回使用バイアルが解凍され、７．５×１０^４個の細胞が標的細胞／Ｂ７－Ｈ４抗体混合物に添加され、３７℃でインキュベートされた。２４時間後、試料は室温（ＲＴ）にされ、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ緩衝液でインキュベートされた。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルリーダーで、基質及び発光が定量化された。データは発光対抗体濃度としてプロットされ、ＥＣ５０効力は、非線形回帰曲線適合（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）を使用して計算された。

Ｂ７－Ｈ４抗体ＡＤＣＣ活性は、Ｂ７－Ｈ４細胞表面密度に依存した：細胞表面分子の数が減少するにつれて、最大ＡＤＣＣ活性の量も減少した。さらに、アフコシル化抗体は、フコシル化抗体と比較して、特に、より低いレベルのＢ７－Ｈ４細胞表面密度を有する標的細胞に対して、改善されたＡＤＣＣ活性を示した（図１）。

５．４実施例４：抗ＰＤ－１抗体と組み合わせたインビボ抗腫瘍有効性
方法：８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）から購入され、研究開始前に最大２週間順化させた。マウス乳癌細胞株４Ｔ１は、マウスＢ７－Ｈ４の細胞外ドメイン及びマウスＢ７Ｈ３の膜貫通ドメインを含むキメラタンパク質を発現するように操作された。腫瘍細胞を、０．５×１０^５細胞／５０μｌ／マウスでマウスの乳房脂肪パッドに同所移植した。接種前に、細胞を１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地で３継代以内で培養した。細胞は、５％ＣＯ２で加湿雰囲気で３７℃で増殖させた。８０～８５％のコンフルエンスに達したら、細胞は回収され、各マウスの腹側腹部で無血清ＲＰＭＩ１６４０中に再懸濁され、乳房脂肪パッドに入れられた。

マウスは、腫瘍増殖について細胞移植後、週２回モニタリングされた。各腫瘍の長さ及び幅は、キャリパーを使用して測定され、体積は以下の式に従って計算された。腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ）２）／２。治療開始日に、すべての腫瘍は測定され、異常値は除外され、マウスは無作為に治療群に割り当てられた。抗Ｂ７－Ｈ４治療についてフコシル化マウスＩｇＧ２ａに融合した２０５０２可変領域を含む、２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆと呼ばれる２０５０２のマウス代用物を利用した。対照として、マウスはｍｓＩｇＧ２ａ（抗ＨＥＬ）が投与された。２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－ＦまたはｍｓＩｇＧ２ａは、接種後１１日目から週２回静脈内（ｉ．ｖ．）注射により４回投与された。抗ＰＤ－１（ＦｃサイレントｍｓＩｇＧ２ａドメインを含有するＲＭＰ１－１４（Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ）の改変版）は、接種後１１日目から週２回、腹腔内（ｉ．ｐ．）注入を介して投与された。腫瘍体積は、腫瘍が動物体重の１０％、または約２０００ｍｍ^３を超えるまで、週に少なくとも２回測定され続けた。

結果：腫瘍サイズの変化、平均腫瘍体積の変化、及び生存率はそれぞれ図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃに示される。２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆまたは抗ＰＤ－１のいずれかでの処置は、ｍｓＩｇＧ２ａ対照と比較して有意に腫瘍増殖を減少させた（ｐ＜０．０５）。２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆ及び抗ＰＤ－１の共投与は、単剤療法のいずれかと比較して有意に腫瘍成長阻害を増強した（ｐ＜０．０５）。さらに、併用療法は、１２匹のマウスのうち５匹において完全な腫瘍退縮をもたらした。Ｐ値は、各群間の多重比較を用い、研究の各日の計算された腫瘍体積のＯｎｅ－Ｗａｙ ＡＮＯＶＡを使用して計算された。

追加の実験において、２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆは、１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇの低用量で、操作された４Ｔ１モデルにおいて単剤療法として用量依存的な抗腫瘍活性を示した（図２）。２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆを０．３ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇの用量で、抗ＰＤ－１抗体（５ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせることにより、操作された４Ｔ１モデル及び同様に操作されたＢ１６（黒色腫）モデルの両方において、試験された２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆのほぼすべての用量で相乗抗腫瘍活性をもたらした（図３）。（ＰＤ－１抗体は、４Ｔ１モデルに２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆの最初の３回投与と同じ日に３回、Ｂ１６モデルに２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆの第２及び第４回投与と同じ日に２回投与された）この相乗効果は、２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆ単独の投与が腫瘍体積に有意な影響を及ぼさなかったことを考慮すると、０．３ｍｇ／ｋｇの投与に関して特に予想外であった（図２）。さらに、抗ＰＤ１と組み合わせた２０５０２－ｍｓＩｇＧ２ａ－Ｆの０．３ｍｇ／ｋｇ用量で観察された有効性（生存率）は、抗ＰＤ１と組み合わせた３ｍｇ／ｋｇ用量または３０ｍｇ／ｋｇ用量のいずれかで観察された有効性と驚くほど同等であったか、またはさらに優れていた。したがって、これらの結果は、抗ＰＤ１が、単剤療法として有効ではない後者の用量で抗Ｂ７－Ｈ４抗体と相乗的に組み合わされることを示し、これは、有効性の点だけでなく、安全性の点でも利点を有し得る。

５．５実施例５：非臨床薬物動態
アフコシル化２０５０２の薬物動態（ＰＫ）及び毒物動態（ＴＫ）は、マウス、ラット、及びカニクイザルにおける静脈内（ＩＶ）投与を単回及び／または毎週繰り返した後に評価された。観察されたＰＫ特性は、すべての研究にわたって一貫していた。_Hlk494737772すべての種において、アフコシル化２０５０２は、用量増加に伴い、暴露における線形ＰＫ及び用量比例的増加（血清濃度－時間曲線下面積［ＡＵＣ］）を示した。最初の投与と最後の投与の間に２０５０２を毎週４回投与した後、毎週の曝露量（ＡＵＣ_０～７日）がおよそ２倍増加したが、定常状態は達成されなかった。血清アフコシル化２０５０２濃度－時間プロファイルにおいて実質的な性別差は明らかではなかった。カニクイザルにおいて（２つの異なる研究にわたって）、回復動物から推定される半減期は、約８．８日～１２日の範囲であり、用量レベルは１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲であった。_Hlk494737772４０ｍｇ／ｋｇでの単回ＩＶ注入投与後のラットにおける推定半減期は、約１３．２日であった。動物におけるアフコシル化２０５０２のＰＫ特性は、３週間に１回（Ｑ３Ｗ）の投与レジメンでヒトにおけるＩＶ注入を支持する。

５．６実施例６：毒性学
アフコシル化２０５０２を用いた毒性研究はラット及びカニクイザルにおいて行われた。この研究は、ラットにおけるパイロット単回用量薬物動態（ＰＫ）／忍容性研究、カニクイザルにおけるパイロット反復用量毒性研究、ならびにラット及びカニクイザルにおける良好な実験室慣行（ＧＬＰ）反復用量毒性研究を可能にする治験用新薬（ＩＮＤ）、だけでなくヒト、ラット、及びカニクイザル組織とのＧＬＰ組織交差反応性研究を含んだ。

ラットにおける単回用量パイロット忍容性研究において、動物は、３０分の静脈内（ＩＶ）注入として最大４０ｍｇ／ｋｇの投薬を受けた。アフコシル化２０５０２は、臨床観察、体重、食物消費、臨床病理学（血清化学または血液学）評価、総観察、臓器重量、または組織病理学的評価に影響を及ぼさなかった。

パイロット反復用量毒性研究において、カニクイザルは３０分の静脈内注入として最大１００ｍｇ／ｋｇのアフコシル化２０５０２の週４回の静脈内投薬を受けた。すべての用量は、カニクイザルによって十分に忍容された。臨床観察、体重、臨床病理学、剖検、臓器重量、または組織病理学パラメータの評価中に、アフコシル化２０５０２の投与に起因する試験物品に関連する予定外の死亡率または変化はなかった。

反復用量ＧＬＰ毒性研究において、アフコシル化２０５０２を、ラット及びカニクイザルの両方に、１、１０、及び１００ｍｇ／ｋｇ／用量の用量レベルで４週間の投薬でＩＶによって投与した。毒性の可逆性は、最終投与後６週間の回復期間中に評価された。評価のためのパラメータに、眼科検査、臨床観察、体温、体重、食物消費、血液学、凝固、臨床化学、尿検査、臓器重量、肉眼的、及び顕微鏡的評価を含んだ。カニクイザルの研究において、潜在的な心臓毒性を評価するために心電図（ＥＣＧ）もまた評価された。

ＧＬＰラット研究の評価中、アフコシル化２０５０２は概して十分に忍容され、アフコシル化２０５０２に起因する毒性効果はなかった。Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は、１００ｍｇ／ｋｇ／用量であるとみなされた。

ＧＬＰカニクイザルの研究において、アフコシル化２０５０２は概して十分に忍容され、評価されたパラメータのいずれかにおいてもアフコシル化２０５０２に起因する有害事象（ＡＥ）は観察されなかった。研究中、高用量群において、投薬フェーズの終了時に高い下痢の発生が観察された。中用量及び高用量における罹患動物の発生率が高いことだけでなく投薬期間の後期フェーズにおける発症のために、アフコシル化２０５０２曝露との関係が見込まれる。下痢を有する動物を含む、アフコシル化２０５０２で治療した動物において、腸管に顕微鏡的変化はなかった。したがって、この所見は、有害ではないが、被験試料に関連している可能性があるとみなされた。本研究では単一の死亡率があった。中用量回復群の１匹の動物は、最後の投与から１４日後の研究３５日目に死亡していることがわかった。臨床観察、肉眼的及び顕微鏡的評価は、腸捻転の診断と一致した。腸捻転は、カニクイザルにおいて時折発生し、これは、この動物において自然発生の状態であり、被験試料とは関連しないとみなされた。カニクイザルにおけるＮＯＡＥＬは、１００ｍｇ／ｋｇ／用量であるとみなされた。

インビボ毒性研究に加えて、ＧＬＰ準拠組織交差反応性研究が行われ、ラット、カニクイザル、及びヒト由来の３６個の組織のパネルへのアフコシル化２０５０２の結合を比較した。結果は、３種間でアフコシル化２０５０２の結合パターンが類似しており、乳腺上皮に限定されていることを示した。

したがって、アフコシル化２０５０２は、カニクイザル及びラットにおいて十分に忍容された。両種のＮＯＡＥＬは、１００ｍｇ／ｋｇ／用量であるとみなされ、４週間のＩＶ用量として投与されたときに試験された最高用量である。
５．７実施例７：ペムブロリズマブと組み合わせてアフコシル化２０５０２を研究するフェーズ１ａ用量漸増／安全性リードイン及びフェーズ１ｂ用量拡大
便宜上、アフコシル化２０５０２は、この実施例においてＡ－２０５０２と称される。
タイトル：進行性固形腫瘍を有する患者における、ペムブロリズマブ（抗ＰＤ１抗体）と組み合わせた抗Ｂ７－Ｈ４抗体のフェーズ１ａ／１ｂ研究
フェーズ１ａの目的及びエンドポイント：

フェーズ１ｂの目的とエンドポイント：

ある特定の実施形態において、注射用ペムブロリズマブは、単回投与バイアル中の滅菌、防腐剤非含有、白色～オフホワイトの凍結乾燥粉末として供給される。各バイアルは、静脈内注入のために再構成され、希釈され得る。そのような再構成溶液の各２ｍＬは、５０ｍｇのペムブロリズマブを含有し、Ｌ－ヒスチジン（３．１ｍｇ）、ポリソルベート８０（０．４ｍｇ）、及びスクロース（１４０ｍｇ）中に製剤化される。ＰＨを５．５に調整するために、塩酸／水酸化ナトリウムを含み得る。凍結乾燥粉末は、２．３ｍＬの注射用滅菌水、ＵＳＰを、凍結乾燥粉末上に直接注入せず、バイアルの壁に沿って水を注入することによって再構成される（結果として生じる濃度２５ｍｇ／ｍＬ）。バイアルはゆっくりと回転され（振らずに）、気泡が消えるまで最大５分間待つ。

他の実施形態において、ペムブロリズマブは、単回使用バイアル中の１００ｍｇ／４ｍＬ（２５ｍｇ／ｍＬ）溶液として注射に利用可能である。注射液は、静脈内注射のために希釈する必要がある、無菌で防腐剤を含まず、透明からわずかに乳白色で、無色からわずかに黄色の溶液である。各バイアルは、４ｍＬの溶液中に１００ｍｇのペムブロリズマブを含む。各１ｍＬの溶液は、２５ｍｇのペンブロリズマブを含有し、Ｌ－ヒスチジン（１．５５ｍｇ）、ポリソルベート８０（０．２ｍｇ）、スクロース（７０ｍｇ）、及び注射用水、ＵＳＰで製剤化される。
研究設計：これは、進行性固形腫瘍におけるペンブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２の投薬、安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、薬力学、及び予備的有効性を評価するためのフェーズ１ａ／１ｂ非盲検多施設研究である。

この研究は、ペムブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２についてのフェーズ１ａ用量漸増／安全性リードイン（フェーズ１ａ用量漸増）及びフェーズ１ｂ用量拡大部分（フェーズ１ｂ用量拡大）を含む。

アーカイブ腫瘍組織（またはアーカイブ組織が利用可能でない場合に得られる新鮮な生検）は事前スクリーニングして、フェーズ１ａ用量探索及びフェーズ１ｂ用量拡大における患者及びバイオマーカー分析のための中央実験室における免疫組織化学（ＩＨＣ）によって、Ｂ７－Ｈ４（Ｂ７Ｓ１、Ｂ７ｘ、またはＶＴＣＮ１としても知られるＢ７ファミリーの膜貫通タンパク質）発現レベルを試験し得る。

ある特定の実施形態において、アーカイブ腫瘍組織及び／または新鮮生検は、以下のように提供される：
フェーズ１ａ用量漸増：
●患者に対する遡及的バイオマーカー分析のためのアーカイブ腫瘍組織（またはアーカイブ組織が利用できない場合に得られる新鮮な生検）の提供。
フェーズ１ａ用量探索：
●事前スクリーニング及びバイオマーカー分析のために中央研究所で実施されたＩＨＣ試験を通じてＢ７－Ｈ４発現レベルを評価するためのアーカイブ腫瘍組織。アーカイブ組織が利用できない場合は、この試験に新鮮な生検組織が使用される。
●新鮮な生検は、スクリーニング中及び治療後に使用される。
フェーズ１ｂ用量拡大：
●事前スクリーニング及びバイオマーカー分析のために中央検査室で実施されるＩＨＣ試験を通じて、Ｂ７－Ｈ４発現レベルを評価するためのアーカイブ腫瘍組織。アーカイブ組織が利用できない場合、この試験には新鮮な生検組織が使用される。
●新鮮な生検は、拡大した薬物動態分析のために、スクリーニング中及び治療後の患者のサブセット（例えば、３０－患者コホートあたり少なくとも１０人の患者）について使用される。

さらなる詳細が、本概要のフェーズ１ａ用量漸増及びフェーズ１ｂ用量拡大セクション下の各研究段階について以下に提供される。
フェーズ１ａ安全性リードイン（ペムブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２）：少なくとも３名の患者は、２００ｍｇのペンブロリズマブＱ３Ｗと組み合わせた単剤療法としてＡ－２０５０２の最大許容用量（ＭＴＤ）及び／または推奨用量（ＲＤ）で登録され、用量制限毒性（ＤＬＴ）について評価される。合計最大１０名の患者についての追加の患者は、Ａ－２０５２０及びペンブロリズマブのＲＤで治療され得る。必要に応じて、Ａ－２０５０２の用量は、以下に説明する漸減のためのアルゴリズムに従って減少させ得る。提案される用量レベルは、以下のとおりである：
●１ａＣ１：Ａ－２０５０２（ＲＤ）＋ペムブロリズマブ２００ｍｇ ＩＶ Ｑ３Ｗ
●１ａＣ２：Ａ－２０５０２（１０ｍｇ／ｋｇ）＋ペムブロリズマブ２００ｍｇＩＶ Ｑ３Ｗ
●１ａＣ３：Ａ－２０５０２（３ｍｇ／ｋｇ）＋ペムブロリズマブ２００ｍｇ ＩＶ Ｑ３Ｗ
略語：ＩＶ＝静脈内、Ｑ３Ｗ＝３週間に１回、ＲＤ＝推奨用量。

いくつかの実施形態において、ＲＤは２０ｍｇ／ｋｇである。進行性固形腫瘍を有する患者におけるフェーズ１ａ／１ｂ単剤療法研究において、Ａ－２０５０２は、用量制限毒性を伴わず、２０ｍｇ／ｋｇの高用量で十分に忍容された。そのフェーズ１ａ／１ｂ単剤療法研究における患者の薬物動態研究に基づいて、２０ｍｇ／ｋｇのＲＤで観察されたＡ－２０５０２のトラフ濃度は、親和性に基づいてＢ７－Ｈ４及びＦｃγＩＩＩａの両方について≧９５％の受容体飽和を達成すると予測される。Ａ－２０５０２は、≧０．３ｍｇ／ｋｇの用量で用量比例曝露を達成し、１～２週間の半減期を有した。２０ｍｇ／ｋｇでのＡ－２０５０２の血清濃度は、腫瘍型（乳房、卵巣、及び子宮内膜）にわたって、ペムブロリズマブの有無にかかわらず、経時的に類似していた。

他の用量レベル（例えば、０．１、０．３、１、または２０ｍｇ／ｋｇ）は、例えば、安全性、忍容性、客観的奏効、ＰＫ、及び薬力学、ならびに非臨床データから推定される有効な曝露の推定に基づいて、併用研究で使用され得る。例えば、安全性データに基づくＡ－２０５０２のより低いまたは中間の用量レベルが使用され得る。Ａ－２０５０２及びペムブロリズマブの組み合わせのＤＬＴ基準は以下のとおりである：

フェーズ１ａ用量漸増中のＤＬＴは、帰属にかかわらず、以下のいずれかの事象として定義される（基礎疾患または関連性のない原因に明らかに起因する事象を除く）：
●治療後２１日以内に発生した任意のグレード３以上の非血液毒性（グレード３の吐き気、嘔吐、下痢を除く）
●治療の最初の２１日以内に発生した、最適なサポートケアにもかかわらず、グレード３の吐き気、嘔吐、下痢が＞７２時間続く
●発熱性好中球減少及び／または絶対好中球数（ＡＮＣ）＜１．０×１０^９Ｌあたり、７日以上持続するグレード４の好中球減少、グレード４の血小板減少（＜２５．０×１０^９Ｌあたり）、またはグレード３の治療の最初の２１日以内に出血が伴う血小板減少（＜５０．０～２５．０×１０^９Ｌあたり）の記録された感染
●肝臓と癌との関与とは関係ない、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ／アラニントランスアミナーゼ（ＡＳＴ／ＡＬＴ）が＞３×正常上限（ＵＬＮ）、及び同時総ビリルビンが＞２×ＵＬＮ
●臨床後遺症にかかわらず、任意のグレード４の検査値
●治験責任医師及び治験依頼者の合意に従って臨床的に重要でない、７２時間以内に解消しないその他のグレード３の臨床検査値
Ａ－２０５０２及びペムブロリズマブの組み合わせに関する具体的なＤＬＴ考慮事項
●ペムブロリズマブは既知の免疫チェックポイント阻害剤であり、Ａ－２０５０２の提案される作用機序の１つは免疫チェックポイント遮断であるため、この組み合わせで免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）が予想される。ＩｒＡＥは、未知の病因の研究薬曝露に関連し、臨床的に重要なＡＥとして定義され、免疫媒介性メカニズムと一致する。その背景に基づいて、以下のｉｒＡＥの最初の発生は、免疫療法で予測されるため、ＤＬＴとはみなされない：
●グレード３の腫瘍再燃（既知または疑われる腫瘍の部位で局所的な痛み、刺激、または発疹と定義される）、
●グレード３の発疹
●１４日以内にグレード１以下に解消したグレード３免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）。
●一過性（発症後６時間以内に解消）グレード３の点滴関連ＡＥ

同じまたは異なる患者において、これらの事象の第２の発生（グレード３の腫瘍再燃を除く）は、ＤＬＴとみなされる。

ＤＬＴ評価間隔は、注入開始時に治療の初日に始まり、２１日間継続する。以下の表に概説されたアルゴリズムは投与決定に適用される。Ａ－２０５０２の用量は、ＤＬＴに応答して必要に応じて低下され得る。ペムブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２のＭＴＤ及び／またはＲＤは、≦１／３～６の患者がＤＬＴに遭遇する用量となる。
フェーズ１ａにおけるペムブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２安全性リードインの用量漸減決定のためのアルゴリズム：

フェーズ１ｂの組み合わせの拡張：
フェーズ１ｂは、ＩＨＣによるＢ７－Ｈ４発現を有すると前向きに特定されたコホートからなり得る。ある特定の実施形態において、以下の選択された腫瘍型において、ペムブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２の２つのコホートが存在するであろう：
●コホート１ｂＣ１：_Hlk523386007ＴＮＢＣ（ペムブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２）
_Hlk523386007●コホート１ｂＣ２：卵巣癌（ペムブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２）
別の実施形態において、フェーズ１ｂ組み合わせは、１つの初期コホートを有し、ＴＮＢＣなどの他のコホートは、その後、フェーズ１ｂ検査に登録され得る。
●コホート１ｂＣ１：卵巣癌（ペムブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２）

ある特定の実施形態において、最大３個の追加の組み合わせコホートが追加され得る。

研究から得られる新たな利用可能な臨床データ及び翻訳データに基づいて、ペムブロリズマブと組み合わせてＡ－２０５０２で治療される追加の腫瘍型のコホートは検査中に開かれ得る（例えば、任意の個々のコホートにおいて３０人以下の患者）。
用量：ある特定の実施形態において、Ａ－２０５０２は、各２１日サイクルの１日目に、６０分（±５分）ＩＶ注入Ｑ３Ｗにおいて単剤として投与される。Ａ－２０５０２の用量は、サイクル１の１日目（Ｃ１Ｄ１）の体重に基づく。サイクル１後、Ａ－２０５０２用量は、患者の体重がサイクル１の１日目から＞１０％変化した場合にのみ、各注入訪問時に再計算される。

ペムブロリズマブは、Ａ－２０５０２ ＩＶ注入の完了後に、サイクル１、１日目から開始して３０分（±５分）にわたってＩＶ注入により２００ｍｇの用量で投与され、各２１日サイクルの１日目にＱ３Ｗを繰り返す。

ペムブロリズマブと組み合わせたＡ－２０５０２の事前に指定された最大投薬回数はない。患者は、治験責任医師が疾患の進行を評価するまで、または患者が他のプロトコル指定の離脱基準のいずれかを満たすまで、研究指定のコホート／用量に従って両方の薬物を組み合わせて投与し続け得る。患者が２つの薬物のうちの１つを中止する場合、患者は、他方の薬物を単独で受け続け得る。

疾患進行を超える治療は、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓバージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１）に従って、進行性疾患を有する患者において、利益／リスク評価が研究治療薬の継続的投与に有利である場合（例えば、患者が治験責任医師によって評価された臨床的利益を経験し続け、治療に耐える場合）に許可され得る。
研究期間：個々の患者の研究期間には、スクリーニング（最大２８日間）、治療、及び治療終了（ＥＯＴ）フォローアップ期間が含まれ、これには最終投与後約２８（±７）日後及び１００（±７）日後の訪問が含まれる。すべての患者は、疾患進行まで治療する資格があるため、個々の患者の実際の治療期間は、それぞれの腫瘍型の進行までの予想時間に応じて変動する。

加えて、フェーズ１ｂ用量拡大に登録された患者は、最大２年間の生存（スキャン及び生存状態Ｑ１２Ｗを含むＬＴＦＵ）について追跡される。
患者数：この研究のために計画された患者の数は、以下のように推定されるが、この数は必要に応じて調整され得る。

フェーズ１ａは、安全性リードインにおいてペムブロリズマブと組み合わせてＡ－２０５０２を受ける６～２２人の患者または１０～２２人の患者を登録し得る。ペムブロリズマブと組み合わせてＡ－２０５０２を評価する１つまたは２つの追加のコホートは、例えば、３０人以下の患者とともに登録される。

応募資格基準：
包括基準：フェーズ１ａの包括基準
フェーズ１ａに登録した患者の包括基準は次のとおりである。
１）原発性中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍を除く組織学的に確認された固形腫瘍。
２）切除不能、局所進行、または転移性の疾患。
３）任意の研究固有の評価の前に、施設審査委員会／独立倫理委員会（ＩＲＢ／ＩＥＣ）が承認したインフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）を理解し、署名することができる。
４）患者は、自分の状態に対して臨床的利益をもたらすことが知られている既存の療法に対して難治性または忍容であるべきである。
５）すべての患者は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に従ってベースラインで少なくとも１つの測定可能な病変を有する必要がある。以前に放射線照射された領域、または他の局所領域療法を受けた領域に位置する腫瘍部位は、病変に進行が示されていない限り、測定可能であるとみなされない。
６）以前の抗癌療法のための適切なウォッシュアウト（すなわち、最後の投与から≧５半減期または４週間、いずれか短い方）。
７）アーカイブ腫瘍組織の利用可能性、及び遡及的バイオマーカー分析のためのアーカイブ腫瘍の提供への同意、またはアーカイブ組織が利用できない場合、患者はスクリーニング中に新鮮な腫瘍生検を受けなければならない（フェーズ１ａ用量探索部分の患者には生検が必要）。
８）ＩＣＦ署名時の年齢≧１８歳。
９）Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータスは、０または１である。
１０）治験責任医師の見解において、平均寿命は少なくとも３ヶ月である。
１１）意志を持ち、すべての研究手順に従うことができる。
１２）以前の放射線療法が、研究薬の初回投与の少なくとも２週間前に完了しなければならない。
１３）以前の放射性医薬品（例えば、ストロンチウム、サマリウム）は、研究薬の最初の投与の少なくとも８週間前に完了しなければならない。
１４）全身麻酔を必要とする以前の手術は、研究薬投与の少なくとも１週間前に完了しなければならない。局所／硬膜外麻酔を必要とする手術は、研究薬の初回投与の少なくとも７２時間前に完了する必要がある。患者は任意の手術から回復している必要がある。
１５）スクリーニング検査値は、以下の基準を満たす必要がある。
血液学的
ａ．好中球≧１２００細胞／μＬ
ｂ．血小板≧７５×１０^３／μＬ
ｃ．ヘモグロビン（Ｈｂ）≧９．０ｇ／ｄＬ
腎臓：
血清クレアチニン＜１．５×ＵＬＮまたはクレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）≧４０ｍＬ／分の（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ／Ｇａｕｌｔ Ｆｏｒｍｕｌａを使用）

肝臓：
ｄ．ＡＳＴ及びＡＬＴ≦３×ＵＬＮ（肝臓転移を有する患者におけるＡＳＴ及びＡＬＴ＜５×ＵＬＮが許容される）
ｅ．ビリルビン＜１．５×ＵＬＮ（ギルバート症候群の患者を除き、総ビリルビンが＜３ｍｇ／ｄＬでなければならない）
１６）サイクル１、１日目の治療前≦９６時間の血清β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン（β－ｈＣＧ）妊娠試験が陰性（妊娠可能性のある女性のみ）。
１７）性的に活発な患者（妊娠可能性のある女性及び男性）は、Ａ－２０５０２の最後の投与から６ヶ月後まで、２つの有効な避妊方法を使用する意欲があり、そのうち１つは物理的バリア法（コンドーム、横隔膜、または子宮頸部／金庫キャップ）でなければならない。その他の効果的な避妊方法には以下を含む：
スクリーニングの少なくとも６ヶ月前に恒久的な不妊手術（子宮切除及び／または両側卵巣切除、または手術による両側卵管結紮、または精管切除）
妊娠可能性のある女性で、研究の少なくとも９０日前に安定した経口避妊療法、子宮内避妊、インプラント装置を受けている、または生き方として性交を控えている
フェーズ１ｂ包括基準は以下のとおりである：
１８）フェーズ１ａのすべての包含基準（例外：包括基準＃１）。
１９）付随する検証済み中央実験室ＩＨＣアッセイによって評価される、アーカイブまたは新鮮な腫瘍試料中のＢ７－Ｈ４発現に対して陽性である。
２０）過去２年以内に再発の証拠がない状態で確実に治療されている場合、他の悪性腫瘍の既往が認められる（例外：２年以内に確定的に治療した非黒色腫皮膚癌、原位小葉癌、及びインサイチュ子宮頸癌が許容される）。
フェーズ１ｂの追加のコホート特異的包括基準
コホート１ｂＣ１卵巣癌：
●臨床的利益をもたらすことが知られている既存の療法に対して難治性である再発性上皮性卵巣癌、原発性腹膜癌、または卵管癌の組織学的または細胞学的に確認された診断
●少なくとも１つの白金含有レジメンを含む、または追加の化学療法に忍容でない、少なくとも２つの以前の治療レジメン上または後の進行性疾患
●抗ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１指向性薬剤による事前の治療なし
コホート１ｂＣ２ ＴＮＢＣ：
●組織学的または細胞学的に確認された転移性ＴＮＢＣ
●転移性の設定で投与されている少なくとも１つの全身性化学療法の少なくとも２つの前のライン
●抗ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１指向性薬剤による事前の治療なし

応募資格基準：除外基準（フェーズ１ａ及びフェーズ１ｂ）
次のいずれかの基準を満たす患者は除外され得る：
１）ステロイドまたは吸収された局所ステロイドなどの全身性薬剤の免疫抑制用量（用量≧１０ｍｇ／日のプレドニゾンまたは同等の日量）は、研究薬の初回投与の少なくとも２週間前に中止されなければならない。高用量ステロイドの短期経過、連続低用量（プレドニゾン＜１０ｍｇ／日）、ステロイドの吸入、鼻腔内、眼内、及び関節注射が許容される。
２）スクリーニング時にＮｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）＞Ｃｌａｓｓ２を用いた心臓機能の低下。
３）不安定狭心症などの制御不能または著しい心臓疾患
４）スクリーニング時に、施設ガイドラインに従って心拍数（ＱＴｃ）を修正したＱＴ間隔が男性＞４５０ミリ秒、女性＞４７０ミリ秒。
５）以前の生物学的薬剤に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）、重度のアレルギー、アナフィラキシー、または他の注入関連反応の病歴。
６）治験薬（ＩＰ）製剤の任意の成分及び／またはペンブロリズマブに対する既知の過敏症。
７）研究薬の最初の投与前４週間以内のワクチン（例えば、ヒトパピローマウイルス［ＨＰＶ］ワクチン）。不活化季節性インフルエンザワクチンは、治療前及び治療中に制限なく患者に投与され得る。生きたウイルスを含むインフルエンザワクチン、または感染症（すなわち、肺炎球菌、水痘など）のための他の臨床的に適応されるワクチン接種は許可され得るが、主催者の医療モニターと協議しなければならず、ワクチンの投与の前後に研究薬の洗い流し期間を必要とし得る。
８）治験責任医師の見解において、患者が生物学的薬剤に曝露されることを妨げ、または患者の安全性にリスクを生じさせる可能性があると考えられる、現在の未解決の感染症または慢性的、能動的、臨床的に有意な感染症（ウイルス、細菌、真菌、またはその他）の既往歴。
９）治験責任医師の見解で臨床的に有意であると考えられる異常な血清化学値を有する患者。これには、異常な血清化学値に関連する臨床徴候及び症状を示す患者、だけでなく血清化学値が無症候性であるが、治験責任医師によれば臨床的に有意である（例えば、低カリウム血症または低ナトリウム血症）患者を含む。
１０）治験責任医師の見解で、患者の安全性にリスクをもたらし、研究参加または個々の患者の結果の解釈に支障をきたす可能性があり、任意の制御されていない病状または精神疾患。
１１）妊娠中または授乳中。
１２）過去２年間、治療を必要とする活性、既知、または疑われる自己免疫疾患。Ｉ型糖尿病、ホルモン補充のみを必要とする甲状腺機能低下症、全身治療を必要としない皮膚疾患（白斑、乾癬、または脱毛症など）、または外部トリガーがない場合に再発することが予想されない状態の患者は、登録することが許可されている。
１３）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）１または２または既知の後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の検査陽性の既知の病歴。
１４）急性または慢性感染を示すＢ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）または検出可能なＣ型肝炎ウイルスリボ核酸（ＨＣＶ ＲＮＡ）の試験が陽性。
１５）Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ （ＮＣＩ） Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＴＣＡＥ）に基づく、＞グレード１の以前の治療（グレード２脱毛症または末梢神経障害を除く）からの継続的な有害作用。
１６）症状性間質性肺疾患または炎症性肺炎。
１７）未治療または活性ＣＮＳまたは軟髄膜転移。転移が治療され、患者が研究薬の最初の投与前に少なくとも２週間、神経学的にベースラインに戻るか、または神経学的に安定している場合（ＣＮＳ治療に関連する残留徴候または症状を除く）、患者は適格である。
１８）凝固障害または出血性素因の証拠。抗凝固剤の安定した治療用量を受けている患者は許容される。
１９）研究薬の初回投与前７２時間以内に完了した血液または血小板の輸血。
２０）クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む、任意の制御不能な炎症性ＧＩ疾患
試験及び観察：安全性評価は、バイタルサイン、体重、身体検査、ＥＣＯＧスコア、臨床検査（血液学、血清化学、及び尿検査）、心電図（ＥＣＧ）、ならびに有害事象（ＡＥ）及び併用薬のモニタリングを含む。

アーカイブ腫瘍組織及びアーカイブ腫瘍を提供する同意（またはスクリーニング中に新鮮な腫瘍生検を受ける意欲）は、ベースライン標的レベル、腫瘍免疫表現型及び薬物動態応答の関係を探索するためのバイオマーカー分析のために収集される。

治療前及び治療中の腫瘍組織は、フェーズ１ａ用量探索におけるすべての患者、及び拡大された薬物動態分析のためのフェーズ１ｂ用量拡大における患者のサブセット（３０人の患者のコホート当たり最大１５人の患者）について収集され得る。

有効性評価は、６週間毎に実施される放射線撮影画像からなり得る。奏効は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に従って評価される。

統計方法：
有効性分析
ＯＲＲは、各用量／コホートごとに９０％信頼区間（ＣＩ）を有する頻度及びパーセンテージによって要約され得る。完全奏効（ＣＲ）及び部分奏効（ＰＲ）患者の奏効期間（ＤＯＲ）は、奏効者数、事象／検閲された数及び割合、ならびに９５％ＣＩを有するＤＯＲ中央値のカプラン・マイヤー推定で要約され得る。治療した患者の無増悪生存期間（ＰＦＳ）は、各用量／コホートごとにＰＦＳを有する患者の数及び割合で要約され得る。ＰＦＳは、９５％ＣＩのＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法を使用して要約され得る。ＯＲＲ、ＤＯＲ、及びＰＦＳは、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１を使用して決定され得る。

薬物動態分析
個々及び平均（±ＳＤ）血清Ａ－２０５０２濃度－時間データは表にされ得、用量レベル／コホートによってプロットされ得る。ＰＫパラメータは、適切かつ該当する場合、用量レベル／コホートによって表にされ得、要約され得る。Ａ－２０５０２曝露に対する免疫原性の影響は、データが許す限り、用量レベル／コホートによって評価され得、表にされ得、要約され得る。ペムブロリズマブ濃度－時間データの個々及び平均（±ＳＤ）Ｃ_ｍａｘ及びＣ_{ｔｒｏｕｇｈ}は表にされ得、コホートによってプロットされ得る。蓄積比及び定常状態の達成などのＰＫパラメータは、データが利用可能である場合、用量レベル／コホートによって表にされ得及び要約され得る。

免疫原性分析
ベースラインのＡＤＡ陽性対象は、ベースラインでＡＤＡ陽性試料を有する対象として定義される。ＡＤＡ陽性対象は、治療開始後のベースラインと比較して少なくとも１つのＡＤＡ陽性飼料を有する対象である。治療開始後のベースラインＡＤＡ－陽性対象及びＡＤＡ陽性対象の頻度分布は、Ａ－２０５０２及びペムブロリズマブについてそれぞれ要約され得る。

薬物動態分析
選択した薬物動態バイオマーカーは、前治療及び治療中の腫瘍及び末梢血試料の間の有意義な変化について評価される。

本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、記載されるものに加えて本発明の様々な改変が前述の記載及び添付の図から当業者には明らかとなるであろう。そのような改変は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。

本明細書に列挙されるすべての参考文献（例えば、刊行物または特許または特許出願）は、各個々の参考文献（例えば、刊行物または特許または特許出願）がすべての目的のために参照によりその全体が具体的かつ個別に本明細書に組み込まれるように示される場合と同程度に、すべての目的においてその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

他の実施形態は以下の特許請求の範囲内である。

Claims (53)

1. ヒト対象において固形腫瘍を治療する方法であって、（ｉ）ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む、約０．１～約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む、約２００ｍｇの抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片と、を前記対象に投与することを含む、前記方法。
2. ヒト対象において固形腫瘍を治療する方法であって、
   （ａ）（ｉ）抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片がヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む、前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、ならびに（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物であって、
   前記組成物中の前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％がアフコシル化され、かつ
   約０．１～約２０ｍｇ／ｋｇの前記抗体またはその抗原結合断片が投与される、前記医薬組成物と、
   （ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片、ならびに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物であって、約２００ｍｇの前記抗体または抗原結合断片が投与される、前記医薬組成物と、を前記対象に投与することを含む、前記方法。
3. 約２０ｍｇ／ｋｇの前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
4. 約１０ｍｇ／ｋｇの前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
5. 約３ｍｇ／ｋｇの前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
6. 約１ｍｇ／ｋｇの前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
7. 約０．３ｍｇ／ｋｇの前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
8. 約０．１ｍｇ／ｋｇの前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、前記対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
9. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片及び前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片が、同時に投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片及び前記抗ＰＤ－１抗体または抗原結合断片が、同日に別個の製剤として投与される、請求項９に記載の方法。
11. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片及び前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片が、連続的に投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片が、前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が投与された後に投与される、請求項８に記載の方法。
13. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、３週間に約１回投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片が、３週間に約１回投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片及び前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片が各々、３週間に約１回投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、静脈内投与される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片が、静脈内投与される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. Ｂ７－Ｈ４が、前記投与の前に、免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用して前記固形腫瘍中で検出されている、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片が、重鎖定常領域、及び／または軽鎖定常領域を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記重鎖定常領域がヒト免疫グロブリンＩｇＧ_１重鎖定常領域である、及び／または前記軽鎖定常領域がヒト免疫グロブリンＩｇＧκ軽鎖定常領域である、請求項２０に記載の方法。
22. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／または配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、ヒト抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、アフコシル化される、請求項１及び３～２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、全長抗体である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が、抗原結合断片である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド架橋Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ^２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む、請求項２７に記載の方法。
29. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片のフコシル化が、前記組成物中で検出できない、請求項２～２９のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記抗ＰＤ－１抗体または抗原結合断片が、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記抗ＰＤ－１抗体または抗原結合断片が、ペムブロリズマブである、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 前記方法が、２００ｍｇのペムブロリズマブを投与することを含む、請求項３１に記載の方法。
33. 前記方法が、（ｉ）ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、３、１０、または２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体または抗原結合断片が検出可能にフコシル化されていない、前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）２００ｍｇのペムブロリズマブと、を前記対象に投与することを含み、（ｉ）及び（ｉｉ）が同日に別個の製剤として静脈内投与される、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
34. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項３３に記載の方法。
35. 前記固形腫瘍が、Ｂ７－Ｈ４を発現する、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
36. 前記固形腫瘍が、切除不能、局所進行性、または転移性である、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
37. 該固形腫瘍が、乳癌、腺管癌、子宮内膜癌、卵巣癌、尿路上皮癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌、及び膀胱癌からなる群から選択される、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。
38. 前記固形腫瘍が、乳癌または卵巣癌である、請求項３７に記載の方法。
39. 前記固形腫瘍が、乳癌である、請求項３８に記載の方法。
40. 前記乳癌が、進行性乳癌である、請求項３９に記載の方法。
41. 前記乳癌が、トリプルネガティブ乳癌である、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記乳癌が、ホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌である、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記非小細胞肺癌が、扁平上皮細胞癌である、請求項３７に記載の方法。
44. 前記患者が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストによる以前の治療を受けていない、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。
45. 前記方法が、前記腫瘍内の免疫細胞の数を監視することをさらに含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
46. 前記方法が、前記腫瘍内のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＣＤ４＋細胞、及び／またはＣＤ８＋細胞の数を監視することをさらに含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
47. 前記方法が、前記対象におけるサイトカインレベルを監視することをさらに含む、請求項１～４７のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記方法が、前記対象におけるＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＮＦ、及び／またはインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）レベルを監視することをさらに含む、請求項１～４７のいずれか一項に記載の方法。
49. ヒト対象における固形腫瘍を治療する方法であって、（ｉ）ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７－Ｈ４抗体と、（ｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、約２００ｍｇの抗ＰＤ－１抗体と、を前記対象に投与することを含み、前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体及び前記抗ＰＤ－１抗体が、３週間に約１回静脈内投与される、前記方法。
50. ヒト対象において固形腫瘍を治療する方法であって、
    （ａ）（ｉ）ヒトＢ７－Ｈ４に特異的に結合し、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ、ならびに（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物であって、
    前記組成物中の前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体の少なくとも９５％がアフコシル化され、かつ
    約２０ｍｇ／ｋｇの前記抗体が投与される、前記医薬組成物と、
    （ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片、ならびに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物であって、約２００ｍｇの前記抗体または抗原結合断片が投与される、前記医薬組成物と、を前記対象に投与することを含み、
    前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体及び前記抗ＰＤ－１抗体が、３週間に約１回静脈内投与される、前記方法。
51. 前記抗Ｂ７－Ｈ４抗体が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４９または５０に記載の方法。
52. 前記抗ＰＤ－１抗体が、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の方法。
53. 前記固形腫瘍が、乳癌であって、任意に前記乳癌がトリプルネガティブ乳癌である、前記乳癌、または卵巣癌である、請求項４９～５３のいずれか一項に記載の方法。

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