JP2021176326A - 融合タンパク質を用いたｔｃｒの再プログラミングのための組成物及び方法 - Google Patents
融合タンパク質を用いたｔｃｒの再プログラミングのための組成物及び方法 Download PDFInfo
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Abstract
【課題】Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）、１つ以上のＴＦＰを発現するように改変されたＴ細胞、及び、がんを含めた疾患の治療のための使用方法を提供する。
【解決手段】Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び、ＣＤ３イプシロンの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメイン、を含むＴＣＲサブユニット、並びに、
（ｂ）抗原結合ドメインを含むヒト又はヒト化抗体ドメインを含み、前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する、単離された組み換え核酸分子。
【選択図】図１
【解決手段】Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び、ＣＤ３イプシロンの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメイン、を含むＴＣＲサブユニット、並びに、
（ｂ）抗原結合ドメインを含むヒト又はヒト化抗体ドメインを含み、前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する、単離された組み換え核酸分子。
【選択図】図１
Description
相互参照
本出願は、２０１５年５月１８日に出願された米国仮出願第６２／１６３，３４２号の
利益を主張する。該仮出願は、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる
。
本出願は、２０１５年５月１８日に出願された米国仮出願第６２／１６３，３４２号の
利益を主張する。該仮出願は、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる
。
血液学的悪性腫瘍または末期の固形腫瘍を有するほとんどの患者は、標準的治療では治
癒不可能である。さらに、従来の治療法の選択肢は、多くの場合重篤な副作用がある。が
ん性細胞を拒絶するために患者の免疫系を関わらせる多くの試み、すなわち、集合的にが
ん免疫療法と呼ばれる方法がなされている。しかしながら、いくつかの障害が、その臨床
効果の達成をやや困難にしている。何百ものいわゆる腫瘍抗原が特定されているが、これ
らは多くの場合、自己由来であるため、がん免疫療法を健康な組織に向かわせる可能性が
あるか、または免疫原性に乏しい。さらに、がん細胞は多重機構を用いてそれら自身を見
えなくしたり、がん免疫療法による免疫攻撃の開始及び伝播に敵対したりする。
癒不可能である。さらに、従来の治療法の選択肢は、多くの場合重篤な副作用がある。が
ん性細胞を拒絶するために患者の免疫系を関わらせる多くの試み、すなわち、集合的にが
ん免疫療法と呼ばれる方法がなされている。しかしながら、いくつかの障害が、その臨床
効果の達成をやや困難にしている。何百ものいわゆる腫瘍抗原が特定されているが、これ
らは多くの場合、自己由来であるため、がん免疫療法を健康な組織に向かわせる可能性が
あるか、または免疫原性に乏しい。さらに、がん細胞は多重機構を用いてそれら自身を見
えなくしたり、がん免疫療法による免疫攻撃の開始及び伝播に敵対したりする。
がん細胞の適切な細胞表面分子に、遺伝子操作されたＴ細胞を向け直すことに頼るキメ
ラ抗原受容体（ＣＡＲ）変性自己Ｔ細胞治療を用いた最近の発展は、免疫系の力のＢ細胞
悪性腫瘍の治療における利用に期待できる結果を示している（例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ
ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ３：３８８−３９８ （２０１
３）参照）。ＣＤ１９特異的ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＴＬ０１９と呼ばれる）での臨床結果は
、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）ならびに小児急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の患者に完
全寛解を示した（例えば、Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ
３：９５ｒａ７３ （２０１１）， Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＮＥＪＭ ３６
５：７２５−７３３ （２０１１）， Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．， ＮＥＪＭ ３６８
：１５０９−１５１８ （２０１３）参照）。代替的な方法は、自己Ｔ細胞の遺伝子操作
のために、腫瘍関連ペプチド抗原に選ばれたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ及びベータ
鎖の使用である。これらのＴＣＲ鎖は、完全なＴＣＲ複合体を形成し、該Ｔ細胞に第二の
定義された特異性に対するＴＣＲを与える。ＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲアルファ及び
ベータ鎖を発現する改変自己Ｔ細胞によって、滑膜がんの患者で有望な結果が得られた。
ラ抗原受容体（ＣＡＲ）変性自己Ｔ細胞治療を用いた最近の発展は、免疫系の力のＢ細胞
悪性腫瘍の治療における利用に期待できる結果を示している（例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ
ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ３：３８８−３９８ （２０１
３）参照）。ＣＤ１９特異的ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＴＬ０１９と呼ばれる）での臨床結果は
、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）ならびに小児急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の患者に完
全寛解を示した（例えば、Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ
３：９５ｒａ７３ （２０１１）， Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＮＥＪＭ ３６
５：７２５−７３３ （２０１１）， Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．， ＮＥＪＭ ３６８
：１５０９−１５１８ （２０１３）参照）。代替的な方法は、自己Ｔ細胞の遺伝子操作
のために、腫瘍関連ペプチド抗原に選ばれたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ及びベータ
鎖の使用である。これらのＴＣＲ鎖は、完全なＴＣＲ複合体を形成し、該Ｔ細胞に第二の
定義された特異性に対するＴＣＲを与える。ＮＹ−ＥＳＯ−１特異的ＴＣＲアルファ及び
ベータ鎖を発現する改変自己Ｔ細胞によって、滑膜がんの患者で有望な結果が得られた。
ＣＡＲまたは第二のＴＣＲを発現する遺伝子組み換えＴ細胞に関するインビトロ／エキ
ソビボでそれぞれの標的細胞を認識及び破壊する能力に加えて、改変Ｔ細胞での成功した
患者の治療は、該Ｔ細胞に強力な活性化、増殖、経時的な持続性の能力があること、及び
、再発性疾患の場合、「記憶」反応を有効にすることを要求する。ＣＡＲ Ｔ細胞の高く
扱いやすい臨床効果は、現在のところＣＤ１９陽性Ｂ細胞悪性腫瘍及び、ＨＬＡ−Ａ２を
発現するＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド発現滑膜肉腫患者に限られる。遺伝子操作されたＴ細
胞を様々なヒトの悪性腫瘍に対してより広く作用するように改良する明確な必要性がある
。本明細書では、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、及びＣＤ３デルタを含めたＴＣＲサ
ブユニット、ならびに、既存の方法の限界を克服する可能性を有する細胞表面抗原に特異
的な結合ドメインを備えたＴＣＲアルファ及びＴＣＲベータ鎖の新規な融合タンパク質を
記載する。本明細書では、ＣＡＲより標的細胞を効率的に死滅させるが、炎症性サイトカ
インを同等またはより少ないレベルで放出する新規な融合タンパク質を記載する。これら
サイトカイン値の上昇は、養子ＣＡＲ−Ｔ療法に対する用量制限毒性と関連しているため
、これらの融合タンパク質及びそれらの使用方法は、ＣＡＲと比較してＴＦＰの有効性を
表す。
ソビボでそれぞれの標的細胞を認識及び破壊する能力に加えて、改変Ｔ細胞での成功した
患者の治療は、該Ｔ細胞に強力な活性化、増殖、経時的な持続性の能力があること、及び
、再発性疾患の場合、「記憶」反応を有効にすることを要求する。ＣＡＲ Ｔ細胞の高く
扱いやすい臨床効果は、現在のところＣＤ１９陽性Ｂ細胞悪性腫瘍及び、ＨＬＡ−Ａ２を
発現するＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド発現滑膜肉腫患者に限られる。遺伝子操作されたＴ細
胞を様々なヒトの悪性腫瘍に対してより広く作用するように改良する明確な必要性がある
。本明細書では、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、及びＣＤ３デルタを含めたＴＣＲサ
ブユニット、ならびに、既存の方法の限界を克服する可能性を有する細胞表面抗原に特異
的な結合ドメインを備えたＴＣＲアルファ及びＴＣＲベータ鎖の新規な融合タンパク質を
記載する。本明細書では、ＣＡＲより標的細胞を効率的に死滅させるが、炎症性サイトカ
インを同等またはより少ないレベルで放出する新規な融合タンパク質を記載する。これら
サイトカイン値の上昇は、養子ＣＡＲ−Ｔ療法に対する用量制限毒性と関連しているため
、これらの融合タンパク質及びそれらの使用方法は、ＣＡＲと比較してＴＦＰの有効性を
表す。
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）、１つ以上のＴＦＰを発現するよう
に改変されたＴ細胞、及び疾患の治療のためのそれらの使用方法を本明細書に提供する。
に改変されたＴ細胞、及び疾患の治療のためのそれらの使用方法を本明細書に提供する。
１つの態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＣＤ３イプシロンの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含
むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含む
ヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動
可能に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に
提供する。
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＣＤ３イプシロンの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含
むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含む
ヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動
可能に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に
提供する。
１つの態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＣＤ３ガンマの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴ
ＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含むヒト
またはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動可能
に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に提供
する。
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＣＤ３ガンマの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴ
ＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含むヒト
またはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動可能
に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に提供
する。
１つの態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＣＤ３デルタの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴ
ＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含むヒト
またはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動可能
に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に提供
する。
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＣＤ３デルタの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴ
ＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含むヒト
またはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動可能
に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に提供
する。
１つの態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＴＣＲアルファの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含む
ＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含むヒ
トまたはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動可
能に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に提
供する。
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＴＣＲアルファの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含む
ＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含むヒ
トまたはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動可
能に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に提
供する。
１つの態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＴＣＲベータの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴ
ＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含むヒト
またはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動可能
に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に提供
する。
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲの細胞外ドメインの少なくと
も一部、及び、ＴＣＲベータの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴ
ＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット、ならびに抗原結合ドメインを含むヒト
またはヒト化抗体ドメインを含み、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインが作動可能
に連結され、該ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する分子を本明細書に提供
する。
１つの態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲサブユニット及び、抗ＣＤ１
９結合ドメインである抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む分子
を本明細書に提供する。
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲサブユニット及び、抗ＣＤ１
９結合ドメインである抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む分子
を本明細書に提供する。
１つの態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲサブユニット及び、抗Ｂ細胞
成熟抗原（ＢＣＭＡ）結合ドメインである抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体
ドメインを含む分子を本明細書に提供する。
、単離された組み換え核酸分子であって、該ＴＦＰがＴＣＲサブユニット及び、抗Ｂ細胞
成熟抗原（ＢＣＭＡ）結合ドメインである抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体
ドメインを含む分子を本明細書に提供する。
いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニット及び該抗体ドメインは、作動可能に連結され
る。いくつかの例では、該ＴＦＰは、Ｔ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する。いくつ
かの例では、該コードされた抗原結合ドメインは、リンカー配列によって該ＴＣＲの細胞
外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該コードされたリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ
）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、
ＴＣＲの細胞外ドメインを含む。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの
膜貫通ドメインを含む。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの細胞内ド
メインを含む。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、（ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、（ｉｉ）ＴＣＲの膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲの細胞内ドメインを含む
とともに、（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）のうちの少なくとも２つは同じＴＣＲサブ
ユニット由来である。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、ＣＤ３イプシロン、
ＣＤ３ガンマ、もしくはＣＤ３デルタの細胞内シグナル伝達ドメインから選択される刺激
ドメイン、または少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのそれに対する修飾を有するアミ
ノ酸配列を含むＴＣＲの細胞内ドメインを含む。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニッ
トは、４−１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及び／またはＣＤ３ゼータの機能的シグ
ナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なくとも１つのそれに対する修
飾を有するアミノ酸配列を含む細胞内ドメインを含む。いくつかの例では、該ヒトまたは
ヒト化抗体ドメインは、抗体フラグメントを含む。いくつかの例では、該ヒトまたはヒト
化抗体ドメインは、ｓｃＦｖまたはＶＨドメインを含む。いくつかの例では、該単離され
た核酸分子は、（ｉ）それぞれ配列番号２５、配列番号２７、及び配列番号２９に７０〜
１００％の配列同一性がある、抗ＣＤ１９軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ
）ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列
番号３１、配列番号３３、及び配列番号３５に７０〜１００％の配列同一性がある、抗Ｃ
Ｄ１９重鎖結合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及び
ＨＣ ＣＤＲ３をコードする。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、軽鎖可変領
域をコードするとともに、該軽鎖可変領域は、配列番号４９の軽鎖可変領域アミノ酸配列
の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号４９
の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む。いくつか
の例では、該単離された核酸分子は、重鎖可変領域をコードするとともに、該重鎖可変領
域は、配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修
飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９
５〜９９％の同一性がある配列を含む。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、（
ｉ）それぞれ配列番号３７、配列番号３９、及び配列番号４１に７０〜１００％の配列同
一性がある、抗ＢＣＭＡ軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＬＣ
ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列番号４３、配列番
号４５、及び配列番号４７に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＢＣＭＡ重鎖結合ド
メインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３を
コードする。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、軽鎖可変領域をコードすると
ともに、該軽鎖可変領域は、配列番号５３の軽鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つ
から最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５３の軽鎖可変領域ア
ミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む。いくつかの例では、該単離
された核酸分子は、重鎖可変領域をコードするとともに、該重鎖可変領域は、配列番号５
５の重鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ
酸配列、または、配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一
性がある配列を含む。いくつかの例では、該ＴＦＰは、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ
鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ
３デルタのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから
最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質
の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含む。い
くつかの例では、該コードされたＴＦＰは、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３
イプシロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタの
ＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０ま
での修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ド
メインを含む膜貫通ドメインを含む。いくつかの例では、該コードされたＴＦＰは、ＴＣ
Ｒアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＴＣＲゼータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニッ
ト、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット、ＣＤ４５
、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３
７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、それらの機
能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ
酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含
む。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、さらに、共刺激ドメインをコードする
配列を含む。いくつかの例では、該共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、Ｃ
Ｄ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ
２７８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ならびに少なくとも１つから最大２０までの
それに対する修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質か
ら得られる機能的シグナル伝達ドメインである。いくつかの例では、該単離された核酸分
子は、さらにリーダー配列を含む。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、ｍＲＮ
Ａである。
る。いくつかの例では、該ＴＦＰは、Ｔ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する。いくつ
かの例では、該コードされた抗原結合ドメインは、リンカー配列によって該ＴＣＲの細胞
外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該コードされたリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ
）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、
ＴＣＲの細胞外ドメインを含む。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの
膜貫通ドメインを含む。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの細胞内ド
メインを含む。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、（ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、（ｉｉ）ＴＣＲの膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲの細胞内ドメインを含む
とともに、（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）のうちの少なくとも２つは同じＴＣＲサブ
ユニット由来である。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニットは、ＣＤ３イプシロン、
ＣＤ３ガンマ、もしくはＣＤ３デルタの細胞内シグナル伝達ドメインから選択される刺激
ドメイン、または少なくとも１つ、２つ、もしくは３つのそれに対する修飾を有するアミ
ノ酸配列を含むＴＣＲの細胞内ドメインを含む。いくつかの例では、該ＴＣＲサブユニッ
トは、４−１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及び／またはＣＤ３ゼータの機能的シグ
ナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なくとも１つのそれに対する修
飾を有するアミノ酸配列を含む細胞内ドメインを含む。いくつかの例では、該ヒトまたは
ヒト化抗体ドメインは、抗体フラグメントを含む。いくつかの例では、該ヒトまたはヒト
化抗体ドメインは、ｓｃＦｖまたはＶＨドメインを含む。いくつかの例では、該単離され
た核酸分子は、（ｉ）それぞれ配列番号２５、配列番号２７、及び配列番号２９に７０〜
１００％の配列同一性がある、抗ＣＤ１９軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ
）ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列
番号３１、配列番号３３、及び配列番号３５に７０〜１００％の配列同一性がある、抗Ｃ
Ｄ１９重鎖結合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及び
ＨＣ ＣＤＲ３をコードする。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、軽鎖可変領
域をコードするとともに、該軽鎖可変領域は、配列番号４９の軽鎖可変領域アミノ酸配列
の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号４９
の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む。いくつか
の例では、該単離された核酸分子は、重鎖可変領域をコードするとともに、該重鎖可変領
域は、配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修
飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９
５〜９９％の同一性がある配列を含む。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、（
ｉ）それぞれ配列番号３７、配列番号３９、及び配列番号４１に７０〜１００％の配列同
一性がある、抗ＢＣＭＡ軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＬＣ
ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列番号４３、配列番
号４５、及び配列番号４７に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＢＣＭＡ重鎖結合ド
メインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３を
コードする。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、軽鎖可変領域をコードすると
ともに、該軽鎖可変領域は、配列番号５３の軽鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つ
から最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５３の軽鎖可変領域ア
ミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む。いくつかの例では、該単離
された核酸分子は、重鎖可変領域をコードするとともに、該重鎖可変領域は、配列番号５
５の重鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ
酸配列、または、配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一
性がある配列を含む。いくつかの例では、該ＴＦＰは、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ
鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ
３デルタのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから
最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質
の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含む。い
くつかの例では、該コードされたＴＦＰは、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３
イプシロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタの
ＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０ま
での修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ド
メインを含む膜貫通ドメインを含む。いくつかの例では、該コードされたＴＦＰは、ＴＣ
Ｒアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＴＣＲゼータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニッ
ト、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット、ＣＤ４５
、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３
７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、それらの機
能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ
酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含
む。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、さらに、共刺激ドメインをコードする
配列を含む。いくつかの例では、該共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、Ｃ
Ｄ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ
２７８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ならびに少なくとも１つから最大２０までの
それに対する修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質か
ら得られる機能的シグナル伝達ドメインである。いくつかの例では、該単離された核酸分
子は、さらにリーダー配列を含む。いくつかの例では、該単離された核酸分子は、ｍＲＮ
Ａである。
いくつかの例では、該ＴＦＰは、ＴＣＲサブユニットの免疫受容活性化チロシンモチー
フ（ＩＴＡＭ）を含み、該サブユニットは、ＣＤ３ゼータのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３
イプシロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタの
ＴＣＲサブユニット、ＴＣＲゼータ鎖、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容
体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、
Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベ
ータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ
２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８
、ＣＤ６６ｄ、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までのそ
れに対する修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質のＩ
ＴＡＭまたはその一部を含む。いくつかの例では、該ＩＴＡＭは、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３
デルタ、またはＣＤ３イプシロンのＩＴＡＭを置き換える。いくつかの例では、該ＩＴＡ
Ｍは、ＣＤ３ゼータのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニット、Ｃ
Ｄ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニットからなる群か
ら選択されるとともに、ＣＤ３ゼータのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲ
サブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニ
ットからなる群から選択される異なるＩＴＡＭを置き換える。
フ（ＩＴＡＭ）を含み、該サブユニットは、ＣＤ３ゼータのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３
イプシロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタの
ＴＣＲサブユニット、ＴＣＲゼータ鎖、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容
体２鎖、Ｆｃガンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、
Ｆｃガンマ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベ
ータ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ
２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８
、ＣＤ６６ｄ、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までのそ
れに対する修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質のＩ
ＴＡＭまたはその一部を含む。いくつかの例では、該ＩＴＡＭは、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３
デルタ、またはＣＤ３イプシロンのＩＴＡＭを置き換える。いくつかの例では、該ＩＴＡ
Ｍは、ＣＤ３ゼータのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニット、Ｃ
Ｄ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニットからなる群か
ら選択されるとともに、ＣＤ３ゼータのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲ
サブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニ
ットからなる群から選択される異なるＩＴＡＭを置き換える。
いくつかの例では、該核酸は、ヌクレオチド類似体を含む。いくつかの例では、該ヌク
レオチド類似体は、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）
、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−
Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−
ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジ
メチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、２’−Ｏ−Ｎ−メチルア
セトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ
）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、モ
ルホリノ、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド、及び２’
−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホルアミダイトからなる群から選択される。
レオチド類似体は、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）
、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−
Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−
ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジ
メチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、２’−Ｏ−Ｎ−メチルア
セトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ
）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、モ
ルホリノ、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド、及び２’
−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホルアミダイトからなる群から選択される。
１つの態様において、本明細書で提供される核酸分子によってコードされる単離された
ポリペプチド分子を本明細書に提供する。
ポリペプチド分子を本明細書に提供する。
１つの態様において、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子を本明細書に提
供する。
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子を本明細書に提
供する。
１つの態様において、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子で
あって、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと
機能的に相互作用することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に提供する。
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子で
あって、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと
機能的に相互作用することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に提供する。
１つの態様において、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子で
あって、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に
提供する。
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子で
あって、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に
提供する。
いくつかの例では、該単離されたＴＦＰ分子は、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメ
イン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または
抗体フラグメントを含む。いくつかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、ｓｃＦｖま
たはＶＨドメインである。いくつかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号５
１のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント
、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む。いく
つかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号４９のアミノ酸配列に対して９５
〜１００％の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最
大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む。いくつかの例では、該単離されたＴ
ＦＰ分子は、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニッ
ト、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット、それらの
機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミ
ノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴ
ＣＲの細胞外ドメインを含む。いくつかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、リンカ
ー配列によって該ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー
領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。
イン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または
抗体フラグメントを含む。いくつかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、ｓｃＦｖま
たはＶＨドメインである。いくつかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号５
１のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント
、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む。いく
つかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号４９のアミノ酸配列に対して９５
〜１００％の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最
大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む。いくつかの例では、該単離されたＴ
ＦＰ分子は、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニッ
ト、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット、それらの
機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミ
ノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴ
ＣＲの細胞外ドメインを含む。いくつかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、リンカ
ー配列によって該ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー
領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。
１つの態様において、ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子を本明細書に提
供する。
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子を本明細書に提
供する。
１つの態様において、ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子で
あって、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと
機能的に相互作用することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に提供する。
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子で
あって、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと
機能的に相互作用することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に提供する。
１つの態様において、ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子で
あって、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に
提供する。
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子で
あって、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に
提供する。
いくつかの例では、該単離されたＴＦＰ分子は、ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメ
イン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または
抗体フラグメントを含む。いくつかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ｓｃＦｖま
たはＶＨドメインである。いくつかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号５
５のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント
、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む。いく
つかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号５３のアミノ酸配列に対して９５
〜１００％の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最
大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む。いくつかの例では、該単離されたＴ
ＦＰ分子は、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニッ
ト、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット、それらの
機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミ
ノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴ
ＣＲの細胞外ドメインを含む。いくつかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、リンカ
ー配列によって該ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー
領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつかの例では、該単離さ
れたＴＦＰ分子は、さらに、共刺激ドメインをコードする配列を含む。いくつかの例では
、該単離されたＴＦＰ分子は、さらに、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする配列を
含む。いくつかの例では、該単離されたＴＦＰ分子は、さらにリーダー配列を含む。
イン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または
抗体フラグメントを含む。いくつかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ｓｃＦｖま
たはＶＨドメインである。いくつかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号５
５のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント
、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む。いく
つかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号５３のアミノ酸配列に対して９５
〜１００％の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最
大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む。いくつかの例では、該単離されたＴ
ＦＰ分子は、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニッ
ト、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット、それらの
機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミ
ノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴ
ＣＲの細胞外ドメインを含む。いくつかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、リンカ
ー配列によって該ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー
領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつかの例では、該単離さ
れたＴＦＰ分子は、さらに、共刺激ドメインをコードする配列を含む。いくつかの例では
、該単離されたＴＦＰ分子は、さらに、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする配列を
含む。いくつかの例では、該単離されたＴＦＰ分子は、さらにリーダー配列を含む。
１つの態様において、本明細書で提供されるＴＦＰをコードする核酸分子を含むベクタ
ーを本明細書に提供する。いくつかの例では、該ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミ
ド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）
ベクター、またはレトロウイルスベクターからなる群から選択される。いくつかの例では
、該ベクターは、さらにプロモーターを含む。いくつかの例では、該ベクターは、インビ
トロで転写されたベクターである。いくつかの例では、該ベクターの核酸配列は、さらに
ポリ（Ａ）尾部を含む。いくつかの例では、該ベクターの核酸配列は、さらに３’ＵＴＲ
を含む。
ーを本明細書に提供する。いくつかの例では、該ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミ
ド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）
ベクター、またはレトロウイルスベクターからなる群から選択される。いくつかの例では
、該ベクターは、さらにプロモーターを含む。いくつかの例では、該ベクターは、インビ
トロで転写されたベクターである。いくつかの例では、該ベクターの核酸配列は、さらに
ポリ（Ａ）尾部を含む。いくつかの例では、該ベクターの核酸配列は、さらに３’ＵＴＲ
を含む。
１つの態様において、本明細書で提供されるベクターを含む細胞を本明細書に提供する
。いくつかの例では、該細胞はヒトＴ細胞である。いくつかの例では、該Ｔ細胞は、ＣＤ
８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの例では、該細胞は、さらに、細胞内シグナ
ル伝達ドメインからの陽性シグナルを含む第二のポリペプチドに会合した、抑制分子の少
なくとも一部を含む第一のポリペプチドを含む抑制分子をコードする核酸を含む。いくつ
かの例では、該抑制分子は、ＰＤ１の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドならびに
共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含む。
。いくつかの例では、該細胞はヒトＴ細胞である。いくつかの例では、該Ｔ細胞は、ＣＤ
８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの例では、該細胞は、さらに、細胞内シグナ
ル伝達ドメインからの陽性シグナルを含む第二のポリペプチドに会合した、抑制分子の少
なくとも一部を含む第一のポリペプチドを含む抑制分子をコードする核酸を含む。いくつ
かの例では、該抑制分子は、ＰＤ１の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドならびに
共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含む。
１つの態様において、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞であって、少なくとも２つの
ＴＦＰ分子を含み、該ＴＦＰ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの
細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、該ＴＦＰ分子が該ヒトＣ
Ｄ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、該細胞において、及び／または該細胞の表面で、内
因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相
互作用することが可能な該Ｔ細胞を本明細書に提供する。
ＴＦＰ分子を含み、該ＴＦＰ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの
細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、該ＴＦＰ分子が該ヒトＣ
Ｄ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、該細胞において、及び／または該細胞の表面で、内
因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相
互作用することが可能な該Ｔ細胞を本明細書に提供する。
１つの態様において、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子、ならびに少なくとも１つ
の内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体を本明細書に提供する。
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子、ならびに少なくとも１つ
の内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体を本明細書に提供する。
いくつかの例では、該ＴＣＲは、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロ
ンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣ
Ｒサブユニットからなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を
含む。いくつかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、リンカー配列によって該ＴＣＲ
の細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを
含み、この場合ｎ＝１〜４である。
ンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣ
Ｒサブユニットからなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を
含む。いくつかの例では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、リンカー配列によって該ＴＣＲ
の細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを
含み、この場合ｎ＝１〜４である。
１つの態様において、ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメ
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子、ならびに少なくとも１つ
の内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体を本明細書に提供する。
イン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子、ならびに少なくとも１つ
の内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体を本明細書に提供する。
いくつかの例では、該ＴＣＲは、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロ
ンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣ
Ｒサブユニットからなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を
含む。いくつかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、リンカー配列によって該ＴＣＲ
の細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを
含み、この場合ｎ＝１〜４である。
ンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣ
Ｒサブユニットからなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を
含む。いくつかの例では、該抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、リンカー配列によって該ＴＣＲ
の細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを
含み、この場合ｎ＝１〜４である。
１つの態様において、本明細書で提供されるタンパク質複合体あたり、少なくとも２つ
の異なるＴＦＰタンパク質を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞を本明細書に提供す
る。
の異なるＴＦＰタンパク質を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞を本明細書に提供す
る。
１つの態様において、本明細書で提供されるベクターでＴ細胞に形質導入することを含
む細胞の作製方法を本明細書に提供する。
む細胞の作製方法を本明細書に提供する。
１つの態様において、インビトロで転写されたＲＮＡまたは合成ＲＮＡを細胞に導入す
ることを含む、ＲＮＡ改変細胞集団の生成方法であって、該ＲＮＡが本明細書で提供され
るＴＦＰ分子をコードする核酸を含むものである方法を本明細書に提供する。
ることを含む、ＲＮＡ改変細胞集団の生成方法であって、該ＲＮＡが本明細書で提供され
るＴＦＰ分子をコードする核酸を含むものである方法を本明細書に提供する。
１つの態様において、哺乳類に抗腫瘍免疫を与える方法であって、該哺乳類に対して、
有効量の本明細書で提供されるＴＦＰ分子を発現する、または本明細書で提供されるポリ
ペプチド分子を発現する細胞を投与することを含む方法を本明細書に提供する。
有効量の本明細書で提供されるＴＦＰ分子を発現する、または本明細書で提供されるポリ
ペプチド分子を発現する細胞を投与することを含む方法を本明細書に提供する。
いくつかの例では、該細胞は自己Ｔ細胞である。いくつかの例では、該細胞は同種異系
Ｔ細胞である。いくつかの例では、該哺乳類はヒトである。
Ｔ細胞である。いくつかの例では、該哺乳類はヒトである。
１つの態様において、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患を有する哺乳類の治療
方法であって、該哺乳類に対して、有効量の本明細書で提供されるＴＦＰ分子、本明細書
で提供される細胞、または本明細書で提供されるポリペプチド分子を投与することを含む
方法を本明細書に提供する。
方法であって、該哺乳類に対して、有効量の本明細書で提供されるＴＦＰ分子、本明細書
で提供される細胞、または本明細書で提供されるポリペプチド分子を投与することを含む
方法を本明細書に提供する。
いくつかの例では、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う該疾患は、増殖性疾患、がん
、悪性腫瘍、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、前白血病、ＣＤ１９の発現を伴う非がん関
連の適応症からなる群から選択される。いくつかの例では、該疾患は、Ｂ細胞急性リンパ
性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、急性リンパ性白血
病（ＡＬＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前
リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細
胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞濾胞性リンパ腫、大
細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫
、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫
、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリ
ン血症、前白血病、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、及びこれらの組合せから
なる群から選択される血液がんである。いくつかの例では、ＴＦＰ分子を発現する該細胞
は、ＴＦＰ分子を発現する細胞の効果を高める薬剤と組み合わせて投与される。いくつか
の例では、該哺乳類では、有効量の抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＢＣ
ＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞を投与した哺乳類と比較して、サイトカインの放出が少な
い。いくつかの例では、ＴＦＰ分子を発現する該細胞は、ＴＦＰ分子を発現する細胞の投
与に伴う１つ以上の副作用を改善する薬剤と組み合わせて投与される。いくつかの例では
、ＴＦＰ分子を発現する該細胞は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡに関連する疾患を治療する薬
剤と組み合わせて投与される。
、悪性腫瘍、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、前白血病、ＣＤ１９の発現を伴う非がん関
連の適応症からなる群から選択される。いくつかの例では、該疾患は、Ｂ細胞急性リンパ
性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、急性リンパ性白血
病（ＡＬＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前
リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細
胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞濾胞性リンパ腫、大
細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫
、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫
、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリ
ン血症、前白血病、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、及びこれらの組合せから
なる群から選択される血液がんである。いくつかの例では、ＴＦＰ分子を発現する該細胞
は、ＴＦＰ分子を発現する細胞の効果を高める薬剤と組み合わせて投与される。いくつか
の例では、該哺乳類では、有効量の抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＢＣ
ＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞を投与した哺乳類と比較して、サイトカインの放出が少な
い。いくつかの例では、ＴＦＰ分子を発現する該細胞は、ＴＦＰ分子を発現する細胞の投
与に伴う１つ以上の副作用を改善する薬剤と組み合わせて投与される。いくつかの例では
、ＴＦＰ分子を発現する該細胞は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡに関連する疾患を治療する薬
剤と組み合わせて投与される。
１つの態様において、本明細書で提供される単離された核酸分子、本明細書で提供され
る単離されたポリペプチド分子、本明細書で提供される単離されたＴＦＰ、本明細書で提
供される複合体、本明細書で提供されるベクター、または本明細書で提供される細胞は、
薬剤用である。
る単離されたポリペプチド分子、本明細書で提供される単離されたＴＦＰ、本明細書で提
供される複合体、本明細書で提供されるベクター、または本明細書で提供される細胞は、
薬剤用である。
１つの態様において、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患を有する哺乳類の治療
方法であって、該哺乳類に対して、有効量の本明細書で提供されるＴＦＰ分子、本明細書
で提供される細胞、または本明細書で提供されるポリペプチド分子を投与することを含み
、該哺乳類では、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発
現するＴ細胞の有効量を投与された哺乳類と比較して、サイトカインの放出が少ないもの
である方法を本明細書に提供する。
方法であって、該哺乳類に対して、有効量の本明細書で提供されるＴＦＰ分子、本明細書
で提供される細胞、または本明細書で提供されるポリペプチド分子を投与することを含み
、該哺乳類では、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発
現するＴ細胞の有効量を投与された哺乳類と比較して、サイトカインの放出が少ないもの
である方法を本明細書に提供する。
参照による引用
本明細書で言及するすべての出版物、特許、及び特許出願は、個々の出版物、特許、ま
たは特許出願が具体的かつ個別に、参照することによって組み込まれることが示された場
合と同じ程度まで、参照することによって本明細書に組み込まれる。
本明細書で言及するすべての出版物、特許、及び特許出願は、個々の出版物、特許、ま
たは特許出願が具体的かつ個別に、参照することによって組み込まれることが示された場
合と同じ程度まで、参照することによって本明細書に組み込まれる。
本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に明記する。本発明の特徴及び利
点のさらなる理解は、本発明の原理が利用される具体的な実施形態を明記する以下の詳細
な説明、ならびに添付の図面を参照することによって得られるであろう。
点のさらなる理解は、本発明の原理が利用される具体的な実施形態を明記する以下の詳細
な説明、ならびに添付の図面を参照することによって得られるであろう。
発明の詳細な説明
１つの態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする
、単離された核酸分子であって、該ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニット、及び抗ＣＤ１９結合
ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む分子を本明細書に提供する。いくつ
かの実施形態では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの細胞外ドメインを含む。他の実施
形態では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの膜貫通ドメインを含む。さらに他の実施形
態では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの細胞内ドメインを含む。さらなる実施形態で
は、該ＴＣＲサブユニットは、（ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメイン、（ｉｉ）ＴＣＲの膜貫通
ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲの細胞内ドメインを含むとともに、（ｉ）、（ｉｉ）、
及び（ｉｉｉ）のうちの少なくとも２つは同じＴＣＲサブユニット由来である。さらに別
の実施形態では、該ＴＣＲサブユニットは、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、もしくは
ＣＤ３デルタの細胞内シグナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なく
とも１つ、２つ、もしくは３つのそれに対する修飾を有するアミノ酸配列を含むＴＣＲの
細胞内ドメインを含む。さらに別の実施形態では、該ＴＣＲサブユニットは、４−１ＢＢ
の機能的シグナル伝達ドメイン及び／またはＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメイン
から選択される刺激ドメイン、またはそれに対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つ
の修飾を有するアミノ酸配列を含む細胞内ドメインを含む。
１つの態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする
、単離された核酸分子であって、該ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニット、及び抗ＣＤ１９結合
ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む分子を本明細書に提供する。いくつ
かの実施形態では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの細胞外ドメインを含む。他の実施
形態では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの膜貫通ドメインを含む。さらに他の実施形
態では、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲの細胞内ドメインを含む。さらなる実施形態で
は、該ＴＣＲサブユニットは、（ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメイン、（ｉｉ）ＴＣＲの膜貫通
ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲの細胞内ドメインを含むとともに、（ｉ）、（ｉｉ）、
及び（ｉｉｉ）のうちの少なくとも２つは同じＴＣＲサブユニット由来である。さらに別
の実施形態では、該ＴＣＲサブユニットは、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、もしくは
ＣＤ３デルタの細胞内シグナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なく
とも１つ、２つ、もしくは３つのそれに対する修飾を有するアミノ酸配列を含むＴＣＲの
細胞内ドメインを含む。さらに別の実施形態では、該ＴＣＲサブユニットは、４−１ＢＢ
の機能的シグナル伝達ドメイン及び／またはＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメイン
から選択される刺激ドメイン、またはそれに対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つ
の修飾を有するアミノ酸配列を含む細胞内ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該ヒトまたはヒト化抗体ドメインは、抗体フラグメントを含
む。いくつかの実施形態では、該ヒトまたはヒト化抗体ドメインは、ｓｃＦｖまたはＶＨ
ドメインを含む。
む。いくつかの実施形態では、該ヒトまたはヒト化抗体ドメインは、ｓｃＦｖまたはＶＨ
ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該単離された核酸分子は、（ｉ）本明細書で提供されるいず
れかの抗ＣＤ１９軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤ
Ｒ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）本明細書で提供されるいずれかの抗Ｃ
Ｄ１９重鎖結合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及び
ＨＣ ＣＤＲ３を含む。
れかの抗ＣＤ１９軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤ
Ｒ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）本明細書で提供されるいずれかの抗Ｃ
Ｄ１９重鎖結合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及び
ＨＣ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、該軽鎖可変領域は、本明細書で提供される軽鎖可変領域のア
ミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大３０、２０、もしくは
１０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、本明細書で提供されるアミノ酸配列に対
して９５〜９９％の同一性がある配列を含む。他の実施形態では、該重鎖可変領域は、本
明細書で提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、もしくは３つ
の修飾から最大３０、２０、もしくは１０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、本
明細書で提供されるアミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む。
ミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大３０、２０、もしくは
１０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、本明細書で提供されるアミノ酸配列に対
して９５〜９９％の同一性がある配列を含む。他の実施形態では、該重鎖可変領域は、本
明細書で提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、もしくは３つ
の修飾から最大３０、２０、もしくは１０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、本
明細書で提供されるアミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む。
いくつかの実施形態では、該ＴＦＰは、Ｔ細胞受容体のアルファもしくはベータ鎖、Ｃ
Ｄ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、またはＣＤ３ガンマからなる群から選択されるタンパク
質の細胞外ドメインもしくはその一部、もしくはその機能的フラグメント、またはそれに
対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大２０、１０、もしくは５つま
での修飾を有するアミノ酸配列を含むＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含む。他の
実施形態では、該コードされたＴＦＰは、ＴＣＲのアルファ鎖、ベータ鎖、もしくはＴＣ
ＲサブユニットのＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、及びＣＤ３デルタからなる群から選
択されるタンパク質の膜貫通ドメイン、またはそれらの機能的フラグメント、もしくはそ
れに対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つから最大２０、１０、もしくは５までの
修飾を有するアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインを含む。
Ｄ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、またはＣＤ３ガンマからなる群から選択されるタンパク
質の細胞外ドメインもしくはその一部、もしくはその機能的フラグメント、またはそれに
対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大２０、１０、もしくは５つま
での修飾を有するアミノ酸配列を含むＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含む。他の
実施形態では、該コードされたＴＦＰは、ＴＣＲのアルファ鎖、ベータ鎖、もしくはＴＣ
ＲサブユニットのＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、及びＣＤ３デルタからなる群から選
択されるタンパク質の膜貫通ドメイン、またはそれらの機能的フラグメント、もしくはそ
れに対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つから最大２０、１０、もしくは５までの
修飾を有するアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該コードされたＴＦＰは、ＴＣＲのアルファ、ベータ、もし
くはゼータ鎖、またはＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、及びＣＤ３デルタ ＣＤ４５、
ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３７
、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ならびにＣＤ１５４からな
る群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメイン、もしくはその機能的フラグメント、ま
たはそれに対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大２０、１０、もし
くは５までの修飾を有するアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインを含む。
くはゼータ鎖、またはＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、及びＣＤ３デルタ ＣＤ４５、
ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３７
、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ならびにＣＤ１５４からな
る群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメイン、もしくはその機能的フラグメント、ま
たはそれに対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大２０、１０、もし
くは５までの修飾を有するアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該コードされた抗ＣＤ１９結合ドメインは、リンカー配列に
よって該ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該コードされたリン
カー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつかの例では、該コ
ードされたリンカー配列は、長いリンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該コ
ードされた長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝２〜４である。いく
つかの例では、該コードされたリンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ）配列を含む。いく
つかの例では、該コードされた短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝
１〜３である。
よって該ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該コードされたリン
カー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつかの例では、該コ
ードされたリンカー配列は、長いリンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該コ
ードされた長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝２〜４である。いく
つかの例では、該コードされたリンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ）配列を含む。いく
つかの例では、該コードされた短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝
１〜３である。
いくつかの実施形態では、該単離された核酸分子は、さらに、共刺激ドメインをコード
する配列を含む。いくつかの例では、該共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７
、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（
ＣＤ２７８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）からなる群から選択されるタンパク質、ま
たはそれに対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大２０、１０、もし
くは５つまでの修飾を有するアミノ酸配列から得られる機能的シグナル伝達ドメインであ
る。
する配列を含む。いくつかの例では、該共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７
、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（
ＣＤ２７８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）からなる群から選択されるタンパク質、ま
たはそれに対する少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大２０、１０、もし
くは５つまでの修飾を有するアミノ酸配列から得られる機能的シグナル伝達ドメインであ
る。
いくつかの実施形態では、該単離された核酸分子は、さらにリーダー配列を含む。
また、前述の核酸分子のいずれかによってコードされる単離されたポリペプチド分子を
本明細書に提供する。
本明細書に提供する。
また、別の態様において、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外
ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む単離されたＴ細胞受容体融合タン
パク質（ＴＦＰ）分子を本明細書に提供する。いくつかの実施形態では、該単離されたＴ
ＦＰ分子は、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫
通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または抗体フラグメントを含む。
ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む単離されたＴ細胞受容体融合タン
パク質（ＴＦＰ）分子を本明細書に提供する。いくつかの実施形態では、該単離されたＴ
ＦＰ分子は、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫
通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または抗体フラグメントを含む。
いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、ｓｃＦｖまたはＶＨドメイン
である。他の実施形態では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書で提供されるアミノ
酸配列の軽鎖及び重鎖、もしくはそれらの機能的フラグメント、もしくは本明細書で提供
される軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最
大３０、２０、もしくは１０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、本明細書で提供
されるアミノ酸配列に９５〜９９％の同一性がある配列を含む。
である。他の実施形態では、該抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書で提供されるアミノ
酸配列の軽鎖及び重鎖、もしくはそれらの機能的フラグメント、もしくは本明細書で提供
される軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾から最
大３０、２０、もしくは１０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、本明細書で提供
されるアミノ酸配列に９５〜９９％の同一性がある配列を含む。
いくつかの実施形態では、該単離されたＴＦＰ分子は、Ｔ細胞受容体のアルファもしく
はベータ鎖、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、またはＣＤ３ガンマからなる群から選択
されるタンパク質の細胞外ドメインもしくはその一部、またはそれに対する少なくとも１
つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大２０、１０、もしくは５つまでの修飾を有するア
ミノ酸配列を含むＴＣＲの細胞外ドメインを含む。
はベータ鎖、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、またはＣＤ３ガンマからなる群から選択
されるタンパク質の細胞外ドメインもしくはその一部、またはそれに対する少なくとも１
つ、２つ、もしくは３つの修飾から最大２０、１０、もしくは５つまでの修飾を有するア
ミノ酸配列を含むＴＣＲの細胞外ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９結合ドメインは、リンカー配列によって該ＴＣＲ
の細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを
含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、長いリンカー
（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、
この場合ｎ＝２〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ
）配列を含む。いくつかの例では、該短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場
合ｎ＝１〜３である。
の細胞外ドメインにつながれる。いくつかの例では、該リンカー領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを
含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、長いリンカー
（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、
この場合ｎ＝２〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ
）配列を含む。いくつかの例では、該短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場
合ｎ＝１〜３である。
いくつかの実施形態では、該単離されたＴＦＰ分子は、さらに、共刺激ドメインをコー
ドする配列を含む。他の実施形態では、該単離されたＴＦＰ分子は、さらに、細胞内シグ
ナル伝達ドメインをコードする配列を含む。さらに他の実施形態では、該単離されたＴＦ
Ｐ分子は、さらにリーダー配列を含む。
ドする配列を含む。他の実施形態では、該単離されたＴＦＰ分子は、さらに、細胞内シグ
ナル伝達ドメインをコードする配列を含む。さらに他の実施形態では、該単離されたＴＦ
Ｐ分子は、さらにリーダー配列を含む。
また、前述のＴＦＰ分子のいずれかをコードする核酸分子を含むベクターを本明細書に
提供する。いくつかの実施形態では、該ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レン
チウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターからなる
群から選択される。いくつかの実施形態では、該ベクターは、さらにプロモーターを含む
。いくつかの実施形態では、該ベクターは、インビトロで転写されたベクターである。い
くつかの実施形態では、該ベクターの核酸配列は、さらにポリ（Ａ）尾部を含む。いくつ
かの実施形態では、該ベクターの核酸配列は、さらに３’ＵＴＲを含む。
提供する。いくつかの実施形態では、該ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レン
チウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターからなる
群から選択される。いくつかの実施形態では、該ベクターは、さらにプロモーターを含む
。いくつかの実施形態では、該ベクターは、インビトロで転写されたベクターである。い
くつかの実施形態では、該ベクターの核酸配列は、さらにポリ（Ａ）尾部を含む。いくつ
かの実施形態では、該ベクターの核酸配列は、さらに３’ＵＴＲを含む。
また、記載のベクターのいずれかを含む細胞を本明細書に提供する。いくつかの実施形
態では、該細胞はヒトＴ細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ８＋また
はＣＤ４＋Ｔ細胞である。他の実施形態では、該細胞は、さらに、細胞内シグナル伝達ド
メインからの陽性シグナルを含む第二のポリペプチドに会合した、抑制分子の少なくとも
一部を含む第一のポリペプチドを含む抑制分子をコードする核酸を含む。いくつかの実施
形態では、該抑制分子は、ＰＤ１の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドならびに共
刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含む。
態では、該細胞はヒトＴ細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ８＋また
はＣＤ４＋Ｔ細胞である。他の実施形態では、該細胞は、さらに、細胞内シグナル伝達ド
メインからの陽性シグナルを含む第二のポリペプチドに会合した、抑制分子の少なくとも
一部を含む第一のポリペプチドを含む抑制分子をコードする核酸を含む。いくつかの実施
形態では、該抑制分子は、ＰＤ１の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドならびに共
刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含む。
別の態様において、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイ
ン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子であ
って、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機
能的に相互作用することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に提供する。
ン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子であ
って、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機
能的に相互作用することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に提供する。
別の態様において、ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイ
ン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子であ
って、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に提
供する。
ン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離されたＴＦＰ分子であ
って、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な該ＴＦＰ分子を本明細書に提
供する。
別の態様において、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞であって、少なくとも２つのＴ
ＦＰ分子を含み、該ＴＦＰ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細
胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、該ＴＦＰ分子が該ヒトＣＤ
８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、該細胞において、及び／または該細胞の表面で、内因
性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互
作用することが可能な該Ｔ細胞を本明細書に提供する。
ＦＰ分子を含み、該ＴＦＰ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細
胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、該ＴＦＰ分子が該ヒトＣＤ
８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、該細胞において、及び／または該細胞の表面で、内因
性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互
作用することが可能な該Ｔ細胞を本明細書に提供する。
別の態様において、ｉ）ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ド
メイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子、ならびにｉｉ）少なく
とも１つの内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体を本明細書に提供する。
メイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子、ならびにｉｉ）少なく
とも１つの内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体を本明細書に提供する。
いくつかの実施形態では、該ＴＣＲは、Ｔ細胞受容体のアルファもしくはベータ鎖、Ｃ
Ｄ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、またはＣＤ３ガンマからなる群から選択されるタンパク
質の細胞外ドメインもしくはその一部を含む。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ１９結
合ドメインは、リンカー配列によって該ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる。いくつか
の例では、該リンカー領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつ
かの例では、該リンカー配列は、長いリンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、
該長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝２〜４である。いくつかの例
では、該リンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ）配列を含む。いくつかの例では、該短い
リンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜３である。
Ｄ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、またはＣＤ３ガンマからなる群から選択されるタンパク
質の細胞外ドメインもしくはその一部を含む。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ１９結
合ドメインは、リンカー配列によって該ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる。いくつか
の例では、該リンカー領域は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜４である。いくつ
かの例では、該リンカー配列は、長いリンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、
該長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝２〜４である。いくつかの例
では、該リンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ）配列を含む。いくつかの例では、該短い
リンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝１〜３である。
また、記載のいずれかのタンパク質複合体あたり、少なくとも２つの異なるＴＦＰタン
パク質を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞を本明細書に提供する。
パク質を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞を本明細書に提供する。
別の態様において、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団であって、該集団の該Ｔ
細胞が個々にまたは集合的に少なくとも２つのＴＦＰ分子を含み、該ＴＦＰ分子がヒトま
たはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインもしくは抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ド
メイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、該ＴＦＰ分子が該ヒトＣＤ８＋ま
たはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、該細胞において、及び／または該細胞の表面で、内因性ＴＣ
Ｒ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用す
ることが可能な該Ｔ細胞集団を本明細書に提供する。
細胞が個々にまたは集合的に少なくとも２つのＴＦＰ分子を含み、該ＴＦＰ分子がヒトま
たはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインもしくは抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ド
メイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、該ＴＦＰ分子が該ヒトＣＤ８＋ま
たはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、該細胞において、及び／または該細胞の表面で、内因性ＴＣ
Ｒ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用す
ることが可能な該Ｔ細胞集団を本明細書に提供する。
別の態様において、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団であって、該集団の該Ｔ
細胞が個々にまたは集合的に、本明細書で提供される単離された核酸分子によってコード
される少なくとも２つのＴＦＰ分子を含む該Ｔ細胞集団を本明細書に提供する。
細胞が個々にまたは集合的に、本明細書で提供される単離された核酸分子によってコード
される少なくとも２つのＴＦＰ分子を含む該Ｔ細胞集団を本明細書に提供する。
別の態様において、Ｔ細胞に記載のベクターのいずれかで形質導入することを含む細胞
の作製方法を本明細書に提供する。
の作製方法を本明細書に提供する。
別の態様において、インビトロで転写されたＲＮＡまたは合成ＲＮＡを細胞に導入する
ことを含む、ＲＮＡ改変細胞集団の生成方法であって、該ＲＮＡが記載のＴＦＰ分子のい
ずれかをコードする核酸を含むものである方法を本明細書に提供する。
ことを含む、ＲＮＡ改変細胞集団の生成方法であって、該ＲＮＡが記載のＴＦＰ分子のい
ずれかをコードする核酸を含むものである方法を本明細書に提供する。
別の態様において、哺乳類に抗腫瘍免疫を与える方法であって、該哺乳類に対して、記
載のＴＦＰ分子のいずれかを発現する細胞の有効量を投与することを含む方法を本明細書
に提供する。いくつかの実施形態では、該細胞は自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態
では、該細胞は、同種異系Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、該哺乳類はヒトであ
る。
載のＴＦＰ分子のいずれかを発現する細胞の有効量を投与することを含む方法を本明細書
に提供する。いくつかの実施形態では、該細胞は自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態
では、該細胞は、同種異系Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、該哺乳類はヒトであ
る。
別の態様において、ＣＤ１９の発現を伴う疾患を有する哺乳類の治療方法であって、該
哺乳類に対して、記載のＴＦＰ分子のいずれかを含む細胞の有効量を投与することを含む
方法を本明細書に提供する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９の発現を伴う該疾患は、
増殖性疾患、例えば、がんもしくは悪性腫瘍、または前がん状態、例えば、骨髄異形成、
骨髄異形成症候群、もしくは前白血病、またはＣＤ１９の発現を伴う非がん関連の適応症
から選択される。いくつかの実施形態では、該疾患は、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「Ｂ
−ＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「Ｔ−ＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（Ａ
ＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の急性白血病；慢性骨髄性白血病（
ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上
の慢性白血病；Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキット
リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小
細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マント
ル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非
ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレー
ムマクログロブリン血症、及び骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によってま
とめられる様々な血液疾患の集まりである「前白血病」が挙げられるがこれらに限定され
ないさらなる血液がんまたは血液疾患、及び非定型及び／または非古典的がん、悪性腫瘍
、ＣＤ１９を発現する前がん状態もしくは増殖性疾患が挙げられるがこれらに限定されな
いＣＤ１９の発現を伴う疾患；及びそれらの組合せがからなる群から選択される血液がん
である。
哺乳類に対して、記載のＴＦＰ分子のいずれかを含む細胞の有効量を投与することを含む
方法を本明細書に提供する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９の発現を伴う該疾患は、
増殖性疾患、例えば、がんもしくは悪性腫瘍、または前がん状態、例えば、骨髄異形成、
骨髄異形成症候群、もしくは前白血病、またはＣＤ１９の発現を伴う非がん関連の適応症
から選択される。いくつかの実施形態では、該疾患は、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「Ｂ
−ＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「Ｔ−ＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（Ａ
ＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の急性白血病；慢性骨髄性白血病（
ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上
の慢性白血病；Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキット
リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小
細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マント
ル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非
ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレー
ムマクログロブリン血症、及び骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によってま
とめられる様々な血液疾患の集まりである「前白血病」が挙げられるがこれらに限定され
ないさらなる血液がんまたは血液疾患、及び非定型及び／または非古典的がん、悪性腫瘍
、ＣＤ１９を発現する前がん状態もしくは増殖性疾患が挙げられるがこれらに限定されな
いＣＤ１９の発現を伴う疾患；及びそれらの組合せがからなる群から選択される血液がん
である。
いくつかの実施形態では、記載のＴＦＰ分子のいずれかを発現する細胞は、ＴＦＰ分子
を発現する細胞の投与に伴う１つ以上の副作用を改善する薬剤と組み合わせて投与される
。いくつかの実施形態では、記載のＴＦＰ分子のいずれかを発現する該細胞は、ＣＤ１９
に関連する疾患を治療する薬剤と組み合わせて投与される。
を発現する細胞の投与に伴う１つ以上の副作用を改善する薬剤と組み合わせて投与される
。いくつかの実施形態では、記載のＴＦＰ分子のいずれかを発現する該細胞は、ＣＤ１９
に関連する疾患を治療する薬剤と組み合わせて投与される。
また、記載の単離された核酸分子のいずれか、記載の単離されたポリペプチド分子のい
ずれか、記載の単離されたＴＦＰ分子のいずれか、記載のタンパク質複合体のいずれか、
記載のベクターのいずれか、または記載の細胞のいずれかは、薬剤用である。
ずれか、記載の単離されたＴＦＰ分子のいずれか、記載のタンパク質複合体のいずれか、
記載のベクターのいずれか、または記載の細胞のいずれかは、薬剤用である。
定義
別段の定義のない限り、本明細書で用いるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が
属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。
別段の定義のない限り、本明細書で用いるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が
属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。
用語「ａ」及び「ａｎ」は、該冠詞の文法上の目的語の１つまたは１つより多く（すな
わち、少なくとも１つ）を指す。例として、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ（要素）」は、１つ
の要素または１つより多い要素を意味する。
わち、少なくとも１つ）を指す。例として、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ（要素）」は、１つ
の要素または１つより多い要素を意味する。
本明細書で用いられる、「約」は、状況及び当業者が知るまたは知り得ることに応じて
、プラスマイナス１パーセント未満もしくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、または
３０パーセント超を意味することができる。
、プラスマイナス１パーセント未満もしくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、または
３０パーセント超を意味することができる。
本明細書で用いられる、「ｓｕｂｊｅｃｔ（対象）」もしくは「ｓｕｂｊｅｃｔｓ（対
象）」または「ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ（個体）」には、哺乳類、例えば、ヒトまたは非
ヒト哺乳類、例えば、家畜、農業用、または野生の動物、ならびに鳥類及び水生動物が含
まれ得るがこれらに限定されない。「ｐａｔｉｅｎｔ（患者）」は、疾患、障害、もしく
は状態に罹患している、もしくはその発病の危険性がある対象、または他の面では、本明
細書で提供される組成物及び方法を必要とする対象である。
象）」または「ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ（個体）」には、哺乳類、例えば、ヒトまたは非
ヒト哺乳類、例えば、家畜、農業用、または野生の動物、ならびに鳥類及び水生動物が含
まれ得るがこれらに限定されない。「ｐａｔｉｅｎｔ（患者）」は、疾患、障害、もしく
は状態に罹患している、もしくはその発病の危険性がある対象、または他の面では、本明
細書で提供される組成物及び方法を必要とする対象である。
本明細書で用いられる、「ｔｒｅａｔｉｎｇ（治療すること）」または「ｔｒｅａｔｍ
ｅｎｔ（治療）」は、該疾患もしくは状態の治療または改善における成功の任意の兆候を
指す。治療することには、例えば、該疾患もしくは状態の１つ以上の症状の重症度を縮小
すること、遅らせること、または軽減することが含まれる場合も、患者が経験する疾患、
不具合、障害、または悪条件等の症状の頻度を減少させることが含まれる場合もある。本
明細書で用いられる、「ｔｒｅａｔ ｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔ（治療または予防）」は、該
疾患もしくは状態のある程度の治療または改善をもたらす方法を指すために本明細書で用
いられることがあり、また、該状態の完全な予防が挙げられるがこれに限定されないその
目的に向けられた様々な結果を企図する。
ｅｎｔ（治療）」は、該疾患もしくは状態の治療または改善における成功の任意の兆候を
指す。治療することには、例えば、該疾患もしくは状態の１つ以上の症状の重症度を縮小
すること、遅らせること、または軽減することが含まれる場合も、患者が経験する疾患、
不具合、障害、または悪条件等の症状の頻度を減少させることが含まれる場合もある。本
明細書で用いられる、「ｔｒｅａｔ ｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔ（治療または予防）」は、該
疾患もしくは状態のある程度の治療または改善をもたらす方法を指すために本明細書で用
いられることがあり、また、該状態の完全な予防が挙げられるがこれに限定されないその
目的に向けられた様々な結果を企図する。
本明細書で用いられる、「ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ（予防すること）」は、患者における
疾患または状態、例えば、腫瘍形成の予防を指す。例えば、腫瘍または他のがんの形態の
発症の危険性がある個体が本発明の方法で治療され、後に該腫瘍または他のがんの形態を
発症しない場合、該疾患は少なくともある期間にわたってその個体において予防されてい
る。
疾患または状態、例えば、腫瘍形成の予防を指す。例えば、腫瘍または他のがんの形態の
発症の危険性がある個体が本発明の方法で治療され、後に該腫瘍または他のがんの形態を
発症しない場合、該疾患は少なくともある期間にわたってその個体において予防されてい
る。
本明細書で用いられる、「治療有効量」は、組成物またはその活性成分の、該組成物が
投与される個体に対して有益な効果を与えるのに、またはそうでなければ有害な有益でな
い事象を減少させるのに十分な量である。「治療有効用量」は、本明細書では、１つ以上
の所望のまたは望ましい（例えば、有益な）効果を生み出すために投与される用量を意味
し、かかる投与は特定期間に１回以上存在する。正確な用量は、当該治療の目的に依存し
、既知の技術を用いて当業者によって解明可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ （ｖｏｌｓ． １−３，
１９９２）；Ｌｌｏｙｄ， Ｔｈｅ Ａｒｔ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ （１９９９
）；及びＰｉｃｋａｒ， Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ （１９９９）参照
）。
投与される個体に対して有益な効果を与えるのに、またはそうでなければ有害な有益でな
い事象を減少させるのに十分な量である。「治療有効用量」は、本明細書では、１つ以上
の所望のまたは望ましい（例えば、有益な）効果を生み出すために投与される用量を意味
し、かかる投与は特定期間に１回以上存在する。正確な用量は、当該治療の目的に依存し
、既知の技術を用いて当業者によって解明可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ （ｖｏｌｓ． １−３，
１９９２）；Ｌｌｏｙｄ， Ｔｈｅ Ａｒｔ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ （１９９９
）；及びＰｉｃｋａｒ， Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ （１９９９）参照
）。
本明細書で用いられる、「Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質」または「ＴＦＰ」
は、該ＴＣＲを含む様々なポリペプチド由来の組み換えポリペプチドを含み、該ＴＣＲは
、概してｉ）標的細胞上の表面抗原に結合すること、及びｉｉ）通常はＴ細胞内またはそ
の表面上で同一の場所に配置された場合に、無傷のＴＣＲ複合体の他のポリペプチド成分
と相互作用することが可能である。
は、該ＴＣＲを含む様々なポリペプチド由来の組み換えポリペプチドを含み、該ＴＣＲは
、概してｉ）標的細胞上の表面抗原に結合すること、及びｉｉ）通常はＴ細胞内またはそ
の表面上で同一の場所に配置された場合に、無傷のＴＣＲ複合体の他のポリペプチド成分
と相互作用することが可能である。
本明細書で用いられる、用語「ＣＤ１９」は、表面抗原分類１９のタンパク質を指し、
これは、Ｂ細胞白血病前駆細胞、他の悪性Ｂ細胞、及び正常Ｂ細胞系列のほとんどの細胞
上で検出可能な抗原決定基である。ヒト及びマウスのアミノ酸ならびに核酸配列は、公共
のデータベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ
に見出すことができる。例えば、ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗ
ｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１５３９１として見出すことができる。ヒトＣＤ
１９ポリペプチドの標準的な配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ１５３９１（
またはＰ１５３９１−１）：
これは、Ｂ細胞白血病前駆細胞、他の悪性Ｂ細胞、及び正常Ｂ細胞系列のほとんどの細胞
上で検出可能な抗原決定基である。ヒト及びマウスのアミノ酸ならびに核酸配列は、公共
のデータベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ
に見出すことができる。例えば、ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗ
ｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１５３９１として見出すことができる。ヒトＣＤ
１９ポリペプチドの標準的な配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ１５３９１（
またはＰ１５３９１−１）：
ヒトＣＤ１９をコードするヌクレオチド配列は、アクセッション番号ＮＭ００１１７８
０９８で見出すことができる。ＣＤ１９は、例えば、ＡＬＬ、ＣＬＬ、及び非ホジキンリ
ンパ腫（ＮＨＬ）を含めたほとんどのＢ細胞系列のがんで発現される。ＣＤ１９を発現す
る他の細胞は、「ＣＤ１９の発現を伴う疾患」の定義内で以下に示す。それはまた、正常
Ｂ細胞の前駆細胞の初期マーカーである。例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．
Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎ． ３４ （１６−１７）： １１５７−１１６５ （１９９７）
参照。一例では、ＴＦＰの抗原結合部位は、悪性及び正常Ｂ細胞で発現されるＣＤ１９タ
ンパク質の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、これに結合する。
０９８で見出すことができる。ＣＤ１９は、例えば、ＡＬＬ、ＣＬＬ、及び非ホジキンリ
ンパ腫（ＮＨＬ）を含めたほとんどのＢ細胞系列のがんで発現される。ＣＤ１９を発現す
る他の細胞は、「ＣＤ１９の発現を伴う疾患」の定義内で以下に示す。それはまた、正常
Ｂ細胞の前駆細胞の初期マーカーである。例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．
Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎ． ３４ （１６−１７）： １１５７−１１６５ （１９９７）
参照。一例では、ＴＦＰの抗原結合部位は、悪性及び正常Ｂ細胞で発現されるＣＤ１９タ
ンパク質の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、これに結合する。
本明細書で用いられる、用語「ＢＣＭＡ」は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー
メンバー１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）としても知られるＢ細胞成熟抗原を指し、表面抗原分
類２６９のタンパク質（ＣＤ２６９）は、ＴＮＦＲＳＦ１７遺伝子によってヒトにおいて
コードされるタンパク質である。ＴＮＦＲＳＦ１７は、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）を
認識するＴＮＦ受容体スーパーファミリーの細胞表面受容体である（例えば、Ｌａａｂｉ
ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ １１ （１１）： ３８９７−９０４ （１９９２）参照
。この受容体は、成熟Ｂリンパ球で発現し、Ｂ細胞発生及び自己免疫反応にとって重要で
あり得る。ヒト及びマウスのアミノ酸ならびに核酸配列は、公共のデータベース、例えば
、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔに見出すことができる。
例えば、ヒトＢＣＭＡのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセ
ッション番号Ｑ０２２２３で見出すことができる。ヒトＢＣＭＡポリペプチドの標準的な
配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ０２２２３（またはＱ０２２２３−１）：
メンバー１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）としても知られるＢ細胞成熟抗原を指し、表面抗原分
類２６９のタンパク質（ＣＤ２６９）は、ＴＮＦＲＳＦ１７遺伝子によってヒトにおいて
コードされるタンパク質である。ＴＮＦＲＳＦ１７は、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）を
認識するＴＮＦ受容体スーパーファミリーの細胞表面受容体である（例えば、Ｌａａｂｉ
ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ １１ （１１）： ３８９７−９０４ （１９９２）参照
。この受容体は、成熟Ｂリンパ球で発現し、Ｂ細胞発生及び自己免疫反応にとって重要で
あり得る。ヒト及びマウスのアミノ酸ならびに核酸配列は、公共のデータベース、例えば
、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔに見出すことができる。
例えば、ヒトＢＣＭＡのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセ
ッション番号Ｑ０２２２３で見出すことができる。ヒトＢＣＭＡポリペプチドの標準的な
配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ０２２２３（またはＱ０２２２３−１）：
ヒトＢＣＭＡをコードするヌクレオチド配列は、アクセッション番号ＮＭ００１１９２
で見出すことができる。ＢＣＭＡは、例えば、白血病、リンパ腫、及び多発性骨髄腫を含
めたほとんどのＢ系列のがんで発現される。ＢＣＭＡを発現する他の細胞は、「ＢＣＭＡ
の発現を伴う疾患」の定義内で以下に示す。この受容体は、腫瘍壊死因子（リガンド）ス
ーパーファミリー、メンバー１３ｂ（ＴＮＦＳＦ１３Ｂ／ＴＡＬＬ−１／ＢＡＦＦ）に特
異的に結合すること、ならびにＮＦ−カッパＢ及びＭＡＰＫ８／ＪＮＫ活性化につながる
ことが示されている。この受容体は、様々なＴＲＡＦファミリーメンバーにも結合し、ひ
いては細胞の生存及び増殖のためのシグナルを伝達することができる（例えば、Ｌａａｂ
ｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２２ （７）：
１１４７−５４ （１９９４）参照。一例では、ＴＦＰの抗原結合部位は、悪性及び正
常Ｂ細胞で発現されるＢＣＭＡタンパク質の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、こ
れに結合する。
で見出すことができる。ＢＣＭＡは、例えば、白血病、リンパ腫、及び多発性骨髄腫を含
めたほとんどのＢ系列のがんで発現される。ＢＣＭＡを発現する他の細胞は、「ＢＣＭＡ
の発現を伴う疾患」の定義内で以下に示す。この受容体は、腫瘍壊死因子（リガンド）ス
ーパーファミリー、メンバー１３ｂ（ＴＮＦＳＦ１３Ｂ／ＴＡＬＬ−１／ＢＡＦＦ）に特
異的に結合すること、ならびにＮＦ−カッパＢ及びＭＡＰＫ８／ＪＮＫ活性化につながる
ことが示されている。この受容体は、様々なＴＲＡＦファミリーメンバーにも結合し、ひ
いては細胞の生存及び増殖のためのシグナルを伝達することができる（例えば、Ｌａａｂ
ｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２２ （７）：
１１４７−５４ （１９９４）参照。一例では、ＴＦＰの抗原結合部位は、悪性及び正
常Ｂ細胞で発現されるＢＣＭＡタンパク質の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、こ
れに結合する。
本明細書で用いられる、用語「抗体」は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子
由来のタンパク質またはポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナルもしくはモノ
クローナル起源の無傷の免疫グロブリンであってもそれらのフラグメントであってもよく
、天然源由来でも組み換え源由来でもよい。
由来のタンパク質またはポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナルもしくはモノ
クローナル起源の無傷の免疫グロブリンであってもそれらのフラグメントであってもよく
、天然源由来でも組み換え源由来でもよい。
用語「抗体フラグメント」または「抗体結合ドメイン」は、抗体の少なくとも一部、ま
たはその組み換え変異体を指し、これは抗原結合ドメイン、すなわち、無傷の抗体の抗原
決定可変領域を含み、これは該抗体フラグメントの標的、例えば、抗原及びその明らかな
エピトープに対する認識ならびに特異的結合を付与するのに十分である。抗体フラグメン
トの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、一本鎖（
ｓｃ）Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）抗体フラグメント、線形抗体、単一ドメイン抗体、例えば、
ｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）、ラクダ科ＶＨＨドメイン、ならびに抗体フラグ
メントから形成される多重特異性抗体が挙げられるがこれらに限定されない。
たはその組み換え変異体を指し、これは抗原結合ドメイン、すなわち、無傷の抗体の抗原
決定可変領域を含み、これは該抗体フラグメントの標的、例えば、抗原及びその明らかな
エピトープに対する認識ならびに特異的結合を付与するのに十分である。抗体フラグメン
トの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、一本鎖（
ｓｃ）Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）抗体フラグメント、線形抗体、単一ドメイン抗体、例えば、
ｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）、ラクダ科ＶＨＨドメイン、ならびに抗体フラグ
メントから形成される多重特異性抗体が挙げられるがこれらに限定されない。
用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメント及び重鎖
可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントを含む融合タンパク質を指すとともに
、該軽鎖及び重鎖可変領域は、短い可動性ポリペプチドリンカーを介して隣接して連結さ
れ、単一のポリペプチド鎖として発現され得、該ｓｃＦｖはそれが由来する無傷の抗体の
特異性を保持している。
可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントを含む融合タンパク質を指すとともに
、該軽鎖及び重鎖可変領域は、短い可動性ポリペプチドリンカーを介して隣接して連結さ
れ、単一のポリペプチド鎖として発現され得、該ｓｃＦｖはそれが由来する無傷の抗体の
特異性を保持している。
抗体に関する「重鎖可変領域」または「ＶＨ」は、フレームワーク領域として知られる
フランキングストレッチ間に介在する３つのＣＤＲを含む重鎖のフラグメントを指し、こ
れらのフレームワーク領域は、一般に該ＣＤＲよりも高度に保存され、該ＣＤＲを支持す
る骨格を形成する。
フランキングストレッチ間に介在する３つのＣＤＲを含む重鎖のフラグメントを指し、こ
れらのフレームワーク領域は、一般に該ＣＤＲよりも高度に保存され、該ＣＤＲを支持す
る骨格を形成する。
指定されない限り、本明細書で用いられるｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨの可変領域を、例
えば、当該ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端に関していずれの順序で有してもよく、すな
わち、ｓｃＦｖは、ＶＬ−リンカー−ＶＨを含んでも、ＶＨ−リンカー−ＶＬを含んでも
よい。
えば、当該ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端に関していずれの順序で有してもよく、すな
わち、ｓｃＦｖは、ＶＬ−リンカー−ＶＨを含んでも、ＶＨ−リンカー−ＶＬを含んでも
よい。
抗体またはその抗体フラグメントを含む本発明のＴＦＰ組成物の部分は、例えば、単一
ドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、マウス、ヒト化またはヒト抗体由来の一本鎖抗
体（ｓｃＦｖ）等の該抗原結合ドメインが連続ポリペプチド鎖の一部として発現される様
々な形態で存在し得る（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｉｎ： Ｕｓｉｎ
ｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．；Ｈａｒ
ｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｉｎ： Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．；
Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．， １９８８，
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６）。１つの態様において、本発明のＴＦＰ組
成物の該抗原結合ドメインは、抗体フラグメントを含む。さらなる態様において、該ＴＦ
Ｐは、ｓｃＦｖまたはｓｄＡｂを含む抗体フラグメントを含む。
ドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、マウス、ヒト化またはヒト抗体由来の一本鎖抗
体（ｓｃＦｖ）等の該抗原結合ドメインが連続ポリペプチド鎖の一部として発現される様
々な形態で存在し得る（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｉｎ： Ｕｓｉｎ
ｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．；Ｈａｒ
ｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｉｎ： Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．；
Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．， １９８８，
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６）。１つの態様において、本発明のＴＦＰ組
成物の該抗原結合ドメインは、抗体フラグメントを含む。さらなる態様において、該ＴＦ
Ｐは、ｓｃＦｖまたはｓｄＡｂを含む抗体フラグメントを含む。
用語「抗体重鎖」は、抗体分子に天然起源のコンホメーションで含まれる２つのタイプ
のポリペプチド鎖のうちの大きい方を指し、これは通常、当該抗体が属するクラスを決定
する。
のポリペプチド鎖のうちの大きい方を指し、これは通常、当該抗体が属するクラスを決定
する。
用語「抗体軽鎖」は、抗体分子に天然起源のコンホメーションで含まれる２つのタイプ
のポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）軽鎖
は、２つの主要な抗体軽鎖のアイソタイプを指す。
のポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）軽鎖
は、２つの主要な抗体軽鎖のアイソタイプを指す。
用語「組み換え抗体」は、組み換えＤＮＡ技術を用いて生成された抗体、例えば、バク
テリオファージまたは酵母の発現系によって発現される抗体を指す。該用語はまた、当該
抗体をコードし、抗体タンパク質を発現するＤＮＡ分子、または該抗体を特定するアミノ
酸配列の合成によって生成された抗体を意味すると解釈されるものとし、この場合、該Ｄ
ＮＡまたはアミノ酸配列は、当技術分野で利用可能かつ周知の組み換えＤＮＡまたはアミ
ノ酸配列技術を用いて得られたものである。
テリオファージまたは酵母の発現系によって発現される抗体を指す。該用語はまた、当該
抗体をコードし、抗体タンパク質を発現するＤＮＡ分子、または該抗体を特定するアミノ
酸配列の合成によって生成された抗体を意味すると解釈されるものとし、この場合、該Ｄ
ＮＡまたはアミノ酸配列は、当技術分野で利用可能かつ周知の組み換えＤＮＡまたはアミ
ノ酸配列技術を用いて得られたものである。
用語「抗原」または「Ａｇ」は、抗体によって特異的に結合され得る、または他の場合
には免疫反応を誘発する分子を指す。この免疫反応は、抗体産生もしくは特異的な免疫適
格細胞の活性化のいずれか、またはその両方を含み得る。
には免疫反応を誘発する分子を指す。この免疫反応は、抗体産生もしくは特異的な免疫適
格細胞の活性化のいずれか、またはその両方を含み得る。
当業者には、実質的にすべてのタンパク質またはペプチドを含めた任意の高分子が抗原
の役割を果たすことができることが理解されよう。さらに、抗原は組み換えまたはゲノム
ＤＮＡから誘導することができる。当業者には、免疫反応を誘発するタンパク質をコード
するヌクレオチド配列または部分的なヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、ひいては
本明細書で用いられる用語「抗原」をコードすることが理解されよう。さらに、当業者に
は、抗原が遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によって完全にコードされる必要はないこと
が理解されよう。本発明が、限定されないが、複数の遺伝子の部分的なヌクレオチド配列
の使用を含み、これらのヌクレオチド配列が、所望の免疫反応を誘発するポリペプチドを
コードする様々な組合せで配置されることは容易にわかる。さらに、当業者には、抗原は
「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことが理解されよう。抗原は生成されて
も合成されてもよいし、生体試料由来であってもよいし、ポリペプチド以外の高分子の場
合もあることは容易にわかる。かかる生体試料としては、組織試料、腫瘍試料、細胞、ま
たは他の生物学的要素の液体を挙げることができるがこれらに限定されない。
の役割を果たすことができることが理解されよう。さらに、抗原は組み換えまたはゲノム
ＤＮＡから誘導することができる。当業者には、免疫反応を誘発するタンパク質をコード
するヌクレオチド配列または部分的なヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、ひいては
本明細書で用いられる用語「抗原」をコードすることが理解されよう。さらに、当業者に
は、抗原が遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によって完全にコードされる必要はないこと
が理解されよう。本発明が、限定されないが、複数の遺伝子の部分的なヌクレオチド配列
の使用を含み、これらのヌクレオチド配列が、所望の免疫反応を誘発するポリペプチドを
コードする様々な組合せで配置されることは容易にわかる。さらに、当業者には、抗原は
「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことが理解されよう。抗原は生成されて
も合成されてもよいし、生体試料由来であってもよいし、ポリペプチド以外の高分子の場
合もあることは容易にわかる。かかる生体試料としては、組織試料、腫瘍試料、細胞、ま
たは他の生物学的要素の液体を挙げることができるがこれらに限定されない。
用語「抗腫瘍効果」は、様々な手段で明らかにすることができる生物学的効果を指し、
例えば、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の延長、腫瘍細胞
増殖の減少、腫瘍細胞生存率の低下、またはがん性状態に関連する様々な生理学的症状の
改善が挙げられるがこれらに限定されない。「抗腫瘍効果」は、本発明のペプチド、ポリ
ヌクレオチド、細胞、及び抗体の最初の段階での腫瘍の発生の予防能力によっても明らか
にすることができる。
例えば、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の延長、腫瘍細胞
増殖の減少、腫瘍細胞生存率の低下、またはがん性状態に関連する様々な生理学的症状の
改善が挙げられるがこれらに限定されない。「抗腫瘍効果」は、本発明のペプチド、ポリ
ヌクレオチド、細胞、及び抗体の最初の段階での腫瘍の発生の予防能力によっても明らか
にすることができる。
用語「自己」は、任意の材料であって、後にそれが再導入される個体と同じ個体由来の
ものを指す。
ものを指す。
用語「同種異系」は、任意の材料であって、同じ種の異なる動物、または該材料が導入
される個体と異なる患者由来のものを指す。遺伝子が１つ以上の遺伝子座で同一ではない
場合、２つ以上の個体は互いに同種異系であると言われる。いくつかの態様において、同
じ種の個体由来の同種異系材料は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝学的に異なり得
る。
される個体と異なる患者由来のものを指す。遺伝子が１つ以上の遺伝子座で同一ではない
場合、２つ以上の個体は互いに同種異系であると言われる。いくつかの態様において、同
じ種の個体由来の同種異系材料は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝学的に異なり得
る。
用語「異種」は、異なる種の動物由来の移植片を指す。
用語「がん」は、異常細胞の急速かつ制御されない増殖を特徴とする疾患を指す。がん
細胞は、局所的にも、血流及びリンパ系を介して体の他の部分に広がることもできる。様
々ながんの例は本明細書で記載されており、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頚がん
、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病
、肺がん等が挙げられるがこれらに限定されない。
細胞は、局所的にも、血流及びリンパ系を介して体の他の部分に広がることもできる。様
々ながんの例は本明細書で記載されており、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頚がん
、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病
、肺がん等が挙げられるがこれらに限定されない。
成句「ＣＤ１９の発現を伴う疾患」及び「ＢＣＭＡの発現を伴う疾患」としては、がん
や悪性腫瘍等の増殖性疾患、もしくは骨髄異形成、骨髄異形成症候群、もしくは前白血病
等の前がん状態；またはＣＤ１９もしくはＢＣＭＡを発現する細胞に関連する非がん関連
の適応症を含めたＣＤ１９もしくはＢＣＭＡの発現を伴う疾患またはＣＤ１９もしくはＢ
ＣＭＡを発現する細胞に関連する状態が挙げられるがこれらに限定されない。１つの態様
において、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴うがんは、血液がんである。１つの態様に
おいて、該血液がんは、白血病またはリンパ腫である。１つの態様において、ＣＤ１９ま
たはＢＣＭＡの発現を伴うがんとしては、例えば、Ｂ細胞ＡＬＬ、Ｔ細胞急性リンパ性白
血病（ＴＡＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の急性白血病、例えば、
ＣＬＬまたは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が挙げられるがこれらに限定されない例えば１
つ以上の慢性白血病が挙げられるがこれらに限定されないがん及び悪性腫瘍が挙げられる
。ＣＤ１９の発現を伴うさらなるがんまたは血液疾患は、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白
血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リ
ンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫、
悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多
発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ
腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ならびに骨
髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によってまとめられる様々な血液疾患の集ま
りである「前白血病」等を含むがこれらに限定されない。ＣＤ１９またはＢＣＭＡ発現の
発現を伴うさらなる疾患としては、例えば、非定型及び／または非古典的がん、悪性腫瘍
、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う前がん状態もしくは増殖性疾患が挙げられるがこ
れらに限定されない。ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う非がん関連の適応症としては
、例えば、自己免疫疾患（例えば、狼瘡、リウマチ性関節炎、大腸炎）、炎症性疾患（ア
レルギー及び喘息）、ならびに移植が挙げられるがこれらに限定されない。
や悪性腫瘍等の増殖性疾患、もしくは骨髄異形成、骨髄異形成症候群、もしくは前白血病
等の前がん状態；またはＣＤ１９もしくはＢＣＭＡを発現する細胞に関連する非がん関連
の適応症を含めたＣＤ１９もしくはＢＣＭＡの発現を伴う疾患またはＣＤ１９もしくはＢ
ＣＭＡを発現する細胞に関連する状態が挙げられるがこれらに限定されない。１つの態様
において、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴うがんは、血液がんである。１つの態様に
おいて、該血液がんは、白血病またはリンパ腫である。１つの態様において、ＣＤ１９ま
たはＢＣＭＡの発現を伴うがんとしては、例えば、Ｂ細胞ＡＬＬ、Ｔ細胞急性リンパ性白
血病（ＴＡＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の急性白血病、例えば、
ＣＬＬまたは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が挙げられるがこれらに限定されない例えば１
つ以上の慢性白血病が挙げられるがこれらに限定されないがん及び悪性腫瘍が挙げられる
。ＣＤ１９の発現を伴うさらなるがんまたは血液疾患は、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白
血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リ
ンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫、
悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多
発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ
腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ならびに骨
髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によってまとめられる様々な血液疾患の集ま
りである「前白血病」等を含むがこれらに限定されない。ＣＤ１９またはＢＣＭＡ発現の
発現を伴うさらなる疾患としては、例えば、非定型及び／または非古典的がん、悪性腫瘍
、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う前がん状態もしくは増殖性疾患が挙げられるがこ
れらに限定されない。ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う非がん関連の適応症としては
、例えば、自己免疫疾患（例えば、狼瘡、リウマチ性関節炎、大腸炎）、炎症性疾患（ア
レルギー及び喘息）、ならびに移植が挙げられるがこれらに限定されない。
用語「保存的配列修飾」は、当該アミノ酸配列を含む抗体または抗体フラグメントの結
合特性に大きく作用しないか、これを大きく変えないアミノ酸修飾を指す。かかる保存的
修飾としては、アミノ酸の置換、付加、及び欠失が挙げられる。修飾は、当技術分野で既
知の標準的技術、例えば、部位特異的突然変異誘発法及びＰＣＲ媒介突然変異誘発法等に
よって、本発明の抗体または抗体フラグメントに導入することができる。保存的アミノ酸
置換は、該アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである
。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これ
らのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸
性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン
、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトフ
ァン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、
フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソ
ロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、
ヒスチジン）のアミノ酸が挙げられる。従って、本発明のＴＦＰ内の１つ以上のアミノ酸
残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換えることができるとともに
、変更されたＴＦＰは、本明細書に記載の機能アッセイを用いて検査することができる。
合特性に大きく作用しないか、これを大きく変えないアミノ酸修飾を指す。かかる保存的
修飾としては、アミノ酸の置換、付加、及び欠失が挙げられる。修飾は、当技術分野で既
知の標準的技術、例えば、部位特異的突然変異誘発法及びＰＣＲ媒介突然変異誘発法等に
よって、本発明の抗体または抗体フラグメントに導入することができる。保存的アミノ酸
置換は、該アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである
。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これ
らのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸
性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン
、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトフ
ァン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、
フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソ
ロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、
ヒスチジン）のアミノ酸が挙げられる。従って、本発明のＴＦＰ内の１つ以上のアミノ酸
残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換えることができるとともに
、変更されたＴＦＰは、本明細書に記載の機能アッセイを用いて検査することができる。
用語「刺激」は、刺激ドメインまたは刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）がそ
の同族リガンドと結合し、それによって、限定されないが、該ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介
したシグナル伝達等のシグナル伝達事象を媒介することによって誘導される一次応答を指
す。刺激は、特定の分子の変化した発現、及び／または細胞骨格構造の再構成等を媒介す
ることができる。
の同族リガンドと結合し、それによって、限定されないが、該ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介
したシグナル伝達等のシグナル伝達事象を媒介することによって誘導される一次応答を指
す。刺激は、特定の分子の変化した発現、及び／または細胞骨格構造の再構成等を媒介す
ることができる。
用語「刺激分子」または「刺激ドメイン」は、Ｔ細胞によって発現される分子またはそ
の一部を指し、該Ｔ細胞は一次細胞質シグナル伝達配列（複数可）を提供し、該シグナル
伝達配列（複数可）は、該Ｔ細胞のシグナル伝達経路の少なくともある局面に対して当該
ＴＣＲ複合体の一次活性化を促進的に調節する。１つの態様において、該一次シグナルは
、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体が、ペプチドをロードされたＭＨＣ分子と結合すること
によって開始され、これが、増殖、活性化、分化等を含むがこれらに限定されないＴ細胞
応答の媒介につながる。促進的に作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル
伝達ドメイン」とも呼ばれる）は、免疫受容活性化チロシンモチーフまたは「ＩＴＡＭ」
として知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に用いられる一次細
胞質シグナル伝達配列を含むＩＴＡＭの例としては、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、Ｆｃ
Ｒベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７
９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、及びＣＤ６６ｄ由来
のものが挙げられるがこれらに限定されない。
の一部を指し、該Ｔ細胞は一次細胞質シグナル伝達配列（複数可）を提供し、該シグナル
伝達配列（複数可）は、該Ｔ細胞のシグナル伝達経路の少なくともある局面に対して当該
ＴＣＲ複合体の一次活性化を促進的に調節する。１つの態様において、該一次シグナルは
、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体が、ペプチドをロードされたＭＨＣ分子と結合すること
によって開始され、これが、増殖、活性化、分化等を含むがこれらに限定されないＴ細胞
応答の媒介につながる。促進的に作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル
伝達ドメイン」とも呼ばれる）は、免疫受容活性化チロシンモチーフまたは「ＩＴＡＭ」
として知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に用いられる一次細
胞質シグナル伝達配列を含むＩＴＡＭの例としては、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、Ｆｃ
Ｒベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７
９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、及びＣＤ６６ｄ由来
のものが挙げられるがこれらに限定されない。
用語「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、その表面の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）
で複合化された外来抗原を提示するアクセサリー細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞等）等
の免疫系細胞を指す。Ｔ細胞は、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこれらの複合
体を認識する。ＡＰＣは、抗原を加工し、それらをＴ細胞に提示する。
で複合化された外来抗原を提示するアクセサリー細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞等）等
の免疫系細胞を指す。Ｔ細胞は、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこれらの複合
体を認識する。ＡＰＣは、抗原を加工し、それらをＴ細胞に提示する。
本明細書で用いられる用語、「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、分子の細胞内部分を
指す。該細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＦＰ含有細胞、例えば、ＴＦＰ発現Ｔ細胞の
免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えば、ＴＦＰ発現Ｔ細胞におけ
る免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解反応及びサイトカインの分泌を含めたＴ
ヘルパー細胞活性が挙げられる。実施形態では、該細胞内シグナル伝達ドメインは、一次
細胞内シグナル伝達ドメインを含むことができる。例示的な一次細胞内シグナル伝達ドメ
インとしては、一次刺激、または抗原依存性刺激に関与する分子由来のものが挙げられる
。実施形態では、該細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含むことが
できる。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインとしては、共刺激シグナル、または
抗原非依存性刺激に関与する分子由来のものが挙げられる。
指す。該細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＦＰ含有細胞、例えば、ＴＦＰ発現Ｔ細胞の
免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えば、ＴＦＰ発現Ｔ細胞におけ
る免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解反応及びサイトカインの分泌を含めたＴ
ヘルパー細胞活性が挙げられる。実施形態では、該細胞内シグナル伝達ドメインは、一次
細胞内シグナル伝達ドメインを含むことができる。例示的な一次細胞内シグナル伝達ドメ
インとしては、一次刺激、または抗原依存性刺激に関与する分子由来のものが挙げられる
。実施形態では、該細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含むことが
できる。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインとしては、共刺激シグナル、または
抗原非依存性刺激に関与する分子由来のものが挙げられる。
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ（「免疫受容活性化チロシンモチーフ」
）を含むことができる。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ
３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロ
ン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ならびにＣＤ６６ｄ ＤＡＰ１０及び
ＤＡＰ１２由来のものが挙げられるがこれらに限定されない。
）を含むことができる。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ
３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロ
ン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ならびにＣＤ６６ｄ ＤＡＰ１０及び
ＤＡＰ１２由来のものが挙げられるがこれらに限定されない。
用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによって、例えば、限
定されないが、増殖等のＴ細胞による共刺激反応を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パート
ナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫反応に必要とされる、抗原受容体またはそれら
のリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子としては、ＭＨＣクラス１分子、ＢＴ
ＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体、ならびにＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、Ｃ
ＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３
７）が挙げられるがこれらに限定されない。共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺
激分子の細胞内部分である場合がある。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーで表
すことができる：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン
受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、及び
活性化ＮＫ細胞受容体。かかる分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（Ｃ
Ｄ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥ
Ｍ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ
、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合す
るリガンド等が挙げられる。該細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の全
細胞内部分もしくは全天然細胞内シグナル伝達ドメイン、またはその機能的フラグメント
を含むことができる。用語「４−１ＢＢ」は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ
６２４７８．２として与えられたアミノ酸配列、または、非ヒト種、例えば、マウス、げ
っ歯類、サル、類人猿等由来の同等の残基のＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指
し、「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ６２４
７８．２のアミノ酸残基２１４〜２５５、または非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、
サル、類人猿等由来の同等の残基として定義される。
定されないが、増殖等のＴ細胞による共刺激反応を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パート
ナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫反応に必要とされる、抗原受容体またはそれら
のリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子としては、ＭＨＣクラス１分子、ＢＴ
ＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体、ならびにＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、Ｃ
ＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３
７）が挙げられるがこれらに限定されない。共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺
激分子の細胞内部分である場合がある。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーで表
すことができる：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン
受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、及び
活性化ＮＫ細胞受容体。かかる分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（Ｃ
Ｄ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥ
Ｍ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ
、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合す
るリガンド等が挙げられる。該細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の全
細胞内部分もしくは全天然細胞内シグナル伝達ドメイン、またはその機能的フラグメント
を含むことができる。用語「４−１ＢＢ」は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ
６２４７８．２として与えられたアミノ酸配列、または、非ヒト種、例えば、マウス、げ
っ歯類、サル、類人猿等由来の同等の残基のＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指
し、「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ６２４
７８．２のアミノ酸残基２１４〜２５５、または非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、
サル、類人猿等由来の同等の残基として定義される。
用語「ｅｎｃｏｄｉｎｇ（コードすること）」は、定義されたヌクレオチド配列（例え
ば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）または定義されたアミノ酸配列及びそれに起因
する生物学的特性を有する生物学的過程における他のポリマーならびに高分子の合成用の
鋳型の役割を果たすための遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡ等のポリヌクレオチド内の
ヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはＲＮ
Ａは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が細胞または他の生体系内の当該タ
ンパク質を産生する場合、タンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配
列と同一であり、通常配列表に示されるコード鎖、及び遺伝子またはｃＤＮＡの転写の鋳
型として用いられる非コード鎖の両方が、該タンパク質またはその遺伝子もしくはｃＤＮ
Ａの他の産物をコードすると見なすことができる。
ば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）または定義されたアミノ酸配列及びそれに起因
する生物学的特性を有する生物学的過程における他のポリマーならびに高分子の合成用の
鋳型の役割を果たすための遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡ等のポリヌクレオチド内の
ヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはＲＮ
Ａは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が細胞または他の生体系内の当該タ
ンパク質を産生する場合、タンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配
列と同一であり、通常配列表に示されるコード鎖、及び遺伝子またはｃＤＮＡの転写の鋳
型として用いられる非コード鎖の両方が、該タンパク質またはその遺伝子もしくはｃＤＮ
Ａの他の産物をコードすると見なすことができる。
別段の指定のない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、互いに
縮重した型であり、同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列が含まれる
。タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という成句は、該タンパク質を
コードする該ヌクレオチド配列が型によっては１つ以上のイントロンを含む場合があると
いう程度まで、イントロン含む場合もある。
縮重した型であり、同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列が含まれる
。タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という成句は、該タンパク質を
コードする該ヌクレオチド配列が型によっては１つ以上のイントロンを含む場合があると
いう程度まで、イントロン含む場合もある。
用語「有効量」または「治療有効量」は、本明細書では交換可能に用いられ、本明細書
に記載される化合物、処方、材料、または組成物の特定の生物学的または治療上の効果を
達成するのに有効な量を指す。
に記載される化合物、処方、材料、または組成物の特定の生物学的または治療上の効果を
達成するのに有効な量を指す。
用語「内因性」は、有機体、細胞、組織、もしくは系由来の、またはその内部で産生さ
れる任意の材料を指す。
れる任意の材料を指す。
用語「外因性」は、有機体、細胞、組織、もしくは系から導入される、またはその外部
で産生される任意の材料を指す。
で産生される任意の材料を指す。
用語「発現」は、プロモーターによって動作される特定のヌクレオチド配列の転写及び
／または翻訳を指す。
／または翻訳を指す。
用語「転移ベクター」は、単離された核酸を含み、該単離された核酸を細胞の内部に送
達するために用いることができる組成物を指す。線状ポリヌクレオチド、イオン性もしく
は両親媒性化合物に会合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスが挙げられる
がこれらに限定されない多くのベクターが当技術分野で知られている。従って、用語「転
移ベクター」には、自己複製プラスミドまたはウイルスが含まれる。該用語は、さらに、
細胞内への核酸の転移を促進する非プラスミド及び非ウイルス性化合物、例えば、ポリリ
ジン化合物、リポソーム等を含むとも解釈されるものとする。ウイルス性転移ベクターの
例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベ
クター、レンチウイルスベクター等が挙げられるがこれらに限定されない。
達するために用いることができる組成物を指す。線状ポリヌクレオチド、イオン性もしく
は両親媒性化合物に会合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスが挙げられる
がこれらに限定されない多くのベクターが当技術分野で知られている。従って、用語「転
移ベクター」には、自己複製プラスミドまたはウイルスが含まれる。該用語は、さらに、
細胞内への核酸の転移を促進する非プラスミド及び非ウイルス性化合物、例えば、ポリリ
ジン化合物、リポソーム等を含むとも解釈されるものとする。ウイルス性転移ベクターの
例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベ
クター、レンチウイルスベクター等が挙げられるがこれらに限定されない。
用語「発現ベクター」は、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結した発現制御
配列を含む組み換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のた
めに十分なシスエレメントを含み、発現用の他のエレメントは、宿主細胞によって、また
はインビトロ発現系で供給され得る。発現ベクターには、組み換えポリヌクレオチドを組
み込むコスミド、プラスミド（例えば、裸の、またはリポソームに含まれる）、ならびに
ウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴
ウイルス）を含めた、当技術分野で知られるすべてのものが挙げられる。
配列を含む組み換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のた
めに十分なシスエレメントを含み、発現用の他のエレメントは、宿主細胞によって、また
はインビトロ発現系で供給され得る。発現ベクターには、組み換えポリヌクレオチドを組
み込むコスミド、プラスミド（例えば、裸の、またはリポソームに含まれる）、ならびに
ウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴
ウイルス）を含めた、当技術分野で知られるすべてのものが挙げられる。
用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科の属を指す。レンチウイルスは、レトロ
ウイルスの中でも非分裂細胞に感染することができることで独特である。レンチウイルス
は、宿主細胞のＤＮＡに大量の遺伝情報を送達することができるため、遺伝子送達ベクタ
ーの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びＦＩＶは、すべてレンチウイ
ルスの例である。
ウイルスの中でも非分裂細胞に感染することができることで独特である。レンチウイルス
は、宿主細胞のＤＮＡに大量の遺伝情報を送達することができるため、遺伝子送達ベクタ
ーの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びＦＩＶは、すべてレンチウイ
ルスの例である。
用語「レンチウイルスベクター」は、特に、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ．
Ｔｈｅｒ． １７（８）： １４５３−１４６４ （２００９）に示される自己不活性
化レンチウイルスベクターを含めたレンチウイルスゲノムの少なくとも一部由来のベクタ
ーを指す。臨床で使用され得るレンチウイルスベクターの他の例としては、例えば、Ｏｘ
ｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（商標）遺伝子送達技術、Ｌｅ
ｎｔｉｇｅｎのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステム等が挙げられるがこれらに限
定されない。非臨床型のレンチウイルスベクターもまた利用可能であり、当業者には既知
である。
Ｔｈｅｒ． １７（８）： １４５３−１４６４ （２００９）に示される自己不活性
化レンチウイルスベクターを含めたレンチウイルスゲノムの少なくとも一部由来のベクタ
ーを指す。臨床で使用され得るレンチウイルスベクターの他の例としては、例えば、Ｏｘ
ｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（商標）遺伝子送達技術、Ｌｅ
ｎｔｉｇｅｎのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステム等が挙げられるがこれらに限
定されない。非臨床型のレンチウイルスベクターもまた利用可能であり、当業者には既知
である。
用語「相同」または「同一性」は、２つのポリマー分子間、例えば、２つのＤＮＡ分子
もしくは２つのＲＮＡ分子等の２つの核酸分子間、または２つのポリペプチド分子間のサ
ブユニット配列の同一性を指す。該２つの分子の両方のサブユニット部分が同じモノマー
サブユニットで占められている場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデ
ニンで占められている場合、それらはその位置で相同または同一である。２配列間の相同
性は、一致または相同位置の数の一次関数であり、例えば、２つの配列の位置の半分（例
えば、長さ１０サブユニットのポリマー中５つの位置）が相同である場合、該２配列は５
０％相同であり、位置の９０％（例えば、１０のうちの９）が一致または相同の場合、該
２配列は９０％相同である。
もしくは２つのＲＮＡ分子等の２つの核酸分子間、または２つのポリペプチド分子間のサ
ブユニット配列の同一性を指す。該２つの分子の両方のサブユニット部分が同じモノマー
サブユニットで占められている場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデ
ニンで占められている場合、それらはその位置で相同または同一である。２配列間の相同
性は、一致または相同位置の数の一次関数であり、例えば、２つの配列の位置の半分（例
えば、長さ１０サブユニットのポリマー中５つの位置）が相同である場合、該２配列は５
０％相同であり、位置の９０％（例えば、１０のうちの９）が一致または相同の場合、該
２配列は９０％相同である。
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、最小限の非ヒト免疫グロブリン由
来の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそのフラグメント（例
えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、もしくは抗体の他の抗原結合サブ配列
）である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体及びその抗体フラグメントは、ヒト免疫
グロブリン（レシピエントの抗体または抗体フラグメント）であって、該レシピエントの
相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基は、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウ
ス、ラット、またはウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置き換えら
れる。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は
、対応する非ヒト残基で置き換えられる。さらに、ヒト化抗体／抗体フラグメントは、レ
シピエントの抗体にも、取り込まれたＣＤＲやフレームワーク配列にも見られない残基を
含むことができる。これらの修飾は、抗体または抗体フラグメントの性能をさらに洗練及
び最適化することができる。一般に、該ヒト化抗体またはその抗体フラグメントは、少な
くとも１つ及び通常は２つの可変ドメインを実質的にすべて含み、非ヒト免疫グロブリン
のものに対応するすべてのまたは実質的にすべてのＣＤＲ領域ならびにＦＲ領域のすべて
またはかなりの部分が、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体または抗体フ
ラグメントは、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常はヒト免疫グロブリンのものの少
なくとも一部も含み得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａ
ｔｕｒｅ， ３２１： ５２２−５２５， １９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ
．， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２： ３２３−３２９， １９８８；Ｐｒｅｓｔａ， Ｃｕ
ｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．， ２： ５９３−５９６， １９９２を
参照されたい。
来の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそのフラグメント（例
えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、もしくは抗体の他の抗原結合サブ配列
）である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体及びその抗体フラグメントは、ヒト免疫
グロブリン（レシピエントの抗体または抗体フラグメント）であって、該レシピエントの
相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基は、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウ
ス、ラット、またはウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置き換えら
れる。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は
、対応する非ヒト残基で置き換えられる。さらに、ヒト化抗体／抗体フラグメントは、レ
シピエントの抗体にも、取り込まれたＣＤＲやフレームワーク配列にも見られない残基を
含むことができる。これらの修飾は、抗体または抗体フラグメントの性能をさらに洗練及
び最適化することができる。一般に、該ヒト化抗体またはその抗体フラグメントは、少な
くとも１つ及び通常は２つの可変ドメインを実質的にすべて含み、非ヒト免疫グロブリン
のものに対応するすべてのまたは実質的にすべてのＣＤＲ領域ならびにＦＲ領域のすべて
またはかなりの部分が、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体または抗体フ
ラグメントは、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常はヒト免疫グロブリンのものの少
なくとも一部も含み得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａ
ｔｕｒｅ， ３２１： ５２２−５２５， １９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ
．， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２： ３２３−３２９， １９８８；Ｐｒｅｓｔａ， Ｃｕ
ｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．， ２： ５９３−５９６， １９９２を
参照されたい。
「ヒト」または「完全ヒト」は、抗体または抗体フラグメント等の免疫グロブリンであ
って、分子全体がヒト由来のものであるか、または該抗体もしくは免疫グロブリンのヒト
型に対して同一のアミノ酸配列からなるものを指す。
って、分子全体がヒト由来のものであるか、または該抗体もしくは免疫グロブリンのヒト
型に対して同一のアミノ酸配列からなるものを指す。
用語「単離された」は、自然状態から変更されたまたは除去されたことを意味する。例
えば、生きている動物に天然に存在する核酸またはペプチドは、「単離された」ものでは
ないが、その自然状態の共存物質から部分的に、もしくは完全に分離された同じ核酸また
はペプチドは「単離された」ものである。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に
精製された形で存在することも、例えば、宿主細胞等の非天然環境に存在することもでき
る。
えば、生きている動物に天然に存在する核酸またはペプチドは、「単離された」ものでは
ないが、その自然状態の共存物質から部分的に、もしくは完全に分離された同じ核酸また
はペプチドは「単離された」ものである。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に
精製された形で存在することも、例えば、宿主細胞等の非天然環境に存在することもでき
る。
本発明の中で、一般に存在する核酸塩基について以下の略語が使用される。「Ａ」はア
デノシンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアノシンを指し、「Ｔ」はチミジ
ンを指し、「Ｕ」はウリジンを指す。
デノシンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアノシンを指し、「Ｔ」はチミジ
ンを指し、「Ｕ」はウリジンを指す。
用語「作動可能に連結された」または「転写制御」は、調節配列と異種核酸配列の間の
機能的連結を指し、後者の発現をもたらす。例えば、第一の核酸配列が第二の核酸配列と
機能的な関係に置かれる場合、第一の核酸配列は、第二の核酸配列と作動可能に連結され
ている。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、プロ
モーターはコード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は
、互いに隣接することができ、例えば、２つのタンパク質のコード領域を結合するために
必要な場合、同じリーディングフレーム内にある。
機能的連結を指し、後者の発現をもたらす。例えば、第一の核酸配列が第二の核酸配列と
機能的な関係に置かれる場合、第一の核酸配列は、第二の核酸配列と作動可能に連結され
ている。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、プロ
モーターはコード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は
、互いに隣接することができ、例えば、２つのタンパク質のコード領域を結合するために
必要な場合、同じリーディングフレーム内にある。
免疫原性組成物の「非経口」投与という用語には、例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内
（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、もしくは胸骨内、腫瘍内、または注入技術が含まれ
る。
（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、もしくは胸骨内、腫瘍内、または注入技術が含まれ
る。
用語「核酸」または「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二本鎖形態のいずれかのデ
オキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）及びそのポリマーを指す。特に限定
されない限り、該用語は、参照の核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオ
チドと同様の様式で代謝される天然のヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する
。別段の指示がない限り、特定の核酸配列は、明確に示された配列だけでなく、暗黙的に
、保存的に修飾されたその変異体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ
、ＳＮＰ、及び相補的配列も包含する。特に、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された
（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／またはデオキシイノシン残基
で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ． １９：５０８１ （１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋ
ａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６０：２６０５−２６０８ （
１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｐｒｏ
ｂｅｓ ８：９１−９８ （１９９４））。
オキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）及びそのポリマーを指す。特に限定
されない限り、該用語は、参照の核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオ
チドと同様の様式で代謝される天然のヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する
。別段の指示がない限り、特定の核酸配列は、明確に示された配列だけでなく、暗黙的に
、保存的に修飾されたその変異体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ
、ＳＮＰ、及び相補的配列も包含する。特に、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された
（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／またはデオキシイノシン残基
で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ． １９：５０８１ （１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋ
ａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６０：２６０５−２６０８ （
１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｐｒｏ
ｂｅｓ ８：９１−９８ （１９９４））。
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、交換可能に用いられ、
ペプチド結合で共有結合されたアミノ酸配列からなる化合物を指す。タンパク質またはペ
プチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含まなくてはならず、タンパク質またはペプチド
の配列を構成することができるアミノ酸の最大数に制限は設けられていない。ポリペプチ
ドには、ペプチド結合で互いに結合された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまた
はタンパク質が含まれる。本明細書で用いられる該用語は、当技術分野で一般に例えば、
ペプチド、オリゴペプチド、及びオリゴマーとも呼ばれる短鎖、ならびに、当技術分野で
一般にタンパク質と呼ばれ、多くのタイプがある長鎖の両方を指す。「ポリペプチド」に
は、例えば、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプ
チド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、変性ポリペプチド、誘導
体、類似体、融合タンパク質等が含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組み換え
ペプチド、またはそれらの組合せが含まれる。
ペプチド結合で共有結合されたアミノ酸配列からなる化合物を指す。タンパク質またはペ
プチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含まなくてはならず、タンパク質またはペプチド
の配列を構成することができるアミノ酸の最大数に制限は設けられていない。ポリペプチ
ドには、ペプチド結合で互いに結合された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまた
はタンパク質が含まれる。本明細書で用いられる該用語は、当技術分野で一般に例えば、
ペプチド、オリゴペプチド、及びオリゴマーとも呼ばれる短鎖、ならびに、当技術分野で
一般にタンパク質と呼ばれ、多くのタイプがある長鎖の両方を指す。「ポリペプチド」に
は、例えば、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプ
チド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、変性ポリペプチド、誘導
体、類似体、融合タンパク質等が含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組み換え
ペプチド、またはそれらの組合せが含まれる。
用語「プロモーター」は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するのに必要な、
細胞の転写機構もしくは導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
細胞の転写機構もしくは導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
用語「プロモーター／調節配列」は、該プロモーター／調節配列に作動可能に連結され
た遺伝子産物の発現に必要とされる核酸配列を指す。いくつかの例では、この配列は、コ
アプロモーター配列の場合があり、他の例では、この配列は、遺伝子産物の発現に必要と
されるエンハンサー配列及び他の調節エレメントも含む場合がある。該プロモーター／調
節配列は、例えば、組織特異的な様式で遺伝子産物を発現するものの場合がある。
た遺伝子産物の発現に必要とされる核酸配列を指す。いくつかの例では、この配列は、コ
アプロモーター配列の場合があり、他の例では、この配列は、遺伝子産物の発現に必要と
されるエンハンサー配列及び他の調節エレメントも含む場合がある。該プロモーター／調
節配列は、例えば、組織特異的な様式で遺伝子産物を発現するものの場合がある。
用語「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチド
と作動可能に連結された場合に、当該細胞のほとんどまたはすべての生理条件下で、細胞
内に該遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列を指す。
と作動可能に連結された場合に、当該細胞のほとんどまたはすべての生理条件下で、細胞
内に該遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列を指す。
用語「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチド
と作動可能に連結された場合に、該プロモーターに対応する誘導因子が当該細胞に存在す
る場合に実質的に唯一、細胞内に遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列を指す。
と作動可能に連結された場合に、該プロモーターに対応する誘導因子が当該細胞に存在す
る場合に実質的に唯一、細胞内に遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列を指す。
用語「組織特異的」プロモーターは、遺伝子によってコードまたは特定されるポリヌク
レオチドと作動可能に連結された場合に、当該細胞が該プロモーターに対応する組織型の
細胞の場合に実質的に唯一、細胞内に遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列を指す。
レオチドと作動可能に連結された場合に、当該細胞が該プロモーターに対応する組織型の
細胞の場合に実質的に唯一、細胞内に遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列を指す。
ｓｃＦｖとの関連で用いられる用語「リンカー」及び「可動性ポリペプチドリンカー」
は、単独でまたは組み合わせて用いて可変重鎖及び可変軽鎖領域を連結するグリシン及び
／またはセリン残基等のアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。１つの実施形態では
、該可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎを含み、この場合ｎは１以上の正の整数である。例え
ば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９、及び
ｎ＝１０。１つの実施形態では、該可動性ポリペプチドリンカーには、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ
）４または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３が含まれるがこれに限定されない。別の実施形態では、
該リンカーには、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）、または（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）の
多重反復が含まれる。同様に本発明の範囲内に含まれるのは、ＷＯ２０１２／１３８４７
５（参照することによって本明細書に組み込まれる）に記載のリンカーである。いくつか
の例では、該リンカー配列は、長いリンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該
長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合、ｎ＝２〜４である。いくつかの例
では、該リンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ）配列を含む。いくつかの例では、該短い
リンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合、ｎ＝１〜３である。
は、単独でまたは組み合わせて用いて可変重鎖及び可変軽鎖領域を連結するグリシン及び
／またはセリン残基等のアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。１つの実施形態では
、該可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎを含み、この場合ｎは１以上の正の整数である。例え
ば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９、及び
ｎ＝１０。１つの実施形態では、該可動性ポリペプチドリンカーには、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ
）４または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３が含まれるがこれに限定されない。別の実施形態では、
該リンカーには、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）、または（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）の
多重反復が含まれる。同様に本発明の範囲内に含まれるのは、ＷＯ２０１２／１３８４７
５（参照することによって本明細書に組み込まれる）に記載のリンカーである。いくつか
の例では、該リンカー配列は、長いリンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該
長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合、ｎ＝２〜４である。いくつかの例
では、該リンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ）配列を含む。いくつかの例では、該短い
リンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合、ｎ＝１〜３である。
本明細書で用いられる、５’キャップ（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７−メチルグアノシン
キャップ、またはＲＮＡ ｍ７Ｇキャップとも呼ばれる）は、転写開始の直後に真核生物
のメッセンジャーＲＮＡの「フロント」または５’末端に付加された修飾グアニンヌクレ
オチドである。該５’キャップは、最初に転写されたヌクレオチドに連結される末端基か
らなる。その存在は、リボソームによる認識及びＲＮアーゼからの保護に不可欠である。
キャップの付加は転写と対になっており、各々が他方に影響を与えるように同時転写的に
起こる。転写開始の直後、合成されるｍＲＮＡの５’末端は、ＲＮＡポリメラーゼと会合
したキャップ合成複合体によって結合される。この酵素複合体は、ｍＲＮＡのキャッピン
グに必要とされる化学反応を触媒する。合成は、多段階の生化学反応として進行する。該
キャッピング部分は、ｍＲＮＡの機能、例えば、その安定性や翻訳効率を調節するために
修飾され得る。
キャップ、またはＲＮＡ ｍ７Ｇキャップとも呼ばれる）は、転写開始の直後に真核生物
のメッセンジャーＲＮＡの「フロント」または５’末端に付加された修飾グアニンヌクレ
オチドである。該５’キャップは、最初に転写されたヌクレオチドに連結される末端基か
らなる。その存在は、リボソームによる認識及びＲＮアーゼからの保護に不可欠である。
キャップの付加は転写と対になっており、各々が他方に影響を与えるように同時転写的に
起こる。転写開始の直後、合成されるｍＲＮＡの５’末端は、ＲＮＡポリメラーゼと会合
したキャップ合成複合体によって結合される。この酵素複合体は、ｍＲＮＡのキャッピン
グに必要とされる化学反応を触媒する。合成は、多段階の生化学反応として進行する。該
キャッピング部分は、ｍＲＮＡの機能、例えば、その安定性や翻訳効率を調節するために
修飾され得る。
本明細書で用いられる、「インビトロで転写されたＲＮＡ」は、インビトロで合成され
たＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。一般に、該インビトロで転写されたＲＮＡは、イ
ンビトロ転写ベクターから生成される。該インビトロ転写ベクターは、該インビトロで転
写されたＲＮＡを生成するために用いられる鋳型を含む。
たＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。一般に、該インビトロで転写されたＲＮＡは、イ
ンビトロ転写ベクターから生成される。該インビトロ転写ベクターは、該インビトロで転
写されたＲＮＡを生成するために用いられる鋳型を含む。
本明細書で用いられる、「ポリ（Ａ）」は、ポリアデニル化によってｍＲＮＡに加えら
れる一連のアデノシンである。一過性発現用の構築物の好ましい実施形態では、該ポリＡ
は、５０〜５０００であり、好ましくは６４より多く、より好ましくは１００より多く、
最も好ましくは３００または４００より多い。ポリ（Ａ）配列は、局在化、安定性、また
は翻訳効率等のｍＲＮＡの機能を調節するために化学的または酵素的に修飾され得る。
れる一連のアデノシンである。一過性発現用の構築物の好ましい実施形態では、該ポリＡ
は、５０〜５０００であり、好ましくは６４より多く、より好ましくは１００より多く、
最も好ましくは３００または４００より多い。ポリ（Ａ）配列は、局在化、安定性、また
は翻訳効率等のｍＲＮＡの機能を調節するために化学的または酵素的に修飾され得る。
本明細書で用いられる、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子に対するポ
リアデニリル部分またはその修飾変異体の共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメ
ッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は３’末端でポリアデニル化される。該３’ポリ（
Ａ）尾部は、酵素ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用を介して、プレｍＲＮＡに付加され
た長い配列のアデニンヌクレオチド（多くの場合数百）である。高等真核生物では、該ポ
リ（Ａ）尾部は、特定の配列、すなわち、ポリアデニル化シグナルを含む転写産物に付加
される。該ポリ（Ａ）尾部及びそれに結合したタンパク質は、エキソヌクレアーゼによる
分解からのｍＲＮＡの保護に役立つ。ポリアデニル化はまた、転写の終結、核からのｍＲ
ＮＡの取り出し、及び転写にとっても重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡのＲＮＡへ
の転写の直後、核内で起こるが、後に細胞質内でもさらに起こる場合もある。転写が終結
した後、該ｍＲＮＡ鎖は、ＲＮＡポリメラーゼと会合したエンドヌクレアーゼ複合体の作
用を介して切断される。該切断部位は、通常、該切断部位近傍の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの
存在を特徴とする。該ｍＲＮＡが切断された後、アデノシン残基が該切断部位の遊離の３
’末端に付加される。
リアデニリル部分またはその修飾変異体の共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメ
ッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は３’末端でポリアデニル化される。該３’ポリ（
Ａ）尾部は、酵素ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用を介して、プレｍＲＮＡに付加され
た長い配列のアデニンヌクレオチド（多くの場合数百）である。高等真核生物では、該ポ
リ（Ａ）尾部は、特定の配列、すなわち、ポリアデニル化シグナルを含む転写産物に付加
される。該ポリ（Ａ）尾部及びそれに結合したタンパク質は、エキソヌクレアーゼによる
分解からのｍＲＮＡの保護に役立つ。ポリアデニル化はまた、転写の終結、核からのｍＲ
ＮＡの取り出し、及び転写にとっても重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡのＲＮＡへ
の転写の直後、核内で起こるが、後に細胞質内でもさらに起こる場合もある。転写が終結
した後、該ｍＲＮＡ鎖は、ＲＮＡポリメラーゼと会合したエンドヌクレアーゼ複合体の作
用を介して切断される。該切断部位は、通常、該切断部位近傍の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの
存在を特徴とする。該ｍＲＮＡが切断された後、アデノシン残基が該切断部位の遊離の３
’末端に付加される。
本明細書で用いられる、「一過性」は、融合していない導入遺伝子の数時間、数日、ま
たは数週間の発現を指し、この場合、発現の期間は、該遺伝子がゲノムに融合された場合
、または宿主細胞の安定なプラスミドレプリコン内に含まれた場合の発現に対する期間よ
り短い。
たは数週間の発現を指し、この場合、発現の期間は、該遺伝子がゲノムに融合された場合
、または宿主細胞の安定なプラスミドレプリコン内に含まれた場合の発現に対する期間よ
り短い。
用語「シグナル伝達経路」は、細胞の１つの部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝
達に関与する様々なシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。成句「細胞表面受容体」
には、シグナルを受け取り、細胞膜を越えてシグナルを伝達することが可能な分子及び分
子の複合体が含まれる。
達に関与する様々なシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。成句「細胞表面受容体」
には、シグナルを受け取り、細胞膜を越えてシグナルを伝達することが可能な分子及び分
子の複合体が含まれる。
用語「対象」は、免疫反応が誘発され得る生体（例えば、哺乳類、ヒト）を含むことが
意図される。
意図される。
用語「実質的に精製された」細胞は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質
的に精製された細胞はまた、その天然に存在する状態では通常会合している他の細胞型か
ら分離された細胞も指す。いくつかの例では、実質的に精製された細胞の集団は、均質な
細胞の集団を指す。他の例では、この用語は単に、それらがその天然の状態では自然に会
合している細胞から分離された細胞を指す。いくつかの態様において、該細胞は、インビ
トロで培養される。他の態様において、該細胞はインビトロでは培養されない。
的に精製された細胞はまた、その天然に存在する状態では通常会合している他の細胞型か
ら分離された細胞も指す。いくつかの例では、実質的に精製された細胞の集団は、均質な
細胞の集団を指す。他の例では、この用語は単に、それらがその天然の状態では自然に会
合している細胞から分離された細胞を指す。いくつかの態様において、該細胞は、インビ
トロで培養される。他の態様において、該細胞はインビトロでは培養されない。
本明細書で用いられる、用語「ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ（治療的）」は、ｔｒｅａｔｍ
ｅｎｔ（治療）を意味する。治療効果は、病態の減少、抑制、寛解、または根絶によって
得られる。
ｅｎｔ（治療）を意味する。治療効果は、病態の減少、抑制、寛解、または根絶によって
得られる。
本明細書で用いられる、用語「ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ（予防）」は、疾患もしくは病
態に対する予防または保護治療を意味する。
態に対する予防または保護治療を意味する。
本発明の中で、「腫瘍抗原」、もしくは「過剰増殖性疾患抗原」、または「過剰増殖性
疾患に関連する抗原」は、特定の過剰増殖性疾患に共通の抗原を指す。特定の態様におい
て、本発明の該過剰増殖性疾患抗原は、原発性または転移性黒色腫、胸腺腫、リンパ腫、
肉腫、肺がん、肝臓がん、ＮＨＬ、白血病、子宮がん、子宮頸がん、膀胱がん、腎臓がん
、及び腺がん、例えば、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、膵臓がん等が挙げられるがこれ
らに限定されないがん由来である。
疾患に関連する抗原」は、特定の過剰増殖性疾患に共通の抗原を指す。特定の態様におい
て、本発明の該過剰増殖性疾患抗原は、原発性または転移性黒色腫、胸腺腫、リンパ腫、
肉腫、肺がん、肝臓がん、ＮＨＬ、白血病、子宮がん、子宮頸がん、膀胱がん、腎臓がん
、及び腺がん、例えば、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、膵臓がん等が挙げられるがこれ
らに限定されないがん由来である。
用語「トランスフェクトされた」、もしくは「変換された」、または「形質導入された
」は、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入される過程を指す。「トランスフェクトさ
れた」、もしくは「変換された」、または「形質導入された」細胞は、外因性の核酸でト
ランスフェクトされた、変換された、または形質導入されたものである。該細胞は初代対
象細胞及びその後代を含む。
」は、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入される過程を指す。「トランスフェクトさ
れた」、もしくは「変換された」、または「形質導入された」細胞は、外因性の核酸でト
ランスフェクトされた、変換された、または形質導入されたものである。該細胞は初代対
象細胞及びその後代を含む。
用語「特異的に結合する」は、試料中に含まれる同族結合パートナー（例えば、ＣＤ１
９）を認識及びこれに結合するが、必ずしも実質的に該試料中の他の分子を認識すること
もこれに結合することも必要ではない抗体、抗体フラグメント、または特定のリガンドを
指す。
９）を認識及びこれに結合するが、必ずしも実質的に該試料中の他の分子を認識すること
もこれに結合することも必要ではない抗体、抗体フラグメント、または特定のリガンドを
指す。
範囲：本開示を通して、本発明の様々な態様は、範囲の形式で示され得る。範囲の形式
での記述は、単に便宜のため及び簡略して表現するためであると理解されるものとし、本
発明の範囲に対する柔軟性のない制限と解釈されるものとはしない。従って、範囲の記述
は、その範囲内の個々の数値だけでなく、具体的に開示されるすべての可能な部分的な範
囲を有すると見なされるものとする。例えば、１〜６等の範囲の記述は、１〜３、１〜４
、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６等のように具体的に開示される部分的な範囲、ならび
に、その範囲内の個々の数、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６を有
すると見なされるものとする。別の例として、９５〜９９％同一等の範囲は、９５％、９
６％、９７％、９８％、または９９％同一のものを含み、かつ、９６〜９９％、９６〜９
８％、９６〜９７％、９７〜９９％、９７〜９８％、及び９８〜９９％同一等の部分的な
範囲を含む。これは、当該範囲の幅にかかわらず適用される。
での記述は、単に便宜のため及び簡略して表現するためであると理解されるものとし、本
発明の範囲に対する柔軟性のない制限と解釈されるものとはしない。従って、範囲の記述
は、その範囲内の個々の数値だけでなく、具体的に開示されるすべての可能な部分的な範
囲を有すると見なされるものとする。例えば、１〜６等の範囲の記述は、１〜３、１〜４
、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６等のように具体的に開示される部分的な範囲、ならび
に、その範囲内の個々の数、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６を有
すると見なされるものとする。別の例として、９５〜９９％同一等の範囲は、９５％、９
６％、９７％、９８％、または９９％同一のものを含み、かつ、９６〜９９％、９６〜９
８％、９６〜９７％、９７〜９９％、９７〜９８％、及び９８〜９９％同一等の部分的な
範囲を含む。これは、当該範囲の幅にかかわらず適用される。
説明
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質を用いたがん等の疾患の治療用の組成物及び使
用方法を本明細書に提供する。本明細書で用いられる、「Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タ
ンパク質」または「ＴＦＰ」は、該ＴＣＲを含む様々なポリペプチド由来の組み換えポリ
ペプチドを含み、該ＴＣＲは、概してｉ）標的細胞上の表面抗原に結合すること、及びｉ
ｉ）通常はＴ細胞内またはその表面上で同一の場所に配置された場合に、無傷のＴＣＲ複
合体の他のポリペプチド成分と相互作用することが可能である。本明細書で提供されるＴ
ＦＰは、キメラ抗原受容体と比較して、かなりの利点を提供する。用語「キメラ抗原受容
体」または代替的に「ＣＡＲ」は、ｓｃＦｖの形で細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメ
イン、及び以下に定義される刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シ
グナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含
む組み換えポリペプチドを指す。一般に、ＣＡＲの中心細胞内シグナル伝達ドメインは、
通常ＴＣＲ複合体と会合して見出されるＣＤ３ゼータ鎖由来である。該ＣＤ３ゼータシグ
ナル伝達ドメインは、４−１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、及び／またはＣ
Ｄ２８等の少なくとも１つの共刺激分子由来の１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインと
融合することができる。
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質を用いたがん等の疾患の治療用の組成物及び使
用方法を本明細書に提供する。本明細書で用いられる、「Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タ
ンパク質」または「ＴＦＰ」は、該ＴＣＲを含む様々なポリペプチド由来の組み換えポリ
ペプチドを含み、該ＴＣＲは、概してｉ）標的細胞上の表面抗原に結合すること、及びｉ
ｉ）通常はＴ細胞内またはその表面上で同一の場所に配置された場合に、無傷のＴＣＲ複
合体の他のポリペプチド成分と相互作用することが可能である。本明細書で提供されるＴ
ＦＰは、キメラ抗原受容体と比較して、かなりの利点を提供する。用語「キメラ抗原受容
体」または代替的に「ＣＡＲ」は、ｓｃＦｖの形で細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメ
イン、及び以下に定義される刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シ
グナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含
む組み換えポリペプチドを指す。一般に、ＣＡＲの中心細胞内シグナル伝達ドメインは、
通常ＴＣＲ複合体と会合して見出されるＣＤ３ゼータ鎖由来である。該ＣＤ３ゼータシグ
ナル伝達ドメインは、４−１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、及び／またはＣ
Ｄ２８等の少なくとも１つの共刺激分子由来の１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインと
融合することができる。
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）
本発明は、ＴＦＰをコードする組み換えＤＮＡ構築物であって、該ＴＦＰがＣＤ１９、
例えばヒトＣＤ１９に特異的に結合する抗体フラグメントを含み、該抗体フラグメントの
配列が、ＴＣＲサブユニットまたはその一部をコードする核酸配列と隣接し、かつそれと
同じリーディングフレーム内にある構築物を包含する。本発明は、ＴＦＰをコードする組
み換えＤＮＡ構築物であって、該ＴＦＰがＢＣＭＡ、例えばヒトＢＣＭＡに特異的に結合
する抗体フラグメントを含み、該抗体フラグメントの配列が、ＴＣＲサブユニットまたは
その一部をコードする核酸配列と隣接し、かつそれと同じリーディングフレーム内にある
構築物を包含する。本明細書で提供されるＴＦＰは、１つ以上の内因性（または代替的に
、１つ以上の外因性、もしくは内因性及び外因性の組合せ）ＴＣＲサブユニットと会合し
、機能的ＴＣＲ複合体を形成することが可能である。
本発明は、ＴＦＰをコードする組み換えＤＮＡ構築物であって、該ＴＦＰがＣＤ１９、
例えばヒトＣＤ１９に特異的に結合する抗体フラグメントを含み、該抗体フラグメントの
配列が、ＴＣＲサブユニットまたはその一部をコードする核酸配列と隣接し、かつそれと
同じリーディングフレーム内にある構築物を包含する。本発明は、ＴＦＰをコードする組
み換えＤＮＡ構築物であって、該ＴＦＰがＢＣＭＡ、例えばヒトＢＣＭＡに特異的に結合
する抗体フラグメントを含み、該抗体フラグメントの配列が、ＴＣＲサブユニットまたは
その一部をコードする核酸配列と隣接し、かつそれと同じリーディングフレーム内にある
構築物を包含する。本明細書で提供されるＴＦＰは、１つ以上の内因性（または代替的に
、１つ以上の外因性、もしくは内因性及び外因性の組合せ）ＴＣＲサブユニットと会合し
、機能的ＴＣＲ複合体を形成することが可能である。
１つの態様において、本発明のＴＦＰは、標的特異的結合因子、別名抗原結合ドメイン
を含む。部分の選択は、標的細胞の表面を決定する標的抗原の型と数に依存する。例えば
、該抗原結合ドメインは、特定の病態と関連する標的細胞の細胞表面マーカーとして作用
する標的抗原を認識するために選択され得る。従って、本発明のＴＦＰにおける抗原結合
ドメインに対して標的抗原の役割をし得る細胞表面マーカーの例としては、ウイルス、細
菌、及び寄生虫感染症；自己免疫疾患；ならびにがん性疾患（例えば、悪性疾患）に関連
するものが挙げられる。
を含む。部分の選択は、標的細胞の表面を決定する標的抗原の型と数に依存する。例えば
、該抗原結合ドメインは、特定の病態と関連する標的細胞の細胞表面マーカーとして作用
する標的抗原を認識するために選択され得る。従って、本発明のＴＦＰにおける抗原結合
ドメインに対して標的抗原の役割をし得る細胞表面マーカーの例としては、ウイルス、細
菌、及び寄生虫感染症；自己免疫疾患；ならびにがん性疾患（例えば、悪性疾患）に関連
するものが挙げられる。
１つの態様において、該ＴＦＰ媒介Ｔ細胞応答は、所望の抗原に特異的に結合するＴＦ
Ｐ内に抗原結合ドメインを組み込む方法によって、目的の抗原に向かわせることができる
。
Ｐ内に抗原結合ドメインを組み込む方法によって、目的の抗原に向かわせることができる
。
１つの態様において、該抗原結合ドメインを含むＴＦＰの部分は、ＣＤ１９を標的とす
る抗原結合ドメインを含む。１つの態様において、該抗原結合ドメインはヒトＣＤ１９を
標的とする。１つの態様において、該抗原結合ドメインを含むＴＦＰの部分は、ＢＣＭＡ
を標的とする抗原結合ドメインを含む。１つの態様において、該抗原結合ドメインは、ヒ
トＢＣＭＡを標的とする。
る抗原結合ドメインを含む。１つの態様において、該抗原結合ドメインはヒトＣＤ１９を
標的とする。１つの態様において、該抗原結合ドメインを含むＴＦＰの部分は、ＢＣＭＡ
を標的とする抗原結合ドメインを含む。１つの態様において、該抗原結合ドメインは、ヒ
トＢＣＭＡを標的とする。
該抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、ヒ
ト抗体、ヒト化抗体、及びその機能的フラグメントを含むがこれらに限定されない抗原に
結合する任意のドメインであることができ、単一ドメイン抗体、例えば、重鎖可変ドメイ
ン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、及びラクダ科由来ナノボディの可変ドメイン（
ＶＨＨ）、ならびに当技術分野で抗原結合ドメインとして機能することが知られる代替骨
格、例えば、組み換えフィブロネクチンドメイン、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）
、ＤＡＲＰＩＮ等が挙げられるがこれらに限定されない。同様に、当該標的抗原を特異的
に認識し、これに結合する天然または合成リガンドが、該ＴＦＰに対する抗原結合ドメイ
ンとして使用され得る。いくつかの例では、該抗原結合ドメインが、該ＴＦＰが最終的に
用いられるのと同じ種由来であることが有益である。例えば、ヒトでの使用については、
該ＴＦＰの抗原結合ドメインが、抗体または抗体フラグメントの抗原結合ドメインに対し
てヒトまたはヒト化残基を含むことが有益であり得る。
ト抗体、ヒト化抗体、及びその機能的フラグメントを含むがこれらに限定されない抗原に
結合する任意のドメインであることができ、単一ドメイン抗体、例えば、重鎖可変ドメイ
ン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、及びラクダ科由来ナノボディの可変ドメイン（
ＶＨＨ）、ならびに当技術分野で抗原結合ドメインとして機能することが知られる代替骨
格、例えば、組み換えフィブロネクチンドメイン、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）
、ＤＡＲＰＩＮ等が挙げられるがこれらに限定されない。同様に、当該標的抗原を特異的
に認識し、これに結合する天然または合成リガンドが、該ＴＦＰに対する抗原結合ドメイ
ンとして使用され得る。いくつかの例では、該抗原結合ドメインが、該ＴＦＰが最終的に
用いられるのと同じ種由来であることが有益である。例えば、ヒトでの使用については、
該ＴＦＰの抗原結合ドメインが、抗体または抗体フラグメントの抗原結合ドメインに対し
てヒトまたはヒト化残基を含むことが有益であり得る。
従って、１つの態様において、該抗原結合ドメインは、ヒト化またはヒト抗体もしくは
ヒト化またはヒト抗体フラグメント、またはマウス抗体もしくはマウス抗体フラグメント
を含む。１つの実施形態では、該ヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ド
メインは、本明細書に記載のヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイ
ンの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２
）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つすべて）、
及び／または、本明細書に記載のヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９結合ドメインの重鎖相補
性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖
相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つすべて）を含み、例えば
、ヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは１つ以上、例えば、３
つすべてのＬＣ ＣＤＲ及び１つ以上、例えば、３つすべてのＨＣ ＣＤＲを含む。１つ
の実施形態では、該ヒト化またはヒト抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載のヒト
化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ
ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（
ＨＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つすべて）を含み、例えば、該ヒト化もしくは
ヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、それぞれが本明細書に記載のＨＣ Ｃ
ＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３を含む２つの可変重鎖領域を有する。１つ
の実施形態では、該ヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本
明細書に記載のヒト化もしくはヒト軽鎖可変領域及び／または本明細書に記載のヒト化も
しくはヒト重鎖可変領域を含む。１つの実施形態では、該ヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９
または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に記載のヒト化重鎖可変領域、例えば、少な
くとも２つの本明細書に記載のヒト化またはヒト重鎖可変領域を含む。１つの実施形態で
は、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書で提供されるアミノ酸配列
の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。実施形態では、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結
合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、本明細書で提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列
の少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾（例えば、置換）から最大３０、２０、も
しくは１０までの修飾（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、または、本明細書で提供
されるアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性がある配列を含む軽鎖可変領域、及び／また
は、本明細書で提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、もしく
は３つの修飾（例えば、置換）から最大３０、２０、もしくは１０までの修飾（例えば、
置換）を有するアミノ酸配列、または、本明細書で提供されるアミノ酸配列に対して９５
〜９９％の同一性がある配列を含む重鎖可変領域を含む。１つの実施形態では、該ヒト化
もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書に
記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可
変領域に、リンカー、例えば、本明細書に記載のリンカーを介して取り付けられる。１つ
の実施形態では、該ヒト化抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓ
ｅｒ）ｎリンカーを含み、この場合、ｎは１、２、３、４、５、もしくは６であり、好ま
しくは３または４である。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の
配向のいずれかの場合がある：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域または重鎖可変領
域−リンカー−軽鎖可変領域。いくつかの例では、該リンカー配列は長いリンカー（ＬＬ
）配列を含む。いくつかの例では、該長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場
合ｎ＝２〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ）配列
を含む。いくつかの例では、該短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝
１〜３である。
ヒト化またはヒト抗体フラグメント、またはマウス抗体もしくはマウス抗体フラグメント
を含む。１つの実施形態では、該ヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ド
メインは、本明細書に記載のヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイ
ンの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２
）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つすべて）、
及び／または、本明細書に記載のヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９結合ドメインの重鎖相補
性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖
相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つすべて）を含み、例えば
、ヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは１つ以上、例えば、３
つすべてのＬＣ ＣＤＲ及び１つ以上、例えば、３つすべてのＨＣ ＣＤＲを含む。１つ
の実施形態では、該ヒト化またはヒト抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載のヒト
化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ
ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（
ＨＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つすべて）を含み、例えば、該ヒト化もしくは
ヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、それぞれが本明細書に記載のＨＣ Ｃ
ＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３を含む２つの可変重鎖領域を有する。１つ
の実施形態では、該ヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本
明細書に記載のヒト化もしくはヒト軽鎖可変領域及び／または本明細書に記載のヒト化も
しくはヒト重鎖可変領域を含む。１つの実施形態では、該ヒト化もしくはヒト抗ＣＤ１９
または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に記載のヒト化重鎖可変領域、例えば、少な
くとも２つの本明細書に記載のヒト化またはヒト重鎖可変領域を含む。１つの実施形態で
は、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書で提供されるアミノ酸配列
の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。実施形態では、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結
合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、本明細書で提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列
の少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの修飾（例えば、置換）から最大３０、２０、も
しくは１０までの修飾（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、または、本明細書で提供
されるアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性がある配列を含む軽鎖可変領域、及び／また
は、本明細書で提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、もしく
は３つの修飾（例えば、置換）から最大３０、２０、もしくは１０までの修飾（例えば、
置換）を有するアミノ酸配列、または、本明細書で提供されるアミノ酸配列に対して９５
〜９９％の同一性がある配列を含む重鎖可変領域を含む。１つの実施形態では、該ヒト化
もしくはヒト抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書に
記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可
変領域に、リンカー、例えば、本明細書に記載のリンカーを介して取り付けられる。１つ
の実施形態では、該ヒト化抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓ
ｅｒ）ｎリンカーを含み、この場合、ｎは１、２、３、４、５、もしくは６であり、好ま
しくは３または４である。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の
配向のいずれかの場合がある：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域または重鎖可変領
域−リンカー−軽鎖可変領域。いくつかの例では、該リンカー配列は長いリンカー（ＬＬ
）配列を含む。いくつかの例では、該長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場
合ｎ＝２〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、短いリンカー（ＳＬ）配列
を含む。いくつかの例では、該短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝
１〜３である。
いくつかの態様において、非ヒト抗体はヒト化され、そこで該抗体の特定の配列または
領域は、ヒトにおいて自然に産生される抗体またはそのフラグメントとの類似性を増すよ
うに修飾される。１つの態様において、該抗原結合ドメインはヒト化される。
領域は、ヒトにおいて自然に産生される抗体またはそのフラグメントとの類似性を増すよ
うに修飾される。１つの態様において、該抗原結合ドメインはヒト化される。
ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植（例えば、欧州特許第ＥＰ２３９，４００号；国際公開第Ｗ
Ｏ９１／０９９６７号；ならびに米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０
１号、及び第５，５８５，０８９号参照。これらの各々は、参照することによってそれら
の全体が本明細書に組み込まれる）、ベニアリングまたはリサーフェーシング（例えば、
欧州特許第ＥＰ５９２，１０６号及び第ＥＰ５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ， １９９
１， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２８（４／５）：４８９−４９８
；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅ
ｒｉｎｇ， ７（６）：８０５−８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．， １９９
４， ＰＮＡＳ， ９１：９６９−９７３参照。これらの各々は、参照することによって
それらの全体が本明細書に組み込まれる）、鎖シャフリング（例えば、米国特許第５，５
６５，３３２号参照。参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる）、なら
びに例えば、各々が参照することによって全体として本明細書に組み込まれる米国特許出
願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４号、米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００４８
６１７号、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公
開第ＷＯ９３１７１０５号， Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １
６９：１１１９−２５ （２００２）， Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｅｎｇ．， １３（５）：３５３−６０ （２０００）， Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ
．， Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２０（３）：２６７−７９ （２０００）， Ｂａｃａ ｅｔ
ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２（１６）：１０６７８−８４ （
１９９７）， Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．， ９（１
０）：８９５−９０４ （１９９６）， Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．， ５５ （２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ （１９９５）， Ｃ
ｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５５（８）：１７１７−２２
（１９９５）， Ｓａｎｄｈｕ Ｊ Ｓ， Ｇｅｎｅ， １５０（２）：４０９−１０
（１９９４），及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．，
２３５（３）：９５９−７３ （１９９４）に開示される技術が挙げられるがこれらに
限定されない当技術分野で既知の様々な技術を用いて産生することができる。多くの場合
、フレームワーク領域内のフレームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基
で置換され、抗原結合を変更、例えば、改善する。これらのフレームワーク置換は、当技
術分野で周知の方法によって特定され、例えば、該ＣＤＲとフレームワーク残基の相互作
用のモデリングによって抗原結合及び配列比較に重要なフレームワーク残基を特定し、特
定の位置で他とは異なるフレームワーク残基を特定する（例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，米国特許第５，５８５，０８９号；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， １
９８８， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２：３２３参照。これらは参照することによってそれら
の全体が本明細書に組み込まれる）。
Ｏ９１／０９９６７号；ならびに米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０
１号、及び第５，５８５，０８９号参照。これらの各々は、参照することによってそれら
の全体が本明細書に組み込まれる）、ベニアリングまたはリサーフェーシング（例えば、
欧州特許第ＥＰ５９２，１０６号及び第ＥＰ５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ， １９９
１， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２８（４／５）：４８９−４９８
；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅ
ｒｉｎｇ， ７（６）：８０５−８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．， １９９
４， ＰＮＡＳ， ９１：９６９−９７３参照。これらの各々は、参照することによって
それらの全体が本明細書に組み込まれる）、鎖シャフリング（例えば、米国特許第５，５
６５，３３２号参照。参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる）、なら
びに例えば、各々が参照することによって全体として本明細書に組み込まれる米国特許出
願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４号、米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００４８
６１７号、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公
開第ＷＯ９３１７１０５号， Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １
６９：１１１９−２５ （２００２）， Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｅｎｇ．， １３（５）：３５３−６０ （２０００）， Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ
．， Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２０（３）：２６７−７９ （２０００）， Ｂａｃａ ｅｔ
ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２（１６）：１０６７８−８４ （
１９９７）， Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．， ９（１
０）：８９５−９０４ （１９９６）， Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．， ５５ （２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ （１９９５）， Ｃ
ｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５５（８）：１７１７−２２
（１９９５）， Ｓａｎｄｈｕ Ｊ Ｓ， Ｇｅｎｅ， １５０（２）：４０９−１０
（１９９４），及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．，
２３５（３）：９５９−７３ （１９９４）に開示される技術が挙げられるがこれらに
限定されない当技術分野で既知の様々な技術を用いて産生することができる。多くの場合
、フレームワーク領域内のフレームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基
で置換され、抗原結合を変更、例えば、改善する。これらのフレームワーク置換は、当技
術分野で周知の方法によって特定され、例えば、該ＣＤＲとフレームワーク残基の相互作
用のモデリングによって抗原結合及び配列比較に重要なフレームワーク残基を特定し、特
定の位置で他とは異なるフレームワーク残基を特定する（例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａ
ｌ．，米国特許第５，５８５，０８９号；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， １
９８８， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２：３２３参照。これらは参照することによってそれら
の全体が本明細書に組み込まれる）。
ヒト化抗体または抗体フラグメントは、非ヒト起源由来のそれに残る１つ以上のアミノ
酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「ｉｍｐｏｒｔ（取り込
み）」残基と呼ばれ、これらは通常、「取り込み」可変ドメインから取り出される。本明
細書で提供される、ヒト化抗体または抗体フラグメントは、非ヒト免疫グロブリン分子由
来の１つ以上のＣＤＲ及びフレームワーク領域を含むとともに、該フレームワークを構成
するアミノ酸残基は、完全にまたは大部分ヒト生殖細胞系由来である。抗体または抗体フ
ラグメントのヒト化に対する多数の技術は、当技術分野で周知であり、Ｗｉｎｔｅｒ及び
共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３２１：５２２−
５２５ （１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２
：３２３−３２７ （１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ， ２３９：１５３４−１５３６ （１９８８））に従い、げっ歯類のＣＤＲまたはＣ
ＤＲ配列を対応する配列のヒト抗体の代わりに用いることによって、すなわちＣＤＲ移植
で基本的に行うことができる（ＥＰ２３９，４００号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／０９９６
７号；及び米国特許第４，８１６，５６７号；第６，３３１，４１５号；第５，２２５，
５３９号；第５，５３０，１０１号；第５，５８５，０８９号；第６，５４８，６４０号
。これらの内容は、参照することによってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。か
かるヒト化抗体及び抗体フラグメントにおいて、非ヒト種由来の対応する配列による置換
は、無傷のヒト可変ドメインよりかなり少ない。ヒト化抗体は、多くの場合、いくつかの
ＣＤＲ残基及び場合によりいくつかのフレームワーク（ＦＲ）残基がげっ歯類抗体におけ
る類似部位由来の残基によって置換されるヒト抗体である。抗体及び抗体フラグメントの
ヒト化は、ベニアリングもしくはリサーフェーシング（ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９
，５９６；Ｐａｄｌａｎ， １９９１， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，
２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ７（６）：８０５−８１４ （１９９４）；及びＲｏ
ｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ， ９１：９６９−９７３ （１９９４））、ま
たは鎖シャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）によっても達成され得る。これ
らの内容は、参照することによってそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「ｉｍｐｏｒｔ（取り込
み）」残基と呼ばれ、これらは通常、「取り込み」可変ドメインから取り出される。本明
細書で提供される、ヒト化抗体または抗体フラグメントは、非ヒト免疫グロブリン分子由
来の１つ以上のＣＤＲ及びフレームワーク領域を含むとともに、該フレームワークを構成
するアミノ酸残基は、完全にまたは大部分ヒト生殖細胞系由来である。抗体または抗体フ
ラグメントのヒト化に対する多数の技術は、当技術分野で周知であり、Ｗｉｎｔｅｒ及び
共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３２１：５２２−
５２５ （１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２
：３２３−３２７ （１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ， ２３９：１５３４−１５３６ （１９８８））に従い、げっ歯類のＣＤＲまたはＣ
ＤＲ配列を対応する配列のヒト抗体の代わりに用いることによって、すなわちＣＤＲ移植
で基本的に行うことができる（ＥＰ２３９，４００号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／０９９６
７号；及び米国特許第４，８１６，５６７号；第６，３３１，４１５号；第５，２２５，
５３９号；第５，５３０，１０１号；第５，５８５，０８９号；第６，５４８，６４０号
。これらの内容は、参照することによってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。か
かるヒト化抗体及び抗体フラグメントにおいて、非ヒト種由来の対応する配列による置換
は、無傷のヒト可変ドメインよりかなり少ない。ヒト化抗体は、多くの場合、いくつかの
ＣＤＲ残基及び場合によりいくつかのフレームワーク（ＦＲ）残基がげっ歯類抗体におけ
る類似部位由来の残基によって置換されるヒト抗体である。抗体及び抗体フラグメントの
ヒト化は、ベニアリングもしくはリサーフェーシング（ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９
，５９６；Ｐａｄｌａｎ， １９９１， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，
２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ７（６）：８０５−８１４ （１９９４）；及びＲｏ
ｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ， ９１：９６９−９７３ （１９９４））、ま
たは鎖シャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）によっても達成され得る。これ
らの内容は、参照することによってそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
該ヒト化抗体の作製に用いられる軽及び重の両方のヒト可変ドメインを選ぶことは、抗
原性を減らすことである。いわゆる「最良適合」法によれば、げっ歯類抗体の該可変ドメ
インの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリに対してスクリーニングされ
る。げっ歯類のものに最も近い該ヒト配列は、次に該ヒト化抗体用のヒトフレームワーク
（ＦＲ）として認められる（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １
５１：２２９６ （１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂ
ｉｏｌ．， １９６：９０１ （１９８７）。これらの内容は、参照することによってそ
れらの全体が本明細書に組み込まれる）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定の亜群のす
べてのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを用いる。同じフレーム
ワークをいくつかの異なるヒト化抗体に用いる場合がある（例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ
ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎ． ３４ （１６−１７）： １１５７−１１６
５ （１９９７）；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ
． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８９：４２８５ （１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．
， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５１：２６２３ （１９９３）参照。これらの内容は
、参照することによってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態
では、該フレームワーク領域、例えば、重鎖可変領域の４つのすべてのフレームワーク領
域は、ＶＨ４−４−５９生殖細胞系列配列由来である。１つの実施形態では、該フレーム
ワーク領域は、例えば、対応するマウス配列でのアミノ酸から、１つ、２つ、３つ、４つ
、または５つの修飾、例えば、置換を含み得る。１つの実施形態では、該フレームワーク
領域、例えば、該軽鎖可変領域の４つのすべてのフレームワーク領域は、ＶＫ３−１．２
５生殖細胞系列配列由来である。１つの実施形態では、該フレームワーク領域は、例えば
、対応するマウス配列でのアミノ酸から、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの修飾、
例えば、置換を含み得る。
原性を減らすことである。いわゆる「最良適合」法によれば、げっ歯類抗体の該可変ドメ
インの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリに対してスクリーニングされ
る。げっ歯類のものに最も近い該ヒト配列は、次に該ヒト化抗体用のヒトフレームワーク
（ＦＲ）として認められる（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １
５１：２２９６ （１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂ
ｉｏｌ．， １９６：９０１ （１９８７）。これらの内容は、参照することによってそ
れらの全体が本明細書に組み込まれる）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定の亜群のす
べてのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを用いる。同じフレーム
ワークをいくつかの異なるヒト化抗体に用いる場合がある（例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ
ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎ． ３４ （１６−１７）： １１５７−１１６
５ （１９９７）；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ
． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８９：４２８５ （１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．
， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５１：２６２３ （１９９３）参照。これらの内容は
、参照することによってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態
では、該フレームワーク領域、例えば、重鎖可変領域の４つのすべてのフレームワーク領
域は、ＶＨ４−４−５９生殖細胞系列配列由来である。１つの実施形態では、該フレーム
ワーク領域は、例えば、対応するマウス配列でのアミノ酸から、１つ、２つ、３つ、４つ
、または５つの修飾、例えば、置換を含み得る。１つの実施形態では、該フレームワーク
領域、例えば、該軽鎖可変領域の４つのすべてのフレームワーク領域は、ＶＫ３−１．２
５生殖細胞系列配列由来である。１つの実施形態では、該フレームワーク領域は、例えば
、対応するマウス配列でのアミノ酸から、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの修飾、
例えば、置換を含み得る。
いくつかの態様において、抗体フラグメントを含む本発明のＴＦＰ組成物の部分は、標
的抗原に対する高い親和性及び他の有益な生物学的特性を保持しながらヒト化される。本
発明の１つの態様によれば、ヒト化抗体及び抗体フラグメントは、当該親配列及びヒト化
配列の３次元モデルを用いて、該親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析過程によって
調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者にはよく知
られている。コンピュータプログラムが利用可能であり、これは、選択された候補の免疫
グロブリン配列の推定される３次元立体配座構造を説明及び表示する。これらの表示の検
査は、候補の免疫グロブリン配列の機能性における当該残基の可能性のある役割の分析、
例えば、該候補の免疫グロブリンの標的抗原を結合する能力に影響を与える残基の分析を
可能にする。このように、ＦＲ残基は、所望の抗体または抗体フラグメントの特性、例え
ば、標的抗原に対する親和性の増加が達成されるように、当該レシピエント及び取り込み
配列から選択ならびに組み合わせることができる。一般に、該ＣＤＲ残基は、抗原結合へ
の影響に直接及び最も実質的に関与している。
的抗原に対する高い親和性及び他の有益な生物学的特性を保持しながらヒト化される。本
発明の１つの態様によれば、ヒト化抗体及び抗体フラグメントは、当該親配列及びヒト化
配列の３次元モデルを用いて、該親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析過程によって
調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者にはよく知
られている。コンピュータプログラムが利用可能であり、これは、選択された候補の免疫
グロブリン配列の推定される３次元立体配座構造を説明及び表示する。これらの表示の検
査は、候補の免疫グロブリン配列の機能性における当該残基の可能性のある役割の分析、
例えば、該候補の免疫グロブリンの標的抗原を結合する能力に影響を与える残基の分析を
可能にする。このように、ＦＲ残基は、所望の抗体または抗体フラグメントの特性、例え
ば、標的抗原に対する親和性の増加が達成されるように、当該レシピエント及び取り込み
配列から選択ならびに組み合わせることができる。一般に、該ＣＤＲ残基は、抗原結合へ
の影響に直接及び最も実質的に関与している。
ヒト化抗体または抗体フラグメントは、元の抗体と同様の抗原特異性、例えば、本発明
では、ヒトＣＤ１９に対する結合能を保持し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体
または抗体フラグメントでは、ヒトＣＤ１９またはヒトＢＣＭＡに対する結合の親和性及
び／または特異性が向上する場合がある。
では、ヒトＣＤ１９に対する結合能を保持し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体
または抗体フラグメントでは、ヒトＣＤ１９またはヒトＢＣＭＡに対する結合の親和性及
び／または特異性が向上する場合がある。
１つの態様において、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、抗体または抗体
フラグメントの特定の機能的特色または特性によって特徴づけられる。例えば、１つの態
様において、抗原結合ドメインを含む本発明のＴＦＰ組成物の部分は、ヒトＣＤ１９また
はヒトＢＣＭＡに特異的に結合する。１つの態様において、該抗原結合ドメインは、Ｎｉ
ｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎ． ３４ （１６−１７）： １
１５７−１１６５ （１９９７）に記載のＦＭＣ６３ ｓｃＦｖと同じまたは同様のヒト
ＣＤ１９に対する結合特異性を有する。１つの態様において、本発明は、抗体または抗体
フラグメントを含むとともにＣＤ１９もしくはＢＣＭＡタンパク質またはそのフラグメン
トに特異的に結合する抗原結合ドメインに関し、該抗体または抗体フラグメントは、本明
細書で提供されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖及び／または可変重鎖を含むものである。
特定の態様において、該ｓｃＦｖは、リーダー配列に隣接し及びこれと同じリーディング
フレーム内にある。
フラグメントの特定の機能的特色または特性によって特徴づけられる。例えば、１つの態
様において、抗原結合ドメインを含む本発明のＴＦＰ組成物の部分は、ヒトＣＤ１９また
はヒトＢＣＭＡに特異的に結合する。１つの態様において、該抗原結合ドメインは、Ｎｉ
ｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎ． ３４ （１６−１７）： １
１５７−１１６５ （１９９７）に記載のＦＭＣ６３ ｓｃＦｖと同じまたは同様のヒト
ＣＤ１９に対する結合特異性を有する。１つの態様において、本発明は、抗体または抗体
フラグメントを含むとともにＣＤ１９もしくはＢＣＭＡタンパク質またはそのフラグメン
トに特異的に結合する抗原結合ドメインに関し、該抗体または抗体フラグメントは、本明
細書で提供されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖及び／または可変重鎖を含むものである。
特定の態様において、該ｓｃＦｖは、リーダー配列に隣接し及びこれと同じリーディング
フレーム内にある。
１つの態様において、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、フラグメント、
例えば、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。１つの態様において、該抗ＣＤ１
９結合ドメインは、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、または二官能性（例えば、二重特異
性）ハイブリッド抗体（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ．
Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７， １０５ （１９８７））である。１つの態様におい
て、本発明の抗体及びそれらのフラグメントは、野生型または親和性が向上されたＣＤ１
９タンパク質に結合する。
例えば、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。１つの態様において、該抗ＣＤ１
９結合ドメインは、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、または二官能性（例えば、二重特異
性）ハイブリッド抗体（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ．
Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７， １０５ （１９８７））である。１つの態様におい
て、本発明の抗体及びそれらのフラグメントは、野生型または親和性が向上されたＣＤ１
９タンパク質に結合する。
また、標的抗原（例えば、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、または融合部分結合ドメインの標的に
ついて本明細書の他の箇所に記載される任意の標的抗原）に特異的な抗体抗原結合ドメイ
ンを得るための方法であって、本明細書に示されるＶＨドメインのアミノ酸配列内の１つ
以上のアミノ酸の付加、削除、置換、または挿入を経由して、該ＶＨドメインのアミノ酸
配列変異体であるＶＨドメインを準備し、任意に、このようにして準備されたＶＨドメイ
ンを１つ以上のＶＬドメインと組み合せ、該ＶＨドメインまたはＶＨ／ＶＬの組合せもし
くは複数の組合せを試験し、特定の結合メンバー、または、任意に１つ以上の所望の特性
を有する目的の標的抗原（例えば、ＣＤ１９またはＢＣＭＡ）に特異的な抗体抗原結合ド
メインを特定することを含む方法を本明細書に提供する。
ついて本明細書の他の箇所に記載される任意の標的抗原）に特異的な抗体抗原結合ドメイ
ンを得るための方法であって、本明細書に示されるＶＨドメインのアミノ酸配列内の１つ
以上のアミノ酸の付加、削除、置換、または挿入を経由して、該ＶＨドメインのアミノ酸
配列変異体であるＶＨドメインを準備し、任意に、このようにして準備されたＶＨドメイ
ンを１つ以上のＶＬドメインと組み合せ、該ＶＨドメインまたはＶＨ／ＶＬの組合せもし
くは複数の組合せを試験し、特定の結合メンバー、または、任意に１つ以上の所望の特性
を有する目的の標的抗原（例えば、ＣＤ１９またはＢＣＭＡ）に特異的な抗体抗原結合ド
メインを特定することを含む方法を本明細書に提供する。
いくつかの例では、ＶＨドメイン及びｓｃＦｖは当技術分野で既知の方法に従って調製
することができる（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４２：４２３−４２６ ａｎｄ Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｐ
ｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３参照
）。ｓｃＦｖ分子は、ＶＨ及びＶＬ領域を、可動性ポリペプチドリンカーを用いて連結さ
せることによって産生することができる。該ｓｃＦｖ分子は、最適化された長さ及び／ま
たはアミノ酸組成のリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。該リンカーの
長さは、ｓｃＦｖの可変領域の折りたたみ方及び相互作用のし方に大きく影響し得る。実
際、短いポリペプチドリンカーが用いられる場合（例えば、５〜１０アミノ酸）、鎖内の
折りたたみは防止される。鎖間の折りたたみもまた、該２つの可変領域を一緒にして機能
的エピトープ結合部位を形成するために必要である。いくつかの例では、該リンカー配列
は、長いリンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該長いリンカー配列は、（Ｇ
４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝２〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、短
いリンカー（ＳＬ）配列を含む。いくつかの例では、該短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）
ｎを含み、この場合ｎ＝１〜３である。リンカーの配向及びサイズの例については、例え
ば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ． １９９３ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ９０：６４４４−６４４８，米国特許出願公開第２００５／０
１００５４３号、第２００５／０１７５６０６号、第２００７／００１４７９４号、なら
びにＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／０２０２５８号、及び第ＷＯ２００７／０２４７１５号
を参照されたい。これらは参照することによって本明細書に組み込まれる。
することができる（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４２：４２３−４２６ ａｎｄ Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｐ
ｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３参照
）。ｓｃＦｖ分子は、ＶＨ及びＶＬ領域を、可動性ポリペプチドリンカーを用いて連結さ
せることによって産生することができる。該ｓｃＦｖ分子は、最適化された長さ及び／ま
たはアミノ酸組成のリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。該リンカーの
長さは、ｓｃＦｖの可変領域の折りたたみ方及び相互作用のし方に大きく影響し得る。実
際、短いポリペプチドリンカーが用いられる場合（例えば、５〜１０アミノ酸）、鎖内の
折りたたみは防止される。鎖間の折りたたみもまた、該２つの可変領域を一緒にして機能
的エピトープ結合部位を形成するために必要である。いくつかの例では、該リンカー配列
は、長いリンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該長いリンカー配列は、（Ｇ
４Ｓ）ｎを含み、この場合ｎ＝２〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、短
いリンカー（ＳＬ）配列を含む。いくつかの例では、該短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）
ｎを含み、この場合ｎ＝１〜３である。リンカーの配向及びサイズの例については、例え
ば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ． １９９３ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ９０：６４４４−６４４８，米国特許出願公開第２００５／０
１００５４３号、第２００５／０１７５６０６号、第２００７／００１４７９４号、なら
びにＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／０２０２５８号、及び第ＷＯ２００７／０２４７１５号
を参照されたい。これらは参照することによって本明細書に組み込まれる。
ｓｃＦｖは、そのＶＬ及びＶＨ領域間に約１０、１１、１２、１３、１４、１５、また
は１５を超える残基のリンカーを含むことができる。該リンカー配列は、任意の天然に存
在するアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、該リンカー配列は、アミノ酸のグ
リシン及びセリンを含む。別の実施形態では、該リンカー配列は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ
等のグリシンとセリンの繰り返しの組を含み、この場合、ｎは１以上の正の整数である。
１つの実施形態では、該リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３
であり得る。該リンカーの長さの変動は、活性を保持または向上させる場合があり、活性
研究における優れた有効性を生じさせる。いくつかの例では、該リンカー配列は、長いリ
ンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを
含み、この場合ｎ＝２〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、短いリンカー
（ＳＬ）配列を含む。いくつかの例では、該短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、
この場合ｎ＝１〜３である。
は１５を超える残基のリンカーを含むことができる。該リンカー配列は、任意の天然に存
在するアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、該リンカー配列は、アミノ酸のグ
リシン及びセリンを含む。別の実施形態では、該リンカー配列は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ
等のグリシンとセリンの繰り返しの組を含み、この場合、ｎは１以上の正の整数である。
１つの実施形態では、該リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３
であり得る。該リンカーの長さの変動は、活性を保持または向上させる場合があり、活性
研究における優れた有効性を生じさせる。いくつかの例では、該リンカー配列は、長いリ
ンカー（ＬＬ）配列を含む。いくつかの例では、該長いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを
含み、この場合ｎ＝２〜４である。いくつかの例では、該リンカー配列は、短いリンカー
（ＳＬ）配列を含む。いくつかの例では、該短いリンカー配列は、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、
この場合ｎ＝１〜３である。
安定性及び変異
抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖ分子（例えば、可溶性ｓ
ｃＦｖ）の安定性は、従来の対照ｓｃＦｖ分子または完全長抗体の生物物理学的特性（例
えば、熱安定性）に関して評価することができる。１つの実施形態では、該ヒト化または
ヒトｓｃＦｖは、記載のアッセイにおいて、親のｓｃＦｖより、約０．１、約０．２５、
約０．５、約０．７５、約１、約１．２５、約１．５、約１．７５、約２、約２．５、約
３、約３．５、約４、約４．５、約５、約５．５、約６、約６．５、約７、約７．５、約
８、約８．５、約９、約９．５、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、
または約１５℃高い熱安定性を有する。
抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖ分子（例えば、可溶性ｓ
ｃＦｖ）の安定性は、従来の対照ｓｃＦｖ分子または完全長抗体の生物物理学的特性（例
えば、熱安定性）に関して評価することができる。１つの実施形態では、該ヒト化または
ヒトｓｃＦｖは、記載のアッセイにおいて、親のｓｃＦｖより、約０．１、約０．２５、
約０．５、約０．７５、約１、約１．２５、約１．５、約１．７５、約２、約２．５、約
３、約３．５、約４、約４．５、約５、約５．５、約６、約６．５、約７、約７．５、約
８、約８．５、約９、約９．５、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、
または約１５℃高い熱安定性を有する。
該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖの熱安定性の改良は、
続いてＣＤ１９−ＴＦＰ構築物全体にもたらされ、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦ
Ｐ構築物の治療特性の改良につながる。該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例
えば、ｓｃＦｖの熱安定性は、従来の抗体と比較して少なくとも約２℃または３℃改良さ
れ得る。１つの実施形態では、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、ｓ
ｃＦｖは、従来の抗体と比較して１℃改良された熱安定性を有する。別の実施形態では、
該抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖは、従来の抗体と比較して２℃改良された
熱安定性を有する。別の実施形態では、該ｓｃＦｖは、従来の抗体と比較して、４℃、５
℃、６℃、７℃、８℃、９℃、１０℃、１１℃、１２℃、１３℃、１４℃、または１５℃
改良された熱安定性を有する。比較は、例えば、本明細書に開示のｓｃＦｖ分子と、該ｓ
ｃＦｖ ＶＨ及びＶＬが由来する抗体のｓｃＦｖ分子またはＦａｂフラグメント間でなさ
れ得る。熱安定性は、当技術分野で既知の方法を用いて測定することができる。例えば、
１つの実施形態では、ＴＭが測定され得る。ＴＭの測定方法及びタンパク質の安定性の他
の決定方法は、以下により詳しく記載される。
続いてＣＤ１９−ＴＦＰ構築物全体にもたらされ、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦ
Ｐ構築物の治療特性の改良につながる。該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例
えば、ｓｃＦｖの熱安定性は、従来の抗体と比較して少なくとも約２℃または３℃改良さ
れ得る。１つの実施形態では、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、ｓ
ｃＦｖは、従来の抗体と比較して１℃改良された熱安定性を有する。別の実施形態では、
該抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖは、従来の抗体と比較して２℃改良された
熱安定性を有する。別の実施形態では、該ｓｃＦｖは、従来の抗体と比較して、４℃、５
℃、６℃、７℃、８℃、９℃、１０℃、１１℃、１２℃、１３℃、１４℃、または１５℃
改良された熱安定性を有する。比較は、例えば、本明細書に開示のｓｃＦｖ分子と、該ｓ
ｃＦｖ ＶＨ及びＶＬが由来する抗体のｓｃＦｖ分子またはＦａｂフラグメント間でなさ
れ得る。熱安定性は、当技術分野で既知の方法を用いて測定することができる。例えば、
１つの実施形態では、ＴＭが測定され得る。ＴＭの測定方法及びタンパク質の安定性の他
の決定方法は、以下により詳しく記載される。
ｓｃＦｖの変異（可溶性ｓｃＦｖのヒト化または直接突然変異誘発を介して生じる）は
、該ｓｃＦｖの安定性を変化させ、該ｓｃＦｖ及び該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦ
Ｐ構築物の全体的な安定性を改良する。ヒト化ｓｃＦｖの安定性は、ＴＭ、温度変性、及
び温度凝集等の測定結果を用いて、マウスのｓｃＦｖに対して比較される。１つの実施形
態では、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖは、変異したｓ
ｃＦｖが該抗ＣＤ１９ ＴＦＰ構築物に改良された安定性を付与するように、該ヒト化過
程から生じる少なくとも１つの変異を含む。別の実施形態では、該抗ＣＤ１９結合ドメイ
ン、例えば、ｓｃＦｖは、変異したｓｃＦｖが該ＣＤ１９−ＴＦＰまたはＢＣＭＡ−ＴＦ
Ｐ構築物に改良された安定性を付与するように、該ヒト化過程から生じる少なくとも１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０の変異を含む。
、該ｓｃＦｖの安定性を変化させ、該ｓｃＦｖ及び該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦ
Ｐ構築物の全体的な安定性を改良する。ヒト化ｓｃＦｖの安定性は、ＴＭ、温度変性、及
び温度凝集等の測定結果を用いて、マウスのｓｃＦｖに対して比較される。１つの実施形
態では、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖは、変異したｓ
ｃＦｖが該抗ＣＤ１９ ＴＦＰ構築物に改良された安定性を付与するように、該ヒト化過
程から生じる少なくとも１つの変異を含む。別の実施形態では、該抗ＣＤ１９結合ドメイ
ン、例えば、ｓｃＦｖは、変異したｓｃＦｖが該ＣＤ１９−ＴＦＰまたはＢＣＭＡ−ＴＦ
Ｐ構築物に改良された安定性を付与するように、該ヒト化過程から生じる少なくとも１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０の変異を含む。
１つの態様において、該ＴＦＰの抗原結合ドメインは、本明細書に記載の抗原結合ドメ
インのアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含み、該抗原結合ドメインは、本明細書
に記載の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ抗体フラグメントの所望の機能特性を保持する。１
つの特定の態様において、本発明のＴＦＰ組成物は、抗体フラグメントを含む。さらなる
態様において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖを含む。
インのアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含み、該抗原結合ドメインは、本明細書
に記載の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ抗体フラグメントの所望の機能特性を保持する。１
つの特定の態様において、本発明のＴＦＰ組成物は、抗体フラグメントを含む。さらなる
態様において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖを含む。
様々な態様において、該ＴＦＰの抗原結合ドメインは、一方または両方の可変領域（例
えば、ＶＨ及び／またはＶＬ）内、例えば、１つ以上のＣＤＲ領域内、及び／または１つ
以上のフレームワーク領域内の１つ以上のアミノ酸を修飾することによって改変される。
１つの特定の態様において、本発明のＴＦＰ組成物は、抗体フラグメントを含む。さらな
る態様において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖを含む。
えば、ＶＨ及び／またはＶＬ）内、例えば、１つ以上のＣＤＲ領域内、及び／または１つ
以上のフレームワーク領域内の１つ以上のアミノ酸を修飾することによって改変される。
１つの特定の態様において、本発明のＴＦＰ組成物は、抗体フラグメントを含む。さらな
る態様において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖを含む。
当業者には、本発明の抗体または抗体フラグメントがさらに、それらがアミノ酸配列の
点で異なる（例えば、野生型から）が、所望の活性の点では変化しないように修飾されて
もよいことが理解されよう。例えば、「非必須」アミノ酸残基でアミノ酸置換をもたらす
さらなるヌクレオチド置換を該タンパク質に施してもよい。例えば、分子内の非必須アミ
ノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えてもよい。別の実施
形態では、一連のアミノ酸を、側鎖ファミリーのメンバーの順序及び／または組成が異な
る構造的に同様の一連のもので置き換えることができ、例えば、アミノ酸残基が同様の側
鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる保存的置換が行われ得る。
点で異なる（例えば、野生型から）が、所望の活性の点では変化しないように修飾されて
もよいことが理解されよう。例えば、「非必須」アミノ酸残基でアミノ酸置換をもたらす
さらなるヌクレオチド置換を該タンパク質に施してもよい。例えば、分子内の非必須アミ
ノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えてもよい。別の実施
形態では、一連のアミノ酸を、側鎖ファミリーのメンバーの順序及び／または組成が異な
る構造的に同様の一連のもので置き換えることができ、例えば、アミノ酸残基が同様の側
鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる保存的置換が行われ得る。
同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されており、塩基
性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン
酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、
セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン
）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（
例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。
性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン
酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、
セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン
）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（
例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列における同一性率は、同じである２つ以上の配
列を指す。２つの配列が、最大一致のために比較ウィンドウ上、または以下の配列比較ア
ルゴリズムの１つを用いて、もしくはマニュアルアラインメント及び目視による調査で測
定される指定された領域で比較ならびに整列された場合、同一であるアミノ酸残基または
ヌクレオチドを特定の割合有するとき、２つの配列は「実質的に同一」である（例えば、
特定の領域にわたって、または特定されていない場合、全配列にわたって６０％同一、任
意に７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９
％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、また
は９９％同一）。任意に、該同一性は、少なくとも長さ約５０ヌクレオチド（または１０
アミノ酸）の領域にわたって、またはより好ましくは、長さ１００〜５００もしくは１０
００以上のヌクレオチド（または２０、５０、２００、もしくはそれ以上のアミノ酸）の
領域にわたって存在する。
列を指す。２つの配列が、最大一致のために比較ウィンドウ上、または以下の配列比較ア
ルゴリズムの１つを用いて、もしくはマニュアルアラインメント及び目視による調査で測
定される指定された領域で比較ならびに整列された場合、同一であるアミノ酸残基または
ヌクレオチドを特定の割合有するとき、２つの配列は「実質的に同一」である（例えば、
特定の領域にわたって、または特定されていない場合、全配列にわたって６０％同一、任
意に７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９
％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９
％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、また
は９９％同一）。任意に、該同一性は、少なくとも長さ約５０ヌクレオチド（または１０
アミノ酸）の領域にわたって、またはより好ましくは、長さ１００〜５００もしくは１０
００以上のヌクレオチド（または２０、５０、２００、もしくはそれ以上のアミノ酸）の
領域にわたって存在する。
配列比較については、通常、１つの配列が参照配列の役割を果たし、これに対して試験
配列が比較される。配列比較アルゴリズムを用いる場合、試験配列及び参照配列をコンピ
ュータに入力し、必要に応じてサブ配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムのパ
ラメータを指定する。デフォルトのプログラムパラメータを用いてもよいし、別のパラメ
ータを指定してもよい。該配列比較アルゴリズムは、その後、該プログラムパラメータに
基づいて、該参照配列に対する該試験配列の配列同一性率を計算する。比較のための配列
のアラインメント方法は、当技術分野で周知である。比較のための配列の最適なアライン
メントは、例えば、局所的相同性アルゴリズムのＳｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ
， （１９７０） Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ． ２：４８２ｃ、相同性アライン
メントアルゴリズムのＮｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ， （１９７０） Ｊ
． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４３、類似法検索のＰｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉ
ｐｍａｎ， （１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ
８５：２４４４、これらアルゴリズムのコンピュータによる実施（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍ
ｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， ５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，ウィスコンシン州マジソ
ンにおいて、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、または、マニ
ュアルアラインメント及び目視による調査（例えば、Ｂｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ．， （２
００３） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ参照）によって行うことができる。配列同一性及び配列類似性率の測定に適したア
ルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これ
らは、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， （１９７７） Ｎｕｃ． Ａｃｉ
ｄｓ Ｒｅｓ． ２５：３３８９−３４０２；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，
（１９９０） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３−４１０に記載されている
。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、国立バイオテクノロジー情報センター（
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍ
ａｔｉｏｎ）によって公開されている。
配列が比較される。配列比較アルゴリズムを用いる場合、試験配列及び参照配列をコンピ
ュータに入力し、必要に応じてサブ配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムのパ
ラメータを指定する。デフォルトのプログラムパラメータを用いてもよいし、別のパラメ
ータを指定してもよい。該配列比較アルゴリズムは、その後、該プログラムパラメータに
基づいて、該参照配列に対する該試験配列の配列同一性率を計算する。比較のための配列
のアラインメント方法は、当技術分野で周知である。比較のための配列の最適なアライン
メントは、例えば、局所的相同性アルゴリズムのＳｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ
， （１９７０） Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ． ２：４８２ｃ、相同性アライン
メントアルゴリズムのＮｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ， （１９７０） Ｊ
． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４３、類似法検索のＰｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉ
ｐｍａｎ， （１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ
８５：２４４４、これらアルゴリズムのコンピュータによる実施（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍ
ｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， ５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，ウィスコンシン州マジソ
ンにおいて、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、または、マニ
ュアルアラインメント及び目視による調査（例えば、Ｂｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ．， （２
００３） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ参照）によって行うことができる。配列同一性及び配列類似性率の測定に適したア
ルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これ
らは、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， （１９７７） Ｎｕｃ． Ａｃｉ
ｄｓ Ｒｅｓ． ２５：３３８９−３４０２；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，
（１９９０） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３−４１０に記載されている
。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、国立バイオテクノロジー情報センター（
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍ
ａｔｉｏｎ）によって公開されている。
１つの態様において、本発明は、機能的に等価な分子を産生する出発抗体またはフラグ
メント（例えば、ｓｃＦｖ）のアミノ酸配列の修飾を企図する。例えば、ＴＦＰに含まれ
る抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインのＶＨまたはＶＬ、例えば、ｓｃＦｖは、該
抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖの出発ＶＨまたはＶＬフレームワーク領域の
少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８
％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８
％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８
％、９９％の同一性を保持するように修飾され得る。本発明は、全ＴＦＰ構築物の修飾、
例えば、機能的に等価な分子を産生するための該ＴＦＰ構築物の様々なドメインの１つ以
上のアミノ酸配列の修飾を企図する。該ＴＦＰ構築物は、出発ＴＦＰ構築物の少なくとも
約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％
、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
の同一性を保持するように修飾され得る。
メント（例えば、ｓｃＦｖ）のアミノ酸配列の修飾を企図する。例えば、ＴＦＰに含まれ
る抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインのＶＨまたはＶＬ、例えば、ｓｃＦｖは、該
抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖの出発ＶＨまたはＶＬフレームワーク領域の
少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８
％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８
％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８
％、９９％の同一性を保持するように修飾され得る。本発明は、全ＴＦＰ構築物の修飾、
例えば、機能的に等価な分子を産生するための該ＴＦＰ構築物の様々なドメインの１つ以
上のアミノ酸配列の修飾を企図する。該ＴＦＰ構築物は、出発ＴＦＰ構築物の少なくとも
約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％
、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
の同一性を保持するように修飾され得る。
細胞外ドメイン
細胞外ドメインは、天然または組み換え起源のいずれかから誘導され得る。該起源が天
然の場合、該ドメインは、任意のタンパク質由来でよいが、具体的には膜結合または膜貫
通タンパク質以外である。１つの態様において、該細胞外ドメインは、該膜貫通ドメイン
と会合することが可能である。本発明における特定の用途の細胞外ドメインは、例えば、
Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、もしくはゼータ鎖、またはＣＤ３イプシロン、ＣＤ３
ガンマ、もしくはＣＤ３デルタ、または別の実施形態では、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ４
、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ
８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも細胞外領域（複数可
）を含み得る。
細胞外ドメインは、天然または組み換え起源のいずれかから誘導され得る。該起源が天
然の場合、該ドメインは、任意のタンパク質由来でよいが、具体的には膜結合または膜貫
通タンパク質以外である。１つの態様において、該細胞外ドメインは、該膜貫通ドメイン
と会合することが可能である。本発明における特定の用途の細胞外ドメインは、例えば、
Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、もしくはゼータ鎖、またはＣＤ３イプシロン、ＣＤ３
ガンマ、もしくはＣＤ３デルタ、または別の実施形態では、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ４
、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ
８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも細胞外領域（複数可
）を含み得る。
膜貫通ドメイン
一般に、ＴＦＰ配列は、単一のゲノム配列によってコードされる細胞外ドメイン及び膜
貫通ドメインを含む。別の実施形態では、ＴＦＰは、該ＴＦＰの細胞外ドメインに対して
異種の膜貫通ドメインを含むように設計され得る。膜貫通ドメインは、該膜貫通領域に隣
接した１つ以上のさらなるアミノ酸、例えば、該膜貫通が由来したタンパク質の細胞外領
域に会合した１つ以上のアミノ酸（例えば、該細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７
、８、９、１０、または１５までのアミノ酸）及び／または該膜貫通タンパク質が由来す
るタンパク質の細胞内領域と会合した１つ以上のさらなるアミノ酸（例えば、該細胞内領
域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１５までのアミノ酸）を含み得
る。１つの態様において、該膜貫通ドメインは、該ＴＦＰの他のドメインの１つと会合し
ているものであり、使用される。いくつかの例では、該膜貫通ドメインは、かかるドメイ
ンが同じまたは異なる膜表面タンパク質の膜貫通ドメインに結合しないように、例えば、
受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にするために、選択またはアミノ酸置
換で修飾され得る。１つの態様において、該膜貫通ドメインは、ＴＦＰ−Ｔ細胞表面の別
のＴＦＰとホモ二量化することが可能である。異なる態様において、該膜貫通ドメインの
アミノ酸配列は、同じＴＦＰに存在する天然の結合パートナーの結合ドメインとの相互作
用を最小にするために修飾または置換され得る。
一般に、ＴＦＰ配列は、単一のゲノム配列によってコードされる細胞外ドメイン及び膜
貫通ドメインを含む。別の実施形態では、ＴＦＰは、該ＴＦＰの細胞外ドメインに対して
異種の膜貫通ドメインを含むように設計され得る。膜貫通ドメインは、該膜貫通領域に隣
接した１つ以上のさらなるアミノ酸、例えば、該膜貫通が由来したタンパク質の細胞外領
域に会合した１つ以上のアミノ酸（例えば、該細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７
、８、９、１０、または１５までのアミノ酸）及び／または該膜貫通タンパク質が由来す
るタンパク質の細胞内領域と会合した１つ以上のさらなるアミノ酸（例えば、該細胞内領
域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１５までのアミノ酸）を含み得
る。１つの態様において、該膜貫通ドメインは、該ＴＦＰの他のドメインの１つと会合し
ているものであり、使用される。いくつかの例では、該膜貫通ドメインは、かかるドメイ
ンが同じまたは異なる膜表面タンパク質の膜貫通ドメインに結合しないように、例えば、
受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にするために、選択またはアミノ酸置
換で修飾され得る。１つの態様において、該膜貫通ドメインは、ＴＦＰ−Ｔ細胞表面の別
のＴＦＰとホモ二量化することが可能である。異なる態様において、該膜貫通ドメインの
アミノ酸配列は、同じＴＦＰに存在する天然の結合パートナーの結合ドメインとの相互作
用を最小にするために修飾または置換され得る。
該膜貫通ドメインは、天然または組み換え起源のいずれかから誘導され得る。該起源が
天然の場合、該ドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質由来でよい。１つの態
様において、該膜貫通ドメインは、該ＴＦＰが標的に結合している場合はいつでも、該細
胞内ドメイン（複数可）にシグナル伝達することが可能である。本発明において、特定の
用途の膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、もしくはゼータ鎖
、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６
、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１
３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域（複数可）を含み得る。
天然の場合、該ドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質由来でよい。１つの態
様において、該膜貫通ドメインは、該ＴＦＰが標的に結合している場合はいつでも、該細
胞内ドメイン（複数可）にシグナル伝達することが可能である。本発明において、特定の
用途の膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、もしくはゼータ鎖
、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６
、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１
３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域（複数可）を含み得る。
いくつかの例では、該膜貫通ドメインは、ＴＦＰの細胞外領域、例えば、ＴＦＰの抗原
結合ドメインに、ヒンジ、例えば、ヒトタンパク質由来のヒンジを介して取り付けること
ができる。例えば、１つの実施形態では、該ヒンジは、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）のヒ
ンジ、例えば、ＩｇＧ４のヒンジ、またはＣＤ８ａのヒンジであり得る。
結合ドメインに、ヒンジ、例えば、ヒトタンパク質由来のヒンジを介して取り付けること
ができる。例えば、１つの実施形態では、該ヒンジは、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）のヒ
ンジ、例えば、ＩｇＧ４のヒンジ、またはＣＤ８ａのヒンジであり得る。
リンカー
任意に、長さ２〜１０アミノ酸の短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、ＴＦＰの
膜貫通ドメインと細胞質領域間の結合を形成し得る。グリシン−セリンダブレットは、特
に適切なリンカーを提供する。例えば、１つの態様において、該リンカーはＧＧＧＧＳＧ
ＧＧＧＳ（配列番号３）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該リンカーは
、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣ（配列番号４）のヌ
クレオチド配列によってコードされる。
任意に、長さ２〜１０アミノ酸の短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、ＴＦＰの
膜貫通ドメインと細胞質領域間の結合を形成し得る。グリシン−セリンダブレットは、特
に適切なリンカーを提供する。例えば、１つの態様において、該リンカーはＧＧＧＧＳＧ
ＧＧＧＳ（配列番号３）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該リンカーは
、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣ（配列番号４）のヌ
クレオチド配列によってコードされる。
細胞質ドメイン
ＴＦＰの細胞質ドメインは、該ＴＦＰがＣＤ３ガンマ、デルタ、またはイプシロンポリ
ペプチドを含む場合、細胞内シグナル伝達ドメインを含むことができる。すなわち、ＴＣ
Ｒアルファ及びＴＣＲベータサブユニットは、一般にシグナル伝達ドメインを欠いている
。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般に、該ＴＦＰが導入されている免疫細胞の少なく
とも１つの正常なエフェクター機能の活性化に関与する。用語「エフェクター機能」は、
細胞の特殊な機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性またはサ
イトカインの分泌を含めたヘルパー活性であり得る。従って、用語「細胞内シグナル伝達
ドメイン」は、該エフェクター機能のシグナルを伝達し、該細胞に特殊機能を行うように
指示するタンパク質の部分を指す。通常全細胞内シグナル伝達ドメインが使用され得るが
、多くの場合、全鎖を使用する必要はない。該細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が
用いられる限りでは、かかる切断部分は、それがエフェクター機能のシグナルを伝達する
限り、無傷の鎖の代わりに用いることができる。細胞内シグナル伝達ドメインという用語
は、従って、該エフェクター機能のシグナルを伝達するのに十分な該細胞内シグナル伝達
ドメインの任意の切断部分を含めることを意図されている。
ＴＦＰの細胞質ドメインは、該ＴＦＰがＣＤ３ガンマ、デルタ、またはイプシロンポリ
ペプチドを含む場合、細胞内シグナル伝達ドメインを含むことができる。すなわち、ＴＣ
Ｒアルファ及びＴＣＲベータサブユニットは、一般にシグナル伝達ドメインを欠いている
。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般に、該ＴＦＰが導入されている免疫細胞の少なく
とも１つの正常なエフェクター機能の活性化に関与する。用語「エフェクター機能」は、
細胞の特殊な機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性またはサ
イトカインの分泌を含めたヘルパー活性であり得る。従って、用語「細胞内シグナル伝達
ドメイン」は、該エフェクター機能のシグナルを伝達し、該細胞に特殊機能を行うように
指示するタンパク質の部分を指す。通常全細胞内シグナル伝達ドメインが使用され得るが
、多くの場合、全鎖を使用する必要はない。該細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が
用いられる限りでは、かかる切断部分は、それがエフェクター機能のシグナルを伝達する
限り、無傷の鎖の代わりに用いることができる。細胞内シグナル伝達ドメインという用語
は、従って、該エフェクター機能のシグナルを伝達するのに十分な該細胞内シグナル伝達
ドメインの任意の切断部分を含めることを意図されている。
本発明のＴＦＰに用いる細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、同時に作用して、
抗原受容体係合後にシグナル伝達を開始するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及び共受容体の細胞
質配列、ならびにこれらの配列の任意の誘導体または変異体及び同じ機能を有する任意の
組み換え配列が挙げられる。
抗原受容体係合後にシグナル伝達を開始するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及び共受容体の細胞
質配列、ならびにこれらの配列の任意の誘導体または変異体及び同じ機能を有する任意の
組み換え配列が挙げられる。
ＴＣＲのみを介して生成されるシグナルは、ナイーブＴ細胞の完全な活性化には不十分
であること、ならびに二次及び／または共刺激シグナルが必要であることが知られている
。従って、ナイーブＴ細胞の活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列、
すなわち、ＴＣＲを介して抗原依存性の一次活性化を開始するもの（一次細胞内シグナル
伝達ドメイン）、及び、抗原非依存的様式で作用し、二次または共刺激シグナルを与える
もの（二次細胞質ドメイン、例えば、共刺激ドメイン）によって媒介されると言える。
であること、ならびに二次及び／または共刺激シグナルが必要であることが知られている
。従って、ナイーブＴ細胞の活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列、
すなわち、ＴＣＲを介して抗原依存性の一次活性化を開始するもの（一次細胞内シグナル
伝達ドメイン）、及び、抗原非依存的様式で作用し、二次または共刺激シグナルを与える
もの（二次細胞質ドメイン、例えば、共刺激ドメイン）によって媒介されると言える。
一次シグナル伝達ドメインは、促進的方法または抑制的方法のいずれかで、ＴＣＲ複合
体の一次活性化を調節する。促進的な方法で作用する一次細胞内シグナル伝達ドメインは
、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）として知られるシグナル伝達モチーフを
含み得る。
体の一次活性化を調節する。促進的な方法で作用する一次細胞内シグナル伝達ドメインは
、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）として知られるシグナル伝達モチーフを
含み得る。
本発明において特に用いられる一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むＩＴＡＭの例と
しては、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、Ｃ
Ｄ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄのものが
挙げられる。１つの実施形態では、本発明のＴＦＰは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例
えば、ＣＤ３イプシロンの一次シグナル伝達ドメインを含む。１つの実施形態では、一次
シグナル伝達ドメインは、変性ＩＴＡＭドメイン、例えば、天然のＩＴＡＭドメインと比
較して、活性が変化（例えば、増加または減少）している変異ＩＴＡＭドメインを含む。
１つの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、変性ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナ
ル伝達ドメイン、例えば、最適化された及び／または切断されたＩＴＡＭ含有一次細胞内
シグナル伝達ドメインを含む。実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ
、３つ、４つ、またはそれより多いＩＴＡＭモチーフを含む。
しては、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、Ｃ
Ｄ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄのものが
挙げられる。１つの実施形態では、本発明のＴＦＰは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例
えば、ＣＤ３イプシロンの一次シグナル伝達ドメインを含む。１つの実施形態では、一次
シグナル伝達ドメインは、変性ＩＴＡＭドメイン、例えば、天然のＩＴＡＭドメインと比
較して、活性が変化（例えば、増加または減少）している変異ＩＴＡＭドメインを含む。
１つの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、変性ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナ
ル伝達ドメイン、例えば、最適化された及び／または切断されたＩＴＡＭ含有一次細胞内
シグナル伝達ドメインを含む。実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ
、３つ、４つ、またはそれより多いＩＴＡＭモチーフを含む。
ＴＦＰの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをそれ自
体で含むことも、本発明のＴＦＰとの関連で有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達
ドメイン（複数可）と組み合わせることもできる。例えば、該ＴＦＰの細胞内シグナル伝
達ドメインは、ＣＤ３イプシロン鎖部分及び共刺激シグナル伝達ドメインを含むことがで
きる。
該共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＴＦＰの部分を指
す。共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な反応に必要とされる、抗原受容体ま
たはそのリガンド以外の細胞表面分子である。かかる分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ
２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ１、ＩＣＯＳ、
リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ
７−Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンド等が挙げられる。例えば、ＣＤ２７
の共刺激は、ヒトＴＦＰ−Ｔ細胞のインビトロでの増殖、エフェクター機能、及び生存率
を向上させることが明らかにされており、インビボでのヒトＴ細胞の持続及び抗腫瘍活性
を増大させる（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｂｌｏｏｄ． ２０１２；１１９（３）：６９
６−７０６）。
体で含むことも、本発明のＴＦＰとの関連で有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達
ドメイン（複数可）と組み合わせることもできる。例えば、該ＴＦＰの細胞内シグナル伝
達ドメインは、ＣＤ３イプシロン鎖部分及び共刺激シグナル伝達ドメインを含むことがで
きる。
該共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＴＦＰの部分を指
す。共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な反応に必要とされる、抗原受容体ま
たはそのリガンド以外の細胞表面分子である。かかる分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ
２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ１、ＩＣＯＳ、
リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ
７−Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンド等が挙げられる。例えば、ＣＤ２７
の共刺激は、ヒトＴＦＰ−Ｔ細胞のインビトロでの増殖、エフェクター機能、及び生存率
を向上させることが明らかにされており、インビボでのヒトＴ細胞の持続及び抗腫瘍活性
を増大させる（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｂｌｏｏｄ． ２０１２；１１９（３）：６９
６−７０６）。
本発明のＴＦＰの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列は、ランダムまたは特定の順
序で互いに連結されている場合がある。任意に、例えば、長さ２〜１０アミノ酸（例えば
、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）の短いオリゴまたはポリペプ
チドリンカーは細胞内シグナル伝達配列間の結合を形成し得る。
序で互いに連結されている場合がある。任意に、例えば、長さ２〜１０アミノ酸（例えば
、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）の短いオリゴまたはポリペプ
チドリンカーは細胞内シグナル伝達配列間の結合を形成し得る。
１つの実施形態では、グリシン−セリンダブレットが適切なリンカーとして使用され得
る。１つの実施形態では、単一のアミノ酸，例えば、アラニン、グリシンが適切なリンカ
ーとして使用され得る。
る。１つの実施形態では、単一のアミノ酸，例えば、アラニン、グリシンが適切なリンカ
ーとして使用され得る。
１つの態様において、本明細書に記載のＴＦＰ発現細胞は、さらに、第二のＴＦＰ、例
えば、異なる抗原結合ドメイン、例えば、同じ標的（ＣＤ１９もしくはＢＣＭＡ）または
異なる標的（例えば、ＣＤ１２３）に対するものを含む第二のＴＦＰを含むことができる
。１つの実施形態では、該ＴＦＰ発現細胞が２つ以上の異なるＴＦＰを含む場合、該異な
るＴＦＰの抗原結合ドメインは、該抗原結合ドメインが互いに相互作用しないようにもな
り得る。例えば、第一及び第二のＴＦＰを発現する細胞は、第一のＴＦＰの抗原結合ドメ
インを例えば、フラグメント、例えば、ｓｃＦｖとして有することができ、これは、第二
のＴＦＰの抗原結合ドメインと会合を形成しないものであり、例えば、該第二のＴＦＰの
抗原結合ドメインはＶＨＨである。
えば、異なる抗原結合ドメイン、例えば、同じ標的（ＣＤ１９もしくはＢＣＭＡ）または
異なる標的（例えば、ＣＤ１２３）に対するものを含む第二のＴＦＰを含むことができる
。１つの実施形態では、該ＴＦＰ発現細胞が２つ以上の異なるＴＦＰを含む場合、該異な
るＴＦＰの抗原結合ドメインは、該抗原結合ドメインが互いに相互作用しないようにもな
り得る。例えば、第一及び第二のＴＦＰを発現する細胞は、第一のＴＦＰの抗原結合ドメ
インを例えば、フラグメント、例えば、ｓｃＦｖとして有することができ、これは、第二
のＴＦＰの抗原結合ドメインと会合を形成しないものであり、例えば、該第二のＴＦＰの
抗原結合ドメインはＶＨＨである。
別の態様では、本明細書に記載のＴＦＰ発現細胞は、さらに、別の作用物質、例えば、
ＴＦＰ発現細胞の活性を高める作用物質を発現することができる。例えば、１つの実施形
態では、該作用物質は、抑制分子を阻害する作用物質でありうる。抑制分子、例えば、Ｐ
Ｄ１は、いくつかの実施形態では、ＴＦＰ発現細胞の免疫エフェクター反応の開始能力を
弱める場合がある。抑制分子の例としては、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３
、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、及
びＴＧＦＲベータが挙げられる。１つの実施形態では、抑制分子を阻害する該作用物質は
、第一のポリペプチド、例えば、陽性シグナルを細胞、例えば、本明細書に記載の細胞内
シグナル伝達ドメインに与える第二のポリペプチドに会合した抑制分子を含む。１つの実
施形態では、該作用物質は、第一のポリペプチド、例えば、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ
４、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ３、２Ｂ４、及びＴＩＧＩＴ、またはこ
れらのいずれかのフラグメント（例えば、これらのいずれかの細胞外ドメインの少なくと
も一部）等の抑制分子のもの、ならびに、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン
（例えば、共刺激ドメイン（例えば、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、またはＣＤ２８、例えば、
本明細書に記載の）及び／または一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の
ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む）である第二のポリペプチドを含む。１つの実
施形態では、該作用物質は、ＰＤ１の第一のポリペプチドまたはそのフラグメント（例え
ば、ＰＤ１の細胞外ドメインの少なくとも一部）、及び本明細書に記載の細胞内シグナル
伝達ドメインの第二のポリペプチド（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ド
メイン及び／または本明細書に記載のＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン）を含む。ＰＤ
１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミ
リーの抑制性メンバーである。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞、及び骨髄細胞上で発
現される（Ａｇａｔａ ｅｔ ａｌ． １９９６ Ｉｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ８：７６
５−７５）。ＰＤ１に対する２つのリガンド、すなわち、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２が、
ＰＤ１への結合時、Ｔ細胞の活性化を下方制御することが示された（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅ
ｔ ａｌ． ２０００ Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａ
ｎ ｅｔ ａｌ． ２００１ Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ
ｅｔ ａｌ． ２００２ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：６３４−４３）。ＰＤ
−Ｌ１は、ヒトのがんに豊富に含まれている（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ． ２００３ Ｊ
Ｍｏｌ Ｍｅｄ ８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ． ２００５ Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ
ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １０：５０９４）。免疫
抑制は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１の局所的相互作用を阻害することによって覆され得る。
ＴＦＰ発現細胞の活性を高める作用物質を発現することができる。例えば、１つの実施形
態では、該作用物質は、抑制分子を阻害する作用物質でありうる。抑制分子、例えば、Ｐ
Ｄ１は、いくつかの実施形態では、ＴＦＰ発現細胞の免疫エフェクター反応の開始能力を
弱める場合がある。抑制分子の例としては、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３
、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、及
びＴＧＦＲベータが挙げられる。１つの実施形態では、抑制分子を阻害する該作用物質は
、第一のポリペプチド、例えば、陽性シグナルを細胞、例えば、本明細書に記載の細胞内
シグナル伝達ドメインに与える第二のポリペプチドに会合した抑制分子を含む。１つの実
施形態では、該作用物質は、第一のポリペプチド、例えば、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ
４、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ３、２Ｂ４、及びＴＩＧＩＴ、またはこ
れらのいずれかのフラグメント（例えば、これらのいずれかの細胞外ドメインの少なくと
も一部）等の抑制分子のもの、ならびに、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン
（例えば、共刺激ドメイン（例えば、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、またはＣＤ２８、例えば、
本明細書に記載の）及び／または一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の
ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む）である第二のポリペプチドを含む。１つの実
施形態では、該作用物質は、ＰＤ１の第一のポリペプチドまたはそのフラグメント（例え
ば、ＰＤ１の細胞外ドメインの少なくとも一部）、及び本明細書に記載の細胞内シグナル
伝達ドメインの第二のポリペプチド（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ド
メイン及び／または本明細書に記載のＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン）を含む。ＰＤ
１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミ
リーの抑制性メンバーである。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞、及び骨髄細胞上で発
現される（Ａｇａｔａ ｅｔ ａｌ． １９９６ Ｉｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ８：７６
５−７５）。ＰＤ１に対する２つのリガンド、すなわち、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２が、
ＰＤ１への結合時、Ｔ細胞の活性化を下方制御することが示された（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅ
ｔ ａｌ． ２０００ Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａ
ｎ ｅｔ ａｌ． ２００１ Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ
ｅｔ ａｌ． ２００２ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：６３４−４３）。ＰＤ
−Ｌ１は、ヒトのがんに豊富に含まれている（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ． ２００３ Ｊ
Ｍｏｌ Ｍｅｄ ８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ． ２００５ Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ
ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １０：５０９４）。免疫
抑制は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１の局所的相互作用を阻害することによって覆され得る。
１つの実施形態では、該作用物質は、抑制分子の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み、例
えば、プログラム死１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｄｅａｔｈ １）（ＰＤ１）は、膜貫通
ドメインならびに任意に細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、４１ＢＢ及びＣＤ３ゼー
タと融合することができる（本明細書ではＰＤ１ ＴＦＰとも呼ばれる）。１つの実施形
態では、該ＰＤ１ ＴＦＰは、本明細書に記載の抗ＣＤ１９ ＴＦＰと組み合わせて使用
された場合、Ｔ細胞の持続性を向上させる。１つの実施形態では、ＴＦＰは、ＰＤ １の
細胞外ドメインを含むＰＤ１ ＴＦＰである。選択的に、抗体または抗体フラグメント、
例えば、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）またはプログラム死リガンド２（ＰＤ−
Ｌ２）に特異的に結合するｓｃＦｖを含むＴＦＰを提供する。
えば、プログラム死１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｄｅａｔｈ １）（ＰＤ１）は、膜貫通
ドメインならびに任意に細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、４１ＢＢ及びＣＤ３ゼー
タと融合することができる（本明細書ではＰＤ１ ＴＦＰとも呼ばれる）。１つの実施形
態では、該ＰＤ１ ＴＦＰは、本明細書に記載の抗ＣＤ１９ ＴＦＰと組み合わせて使用
された場合、Ｔ細胞の持続性を向上させる。１つの実施形態では、ＴＦＰは、ＰＤ １の
細胞外ドメインを含むＰＤ１ ＴＦＰである。選択的に、抗体または抗体フラグメント、
例えば、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）またはプログラム死リガンド２（ＰＤ−
Ｌ２）に特異的に結合するｓｃＦｖを含むＴＦＰを提供する。
別の態様において、本発明は、ＴＦＰ発現Ｔ細胞、例えば、ＴＦＰ−Ｔ細胞の集団を提
供する。いくつかの実施形態では、該ＴＦＰ発現Ｔ細胞の集団は、異なるＴＦＰを発現す
る細胞の混合物を含む、例えば、１つの実施形態では、該ＴＦＰ−Ｔ細胞の集団は、本明
細書に記載の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有するＴＦＰを発現する第一の
細胞、及び異なる抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、該第一の細胞によ
って発現されるＴＦＰ内の抗ＣＤ１９結合ドメインとは異なる本明細書に記載の抗ＣＤ１
９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含むことができる。別の例として、該ＴＦＰ発現細胞
の集団は、抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、本明細書に記載のものを
含むＴＦＰを発現する第一の細胞、及びＣＤ１９やＢＣＭＡ以外の標的（例えば、別の腫
瘍関連抗原）に対する抗原結合ドメインを含むＴＦＰを発現する第二の細胞を含むことが
できる。
供する。いくつかの実施形態では、該ＴＦＰ発現Ｔ細胞の集団は、異なるＴＦＰを発現す
る細胞の混合物を含む、例えば、１つの実施形態では、該ＴＦＰ−Ｔ細胞の集団は、本明
細書に記載の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有するＴＦＰを発現する第一の
細胞、及び異なる抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、該第一の細胞によ
って発現されるＴＦＰ内の抗ＣＤ１９結合ドメインとは異なる本明細書に記載の抗ＣＤ１
９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含むことができる。別の例として、該ＴＦＰ発現細胞
の集団は、抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば、本明細書に記載のものを
含むＴＦＰを発現する第一の細胞、及びＣＤ１９やＢＣＭＡ以外の標的（例えば、別の腫
瘍関連抗原）に対する抗原結合ドメインを含むＴＦＰを発現する第二の細胞を含むことが
できる。
別の態様において、本発明は、当該集団内の少なくとも１つの細胞が本明細書に記載の
抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有するＴＦＰを発現する細胞の集団、及び別
の作用物質、例えば、ＴＦＰ発現細胞の活性を高める作用物質を発現する第二の細胞を提
供する。例えば、１つの実施形態では、該作用物質は、抑制分子を阻害する作用物質であ
り得る。抑制分子は、例えば、いくつかの実施形態では、ＴＦＰ発現細胞の免疫エフェク
ター反応の開始能力を弱める場合がある。抑制分子の例としては、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、
ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、Ｌ
ＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、及びＴＧＦＲベータが挙げられる。１つの実施形態では
、抑制分子を阻害する該作用物質は、第一のポリペプチド、例えば、陽性シグナルを細胞
、例えば、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに与える第二のポリペプチドに
会合した抑制分子を含む。
抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有するＴＦＰを発現する細胞の集団、及び別
の作用物質、例えば、ＴＦＰ発現細胞の活性を高める作用物質を発現する第二の細胞を提
供する。例えば、１つの実施形態では、該作用物質は、抑制分子を阻害する作用物質であ
り得る。抑制分子は、例えば、いくつかの実施形態では、ＴＦＰ発現細胞の免疫エフェク
ター反応の開始能力を弱める場合がある。抑制分子の例としては、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、
ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、Ｌ
ＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、及びＴＧＦＲベータが挙げられる。１つの実施形態では
、抑制分子を阻害する該作用物質は、第一のポリペプチド、例えば、陽性シグナルを細胞
、例えば、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに与える第二のポリペプチドに
会合した抑制分子を含む。
ＴＦＰをコードするインビトロで転写されたＲＮＡの産生方法を本明細書に開示する。
また、本発明は、細胞に直接トランスフェクトすることができるＴＦＰをコードするＲＮ
Ａ構築物を含む。トランスフェクションに用いるｍＲＮＡの生成方法は、特別に設計され
たプライマーでの鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）に続いてポリＡ付加を含んで、３’及
び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ、及び／または配列内リボソーム進入部
位（ＩＲＥＳ）、発現される核酸、及び通常は５０〜２０００塩基の長さのポリＡ尾部を
含む構築物を産生することができる。このようにして産生されたＲＮＡは、異なる種類の
細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。１つの態様において、該鋳型は、Ｔ
ＦＰに対する配列を含む。
また、本発明は、細胞に直接トランスフェクトすることができるＴＦＰをコードするＲＮ
Ａ構築物を含む。トランスフェクションに用いるｍＲＮＡの生成方法は、特別に設計され
たプライマーでの鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）に続いてポリＡ付加を含んで、３’及
び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ、及び／または配列内リボソーム進入部
位（ＩＲＥＳ）、発現される核酸、及び通常は５０〜２０００塩基の長さのポリＡ尾部を
含む構築物を産生することができる。このようにして産生されたＲＮＡは、異なる種類の
細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。１つの態様において、該鋳型は、Ｔ
ＦＰに対する配列を含む。
１つの態様において、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰは、メッセンジャーＲＮ
Ａ（ｍＲＮＡ）によってコードされる。１つの態様において、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣ
ＭＡ ＴＦＰをコードするｍＲＮＡは、ＴＦＰ−Ｔ細胞の産生のため、Ｔ細胞に導入され
る。１つの実施形態では、該インビトロで転写されたＲＮＡ ＴＦＰは、一過性トランス
フェクションとして細胞に導入され得る。該ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）
で生成される鋳型を用いたインビトロ転写によって産生される。任意の起源由来の目的の
ＤＮＡは、ＰＣＲによってインビトロｍＲＮＡ合成用の鋳型に、適切なプライマー及びＲ
ＮＡポリメラーゼを用いて直接変換することができる。該ＤＮＡの起源は、例えば、ゲノ
ムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列、または任意
の他の適切なＤＮＡ起源でよい。インビトロ転写用の所望の鋳型は、本発明のＴＦＰであ
る。１つの実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、オープンリーディングフレーム
を含む。該ＤＮＡは、有機体のゲノム由来の天然ＤＮＡ配列由来でよい。１つの実施形態
では、該核酸は、５’及び／または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の一部または全部を含み得
る。該核酸はエキソン及びイントロンを含み得る。１つの実施形態では、ＰＣＲに使用さ
れるＤＮＡは、ヒト核酸配列である。別の実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、
５’及び３’ＵＴＲを含むヒト核酸配列である。該ＤＮＡは、代替的に、天然に存在する
有機体で通常発現されない人工ＤＮＡ配列でよい。例示的な人口ＤＮＡ配列は、融合タン
パク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するために合わせて連結される
遺伝子の部分を含むものである。合わせて連結されるＤＮＡの該部分は、単一の有機体由
来でも、複数の有機体由来でもよい。
Ａ（ｍＲＮＡ）によってコードされる。１つの態様において、該抗ＣＤ１９または抗ＢＣ
ＭＡ ＴＦＰをコードするｍＲＮＡは、ＴＦＰ−Ｔ細胞の産生のため、Ｔ細胞に導入され
る。１つの実施形態では、該インビトロで転写されたＲＮＡ ＴＦＰは、一過性トランス
フェクションとして細胞に導入され得る。該ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）
で生成される鋳型を用いたインビトロ転写によって産生される。任意の起源由来の目的の
ＤＮＡは、ＰＣＲによってインビトロｍＲＮＡ合成用の鋳型に、適切なプライマー及びＲ
ＮＡポリメラーゼを用いて直接変換することができる。該ＤＮＡの起源は、例えば、ゲノ
ムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列、または任意
の他の適切なＤＮＡ起源でよい。インビトロ転写用の所望の鋳型は、本発明のＴＦＰであ
る。１つの実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、オープンリーディングフレーム
を含む。該ＤＮＡは、有機体のゲノム由来の天然ＤＮＡ配列由来でよい。１つの実施形態
では、該核酸は、５’及び／または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の一部または全部を含み得
る。該核酸はエキソン及びイントロンを含み得る。１つの実施形態では、ＰＣＲに使用さ
れるＤＮＡは、ヒト核酸配列である。別の実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、
５’及び３’ＵＴＲを含むヒト核酸配列である。該ＤＮＡは、代替的に、天然に存在する
有機体で通常発現されない人工ＤＮＡ配列でよい。例示的な人口ＤＮＡ配列は、融合タン
パク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するために合わせて連結される
遺伝子の部分を含むものである。合わせて連結されるＤＮＡの該部分は、単一の有機体由
来でも、複数の有機体由来でもよい。
ＰＣＲを用いて、トランスフェクションに用いられるｍＲＮＡのインビトロ転写用の鋳
型を生成する。ＰＣＲの実施方法は、当技術分野で周知である。ＰＣＲ用のプライマーは
、該ＰＣＲ用の鋳型として用いられるＤＮＡの領域に実質的に相補的な領域を有するよう
に設計される。本明細書で用いられる、「実質的に相補的」とは、プライマー配列におけ
る塩基の大部分もしくはすべてが相補的である、または、１つ以上の塩基が非相補的、も
しくは不一致であるヌクレオチド配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲに用いら
れるアニーリング条件下で、アニーリングまたは目的のＤＮＡ標的とのハイブリッド形成
が可能である。該プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分と実質的に相補的になるように
設計され得る。例えば、該プライマーは、細胞内で通常転写される核酸（オープンリーデ
ィングフレーム）の部分を５’及び３’ＵＴＲを含めて増幅するように設計され得る。ま
た、該プライマーは、目的の特定のドメインをコードする核酸の部分を増幅するように設
計することもできる。１つの実施形態では、該プライマーは、ヒトｃＤＮＡのコード領域
を５’及び３’ＵＴＲのすべてまたは一部を含めて増幅するように設計される。ＰＣＲに
有用なプライマーは、当技術分野で周知の合成方法によって産生され得る。「フォワード
プライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の上流であるＤＮＡ鋳型上のヌクレオチドに実質
的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「上流」は、コード鎖に関し
て増幅されるＤＮＡ配列に対する５の位置を指すために本明細書で用いられる。「リバー
スプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の下流である二本鎖ＤＮＡ鋳型に実質的に相補
的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「下流」は、コード鎖に関して増幅さ
れるＤＮＡ配列に対する３’の位置を指すために本明細書で用いられる。
型を生成する。ＰＣＲの実施方法は、当技術分野で周知である。ＰＣＲ用のプライマーは
、該ＰＣＲ用の鋳型として用いられるＤＮＡの領域に実質的に相補的な領域を有するよう
に設計される。本明細書で用いられる、「実質的に相補的」とは、プライマー配列におけ
る塩基の大部分もしくはすべてが相補的である、または、１つ以上の塩基が非相補的、も
しくは不一致であるヌクレオチド配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲに用いら
れるアニーリング条件下で、アニーリングまたは目的のＤＮＡ標的とのハイブリッド形成
が可能である。該プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分と実質的に相補的になるように
設計され得る。例えば、該プライマーは、細胞内で通常転写される核酸（オープンリーデ
ィングフレーム）の部分を５’及び３’ＵＴＲを含めて増幅するように設計され得る。ま
た、該プライマーは、目的の特定のドメインをコードする核酸の部分を増幅するように設
計することもできる。１つの実施形態では、該プライマーは、ヒトｃＤＮＡのコード領域
を５’及び３’ＵＴＲのすべてまたは一部を含めて増幅するように設計される。ＰＣＲに
有用なプライマーは、当技術分野で周知の合成方法によって産生され得る。「フォワード
プライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の上流であるＤＮＡ鋳型上のヌクレオチドに実質
的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「上流」は、コード鎖に関し
て増幅されるＤＮＡ配列に対する５の位置を指すために本明細書で用いられる。「リバー
スプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の下流である二本鎖ＤＮＡ鋳型に実質的に相補
的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「下流」は、コード鎖に関して増幅さ
れるＤＮＡ配列に対する３’の位置を指すために本明細書で用いられる。
ＰＣＲに有用な任意のＤＮＡポリメラーゼを本明細書に開示の方法に用いることができ
る。当該試薬とポリメラーゼは、複数の供給源から市販されている。
る。当該試薬とポリメラーゼは、複数の供給源から市販されている。
安定性及び／または翻訳効率を促進する能力がある化学構造も用いることができる。該
ＲＮＡは、好ましくは５’及び３’ＵＴＲを有する。１つの実施形態では、該５’ＵＴＲ
は、１〜３０００ヌクレオチドの長さである。コード領域に付加される５’及び３’ＵＴ
Ｒ配列の長さは、当該ＵＴＲの異なる領域にアニーリングするＰＣＲ用のプライマー設計
を含むがこれに限定されない異なる方法によって変更することができる。この方法を用い
て、当業者は、転写されたＲＮＡのトランスフェクションに続いて、最適な翻訳効率を達
成するために必要な５’及び３’ＵＴＲの長さを変更することができる。
ＲＮＡは、好ましくは５’及び３’ＵＴＲを有する。１つの実施形態では、該５’ＵＴＲ
は、１〜３０００ヌクレオチドの長さである。コード領域に付加される５’及び３’ＵＴ
Ｒ配列の長さは、当該ＵＴＲの異なる領域にアニーリングするＰＣＲ用のプライマー設計
を含むがこれに限定されない異なる方法によって変更することができる。この方法を用い
て、当業者は、転写されたＲＮＡのトランスフェクションに続いて、最適な翻訳効率を達
成するために必要な５’及び３’ＵＴＲの長さを変更することができる。
該５’及び３’ＵＴＲは、目的の核酸に対する天然に存在する内因性５’及び３’ＵＴ
Ｒであってよい。別の方法として、目的の核酸にとって内因性でないＵＴＲ配列を、該Ｕ
ＴＲ配列をフォワード及びリバースプライマーに組み込むことによって、または当該鋳型
の任意の他の修飾によって付加することができる。目的の核酸にとって内因性でないＵＴ
Ｒ配列の使用は、該ＲＮＡの安定性及び／または翻訳効率を変更するために有用な場合が
ある。例えば、３’ＵＴＲ配列内のＡＵリッチ領域は、ｍＲＮＡの安定性を弱め得ること
が知られている。従って、３’ＵＴＲは、当技術分野で周知のＵＴＲの特性に基づいて、
転写されたＲＮＡの安定性を高めるように選択または設計され得る。
Ｒであってよい。別の方法として、目的の核酸にとって内因性でないＵＴＲ配列を、該Ｕ
ＴＲ配列をフォワード及びリバースプライマーに組み込むことによって、または当該鋳型
の任意の他の修飾によって付加することができる。目的の核酸にとって内因性でないＵＴ
Ｒ配列の使用は、該ＲＮＡの安定性及び／または翻訳効率を変更するために有用な場合が
ある。例えば、３’ＵＴＲ配列内のＡＵリッチ領域は、ｍＲＮＡの安定性を弱め得ること
が知られている。従って、３’ＵＴＲは、当技術分野で周知のＵＴＲの特性に基づいて、
転写されたＲＮＡの安定性を高めるように選択または設計され得る。
１つの実施形態では、該５’ＵＴＲは、内因性核酸のコザック配列を含み得る。別の方
法として、目的の核酸にとって内因性でない５’ＵＴＲが上記の通りＰＣＲによって付加
される場合、コンセンサスコザック配列は、該５’ＵＴＲ配列の付加によって再設計され
得る。コザック配列は、いくつかのＲＮＡ転写産物の翻訳効率を高めることができるが、
効率的な翻訳を可能にするためにすべてのＲＮＡに必要であるとは思われない。多くのｍ
ＲＮＡに対するコザック配列の必要性は当技術分野で知られている。他の実施形態では、
該５’ＵＴＲは、そのＲＮＡゲノムが細胞内で安定であるＲＮＡウイルスの５’ＵＴＲで
あってよい。他の実施形態では、該３’または５’ＵＴＲに様々なヌクレオチド類似体を
用いて当該ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨げることができる。
法として、目的の核酸にとって内因性でない５’ＵＴＲが上記の通りＰＣＲによって付加
される場合、コンセンサスコザック配列は、該５’ＵＴＲ配列の付加によって再設計され
得る。コザック配列は、いくつかのＲＮＡ転写産物の翻訳効率を高めることができるが、
効率的な翻訳を可能にするためにすべてのＲＮＡに必要であるとは思われない。多くのｍ
ＲＮＡに対するコザック配列の必要性は当技術分野で知られている。他の実施形態では、
該５’ＵＴＲは、そのＲＮＡゲノムが細胞内で安定であるＲＮＡウイルスの５’ＵＴＲで
あってよい。他の実施形態では、該３’または５’ＵＴＲに様々なヌクレオチド類似体を
用いて当該ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨げることができる。
遺伝子クローニングを必要とせずに、ＤＮＡ鋳型からのＲＮＡ合成を可能にするために
、転写プロモーターが転写される配列の上流のＤＮＡ鋳型に取り付けられるべきである。
ＲＮＡポリメラーゼに対するプロモーターとして機能する配列がフォワードプライマーの
５’末端に付加される場合、該ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターは、転写されるオープ
ンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に取り込まれる。１つの好ましい実施形態で
は、該プロモーターは、本明細書の他の箇所に記載されるＴ７ポリメラーゼプロモーター
である。他の有用なプロモーターとしては、Ｔ３及びＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼプロモ
ーターが挙げられるがこれらに限定されない。Ｔ７、Ｔ３、及びＳＰ６プロモーターに対
するコンセンサスヌクレオチド配列は、当技術分野で知られている。
、転写プロモーターが転写される配列の上流のＤＮＡ鋳型に取り付けられるべきである。
ＲＮＡポリメラーゼに対するプロモーターとして機能する配列がフォワードプライマーの
５’末端に付加される場合、該ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターは、転写されるオープ
ンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に取り込まれる。１つの好ましい実施形態で
は、該プロモーターは、本明細書の他の箇所に記載されるＴ７ポリメラーゼプロモーター
である。他の有用なプロモーターとしては、Ｔ３及びＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼプロモ
ーターが挙げられるがこれらに限定されない。Ｔ７、Ｔ３、及びＳＰ６プロモーターに対
するコンセンサスヌクレオチド配列は、当技術分野で知られている。
好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、５’末端のキャップ及び３’ポリ（Ａ）尾部の両
方を有し、これらは細胞内でのｍＲＮＡのリボソーム結合、転写の開始、及び安定性を決
定する。環状ＤＮＡ鋳型、例えば、プラスミドＤＮＡ上で、ＲＮＡポリメラーゼは、真核
細胞での発現に適さない長い鎖状体産物を産生する。３’ＵＴＲの末端で線形化したプラ
スミドＤＮＡの転写で、通常のサイズのｍＲＮＡができるが、これが転写後にポリアデニ
ル化されても、真核生物のトランスフェクションには有効ではない。
方を有し、これらは細胞内でのｍＲＮＡのリボソーム結合、転写の開始、及び安定性を決
定する。環状ＤＮＡ鋳型、例えば、プラスミドＤＮＡ上で、ＲＮＡポリメラーゼは、真核
細胞での発現に適さない長い鎖状体産物を産生する。３’ＵＴＲの末端で線形化したプラ
スミドＤＮＡの転写で、通常のサイズのｍＲＮＡができるが、これが転写後にポリアデニ
ル化されても、真核生物のトランスフェクションには有効ではない。
線状ＤＮＡ鋳型上で、ファージＴ７ ＲＮＡポリメラーゼは、該転写産物の３’末端を
該鋳型の最後の塩基を越えて延長することができる（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ ａｎｄ Ｍｉ
ｅｒｅｎｄｏｒｆ， Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， １３：６２２３−３６ （１９
８５）；Ｎａｃｈｅｖａ ａｎｄ Ｂｅｒｚａｌ−Ｈｅｒｒａｎｚ， Ｅｕｒ． Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２７０：１４８５−６５ （２００３）。
該鋳型の最後の塩基を越えて延長することができる（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ ａｎｄ Ｍｉ
ｅｒｅｎｄｏｒｆ， Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， １３：６２２３−３６ （１９
８５）；Ｎａｃｈｅｖａ ａｎｄ Ｂｅｒｚａｌ−Ｈｅｒｒａｎｚ， Ｅｕｒ． Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２７０：１４８５−６５ （２００３）。
ＤＮＡ鋳型内へのポリＡ／Ｔストレッチの従来の統合法は、分子クローニングである。
しかしながら、プラスミドＤＮＡ内に統合されたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミドの不安定
性の原因となるため、細菌の細胞由来のプラスミドＤＮＡ鋳型は、多くの場合、欠失及び
他の異常によって高度に不純である。このことが、クローニング法を面倒で時間がかかる
だけでなく、しばしば信頼できないものにする。そのようなわけで、クローニングするこ
となくポリＡ／Ｔ３’ストレッチを備えたＤＮＡ鋳型の構築を可能にする方法が非常に望
ましい。
しかしながら、プラスミドＤＮＡ内に統合されたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミドの不安定
性の原因となるため、細菌の細胞由来のプラスミドＤＮＡ鋳型は、多くの場合、欠失及び
他の異常によって高度に不純である。このことが、クローニング法を面倒で時間がかかる
だけでなく、しばしば信頼できないものにする。そのようなわけで、クローニングするこ
となくポリＡ／Ｔ３’ストレッチを備えたＤＮＡ鋳型の構築を可能にする方法が非常に望
ましい。
転写ＤＮＡ鋳型のポリＡ／Ｔセグメントは、ポリＴ尾部、例えば、１００Ｔ尾部（サイ
ズは５０〜５０００Ｔでよい）を含むリバースプライマーを用いてＰＣＲの過程で、また
は、ＤＮＡ連結反応もしくはインビトロ組み換えを含むがこれに限定されない任意の他の
方法によるＰＣＲ後に産生され得る。ポリ（Ａ）尾部はまた、ＲＮＡに安定性をもたらし
、それらの分解を減少させる。一般に、ポリ（Ａ）尾部の長さは、転写されたＲＮＡの安
定性と正の相関がある。１つの実施形態では、該ポリ（Ａ）尾部は、１００〜５０００ア
デノシンである。
ズは５０〜５０００Ｔでよい）を含むリバースプライマーを用いてＰＣＲの過程で、また
は、ＤＮＡ連結反応もしくはインビトロ組み換えを含むがこれに限定されない任意の他の
方法によるＰＣＲ後に産生され得る。ポリ（Ａ）尾部はまた、ＲＮＡに安定性をもたらし
、それらの分解を減少させる。一般に、ポリ（Ａ）尾部の長さは、転写されたＲＮＡの安
定性と正の相関がある。１つの実施形態では、該ポリ（Ａ）尾部は、１００〜５０００ア
デノシンである。
ＲＮＡのポリ（Ａ）尾部は、ポリ（Ａ）ポリメラーゼ、例えば、Ｅ． ｃｏｌｉのポリ
Ａポリメラーゼ（Ｅ−ＰＡＰ）を用いてインビトロ転写後にさらに延長され得る。１つの
実施形態では、ポリ（Ａ）尾部の長さを１００ヌクレオチドから３００〜４００ヌクレオ
チドまで増加させることは、当該ＲＮＡの翻訳効率において約２倍の増加をもたらす。さ
らに、３’末端への異なる化学基の連結は、ｍＲＮＡの安定性を増加させうる。かかる連
結は、変性／人口ヌクレオチド、アプタマー、及び他の化合物を含むことができる。例え
ば、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを用いて、該ポリ（Ａ）尾部にＡＴＰ類似体を組み入れるこ
とができる。ＡＴＰ類似体は、さらに当該ＲＮＡの安定性を高める。
Ａポリメラーゼ（Ｅ−ＰＡＰ）を用いてインビトロ転写後にさらに延長され得る。１つの
実施形態では、ポリ（Ａ）尾部の長さを１００ヌクレオチドから３００〜４００ヌクレオ
チドまで増加させることは、当該ＲＮＡの翻訳効率において約２倍の増加をもたらす。さ
らに、３’末端への異なる化学基の連結は、ｍＲＮＡの安定性を増加させうる。かかる連
結は、変性／人口ヌクレオチド、アプタマー、及び他の化合物を含むことができる。例え
ば、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを用いて、該ポリ（Ａ）尾部にＡＴＰ類似体を組み入れるこ
とができる。ＡＴＰ類似体は、さらに当該ＲＮＡの安定性を高める。
５’キャップを付けることは、同様にＲＮＡ分子に安定性をもたらす。好ましい実施形
態では、本明細書に開示の方法で産生されるＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャッ
プは、当技術分野で知られているとともに本明細書に記載される技術を用いて提供される
（Ｃｏｕｇｏｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ．
， ２９：４３６−４４４ （２００１）；Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｒ
ＮＡ， ７：１４６８−９５ （２００１）；Ｅｌａｎｇｏ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏ
ｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ３３０：９５８−９６６
（２００５））。
態では、本明細書に開示の方法で産生されるＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャッ
プは、当技術分野で知られているとともに本明細書に記載される技術を用いて提供される
（Ｃｏｕｇｏｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ．
， ２９：４３６−４４４ （２００１）；Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｒ
ＮＡ， ７：１４６８−９５ （２００１）；Ｅｌａｎｇｏ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏ
ｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ３３０：９５８−９６６
（２００５））。
本明細書に開示の方法によって産生されるＲＮＡは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲ
ＥＳ）の配列も含むことができる。該ＩＲＥＳ配列は、任意のウイルス、染色体、または
人工的に設計された配列でよく、これがｍＲＮＡに対するキャップ非依存性リボソーム結
合を開始し、翻訳の開始を促す。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、酸化防止剤、及び界
面活性剤等の、細胞の透過性及び生存能力を促進する因子を含み得る細胞のエレクトロポ
レーションに適した任意の溶質を含めることができる。
ＥＳ）の配列も含むことができる。該ＩＲＥＳ配列は、任意のウイルス、染色体、または
人工的に設計された配列でよく、これがｍＲＮＡに対するキャップ非依存性リボソーム結
合を開始し、翻訳の開始を促す。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、酸化防止剤、及び界
面活性剤等の、細胞の透過性及び生存能力を促進する因子を含み得る細胞のエレクトロポ
レーションに適した任意の溶質を含めることができる。
ＲＮＡは、複数の異なる方法、例えば、エレクトロポレーション（Ａｍａｘａ Ｎｕｃ
ｌｅｏｆｅｃｔｏｒ−ＩＩ（Ａｍａｘａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ドイツ、ケルン））、
（ＥＣＭ ８３０（ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、マサチューセ
ッツ州ボストン）、もしくはＧｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ ＩＩ（ＢｉｏＲａｄ、コロラド州
デンバー）、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ、ドイツ、ハンブルク）、
リポフェクションを用いたカチオン性リポソーム媒介トランスフェクション、ポリマーカ
プセル化、ペプチド媒介トランスフェクション、または微粒子銃粒子送達システム、例え
ば、「遺伝子銃」（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ．， １２（８）：８６１−７０ （２００１）参照）が挙げられるがこれらに
限定されない商業的に利用可能な方法のいずれかを用いて、標的細胞に導入することがで
きる。
ｌｅｏｆｅｃｔｏｒ−ＩＩ（Ａｍａｘａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ドイツ、ケルン））、
（ＥＣＭ ８３０（ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、マサチューセ
ッツ州ボストン）、もしくはＧｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ ＩＩ（ＢｉｏＲａｄ、コロラド州
デンバー）、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ、ドイツ、ハンブルク）、
リポフェクションを用いたカチオン性リポソーム媒介トランスフェクション、ポリマーカ
プセル化、ペプチド媒介トランスフェクション、または微粒子銃粒子送達システム、例え
ば、「遺伝子銃」（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ， ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ．， １２（８）：８６１−７０ （２００１）参照）が挙げられるがこれらに
限定されない商業的に利用可能な方法のいずれかを用いて、標的細胞に導入することがで
きる。
ＴＦＰをコードする核酸構築物
本発明は、本明細書に記載の１つ以上のＴＦＰ構築物をコードする核酸分子もまた提供
する。１つの態様において、該核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供され
る。１つの態様において、該核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。
本発明は、本明細書に記載の１つ以上のＴＦＰ構築物をコードする核酸分子もまた提供
する。１つの態様において、該核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供され
る。１つの態様において、該核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。
所望の分子をコードする核酸配列は、当技術分野で知られている組み換え法を用いて、
例えば、該遺伝子を発現する細胞のライブラリのスクリーニングによって、それを含むこ
とが知られているベクターから当該遺伝子を抽出することによって、またはそれを含む細
胞及び組織から直接単離することによって、標準的な技術を用いて得ることができる。別
の方法として、目的の遺伝子は、クローンではなく、合成的に産生することができる。
例えば、該遺伝子を発現する細胞のライブラリのスクリーニングによって、それを含むこ
とが知られているベクターから当該遺伝子を抽出することによって、またはそれを含む細
胞及び組織から直接単離することによって、標準的な技術を用いて得ることができる。別
の方法として、目的の遺伝子は、クローンではなく、合成的に産生することができる。
本発明は、本発明のＤＮＡが挿入されるベクターもまた提供する。レンチウイルス等の
レトロウイルス由来のベクターは、それらが長期間にわたる安定した導入遺伝子の統合及
び娘細胞におけるその増殖を可能にするため、長期間にわたる遺伝子導入を達成するのに
適したツールである。レンチウイルスベクターは、それらが肝細胞等の非増殖性細胞を形
質導入することができるという点で、マウス白血病ウイルス等のオンコレトロウイルス由
来のベクターより追加された利点を有する。それらはまた、追加された低免疫原性の利点
を有する。
レトロウイルス由来のベクターは、それらが長期間にわたる安定した導入遺伝子の統合及
び娘細胞におけるその増殖を可能にするため、長期間にわたる遺伝子導入を達成するのに
適したツールである。レンチウイルスベクターは、それらが肝細胞等の非増殖性細胞を形
質導入することができるという点で、マウス白血病ウイルス等のオンコレトロウイルス由
来のベクターより追加された利点を有する。それらはまた、追加された低免疫原性の利点
を有する。
別の実施形態では、本発明の所望のＴＦＰをコードする核酸を含むベクターは、アデノ
ウイルスベクター（Ａ５／３５）である。別の実施形態では、ＴＦＰをコードする核酸の
発現は、スリーピングビューティー、クリスパー（ｃｒｉｓｐｅｒ）、ＣＡＳ９、及びジ
ンクフィンガーヌクレアーゼ等のトランスポゾンを用いて達成され得る。下記参照Ｊｕｎ
ｅ ｅｔ ａｌ． ２００９ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
９．１０： ７０４−７１６は、参照することによって本明細書に組み込まれる。
ウイルスベクター（Ａ５／３５）である。別の実施形態では、ＴＦＰをコードする核酸の
発現は、スリーピングビューティー、クリスパー（ｃｒｉｓｐｅｒ）、ＣＡＳ９、及びジ
ンクフィンガーヌクレアーゼ等のトランスポゾンを用いて達成され得る。下記参照Ｊｕｎ
ｅ ｅｔ ａｌ． ２００９ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
９．１０： ７０４−７１６は、参照することによって本明細書に組み込まれる。
本発明の発現構築物は、標準的な遺伝子導入プロトコルを用いて核酸免疫付与及び遺伝
子治療にも用いることができる。遺伝子導入方法は、当技術分野で知られている（例えば
、米国特許第５，３９９，３４６号、第５，５８０，８５９号、第５，５８９，４６６号
参照。参照することによってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。別の実施形態で
は、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
子治療にも用いることができる。遺伝子導入方法は、当技術分野で知られている（例えば
、米国特許第５，３９９，３４６号、第５，５８０，８５９号、第５，５８９，４６６号
参照。参照することによってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。別の実施形態で
は、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
該核酸は、複数のタイプのベクターにクローニングされ得る。例えば、該核酸は、プラ
スミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、及びコスミドが挙げられるがこ
れらに限定されないベクターにクローニングすることができる。特に重要であるベクター
には、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、及び配列決定ベクターが含
まれる。
スミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、及びコスミドが挙げられるがこ
れらに限定されないベクターにクローニングすることができる。特に重要であるベクター
には、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、及び配列決定ベクターが含
まれる。
さらに、該発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルス
ベクター技術は、当技術分野で周知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，
２０１２， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ， ｖｏｌｕｍｅｓ １−４， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒ
ｅｓｓ， ＮＹ）、ならびに他のウイルス学及び分子生物学マニュアルに記載されている
。ベクターとして有用なウイルスとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随
伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルスが挙げられるがこれらに限定されな
い。一般に、適切なベクターは、少なくとも１つの有機体で機能する複製起点、プロモー
ター配列、都合の良い制限エンドヌクレアーゼ部位、及び１つ以上の選択マーカーを含む
（例えば、ＷＯ０１／９６５８４；ＷＯ０１／２９０５８；及び米国特許第６，３２６，
１９３号）。
ベクター技術は、当技術分野で周知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，
２０１２， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ， ｖｏｌｕｍｅｓ １−４， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒ
ｅｓｓ， ＮＹ）、ならびに他のウイルス学及び分子生物学マニュアルに記載されている
。ベクターとして有用なウイルスとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随
伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルスが挙げられるがこれらに限定されな
い。一般に、適切なベクターは、少なくとも１つの有機体で機能する複製起点、プロモー
ター配列、都合の良い制限エンドヌクレアーゼ部位、及び１つ以上の選択マーカーを含む
（例えば、ＷＯ０１／９６５８４；ＷＯ０１／２９０５８；及び米国特許第６，３２６，
１９３号）。
複数のウイルスベースの系が、哺乳類細胞への遺伝子導入用に開発されてきた。例えば
、レトロウイルスは、遺伝子導入系に都合の良いプラットフォームを提供する。選択され
た遺伝子は、ベクターに挿入され、当技術分野で知られている技術を用いてレトロウイル
ス粒子内に包装され得る。該組み換えウイルスは次に単離され、インビボまたはエキソビ
ボのいずれかで、目的の細胞に導入され得る。複数のレトロウイルス系が当技術分野で知
られている。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが用いられる。複数のア
デノウイルスベクターが当技術分野で知られている。１つの実施形態では、レンチウイル
スベクターが用いられる。
、レトロウイルスは、遺伝子導入系に都合の良いプラットフォームを提供する。選択され
た遺伝子は、ベクターに挿入され、当技術分野で知られている技術を用いてレトロウイル
ス粒子内に包装され得る。該組み換えウイルスは次に単離され、インビボまたはエキソビ
ボのいずれかで、目的の細胞に導入され得る。複数のレトロウイルス系が当技術分野で知
られている。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが用いられる。複数のア
デノウイルスベクターが当技術分野で知られている。１つの実施形態では、レンチウイル
スベクターが用いられる。
さらなるプロモーター要素、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。通
常、これらは、開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域に位置しているが、複数のプロモ
ーターが該開始部位の下流に同様に機能要素を含むことが示されている。要素が互いに反
転または互いに連動される場合にプロモーターの機能が保存されるように、プロモーター
要素間の間隔にはしばしば柔軟性がある。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターにおい
て、プロモーター要素間の間隔は、活性が低下し始める前に５０ｂｐ離れるまで増加し得
る。プロモーターに応じて、個々の要素は、協調的または独立的に機能して転写を活性化
し得ると思われる。
常、これらは、開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域に位置しているが、複数のプロモ
ーターが該開始部位の下流に同様に機能要素を含むことが示されている。要素が互いに反
転または互いに連動される場合にプロモーターの機能が保存されるように、プロモーター
要素間の間隔にはしばしば柔軟性がある。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターにおい
て、プロモーター要素間の間隔は、活性が低下し始める前に５０ｂｐ離れるまで増加し得
る。プロモーターに応じて、個々の要素は、協調的または独立的に機能して転写を活性化
し得ると思われる。
哺乳類のＴ細胞においてＴＦＰ導入遺伝子を発現することが可能なプロモーターの例は
、ＥＦ１ａプロモーターである。天然ＥＦ１ａプロモーターは、アミノアシルｔＲＮＡの
リボソームへの酵素的導入に関与する伸長因子１複合体のアルファサブユニットの発現を
動作させる。該ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳類の発現プラスミドに広く用いられており
、レンチウイルスベクターにクローニングされた導入遺伝子からのＴＦＰ発現を動作させ
るのに有効であることが示されている（例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ
． Ｔｈｅｒ． １７（８）： １４５３−１４６４ （２００９）参照）。プロモータ
ーの別の例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプ
ロモーター配列は、それに作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベル
の発現を動作させることができる強力な構成的プロモーター配列である。しかしながら、
シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳がんウイルス（ＭＭＴＶ
）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕ
ＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス前初
期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびに、ヒト遺伝子のプロモータ
ー、例えば、限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子
１ａプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、及びクレアチンキナーゼプロモーターが
挙げられるがこれらに限定されない他の構成的プロモーター配列もまた使用され得る。さ
らに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されないものとする。誘導性プロモー
ターもまた本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、作動可能に連
結されたポリヌクレオチド配列の発現を、かかる発現が望まれる場合にオンにすること、
または発現が望まれない場合には該発現をオフにすることが可能な分子スイッチを提供す
る。誘導性プロモーターの例としては、メタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉ
ｎｅ）プロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、
及びテトラサイクリン調節プロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。
、ＥＦ１ａプロモーターである。天然ＥＦ１ａプロモーターは、アミノアシルｔＲＮＡの
リボソームへの酵素的導入に関与する伸長因子１複合体のアルファサブユニットの発現を
動作させる。該ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳類の発現プラスミドに広く用いられており
、レンチウイルスベクターにクローニングされた導入遺伝子からのＴＦＰ発現を動作させ
るのに有効であることが示されている（例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ
． Ｔｈｅｒ． １７（８）： １４５３−１４６４ （２００９）参照）。プロモータ
ーの別の例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプ
ロモーター配列は、それに作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベル
の発現を動作させることができる強力な構成的プロモーター配列である。しかしながら、
シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳がんウイルス（ＭＭＴＶ
）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕ
ＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス前初
期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびに、ヒト遺伝子のプロモータ
ー、例えば、限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子
１ａプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、及びクレアチンキナーゼプロモーターが
挙げられるがこれらに限定されない他の構成的プロモーター配列もまた使用され得る。さ
らに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されないものとする。誘導性プロモー
ターもまた本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、作動可能に連
結されたポリヌクレオチド配列の発現を、かかる発現が望まれる場合にオンにすること、
または発現が望まれない場合には該発現をオフにすることが可能な分子スイッチを提供す
る。誘導性プロモーターの例としては、メタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉ
ｎｅ）プロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、
及びテトラサイクリン調節プロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。
ＴＦＰポリペプチドまたはその一部の発現を評価するため、細胞に導入される発現ベク
ターはまた、選択マーカー遺伝子もしくはレポーター遺伝子のいずれかまたはその両方を
含んで、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染させようとする細胞の集
団からの発現細胞の特定及び選択を容易にすることができる。他の態様において、該選択
マーカーは、ＤＮＡの別々の片上に担持され、同時トランスフェクション法に用いられる
場合がある。選択マーカーとレポーター遺伝子の両方が、当該宿主細胞内での発現を可能
にするために適切な調節配列に隣接されてもよい。有用な選択マーカーとしては、例えば
、抗生物質抵抗性遺伝子、例えば、ｎｅｏ等が挙げられる。
ターはまた、選択マーカー遺伝子もしくはレポーター遺伝子のいずれかまたはその両方を
含んで、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染させようとする細胞の集
団からの発現細胞の特定及び選択を容易にすることができる。他の態様において、該選択
マーカーは、ＤＮＡの別々の片上に担持され、同時トランスフェクション法に用いられる
場合がある。選択マーカーとレポーター遺伝子の両方が、当該宿主細胞内での発現を可能
にするために適切な調節配列に隣接されてもよい。有用な選択マーカーとしては、例えば
、抗生物質抵抗性遺伝子、例えば、ｎｅｏ等が挙げられる。
レポーター遺伝子は、トランスフェクトされた可能性のある細胞を特定するため、及び
調節配列の機能を評価するために用いられる。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエン
トの有機体または組織内に含まれない、またはこれらによって発現されず、その発現が、
多少容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によって明らかにされるポリペプチドをコ
ードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、当該ＤＮＡが当該レシピエント細胞
に導入された後の適切な時点でアッセイされる。適切なレポーター遺伝子としては、ルシ
フェラーゼ、ベータガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラー
ゼ、分泌アルカリフォスファターゼをコードする遺伝子、または緑色蛍光タンパク質遺伝
子を挙げることができる（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ ｅｔ ａｌ．， ２０００ ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９： ７９−８２）。適切な発現系は周知であり、既知の技術を
用いて調製しても、商業的に入手してもよい。一般に、最も高いレポーター遺伝子の発現
レベルを示す最小の５’隣接領域を備えた構築物は、プロモーターとして特定される。か
かるプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され、プロモーターに動作される転写
を調節する能力について作用物質を評価するために使用され得る。
調節配列の機能を評価するために用いられる。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエン
トの有機体または組織内に含まれない、またはこれらによって発現されず、その発現が、
多少容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によって明らかにされるポリペプチドをコ
ードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、当該ＤＮＡが当該レシピエント細胞
に導入された後の適切な時点でアッセイされる。適切なレポーター遺伝子としては、ルシ
フェラーゼ、ベータガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラー
ゼ、分泌アルカリフォスファターゼをコードする遺伝子、または緑色蛍光タンパク質遺伝
子を挙げることができる（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ ｅｔ ａｌ．， ２０００ ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９： ７９−８２）。適切な発現系は周知であり、既知の技術を
用いて調製しても、商業的に入手してもよい。一般に、最も高いレポーター遺伝子の発現
レベルを示す最小の５’隣接領域を備えた構築物は、プロモーターとして特定される。か
かるプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され、プロモーターに動作される転写
を調節する能力について作用物質を評価するために使用され得る。
細胞内に遺伝子を導入及び発現させる方法は、当技術分野で知られている。発現ベクタ
ーとの関連では、該ベクターは、宿主細胞、例えば、哺乳類、細菌、酵母、または昆虫の
細胞に、当技術分野の任意の方法によって容易に導入することができる。例えば、該発現
ベクターは、物理的、化学的、または生物学的手段によって宿主細胞に移植することがで
きる。
ーとの関連では、該ベクターは、宿主細胞、例えば、哺乳類、細菌、酵母、または昆虫の
細胞に、当技術分野の任意の方法によって容易に導入することができる。例えば、該発現
ベクターは、物理的、化学的、または生物学的手段によって宿主細胞に移植することがで
きる。
宿主細胞内へポリヌクレオチドを導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈
殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション
等が含まれる。ベクター及び／または外因性核酸を含む細胞の産生方法は、当技術分野で
周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ｖｏｌｕｍｅｓ
１−４， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ参照）。宿主
細胞内へのポリヌクレオチドの導入のための好ましい方法は、リン酸カルシウム法である
。
殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション
等が含まれる。ベクター及び／または外因性核酸を含む細胞の産生方法は、当技術分野で
周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ｖｏｌｕｍｅｓ
１−４， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ参照）。宿主
細胞内へのポリヌクレオチドの導入のための好ましい方法は、リン酸カルシウム法である
。
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞内に導入するための生物学的方法には、ＤＮＡ及び
ＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、
哺乳類、例えば、ヒト細胞に遺伝子を挿入するために最も広く用いられる方法となってい
る。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイル
スＩ型、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス等から誘導され得る（例えば、米国特
許第５，３５０，６７４号及び第５，５８５，３６２号参照。
ＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、
哺乳類、例えば、ヒト細胞に遺伝子を挿入するために最も広く用いられる方法となってい
る。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイル
スＩ型、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス等から誘導され得る（例えば、米国特
許第５，３５０，６７４号及び第５，５８５，３６２号参照。
宿主細胞内へポリヌクレオチドを導入するための化学的手段には、コロイド分散系、例
えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油型エマル
ション、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含めた脂質ベースの系が含まれる。イン
ビトロ及びインビボでの送達媒体として使用するための例示的なコロイド系は、リポソー
ム（例えば、人工膜小胞）である。他の最先端の核酸の標的化送達、例えば、標的化ナノ
粒子または他の適切なサブミクロンサイズの送達システムでのポリヌクレオチドの送達が
利用可能である。
えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油型エマル
ション、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含めた脂質ベースの系が含まれる。イン
ビトロ及びインビボでの送達媒体として使用するための例示的なコロイド系は、リポソー
ム（例えば、人工膜小胞）である。他の最先端の核酸の標的化送達、例えば、標的化ナノ
粒子または他の適切なサブミクロンサイズの送達システムでのポリヌクレオチドの送達が
利用可能である。
非ウイルス送達システムが利用される場合、例示的な送達媒体はリポソームである。脂
質製剤の使用は、宿主細胞内への核酸の導入（インビトロ、エキソビボ、またはインビボ
）を企図する。別の態様において、該核酸は、脂質と会合され得る。脂質に会合した核酸
は、リポソームの水性内部に封入、リポソームの脂質二重層内に散在、リポソーム及びオ
リゴヌクレオチドの両方に会合した連結分子を介してリポソームに付着、リポソーム内に
封入、リポソームと複合化、脂質含有溶液に分散、脂質と混合、脂質と統合、脂質中に懸
濁液として含有、ミセルとともに含有もしくは複合化、または他の場合には脂質と会合さ
れ得る。脂質、脂質／ＤＮＡ、または脂質／発現ベクター関連組成物は、溶液中でいかな
る特定の構造にも限定されない。例えば、それらは二層構造で、ミセルとして、または「
崩壊した」構造で存在してもよい。それらはまた、単に溶液に散在されてもよく、サイズ
も形も均一でない凝集体を形成すると思われる。脂質は、脂肪性の物質であり、天然に存
在する脂質でも合成脂質でもよい。例えば、脂質には、細胞質に天然に存在する脂肪小滴
、ならびに長鎖脂肪族炭化水素及びそれらの誘導体、例えば、脂肪酸、アルコール、アミ
ン、アミノアルコール、及びアルデヒドを含む化合物のクラスが含まれる。
質製剤の使用は、宿主細胞内への核酸の導入（インビトロ、エキソビボ、またはインビボ
）を企図する。別の態様において、該核酸は、脂質と会合され得る。脂質に会合した核酸
は、リポソームの水性内部に封入、リポソームの脂質二重層内に散在、リポソーム及びオ
リゴヌクレオチドの両方に会合した連結分子を介してリポソームに付着、リポソーム内に
封入、リポソームと複合化、脂質含有溶液に分散、脂質と混合、脂質と統合、脂質中に懸
濁液として含有、ミセルとともに含有もしくは複合化、または他の場合には脂質と会合さ
れ得る。脂質、脂質／ＤＮＡ、または脂質／発現ベクター関連組成物は、溶液中でいかな
る特定の構造にも限定されない。例えば、それらは二層構造で、ミセルとして、または「
崩壊した」構造で存在してもよい。それらはまた、単に溶液に散在されてもよく、サイズ
も形も均一でない凝集体を形成すると思われる。脂質は、脂肪性の物質であり、天然に存
在する脂質でも合成脂質でもよい。例えば、脂質には、細胞質に天然に存在する脂肪小滴
、ならびに長鎖脂肪族炭化水素及びそれらの誘導体、例えば、脂肪酸、アルコール、アミ
ン、アミノアルコール、及びアルデヒドを含む化合物のクラスが含まれる。
使用に適した脂質は、商業的供給源から入手することができる。例えば、ジミリスチル
ホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、ミズーリ州セントルイスＳｉｇｍａから入手
可能であり；リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ ＆ Ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
（ニューヨーク州プレーンビュー）から入手可能であり；コレステロール（「Ｃｈｏｉ」
）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇから入手可能であり；ジミリスチルホスフ
ァチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）及び他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌ
ｉｐｉｄｓ， Ｉｎｃ．（アラバマ州バーミングハム）から入手され得る。脂質のクロロ
ホルムまたはクロロホルム／メタノール中での原液は、約−２０℃で保存され得る。クロ
ロホルムは、メタノールより容易に蒸発するため、唯一の溶媒として用いられる。「リポ
ソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成によって形成される様々な単層ま
たは多重膜の脂質媒体を包含する総称である。リポソームは、リン脂質二重膜及び内側の
水性媒体を備えた小胞構造を有することを特徴とし得る。多重膜リポソームは、水性媒体
によって分離された複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁さ
れた場合に自然に生じる。該脂質成分は、自己再編成を経て、閉鎖構造を形成し、当該脂
質二重層間に水及び溶解した溶質を封入する（Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．， １９９１
Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５： ５０５−１０）。しかしながら、通常の小胞構造とは
溶液中での構造が異なる組成物も包含される。例えば、該脂質は、ミセル構造をとっても
よいし、単に脂質分子の不均一な凝集体として存在してもよい。リポフェクタミン・核酸
複合体もまた企図される。
ホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、ミズーリ州セントルイスＳｉｇｍａから入手
可能であり；リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ ＆ Ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
（ニューヨーク州プレーンビュー）から入手可能であり；コレステロール（「Ｃｈｏｉ」
）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇから入手可能であり；ジミリスチルホスフ
ァチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）及び他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌ
ｉｐｉｄｓ， Ｉｎｃ．（アラバマ州バーミングハム）から入手され得る。脂質のクロロ
ホルムまたはクロロホルム／メタノール中での原液は、約−２０℃で保存され得る。クロ
ロホルムは、メタノールより容易に蒸発するため、唯一の溶媒として用いられる。「リポ
ソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成によって形成される様々な単層ま
たは多重膜の脂質媒体を包含する総称である。リポソームは、リン脂質二重膜及び内側の
水性媒体を備えた小胞構造を有することを特徴とし得る。多重膜リポソームは、水性媒体
によって分離された複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁さ
れた場合に自然に生じる。該脂質成分は、自己再編成を経て、閉鎖構造を形成し、当該脂
質二重層間に水及び溶解した溶質を封入する（Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．， １９９１
Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５： ５０５−１０）。しかしながら、通常の小胞構造とは
溶液中での構造が異なる組成物も包含される。例えば、該脂質は、ミセル構造をとっても
よいし、単に脂質分子の不均一な凝集体として存在してもよい。リポフェクタミン・核酸
複合体もまた企図される。
宿主細胞内へ外因性核酸を導入するのに用いられる方法、または他の場合には本発明の
阻害剤に細胞を暴露するのに用いられる方法にかかわらず、宿主細胞内での組み換えＤＮ
Ａ配列の存在を確認するために様々なアッセイが行われ得る。かかるアッセイとしては、
例えば、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、例えば、サザン及びノーザンブロッ
ト法、ＲＴ−ＰＣＲ、及びＰＣＲ；「生化学的」アッセイ、例えば、特定のペプチドの有
無を例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット法）によって、または本
明細書に記載のアッセイによって検出し、本発明の範囲に含まれる作用物質を特定するこ
とが挙げられる。
阻害剤に細胞を暴露するのに用いられる方法にかかわらず、宿主細胞内での組み換えＤＮ
Ａ配列の存在を確認するために様々なアッセイが行われ得る。かかるアッセイとしては、
例えば、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、例えば、サザン及びノーザンブロッ
ト法、ＲＴ−ＰＣＲ、及びＰＣＲ；「生化学的」アッセイ、例えば、特定のペプチドの有
無を例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット法）によって、または本
明細書に記載のアッセイによって検出し、本発明の範囲に含まれる作用物質を特定するこ
とが挙げられる。
本発明はさらに、ＴＦＰをコードする核酸分子を含むベクターを提供する。１つの態様
において、ＴＦＰベクターは、細胞、例えば、Ｔ細胞に直接導入することができる。１つ
の態様において、該ベクターは、クローニングまたは発現ベクター、例えば、１つ以上の
プラスミド（例えば、発現プラスミド、クローニングベクター、ミニサークル、ミニベク
ター、二重微小染色体）、レトロウイルスベクター構築物及びレンチウイルスベクター構
築物が挙げられるがこれらに限定されないベクターである。１つの態様において、該ベク
ターは、哺乳類のＴ細胞でＴＦＰ構築物を発現することが可能である。１つの態様におい
て、該哺乳類のＴ細胞は、ヒトＴ細胞である。
において、ＴＦＰベクターは、細胞、例えば、Ｔ細胞に直接導入することができる。１つ
の態様において、該ベクターは、クローニングまたは発現ベクター、例えば、１つ以上の
プラスミド（例えば、発現プラスミド、クローニングベクター、ミニサークル、ミニベク
ター、二重微小染色体）、レトロウイルスベクター構築物及びレンチウイルスベクター構
築物が挙げられるがこれらに限定されないベクターである。１つの態様において、該ベク
ターは、哺乳類のＴ細胞でＴＦＰ構築物を発現することが可能である。１つの態様におい
て、該哺乳類のＴ細胞は、ヒトＴ細胞である。
Ｔ細胞源
増殖及び遺伝子組み換えに先立って、Ｔ細胞源を対象から採取する。用語「対象」は、
免疫反応が誘発され得る生体（例えば、哺乳類）を含むことが意図されている。対象の例
としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、及びそれらのトランスジェニック種が挙
げられる。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部
位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍を含めた複数の起源から採取することが
できる。本発明の特定の態様において、当技術分野で入手可能な様々なＴ細胞株が用いら
れる場合がある。本発明の特定の態様において、Ｔ細胞は、当業者に知られる様々な技術
、例えば、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離を用いて対象から採取された血液の単位から得るこ
とができる。１つの好ましい態様において、個体の循環血液由来の細胞は、アフェレーシ
スによって採取される。該アフェレーシス産物は、通常、Ｔ細胞を含めたリンパ球、単球
、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球細胞、赤血球、及び血小板を含む。１つの態様におい
て、アフェレーシスによって採取された細胞は、血漿画分を除去し、該細胞をその後の処
理段階に適切な緩衝液または媒体に配するために洗浄され得る。本発明の１つの態様にお
いて、該細胞はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。別の態様において、該洗
浄液は、カルシウムを欠いており、かつ、マグネシウムを欠く場合も２価カチオンのすべ
てではないがその多くを欠く場合もある。カルシウムの非存在下での最初の活性化段階は
、活性化の拡大につながり得る。当業者には容易に理解されるように、洗浄段階は当業者
に知られる方法によって、例えば、半自動の「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂ
ｅ ２９９１セルプロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎ
ｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を用いて、メーカーの指示に従って達成され得
る。洗浄後、細胞を様々な生体適合性緩衝液、例えば、ＣａフリーでＭｇフリーのＰＢＳ
、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または、緩衝液を含むもしくは含まない他の生理食塩水に
再懸濁され得る。別の方法として、該アフェレーシス試料の望ましくない成分を除去し、
細胞を直接培地に再懸濁してもよい。
増殖及び遺伝子組み換えに先立って、Ｔ細胞源を対象から採取する。用語「対象」は、
免疫反応が誘発され得る生体（例えば、哺乳類）を含むことが意図されている。対象の例
としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、及びそれらのトランスジェニック種が挙
げられる。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部
位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍を含めた複数の起源から採取することが
できる。本発明の特定の態様において、当技術分野で入手可能な様々なＴ細胞株が用いら
れる場合がある。本発明の特定の態様において、Ｔ細胞は、当業者に知られる様々な技術
、例えば、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離を用いて対象から採取された血液の単位から得るこ
とができる。１つの好ましい態様において、個体の循環血液由来の細胞は、アフェレーシ
スによって採取される。該アフェレーシス産物は、通常、Ｔ細胞を含めたリンパ球、単球
、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球細胞、赤血球、及び血小板を含む。１つの態様におい
て、アフェレーシスによって採取された細胞は、血漿画分を除去し、該細胞をその後の処
理段階に適切な緩衝液または媒体に配するために洗浄され得る。本発明の１つの態様にお
いて、該細胞はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。別の態様において、該洗
浄液は、カルシウムを欠いており、かつ、マグネシウムを欠く場合も２価カチオンのすべ
てではないがその多くを欠く場合もある。カルシウムの非存在下での最初の活性化段階は
、活性化の拡大につながり得る。当業者には容易に理解されるように、洗浄段階は当業者
に知られる方法によって、例えば、半自動の「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂ
ｅ ２９９１セルプロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎ
ｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を用いて、メーカーの指示に従って達成され得
る。洗浄後、細胞を様々な生体適合性緩衝液、例えば、ＣａフリーでＭｇフリーのＰＢＳ
、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または、緩衝液を含むもしくは含まない他の生理食塩水に
再懸濁され得る。別の方法として、該アフェレーシス試料の望ましくない成分を除去し、
細胞を直接培地に再懸濁してもよい。
１つの態様において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、単球を、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（
商標）勾配を介した遠心分離によって、または向流遠心水簸によって、枯渇させることに
よって、末梢血リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の亜集団、例えば、ＣＤ３＋、Ｃ
Ｄ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞をさらに、
正のまたは負の選択技術によって単離することができる。例えば、１つの態様において、
Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３×２８）結合ビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢ
ＥＡＤＳ（商標）Ｍ−４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔとともに、所望のＴ細胞の正の選択
に十分な期間インキュベートすることによって単離される。１つの態様において、該期間
は、約３０分である。さらなる態様において、該期間は３０分から３６時間またはそれ以
上及びその間のすべての整数値に及ぶ。さらなる態様において、該期間は、少なくとも１
、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ましい態様において、該期間は、
１０〜２４時間である。１つの態様において、該インキュベート期間は、２４時間である
。腫瘍組織または免疫不全の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離するような、他
の細胞型と比較してＴ細胞が少ない任意の状況でＴ細胞を単離するために、より長いイン
キュベート時間を用いてもよい。さらに、より長いインキュベート時間を用いることで、
ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉の効率を高めることができる。従って、Ｔ細胞を該ＣＤ３／ＣＤ２
８ビーズに結合させる時間を単に短縮または延長することによって、及び／またはＴ細胞
に対する該ビーズの割合を増加または減少させる（本明細書にさらに記載される）ことに
よって、Ｔ細胞の亜集団が優先的に培養開始時または当該工程の他の時点で選択または反
選択され得る。さらに、該ビーズもしくは他の表面上で抗ＣＤ３及び／または抗ＣＤ２８
抗体の比を増加もしくは減少させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、優先的に培養開始
時または他の所望の時点で選択または反選択され得る。当業者であれば、本発明の中で複
数の選択期間もまた使用することができることが認められよう。特定の態様において、該
選択手順を行い、「選択されていない」細胞を活性化及び増殖工程で用いることが望まし
い場合がある。「選択されていない」細胞は、さらなる選択期間に供することもできる。
商標）勾配を介した遠心分離によって、または向流遠心水簸によって、枯渇させることに
よって、末梢血リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の亜集団、例えば、ＣＤ３＋、Ｃ
Ｄ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞をさらに、
正のまたは負の選択技術によって単離することができる。例えば、１つの態様において、
Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３×２８）結合ビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢ
ＥＡＤＳ（商標）Ｍ−４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔとともに、所望のＴ細胞の正の選択
に十分な期間インキュベートすることによって単離される。１つの態様において、該期間
は、約３０分である。さらなる態様において、該期間は３０分から３６時間またはそれ以
上及びその間のすべての整数値に及ぶ。さらなる態様において、該期間は、少なくとも１
、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ましい態様において、該期間は、
１０〜２４時間である。１つの態様において、該インキュベート期間は、２４時間である
。腫瘍組織または免疫不全の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離するような、他
の細胞型と比較してＴ細胞が少ない任意の状況でＴ細胞を単離するために、より長いイン
キュベート時間を用いてもよい。さらに、より長いインキュベート時間を用いることで、
ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉の効率を高めることができる。従って、Ｔ細胞を該ＣＤ３／ＣＤ２
８ビーズに結合させる時間を単に短縮または延長することによって、及び／またはＴ細胞
に対する該ビーズの割合を増加または減少させる（本明細書にさらに記載される）ことに
よって、Ｔ細胞の亜集団が優先的に培養開始時または当該工程の他の時点で選択または反
選択され得る。さらに、該ビーズもしくは他の表面上で抗ＣＤ３及び／または抗ＣＤ２８
抗体の比を増加もしくは減少させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、優先的に培養開始
時または他の所望の時点で選択または反選択され得る。当業者であれば、本発明の中で複
数の選択期間もまた使用することができることが認められよう。特定の態様において、該
選択手順を行い、「選択されていない」細胞を活性化及び増殖工程で用いることが望まし
い場合がある。「選択されていない」細胞は、さらなる選択期間に供することもできる。
負の選択によるＴ細胞集団の濃縮は、負に選択された細胞に特有の表面マーカーに対す
る抗体の組合せを用いて達成することができる。１つの方法は、負に選択された細胞に存
在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを用いる負磁気免疫接着
またはフローサイトメトリーを介した細胞選別及び／または選択である。例えば、負の選
択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するためには、モノクローナル抗体カクテルは通常、ＣＤ
１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＣＤ８に対する抗体を含む
。特定の態様において、通常ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、及び
ＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を濃縮または正に選択することが望ましい場合があ
る。別の方法として、特定の態様において、調節性Ｔ細胞は、抗Ｃ２５結合ビーズまたは
他の同様の選択方法によって枯渇される。
る抗体の組合せを用いて達成することができる。１つの方法は、負に選択された細胞に存
在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを用いる負磁気免疫接着
またはフローサイトメトリーを介した細胞選別及び／または選択である。例えば、負の選
択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するためには、モノクローナル抗体カクテルは通常、ＣＤ
１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＣＤ８に対する抗体を含む
。特定の態様において、通常ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、及び
ＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を濃縮または正に選択することが望ましい場合があ
る。別の方法として、特定の態様において、調節性Ｔ細胞は、抗Ｃ２５結合ビーズまたは
他の同様の選択方法によって枯渇される。
１つの実施形態では、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ
−３、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、グランザイムＢ、及びパーフ
ォリン、または他の適切な分子、例えば、他のサイトカインのうちの１つ以上を発現する
Ｔ細胞集団が選択され得る。細胞発現のスクリーニング方法は、例えば、ＰＣＴ公開第Ｗ
Ｏ２０１３／１２６７１２号に記載の方法によって、決定することができる。
−３、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、グランザイムＢ、及びパーフ
ォリン、または他の適切な分子、例えば、他のサイトカインのうちの１つ以上を発現する
Ｔ細胞集団が選択され得る。細胞発現のスクリーニング方法は、例えば、ＰＣＴ公開第Ｗ
Ｏ２０１３／１２６７１２号に記載の方法によって、決定することができる。
正または負の選択による所望の細胞集団の単離のため、細胞濃度及び表面（例えば、ビ
ーズ等の粒子）は変更され得る。特定の態様において、ビーズと細胞が混合される体積を
大幅に減少させ（例えば、細胞濃度を増加させ）、細胞とビーズを最大に接触させること
が望ましい場合がある。例えば、１つの態様において、２０億個の細胞／ｍＬの濃度が用
いられる。１つの態様において、１０億個の細胞／ｍＬの濃度が用いられる。さらなる態
様において、１億個超の細胞／ｍＬが用いられる。さらなる態様において、１０００万、
１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００
万、または５０００万個の細胞／ｍＬの細胞濃度が用いられる。さらに１つの態様におい
て、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個の細
胞／ｍＬからの細胞濃度が用いられる。さらなる態様において、１億２５００万または１
億５０００万個の細胞／ｍＬの濃度を用いることができる。高濃度の使用は、細胞収率、
細胞活性化、及び細胞増殖の増加をもたらすことができる。さらに、高細胞濃度の使用は
、目的の標的抗原の発現が弱い可能性がある細胞、例えば、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞、または
多くの腫瘍細胞が存在する試料（例えば、白血病血液、腫瘍組織等）からの細胞のより効
率的な捕捉を可能にする。かかる細胞集団は、治療的価値を有する場合があり、得ること
が望ましい。例えば、高細胞濃度の使用は、通常ＣＤ２８の発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞の
より効率的な選択を可能にする。
ーズ等の粒子）は変更され得る。特定の態様において、ビーズと細胞が混合される体積を
大幅に減少させ（例えば、細胞濃度を増加させ）、細胞とビーズを最大に接触させること
が望ましい場合がある。例えば、１つの態様において、２０億個の細胞／ｍＬの濃度が用
いられる。１つの態様において、１０億個の細胞／ｍＬの濃度が用いられる。さらなる態
様において、１億個超の細胞／ｍＬが用いられる。さらなる態様において、１０００万、
１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００
万、または５０００万個の細胞／ｍＬの細胞濃度が用いられる。さらに１つの態様におい
て、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個の細
胞／ｍＬからの細胞濃度が用いられる。さらなる態様において、１億２５００万または１
億５０００万個の細胞／ｍＬの濃度を用いることができる。高濃度の使用は、細胞収率、
細胞活性化、及び細胞増殖の増加をもたらすことができる。さらに、高細胞濃度の使用は
、目的の標的抗原の発現が弱い可能性がある細胞、例えば、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞、または
多くの腫瘍細胞が存在する試料（例えば、白血病血液、腫瘍組織等）からの細胞のより効
率的な捕捉を可能にする。かかる細胞集団は、治療的価値を有する場合があり、得ること
が望ましい。例えば、高細胞濃度の使用は、通常ＣＤ２８の発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞の
より効率的な選択を可能にする。
関連する態様において、より低濃度の細胞を使用することが望ましい場合がある。Ｔ細
胞と表面（例えば、ビーズ等の粒子）の混合物を大幅に希釈することによって、該粒子と
細胞間の相互作用が最小化される。これは、該粒子に結合される所望の抗原を豊富に発現
する細胞を選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度
において、ＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕捉される。１つの態様において、使用される細
胞濃度は５×１０６／ｍＬである。他の態様において、使用される濃度は約１×１０５／
ｍＬ〜１×１０６／ｍＬ、及びその間の任意の整数値であり得る。他の態様において、該
細胞は、回転装置上で様々な長さの時間、様々な速度で、２〜１０℃または室温のいずれ
かでインキュベートされ得る。
胞と表面（例えば、ビーズ等の粒子）の混合物を大幅に希釈することによって、該粒子と
細胞間の相互作用が最小化される。これは、該粒子に結合される所望の抗原を豊富に発現
する細胞を選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度
において、ＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕捉される。１つの態様において、使用される細
胞濃度は５×１０６／ｍＬである。他の態様において、使用される濃度は約１×１０５／
ｍＬ〜１×１０６／ｍＬ、及びその間の任意の整数値であり得る。他の態様において、該
細胞は、回転装置上で様々な長さの時間、様々な速度で、２〜１０℃または室温のいずれ
かでインキュベートされ得る。
刺激用のＴ細胞は、洗浄段階の後、凍結させることもできる。理論に拘束されることを
望むものではないが、凍結及びそれに続く解凍段階は、当該細胞集団の顆粒球及びある程
度の単球を除去することによってより均一な産物を提供する。血漿及び血小板を除去する
洗浄段階の後、該細胞は、凍結溶液に懸濁され得る。多くの凍結溶液及びパラメータが当
技術分野で知られており、これに関して有用であるが、１つの方法は、２０％ＤＭＳＯ及
び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ、または、１０％デキストラン４０及び５％デキ
ストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯ、もしくは３１．２５％Ｐ
ｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０
％デキストラン４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン、ならびに７．
５％ＤＭＳＯを含む培地、または例えば、Ｈｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを
含む他の適切な細胞凍結媒体の使用を含み、該細胞をその後−８０℃に毎分１の速度で凍
結し、液体窒素貯蔵タンクの気相で保存する。他の制御凍結法は、−２０℃でのまたは液
体窒素中での制御されていない即時凍結と同様に使用され得る。特定の態様において、凍
結保存細胞は、本明細書に記載の通り解凍及び洗浄され、室温で１時間静置され、その後
本発明の方法を用いて活性化される。
望むものではないが、凍結及びそれに続く解凍段階は、当該細胞集団の顆粒球及びある程
度の単球を除去することによってより均一な産物を提供する。血漿及び血小板を除去する
洗浄段階の後、該細胞は、凍結溶液に懸濁され得る。多くの凍結溶液及びパラメータが当
技術分野で知られており、これに関して有用であるが、１つの方法は、２０％ＤＭＳＯ及
び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ、または、１０％デキストラン４０及び５％デキ
ストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯ、もしくは３１．２５％Ｐ
ｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０
％デキストラン４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン、ならびに７．
５％ＤＭＳＯを含む培地、または例えば、Ｈｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを
含む他の適切な細胞凍結媒体の使用を含み、該細胞をその後−８０℃に毎分１の速度で凍
結し、液体窒素貯蔵タンクの気相で保存する。他の制御凍結法は、−２０℃でのまたは液
体窒素中での制御されていない即時凍結と同様に使用され得る。特定の態様において、凍
結保存細胞は、本明細書に記載の通り解凍及び洗浄され、室温で１時間静置され、その後
本発明の方法を用いて活性化される。
本発明の中で同様に企図されるのは、本明細書に記載の増殖細胞が必要とされる前の期
間における対象からの血液試料またはアフェレーシス産物の採取である。従って、増殖さ
れる細胞源は、任意の必要な時点で採取され、所望の細胞、例えば、Ｔ細胞は、Ｔ細胞療
法で恩恵を受ける様々な疾患または状態、例えば、本明細書に記載のそれらのためのＴ細
胞療法における後の使用のために単離及び凍結される。１つの態様において、血液試料ま
たはアフェレーシスは、概して健康な対象から採取される。特定の態様において、血液試
料またはアフェレーシスは、疾患の発症の危険性があるがまだ発病していない概して健康
な対象から採取し、目的の細胞を後の使用のために単離及び凍結する。特定の態様におい
て、該Ｔ細胞は、増殖され、凍結され、その後使用され得る。特定の態様において、試料
は、本明細書に記載の特定の疾患の診断の直後で、いずれかの治療の前の患者から採取さ
れる。さらなる態様において、該細胞は、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤
、化学療法、放射線、免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレ
キサート、ミコフェノール酸、及びＦＫ５０６、抗体、または他の免疫消失薬、例えば、
ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０
６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、ならびに放射線
照射等の薬剤での治療が挙げられるがこれに限定されない様々な関連する治療法に先立っ
て、対象からの血液試料またはアフェレーシスから単離される。
間における対象からの血液試料またはアフェレーシス産物の採取である。従って、増殖さ
れる細胞源は、任意の必要な時点で採取され、所望の細胞、例えば、Ｔ細胞は、Ｔ細胞療
法で恩恵を受ける様々な疾患または状態、例えば、本明細書に記載のそれらのためのＴ細
胞療法における後の使用のために単離及び凍結される。１つの態様において、血液試料ま
たはアフェレーシスは、概して健康な対象から採取される。特定の態様において、血液試
料またはアフェレーシスは、疾患の発症の危険性があるがまだ発病していない概して健康
な対象から採取し、目的の細胞を後の使用のために単離及び凍結する。特定の態様におい
て、該Ｔ細胞は、増殖され、凍結され、その後使用され得る。特定の態様において、試料
は、本明細書に記載の特定の疾患の診断の直後で、いずれかの治療の前の患者から採取さ
れる。さらなる態様において、該細胞は、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤
、化学療法、放射線、免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレ
キサート、ミコフェノール酸、及びＦＫ５０６、抗体、または他の免疫消失薬、例えば、
ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０
６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、ならびに放射線
照射等の薬剤での治療が挙げられるがこれに限定されない様々な関連する治療法に先立っ
て、対象からの血液試料またはアフェレーシスから単離される。
本発明のさらなる態様において、Ｔ細胞は、当該対象に機能的Ｔ細胞を残す治療の後に
、患者から直接採取される。その点について、特定のがん治療の後、免疫系に損傷を与え
る薬物での特定の治療において、治療の直後、患者が当該治療から通常回復する期間に、
得られたＴ細胞の品質は、エキソビボでのそれらの増殖能が最適であるか、または改善さ
れている可能性がある。同様に、本明細書に記載の方法を用いたエキソビボ操作の後、こ
れらの細胞は、生着及びインビボ増殖の向上に好ましい状態にあり得る。従って、本発明
の中に、Ｔ細胞を含めた血液細胞、樹状細胞、または造血系の他の細胞をこの回復期に採
取することが企図される。さらに、特定の態様において、動員（例えば、ＧＭ−ＣＳＦで
の動員）及び前処置レジメンを用いて、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生、及び／ま
たは増殖が促進される対象における、特に治療後の所定の時間窓での条件を作成すること
ができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、及び免疫系の他の細胞
が挙げられる。
、患者から直接採取される。その点について、特定のがん治療の後、免疫系に損傷を与え
る薬物での特定の治療において、治療の直後、患者が当該治療から通常回復する期間に、
得られたＴ細胞の品質は、エキソビボでのそれらの増殖能が最適であるか、または改善さ
れている可能性がある。同様に、本明細書に記載の方法を用いたエキソビボ操作の後、こ
れらの細胞は、生着及びインビボ増殖の向上に好ましい状態にあり得る。従って、本発明
の中に、Ｔ細胞を含めた血液細胞、樹状細胞、または造血系の他の細胞をこの回復期に採
取することが企図される。さらに、特定の態様において、動員（例えば、ＧＭ−ＣＳＦで
の動員）及び前処置レジメンを用いて、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生、及び／ま
たは増殖が促進される対象における、特に治療後の所定の時間窓での条件を作成すること
ができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、及び免疫系の他の細胞
が挙げられる。
Ｔ細胞の活性化及び増殖
Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号；第６，５３４，０５５号；第６
，９０５，６８０号；第６，６９２，９６４号；第５，８５８，３５８号；第６，８８７
，４６６号；第６，９０５，６８１号；第７，１４４，５７５号；第７，０６７，３１８
号；第７，１７２，８６９号；第７，２３２，５６６号；第７，１７５，８４３号；第５
，８８３，２２３号；第６，９０５，８７４号；第６，７９７，５１４号；第６，８６７
，０４１号；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載の方法を用いて通
常活性化及び増殖され得る。
Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号；第６，５３４，０５５号；第６
，９０５，６８０号；第６，６９２，９６４号；第５，８５８，３５８号；第６，８８７
，４６６号；第６，９０５，６８１号；第７，１４４，５７５号；第７，０６７，３１８
号；第７，１７２，８６９号；第７，２３２，５６６号；第７，１７５，８４３号；第５
，８８３，２２３号；第６，９０５，８７４号；第６，７９７，５１４号；第６，８６７
，０４１号；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載の方法を用いて通
常活性化及び増殖され得る。
一般に、本発明のＴ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する作用物質を
付着された表面及び該Ｔ細胞の表面の共刺激分子を刺激するリガンドとの接触によって増
殖され得る。特に、Ｔ細胞集団は、本明細書に記載の通り、例えば、抗ＣＤ３抗体もしく
はその抗原結合フラグメント、もしくは表面に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触によっ
て、またはカルシウムイオノフォアと組み合わせてプロテインキナーゼＣ活性化剤（例え
ば、ブリオスタチン）との接触によって刺激され得る。Ｔ細胞表面のアクセサリー分子の
共刺激に対しては、該アクセサリー分子に結合するリガンドが用いられる。例えば、Ｔ細
胞集団は、該Ｔ細胞の増殖を刺激するために適切な条件下、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８
抗体と接触され得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激する
ためには、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ
−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、フランス、ブザンソン）が挙げられ、当技
術分野で一般に知られる他の方法を用いてもよい（Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．、Ｔｒａｎｓ
ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ． ３０（８）：３９７５−３９７７、１９９８；Ｈａａｎｅｎ
ｅｔ ａｌ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １９０（９）：１３１９１３２８、１９９９
；Ｇａｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ． ２２７（１−
２）：５３−６３、１９９９）。
付着された表面及び該Ｔ細胞の表面の共刺激分子を刺激するリガンドとの接触によって増
殖され得る。特に、Ｔ細胞集団は、本明細書に記載の通り、例えば、抗ＣＤ３抗体もしく
はその抗原結合フラグメント、もしくは表面に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触によっ
て、またはカルシウムイオノフォアと組み合わせてプロテインキナーゼＣ活性化剤（例え
ば、ブリオスタチン）との接触によって刺激され得る。Ｔ細胞表面のアクセサリー分子の
共刺激に対しては、該アクセサリー分子に結合するリガンドが用いられる。例えば、Ｔ細
胞集団は、該Ｔ細胞の増殖を刺激するために適切な条件下、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８
抗体と接触され得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激する
ためには、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ
−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、フランス、ブザンソン）が挙げられ、当技
術分野で一般に知られる他の方法を用いてもよい（Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．、Ｔｒａｎｓ
ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ． ３０（８）：３９７５−３９７７、１９９８；Ｈａａｎｅｎ
ｅｔ ａｌ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １９０（９）：１３１９１３２８、１９９９
；Ｇａｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ． ２２７（１−
２）：５３−６３、１９９９）。
多様な刺激時間に曝露されたＴ細胞は、異なる特性を呈し得る。例えば、典型的な血液
またはアフェレーシスで得られた末梢血の単核細胞産物は、ヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、
ＣＤ４＋）を有し、これは細胞傷害性やサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より
多い。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞のエキソビボでの増殖は、
約８〜９日目より前には、主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団を産生するが、約８〜９日目
より後は、Ｔ細胞集団は次第に増加するＴＣ細胞集団を含む。従って、治療の目的に応じ
て、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが有利な場合がある。同様に、
抗原特異的なＴＣ細胞のサブセットが単離された場合、このサブセットをさらに増殖させ
ることが有益な場合がある。
またはアフェレーシスで得られた末梢血の単核細胞産物は、ヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、
ＣＤ４＋）を有し、これは細胞傷害性やサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より
多い。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞のエキソビボでの増殖は、
約８〜９日目より前には、主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団を産生するが、約８〜９日目
より後は、Ｔ細胞集団は次第に増加するＴＣ細胞集団を含む。従って、治療の目的に応じ
て、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが有利な場合がある。同様に、
抗原特異的なＴＣ細胞のサブセットが単離された場合、このサブセットをさらに増殖させ
ることが有益な場合がある。
さらに、ＣＤ４及びＣＤ８のマーカーに加えて、該細胞増殖工程において、他の表現型
のマーカーは大きく変化するが、大部分は再現性がよい。従って、かかる再現性が、活性
化Ｔ細胞産物を特定の目的用に調整する能力を可能にする。
のマーカーは大きく変化するが、大部分は再現性がよい。従って、かかる再現性が、活性
化Ｔ細胞産物を特定の目的用に調整する能力を可能にする。
抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰが構築されると、様々なアッセイを用いて該分子
の活性、例えば、抗原刺激後のＴ細胞を増殖する能力、再刺激の非存在下でＴ細胞増殖を
維持する能力、及び適切なインビトロ及び動物モデルでの抗がん活性等であるがこれらに
限定されない活性を評価することができる。抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰの効果
を評価するアッセイは、以下にさらに詳細に説明する。
の活性、例えば、抗原刺激後のＴ細胞を増殖する能力、再刺激の非存在下でＴ細胞増殖を
維持する能力、及び適切なインビトロ及び動物モデルでの抗がん活性等であるがこれらに
限定されない活性を評価することができる。抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰの効果
を評価するアッセイは、以下にさらに詳細に説明する。
一次Ｔ細胞におけるＴＦＰ発現のウェスタンブロット分析を用いて、モノマー及びダイ
マーの存在を検出することができる（例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５３−１４６４ （２００９）参照）
。極めて簡潔には、該ＴＦＰを発現するＴ細胞（ＣＤ４＋とＣＤ８＋Ｔ細胞の１：１混合
物）を、インビトロで１０日より長く増殖させ、その後溶解し還元条件でＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅに供する。ＴＦＰは、ＴＣＲ鎖に対する抗体を用いてウェスタンブロット法によって検
出される。同じＴ細胞のサブセットを、非還元条件でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に用い共有
結合ダイマーの生成の評価を可能にする。
マーの存在を検出することができる（例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５３−１４６４ （２００９）参照）
。極めて簡潔には、該ＴＦＰを発現するＴ細胞（ＣＤ４＋とＣＤ８＋Ｔ細胞の１：１混合
物）を、インビトロで１０日より長く増殖させ、その後溶解し還元条件でＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅに供する。ＴＦＰは、ＴＣＲ鎖に対する抗体を用いてウェスタンブロット法によって検
出される。同じＴ細胞のサブセットを、非還元条件でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に用い共有
結合ダイマーの生成の評価を可能にする。
抗原刺激後のＴＦＰ＋Ｔ細胞のインビトロでの増殖は、フローサイトメトリーで測定す
ることができる。例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物を、アルファＣＤ３／ア
ルファＣＤ２８及びＡＰＣで刺激し、その後分析されるプロモーターの制御下で、ＧＦＰ
を発現するレンチウイルスベクターで形質導入する。例示的なプロモーターとしては、Ｃ
ＭＶ ＩＥ遺伝子、ＥＦ−１アルファ、ユビキチンＣ、またはホスホグリセロキナーゼ（
ＰＧＫ）プロモーターが挙げられる。ＧＦＰの蛍光は、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ
細胞のサブセット中での培養の６日目に、フローサイトメトリーによって評価される（例
えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８
）： １４５３−１４６４ （２００９）参照）。別の方法として、ＣＤ４＋及びＣＤ８
＋Ｔ細胞の混合物をアルファＣＤ３／アルファＣＤ２８被覆磁気ビーズで０日目に刺激し
、１日目に、ＴＦＰを発現するバイシストロニックなレンチウイルスベクターを用い、ｅ
ＧＦＰとともに、２Ａリボソームスキッピング配列を用いてＴＦＰで形質導入する。培養
物を洗浄後、ＣＤ１９＋Ｋ５６２細胞（Ｋ５６２−ＣＤ１９）、野生型Ｋ５６２細胞（Ｋ
５６２野生型）、または抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体の存在下でｈＣＤ３２及び４−１Ｂ
ＢＬを発現するＫ５６２細胞（Ｋ５６２−ＢＢＬ３／２８）のいずれかで再刺激する。外
因性ＩＬ−２を該培養物に１日おきに１００ＩＵ／ｍＬで添加する。ＧＦＰ＋Ｔ細胞は、
ビーズに基づく計数を用いてフローサイトメトリーによって数えられる（例えば、Ｍｉｌ
ｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５
３−１４６４ （２００９）参照）。
ることができる。例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物を、アルファＣＤ３／ア
ルファＣＤ２８及びＡＰＣで刺激し、その後分析されるプロモーターの制御下で、ＧＦＰ
を発現するレンチウイルスベクターで形質導入する。例示的なプロモーターとしては、Ｃ
ＭＶ ＩＥ遺伝子、ＥＦ−１アルファ、ユビキチンＣ、またはホスホグリセロキナーゼ（
ＰＧＫ）プロモーターが挙げられる。ＧＦＰの蛍光は、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ
細胞のサブセット中での培養の６日目に、フローサイトメトリーによって評価される（例
えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８
）： １４５３−１４６４ （２００９）参照）。別の方法として、ＣＤ４＋及びＣＤ８
＋Ｔ細胞の混合物をアルファＣＤ３／アルファＣＤ２８被覆磁気ビーズで０日目に刺激し
、１日目に、ＴＦＰを発現するバイシストロニックなレンチウイルスベクターを用い、ｅ
ＧＦＰとともに、２Ａリボソームスキッピング配列を用いてＴＦＰで形質導入する。培養
物を洗浄後、ＣＤ１９＋Ｋ５６２細胞（Ｋ５６２−ＣＤ１９）、野生型Ｋ５６２細胞（Ｋ
５６２野生型）、または抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体の存在下でｈＣＤ３２及び４−１Ｂ
ＢＬを発現するＫ５６２細胞（Ｋ５６２−ＢＢＬ３／２８）のいずれかで再刺激する。外
因性ＩＬ−２を該培養物に１日おきに１００ＩＵ／ｍＬで添加する。ＧＦＰ＋Ｔ細胞は、
ビーズに基づく計数を用いてフローサイトメトリーによって数えられる（例えば、Ｍｉｌ
ｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５
３−１４６４ （２００９）参照）。
再刺激の非存在下で持続するＴＦＰ＋Ｔ細胞の増殖もまた測定することができる（例え
ば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）
： １４５３−１４６４ （２００９）参照）。簡潔には、アルファＣＤ３／アルファＣ
Ｄ２８被覆磁気ビーズで０日目に刺激し、指示されたＴＦＰで１日目に形質導入した後、
培養の８日目に、平均Ｔ細胞体積（ｆｌ）をＣｏｕｌｔｅｒ Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ Ｉ
ＩＩ粒子計測器を用いて測定する。
ば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）
： １４５３−１４６４ （２００９）参照）。簡潔には、アルファＣＤ３／アルファＣ
Ｄ２８被覆磁気ビーズで０日目に刺激し、指示されたＴＦＰで１日目に形質導入した後、
培養の８日目に、平均Ｔ細胞体積（ｆｌ）をＣｏｕｌｔｅｒ Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ Ｉ
ＩＩ粒子計測器を用いて測定する。
動物モデルを用いてＴＦＰ−Ｔ活性を測定することもできる。例えば、免疫不全マウス
において初代ヒトプレＢ ＡＬＬを治療するためのヒトＣＤ１９特異的ＴＦＰ＋Ｔ細胞を
用いた異種移植モデルを用いることができる（例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５３−１４６４ （２００９
）参照）。極めて簡潔には、ＡＬＬの定着後、マウスを治療群に応じてランダム化する。
異なる数の改変Ｔ細胞を１：１の比でＢ−ＡＬＬを有するＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γ−／−マ
ウスに同時注入する。マウス由来の脾臓ＤＮＡにおける各ベクターのコピー数を、Ｔ細胞
の注入後の様々な時点で評価する。動物を１週間間隔で白血病について評価する。末梢血
ＣＤ１９＋Ｂ−ＡＬＬ芽細胞数を、アルファＣＤ１９−ゼータＴＦＰ＋Ｔ細胞またはｍｏ
ｃｋ形質導入Ｔ細胞を注入されたマウスで測定する。これらの群についての生存曲線を、
ログランク検定を用いて比較する。さらに、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γ−／−マウスにおける
Ｔ細胞注入の４週間後の末梢血ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の絶対数も分析することがで
きる。マウスに白血病細胞を注入し、３週間後、ｅＧＦＰに連結されたＴＦＰをコードす
るバイシストロニックなレンチウイルスベクターによって、ＴＦＰを発現するように改変
されたＴ細胞を注入する。Ｔ細胞は、注入に先立って、ｍｏｃｋ形質導入細胞と混合する
ことによって、４５〜５０％入力ＧＦＰ＋Ｔ細胞に正規化され、フローサイトメトリーに
よって確認される。動物を１週間間隔で白血病について評価する。ＴＦＰ＋Ｔ細胞群につ
いての生存曲線を、ログランク検定を用いて比較する。
において初代ヒトプレＢ ＡＬＬを治療するためのヒトＣＤ１９特異的ＴＦＰ＋Ｔ細胞を
用いた異種移植モデルを用いることができる（例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５３−１４６４ （２００９
）参照）。極めて簡潔には、ＡＬＬの定着後、マウスを治療群に応じてランダム化する。
異なる数の改変Ｔ細胞を１：１の比でＢ−ＡＬＬを有するＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γ−／−マ
ウスに同時注入する。マウス由来の脾臓ＤＮＡにおける各ベクターのコピー数を、Ｔ細胞
の注入後の様々な時点で評価する。動物を１週間間隔で白血病について評価する。末梢血
ＣＤ１９＋Ｂ−ＡＬＬ芽細胞数を、アルファＣＤ１９−ゼータＴＦＰ＋Ｔ細胞またはｍｏ
ｃｋ形質導入Ｔ細胞を注入されたマウスで測定する。これらの群についての生存曲線を、
ログランク検定を用いて比較する。さらに、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γ−／−マウスにおける
Ｔ細胞注入の４週間後の末梢血ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の絶対数も分析することがで
きる。マウスに白血病細胞を注入し、３週間後、ｅＧＦＰに連結されたＴＦＰをコードす
るバイシストロニックなレンチウイルスベクターによって、ＴＦＰを発現するように改変
されたＴ細胞を注入する。Ｔ細胞は、注入に先立って、ｍｏｃｋ形質導入細胞と混合する
ことによって、４５〜５０％入力ＧＦＰ＋Ｔ細胞に正規化され、フローサイトメトリーに
よって確認される。動物を１週間間隔で白血病について評価する。ＴＦＰ＋Ｔ細胞群につ
いての生存曲線を、ログランク検定を用いて比較する。
用量依存的なＴＦＰ治療反応が評価され得る（例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５３−１４６４ （２００
９）参照）。例えば、末梢血を、２１日目にＴＦＰ Ｔ細胞、もしくは同数のｍｏｃｋ形
質導入Ｔ細胞を注入した、またはＴ細胞を注入しないマウスにおいて、白血病の成立後３
５〜７０日で採取する。３５日目及び４９日目に、末梢血ＣＤ１９＋ＡＬＬ芽細胞数の測
定のため、各群のマウスをランダムに採血し、その後殺処分する。残りの動物は５７日目
及び７０日目に評価する。
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５３−１４６４ （２００
９）参照）。例えば、末梢血を、２１日目にＴＦＰ Ｔ細胞、もしくは同数のｍｏｃｋ形
質導入Ｔ細胞を注入した、またはＴ細胞を注入しないマウスにおいて、白血病の成立後３
５〜７０日で採取する。３５日目及び４９日目に、末梢血ＣＤ１９＋ＡＬＬ芽細胞数の測
定のため、各群のマウスをランダムに採血し、その後殺処分する。残りの動物は５７日目
及び７０日目に評価する。
細胞増殖及びサイトカイン産生の評価は、以前に例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．
， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５３−１４６４ （２０
０９）で記載されている。簡潔には、ＴＦＰ媒介増殖の評価は、マイクロタイタープレー
トにて、洗浄したＴ細胞を、ＣＤ１９を発現するＫ５６２細胞（Ｋ１９）またはＣＤ３２
及びＣＤ１３７を発現するＫ５６２細胞（ＫＴ３２−ＢＢＬ）と、最終的なＴ細胞：Ｋ５
６２比が２：１になるように混合することによって行われる。Ｋ５６２細胞には、使用に
先立ってガンマ線を照射する。抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８（クローン
９．３）モノクローナル抗体を、ＫＴ３２−ＢＢＬ細胞との培養物に加えてＴ細胞増殖刺
激用陽性対照とする。これは、これらのシグナルが長期的なＣＤ８＋Ｔ細胞のエキソビボ
での増殖を裏付けるためである。Ｔ細胞は、ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）蛍光ビーズ
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びフローサイトメトリーを用いて培養下でメーカーの記載通
りに数える。ＴＦＰ＋Ｔ細胞は、ｅＧＦＰ−２Ａが連結されたＴＦＰ発現レンチウイルス
ベクターで改変されたＴ細胞を用いてＧＦＰの発現によって特定される。ＧＦＰを発現し
ないＴＦＰ＋Ｔ細胞については、該ＴＦＰ＋Ｔ細胞は、ビオチン化組み換えＣＤ１９タン
パク質及び二次アビジン・ＰＥ複合体で検出される。Ｔ細胞上でのＣＤ４＋及びＣＤ８＋
の発現は、特定のモノクローナル抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でも同時に検出
される。サイトカインの測定は、再刺激の２４時間後に採取された上清にて、ヒトＴＨ１
／ＴＨ２サイトカインサイトメトリービーズアレイキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ）を用い、メーカーの指示に従って行う。蛍光は、ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイ
トメーターを用いて評価し、データはメーカーの指示に従って分析する。
， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）： １４５３−１４６４ （２０
０９）で記載されている。簡潔には、ＴＦＰ媒介増殖の評価は、マイクロタイタープレー
トにて、洗浄したＴ細胞を、ＣＤ１９を発現するＫ５６２細胞（Ｋ１９）またはＣＤ３２
及びＣＤ１３７を発現するＫ５６２細胞（ＫＴ３２−ＢＢＬ）と、最終的なＴ細胞：Ｋ５
６２比が２：１になるように混合することによって行われる。Ｋ５６２細胞には、使用に
先立ってガンマ線を照射する。抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８（クローン
９．３）モノクローナル抗体を、ＫＴ３２−ＢＢＬ細胞との培養物に加えてＴ細胞増殖刺
激用陽性対照とする。これは、これらのシグナルが長期的なＣＤ８＋Ｔ細胞のエキソビボ
での増殖を裏付けるためである。Ｔ細胞は、ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）蛍光ビーズ
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びフローサイトメトリーを用いて培養下でメーカーの記載通
りに数える。ＴＦＰ＋Ｔ細胞は、ｅＧＦＰ−２Ａが連結されたＴＦＰ発現レンチウイルス
ベクターで改変されたＴ細胞を用いてＧＦＰの発現によって特定される。ＧＦＰを発現し
ないＴＦＰ＋Ｔ細胞については、該ＴＦＰ＋Ｔ細胞は、ビオチン化組み換えＣＤ１９タン
パク質及び二次アビジン・ＰＥ複合体で検出される。Ｔ細胞上でのＣＤ４＋及びＣＤ８＋
の発現は、特定のモノクローナル抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でも同時に検出
される。サイトカインの測定は、再刺激の２４時間後に採取された上清にて、ヒトＴＨ１
／ＴＨ２サイトカインサイトメトリービーズアレイキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ）を用い、メーカーの指示に従って行う。蛍光は、ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイ
トメーターを用いて評価し、データはメーカーの指示に従って分析する。
細胞傷害性は、標準的な５１Ｃｒ放出アッセイによって評価することができる（例えば
、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：
１４５３−１４６４ （２００９）参照）。簡潔には、標的細胞（Ｋ５６２系列及び初
代プロＢ−ＡＬＬ細胞）に、３７℃で２時間、頻繁に攪拌しながら５１Ｃｒ（ＮａＣｒＯ
４として、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ）をロードし、これを完全ＲＰＭＩ
で２度洗浄し、マイクロタイタープレートに播種する。エフェクターＴ細胞を、該ウェル
内で、完全ＲＰＭＩ中で標的細胞と、様々なエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比で
混合する。培地のみを含む（自然放出、ＳＲ）または界面活性剤トリトン−Ｘ１００の１
％溶液を含む（総放出、ＴＲ）さらなるウェルも用意する。３７℃で４時間の培養後、各
ウェルから上清を採取する。放出された５１Ｃｒをその後ガンマパーティクルカウンター
（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．、マサチューセッツ州ウォルサム）を
用いて測定する。各条件を少なくとも３連で行い、溶解率を式：溶解％＝（ＥＲ−ＳＲ）
／（ＴＲ−ＳＲ）を用いて計算する。式中、ＥＲは各実験条件についての５１Ｃｒ放出の
平均を表す。
、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：
１４５３−１４６４ （２００９）参照）。簡潔には、標的細胞（Ｋ５６２系列及び初
代プロＢ−ＡＬＬ細胞）に、３７℃で２時間、頻繁に攪拌しながら５１Ｃｒ（ＮａＣｒＯ
４として、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ）をロードし、これを完全ＲＰＭＩ
で２度洗浄し、マイクロタイタープレートに播種する。エフェクターＴ細胞を、該ウェル
内で、完全ＲＰＭＩ中で標的細胞と、様々なエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比で
混合する。培地のみを含む（自然放出、ＳＲ）または界面活性剤トリトン−Ｘ１００の１
％溶液を含む（総放出、ＴＲ）さらなるウェルも用意する。３７℃で４時間の培養後、各
ウェルから上清を採取する。放出された５１Ｃｒをその後ガンマパーティクルカウンター
（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．、マサチューセッツ州ウォルサム）を
用いて測定する。各条件を少なくとも３連で行い、溶解率を式：溶解％＝（ＥＲ−ＳＲ）
／（ＴＲ−ＳＲ）を用いて計算する。式中、ＥＲは各実験条件についての５１Ｃｒ放出の
平均を表す。
画像技術を用いて、腫瘍を有する動物モデルにおけるＴＦＰの特異的輸送及び増殖を評
価することができる。かかるアッセイは、例えば、Ｂａｒｒｅｔｔ ｅｔ ａｌ．， Ｈ
ｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２２：１５７５−１５８６ （２０１１）に記載
されている。簡潔には、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＳＧ）マウスに、Ｎａｌｍ−
６細胞に続いて７日後、ＴＦＰ構築物でのエレクトロポレーションの４時間後にＴ細胞を
静注する。該Ｔ細胞は、ホタルルシフェラーゼを発現させるためにレンチウイルス構築物
を安定的にトランスフェクトされ、マウスは生物発光に対して撮像される。別の方法とし
て、Ｎａｌｍ−６異種移植モデルにおけるＴＦＰ＋Ｔ細胞の単回注射の治療効果及び特異
性は以下の通りに測定することができる：ＮＳＧマウスに、ホタルルシフェラーゼを安定
的に発現するように形質導入したＮａｌｍ−６を注射し、続いて７日後にＣＤ１９ ＴＦ
ＰをエレクトロポレーションしたＴ細胞を単回尾静脈注射する。動物を注射後の様々な時
点で撮像する。例えば、代表的なマウスにおけるホタルルシフェラーゼ陽性白血病光子密
度ヒートマップを５日目（処置の２日前）及び８日目（ＴＦＰ＋ＰＢＬの２４時間後）に
生成することができる。
価することができる。かかるアッセイは、例えば、Ｂａｒｒｅｔｔ ｅｔ ａｌ．， Ｈ
ｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２２：１５７５−１５８６ （２０１１）に記載
されている。簡潔には、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＳＧ）マウスに、Ｎａｌｍ−
６細胞に続いて７日後、ＴＦＰ構築物でのエレクトロポレーションの４時間後にＴ細胞を
静注する。該Ｔ細胞は、ホタルルシフェラーゼを発現させるためにレンチウイルス構築物
を安定的にトランスフェクトされ、マウスは生物発光に対して撮像される。別の方法とし
て、Ｎａｌｍ−６異種移植モデルにおけるＴＦＰ＋Ｔ細胞の単回注射の治療効果及び特異
性は以下の通りに測定することができる：ＮＳＧマウスに、ホタルルシフェラーゼを安定
的に発現するように形質導入したＮａｌｍ−６を注射し、続いて７日後にＣＤ１９ ＴＦ
ＰをエレクトロポレーションしたＴ細胞を単回尾静脈注射する。動物を注射後の様々な時
点で撮像する。例えば、代表的なマウスにおけるホタルルシフェラーゼ陽性白血病光子密
度ヒートマップを５日目（処置の２日前）及び８日目（ＴＦＰ＋ＰＢＬの２４時間後）に
生成することができる。
本明細書の実施例の節に記載のものならびに当技術分野で既知のものを含めた他のアッ
セイもまた、本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ構築物を評価するために用い
ることができる。
セイもまた、本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ構築物を評価するために用い
ることができる。
治療への応用
ＣＤ１９またはＢＣＭＡ関連疾患及び／または障害
１つの態様において、本発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患の治療方法
を提供する。１つの態様において、本発明は、腫瘍の一部がＣＤ１９またはＢＣＭＡに対
して陰性であり、腫瘍の一部がＣＤ１９またはＢＣＭＡに対して陽性である疾患の治療方
法を提供する。例えば、本発明のＴＦＰは、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現の上昇を伴う
疾患の治療を受けた対象の治療に有用であり、この場合、ＣＤ１９またはＢＣＭＡのレベ
ルの上昇の治療を受けた該対象は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡのレベルの上昇を伴う疾患を
呈する。
ＣＤ１９またはＢＣＭＡ関連疾患及び／または障害
１つの態様において、本発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患の治療方法
を提供する。１つの態様において、本発明は、腫瘍の一部がＣＤ１９またはＢＣＭＡに対
して陰性であり、腫瘍の一部がＣＤ１９またはＢＣＭＡに対して陽性である疾患の治療方
法を提供する。例えば、本発明のＴＦＰは、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現の上昇を伴う
疾患の治療を受けた対象の治療に有用であり、この場合、ＣＤ１９またはＢＣＭＡのレベ
ルの上昇の治療を受けた該対象は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡのレベルの上昇を伴う疾患を
呈する。
１つの態様において、本発明は、哺乳類のＴ細胞での発現用のプロモーターに作動可能
に連結された抗ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰを含むベクターに関する。１つの態様に
おいて、本発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する腫瘍の治療用のＣＤ１９またはＢ
ＣＭＡ ＴＦＰを発現する組み換えＴ細胞を提供し、該ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ
を発現する組み換えＴ細胞は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔと呼ばれる。１つの
態様において、本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔは、該ＴＦＰ−Ｔが腫瘍細
胞を標的とし、該腫瘍の成長が阻害されるように、腫瘍細胞を、その表面で発現する少な
くとも１つの本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰと接触させることが可能である。
に連結された抗ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰを含むベクターに関する。１つの態様に
おいて、本発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する腫瘍の治療用のＣＤ１９またはＢ
ＣＭＡ ＴＦＰを発現する組み換えＴ細胞を提供し、該ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ
を発現する組み換えＴ細胞は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔと呼ばれる。１つの
態様において、本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔは、該ＴＦＰ−Ｔが腫瘍細
胞を標的とし、該腫瘍の成長が阻害されるように、腫瘍細胞を、その表面で発現する少な
くとも１つの本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰと接触させることが可能である。
１つの態様において、本発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞の成長の
阻害方法であって、該ＴＦＰ−Ｔが抗原に反応して活性化され、がん細胞を標的化し、該
腫瘍の成長が阻害されるように、該腫瘍細胞を本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ
−Ｔ細胞と接触させることを含む方法に関する。
阻害方法であって、該ＴＦＰ−Ｔが抗原に反応して活性化され、がん細胞を標的化し、該
腫瘍の成長が阻害されるように、該腫瘍細胞を本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ
−Ｔ細胞と接触させることを含む方法に関する。
１つの態様において、本発明は、対象におけるがんの治療方法に関する。該方法は、該
がんが該対象において治療されるように、本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ
細胞を該対象に投与することを含む。本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞
で治療可能ながんの例は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴うがんである。１つの態様
において、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う該がんは血液がんである。１つの態様に
おいて、該血液がんは、白血病またはリンパ腫である。１つの態様において、ＣＤ１９の
発現を伴うがんには、例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性
リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）が挙げられるがこれら
に限定されない例えば１つ以上の急性白血病；例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢
性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の慢性白血病
が挙げられるがこれらに限定されないがん及び悪性腫瘍が挙げられる。ＣＤ１９またはＢ
ＣＭＡの発現を伴うさらなるがんまたは血液疾患としては、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性
白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞
リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫
、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、
多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リン
パ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ならびに
骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によってまとめられる様々な血液疾患の集
まりである「前白血病」等が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、ＣＤ１９また
はＢＣＭＡの発現を伴う疾患としては、例えば、非定型及び／または非古典的がん、悪性
腫瘍、ＣＤ１９もしくはＢＣＭＡの発現を伴う前がん状態または増殖性疾患が挙げられる
がこれらに限定されない。
がんが該対象において治療されるように、本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ
細胞を該対象に投与することを含む。本発明のＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞
で治療可能ながんの例は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴うがんである。１つの態様
において、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う該がんは血液がんである。１つの態様に
おいて、該血液がんは、白血病またはリンパ腫である。１つの態様において、ＣＤ１９の
発現を伴うがんには、例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性
リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）が挙げられるがこれら
に限定されない例えば１つ以上の急性白血病；例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢
性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の慢性白血病
が挙げられるがこれらに限定されないがん及び悪性腫瘍が挙げられる。ＣＤ１９またはＢ
ＣＭＡの発現を伴うさらなるがんまたは血液疾患としては、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性
白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞
リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫
、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、
多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リン
パ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ならびに
骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によってまとめられる様々な血液疾患の集
まりである「前白血病」等が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、ＣＤ１９また
はＢＣＭＡの発現を伴う疾患としては、例えば、非定型及び／または非古典的がん、悪性
腫瘍、ＣＤ１９もしくはＢＣＭＡの発現を伴う前がん状態または増殖性疾患が挙げられる
がこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ、例えば、本明細書に記載
のもので治療され得るがんは、多発性骨髄腫である。多発性骨髄腫は、血液のがんであり
、骨髄での形質細胞クローンの蓄積を特徴とする。多発性骨髄腫に対する現行の治療は、
サリドマイド類似体であるレナリドミドでの治療が挙げられるがこれに限定されない。レ
ナリドミドは、抗腫瘍活性、血管形成阻害、及び免疫修飾を含む活性を有する。一般に、
骨髄腫細胞は、フローサイトメトリーによって、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現に対して
陰性であると考えられている。本発明は、骨髄腫の腫瘍細胞の数パーセントがＣＤ１９ま
たはＢＣＭＡを発現することの認識を包含する。従って、いくつかの実施形態では、Ｃ１
９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ、例えば、本明細書に記載のものは、骨髄腫細胞を標的化する
ために使用され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ治療は
、１つ以上のさらなる治療、例えば、レナリドミド治療と組み合わせて使用され得る。
のもので治療され得るがんは、多発性骨髄腫である。多発性骨髄腫は、血液のがんであり
、骨髄での形質細胞クローンの蓄積を特徴とする。多発性骨髄腫に対する現行の治療は、
サリドマイド類似体であるレナリドミドでの治療が挙げられるがこれに限定されない。レ
ナリドミドは、抗腫瘍活性、血管形成阻害、及び免疫修飾を含む活性を有する。一般に、
骨髄腫細胞は、フローサイトメトリーによって、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現に対して
陰性であると考えられている。本発明は、骨髄腫の腫瘍細胞の数パーセントがＣＤ１９ま
たはＢＣＭＡを発現することの認識を包含する。従って、いくつかの実施形態では、Ｃ１
９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ、例えば、本明細書に記載のものは、骨髄腫細胞を標的化する
ために使用され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ＴＦＰ治療は
、１つ以上のさらなる治療、例えば、レナリドミド治療と組み合わせて使用され得る。
本発明は、Ｔ細胞がＴＦＰを発現するように遺伝子組み換えされ、該ＴＦＰ発現Ｔ細胞
が、それを必要とするレシピエントに注入される、一種の細胞療法を含む。注入された細
胞は、レシピエントの腫瘍細胞を死滅させることが可能である。抗体療法と異なり、ＴＦ
Ｐ発現Ｔ細胞は、インビボで複製することが可能であり、長期持続をもたらし、それが腫
瘍の持続的制御につながり得る。様々な態様において、患者に投与された該Ｔ細胞、また
はそれらの後代は、患者に該Ｔ細胞を投与後、少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ
月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、
１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、
２年、３年、４年、または５年間、当該患者内で存続する。
が、それを必要とするレシピエントに注入される、一種の細胞療法を含む。注入された細
胞は、レシピエントの腫瘍細胞を死滅させることが可能である。抗体療法と異なり、ＴＦ
Ｐ発現Ｔ細胞は、インビボで複製することが可能であり、長期持続をもたらし、それが腫
瘍の持続的制御につながり得る。様々な態様において、患者に投与された該Ｔ細胞、また
はそれらの後代は、患者に該Ｔ細胞を投与後、少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ
月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、
１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、
２年、３年、４年、または５年間、当該患者内で存続する。
また、本発明は、Ｔ細胞が、ＴＦＰを一過性に発現するために、例えば、インビトロで
転写されたＲＮＡによって改変され、該ＴＦＰ発現Ｔ細胞が、それを必要とするレシピエ
ントに注入される、一種の細胞療法を含む。注入された細胞は、レシピエントの腫瘍細胞
を死滅させることが可能である。従って、様々な態様において、患者に投与された該Ｔ細
胞は、患者に該Ｔ細胞を投与後、１ヶ月未満、例えば、３週間、２週間、または１週間存
在する。
転写されたＲＮＡによって改変され、該ＴＦＰ発現Ｔ細胞が、それを必要とするレシピエ
ントに注入される、一種の細胞療法を含む。注入された細胞は、レシピエントの腫瘍細胞
を死滅させることが可能である。従って、様々な態様において、患者に投与された該Ｔ細
胞は、患者に該Ｔ細胞を投与後、１ヶ月未満、例えば、３週間、２週間、または１週間存
在する。
いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、該ＴＦＰ発現Ｔ細胞に
よって誘発される抗腫瘍免疫反応は、能動でも受動免疫反応でもよく、代替的に、直接対
間接免疫反応によってもよい。１つの態様において、該ＴＦＰを形質導入したＴ細胞は、
該ＣＤ１９またはＢＣＭＡ抗原を発現するヒトがん細胞に反応して特定の炎症性サイトカ
イン分泌及び強力な細胞溶解反応を呈し、可溶性ＣＤ１９またはＢＣＭＡ阻害に耐性であ
り、バイスタンダー殺傷を媒介し、定着したヒト腫瘍の退行を媒介する。例えば、ＣＤ１
９を発現するまたはＢＣＭＡを発現する腫瘍の異種フィールド内の抗原のない腫瘍細胞は
、隣接する抗原陽性がん細胞にすでに反応しているＣＤ１９再指向性またはＢＣＭＡ再指
向性Ｔ細胞による間接的な破壊に対して敏感である可能性がある。
よって誘発される抗腫瘍免疫反応は、能動でも受動免疫反応でもよく、代替的に、直接対
間接免疫反応によってもよい。１つの態様において、該ＴＦＰを形質導入したＴ細胞は、
該ＣＤ１９またはＢＣＭＡ抗原を発現するヒトがん細胞に反応して特定の炎症性サイトカ
イン分泌及び強力な細胞溶解反応を呈し、可溶性ＣＤ１９またはＢＣＭＡ阻害に耐性であ
り、バイスタンダー殺傷を媒介し、定着したヒト腫瘍の退行を媒介する。例えば、ＣＤ１
９を発現するまたはＢＣＭＡを発現する腫瘍の異種フィールド内の抗原のない腫瘍細胞は
、隣接する抗原陽性がん細胞にすでに反応しているＣＤ１９再指向性またはＢＣＭＡ再指
向性Ｔ細胞による間接的な破壊に対して敏感である可能性がある。
１つの態様において、本発明のヒトＴＦＰ改変Ｔ細胞は、哺乳類における、エキソビボ
での免疫付与及び／またはインビボ治療用の一種のワクチンであり得る。１つの態様にお
いて、該哺乳類はヒトである。
での免疫付与及び／またはインビボ治療用の一種のワクチンであり得る。１つの態様にお
いて、該哺乳類はヒトである。
エキソビボでの免疫付与に関しては、該細胞を哺乳類に投与する前に、以下のうちの少
なくとも１つがインビトロで行われる：ｉ）該細胞の増殖、ｉｉ）ＴＦＰをコードする核
酸を該細胞に導入する、またはｉｉｉ）該細胞の凍結保存。
なくとも１つがインビトロで行われる：ｉ）該細胞の増殖、ｉｉ）ＴＦＰをコードする核
酸を該細胞に導入する、またはｉｉｉ）該細胞の凍結保存。
エキソビボ手順は、当技術分野で周知であり、以下により詳細に論じる。簡潔には、細
胞を哺乳類（例えば、ヒト）から単離し、本明細書に開示のＴＦＰを発現するベクターで
遺伝子組み換えする（すなわち、インビトロで形質導入またはトランスフェクトする）。
該ＴＦＰで改変された細胞を哺乳類レシピエントに投与し、治療効果を得ることができる
。該哺乳類レシピエントは、ヒトでよく、該ＴＦＰで改変された細胞は、該レシピエント
に関して自己移植の場合がある。別の方法として、該細胞は、該レシピエントに関して同
種異系、同系、または異種の場合がある。
胞を哺乳類（例えば、ヒト）から単離し、本明細書に開示のＴＦＰを発現するベクターで
遺伝子組み換えする（すなわち、インビトロで形質導入またはトランスフェクトする）。
該ＴＦＰで改変された細胞を哺乳類レシピエントに投与し、治療効果を得ることができる
。該哺乳類レシピエントは、ヒトでよく、該ＴＦＰで改変された細胞は、該レシピエント
に関して自己移植の場合がある。別の方法として、該細胞は、該レシピエントに関して同
種異系、同系、または異種の場合がある。
造血幹及び前駆細胞のエキソビボでの増殖手順は、参照することによって本明細書に組
み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号に記載されており、本発明の細胞に適用する
ことができる。他の適切な方法は当技術分野で知られており、従って、本発明は、該細胞
の任意の特定のエキソビボでの増殖方法に限定されない。簡潔には、Ｔ細胞のエキソビボ
での培養及び増殖は：（１）末梢血採取または骨髄外植片から、哺乳類由来のＣＤ３４＋
造血幹及び前駆細胞を採取し；（２）かかる細胞をエキソビボで増殖させることを含む。
米国特許第５，１９９，９４２号に記載の細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−
１、ＩＬ−３、及びｃ−ｋｉｔリガンド等の他の因子を該細胞の培養及び増殖のために用
いることができる。
み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号に記載されており、本発明の細胞に適用する
ことができる。他の適切な方法は当技術分野で知られており、従って、本発明は、該細胞
の任意の特定のエキソビボでの増殖方法に限定されない。簡潔には、Ｔ細胞のエキソビボ
での培養及び増殖は：（１）末梢血採取または骨髄外植片から、哺乳類由来のＣＤ３４＋
造血幹及び前駆細胞を採取し；（２）かかる細胞をエキソビボで増殖させることを含む。
米国特許第５，１９９，９４２号に記載の細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−
１、ＩＬ−３、及びｃ−ｋｉｔリガンド等の他の因子を該細胞の培養及び増殖のために用
いることができる。
エキソビボでの免疫付与において、細胞ベースのワクチンの使用に加えて本発明は、患
者の抗原に対する免疫反応を誘発するインビボでの免疫付与のための組成物及び方法もま
た提供する。
者の抗原に対する免疫反応を誘発するインビボでの免疫付与のための組成物及び方法もま
た提供する。
一般に、本明細書に記載の活性化及び増殖された細胞は、免疫不全の個体で生じる疾患
の治療及び予防に利用され得る。特に、本発明のＴＦＰで改変されたＴ細胞は、ＣＤ１９
またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、障害、及び状態の治療に用いられる。特定の態様にお
いて、本発明の細胞は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、障害、及び状態を発
症する危険性がある患者の治療に用いられる。従って、本発明は、治療有効量の本発明の
ＴＦＰで改変されたＴ細胞を、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、障害、及び状
態の治療または予防を必要とする対象に投与することを含む、該治療または予防のための
方法を提供する。
の治療及び予防に利用され得る。特に、本発明のＴＦＰで改変されたＴ細胞は、ＣＤ１９
またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、障害、及び状態の治療に用いられる。特定の態様にお
いて、本発明の細胞は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、障害、及び状態を発
症する危険性がある患者の治療に用いられる。従って、本発明は、治療有効量の本発明の
ＴＦＰで改変されたＴ細胞を、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、障害、及び状
態の治療または予防を必要とする対象に投与することを含む、該治療または予防のための
方法を提供する。
１つの態様において、本発明のＴＦＰ−Ｔ細胞は、がんや悪性腫瘍などの増殖性疾患、
または骨髄異形成、骨髄異形成症候群、もしくは前白血病などの前がん状態の治療に使用
され得る。１つの態様において、該がんは血液がんである。１つの態様において、該血液
がんは、白血病またはリンパ腫である。１つの態様において、本発明のＴＦＰ−Ｔ細胞は
、例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「
ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない例え
ば急性白血病；例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が
挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の慢性白血病；例えば、Ｂ細胞前リンパ球性
白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞
リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫
、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、
多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リン
パ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ならびに
骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によってまとめられる様々な血液疾患の集
まりである「前白血病」等が挙げられるがこれらに限定されないさらなる血液がんまたは
血液疾患等であるがこれらに限定されないがん及び悪性腫瘍を治療するために使用され得
る。さらに、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患としては、例えば、非定型及び／
または非古典的がん、悪性腫瘍、ＣＤ１９もしくはＢＣＭＡを発現する前がん状態または
増殖性疾患が挙げられるがこれらに限定されない。ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う
非がん関連の適応症としては、例えば、自己免疫疾患（例えば、狼瘡）、炎症性疾患（ア
レルギー及び喘息）、ならびに移植が挙げられるがこれらに限定されない。
または骨髄異形成、骨髄異形成症候群、もしくは前白血病などの前がん状態の治療に使用
され得る。１つの態様において、該がんは血液がんである。１つの態様において、該血液
がんは、白血病またはリンパ腫である。１つの態様において、本発明のＴＦＰ−Ｔ細胞は
、例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「
ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない例え
ば急性白血病；例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が
挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の慢性白血病；例えば、Ｂ細胞前リンパ球性
白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞
リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫
、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、
多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リン
パ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ならびに
骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によってまとめられる様々な血液疾患の集
まりである「前白血病」等が挙げられるがこれらに限定されないさらなる血液がんまたは
血液疾患等であるがこれらに限定されないがん及び悪性腫瘍を治療するために使用され得
る。さらに、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患としては、例えば、非定型及び／
または非古典的がん、悪性腫瘍、ＣＤ１９もしくはＢＣＭＡを発現する前がん状態または
増殖性疾患が挙げられるがこれらに限定されない。ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う
非がん関連の適応症としては、例えば、自己免疫疾患（例えば、狼瘡）、炎症性疾患（ア
レルギー及び喘息）、ならびに移植が挙げられるがこれらに限定されない。
本発明のＴＦＰで改変されたＴ細胞は、単独で投与しても、希釈剤及び／または他の成
分、例えば、ＩＬ−２もしくは他のサイトカイン、または細胞集団と組み合わせて医薬組
成物として投与してもよい。
分、例えば、ＩＬ−２もしくは他のサイトカイン、または細胞集団と組み合わせて医薬組
成物として投与してもよい。
血液がん
血液がん疾患は、白血病及び悪性リンパ増殖性疾患等の、血液、骨髄、ならびにリンパ
系に影響を与える種類のがんである。
血液がん疾患は、白血病及び悪性リンパ増殖性疾患等の、血液、骨髄、ならびにリンパ
系に影響を与える種類のがんである。
白血病は、急性白血病と慢性白血病に分類することができる。急性白血病は、さらに急
性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）として分類することができ
る。慢性白血病には、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が
含まれる。他の関連する疾患としては、骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）及
びＡＭＬへの転換の危険性によってまとめられる様々な血液疾患の集まりである骨髄異形
成症候群（ＭＤＳ、かつて「前白血病」として知られていた）が挙げられる。
性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）として分類することができ
る。慢性白血病には、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が
含まれる。他の関連する疾患としては、骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）及
びＡＭＬへの転換の危険性によってまとめられる様々な血液疾患の集まりである骨髄異形
成症候群（ＭＤＳ、かつて「前白血病」として知られていた）が挙げられる。
本発明は、がんの治療用の組成物及び方法を提供する。１つの態様において、該がんは
、白血病またはリンパ腫が挙げられるがこれに限定されない血液がんである。１つの態様
において、本発明のＴＦＰ−Ｔ細胞は、例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ
」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）が挙
げられるがこれらに限定されない例えば急性白血病；例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ
）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の慢性
白血病；例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキッ
トリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、
小細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マン
トル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、
非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレ
ームマクログロブリン血症、ならびに骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によ
ってまとめられる様々な血液疾患の集まりである「前白血病」等が挙げられるがこれらに
限定されないさらなる血液がんまたは血液疾患等であるがこれらに限定されないがん及び
悪性腫瘍を治療するために使用され得る。さらに、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う
疾患としては、例えば、非定型及び／または非古典的がん、悪性腫瘍、ＣＤ１９もしくは
ＢＣＭＡを発現する前がん状態または増殖性疾患が挙げられるがこれらに限定されない。
、白血病またはリンパ腫が挙げられるがこれに限定されない血液がんである。１つの態様
において、本発明のＴＦＰ−Ｔ細胞は、例えば、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ
」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）が挙
げられるがこれらに限定されない例えば急性白血病；例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ
）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の慢性
白血病；例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキッ
トリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、
小細胞もしくは大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マン
トル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、
非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレ
ームマクログロブリン血症、ならびに骨髄の血液細胞の無効な産生（または異形成）によ
ってまとめられる様々な血液疾患の集まりである「前白血病」等が挙げられるがこれらに
限定されないさらなる血液がんまたは血液疾患等であるがこれらに限定されないがん及び
悪性腫瘍を治療するために使用され得る。さらに、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う
疾患としては、例えば、非定型及び／または非古典的がん、悪性腫瘍、ＣＤ１９もしくは
ＢＣＭＡを発現する前がん状態または増殖性疾患が挙げられるがこれらに限定されない。
また、本発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞集団の増殖を阻害、または該
集団を減少させる方法であって、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞を含む細胞集団
を、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣ
ＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞と接触させることを含む方法を提供する。特定の態様において、本
発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現するがん細胞集団の増殖を阻害、または該集団を
減少させる方法であって、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現するがん細胞集団を、ＣＤ１９
またはＢＣＭＡを発現する細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ
−Ｔ細胞と接触させることを含む方法を提供する。１つの態様において、本発明は、ＣＤ
１９またはＢＣＭＡを発現するがん細胞集団の増殖を阻害、または該集団を減少させる方
法であって、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現するがん細胞集団を、ＣＤ１９またはＢＣＭ
Ａを発現する細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞と接
触させることを含む方法を提供する。特定の態様において、本発明の抗ＣＤ１９または抗
ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞は、細胞及び／またはがん細胞の分量、数、量、または割合を
、骨髄性白血病または他のＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞に関連するがんを有す
る対象またはそれに対する動物モデルにおいて、陰性対照と比較して、少なくとも２５％
、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なく
とも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％低下させる
。１つの態様において、該対象はヒトである。
集団を減少させる方法であって、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞を含む細胞集団
を、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣ
ＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞と接触させることを含む方法を提供する。特定の態様において、本
発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現するがん細胞集団の増殖を阻害、または該集団を
減少させる方法であって、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現するがん細胞集団を、ＣＤ１９
またはＢＣＭＡを発現する細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ
−Ｔ細胞と接触させることを含む方法を提供する。１つの態様において、本発明は、ＣＤ
１９またはＢＣＭＡを発現するがん細胞集団の増殖を阻害、または該集団を減少させる方
法であって、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現するがん細胞集団を、ＣＤ１９またはＢＣＭ
Ａを発現する細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞と接
触させることを含む方法を提供する。特定の態様において、本発明の抗ＣＤ１９または抗
ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞は、細胞及び／またはがん細胞の分量、数、量、または割合を
、骨髄性白血病または他のＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞に関連するがんを有す
る対象またはそれに対する動物モデルにおいて、陰性対照と比較して、少なくとも２５％
、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なく
とも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％低下させる
。１つの態様において、該対象はヒトである。
また、本発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞に関連する疾患（例えば、Ｃ
Ｄ１９またはＢＣＭＡを発現する血液がんまたは非定型がん）を予防、治療、及び／また
は管理する方法であって、必要とする対象に対して、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する
細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞を投与することを
含む方法を提供する。１つの態様において、該対象はヒトである。ＣＤ１９またはＢＣＭ
Ａを発現する細胞に関連する疾患の非限定的な例としては、自己免疫疾患（狼瘡等）、炎
症性疾患（アレルギー及び喘息等）、ならびにがん（血液がんまたはＣＤ１９もしくはＢ
ＣＭＡを発現する非定型がん等）が挙げられる。
Ｄ１９またはＢＣＭＡを発現する血液がんまたは非定型がん）を予防、治療、及び／また
は管理する方法であって、必要とする対象に対して、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する
細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞を投与することを
含む方法を提供する。１つの態様において、該対象はヒトである。ＣＤ１９またはＢＣＭ
Ａを発現する細胞に関連する疾患の非限定的な例としては、自己免疫疾患（狼瘡等）、炎
症性疾患（アレルギー及び喘息等）、ならびにがん（血液がんまたはＣＤ１９もしくはＢ
ＣＭＡを発現する非定型がん等）が挙げられる。
また、本発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞に関連する疾患を予防、治療
、及び／または管理する方法であって、必要とする対象に対して、ＣＤ１９またはＢＣＭ
Ａを発現する細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞を投
与することを含む方法を提供する。１つの態様において、該対象はヒトである。
、及び／または管理する方法であって、必要とする対象に対して、ＣＤ１９またはＢＣＭ
Ａを発現する細胞に結合する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞を投
与することを含む方法を提供する。１つの態様において、該対象はヒトである。
本発明は、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞に関連するがんの再発の予防方法で
あって、それを必要とする対象に対して、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞に結合
する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞を投与することを含む方法を
提供する。１つの態様において、該方法は、それを必要とする対象に対して、ＣＤ１９ま
たはＢＣＭＡを発現する細胞に結合する本明細書に記載の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ
ＴＦＰ−Ｔ細胞の有効量を別の治療の有効量と組み合わせて投与することを含む。
あって、それを必要とする対象に対して、ＣＤ１９またはＢＣＭＡを発現する細胞に結合
する本発明の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ−Ｔ細胞を投与することを含む方法を
提供する。１つの態様において、該方法は、それを必要とする対象に対して、ＣＤ１９ま
たはＢＣＭＡを発現する細胞に結合する本明細書に記載の抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ
ＴＦＰ−Ｔ細胞の有効量を別の治療の有効量と組み合わせて投与することを含む。
併用療法
本明細書に記載のＴＦＰ発現細胞は、他の既知の薬剤及び治療と組み合わせて使用して
もよい。本明細書で用いられる、「組み合わせて」投与されるとは、対象に対して、２つ
（またはそれ以上）の異なる治療が、該対象の疾患の苦痛の過程において送達されること
、例えば、該２つ以上の治療が、該対象が該障害と診断された後、該障害が治癒もしくは
除去される前、または治療が他の理由のために中止される前に送達されることを意味する
。いくつかの実施形態では、投与に関して重複があるように、１つの治療の送達は、第二
の送達の開始時に依然として行われている。これは、本明細書では「同時」または「同時
送達」と呼ばれる場合がある。他の実施形態では、１つの治療の送達は、他方の治療の送
達の開始前に終了する。いずれかの場合のいくつかの実施形態では、該治療は、併用投与
のためにより効果的である。例えば、該第二の治療はより効果的であり、例えば、該第一
の治療なしで該第二の治療が施される場合に見られるより、より少ない該第二の治療で同
等の効果が見られるか、または、該第二の治療は症状を大幅に減少させ、類似の状況は該
第一の治療でも見られる。いくつかの実施形態では、送達は、症状、または、障害に関連
する他のパラメータの減少が、他方の非存在下で送達される１つの治療で観察されるもの
より大きくなるようになされる。該２つの治療の効果は、一部相加的であるか、完全に相
加的であるか、または相加的を超える場合がある。該送達は、送達された第一の治療の効
果が、第二の治療が送達される際に依然として検出可能であるようになされ得る。
本明細書に記載のＴＦＰ発現細胞は、他の既知の薬剤及び治療と組み合わせて使用して
もよい。本明細書で用いられる、「組み合わせて」投与されるとは、対象に対して、２つ
（またはそれ以上）の異なる治療が、該対象の疾患の苦痛の過程において送達されること
、例えば、該２つ以上の治療が、該対象が該障害と診断された後、該障害が治癒もしくは
除去される前、または治療が他の理由のために中止される前に送達されることを意味する
。いくつかの実施形態では、投与に関して重複があるように、１つの治療の送達は、第二
の送達の開始時に依然として行われている。これは、本明細書では「同時」または「同時
送達」と呼ばれる場合がある。他の実施形態では、１つの治療の送達は、他方の治療の送
達の開始前に終了する。いずれかの場合のいくつかの実施形態では、該治療は、併用投与
のためにより効果的である。例えば、該第二の治療はより効果的であり、例えば、該第一
の治療なしで該第二の治療が施される場合に見られるより、より少ない該第二の治療で同
等の効果が見られるか、または、該第二の治療は症状を大幅に減少させ、類似の状況は該
第一の治療でも見られる。いくつかの実施形態では、送達は、症状、または、障害に関連
する他のパラメータの減少が、他方の非存在下で送達される１つの治療で観察されるもの
より大きくなるようになされる。該２つの治療の効果は、一部相加的であるか、完全に相
加的であるか、または相加的を超える場合がある。該送達は、送達された第一の治療の効
果が、第二の治療が送達される際に依然として検出可能であるようになされ得る。
いくつかの実施形態では、「少なくとも１つの追加の治療薬」には、ＴＦＰ発現細胞が
含まれる。また、同じもしくは異なる標的抗原、または同じ標的抗原上の同じもしくは異
なるエピトープに結合する複数のＴＦＰを発現するＴ細胞を提供する。また、第一のＴ細
胞のサブセットが第一のＴＦＰを発現し、第二のＴ細胞のサブセットが第二のＴＦＰを発
現するＴ細胞の集団を提供する。
含まれる。また、同じもしくは異なる標的抗原、または同じ標的抗原上の同じもしくは異
なるエピトープに結合する複数のＴＦＰを発現するＴ細胞を提供する。また、第一のＴ細
胞のサブセットが第一のＴＦＰを発現し、第二のＴ細胞のサブセットが第二のＴＦＰを発
現するＴ細胞の集団を提供する。
本明細書に記載のＴＦＰ発現細胞及び少なくとも１つの追加の治療薬は、同時に、同じ
もしくは別々の組成物中で、または連続的に投与され得る。連続投与については、本明細
書に記載のＴＦＰ発現細胞を第一に投与し、該追加の薬剤を第二に投与してもよいし、該
投与順序を入れ替えてもよい。
もしくは別々の組成物中で、または連続的に投与され得る。連続投与については、本明細
書に記載のＴＦＰ発現細胞を第一に投与し、該追加の薬剤を第二に投与してもよいし、該
投与順序を入れ替えてもよい。
さらなる態様において、本明細書に記載のＴＦＰ発現細胞は、手術、化学療法、放射線
、免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェ
ノール酸、及びＦＫ５０６、抗体、もしくは他の免疫消失薬、例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ、
抗ＣＤ３抗体、または他の抗体療法、シトキシン（ｃｙｔｏｘｉｎ）、フルダラビン、シ
クロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１
２２８、サイトカイン、及び放射線照射、ペプチドワクチン、例えば、Ｉｚｕｍｏｔｏ
ｅｔ ａｌ． ２００８ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ １０８：９６３−９７１に記載のも
のと組み合わせて治療計画に使用され得る。
、免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェ
ノール酸、及びＦＫ５０６、抗体、もしくは他の免疫消失薬、例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ、
抗ＣＤ３抗体、または他の抗体療法、シトキシン（ｃｙｔｏｘｉｎ）、フルダラビン、シ
クロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１
２２８、サイトカイン、及び放射線照射、ペプチドワクチン、例えば、Ｉｚｕｍｏｔｏ
ｅｔ ａｌ． ２００８ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ １０８：９６３−９７１に記載のも
のと組み合わせて治療計画に使用され得る。
１つの実施形態では、該対象は、ＴＦＰ発現細胞の投与に伴う副作用を減少または改善
する薬剤を投与される場合がある。ＴＦＰ発現細胞の投与に伴う副作用としては、サイト
カイン放出症候群（ＣＲＳ）、及びマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）とも呼ばれる
血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）が挙げられるがこれらに限定されない。ＣＲＳの症
状としては、高熱、吐き気、一過性低血圧、低酸素症等が挙げられる。従って、本明細書
に記載の方法は、本明細書に記載のＴＦＰ発現細胞を対象に投与し、さらにＴＦＰ発現細
胞での治療を起因とする可溶性因子レベルの上昇を管理する薬剤を投与することを含むこ
とができる。１つの実施形態では、該対象内で上昇される可溶性因子は、ＩＦＮ−γ、Ｔ
ＮＦα、ＩＬ−２、及びＩＬ−６のうちの１つ以上である。従って、この副作用を治療す
るために投与される薬剤は、１つ以上のこれらの可溶性因子を中和する薬剤であり得る。
かかる薬剤としては、ステロイド、ＴＮＦαの阻害剤、及びＩＬ−６の阻害剤が挙げられ
るがこれらに限定されない。ＴＮＦα阻害剤の例は、エンタネルセプト（ｅｎｔａｎｅｒ
ｃｅｐｔ）である。ＩＬ−６阻害剤の例はトシリズマブ（ｔｏｃ）である。
する薬剤を投与される場合がある。ＴＦＰ発現細胞の投与に伴う副作用としては、サイト
カイン放出症候群（ＣＲＳ）、及びマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）とも呼ばれる
血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）が挙げられるがこれらに限定されない。ＣＲＳの症
状としては、高熱、吐き気、一過性低血圧、低酸素症等が挙げられる。従って、本明細書
に記載の方法は、本明細書に記載のＴＦＰ発現細胞を対象に投与し、さらにＴＦＰ発現細
胞での治療を起因とする可溶性因子レベルの上昇を管理する薬剤を投与することを含むこ
とができる。１つの実施形態では、該対象内で上昇される可溶性因子は、ＩＦＮ−γ、Ｔ
ＮＦα、ＩＬ−２、及びＩＬ−６のうちの１つ以上である。従って、この副作用を治療す
るために投与される薬剤は、１つ以上のこれらの可溶性因子を中和する薬剤であり得る。
かかる薬剤としては、ステロイド、ＴＮＦαの阻害剤、及びＩＬ−６の阻害剤が挙げられ
るがこれらに限定されない。ＴＮＦα阻害剤の例は、エンタネルセプト（ｅｎｔａｎｅｒ
ｃｅｐｔ）である。ＩＬ−６阻害剤の例はトシリズマブ（ｔｏｃ）である。
１つの実施形態では、対象は、ＴＦＰ発現細胞の活性を高める薬剤を投与される場合が
ある。例えば、１つの実施形態では、該薬剤は、抑制分子を阻害する薬剤であり得る。抑
制分子、例えば、プログラム死１（ＰＤ１）は、いくつかの実施形態では、ＴＦＰ発現細
胞の免疫エフェクター反応の開始能力を弱める場合がある。抑制分子の例としては、ＰＤ
１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ
、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、及びＴＧＦＲベータが挙げられる。抑制分子の、例
えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質レベルの阻害による阻害は、ＴＦＰ発現細胞の
性能を最適化する可能性がある。実施形態では、抑制性核酸、例えば、抑制性核酸、例え
ば、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡは、該ＴＦＰ発現細胞において
抑制分子の発現を阻害するために使用され得る。実施形態では、該阻害剤はｓｈＲＮＡで
ある。実施形態では、該抑制分子は、ＴＦＰ発現細胞内で阻害される。これらの実施形態
では、該抑制分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子が、該ＴＦＰの成分、例えばすべての
成分をコードする核酸に結合される。１つの実施形態では、抑制シグナルの阻害剤は、例
えば、抑制分子に結合する抗体または抗体フラグメントであり得る。例えば、該薬剤は、
ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、またはＣＴＬＡ４（例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ−
０１０及びＭＤＸ−１０１とも呼ばれ、Ｙｅｒｖｏｙ（商標）として市販されている；Ｂ
ｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒから入手可能
なＩｇＧ２モノクローナル抗体、かつてチシリムマブとして知られていたもの、ＣＰ−６
７５，２０６））に結合する抗体また抗体フラグメントであり得る。実施形態では、該薬
剤は、ＴＩＭ３に結合する抗体または抗体フラグメントである。実施形態では、該薬剤は
、ＬＡＧ３に結合する抗体または抗体フラグメントである。
ある。例えば、１つの実施形態では、該薬剤は、抑制分子を阻害する薬剤であり得る。抑
制分子、例えば、プログラム死１（ＰＤ１）は、いくつかの実施形態では、ＴＦＰ発現細
胞の免疫エフェクター反応の開始能力を弱める場合がある。抑制分子の例としては、ＰＤ
１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ
、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、及びＴＧＦＲベータが挙げられる。抑制分子の、例
えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質レベルの阻害による阻害は、ＴＦＰ発現細胞の
性能を最適化する可能性がある。実施形態では、抑制性核酸、例えば、抑制性核酸、例え
ば、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡは、該ＴＦＰ発現細胞において
抑制分子の発現を阻害するために使用され得る。実施形態では、該阻害剤はｓｈＲＮＡで
ある。実施形態では、該抑制分子は、ＴＦＰ発現細胞内で阻害される。これらの実施形態
では、該抑制分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子が、該ＴＦＰの成分、例えばすべての
成分をコードする核酸に結合される。１つの実施形態では、抑制シグナルの阻害剤は、例
えば、抑制分子に結合する抗体または抗体フラグメントであり得る。例えば、該薬剤は、
ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、またはＣＴＬＡ４（例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ−
０１０及びＭＤＸ−１０１とも呼ばれ、Ｙｅｒｖｏｙ（商標）として市販されている；Ｂ
ｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒから入手可能
なＩｇＧ２モノクローナル抗体、かつてチシリムマブとして知られていたもの、ＣＰ−６
７５，２０６））に結合する抗体また抗体フラグメントであり得る。実施形態では、該薬
剤は、ＴＩＭ３に結合する抗体または抗体フラグメントである。実施形態では、該薬剤は
、ＬＡＧ３に結合する抗体または抗体フラグメントである。
いくつかの実施形態では、ＴＦＰ発現細胞の活性を高める薬剤、例えば、第一のドメイ
ン及び第二のドメインを含み、該第一のドメインが抑制分子またはそのフラグメントであ
り、該第二のドメインが陽性シグナルに関連するポリペプチド、例えば、本明細書に記載
の細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドである融合タンパク質であり得る。い
くつかの実施形態では、陽性シグナルに関連している該ポリペプチドは、ＣＤ２８、ＣＤ
２７、ＩＣＯＳの共刺激ドメイン、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ２７、及び／またはＩＣＯＳ
の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び／または一次シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ
３ゼータの、例えば、本明細書に記載のものを含み得る。１つの実施形態では、該融合タ
ンパク質は、ＴＦＰを発現するのと同じ細胞によって発現される。別の実施形態では、該
融合タンパク質は、細胞、例えば、抗ＣＤ１９ ＴＦＰを発現しないＴ細胞によって発現
される。
ン及び第二のドメインを含み、該第一のドメインが抑制分子またはそのフラグメントであ
り、該第二のドメインが陽性シグナルに関連するポリペプチド、例えば、本明細書に記載
の細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドである融合タンパク質であり得る。い
くつかの実施形態では、陽性シグナルに関連している該ポリペプチドは、ＣＤ２８、ＣＤ
２７、ＩＣＯＳの共刺激ドメイン、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ２７、及び／またはＩＣＯＳ
の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び／または一次シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ
３ゼータの、例えば、本明細書に記載のものを含み得る。１つの実施形態では、該融合タ
ンパク質は、ＴＦＰを発現するのと同じ細胞によって発現される。別の実施形態では、該
融合タンパク質は、細胞、例えば、抗ＣＤ１９ ＴＦＰを発現しないＴ細胞によって発現
される。
医薬組成物
本発明の医薬組成物は、ＴＦＰ発現細胞、例えば、本明細書に記載の複数のＴＦＰ発現
細胞を、１つ以上の医薬的にもしくは生理学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤
と組み合わせて含み得る。かかる組成物は、緩衝液、例えば、中性緩衝生理食塩水、リン
酸緩衝生理食塩水等；炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロースもしくは
デキストラン、マンニトール；タンパク質；ポリペプチドもしくはアミノ酸、例えば、グ
リシン；酸化防止剤；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡもしくはグルタチオン；アジュバン
ト（例えば、水酸化アルミニウム）；ならびに保存料を含んでよい。本発明の組成物は、
１つの態様において、静脈内投与用に処方される。
本発明の医薬組成物は、ＴＦＰ発現細胞、例えば、本明細書に記載の複数のＴＦＰ発現
細胞を、１つ以上の医薬的にもしくは生理学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤
と組み合わせて含み得る。かかる組成物は、緩衝液、例えば、中性緩衝生理食塩水、リン
酸緩衝生理食塩水等；炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロースもしくは
デキストラン、マンニトール；タンパク質；ポリペプチドもしくはアミノ酸、例えば、グ
リシン；酸化防止剤；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡもしくはグルタチオン；アジュバン
ト（例えば、水酸化アルミニウム）；ならびに保存料を含んでよい。本発明の組成物は、
１つの態様において、静脈内投与用に処方される。
本発明の医薬組成物は、治療される（または予防される）疾患に適切な方法で投与され
得る。投与の量及び頻度は、当該患者の状態ならびに該患者の疾患のタイプ及び重症度等
の要因によって決定されるが、適切な用量は臨床試験で決定される場合がある。
得る。投与の量及び頻度は、当該患者の状態ならびに該患者の疾患のタイプ及び重症度等
の要因によって決定されるが、適切な用量は臨床試験で決定される場合がある。
１つの実施形態では、該医薬組成物は、混入物質、例えば、エンドトキシン、マイコプ
ラズマ、自己複製レンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ−Ｇ核酸、ＨＩＶ ｇａｇ
、残存抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、保存ヒト血清、ウシ血清アルブミ
ン、ウシ血清、培地成分、ベクターパッケージング細胞もしくはプラスミド成分、細菌、
及び真菌からなる群から選択される混入物質が実質的になく、例えば、検出レベルの該混
入物質がない。１つの実施形態では、該細菌は、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌ
ｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｈａｅ
ｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅ
ｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、及びＳｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓＡ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
ラズマ、自己複製レンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ−Ｇ核酸、ＨＩＶ ｇａｇ
、残存抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、保存ヒト血清、ウシ血清アルブミ
ン、ウシ血清、培地成分、ベクターパッケージング細胞もしくはプラスミド成分、細菌、
及び真菌からなる群から選択される混入物質が実質的になく、例えば、検出レベルの該混
入物質がない。１つの実施形態では、該細菌は、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌ
ｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｈａｅ
ｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅ
ｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、及びＳｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓＡ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
「免疫学的有効量」、「抗腫瘍有効量」「腫瘍阻害有効量」、または「治療量」が示さ
れる場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、当該患者（対象）の年齢、体重、腫
瘍サイズ、感染もしくは転移の程度、及び状態の個体差を考慮して医師によって決定され
得る。本明細書に記載のＴ細胞を含む医薬組成物は、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、い
くつかの例では１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重で、これらの範囲内のすべての整数値を含
めた用量で投与され得るということが一般に言える。また、Ｔ細胞組成物は、これらの用
量において複数回投与され得る。該細胞は、免疫療法で広く知られている注入技術を用い
て投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎ
ｇ． Ｊ． ｏｆ Ｍｅｄ． ３１９：１６７６， １９８８参照）。
れる場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、当該患者（対象）の年齢、体重、腫
瘍サイズ、感染もしくは転移の程度、及び状態の個体差を考慮して医師によって決定され
得る。本明細書に記載のＴ細胞を含む医薬組成物は、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、い
くつかの例では１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重で、これらの範囲内のすべての整数値を含
めた用量で投与され得るということが一般に言える。また、Ｔ細胞組成物は、これらの用
量において複数回投与され得る。該細胞は、免疫療法で広く知られている注入技術を用い
て投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎ
ｇ． Ｊ． ｏｆ Ｍｅｄ． ３１９：１６７６， １９８８参照）。
特定の態様において、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、その後続いて再採血し（またはア
フェレーシスが行われている）、本発明に従ってそこからＴ細胞を活性化し、これらの活
性化及び増殖されたＴ細胞を該患者に再注入することが望ましい場合がある。この工程は
数週間ごとに複数回行われ得る。特定の態様において、Ｔ細胞は１０ｃｃ〜４００ｃｃの
採血から活性化することができる。特定の態様において、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ
、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの
採血から活性化される。
フェレーシスが行われている）、本発明に従ってそこからＴ細胞を活性化し、これらの活
性化及び増殖されたＴ細胞を該患者に再注入することが望ましい場合がある。この工程は
数週間ごとに複数回行われ得る。特定の態様において、Ｔ細胞は１０ｃｃ〜４００ｃｃの
採血から活性化することができる。特定の態様において、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ
、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの
採血から活性化される。
目的の組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、経口摂取、輸液、注入、または移植を
含めた任意の都合の良い方法で行ってよい。本明細書に記載の組成物は、患者に対して、
経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．
）注射により、または腹腔内に投与され得る。１つの態様では、本発明のＴ細胞組成物は
、患者に対して、皮内または皮下注射によって投与される。１つの態様において、本発明
のＴ細胞組成物は、ｉ．ｖ．注射によって投与される。該Ｔ細胞組成物は、腫瘍、リンパ
節、または感染部位に直接注入してもよい。
含めた任意の都合の良い方法で行ってよい。本明細書に記載の組成物は、患者に対して、
経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．
）注射により、または腹腔内に投与され得る。１つの態様では、本発明のＴ細胞組成物は
、患者に対して、皮内または皮下注射によって投与される。１つの態様において、本発明
のＴ細胞組成物は、ｉ．ｖ．注射によって投与される。該Ｔ細胞組成物は、腫瘍、リンパ
節、または感染部位に直接注入してもよい。
特定の例示的な態様において、対象は、白血球を採取し、エキソビボで濃縮しまたは枯
渇させて目的の細胞、例えば、Ｔ細胞を選択及び／または単離する白血球除去療法を受け
てもよい。これらのＴ細胞分離株は、当技術分野で知られている方法によって増殖され、
１つ以上の本発明のＴＦＰ構築物が導入され得るように処理され、それによって本発明の
ＴＦＰ発現Ｔ細胞を生成してもよい。それを必要とする対象は、その後標準的な大量化学
療法での治療に続いて末梢血幹細胞移植を受けてもよい。特定の態様において、該移植の
後、またはそれと同時に、対象は、本発明の増殖されたＴＦＰ Ｔ細胞の注入を受ける。
さらなる態様において、増殖された細胞は、手術の前または後に投与される。
渇させて目的の細胞、例えば、Ｔ細胞を選択及び／または単離する白血球除去療法を受け
てもよい。これらのＴ細胞分離株は、当技術分野で知られている方法によって増殖され、
１つ以上の本発明のＴＦＰ構築物が導入され得るように処理され、それによって本発明の
ＴＦＰ発現Ｔ細胞を生成してもよい。それを必要とする対象は、その後標準的な大量化学
療法での治療に続いて末梢血幹細胞移植を受けてもよい。特定の態様において、該移植の
後、またはそれと同時に、対象は、本発明の増殖されたＴＦＰ Ｔ細胞の注入を受ける。
さらなる態様において、増殖された細胞は、手術の前または後に投与される。
患者に施される上記治療の用量は、治療される状態の正確な性質及び治療のレシピエン
トによって変わる。ヒトへの投与に対する用量のスケーリングは、当該分野で認められた
慣行に従って行うことができる。例えば、ＣＡＭＰＡＴＨの投与量は通常、成人患者に対
して、１〜約１００ｍｇの範囲であり、通常、１〜３０日間、毎日投与される。好ましい
１日用量は、１〜１０ｍｇ／日であるが、いくつかの例では、より大量の４０ｍｇ／日ま
でが用いられてもよい（米国特許第６，１２０，７６６号に記載されている）。
トによって変わる。ヒトへの投与に対する用量のスケーリングは、当該分野で認められた
慣行に従って行うことができる。例えば、ＣＡＭＰＡＴＨの投与量は通常、成人患者に対
して、１〜約１００ｍｇの範囲であり、通常、１〜３０日間、毎日投与される。好ましい
１日用量は、１〜１０ｍｇ／日であるが、いくつかの例では、より大量の４０ｍｇ／日ま
でが用いられてもよい（米国特許第６，１２０，７６６号に記載されている）。
１つの実施形態では、該ＴＦＰは、例えば、インビトロ転写を用いてＴ細胞内に導入さ
れ、対象（例えば、ヒト）は、本発明のＴＦＰ Ｔ細胞の最初の投与及び１回以上のそれ
に続く本発明のＴＦＰ Ｔ細胞の投与を受けるが、該１回以上のそれに続く投与は、先の
投与後、１５日未満で、例えば、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、
４、３、または２日で施される。１つの実施形態では、本発明のＴＦＰ Ｔ細胞の複数回
の投与が、該対象（例えば、ヒト）に対して１週間ごとに施され、例えば、本発明のＴＦ
Ｐ−Ｔ細胞の２、３、または４回の投与が１週間ごとに施される。１つの実施形態では、
該対象（例えば、ヒト対象）は、１週間ごとに複数回のＴＦＰ Ｔ細胞の投与（例えば、
１週間ごとに２、３、または４回の投与）（本明細書ではサイクルとも呼ぶ）を受け、続
いて１週間はＴＦＰ Ｔ細胞の投与をせず、その後１回以上の追加のＴＦＰ Ｔ細胞の投
与（例えば、１週間ごとに複数回の該ＴＦＰ Ｔ細胞の投与）が該対象に施される。別の
実施形態では、該対象（例えば、ヒト対象）は、複数サイクルのＴＦＰ Ｔ細胞を受ける
とともに、各サイクルの間隔は１０、９、８、７、６、５、４、または３日未満である。
１つの実施形態では、該ＴＦＰ−Ｔ細胞は、１週間ごとに３回の投与のために１日おきに
投与される。１つの実施形態では、本発明のＴＦＰ Ｔ細胞は、少なくとも２、３、４、
５、６、７、８週間、またはそれ以上投与される。
れ、対象（例えば、ヒト）は、本発明のＴＦＰ Ｔ細胞の最初の投与及び１回以上のそれ
に続く本発明のＴＦＰ Ｔ細胞の投与を受けるが、該１回以上のそれに続く投与は、先の
投与後、１５日未満で、例えば、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、
４、３、または２日で施される。１つの実施形態では、本発明のＴＦＰ Ｔ細胞の複数回
の投与が、該対象（例えば、ヒト）に対して１週間ごとに施され、例えば、本発明のＴＦ
Ｐ−Ｔ細胞の２、３、または４回の投与が１週間ごとに施される。１つの実施形態では、
該対象（例えば、ヒト対象）は、１週間ごとに複数回のＴＦＰ Ｔ細胞の投与（例えば、
１週間ごとに２、３、または４回の投与）（本明細書ではサイクルとも呼ぶ）を受け、続
いて１週間はＴＦＰ Ｔ細胞の投与をせず、その後１回以上の追加のＴＦＰ Ｔ細胞の投
与（例えば、１週間ごとに複数回の該ＴＦＰ Ｔ細胞の投与）が該対象に施される。別の
実施形態では、該対象（例えば、ヒト対象）は、複数サイクルのＴＦＰ Ｔ細胞を受ける
とともに、各サイクルの間隔は１０、９、８、７、６、５、４、または３日未満である。
１つの実施形態では、該ＴＦＰ−Ｔ細胞は、１週間ごとに３回の投与のために１日おきに
投与される。１つの実施形態では、本発明のＴＦＰ Ｔ細胞は、少なくとも２、３、４、
５、６、７、８週間、またはそれ以上投与される。
１つの態様において、ＣＤ１９ ＴＦＰ Ｔ細胞は、レンチウイルス等のレンチウイル
ス性ウイルスベクターを用いて生成される。その方法で生成されるＴＦＰ−Ｔ細胞は、安
定的にＴＦＰを発現する。
ス性ウイルスベクターを用いて生成される。その方法で生成されるＴＦＰ−Ｔ細胞は、安
定的にＴＦＰを発現する。
１つの態様において、ＴＦＰ Ｔ細胞は、形質導入後、ＴＦＰベクターを４、５、６、
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５日間一過性に発現する。ＴＦＰの一過
性の発現は、ＲＮＡ ＴＦＰベクターの送達によってもたらされ得る。１つの態様におい
て、該ＴＦＰ ＲＮＡは、エレクトロポレーションによってＴ細胞に形質導入される。
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５日間一過性に発現する。ＴＦＰの一過
性の発現は、ＲＮＡ ＴＦＰベクターの送達によってもたらされ得る。１つの態様におい
て、該ＴＦＰ ＲＮＡは、エレクトロポレーションによってＴ細胞に形質導入される。
一過性に発現するＴＦＰ Ｔ細胞を用いて（特にマウスｓｃＦｖ担持ＴＦＰ Ｔ細胞で
）治療される患者に生じ得る潜在的な問題は、複合的治療後のアナフィラキシーである。
）治療される患者に生じ得る潜在的な問題は、複合的治療後のアナフィラキシーである。
本理論に拘束されるものではないが、かかるアナフィラキシー反応は、体液性抗ＴＦＰ
反応を発症している患者、すなわち、抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＴＦＰ抗体によっ
て引き起こされる可能性があると考えられる。患者の抗体産生細胞は、抗原への曝露が１
０〜１４日間中断された場合、ＩｇＧアイソタイプ（これはアナフィラキシーを引き起こ
さない）からＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチを受けていると思われる。
反応を発症している患者、すなわち、抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＴＦＰ抗体によっ
て引き起こされる可能性があると考えられる。患者の抗体産生細胞は、抗原への曝露が１
０〜１４日間中断された場合、ＩｇＧアイソタイプ（これはアナフィラキシーを引き起こ
さない）からＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチを受けていると思われる。
患者が一過性ＴＦＰ治療（ＲＮＡ形質導入によって生成されるもの等）の過程で抗ＴＦＰ
抗体反応を生成する危険性が高い場合、ＴＦＰ Ｔ細胞注入の中断は、１０〜１４日より
長く続けるべきではない。
抗体反応を生成する危険性が高い場合、ＴＦＰ Ｔ細胞注入の中断は、１０〜１４日より
長く続けるべきではない。
本発明を、以下の実験実施例を参照することによってさらに詳細に説明する。これらの
実施例は、例示の目的でのみ提供し、特に明記しない限り限定することを意図しない。従
って、本発明は、以下の実施例には一切限定されないと解釈されるものとし、本明細書で
提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形を包含すると解釈されるも
のとする。さらに説明することなく、当業者には、前述の説明及び以下の例示的な実施例
を用いて、本発明の化合物を作製及び利用すること、ならびに請求項に係る方法を実施す
ることが可能であると考えられる。以下の実施例は、本発明の様々な態様を具体的に挙げ
るが、これらは本開示の残余の部分を限定するとは一切解釈されない。
実施例は、例示の目的でのみ提供し、特に明記しない限り限定することを意図しない。従
って、本発明は、以下の実施例には一切限定されないと解釈されるものとし、本明細書で
提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形を包含すると解釈されるも
のとする。さらに説明することなく、当業者には、前述の説明及び以下の例示的な実施例
を用いて、本発明の化合物を作製及び利用すること、ならびに請求項に係る方法を実施す
ることが可能であると考えられる。以下の実施例は、本発明の様々な態様を具体的に挙げ
るが、これらは本開示の残余の部分を限定するとは一切解釈されない。
実施例１：ＴＦＰ構築物
抗ＣＤ１９ ＴＦＰ構築物は、短いリンカー（ＳＬ）：ＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧ
ＧＧＧＳＬＥ（配列番号５）または長いリンカー（ＬＬ）：ＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬ
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥ（配列番号６）をコードするＤＮＡ配列のいずれか
によってＣＤ３またはＴＣＲ ＤＮＡフラグメントに連結した抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ Ｄ
ＮＡフラグメントを、ＸｂａＩ及びＥｃｏＲ１部位でｐ５１０ベクター（（Ｓｙｓｔｅｍ
Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＳＢＩ））にクローニングすることによって作り出した。
抗ＣＤ１９ ＴＦＰ構築物は、短いリンカー（ＳＬ）：ＡＡＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧ
ＧＧＧＳＬＥ（配列番号５）または長いリンカー（ＬＬ）：ＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬ
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥ（配列番号６）をコードするＤＮＡ配列のいずれか
によってＣＤ３またはＴＣＲ ＤＮＡフラグメントに連結した抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ Ｄ
ＮＡフラグメントを、ＸｂａＩ及びＥｃｏＲ１部位でｐ５１０ベクター（（Ｓｙｓｔｅｍ
Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＳＢＩ））にクローニングすることによって作り出した。
生成した抗ＣＤ１９ ＴＲｕＣ構築物は、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲα（抗
ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−ヒト完全長Ｔ細胞受容体α鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ
１９＿ＬＬ＿ＴＣＲ αＣ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−ヒトＴ細胞受容体α
定常ドメイン鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲβ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長
いリンカー−ヒト完全長Ｔ細胞受容体β鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲβＣ
（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−ヒトＴ細胞受容体β定常ドメイン鎖）、ｐ５１
０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＣＤ３γ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−ヒトＣＤ３γ
鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＣＤ３δ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−
ヒトＣＤ３δ鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＣＤ３ε（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長
いリンカー−ヒトＣＤ３ε鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ＿ＴＣＲβ（抗ＣＤ１９
ｓｃＦｖ−短いリンカー−ヒト完全長Ｔ細胞受容体β鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ
＿ＣＤ３γ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−短いリンカー−ヒトＣＤ３γ鎖）、ｐ５１０＿抗Ｃ
Ｄ１９＿ＳＬ＿ＣＤ３δ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−短いリンカー−ヒトＣＤ３δ鎖）、ｐ
５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ＿ＣＤ３ε（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−短いリンカー−ヒトＣＤ
３ε鎖）であった。
ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−ヒト完全長Ｔ細胞受容体α鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ
１９＿ＬＬ＿ＴＣＲ αＣ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−ヒトＴ細胞受容体α
定常ドメイン鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲβ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長
いリンカー−ヒト完全長Ｔ細胞受容体β鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲβＣ
（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−ヒトＴ細胞受容体β定常ドメイン鎖）、ｐ５１
０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＣＤ３γ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−ヒトＣＤ３γ
鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＣＤ３δ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長いリンカー−
ヒトＣＤ３δ鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＣＤ３ε（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−長
いリンカー−ヒトＣＤ３ε鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ＿ＴＣＲβ（抗ＣＤ１９
ｓｃＦｖ−短いリンカー−ヒト完全長Ｔ細胞受容体β鎖）、ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ
＿ＣＤ３γ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−短いリンカー−ヒトＣＤ３γ鎖）、ｐ５１０＿抗Ｃ
Ｄ１９＿ＳＬ＿ＣＤ３δ（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−短いリンカー−ヒトＣＤ３δ鎖）、ｐ
５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ＿ＣＤ３ε（抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ−短いリンカー−ヒトＣＤ
３ε鎖）であった。
抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物であるｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿２８ζは、抗ＣＤ１９、部分
的なＣＤ２８の細胞外ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン、ＣＤ２８の細胞内ドメイン
、及びＣＤ３ゼータをコードする合成ＤＮＡを、ＸｂａＩ及びＥｃｏＲ１部位でｐ５１０
ベクターにクローニングすることによって生成した。
的なＣＤ２８の細胞外ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン、ＣＤ２８の細胞内ドメイン
、及びＣＤ３ゼータをコードする合成ＤＮＡを、ＸｂａＩ及びＥｃｏＲ１部位でｐ５１０
ベクターにクローニングすることによって生成した。
抗ＢＣＭＡ ＴＦＰ構築物は、リンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥ（配列
番号７）をコードするＤＮＡ配列によってＣＤ３ ＤＮＡフラグメントに連結された抗Ｂ
ＣＭＡ ｓｃＦｖ ＤＮＡフラグメントを、ＸｂａＩ及びＥｃｏＲ１部位でｐ５１０ベク
ター（ＳＢＩ）にクローニングすることによって作り出した。生成した抗ＢＣＭＡ ＴＦ
Ｐ構築物は、ｐ５１０＿抗ＢＣＭＡ＿ＣＤ３γ（抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ−リンカー−ヒト
ＣＤ３γ鎖）及びｐ５１０＿抗ＢＣＭＡ＿ＣＤ３ε（抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ−リンカー−
ヒトＣＤ３ε鎖）であった。
番号７）をコードするＤＮＡ配列によってＣＤ３ ＤＮＡフラグメントに連結された抗Ｂ
ＣＭＡ ｓｃＦｖ ＤＮＡフラグメントを、ＸｂａＩ及びＥｃｏＲ１部位でｐ５１０ベク
ター（ＳＢＩ）にクローニングすることによって作り出した。生成した抗ＢＣＭＡ ＴＦ
Ｐ構築物は、ｐ５１０＿抗ＢＣＭＡ＿ＣＤ３γ（抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ−リンカー−ヒト
ＣＤ３γ鎖）及びｐ５１０＿抗ＢＣＭＡ＿ＣＤ３ε（抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ−リンカー−
ヒトＣＤ３ε鎖）であった。
完全長ＢＣＭＡを合成し、ＢａｍＨＩ及びＮｈｅＩ部位でｐ５１４（ＳＢＩ）にクロー
ニングし、安定な標的細胞株を生成するために用いられる構築物ｐ５１４＿ＢＣＭＡを生
成した。
ニングし、安定な標的細胞株を生成するために用いられる構築物ｐ５１４＿ＢＣＭＡを生
成した。
抗線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）及び抗カルボアンヒドラーゼ−９（ＣＡＩＸ
）ＴＦＰ構築物は、リンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥ（配列番号７）をコ
ードするＤＮＡ配列によって、ＣＤ３ ＤＮＡフラグメントに連結された抗ＦＡＰまたは
抗ＣＡＩＸ ｓｃＦｖ ＤＮＡフラグメントを、ＸｂａＩ及びＥｃｏＲ１部位でｐ５１０
ベクター（ＳＢＩ）にクローニングすることによって作り出した。生成され得る抗ＦＡＰ
または抗ＣＡＩＸ ＴＦＰ構築物としては、ｐ５１０＿抗ＦＡＰ＿ＣＤ３γ（抗ＦＡＰ
ｓｃＦｖ−リンカー−ヒトＣＤ３γ鎖）及びｐ５１０＿抗ＦＡＰ＿ＣＤ３ε（抗ＦＡＰ
ｓｃＦｖ−リンカー−ヒトＣＤ３ε鎖）ならびにｐ５１０＿抗ＣＡＩＸ＿ＣＤ３γ（抗Ｃ
ＡＩＸ ｓｃＦｖ−リンカー−ヒトＣＤ３γ鎖）及びｐ５１０＿抗ＣＡＩＸ＿ＣＤ３ε（
抗ＣＡＩＸ ｓｃＦｖ−リンカー−ヒトＣＤ３ε鎖）が挙げられる。
）ＴＦＰ構築物は、リンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥ（配列番号７）をコ
ードするＤＮＡ配列によって、ＣＤ３ ＤＮＡフラグメントに連結された抗ＦＡＰまたは
抗ＣＡＩＸ ｓｃＦｖ ＤＮＡフラグメントを、ＸｂａＩ及びＥｃｏＲ１部位でｐ５１０
ベクター（ＳＢＩ）にクローニングすることによって作り出した。生成され得る抗ＦＡＰ
または抗ＣＡＩＸ ＴＦＰ構築物としては、ｐ５１０＿抗ＦＡＰ＿ＣＤ３γ（抗ＦＡＰ
ｓｃＦｖ−リンカー−ヒトＣＤ３γ鎖）及びｐ５１０＿抗ＦＡＰ＿ＣＤ３ε（抗ＦＡＰ
ｓｃＦｖ−リンカー−ヒトＣＤ３ε鎖）ならびにｐ５１０＿抗ＣＡＩＸ＿ＣＤ３γ（抗Ｃ
ＡＩＸ ｓｃＦｖ−リンカー−ヒトＣＤ３γ鎖）及びｐ５１０＿抗ＣＡＩＸ＿ＣＤ３ε（
抗ＣＡＩＸ ｓｃＦｖ−リンカー−ヒトＣＤ３ε鎖）が挙げられる。
完全長ＦＡＰ及びＣＡＩＸを合成し、ＢａｍＨＩ及びＮｈｅＩ部位でｐ５１４（ＳＢＩ
）にクローニングし、構築物ｐ５１４＿ＦＡＰ及びｐ５１４＿ＣＡＩＸを生成することが
でき、これを安定な標的細胞株を生成するために用いることができる。
）にクローニングし、構築物ｐ５１４＿ＦＡＰ及びｐ５１４＿ＣＡＩＸを生成することが
でき、これを安定な標的細胞株を生成するために用いることができる。
例示的な構築物の配列を以下に示す。
構築物の配列
標的構築物
ｐ５１４＿ＢＣＭＡ（配列番号８）
構築物の配列
標的構築物
ｐ５１４＿ＢＣＭＡ（配列番号８）
ＣＡＲ構築物
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿２８ζ（配列番号９）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿２８ζ（配列番号９）
ｐ５２６Ａ＿１９ＢＢＺ（配列番号１０）
ＴＦＰ（ＴＲｕＣ）構築物
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲアルファ（配列番号１１）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲアルファ（配列番号１１）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲアルファＣ（配列番号１２）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲベータ（配列番号１３）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＴＣＲベータＣ（配列番号１４）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＣＤ３ガンマ（配列番号１５）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＣＤデルタ（配列番号１６）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＬＬ＿ＣＤ３イプシロン（配列番号１７）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ＿ＣＤ３イプシロン（配列番号１８）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ＿ＣＤ３ガンマ（配列番号１９）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ＿ＣＤ３デルタ（配列番号２０）
ｐ５１０＿抗ＣＤ１９＿ＳＬ＿ＴＣＲベータ（配列番号２１）
ｐ５１０＿抗ＢＣＭＡ＿ＣＤ３イプシロン（配列番号２２）
ｐ５１０＿抗ＢＣＭＡ＿ＣＤ３ガンマ（配列番号２３）
実施例２：抗体配列
抗体配列の生成
ヒトＣＤ１９ポリペプチドの標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１
５３９１（またはＰ１５３９１−１）である。ヒトＢＣＭＡポリペプチドの標準的な配列
は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０２２２３（またはＱ０２２２３−１）である
。ヒトＣＤ１９ポリペプチドもしくはヒトＢＣＭＡポリペプチドまたはヒトＦＡＰポリペ
プチドもしくはヒトＢＣＭＡポリペプチド、及びそのフラグメントまたはドメインに特異
的に結合することが可能な抗体ポリペプチドを提供する。抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡ
ＩＸ、及び抗ＢＣＭＡ抗体は、様々な技術を用いて生成することができる（例えば、（Ｎ
ｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ， １９９７）参照。マウス抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗Ｃ
ＡＩＸ、または抗ＢＣＭＡ抗体が出発物質として使用される場合、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ
）融合タンパク質（ＴＦＰ）治療、すなわち、このＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、
ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ構築物で形質導入されたＴ細胞での治療を受
ける対象において、これらマウス特異的残基が、ヒト−抗マウス抗原（ＨＡＭＡ）反応を
誘導する場合があるマウス抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、または抗ＢＣＭＡ抗体の
ヒト化が臨床環境では望まれる。ヒト化は、マウス抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、
または抗ＢＣＭＡ抗体由来のＣＤＲ領域を、適切なヒト生殖細胞系列のアクセプターフレ
ームワークに移植することならびに任意にＣＤＲ及び／またはフレームワーク領域に対す
る他の修飾によって達成される。本明細書で提供される、抗体及び抗体フラグメント残基
の番号付けは、Ｋａｂａｔに従う（Ｋａｂａｔ Ｅ． Ａ． ｅｔ ａｌ， １９９１；
Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ， １９８７）。
抗体配列の生成
ヒトＣＤ１９ポリペプチドの標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１
５３９１（またはＰ１５３９１−１）である。ヒトＢＣＭＡポリペプチドの標準的な配列
は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０２２２３（またはＱ０２２２３−１）である
。ヒトＣＤ１９ポリペプチドもしくはヒトＢＣＭＡポリペプチドまたはヒトＦＡＰポリペ
プチドもしくはヒトＢＣＭＡポリペプチド、及びそのフラグメントまたはドメインに特異
的に結合することが可能な抗体ポリペプチドを提供する。抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡ
ＩＸ、及び抗ＢＣＭＡ抗体は、様々な技術を用いて生成することができる（例えば、（Ｎ
ｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ， １９９７）参照。マウス抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗Ｃ
ＡＩＸ、または抗ＢＣＭＡ抗体が出発物質として使用される場合、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ
）融合タンパク質（ＴＦＰ）治療、すなわち、このＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、
ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ構築物で形質導入されたＴ細胞での治療を受
ける対象において、これらマウス特異的残基が、ヒト−抗マウス抗原（ＨＡＭＡ）反応を
誘導する場合があるマウス抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、または抗ＢＣＭＡ抗体の
ヒト化が臨床環境では望まれる。ヒト化は、マウス抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、
または抗ＢＣＭＡ抗体由来のＣＤＲ領域を、適切なヒト生殖細胞系列のアクセプターフレ
ームワークに移植することならびに任意にＣＤＲ及び／またはフレームワーク領域に対す
る他の修飾によって達成される。本明細書で提供される、抗体及び抗体フラグメント残基
の番号付けは、Ｋａｂａｔに従う（Ｋａｂａｔ Ｅ． Ａ． ｅｔ ａｌ， １９９１；
Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ， １９８７）。
ｓｃＦｖの生成
ヒトもしくはヒト化抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、または抗ＢＣＭＡ ＩｇＧを
用いてＴＦＰ構築物用のｓｃＦｖ配列を生成する。ヒトまたはヒト化ＶＬ及びＶＨドメイ
ンをコードするＤＮＡ配列を得、これら構築物のコドンを任意に、ヒト由来の細胞での発
現に最適化する。ｓｃＦｖに現れるＶＬ及びＶＨドメインの順序は様々であり（すなわち
、ＶＬ−ＶＨまたはＶＨ−ＶＬ配向）、「Ｇ４Ｓ」または「Ｇ４Ｓ」サブユニットの３つ
のコピー（Ｇ４Ｓ）３がこれら可変ドメインをつないでｓｃＦｖドメインを生成する。抗
ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、及び抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖプラスミド構築物は、任意
のＦｌａｇ、Ｈｉｓ、または他のアフィニティタグを有する場合があり、ＨＥＫ２９３ま
たは他の適切なヒトもしくは哺乳類の細胞株にエレクトロポレートされ、精製される。検
証アッセイとしては、ＦＡＣＳによる結合分析、Ｐｒｏｔｅｏｎを用いる動態解析、及び
ＣＤ１９発現細胞の染色が挙げられる。
ヒトもしくはヒト化抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、または抗ＢＣＭＡ ＩｇＧを
用いてＴＦＰ構築物用のｓｃＦｖ配列を生成する。ヒトまたはヒト化ＶＬ及びＶＨドメイ
ンをコードするＤＮＡ配列を得、これら構築物のコドンを任意に、ヒト由来の細胞での発
現に最適化する。ｓｃＦｖに現れるＶＬ及びＶＨドメインの順序は様々であり（すなわち
、ＶＬ−ＶＨまたはＶＨ−ＶＬ配向）、「Ｇ４Ｓ」または「Ｇ４Ｓ」サブユニットの３つ
のコピー（Ｇ４Ｓ）３がこれら可変ドメインをつないでｓｃＦｖドメインを生成する。抗
ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、及び抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖプラスミド構築物は、任意
のＦｌａｇ、Ｈｉｓ、または他のアフィニティタグを有する場合があり、ＨＥＫ２９３ま
たは他の適切なヒトもしくは哺乳類の細胞株にエレクトロポレートされ、精製される。検
証アッセイとしては、ＦＡＣＳによる結合分析、Ｐｒｏｔｅｏｎを用いる動態解析、及び
ＣＤ１９発現細胞の染色が挙げられる。
ＶＬ及びＶＨドメインの例示的な抗ＣＤ１９または抗ＢＣＭＡ ＣＤＲならびにそれら
をそれぞれコードするヌクレオチド配列を以下に示す。
をそれぞれコードするヌクレオチド配列を以下に示す。
抗ＣＤ１９
抗ＣＤ１９軽鎖ＣＤＲ１
コード配列：ＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＴＡＡＡ（配列番号２４）
アミノ酸配列：ＲＡＳＱＤＩＳＫ（配列番号２５）
抗ＣＤ１９軽鎖ＣＤＲ１
コード配列：ＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＴＡＡＡ（配列番号２４）
アミノ酸配列：ＲＡＳＱＤＩＳＫ（配列番号２５）
抗ＣＤ１９軽鎖ＣＤＲ２
コード配列：ＡＴＣＴＡＣＣＡＴＡＣＡＴＣＡＡＧＡＴＴＡ（配列番号２６）
アミノ酸配列：ＩＹＨＴＳＲＬ（配列番号２７）
コード配列：ＡＴＣＴＡＣＣＡＴＡＣＡＴＣＡＡＧＡＴＴＡ（配列番号２６）
アミノ酸配列：ＩＹＨＴＳＲＬ（配列番号２７）
抗ＣＤ１９軽鎖ＣＤＲ３
コード配列：ＣＡＡＣＡＧＧＧＴＡＡＴＡＣＧＣＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧ（配列番号２８
）
アミノ酸配列：ＱＱＧＮＴＬＰＹＴ（配列番号２９）
コード配列：ＣＡＡＣＡＧＧＧＴＡＡＴＡＣＧＣＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧ（配列番号２８
）
アミノ酸配列：ＱＱＧＮＴＬＰＹＴ（配列番号２９）
抗ＣＤ１９重鎖ＣＤＲ１
コード配列：ＧＧＧＧＴＣＴＣＡＴＴＡＣＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＴＧＴＡＡＧＣ（配列番
号３０）
アミノ酸配列：ＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳ（配列番号３１）
コード配列：ＧＧＧＧＴＣＴＣＡＴＴＡＣＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＴＧＴＡＡＧＣ（配列番
号３０）
アミノ酸配列：ＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳ（配列番号３１）
抗ＣＤ１９重鎖ＣＤＲ２
コード配列：ＧＴＡＡＴＡＴＧＧＧＧＴＡＧＴＧＡＡＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＴ
ＣＡＧＣＴＣＴＣ（配列番号３２）
アミノ酸配列：ＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬ（配列番号３３）
コード配列：ＧＴＡＡＴＡＴＧＧＧＧＴＡＧＴＧＡＡＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＴ
ＣＡＧＣＴＣＴＣ（配列番号３２）
アミノ酸配列：ＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬ（配列番号３３）
抗ＣＤ１９重鎖ＣＤＲ３
コード配列：ＣＡＴＴＡＴＴＡＣＴＡＣＧＧＴＧＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴ
ＡＣ（配列番号３４）
アミノ酸配列：ＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹ（配列番号３５）
コード配列：ＣＡＴＴＡＴＴＡＣＴＡＣＧＧＴＧＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴ
ＡＣ（配列番号３４）
アミノ酸配列：ＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹ（配列番号３５）
抗ＢＣＭＡ
抗ＢＣＭＡ軽鎖ＣＤＲ１
コード配列：ＡＡＡＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＧＴＧＣＡＴＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡ
ＡＣＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＡＴ（配列番号３６）
アミノ酸配列：ＫＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号３７）
抗ＢＣＭＡ軽鎖ＣＤＲ１
コード配列：ＡＡＡＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＧＴＧＣＡＴＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡ
ＡＣＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＡＴ（配列番号３６）
アミノ酸配列：ＫＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号３７）
抗ＢＣＭＡ軽鎖ＣＤＲ２
コード配列：ＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣ（配列番号３８）
アミノ酸配列：ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号３９）
コード配列：ＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣ（配列番号３８）
アミノ酸配列：ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号３９）
抗ＢＣＭＡ軽鎖ＣＤＲ３
コード配列：ＧＣＧＧＡＡＡＣＣＡＧＣＣＡＴＧＴＧＣＣＧＴＧＧＡＣＣ（配列番号４０
）
アミノ酸配列：ＡＥＴＳＨＶＰＷＴ（配列番号４１）
コード配列：ＧＣＧＧＡＡＡＣＣＡＧＣＣＡＴＧＴＧＣＣＧＴＧＧＡＣＣ（配列番号４０
）
アミノ酸配列：ＡＥＴＳＨＶＰＷＴ（配列番号４１）
抗ＢＣＭＡ重鎖ＣＤＲ１
コード配列：ＡＡＡＧＣＧＡＧＣＧＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＴＣＣＧＧＡＴＴＡＴＴＡＴＡ
ＴＴＡＡＣ（配列番号４２）
アミノ酸配列：ＫＡＳＧＹＳＦＰＤＹＹＩＮ（配列番号４３）
コード配列：ＡＡＡＧＣＧＡＧＣＧＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＴＣＣＧＧＡＴＴＡＴＴＡＴＡ
ＴＴＡＡＣ（配列番号４２）
アミノ酸配列：ＫＡＳＧＹＳＦＰＤＹＹＩＮ（配列番号４３）
抗ＢＣＭＡ重鎖ＣＤＲ２
コード配列：ＴＧＧＡＴＴＴＡＴＴＴＴＧＣＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＧＡＡＴＡＴＡ
ＡＣＣＡＧＡＡＡＴＴＴＡＣＣＧＧＣ（配列番号４４）
アミノ酸配列：ＷＩＹＦＡＳＧＮＳＥＹＮＱＫＦＴＧ（配列番号４５）
コード配列：ＴＧＧＡＴＴＴＡＴＴＴＴＧＣＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＧＡＡＴＡＴＡ
ＡＣＣＡＧＡＡＡＴＴＴＡＣＣＧＧＣ（配列番号４４）
アミノ酸配列：ＷＩＹＦＡＳＧＮＳＥＹＮＱＫＦＴＧ（配列番号４５）
抗ＢＣＭＡ重鎖ＣＤＲ３
コード配列：ＣＴＧＴＡＴＧＡＴＴＡＴＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＧ（配列番
号４６）
アミノ酸配列：ＬＹＤＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号４７）
コード配列：ＣＴＧＴＡＴＧＡＴＴＡＴＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＧ（配列番
号４６）
アミノ酸配列：ＬＹＤＹＤＷＹＦＤＶ（配列番号４７）
抗ＣＤ１９軽鎖可変領域
コード配列：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴ
ＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡ
ＧＧＡＣＡＴＴＡＧＴＡＡＡＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡ
ＧＡＴＧＧＡＡＣＴＧＴＴＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＴＡＣＡＴＣＡＡＧＡＴ
ＴＡＣＡＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣ
ＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＡＴＴＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡ
ＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＡＡＴＡＣＧＣ
ＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＴＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＣ
Ａ（配列番号４８）
アミノ酸配列：
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰ
ＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱ
ＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴ（配列番号４９）
コード配列：
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴ
ＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡ
ＧＧＡＣＡＴＴＡＧＴＡＡＡＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡ
ＧＡＴＧＧＡＡＣＴＧＴＴＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＴＡＣＡＴＣＡＡＧＡＴ
ＴＡＣＡＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣ
ＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＡＴＴＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡ
ＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＡＡＴＡＣＧＣ
ＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＴＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＣ
Ａ（配列番号４８）
アミノ酸配列：
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰ
ＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱ
ＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴ（配列番号４９）
抗ＣＤ１９重鎖可変領域
コード配列：
ＧＡＧＧＴＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＧＣＧＣ
ＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＧＴＣＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＡＧＧＧＧＴ
ＣＴＣＡＴＴＡＣＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＴＧＴＡＡＧＣＴＧＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＣＴ
ＣＣＡＣＧＡＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＡＡＴＡＴＧＧＧＧＴＡ
ＧＴＧＡＡＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＴＣＡＧＣＴＣＴＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＣＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＴＴＴＣＴＴＡ
ＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＴＴＡＣＴ
ＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＡＣＡＴＴＡＴＴＡＣＴＡＣＧＧＴＧＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＴＡＴ
ＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
（配列番号５０）
アミノ酸配列：
ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰ
ＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬ
ＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
（配列番号５１）
コード配列：
ＧＡＧＧＴＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＧＣＧＣ
ＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＧＴＣＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＡＧＧＧＧＴ
ＣＴＣＡＴＴＡＣＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＴＧＴＡＡＧＣＴＧＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＣＴ
ＣＣＡＣＧＡＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＡＡＴＡＴＧＧＧＧＴＡ
ＧＴＧＡＡＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＴＣＡＧＣＴＣＴＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＣＴ
ＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＴＴＴＣＴＴＡ
ＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＴＴＡＣＴ
ＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＡＣＡＴＴＡＴＴＡＣＴＡＣＧＧＴＧＧＴＡＧＣＴＡＴＧＣＴＡＴ
ＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
（配列番号５０）
アミノ酸配列：
ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰ
ＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬ
ＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
（配列番号５１）
抗ＢＣＭＡ軽鎖可変領域
コード配列：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＴＧＡ
ＣＣＣＣＧＧＧＣＧＡＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＡＴＴＡＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＣＣＡ
ＧＡＧＣＣＴＧＧＴＧＣＡＴＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＡＴＴＧＧ
ＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴ
ＡＴＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＡＴＣＧＣＴＴ
ＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＣＧＧＡＴＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＡＡＡＴＴ
ＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＴＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧ
ＣＧＧＡＡＡＣＣＡＧＣＣＡＴＧＴＧＣＣＧＴＧＧＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣ
ＣＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＣ（配列番号５２）
アミノ酸配列：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨＷ
ＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＡＤＦＴＬＫＩ
ＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＥＴＳＨＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＳ（配列番号：
５３）
コード配列：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＣＣＧＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＴＧＡ
ＣＣＣＣＧＧＧＣＧＡＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＡＴＴＡＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＣＣＡ
ＧＡＧＣＣＴＧＧＴＧＣＡＴＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＴＣＴＧＣＡＴＴＧＧ
ＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴ
ＡＴＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＡＴＣＧＣＴＴ
ＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＣＧＧＡＴＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＡＡＡＴＴ
ＡＧＣＣＧＣＧＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＴＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧ
ＣＧＧＡＡＡＣＣＡＧＣＣＡＴＧＴＧＣＣＧＴＧＧＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣ
ＣＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＣ（配列番号５２）
アミノ酸配列：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨＷ
ＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＡＤＦＴＬＫＩ
ＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＥＴＳＨＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＳ（配列番号：
５３）
抗ＢＣＭＡ重鎖可変領域
コード配列：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＧＡＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＣ
ＣＧＧＧＣＧＣＧＡＧＣＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＧＡＧＣＧＧＣＴＡ
ＴＡＧＣＴＴＴＣＣＧＧＡＴＴＡＴＴＡＴＡＴＴＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧ
ＣＣＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＴＴＴＴＧ
ＣＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＧＡＡＴＡＴＡＡＣＣＡＧＡＡＡＴＴＴＡＣＣＧＧＣＣＧ
ＣＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＣＧＡＴＡＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＧＴＡＴ
ＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＣＡＧＣＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＧＧＴＧＴ
ＡＴＴＴＴＴＧＣＧＣＧＡＧＣＣＴＧＴＡＴＧＡＴＴＡＴＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡ
ＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ（配列
番号５４）
アミノ酸配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＰＤＹＹＩＮＷＶＲＱＡ
ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＹＦＡＳＧＮＳＥＹＮＱＫＦＴＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＳＳＴＡＹ
ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＳＬＹＤＹＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（
配列番号５５）
コード配列：
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＧＡＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＣ
ＣＧＧＧＣＧＣＧＡＧＣＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＧＡＧＣＧＧＣＴＡ
ＴＡＧＣＴＴＴＣＣＧＧＡＴＴＡＴＴＡＴＡＴＴＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧ
ＣＣＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＴＴＡＴＴＴＴＧ
ＣＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＧＡＡＴＡＴＡＡＣＣＡＧＡＡＡＴＴＴＡＣＣＧＧＣＣＧ
ＣＧＴＧＡＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＣＧＡＴＡＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＧＴＡＴ
ＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＣＡＧＣＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＧＧＴＧＴ
ＡＴＴＴＴＴＧＣＧＣＧＡＧＣＣＴＧＴＡＴＧＡＴＴＡＴＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡ
ＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ（配列
番号５４）
アミノ酸配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＰＤＹＹＩＮＷＶＲＱＡ
ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＹＦＡＳＧＮＳＥＹＮＱＫＦＴＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＳＳＴＡＹ
ＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＳＬＹＤＹＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（
配列番号５５）
ＴＣＲサブユニット源
ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のサブユニットはすべて、細胞外ドメイン、膜貫通
ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。ヒトＴＣＲ複合体は、ＣＤ３イプシロンポリペプ
チド、ＣＤ３ガンマポリペプチド、ＣＤ３デルタポリペプチド、ＣＤ３ゼータポリペプチ
ド、ＴＣＲアルファ鎖ポリペプチド、及びＴＣＲベータ鎖ポリペプチドを含む。ヒトＣＤ
３イプシロンポリペプチドの標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０７
７６６である。ヒトＣＤ３ガンマポリペプチドの標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセ
ッション番号Ｐ０９６９３である。ヒトＣＤ３デルタポリペプチドの標準的な配列は、Ｕ
ｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０４３２３４である。ヒトＣＤ３ゼータポリペプチド
の標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ２０９６３である。ヒトＴＣＲ
アルファ鎖の標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ６ＩＳＵ１である。
ヒトＴＣＲベータ鎖Ｃ領域の標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１
８５０であり、ヒトＴＣＲベータ鎖Ｖ領域の配列は、Ｐ０４４３５である。
ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のサブユニットはすべて、細胞外ドメイン、膜貫通
ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。ヒトＴＣＲ複合体は、ＣＤ３イプシロンポリペプ
チド、ＣＤ３ガンマポリペプチド、ＣＤ３デルタポリペプチド、ＣＤ３ゼータポリペプチ
ド、ＴＣＲアルファ鎖ポリペプチド、及びＴＣＲベータ鎖ポリペプチドを含む。ヒトＣＤ
３イプシロンポリペプチドの標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０７
７６６である。ヒトＣＤ３ガンマポリペプチドの標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセ
ッション番号Ｐ０９６９３である。ヒトＣＤ３デルタポリペプチドの標準的な配列は、Ｕ
ｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０４３２３４である。ヒトＣＤ３ゼータポリペプチド
の標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ２０９６３である。ヒトＴＣＲ
アルファ鎖の標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ６ＩＳＵ１である。
ヒトＴＣＲベータ鎖Ｃ領域の標準的な配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１
８５０であり、ヒトＴＣＲベータ鎖Ｖ領域の配列は、Ｐ０４４３５である。
ヒトＣＤ３イプシロンポリペプチドの標準的な配列は：
ＭＱＳＧＴＨＷＲＶＬＧＬＣＬＬＳＶＧＶＷＧＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩ
ＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤ
ＨＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＣＥ
ＮＣＭＥＭＤＶＭＳＶＡＴＩＶＩＶＤＩＣＩＴＧＧＬＬＬＬＶＹＹＷＳＫＮＲＫＡＫＡＫ
ＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳ
ＧＬＮＱＲＲＩ（配列番号５６）である。
ＭＱＳＧＴＨＷＲＶＬＧＬＣＬＬＳＶＧＶＷＧＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩ
ＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤ
ＨＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＣＥ
ＮＣＭＥＭＤＶＭＳＶＡＴＩＶＩＶＤＩＣＩＴＧＧＬＬＬＬＶＹＹＷＳＫＮＲＫＡＫＡＫ
ＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳ
ＧＬＮＱＲＲＩ（配列番号５６）である。
ヒトＣＤ３ガンマポリペプチドの標準的な配列は：
ＭＥＱＧＫＧＬＡＶＬＩＬＡＩＩＬＬＱＧＴＬＡＱＳＩＫＧＮＨＬＶＫＶＹＤＹＱＥＤＧ
ＳＶＬＬＴＣＤＡＥＡＫＮＩＴＷＦＫＤＧＫＭＩＧＦＬＴＥＤＫＫＫＷＮＬＧＳＮＡＫＤ
ＰＲＧＭＹＱＣＫＧＳＱＮＫＳＫＰＬＱＶＹＹＲＭＣＱＮＣＩＥＬＮＡＡＴＩＳＧＦＬＦ
ＡＥＩＶＳＩＦＶＬＡＶＧＶＹＦＩＡＧＱＤＧＶＲＱＳＲＡＳＤＫＱＴＬＬＰＮＤＱＬＹ
ＱＰＬＫＤＲＥＤＤＱＹＳＨＬＱＧＮＱＬＲＲＮ（配列番号５７）である。
ＭＥＱＧＫＧＬＡＶＬＩＬＡＩＩＬＬＱＧＴＬＡＱＳＩＫＧＮＨＬＶＫＶＹＤＹＱＥＤＧ
ＳＶＬＬＴＣＤＡＥＡＫＮＩＴＷＦＫＤＧＫＭＩＧＦＬＴＥＤＫＫＫＷＮＬＧＳＮＡＫＤ
ＰＲＧＭＹＱＣＫＧＳＱＮＫＳＫＰＬＱＶＹＹＲＭＣＱＮＣＩＥＬＮＡＡＴＩＳＧＦＬＦ
ＡＥＩＶＳＩＦＶＬＡＶＧＶＹＦＩＡＧＱＤＧＶＲＱＳＲＡＳＤＫＱＴＬＬＰＮＤＱＬＹ
ＱＰＬＫＤＲＥＤＤＱＹＳＨＬＱＧＮＱＬＲＲＮ（配列番号５７）である。
ヒトＣＤ３デルタポリペプチドの標準的な配列は：
ＭＥＨＳＴＦＬＳＧＬＶＬＡＴＬＬＳＱＶＳＰＦＫＩＰＩＥＥＬＥＤＲＶＦＶＮＣＮＴＳ
ＩＴＷＶＥＧＴＶＧＴＬＬＳＤＩＴＲＬＤＬＧＫＲＩＬＤＰＲＧＩＹＲＣＮＧＴＤＩＹＫ
ＤＫＥＳＴＶＱＶＨＹＲＭＣＱＳＣＶＥＬＤＰＡＴＶＡＧＩＩＶＴＤＶＩＡＴＬＬＬＡＬ
ＧＶＦＣＦＡＧＨＥＴＧＲＬＳＧＡＡＤＴＱＡＬＬＲＮＤＱＶＹＱＰＬＲＤＲＤＤＡＱＹ
ＳＨＬＧＧＮＷＡＲＮＫ（配列番号５８）である。
ＭＥＨＳＴＦＬＳＧＬＶＬＡＴＬＬＳＱＶＳＰＦＫＩＰＩＥＥＬＥＤＲＶＦＶＮＣＮＴＳ
ＩＴＷＶＥＧＴＶＧＴＬＬＳＤＩＴＲＬＤＬＧＫＲＩＬＤＰＲＧＩＹＲＣＮＧＴＤＩＹＫ
ＤＫＥＳＴＶＱＶＨＹＲＭＣＱＳＣＶＥＬＤＰＡＴＶＡＧＩＩＶＴＤＶＩＡＴＬＬＬＡＬ
ＧＶＦＣＦＡＧＨＥＴＧＲＬＳＧＡＡＤＴＱＡＬＬＲＮＤＱＶＹＱＰＬＲＤＲＤＤＡＱＹ
ＳＨＬＧＧＮＷＡＲＮＫ（配列番号５８）である。
ヒトＣＤ３ゼータポリペプチドの標準的な配列は：
ＭＫＷＫＡＬＦＴＡＡＩＬＱＡＱＬＰＩＴＥＡＱＳＦＧＬＬＤＰＫＬＣＹＬＬＤＧＩＬＦ
ＩＹＧＶＩＬＴＡＬＦＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲ
ＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡ
ＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡ
ＬＰＰＲ（配列番号５９）である。
ＭＫＷＫＡＬＦＴＡＡＩＬＱＡＱＬＰＩＴＥＡＱＳＦＧＬＬＤＰＫＬＣＹＬＬＤＧＩＬＦ
ＩＹＧＶＩＬＴＡＬＦＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲ
ＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡ
ＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡ
ＬＰＰＲ（配列番号５９）である。
ヒトＴＣＲアルファ鎖の標準的な配列は：
ＭＡＧＴＷＬＬＬＬＬＡＬＧＣＰＡＬＰＴＧＶＧＧＴＰＦＰＳＬＡＰＰＩＭＬＬＶＤＧＫ
ＱＱＭＶＶＶＣＬＶＬＤＶＡＰＰＧＬＤＳＰＩＷＦＳＡＧＮＧＳＡＬＤＡＦＴＹＧＰＳＰ
ＡＴＤＧＴＷＴＮＬＡＨＬＳＬＰＳＥＥＬＡＳＷＥＰＬＶＣＨＴＧＰＧＡＥＧＨＳＲＳＴ
ＱＰＭＨＬＳＧＥＡＳＴＡＲＴＣＰＱＥＰＬＲＧＴＰＧＧＡＬＷＬＧＶＬＲＬＬＬＦＫＬ
ＬＬＦＤＬＬＬＴＣＳＣＬＣＤＰＡＧＰＬＰＳＰＡＴＴＴＲＬＲＡＬＧＳＨＲＬＨＰＡＴ
ＥＴＧＧＲＥＡＴＳＳＰＲＰＱＰＲＤＲＲＷＧＤＴＰＰＧＲＫＰＧＳＰＶＷＧＥＧＳＹＬ
ＳＳＹＰＴＣＰＡＱＡＷＣＳＲＳＡＬＲＡＰＳＳＳＬＧＡＦＦＡＧＤＬＰＰＰＬＱＡＧＡ
Ａ（配列番号６０）である。
ＭＡＧＴＷＬＬＬＬＬＡＬＧＣＰＡＬＰＴＧＶＧＧＴＰＦＰＳＬＡＰＰＩＭＬＬＶＤＧＫ
ＱＱＭＶＶＶＣＬＶＬＤＶＡＰＰＧＬＤＳＰＩＷＦＳＡＧＮＧＳＡＬＤＡＦＴＹＧＰＳＰ
ＡＴＤＧＴＷＴＮＬＡＨＬＳＬＰＳＥＥＬＡＳＷＥＰＬＶＣＨＴＧＰＧＡＥＧＨＳＲＳＴ
ＱＰＭＨＬＳＧＥＡＳＴＡＲＴＣＰＱＥＰＬＲＧＴＰＧＧＡＬＷＬＧＶＬＲＬＬＬＦＫＬ
ＬＬＦＤＬＬＬＴＣＳＣＬＣＤＰＡＧＰＬＰＳＰＡＴＴＴＲＬＲＡＬＧＳＨＲＬＨＰＡＴ
ＥＴＧＧＲＥＡＴＳＳＰＲＰＱＰＲＤＲＲＷＧＤＴＰＰＧＲＫＰＧＳＰＶＷＧＥＧＳＹＬ
ＳＳＹＰＴＣＰＡＱＡＷＣＳＲＳＡＬＲＡＰＳＳＳＬＧＡＦＦＡＧＤＬＰＰＰＬＱＡＧＡ
Ａ（配列番号６０）である。
ヒトＴＣＲアルファ鎖Ｃ領域の標準的な配列は：
ＰＮＩＱＮＰＤＰＡＶＹＱＬＲＤＳＫＳＳＤＫＳＶＣＬＦＴＤＦＤＳＱＴＮＶＳＱＳＫＤ
ＳＤＶＹＩＴＤＫＴＶＬＤＭＲＳＭＤＦＫＳＮＳＡＶＡＷＳＮＫＳＤＦＡＣＡＮＡＦＮＮ
ＳＩＩＰＥＤＴＦＦＰＳＰＥＳＳＣＤＶＫＬＶＥＫＳＦＥＴＤＴＮＬＮＦＱＮＬＳＶＩＧ
ＦＲＩＬＬＬＫＶＡＧＦＮＬＬＭＴＬＲＬＷＳＳ（配列番号６１）である。
ＰＮＩＱＮＰＤＰＡＶＹＱＬＲＤＳＫＳＳＤＫＳＶＣＬＦＴＤＦＤＳＱＴＮＶＳＱＳＫＤ
ＳＤＶＹＩＴＤＫＴＶＬＤＭＲＳＭＤＦＫＳＮＳＡＶＡＷＳＮＫＳＤＦＡＣＡＮＡＦＮＮ
ＳＩＩＰＥＤＴＦＦＰＳＰＥＳＳＣＤＶＫＬＶＥＫＳＦＥＴＤＴＮＬＮＦＱＮＬＳＶＩＧ
ＦＲＩＬＬＬＫＶＡＧＦＮＬＬＭＴＬＲＬＷＳＳ（配列番号６１）である。
ヒトＴＣＲアルファ鎖Ｖ領域ＣＴＬ−Ｌ１７の標準的な配列は：
ＭＡＭＬＬＧＡＳＶＬＩＬＷＬＱＰＤＷＶＮＳＱＱＫＮＤＤＱＱＶＫＱＮＳＰＳＬＳＶＱ
ＥＧＲＩＳＩＬＮＣＤＹＴＮＳＭＦＤＹＦＬＷＹＫＫＹＰＡＥＧＰＴＦＬＩＳＩＳＳＩＫ
ＤＫＮＥＤＧＲＦＴＶＦＬＮＫＳＡＫＨＬＳＬＨＩＶＰＳＱＰＧＤＳＡＶＹＦＣＡＡＫＧ
ＡＧＴＡＳＫＬＴＦＧＴＧＴＲＬＱＶＴＬ（配列番号６２）である。
ＭＡＭＬＬＧＡＳＶＬＩＬＷＬＱＰＤＷＶＮＳＱＱＫＮＤＤＱＱＶＫＱＮＳＰＳＬＳＶＱ
ＥＧＲＩＳＩＬＮＣＤＹＴＮＳＭＦＤＹＦＬＷＹＫＫＹＰＡＥＧＰＴＦＬＩＳＩＳＳＩＫ
ＤＫＮＥＤＧＲＦＴＶＦＬＮＫＳＡＫＨＬＳＬＨＩＶＰＳＱＰＧＤＳＡＶＹＦＣＡＡＫＧ
ＡＧＴＡＳＫＬＴＦＧＴＧＴＲＬＱＶＴＬ（配列番号６２）である。
ヒトＴＣＲベータ鎖Ｃ領域の標準的な配列は：
ＥＤＬＮＫＶＦＰＰＥＶＡＶＦＥＰＳＥＡＥＩＳＨＴＱＫＡＴＬＶＣＬＡＴＧＦＦＰＤＨ
ＶＥＬＳＷＷＶＮＧＫＥＶＨＳＧＶＳＴＤＰＱＰＬＫＥＱＰＡＬＮＤＳＲＹＣＬＳＳＲＬ
ＲＶＳＡＴＦＷＱＮＰＲＮＨＦＲＣＱＶＱＦＹＧＬＳＥＮＤＥＷＴＱＤＲＡＫＰＶＴＱＩ
ＶＳＡＥＡＷＧＲＡＤＣＧＦＴＳＶＳＹＱＱＧＶＬＳＡＴＩＬＹＥＩＬＬＧＫＡＴＬＹＡ
ＶＬＶＳＡＬＶＬＭＡＭＶＫＲＫＤＦ（配列番号６３）である。
ＥＤＬＮＫＶＦＰＰＥＶＡＶＦＥＰＳＥＡＥＩＳＨＴＱＫＡＴＬＶＣＬＡＴＧＦＦＰＤＨ
ＶＥＬＳＷＷＶＮＧＫＥＶＨＳＧＶＳＴＤＰＱＰＬＫＥＱＰＡＬＮＤＳＲＹＣＬＳＳＲＬ
ＲＶＳＡＴＦＷＱＮＰＲＮＨＦＲＣＱＶＱＦＹＧＬＳＥＮＤＥＷＴＱＤＲＡＫＰＶＴＱＩ
ＶＳＡＥＡＷＧＲＡＤＣＧＦＴＳＶＳＹＱＱＧＶＬＳＡＴＩＬＹＥＩＬＬＧＫＡＴＬＹＡ
ＶＬＶＳＡＬＶＬＭＡＭＶＫＲＫＤＦ（配列番号６３）である。
ヒトＴＣＲベータ鎖Ｖ領域ＣＴＬ−Ｌ１７の標準的な配列は：
ＭＧＴＳＬＬＣＷＭＡＬＣＬＬＧＡＤＨＡＤＴＧＶＳＱＮＰＲＨＮＩＴＫＲＧＱＮＶＴＦ
ＲＣＤＰＩＳＥＨＮＲＬＹＷＹＲＱＴＬＧＱＧＰＥＦＬＴＹＦＱＮＥＡＱＬＥＫＳＲＬＬ
ＳＤＲＦＳＡＥＲＰＫＧＳＦＳＴＬＥＩＱＲＴＥＱＧＤＳＡＭＹＬＣＡＳＳＬＡＧＬＮＱ
ＰＱＨＦＧＤＧＴＲＬＳＩＬ（配列番号６４）である。
ＭＧＴＳＬＬＣＷＭＡＬＣＬＬＧＡＤＨＡＤＴＧＶＳＱＮＰＲＨＮＩＴＫＲＧＱＮＶＴＦ
ＲＣＤＰＩＳＥＨＮＲＬＹＷＹＲＱＴＬＧＱＧＰＥＦＬＴＹＦＱＮＥＡＱＬＥＫＳＲＬＬ
ＳＤＲＦＳＡＥＲＰＫＧＳＦＳＴＬＥＩＱＲＴＥＱＧＤＳＡＭＹＬＣＡＳＳＬＡＧＬＮＱ
ＰＱＨＦＧＤＧＴＲＬＳＩＬ（配列番号６４）である。
ヒトＴＣＲベータ鎖Ｖ領域ＹＴ３５の標準的な配列は：
ＭＤＳＷＴＦＣＣＶＳＬＣＩＬＶＡＫＨＴＤＡＧＶＩＱＳＰＲＨＥＶＴＥＭＧＱＥＶＴＬ
ＲＣＫＰＩＳＧＨＮＳＬＦＷＹＲＱＴＭＭＲＧＬＥＬＬＩＹＦＮＮＮＶＰＩＤＤＳＧＭＰ
ＥＤＲＦＳＡＫＭＰＮＡＳＦＳＴＬＫＩＱＰＳＥＰＲＤＳＡＶＹＦＣＡＳＳＦＳＴＣＳＡ
ＮＹＧＹＴＦＧＳＧＴＲＬＴＶＶ（配列番号６５）である。
ＭＤＳＷＴＦＣＣＶＳＬＣＩＬＶＡＫＨＴＤＡＧＶＩＱＳＰＲＨＥＶＴＥＭＧＱＥＶＴＬ
ＲＣＫＰＩＳＧＨＮＳＬＦＷＹＲＱＴＭＭＲＧＬＥＬＬＩＹＦＮＮＮＶＰＩＤＤＳＧＭＰ
ＥＤＲＦＳＡＫＭＰＮＡＳＦＳＴＬＫＩＱＰＳＥＰＲＤＳＡＶＹＦＣＡＳＳＦＳＴＣＳＡ
ＮＹＧＹＴＦＧＳＧＴＲＬＴＶＶ（配列番号６５）である。
例示的な抗ＢＣＭＡ重鎖配列は：
ＴＣＲドメイン及びｓｃＦｖからのＴＦＰの生成
ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、リンカー配列、例えば、Ｇ４Ｓ、（Ｇ４Ｓ）２
、（Ｇ４Ｓ）３、または（Ｇ４Ｓ）４を用いてＣＤ３イプシロンまたは他のＴＣＲサブユ
ニット（１Ｃ参照）に組み換え技術によって連結される。様々なリンカー及びｓｃＦｖの
構造が利用される。ＴＦＰの生成のため、ＴＣＲアルファ鎖及びＴＣＲベータ鎖を完全長
ポリペプチドまたはそれらの定常ドメインのみのいずれかとして用いた。ＴＣＲアルファ
及びＴＣＲベータ鎖の任意の可変配列が、ＴＦＰの作製を可能にする。
ＣＤ１９またはＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、リンカー配列、例えば、Ｇ４Ｓ、（Ｇ４Ｓ）２
、（Ｇ４Ｓ）３、または（Ｇ４Ｓ）４を用いてＣＤ３イプシロンまたは他のＴＣＲサブユ
ニット（１Ｃ参照）に組み換え技術によって連結される。様々なリンカー及びｓｃＦｖの
構造が利用される。ＴＦＰの生成のため、ＴＣＲアルファ鎖及びＴＣＲベータ鎖を完全長
ポリペプチドまたはそれらの定常ドメインのみのいずれかとして用いた。ＴＣＲアルファ
及びＴＣＲベータ鎖の任意の可変配列が、ＴＦＰの作製を可能にする。
ＴＦＰ発現ベクター
プロモーター（サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー−プロモーター）、分泌
を可能にするためのシグナル伝達配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネータ（
ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）遺伝子）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能
にする要素（例えば、ＳＶ４０起点及びＣｏｌＥ１または当技術分野で既知の他のもの）
、ならびに選択を可能にする要素（アンピシリン耐性遺伝子及びゼオシンマーカー）を含
む発現ベクターを提供する。
プロモーター（サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー−プロモーター）、分泌
を可能にするためのシグナル伝達配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネータ（
ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）遺伝子）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能
にする要素（例えば、ＳＶ４０起点及びＣｏｌＥ１または当技術分野で既知の他のもの）
、ならびに選択を可能にする要素（アンピシリン耐性遺伝子及びゼオシンマーカー）を含
む発現ベクターを提供する。
好ましくは、ＴＦＰをコードする核酸構築物は、レンチウイルス発現ベクターにクロー
ニングされ、発現は、ＣＤ１９＋標的細胞に反応するＴＦＰ．ＣＤ１９形質導入Ｔ細胞（
「ＣＤ１９．ＴＦＰ」もしくは「ＣＤ１９．ＴＦＰ Ｔ細胞」または「ＴＦＰ．ＣＤ１９
」もしくは「ＴＦＰ．ＣＤ１９ Ｔ細胞」）、ＦＡＰ＋標的細胞に反応するＴＦＰ．ＦＡ
Ｐ形質導入Ｔ細胞（「ＦＡＰ．ＴＦＰ」もしくは「ＦＡＰ．ＴＦＰ Ｔ細胞」または「Ｔ
ＦＰ．ＦＡＰ」もしくは「ＴＦＰ．ＦＡＰ Ｔ細胞」）、ＣＡＩＸ＋標的細胞に反応する
ＴＦＰ．ＣＡＩＸ形質導入Ｔ細胞（「ＣＡＩＸ．ＴＦＰ」もしくは「ＣＡＩＸ．ＴＦＰ
Ｔ細胞」または「ＴＦＰ．ＣＡＩＸ」もしくは「ＴＦＰ．ＣＡＩＸ Ｔ細胞」）、または
ＢＣＭＡ＋標的細胞に反応するＴＦＰ．ＢＣＭＡ形質導入Ｔ細胞（「ＢＣＭＡ．ＴＦＰ」
もしくは「ＢＣＭＡ．ＴＦＰ Ｔ細胞」または「ＴＦＰ．ＢＣＭＡ」もしくは「ＴＦＰ．
ＢＣＭＡ Ｔ細胞」）のエフェクターＴ細胞応答の量と質に基づいて認められる。エフェ
クターＴ細胞応答としては、細胞拡大、増殖、倍加、サイトカイン産生、及び標的細胞溶
解または細胞溶解活性（すなわち、脱顆粒）が挙げられるがこれらに限定されない。
ニングされ、発現は、ＣＤ１９＋標的細胞に反応するＴＦＰ．ＣＤ１９形質導入Ｔ細胞（
「ＣＤ１９．ＴＦＰ」もしくは「ＣＤ１９．ＴＦＰ Ｔ細胞」または「ＴＦＰ．ＣＤ１９
」もしくは「ＴＦＰ．ＣＤ１９ Ｔ細胞」）、ＦＡＰ＋標的細胞に反応するＴＦＰ．ＦＡ
Ｐ形質導入Ｔ細胞（「ＦＡＰ．ＴＦＰ」もしくは「ＦＡＰ．ＴＦＰ Ｔ細胞」または「Ｔ
ＦＰ．ＦＡＰ」もしくは「ＴＦＰ．ＦＡＰ Ｔ細胞」）、ＣＡＩＸ＋標的細胞に反応する
ＴＦＰ．ＣＡＩＸ形質導入Ｔ細胞（「ＣＡＩＸ．ＴＦＰ」もしくは「ＣＡＩＸ．ＴＦＰ
Ｔ細胞」または「ＴＦＰ．ＣＡＩＸ」もしくは「ＴＦＰ．ＣＡＩＸ Ｔ細胞」）、または
ＢＣＭＡ＋標的細胞に反応するＴＦＰ．ＢＣＭＡ形質導入Ｔ細胞（「ＢＣＭＡ．ＴＦＰ」
もしくは「ＢＣＭＡ．ＴＦＰ Ｔ細胞」または「ＴＦＰ．ＢＣＭＡ」もしくは「ＴＦＰ．
ＢＣＭＡ Ｔ細胞」）のエフェクターＴ細胞応答の量と質に基づいて認められる。エフェ
クターＴ細胞応答としては、細胞拡大、増殖、倍加、サイトカイン産生、及び標的細胞溶
解または細胞溶解活性（すなわち、脱顆粒）が挙げられるがこれらに限定されない。
ＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡのレ
ンチウイルス転移ベクターは、ＶＳＶｇ偽型レンチウイルス粒子にパッケージされるゲノ
ム材料を産生するために用いられる。レンチウイルス転移ベクターのＤＮＡをＶＳＶｇの
３つのパッケージング成分、ｇａｇ／ｐｏｌ及びｒｅｖをリポフェクタミン試薬と組み合
わせて混合し、それらを一緒に２９３細胞にトランスフェクトする。２４及び４８時間後
、培地を採取し、濾過し、超遠心分離によって濃縮する。得られたウイルス調製物を−８
０Ｃで保存する。形質導入単位の数は、ＳｕｐＴ１細胞での滴定で決定される。再指向性
ＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細
胞は、新たな天然のＴ細胞を抗ＣＤ３ｘ抗ＣＤ２８ビーズで２４時間活性化し、その後適
切な数の形質導入単位を加え、所望の割合の形質導入Ｔ細胞を得ることによって産生され
る。これらの改変Ｔ細胞を、細胞が休止し、そのサイズが減少するまで増殖させ、この時
点で細胞を後の分析用に凍結保存する。細胞の数及びサイズは、ｃｏｕｌｔｅｒのマルチ
サイザーＩＩＩを用いて測定する。凍結保存の前に、形質導入された細胞（ＴＦＰ．ＣＤ
１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡを細胞表面で発現す
る）の割合及びその発現のそれらの相対的蛍光強度をフローサイトメトリー分析によって
決定する。ヒストグラムのプロットから、これらＴＦＰの相対的発現レベルが、形質導入
された割合とそれらの相対的蛍光強度を比較することによって、調べられる。
ンチウイルス転移ベクターは、ＶＳＶｇ偽型レンチウイルス粒子にパッケージされるゲノ
ム材料を産生するために用いられる。レンチウイルス転移ベクターのＤＮＡをＶＳＶｇの
３つのパッケージング成分、ｇａｇ／ｐｏｌ及びｒｅｖをリポフェクタミン試薬と組み合
わせて混合し、それらを一緒に２９３細胞にトランスフェクトする。２４及び４８時間後
、培地を採取し、濾過し、超遠心分離によって濃縮する。得られたウイルス調製物を−８
０Ｃで保存する。形質導入単位の数は、ＳｕｐＴ１細胞での滴定で決定される。再指向性
ＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細
胞は、新たな天然のＴ細胞を抗ＣＤ３ｘ抗ＣＤ２８ビーズで２４時間活性化し、その後適
切な数の形質導入単位を加え、所望の割合の形質導入Ｔ細胞を得ることによって産生され
る。これらの改変Ｔ細胞を、細胞が休止し、そのサイズが減少するまで増殖させ、この時
点で細胞を後の分析用に凍結保存する。細胞の数及びサイズは、ｃｏｕｌｔｅｒのマルチ
サイザーＩＩＩを用いて測定する。凍結保存の前に、形質導入された細胞（ＴＦＰ．ＣＤ
１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡを細胞表面で発現す
る）の割合及びその発現のそれらの相対的蛍光強度をフローサイトメトリー分析によって
決定する。ヒストグラムのプロットから、これらＴＦＰの相対的発現レベルが、形質導入
された割合とそれらの相対的蛍光強度を比較することによって、調べられる。
いくつかの実施形態では、複数のウイルスベクターでのＴ細胞の形質導入によって、複
数のＴＦＰが導入される。
数のＴＦＰが導入される。
ヒト化ＴＦＰ再指向性Ｔ細胞の細胞溶解活性、増殖能力、及びサイトカイン分泌の評価
ＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ
細胞の細胞表面で発現するＴＦＰを産生し、標的腫瘍細胞を殺傷し、増殖し、サイトカイ
ンを分泌する機能的能力は、当技術分野で既知のアッセイを用いて決定される。
ＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ
細胞の細胞表面で発現するＴＦＰを産生し、標的腫瘍細胞を殺傷し、増殖し、サイトカイ
ンを分泌する機能的能力は、当技術分野で既知のアッセイを用いて決定される。
ヒトＰＢＭＣ（例えば、天然のＴ細胞が、Ｔ細胞、すなわちＣＤ４＋及びＣＤ８＋リン
パ球に対して負の選択によって得られる正常なアフェレーシスドナー由来の血液）をヒト
インターロイキン−２（ＩＬ−２）で処理し、その後抗ＣＤ３ｘ抗ＣＤ２８ビーズで、例
えば、１０％ＲＰＭＩ中、３７℃、５％ＣＯ２にて、活性化し、その後ＴＦＰをコードす
るレンチウイルスベクターで形質導入する。フローサイトメトリーアッセイを用いて、例
えば、抗ＦＬＡＧ抗体または抗マウス可変ドメイン抗体によって、ＴＦＰの細胞表面での
存在を確認する。サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ）産生は、ＥＬＩＳＡまたは他のア
ッセイを用いて測定される。
パ球に対して負の選択によって得られる正常なアフェレーシスドナー由来の血液）をヒト
インターロイキン−２（ＩＬ−２）で処理し、その後抗ＣＤ３ｘ抗ＣＤ２８ビーズで、例
えば、１０％ＲＰＭＩ中、３７℃、５％ＣＯ２にて、活性化し、その後ＴＦＰをコードす
るレンチウイルスベクターで形質導入する。フローサイトメトリーアッセイを用いて、例
えば、抗ＦＬＡＧ抗体または抗マウス可変ドメイン抗体によって、ＴＦＰの細胞表面での
存在を確認する。サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ）産生は、ＥＬＩＳＡまたは他のア
ッセイを用いて測定される。
実施例３：ヒトＡＬＬマウスモデルにおけるヒトＴＦＰ Ｔ細胞効力
初代ヒトＡＬＬ細胞は、インビトロでそれらを培養することなく免疫不全マウス（例え
ば、ＮＳＧまたはＮＯＤ）で成長することができる。同様に、培養ヒトＡＬＬ細胞株は、
かかるマウスにおいて白血病を誘導することができる。ＡＬＬを有するマウスは、例えば
、ＨＡＬＬＸ５４４７モデルにおいて、ヒトＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ
．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞の効力を調べるために用いることができる
。このモデルでの読み出しは、ＡＬＬ細胞の静脈内（ｉ．ｖ．）注入後の、ヒトＴＦＰ．
ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞のｉ．
ｖ．投与の非存在下及び存在下でのマウスの生存率である。
初代ヒトＡＬＬ細胞は、インビトロでそれらを培養することなく免疫不全マウス（例え
ば、ＮＳＧまたはＮＯＤ）で成長することができる。同様に、培養ヒトＡＬＬ細胞株は、
かかるマウスにおいて白血病を誘導することができる。ＡＬＬを有するマウスは、例えば
、ＨＡＬＬＸ５４４７モデルにおいて、ヒトＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ
．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞の効力を調べるために用いることができる
。このモデルでの読み出しは、ＡＬＬ細胞の静脈内（ｉ．ｖ．）注入後の、ヒトＴＦＰ．
ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞のｉ．
ｖ．投与の非存在下及び存在下でのマウスの生存率である。
実施例４：インビボ固形腫瘍異種移植マウスモデルにおけるヒトＴＦＰ Ｔ細胞治療
ヒトＴＦＰ．ＣＤ１９またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞の効力もまた、ヒトＣＤ１９も
しくはＢＣＭＡを発現するＡＬＬ、ＣＬＬ、またはＮＨＬヒト細胞株由来の皮下固形腫瘍
を有する免疫不全マウスモデルで調べることできる。ヒトＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．Ｆ
ＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞治療に反応した腫瘍の縮小は
、キャリパーによる腫瘍サイズの測定によって、またはＧＦＰ発現腫瘍細胞によって放出
されるＧＦＰの蛍光シグナルの強度を観察することのいずれかによって評価することがで
きる。
ヒトＴＦＰ．ＣＤ１９またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞の効力もまた、ヒトＣＤ１９も
しくはＢＣＭＡを発現するＡＬＬ、ＣＬＬ、またはＮＨＬヒト細胞株由来の皮下固形腫瘍
を有する免疫不全マウスモデルで調べることできる。ヒトＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．Ｆ
ＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞治療に反応した腫瘍の縮小は
、キャリパーによる腫瘍サイズの測定によって、またはＧＦＰ発現腫瘍細胞によって放出
されるＧＦＰの蛍光シグナルの強度を観察することのいずれかによって評価することがで
きる。
初代ヒト固形腫瘍細胞は、インビトロでそれらを培養することなく免疫不全マウスで成
長することができる。例示的な固形がん細胞としては、例えば、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ
Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）及び／またはｔｈｅ Ｂｒｏａｄ Ｃａｎｃｅｒ
Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（ＣＣＬＥ，Ｂａｒｒｅｔｉｎａ ｅ
ｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ４８３：６０３ （２０１２）参照）に示される固形腫瘍
細胞株が挙げられる。例示的な固形がん細胞としては、腎細胞がん、乳がん、肺がん、卵
巣がん、前立腺がん、結腸がん、子宮頚がん、脳がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓または
胃がんから単離される初代腫瘍細胞が挙げられる。これらのマウスを、ヒト腫瘍異種移植
モデルにおいてＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．
ＢＣＭＡ Ｔ細胞の効力を調べるために用いることができる（例えば、Ｍｏｒｔｏｎ ｅ
ｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｐｒｏｃｏｌ． ２：２４７ （２００７）参照）。１×１０
６〜１×１０７個の初代細胞（コラゲナーゼ処理バルク腫瘍のＥＣマトリクス材料懸濁物
）または腫瘍フラグメント（ＥＣマトリクス材料中の初代腫瘍フラグメント）の皮下移植
もしくは注射に続いて、腫瘍を治療開始に先立って２００〜５００ｍｍ３まで成長させる
。
長することができる。例示的な固形がん細胞としては、例えば、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ
Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）及び／またはｔｈｅ Ｂｒｏａｄ Ｃａｎｃｅｒ
Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（ＣＣＬＥ，Ｂａｒｒｅｔｉｎａ ｅ
ｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ４８３：６０３ （２０１２）参照）に示される固形腫瘍
細胞株が挙げられる。例示的な固形がん細胞としては、腎細胞がん、乳がん、肺がん、卵
巣がん、前立腺がん、結腸がん、子宮頚がん、脳がん、肝臓がん、膵臓がん、腎臓または
胃がんから単離される初代腫瘍細胞が挙げられる。これらのマウスを、ヒト腫瘍異種移植
モデルにおいてＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴＦＰ．
ＢＣＭＡ Ｔ細胞の効力を調べるために用いることができる（例えば、Ｍｏｒｔｏｎ ｅ
ｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｐｒｏｃｏｌ． ２：２４７ （２００７）参照）。１×１０
６〜１×１０７個の初代細胞（コラゲナーゼ処理バルク腫瘍のＥＣマトリクス材料懸濁物
）または腫瘍フラグメント（ＥＣマトリクス材料中の初代腫瘍フラグメント）の皮下移植
もしくは注射に続いて、腫瘍を治療開始に先立って２００〜５００ｍｍ３まで成長させる
。
実施例５：多重ＴＦＰポリペプチドの実証、及び多重ヒト化ＴＦＰ再指向性Ｔ細胞の使
用
本明細書で提供されるＴＦＰポリペプチドは、内因性ＴＣＲサブユニットのポリペプチ
ドと機能的に会合し、機能的ＴＣＲ複合体を形成することが可能である。ここで、レンチ
ウイルスベクター内の複数のＴＦＰを用いて、機能的多重組み換えＴＣＲ複合体を生成す
るためにＴ細胞を形質導入する。例えば、ｉ）ＣＤ３−ｄｓｅｌｔａポリペプチド由来の
細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインならびにＣＤ１９、ＦＡＰ、ＣＡ
ＩＸ、またはＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖ抗体フラグメントを有する第一のＴＦＰ、ならびに
ｉｉ）ＣＤ３ガンマポリペプチド由来の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ド
メインならびにＣＤ１９、ＦＡＰ、ＣＡＩＸ、またはＢＣＭＡ特異的抗体フラグメントを
有する第二のＴＦＰを含むＴ細胞を提供する。該第一のＴＦＰ及び第二のＴＦＰは、互い
に、及び内因性ＴＣＲサブユニットのポリペプチドと相互作用することが可能であり、そ
れによって機能的ＴＣＲ複合体を形成する。
用
本明細書で提供されるＴＦＰポリペプチドは、内因性ＴＣＲサブユニットのポリペプチ
ドと機能的に会合し、機能的ＴＣＲ複合体を形成することが可能である。ここで、レンチ
ウイルスベクター内の複数のＴＦＰを用いて、機能的多重組み換えＴＣＲ複合体を生成す
るためにＴ細胞を形質導入する。例えば、ｉ）ＣＤ３−ｄｓｅｌｔａポリペプチド由来の
細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインならびにＣＤ１９、ＦＡＰ、ＣＡ
ＩＸ、またはＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖ抗体フラグメントを有する第一のＴＦＰ、ならびに
ｉｉ）ＣＤ３ガンマポリペプチド由来の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ド
メインならびにＣＤ１９、ＦＡＰ、ＣＡＩＸ、またはＢＣＭＡ特異的抗体フラグメントを
有する第二のＴＦＰを含むＴ細胞を提供する。該第一のＴＦＰ及び第二のＴＦＰは、互い
に、及び内因性ＴＣＲサブユニットのポリペプチドと相互作用することが可能であり、そ
れによって機能的ＴＣＲ複合体を形成する。
これらの多重ヒト化ＴＦＰ．ＣＤ１９、ＴＦＰ．ＦＡＰ、ＴＦＰ．ＣＡＩＸ、またはＴ
ＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞の使用は、上記実施例２及び３に示す通り、液性及び固形腫瘍で
実証される。
ＦＰ．ＢＣＭＡ Ｔ細胞の使用は、上記実施例２及び３に示す通り、液性及び固形腫瘍で
実証される。
実施例６：ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞の調製
レンチウイルスの産生
適切な構築物をコードするレンチウイルスを以下のように調製した。５×１０６個のＨ
ＥＫ２９３ＦＴ細胞を、１００ｍｍのディッシュに播種し、培養密度７０〜９０％になる
まで一夜置いた。示されたＤＮＡプラスミド２．５μｇ及びレンチウイルスパッケージン
グミックス（ＡＬＳＴＥＭ、カタログ番号ＶＰ１００；付属書Ｂ３参照）２０μＬを０．
５ｍＬの血清を含まないＤＭＥＭまたはＯｐｔｉ−ＭＥＭ Ｉ培地で希釈し、緩やかに混
合した。別のチューブで、ＮａｎｏＦｅｃｔトランスフェクション試薬（ＡＬＳＴＥＭ、
カタログ番号ＮＦ１００）３０μＬを、０．５ｍＬの血清を含まないＤＭＥＭまたはＯｐ
ｔｉ−ＭＥＭ Ｉ培地で希釈し、緩やかに混合した。これらＮａｎｏＦｅｃｔ／ＤＭＥＭ
及びＤＮＡ／ＤＭＥＭ溶液をその後混合し、１０〜１５秒間ボルテックスし、その後、こ
のＤＭＥＭ−プラスミド−ＮａｎｏＦｅｃｔ混合物を室温で１５分間インキュベートした
。前段階からの完全トランスフェクション複合体を、細胞のプレートに滴下し、揺動して
プレート内のトランスフェクション複合体を均等に分散させた。このプレートをその後加
湿された５％ＣＯ２インキュベータ内で、３７℃で一夜インキュベートした。翌日、上清
を１０ｍＬの新たな培地で置換し、ＶｉｒａｌＢｏｏｓｔ（５００ｘ、ＡＬＳＴＥＭ、カ
タログ番号ＶＢ１００）２０μＬを追加した。これらのプレートをその後さらに２４時間
、３７℃でインキュベートした。レンチウイルスを含む上清をその後５０ｍＬの滅菌蓋つ
きコニカル遠心チューブに採取し、氷上に置いた。４℃で１５分間、３０００ｒｐｍでの
遠心分離後、透明な上清を低タンパク質結合性０．４５μｍ滅菌フィルターでろ過し、続
いてウイルスを４℃で１．５時間、２５，０００ｒｐｍの超遠心分離（Ｂｅｃｋｍａｎｎ
、Ｌ８−７０Ｍ）によって単離した。このペレットを取り出し、ＤＭＥＭ培地に再懸濁し
、レンチウイルス濃度／力価を、定量的ＲＴ−ＰＣＲにて、Ｌｅｎｔｉ−Ｘ ｑＲＴ−Ｐ
ＣＲ滴定キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ；カタログ番号６３１２３５）を用いて確立した。任
意の残余のプラスミドＤＮＡは、ＤＮａｓｅＩで処理することで除去した。このウイルス
ストック調製物は、すぐに感染に用いたか、または等分し、後の使用のために−８０℃で
保存した。
レンチウイルスの産生
適切な構築物をコードするレンチウイルスを以下のように調製した。５×１０６個のＨ
ＥＫ２９３ＦＴ細胞を、１００ｍｍのディッシュに播種し、培養密度７０〜９０％になる
まで一夜置いた。示されたＤＮＡプラスミド２．５μｇ及びレンチウイルスパッケージン
グミックス（ＡＬＳＴＥＭ、カタログ番号ＶＰ１００；付属書Ｂ３参照）２０μＬを０．
５ｍＬの血清を含まないＤＭＥＭまたはＯｐｔｉ−ＭＥＭ Ｉ培地で希釈し、緩やかに混
合した。別のチューブで、ＮａｎｏＦｅｃｔトランスフェクション試薬（ＡＬＳＴＥＭ、
カタログ番号ＮＦ１００）３０μＬを、０．５ｍＬの血清を含まないＤＭＥＭまたはＯｐ
ｔｉ−ＭＥＭ Ｉ培地で希釈し、緩やかに混合した。これらＮａｎｏＦｅｃｔ／ＤＭＥＭ
及びＤＮＡ／ＤＭＥＭ溶液をその後混合し、１０〜１５秒間ボルテックスし、その後、こ
のＤＭＥＭ−プラスミド−ＮａｎｏＦｅｃｔ混合物を室温で１５分間インキュベートした
。前段階からの完全トランスフェクション複合体を、細胞のプレートに滴下し、揺動して
プレート内のトランスフェクション複合体を均等に分散させた。このプレートをその後加
湿された５％ＣＯ２インキュベータ内で、３７℃で一夜インキュベートした。翌日、上清
を１０ｍＬの新たな培地で置換し、ＶｉｒａｌＢｏｏｓｔ（５００ｘ、ＡＬＳＴＥＭ、カ
タログ番号ＶＢ１００）２０μＬを追加した。これらのプレートをその後さらに２４時間
、３７℃でインキュベートした。レンチウイルスを含む上清をその後５０ｍＬの滅菌蓋つ
きコニカル遠心チューブに採取し、氷上に置いた。４℃で１５分間、３０００ｒｐｍでの
遠心分離後、透明な上清を低タンパク質結合性０．４５μｍ滅菌フィルターでろ過し、続
いてウイルスを４℃で１．５時間、２５，０００ｒｐｍの超遠心分離（Ｂｅｃｋｍａｎｎ
、Ｌ８−７０Ｍ）によって単離した。このペレットを取り出し、ＤＭＥＭ培地に再懸濁し
、レンチウイルス濃度／力価を、定量的ＲＴ−ＰＣＲにて、Ｌｅｎｔｉ−Ｘ ｑＲＴ−Ｐ
ＣＲ滴定キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ；カタログ番号６３１２３５）を用いて確立した。任
意の残余のプラスミドＤＮＡは、ＤＮａｓｅＩで処理することで除去した。このウイルス
ストック調製物は、すぐに感染に用いたか、または等分し、後の使用のために−８０℃で
保存した。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
ＰＢＭＣ単離
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、全血またはバフィーコートのいずれかから調製した。全
血は、１０ｍＬのヘパリンバキュテナーに採取し、すぐに処理したか、または４℃で一夜
保存した。抗凝固処理した全血約１０ｍＬを、５０ｍＬのコニカル遠心チューブで、滅菌
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）緩衝液と総体積２０ｍＬになるまで混合した（ＰＢＳ、
ｐＨ７．４、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を含まない）。この血液／ＰＢＳ混合物２０ｍＬをその
後静かに１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ
、１７−１４４０−０３）の表面に載せ、その後４００ｇで３０〜４０分間、室温にて、
ブレーキをかけることなく遠心分離した。
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、全血またはバフィーコートのいずれかから調製した。全
血は、１０ｍＬのヘパリンバキュテナーに採取し、すぐに処理したか、または４℃で一夜
保存した。抗凝固処理した全血約１０ｍＬを、５０ｍＬのコニカル遠心チューブで、滅菌
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）緩衝液と総体積２０ｍＬになるまで混合した（ＰＢＳ、
ｐＨ７．４、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を含まない）。この血液／ＰＢＳ混合物２０ｍＬをその
後静かに１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ ＰＬＵＳ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ
、１７−１４４０−０３）の表面に載せ、その後４００ｇで３０〜４０分間、室温にて、
ブレーキをかけることなく遠心分離した。
バフィーコートは、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｌｏｏｄ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（マサチュ
ーセッツ州ボストン）から購入した。Ｌｅｕｃｏｓｅｐチューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉ
ｏ−ｏｎｅ）は、１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ
）を加えて準備し、１０００ｇで１分間遠心分離した。バフィーコートは、ＰＢＳ（ｐＨ
７．４、Ｃａ２＋もＭｇ２＋も含まない）で１：３に希釈した。この希釈バフィーコート
をＬｅｕｃｏｓｅｐチューブに移し、１０００ｇで１５分間、ブレーキをかけることなく
遠心分離した。希釈血漿／Ｆｉｃｏｌｌ界面に見られる末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を含む
細胞層を、Ｆｉｃｏｌｌの混入を最小限にするように注意深く取り出した。残余のＦｉｃ
ｏｌｌ、血小板、及び血漿タンパク質は、その後、このＰＢＭＣを４０ｍＬのＰＢＳで３
回、室温にて２００ｇで１０分間遠心分離することによって洗浄して除去した。これらの
細胞をその後血球計で計数した。この洗浄ＰＢＭＣをＣＡＲ−Ｔ培地（ＡＩＭ Ｖ−Ａｌ
ｂｕＭＡＸ（ＢＳＡ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、５％ＡＢ血清及び１．
２５μｇ／ｍＬアンホテリシンＢ（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、カリフォル
ニア州ウッドランド）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、ならびに１００μ／ｍＬストレプト
マイシンを含む）で一度洗浄した。別の方法として、この洗浄ＰＢＭＣを断熱バイアルに
移し、−８０℃で２４時間凍結し、その後、後の使用のために液体窒素中で保存した。
ーセッツ州ボストン）から購入した。Ｌｅｕｃｏｓｅｐチューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉ
ｏ−ｏｎｅ）は、１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ
）を加えて準備し、１０００ｇで１分間遠心分離した。バフィーコートは、ＰＢＳ（ｐＨ
７．４、Ｃａ２＋もＭｇ２＋も含まない）で１：３に希釈した。この希釈バフィーコート
をＬｅｕｃｏｓｅｐチューブに移し、１０００ｇで１５分間、ブレーキをかけることなく
遠心分離した。希釈血漿／Ｆｉｃｏｌｌ界面に見られる末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を含む
細胞層を、Ｆｉｃｏｌｌの混入を最小限にするように注意深く取り出した。残余のＦｉｃ
ｏｌｌ、血小板、及び血漿タンパク質は、その後、このＰＢＭＣを４０ｍＬのＰＢＳで３
回、室温にて２００ｇで１０分間遠心分離することによって洗浄して除去した。これらの
細胞をその後血球計で計数した。この洗浄ＰＢＭＣをＣＡＲ−Ｔ培地（ＡＩＭ Ｖ−Ａｌ
ｂｕＭＡＸ（ＢＳＡ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、５％ＡＢ血清及び１．
２５μｇ／ｍＬアンホテリシンＢ（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、カリフォル
ニア州ウッドランド）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、ならびに１００μ／ｍＬストレプト
マイシンを含む）で一度洗浄した。別の方法として、この洗浄ＰＢＭＣを断熱バイアルに
移し、−８０℃で２４時間凍結し、その後、後の使用のために液体窒素中で保存した。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
Ｔ細胞の活性化
全血またはバフィーコートのいずれかから調製した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、ウイ
ルスの形質導入に先立って、抗ヒトＣＤ２８及びＣＤ３抗体結合磁気ビーズで２４時間刺
激した。新たに単離したＰＢＭＣを、ＣＡＲ−Ｔ培地（ＡＩＭ Ｖ−ＡｌｂｕＭＡＸ（Ｂ
ＳＡ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、５％ＡＢ血清及び１．２５μｇ／ｍＬ
アンホテリシンＢ（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリ
ン、ならびに１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含む）でｈｕＩＬ−２なしで一度洗
浄し、その後３００ＩＵ／ｍＬのヒトＩＬ−２（１０００ｘストックから；Ｉｎｖｉｔｒ
ｏｇｅｎ）を含むＣＡＲ−Ｔ培地に、最終濃度１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。ＰＢ
ＭＣが前もって凍結されたものであった場合、これらを解凍し、予め温めた（３７℃）ｃ
ＤＭＥＭ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）９ｍＬに１×１０７細胞／ｍＬで
再懸濁し、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプト
マイシンの存在下、１×１０６細胞／ｍＬの濃度で、ＣＡＲＴ培地で一度洗浄し、ＣＡＲ
−Ｔ培地に１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁し、上記の通りＩＬ−２を添加した。
全血またはバフィーコートのいずれかから調製した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、ウイ
ルスの形質導入に先立って、抗ヒトＣＤ２８及びＣＤ３抗体結合磁気ビーズで２４時間刺
激した。新たに単離したＰＢＭＣを、ＣＡＲ−Ｔ培地（ＡＩＭ Ｖ−ＡｌｂｕＭＡＸ（Ｂ
ＳＡ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、５％ＡＢ血清及び１．２５μｇ／ｍＬ
アンホテリシンＢ（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリ
ン、ならびに１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含む）でｈｕＩＬ−２なしで一度洗
浄し、その後３００ＩＵ／ｍＬのヒトＩＬ−２（１０００ｘストックから；Ｉｎｖｉｔｒ
ｏｇｅｎ）を含むＣＡＲ−Ｔ培地に、最終濃度１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。ＰＢ
ＭＣが前もって凍結されたものであった場合、これらを解凍し、予め温めた（３７℃）ｃ
ＤＭＥＭ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）９ｍＬに１×１０７細胞／ｍＬで
再懸濁し、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプト
マイシンの存在下、１×１０６細胞／ｍＬの濃度で、ＣＡＲＴ培地で一度洗浄し、ＣＡＲ
−Ｔ培地に１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁し、上記の通りＩＬ−２を添加した。
活性化に先立って、抗ヒトＣＤ２８及びＣＤ３抗体結合磁気ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ）を、磁気ラックを使用して１ｍＬの滅菌１ｘ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄し
てビーズをこの溶液から分離し、その後、３００ＩＵ／ｍＬのヒトＩＬ−２とともにＣＡ
Ｒ−Ｔ培地に再懸濁し、最終濃度４×１０７ビーズ／ｍＬにした。ＰＢＭＣ及びビーズを
その後、２５μＬ（１×１０６ビーズ）のビーズを１ｍＬのＰＢＭＣに移すことで、ビー
ズ対細胞比１：１で混合した。所望の数の分割量をその後１２ウェルの低付着性または未
処理の細胞培養プレートの単一のウェルに分配し、ウイルスの形質導入に先立って３７℃
、５％ＣＯ２にて２４時間インキュベートした。
ｅｎ）を、磁気ラックを使用して１ｍＬの滅菌１ｘ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄し
てビーズをこの溶液から分離し、その後、３００ＩＵ／ｍＬのヒトＩＬ−２とともにＣＡ
Ｒ−Ｔ培地に再懸濁し、最終濃度４×１０７ビーズ／ｍＬにした。ＰＢＭＣ及びビーズを
その後、２５μＬ（１×１０６ビーズ）のビーズを１ｍＬのＰＢＭＣに移すことで、ビー
ズ対細胞比１：１で混合した。所望の数の分割量をその後１２ウェルの低付着性または未
処理の細胞培養プレートの単一のウェルに分配し、ウイルスの形質導入に先立って３７℃
、５％ＣＯ２にて２４時間インキュベートした。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
Ｔ細胞の形質導入／トランスフェクション及び増殖
ＰＢＭＣの活性化後、細胞を３７℃、５％ＣＯ２にて２４時間インキュベートした。レ
ンチウイルスを氷上で解凍し、５×１０６のレンチウイルスを、培地１ｍＬ当たり２μＬ
のＴｒａｎｓｐｌｕｓ（Ａｌｓｔｅｍ）（最終希釈１：５００）とともに１×１０６細胞
の各ウェルに加えた。細胞をさらに２４時間インキュベートし、その後ウイルスの添加を
繰り返した。別の方法として、レンチウイルスを氷上で解凍し、それぞれのウイルスを５
μｇ／ｍＬのポリブレン（Ｓｉｇｍａ）の存在下、５または５０ＭＯＩで加えた。細胞を
室温で１００分間、１００ｇでスピノキュレートした。細胞をその後、３００ＩＵ／ｍＬ
のヒトＩＬ−２の継続的な存在下で６〜１４日間成長させた（総インキュベート時間は、
必要とされる最終的なＣＡＲ−Ｔ細胞の数による）。細胞濃度は、２〜３日ごとに分析し
、その際、培地を追加して細胞懸濁液を１×１０６細胞／ｍＬに維持した。
ＰＢＭＣの活性化後、細胞を３７℃、５％ＣＯ２にて２４時間インキュベートした。レ
ンチウイルスを氷上で解凍し、５×１０６のレンチウイルスを、培地１ｍＬ当たり２μＬ
のＴｒａｎｓｐｌｕｓ（Ａｌｓｔｅｍ）（最終希釈１：５００）とともに１×１０６細胞
の各ウェルに加えた。細胞をさらに２４時間インキュベートし、その後ウイルスの添加を
繰り返した。別の方法として、レンチウイルスを氷上で解凍し、それぞれのウイルスを５
μｇ／ｍＬのポリブレン（Ｓｉｇｍａ）の存在下、５または５０ＭＯＩで加えた。細胞を
室温で１００分間、１００ｇでスピノキュレートした。細胞をその後、３００ＩＵ／ｍＬ
のヒトＩＬ−２の継続的な存在下で６〜１４日間成長させた（総インキュベート時間は、
必要とされる最終的なＣＡＲ−Ｔ細胞の数による）。細胞濃度は、２〜３日ごとに分析し
、その際、培地を追加して細胞懸濁液を１×１０６細胞／ｍＬに維持した。
いくつかの例では、活性化されたＰＢＭＣをインビトロで転写された（ＩＶＴ）ｍＲＮ
Ａでエレクトロポレートした（図１４）。ヒトＰＢＭＣをＤｙｎａビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｓｈｅｒ）で１対１の比で３日間、３００ＩＵ／ｍｌの組み換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆
Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）の存在下で刺激した。このビーズはエレクトロポレーションの前に除
去した。これらの細胞を洗浄し、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に
２．５×１０７細胞／ｍＬの濃度で再懸濁した。この細胞懸濁液２００μＬ（５×１０６
細胞）をギャップ２ｍｍのＥｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ Ｃｕｖｅｔｔｅｓ Ｐｌｕ
ｓ（商標）（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ）に移し、氷上で予冷した。
１０μｇのＩＶＴ ＴＦＰ ｍＲＮＡをこの細胞懸濁液に加えた。このｍＲＮＡ／細胞混
合物をその後、ＥＣＭ８３０ Ｅｌｅｔｒｏ Ｓｑｕａｒｅ Ｗａｖｅ Ｐｏｒａｔｏｒ
（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ）を用いて２００Ｖで２０ミリ秒間エレ
クトロポレートした。このエレクトロポレーションの直後、細胞を新たな細胞培養培地（
ＡＩＭ Ｖ ＡｌｂｕＭＡＸ（ＢＳＡ）無血清培地＋５％ヒトＡＢ血清＋３００ＩＵ／ｍ
ｌ ＩＬ−２）に移し、３７℃でインキュベートした。
Ａでエレクトロポレートした（図１４）。ヒトＰＢＭＣをＤｙｎａビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｓｈｅｒ）で１対１の比で３日間、３００ＩＵ／ｍｌの組み換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆
Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）の存在下で刺激した。このビーズはエレクトロポレーションの前に除
去した。これらの細胞を洗浄し、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に
２．５×１０７細胞／ｍＬの濃度で再懸濁した。この細胞懸濁液２００μＬ（５×１０６
細胞）をギャップ２ｍｍのＥｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ Ｃｕｖｅｔｔｅｓ Ｐｌｕ
ｓ（商標）（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ）に移し、氷上で予冷した。
１０μｇのＩＶＴ ＴＦＰ ｍＲＮＡをこの細胞懸濁液に加えた。このｍＲＮＡ／細胞混
合物をその後、ＥＣＭ８３０ Ｅｌｅｔｒｏ Ｓｑｕａｒｅ Ｗａｖｅ Ｐｏｒａｔｏｒ
（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＢＴＸ）を用いて２００Ｖで２０ミリ秒間エレ
クトロポレートした。このエレクトロポレーションの直後、細胞を新たな細胞培養培地（
ＡＩＭ Ｖ ＡｌｂｕＭＡＸ（ＢＳＡ）無血清培地＋５％ヒトＡＢ血清＋３００ＩＵ／ｍ
ｌ ＩＬ−２）に移し、３７℃でインキュベートした。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
細胞染色によるＴＦＰ発現の検証
レンチウイルスの形質導入またはｍＲＮＡのエレクトロポレーションに続いて、抗ＣＤ
１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、及び抗ＢＣＭＡ ＣＡＲならびにＴＦＰの発現を、抗マウ
スＦａｂ抗体を用いてフローサイトメトリーにて確認し、マウス抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、
抗ＣＡＩＸ、または抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖを検出した。Ｔ細胞を３ｍＬの染色用緩衝液（
ＰＢＳ、４％ＢＳＡ）にて３回洗浄し、ウェル当たり１×１０６細胞でＰＢＳに再懸濁し
た。死細胞の排除のため、細胞をＬｉｖｅ ｄｅａｄ ａｑｕａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
）で３０分間氷上にてインキュベートした。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、５０μＬの染色
用緩衝液に再懸濁した。Ｆｃ受容体をブロックするため、１μＬの１：１００希釈正常ヤ
ギＩｇＧ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各チューブに加え、氷中で１０分間イ
ンキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液１．０ｍＬを各チューブに加え、よく混合し、細胞を
３００ｇで５分間の遠心分離によってペレットにした。ｓｃＦｖ ＴＦＰの表面発現は、
ビオチン標識ポリクローナルヤギ抗マウスＦ（ａｂ）２抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ）と、アイソタイプコントロールとして働くビオチン標識正常ポリクローナル
ヤギＩｇＧ抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって検出した。両抗体を１
００μＬの反応体積中、１０μｇ／ｍＬで加えた。細胞をその後４℃で４５分間インキュ
ベートし、１回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、１００μＬの１：１０００希釈正常
マウスＩｇＧを各チューブに加えることによって、正常マウスＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ）でブロックした。細胞をその後氷上で１０分間インキュベートし、染色用緩衝液で
洗浄し、１００μＬの染色用緩衝液に再懸濁した。これらの細胞をその後、１．０μＬの
フィコエリトリン（ＰＥ）標識ストレプトアビジン（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の
添加によって染色し、ＡＰＣ抗ヒトＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ）、ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５抗ヒトＣＤ８抗体（クローンＳＫ１、ＢＤ Ｂ
ｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びパシフィックブルー抗ヒトＣＤ４抗体（クローンＲＰＡ−
Ｔ４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を各チューブに加えた。フローサイトメトリーを
ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）Ｘ２０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて行い
、データをＦＡＣＳ ｄｉｖａソフトウェアを用いて取得し、ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓ
ｔａｒ，Ｉｎｃ．オレゴン州アシュランド）で解析した。形質導入Ｔ細胞の２０％〜４０
％が抗ＣＤ１９ ＣＡＲ、抗ＣＤ１９ ＬＬ ＴＦＰ、抗ＣＤ１９ ＳＬ ＴＦＰ、また
は抗ＢＣＭＡ ＴＦＰを発現し、ＣＡＲ及びＴＦＰ構築物の同等のレベルの形質導入なら
びに表面発現を示した（図５〜７）。
レンチウイルスの形質導入またはｍＲＮＡのエレクトロポレーションに続いて、抗ＣＤ
１９、抗ＦＡＰ、抗ＣＡＩＸ、及び抗ＢＣＭＡ ＣＡＲならびにＴＦＰの発現を、抗マウ
スＦａｂ抗体を用いてフローサイトメトリーにて確認し、マウス抗ＣＤ１９、抗ＦＡＰ、
抗ＣＡＩＸ、または抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖを検出した。Ｔ細胞を３ｍＬの染色用緩衝液（
ＰＢＳ、４％ＢＳＡ）にて３回洗浄し、ウェル当たり１×１０６細胞でＰＢＳに再懸濁し
た。死細胞の排除のため、細胞をＬｉｖｅ ｄｅａｄ ａｑｕａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
）で３０分間氷上にてインキュベートした。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、５０μＬの染色
用緩衝液に再懸濁した。Ｆｃ受容体をブロックするため、１μＬの１：１００希釈正常ヤ
ギＩｇＧ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各チューブに加え、氷中で１０分間イ
ンキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液１．０ｍＬを各チューブに加え、よく混合し、細胞を
３００ｇで５分間の遠心分離によってペレットにした。ｓｃＦｖ ＴＦＰの表面発現は、
ビオチン標識ポリクローナルヤギ抗マウスＦ（ａｂ）２抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ）と、アイソタイプコントロールとして働くビオチン標識正常ポリクローナル
ヤギＩｇＧ抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって検出した。両抗体を１
００μＬの反応体積中、１０μｇ／ｍＬで加えた。細胞をその後４℃で４５分間インキュ
ベートし、１回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、１００μＬの１：１０００希釈正常
マウスＩｇＧを各チューブに加えることによって、正常マウスＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ）でブロックした。細胞をその後氷上で１０分間インキュベートし、染色用緩衝液で
洗浄し、１００μＬの染色用緩衝液に再懸濁した。これらの細胞をその後、１．０μＬの
フィコエリトリン（ＰＥ）標識ストレプトアビジン（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の
添加によって染色し、ＡＰＣ抗ヒトＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ）、ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５抗ヒトＣＤ８抗体（クローンＳＫ１、ＢＤ Ｂ
ｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びパシフィックブルー抗ヒトＣＤ４抗体（クローンＲＰＡ−
Ｔ４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を各チューブに加えた。フローサイトメトリーを
ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）Ｘ２０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて行い
、データをＦＡＣＳ ｄｉｖａソフトウェアを用いて取得し、ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓ
ｔａｒ，Ｉｎｃ．オレゴン州アシュランド）で解析した。形質導入Ｔ細胞の２０％〜４０
％が抗ＣＤ１９ ＣＡＲ、抗ＣＤ１９ ＬＬ ＴＦＰ、抗ＣＤ１９ ＳＬ ＴＦＰ、また
は抗ＢＣＭＡ ＴＦＰを発現し、ＣＡＲ及びＴＦＰ構築物の同等のレベルの形質導入なら
びに表面発現を示した（図５〜７）。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
実施例７：フローサイトメトリーによる細胞傷害性アッセイ
それぞれＣＤ１９、ＦＡＰ、ＣＡＩＸ、またはＢＣＭＡ標的に対して陽性または陰性の
いずれかである標的細胞を蛍光染料であるカルボキシフルオレセイン二酢酸サクシニミジ
ルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した。これらの標的細胞を、未形質導入であるか、対照の
ＣＡＲ−Ｔ構築物で形質導入、またはＴＦＰで形質導入されたエフェクターＴ細胞と混合
した。示されたインキュベーション時間の後、死対生ＣＦＳＥ標識標的細胞及び陰性対照
の標的細胞の割合を各エフェクター／標的細胞培養に対してフローサイトメトリーで決定
した。各Ｔ細胞＋標的細胞培養における標的細胞の生存率を、標的細胞のみを含むウェル
に対して計算した。
それぞれＣＤ１９、ＦＡＰ、ＣＡＩＸ、またはＢＣＭＡ標的に対して陽性または陰性の
いずれかである標的細胞を蛍光染料であるカルボキシフルオレセイン二酢酸サクシニミジ
ルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した。これらの標的細胞を、未形質導入であるか、対照の
ＣＡＲ−Ｔ構築物で形質導入、またはＴＦＰで形質導入されたエフェクターＴ細胞と混合
した。示されたインキュベーション時間の後、死対生ＣＦＳＥ標識標的細胞及び陰性対照
の標的細胞の割合を各エフェクター／標的細胞培養に対してフローサイトメトリーで決定
した。各Ｔ細胞＋標的細胞培養における標的細胞の生存率を、標的細胞のみを含むウェル
に対して計算した。
エフェクターＴ細胞の細胞傷害活性は、エフェクター及び標的細胞の共インキュベーシ
ョン後のエフェクターＴ細胞を含まないまたは含む標的細胞における生存標的細胞の数を
、フローサイトメトリーを用いて比較することによって測定した。ＣＤ１９ ＴＦＰまた
はＣＡＲ−Ｔ細胞での実験において、標的細胞はＣＤ１９陽性Ｒａｊｉ Ｂｕｒｋｉｔｔ
リンパ腫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ−８６）であり、陰性対照として用いた細胞はＣＤ１９
陰性Ｋ５６２細胞（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ−２４３）であった。ＢＣＭＡ ＴＦＰ Ｔ細胞で
の実験では、標的細胞はＢＣＭＡ陽性ＲＰＭＩ−８２２６形質細胞腫／骨髄腫細胞（ＡＴ
ＣＣ，ＣＣＬ−１５５）であり、陰性対照として用いた細胞は、ＢＣＭＡ陰性Ｒａｊｉ
Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ−８６）であった。
ョン後のエフェクターＴ細胞を含まないまたは含む標的細胞における生存標的細胞の数を
、フローサイトメトリーを用いて比較することによって測定した。ＣＤ１９ ＴＦＰまた
はＣＡＲ−Ｔ細胞での実験において、標的細胞はＣＤ１９陽性Ｒａｊｉ Ｂｕｒｋｉｔｔ
リンパ腫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ−８６）であり、陰性対照として用いた細胞はＣＤ１９
陰性Ｋ５６２細胞（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ−２４３）であった。ＢＣＭＡ ＴＦＰ Ｔ細胞で
の実験では、標的細胞はＢＣＭＡ陽性ＲＰＭＩ−８２２６形質細胞腫／骨髄腫細胞（ＡＴ
ＣＣ，ＣＣＬ−１５５）であり、陰性対照として用いた細胞は、ＢＣＭＡ陰性Ｒａｊｉ
Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ−８６）であった。
標的細胞は、一度洗浄し、ＰＢＳに１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。蛍光染料のカ
ルボキシフルオレセイン二酢酸サクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉ
ｓｈｅｒ）を濃度０．０３μＭでこの細胞懸濁液に加え、これらの細胞を室温で２０分間
インキュベートした。反応体積の５倍の体積で完全細胞培養培地（ＲＰＭＩ−１６４０＋
１０％ＨＩ−ＦＢＳ）をこの細胞懸濁液に加えることによって、この標識化反応を止め、
室温でさらに２分間、これらの細胞をインキュベートした。これらの細胞を遠心分離によ
ってペレットにし、細胞傷害性培地（フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ１６４０（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）プラス５％ＡＢ血清（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）に
２×１０５細胞／ｍＬで再懸濁した。ＣＦＳＥ標識標的細胞懸濁液（１０，０００細胞に
相当）５０マイクロリットルを９６ウェルのＵ底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の各ウェル
に加えた。
ルボキシフルオレセイン二酢酸サクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉ
ｓｈｅｒ）を濃度０．０３μＭでこの細胞懸濁液に加え、これらの細胞を室温で２０分間
インキュベートした。反応体積の５倍の体積で完全細胞培養培地（ＲＰＭＩ−１６４０＋
１０％ＨＩ−ＦＢＳ）をこの細胞懸濁液に加えることによって、この標識化反応を止め、
室温でさらに２分間、これらの細胞をインキュベートした。これらの細胞を遠心分離によ
ってペレットにし、細胞傷害性培地（フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ１６４０（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）プラス５％ＡＢ血清（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）に
２×１０５細胞／ｍＬで再懸濁した。ＣＦＳＥ標識標的細胞懸濁液（１０，０００細胞に
相当）５０マイクロリットルを９６ウェルのＵ底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の各ウェル
に加えた。
ＢＣＭＡ ＴＦＰ構築物で形質導入されたエフェクターＴ細胞を、陰性対照としての未
形質導入Ｔ細胞と一緒に洗浄し、細胞傷害性培地に２×１０６細胞／ｍＬまたは１×１０
６細胞／ｍＬで懸濁した。エフェクターＴ細胞懸濁液５０μＬ（１００，０００または５
０，０００細胞に相当）を、播種した標的細胞に加え、総体積１００μＬ中、それぞれエ
フェクター対標的比１０対１または５対１にした。これらの培養物をその後混合し、沈降
させ、３７℃、５％ＣＯ２にて４時間インキュベートした。このインキュベートの直後、
７ＡＡＤ（７−アミノアクチノマイシンＤ）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）をメーカーの推奨通
りにこの培養細胞に加え、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ−２０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ）でフローサイトメトリーを行った。フローサイトメトリーデータの解析は、Ｆｌ
ｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ，Ｉｎｃ．）を用いて行った。
形質導入Ｔ細胞と一緒に洗浄し、細胞傷害性培地に２×１０６細胞／ｍＬまたは１×１０
６細胞／ｍＬで懸濁した。エフェクターＴ細胞懸濁液５０μＬ（１００，０００または５
０，０００細胞に相当）を、播種した標的細胞に加え、総体積１００μＬ中、それぞれエ
フェクター対標的比１０対１または５対１にした。これらの培養物をその後混合し、沈降
させ、３７℃、５％ＣＯ２にて４時間インキュベートした。このインキュベートの直後、
７ＡＡＤ（７−アミノアクチノマイシンＤ）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）をメーカーの推奨通
りにこの培養細胞に加え、ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ−２０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ）でフローサイトメトリーを行った。フローサイトメトリーデータの解析は、Ｆｌ
ｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ，Ｉｎｃ．）を用いて行った。
ＲＰＭＩ−８２２６標的細胞の生存率は、エフェクターＴ細胞及び標的細胞を含む試料
中の生存ＲＰＭＩ−８２２６標的細胞数（ＣＦＳＥ＋７−ＡＡＤ−）を、標的細胞のみを
含む試料中の生存ＲＰＭＩ−８２２６標的細胞数（ＣＦＳＥ＋７−ＡＡＤ−）で除するこ
とによって計算した。エフェクター細胞の細胞傷害性は、ＲＰＭＩ−８２２６の殺傷率＝
１００％−ＲＰＭＩ−８２２６細胞の生存率として計算した。
中の生存ＲＰＭＩ−８２２６標的細胞数（ＣＦＳＥ＋７−ＡＡＤ−）を、標的細胞のみを
含む試料中の生存ＲＰＭＩ−８２２６標的細胞数（ＣＦＳＥ＋７−ＡＡＤ−）で除するこ
とによって計算した。エフェクター細胞の細胞傷害性は、ＲＰＭＩ−８２２６の殺傷率＝
１００％−ＲＰＭＩ−８２２６細胞の生存率として計算した。
上記の通り、抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＴ細胞は、未形質導
入であるか、または非ＣＤ１９特異的ＣＡＲ対照で形質導入したＴ細胞と比較した場合に
、ＣＤ１９発現Ｒａｊｉ Ｂ細胞に対して細胞傷害性を示した（図８）。しかしながら、
抗ＣＤ１９−ＣＤ３εで形質導入されたＴ細胞は、調べたすべてのエフェクター：標的比
において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ対照よりもＲａｊｉ標的に対して効果的な細胞傷害性を誘
導した。抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＴＦＰもまた、５〜１０：１のエフェクター：標的比に
おいて、抗ＣＤ１９ ＣＡＲで観察されるよりも高かった強い細胞傷害性を媒介した（図
８）。多少の細胞傷害性が抗ＣＤ１９−ＴＣＲα及び抗ＣＤ１９−ＴＣＲβ ＴＦＰで観
察された。同様の結果が、代替ヒンジ領域で構築された抗ＣＤ１９ ＴＦＰで得られた。
今度もまた、ＣＤ１９発現Ｒａｊｉ標的細胞に対する細胞傷害性は、抗ＣＤ１９−ＣＤ３
εまたは抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞で、抗ＣＤ１９−ＣＡＲ
で形質導入されたＴ細胞よりも高かった。
入であるか、または非ＣＤ１９特異的ＣＡＲ対照で形質導入したＴ細胞と比較した場合に
、ＣＤ１９発現Ｒａｊｉ Ｂ細胞に対して細胞傷害性を示した（図８）。しかしながら、
抗ＣＤ１９−ＣＤ３εで形質導入されたＴ細胞は、調べたすべてのエフェクター：標的比
において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ対照よりもＲａｊｉ標的に対して効果的な細胞傷害性を誘
導した。抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＴＦＰもまた、５〜１０：１のエフェクター：標的比に
おいて、抗ＣＤ１９ ＣＡＲで観察されるよりも高かった強い細胞傷害性を媒介した（図
８）。多少の細胞傷害性が抗ＣＤ１９−ＴＣＲα及び抗ＣＤ１９−ＴＣＲβ ＴＦＰで観
察された。同様の結果が、代替ヒンジ領域で構築された抗ＣＤ１９ ＴＦＰで得られた。
今度もまた、ＣＤ１９発現Ｒａｊｉ標的細胞に対する細胞傷害性は、抗ＣＤ１９−ＣＤ３
εまたは抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞で、抗ＣＤ１９−ＣＡＲ
で形質導入されたＴ細胞よりも高かった。
ＣＤ−１９に特異的なＴＦＰをコードするｍＲＮＡでエレクトロポレートされたＴ細胞
もまた、ＣＤ１９発現Ｒａｊｉ細胞に対する強い細胞傷害性を示した。対照や抗ＣＤ１９
ＴＲｕＣ構築物のいずれでもＣＤ１９陰性Ｋ５６２細胞の有意な殺傷が見られなかった
一方、ＲａｊｉのＣＤ１９に特異的な殺傷が、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε ＳＬまたは抗ＣＤ
１９−ＣＤ３γ ＳＬ ＴＲｕＣのいずれかで形質導入されたＴ細胞によって観察された
（図１４）。
もまた、ＣＤ１９発現Ｒａｊｉ細胞に対する強い細胞傷害性を示した。対照や抗ＣＤ１９
ＴＲｕＣ構築物のいずれでもＣＤ１９陰性Ｋ５６２細胞の有意な殺傷が見られなかった
一方、ＲａｊｉのＣＤ１９に特異的な殺傷が、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε ＳＬまたは抗ＣＤ
１９−ＣＤ３γ ＳＬ ＴＲｕＣのいずれかで形質導入されたＴ細胞によって観察された
（図１４）。
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的なＴＦＰで形質導入されたＴ細胞も同様に、ＢＣ
ＭＡ発現ＲＰＭＩ８２２６細胞に対する強い細胞傷害性を示した。抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３ε
または抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞は、ＢＣＭＡ発現ＲＰＭＩ
８２２６標的細胞に対する細胞傷害性を効果的に媒介した。エフェクター対標的細胞比１
０：１では、標的細胞のほとんど１００％が殺傷された（図９）。
ＭＡ発現ＲＰＭＩ８２２６細胞に対する強い細胞傷害性を示した。抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３ε
または抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞は、ＢＣＭＡ発現ＲＰＭＩ
８２２６標的細胞に対する細胞傷害性を効果的に媒介した。エフェクター対標的細胞比１
０：１では、標的細胞のほとんど１００％が殺傷された（図９）。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
実施例８：リアルタイム細胞傷害性アッセイによる細胞傷害性
抗ＣＤ１９及び抗ＢＣＭＡ ＴＦＰはまた、リアルタイム細胞傷害性アッセイ（ＲＴＣ
Ａ）形式でも抗ＣＤ１９ ＣＡＲより優れた細胞傷害性を示した。ＲＴＣＡアッセイは、
特殊な９６ウェルプレートの各ウェルで、リアルタイムで接着性の標的細胞単層の電気イ
ンピーダンスを測定し、最終的な読み出しを細胞指数と呼ばれる値として示す。細胞指数
の変化は、同時にインキュベートされたＴ細胞エフェクターによる標的細胞の殺傷の結果
として、標的細胞単層の破壊を示す。従って、エフェクターＴ細胞の細胞傷害性は、標的
細胞及びエフェクターＴ細胞の両方を含むウェルの細胞指数と標的細胞のみを含むウェル
のそれとを比較した変化として評価することができる。
抗ＣＤ１９及び抗ＢＣＭＡ ＴＦＰはまた、リアルタイム細胞傷害性アッセイ（ＲＴＣ
Ａ）形式でも抗ＣＤ１９ ＣＡＲより優れた細胞傷害性を示した。ＲＴＣＡアッセイは、
特殊な９６ウェルプレートの各ウェルで、リアルタイムで接着性の標的細胞単層の電気イ
ンピーダンスを測定し、最終的な読み出しを細胞指数と呼ばれる値として示す。細胞指数
の変化は、同時にインキュベートされたＴ細胞エフェクターによる標的細胞の殺傷の結果
として、標的細胞単層の破壊を示す。従って、エフェクターＴ細胞の細胞傷害性は、標的
細胞及びエフェクターＴ細胞の両方を含むウェルの細胞指数と標的細胞のみを含むウェル
のそれとを比較した変化として評価することができる。
ＲＴＣＡに対する標的細胞は、ＨｅＬａ細胞でＣＤ１９を発現する（ＣＤ１９−ＨｅＬ
ａ）またはＢＣＭＡを発現する（ＢＣＭＡ−ＨｅＬａ）ものと、陰性対照として、親の、
未形質導入ＨｅＬａ細胞である。完全長ヒトＣＤ１９またはＢＣＭＡをコードするＤＮＡ
は、ＧｅｎｅＡｒｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）によって合成し、ＥＦ１ａプロモータ
ーの制御下で、選択マーカーとしてネオマイシンを担持するデュアルプロモーターのレン
チウイルスベクターｐＣＤＨ５１４Ｂ（Ｓｙｓｔｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の複数の
クローニング部位に挿入した。ＣＤ１９またはＢＣＭＡをコードするベクターのいずれか
を担持するレンチウイルスをその後パッケージした。ＨｅＬａ細胞をＣＤ１９またはＢＣ
ＭＡレンチウイルスのいずれかで２４時間形質導入し、その後Ｇ４１８（１ｍｇ／ｍＬ）
で選択した。この形質導入されたＣＤ１９−ＨｅｌａまたはＢＣＭＡ−ＨｅＬａによるＣ
Ｄ１９またはＢＣＭＡの発現は、抗ヒトＣＤ１９またはＢＣＭＡ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎ
ｄ、クローン番号１９Ａ２；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、クローン番号ＲＥＡ３１５）でのＦＡＣ
Ｓ分析によって確認した。
ａ）またはＢＣＭＡを発現する（ＢＣＭＡ−ＨｅＬａ）ものと、陰性対照として、親の、
未形質導入ＨｅＬａ細胞である。完全長ヒトＣＤ１９またはＢＣＭＡをコードするＤＮＡ
は、ＧｅｎｅＡｒｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）によって合成し、ＥＦ１ａプロモータ
ーの制御下で、選択マーカーとしてネオマイシンを担持するデュアルプロモーターのレン
チウイルスベクターｐＣＤＨ５１４Ｂ（Ｓｙｓｔｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の複数の
クローニング部位に挿入した。ＣＤ１９またはＢＣＭＡをコードするベクターのいずれか
を担持するレンチウイルスをその後パッケージした。ＨｅＬａ細胞をＣＤ１９またはＢＣ
ＭＡレンチウイルスのいずれかで２４時間形質導入し、その後Ｇ４１８（１ｍｇ／ｍＬ）
で選択した。この形質導入されたＣＤ１９−ＨｅｌａまたはＢＣＭＡ−ＨｅＬａによるＣ
Ｄ１９またはＢＣＭＡの発現は、抗ヒトＣＤ１９またはＢＣＭＡ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎ
ｄ、クローン番号１９Ａ２；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、クローン番号ＲＥＡ３１５）でのＦＡＣ
Ｓ分析によって確認した。
接着性標的細胞は、ＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質−抗真菌剤（Ｌｉｆｅ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で培養した。ＲＴＣＡの調製のため、ＲＰＭＩ培地５０μＬを
Ｅプレート（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ，カタログ番号：ＪＬ−１０−
１５６０１０−１Ａ）の適切なウェルに加えた。このプレートをＲＴＣＡ ＭＰ機器（Ａ
ＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）内に配置し、適切なプレートのレイアウト
及びアッセイスケジュールを、メーカーの取扱説明書に記載の通り、ＲＴＣＡ２．０ソフ
トウェアに入力した。ベースラインの測定は、１００回の測定に対して１５分毎に行った
。体積１００μＬ中１×１０４個の標的細胞をその後各アッセイウェルに加え、これらの
細胞を１５分間沈殿させた。このプレートを読み取り機に戻し、読み取りを再開した。
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で培養した。ＲＴＣＡの調製のため、ＲＰＭＩ培地５０μＬを
Ｅプレート（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ，カタログ番号：ＪＬ−１０−
１５６０１０−１Ａ）の適切なウェルに加えた。このプレートをＲＴＣＡ ＭＰ機器（Ａ
ＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）内に配置し、適切なプレートのレイアウト
及びアッセイスケジュールを、メーカーの取扱説明書に記載の通り、ＲＴＣＡ２．０ソフ
トウェアに入力した。ベースラインの測定は、１００回の測定に対して１５分毎に行った
。体積１００μＬ中１×１０４個の標的細胞をその後各アッセイウェルに加え、これらの
細胞を１５分間沈殿させた。このプレートを読み取り機に戻し、読み取りを再開した。
翌日、エフェクターＴ細胞を洗浄し、細胞傷害性培地（フェノールレッドを含まないＲ
ＰＭＩ１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）プラス５％ＡＢ血清（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐ
ｒｏｄｕｃｔｓ；１００−３１８））に再懸濁した。このプレートをその後機器から取り
出し、細胞傷害性培地（フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ１６４０＋５％ＡＢ血清）
に懸濁したエフェクターＴ細胞を１００，０００細胞または５０，０００細胞で各ウェル
に加え、エフェクター対標的比をそれぞれ１０対１または５対１にした。このプレートを
その後機器に戻した。測定を１００測定について２分ごとに行い、その後１０００測定に
ついて１５分ごとに行った。
ＰＭＩ１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）プラス５％ＡＢ血清（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐ
ｒｏｄｕｃｔｓ；１００−３１８））に再懸濁した。このプレートをその後機器から取り
出し、細胞傷害性培地（フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ１６４０＋５％ＡＢ血清）
に懸濁したエフェクターＴ細胞を１００，０００細胞または５０，０００細胞で各ウェル
に加え、エフェクター対標的比をそれぞれ１０対１または５対１にした。このプレートを
その後機器に戻した。測定を１００測定について２分ごとに行い、その後１０００測定に
ついて１５分ごとに行った。
ＲＴＣＡアッセイにおいて、ＣＤ１９で形質導入されたＨｅＬａの殺傷は、エフェクタ
ー細胞の添加後、ＨｅＬａ単独または対照のＣＡＲ構築物で形質導入されたＴ細胞と共イ
ンキュベートされたＨｅＬａと比較して、細胞指数の時間依存性の減少によって示される
ように、抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞で形質導入されたＴ細胞に
よって観察された（図１１）。しかしながら、抗ＣＤ１９−ＣＤ３εまたは抗ＢＣＭＡ−
ＣＤ３γ ＴＦＰ発現Ｔ細胞による標的細胞の殺傷は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲで観察される
よりも深く、迅速であった。例えば、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε ＴＦＰで形質導入されたＴ
細胞の添加の４時間以内に、ＣＤ１９発現標的細胞の殺傷は基本的に完了した。他のＣＤ
３及びＴＣＲ構築物を含み複数のＴＦＰ構築物で形質導入されたＴ細胞にはほとんどまた
は全く殺傷が観察されなかった。同様の結果が、代替ヒンジ領域で構築された抗ＣＤ１９
ＴＦＰで得られた。ＣＤ１９で形質導入されたＨｅＬａ標的細胞に対する細胞傷害性は
、この場合もやはり抗ＣＤ１９−ＣＤ３εまたは抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導
入されたＴ細胞で、抗ＣＤ１９−ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞よりも大きかった。
ー細胞の添加後、ＨｅＬａ単独または対照のＣＡＲ構築物で形質導入されたＴ細胞と共イ
ンキュベートされたＨｅＬａと比較して、細胞指数の時間依存性の減少によって示される
ように、抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞で形質導入されたＴ細胞に
よって観察された（図１１）。しかしながら、抗ＣＤ１９−ＣＤ３εまたは抗ＢＣＭＡ−
ＣＤ３γ ＴＦＰ発現Ｔ細胞による標的細胞の殺傷は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲで観察される
よりも深く、迅速であった。例えば、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε ＴＦＰで形質導入されたＴ
細胞の添加の４時間以内に、ＣＤ１９発現標的細胞の殺傷は基本的に完了した。他のＣＤ
３及びＴＣＲ構築物を含み複数のＴＦＰ構築物で形質導入されたＴ細胞にはほとんどまた
は全く殺傷が観察されなかった。同様の結果が、代替ヒンジ領域で構築された抗ＣＤ１９
ＴＦＰで得られた。ＣＤ１９で形質導入されたＨｅＬａ標的細胞に対する細胞傷害性は
、この場合もやはり抗ＣＤ１９−ＣＤ３εまたは抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導
入されたＴ細胞で、抗ＣＤ１９−ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞よりも大きかった。
抗ＢＣＭＡ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞もまた、ＢＣＭＡ発現ＲＰＭＩ８２２６細
胞に対して強い細胞傷害性を示した。図９に示す通り、抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３εまたは抗Ｂ
ＣＭＡ−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞は、ＢＣＭＡ発現ＲＰＭＩ８２２６標
的細胞に対する細胞傷害性を効果的に媒介した。エフェクター対標的比１０：１で、ほと
んど１００％の標的細胞が殺傷された（図１２）。
胞に対して強い細胞傷害性を示した。図９に示す通り、抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３εまたは抗Ｂ
ＣＭＡ−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞は、ＢＣＭＡ発現ＲＰＭＩ８２２６標
的細胞に対する細胞傷害性を効果的に媒介した。エフェクター対標的比１０：１で、ほと
んど１００％の標的細胞が殺傷された（図１２）。
ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞の細胞傷害活性は、形質導入に使用されたウイルス量（
ＭＯＩ）に対して用量依存的であった。ＣＤ１９−ＨｅＬａの殺傷の増加は、抗ＣＤ１９
−ＣＤ３ε ＴＦＰレンチウイルスのＭＯＩの増加とともに観察され、ＴＦＰの形質導入
と細胞傷害活性の関係がさらに強まった（図１３）。
ＭＯＩ）に対して用量依存的であった。ＣＤ１９−ＨｅＬａの殺傷の増加は、抗ＣＤ１９
−ＣＤ３ε ＴＦＰレンチウイルスのＭＯＩの増加とともに観察され、ＴＦＰの形質導入
と細胞傷害活性の関係がさらに強まった（図１３）。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
実施例９：ＥＬＩＳＡによるＩＬ−２及びＩＦＮ−γ分泌
同族抗原を有する細胞の認識と関連するエフェクターＴ細胞活性化及び増殖の別の尺度
は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）及びインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）等
のエフェクターサイトカインの産生である。
同族抗原を有する細胞の認識と関連するエフェクターＴ細胞活性化及び増殖の別の尺度
は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）及びインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）等
のエフェクターサイトカインの産生である。
ヒトＩＬ−２に対するＥＬＩＳＡアッセイ（カタログ番号ＥＨ２ＩＬ２、Ｔｈｅｒｍｏ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＩＦＮ−γに対するＥＬＩＳＡアッセイ カタログ番号Ｋ
ＨＣ４０１２、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をこれら製品の挿入物に記載の通りに行った。簡
潔には、５０μＬの再構成された標準または試料を二連で９６ウェルプレートの各ウェル
に加え、続いてビオチン化抗体試薬５０μＬを加えた。試料は、プレートを数回静かにタ
ップすることによって混合した。その後標準も試料も含まないウェルのすべてに標準希釈
剤を５０μＬ加え、このプレートを慎重に接着プレートカバーで密封し、その後室温（２
０〜２５℃）で３時間インキュベートした。このプレートカバーをその後外し、プレート
の中を空にし、各ウェルに洗浄用緩衝液を満たした。この洗浄手順を合計３回繰り返し、
このプレートを紙タオルや他の吸収材料にあてた。調製ストレプトアビジン−ＨＲＰ溶液
１００μＬを各ウェルに加え、新しいプレートカバーを取り付けた後、室温で３０分間イ
ンキュベートした。このプレートカバーを再び外し、このプレートの内容物を廃棄し、Ｔ
ＭＢ基質溶液１００μＬを各ウェルに加えた。室温の暗所で３０分間反応させ、その後停
止液１００μＬを各ウェルに加えた。このプレートを評価する。反応停止の３０分以内に
、４５０ｎｍ及び５５０ｎｍに設定されたＥＬＩＳＡプレートリーダーで吸光度を測定し
た。４５０ｎｍの値から５５０ｎｍの値を引き、未知の試料のＩＬ−２量をＩＬ−２標準
曲線から得られる値と比較して計算した。
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＩＦＮ−γに対するＥＬＩＳＡアッセイ カタログ番号Ｋ
ＨＣ４０１２、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をこれら製品の挿入物に記載の通りに行った。簡
潔には、５０μＬの再構成された標準または試料を二連で９６ウェルプレートの各ウェル
に加え、続いてビオチン化抗体試薬５０μＬを加えた。試料は、プレートを数回静かにタ
ップすることによって混合した。その後標準も試料も含まないウェルのすべてに標準希釈
剤を５０μＬ加え、このプレートを慎重に接着プレートカバーで密封し、その後室温（２
０〜２５℃）で３時間インキュベートした。このプレートカバーをその後外し、プレート
の中を空にし、各ウェルに洗浄用緩衝液を満たした。この洗浄手順を合計３回繰り返し、
このプレートを紙タオルや他の吸収材料にあてた。調製ストレプトアビジン−ＨＲＰ溶液
１００μＬを各ウェルに加え、新しいプレートカバーを取り付けた後、室温で３０分間イ
ンキュベートした。このプレートカバーを再び外し、このプレートの内容物を廃棄し、Ｔ
ＭＢ基質溶液１００μＬを各ウェルに加えた。室温の暗所で３０分間反応させ、その後停
止液１００μＬを各ウェルに加えた。このプレートを評価する。反応停止の３０分以内に
、４５０ｎｍ及び５５０ｎｍに設定されたＥＬＩＳＡプレートリーダーで吸光度を測定し
た。４５０ｎｍの値から５５０ｎｍの値を引き、未知の試料のＩＬ−２量をＩＬ−２標準
曲線から得られる値と比較して計算した。
別の方法として、２プレックスアッセイをヒトサイトカイン磁気緩衝液試薬キット（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＬＨＢ０００１Ｍ）をヒトＩＬ−２磁気ビーズキット（Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ、ＬＨＣ００２１Ｍ）及びヒトＩＦＮ−γ磁気ビーズキット（Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ、ＬＨＣ４０３１Ｍ）とともに用いて行った。簡潔には、２５μＬのヒトＩＬ−２
及びＩＦＮ−γ抗体ビーズを９６ウェルプレートの各ウェルに加え、以下のガイドライン
を用いて洗浄した：１ｘ洗浄液２００μＬの２回洗浄、プレートを磁気９６ウェルプレー
トセパレータ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａ１４１７９）に接触させて置き、ビーズを１分
間沈殿させ、液体をデカントする。その後、インキュベーション緩衝液５０μＬをプレー
トの各ウェルに、二連で再構成標準１００μＬまたは三連で試料（細胞傷害性アッセイか
らの上清）５０μＬ及びアッセイ用希釈剤５０μＬを加え、合計体積を１５０μＬにした
。試料を暗所にて、軌道半径３ｍｍのオービタルシェーカーを用いて、室温で２時間、６
００ｒｐｍで混合した。同じ洗浄ガイドラインに従ってこのプレートを洗浄し、１００μ
ＬのヒトＩＬ−２及びＩＦＮ−γビオチン化検出抗体を各ウェルに加えた。試料を暗所に
て、軌道半径３ｍｍのオービタルシェーカーを用いて、室温で１時間、６００ｒｐｍで混
合した。同じ洗浄ガイドラインに従ってこのプレートを洗浄し、ストレプトアビジン−Ｒ
−フィコエリトリン１００μＬを各ウェルに加えた。試料を暗所にて、軌道半径３ｍｍの
オービタルシェーカーを用いて、室温で３０分間、６００ｒｐｍで混合した。同じ洗浄ガ
イドラインを用いてこのプレートを３回洗浄し、液体をデカント後、試料を１ｘ洗浄液１
５０μＬに再懸濁した。これらの試料を、軌道半径３ｍｍのオービタルシェーカーを用い
て、６００ｒｐｍで３分間混合し、４℃で一夜保存した。その後、同じ洗浄ガイドライン
に従ってこのプレートを洗浄し、これらの試料を１ｘ洗浄液１５０μＬに再懸濁した。
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＬＨＢ０００１Ｍ）をヒトＩＬ−２磁気ビーズキット（Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ、ＬＨＣ００２１Ｍ）及びヒトＩＦＮ−γ磁気ビーズキット（Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ、ＬＨＣ４０３１Ｍ）とともに用いて行った。簡潔には、２５μＬのヒトＩＬ−２
及びＩＦＮ−γ抗体ビーズを９６ウェルプレートの各ウェルに加え、以下のガイドライン
を用いて洗浄した：１ｘ洗浄液２００μＬの２回洗浄、プレートを磁気９６ウェルプレー
トセパレータ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａ１４１７９）に接触させて置き、ビーズを１分
間沈殿させ、液体をデカントする。その後、インキュベーション緩衝液５０μＬをプレー
トの各ウェルに、二連で再構成標準１００μＬまたは三連で試料（細胞傷害性アッセイか
らの上清）５０μＬ及びアッセイ用希釈剤５０μＬを加え、合計体積を１５０μＬにした
。試料を暗所にて、軌道半径３ｍｍのオービタルシェーカーを用いて、室温で２時間、６
００ｒｐｍで混合した。同じ洗浄ガイドラインに従ってこのプレートを洗浄し、１００μ
ＬのヒトＩＬ−２及びＩＦＮ−γビオチン化検出抗体を各ウェルに加えた。試料を暗所に
て、軌道半径３ｍｍのオービタルシェーカーを用いて、室温で１時間、６００ｒｐｍで混
合した。同じ洗浄ガイドラインに従ってこのプレートを洗浄し、ストレプトアビジン−Ｒ
−フィコエリトリン１００μＬを各ウェルに加えた。試料を暗所にて、軌道半径３ｍｍの
オービタルシェーカーを用いて、室温で３０分間、６００ｒｐｍで混合した。同じ洗浄ガ
イドラインを用いてこのプレートを３回洗浄し、液体をデカント後、試料を１ｘ洗浄液１
５０μＬに再懸濁した。これらの試料を、軌道半径３ｍｍのオービタルシェーカーを用い
て、６００ｒｐｍで３分間混合し、４℃で一夜保存した。その後、同じ洗浄ガイドライン
に従ってこのプレートを洗浄し、これらの試料を１ｘ洗浄液１５０μＬに再懸濁した。
このプレートをＭＡＧＰＩＸシステム（Ｌｕｍｉｎｅｘ）及びｘＰＯＮＥＮＴソフトウ
ェアを用いて読み取った。このデータの解析は、標準曲線とサイトカイン濃度を与えるＭ
ＩＬＬＩＰＬＥＸ Ａｎａｌｙｓｔソフトウェアを用いて行った。
ェアを用いて読み取った。このデータの解析は、標準曲線とサイトカイン濃度を与えるＭ
ＩＬＬＩＰＬＥＸ Ａｎａｌｙｓｔソフトウェアを用いて行った。
図１５は、未形質導入または対照のＣＡＲで形質導入されたＴ細胞に対して、抗ＣＤ１
９ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞が、内因的にＣＤ１９を発現するＲａｊｉ細胞または
ＣＤ１９で形質導入されたＨｅＬａ細胞のどちらかと共培養された場合に高レベルのＩＬ
−２及びＩＦＮ−γの両方を産生することを示している。対照的に、ＣＤ１９陰性Ｋ５６
２細胞または未形質導入ＨｅＬａ細胞との共培養では、ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞か
らほとんどサイトカインが分泌されなかった。先の細胞傷害性のデータと一致して、代替
ヒンジ領域で構築された抗ＣＤ１９ ＴＦＰは、ＣＤ１９を有する標的細胞との共培養で
同様の結果をもたらした（図１６）。
９ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞が、内因的にＣＤ１９を発現するＲａｊｉ細胞または
ＣＤ１９で形質導入されたＨｅＬａ細胞のどちらかと共培養された場合に高レベルのＩＬ
−２及びＩＦＮ−γの両方を産生することを示している。対照的に、ＣＤ１９陰性Ｋ５６
２細胞または未形質導入ＨｅＬａ細胞との共培養では、ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞か
らほとんどサイトカインが分泌されなかった。先の細胞傷害性のデータと一致して、代替
ヒンジ領域で構築された抗ＣＤ１９ ＴＦＰは、ＣＤ１９を有する標的細胞との共培養で
同様の結果をもたらした（図１６）。
先の細胞傷害性のデータと一致して、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε及び抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ
は、ＴＦＰ構築物の中で最大レベルのＩＬ−２及びＩＦＮ−γを生じた（図１５及び１６
）。しかしながら、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε及び抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導入
されたＴ細胞によるサイトカイン産生は、これらＴＦＰがより高レベルの標的細胞の殺傷
を示している（図８及び１１）にもかかわらず、抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲを発現する
Ｔ細胞のそれと同程度であった。ＴＦＰはＣＡＲより効果的に標的細胞を殺傷するが、同
程度またはより低いレベルの炎症性サイトカインを放出し得るという可能性は、高レベル
のこれらサイトカインが、養子ＣＡＲ−Ｔ療法に対する用量制限毒性と関連していること
から、ＣＡＲと比べてＴＦＰの潜在的な利点を表している。
は、ＴＦＰ構築物の中で最大レベルのＩＬ−２及びＩＦＮ−γを生じた（図１５及び１６
）。しかしながら、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε及び抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導入
されたＴ細胞によるサイトカイン産生は、これらＴＦＰがより高レベルの標的細胞の殺傷
を示している（図８及び１１）にもかかわらず、抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲを発現する
Ｔ細胞のそれと同程度であった。ＴＦＰはＣＡＲより効果的に標的細胞を殺傷するが、同
程度またはより低いレベルの炎症性サイトカインを放出し得るという可能性は、高レベル
のこれらサイトカインが、養子ＣＡＲ−Ｔ療法に対する用量制限毒性と関連していること
から、ＣＡＲと比べてＴＦＰの潜在的な利点を表している。
抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３εまたは抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３γ ＴＦＰで形質導入されたＴ細胞も
また、ＢＣＭＡを発現しない対照のＨｅＬａ細胞ではなく、ＢＣＭＡ−ＨｅＬａとの共培
養でＩＬ−２及びＩＦＮ−γを産生した（図１７）。
また、ＢＣＭＡを発現しない対照のＨｅＬａ細胞ではなく、ＢＣＭＡ−ＨｅＬａとの共培
養でＩＬ−２及びＩＦＮ−γを産生した（図１７）。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
実施例１０：フローサイトメトリーによるＣＤ１０７ａの曝露
Ｔ細胞活性化のさらなるアッセイは、休止細胞における細胞質細胞溶解性顆粒の膜に位
置するリソソーム膜タンパク質（ＬＡＭＰ−１）であるＣＤ１０７ａの表面発現である。
エフェクターＴ細胞の脱顆粒、すなわち、細胞溶解活性の必要条件は、活性化誘導の顆粒
エキソサイトーシス後、ＣＤ１０７ａの細胞表面への動員をもたらす。従って、ＣＤ１０
７ａの曝露は、細胞傷害性と密接に相関するサイトカイン産生に加えて、Ｔ細胞活性化の
さらなる尺度を与える。
Ｔ細胞活性化のさらなるアッセイは、休止細胞における細胞質細胞溶解性顆粒の膜に位
置するリソソーム膜タンパク質（ＬＡＭＰ−１）であるＣＤ１０７ａの表面発現である。
エフェクターＴ細胞の脱顆粒、すなわち、細胞溶解活性の必要条件は、活性化誘導の顆粒
エキソサイトーシス後、ＣＤ１０７ａの細胞表面への動員をもたらす。従って、ＣＤ１０
７ａの曝露は、細胞傷害性と密接に相関するサイトカイン産生に加えて、Ｔ細胞活性化の
さらなる尺度を与える。
標的及びエフェクター細胞は別々に洗浄し、細胞傷害性培地（ＲＰＭＩ＋５％ヒトＡＢ
血清＋１％抗生物質抗真菌剤）に再懸濁した。このアッセイは、Ｕ底９６ウェルプレート
（Ｃｏｒｎｉｎｇ）にて、最終体積１００μＬ中、０．５μＬ／ウェルのＰＥ／Ｃｙ７標
識抗ヒトＣＤ１０７ａ（ＬＡＭＰ−１）抗体（クローンＨ４Ａ３、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ）の存在下、２×１０５個のエフェクター細胞と２×１０５個の標的細胞を混合
することによって行った。これらの培養物をその後３７℃、５％ＣＯ２にて１時間インキ
ュベートした。このインキュベーションの直後、１：１０希釈の分泌阻害剤モネンシン（
１０００ｘ溶液、ＢＤ ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（商標））１０μＬを、細胞を乱さないよう
に慎重に各ウェルに加えた。このプレートをその後３７℃、５％ＣＯ２にてさらに２．５
時間インキュベートした。このインキュベーションに続いて、これらの細胞をＡＰＣ抗ヒ
トＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＰｅｒＣＰ／Ｃ
ｙ５．５抗ヒトＣＤ８抗体（クローンＳＫ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びパ
シフィックブルー抗ヒトＣＤ４抗体（クローンＲＰＡ−Ｔ４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ）で染色し、その後３７℃、５％ＣＯ２にて３０分間インキュベートした。これらの
細胞をその後ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、（分析に先立ってＦＡＣＳ緩衝液１００μＬ
及びＩＣ固定緩衝液１００ｕｌに再懸濁した。
血清＋１％抗生物質抗真菌剤）に再懸濁した。このアッセイは、Ｕ底９６ウェルプレート
（Ｃｏｒｎｉｎｇ）にて、最終体積１００μＬ中、０．５μＬ／ウェルのＰＥ／Ｃｙ７標
識抗ヒトＣＤ１０７ａ（ＬＡＭＰ−１）抗体（クローンＨ４Ａ３、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ）の存在下、２×１０５個のエフェクター細胞と２×１０５個の標的細胞を混合
することによって行った。これらの培養物をその後３７℃、５％ＣＯ２にて１時間インキ
ュベートした。このインキュベーションの直後、１：１０希釈の分泌阻害剤モネンシン（
１０００ｘ溶液、ＢＤ ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（商標））１０μＬを、細胞を乱さないよう
に慎重に各ウェルに加えた。このプレートをその後３７℃、５％ＣＯ２にてさらに２．５
時間インキュベートした。このインキュベーションに続いて、これらの細胞をＡＰＣ抗ヒ
トＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＰｅｒＣＰ／Ｃ
ｙ５．５抗ヒトＣＤ８抗体（クローンＳＫ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びパ
シフィックブルー抗ヒトＣＤ４抗体（クローンＲＰＡ−Ｔ４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ）で染色し、その後３７℃、５％ＣＯ２にて３０分間インキュベートした。これらの
細胞をその後ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、（分析に先立ってＦＡＣＳ緩衝液１００μＬ
及びＩＣ固定緩衝液１００ｕｌに再懸濁した。
Ｔ細胞表面でのＣＤ１０７ａの曝露は、フローサイトメトリーによって検出した。フロ
ーサイトメトリーは、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）Ｘ２０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ）で行い、フローサイトメトリーデータの解析は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔ
ｒｅｅｓｔａｒ，Ｉｎｃ．オレゴン州アシュランド）を用いて行った。ＣＤ１０７＋ｖｅ
であるＣＤ３ゲート内のＣＤ８＋エフェクター細胞の割合を、各エフェクター／標的細胞
培養について測定した。
ーサイトメトリーは、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）Ｘ２０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ）で行い、フローサイトメトリーデータの解析は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔ
ｒｅｅｓｔａｒ，Ｉｎｃ．オレゴン州アシュランド）を用いて行った。ＣＤ１０７＋ｖｅ
であるＣＤ３ゲート内のＣＤ８＋エフェクター細胞の割合を、各エフェクター／標的細胞
培養について測定した。
先の細胞傷害性及びサイトカインのデータと一致して、ＲａｊｉまたはＮａｌｍ−６細
胞等のＣＤ−１９発現標的細胞と抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲで形質導入されたエフェク
ターＴ細胞の共培養は、ＣＤ１９−ｖｅ標的細胞とともにインキュベートしたエフェクタ
ーと比較して、表面ＣＤ１０７ａ発現の３〜５倍の増加を誘導した（図１８）。同じ条件
下で比較すると、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε ＬＬまたは抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＬＬ ＴＦ
Ｐ発現エフェクターは、ＣＤ１０７ａ発現の５〜７倍の誘導を呈した。代替ヒンジ領域で
構築された抗ＣＤ１９ ＴＦＰはＣＤ１９を有する標的細胞との共培養で同様の結果をも
たらした。
胞等のＣＤ−１９発現標的細胞と抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲで形質導入されたエフェク
ターＴ細胞の共培養は、ＣＤ１９−ｖｅ標的細胞とともにインキュベートしたエフェクタ
ーと比較して、表面ＣＤ１０７ａ発現の３〜５倍の増加を誘導した（図１８）。同じ条件
下で比較すると、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε ＬＬまたは抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＬＬ ＴＦ
Ｐ発現エフェクターは、ＣＤ１０７ａ発現の５〜７倍の誘導を呈した。代替ヒンジ領域で
構築された抗ＣＤ１９ ＴＦＰはＣＤ１９を有する標的細胞との共培養で同様の結果をも
たらした。
未形質導入のＴ細胞と比較して、抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３εまたは抗ＢＣＭＡ−ＣＤ３γ
ＴＦＰで形質導入された細胞も同様に、ＢＣＭＡ＋ｖｅ ＲＰＭＩ８２２６細胞との共培
養でＣＤ１０７ａの表面発現の増加を呈した（図１９）。これらの結果は、ＴＦＰで形質
導入されたエフェクターＴ細胞が、それらの同族抗原を発現する標的細胞への曝露で活性
化し、脱顆粒することを示している。
ＴＦＰで形質導入された細胞も同様に、ＢＣＭＡ＋ｖｅ ＲＰＭＩ８２２６細胞との共培
養でＣＤ１０７ａの表面発現の増加を呈した（図１９）。これらの結果は、ＴＦＰで形質
導入されたエフェクターＴ細胞が、それらの同族抗原を発現する標的細胞への曝露で活性
化し、脱顆粒することを示している。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
実施例１１：マウスでのインビボ効力研究
抗ＣＤ１９ ＴＦＰで形質導入されたエフェクターＴ細胞のインビボでの抗腫瘍反応を
達成する能力を評価するために、抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲ、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε
ＬＬ ＴＦＰ、または抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＬＬ ＴＦＰのいずれかで形質導入された
エフェクターＴ細胞を、前もってＣＤ１９＋ＲａｊｉまたはＮａｌｍ−６ヒト白血病細胞
株を接種したＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ−２Ｒγ−／−（ＮＳＧ−ＪＡＸ）マウスに養子移
入した。
抗ＣＤ１９ ＴＦＰで形質導入されたエフェクターＴ細胞のインビボでの抗腫瘍反応を
達成する能力を評価するために、抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲ、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε
ＬＬ ＴＦＰ、または抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＬＬ ＴＦＰのいずれかで形質導入された
エフェクターＴ細胞を、前もってＣＤ１９＋ＲａｊｉまたはＮａｌｍ−６ヒト白血病細胞
株を接種したＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ−２Ｒγ−／−（ＮＳＧ−ＪＡＸ）マウスに養子移
入した。
本研究の開始前に少なくとも６週齢の雌のＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ−２Ｒγ−／−（Ｎ
ＳＧ−ＪＡＸ）マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ストック番号００５５
５７）から入手し、実験的使用の前に３日間、順化させた。接種用のＲａｊｉ及びＮａｌ
ｍ−６ヒト白血病細胞株は、対数期の培養に維持し、その後採取し、トリパンブルーで計
数して生細胞数を測定した。腫瘍投与の当日、これらの細胞を３００ｇで５分間遠心分離
し、予め温めた滅菌ＰＢＳに、１×１０６細胞／１００μＬ（Ｎａｌｍ−６）または５×
１０５細胞／１００μＬ（Ｒａｊｉ）のいずれかで再懸濁した。未形質導入または抗ＣＤ
１９−２８ζ ＣＡＲ、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε ＬＬ ＴＦＰ、または抗ＣＤ３γ ＬＬ
ＴＦＰ構築物で形質導入された養子移入用のＴ細胞を調製した。本研究の０日目、実験
群あたり１０匹の動物に５×１０５個のＲａｊｉまたは１×１０６個のＮａｌｍ−６細胞
のいずれかを静脈内投与した。三日後、滅菌ＰＢＳ１００μＬ中の示されたエフェクター
Ｔ細胞集団５×１０６個を各動物に対して静脈内に移入した。これら動物における詳細な
臨床観察を安楽死させるまで毎日記録した。死亡または安楽死まで、すべての動物に対し
て毎週体重測定を行った。被験物質及び対照物質の養子移入の３５日後にすべての動物を
安楽死させた。本研究中、瀕死と思われたすべての動物は、獣医師と協議の上、本研究の
責任者の判断で安楽死させた。
ＳＧ−ＪＡＸ）マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ストック番号００５５
５７）から入手し、実験的使用の前に３日間、順化させた。接種用のＲａｊｉ及びＮａｌ
ｍ−６ヒト白血病細胞株は、対数期の培養に維持し、その後採取し、トリパンブルーで計
数して生細胞数を測定した。腫瘍投与の当日、これらの細胞を３００ｇで５分間遠心分離
し、予め温めた滅菌ＰＢＳに、１×１０６細胞／１００μＬ（Ｎａｌｍ−６）または５×
１０５細胞／１００μＬ（Ｒａｊｉ）のいずれかで再懸濁した。未形質導入または抗ＣＤ
１９−２８ζ ＣＡＲ、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε ＬＬ ＴＦＰ、または抗ＣＤ３γ ＬＬ
ＴＦＰ構築物で形質導入された養子移入用のＴ細胞を調製した。本研究の０日目、実験
群あたり１０匹の動物に５×１０５個のＲａｊｉまたは１×１０６個のＮａｌｍ−６細胞
のいずれかを静脈内投与した。三日後、滅菌ＰＢＳ１００μＬ中の示されたエフェクター
Ｔ細胞集団５×１０６個を各動物に対して静脈内に移入した。これら動物における詳細な
臨床観察を安楽死させるまで毎日記録した。死亡または安楽死まで、すべての動物に対し
て毎週体重測定を行った。被験物質及び対照物質の養子移入の３５日後にすべての動物を
安楽死させた。本研究中、瀕死と思われたすべての動物は、獣医師と協議の上、本研究の
責任者の判断で安楽死させた。
未形質導入Ｔ細胞と比較して、抗ＣＤ１９−２８ζ ＣＡＲ、抗ＣＤ１９−ＣＤ３ε
ＬＬ ＴＦＰ、または抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＬＬ ＴＦＰのいずれかで形質導入された
Ｔ細胞の養子移入は、Ｒａｊｉ（図２０Ａ）及びＮａｌｍ６（図２０Ｂ）の両方の担腫瘍
マウスの生存を延長させ、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及びＴＦＰで形質導入されたＴ細胞の両方
がこれらマウスモデルにおける対応する生存の延長で、標的細胞の殺傷を媒介することが
可能であることを示した。集合的に、これらのデータは、ＴＦＰが、インビトロ及びイン
ビボで、第一世代のＣＡＲより優れた抗原特異的な殺傷を示すキメラ受容体を作り出すた
めの代替的なプラットフォームを表すということを示している。
ＬＬ ＴＦＰ、または抗ＣＤ１９−ＣＤ３γ ＬＬ ＴＦＰのいずれかで形質導入された
Ｔ細胞の養子移入は、Ｒａｊｉ（図２０Ａ）及びＮａｌｍ６（図２０Ｂ）の両方の担腫瘍
マウスの生存を延長させ、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及びＴＦＰで形質導入されたＴ細胞の両方
がこれらマウスモデルにおける対応する生存の延長で、標的細胞の殺傷を媒介することが
可能であることを示した。集合的に、これらのデータは、ＴＦＰが、インビトロ及びイン
ビボで、第一世代のＣＡＲより優れた抗原特異的な殺傷を示すキメラ受容体を作り出すた
めの代替的なプラットフォームを表すということを示している。
同様の実験を、ＦＡＰ．ＴＦＰ及びＣＡＩＸ．ＴＦＰ構築物で行うことができる。
本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し説明してきたが、当業者には、かかる実施
形態が例としてのみ提供されることが明らかであろう。多くの変形、変更、及び置換は、
本発明から逸脱することなく当業者には直ちに想起されるであろう。本明細書に記載され
る本発明の実施形態に対する様々な代替が、本発明の実践において採用される場合がある
ことを理解されたい。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を決定すること、ならびに
これら特許請求の範囲内の方法及び構造ならびにそれらの同等物がその適用を受けている
ことが意図される。
形態が例としてのみ提供されることが明らかであろう。多くの変形、変更、及び置換は、
本発明から逸脱することなく当業者には直ちに想起されるであろう。本明細書に記載され
る本発明の実施形態に対する様々な代替が、本発明の実践において採用される場合がある
ことを理解されたい。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を決定すること、ならびに
これら特許請求の範囲内の方法及び構造ならびにそれらの同等物がその適用を受けている
ことが意図される。
本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し説明してきたが、当業者には、かかる実施形態が例としてのみ提供されることが明らかであろう。多くの変形、変更、及び置換は、本発明から逸脱することなく当業者には直ちに想起されるであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態に対する様々な代替が、本発明の実践において採用される場合があることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を決定すること、ならびにこれら特許請求の範囲内の方法及び構造ならびにそれらの同等物がその適用を受けていることが意図される。
本願は以下の発明を包含する。
［項目１］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＣＤ３εの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目２］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＣＤ３γの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目３］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目４］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＴＣＲαの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目５］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＴＣＲβの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目６］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニット及び、抗ＣＤ１９結合ドメインである抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む単離された組み換え核酸分子。
［項目７］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニット及び、抗Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）結合ドメインである抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む単離された組み換え核酸分子。
［項目８］ 前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結される、項目６または７に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目９］ 前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する、項目６〜８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１０］ 前記コードされた抗原結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目１〜９のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１１］ 前記コードされたリンカー配列が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目１０に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１２］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲの細胞外ドメインを含む、項目１〜１１のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１３］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲの膜貫通ドメインを含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１４］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲの細胞内ドメインを含む、項目１〜１３のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１５］ 前記ＴＣＲサブユニットが、（ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメイン、（ｉｉ）ＴＣＲの膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲの細胞内ドメインを含むとともに、（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）のうちの少なくとも２つが同じＴＣＲサブユニット由来である、項目１〜１４のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１６］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、もしくはＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なくとも１つの修飾を有するアミノ酸配列を含むＴＣＲの細胞内ドメインを含む、項目１〜１５のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１７］ 前記ＴＣＲサブユニットが、４−１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及び／またはＣＤ３ζの機能的シグナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なくとも１つの修飾を有するアミノ酸配列を含む細胞内ドメインを含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１８］ 前記ヒトまたはヒト化抗体ドメインが、抗体フラグメントを含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１９］ 前記ヒトまたはヒト化抗体ドメインが、ｓｃＦｖまたはＶ Ｈ ドメインを含む、項目１〜１８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２０］ （ｉ）それぞれ配列番号２５、配列番号２７、及び配列番号２９に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＣＤ１９軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列番号３１、配列番号３３、及び配列番号３５に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＣＤ１９重鎖結合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３をコードする、項目１〜１９のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２１］ 軽鎖可変領域をコードし、前記軽鎖可変領域が、配列番号４９の軽鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号４９の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２２］ 重鎖可変領域をコードし、前記重鎖可変領域が、配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、項目１〜２１のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２３］ （ｉ）それぞれ配列番号３７、配列番号３９、及び配列番号４１に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＢＣＭＡ軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列番号４３、配列番号４５、及び配列番号４７に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＢＣＭＡ重鎖結合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３をコードする、項目１〜１９のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２４］ 軽鎖可変領域をコードし、前記軽鎖可変領域が、配列番号５３の軽鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５３の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、項目１〜１９及び２３のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２５］ 重鎖可変領域をコードし、前記重鎖可変領域が、配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、項目１〜１９、２３、及び２４のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２６］ 前記ＴＦＰが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含む、項目１〜２５のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２７］ コードされたＴＦＰが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含む、項目１〜２６のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２８］ コードされたＴＦＰが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲζ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含む、項目１〜２７のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２９］ さらに、共刺激ドメインをコードする配列を含む、項目１〜２８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３０］ 前記共刺激ドメインが、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ならびに少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質から得られる機能的シグナル伝達ドメインである、項目２９に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３１］ 前記少なくとも１つから最大２０までの修飾が、細胞のシグナル伝達を媒介するアミノ酸の修飾、または前記ＴＦＰへのリガンド結合に反応してリン酸化されるアミノ酸の修飾を含む、項目１〜３０のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３２］ ｍＲＮＡである、項目１〜３１のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３３］ 前記ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニットの免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含み、前記サブユニットが、ＣＤ３ζのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、ＴＣＲζ鎖、Ｆｃε受容体１鎖、Ｆｃε受容体２鎖、Ｆｃγ受容体１鎖、Ｆｃγ受容体２ａ鎖、Ｆｃγ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃγ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃγ受容体３ａ鎖、Ｆｃγ受容体３ｂ鎖、Ｆｃβ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質のＩＴＡＭまたはその一部を含む、項目１〜３２のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３４］ 前記ＩＴＡＭが、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、またはＣＤ３εのＩＴＡＭを置き換える、項目３３に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３５］ 前記ＩＴＡＭが、ＣＤ３ζのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３δのＴＣＲサブユニットからなる群から選択されるとともに、ＣＤ３ζのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３δのＴＣＲサブユニットからなる群から選択される異なるＩＴＡＭを置き換える、項目３３に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３６］ 前記核酸がヌクレオチド類似体を含む、項目１〜３５のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３７］ 前記ヌクレオチド類似体が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド、及び２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホルアミダイトからなる群から選択される、項目３６に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３８］ さらに、リーダー配列を含む、項目１〜３７のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３９］ 項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子によってコードされる単離されたポリペプチド分子。
［項目４０］ ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４１］ ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４２］ ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４３］ ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または抗体フラグメントを含む、項目４０に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４４］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、ｓｃＦｖまたはＶ Ｈ ドメインである、項目４０〜４３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４５］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号５１のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目４０〜４４のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４６］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号４９のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目４０〜４５のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４７］ ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲの細胞外ドメインを含む、項目４０〜４６のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４８］ 項目４０〜４７のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４９］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目４０〜４８のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５０］ リンカー領域が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目４９に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５１］ ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む、単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５２］ ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５３］ ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５４］ ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または抗体フラグメントを含む、項目５３に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５５］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインがｓｃＦｖまたはＶ Ｈ ドメインである、項目５１〜５４のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５６］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、配列番号５５のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目５１〜５５のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５７］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、配列番号５３のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目５１〜５６のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５８］ ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲの細胞外ドメインを含む、項目５１〜５７のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子
［項目５９］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目５１〜５８のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６０］ リンカー領域が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目５９に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６１］ さらに、共刺激ドメインをコードする配列を含む、項目４０〜６０のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６２］ さらに、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする配列を含む、項目４０〜６１のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６３］ さらにリーダー配列を含む、項目４０〜６２のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６４］ 項目４０〜６３のいずれか一項に記載のＴＦＰをコードする配列を含む核酸。
［項目６５］ ＤＮＡ及びＲＮＡからなる群から選択される、項目６４に記載の核酸。
［項目６６］ 前記核酸がｍＲＮＡである、項目６４または６５に記載の核酸。
［項目６７］ ヌクレオチド類似体を含む、項目６４〜６６のいずれか一項に記載の核酸。
［項目６８］ 前記ヌクレオチド類似体が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド、及び２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホルアミダイトからなる群から選択される、項目６７に記載の核酸。
［項目６９］ さらに、プロモーターを含む、項目６４〜６８のいずれか一項に記載の核酸。
［項目７０］ インビトロで転写された核酸である、項目６４〜６９のいずれか一項に記載の核酸。
［項目７１］ さらに、ポリ（Ａ）尾部をコードする配列を含む、項目６４〜７０のいずれか一項に記載の核酸。
［項目７２］ さらに、３’ＵＴＲ配列を含む、項目６４〜７１のいずれか一項に記載の核酸。
［項目７３］ 項目４０〜６３のいずれか一項に記載のＴＦＰをコードする核酸分子を含むベクター。
［項目７４］ ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ベクター、またはレトロウイルスベクターからなる群から選択される、項目７３に記載のベクター。
［項目７５］ さらに、プロモーターを含む、項目７３または７４に記載のベクター。
［項目７６］ インビトロで転写されたベクターである、項目７３〜７５のいずれか一項に記載のベクター。
［項目７７］ 前記ベクターの核酸配列がさらにポリ（Ａ）尾部を含む、項目７３〜７６のいずれか
一項に記載のベクター。
［項目７８］ 前記ベクターの核酸配列がさらに３’ＵＴＲを含む、項目７３〜７７のいずれか一項に記載のベクター。
［項目７９］ 項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞。
［項目８０］ ヒトＴ細胞である、項目７９に記載の細胞。
［項目８１］ 前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞である、項目８０に記載の細胞。
［項目８２］ さらに、細胞内シグナル伝達ドメインからの陽性シグナルを含む第二のポリペプチドに会合した、抑制分子の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドを含む抑制分子をコードする核酸を含む、項目７９〜８１のいずれか一項に記載の細胞。
［項目８３］ 前記抑制分子が、ＰＤ１の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドならびに共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含む、項目８２に記載の細胞。
［項目８４］ ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞であって、少なくとも２つのＴＦＰ分子を含み、前記ＴＦＰ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９もしくは抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、前記ＴＦＰ分子が前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞において、及び／または前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の表面で、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが可能である、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞。
［項目８５］ ｉ）ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子；ならびに
ｉｉ）少なくとも１つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体。
［項目８６］ 前記ＴＣＲが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３δのＴＣＲサブユニットからなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含む、項目８５に記載のタンパク質複合体。
［項目８７］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目８５または８６に記載のタンパク質複合体。
［項目８８］ リンカー領域が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目８７に記載のタンパク質複合体
［項目８９］ （ａ）項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子によってコードされるＴＦＰ、及び
（ｂ）少なくとも１つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体。
［項目９０］ ｉ）ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子；ならびに
ｉｉ）少なくとも１つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体。
［項目９１］ 前記ＴＣＲが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３δのＴＣＲサブユニットからなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含む、項目９０に記載のタンパク質複合体。
［項目９２］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目９０または９１に記載のタンパク質複合体。
［項目９３］ リンカー領域が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目９２に記載のタンパク質複合体。
［項目９４］ 項目８５〜９３のいずれか一項に記載のタンパク質複合体あたり、少なくとも２つの異なるＴＦＰタンパク質を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞。
［項目９５］ 項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された核酸分子によってコードされる少なくとも２つの異なるＴＦＰ分子を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞。
［項目９６］ ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団であって、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団のＴ細胞が個々にまたは集合的に少なくとも２つのＴＦＰ分子を含み、前記ＴＦＰ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９もしくは抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、前記ＴＦＰ分子が前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞において、及び／または前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の表面で、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが可能である、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団。
［項目９７］ ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団であって、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団のＴ細胞が個々にまたは集合的に、項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子によってコードされる少なくとも２つのＴＦＰ分子を含む、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団。
［項目９８］ Ｔ細胞に項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、または項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクターで形質導入することを含む細胞の作製方法。
［項目９９］ インビトロで転写されたＲＮＡまたは合成ＲＮＡを細胞に導入することを含む、ＲＮＡ改変細胞集団の生成方法であって、前記ＲＮＡが項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子をコードする核酸を含む、方法。
［項目１００］ 哺乳類に抗腫瘍免疫を与える方法であって、前記哺乳類に対して、有効量の項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子を発現する細胞、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクター、または項目７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞を投与することを含む、方法。
［項目１０１］ 細胞が自己Ｔ細胞である、項目１００に記載の方法。
［項目１０２］ 細胞が同種異系Ｔ細胞である、項目１００に記載の方法。
［項目１０３］ 前記哺乳類がヒトである、項目１００〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
［項目１０４］ ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患を有する哺乳類の治療方法であって、前記哺乳類に対して、有効量の項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子を発現する細胞、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクター、または項目７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞を投与することを含む、方法。
［項目１０５］ ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う前記疾患が、増殖性疾患、がん、悪性腫瘍、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、前白血病、ＣＤ１９の発現を伴う非がん関連の適応症からなる群から選択される、項目１０４に記載の方法。
［項目１０６］ 前記疾患が、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞濾胞性リンパ腫、大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、前白血病、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、及びこれらの組合せからなる群から選択される血液がんである、項目１０４に記載の方法。
［項目１０７］ ＴＦＰ分子を発現する前記細胞が、ＴＦＰ分子を発現する細胞の効果を高める薬剤と組み合わせて投与される、項目１０４に記載の方法。
［項目１０８］ 前記哺乳類では、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞の有効量を投与された哺乳類と比較して、サイトカインの放出が少ない、項目１０４〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
［項目１０９］ ＴＦＰ分子を発現する前記細胞が、ＴＦＰ分子を発現する細胞の投与に伴う１つ以上の副作用を改善する薬剤と組み合わせて投与される、項目１０４〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
［項目１１０］ ＴＦＰ分子を発現する前記細胞が、ＣＤ１９またはＢＣＭＡに関連する疾患を治療する薬剤と組み合わせて投与される、項目１０４〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
［項目１１１］ 薬剤用としての、項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子を発現する細胞、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクター、項目８５〜９３のいずれか一項に記載のタンパク質複合体、または項目７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞。
［項目１１２］ ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患を有する哺乳類の治療方法であって、前記哺乳類に対して、有効量の項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子を発現する細胞、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクター、または項目７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞を投与することを含み、前記哺乳類では、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞の有効量を投与された哺乳類と比較して、サイトカインの放出が少ない、方法。
本願は以下の発明を包含する。
［項目１］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＣＤ３εの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目２］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＣＤ３γの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目３］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目４］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＴＣＲαの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目５］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＴＣＲβの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメインを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ） 抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。
［項目６］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニット及び、抗ＣＤ１９結合ドメインである抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む単離された組み換え核酸分子。
［項目７］ Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニット及び、抗Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）結合ドメインである抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む単離された組み換え核酸分子。
［項目８］ 前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結される、項目６または７に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目９］ 前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する、項目６〜８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１０］ 前記コードされた抗原結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目１〜９のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１１］ 前記コードされたリンカー配列が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目１０に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１２］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲの細胞外ドメインを含む、項目１〜１１のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１３］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲの膜貫通ドメインを含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１４］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲの細胞内ドメインを含む、項目１〜１３のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１５］ 前記ＴＣＲサブユニットが、（ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメイン、（ｉｉ）ＴＣＲの膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲの細胞内ドメインを含むとともに、（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）のうちの少なくとも２つが同じＴＣＲサブユニット由来である、項目１〜１４のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１６］ 前記ＴＣＲサブユニットが、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、もしくはＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なくとも１つの修飾を有するアミノ酸配列を含むＴＣＲの細胞内ドメインを含む、項目１〜１５のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１７］ 前記ＴＣＲサブユニットが、４−１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及び／またはＣＤ３ζの機能的シグナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なくとも１つの修飾を有するアミノ酸配列を含む細胞内ドメインを含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１８］ 前記ヒトまたはヒト化抗体ドメインが、抗体フラグメントを含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目１９］ 前記ヒトまたはヒト化抗体ドメインが、ｓｃＦｖまたはＶ Ｈ ドメインを含む、項目１〜１８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２０］ （ｉ）それぞれ配列番号２５、配列番号２７、及び配列番号２９に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＣＤ１９軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列番号３１、配列番号３３、及び配列番号３５に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＣＤ１９重鎖結合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３をコードする、項目１〜１９のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２１］ 軽鎖可変領域をコードし、前記軽鎖可変領域が、配列番号４９の軽鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号４９の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２２］ 重鎖可変領域をコードし、前記重鎖可変領域が、配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、項目１〜２１のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２３］ （ｉ）それぞれ配列番号３７、配列番号３９、及び配列番号４１に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＢＣＭＡ軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列番号４３、配列番号４５、及び配列番号４７に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＢＣＭＡ重鎖結合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３をコードする、項目１〜１９のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２４］ 軽鎖可変領域をコードし、前記軽鎖可変領域が、配列番号５３の軽鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５３の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、項目１〜１９及び２３のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２５］ 重鎖可変領域をコードし、前記重鎖可変領域が、配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、項目１〜１９、２３、及び２４のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２６］ 前記ＴＦＰが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含む、項目１〜２５のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２７］ コードされたＴＦＰが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含む、項目１〜２６のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２８］ コードされたＴＦＰが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲζ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含む、項目１〜２７のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目２９］ さらに、共刺激ドメインをコードする配列を含む、項目１〜２８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３０］ 前記共刺激ドメインが、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ならびに少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質から得られる機能的シグナル伝達ドメインである、項目２９に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３１］ 前記少なくとも１つから最大２０までの修飾が、細胞のシグナル伝達を媒介するアミノ酸の修飾、または前記ＴＦＰへのリガンド結合に反応してリン酸化されるアミノ酸の修飾を含む、項目１〜３０のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３２］ ｍＲＮＡである、項目１〜３１のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３３］ 前記ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニットの免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含み、前記サブユニットが、ＣＤ３ζのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、ＴＣＲζ鎖、Ｆｃε受容体１鎖、Ｆｃε受容体２鎖、Ｆｃγ受容体１鎖、Ｆｃγ受容体２ａ鎖、Ｆｃγ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃγ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃγ受容体３ａ鎖、Ｆｃγ受容体３ｂ鎖、Ｆｃβ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質のＩＴＡＭまたはその一部を含む、項目１〜３２のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３４］ 前記ＩＴＡＭが、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、またはＣＤ３εのＩＴＡＭを置き換える、項目３３に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３５］ 前記ＩＴＡＭが、ＣＤ３ζのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３δのＴＣＲサブユニットからなる群から選択されるとともに、ＣＤ３ζのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３δのＴＣＲサブユニットからなる群から選択される異なるＩＴＡＭを置き換える、項目３３に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３６］ 前記核酸がヌクレオチド類似体を含む、項目１〜３５のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３７］ 前記ヌクレオチド類似体が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド、及び２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホルアミダイトからなる群から選択される、項目３６に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３８］ さらに、リーダー配列を含む、項目１〜３７のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。
［項目３９］ 項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子によってコードされる単離されたポリペプチド分子。
［項目４０］ ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４１］ ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４２］ ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４３］ ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または抗体フラグメントを含む、項目４０に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４４］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、ｓｃＦｖまたはＶ Ｈ ドメインである、項目４０〜４３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４５］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号５１のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目４０〜４４のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４６］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号４９のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目４０〜４５のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４７］ ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲの細胞外ドメインを含む、項目４０〜４６のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４８］ 項目４０〜４７のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目４９］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目４０〜４８のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５０］ リンカー領域が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目４９に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５１］ ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む、単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５２］ ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５３］ ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５４］ ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む抗体または抗体フラグメントを含む、項目５３に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５５］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインがｓｃＦｖまたはＶ Ｈ ドメインである、項目５１〜５４のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５６］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、配列番号５５のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目５１〜５５のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５７］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、配列番号５３のアミノ酸配列に対して９５〜１００％の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、項目５１〜５６のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目５８］ ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲの細胞外ドメインを含む、項目５１〜５７のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子
［項目５９］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目５１〜５８のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６０］ リンカー領域が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目５９に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６１］ さらに、共刺激ドメインをコードする配列を含む、項目４０〜６０のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６２］ さらに、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする配列を含む、項目４０〜６１のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６３］ さらにリーダー配列を含む、項目４０〜６２のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
［項目６４］ 項目４０〜６３のいずれか一項に記載のＴＦＰをコードする配列を含む核酸。
［項目６５］ ＤＮＡ及びＲＮＡからなる群から選択される、項目６４に記載の核酸。
［項目６６］ 前記核酸がｍＲＮＡである、項目６４または６５に記載の核酸。
［項目６７］ ヌクレオチド類似体を含む、項目６４〜６６のいずれか一項に記載の核酸。
［項目６８］ 前記ヌクレオチド類似体が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド、及び２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホルアミダイトからなる群から選択される、項目６７に記載の核酸。
［項目６９］ さらに、プロモーターを含む、項目６４〜６８のいずれか一項に記載の核酸。
［項目７０］ インビトロで転写された核酸である、項目６４〜６９のいずれか一項に記載の核酸。
［項目７１］ さらに、ポリ（Ａ）尾部をコードする配列を含む、項目６４〜７０のいずれか一項に記載の核酸。
［項目７２］ さらに、３’ＵＴＲ配列を含む、項目６４〜７１のいずれか一項に記載の核酸。
［項目７３］ 項目４０〜６３のいずれか一項に記載のＴＦＰをコードする核酸分子を含むベクター。
［項目７４］ ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ベクター、またはレトロウイルスベクターからなる群から選択される、項目７３に記載のベクター。
［項目７５］ さらに、プロモーターを含む、項目７３または７４に記載のベクター。
［項目７６］ インビトロで転写されたベクターである、項目７３〜７５のいずれか一項に記載のベクター。
［項目７７］ 前記ベクターの核酸配列がさらにポリ（Ａ）尾部を含む、項目７３〜７６のいずれか
一項に記載のベクター。
［項目７８］ 前記ベクターの核酸配列がさらに３’ＵＴＲを含む、項目７３〜７７のいずれか一項に記載のベクター。
［項目７９］ 項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞。
［項目８０］ ヒトＴ細胞である、項目７９に記載の細胞。
［項目８１］ 前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞である、項目８０に記載の細胞。
［項目８２］ さらに、細胞内シグナル伝達ドメインからの陽性シグナルを含む第二のポリペプチドに会合した、抑制分子の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドを含む抑制分子をコードする核酸を含む、項目７９〜８１のいずれか一項に記載の細胞。
［項目８３］ 前記抑制分子が、ＰＤ１の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドならびに共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含む、項目８２に記載の細胞。
［項目８４］ ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞であって、少なくとも２つのＴＦＰ分子を含み、前記ＴＦＰ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９もしくは抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、前記ＴＦＰ分子が前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞において、及び／または前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の表面で、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが可能である、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞。
［項目８５］ ｉ）ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子；ならびに
ｉｉ）少なくとも１つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体。
［項目８６］ 前記ＴＣＲが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３δのＴＣＲサブユニットからなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含む、項目８５に記載のタンパク質複合体。
［項目８７］ 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目８５または８６に記載のタンパク質複合体。
［項目８８］ リンカー領域が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目８７に記載のタンパク質複合体
［項目８９］ （ａ）項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子によってコードされるＴＦＰ、及び
（ｂ）少なくとも１つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体。
［項目９０］ ｉ）ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子；ならびに
ｉｉ）少なくとも１つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むタンパク質複合体。
［項目９１］ 前記ＴＣＲが、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３δのＴＣＲサブユニットからなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含む、項目９０に記載のタンパク質複合体。
［項目９２］ 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインにつながれる、項目９０または９１に記載のタンパク質複合体。
［項目９３］ リンカー領域が、（Ｇ ４ Ｓ） ｎ を含み、ｎ＝１〜４である、項目９２に記載のタンパク質複合体。
［項目９４］ 項目８５〜９３のいずれか一項に記載のタンパク質複合体あたり、少なくとも２つの異なるＴＦＰタンパク質を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞。
［項目９５］ 項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された核酸分子によってコードされる少なくとも２つの異なるＴＦＰ分子を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞。
［項目９６］ ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団であって、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団のＴ細胞が個々にまたは集合的に少なくとも２つのＴＦＰ分子を含み、前記ＴＦＰ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９もしくは抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、前記ＴＦＰ分子が前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞において、及び／または前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の表面で、内因性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが可能である、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団。
［項目９７］ ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団であって、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団のＴ細胞が個々にまたは集合的に、項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子によってコードされる少なくとも２つのＴＦＰ分子を含む、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団。
［項目９８］ Ｔ細胞に項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、または項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクターで形質導入することを含む細胞の作製方法。
［項目９９］ インビトロで転写されたＲＮＡまたは合成ＲＮＡを細胞に導入することを含む、ＲＮＡ改変細胞集団の生成方法であって、前記ＲＮＡが項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子をコードする核酸を含む、方法。
［項目１００］ 哺乳類に抗腫瘍免疫を与える方法であって、前記哺乳類に対して、有効量の項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子を発現する細胞、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクター、または項目７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞を投与することを含む、方法。
［項目１０１］ 細胞が自己Ｔ細胞である、項目１００に記載の方法。
［項目１０２］ 細胞が同種異系Ｔ細胞である、項目１００に記載の方法。
［項目１０３］ 前記哺乳類がヒトである、項目１００〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
［項目１０４］ ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患を有する哺乳類の治療方法であって、前記哺乳類に対して、有効量の項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子を発現する細胞、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクター、または項目７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞を投与することを含む、方法。
［項目１０５］ ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う前記疾患が、増殖性疾患、がん、悪性腫瘍、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、前白血病、ＣＤ１９の発現を伴う非がん関連の適応症からなる群から選択される、項目１０４に記載の方法。
［項目１０６］ 前記疾患が、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞濾胞性リンパ腫、大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、前白血病、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患、及びこれらの組合せからなる群から選択される血液がんである、項目１０４に記載の方法。
［項目１０７］ ＴＦＰ分子を発現する前記細胞が、ＴＦＰ分子を発現する細胞の効果を高める薬剤と組み合わせて投与される、項目１０４に記載の方法。
［項目１０８］ 前記哺乳類では、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞の有効量を投与された哺乳類と比較して、サイトカインの放出が少ない、項目１０４〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
［項目１０９］ ＴＦＰ分子を発現する前記細胞が、ＴＦＰ分子を発現する細胞の投与に伴う１つ以上の副作用を改善する薬剤と組み合わせて投与される、項目１０４〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
［項目１１０］ ＴＦＰ分子を発現する前記細胞が、ＣＤ１９またはＢＣＭＡに関連する疾患を治療する薬剤と組み合わせて投与される、項目１０４〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
［項目１１１］ 薬剤用としての、項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子を発現する細胞、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクター、項目８５〜９３のいずれか一項に記載のタンパク質複合体、または項目７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞。
［項目１１２］ ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患を有する哺乳類の治療方法であって、前記哺乳類に対して、有効量の項目１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子、項目３９に記載の単離されたポリペプチド分子を発現する細胞、項目４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、項目６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、項目７３〜７８のいずれか一項に記載のベクター、または項目７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞を投与することを含み、前記哺乳類では、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞の有効量を投与された哺乳類と比較して、サイトカインの放出が少ない、方法。
Claims (112)
- Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え
核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＣＤ３イプシロンの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメ
インを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ）抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細
胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。 - Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換
え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＣＤ３ガンマの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメイン
を含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ）抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細
胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。 - Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換
え核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＣＤ３デルタの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメイン
を含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ）抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細
胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。 - Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え
核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＴＣＲアルファの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメイ
ンを含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ）抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細
胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。 - Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え
核酸分子であって、前記ＴＦＰが、
（ａ） （ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメインの少なくとも一部、及び
（ｉｉ）ＴＣＲベータの細胞内シグナル伝達ドメイン由来の刺激ドメイン
を含むＴＣＲの細胞内ドメインを含むＴＣＲサブユニット；ならびに
（ｂ）抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含み；
前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結され、前記ＴＦＰがＴ細
胞で発現される際にＴＣＲに合体する単離された組み換え核酸分子。 - Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え
核酸分子であって、前記ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニット及び、抗ＣＤ１９結合ドメインで
ある抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む単離された組み換え核
酸分子。 - Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）をコードする、単離された組み換え
核酸分子であって、前記ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニット及び、抗Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭ
Ａ）結合ドメインである抗原結合ドメインを含むヒトまたはヒト化抗体ドメインを含む単
離された組み換え核酸分子。 - 前記ＴＣＲサブユニット及び前記抗体ドメインが作動可能に連結される、請求項６また
は７に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＴＦＰがＴ細胞で発現される際にＴＣＲに合体する、請求項６〜８のいずれか一項
に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記コードされた抗原結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメ
インにつながれる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記コードされたリンカー配列が、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、ｎ＝１〜４である、請求項１
０に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲの細胞外ドメインを含む、請求項１〜１１のいずれ
か一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲの膜貫通ドメインを含む、請求項１〜１２のいずれ
か一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲの細胞内ドメインを含む、請求項１〜１３のいずれ
か一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＴＣＲサブユニットが、（ｉ）ＴＣＲの細胞外ドメイン、（ｉｉ）ＴＣＲの膜貫通
ドメイン、及び（ｉｉｉ）ＴＣＲの細胞内ドメインを含むとともに、（ｉ）、（ｉｉ）、
及び（ｉｉｉ）のうちの少なくとも２つが同じＴＣＲサブユニット由来である、請求項１
〜１４のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＴＣＲサブユニットが、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、もしくはＣＤ３デルタ
の細胞内シグナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なくとも１つの修
飾を有するアミノ酸配列を含むＴＣＲの細胞内ドメインを含む、請求項１〜１５のいずれ
か一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＴＣＲサブユニットが、４−１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及び／またはＣ
Ｄ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメインから選択される刺激ドメイン、または少なくと
も１つの修飾を有するアミノ酸配列を含む細胞内ドメインを含む、請求項１〜１６のいず
れか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ヒトまたはヒト化抗体ドメインが、抗体フラグメントを含む、請求項１〜１７のい
ずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ヒトまたはヒト化抗体ドメインが、ｓｃＦｖまたはＶＨドメインを含む、請求項１
〜１８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - （ｉ）それぞれ配列番号２５、配列番号２７、及び配列番号２９に７０〜１００％の配
列同一性がある、抗ＣＤ１９軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列番号３１、配
列番号３３、及び配列番号３５に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＣＤ１９重鎖結
合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ
３をコードする、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 軽鎖可変領域をコードし、前記軽鎖可変領域が、配列番号４９の軽鎖可変領域アミノ酸
配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号
４９の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、請求
項１〜２０のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 重鎖可変領域をコードし、前記重鎖可変領域が、配列番号５１の重鎖可変領域アミノ酸
配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号
５１の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、請求
項１〜２１のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - （ｉ）それぞれ配列番号３７、配列番号３９、及び配列番号４１に７０〜１００％の配
列同一性がある、抗ＢＣＭＡ軽鎖結合ドメインのアミノ酸配列の軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３、及び／または（ｉｉ）それぞれ配列番号４３、配
列番号４５、及び配列番号４７に７０〜１００％の配列同一性がある、抗ＢＣＭＡ重鎖結
合ドメインのアミノ酸配列の重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ
３をコードする、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 軽鎖可変領域をコードし、前記軽鎖可変領域が、配列番号５３の軽鎖可変領域アミノ酸
配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号
５３の軽鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、請求
項１〜１９及び２３のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 重鎖可変領域をコードし、前記重鎖可変領域が、配列番号５５の重鎖可変領域アミノ酸
配列の少なくとも１つから最大３０までの修飾を有するアミノ酸配列、または、配列番号
５５の重鎖可変領域アミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性がある配列を含む、請求
項１〜１９、２３、及び２４のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＴＦＰが、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユ
ニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット、それ
らの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらの
アミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含
むＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の
単離された組み換え核酸分子。 - コードされたＴＦＰが、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣ
Ｒサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニッ
ト、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有する
それらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む膜貫
通ドメインを含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子
。 - コードされたＴＦＰが、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＴＣＲゼータ鎖、ＣＤ３
イプシロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタの
ＴＣＲサブユニット、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２
、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１
３７、ＣＤ１５４、それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０まで
の修飾を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメ
インを含む膜貫通ドメインを含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の単離された組
み換え核酸分子。 - さらに、共刺激ドメインをコードする配列を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記
載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記共刺激ドメインが、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−
１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、及び４−１ＢＢ（
ＣＤ１３７）、ならびに少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ
酸配列からなる群から選択されるタンパク質から得られる機能的シグナル伝達ドメインで
ある、請求項２９に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記少なくとも１つから最大２０までの修飾が、細胞のシグナル伝達を媒介するアミノ
酸の修飾、または前記ＴＦＰへのリガンド結合に反応してリン酸化されるアミノ酸の修飾
を含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - ｍＲＮＡである、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子
。 - 前記ＴＦＰが、ＴＣＲサブユニットの免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を
含み、前記サブユニットが、ＣＤ３ゼータのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンのＴ
ＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニ
ット、ＴＣＲゼータ鎖、Ｆｃイプシロン受容体１鎖、Ｆｃイプシロン受容体２鎖、Ｆｃガ
ンマ受容体１鎖、Ｆｃガンマ受容体２ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃガンマ受容
体２ｂ２鎖、Ｆｃガンマ受容体３ａ鎖、Ｆｃガンマ受容体３ｂ鎖、Ｆｃベータ受容体１鎖
、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３
、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、
それらの機能的フラグメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれ
らのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質のＩＴＡＭまたはその一部を含む
、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＩＴＡＭが、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、またはＣＤ３イプシロンのＩＴＡＭを
置き換える、請求項３３に記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記ＩＴＡＭが、ＣＤ３ゼータのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブ
ユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット
からなる群から選択されるとともに、ＣＤ３ゼータのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３イプシ
ロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴ
ＣＲサブユニットからなる群から選択される異なるＩＴＡＭを置き換える、請求項３３に
記載の単離された組み換え核酸分子。 - 前記核酸がヌクレオチド類似体を含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の単離さ
れた組み換え核酸分子。 - 前記ヌクレオチド類似体が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ
−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオ
ロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（
２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、
Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、２’−Ｏ−Ｎ
−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核
酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（Ｈ
ＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド
、及び２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホルアミダイトからなる群から選択される、請
求項３６に記載の単離された組み換え核酸分子。 - さらに、リーダー配列を含む、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離された組み
換え核酸分子。 - 請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子によってコードさ
れる単離されたポリペプチド分子。 - ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン
、及び細胞内ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子。 - ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン
、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因
性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互
作用することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。 - ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン
、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因
性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。 - ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン
、及び細胞内ドメインを含む抗体または抗体フラグメントを含む、請求項４０に記載の単
離された組み換えＴＦＰ分子。 - 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、ｓｃＦｖまたはＶＨドメインである、請求項４０〜４
３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。 - 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号５１のアミノ酸配列に対して９５〜１００％
の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０まで
の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、請求項４０〜４４のいずれか一項に記載の単離
された組み換えＴＦＰ分子。 - 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、配列番号４９のアミノ酸配列に対して９５〜１００％
の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０まで
の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載の単離
された組み換えＴＦＰ分子。 - ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３
ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラ
グメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列か
らなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲの細胞
外ドメインを含む、請求項４０〜４６のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ
分子。 - 請求項４０〜４７のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。
- 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインに
つながれる、請求項４０〜４８のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。 - リンカー領域が、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、ｎ＝１〜４である、請求項４９に記載の単離さ
れた組み換えＴＦＰ分子。 - ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン
、及び細胞内ドメインを含む、単離された組み換えＴＦＰ分子。 - ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン
、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因
性ＴＣＲ複合体及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互
作用することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。 - ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン
、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離された組み換えＴＦＰ分子であって、内因
性ＴＣＲ複合体に機能的に統合することが可能な単離された組み換えＴＦＰ分子。 - ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン
、及び細胞内ドメインを含む抗体または抗体フラグメントを含む、請求項５３に記載の単
離された組み換えＴＦＰ分子。 - 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインがｓｃＦｖまたはＶＨドメインである、請求項５１〜５４
のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。 - 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、配列番号５５のアミノ酸配列に対して９５〜１００％
の同一性がある重鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０まで
の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、請求項５１〜５５のいずれか一項に記載の単離
された組み換えＴＦＰ分子。 - 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、配列番号５３のアミノ酸配列に対して９５〜１００％
の同一性がある軽鎖、その機能的フラグメント、または少なくとも１つから最大３０まで
の修飾を有するそのアミノ酸配列を含む、請求項５１〜５６のいずれか一項に記載の単離
された組み換えＴＦＰ分子。 - ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３
ガンマのＴＣＲサブユニット、ＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニット、それらの機能的フラ
グメント、及び少なくとも１つから最大２０までの修飾を有するそれらのアミノ酸配列か
らなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含むＴＣＲの細胞
外ドメインを含む、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ
分子 - 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインに
つながれる、請求項５１〜５８のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。 - リンカー領域が、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、ｎ＝１〜４である、請求項５９に記載の単離さ
れた組み換えＴＦＰ分子。 - さらに、共刺激ドメインをコードする配列を含む、請求項４０〜６０のいずれか一項に
記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。 - さらに、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする配列を含む、請求項４０〜６１のい
ずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子。 - さらにリーダー配列を含む、請求項４０〜６２のいずれか一項に記載の単離された組み
換えＴＦＰ分子。 - 請求項４０〜６３のいずれか一項に記載のＴＦＰをコードする配列を含む核酸。
- ＤＮＡ及びＲＮＡからなる群から選択される、請求項６４に記載の核酸。
- 前記核酸がｍＲＮＡである、請求項６４または６５に記載の核酸。
- ヌクレオチド類似体を含む、請求項６４〜６６のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記ヌクレオチド類似体が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ
−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオ
ロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（
２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、
Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、２’−Ｏ−Ｎ
−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核
酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（Ｈ
ＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド
、及び２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホルアミダイトからなる群から選択される、請
求項６７に記載の核酸。 - さらに、プロモーターを含む、請求項６４〜６８のいずれか一項に記載の核酸。
- インビトロで転写された核酸である、請求項６４〜６９のいずれか一項に記載の核酸。
- さらに、ポリ（Ａ）尾部をコードする配列を含む、請求項６４〜７０のいずれか一項に
記載の核酸。 - さらに、３’ＵＴＲ配列を含む、請求項６４〜７１のいずれか一項に記載の核酸。
- 請求項４０〜６３のいずれか一項に記載のＴＦＰをコードする核酸分子を含むベクター
。 - ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ラ
ウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ベクター、またはレトロウイルスベクターからなる群から選
択される、請求項７３に記載のベクター。 - さらに、プロモーターを含む、請求項７３または７４に記載のベクター。
- インビトロで転写されたベクターである、請求項７３〜７５のいずれか一項に記載のベ
クター。 - 前記ベクターの核酸配列がさらにポリ（Ａ）尾部を含む、請求項７３〜７６のいずれか
一項に記載のベクター。 - 前記ベクターの核酸配列がさらに３’ＵＴＲを含む、請求項７３〜７７のいずれか一項
に記載のベクター。 - 請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、請求項３９に記
載の単離されたポリペプチド分子、請求項４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された
組み換えＴＦＰ分子、請求項６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、請求項７３〜７８
のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞。 - ヒトＴ細胞である、請求項７９に記載の細胞。
- 前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項８０に記載の細胞。
- さらに、細胞内シグナル伝達ドメインからの陽性シグナルを含む第二のポリペプチドに
会合した、抑制分子の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドを含む抑制分子をコード
する核酸を含む、請求項７９〜８１のいずれか一項に記載の細胞。 - 前記抑制分子が、ＰＤ１の少なくとも一部を含む第一のポリペプチドならびに共刺激ド
メイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第二のポリペプチドを含む、請求項８２に記
載の細胞。 - ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞であって、少なくとも２つのＴＦＰ分子を含み、前
記ＴＦＰ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９もしくは抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの
細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、前記ＴＦＰ分子が前記ヒ
トＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞におい
て、及び／または前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の表面で、内因性ＴＣＲ複合体
及び／または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが
可能である、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞。 - ｉ）ヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメ
イン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子；ならびに
ｉｉ）少なくとも１つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むタン
パク質複合体。 - 前記ＴＣＲが、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユ
ニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニットか
らなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含む、請求項８５
に記載のタンパク質複合体。 - 前記抗ＣＤ１９結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインに
つながれる、請求項８５または８６に記載のタンパク質複合体。 - リンカー領域が、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、ｎ＝１〜４である、請求項８７に記載のタンパ
ク質複合体 - （ａ）請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子によってコ
ードされるＴＦＰ、及び
（ｂ）少なくとも１つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むタ
ンパク質複合体。 - ｉ）ヒトまたはヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメ
イン、及び細胞内ドメインを含むＴＦＰ分子；ならびに
ｉｉ）少なくとも１つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むタン
パク質複合体。 - 前記ＴＣＲが、ＴＣＲアルファ鎖、ＴＣＲベータ鎖、ＣＤ３イプシロンのＴＣＲサブユ
ニット、ＣＤ３ガンマのＴＣＲサブユニット、及びＣＤ３デルタのＴＣＲサブユニットか
らなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその一部を含む、請求項９０
に記載のタンパク質複合体。 - 前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインが、リンカー配列によって前記ＴＣＲの細胞外ドメインに
つながれる、請求項９０または９１に記載のタンパク質複合体。 - リンカー領域が、（Ｇ４Ｓ）ｎを含み、ｎ＝１〜４である、請求項９２に記載のタンパ
ク質複合体。 - 請求項８５〜９３のいずれか一項に記載のタンパク質複合体あたり、少なくとも２つの
異なるＴＦＰタンパク質を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞。 - 請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離された核酸分子によってコードされる少な
くとも２つの異なるＴＦＰ分子を含むヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞。 - ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団であって、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細
胞の集団のＴ細胞が個々にまたは集合的に少なくとも２つのＴＦＰ分子を含み、前記ＴＦ
Ｐ分子がヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９もしくは抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＴＣＲの細胞外
ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、前記ＴＦＰ分子が前記ヒトＣＤ
８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の中で、前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞において、及
び／または前記ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の表面で、内因性ＴＣＲ複合体及び／
または少なくとも１つの内因性ＴＣＲポリペプチドと機能的に相互作用することが可能で
ある、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団。 - ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団であって、ヒトＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細
胞の集団のＴ細胞が個々にまたは集合的に、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離
された組み換え核酸分子によってコードされる少なくとも２つのＴＦＰ分子を含む、ヒト
ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞の集団。 - Ｔ細胞に請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、請求項
６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、または請求項７３〜７８のいずれか一項に記載
のベクターで形質導入することを含む細胞の作製方法。 - インビトロで転写されたＲＮＡまたは合成ＲＮＡを細胞に導入することを含む、ＲＮＡ
改変細胞集団の生成方法であって、前記ＲＮＡが請求項４０〜６３のいずれか一項に記載
の単離された組み換えＴＦＰ分子をコードする核酸を含む、方法。 - 哺乳類に抗腫瘍免疫を与える方法であって、前記哺乳類に対して、有効量の請求項１〜
３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子、請求項３９に記載の単離され
たポリペプチド分子、請求項３９に記載の単離されたポリペプチド分子を発現する細胞、
請求項４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み換えＴＦＰ分子、請求項６４〜
７２のいずれか一項に記載の核酸、請求項７３〜７８のいずれか一項に記載のベクター、
または請求項７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞を投与することを含
む、方法。 - 細胞が自己Ｔ細胞である、請求項１００に記載の方法。
- 細胞が同種異系Ｔ細胞である、請求項１００に記載の方法。
- 前記哺乳類がヒトである、請求項１００〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
- ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患を有する哺乳類の治療方法であって、前記哺
乳類に対して、有効量の請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸
分子、請求項３９に記載の単離されたポリペプチド分子、請求項３９に記載の単離された
ポリペプチド分子を発現する細胞、請求項４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された
組み換えＴＦＰ分子、請求項６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、請求項７３〜７８
のいずれか一項に記載のベクター、または請求項７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一
項に記載の細胞を投与することを含む、方法。 - ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う前記疾患が、増殖性疾患、がん、悪性腫瘍、骨髄
異形成、骨髄異形成症候群、前白血病、ＣＤ１９の発現を伴う非がん関連の適応症からな
る群から選択される、請求項１０４に記載の方法。 - 前記疾患が、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（
Ｔ−ＡＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リン
パ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バ
ーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白
血病、小細胞濾胞性リンパ腫、大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴ
リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成、骨髄異
形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ヴァ
ルデンストレームマクログロブリン血症、前白血病、ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴
う疾患、及びこれらの組合せからなる群から選択される血液がんである、請求項１０４に
記載の方法。 - ＴＦＰ分子を発現する前記細胞が、ＴＦＰ分子を発現する細胞の効果を高める薬剤と組
み合わせて投与される、請求項１０４に記載の方法。 - 前記哺乳類では、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを
発現するＴ細胞の有効量を投与された哺乳類と比較して、サイトカインの放出が少ない、
請求項１０４〜１０７のいずれか一項に記載の方法。 - ＴＦＰ分子を発現する前記細胞が、ＴＦＰ分子を発現する細胞の投与に伴う１つ以上の
副作用を改善する薬剤と組み合わせて投与される、請求項１０４〜１０８のいずれか一項
に記載の方法。 - ＴＦＰ分子を発現する前記細胞が、ＣＤ１９またはＢＣＭＡに関連する疾患を治療する
薬剤と組み合わせて投与される、請求項１０４〜１０９のいずれか一項に記載の方法。 - 薬剤用としての、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸分子
、請求項３９に記載の単離されたポリペプチド分子、請求項３９に記載の単離されたポリ
ペプチド分子を発現する細胞、請求項４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された組み
換えＴＦＰ分子、請求項６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、請求項７３〜７８のい
ずれか一項に記載のベクター、請求項８５〜９３のいずれか一項に記載のタンパク質複合
体、または請求項７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一項に記載の細胞。 - ＣＤ１９またはＢＣＭＡの発現を伴う疾患を有する哺乳類の治療方法であって、前記哺
乳類に対して、有効量の請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離された組み換え核酸
分子、請求項３９に記載の単離されたポリペプチド分子、請求項３９に記載の単離された
ポリペプチド分子を発現する細胞、請求項４０〜６３のいずれか一項に記載の単離された
組み換えＴＦＰ分子、請求項６４〜７２のいずれか一項に記載の核酸、請求項７３〜７８
のいずれか一項に記載のベクター、または請求項７９〜８４及び９４〜９８のいずれか一
項に記載の細胞を投与することを含み、前記哺乳類では、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（
ＣＡＲ）または抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＴ細胞の有効量を投与された哺乳類と比較
して、サイトカインの放出が少ない、方法。
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| CN110248677B (zh) * | 2017-01-05 | 2023-05-16 | 上海煦顼技术有限公司 | 人源化抗cd19抗体及其与嵌合抗原受体的用途 |
| CN110582509A (zh) * | 2017-01-31 | 2019-12-17 | 诺华股份有限公司 | 使用具有多特异性的嵌合t细胞受体蛋白治疗癌症 |
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| US11851679B2 (en) | 2017-11-01 | 2023-12-26 | Juno Therapeutics, Inc. | Method of assessing activity of recombinant antigen receptors |
| KR102160061B1 (ko) * | 2018-02-01 | 2020-09-29 | 난징 아이에이에스오 바이오테라퓨틱스 컴퍼니, 리미티드 | Bcma에 결합하는 키메릭 항원 수용체(car) 및 그의 용도 |
| US11266690B2 (en) | 2018-02-01 | 2022-03-08 | Nanjing Iaso Biotherapeutics Co., Ltd. | Chimeric antigen receptor (CAR) binding to BCMA, and uses thereof |
| WO2019157279A1 (en) * | 2018-02-10 | 2019-08-15 | Berkeley Lights, Inc. | Mutant idh1 specific t cell receptor |
| EP3749687A4 (en) | 2018-02-11 | 2021-12-29 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Non-hla restricted t cell receptors and uses thereof |
| BR112020016570A2 (pt) | 2018-02-17 | 2020-12-15 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Composições e métodos para liberação de proteína de membrana |
| CA3093449A1 (en) * | 2018-03-09 | 2019-09-12 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| US12291557B2 (en) | 2018-03-28 | 2025-05-06 | Cero Therapeutics Holdings, Inc. | Chimeric TIM4 receptors and uses thereof |
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| US12263190B2 (en) | 2018-11-08 | 2025-04-01 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods and combinations for treatment and T cell modulation |
| CN109735558B (zh) * | 2018-12-12 | 2022-04-15 | 中南大学 | 一种重组car19-il24基因、慢病毒载体、car19-il24-t细胞及应用 |
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| US20220144916A1 (en) * | 2019-02-12 | 2022-05-12 | Board Of Regents, The University Of Texas System | High affinity engineered t-cell receptors targeting cmv infected cells |
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| EP3946382A1 (en) | 2019-04-04 | 2022-02-09 | UMC Utrecht Holding B.V. | Modified immune receptor constructs |
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| AU2021268953A1 (en) * | 2020-05-05 | 2022-12-08 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for TCR reprogramming using CD70 specific fusion proteins |
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| CN112521513B (zh) * | 2020-12-15 | 2021-08-24 | 青岛西凯生物技术有限公司 | 一种靶向cd19的嵌合抗原受体(car)及其应用 |
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| US20240226294A9 (en) * | 2021-02-15 | 2024-07-11 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. | Customized chimeric antigen receptor polypeptides |
| WO2022177966A1 (en) * | 2021-02-16 | 2022-08-25 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for the treatment of hiv |
| WO2022187591A1 (en) | 2021-03-05 | 2022-09-09 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses |
| WO2022192286A1 (en) * | 2021-03-09 | 2022-09-15 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins and rna interference |
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| EP4396232A1 (en) | 2021-09-03 | 2024-07-10 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-lamp1 antibodies and their uses |
| WO2023081767A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-05-11 | Precision Biosciences, Inc. | Methods for immunotherapy |
| US20250009800A1 (en) | 2021-11-16 | 2025-01-09 | Precision Biosciences, Inc. | Methods for cancer immunotherapy |
| WO2023108150A1 (en) | 2021-12-10 | 2023-06-15 | Precision Biosciences, Inc. | Methods for cancer immunotherapy |
| WO2023215725A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Fred Hutchinson Cancer Center | Compositions and methods for cellular immunotherapy |
| WO2024062138A1 (en) | 2022-09-23 | 2024-03-28 | Mnemo Therapeutics | Immune cells comprising a modified suv39h1 gene |
| WO2024148167A1 (en) | 2023-01-05 | 2024-07-11 | Precision Biosciences, Inc. | Optimized engineered meganucleases having specificity for the human t cell receptor alpha constant region gene |
| WO2024243441A1 (en) | 2023-05-24 | 2024-11-28 | Kumquat Biosciences Inc. | Heterocyclic compounds and uses thereof |
| WO2025029930A1 (en) | 2023-07-31 | 2025-02-06 | Legend Biotech Ireland Limited | Cells overexpressing cd31 and methods of use thereof |
| WO2025081123A1 (en) | 2023-10-12 | 2025-04-17 | Fred Hutchinson Cancer Center | Methods and compositions for improving t cell immunotherapy |
| WO2025101820A1 (en) | 2023-11-08 | 2025-05-15 | Fred Hutchinson Cancer Center | Compositions and methods for cellular immunotherapy |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0638119A1 (en) * | 1992-03-18 | 1995-02-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Chimeric receptor genes and cells transformed therewith |
| EP2258720A1 (en) * | 2009-05-19 | 2010-12-08 | Max Delbrück Centrum für Molekulare Medizin (MDC) Berlin-Buch; | Multiple target T cell receptor |
| JP2012508164A (ja) * | 2008-11-07 | 2012-04-05 | マイクロメット アーゲー | 急性リンパ芽球性白血病の治療 |
Family Cites Families (268)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US1009390A (en) | 1910-04-18 | 1911-11-21 | Miehle Printing Press & Mfg | Manufacture of printing-plates. |
| US1035847A (en) | 1910-05-23 | 1912-08-20 | William P Bettendorf | Means for cushioning the bodies of railway-cars. |
| US1020828A (en) | 1911-12-11 | 1912-03-19 | William A Rees | Electric washing-machine. |
| US1044284A (en) | 1912-04-29 | 1912-11-12 | Gen Electric | Heating device. |
| FR901228A (fr) | 1943-01-16 | 1945-07-20 | Deutsche Edelstahlwerke Ag | Système d'aimant à entrefer annulaire |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
| US6548640B1 (en) | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
| GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
| US5906936A (en) * | 1988-05-04 | 1999-05-25 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Endowing lymphocytes with antibody specificity |
| US6534055B1 (en) | 1988-11-23 | 2003-03-18 | Genetics Institute, Inc. | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
| US5858358A (en) | 1992-04-07 | 1999-01-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
| US6905680B2 (en) | 1988-11-23 | 2005-06-14 | Genetics Institute, Inc. | Methods of treating HIV infected subjects |
| US6352694B1 (en) | 1994-06-03 | 2002-03-05 | Genetics Institute, Inc. | Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| US5399346A (en) | 1989-06-14 | 1995-03-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Gene therapy |
| US5585362A (en) | 1989-08-22 | 1996-12-17 | The Regents Of The University Of Michigan | Adenovirus vectors for gene therapy |
| GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
| DE69233482T2 (de) | 1991-05-17 | 2006-01-12 | Merck & Co., Inc. | Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen |
| US5199942A (en) | 1991-06-07 | 1993-04-06 | Immunex Corporation | Method for improving autologous transplantation |
| LU91067I2 (fr) | 1991-06-14 | 2004-04-02 | Genentech Inc | Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines |
| ES2136092T3 (es) | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
| GB9125768D0 (en) | 1991-12-04 | 1992-02-05 | Hale Geoffrey | Therapeutic method |
| JP4157160B2 (ja) | 1991-12-13 | 2008-09-24 | ゾーマ テクノロジー リミテッド | 改変抗体可変領域の調製のための方法 |
| GB9203459D0 (en) | 1992-02-19 | 1992-04-08 | Scotgen Ltd | Antibodies with germ-line variable regions |
| WO1993019163A1 (en) | 1992-03-18 | 1993-09-30 | Yeda Research And Development Co, Ltd. | Chimeric receptor genes and cells transformed therewith |
| US5350674A (en) | 1992-09-04 | 1994-09-27 | Becton, Dickinson And Company | Intrinsic factor - horse peroxidase conjugates and a method for increasing the stability thereof |
| US5639641A (en) | 1992-09-09 | 1997-06-17 | Immunogen Inc. | Resurfacing of rodent antibodies |
| US7175843B2 (en) | 1994-06-03 | 2007-02-13 | Genetics Institute, Llc | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| US7067318B2 (en) | 1995-06-07 | 2006-06-27 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods for transfecting T cells |
| US6692964B1 (en) | 1995-05-04 | 2004-02-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Methods for transfecting T cells |
| GB9809658D0 (en) | 1998-05-06 | 1998-07-01 | Celltech Therapeutics Ltd | Biological products |
| EP2011801A1 (en) | 1999-05-27 | 2009-01-07 | Government of the United States as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Immunoconjugates having high binding affinity |
| JP2003502341A (ja) | 1999-06-16 | 2003-01-21 | マイアロス コーポレイション | 白血病阻害因子に由来するレトロ−インベルソなペプチド |
| EP1235842A4 (en) | 1999-10-15 | 2003-04-23 | Univ Massachusetts | Rna interference pathway genes as tools for targeted genetic interference |
| US6326193B1 (en) | 1999-11-05 | 2001-12-04 | Cambria Biosciences, Llc | Insect control agent |
| US6797514B2 (en) | 2000-02-24 | 2004-09-28 | Xcyte Therapies, Inc. | Simultaneous stimulation and concentration of cells |
| US7572631B2 (en) | 2000-02-24 | 2009-08-11 | Invitrogen Corporation | Activation and expansion of T cells |
| EP1257632B1 (en) | 2000-02-24 | 2007-09-12 | Xcyte Therapies, Inc. | Simultaneous stimulation and concentration of cells |
| US6867041B2 (en) | 2000-02-24 | 2005-03-15 | Xcyte Therapies, Inc. | Simultaneous stimulation and concentration of cells |
| WO2001096584A2 (en) | 2000-06-12 | 2001-12-20 | Akkadix Corporation | Materials and methods for the control of nematodes |
| US6822082B2 (en) | 2000-06-30 | 2004-11-23 | Zymogenetics, Inc. | Polynucleotides for mammalian secreted protein, Z1055G2P |
| JP5312721B2 (ja) | 2000-11-07 | 2013-10-09 | シティ・オブ・ホープ | Ｃｄ１９特異的再指向免疫細胞 |
| CN1294148C (zh) | 2001-04-11 | 2007-01-10 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 环状单链三特异抗体 |
| WO2003025020A1 (fr) | 2001-09-13 | 2003-03-27 | Institute For Antibodies Co., Ltd. | Procede pour creer une banque d'anticorps de chameaux |
| AU2003208839A1 (en) | 2002-02-13 | 2003-09-04 | Micromet Ag | De-immunized (poly)peptide constructs |
| DE10244457A1 (de) | 2002-09-24 | 2004-04-01 | Johannes-Gutenberg-Universität Mainz | Verfahren zur rationalen Mutagenese von alpha/beta T-Zell Rezeptoren und entsprechend mutierte MDM2-Protein spezifische alpha/beta T-Zell Rezeptoren |
| JP2006524036A (ja) | 2002-11-08 | 2006-10-26 | アブリンクス エン．ヴェー． | 腫瘍壊死因子αを標的とする単一ドメイン抗体およびその使用 |
| US20050129671A1 (en) | 2003-03-11 | 2005-06-16 | City Of Hope | Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells |
| US7251470B2 (en) | 2003-06-25 | 2007-07-31 | Nokia Corporation | Emergency response system with personal emergency device |
| JP5026072B2 (ja) | 2003-07-01 | 2012-09-12 | イミューノメディクス、インコーポレイテッド | 二重特異性抗体の多価キャリヤー |
| US7902338B2 (en) | 2003-07-31 | 2011-03-08 | Immunomedics, Inc. | Anti-CD19 antibodies |
| EP1660186B1 (en) | 2003-08-18 | 2013-12-25 | MedImmune, LLC | Humanization of antibodies |
| AU2004280333A1 (en) | 2003-08-22 | 2005-04-21 | Medimmune, Llc | Humanization of antibodies |
| DK1673398T3 (da) | 2003-10-16 | 2011-04-18 | Micromet Ag | Multispecifikke, deimmuniserede CD3-bindere |
| US20130266551A1 (en) | 2003-11-05 | 2013-10-10 | St. Jude Children's Research Hospital, Inc. | Chimeric receptors with 4-1bb stimulatory signaling domain |
| US7982011B2 (en) | 2003-11-25 | 2011-07-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Mutated anti-cd22 antibodies and immunoconjugates |
| US20050238626A1 (en) | 2004-04-01 | 2005-10-27 | Lili Yang | Antigen specific T cell therapy |
| JP2008512352A (ja) | 2004-07-17 | 2008-04-24 | イムクローン システムズ インコーポレイティド | 新規な四価の二重特異性抗体 |
| WO2006018833A2 (en) | 2004-08-16 | 2006-02-23 | Tadiran Spectralink Ltd. | A wearable device, system and method for measuring a pulse while a user is in motion |
| US9707302B2 (en) | 2013-07-23 | 2017-07-18 | Immunomedics, Inc. | Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer |
| ES2386367T3 (es) | 2005-03-10 | 2012-08-17 | Morphotek, Inc. | Anticuerpos anti-mesotelina |
| AU2006247565A1 (en) | 2005-05-12 | 2006-11-23 | The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of Health And Human Services | Anti-mesothelin antibodies useful for immunological assays |
| CN101370525B (zh) | 2005-08-19 | 2013-09-18 | Abbvie公司 | 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途 |
| AT503861B1 (de) | 2006-07-05 | 2008-06-15 | F Star Biotech Forsch & Entw | Verfahren zur manipulation von t-zell-rezeptoren |
| JP5840837B2 (ja) | 2007-03-30 | 2016-01-06 | メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター | 養子移入ｔリンパ球における副刺激リガンドの構成性発現 |
| GB0721686D0 (en) | 2007-11-05 | 2007-12-12 | Medinnova As | Polypeptides |
| CN101952319B (zh) | 2007-11-26 | 2015-04-15 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 抗-间皮素抗体及其用途 |
| EP2225275A4 (en) | 2007-11-28 | 2013-04-03 | Medimmune Llc | PROTEIN FORMULATION |
| KR20090092900A (ko) | 2008-02-28 | 2009-09-02 | 신준호 | 어린이 및 노약자 안전보호시스템 |
| US20090322513A1 (en) | 2008-06-27 | 2009-12-31 | Franklin Dun-Jen Hwang | Medical emergency alert system and method |
| PT3006459T (pt) | 2008-08-26 | 2021-11-26 | Hope City | Método e composições para funcionamento melhorado de efetores antitumorais de células t |
| EP2342228B1 (en) | 2008-09-12 | 2017-09-06 | Oxford University Innovation Limited | Pd-1 specific antibodies and uses thereof |
| BRPI0919840B1 (pt) | 2008-10-01 | 2023-02-28 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Molécula de anticorpo de cadeia única biespecífica, seu uso, e composição farmacêutica que a compreende |
| MX2011008843A (es) | 2009-02-23 | 2011-12-14 | Glenmark Pharmaceuticals Sa | Anticuerpos humanizados que se unen a cd19 y sus usos. |
| PL2406284T3 (pl) * | 2009-03-10 | 2017-09-29 | Biogen Ma Inc. | Przeciwciała anty-bcma |
| US9316646B2 (en) | 2009-04-23 | 2016-04-19 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Anti-human ROR1 antibodies |
| NO2490635T3 (ja) | 2009-10-23 | 2018-02-03 | ||
| US9181527B2 (en) | 2009-10-29 | 2015-11-10 | The Trustees Of Dartmouth College | T cell receptor-deficient T cell compositions |
| EP2361936B1 (en) | 2010-02-25 | 2016-04-20 | Affimed GmbH | Antigen-binding molecule and uses thereof |
| US9169328B2 (en) | 2010-03-26 | 2015-10-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Antibodies to MUC16 and methods of use thereof |
| EP2593796A4 (en) | 2010-07-16 | 2016-07-27 | Auckland Uniservices Ltd | BACTERIAL NITROREDUCTASE ENZYMES AND METHOD THEREFOR |
| EP3467101A3 (en) | 2010-09-08 | 2019-06-19 | Baylor College of Medicine | Immunotherapy of brain tumor using geneticially engineered gd2-specific t cells |
| CN103459425B (zh) | 2010-10-27 | 2015-11-25 | 安进研发（慕尼黑）股份有限公司 | 用于治疗dlbcl的组合物 |
| WO2012058460A2 (en) | 2010-10-27 | 2012-05-03 | Baylor College Of Medicine | Chimeric cd27 receptors for redirecting t cells to cd70-positive malignancies |
| WO2012075158A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-07 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Chimeric rabbit/human ror1 antibodies |
| PH12013501201A1 (en) * | 2010-12-09 | 2013-07-29 | Univ Pennsylvania | Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer |
| GB201020995D0 (en) | 2010-12-10 | 2011-01-26 | Bioinvent Int Ab | Biological materials and uses thereof |
| TWI589589B (zh) | 2010-12-20 | 2017-07-01 | 建南德克公司 | 抗間皮素（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）抗體及免疫接合物 |
| HUE035281T2 (en) | 2011-01-14 | 2018-05-02 | Univ California | Therapeutic antibodies against ror-1 protein and methods for use of same |
| SG192010A1 (en) | 2011-01-18 | 2013-08-30 | Univ Pennsylvania | Compositions and methods for treating cancer |
| KR101551555B1 (ko) | 2011-03-17 | 2015-09-08 | 밀테니 비오텍 게앰베하 | Tcr 알파/베타가 고갈된 세포 제제 |
| IL285335B2 (en) | 2011-04-08 | 2023-12-01 | Us Health | Chimeric antigen receptors against epidermal growth factor receptor variant III and their use in cancer treatment |
| MX2014003176A (es) | 2011-09-16 | 2015-08-05 | Univ Pennsylvania | Celulas t diseñadas mediante arn para el tratamiento de cancer. |
| KR101471647B1 (ko) | 2011-10-26 | 2014-12-11 | 국립암센터 | 변이 ｃｔｌａ4 유전자 이입 ｔ 세포 및 이를 포함하는 항암 면역치료용 조성물 |
| WO2013063419A2 (en) | 2011-10-28 | 2013-05-02 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | A fully human, anti-mesothelin specific chimeric immune receptor for redirected mesothelin-expressing cell targeting |
| WO2013067492A1 (en) | 2011-11-03 | 2013-05-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Isolated b7-h4 specific compositions and methods of use thereof |
| WO2013070468A1 (en) | 2011-11-08 | 2013-05-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Glypican-3-specific antibody and uses thereof |
| TWI679212B (zh) | 2011-11-15 | 2019-12-11 | 美商安進股份有限公司 | 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子 |
| AR089114A1 (es) | 2011-12-09 | 2014-07-30 | Amgen Res Munich Gmbh | PREVENCION DE LOS EFECTOS ADVERSOS CAUSADOS POR LOS ANTICUERPOS BIESPECIFICOS EpCAMxCD3 |
| AU2013221672B2 (en) | 2012-02-13 | 2017-11-09 | Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute | Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof |
| CA2863799C (en) | 2012-02-22 | 2020-09-01 | Matthew J. FRIGAULT | Compositions and methods for generating a persisting population of t cells useful for the treatment of cancer |
| EP2817331B1 (en) | 2012-02-22 | 2023-08-30 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Use of the cd2 signaling domain in second-generation chimeric antigen receptors |
| EP3421489B1 (en) | 2012-03-23 | 2021-05-05 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Anti-mesothelin chimeric antigen receptors |
| CN110295186A (zh) | 2012-04-11 | 2019-10-01 | 美国卫生和人力服务部 | 靶向b-细胞成熟抗原的嵌合抗原受体 |
| US20130280220A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Nabil Ahmed | Chimeric antigen receptor for bispecific activation and targeting of t lymphocytes |
| US9127081B2 (en) | 2012-05-10 | 2015-09-08 | Washington University | Tumor targeted TNF-related apoptosis inducing ligand fusion polypeptide and nucleic acids encoding the same |
| AU2013266733B2 (en) * | 2012-05-25 | 2018-07-05 | Cellectis | Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant T cell for immunotherapy |
| EP3584256A1 (en) | 2012-07-13 | 2019-12-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of assessing the suitability of transduced t cells for administration |
| US9765156B2 (en) | 2012-07-13 | 2017-09-19 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Enhancing activity of CAR T cells by co-introducing a bispecific antibody |
| WO2014011993A2 (en) | 2012-07-13 | 2014-01-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Epitope spreading associated with car t-cells |
| US10780118B2 (en) | 2012-08-20 | 2020-09-22 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Method and compositions for cellular immunotherapy |
| ES2666131T3 (es) | 2012-09-27 | 2018-05-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Anticuerpos de mesotelina y métodos para provocar una potente actividad antitumoral |
| EP2904106A4 (en) | 2012-10-01 | 2016-05-11 | Univ Pennsylvania | COMPOSITIONS AND METHOD FOR TARGETING CURRIC ACIDS FOR THE TREATMENT OF CANCER |
| EP2903637B1 (en) | 2012-10-02 | 2019-06-12 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Compositions and methods for immunotherapy |
| US10117896B2 (en) | 2012-10-05 | 2018-11-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of a trans-signaling approach in chimeric antigen receptors |
| CA2892059C (en) | 2012-11-21 | 2023-02-14 | Wuhan Yzy Biopharma Co., Ltd. | Bispecific antibody |
| US8697359B1 (en) | 2012-12-12 | 2014-04-15 | The Broad Institute, Inc. | CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products |
| US20150329640A1 (en) | 2012-12-20 | 2015-11-19 | Bluebird Bio, Inc. | Chimeric antigen receptors and immune cells targeting b cell malignancies |
| US9963513B2 (en) | 2013-02-05 | 2018-05-08 | Engmab Sàrl | Method for the selection of antibodies against BCMA |
| SG11201507026WA (en) | 2013-02-06 | 2015-10-29 | Anthrogenesis Corp | Modified t lymphocytes having improved specificity |
| HUE036250T2 (hu) | 2013-02-15 | 2018-06-28 | Univ California | Kiméra antigénreceptor és eljárások az alkalmazására |
| US9573988B2 (en) * | 2013-02-20 | 2017-02-21 | Novartis Ag | Effective targeting of primary human leukemia using anti-CD123 chimeric antigen receptor engineered T cells |
| CA2896370A1 (en) | 2013-02-26 | 2014-09-04 | Roche Glycart Ag | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
| KR20230152160A (ko) | 2013-02-26 | 2023-11-02 | 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 | 면역치료용 조성물 및 방법 |
| WO2014134412A1 (en) | 2013-03-01 | 2014-09-04 | Regents Of The University Of Minnesota | Talen-based gene correction |
| AU2014225788B2 (en) | 2013-03-05 | 2018-03-29 | Baylor College Of Medicine | Engager cells for immunotherapy |
| IL300508A (en) | 2013-03-15 | 2023-04-01 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Preparations and methods for immunotherapy |
| BR112015023752B1 (pt) | 2013-03-15 | 2023-11-14 | Zyngenia, Inc. | Domínio de reconhecimento modular (mrd), complexo compreendendo mrd e cetuximabe, usos do complexo para inibir a angiogênese e tratar câncer e composição farmacêutica compreendendo o dito complexo |
| AR095374A1 (es) | 2013-03-15 | 2015-10-14 | Amgen Res (Munich) Gmbh | Moléculas de unión para bcma y cd3 |
| US9446105B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-09-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Chimeric antigen receptor specific for folate receptor β |
| WO2014152177A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Anthrogenesis Corporation | Modified t lymphocytes |
| TWI654206B (zh) | 2013-03-16 | 2019-03-21 | 諾華公司 | 使用人類化抗－ｃｄ１９嵌合抗原受體治療癌症 |
| WO2014165707A2 (en) | 2013-04-03 | 2014-10-09 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Effective generation of tumor-targeted t-cells derived from pluripotent stem cells |
| LT3546572T (lt) | 2013-05-13 | 2024-05-27 | Cellectis | Cd19 specifinis chimerinis antigeno receptorius ir jo panaudojimas |
| US11311575B2 (en) | 2013-05-13 | 2022-04-26 | Cellectis | Methods for engineering highly active T cell for immunotherapy |
| EP3004168A4 (en) | 2013-05-24 | 2017-03-01 | Board of Regents, The University of Texas System | Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies |
| ES2883131T3 (es) | 2013-05-29 | 2021-12-07 | Cellectis | Métodos para la modificación de células T para inmunoterapia utilizando el sistema de nucleasa CAS guiado por ARN |
| DK3309248T3 (da) | 2013-05-29 | 2021-08-02 | Cellectis | Fremgangsmåde til manipulering af T-celler til immunterapi under anvendelse af et RNA-guidet CAS-nuklease-system |
| AU2014287011A1 (en) | 2013-07-12 | 2016-02-25 | Zymeworks Inc. | Bispecific CD3 and CD19 antigen binding constructs |
| EP3027755B1 (en) | 2013-08-02 | 2019-10-09 | The Regents of The University of California | Engineering antiviral t cell immunity through stem cells and chimeric antigen receptors |
| CN106163556B (zh) | 2013-09-25 | 2024-04-09 | 西托姆克斯治疗公司 | 基质金属蛋白酶底物和其它可切割部分及其使用方法 |
| GB201317929D0 (en) | 2013-10-10 | 2013-11-27 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
| ES2741308T3 (es) | 2013-10-15 | 2020-02-10 | Scripps Research Inst | Interruptores de células T con receptores de antígenos quiméricos y usos de los mismos |
| KR102339240B1 (ko) | 2013-10-15 | 2021-12-15 | 더 스크립스 리서치 인스티튜트 | 펩타이드 키메라 항원 수용체 t 세포 스위치 및 이의 용도 |
| WO2015092024A2 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Cellectis | Method of engineering multi-input signal sensitive t cell for immunotherapy |
| EP3087101B1 (en) | 2013-12-20 | 2024-06-05 | Novartis AG | Regulatable chimeric antigen receptor |
| WO2015095895A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Tagged chimeric effector molecules and receptors thereof |
| CN106459182B (zh) | 2013-12-30 | 2021-09-03 | 岸迈生物科技有限公司 | 串联fab免疫球蛋白及其用途 |
| ES2701846T3 (es) | 2014-01-14 | 2019-02-26 | Cellectis | Receptor de antígeno quimérico que usa dominios de reconocimiento de antígenos derivados de pez cartilaginoso |
| EP3097117B1 (en) * | 2014-01-21 | 2023-10-04 | Novartis Ag | Enhanced antigen presenting ability of car t cells by co-introduction of costimulatory molecules |
| TWI681969B (zh) | 2014-01-23 | 2020-01-11 | 美商再生元醫藥公司 | 針對ｐｄ-１的人類抗體 |
| EP3097123A1 (en) | 2014-01-24 | 2016-11-30 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Anti-ny-br-1 polypeptides, proteins, and chimeric antigen receptors |
| MX2016010171A (es) | 2014-02-04 | 2017-02-15 | Us Health | Metodos para producir celulas t autologas utiles para tratar desordenes de celulas b y otros tipos de cancer, y composiciones de las mismas. |
| WO2015123642A1 (en) | 2014-02-14 | 2015-08-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Chimeric antigen receptors and methods of making |
| HUE041497T2 (hu) | 2014-02-14 | 2019-05-28 | Cellectis | Immunsejteken és patológiás sejteken egyaránt jelen lévõ antigént célzó génmódosított sejtek immunterápia célra |
| CA2939711C (en) | 2014-02-21 | 2020-09-29 | Cellectis | Method for in situ inhibition of regulatory t cells |
| US9139649B2 (en) | 2014-02-25 | 2015-09-22 | Immunomedics, Inc. | Humanized anti-CD22 antibody |
| KR101605421B1 (ko) | 2014-03-05 | 2016-03-23 | 국립암센터 | B 세포 림프종 세포를 특이적으로 인지하는 단일클론항체 및 이의 용도 |
| EP3119425B1 (en) | 2014-03-15 | 2020-09-23 | Novartis AG | Regulatable chimeric antigen receptor |
| ES2939760T3 (es) | 2014-03-15 | 2023-04-26 | Novartis Ag | Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico para antígenos |
| LT3708579T (lt) | 2014-04-01 | 2024-07-25 | Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh | Klaudinui-6 specifiniai imunoreceptoriai ir t ląstelių epitopai |
| US10316101B2 (en) | 2014-04-14 | 2019-06-11 | Cellectis | BCMA (CD269) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy |
| MX382102B (es) | 2014-04-25 | 2025-03-13 | 2Seventy Bio Inc | Métodos mejorados para la elaboración de terapias celulares adoptivas. |
| CN106536549B (zh) | 2014-04-25 | 2020-01-17 | 蓝鸟生物公司 | Mnd启动子嵌合抗原受体 |
| EP3166968B1 (en) | 2014-05-02 | 2021-09-22 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Compositions and methods of chimeric autoantibody receptor t cells |
| WO2015177349A1 (en) | 2014-05-23 | 2015-11-26 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti- egfr conformational single domain antibodies and uses thereof |
| WO2015179801A1 (en) | 2014-05-23 | 2015-11-26 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Car based immunotherapy |
| EP4166148A1 (en) | 2014-06-06 | 2023-04-19 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Mesothelin-targeted chimeric antigen receptors and uses thereof |
| AU2015289644A1 (en) | 2014-07-15 | 2017-02-02 | Juno Therapeutics, Inc. | Engineered cells for adoptive cell therapy |
| EP3172237A2 (en) | 2014-07-21 | 2017-05-31 | Novartis AG | Treatment of cancer using humanized anti-bcma chimeric antigen receptor |
| RU2747457C2 (ru) | 2014-07-24 | 2021-05-05 | Блубёрд Био, Инк. | Химерные антигенные рецепторы к bcma |
| BR112017001821A2 (pt) | 2014-07-29 | 2017-11-21 | Cellectis | receptores de antígenos quiméricos específicos de ror1 (ntrkr1) para imunoterapia de câncer |
| EP2982692A1 (en) | 2014-08-04 | 2016-02-10 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA |
| EP3177711B1 (en) | 2014-08-07 | 2024-04-24 | Northwestern University | Use of ligands for the programmed cell death receptor conjugated to solid supports for the expansion of human regulatory t cells |
| WO2016019969A1 (en) | 2014-08-08 | 2016-02-11 | Ludwig-Maximilians-Universität München | Subcutaneously administered bispecific antibodies for use in the treatment of cancer |
| CA2994927A1 (en) | 2014-08-08 | 2016-02-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | High affinity pd-1 agents and methods of use |
| CA2957929A1 (en) | 2014-08-12 | 2016-02-18 | Anthrogenesis Corporation | Car-t lymphocytes engineered to home to lymph node b cell zone, skin, or gastrointestinal tract |
| EP3186284B1 (en) | 2014-08-28 | 2022-04-06 | BioAtla, Inc. | Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells |
| GB201415347D0 (en) | 2014-08-29 | 2014-10-15 | Ucl Business Plc | Signalling system |
| WO2016036678A1 (en) | 2014-09-02 | 2016-03-10 | Medimmune, Llc | Formulations of bispecific antibodies |
| WO2016040441A1 (en) | 2014-09-09 | 2016-03-17 | Unum Therapeutics | Chimeric receptors and uses thereof in immune therapy |
| BR122024000360A2 (pt) | 2014-09-19 | 2024-02-27 | City Of Hope | Molécula de ácido nucleico, população de células t humanas transduzidas por um vetor que compreende um cassete de expressão que codifica um receptor de antígeno quimérico e seu uso |
| WO2016054520A2 (en) * | 2014-10-03 | 2016-04-07 | The California Institute For Biomedical Research | Engineered cell surface proteins and uses thereof |
| KR20170068539A (ko) | 2014-10-07 | 2017-06-19 | 셀렉티스 | Ｃａｒ―유도된 면역 세포들 활성의 조절 방법 |
| KR102727919B1 (ko) | 2014-10-20 | 2024-11-11 | 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 | 입양 세포 치료에서 투여를 위한 방법 및 조성물 |
| EP3212225A4 (en) † | 2014-10-31 | 2018-10-17 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Methods and compositions for modified t cells |
| EP3215139B1 (en) | 2014-11-03 | 2020-08-19 | Cerus Corporation | Compositions and methods for improved car-t cell therapies |
| SG10202002324SA (en) | 2014-11-05 | 2020-05-28 | Juno Therapeutics Inc | Methods for transduction and cell processing |
| CA2968162A1 (en) | 2014-11-20 | 2016-05-26 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Common light chains and methods of use |
| EP3023437A1 (en) | 2014-11-20 | 2016-05-25 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA |
| US10201606B2 (en) | 2014-11-26 | 2019-02-12 | Miltenyi Biotec Gmbh | Combination immunotherapy of antigen-recognizing receptors and hematopoietic cells for the treatment of diseases |
| EP3029067A1 (en) | 2014-12-01 | 2016-06-08 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Use of blocking-reagents for reducing unspecific T cell-activation |
| US20180334490A1 (en) | 2014-12-03 | 2018-11-22 | Qilong H. Wu | Methods for b cell preconditioning in car therapy |
| CN107206025A (zh) | 2014-12-03 | 2017-09-26 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 用于过继细胞治疗的方法和组合物 |
| EP3029068A1 (en) | 2014-12-03 | 2016-06-08 | EngMab AG | Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA for use in the treatment of diseases |
| AU2015357533B2 (en) | 2014-12-05 | 2021-10-07 | Eureka Therapeutics, Inc. | Antibodies targeting B-cell maturation antigen and methods of use |
| FI3227432T3 (fi) | 2014-12-05 | 2024-01-09 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | B-solujen kypsymisantigeeniin kohdistuvia kimeerisiä antigeenireseptoreita ja niiden käyttötarkoituksia |
| CA2969864A1 (en) | 2014-12-05 | 2016-06-09 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Chimeric antigen receptors targeting g-protein coupled receptor and uses thereof |
| EP3233095A2 (en) | 2014-12-17 | 2017-10-25 | Cellectis | INHIBITORY CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (iCAR OR N-CAR) EXPRESSING NON-T CELL TRANSDUCTION DOMAIN |
| EP3037170A1 (en) | 2014-12-27 | 2016-06-29 | Miltenyi Biotec GmbH | Multisort cell separation method |
| AU2015374296B2 (en) | 2014-12-29 | 2021-09-02 | Novartis Ag | Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells |
| WO2016115274A1 (en) | 2015-01-14 | 2016-07-21 | Compass Therapeutics Llc | Multispecific immunomodulatory antigen-binding constructs |
| WO2016115482A1 (en) | 2015-01-16 | 2016-07-21 | Novartis Pharma Ag | Phosphoglycerate kinase 1 (pgk) promoters and methods of use for expressing chimeric antigen receptor |
| CA2973964A1 (en) | 2015-01-16 | 2016-07-21 | Juno Therapeutics, Inc. | Antibodies and chimeric antigen receptors specific for ror1 |
| GB201501175D0 (en) | 2015-01-23 | 2015-03-11 | Univ Oslo Hf | A universal T-cell for personalised medicine |
| CN107835820B (zh) | 2015-01-26 | 2021-10-15 | 芝加哥大学 | 识别癌症特异性IL13Rα2的CAR T细胞 |
| WO2016126608A1 (en) | 2015-02-02 | 2016-08-11 | Novartis Ag | Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof |
| WO2016123675A1 (en) | 2015-02-05 | 2016-08-11 | The University Of Queensland | Targeting constructs for delivery of payloads |
| WO2016127043A1 (en) | 2015-02-05 | 2016-08-11 | Stc.Unm | Anti-pre-bcr antagonists and methods |
| US20160228547A1 (en) | 2015-02-06 | 2016-08-11 | Batu Biologics, Inc. | Chimeric antigen receptor targeting of tumor endothelium |
| WO2016130598A1 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Bi-specific chimeric antigen receptor and uses thereof |
| JP6846352B2 (ja) | 2015-02-12 | 2021-03-24 | ユニバーシティー ヘルス ネットワーク | キメラ抗原受容体 |
| US20160237407A1 (en) | 2015-02-17 | 2016-08-18 | Batu Biologics, Inc. | Universal donor chimeric antigen receptor cells |
| WO2016132366A1 (en) | 2015-02-18 | 2016-08-25 | Enlivex Therapeutics Ltd. | Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment |
| US10590182B2 (en) | 2015-02-24 | 2020-03-17 | The Regents Of The University Of California | Binding-triggered transcriptional switches and methods of use thereof |
| BR112017018770A2 (pt) | 2015-03-02 | 2018-04-17 | Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. | redução da tolerância imunológica induzida por pd-l1 |
| EP3265481B1 (en) | 2015-03-05 | 2024-05-01 | Fred Hutchinson Cancer Center | Immunomodulatory fusion proteins and uses thereof |
| GB201504840D0 (en) | 2015-03-23 | 2015-05-06 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
| KR20170134525A (ko) | 2015-04-02 | 2017-12-06 | 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 | Tnfrsf14 / hvem 단백질 및 이의 이용 방법 |
| AU2016264323B2 (en) | 2015-05-18 | 2021-02-18 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins |
| JP7085988B2 (ja) | 2015-06-19 | 2022-06-17 | セバスチャン コボルド | Ｐｄ－１－ｃｄ２８融合タンパク質および医療におけるその使用 |
| CN114133448A (zh) | 2015-06-23 | 2022-03-04 | 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 | 新型pd-1免疫调节剂 |
| WO2017004150A1 (en) | 2015-06-29 | 2017-01-05 | The Johns Hopkins University | Immune checkpoint chimeric antigen receptors therapy |
| WO2017040945A1 (en) | 2015-09-04 | 2017-03-09 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immune cell compositions and methods of use |
| CN106519037B (zh) | 2015-09-11 | 2019-07-23 | 科济生物医药（上海）有限公司 | 可活化的嵌合受体 |
| ES2920525T3 (es) | 2015-10-05 | 2022-08-05 | Prec Biosciences Inc | Células genéticamente modificadas que comprenden un gen de región constante alfa del receptor de linfocitos T humano modificado |
| CN107614519B (zh) | 2015-10-23 | 2022-08-05 | 优瑞科生物技术公司 | 抗体/t细胞受体嵌合构建体及其用途 |
| US11020429B2 (en) | 2015-11-05 | 2021-06-01 | Juno Therapeutics, Inc. | Vectors and genetically engineered immune cells expressing metabolic pathway modulators and uses in adoptive cell therapy |
| CN105331585A (zh) | 2015-11-13 | 2016-02-17 | 科济生物医药（上海）有限公司 | 携带pd-l1阻断剂的嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞 |
| AU2016366226B2 (en) | 2015-12-09 | 2023-06-01 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immune cell compositions and methods of using same |
| MA44140A (fr) | 2015-12-22 | 2021-05-19 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Récepteur d'antigène chimérique (car) contre la mésothéline et anticorps contre l'inhibiteur de pd-l1 pour une utilisation combinée dans une thérapie anticancéreuse |
| WO2017139623A1 (en) | 2016-02-10 | 2017-08-17 | Immunomedics, Inc. | Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers |
| EP3433280B1 (en) | 2016-03-22 | 2023-04-19 | F. Hoffmann-La Roche AG | Protease-activated t cell bispecific molecules |
| EP3433269B1 (en) | 2016-03-23 | 2023-09-27 | Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) | Fusion proteins of pd-1 and 4-1bb |
| BR112018070073A2 (pt) | 2016-04-01 | 2019-02-12 | Kite Pharma, Inc. | receptores de antígeno quimérico e célula t e métodos de uso |
| WO2017214452A1 (en) | 2016-06-08 | 2017-12-14 | Xencor, Inc. | Treatment of igg4-related diseases with anti-cd19 antibodies crossbinding to cd32b |
| EP3494138A1 (en) | 2016-08-02 | 2019-06-12 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| CN109863242A (zh) | 2016-08-30 | 2019-06-07 | 纪念斯隆-凯特林癌症中心 | 用于治疗病毒感染和其它感染的免疫细胞组合物和使用方法 |
| WO2018067993A1 (en) | 2016-10-07 | 2018-04-12 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for t-cell receptors reprogramming using fusion proteins |
| CN110177803A (zh) | 2016-11-22 | 2019-08-27 | T细胞受体治疗公司 | 用于使用融合蛋白进行tcr重新编程的组合物和方法 |
| AU2017382902A1 (en) | 2016-12-21 | 2019-07-18 | TCR2 Therapeutics Inc. | Engineered T cells for the treatment of cancer |
| US20190330306A1 (en) | 2016-12-22 | 2019-10-31 | Windmil Therapeutics, Inc. | Compositions and Methods for Modulating the Immune System |
| CA3050835A1 (en) | 2017-01-23 | 2018-07-26 | Carsgen Therapeutics Co., Ltd. | Bcma-targeting antibody and use thereof |
| AU2018251150B2 (en) | 2017-04-13 | 2024-05-09 | Albert-Ludwigs-Universität Freiburg | New sequence specific reagents targeting CCR5 in primary hematopoietic cells |
| CN110662547A (zh) | 2017-04-26 | 2020-01-07 | 优瑞科生物技术公司 | 表达嵌合活化受体及嵌合刺激受体的细胞及其用途 |
| WO2018232020A1 (en) | 2017-06-13 | 2018-12-20 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| MX2020004185A (es) | 2017-09-27 | 2021-01-08 | Univ Southern California | Nuevas plataformas para coestimulacion, nuevos diseños car y otras mejoras para terapia celular adoptiva. |
| GB201800298D0 (en) | 2018-01-09 | 2018-02-21 | Autolus Ltd | Method |
| CA3089318A1 (en) | 2018-02-01 | 2019-08-08 | Pfizer Inc. | Chimeric antigen receptors targeting cd70 |
| CA3093449A1 (en) | 2018-03-09 | 2019-09-12 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| WO2019222275A2 (en) | 2018-05-14 | 2019-11-21 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using inducible fusion proteins |
| TW202023580A (zh) | 2018-07-26 | 2020-07-01 | 美商Ｔｃｒ２療法股份有限公司 | 使用靶特異性融合蛋白進行ｔｃｒ再程式化之組合物及方法 |
| US11932698B2 (en) | 2018-08-29 | 2024-03-19 | Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. | Anti-mesothelin chimeric antigen receptor (CAR) constructs and uses thereof |
| EP3844192A1 (en) | 2018-08-30 | 2021-07-07 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| EP3941494A4 (en) | 2019-03-22 | 2022-12-21 | TCR2 Therapeutics Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS OF TCR REPROGRAMMING USING FUSION PROTEINS |
| US20220362295A1 (en) | 2019-04-22 | 2022-11-17 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| US20210130438A1 (en) | 2019-10-28 | 2021-05-06 | The Broad Institute, Inc. | Pan-cancer t cell exhaustion genes |
| US20230338421A1 (en) | 2020-01-10 | 2023-10-26 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for autoimmunity regulation |
| WO2021155034A1 (en) | 2020-01-29 | 2021-08-05 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using muc16 specific fusion proteins |
| AU2021268953A1 (en) | 2020-05-05 | 2022-12-08 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for TCR reprogramming using CD70 specific fusion proteins |
| WO2022020720A1 (en) | 2020-07-24 | 2022-01-27 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for treating cancer |
| WO2022056321A1 (en) | 2020-09-10 | 2022-03-17 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using gpc3 specific fusion proteins |
| WO2022177966A1 (en) | 2021-02-16 | 2022-08-25 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for the treatment of hiv |
| US20230065936A1 (en) | 2021-04-09 | 2023-03-02 | Tcr2 Therapeutics Inc | Compositions and methods for treating cancer |
| WO2023044039A1 (en) | 2021-09-16 | 2023-03-23 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for treating cancer |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0638119A1 (en) * | 1992-03-18 | 1995-02-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Chimeric receptor genes and cells transformed therewith |
| JPH07505282A (ja) * | 1992-03-18 | 1995-06-15 | イエダ リサーチ アンド デベロプメント カンパニイ リミテッド | キメラ受容体遺伝子およびこれを用いて形質転換した細胞 |
| JP2012508164A (ja) * | 2008-11-07 | 2012-04-05 | マイクロメット アーゲー | 急性リンパ芽球性白血病の治療 |
| EP2258720A1 (en) * | 2009-05-19 | 2010-12-08 | Max Delbrück Centrum für Molekulare Medizin (MDC) Berlin-Buch; | Multiple target T cell receptor |
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