[go: up one dir, main page]

JP2020506890A - 合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のパターン化された投与 - Google Patents

合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のパターン化された投与 Download PDF

Info

Publication number
JP2020506890A
JP2020506890A JP2019537184A JP2019537184A JP2020506890A JP 2020506890 A JP2020506890 A JP 2020506890A JP 2019537184 A JP2019537184 A JP 2019537184A JP 2019537184 A JP2019537184 A JP 2019537184A JP 2020506890 A JP2020506890 A JP 2020506890A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
dose
administration
post
aav
synthetic nanocarrier
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2019537184A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2020506890A5 (ja
Inventor
イリンスキー，ピョートル
タカシ ケイ． キシモト
タカシ ケイ． キシモト
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Cartesian Therapeutics Inc
Original Assignee
Selecta Biosciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Selecta Biosciences Inc filed Critical Selecta Biosciences Inc
Publication of JP2020506890A publication Critical patent/JP2020506890A/ja
Publication of JP2020506890A5 publication Critical patent/JP2020506890A5/ja
Priority to JP2023020085A priority Critical patent/JP2023071721A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/001—Preparations to induce tolerance to non-self, e.g. prior to transplantation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6907—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a microemulsion, nanoemulsion or micelle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A61K47/6937—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol the polymer being PLGA, PLA or polyglycolic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16H—HEALTHCARE INFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR THE HANDLING OR PROCESSING OF MEDICAL OR HEALTHCARE DATA
    • G16H20/00—ICT specially adapted for therapies or health-improving plans, e.g. for handling prescriptions, for steering therapy or for monitoring patient compliance
    • G16H20/10—ICT specially adapted for therapies or health-improving plans, e.g. for handling prescriptions, for steering therapy or for monitoring patient compliance relating to drugs or medications, e.g. for ensuring correct administration to patients
    • G16H20/17—ICT specially adapted for therapies or health-improving plans, e.g. for handling prescriptions, for steering therapy or for monitoring patient compliance relating to drugs or medications, e.g. for ensuring correct administration to patients delivered via infusion or injection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10042—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector virus or viral particle as vehicle, e.g. encapsulating small organic molecule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A90/00—Technologies having an indirect contribution to adaptation to climate change
    • Y02A90/10—Information and communication technologies [ICT] supporting adaptation to climate change, e.g. for weather forecasting or climate simulation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Primary Health Care (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本明細書において提供されるのは、ウイルスベクターおよび免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与するための方法および関連する組成物である。いくつかの態様において、本明細書において提供される方法および組成物は、導入遺伝子発現の改善および／または免疫応答の低下、例えばＩｇＭおよび／またはＩｇＧ免疫応答の下方制御を達成する。

Description

関連出願
本願は、２０１７年１月７日に出願された米国仮出願番号62/443,658、２０１７年１月１２日に出願された米国仮出願番号62/445,637、および２０１７年８月１４日に出願された米国仮出願番号62/545,412に対する３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９下における優先権の利益を主張し、これらの各々の全内容は、本明細書において参考として援用される。
発明の分野
本発明は、少なくとも部分的に、ウイルスベクターおよび免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与するための、方法、および関連する組成物に関する。いくつかの態様において、本明細書において提供される方法および組成物は、導入遺伝子発現の増大および／または免疫応答の低下、例えばウイルスベクターに対するＩｇＭおよび／またはＩｇＧ免疫応答の下方制御を達成する。
一側面において、
ウイルスベクターおよび免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを対象に１回目に共投与すること、ならびに
１回目の共投与の前および／または後の１回以上の時点において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与すること、
を含む方法が提供され、
ここで、前および／または後の免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与は、１回目の共投与のそれぞれ前または後、１か月、２週間、１週間、１日、１２時間、６時間、１時間、３０分、または１５分以内に起こる。
本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、方法は、ウイルスベクターと免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとを２回目に対象に共投与すること、ならびに、２回目の共投与の前および／または後の１回以上の時点において免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを投与することをさらに含み、ここで、前および／または後の免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与は、２回目の共投与のそれぞれ前または後、１か月、２週間、１週間、１日、１２時間、６時間、１時間、３０分、または１５分以内に起こる。
一側面において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとウイルスベクターとを対象に共投与すること、ならびに免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの少なくとも１回のプレ用量および／または少なくとも１回のポスト用量を、ウイルスベクターなしで対象に投与することを含む方法が提供される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、少なくとも１回のプレ用量および少なくとも１回のポスト用量が、対象に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、少なくとも２回のプレ用量が、対象に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、少なくとも２回のポスト用量が、対象に投与される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、共投与が、対象において繰り返される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの少なくとも１回のプレ用量および／または少なくとも１回のポスト用量が、ウイルスベクターなしで、各々の繰り返し投与ステップにより対象に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、少なくとも１回のプレ用量および少なくとも１回のポスト用量が、各々の繰り返し投与ステップにより対象に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、少なくとも２回のプレ用量が、各々の繰り返し投与ステップにより対象に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、少なくとも２回のポスト用量が、各々の繰り返し投与ステップにより対象に投与される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１か月以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後２週間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１週間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後３日間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後２日間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１日以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１２時間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後６時間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１時間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後３０分以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１５分以内に起こる。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のプレ用量および／またはポスト用量は、共投与ステップの３日以内に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のプレ用量および／またはポスト用量は、共投与ステップの２日以内に投与される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のポスト用量は、共投与ステップの後、隔週で投与される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のプレ用量の免疫抑制剤の量は、各々の共投与ステップの免疫抑制剤の量と同じである。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のポスト用量の免疫抑制剤の量は、各々の共投与ステップの免疫抑制剤の量と同じである。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のプレ用量、ポスト用量および／または共投与ステップは、静脈内投与によるものである。
一側面において、第１の対象に、（１）（ａ）合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の用量と（ｂ）ウイルスベクターの用量とを共投与すること、ならびに（２）（ｃ）合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤のプレ用量および／またはポスト用量を、ウイルスベクターの用量なしで投与することを含む方法が提供され、ここで、（ａ）および（ｃ）の免疫抑制剤の量は、一緒に、ウイルスベクターと共投与された場合に、合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のプレ用量またはポスト用量なしで、ウイルスベクターに対する免疫応答を低下させるか、または第２の対象においてウイルスベクターの導入遺伝子発現を増大させる、合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の用量の免疫抑制剤の量に等しい。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、（ｃ）のプレ用量またはポスト用量の免疫抑制剤の量は、（ｄ）の量の半分以下である。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、（ｃ）のプレ用量またはポスト用量の免疫抑制剤の量は、（ｄ）の量の半分である。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量およびポスト用量が、（ｃ）において第１の対象に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、（ｃ）のプレ用量およびポスト用量の免疫抑制剤の量は、同じである。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、（ａ）の免疫抑制剤の量は、（ｃ）のプレ用量またはポスト用量の量と同じである。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、（ｃ）において、少なくとも２回のプレ用量が、第１の対象に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、（ｃ）において、少なくとも２回のポスト用量が、第１の対象に投与される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、（１）および（２）は、繰り返される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後、１か月以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後２週間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１週間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後３日間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後２日間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１日以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１２時間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後６時間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１時間以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後３０分以内に起こる。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１５分以内に起こる。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のプレ用量および／またはポスト用量は、共投与ステップの３日以内に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のプレ用量および／またはポスト用量は、共投与ステップの２日以内に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のポスト用量は、共投与ステップの後、隔週で投与される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、各々のプレ用量、ポスト用量および／または共投与ステップは、静脈内投与によるものである。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターは、１つ以上の発現制御配列を含む。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、１つ以上の発現制御配列は、肝臓特異的プロモーターを含む。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、１つ以上の発現制御配列は、構成的プロモーターを含む。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、方法は、１つ以上の時点において対象におけるウイルスベクターに対するＩｇＭおよび／またはＩｇＧ応答を評価することをさらに含む。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ＩｇＭおよび／またはＩｇＧ応答を評価する時点のうちの少なくとも１つは、共投与の後である。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターと免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとは、各々の共投与のために混合される。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターである。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、アデノ随伴ウイルスベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０またはＡＡＶ１１アデノ随伴ウイルスベクターである。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、共投与および／またはプレ用量および／またはポスト用量の免疫抑制剤は、ＮＦ−ｋＢ経路の阻害剤である。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、共投与および／またはプレ用量および／またはポスト用量の免疫抑制剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシンである。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、合成ナノキャリアにカップリングされている。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、合成ナノキャリア中にカプセル化されている。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、共投与および／またはプレ用量および／またはポスト用量の合成ナノキャリアは、脂質ナノ粒子、ポリマー性ナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤ベースのエマルジョン、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤ、ウイルス様粒子またはペプチドもしくはタンパク質粒子を含む。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアは、ポリマー性ナノ粒子を含む。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ポリマー性ナノ粒子は、ポリエステル、ポリエーテルに結合したポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ポリマー性ナノ粒子は、ポリエステルまたはポリエーテルに結合したポリエステルを含む。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ポリエステルは、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−グリコール酸コポリマー）またはポリカプロラクトンを含む。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ポリマー性ナノ粒子は、ポリエステルおよびポリエーテルに結合したポリエステルを含む。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、ポリエーテルは、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの集団の動的光散乱を用いて得られる粒子サイズ分布の平均は、１１０ｎｍより大きい直径である。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、１５０ｎｍより大きい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、２００ｎｍより大きい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、２５０ｎｍより大きい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、５μｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、４μｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、３μｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、２μｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、１μｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、７５０ｎｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、５００ｎｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、４５０ｎｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、４００ｎｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、３５０ｎｍより小さい。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、直径は、３００ｎｍより小さい。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の負荷量は、合成ナノキャリア全体の平均で、０．１％〜５０％（重量／重量）である。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、負荷量は、０．１％〜２５％である。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、負荷量は、１％〜２５％である。提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、負荷量は、２％〜２５％である。
提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、合成ナノキャリアの集団のアスペクト比は、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７または１：１０より大きい。
一側面において、各々が例えば請求項のうちのいずれか１つにおいて記載されるような、本明細書において提供されるプレ用量のうちのいずれか１つの１つ以上、または本明細書において提供されるポスト用量のうちのいずれか１つの１つ以上、ならびに、ウイルスベクターによる共投与のための、本明細書において提供される免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのうちのいずれか１つの用量、を含むキットが提供される。
提供されるキットのうちのいずれか１つの一態様において、キットは、本明細書において提供されるウイルスベクターのうちのいずれか１つの用量をさらに含む。
提供されるキットのうちのいずれか１つの一態様において、キットは、本明細書において提供されるプレ用量のうちのいずれか１つの１つ以上、および本明細書において提供されるポスト用量のうちのいずれか１つの１つ以上を含む。
提供されるキットのうちのいずれか１つの一態様において、キットは、使用のための指示をさらに含む。提供されるキットのうちのいずれか１つの一態様において、使用のための指示は、本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つを実施するための指示を含む。
提供されるキットのうちのいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターによる投与のための免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、例えば請求項のうちのいずれか１つにおいて記載されるような、本明細書において提供される免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのうちのいずれか１つである。
提供されるキットのうちのいずれか１つの一態様において、ウイルスベクターは、例えば請求項のうちのいずれか１つにおいて記載されるような、本明細書において提供されるウイルスベクターのうちのいずれか１つである。
本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つの一態様において、前および／または後の免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与は、ウイルスベクターの投与を含まない。
別の側面において、本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つの合成ナノキャリアのうちのいずれか１つまたはその組み合わせを含むキットが提供される。提供されるキットのうちのいずれか１つの一態様において、キットは、本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つのウイルスベクターをさらに含む。提供されるキットのうちのいずれか１つの一態様において、キットは、本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つの１つ以上のプレ用量および／またはポスト用量をさらに含む。
図１Ａおよび１Ｂは、ラパマイシンを含む合成ナノキャリアを用いる、またはこれを用いない場合の、ＳＥＡＰ活性およびＡＡＶ ＩｇＧ抗体レベルを示す 図２Ａおよび２Ｂは、それぞれ、ｄ１９およびｄ７５におけるＳＥＡＰ活性を示す。 図２Ｃは、ｄ１９およびｄ７５の両方におけるＡＡＶ ＩｇＧ抗体レベルを示す。 図３Ａは、ＳＥＡＰ発現動態を示す。図３Ｂは、ｄ１２およびｄ１９におけるＡＡＶ ＩｇＧ抗体レベルを示す。 図４Ａおよび４Ｂは、ＡＡＶおよびラパマイシンを含む合成ナノキャリアの容積によるサイズ分布を示す。 図５Ａは、ＡＡＶ投与後のｄ５およびｄ１０における血清ＡＡＶ ＩｇＭを示す。図５Ｂは、ｄ７、ｄ１２、ｄ１９およびｄ８９における血清ＡＡＶ ＩｇＭを示す。
図６は、ｄ７におけるＡＡＶ ＩｇＭを、長軸方向のＡＡＶ駆動型のＳＥＡＰ発現に対して示す。 図７は、ｄ７、ｄ１２、ｄ１９およびｄ３３におけるＡＡＶ ＩｇＧ抗体レベルを示す。 図８は、ＳＥＡＰ発現動態（ｄ７−ｄ４７）を示す。 図９は、ｄ５およびｄ１３におけるＡＡＶ ＩｇＭ抗体レベルを示す。 図１０は、ｄ９、ｄ１３およびｄ２０におけるＡＡＶ ＩｇＧ抗体レベルを示す。
図１１Ａは、ＡＡＶ−ＳＥＡＰ±ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（ＳＶＰ［Rapa］）による初回ＡＡＶ接種の後の特定の時間におけるＳＥＡＰ発現動態を示すグラフである。図１１Ｂは、ＡＡＶ−ＳＥＡＰ±ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（ＳＶＰ［Rapa］）による初回ＡＡＶ接種の後の異なる時点におけるＡＡＶ ＩｇＧ形成を示すグラフである。 図１２は、ＡＡＶ−ＳＥＡＰ±ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（ＳＶＰ［Rapa］）による注射の後の特定の時間におけるＳＥＡＰ発現動態を示すグラフである。 図１３Ａは、ＡＡＶ８をプレ免疫されたマウスにおける特定の時間におけるＡＡＶ駆動型のＳＥＡＰ発現動態を示すグラフである。図１３Ｂは、ＳＶＰ［Rapa］投与の異なる組み合わせおよびレジメンによる、異なる時点における、ＡＡＶ ＩｇＧ形成を示すグラフである。 図１４Ａは、ＡＡＶ ＩｇＧを有するマウスにおける、ラパマイシンを含む合成ナノキャリア（ＳＶＰ［Rapa］）の２回の用量の後での、ＳＥＡＰ発現動態を示すグラフである。図１４Ｂは、ｄ１３９におけるＳＥＡＰ発現を示すグラフであって、ＡＡＶブースト（ｄ９２）時にラパマイシンを含む合成ナノキャリア（ＳＶＰ［Rapa］）のゼロ回または１回の用量を投与された群と、ＡＡＶブースト（ｄ９２）時にラパマイシンを含む合成ナノキャリア（ＳＶＰ［Rapa］）の２回の用量を投与された群とを比較している。 図１４Ｃは、特定の時点におけるＡＡＶ−（ＲＦＰ／ＳＥＡＰ）投与後のＡＡＶ ＩｇＧ動態を示すグラフである。図１４Ｄは、ｄ１５３におけるＡＡＶ ＩｇＧとＳＥＡＰ活性との間の負の相関関係を示すグラフである。 図１５Ａは、異なるＳＶＰ［Rapa］投与レジメン下における第１のＡＡＶ注射後の血清ＳＥＡＰ動態を示すグラフである。図１５Ｂは、ＡＡＶベクターとラパマイシンを含む合成ナノキャリア（ＳＶＰ［Rapa］）との共注射（co-injection）の後で、異なるレジメンのＳＶＰ［Rapa］投与を行った後の、ＡＡＶ ＩｇＧを示すグラフである。
図１６は、ＡＡＶとＳＶＰ［Rapa］とを共注射され、次いで異なるＳＶＰ［Rapa］レジメンで処置された群における、ｄ１１６におけるＡＡＶ ＩｇＧ測定を示す。 図１７Ａは、異なる時点（ＡＡＶプライミング用量後の日数）におけるＳＥＡＰ動態（ＡＡＶ−ＳＥＡＰ、１×１０１０ＶＧ；ｄ０／１２５）を示すグラフである。図１７Ｂは、ＥＬＩＳＡの結果を表すグラフである。グラフは、異なる処置レジメン（ｄ７、ｄ１２、ｄ１９、ｄ４７およびｄ７５における）の後のＡＡＶ ＩｇＧのレベルを示す。
発明の詳細な説明
本発明を詳細に記載する前に、本発明は、特に例示される材料またはプロセスのパラメーターに限定されるものではなく、したがって、無論変化してもよいことが理解されるべきである。また、本明細書において用いられる用語は、単に発明の特定の態様を記載することを目的とするものであって、本発明を記載するための代替的な用語の使用の限定要因となることを意図するものではないことも、理解されるべきである。
本明細書において引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、上記または下記のいずれにおいても、本明細書によりその全体において全ての目的のために参考として援用される。かかる援用は、援用された本明細書において引用される刊行物、特許および特許出願のうちの任意のものが先行技術を構成することを認めることを意図するものではない。
本明細書および添付の請求の範囲において用いられる場合、単数形「a」、「an」および「the」は、内容が明らかに他を示さない限りにおいて、複数の指示物を含む。例えば、「a polymer」に対する参照は、２つ以上のかかる分子の混合物、または単一のポリマー種の異なる分子量のものの混合物を含み、「合成ナノキャリア」に対する参照は、２つ以上のかかる合成ナノキャリアまたは複数のかかる合成ナノキャリアの混合物を含み、「a DNA molecule」に対する参照は、２つ以上のかかるＤＮＡ分子または複数のかかるＤＮＡ分子の混合物を含み、「an immunosuppressant」に対する参照は、２つ以上のかかる免疫抑制剤分子または複数のかかる免疫抑制剤分子の混合物を含む、など。
本明細書において用いられる場合、用語「含む（comprise）」またはそのバリエーション、例えば「含む（comprises）」または「含むこと（comprising）」は、任意の列記される完全体（integer）（例えば特色（a feature）、要素（element）、特徴（characteristic）、特性（property）、方法／プロセスのステップ（method/process step）もしくは限定要因（limitation））、または完全体の群（例えば特色（features）、要素（elements）、特徴（characteristics）、特性（properties）、方法／プロセスのステップ（method/process steps）もしくは限定要因（limitations））の包含を示すように読まれるべきであるが、任意の他の完全体または完全体の群の除外を示すものとして読まれるべきではない。
したがって、本明細書において用いられる場合、用語「含むこと（comprising）」は、包括的であって、さらなる、列記されていない完全体または方法／プロセスのステップを除外するものではない。
本明細書において提供される組成物および方法のうちのいずれかの態様において、「含むこと（comprising）」は、「から本質的になる（consisting essentially of）」または「からなる（consisting of）」により置き換えることができる。句「から本質的になる（consisting essentially of）」は、本明細書において、特定の完全体またはステップ、ならびに請求される発明の特徴または機能に対して物質的に影響を及ぼさないものを必要とするように用いられる。本明細書において用いられる場合、用語「からなる（consisting）」は、（例えば特色（a feature）、要素（element）、特徴（characteristic）、特性（property）、方法／プロセスのステップ（method/process step）もしくは限定要因（limitation））、または完全体の群（例えば特色（features）、要素（elements）、特徴（characteristics）、特性（properties）、方法／プロセスのステップ（method/process steps）もしくは限定要因（limitations））のみの存在を示すように用いられる。
Ａ．導入
ウイルスベクター、例えばアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づくものは、遺伝子治療などの治療的適用において多大な潜在能力を示してきた。しかし、遺伝子治療および他の適用におけるウイルスベクターの使用は、ウイルス性抗原への暴露の結果としての免疫原性に起因して、限定されてきた。ウイルスベクターに暴露された対象は、しばしば免疫応答を呈し、最終的にウイルスベクターに対する耐性を獲得することになるか、および／または著しい炎症反応に直面することになる。ウイルスベクターに対する細胞性および体液性のいずれの免疫応答も、例えば繰り返し投与に関して、かかる治療の効力を弱めるか、および／またはかかる治療を用いる能力を低下させ得る。これらの免疫応答は、抗体、Ｂ細胞およびＴ細胞応答を含み、ウイルスのキャプシドまたはコートタンパク質、またはそれらのペプチドなどの、ウイルスベクターのウイルス性抗原に対して特異的であり得る。
本発明者らは、驚くべきことに、合成ナノキャリアとウイルスベクターとの共投与と組み合わせた、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのプレ用量および／またはポスト用量を含む投与レジメンにより、改善された免疫応答の低下および／または改善された導入遺伝子発現を達成することができることを発見した。かかる改善は、合成ナノキャリアとウイルスベクターとの共投与のみ（プレ用量またはポスト用量なしでの）と比較して、顕著である。例えば、例において示されるように、ラパマイシン含有合成ナノキャリアと共投与された肝臓指向性ＡＡＶ８ベクターの注射の前および／または後の、ラパマイシン含有合成ナノキャリアのさらなる投与が、初回およびフォローアップの両方の注射の後で、ナイーブな動物およびＡＡＶ免疫動物において、最も高くかつ最も安定なレベルの導入遺伝子発現を維持したことが示された。これは、最も低いＡＡＶ抗体応答と結びついた。
加えてまた驚くべきことに、合成ナノキャリア中に含まれる場合、共投与ステップの免疫抑制剤の量を、プレ用量またはポスト用量により、共投与ステップのみ（プレ用量またはポスト用量なし）と比較して、減少させることができることを見出した。したがって、合成ナノキャリア中に含まれる場合、免疫抑制剤の量は、プレ用量および／またはポスト用量と、本明細書において提供される処置レジメンのうちのいずれか１つにおいて共投与される用量の間で、「分割」することができる。例えば、例は、合成ナノキャリア中に含まれる場合、免疫抑制剤の用量を２つの部分に分割して、第１の半分の用量を、第２の半分の用量を用いるＡＡＶベクター共注射の前に投与することが、同じ総用量の免疫抑制剤が（合成ナノキャリア中に含まれる場合で）ＡＡＶベクターにより単純に共注射された場合と比較して、導入遺伝子発現に関して、および抗ウイルスＩｇＧに対する抑制効果のために、有益であったことを示す。
加えて、驚くべきことに、ウイルスベクター投与が、ウイルスベクター投与のすぐ後に、強力なＩｇＭ免疫応答をもたらし得ることを発見した。また、いくつかの例において、ウイルスベクター投与と相対的な時点で投与された、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアが、ＩｇＭ依存的な様式において上昇した導入遺伝子発現を誘導することを発見した。特に、合成ナノキャリアは、アデノ随伴ウイルスベクターに対するＩｇＭ免疫応答の誘導を下方制御すること、および、初期ＩｇＭレベルは導入遺伝子発現と逆相関し、ウイルスベクター投与に続く高いＩｇＭ抗体レベルは、導入遺伝子発現の低いレベルと相関し、逆もまたしかりであることを見出した。さらに、この相関関係は、ウイルスベクターのさらなる投与の後で持続することが見出した。これらの発見に先立ち、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアが、可溶性タンパク質およびウイルス粒子を含む多数の抗原に対するＩｇＧ抗体応答を下方制御することが示された。しかし、ウイルスベクター投与について、例えば導入遺伝子発現などの特定の文脈においては、ＩｇＭ抗体応答などの他の免疫応答が重要である場合もある。
したがって、本発明者らは、驚くべきことに、かつ予想外に、本明細書において開示される発明を実施することにより、上記の問題および限定要因を克服することができることを発見した。処置のためのウイルスベクターの有効な使用に対する前述の障害に対する解決手段を提供する方法および組成物を提供する。本明細書において提供されるのは、本明細書において提供されるウイルスベクターコンストラクトのうちのいずれか１つを免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと組み合わせて含むウイルスベクターで、種々の異なる投与レジメンにおいて、特に免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのプレ用量および／またはポスト用量により、対象を処置するための方法および組成物である。提供される方法および関連する組成物は、ウイルスベクターの使用の改善を可能にし、ＩｇＭおよび／またはＩｇＧ免疫応答などの望ましくない免疫応答の低下をもたらすか、および／または、例えば導入遺伝子発現の増大を通しての、効力の改善をもたらすことができる。
本発明は、ここで、以下により詳細に記載されるであろう。
Ｂ．定義
「投与すること（administering）」または「投与（administration）」または「投与する（administer）」とは、材料を、対象に対して、薬理学的に有用な様式において、与えるかまたは分配することを意味する。当該用語は、「投与させること（causing to be administered）」を含むように意図される。「投与させること」とは、他者に、直接的または間接的に、当該材料を投与させること（causing）、投与することを促すこと（urging）こと、投与することを奨励すること（encouraging）、投与することを補助すること（aiding）、投与することを誘導すること（inducing ）または指示すること（directing）を意味する。投与の間の期間に言及する場合、別段に記載される場合を除いて、当該期間は、投与の開始との間の時間である。
本明細書において用いられる場合、「共投与すること（coadministering）」とは、医師が、投与の間の任意の時間が、所望される治療結果に対する影響に関して、実質的に無であるか無視可能であるとみなすであろう場合に、同じ時間における、または実質的に同じ時間における投与を指す。本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、共投与は、同時（simultaneous）投与である。「同時」とは、投与が、互いの５、４、３、２、１分以内、またはそれより短い時間内に始まることを意味する。いくつかの態様において、１つの組成物の投与の終了と別の組成物の投与の開始との間に、５、４、３、２、１分以下、またはそれより短い時間が経過する。他の態様において、１つの組成物の投与の開始と別の組成物の投与の開始との間に、５、４、３、２、１分以下、またはそれより短い時間が経過する（例えば、２つの組成物が、異なる場所においておよび／または異なる様式を介して与えられる場合など）。いくつかの態様において、同時とは、投与が同じ時間に開始されることを意味する。他の態様において、組成物は、混合されて、対象に与えられる。免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、繰り返し、例えば、２、３、４、５回またはそれより多く、ウイルスベクターと共投与してもよい。
提供される方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、ウイルスベクターと免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとの共投与は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与の前におよび／または後に（それぞれ、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのプレ用量またはポスト用量）、ウイルスベクターなしで行われる。提供される方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのプレ用量は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとウイルスベクターとの共投与の１、２または３日前に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのポスト用量は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとウイルスベクターとの共投与の１、２または３日後に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、１回より多くのプレ用量および／またはポスト用量は、各々の共投与と共に投与される。提供される方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、共投与が繰り返される場合、各々の繰り返し用量は、１または２回またはそれより多くのプレ用量に先行される。提供される方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、共投与が繰り返される場合、各々の繰り返し用量の後に、１または２回またはそれより多くのポスト用量が続く。提供される方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、各々の共投与と共に１回より多くのポスト用量が投与される場合、ポスト用量は、各々の共投与と共に、隔週で投与される。
「混合する（admix）」とは、本明細書において用いられる場合、２つ以上の構成成分の混合であって、当該２つ以上の構成成分が、組成物中に一緒に存在し、当該組成物の投与が、当該２つ以上の構成成分を対象に提供するようなものを指す。本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つの共投与のうちのいずれか１つは、混合物として投与することができる。
「有効量」とは、本明細書において提供されるような対象への投与のための組成物に関して、対象において１つ以上の所望される結果、例えば、ウイルスベクターなどに対するＩｇＭおよび／またはＩｇＧ免疫応答などの免疫応答の低下または除去、および／または有効なまたは増大した導入遺伝子発現をもたらす、組成物の量を指す。有効量は、in vitroまたはin vivoでの目的のためのものであってよい。in vivoでの目的について、量は、医師が、ウイルスベクターの投与の結果として望ましくない免疫応答を経験し得る対象のために臨床的利益を有し得るとみなすであろうものであってよい。本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つにおいて、投与される組成物は、本明細書において提供されるような有効量のうちのいずれか１つにおけるものであってよい。
有効量は、望ましくない免疫応答のレベルを低下させることを含み得るが、いくつかの態様においては、それは、望ましくない免疫応答を完全に予防することを含む。有効量はまた、望ましくない免疫応答の発生を遅延させることを含んでもよい。有効量はまた、所望される治療上のエンドポイントまたは所望される治療結果をもたらす量であってよい。提供される組成物および方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、有効量は、所望される免疫応答、例えばＩｇＭおよび／またはＩｇＧ応答などのウイルスベクターに対する免疫応答の低下もしくは除去、および／または有効な導入遺伝子の生成もしくはその発現の増大が、対象において少なくとも１か月間持続するものである。この低下もしくは除去または有効なもしくは増大した発現は、局所的にまたは全身的に測定することができる。前述のもののいずれかの達成は、慣用的な方法によりモニタリングすることができる。
有効量は、無論、処置されている特定の対象；状態、疾患または障害の重篤度；年齢、身体条件、サイズおよび体重を含む個々の患者のパラメーター；処置の期間；併用治療（あれば）の性質；投与の特定の経路、ならびに健康管理者の知識および専門技術の範囲内の類似の要因に依存するであろう。これらの要因は、当業者に周知であり、慣用的な実験のみを用いて取り組むことができる。
有効量とは、単一の材料の構成成分の用量を指してもよく、または、多数の材料の構成成分の用量を指してもよい。例えば、免疫抑制剤の有効量に言及する場合、免疫抑制剤を含む材料の単一の用量を指しても、免疫抑制剤を含む同じもしくは異なる材料の多数の用量を指してもよい。したがって、本明細書において用いられる場合、提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤の有効量は、免疫抑制剤の他の投与なしでの、本明細書において提供されるような共投与ステップにおける免疫抑制剤の量であってよい。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの他の態様においては、しかし、免疫抑制剤の量は、投与のセットのついての免疫抑制剤の総量、例えば、本明細書において提供されるようなプレ用量および／またはポスト用量の免疫抑制剤の量と組み合わせた、本明細書において提供されるような共投与の免疫抑制剤の総量である。
提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤の量は、投与のセットの間で「分割され」、総量は、別のレジメン（プレ用量またはポスト用量の投与なしで、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと共投与される場合など）により、低下した免疫応答または有効なもしくは増大したウイルスベクターの導入遺伝子発現を達成することが決定された量に基づくものであってもよい。この免疫抑制剤の総量は、プレ用量および／またはポスト用量として与えられた免疫抑制剤の量、ならびに共投与ステップとして与えられた免疫抑制剤の量の間で分配される、本明細書において提供されるようなレジメンにより投与することができる。したがって、提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、共投与される用量と組み合わされたプレ用量および／またはポスト用量の免疫抑制剤の量は、この総量に等しい。
提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、プレ用量またはポスト用量の免疫抑制剤の量は、この総量の半分以下である。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、プレ用量またはポスト用量の免疫抑制剤の量は、この総量の半分である。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、プレ用量および／またはポスト用量の免疫抑制剤の量は、共投与ステップの免疫抑制剤の量と同じであってもよい。
「免疫応答を評価すること」とは、in vitroまたはin vivoでの免疫応答のレベル、その存在または不在、その減少、その増大などの、任意の測定または決定を指す。かかる測定または決定は、対象から得られる１つ以上の試料において行うことができる。かかる評価は、本明細書において提供されるか、ＥＬＩＳＡベースのアッセイを含む当該分野において他に公知の方法のうちのいずれか１つを用いて行うことができる。評価は、例えば対象からの試料中の、ＩｇＭおよび／またはＩｇＧ抗体など（ウイルスベクターに対して特異的なものなど）の抗体の数またはパーセンテージを評価することであってよい。評価はまた、免疫応答に関する任意の効果を評価すること、例えばサイトカインの存在または不在、細胞の表現型などを測定することであってもよい。本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つは、ウイルスベクターまたはその抗原に対する免疫応答を評価するステップを含むか、これをさらに含んでもよい。評価は、直接的に行われても、間接的に行われてもよい。当該用語は、他者に、免疫応答を評価させるか、評価することを促すか、評価することを奨励するか、評価することを補助するか、評価することを誘導または指示する行動を含む。
「平均」とは、本明細書において用いられる場合、別段に記述されない限り、算術平均を指す。
「カップリングする」または「カップリングされる」（および類似のもの）は、１つの実体（例えば部分）を別のものに化学的に会合させることを意味する。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、カップリングは、共有結合性であり、これは、結合が、２つの実体の間の共有結合の存在に関して起こることを意味する。非共有結合性の態様において、非共有結合性カップリングは、電荷相互作用、アフィニティー相互作用、金属配位、物理的吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファン・デル・ワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない、非共有結合性相互作用により媒介される。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの態様において、カプセル化が、カップリングの形態である。
「用量」とは、薬理学的および／または免疫学的に活性な材料の、所与の時間にわたる対象への投与のための特定の量を指す。一般的に、本発明の方法およびキットを含む組成物における免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよび／またはウイルスベクターの用量は、別段に提供されない限り、合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の量および／またはウイルスベクターの量を指す。あるいは、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの用量に言及する場合においては、用量は、所望される量の免疫抑制剤を提供する合成ナノキャリアの数に基づいて投与してもよい。用量が、繰り返し投与に関して用いられる場合、用量は、繰り返し投与の各々の量を指し、これは、同じであっても異なっていてもよい。「プレ用量」とは、本明細書において用いられる場合、材料または材料のセットの投与の前に投与される、材料または材料のセットを指す。「ポスト用量」とは、本明細書において用いられる場合、別の材料または材料のセットの投与の後に投与される、材料または材料のセットを指す。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、プレ用量またはポスト用量の材料は、他方の投与の材料と同じであっても異なっていてもよい。好ましくは、本明細書において提供されるように、プレ用量またはポスト用量の材料は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアを含むが、ウイルスベクターを含まない。
「カプセル化する（encapsulate）」とは、合成ナノキャリア中の物質のうちの少なくとも一部を封入する（enclose）ことを意味する。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、物質は、合成ナノキャリア中に完全に封入される。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの他の態様において、封入される物質のうちの大部分または全てが、合成ナノキャリアに対して外部の局所環境に暴露されない。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの他の態様において、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％または５％（重量／重量）以下が、局所環境に暴露される。カプセル化は、吸収とは区別される。吸収は、物質のうちの大部分または全てを合成ナノキャリアの表面上に置き、物質が、合成ナノキャリアに対して外部の局所環境に暴露されたままにする。
「発現制御配列」は、発現に影響を及ぼすことができる任意の配列であって、プロモーター、エンハンサー、およびオペレーターを含み得る。ベクター内の発現制御配列、または制御エレメントは、適切な核酸の転写、翻訳、ウイルスのパッケージングなどを促進することができる。一般に、制御エレメントは、シス側で作用するが、トランス側でもまた機能し得る。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの一態様において、発現制御配列は、プロモーター、例えば構成的プロモーターまたは組織特異的プロモーターである。「構成的プロモーター」は、遍在または無差別（promiscuous）プロモーターとも称され、一般に活性であり、特定の細胞に排他的または優先的であるとは考えられていないものである。「組織特異的プロモーター」とは、特定の細胞型または組織において活性であるものであって、かかる活性は、特定の細胞型または組織に対して排他的であり得る。本明細書において提供される核酸またはウイルスベクターのうちのいずれか１つにおいて、プロモーターは、本明細書において提供されるプロモーターのうちのいずれか１つであってよい。
「ウイルスベクターに対する免疫応答」または類似のものは、抗体（例えば、ＩｇＭもしくはＩｇＧ）または細胞の応答などの任意の望ましくないウイルスベクターに対する免疫応答を指す。いくつかの態様において、望ましくない免疫応答は、ウイルスベクターまたはその抗原に対する抗原特異的免疫応答である。いくつかの態様において、免疫応答は、ウイルスベクターのウイルス性抗原に対して特異的である。他の態様において、免疫応答は、ウイルスベクターの導入遺伝子によりコードされるタンパク質またはペプチドに対して特異的である。いくつかの態様において、免疫応答は、ウイルスベクターのウイルス性抗原に対して特異的であり、ウイルスベクターの導入遺伝子によりコードされるタンパク質またはペプチドに対しては特異的でない。
いくつかの態様において、対象における低下した抗ウイルスベクター応答とは、本明細書において提供されるような投与の後に対象から得られた生体試料を用いて測定された抗ウイルスベクター免疫応答であって、本明細書において提供されるような投与を用いない、試験対象などの別の対象へのウイルスベクターの投与の後で、この他の対象から得られた生体試料を用いて測定された抗ウイルスベクター免疫応答と比較して低下したものを含む。いくつかの態様において、抗ウイルスベクター免疫応答は、本明細書において提供されるような投与の後で対象から得られた生体試料における、その後の対象の生体試料に対して行われたウイルスベクターのin vitroでのチャレンジの後の抗ウイルスベクター免疫応答であって、本明細書において提供されるような投与なしで、試験対象などの別の対象から、当該他の対象へのウイルスベクターの投与の後で得られた生体試料に対して行われたウイルスベクターのin vitroでのチャレンジの後で検出された抗ウイルスベクター免疫応答と比較して低下したものである。他の態様において、免疫応答は、別の対象において、例えば試験対象からの試料において評価することができ、ここで、当該他の対象についての結果は、スケーリングの有無にかかわらず、組織において対象において起こっているか既に起こったものの指標となることが期待されるであろう。いくつかの態様において、対象における低下した抗ウイルスベクター応答は、本明細書において提供されるような投与の後で対象から得られた生体試料を用いて測定された抗ウイルスベクター免疫応答であって、当該対象から、異なる時点において（例えば、本明細書において提供されるような投与なしで、例えば本明細書において提供されるような投与の前の時点において）得られた生体試料を用いて測定された抗ウイルスベクター免疫応答と比較して、低下したものを含む。
「免疫抑制剤」とは、好ましくはＡＰＣに対するその効果を通して、免疫寛容原性効果を引き起こすことができる化合物を意味する、免疫寛容原性効果とは、一般に、ＡＰＣまたは他の免疫細胞による、抗原に対する望ましくない免疫応答を耐久性のある様式において全身性および／または局所性に軽減、阻害または予防する調節を指す。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、ＡＰＣに、１つ以上の免疫エフェクター細胞における制御性の表現型を促進させるものである。例えば、制御性の表現型とは、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の産生の阻害、誘導、刺激または動員、抗原特異的抗体の産生の阻害、Ｔｒｅｇ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞）の産生、誘導、刺激または動員などにより特徴づけることができる。これは、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の制御性の表現型への変換の結果であり得る。これはまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞、マクロファージおよびｉＮＫＴ細胞などの他の免疫細胞におけるＦｏｘＰ３の誘導の結果でもあり得る。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、ＡＰＣが抗原をプロセッシングした後に、ＡＰＣの応答に影響を及ぼすものである。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤は、抗原のプロセッシングを妨害するものではない。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのさらなる態様において、免疫抑制剤は、アポトーシス性のシグナル伝達分子ではない。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤は、リン脂質ではない。
免疫抑制剤として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：スタチン；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシンアナログ（すなわち、ラパログ）；ＴＧＦ−βシグナル伝達剤；ＴＧＦ−β受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、例えばトリコスタチンＡ；副腎皮質ステロイド；ミトコンドリアの機能の阻害剤、例えばロテノン；Ｐ３８阻害剤；ＮＦ−κβ阻害剤、例えば６Ｂｉｏ、デキサメタゾン、ＴＣＰＡ−１、ＩＫＫ ＶＩＩ；アデノシン受容体アゴニスト；プロスタグランジンＥ２アゴニスト（ＰＧＥ２）、例えばミソプロストール；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えばホスホジエステラーゼ４阻害剤（ＰＤＥ４）、例えばロリプラム；プロテアソーム阻害剤；キナーゼ阻害剤；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；グルココルチコイド；レチノイド；サイトカイン阻害剤；サイトカイン受容体阻害剤；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；カルシニューリン阻害剤；ホスファターゼ阻害剤；ＰＩ３ＫＢ阻害剤、例えばＴＧＸ−２２１；オートファジー阻害剤、例えば３−メチルアデニン；アリール炭化水素受容体阻害剤；プロテアソーム阻害剤Ｉ（ＰＳＩ）；ならびに酸化型ＡＴＰ、例えばＰ２Ｘ受容体遮断薬。免疫抑制剤としてまた、以下が挙げられる：ＩＤＯ、ビタミンＤ３、レチノイン酸、シクロスポリン、例えばシクロスポリンＡ、アリール炭化水素受容体阻害剤、レスベラトロール、アザチオプリン（Ａｚａ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、ＦＫ５０６、サングリフェリン（sanglifehrin）Ａ、サルメテロール、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、アスピリンおよび他のＣＯＸ阻害剤、ニフルミン酸、エストリオールおよびトリプトライド。他の例次的な免疫抑制剤として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：小分子薬、天然の生成物、抗体（例えば、ＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ４に対する抗体）、生物製剤（biologics）ベースの薬物、炭水化物ベースの薬物、ＲＮＡｉ、アンチセンス核酸、アプタマー、メトトレキサート、ＮＳＡＩＤ；フィンゴリモド；ナタリズマブ；アレムツズマブ；抗ＣＤ３；タクロリムス（ＦＫ５０６）、アバタセプト、ベラタセプトなど。「ラパログ」とは、本明細書において用いられる場合、ラパマイシン（シロリムス）に構造的に関連する分子（アナログ）を指す。ラパログの例として、限定することなく、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９）、エベロリムス（ＲＡＤ００１）、リダフォロリムス（ＡＰ−２３５７３）、およびゾタロリムス（ＡＢＴ−５７８）が挙げられる。ラパログのさらなる例は、例えばＷＯ公開WO 1998/002441および米国特許第8,455,510号において見出すことができ、それらのラパログは、その全体において本明細書において参考として援用される。さらなる免疫抑制剤は、当業者には公知であり、本発明は、このことに関して限定されない。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの態様において、免疫抑制剤は、本明細書において提供される剤のうちのいずれか１つ、例えば前述のもののうちのいずれか１つを含んでもよい。
「導入遺伝子発現を増大させること」とは、対象におけるウイルスベクターの導入遺伝子発現のレベルを増大させることを指し、導入遺伝子は、ウイルスベクターにより送達されるものである。いくつかの態様において、導入遺伝子発現のレベルは、対象における多様な目的の組織または系における導入遺伝子タンパク質濃度を測定することにより決定することができる。あるいは、導入遺伝子の発現生成物が核酸である場合、導入遺伝子発現のレベルは、導入遺伝子の核酸生成物により測定することができる。導入遺伝子発現を増大させることは、例えば、対象から得られた試料中の導入遺伝子発現の量を測定して、それを前の試料と比較することにより、決定することができる。試料は、組織試料であってもよい。いくつかの態様において、導入遺伝子発現は、フローサイトメトリーを用いて測定することができる。他の態様において、増大した導入遺伝子発現は、別の対象において、例えば試験対象からの試料において、評価することができ、ここで、当該他の対象についての結果は、スケーリングの有無にかかわらず、組織において対象において起こっているか、または既に起こったことの指標となることが期待されるであろう。本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つは、増大した導入遺伝子発現をもたらし得る。
「負荷量（load）」とは、免疫抑制剤が合成ナノキャリア中に含まれる場合、例えばそれにカップリングされる場合、合成ナノキャリア全体における材料の総乾燥処方重量（重量／重量）に基づく、合成ナノキャリア中の免疫抑制剤の量である。一般に、かかる負荷量は、合成ナノキャリアの集合全体にわたる平均として計算される。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの一態様において、負荷量は、合成ナノキャリア全体の平均で、０．１％〜９９％である。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの別の態様において、負荷量は、０．１％〜５０％である。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの別の態様において、負荷量は、０．１％〜２０％である。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのさらなる態様において、負荷量は、０．１％〜１０％である。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのなおさらなる態様において、負荷量は、１％〜１０％ｖ。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのなおさらなる態様において、負荷量は、７％〜２０％である。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのさらに別の態様において、負荷量は、合成ナノキャリアの集合全体の平均で、少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．４％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも０．７％、少なくとも０．８％、少なくとも０．９％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％である。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのさらにさらなる態様において、負荷量は、合成ナノキャリアの集合全体の平均で、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％または２０％である。上の態様のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、負荷量は、合成ナノキャリアの集合全体の平均で、２５％以下である。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの態様において、負荷量は、当該分野において知られているように計算される。
「合成ナノキャリアの最大寸法」とは、合成ナノキャリアの任意の軸に沿って測定されるナノキャリアの最大の寸法を意味する。「合成ナノキャリアの最小寸法」とは、合成ナノキャリアの任意の軸に沿って測定される合成ナノキャリアの最小の寸法を意味する。例えば、球体の合成ナノキャリアについては、合成ナノキャリアの最大および最小寸法は、実質的に同一であり、その直径のサイズであろう。同様に、立方体状の合成ナノキャリアについて、合成ナノキャリアの最小寸法は、その高さ、幅または長さのうちの最小のものであり、一方、合成ナノキャリアの最大寸法は、その高さ、幅または長さのうちの最大のものであろう。一態様において、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいて、試料中の合成ナノキャリアのうちの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法が、１００ｎｍに等しいかまたはこれより大きい。一態様において、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいて、試料中の合成ナノキャリアのうちの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法が、５μｍに等しいかまたはこれより小さい。好ましくは、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいて、試料中の合成ナノキャリアのうちの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法が、１１０ｎｍより大きく、より好ましくは１２０ｎｍより大きく、より好ましくは１３０ｎｍより大きく、より好ましくは１５０ｎｍよりなお大きい。合成ナノキャリアの最大寸法と最小寸法とのアスペクト比は、態様に依存して変化し得る。例えば、合成ナノキャリアの最大寸法の最小寸法に対するアスペクト比は、１：１〜１，０００，０００：１、好ましくは１：１〜１００，０００：１、より好ましくは１：１〜１０，０００：１、より好ましくは１：１〜１０００：１、なおより好ましくは１：１〜１００：１、さらにより好ましくは１：１〜１０：１で変化し得る。好ましくは、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいて、試料中の合成ナノキャリアのうちの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、３μｍに等しいかまたはこれより小さく、より好ましくは２μｍに等しいかまたはこれより小さく、より好ましくは１μｍに等しいかまたはこれより小さく、より好ましくは８００ｎｍに等しいかまたはこれより小さく、より好ましくは６００ｎｍに等しいかまたはこれより小さく、より好ましくはなお５００ｎｍに等しいかまたはこれより小さい。好ましい態様において、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいて、試料中の合成ナノキャリアのうちの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍと等しいかまたはこれより大きく、より好ましくは１２０ｎｍと等しいかまたはこれより大きく、より好ましくは１３０ｎｍと等しいかまたはこれより大きく、より好ましくは１４０ｎｍと等しいかまたはこれより大きく、より好ましくは１５０ｎｍとなお等しいかまたはこれより大きい。合成ナノキャリアの寸法（例えば有効直径）の測定値は、いくつかの態様において、液体（通常は水性）の媒質中に合成ナノキャリアを懸濁し、動的光散乱（ＤＬＳ）を用いる（例えばBrookhaven ZetaPALS装置を用いる）ことにより得ることができる。例えば、合成ナノキャリアの懸濁液を、水性バッファーから精製水中に希釈して、約０．０１〜０．１ｍｇ／ｍＬの最終的な合成ナノキャリア懸濁液濃度を達成することができる。希釈された懸濁液は、ＤＬＳ分析のための好適なキュベットの内部で直接調製しても、これに移してもよい。キュベットを、次いで、ＤＬＳ中に置き、制御された温度に平衡化させ、次いで、媒質の粘性および試料の屈折率についての適切なインプットに基づいて、安定かつ再現可能な分布を得るために十分な時間にわたりスキャンすることができる。有効直径、または分布の平均を、次いで報告する。高アスペクト比、または非球形の、合成ナノキャリアの有効サイズを決定することは、より正確な測定値を得るために、電子顕微鏡などの増加的な技術を必要とし得る。合成ナノキャリアの「寸法」または「サイズ」または「直径」は、例えば動的光散乱を用いて得られる、粒子サイズ分布の平均を意味する。
「薬学的に受入可能な賦形剤」または「薬学的に受入可能なキャリア」は、組成物を処方するために薬理学的に活性な材料と一緒に用いられる、薬理学的に不活性な材料を意味する。薬学的に受入可能な賦形剤は、当該分野において公知の多様な材料を含み、これは、多糖（例えばグルコース、ラクトースなど）、抗菌剤などの保存剤、再構成補助剤、着色剤、食塩水（例えばリン酸緩衝化食塩水）、およびバッファーを含むが、これらに限定されない。
「繰り返し用量」または「繰り返し投与」または類似のものは、同じ材料のより早い用量または投与の後で対象に投与される材料または材料のセットの、少なくとも１回のさらなる用量または投与を意味する。材料は同じであってもよく、一方、繰り返し用量または投与中の材料の量は、異なっていてもよい。
「対象」は、ヒトおよび霊長類などの温血哺乳動物；鳥類；ネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマおよびブタなどの飼育された家庭または農場の動物；マウス、ラットおよびモルモットなどの研究動物；魚類；爬虫類；動物園および野生の動物などを含む動物を意味する。本明細書において用いられる場合、対象は、本明細書において提供される方法または組成物のうちのいずれか１つを必要とするものであってよい。本明細書において提供される「第２の対象」または「別の対象」とは、投与が提供されている対象とは異なる別の対象を指す。この対象は、試験対象などの任意の他の対象であってよく、この対象は、同じまたは異なる種のものであってよい。好ましくは、この第２の対象は、合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤のプレ用量またはポスト用量を投与されることなく、合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤とウイルスベクターとの共投与により、ウイルスベクターに対する低下した免疫応答または有効なもしくは増大したウイルスベクターの導入遺伝子発現が達成されているものである。したがって、提供される方法のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、第２の対象または別の対象は、低下した免疫応答または増大した導入遺伝子発現を達成するために、共投与のみを受けている。この共投与の免疫抑制剤の量を用いて、記載される方法のうちのいずれか１つによる、または本明細書において提供される組成物のうちのいずれか１つにおける使用のための、本明細書において提供されるような用量を決定することができる。この量は、類似のまたはより優れた効果を達成するために、プレ用量および／またはポスト用量と共投与される用量との間で分配することができる。
提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、第２のまたは他の対象が異なる種のものである場合、量は、投与を受けることになる対象の種について適切であるようにスケーリングすることができ、このスケーリングされた量は、本明細書において提供されるように、合計として用いることができる。例えば、非比例的なスケーリングまたは他のスケーリング方法を用いることができる。第２の対象または他の対象における免疫応答、ならびに導入遺伝子発現は、当業者に公知の、または本明細書において別段に提供されるような慣用的な方法を用いて、評価することができる。本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つは、本明細書において記載されるような第２のまたは他の対象におけるこれらの量のうちの１つ以上を決定することを含むか、これをさらに含んでもよい。
「合成ナノキャリア」は、天然において見出されない分散した物体であって、サイズが５マイクロンより小さいかまたはこれと等しい少なくとも１つの寸法を有する者を意味する。アルブミンナノ粒子は、一般に合成ナノキャリアとして含まれるが、しかし、ある態様において、合成ナノキャリアは、アルブミンナノ粒子を含まない。態様において、合成ナノキャリアは、キトサンを含まない。他の態様において、合成ナノキャリアは、脂質ベースのナノ粒子ではない。さらなる態様において、合成ナノキャリアは、リン脂質を含まない。
合成ナノキャリアは、これらに限定されないが、１つまたは複数の脂質ベースのナノ粒子（本明細書においてまた、脂質ナノ粒子、すなわち、それらの構造を構成する材料のうちの大部分が脂質であるナノ粒子としても言及される）、ポリマー性ナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤ベースのエマルジョン、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤ、ウイルス様粒子（すなわち、ウイルスの構造タンパク質から主に構成されるが、感染性ではないか、低い感染性を有する粒子）、ペプチドまたはタンパク質ベースの粒子（本明細書においてまた、タンパク質粒子、すなわち、それらの構造を構成する材料のうちの大部分がペプチドまたはタンパク質である粒子としても言及される）（アルブミンナノ粒子など）、および／または脂質−ポリマーナノ粒子などのナノ材料の組み合わせを用いて開発されるナノ粒子であってよい。合成ナノキャリアは、球状、立方体状、錐体状、長方形、円柱状、環状体状などを含むがこれらに限定されない、多様な異なる形状であってよい。本発明による合成ナノキャリアは、１つ以上の表面を含む。本発明の実施における使用のために適応させることができる例示的な合成ナノキャリアは、以下を含む：（１）Grefらに対する米国特許5,543,158において開示される生分解性ナノ粒子、（２）Saltzmanらに対する公開された米国特許出願20060002852のポリマー性ナノ粒子、（３）DeSimoneらに対する公開された米国特許出願20090028910のリソグラフィーにより構築されたナノ粒子、（４）von Andrianらに対するWO 2009/051837の開示、（５）Penadesらに対する公開された米国特許出願2008/0145441において開示されるナノ粒子、（６）de los Riosらに対する公開された米国特許出願20090226525において開示されるタンパク質ナノ粒子、（７）Sebbelらに対する公開された米国特許出願20060222652において開示されるウイルス様粒子、（８）Bachmannらに対する公開された米国特許出願20060251677において開示されるウイルス様粒子に結合した核酸、（９）WO2010047839A1またはWO2009106999A2において開示されるウイルス様粒子、（１０）P. Paolicelli et al.,「Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles」Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)において開示されるナノ沈殿された（nanoprecipitated）ナノ粒子、（１１）米国公開2002/0086049において開示されるアポトーシス細胞、アポトーシス小体、または合成もしくは半合成の模倣物、あるいは（１２）Lookら、「Nanogel-based delivery of mycophenolic acid ameliorates systemic lupus erythematosus in mice」J. Clinical Investigation 123(4):1741-1749 (2013)のもの。
約１００ｎｍと等しいかまたはこれより小さい、好ましくは１００ｎｍと等しいかまたはこれより小さい最小寸法を有する、本発明による合成ナノキャリアは、補体を活性化するヒドロキシル基を有する表面を含まないか、あるいは、補体を活性化するヒドロキシル基ではない部分から本質的になる表面を含む。好ましい態様において、約１００ｎｍと等しいかまたはこれより小さい、好ましくは１００ｎｍと等しいかまたはこれより小さい最小寸法を有する、本発明による合成ナノキャリアは、補体を実質的に活性化する表面を含まないか、あるいは、補体を実質的に活性化しない部分から本質的になる表面を含む。より好ましい態様において、約１００ｎｍと等しいかまたはこれより小さい、好ましくは１００ｎｍと等しいかまたはこれより小さい最小寸法を有する、本発明による合成ナノキャリアは、補体を活性化する表面を含まないか、あるいは、補体を活性化しない部分から本質的になる表面を含む。態様において、合成ナノキャリアは、ウイルス様粒子を除外する。態様において、合成ナノキャリアは、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７より大きい、または１：１０より大きいアスペクト比を有していてもよい。
「ウイルスベクターの導入遺伝子」または「導入遺伝子」または類似のものは、それを細胞中に輸送するためにウイルスベクターが用いられる核酸材料であって、細胞中に輸送された後、本明細書において記載されるような治療的適用などのために、発現されてそれぞれタンパク質または核酸分子を生成するものを指す。「発現される」または「発現」または類似のものは、細胞中に導入遺伝子が形質導入されて、形質導入された細胞によりプロセッシングされた後の、機能的な（すなわち、所望される目的のために生理学的に活性である）遺伝子生成物の合成を指す。かかる遺伝子生成物はまた、本明細書において、「導入遺伝子発現生成物」としても言及される。発現された生成物は、したがって、結果として生じる、導入遺伝子によりコードされる、タンパク質または核酸、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは治療用ＲＮＡである。
「ウイルスベクター」は、核酸などのペイロードを細胞に送達することができるか、これを送達する、ウイルスベースの送達系を意味する。一般に、当該用語は、キャプシドおよび／またはコートタンパク質などのウイルス構成成分（これはまた、ペイロードを含んでもよいか、またはこれを含む（およびそのように適応させられている）を有する、ウイルスベクターコンストラクトを指す。いくつかの態様において、ペイロードは、導入遺伝子をコードする。いくつかの態様において、導入遺伝子は、治療用タンパク質、ＤＮＡ結合タンパク質またはエンドヌクレアーゼなどの、本明細書において提供されるタンパク質をコードするものである。他の態様において、導入遺伝子は、ガイドＲＮＡ、アンチセンス核酸、ｓｎＲＮＡ、ＲＮＡｉ分子（例えば、ｄｓＲＮＡまたはｓｓＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、または三重鎖形成オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）などをコードする。他の態様において、ペイロードは、それ自体が治療的である核酸であって、送達された核酸の発現は必要でない。例えば、核酸は、合成ｓｉＲＮＡなどのｓｉＲＮＡであってもよい。
いくつかの態様において、ペイロードはまた、他の構成成分、例えば逆位末端反復配列（ＩＴＲ）、マーカーなどをコードしていてもよい。ペイロードはまた、発現制御配列を含んでもよい。発現制御ＤＮＡ配列として、プロモーター、エンハンサー、およびオペレーターが挙げられ、一般に、発現コンストラクトが利用されることになる発現系に基づいて選択される。いくつかの態様において、プロモーターおよびエンハンサー配列は、遺伝子発現を増加させる能力のために選択されるが、一方、オペレーター配列は、遺伝子発現を制御する能力のために選択され得る。ペイロードはまた、いくつかの態様においては、宿主細胞における相同組み換えを亢進し（facilitate）、好ましくはこれを促進する（promote）配列を含んでもよい。
例示的な発現制御配列として、プロモーター配列、例えば、サイトメガロウイルスプロモーター；ラウス肉腫ウイルスプロモーター；およびサルウイルス４０プロモーター；ならびに本明細書において他の場所で開示されるか、当該分野において他に公知の任意の他の型のプロモーターが挙げられる。一般に、プロモーターは、所望される発現生成物をコードする配列の上流（すなわち５’）に作動的に連結される。ペイロードはまた、コード配列の下流（すなわち３’）に作動的に連結された好適なポリアデニル化配列（例えば、ＳＶ４０またはヒト成長ホルモン遺伝子のポリアデニル化配列）を含んでもよい。
一般に、ウイルスベクターは、１つ以上の所望される核酸を細胞中に形質導入することができるように、操作される。加えて、本明細書において提供される治療的適用のために、ウイルスベクターは複製欠損であることがこのましいことが、理解されるであろう。ウイルスベクターは、限定することなく、レトロウイルス（例えば、マウスレトロウイルス、トリレトロウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ））、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウィルス、アデノ随伴ウイルス、アルファウイルスなどに基づいていてよい。他の例は、本明細書において他の場所において提供されるか、当該分野において公知である。ウイルスベクターは、本明細書において提供されるもののうちのいずれか１つなどの、ウイルスの天然のバリアント、株、または血清型に基づいていてもよい。ウイルスベクターはまた、分子進化を通して選択されるウイルスに基づいていてもよい（例えば、J.T. Koerber et al, Mol. Ther. 17(12):2088-2095および米国特許第6,09,548を参照）。ウイルスベクターは、限定することなく、ＡＡＶ８またはＡＡＶ２などのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づいていてもよい。ウイルスベクターはまた、Ａｎｃ８０に基づいていてもよい。したがって、本明細書において提供されるＡＡＶベクターまたはＡｎｃ８０ベクターは、それぞれＡＡＶまたはＡｎｃ８０に基づくウイルスベクターであり、核酸材料の送達のためにそれをパッケージングすることができるウイルスの構成成分、例えばキャプシドおよび／またはタンパク質などのを有する。ＡＡＶベクターの他の例として、これらに限定されないが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、またはＡＡＶ−２ｉ８またはそれらのバリアントに基づくものが挙げられる。ウイルスベクターはまた、操作されたベクター、組み換えベクター、変異体ベクター、またはハイブリッドベクターであってもよい。かかるベクターを作製する方法は、当業者には明らかであろう。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、「キメラウイルスベクター」である。かかる態様において、このことは、ウイルスベクターが、１つより多くのウイルスまたはウイルスベクターに由来するウイルスの構成成分から構成されることを意味する。例えば、ＰＣＴ公開WO01/091802およびWO14/168953、ならびに米国特許第6,468,771を参照。かかるウイルスベクターは、例えば、ＡＡＶ８／Ａｎｃ８０またはＡＡＶ２／Ａｎｃ８０ウイルスベクターであってよい。
さらなるウイルスベクターエレメントは、シス側またはトランス側において機能することができる。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、ベクターゲノムを含み、これはまた、標的（ドナー）配列の５’または３’末端に隣接する１つ以上の逆位末端反復（ＩＴＲ）配列、転写を促進する発現制御エレメント（例えばプロモーターまたはエンハンサー）、イントロン配列、スタッファー（stuffer）／フィラー（filler）ポリヌクレオチド配列（一般に、不活性配列）、および／または標的（ドナー）配列の３’末端に位置するポリ（Ａ）配列を含む。
Ｃ．本発明の方法における使用のための組成物
重要なことに、本明細書において提供される方法および組成物は、ウイルスベクターの投与による効果の改善を提供する。したがって、本明細書において提供される方法および組成物は、ウイルスベクターによる対象の処置のために有用である。かかるウイルスベクターは、遺伝子治療などを含む多様な目的のために核酸を送達するために用いることができる。上述のとおり、ウイルスベクターに対する免疫応答は、その効力に対して有害な影響を及ぼし得、また、その再投与を妨害し得る。重要なことに、本明細書において提供される方法および組成物は、導入遺伝子の発現の改善を達成すること、および／またはウイルスベクターに対する免疫応答を低下させることにより、前述の障害を克服することを見出した。本発明者らは、驚くべきことに、合成ナノキャリアとウイルスベクターとの共投与と組み合わせた、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのプレ用量および／またはポスト用量を含む投与レジメンにより、免疫応答の低下および／または導入遺伝子発現の改善を達成することができることを発見した。加えてまた驚くべきことに、合成ナノキャリア中に含まれる場合、共投与ステップの免疫抑制剤の量を、プレ用量またはポスト用量により、共投与ステップのみと比較して減少させることができることを見出した。したがって、本明細書において提供される処置レジメンのうちのいずれか１つにおいて、免疫抑制剤の量は、合成ナノキャリア中に含まれる場合、プレ用量および／またはポスト用量と共投与される用量との間で「分割」することができる。
また、上述のとおり、ウイルスベクター投与が、ウイルスベクター投与のすぐ後に、ＩｇＭ免疫応答をもたらし得ることを発見した。また、ウイルスベクターと相対的な時間において投与された、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアが、ＩｇＭ依存的な様式において、上昇した導入遺伝子発現を誘導することができることを発見した。
導入遺伝子
ウイルスベクターのペイロードは、導入遺伝子であってよい。例えば、導入遺伝子は、所望される発現生成物、例えば、ポリペプチド、タンパク質、タンパク質混合物、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、機能的ＲＮＡ分子（例えば、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、ＲＮＡレプリコン、または他の目的の生成物をコードしていてもよい。
例えば、導入遺伝子の発現生成物は、対象（例えば疾患または障害を有する対象）にとって有益なタンパク質またはその部分であってもよい。タンパク質は、細胞外、細胞内、または膜結合タンパク質であってもよい。例えば、導入遺伝子は、酵素、血液派生物（blood derivatives）、ホルモン、インターロイキンおよびインターフェロンなどのリンホカイン、凝固剤（coagulant）、増殖因子、神経伝達物質、腫瘍抑制因子、アポリポタンパク質、抗原、および抗体をコードしていてもよい。対象は、それにより当該タンパク質の対象の内因性のバージョンが欠損しているか、または限定された量において産生されるか、もしくは全く産生されない、疾患または障害を有するか、これを有することが疑われてもよい。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの他の態様において、導入遺伝子の発現生成物は、対象にとって有益な遺伝子またはその部分であってよい。
治療用タンパク質の例として、これらに限定されないが、注入可能または注射可能な治療用タンパク質、酵素、酵素コファクター、ホルモン、血液または血液凝固因子、サイトカインおよびインターフェロン、増殖因子、アディポカインなどが挙げられる。
注入可能または注射可能な治療用タンパク質の例として、例えば、トシリズマブ（Roche/Actemra（登録商標））、アルファ−１アンチトリプシン（Kamada/AAT）、ヘマタイド（登録商標）（AffymaxおよびTakeda、合成ペプチド）、アルブインターフェロンアルファ−２ｂ（Novartis/Zalbin（商標））、Rhucin（登録商標）（Pharming Group、Ｃ１阻害剤置換療法）、テサモレリン（Theratechnologies/Egrifta、合成の成長ホルモン放出因子）、オクレリズマブ（Genentech、RocheおよびBiogen）、ベリムマブ（GlaxoSmithKline/Benlysta（登録商標））、ペグロチカーゼ（Savient Pharmaceuticals/Krystexxa（商標））、タリグルセラーゼアルファ（Protalix/Uplyso）、アガルシダーゼアルファ（Shire/Replagal（登録商標））、およびベラグルセラーゼアルファ（Shire）が挙げられる。
酵素の例として、リゾチーム、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、ウリカーゼ、グリコシダーゼ、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、コラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ヘパリナーゼ、ヘパラナーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、溶解素およびリガーゼが挙げられる。酵素の他の例として、酵素置換療法のために用いられるものが挙げられ、これは、これらに限定されないが、イミグルセラーゼ（例えばCEREZYME（商標））、ａ−ガラクトシダーゼＡ（a-gal A）（例えば、アガルシダーゼベータ、FABRYZYME（商標））、酸性ａ−ガラクトシダーゼ（ＧＡＡ）（例えば、アルグルコシダーゼアルファ、LUMIZYME（商標）、MYOZYME（商標））、およびアリールスルファターゼＢ（例えば、ラロニダーゼ、ALDURAZYME（商標）、イデュルスルファーゼ、ELAPRASE（商標）、アリールスルファターゼＢ、NAGLAZYME（商標））を含む。
ホルモンの例として、以下が挙げられる：メラトニン（Ｎ−アセチル−５−メトキシトリプタミン）、セロトニン、チロキシン（またはテトラヨードチロニン）（甲状腺ホルモン）、トリヨードチロニン（甲状腺ホルモン）、エピネフリン（またはアドレナリン）、ノルエピネフリン（またはノルアドレナリン）、ドーパミン（またはプロラクチン阻害ホルモン）、抗ミュラー管ホルモン（antimullerian hormone）（またはミュラー管阻害因子またはホルモン）、アディポネクチン、副腎皮質刺激ホルモン（またはコルチコトロピン）、アンジオテンシノーゲンおよびアンジオテンシン、抗利尿ホルモン（またはバソプレシン、アルギニンバソプレシン）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（またはアトリオペプチン）、カルシトニン、コレシストキニン、コルチコトロピン放出ホルモン、エリスロポエチン、濾胞刺激ホルモン、ガストリン、グレリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）、ＧＩＰ、ゴナドトロピン放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ヒト胎盤性ラクトゲン、成長ホルモン、インヒビン、インスリン、インスリン様増殖因子（またはソマトメジン）、レプチン、黄体化ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、オレキシン、オキシトシン、副甲状腺ホルモン、プロラクチン、レラキシン、セクレチン、ソマトスタチン、トロンボポエチン、甲状腺刺激ホルモン（またはチロトロピン）、チロトロピン放出ホルモン、コルチゾール、アルドステロン、テストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステンジオン、ジヒドロテストステロン、エストラジオール、エストロン、エストリオール、プロゲステロン、カルシトリオール（１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）、カルシジオール（２５−ヒドロキシビタミンＤ３）、プロスタグランジン、ロイコトリエン、プロスタサイクリン、トロンボキサン、プロラクチン放出ホルモン、リポトロピン、脳性ナトリウム利尿ペプチド、ニューロペプチドＹ、ヒスタミン、エンドセリン、膵臓ポリペプチド、レニン、およびエンケファリン。
血液または血液凝固因子の例として、以下が挙げられる：第Ｉ因子（フィブリノーゲン）、第ＩＩ因子（プロトロンビン）、組織因子、第Ｖ因子（プロアクセレリン（proaccelerin）、不安定な因子）、第ＶＩＩ因子（安定な因子、プロコンバーチン）、第ＶＩＩＩ因子（抗血友病性グロブリン）、第ＩＸ因子（クリスマス因子または血漿トロンボプラスチン構成成分）、第Ｘ因子（Stuart-Prower因子）、第Ｘａ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子（Hageman因子）、第ＸＩＩＩ因子（フィブリン安定化因子）、フォン・ヴィルブランド因子、フォン・ヘルデブラント（von Heldebrant）因子、プレカリクレイン（フレッチャー因子）、高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）（フィッツジェラルド因子）、フィブロネクチン、フィブリン、トロンビン、アンチトロンビン、例えばアンチトロンビンＩＩＩ、ヘパリンコファクターＩＩ、タンパク質Ｃ、タンパク質Ｓ、タンパク質Ｚ、タンパク質Ｚ関連プロテアーゼ阻害剤（ＺＰＩ）、プラスミノーゲン、アルファ２−抗プラスミン、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤−１（ＰＡＩ１）、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤−２（ＰＡＩ２）、がん凝血原、およびエポエチンアルファ（エポジェン、プロクリット）。
サイトカインの例として、以下が挙げられる：リンホカイン、インターロイキン、およびケモカイン、１型サイトカイン、例えばＩＦＮ−γ、ＴＧＦ−β、および２型サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３。
増殖因子の例として、以下が挙げられる：アドレノメデュリン（ＡＭ）、アンギオポエチン（Ａｎｇ）、自己分泌型細胞運動刺激因子、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、増殖分化因子−９（ＧＤＦ９）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ヘパトーマ由来増殖因子（ＨＤＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、遊走刺激因子、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、神経成長因子（ＮＧＦ）および他のニューロトロフィン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ−α）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、Ｗｎｔシグナル伝達経路、胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）、［（ウシ胎仔ソマトトロピン）］（ＦＢＳ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−７。
アディポカインの例として、レプチンおよびアディポネクチンが挙げられる。
治療用タンパク質のさらなる例として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：受容体、シグナル伝達タンパク質、骨格筋タンパク質、足場タンパク質、転写因子、構造タンパク質、膜タンパク質、細胞質ゾルタンパク質、結合タンパク質、核タンパク質、分泌型タンパク質、ゴルジタンパク質、小胞体タンパク質、ミトコンドリアタンパク質、および小胞タンパク質など。
提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの一態様において、発現生成物は、標的遺伝子または標的遺伝子の一部を、破壊するか、修正／修復するか、またはこれを置き換えるために用いてもよい。例えば、Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat/Cas（CRISPR/Cas）系は、正確なゲノム編集のために用いることができる。この系において、単一のＣＲＩＳＰＲ関連ヌクレアーゼ（Ｃａｓヌクレアーゼ）を、塩基配列の短い反復を含むＤＮＡ遺伝子座を含む特異的なＤＮＡ標的を認識するように、ガイドＲＮＡ（短鎖（short）ＲＮＡ）によりプログラミングしてもよい。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座は、ウイルスのゲノム材料に由来するスペーサーＤＮＡの短いセグメントに隣接する。最も一般的な系であるＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ系において、スペーサーＤＮＡは、トランス活性化ＲＮＡ（ｔｒａｃＲＮＡ）とハイブリダイズし、ここで、それは、ＣＲＩＳＰＲ−ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）にプロセッシングされて、次いでＣａｓヌクレアーゼと会合して複合体を形成し、これがＲＮＡｓｅＩＩＩプロセッシングを開始させ、外来ＤＮＡの分解をもたらす。標的配列は、好ましくは、認識されるために、その３’末端においてプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列を含む。系は、多数の方法において改変することができ、例えば、合成のガイドＲＮＡを、ＣＲＩＳＰＲベクターに融合させてもよく、多様な異なるガイドＲＮＡ構造およびエレメントが可能である（ヘアピンおよび足場配列を含む）。
提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、導入遺伝子配列は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系のいずれか１つ以上の構成成分、例えば発現されると検出可能なシグナルを生成するレポーター配列をコードしていてもよい。かかるレポーター配列の例として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：β−ラクタマーゼ、β−ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリホスファターゼ, チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、例えばＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８を含む膜結合タンパク質、およびインフルエンザヘマグルチニンタンパク質。他のレポーターは、当業者に公知である。
提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの別の例において、導入遺伝子は、ＲＮＡ生成物、例えばｔＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、触媒性ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｍｉＲＮＡ、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、トランススプライシングＲＮＡ、およびアンチセンスＲＮＡをコードしていてもよい。例えば、対象において標的とされる核酸配列の発現を阻害または失わせるために、特定のＲＮＡ配列を作製することができる。好適な標的配列として、例えば、腫瘍性の標的およびウイルス疾患が挙げられる。
提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、導入遺伝子配列は、発現されると検出可能なシグナルを生成するレポーター配列をコードしていても、または、導入遺伝子配列は、疾患の動物モデルを作製するために用いることができるタンパク質もしくは機能的ＲＮＡをコードしていてもよい。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの別の例において、導入遺伝子は、研究目的のために、例えば導入遺伝子を保有する体細胞トランスジェニック動物モデルを作製するために（例えば導入遺伝子の生成物の機能の研究のために）用いられることが意図されるタンパク質または機能的ＲＮＡをコードしていてもよい。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの他の態様において、かかる発現生成物の企図は、処置のためのものである。導入遺伝子の他の用途は、当業者には明らかであろう。
導入遺伝子の配列はまた、発現制御配列を含んでもよい。発現制御配列は、プロモーター、エンハンサー、およびオペレーターを含み、一般に、発現コンストラクトが利用されることになる発現系に基づいて選択される。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、プロモーターおよびエンハンサー配列は、遺伝子発現を増加させる能力のために選択されるが、一方、オペレーター配列は、遺伝子発現を制御する能力のために選択され得る。典型的には、プロモーター配列は、所望される発現生成物をコードする核酸配列の上流（すなわち５’）に位置し、隣接する配列に作動的に連結され、それにより、所望される生成物が発現される量を、プロモーターなしで発現される量と比較して増加させる。エンハンサー配列は、一般に、プロモーター配列の上流に位置し、所望される生成物の発現をさらに増加させることができる。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、エンハンサー配列は、プロモーターの下流、および／または導入遺伝子中に位置していてもよい。導入遺伝子はまた、宿主細胞における相同組み換えおよび／またはパッケージングを亢進し、このましくはそれを促進する配列を含んでもよい。導入遺伝子はまた、宿主細胞中での複製のために必要な配列を含んでもよい。
例示的な発現制御配列として、本明細書において提供され得るいずれか１つなどの、肝臓特異的プロモーター配列および構成的プロモーター配列が挙げられる。他の組織特異的プロモーターとして、眼、網膜、中枢神経系、脊髄その他が挙げられる。遍在的または無差別的なプロモーターおよびエンハンサーの例として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター／エンハンサー配列、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター／エンハンサー配列、および多様な哺乳動物細胞型において活性な他のウイルスプロモーター／エンハンサー、または天然においては存在しない合成のエレメント（例えば、Boshart et al, Cell, 41 :521-530 (1985)を参照）、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）プロモーター、細胞質型β−アクチンプロモーターおよびホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター。
オペレーター、または制御可能エレメントは、作動的に連結された核酸の発現を増大または減少させるシグナルまたは刺激に対して応答性である。誘導性エレメントは、シグナルまたは刺激に対する応答において、作動的に連結された核酸の発現を増大するもの、例えばホルモン誘導性プロモーターである。抑制性エレメントは、シグナルまたは刺激に対する応答において、作動的に連結された核酸の発現を減少させるものである。典型的には、抑制性および誘導性エレメントは、存在するシグナルまたは刺激 の量に対して比例的に応答性である。導入遺伝子は、提供される方法または組成物のうちのいずれか１つにおいて、かかる配列を含んでもよい。
導入遺伝子はまた、コード配列の下流（すなわち３’）に作動的に連結された好適なポリアデニル化配列を含んでもよい。
例えば遺伝子治療のための、導入遺伝子を送達する方法は、、当該分野において公知である（例えば、Smith. Int. J. Med. Sci. 1(2)：76-91 (2004)；Phillips. Methods in Enzymology：Gene Therapy Methods. Vol. 346. Academic Press (2002)を参照）。本明細書において記載される導入遺伝子のうちのいずれかを、当該分野において公知の方法を用いて、本明細書において記載されるウイルスベクターのうちのいずれかに組み込むことができる。例えば、米国特許第7,629,153を参照。
ウイルスベクター
ウイルスは、それらのゲノムを、それらが感染する細胞の内部に輸送するために特化した機構を進化させてきた；かかるウイルスに基づくウイルスベクターを、特定の用途に対して細胞に形質導入するために仕立てることができる。本明細書において提供されるように用いることができるウイルスベクターの例は、当該分野において公知であるか、本明細書において記載される。好適なウイルスベクターとして、例えば、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベースのベクター、アデノウィルスベースのベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースのベクター、およびＡＡＶ−アデノウィルスキメラベクターが挙げられる。
本明細書において提供されるウイルスベクターは、レトロウイルスに基づくものであってもよい。レトロウイルスは、一本鎖のプラス鎖（positive sense）ＲＮＡウイルスである。レトロウイルスベクターは、ウイルスを複製無能にするように操作することができる。したがって、レトロウイルスベクターは、in vivoでの安定な遺伝子導入のために、特に有用であると考えられる。レトロウイルスベクターの例は、例えば米国公開番号20120009161、20090118212および20090017543において見出すことができ、ウイルスベクターおよびそれらを作製する方法は、本明細書においてその全体において参考として援用される。
レンチウイルスベクターは、本明細書において提供されるようなウイルスベクターの生成のために用いることができるレトロウイルスベクターの例である。レンチウイルスの例として、ＨＩＶ（ヒト）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）およびビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）が挙げられる。レンチウイルスベクターの例は、例えば、米国公開番号20150224209、20150203870、20140335607、20140248306、20090148936および20080254008において見出すことができ、ウイルスベクターおよびそれらを作製する方法は、本明細書においてその全体において参考として援用される。
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベースのウイルスベクターもまた、本明細書において提供されるような用途のために好適である。多くの複製欠損ＨＳＶベクターは、複製を防止するために１つ以上の中間初期遺伝子（intermediate-early gene）を取り除くための欠失を含む。ＨＳＶベースのベクターの記載については、例えば、米国特許第5,837,532号、同第5,846,782号、同第5,849,572号、および同第5,804,413号、ならびに国際特許出願WO 91/02788、WO 96/04394、WO 98/15637、およびWO 99/06583を参照；これらのウイルスベクタおよびそれらを作製する方法の記載は、本明細書においてその全体において参考として援用される。
ウイルスベクターは、アデノウィルスに基づくものであってもよい。ウイルスベクターの基礎とすることができるアデノウィルスは、任意の起源、任意のサブグループ、任意のサブタイプ、または任意の血清型からのものであってよい。例えば、アデノウィルスは、サブグループＡ（例えば、血清型１２、１８および３１）、サブグループＢ（例えば、血清型３、７、１１、１４、１６、２１、３４、３５および５０）、サブグループＣ（例えば、血清型１、２、５および６）、サブグループＤ（例えば、血清型８、９、１０、１３、１５、１７、１９、２０、２２〜３０、３２、３３、３６〜３９および４２〜４８）、サブグループＥ（例えば、血清型４）、サブグループＦ（例えば、血清型４０および４１）、未分類の血清群（例えば、血清型４９および５１）、または任意の他のアデノウィルス血清型のものであってよい。アデノウィルス血清型１〜５１は、American Type Culture Collection（ATCC、Manassas, Va.）から入手可能である。非グループＣアデノウィルス、および非ヒトアデノウィルスであっても、複製欠損アデノウイルスベクターを調製するために用いることができる。非グループＣアデノウイルスベクター、非グループＣアデノウイルスベクターを生成する方法、および非グループＣアデノウイルスベクターを用いる方法は、例えば、米国特許第5,801,030号、同第5,837,511号、および同第5,849,561、ならびに国際特許出願WO 97/12986およびWO 98/53087において開示される。任意のアデノウィルス（キメラアデノウィルスであっても）を、アデノウイルスベクターのためのウイルスゲノムのソースとして用いることができる。例えば、ヒトアデノウィルスを、複製欠損アデノウイルスベクターのためのウイルスゲノムのソースとして用いることができる。アデノウイルスベクターのさらなる例は、米国公開番号20150093831、20140248305、20120283318、20100008889、20090175897および20090088398において見出すことができ、これらのウイルスベクターおよびそれらを作製する方法の記載は、その全体において参考として援用される。
本明細書において提供されるウイルスベクターはまた、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づくものであってもよい。ＡＡＶベクターは、本明細書において記載されるものなどの治療的適用における使用のために、特に重要であった。ＡＡＶベースのベクターの記載については、例えば、米国特許第8,679,837号、同第8,637,255号、同第8,409,842号、同第7,803,622号、および同第7,790,449号、ならびに米国公開番号20150065562、20140155469、20140037585、20130096182、20120100606および20070036757を参照。ＡＡＶベクターは、組み換えＡＡＶベクターであってもよい。ＡＡＶベクターはまた、自己相補的（ｓｃ）ＡＡＶベクターであってもよく、これは、例えば米国特許公開2007/01110724および2004/0029106、ならびに米国特許第7,465,583号および同第7,186,699号において記載され、これらのウイルスベクターおよびそれらを作製する方法は、その全体において本明細書において参考として援用される。
ウイルスベクターの基礎とすることができるアデノ随伴ウイルスは、任意の血清型または血清型の混合物のものであってよい。ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０およびＡＡＶ１１を含む。例えば、ウイルスベクターが血清型の混合物に基づく場合、ウイルスベクターは、１つのＡＡＶ血清型（例えばＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１のうちのいずれか１つから選択される）から取得されたキャプシドシグナル配列、ならびに異なる血清型（例えばＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１のうちのいずれか１つから選択される）からのパッケージング配列を含んでもよい。本明細書において提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、したがって、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２／８ベースのベクターである。本明細書において提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの他の態様において、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２／５ベースのベクターである。
提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、ウイルスベクターの基礎とするウイルスは、Ａｎｃ８０などの合成ものであってもよい。
提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、ウイルスベクターは、ＡＡＶ／Ａｎｃ８０ベクター、例えばＡＡＶ８／Ａｎｃ８０ベクターまたはＡＡＶ２／Ａｎｃ８０ベクターである。
ベクターの基礎とすることができる他のウイルスとして、ＡＡＶ１、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈｌ０、ｒｈ７４またはＡＡＶ−２ｉ８、およびそれらのバリアントが挙げられる。
本明細書において提供されるウイルスベクターはまた、アルファウイルスに基づくものであってもよい。アルファウイルスとして、以下が挙げられる：シンドビス（およびＶＥＥＶ）ウイルス、アウラ（Aura）ウイルス、ババンキウイルス、バーマ（Barmah）森林ウイルス、べバル（Bebaru）ウイルス、カバソウ（Cabassou）ウイルス、チクングニアウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エバーグレーズウイルス、フォートモルガン（Fort Morgan）、ゲタウイルス、ハイランズＪ（Highlands J）ウイルス、キジラガ（Kyzylagach）ウイルス、マヤロ（Mayaro）ウイルス、メ・トリ（Me Tri）ウイルス、ミデルブルグ（Middelburg）ウイルス、モッソ・ダス・ペドラス（Mosso das Pedras）ウイルス、ムカンボ（Mucambo）ウイルス、ヌドゥム（Ndumu）ウイルス、オニョンニョン（O'nyong-nyong）ウイルス、ピクスナ（Pixuna）ウイルス、リオ・ネグロ（Rio Negro）ウイルス、ロスリバーウイルス、サケ膵臓疾患ウイルス（Salmon pancreas disease virus）、セムリキ森林ウイルス、ミナミゾウアザラシウイルス、トナテ（Tonate）ウイルス、トロカラ（Trocara）ウイルス、ウナ（Una）ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、およびワタロアウイルス。アルファウイルスベクターの例は、米国公開番号20150050243、20090305344、および20060177819において見出すことができる；ベクターおよびそれらを作製する方法は、その全体において本明細書において参考として援用される。
本明細書において提供されるウイルスベクターのうちのいずれか１つは、本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つにおける使用のためのものであってよい。
免疫抑制剤
免疫抑制剤として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：スタチン；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンまたはラパマイシンアナログ；ＴＧＦ−βシグナル伝達剤；ＴＧＦ−β受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤；副腎皮質ステロイド；ミトコンドリアの機能の阻害剤、例えばロテノン；Ｐ３８阻害剤；ＮＦ−κβ阻害剤；アデノシン受容体アゴニスト；プロスタグランジンＥ２アゴニスト；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えばホスホジエステラーゼ４阻害剤；プロテアソーム阻害剤；キナーゼ阻害剤；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；グルココルチコイド；レチノイド；サイトカイン阻害剤；サイトカイン受容体阻害剤；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；カルシニューリン阻害剤；ホスファターゼ阻害剤および酸化型ＡＴＰ。免疫抑制剤はまた、以下を含む：ＩＤＯ、ビタミンＤ３、シクロスポリンＡ、アリール炭化水素受容体阻害剤、レスベラトロール、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アスピリン、ニフルミン酸、エストリオール、トリプトライド、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１０）、シクロスポリンＡ、サイトカインまたはサイトカイン受容体を標的とするｓｉＲＮＡなど。
スタチンの例として、以下が挙げられる：アトルバスタチン（LIPITOR（登録商標）、TORVAST（登録商標））、セリバスタチン、フルバスタチン（LESCOL（登録商標）、LESCOL（登録商標）XL）、ロバスタチン（MEVACOR（登録商標）、ALTOCOR（登録商標）、ALTOPREV（登録商標））、メバスタチン（COMPACTIN（登録商標））、ピタバスタチン（LIVALO（登録商標）、PIAVA（登録商標））、ロスバスタチン（PRAVACHOL（登録商標）、SELEKTINE（登録商標）、LIPOSTAT（登録商標））、ロスバスタチン（CRESTOR（登録商標））、およびシンバスタチン（ZOCOR（登録商標）、LIPEX（登録商標））。
ｍＴＯＲ阻害剤の例として、以下が挙げられる：ラパマイシンおよびそのアナログ（例えば、CCL-779、RAD001、AP23573、Ｃ２０−タアリルラパマイシン（C20-Marap）、Ｃ１６−（Ｓ）−ブチルスルホンアミドラパマイシン（C16-BSrap）、Ｃ１６−（Ｓ）−３−メチルインドールラパマイシン（C16-iRap）（Bayle et al. Chemistry & Biology 2006、13:99-107））、AZD8055、BEZ235（NVP-BEZ235）、クリソファン酸（クリソファノール）、デフォロリムス（MK-8669）、エベロリムス（RAD0001）、KU-0063794、PI-103、PP242、テムシロリムス、およびWYE-354（Selleck、Houston、TX、USAから入手可能）。
ＴＧＦ−βシグナル伝達剤の例として、以下が挙げられる：ＴＧＦ−βリガンド（例えば、アクチビンＡ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ１１、骨形成タンパク質、ノーダル（Nodal）、ＴＧＦ−β類）およびそれらの受容体（例えば、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ１Ｃ、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＴＧＦβＲＩ、ＴＧＦβＲＩＩ）、Ｒ−ＳＭＡＤＳ／ｃｏ−ＳＭＡＤＳ（例えば、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ５、ＳＭＡＤ８）、ならびにリガンド阻害剤（例えば、フォリスタチン、ノギン、コーディン、ＤＡＮ、レフティー、ＬＴＢＰ１、ＴＨＢＳ１、デコリン）。
ミトコンドリアの機能の阻害剤の例として、以下が挙げられる：アトラクチロシド（二カリウム塩）、ボンクレキン酸（三アンモニウム塩）、カルボニルシアニドｍ−クロロフェニルヒドラゾン、カルボキシアトラクチロシド（例えば、Atractylis gummiferaからのもの）、CGP-37157、（−）−デグエリン（例えば、Mundulea sericeaからのもの）、Ｆ１６、ヘキソキナーゼＩＩ ＶＤＡＣ結合ドメインペプチド、オリゴマイシン、ロテノン、Ｒｕ３６０、ＳＦＫ１、およびバリノマイシン（例えば、Streptomyces fulvissimusからのもの）（EMD4Biosciences, USA）。
Ｐ３８阻害剤の例として、以下が挙げられる：SB-203580（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルフィニルフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾール）、SB-239063（トランス−１−（４ヒドロキシシクロヘキシル）−４−（フルオロフェニル）−５−（２−メトキシ−ピリミジン−４−イル）イミダゾール）、SB-220025（５−（２アミノ−４−ピリミジニル）−４−（４−フルオロフェニル）−１−（４−ピペリジニル）イミダゾール））、およびARRY-797。
ＮＦ（例えば、ＮＫ−κβ）阻害剤の例として、以下が挙げられる：ＩＦＲＤ１、２−（１，８−ナフチリジン−２−イル）−フェノール、５−アミノサリチル酸、BAY 11-7082、BAY 11-7085、ＣＡＰＥ（カフェイン酸フェネチルエステル）、ジエチルマレイン酸、ＩＫＫ−２阻害剤ＩＶ、IMD 0354、ラクタシスチン、MG-132［Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＣＨＯ］、ＮＦκＢ活性化阻害剤ＩＩＩ、ＮＦ−κＢ活性化阻害剤ＩＩ、JSH-23、パルテノライド、フェニルアルシンオキシド（ＰＡＯ）、PPM-18、ピロリジンジチオカルバミン酸アンモニウム塩、QNZ、RO 106-9920、ロカグラミド（rocaglamide）、ロカグラミドＡＬ、ロカグラミドＣ、ロカグラミドＩ、ロカグラミドＪ、ロカグラオール（rocaglaol）、(R)-MG-132、サリチル酸ナトリウム、トリプトライド（PG490）、およびウェデロラクトン（wedelolactone）。
アデノシン受容体アゴニストの例として、CGS-21680およびATL-146eが挙げられる。
プロスタグランジンＥ２アゴニストの例として、Ｅ−プロスタノイド２およびＥ−プロスタノイド４が挙げられる。
ホスホジエステラーゼ阻害剤（非選択的および選択的阻害剤）の例として、以下が挙げられる：カフェイン、アミノフィリン、ＩＢＭＸ（３−イソブチル−１−メチルキサンチン）、パラキサンチン、ペントキシフィリン、テオブロミン、テオフィリン、メチル化キサンチン、ビンポセチン、ＥＨＮＡ（エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン）、アナグレリド、エノキシモン（PERFAN（商標））、ミルリノン、レボシメンダン、メセンブリン、イブジラスト、ピクラミラスト、ルテオリン、ドロタベリン、ロフルミラスト（DAXAS（商標）、DALIRESP（商標））、シルデナフィル（REVATION（登録商標）、VIAGRA（登録商標））、タダラフィル（ADCIRCA（登録商標）、CIALIS（登録商標））、バルデナフィル（LEVITRA（登録商標）、STAXYN（登録商標））、ウデナフィル、アバナフィル、イカリイン（icariin）、４−メチルピペラジン、およびピラゾロピリミジン−７−１。
プロテアソーム阻害剤の例として、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、エピガロカテキン−３−没食子酸エステル、およびサリノスポラミドＡが挙げられる。
キナーゼ阻害剤の例として、ベバシズマブ、BIBW 2992、セツキシマブ（ERBITUX（登録商標））、イマチニブ（GLEEVEC（登録商標））、トラスツズマブ（HERCEPTIN（登録商標））、ゲフィチニブ（IRESSA（登録商標））、ラニビズマブ（LUCENTIS（登録商標））、ペガプタニブ、ソラフェニブ、ダサチニブ、スニチニブ、エルロチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パニツムマブ、バンデタニブ、E7080、パゾパニブ、およびムブリチニブ（mubritinib）が挙げられる。
グルココルチコイドの例として、以下が挙げられる：ヒドロコルチゾン（コルチゾール）、酢酸コルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸デオキシコルチコステロン（ＤＯＣＡ）、およびアルドステロン。
レチノイドの例として、以下が挙げられる：レチノール、レチナール、トレチノイン（レチノイン酸、RETIN-A（登録商標））、イソトレチノイン（ACCUTANE（登録商標）、AMNESTEEM（登録商標）、CLARAVIS（登録商標）、SOTRET（登録商標））、アリトレチノイン（PANRETIN（登録商標））、エトレチナート（TEGISON（商標））およびその代謝物であるアシトレチン（SORIATANE（登録商標））、タザロテン（TAZORAC（登録商標）、AVAGE（登録商標）、ZORAC（登録商標））、ベキサロテン（TARGRETIN（登録商標））、およびアダパレン（DIFFERIN（登録商標））。
サイトカイン阻害剤の例として、ＩＬ１ｒａ、ＩＬ１受容体アンタゴニスト、ＩＧＦＢＰ、ＴＮＦ−ＢＦ、ウロモジュリン、アルファ−２−マクログロブリン、シクロスポリンＡ、ペンタミジン、およびペントキシフィリン（PENTOPAK（登録商標）、PENTOXIL（登録商標）、TRENTAL（登録商標））が挙げられる。
ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アンタゴニストの例として、GW9662、ＰＰＡＲγアンタゴニストＩＩＩ、G335、およびT0070907（EMD4Biosciences, USA）が挙げられる。
ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アゴニストの例として、ピオグリタゾン、シグリタゾン、クロフィブラート、GW1929、GW7647、L-165,041、LY 171883、ＰＰＡＲγアクチベーター、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ、トログリタゾン、およびWY-14643（EMD4Biosciences, USA）が挙げられる。
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤の例として、以下が挙げられる：ヒドロキサム酸（またはヒドロキサメート）、例えばトリコスタチンＡ、環状テトラペプチド（例えばトラポキシンＢ）およびデプシペプチド、ベンズアミド、求電子性ケトン、脂肪族酸化合物、例えばフェニル酪酸ぷｐぼバルプロ酸、ヒドロキサム酸、例えばボリノスタット（SAHA）、ベリノスタット（PXD101）、LAQ824、およびパノビノスタット（LBH589）、ベンズアミド、例えばエンチノスタット（MS-275）、CI994、およびモセチノスタット（MGCD0103）、ニコチンアミド、ＮＡＤの誘導体、ジヒドロクマリン、ナフトピラノン、および２−ヒドロキシナフトアルデヒド。
カルシニューリン阻害剤の例として、シクロスポリン、ピメクロリムス、ボクロスポリン、およびタクロリムスが挙げられる。
ホスファターゼ阻害剤の例として、以下が挙げられる：BN82002塩酸塩、CP-91149、カリクリンＡ、カンタリジン酸、カンタリジン、シペルメトリン、エチル−３，４−デフォスタチン（dephostatin）、フォストリエシンナトリウム塩、MAZ51、メチル−３，４−デフォスタチン、NSC 95397、ノルカンタリジン（norcantharidin）、Prorocentrum concavumからのオカダ酸アンモニウム塩、オカダ酸、オカダ酸カリウム塩、オカダ酸ナトリウム塩、フェニルアルシンオキシド、多様なホスファターゼ阻害剤カクテル、タンパク質ホスファターゼ１Ｃ、タンパク質ホスファターゼ２Ａ阻害剤タンパク質、タンパク質ホスファターゼ２Ａ１、タンパク質ホスファターゼ２Ａ２、およびオルトバナジン酸ナトリウム（sodium orthovanadate）。
合成ナノキャリア
本明細書において提供される方法は、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与を含む。一般に、免疫抑制剤は、合成ナノキャリアの構造を構成する材料に加える要素である。例えば、合成ナノキャリアが１つ以上のポリマーから構成される、提供される方法または組成物のうちのいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、当該１つ以上のポリマーに加える化合物であって、提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様においては、当該１つ以上のポリマーに結合している化合物である。合成ナノキャリアの材料がまた、免疫寛容原性効果をもたらす態様において、免疫抑制剤は、免疫寛容原性効果をもたらす合成ナノキャリアの材料に加えて存在する要素である。
本発明により、多様な合成ナノキャリアを用いることができる。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、球または球状体である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、扁平または板の形状である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、立方体または立方体状である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、卵円または楕円である。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、円柱、円錐、または錐体である。
いくつかの態様においては、各々の合成ナノキャリアが類似の特性を有するように、サイズまたは形状に関して比較的均一な合成ナノキャリアの集合を用いることが望ましい。例えば、合成ナノキャリアの合計数に基づいて、提供される組成物または方法のうちのいずれか１つの合成ナノキャリアのうちの少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は、合成ナノキャリアの平均直径または平均寸法の５％、１０％、または２０％以内に該当する最小寸法または最大寸法を有していてもよい。
合成ナノキャリアは、固体または中空であってもよく、１つ以上の層を含んでもよい。いくつかの態様において、各々の層は、他の層と比較してユニークな組成物およびユニークな特性を有する。ほんの一例を挙げると、合成ナノキャリアは、コア／シェル構造を有していてもよく、ここで、コアは、１つの層（例えばポリマー性のコア）であり、シェルは、第２の層（例えば脂質二重層または単層）である。合成ナノキャリアは、複数の異なる層を含んでもよい。
いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、任意に、１つ以上の脂質を含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、リポソームを含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質二重層を含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質単層を含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、ミセルを含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）により囲まれたポリマー性マトリックスを含むコアを含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）により囲まれた非ポリマー性コア（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子、タンパク質、核酸、炭水化物など）を含んでもよい。
他の態様において、合成ナノキャリアは、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子などを含んでもよい。いくつかの態様において、非ポリマー性合成ナノキャリアは、非ポリマー性構成成分の凝集物、例えば金属原子（例えば金原子）の凝集物である。
いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、任意に、１つ以上の両親媒性の実体を含んでもよい。いくつかの態様において、両親媒性の実体は、増大した安定性、改善された均一性、または増大した粘性を有する合成ナノキャリアの生成を促進し得る。いくつかの態様において、両親媒性の実体は、脂質膜（例えば、脂質二重層、脂質単層など）の内部表面に結合していてもよい。当該分野において公知の多くの両親媒性の実体が、本発明による合成ナノキャリアを作製するために好適である。かかる両親媒性の実体として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：ホスホグリセリド；ホスファチジルコリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）；ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；ジオレイルオキシプロピルトリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；ジオレイルホスファチジルコリン；コレステロール；コレステロールエステル；ジアシルグリセロール；コハク酸ジアシルグリセロール；ジホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；ヘキサンデカノール；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの脂肪アルコール；ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル；パルミチン酸またはオレイン酸などの界面活性脂肪酸；脂肪酸；脂肪酸モノグリセリド；脂肪酸ジグリセリド；脂肪酸アミド；ソルビタントリオレート（Span（登録商標）85）グリコラート；ソルビタンモノラウレート（Span（登録商標）20）；ポリソルベート２０（Tween（登録商標）20）；ポリソルベート６０（Tween（登録商標）60）；ポリソルベート６５（Tween（登録商標）65）；ポリソルベート８０（Tween（登録商標）80）；ポリソルベート８５（Tween（登録商標）85）；ポリオキシエチレンモノステアレート；サーファクチン；ポロキソマー（poloxomer）；ソルビタントリオレエートなどのソルビタン脂肪酸エステル；レシチン；リゾレシチン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴミエリン；ホスファチジルエタノールアミン（セファリン）；カルジオリピン；ホスファチジン酸；セレブロシド；ジセチルホスファート；ジパルミトイルホスファチジルグリセロール；ステアリルアミン；ドデシルアミン；ヘキサデシル-アミン；アセチルパルミテート；グリセロールリシノレート；ヘキサデシルステアレート；イソプロピルミリステート；チロキサポール；ポリ（エチレングリコール）５０００−ホスファチジルエタノールアミン；ポリ（エチレングリコール）４００−モノステアレート；リン脂質；高い界面活性特性を有する合成および／または天然の洗剤；デオキシコレート；シクロデキストリン；カオトロピックな塩；イオン対形成剤；ならびにこれらの組み合わせ。両親媒性の実体の構成成分は、異なる両親媒性の実体の混合物であってもよい。当業者は、これが、包括的なものではなく、例示的な界面活性を有する物質のリストであることを認識するであろう。本発明により用いられるべき合成ナノキャリアの生成において、任意の両親媒性の実体を用いることができる。
いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、任意に、１つ以上の炭水化物を含んでもよい。炭水化物は、天然であっても合成であってもよい。炭水化物は、誘導体化された天然炭水化物であってもよい。ある態様において、炭水化物は、これらに限定されないが、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、セロビオース、マンノース、キシロース、アラビノース、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラクトサミン、およびノイラミン酸を含む、単糖または二糖を含む。ある態様において、炭水化物は、これらに限定されないが、以下を含む多糖である：プルラン、セルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシセルロース（ＨＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、デキストラン、シクロデキストラン、グリコーゲン、ヒドロキシエチルデンプン、カラギーナン、グリコン（glycon）、アミロース、キトサン、Ｎ，Ｏ−カルボキシルメチルキトサン、アルギンおよびアルギン酸、デンプン、キチン、イヌリン、コンニャク、グルコマンナン、プスツラン、ヘパリン、ヒアルロン酸、カードラン、およびキサンタン。態様において、合成ナノキャリアは、多糖などの炭水化物を含まない（または特にこれを除外する）。ある態様において、炭水化物は、これらに限定されないが、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトールおよびラクチトールを含む糖アルコールなどの炭水化物誘導体を含んでもよい。
いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、１つ以上のポリマーを含んでもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、非メトキシ末端化されたプルロニックポリマーである１つ以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーのうちの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％（重量／重量）は、非メトキシ末端化されたプルロニックポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの全ては、非メトキシ末端化されたプルロニックポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、非メトキシ末端化されたポリマーである１つ以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーのうちの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％（重量／重量）は、非メトキシ末端ポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの全ては、非メトキシ末端化されたポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、プルロニックポリマーを含まない１つ以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーのうちの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％（重量／重量）は、プルロニックポリマーを含まない。いくつかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの全ては、プルロニックポリマーを含まない。いくつかの態様において、かかるポリマーは、コーティング層（例えば、リポソーム、脂質単層、ミセルなど）により囲まれていてもよい。いくつかの態様において、合成ナノキャリアのエレメントは、ポリマーに結合していてもよい。
免疫抑制剤は、多数の方法のうちのいずれかにより、合成ナノキャリアにカップリングさせることができる。一般に、結合は、免疫抑制剤と合成ナノキャリアとの間の結合の結果であり得る。この結合は、免疫抑制剤が、合成ナノキャリアの表面に結合すること、および／または合成ナノキャリア中に含まれる（カプセル化される）ことをもたらし得る。いくつかの態様においては、しかし、免疫抑制剤は、合成ナノキャリアにより、合成ナノキャリアへの結合よりもむしろ合成ナノキャリアの構造の結果として、カプセル化される。好ましい態様において、合成ナノキャリアは、本明細書において提供されるようなポリマーを含み、免疫抑制剤は当該ポリマーに接着している。
接着が、免疫抑制剤と合成ナノキャリアとの間の結合の結果として起こる場合、接着は、カップリング部分を介して起こり得る。カップリング部分は、それを通して免疫抑制剤が合成ナノキャリアに結合する、任意の部分であってよい。かかる部分として、アミド結合またはエステル結合などの共有結合、ならびに免疫抑制剤を合成ナノキャリアに結合させる（共有結合によりまたは非共有結合により）別の分子が挙げられる。かかる分子は、リンカーまたはポリマーまたはその単位を含む。例えば、カップリング部分は、免疫抑制剤が静電的にそれに結合する、荷電されたポリマーを含んでもよい。別の例として、カップリング部分は、それが共有結合する荷電されたポリマーを含んでもよい。
好ましい態様において、合成ナノキャリアは、本明細書において提供されるようなポリマーを含む。これらの合成ナノキャリアは、完全にポリマー性であっても、ポリマーと他の材料との混合物であってもよい
いくつかの態様において、合成ナノキャリアのポリマーは、会合してポリマー性マトリックスを形成する。これらの態様のうちのいくつかにおいて、構免疫抑制剤などの成成分は、ポリマー性マトリックスの１つ以上のポリマーと共有結合により会合していてもよい。いくつかの態様において、共有結合による会合は、リンカーにより媒介される。いくつかの態様において、構成成分は、ポリマー性マトリックスの１つ以上のポリマーと、非共有結合的に会合していてもよい。例えば、いくつかの態様において、構成成分は、ポリマー性マトリックス中にカプセル化されるか、ポリマー性マトリックスにより囲まれるか、および／またはポリマー性マトリックス全体に分散していてもよい。あるいはまたは加えて、構成成分は、疎水性相互作用、電荷相互作用、ファン・デル・ワールス力などにより、ポリマー性マトリックスの１つ以上のポリマーと会合していてもよい。ポリマー性マトリックスをそれから形成させるための多様なポリマーおよび方法は、従来から知られている。
ポリマーは、天然または非天然（合成）のポリマーであってよい。ポリマーは、ホモポリマーであっても、２つ以上のモノマーを含むコポリマーであってもよい。配列に関して、コポリマーは、ランダムであっても、ブロックであっても、またはランダム配列とブロック配列との組み合わせであってもよい。典型的には、本発明によるポリマーは、有機ポリマーである。
いくつかの態様において、ポリマーは、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリアミド、またはポリエーテル、またはこれらの単位を含む。他の態様において、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、またはポリカプロラクトン、またはこれらの単位を含む。いくつかの態様において、ポリマーは、生分解性であることが好ましい。したがって、これらの態様において、ポリマーが、ポリエーテル、例えばポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはこれらの単位を含む場合、ポリマーが生分解性となるように、ポリマーがポリエーテルと生分解性ポリマーとのブロックコポリマーを含むことが好ましい。他の態様において、ポリマーは、ポリエーテルまたはその単位、例えばポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはこれらの単位のみを含むのではない。
本発明における使用のために有用なポリマーの他の例として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：ポリエチレン、ポリカーボネート（例えばポリ（１，３−ジオキサン−２オン））、ポリ無水物（例えばポリ（セバシン酸無水物））、ポリプロピルフマレート（fumerate）、ポリアミド（例えばポリカプロラクタム）、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル（例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリラクチド−コ−グリコリド、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酸（例えばポリ（β−ヒドロキシアルカノエート）））、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリウレア、ポリスチレン、およびポリアミン、ポリリジン、ポリリジン−ＰＥＧコポリマー、およびポリ（エチレンイミン）、ポリ（エチレンイミン）−ＰＥＧコポリマー。
いくつかの態様において、本発明によるポリマーは、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１７７．２６００下においてヒトにおける使用について承認されているポリマーを含み、これは、これらに限定されないが、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリバレロラクトン、ポリ（１，３−ジオキサン−２オン））；ポリ無水物（例えば、ポリ（セバシン酸無水物））；ポリエーテル（例えば、ポリエチレングリコール）；ポリウレタン；ポリメタクリレート；ポリアクリレート；およびポリシアノアクリレートを含む。
いくつかの態様において、ポリマーは、親水性であってもよい。例えば、ポリマーは、アニオン性基（例えば、リン酸基、硫酸基、カルボン酸基）；カチオン性基（例えば、四級アミン基）；または極性基（例えば、ヒドロキシル基、チオール基、アミン基）を含んでもよい。いくつかの態様において、親水性ポリマー性マトリックスを含む合成ナノキャリアは、合成ナノキャリア中に親水性環境を生じる。いくつかの態様において、ポリマーは、疎水性であってもよい。いくつかの態様において、疎水性ポリマー性マトリックスを含む合成ナノキャリアは、合成ナノキャリア中に疎水性環境を生じる。ポリマーの親水性または疎水性の選択は、合成ナノキャリア中に組み込まれる材料の性質に対して影響を有し得る。
いくつかの態様において、ポリマーは、１つ以上の部分および／または官能基により修飾されていてもよい。多様な部分または官能基を、本発明により用いることができる。いくつかの態様において、ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）により、炭水化物により、および／または多糖から誘導される非環式ポリアセタールにより修飾されていてもよい（Papisov, 2001, ACS Symposium Series, 786:301）。ある態様は、Grefらに対する米国特許第5543158号、またはVon AndrianらによるWO公開WO2009/051837の一般的教示を用いて行うことができる。
いくつかの態様において、ポリマーは、脂質または脂肪酸基により修飾されていてもよい。いくつかの態様において、脂肪酸基は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、またはリグノセリン酸のうちの１つ以上であってよい。いくつかの態様において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、アルファ−リノール酸、ガンマ−リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、またはエルカ酸のうちの１つ以上であってよい。
いくつかの態様において、ポリマーは、以下を含むポリエステルであってよい：本明細書において集合的に「ＰＬＧＡ」として言及される乳酸およびグリコール酸の単位を含むコポリマー、例えばポリ（乳酸−コ−グリコール酸）およびポリ（ラクチド−コ−グリコリド）；ならびに本明細書において「ＰＧＡ」として言及されるグリコール酸単位を含むホモポリマー、および本明細書において集合的に「ＰＬＡ」として言及される乳酸単位を含むホモポリマー、例えばポリ−Ｌ−乳酸、ポリ−Ｄ−乳酸、ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸、ポリ−Ｌ−ラクチド、ポリ−Ｄ−ラクチドおよびポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチド。いくつかの態様において、例示的なポリエステルとして、例えば、ポリヒドロキシ酸；ＰＥＧコポリマー、ならびにラクチドとグリコリドとのコポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧコポリマー、ＰＧＡ−ＰＥＧコポリマー、ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー、およびこれらの誘導体が挙げられる。いくつかの態様において、ポリエステルとして、例えば、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（カプロラクトン）−ＰＥＧコポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−コ−Ｌ−リジン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］、およびこれらの誘導体が挙げられる。
いくつかの態様において、ポリマーは、ＰＬＧＡであってよい。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸との生体適合性かつ生分解性のコポリマーであり、ＰＬＧＡの多様な形態が、乳酸：グリコール酸の比により特徴づけられる。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸、またはＤ，Ｌ−乳酸であってよい。ＰＬＧＡの分解速度は、乳酸：グリコール酸比を改変することにより調整することができる。いくつかの態様において、本発明により用いられるべきＰＬＧＡは、約８５：１５、約７５：２５、約６０：４０、約５０：５０、約４０：６０、約２５：７５、または約１５：８５の乳酸：グリコール酸比により特徴づけられる。
いくつかの態様において、ポリマーは、１つ以上のアクリルポリマーであってもよい。ある態様において、アクリルポリマーとして、例えば、以下が挙げられる：アクリル酸とメタクリル酸とのコポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（メタクリル酸無水物）、メチルメタクリレート、ポリメタクリレート、ポリ（メチルメタクリレート）コポリマー、ポリアクリルアミド、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、グリシジルメタクリレートコポリマー、ポリシアノアクリレート、前述のポリマーのうちの１つ以上を含む組み合わせ。アクリルポリマーは、低い含有量の四級アンモニウム基を有するアクリル酸エステルとメタクリル酸エステルとの完全に重合されたコポリマーを含んでもよい。
いくつかの態様において、ポリマーは、カチオン性ポリマーであってもよい。一般的に、カチオン性ポリマーは、核酸の負に荷電した鎖を濃縮および／または保護することができる。アミン含有ポリマー、例えばポリ（リジン）（Zauner et al., 1998, Adv. Drug Del. Rev., 30:97；およびKabanov et al., 1995, Bioconjugate Chem., 6:7）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ；Boussif et al., 1995, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1995, 92:7297）、ならびにポリ（アミノアミン）デンドリマー（Kukowska-Latallo et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 93:4897；Tang et al., 1996, Bioconjugate Chem., 7:703；およびHaensler et al., 1993, Bioconjugate Chem., 4:372）は、生理学的ｐＨにおいて正に荷電し、核酸とイオン対を形成する。態様において、合成ナノキャリアは、カチオン性ポリマーを含まなくともよい（またはこれを除外してもよい）。
いくつかの態様において、ポリマーは、カチオン性側鎖を有する分解性ポリエステルであってもよい（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658；Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc., 115:11010；Kwon et al., 1989, Macromolecules, 22:3250；Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633；およびZhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399）。これらのポリエステルの例として、ポリ（Ｌ−ラクチド−コ−Ｌ−リジン）（Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc., 115:11010）、ポリ（セリンエステル）（Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658；およびLim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633）、ならびにポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658；and Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633）が挙げられる。
これらのおよび他のポリマーの特性ならびにそれらを調製するための方法は、は、当該分野において周知である（例えば、米国特許6,123,727；5,804,178；5,770,417；5,736,372；5,716,404；6,095,148；5,837,752；5,902,599；5,696,175；5,514,378；5,512,600；5,399,665；5,019,379；5,010,167；4,806,621；4,638,045；および4,946,929；Wang et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:9480；Lim et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:2460；Langer, 2000, Acc. Chem. Res., 33:94；Langer, 1999, J. Control. Release, 62:7；およびUhrich et al., 1999, Chem. Rev., 99:3181を参照）。より一般的には、特定の好適なポリマーを合成するための多様な方法は、Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Amines and Ammonium Salts、Goethals編、Pergamon Press、1980年；Principles of Polymerization、Odian著、John Wiley & Sons、第４版、2004年；Contemporary Polymer Chemistry、Allcockら著、Prentice-Hall、1981年；Deming et al., 1997, Nature, 390:386において；ならびに、米国特許6,506,577、6,632,922、6,686,446および6,818,732において記載される。
いくつかの態様において、ポリマーは、直鎖状または分枝状ポリマーであってよい。いくつかの態様において、ポリマーは、デンドリマーであってよい。いくつかの態様において、ポリマーは、互いに実質的に架橋されていてもよい。いくつかの態様において、ポリマーは、実質的に架橋を含まなくともよい。いくつかの態様において、ポリマーは、架橋のステップを経験することなく、本発明により用いられてもよい。さらに、合成ナノキャリアは、前述のおよび他のポリマーのうちのいずれかの、ブロックコポリマー、グラフトコポリマー、ブレンド、混合物および／または付加体（adduct）を含んでもよいことが、理解されるべきである。当業者は、本明細書において列記されるポリマーが、包括的なものではなく、本発明により使用することができるポリマーの例示的なリストを表すことを認識するであろう。
いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、ポリマー性構成成分を含まない。いくつかの態様において、合成ナノキャリアは、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子などを含んでもよい。いくつかの態様において、非ポリマー性合成ナノキャリアは、非ポリマー性構成成分の凝集物、例えば金属原子（例えば金原子）の凝集物である。
本発明による組成物は、薬学的に受入可能な賦形剤、例えば保存剤、バッファー、食塩水、またはリン酸緩衝化食塩水を含んでもよい。組成物は、有用な投与形態に到達するための従来の医薬の製造および配合技術を用いて、製造することができる。一態様において、組成物は、注射のための無菌の食塩水溶液中に、保存剤と一緒に懸濁される。
Ｄ．組成物を使用および製造する方法
ウイルスベクターは、当業者に公知であるか、本明細書において別段に記載される方法により作製することができる。例えば、ウイルスベクターは、例えば、米国特許第4,797,368号およびLaughlin et al., Gene, 23, 65-73 (1983）において記載される方法を用いて、構築および／または精製することができる。
一例として、複製欠損アデノウイルスベクターは、抗力価のウイルスベクターストックを作製するために、複製欠損アデノウイルスベクターにおいては存在しないが、ウイルスの増殖のために必要とされる遺伝子機能を、適切なレベルにおいて提供する、補完性（complementing）の細胞株において生成しもよい。補完性細胞株は、（例えばアデノウィルスアンプリコンの増殖を可能にするための）全てのアデノウィルス機能を含む、初期領域、後期領域、ウイルスパッケージング領域、ウイルス関連ＲＮＡ領域、またはこれらの組み合わせによりコードされる、少なくとも１つの複製に必須の遺伝子機能の欠損を補完することができる。補完性細胞株の構築は、Sambrookら、Molecular Cloning, a Laboratory Manual、第２版、Cold Spring Harbor Press、Cold Spring Harbor、N.Y.（1989）、およびAusubelら、Current Protocols in Molecular Biology、Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons、New York、N.Y.（1994）により記載されるものなどの、標準的な分子生物学および細胞培養技術を含む。
アデノウイルスベクターを生成するための補完性細胞株として、これらに限定されないが、ＨＥＫ２９３細胞（例えばGraham et al., J. Gen. Virol., 36, 59-72 (1977）において記載される）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞（例えば国際特許出願WO 97/00326、ならびに米国特許第5,994,128号および同第6,033,908号において記載される）、ならびに２９３−ＯＲＦ６細胞（例えば国際特許出願WO 95/34671およびBrough et al., J. Virol., 71, 9206-9213 (1997)において記載される）が挙げられる。いくつかの例において、補完性細胞は、全ての必要とされるアデノウィルス遺伝子機能については補完しないであろう。アデノウイルスベクターの複製を可能にするために、細胞またはアデノウィルスのゲノムによりコードされない遺伝子機能をトランスで提供するために、ヘルパーウイルスを用いてもよい。アデノウイルスベクターは、例えば、米国特許第5,965,358号、同第5,994,128号、同第6,033,908号、同第6,168,941号、同第6,329,200号、同第6,383,795号、同第6,440,728号、同第6,447,995号、および同第6,475,757号、米国特許出願公開番号2002/0034735 A1、ならびに国際特許出願WO 98/53087、WO 98/56937、WO 99/15686、WO 99/54441、WO 00/12765、WO 01/77304、およびWO 02/29388、ならびに本明細書において同定される他の参考文献において記載される材料および方法を用いて、構築するか、増殖させるか、および／または精製することができる。アデノウィルス血清型３５ベクターを含む非グループＣアデノウイルスベクターは、例えば、米国特許第5,837,511号および同第5,849,561号、ならびに国際特許出願WO 97/12986およびWO 98/53087において記載される方法を用いて生成することができる。
ＡＡＶベクターなどのウイルスベクターは、組み換え方法を用いて生成することができる。例えば、方法は、ＡＡＶキャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードする核酸配列；機能的ｒｅｐ遺伝子；ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）および導入遺伝子からなる組み換えＡＡＶベクター；ならびに組み換えＡＡＶベクターのＡＡＶキャプシドタンパク質中へのパッケージングを許容する十分なヘルパー機能を含む宿主細胞を培養することを含んでもよい。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１およびこれらのバリアントからなる群より選択されるＡＡＶ血清型の逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含んでもよい。
ウイルスベクターをキャプシド中にパッケージングするために宿主細胞において培養されるべき構成成分は、宿主細胞にトランスで提供してもよい。あるいは、必要とされる構成成分（例えば、組み換えＡＡＶベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、および／またはヘルパー機能）のうちのいずれか１つ以上を、当業者に公知の方法を用いて、必要とされる構成成分のうちの１つ以上を含むように操作された、安定な宿主細胞により提供してもよい。最も好適には、かかる安定な宿主細胞は、必要とされる構成成分を、誘導性プロモーターの制御下において含んでもよい。しかし、必要とされる構成成分は、構成的プロモーターの制御下にあってもよい。ウイルスベクターを生成するために必要とされる組み換えウイルスベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、およびヘルパー機能を、任意の適切な遺伝子エレメントを用いて、パッケージング宿主細胞に送達してもよい。選択される遺伝子エレメントは、本明細書において記載されるものを含む、任意の好適な方法により送達することができる。他の方法は、核酸操作における当業者に公知であり、遺伝子工学、組み換え工学、および合成技術を含む。例えば、Sambrookら、Molecular Cloning：A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Press、Cold Spring Harbor、N.Y.を参照。同様に、ｒＡＡＶビリオンを作製する方法は、周知であり、好適な方法の選択は、本発明に対する限定要因ではない。例えば、K. Fisher et al, J. Virol., 70:520-532 (1993)および米国特許第5,478,745号を参照。
いくつかの態様において、組み換えＡＡＶトランスファーベクターは、三重遺伝子導入方法を用いて生成してもよい（例えば米国特許第6,001,650号、米国特許第6,593,123号、ならびにX. Xiao et al, J. Virol. 72:2224-2232 (1998)およびT. Matsushita et al, Gene Ther. 5(7)：938-945 (1998)において詳細に記載されるとおりであり、三重遺伝子導入方法に関するこれらの内容は、本明細書において参考として援用される）。例えば、組み換えＡＡＶは、宿主細胞を、組み換えＡＡＶトランスファーベクター（導入遺伝子を含む）で、ＡＡＶ粒子、ＡＡＶヘルパー機能ベクター、および補助機能ベクターにパッケージングされるように遺伝子導入することにより、生成することができる。一般に、ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、ＡＡＶヘルパー機能配列（ｒｅｐおよびｃａｐ）をコードし、これらは、増殖性ＡＡＶの複製およびキャプシド化のためにトランスで機能する。好ましくは、ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、いかなる検出可能な野生型ＡＡＶビリオン（すなわち機能的ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子を含むＡＡＶビリオン）をも生じることなく、効率的なＡＡＶベクター生成を支持する。補助機能ベクターは、ＡＡＶが複製のために依存している、非ＡＡＶ由来のウイルスおよび／または細胞の機能のためのヌクレオチド配列をコードする。補助機能は、ＡＡＶ複製のために必要とされる機能を含み、これは、限定することなく、以下を含む：ＡＡＶ遺伝子転写の活性化に関与する部分、段階特異的なＡＡＶ ｍＲＮＡスプライシング、ＡＡＶ ＤＮＡ複製、ｃａｐ発現生成物の合成、およびＡＡＶキャプシドの組み立て。ウイルスベースの補助機能は、アデノウィルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス１型以外）、およびワクシニアウイルスなどの既知のヘルパーウイルスのうちのいずれかに由来してもよい。
ウイルスベクターを生成するための他の方法は、当該分野において公知である。さらに、ウイルスベクターは、市販されている。
免疫抑制剤にカップリングした合成ナノキャリアに関して、構成成分を合成ナノキャリアに接着させるための方法は、有用であり得る。
態様において、構成成分を、例えば合成ナノキャリアに接着させるための方法は、有用であり得る。ある態様において、接着は、共有結合性リンカーであってもよい。態様において、本発明による免疫抑制剤は、アジド基とアルキン基を含む免疫抑制剤との１，３−双極性環付加反応により、またはアルキンとアジド基を含む免疫抑制剤との１，３−双極性環付加反応により形成される、１，２，３−トリアゾールリンカーを介して、外部表面に共有結合により接着させることができる。かかる環付加反応は、好ましくは、好適なＣｕ（Ｉ）−リガンドおよびＣｕ（ＩＩ）化合物を触媒活性Ｃｕ（Ｉ）化合物に還元するための還元剤と共に、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下において行われる。Ｃｕ（Ｉ）により触媒されるアジド−アルキン環付加（ＣｕＡＡＣ）はまた、クリック反応としても言及され得る。
加えて、共有結合性カップリングは、以下を含む共有結合性リンカーを含んでもよい：アミドリンカー、ジスルフィドリンカー、チオエーテルリンカー、ヒドラゾンリンカー、ヒドラジドリンカー、イミンまたはオキシムリンカー、ウレアまたはチオウレアリンカー、アミジンリンカー、アミンリンカー、およびスルホンアミドリンカー。
アミドリンカーは、免疫抑制剤などの１つの構成成分上のアミンとナノキャリアなどの第２の構成成分のカルボン酸基との間のアミド結合を介して形成される。リンカー中のアミド結合は、従来のアミド結合のうちのいずれかを用いて行うことができ、これは、好適に保護されたアミノ酸と、活性化されたカルボン酸（Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドにより活性化されたエステルなど）との反応を形成する。
ジスルフィドリンカーは、例えばＲ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ２の形態の２個の硫黄原子の間のジスルフィド（Ｓ−Ｓ）結合の形成を介して作製する。ジスルフィド結合は、チオール／メルカプタン基（−ＳＨ）を含む構成成分と別の活性化されたチオール基との、またはチオール／メルカプタン基を含む構成成分と、活性化されたチオール基を含む構成成分との、チオール交換により形成することができる。
トリアゾールリンカー、特に、

ここで、Ｒ１およびＲ２は、任意の化学実体であってよい、
の形態の１，２，３−トリアゾールは、末端アルキンが第２の構成成分（免疫抑制剤など）に接着したている第１の構成成分に接着したアジドの１，３−双極性環付加反応により作製される。１，３−双極性環付加反応は、触媒を用いてまたはこれを用いずに、好ましくは、１，２，３−トリアゾール機能を通して２つの構成成分を連結するＣｕ（Ｉ）−触媒を用いて行う。この化学は、Sharpless et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41(14), 2596, (2002）およびMeldal, et al, Chem. Rev., 2008, 108(8), 2952-3015において詳細に記載され、しばしば、「クリック」反応またはＣｕＡＡＣとして言及される。
チオエーテルリンカーは、例えばＲ１−Ｓ−Ｒ２の形態における硫黄−炭素（チオエーテル）結合の形成により作製する。チオエーテルは、第２の構成成分上のハライドまたはエポキシドなどのアルキル化基による１つの構成成分上のチオール／メルカプタン（−ＳＨ）基のいずれかのアルキル化により作製することができる。チオエーテルリンカーはまた、１つの構成成分上のチオール／メルカプタン基の、マイケルアクセプターとしてマレイミド基またはビニルスルホン基を含む第２の構成成分上の電子欠乏アルケン基へのマイケル付加により形成させることができる。別の方法において、チオエーテルリンカーは、１つの構成成分上のチオール／メルカプタン基と第２の構成成分上のアルケン基とのラジカルチオール−エン反応により調製することができる。
ヒドラゾンリンカーは、１つの構成成分上のヒドラジド基と第２の構成成分上のアルデヒド／ケトン基との反応により作製する。
ヒドラジドリンカーは、１つの構成成分上のヒドラジン基と第２の構成成分上のカルボン酸基との反応により形成させる。かかる反応は、一般に、活性化試薬によりカルボン酸が活性化されるアミド結合の形成と類似の化学を用いて行う。
イミンまたはオキシムリンカーは、１つの構成成分上のアミンまたはＮ−アルコキシアミン（またはアミノオキシ）基と第２の構成成分上のアルデヒドまたはケトン基との反応により形成される。
ウレアまたはチオウレアリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と第２の構成成分上のイソシアネートまたはチオイソシアネート基との反応により調製される。
アミジンリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と第２の構成成分上のイミドエステル基との反応により調製される。
アミンリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と第２の構成成分上のアルキル化基（ハライド、エポキシド、またはスルホン酸エステル基など）とのアルキル化反応により作製する。あるいは、アミンリンカーはまた、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムなどの好適な還元性試薬を用いる、１つの構成成分上のアミン基と第２の構成成分上のアルデヒドまたはケトン基との還元的アミノ化により、作製することができる。
スルホンアミドリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と第２の構成成分上ののスルホニルハライド（例えば塩化スルホニル）基との反応により作製する。
スルホンリンカーは、求核剤のビニルスルホンへのマイケル付加により作製する。ビニルスルホンまたは求核剤のいずれかは、ナノキャリアの表面上にあるか、または構成成分に結合していてもよい。
構成成分はまた、非共有結合性抱合方法を介して、抱合させてもよい。例えば、負に荷電した免疫抑制剤は、静電気的吸着を通して、正に荷電した構成成分に抱合させることができる。金属リガンドを含む構成成分もまた、金属−リガンド錯体を介して金属錯体に抱合させることができる。
態様において、構成成分は、合成ナノキャリアの組み立ての前に、ポリマー、例えばポリ乳酸−ブロック−ポリエチレングリコールに接着していてもよく、または、合成ナノキャリアを、その表面上で反応性もしくは活性化可能な基により形成させてもよい。後者の場合、構成成分は、合成ナノキャリアの表面により提示される、接着の化学と適合性である基を用いて調製することができる。他の態様において、ペプチド構成成分は、好適なリンカーを用いてＶＬＰまたはリポソームに接着させることができる。リンカーは、２つの分子を一緒にカップリングすることができる化合物または試薬である。一態様において、リンカーは、Hermanson 2008において記載されるようなホモ二官能性またはヘテロ二官能性試薬であってよい。例えば、表面上にカルボキシ基を含むＶＬＰまたはリポソーム合成ナノキャリアは、ＡＤＨリンカーにより対応する合成ナノキャリアを形成するＥＤＣの存在下において、ホモ二官能性リンカーであるアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）で処置することができる。生じたＡＤＨにより連結された合成ナノキャリアを、次いで、ナノキャリア上のＡＤＨリンカーの他方の末端を介して酸性基を含むペプチド構成成分と抱合させ、対応するＶＬＰまたはリポソームペプチド抱合体を生成する。
態様において、ポリマー鎖の末端にアジドまたはアルキン基を含むポリマーを調製する。このポリマーを、次いで、複数のアルキンまたはアジド基をそのナノキャリアの表面上に位置させるような様式において、合成ナノキャリアを調製するために用いる。あるいは、合成ナノキャリアを別の経路により調製し、その後、アルキンまたはアジド基で官能化してもよい。構成成分は、アルキン（ポリマーがアジドを含む場合）またはアジド（ポリマーがアルキンを含む場合）基のいずれかが存在するように調製する。構成成分を、次いで、１，３−双極性環付加反応を介して、触媒を用いてまたはこれを用いずに、ナノキャリアと反応させ、これは、１，４−置換１，２，３−トリアゾールリンカーを通して、構成成分を粒子に共有結合により接着させる。
構成成分が小分子である場合、合成ナノキャリアの組み立ての前に構成成分をポリマーに接着させることは有利であり得る。態様において、構成成分をポリマーに接着させてその後このポリマー抱合体を合成ナノキャリアの構築に用いるというよりはむしろ、表面基の使用を通して構成成分を合成ナノキャリアに接着させるために用いられるような表面基を有する合成ナノキャリアを調製することもまた有利である。
利用可能な抱合方法の詳細な説明については、Academic Press, Inc.により2008年に刊行されたHermanson G T「Bioconjugate Techniques」、第２版を参照。共有結合による接着に加えて、構成成分は、予め形成された合成ナノキャリアへの吸着により接着しても、または、それは、合成ナノキャリアの形成の間にカプセル化により接着していてもよい。
合成ナノキャリアは、当該分野において公知の多様な方法を用いて調製することができる。例えば、合成ナノキャリアは、ナノ沈殿、流体チャネルを用いるフローフォーカス（flow focusing）、スプレー乾燥、単一および二重のエマルジョン溶媒蒸発、溶媒抽出、相分離、粉砕（milling）、マイクロエマルジョンの手法、微細加工、ナノ加工、犠牲層、単純および複雑なコアセルベーション、ならびに当業者に周知の他の方法などの方法により形成させることができる。あるいは、または加えて、単分散の半導体、伝導性、磁性、有機性および他のナノ材料のための水性および有機性の溶媒合成は記載されている（Pellegrino et al., 2005, Small, 1:48；Murray et al., 2000, Ann. Rev. Mat. Sci., 30:545；およびTrindade et al., 2001, Chem. Mat., 13:3843）。さらなる方法は、文献において記載されている（例えば、Doubrow編、「Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy」、CRC Press, Boca Raton, 1992；Mathiowitz et al., 1987, J. Control. Release, 5:13；Mathiowitz et al., 1987, Reactive Polymers, 6:275；およびMathiowitz et al., 1988, J. Appl. Polymer Sci., 35:755；米国特許5578325および6007845；P. Paolicelliら、「Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles」Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)を参照）。
材料は、望ましい場合、以下を含むがこれらに限定されない多様な方法を用いて、合成ナノキャリア中にカプセル化することができる：C. Astete et al.,「Synthesis and characterization of PLGA nanoparticles」J. Biomater. Sci. Polymer Edn, Vol. 17, No. 3, pp. 247-289 (2006)；K. Avgoustakis「Pegylated Poly(Lactide) and Poly(Lactide-Co-Glycolide) Nanoparticles：Preparation, Properties and Possible Applications in Drug Delivery」Current Drug Delivery 1:321-333 (2004)；C. Reis et al.,「Nanoカプセル化I. Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles」Nanomedicine 2:8- 21 (2006)；P. Paolicelli et al.,「Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles」Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)。材料を合成ナノキャリア中にカプセル化するために好適な他の方法もまた用いることができ、これは、限定されないが、Ungerに対して２００３年１０月１４日に発行された米国特許6,632,671において開示される方法を含む。
ある態様において、合成ナノキャリアは、ナノ沈殿のプロセスまたはスプレー乾燥により調製される。合成ナノキャリアを調製することにおいて用いられる条件は、所望されるサイズまたは特性（例えば、疎水性、親水性、外部の形態学、「粘着性（stickiness）」、形状など）の粒子を得るために、改変してもよい。合成ナノキャリアを調製する方法および用いられる条件（例えば、溶媒、温度、濃度、気流速度など）は、合成ナノキャリアに接着すべき材料、および／またはポリマーマトリックスの組成に依存し得る。
上の方法のいずれかにより調製された合成ナノキャリアが、所望される範囲の外のサイズ範囲を有する場合、合成ナノキャリアを、例えば篩を使用して、サイズ調整することができる。
合成ナノキャリアのエレメントは、例えば、１つ以上の共有結合により、合成ナノキャリア全体に接着させても、１つ以上のリンカーにより接着していてもよい。合成ナノキャリアを官能化するさらなる方法は、Saltzmanらに対する公開された米国特許出願2006/0002852、DeSimoneらに対する公開された米国特許出願2009/0028910、またはMurthyらに対する公開された国際特許出願WO/2008/127532 A1から適応させてもよい。
あるいはまたは加えて、合成ナノキャリアは、非共有結合性相互作用を介して、直接的または間接的に、構成成分に接着していてもよい。非共有結合性の態様において、非共有結合性の接着は、電荷相互作用、アフィニティー相互作用、金属配位、物理的吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファン・デル・ワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない、非共有結合性相互作用により媒介される。かかる接着は、合成ナノキャリアの外部表面または内部表面上のものとなるように配置される。態様において、カプセル化および／または吸着は、接着の一形態である。
本明細書において提供される組成物は、以下を含んでもよい：無機または有機の緩衝化剤（例えば、リン酸、炭酸、酢酸またはクエン酸のナトリウムまたはカリウム塩）およびｐＨ調整剤（例えば、塩酸、水酸化ナトリウムまたはカリウム、クエン酸または酢酸の塩、アミノ酸およびそれらの塩）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、アルファ−トコフェロール）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン９−１０ノニルフェノール、デオキシコール酸ナトリウム）、溶解および／または凍結／溶解（lyo）安定化剤（例えば、スクロース、ラクトース、マンニトール、トレハロース）、浸透圧調整剤（例えば、塩または糖）、抗菌剤（例えば、安息香酸、フェノール、ゲンタマイシン）、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロキサン）、保存剤（例えば、チメロサール、２−フェノキシエタノール、ＥＤＴＡ）、ポリマー性安定化剤および粘性調整剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー４８８、カルボキシメチルセルロース）および共溶媒（例えば、グリセロール、ポリエチレングリコール、エタノール）。
本発明による組成物は、薬学的に受入可能な賦形剤を含んでもよい。組成物は、有用な投与形態に到達するための従来の医薬の製造および配合技術を用いて製造することができる。本発明を実施することにおける使用のために好適な技術は、Handbook of Industrial Mixing：Science and Practice、Edward L. Paul, Victor、A. Atiemo-ObengおよびSuzanne M. Kresta編、2004年、John Wiley & Sons, Inc.；およびPharmaceutics：The Science of Dosage Form Design、第２版、M. E. Auten編、2001年、Churchill Livingstoneにおいて見出すことができる。一態様において、組成物は、注射のための無菌の食塩水溶液中に保存剤と共に懸濁される。
本発明の組成物は、任意の好適な様式において製造すること、および本発明は、決して、本明細書において記載される方法を用いて生成され得る組成物に限定されるものではないことが、理解されるべきである。適切な製造の方法の選択は、関連する特定の部分の特性に対する注意を必要とし得る。
いくつかの態様において、組成物は、無菌条件下において製造されるか、最後に無菌化される。このことは、生じる組成物が無菌かつ非感染性であることを保証し、それにより、非無菌の組成物と比較した場合に、安全性を改善する。このことは、組成物を投与されている対象が、免疫欠損を有するか、感染症を罹患しているか、および／または感染に対して感受性である場合には特に、価値ある安全性の指標を提供する。
本発明による投与は、これらに限定されないが、皮下、静脈内、筋肉内および腹腔内経路を含む多様な経路によるものであってよい。本明細書において言及される組成物は、従来の方法を用いる投与、いくつかの態様においては共投与のために、製造および調製することができる。
本発明の組成物は、有効量、例えば本明細書において別の場所に記載される有効量において投与することができる。投与形態は、多様な頻度において投与することができる。提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、ウイルスベクターを用いるまたはこれを用いない、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの繰り返し投与が行われる。
本発明の側面は、本明細書において提供されるような投与の方法のためのプロトコルを決定することに関する。プロトコルは、少なくとも、頻度、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよび／またはウイルスベクターの投与量を、例えば提供される投与レジメンに従って変化させ、所望されるまたは望ましくない免疫応答または導入遺伝子発現を評価することにより、決定することができる。本発明の実施のための好ましいプロトコルは、ウイルスベクターまたはそのウイルス性抗原に対する免疫応答を低下させるか、および／または導入遺伝子発現を促進する。プロトコルは、例えば本明細書において提供される投与レジメンのうちのいずれか１つに従う、投与の頻度ならびに免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよび／またはウイルスベクターの用量を含む。本明細書において提供される方法のうちのいずれか１つは、プロトコルを決定するステップを含んでもよく、または、投与するステップは、本明細書において提供されるような所望される結果のうちの１つ以上を達成することが決定されたプロトコルに従って行われる。
本開示の別の側面は、キットに関する。提供されるキットのうちのいずれか１つのいくつかの態様において、キットは、本明細書において提供される組成物のうちのいずれか１つを含む。好ましくは、組成物は、本明細書において提供されるような任意の１つ以上の用量を提供する量におけるものである。組成物は、キットにおいて、１つの容器中または１つより多くの容器中にある。提供されるキットのうちのいずれか１つのいくつかの態様において、容器は、バイアルまたはアンプルである。提供されるキットのうちのいずれか１つのいくつかの態様において、組成物は、後の時点においてそれらを再構成することができるように、別の容器中または同じ容器中で、各々凍結乾燥形態にある。提供されるキットのうちのいずれか１つのいくつかの態様において、キットは、再構成、混合、投与などのための指示をさらに含む。提供されるキットのうちのいずれか１つのいくつかの態様において、指示は、本明細書において記載される方法のうちのいずれか１つの説明を含む。指示は、任意の好適な形態であってよく、例えば、印刷された挿入物またはラベルとしての形態であってよい。提供されるキットのうちのいずれか１つのいくつかの態様において、キットは、組成物をin vivoで対象に送達することができる１つ以上のシリンジまたは他のデバイスをさらに含む。
例
例１：ラパマイシンを含む合成ナノキャリア
材料
ラパマイシンは、TSZ CHEMから購入した（185 Wilson Street, Framingham, MA 01702；製品カタログ＃R1017）。７６％ラクチドおよび２４％グリコリド含有量および０．６９ｄＬ／ｇの本来の粘度を有するＰＬＧＡは、SurModics Pharmaceuticalsから購入した（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211；製品コード7525 DLG 7A）。約５，０００ＤａのＰＥＧブロックおよび約４０，０００ＤａのＰＬＡブロックを有するＰＬＡ−ＰＥＧブロックコポリマーは、SurModics Pharmaceuticalsから購入した（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211；製品コード100 DL mPEG 5000 5CE）。ポリビニルアルコール（８５〜８９％加水分解されている）は、EMD Chemicalsから購入した（Product Number 1.41350.1001）。
方法
溶液は、以下のとおり調製した：
溶液１：塩化メチレン中、７５ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡおよび２５ｍｇ／ｍＬのＰＬＡ−ＰＥＧ。溶液は、ＰＬＧＡおよびＰＬＡ−ＰＥＧを、純粋な塩化メチレン中で溶解することにより調製した。
溶液２：塩化メチレン中１００ｍｇ／ｍＬのラパマイシン。溶液は、ラパマイシンを純粋な塩化メチレン中で溶解することにより調製した。
溶液３：１００ｍＭのｐＨ８のリン酸バッファー中５０ｍｇ／ｍＬのポリビニルアルコール。
水中油型エマルジョンを用いて、ナノキャリアを調製した。Ｏ／Ｗエマルジョンは、小さな圧力管中で溶液１（１ｍＬ）、溶液２（０．１ｍＬ）、および溶液３（３ｍＬ）を組み合わせて、Branson Digital Sonifier 250を用いて３０％の振幅で６０秒間にわたり超音波処理することにより調製した。Ｏ／Ｗエマルジョンを、７０ｍＭのｐＨ８のリン酸バッファー溶液（３０ｍＬ）を含むビーカーに加えて、室温で２時間にわたり撹拌して、塩化メチレンを蒸発させ、ナノキャリアを形成させた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移して、７５，０００×ｇおよび４℃で３５分間遠心分離し、上清を取り除き、ペレットをリン酸緩衝化食塩水中で再懸濁することにより洗浄した。洗浄の手順を繰り返し、ペレットを、リン酸緩衝化食塩水中で、約１０ｍｇ／ｍＬの最終ナノキャリア懸濁液のために再懸濁した。
ナノキャリアのサイズを、動的光散乱により決定した。ナノキャリア中のラパマイシンの量を、ＨＰＬＣ分析により決定した。１ｍＬの懸濁液あたりの合計の乾燥ナノキャリア質量を、重量測定的方法により決定した。
例２：GSK1059615を含む合成ナノキャリア
材料
GSK1059615は、MedChem Expressから購入した（11 Deer Park Drive, Suite 102D Monmouth Junction, NJ 08852）；製品コードHY-12036。１：１のラクチド：グリコリド比および０．２４ｄＬ／ｇの本来の粘度を有するＰＬＧＡ
は、Lakeshore Biomaterialsから購入した（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）；製品コード5050 DLG 2.5A。メチルエーテル末端化された約５，０００ＤａのＰＥＧブロックおよび０．２６ＤＬ／ｇの全体的な本来の粘度を有するＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅブロックコポリマーは、Lakeshore Biomaterialsから購入した（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211；製品コード100 DL mPEG 5000 5K-E）。Cellgroリン酸緩衝化食塩水１×（ｐＨ７．４）（ＰＢＳ １Ｘ）は、Corningから購入した（9345 Discovery Blvd. Manassas, VA 20109）；製品コード21-040-CV。
方法
溶液は、以下のとおり調製した：
溶液１：ＰＬＧＡ（１２５ｍｇ）、およびＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（１２５ｍｇ）を、１０ｍＬのアセトン中で溶解した。溶液２：GSK1059615は、１ｍＬのＮ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）中１０ｍｇで調製した。
ナノキャリアは、小さいガラス圧力管中で溶液１（４ｍＬ）および溶液２（０．２５ｍＬ）を組み合わせ、混合物を、２０ｍＬの超純水を含む２５０ｍＬの丸底フラスコに、撹拌しながら滴加することにより調製した。フラスコを回転式蒸発デバイス上に載せて、減圧下においてアセトンを取り除いた。ナノキャリアの一部を、ナノキャリア懸濁液を遠心管に移して、75,600rcfおよび４℃で50分間にわたり遠心分離し、上清を取り除き、ＰＢＳ １Ｘ中でペレットを再懸濁することにより洗浄した。洗浄の手順を繰り返し、ＰＢＳ １Ｘ中でペレットを再懸濁して、ポリマーに基づいて１０ｍｇ／ｍＬの名目上の濃度を有するナノキャリア懸濁液を達成した。洗浄したナノキャリア溶液を、次いで、Pall製の１．２μｍのＰＥＳメンブレンシリンジフィルター（パート番号4656）を用いてろ過した。同一のナノキャリア溶液を、上のとおり調製し、ろ過ステップの直後にプールした。均一な懸濁液を、−２０℃で凍結保存した。
ナノキャリアサイズを、動的光散乱により決定した。ナノキャリア中のGSK1059615の量を、３５１ｎｍにおけるＵＶ吸収により決定した。１ｍＬの懸濁液あたりの合計の乾燥ナノキャリアの質量を、重量測定的方法により決定した。
例３：初期ＡＡＶによりコードされる導入遺伝子のin vivoでの発現は、ＡＡＶが、ラパマイシンにカップリングされた合成ナノキャリアと予め混合された場合には影響を受けない
標準的なオスマウスＡＡＶ形質導入モデルにおいて、ＡＡＶがラパマイシンにカップリングされた合成ナノキャリアと予め混合された場合（ＳＶＰ［Rapa］）（この場合においてはカプセル化されたラパマイシン）、初期ＡＡＶによりコードされる導入遺伝子のin vivoでの発現は、影響を受けない；ＳＶＰ［Rapa］が、ＡＡＶの直後に投与される場合、導入遺伝子発現は劣る；この効果は、ＩｇＧ抗体形成に依存しないことを見出した。
具体的には、６〜１２個体のオスＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、ＳＶＰにカプセル化されたラパマイシン（この例においてはＳＶＰ［Rapa］）を用いてまたはこれを用いずに（これは、ＡＡＶに混合され、次いで投与されるか、ＡＡＶ−ＳＥＡＰの直後に（１５分以内の間隔；「非混合」とラベルされる）注射される）、ＡＡＶ−ＳＥＡＰを注射した（ｉ．ｖ．、尾静脈）。示された時点（第１９日）においてマウスから採血し、血清を全血から分離し、−２０±５℃で分析まで保存した。次いで、ThermoFisher Scientific（Waltham, MA, USA）製のキットを用いて、血清におけるＳＥＡＰレベルを測定した。簡単に述べると、血清試料および陽性対照を、希釈バッファー中で希釈し、６５℃で３０分間にわたりインキュベートし、次いで室温まで冷却し、９６ウェルのフォーマット中に播種し、アッセイバッファー（５分間）および次いで基質（２０分間）を添加し、プレートをルミノメーター（４７７ｎｍ）上で読み取った。
別に、ＡＡＶに対するＩｇＧ抗体を、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定した：９６ウェルプレートをＡＡＶで一晩コートし、翌日に洗浄およびブロッキングし、次いで希釈した血清試料（１：４０）をプレートに加えてインキュベートした；プレートを次いで洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的ＨＲＰを添加し、その後さらにインキュベートおよび洗浄し、ＡＡＶに対するＩｇＧ抗体の存在を、ＴＭＢ基質を添加することにより検出し、４５０ｎｍの吸光度において（５７０ｎｍの参照波長を用いて）測定した（最大光学密度（ＯＤ）として表されるシグナルの強度は、試料中のＩｇＧ抗体の量に直接的に比例する）。
混合されたＳＶＰ［Rapa］は、この時点においてはＳＥＡＰ発現に影響を及ぼさなかったが、ＳＥＡＰ発現は、ＡＡＶ−ＳＥＡＰの後にＳＶＰ［Ｒａｐａ］を連続的に注射されたマウスにおいて、下方制御された（図１Ａ）。この時点においてＳＶＰ［Rapa］で処置された全てのマウスがＡＡＶに対するＩｇＧ抗体の下方制御を示したことから、この効果は、ＡＡＶに対するＩｇＧ抗体の誘導に非依存的であった（図１Ｂ）。
例４：混合されていないラパマイシンにカップリングされた合成ナノキャリアは、投与の順序にかかわらず、ＡＡＶ駆動型の導入遺伝子の発現の初期の下方制御をもたらす
本実験において、非混合ＳＶＰ［Rapa］は、投与の順序にかかわらず、ＡＡＶ駆動型の導入遺伝子の発現の初期の下方制御をもたらすことを見出した。導入遺伝子の発現レベルは、ＳＶＰ［Rapa］と組み合わせたＡＡＶを投与されたマウスにおいて経時的に増大することを見出した；この効果は、ＳＶＰ［Rapa］によるＩｇＧ抗体の下方制御と関係しない。
具体的には、５〜６個体のオスＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、ＳＶＰ［Rapa］を用いてまたはこれを用いずに（これは、ＡＡＶと混合されるか、またはＡＡＶ−ＳＥＡＰの前もしくは後に、１５分間もしくは１時間の間隔で注射された）、ＡＡＶ−ＳＥＡＰをｉ．ｖ．で注射した。示された時点（ｄ１９およびｄ７５）において、マウス血清中のＳＥＡＰ活性およびＡＡＶに対するＩｇＧ抗体を測定した。
ＡＡＶ−ＳＥＡＰとＳＶＰ［Rapa］との別々の投与は、第１９日において、より低いＳＥＡＰの発現をもたらした（図２Ａ）。１時間間隔で処置されたマウスは、１５分間隔で注射されたマウスよりもいくらか低い発現を示した。混合されたＡＡＶ−ＳＥＡＰおよびＳＶＰ［Rapa］を投与されたマウスは、ＡＡＶ−ＳＥＡＰのみを注射されたものと同じレベルのＳＥＡＰ発現を有した（図２Ａ）。注目すべきことに、ＳＥＡＰ発現のレベルは、ＳＶＰ［Rapa］を投与された全てのマウスにおいて、経時的に増大し、第７５日までに、混合されたＡＡＶ−ＳＥＡＰおよびＳＶＰ［Rapa］を投与されたマウスは、ＡＡＶ−ＳＥＡＰのみを投与されたものより高いレベルまでＳＥＡＰを発現したが、一方で、混合されていないＡＡＶ−ＳＥＡＰおよびＳＶＰ［Rapa］を投与されたマウスの群で、ＡＡＶ−ＳＥＡＰのみを投与されたものと類似するＳＥＡＰレベルを生成するものが存在した（図２Ｂ）。この現象は、ＳＶＰ［Rapa］を投与された全ての群において観察されたＩｇＧ抗体の下方制御に非依存的であった（図２Ｃ）。
例５：混合されたラパマイシンにカップリングされた合成ナノキャリアおよびＡＡＶ−ＳＥＡＰは、ＩｇＧ抗体応答にかかわらず、導入遺伝子の発現の即時上昇をもたらす
本実験において、ＡＡＶ−ＳＥＡＰを用いるＳＶＰ［Rapa］のメスマウスへの投与は、ＩｇＧ抗体応答にかかわらず、導入遺伝子の発現の即時上昇をもたらすことを見出した。
例３および４から、ＳＶＰ［Rapa］とＡＡＶとを混合しないことは、短期において劣った効果を有し得ると考えられる。しかし、当該現象は、初期の時点（第１９日など）においては、オスＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて一般的に観察されるＡＡＶによる効率的な形質導入によりマスクされる場合がある。別に、Ｃ５７ＢＬ／６メスマウスの群に、ＳＶＰ［Rapa］を用いてまたはこれを用いずに、２つの異なる用量のＡＡＶ−ＳＥＡＰを接種し、第１２および１９日に、血清中のＳＥＡＰ活性およびＡＡＶ ＩｇＧ抗体を測定した。ＳＥＡＰ発現のレベルの上昇が、ＡＡＶ−ＳＥＡＰとＳＶＰ［Rapa］との混合物を投与された全てのマウスにおいて、ＡＡＶ接種の直後に起こることが見出され、平均２倍の改善であった（図３Ａ）。注目すべきことに、このことは、最少のＩｇＧ抗体誘導が観察される第１２日などの、非常に初期の時点において観察された（図３Ｂ）。加えて、群間のＳＥＡＰ発現の相対的レベルは、所与の時間間隔内で同じままであった（注射後１２日と１９日との間）が、一方で、ＳＶＰ［Rapa］未処置群におけるＩｇＧ抗体レベルは、同じ時間にわたって増大した（図３Ｂ）。
これらの結果は、導入遺伝子を担持するＡＡＶおよびＳＶＰ［Rapa］の投与が、in vivoで、より高い導入遺伝子発現のレベルをもたらし、これは、ＡＡＶ形質導入をより受け入れにくい系において特に注目すべきであること、ならびにこの現象が、ＳＶＰ［Rapa］によるＡＡＶ ＩｇＧ抗体の下方制御に非依存的であることを確認する。
例６：ＡＡＶとラパマイシンにカップリングされた合成ナノキャリアとの混合はin vitroで１５分以内にその完全な吸着をもたらす
具体的には、１ｍＬのＰＢＳ中の２．５×１０１１ＶＧのＡＡＶまたはＳＶＰ［Rapa］粒子を、石英キュベットに加え、ＤＬＳにより別々に測定する（図４Ａ）か、または混合した後に（１００：１のＡＡＶ対ＳＶＰ［Rapa］粒子比において）、インキュベーションの直後もしくは１５分後に測定する（図４Ｂ）。
ＡＡＶをＳＶＰ［Rapa］に混合した直後に（図４Ｂ）、２つの別々のピークが観察され、これらは、別々に測定されたＡＡＶおよびＳＶＰ［Rapa］のサイズに対応した（図４Ａ；それぞれ２５および１５０ｎｍ）。ＳＶＰ［Rapa］のＡＡＶへの混合の１５分後においては、単一のピークのみが観察され（図４Ｂ）、これは、ナノキャリアのサイズに対応し、このことは、ＳＶＰ［Rapa］へのＡＡＶの完全な吸着を示す。
例７：初期ＡＡＶ ＩｇＭ誘導は、ラパマイシンにカップリングされた合成ナノキャリアおよびウイルスベクターの投与により下方制御される
５個体のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、ＳＶＰにカプセル化されたラパマイシン（この例においてはＳＶＰ［Rapa］）または対照ポリマーのみ（この例においてはＳＶＰ［Empty］）を用いてまたはこれを用いずに（これは、ＡＡＶと混合されて次いで投与されるか、またはＡＡＶ−ＳＥＡＰの直前に注射された（１５分以内の間隔で；「非混合」とラベルされる））、１×１０１０ウイルスゲノム（ＶＧ）のＡＡＶ−ＳＥＡＰを注射した（ｉ．ｖ．、尾静脈）。示された時点において（Ａにおいては第５および１０日、ならびにＢにおいては第６、１２、１９および８９日）、マウスから採血し、血清を全血から分離し、−２０±５℃で分析まで保存した。別に、ＡＡＶに対するＩｇＭ抗体をＥＬＩＳＡアッセイにより測定した：９６ウェルプレートをＡＡＶで一晩コートし、翌日に洗浄およびブロッキングし、次いで希釈した血清試料（１：４０）をプレートに加えてインキュベートした；プレートを次いで洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＭ特異的ＨＲＰを添加し、その後さらにインキュベートおよび洗浄し、ＡＡＶに対するＩｇＭ抗体の存在を、ＴＭＢ基質を添加することにより検出し、４５０ｎｍの吸光度において（５７０ｎｍの参照波長を用いて）測定した（最大光学密度（ＯＤ）として表されるシグナルの強度は、試料中のＩｇＭ抗体の量に直接的に比例する）。
ＳＶＰ［Rapa］と共に投与された混合および非混合ＡＡＶはいずれも、ＡＡＶ注射の後、第５（図５Ａ）および７日において（図５Ｂ）、ＩｇＭの初期誘導を、正常血清の基線（破線）に近いレベルまで強力に下方制御した。この効果は、第１０日においてもなお観察された（図５Ａ）が、第１２日以降までにはより顕著ではなくなり（図５Ｂ）、この時点において、未処置のマウスにおけるＩｇＭのレベルは減少した。対照ＳＶＰ［Empty］ナノキャリアで処置された群においては、ＩｇＭの下方制御活性は観察されなかった。
例８：ＡＡＶキャプシドに対する初期ＩｇＭのレベルは、ＡＡＶ投与後の導入遺伝子発現のレベルと逆相関する
４〜５個体のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスの８つの群に、ＳＶＰ［Rapa］を用いてまたはこれを用いずに、またはＳＶＰ［Empty］を用いて（これは、ＡＡＶと混合されるか、またはＡＡＶ−ＳＥＡＰの直前に別に注射された）、ＡＡＶ−ＳＥＡＰ（１×１０１０ＶＧ）をｉ．ｖ．で注射した。示された時点（ｄ７〜ｄ８９）において、ＳＥＡＰ活性およびＡＡＶ ＩｇＭレベルを測定した（図６）。第９２日において、全ての動物を、同じ量のＡＡＶ−ＳＥＡＰでブーストし、プライミング時のものと同じ処置に供した。ThermoFisher Scientific（Waltham, MA, USA）製のアッセイキットを用いて、血清におけるＳＥＡＰレベルを測定した。簡単に述べると、血清試料および陽性対照を、希釈バッファー中で希釈し、６５℃で３０分間にわたりインキュベートし、次いで室温まで冷却し、９６ウェルのフォーマット中に播種し、アッセイバッファー（５分間）および次いで基質（２０分間）を添加し、プレートをルミノメーター（４７７ｎｍ）において読み取った。
ｄ７におけるＩｇＭレベルは、血清中のＳＥＡＰの全体レベルが一般に低いＡＡＶ投与後の第７日において、血清ＳＥＡＰレベルと、極めて強力かつ統計学的に有意な逆相関を示した（グラフ上にｐ値を示す）。この相関は、初回のＡＡＶおよびＳＶＰ［Rapa］投与の後ほぼ３か月間にわたり維持された。さらに、ＡＡＶ−ＳＥＡＰブーストの後、第９２日において、初期には低いＡＡＶ ＩｇＭのレベルを有した動物は、ブーストに対して、より有益な様式において、すなわち、導入遺伝子発現をより高いレベルまで上昇させることにより応答したが、一方で、初期に高いＩｇＭレベルを有する動物は、より弱い様式において、すなわち、導入遺伝子発現のより低い上昇により応答した。結果として、初期（第７日）のＡＡＶ ＩｇＭレベルとブースト後の血清ＳＥＡＰレベルとの間の逆相関は、ブースト後にさらに強力になった（ｄ９９およびｄ１０４、またはブースト後第７日および第１２日）。
例９：合成ナノキャリアおよびウイルスベクターの前のラパマイシンにカップリングされた合成ナノキャリアの投与（仮想的）
対象の群に、ＳＶＰ［Rapa］をｉ．ｖ．で注射し、３０日以内に、対象に、ＡＡＶ−ＳＥＡＰ（１×１０１０ＶＧ）を、ＳＶＰ［Rapa］と共に（これは、混合されるか、または混合されないが同時に投与される）、ｉ．ｖ．で注射する。示された時点において、ＳＥＡＰ活性およびＡＡＶ ＩｇＭレベルを測定する。
例１０：ラパマイシンにカップリングされた合成ナノキャリアおよびウイルスベクターのさらなる投与（仮想的）
例９における対象の第２の投与の３０日以内に、対象に、再び、ＳＶＰ［Rapa］をｉ．ｖ．で注射する。さらなる３０日間以内に、対象に、ＡＡＶ−ＳＥＡＰ（１×１０１０ＶＧ）を、ＳＶＰ［Rapa］と共に（これは、混合されるか、または混合されないが同時に投与される）、ｉ．ｖ．で注射する。示された時点において、ＳＥＡＰ活性およびＡＡＶ ＩｇＭレベルを再び測定する。
例１１：ＩｇＧ抑制
５個体のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、１×１０１０ウイルスゲノム（ＶＧ）のＡＡＶ−ＳＥＡＰを、単独で、またはＳＶＰにカプセル化されたラパマイシン（この例においてはＳＶＰ［Rapa］）、または対照ポリマーのみ（この例においてはＳＶＰ［Empty］）と共に注射し（ｉ．ｖ．、尾静脈）、前者は、ＡＡＶに混合して次いで投与されるか、またはＡＡＶ−ＳＥＡＰの前に注射した（１５分以内；「非混合」とラベルされる）。示された時点において マウスから採血し、血清を全血から分離し、−２０±５℃で分析まで保存した。
ＡＡＶに対するＩｇＧ抗体を、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定した：９６ウェルプレートをＡＡＶで一晩コートし、翌日に洗浄およびブロッキングし、次いで希釈した血清試料（１：４０）をプレートに加えてインキュベートした；プレートを次いで洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的ＨＲＰを添加し、その後さらにインキュベートおよび洗浄し、ＡＡＶに対するＩｇＧ抗体の存在を、ＴＭＢ基質を添加することにより検出し、４５０ｎｍの吸光度において（５７０ｎｍの参照波長を用いて）測定した（最大光学密度（ＯＤ）として表されるシグナルの強度は、試料中のＩｇＧ抗体の量に比例する）。ＳＥＡＰレベルを、ThermoFisher Scientific（Waltham, MA, USA）製のアッセイキットを用いて測定した。血清試料および陽性対照を、希釈バッファー中で希釈し、６５℃で３０分間にわたりインキュベートし、室温まで冷却し、９６ウェルのフォーマット中に播種し、アッセイバッファー（５分間）および次いで基質（２０分間）を添加し、プレートをルミノメーター（４７７ｎｍ）において読み取った。
混合されたおよび非混合のＳＶＰ［Rapa］はいずれも、ＡＡＶに対するＩｇＧの初期の誘導を抑制した（図７）。この効果は、ＳＶＰ［Rapa］がＡＡＶに混合されていたか、ＡＡＶ注射の前に別に投与されたかにかかわらず、強力であった。
ＡＡＶと混合されたおよび非混合のＳＶＰ［Rapa］は、いずれも、血清中のＳＥＡＰ発現の初期のおよび一貫した上昇を促進した（図８）。両方のＳＶＰ［Rapa］処置群におけるＳＥＡＰ発現は、未処置群におけるものより２．５〜３．０倍高く、また対照ＳＶＰ［Empty］で処置された群におけるものよりも高かった。この差は、第７日において観察され、少なくとも７週間にわたり持続した。
例１２：ＩｇＭおよびＩｇＧ抑制
５個体のメスＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、１×１０１０ウイルスゲノム（ＶＧ）のＡＡＶのみを注射する（ｉ．ｖ．、尾静脈）か、またはＳＶＰにカプセル化されたラパマイシン（この例においてはＳＶＰ［Rapa］）を、ＡＡＶと混合して、次いで投与するか（第０日）、ＡＡＶの１日前に（第−１日）別に注射するか、もしくは、両方を、ＡＡＶの１日前に別々に注射し、混合して注射した（第−１、０日）。示された時点において、マウスから採血し、血清を全血から分離して、−２０±５℃で分析まで貯蔵した。ＩｇＭおよびＩｇＧのレベルを、上記のとおり決定した。
ＡＡＶと混合されたＳＶＰ［Rapa］は、ＡＡＶのＩｇＭ（図９）およびＩｇＧ（図１０）の両方の抑制をもたらしたが、ＳＶＰ［Rapa］をＡＡＶとは別に１日前に投与した場合に、類似の効果が観察された。注目すべきことに、これら２群におけるＡＡＶのＩｇＭ（第１３日まで、図９）およびＩｇＧ（第２０日まで、図１０）の両方が、より後の時点において上昇し始めたが、それらのレベルは、未処置のマウスにおけるものよりも低いままであった。同じ時点において、ＡＡＶ注射の１日前にＳＶＰ［Rapa］で処置され、また混合物で処置されたマウス（ｄ−１、０）は、第５日において最も低いＡＡＶ ＩｇＭレベルを示し（第１３日までに限界（marginal）上昇、図９）、第２０日までＡＡＶ ＩｇＧの発生を示さなかった（図１０）。したがって、ＡＡＶのＩｇＭおよびＩｇＧ抗体の産生は、第−１日および第０日においてＳＶＰ［Rapa］処置を受けたマウスにおいて、より強力に抑制された。
例１３：免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア
ラパマイシンなどの免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、当業者に公知の任意の方法を用いて生成することができる。好ましくは、本明細書において提供される方法または組成物のうちのいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、米国公開番号US 2016/0128986 A1および米国公開番号US 2016/0128987 A1の方法のうちのいずれか１つにより生成され、記載される生成の方法および生じる合成ナノキャリアは、その全体において本明細書において参考として援用される。本明細書において提供される方法または組成物のうちのいずれか１つにおいて、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、かかる援用される合成ナノキャリアである。ラパマイシンを含む合成ナノキャリアは、これらの援用される方法に少なくとも類似する方法により生成し、以下の例において用いた。
例１４：免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの分割用量
合成ナノキャリア中に含まれる場合、ラパマイシンの用量を２つの部分に分割して、第１の半分を、AAVベクターとラパマイシンの第２の半分の用量（合成ナノキャリア中に含まれる場合）との共注射の前に投与することは、 導入遺伝子の発現に関して（図１１Ａ）、およびその抗ウイルスＩｇＧに対する抑制性効果のために（図１１Ｂ）、ラパマイシンの同じ累積用量が合成ナノキャリア中に含まれてＡＡＶベクターと共注射される場合と比較して、有益であることを見出した。
５個体のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、第０および９２日において、１×１０１０ウイルスゲノム（ＶＧ）のＡＡＶ−ＳＥＡＰを、単独で（ＡＡＶ−ＳＥＡＰ）、もしくはラパマイシン含有合成ナノキャリアと共に（ＡＡＶ−ＳＥＡＰ＋ラパマイシン含有合成ナノキャリア、１００μｇ、ｄ０、９２）を注射する（静脈内、ｉ．ｖ．、尾静脈）か、または、ラパマイシン含有合成ナノキャリア（５０μｇのラパマイシン）を、ＡＡＶ注射の２日前およびＡＡＶ注射と共に送達した（ＡＡＶ−ＳＥＡＰ＋ラパマイシン含有合成ナノキャリア、ｄ−２、０、９０、９２）。図１１Ａにおいて示される時点において（第７、１９、７５、９９、１０４および１１１日）、マウスから採血し、血清を全血から分離し、−２０±５℃で分析まで保存した。
血清におけるＳＥＡＰレベルを、ThermoFisher Scientific（Waltham, MA, USA）製のアッセイキットを用いて測定した。簡単に述べると、血清試料および陽性対照を、希釈バッファー中で希釈し、６５℃で３０分間（min）にわたりインキュベートし、次いで室温まで冷却し、９６ウェルのフォーマット中に播種し、アッセイバッファー（５分間）、および次いで添加した基質（２０分間）と共にインキュベートし、プレートを、ルミノメーター（４７７ｎｍ）を用いて読み取った。
別に、ＡＡＶに対するＩｇＧ抗体を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。９６ウェルのプレートを、ＡＡＶで一晩コートし、次いで翌日に洗浄およびブロッキングした。希釈した血清試料（１：４０）をプレートに加えてインキュベートした。プレートを、次いで洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的ＨＲＰを添加した。別のインキュベーションおよび洗浄の後、ＡＡＶに対するＩｇＧ抗体の存在を、ＴＭＢ基質を添加することにより検出し、４５０ｎｍの吸光度において（５７０ｎｍの参照波長を用いて）測定した（図１１Ｂにおいて、最大光学密度（ＯＤ）として表されるシグナルの強度は、試料中のＩｇＧ抗体の量に直接的に比例する）。
ＡＡＶ−ＳＥＡＰに混合されたラパマイシン含有合成ナノキャリア（５０μｇ）の共投与の２日前の、ラパマイシン含有合成ナノキャリア（５０μｇ）の投与は、ＳＥＡＰ発現の即時上昇をもたらし（図１１Ａ）、これは、特定の時点においては、ＳＶＰを用いない場合よりもほぼ２倍高かった。各々の時点について、各々の群において、グラフの上に、第１９日（ｄ１９）における未処置のマウスにおけるもの（１００％）と比較した相対的発現を示す。同じ時間において、同じ合計１００μｇの用量（ＡＡＶと混合されて共投与されるラパマイシン含有合成ナノキャリア）は、導入遺伝子の発現に対して有益な効果を有しなかった。第９２日ブースト（矢印により示す）の後に、類似の効果が観察された。注目すべきことに、ラパマイシン含有合成ナノキャリアの投与の両方のレジメンが、プライミングおよびブーストの後に、ＡＡＶに対するＩｇＧ応答の形成を同等に抑制した（図１１Ｂ）。
例１５：少なくとも２つの部分における免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの投与
合成ナノキャリア中に含まれる場合、２つの部分におけるラパマイシンの用量の送達は、第１の部分が第２の半分の用量とのＡＡＶの共注射の２日前に投与される場合、安定に上昇した導入遺伝子の発現をもたらすことを見出した（図１２）。
９〜１０個体のメスＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、第０日において、１×１０１０ＶＧのＡＡＶ−ＳＥＡＰを、単独で（ＡＡＶ−ＳＥＡＰ）、またはＡＡＶ注射の２日前およびＡＡＶ注射と共に送達される５０μｇのラパマイシンと共に（合成ナノキャリア中に含まれる場合）（ＡＡＶ−ＳＥＡＰ＋ラパマイシン含有合成ナノキャリア、ｄ−２、０）注射した（ｉ．ｖ．、尾静脈）。示された時点において（第７、１２、１９、３３、４８および７７日）マウスから採血し、血清を全血から分離し、−２０±５℃で分析まで保存した。血清におけるＳＥＡＰレベルを、例１４において記載されるように測定した。
ＡＡＶ−ＳＥＡＰに混合された別の５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）の共投与の２日前の、５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）の投与は、ＳＥＡＰ発現の即時上昇をもたらし、これは、一般に、合成ナノキャリアを用いない場合のものよりも２倍高かった（ＡＡＶ投与後、初期の７日間では、３倍であった）。この差は、全ての連続する時点において、安定であり、維持された（各々の時点について、各々の群において、グラフの上に、ｄ１９における未処置のマウスにおけるものを１００％として、これと比較した相対的発現を示す）。
例１６：免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのさらなる用量
ＡＡＶ免疫マウスへの、ラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）とのＡＡＶベクターの共注射の前の、ラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）のさらなる用量の送達は、導入遺伝子の発現の上昇をもたらすことが見出された。
５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）のプレ投与は、ＡＡＶプライミングの後の導入遺伝子の発現のために有益であることが観察されたので、それがまたＡＡＶに先に暴露された動物においても有益であるか否かを検討した。５個体のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、第０日において、１×１０１０ＶＧのＡＡＶ−ＲＦＰを、単独で、または５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）と混合して注射し（ｉ．ｖ．、尾静脈）、次いで、単独またはラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）と混合した同じ用量のＡＡＶ−ＳＥＡＰでブーストするか、またはラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）を、いずれもＡＡＶ−ＳＥＡＰに混合して、ＡＡＶ−ＳＥＡＰの３日前にプレ注射した。示された時点において、マウスから採血し、血清を全血から分離して、−２０±５℃で分析まで保存した。血清におけるＳＥＡＰレベルおよびＡＡＶに対するＩｇＧを、例１４において記載されるように測定した。
ラパマイシン含有合成ナノキャリアで処置されていない動物（ＡＡＶ−ＲＦＰ／ＡＡＶ−ＳＥＡＰ）は、有意義なＳＥＡＰ導入遺伝子の発現を示さなかった（図１３Ａ）。ＡＡＶ−ＲＦＰプライミングのみにおける５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）の投与（ＡＡＶ−ＲＦＰ＋ラパマイシン含有合成ナノキャリア／ＡＡＶ−ＳＥＡＰ）は、低いレベルの導入遺伝子発現を示した（一般に、ＡＡＶ−ＲＦＰをプレ注射されていないナイーブなマウスのものから１０〜１３％）。導入遺伝子発現のさらなる上昇は、プライミングおよびブーストの両方におけるラパマイシン含有合成ナノキャリア投与により達成され（ＡＡＶ−ＲＦＰ／ＡＡＶ−ＳＥＡＰ；ラパマイシン含有合成ナノキャリア、ｄ０、８６）、これは、ときに２０％を越え、１５〜２４％の区間内にとどまった。対照的に、ＡＡＶブーストの３日前におけるさらなるラパマイシン含有合成ナノキャリアの投与は、ＳＥＡＰ発現のはるかにより高い上昇をもたらし、これはときにナイーブなマウスのものから５０％を超えて、３４〜５２％の範囲内にとどまった（各々の時点について、各々の群において、グラフの上に、各々の時点におけるプライミングされていないマウスにおけるものを１００％として、これと比較した相対的発現を示す）。
この導入遺伝子発現は、ラパマイシン含有合成ナノキャリアで処置されていないマウスによるＡＡＶ ＩｇＧの存在に、緊密に位置づけされ、これに対して逆に対応した；ラパマイシン含有合成ナノキャリアで処置されていないマウスは、即時のＩｇＧ産生を示し、これは次いでブーストによりさらに上昇した（図１３Ｂにおいて矢印により示す）。プライミングにおいてのみラパマイシン含有合成ナノキャリアで処置されたマウスは、ブーストのすぐ後にＡＡＶ ＩｇＧを生じたが、一方、プライミングおよびブーストの両方で処置されたものは、数週間遅れてブースト後の抗体の発達を示した。注目すべきことに、ＡＡＶブーストの前にラパマイシン含有合成ナノキャリアでさらに処置されたマウスは、研究の期間にわたって、ほとんどが抗体陰性であり続け、１個体のマウスのみが、ブーストの後７週間において検出可能なＩｇＧ抗体を示した（図１３Ｂ）。
例１７：免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのさらなる用量
予め存在していたＡＡＶ ＩｇＧのレベルが低い（かつ初回プライミング用量においてラパマイシン含有合成ナノキャリアで処置されていない）マウスへの、ＡＡＶベクターとラパマイシン含有合成ナノキャリアとの共注射の前の、ラパマイシン含有合成ナノキャリアのさらなる用量の送達は、ブースト後の導入遺伝子の発現にとって必須であることを見出した。
さらなる５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）のプレ投与が、ＡＡＶに先に暴露されていたが、また初回プライミングにおいてラパマイシン含有合成ナノキャリアで処置されていた動物において、ＡＡＶブースト後の導入遺伝子発現のために有益であることが示されたので、同様の利益が、ＡＡＶに事前に暴露され、ラパマイシン含有合成ナノキャリア共投与を用いずにＡＡＶにより免疫した動物において見出されるか否かを検討した。５〜７個体のメスＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、第０日において、２×１０９ＶＧのＡＡＶ−ＲＦＰを注射し（ｉ．ｖ．、尾静脈）、次いで、ＡＡＶ ＩｇＧのレベルのが低いマウス（プライミング後第７５日における最大ＯＤ≦０．３）を選択して、第９２日において、単独またはラパマイシン含有合成ナノキャリアと混合した１×１０１０ＶＧのＡＡＶ−ＳＥＡＰでブーストするか、または、いずれもＡＡＶ−ＳＥＡＰと混合したラパマイシン含有合成ナノキャリアを、ＡＡＶ−ＳＥＡＰの２日前に事前注射した。示された時点において、マウスから採血し、血清を全血から分離し、−２０±５℃で分析まで保存した。血清におけるＳＥＡＰレベルおよびＡＡＶに対するＩｇＧを、例１４において記載されるように測定した。
ラパマイシン含有合成ナノキャリアで処置されていないか、またはブーストにおいて単一のラパマイシン含有合成ナノキャリア投与を投与されている動物（ＡＡＶ−ＲＦＰ／ＳＥＡＰ；ラパマイシン含有合成ナノキャリア≦１）は、非常に僅かなＳＥＡＰ導入遺伝子発現を示した（図１４Ａ）。導入遺伝子の発現は、通常、５〜９％の区間内であり（ナイーブなマウスにおける１００％での発現と比較して）、有意義な発現レベルを示した５個体のうちの単一のマウスに起因した（図１４Ｂ中、左欄を参照）。対照的に、５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）を、ＡＡＶブーストの２日前に、およびまたブーストにおいても投与された群からのマウス（ＡＡＶ−ＲＦＰ／ＳＥＡＰ；ラパマイシン含有合成ナノキャリア＝２）は、はるかにより顕著なＳＥＡＰ発現を示し、これは一般に、ナイーブなマウスのものと比較して３４〜４０％の範囲内にとどまった（図１４Ａにおいて、各々の時点について、各々の群における相対的発現を示す）。注目すべきことに、この群における７個体のマウスのうちの５個体は、検出可能なＳＥＡＰ発現を示し（図１４Ｂにおける右欄を参照）、これは、実験群の間で、統計学的に有意な異なるレベルのＳＥＡＰ発現をもたらした（図１４Ｂ）。
ＡＡＶ免疫マウスにおけるこのブースト後の導入遺伝子発現活性は、ＡＡＶに対する既往の応答の発生に対して、緊密に、かつ逆に対応し、これは、２回より少ないラパマイシン含有合成ナノキャリアによる処置を受けたマウスにおけるＡＡＶ ＩｇＧの上昇、およびＡＡＶブーストの前およびＡＡＶブースト時において２回のラパマイシン含有合成ナノキャリア処置を受けたマウスにおけるこの応答のシフトにより示されるとおりである（図１４Ｃ、ブーストを矢印により示す）。５個体のうちの１個体を除く全てのマウスが、強力にＡＡＶ ＩｇＧ陽性となったことから、２回より少ない用量のラパマイシン含有合成ナノキャリアで処置されたマウスは、ブースト後第７日において早くも強力なＡＡＶ ＩｇＧ追加免疫応答を示した（図１４Ｃ）。同時に、ラパマイシン含有合成ナノキャリアで２回処置されたマウスは、それによりはるかにより低いＡＡＶに対する既往の抗体応答を示し、これは、７個体のうちの２個体のマウスのみが強力にＡＡＶ ＩｇＧ陽性となったことから、第９２日のブースト後第７日において早くも統計学的に有意に異なるものとなった（図１４Ｃ中ｄ９９）。注目すべきことに、この群における抗体レベルは、第９２日においてはじめてＡＡＶに暴露されたナイーブなマウスにおけるものよりも一貫して低かった（図１４Ａおよび１４Ｃ中の参照対照群）。驚くことではないが、まさにこれらのマウス（２回より少ないラパマイシン含有合成ナノキャリア処置を受けている群のうちの１個体および２回のラパマイシン含有合成ナノキャリア処置を受けている群のうちの５個体）は、２つの実験群においてＡＡＶ ＩｇＧと血清ＳＥＡＰレベルとの間の統計学的に有意な逆相関をもたらす有意義なＳＥＡＰ発現を一貫して示した点において同じであった（図１４Ｄ）。
例１８：免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびウイルスベクターの投与
ＡＡＶベクターとラパマイシン含有合成ナノキャリアとの共注射の後に投与されたラパマイシン含有合成ナノキャリア用量は、導入遺伝子の発現およびＡＡＶ抗体の抑制のためのさらなる利益を提供することを見出した。
ラパマイシン含有合成ナノキャリアとＡＡＶとの共投与は、ＡＡＶ駆動型の導入遺伝子発現のための、および、ＡＡＶに対する抗体を有効に抑制するために、すみやかな利益を提供することを示したが、さらなるラパマイシン含有合成ナノキャリア注射が、さらなる利益を提供するか否かを検討した。５個体のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、第０および８８日において、１×１０１０ＶＧのＡＡＶ−ＳＥＡＰを、単独で、または５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）と混合して注射し（ｉ．ｖ．、尾静脈）、１群を次いで、さらに２回、隔週で、いずれもプライミングおよびブーストの後に、ラパマイシン含有合成ナノキャリア注射で処置した（ｄ１４、２８、１０２および１１６）。示した時点において、マウスから採血し、血清を全血から分離し、−２０±５℃で分析まで保存した。血清におけるＳＥＡＰレベルおよびＡＡＶに対するＩｇＧを、例１４において記載されるように測定した。
先に示したとおり、ＡＡＶ−ＳＥＡＰと混合した５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）の投与は、ＳＥＡＰ発現の即時上昇をもたらし（図１５Ａ）、これは、ある時点においては、合成ナノキャリアを用いない群よりも４倍高かった。しかし、さらなるラパマイシン含有合成ナノキャリア処置は、さらにより顕著な利益を提供し、生じた発現レベルは、未処置のマウスよりも６〜７倍高かった。第８８日のブーストの後で、さらなる上昇が観察された（矢印により示す；各々のブースト後の時点について、各々の群におけるブースト前のｄ７５のＳＥＡＰレベルと比較して、相対的発現を示す）。ブースト時におけるラパマイシン含有合成ナノキャリアの投与は、中程度のさらなる利益を提供し、生じた導入遺伝子の発現は、未処置のマウスと比較して５倍過剰に安定化し、さらなるラパマイシン含有合成ナノキャリア処置の利益は、第１０８日における８倍の差異まで上昇し続けた。このことは、さらなるラパマイシン含有合成ナノキャリアを投与されたマウスにおける、より顕著なＡＡＶ ＩｇＧの抑制に対応し、一方で、ＡＡＶと混合されたラパマイシン含有合成ナノキャリアのみで処置されたマウスにおけるＩｇＧ応答抑制は顕著であったが、ブースト後は特に、不完全であった（図１５Ｂ）。
例１９：免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアのさらなる用量
さらなるラパマイシン含有合成ナノキャリアは、長期のＡＡＶ抗体抑制についての最高の潜在能力を提供することを見出した。
ＡＡＶとのラパマイシン含有合成ナノキャリアの共投与、およびそのさらなる適用は、ＡＡＶに対する抗体を効果的に抑制することが示されたが、この抑制は、必ずしも常に１００％のレベルに達しない。したがって、プライミング時におけるさらなるラパマイシン含有合成ナノキャリア注射と、ラパマイシン含有合成ナノキャリアのフォローアップ投与とを組み合わせることが、組み合わされた相乗的利益を提供するか否かを検討した。６〜９個体のメスＣ５７ＢＬ／６マウスの群に、第０日および８３日において、１×１０１０ＶＧのＡＡＶ−ＳＥＡＰを、単独で、または５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）と混合して注射し（ｉ．ｖ．、尾静脈）、１群をさらに、プライミングの２日前およびブースト時に（ｄ−２およびｄ８１）ラパマイシン含有合成ナノキャリアで処置し、他方を、さらに２回、隔週で、いずれもプライミングおよびブーストの後に、ラパマイシン含有合成ナノキャリア注射で処置し（ｄ１４、２８、９７および１１６）、最後の１つを、これらの組み合わせで処置した（ｄ−２、１２、２８、８１、９７および１１６）。ＡＡＶに対するＩｇＧを、例１４において記載されるように測定した。
前に示したとおり、免疫前のラパマイシン含有合成ナノキャリア処置と組み合わせた、ＡＡＶ−ＳＥＡＰと混合した５０μｇのラパマイシン（合成ナノキャリア中に含まれる場合）の投与（ｇｒ．２；ｄ−２、０、８１、８３）は、９個体のマウスのうちの２個体のみが、第９０日（ブースト直後）において検出可能なＩｇＧレベル（これは最大ＯＤにより決定される）を示したことから、ブースト前の転換なしで、著明なＡＡＶ ＩｇＧ抑制をもたらした。９個体のうちの３個体（および強力には３個体のうちの１個体のみ）が、第１１６日（ブースト後３３日）までにＩｇＧ陽性であった。本研究において、ラパマイシン含有合成ナノキャリアによるフォローアップ（ｄ１４およびｄ２８）処置は、ブースト前投与と同程度に効率的であった（転換なし）。しかし、数個体のマウスは、ブースト後に転換し始め（９個体のうちの５個体；強力には５個体のうちの４個体）、第１１６日までに陽性となった。したがって、両方のラパマイシン含有合成ナノキャリア投与レジメンの組み合わせが、第１１６日（ブースト後３３日）までは何らの転換も観察されなかったことから、最も有効であった（図１６）。
例２０：ＡＡＶ駆動型の導入遺伝子発現
標準的なメスマウスＡＡＶ形質導入モデルにおいて、ＳＶＰ［Rapa］をＡＡＶと共投与することの利益が存在し、これは、in vivoで、より高い導入遺伝子発現をもたらすことが観察されている。この効果は、さらなるＳＶＰ［Rapa］投与によりさらに増強される。この例において、プライミング時における、およびブースト時における、ＡＡＶとの単一のＳＶＰ［Rapa］の共投与は、導入遺伝子発現を用量依存的な様式において改善すること、およびこの効果は、少なくとも部分的に、ＡＡＶ抗体の発生と逆相関することが示される。さらに、ＡＡＶ駆動型の導入遺伝子発現を強力に上昇することができる高用量のＳＶＰ［Rapa］を３つの部分に均等に分割し、そのうちの１つのみをＡＡＶと共投与し、他の２つをＡＡＶ注射の前および後に別々に投与するのであれば、導入遺伝子発現に対するＳＶＰ［Rapa］の有益な効果、およびＳＶＰ［Rapa］により媒介されるＡＡＶ抗体発生の抑制は、損なわれない。
具体的には、４群の１０個体のメスＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＳＶＰ［Rapa］を用いずにまたはこれと共に、１×１０１０ＶＧのＡＡＶ８−ＳＥＡＰを注射した（静脈内で（ｉ．ｖ．）、尾静脈）。以下の用量のＳＶＰ［Rapa］を用いた：単一の５０μｇの用量（ＡＡＶと混合されて共投与された）、単一の１５０μｇの用量（ＡＡＶと混合されて共投与された）、および１５０μｇの用量を３回の５０μｇの注射に分割したもの（１つはＡＡＶと混合されて共投与され、２つは、ＡＡＶ注射の２日前およびＡＡＶ注射の２日後に別々に投与された）。
示した時点において（第７、１２、１９、４７および７５日）、マウスから採血し、血清を全血から分離し、−２０±５℃で分析まで保存した。次いで、ＡＡＶに対するＩｇＧ抗体を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。９６ウェルのプレートを、ＡＡＶで一晩コートし、翌日に洗浄してブロッキングし、次いで希釈した血清試料（１：４０）をプレートに加えてインキュベートした。インキュベーションの後で、プレートを洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的ＨＲＰを添加した。プレートをインキュベートし、再度洗浄して、次いでＡＡＶに対するＩｇＧ抗体の存在を、ＴＭＢ基質を添加して、４５０ｎｍの吸光度におけるシグナルを、５７０ｎｍの参照波長を用いて測定することにより検出した。最大光学密度（ＯＤ）として表されるシグナルの強度は、試料中のＩｇＧ抗体の量に直接的に比例する。
別に、ThermoFisher Scientific（Waltham, MA, USA）製のアッセイキットを用いて、血清中の分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レベルを測定した。簡単に述べると、血清試料および陽性対照を、希釈バッファー中で希釈し、６５℃で３０分間にわたりインキュベートし、次いで室温まで冷却し、９６ウェルのプレートに播種し、次いでアッセイバッファー（５分間）および次いで基質（２０分間）と共にインキュベートした。プレートを、次いで、ルミノメーターにおいて４７７ｎｍで読み取った。
初期の（プライミング後の）ＡＡＶ ＩｇＧおよびＳＥＡＰの検出および分析の後、マウスを休息させ、次いで、第１１７日において再び採血し、第１２５日において、プライミング時と同じＡＡＶおよびＳＶＰ［Rapa］の用量を用いて、ＡＡＶ−ＳＥＡＰでブーストした；すなわち、第１の群はＳＶＰ［Rapa］を投与されず、続く群は、５０μｇのＳＶＰ［Rapa］をブースト時に、１５０μｇのＳＶＰ［Rapa］をブースト時に、および５０μｇのＳＶＰ［Rapa］を３回：ブーストの２日前、ブースト時（ＡＡＶと混合され、共投与された）、およびブーストの２日後に、投与された。マウスを、次いで、第１３２および１３８日（ブースト後７日および１３日）に採血し、およびＳＥＡＰ血清レベルを、上で特定したように決定した。
ＳＶＰ［Rapa］で処置された全ての群は、プライミングの直後に、未処置のマウスにおけるものと比較して、増大したSEAPレベルを示し（図１７Ａ、ｇｒ．１対ｇｒ．２〜４）、これらの差異は、統計学的に有意であり（****−ｐ＜０．０００１）、数か月間にわたり持続した。初期の時点のほとんどにおいて、１５０μｇのＳＶＰ［Rapa］（単一または分割用量として；ｇｒ．３および４）で処置された群におけるＳＥＡＰレベルは、より低い、５０μｇの用量（ｇｒ．２）で処置された群よりも高かったが、長期において（ｄ７５〜１１７）、これらのレベルの全ては等しくなった。大いに、このことは、１５０μｇのＳＶＰ［Rapa］で処置された群中のマウスにおけるＡＡＶ ＩｇＧ発生の初期動態と相関し、第７５日までの間に、および第７５日を含めて、ＩｇＧの転換を示さなかった（図１７Ｂ、ｇｒ．３および４）が、一方で、より低い、５０μｇの用量（図１７Ｂ、ｇｒ．２）で処置された群中の数個体のマウスは、第１９日において検出可能な抗体を示し、１０個体のうちの４個体（４０％）は、第７５日までに転換した（図１７Ｂ）。注目すべきことに、ＳＶＰ［Rapa］なしでＡＡＶを注射された全てのマウスは、迅速にＡＡＶ ＩｇＧ陽性となった（図１７Ｂ、ｇｒ．１）。
第１２５日のブーストの後で（図１７Ａにおいて矢印により示す）、ＳＶＰ［Rapa］処置群と未処置群との間の差異は、さらにより著明になった（図１７Ａ、第１３２および１３８日）。注目すべきことに、ブーストの直後に（ｄ１３２）、ＳＶＰ［Rapa］で処置されていないマウスにおいて、ＳＥＡＰの上昇は存在しなかったが（ブースト後のＳＥＡＰ発現の、ｄ１１７におけるブースト前発現に対する比を、図１７Ａにおいて上の行として示す）、一方で、全てのＳＶＰ［Rapa］処置群は、即時上昇を示した（図１７Ａ、ｇｒ．２〜４、ｄ１３２）。興味深いことに、未処置群における、および低い５０μｇの用量のＳＶＰ［Rapa］で処置された群におけるＳＥＡＰレベルは、それらの相対的発現と類似の様式において第１３８日まで進行し（図１７Ａにおいて下の行として示し、未処置のｇｒ．１におけるレベルに「１００」の数を割り当てた）、同じにとどまった（５０μｇ処置群は、一貫して約３．５倍高いＳＥＡＰを有する）。同じ時間において、より高い（１５０μｇ）用量のＳＶＰ［Rapa］で処置されたマウスの両方の群におけるＳＥＡＰレベルは、第１３２日から第１３８日までにさらに上昇した導入遺伝子発現を有した；すなわち、未処置のマウスにおけるものよりも約４倍高かったものから、約４．５倍高いものとなり、１つの場合においては、さらに、より低い（５０μｇ）用量のＳＶＰ［Rapa］で処置されたマウスのものとは統計学的に異なるものとなった（図１７Ａ、ｇｒ．２対ｇｒ．４；第１３８日；ｐ＜０．０５）。
したがって、ＡＡＶ駆動型の導入遺伝子発現は、プライミングおよびブーストの両方において、混合されたＳＶＰ［Rapa］の共投与により用量依存的な様式において上昇したことを見出した。この効果は、完全ではないが、ＡＡＶに対する抗体の抑制と逆相関し、しかし、ＡＡＶと混合された単一の用量として、またはそのうちの一部がＡＡＶと混合され、一部が別に投与される分割用量として送達される、ＳＶＰ［Rapa］用量に対して、依存的ではなかった。

Claims (98)

  1. 以下：
    免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびウイルスベクターを対象に共投与すること、ならびに
    ウイルスベクターなしで免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの少なくとも１回のプレ用量および／または少なくとも１回のポスト用量を、対象に投与すること
    を含む、方法。
  2. 少なくとも１回のプレ用量および少なくとも１回のポスト用量が、対象に投与される、請求項１に記載の方法。
  3. 少なくとも２回のプレ用量が、対象に投与される、請求項１または２に記載の方法。
  4. 少なくとも２回のポスト用量が、対象に投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 共投与が、対象において繰り返される、請求項１に記載の方法。
  6. 免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの少なくとも１回のプレ用量および／または少なくとも１回のポスト用量が、ウイルスベクターなしで、各々の繰り返し投与ステップにより対象に投与される、請求項５に記載の方法。
  7. 少なくとも１回のプレ用量および少なくとも１回のポスト用量が、各々の繰り返し投与ステップにより対象に投与される、請求項６に記載の方法。
  8. 少なくとも２回のプレ用量が、各々の繰り返し投与ステップにより対象に投与される、請求項６または７に記載の方法。
  9. 少なくとも２回のポスト用量が、各々の繰り返し投与ステップにより対象に投与される、請求項６〜８のいずれか一項に記載の方法。
  10. プレ用量および／またはポスト用量の投与は、それぞれ、共投与の前または後１か月以内に起こる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
  11. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後２週間以内に起こる、請求項１０に記載の方法。
  12. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１週間以内に起こる、請求項１１に記載の方法。
  13. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後３日間以内に起こる、請求項１２に記載の方法。
  14. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後２日間以内に起こる、請求項１３に記載の方法。
  15. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１日以内に起こる、請求項１４に記載の方法。
  16. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１２時間以内に起こる、請求項１５に記載の方法。
  17. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後６時間以内に起こる、請求項１６に記載の方法。
  18. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１時間以内に起こる、請求項１７に記載の方法。
  19. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後３０分以内に起こる、請求項１８に記載の方法。
  20. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１５分以内に起こる、請求項１９に記載の方法。
  21. 各々のプレ用量および／またはポスト用量が、共投与ステップの３日以内に投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
  22. 各々のプレ用量および／またはポスト用量が、共投与ステップの２日以内に投与される、請求項２１に記載の方法。
  23. 各々のポスト用量が、共投与ステップの後、隔週で投与される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
  24. 各々のプレ用量の免疫抑制剤の量が、各々の共投与ステップの免疫抑制剤の量と同じである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. 各々のポスト用量の免疫抑制剤の量が、各々の共投与ステップの免疫抑制剤の量と同じである、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
  26. 各々のプレ用量、ポスト用量および／または共投与ステップが、静脈内投与によるものである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 以下：
    第１の対象に、（１）（ａ）合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の用量と（ｂ）ウイルスベクターの用量とを共投与すること、ならびに（２）（ｃ）合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤のプレ用量および／またはポスト用量を、ウイルスベクターの用量なしで投与すること、
    を含む、方法であって、
    ここで、（ａ）および（ｃ）の免疫抑制剤の量は、一緒に、ウイルスベクターと共投与された場合に、合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のプレ用量またはポスト用量なしで、ウイルスベクターに対する免疫応答を低下させるか、または第２の対象においてウイルスベクターの導入遺伝子発現を増大させる、合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の用量の免疫抑制剤の量に等しい、
    前記方法。
  28. （ｃ）のプレ用量またはポスト用量の免疫抑制剤の量が、（ｄ）の量の半分以下である、請求項２７に記載の方法。
  29. （ｃ）のプレ用量またはポスト用量の免疫抑制剤の量が、（ｄ）の量の半分である、請求項２７または２８に記載の方法。
  30. プレ用量およびポスト用量が、（ｃ）において第１の対象に投与される、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. （ｃ）のプレ用量およびポスト用量の免疫抑制剤の量が、同じである、請求項３０に記載の方法。
  32. （ａ）の免疫抑制剤の量が、（ｃ）のプレ用量またはポスト用量の量と同じである、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. （ｃ）少なくとも２回のプレ用量が、第１の対象に投与される、請求項２７〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  34. （ｃ）少なくとも２回のポスト用量が、第１の対象に投与される、請求項２７〜３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. （１）および（２）が、繰り返される、請求項２７〜３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後、１か月以内に起こる、請求項２７〜３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後２週間以内に起こる、請求項３６に記載の方法。
  38. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１週間以内に起こる、請求項３７に記載の方法。
  39. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後３日間以内に起こる、請求項３８に記載の方法。
  40. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後２日間以内に起こる、請求項３９に記載の方法。
  41. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１日以内に起こる、請求項４０に記載の方法。
  42. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１２時間以内に起こる、請求項４１に記載の方法。
  43. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後６時間以内に起こる、請求項４２に記載の方法。
  44. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１時間以内に起こる、請求項４３に記載の方法。
  45. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後３０分以内に起こる、請求項４４に記載の方法。
  46. プレ用量および／またはポスト用量の投与が、それぞれ、共投与の前または後１５分以内に起こる、請求項４５に記載の方法。
  47. 各々のプレ用量および／またはポスト用量が、共投与ステップの３日以内に投与される、請求項２７〜３５のいずれか一項に記載の方法。
  48. 各々のプレ用量および／またはポスト用量が、共投与ステップの２日以内に投与される、請求項４７に記載の方法。
  49. 各々のポスト用量が、共投与ステップの後、隔週で投与される、請求項２７〜４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. 各々のプレ用量、ポスト用量および／または共投与ステップが、静脈内投与によるものである、請求項２７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. ウイルスベクターが、１つ以上の発現制御配列を含む、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. １つ以上の発現制御配列が、肝臓特異的プロモーターを含む、請求項５１に記載の方法。
  53. １つ以上の発現制御配列が、構成的プロモーターを含む、請求項５２に記載の方法。
  54. １つ以上の時点において対象におけるウイルスベクターに対するＩｇＭ応答を評価することをさらに含む、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. ＩｇＭ応答を評価する時点のうちの少なくとも１つが、共投与の後である、請求項５４に記載の方法。
  56. ウイルスベクターと免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとが、各々の共投与のために混合される、請求項１〜５５のいずれか一項に記載の方法。
  57. ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
  58. ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、請求項５７に記載の方法。
  59. アデノ随伴ウイルスベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０またはＡＡＶ１１アデノ随伴ウイルスベクターである、請求項５８に記載の方法。
  60. 共投与および／またはプレ用量および／またはポスト用量の免疫抑制剤が、ＮＦ−ｋＢ経路の阻害剤である、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の方法。
  61. 共投与および／またはプレ用量および／またはポスト用量の免疫抑制剤が、ｍＴＯＲ阻害剤である、請求項１〜６０のいずれか一項に記載の方法。
  62. ｍＴＯＲ阻害剤が、ラパマイシンである、請求項６１に記載の方法。
  63. 免疫抑制剤が、合成ナノキャリアにカップリングされている、請求項１〜６２のいずれか一項に記載の方法。
  64. 免疫抑制剤が、合成ナノキャリア中にカプセル化されている、請求項６２に記載の方法。
  65. 共投与および／またはプレ用量および／またはポスト用量の合成ナノキャリアが、脂質ナノ粒子、ポリマー性ナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤ベースのエマルジョン、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤ、ウイルス様粒子またはペプチドもしくはタンパク質粒子を含む、請求項１〜６４のいずれか一項に記載の方法。
  66. 合成ナノキャリアが、ポリマー性ナノ粒子を含む、請求項６５に記載の方法。
  67. ポリマー性ナノ粒子が、ポリエステル、ポリエーテルに結合したポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む、請求項６６に記載の方法。
  68. ポリマー性ナノ粒子が、ポリエステルまたはポリエーテルに結合したポリエステルを含む、請求項６７に記載の方法。
  69. ポリエステルが、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−グリコール酸コポリマー）またはポリカプロラクトンを含む、請求項６７または６８に記載の方法。
  70. ポリマー性ナノ粒子が、ポリエステルおよびポリエーテルに結合したポリエステルを含む、請求項６７〜６９のいずれか一項に記載の方法。
  71. ポリエーテルが、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む、請求項６７〜７０のいずれか一項に記載の方法。
  72. 合成ナノキャリアの集団の動的光散乱を用いて得られる粒子サイズ分布の平均が、１１０ｎｍより大きな直径である、請求項１〜７１のいずれか一項に記載の方法。
  73. 直径が、１５０ｎｍより大きい、請求項７２に記載の方法。
  74. 直径が、２００ｎｍより大きい、請求項７３に記載の方法。
  75. 直径が、２５０ｎｍより大きい、請求項７４に記載の方法。
  76. 直径が、５μｍより小さい、請求項７２〜７５のいずれか一項に記載の方法。
  77. 直径が、４μｍより小さい、請求項７６に記載の方法。
  78. 直径が、３μｍより小さい、請求項７７に記載の方法。
  79. 直径が、２μｍより小さい、請求項７８に記載の方法
  80. 直径が、１μｍより小さい、請求項７９に記載の方法。
  81. 直径が、７５０ｎｍより小さい、請求項８０に記載の方法。
  82. 直径が、５００ｎｍより小さい、請求項８１に記載の方法。
  83. 直径が、４５０ｎｍより小さい、請求項８２に記載の方法。
  84. 直径が、４００ｎｍより小さい、請求項５０に記載の方法。
  85. 直径が、３５０ｎｍより小さい、請求項８４に記載の方法。
  86. 直径が、３００ｎｍより小さい、請求項８５に記載の方法。
  87. 合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の負荷量が、合成ナノキャリア全体の平均で、０．１％〜５０％（重量／重量）である、請求項１〜８６のいずれか一項に記載の方法。
  88. 負荷量が、０．１％〜２５％である、請求項８７に記載の方法
  89. 負荷量が、１％〜２５％である、請求項８８に記載の方法。
  90. 負荷量が、２％〜２５％である、請求項８９に記載の方法。
  91. 合成ナノキャリアの集団のアスペクト比が、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７または１：１０より大きい、請求項１〜９０のいずれか一項に記載の方法。
  92. 以下：
    各々が請求項１〜９１のいずれか一項に記載されるような、１つ以上のプレ用量または１つ以上のポスト用量、ならびに
    ウイルスベクターによる共投与のための免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアの用量
    を含む、キット。
  93. ウイルスベクターの用量をさらに含む、請求項９２に記載のキット。
  94. １つ以上のプレ用量および１つ以上のポスト用量を含む、請求項９２または９３に記載のキット。
  95. 使用のための指示をさらに含む、請求項９２〜９４のいずれか一項に記載のキット。
  96. 使用のための指示が、請求項１〜９１のいずれか一項に記載の方法を実施するための指示を含む、請求項９５に記載のキット。
  97. ウイルスベクターによる投与のための免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアが、請求項１〜９１のいずれか一項において記載されるようなものである、請求項９２〜９６のいずれか一項に記載のキット。
  98. ウイルスベクターが、請求項１〜９１のいずれか一項において記載されるようなものである、請求項９２〜９７のいずれか一項に記載のキット。
JP2019537184A 2017-01-07 2018-01-05 合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のパターン化された投与 Pending JP2020506890A (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2023020085A JP2023071721A (ja) 2017-01-07 2023-02-13 合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のパターン化された投与

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762443658P 2017-01-07 2017-01-07
US62/443,658 2017-01-07
US201762445637P 2017-01-12 2017-01-12
US62/445,637 2017-01-12
US201762545412P 2017-08-14 2017-08-14
US62/545,412 2017-08-14
PCT/US2018/012503 WO2018129268A1 (en) 2017-01-07 2018-01-05 Patterned dosing of immunosuppressants coupled to synthetic nanocarriers

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023020085A Division JP2023071721A (ja) 2017-01-07 2023-02-13 合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のパターン化された投与

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2020506890A true JP2020506890A (ja) 2020-03-05
JP2020506890A5 JP2020506890A5 (ja) 2021-04-30

Family

ID=61569354

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019537184A Pending JP2020506890A (ja) 2017-01-07 2018-01-05 合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のパターン化された投与
JP2023020085A Pending JP2023071721A (ja) 2017-01-07 2023-02-13 合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のパターン化された投与

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023020085A Pending JP2023071721A (ja) 2017-01-07 2023-02-13 合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のパターン化された投与

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20180193482A1 (ja)
EP (1) EP3565572A1 (ja)
JP (2) JP2020506890A (ja)
KR (2) KR20240015743A (ja)
CN (1) CN110325203A (ja)
AU (1) AU2018205496A1 (ja)
BR (1) BR112019013862A2 (ja)
CA (1) CA3049384A1 (ja)
IL (1) IL267819A (ja)
MX (1) MX2019008143A (ja)
WO (1) WO2018129268A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023548948A (ja) * 2020-11-10 2023-11-21 ブルーメイジ バイオテクノロジー コーポレイション リミティド エルゴチオネインの安定化におけるヒアルロン酸又はその塩及び／又はトレハロースの使用、及びヒアルロン酸又はその塩及び／又はトレハロースを含有するエルゴチオネイン組成物

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2013012596A (es) 2011-04-29 2014-08-21 Selecta Biosciences Inc Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para generar linfocitos t reguladores cd8+.
BR112015027279A8 (pt) 2013-05-03 2018-01-30 Selecta Biosciences Inc métodos e composições para acentuar células t reguladoras cd4+
US20160074532A1 (en) 2014-09-07 2016-03-17 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene editing anti-viral transfer vector immune responses
EP3592389B1 (en) 2017-03-11 2025-05-07 Cartesian Therapeutics, Inc. Methods and compositions related to combined treatment with anti-inflammatories and synthetic nanocarriers comprising an immunosuppressant
KR20200086670A (ko) * 2017-10-13 2020-07-17 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 항바이러스 전달 벡터 IgM 반응을 약화시키기 위한 방법 및 조성물
MX2021000638A (es) * 2018-07-16 2021-06-23 Selecta Biosciences Inc Métodos y composiciones de construcciones y vectores de acidemia metilmalónica.
JP2022531201A (ja) * 2019-04-28 2022-07-06 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド ウイルス導入ベクターに対する既存の免疫を伴う対象の処置のための方法
CN114206396A (zh) * 2019-05-28 2022-03-18 西莱克塔生物科技公司 用于减弱抗病毒转移载体免疫应答的方法和组合物
JP2022537555A (ja) * 2019-06-20 2022-08-26 武田薬品工業株式会社 ウイルスベースの遺伝子療法による治療方法
WO2021155286A1 (en) * 2020-01-29 2021-08-05 Helix Nanotechnologies, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR NUCLEIC ACID EXPRESSION INVOLVING INHIBITION OF NF-kB PATHWAYS AND/OR IRF PATHWAYS
EP4135693A1 (en) * 2020-04-14 2023-02-22 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for inducing autophagy
WO2022150335A1 (en) * 2021-01-05 2022-07-14 Selecta Biosciences, Inc. Viral vector dosing protocols
EP4323015A4 (en) 2021-04-16 2025-10-22 Askbio Inc RATIONALLY POLYPLOID AAV VIRIONS CROSS THE BLOOD-BRAIN BARRIER AND TRIGGER A REDUCED HUMORAL RESPONSE
WO2023086615A1 (en) * 2021-11-14 2023-05-19 Selecta Biosciences, Inc. Multiple dosing with viral vectors
WO2025256978A1 (en) 2024-06-13 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Variants of igm and igg cleaving enzymes
WO2025256977A1 (en) 2024-06-13 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Novel igm and igg cleaving enzymes

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10507758A (ja) * 1994-10-19 1998-07-28 ジェネティック セラピー，インコーポレイテッド アデノウイルスおよび免疫抑制剤同時反復投与を伴う遺伝子治療
JP2014513092A (ja) * 2011-04-29 2014-05-29 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド Ｔエフェクター細胞を抗原特異的に欠失させるための寛容原性合成ナノキャリア
WO2016037164A1 (en) * 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene expression modulating anti-viral transfer vector immune responses
JP2016526048A (ja) * 2013-06-04 2016-09-01 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドＳｅｌｅｃｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． 非免疫抑制性の抗原特異的免疫治療薬の反復投与

Family Cites Families (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US609548A (en) 1898-08-23 Horse-hitching device
US4946929A (en) 1983-03-22 1990-08-07 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible articles useful as implants and prostheses having predictable degradation rates
US4638045A (en) 1985-02-19 1987-01-20 Massachusetts Institute Of Technology Non-peptide polyamino acid bioerodible polymers
US4797368A (en) 1985-03-15 1989-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector
US4806621A (en) 1986-01-21 1989-02-21 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible, bioerodible, hydrophobic, implantable polyimino carbonate article
CA1340581C (en) 1986-11-20 1999-06-08 Joseph P. Vacanti Chimeric neomorphogenesis of organs by controlled cellular implantation using artificial matrices
US5736372A (en) 1986-11-20 1998-04-07 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure
US5804178A (en) 1986-11-20 1998-09-08 Massachusetts Institute Of Technology Implantation of cell-matrix structure adjacent mesentery, omentum or peritoneum tissue
US5019379A (en) 1987-07-31 1991-05-28 Massachusetts Institute Of Technology Unsaturated polyanhydrides
US5010167A (en) 1989-03-31 1991-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Poly(amide-and imide-co-anhydride) for biological application
GB8918616D0 (en) 1989-08-15 1989-09-27 Univ Glasgow Herpes simplex virus type 1 mutant
US5849572A (en) 1990-10-10 1998-12-15 Regents Of The University Of Michigan HSV-1 vector containing a lat promoter
US5804413A (en) 1992-07-31 1998-09-08 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Herpes simplex virus strains for gene transfer
US5399665A (en) 1992-11-05 1995-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymers for cell transplantation
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5512600A (en) 1993-01-15 1996-04-30 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of bonded fiber structures for cell implantation
US5514378A (en) 1993-02-01 1996-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible polymer membranes and methods of preparation of three dimensional membrane structures
US5565215A (en) 1993-07-23 1996-10-15 Massachusettes Institute Of Technology Biodegradable injectable particles for imaging
US5543158A (en) 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
ATE314482T1 (de) 1993-10-25 2006-01-15 Canji Inc Rekombinante adenoviren-vektor und verfahren zur verwendung
EP1548118A2 (en) 1994-06-10 2005-06-29 Genvec, Inc. Complementary adenoviral vector systems and cell lines
US6007845A (en) 1994-07-22 1999-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
GB9415319D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Medical Res Council HSV viral vector
US5846782A (en) 1995-11-28 1998-12-08 Genvec, Inc. Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs
US5716404A (en) 1994-12-16 1998-02-10 Massachusetts Institute Of Technology Breast tissue engineering
US6123727A (en) 1995-05-01 2000-09-26 Massachusetts Institute Of Technology Tissue engineered tendons and ligaments
IL122614A0 (en) 1995-06-15 1998-08-16 Introgene Bv Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy
US6001650A (en) 1995-08-03 1999-12-14 Avigen, Inc. High-efficiency wild-type-free AAV helper functions
US5801030A (en) 1995-09-01 1998-09-01 Genvec, Inc. Methods and vectors for site-specific recombination
US5837511A (en) 1995-10-02 1998-11-17 Cornell Research Foundation, Inc. Non-group C adenoviral vectors
US6095148A (en) 1995-11-03 2000-08-01 Children's Medical Center Corporation Neuronal stimulation using electrically conducting polymers
US5902599A (en) 1996-02-20 1999-05-11 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymer networks for use in orthopedic and dental applications
EP0937082A2 (en) 1996-07-12 1999-08-25 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Materials and method for treating or preventing pathogenic fungal infection
US5849561A (en) 1997-05-22 1998-12-15 Cornell Research Foundation, Inc. Method for the production of non-group C adenoviral vectors
AU8067698A (en) 1997-06-09 1998-12-30 Genvec, Inc. Chimeric vectors comprising a phage packaging site and a portion derived from a genome of a eukaryotic virus
US5837752A (en) 1997-07-17 1998-11-17 Massachusetts Institute Of Technology Semi-interpenetrating polymer networks
AU8605598A (en) 1997-07-31 1999-02-22 University Of Pittsburgh Targeted hsv vectors
ATE303448T1 (de) 1997-09-23 2005-09-15 Genvec Inc Duale selektionkassette und sie enthaltende plasmide
NZ505325A (en) 1997-12-23 2003-07-25 Crucell Holland B Adeno-associated virus and adenovirus chimeric recombinant viruses useful for the integration of foreign genetic information into the chromosomal dna of target cells
US6506577B1 (en) 1998-03-19 2003-01-14 The Regents Of The University Of California Synthesis and crosslinking of catechol containing copolypeptides
US6686446B2 (en) 1998-03-19 2004-02-03 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
US6632922B1 (en) 1998-03-19 2003-10-14 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
DE69927013T2 (de) 1998-04-22 2006-06-29 Genvec, Inc. Effiziente reinigung von adenovirus
US6436392B1 (en) 1998-05-20 2002-08-20 University Of Iowa Research Foundation Adeno-associated virus vectors
US5965358A (en) 1998-08-26 1999-10-12 Genvec, Inc. Method for assessing the relative purity of viral gene transfer vector stocks
US6759237B1 (en) 1998-11-05 2004-07-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same
EP1267946A4 (en) 2000-02-28 2008-07-02 Genesegues Inc SYSTEM AND METHOD FOR ENCAPSULATING NANOCAPSULES
US6168941B1 (en) 2000-04-07 2001-01-02 Genvec, Inc. Method of producing adenoviral vector stocks
WO2001085208A2 (en) 2000-05-05 2001-11-15 Cytos Biotechnology Ag Molecular antigen arrays and vaccines
WO2001091802A1 (en) 2000-05-30 2001-12-06 Baylor College Of Medicine Chimeric viral vectors for gene therapy
WO2001092551A2 (en) 2000-06-01 2001-12-06 University Of North Carolina At Chapel Hill Duplexed parvovirus vectors
US6593123B1 (en) 2000-08-07 2003-07-15 Avigen, Inc. Large-scale recombinant adeno-associated virus (rAAV) production and purification
CA2319928A1 (en) 2000-09-18 2002-03-18 Vasogen Ireland Limited Apoptosis-mimicking synthetic entities and use thereof in medical treatments
US6447995B1 (en) 2000-10-04 2002-09-10 Genvec, Inc. Utilizing intrinsic fluorescence to detect adenovirus
GB0025414D0 (en) 2000-10-16 2000-11-29 Consejo Superior Investigacion Nanoparticles
US7122181B2 (en) 2000-12-19 2006-10-17 Research Development Foundation Lentiviral vector-mediated gene transfer and uses thereof
ATE472335T1 (de) 2001-05-31 2010-07-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Chimere alphavirus-replikon-partikel
DK1412493T3 (da) 2001-08-02 2012-01-09 Inst Clayton De La Rech Fremgangsmåder og sammensætninger der angår forbedrede lentiviral-vektor.-produktionsystemer
US6818732B2 (en) 2001-08-30 2004-11-16 The Regents Of The University Of California Transition metal initiators for controlled poly (beta-peptide) synthesis from beta-lactam monomers
AU2002327614B2 (en) 2001-09-06 2007-12-06 Alphavax, Inc. Alphavirus replicon vector systems
CN1606456A (zh) 2001-10-02 2005-04-13 克雷顿研究院 限制性表达慢病毒载体
WO2003052051A2 (en) 2001-12-17 2003-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences
EP1581056B1 (en) 2002-12-13 2010-07-21 Genetix Pharmaceuticals Inc. Therapeutic retroviral vectors for gene therapy
WO2004075861A2 (en) 2003-02-26 2004-09-10 Children's Hospital, Inc. Recombinant adeno-associated virus production
AU2004224762B2 (en) 2003-03-26 2009-12-24 Kuros Us Llc Packaging of immunostimulatory oligonucleotides into virus-like particles: method of preparation and use
US7186699B2 (en) 2003-06-03 2007-03-06 Cell Genesys, Inc. Method for treating cancer by vector-mediated delivery of one or more anti-angiogenic or pro-apoptotic genes
EP1486567A1 (en) 2003-06-11 2004-12-15 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Improved adeno-associated virus (AAV) vector for gene therapy
US20050100890A1 (en) 2003-10-15 2005-05-12 Davidson Beverly L. Methods for producing and using in vivo pseudotyped retroviruses
KR101376715B1 (ko) 2003-12-19 2014-03-27 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 소프트 또는 임프린트 리소그래피를 이용하여 분리된 마이크로- 및 나노- 구조를 제작하는 방법
JP2008512350A (ja) 2004-07-01 2008-04-24 イェール ユニバーシティ 標的化され、そして高密度で薬物が負荷されるポリマー性物質
EP1858332A4 (en) 2005-02-16 2011-06-22 Lentigen Corp LENTIVIRUS VECTORS AND ITS USE
CN101248186A (zh) 2005-05-23 2008-08-20 瓦克辛公司 不含腺病毒的重组腺病毒载体的快速生产
EP1974044B1 (en) 2005-12-12 2011-01-26 CANJI, Inc. Adenoviral expression vectors having an expression cassette in the e1 region and an inactivated e2b polymerase
GB0526211D0 (en) 2005-12-22 2006-02-01 Oxford Biomedica Ltd Viral vectors
US20090226525A1 (en) 2007-04-09 2009-09-10 Chimeros Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
AU2008239795A1 (en) 2007-04-12 2008-10-23 Emory University Novel strategies for delivery of active agents using micelles and particles
MX2010001379A (es) 2007-08-03 2010-06-08 Pasteur Institut Vectores de tranferencia de gen lentiviral y sus aplicaciones medicinales.
AU2008314647B2 (en) 2007-10-12 2013-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Vaccine nanotechnology
EP2262489A2 (en) 2008-02-28 2010-12-22 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung des öffentlichen Rechts Hollow nanoparticles and uses thereof
US8871515B2 (en) 2008-09-17 2014-10-28 Isogenis, Inc. Construction of fully-deleted adenovirus-based gene delivery vectors and uses thereof
CN101676291B (zh) 2008-09-18 2012-05-09 上海海和药物研究开发有限公司 一类雷帕霉素碳酸酯类似物、其药物组合物及其制备方法和用途
WO2010047839A1 (en) 2008-10-25 2010-04-29 Aura Biosciences Modified plant virus particles and uses therefor
WO2010114948A2 (en) 2009-04-02 2010-10-07 University Of Florida Research Foundation, Inc. An inducible system for highly efficient production of recombinant adeno-associated virus (raav) vectors
US20120283318A1 (en) 2009-10-05 2012-11-08 Mei Ya-Fang Replicating viral vectors for gene therapy
US8927514B2 (en) 2010-04-30 2015-01-06 City Of Hope Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment
WO2012112578A2 (en) 2011-02-14 2012-08-23 The Children's Hospital Of Philadelphia Improved aav8 vector with enhanced functional activity and methods of use thereof
US20140155469A1 (en) 2011-04-19 2014-06-05 The Research Foundation Of State University Of New York Adeno-associated-virus rep sequences, vectors and viruses
EP3663395B1 (en) 2012-03-26 2024-07-31 The United States of America, as Represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Office of Technology, Transfer, Delivery of packaged rna to mammalian cells
HUE054087T2 (hu) 2012-04-18 2021-09-28 Childrens Hospital Philadelphia Készítmények és eljárások nagy hatékonyságú géntranszferre AAV kapszidvariánsok alkalmazásával
US20150224209A1 (en) 2012-09-14 2015-08-13 The Regents Of The University Of California Lentiviral vector for stem cell gene therapy of sickle cell disease
CN102871966B (zh) * 2012-10-19 2013-11-20 东南大学 用于改善雷帕霉素生物利用度的纳米载药颗粒及其制备方法
US9624510B2 (en) 2013-03-01 2017-04-18 The Wistar Institute Adenoviral vectors comprising partial deletions of E3
CA2909085C (en) 2013-04-08 2023-08-29 University Of Iowa Research Foundation Chimeric adeno-associated virus/ bocavirus parvovirus vector
BR112015027279A8 (pt) * 2013-05-03 2018-01-30 Selecta Biosciences Inc métodos e composições para acentuar células t reguladoras cd4+
GB201407322D0 (en) * 2014-04-25 2014-06-11 Ospedale San Raffaele Gene therapy
CN107072964A (zh) 2014-11-05 2017-08-18 西莱克塔生物科技公司 与低hlb表面活性剂在生产包含rapalog的合成纳米颗粒中之用途相关的方法和组合物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10507758A (ja) * 1994-10-19 1998-07-28 ジェネティック セラピー，インコーポレイテッド アデノウイルスおよび免疫抑制剤同時反復投与を伴う遺伝子治療
JP2014513092A (ja) * 2011-04-29 2014-05-29 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド Ｔエフェクター細胞を抗原特異的に欠失させるための寛容原性合成ナノキャリア
JP2016526048A (ja) * 2013-06-04 2016-09-01 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドＳｅｌｅｃｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． 非免疫抑制性の抗原特異的免疫治療薬の反復投与
WO2016037164A1 (en) * 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene expression modulating anti-viral transfer vector immune responses

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FRONTIERS IN MICROBIOLOGY, 2011, VOL.2, ARTICLE 244, JPN6021049683, ISSN: 0005038447 *
HUMAN GENE THERAPY, 2014, VOL.25, PP.506-515, JPN6021049685, ISSN: 0005038449 *
MOLECULAR THERAPY, 2007, VOL.15, NO.6, PP.1160-1166, JPN6021049684, ISSN: 0005038448 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023548948A (ja) * 2020-11-10 2023-11-21 ブルーメイジ バイオテクノロジー コーポレイション リミティド エルゴチオネインの安定化におけるヒアルロン酸又はその塩及び／又はトレハロースの使用、及びヒアルロン酸又はその塩及び／又はトレハロースを含有するエルゴチオネイン組成物
JP7685140B2 (ja) 2020-11-10 2025-05-29 ブルーメイジ バイオテクノロジー コーポレイション リミティド エルゴチオネインの安定化におけるヒアルロン酸又はその塩及び／又はトレハロースの使用、及びヒアルロン酸又はその塩及び／又はトレハロースを含有するエルゴチオネイン組成物

Also Published As

Publication number Publication date
KR20240015743A (ko) 2024-02-05
EP3565572A1 (en) 2019-11-13
US20180193482A1 (en) 2018-07-12
CN110325203A (zh) 2019-10-11
KR20190104194A (ko) 2019-09-06
JP2023071721A (ja) 2023-05-23
MX2019008143A (es) 2020-01-13
CA3049384A1 (en) 2018-07-12
BR112019013862A2 (pt) 2020-04-14
WO2018129268A1 (en) 2018-07-12
IL267819A (en) 2019-09-26
AU2018205496A1 (en) 2019-07-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2023071721A (ja) 合成ナノキャリアにカップリングした免疫抑制剤のパターン化された投与
JP7425767B2 (ja) 遺伝子発現調節抗ウイルス導入ベクター免疫応答を減弱化するための方法および組成物
US20200360453A1 (en) Methods for treatment of subjects with preexisting immunity to viral transfer vectors
US20240024517A1 (en) Viral vector dosing protocols
US20230140196A1 (en) Viral vector dosing protocols
WO2024229370A1 (en) Compositions and methods for treating gvhd
WO2024229380A1 (en) Immunosuppressant in combination with high affinity il-2 receptor agonists in autoimmune liver diseases
EP4429662A1 (en) Multiple dosing with viral vectors

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210105

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210105

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210322

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20211213

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20220314

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20220512

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220613

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20221012

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230213

C60 Trial request (containing other claim documents, opposition documents)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60

Effective date: 20230213

C11 Written invitation by the commissioner to file amendments

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C11

Effective date: 20230222

A911 Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20230327

C21 Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21

Effective date: 20230328

A912 Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912

Effective date: 20230421

C211 Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C211

Effective date: 20230425