[go: up one dir, main page]

JP2019502650A - 抗ＥｒｂＢ２抗体−薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその適用 - Google Patents

抗ＥｒｂＢ２抗体−薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその適用 Download PDF

Info

Publication number
JP2019502650A
JP2019502650A JP2017566133A JP2017566133A JP2019502650A JP 2019502650 A JP2019502650 A JP 2019502650A JP 2017566133 A JP2017566133 A JP 2017566133A JP 2017566133 A JP2017566133 A JP 2017566133A JP 2019502650 A JP2019502650 A JP 2019502650A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
drug conjugate
cancer
group
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2017566133A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2019502650A5 (ja
JP6888871B2 (ja
Inventor
トントン シュエ，
トントン シュエ，
ミヤオ，ジェンウェイ
ジン ワン，
ジン ワン，
ガン チェン，
ガン チェン，
イエン チン，
イエン チン，
トン ジュウ，
トン ジュウ，
リャン シャオ，
リャン シャオ，
ホン ジャン，
ホン ジャン，
チウイェン ヤン，
チウイェン ヤン，
ディラン ダールン デン，
ディラン ダールン デン，
リーピン リュウ，
リーピン リュウ，
ホン ゼン，
ホン ゼン，
リー イン，
リー イン，
チーフェン シー，
チーフェン シー，
ホンメイ ソン，
ホンメイ ソン，
シー ジャオ，
シー ジャオ，
リーチュン ワン，
リーチュン ワン，
ジンイー ワン，
ジンイー ワン，
Original Assignee
シチュアン ケルン−バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド
シチュアン ケルン−バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by シチュアン ケルン−バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド, シチュアン ケルン−バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド filed Critical シチュアン ケルン−バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド
Publication of JP2019502650A publication Critical patent/JP2019502650A/ja
Publication of JP2019502650A5 publication Critical patent/JP2019502650A5/ja
Priority to JP2021083093A priority Critical patent/JP7200454B2/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6888871B2 publication Critical patent/JP6888871B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/536—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/07—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

抗ＥｒｂＢ２抗体−薬物コンジュゲート、それを含む組成物、そのための調製方法、及びその適用が提供される。
【選択図】 図３

Description

本発明は、生物医学技術の分野に関する。特に、本発明は、抗ＥｒｂＢ２抗体−薬物コンジュゲート、それを含む組成物、並びにそれらの調製方法及び使用に関する。
標的治療のための新規な医薬品としての抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、がん治療の新時代の到来を告げる。Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．及びＩｍｍｕｎｏＧｅｎ，Ｉｎｃが先頭に立ち、多くの多国籍の製薬企業及び新興企業がこの分野における研究及び開発に関わっている。Ｍａｒｋｅｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社による報告によれば、現在、世界規模の臨床試験において合計４５種のＡＤＣがある。
ＡＤＣは、通常、３つの部分、すなわち、抗体、リンカー（複数可）及び薬物（複数可）が含まれ、これらは、いくつかの方法で連結される。
抗体は、薬物についての優れた標的指向化担体である。薬物と抗体とがヒドロキシル、メルカプト又はアミノ等の特異的な官能基を介してコンジュゲートされて、化学免疫コンジュゲート（ｃｈｅｍｏｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成することができる。抗体にコンジュゲートした薬物は、抗体の標的指向化能力により、正確に標的細胞に輸送され、それによって、疾患部位で局部薬物濃度を効率的に増加させ、一方、効果の増加及び毒性の低下を達成するために他の組織又は臓器で薬物濃度を大いに下げることができる。これらの戦略に用いられるポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体が報告されている（Ｒｏｗｌａｎｄら、１９８６年、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、２１巻：１８３〜８７頁）。現在臨床的に用いられているＡＤＣにおける抗体は、大部分はヒト化抗体であり、例えば、ＰＳＭＡ ＡＤＣ（抗ＰＳＭＡ抗体−ＭＭＡＥコンジュゲート）、ＳＧＮ−７５（抗ＣＤ７０抗体−ＭＭＡＦコンジュゲート）及びＴ−ＤＭ１（トラスツズマブ−ＤＭ１コンジュゲート）におけるものは、すべてヒト化抗体である。これまでのところ、ＦＤＡによって承認されたＡＤＣには、カドサイラ（Ｋａｄｃｙｌａ）（登録商標）（Ｔ−ＤＭ１）及びアドセトリス（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）が含まれる。
ＡＤＣ中の「弾頭」としての薬物は、通常、細胞傷害性薬物であり、これらは、主に、細胞中のＤＮＡ又はタンパク質合成を阻害し、細胞有糸分裂等を阻害することにより、腫瘍細胞を死滅させる。細胞傷害性薬物も正常細胞にとって致死的であるため、これらの開発及び用途は、非常に制限される。初期のＡＤＣは、従来の抗新生物薬を用いるが、これらの臨床活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、これらの薬物の活性より一般に低い。現在のＡＤＣにおける細胞傷害性薬物には、マイタンシノイド（例えば、ＥＰ０４２５２３５、米国特許第５２０８０２０号、米国特許第５４１６０６４号、米国特許第７２７６４９７号、米国特許第７４７３７９６号、米国特許第７８５１４３２号、米国特許出願公開第２００７／０２６９４４７号、米国特許出願公開第２０１１／０１５８９９１号、国際公開第２００４／１０３２７２号、国際公開第２０１２／０６１５９０号を参照のこと）、オーリスタチン（Ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）（例えば、米国特許第６８８４８６９号、米国特許第７４９８２９８号を参照のこと）、カリチアマイシン（例えば、米国特許第５６０６０４０号、米国特許第５７７０７１０号を参照のこと）、ドキソルビシン（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、２００２年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、１３巻：８５５〜８６９頁を参照のこと）、デュオカルマイシン及びＣＣ−１０６５（例えば、米国特許第７１２９２６１号を参照のこと）、イリノテカン代謝産物（例えば、国際公開第２０１５／０１２９０４号を参照のこと）、ピロロベンゾジアゼピン（例えば、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｈｅａｌｔｈｃ．２０１２年 Ｗｉｎｔｅｒ、９巻（４号）：２８〜３１頁を参照のこと）及びピロロベンゾジアゼピン二量体（ＰＢＤ二量体、例えば、国際公開第２００５／０４０１７０号を参照のこと）が含まれる。これらの細胞傷害性薬物は、非常に強力な非−選択的な毒性を有し、正常細胞を損傷し、したがって、それ自体は医薬品として用いることができない。
ＡＤＣにおけるリンカーは、細胞の外側で抗体からの小分子の薬物の脱離を防止し、細胞への内部移行において、クリーバブルリンカーの場合、適切な条件下で切断して、活性がある小分子の薬物を放出し、非−クリーバブルリンカーの場合、小分子の薬物及び抗体の酵素加水分解の結果生じたアミノ酸残基と共に活性部分を形成する要件を満たさなければならない。
現在、臨床試験におけるＡＤＣの中で、細胞傷害性薬物は、リンカーによって、抗体表面でリジン残基に又は（鎖間のジスルフィド結合の部分的還元後に利用可能な）抗体ヒンジ領域においてシステイン残基に、一般に、結合される。これらの薬物が、抗体表面でリジン残基に結合される場合、多数のリジン残基（８０個を超えるリジン残基）が、抗体表面に存在し、コンジュゲーション反応が、非−選択的であるため、コンジュゲーション部位及びコンジュゲートした薬剤の数に関して不確かさがあり、得られたＡＤＣの異質性をもたらす。例えば、Ｔ−ＤＭ１は、ＤＡＲ（薬物抗体比）値の分布が０〜８であり、平均ＤＡＲが３．５である（Ｌａｚａｒら、２００５年、Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．、１９巻：１８０６〜１８１４頁）。通常、ＡＤＣは、２〜４の範囲でＤＡＲを有する。これらの薬物が、抗体ヒンジ領域においてシステイン残基に結合される場合、４つの鎖間のジスルフィド結合だけが、ヒンジ領域において存在するに過ぎないため、鎖間のジスルフィド結合を部分的に減らすことが必要である（Ｓｕｎら、２００５年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、１６巻：１２８２〜１２９０頁）。しかしながら、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）及びリン酸トリクロルエチル（ＴＣＥＰ）等、現在の還元剤は、鎖間のジスルフィド結合を選択的に還元することができず、したがって、得られたＡＤＣは、均質な生成物でないが、複数の構成成分の混合物であり、主成分のＤＡＲは、０、２、４、６及び８であり、各ＤＡＲ値について、異なるコンジュゲーション部位から生じる異なる異性体がある。ＡＤＣ生成物の異質性は、生成物中の異なる構成成分の異なる薬物動態、効力、及び毒性によりその臨床適用（例えば、ＤＡＲがより高い構成成分が、ｉｎ ｖｉｖｏでより速やかに消失し、より重篤な毒性に寄与する、Ｂｏｓｗｅｌｌら、２０１１年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、２２巻：１９９４〜２００４頁を参照のこと）に不利であり、安定性を不十分にする。
ＥｒｂＢ受容体チロシンキナーゼファミリーは、細胞増殖、分化及び生存について重要な調節因子である。本ファミリーには、４つのメンバー、すなわち、上皮性増殖因子受容体（ＥＧＦＲ又はＥｒｂＢ１）、Ｈｅｒ２（ＥｒｂＢ２）、Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ３）及びＨｅｒ４（ＥｒｂＢ４）が含まれる。
抗ＥｒｂＢ２抗体の、トラスツズマブは、ＥｒｂＢ２−過剰発現乳がんの治療のために臨床的に用いられている。臨床試験において、免疫組織化学（ＩＨＣ）レベルが２＋を超える患者の１５％は、トラスツズマブへの臨床応答があり、応答中央値（ｍｅｄｉａｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）は、９．１カ月であった（例えば、Ｃｏｂｌｅｉｇｈら、１９９６年、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１４巻：７３７〜７４４頁を参照のこと）。トラスツズマブ（ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ））は、ＥｒｂＢ２−過剰発現乳がんに罹患している患者の治療用に、１９９８年９月２５日に米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認された。
トラスツズマブが、一部の乳がん患者を救い又は患者の生存を延長するが、ＥｒｂＢ２−過剰発現患者において、有効であるに過ぎず、臨床の奏功率は、わずか１５％である。したがって、より多くの患者により良好な効果を有する医薬品の必要性が依然としてある。
トラスツズマブは、マイタンシン（ＤＭ１）とコンジュゲートして、治療係数を改善するために、トラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ１、カドサイラ（登録商標））を形成している。Ｔ−ＤＭ１は、トラスツズマブによる治療、第一選択のタキサン及び他の抗Ｈｅｒ２治療薬が、無効である患者において用いられる。Ｔ−ＤＭ１は、薬物を腫瘍に送達して、腫瘍サイズを縮小し、疾患の進行を遅延させ、生存を延長する。臨床試験において、Ｔ−ＤＭ１の安全性及び効果を評価した。Ｔ−ＤＭ１は、ＦＤＡによって承認されたＨｅｒ２を標的指向化する第４の医薬品になる。しかしながら、これが承認された時、Ｔ−ＤＭ１について警告するブラックボックスがあり、患者及び医療専門家に、Ｔ−ＤＭ１が、肝毒性、心毒性及び死亡をもたらすおそれがあることを思い出させた。これは、主に、ｉｎ ｖｉｖｏでＴ−ＤＭ１の分解の際に放出された、脱離したＤＭ１及びＤＭ１−含有小分子によるものである。
Ｔ−ＤＭ１は、トラスツズマブ上のリジン側鎖アミノ基を、スルホスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）と共役し、次いで、ＤＭ１を結合することにより調製される。平均して、３．５ＤＭ１分子は、Ｔ−ＤＭ１中で１個のトラスツズマブ分子に結合される。トラスツズマブにおいて８８個のリジン残基があるため、Ｔ−ＤＭ１は、実際に、異なる数のＤＭ１分子が結合され、様々な共役部位を有する、様々なＡＤＣの組み合わせである。しかしながら、効果、薬物動態及び／又は毒性は、ＡＤＣの中でも異なる。一般に、高い薬物負荷はまた、ＡＤＣの凝集によるポリマーの量の増加、安定性の低下、毒性の増加、免疫原性の増加、速やかなｉｎ ｖｉｖｏクリアランス速度、半減期の減少及び治療係数の乏しさ等、多くの問題を引き起こすが、高い薬物負荷のＡＤＣは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が高い。
本発明は、従来技術における上記課題を解決することを目的としている。本発明は、哺乳動物において腫瘍成長を抑制し、様々ながんを治療するために用いることができる抗Ｈｅｒ２抗体−薬物コンジュゲートを提供する。これらのコンジュゲートは、より優れた生物活性、安定性、均質性、及び毒性副作用の減少を有する。
第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物

［式中、
Ａは、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体であり；
Ｘ及びＹはそれぞれ、独立に、Ｎ又はＣＲ１であり、各出現につきＲ１は、独立に、Ｈ又はＣ１〜Ｃ１０アルキルであり；
Ｌは、二価のリンカーであり；
Ｄは、細胞傷害性薬物基であり；
ａは、２〜１０からなる群から選択される整数である］
を提供する。
第２の態様では、本発明は、
（１）．式（Ｉ−Ａ）の化合物

［式中、Ｄ、Ｌ、Ｘ及びＹは、上記の式（Ｉ）に定義される通りである］
を調製するステップと；
（２）．ステップ（１）から得られた式（Ｉ−Ａ）の化合物を活性化することにより、式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物

［式中、Ｇは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ３、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＯＮＲＲ’、ＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＰ（Ｏ）ＲＲ’、ＲＳＯ２−Ｏ−、及び

からなる群から選択され、各出現につきＲ及びＲ’はそれぞれ、独立に、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、５〜１０個の環原子を有するヘテロシクリル、又はフェノキシからなる群から選択され、アルキル、アリール、ヘテロシクリル及びフェノキシはそれぞれ、非置換であるか又はハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜８個の環原子を有するヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール及び５〜１０個の環原子を有するヘテロアリールからなる群から選択される１つ又は複数の置換基で独立に置換される］
を得るステップと；
（３）．ステップ（２）から得られた式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物を、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体とコンジュゲートすることにより、異なる値を有する抗体−薬物コンジュゲートの混合物を得るステップと；
（４）．イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー及び親和性クロマトグラフィーからなる群から選択される１種又は複数のクロマトグラフ法を用いて、ステップ（３）から得られた混合物を精製することにより、抗体−薬物コンジュゲートを得るステップと
を含む、第１の態様の抗体−薬物コンジュゲートの調製方法を提供する。
第３の態様では、本発明は、本発明の第１の態様の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。
第４の態様では、本発明は、がんの予防又は治療用の医薬品の製造において、本発明の第１の態様の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物の使用を提供する。
第５の態様では、本発明は、本発明の第１の態様の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物を含む、医薬品製剤を提供する。
第６の態様では、本発明は、本発明の第１の態様の抗体−薬物コンジュゲート、薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物を、それを必要とする患者に投与するステップ、又は本発明の第３の態様の医薬組成物若しくは本発明の第５の態様の医薬品製剤を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、がんの予防又は治療のための方法を提供する。
未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。 抗体−薬物コンジュゲートＩ−１のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。 抗体−薬物コンジュゲートＩ−１及びトラスツズマブの重複する減少した逆相クロマトグラムを示す図である。 同じ条件下の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１及びトラスツズマブのプロテアーゼ加水分解後に得られたペプチドマッピングを示す図である。 未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−２のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。 抗体−薬物コンジュゲートＩ−２のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。 抗体−薬物コンジュゲートＩ−２及びトラスツズマブの重複する減少した逆相クロマトグラムを示す図である。 同じ条件下の抗体−薬物コンジュゲートＩ−２及びトラスツズマブのプロテアーゼ加水分解後に得られたペプチドマッピングを示す図である。 未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−３のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。 抗体−薬物コンジュゲートＩ−３のＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。 抗体−薬物コンジュゲートＩ−３及びトラスツズマブの重複する減少した逆相クロマトグラムを示す図である。 同じ条件下の抗体−薬物コンジュゲートＩ−３及びトラスツズマブのプロテアーゼ加水分解後に得られたペプチドマッピングを示す図である。
別段定義されない限り、本明細書において用いられるすべての用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。関連する定義及び用語は、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ）において見出すことができる。
本明細書に記載した数的な範囲は、その中に包摂される任意の及びすべての部分範囲を包含するものとして理解されるものとする。例えば、「１〜１０」の範囲は、１〜１０の明らかに示された値だけでなく、１〜１０の範囲における任意の単一の値（例えば、２、３、４、５、６、７、８、及び９）並びに部分範囲（例えば、１〜２、１．５〜２．５、１〜３、１．５〜３．５、２．５〜４、３〜４．５等）が含まれるものと理解されるべきである。この原理はまた、唯一の値が、最小値又は最大値として示される範囲に適用する。
本明細書を通して言及されるすべての参照は、参照によりその全体を本明細書に組み込む。
第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物を提供する

［式中、
Ａは、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体であり；
Ｘ及びＹはそれぞれ、独立に、Ｎ又はＣＲ１であり（好ましくは、Ｙは、ＣＲ１であり、Ｘは、Ｎである）、各出現につきＲ１は、独立に、Ｈ又はＣ１〜Ｃ１０アルキルであり、好ましくは、Ｈ又はＣ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル又はヘキシル）であり；
Ｌは、二価のリンカーであり；
Ｄは、細胞傷害性薬物基であり；
ａは、２〜１０からなる群から選択される整数、例えば、２、３又は４等であり、特に、好ましくは２である］。
抗体
本発明において用いられる抗体は、二重特異性抗体及び抗体官能性誘導体を含めた、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体である。
用語「ＥｒｂＢ２」及び「ＨＥＲ２」は、本明細書で互換的に用いられ、両語とも、天然に存在するヒトＨＥＲ２タンパク質（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｘ０３３６３、例えば、Ｓｅｍｂａら、（１９８５年）ＰＮＡＳ、８２巻：６４９７〜６５０１頁；及びＹａｍａｍｏｔｏら、（１９８６年）Ｎａｔｕｒｅ、３１９巻：２３０〜２３４頁を参照のこと）、並びにそれらの官能性誘導体、例えば、アミノ酸配列変異体を意味する。用語「ｅｒｂＢ２」とは、ヒトＨｅｒ２をコード化する遺伝子を意味し、用語「ｎｅｕ」とは、ラットｐｌ８５ｎｅｕをコード化する遺伝子を意味する。がん細胞、例えば、乳がん細胞、卵巣がん細胞、胃がん細胞、子宮内膜がん細胞、唾液腺がん細胞、肺がん細胞、腎がん細胞、結腸がん細胞、甲状腺がん細胞、膵がん細胞、膀胱がん細胞又は肝がん細胞等は、通常、ＥｒｂＢ２受容体を発現する細胞である。
本発明における好ましいＨｅｒ２は、ヒトＨｅｒ２の未変性配列である。本発明において用いることができる抗Ｈｅｒ２抗体の例には、それだけに限定されないが、ＭＡｂｓ４Ｄ５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １０４６３）、２Ｃ４（ＡＴＣＣ ＨＢ−１２６９７）、７Ｆ３（ＡＴＣＣ ＨＢ−１２２１６）及び７Ｃ２（ＡＴＣＣ ＨＢ １２２１５）が含まれ、これらは、例えば、米国特許第５，７７２，９９７号、国際公開第９８／７７７９７号及び米国特許第５，８４０，５２５号に記載されている。
ヒト化抗Ｈｅｒ２抗体には、米国特許第５，８２１，３３７号の表３に記載のｈｕＭＡｂ４Ｄ５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８；並びにＣＮ１３７００８２Ａの図１Ｂに示される７Ｃ２、７Ｆ３、２Ｃ４、７Ｄ３、３Ｅ８及び２Ｃ４が含まれる。
本発明において用いることができる抗ＨＥＲ２抗体の例には、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ；Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＰ３９６Ｌ；並びに国際公開第２００９／１２３８９４号に記載のＲ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６；国際公開第２０１２／０７９０９３号に記載のＭＭ−１１１；ＣＮ１０４４１８９５２Ａの請求項２〜１０に記載の抗体ＴＰｓ、ＴＰＬ、ＰＴｓ又はＰＴＬ；国際公開第２０１０／１０８１２７号の図３３Ａ及び図３３Ｂに記載の抗体Ｄｌ、Ｄｌ．５、Ｄｌ．５−１００、ＤＬＩｌ、ＤＬｌ Ｉｂ又はＤＬｌ Ｉｆ；及び国際公開第９３／２１３１９号に記載のヒト化５２０Ｃ９をさらに含むことができる。
本発明におけるＨｅｒ２の未変性配列は、自然から単離することができる、又は組換えＤＮＡ技術、化学合成、又はその組み合わせによって生成することができる。
用語「官能性誘導体」には、アミノ酸配列変異体及び未変性のポリペプチド共有結合性誘導体（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｖａｌｅｎｔ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）（例えば、翻訳後修飾、ピログルタミン酸誘導体化等により得られたもの）が含まれ、但しこれらは、未変性のポリペプチドのものと同様であるか又はそれよりも高い親和性及び生物活性を保持する。アミノ酸配列変異体及び未変性のポリペプチドアミノ酸配列は、一般に、後者において１種若しくは複数のアミノ酸置換、欠失及び／又は挿入と異なる。欠失体には、未変性のポリペプチド及びＮ−末端及び／又はＣ−末端切断変異体の断片が含まれる。通常、アミノ酸配列変異体及び未変性のポリペプチドは、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％の相同性を有するべきである。未変性のポリペプチド共有結合性誘導体は、抗体の翻訳後プロセシングを変化させることにより、例えば、糖鎖修飾部位の数又は位置を変化させることにより得られるものとなり得る。
用語「相同性」、「コンシステンシー」、「同一性」及び「類似性」は、本明細書において互換的に用いられ、最善のアラインメント（最適なアラインメント）の後に得られた、同一のヌクレオチドの百分率又は比較しようとする２種の核酸又はアミノ酸配列間の同一のアミノ酸残基の百分率を意味し、この百分率は、純粋に統計的であり、２つの配列間の差は、無作為に及びこれらの長さ全体にわたって分布する。２種の核酸又はアミノ酸配列間のアラインメントは、通常、最適な方式で整列させた後、これらの配列を比較することにより行い、比較は、セグメントにより又は「比較ウィンドウ」により行うことができる。最適なアラインメントは、手動の他に、参照に記載の他の方法、例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ、１９８１年、Ａｄ．Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．、２巻：４８２頁に記載の局所的相同アルゴリズム、Ｎｅｄｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ、１９７０年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８巻：４４３頁に記載の局所的相同アルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ、１９８８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５巻：２４４４頁に記載の類似性調査方法によって、及びこれらのアルゴリズムを用いたコンピュータソフトウェア（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ）により、又はＢＬＡＳＴ Ｎ若しくはＢＬＡＳＴ Ｐ比較ソフトウェアにより行うことができる。
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、最も広い意味で用いられ、これらが所望の生物活性を示す限り、完全なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び少なくとも２種の完全抗体（例えば、二重特異性抗体）から形成される多特異性抗体を包含する。
本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」とは、ほぼ均質な抗体の母集団から得られた抗体を意味し、すなわち、母集団を構成する個別の抗体は、少量で存在し得る、あり得る天然に存在する突然変異を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原決定基（エピトープ）に非常に特異的であり、それに対して、ポリクローナル抗体は、異なる決定基（エピトープ）に対して方向づけられる異なる抗体が含まれる。特異性以外に、モノクローナル抗体は、他の抗体によって汚染されずに合成することができると有利である。ここで、修飾語句の「モノクローナル」は、抗体のほぼ均質な母集団から得られている抗体の特徴を示し、任意の特定の生成方法を要するものと解釈すべきでない。
本発明におけるモノクローナル抗体は、特に、キメラ抗体が含まれ、これは、所望の生物活性を示す限り、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、いくつかの種、いくつかのクラス、又はいくつかのサブクラスの抗体において対応する配列と同一又は相同的であり、この鎖（複数可）の残りが、別の種、別のクラス、又は別のサブクラスの抗体において対応する配列と同一又は相同的である（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、（１９８４年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１巻：６８５１〜６８５５頁を参照のこと）。本発明において用いることができるキメラ抗体には、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、ゴリラ等）からの可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含む、霊長類化抗体が含まれる。
用語「抗体フラグメント」とは、抗体、好ましくは、抗原結合又はその可変領域の一部を意味する。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；二重特異性抗体；直鎖の抗体；及び単鎖Ｆｖが含まれる。
用語「二重特異性抗体」及び「二機能性抗体コンジュゲート」は、互換的に用いられ、カップリングする腕によって第１の抗体（断片）及び第２の抗体（断片）により形成されたコンジュゲートを意味し、それぞれの抗体の活性は、コンジュゲートに残存し、したがって、二重機能及び二重特異性を有する。
用語「多特異性抗体」には、例えば、三重及び四重特異性抗体が含まれ、前者は、異なる３つのタイプの抗原結合特異性を有する抗体であり、後者は、異なる４つのタイプの抗原結合特異性を有する抗体である。
用語「未変化抗体」とは、抗原結合可変領域、並びに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を含む抗体を意味する。定常ドメインは、未変性配列（例えば、ヒト未変性配列定常ドメイン）又はそれらのアミノ酸配列変異体でもよい。１種若しくは複数のエフェクター機能を有する未変化抗体が、好ましい。
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含むキメラ抗体を意味する。ほとんどのヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（ドナー抗体）であり、これは、超可変領域から得られた残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト（例えば、マウス、ラット、ウサギ又はヒト以外の霊長類）種（ドナー抗体）の超可変領域から得られた残基により置換される。いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基はまた、非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体において見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体性能をさらに洗練させるためになされる。ヒト化抗体は、一般に、少なくとも１つ、通常、２つの可変ドメインを含み、超可変のループのすべて又はほぼすべては、非ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、ＦＲのすべて又はほぼすべては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含むこともできる（Ｆｃ、通常、ヒト免疫グロブリンのＦｃ）。詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓら、１９８６年、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２〜５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８年、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜３２９頁；及びＰｒｅｓｔａ、１９９２年、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｗｌ ２：５９３〜５９６頁を参照のこと。
これらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、未変化抗体は、異なる「クラス」に割り当てることができる。主な５つのクラスは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭであり、これらのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。抗体の異なるクラスの重鎖定常ドメインは、それぞれα、β、ε、γ、及びμとして公知である。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配置は、当技術分野で周知である。
本発明において、抗体におけるアミノ酸置換は、ほとんどの場合にＬ−アミノ酸による置換であるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１種又は複数のＤ−アミノ酸を含むことができる。Ｄ−アミノ酸を含有するペプチドは、Ｌ−アミノ酸から排他的に構成されるペプチドよりも、安定し、口腔、腸管又は血漿で分解しにくいと考えられる。
本発明において用いられるモノクローナル抗体は、様々な方法により生成することができる。例えば、本発明において用いるためのモノクローナル抗体は、（マウス、ハムスター、ラット及びヒトの細胞を含めた）様々な種を用いたハイブリドーマ法により（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、１９７５年、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁を参照のこと）、又は組換えＤＮＡ技術により（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、又はファージ抗体ライブラリーからの単離により（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、１９９１年、Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４〜６２８頁；及びＭａｒｋｓら、１９９１年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１〜５９７頁を参照のこと）得ることができる。
本発明において用いられる好ましい抗体は、抗ヒトＥｒｂＢ２抗体であり、好ましくは、抗ヒトＥｒｂＢ２抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３は、それぞれ、トラスツズマブのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３である。抗ヒトＥｒｂＢ２抗体は、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体（ｆｕｌｌｙ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）となり得る。
本発明において用いられる抗体は、米国特許第５，８２１，３３７号の図１に示されるヒト化マウス抗ヒトＨｅｒ２抗体４Ｄ５であることがより好ましい。
本発明において用いられる抗体は、トラスツズマブであることが特に好ましく、その配列は、例えば、ＣＮ１０３３１９５９９Ａに開示されている。トラスツズマブの重鎖の末端のＬｙｓは、欠失の傾向があり、しかしながら、生物活性に影響を与えない。Ｄｉｃｋ、Ｌ．Ｗ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、１００巻：１１３２〜１１４３頁を参照のこと。上記の通り、トラスツズマブ、重鎖の末端のＬｙｓが欠失しているその配列、又はその断片は、すべて、本発明のトラスツズマブの範囲内である。
トラスツズマブ重鎖配列（配列番号１）は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
である。
トラスツズマブ軽鎖配列（配列番号２）は、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
である。
抗体フラグメントは、様々な方法により、例えば、未変化抗体のタンパク質消化（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、１９９２年、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２４巻：１０７〜１１７頁；及びＢｒｅｎｎａｎら、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９巻：８１頁を参照のこと）により、又は上記で論じられた組換え宿主細胞及び抗体ファージライブラリーにより、直接、生成することができる。或いは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から直接回収し、化学的に結合させて、Ｆ（ａｂ’）断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）、１９９２年２月、１０巻（２号）：１６３〜１６７頁）。さらに、Ｆ（ａｂ’）断片は、組換え宿主細胞培養から直接単離することができる。抗体フラグメントの生成のための他の技法は、当業者には明らかである。いくつかの実施形態では、本発明において用いられる抗体フラグメントは、単鎖のＦｖ断片（ｓｃＦｖ）である（例えば、国際公開第９３／１６１８５号；米国特許第５，５７１，８９４号；及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと）。いくつかの実施形態では、抗体フラグメントは、直鎖の抗体フラグメントであり（例えば、米国特許第５，６４１，８７０号を参照のこと）、これは、単一特異性でも二重特異性でもよい。
少なくとも２種の異なるエピトープについての結合特異性を有する二重特異性抗体（例えば、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、１９８３年、Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻：５３７〜５３９頁を参照のこと）は、ＥｒｂＢ２タンパク質の２種の異なるエピトープに結合することができる。他の二重特異性抗体は、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３及び／又はＥｒｂＢ４についての結合部位（複数可）と、ＥｒｂＢ２結合部位を組み合わせることができる。或いは、抗ＥｒｂＢ２の腕は、ＥｒｂＢ２−発現細胞への細胞防御機構に焦点を絞るために、Ｔ−細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２若しくはＣＤ３）等の白血球、又はＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）等のＩｇＧ（ＦｃγＲ）についてのＦｃ受容体においてトリガー分子に結合する腕と組み合わせることができる。二重特異性抗体は、細胞傷害性薬物を、ＥｒｂＢ２−発現細胞に局在化させるために用いることができる（例えば、国際公開第９６／１６６７３号、米国特許第５，８３７，２３４号、国際公開第９８／０２４６３号及び米国特許第５，８２１，３３７号を参照のこと）。二重特異性抗体についての精製方法が開示されている（例えば、国際公開第９３／０８８２９号；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、１９９１年、ＥＭＢＯ Ｊ．１０巻：３６５５〜３６５９頁；国際公開第９４／０４６９０号；Ｓｕｒｅｓｈら、１９８６年、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１巻：２１０号；米国特許第５，７３１，１６８号を参照のこと）。二重特異性抗体は、ロイシンジッパー（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、１９９２年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８巻（５号）：１５４７〜１５５３を参照のこと）、及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、１９９４年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２巻：５３６８頁を参照のこと）を用いて生成することができる。
二重特異性抗体を、抗体フラグメントから生成するための技法は、化学結合を用いたもの等が記載されており、未変化抗体は、タンパク分解的に切断されて、Ｆ（ａｂ’）断片が生成される（Ｂｒｅｎｎａｎら、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻：８１頁）。Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌から回収され、化学的に結合されて、二重特異性抗体を形成する（Ｓｈａｌａｂｙら、１９９２年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５巻：２１７〜２２５頁を参照のこと）。「二重特異性抗体」技術では、二重特異性抗体断片を作製するための代替方法を提供する（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、１９９３年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻：６４４４〜６４４８頁を参照のこと）。
２価を超える結合価を有する抗体を調製することができる。３つ又はそれ以上の抗原結合部位及び２つ又はそれ以上の可変ドメインを有する多価「オクトパス」抗体は、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に生成することができる（例えば、米国特許出願公開第２００２／０００４５８６号及び国際公開第０１／７７３４２を参照のこと）。例えば、三重特異性抗体を調製することができる（例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻：６０頁を参照のこと）。（重鎖中の又は修飾される重鎖中の）三重特異性若しくは四重特異性抗体のＣＨ３ドメインは、例えば、国際公開第９６／０２７０１１号、Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．ら、１９９６年、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、９巻：６１７〜６２１頁；及びＭｅｒｃｈａｎｔ，Ａ．Ｍ．ら、１９９８年、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１６巻：６７７〜６８１頁においていくつかの例が詳細に記載されている、「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）」技術によって変更することができる。本方法では、２つのＣＨ３ドメインの相互作用表面を変更して、これらの２つのＣＨ３ドメインを含む両方の重鎖のヘテロ二量体化を増加させる。（２本の重鎖の）２つのＣＨ３ドメインが、それぞれ「ノブ（ｋｎｏｂ）」となり得、もう一方が、「ホール（ｈｏｌｅ）」である。ジスルフィド架橋の導入によって、ヘテロ二量体をさらに安定させ（例えば、Ｍｅｒｃｈａｎｔ，Ａ．Ｍ．ら、１９９８年、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６巻：６７７〜６８１頁；及びＡｔｗｅｌｌ、Ｓ．ら、１９９７年、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．、２７０巻：２６〜３５頁を参照のこと）、収率を増加させる。
アミノ酸配列は、基礎となる核酸配列を変更することにより、通常変更される。抗体のアミノ酸配列変異体をコード化する核酸分子は、当技術分野で公知の様々な方法によって調製することができる。これらの方法には、それだけに限定されないが、（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合では）天然資源からの単離又はオリゴヌクレオチド−によって媒介される（若しくは部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及び抗体の早期に調製された変異体又は非変異体バージョンのカセット変異誘発による調製が含まれる。置換型変異誘発（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）について最大の対象となる部位には、超可変領域が含まれるが、ＦＲ変更もまた、考えられる。従来の分子生物学技法を用いたＣＮ１０３３１９５９９Ａの実施例２にあるように、特定部位の突然変異誘発を、トラスツズマブの重鎖、及びトラスツズマブ突然変異体Ｋ３０Ｒの重鎖をコード化する全遺伝子合成されたＤＮＡ断片に行い、重鎖発現ベクターにクローン化し、消化及び連結反応の操作を、市販キットの使用説明書に従って行った。
薬物
本発明において用いられる薬物は、細胞傷害性薬物である。本明細書で使用される場合、用語「細胞傷害性薬物」とは、細胞の機能を抑制する若しくは防止する、及び／又は細胞の破壊を引き起こす物質を意味する。
いくつかの実施形態では、細胞傷害性薬物は、オーリスタチンであり、（ドラスタチン−１０の誘導体としても公知の）オーリスタチンＥ又はその誘導体（例えば、オーリスタチンＥ及びケト酸から形成されたエステル）等である。例えば、オーリスタチンＥは、パラ−アセチル安息香酸又はベンゾイル吉草酸と反応させて、それぞれＡＥＢ（オーリスタチンＥＢ）及びＡＥＶＢ（５−ベンゾイル吉草酸オーリスタチンＥエステル）を生成することができる。他の典型的なオーリスタチンには、ＡＦＰ（オーリスタチンＦフェニレンジアミン）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）、及びＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ）が含まれる。
模範的なオーリスタチンの合成及び構造は、米国特許第６，８８４，８６９号、米国特許第７，０９８，３０８号、米国特許第７，２５６，２５７号、米国特許第７，４２３，１１６号、米国特許第７，４９８，２９８号及び米国特許第７，７４５，３９４号に記載されている。他の新規のオーリスタチンの合成及び構造は、国際公開第２０１３／１７３３９３号に記載されている。これらの参照文献を、参照によりその全体を本明細書に組み込む。
いくつかの実施形態では、細胞傷害性薬物は、マイタンシノイドの薬剤である。マイタンシンは、Ｋｕｐｃｈａｎらにより、東アフリカ低木マイテヌス・セラッタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ ｓｅｒｒａｔａ）から最初に単離され、メトトレキサート、ダウノルビシン、及びビンクリスチン（米国特許第３，８９６，１１１号を参照のこと）等の従来の化学療法薬よりも細胞毒性が１００〜１０００倍高いことが示された。続いて、いくつかの微生物はまた、マイタンシノール（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｌ）及びマイタンシノールのＣ−３エステル等のマイタンシノイドを生成することが見出された（米国特許第４，１５１，０４２号を参照のこと）。合成マイタンシノールＣ−３エステル及びマイタンシノール類似体もまた、報告されている（Ｋｕｐｃｈａｎら、１９７８年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２１巻：３１〜３７頁；Ｈｉｇａｓｈｉｄｅら、１９７７年、Ｎａｔｕｒｅ、２７０巻：７２１〜７２２頁；Ｋａｗａｉら、１９８４年、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、３２巻：３４４１〜３４５１頁を参照のこと）。マイタンシノールのＣ−３エステルは、マイタンシノールから調製される。マイタンシノール類似体の例には、（例えば、脱塩素化された（ｄｅｃｈｌｏｒｉｎａｔｅｄ））芳香環又はＣ−１５、Ｃ−１８、Ｃ−２０及び／又はＣ−４、Ｃ−５で修飾されたマイタンシノールが含まれる。
いくつかの実施形態では、細胞傷害性薬物は、例えば、それだけに限定されないが、以下の化合物：


［式中、Ｒ、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、各出現につきＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル又はＣ３〜Ｃ８シクロアルキルからなる群から選択され、アルキル及びシクロアルキルは、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ若しくはＩ）から選択される１つ若しくは複数の（例えば、１、２、３、４若しくは５つの）置換基で、任意選択で置換され；Ｘは、−Ｓ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＯＲ）−、−ＣＨ（ＯＮＨ２）−、又は−Ｃ（Ｏ）−であり；Ｒ’は、Ｈ、−ＮＨ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒからなる群から選択され；Ａｒは、Ｃ６〜Ｃ１４アリール（例えば、フェニル又はナフチル）である］
である。
好ましい実施形態では、細胞傷害性薬物基は、式（Ｄ１）若しくは（Ｄ２）の化合物、又はその立体異性体に由来する

［式中、
Ｒ２は、−ＣＨ２Ｎ３、−ＣＯＮＨＳＯ２（シクロプロピル）、チアゾール−２−イル、−ＣＨ３及び−ＣＯＯＨからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ及び−ＯＨからなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、−ＮＨ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ６（式中、Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル又はＣ６〜Ｃ１４アリールであり、アルキル、シクロアルキル及びアリールは、Ｆ等のハロゲンから選択される１つ若しくは複数の（例えば、１、２、３、４若しくは５つの）置換基で任意選択でそれぞれ置換される）からなる群から選択される］；

［式中、Ｒ５は、−ＣＨ（ＣＨ３）Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＳＨ及び−ＣＨ（ＣＨ３）Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＳＨからなる群から選択される］。
式（Ｉ）では、細胞傷害性薬物基は、Ｒ４若しくはＲ５を除去することにより、又は式（Ｄ１）若しくは（Ｄ２）の化合物から、Ｒ４又はＲ５中の水素又はＲ６を除去することにより得られる基となり得る。
好ましい実施形態では、細胞傷害性薬物は、

から選択される。
リンカー
本発明の抗体薬物のコンジュゲーションでは、細胞傷害性薬物基は、二価のリンカーを介して抗体分子に連結される。
リンカーの抗体へのコンジュゲーションは、様々な方法によって、例えば、抗体の表面のリジン残基、又は抗体の酸化アルキル基との還元カップリングによって達成することができる。このコンジュゲーションは、ヒドラゾン、ジスルフィド結合若しくはペプチド構造に基づいたものとなり得る。これらのコンジュゲーション方法は、当業者に公知である。
本発明において有用なリンカーには、クリーバブル及び非−クリーバブルリンカーが含まれる。クリーバブルリンカーは、通常、細胞内条件下で切断に感受性が強い。適当なクリーバブルリンカーには、例えば、細胞内プロテアーゼ（例えば、リソソームプロテアーゼ等）又はエンドソームプロテアーゼにより切断可能なペプチドリンカーが含まれる。模範的な実施形態では、クリーバブルリンカーは、ジペプチドリンカー、例えば、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）リンカー、フェニルアラニン−リジン（ｐｈｅ−ｌｙｓ）リンカー、又はマレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ｍｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ）リンカーとなり得る。他の適当なクリーバブルリンカーには、ある特定のｐＨ又はｐＨ範囲で加水分解性のリンカー（例えば、ヒドラゾンリンカー）及びジスルフィドリンカーが含まれる。非−クリーバブルリンカーは、スルホ−ＳＭＣＣとなり得る。スルホ−ＳＭＣＣは、マレイミド基によってタンパク質に結合され、そのスルホ−ＮＨＳエステルは、第一級アミン（例えば、タンパク質又はペプチドのリジンε−アミノ及びＮ−末端α−アミノ）と反応させることができる。さらに他の非−クリーバブルリンカーは、マレイミドカプロイル（ＭＣ）である。リンカーは、薬物が放出されるために、抗体が細胞内に分解されなければならない程度に、抗体に共有結合され得る。
リンカーには、抗体への結合のための基、例えば、アミノ、ヒドロキシル若しくはカルボキシル基が含まれる。リンカーは、例えば、マレイミド、ハロアセトアミド（例えば、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド又はクロロアセトアミド）、ハロエステル（例えば、ヨードエステル、ブロモエステル又はクロロエステル）、ハロメチルケトン（例えば、ヨードメチルケトン、ブロモメチルケトン又はクロロメチルケトン）、ベンジル性ハロゲン化物（例えば、ベンジル性ヨウ化物、ベンジル性臭化物又はベンジル性塩化物）、ビニルスルホン及びピリジルチオ）（例えば、Ｗｏｎｇ、１９９１年、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎを参照のこと）に由来し得る。
いくつかの実施形態では、リンカーには、少なくともＶａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＰＡＢ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＰＡＢ、Ａｌａ−ＰＡＢ又はＰＡＢが含まれる。いくつかの実施形態では、リンカーには、少なくともペプチド、オリゴ糖、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−が含まれる。いくつかの実施形態では、リンカーには、少なくとも −Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−が含まれる。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）中のリンカーＬは、






［式中、ｍ及びｎはそれぞれ、各出現につき１〜１０からなる群から選択される整数であり、好ましくは１、２、３、４、５又は６である］
からなる群から選択することができる。
抗体−薬物コンジュゲート
本発明の第１の態様の抗体−薬物コンジュゲートは、上記の本明細書で定義される通り、式（Ｉ）によって表される。
式（Ｉ）の最も好ましい抗体−薬物コンジュゲートは、Ｉ−１、Ｉ−２及びＩ−３：

［式中、「Ａ」は、トラスツズマブである］
から選択される。
本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、薬学的に許容される塩、又は立体異性体、若しくは代謝産物、若しくは溶媒和物の形態となり得、これらの塩、立体異性体、又は代謝産物はまた、溶媒和物の形態となり得る。
用語「薬学的に許容される塩」とは、化合物の生物学的利用可能性及び性質を維持し、生物学的又は他の態様に関して、医薬品の要件を満たす塩を意味する。多くの場合では、本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、アミノ基及び／又はカルボキシル基又はその中の他の類似の基によって、酸付加塩及び／又は塩基付加塩を形成する。
薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸又は有機酸で形成されたものとなり得る。無機酸には、例えば，塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、及びリン酸等が含まれる。有機酸には、例えば、酢酸、プロピオン酸、ヒドロキシ酢酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、及びサリチル酸等が含まれる。
薬学的に許容される塩基付加塩は、無機塩基又は有機塩基で形成されたものとなり得る。無機塩基で形成された塩には、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩、及びアルミニウム塩等が含まれ、アンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩、及びマグネシウム塩が、特に好ましい。有機塩基には、例えば、第一級アミン、第二級アミン、及び第三級アミン、（天然に存在する置換アミンを含めた）置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂等が含まれる。有機塩基のある特定の例は、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、Ｎ−エチルエタンアミン、トリプロピルアミン及びエタノールアミンである。
用語「立体異性体」とは、少なくとも１個の不斉中心の存在により形成された異性体を意味する。１個若しくは複数の不斉中心を有する化合物は、ラセミ体、ラセミ混合物、単一の鏡像異性体、ジアステレオマー混合物及び単一のジアステレオマーを形成することができる。ある特定の個々の分子は、幾何異性体（シス−／トランス−）として存在し得る。別段の指定がない限り、１個若しくは複数の不斉中心を有する化合物の名称又は構造が、立体化学を特に示さずに開示される場合、これらの化合物のあり得るすべての立体異性体が考えられることが理解されるべきである。
用語「溶媒和物」とは、１個若しくは複数の溶媒分子及び式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲート又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは異性体のいずれかによって形成された溶媒和物を意味する。用語「溶媒和物」には、水和物（例えば、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物及び類似の水和物）が含まれる。
用語「代謝産物」とは、投与の際ｉｎ ｖｉｖｏで、酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド、エステル化及び／又は酵素分解によって生成される物質を意味する。
本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、有効量の細胞傷害性薬物を、腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、より良好な治療選択性を提供し、低用量で所望の効果を達成することができる。
第２の態様では、本発明は、
（１）式（Ｉ−Ａ）の化合物：

［式中、Ｄ、Ｌ、Ｘ及びＹは、上記の式（Ｉ）において定義される通りである］
を調製するステップと；
（２）ステップ（１）から得られた式（Ｉ−Ａ）の化合物を活性化することにより式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物

［式中、
Ｇは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ３、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＯＮＲＲ’、ＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＰ（Ｏ）ＲＲ’、ＲＳＯ２−Ｏ−及び

からなる群から選択され、各出現につきＲ及びＲ’はそれぞれ、独立に、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、５〜１０個の環原子を有するヘテロシクリル、又はフェノキシであり、アルキル、アリール、ヘテロシクリル及びフェノキシはそれぞれ、非置換であるか又はハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜８個の環原子を有するヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の環原子を有するヘテロアリールからなる群から選択される１つ又は複数の置換基で独立に置換される］
を得るステップと；
（３）ステップ（２）から得られた式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物を、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体とコンジュゲートすることにより、異なる値を有する様々な抗体−薬物コンジュゲートの混合物を得るステップと；
（４）イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー及び親和性クロマトグラフィーからなる群から選択される１種又は複数のクロマトグラフ法によって、ステップ（３）から得られた混合物を精製することにより、抗体−薬物コンジュゲートを得るステップと
を含む、第１の態様の抗体−薬物コンジュゲートの調製方法を提供する。
ステップ（２）における式（Ｉ−Ａ−Ｇ）中のＧ基は、−ＯＮＲＲ’及び−ＯＰ（Ｏ）ＲＲ’［式中、各出現につきＲ及びＲ’はそれぞれ、独立に、フェノキシである］からなる群から選択されることが好ましい。
ステップ（２）における式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物は、式（Ｉ−Ａ）の化合物と、ペンタフルオロフェノールを反応させることにより、形成される式（Ｉ−Ｂ）の化合物：

［式中、Ｄ、Ｌ、Ｘ及びＹは、上記の式（Ｉ）で定義される通りであり、反応は、好ましくは、ＥＤＣＩ、ＮＨＳ及び／又はＤＣＭを用いて行われる］
であることがより好ましい。
ステップ（４）における精製は、ＨＰＬＣにより行われることが好ましい。
第３の態様では、本発明は、本発明の第１の態様の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。任意選択で、医薬組成物は、１種若しくは複数の他の抗がん剤、例えば、化学療法薬及び／又は抗体をさらに含む。
本明細書において用いられる用語「医薬組成物」とは、特定の目的のための少なくとも１種の有効成分及び薬学的に許容される担体及び／又は添加剤の組み合わせを意味する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、様々な成分の混合物の形態であり、他のいくつかの実施形態では、医薬組成物の様々な成分は、これらが一緒になって働いて、本発明の目的を達成することができることを条件として、時間及び／又は空間に関して分離することができる。
２種又はそれ以上の有効成分が、医薬組成物において構成される場合、有効成分は、対象に、混合物として同時に適用してもよく、対象に別々に適用してもよい。別々に適用する場合、有効成分は、同時に又は順次適用することができる。
薬学的に許容される担体の選択は、医薬組成物の剤形、第１に、剤形の投与経路（例えば、経口、経鼻、皮内、皮下、筋肉内又は静脈内注入）、及び第２に、剤形の調製法に依存する。例えば、薬学的に許容される担体は、水（例えば、注射用水）、緩衝液、等張塩液、例えば、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）、ブドウ糖、マンニトール、デキストロース、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸マグネシウム、０．３％グリセリン、ヒアルロン酸、アスコルビン酸、乳酸、アルコール、ポリアルキレングリコール、例えば、ポリエチレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール４０００）又はポリプロピレングリコール、トリグリセリド等を含むことができる。
さらに、本発明の医薬組成物は、必要に応じて、様々な添加物、例えば、湿潤剤、乳化剤又は緩衝液等で構成することができる。
第４の態様では、本発明は、がんの予防又は治療のための医薬品の製造における、本発明の第１の態様の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物の使用を提供する。がんは、以下本発明の第６の態様に記載した通り、例えば、乳がん、胃がん、卵巣がん、非小細胞肺がん及び肝がん、特に、乳がん、例えば、ＥｒｂＢ２の発現が高い乳がんを含むが、それだけに限定されない。
第５の態様では、本発明は、本発明の第１の態様の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物を含む、医薬品製剤を提供する。
医薬品製剤は、固形製剤、半固形製剤、液体製剤又は気体製剤の形態であることが好ましい。医薬品は、特に、注射用の凍結乾燥粉末が好ましく、これは、臨床使用において、より少ない量の補助物質、優れた安定性及び高い安全性という利点がある。
第６の態様では、本発明は、本発明の第１の態様の抗体−薬物コンジュゲート、薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物を、それを必要とする患者に投与するステップと、又は本発明の第３の態様の医薬組成物又は本発明の第５の態様の医薬品製剤を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、がんの予防又は治療のための方法を提供する。任意選択で、本方法は、１種若しくは複数の他の抗がん剤、例えば、化学療法薬及び／又は抗体等を、患者に投与するステップをさらに含み、これは、本発明の抗体−薬物コンジュゲート、医薬組成物又は医薬品製剤と、同時に若しくは順次投与することができる。
がんには、癌だけに限定されないが、芽細胞腫、肉腫、白血病、リンパ腫及び他の悪性のリンパ系疾患が含まれる。がんの特定の例には、有棘細胞癌（例えば、扁平上皮細胞癌）、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、肺腺癌及び肺有棘細胞癌）、腹膜がん、及び胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）又は胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、胃腸がん及び消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ））、膵がん、悪性神経膠腫、子宮頚がん、卵巣がん、膀胱がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん又は子宮がん、唾液腺がん、腎がん、前立腺がん、膣がん、甲状腺がん、肝がん、肛門がん、陰茎がん、並びに頭部及び頚部がんが含まれる。特に、がんは、ＥｒｂＢ２の発現が高いもの、例えば、乳がん、胃がん、子宮内膜がん、唾液腺がん、肺がん、腎がん、結腸がん、甲状腺がん、膵がん又は膀胱がんである。
本発明は、以下の例によってさらに例示される。これらの例は、本発明を例示するために用いるに過ぎず、いかようにも本発明を限定するものではない。
各例において用いられる略語の意味を、以下の表に示す。
実施例１．抗体−薬物コンジュゲートＩ−１の調製
ステップａ．中間体Ｄ−Ｉの調製
室温で、化合物Ｄ−０（１ｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＦ（５０ｍｌ）に溶解し、ＤＩＣ（１．１当量）、ＨＯＡｔ（１．１当量）及び４−（３−アジド−２−アミノプロピル）アニリン（１．５当量）を、連続的に加えた。反応混合物を、室温で８時間撹拌し、次いで、水（６００ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ×３）を加えた。抽出後、有機相を収集し、濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、中間体Ｄ−１を得た。
ＭＳ ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：７７３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップｂ．中間体Ｉ−Ａ−１の調製
室温で、化合物Ｓ−２（０．１ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＦ（５０ｍｌ）に溶解し、ＤＩＥＡ（２当量）、ＨＡＴＵ（１．０５当量）及び化合物Ｄ−１（２．０当量）を、連続的に加えた。反応を、室温で１２時間進行させ、次いで、水（３００ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ×３）を加えた。抽出後、有機相を収集し、濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、中間体Ｄ−Ａ−１を得た。
室温で、化合物Ｄ−Ａ−１（０．１ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解し、ＤＩＣ（１．１当量）、ＨＯＡｔ（１．１当量）及びピペリジン−４−カルボン酸（１．２当量）を、連続的に加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌し、次いで、水（６０ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ×３）を加えた。抽出後、有機相を収集し、濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、中間体Ｉ−Ａ−１を得た。
ＭＳ ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１２４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
或いは、
氷−水浴中で、化合物Ｓ−２’（０．１ｍｍｏｌ、１．０当量）を、ＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解し、ＤＩＥＡ（２．０当量）、ＰｙＢＯＰ（１．０当量）、ＨＯＢＴ（１．０当量）及び化合物Ｄ−１（０．２ｍｍｏｌ、２．０当量）を、連続的に加えた。反応を、室温で１２時間進行させ、次いで、水（３０ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ×３）を加えた。抽出後、有機相を収集し、濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、中間体Ｄ−Ａ−１’を得た。
室温で、化合物Ｄ−Ａ−１’（０．０５ｍｍｏｌ、１．０当量）を、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（６ｍｌ、ｖ：ｖ＝５：１）に溶解し、ＬｉＯＨ一水和物（３．０当量）を加えた。反応混合物を、室温で１６時間撹拌した。精製後、中間体Ｉ−Ａ−１を得た。
ＭＳ ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１２４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップｃ．中間体Ｉ−Ｂ−１の調製
室温で、化合物Ｉ−Ａ−１（０．１ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解し、ＥＤＣＩ（１．５当量）、ＮＨＳ（１．５当量）及びペンタフルオロフェノール（２．０当量）を、連続的に加えた。反応を、室温で１８時間進行させた。反応混合物を、水（３０ｍｌ）、１０％（ｗ／ｖ）クエン酸水溶液（２０ｍｌ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）で連続的に洗浄した。有機相を収集し、濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、中間体Ｉ−Ｂ−１を得た。
ＭＳ ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１４０６［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップｄ．未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１の調製
ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ＝７．４）中で調製されたトラスツズマブ１０〜２０ｍｇ／ｍｌの１ｍｌ溶液に、４〜６倍のモル量の、ＤＭＡに溶解した化合物Ｉ−Ｂ−１を加えた。反応を、穏やかに撹拌しながら、２〜４０℃の範囲の温度で２〜６時間進行させ、ＨＩＣ−ＨＰＬＣによってモニターして、未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１を得た。ＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを、図１に示す。
ＨＩＣ−ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫｇｅｌ Ｂｕｔｙｌ−ＮＰＲ、４．６×１００ｍｍ
移動相Ａ：１．５Ｍ硫酸アンモニア水溶液
移動相Ｂ：２５ｍＭリン酸ナトリウム水溶液、ｐＨ＝７．０、２５％（ｖ／ｖ）イソプロパノール水溶液
流量：０．５ｍｌ／分
勾配：０〜２分：１７％移動相Ｂ＋８３％移動相Ａ；
２〜１５分：１７〜４０％移動相Ｂ＋８３〜６０％移動相Ａ
１５〜１５．１分：４０〜７０％移動相Ｂ＋６０〜３０％移動相Ａ
１５．１〜１７分：７０％移動相Ｂ＋３０％移動相Ａ
未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１は、Ｉ−１−１（図１中のＤＡＲ１、ｎ＝１）、Ｉ−１−２（図１中のＤＡＲ２、ｎ＝２）、Ｉ−１−３（図１中のＤＡＲ３、ｎ＝３）、及びＩ−１−４（図１中のＤＡＲ４、ｎ＝４）を含む混合物であることを、図１から示すことができる。
ステップｅ．未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１の精製
ステップｄで得られた未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１を、ＨＩＣによって精製し、次いで、緩衝液の変化により脱塩し、限外ろ過により濃縮して、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１を得た。
ＨＩＣ条件：
充てん材料：ＧＥ社製のＰｈｅｙｎｌ ＨＰ
移動相Ａ：１．５Ｍ硫酸アンモニア水溶液、２５ｍＭリン酸水素二ナトリウム水溶液、ｐＨ＝７．０
移動相Ｂ：２５ｍＭリン酸水素二ナトリウム水溶液、ｐＨ＝７．０、１０％イソプロパノール水溶液
流量：１．０ｍｌ／分
勾配：０％〜４０％移動相Ｂは、２０ＣＶの場合洗浄し；４０％〜１００％移動相Ｂは、３０ＣＶの場合洗浄し、管に収集した。
得られた抗体−薬物コンジュゲートＩ−１のＤＡＲを、ＨＩＣ−ＵＰＬＣによって分析し、図２に示されるクロマトグラムを得た。抗体−薬物コンジュゲートＩ−１は、単一のピークを示すことを図２から示すことができ、図４中のペプチドマッピングを組み合わせることによる分析によって、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１は、ＤＡＲが２である、すなわち、ｎ＝２であることが示された。２つの薬物分子が、１つの抗体分子にコンジュゲートした抗体−薬物コンジュゲートであり、この生成物は、純粋である。
さらに、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１の重鎖及び軽鎖を、還元型液体クロマトグラフィーにより分析し、図３に示される重複逆相クロマトグラムを得た。図３中で、濃い線は、トラスツズマブのクロマトグラムを表し、薄い線は、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１のクロマトグラムを表す。両方のクロマトグラムでは、より高いピークは、重鎖を表し、より低いピークは、軽鎖を表す。コンジュゲートした薬物を含まないトラスツズマブの軽鎖の疎水性と比較した場合、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１の軽鎖の疎水性が強化され、より長い保持時間を示すことを、図３から示すことができる。これにより、すべての薬物分子は、抗体の軽鎖にコンジュゲートされることが示される。
さらに、図４に示される通り、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１及びトラスツズマブ両方のペプチドマッピングを、同じ条件下で消化後に得た。
図４のペプチドマッピングでは、上部の曲線は、２１４ｎｍの抗体のペプチドマッピングであり、下部の曲線は、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１のペプチドマッピングである。比較によれば、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１は、保持時間６５．５分で一つだけ追加のピークを有することが示される。図３中の軽鎖及び重鎖のクロマトグラムの減少と共に、細胞傷害性薬物（Ｄ）は、この例で得られた抗体−薬物コンジュゲートＩ−１における軽鎖の同じペプチドセグメントのリジン残基にすべてコンジュゲートされ、部位特異的なコンジュゲーションによって、生成物の優れた均質性、制御性、及び反復率が保証される。
実施例２．抗体−薬物コンジュゲートＩ−２の調製
ステップａ．中間体Ｉ−Ａ−２の調製
室温で、化合物Ｄ−２（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、１ｍｍｏｌ、１当量から購入した）を、ＤＭＦ（５０ｍｌ）に溶解し、炭酸カリウム（２．５当量）及びメチル２−クロロアセテート（１．５当量）を加えた。反応混合物を、４０〜４５ｏＣまで加熱し、反応を４時間進行させた。反応の終了後、固体の炭酸カリウムを、ろ過によって除去し、ろ液を濃縮した。濃縮から得られた物質を、メタノール（３０ｍｌ）に溶解し、１Ｍ水酸化リチウム水溶液を加えて、ｐＨを１３〜１４に調整した。反応混合物を、５５℃まで加熱し、１６時間撹拌し、その後、１０％（ｗ／ｖ）クエン酸水溶液を加え、濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、中間体Ｄ−Ａ−２を得た。
室温で、化合物Ｄ−Ａ−２（０．１ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解し、ＤＩＣ（１．１当量）、ＨＯＡｔ（１．１当量）及びピペリジン−４−カルボン酸（１．２当量）を連続的に加えた。反応混合物を、室温で６時間撹拌し、次いで、水（６０ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ×３）を加えた。抽出後、有機相を収集し、濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、中間体Ｉ−Ａ−２を得た。
ＭＳ ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：９０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップｂ．中間体Ｉ−Ｂ−２の調製
室温で、化合物Ｉ−Ａ−２（０．１ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解し、ＥＤＣＩ（１．５当量）、ＮＨＳ（１．５当量）及びペンタフルオロフェノール（２．０当量）を、連続的に加えた。反応を、室温で１８時間進行させた。反応混合物を、水（３０ｍｌ）、飽和クエン酸水溶液（２０ｍｌ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）で連続的に洗浄した。抽出後、有機相を収集し、濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、中間体Ｉ−Ｂ−２を得た。
ＭＳ ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１０７３［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップｃ．未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−２の調製
ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ＝７．４）中で調製したトラスツズマブ１０ｍｇ／ｍｌの１ｍｌ溶液に、８倍のモル量の、ＤＭＡに溶解された化合物Ｉ−Ｂ−２を加えた。反応を、室温で１６時間穏やかに撹拌しながら進行させ、ＨＩＣ−ＨＰＬＣによってモニターして（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ条件は、実施例１のステップｄにおける条件と同じであった）、未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−２を得た。ＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを、図５に示す。
未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−２は、Ｉ−２−１（図５中のＤＡＲ１、ｎ＝１）、Ｉ−２−２（図５中のＤＡＲ２、ｎ＝２）、及びＩ−２−３（図５中のＤＡＲ３、ｎ＝３）を含む、混合物であることを、図５から示すことができる。
ステップｄ．未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−２の精製
ステップｃで得られた未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−２を、ＨＩＣにより精製し（ＨＩＣ条件は、実施例１のステップｅにおける条件と同じであった）、次いで、緩衝液の変化によって脱塩し、限外ろ過によって濃縮して、抗体−薬物コンジュゲートＩ−２を得た。
得られた抗体−薬物コンジュゲートＩ−２のＤＡＲを、ＨＩＣ−ＨＰＬＣにより分析し、図６に示されるクロマトグラムを得た。抗体−薬物コンジュゲートＩ−２のＤＡＲは、２であり、抗体−薬物コンジュゲート中でｎ＝２を示していることを、図６から示すことができる。２つの薬物分子が、１つの抗体分子にコンジュゲートした抗体−薬物コンジュゲートであり、生成物は純粋である。
さらに、抗体−薬物コンジュゲートＩ−２の重鎖及び軽鎖を、還元型液体クロマトグラフィーにより分析し、図７に示される重複クロマトグラムを得た。図７中で、濃い線は、トラスツズマブのクロマトグラムを表し、薄い線は、抗体−薬物コンジュゲートＩ−２のクロマトグラムを表す。両方のクロマトグラムでは、より高いピークは、重鎖を表し、より低いピークは、軽鎖を表す。コンジュゲートした薬物を含まないトラスツズマブの軽鎖の疎水性と比較した場合、抗体−薬物コンジュゲートＩ−２の軽鎖の疎水性が強化され、より長い保持時間を示すことを、図７から示すことができる。これにより、すべての薬物分子は、抗体の軽鎖にコンジュゲートされることが示される。
さらに、図８に示される通り、抗体−薬物コンジュゲートＩ−２及びトラスツズマブ両方のペプチドマッピングを、同じ条件下で消化後に得た。
図８のペプチドマッピングでは、上部の曲線は、２１４ｎｍの抗体のペプチドマッピングであり、下部の曲線は、抗体−薬物コンジュゲートＩ−２のペプチドマッピングである。比較によれば、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１は、保持時間３３．０分で一つだけ追加のピークを有することが示される。図７中の軽鎖及び重鎖のクロマトグラムの減少と共に、細胞傷害性薬物（Ｄ）は、この例で得られた抗体−薬物コンジュゲートＩ−２における軽鎖の同じペプチドセグメントのリジン残基にすべてコンジュゲートされ、部位特異的なコンジュゲーションによって、生成物の優れた均質性、制御性、及び反復率が保証される。
実施例３．抗体−薬物コンジュゲートＩ−３の調製
ステップａ．中間体Ｉ−Ａ−３の調製
室温で、化合物Ｄ−３（ＣＮ１０４６６２０００Ａの６５頁の実施例Ｖ−３に従って合成される、１ｍｍｏｌ、１当量）を、ＴＨＦ（６０ｍｌ）及びＤＭＦ（３０ｍｌ）の混合物に溶解し、ジ−（ｐ−ニトロフェニル）カルボネート（３当量）及びＤＩＥＡ（２当量）を、連続的に加えた。反応混合物を、室温で１２時間撹拌し、水（６００ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ×３）を加えた。抽出後、有機相を収集し、濃縮して、未精製の中間体Ｄ−Ａ−３を得、これを、精製せずに次のステップにおける反応のために直接用いた。
室温で、ピペリジン−４−カルボン酸（５当量）を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍｌ）に溶解し、未精製のＤ−Ａ−３（１当量）を加えた。反応混合物を、室温で８時間撹拌した。１０％（ｗ／ｖ）クエン酸水溶液を加えて、ｐＨを４〜５に調整し、その後、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ×２）で抽出した。有機相を乾燥し、濃縮して、未精製の中間体Ｉ−Ａ−３を得た。
ＭＳ ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１０２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップｂ．中間体Ｉ−Ｂ−３の調製
室温で、化合物Ｉ−Ａ−３（０．１ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解し、ＥＤＣＩ（１．５当量）、ＮＨＳ（１．５当量）及びペンタフルオロフェノール（２．０当量）を、連続的に加えた。反応を、室温で１８時間進行させた。反応混合物を、水（３０ｍｌ）、１０％（ｗ／ｖ）クエン酸水溶液（２０ｍｌ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）で連続的に洗浄した。抽出後、有機相を収集し、濃縮し、ＨＰＬＣにより精製して、中間体Ｉ−Ｂ−３を得た。
ＭＳ ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：１１８６［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．０２〜７．０９（ｍ、４Ｈ）、４．９２（ｍ、１Ｈ）、４．５２（ｍ、１Ｈ）、３．８９（ｄ、１Ｈ）、３．７７（ｍ、１Ｈ）、３．６８〜３．５５（ｍ、３Ｈ）、３．４６（ｍ、２Ｈ）、３．２４（ｍ、６Ｈ）、３．０５（ｄ、２Ｈ）、２．９２〜２．９０（ｍ、４Ｈ）、２．６８（ｍ、１Ｈ）、２．３３〜２．２７（ｍ、１１Ｈ）、１．９７〜１．９３（ｍ、４Ｈ）、１．７３〜１．７２（ｍ、５Ｈ）、１．２９〜１．２４（ｍ、５Ｈ），１．０６〜１．０１（ｍ、１５Ｈ）、０．９６（ｍ、３Ｈ）、０．７４（ｍ、４Ｈ）、３．３４（ｍ、４Ｈ）。
ステップｃ．未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−３の調製
ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ＝７．８）中で調製したトラスツズマブ１０ｍｇ／ｍｌの１ｍｌ溶液に、８倍のモル量の、ＤＭＡに溶解される化合物Ｉ−Ｂ−３を加えた。反応を、室温で４時間穏やかに撹拌しながら進行させ、ＨＩＣ−ＨＰＬＣによってモニターして（ＨＩＣ−ＨＰＬＣ条件は、実施例１のステップｄにおける条件と同じであった）、未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−３を得た。ＨＩＣ−ＨＰＬＣクロマトグラムを、図９に示す。
未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−３は、Ｉ−３−１（図９中のＤＡＲ１、ｎ＝１）、Ｉ−３−２（図９中のＤＡＲ２、ｎ＝２）、及びＩ−３−３（図８中のＤＡＲ３、ｎ＝３）を含む混合物であることを、図９から示すことができる。
ステップｄ．未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−３の精製
ステップｃにおいて得られた未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−３を、ＨＩＣにより精製し（ＨＩＣ条件は、実施例１のステップｅにおける条件と同じであった）、次いで、緩衝液の変化によって脱塩し、限外ろ過によって濃縮して、抗体−薬物コンジュゲートＩ−３を得た。
得られた抗体−薬物コンジュゲートＩ−３のＤＡＲを、ＨＩＣ−ＨＰＬＣにより分析し、図１０に示されるクロマトグラムを得た。抗体−薬物コンジュゲートＩ−３のＤＡＲは、２であり、抗体−薬物コンジュゲート中でｎ＝２を示していることを、図１０から示すことができる。２つの薬物分子が、１つの抗体分子にコンジュゲートした抗体−薬物コンジュゲートであり、生成物は純粋である。
さらに、抗体−薬物コンジュゲートＩ−３の重鎖及び軽鎖を、還元型液体クロマトグラフィーにより分析し、図１１に示される重複クロマトグラムを得た。図１１中で、濃い線は、トラスツズマブのクロマトグラムを表し、薄い線は、抗体−薬物コンジュゲートＩ−３のクロマトグラムを表す。両方のクロマトグラムでは、より高いピークは、重鎖を表し、より低いピークは、軽鎖を表す。コンジュゲートした薬物を含まないトラスツズマブの軽鎖の疎水性と比較した場合、抗体−薬物コンジュゲートＩ−３の軽鎖の疎水性が強化され、より長い保持時間を示すことを、図１１から示すことができる。これにより、すべての薬物分子は、抗体の軽鎖にコンジュゲートされることが示される。
さらに、図１２に示される通り、抗体−薬物コンジュゲートＩ−３及びトラスツズマブのペプチドマッピングを、同じ条件下で消化後に得た。
図１２のペプチドマッピングでは、上部の曲線は、２１４ｎｍの抗体のペプチドマッピングであり、下部の曲線は、抗体−薬物コンジュゲートＩ−３のペプチドマッピングである。比較によれば、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１は、保持時間３９．０分で唯一の追加のペプチド断片を有することが示される。図１１中の軽鎖及び重鎖のクロマトグラムの減少と共に、細胞傷害性薬物（Ｄ）は、この例で得られた抗体−薬物コンジュゲートＩ−３における軽鎖の同じペプチドセグメントのリジン残基にすべてコンジュゲートされ、部位特異的なコンジュゲーションによって、生成物の優れた均質性、制御性、及び反復率が保証される。
実施例４．Ｉｎ ｖｉｖｏ活性試験
本例では、実施例１〜３の抗体−薬物コンジュゲートを、皮下にヒト腫瘍細胞で移植したマウスにおける腫瘍増殖の抑制について評価した。特に、本例では、実施例１〜３の抗体−薬物コンジュゲートを、ヒト胃がん細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、乳がん細胞株ＢＴ４７４、又は卵巣がん細胞株ＳＫ−ＯＶ−３で移植されたマウスの尾静脈に、単回静脈内注射により投与した。腫瘍容積及び動物の体重の変化を、担がんのマウスにおける抗体−薬物コンジュゲートの効果（腫瘍−抑制効果）の算出のために測定した。
適量のトラスツズマブ、Ｔ−ＤＭ１（陽性対照、カドサイラ（登録商標）（アド−トラスツズマブエムタンシン）、Ｒｏｃｈｅ社）及び本発明の抗体−薬物コンジュゲート（実施例１〜３で調製したＩ−３、Ｉ−１又はＩ−２）を秤量し、いくつかの濃度の母液を、無菌の超純水を用いて調製した。軽く振った後、母液を、分割して充てんし、−８０℃で貯蔵した。使用のための治療溶液を、通常生理食塩溶液で希釈することにより得、同じ濃度の通常生理食塩溶液を、溶媒対照として用いた。
腫瘍容積が１００〜２００ｍｍ３の、担がんのマウス（１．２で得られたモデル）を、１群当たり７匹のマウスにランダムに割り付けた（各群におけるサンプルの数は、サンプルの量に従って決定された）。投与量は、１０ｍｌ／ｋｇであった。投与経路は、尾静脈の単回静脈内注射であった。投与後、腫瘍直径を、８週間の観測期間の間週に２回、ノギスで測定し、腫瘍容積を、ａ及びｂが、それぞれ、腫瘍の外径及び内径を表す以下の方程式Ｖ＝０．５ａ２×ｂに従って算出した。動物の死亡を観察し、毎日記録した。
腫瘍増殖阻害ＴＧＩ（％）を、抗体−薬物コンジュゲートの抗腫瘍効果を評価するために、以下の方程式で算出した。
ＴＧＩ（％）＝［１−（ＶＴｓ−ＶＴｅ）／（ＶＣｅ−ＶＣｓ）］×１００％
式中、ＶＴｅ：観測の終了時の治療群の平均腫瘍容積
ＶＴｓ：投与時の治療群の平均腫瘍容積
ＶＣｅ：観測の終了時の対照群の平均腫瘍容積
ＶＣｓ：投与時の対照群平均腫瘍容積
これらの結果を、表１〜４に示す。

本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、様々な乳がん細胞株に対する類似の腫瘍抑制効果を有する。


表１〜４に示す通り、本発明の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１、Ｉ−３及びＩ−２は、Ｔ−ＤＭ１と比較した場合、様々な腫瘍、例えば、胃がん、卵巣がん、乳がんに対して、明らかに優位な腫瘍−抑制活性を有し、動物の死亡によってこれらの有利な安全性が示される。
実施例５．Ｉｎ ｖｉｖｏ安定性試験
ラットにおける実施例１〜３の抗体−薬物コンジュゲートの安定性を、本例において評価した。特に、本例では、実施例１〜３の抗体−薬物コンジュゲートを、投与量２ｍｇ／ｋｇでの尾静脈の単回静脈内注射により、ラットに投与した。血液を、頸静脈から規則的に収集し、血液中の抗体−薬物コンジュゲート及び全抗体の濃度を、ＥＬＩＳＡにより測定して、ラットにおける抗体−薬物コンジュゲートの半減期を算出した。これらの結果を、表５に示す。
本発明の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１、Ｉ−２、Ｉ−３は、半減期がより長いことが、表５から示すことができ、Ｔ−ＤＭ１と比較した場合、明らかに優位な安定性を示している。
実施例６．抗体−薬物コンジュゲートＩ−１の注射用の凍結乾燥粉末の調製
以下の表中の物質を用いて、抗体−薬物コンジュゲートＩ−１の注射用の凍結乾燥粉末を調製した。

調製方法：
１． アスコルビン酸２０ｇ及び乳酸１０ｇを、注射用水１０００ｍｌと加え、次いで、５０〜５５℃まで加熱し、撹拌しながら溶解した。抗体−薬物コンジュゲート２８ｇを、溶液に加え、撹拌しながら溶解し、次いで、１５分間撹拌した。
２． ポリエチレングリコール４０００ ６３ｇを、注射用水８００ｍｌと加え、１５分間撹拌した。
３． １及び２から得られた溶液を組み合わせた後、残りの注射用水を加えた。０．１５％針状活性炭（ｎｅｅｄｌｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃａｒｂｏｎ）を加え、混合物を、２５分間撹拌した。炭素を、ろ過により除去した後、中間体生成物を検査し、適格な場合、０．２２μｍ膜により滅菌のためにろ過した。
４． ろ液を、バイアル中に注ぎ、凍結乾燥して、注射用の凍結乾燥粉末を得た。検査後、適格な生成物を充てんした。
実施例７．抗体−薬物コンジュゲートＩ−２の注射用の凍結乾燥粉末の調製
以下の表中の物質を用いて、抗体−薬物コンジュゲートＩ−２の注射用の凍結乾燥粉末を調製した。

調製方法：
１． コハク酸ナトリウム１６．２ｇ、Ｔｗｅｅｎ ２０ ２ｇ及びスクロース６００ｇを、注射用水と一緒に、一定容量１０Ｌに加え、撹拌しながら溶解した。溶液を、無菌のろ過後に、配合物緩衝液として用いた。抗体−薬物コンジュゲートＩ−２ ２０ｇを含有する量に相当する原液の量を、後者と交換するために配合物緩衝液で、限外ろ過し、次いで、１０００ｍｌまで濃縮した。
２． １から得られた溶液を、滅菌のために０．２２μｍ膜によりろ過した。
３． ろ液を、バイアル中に注ぎ、凍結乾燥して、注射用の凍結乾燥粉末を得た。検査後、適格な生成物を充てんした。
実施例８．抗体−薬物コンジュゲートＩ−３の注射用の凍結乾燥粉末の調製
以下の表中の物質を用いて、抗体−薬物コンジュゲートＩ−３の注射用の凍結乾燥粉末を調製した。

調製方法：
１． Ｌ−ヒスチジン３．２ｇ、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩４．９５ｇ、トレハロース二水和物２００ｇ及びＴｗｅｅｎ ２０ ０．９ｇを、注射用水と一緒に一定容量の１Ｌに加え、撹拌しながら溶解した。溶液を、無菌のろ過後に配合物緩衝液として用いた。抗体−薬物コンジュゲートＩ−３ ２０ｇを含有する量に相当する原液の量を、後者と交換するために配合物緩衝液で、限外ろ過し、次いで、１０００ｍｌまで濃縮した。
２． １から得られた溶液を、滅菌のために０．２２μｍ膜によりろ過した。
３． ろ液を、バイアル中に注ぎ、凍結乾燥して、注射用の凍結乾燥粉末を得た。検査後、適格な生成物を充てんした。
本発明は、上記の、ある特定の例として例示されているが、これらの例に限定されるものと解釈すべきでない。本発明は、上記で開示される一般的な態様を考慮し、当業者は、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本発明の様々な詳細に様々な修正又は変更をすることができる。したがって、本明細書は、例示的な目的のために過ぎず、任意の制限のためではない。

Claims (15)

  1. 式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物

    ［式中、
    Ａは、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体であり；
    Ｘ及びＹのそれぞれは、独立にＮ又はＣＲ１であり、各Ｒ１は、独立にＨ又はＣ１〜Ｃ１０アルキルであり；
    Ｌは、二価のリンカーであり；
    Ｄは、細胞傷害性薬物基であり；
    ａは、２〜１０からなる群から選択される整数である］。
  2. 抗ＥｒｂＢ２抗体が、抗ヒトＥｒｂＢ２抗体であり、好ましくは、抗ヒトＥｒｂＢ２抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３が、それぞれ、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３である、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
  3. 抗ＥｒｂＢ２抗体が、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体、好ましくは、トラスツズマブである、請求項２に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
  4. ＹがＣＲ１であり、ＸがＮである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
  5. Ｒ１がＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
  6. ａが２、３又は４である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
  7. Ｌが、






    ［式中、ｍ及びｎはそれぞれ、各出現につき１〜１０からなる群から選択される整数であり、１、２、３、４、５又は６であることが好ましい］
    からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
  8. 細胞傷害性薬物基が、式（Ｄ１）若しくは（Ｄ２）の化合物又はその立体異性体に由来する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物

    ［式中、
    Ｒ２は、−ＣＨ２Ｎ３、−ＣＯＮＨＳＯ２（シクロプロピル）、チアゾール−２−イル、−ＣＨ３及び−ＣＯＯＨからなる群から選択され；
    Ｒ３は、Ｈ及び−ＯＨからなる群から選択され；
    Ｒ４は、Ｈ、−ＮＨ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ６（式中、Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル又はＣ６〜Ｃ１４アリールであり、アルキル、シクロアルキル及びアリールは、Ｆ等のハロゲンから選択される１つ又は複数（例えば、１、２、３、４又は５つ）の置換基で任意選択でそれぞれ置換される）からなる群から選択される］；

    ［式中、Ｒ５は、−Ｃ（ＣＨ３）Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＳＨ及び−Ｃ（ＣＨ３）Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＳＨからなる群から選択される］。
  9. 抗体−薬物コンジュゲートが、Ｉ−１、Ｉ−２及びＩ−３

    ［式中、Ａは、トラスツズマブである］
    からなる群から選択される、請求項８に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
  10. （１）．式（Ｉ−Ａ）の化合物

    ［式中、Ｄ、Ｌ、Ｘ及びＹは、式（Ｉ）について、請求項１〜９のいずれか一項で定義された通りである］
    を調製するステップと；
    （２）．ステップ（１）から得られた式（Ｉ−Ａ）の化合物を活性化することにより式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物

    ［式中、Ｇは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ３、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＯＮＲＲ’、ＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＰ（Ｏ）ＲＲ’、ＲＳＯ２−Ｏ−及び

    からなる群から選択され、各出現につきＲ及びＲ’はそれぞれ、独立に、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、５〜１０個の環原子を有するヘテロシクリル、又はフェノキシであり、アルキル、アリール、ヘテロシクリル及びフェノキシはそれぞれ、非置換であるか又はハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜８個の環原子を有するヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の環原子を有するヘテロアリールからなる群から選択される１つ又は複数の置換基で独立に置換され；Ｇは、−ＯＮＲＲ’及び−ＯＰ（Ｏ）ＲＲ’（式中、各出現につきＲ及びＲはそれぞれ、独立に、フェノキシである）からなる群から選択されることが好ましい］
    を得るステップと；
    （３）ステップ（２）から得られた式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物を、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体とコンジュゲートすることにより、異なるａ値を有する様々な抗体−薬物コンジュゲートの混合物を得るステップと；
    （４）イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー及び親和性クロマトグラフィーからなる群から選択される１種又は複数のクロマトグラフ法によって、ステップ（３）から得られた混合物を精製することにより、抗体−薬物コンジュゲートを得るステップと
    を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲートの調製方法。
  11. ステップ（２）における式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物が、式（Ｉ−Ａ）の化合物を、ペンタフルオロフェノールと反応させることにより、形成される式（Ｉ−Ｂ）の化合物：

    ［式中、Ｄ、Ｌ、Ｘ及びＹは、式（Ｉ）について請求項１〜９のいずれか一項で定義された通りであり、反応は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド及び／又はジクロロメタンを好ましくは用いて行われる］
    である、請求項１０に記載の調製方法。
  12. 請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物、及び薬学的に許容される担体を含み、化学療法薬及び／又は抗体等の１種若しくは複数の他の抗がん剤を、任意選択でさらに含む、医薬組成物。
  13. がんの予防又は治療用の医薬品の製造における、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物の使用。
  14. がんが、乳がん、胃がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、肝がん、子宮内膜がん、唾液腺がん、腎がん、結腸がん、甲状腺がん、膵がん又は膀胱がん、特に、乳がん、例えば、ＥｒｂＢ２−過剰発現乳がん等からなる群から選択される、請求項１３に記載の使用。
  15. 好ましくは固形製剤、半固形製剤、液体製剤又は気体製剤であり、例えば、凍結乾燥粉末等の形態である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物を含む、医薬品製剤。
JP2017566133A 2015-11-23 2016-11-22 抗ＥｒｂＢ２抗体−薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその使用 Active JP6888871B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021083093A JP7200454B2 (ja) 2015-11-23 2021-05-17 抗ＥｒｂＢ２抗体－薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその使用

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510824064.8 2015-11-23
CN201510824064.8A CN106729743B (zh) 2015-11-23 2015-11-23 抗ErbB2抗体-药物偶联物及其组合物、制备方法和应用
PCT/CN2016/106802 WO2017088734A1 (zh) 2015-11-23 2016-11-22 抗ErbB2抗体-药物偶联物及其组合物、制备方法和应用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021083093A Division JP7200454B2 (ja) 2015-11-23 2021-05-17 抗ＥｒｂＢ２抗体－薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその使用

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2019502650A true JP2019502650A (ja) 2019-01-31
JP2019502650A5 JP2019502650A5 (ja) 2021-05-13
JP6888871B2 JP6888871B2 (ja) 2021-06-16

Family

ID=58762994

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017566133A Active JP6888871B2 (ja) 2015-11-23 2016-11-22 抗ＥｒｂＢ２抗体−薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその使用
JP2021083093A Active JP7200454B2 (ja) 2015-11-23 2021-05-17 抗ＥｒｂＢ２抗体－薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその使用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021083093A Active JP7200454B2 (ja) 2015-11-23 2021-05-17 抗ＥｒｂＢ２抗体－薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその使用

Country Status (15)

Country Link
US (3) US20190076438A1 (ja)
EP (1) EP3381469B1 (ja)
JP (2) JP6888871B2 (ja)
KR (1) KR20180080128A (ja)
CN (4) CN106729743B (ja)
AU (1) AU2016359514A1 (ja)
CA (1) CA3000763A1 (ja)
DK (1) DK3381469T3 (ja)
EA (1) EA039757B1 (ja)
ES (1) ES2887349T3 (ja)
HK (1) HK1243957B (ja)
HU (1) HUE055671T2 (ja)
PL (1) PL3381469T3 (ja)
PT (1) PT3381469T (ja)
WO (1) WO2017088734A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2022511219A (ja) * 2019-03-26 2022-01-31 レメゲン シーオー．，エルティーディー． 抗Ｈｅｒ２抗体薬物コンジュゲートの製剤
JP2023541609A (ja) * 2020-09-16 2023-10-03 シチュアン ケルン－バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド 抗ネクチン－４抗体、それを含むコンジュゲート、及びその適用

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106729743B (zh) * 2015-11-23 2021-09-21 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗ErbB2抗体-药物偶联物及其组合物、制备方法和应用
CN107857798B (zh) * 2016-09-22 2021-03-23 联宁（苏州）生物制药有限公司 一种用于抗体药物偶联物的毒素及其制备方法
CN107915770B (zh) * 2016-10-11 2020-08-25 联宁（苏州）生物制药有限公司 一种抗体药物偶联物中间体及其制备方法
WO2018158716A1 (en) * 2017-03-02 2018-09-07 Cadila Healthcare Limited Novel protein drug conjugate formulation
WO2018192407A1 (zh) * 2017-04-19 2018-10-25 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 细胞毒素和偶联物、其用途和制备方法
CN113603703A (zh) * 2017-12-15 2021-11-05 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 生物活性物偶联物及其制备方法和用途
WO2019149116A1 (zh) * 2018-01-30 2019-08-08 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 制备偶联物的方法
WO2019214492A1 (zh) * 2018-05-11 2019-11-14 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗her2抗体-药物偶联物在治疗癌症中的用途
CN109692331A (zh) * 2019-01-07 2019-04-30 合肥瀚科迈博生物技术有限公司 一种抗体偶联药物的制备方法
JP2023515941A (ja) 2020-02-28 2023-04-17 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｈｅｒ２に結合する二重特異性抗原結合分子およびその使用方法
WO2022233262A1 (zh) * 2021-05-07 2022-11-10 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗体药物偶联物治疗癌症的方法及用途
CN113521018B (zh) * 2021-07-20 2022-11-18 浙江新码生物医药有限公司 一种含有抗her2-药物偶联物的冻干组合物、冻干制剂及其制备方法和用途
CN119139490A (zh) * 2023-06-14 2024-12-17 江苏迈威康新药研发有限公司 一种制备抗体药物偶联物的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012207036A (ja) * 2006-03-22 2012-10-25 F Hoffmann La Roche Ag 血管内皮増殖因子に対する抗体と、２型ヒト上皮成長因子受容体に対する抗体を用いた腫瘍治療
JP2013163687A (ja) * 2006-08-21 2013-08-22 F Hoffmann La Roche Ag 抗ｖｅｇｆ抗体による腫瘍治療
JP2013224305A (ja) * 2009-07-31 2013-10-31 F Hoffmann-La Roche Ag 皮下抗ｈｅｒ２抗体製剤
WO2013173392A1 (en) * 2012-05-15 2013-11-21 Concortis Biosystems, Corp Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
US20150105540A1 (en) * 2013-10-15 2015-04-16 Sorrento Therapeutics Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
WO2016123412A1 (en) * 2015-01-28 2016-08-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
IL101943A0 (en) 1991-05-24 1992-12-30 Genentech Inc Structure,production and use of heregulin
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
ATE295420T1 (de) 1992-02-06 2005-05-15 Chiron Corp Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
WO1993021319A1 (en) 1992-04-08 1993-10-28 Cetus Oncology Corporation HUMANIZED C-erbB-2 SPECIFIC ANTIBODIES
EP0656064B1 (en) 1992-08-17 1997-03-05 Genentech, Inc. Bispecific immunoadhesins
CA2207869A1 (en) 1994-12-02 1996-06-06 Chiron Corporation Method of promoting an immune response with a bispecific antibody
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5837234A (en) 1995-06-07 1998-11-17 Cytotherapeutics, Inc. Bioartificial organ containing cells encapsulated in a permselective polyether suflfone membrane
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
JP2001504326A (ja) 1996-10-18 2001-04-03 ジェネンテック インコーポレーテッド 抗ＥｒｂＢ２抗体
CN101518653B (zh) 1999-06-25 2015-08-19 基因技术股份有限公司 使用抗ErbB抗体-类美坦素偶联物的治疗方法
EP1216258A1 (en) 1999-09-28 2002-06-26 Universität Zürich Factors having prion-binding activity in serum and plasma and agents to detect transmissible spongiform encephalopathitis
PT2857516T (pt) 2000-04-11 2017-08-28 Genentech Inc Anticorpos multivalentes e utilizações dos mesmos
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US7256257B2 (en) 2001-04-30 2007-08-14 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
NZ529788A (en) 2001-05-31 2003-12-19 Medarex Inc Cytotoxins, prodrugs, linkers and stabilizers useful therefor
AU2004240541B2 (en) 2003-05-20 2009-08-20 Immunogen, Inc. Improved cytotoxic agents comprising new maytansinoids
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
AU2004284075A1 (en) 2003-10-22 2005-05-06 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
PT2489364E (pt) 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
ES2549077T3 (es) * 2004-04-07 2015-10-22 Genentech, Inc. Espectrometría de masas de conjugados de anticuerpos
EP2286844A3 (en) * 2004-06-01 2012-08-22 Genentech, Inc. Antibody-drug conjugates and methods
CR20180483A (es) * 2008-03-18 2018-12-05 Genentech Inc COMBINACIONES DE UN CONJUNGADO ANTICUERPO-FÁRMACO ANTI-HER2 Y AGENTES QUIMIOTERAPÉUTICOS (Divisional 11678)
US8802093B2 (en) 2008-04-02 2014-08-12 Macrogenics, Inc. HER2/neu-specific antibodies and methods of using same
US8406739B2 (en) * 2008-11-19 2013-03-26 At&T Mobility Ii Llc Mediation router
CN101463344B (zh) * 2009-01-15 2012-06-27 协和干细胞基因工程有限公司 抗人Her2单克隆抗体杂交瘤细胞系、单克隆抗体、试剂盒及其用途
CN102356092B (zh) 2009-03-20 2014-11-05 霍夫曼-拉罗奇有限公司 双特异性抗-her抗体
SG186451A1 (en) 2010-07-12 2013-01-30 Covx Technologies Ireland Ltd Multifunctional antibody conjugates
EA201390642A1 (ru) * 2010-11-03 2013-12-30 Иммуноджен, Инк. Цитотоксические агенты, содержащие новые производные анзамитоцина
EP2648753A4 (en) 2010-12-10 2015-06-24 Merrimack Pharmaceuticals Inc ASSAY AND ADMINISTRATION OF BISPECIFIC SCFV CONJUGATES
ES2819573T3 (es) 2012-12-13 2021-04-16 Immunomedics Inc Método para producir inmunoconjugados de anticuerpo-SN-38 con un enlazador CL2A
US9814784B2 (en) * 2013-01-03 2017-11-14 Celltrion, Inc. Antibody-linker-drug conjugate, preparation method therefor, and anticancer drug composition containing same
CN103319599B (zh) * 2013-05-27 2015-02-18 上海交联药物研发有限公司 一种抗人ErbB2抗体—美登木素偶联物及其应用
JP6032361B2 (ja) * 2013-06-17 2016-11-24 アイシン・エィ・ダブリュ株式会社 パーキング装置
CN104418952B (zh) 2013-09-04 2017-08-08 上海张江生物技术有限公司 一种用于治疗乳腺癌的抗ErbB2双特异性抗体
WO2015047510A1 (en) * 2013-09-27 2015-04-02 Immunomedics, Inc. Anti-trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
PT3069735T (pt) * 2014-01-10 2018-05-18 Synthon Biopharmaceuticals Bv Adc de duocarmicina para utilização no tratamento de cancro da bexiga
CN104892763A (zh) * 2014-03-05 2015-09-09 中国科学院上海药物研究所 抗体-药物偶联物Pertuzumab-MCC-DM1、其与Trastuzumab的组合物及其应用
CN106729743B (zh) 2015-11-23 2021-09-21 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗ErbB2抗体-药物偶联物及其组合物、制备方法和应用
CN107029244B (zh) * 2016-02-04 2021-04-27 浙江昭华生物医药有限公司 抗her2抗体-药物偶联物及其应用
WO2018036438A1 (zh) * 2016-08-23 2018-03-01 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一种抗体-药物偶联物及其制备方法和应用
CN107915770B (zh) * 2016-10-11 2020-08-25 联宁（苏州）生物制药有限公司 一种抗体药物偶联物中间体及其制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012207036A (ja) * 2006-03-22 2012-10-25 F Hoffmann La Roche Ag 血管内皮増殖因子に対する抗体と、２型ヒト上皮成長因子受容体に対する抗体を用いた腫瘍治療
JP2013163687A (ja) * 2006-08-21 2013-08-22 F Hoffmann La Roche Ag 抗ｖｅｇｆ抗体による腫瘍治療
JP2013224305A (ja) * 2009-07-31 2013-10-31 F Hoffmann-La Roche Ag 皮下抗ｈｅｒ２抗体製剤
WO2013173392A1 (en) * 2012-05-15 2013-11-21 Concortis Biosystems, Corp Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
US20150105540A1 (en) * 2013-10-15 2015-04-16 Sorrento Therapeutics Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
WO2016123412A1 (en) * 2015-01-28 2016-08-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2022511219A (ja) * 2019-03-26 2022-01-31 レメゲン シーオー．，エルティーディー． 抗Ｈｅｒ２抗体薬物コンジュゲートの製剤
JP7264986B2 (ja) 2019-03-26 2023-04-25 レメゲン シーオー．，エルティーディー． 抗Ｈｅｒ２抗体薬物コンジュゲートの製剤
JP2023541609A (ja) * 2020-09-16 2023-10-03 シチュアン ケルン－バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド 抗ネクチン－４抗体、それを含むコンジュゲート、及びその適用
JP7458686B2 (ja) 2020-09-16 2024-04-01 シチュアン ケルン－バイオテック バイオファーマシューティカル カンパニー リミテッド 抗ネクチン－４抗体、それを含むコンジュゲート、及びその適用

Also Published As

Publication number Publication date
CN107921124B (zh) 2018-12-28
PT3381469T (pt) 2021-09-02
CN106729743A (zh) 2017-05-31
JP7200454B2 (ja) 2023-01-10
HK1243957B (zh) 2019-10-04
PL3381469T3 (pl) 2021-11-29
US20230293536A1 (en) 2023-09-21
EP3381469A1 (en) 2018-10-03
CN109395089B (zh) 2022-08-12
EP3381469A4 (en) 2019-07-31
EP3381469B1 (en) 2021-06-30
US20210252006A1 (en) 2021-08-19
HUE055671T2 (hu) 2021-12-28
CA3000763A1 (en) 2017-06-01
AU2016359514A1 (en) 2018-04-26
CN106729743B (zh) 2021-09-21
CN109395090B (zh) 2022-03-25
JP6888871B2 (ja) 2021-06-16
JP2021152006A (ja) 2021-09-30
US11903948B2 (en) 2024-02-20
CN109395089A (zh) 2019-03-01
US20190076438A1 (en) 2019-03-14
ES2887349T3 (es) 2021-12-22
EA039757B1 (ru) 2022-03-10
DK3381469T3 (da) 2021-08-09
CN107921124A (zh) 2018-04-17
EA201792590A1 (ru) 2019-03-29
WO2017088734A1 (zh) 2017-06-01
CN109395090A (zh) 2019-03-01
KR20180080128A (ko) 2018-07-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7200454B2 (ja) 抗ＥｒｂＢ２抗体－薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその使用
JP7515228B2 (ja) フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP4993645B2 (ja) 抗体薬剤結合体および方法
KR102556826B1 (ko) 효소적으로 절단가능한 기를 갖는 항체 약물 접합체 (adc)
ES2579805T3 (es) Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
WO2018036438A1 (zh) 一种抗体-药物偶联物及其制备方法和应用
CN110903395A (zh) 抗体、偶联物及其制备方法和用途
JP2022519273A (ja) 抗ｃｄ２２８抗体及び抗体薬物コンジュゲート
JP7455188B2 (ja) コンジュゲーションのためのポリペプチド複合体及びその応用
JP7440509B2 (ja) Ｃｄｃｐ１－標的化療法
US20240366778A1 (en) Anti-nectin-4 antibody, drug conjugate, and preparation method therefor and use thereof
CA3093477A1 (en) Anti-her2 biparatopic antibody-drug conjugates and methods of use
CN113453724B (zh) 基于磺酰基马来酰亚胺的连接子和相应的偶联物
US20220008553A1 (en) Anti-erbb2 antibody-drug conjugate and composition thereof, preparation method therefor, and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20180322

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20190918

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20191108

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20191108

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20201013

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20201228

A524 Written submission of copy of amendment under article 19 pct

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524

Effective date: 20210331

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20210420

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20210517

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6888871

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250