JP2015535237A

JP2015535237A - Ｔｎｆｒ：ｆｃ融合プロテインの安定な医薬組成物

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Publication number: JP2015535237A
Application number: JP2015538612A
Authority: JP
Inventors: アプテ−デシュパンデ，アンジャリ，ディーパク; デオカール，バイバブ，ディアヌシュウォー; モディ，ラストム，ソラブ
Original assignee: Lupin Atlantis Holdings SA
Current assignee: Lupin Atlantis Holdings SA
Priority date: 2012-10-26
Filing date: 2013-10-24
Publication date: 2015-12-10
Anticipated expiration: 2033-10-24
Also published as: EP2919801A1; ES2806946T3; US20180236030A1; KR20150074069A; WO2014064637A1; EP2919801B1; AU2013336279B2; MX2015005231A; RU2015119603A; US10058589B2; CA2889271A1; AU2013336279A1; RU2664691C2; BR112015009462A2; CN104936607A; US20150283241A1; JP6431844B2; PL2919801T3; KR102132050B1; MX366622B

Abstract

この発明は、腫瘍壊死因子受容体Ｆｃ融合プロテイン（TNFR:Fc）を含む安定な医薬組成物に関する。より詳細には、本発明は、腫瘍壊死因子受容体Ｆｃ融合プロテイン（TNFR:Fc）およびリン酸塩−クエン酸塩バッファを含む安定な医薬組成物に関する。また、本発明は該組成物の製造方法、適用方法および該組成物を含むキットにも関する。【選択図】なし

Description

この発明は、腫瘍壊死因子受容体Ｆｃ融合プロテイン（TNFR:Fc）を含む安定な医薬組成物を提供するものである。
本発明は、また、該組成物の製造方法、投与方法および該組成物を含むキットを提供するものでもある。

腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αは、その受容体に結合することにより、炎症およびそれを伴った徴候を促進するサイトカインである。それは、マクロファージおよびその他多くの免疫細胞により産生される。それは、リューマチ性関節炎、乾癬性関節炎、ＳＬＥ、クローン病などのような多くの炎症性疾患の病原に関与している。

Hohmannらは、異なったタイプの細胞、すなわち骨髄細胞および上皮細胞に存在するＴＮＦ−αの２つの異なった受容体を同定した（Hohmann ら、1989 J Biol Chem. 25, 14927-34）。Brockhausらは、モノクローナル抗体を用いて、ＴＮＦ−αおよびβのどちらもが両方の受容体に高い親和性でもって結合していることを実証した（Brockhaus ら、1990 ProcNatlAcadSci U S A., 87(8), 3127-31）。

腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）は炎症の中心的な調節因子であり、ＴＮＦ−αアンタゴニストは、ＴＮＦ−αが主要な病因となっている炎症性疾患を治療するのに有効であるだろう。ＴＮＦの抑制は、リューマチ性関節炎、および乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患を含むその他の型の炎症性疾患を患っている患者の治療に有効であることが証明されている。そのようなＴＮＦ−αアンタゴニストの一つがエタネルセプト（Etanercept）である。

エタネルセプトは、組換えＤＮＡ技術により産生される２量体の融合プロテインであり、ＴＮＦ受容体２の可溶性リガンド結合部位の遺伝子がヒトIgG１のFc成分の遺伝子と融合して所望の融合プロテインとなっている（US 7648702）。

エタネルセプトはＣＨＯ細胞中に発現する。エタネルセプトのＦｃ成分は、ＣＨ１ドメインを欠落しているが、ＣＨ２、ＣＨ３ドメインおよびヒンジ領域を有している。この融合プロテインは、およそ１５０ｋＤの分子量を有しており、９３４のアミノ酸からなっている。

エタネルセプトはＴＮＦに干渉してＴＮＦインヒビターとして作用するため、自己免疫疾患を治療するバイオ医薬として用いられ得る。それは、リューマチ性関節炎および乾癬性関節炎の患者における関節の進行性損傷を予防する。

その独特な構造のため、エタネルセプトは、ＴＮＦ−αに対して、その内因性受容体より５０〜１００倍も有効に結合する（Gofeeet ら、2003J Am AcadDermatol. 49, S105-111, Strober 2005 SeminCutan Med Surg. 24; 28-36)。

その上、その２量体の性質により、内因性受容体による一つの結合に比べて、２つのＴＮＦ−α分子に結合することができる。ＩｇＧのＦｃ領域にこの分子が結合すると、内因性の可溶性形態に比べて半減期が増す。エタネルセプトは、凍結乾燥形態および液状形態の両方で商業的に入手できる。

組成物の最も重要な特徴は、プロテインがその構造的立体配座または活性を保持するのを助長することである。組成物中のプロテインの安定性は、長期間の保存に関連し得る。医薬組成物の活性ポリペプチドは、保存の初期段階の組成物と比べて、その活性を実質的に失わないことを意味するものと理解される。

ポリペプチドはすべて等電点（ｐＩ）を有しており、この等電点は通常ポリペプチドが実効電荷を帯びないときのｐＨとして定義される。プロテインの溶解性は、その溶液のｐＨがそのプロテインの等電点（ｐＩ）に等しいときに、典型的に最も低いということが、当該技術分野で知られている。

プロテインのＦａｂドメインのＴｍは、プロテインの温度安定性の良い指標であり、さらに保管期間の指標でもあり得る。示差走査熱量計により測定されたプロテインのＴｍ値は、プロテイン立体配座における熱誘発性変化およびプロテイン・アンフォルディングのメカニズムおよび溶液中の安定性についての情報を提供する。

より低いＴｍは所定の溶液中でのプロテインのより低い安定性を示すのに対して、より高いＴｍは当該プロテインのより良い安定性を示す。プロテインのＴｍは、製剤の組成に基づいて変動し、個々の製剤におけるその安定性を次々に反映する。

長期間の保存中に、プロテインの水性組成物および凍結乾燥組成物のどちらも、凝集または分解により活性プロテインを失うことがある。プロテインの凝集は、免疫原性へと導くことがあり、望ましくない。
組成物中で用いられるエタネルセプトの濃度は高いので、長期間保存中にプロテインが凝集する可能性があり得る。プロテインの安定性を改善するために、存在する添加剤の濃度を変えるか、または新しい添加剤を加えて組成物を改変するかのどちらかがあり得る。

米国特許第5,215,743号、同第7,648,702号、米国特許出願第20070053906号およびWO 2011141926号は、ＴＮＦ−結合プロテイン、緩衝剤および等張化剤を含むＴＮＦ−結合プロテインの水性組成物を含む医薬組成物を開示している。

一つの実施態様において、本発明は、TNFR:Fc融合プロテインおよびリン酸塩−クエン酸塩緩衝剤を含む安定な医薬組成物に関する。

もう一つの実施態様において、本発明はTNFR:Fc融合プロテイン、リン酸塩−クエン酸塩緩衝剤、ならびにＬ−グリシン、ウレアおよび２−ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（HPBCD）から選択される抗凝集剤を含む安定な医薬組成物に関する。

もう一つの実施態様において、本発明はTNFR:Fc融合プロテイン、リン酸塩−クエン酸塩緩衝剤、Ｌ−グリシン、ウレアおよびHPBCDから選択される抗凝集剤、等張化剤ならびに安定化剤を含む、安定な医薬組成物に関する。

もう一つの実施態様において、本発明は、本発明の安定な医薬組成物を用いて疾病を治療する方法に関する。そのような疾患は、リュウマチ性関節炎、多関節性若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎またはプラーク性乾癬であり得る。

もう一つの実施態様において、本発明は、本発明の組成物を含むキットまたは容器に関する。

以下に説明する本発明の一つ以上の実施態様の詳細は、例示するだけのものであり、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。
本発明のその他の特徴、目的および利点は、発明の詳細な説明および特許請求の範囲の記載から明らかになるであろう。

発明の詳細な説明

この発明は、ヒト免疫グロブリンのFc 部位に融合したTNFR分子（TNFR:Fc 融合プロテイン）を含む安定な医薬組成物を提供する。
より詳細には、この発明は、より低い劣化の可能性を発揮するリン酸塩−クエン酸塩バッファ中のエタネルセプトの安定な医薬組成物に関する。
この発明の一実施態様において、TNFR:Fc 融合プロテインはエタネルセプトである。

抗凝集剤としてＬ−グリシンを用いたリン酸塩バッファ中のエタネルセプトの医薬組成物は、抗凝集剤としてアルギニン、プロリン、リジン、アスパラギン酸のようなその他のアミノ酸を用いたエタネルセプトのリン酸塩バッファ中の組成物と比べて安定でないということが、米国特許7648702号およびWO2011141926号出願に報告されている。

上記のWO2011141926号出願は、リン酸塩バッファおよび抗凝集剤としてのＬ−グリシン中のエタネルセプトを含む組成物が、凝集および分解生成物を示したことを開示している。

異なったバッファ中で異なった抗凝集剤を用いたエタネルセプトの組成物を研究している間に、リン酸塩−クエン酸塩バッファを抗凝集剤としてのＬ−グリシンとともに含むエタネルセプトの組成物が、リン酸塩バッファを抗凝集剤としてのＬ−グリシンとともに含むエタネルセプトの組成物と比べて、５℃および４０℃で改善された安定性を示すことが観察された。

実施例の部に示されているように、抗凝集剤としてのＬ−グリシンと組み合わさったリン酸塩−クエン酸塩バッファから本質的になるエタネルセプトの組成物の安定性は、５℃で６か月間、および４０℃で２週間の安定性試験で評価された（ストレス条件下の安定性試験）。

リン酸塩−クエン酸塩バッファ系を含む組成物は、ＳＥＣにより測定された凝集生成物および分解生成物の％に関して、リン酸塩バッファ系を含む組成物と比べて、より優れていると評価された。

ここで用いられる安定な医薬組成物は、TNFR:Fc融合プロテインが次の特徴を示すことを意味している：

i．リン酸塩−クエン酸塩バッファ中のTNFR:Fc融合プロテインの安定な医薬組成物は、リン酸塩バッファ、アルギニンおよび塩化ナトリウムを含むエタネルセプトの組成物に比べて改善された安定性を示す。４０℃で２週間保管後にＳＥＣにより測定した凝集％は、リン酸塩−クエン酸塩バッファ中で抗凝集剤としてＬ−グリシンを含むエタネルセプト組成物において、より低い。

ii．リン酸塩−クエン酸塩バッファ中のTNFR:Fc融合プロテインの安定な医薬組成物は、リン酸塩バッファ、アルギニンおよび塩化ナトリウムを含むエタネルセプトの組成物と同様に、４０℃で２週間保管後ＳＥＣにより、５％未満高い分子量または低い分子量の不純物を示す。

iii．リン酸塩−クエン酸塩バッファ、グリシン中のTNFR:Fc融合プロテインの安定な医薬組成物は、およそ８％高い分子量または低い分子量の不純物を示す。一方、リン酸塩バッファ、抗凝集剤としてのグリシンを含むエタネルセプトの組成物は、４０℃で２週間保管後ＳＥＣにより、〜１５％の不純物を示した。

もう一つの実施態様において、本発明は、ウレア、HPBCDのような他の抗凝集剤を含むリン酸塩−クエン酸塩バッファ中のエタネルセプトの医薬組成物に関する。

リン酸塩−クエン酸塩バッファ中のエタネルセプト組成物の改善された安定性を得た後、アミノ酸以外の他の化合物からの抗凝集剤が試験された。

ウレアおよびHPBCDもリン酸塩−クエン酸塩バッファ中のエタネルセプトの安定な医薬組成物をもたらすことが観察された。このことは、医薬組成物のエタネルセプトは、保管当初の組成物に比べて、その活性を実質的に失っていないということを意味していると理解される。

「実質的」という用語は、保管当初の組成物の活性に比べて、その活性の２０％以下、より好ましくは１５％以下、さらに好ましくは１０％以下、そして最も好ましくは５％以下をいう。

本発明の医薬組成物は、長期間の保管に適している。ここで用いられる「長期間の保管」という用語は、医薬組成物の保管が、１か月以上、好ましくは６か月あるいは１２か月以上、より好ましくは２４か月以上安定であるということを意味している。

腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）は、急性フェーズのリアクションを促進する一群のサイトカインの一つであり、したがって全身性の炎症に関与するサイトカインである。

ＴＮＦ-αは、炎症を誘発することができ、アポトーシス細胞死を誘発することができ、また腫瘍の発生およびウィルスの複製を阻止することができる。ＴＮＦ-α産生のディスレギュレーションは、自己免疫疾患、強直性脊椎炎、若年性リューマチ関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、リューマチ関節炎、ウェグナー病（肉芽腫症）、クローン病もしくは炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、Ｃ型肝炎、子宮内膜症、喘息、悪液質、アトピー性皮膚炎、アルツハイマーおよび癌のようなヒトの種々の病気に関係してきた。

TNFR:Fcの投与量は、疾患、症状の重篤性、患者の治療暦および（以前の）治療に対する応答性に依存し、医師によって調整され、かつモニターされる。
医薬組成物は、単回または連続注入により、皮下、筋肉内、静脈内、腹膜内、脳脊髄内、関節内、関節滑液内および／または包膜内のように、非経口投与され得る。

一つの実施態様において、TNFR:Fcは、成人または若年の患者に投与することができ、その投与量は約１〜８０ｍｇの範囲にわたる。この投与量が週１回、週２回投与され得る。さらに、上記の投与量は、毎週、２週間ごとに、あるいは数週間、例えば３週間に分けて投与され得る。治療の投与量および投与期間は、患者の応答性および患者の要求によって変動し得る。

もう一つの実施態様において、若年および小児の患者にとって適当な療法は、TNFR:Fc ０．４ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの投与量を含み、１週間に１回ないし複数回投与され得る。
成人のリュウマチ関節炎の場合、25 mg のTNFR:Fcが１週間に２回、あるいは50 mg のTNFR:Fc が１週間に１回投与され得る。

乾癬性関節炎の場合、２５ｍｇのTNFR:Fc が週２回、あるいは５０ｍｇのTNFR:Fc が週１回投与され得る。
強直性脊椎炎の場合、週２回２５ｍｇ、あるいは週１回５０ｍｇのTNFR:Fc が投与され得る。

成人のプラーク乾癬の場合、TNFR:Fc の推奨される投与量は、週２回２５ｍｇが投与されるか、あるいは週１回５０ｍｇが投与される。小児のプラーク乾癬の場合、推奨されるTNFR:Fc の投与量は、週０．８ｍｇ／ｋｇであり、１週間当たり最大５０ｍｇである。

若年の多関節特発性関節炎の場合、TNFR:Fc の推奨される投与量は、週０．８ｍｇ／ｋｇであり、１週間当たりの最大投与量は５０ｍｇである。腎臓および肝臓障害の場合、投与量の調整は不要である。

第２の観点において、本発明は、第１の観点による組成物およびこの組成物使用のための指示書を含むキットに関する。
好ましい実施態様において、組成物は予め充填されるシリンジ中に含まれる。もう一つの好ましい実施態様において、組成物は予め充填されるバイアル中に含まれる。
上記のキットは、本発明の医薬組成物を含む一つ以上の単回投与剤形を含み得る。

適当なシリンジ、バイアルまたはカートリッジはいずれも使用することができる。
上記のキットは、本発明による医薬組成物を自動注射器のような第２のもう一つのコンテナ中に含んでいてもよい。予め充填されたシリンジは水性の形態にある組成物を含んでいてもよい。記述されたシリンジは、自動注射器と共に供給されていてもよく、それはしばしば単回使用に対する使い捨て品であり、例えば０．１〜１ｍｌの容量を有し得る。

しかしながら、シリンジや自動注射器は、多回使用または多投与用でもあり得る。上記のバイアルは、凍結乾燥形態または水性形態にある組成物を含んでいてもよく、単回使用あるいは多使用器具として役立つ。バイアルは例えば１〜１０ｍｌの容量を有し得る。

医薬組成物は無菌であり、２〜８℃で長期間安定である。また、２５℃で保管されたとき、６か月まで安定である。

本発明は、エタネルセプト、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、Ｌ−グリシン、ウレアおよびHPBCDから選択される抗凝集剤、等張化剤、安定化剤を実質的に含み、かつその他の賦形剤を任意に、適当に組み合わせて含む医薬組成物を提供する。

本発明は、さらに、安定な医薬組成物に関するものでもあり、該組成物は液状または凍結乾燥されている。
本発明は、さらに予め充填されたシリンジ、バイアル、カートリッジまたはペンの形態にある安定な医薬組成物に関するものでもある。

本発明の一つの実施態様において、活性医薬成分エタネルセプトが用いられており、該成分はＣＨＯ細胞を用いる組換えＤＮＡ技術から得られる。
組成物中のエタネルセプトの濃度は、10 mg/mL〜100 mg/mLである。本発明の好ましい実施態様において、組成物中のエタネルセプトの濃度は、10 mg/mL〜60 mg/mLである。本発明の最も好ましい実施態様において、組成物中のエタネルセプトの濃度は、20 mg/mL〜60 mg/mLである。

本発明のもう一つの実施態様において、バッファはリン酸塩−クエン酸塩バッファである。本発明の一つの実施態様において、組成物中のバッファの濃度は10 mM〜100 mMである。本発明の好ましい実施態様において、組成物中のバッファの濃度は10 mM〜50 mMである。本発明のもう一つの好ましい実施態様において、組成物中のバッファの濃度は20 mM〜40 mMである。

本発明のもう一つの実施態様において、組成物のｐＨは５〜８である。
本発明のもう一つの実施態様において、該エタネルセプト組成物は、Ｌ−グリシン、ウレアおよびHPBCD から選択される抗凝集剤を含む。

本発明の実施態様において、抗凝集剤がＬ−グリシンであるとき、組成物中のＬ−グリシンの濃度は10 mM〜300 mMである。
本発明のもう一つの実施態様において、抗凝集剤がウレアであるとき、組成物中のウレアの濃度は20 mM〜50 mMである。
本発明のもう一つの実施態様において、抗凝集剤がHPBCDであるとき、HPBCDの濃度は10 mM〜100 mMである。

本発明のもう一つの実施態様において、安定な医薬組成物は非経口的に許容される等張化剤をさらに含む。
等張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムのような塩、またはマンニトール、スクロース、グルコースのようなサッカライド、またはアルギニン、システイン、ヒスチジンのようなアミノ酸などの群から選択される。
好ましい等張化剤は塩化ナトリウムである。その濃度は0 mM〜150 mM の範囲で変動する。

本発明のさらにもう一つの実施態様において、安定な医薬組成物は安定化剤をさらに含む。
安定化剤は、スクロース、トレハロース、ラクトース、マンニトールからなる群から選択される。好ましい安定化剤はスクロースである。
組成物中の安定化剤の濃度は、0.5 重量%〜10 重量%で変動する。本発明の最も好ましい実施態様において、組成物中の安定化剤の濃度は0.5重量% 〜1.5重量%である。

本発明のさらにもう一つの実施態様において、安定な医薬組成物はキレート剤を任意に含んでいてもよい。
キレート剤は、EDTA、DTPA、HEDTA、NTAおよびTSPからなる群から選択される。好ましいキレート剤はEDTAである。本発明のより好ましい実施態様において、EDTAの濃度は0 mM〜10 mMである。

本発明のもう一つの実施態様において、本発明の安定な医薬組成物は、安定なエタネルセプト、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、Ｌ−グリシン、ウレアまたはHPBCDから選択される抗凝集剤、および温度５℃で長期間の棚寿命を有する安定化剤としてのスクロースを含む。

本発明のもう一つの実施態様において、本発明の安定な医薬組成物は、エタネルセプト、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、Ｌ−グリシン、ウレアまたはHPBCDから選択される抗凝集剤、および５℃で長期間の棚寿命を有する安定化剤としてのスクロースを含む。

本発明のもう一つの実施態様において、本発明の安定な医薬組成物は、エタネルセプト、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、Ｌ−グリシン、ウレアまたはHPBCDから選択される抗凝集剤、および４０℃で２週間の棚寿命を有する安定化剤としてのスクロースを含む。

本発明のもう一つの実施態様において、本発明の安定な医薬組成物は、エタネルセプト、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、Ｌ−グリシン、ウレアまたはHPBCDから選択される抗凝集剤、およびより長い棚寿命をもたらし、より長期間活性を維持し、医薬組成物により良い安定性をもたらす安定化剤としてのスクロースを含む。

もう一つの実施態様において、本発明は、TNFR:Fc、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、Ｌ−グリシン、ウレアおよびHPBCDからなる群から選択される安定化剤を含む、第１の観点による医薬組成物を製造する方法に関する。

好ましい実施態様において、該方法は、塩化ナトリウムのような少なくとも一つの等張化剤、スクロースのような安定化剤および前記のようなキレート剤を任意に加える工程をさらに含む。

もう一つの実施態様において、該方法は、凍結乾燥工程をさらに含んでいてもよく、この工程は少なくとも一つの等張化剤および／または前記のような賦形剤を加える前後のいずれでもよい。

本発明の好ましい実施態様によれば、医薬組成物は、10 mg/ml〜100 mg/ml のエタネルセプト、約10 mM 〜100 mMのリン酸塩−クエン酸塩バッファ、約10 mM〜300 mMのＬ−グリシン、約0 mM〜150 mMの塩化ナトリウムおよび５〜７のｐＨ範囲を有する約0.5 重量%〜10重量%のスクロースを含む。

本発明のもう一つの好ましい実施態様によれば、医薬組成物は、10 mg/ml〜100 mg/ml のエタネルセプト、約10 mM 〜100 mMのリン酸塩−クエン酸塩バッファ、約1 mg/ml〜18 mg/mlのウレア、約1 mM〜150 mMの塩化ナトリウム、約0.5重量%〜2重量%のスクロースおよび５〜７のｐＨ範囲を有する約0mM〜10mMのＥＤＴＡを含む。

本発明の好ましいもう一つの実施態様によれば、医薬組成物は、10 mg/ml〜100 mg/ml のエタネルセプト、約10 mM 〜100 mMのリン酸塩−クエン酸塩バッファ、約20mg/ml〜30mg/mlのHPBCD、約1 mM〜150 mMの塩化ナトリウム、約0.5重量%〜2重量%のスクロースおよび0ｍＭ〜10ｍＭの５〜７のｐＨ範囲を有するＥＤＴＡを含む。

本発明は、以下の実施例を参照すれば、より充分に理解されるだろう。しかしながら、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきものではない。

実験の部
以下に記載された実施例のために用いられた活性成分、エタネルセプトは、組換えＤＮＡ技術によりＣＨＯ細胞中から導かれた。ＣＨＯ細胞はフェッド−バッチプロセスで培養された。
エタネルセプトは、アフィニティ・クロマトグラフィならびにさらなるクロマトグラフィ工程および濾過工程を含む標準的な精製および濾過方法により、細胞を含まない培養物から精製された。以下の実施例、すなわち実施例２および実施例５で用いられた異なった製造バッチから導かれた。

エタネルセプトの安定な医薬組成物の一般的な製造方法
エタネルセプトの医薬物質組成物を製造する方法は、２つのステップ、すなわち製剤バルクの調製および最終品の充填ステップを含む。

製剤のバルクは、所定の医薬物質濃度を達成するために、該医薬物質を製剤のバッファで希釈することにより製造される。該製剤バッファは、所定量のクエン酸３ナトリウム２水和物およびリン酸２水素ナトリウム２水和物をＷＦＩに加えて混合することにより調製される。さらに、所定量のその他の賦形剤が上記の溶液に加えられ、その所定量がｐＨ調整後のＷＦＩで調整される。

製剤バッファは、次いで0.22μの無菌グレードのPVDFフィルタを用いて、無菌的に濾過される。バッチの計算に従って、所定量のエタネルセプト（同じ製剤）が無菌的に希釈される。

該組成物は、ゲル浸透−高速液体クロマトグラフィ（SE-HPCL）により、５℃、２５℃および４０℃で、異なった保管時間フレームで分析された。SE-HPLCは、プロテイン類およびその関連不純物をサイズに基づいて分離する。
したがって、それはエタネルセプトの凝集および微細化を検知するのに有用である。

以下の実施例は、本発明を説明するものであって、限定することを意図するものではない。

実施例１
エタネルセプトの医薬物質組成物を製造する方法は、２つのステップ、すなわち製剤バルクの調製および最終品の充填ステップを含む、

製剤のバルクは、所定の医薬物質濃度を達成するために、該医薬物質を製剤のバッファで希釈することにより製造される。該製剤バッファは、（表１に記述されている）所定量のクエン酸３ナトリウム２水和物およびリン酸２水素ナトリウム２水和物をＷＦＩに加えて混合することにより調製される。さらに、抗凝集剤としての所定量のグリシンおよびその他の賦形剤が上記の溶液に加えられ、その所定量がｐＨ調整後のＷＦＩでｐＨ調整される。

製剤バッファは、次いで0.22 μの無菌グレードのPVDFフィルタを用いて、無菌的に濾過される。バッチの計算に従って、所定量のエタネルセプトＤＳ（同じ製剤中）が濾過された製剤バッファで無菌的に希釈されて、エタネルセプトバルクの所定濃度50 ± 5 mg/mLとなる。

調製されたバルクは、0.22 μの無菌グレードのPVDFフィルタを用いて、無菌的に濾過され、予め充填されるシリンジ中に無菌的に分配される。該PFSは次いで種々の温度で安定性試験に付された。
表１は、抗凝集剤としてのＬ−グリシンを75 mM 濃度で用いて得られた組成物を記述している。

実施例２
エタネルセプト組成物が、異なったバッファ中および異なった抗凝集剤を用いて試験された。
リン酸塩−クエン酸塩バッファを抗凝集剤としてのＬ−グリシンとともに含むエタネルセプト組成物の短期間試験が、リン酸塩バッファを抗凝集剤としてのＬ−グリシンとともに含むエタネルセプト組成物と並行して、その他の賦形剤は同じにして、SE-HPLCを用いて、５℃で６か月および４０℃で２週間それぞれ行われた。その結果が表２に示されている。表２は、異なったエタネルセプト組成物の安定性試験を示している。

表２が示すように、リン酸塩−クエン酸塩バッファを抗凝集剤としてのＬ−グリシンとともに含むエタネルセプト組成物は、リン酸塩バッファを抗凝集剤としてのＬ−グリシンとともに含むエタネルセプト組成物と比べて、５℃および４０℃で改善された安定性を示した。

実施例３
エタネルセプト医薬物質組成物の製造方法は、実施例１で説明されたのと同様であり、用いられた抗凝集剤はウレアである。表３に示された組成物は、抗凝集剤としてウレアを用いて調製された。

実施例４
エタネルセプト医薬物質組成物の製造方法は、実施例１で説明されたのと同様であり、用いられた抗凝集剤はHPBCDである。表４に示された組成物は、抗凝集剤としてHPBCDを用いて調製された。

実施例５
リン酸塩バッファおよび抗凝集剤としてのL-アルギニンを含むエタネルセプト組成物（組成物１）ならびにリン酸塩−クエン酸塩バッファおよび抗凝集剤としてのＬ−アルギニンを含むエタネルセプト組成物（組成物２）がＰＦＳ中に充填され、現在進行中の長期間安定性試験に付された。

５℃で９か月保管、２５℃で６か月保管、４０℃で２週間保管後のプロテイン純度のデータが、SE-HPCLを用いて分析された。その結果が表５に示されている。

同様にして、実施例３および実施例４の組成物、すなわちリン酸塩−クエン酸塩バッファを抗凝集剤としてのウレアとともに含むエタネルセプトの組成物、ならびにリン酸塩−クエン酸塩バッファを抗凝集剤としてのHPBCDとともに含むエタネルセプトの組成物を、ＰＦＳに充填し、５℃、２５℃および４０℃での安定性が試験された。
これらの組成物の安定性が評価され、組成物１と２週間まで比較し得ることがわかった。

実施例６
凍結乾燥試験のために用いられるエタネルセプトが製剤化され、表６に示される医薬組成物で広範に透析された。個々の製剤バルクが半栓されたバイアル中に充填されて、凍結乾燥に付された。

この出願において引用されたすべての特許、特許出願および刊行物は、個々の特許、特許出願または刊行物がそれぞれ示されているのと同程度に、それらのすべてがあらゆる目的のために、参照によりここに組み込まれる。
いくつかの実施態様および実施例が上記で詳細に記載されているが、それらの教示から離れることなく、該実施態様および実施例において、多くの修正が可能であることを、当業者は明らかに理解できるだろう。

Claims

TNFR:Fc融合プロテインおよびリン酸塩−クエン酸塩バッファを含む安定な医薬組成物。
TNFR:Fc融合プロテイン、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、ならびにＬ−グリシン、ウレアおよび２−ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（HPBCD）からなる群から選択される抗凝集剤を含む安定な医薬組成物。
組成物のｐＨが５〜７の範囲内にある、請求項１または２に記載の組成物。
TNFR:Fc融合プロテインがエタネルセプトである、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
TNFR:Fc融合プロテイン；リン酸塩−クエン酸塩バッファ；Ｌ−グリシン、ウレアおよび２−ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（HPBCD）から選択される抗凝集剤；等張化剤ならびに安定化剤を含む、安定な医薬組成物。
等張化剤が、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムからなる塩のグループ、マンニトール、スクロース、グルコースからなるサッカライドのグループ、およびアミノ酸類から選択される、請求項５に記載の組成物。
安定化剤がスクロースおよびトレハロースからなる群から選択される、請求項５に記載の組成物。
エタネルセプト、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、抗凝集剤としてのＬ−グリシン、等張化剤としての塩化ナトリウムおよび安定化剤としてのスクロースを含む、請求項５に記載の安定な医薬組成物。
エタネルセプト、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、抗凝集剤としてのウレア、等張化剤としての塩化ナトリウム、安定化剤としてのスクロースおよびキレート剤としてのＥＤＴＡを含む、請求項５に記載の安定な医薬組成物。
エタネルセプト、リン酸塩−クエン酸塩バッファ、抗凝集剤としてのＨＰＢＣＤ、等張化剤としての塩化ナトリウム、安定化剤としてのスクロースおよびキレート剤としてのＥＤＴＡを含む、請求項５に記載の安定な医薬組成物。
組成物が無菌化されて非経口投与用に用意されている、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
組成物が液状である、請求項１１に記載の組成物。
組成物が凍結乾燥されている、請求項１１に記載の組成物。
10 mg/ml 〜 100 mg/ml のエタネルセプト、約10 mM 〜 100 mM のリン酸塩−クエン酸塩バッファ、約10 mM 〜 300 mM のＬ−グリシン、約 0 mM 〜 150 mM の塩化ナトリウムおよび約 0.5 重量% 〜 10重量% のスクロースを含む、請求項８に記載の医薬組成物。
10 mg/ml 〜 100 mg/ml のエタネルセプト、約10 mM 〜 100 mM のリン酸塩−クエン酸塩バッファ、約1 mg/ml 〜 18 mg/ml のウレア、約1 mM 〜 150 mM の塩化ナトリウム、約 0.5 重量% 〜 2 重量% のスクロースおよび約 0mM 〜 10 mM のEDTAを含む、請求項９に記載の医薬組成物。
10 mg/ml 〜 100 mg/ml のエタネルセプト、約10 mM 〜 100 mM のリン酸塩−クエン酸塩バッファ、約 20 mg/ml 〜 30 mg/ml のHPBCD、約 1 mM 〜 150 mM の塩化ナトリウム、約 0.5 重量% 〜 2 重量% のスクロースおよび約0 mM 〜 10 mM のEDTAを含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物および該組成物の使用指示書を含むキット。
組成物が液状または凍結乾燥粉末である、請求項１７に記載のキット。
組成物が充填用無菌シリンジまたはバイアルまたはカートリッジ中に保管されている、請求項１７に記載のキット。
請求項１〜１６のいずれかに記載の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、治療が必要な哺乳動物の治療方法。