JP2014141465A - ４ｈ−クロモン誘導体、それらの製造方法及びそれらを用いる核酸検出方法 - Google Patents

Abstract

【課題】ストークスシフトが大きく、可視光励起が可能で、蛍光増感率が大きい二本鎖核酸を検出するための蛍光色素を提供する。
【解決手段】一般式（１）

（式中、Ｒ^１は水素原子等を表す。Ｒ^２およびＲ^３は各々独立に炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３は各々独立に水素原子等を表す。Ｒ^６は水素原子；炭素数１から４のアルキル基；（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；炭素数７から８のアラルキル基；またはベンゾイル基、ｎは０または１を表し、ｍは０または１を表す。）で表される４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩により前記課題を解決する。
【選択図】なし

Description

本発明は、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素として有用な、４Ｈ−クロモン誘導体およびそれらの製造方法に関する。

近年、生命科学の発展に伴い、生体関連物質の蛍光検出技術は重要となっている。特に、ヒトゲノムの解読がほぼ完了した今日、核酸の蛍光検出技術は、遺伝子診断、創薬研究、分子生物学研究等、多岐にわたり需要が増しており、これまでに多くの二本鎖核酸検出用蛍光色素が開発されている（非特許文献１）。汎用二本鎖核酸検出色素として、ヘキスト３３３４２（商品名）などのヘキストシリーズやＤＡＰＩ等の二本鎖核酸検出用蛍光色素が開示されているが、これらは紫外光で蛍光色素を励起する為、核酸を損傷する恐れがある。また、可視光励起が可能な蛍光色素として、サイバーグリーン（商品名）等のシアニン系二本鎖核酸検出用蛍光色素が開示されているが、これらの蛍光色素のストークスシフトは１００ｎｍ以下であり、励起スペクトルと蛍光スペクトルの重なりが大きいために、バックグラウンドノイズが大きくなり検出感度が低下する恐れがある。また、エチジウムブロミド等の可視光励起が可能で１５０ｎｍ近いストークスシフトをもつ二本鎖核酸検出用蛍光色素が開示されているが、当該色素と二本鎖核酸との接触による蛍光強度値の増加の割合、いわゆる蛍光増感率が低いために過剰の色素を用いなければならない。したがって、大きいストークスシフトを持ち蛍光増感率が高い可視光励起が可能な核酸検出用蛍光色素の開発が求められている。非特許文献２にはストークスシフトが２０９ｎｍのＤＮＡ検出蛍光色素が開示されているが、蛍光増感率が低く、紫外光励起が必要である。

本発明の４Ｈ−クロモン誘導体はこれまでに全く報告されておらず、新規の化合物である。非特許文献３には、本発明の化合物と類似の構造である２−スチリル−４Ｈ−クロモン誘導体が開示されているが、本発明の４Ｈ−クロモン誘導体とは、少なくともスチリル基４位にジメチルアミノ基を有している点、クロモン環７位またはベンゾクロモン環８位にアルコキシ基を有する点で異なり、さらに、非特許文献３には、蛍光特性に関する記載は一切されていない。

Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ （ｏｎｌｉｎｅ），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ−Ｃｈａｐｔｅｒ ８ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂ，１２２，１２０５０−１２０５５（２００８） Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１８，４１９５−４２０１（２０１０）

従来の二本鎖核酸検出用蛍光色素は、紫外光励起、ストークスシフトが１５０ｎｍ以下、低い蛍光増感率のいずれかの問題点を有していた。

本発明の課題は、ストークスシフトが大きく、可視光励起が可能で、蛍光増感率が大きい二本鎖核酸を検出するための蛍光色素を提供することにある。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、本発明の４Ｈ−クロモン誘導体が、ストークスシフトが大きく、可視光励起が可能で、二本鎖核酸存在下大きな蛍光増感率を示す核酸検出用蛍光色素であることを見出し、本発明に至った。

すなわち本発明は、一般式（１）

（式中、Ｒ^１は水素原子；炭素数１から３のアルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から４のアルキル基；炭素数３から６のアルキニル基；（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；下記式（２）

で表される置換（トリアゾール−４−イル）メチル基；または（２−ブロモアセチル）アミノエチル基を表す。Ｒ^２およびＲ^３は各々独立に炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３は各々独立に水素原子、ハロゲン原子またはメトキシ基を表す。Ｒ^６は水素原子；炭素数１から４のアルキル基；（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；炭素数７から８のアラルキル基；またはベンゾイル基を表し、ｎは０または１を表し、ｍは０または１を表す。）で表される４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩に関する。

また本発明は、一般式（３）

（式中、Ｒ^１ａは炭素数１から３のアルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から４のアルキル基；炭素数３から６のアルキニル基；（炭素数１から４のアルキル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基を表す。Ｒ^２およびＲ^３は各々独立に炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３は各々独立に水素原子、ハロゲン原子またはメトキシ基を表し、ｎは０または１を表し、ｍは０または１を表す。）で表されるエノン誘導体およびそのアンモニウム塩を酸化することを特徴とする、一般式（１ａ）

（式中、Ｒ^１ａ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。）で表される３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩の製造方法に関する。

また本発明は、一般式（４）

（式中、Ｒ^１ａは炭素数１から３のアルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から４のアルキル基；炭素数３から６のアルキニル基；（炭素数１から４のアルキル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基を表す。Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３は各々独立に水素原子、ハロゲン原子またはメトキシ基を表し、ｎは０または１を表す。）で表されるヒドロキシアセトフェノン誘導体およびそのアンモニウム塩と、一般式（５）

（式中、Ｒ^２およびＲ^３は各々独立に炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３およびＲ^４−４は各々独立に水素原子、ハロゲン原子またはメトキシ基を表し、ｍは０または１を表す。）で表されるアルデヒド誘導体とを塩基存在下で反応させて得られる、一般式（３）

（式中、Ｒ^１ａ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。）で表されるエノン誘導体およびそのアンモニウム塩を用いることを特徴とする、前記製造方法に関する。

また本発明は、一般式（１）

（式中、Ｒ^１は水素原子；炭素数１から３のアルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から４のアルキル基；炭素数３から６のアルキニル基；（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；下記式（２）

で表される置換（トリアゾール−４−イル）メチル基；または（２−ブロモアセチル）アミノエチル基を表す。Ｒ^２およびＲ^３は各々独立に炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３は各々独立に水素原子、ハロゲン原子またはメトキシ基を表す。Ｒ^６は水素原子；炭素数１から４のアルキル基；（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；炭素数７から８のアラルキル基；またはベンゾイル基を表し、ｎは０または１を表し、ｍは０または１を表す。）で表される４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、当該４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩の蛍光増感を観測することにより、二本鎖核酸を検出する方法に関するものである。

以下に本発明を詳細に説明する。

本発明の４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩（以下、本発明の蛍光色素という）中、Ｒ^１で表される炭素数１から３のアルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から４のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、メトキシメチル基、２−メトキシエチル基、エトキシメチル基、２−エトキシエチル基、３−メトキシプロピル基および４−メトキシブチル基を例示することができる。

Ｒ^１で表される炭素数３から６のアルキニル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、プロパルギル基、２−ブチニル基、３−ブチニル基、２−ペンチニル基、３−ペンチニル基、４−ペンチニル基、２−メチル−３−ブチニル基、２−ヘキシニル基、３−ヘキシニル基、４−ヘキシニル基、５−ヘキシニル基、４−メチル−２−ペンチニル基、１−メチル−３−ペンチニル基、２−メチル−３−ペンチニル基、１−メチル−４−ペンチニル基、２−メチル−４−ペンチニル基、３−メチル−４−ペンチニル基、１，１−ジメチル−２−ブチニル基、１，１−ジメチル−３−ブチニル基および１，２−ジメチル−３−ブチニル基を例示することができる。

Ｒ^１で表される（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基としては、２−アミノエチル基、３−アミノプロピル基、４−アミノブチル基、５−アミノペンチル基、６−アミノへキシル基、２−（ジメチルアミノ）エチル基、３−（ジメチルアミノ）プロピル基、４−（ジメチルアミノ）ブチル基、５−（ジメチルアミノ）ペンチル基、６−（ジメチルアミノ）へキシル基、２−（ジエチルアミノ）エチル基、３−（ジエチルアミノ）プロピル基、４−（ジエチルアミノ）ブチル基、５−（ジエチルアミノ）ペンチル基、６−（ジエチルアミノ）へキシル基、２−（ジプロピルアミノ）プロピル基、３−（ジプロピルアミノ）プロピル基、４−（ジプロピルアミノ）ブチル基、５−（ジプロピルアミノ）ペンチル基、６−（ジプロピルアミノ）へキシル基、２−（ジブチルアミノ）エチル基、３−（ジブチルアミノ）プロピル基、４−（ジブチルアミノ）ブチル基、５−（ジブチルアミノ）ペンチル基、６−（ジブチルアミノ）へキシル基、２−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］エチル基、２−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］エチル基、２−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］エチル基、３−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］プロピル基、４−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］ブチル基、５−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］ペンチル基、６−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］へキシル基、３−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］プロピル基、４−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］ブチル基、５−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］ペンチル基、６−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］へキシル基、３−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］プロピル基、４−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］ブチル基、５−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］ペンチル基および６−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］へキシル基を例示することができる。また、（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基中のアミノ基は、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸またはメシル酸等のブレンステッド酸によってアンモニウム化されていてもよい。

Ｒ^１が式（２）

で表される置換（トリアゾール−４−イル）メチル基の場合、置換（トリアゾール−４−イル）メチル基中のアミノ基は、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸またはメシル酸等のブレンステッド酸によってアンモニウム化されていてもよい。

蛍光強度が強い点で、Ｒ^１としてはアンモニウム化されていてもよい（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基が好ましく、さらにトリフルオロ酢酸によってアンモニウム化されていてもよい３−アミノプロピル基またはトリフルオロ酢酸によってアンモニウム化されていてもよい２−（ジエチルアミノ）エチル基が好ましい。

本発明の蛍光色素中、Ｒ^２およびＲ^３で表される炭素数１から３のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基およびイソプロピル基を例示することができる。蛍光強度が強い点で、Ｒ^２およびＲ^３としてはメチル基が好ましい。

本発明の蛍光色素中、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３およびＲ^４−４で表されるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素原子を例示することができる。蛍光強度が強い点で、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３およびＲ^４−４としては水素原子、フッ素原子が好ましく、水素原子がさらに好ましい。

本発明の蛍光色素中、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３で表されるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素原子を例示することができる。蛍光強度が強い点で、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３としては水素原子が好ましい。

本発明の蛍光色素中、Ｒ^６で表される炭素数１から４のアルキル基としては直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基およびｔｅｒｔ−ブチル基を例示することができる。

Ｒ^６で表される（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基としては、２−アミノエチル基、３−アミノプロピル基、４−アミノブチル基、５−アミノペンチル基、６−アミノへキシル基、２−（ジメチルアミノ）エチル基、３−（ジメチルアミノ）プロピル基、４−（ジメチルアミノ）ブチル基、５−（ジメチルアミノ）ペンチル基、６−（ジメチルアミノ）へキシル基、２−（ジエチルアミノ）エチル基、３−（ジエチルアミノ）プロピル基、４−（ジエチルアミノ）ブチル基、５−（ジエチルアミノ）ペンチル基、６−（ジエチルアミノ）へキシル基、２−（ジプロピルアミノ）プロピル基、３−（ジプロピルアミノ）プロピル基、４−（ジプロピルアミノ）ブチル基、５−（ジプロピルアミノ）ペンチル基、６−（ジプロピルアミノ）へキシル基、２−（ジブチルアミノ）エチル基、３−（ジブチルアミノ）プロピル基、４−（ジブチルアミノ）ブチル基、５−（ジブチルアミノ）ペンチル基、６−（ジブチルアミノ）へキシル基、２−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］エチル基、２−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］エチル基、２−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］エチル基、３−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］プロピル基、４−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］ブチル基、５−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］ペンチル基、６−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］へキシル基、３−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］プロピル基、４−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］ブチル基、５−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］ペンチル基、６−［ビス（３−アミノプロピル）アミノ］へキシル基、３−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］プロピル基、４−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］ブチル基、５−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］ペンチル基および６−［ビス（４−アミノブチル）アミノ］へキシル基を例示することができる。また、（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基中のアミノ基は、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸またはメシル酸等のブレンステッド酸によってアンモニウム化されていてもよい。

Ｒ^６で表される炭素数７から８のアラルキル基としては、ベンジル基およびフェネチル基を例示することができる。蛍光強度が強い点で、Ｒ^６としては水素原子、メチル基またはトリフルオロ酢酸によってアンモニウム化されていてもよい３−アミノプロピル基が好ましい。

本発明の３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体は、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸またはメシル酸等のブレンステッド酸によってアンモニウム塩になっていてもよい。

次に、本発明の蛍光色素の製造方法（以下、単に本発明の製造方法という）について詳細に説明する。本発明の蛍光色素は、下記スキームにより製造することができる。

（式中、Ｒ^１ａ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。Ｒ^６ａは炭素数１から４のアルキル基；（炭素数１から４のアルキル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；炭素数７から８のアラルキル基；またはベンゾイル基を表し、Ｘはハロゲン原子を表す。）
Ｒ^１ａで表される炭素数１から３のアルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から４のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、メトキシメチル基、２−メトキシエチル基、エトキシメチル基、２−エトキシエチル基、３−メトキシプロピル基および４−メトキシブチル基を例示することができる。

Ｒ^１ａで表される炭素数３から６のアルキニル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、プロパルギル基、２−ブチニル基、３−ブチニル基、２−ペンチニル基、３−ペンチニル基、４−ペンチニル基、２−メチル−３−ブチニル基、２−ヘキシニル基、３−ヘキシニル基、４−ヘキシニル基、５−ヘキシニル基、４−メチル−２−ペンチニル基、１−メチル−３−ペンチニル基、２−メチル−３−ペンチニル基、１−メチル−４−ペンチニル基、２−メチル−４−ペンチニル基、３−メチル−４−ペンチニル基、１，１−ジメチル−２−ブチニル基、１，１−ジメチル−３−ブチニル基および１，２−ジメチル−３−ブチニル基を例示することができる。

Ｒ^１ａで表される（炭素数１から４のアルキル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基としては、２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル基、３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロピル基、４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル基、５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチル基、６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）へキシル基、２−（ジメチルアミノ）エチル基、３−（ジメチルアミノ）プロピル基、４−（ジメチルアミノ）ブチル基、５−（ジメチルアミノ）ペンチル基、６−（ジメチルアミノ）へキシル基、２−（ジエチルアミノ）エチル基、３−（ジエチルアミノ）プロピル基、４−（ジエチルアミノ）ブチル基、５−（ジエチルアミノ）ペンチル基、６−（ジエチルアミノ）へキシル基、２−（ジプロピルアミノ）エチル基、３−（ジプロピルアミノ）プロピル基、４−（ジプロピルアミノ）ブチル基、５−（ジプロピルアミノ）ペンチル基、６−（ジプロピルアミノ）へキシル基、２−（ジブチルアミノ）エチル基、３−（ジブチルアミノ）プロピル基、４−（ジブチルアミノ）ブチル基、５−（ジブチルアミノ）ペンチル基、６−（ジブチルアミノ）へキシル基を例示することができる。また、（炭素数１から４のアルキル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基中のアミノ基は、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸またはメシル酸等のブレンステッド酸によってアンモニウム化されていてもよい。

Ｒ^６ａで表される炭素数１から４のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基を例示することができる。

Ｒ^６ａで表される（炭素数１から４のアルキル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基としては、２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル基、３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロピル基、４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチル基、５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチル基、６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）へキシル基、２−（ジメチルアミノ）エチル基、３−（ジメチルアミノ）プロピル基、４−（ジメチルアミノ）ブチル基、５−（ジメチルアミノ）ペンチル基、６−（ジメチルアミノ）へキシル基、２−（ジエチルアミノ）エチル基、３−（ジエチルアミノ）プロピル基、４−（ジエチルアミノ）ブチル基、５−（ジエチルアミノ）ペンチル基、６−（ジエチルアミノ）へキシル基、２−（ジプロピルアミノ）エチル基、３−（ジプロピルアミノ）プロピル基、４−（ジプロピルアミノ）ブチル基、５−（ジプロピルアミノ）ペンチル基、６−（ジプロピルアミノ）へキシル基、２−（ジブチルアミノ）エチル基、３−（ジブチルアミノ）プロピル基、４−（ジブチルアミノ）ブチル基、５−（ジブチルアミノ）ペンチル基、６−（ジブチルアミノ）へキシル基を例示することができる。また、（炭素数１から４のアルキル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基中のアミノ基は、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸またはメシル酸等のブレンステッド酸によってアンモニウム化されていてもよい。

Ｒ^６ａで表される炭素数７から８のアラルキル基としては、ベンジル基、フェネチル基を例示することができる。

Ｘで表されるハロゲン原子としては、ヨウ素原子、臭素原子を例示することができる。中でも収率が良い点でヨウ素原子が好ましい。

本発明の３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体（１ａ）、エノン誘導体（３）およびヒドロキシアセトフェノン誘導体（４）は、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸またはメシル酸等のブレンステッド酸によってアンモニウム塩になっていてもよい。

工程−１は、ヒドロキシアセトフェノン誘導体（４）をアルデヒド誘導体（５）と塩基存在下反応させ、エノン誘導体（３）を製造する工程である。

本発明の製造方法の原料であるヒドロキシアセトフェノン誘導体（４）は、一部は市販されているが、文献記載の方法（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１６，７３５８−７３７０（２００８））を参考に調製することができる。

本発明の製造方法の原料であるアルデヒド誘導体（５）は、一部は市販されているが、文献記載の方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１３３，６６４２−６６４９（２０１１）、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ，５，７７７−７８０（２００３）、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１８，１６４１−１６５０（１９８８））を参考に、対応する４−アミノベンズアルデヒドまたは４−アミノハロベンゼンから調製することができる。

工程−１の反応は、塩基の存在下に行なうことが必須である。塩基としては、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムメトキシド、カリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物類、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム等のアルカリ金属炭酸塩を例示することができる。中でも収率が良い点で、ナトリウムメトキシド、水酸化ナトリウムが塩基として好ましい。

工程−１の反応は、反応を阻害しない溶媒であれば溶媒中で行なってもよい。本工程で用いることのできる溶媒として、具体的には、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン等のエーテル系溶媒、ヘキサン、ペンタン、シクロヘキサン等の炭化水素系溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン系溶媒、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン等の非プロトン性極性溶媒、メタノール、エタノール等のアルコール系溶媒、水を例示することができ、これらの溶媒の中から２種類以上を混合して用いてもよい。中でも収率が良い点で、ジメチルホルムアミド、エタノールが好ましい。

ヒドロキシアセトフェノン誘導体（４）とアルデヒド誘導体（５）とのモル比に特に制限はないが、１：１から１：１０の範囲が好ましく、中でも収率が良い点で１：１から１：３がさらに好ましい。ヒドロキシアセトフェノン誘導体（４）と塩基とのモル比も特に制限はないが、１：１から１：１０の範囲が好ましく、中でも収率が良い点で１：１から１：３がさらに好ましい。

工程−１の反応温度は、−７８℃から１５０℃の範囲から適宜選ばれた温度で行なうことができる。中でも収率が良い点で室温から１２０℃の範囲が好ましい。

工程−１の反応で得られるエノン誘導体（３）は、必要に応じて反応終了後、反応溶液から精製することができる。精製する方法には特に限定は無いが、溶媒抽出、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、薄層分取クロマトグラフィー、分取液体クロマトグラフィー、再結晶または昇華等の汎用的な方法で目的物を精製することができる。

工程−２は、エノン誘導体（３）を酸化して、３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体（１ａ）を製造する工程である。

工程−２の酸化は、酸化剤の存在下に行なうことが好ましい。用いることのできる酸化剤としては、過酸化水素、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド、３−クロロ過安息香酸、過安息香酸を例示することができる。収率が良い点で過酸化水素が好ましい。

また、塩基の存在下に行なうことにより収率を向上することができる。塩基としては、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムメトキシド、カリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物類、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム等のアルカリ金属炭酸塩を例示することができる。中でも収率が良い点で、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムが塩基として好ましい。

工程−２の反応は、反応を阻害しない溶媒であれば溶媒中で行なってもよい。本工程で用いることのできる溶媒として、具体的には、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン等のエーテル系溶媒、ヘキサン、ペンタン、シクロヘキサン等の炭化水素系溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン系溶媒、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン等の非プロトン性極性溶媒、メタノール、エタノール等のアルコール系溶媒、水を例示することができ、これらの溶媒の中から２種類以上を混合して用いてもよい。中でも収率が良い点で、エタノールが好ましい。

エノン誘導体（３）と酸化剤とのモル比に特に制限はないが、１：１から１：３０の範囲が好ましく、中でも収率が良い点で１：１０から１：１５がさらに好ましい。エノン誘導体（３）と塩基とのモル比も特に制限はないが、１：１から１：３０の範囲が好ましく、中でも収率が良い点で１：１０から１：１５がさらに好ましい。

工程−２の反応温度は、−７８℃から１５０℃の範囲から適宜選ばれた温度で行なうことができる。中でも収率が良い点で室温から１２０℃の範囲が好ましい。

工程−２の反応で得られる３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体（１ａ）は、必要に応じて反応終了後、反応溶液から精製することができる。精製する方法には特に限定は無いが、溶媒抽出、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、薄層分取クロマトグラフィー、分取液体クロマトグラフィー、再結晶または昇華等の汎用的な方法で目的物を精製することができる。

工程−３は、３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体（１ａ）とハロゲン化物（６）を塩基存在下で反応させ、４Ｈ−クロモン誘導体（１ｂ）を製造する工程である。

工程−３の反応は、塩基の存在下に行なうことが必須である。塩基としては、水素化ナトリウム、水素化カリウム等のアルカリ金属水素化物、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムメトキシド、カリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物類、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム等のアルカリ金属炭酸塩を例示することができる。中でも収率が良い点で、炭酸カリウムが塩基として好ましい。

工程−３の反応は、反応を阻害しない溶媒であれば溶媒中で行なってもよい。本工程で用いることのできる溶媒として、具体的には、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン等のエーテル系溶媒、ヘキサン、ペンタン、シクロヘキサン等の炭化水素系溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン系溶媒、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン等の非プロトン性極性溶媒、メタノール、エタノール等のアルコール系溶媒、水を例示することができ、これらの溶媒の中から２種類以上を混合して用いてもよい。中でも収率が良い点で、ジメチルホルムアミドが好ましい。

３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体（１ａ）とハロゲン化物（６）とのモル比に特に制限はないが、１：１から１：１０の範囲が好ましく、中でも収率が良い点で１：１から１：３がさらに好ましい。３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体（１ａ）と塩基とのモル比も特に制限はないが、１：１から１：１０の範囲が好ましく、中でも収率が良い点で１：３から１：５がさらに好ましい。

工程−３の反応温度は、−７８℃から１５０℃の範囲から適宜選ばれた温度で行なうことができる。中でも収率が良い点で室温から１００℃の範囲が好ましい。

工程−３の反応で得られる４Ｈ−クロモン誘導体（１ｂ）は、必要に応じて反応終了後、反応溶液から精製することができる。精製する方法には特に限定は無いが、溶媒抽出、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、薄層分取クロマトグラフィー、分取液体クロマトグラフィー、再結晶または昇華等の汎用的な方法で目的物を精製することができる。

Ｒ^６が（炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基である本発明の蛍光色素の場合、下記スキームに示した方法により製造することができる。

（式中、Ｒ^１ａ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、Ｘ、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。Ｒ^７は炭素数２から４のアミノアルキル基を表し、ｌは１から５までの整数を表す。）
Ｒ^７で表される炭素数２から４のアミノアルキル基としては、２−アミノエチル基、３−アミノプロピル基、４−アミノブチル基を例示することができる。

酸としては、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸およびメシル酸等のブレンステッド酸を用いることができる。

Ｒ^１が水素原子である本発明の蛍光色素の場合、下記スキームに示した方法により製造することができる。

（式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、Ｒ^６、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。）
酸としては、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸およびメシル酸等のブレンステッド酸を用いることができる。

Ｒ^１が（炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基である本発明の蛍光色素の場合、下記スキームに示した方法により製造することができる。

（式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、Ｒ^６、Ｘ、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。Ｒ^８は炭素数２から４のアミノアルキル基を表し、ｋは１から５までの整数を表す。）
Ｒ^８で表される炭素数２から４のアミノアルキル基としては、２−アミノエチル基、３−アミノプロピル基、４−アミノブチル基を例示することができる。

酸としては、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸およびメシル酸等のブレンステッド酸を用いることができる。

Ｒ^１が下記式（２）

で表される置換（トリアゾール−４−イル）メチル基である本発明の蛍光色素の場合、下記スキームで示した方法により製造することができる。

（式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、Ｒ^６、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。）
銅塩としては、ヨウ化銅（Ｉ）、臭化銅（Ｉ）等の１価の銅塩、または、アスコルビン酸ナトリウム等の還元剤存在下にて硫酸銅（ＩＩ）五水和物等の２価の銅塩を用いることができる。

酸としては、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸およびメシル酸等のブレンステッド酸を用いることができる。

Ｒ^１が（２−ブロモアセチル）アミノエチル基の場合、下記スキームで示した方法により製造することができる。

（式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、Ｒ^６、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。）
本発明の４Ｈ−クロモン誘導体のアンモニウム塩は、対応するアミノ基を塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、トシル酸およびメシル酸等のブレンステッド酸によってアンモニウム化することで製造することができる。

本発明の蛍光色素（１）は、二本鎖核酸と分子間相互作用することにより顕著な蛍光増感を示すので、二本鎖核酸の検出に用いることができる。分子間相互作用の方法に特に制限はないが、例えば、静電相互作用、インターカレーション、マイナーグルーブバインディング、メジャーグルーブバインディング等が挙げられる。好ましくはマイナーグルーブバインディング、メジャーグルーブバインディングである。検出対象の二本鎖核酸は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドのいずれであってもよく、ＰＣＲ等に代表される核酸増幅反応により合成された二本鎖核酸、化学的に合成された二本鎖核酸、血液、組織、細胞等の生体由来試料から抽出された二本鎖核酸、食品、土壌、排水等から分離された微生物由来試料から抽出された二本鎖核酸等を用いることができる。

本発明の蛍光色素（１）と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、当該蛍光色素（１）の蛍光増感を観測する溶媒に特に制限はないが、緩衝液を用いることが好ましい。当該緩衝液としては、トリス−塩酸緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液を例示することができる。また、検出対象の二本鎖核酸の熱的安定性の向上を目的に、前述の緩衝液に任意の濃度で無機塩を添加してもよい。用いることのできる無機塩としては、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、臭化ナトリウム、臭化マグネシウム、臭化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウムを例示することができ、これらの無機塩の中から２種類以上を混合して用いてもよい。なお、無機塩の添加濃度は５Ｍまでの範囲が好ましい。前述の緩衝液に、さらに０％から８０％の割合で当該緩衝液と混和可能な有機溶媒を添加してもよい。当該有機溶媒としては、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、ヘキサメチルリン酸トリアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフランを例示することができ、これらの中から２種類以上を混合してもよい。有機溶媒の添加割合は、検出対象の二本鎖核酸が安定して存在する点で、０％から２０％の範囲が好ましい。

本発明の蛍光色素（１）と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、本発明の蛍光色素（１）の蛍光増感を観測する温度に特に制限はないが、検出対象の二本鎖核酸の融解温度（Ｔｍ値）以下である０℃から８０℃が好ましく、０℃から６０℃の範囲が特に好ましい。

本発明の４Ｈ−クロモン誘導体は、ストークスシフトが大きく、可視光励起が可能な緑色、黄色または赤色蛍光を示し、核酸存在下、大きな蛍光増感率を示す核酸検出用蛍光色素として用いることができる。

次に本発明を実施例および比較例によってさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例１

２’−ヒドロキシ−４’−（メトキシメトキシ）アセトフェノン（化合物１）（２．１ｇ，１１ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（１．９ｇ，１１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１１ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１．８ｇ，３３ｍｍｏｌ）を加えて、室温で３．５時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、更に水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム）で精製して、（２Ｅ，４Ｅ）−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−［２−ヒドロキシ−４−（メトキシメトキシ）フェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物３）（２．２ｇ，収率５６％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ１３．５２（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，１４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，１５．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．６２（ｄｄ，Ｊ＝２．５，９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｓ，２Ｈ），３．３９（ｓ，３Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ）．
実施例２

（２Ｅ，４Ｅ）−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−［２−ヒドロキシ−４−（メトキシメトキシ）フェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物３）（２．２ｇ，６．２ｍｍｏｌ）をエタノール（４０ｍＬ）に懸濁させ、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１５．５ｍＬ，６２ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（７．０ｍＬ，６２ｍｍｏｌ）を加えて、３０分間加熱還流した。反応終了後、反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、クロロホルム（８０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１．７％メタノール／クロロホルム、２％メタノール／クロロホルムの順）で精製することにより、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−７−（メトキシメトキシ）−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４）（９３３ｍｇ，４１％）を橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．３６（ｓ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ）．
実施例３

（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−７−（メトキシメトキシ）−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４）（１００ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸−テトラヒドロフラン−水（２ｍＬ、８：１：１ｖ／ｖ）に溶解し、室温で３０分間撹拌した。反応終了後、反応混合液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて液性をｐＨ７とした後、水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、減圧下乾燥して（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３，７−ジヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物５）（７８ｍｇ，８９％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ１０．６９（ｂｒｓ，１Ｈ），９．１０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄｄ，Ｊ＝２．２，８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ）．
実施例４

２’−ヒドロキシ−４’−（２−プロピニルオキシ）アセトフェノン（化合物６）（１００ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（９２ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（８６ｍｇ，１．６ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２．５時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とした後、水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム）で精製して、（２Ｅ，４Ｅ）−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−［２−ヒドロキシ−４−（２−プロピニルオキシ）フェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物８）（１０５ｍｇ，収率５７％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ１３．６３（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，１４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，１５．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．２，９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９１（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，２Ｈ），３．６５（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ）．
実施例５

（２Ｅ，４Ｅ）−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−［２−ヒドロキシ−４−（２−プロピニルオキシ）フェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物８）（９０ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）をエタノール（２ｍＬ）に懸濁させ、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．６５ｍＬ，２．６ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（２９５ｍｇ，２．６ｍｍｏｌ）を加えて、４時間加熱還流した。反応終了後、反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、更に水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、得られた固体を減圧下乾燥して、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−７−（２−プロピニルオキシ）−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物９）（４３ｍｇ，４６％）を赤橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２３（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．９９（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６９（ｔ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ）．
実施例６

（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−７−（２−プロピニルオキシ）−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物９）（４３ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド−水（１．６ｍＬ，４：１（ｖ／ｖ））に溶解し、Ｎ−（３−アジドプロピル）−Ｎ，Ｎ’−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ’−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロピル］ブタン−１，４−ジアミン（化合物１０）（７３ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（４８ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）、硫酸銅（ＩＩ）五水和物（３０ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に水を加えて沈殿物を析出させ、ろ過により沈殿物を回収した。得られた固体を分取薄層クロマトグラフィー［クロロホルム−メタノール（２０：１）］で精製してＢｏｃ保護化合物体（化合物１１）（５９ｍｇ，５５％）を得た。得られたＢｏｃ保護化合物体（化合物１１）（５９ｍｇ，６６μｍｏｌ）をジクロロメタン（１．２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．３ｍＬ）を加えて室温で６時間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（［１−［３−［４−［３−アンモニオプロピル］アンモニオブチル］アンモニオプロピル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル］メチルオキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリス（トリフルオロアセテート）（化合物１２）（４３ｍｇ，７０％）を紫色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．５１（ｂｒｓ，１Ｈ），８．５３−８．７６（ｍ，４Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｂｒｓ，３Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），５．３４（ｓ，２Ｈ），４．５１（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ），２．８２−３．０７（ｍ，８Ｈ），２．１４−２．２４（ｍ，２Ｈ），１．８１−１．９１（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．６５（ｍ，４Ｈ）．
実施例７

３’−ヒドロキシ−６’−（２−プロピニルオキシ）−２’−アセトナフトン（化合物１３）（７０ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（５６ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（４７ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）を加えて、室温で３時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とした後、水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム）で精製して、（２Ｅ，４Ｅ）−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−［２−ヒドロキシ−７−（２−プロピニルオキシ）ナフタレン−３−イル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物１４）（１００ｍｇ，収率８７％）を黒紫色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ１２．２３（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｓ，１Ｈ），７．０５（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．９３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ）．
実施例８

（２Ｅ，４Ｅ）−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−［２−ヒドロキシ−７−（２−プロピニルオキシ）ナフタレン−３−イル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物１４）（８０ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）をエタノール（２ｍＬ）に懸濁させ、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．５０ｍＬ，２．０ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（２２７ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）を加えて、１．５時間加熱還流した。反応終了後、反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、得られた固体を減圧下乾燥して、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−８−（２−プロピニルオキシ）−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物１５）（４５ｍｇ，５５％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ８．６８（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１５（ｍ，１Ｈ），８．０２（ｍ，１Ｈ），７．３８−７．６５（ｍ，５Ｈ），７．１５−７．３３（ｍ，２Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．９９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６６（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ）．
実施例９

（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−８−（２−プロピニルオキシ）−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物１５）（４５ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド−水（１ｍＬ，４：１ｖ／ｖ）に溶解し、Ｎ−（３−アジドプロピル）−Ｎ，Ｎ’−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ’−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロピル］ブタン−１，４−ジアミン （化合物１０）（６８ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（４．４ｍｇ，２２μｍｏｌ）、硫酸銅（ＩＩ）五水和物（２．７ｍｇ，１１μｍｏｌ）を加えて、室温で１時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に水を加えて沈殿物を析出させ、ろ過により沈殿物を回収した。得られた固体を分取薄層クロマトグラフィー［６．３％メタノール／クロロホルム］で精製してＢｏｃ保護化合物体（化合物１６）（５２ｍｇ，５０％）を得た。得られたＢｏｃ保護化合物体（化合物１６）（５２ｍｇ，５５μｍｏｌ）をジクロロメタン（１．２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．３ｍＬ）を加えて室温で６時間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−８−（［１−［３−［４−［３−アンモニオプロピル］アンモニオブチル］アンモニオプロピル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル］メチルオキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン＝トリス（トリフルオロアセテート）（化合物１７）（４０ｍｇ，７４％）を紫色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２９（ｂｒｓ，１Ｈ），８．７０（ｓ，１Ｈ），８．５５（ｂｒｓ，４Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｂｒｓ，３Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），５．３５（ｓ，２Ｈ），４．５２（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，４Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ），２．８１−３．０９（ｍ，８Ｈ），２．１３−２．２３（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．９２（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．６５（ｍ，４Ｈ）．
実施例１０

４’−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２’−ヒドロキシアセトフェノン（化合物１８）（２４８ｍｇ，０．８４ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（１４７ｍｇ，０．８４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１３６ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で３０分間、８０℃で１２時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とした後、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を水（２５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［１４％酢酸エチル／ヘキサン、５０％酢酸エチル／ヘキサンの順］で精製して、（２Ｅ，４Ｅ）−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−［２−ヒドロキシ−４−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］フェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物１９）（１６７ｍｇ，収率４４％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１３．６７（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１４．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．４５（ｄｄ，Ｊ＝２．５，８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｂｒｓ，１Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．５５（ｍ，２Ｈ），３．０３（ｓ，６Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）．
実施例１１

（２Ｅ，４Ｅ）−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−［２−ヒドロキシ−４−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］フェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物１９）（１６７ｍｇ，０．３７ｍｍｏｌ）をエタノール（２ｍＬ）に懸濁させ、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．９２ｍＬ，３．７ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（４２０ｍｇ，３．７ｍｍｏｌ）を加えて、２．５時間加熱還流した。反応終了後、反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、得られた固体を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物２０）（３５ｍｇ，２０％）を茶色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０９（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝２．２，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．１０−４．１７（ｍ，２Ｈ），３．３４−３．３９（ｍ，２Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ）．
実施例１２

（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物２０）（３５ｍｇ，７５μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で１時間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（２−アンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物２１）（２５ｍｇ，６９％）を茶色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２８（ｂｒｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８８−８．１７（ｍ，３Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．３３（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２４−３．３５（ｍ，２Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ）．
実施例１３

６’−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−３’−ヒドロキシ−２’−アセトナフトン（化合物２２）（５１１ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（２８５ｍｇ，１．６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（２４３ｍｇ，４．５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で２．５時間撹拌した。次いで、反応混合液にエタノール（７．５ｍＬ）、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（３．８ｍＬ，１５ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（１．７ｇ，１５ｍｍｏｌ）を加えて、更に１．５時間加熱還流した。反応終了後、反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２．５％メタノール／クロロホルム、５％メタノール／クロロホルムの順）で精製して、（Ｅ）−８−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物２３）（３０１ｍｇ，３９％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２６（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄｄ，Ｊ＝２．５，９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．１４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｄｔ，Ｊ＝５．５，５．７Ｈｚ，２Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）．
実施例１４

（Ｅ）−８−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物２３）（３００ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加えて、室温で１時間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−８−（２−アンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物２４）（２８２ｍｇ，９５％）を茶褐色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．３０（ｂｒｓ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．９５−８．０７（ｍ，３Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３５（ｍ，２Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ）．
実施例１５

（Ｅ）−８−（２−アンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物２４）（５３ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５２μＬ，０．３ｍｍｏｌ）を加えて０℃に冷却した。ブロモアセチルブロミド（１０μＬ，０．１２ｍｍｏｌ）を加えてそのまま１時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に水（１０ｍＬ）を加えて反応を停止させ、クロロホルム（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（３％メタノール／クロロホルム）で精製して（Ｅ）−２−ブロモ−Ｎ−［２−［２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−８−イルオキシ］エチル］アセトアミド（化合物２５）（７．１ｍｇ，１３％）を紫色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２７（ｂｒｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．５９−８．６７（ｍ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ＝２．４，９．１Ｈｚ，１Ｈ）， ７．１６（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）， ３．０２（ｓ，２Ｈ），３．５７（ｑ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ）．
実施例１６

６’−［２−（ジエチルアミノ）エトキシ］−３’−ヒドロキシ−２’−アセトナフトン（化合物２６）（３９ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（２５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（２１ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）を加えて、８０℃で６時間撹拌した。次いで、反応混合液にエタノール（１．５ｍＬ）、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．３３ｍＬ，１．３ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（１４７ｇ，１．３ｍｍｏｌ）を加えて、更に１時間加熱還流した。反応終了後、反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、クロロホルム（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（６％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−８−［２−（ジエチルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オンを赤褐色固体として得た。得られた（Ｅ）−８−［２−（ジエチルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オンをジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で１時間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−８−（２−ジエチルアンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物２７）（１ｍｇ，１．４％）を紫色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２７（ｂｒｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｍ，２Ｈ），３．３２（ｍ，４Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ），２．８６（ｍ，２Ｈ），１．００（ｍ，６Ｈ）．
実施例１７

３’−ヒドロキシ−６’−［２−（ジブチルアミノ）エトキシ］−２’−アセトナフトン（化合物２８）（３３ｍｇ，９２μｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（１８ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１５ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）を加えて、８０℃で２時間撹拌した。反応混合液にエタノール（１ｍＬ）、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．２３ｍＬ，０．９２ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（１０４ｇ，０．９２ｍｍｏｌ）を加えて、１．５時間加熱還流した。反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（２％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−８−［２−（ジブチルアミノ）エトキシ］−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オンを赤褐色固体として得た。得られた（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−８−［２−（ジブチルアミノ）エトキシ］−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オンをジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で１時間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−８−（２−ジブチルアンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物２９）（２．１ｍｇ，３．６％）を紫色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．３４（ｂｒｓ，１Ｈ），９．３０（ｓ，１Ｈ），８．７２（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｍ，２Ｈ），３．２１（ｍ，４Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ），１．６８（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４Ｈ），１．３６（ｓｅｘｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例１８

４’−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシ］−２’−ヒドロキシアセトフェノン（化合物３０）（１．２４ｇ，４．０ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（７０２ｍｇ，４．０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（６４８ｍｇ，１２ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間、８０℃で３０分間撹拌した。反応終了後、反応混合液に１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ１とした後、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を１Ｍ塩酸（２５ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）、飽和食塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１６％酢酸エチル／ヘキサン、２０％酢酸エチル／ヘキサンの順）で精製して、（２Ｅ，４Ｅ）−１−［４−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシ］−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−ヒドロキシフェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物３１）（８０ｍｇ，収率４．３％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１３．６９（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，１４，５Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，１５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｓ，１Ｈ），４．７２（ｂｒｓ，１Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ），３．０２（ｓ，６Ｈ），２．００（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）．
実施例１９

（２Ｅ，４Ｅ）−１−［４−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシ］−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−ヒドロキシフェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物３１）（８０ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）をエタノール（２ｍＬ）に懸濁させ、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．４３ｍＬ，１．７ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（１９４ｍｇ，１．７ｍｍｏｌ）を加えて、２時間加熱還流した。反応終了後、反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ１とし、更に水（２５ｍＬ）を加えて反応液を希釈し、クロロホルム（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒を留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−７−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物３２）（３４ｍｇ，４２％）を茶色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２４（ｂｒｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｍ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．１４（ｍ，２Ｈ），３．１２（ｍ，２Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ），１．８９（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）．
実施例２０

（Ｅ）−７−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物３２）（３４ｍｇ，７１μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で３０分間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（３−アンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物３３）（２４ｍｇ，７１％）を茶色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．９７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｂｒｓ，３Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｍ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１６．０，１Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝２．２，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．２３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３６（ｍ，２Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ），２．０５（ｍ，２Ｈ）．
実施例２１

４’−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルオキシ］−２’−ヒドロキシアセトフェノン（化合物３４）（７４２ｍｇ，２．２ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（３８５ｍｇ，２．２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（３５７ｍｇ，６．６ｍｍｏｌ）を加えて、８０℃で６時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ１とした後、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を１Ｍ塩酸（２５ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）、飽和食塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１５％酢酸エチル／ヘキサン、次に２５％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、（２Ｅ，４Ｅ）−１−［４−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルオキシ］−２−ヒドロキシフェニル］−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物３５）（１７４ｍｇ，収率１６％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１３．７０（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，１４．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，１５．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．４１−６．４６（ｍ，２Ｈ）４．５５（ｂｒｓ，１Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），３．１５（ｍ，２Ｈ），３．０３（ｓ，６Ｈ），１．８２（ｍ，２Ｈ），１．４０−１．５７（ｍ，４Ｈ），１，４５（ｓ，９Ｈ）．
実施例２２

（２Ｅ，４Ｅ）−１−［４−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルオキシ］−２−ヒドロキシフェニル］−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物３５）（１７４ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ）をエタノール（４ｍＬ）に懸濁させ、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．８８ｍＬ，３．５ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（３９７ｍｇ，３．５ｍｍｏｌ）を加えて、１．５時間加熱還流した。反応終了後、反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ１とし、更に水（２５ｍＬ）を加えて反応液を希釈し、クロロホルム（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒を留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−７−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルオキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物３６）（９３ｍｇ，５２％）を茶色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２２（ｂｒｓ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｍ，１Ｈ），７．１９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｍ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．１１（ｍ，２Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ），２．９６（ｍ，２Ｈ），１．７７（ｍ，２Ｈ），１．３９−１．５０（ｍ，４Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）．
実施例２３

（Ｅ）−７−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンチルオキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物３６）（９３ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で３０分間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（５−アンモニオペンチルオキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物３７）（５０ｍｇ，５３％）を茶色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｂｒｓ，３Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝２．１，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．１４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．９８（ｓ，６Ｈ），２．８３（ｍ，２Ｈ），１．８１（ｍ，２Ｈ），１．６２（ｍ，２Ｈ），１．４９（ｍ，２Ｈ）．
実施例２４

４’−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２’−ヒドロキシアセトフェノン（化合物１８）（２９５ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）−３−フルオロフェニル］−２−プロペナール（化合物３８）（１９３ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１６２ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ）を加えて、１００℃で３時間撹拌した。反応液を室温まで冷却した後、反応混合物にエタノール（５ｍＬ）で希釈した後、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２．５ｍＬ，１０ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（１．１５ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加え、更に２時間加熱還流した。反応終了後、反応液を０℃に冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、クロロホルム（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を水（２５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）−３−フルオロスチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物３９）（４８ｍｇ，１０％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．３９（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝２．２，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，９．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．３６（ｍ，２Ｈ），２．８７（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，６Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ）．
実施例２５

（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）−３−フルオロスチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物３９）（２６．３ｍｇ，５４μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で１時間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（２−アンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）−３−フルオロスチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物４０）（４．３ｍｇ，１７％）を茶色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．４６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．０３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｍ，２Ｈ），３．３２（ｍ，２Ｈ），２．８８（ｓ，６Ｈ）．
実施例２６

４’−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２’−ヒドロキシアセトフェノン（化合物１８）（２００ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）−２−フルオロフェニル］−２−プロペナール（化合物４１）（１３１ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１１０ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）を加えて、１００℃で５．５時間撹拌した。反応液を室温まで冷却した後、反応混合物にエタノール（５ｍＬ）で希釈した後、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１．７ｍＬ，６．８ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（７７０ｇ，６．８ｍｍｏｌ）を加え、更に１．５時間加熱還流した。反応終了後、反応液を０℃に冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、クロロホルム（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を水（２５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）−２−フルオロスチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４２）（９．１ｍｇ，３％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．３０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｍ，１Ｈ），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｄｄ，Ｊ＝２．５，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．５６（ｄｄ，Ｊ＝２．５，１５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｍ，２Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ）．
実施例２７

（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）−２−フルオロスチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４２）（９．１ｍｇ，１９μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で１時間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（２−アンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）−２−フルオロスチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物４３）（７．４ｍｇ，８４％）を茶色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｂｒｓ，３Ｈ），７．６２（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｄｄ，Ｊ＝２．２，９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｄｄ，Ｊ＝２．２，１５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ）．
実施例２８

（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物２０）（３０ｍｇ，６４μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（２７ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（６μＬ，９６μｍｏｌ）を加えて室温で８時間撹拌した。反応液に水（１０ｍＬ）を加えて沈殿物を析出させ、ろ過により沈殿物を回収後、得られた固体を分取薄層クロマトグラフィー（４％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−メトキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４４）（１８ｍｇ，５９％）を橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．９３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．３６（ｍ，２Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）．
実施例２９

（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−メトキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４４）（１８ｍｇ，３７μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で３０分間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（２−アンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−メトキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物４５）（１１ｍｇ，６２％）を橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．９９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｂｒｓ，３Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．３３（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．３６（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｓ，６Ｈ）．
実施例３０

（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物２０）（３０ｍｇ，６４μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（２７ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）、１−ヨードブタン（１１μＬ，９６μｍｏｌ）を加えて室温で８時間撹拌した。反応終了後、反応液に水（１０ｍＬ）を加えた後、クロロホルム（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（４％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−３−ブトキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４６）（２２ｍｇ，６３％）を橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．９２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３５（ｍ，２Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ），１．７２（ｍ，２Ｈ），１．５１（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例３１

（Ｅ）−３−ブトキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４６）（２２ｍｇ，４５μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で３０分間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（２−アンモニオエトキシ）−３−ブトキシ−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物４７）（１５ｍｇ，６４％）を橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ８．００（ｂｒｓ，３Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．３３（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｓ，６Ｈ），１．７２（ｍ，２Ｈ），１．５１（ｍ，２Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．
実施例３２

（Ｅ）−７−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物３２）（３０ｍｇ，６２μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（２７ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）、ヨウ化３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロピル（２７ｍｇ，９６μｍｏｌ）を加えて室温で８時間撹拌した。反応終了後、反応液に水（１０ｍＬ）を加えた後、クロロホルム（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−３，７−ビス［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４８）（１８ｍｇ，４５％）を褐色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．１１（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），５．９９（ｍ，１Ｈ），４．７３（ｍ，１Ｈ），４．１４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．１２（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），３．５０（ｍ，２Ｈ），３．３６（ｍ，２Ｈ），３．０５（ｓ，６Ｈ），２．０６（ｍ，２Ｈ），１．９７（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）．
実施例３３

（Ｅ）−３，７−ビス［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物４８）（１８ｍｇ，２９μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で３０分間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−３，７−ビス（３−アンモニオプロポキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン＝ビス（トリフルオロアセテート）（化合物４９）（５ｍｇ，２８％）を褐色油状物質として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．９７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｂｒｓ，３Ｈ），７．８０（ｂｒｓ，３Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２３（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），４．１１（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．１１（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｓ，６Ｈ），３．００（ｍ，２Ｈ），２．００−２．１３（ｍ，４Ｈ）．
実施例３４

３’−ヒドロキシ−６’−（２−プロピニルオキシ）−２’−アセトナフトン（化合物１３）（８０ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）と４−ジメチルアミノベンズアルデヒド（化合物５０）（５０ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）をエタノール（１ｍＬ）に溶解し、４Ｍ水酸化カリウム水溶液（０．２５ｍＬ，０．９９ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１２時間、加熱還流下５時間反応させた。反応液を室温に冷却した後、４Ｍ水酸化カリウム水溶液（０．８３ｍＬ，３．３ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（３７４ｍｇ，３．３ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とした後、水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、得られた固体をメタノールで洗浄して、２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−ヒドロキシ−８−（２−プロピニルオキシ）−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物５１）（２２ｍｇ，収率１７％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．１０（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．５，９．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），４．９９（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６６（ｔ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ）．
実施例３５

２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−ヒドロキシ−８−（２−プロピニルオキシ）−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物５１）（２２ｍｇ，５７μｍｏｌ）をジメチルスルホキシド−水（１ｍＬ，４：１ｖ／ｖ）に溶解し、Ｎ−（３−アジドプロピル）−Ｎ，Ｎ’−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ’−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロピル］ブタン−１，４−ジアミン（化合物１０）（２９ｍｇ，５７μｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（１１ｍｇ，５７μｍｏｌ）、硫酸銅（ＩＩ）五水和物（１．４ｍｇ，５．７μｍｏｌ）を加えて、室温で５時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に水を加えて沈殿物を析出させ、ろ過により沈殿物を回収した。得られた固体を分取薄層クロマトグラフィー［５％メタノール／クロロホルム］で精製してＢｏｃ保護化合物体（化合物５２）（２４ｍｇ，４６％）を得た。得られたＢｏｃ保護化合物体（化合物５２）（２４ｍｇ，２６μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて室温で５時間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、８−（［１−［３−［４−［３−アンモニオプロピル］アンモニオブチル］アンモニオプロピル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル］メチルオキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン＝トリス（トリフルオロアセテート）（化合物５３）（１５ｍｇ，６０％）を紫色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．１２（ｂｒｓ，１Ｈ），８．７２（ｓ，１Ｈ），８．４９−８．６７（ｍ，４Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｂｒｓ，３Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），５．３５（ｓ，２Ｈ），４．５２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．０５（ｓ，６Ｈ），２．８０−３．０２（ｍ，１０Ｈ），２．１３−２．２４（ｍ，２Ｈ），１．８１−１．９１（ｍ，２Ｈ），１．５４−１．６６（ｍ，４Ｈ）．
実施例３６

６’−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−３’−ヒドロキシ−２’−アセトナフトン（化合物２２）（４９４ｍｇ，１．４ｍｍｏｌ）と４−ジメチルアミノベンズアルデヒド（化合物５０）（２３５ｍｇ，１．６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した後、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５１３ｍｇ，４．２ｍｍｏｌ）を加えて、０℃で３０分間撹拌した。反応液に水を加えて沈殿を析出させ、ろ過により回収した。得られた固体をフラッシュクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−（２−ヒドロキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシナフタレン−３−イル］プロパ−２−エン−１−オン（化合物５４）（６４８ｍｇ，９７％）を橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ１２．５８（ｓ，１Ｈ），８．９２（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝ １５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝２．４，９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．０９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．３７（ｑ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．０５（ｓ，６Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ）．
実施例３７

（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１−（２−ヒドロキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシナフタレン−３−イル］プロパ−２−エン−１−オン（化合物５４）（８６ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）をエタノール（１ｍＬ）に懸濁させ、３０％過酸化水素水（２０４ｍｇ，１．８ｍｍｏｌ）、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．４５ｍＬ，１．８ｍｍｏｌ）を加えて１時間加熱還流した。反応液を室温に冷却後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ７とし、水を加えて沈殿物を析出させた。析出した沈殿物をろ取した後、得られた固体をフラッシュクロマトグラフィー（２％メタノール／クロロホルム）で精製して、８−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物５５）（２０ｍｇ，２３％）を黄色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．０６（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄｄ，Ｊ＝２．５，９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），４．１４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｑ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）．
実施例３８

８−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物５５）（２０ｍｇ，４１μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて室温で３０分間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、８−（２−アンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物５６）（１４ｍｇ，６８％）を黄色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ８．７３（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄｄ，Ｊ＝２．４，９．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），４．３４（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．３３（ｑ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ）．
実施例３９

８−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物５５）（５０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（４２ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）、ベンジルブロミド（１８μＬ，０．１５ｍｍｏｌ）を加えて室温で２４時間撹拌した。反応終了後、反応液に水（２０ｍＬ）を加えた後、クロロホルム（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム、次いで５％酢酸エチル／クロロホルム）で精製して、３−ベンジルオキシ−８−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物５７）（４３ｍｇ，７４％）を黄色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．６８（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），７．４２−７．４６（ｍ，３Ｈ），７．２９−７．４０（ｍ，３Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０７−７．１３（ｍ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），５．０７（ｓ，２Ｈ），４．１４（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．４０（ｑ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）．
実施例４０

３−ベンジルオキシ−８−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン（化合物５７）（４３ｍｇ，７４μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて室温で３０分間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、８−（２−アンモニオエトキシ）−３−ベンジルオキシ−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−４Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物５８）（１９ｍｇ，５１％）を黄色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ８．７２（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），８．０１（ｂｒｓ，３Ｈ），７．４５−７．５１（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，４Ｈ），７．２７（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．３５−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．０５（ｓ，６Ｈ）．
実施例４１

（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物２０）（３０ｍｇ，６４μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（２７ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）、ベンジルブロミド（１１μＬ，９６μｍｏｌ）を加えて室温で１２時間撹拌した。反応終了後、反応液に水（２０ｍＬ）を加えた後、クロロホルム（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−３−ベンジルオキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物５９）（２５ｍｇ，７０％）を橙色固体として得た。得られた（Ｅ）−３−ベンジルオキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物５９）（２５ｍｇ，４５μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて室温で３０分間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（２−アンモニオエトキシ）−３−ベンジルオキシ−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物６０）（１５ｍｇ，５８％）を橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ８．０３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｂｒｓ，３Ｈ），７．４８−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．４７（ｍ，６Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝１６，１Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），５．１６（ｓ，２Ｈ），４．３３（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．２９−３．３５（ｍ，２Ｈ），３．００（ｓ，６Ｈ）．
実施例４２

（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物２０）（３０ｍｇ，６４μｍｏｌ）をピリジン（１ｍＬ）に溶解し、塩化ベンゾイル（１１μＬ，９６μｍｏｌ）を加えて室温で１２時間撹拌した。反応終了後、反応液に水（２０ｍＬ）を加えた後、クロロホルム（２０ｍＬ×３）で抽出し、１Ｍ塩酸（１０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）、飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−３−ベンゾイルオキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物６１）（２０ｍｇ，５５％）を橙色固体として得た。得られた（Ｅ）−３−ベンゾイルオキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物６１）（２０ｍｇ，３５μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて室温で３０分間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、８−（２−アンモニオエトキシ）−３−ベンゾイルオキシ−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物６２）（１９ｍｇ，５１％）を橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ８．１８−８．２２（ｍ，２Ｈ），８．０３（ｂｒｓ，３Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７８−７．８４（ｍ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６４−７．６９（ｍ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．３８（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２９−３．４３（ｍ，２Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ）．
実施例４３

（Ｅ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物２０）（５６ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（５０ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）、（２−ブロモエチル）ベンゼン（２４μＬ，０．１８ｍｍｏｌ）を加えて室温で１２時間撹拌した。反応終了後、反応液に水（２０ｍＬ）を加えた後、クロロホルム（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−（２−フェニルエトキシ）−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物６３）（５３ｍｇ，７７％）を橙色固体として得た。得られた（Ｅ）−７−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−（２−フェニルエトキシ）−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物６３）（５３ｍｇ，９３μｍｏｌ）をジクロロメタン（１．２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．３ｍＬ）を加えて室温で３０分間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、８−（２−アンモニオエトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−３−（２−フェニルエトキシ）−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物６４）（２５ｍｇ，４５％）を橙色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ７．９９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｂｒｓ，３Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，５Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．０５（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），４．３２（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），３．３１（ｑ，Ｊ−５．１Ｈｚ，２Ｈ），３．０５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０１（ｓ，６Ｈ）．
実施例４４

４’−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチルオキシ］−２’−ヒドロキシアセトフェノン（化合物６５）（１．２９ｇ，３．９ｍｍｏｌ）と（Ｅ）−３−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−プロペナール（化合物７）（６９９ｍｇ，３．９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．３６ｇ，１１ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間撹拌した。反応終了後、反応混合液に１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ１とした後、クロロホルム（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を１Ｍ塩酸（２５ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）、飽和食塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン、次に２５％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、（２Ｅ，４Ｅ）−１−［４−［５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブチルオキシ］−２−ヒドロキシフェニル］−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物６６）（５００ｍｇ，収率２８％）を赤色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１３．６８（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１４．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝１４．４，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１５．３Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．４１−６．４６（ｍ，２Ｈ），４．５９（ｂｒｓ，１Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．１５−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．０３（ｓ，６Ｈ），１．７８−１．８８（ｍ，２Ｈ），１．６３−１．７２（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）．
実施例４５

（２Ｅ，４Ｅ）−１−［４−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブトキシ］−５−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−２−ヒドロキシフェニル］ペンタ−２，４−ジエン−１−オン（化合物６６）（１００ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）をエタノール（１ｍＬ）に懸濁させ、４Ｍ水酸化カリウム水溶液（０．５３ｍＬ，２．１ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（２３６ｍｇ，２．１ｍｍｏｌ）を加えて、１．５時間加熱還流した。反応終了後、反応混合液を室温まで冷却した後、１Ｍ塩酸を加えて液性をｐＨ１とし、更に水（２５ｍＬ）を加えて反応液を希釈し、クロロホルム（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒を留去し、得られた残渣を分取薄層クロマトグラフィー（５％メタノール／クロロホルム）で精製して、（Ｅ）−７−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物６７）（４９ｍｇ，４７％）を茶色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２１（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１６−７．２１（ｍ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５−６．９２（ｍ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．１３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９９−３．０４（ｍ，２Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ），１．７０−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．５０−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）．
実施例４６

（Ｅ）−７−［３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ブトキシ］−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン（化合物６７）（４９ｍｇ，９９μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて、室温で３０分間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣にジエチルエーテルを加えて固化させ、（Ｅ）−７−（３−アンモニオブトキシ）−２−［４−（ジメチルアミノ）スチリル］−３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロメン−４−オン＝トリフルオロアセテート（化合物６８）（３８ｍｇ，７８％）を茶色固体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ９．２３（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｂｒｓ，３Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．１８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９９（ｓ，６Ｈ），２．８４−２，９５（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．６８−１．７８（ｍ，２Ｈ）．
実施例４７
４Ｈ−クロモン誘導体（１）に二本鎖ＤＮＡ（ＤＮＡ−ＤＮＡ）を添加した時の蛍光特性を評価した。
（ａ）方法
以下の条件で、本発明の４Ｈ−クロモン誘導体（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）に二本鎖ＤＮＡ（ＤＮＡ−ＤＮＡ）を添加して励起・蛍光スペクトルを測定した。

二本鎖ＤＮＡ：
５’−ｄ（ＣＧＡＣＧＣＡＧＧＧＡＴＧＴＴＡＡＧＴＡＴＡＡＣＡＴＴＴＧＣ）− ３’（センス鎖、配列番号１）と５’−ｄ（ＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＴＡＣＴＴＡＡ ＣＡＴＣＣＣＴＧＣＧＴＣＧ）−３’（アンチセンス鎖、配列番号２）とからなる 二本鎖ＤＮＡ
測定溶液：
ＴＥバッファー（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ
８．０），１％ ＤＭＳＯ
色素濃度：２．０μＭ
二本鎖核酸の濃度：１．０μＭ
測定温度：２５℃
石英セル光路長：１．０ｃｍ
（ｂ）結果
本発明の４Ｈ−クロモン誘導体（本発明の蛍光色素）（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）のみでの最大励起波長、最大蛍光波長、ストークスシフトおよび蛍光強度、ならびに二本鎖ＤＮＡ（ＤＮＡ−ＤＮＡ）添加時の各化合物の最大励起波長、最大蛍光波長、ストークスシフト、蛍光強度および蛍光増感率（二本鎖ＤＮＡ（ＤＮＡ−ＤＮＡ）添加時の蛍光強度を色素のみ（添加物なし）での蛍光強度値で割った値）を表１に示す。

実施例４８
４Ｈ−クロモン誘導体（１）にＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドを添加した時の蛍光特性を評価した。
（ａ）方法
以下の条件で、本発明の４Ｈ−クロモン誘導体（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）にＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドを添加して励起・蛍光スペクトルを測定した。

ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド：
５’−ｄ（ＧＡＣＧＣＣＡＴＣＴＴＣＡＴＴＣＡＣ）−３’（センス鎖、配列番号 ３）と５’−ｒ（ＧＵＧＡＡＵＧＡＡＧＡＵＧＧＣＧＵＣ）−３’（アンチセンス 鎖、配列番号４）とからなるＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド
測定溶液：
ＴＥバッファー（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ
８．０），１％ ＤＭＳＯ
色素濃度：２．０μＭ
二本鎖核酸の濃度：１．０μＭ
測定温度：２５℃
石英セル光路長：０．５ｃｍ
（ｂ）結果
本発明の４Ｈ−クロモン誘導体（本発明の蛍光色素）（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）のみでの最大励起波長、最大蛍光波長、ストークスシフトおよび蛍光強度、ならびにＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド添加時の各化合物の最大励起波長、最大蛍光波長、ストークスシフト、蛍光強度および蛍光増感率（ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド添加時の蛍光強度を色素のみ（添加物なし）での蛍光強度値で割った値）を表２に示す。

実施例４９
４Ｈ−クロモン誘導体（１）にＤＮＡを添加した時の蛍光特性を評価した。
（ａ）方法
以下の条件で、本発明の４Ｈ−クロモン誘導体（１）（化合物１２、化合物１７、化合物２１、化合物２４、化合物２７、化合物３３、化合物３７、化合物４０、化合物４３、化合物４５、化合物４７、化合物４９）にＤＮＡを添加して励起・蛍光スペクトルを測定した。

ＤＮＡ：デオキシリボ核酸ナトリウム塩（サケ精巣由来）
測定溶液：
ＴＥバッファー（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ
８．０），１％ ＤＭＳＯ
色素濃度：５．０μＭ
ＤＮＡの濃度：２００μｇ／ｍＬ
測定温度：２５℃
石英セル光路長：１．０ｃｍ
（ｂ）結果
本発明の４Ｈ−クロモン誘導体（本発明の蛍光色素）（１）（化合物１２、化合物１７、化合物２１、化合物２４、化合物２７、化合物３３、化合物３７、化合物４０、化合物４３、化合物４５、化合物４７、化合物４９）のみでの最大励起波長、最大蛍光波長、ストークスシフトおよび蛍光強度、ならびにＤＮＡ添加時の各化合物の最大励起波長、最大蛍光波長、ストークスシフト、蛍光強度および蛍光増感率（ＤＮＡ添加時の蛍光強度を色素のみ（添加物なし）での蛍光強度値で割った値）を表３に示す。

本発明の蛍光色素（１）は、二本鎖核酸の添加により大きな蛍光増感と非常に長いストークスシフトを示し、可視光励起が可能で緑色、黄色または赤色蛍光を示すことが分かる。具体的には、ＤＮＡ−ＤＮＡを添加した時の本発明の蛍光色素（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）における蛍光増感率は、それぞれ６．１倍、５．２、１８．５倍を示し、本発明の蛍光色素がＤＮＡ−ＤＮＡに対して大きく蛍光増感することが確認できた。さらに、ＤＮＡ−ＤＮＡの添加による本発明の蛍光色素（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）のストークスシフトも１２３ｎｍから１８６ｎｍと非常に大きいことも確認した。さらに、ＤＮＡ−ＤＮＡの添加による本発明の蛍光色素（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）の最大励起波長が４３５ｎｍ、４６７ｎｍ、４４６ｎｍと可視光領域にあることが確認できた。同様に、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドを添加した時の本発明の蛍光色素（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）における蛍光増感率は、それぞれ９．５倍、９．０倍、２７倍を示し、本発明の蛍光色素がＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドに対して大きく蛍光増感することが確認できた。さらに、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドの添加による本発明の蛍光色素（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）のストークスシフトも１２１ｎｍから１８７ｎｍといずれも非常に大きいことも確認した。さらに、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドの添加による本発明の蛍光色素（１）（化合物１２、化合物１７、化合物５３）の最大励起波長は４３８ｎｍ、４６７ｎｍ、４４８ｎｍと可視光領域にあることが確認できた。また、サケ精巣由来のＤＮＡを添加した時の本発明の蛍光色素（１）における蛍光増感率は１１．９倍から２２８．８倍を示し、本発明の蛍光色素がＤＮＡに対して大きく蛍光増感することが確認できた。さらに、サケ由来のＤＮＡの添加による本発明の蛍光色素（１）のストークスシフトも１６４ｎｍから２１４ｎｍと非常に大きいことも確認した。さらに、サケ精巣由来のＤＮＡの添加による本発明の蛍光色素（１）の最大励起波長は３９８ｎｍから４６７ｎｍと可視光領域にあることが確認できた。

比較例１
対照色素としてエチジウムブロミドにＤＮＡを添加した時の蛍光特性を評価した。
（ａ）方法
以下の条件で、エチジウムブロミドにＤＮＡを添加して励起・蛍光スペクトルを測定した。

ＤＮＡ：デオキシリボ核酸ナトリウム塩（サケ精巣由来）
測定溶液：
ＴＥバッファー（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ １ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ
８．０），１％ ＤＭＳＯ
色素濃度：５．０μＭ
ＤＮＡの濃度：２００μｇ／ｍＬ
測定温度：２５℃
石英セル光路長：１．０ｃｍ
（ｂ）結果
エチジウムブロミドのみでの最大励起波長、最大蛍光波長、ストークスシフトおよび蛍光強度、ならびにＤＮＡ添加時の最大励起波長、最大蛍光波長、ストークスシフト、蛍光強度および蛍光増感率（ＤＮＡ添加時の蛍光強度を色素のみ（添加物なし）での蛍光強度値で割った値）を表４に示す。

以上の結果より、本発明の蛍光色素（１）は、二本鎖核酸添加による蛍光強度の増大と非常に大きいストークスシフトを示し、可視光励起が可能であることが確認できる。

Claims (8)

1. 一般式（１）
   

   

   （式中、Ｒ^１は水素原子；炭素数１から３のアルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から４のアルキル基；炭素数３から６のアルキニル基；（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；下記式（２）
   

   

   で表される置換（トリアゾール−４−イル）メチル基；または（２−ブロモアセチル）アミノエチル基を表す。Ｒ^２およびＲ^３は各々独立に炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３は各々独立に水素原子、ハロゲン原子またはメトキシ基を表す。Ｒ^６は水素原子；炭素数１から４のアルキル基；（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；炭素数７から８のアラルキル基；またはベンゾイル基を表し、ｎは０または１を表し、ｍは０または１を表す。）で表される４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩。
2. Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３が水素原子である、請求項１に記載の４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩。
3. Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３およびＲ^４−４が水素原子である、請求項１または２に記載の４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩。
4. Ｒ^２およびＲ^３がメチル基である、請求項１から３のいずれかに記載の４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩。
5. Ｒ^１が（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基である、請求項１から４のいずれかに記載の４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩。
6. 一般式（３）
   

   

   （式中、Ｒ^１ａは炭素数１から３のアルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から４のアルキル基；炭素数３から６のアルキニル基；（炭素数１から４のアルキル基またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基を表す。Ｒ^２およびＲ^３は各々独立に炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３は各々独立に水素原子、ハロゲン原子またはメトキシ基を表し、ｎは０または１を表し、ｍは０または１表す。）で表されるエノン誘導体およびそのアンモニウム塩を酸化することを特徴とする、一般式（１ａ）
   

   

   （式中、Ｒ^１ａ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。）で表される３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩の製造方法。
7. 一般式（４）
   

   

   （式中、Ｒ^１ａ、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３およびｎは前記と同じ意味を表す。）で表されるヒドロキシアセトフェノン誘導体およびそのアンモニウム塩と、一般式（５）
   

   

   （式中、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４及びｍは前記と同じ意味を表す。）で表されるアルデヒド誘導体とを塩基存在下で反応させて得られる、一般式（３）
   

   

   （式中、Ｒ^１ａ、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２、Ｒ^５−３、ｎおよびｍは前記と同じ意味を表す。）で表されるエノン誘導体およびそのアンモニウム塩を用いることを特徴とする、請求項６に記載の３−ヒドロキシ−４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩の製造方法。
8. 一般式（１）
   

   

   （式中、Ｒ^１は水素原子；炭素数１から３のアルコキシ基で置換されていてもよい炭素数１から４のアルキル基；炭素数３から６のアルキニル基；（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；下記式（２）
   

   

   で表される置換（トリアゾール−４−イル）メチル基；または（２−ブロモアセチル）アミノエチル基を表す。Ｒ^２およびＲ^３は各々独立に炭素数１から３のアルキル基を表す。Ｒ^４−１、Ｒ^４−２、Ｒ^４−３、Ｒ^４−４、Ｒ^５−１、Ｒ^５−２およびＲ^５−３は各々独立に水素原子、ハロゲン原子またはメトキシ基を表す。Ｒ^６は水素原子；炭素数１から４のアルキル基；（炭素数１から４のアルキル基または炭素数２から４のアミノアルキル基で置換されていてもよい）アミノ基で置換されている炭素数２から６のアルキル基；炭素数７から８のアラルキル基；またはベンゾイル基、ｎは０または１を表し、ｍは０または１を表す。）で表される４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、当該４Ｈ−クロモン誘導体およびそのアンモニウム塩の蛍光増感を観測することにより、二本鎖核酸を検出する方法。